TW202330602A - 人類單羧酸鹽轉運蛋白1抗體及其用途 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於特異性結合人類單羧酸鹽轉運蛋白1 (MCT1)之抗體(「抗人類MCT1抗體」)、包含此類抗人類MCT1抗體之組合物及使用此類抗人類MCT1抗體的方法。
Description
本發明屬於藥物領域。特定言之，本發明係關於特異性結合人類單羧酸鹽轉運蛋白1 (human monocarboxylate transporter 1，MCT1)之抗體(「抗人類MCT1抗體」)、包含此類抗人類MCT1抗體之組合物及使用此類抗人類MCT1抗體的方法。
單羧酸鹽轉運蛋白1 (亦稱為MCT1、SLC16A1、HHF7、MCT、MCT1D或「溶質載體家族16成員1」)為負責關鍵代謝物(包括糖酵解之產物)的便利轉運之多程跨膜蛋白。MCT1為最大表面膜蛋白家族中之一者的成員，稱為溶質通道蛋白(solute channel protein，SLC)，其功能涉及關鍵細胞營養物質、代謝物、離子、荷爾蒙及脂質的跨膜轉運。MCT1屬於轉運蛋白之SLC16家族，其中五種已展示以便利的、pH依賴性及雙向方式轉運單羧酸鹽，諸如丙酮酸鹽、乳酸鹽及酮(諸如乙醯乙酸鹽及
β-羥丁酸鹽)。轉運蛋白之SLC16家族SLC16A1 (MCT1)、SLC16A7 (MCT2)、SLC16A8 (MCT3)及SLC16A3 (MCT4)已全部展示以1至40 mM範圍內的Km轉運單羧酸鹽(Halestrap AP,
IUBMB Life. 2012;64(1):1-9)。MCT1、MCT3及MCT4與含有表面蛋白CD147 (Basigin)的Ig域共表現，在許多細胞中對於適當細胞表面表現而言至關重要。MCT1尤其與T及B細胞中之乳酸鹽的轉運相關(Fischer K, 等人,
Blood.2007;109(9):3812-9)。
免疫細胞在整個生長期間經歷其代謝需求之轉變，且其需要特定代謝狀態以便應用其效應功能。舉例而言，與非自體免疫對照相比，在來自狼瘡易感B6.
Sle1.Sle2.Sle3(TC)小鼠之CD4
+T細胞中糖酵解及粒線體氧化代謝均升高(Yin Y, 等人,
Sci Transl Med.2015;7(274):274ra18)。用粒線體代謝抑制劑二甲雙胍(metformin)與葡萄糖代謝抑制劑2-去氧-D-葡萄糖(2-Deoxy-D-glucose，2DG)之組合處理TC小鼠使T細胞代謝正常化且逆轉疾病生物指標(Yin Y, 等人,
Sci Transl Med.2015;7(274):274ra18)。二甲雙胍與2DG均亦在活體外減少IFNγ產生(Yin Y, 等人,
Sci Transl Med.2015;7(274):274ra18)。阻斷乳酸鹽之輸出減少經由糖酵解路徑之通量，且藉由更改Myc可使T細胞偏離效應功能(Doherty JR, 等人,
Cancer Research. 2014;74(3):908-20；Wang R, 等人,
Immunity.2011;35(6):871-82)。
由於酮利用及代謝之更改，在應激(感染、饑餓)下識別具有同種接合MCT1功能喪失型(loss-of-function，LOF)突變之個體；MCT1中有缺陷之成年人類在其他方面健康(van Hasselt PM,
N Engl J Med.2014, 371(20):1900-7；Balasubramaniam S, 等人,
JIMD Rep.2016;29:33-8)。嬰兒出現酮利用缺陷且有時出現運動不耐。隨著其年齡增長，此等不同症狀消失，可能由於青春期期間骨胳肌肉質量之增長。具有同種接合MCT1突變之個體的異種接合家庭成員沒有酮酸中毒之病史，表明LOF突變僅在與另外的基因/環境因素結合時導致酮酸中毒(Balasubramaniam S, 等人,
JIMD Rep.2016, 29:33-8)。在免疫系統外，MCT1以及其他MCT在多個器官中表現，包括骨胳肌肉、腎臟、肝、睪丸、心臟及大腦。具有MCT1突變之個體中不存在廣泛毒性很可能係由於MCT之冗餘。舉例而言，MCT1、MCT2及MCT4全部在視網膜中表現(Philp NJ,
Investigative Ophthalmology & Visual Science. 2003, 44(3):1305-11)，且在MCT1缺陷個體中未觀測到視網膜缺陷，表明功能冗餘。此時，在MCT1缺陷個體中尚未觀測到明顯免疫缺陷。另外，MCT1缺陷人類並不存在任何紅血細胞功能障礙。
考慮到MCT在許多組織中之廣泛表現，已研發出小分子MCT抑制劑。然而，許多此等小分子方法擊中多種MCT，引起偏離目標毒性，包括組織毒性。因此，仍需要選擇性且特異性以MCT1為目標之療法。
已揭示以MCT1為目標之抗體，例如WO19136300中所闡述。然而，迄今為止尚未有已知的特異性結合人類MCT1之抗體批准用於治療用途或處於臨床開發中。因此，仍需要選擇性且特異性結合人類MCT1、具有所期望的可開發性及患者安全概況且可用於治療MCT1相關病症(諸如自體免疫性病況)之抗體。
本發明提供抗體，其選擇性且特異性結合人類MCT1並抑制MCT1介導之反應(例如代謝物轉運、T細胞及B細胞增殖)，及/或驅動調節T細胞之分化；及包含此類MCT1抗體之組合物及使用此類MCT1抗體及組合物的方法。特定言之，本發明提供抗人類MCT1抗體，其特異性結合人類MCT1，具有所期望的結合親和力，抑制MCT1介導之反應，具有所期望的可開發性及/或患者安全概況，諸如具有低免疫原性風險。所期望的可開發性概況進一步減小下游分析性及製造製程中之潛在複雜及高成本變化。如本文所揭示之抗人類MCT1抗體，可用於治療MCT1相關病症，諸如自體免疫性病況(例如全身性紅斑狼瘡、發炎性腸病、類風濕性關節炎、牛皮癬或多發性硬化症)、過敏病況、發炎性病況、代謝障礙、移植或細胞療法接受體、MCT1陽性癌症、運動誘發之高胰島素症(exercise-induced hyperinsulinism，EIHI)病況及/或多囊性腎病(polycystic kidney disease，ADPKD)。因此，本文所提供之抗人類MCT1抗體具有以下特性中之一或多者：1)特異性結合人類MCT1，具有所期望的結合親和力；2)抑制MCT1介導之代謝物轉運；3)抑制CD4及CD8 T細胞增殖；4)抑制B細胞增殖；5)驅動調節T細胞(例如Foxp3+調節T細胞)之分化；6)在活體外不顯著誘發效應功能介導的殺滅(例如ADCC、ADCP)或嗜中性白血球活化；7)不顯著誘發互補序列介導的活性；8)低免疫原性風險；9)低培養中氧化及/或分解；10)低至不可偵測的與人類血清蛋白結合；11)低疏水性；12)所期望的特性，諸如穩定性、溶解性，及較小的例如與分析性管柱樹脂結合，得到所期望的可開發性及患者安全概況用於治療MCT1相關之病症。
在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體為完全人類化抗體。在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體特異性結合人類及/或食蟹猴MCT1。在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體包含構架胺基酸序列之特定組合，該等構架胺基酸序列支持且允許如本文所揭示之特定CDR胺基酸序列的最佳呈遞。在一些實施例中，此類抗人類MCT1抗體具有所期望的結合親和力及功能活性，諸如本文所描述之彼等。在進一步實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體特異性結合人類MCT1且抑制代謝物(例如乳酸鹽、丙酮酸鹽、酮)轉運及T細胞及/或B細胞增殖。在進一步實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體特異性結合人類MCT1且驅動調節T細胞之分化。在此類實施例中，調節T細胞藉由本發明之抗人類MCT1抗體而增加導致抑制自體免疫反應。在進一步實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有所期望的可發展性及/或患者安全概況，諸如可接受的免疫原性風險，減少或消除：氧化及培養中分解；非特異性血清蛋白結合(例如血清IgG、載脂蛋白)及/或疏水性。此等所期望的可發展性概況指示降低聚集及/或產量損失風險，降低較快清除風險，所期望的藥物動力學概況、溶解性、穩定性及/或減少下游純化及分析過程中之難題。
在又其他實施例中，本發明之抗人類MCT1抗體並不顯著誘發效應功能介導的殺滅及/或C1q互補活性。
相應地，在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 31，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 34之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 36之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 40，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 41之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 42之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 44，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 45之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 46之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 48，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 49之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 50之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 52，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 53之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 54之HC及包含SEQ ID NO: 37之輕鏈(light chain，LC)。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 56，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 57之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 58之重鏈(heavy chain，HC)及包含SEQ ID NO: 37之輕鏈(LC)。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 60，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 61之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 62之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 64，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 65之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 66之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 68，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 69之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 70之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 72，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 73之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 74之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 76，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 77之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 78之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 80，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 81之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 82之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 84，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 85之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 86之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 88，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 89之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 90之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 72，LCDR1包含SEQ ID NO: 4，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 73之VH及包含SEQ ID NO: 8之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 74之HC及包含SEQ ID NO: 10之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 68，LCDR1包含SEQ ID NO: 4，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 69之VH及包含SEQ ID NO: 8之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 70之HC及包含SEQ ID NO: 10之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO: 80或SEQ ID NO: 84，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 41、49、53、61、77、81或85之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 42、50、54、62、78、82或86之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 97，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，SEQ ID NO: 97之Xaa
2為纈胺酸或精胺酸，SEQ ID NO: 97之Xaa
7為精胺酸或白胺酸，SEQ ID NO: 97之Xaa
9為天冬醯胺或甘胺酸，SEQ ID NO: 97之Xaa
10為酪胺酸或異白胺酸，SEQ ID NO: 97之Xaa
12為白胺酸或異白胺酸，及SEQ ID NO: 97之Xaa
13為麩醯胺酸、纈胺酸或甘胺酸。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 41、49、53、61、77、81或85之VH及包含SEQ ID NO: 35之VL。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 42、50、54、62、78、82或86之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。在此類實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有所期望的結合及功能活性。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 44或SEQ ID NO: 88，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 45或89之VH且VL包含SEQ ID NO: 35。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 46或90之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。在此類實施例中，如所揭示之抗人類MCT1抗體具有所期望的結合及功能活性。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 98，HCDR3包含SEQ ID NO: 32，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，SEQ ID NO: 98之Xaa
4為精胺酸或絲胺酸，且SEQ ID NO: 98之Xaa
9為異白胺酸或麩胺酸，且SEQ ID NO: 98之Xaa
13為麩胺酸或精胺酸。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 45或89之VH且VL包含SEQ ID NO: 35。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 46或90之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。在此類實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有所期望的結合及功能活性。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 68或SEQ ID NO: 72，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 57、65、69或73之VH且VL包含SEQ ID NO: 35。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 58、66、70或74之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。在此類實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有所期望的結合及功能活性。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人類MCT1且包含VH及VL，其中VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1包含SEQ ID NO: 30，HCDR2包含SEQ ID NO: 2，HCDR3包含SEQ ID NO: 99，LCDR1包含SEQ ID NO: 33，LCDR2包含SEQ ID NO: 5及LCDR3包含SEQ ID NO: 6。在一些實施例中，SEQ ID NO: 99之Xaa
4為精胺酸或白胺酸，且SEQ ID NO: 99之Xaa
6為組胺酸、精胺酸或酪胺酸，且SEQ ID NO: 99之Xaa
20為丙胺酸或脯胺酸。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 57、65、69或73之VH且VL包含SEQ ID NO: 35。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO: 58、66、70或74之HC及包含SEQ ID NO: 37之LC。在此類實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有所期望的結合及功能活性。
在一些實施例中，本發明提供一種包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)之抗體，其中HC及LC包含以下胺基酸序列：
a. HC包含SEQ ID NO: 9且LC包含SEQ ID NO: 10；
b. HC包含SEQ ID NO: 9且LC包含SEQ ID NO: 15；
c. HC包含SEQ ID NO: 19且LC包含SEQ ID NO: 15；
d. HC包含SEQ ID NO: 23且LC包含SEQ ID NO: 24；或
e. HC包含SEQ ID NO: 28且LC包含SEQ ID NO: 24。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 9、19、23或28之重鏈(HC)及包含SEQ ID NO: 10、15或24之輕鏈(LC)。在一些實施例中，本發明提供一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 9之重鏈及包含SEQ ID NO: 10之輕鏈。在一些實施例中，本發明提供一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 9之重鏈及包含SEQ ID NO: 15之輕鏈。在一些實施例中，本發明提供一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 19之重鏈及包含SEQ ID NO: 15之輕鏈。在一些實施例中，本發明提供一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 23之重鏈及包含SEQ ID NO: 24之輕鏈。在一些實施例中，本發明提供一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 28之重鏈及包含SEQ ID NO: 24之輕鏈。
在一些實施例中，本發明提供一種抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 7、18、21或27之重鏈可變區(VH)及包含SEQ ID NO: 8、13或22之輕鏈可變區(VL)。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO: 7且VL包含SEQ ID NO: 8。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO: 7且VL包含SEQ ID NO: 13。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO: 18且VL包含SEQ ID NO: 13。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO: 21且VL包含SEQ ID NO: 22。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO: 27且VL包含SEQ ID NO: 22。
在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有經修飾之可變區。在一些實施例中，修飾在VH中。在一些實施例中，修飾在VL中。在一些實施例中，修飾在VH及VL中。在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有不同人類構架區。在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體之VH及VL包含構架胺基酸序列的特異性組合以支持如本文所揭示之特定CDR胺基酸序列。在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體之VH及VL具有構架胺基酸序列的特異性組合，其允許如本文所揭示之CDR胺基酸序列之最佳呈遞。在一些實施例中，如本文所提供之構架胺基酸序列之特異性組合支持本文所提供之特定CDR胺基酸序列且允許CDR胺基酸序列的最佳呈遞，提供抗體之所期望的結合親和力及功能活性(例如抑制代謝物轉運以及B及/或T細胞增殖，且驅動調節T細胞分化)及/或可發展性特性及/或改良的患者安全性。相應地，在一些實施例中，當與此項技術中已知之MCT1抗體(例如如WO19136300中所描述之INX444)相比時本發明之抗人類MCT1抗體具有改良的可發展性及/或安全概況。在此類實施例中，當與INX444相比時如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有降低的免疫原性風險。在又其他實施例中，當與INX444相比時如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有減少的氧化及培養中分解。在又其他實施例中，當與INX444相比時如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有消除的或減少的非特異性人類血清蛋白結合。在又其他實施例中，當與INX444相比時如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有減少的非特異性相互作用，諸如與純化管柱樹脂結合。在進一步實施例中，當與INX444相比時如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有減小之疏水性。因此，當與INX444相比時如本文所揭示之抗人類MCT1抗體在下游純化及分析過程中具有減少的難題及/或改良之藥物動力學概況。
在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有經修飾之人類IgG1或人類IgG4恆定區。
在一些實施例中，如本文所揭示之抗人類MCT1抗體具有經修飾之Fc區(例如經修飾之IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)，該經修飾之Fc區具有減少或消除的Fc效應功能。當與包含野生型IgGFc區之抗體相比時，如本文所描述之此類抗人類MCT1抗體展示減少或消除的與FcγR受體之結合，由此具有減少的細胞毒性。患者安全性可經由此類包含經修飾之Fc區的抗人類MCT1抗體之充分減少或消除之效應功能來改良。
在一些實施例中，抗人類MCT1抗體具有人類IgG1同型。在此類實施例中，本文所述之抗人類MCT1抗體具有經修飾之IgG1 Fc區，該經修飾之IgG1 Fc區具有經消除的Fc效應功能，亦即IgG1 Fc效應無效。舉例而言，此類抗人類MCT1抗體包含IgG1 Fc區，該IgG1 Fc區包含胺基酸取代L234A、L235E、G237A、A330S及P331S，展示減少的與FcγR及C1q受體之結合(全部胺基酸殘基均根據EU索引編號來編號)。在一些實施例中，本文所述之抗人類MCT1抗體具有亦稱作IgG1EN Fc區的經修飾之人類IgG1 Fc區，該經修飾之人類IgG1 Fc區包含在殘基234處的丙胺酸、在殘基235處的麩胺酸、在殘基237處的丙胺酸、在殘基330處的絲胺酸及在殘基331處的絲胺酸(全部殘基均根據EU索引編號來編號)。在其他實施例中，本文所述之抗人類MCT1抗體具有亦稱作INX LALA Fc區的經修飾之人類IgG1 Fc區，該人類IgG1 Fc區包含在殘基234處的丙胺酸、在殘基235處的丙胺酸、在殘基269處的精胺酸及在殘基322處的丙胺酸(全部殘基均根據EU索引編號來編號)。
先前已描述人類IgG1之不同異型(多型性)(例如G1m3、G1m17、G1m1及G1m2異型) (Jefferis R.,等人, mAbs 1(4): 1-7, 2009；Webster C.,等人, mAbs 2016, 8 (2): 253-263)。人類IgG1蛋白之重鏈可表示為G1m3、G1m17,1或G1m17,1,2異型；尚未針對IgG4定義異型(Jefferis R.,等人, mAbs 1(4): 1-7, 2009)。在一些實施例中，本文所述之抗人類MCT1抗體包含IgG1 G1m3異型之重鏈，其包含位置214處的精胺酸、位置356處的麩胺酸及位置358處的甲硫胺酸(全部殘基均根據EU索引編號編號)。在一些實施例中，本文所述之抗人類MCT1抗體包含IgG1 G1m17,1異型之重鏈，其包含位置214處的離胺酸、位置356處的天冬胺酸及位置358處的白胺酸(全部殘基均根據EU索引編號來編號)。
人類MCT1在經活化T細胞及B細胞上表現。本文所述之抗人類MCT1抗體在與MCT1結合後減少、遏制、削弱或以其他方式抑制表現MCT1之細胞(諸如經活化T細胞及B細胞)中的MCT1功能。在此類實施例中抗人類MCT1抗體或其抗原結合片段結合人類MCT1且抑制MCT1介導之轉運、CD4及CD8 T細胞增殖及/或B細胞增殖。在一些實施例中，抗人類MCT1抗體或其抗原結合片段抑制T細胞中MCT1介導的轉運且引起T細胞分化中之變化。T細胞分化中之此類變化可進一步促進調節T細胞(Treg)之分化。調節T細胞之調節包括(但不限於)FoxP3
+及Foxp3
-Treg。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段結合人類MCT1且抑制MCT1介導的轉運約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段結合人類MCT1且抑制MCT1介導的代謝物轉運約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段結合人類MCT1且抑制MCT1介導的丙酮酸鹽轉運約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段結合人類MCT1且抑制MCT1介導的乳酸鹽轉運約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段結合T細胞上之人類MCT1且抑制MCT1介導的CD4 T細胞增殖約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段結合T細胞上之人類MCT1且抑制MCT1介導的CD8 T細胞增殖約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段結合T細胞上之人類MCT1且抑制MCT1介導的CD4及CD8 T細胞增殖約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。在一些實施例中，本發明之抗體或其抗原結合片段結合B細胞上之人類MCT1且抑制MCT1介導的B細胞增殖約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。
在一些實施例中，本發明之抗人類MCT1抗體結合人類MCT1且以構形依賴性方式抑制人類MCT1介導的轉運。
在一些實施例中，本發明提供編碼新穎抗人類MCT1抗體之重鏈或輕鏈、或VH或VL的核酸或包含此類核酸之載體。
在一些實施例中，本發明提供一種包含SEQ ID NO: 11、20、25、29、38、43、47、51、55、59、63、67、71、75、79、83、87、91、12、17、26或39之序列的核酸。
在一些實施例中，提供編碼特異性結合人類MCT1之抗體的重鏈或輕鏈之核酸。在一些實施例中，提供包含編碼SEQ ID NO: 9、19、23、28、36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、10、15、24或37之序列的核酸。在一些實施例中，提供包含編碼抗體重鏈之序列核酸，該抗體重鏈包含SEQ ID NO: 9、19、23、28、36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90。舉例而言，核酸可包含選自SEQ ID NO: 11、20、25、29、38、43、47、51、55、59、63、67、71、75、79、83、87或91之序列。在一些實施例中，提供包含編碼抗體輕鏈之序列的核酸，該抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 10、15、24或37。舉例而言，核酸可包含選自SEQ ID NO: 12、17、26或39之序列。
在本發明之一些實施例中，提供編碼特異性結合人類MCT1之抗體的VH或VL之核酸。在一些實施例中，提供包含編碼SEQ ID NO: 7、18、21、27、34、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、8、13、22或35之序列的核酸。在一些實施例中，提供包含編碼抗體VH之序列的核酸，抗體VH包含SEQ ID NO: 7、18、21、27、34、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85或89。在一些實施例中，提供包含編碼抗體VL之序列的核酸，該抗體VL包含SEQ ID NO: 8、13、22或35。
本發明之一些實施例提供包含編碼抗體重鏈或輕鏈之核酸序列的載體。舉例而言，此類載體可包含編碼SEQ ID NO: 9、19、23、28、36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 10、15、24或37之核酸序列。
本文亦提供包含編碼抗體VH或VL之核酸序列的載體。舉例而言，此類載體可包含編碼SEQ ID NO: 7、18、21、27、34、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85或89之核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 8、13、22或35之核酸序列。
本文亦提供包含編碼抗體重鏈之第一核酸序列及編碼抗體輕鏈之第二核酸序列的載體。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 9、19、23、28、36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10、15、24或37之第二核酸序列。
在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 9之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 9之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 15之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 19之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 15之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 23之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 24之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 28之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 24之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 36之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 42之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 46之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 50之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 54之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 58之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 62之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 66之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 70之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 74之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 78之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 82之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 86之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 90之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 74之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。在一些實施例中，載體包含編碼SEQ ID NO: 70之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。
亦提供包含第一載體及第二載體之組合物，第一載體包含編碼抗體重鏈之核酸序列，第二載體包含編碼抗體輕鏈之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9、19、23、28、36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10、15、24或37第二核酸序列。
在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 15之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 19之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 15之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 23之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 24之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 28之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 24之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 36之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 42之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 46之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 50之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 54之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 58之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 62之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 66之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 70之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 74之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 78之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 82之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 86之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 90之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 74之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。在一些實施例中，組合物包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 70之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。
本發明之核酸可於宿主細胞中表現，例如在核酸已可操作地連接於表現控制序列之後。能夠表現其可操作地連接之核酸的表現控制序列為此項技術中所熟知。表現載體可包括編碼一或多種信號肽之序列，該一或多種信號肽促進多肽自宿主細胞之分泌。含有所關注之核酸(例如編碼抗體之重鏈或輕鏈的核酸)之表現載體可藉由熟知方法轉移至宿主細胞中，例如穩定或短暫的轉染、轉型、轉導或感染。另外，表現載體可含有一或多種選擇標記物，例如四環素、新黴素及二氫葉酸還原酶，以輔助偵測經所需核酸序列轉型之宿主細胞。
在另一態樣中，本發明提供包含本文所述之核酸、載體或核酸組合物之細胞，例如宿主細胞。宿主細胞可為經表現本文所述抗體之全部或一部分的一或多種表現載體穩定或短暫轉染、轉型、轉導或感染的細胞。在一些實施例中，宿主細胞可經表現本發明抗體之HC及LC多肽之表現載體穩定或短暫地轉染、轉型、轉導或感染。在一些實施例中，宿主細胞可經表現本文所述抗體之HC多肽之第一載體及表現本文所述抗體之LC多肽之第二載體穩定或短暫地轉染、轉型、轉導或感染。此類宿主細胞，例如哺乳動物宿主細胞，可表現如本文所述之特異性結合人類MCT1之抗體。已知能夠表現抗體之哺乳動物宿主細胞包括CHO細胞、HEK293細胞、COS細胞及NS0細胞。
在一些實施例中，細胞(例如宿主細胞)包含載體，該載體包含編碼SEQ ID NO: 9、19、23、28、36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10、15、24或37之第二核酸序列。
在一些實施例中，細胞(例如宿主細胞)包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9、19、23、28、36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10、15、24或37之核酸序列。
在一些實施例中，細胞包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9、70或74之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。在一些實施例中，細胞包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9或19之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 15之核酸序列。在一些實施例中，細胞包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 23或28之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 24之核酸序列。在一些實施例中，細胞包含第一載體及第二載體，第一載體包含編碼SEQ ID NO: 36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之核酸序列，第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。
本發明進一步提供一種方法，其用於藉由在使抗體表現之條件下培養上文所述之宿主細胞(例如哺乳動物宿主細胞)並自培養基回收經表現的抗體來產生本文所述之特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段。可藉由習知技術純化其中已分泌有抗體之培養基。可採用蛋白純化之不同方法，且此類方法為此項技術中已知的且描述於例如Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990)及Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 第3版, Springer, NY (1994)中。
本發明進一步提供藉由本文所述方法中之任一者所產生的抗體或其抗原結合片段。
在另一態樣中，本發明提供包含本文所述之抗體、核酸或載體之醫藥組合物。此類醫藥組合物亦可包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑。醫藥組合物可藉由此項技術中所熟知之方法製備(例如，
Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第22版. (2012), A. Loyd等人, Pharmaceutical Press)。
在一些實施例中，本文所述之抗人類MCT1抗體、核酸、載體或醫藥組合物可用於抑制經活化T細胞及/或B細胞及用於治療與過度活化的T細胞及B細胞相關之病況，諸如自體免疫性、過敏性或發炎性病況。在一些實施例中，本文所述之抗人類MCT1抗體、核酸、載體或醫藥組合物可用於增加調節T細胞之活性或數量及用於治療與過度活化的T細胞及B細胞相關之病況，諸如自體免疫性、過敏性或發炎性病況。此類自體免疫性、發炎性及過敏性病況包括例如類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)、牛皮癬性關節炎、牛皮癬、硬皮病、多發性硬化症、狼瘡、發炎性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)、免疫性血小板減少症(immune thrombocytopenia，ITP)、糖尿病、移植物抗宿主疾病(graft versus host disease，GvHD)、類肉瘤病、過敏性哮喘及肝炎相關肝毒性。此等抗人類MCT1抗體亦可用於藉由抑制對抗所移植細胞、組織或器官(諸如組織移植物、CAR-T細胞療法或基因療法構築體或含有構築體之細胞)之不希望的T細胞免疫反應來治療移植或細胞療法接受體。
在一些實施例中，本發明提供治療有需要之個體之自體免疫性病況的方法，其包含向該個體投與治療有效量之如本文所提供的抗人類MCT1抗體、編碼此類抗體之核酸、包含此類核酸之載體或包含此類抗體之醫藥組合物。自體免疫性病況之實例包括全身性紅斑狼瘡、發炎性腸病、類風濕性關節炎、牛皮癬或多發性硬化症。在進一步實施例中，本發明提供治療有需要之個體之過敏性病況、發炎性病況、代謝病症、移植或細胞療法接受體、MCT1陽性癌症、運動誘發之高胰島素症(EIHI)病況或多囊性腎病(ADPKD)的方法，方法包含向該個體投與治療有效量之如本文所提供的抗體、編碼此類抗體之核酸、包含此類核酸之載體或包含此類抗體之醫藥組合物。本文所述之抗體、核酸、載體或醫藥組合物可藉由非經腸途徑(例如皮下及靜脈內)投與。
在一些實施例中，本發明提供本文所述之抗人類MCT1抗體、核酸、載體或醫藥組合物用於療法。此外，本發明亦提供本文所述之抗人類MCT1抗體、核酸、載體、細胞或醫藥組合物用於治療自體免疫性病況、過敏性病況、發炎性病況、代謝病症、移植或細胞療法接受體、MCT1陽性癌症、EIHI病況或ADPKD。在一些實施例中，本文提供本文所述之抗人類MCT1抗體、核酸、載體、細胞或醫藥組合物用於治療自體免疫性病況，例如全身性紅斑狼瘡、發炎性腸病、類風濕性關節炎、牛皮癬或多發性硬化症。
在一些實施例中，本發明提供本文所述之抗人類MCT1抗體、核酸、載體、細胞或醫藥組合物之用途，其用於製造用以治療自體免疫性病況、過敏性病況、發炎性病況、代謝病症、移植或細胞療法接受體、MCT1陽性癌症、EIHI病況或ADPKD之藥物。
根據35 U.S.C. §119(e)本申請案要求於2021年9月14日申請之美國臨時申請案第63/261,177號及2021年10月28日申請之第63/272,903號之權益；其揭示內容以引用之方式併入本文中。
本文所揭示之方法及治療性用途之一個潛在優勢為在罹患自體免疫性病況、過敏性疾病、發炎性病況、代謝病症、移植或細胞療法接受體、MCT1陽性癌症、EIHI病況或ADPKD之患者中產生明顯及/或長期的緩解之可能性，具有可接受的可發展性及/或安全性概況，包括可接受的免疫原性、耐受性、毒性及/或不良反應，從而患者整體上受益於該治療方法。
如本文所用，除非另外陳述，否則術語「MCT1」係指由處理細胞中之MCT1前驅蛋白而產生的任何天然、成熟MCT1。除非另外指示，否則該術語包括來自任何脊椎動物來源之MCT1，包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類及食蟹猴或恆河猴)及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。該術語亦包括MCT1之天然存在之變體，例如剪接變體或對偶基因變體。人類MCT1之實例之胺基酸序列為此項技術中已知的，例如NCBI參考序列號NP_003042.3 (SEQ ID NO: 95)。食蟹猴MCT1之實例之胺基酸序列亦為此項技術中已知的，例如UniProt登錄號A0A2K5VB69 (SEQ ID NO: 96)。術語「人類MCT1」在本文中用於共同指代全部已知的人類MCT1異構體及多晶型形式。
如本文所用，術語「抗體」係指結合抗原之免疫球蛋白分子。抗體之實施例包括單株抗體、多株抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、雙特異性或多特異性抗體，或共軛抗體。抗體可為任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA)，及任何子類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)。
例示性抗體為包含四條多肽鏈之免疫球蛋白G (immunoglobulin G，IgG)型抗體：經由鏈間雙硫鍵交聯之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)。四條多肽鏈中之各者之胺基端部分包括具有約100-125個或更多個胺基酸之主要負責抗原識別的可變區。四條多肽鏈中之各者之羧基端部分含有主要負責效應功能的恆定區。各重鏈包含重鏈可變區(VH)及重鏈恆定區。重鏈恆定區係指抗體之包含抗體重鏈之Fc區及CH1域的區。各輕鏈包含輕鏈可變區(VL)及輕鏈恆定區。IgG同型可進一步分為子類別(例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4)。恆定區中之胺基酸殘基之編號係基於如Kabat (Kabat等人,
Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, Bethesda, MD: U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, National Institutes of Health (1991))中之EU索引。術語EU索引編號或EU編號在本文中可互換地使用。
VH及VL區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(complementarity determining region，CDR)，其間穿插有稱為構架區(framework region，FR)之更保守的區。CDR曝露於蛋白之表面上，且為對於抗體之抗原結合特異性而言重要的區。各VH及VL由自胺基端至羧基端按以下次序排列之三個CDR及四個FR組成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本文中，重鏈之三個CDR稱為「HCDR1、HCDR2及HCDR3」且輕鏈之三個CDR稱為「LCDR1、LCDR2及LCDR3」。CDR含有與抗原形成特異性相互作用之大部分殘基。將胺基酸殘基分配至CDR可根據熟知方案進行，包括描述於以下中之方案：Kabat (Kabat等人, 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))、Chothia (Chothia等人, 「Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins」, Journal of Molecular Biology, 196, 901-917 (1987)；Al-Lazikani等人, 「Standard conformations for the canonical structures of immunoglobulins」, Journal of Molecular Biology, 273, 927-948 (1997))、North (North等人, 「A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations」, Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011))，或IMGT (可在www.imgt.org獲取之國際ImMunoGeneTics資料庫；參見Lefranc等人, Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212)。本文所述之抗人類MCT1抗體之CDR區由上文所述定義的組合定義。
本發明之實施例亦包括抗體片段或抗原結合片段，其包含抗體之保留與抗原特異性相互作用的能力之至少一部分，諸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv、scFab、二硫鍵鍵聯的Fvs (sdFv)、Fd片段或線性抗體，其可例如與Fc區或IgG重鏈恆定區融合。
如本文所用，術語「Fc區」係指抗體之包含抗體重鏈之CH2及CH3域的區。視情況，Fc區可包括抗體重鏈之鉸鏈區之一部分或整個鉸鏈區。諸如效應功能之生物活性可歸因於Fc區，其隨抗體同型變化。抗體效應功能之實例包括：Fc受體結合，抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(antibody-dependent cell mediated cytotoxicity，ADCC)，抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(antibody-dependent cell mediated phagocytosis，ADCP)，C1q結合，補體依賴性細胞毒性(complement dependent cytotoxicity，CDC)，吞噬作用，細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
術語「Fc受體」或「FcR」描述與抗體之Fc區結合之受體。在一些實施例中，FcR為天然序列人類FcR。「Fc γ受體」或「FcγR」為結合IgG抗體之FcR且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子類別之受體，包括此等受體之對偶基因變體及交替剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA (「活化受體」)及FcγRIIB (「抑制受體」)，其具有不同之處主要在於其細胞質域之胺基酸序列。FcR在Ravetch及Kinet,
Ann. Rev. Immunol., 9:457-92 (1991)；Capel等人, Immunomethods, 4:25-34 (1994)；及de Haas等人,
J. Lab. Clin. Med., 126:330-41 (1995)中綜述。
如本文所用，除非另外指明，否則術語「結合」意欲意謂蛋白或分子與另一蛋白或分子形成化學鍵或吸引交互作用之能力，其如藉由此項技術中已知之常用方法所測定，使得兩種蛋白或分子接近。
如本文所用，術語「核酸」係指核苷酸之聚合物，其包括含單股及/或雙股核苷酸之分子(諸如DNA、cDNA及RNA分子)，併入有天然、經修飾核苷酸及/或核苷酸類似物。本發明之聚核苷酸亦可包括例如藉由DNA或RNA聚合酶或合成反應併入其中之受質。
如本文所用，術語「個體」係指哺乳動物，包括(但不限於)人類、黑猩猩、猿、猴、牛、馬、綿羊、山羊、豬、兔、狗、貓、大鼠、小鼠、天竺鼠及其類似動物。較佳地，個體為人類。
如本文所用，術語「治療有效量」係指蛋白或核酸或載體或組合物之量，該量將引發個體之生物或醫學反應，例如降低或抑制酶或蛋白活性、或減輕症狀、緩解病況、減慢或延緩疾病進展或預防疾病等。在一非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指蛋白或核酸或載體或組合物之必需量(在劑量下及對於時間段及對於投與方式)，當向個體投與時可有效地至少部分緩解、抑制、預防及/或減輕病況或病症或疾病以達成所需治療劑結果。蛋白或核酸或載體或組合物之治療有效量可根據以下因素改變：諸如疾病病狀，個體之年齡、性別及體重以及蛋白或核酸或載體或組合物引發個體之所需反應的能力。治療有效量亦為本發明之蛋白或核酸或載體或組合物之任何毒性或不利作用超過治療有益作用的量。
如本文所用，術語「抑制」係指例如生物反應或活性之減低、降低、減慢、減少、停止、中斷、終止、拮抗或阻斷，但未必指示生物反應之完全消除。
如本文所用，術語「治療(treatment/treating)」係指其中可存在減慢、控制、延緩或停止本文所揭示之病症或疾病的進展，或減輕病症或疾病症狀，但未必指示完全消除全部病症或疾病之全部過程。治療包括投與蛋白或核酸或載體或組合物用於治療患者(尤其人類)之疾病或病況。
如本文所用，術語「約」意謂5%內。
如本文所用，除非本文中另外指示或與上下文明顯矛盾，否則本發明之上下文中(尤其在申請專利範圍之上下文中)所用的術語「一(a/an)」、「該」及類似術語應解釋為涵蓋單數及複數兩者。
實例提供以下實例以進行說明，但不限制所主張之發明。
實例 1 ： 人類化 MCT1 抗體 ( 抗人類 MCT1 抗體 ) 之 抗體生成及工程改造。 抗體工程改造及生成 ： 人類化MCT1抗體係藉由經由人類化及CDR工程改造對抗MCT1親本大鼠單株抗體M1056 (WO19136300中所描述)進行工程改造及實驗測試來生成。前述單株抗體INX444 [WO19136300中所描述]經由人類化、CDR工程改造及輕鏈改組自親本大鼠抗體M1056衍生。然而，對INX444之分析確認若干可發展性難題及風險因素。在細胞培養中觀測到顯著氧化及剪切，對於INX444與管柱樹脂及血清蛋白之非特異性相互作用觀測到由氧化所致之不穩定性，在下游分析性及製造製程中形成難題，其影響此抗體之潛在臨床開發及/或商業潛力。另外，觀測到INX444之快速清除及高免疫原性風險。INX444之VH及VL序列各自含有至少五個非人類構架殘基以及引入VH親本大鼠抗體序列中的CDR突變及藉由輕鏈改組引入之非親本VL CDR片段。為了克服INX444之可發展性難題及免疫原性劣勢，採取徹底的人類化及工程改造途徑重新將親本大鼠M1056抗體人類化及工程改造。在構架替換後，新人類化抗體(抗人類MCT1抗體)在其CDR及IgG恆定區中進行工程改造以進一步改良所需特性。
本文所述之抗人類MCT1抗體可藉由熟知的方法合成及純化。適當的宿主細胞，諸如中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovarian，CHO)可經表現系統短暫或穩定轉染用於使用預定HC:LC載體比值(若使用兩種載體)分泌抗體或編碼重鏈及輕鏈兩者之單一載體系統。已分泌出抗體之澄清培養基可使用常用技術來純化。
抗體構架工程改造 ： 為了克服在INX444中觀測到之構架及CDR胺基酸殘基對免疫原性特性的影響，選擇不同人類化及工程改造途徑。簡言之，使用構架文庫途徑將親本大鼠抗體M1056人類化。對於構架文庫，合成含有遵循兩種不同CDR定義之M1056 CDR的十二種人類VH構架生殖系基因(1-24、1-46、1-69、2-5、3-15、3-23、3-53、3-72、4-04、4-39、5-51及6-01)及八種人類VL構架基因(A-19、A-26、A-27、B-2、B-3、L-2、L-12及O-2) (生成兩種96 HC/LC組合文庫)且選殖入重鏈及輕鏈人類IgG1表現載體中。生成全部192種組合且短暫轉染至中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中。評定來自經轉染CHO細胞之上清液之功能活性，諸如MCT1輸送體活性之抑制，且在一些情況下，評定MCT1細胞結合、T細胞抑制、穩定性及免疫原性。
如藉由溴丙酮酸鹽轉運檢驗所測定，人類構架文庫之篩選揭示192種全人類構架抗體中的21種顯示自親本大鼠抗體衍生之CDR (M1056)展現明顯的功能活性。其餘的抗體並不展示顯著活性。在穩定性及免疫原性風險之初步評定之後，對12種構架抗體組合進行進一步實驗表徵以評估諸如基於細胞的MCT1結合、抑制T細胞增殖之功能活性、生理特性及人類血清結合之特性。如表1及表2中所展示此等分析選擇五種抗體(即：Ab1、Ab2、Ab3、Ab4及Ab5)用於進一步深入表徵，尤其集中於免疫原性評定。此等五種構架抗體展示可發展性、標準平台純化適合度及評估臨床免疫原性風險之關鍵讀數方面的顯著改良。全部五種構架抗體均確定特異性及選擇性結合MCT1。所描述之經由查詢具有/顯示親本嚙齒動物抗體CDR之全人類VH及VL生殖系序列的代表性子集之全面組合性文庫以識別生產性溶液之構架工程改造(即人類化)過程(或構架替代)為改良抗體的可發展性之關鍵步驟。各自具有顯示M1056衍生之CDR的全人類生殖系構架之特定VH/VL組合之全部五種最終所選構架抗體均展示顯著改良的與臨床開發相關之特性，諸如製程開發及免疫原性。
此外，在使全部6個CDR恢復回親本CDR序列之人類化過程中去除引入INX444之HCDR3中的色胺酸突變，在氧化方面得到顯著改良。
抗體 CDR 工程改造 ： 選擇人類化構架抗體Ab1用於進一步工程改造。將位點飽和突變誘發途徑用於生成全面文庫，其含有人類化構架抗體Ab1之每個VH及VL CDR胺基酸殘基處之全部可能的天然胺基酸取代(不包括半胱胺酸)。使用高通量流式細胞量測術檢驗針對MCT1細胞結合篩選1444種所得Ab1之CDR抗體變體且將假定的成功結果按比例擴大並確定結合及功能活性。在一些情況下，此初步突變誘發成果揭示結合及功能活性讀數中之不一致(例如引起結合之明顯改良的某些突變並不轉化成改良的抑制活性，或在某些情況下，甚至降低功能活性)，表明機制結構-抗體之轉運蛋白結合及功能性轉運抑制的活性要求中之斷線。所選突變在結合及效能方面之改良為適中的且進行第二輪位點飽和突變誘發。測定初步CDR文庫篩選中發現之關鍵胺基酸變化(HC CDR1 F27R)以改良結合親和力及功能活性(例如抑制代謝物轉運及CD4/CD8 T細胞增殖)，將該關鍵胺基酸變化嵌入新飽和突變誘發文庫中且用於解決觀測到之結合與抑制之結構要求方面的差異，修改篩選策略以整合全部1444種新抗體變體之基於細胞的結合的平行高通量分析以及使用高通量溴丙酮酸鹽(Bromopyruvate，BP)活體外轉運檢驗進行的MCT介導之轉運抑制。識別出諸如在BP轉運及T細胞抑制檢驗中顯著改良結合及/或功能活性之CDR突變(如表3中所示之一些)。將最佳單胺基酸變化組合於經合理設計之組合性文庫中且針對功能活性(BP轉運及T細胞抑制)篩選所得抗體。評定來自組合性文庫表明最大改良效能之稱為Ab6至Ab21之一組16個成功結果(如表1、表2及表3中所示)的可發展性及免疫原性以確定具有能夠實現臨床開發之可發展性及免疫原性特性之高效能治療抗體。
抗體恆定區工程改造 ： 選擇稱為IgG1EN之展示減少之與FcγR及C1q受體的結合之具有L234A、L235E、G237A、A330S及P331S處之胺基酸取代的人類IgG1效應無效主鏈(全部胺基酸殘基均根據EU索引編號來編號)用於例示性抗人類MCT1抗體。將如WO19136300中所描述之具有Fc區(其具有在殘基234處之丙胺酸、在殘基235處之丙胺酸、在殘基269處之精胺酸及在殘基322處之丙胺酸)的INX444 (在本文中稱為INX444 LALA)轉化成IgG1EN主鏈(稱為INX444 IgG1EN)。未觀測到與INX444上之2個不同主鏈(亦即INX444 LALA及INX444 IgG1EN)在效應功能活性、可發展性概況或免疫原性概況方面的顯著差異。
表 1 ： 例示性抗人類 MCT1 抗體之 CDR 胺基酸序列
表 2 ： 例示性抗人類 MCT1 抗體之胺基酸序列
表 3 ： 由 Ab1 之 組合性工程改造生成的例示性抗人類 MCT1 抗體 ( 展示與 Ab1 相比的 CDR 差異 )
| 抗人類MCT1 抗體 | CDR 序列 | |||||
| HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 | |
| Ab1 、Ab2 、Ab3 、Ab4 、Ab5 | SEQ ID NO: 1 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 3 | SEQ ID NO: 4 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab6 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 31 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab7 | SEQ ID NO: 40 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab8 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 44 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab9 | SEQ ID NO: 48 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab10 | SEQ ID NO: 52 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab11 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 56 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab12 | SEQ ID NO: 60 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab13 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 64 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab14 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 68 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab15 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 72 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab16 | SEQ ID NO: 76 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab17 | SEQ ID NO: 80 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab18 | SEQ ID NO: 84 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab19 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 88 | SEQ ID NO: 32 | SEQ ID NO: 33 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab20 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 72 | SEQ ID NO: 4 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| Ab21 | SEQ ID NO: 30 | SEQ ID NO: 2 | SEQ ID NO: 68 | SEQ ID NO: 4 | SEQ ID NO: 5 | SEQ ID NO: 6 |
| 抗人類MCT1 抗體 | VH | VL | HC | LC |
| Ab1 | SEQ ID NO: 7 | SEQ ID NO: 8 | SEQ ID NO: 9 | SEQ ID NO: 10 |
| Ab2 | SEQ ID NO: 7 | SEQ ID NO: 13 | SEQ ID NO: 9 | SEQ ID NO: 15 |
| Ab3 | SEQ ID NO: 18 | SEQ ID NO: 13 | SEQ ID NO: 19 | SEQ ID NO: 15 |
| Ab4 | SEQ ID NO: 21 | SEQ ID NO: 22 | SEQ ID NO: 23 | SEQ ID NO: 24 |
| Ab5 | SEQ ID NO: 27 | SEQ ID NO: 22 | SEQ ID NO: 28 | SEQ ID NO: 24 |
| Ab6 | SEQ ID NO: 34 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 36 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab7 | SEQ ID NO: 41 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 42 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab8 | SEQ ID NO: 45 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 46 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab9 | SEQ ID NO: 49 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 50 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab10 | SEQ ID NO: 53 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 54 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab11 | SEQ ID NO: 57 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 58 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab12 | SEQ ID NO: 61 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 62 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab13 | SEQ ID NO: 65 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 66 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab14 | SEQ ID NO: 69 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 70 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab15 | SEQ ID NO: 73 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 74 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab16 | SEQ ID NO: 77 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 78 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab17 | SEQ ID NO: 81 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 82 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab18 | SEQ ID NO: 85 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 86 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab19 | SEQ ID NO: 89 | SEQ ID NO: 35 | SEQ ID NO: 90 | SEQ ID NO: 37 |
| Ab20 | SEQ ID NO: 73 | SEQ ID NO: 8 | SEQ ID NO: 74 | SEQ ID NO: 10 |
| Ab21 | SEQ ID NO: 69 | SEQ ID NO: 8 | SEQ ID NO: 70 | SEQ ID NO: 10 |
| 抗人類MCT1 抗體 | 與Ab1 相比之HCDR 及LCDR 胺基酸差異 | |
| HCDR | LCDR | |
| Ab6 | F27R (HCDR1) + E62R (HCDR2) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab7 | F27R (HCDR1) + L29R (HCDR1) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab8 | F27R (HCDR1) + E58I (HCDR2) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab9 | F27R (HCDR1) + L34I (HCDR1) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab10 | F27R (HCDR1) + N31G (HCDR1) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab11 | F27R (HCDR1) + S99R (HCDR3) + Y101H (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab12 | F27R (HCDR1) + Q35V (HCDR1) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab13 | F27R (HCDR1) + S99R (HCDR3) + Y101R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab14 | F27R (HCDR1) + S99R (HCDR3) + A115P (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab15 | F27R (HCDR1) + S99L (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab16 | V24R (HCDR1) + F27R (HCDR1) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab17 | F27R (HCDR1) + Y32I (HCDR1) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab18 | F27R (HCDR1) + Q35G (HCDR1) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab19 | F27R (HCDR1) + S53R (HCDR2) + S99R (HCDR3) | N30E (LCDR1) |
| Ab20 | F27R (HCDR1) + S99L (HCDR3) | 無差異 |
| Ab21 | F27R (HCDR1) + S99R (HCDR3) + A115P (HCDR3) | 無差異 |
實例 2 ： 抗人類 MCT1 抗體之結合親和力 在 25 ℃ 下篩選之抗體之結合親和力 ： 使用競爭Meso Scale Discovery (MSD)結合檢驗來針對與人類MCT1之結合篩選例示性抗人類MCT1抗體。簡言之，將四種恆定濃度之各抗體與HEK WT細胞(經驗證表現MCT1 1.09×10
6個受體/細胞)之2或3倍稀釋系列混合得到以下最終濃度：對於各抗體250、125、62.5及31.25 pM (n=1)及60至.0585百萬個細胞/mL之細胞梯度。將混合物在37℃下培育1-2天。在培育之後，將經培育樣品以500xg快速離心5 min以去除細胞。在4℃下用1 μg/mL之於磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate buffered saline，PBS)中之山羊抗人類FC塗佈96孔多陣列盤(Meso Scale Diagnostics，目錄號L15XA-3)整夜。在塗佈以後，將盤用150 μL PBST (含0.05% Tween
®20之PBS)洗滌3次且在25℃下用150 μL/孔的PBS 3%阻斷劑A緩衝液(目錄號R93BA-1)阻斷1小時。隨後將盤用PBST洗滌3次。50 μL之預培育抗體：將細胞稀釋系列轉移至孔中且在25℃下在700 rpm振盪下培育1小時。將盤用PBST洗滌3次。隨後添加100 μL之1 μg/mL的抗人類κ生物素抗體(目錄號2060-08)，且將盤在25℃下在700 rpm振盪下培育1小時。將盤用PBST洗滌3次，接著添加100 μL之1 μg/mL MSD Sulfo-tag鏈黴抗生物素蛋白抗體(Meso Scale Diagnostics目錄號R32 AD1)，且將盤在25℃下在700 rpm振盪下培育1小時。將盤用PBST洗滌3次，將150 μL/孔之1X讀取緩衝液T添加至孔中且在添加緩衝液15 min之後在SECTOR
®Imager 6000 (Meso Scale Diagnostics)上分析。表觀KD係藉由使用用標準化ECL值繪製之檢驗開發工具套組將S形曲線擬合至電化學發光(electrochemiluminescence，ECL)反應相對於對數(MCT1受體濃度)來測定。
如表4a中所展現之代表性結果展示抗人類MCT1抗體具有所期望的與人類MCT1的結合親和力。
在 37 ℃ 下 Ab1 及 Ab6 之 結合親和力 ： 例示性抗人類MCT1抗體Ab1及Ab6與人類MCT1之結合親和力係使用競爭Meso Scale Discovery (MSD)結合檢驗來量測。簡言之，將兩種恆定濃度之各抗體與HEK WT細胞之稀釋系列(經驗證表現MCT1 1.09×10
6個受體/細胞)混合得到以下最終濃度：對於各抗體50 pM及5 pM三份及29至.0044百萬個細胞/mL之3倍細胞梯度。將混合物在37℃下在以300 rpm振盪情況下培育36-48小時。在培育之後，將經培育樣品以500xg快速離心8 min以去除細胞。在4℃下用3 μg/mL之於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之山羊抗人類FC塗佈96孔多陣列盤(Meso Scale Diagnostics，目錄號L15XA-3)整夜。在塗佈以後，將盤用150 μL PBST (含0.05% Tween
®20之PBS)洗滌3次且在37℃下用150 μL/孔的PBS 3%阻斷劑A緩衝液(Meso Scale Diagnostics，目錄號R93BA-1)阻斷30 min。隨後將盤用PBST洗滌3次。50 μL之預培育抗體：將細胞稀釋系列轉移至孔中且在37℃下在1000 rpm振盪下培育1小時。將盤用PBST洗滌3次。隨後添加100 μL之1 μg/mL抗人類κ生物素抗體(Southern Biotech，目錄號2060-08)，且將盤在37℃下在1000 rpm振盪下培育30 min。將盤用PBST洗滌3次，接著添加100 μL之1 μg/mL MSD Sulfo-tag鏈黴抗生物素蛋白抗體(Meso Scale Diagnostics目錄號R32AD-1)，且將盤在37℃下在1000 rpm振盪下培育15 min。將盤用PBST洗滌3次，將150 μL/孔之1X讀取緩衝液T (Meso Scale Diagnostics目錄號R92TC-1)添加至孔中且在添加緩衝液15 min之後在SECTOR
®Imager 6000 (Meso Scale Diagnostics)上分析。表觀K
D係藉由使用用標準化ECL值繪製之檢驗開發工具套組將S形曲線擬合至電化學發光(ECL)反應相對於對數(MCT1受體濃度)來測定。根據分開的獨立稀釋系列及盤執行各實驗三次。報導之資料為平均K
D。
如表4b中所展現之結果展示抗人類MCT1 Ab1及Ab6具有所期望的與人類MCT1之結合親和力。
表 4a. 在 25 ℃ 下例示性抗人類 MCT1 抗體與 MCT1 之 結合親和力篩選
表 4b. 在 37 ℃ 下例示性抗人類 MCT1 抗體 Ab1 及 Ab6 與 人類 MCT1 之結合親和力
| MCT1 抗體 | KD 值 (nM) |
| Ab1 | 5.81 |
| Ab6 | 1.27 |
| Ab7 | 0.47 |
| Ab8 | 0.55 |
| Ab9 | 4.56 |
| Ab10 | 0.85 |
| Ab11 | 1.91 |
| Ab12 | 1.64 |
| Ab13 | 2.82 |
| Ab14 | 1.31 |
| Ab15 | 1.96 |
| Ab16 | 0.71 |
| Ab17 | 1.04 |
| Ab18 | 5.14 |
| Ab19 | 0.46 |
| Ab20 | 0.64 |
| Ab21 | 0.85 |
| MCT1 抗體 | K D 值 (nM) |
| Ab1 | 1.23 |
| Ab6 | 0.59 |
實例 3 ： 抗人類 MCT1 抗體之功能性表徵 MCT1 介導之轉運的抑制 ： 將活體外溴丙酮酸鹽功能性轉運檢驗用於評定例示性抗人類MCT1抗體抑制MCT1介導之轉運活性之能力。將表現MCT1之HEK293T細胞在37℃下用例示性抗人類MCT1抗體或小分子MCT1抑制劑預處理1 h。隨後使細胞與濃度在25至500 mM範圍內之細胞毒性反應劑3-溴丙酮酸鹽(3-bromopyruvate，3-BrPy)一起培育2至6 h。使用商購存活率套組(ATPlite，PerkinElmer)在96孔盤中來定量來自死亡細胞之ATP且使用發光來量測存活率。ATP產生之減少指示抗體之功能活性。將人類化之前的小鼠或嵌合抗體用作陽性對照抗體。將MCT1/CD147雙基因剔除293T細胞用作陰性對照細胞系。
如表5中所展現之結果展示例示性抗人類MCT1抗體在溴丙酮酸鹽檢驗中抑制MCT1受體介導的轉運，且由此亦可識別為拮抗性抗人類MCT1抗體。
表 5 ： 例示性抗人類 MCT1 抗體對 MCT1 介導之轉運之抑制。
| MCT1 抗體 | IC 50 值 [nM] |
| Ab1 | 164 |
| Ab6 | 25 |
| Ab7 | 28 |
| Ab8 | 21 |
| Ab9 | 35 |
| Ab10 | 39 |
| Ab11 | 35 |
| Ab12 | 39 |
| Ab13 | 42 |
| Ab14 | 40 |
| Ab15 | 48 |
| Ab16 | 31 |
| Ab17 | 38 |
| Ab18 | 41 |
| Ab19 | 35 |
| Ab20 | 83 |
| Ab21 | 50 |
CD4/CD8 T 細胞 增殖之抑制 ： 在自人類PBMC分離之初級T細胞中評定例示性抗人類MCT1抗體對T細胞增殖之抑制。藉由標準Ficoll-Paque
TM增強版(GE HEALTHCARE)密度梯度離心方法自人類血液樣品分離人類PBMC，且藉由用EasySep
TM人類T細胞增濃套組根據製造商之方案(STEMCELL™ Technologies)進行負向選擇而自PBMC懸浮液分離初級T細胞。將所分離之人類初級T細胞用細胞痕量紫色染料(Thermo Fisher)標記且以1×10
6個細胞/mL再懸浮，並塗覆到於完全培養基(含有10%胎牛血清、1X MEM-非必需胺基酸、1 mM丙酮酸鈉、1X青黴素-鏈黴素溶液(全部來自Corning
®)及1X GlutaMAX
TM(Gibco
TM)、0.1% β-巰基乙醇(Life Technologies)之RPMI-1640)中的聚苯乙烯96孔u形底盤中。以300 μg /mL 4倍稀釋及11點滴定添加抗人類MCT1抗體或同型對照抗體。在37℃及5% CO
2下用人類CD3/CD28戴諾珠粒(GIBCO)刺激細胞3天。藉由FACS根據細胞痕量紫色染料之稀釋液分析T細胞增殖。
結果展示例示性抗人類MCT1抗體以劑量依賴型方式抑制CD4及CD8 T細胞增殖。表6展示例示性抗人類MCT1抗體抑制CD4及CD8T細胞增殖之IC
50值。
表 6. 例示性抗人類 MCT1 抗體對 T 細胞增殖之 抑制
| MCT1 抗體 | CD4 T 細胞 IC 50[nM] | CD8 T 細胞 IC 50[nM] |
| Ab1 | 59 | 42 |
| Ab6 | 3 | 3 |
| Ab7 | 2 | 4 |
| Ab8 | 3 | 3 |
| Ab9 | 4 | 5 |
| Ab10 | 3 | 7 |
| Ab11 | 4 | 5 |
| Ab12 | 4 | 5 |
| Ab13 | 3 | 4 |
| Ab14 | 5 | 6 |
| Ab15 | 5 | 8 |
| Ab16 | 5 | 3 |
| Ab17 | 5 | 2 |
| Ab18 | 6 | 2 |
| Ab19 | 5 | 3 |
| Ab20 | 13 | 6 |
| Ab21 | 6 | 4 |
活體外 T 調節細胞分化 ： 在自PBMC分離之初級原生CD4 T細胞中評定例示性抗人類MCT1抗體對誘發調節T (Treg)細胞之擴增之增強。藉由標準Ficoll-Paque
TM增強版(GE HEALTHCARE)密度梯度離心方法自人類血液樣品分人類PBMC，且藉由根據製造商之方案(StemCell)進行之負向選擇來自PBMC懸浮液分離初級原生CD4 T細胞。使所分離之人類初級原生CD4 T細胞以1×10
6個細胞/mL再懸浮，並塗覆到於完全培養基(含有10%胎牛血清、1X MEM-非必需胺基酸、1 mM丙酮酸鈉、1X青黴素-鏈黴素溶液(全部來自Corning
®)及1X GlutaMAX
TM(Gibco
TM)、0.1% β-巰基乙醇(Life Technologies)之RPMI-1640)中的聚苯乙烯96孔u形底盤中。以不同濃度添加例示性抗人類MCT1抗體或同型對照抗體。在37℃及5% CO
2下用抗CD3/CD28戴諾珠粒(Gibco)及hrTGFb (R&D)及hrIL -2 (研發)刺激細胞3天。藉由FACS根據FoxP3+/CD25+細胞之%來分析Treg分化。
如圖1及表7及表8中所展現之結果展示抗人類MCT1抗體Ab1及Ab6與同型對照相比以濃度依賴性方式增加調節T細胞分化。此等結果展示抗人類MCT1抗體之出人意料的益處，表明用Ab1或Ab6處理可增強隨後抑制自體免疫性反應之調節T細胞之分化。
表 7. 在處理時在用抗人類 MCT1 抗體 Ab1 處理後調節 T 細胞分化之增加百分比
表 8. 當用抗人類 MCT1 抗體 Ab6 或同型對照處理時調節 T 細胞分化之增加百分比
| 濃度 (nM) | 相對於同型對照經Ab1 處理之Treg 細胞增量% |
| 2000 | 16.5 (+/-6.8) |
| 400 | 17.3(+/-5.8) |
| 80 | 12.4 (+/-7.2) |
| 16 | 2.4 (+/-1.6) |
| 3.2 | 0 |
| 0.64 | -1.4 (+/-3.0) |
| 0.128 | -0.8 (+/-0.2) |
| 濃度 (μg/mL) | 經Ab6 處理之Treg 細胞之增量% | 經同型對照處理 之Treg 細胞之增量% |
| 300 | 14.39 | 0.07 |
| 60 | 10.81 | 3.09 |
| 12 | 8.78 | 4.99 |
| 2.4 | 2.95 | 0.63 |
| 0.48 | -5.82 | 2.24 |
| 0.096 | -3.16 | 3.37 |
| 0.0192 | 1.05 | 2.10 |
B 細胞 增殖 ： 在自人類PBMC分離之初級B細胞中評定例示性抗人類MCT1抗體對B細胞增殖之抑制。藉由標準Ficoll-Paque
TM增強版(GE HEALTHCARE)密度梯度離心方法自人類血液樣品分離人類PBMC，且藉由用CD19微珠根據製造商之方案(Miltenyi Biotec)進行正向選擇來自PBMC懸浮液分離初級B細胞。將所分離之人類初級B細胞用細胞痕量紫色染料(Thermo Fisher)標記且以1×10
6個細胞/mL再懸浮，並塗覆到於完全培養基(含有10%胎牛血清、1X MEM-非必需胺基酸、1 mM丙酮酸鈉、1X青黴素-鏈黴素溶液(全部來自Corning
®)及1X GlutaMAX
TM(Gibco
TM)、0.1% β-巰基乙醇(Life Technologies)之RPMI-1640)中的聚苯乙烯96孔u形底盤中。以300 μg /mL 4倍稀釋及11-點滴定添加例示性抗人類MCT1抗體或同型對照抗體。在37℃下及5% CO
2下用人類MEGACD40L蛋白(ENZO)及rhIL-4 (R&D)刺激細胞5天。藉由FACS根據細胞痕量紫色染料之稀釋液分析B細胞增殖。
結果展示例示性抗人類MCT1抗體Ab6以劑量依賴性方式抑制B細胞增殖，如表9中所示3個供體之平均IC
50為2.95 nM。
表 9. 例示性抗人類 MCT1 抗體 Ab6 對 B 細胞 增殖之抑制
| 供體 1 | 供體 2 | 供體 3 | 平均 | |
| IC50 (nM) | 3.06 | 2.40 | 3.38 | 2.95 |
實例 4 ： 抗人類 MCT1 抗體之 Fcy 受體結合及效應功能活性進行活體外人類Fcy受體(FcyR)結合及效應功能活性以確認抗人類MCT1抗體缺乏可偵測之FcyR結合、補體依賴性細胞毒性(complement-dependent cytotoxicity，CDC)、抗體依賴性細胞毒性(antibody-dependent cellular cytotoxicity，ADCC)及抗體依賴性細胞吞噬作用(antibody-dependent cellular phagocytosis，ADCP)活性。
人類 Fc γ 受體 結合。 將Biacore T100 (Cytiva)、Biacore反應劑及Scrubber2 Biacore評估軟體(Biologics 2008)用於MCT1抗體之SPR結合分析。另外，亦比較IgGEN與LALA IgG主鏈之與Fcγ受體之結合。使用製造商之EDC/NHS胺偶合方法(Cytiva P/N BR100050)製備一系列S CM5晶片(Cytiva P/N BR100530)。簡言之，所有4個流動細胞(flow cell，FC)之表面藉由以10 μL/分鐘注射EDC/NHS之1:1混合物7分鐘而活化。將蛋白A(Calbiochem P/N 539202)在10 mM乙酸鹽、pH 4.5緩衝液中稀釋至100 μg/mL，且藉由以10 μL/分鐘之流動速率注射7分鐘持續約4000 RU將其固定至所有4個FC上。以10 μL/分鐘注射乙醇胺7分鐘以阻斷未反應之位置。注射2×10 μL甘胺酸(pH 1.5)用於去除任何非共價相關蛋白。操作緩衝液為1x HBS-EP+ (TEKNOVA,P/N H8022)。自穩定CHO細胞表現產生FcγR胞外結構域(ECD)-FcγRI (CD64)、FcγRIIA_131R及FcγRIIA_131H (CD32a)，FcγRIIIA_158V、FcγRIIIA_158F (CD16a)及cγRIIb (CD32b)。使用IgG瓊脂糖及尺寸排阻層析法(SEC)來純化全部FcγR ECD。對於FcγRI結合，在操作緩衝液中將抗體稀釋至2.5 μg/mL，且在FC 2至4(捕獲之RU)中捕獲各抗體之約150 RU。FC1為參考FC，因此未在FC1中捕獲抗體。在操作緩衝液中將FcγRI ECD稀釋至200 nM，且隨後在操作緩衝液中將其兩倍連續稀釋至0.78 nM。以40 μL/分鐘在所有FC上進行具有各濃度之至少兩次注射持續120秒，隨後進行1200秒解離相位。藉由在所有FC上以30 μL/分鐘注射15 μL之10 mM甘胺酸(pH 1.5)以進行再生。以FC2-FC1、FC3-FC1及FC4-FC1形式收集參考減去資料。在25℃下獲得量測結果。使用藉由Scrubber 2 Biacore評估軟體以進行穩態平衡分析或BIA評估中之「1:1(朗繆爾)結合」模型來計算親和力(K
D)。對於FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIIIa結合，在操作緩衝液中將抗體稀釋至5 μg/mL，且在FC 2至4(捕獲之RU)中捕獲各抗體之約500 RU。FC1再次為參考FC。在操作緩衝液中將Fcγ受體ECD稀釋至10 μM，且隨後在操作緩衝液中將其2倍連續稀釋至39 nM。以40 μL/分鐘在所有FC上進行各濃度之重複注射持續60秒，隨後進行120秒解離相位。藉由在所有FC上以30 μL/分鐘注射15 μL之10 mM甘胺酸(pH 1.5)以進行再生。以FC2-FC1、FC3-FC1及FC4-FC1形式收集參考減去資料。在25℃下獲得量測結果。使用Scrubber 2 Biacore評估軟體進行穩態平衡分析來計算親和力(K
D)。
如表10中所展現之結果展示IgG1EN Fc及LALA Fc主鏈並不結合Fcγ受體。
表 10. 抗人類 MCT1 抗體與人類 Fcγ 受體之 結合親和力
| 人類 FcγR 受體 | 人類 WT IgG1 Fc K D ± SD | INX444 IgG1EN K D | INX444 LALA K D |
| FcγRI | 42.6 ± 3.5 pM | 未結合 | ＞ 200 nM |
| FcγRIIA_131H | 0.5 ± 0.0 uM | ＞ 10 uM | ＞ 10 uM |
| FcγRIIA_131R | 0.5 ± 0.0 uM | ＞10 uM | ＞10 uM |
| FcγRIIb | 1.9 ± 0.0 uM | ＞10 uM | ＞10 uM |
| FcγRIIIA_V158 | 0.1 ± 0.0 uM | ＞10 uM | ＞10 uM |
| FcγRIIIA_F158 | 0.9 ± 0.0 uM | ＞10 uM | ＞10 uM |
C1q 結合。 用100 μL/孔之於DPBS (Dulbecco's HyClone)中稀釋濃度範圍在10 μg/mL至0.19 μg/mL之各抗體塗佈96孔微量盤。在複孔中執行測試。將盤密封且在4℃下培育整夜。去除塗佈反應劑，並添加200 μL/孔之酪蛋白阻斷反應劑(Thermo)。將盤密封並在室溫(room temperature，RT)下培育2小時。將盤用洗滌緩衝液(含0.05% Tween 20之1x TBE)洗滌3次，且添加100 μL/孔之稀釋於酪蛋白阻斷試劑中的10 μg/mL之人類C1q (MS Biomedical)並在RT下培育3小時。隨後將盤用洗滌緩衝液洗滌三次，並添加100 µL/孔綿羊抗人類C1q-HRP (Abcam號ab46191)於酪蛋白阻斷劑中之1:800稀釋液並在RT下培育1小時。隨後將盤用洗滌緩衝液洗滌6次，且向各孔中添加100 μL/孔之TMB受質(Pierce)並培育7分鐘。將100 µL之1 N HCl添加至各孔中以使反應停止。緊接著使用設定為450 nm之比色微量盤讀取器量測光學密度。使用SoftMax Pro 7.1資料獲取及分析軟體來分析資料。
結果(未展示)展示當與以劑量依賴性方式結合之人類IgG1陽性對照抗體相比時例示性抗人類MCT1抗體Ab6及IgG1EN對照並不結合補體組分C1q。
活體外 ADCC 、 ADCP 及 CDC 活性。 將表現MCT1及CD20之Raji細胞用作目標細胞用於3次檢驗。對於ADCC檢驗，將穩定共表現人類FcγRIIIa (V158)、人類FcεRγ鏈及NFAT螢光素酶報導基因(Eli Lilly and Company)之Jurkat FcγRIIIa (V158)-NFAT-Luc細胞系用作效應細胞系。對於ADCP檢驗，將穩定共表現人類FcγRIIa (H131)及NFAT螢光素酶報導基因(G988A，Promega)之Jurkat FcγRIIa-NFAT-Luc細胞系用作效應細胞系。簡言之，將測試樣品連續稀釋4倍重複兩次且將50 μL/孔之經稀釋測試化合物或檢驗緩衝液添加至96孔盤(Costar 3917)中。在檢驗培養基中將Raji細胞稀釋至最終細胞密度為1.0×10
6個細胞/mL且將體積為50 μL細胞/孔添加至具有50 μL/孔之連續稀釋測試樣品的ADCC、ADCP及CDC檢驗盤中。使ADCC、ADCP及CDC檢驗盤在盤振盪器上以200 rpm溫和地攪拌30秒，隨後在37℃下培育1 h。將經穩定轉染之Jurkat V158細胞或Jurkat H131細胞稀釋至3×10
6個細胞/mL之濃度並將50 μL/孔添加至對應的含有連續稀釋測試樣品及Raji細胞之ADCC及ADCP檢驗盤中，且藉由在盤振盪器上以200 rpm溫和攪拌30秒使盤混合，隨後在37℃下培育4小時。將經預稀釋之來自人類血清之補體(Quidel A113)添加至含有連續稀釋測試樣品及Raji細胞CDC盤(50 μL/孔)中，且藉由在盤振盪器上以200 rpm溫和攪拌30秒使盤混合，隨後在37℃下培育2 h。在培育之後，歷時10分鐘使ADCC、ADCP及CDC盤達到室溫，接著添加100 μL之One-glo Ex (E8130，Promega)至ADCC及ADCP檢驗盤並添加Cell‑Titer Glo (G7571，Promega)至CDC檢驗盤。使用Envision 11多模讀盤器使用0.2 cps集成度讀取發光。使用Prism v8.2 (Graph pad)分析結果。
活體外嗜中性白血球活化。 使用自三個獨立健康供體獲取之經肝素處理之人類全血。將血液用檢驗培養基以1:1稀釋且以100μl/孔塗覆於96孔盤中。以300 μg/mL開始將測試抗體滴定至經稀釋全血中，接著1:5連續稀釋。將R848 (TLR7促效劑)用作陽性對照，最終濃度為1 μg/mL。所有條件重複進行三次。將樣品培育1 h或整夜，此後使用ACK緩衝液使紅血細胞裂解，將細胞洗滌並經以下抗體之混合物染色：抗CD3-BV785 (目錄號317330，Biolegend)、抗CD45-BV421 (目錄號563879，BD Bioscience)、CD66b-FITC (目錄號555724，BD Bioscience)、CD11b-PE-Cy7 (目錄號552850 BD Bioscience)。將細胞在RT下染色30 min、洗滌並使用Fortessa X-20採集，資料係使用FlowJo分析且在Prism GraphPad中繪製。嗜鹼性球係基於其尺寸及粒度以及以下製造者之表現識別：CD45+/CD3-/CD66b+/CD11b+。根據CD45+/CD3-/CD66b+/CD11b+細胞之gMFI (幾何平均螢光強度)來分析CD66b及CD11b之表現。
圖2A中之結果展示當與以劑量依賴性方式引發ADCC活性的陽性對照野生型IgG1抗人類MCT1抗體及CD20抗體相比時，例示性抗人類MCT1抗體Ab6在全部所測試濃度下均不引發ADCC活性。圖2B中之結果展示當與以劑量依賴性方式引發ADCP活性的陽性對照野生型IgG1抗人類MCT1抗體及CD20抗體相比時，例示性抗人類MCT1抗體Ab6在全部所測試濃度下均不引發ADCP活性。嗜中性白血球活化檢驗之結果(未展示)確定抗人類MCT1抗體Ab6在全部時間點及所測試濃度下均不具有FcγRIIa活化。此等結果加起來展示Ab6不大可能在活體內引發Fc介導之效應功能活性。圖2C中之結果展示當與以劑量依賴性方式引發CDC活性的抗CD20陽性對照相比時，例示性抗人類MCT1抗體Ab6或野生型IgG1對照抗體均不引發CDC活性。
實例 5 ： 抗人類 MCT1 抗體之可發展性特性評估抗人類MCT1抗體之生理及化學特性以測定抗體之可發展性概況。
培養中之氧化及分解 ： 評定例示性抗人類MCT1抗體在培養中之氧化及分解。例示性抗人類MCT1抗體在CHO細胞中表現且隨後經受蛋白A捕獲方法。將捕捉管柱(MabSelect™ SuRe™蛋白A)藉由用2管柱體積之50 mM Tris pH 8.0洗滌來中和，隨後用20 mM Tris pH 7.0平衡。隨後將含有抗體之無細胞生物反應器收集物裝載到管柱上。在樣品裝載以後，將管柱用20 mM Tris pH 7.0洗滌，隨後用兩個管柱體積之20 mM Tris pH 7.0 + 1M NaCl洗滌，隨後用20 mM Tris pH 7.0洗滌。隨後使用20 mM乙酸+5 mM檸檬酸緩衝液(pH 2.9)自管柱溶離出MCT1抗體。藉由UV吸收(＞200 mAu)收集溶離份並合併在一起。隨後用1M Tris pH 8.0將此合併物調節至pH 5且使其在室溫下在攪拌時培育15 min。隨後在室溫下使溶離飽和持續總共1小時。將樣品合併物在20℃下以3000xg快速離心5分鐘以去除宿主細胞蛋白(host cell protein，HCP)沈澱物。隨後將樣品上清液用0.22 micron steri-flip PDVF過濾器(Millipore)過濾且隨後經受製備性SEC (參見圖3A及圖3B)。
如圖3A及圖3B中所展現之結果，指示例示性抗人類MCT1抗體具有所期望的可發展性氧化及分解概況。具體而言，Ab1之SEC特徵曲線(圖3A)展示較窄單峰而無任何肩峰，指示與INX444相比減少之分解(例如培養中之剪切)或抗體之氧化，提供所期望的可發展性特性且可能減少下游分析性及製造製程中複雜及高成本的變化(諸如允許藉由標準純化程序收集高純度材料)。INX444抗體之SEC特徵曲線(圖3B)在溶離特徵曲線中展示前肩峰。藉由LC/MS/MS對INX444抗體之進一步分析確認該前肩峰由培養中抗體剪切(CH1多剪切部位)及氧化(大多在胺基酸殘基W105處觀測到)引起。應用標準平台純化程序不適用於自INX444抗體去除此等雜質，且因此為下游純化製程及可發展性造成難題。
與分析性尺寸排阻管柱之相互作用 ： 將3 μg之例示性抗人類MCT1抗體(高於96%純度)注射到Agilent HPLC系統上之分析性尺寸排阻管柱(TOSOH TSKgel-UP-SW3000，Fisher scientific，目錄號50-104-9800)上，移動相流動速率為0.35 mL/min。在214 nm處偵測UV信號。
如表11及圖4中所展現結果展示當與INX444 (5.18分鐘)相比時，例示性抗人類MCT1抗體在分析性尺寸排阻管柱上之滯留時間顯著減少(範圍為3.78至4.04分鐘)。具體而言，此等結果指示當與INX444抗體相比時管柱樹脂與例示性抗人類MCT1抗體之間的相互作用減少(此亦由圖4中Ab1及INX444之峰寬展現)。抗體與管柱樹脂之強相互作用造成偵測可溶性高分子量物種之分析方法開發中的難題且需要在下游分析性製程中修改。
表 11. 例示性抗人類 MCT1 抗體之尺寸排阻管柱滯留時間
| MCT1 抗體 | 滯留時間 [ 分鐘 ] |
| Ab1 | 3.78 |
| Ab6 | 3.91 |
| Ab7 | 3.90 |
| Ab8 | 3.91 |
| Ab9 | 3.90 |
| Ab10 | 3.91 |
| Ab11 | 3.91 |
| Ab12 | 3.90 |
| Ab13 | 3.88 |
| Ab14 | 3.90 |
| Ab15 | 3.89 |
| Ab16 | 3.91 |
| Ab17 | 3.90 |
| Ab18 | 4.04 |
| Ab19 | 4.04 |
| Ab20 | 4.08 |
| Ab21 | 4.09 |
| INX444 IgG1EN | 5.18 |
疏水性相互作用層析 (hydrophobic interaction chromatography ， HIC) ： 將20 μg之IgG樣品(1 mg/mL)用2x緩衝液A濃縮液(2 M硫酸銨，0.1 M磷酸鈉，pH 6.8) 1:1稀釋以在分析之前達成1 M之最終硫酸銨濃度。使用TSKgel丁基-NPR (4.6 mm ID×10 cm，2.5 um，Tosoh號42168)管柱，保持在流動相A (1 M硫酸銨，50 mM磷酸鈉，pH 6.8 )中2分鐘，接著流動相A及流動相B (50 mM磷酸鈉，pH 6.8)之線性梯度(0-100% B)歷經23分鐘，流動速率為1 mL/分鐘。最終保持在100%流動相B中5分鐘用於去除任何剩餘蛋白，且在280 nm及215 nm處監測UV吸收。
如表12中所展現之結果展示，當與滯留時間為12 min之INX444相比時，例示性抗人類MCT1抗體Ab6至Ab21在疏水性相互作用管柱上的滯留時間更短(範圍為6.53 min至8.46 min)，指示較低的疏水性。抗體疏水性可引起下游製造問題，諸如較差表現及蛋白聚集。
表 12 ： 關於例示性抗人類 MCT1 抗體之疏水性相互作用層析資料
| MCT1 抗體 | HIC RT [min] |
| Ab1 | 11.9 |
| Ab6 | 7.4 |
| Ab7 | 6.53 |
| Ab8 | 7.31 |
| Ab9 | 7.21 |
| Ab10 | 7.71 |
| Ab11 | 7.08 |
| Ab12 | 7.53 |
| Ab13 | 6.92 |
| Ab14 | 7.32 |
| Ab15 | 8 |
| Ab16 | 6.64 |
| Ab17 | 6.66 |
| Ab18 | 7.82 |
| Ab19 | 7.12 |
| Ab20 | 8.46 |
| Ab21 | 7.84 |
| INX444 IgG1EN | 12 |
交叉相互作用層析 ： 藉由將約30 mg人類血清多株抗體(I4506；Sigma)與經1-mL HiTrap NHS活化之管柱(17-0716-01；GE Healthcare)偶合，接著用乙醇胺及Tris淬滅來製備交叉相互作用層析(cross-interaction chromatography，CIC) IgG管柱。藉由用乙醇胺及Tris去活化來製備空白管柱(無IgG之對照管柱)。將20 μg之各抗體注射到Agilent 1260系列HPLC系統上之各管柱(IgG及空白)上，管柱使用10 mM磷酸鈉、10 mM NaCl (pH 6.5)作為移動相，恆定流動速率為0.2 mL/min。由IgG及空白管柱所獲得之滯留時間(Retention time，RT)均用於計算K' (滯留時間之比，按IgG K'=[IgG管柱RT-空白管柱RT]/空白管柱RT計算)。此外，由於一些樣品中之峰拖尾，亦獲得50%高度處之峰寬以監測測試抗體之「黏性」。
如表13中所展現之結果，展示當與INX444 (IgG RT為11 min，空白峰寬為6.81 min)相比時，如由IgG管柱滯留時間(範圍為5.07至5.41 min)及空白峰寬(範圍為4.81至5.01 min)所展示，例示性抗人類MCT1抗體並不呈現顯著的與血清IgG或空白管柱之非特異性結合。此外，當與INX444 (IgG峰寬為8 min，空白峰寬為2 min)相比時，例示性抗體之IgG峰寬範圍為1.36至1.94 min及空白峰寬範圍為0.88至1.2 min，指示較少的IgG及管柱樹脂相互作用。較短的在CIC管柱上之IgG滯留時間指示可能改良的抗體溶解性。
表 13 ： 例示性抗人類 MCT1 抗體之 CIC 分析
| MCT1 抗體 | IgG 管柱 RT [min] | 空白管柱 RT [min] | IgG 管柱峰寬 [min] | 空白管柱峰寬[min] | IgG K' ( 管柱滯留時間比) |
| Ab1 | 5.07 | 4.81 | 1.5 | 1.2 | 0.05 |
| Ab6 | 5.31 | 4.97 | 1.45 | 1 | 0.07 |
| Ab7 | 5.38 | 5 | 1.79 | 0.88 | 0.08 |
| Ab8 | 5.34 | 4.98 | 1.55 | 1.02 | 0.07 |
| Ab9 | 5.28 | 4.94 | 1.46 | 1.08 | 0.07 |
| Ab10 | 5.27 | 4.96 | 1.44 | 1.08 | 0.06 |
| Ab11 | 5.33 | 5.01 | 1.57 | 0.91 | 0.06 |
| Ab12 | 5.29 | 4.95 | 1.46 | 1.08 | 0.07 |
| Ab13 | 5.33 | 4.98 | 1.63 | 0.94 | 0.07 |
| Ab14 | 5.29 | 4.95 | 1.51 | 1.06 | 0.07 |
| Ab15 | 5.27 | 4.83 | 1.55 | 1.17 | 0.09 |
| Ab16 | 5.4 | 5 | 1.89 | 0.89 | 0.08 |
| Ab17 | 5.19 | 4.92 | 1.36 | 1.1 | 0.05 |
| Ab18 | 5.35 | 4.98 | 1.64 | 1.04 | 0.08 |
| Ab19 | 5.41 | 5 | 1.94 | 0.88 | 0.08 |
| INX444 IgG1EN | 11 | 6.81 | 8 | 3 | 0.615 |
溶解性 ： 藉由用30 kDa分子量截止離心過濾器(例如Amicon U.C.過濾器，Millipore，目錄號UFC903024)將100 mg例示性抗人類MCT1抗體濃縮至大約0.5 mL之體積來評定溶解性。藉由使用Solo VPE分光光度計(C Technologies, Inc)來量測樣品之最終濃度。結果展示例示性抗人類MCT1抗體具有高溶解性。
熱穩定性 ： 將差示掃描熱量測定(Differential Scanning Calorimetry，DSC)用於評估例示性抗人類MCT1抗體抗熱變性之穩定性。使用Malvern MircoCal VP-DSC儀器進行DSC。以60℃/小時之恆定速率將樣品自20℃加熱至110℃。使用MicroCal VP-Capillary DSC自動分析程式執行分析方法。執行基線校正，並確定T起點及TM。結果展示例示性抗人類MCT1抗體具有相當的Tm及對於開發可接受的熱穩定性。
化學穩定性 ： 在可接受之緩衝液中在高濃度(大約100 mg/mL)下評定例示性MCT1抗體之穩定性。在5℃及35℃下培育經濃縮樣品4週之時間段。在培育以後，對樣品進行分析，用尺寸排阻層析法(SEC)分析主峰損失之百分比(Δ%主峰)，藉由毛細電泳法(CE-SDS)分析片段化，及藉由LCMS肽定位分析化學修飾(例如去醯胺、異構化或氧化)。
冷凍 / 解凍穩定性 ： 使用緩慢的3次重複、經控制溫度循環在高濃度(大約100 mg/mL)評估下冷凍/解凍穩定性，溫度循環模仿放置在-70℃下之大體積的大塊藥物物質之冷凍/解凍條件。
實例 6 ： 例示性抗人類 MCT1 抗體之免疫原性風險分析 免疫原性 T 細胞 增殖檢驗 ： 評定例示性抗人類MCT1抗體或測試候選物MAPPS肽藉由誘發細胞增殖來活化CD4+ T細胞之能力。製備CD8+ T細胞耗盡之PBMC且用羧基螢光素二乙酸丁二醯亞胺酯(Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester，CFSE)標記。各樣品與培養基對照、匙孔血藍蛋白(keyhole limpet haemocyanin，KLH；陽性對照)、對應的治療性對照(陽性臨床基準抗體或肽免疫原性對照)、例示性抗體或測試候選物MAPPS肽一起測試。將細胞培養並培育7天。在第7天，藉由流式細胞量測術分析樣品之CD4+ T細胞增殖性反應。計算中位細胞分裂指數(cellular division index，CDI)。對9個供體進行評定。產生CDI
＞2.5之供體視為陽性反應者。評估全部供體中之供體出現率百分比。
如在表14中所展現之結果，展示當與展現78%陽性供體反應之陽性對照抗CXCR4抗體相比時，所測試例示性抗人類MCT1抗體具有顯著減少之來自9個所測試供體的T細胞增殖(範圍為0%至22%陽性供體反應)，指示低免疫原性風險。此等結果指示例示性抗人類MCT1抗體之低免疫原性風險概況。在T細胞增殖檢驗中INX444展示89%陽性供體反應，指示高免疫原性風險概況。
表 14 ： 評定例示性抗人類 MCT1 抗體之免疫原性風險的 T 細胞增殖 檢驗
| 抗體 | 陽性供體反應% |
| KLH | 100 |
| anti-CXCR4 | 78 |
| INX444 IgG1EN | 89 |
| Ab1 | 0 |
| Ab2 | 11 |
| Ab3 | 0 |
| Ab4 | 11 |
| Ab5 | 22 |
| Ab6 | 10 |
| Ab15 | 9 |
| Ab20 | 20 |
| Ab21 | 10 |
血清蛋白結合 ： 為進一步評定例示性抗人類MCT1抗體之免疫原性風險概況，使用質譜(mass spectrometry，MS)測定血清蛋白結合。將在PBS中稀釋之抗體在4℃下以3 μg/孔塗佈於Nunc MaxiSorp (或Immulon 4 HBX)微量盤上整夜。次日，將盤用200 μL之冷PBS洗滌3次，且在RT下用100 μL之PBS/1% BSA阻斷3小時。去除阻斷溶液，且將盤再洗滌3次。將100 μL之人類血清樣品(來自八個供體之合併血清，用PBS/蛋白酶抑制劑1:1稀釋)添加至孔中，且將盤在4℃下培育整夜。次日，去除樣品，且將盤用200 μL冷PBS洗滌十次。將結合蛋白用1%酸性酸溶離、還原、烷基化及用胰蛋白酶消化。藉由奈米LC/MS使用Thermo QE-HFX (或LUMOS)質譜儀來分析胰蛋白酶肽。肽及蛋白標識係使用搜索算法用胰蛋白酶及人類資料庫用隨附測試抗體序列由內部蛋白體組學管線生成。離子係藉由內部蛋白體組學工具(Chrom-Alignment, Meta-consense and Quant)定量並使用單向分析/每對、司徒頓氏t測試(Student's t test) (或所有對，Tukey HSD)平台在JMP中分析。p＜0.05且差異＞1之離子視為富集。
MS分析之結果展示例示性抗人類MCT1抗體並不具有可偵測的與血清蛋白之結合。此不具有結合指示免疫原性風險降低及更快速清除之風險降低，由此為例示性抗人類MCT1抗體提供可能合乎需要的安全性免疫原性風險及PK概況。結果進一步展示INX444與血清中之多脂蛋白元結合，表明更高的免疫原性風險及可能更快速的清除。
實例 7 ： 抗人類 MCT1 Ab 之 活體內表徵 移植物抗宿主疾病 (GvHD) 檢驗 ： 將雌性NSG™小鼠(NOD.Cg-Prkdc
scidIl2rg
tm1Wjl/SzJ，JAX Labs，儲備號05557)在12 h明:暗循環情況下在72℃下3隻/籠圈養且允許自由飲食及飲水(n=33)。使用SepMate 50 Ficol製備試管根據製造商說明書(StemCell Technologies，Vancouver，BC)自獲自聖地亞哥血庫(加州聖地亞哥)之LRS試管分離出人類PBMC。使新分離之PBMC以1.2×10
8個細胞/mL懸浮於PBS中且在第0天向小鼠靜脈內移植100 μL PBMC懸浮液(1.2×10
7/細胞/小鼠，n=29)；4隻小鼠未移植PBMC作為非移植對照。在第1天，將小鼠分成體重相配組且皮下給與人類IgG1EN同型對照抗體或Ab1或Ab6。在實驗之剩餘時間中繼續每週一次給與。常規執行健康檢查及體重量測。在研究結束時對於經Ab6處理之小鼠進一步針對T調節細胞擴增評估脾細胞。
如圖5及圖6中所展現之結果展示用Ab1或Ab6處理分別可實現完全免於體重減輕，在特定劑量下與非移植對照組相似。出人意料地，如表15中所示，當與對照相比時用抗人類MCT1抗體Ab6處理展示在研究結束時脾細胞中FoxP3
+調節T細胞之擴增。此等結果表明由Ab6誘發之調節T細胞的擴增亦可有助於免於體重減輕。
表 15. 用抗人類 MCT1 抗體 Ab6 處理後 FoxP3+ 調節 T 細胞數量之增加
| 濃度 (nM) | FoxP3+ Treg 細胞之平均數量之 增加 | 標準差 |
| 人類IgG1EN對照 | 21188 | 31304 |
| Ab6 3mg/kg | 170708 | 104709 |
| Ab6 0.3mg/kg | 25940 | 19596 |
| Ab6 0.03 mg/kg | 63008 | 95784 |
| Ab6 0.003 mg/kg | 14260 | 14443 |
序列 Ab1 SEQ ID NO: 1 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 3 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR3 SEQ ID NO: 4 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO: 7 Ab1 及 Ab2 之 VH SEQ ID NO: 8 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 VL SEQ ID NO: 9 Ab1 及 Ab2 之 HC SEQ ID NO: 10 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 LC SEQ ID NO: 11 Ab1 及 Ab2 之 HC DNA SEQ ID NO: 12 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 LC DNA Ab2 SEQ ID NO: 1 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 及 Ab5 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 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Ab7 SEQ ID NO: 40 Ab7 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 32 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab12 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO: 41 Ab7 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO: 42 Ab7 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO:43 Ab7 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab8 SEQ ID NO: 30 Ab6 、 Ab8 、 Ab11 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR1 SEQ ID NO: 44 Ab8 之 HCDR2 SEQ ID NO: 32 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab12 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO: 45 Ab8 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO: 46 Ab8 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO: 47 Ab8 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab9 SEQ ID NO: 48 Ab9 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 32 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab12 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO: 49 Ab9 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO: 50 Ab9 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO: 51 Ab9 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab10 SEQ ID NO: 52 Ab10 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 32 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab12 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO: 53 Ab10 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO: 54 Ab10 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO: 55 Ab10 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab11 SEQ ID NO: 30 Ab6 、 Ab8 、 Ab11 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 56 Ab11 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ 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Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO:65 Ab13 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO: 66 Ab13 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO:67 Ab13 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab14 SEQ ID NO: 30 Ab6 、 Ab8 、 Ab11 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 68 Ab14 及 Ab21 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 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HCDR2 SEQ ID NO: 32 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab12 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO:77 Ab16 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO:78 Ab16 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO:79 Ab16 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab17 SEQ ID NO: 80 Ab17 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 32 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab12 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO: 81 Ab17 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO: 82 Ab17 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO: 83 Ab17 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab18 SEQ ID NO: 84 Ab18 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 32 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab12 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO: 85 Ab18 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO: 86 Ab18 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO: 87 Ab18 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab19 SEQ ID NO: 30 Ab6 、 Ab8 、 Ab11 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR1 SEQ ID NO: 88 Ab19 之 HCDR2 SEQ ID NO: 32 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab12 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 HCDR3 SEQ ID NO: 33 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO:89 Ab19 之 VH SEQ ID NO: 35 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 VL SEQ ID NO: 90 Ab19 之 HC SEQ ID NO: 37 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC SEQ ID NO: 91 Ab19 之 HC DNA SEQ ID NO: 39 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 及 Ab19 之 LC DNA Ab20 SEQ ID NO: 30 Ab6 、 Ab8 、 Ab11 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 72 Ab15 及 Ab20 之 HCDR3 SEQ ID NO: 4 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO: 73 Ab15 及 Ab20 之 VH SEQ ID NO: 8 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 VL SEQ ID NO: 74 Ab15 及 Ab20 之 HC SEQ ID NO: 10 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 LC SEQ ID NO:75 Ab15 及 Ab20 之 HC DNA SEQ ID NO: 12 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 LC DNA Ab21 SEQ ID NO: 30 Ab6 、 Ab8 、 Ab11 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR1 SEQ ID NO: 2 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab7 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab20 及 Ab21 之 HCDR2 SEQ ID NO: 68 Ab14 及 Ab21 之 HCDR3 SEQ ID NO: 4 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR1 SEQ ID NO: 5 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR2 SEQ ID NO: 6 Ab1 、 Ab2 、 Ab3 、 Ab4 、 Ab5 、 Ab6 、 Ab7 、 Ab8 、 Ab9 、 Ab10 、 Ab11 、 Ab12 、 Ab13 、 Ab14 、 Ab15 、 Ab16 、 Ab17 、 Ab18 、 Ab19 、 Ab20 及 Ab21 之 LCDR3 SEQ ID NO:69 Ab14 及 Ab21 之 VH SEQ ID NO: 8 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 VL SEQ ID NO: 70 Ab14 及 Ab21 之 HC SEQ ID NO: 10 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 LC SEQ ID NO: 71 Ab14 及 Ab21 之 HC DNA SEQ ID NO: 12 Ab1 、 Ab20 及 Ab21 之 LC DNA INX444 LALA SEQ ID NO:92 INX444 LALA 之 HC (CDR 加粗、加下劃線 ) SEQ ID NO: 93 INX444 LALA 及 INX444 IgG1EN 之 LC (CDR 加粗、加下劃線 ) INX444 IgG1EN SEQ ID NO: 94 INX444 IgG1EN 之 HC (CDR 加粗、加下劃線 ) SEQ ID NO: 93 INX444 LALA 及 INX444 IgG1EN 之 LC (CDR 加粗、加下劃線 ) SEQ ID NO: 95 人類 MCT1 蛋白 SEQ ID NO: 96 食蟹猴 MCT1 蛋白 SEQ ID NO: 97 HCDR1 其中Xaa
2為纈胺酸或精胺酸，Xaa
7為白胺酸或精胺酸，Xaa
9為天冬醯胺或甘胺酸，Xaa
10為酪胺酸或異白胺酸，Xaa
12為白胺酸或異白胺酸，及Xaa
13為麩醯胺酸、纈胺酸或甘胺酸
SEQ ID NO: 98 HCDR2 其中Xaa
4為精胺酸或絲胺酸，Xaa
9為異白胺酸或麩胺酸，及Xaa
13為麩胺酸或精胺酸
SEQ ID NO: 99 HCDR3 其中Xaa
4為精胺酸或白胺酸，及Xaa
6為組胺酸或精胺酸或酪胺酸，及Xaa
20為脯胺酸或丙胺酸
圖 1展示抗人類MCT1抗體Ab1結合人類MCT1且以濃度依賴性方式增加調節T細胞分化。
圖 2A 、圖 2B 及圖 2C展示抗人類MCT1抗體Ab6並不顯著引發ADCC (3A)或ADCP (3B) Fc介導之效應功能活性或CDC (3C)活性。
圖 3A 及圖 3B展示在細胞培養及親和性捕獲之後抗人類MCT1抗體Ab1 (1A)及INX444抗體(1B)之製備性尺寸排阻層析法(size exclusion chromatography，SEC)層析圖。
圖 4展示比較抗人類MCT1抗體Ab1與INX444 IgG1EN之滯留時間的分析性SEC層析圖之重疊圖。
圖 5展示在GvHD小鼠模型中經抗人類MCT1抗體Ab1處理之小鼠呈現出免於體重減輕。
圖 6展示在GvHD小鼠模型中經抗人類MCT1抗體Ab6處理之小鼠呈現出免於體重減輕。
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Claims (50)
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 30； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 31； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 32； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 33； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含SEQ ID NO: 34，且該VL包含SEQ ID NO: 35。
- 一種抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 36且該LC包含SEQ ID NO: 37。
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 30； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 56、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 68或SEQ ID NO: 72； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 33； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 30； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 99； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 33； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 如請求項4至5中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含SEQ ID NO: 57、65、69或73且該VL包含SEQ ID NO: 35。
- 一種抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 58、66、70或74，且該LC包含SEQ ID NO: 37。
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 30； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 72； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 4； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 如請求項8之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含SEQ ID NO: 73，且該VL包含SEQ ID NO: 8。
- 一種抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 74且該LC包含SEQ ID NO: 10。
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 30； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 68； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 4； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 如請求項11之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含SEQ ID NO: 69，且該VL包含SEQ ID NO: 8。
- 一種抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 70且該LC包含SEQ ID NO: 10。
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO: 80或SEQ ID NO: 84； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 32； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 33； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 97； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 2； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 32； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 33； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 如請求項14至15中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含SEQ ID NO: 41、49、53、61、77、81或85且該VL包含SEQ ID NO: 35。
- 一種抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 42、50、54、62、78、82或86，且該LC包含SEQ ID NO: 37。
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 30； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 44或SEQ ID NO: 88； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 32； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 33； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 一種特異性結合人類MCT1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含重鏈互補決定區HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該VL包含輕鏈互補決定區LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中： 該HCDR1包含SEQ ID NO: 30； 該HCDR2包含SEQ ID NO: 98； 該HCDR3包含SEQ ID NO: 32； 該LCDR1包含SEQ ID NO: 33； 該LCDR2包含SEQ ID NO: 5；及 該LCDR3包含SEQ ID NO: 6。
- 如請求項18至19中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含SEQ ID NO: 45或89，且該VL包含SEQ ID NO: 35。
- 一種抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC包含SEQ ID NO: 46或90，且該LC包含SEQ ID NO: 37。
- 一種抗體或其抗體結合片段，其包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含SEQ ID NO: 7、18、21或27，且該VL包含SEQ ID NO: 8、13或22。
- 如請求項22之抗體或其抗體結合片段，其包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中： a. 該VH包含SEQ ID NO: 7且該VL包含SEQ ID NO: 8； b. 該VH包含SEQ ID NO: 7且該VL包含SEQ ID NO: 13； c. 該VH包含SEQ ID NO: 18且該VL包含SEQ ID NO: 13； d. 該VH包含SEQ ID NO: 21且該VL包含SEQ ID NO: 22；或 e. 該VH包含SEQ ID NO: 27且該VL包含SEQ ID NO: 22。
- 一種抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC及該LC包含以下胺基酸序列： a) 該HC包含SEQ ID NO: 9且該LC包含SEQ ID NO: 10； b) 該HC包含SEQ ID NO: 9且該LC包含SEQ ID NO: 15； c) 該HC包含SEQ ID NO: 19且該LC包含SEQ ID NO: 15； d) 該HC包含SEQ ID NO: 23且該LC包含SEQ ID NO: 24；或 e) 該HC包含SEQ ID NO: 28且該LC包含SEQ ID NO: 24。
- 如請求項1至2、4至5、8至9、11至12、14至15、18至19及22至23中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類IgG1同型。
- 如請求項25之抗體或其抗原結合片段，其中該人類IgG1為效應無效。
- 一種核酸，其包含編碼SEQ ID NO: 9、19、23、28、36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、10、15、24或37之序列。
- 一種載體，其包含如請求項27之核酸。
- 如請求項28之載體，其中該載體包含編碼SEQ ID NO: 9、70或74之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 10之第二核酸序列。
- 如請求項28之載體，其中該載體包含編碼SEQ ID NO: 9或19之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 15之第二核酸序列。
- 如請求項28之載體，其中該載體包含編碼SEQ ID NO: 23或28之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 24之第二核酸序列。
- 如請求項28之載體，其中該載體包含編碼SEQ ID NO: 36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之第一核酸序列及編碼SEQ ID NO: 37之第二核酸序列。
- 一種組合物，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9、70或74之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。
- 一種組合物，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9或19之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 15之核酸序列。
- 一種組合物，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 23或28之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 24之核酸序列。
- 一種組合物，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。
- 一種細胞，其包含如請求項28至36中任一項之載體。
- 一種細胞，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9、70或74之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 10之核酸序列。
- 一種細胞，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 9或19之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 15之核酸序列。
- 一種細胞，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 23或28之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 24之核酸序列。
- 一種細胞，其包含第一載體及第二載體，該第一載體包含編碼SEQ ID NO: 36、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86或90之核酸序列，該第二載體包含編碼SEQ ID NO: 37之核酸序列。
- 如請求項37至41中任一項之細胞，其中該細胞為哺乳動物細胞。
- 一種產生抗體之方法，其包含在使該抗體表現之條件下培養如請求項38至41中任一項之細胞，並自培養基回收經表現之抗體。
- 一種藉由如請求項43之方法所產生的抗體。
- 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至26及44中任一項之抗體及醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑。
- 一種如請求項1至26及44中任一項之抗體或如請求項45之醫藥組合物之用途，其用於製造用以抑制有需要之個體之T效應細胞或B細胞的活性或數量之藥物。
- 一種如請求項1至26及44中任一項之抗體或如請求項45之醫藥組合物之用途，其用於製造用以提高有需要之個體之調節T細胞的活性或數量之藥物。
- 一種如請求項1至26及44中任一項之抗體或如請求項45之醫藥組合物之用途，其用於製造用以治療自體免疫性病況的藥物。
- 如請求項48之用途，其中該自體免疫性病況為全身性紅斑狼瘡、發炎性腸病、類風濕性關節炎、牛皮癬或多發性硬化症。
- 一種如請求項1至26及44中任一項之抗體或如請求項45之醫藥組合物之用途，其用於製造用以治療過敏性病況、發炎性病況、代謝病症、移植或細胞療法接受體、MCT1陽性癌症、運動誘發之高胰島素症(EIHI)病況或多囊性腎病(ADPKD)的藥物。
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