TW202330581A - 含有il-21r突變蛋白之免疫細胞介素 - Google Patents

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Abstract

本文提供一種免疫細胞介素，其包含(i)對靶蛋白具有特異性之抗原結合蛋白(ABP)；(ii)IL-21域；及(iii) IL-21Rα突變蛋白，其中該IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比具有降低的對該IL-21域的結合親和力。進一步提供包括使用該免疫細胞介素選擇性活化目標細胞上之IL-21Rα，藉此增強免疫反應或治療癌症之方法。

Description

含有IL-21R突變蛋白之免疫細胞介素
在過去十年中，由抗PD-1或抗CTLA-4抗體代表之免疫檢查點阻斷(ICB)在癌症免疫療法中取得了相當大的成功，其中ICB再程式化患者之免疫系統以對抗癌症。儘管此等類型的療法具有顯著的效果，但極少患者自ICB受益，因為大部分患者未能產生持久的免疫反應且阻止癌症生長的進展。活化T細胞之長效及持久效應功能對於藉由T細胞介導之免疫反應自吾等體內清除癌細胞係至關重要的。在慢性感染及癌症中，大部分曝露於持久性抗原隨後持續的T細胞受體刺激的T細胞被耗竭。腫瘤微環境中之耗竭性T細胞顯示如IFN-γ及TNF-α之細胞介素釋放功能障礙，此為其主要的效應功能，及增殖能力的喪失。耗竭性T細胞與效應及記憶T細胞之區別在於在耗竭性T細胞表面上諸如PD-1、TIM-3或CTLA-4之共同抑制受體的高表現量。完全分化的耗竭性T細胞的另一個顯著特徵為表觀遺傳穩定性，此可能為對ICB治療產生抗性的主要原因。
Kristen E. Pauken進行之最近的一項研究報導，耗竭性T細胞基因體之表觀遺傳命運不靈活阻礙了預計由ICB治療觸發之耗竭性T細胞向記憶T細胞的轉變。此表明，將耗竭性T細胞表觀遺傳再程式化為具有自我更新及持久效應功能潛力的記憶T細胞，可能係解決當前癌症免疫治療限制的解決方案。
表觀遺傳再程式化伴隨諸如組蛋白甲基轉移酶(HMT)、組蛋白乙醯基轉移酶(HAT)或DNA甲基轉移酶(DNMT)之寫入酶的表現量的變化，所有此等酶都可改變決定基因表現或抑制的染色質狀態。眾所周知，免疫細胞中細胞介素觸發之信號調節寫入酶的表現量或活性，決定了免疫細胞的分化命運。在所有類型的細胞介素中，已知γ鏈細胞介素，即IL-2、IL-4、IL-7、IL-9及IL-21，在效應T細胞之活化或記憶T細胞之分化中具有重要作用，表明它們可能為抗癌免疫治療的潛在候選者。此等細胞介素可藉由改變數種負責表觀遺傳修飾的轉錄因子的表現量，導致染色體可及性及染色質結構的變化。舉例而言，已知T細胞中表現之轉錄因子TCF-1具有內在的HDAC (組蛋白脫乙醯基酶)活性，且藉由改變染色質的可及性來調節基因表現。據報導，在活體外培養或活體內實驗中，可藉由如IL-7、IL-15或IL-21之細胞介素之處理來誘導T細胞中TCF-1的表現。最近，基於單細胞定序分析之譜系追蹤闡明，TCF-1係祖細胞耗竭的CD4+或CD8+ T細胞(TPEX)對ICB治療有反應的關鍵生物標記。此意謂操縱由T細胞中細胞介素誘導之如TCF-1之轉錄因子的表現可能為癌症免疫療法的另一種選擇。數十年來，人們一直在嘗試將此等細胞介素用於癌症免疫療法。
然而，由於嚴重的劑量限制性毒性，導致患者死亡，臨床效用很小。一般而言，細胞介素受體之表現遍佈全身，且高劑量細胞介素之治療與全身毒性有關。因此，需要增強細胞介素之特異性以增加全身投與的耐受劑量以解決毒性相關問題。
本發明提供一種對目標細胞具有特異性之新穎的免疫細胞介素。免疫細胞介素藉由包含與靶蛋白特異性之抗原結合蛋白(ABP)融合之細胞介素分子(IL-21)及加帽部分，干擾細胞介素分子與非目標細胞的非特異性結合，從而對目標細胞具有特異性活性。作為加帽部分，本發明提供與野生型IL-21Rα相比具有降低的對IL-21域的結合親和力的IL-21Rα突變蛋白。
此免疫細胞介素藉由其ABP與在某種細胞類型(例如免疫細胞)表面上表現之靶蛋白結合，導致細胞介素在目標細胞附近積聚。若免疫細胞介素之細胞介素在到達其目標細胞之前隨機結合非目標細胞，則高劑量的細胞介素可誘發多種副作用，且其可導致免疫細胞介素之治療指數狹窄。為避免此問題，IL-21Rα之細胞外域用作加帽部分，以干擾IL-21與非目標細胞上的內源性IL-21Rα (例如野生型IL21Rα (IL21RαWT))的結合。由於非目標細胞缺乏ABP可識別之靶蛋白，因此免疫細胞介素不會靶向非目標細胞，且IL-21仍被加帽部分加帽。一旦帶有加帽IL-21之免疫細胞介素被遞送至目標細胞，加帽部分，即IL-21Rα之細胞外域，藉由與目標細胞之內源性IL21Rα (例如IL21RαWT)競爭而被剝離，此可使IL-21與內源性IL21Rα結合且將信號轉導至目標細胞。
由於IL-21與IL-21Rα之細胞外域之高結合親和力(約K D=50pmol)可干擾免疫細胞介素之IL-21Rα之細胞外域與目標細胞之內源性IL-21Rα之間的競爭，免疫細胞介素中IL-21Rα之細胞外域突變(IL-21Rα突變蛋白)為與IL-21具有較低的結合親和力。免疫細胞介素之ABP可將包含IL-21及IL21Rα突變蛋白之複合物引導至特定的目標細胞，且引至目標細胞之IL-21可藉由免疫細胞介素之IL-21Rα突變蛋白與目標細胞表面上之內源性IL-21受體之間的競爭結合目標細胞且轉導信號至目標細胞。
因此，本發明提供：一種免疫細胞介素，其包含： a. 對靶蛋白具有特異性之抗原結合蛋白(ABP)；  b. IL-21域；及  c. IL-21Rα突變蛋白，  其中該IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比具有降低的對該IL-21域的結合親和力。
在一些實施例中，靶蛋白係免疫檢查點分子。在一些實施例中，靶蛋白係PD-1、PD-L1、TIGIT、LAG-3、CTLA-4、TIM-3、CD39、CD38、CD73、CD36、CD25、CD47、CD24、CD20、SIPRα、CD40或CD20。
在一些實施例中，ABP係針對靶蛋白之抗體。在一些實施例中，ABP係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，ABP係抗PD-1抗體。在一些實施例中，抗PD-1抗體係IgG。
在一些實施例中，ABP包含選自人類IgG1 Fc片段、人類IgG2 Fc片段、人類IgG3 Fc片段及人類IgG4 Fc片段之Fc片段。在一些實施例中，Fc片段係人類IgG4 Fc片段。在一些實施例中，Fc片段包含選自SEQ ID NO: 16、185至190之序列。
在一些實施例中，ABP包含具有兩個Fc部分之Fc片段。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白連接至兩個Fc部分之第一個，且IL-21域連接至兩個Fc部分之第二個。在一些實施例中，IL-21域及IL-21Rα突變蛋白分別藉由不可裂解肽連接子或無肽連接子之情況下連接。在一些實施例中，不可裂解肽連接子係具有SEQ ID NO: 17序列之G4S連接子。在一些實施例中，不可裂解肽連接子具有選自SEQ ID NO: 212至224之序列。
在一些實施例中，ABP選自納武單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、西米普利單抗(cemiplimab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、多塔利單抗(dostarlimab)、度伐魯單抗(durvalumab)、阿維魯單抗(avelumab)、伊派利單抗(ipilimumab)、曲美木單抗(tremelimumab)、替瑞利尤單抗(tiragolumab)、瑞拉利單抗(relatlimab)或其功能變異體。在一些實施例中，ABP包含納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗或曲美木單抗之V HCDR1、V HCDR2、V HCDR3、V LCDR1、V LCDR2及V LCDR3序列。在一些實施例中，ABP包含納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗或曲美木單抗之重鏈及/或輕鏈。在一些實施例中，ABP包含納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗或曲美木單抗之重鏈可變域及/或輕鏈可變域。在一些實施例中，重鏈可變域及/或輕鏈域連接至人類IgG1 Fc片段、人類IgG2 Fc片段、人類IgG3 Fc片段或人類IgG4 Fc片段。在一些實施例中，Fc片段包括用於杵-臼(knob-in-hole)相互作用之突變，
在一些實施例中，ABP包含： a. 具有SEQ ID NO: 1之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 2之序列之輕鏈；  b. 具有SEQ ID NO: 3之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 4之序列之輕鏈；  c. 具有SEQ ID NO: 5之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 6之序列之輕鏈；  d. 具有SEQ ID NO: 7之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 8之序列之輕鏈；  e. 具有SEQ ID NO: 9之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 10之序列之輕鏈；  f.  具有SEQ ID NO: 11之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之輕鏈；  g. 具有SEQ ID NO: 13之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 14之序列之輕鏈；  h. 具有SEQ ID NO: 151之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 152之序列之輕鏈；  i.  具有SEQ ID NO: 153之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 154之序列之輕鏈；  j.  具有SEQ ID NO: 225之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 226之序列之輕鏈；或  k. 具有SEQ ID NO: 227之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 228之序列之輕鏈。
在一些實施例中，ABP包含： a. 具有SEQ ID NO: 1之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 2之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 1中C端之Lys (K)；  b. 具有SEQ ID NO: 3之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 4之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 3中C端之Lys (K)；  c. 具有SEQ ID NO: 5之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 6之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 5中C端之Lys (K)；  d. 具有SEQ ID NO: 7之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 8之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 7中C端之Lys (K)；  e. 具有SEQ ID NO: 9之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 10之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 9中C端之Lys (K)；  f.  具有SEQ ID NO: 11之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 12之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 11中C端之Lys (K)；  g. 具有SEQ ID NO: 13之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 14之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 13中C端之Lys (K)；  h. 具有SEQ ID NO: 151之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 152之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 151中C端之Lys (K)；  i.  具有SEQ ID NO: 153之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 154之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 153中C端之Lys (K)；  j.  具有SEQ ID NO: 225之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 226之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID 225中C端之Lys (K)；或  k. 具有SEQ ID NO: 227之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 228之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID 227中C端之Lys (K)。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少10倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少10至10,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少100倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少10至5000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少100至5000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少100至1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少500至1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約500倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約100倍。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)具有至少95%序列一致性之序列。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)具有至少96%、97%、98%或99%序列一致性之序列。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)相比包含至少一個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)相比包含一至五個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)相比包含一個胺基酸取代。在一些實施例中，該一或多個胺基酸取代係在選自野生型IL-21Rα序列之Y10、Q35、Y36、E38、L39、F67、H68、M70、A71、D72、D73、I74、L94、P126、Y129、M130、K134、S189、S190及Y191的一或多個胺基酸位置。在一些實施例中，該一或多個胺基酸取代係在選自野生型IL-21Rα序列之Y36、E38、L39、M70、A71、D72、D73、I74及L94的一或多個胺基酸位置。
在一些實施例中，胺基酸取代係選自： a. Y10A  b. Q35K、Q35R或Q35Y；  c. Y36A、Y36C、Y36E、Y36G、Y36H、Y36I、Y36K、Y36M、Y36N、Y36P、Y36Q、Y36R、Y36S、Y36T或Y36V；  d. E38A、E38C、E38K、E38R或E38Y；  e. L39A、L39C、L39E、L39F、L39H、L39K、L39R、L39W或L39Y；  f.  F67A；  g. H68A；  h. M70C、M70D、M70F、M70G、M70H、M70K、M70L、M70N、M70Q、M70R、M70S、M70T、M70V、M70W或M70Y；  i.  A71E、A71F、A71I、A71L、A71Q、A71R、A71W或A71Y；  j.  D72A、D72C、D72E、D72F、D72G、D72H、D72I、D72K、D72L、D72M、D72Q、D72R、D72W或D72Y；  k. D73C、D73A、D73E、D73H、D73K、D73R、D73W或D73Y；  l.  I74A、I74H、I74K、I74R或I74W；  m.   L94A、L94F、L94K、L94Q、L94R或L94Y；  n. P126A；  o. Y129A；  p. M130A；  q. K134A；  r.  S189A；  s. S190A；及  t.  Y191A。
在一些實施例中，胺基酸取代係選自： a. Y36C、Y36E、Y36G、Y36H、Y36I、Y36K、Y36M、Y36N、Y36P、Y36Q、Y36R、Y36S、Y36T或Y36V；  b. E38C、E38R或E38Y；  c. L39A、L39C、L39E、L39F、L39H、L39K、L39R、L39W或L39Y；  d. M70C、M70D、M70F、M70G、M70H、M70K、M70L、M70N、M70Q、M70R、M70S、M70T、M70V、M70W或M70Y；  e. A71E、A71F、A71I、A71L、A71Q、A71R、A71W或A71Y；  f.  D72A、D72C、D72E、D72F、D72G、D72H、D72I、D72K、D72L、D72M、D72Q、D72R、D72W或D72Y；  g. D73A  h. I74R，或I74W；及  i.  L94A、L94F、L94K、L94Q、L94R或L94Y。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含第一鏈，其自N端至C端包含： a. 具有選自SEQ ID NO: 16及185至190之任一個序列之人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc片段；及  b. 具有選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列的IL-21Rα突變蛋白。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含第一鏈，其自N端至C端包含： a. 具有選自SEQ ID NO: 16及185至190之任一個序列之人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc片段；  b. 肽連接子；及  c. 具有選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列的IL-21Rα突變蛋白。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含第一鏈，其自N端至C端包含： a. 包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225、227之序列或其變異體之ABP的重鏈；及  b.  IL-21Rα突變蛋白。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含第一鏈，其自N端至C端包含： a. 包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225、227之序列或其變異體之ABP的重鏈；  b. 肽連接子；及  c.  IL-21Rα突變蛋白。
在一些實施例中，ABP之重鏈包含用於杵-臼相互作用之杵變異體或臼變異體，其中杵變異體及臼變異體包含用於杵-臼相互作用之一或多個修飾。
在一些實施例中，ABP之重鏈包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列之變異體，其中該變異體在序列C端具有Lys (K)之缺失。
在一些實施例中，ABP之重鏈包含SEQ ID NO: 103之序列。
在一些實施例中，肽連接子係具有SEQ ID NO: 17序列之G4S連接子。在一些實施例中，肽連接子具有選自SEQ ID NO: 212至224之序列。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。在一些實施例中，第一鏈具有選自SEQ ID NO: 104至150及192至209之序列。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含第二鏈，其包含ABP之重鏈、肽連接子及IL-21域。在一些實施例中，ABP之重鏈包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列。在一些實施例中，ABP之重鏈包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列之變異體。變異體在選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列之C端包含離胺酸(Lys或K)之缺失。在一些實施例中，ABP之重鏈可包含用於杵-臼相互作用之杵變異體或臼變異體。在一些實施例中，肽連接子係選自SEQ ID NO: 17及SEQ ID NO: 212至224。在一些實施例中，第二鏈具有SEQ ID NO: 101之序列。在一些實施例中，IL-21域係人類IL-21或其功能變異體。在一些實施例中，IL-21域具有SEQ ID NO: 100 (人類IL-21)之序列。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含ABP之第一重鏈及第二重鏈。在一些實施例中，第一重鏈包含杵突變且第二重鏈包含臼突變，用於杵-臼相互作用。在一些實施例中，第一重鏈包含臼突變且第二重鏈包含杵突變，用於杵-臼相互作用。在一些實施例中，重鏈係全長重鏈或其片段。在一些實施例中，臼突變及杵突變包含於各重鏈之Fc部分中。在一些實施例中，臼突變及杵突變包含於各重鏈之CH3域中。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含具有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10、12、14、102、152、154、226及228之序列之輕鏈。
在一些實施例中，IL-21域係人類IL-21或其功能變異體。在一些實施例中，IL-21域具有SEQ ID NO: 100 (人類IL-21)之序列。
在另一態樣中，本發明提供一或多種編碼本文提供之免疫細胞介素之聚核苷酸。
在一些實施例中，該一或多種聚核苷酸包含： a. 編碼包含ABP之重鏈及IL-21Rα突變蛋白之第一鏈的第一聚核苷酸片段；  b. 編碼包含ABP之重鏈及IL-21域之第二鏈的第二聚核苷酸片段；及  c. 編碼ABP之輕鏈之第三聚核苷酸片段。
在一些實施例中，第一聚核苷酸片段、第二聚核苷酸片段及第三聚核苷酸片段在單個聚核苷酸分子中。在一些實施例中，第一聚核苷酸片段、第二聚核苷酸片段及第三聚核苷酸片段在多個聚核苷酸分子中。在一些實施例中，第一聚核苷酸片段、第二聚核苷酸片段及第三聚核苷酸片段單獨存在於獨立的聚核苷酸分子中。
在另一態樣中，本發明提供一或多種包含本文所述之一或多種聚核苷酸之載體。
在又一態樣中，本發明提供一種宿主細胞，其包含本文所述之一或多種聚核苷酸或一或多種載體。在一些實施例中，宿主細胞包含本文提供之免疫細胞介素。在一些實施例中，宿主細胞係免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞係T細胞。
宿主細胞可為真核生物細胞，例如諸如酵母之真菌細胞。宿主細胞可為哺乳動物細胞(其可為細胞培養物中之細胞，或存在於組織或器官中之細胞)。在一些實施例中，宿主細胞係人類、小鼠、大鼠、兔、牛或狗(或例如任何其他野生、家畜/馴養動物)細胞。在一些實施例中，宿主細胞係穩定細胞株細胞、或初生細胞、貼壁或懸浮細胞。作為實例，宿主細胞可為巨噬細胞、骨肉瘤、或CHO、BHK (幼倉鼠腎)、波韋氏(Bowes)人類黑色素瘤細胞、911、AT1080、A549、HEK293或希拉細胞株細胞或小鼠初生細胞，但不限於此。在一些實施例中，宿主細胞係細菌細胞，諸如大腸桿菌。
真核生物細胞可為植物細胞(例如單子葉或雙子葉植物細胞；通常為實驗、作物及/或觀賞植物細胞，例如芥菜屬、玉米)；魚(例如斑馬魚；鮭魚)、鳥類(例如雞或其他家養鳥類)、昆蟲(例如果蠅；蜜蜂)、線蟲(Nematoidia)或原生生物(例如瘧原蟲屬(Plasmodium spp)或棘阿米巴原蟲屬(Acantamoeba spp))細胞。
在一個態樣中，本發明提供一種增強個體之免疫反應之方法，其包含向個體投與本文所述之免疫細胞介素或本文所述之宿主細胞。在一些實施例中，個體係癌症患者。
在一個態樣中，本發明提供一種選擇性活化目標細胞上之IL-21Rα之方法，其包含：將本發明之免疫細胞介素遞送至目標細胞。在一些實施例中，目標細胞係免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞係T細胞。
本發明之另一態樣提供與野生型IL-21Rα相比具有降低的對IL-21域的結合親和力的IL-21Rα突變蛋白。
在一些實施例中，野生型IL-21Rα包含SEQ ID NO: 15之序列。在一些實施例中，IL-21域係人類IL-21或其功能變異體。在一些實施例中，IL-21域具有SEQ ID NO: 100之序列。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少10倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少10至10,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少100倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少10至5000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少100至5000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少100至1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少500至1000倍。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約500倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約100倍。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)具有至少95%序列一致性之序列。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)具有至少96%、97%、98%或99%序列一致性之序列。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)相比包含至少一個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)相比包含一至五個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15 (IL-21Rα WT)相比具有一個胺基酸取代。
在一些實施例中，該一或多個胺基酸取代係在選自野生型IL-21Rα序列之Y10、Q35、Y36、E38、L39、F67、H68、M70、A71、D72、D73、I74、L94、P126、Y129、M130、K134、S189、S190及Y191的一或多個胺基酸位置。在一些實施例中，該一或多個胺基酸取代係在選自野生型IL-21Rα序列之Y36、E38、L39、M70、A71、D72、D73、I74及L94的一或多個胺基酸位置。
在一些實施例中，胺基酸取代係選自： a. Y10A  b. Q35K、Q35R或Q35Y；  c. Y36A、Y36C、Y36E、Y36G、Y36H、Y36I、Y36K、Y36M、Y36N、Y36P、Y36Q、Y36R、Y36S、Y36T或Y36V；  d. E38A、E38C、E38K、E38R或E38Y；  e. L39A、L39C、L39E、L39F、L39H、L39K、L39R、L39W或L39Y；  f.  F67A；  g. H68A；  h. M70C、M70D、M70F、M70G、M70H、M70K、M70L、M70N、M70Q、M70R、M70S、M70T、M70V、M70W或M70Y；  i.  A71E、A71F、A71I、A71L、A71Q、A71R、A71W或A71Y；  j.  D72A、D72C、D72E、D72F、D72G、D72H、D72I、D72K、D72L、D72M、D72Q、D72R、D72W或D72Y；  k. D73C、D73A、D73E、D73H、D73K、D73R、D73W或D73Y；  l.  I74A、I74H、I74K、I74R或I74W；  m.   L94A、L94F、L94K、L94Q、L94R或L94Y；  n. P126A；  o. Y129A；  p. M130A；  q. K134A；  r.  S189A；  s. S190A；及  t.  Y191A。
在一些實施例中，胺基酸取代係選自： a. Y36C、Y36E、Y36G、Y36H、Y36I、Y36K、Y36M、Y36N、Y36P、Y36Q、Y36R、Y36S、Y36T或Y36V；  b. E38C、E38R或E38Y；  c. L39A、L39C、L39E、L39F、L39H、L39K、L39R、L39W或L39Y；  d. M70C、M70D、M70F、M70G、M70H、M70K、M70L、M70N、M70Q、M70R、M70S、M70T、M70V、M70W或M70Y；  e. A71E、A71F、A71I、A71L、A71Q、A71R、A71W或A71Y；  f.  D72A、D72C、D72E、D72F、D72G、D72H、D72I、D72K、D72L、D72M、D72Q、D72R、D72W或D72Y；  g. D73A  h. I74R，或I74W；及  i.  L94A、L94F、L94K、L94Q、L94R或L94Y。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。
在另一態樣中，本發明提供一種聚核苷酸，其包含本文所述之IL-21Rα突變蛋白之編碼序列。在又一態樣中，本發明提供一種載體，其包含該聚核苷酸。在一些實施例中，該載體係病毒載體。在一些實施例中，該載體係重組AAV或慢病毒載體。
本發明亦提供一種宿主細胞，其包含本文所述之IL-21 Rα突變蛋白、聚核苷酸或載體。
1. 相關申請案之交叉引用
本申請案主張2021年9月30日申請之美國臨時專利申請案第63/250,911號及2022年6月10日申請之第63/351,298號之優先權及權利，其全部內容以引用之方式併入本文中。 2. 序列表
本申請案含有序列表，該序列表具有[]序列，其已經由[]提交且以全文引用之方式併入本文中。2022年[]創建之該[]複本被命名為[]且位元組大小為[]。
6.1. 定義如本文所用之術語「 IL-21Rα 突變蛋白 (IL-21Rα mutein)」、「 IL-21R α 突變蛋白 (IL-21RαMutein)」、「 IL21R α 突變蛋白 (IL21R α mutein)」或「 IL21R α 突變蛋白 (IL21R α Mutein)」係指具有一或多個修飾之IL-21Rα之胞外域。修飾可為胺基酸取代、插入、缺失或其他突變。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型人類IL-21Rα或其胞外域相比包括一或多個生物修飾、化學修飾或兩者。在一些實施例中，野生型人類IL-21Rα之胞外域包含SEQ ID NO: 15之序列。
如本文所用之術語「 醫藥學上可接受之載劑」係指不減弱根據本發明之免疫細胞介素之生物活性及特性的載劑或稀釋劑。作為調配為液態溶液之組合物中之醫藥學上可接受之載劑，可使用無菌及生物相容的載劑。醫藥學上可接受之載劑可為生理鹽水、無菌水、林格氏(Ringer's)溶液、緩衝生理鹽水、白蛋白注射溶液、葡萄糖溶液、麥芽糊精溶液、丙三醇、乙醇或其兩者或更多者之混合物。另外，本發明之組合物必要時可包含其他習知添加劑，包括抗氧化劑、緩衝劑及抑菌劑。此外，本發明之組合物可藉助於稀釋劑、分散劑、界面活性劑、黏合劑及潤滑劑調配為諸如水溶液、懸浮液或乳液之可注射形式。另外，根據本發明之組合物可呈丸劑、膠囊、粒劑或錠劑之形式經調配。可使用此項技術中已知之其他載劑，例如文獻[Remington's Pharmaceutical Sciences (E. W. Martin)]中所描述。
術語「 抗原結合蛋白 (ABP)」係指包含一或多個特異性結合抗原或抗原決定基之抗原結合域的蛋白質。在一些實施例中，抗原結合域以與天然存在之抗體類似之特異性及親和力結合抗原或抗原決定基。在一些實施例中，ABP包含抗體。在一些實施例中，ABP係由抗體組成。在一些實施例中，ABP基本上由抗體組成。在一些實施例中，ABP包含替代骨架。在一些實施例中，ABP係由替代骨架組成。在一些實施例中，ABP基本上由替代骨架組成。在一些實施例中，ABP包含抗體片段。在一些實施例中，ABP係由抗體片段組成。在一些實施例中，ABP基本上由抗體片段組成。在一些實施例中，ABP結合靶蛋白之細胞外域。在某些實施例中，本文提供之ABP結合至靶蛋白之抗原決定基，該抗原決定基在不同物種之間或當中係保守的。
在一些實施例中，ABP係抗體且該抗體可為單株抗體、多株抗體、多特異性抗體、雙重特異性或雙特異性抗體、抗個體基因型抗體或雙功能雜交抗體。在一些實施例中，ABP包含一或多個重鏈或其片段。在一些實施例中，ABP包含一或多個輕鏈或其片段。在一些實施例中，抗體包含兩個重鏈及兩個輕鏈或其片段。在一些實施例中，重鏈之片段包含重鏈之Fc片段、CH3域或CH2域。
術語「 替代骨架」係指其中一或多個區可經多樣化以產生一或多個特異性結合抗原或抗原決定基之抗原結合域的分子。在一些實施例中，抗原結合域以與天然存在之抗體類似之特異性及親和力結合抗原或抗原決定基。例示性替代骨架包括衍生自以下之彼等骨架：纖網蛋白(例如Adnectins TM)、β-三明治(β-sandwich)(例如iMab)、脂質運載蛋白(例如Anticalins ®)、EETI-II/AGRP、BPTI/LACI-D1/ITI-D2 (例如Kunitz域)、 硫氧還原蛋白肽適體、蛋白A (例如Affibody ®)、錨蛋白重複(例如DARPin)、雙功能抗體、γ-B-晶狀體球蛋白/泛蛋白(例如Affilin)、CTLD 3(例如Tetranectin)、Fynomer及LDLR-A模組(例如Avimer)。替代骨架之額外資訊將提供於Binz等人, Nat. Biotechnol., 2005 23:1257-1268；Skerra, Current Opin. In Biotech., 2007 18:295-304；及Silacci等人, J. Biol. Chem., 2014, 289:14392-14398中；其中之每一者以全文引用的方式併入本文中。替代骨架係一種ABP。
術語「 抗體片段」包含完整抗體之一部分，諸如完整抗體之抗原結合或可變區。抗體片段包括例如Fv片段、抗原結合片段(Fab)、F(ab') 2片段、Fab'片段、單鏈可變片段(scFv、sFv)、scFv-Fc片段。二硫鍵鍵聯之Fv片段，及單域抗體(sdAb)。
術語「 抗原結合域」意謂ABP能夠特異性結合於抗原或抗原決定基之部分。
術語「 Fc 片段」意謂免疫球蛋白重鏈之C端區，在天然存在之抗體中，其與Fc受體及補體系統之某些蛋白質相互作用。不同免疫球蛋白之Fc區之結構及其中所含有的糖基化位點為此項技術中已知的。參見Schroeder及Cavacini, J. Allergy Clin. Immunol., 2010, 125: S41-52，其以全文引用的方式併入本文中。Fc片段可包含兩個Fc部分。Fc部分可包含重鏈之CH2-CH3域。在一些實施例中，ABP包含具有兩個Fc部分之Fc片段，其中各Fc部分獨立地選自IgG子類，例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。在一些實施例中，ABP包含兩個IgG1之Fc部分。在一些實施例中，ABP包含兩個IgG4之Fc部分。在一些實施例中，ABP包含具有兩個Fc部分之Fc片段，其中第一個Fc部分係IgG1之Fc部分且第二個Fc部分係IgG4之Fc部分。在一些實施例中，ABP包含具有兩個Fc部分之Fc片段，其中第一個Fc部分包含IgG1之C H3且第二個Fc部分包含IgG4之C H3。
Fc區可為天然存在之Fc區，或在本發明中別處所描述經修飾之Fc區。舉例而言，Fc部分可為用於杵-臼相互作用之杵變異體或臼變異體。Fc片段可包含免疫球蛋白重鏈之C端區之杵變異體及臼變異體。
在一些情況下，Fc片段經工程改造以引入突變以降低免疫球蛋白之效應功能，此藉由降低對FcγR之結合親和力來最小化ADCC。彼等突變係所謂的人類IgG1類型LALA突變(L234A/L235A)及SPLE突變(S228P/L235E)。(參見例如Hezareh等人 J. Virol. (2001) 75(24): 12161-8)。在其他實施例中，LALA或SPLE突變存在於具有杵-進入-臼(knobs-into-holes)突變之Fc片段中。
Fc片段可包含M252Y/S254T/T256E (「YTE」)突變。YTE突變允許同時調節IgG 1的血清半衰期、組織分佈及活性(參見DalFAcqua等人, J Biol Chem. (2006) 281:23514-24；及Robbie等人, Antimicr oh Agents Chemother. (2013) 57(12):6147-53)。在其他實施例中，YTE突變存在於具有杵-進入-臼突變之抗體中。
V H及V L區可進一步再分成高變區(region of hypervariability) (「高變區(hypervariable region；HVR)」；亦稱為「互補決定區」(CDR))，其中穿插有較保守區。較保守區被稱作構架區(FR)。各V H及V L通常包含三個CDR及四個FR，其按如下次序(自N端至C端)排列：FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4。CDR涉及抗原結合，且影響抗體之抗原特異性及結合親和力。參見Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest第5版. (1991) Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD，其以全文引用的方式併入本文中。
來自任何脊椎動物物種之輕鏈可基於其恆定域之序列而歸為被稱為卡帕(κ)及拉姆達(λ)之兩種類型中之一種。
來自任何脊椎動物物種之重鏈可歸為五種不同類別(或同型)中之一種：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。此等類別亦分別被稱為α、δ、ε、γ及µ。IgG及IgA類別基於序列及功能差異而進一步分成子類別。人類表現以下子類別：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。
CDR之胺基酸序列邊界可藉由熟習此項技術者使用多個已知編號方案中之任一者測定，包括Kabat等人, 上文(「Kabat」編號方案)；Al-Lazikani等人, 1997, J. Mol. Biol., 273:927-948 (「Chothia」編號方案)；MacCallum等人, 1996, J. Mol. Biol.262:732-745 (「Contact」編號方案)；Lefranc等人, Dev. Comp. Immunol., 2003, 27:55-77 (「IMGT」編號方案)；及Honegge及Plückthun, J. Mol. Biol., 2001, 309:657-70 (「Aho」編號方案)所描述之彼等者；該等文獻中之每一者以全文引用的方式併入本文中。
表1提供CDR1-L (V L之CDR1)、CDR2-L (V L之CDR2)、CDR3-L (V L之CDR3)、CDR1-H (V H之CDR1)、CDR2-H (V H之CDR2)及CDR3-H (V H之CDR3)之例示性位置，藉由Kabat及Chothia方案鑑別。對於CDR1-H，殘基編號使用Kabat及Chothia編號方案兩者來提供。
CDR可例如使用諸如Abnum之抗體編號軟體指配，該軟體在www.bioinf.org.uk/abs/abnum/中可用，且描述於Abhinandan及Martin, Immunology, 2008, 45:3832-3839或bioinf.org.uk - UCL之Andrew C.R. Martin教授小組中，其以全文引用的方式併入本文中。
表1根據Kabat及Chothia編號方案之例示性CDR殘基。
CDR Kabat Chothia
CDR1-L 24-34 24-34
CDR2-L 50-56 50-56
CDR3-L 89-97 89-97
CDR1-H (Kabat 編號) 31-35B 26-32或34*
CDR1-H (Chothia 編號) 31-35 26-32
CDR2-H 50-65 52-56
CDR3-H 95-102 95-102
* 當使用Kabat編號規約編號時，CDR1-H之C端在32與34之間變化，視CDR之長度而定。
術語「治療(treating)」(及其變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treatment)」)係指試圖改變有需要之個體之疾病或病狀之天然病程的臨床干預。可為了預防及在臨床病理學過程期間進行治療。治療之合乎需要作用包括預防疾病之發生或復發，減輕症狀，減弱疾病之任何直接或間接病理學結果，預防轉移，降低疾病進展速率，改進或緩和疾病病狀，及緩解或改善預後。
6.2. 其他定則解釋本文所列舉之範圍應理解為範圍內所有值之簡寫，包括所述端點。舉例而言，1至50之範圍應理解為包括來自以下組成之群的任何數字、數字組合或子範圍：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49及50。
除非另外規定，否則提及具有一或多個立體中心之化合物意指其各立體異構體，以及立體異構體之所有組合。
6.3. 實驗觀測結果之概述本發明提供與IL21RαWT相比具有降低的對IL-21的親和力的IL21Rα突變蛋白，及包含IL21Rα突變蛋白作為加帽部分的免疫細胞介素。
作為一個實例，本發明提供一種免疫細胞介素(αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21)，其包含靶向PD-1之ABP。免疫細胞介素可靶向諸如CD4+或CD8 T+細胞之PD-1表現細胞。免疫細胞介素包含四個多肽鏈-兩個相同輕鏈及兩個不同重鏈-藉由杵-進入-臼(KiH)相互作用接合以形成異二聚體。在免疫細胞介素中，兩個重鏈中之一者與IL-21融合，且另一個與加帽部分融合，該加帽部分為IL-21Rα之胞外域之突變(IL-21Rα突變蛋白)。IL-21及加帽部分藉由不可裂解及可撓性的多肽連接子與重鏈融合。
申請人在CHO細胞中表現免疫細胞介素且將其純化，純度≥ 95%。當藉由質譜法量測時，免疫細胞介素在去糖基化形式下之分子量為185kDa，在糖基化形式下之分子量為195kDa。申請人亦確認，超過90%之分子以αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21之異二聚體形式存在。申請人使用PD-L1/TCR活化劑-CHO重組細胞株(BPS bioscience)進一步量測抗PD-1抗體之活性，該細胞株可藉由NFAT反應元件驅動之螢光素酶報導系統量測TCR信號傳導的強度。實驗表明IL21Rα突變蛋白/IL21與IgG之融合對抗PD-1抗體之活性影響不大。此外，SPR分析表明，IL-21WT或IL21Rα突變蛋白及IL-21與抗PD-1抗體之融合不影響對PD-1之親和力(圖7A至7Q)。
申請人生成66種包含抗PD-1 IgG、IL-21及IL-21Rα之多種突變蛋白中之一者的候選免疫細胞介素。隨後，使用高通量HTRF分析，申請人測試αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21之應用是否增加PD-1(+) T細胞中STAT3之磷酸化。基於HTRF分析之結果，選擇六種αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21候選。與對照αPD-1IL21RαWT/IL21處理相比，所選之候選物在較低濃度下顯示出最大效能，並選擇性地作用於PD-1(+)細胞。與對照免疫細胞介素(αPD-1IL21RαWT/IL21)相比，它們在較低濃度下顯示出優良效能。
可在人類化PDX小鼠模型中測試所選之候選物的抗癌功效。當αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21與PD-1(+) T細胞上表現之PD-1結合時，IL21Rα突變蛋白與人類IL-21之結合親和力降低可使免疫細胞介素之IL-21與內源性IL21Rα (例如IL21RαWT)競爭且與其結合，且導致PD-1(+) T細胞的活力，以產生持久的抗癌免疫力。
總之，本發明提供一種免疫細胞介素，其可專門將IL-21遞送至PD-1 (+)T細胞且重振T細胞以獲得記憶樣表型以實現持久的抗癌免疫力。
6.4. IL-21Rα 突變蛋白在一個態樣中，本發明提供與野生型IL-21Rα相比具有降低的對IL-21域的結合親和力的IL-21Rα突變蛋白。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白在IL-21Rα針對IL-21之結合位點具有突變。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白在IL-21Rα針對IL-21之結合位點具有一或多個胺基酸取代、插入或缺失。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白特異性結合於IL-21域，但具有降低的親和力。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少10倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少50倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少100倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少200倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少300倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少500倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少至少5000倍。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少10至10,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少10至5,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少100至5,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少10至1,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少100至1,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少500至1,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少500至2,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少1,000至2,000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少2,000至5000倍。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約5000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約2500倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約1000倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約500倍。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對IL-21域之結合親和力減少約100倍。
在一些實施例中，野生型IL-21Rα係人類IL-21Rα之胞外域。在一些實施例中，野生型IL-21Rα具有SEQ ID NO: 15之序列。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15具有至少95%序列一致性之序列。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15具有至少96%序列一致性之序列。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15具有至少97%序列一致性之序列。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15具有至少98%序列一致性之序列。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15具有至少99%序列一致性之序列。
在一些實施例中，IL-21 Rα突變蛋白在涉及IL-21與IL-21 Rα之間的相互作用的結合位點包括一或多個修飾。在一些實施例中，該一或多個修飾係胺基酸取代、缺失、插入或其組合。在一些實施例中，該一或多個修飾係化學修飾。 在一些實施例中，修飾可誘發結合位點之結構變化。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含至少一個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含一個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含兩個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含三個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含四個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含五個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含大於五個胺基酸取代。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含一至五個胺基酸取代。
在一些實施例中，該一或多個胺基酸取代係在選自野生型IL-21Rα序列之Y10、Q35、Y36、E38、L39、F67、H68、M70、A71、D72、D73、I74、L94、P126、Y129、M130、K134、S189、S190及Y191的一或多個胺基酸位置。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白包含在選自野生型IL-21Rα序列之Y10、Q35、Y36、E38、L39、F67、H68、M70、A71、D72、D73、I74、L94、P126、Y129、M130、K134、S189、S190及Y191的一個胺基酸位置的胺基酸取代。
在一些實施例中，該一或多個胺基酸取代係在選自野生型IL-21Rα序列之Y36、E38、L39、M70、A71、D72、D73、I74及L94的一或多個胺基酸位置。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白包含在選自野生型IL-21Rα序列之Y36、E38、L39、M70、A71、D72、D73、I74及L94的一個胺基酸位置的胺基酸取代。
在一些實施例中，IL-21 Rα突變蛋白包含僅在選自野生型IL-21Rα序列之Y10、Q35、Y36、E38、L39、F67、H68、M70、A71、D72、D73、I74、L94、P126、Y129、M130、K134、S189、S190及Y191之一或多個胺基酸位置不同於野生型IL-21Rα序列的序列。在一些實施例中，IL-21 Rα突變蛋白包含僅在選自Y36、E38、L39、M70、A71、D72、D73、I74及L94之一或多個胺基酸位置不同於野生型IL-21Rα序列的序列。
在一些實施例中，IL-21 Rα突變蛋白包含僅在選自野生型IL-21Rα序列之Y10、Q35、Y36、E38、L39、F67、H68、M70、A71、D72、D73、I74、L94、P126、Y129、M130、K134、S189、S190及Y191之一個胺基酸位置不同於野生型IL-21Rα序列的序列。在一些實施例中，IL-21 Rα突變蛋白包含僅在選自Y36、E38、L39、M70、A71、D72、D73、I74及L94之一個胺基酸位置不同於野生型IL-21Rα序列的序列。
在一些實施例中，該一或多個胺基酸取代係選自： a. Y10A  b. Q35K、Q35R或Q35Y；  c. Y36A、Y36C、Y36E、Y36G、Y36H、Y36I、Y36K、Y36M、Y36N、Y36P、Y36Q、Y36R、Y36S、Y36T或Y36V；  d. E38A、E38C、E38K、E38R或E38Y；  e. L39A、L39C、L39E、L39F、L39H、L39K、L39R、L39W或L39Y；  f.  F67A；  g. H68A；  h. M70C、M70D、M70F、M70G、M70H、M70K、M70L、M70N、M70Q、M70R、M70S、M70T、M70V、M70W或M70Y；  i.  A71E、A71F、A71I、A71L、A71Q、A71R、A71W或A71Y；  j.  D72A、D72C、D72E、D72F、D72G、D72H、D72I、D72K、D72L、D72M、D72Q、D72R、D72W或D72Y；  k. D73C、D73A、D73E、D73H、D73K、D73R、D73W或D73Y；  l.  I74A、I74H、I74K、I74R或I74W；  m.        L94A、L94F、L94K、L94Q、L94R或L94Y；  n. P126A；  o. Y129A；  p. M130A；  q. K134A；  r.  S189A；  s. S190A；及  t.  Y191A。
在一些實施例中，該一或多個胺基酸取代係選自： a. Y36C、Y36E、Y36G、Y36H、Y36I、Y36K、Y36M、Y36N、Y36P、Y36Q、Y36R、Y36S、Y36T或Y36V；  b. E38C、E38R或E38Y；  c. L39A、L39C、L39E、L39F、L39H、L39K、L39R、L39W或L39Y；  d. M70C、M70D、M70F、M70G、M70H、M70K、M70L、M70N、M70Q、M70R、M70S、M70T、M70V、M70W或M70Y；  e. A71E、A71F、A71I、A71L、A71Q、A71R、A71W或A71Y；  f.  D72A、D72C、D72E、D72F、D72G、D72H、D72I、D72K、D72L、D72M、D72Q、D72R、D72W或D72Y；  g. D73A  h. I74R，或I74W；及  i.  L94A、L94F、L94K、L94Q、L94R或L94Y。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白包含具有選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列之蛋白質的功能片段。功能片段可結合至IL-21域。
6.5. 免疫細胞介素在另一態樣中，本發明提供一種免疫細胞介素，其包含(i)對靶蛋白具有特異性之抗原結合蛋白(ABP)；(ii)IL-21域；及(iii) IL-21Rα突變蛋白，其中該IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比具有降低的對該IL-21域的結合親和力。
免疫細胞介素可包含第6.4部分中揭示之IL-21Rα突變蛋白。在一些實施例中，免疫細胞介素係選自R-kine-1至66之免疫細胞介素。
6.5.1. 抗原結合蛋白 (ABP)本文所揭示之免疫細胞介素包含對靶蛋白具有特異性之抗原結合蛋白(ABP)。
靶蛋白可為免疫細胞之表面蛋白。在一些實施例中，靶蛋白為對T細胞具有特異性之表面蛋白。在一些實施例中，靶蛋白對CD4+或CD8 T+細胞具有特異性。
在一些實施例中，靶蛋白係免疫檢查點分子。在一些實施例中，靶蛋白係PD-1、PD-L1、TIGIT、LAG-3、CTLA-4、TIM-3、CD39、CD38、CD73、CD36、CD25、CD47、CD24、CD20、SIPRα、CD40或CD20。
在一些實施例中，ABP係針對靶蛋白之抗體或其片段。
在一些實施例中，ABP係免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，ABP係抗PD-1抗體。在一些實施例中，抗PD-1抗體係IgG。在一些實施例中，ABP係抗CTLA-4抗體。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體係IgG。在一些實施例中，ABP係抗TIGIT抗體。在一些實施例中，抗TIGIT抗體係IgG。在一些實施例中，ABP係抗LAG-3抗體。在一些實施例中，抗LAG-3抗體係IgG。
在一些實施例中，ABP包含選自人類IgG1 Fc片段、人類IgG2 Fc片段、人類IgG3 Fc片段及人類IgG4 Fc片段之Fc片段。在一些實施例中，Fc片段係人類IgG4 Fc片段。在一些實施例中，Fc片段係人類IgG1 Fc片段。在一些實施例中，Fc片段包含用於杵-臼相互作用之修飾。在一些實施例中，Fc片段經工程改造以引入突變以降低免疫球蛋白之效應功能，此藉由降低對FcγR之結合親和力來最小化ADCC。在一些實施例中，Fc片段包含選自SEQ ID NO: 16、185至190之序列。在一些實施例中，Fc片段經工程改造以提高Fc片段或含有Fc片段之免疫細胞介素的穩定性。舉例而言，Fc片段經工程改造以移除C端之Lys (K)。
在一些實施例中，ABP選自納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、曲美木單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗或其功能變異體。功能變異體係指與原始ABP相比具有一或多個修飾但保持原始ABP之結合親和力及/或特異性的ABP。在一些實施例中，功能變異體包含原始ABP之結合域及異源Fc片段。
在一些實施例中，ABP包含選自納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗、曲美木單抗之抗體的V HCDR1、V HCDR2、V HCDR3、V LCDR1、V LCDR2及V LCDR3序列。在一些實施例中，ABP包含選自納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗、曲美木單抗之抗體的重鏈可變域。在一些實施例中，ABP包含選自納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗、曲美木單抗之抗體的輕鏈可變域。在一些實施例中，ABP包含選自納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗、曲美木單抗之抗體的重鏈可變域及輕鏈可變域。
在一些實施例中，ABP包含： a. 具有SEQ ID NO: 1之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 2之序列之輕鏈；  b. 具有SEQ ID NO: 3之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 4之序列之輕鏈；  c. 具有SEQ ID NO: 5之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 6之序列之輕鏈；  d. 具有SEQ ID NO: 7之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 8之序列之輕鏈；  e. 具有SEQ ID NO: 9之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 10之序列之輕鏈；  f.  具有SEQ ID NO: 11之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之輕鏈；  g. 具有SEQ ID NO: 13之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 14之序列之輕鏈；  h. 具有SEQ ID NO: 151之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 152之序列之輕鏈；  i.  具有SEQ ID NO: 153之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 154之序列之輕鏈；  j.  具有SEQ ID NO: 225之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 226之序列之輕鏈；或  k. 具有SEQ ID NO: 227之序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 228之序列之輕鏈。
在一些實施例中，ABP包含： a. 具有SEQ ID NO: 1之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 2之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 1中C端之Lys (K)；  b. 具有SEQ ID NO: 3之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 4之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 3中C端之Lys (K)；  c. 具有SEQ ID NO: 5之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 6之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 5中C端之Lys (K)；  d. 具有SEQ ID NO: 7之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 8之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 7中C端之Lys (K)；  e. 具有SEQ ID NO: 9之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 10之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 9中C端之Lys (K)；  f.  具有SEQ ID NO: 11之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 12之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 11中C端之Lys (K)；   g. 具有SEQ ID NO: 13之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 14之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 13中C端之Lys (K)；  h. 具有SEQ ID NO: 151之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 152之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 151中C端之Lys (K)；   i.  具有SEQ ID NO: 153之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 154之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID NO: 153中C端之Lys (K)；  j.  具有SEQ ID NO: 225之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 226之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID 225中C端之Lys (K)；或  k. 具有SEQ ID NO: 227之序列或其變異體之重鏈，及具有SEQ ID NO: 228之序列之輕鏈，其中該變異體包含杵-臼突變及/或移除SEQ ID 227中C端之Lys (K)。
在較佳實施例中，ABP包含兩個Fc部分。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白連接至兩個Fc部分之第一個，且IL-21域連接至兩個Fc部分之第二個。在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白連接至兩個Fc部分之第一個的C端，且IL-21域連接至兩個Fc部分之第二個的C端。可使用此項技術中已知之多種方法將IL-21Rα突變蛋白連接至兩個Fc部分之第一個，且將IL-21域連接至兩個Fc部分之第二個。在一些實施例中，IL-21域及IL-21Rα突變蛋白分別藉由不可裂解肽連接子或無肽連接子之情況下連接。在一些實施例中，不可裂解肽連接子係具有SEQ ID NO: 17序列之G4S連接子。在一些實施例中，使用非肽連接子。在一些實施例中，不可裂解肽連接子具有選自SEQ ID NO: 212至224之序列。
在一些實施例中，ABP包含人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之Fc部分。在一些實施例中，Fc部分包含選自SEQ ID NO: 16及185至190之任一個序列。在一些實施例中，Fc部分包含人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之C H3域。
在一些實施例中，ABP包含抗體片段。在一些實施例中，ABP為Fv片段、Fab片段、F(ab') 2片段、Fab'片段、scFv (sFv)片段及scFv-Fc片段。
在一些實施例中，ABP包含Fc片段之杵變異體及臼變異體。
6.5.2.    IL-21 域在一些實施例中，IL-21域為人類IL-21。在一些實施例中，IL-21域為人類IL-21之功能片段，其可結合至IL-21Rα且活化目標細胞。在一些實施例中，IL-21域為人類IL-21之功能變異體或同系物，其可結合至IL-21Rα且活化目標細胞。
在一些實施例中，IL-21域具有SEQ ID NO: 100 (人類IL-21)之序列。在一些實施例中，IL-21域具有與SEQ ID NO: 100至少90%、95%、97%、98%或99%一致的序列。
6.5.3. 免疫細胞介素結構在一些實施例中，免疫細胞介素包含四個多肽鏈-兩個相同輕鏈及兩個重鏈，藉由杵-進入-臼(KiH)相互作用接合以形成異二聚體。在一些實施例中，兩個重鏈中之一個(「第一鏈」)與加帽部分(例如IL-21Rα突變蛋白)融合，且另一個(「第二鏈」)與IL-21融合。在一些實施例中，IL-21及加帽部分藉由肽連接子與重鏈融合。在一些實施例中，肽連接子為不可裂解及可撓性的肽連接子。
在一些實施例中，第一鏈自N端至C端包含： a. ABP之第一Fc部分；及  b. IL-21Rα突變蛋白。
在一些實施例中，第一鏈進一步包含在ABP之第一Fc部分與IL-21Rα突變蛋白之間的連接子。
在一些實施例中，第一Fc部分為具有選自SEQ ID NO: 16、185至190之任一個序列的人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一些實施例中，第一Fc部分包含人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之C H3域。
在一些實施例中，第一鏈自N端至C端包含： a. ABP之第一重鏈；及  b. IL-21Rα突變蛋白。
在一些實施例中，第一鏈進一步包含在ABP之第一重鏈與IL-21Rα突變蛋白之間的連接子。
在一些實施例中，ABP之第一重鏈包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列或其變異體。在一些實施例中，該變異體在選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列中包含杵-臼突變。在一些實施例中，該變異體在選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列中包含C端Lys (K)之移除。在一些實施例中，該變異體在選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列中包含杵-臼突變及C端Lys (K)之移除。杵-臼突變可為用於製作針對杵-臼相互作用之杵變異體或用於製作臼變異體之突變。在一些實施例中，ABP之第一重鏈包含SEQ ID NO: 103之序列。
在一些實施例中，IL-21Rα突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。
在一些實施例中，第一鏈包含選自SEQ ID NO: 104至150及192至209之序列。
在一些實施例中，第一鏈包含選自SEQ ID NO: 170至184之序列。
在一些實施例中，第二鏈自N端至C端包含： a. ABP之第二Fc部分；及  b. IL-21域。
在一些實施例中，第二鏈進一步包含在ABP之第二Fc部分與IL-21域之間的連接子。
在一些實施例中，第二Fc部分係ABP之第二重鏈。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含ABP之第一重鏈及第二重鏈。在一些實施例中，第一重鏈包含杵突變且第二重鏈包含臼突變，用於杵-臼相互作用。在一些實施例中，第一重鏈包含臼突變且第二重鏈包含杵突變，用於杵-臼相互作用。
在一些實施例中，第二鏈具有SEQ ID NO: 101之序列。
在一些實施例中，免疫細胞介素包含兩個相同輕鏈。在一些實施例中，輕鏈具有SEQ ID NO: 102之序列。在一些實施例中，輕鏈係選自納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、曲美木單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗或其功能變異體之ABP中之任一者的輕鏈。
6.6. 聚核苷酸、載體及宿主細胞本發明之一個態樣提供一或多種編碼免疫細胞介素之聚核苷酸。 在一些實施例中，該一或多種聚核苷酸包含： a. 編碼包含ABP之重鏈及IL-21Rα突變蛋白之第一鏈的第一聚核苷酸片段；  b. 編碼包含ABP之重鏈及IL-21域之第二鏈的第二聚核苷酸片段；及   c. 編碼ABP之輕鏈之第三聚核苷酸片段。
在一些實施例中，第一聚核苷酸片段包含具有ABP之重鏈、肽連接子及IL-21Rα突變蛋白之第一鏈的編碼序列。在一些實施例中，第一聚核苷酸片段包含具有選自SEQ ID NO: 104至150及192至209之序列之多肽的編碼序列。
在一些實施例中，第二聚核苷酸片段包含具有ABP之重鏈、肽連接子及IL-21域之第二鏈的編碼序列。在一些實施例中，第二聚核苷酸片段包含具有SEQ ID NO: 101之序列之多肽的編碼序列。
在一些實施例中，第三聚核苷酸片段包含具有SEQ ID NO: 102之序列之輕鏈的編碼序列。
在一些實施例中，第一聚核苷酸片段包含與SEQ ID NO: 210具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、98%或99%一致的序列。在一些實施例中，第一聚核苷酸包含具有一或多個核苷酸差異之SEQ ID NO: 210之序列，該一或多個核苷酸差異對應於IL21Rα突變蛋白中之一或多個胺基酸取代。
在一些實施例中，第一聚核苷酸片段包含與SEQ ID NO: 211具有至少85%、90%、95%、96%、97%、98%、98%或99%一致的序列。在一些實施例中，第一聚核苷酸包含具有一或多個核苷酸差異之SEQ ID NO: 211之序列，該一或多個核苷酸差異對應於IL21Rα突變蛋白中之一或多個胺基酸取代。
在一些實施例中，該一或多種聚核苷酸具有已經密碼子最佳化之序列以在哺乳動物細胞中表現。在一些實施例中，該一或多種聚核苷酸具有已經密碼子最佳化之序列以在人類細胞中表現。
在一些實施例中，第一聚核苷酸片段、第二聚核苷酸片段及第三聚核苷酸片段在單個聚核苷酸分子中。在一些實施例中，第一聚核苷酸片段、第二聚核苷酸片段及第三聚核苷酸片段在多個聚核苷酸分子中。
當單個聚核苷酸分子中存在超過一個聚核苷酸片段時，多個聚核苷酸片段可被內部核糖體進入位點(IRES)分隔開。在一些實施例中，多個聚核苷酸片段被自裂解位點分隔開。
在一些實施例中，該一或多種聚核苷酸進一步包含可操作地連接於第一、第二或第三聚核苷酸片段之調節序列。在一些實施例中，該一或多種聚核苷酸包含超過一個調節序列。在一些實施例中，該一或多種聚核苷酸包含針對第一、第二及第三聚核苷酸片段中之每一者的調節序列。
在一些實施例中，第一聚核苷酸片段、第二聚核苷酸片段及第三聚核苷酸片段單獨存在於獨立的聚核苷酸分子中。
在另一態樣中，本發明提供一或多種包含該一或多種聚核苷酸之載體。在一些實施例中，第一聚核苷酸片段、第二聚核苷酸片段及第三聚核苷酸片段單獨存在於獨立的載體中。在一些實施例中，聚核苷酸片段中之兩個或更多個在單個載體中選殖。
在一些實施例中，該載體係病毒載體。在一些實施例中，該載體係AAV載體或慢病毒載體。在一些實施例中，該載體為非病毒。在一些實施例中，該載體係質體。
在一些實施例中，該一或多種聚核苷酸或該一或多種載體存在於宿主細胞中。因此，本發明之一個態樣提供一種宿主細胞，其包含該一或多種聚核苷酸或該一或多種載體。在一些實施例中，宿主細胞表現免疫細胞介素。在一些實施例中，宿主細胞包含免疫細胞介素。在一些實施例中，宿主細胞釋放免疫細胞介素。在一些實施例中，宿主細胞係免疫細胞。在一些實施例中，宿主細胞係T細胞。
宿主細胞可為真核生物細胞，例如諸如酵母之真菌細胞。宿主細胞可為哺乳動物細胞(其可為細胞培養物中之細胞，或存在於組織或器官中之細胞)。在一些實施例中，宿主細胞係人類、小鼠、大鼠、兔、牛或狗(或例如任何其他野生、家畜/馴養動物)細胞。在一些實施例中，宿主細胞係穩定細胞株細胞、或初生細胞、貼壁或懸浮細胞。作為實例，宿主細胞可為巨噬細胞、骨肉瘤、或CHO、BHK (幼倉鼠腎)、波韋氏人類黑色素瘤細胞、911、AT1080、A549、HEK293或希拉細胞株細胞或小鼠初生細胞，但不限於此。在一些實施例中，宿主細胞係細菌細胞，諸如大腸桿菌。
真核生物細胞可為植物細胞(例如單子葉或雙子葉植物細胞；通常為實驗、作物及/或觀賞植物細胞，例如芥菜屬、玉米)；魚(例如斑馬魚；鮭魚)、鳥類(例如雞或其他家養鳥類)、昆蟲(例如果蠅；蜜蜂)、線蟲或原生生物(例如瘧原蟲屬或棘阿米巴原蟲屬)細胞。
在一些實施例中，宿主細胞用於生產免疫細胞介素。在一些實施例中，產生自宿主細胞之免疫細胞介素經純化用於醫療用途。在一些實施例中，宿主細胞用作治療劑。
本發明之一個態樣提供編碼IL-21Rα突變蛋白之聚核苷酸。在一些實施例中，編碼IL-21Rα突變蛋白之聚核苷酸具有選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。在一些實施例中，聚核苷酸係病毒或非病毒載體。在一些實施例中，聚核苷酸進一步包含可操作地連接於IL-21Rα突變蛋白之編碼序列之調節序列。在另一態樣中，本發明提供一種宿主細胞，其包含編碼IL-21Rα突變蛋白之聚核苷酸。
6.7. 治療方法在另一態樣中，本發明提供一種向個體投與免疫細胞介素或表現上述免疫細胞介素之宿主細胞的方法。在一些實施例中，個體係癌症患者。
在一些實施例中，該投與有效增強個體之免疫反應。在一些實施例中，該投與有效治療癌症。在一些實施例中，該投與有效選擇性地活化目標細胞上的IL-21Rα。在一些實施例中，目標細胞係免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞係T細胞。
在一些實施例中，免疫細胞介素或宿主細胞呈足以增強個體之免疫反應的量投與。在一些實施例中，免疫細胞介素或宿主細胞呈足以治療癌症的量投與。在一些實施例中，免疫細胞介素或宿主細胞呈足以選擇性活化目標細胞上之IL-21Rα的量投與。
在一些實施例中，該方法包含投與免疫細胞介素、宿主細胞或包含免疫細胞介素或宿主細胞之醫藥組合物。
6.8. 醫藥組合物在一個態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含免疫細胞介素或包含本文提供之免疫細胞介素之宿主細胞。
在一些實施例中，醫藥組合物包含免疫細胞介素及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含表現免疫細胞介素之宿主細胞及醫藥學上可接受之載劑。
在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑係無菌水溶液或分散液及用於製備無菌可注射溶液或分散液之無菌散劑。在一些實施例中，組合物經調配用於非經腸注射。組合物可調配為固體、溶液、微乳液、脂質體或適合於高藥物濃度之其他有序結構。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇及液體聚乙二醇)、及其適合混合物之溶劑或分散介質。在一些情況下，組合物含有等張劑，例如糖、多元醇，例如山梨糖醇，或氯化鈉。
在一些實施例中，醫藥組合物呈上文描述使用之單位劑量提供。
7. 實例 7.1. 生成 IL21Rα 突變蛋白基於IL-21及IL-21Rα之預測結構，預測IL-21Rα之九(9)個胺基酸殘基(M70、A71、D72、D73、Y36、E38、L39、I74及L94)形成與IL-21的結合位點。由電腦模擬分析(Discovery工作室)亦預測IL-21Rα之一些胺基酸殘基(例如Q35)涉及結合親和力。藉由對IL-21Rα之各胺基酸殘基進行丙胺酸掃描誘變，進一步研究它們在與IL-21結合中的作用。IL-21Rα突變蛋白藉由對表2中提供之IL-21Rα胺基酸序列中的20個胺基酸殘基進行單胺基酸取代而設計。
表 2 WT 及 IL-21Rα 突變蛋白
編號 點突變 編號 點突變
1 WT 48 M70T
2 Y10A 49 M70V
3 Q35K 50 M70W
4 Q35R 51 M70Y
5 Q35Y 52 A71E
6 Y36A 53 A71F
7 Y36C 54 A71I
8 Y36E 55 A71L
9 Y36G 56 A71Q
10 Y36H 57 A71R
11 Y36I 58 A71W
12 Y36K 59 A71Y
13 Y36M 60 D72A
14 Y36N 61 D72C
15 Y36P 62 D72E
16 Y36Q 63 D72G
17 Y36R 64 D72H
18 Y36S 65 D72K
19 Y36T 66 D72Q
20 Y36V 67 D72R
21 E38A 68 D72W
22 E38C 69 D72Y
23 E38K 70 D73A
24 E38R 71 I74A
25 E38Y 72 I74K
26 L39A 73 I74R
27 L39C 74 I74W
28 L39E 75 L94A
29 L39F 76 L94F
30 L39H 77 L94K
31 L39K 78 L94Q
32 L39R 79 L94R
33 L39W 80 L94Y
34 L39Y 81 P126A
35 F67A 82 Y129A
36 H68A 83 M130A
37 M70C 84 K134A
38 M70D 85 S189A
39 M70F 86 S190A
40 M70G 87 Y191A
41 M70H   
42 M70K
43 M70L
44 M70N
45 M70Q
46 M70R
47 M70S
藉由向編碼野生型IL-21Rα之質體引入一或多個點突變產生IL21R突變蛋白。人類IgG1Fc (Pro100-Lys330)及IL21R α (Cys20-Glu232)野生型或突變蛋白藉由(G4S) 3連接子結合。在N端添加天青殺素(Azurocidin)信號肽用於分泌表現之蛋白質。藉由定序驗證構築體後，進行大規模質體製備以獲得足夠的DNA進行轉染。
7.2.     IL-21Rα 突變蛋白對 IL-21 之 SPR 全動力學分析二價Fc-融合蛋白(IgG1)與突變蛋白中之各者一起產生[IL21Rα突變蛋白-Fc]，且其對IL-21之結合親和力藉由SPR (Biacore 8K)量測(表3及圖2A至2V)。IL21Rα突變蛋白及IL-21之親和力藉由CM5感測器晶片測試。以10 μL/min之流動速率持續420 s將400mM EDC及100mM NHS (Cytiva)注入CM5感測器晶片作為活化劑，隨後以10 μL/min之流動速率持續240 s將1.55 μg/mL之溶於10mM NaAc (pH 5.0)中之hIL-21注入通道。藉由1 M乙醇胺-HCl (Cytiva)以10 μL/min之流動速率使晶片去活化420 s。
使用多循環動力學進行分析。將7種不同濃度之hIL-21R (WT或突變蛋白)及操作緩衝液以80 μL/min之流動速率有序注入Fc1-Fc2，結合期為120 s，接著解離1000 s。每個解離期之後，注射10 mM甘胺酸pH 1.5作為再生緩衝液。
自測試感測器圖譜減去來自參考通道Fc1及緩衝液通道之感測器圖譜。藉由1:1結合模型或異質配位體擬合實驗資料。使用15kDa之分子量計算IL-21之莫耳濃度。
來自IL-21Rα突變蛋白對IL21之SPR全動力學分析之資料在圖2A至2V中提供。使用Biacore 8K量測突變蛋白之結合親和力且在表3中提供。
表3 Fc-IL21Rα (WT 及突變蛋白) 對IL21 之 結合親和力 (1:1 結合模型 )
編號 點突變 K D (M)
1 WT 1.67E-10
2 Y10A 5.23E-10
3 Q35K 3.43E-10
4 Q35R 4.91E-10
5 Q35Y 3.66E-10
6 Y36A 2.13E-09
7 Y36C 1.10E-09
8 Y36E 6.88E-10
9 Y36G 2.76E-09
10 Y36H 6.11E-10
11 Y36I 2.55E-09
12 Y36K 2.97E-09
13 Y36M 7.26E-10
14 Y36N 8.94E-10
15 Y36P 2.46E-07
16 Y36Q 1.04E-09
17 Y36R 6.67E-09
18 Y36S 2.58E-09
19 Y36T 3.98E-09
20 Y36V 3.33E-09
21 E38A 2.85E-08
22 E38C 2.40E-08
23 E38K ＞1.00E-06*
24 E38R ＞1.00E-06
25 E38Y 1.77E-07
26 L39A 2.36E-08
27 L39C 1.50E-07
28 L39E 1.02E-07
29 L39F 2.65E-10
30 L39H 1.98E-09
31 L39K 1.41E-08
32 L39R 9.70E-08
33 L39W 2.33E-09
34 L39Y 8.16E-10
35 F67A 4.37E-10
36 H68A 1.68E-10
37 M70C ＞1.00E-06
38 M70D ＞1.00E-06
39 M70F 1.18E-09
40 M70G ＞1.00E-06
41 M70H 6.94E-07
42 M70K ＞1.00E-06
43 M70L 6.42E-10
44 M70N 1.16E-07
45 M70Q 6.85E-07
46 M70R ＞1.00E-06
47 M70S 8.54E-08
48 M70T 5.12E-09
49 M70V 9.74E-10
50 M70W 7.06E-07
51 M70Y 7.92E-08
52 A71E 2.92E-09
53 A71F 1.01E-09
54 A71I 1.97E-09
55 A71L 1.26E-09
56 A71Q 5.01E-09
57 A71R 4.09E-07
58 A71W 1.85E-08
59 A71Y 1.03E-08
60 D72A ＞1.00E-06
61 D72C ＞1.00E-06
62 D72E 1.14E-06
63 D72G ＞1.00E-06
64 D72H ＞1.00E-06
65 D72K ＞1.00E-06
66 D72Q ＞1.00E-06
67 D72R ＞1.00E-06
68 D72W ＞1.00E-06
69 D72Y ＞1.00E-06
70 D73A ＞1.00E-06
71 I74A 7.66E-10
72 I74K 5.18E-10
73 I74R 1.30E-09
74 I74W 1.15E-09
75 L94A 1.44E-09
76 L94F 1.49E-09
77 L94K 2.79E-07
78 L94Q 1.19E-09
79 L94R 3.97E-08
80 L94Y 1.13E-09
81 P126A 2.77E-10
82 Y129A 5.15E-10
83 M130A 2.54E-10
84 K134A 6.18E-10
85 S189A 2.90E-10
86 S190A 2.45E-10
87 Y191A 6.67E-10
*1.00E-06係最低偵測極限。
在量測突變蛋白[IL21Rα(mut)-Fc]對IL-21之結合親和力之後，將58種突變蛋白基於它們對IL-21之結合親和力的降低程度進行分類，例如，與野生型IL-21Rα相比降低10、100及1000倍。最終，生成66種IgG融合蛋白，其中一個IL-21及IL21-Rα之突變蛋白中之一者分別與IgG的兩個重鏈之一融合。
7.3. 生成免疫細胞介素 (αPD-1IL21Rα 突變蛋白 /IL21)本文所述之免疫細胞介素αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21可藉由作為ICB工作且誘導由目標細胞表面上表現之IL21受體複合物(IL21Rα/共同γ鏈)介導的信號轉導而呈現抗癌免疫反應。αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21被設計成僅在與PD-1結合時主要活化靶免疫細胞。其藉由接近引發IL21Rα突變蛋白與目標細胞之內源性IL21Rα (例如IL21RαWT)之間的競爭，誘導IL21Rα突變蛋白自IL-21部分剝離，使其與內源性IL21Rα結合。
此前，研發了一種融合蛋白，其包含融合至抗PD-1抗體之C端的毒性減弱IL-21，用於藉由活化免疫細胞來治療癌症。在融合蛋白中，毒性減弱IL-21用於減少脫靶效應，且抗PD-1抗體用於提高靶點的生物可用性。毒性減弱IL-21在IL-21胺基酸序列中包括兩個點突變，使其最大效能與野生型IL-21相比降低至70-80% (參見Shanling Shen 等人. Engineered IL-21 Cytokine Muteins Fused to Anti-PD-1 Antibodies Can Improve CD8+ T Cell Function and Anti-tumor Immunity. Front Immunol. 2020年五月8日;11:832)。
不同於包含毒性減弱IL-21之融合蛋白，αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21包括未經修飾之IL-21，因此其對目標細胞可具有與野生型IL-21類似的效果。生成66種各含有不同IL21Rα突變蛋白之免疫細胞介素。66種免疫細胞介素(表4)包括一或兩個胺基酸取代。更具體而言，免疫細胞介素(R-kine-1至66)包括(i)包含重鏈、G4S連接子及IL-21Rα突變蛋白之第一鏈；(ii)包含重鏈、G4S連接子及人類IL-21之第二鏈；及(iii)兩個輕鏈，在表4中指定。
表 4
編號 IL-21Rα 突變位點 第一鏈( 重鏈-G4S 連接子-IL-21R α 突變蛋白) 之序列 第二鏈( 重鏈-G4S 連接子- 人類IL-21) 之序列 兩個輕鏈之序列
R-kine-1 WT SEQ ID NO: 191 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-2 Y36C SEQ ID NO: 104 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-3 Y36E SEQ ID NO: 105 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-4 Y36G SEQ ID NO: 106 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-5 Y36H SEQ ID NO: 107 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-6 Y36I SEQ ID NO: 108 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-7 Y36K SEQ ID NO: 109 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-8 Y36M SEQ ID NO: 110 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-9 Y36N SEQ ID NO: 111 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-10 Y36P SEQ ID NO: 112 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-11 Y36Q SEQ ID NO: 113 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-12 Y36R SEQ ID NO: 114 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-13 Y36S SEQ ID NO: 115 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-14 Y36T SEQ ID NO: 116 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-15 Y36V SEQ ID NO: 117 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-16 E38C SEQ ID NO: 118 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-17 E38R SEQ ID NO: 200 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-18 E38Y SEQ ID NO: 119 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-19 L39C SEQ ID NO: 120 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-20 L39E SEQ ID NO: 121 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-21 L39H SEQ ID NO: 122 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-22 L39K SEQ ID NO: 123 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-23 L39R SEQ ID NO: 124 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-24 L39W SEQ ID NO: 125 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-25 L39Y SEQ ID NO: 126 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-26 M70F SEQ ID NO: 127 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-27 M70H SEQ ID NO: 128 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-28 M70N SEQ ID NO: 129 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-29 M70Q SEQ ID NO: 130 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-30 M70S SEQ ID NO: 131 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-31 M70T SEQ ID NO: 132 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-32 M70V SEQ ID NO: 133 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-33 M70W SEQ ID NO: 134 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-34 M70Y SEQ ID NO: 135 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-35 A71E SEQ ID NO: 136 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-36 A71F SEQ ID NO: 137 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-37 A71I SEQ ID NO: 138 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-38 A71L SEQ ID NO: 139 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-39 A71Q SEQ ID NO: 140 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-40 A71R SEQ ID NO: 141 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-41 A71W SEQ ID NO: 142 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-42 A71Y SEQ ID NO: 143 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-43 I74R SEQ ID NO: 144 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-44 I74W SEQ ID NO: 145 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-45 L94F SEQ ID NO: 146 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-46 L94K SEQ ID NO: 147 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-47 L94Q SEQ ID NO: 148 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-48 L94R SEQ ID NO: 149 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-49 L94Y SEQ ID NO: 150 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-50 M70C SEQ ID NO: 201 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-51 M70D SEQ ID NO: 202 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-52 M70G SEQ ID NO: 203 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-53 M70R SEQ ID NO: 204 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-54 D72A SEQ ID NO: 205 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-55 D72E SEQ ID NO: 206 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-56 D72Q SEQ ID NO: 207 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-57 D72R SEQ ID NO: 208 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-58 D73A SEQ ID NO: 209 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-59 Y36A + D72E SEQ ID NO: 192 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-60 Y36A + L94R SEQ ID NO: 193 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-61 E38A + D72E SEQ ID NO: 194 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-62 E38A + L94K SEQ ID NO: 195 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-63 E38A + L94R SEQ ID NO: 196 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-64 E38R + D72R SEQ ID NO: 197 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-65 D72E + L94K SEQ ID NO: 198 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
R-kine-66 D72E + L94R SEQ ID NO: 199 SEQ ID NO: 101 SEQ ID NO: 102
為生成免疫細胞介素，在100 mL細胞培養基中製備高於95%存活率之6.0×10 6/mL之ExpiCHO細胞(ThermoFisher)。將100 µg編碼免疫細胞介素之質體DNA與ExpiFectamine™ CHO轉染劑(ThermoFisher)混合，且將混合物添加至細胞培養基中。細胞培養物在平台搖動器中培育，旋轉速率為150 rpm。溫度維持在37℃同時CO 2含量為8%。
培育十天後，藉由以4000 rpm、25℃離心10分鐘使細胞成球粒。收集上清液用於純化及凝膠電泳。遵循NuPAGE TM4-12% Bis-Tris Protein Gel (ThermoFisher)之說明，將上清液裝載於SDS-PAGE凝膠上。PageRuler TMUnstained Protein Ladder (ThermoFisher)與蛋白質樣品一起用於測定蛋白質之分子量。隨後藉由蛋白A管柱(Cytiva)隨後SEC管柱(Cytiva)純化融合蛋白。
7.4. 免疫細胞介素 (αPD-1IL21Rα 突變蛋白 /IL21) 之均勻 時間解析螢光 (HTRF) 磷酸化 STAT3 分析藉由在基於HTRF之高通量分析中量測STAT3之磷酸化來評估66種免疫細胞介素。在pSTAT3分析中使用人類皮膚T淋巴細胞株(H9 (Cobioer)，Hut78細胞之衍生物)及穩定表現程式化細胞死亡蛋白1之H9細胞(PD-1(+) H9)。針對H9，在含有20%胎牛血清(FBS，Gibco)及1%青黴素/鏈黴素(Sigma Aldrich)之IMDM培養基(Gibco)中生長細胞。針對PD-1陽性H9細胞，額外添加3 μg/mL嘌呤黴素(Invivogen)。每48小時進行細胞繼代培養，以避免可能阻止細胞週期的高密度。
進行pSTAT3生產之量測，以研究IL-21與IL-21受體及常見γ鏈結合對細胞的活化。pSTAT3之高產量被視為經處理材料反應強烈的標誌。為進行實驗，遵循製造商之使用者指南使用pSTAT3 ELISA套組(Perkin Elmer，MA)及Flex Station 3 (Molecular Devices，CA)。
詳細描述如下。用無血清培養基培育PD-1(-) H9或PD-1(+) H9細胞隔夜。培育後，用HBSS (Gibco)溶液收集離心細胞(以125 g)且以2.5 × 10 4個細胞/孔/8μL接種於白色96孔低體積盤(Cisbio)上。用於評估之化合物以終濃度的3×濃度製備，且在37℃下對細胞處理30分鐘。將裂解緩衝液加入孔中30分鐘，且隨後遵循製造商之方案處理HTRF反應的試劑。24小時後，藉由Flex Station 3設備量測HTRF反應。
進行非線性分析(4參數邏輯式回歸)以計算包括 EC 50、最大反應及希爾斜率(Hillslope)之實驗參數。採用Black及Leff操作模型以估計化合物之內在功效。
圖4、5及6A至6E顯示，αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21之抗PD-1抗體之部分導致αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21對PD-1(+)或PD-1(-) H9細胞的藥效學差異。
特定而言，αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21處理之PD-1(-)細胞中所觀測到之STAT3之磷酸化的 EC 50值比PD-1(+)細胞高，且兩種細胞株中最大功效類似(表5)。
表5. EC 50 之 概述
突變 PD-1(-) H9細胞 PD-1(+) H9細胞
EC 50(M) sem EC 50(M) sem
野生型 2.58E-07 4.53E-08 1.77E-07 3.78E-08
D72E 1.57E-07 2.03E-08 3.29E-09 5.80E-10
A71R 1.29E-07 2.57E-08 4.87E-09 6.83E-10
Y36G 1.44E-07 3.80E-08 1.28E-08 3.68E-09
M70Q 1.75E-07 2.55E-08 6.14E-09 6.72E-10
M70H 1.98E-07 3.57E-08 6.93E-09 8.64E-10
M70W 1.90E-07 2.99E-08 6.66E-09 9.50E-10
L94K 2.53E-07 5.90E-08 1.03E-08 1.88E-09
E38R 2.13E-07 4.37E-08 1.30E-09 1.49E-10
M70R 1.63E-08 3.00E-09 3.21E-10 4.36E-11
M70D 1.51E-07 3.17E-08 1.06E-09 1.08E-10
M70C 2.96E-07 6.20E-08 1.15E-07 2.63E-08
M70G 4.19E-07 8.23E-08 2.91E-09 4.02E-10
D72R 1.20E-08 2.60E-09 5.04E-10 6.72E-11
D72Q 1.65E-07 3.35E-08 9.50E-10 1.17E-10
D72A 1.39E-07 1.59E-08 1.22E-09 1.71E-10
D73A 6.45E-08 9.86E-09 6.13E-10 8.81E-11
D72E + E38A 2.69E-08 6.03E-09 4.38E-10 7.87E-11
自基於HTRF之高通量篩選結果中選擇αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21之六個變異體，各含有選自E38R、M70D、M70H、M70Q、D72A及L94K之不同突變蛋白，用於進一步研究(圖3)。在此等六個變異體中，M70Q及M70H突變蛋白顯示與野生型IL-21相當的功效，區別於含有上述毒性減弱IL-21的融合蛋白。毒性減弱IL-21與野生型IL-21相比顯示小於80%功效(圖4及5)。
此等結果表明αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21之IL-21Rα突變蛋白充當加帽分子抑制IL-21與非目標細胞結合，此為PD-1(-)細胞中信號強度低的原因。此表明αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21係具有高組織特異性之免疫細胞介素。
此外，藉由對加帽部分引入適當的修飾以調節對其受體的特異性來增加特異性同時保持藥物物質的功效為吾等之發明區別於其他藥物的獨特優勢。αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21顯示完全促效劑及競爭性拮抗劑的特性。
7.5. 免疫細胞介素 (αPD-1IL21Rα 突變蛋白 /IL21) 對 PD-1 之 SPR 全動力學分析藉由表面電漿子共振(SPR，Biacore 8K)分析確定免疫細胞介素與人類PD-1 (hPD-1)之間的相互作用。免疫細胞介素及hPD-1之親和力藉由CM5感測器晶片測試。以10 μL/min之流動速率持續420 s將400mM EDC及100mM NHS (Cytiva)注入CM5感測器晶片作為活化劑，隨後以10 μL/min之流動速率持續420 s將25 μg/mL之溶於10mM NaAc (pH 4.5)中之抗人類Fc IgG注入通道1至8。藉由1 M乙醇胺-HCl (Cytiva)以10 μL/min之流動速率使晶片去活化420 s。
在操作緩衝液(1×HBS-EP+)中稀釋之免疫細胞介素經由抗人類Fc IgG以10 μL/min的流動速率持續40 s捕獲至Fc2上。使用多循環動力學以進行分析。將7種不同濃度(0、2.5、5、10、20、40及80 nM)之分析物hPD-1及操作緩衝液以30 μL/min之流動速率有序注入Fc1-Fc2，結合期為180 s，接著解離900 s。在每個解離期之後，注射10 mM甘胺酸pH 1.5作為再生緩衝液。
自測試感測器圖譜減去來自參考通道Fc1及緩衝液通道之感測器圖譜。藉由1:1結合模型擬合實驗資料。使用17kDa之分子量計算hPD-1之莫耳濃度。
SPR分析表明，IL21RαWT或IL21Rα突變蛋白及IL-21與抗PD-1抗體之融合不影響抗PD-1抗體對PD-1之親和力(圖7A至7Q，表6)。
表 6
編號 IL-21R 突變位點 K D (M) 編號 IL-21R 突變位點 K D (M)
1 WT 8.41E-09 34 M70Y 8.81E-09
2 Y36C 8.36E-09 35 A71E 8.14E-09
3 Y36E 8.32E-09 36 A71F 8.70E-09
4 Y36G 8.51E-09 37 A71I 8.59E-09
5 Y36H 9.02E-09 38 A71L 8.87E-09
6 Y36I 8.74E-09 39 A71Q 8.51E-09
7 Y36K 8.23E-09 40 A71R 8.94E-09
8 Y36M 8.32E-09 41 A71W 9.12E-09
9 Y36N 8.20E-09 42 A71Y 8.94E-09
10 Y36P 8.44E-09 43 I74R 8.90E-09
11 Y36Q 8.49E-09 44 I74W 8.94E-09
12 Y36R 8.45E-09 45 L94F 8.39E-09
13 Y36S 8.39E-09 46 L94K 8.90E-09
14 Y36T 8.52E-09 47 L94Q 8.90E-09
15 Y36V 8.63E-09 48 L94R 7.82E-09
16 E38C 9.06E-09 49 L94Y 9.19E-09
17 E38R 6.61E-09 50 M70C 7.91E-09
18 E38Y 8.73E-09 51 M70D 7.25E-09
19 L39C 8.61E-09 52 M70G 8.42E-09
20 L39E 8.45E-09 53 M70R 6.83E-09
21 L39H 8.24E-09 54 D72A 6.88E-09
22 L39K 8.43E-09 55 D72E 6.53E-09
23 L39R 8.62E-09 56 D72Q 8.64E-09
24 L39W 8.78E-09 57 D72R 8.03E-09
25 L39Y 9.74E-09 58 D73A 7.47E-09
26 M70F 9.01E-09 59 Y36A + L94R 7.26E-09
27 M70H 8.85E-09 60 E38A + L94K 7.70E-09
28 M70N 8.78E-09 61 E38A + L94R 8.16E-09
29 M70Q 8.85E-09 62 D72E + Y36A 7.39E-09
30 M70S 8.84E-09 63 D72E + E38A 7.19E-09
31 M70T 8.49E-09 64 D72E + L94K 7.58E-09
32 M70V 8.53E-09 65 D72E + L94R 8.01E-09
33 M70W 8.86E-09 66 D72R + E38R 7.02E-09
7.6. 免疫細胞介素 (αPD-1IL21Rα 突變蛋白 /IL21) 與 FcRn 之結合親和力已知基於抗體之蛋白質藥物與FcRn之結合親和力與其活體內半衰期關聯極大。免疫細胞介素(αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21)與FcRn之結合親和力使用生物層干涉量測法(BLI)系統量測。作為對照，亦量測不與IL-21或IL-21 Rα突變蛋白結合之抗PD-1抗體的結合親和力。
為了分析，FAB2G生物感測器(Sartorius)在96孔盤(Corning)中用操作緩衝液水合10分鐘。用操作緩衝液稀釋配位體(抗PD-1抗體或免疫細胞介素)以使最終濃度為0.5 µg/ml之抗PD-1抗體及2 µg/ml之免疫細胞介素。向FAB2G生物感測器裝載1.5 nm含量之抗PD-1抗體或免疫細胞介素。在裝載抗PD-1抗體或免疫細胞介素後，藉由在操作緩衝液中培育經裝載感測器尖端300秒來設置基線。裝載配位體之感測器尖端在含有2倍連續稀釋的可溶性FcRn/B2M複合受體的孔中培育。量測結合及解離60秒或直至達成穩定狀態。圖8A中提供量測資料。
使用Octet RED96e (ForteBio)儀器量測抗PD-1抗體或免疫細胞介素與FcRn的結合親和力。經最佳化之Octet樣品緩衝液(100mM磷酸鈉，300mM NaCl，0.05% Tween20)用於樣品稀釋及所有結合基線、結合及解離步驟，pH值為6.0或pH值為7.4。減去僅緩衝液之空白曲線以校正任何漂移。使用ForteBio TM資料分析軟體11.1將資料擬合至1:1結合模型以確定K on、K off及K D，在圖8B中提供。
資料顯示，免疫細胞介素與FcRn之結合親和力與抗PD-1抗體的結合親和力無顯著差異。此結果表明，本發明之免疫細胞介素之藥物動力學概況將受益於FcRn結合能力，因此具有足以提供治療效果的半衰期。
7.7. 活體外腫瘤殺傷分析為確認本發明免疫細胞介素(αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21)之抗腫瘤作用，測試用本發明免疫細胞介素處理之CD8+ T細胞之IFNγ表現量的增加及細胞毒性的變化。當CD8+ T細胞與藉由MHC-肽複合物在其表面呈遞特定抗原的自體單核球衍生DC (moDC)共培養時，受腫瘤抗原教育之CD8+ T細胞(例如CTL)可識別且攻擊表現彼等抗原的腫瘤細胞。藉由量測歸因於腫瘤細胞死亡而自腫瘤細胞中洩漏的螢光物質，證實了免疫細胞介素的功效。
特定而言，人類PBMC係購自StemExpress (美國)。 使用Pan Monocyte Isolation Kit (Miltenyi Biotec)分離單核球，且在RPMI1640培養基(Gibco)中與35 ng/mL重組人類IL-4 (R&D Systems)及50 ng/mL GM-CSF (R&D Systems)一起培養7天，以將單核球分化為樹突狀細胞(DC)。使用10 ng/mL重組人類IL-6 (R&D Systems)、15 ng/mL IL-1β (R&D Systems)、40 ng/mL TGFα (R&D Systems)及1 μg/mL PGE2 (PeproTech)使未成熟之單核球衍生DC進一步成熟3天。在成熟期間，向單核球衍生DC (moDC)加載抗原肽。使用CD8 +T細胞分離套組(Miltenyi Biotec)分離自體供體之CD8+ T細胞且以10:1細胞數量比率與成熟moDC共培養10天。每2或3天添加補充有重組人類IL-15 (R&D Systems)及重組人類IL-7 (R&D Systems)之培養基以維持CTL。
隨後使用抗CD3ε抗體(R&D Systems)、抗CD28抗體(R&D Systems)及重組人類IL-2 (R&D Systems)擴增CTL 5天。在CTL (效應細胞)擴增期間，以500nM濃度處理本發明免疫細胞介素(αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21或αPD-1IL21RαWT/IL21)或對照(例如抗PD-1抗體)。
7.7.1. 釋放 IFN-γ藉由ELISA使用人類IFN-γ DuoSet ELISA套組(R&D Systems)量測培養上清液中之IFNγ含量。結果在圖10中提供，證實了回應免疫細胞介素(αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21之四種變異體，各含有選自M70D、M70Q、L94K及E39R之不同突變蛋白)自CTL釋放之IFNγ增加。
7.7.2. 細胞毒性為證實腫瘤殺傷功效，在與擴增之CTL (效應細胞)共培養前一天接種經Calcein AM(Invitrogen)染色之目標細胞(MeWo細胞株或CMV pp65基因轉導之A375細胞株(A375_CMV))。收集效應細胞且加載至具有目標細胞之培養基且培養36小時。藉由使用FlexStation3設備偵測Ex 485 nm及Em 530 nm之螢光信號來量測死亡腫瘤細胞中Calcein AM的釋放。
圖11A及11B提供分別來自MeWo細胞株及A375_CMV細胞株之資料。資料顯示經αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21處理之CTL顯示比對照更好的腫瘤殺傷活性。此可歸因於αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21增強CTL的效應功能。此等表明本文提供之免疫細胞介素αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21在施加至癌症患者時可增強抗腫瘤活性。
7.8. 針對 CTLA-4 、 TIGIT 、 LAG-3 之免疫細胞介素 (αCTLA-4L21Rα 突變蛋白 /IL21 ； αTIGITIL21Rα 突變蛋白 /IL21 ；或 αLAG-3IL21Rα 突變蛋白 /IL21)藉由上文關於αPD-1L21Rα突變蛋白/IL21描述之方法產生針對三種不同靶標CTLA-4、TIGIT及LAG-3中之每一者的兩種免疫細胞介素(αCTLA-4L21Rα突變蛋白/IL21；αTIGITIL21Rα突變蛋白/IL21；或αLAG-3IL21Rα突變蛋白/IL21)。免疫細胞介素包括(i)包含重鏈、G4S連接子及IL-21Rα突變蛋白之第一鏈；(ii)包含重鏈、G4S連接子及人類IL-21之第二鏈；及(iii)兩個輕鏈，在表7中指定。免疫細胞介素成功地自CHO細胞株中產生，且HTRF分析證實了它們的STAT3磷酸化的功能活性，如5.9中所述。
表 7
IL-21Rα 突變位點 第一鏈( 重鏈-G4S 連接子-IL-21R α 突變蛋白) 之序列 第二鏈( 重鏈-G4S 連接子- 人類IL-21) 之序列 兩個輕鏈之序列
伊派利單抗 WT SEQ ID NO: 230 SEQ ID NO: 229 SEQ ID NO: 152
M70D SEQ ID NO: 231 SEQ ID NO: 229 SEQ ID NO: 152
D72A SEQ ID NO: 232 SEQ ID NO: 229 SEQ ID NO: 152
替瑞利尤單抗 WT SEQ ID NO: 234 SEQ ID NO: 233 SEQ ID NO: 226
M70D SEQ ID NO: 235 SEQ ID NO: 233 SEQ ID NO: 226
D72A SEQ ID NO: 236 SEQ ID NO: 233 SEQ ID NO: 226
瑞拉利單抗 WT SEQ ID NO: 238 SEQ ID NO: 237 SEQ ID NO: 228
M70D SEQ ID NO: 239 SEQ ID NO: 237 SEQ ID NO: 228
D72A SEQ ID NO: 240 SEQ ID NO: 237 SEQ ID NO: 228
7.9. 免疫細胞介素 ( α CTLA-4IL21R α 突變蛋白 /IL21 ； α TIGITIL21R α 突變蛋白 /IL21 ；及 α LAG-3IL21R α 突變蛋白 /IL21) 之均勻 時間解析螢光 (HTRF) 磷酸化 STAT3 分析藉由在基於HTRF之高通量分析中量測STAT3之磷酸化來評估針對CTLA-4、TIGIT或LAG-3之免疫細胞介素。對於H9，在含有20%胎牛血清(FBS，Gibco)及1%青黴素/鏈黴素(Sigma Aldrich)之IMDM培養基(Gibco)中生長人類皮膚T淋巴細胞株(H9 (Cobioer)，Hut78細胞之衍生物)。向H9細胞額外添加3 μg/mL嘌呤黴素(Invivogen)。每48小時進行細胞繼代培養，以避免可能阻止細胞週期的高密度。
用無血清培養基培育H9細胞隔夜。培育後，用HBSS (Gibco)溶液收集離心細胞(以125 g)且以2.5 × 10 4個細胞/孔/8μL接種於白色96孔低體積盤(Cisbio)上。用於評估之化合物以終濃度的3×製備，且在37℃下施加至細胞30分鐘。將裂解緩衝液加入孔中30分鐘，且隨後遵循製造商之方案處理HTRF反應的試劑。24小時後，藉由Flex Station 3設備量測HTRF反應。
圖12及表8提供展現rhIL21、ABP-IL21RαWT/IL21及ABP-IL21Rα突變蛋白/IL21活化之HTRF反應的資料。其中，由於IL21RαWT或IL21Rα突變蛋白對IL21之掩蔽作用，ABP-IL21RαWT/IL21及ABP-IL21Rα突變蛋白/IL21具有比rhIL21顯著更低的活性。如所預期，鑒於IL21RαWT與IL21Rα突變蛋白相比具有對IL21之更高的親和力，IL21RαWT之掩蔽作用比IL21Rα突變蛋白大。
   表 8 EC 50 之 概述
rhIL21 抗CTLA-4 抗體 αCTLA-4 IL21Rα WT/IL21 αCTLA-4 IL21Rα 突變蛋白(M70D)/IL21 αCTLA-4 IL21Rα 突變蛋白(D72A)/IL21
EC50(M) 7.47E-10 N/A 6.524E-07 3.399E-07 5.143E-07
EC50 比率 1.0 N/A 873.4 455.0 688.5
      抗TIGIT 抗體 αTIGIT IL21Rα WT/IL21 αTIGIT IL21Rα 突變蛋白(M70D)/IL21 αTIGIT IL21Rα 突變蛋白(D72A)/IL21
EC50(M)    N/A 6.096E-07 2.017E-07 1.67E-07
EC50 比率    N/A 816.1 270.0 223.6
   抗LAG-3 抗體 αLAG-3 IL21Rα WT/IL21 αLAG-3 IL21Rα 突變蛋白(M70D)/IL21 αLAG-3 IL21Rα 突變蛋白(D72A)/IL21
EC50(M)    N/A 2.73E-06 1.42E-07 4.538E-07
EC50 比率    N/A 3654.6 190.1 607.5
7.10. 免疫細胞介素 ( α CTLA-4IL21R α 突變蛋白 /IL21 ； α TIGITIL21R α 突變蛋白 /IL21 ；或 α LAG-3IL21R α 突變蛋白 /IL21) 之 SPR 全動力學分析藉由表面電漿子共振(SPR)分析測試免疫細胞介素與其對應的人類靶蛋白(hCTLA-4、hTIGIT或hLAG-3)之間的結合。藉由CM5感測器晶片測試免疫細胞介素與其人類配位體的親和力。以10 μL/min之流動速率持續420 s將400mM EDC及100mM NHS (Cytiva)注入CM5感測器晶片作為活化劑，隨後以10 μL/min之流動速率持續420 s將25 μg/mL之溶於10mM NaAc (pH 4.5)中之抗人類Fc IgG注入通道1至8。藉由1 M乙醇胺-HCl (Cytiva)以10 μL/min之流動速率使晶片去活化420 s。
在操作緩衝液(1×HBS-EP+)中稀釋之免疫細胞介素經由抗人類Fc IgG以10 μL/min的流動速率持續40 s捕獲至Fc2上。使用多循環動力學以進行分析。將6個濃度(1.56、3.13、6.25、12.5、25及50 nM)之分析物hCTLA-4 (Acro Biosystems)或6個濃度(0.78、1.56、3.13、6.25、12.5及25 nM)之分析物hTIGIT (R&D systems)或6個濃度(0.31、0.63、1.25、2.5、5及10nM)之分析物hLAG-3 (Acro Biosystems)及操作緩衝液以30 μL/min之流動速率有序注入Fc1-Fc2，結合期為180 s，接著解離900 s。在每個解離期之後，注射10 mM甘胺酸pH 1.5作為再生緩衝液。
自測試感測器圖譜減去用於參考通道Fc1及緩衝液通道之感測器圖譜。藉由1:1結合模型或異質配位體模型擬合實驗資料。
SPR分析表明，IL21RαWT或IL21Rα突變蛋白及IL-21與抗CTLA-4、抗TIGIT或抗LAG-3抗體之融合不影響抗CTLA-4、抗TIGIT或抗LAG-3抗體與其對應的靶標的親和力(表9；圖9A、9B及9C)。
表9 免疫細胞介素(αCTLA-4IL21Rα 突變蛋白/IL21 ；αTIGITIL21Rα 突變蛋白/IL21 ；或αLAG-3IL21Rα 突變蛋白/IL21) 對靶標(CTLA-4 ；TIGIT ；或LAG-3) 之 親和力
編號 對照抗體 K D (M) 編號 IL-21R 突變位點 K D (M)
1 伊派利單抗 2.09E-08 針對 hCTLA-4
2 替瑞利尤單抗 5.95E-11 1 WT 1.80E-08
3 瑞拉利單抗 2.39E-10 2 M70D 1.81E-08
N/A 3 D72A 1.71E-08
針對 hTIGIT
4 WT 5.17E-11
5 M70D 5.37E-11
6 D72A 5.60E-11
針對 hLAG-3
7 WT 2.64E-10
8 M70D 2.49E-10
9 D72A 2.55E-10
8. 等效物及以引用之方式併入儘管已參考較佳實施例及各種替代實施例特定展示及描述本發明，但應理解，在不偏離本發明之精神及範疇之情況下，熟習相關技術者可在其中作出形式及細節的各種變化。
出於所有目的，本說明書正文內引用之所有參考文獻、所頒予專利及專利申請案均以全文引用的方式併入本文中。 9. 序列表
序列表概述
SEQ ID NO 序列
1 納武單抗重鏈
2 納武單抗輕鏈
3 帕博利珠單抗重鏈
4 帕博利珠單抗輕鏈
5 西米普利單抗重鏈
6 西米普利單抗輕鏈
7 阿特珠單抗重鏈
8 阿特珠單抗輕鏈
9 多塔利單抗重鏈
10 多塔利單抗輕鏈
11 度伐魯單抗重鏈
12 度伐魯單抗輕鏈
13 阿維魯單抗重鏈
14 阿維魯單抗輕鏈
15 野生型IL-21Rα (胞外域；細胞外域)
16 人類IgG1 Fc (100 Pro-330 Lys)
17 G4S連接子
18-99 IL-21Rα突變蛋白
100 人類IL-21
101 具有杵突變之第二鏈(抗PD-1抗體之重鏈+連接子+人類IL-21)
102 抗PD-1抗體，輕鏈
103 抗PD-1抗體，具有臼突變之重鏈
104-150 αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白
151 (伊派利單抗重鏈)
152 (伊派利單抗輕鏈)
153 (曲美木單抗重鏈)
154 (曲美木單抗輕鏈)
155-169 IL21Rα突變蛋白
170-184 Fc-連接子-IL21Rα突變蛋白
185 IgG1 Fc部分(WT)
186 IgG2 Fc部分(WT)
187 IgG3 Fc部分(WT)
188 IgG4 Fc部分(WT)
189 具有『LALA』(L234A/L235A)突變之IGHG1 (免疫球蛋白重恆定γ1)
190 具有『SPLE』(S228P/L235E)突變之IGHG4 (免疫球蛋白重恆定γ4)
191 αPD-1-連接子- IL21RαWT
192-209 αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白
210 編碼IgG1-1IL21Rα (野生型)之聚核苷酸
211 編碼αPD-1IL21Rα (野生型)之聚核苷酸
212-217 可撓性連接子
218-224 剛性連接子
225 替瑞利尤單抗重鏈
226 替瑞利尤單抗輕鏈
227 瑞拉利單抗重鏈
228 瑞拉利單抗輕鏈
229 具有杵突變之第二鏈(抗CTLA-4抗體之重鏈+連接子+人類IL-21)
230 αCTLA-4 +連接子+IL21RαWT
231-232 αCTLA-4 +連接子+IL21Rα突變蛋白
233 具有杵突變之第二鏈(抗TIGIT抗體之重鏈+連接子+人類IL-21)
234 αTIGIT +連接子+IL21RαWT
235-236 αTIGIT +連接子+IL21Rα突變蛋白
237 具有杵突變之第二鏈(抗LAG-3抗體之重鏈+連接子+人類IL-21)
238 αLAG-3 +連接子+IL21RαWT
239-240 αLAG-3 +連接子+IL21Rα突變蛋白
SEQ ID NO 序列
1 (納武單抗重鏈) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYY ADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPS VFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSLGK
2 (納武單抗輕鏈) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
3 (帕博利珠單抗重鏈) QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
4 (帕博利珠單抗輕鏈) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
5 (西米普利單抗重鏈) EVQLLESGGV LVQPGGSLRL SCAASGFTFS NFGMTWVRQA PGKGLEWVSG ISGGGRDTYF ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLKGED TAVYYCVKWG NIYFDYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTKTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK
6 (西米普利單抗輕鏈) DIQMTQSPSS LSASVGDSIT ITCRASLSIN TFLNWYQQKP GKAPNLLIYA ASSLHGGVPS RFSGSGSGTD FTLTIRTLQP EDFATYYCQQ SSNTPFTFGP GTVVDFRRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
7 (阿特珠單抗重鏈) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
8 (阿特珠單抗輕鏈) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
9 (多塔利單抗重鏈) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMSWVRQAPGKGLEWVSTISGGGSYTYYQDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYYAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
10 (多塔利單抗輕鏈) DIQLTQSPSFLSAYVGDRVTITCKASQDVGTAVAWYQQKPGKAPKLLIYWASTLHTGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQHYSSYPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
11 (度伐魯單抗重鏈) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
12 (度伐魯單抗輕鏈) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
13 (阿維魯單抗重鏈) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
14 (阿維魯單抗輕鏈) QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
15 IL-21RαWT CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
16 人類IgG1 Fc (100 Pro-330 Lys) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
17 G4S連接子 GGGGSGGGGSGGGGS
18 Q35K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQD KYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
19 Q35R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQD RYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
20 Q35Y (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQD YYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
21 Y36C (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ CEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
22 Y36E (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ EEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
23 Y36G (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ GEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
24 Y36H (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ HEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
25 Y36I (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ IEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
26 Y36K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ KEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
27 Y36M (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ MEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
28 Y36N (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ NEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
29 Y36P (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ PEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
30 Y36Q (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ QEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
31 Y36R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ REELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
32 Y36S (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ SEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
33 Y36T (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ TEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
34 Y36V (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ VEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
35 E38C (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE CLKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
36 E38K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE KLKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
37 E38R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE RLKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
38 E38Y (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE YLKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
39 L39C (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE CKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
40 L39E (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE EKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
41 L39F (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE FKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
42 L39H (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE HKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
43 L39K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE KKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
44 L39R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE RKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
45 L39W (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE WKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
46 L39Y (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE YKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
47 M70C (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF CADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
48 M70D (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF DADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
49 M70F (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF FADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
50 M70G (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF GADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
51 M70H (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF HADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
52 M70K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF KADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
53 M70L (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF LADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
54 M70N (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF NADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
55 M70Q (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF QADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
56 M70R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF RADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
57 M70S (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF SADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
58 M70T (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF TADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
59 M70V (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF VADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
60 M70W (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF WADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
61 M70Y (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF YADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
62 A71E (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM EDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
63 A71F (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM FDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
64 A71I (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM IDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
65 A71L (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM LDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
66 A71Q (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM QDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
67 A71R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM RDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
68 A71W (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM WDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
69 A71Y (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM YDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
70 D72A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA ADIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
71 D72C (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA CDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
72 D72E (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA EDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
73 D72F (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA FDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
74 D72G (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA GDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
75 D72H (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA HDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
76 D72I (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA IDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
77 D72K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA KDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
78 D72L (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA LDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
79 D72M (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA MDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
80 D72Q (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA QDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
81 D72R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA RDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
82 D72W (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA WDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
83 D72Y (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA YDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
84 D73C (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD CIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
85 D73A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD AIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
86 D73E (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD EIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
87 D73H (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD HIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
88 D73K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD KIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
89 D73R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD RIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
90 D73W (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD WIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
91 D73Y (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD YIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
92 I74H (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADD HFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
93 I74K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADD KFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
94 I74R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADD RFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
95 I74W (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADD WFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
96 L94F (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF FLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
97 L94K (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF KLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
98 L94Q (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF QLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
99 L94R (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF RLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
100 人類IL-21 QDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
101 具有杵突變之第二鏈(抗PD-1抗體之重鏈+連接子+人類IL-21 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
102 抗PD-1抗體，輕鏈 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
103 抗PD-1抗體，具有臼突變之重鏈 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
104 Y36C (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ CEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
105 Y36E (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ EEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
106 Y36G (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ GEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
107 Y36H (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ HEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
108 Y36I (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ IEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
109 Y36K (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ KEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
110 Y36M (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ MEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
111 Y36N (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ NEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
112 Y36P (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ PEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
113 Y36Q (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ QEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
114 Y36R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ REELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
115 Y36S (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ SEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
116 Y36T (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ TEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
117 Y36V (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ VEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
118 E38C (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE CLKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
119 E38Y (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE YLKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
120 L39C (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE CKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
121 L39E (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE EKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
122 L39H (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE HKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
123 L39K (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE KKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
124 L39R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE RKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
125 L39W (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE WKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
126 L39Y (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE YKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
127 M70F (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF FADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
128 M70H (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF HADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
129 M70N (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF NADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
130 M70Q (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF QADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
131 M70S (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF SADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
132 M70T (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF TADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
133 M70V (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF VADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
134 M70W (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF WADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
135 M70Y (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF YADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
136 A71E (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM EDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
137 A71F (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM FDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
138 A71I (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM IDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
139 A71L (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM LDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
140 A71Q (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM QDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
141 A71R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM RDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
142 A71W (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM WDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
143 A71Y (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFM YDDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
144 I74R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADD RFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
145 I74W (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADD WFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
146 L94F (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF FLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
147 L94K (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF KLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
148 L94Q (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF QLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
149 L94R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF RLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
150 L94Y (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF YLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
151 (伊派利單抗重鏈) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYY ADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSAS TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL YSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
152 (伊派利單抗輕鏈) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIP DRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFP PSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
153 (曲美木單抗重鏈) QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAASGFTFS SYGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDGSNKYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARDP RGATLYYYYY GMDVWGQGTT VTVSSASTKG PSVFPLAPCS RSTSESTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSN FGTQTYTCNV DHKPSNTKVD KTVERKCCVE CPPCPAPPVA GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVQFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQF NSTFRVVSVL TVVHQDWLNG KEYKCKVSNK GLPAPIEKTI SKTKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP MLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG K
154 (曲美木單抗輕鏈) DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSIN SYLDWYQQKP GKAPKLLIYA ASSLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YYSTPFTFGP GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
155 Y10A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTD ALQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
156 Y36A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ AEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
157 E38A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE ALKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
158 L39A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE AKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
159 F67A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDV AHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
160 H68A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVF AFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
161 I74A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADD AFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
162 L94A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF ALAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
163 P126A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYED AAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
164 Y129A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAF AMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
165 M130A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFY ALKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
166 K134A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKG ALQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
167 S189A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPG ASYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
168 S190A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGS AYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
169 Y191A (IL-21Rα突變蛋白) CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSS AQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
170 Y10A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTD ALQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
171 Y36A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ AEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
172 E38A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE ALKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
173 L39A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEE AKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
174 F67A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDV AHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
175 H68A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVF AFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
176 I74A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADD AFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
177 L94A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF ALAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
178 P126A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYED AAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
179 Y129A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAF AMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
180 M130A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFY ALKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
181 K134A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKG ALQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
182 S189A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPG ASYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
183 S190A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGS AYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
184 Y191A (Fc-連接子-IL-21Rα突變蛋白) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSS AQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
185 IgG1 Fc部分(WT) PKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
186 IgG2 Fc部分(WT) ERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK
187 IgG3 Fc部分(WT) ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
188 IgG4 Fc部分(WT) ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
189 具有『LALA』(L234A/L235A)突變之IGHG1 (免疫球蛋白重恆定γ1) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
190 具有『SPLE』(S228P/L235E)突變之IGHG4 (免疫球蛋白重恆定γ4) ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
191 αPD-1-連接子-IL21RαWT QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGS CPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
192 Y36A + D72E (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ AEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA EDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
193 Y36A + L94R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQ AEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF RLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
194 E38A + D72E (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE ALKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA EDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
195 E38A + L94K (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE ALKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF KLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
196 E38A + L94R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE ALKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSF RLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
197 E38R + D72R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE RLKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA RDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
198 D72E + L94K (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA EDIFSVNITDQSGNYSQECGSF KLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
199 D72E + L94R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白)    QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA EDIFSVNITDQSGNYSQECGSF RLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
200 E38R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYE RLKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
201 M70C (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF CADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
202 M70D (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF DADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
203 M70G (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF GADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
204 M70R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHF RADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
205 D72A (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA ADIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
206 D72E (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA EDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
207 D72Q (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA QDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
208 D72R (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMA RDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
209 D73A (αPD-1+連接子+IL21Rα突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAD AIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
210 (編碼IgG1 Fc-IL21Rα (野生型)之聚核苷酸) CCGAAATCATGTGACAAAACTCATACTTGTCCTCCATGCCCAGCCCCAGAATTGCTGGGGGGACCATCTGTGTTCCTTTTCCCCCCTAAGCCAAAAGACACTCTGATGATCAGTCGCACTCCTGAAGTGACCTGCGTCGTGGTAGACGTCTCTCACGAAGATCCCGAGGTCAAATTTAACTGGTATGTGGATGGCGTGGAAGTTCATAACGCAAAAACCAAACCCCGCGAAGAACAATATAATAGCACATACCGTGTTGTTAGCGTTTTGACAGTCCTTCACCAGGATTGGCTCAACGGAAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAATAAAGCATTGCCCGCCCCTATAGAGAAGACTATTAGCAAGGCCAAAGGTCAGCCCCGGGAGCCTCAGGTGTATACATTGCCTCCCAGCCGCGATGAACTCACTAAAAACCAAGTCAGCCTCACATGTCTGGTTAAAGGTTTTTACCCCAGCGATATCGCAGTCGAGTGGGAATCTAATGGGCAGCCTGAAAATAACTATAAGACAACCCCACCAGTGTTGGATAGCGATGGCAGCTTTTTTCTTTACTCTAAGTTGACTGTTGACAAGAGCAGGTGGCAACAAGGCAACGTGTTTAGCTGCAGTGTCATGCACGAAGCACTCCACAATCATTACACCCAGAAGAGTCTGAGCTTGTCACCTGGAAAGGGTGGAGGCGGTTCAGGCGGAGGTGGCTCTGGCGGTGGCGGATCATGTCCTGACCTGGTGTGCTACACCGACTACCTGCAGACCGTGATCTGCATCCTGGAGATGTGGAACCTGCATCCTTCTACCCTGACACTGACCTGGCAGGACCAGTACGAGGAACTGAAGGACGAGGCCACCTCCTGCTCCCTGCACAGATCTGCTCACAACGCCACCCACGCTACCTACACCTGTCACATGGACGTGTTCCACTTCATGGCCGACGACATCTTTTCTGTGAACATCACCGATCAGTCTGGCAACTACTCCCAAGAGTGCGGCTCTTTCCTGCTGGCCGAGTCCATCAAGCCTGCTCCTCCTTTCAACGTGACCGTGACCTTCTCCGGCCAGTACAACATCTCTTGGCGGTCCGACTACGAGGACCCCGCCTTCTACATGCTGAAGGGCAAGCTGCAGTACGAGCTGCAGTACCGGAACAGAGGCGACCCTTGGGCCGTGTCCCCTAGAAGAAAGCTGATCTCCGTGGACTCCAGATCCGTGTCTCTGCTGCCTCTGGAATTCCGGAAGGACTCTAGCTACGAACTGCAAGTGCGGGCTGGCCCTATGCCTGGCTCCTCCTACCAGGGAACATGGTCCGAGTGGAGCGATCCTGTGATCTTCCAGACCCAGTCCGAAGAGCTGAAAGAG
211 (編碼αPD-1IL21RαWT之聚核苷酸) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCCGGAGGAGGAGTGGTGCAGCCAGGCAGGTCCCTGCGGCTGGACTGTAAGGCCTCCGGCATCACCTTTTCTAACTCCGGAATGCATTGGGTGAGGCAGGCTCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCTGTGATCTGGTACGACGGCAGCAAGCGGTACTATGCCGATTCTGTGAAGGGCAGATTCACAATCTCTCGCGACAACTCCAAGAATACCCTGTTTCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCCGAGGATACAGCCGTGTACTATTGCGCTACCAATGACGATTACTGGGGCCAGGGCACACTGGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACAAAGGGACCATCCGTGTTCCCACTGGCTCCATGCAGCCGGTCTACATCCGAGAGCACCGCCGCTCTGGGATGTCTGGTGAAGGATTATTTCCCTGAGCCAGTGACCGTGAGCTGGAACTCCGGCGCCCTGACATCTGGCGTGCACACCTTTCCTGCTGTGCTGCAGTCTTCCGGCCTGTACTCCCTGAGCTCTGTGGTGACAGTGCCCTCCAGCTCTCTGGGCACCAAGACATATACCTGCAACGTGGACCATAAGCCTTCCAATACCAAGGTGGATAAGAGAGTGGAGAGCAAGTACGGACCACCTTGCCCACCATGTCCAGCTCCTGAGTTTCTGGGAGGACCATCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCCGCACACCTGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCTCAGGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAATGCTAAGACCAAGCCTAGAGAGGAGCAGTTTAACTCCACATACCGCGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCATCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTATAAGTGCAAGGTGTCCAATAAGGGCCTGCCATCCAGCATCGAGAAGACAATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCTTCTCAGGAGGAGATGACAAAGAACCAGGTGTCCCTGTCCTGTGCCGTGAAGGGCTTCTATCCAAGCGACATCGCTGTGGAGTGGGAGTCTAATGGCCAGCCCGAGAACAATTACAAGACCACACCACCCGTGCTGGACTCCGATGGCAGCTTCTTTCTGGTCTCCAGGCTGACAGTGGATAAGAGCCGGTGGCAGGAGGGCAACGTGTTTTCTTGTTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAATCATTACACCCAGAAGAGCCTGTCTCTGTCCCTGGGCGGTGGCGGTGGCTCTGGCGGAGGTGGCTCAGGTGGCGGCGGATCCTGTCCTGATCTCGTGTGCTATACCGACTACCTCCAGACCGTTATTTGTATCCTTGAGATGTGGAATTTGCACCCATCAACACTGACTCTGACTTGGCAGGATCAATACGAGGAGCTGAAAGACGAGGCCACATCCTGCTCCTTGCATCGATCAGCACACAACGCCACTCATGCAACATACACTTGCCATATGGATGTGTTCCACTTCATGGCAGATGATATTTTTTCAGTTAACATTACAGATCAATCCGGCAACTATTCACAGGAATGTGGCTCTTTTCTTCTGGCAGAATCAATAAAGCCCGCACCTCCTTTCAACGTGACTGTCACCTTCTCAGGACAATATAATATCAGCTGGCGATCTGACTATGAGGACCCTGCCTTTTACATGCTGAAAGGCAAGCTCCAATACGAACTTCAATATCGTAATAGGGGGGACCCATGGGCCGTCAGTCCTCGACGGAAGCTGATATCCGTGGACTCTAGAAGTGTCTCTCTCTTGCCCCTCGAATTTAGGAAAGACTCATCCTACGAGCTTCAAGTTCGGGCAGGTCCCATGCCCGGCTCAAGCTATCAGGGGACATGGAGCGAGTGGTCCGACCCAGTAATTTTCCAAACCCAAAGCGAGGAATTGAAAGAG
212 (GGGGS) 1可撓性連接子 GGGGS
213 (GGGGS) 2可撓性連接子 GGGGSGGGGS
214 (GGGGS) 3可撓性連接子 GGGGSGGGGSGGGGS
215 (GGGGS) 4可撓性連接子 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
216 (Gly) 6可撓性連接子 GGGGGG
217 (Gly) 8可撓性連接子 GGGGGGGG
218 (EAAAK) 1剛性連接子 EAAAK
219 (EAAAK)2 剛性連接子 EAAAKEAAAK
220 (EAAAK)3 剛性連接子 EAAAKEAAAKEAAAK
221 A(EAAAK)4ALE A(EAAAK)4A 剛性連接子 AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKALEAEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKA
222 PAPAP 剛性連接子 PAPAP
223 AEAAAKEAAAKA 剛性連接子 AEAAAKEAAAKA
224 (Ala-Pro)n(10-33aa) 剛性連接子 (AP)n, (n=5-15)
225 替瑞利尤單抗重鏈 EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGKTYYRFKWYSDYAVSVKGRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTRESTTYDLLAGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
226 替瑞利尤單抗輕鏈 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQTVLYSSNNKKYLAWYQQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPFTFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
227 瑞拉利單抗重鏈 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
228 瑞拉利單抗輕鏈 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQGTNLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
229 具有杵突變之第二鏈( 抗CTLA-4 抗體之重鏈+ 連接子+ 人類IL-21) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
230 αCTLA-4+ 連接子+IL21Rα WT QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
231 M70D (αCTLA-4+ 連接子+IL21Rα 突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFDADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
232 D72A (αCTLA-4+ 連接子+IL21Rα 突變蛋白) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAADIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
233 具有杵突變之第二鏈( 抗TIGIT 抗體之重鏈+ 連接子+ 人類IL-21) EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGKTYYRFKWYSDYAVSVKGRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTRESTTYDLLAGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
234 αTIGIT+ 連接子+IL21RαWT EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGKTYYRFKWYSDYAVSVKGRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTRESTTYDLLAGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
235 M70D (αTIGIT+ 連接子+IL21Rα 突變蛋白) EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGKTYYRFKWYSDYAVSVKGRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTRESTTYDLLAGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFDADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
236 D72A (αTIGIT+ 連接子+IL21Rα 突變蛋白) EVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGKTYYRFKWYSDYAVSVKGRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVFYCTRESTTYDLLAGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAADIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
237 具有杵突變之第二鏈( 抗LAG-3 抗體之重鏈+ 連接子+ 人類IL-21) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
238 αLAG-3+ 連接子+IL21RαWT QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
239 M70D (αLAG-3+ 連接子+IL21Rα 突變蛋白) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFDADDIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
240 D72A (αLAG-3+ 連接子+IL21Rα 突變蛋白) QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYYWNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSRVTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGYSDYEYNWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGGGGGSGGGGSGGGGSCPDLVCYTDYLQTVICILEMWNLHPSTLTLTWQDQYEELKDEATSCSLHRSAHNATHATYTCHMDVFHFMAADIFSVNITDQSGNYSQECGSFLLAESIKPAPPFNVTVTFSGQYNISWRSDYEDPAFYMLKGKLQYELQYRNRGDPWAVSPRRKLISVDSRSVSLLPLEFRKDSSYELQVRAGPMPGSSYQGTWSEWSDPVIFQTQSEELKE
就以下描述及隨附圖式將更好地理解本發明之此等及其他特徵、態樣及優勢，其中： 圖 1提供例示性免疫細胞介素(αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21)之示意性圖示。 圖 2A 至 2V提供針對IL21之IL-21Rα突變蛋白的SPR全動力學分析的感測器圖譜。 圖 3提供測試66種不同αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21的實驗結果。X軸顯示藉由生物層干涉量測法(BLI)量測之免疫細胞介素對IL21的親和力，且y軸顯示IL-21介導之STAT3磷酸化的功效(功效係數)。結果顯示，由於免疫細胞介素中之IL21Rα突變蛋白與IL-21的結合親和力降低，免疫細胞介素(αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21)具有更高的功效係數。 圖 4提供所選擇之六種αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21、αPD-1IL21RαWT/IL21 (「WT」)及重組人類IL-21蛋白(「IL-21」)的濃度依賴性曲線。具體而言，該圖顯示PD-1(+) H9細胞中IL-21介導之活化(功效係數)。具有M70Q及M70H突變之αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21的最大效能與重組人類IL-21 (「IL-21」)相當，且其他顯示至少80%以上。 圖 5提供所選擇之六種αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21、αPD-1IL21RαWT/IL21 (「WT」)及重組人類IL-21蛋白(「IL-21」)的濃度依賴性曲線。具體而言，該圖顯示PD-1(-) H9細胞中IL-21介導之活化(功效係數)。六種αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21之最大效能與重組人類IL-21 (「IL-21」)類似，但所有變異體之EC50均增加。 圖 6A 至 6E提供在PD-1(-) H9細胞及PD-1(+) H9細胞中觀測到之STAT3磷酸化回應16種αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21變異體之反應曲線。 圖 7A 至 7Q提供針對PD-1之免疫細胞介素(αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21)的SPR全動力學分析的感測器圖譜。 圖 8A顯示使用ForteBio Octet RED96e儀器量測αPD-1抗體或免疫細胞介素與FcRn的結合親和力。 圖 8B係概述αPD-1抗體或免疫細胞介素與FcRn之結合動力學的表。 圖 9A 、 9B 及 9C提供免疫細胞介素(αCTLA-4IL21Rα突變蛋白/IL21；αTIGITIL21Rα突變蛋白/IL21；或αLAG-3IL21Rα突變蛋白/IL21)針對其靶標(hCTLA-4、hTIGIT或hLAG-3)之SPR全動力學分析的感測器圖譜資料。 圖 10顯示自與免疫細胞介素(包括M70D、M70Q、L94K及E38R之αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21)共培養之CTL (效應細胞)釋放的IFNγ濃度(pg/ml)，如第5.7部分所述。將資料與回應αPD-1抗體或αPD-1IL21RαWT/IL21 (「WT」)之IFNγ釋放進行比較。 圖 11A 及 11B顯示自死亡腫瘤細胞釋放之鈣黃綠素AM的螢光信號(RFU)，如第5.7.2部分所述。信號指示效應細胞對用免疫細胞介素(包括M70D、M70Q、L94K及E38R之αPD-1IL21Rα突變蛋白/IL21)或對照(αPD-1抗體或αPD-1IL21RαWT/IL21 (「WT」))處理之腫瘤細胞(MeWo細胞株(圖11A)及A375_CMV細胞株(圖11B))的腫瘤殺傷功效。 圖 12提供自第5.9部分中描述之基於HTRF的高通量分析獲得的STAT3磷酸化曲線。其顯示由rhIL21、ABP-IL21RαWT/IL21及ABP-IL21Rα突變蛋白/IL21誘導之STAT3磷酸化，而非由無IL21結合的抗體(亦即抗CTLA-4抗體(伊派利單抗)、抗TIGIT抗體(替瑞利尤單抗)、抗LAG-3抗體(瑞拉利單抗))誘導。
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Claims (51)

  1. 一種免疫細胞介素，其包含： A.     對靶蛋白具有特異性之抗原結合蛋白(ABP)； B.     IL-21域；及 C.     IL-21Rα突變蛋白， 其中該IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比具有降低的對該IL-21域的結合親和力。
  2. 如請求項1之免疫細胞介素，其中該靶蛋白係免疫檢查點分子。
  3. 如請求項1之免疫細胞介素，其中該靶蛋白係PD-1、PD-L1、TIGIT、LAG-3、CTLA-4、TIM-3、CD39、CD38、CD73、CD36、CD25、CD47、CD24、CD20、SIPRα、CD40或CD20。
  4. 如請求項3之免疫細胞介素，其中該ABP係針對該靶蛋白之抗體或替代的骨架。
  5. 如請求項1至4中任一項之免疫細胞介素，其中該ABP包含Fc片段。
  6. 如請求項1至5中任一項之免疫細胞介素，其中該ABP包含人類IgG1 Fc片段、人類IgG2 Fc片段、人類IgG3 Fc片段或人類IgG4 Fc片段。
  7. 如請求項1至6中任一項之免疫細胞介素，其中該Fc片段包含選自SEQ ID NO: 16、185至190之序列。
  8. 如請求項1至7中任一項之免疫細胞介素，其中該ABP包含具有兩個Fc部分之Fc片段，且該IL-21Rα突變蛋白連接至該兩個Fc部分之第一個，且該IL-21域連接至該兩個Fc部分之第二個。
  9. 如請求項8之免疫細胞介素，其中該IL-21域及該IL-21Rα突變蛋白分別藉由不可裂解肽連接子連接。
  10. 如請求項8之免疫細胞介素，其中該IL-21域及該IL-21Rα突變蛋白分別在無肽連接子之情況下連接。
  11. 如請求項9之免疫細胞介素，其中該不可裂解肽連接子係具有SEQ ID NO: 17之序列之G4S連接子或具有選自SEQ ID NO: 212至224之序列之肽連接子。
  12. 如請求項1至11中任一項之免疫細胞介素，其中該ABP係選自納武單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、西米普利單抗(cemiplimab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、多塔利單抗(dostarlimab)、度伐魯單抗(durvalumab)、阿維魯單抗(avelumab)、伊派利單抗(ipilimumab)、曲美木單抗(tremelimumab)、替瑞利尤單抗(tiragolumab)、瑞拉利單抗(relatlimab)或其功能變異體。
  13. 如請求項1至11中任一項之免疫細胞介素，其中該ABP包含與選自納武單抗、帕博利珠單抗、西米普利單抗、阿特珠單抗、多塔利單抗、度伐魯單抗、阿維魯單抗、伊派利單抗、替瑞利尤單抗、瑞拉利單抗及曲美木單抗之抗體相同的V HCDR1、V HCDR2、V HCDR3、V LCDR1、V LCDR2及V LCDR3序列。
  14. 如請求項1至13中任一項之免疫細胞介素，其中該IL-21Rα突變蛋白與野生型IL-21Rα相比對該IL-21域之結合親和力減少至少10倍。
  15. 如請求項1至14中任一項之免疫細胞介素，其中該IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15具有至少95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之序列。
  16. 如請求項1至15中任一項之免疫細胞介素，其中該IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含至少一個胺基酸取代。
  17. 如請求項16之免疫細胞介素，其中該IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含一至五個胺基酸取代。
  18. 如請求項16至17中任一項之免疫細胞介素，其中該一或多個胺基酸取代係在選自SEQ ID NO: 15中之Y10、Q35、Y36、E38、L39、F67、H68、M70、A71、D72、D73、I74、L94、P126、Y129、M130、K134、S189、S190及Y191之一或多個胺基酸位置。
  19. 如請求項18之免疫細胞介素，其中該一或多個胺基酸取代係在選自SEQ ID NO: 15中之Y36、E38、L39、M70、A71、D72、D73A、I74及L94之一或多個胺基酸位置。
  20. 如請求項1至19中任一項之免疫細胞介素，其中該IL-21Rα突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。
  21. 如請求項1至20中任一項之免疫細胞介素，其包含第一鏈，該第一鏈自N端至C端包含： A.     包含選自SEQ ID NO: 16、185至190之任一個序列之人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc片段；及 B.     具有選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列的該IL-21Rα突變蛋白。
  22. 如請求項1至20中任一項之免疫細胞介素，其包含第一鏈，該第一鏈自N端至C端包含： A.     包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、11、13、151、153、225及227之序列或其變異體之該ABP的重鏈，其中該變異體包含杵-臼(knob-and-hole)突變及/或該序列之C端之Lys (K)的缺失；及 B.     IL-21Rα突變蛋白。
  23. 如請求項22之免疫細胞介素，其中該IL-21Rα突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。
  24. 如請求項22之免疫細胞介素，其中該第一鏈包含選自SEQ ID NO: 104至150、192至209、231至232、235至236及239至240之序列。
  25. 如請求項1至24中任一項之免疫細胞介素，其中該IL-21域係人類IL-21或其功能變異體。
  26. 如請求項25之免疫細胞介素，其中該IL-21域具有SEQ ID NO: 100 (人類IL-21)之序列。
  27. 如請求項1至26中任一項之免疫細胞介素，其包含第二鏈，該第二鏈包含該ABP之重鏈及該IL-21域。
  28. 如請求項27之免疫細胞介素，其中該第二鏈具有SEQ ID NO: 101、229、233或237之序列。
  29. 如請求項1至28中任一項之免疫細胞介素，其進一步包含具有SEQ ID NO: 102、152、226或228之序列之輕鏈。
  30. 一或多種聚核苷酸，其編碼如請求項1至29中任一項之免疫細胞介素。
  31. 如請求項30之一或多種聚核苷酸，其包含： A.     編碼包含該ABP之該重鏈及該IL-21Rα突變蛋白之第一鏈的第一聚核苷酸片段； B.     編碼包含該ABP之該重鏈及該IL-21域之第二鏈的第二聚核苷酸片段；及 C.     編碼該ABP之該輕鏈之第三聚核苷酸片段。
  32. 如請求項31之一或多種聚核苷酸，其中該第一聚核苷酸片段、該第二聚核苷酸片段及該第三聚核苷酸片段在單個聚核苷酸分子中。
  33. 如請求項31之一或多種聚核苷酸，其中該第一聚核苷酸片段、該第二聚核苷酸片段及該第三聚核苷酸片段在多個聚核苷酸分子中。
  34. 如請求項31之一或多種聚核苷酸，其中該第一聚核苷酸片段、該第二聚核苷酸片段及該第三聚核苷酸片段單獨存在於獨立的聚核苷酸分子中。
  35. 一或多種載體，其包含如請求項30至34中任一項之一或多種聚核苷酸。
  36. 一種宿主細胞，其包含如請求項30至34中任一項之一或多種聚核苷酸或如請求項35之一或多種載體。
  37. 一種宿主細胞，其包含如請求項1至29中任一項之免疫細胞介素。
  38. 如請求項36或37之宿主細胞，其中該宿主細胞係免疫細胞，視情況其中該免疫細胞係T細胞。
  39. 一種增強個體之免疫反應之方法，其包含向該個體投與如請求項1至29中任一項之免疫細胞介素或如請求項36至38中任一項之宿主細胞。
  40. 如請求項39之方法，其中該個體係癌症患者。
  41. 一種選擇性活化目標細胞上之IL-21Rα之方法，其包含：將如請求項1至29中任一項之免疫細胞介素遞送至該目標細胞。
  42. 如請求項41之方法，其中該目標細胞係免疫細胞，視情況其中該免疫細胞係T細胞。
  43. 一種IL-21Rα突變蛋白，其與野生型IL-21Rα相比具有降低的對IL-21域的結合親和力。
  44. 如請求項43之IL-21Rα突變蛋白，其中該野生型IL-21Rα包含SEQ ID NO: 15之序列。
  45. 如請求項43或44之IL-21 Rα突變蛋白，其中該IL-21域係人類IL-21或其功能變異體，視情況其中該IL-21域具有SEQ ID NO: 100 (人類IL-21)之序列。
  46. 如請求項43至46中任一項之IL-21 Rα突變蛋白，其與野生型IL-21Rα相比對該IL-21域之結合親和力減少至少10倍。
  47. 如請求項43至46中任一項之IL-21 Rα突變蛋白，其中該IL-21Rα突變蛋白具有與SEQ ID NO: 15具有至少95%、96%、97%、98%或99%序列一致性之序列。
  48. 如請求項43至47中任一項之IL-21 Rα突變蛋白，其中該IL-21Rα突變蛋白與SEQ ID NO: 15相比包含至少一個胺基酸取代。
  49. 如請求項48之IL-21 Rα突變蛋白，其中該一或多個胺基酸取代係在選自SEQ ID NO: 15中之Y10、Q35、Y36、E38、L39、F67、H68、M70、A71、D72、D73、I74、L94、P126、Y129、M130、K134、S189、S190及Y191之一或多個胺基酸位置。
  50. 如請求項43至49中任一項之IL-21 Rα突變蛋白，其中該IL-21Rα突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至99及155至169之序列。
  51. 一種聚核苷酸、載體或宿主細胞，其包含編碼如請求項43至50中任一項之IL-21 Rα突變蛋白之聚核苷酸片段。
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