TW202319050A - 氮雜螺環化合物 - Google Patents
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Abstract
一種氮雜螺環化合物,具體涉及式(II-1)等所示化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療相關疾病藥物中的應用。
Description
本發明涉及一類氮雜螺環化合物,具體涉及式(II-1)等所示化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療相關疾病藥物中的應用。
本申請主張如下優先權:
CN202111308839.8,申請日2021年11月05日;
CN202210837792.2,申請日2022年07月15日;
CN202211351816.X,申請日2022年10月31日。
LRRK2激酶的突變及過表達越來越多地被證明是誘發神經退化性疾病的根本因素,以黑質區中多巴胺能神經元的選擇性變性和細胞死亡為主要特徵。影響著1%的65歲以上的人群,其中遺傳性患者占發病人群的5-10%。該疾病的早期,最明顯的症狀表現為搖動,活動緩慢和行走困難。後期還會出現認知和行為問題,晚期通常會出現癡呆。
越來越多的證據顯示富含白胺酸重複序列的激酶2(LRRK2)突變與神經退化性疾病有不可分割的聯繫,LRRK2是一種在催化磷酸化和GTP-GDP水解中涉及的2527胺基酸蛋白。人類LRRK2mRNA的NCBI參與序列是NM_198578.2。證據顯示,LRRK2在絲胺酸-129處磷酸化a-突觸核蛋白,並且這一磷酸化形式構成路易氏體的重要部分。另外,已經顯示LRRK2的功能結構域中的單核苷酸多肽性引起常見性且散發性神經退化性疾病。目前為止,研究人員已經在患有遲發型神經退化性疾病的家族中識別了超過20個LRRK2突變。例如G2019S突變與常染色體顯性共分離,並且其在歐洲導致約6%的家庭性病例和3%散發性病例。G2019S突變發生在高度保守的激酶結構域,因此G2019S突變可能對激酶活性有影響。此外,在另一殘基R1441上的胺基酸取代也與神經退化性疾病有關,並且顯示提高了LRRK2激酶的活性。在轉基因小鼠模型中的突變體LRRK2蛋白R1441G的過度表達與多巴胺釋放減少有關,顯示LRRK2抑制劑也能積極地調節多巴胺的釋放並且在治療以及多巴胺釋放減少有關,顯示LRRK2抑制劑也能積極地調節多巴胺的釋放並且在治療以降低的多巴胺水平為特徵的疾病中具有潛在效用。相關的數據進一步顯示了LRRK2激酶活性抑制劑也可用於治療相關的神經變性疾病。
因此,開發有效的LRRK2激酶以及突變的LRRK2激酶的抑制劑成為目前治療神經退化性疾病的一條重要的途徑。本發明旨在發明一種可以高度對LRRK2激酶抑制的化合物,從而進一步發明可以很好的治療神經退化性疾病的藥物。
本發明提供式(III-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4)和(III-2)所示化合物或其藥學上可接受的鹽:
、
、
、
、
,
其中,
A選自
、
、
、
、
和
;
結構單元
選自
、
、
和
;
X
1為CH,X
2為C-A;或者,X
1為C-A,X
2為CH;
Y為-C(R
9R
10)-或-O-;
Z
1為CH,Z
2為N;或者,Z
1為N,Z
2為CH;
R
1和R
2分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、CH
3和CF
3;
R
3和R
4分別獨立地選自H和C
1-3烷基,所述C
1-3烷基任選被1、2或3個鹵素取代;
R
5和R
6分別獨立地選自H、F、CH
3和CF
3;
R
7選自CH
3和CHF
2;
R
9和R
10分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、C
1-3烷基和C
1-3烷氧基,所述C
1-3烷基和C
1-3烷氧基分別獨立地任選被1、2或3個鹵素取代;
m、n、q、t分別獨立地選自0、1和2。
在本發明的一些方案中,上述化合物選自式(II-1)、(II-2)、(II-3)和(II-4)所示化合物:
、
、
、
,
其中,
A選自
、
和
;
X
1為CH,X
2為C-A;或者,X
1為C-A,X2為CH;
Y為-C(R9R10)-或-O-;
Z
1為CH,Z
2為N;或者,Z
1為N,Z
2為CH;
R
1和R
2分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、CH
3和CF
3;
R
3和R
4分別獨立地選自H和C
1-3烷基,所述C
1-3烷基任選被1、2或3個鹵素取代;
R
5和R
6分別獨立地選自H和F;
R
7選自CH
3和CHF
2;
R
9和R
10分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、C
1-3烷基和C
1-3烷氧基,所述C
1-3烷基和C
1-3烷氧基分別獨立地任選被1、2或3個鹵素取代;
m、n、q、t分別獨立地選自0、1和2。
在本發明的一些方案中,上述化合物如式(I-1)、(I-2)、(I-3)、(I-4)、(I-5)和(I-6)所示:
、
、
、
、
、
,
其中,Y、R
1、R
2、R
3、R
4、m、n、q和t如本發明所定義。
在本發明的一些方案中,上述式(I-1)、(I-2)、(I-3)、(I-4)、(I-5)和(I-6)所示化合物或其藥學上可接受的鹽:
、
、
、
、
、
,
其中,
Y為-C(R
9R
10)-或-O-;
R
1和R
2分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、CH
3和CF
3;
R
3和R
4分別獨立地選自H和C
1-3烷基,所述C
1-3烷基任選被1、2或3個鹵素取代;
R
9和R
10分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、C
1-3烷基和C
1-3烷氧基,所述C
1-3烷基和C
1-3烷氧基分別獨立地任選被1、2或3個鹵素取代;
m、n、q、t分別獨立地選自0、1和2。
在本發明的一些方案中,上述R
1選自H和F,其他變量如本發明所定義。
在本發明的一些方案中,上述R
2選自Cl和F,其他變量如本發明所定義。
在本發明的一些方案中,上述R
3和R
4分別獨立地選自CH
3,其他變量如本發明所定義。
在本發明的一些方案中,上述R
9和R
10分別獨立地選自H、F、CH
3、-OCHF
2和-OCH
3,其他變量如本發明所定義。
在本發明的一些方案中,上述R
9和R
10分別獨立地選自H、F和-OCH3,其他變量如本發明所定義。
在本發明的一些方案中,上述Y為-CHF-、-CF
2-、-CH
2-、-CH(OCH3)-、-CH(OCHF
2)-和-O-,其他變量如本發明所定義。
本發明還有一些方案是由上述各變量任意組合而來。
本發明還提供化合物或其藥學上可接受的鹽,其中,化合物選自
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
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、
、
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、
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、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
、
和
。
本發明還提供上述化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療帕金森氏症藥物中的應用。
技術效果
本發明化合物對LRRK2具有顯著的激酶抑制和細胞活性以及透膜性和溶解性,同時具有優良的藥代動力學和藥效學性質,如具有較好的入腦性質。
定義和說明
除非另有說明,本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的,而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時,意在指代其對應的商品或其活性成分。
這裡所採用的術語「藥學上可接受的」,是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言,它們在可靠的醫學判斷的範圍之內,適用於與人類和動物的組織接觸使用,而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症,與合理的利益/風險比相稱。
術語「藥學上可接受的鹽」是指本發明化合物的鹽,由本發明發現的具有特定取代基的化合物與相對無毒的酸或鹼製備。當本發明的化合物中含有相對酸性的功能團時,可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的鹼與這類化合物接觸的方式獲得鹼加成鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機胺或鎂鹽或類似的鹽。當本發明的化合物中含有相對鹼性的官能團時,可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的酸與這類化合物接觸的方式獲得酸加成鹽。藥學上可接受的酸加成鹽的實例包括無機酸鹽,所述無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸,碳酸氫根,磷酸、磷酸一氫根、磷酸二氫根 、硫酸、硫酸氫根、氫碘酸、亞磷酸等;以及有機酸鹽,所述有機酸包括如乙酸、丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸和甲磺酸等類似的酸;還包括氨基酸(如精胺酸等)的鹽,以及如葡糖醛酸等有機酸的鹽。本發明的某些特定的化合物含有鹼性和酸性的官能團,從而可以被轉換成任一鹼或酸加成鹽。
本發明的藥學上可接受的鹽可由含有酸根或鹼基的母體化合物通過常規化學方法合成。一般情況下,這樣的鹽的製備方法是:在水或有機溶劑或兩者的混合物中,經由游離酸或鹼形式的這些化合物與化學計量的適當的鹼或酸反應來製備。
除非另有規定,術語「有效量」或「治療有效量」是指無毒的但能達到預期效果的用量。有效量的確定因人而異,取決於受體的年齡和一般情況,也取決於具體的活性物質,個案中合適的有效量可以由本發明所屬技術領域具通常知識者根據常規試驗確定。
本發明的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如,可用放射性同位素標記化合物,比如氚(
3H),碘-125(
125I)或C-14(
14C)。又例如,可用重氫取代氫形成氘代藥物,氘與碳構成的鍵比普通氫與碳構成的鍵更堅固,相比於未氘化藥物,氘代藥物有降低毒副作用、增加藥物穩定性、增強療效、延長藥物生物半衰期等優勢。本發明的化合物的所有同位素組成的變換,無論放射性與否,都包括在本發明的範圍之內。
術語「任選」或「任選地」指的是隨後描述的事件或狀況可能但不是必需出現的,並且該描述包括其中所述事件或狀況發生的情況以及所述事件或狀況不發生的情況。
術語「被取代的」是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代,可以包括重氫和氫的變體,只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基為氧(即=O)時,意味著兩個氫原子被取代。
術語「任選被取代的」是指可以被取代,也可以不被取代,除非另有規定,取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的。
當任何變量(例如R)在化合物的組成或結構中出現一次以上時,其在每一種情況下的定義都是獨立的。因此,例如,如果一個基團被0-2個R所取代,則所述基團可以任選地至多被兩個R所取代,並且每種情況下的R都有獨立的選項。此外,取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。
當一個連接基團的數量為0時,比如-(CRR)
0-,表示該連接基團為單鍵,-C
0烷基-A表示該結構實際上是-A。
當一個取代基數量為0時,表示該取代基是不存在的,比如-A-(R)
0表示該結構實際上是-A。
當一個取代基為空缺時,表示該取代基是不存在的,比如A-X中X為空缺時表示該結構實際上是A。
當其中一個變量選自單鍵時,表示其連接的兩個基團直接相連,比如A-L-Z中L代表單鍵時表示該結構實際上是A-Z。
當一個取代基為空缺時,表示該取代基是不存在的,比如A-X中X為空缺時表示該結構實際上是A。
當所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到被取代的基團上時,這種取代基可以通過其任何原子相鍵合,例如,吡啶基作為取代基可以通過吡啶環上任意一個碳原子連接到被取代的基團上。
當所列舉的連接基團沒有指明其連接方向,其連接方向是任意的,例如,
中連接基團L為-M-W-,此時-M-W-既可以按與從左往右的讀取順序相同的方向連接環A和環B構成
,也可以按照與從左往右的讀取順序相反的方向連接環A和環B構成
。所述連接基團、取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。
除非另有規定,當某一基團具有一個或多個可連接位點時,該基團的任意一個或多個位點可以通過化學鍵與其他基團相連。當該化學鍵的連接方式是不定位的,且可連接位點存在H原子時,則連接化學鍵時,該位點的H原子的個數會隨所連接化學鍵的個數而對應減少變成相應價數的基團。所述位點與其他基團連接的化學鍵可以用直形實線鍵(
)、直形虛線鍵(
)、或波浪線(
)表示。例如-OCH
3中的直形實線鍵表示通過該基團中的氧原子與其他基團相連;
中的直形虛線鍵表示通過該基團中的氮原子的兩端與其他基團相連;
中的波浪線表示通過該苯基基團中的1和2位碳原子與其他基團相連;
表示該哌啶基上的任意可連接位點可以通過1個化學鍵與其他基團相連,至少包括
、
、
、
這4種連接方式,即使-N-上畫出了H原子,但是
仍包括
這種連接方式的基團,只是在連接1個化學鍵時,該位點的H會對應減少1個變成相應的一價哌啶基。
除非另有規定,環上原子的數目通常被定義為環的元數,例如,「5-7元環」是指環繞排列5-7個原子的「環」。
除非另有規定,術語「C
1-3烷基」用於表示直鏈或支鏈的由1至3個碳原子組成的飽和碳氫基團。所述C
1-3烷基包括C
1-2和C
2-3烷基等;其可以是一價(如甲基)、二價(如亞甲基)或者多價(如次甲基)。C
1-3烷基的實例包括但不限於甲基 (Me)、乙基 (Et)、丙基 (包括n-丙基和異丙基) 等。
除非另有規定,術語「C
1-3烷氧基」表示通過一個氧原子連接到分子的其餘部分的那些包含1至3個碳原子的烷基基團。所述C
1-3烷氧基包括C
1-2、C
2-3、C
3和C
2烷氧基等。C
1-3烷氧基的實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基 (包括正丙氧基和異丙氧基)等。
除非另有規定,術語「鹵代素」或「鹵素」本身或作為另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。
本發明的化合物可以通過本發明所屬技術領域具通常知識者所熟知的常規方法來確認結構,如果本發明涉及化合物的絕對構型,則該絕對構型可以通過本領域常規技術手段予以確證。例如X光單晶繞射法(SXRD),把培養出的單晶用Bruker D8 venture繞射儀收集繞射強度數據,光源為CuKα輻射,掃描方式:φ/ 掃描,收集相關數據後,進一步採用直接法(Shelxs97)解析晶體結構,便可以確證絕對構型。
本發明所使用的溶劑可經市售獲得。
本發明採用下述縮略詞:本發明所使用的溶劑可經市售獲得。本發明採用下述縮略詞:CDCl
3代表氘代氯仿,CD
3OD代表氘代甲醇,DMSO-
d 6代表氘代二甲亞碸 。
化合物依據本領域常規命名原則或者使用ChemDraw®軟件命名,市售化合物採用供應商目錄名稱。
下面通過實施例對本發明進行詳細描述,但並不意味著對本發明任何不利限制。本發明的化合物可以通過本發明所屬技術領域具通常知識者所熟知的多種合成方法來製備,包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本發明所屬技術領域具通常知識者所熟知的等同替換方式,優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。對本發明所屬技術領域具通常知識者而言,在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。
第一步
將化合物A-1(400毫克,1.76毫莫耳,1當量)溶於無水甲醇(10毫升),接著向反應液中加入氯化氫的甲醇溶液(2毫升,4莫耳/升,3當量),在25攝氏度氮氣保護下反應2小時。反應完成後,減壓濃縮純化得到中間體A。
MS-ESI 計算值[M+H]
+128, 實測值128。
第一步
將化合物B-1(20克,93.78毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(200毫升),接著在0攝氏度下向反應液中加入三氟化二乙氨基硫(18.14克,112.53毫莫耳,14.87毫升,1.2當量),然後在40攝氏度下反應12小時。反應完成後,加入200毫升水淬滅反應,然後用二氯甲烷(100毫升×3)萃取,再用飽和食鹽水(100毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾後,減壓濃縮得到粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 25:1-10:1)純化得到粗品化合物B-2。
第二步
將化合物B-2(300毫克,1.39毫莫耳,1當量)溶於乙酸乙酯(3毫升),接著在室溫下向反應液中加入氯化氫的乙酸乙酯(4莫耳/升,3.31毫升,8.61當量),在25攝氏度下反應2小時。反應完成後,加入碳酸氫鈉飽和水溶液(10毫升),二氯甲烷萃取(10毫升×3),有機相經飽和食鹽水(10毫升×3)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品未經純化得到中間體B。
MS-ESI 計算值[M+H]
+116, 實測值116。
中間體C製備
第一步
將化合物C-1(350毫克,1.50毫莫耳,1當量)溶於無水甲醇(10毫升),接著向反應液中加入氯化氫的甲醇溶液(2毫升,4莫耳/升,3當量),在25攝氏度氮氣保護下反應2小時。反應完成後,減壓濃縮純化得到中間體C。
MS-ESI 計算值[M+H]
+134, 實測值134。
第一步
將化合物1-1(5.00克,24.75毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(50毫升),接著在25攝氏度下向反應液中加入二碳酸二(三級丁酯)(8.10克,37.12毫莫耳,8.53毫升,1.5當量),在70攝氏度下反應10小時。反應完成後,過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-20:1)純化得到粗品化合物1-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+302,實測值302。
第二步
將化合物1-2(800毫克,2.65毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(40毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(2.59毫克,7.94毫莫耳,3當量)和中間體D(474.94毫克,3.97毫莫耳,1.5當量),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(306.39毫克,529.51微莫耳,0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(484.89毫克,529.51毫莫耳,0.2當量),然後置換氮氣三次。並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-25:1)純化得到化合物1-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+305,實測值305。
第三步
將化合物1-3(456毫克,1.50毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(5毫升),接著向反應液中加入三氟乙酸(7.70克,67.53毫莫耳,5毫升,45.08當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,減壓濃縮,將反應液加入飽和的碳酸氫鈉溶液(20毫升),用二氯甲烷萃取(20毫升×2),分液,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板純化(石油醚:乙酸乙酯= 5:2)得到化合物1-4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+205,實測值205。
第四步
將化合物1-4(110毫克,538.51毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(15毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(103.51毫克,1.08毫莫耳,2當量),中間體E(170.23毫克,538.51微莫耳,1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(51.34毫克,107.70微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(49.31毫克,53.85微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=50/1~二氯甲烷:甲醇= 20:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25*10微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%: 36%-66%,10分鐘) 分離得到化合物1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+484, 實測值484。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 0.64 - 0.69 (m, 4H), 1.80 - 1.90 (m, 6H), 3.64 - 3.71 (m, 3H), 3.95 - 4.01 (m, 4H), 6.24 - 6.32 (m, 1H), 6.79 - 6.87 (m, 1H), 7.27 - 7.33 (m, 1H), 7.38 - 7.43 (m, 1H), 7.53 - 7.59 (m, 1H), 7.60 - 7.68 (m, 1H), 8.07 - 8.13 (m, 1 H), 8.30 - 8.38 (m, 1H).
第一步
將化合物1-2(1克,3.31毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(30毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(3.23克,9.93毫莫耳,3當量)和中間體B(752.62毫克,4.96毫莫耳,1.5當量),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(382.98毫克,661.89微莫耳,0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(303.05毫克,330.95毫莫耳,0.1當量),然後置換氮氣三次。並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-25:1)純化得到粗品化合物2-1。
第二步
將化合物2-1(669毫克,1.99毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(6毫升),接著向反應液中加入三氟乙酸(9.24克,81.04毫莫耳,6毫升,40.75當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板純化(石油醚:乙酸乙酯= 50:1-5:1)得到化合物2-2。
第三步
將化合物2-2(150毫克,634.83毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(30毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(122.02毫克,1.27毫莫耳,2當量),中間體E(220.75毫克,698.31微莫耳,1.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(60.53毫克,126.97微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(58.13毫克,63.48微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=50/1~二氯甲烷:甲醇= 20:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*50毫米*3微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%: 35%-65%,10分鐘) 分離得到化合物2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+516, 實測值516。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 1.82 - 1.87 (m, 6H), 2.25 - 2.48 (m, 2H), 2.51 - 2.71 (m, 2H), 3.63 - 3.67 (m, 3H), 3.84 - 3.88 (m, 4H), 6.18 - 6.27 (m, 1H), 6.77 - 6.86 (m, 1H), 7.25 - 7.34 (m, 1H), 7.38 - 7.43 (m, 1H), 7.49 - 7.58 (m, 1H), 7.59 - 7.68 (m, 1H), 8.07 - 8.12 (m, 1H), 8.29 - 8.36 (m, 1H).
第一步
將化合物1-2(1.00克,3.31毫莫耳,1當量)和中間體F(591.30毫克,3.80毫莫耳,1.15當量)溶於二㗁烷(20毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(3.23克,9.93毫莫耳,3當量)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(303.05 毫克,330.95微莫耳,0.1當量)、4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(191.49 毫克, 330.95 微莫耳, 0.1當量)在100攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,加水(100毫升),乙酸乙酯萃取(60毫升×3),有機相用飽和食鹽水(60毫升×3)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1到20:1)純化得到化合物3-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+341, 實測值341。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 8.12 - 8.03 (m, 1 H), 7.65 - 7.59 (m, 2 H), 7.46 - 7.40 (m, 1 H), 7.01 – 6.95 (m, 2 H), 6.26 - 6.18 (m, 2 H), 5.40 - 5.25 (m, 3 H), 4.19 - 4.09 (m, 5 H), 4.02 - 3.93 (m, 5 H), 3.90 - 3.83 (m, 1 H), 3.71 - 3.63 (m, 5 H), 1.50 - 1.40 (m, 9 H), 0.97 - 0.84(m, 1 H)。
第二步
將化合物3-1(400.00毫克,1.18毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(4毫升),向反應液中加入三氟乙酸(369.07毫克,870.15微莫耳,2.5當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,加入水(10毫升),乙酸乙酯萃取(10毫升×3),有機相經飽和食鹽水(10毫升×3)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 80:1到10:1)純化得到化合物3-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+241, 實測值241。
第三步
將化合物3-2 (160毫克,665.98微莫耳,1.0當量),中間體E (231.58毫克,732.57微莫耳,1.1當量),三級丁醇鈉(192.01毫克,2.00 毫莫耳,3.0當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(63.50毫克,133.20微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(60.98毫克,66.60微莫耳,0.1當量)加入四氫呋喃 (20毫升) 中,氮氣置換保護,反應液加熱到70攝氏下反應12小時。反應完成後,過濾, 濾液減壓濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=15 : 1)和高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150*25毫米*10微米;流動相:流動相A:體積分數0.225%甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 41%-71%, 10分鐘) 純化得到化合物3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+520, 實測值520。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.38 - 8.30 (m, 1 H), 8.12 (s, 1 H), 7.70 - 7.53 (m, 2 H), 7.49 - 7.42 (m, 1 H), 7.35 - 7.26 (m, 1 H), 6.91 - 6.83 (m, 1 H), 6.36 - 6.29 (m, 1 H), 4.14 - 4.08 (m, 2 H), 4.01 - 3.94 (m, 2 H), 3.69 (s, 3 H), 1.88 (s, 3 H),1.85 (s, 3 H), 1.59 - 1.51 (m, 2 H)。
第一步
將化合物1-2(0.9克,2.98毫莫耳)溶於二㗁烷(10毫升),加入中間體A(894.03毫克,4.47毫莫耳),碳酸銫(2.91克,8.94毫莫耳),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(344.68毫克,595.70微莫耳)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(545.50毫克,595.70微莫耳),用氮氣置換三次,反應液在氮氣保護下升溫到100攝氏度,反應12小時。反應完畢後,反應液過濾,濃縮。粗品經柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯=100:1~10:1)得到化合物4-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+349,實測值349。
第二步
將化合物4-1(320毫克,918.39微莫耳)溶於二氯甲烷(5毫升),加入三氟乙酸(7.7克,67.53毫莫耳,5毫升),反應液在20攝氏度下反應0.5小時。反應完畢後,反應液濃縮,用飽和碳酸氫鈉溶液調節pH到8,二氯甲烷(10毫升×2)萃取,有機相用硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮,得到化合物4-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+249,實測值249。
第三步
將化合物4-2(110毫克,442.98微莫耳)溶於四氫呋喃(20毫升),加入化合物中間體E(140.03毫克,442.98微莫耳),三級丁醇鈉(85.14毫克,885.95毫莫耳),三(二亞苄基丙酮)二鈀(40.56毫克,44.30微莫耳)和2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(42.23毫克,88.60微莫耳)和,用氮氣置換三次,反應液在氮氣保護下升溫到70攝氏度,反應12小時。反應完畢後,反應液過濾,濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板純化(二氯甲烷:甲醇=10:1)後,經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米*微米;流動相:流動相A:氨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 65%-65%,10分鐘) 分離得到化合物4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+528,實測值528。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ=1.78 - 1.84 (m, 3H), 1.84 - 1.87 (m, 3H), 2.04 - 2.12 (m, 2H), 2.45 - 2.55 (m, 2H), 3.20 - 3.25 (m, 3H), 3.58 - 3.67 (m, 3H), 3.77 - 3.81 (m, 2H), 3.81 - 3.89 (m, 3H), 6.18 - 6.25 (m, 1H), 6.76 - 6.83 (m, 1H), 7.24 - 7.31 (m, 1H), 7.37 - 7.42 (m, 1H), 7.50 - 7.57 (m, 1H), 7.58 - 7.67 (m, 1H), 8.07 - 8.11 (m, 1H), 8.29 - 8.35 (m, 1H).
第一步
將化合物1-2(700.00毫克,3.23毫莫耳,1當量)和化合物G (441.96 毫克,2.70毫莫耳,1.17當量)溶於二㗁烷(5毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(1.51克,4.63毫莫耳,2當量),4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽(134.04 毫克,231.66微莫耳,0.1當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(106.07毫克 115.83 微莫耳, 0.05 當量)在100攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,加水(10毫升),乙酸乙酯萃取(10毫升×3),飽和食鹽水(20毫升×3)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1到4:1)純化得到化合物5-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+349, 實測值349。
第二步
將化合物5-1(600毫克,1.72毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(5毫升),接著向反應液中加入三氟乙酸(196.75毫克,1.72毫莫耳,1當量),在氮氣保護下25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,加入氨水(30毫升),二氯甲烷萃取(20毫升×3),有機相經飽和食鹽水(30毫升×3)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物5-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+249, 實測值249。
第三步
將化合物5-2(50.00毫克,201.35微莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(2毫升),接著向反應液中加入中間體E(95.48毫克,302.03微莫耳,1.5當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(18.44毫克,20.14微莫耳,0.1當量),2-二(三級丁基膦)-2’,4’,6’-三異丙基聯苯(19.20毫克,40.27微莫耳,0.2當量),三級丁醇鈉(38.70 毫克,402.71微莫耳,2當量),在70攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,加水(10毫升),乙酸乙酯萃取(10毫升×3),有機相用飽和食鹽水(20毫升×3)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮,粗品經矽膠薄層色譜板(石油醚:乙酸乙酯= 1:1)純化,再經高效液相色譜(色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米* 5微米;流動相A:氨水,流動相B:乙腈;B%: 34%-64%,9分鐘),分離得到化合物5。
MS-ESI 計算值[M+H]
+528, 實測值528。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.39 - 8.31 (m, 1 H), 8.15 - 8.09 (m, 1 H), 7.69 - 7.60 (m, 1 H), 7.60 - 7.54 (m, 1 H), 7.60 - 7.53 (m, 1 H) ,7.44 - 7.438(m, 1 H) ,7.35 - 7.27 (m, 1 H), 6.87 - 6.79 (m, 1 H) ,6.30 - 6.24 (m, 1 H) ,3.72 - 3.66 (m, 11 H) ,1.89 - 1.82 (m, 10 H)。
第一步
將化合物1-2(800.00毫克,2.65毫莫耳,1當量)和化合物H(393.68毫克,3.97毫莫耳,1.5當量)溶於二㗁烷(10毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(1.73克,5.30毫莫耳,2當量),醋酸鈀(59.44毫克,264.76微莫耳,0.1當量),三(三級丁基膦)四氟硼酸鹽(76.81毫克,264.76微莫耳,0.1當量),在100攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液減壓濃縮的殘渣經矽膠柱色譜(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-10:1)純化得化合物6-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+321, 實測值321。
第二步
將化合物6-1(350毫克,1.09毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(3毫升),接著在室溫下向反應液中加入三氟乙酸(3毫升),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,加入碳酸氫鈉飽和水溶液(30毫升),二氯甲烷萃取(10毫升×3),有機相經飽和食鹽水(40毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品未經純化得到化合物6-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+221, 實測值221。
第三步
將化合物6-2(70.00毫克,317.80微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(3毫升),接著向反應液中加入中間體E(105.49毫克,333.69微莫耳,1.05當量),三級丁醇鈉(61.08毫克,635.59微莫耳,2當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(30.30毫克,63.56微莫耳,0.2當量), 三(二亞苄基丙酮)二鈀(29.10毫克,31.78微莫耳,0.1當量),在100攝氏度下氮氣保護下反應1小時。反應完成後,反應液用矽藻土過濾,濾液減壓濃縮的粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)純化的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex C18 75*30毫米*3微米;流動相:流動相A:0.5%甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 25%-55%,7分鐘) 分離得到化合物6。
MS-ESI 計算值[M+H]
+500, 實測值500。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.39 - 8.30 (m, 1 H), 8.15 - 8.09 (m, 1 H) ,7.69 - 7.61 (m, 1 H), 7.60 - 7.50 (m, 1 H) ,7.46 - 7.37 (m, 1 H), 7.35 - 7.25 (m, 1 H), 6.86 - 6.78 (m, 1 H), 6.33 - 6.21 (m, 1 H), 4.85 (s, 4 H) ,4.09 - 4.02 (m, 4 H) ,3.72 - 3.64 (m, 3 H) ,1.91 - 1.87 (m, 3 H), 1.84 (s, 3 H)。
第一步
將化合物7-1(5.00克,31.33毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(100毫升),接著向反應液中加入4-二甲氨基吡啶(382.80毫克,3.13毫莫耳,0.1當量)和二碳酸二(三級丁酯)(17.10克,78.33毫莫耳,18.00毫升,2.5當量),在25攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(50毫升)稀釋,二氯甲烷萃取(20毫升×3),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-5:1)純化得到化合物7-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+360, 實測值360。
第二步
將化合物7-2(500.00毫克,1.39毫莫耳,1當量)溶於乙腈(20毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(576.17毫克,4.17毫莫耳,3當量)和中間體D(249.29毫克,2.08毫莫耳,1.5當量),在60攝氏度下反應16小時。反應完成後,加水(60毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(20毫升×3),有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮。粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米*5微米;流動相:流動相A:氨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 48%-78%,9分鐘) 分離得到化合物7-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+407, 實測值407。
第三步
將化合物7-3(400毫克,984.07微莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(5毫升),接著向反應液中加入三氟乙酸(7.70克,67.53毫莫耳,5毫升,68.62當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,加二氯甲烷(20毫升)稀釋,將反應液滴入飽和的碳酸氫鈉溶液(20毫升),用二氯甲烷萃取(20毫升×2),分液,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮,得到化合物7-4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+207, 實測值207。
第五步
將化合物7-4(100毫克,484.86微莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(93.19毫克,969.73微莫耳,2當量),中間體E(153.28毫克,484.86微莫耳,1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(46.23毫克,96.97微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(88.80毫克,96.97微莫耳,0.2當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*50毫米*3微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%: 12%-42%,10分鐘) 分離得到化合物7。
MS-ESI 計算值[M+H]
+486, 實測值486。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 0.72 - 0.75 (m, 4H), 1.82 - 1.84 (m, 3H), 1.85 - 1.87 (m, 3H), 3.89 - 3.92 (m, 3H), 4.18 - 4.20 (m, 4H), 7.16 - 7.24 (m, 1H), 7.39 - 7.48 (m, 1H), 7.51 - 7.58 (m, 1H), 7.97 - 8.04 (m, 1H), 8.10 - 8.17 (m, 1H), 8.18 - 8.23 (m, 1H), 8.28 - 8.41 (m, 1H).
第一步
將化合物7-2(800.00毫克,2.22毫莫耳,1當量)和中間體F(518.86毫克,3.34毫莫耳,1.5當量)溶於乙腈(25毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(921.87毫克,6.67毫莫耳,3當量),在60攝氏度保護下反應16小時。反應完成後,反應液加水(80毫升),乙酸乙酯萃取(40毫升×2),有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾。濾液濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 50:1-3:1)純化得化合物8-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+443,實測值343,287。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 7.89 (s, 1 H) ,4.35 - 4.13 (m, 4 H) , 4.06 - 3.91 (m, 3 H) ,1.55 - 1.31 (m, 18 H), 0.93 - 0.89 (m, 2 H)。
第二步
將化合物8-1(900.00毫克,2.03毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(8毫升),接著在室溫下向反應液中加入三氟乙酸(12.32克,108.05毫莫耳,8毫升,53.12當量),在25攝氏度下反應2小時。反應完成後,加入飽和碳酸氫鈉水溶液(150毫升),二氯甲烷萃取(10毫升×3),有機相經飽和食鹽水(30毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物8-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+243,實測值243。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 7.72 - 7.53 (m, 1 H), 4.20 - 4.13 (m, 2 H), 4.06 (s, 2 H) ,4.01 (br s, 3 H), 1.59 - 1.53 (m, 2 H)。
第三步
將化合物8-2(150.00毫克,619.26微莫耳,1當量),中間體E(195.76毫克,619.26微莫耳,1當量)溶於溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(119.02毫克,1.24毫莫耳,2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(56.71毫克,61.93微莫耳,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(59.04毫克,123.85微莫耳,0.2當量),在微波反應器中90攝氏度下反應1小時。反應完成後,反應液用矽藻土過濾,濾液減壓濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米* 5微米;流動相:流動相A:氨水:水(V:V)=10:1的水溶液;流動相B:乙腈;B%: 28%-58%,9分鐘) 分離得到化合物8。
MS-ESI 計算值[M+H]
+522, 實測值522。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.37 - 8.29 (m, 1 H), 8.26 - 8.22 (m, 1 H) ,8.05 - 8.01 (m, 1 H), 7.61 - 7.54 (m, 1 H), 7.49 - 7.44 (m, 1 H), 7.27 - 7.19 (m, 1 H), 4.34 - 4.28 (m, 2 H), 4.25 - 4.19 (m, 2 H), 3.95 (s, 3 H) ,1.90 - 1.83 (m, 6 H), 1.70 - 1.63 (m, 2 H)。
第一步
將化合物7-2(600.00毫克,1.67毫莫耳,1當量)和化合物I(243.03毫克,2.50毫莫耳,1.5當量)溶於乙腈(8毫升),接著向反應液中加入
N,
N-二異丙基乙胺(646.57毫克,5.00毫莫耳,871.37微升,3當量),在60攝氏度保護下反應12小時。反應完成後,反應液加水(40毫升),乙酸乙酯萃取(20毫升×2),有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾。濾液濃縮的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米* 5微米;流動相:流動相A:氨水:水(V:V)=10:1的水溶液;流動相B:乙腈;B%: 55%-85%,9分鐘) 分離純化得化合物9-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+421,實測值421。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 7.81 (s, 1 H), 4.09 (s, 4 H), 3.90 (s, 3 H) , 2.22 (t, J=7.58 Hz, 4 H), 1.88 (t, J=7.52 Hz, 2 H), 1.42 (s, 18 H)。
第二步
將化合物9-1(360.00毫克,856.12微莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(4毫升),接著在室溫下向反應液中加入三氟乙酸(9.24克,81.04毫莫耳,6毫升,94.66當量),在25攝氏度下反應1小時。反應完成後,加入飽和碳酸氫鈉水溶液(15毫升),二氯甲烷萃取(10毫升×2),有機相經飽和食鹽水(30毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物9-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+221,實測值221。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 7.66 (s, 1 H) ,7.27 (s, 1 H), 4.00 (s, 5 H) ,3.96 (s, 3 H), 2.18 (d,
J=7.70 Hz, 3 H) ,2.20 - 2.17 (m, 1 H), 1.88 - 1.82 (m, 2 H)。
第三步
將化合物9-2(120.00毫克,544.79微莫耳,1當量),中間體E(172.22毫克,544.79微莫耳,1當量)溶於溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(104.71毫克,1.09毫莫耳,2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(49.89毫克,54.48微莫耳,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(51.94毫克,108.96微莫耳,0.2當量),在氮氣保護性70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液用矽藻土過濾,濾液減壓濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米* 5微米;流動相:流動相A:氨水:水(V:V)=10:1的水溶液;流動相B:乙腈;B%: 32%-62%,9分鐘) 分離得到化合物9。
MS-ESI 計算值[M+H]
+522, 實測值522。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.39 - 8.24 (m, 1 H), 8.16 - 8.08 (m, 1 H), 8.04-7.98 (m, 1 H), 7.62 - 7.52 (m, 1 H), 7.48 - 7.38 (m, 1 H), 7.24 - 7.14 (m, 1 H), 4.14 - 4.06 (m, 4 H) ,3.96 - 3.91 (m, 3 H), 2.33 - 2.25 (m, 4 H), 1.98 - 1.91 (m, 2 H), 1.86 (d, J=13.46 Hz, 6 H)。
第一步
將化合物7-2(1克,2.78毫莫耳,1.0當量)溶於乙腈(30毫升),加入碳酸鉀(1.15 克,8.34毫莫耳,3當量)和化合物H(413.27毫克,4.17毫莫耳,1.5當量),反應液在60攝氏度下反應16小時。反應完畢後,加入80毫升水淬滅反應,再用乙酸乙酯(40毫升×2)萃取。有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經用矽膠柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯 = 5 : 1) 得到化合物10-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+423, 實測值423。
第二步
將化合物10-1(910毫克,2.15 毫莫耳,1.0當量)溶於二氯甲烷(4毫升),加入三氟乙酸(9.24克,81.04毫莫耳,37.62當量),反應液室溫反應1小時。反應完畢後,反應液濃縮後加入二氯甲烷(50毫升)稀釋,飽和食鹽水(50毫升)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經用矽膠薄層色譜板純化(二氯甲烷:甲醇 = 8 : 1) 得到化合物10-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+223, 實測值223。
第三步
將化合物10-2 (185 毫克,832.42微莫耳,1.0當量),中間體E(263.15毫克,832.42 微莫耳,1.0當量),三級丁醇鈉(160.00 毫克,1.66毫莫耳,2.0當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(79.37毫克,166.48 微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(76.23毫克,83.24微莫耳,0.1當量)加入四氫呋喃 (4毫升) 中,氮氣置換保護,反應液加熱到70攝氏下反應12小時。反應完成後,過濾,濾液減壓濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇 = 10 : 1)和高效液相色譜 (色譜柱:Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50毫米*3微米;流動相:流動相A:體積分數0.225%甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 10%-40%, 10分鐘) 純化得到化合物10。
MS-ESI 計算值[M+H]
+502, 實測值502。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.41 - 8.31 (m, 1 H), 8.19 (s, 1 H), 8.02 (s, 1 H), 7.62 - 7.52 (m, 1 H), 7.49 - 7.39 (m, 1 H), 7.25 - 7.17 (m, 1 H), 4.89 (m, 4 H), 4.30 (s, 4 H), 3.94 (s, 3 H), 1.88 (s, 3 H) , 1.85 (s, 3 H)。
第一步
將化合物11-1(5.00克,24.51毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(50毫升),接著向反應液中加入4-二甲氨基吡啶(299.4毫克,2.45毫莫耳,0.1當量)和二碳酸二(三級丁酯)(13.37克,61.27毫莫耳,2.5當量),在25攝氏度下反應1小時。反應完成後,加水(20毫升)稀釋,二氯甲烷萃取(10毫升×3),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-20:1)純化得到化合物11-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+404, 實測值404。
第二步
將化合物11-2(2.00克,4.95毫莫耳,1當量)和中間體F(923.61毫克,5.94毫莫耳,1.2當量)溶於二㗁烷(20毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(4.84毫克,14.84毫莫耳,3當量),醋酸鈀(222.14毫克,989.47微莫耳,0.2當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(616.12毫克,989.47微莫耳,0.2當量),在100攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 50:1-10:1)純化得化合物11-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+443,287,實測值443,287。
第三步
將化合物11-3(1.00克,2.26毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(12毫升),接著在室溫下向反應液中加入三氟乙酸(6.16克,54.02毫莫耳,4毫升,23.90當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,加入飽和碳酸氫鈉水溶液(30毫升),二氯甲烷萃取(10毫升×3),有機相經飽和食鹽水(40毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經高效液相色譜 (色譜柱: Waters Xbridge 150*50毫米* 10微米;流動相:流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 24%-54%,10分鐘)純化得到化合物11-4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+243, 實測值243。
第四步
將化合物11-4(138.42毫克,571.47微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(10毫升),接著向反應液中加入中間體E(216.78毫克,685.76微莫耳,1.2當量),碳酸銫(558.58毫克,1.71毫莫耳,3當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(71.17毫克,114.29微莫耳,0.2當量), 醋酸鈀(25.66毫克,114.29微莫耳,0.2當量),在100攝氏度下氮氣保護下反應12小時。反應完成後,反應液用矽藻土過濾,並用乙酸乙酯洗滌濾餅,濾液用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米* 5微米;流動相:流動相A:氨水:水(V:V)=10:1的水溶液;流動相B:乙腈;B%: 30%-60%,9分鐘) 分離得到化合物11。
MS-ESI 計算值[M+H]
+521.9, 實測值521.9。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.49 - 8.37 (m, 1 H) ,8.09 - 8.02 (m, 1 H) ,7.62 - 7.51 (m, 1 H), 7.48 - 7.39 (m, 1 H), 7.30 - 7.24 (m, 1 H), 7.22 - 7.14 (m, 1 H) ,4.34 - 4.27 (m, 2 H), 4.24 - 4.19 (m, 2 H) ,3.94 - 3.90 (m, 3 H), 1.90 - 1.87 (m, 3 H), 1.86 - 1.83 (m, 3 H), 1.72 - 1.64 (m, 2 H)。
第一步
將化合物11-2(1.00,2.47毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(20毫升)中,接著在向反應液中加入中間體D(411.28毫克,3.44毫莫耳,1.39當量),1,1’-聯萘-2,2’-雙二苯膦(308.06毫克,494.74 微莫耳, 0.2 當量),碳酸銫(1.61克,4.95毫莫耳,2當量),醋酸鈀(111.07毫克,494.74微莫耳 0.2當量)在100攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,加入水(60毫升),乙酸乙酯萃取(60毫升×3),有機相經飽和食鹽水(60毫升×3)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經用矽膠薄層色譜板純化(二氯甲烷:甲醇 = 10:1) 得到化合物12-1。
MS-ESI 計算值[M-156+H]
+251, 實測值251。
第二步
將化合物12-1(250.00毫克,615.04 微莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(2毫升),接著向反應液中加入三氟乙酸(350.64毫克, 227.69微升,3.08毫莫耳,5當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,加水(100毫升),乙酸乙酯萃取(60毫升×3),有機相用飽和食鹽水(60毫升×3)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物12-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+207, 實測值207。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ= 6.80 - 6.71 (m, 1 H), 6.81 - 6.69 (m, 1 H), 4.96 - 4.76 (m, 39 H) ,3.98 - 3.93(m, 3 H) 0.66 (s, 2 H)。
第三步
將化合物12-2(80毫克,387.89 微莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(5毫升),接著向反應液中加入中間體E(122.62毫克,387.89微莫耳,1當量)、2-二(三級丁基膦)-2’,4’,6’-三異丙基聯苯(36.98毫克, 77.58微莫耳, 0.2 當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(71.04毫克,77.58微莫耳,0.2當量)、三級丁醇鈉(74.56毫克,775.78微莫耳,2 當量)在70攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,加水(100毫升),乙酸乙酯萃取(60毫升×3),有機相用飽和食鹽水(60毫升×3)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 20:1到4:1)純化得到粗品,粗品經高效液相色譜(色譜柱:Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50毫米*3微米;流動相A:甲酸水溶液,流動相B:乙腈;B%: 20%-50%,10分鐘)分離得到化合物12。
MS-ESI 計算值[M+H]
+486, 實測值486。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.34 – 8.40 (m, 1 H), 8.03-7.99(m, 1 H), 7.56- 7.48 (m, 1 H), 7.42 – 7.36(m, 1 H), 7.20 – 7.14 (m, 2 H), 4.19 – 4.16 (m, 4 H), 3.90 – 3.86 (m, 3 H) ,1.87- 1.82 (m, 6 H), 0.77 – 0.74 (m, 4 H)。
第一步
將化合物11-2(1克,2.47毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(20毫升),接著向反應液中加入化合物I(396.64毫克,2.97毫莫耳,1.2當量),碳酸銫(2.42克,7.42毫莫耳,3當量),[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲烷(202.01毫克,247.37毫莫耳,0.1當量) 在100攝氏度氮氣保護下反應2小時。反應完成後,用矽藻土過濾,濾液倒入少量冰水用二氯甲烷(30毫升×3)萃取,飽和食鹽水洗滌2次,最後用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濾液減壓濃縮,經層析柱(石油醚/乙酸乙酯=3/1)純化得到化合物13-1。
MS-ESI 計算值[M-156+H]
+265, 實測值265。
第二步
將化合物13-1(360毫克,856.12微莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(8毫升),接著向反應液中加入三氟乙酸(8毫升),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,倒入少量冰水中,用碳酸鈉調節pH=8,用二氯甲烷(30毫升×2)萃取,有機相經飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷/甲醇= 10/1)純化得到化合物13-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+221, 實測值221。
第三步
將化合物13-2(70毫克,317.79微莫耳,1當量),中間體E(110.51毫克,349.57微莫耳,1.1當量)溶於無水四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(91.62毫克,953.37微莫耳,3當量),2-二-(三級丁基膦)-2’,4’,6’-三異丙基聯苯(30.30毫克,63.56微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(43.65毫克,47.67微莫耳,0.15當量),在氮氣保護下70攝氏度下反應8小時。反應完成後,反應液倒入少量冰水用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取,飽和食鹽水洗滌2次,最後用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濾液減壓濃縮濃縮,經高效液相色譜 (色譜柱Phenomenex Synergi C18 150*25毫米* 10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:26%-56%,10分鐘)分離純化得到化合物13。
MS-ESI 計算值[M+H]
+500, 實測值500。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ ppm 1.75 - 1.87 (m, 6H) 1.89 - 1.97 (m, 2H) 2.22 - 2.33 (m, 4H) 3.81 - 3.94 (m, 3H) 3.99 - 4.09 (m, 4H) 7.05 - 7.20 (m, 2H) 7.31 - 7.42 (m, 1H) 7.44 - 7.59 (m, 1H) 7.91 - 8.07 (m, 1H) 8.30 - 8.43 (m, 1H).
第一步
將化合物11-2(3克,7.42毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(50毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(7.25毫克,22.26毫莫耳,3當量)和化合物H(1.10克,11.13毫莫耳,1.5當量),三(三級丁基膦)四氟硼酸鹽(430.61毫克,1.48毫莫耳,0.2當量)和醋酸鈀(333.22毫克,1.48毫莫耳,0.2當量)。置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-1:1)純化得到化合物14-1。
第二步
將化合物14-1(1克,2.37毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(10毫升),接著向反應液中加入三氟乙酸(15.40克,135.06毫莫耳,10毫升,57.06當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,加二氯甲烷(20毫升)稀釋,將反應液滴入飽和的碳酸氫鈉溶液(20毫升),用二氯甲烷萃取(20毫升×2),分液,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮,得到粗品化合物14-2。
第三步
將化合物14-2(220毫克,1.65毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(20毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(93.19毫克,969.73微莫耳,2當量),中間體E(153.28毫克,484.86微莫耳,1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(78.65毫克,164.98微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(151.08毫克,164.98微莫耳,0.2當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠層析柱(石油醚:乙酸乙酯=50/1~二氯甲烷:甲醇= 3:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米*10微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%: 12%-42%,10分鐘) 分離得到化合物14。
MS-ESI 計算值[M+H]
+502, 實測值502。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 1.84 (d, J=13.38 Hz, 6H), 3.86 - 3.91 (m, 3H), 4.24 - 4.27 (m, 4H), 4.88 (s, 4H) 7.13 - 7.21 (m, 2H), 7.36 - 7.43 (m, 1H), 7.47 - 7.56 (m, 1H), 7.98 - 8.05 (m, 1H), 8.37 - 8.44 (m, 1H).
第一步
將化合物15-1(13.5克,64.77毫莫耳,1當量),溶於甲醇(200毫升),接著在0攝氏度下向反應液中逐步添加甲醇鈉(14克,259.09毫莫耳,4當量),在25攝氏度下攪拌12小時。反應完畢後減壓濃縮,殘液加水 (100毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取 (100毫升×3),有機相用飽和食鹽水(100毫升×2)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮後得到粗產品直接用於下步反應,化合物15-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+207, 實測值207。
第二步
將化合物15-2(5克,31.33毫莫耳,1當量),15-3(7.15克,62.67毫莫耳,2當量)溶於甲苯(150毫升),接著向反應液中添加對甲苯磺酸(539.57毫克,3.13毫莫耳,0.1當量),在氮氣保護下130攝氏度下攪拌12小時。反應完畢後,過濾濾液在減壓下濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1~2:1)分離純化得到化合物15-4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+238,實測值238。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.12 (s, 1 H) 6.00 – 5.92 (m, 2 H) 3.95 (s, 3 H) 2.04 - 2.02 (m, 6 H)。
第三步
將化合物15-4(1克,4.21毫莫耳,1當量),D(699.51毫克,5.85毫莫耳,1.39當量),N,N-二異丙基乙胺(2.18克,16.83毫莫耳,4當量)溶於乙二醇(15毫升),接著在140攝氏度微波下反應1.5小時。反應完畢後,向反應液中加入水(100毫升)乙酸乙酯萃取(100毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(200毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-2:1)分離純化得到化合物15-5。
MS-ESI 計算值[M+H]
+285,實測值285。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 5.98 - 5.94 (m, 1 H) 5.93 - 5.88 (m, 2 H) 4.29 (s, 4 H) 3.87 - 3.81 (m, 3 H) 2.02 (s, 6 H) 0.80 - 0.73 (m, 4 H)。
第四步
將化合物15-5(442毫克,1.55毫莫耳,1當量),鹽酸羥胺(1.08克,15.54毫莫耳,10當量),氫氧化鉀(174.43毫克,3.11毫莫耳,2當量)溶於乙醇(8毫升)/水(4毫升)中,接著在120攝氏度微波下反應1.5小時反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升),乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)分離純化得到化合物15-6。
MS-ESI 計算值[M+H]
+207,實測值207。
第五步
將化合物15-6(30毫克,135.28微莫耳,1當量),中間體E(42.76毫克,135.28微莫耳,1當量),三級丁醇鈉(39毫克,405.83微莫耳,3當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(12.9毫克,27.06微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(12.39毫克,13.53微莫耳,0.1當量)溶於二㗁烷(2毫升)中,接著在120攝氏度微波下反應1.5小時,反應完畢後,向反應液中加入水(5毫升)乙酸乙酯萃取(5毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(10毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)和高效液相色譜法(色譜柱:Phenomenex Synergi C18 150*25毫米*10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:7%-37%,10分鐘)分離純化得到化合物15。
MS-ESI 計算值[M+H]
+486,實測值486。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.36 (dd, J=8.44, 4.52 Hz, 1 H) 8.09 - 8.01 (m, 1 H) 7.53 (ddd, J=14.31, 7.70, 1.22 Hz, 1 H) 7.48 - 7.40 (m, 1 H) 7.2. - 7.15 (m, 1 H) 6.42 - 6.33 (m, 1 H) 4.24 (s, 4 H) 3.93 - 3.80 (m, 3 H) 1.90 - 1.78 (m, 6 H) 0.83 - 0.73 (m, 4 H).
第一步
將化合物15-4(400毫克,1.68毫莫耳,1當量),F(400.91毫克2.58毫莫耳,1.53當量),N,N-二異丙基乙胺(869.99毫克,6.73毫莫耳,4當量)溶於乙二醇(10毫升),接著在140攝氏度微波下反應1.5小時。反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(石油醚:乙酸乙酯=1:1)分離純化得到化合物16-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+321,實測值321。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ= 6.02 (s, 1 H) 5.94- 5.84 (m, 2 H) 4.48 - 4.40 (m, 2 H) 4.32 - 4.25 (m, 2 H) 3.86 - 3.81 (m, 3 H) 2.05 – 1.92 (m, 6 H) 1.64 - 1.58 (m, 2 H).
第二步
將化合物16-1(237毫克,739.85微莫耳,1當量),鹽酸羥胺(514.13毫克,7.40毫莫耳,10當量),氫氧化鉀(93.03毫克,1.48毫莫耳,2當量)溶於乙醇(7毫升)水(3.5毫升)中,接著在120攝氏度微波下反應1.5小時反應完畢後,向反應液中加入水(20毫升)二氯甲烷萃取(20毫升×3),有機相用飽和的食鹽水(20毫升×2)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)分離純化得到化合物16-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+243,實測值243。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 6.29 - 6.27 (m, 1 H) 4.21 - 4.14 (m, 2 H) 4.12 - 4.06 (m, 2 H) 3.97 - 3.90 (m, 3 H) 1.63 - 1.54 (m, 2 H)。
第三步
將化合物16-2(70毫克,268.76微莫耳,1當量),中間體E(127.44克,403.14微莫耳,1.5當量),三級丁醇鈉(77.48毫克,806.28微莫耳,3當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(25.62毫克,53.75微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(24.61毫克,26.88微莫耳,0.1當量)溶於二㗁烷(7毫升)中,接著在氮氣保護下110攝氏度攪拌12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(25毫升)乙酸乙酯萃取(25毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(25毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)和高效液相色譜法(色譜柱:Phenomenex Synergi C18 150*25毫米* 10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:8%-38%,10分鐘)分離純化得到化合物16。
MS-ESI 計算值[M+H]
+522,實測值522。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.47 - 8.39 (m, 1 H) 8.20 - 8.11 (m, 1 H) 7.62 - 7.48 (m, 2 H) 7.28- 7.20 (m, 1 H) 6.62 - 6.55 (m, 1 H) 4.42 - 4.35 (m, 2 H) 4.32 - 4.25 (m, 2 H) 4.00 – 3.94 (m, 3 H) 1.88 - 1.86 (m, 3 H) 1.85 - 1.83 (m, 3 H) 1.73 - 1.67 (m, 2 H)。
第一步
將化合物17-1(2.00克,11.82毫莫耳,1當量)溶於1,2-二氯乙烷(10毫升),接著向反應液中加入過氧化苯甲醯(286.40毫克,1.18毫莫耳,0.1當量),N-溴代丁二醯亞胺(4.63克,26.01毫莫耳,2.2當量),在90攝氏度下反應2小時。反應完成後,加飽和硫代硫酸鈉水溶液(50毫升),乙酸乙酯萃取(20毫升×3),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(45毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 1:0)純化得到化合物17-2。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 7.97 - 7.90 (m, 1 H) 7.16 (t, J=8.68 Hz, 1 H) 4.80 (s, 2 H) 4.62 (d, J=1.83 Hz, 2 H).
第二步
將化合物17-2(5.75克,17.59毫莫耳,1當量)溶於甲苯(60毫升),接著向反應液中加入三氧化二鋁(72.09克,707.00毫莫耳,40.2當量),水(633.67毫克,35.17毫莫耳,633.67微升,2當量),在120攝氏度下反應2小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮,加水(200毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(100毫升×3),有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 1:0-200:1)純化得到化合物17-3。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 8.20 (dd, J=8.93, 4.16 Hz, 1 H), 7.19 - 7.10 (m, 1 H), 5.55 (t, J=1.90 Hz, 2 H), 5.25 (s, 2 H).
第三步
將化合物17-3(300.00毫克,1.64毫莫耳,1當量)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(452.80毫克,3.28毫莫耳,2當量),I(238.73毫克,2.46毫莫耳,1.5當量),在80攝氏度下反應2小時。反應完成後,加水(30毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(15毫升×3),有機相用飽和食鹽水(25毫升×3)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物17-4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+261, 實測值261。
第四步
將化合物17-4(420.00毫克,1.48毫莫耳,1當量)溶於甲醇(10毫升),接著向反應液中加入鈀碳(100.00毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(15PSI)下反應2小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物17-5。
MS-ESI 計算值[M+H]
+230, 實測值230。
第五步
將化合物17-5(200.35毫克,869.92微莫耳,1.1當量),中間體E(250.00毫克,790.83微莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(6毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(152.00毫克,1.58毫莫耳,2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(72.42毫克,79.08微莫耳,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(75.40毫克,158.17微莫耳,0.2當量),在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(石油醚:乙酸乙酯:乙醇= 4:3:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge C18 150*50毫米*10微米;流動相:流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 37%-67%,11分鐘) 分離得到化合物17。
MS-ESI 計算值[M+H]
+510, 實測值510。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.40 - 8.29 (m, 1 H) ,7.99 (s, 1 H), 7.59 - 7.51 (m, 1 H), 7.34 (br t, J=7.83 Hz, 1 H), 7.23 - 7.16 (m, 1 H) ,7.13 (d, J=8.31 Hz, 1 H) ,6.40 (d, J=8.31 Hz, 1 H) ,5.06 (s, 2 H) ,4.62 (s, 1 H), 3.85 (s, 4 H) ,2.26 (t, J=7.64 Hz, 4 H) ,1.99 - 1.90 (m, 2 H), 1.87 (s, 3 H) ,1.84 (s, 3 H).
第一步
將化合物17-3(300毫克,1.64毫莫耳,1當量)溶於乙腈(10毫升),接著向反應液中加入中間體A(402.11毫克,2.46毫莫耳,1.5當量),碳酸鉀(679.20毫克,4.91毫莫耳,3 eq),在80攝氏度下反應2小時。反應完成後,加入乙酸乙酯(30毫升×3)有機相經飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物18-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+291, 實測值291。
第三步
將化合物18-1(400毫克,1.38毫莫耳,1當量)溶於甲醇(10毫升),接著向反應液中加入鈀碳(50毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(15PSI)下反應1小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物18-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+261, 實測值261。
第四步
將化合物18-2(300毫克,1.15毫莫耳,1.1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著加入中間體E(331.18毫克,1.05毫莫耳,1當量)並在氮氣保護下向反應液中加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(95.93毫克,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(99.88毫克,0.2當量),三級丁醇鈉(201.35毫克,2當量),在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,乙酸乙酯萃取(30毫升×3),有機相用飽和食鹽水(20毫升×3)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經高效液相色譜(色譜柱:Waters Xbridge C18 150*50毫米* 10微米;流動相A:碳酸氫銨水溶液,流動相B:乙腈;B%: 28%-58%,11分鐘)分離得到化合物18。
MS-ESI 計算值[M+H]
+540, 實測值540。
1H-NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.33 (br s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.55 (ddd, J = 1.4, 7.7, 14.3 Hz, 1H), 7.34 (br t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.20 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.08 - 4.93 (m, 3H), 4.61 (s, 3H), 4.68 - 4.52 (m, 1H), 3.93 - 3.81 (m, 5H), 3.31 - 3.24 (m, 4H), 2.61 - 2.53 (m, 2H), 2.19 - 2.11 (m, 2H), 1.86 (d, J = 13.4 Hz, 3H), 1.88 (br d, J = 13.5 Hz, 3H).
第一步
將化合物17-3(300毫克,1.64毫莫耳, 1當量)和中間體D (391.81毫克,3.28毫莫耳,2當量)溶於乙腈(10毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(679.2毫克,4.9毫莫耳,3當量),在80攝氏度氮氣保護下反應2小時。反應完成後,乙酸乙酯萃取(10毫升×3),飽和食鹽水(5毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮得到化合物19-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+247, 實測值247。
第二步
將化合物19-1(400.00毫克,1.62毫莫耳,1當量)溶於甲醇(5毫升),接著向反應液中加入鈀碳(50.00毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(15PSI)下反應2小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物19-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+217, 實測值217。
第三步
將化合物19-2(200毫克,924.7微莫耳,1.1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入中間體E(265.75毫克,840.67微莫耳,1當量),三級丁醇鈉(161.58毫克,1.68毫莫耳,2當量),在20攝氏度氮氣保護下加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(76.98毫克,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(80.15毫克,0.2當量),然後加熱至70攝氏度反應12小時。反應完成後,過濾,加入水(10毫升),乙酸乙酯(30毫升×2),有機相經飽和食鹽水(10毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經高效液相色譜(色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米* 5微米;流動相A: 氨水,流動相B:乙腈;B%:30%-60%,9分鐘)分離得到化合物19。
MS-ESI 計算值[M+H]
+496, 實測值496。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 10.97 (s, 1H), 8.56 (dd, J = 4.5, 8.5 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.40 - 7.34 (m, 1H), 7.33 - 7.29 (m, 1H), 7.27 - 7.22 (m, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 1H), 6.44 (s, 1H), 6.36 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.14 (s, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.02 (s, 4H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 0.71 (s, 4H).
第一步
將化合物17-3(350.00毫克,1.91毫莫耳,1當量)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(528.26毫克,3.82毫莫耳,2當量),G(291.68毫克,2.29毫莫耳,1.2當量),在80攝氏度下反應2小時。反應完成後,加水(30毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(15毫升×3),有機相用飽和食鹽水(25毫升×3)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物20-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+291, 實測值291。
第二步
將化合物20-1(500.00毫克,1.72毫莫耳,1當量)溶於甲醇(10毫升),接著向反應液中加入鈀碳(50.00毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(15PSI)下反應2小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物20-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+261, 實測值261。
第三步
將化合物20-2(398.58毫克,1.53毫莫耳,1.1當量),中間體E(440.00毫克,1.39毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(267.52毫克,2.78毫莫耳,2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(127.46毫克,139.19微莫耳,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(132.71毫克,278.37微莫耳,0.2當量),在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液用乙酸乙酯萃取(20毫升×3),有機相用飽和食鹽水(50毫升×3)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯:乙醇= 40:3:1-4:3:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge C18 150*50毫米*10微米;流動相:流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 26%-56%,11分鐘) 分離得到化合物20。
MS-ESI 計算值[M+H]
+540, 實測值540。
1H-NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.38-8.26 (m, 1 H), 8.02 - 7.97 (m, 1 H), 7.60 - 7.49 (m, 1 H), 7.40 - 7.31 (m, 1 H), 7.23 - 7.16 (m, 1 H), 7.16-7.10 (m, 1 H), 6.45 - 6.38 (m, 1 H), 5.12 - 5.07 (m, 2 H), 4.91 (br s, 2 H) ,4.59 - 4.58 (m, 1 H) ,3.72 (s, 4 H) ,3.71 - 3.68 (m, 2 H), 2.08 - 2.04 (m, 2 H) ,1.89 - 1.86 (m, 6 H), 1.85 - 1.84 (m, 2 H).
第一步
將化合物17-3(362.38毫克,1.98毫莫耳,1當量)溶於N,N-二甲基甲醯胺(12毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(820.46毫克,5.94毫莫耳,3當量),B(300.00毫克,1.98毫莫耳,1當量),在80攝氏度下反應2小時。反應完成後,加水(20毫升)稀釋,過濾,濾液濃縮得到化合物21-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+279, 實測值279。
第二步
將化合物21-1(300.00毫克,1.08毫莫耳,1當量)溶於甲醇(10毫升),接著向反應液中加入鈀碳(50.00毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(50PSI)下反應2小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物21-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+249, 實測值249。
第三步
將化合物21-2(150.00毫克,604.12微莫耳,1當量),中間體E(190.98毫克,604.12微莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(116.11毫克,1.21毫莫耳,2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(55.32毫克,60.41微莫耳,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(57.60毫克,120.82微莫耳,0.2當量),在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(石油醚:乙酸乙酯= 0:1)純化得到的粗品進一步經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150*25毫米*5微米;流動相:流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 38%-68%,10分鐘) 分離得到化合物21。
MS-ESI 計算值[M+H]
+528, 實測值528。
1H NMR (400 MHz,CDCl
3) δ = 11.13 - 11.09 (m, 1 H), 11.06 -10.95 (m, 1 H), 8.59 - 8.48 (m, 1 H), 8.09 - 7.97 (m, 1 H) ,7.38 - 7.30 (m, 2 H), 7.26 - 7.20 (m, 1 H), 7.14 -6.99 (m, 1 H) ,6.54 - 6.38 (m, 1 H), 6.33 - 6.27 (m, 1 H), 5.11 - 4.95 (m, 5 H), 3.93 - 3.90 (m, 2 H) ,3.86 (s, 2 H), 2.72 - 2.61 (m, 2 H), 2.53 - 2.39 (m, 2 H), 1.85 (s, 3 H), 1.82 (s, 3 H).
第一步
將中間體C(220.00毫克,1.30毫莫耳,1當量)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(537.85毫克,3.89毫莫耳,3當量),17-3(237.56毫克,1.30毫莫耳,1當量),在80攝氏度下反應2小時。反應完成後,加水(20毫升)稀釋,過濾,濾餅乾燥得到化合物22-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+297, 實測值297。
第二步
將化合物22-1(300.00毫克,1.01毫莫耳,1當量)溶於甲醇(10毫升),接著向反應液中加入鈀碳(50.00毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(15PSI)下反應2小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物22-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+267, 實測值267。
第三步
將化合物22-2(207.22毫克,778.18微莫耳,1.2當量),中間體E(205.00毫克,648.48微莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(124.64毫克,1.30毫莫耳,2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(59.38毫克,64.85微莫耳,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(61.83毫克,129.70微莫耳,0.2當量),在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化得到的粗品進一步經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge C18 150*50毫米*10微米;流動相:流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 33%-63%,11分鐘) 分離得到化合物22。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546, 實測值546。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.41 – 8.22 (m, 1 H), 8.02 – 7.88 (m, 1 H) ,7.60 - 7.48 (m, 1 H) ,7.38 - 7.29 (m, 1 H) ,7.22 - 7.06 (m, 2 H), 6.45 - 6.36 (m, 1 H), 5.03 (s, 2 H), 4.60 (br s, 2 H) ,3.94 (s, 4 H) ,2.82 (t, J=12.17 Hz, 4 H), 1.85 (s, 3 H) ,1.81 (s, 3 H).
第一步
將化合物17-3(300毫克,1.64毫莫耳, 1當量)和化合物H (324.78毫克,3.28毫莫耳,2當量)溶於乙腈(10毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(679.2毫克,4.9毫莫耳,3當量),在80攝氏度氮氣保護下反應2小時。反應完成後,乙酸乙酯萃取(30毫升×3),飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮得到化合物23-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+263,實測值263。
第二步
將化合物23-1(320.00毫克,1.22毫莫耳,1當量)溶於甲醇(10毫升),接著向反應液中加入鈀碳(50.00毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(15PSI)下反應2小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物23-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+233, 實測值233。
第三步
將化合物23-2(300毫克,1.29毫莫耳,1.1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入中間體E(370.17毫克,1.17毫莫耳,1當量),三級丁醇鈉(225.67毫克,1.68毫莫耳,2當量),在20攝氏度氮氣保護下加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(107.52毫克,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(111.75毫克,0.2當量),然後加熱70攝氏度反應12小時。反應完成後過濾後得濾液,加入水(10毫升),乙酸乙酯(30毫升×2),有機相經飽和食鹽水(10毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經高效液相色譜(色譜柱: Waters Xbridge C18 150*50毫米* 10微米;流動相A:碳酸氫銨水溶液,流動相B:乙腈;B%: 20%-50%,11分鐘)分離得到化合物23。
MS-ESI 計算值[M+H]
+512, 實測值512。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 10.99 (s, 1H), 8.55 (dd, J = 4.3, 8.5 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 7.16 - 7.04 (m, 1H), 6.44 (s, 1H), 6.34 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.86 (s, 4H), 4.05 (s, 4H), 1.85 (d, J = 13.2 Hz, 6H).
第一步
將化合物17-3(250.00毫克,1.37毫莫耳,1當量)溶於
N,
N-二甲基甲醯胺(5毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(566.01毫克,4.10毫莫耳,3當量),F(212.37毫克,1.37毫莫耳,1當量),在80攝氏度下反應2小時。反應完成後,加水(30毫升)稀釋,過濾,濾餅乾燥得到化合物24-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+283, 實測值283。
第二步
將化合物24-1(350.00毫克,1.24毫莫耳,1當量)溶於甲醇(10毫升),接著向反應液中加入鈀碳(50.00毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(50PSI)下反應2小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物24-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+253, 實測值253。
第三步
將化合物24-2(248.97毫克,986.96微莫耳,1.2當量),中間體E(260.00毫克,822.47微莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(158.08毫克,1.64毫莫耳,2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(75.31毫克,82.25微莫耳,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(78.42毫克,164.49微莫耳,0.2當量),在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化得到的粗品進一步經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge C18 150*50毫米*10微米;流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 33%-6%,11分鐘) 分離得到化合物24。
MS-ESI 計算值[M+H]
+532, 實測值532。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.29 - 8.39 (m, 1 H) 8.00 (s, 1 H) 7.50 - 7.62 (m, 1 H) 7.36 (br t, J=7.76 Hz, 1 H) 7.13 - 7.26 (m, 2 H) 6.43 - 6.49 (m, 1 H) 5.04 - 5.12 (m, 2 H) 4.92 - 4.93 (m, 2 H) 4.08 - 4.12 (m, 2 H) 3.98 - 4.05 (m, 2 H) 1.88 (s, 3 H) 1.84 (s, 3 H) 1.57 - 1.65 (m, 2 H).
第一步
將化合物17-3(300毫克,1.64毫莫耳,1當量)和化合物J(536.14毫克,3.28毫莫耳,2當量)溶於乙腈(10毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(679.2毫克,4.9毫莫耳,3當量),在80攝氏度氮氣保護下反應2小時。反應完成後,乙酸乙酯萃取(30毫升×3),飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮得到化合物25-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+291, 實測值291。
第二步
將化合物25-1(390.00毫克,1.34毫莫耳,1當量)溶於甲醇(10毫升),接著向反應液中加入鈀碳(100.00毫克,純度:10%),在25攝氏度氫氣氛圍(15PSI)下反應2小時。反應完成後,墊矽藻土過濾,濾液濃縮得到化合物25-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+261, 實測值261。
第三步
將化合物25-2(300毫克,1.15毫莫耳,1.1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入中間體E(331.18毫克,1.05毫莫耳,1當量),三級丁醇鈉(201.36毫克,2.10毫莫耳,2當量),在20攝氏度氮氣保護下加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(95.93毫克,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(99.88毫克,0.2當量),然後加熱70攝氏度反應12小時。反應完成後過濾後得濾液,加入水(10毫升),乙酸乙酯(30毫升×2),有機相經飽和食鹽水(10毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經高效液相色譜(色譜柱:Waters Xbridge C18 150*50毫米* 10微米;流動相A:碳酸氫銨水溶液,流動相B:乙腈;B%:27%-57%,11分鐘)分離得到化合物25。
MS-ESI 計算值[M+H]
+540, 實測值540。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 8.35 (br s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.54 (ddd,
J= 1.5, 7.7, 14.4 Hz, 1H), 7.30 (br t,
J= 6.8 Hz, 1H), 7.18 (br t,
J= 7.5 Hz, 1H), 7.11 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 6.56 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.98 - 4.92 (m, 2H), 3.96 (t,
J= 7.1 Hz, 2H), 3.79 - 3.68 (m, 2H), 3.51 - 3.42 (m, 2H), 3.39 - 3.35 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 4H), 1.88 (s, 3H), 1.84 (s, 3H).
第一步
將化合物E(5克,15.82毫莫耳,1當量)溶於異丙醇(50毫升),然後向反應液中加入化合物1-1(4.15克,20.56毫莫耳,1.3當量)和甲烷磺酸(1.52克,15.82毫莫耳,1當量),在90攝氏度下反應12小時。反應完成後,將反應液減壓濃縮,隨後,加水(50毫升),並用飽和的碳酸氫鈉溶液將溶液的pH調至8,然後加入二氯甲烷(50毫升)稀釋反應液,用二氯甲烷(50毫升×3)萃取,有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮。粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 250×70毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 35%-60%,21分鐘) 分離得到化合物26-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+483,實測值483。
第二步
將化合物26-1(200毫克,415.19微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(20毫升),接著向反應液中加入化合物K(115.27毫克,622.78微莫耳,1.5當量),三級丁醇鈉(119.70毫克,1.25毫莫耳,3當量),4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽(48.05毫克,83.04微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(38.02毫克,41.52微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×25毫米×10 微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%: 4%-34%,10 分鐘) 分離得到化合物26。
MS-ESI 計算值[M+H]
+513, 實測值513。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 8.39-8.29 (m, 1H), 8.16-8.08 (m, 1H), 7.72-7.61 (m, 1H), 7.61-7.51 (m, 1H), 7.49-7.41 (m, 1H), 7.36-7.27 (m, 1H), 6.91-6.80 (m, 1H), 6.31-6.21 (m, 1H), 4.08-3.96 (m, 4H), 3.91-3.82 (m, 4H), 3.70-3.63 (m, 3H), 2.68-2.57 (m, 3H), 1.90-1.81 (m, 6H)。
第一步
將化合物7-2(200毫克,555.986微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(3毫升),接著向反應液中加入化合物K(154.33毫克,833.79微莫耳,1.5當量),碳酸銫(724.44毫克,2.22毫莫耳,4當量),四氟硼酸三(三級丁基膦)(32.25毫克,111.17微莫耳,0.2當量)和醋酸鈀(12.48毫克,55.59微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應3小時。反應完成後,將反應液過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 5:1)純化得到化合物27-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+436,實測值436。
第二步
將化合物27-1溶於二氯甲烷(1毫升)和三氟乙酸(1毫升)的混合溶液中,在室溫下攪拌0.5小時。反應完成後,將反應液減壓濃縮,得到化合物27-2(三氟乙酸鹽)
MS-ESI 計算值[M+H]
+236,實測值236。
第三步
將化合物27-2(100毫克,144.64微莫耳,三氟乙酸鹽,1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入化合物E(59.44毫克,188.03微莫耳,1.3當量),三級丁醇鈉(69.50毫克,723.19微莫耳,5當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(13.79毫克,28.93微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(26.49毫克,28.93微莫耳,0.2當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在70攝氏度下反應2小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%: 1%-30%,10 分鐘) 分離得到化合物27。
MS-ESI 計算值[M+H]
+515,實測值515。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.39-8.30 (m, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.57 (dd, J = 7.8, 13.7 Hz, 1H), 7.48-7.42 (m, 1H), 7.24-7.18 (m, 1H), 4.24 (s, 4H), 3.94 (s, 3H), 3.72 (s, 4H), 2.51 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.85 (s, 3H)。
第一步
將化合物28-1(1克,4.00毫莫耳,1當量)溶於乙醇(15毫升)和水(8毫升)中,接著向反應液中加入氯化銨(1.71克,32.00毫莫耳,8當量)和鐵粉(1.34克,24.00毫莫耳,6當量),在70攝氏度下反應2小時。反應完成後,將反應液減壓濃縮,然後加入二氯甲烷(50毫升)稀釋反應液,用二氯甲烷(50毫升×3)萃取,有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠柱層析 (石油醚:乙酸乙酯= 20:1到 8:1) 分離得到化合物28-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+220,實測值220。
第二步
將化合物28-2(400毫克,1.82毫莫耳,1當量)溶於異丙醇(10毫升),然後向反應液中加入化合物E(689.60毫克,2.18毫莫耳,1.2當量)和甲基磺酸(174.71毫克,1.82毫莫耳,129.41微升,1當量),在90攝氏度下反應12小時。反應完成後,將反應液減壓濃縮,隨後,加水(50毫升),並用飽和的碳酸氫鈉溶液將溶液的pH調至8,然後加入二氯甲烷(30毫升)稀釋反應液,用二氯甲烷(30毫升×3)萃取,有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮。粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C8 250×50 毫米×10 微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:40%-70%,20分鐘) 分離得到化合物28-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+501,實測值501。
第三步
將化合物28-3(200毫克,400.24微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(12毫升),接著向反應液中加入化合物F(124.53毫克,800.48微莫耳,2當量),三級丁醇鈉(153.86毫克,1.60毫莫耳,4當量),4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽(46.32毫克,80.05微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(73.30毫克,80.05微莫耳,0.2當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在110攝氏度下反應5小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×25 毫米×10 微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%:51%-81%,10 分鐘) 分離得到化合物28。
MS-ESI 計算值[M+H]
+538, 實測值538。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.29 (dd,
J= 4.5, 8.3 Hz, 1H), 8.17 (br s, 1H), 7.74-7.59 (m, 2H), 7.41 (dd,
J= 2.9, 11.2 Hz, 1H), 7.38-7.30 (m, 1H), 6.03 (dd,
J= 3.1, 10.1 Hz, 1H), 4.13 (d,
J= 7.8 Hz, 2H), 4.00 (br d,
J= 7.9 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 1.87 (d,
J= 13.6 Hz, 6H), 1.57 (t,
J= 8.6 Hz, 2H)。
第一步
將化合物29-1(4.5克,19.07毫莫耳1當量),碘甲烷(6.77克,47.67毫莫耳,2.5當量),碳酸銫(15.53克,47.67毫莫耳,2.5當量)溶於丙酮(100毫升)中,接著在70攝氏度氮氣保護下反應3小時。反應完畢後,向反應液中加入水(100毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(100毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(200毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-80:1)分離純化得到化合物29-2。
第二步
將化合物29-2(3.85克,15.4毫莫耳,1當量)溶於乙醇(40毫升)和水(20毫升)中,加入鐵粉(5.16克,92.39毫莫耳,6當量),氯化銨(6.59克,123.19毫莫耳,8當量),在70攝氏下反應2小時。反應完畢後,向反應液中加入水(100毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(100毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(200毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-10:1)分離純化得到化合物29-3。
第三步
將化合物29-3(2.9克,13.18毫莫耳,1當量)溶於異丙醇(30毫升)中,再加入化合物E(5克,15.82毫莫耳,1.2當量),甲烷磺酸(1.27克,13.18毫莫耳,1當量),接著在90攝氏度下反應12小時,反應完畢後,將反應混合物過濾濃縮。過濾,濃縮的殘渣經製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex luna C18 250×70毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;45%-75%,20 分鐘) 分離得到化合物29-4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+501,實測值501。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 10.97 (s, 1H), 8.52 (dd,
J= 4.3, 8.4 Hz, 1H), 8.26 (dd,
J= 5.8, 9.2 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.50 (t,
J= 7.9 Hz, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.15 (dt,
J= 1.5, 7.4 Hz, 1H), 6.87 (dd,
J= 8.1, 9.1 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 1.84 (d,
J= 13.1 Hz, 6H)。
第四步
將化合物29-4(250毫克,500.3微莫耳,1當量),化合物F(116.75毫克,750.45毫莫耳,1.5當量),三級丁醇鈉(144.24毫克,1.5毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(45.81毫克,50.03微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽(57.9毫克,100.06微莫耳,0.2當量),溶於二㗁烷(10毫升)中接著在115攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)和製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex Synergi C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;44%-74%,10分鐘) 分離得到化合物29。
MS-ESI 計算值[M+H]
+538,實測值538。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.30 (dd,
J= 4.4, 8.2 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.90 - 7.72 (m, 1H), 7.67 - 7.57 (m, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 6.96 (br d,
J= 4.0 Hz, 1H), 6.67 (dd,
J= 9.2, 12.6 Hz, 1H), 6.14 (d,
J= 7.7 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.41 - 4.10 (m, 4H), 3.63 (s, 3H), 1.84 (d,
J= 13.4 Hz, 6H), 1.64 - 1.57 (m, 1H), 1.51 (t,
J= 8.6 Hz, 2H), 1.40 - 1.26 (m, 1H)。
第一步
將化合物28-3(180毫克,360.22微莫耳,1當量),化合物A(88.42毫克,540.32微莫耳,1.5當量),三級丁醇鈉(103.85,1.08毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(32.99毫克,36.02微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽(41.69毫克,72.04微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(6毫升)中,然後在100攝氏度氮氣保護下反應5小時。反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升),用乙酸乙酯(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;50%-80%,10分鐘) 分離得到化合物30。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546,實測值546。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.27 (dd,
J= 4.3, 8.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.60 (s, 2H), 7.31 (br d,
J= 2.8 Hz, 2H), 5.99 - 5.78 (m, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 5H), 3.62 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.57 - 2.47 (m, 2H), 2.13 - 2.05 (m, 2H), 1.84 (d,
J= 13.6 Hz, 6H)。
第一步
將化合物28-3(400毫克,800.48微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(30毫升),接著向反應液中加入化合物D(143.60毫克,1.20毫微莫耳,1.5當量),三級丁醇鈉(307.70毫克,3.20毫莫耳,4當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(92.63毫克,160.10微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(73.30毫克,80.05微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=50:1到二氯甲烷:甲醇= 20:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×25毫米×10 微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%: 54%-84%,10分鐘) 分離得到化合物31。
MS-ESI 計算值[M+H]
+502, 實測值502。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.28 (dd,
J= 4.4, 8.1 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.70-7.58 (m, 2H), 7.36-7.29 (m, 2H), 5.94 (dd,
J= 2.9, 10.5 Hz, 1H), 3.99 (s, 4H), 3.64 (s, 3H), 1.85 (d,
J= 13.5 Hz, 6H), 0.67 (s, 4H)。
第一步
將化合物29-4(190毫克,442.98微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(15毫升),加入化合物A(93.33毫克,570.34微莫耳,1.5當量),三級丁醇鈉(109.62毫克,1.14毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(34.82毫克,38.02微莫耳,0.1當量)和4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(44.00毫克,76.05微莫耳,0.2當量)。用氮氣置換三次,反應液在氮氣保護下升溫到110攝氏度,反應16小時。反應完畢後,反應液過濾,濃縮。粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150×25毫米×5微米;流動相:流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 45%-75%,10分鐘) 分離得到化合物32。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546,實測值546。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.35 - 8.24 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.61 (dd,
J= 8.0, 14.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 1H), 7.18 (dd,
J= 5.3, 9.1 Hz, 1H), 6.62 (dd,
J= 9.1, 12.6 Hz, 1H), 4.10 - 4.06 (m, 2H), 4.04 - 4.00 (m, 2H), 3.86 - 3.79 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 2.54 - 2.45 (m, 2H), 2.10 - 2.00 (m, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.82 (s, 3H)。
第一步
將化合物29-4(300毫克,600.36微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(20毫升),加入化合物D(107.70毫克,900.54微莫耳,1.5當量),碳酸銫(586.83毫克,1.8毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(54.98毫克,60.04微莫耳,0.1當量)和4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(69.48毫克,120.07微莫耳,0.2當量)。用氮氣置換三次,反應液在氮氣保護下升溫到115攝氏度,反應16小時。反應完畢後,反應液過濾,濃縮。粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge 150×25毫米×5微米;流動相:流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 51%-81%,8分鐘) 分離得到化合物33。
MS-ESI 計算值[M+H]
+502,實測值502。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.38 - 8.24 (m, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.65 - 7.57 (m, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.22 - 7.14 (m, 1H), 6.68 - 6.58 (m, 1H), 4.24 - 4.14 (m, 4H), 3.61 (s, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 0.63 (s, 4H)。
第一步
將化合物29-1(300毫克,1.27毫莫耳,1當量),氫氧化鉀(855.87毫克,15.25毫莫耳,12當量),(溴二氟甲基)三甲基矽烷(774.55毫克,3.81毫莫耳,3當量)溶於乙腈(4毫升)和水(1毫升)中,接著在25攝氏度氮氣保護下反應1小時。反應完畢後,反應液過濾,濾液中加入水(50毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(100毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濾液濃縮得到粗品化合物34-1。
第二步
將化合物34-1(520毫克,1.82毫莫耳,1當量)溶於乙醇(6毫升)和水(3毫升)中,然後加入鐵粉(609.27毫克,10.91毫莫耳,6當量),氯化銨(778.03毫克,14.55毫莫耳,8當量),在70攝氏下反應2小時。反應完畢後,反應液過濾,濾液中加入水(50毫升)稀釋,用二氯甲烷萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-10;1)分離純化得到化合物34-2。
第三步
將化合物34-2(370毫克,1.45毫莫耳,1當量)溶於異丙醇(6毫升)中,再加入化合物E(456.86毫克,1.45毫莫耳,1當量),甲烷磺酸(138.89毫克,1.45毫莫耳,1當量),接著在90攝氏度下反應12小時,反應完畢後,將反應混合物過濾,濾液濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-0:1)分離純化得到化合物34-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+536.9,實測值536.9。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 12.36 (br s, 1H), 10.97 (br s, 1H), 8.03 (br dd, J = 4.2, 7.9 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.43 (br dd, J = 5.5, 8.8 Hz, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 3H), 7.13 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.82 - 6.33 (m, 1H), 1.89 - 1.81 (m, 6H).
第四步
將化合物34-3(250毫克,466.70微莫耳,1當量),化合物F(108.91毫克,700.04毫莫耳,1.5當量),三級丁醇鈉(134.55毫克,1.40毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(42.74毫克,46.67微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(54.01毫克,93.34微莫耳,0.2當量),溶於二㗁烷(10毫升)中接著在115攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,反應液過濾,濾液中加入水(50毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)和製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex Synergi C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;35%-65%,10分鐘) 分離得到化合物34。
MS-ESI 計算值[M+H]
+574,實測值574。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ=8.25 (dd, J = 4.5, 8.4 Hz, 1H), 8.13 - 8.03 (m, 1H), 7.59 (ddd, J = 1.2, 7.7, 14.1 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.25 (dt, J = 1.3, 7.5 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 5.2, 9.0 Hz, 1H), 6.90 (dd, J = 8.9, 12.6 Hz, 1H), 6.73 - 6.24 (m, 1H), 4.47 - 3.90 (m, 4H), 1.84 (d, J = 13.4 Hz, 6H), 1.51 (t, J = 8.7 Hz, 2H).
第一步
將化合物28-2(10克,45.45毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(10毫升),接著向反應液中加入二-三級-丁基二碳酸鹽(19.84克,90.89毫莫耳,20.88毫升,2當量)。反應液在70攝氏度下反應12小時。反應結束後,將反應液減壓濃縮,粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=200:1-80:1)分離純化,得到化合物35-1。
第二步
將化合物35-1(500毫克,1.56毫莫耳,1當量),化合物B的鹽酸鹽(248.61毫克,1.64毫莫耳,1.05當量),三級丁醇鈉(600.34毫克,6.25毫莫耳,4當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(143.01毫克,156.17微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(180.73毫克,312.35微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(20毫升)中接著在100攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-20:1)分離純化得到化合物35-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+255,實測值255。
第三步
將化合物35-2(104毫克,409.01微莫耳,1當量),化合物E(155.16毫克,490.81微莫耳,1.2當量),三級丁醇鈉(117.92毫克,1.23毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(37.45毫克,40.90微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(47.33毫克,81.80微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(5毫升)中接著在100攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,反應液過濾,濃縮的殘渣經製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex Synergi C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;55%-75%,10分鐘) 分離得到化合物35。
MS-ESI 計算值[M+H]
+534,實測值534。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.29 - 8.23 (m, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.68 - 7.56 (m, 2H), 7.35 - 7.28 (m, 2H), 5.93 - 5.87 (m, 1H), 5.03 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 4.5 Hz, 4H), 3.63 (s, 3H), 2.66 - 2.58 (m, 2H), 2.43 - 2.31 (m, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H)。
第一步
將化合物29-4(250毫克,500.30微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(8毫升),接著向反應液中加入化合物B的鹽酸鹽(151.70毫克,1.00毫莫耳,2當量),碳酸銫(652.03毫克,2.00毫莫耳,4當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(57.90毫克,100.06微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(45.81毫克,50.03微莫耳,0.1當量),在110攝氏度下氮氣保護下反應16小時。反應完成後,反應液用矽藻土過濾,濾液減壓濃縮的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Waters Xbridge C18 15×50毫米×10微米;流動相:流動相A:碳酸氫銨水溶液;流動相B:乙腈;B%: 40%-70%,10分鐘) 分離得到化合物36。
MS-ESI 計算值[M+H]
+534, 實測值534。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 8.36 - 8.28 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 1H), 7.54 (br t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 1H), 7.24 - 7.13 (m, 1H), 6.65 (br dd, J = 9.1, 12.4 Hz, 1H), 5.08 - 5.00 (m, 1H), 4.14 - 4.04 (m, 4H), 3.62 (s, 3H), 2.69 - 2.58 (m, 2H), 2.42 - 2.28 (m, 2H), 1.88 (s, 3H), 1.84 (s, 3H)。
第一步
將化合物34-3 (250毫克,466.70微莫耳,1.0 當量),化合物A(114.56 毫克,700.04微莫耳,1.5 當量),碳酸銫(456.17 毫克,1.4 毫莫耳,3.0 當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(54.01 毫克,93.34 微莫耳,0.2 當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(85.47 毫克,93.34 微莫耳,0.2 當量)加入二㗁烷 (20毫升) 中,氮氣置換保護,反應液加熱到100攝氏下反應12小時。反應完成後,過濾,濾液經乙酸乙酯(60毫升)稀釋,飽和食鹽水(60毫升)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾,濾液經減壓濃縮得到的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 44%-74%,10分鐘) 純化得到化合物37。
MS-ESI 計算值[M+H]
+582, 實測值582。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.36 - 8.25 (m, 1H), 8.12 - 7.99 (m, 1H), 7.65 - 7.55 (m, 1H), 7.50 - 7.42 (m, 1H), 7.30 - 7.20 (m, 1H), 7.11 - 7.02 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 6.70 - 6.24 (m, 1H), 4.18 - 4.10 (m, 2H), 4.06 (m, 2H), 3.87 - 3.77 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 2.58 - 2.40 (m, 2H), 2.10 - 2.01 (m, 2H), 1.88 (s, 3H), 1.84 (s, 3H).
第一步
將化合物34-3(250毫克,466.7微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(12毫升)中,加入化合物D(83.72毫克,700.04微莫耳,1.5當量),碳酸銫(684.28毫克,2.1毫莫耳,4.5當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(85.47毫克,93.34微莫耳,0.2當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(54.01毫克,93.34微莫耳,0.2當量),溶於二㗁烷(10毫升)中接著在100攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)和製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;48%-78%,10分鐘) 分離得到化合物38。
MS-ESI 計算值[M+H]
+538,實測值538。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 8.29 (dd,
J= 4.4, 8.3 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.63 - 7.44 (m, 2H), 7.25 (br d,
J= 1.2 Hz, 1H), 7.03 (dd,
J= 5.1, 8.9 Hz, 1H), 6.86 (dd,
J= 9.0, 12.7 Hz, 1H), 6.73 - 6.23 (m, 1H), 4.20 (d,
J= 2.8 Hz, 4H), 1.84 (d,
J= 13.4 Hz, 6H), 0.62 (s, 4H)。
第一步
將化合物34-3 (300毫克,560.03微莫耳,1.0 當量)溶於二㗁烷 (10 毫升), 氮氣置換保護,加入化合物B(127.36 毫克,840.05微莫耳,1.5 當量),碳酸銫(821.11 毫克,2.52 毫莫耳,4.5 當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(48.61 毫克,84.01微莫耳,0.15 當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(76.92毫克,84.01 微莫耳,0.15 當量),氮氣置換保護,反應液加熱到115攝氏下反應12小時。反應完成後,過濾,濾液經減壓濃縮得到的殘渣經矽膠薄層色譜板 (二氯甲烷:甲醇 = 15 : 1)和高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 39%-69%,10分鐘) 純化得到化合物39。
MS-ESI 計算值[M+H]
+570, 實測值570。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.34 - 8.25 (m, 1H), 8.11 - 8.03 (m, 1H), 7.66 - 7.56 (m, 1H), 7.50 - 7.42 (m, 1H), 7.29 - 7.22 (m, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 1H), 6.91 - 6.82 (m, 1H), 6.73 - 6.20 (m, 1H), 5.00 (m, 1H), 4.12 (m, 4H), 2.66 - 2.54 (m, 2H), 2.40 - 2.27 (m, 2H), 1.88 (s, 3H), 1.84 (s, 3H)。
第一步
將化合物40-1(8克,47.29毫莫耳,1當量)溶於
N,N-二甲基甲醯胺(60毫升)中,接著加入碳酸鉀(19.61克,141.88毫莫耳,3當量),在25攝氏度下攪拌0.5小時,然後加入化合物40-2(11.84克,70.94毫莫耳,1.5當量),在60攝氏度下反應6小時,反應完畢後,向反應液中加入水(100毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(100毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(100毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-0:1)分離純化得到化合物40-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+300,實測值300。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 11.85 (br s, 1H), 8.79 (dd,
J= 4.4, 8.4 Hz, 1H), 8.07 (d,
J= 2.4 Hz, 1H), 7.59 (t,
J= 7.9 Hz, 1H), 7.27 - 7.23 (m, 1H), 7.20 - 7.12 (m, 1H), 1.85 (d,
J= 13.2 Hz, 6H)。
第二步
將化合物40-3(666毫克,2.22毫莫耳,1當量),1-1(583.76毫克,2.89毫莫耳,1.3當量),甲烷磺酸(213.59毫克,2.22毫莫耳,1當量),溶於異丙醇(100毫升)中接著在90攝氏度下反應12小時,反應完畢後,將反應液冷卻到室溫,過濾析出的固體,得到化合物40-4。
MS-ESI 計算值[M
+H]
+467,實測值467。
第三步
將化合物40-4(300毫克,644.81微莫耳,1當量), 化合物F(150.47毫克,967.21微莫耳,1.5當量),碳酸銫(630.27毫克,1.93毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(59.05毫克,64.48微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(74.62毫克,128.96微莫耳,0.2當量),溶於二㗁烷(12毫升)中接著在115攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=10:1)和高效液相色譜法 (色譜柱: Waters Xbridge 150×25 毫米×5微米;流動相:流動相A:碳酸氫氨水溶液;流動相B:乙腈;45%-65%,9分鐘) 分離得到化合物40。
MS-ESI 計算值[M+H]
+504,實測值504。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.52 (dd,
J= 4.5, 8.2 Hz, 1H), 8.01 (d,
J= 3.5 Hz, 1H), 7.64 - 7.47 (m, 3H), 7.29 - 7.21 (m, 1H), 6.91 (t,
J= 8.1 Hz, 1H), 6.32 (dd,
J= 1.3, 8.1 Hz, 1H), 4.11 (d,
J= 7.9 Hz, 2H), 3.97 (br d,
J= 7.9 Hz, 2H), 3.69 (s, 3H), 1.86 (d,
J= 13.6 Hz, 6H), 1.54 (t,
J= 8.6 Hz, 2H)。
第一步
將化合物28-3(88.75毫克,177.61微莫耳,1當量),化合物L(70毫克,230.89微莫耳,1.3當量),碳酸銫(173.61毫克,532.83微莫耳,3當量),醋酸鈀(3.99毫克,17.76微莫耳,0.1當量),正丁基-二(1-金剛烷基)膦(12.74毫克,35.52微莫耳,0.2當量),溶於甲苯(10毫升)和水(1毫升)中接著在120攝氏度氮氣保護下反應10小時,反應完畢後,反應液過濾,濃縮的殘渣經高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex luna C18 150×40毫米×15微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;60%-90%,10 分鐘) 分離得到化合物41-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+616,實測值616。
第二步
將化合物41-1(60毫克,95.25微莫耳,1當量)溶於乙酸乙酯(2毫升),接著向反應液中加入濃硫酸(45.71毫克,476.25微莫耳,25.39微升,5當量),在20攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,濃縮得到粗品化合物41-2(硫酸鹽)。
MS-ESI 計算值[M+H]
+516, 實測值516。
第三步
將化合物41-2(60毫克,97.72微莫耳,1當量,硫酸鹽)溶於甲醇(2毫升),接著向反應液中加入甲醛(14.67毫克,488.58微莫耳,13.46微升,5當量),氰基硼氫化鈉(12.28毫克,195.43微莫耳,2當量)和
N,
N-二異丙基乙胺(37.89毫克,293.15微莫耳,51.06微升,3當量),在20攝氏度下反應1小時。反應完成後,反應液過濾濃縮的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:18%-38%,10分鐘) 分離得到41(甲酸鹽)。
MS-ESI 計算值[M+H]
+530, 實測值530。
1H NMR(400 MHz, CD
3OD) δ = 8.51 (s, 1H), 8.27 - 8.22 (m, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.82 - 7.75 (m, 1H), 7.72 - 7.58 (m, 2H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 6.69 - 6.61 (m, 1H), 4.30 (br s, 2H), 4.06 (s, 2H), 3.70 (s, 4H), 2.88 (s, 3H), 2.71 (br t, J = 10.4 Hz, 2H), 2.45 - 2.33 (m, 2H), 1.85 (d, J = 13.5 Hz, 6H)。
第一步
將化合物29-3(500毫克,2.27毫莫耳1當量),化合物F(530.27毫克,3.41毫莫耳,1.5當量),三級丁醇鈉(873.51毫克,9.09毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(208.08毫克,227.23微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(262.96毫克,454.47微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(15毫升)中接著在100攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-0:1)分離純化得到化合物42-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+259,實測值259。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 6.60 (dd,
J= 8.7, 12.5 Hz, 1H), 6.17 - 6.05 (m, 1H), 4.36 (dd,
J= 2.4, 8.4 Hz, 2H), 4.25 - 4.18 (m, 2H), 3.65 (s, 3H), 1.43 (t,
J= 8.4 Hz, 2H)。
第二步
將化合物42-1(250毫克,968.1微莫耳,1當量), 化合物40-3(377.14毫克,1.26毫莫耳,1.3當量),碳酸銫(946.27毫克,2.9毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(88.65毫克,96.81微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(112.03毫克,193.62微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(12毫升)中接著在110攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)稀釋,用二氯甲烷萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;38%-68%,10分鐘) 分離得到化合物42。
MS-ESI 計算值[M+H]
+522,實測值522。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.49 (dd,
J= 4.5, 8.4 Hz, 1H), 7.98 (d,
J= 3.2 Hz, 1H), 7.70 - 7.48 (m, 2H), 7.37 - 7.18 (m, 2H), 6.72 (dd,
J= 9.1, 12.5 Hz, 1H), 4.29 (dd,
J= 2.0, 8.3 Hz, 2H), 4.24 - 4.17 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 1.86 (d,
J= 13.6 Hz, 6H), 1.51 (t,
J= 8.6 Hz, 2H)。
第一步
將化合物35-1(550毫克,1.72毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(20毫升),接著向反應液中加入化合物F(280.63毫克,1.80毫莫耳,1.05當量),碳酸銫(2.24克,6.87毫莫耳,4當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(198.80毫克,343.58微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(157.31毫克,171.79微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1到25:1)純化得到化合物43-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+359, 實測值359。
第二步
將化合物43-1(360毫克,1.00毫莫耳,1當量)溶於乙酸乙酯(4毫升),接著向反應液中加入濃硫酸(502.70毫克,5.02毫莫耳,273.21微升,純度:98%,5當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,用碳酸氫鈉的飽和溶液將反應液的pH調至8,濾液濃縮,得到粗品化合物43-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+259, 實測值259。
第三步
將化合物43-2(80毫克,309.79微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(5毫升),然後向反應液中加入化合物40-3(111.40毫克,371.75毫微莫耳,1.2當量),三級丁醇鈉(89.32毫克,929.37微莫耳,3當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(35.85毫克,91.96微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(28.37毫克,30.98微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在115攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=50:1到1:2,然後二氯甲烷:甲醇= 100:1到50:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×40毫米×15 微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%:47%-77%,10 分鐘) 分離得到化合物43。
MS-ESI 計算值[M+H]
+522, 實測值522。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.48 (dd, J = 4.3, 8.2 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.72-7.56 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 2.9, 11.3 Hz, 1H), 7.31 (dt, J = 1.2, 7.5 Hz, 1H), 6.04 (dd, J = 2.9, 10.3 Hz, 1H), 4.14 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 4.01 (br d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 1.89 (d, J = 13.5 Hz, 6H), 1.57 (t, J = 8.6 Hz, 2H)。
第一步
將化合物35-1(500毫克,1.56毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(15毫升),接著向反應液中加入化合物D(196.11毫克,1.64毫莫耳,1.5當量),碳酸銫(2.04克,6.25毫莫耳,4當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(180.73毫克,312.35微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(143.01毫克,156.17微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1到25:1)純化得到化合物44-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+323, 實測值323。
第二步
將化合物44-1(360毫克,1.12毫莫耳,1當量)溶於乙酸乙酯(7毫升),接著向反應液中加入濃硫酸(558.81毫克,5.58毫莫耳,303.70微升,純度:98%,5當量),在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,用碳酸氫鈉的飽和溶液將反應液的pH調至8,濾液濃縮,得到粗品化合物44-2(240毫克,黃色油,收率:96.70%)。
MS-ESI 計算值[M+H]
+223, 實測值223。
第三步
將化合物44-2(240毫克,1.08微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(15毫升),接著向反應液中加入化合物40-3(388.31毫克,1.30毫微莫耳,1.2當量),碳酸銫(1.06毫克,3.24毫莫耳,3當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(124.96毫克,215.97微莫耳,0.2當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(98.88毫克,107.98微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在115攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=50:1到1:2,然後二氯甲烷:甲醇= 100:1到50:1)純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×25毫米×10 微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%: 51%-81%,10 分鐘) 分離得到化合物44。
MS-ESI 計算值[M+H]
+486, 實測值486。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.50 (dd, J = 4.3, 8.1 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.71-7.58 (m, 2H), 7.43 (dd, J = 2.9, 11.3 Hz, 1H), 7.34-7.24 (m, 1H), 5.96 (dd, J = 3.0, 10.5 Hz, 1H), 4.02 (s, 4H), 3.67 (s, 3H), 1.89 (d, J = 13.5 Hz, 6H), 0.69 (s, 4H)。
第一步
將化合物29-3(1.8克,8.18毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(25毫升)中,加入二-三級-丁基二碳酸酐(2.68克,12.27毫莫耳,1.5當量),接著在70攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完畢後,將反應液減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-10:1)分離純化得到化合物45-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+367,實測值367。
1H NMR (400 MHz,CDCl
3) δ = 8.11 - 7.96 (m, 1H), 6.91 (t,
J= 8.6 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 1.54 (s, 10H) 。
第二步
將化合物45-1(1.5克,4.69毫莫耳,1當量),化合物A(805.05毫克,4.92毫莫耳,1.05當量),碳酸銫(6.11克,18.74毫莫耳,4當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(429.04毫克,468.52微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(542.19毫克,937.05微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(20毫升)中接著在100攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)稀釋,用乙酸乙酯萃取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-20:1)分離純化得到化合物45-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+367,實測值367。
第三步
將化合物45-2(900毫克,2.46毫莫耳,1當量)溶於乙酸乙酯(10毫升)中,再加入硫酸(1.28克,654.61毫莫耳,5當量),接著在25攝氏度下反應0.5小時,反應完畢後,向反應液中加入飽和的碳酸氫鈉溶液(50毫升),用乙酸乙酯萃取(50毫升×3),有機相用飽和的食鹽水(40毫升×2)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮得到化合物45-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+267,實測值267。
第四步
將化合物45-3(100毫克,375.50微莫耳,1當量),化合物40-3(112.53毫克,375.50毫莫耳,1當量),三級丁醇鈉(108.26毫克,1.13毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(34.39毫克,37.55微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(43.45毫克,75.10微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(6毫升)中接著在110攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,向反應液中加入水(50毫升)稀釋,用二氯甲烷取(50毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(50毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;38%-68%,10分鐘) 分離得到化合物45。
MS-ESI 計算值[M+H]
+530,實測值530。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 8.48 (dd,
J= 4.3, 8.1 Hz, 1H), 8.06 (d,
J= 3.5 Hz, 1H), 7.76 - 7.54 (m, 2H), 7.42 (dd,
J= 3.0, 11.3 Hz, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 1H), 5.91 (dd,
J= 3.0, 10.5 Hz, 1H), 3.91 - 3.81 (m, 5H), 3.64 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.64 - 2.44 (m, 2H), 2.16 - 2.03 (m, 2H), 1.88 (d,
J= 13.6 Hz, 6H)。
第一步
將化合物35-2(75毫克,294.96微莫耳,1當量),化合物40-3(106.07毫克,353.95微莫耳,1.2當量),三級丁醇鈉(85.04毫克,884.87微莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(27.01毫克,29.50微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(34.13毫克,58.99微莫耳,0.2當量),溶於二㗁烷(5毫升)中接著在100攝氏度氮氣保護下反應12小時,反應完畢後,用乙酸乙酯萃取(5毫升×2),有機相用飽和的食鹽水(5毫升×2)洗滌,無水硫酸鈉乾燥。過濾,濃縮的殘渣經製備高效液相色譜法 (色譜柱: Phenomenex Synergi C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液-流動相B:乙腈;51%-71%,10分鐘) 分離得到化合物46。
MS-ESI 計算值[M+H]
+518,實測值518。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.50 - 8.41 (m, 1H), 8.05 (d,
J= 3.5 Hz, 1H), 7.67 - 7.55 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.33 - 7.22 (m, 1H), 5.94 - 5.84 (m, 1H), 5.08 - 4.89 (m, 1H), 3.88 (d,
J= 4.5 Hz, 4H), 3.63 (s, 3H), 2.67 - 2.56 (m, 2H), 2.46 - 2.32 (m, 2H), 1.86 (d,
J= 13.4 Hz, 6H)。
第一步
將化合物28-2(6克,27.3毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(80毫升),接著向反應液中加入三乙胺(9.66克,95.4毫莫耳,3.5當量),三氟乙酸酐(17.2克,81.8毫莫耳,3當量),在0攝氏度下反應1小時。反應完成後,加碳酸氫鈉飽和水溶液(250毫升),水(20毫升),乙酸乙酯萃取(100毫升×3),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(100毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 200:1-50:1)純化得到化合物47-1。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 8.54 (br s, 1H), 8.12 (dd,
J= 2.9, 9.5 Hz, 1H), 7.15 (dd,
J= 2.9, 7.6 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H)。
第二步
將化合物47-1(8.1克,25.6毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(80毫升),接著在-78攝氏度下向反應液中加入正丁基鋰(2.5莫耳每升,25.6毫升,2.5當量),在-78攝氏度下反應1小時。然後接著在-78攝氏度下向反應液中加入化合物M(5.41克,25.6毫莫耳,1當量),在-78攝氏度下反應1小時。反應完成後,加飽和氯化銨水溶液(200毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(60毫升×3),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(100毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-4:1)純化的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Welch Ultimate XB-CN 250×70×10微米;流動相:流動相A:正己烷;流動相B:乙醇;B%: 1%-45%,15分鐘) 分離得到化合物47-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+449, 實測值349,393。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 7.46 (dd, J = 3.1, 9.1 Hz, 1H), 7.00 (dd, J = 3.1, 9.2 Hz, 1H), 4.21 - 4.05 (m, 3H), 3.81 (s, 4H), 2.84 - 2.74 (m, 2H), 2.68 - 2.53 (m, 2H), 1.45 (s, 9H)。
第三步
將化合物47-2(390毫克,870微莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(4毫升),接著向反應液中加入三氟乙酸(616毫克,5.40毫莫耳,6.21當量),在20攝氏度下反應2小時。反應完成後,濃縮得到化合物47-3(三氟乙酸鹽)。
MS-ESI 計算值[M+H]
+349, 實測值349。
第四步
將化合物47-3(300毫克,649微莫耳,1當量,三氟乙酸鹽)溶於甲醇(3毫升),接著向反應液中加入甲醛水溶液(263毫克,3.24毫莫耳,純度:37%,5當量),氰基硼氫化鈉(102毫克,1.62毫莫耳,2.5當量),在20攝氏度下反應1小時。反應完成後,濃縮的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Synergi C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:0%-30%,10分鐘) 分離得到化合物47-4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+363, 實測值363。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 6.97 - 6.68 (m, 1H), 6.49 - 6.16 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.54 (br d,
J= 5.1 Hz, 2H), 3.26 (d,
J= 13.4 Hz, 2H), 2.73 (dd,
J= 2.6, 13.4 Hz, 2H), 2.55 - 2.48 (m, 2H), 2.36 (d,
J= 2.8 Hz, 3H)。
第五步
將化合物47-4(0.2克,552微莫耳,1當量)溶於甲醇(2毫升),水(2毫升),接著向反應液中加入碳酸鉀(381毫克,2.76毫莫耳,5當量),在60攝氏度下反應2小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:1%-20%,10分鐘) 分離得到化合物47-5。
MS-ESI 計算值[M+H]
+267, 實測值267。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ =6.44 (dd, J = 3.1, 10.0 Hz, 1H), 6.23 (dd, J = 3.1, 9.4 Hz, 1H), 4.33 (br s, 2H), 4.05 (br s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 2.82 (br d, J = 13.2 Hz, 2H), 2.67 - 2.56 (m, 2H)。
第六步
將化合物47-5(66毫克,248微莫耳,1當量),化合物E(94毫克,297微莫耳,1.2當量)溶於二㗁烷(3毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(323毫克,991微莫耳,4當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(22.7毫克,24.8微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(14.3毫克,24.8微莫耳,0.1當量),在110攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮的殘渣經矽膠薄層色譜板(二氯甲烷:甲醇=8:1)純化得到化合物47-6。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546, 實測值546。
第七步
將化合物47-6(20毫克,36.6微莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(1毫升),接著在0攝氏度下向反應液中加入二乙氨基三氟化硫(7.09毫克,44.0微莫耳,1.2當量),在20攝氏度下反應2小時。反應完成後,加入飽和碳酸氫鈉水溶液(2毫升)淬滅,反應液過濾,濾液濃縮的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:15%-45%,10分鐘) 分離得到化合物47。
MS-ESI 計算值[M+H]
+548, 實測值548。
1H NMR(400 MHz, CD
3OD) δ = 8.55 (s, 1H), 8.24 (dd,
J= 4.3, 8.3 Hz, 1H), 8.20 - 8.16 (m, 1H), 7.99 - 7.83 (m, 1H), 7.75 - 7.54 (m, 2H), 7.36 - 7.23 (m, 1H), 6.76 - 6.50 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.21 - 4.03 (m, 2H), 3.83 - 3.73 (m, 4H), 3.24 - 2.99 (m, 2H), 2.98 - 2.88 (m, 2H), 2.87 - 2.65 (m, 3H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H)。
第一步
將化合物26-1 (250毫克,518.98微莫耳,1.0當量)溶於甲苯 (8毫升) 和水(1毫升),氮氣置換保護,加入化合物L(236.01 毫克,778.48微莫耳,1.5當量),碳酸銫(507.29毫克,1.56 毫莫耳,3當量),正丁基-二(1-金剛烷基)膦(37.22 毫克,103.80微莫耳,0.2 當量),醋酸鈀(23.30毫克,103.80 微莫耳,0.2 當量),氮氣置換保護,反應液加熱到120攝氏下反應16小時。反應完成後,過濾,濾液用乙酸乙酯(100 mL)稀釋,飽和食鹽水(100 mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濾液經減壓濃縮得到的殘渣經矽膠薄層色譜板 (二氯甲烷:甲醇 = 10 : 1)和高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150×40毫米×15微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 56%-86%, 10分鐘) 純化得到化合物48-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+598, 實測值598。
第二步
將化合物48-1(89毫克,148.81微莫耳,1.0當量)溶於乙酸乙酯(2毫升),加入硫酸(74.47 毫克,744.06微莫耳,5.0當量),反應液在20攝氏下反應0.5小時。反應完成後,反應液經減壓濃縮得到粗品化合物48-2(硫酸鹽)。
MS-ESI 計算值[M+H]
+498, 實測值498。
第三步
將化合物48-2 (88毫克,硫酸鹽,147.64微莫耳,1.0當量)溶於甲醇(3毫升),加入
N,
N-二異丙基乙胺(57.25 毫克,442.93微莫耳,3.0當量),甲醛(37%,67.17毫克,738.21微莫耳,5當量),氰基硼氫化鈉(27.83 毫克,442.93微莫耳,3.0 當量),反應液在20攝氏下反應1小時。反應完成後,反應液經減壓濃縮得到的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Unisil 3-100 C18 Ultra 150×50毫米×3微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 7%-37%,7分鐘) 純化得到化合物48(甲酸鹽)。
MS-ESI 計算值[M+H]
+512, 實測值512。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.35 - 8.25 (m, 1H), 8.16 - 8.06 (m, 1H), 7.85 - 7.77 (m, 1H), 7.69 - 7.59 (m, 1H), 7.53 (m, 1H), 7.34 - 7.23 (m, 1H), 7.01 - 6.92 (m, 2H), 4.33 (s, 2H), 4.09 (s, 2H), 3.78 - 3.67 (m, 4H), 2.90 (s, 3H), 2.80 - 2.65 (m, 2H), 2.50 - 2.33 (m, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.84 (s, 3H)。
第一步
將化合物49-1(2克,8.44毫莫耳,1當量),化合物49-2(790.34毫克,10.13毫莫耳,1.2當量),磷酸鉀(2.69克,12.66毫莫耳,1.5當量),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(976.52毫克,1.69毫莫耳,0.2當量)和醋酸鈀(189.45毫克,843.84微莫耳,0.1當量)溶於
N,
N-二甲基甲醯胺(20毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液經過濾,濃縮得到粗品。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=30:1-1:4)分離純化得到化合物49-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+188, 實測值188。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 7.25-7.02 (m, 2H), 6.70 (ddt,
J= 3.6, 4.5, 7.9 Hz, 1H), 1.83 (d,
J= 13.5 Hz, 6H).
第二步
將化合物49-3(350毫克,1.87毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(5毫升),置換三次氮氣,在0攝氏度下加入鈉氫(112.2毫克,2.81毫莫耳,60%純度,1.5當量),攪拌半小時後,在0攝氏度下加入化合物49-4(514.54毫克,2.81毫莫耳,1.5當量),並在氮氣氛圍下在0攝氏度下反應1小時。反應完成後,在25攝氏度下,反應液用飽和氯化銨溶液(50毫升)淬滅反應,加入乙酸乙酯(50毫升)稀釋,再用乙酸乙酯(40毫升×3)萃取。有機相經無水硫酸鈉乾燥後,過濾濃縮得到粗品。粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×40毫米×15 微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%:20%-50%,10 分鐘) 分離得到化合物49-5。
第三步
將化合物49-5(100毫克,299.3微莫耳,1當量),化合物4-2(89.19毫克,359.16微莫耳,1.2當量),碳酸銫(292.55毫克,897.9微莫耳,3當量),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(34.64毫克,59.86微莫耳,0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(27.41毫克,29.93微莫耳,0.1當量)溶於二㗁烷(5毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在105攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液經過濾濃縮得到粗品。粗品經矽膠薄層色譜板(乙酸乙酯:甲醇= 20:1)純化。再經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×25毫米×10 微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%:30%-60%,10 分鐘) 分離得到化合物49。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546, 實測值546。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 8.13 (s, 1H), 7.79 (dd,
J= 7.2, 12.0 Hz, 1H), 7.66 (ddt,
J= 2.9, 4.9, 7.9 Hz, 1H), 7.59-7.51 (m, 1H), 7.01 (dd,
J= 1.1, 8.3 Hz, 1H), 6.51 (t,
J= 8.2 Hz, 1H), 6.09 (dd,
J= 1.3, 8.1 Hz, 1H), 3.90-3.83 (m, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.24 (s, 3H), 2.57-2.45 (m, 2H), 2.15-2.03 (m, 2H), 1.75 (br d, J = 13.7 Hz, 6H)。
第一步
將化合物50-1(3克,12.66毫莫耳,1當量),化合物49-2(1.19克,15.19毫莫耳,1.2當量),磷酸鉀(4.03克,12.66毫莫耳,1.5當量),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(1.46克,2.53毫莫耳,0.2當量)和醋酸鈀(284.17毫克,1.27毫莫耳,0.1當量)溶於
N,
N-二甲基甲醯胺(50毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液加入水(20毫升)淬滅反應,用乙酸乙酯(50毫升)稀釋,再用乙酸乙酯(50毫升×3)萃取,合併有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到粗品。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-1:4)分離純化得到化合物50-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+188, 實測值188。
第二步
將化合物50-2(300毫克,1.6毫莫耳,1當量)溶於乙腈(10毫升),在25攝氏度下加入碳酸鉀(664.63毫克,4.81毫莫耳,3當量),攪拌半小時後,在25攝氏度下加入化合物49-4(441.04毫克,2.4毫莫耳,1.5當量),並在80攝氏度下反應12小時。反應完成後,在25攝氏度下,反應液加入水(50毫升)淬滅反應,加入乙酸乙酯(50毫升)稀釋,再用乙酸乙酯(100毫升×2)萃取,再用飽和食鹽水(50毫升×2)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後,過濾濃縮得到粗品。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=50:1-1:2)分離純化得到化合物50-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+334, 實測值334。
第三步
將化合物50-3(375毫克,1.12毫莫耳,1當量),化合物4-2(306.58毫克,1.23毫莫耳,1.1當量),碳酸銫(1.1克,3.37毫莫耳,3當量),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(129.89毫克,224.47微莫耳,0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(102.78毫克,112.24微莫耳,0.1當量)溶於二㗁烷(5毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在105攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液經過濾濃縮得到粗品。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=20:1-0:1)純化,再經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150×25 毫米×10 微米;流動相:流動相A:甲酸溶液;流動相B:乙腈;B%:49%-79%,10 分鐘) 分離得到化合物50。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546, 實測值546。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 8.53 (dd,
J= 3.4, 8.6 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.53-7.44 (m, 1H), 7.41 (dd,
J= 1.4, 8.1 Hz, 1H), 6.99-6.85 (m, 2H), 6.30 (dd,
J= 1.4, 8.1 Hz, 1H), 3.92-3.78 (m, 4H), 3.67 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 2.67-2.46 (m, 2H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.95 (dd,
J= 2.4, 13.9 Hz, 6H).
第一步
將化合物51-1(2.2克,9.28毫莫耳,1當量),化合物49-2(869.37毫克,11.14毫莫耳,1.2當量),磷酸鉀(2.96克,13.92毫莫耳,1.5當量),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(1.07克,1.86毫莫耳,0.2當量)和醋酸鈀(208.39毫克,928.22微莫耳,0.1當量)溶於
N,
N-二甲基甲醯胺(22毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液經過濾,加入水(100毫升)稀釋,再用乙酸乙酯(100毫升×2)萃取,飽和食鹽水(100毫升)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後,過濾濃縮得到粗品濃縮得到粗品。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-0:1)分離純化得到化合物51-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+188, 實測值188。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 7.44 - 7.11 (m, 1H), 6.80 - 6.08 (m, 2H), 2.29 - 1.54 (m, 6H)。
第二步
將化合物51-2(200毫克,1.07毫莫耳,1當量)溶於四氫呋喃(5毫升),在0攝氏度下和氮氣保護下加入鈉氫(64.11毫克,1.60毫莫耳,60%純度,1.5當量),攪拌半小時後,在0攝氏度下加入化合物49-4(294.02毫克,1.60毫莫耳,1.5當量),並在氮氣氛圍下在0攝氏度下反應1小時。反應完成後,在25攝氏度下,反應液用飽和氯化銨溶液(10毫升)淬滅反應,再用乙酸乙酯(10毫升×2)萃取,飽和食鹽水(10毫升)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後,過濾濃縮得到粗品。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-20:1)分離純化得到化合物51-3。
第三步
將化合物51-3(200毫克,598.60微莫耳,1當量),化合物4-2(178.37毫克,718.32微莫耳,1.2當量),碳酸銫(585.11毫克,1.80毫莫耳,3當量),4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(69.27毫克,119.72微莫耳,0.2當量)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(54.81毫克,59.86微莫耳,0.1當量)溶於二㗁烷(5毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在105攝氏度下反應10小時。反應完成後,反應液經過濾濃縮得到粗品。粗品經經高效液相色譜 (色譜柱:Unisil 3-100 C18 Ultra 150×50毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 44%-74%,10分鐘) 分離得到化合物51。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546,實測值546。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 8.43 - 8.35 (m, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.65 - 7.55 (m, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 1H), 6.98 -6.86 (m, 2H), 6.31 - 6.18 (m, 1H), 3.91 - 3.78 (m, 4H), 3.66 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.57 - 2.46 (m, 2H), 2.13 - 2.02 (m, 2H), 1.88(s, 3H), 1.84 (s, 3H)。
第一步
將化合物52-1(1克,4.22毫莫耳,1當量)溶於
N,N二甲基甲醯胺(15毫升),接著向反應液中加入化合物49-2(395毫克,5.06毫莫耳,1.2當量),磷酸鉀(1.34克,6.33毫莫耳,1.5當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(488毫克,844微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(94.72毫克,422微莫耳,0.1當量),在120攝氏度氮氣保護下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1-0:1)純化得到化合物52-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+188, 實測值188。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 7.08 - 6.99 (m, 2H), 6.79 - 6.71 (m, 1H), 1.83 - 1.80 (m, 3H), 1.75 (br s, 3H)。
第二步
將化合物52-2(330毫克,1.76毫莫耳,1當量)溶於
N,N二甲基甲醯胺(5毫升),接著加入碳酸鉀(731毫克,5.29毫莫耳,3當量),在25攝氏度下反應0.5小時。然後接著加入化合物49-4(388毫克,2.12毫莫耳,1.2當量),在60攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(60毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(30毫升×3),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(40毫升×3)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮。粗品經矽膠薄層色譜板(石油醚:乙酸乙酯= 0:1)純化得到化合物52-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+334, 實測值334。
第三步
將化合物52-3(150毫克,449微莫耳,1當量),化合物4-2(134毫克,539微莫耳,1.2當量)溶於二㗁烷(4毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(439毫克,1.35毫莫耳,3當量),三(二亞苄基丙酮)二鈀(41毫克,45微莫耳,0.1當量),4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(52毫克,89.8微莫耳,0.2當量),在氮氣保護下105攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮的粗品經矽膠薄層色譜板(乙酸乙酯:甲醇= 10:1)純化後的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex C18 75×30毫米×3微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 38%-68%,7分鐘) 分離得到化合物52。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546, 實測值546。
1H NMR(400 MHz, CD
3OD) δ = 8.29 - 8.18 (m, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.53 - 7.42 (m, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 6.86 - 6.76 (m, 1H), 6.31 - 6.20 (m, 1H), 4.66 - 4.53 (m, 1H), 3.89 - 3.86 (m, 2H), 3.83 - 3.80 (m, 2H), 3.67 - 3.62 (m, 3H), 3.27 - 3.22 (m, 3H), 2.58 - 2.47 (m, 2H), 2.11 (ddd, J = 2.9, 6.9, 9.8 Hz, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.84 (s, 3H)。
第一步
將化合物B-1(1克,4.69毫莫耳,1當量),碘化亞酮(178.6毫克,937.77微莫耳,0.2當量)溶於乙腈(12毫升)中,接著在50攝氏度加入溶於乙腈(6毫升)的2-(氟代磺醯基)-二氟乙酸(1.25克,7.03毫莫耳,728.22微升,1.5當量),在50攝氏度下反應1小時。反應完成後,將反應液過濾,濾液減壓濃縮,濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-10:1)純化得到得到化合物53-1。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ = 6.63 - 6.00 (m, 1H), 4.57 - 4.44 (m, 1H), 4.09 - 3.69 (m, 4H), 2.73 - 2.42 (m, 2H), 2.31 (ddd,
J= 3.0, 7.2, 10.1 Hz, 2H), 1.45 - 1.27 (m, 9H).
第二步
將化合物53-1(220毫克,835.61微莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(3毫升)和三氟乙酸(1毫升),在25攝氏度下反應1小時。反應完成後,將反應液過濾,濾液減壓濃縮得到化合物53-2(三氟乙酸鹽)。
第三步
將化合物53-2(105.02毫克,78.88微莫耳,1當量,三氟乙酸鹽),化合物26-1(182.51毫克,378.88微莫耳,1當量)溶於二㗁烷(6毫升),接著向反應液中加入碳酸銫(432.06毫克,1.33毫莫耳,3.5當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(47.18毫克,75.78微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(8.51毫克,37.89微莫耳,0.1當量),氮氣置換三次,在110攝氏度下反應12小時。反應完成後,將反應液過濾,濾液用水(20毫升)稀釋,用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取,有機相用飽和的食鹽水(20毫升)洗滌,無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經製備高效液相色譜法(色譜柱:Phenomenex C18 75毫米×30毫米×3微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:42%-72%,7分鐘) 分離得到化合物53。
MS-ESI 計算值[M+H]
+564,實測值564。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.34 (dd, J = 4.5, 8.1 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.70 - 7.51 (m, 2H), 7.45 - 7.27 (m, 2H), 6.82 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.55 - 6.09 (m, 2H), 4.59 (br d, J = 7.1 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 19.0 Hz, 4H), 3.67 (s, 3H), 2.67 - 2.54 (m, 2H), 2.43 - 2.25 (m, 2H), 1.86 (d, J = 13.6 Hz, 6H).
第一步
將化合物54-1(1克,6.28毫莫耳,1當量)溶於
N,N-二甲基甲醯胺(10毫升),接著在0攝氏度下向反應液中加入
N-溴代丁二醯亞胺(1.12克,6.28毫莫耳,1當量),在25攝氏度下反應1小時。反應完成後,加水(200毫升)稀釋,用飽和的碳酸氫鈉水溶液調節pH到8,乙酸乙酯萃取(200毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(200毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-10:1)純化得到得到化合物54-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+238,實測值238。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 7.98 (s, 1H), 6.43 (dd,
J= 2.1, 10.6 Hz, 1H), 3.81 (d,
J= 0.7 Hz, 3H).
第二步
將化合物53-2(2克,8.4毫莫耳,1當量),化合物E(2.66克,8.4毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(20毫升),接著向反應液中加入甲烷磺酸(807.55毫克,8.4毫莫耳,598.18微升,1當量),氮氣置換三次,在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(20毫升)稀釋,然後用4莫耳每升的氫氧化鈉水溶液調節pH至8,乙酸乙酯萃取(20毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到的殘渣用乙酸乙酯(20毫升)在25攝氏度下打漿30分鐘,得到化合物54-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+519,實測值519。
第三步
將化合物54-3(500毫克,965.83微莫耳,1當量),化合物A(173.86毫克,1.06毫莫耳,1.1當量,鹽酸鹽)溶於二㗁烷(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(324.86毫克,3.38毫莫耳,3.5當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(120.28毫克,193.17微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(21.68毫克,96.58微莫耳,0.1當量),氮氣置換三次,在110攝氏度下反應12小時。反應完成後加水(20毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(20毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:YMC Triart C18 150毫米×25毫米×5微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:56%-86%,10分鐘) 分離得到化合物54。
MS-ESI 計算值[M+H]
+564,實測值564。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.25 (dd, J = 4.5, 8.1 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.68 - 7.45 (m, 3H), 7.35 - 7.24 (m, 1H), 4.07 (t, J = 2.3 Hz, 2H), 4.02 (t, J = 2.3 Hz, 2H), 3.88 - 3.77 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.52 (br d, J = 3.1 Hz, 2H), 2.14 - 2.02 (m, 2H), 1.84 (d, J = 13.6 Hz, 6H).
第一步
將化合物55-1(5克,35.43毫莫耳,1當量)溶於
N,N-二甲基甲醯胺(100毫升),接著在0攝氏度下向反應液中加入
N-溴代丁二醯亞胺(6.31克,35.43毫莫耳,1當量),在25攝氏度下反應1小時。反應完成後,加水(200毫升)稀釋,用飽和的碳酸氫鈉水溶液調pH到8,乙酸乙酯萃取(200毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(200毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-10:1)純化得到化合物55-2。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 6.97 (dd,
J= 7.2, 8.7 Hz, 1H), 6.48 (dd,
J= 1.8, 8.7 Hz, 1H), 3.85 (d,
J= 1.0 Hz, 3H).
第二步
將化合物55-2(4克,18.18毫莫耳,1當量),化合物E(5.75克,18.18毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(40毫升),接著向反應液中加入甲烷磺酸(1.75克,18.18毫莫耳,1.29毫升,1當量),氮氣置換三次,在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(20毫升)稀釋,然後用4莫耳每升的氫氧化鈉水溶液調節pH值至8,乙酸乙酯萃取(20毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到的殘渣用乙酸乙酯(40毫升)在25攝氏度下打漿30分鐘,得到化合物55-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+501,實測值501。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.20 (dd,
J= 4.3, 8.3 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.79 (dd,
J= 1.8, 9.1 Hz, 1H), 7.70 - 7.51 (m, 2H), 7.37 - 7.25 (m, 1H), 7.04 (dd,
J= 7.3, 9.0 Hz, 1H), 3.93 (d,
J= 1.6 Hz, 3H), 1.83 (d,
J= 13.4 Hz, 6H).
第三步
將化合物55-3(300毫克,600.36微莫耳,1當量),化合物A(108.07毫克,660.4微莫耳,1.1當量,鹽酸鹽)溶於二㗁烷(5毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(201.93毫克,2.1毫莫耳,3.5當量),(±)-2.2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(74.77毫克,120.07微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(13.48毫克,60.04微莫耳,0.1當量),氮氣置換三次,在氮氣保護和110攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(20毫升),乙酸乙酯萃取(20毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150毫米×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:38%-68%,9分鐘) 分離得到化合物55。
MS-ESI 計算值[M+H]
+546,實測值546。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.33 (dd,
J= 4.2, 8.3 Hz, 1H), 8.06 (br s, 1H), 7.61 (ddd,
J= 1.3, 7.8, 14.1 Hz, 1H), 7.50 (br t,
J= 7.9 Hz, 1H), 7.37 (dd,
J= 1.5, 8.9 Hz, 1H), 7.26 (dt,
J= 1.3, 7.5 Hz, 1H), 6.19 (t,
J= 9.1 Hz, 1H), 3.97 - 3.81 (m, 8H), 3.26 (s, 3H), 2.64 - 2.49 (m, 2H), 2.21 - 2.07 (m, 2H), 1.85 (d,
J= 13.4 Hz, 6H).
第一步
將化合物28-2(658.58克,2.99毫莫耳,1當量),化合物51-3(658.58毫克,2.99毫莫耳,1當量)溶於二㗁烷(10毫升),接著向反應液中加入甲烷磺酸(287.66毫克,2.99毫莫耳,213.08微升,1當量),氮氣置換三次,在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(20毫升),然後用4莫耳每升的氫氧化鈉水溶液調節pH值至8,乙酸乙酯萃取(20毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到的殘渣用乙酸乙酯(8毫升)在25攝氏度下打漿30分鐘,得到化合物56-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+519,實測值519。
第二步
將化合物56-1(500毫克,965.83微莫耳,1當量),化合物A(173.86毫克,1.06毫莫耳,1.1當量,鹽酸鹽)溶於二㗁烷(10毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(324.87毫克,3.38毫莫耳,3.5當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(120.28毫克,193.17微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(21.68毫克,96.58微莫耳,0.1當量),氮氣置換三次,在110攝氏度下反應12小時。反應完成後,將反應液過濾,再加水(20毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(20毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:YMC Triart C18 150毫米×25毫米×5微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:59%-89%,8.5分鐘) 分離得到化合物56。
MS-ESI 計算值[M+H]
+564,實測值564。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.28 (td,
J= 3.0, 11.9 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.74 - 7.49 (m, 1H), 7.25 (dd,
J= 3.0, 10.8 Hz, 1H), 7.09 - 6.82 (m, 1H), 5.93 (dd,
J= 2.9, 10.4 Hz, 1H), 3.95 - 3.72 (m, 5H), 3.63 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.57 - 2.45 (m, 2H), 2.18 - 2.01 (m, 2H), 1.86 (d,
J= 13.6 Hz, 6H).
第一步
將化合物57-1(0.9克,6.03毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(3毫升),接著在-10攝氏度下分批次向反應液中加入
N-溴代丁二醯亞胺(966.31毫克,5.43毫莫耳,0.9當量),在0攝氏度下反應1小時。反應完成後,在0攝氏度下加水(10毫升)稀釋,二氯甲烷萃取(10毫升×3),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=1:0-100:1)純化得到得到化合物57-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+230,實測值230。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ = 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.46 - 6.39 (m, 1H), 4.76 (br s, 2H), 4.21 - 4.01 (m, 2H), 2.07 - 1.74 (m, 2H).
第二步
將化合物57-2(0.68克,2.98毫莫耳,1當量),化合物E(848.22毫克,2.68毫莫耳,0.9當量)溶於二㗁烷(10毫升),接著向反應液中加入甲烷磺酸(286.54毫克,2.98毫莫耳,1當量),在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(30毫升),乙酸乙酯(30毫升)稀釋,然後用2莫耳每升的氫氧化鈉水溶液調節pH值至7-8,乙酸乙酯萃取(30毫升×3),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(50毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物57-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+509,實測值509。
第三步
將化合物57-3(0.8克,1.58毫莫耳,1當量),化合物A(283.62毫克,1.73毫莫耳,1.1當量)溶於二㗁烷(12毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(454.24毫克,4.73毫莫耳,3當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(196.21毫克,315.12微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(35.37毫克,157.56微莫耳,0.1當量),置換三次氮氣,然後在110攝氏度和氮氣保護下反應16小時。反應完成後,反應液濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 1:1-0:1)純化的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150毫米×40毫米×15微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:20%-50%,15分鐘) 分離得到化合物57。
MS-ESI 計算值[M+H]
+554,實測值554。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ = 11.16 (s, 1H), 8.50 (br d, J = 3.4 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.61 - 7.49 (m, 1H), 7.31 (br t, J = 9.0 Hz, 2H), 7.12 (br t, J = 7.3 Hz, 1H), 5.99 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.11 - 4.06 (m, 2H), 3.83 - 3.68 (m, 5H), 3.17 (s, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.47 - 2.42 (m, 2H), 2.09 - 1.99 (m, 2H), 1.87 - 1.80 (m, 2H), 1.77 (d, J = 13.6 Hz, 6H).
第一步
將化合物26-1(2.00克,4.15毫莫耳,1當量),化合物58-1(2.00克,6.23毫莫耳,1.5當量),氯(2-二環己基膦基-2,4,6-三異丙基-1,1-聯苯基)[2-(2-氨基-1,1-聯苯)]鈀(II)(326.67毫克,415.19微莫耳,0.1當量),2-二環己基磷-2,4,6-三異丙基聯苯(395.85毫克,830.38微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(20毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍和90攝氏度下反應12小時。反應完成後,向反應液中加入飽和氟化鉀水溶液(20毫升),乙酸乙酯(20毫升×2)萃取,飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後,過濾濃縮得到粗品。粗品經矽膠柱層析(乙酸乙酯:甲醇=100:1-10:1)分離純化得到化合物58-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+433, 實測值433。
第二步
將化合物58-2(500毫克,1.16毫莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(10毫升),然後加入戴斯-馬丁過碘烷(734.93毫克,1.73毫莫耳,1.5當量),並在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20毫升)和飽和亞硫酸鈉水溶液(20毫升),再用二氯甲烷(20毫升×2)萃取,飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後,過濾濃縮得到化合物58-3。
第三步
將化合物58-3(200毫克,464.23微莫耳,1當量),化合物A(113.95毫克,696.34微莫耳,1.5當量)溶於二氯甲烷(10毫升),然後加入
N,
N-二異丙基乙胺(60.00毫克,464.23微莫耳,80.86微升,1當量)和三乙醯氧基硼氫化鈉(196.78毫克,928.45微莫耳,2當量),並在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,反應液經過濾濃縮得到粗品。粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150毫米×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 12%-32%,9分鐘) 分離得到化合物58(甲酸鹽)。
MS-ESI 計算值[M+H]
+542,實測值542。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD)δ= 8.47 (s, 1H), 8.33 - 8.26 (m, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.04 - 7.94 (m, 1H), 7.69 - 7.58 (m, 1H), 7.54 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 1H), 7.09 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 4.31 (s, 2H), 4.05 (br d, J = 17.1 Hz, 4H), 3.83 - 3.75 (m, 4H), 3.20 (s, 3H), 2.60 - 2.50 (m, 2H), 2.19 - 2.07 (m, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H)。
第一步
將化合物59-1(2克,8.62毫莫耳,1當量),碘甲烷(1.59克,11.21毫莫耳,697.58微升,1.3當量)和碳酸鉀(2.38克,17.24毫莫耳,2當量)溶於
N,
N-二甲基甲醯胺(20毫升),置換三次氮氣,在60攝氏度下反應12小時。反應完成後,在25攝氏度下,向反應液中加入水(100毫升)淬滅反應,然後用乙酸乙酯(100毫升×2)萃取,合併有機相經飽和食鹽水(50毫升×2)洗滌,有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮,得到粗品化合物59-2。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 7.75 (dd, J = 0.6, 2.0 Hz, 1H), 7.69-7.57 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.39 (s, 3H)。
第二步
將化合物59-2(2克,8.13毫莫耳,1當量)溶於乙醇(12毫升)和水(6毫升)中,接著向反應液中加入鐵粉(2.72克,48.77毫莫耳,6當量)和氯化銨(3.48克,65.03毫莫耳,8當量),置換三次氮氣,在70攝氏度下反應12小時。反應完成後,將反應液過濾,減壓濃縮。粗品經矽膠柱層析 (石油醚:乙酸乙酯= 100:1到5:1) 分離得到化合物59-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+216,實測值216。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 6.75-6.58 (m, 1H), 6.52-6.36 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.47-2.75 (m, 2H), 2.12 (s, 3H)。
第三步
將化合物59-3(1克,4.63毫莫耳,1當量),化合物E(1.76克,5.55毫莫耳,1.2當量)和甲基磺酸(444.78毫克,4.63毫莫耳,329.47微升,1當量)溶於二㗁烷(10毫升),置換三次氮氣,在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,在25攝氏度下,向反應液中加水(10毫升)和乙酸乙酯(10毫升),並用氫氧化鈉水溶液(4莫耳每升)調節pH 至8,然後用乙酸乙酯(10毫升×2)萃取,合併有機相經飽和食鹽水(10毫升×2)洗滌,有機相經無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮。粗品經乙酸乙酯(10毫升)打漿,得到化合物59-4。
MS-ESI 計算值[M+H]
+497,實測值497。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.27 (dd, J = 4.4, 8.1 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.80 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.73-7.53 (m, 2H), 7.40-7.26 (m, 1H), 7.04 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.87 (d, J = 13.5 Hz, 6H)。
第四步
將化合物59-4(2克,4.03毫莫耳,1當量),化合物A(726.23毫克,4.44毫莫耳,1.1當量,鹽酸鹽),三級丁醇鈉(1.16克,12.10毫莫耳,3當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(502.42毫克,806.88微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(90.58毫克,403.44微莫耳,0.1當量)溶於二㗁烷(20毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在110攝氏度下反應12小時。反應完成後,反應液過濾,濾液濃縮。粗品經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 100:1到乙酸乙酯:甲醇=50:1),純化得到的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150毫米×40毫米×15微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:37%-67%,15分鐘) 分離得到化合物59。
MS-ESI 計算值[M+H]
+542, 實測值542。
1H NMR (400 MHz, CD
3OD) δ = 8.31 (dd, J = 4.5, 8.0 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.64 (ddd, J = 1.3, 7.7, 13.9 Hz, 1H), 7.54 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.35-7.19 (m, 2H), 6.01 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 3.88-3.76 (m, 5H), 3.59-3.59 (m, 1H), 3.61 (s, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.50 (ddd, J = 2.8, 6.8, 9.8 Hz, 2H), 2.13 - 2.04 (m, 5H), 1.84 (d, J = 13.4 Hz, 6H)。
第一步
將化合物28-3(500毫克,1.00毫莫耳,1當量),化合物58-1(481.92毫克,1.50毫莫耳,1.5當量),氯(2-二環己基膦基-24,6-三異丙基-1,1-聯苯基)[2-(2-氨基-1,1-聯苯)]鈀(II)(157.45毫克,200.12微莫耳,0.2當量)溶於二㗁烷(10毫升),置換三次氮氣,並在氮氣氛圍下在80攝氏度下反應12小時。反應完成後,向反應液中加入飽和氟化鉀水溶液(20毫升),乙酸乙酯(20毫升×2)萃取,飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後,過濾濃縮得到粗品。粗品經矽膠柱層析(乙酸乙酯:甲醇=100:1-10:1)分離純化得到化合物60-1。
MS-ESI 計算值[M+H]
+451, 實測值451。
第二步
將化合物60-1(150毫克,332.72微莫耳,1當量)溶於二氯甲烷(5毫升),然後加入戴斯-馬丁過碘烷(211.68毫克,499.08毫莫耳,1.5當量),並在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(20毫升)和飽和亞硫酸鈉水溶液(20毫升),再用二氯甲烷(20毫升×2)萃取,飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後,過濾濃縮得到化合物60-2。
第三步
將化合物60-2(100毫克,222.81微莫耳,1當量),化合物A(54.69毫克,334.21微莫耳,1.5當量)溶於二氯甲烷(5毫升),然後加入
N,
N-二異丙基乙胺(28.80毫克,222.81微莫耳,38.81微升,1當量)和三乙醯氧基硼氫化鈉(94.44毫克,445.62微莫耳,2當量),並在25攝氏度下反應0.5小時。反應完成後,反應液經過濾濃縮得到粗品。粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150毫米×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%: 10%-40%) 分離得到化合物60。
MS-ESI 計算值[M+H]
+560,實測值560。
1H NMR (400 MHz,CD
3OD) δ= 8.47 (s, 1H), 8.33 - 8.26 (m, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.04 - 7.94 (m, 1H), 7.69 - 7.58 (m, 1H), 7.54 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 1H), 7.09 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 4.31 (s, 2H), 4.05 (br d, J = 17.1 Hz, 4H), 3.83 - 3.75 (m, 4H), 3.20 (s, 3H), 2.60 - 2.50 (m, 2H), 2.19 - 2.07 (m, 2H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H)。
第一步
將化合物61-1(5克,33.08毫莫耳,1當量)溶於乙腈(60毫升),接著在0攝氏度下向反應液中加入
N-溴代丁二醯亞胺(6.2克,34.7毫莫耳,1.05當量),在30攝氏度下反應1.5小時。反應完成後,加水(100毫升)稀釋,乙酸乙酯萃取(50毫升×3),合併的有機相用飽和氯化鈉水溶液(80毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-20:1)純化的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150毫米×40毫米×15微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:20%-50%,15分鐘) 分離得到得到化合物61-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+230,實測值230。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ = 6.77 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 6.20 (d,
J= 8.7 Hz, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.35 - 4.17 (m, 4H).
第二步
將化合物61-2(1.28克,5.56毫莫耳,1當量),化合物E(1.58克,5.01毫莫耳,0.9當量)溶於二㗁烷(20毫升),接著向反應液中加入甲烷磺酸(534.71毫克,5.56毫莫耳,1當量),在100攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(30毫升),乙酸乙酯(30毫升)稀釋,然後用2莫耳每升的氫氧化鈉水溶液調節pH值至7-8,乙酸乙酯萃取(30毫升×3),合併的有機相用飽和氯化鈉水溶液(50毫升×2)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到化合物61-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+511,實測值511。
第三步
將化合物61-3(1克,1.96毫莫耳,1當量),化合物A(353.15毫克,2.16毫莫耳,1.1當量)溶於二㗁烷(20毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(565.63毫克,5.89毫莫耳,3當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(244.32毫克,392.37微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(44.05毫克,196.19微莫耳,0.1當量),在110攝氏度下反應16小時。反應完成後,反應液濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯= 1:1-0:1)純化的粗品經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex luna C18 150毫米×40毫米×15微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:18%-48%,15分鐘) 分離得到化合物61(甲酸鹽)。
MS-ESI 計算值[M+H]
+556,實測值556。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ = 11.19 (s, 1H), 8.57 - 8.42 (m, 1H), 8.26 - 7.96 (m, 3H), 7.61 - 7.45 (m, 1H), 7.29 (br t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.14 (q, J = 4.8 Hz, 4H), 3.83 - 3.74 (m, 5H), 3.11 (s, 3H), 2.43 (dt, J = 3.4, 6.5 Hz, 2H), 2.05 - 1.94 (m, 2H), 1.76 (d, J = 13.6 Hz, 6H).
第一步
將化合物62-1(1克,7.4毫莫耳,1當量)溶於
N,N-二甲基甲醯胺(10毫升),接著在0攝氏度下向反應液中加入
N-溴代丁二醯亞胺(1.32克,7.4毫莫耳,1當量),在25攝氏度下反應1小時。反應完成後,加水(200毫升)稀釋,用飽和的碳酸氫鈉水溶液調 pH到8,乙酸乙酯萃取(200毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(200毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,減壓濃縮的殘渣經矽膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=100:1-20:1)純化得到得到化合物62-2。
MS-ESI 計算值[M+H]
+216,實測值216。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 6.81 (d,
J= 8.3 Hz, 1H), 6.45 (d,
J= 8.3 Hz, 1H), 4.62 (t,
J= 8.7 Hz, 2H), 3.22 (t,
J= 8.7 Hz, 2H)。
第二步
將化合物62-2(1.33克,6.21毫莫耳,1當量),化合物E(1.96克,6.21毫莫耳,1當量)溶於異丙醇(13毫升),接著向反應液中加入甲烷磺酸(597.13毫克,6.21毫莫耳,442.32微升,1當量),氮氣置換三次,在90攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(20毫升),然後用4莫耳/升的氫氧化鈉水溶液調節pH至8,乙酸乙酯萃取(20毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮得到的殘渣用乙酸乙酯(40毫升)在25攝氏度下打漿30分鐘,得到化合物62-3。
MS-ESI 計算值[M+H]
+495,實測值495。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ = 8.47 (dd,
J= 4.4, 8.4 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.86 (d,
J= 8.8 Hz, 1H), 7.50 - 7.38 (m, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 1H), 7.11 - 7.00 (m, 1H), 6.95 - 6.80 (m, 2H), 4.58 (t,
J= 8.8 Hz, 2H), 3.19 (t,
J= 8.8 Hz, 2H), 1.76 (d,
J= 13.2 Hz, 6H)。
第三步
將化合物62-3(500毫克,1.01毫莫耳,1當量),化合物A(182.3毫克,1.11毫莫耳,1.1當量,一個鹽酸鹽)溶於二㗁烷(12毫升),接著向反應液中加入三級丁醇鈉(340.64毫克,3.54毫莫耳,3.5當量),(±)-2,2-雙(二苯膦基)-1,1-聯萘(126.12毫克,202.54微莫耳,0.2當量),醋酸鈀(22.74毫克,101.27微莫耳,0.1當量),在110攝氏度下反應12小時。反應完成後,加水(20毫升),乙酸乙酯萃取(20毫升×2),合併的有機相用飽和食鹽水溶液(20毫升)洗滌,有機相用無水硫酸鈉乾燥,過濾,濃縮的殘渣經高效液相色譜 (色譜柱:Phenomenex Luna C18 150毫米×25毫米×10微米;流動相:流動相A:甲酸水溶液;流動相B:乙腈;B%:23%-53%,10分鐘) 分離得到化合物62。
MS-ESI 計算值[M+H]
+540,實測值540。
1H NMR (400 MHz,DMSO-
d 6) δ = 11.19 (s, 1H), 8.53 (br s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.65 - 7.44 (m, 1H), 7.27 (br d,
J= 7.6 Hz, 1H), 7.13 - 6.84 (m, 2H), 5.86 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 4.42 (t,
J= 8.7 Hz, 2H), 3.97 - 3.72 (m, 5H), 3.13 (s, 5H), 2.48 - 2.43 (m, 2H), 2.10 - 1.96 (m, 2H), 1.76 (d,
J= 13.6 Hz, 6H)。
實驗例1:體外評價LRRK2激酶抑制活性
實驗目的:通過均相時間分辨螢光檢測磷酸化Fluorescein-ERM (LRRKtide) peptide的磷酸基團與LanthaScreen® Tb-pERM (pLRRKtide) Antibody抗體結合後產生的能量信號轉移(520nM/485nM螢光信號比值)。計算待測化合物的LRRK2激酶抑制IC
50值。
實驗材料:
1. 反應溶液:10 mM 羥乙基哌𠯤乙磺酸 (PH7.5);2 mM 氯化鎂;0.5 mM 乙二醇二乙醚二胺四乙酸;0.002%聚氧乙烯脂肪醇醚;1 mM 二硫蘇糖醇和1% DMSO;
2. 檢測溶液:TR-FRET Dilution Buffer;
3. LRRK2人源重組蛋白:使用GST標籤用桿狀病毒在昆蟲Sf9細胞中表達重組全長人LRRK2 蛋白;
4. 底物:0.4 μM Fluorescein-ERM (LRRKtide) peptide;57 μM ATP。
檢測方法:
均相時間分辨螢光技術(HTRF);
Fluorescein-ERM (LRRKtide) peptide多肽與LanthaScreen® Tb-pERM (pLRRKtide) Antibody抗體在485nM和520nM之間的能量共振轉移。
實驗操作:
1. 通過Echo550非接觸式納升級聲波移液系統加入待測化合物的DMSO溶液;
2. 用新鮮製備的反應溶液配置酶和多肽混合溶液,加入到反應孔穴中,室溫下預溫育20分鐘;
3. 加入57 μM ATP引發反應,室溫反應90分鐘;
4. 加入檢測系統(Fluorescein-ERM (LRRKtide) peptide多肽,LanthaScreen® Tb-pERM (pLRRKtide) Antibody抗體及10 mM乙二胺四乙酸),室溫反應60分鐘,用Em/Ex 520/485檢測螢光信號;
5. 通過信號比值計算相對DMSO空白的相對酶活性抑制,利用軟件XLfit5擬合曲線計算IC
50值。
實驗結果:
表1 LRRK2激酶抑制活性測試結果
供試品 | LRRK2激酶抑制活性(nM) | 供試品 | LRRK2激酶抑制活性(nM) |
化合物1 | 6 | 化合物21 | 6 |
化合物2 | 3 | 化合物22 | 5 |
化合物3 | 6 | 化合物23 | 6 |
化合物4 | 7 | 化合物24 | 5 |
化合物5 | 5 | 化合物25 | 5 |
化合物6 | 5 | 化合物26 | 5 |
化合物7 | 3 | 化合物27 | 4 |
化合物8 | 4 | 化合物28 | 15 |
化合物9 | 4 | 化合物29 | 14 |
化合物10 | 3 | 化合物30 | 5 |
化合物11 | 14 | 化合物31 | 10 |
化合物12 | 12 | 化合物32 | 7 |
化合物15 | 16 | 化合物33 | 13 |
化合物17 | 5 | 化合物36 | 10 |
化合物18 | 4 | 化合物37 | 7 |
化合物19 | 6 | 化合物39 | 16 |
化合物20 | 4 | / | / |
實驗例2:體外評價LRRK2細胞(pSer935)抑制活性
細胞準備:
1.細胞解凍
將293T細胞從液氮中取出,放入37攝氏度的水中。待冰完全融化後,將細胞轉移至5毫升溫暖培養液內,離心,棄去上清液,並把懸浮的細胞作新的細胞在培養基中培養。
2. 細胞的培養和傳代
將293T細胞在培養基裡培養兩至三天
3. 細胞冷凍
將培養好的細胞株放入新鮮的培養液中並稀釋濃度至1*10
7,然後與等量的培養液混合。等分成每份1mL,置於零下80度一天,轉移至液氮中保存。
實驗步驟:
1. (第一天)293T細胞播種
種植1.4×10
6/ 293T細胞於一塊培養板上,兩天的培養後,細胞數量可以成長為5×10
6,所以種子N + 1塊板子足夠N 個96孔板的實驗。
2. (第二天)轉染293T細胞
一、添加5微升 0.5微克/微升 pcmv-flag-lrrk2到145微升 DMEM培養液中,用吸管調勻;
二、添加15微升轉染試劑,吸管調勻;
三、室溫平衡 10分鐘;
四、添加0.5毫升預熱的細胞培養基,調勻;
五、滴加650微升混合物到6孔板中,攪拌徹底;
六、培養板在37攝氏度含5%二氧化碳的加濕孵化器中培養20–24小時。
3.(第三天)293T細胞種植到96孔板上
4.(第4天)抑制劑處理
一、將化合物用離心機處理;
二、添加55微升細胞培養基到抑制劑板中。把盤子放在37攝氏度預熱;
三、轉移50微升含抑制劑的細胞培養至細胞培養板;
四、培養板在37攝氏度含5%二氧化碳的加濕孵化器中培養20–24小時;
五、用滴管抽取300微升含有抑制劑的培養液,取其中200微升,向其中加入100微升的分解劑,密封板子後於4攝氏度搖30分鐘;
六、板子於零下20攝氏度保存直至使用。
5. (第5天)MSD程序
一、添加2微克/25微升 /標記抗體到MSD板中,孵育2小時,(50微升 3.9微克/微升 Flag抗體+ 2.5毫升 胎牛血清/每盤)。離心10秒(1000rpm);
二、丟棄標誌抗體,用300微升 /洗滌緩衝液低速多點洗滌兩次;
三、添加50微升 /塊緩衝液、孵化2小;
四、丟棄緩衝液,以300微升 /洗滌緩衝液手動洗2次;
五、轉移12.5微升裂解緩衝液和細胞裂解液12.5微升至 MSD板,室溫孵育1小時;
六、丟棄裂解液, 用300微升 /洗滌緩衝液多點、低速度洗3次;
七、稀釋ps935(1:200)抗,加入25微升 /抗體,室溫培育1小時;
八、棄第一抗體,用300微升 /洗滌緩衝液多點、低速度洗3次;
九、稀釋山羊抗兔抗體1:500,添加25微升 /抗體至孵育板,室溫培養1小時;
十、棄第二抗體,用300微升 /洗滌緩衝液多點、低速度洗3次。最後一次的洗滌緩衝液到MSD閱讀器;
十一、採集兩次數據;
十二、放棄最後一次的清洗液,添加150微升 / 2倍緩衝液至待讀取孔板;
十三、孵化後約3分鐘,於15分鐘讀取數據。
實驗結果:
表2 pSer935細胞抑制活性測試結果
結論:本發明化合物具有顯著的LRRK2酶和細胞(pSer935)抑制活性。
供試品 | LRRK2細胞抑制活性(nM) | 供試品 | LRRK2細胞抑制活性(nM) |
化合物1 | 65 | 化合物25 | 9 |
化合物2 | 50 | 化合物26 | 52 |
化合物3 | 92 | 化合物27 | 23 |
化合物4 | 34 | 化合物30 | 65 |
化合物6 | 31 | 化合物32 | 59 |
化合物7 | 21 | 化合物35 | 69 |
化合物8 | 15 | 化合物37 | 87 |
化合物9 | 16 | 化合物41的甲酸鹽 | 48 |
化合物10 | 12 | 化合物48的甲酸鹽 | 20 |
化合物17 | 40 | 化合物50 | 42 |
化合物18 | 14 | 化合物51 | 87 |
化合物19 | 7 | 化合物52 | 37 |
化合物20 | 10 | 化合物54 | 42 |
化合物21 | 16 | 化合物55 | 21 |
化合物22 | 21 | 化合物57 | 4 |
化合物23 | 6 | 化合物59 | 36 |
化合物24 | 35 | 化合物61的甲酸鹽 | 4 |
實驗例3:化合物藥代動力學評價
實驗目的:研究化合物在C57BL/6小鼠體內藥代動力學及腦組織和血漿藥物濃度比
實驗材料:C57BL/6小鼠(雄性,8周齡,體重25g-30g)
實驗操作:以標準方案測試化合物靜脈注射 (IV) 及口服 (PO) 給藥後的齧齒類動物藥代特徵,實驗中候選化合物配成1 mg/mL澄清溶液,給予小鼠單次靜脈注射及口服給藥。靜注及口服溶媒均為5%DMSO/5% 15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯(Solutol)/90%水溶液。首先使用4只雄性C57BL/6小鼠,兩隻小鼠進行靜脈注射給藥,給藥劑量為1 mg/kg,收集給藥後0.0833,0.25,0.5,1,2,4,6,8,24 h的血漿樣品,另外兩隻小鼠口服灌胃給藥,給藥劑量為10 mg/kg,收集給藥後0.25,0.5,1,2,4,6,8,24 h的血漿樣品。收集24小時內的全血樣品,3000g離心15分鐘,分離上清得血漿樣品,加入含內標的乙腈溶液沉澱蛋白,充分混勻離心取上清液進樣,以LC-MS/MS 分析方法定量分析血藥濃度,並計算藥代參數,如達峰濃度(C
max),清除率(CL),半衰期(T
1/2),組織分佈(Vdss),藥時曲線下面積(AUC
0-last),生物利用度(F)等。另外,再使用6只小鼠口服灌胃給藥,給藥劑量為5 mg/kg或者10 mg/kg,在給藥後0.5,2和8小時,將收集全腦。將組織樣品用15 mM胎牛血清 [胎牛血清(pH = 7.4)緩衝液:甲醇(體積比,2:1)]勻漿,均質比為1:5(w:v),並將勻漿液分成2個等分樣品,一個用於分析,另一個用於備份。另外,收集給藥後0.25,0.5,1,2,4,8 h的血漿,血漿樣品在收集半小時內,通過在約4℃,3000g,15分鐘離心處理分離上清得血漿樣品。將血漿樣品儲存在聚丙烯管中,在乾冰上快速冷凍並保持在-80℃直至LC / MS / MS分析。加入含內標的乙腈溶液沉澱蛋白,充分混勻離心取上清液進樣,以LC-MS/MS 分析方法定量分析血藥濃度,並計算在0.5小時腦組織和血漿藥物濃度比例(B/P)。
本發明實施例在小鼠體內的藥代動力學相關參數如下表3所示。
表3 體內藥代動力學測試結果
注:「(B/P)@0.5h」 指代是單點(0.5小時)的腦血比。
供試品 | 清除率CL (mL/min/kg) | 組織分佈V dss(L/kg) | 半衰期T 1/2(IV, h) | 達峰濃度C max(nM) | 藥時曲線下面積AUC 0-lastPO (nM.hr) | 生物利用度F (%) | 腦組織/血漿藥物濃度比例(B/P)@0.5h |
化合物3 | 51.4 | 1.93 | 0.63 | 1112 | 2029 | 32.2 | 1.65 |
化合物4 | 75.0 | 1.06 | 0.24 | 2563 | 2107 | 47.3 | 0.52 |
化合物28 | 50.9 | 5.79 | 1.73 | 1148 | 3801 | 61.4 | 0.85 |
化合物30 | 33.7 | 1.65 | 0.65 | 2050 | 3841 | 42.6 | 0.66 |
化合物36 | 71.5 | 1.65 | 0.39 | 1563 | 3649 | 81.7 | 0.67 |
化合物37 | 44.2 | 1.94 | 0.63 | 1747 | 5371 | 81.4 | 0.52 |
化合物51 | 52.1 | 2.08 | 0.50 | 2776 | 5484 | 93.0 | 0.51 |
化合物54 | / | / | / | 2410 | 12720 | / | 0.46 |
化合物55 | / | / | / | 3725 | 11573 | / | 0.44 |
化合物59 | / | / | / | 1950 | 4874 | / | 0.67 |
結論:本發明化合物具有良好的體內藥代動力學性質,包括良好的腦組織和血漿藥物濃度比例(B/P)等。
實驗例4:體內藥效實驗
實驗目的:測試化合物對小鼠腦組織LRRK2磷酸化抑制效果。
實驗材料:
動物:C57BL/6J小鼠(雄性,6~7周齡,體重20g-22g)。
實驗過程:
1. 實驗分組:所有小鼠在實驗前一天秤取體重,按照體重隨機分為5組,每組4只,體重過大和過小的小鼠剔除,保證每組的平均體重一致。實驗分組如下表4所示,共5組,即空白組,陽性對照藥物(組-2~3, n=4, MLi-2和DNL151), 受試藥物實施例 (組3~5, n=4)。
表4 實驗分組和劑量設計
溶媒:5% DMSO /聚乙二醇十二羥基硬脂酸酯(Solutol®HS 15)/ 90% 超純水
2. 實驗操作:
2.1 給藥和組織收集
各組動物按照表4中設計按時間順序依次口服給予溶媒或待測化合物,給藥1小時後處死,冰上取大腦皮層,置於1.5mL EP管中,加入400µL PIPA蛋白裂解液,同時加入4µL PMSF、4µL磷酸酶抑制劑A和4µL磷酸酶抑制劑B,用剪刀攪碎,超音波破碎,冰上靜置15min,4℃離心15min,取上清,冰上放置。取2µL上清,BCA蛋白濃度測定。根據上清體積加入相應比例的5×蛋白上樣緩衝液;蛋白變性,乾浴鍋100℃,10min。低速離心,-80℃保存。
2.2 藥效檢測
(1) 配置新鮮電泳緩衝液,上樣量50µg,跑膠,使用預染的Marker,電壓60-100V,時間1.5h左右(根據目的蛋白分子量大小決定)。
(2) 配轉移緩衝液(使用10倍的轉移緩衝液稀釋,加甲醇15-20%, 甲醇濃度與目的蛋白大小有關)。
(3) PVDF膜用100%甲醇處理30s左右(可延長),變為灰色,之後用轉移緩衝液浸泡,備用;同時需浸泡的還有濾紙和墊片(之後保持膜濕潤)。
(4) 疊放順序:黑色板最下面,墊片,兩層濾紙,膠(反向放),PVDF膜(與膠接觸面左下角做好標記),兩層濾紙,墊片,白色板最上面,扣板(每層用玻璃棒趕氣泡)。
(5) 準備冰,裝好轉膜裝置,電泳100V,時間1.5-2h(注意冰量要足夠,可以冰裡加點水方便傳熱,轉膜會釋放大量熱量)。
(6) 用1×TBST配製5%脫脂牛奶(1×TBST=1×TBS加0.1% Tween)。
(7) 轉膜完畢,若Marker轉上,則說明轉膜成功。
(8) 用5%脫脂牛奶,室溫封閉2h。
(9) 用一抗孵育,4℃過夜。
(10) 用TBST洗膜10min×4次。
(11) 用二抗孵育1h(用螢光二抗則需避光)。
(12) 用1×TBST洗膜20min×3次。
(13) 顯色,ECL化學發光。
3. 實驗結果
3.1 腦組織免疫印跡實驗(Western Blot)結果見圖1。
結論:本發明化合物對在小鼠腦組織中LRRK2磷酸化水平有明顯地抑制作用。
組別 | 供試品 | 數量 | 給藥途徑 | 濃度 | 劑量 | 給藥頻率 |
mg/mL | mg/kg | |||||
1 | 空白組(溶媒) | 4 | 口服灌胃 | N/A | N/A | 單次 |
2 | MLi-2 | 4 | 口服灌胃 | 3 | 30 | 單次 |
3 | DNL151 | 4 | 口服灌胃 | 3 | 30 | 單次 |
3 | 化合物1 | 4 | 口服灌胃 | 3 | 30 | 單次 |
4 | 化合物3 | 4 | 口服灌胃 | 3 | 30 | 單次 |
5 | 化合物4 | 4 | 口服灌胃 | 3 | 30 | 單次 |
無
圖1為本發明化合物腦組織免疫印跡實驗結果。
Claims (15)
- 一種如式(III-1)、(II-2)、(II-3)、(II-4)和(III-2)所示化合物或其藥學上可接受的鹽: 、 、 、 、 , 其中, A選自 、 、 、 、 和 ; 結構單元 選自 、 、 和 ; X 1為CH,X 2為C-A;或者,X 1為C-A,X 2為CH; Y為-C(R 9R 10)-或-O-; Z 1為CH,Z 2為N;或者,Z 1為N,Z 2為CH; R 1和R 2分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、CH 3和CF 3; R 3和R 4分別獨立地選自H和C 1-3烷基,所述C 1-3烷基任選被1、2或3個鹵素取代; R 5和R 6分別獨立地選自H、F、CH 3和CF 3; R 7選自CH 3和CHF 2; R 9和R 10分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基,所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基分別獨立地任選被1、2或3個鹵素取代; m、n、q、t分別獨立地選自0、1和2。
- 根據請求項1所述的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽,其選自式(II-1)、(II-2)、(II-3)和(II-4)所示化合物: 、 、 、 , 其中, A選自 、 和 ; X 1為CH,X 2為C-A;或者,X 1為C-A,X 2為CH; Y為-C(R 9R 10)-或-O-; Z 1為CH,Z 2為N;或者,Z 1為N,Z 2為CH; R 1和R 2分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、CH 3和CF 3; R 3和R 4分別獨立地選自H和C 1-3烷基,所述C 1-3烷基任選被1、2或3個鹵素取代; R 5和R 6分別獨立地選自H和F; R 7選自CH 3和CHF 2; R 9和R 10分別獨立地選自H、F、Cl、Br、I、C 1-3烷基和C 1-3烷氧基,所述C 1-3烷基和C 1-3烷氧基分別獨立地任選被1、2或3個鹵素取代; m、n、q、t分別獨立地選自0、1和2。
- 根據請求項1-4任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽,其中,R 1選自H和F。
- 根據請求項1-4任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽,其中,R 2選自Cl和F。
- 根據請求項1-4任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽,其中,R 3和R 4分別獨立地選自CH 3。
- 根據請求項1-4任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽,其中,R 9和R 10分別獨立地選自H、F、CH 3、-OCHF 2和-OCH 3。
- 根據請求項1-4或6任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽,其中,Y為-CHF-、-CF 2-、-CH 2-、-CH(OCH 3)-、-CH(OCHF 2)-和-O-。
- 根據請求項1~14任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備治療帕金森氏症病藥物中的應用。
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