TW202315601A - ApoE胜肽之使用方法 - Google Patents

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Abstract

本文提供與遞送生物活性劑及治療疾病有關的脂質奈米顆粒(LNP)組合物及方法。

Description

ApoE胜肽之使用方法
生物活性劑的相對不穩定性及低細胞滲透性使得此類藥劑通常難以遞送至細胞中。特別難以遞送至細胞中的生物活性劑包括小分子藥物、基於蛋白質之藥物、基於核酸之藥物及其衍生物。用可離子化脂質調配的脂質奈米顆粒(LNP)可充當用於將生物活性劑遞送至細胞中的承載物(cargo)媒劑。儘管最近已開發出多種LNP組合物，但仍然缺乏抵達所需細胞群、同時維持安全及功效的有效遞送媒劑。因此，需要有效遞送生物活性劑以便治療疾病的LNP組合物。
在一些實施例中，本發明提供包含脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽及一或多種脂質的脂質奈米顆粒(LNP)。與不含ApoE模擬肽的LNP相比，該等LNP的益處在於增強與目標細胞的結合及將藥劑遞送至目標細胞中。增強藥劑向目標細胞(例如肝細胞或脾細胞)的遞送可適用於治療多種疾病。
在某些態樣中，脂質奈米粒子(LNP)包含一或多種脂質及脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽，其中該ApoE模擬胜肽包含ApoE的受體結合域及脂質結合域。
在一些實施例中，LNP為可離子化LNP。
在其他實施例中，一或多種脂質包含可離子化脂質。
在一些實施例中，可離子化脂質包含胺基。在一些此類實施例中，胺基為胺頭基。
在一些實施例中，可離子化脂質包含兩個或更多個脂族尾基，例如兩個至四個脂族尾基。在某些實施例中，脂族尾基為疏水性尾基，例如各自獨立地為烷基或烯基。
在一些實施例中，可離子化脂質為陽離子型脂質。在其他實施例中，可離子化脂質為中性脂質。在一些實施例中，可離子化脂質為兩性離子型脂質。
在較佳實施例中，可離子化脂質在生理pH質子化。
在一些實施例中，一或多種脂質包含結構性脂質，視情況包含類固醇，諸如固醇，例如膽固醇。
在某些實施例中，一或多種脂質包含非陽離子型輔助脂質。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質為磷脂。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質包含二醯基甘油基團。在某些實施例中，非陽離子型輔助脂質為甘油磷脂，諸如磷脂醯膽鹼。或者，非陽離子型輔助脂質不為磷脂醯膽鹼。
在一些實施例中，磷脂為二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)。
在一些實施例中，一或多種脂質包含含有與PEG基團共價鍵結之脂質基團的PEG-脂質。在一些此類實施例中，脂質基團為磷脂。在某些實施例中，脂質基團包含二醯基甘油、二烷基甘油或二烷基胺基。在某些較佳實施例中，脂質基團為甘油磷脂基團。在一些實施例中，脂質基團為二肉豆蔻醯基甘油。
在一些實施例中，脂質結合域包含A類兩親媒性螺旋域，例如DWLKAFYDKVAEKLKEAF (SEQ ID NO: 1)、DWLRAFYDKVAEKLREAF (SEQ ID NO: 2)、DWLRALYDKVAEKLREAL (SEQ ID NO: 3)、DLLRALYDKVAEKLREAW (SEQ ID NO: 4)或FAEKLKEAVKDYFAKLWD (SEQ ID NO: 5)，最佳為DWLKAFYDKVAEKLKEAF (SEQ ID NO: 1)。
在一些實施例中，ApoE的受體結合域能夠結合至LDL受體。
在某些實施例中，ApoE的受體結合域為LRKLRKRLLR (SEQ ID NO: 6)、LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)、LRKMRKRLMR (SEQ ID NO: 8)或RLTRKRGLK (SEQ ID NO: 9)。在較佳實施例中，ApoE的受體結合域為LRKLRKRLLR (SEQ ID NO: 6)或LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)，最佳為LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)。
在某些實施例中，ApoE的受體結合域共價鍵結至脂質結合域。在一些實施例中，ApoE之受體結合域的C端共價鍵結至脂質結合域的N端。在其他實施例中，胺基鍵結至脂質結合域的C端。在某些實施例中，醯基鍵結至ApoE之受體結合域的N端。
在一些實施例中，ApoE模擬胜肽包含脂肪酸部分，例如丁醯基、己醯基、辛醯基、癸醯基、月桂醯基、肉豆蔻醯基、肉豆蔻油醯基、棕櫚醯基、硬脂醯基、油醯基、棕櫚油醯基、亞麻油醯基、次亞麻油醯基或花生四烯醯基。在較佳實施例中，脂肪酸部分為辛醯基、肉豆蔻醯基、棕櫚醯基或油醯基。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含脂肪酸部分，且脂肪酸部分鍵結至ApoE之受體結合域的N端。在一些實施例中，脂肪酸部分包含4至20個碳原子的鏈。
在某些實施例中，脂肪酸部分為飽和脂肪酸部分。
在一些實施例中，脂肪酸部分包含一個、兩個或三個烯烴基團。
在某些實施例中，脂肪酸部分包含ω-胺基。在某些此類實施例中，ω-胺基包含醯基。
在較佳實施例中，脂肪酸部分為4-胺基-丁醯基、6-胺基-己醯基、8-胺基-辛醯基、10-胺基-癸醯基、12-胺基-月桂醯基、14-胺基-肉豆蔻醯基、14-胺基-肉豆蔻油醯基、16-胺基-棕櫚醯基、18-胺基-硬脂醯基、18-胺基-油醯基、16-胺基-棕櫚油醯基、18-胺基-亞麻油醯基、18-胺基-次亞麻油醯基，或20-胺基-花生四烯醯基。
在某些實施例中，脂肪酸部分為Ac-Aha。舉例而言，Apo-E模擬胜肽為Ac-Aha-hE18A-NH 2或Ac-Aha-[R]hE18A-NH 2。
在一些實施例中，ApoE模擬胜肽為Ac-LRKLRKRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 10)；辛醯基-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 11)；肉豆蔻醯基-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 12)；棕櫚醯基-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 13)；或油醯基-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEK LKEAF-NH 2(SEQ ID NO:14)。
在某些實施例中，LNP進一步包含有效負載，諸如藥物、肽、多肽、蛋白質或核酸(例如RNA、mRNA、dsRNA、siRNA、反義RNA、核糖核酸酶、CRISPR/Cas9、ssDNA及DNA)。在一些實施例中，有效負載包含編碼分泌型蛋白、膜結合蛋白、細胞內蛋白、抗體分子或酶的mRNA。
在某些實施例中，LNP經調配用於全身遞送。
在一些實施例中，LNP經調配用於非經腸遞送，例如靜脈內、肌肉內、皮下、鞘內或皮內遞送；或經腸遞送，例如經口、直腸或舌下遞送。
在某些實施例中，LNP不存在於生物體中。
所述醫藥組合物包含如本文所述之LNP及醫藥學上可接受之載劑。
另外，本文所述之組合物及方法可藉由將如本文所述的LNP投與個體而用於治療疾病。在一些實施例中，該疾病為冠狀動脈疾病、類風濕性關節炎、糖尿病、神經退化性疾病、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、周邊動脈疾病、大腦血管疾病、糖尿病來源的心血管疾病、黃斑變性、充血性心臟衰竭、全身狼瘡、癌症及增殖性疾病、遺傳病(例如囊腫性纖維化)、自體免疫疾病、心血管疾病、腎血管疾病、代謝疾病、免疫病症、纖維化疾病、炎症及/或感染性疾病。在某些實施例中，LNP係全身性遞送至個體。在一些實施例中，LNP係非經腸遞送至個體，例如靜脈內、肌肉內、皮下、鞘內或皮內遞送至個體；或經腸遞送至個體，例如經口、直腸或舌下遞送至個體。
本文所述之LNP組合物的治療有效劑量為約0.01 mg/kg至約500 mg/kg、約0.05 mg/kg至約250 mg/kg、約0.1 mg/kg至約100 mg/kg、約0.5 mg/kg至約50 mg/kg、或約1 mg/kg至約25 mg/kg。在較佳實施例中，本文所述之LNP組合物的治療有效劑量為約0.01 mg/kg至約100 mg/kg。
在一些實施例中，LNP被細胞內化。在某些實施例中，與不含ApoE模擬胜肽的相同LNP相比，LNP使細胞的內化增加。在一些實施例中，細胞為肝臟細胞，例如肝細胞、肝星形細胞、庫弗細胞(Kupffer cell)或肝竇狀細胞。在某些實施例中，細胞為腦細胞。在一些實施例中，細胞為脾臟細胞，例如脾細胞。在其他實施例中，細胞為卵巢細胞、肺細胞、腸細胞、心臟細胞、皮膚細胞、眼細胞或骨骼肌細胞。在一些實施例中，細胞為非免疫細胞。在其他實施例中，細胞為癌細胞。在又其他實施例中，細胞為T細胞。在一些實施例中，細胞為幹細胞，諸如造血細胞。在其他實施例中，細胞為肺細胞。在又其他實施例中，細胞為腎細胞。
在一些實施例中，個體之總血漿膽固醇濃度降低。在某些實施例中，個體之血漿LDL濃度、血漿VLDL濃度或兩者均降低。
參照以下特定實施例之詳細描述，可更容易理解所揭示之組合物及方法。
應瞭解，除非另外說明，否則所揭示之組合物及方法不限於特定合成方法、特定分析技術或特定試劑，且因此可變化。亦應瞭解，本文所用術語僅為了描述特定實施例的目的，而非為了限制。
本發明係關於用於治療疾病的脂質奈米顆粒及使用脂質奈米顆粒治療疾病(例如藉由結合脂蛋白元E (ApoE)及抑制下游ApoE效應來治療疾病)的方法。在某些態樣中，提供脂質奈米顆粒(LNP)，其包含一或多種脂質及脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽，其中該ApoE模擬胜肽包含ApoE的受體結合域及脂質結合域。在某些態樣中，本文提供包含本文所揭示之LNP的醫藥組合物。在某些態樣中，本文提供治療疾病之方法，其包含投與本文所揭示之LNP或本文所揭示之醫藥組合物。 定義
為方便起見，此處收集說明書、實例及所附申請專利範圍中使用的某些術語。
冠詞「一(a及an)」在本文中用於指冠詞之一個或超過一個(亦即，至少一個)文法對象。舉例而言，「一元件」意謂一個元件或超過一個元件。
數值範圍包括限定該範圍之數字。考慮到有效數位及與量測相關之誤差，實測值及可量測值應理解為近似值。如本申請案中所用，術語「約」及「大約」具有此項技術中所理解之含義；一者相對於另一者的使用不一定暗示不同範疇。除非另外指明，否則本申請案中所用的數值在使用或不使用修飾術語(諸如「約」或「大約」)的情況下應理解為涵蓋正常的發散度及/或波動，正如相關技術中的一般技術者所瞭解。在某些實施例中，術語「大約」或「約」係指在任一方向(大於或小於)上屬於所述參考值之25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更小百分比內的值範圍，除非另有說明或以其他方式自上下文顯而易見(其中此類數字將超出可能值之100%除外)。
物質、組合物或藥劑「投與(Administering/administration)」個體可使用熟習此項技術者已知之多種方法之一執行。舉例而言，可靜脈內、動脈、皮內、肌肉內、腹膜內、皮下、眼、舌下、經口(藉由攝入)、鼻內(藉由吸入)、脊椎內、大腦內及經皮(藉由吸收，例如經由皮膚管道)投與組合物或藥劑。亦可藉由可再充電或可生物降解的聚合物裝置或其他裝置(例如貼劑及泵浦或調配物，其提供組合物或藥劑之延長、緩慢或控制釋放)適當地引入組合物或藥劑。投與亦可例如進行一次、複數次，及/或一或多個延長的時段。
向個體投與物質、組合物或藥劑之適當方法亦將視例如個體之年齡及/或身體狀況及組合物或藥劑之化學及生物特性(例如溶解度、消化率、生物可用性、穩定性及毒性)而定。在一些實施例中，組合物或藥劑經口投與個體，例如藉由攝入投與個體。在一些實施例中，經口投與的組合物或藥劑為延長釋放或緩慢釋放調配物，或使用用於此類緩慢或延長釋放之裝置投與。
如本文所用，術語「烷基」係具有1至24個碳原子之分支鏈或非分支鏈飽和烴基，諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、二級戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、二十烷基、二十四烷基及其類似基團。烷基可為環狀或非環狀的。烷基可為分支鏈或非分支鏈(亦即直鏈)。烷基亦可經取代或未經取代(較佳未經取代)。舉例而言，烷基可經包括(但不限於)以下的一或多個基團取代：如本文所述的烷基、環烷基、烷氧基、胺基、醚、鹵基、羥基、硝基、矽烷基、側硫基、磺酸酯、羧酸酯或硫醇。「低碳數烷基」基團係含有一至六個(例如一至四個)碳原子之烷基。
如本文所用，術語「烯基」係指含有至少一個碳-碳雙鍵的脂族基團且意欲包括「未經取代之烯基」與「經取代之烯基」，後者係指烯基之一或多個碳上的氫經取代基置換的烯基部分。此類取代基可存在於一或多個包括於或不包括於一或多個雙鍵中之碳上。此外，此類取代基包括如下文所論述之關於烷基所考慮的所有取代基，除非穩定性不允許。舉例而言，考慮烯基可經一或多個烷基、碳環基、芳基、雜環基或雜芳基取代。例示性烯基實例包括(但不限於)乙烯基(-CH=CH 2)、烯丙基(-CH 2CH=CH 2)、環戊烯基(-C 5H 7)及5-己烯基(-CH 2CH 2CH 2CH 2CH=CH 2)。
「伸烷基」基團係指二價烷基，其可為分支鏈或非分支鏈(亦即直鏈)。任一種上述單價烷基可藉由自烷基抽出第二個氫原子而轉化為伸烷基。代表性伸烷基包括C 2-4伸烷基及C 2-3伸烷基。典型伸烷基包括(但不限於)-CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2-、-CH 2CH 2-、-CH 2CH(CH 3)-、-CH 2C(CH 3) 2-、-CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH 2CH 2-及其類似基團。伸烷基亦可經取代或未經取代。舉例而言，伸烷基可經包括(但不限於)以下的一或多個基團取代：如本文所述的烷基、芳基、雜芳基、環烷基、烷氧基、胺基、醚、鹵基、羥基、硝基、矽烷基、側硫基、磺酸酯、磺醯胺、脲、醯胺、胺基甲酸酯、酯、羧酸酯或硫醇。
術語「伸烯基」包括具有至少一個碳-碳雙鍵且在一些實施例中不具有碳-碳參鍵的二價直鏈或分支鏈不飽和非環狀烴基。上述任一種單價烯基可藉由自烯基抽出第二氫原子而轉化為伸烯基。代表性伸烯基包括C 2-6伸烯基。
術語「C x-y」當結合諸如烷基或伸烷基之化學部分使用時意欲包括鏈中含有x至y個碳的基團。舉例而言，術語「C x-y烷基」係指經取代或未經取代之飽和烴基，包括鏈中含有x至y個碳的直鏈及分支鏈烷基及伸烷基。
如本文所定義，「Cn」(其中「n」為整數)描述烴分子或片段(例如烷基)，其中「n」表示該片段或分子中的碳原子數。
如本文所用，術語「抗體」包括完整抗體及其任何抗原結合片段(亦即，「抗原結合部分」)或單鏈。在一些實施例中，「抗體」係指包含藉由二硫鍵互連之至少兩條重(H)鏈及兩條輕(L)鏈的醣蛋白，或其抗原結合部分。各重鏈包含重鏈可變區(本文縮寫為VH)及重鏈恆定區。在某些天然存在之抗體中，重鏈恆定區包含三個域：CH1、CH2及CH3。在某些天然存在之抗體中，各輕鏈包含輕鏈可變區(本文中縮寫為VL)及輕鏈恆定區。輕鏈恆定區包含一個域CL。VH及VL區域可進一步再分成高變區，稱為互補決定區(CDR)，其中散置有更保守的區域，稱為構架區(FR)。各VH及VL由三個CDR及四個FR構成，自胺基端至羧基端，該等CDR及FR依以下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈及輕鏈之可變區含有與抗原相互作用之結合域。抗體恆定區可介導免疫球蛋白結合至宿主組織或因子，包括免疫系統之多種細胞(例如效應細胞)及經典補體系統之第一組分(Clq)。
如本文所用，術語「ApoE模擬物」可與脂蛋白元-E模擬胜肽互換。ApoE模擬物為與ApoE有關、具有ApoE特徵或模擬ApoE的胜肽。ApoE模擬物包括ApoE胜肽(亦即，衍生自全長ApoE的胜肽)。
除非上述說明書中明確指出，否則說明書中敍述「包含」各種組分之實施例亦考慮為「由所述組分組成」或「基本上由所述組分組成」；說明書中敍述「由各種組分組成」亦考慮為「包含」所述組分或「基本上由所述組分組成」；說明書中敍述「關於」各種組分之實施例亦考慮為「對於」所述組分；且說明書中敍述「基本上由各種組分組成」亦考慮為「由所述組分組成」或「包含」所述組分(此互換性不適用於在申請專利範圍中使用此等術語)。
如本文所用，片語「聯合投與」係指兩種或更多種不同治療組合物的任何投與形式，使得先前投與的治療組合物在體內仍然有效的同時，投與第二組合物(例如兩種組合物在患者體內同時有效，可包括兩種組合物的協同效應)。舉例而言，不同治療組合物可在相同調配物或各別調配物中同時或依序投與。在某些實施例中，不同治療組合物彼此可在一小時、12小時、24小時、36小時、48小時、72小時或一週內投與。因此，接受此類療法之個體可受益於不同治療組合物的組合作用。
如本文所用，術語「接觸(contacting)」意謂在兩個或更多個實體之間建立實體連接。舉例而言，使哺乳動物細胞與奈米顆粒組合物接觸意謂使哺乳動物細胞與奈米顆粒共享實體連接。使細胞與外部實體活體內及離體接觸之方法在生物學技術中已熟知。舉例而言，奈米顆粒組合物與置於哺乳動物內之哺乳動物細胞的接觸可藉由不同投藥途徑(例如靜脈內、肌肉內、皮內及皮下)進行且可涉及不同量的奈米顆粒組合物。此外，奈米顆粒組合物可接觸超過一個哺乳動物細胞。
如本文所用，術語「遞送」意謂將實體提供至目的地。舉例而言，將治療劑及/或預防劑遞送至個體可涉及將包括該治療劑及/或預防劑的奈米顆粒組合物投與個體(例如藉由靜脈內、肌肉內、皮內或皮下途徑)。奈米顆粒組合物投與哺乳動物或哺乳動物細胞可涉及使一或多個細胞與奈米顆粒組合物接觸。
如本文所用，「域交換」、「交換域」或「交換」肽係指使脂質結合肽與脂蛋白元E之受體結合域共價連接，使得該脂質結合肽位於合成脂蛋白元E模擬胜肽的N端。舉例而言，肽18A-hE為例示性域交換肽。
如本文所用，術語「脂肪酸」係指具有脂族鏈的單羧酸(「尾」)，其中該脂族鏈可為飽和的、單不飽和的(脂族鏈上的任何位置具有一個不飽和鍵)或多元不飽和的(在脂族鏈上的任何位置具有至少兩個不飽和鍵)。脂族鏈上的不飽和鍵可為雙鍵(順式及/或反式組態)或參鍵。脂肪酸之脂族鏈(飽和、單不飽和或多元不飽和)的長度可為8至32個碳原子不等。脂肪酸可來源於天然來源(動物或植物來源)、合成來源或半合成來源。
如本文所用，「高密度脂蛋白」(HDL)係指尺寸稍微不同(直徑為8-11 nm)的一類脂蛋白，其可輸送膽固醇。HDL膽固醇為與HDL相關的膽固醇。高密度脂蛋白(HDL)載運約四分之一至三分之一的血膽固醇。由於高含量的HDL似乎預防心臟病發作，因此HDL膽固醇被稱為「良好」膽固醇。低含量的HDL (在男性中小於40 mg/dL且在女性中小於50 mg/dL)亦增加心臟病風險。
如本文所用，術語「LDL受體」係指介導富含膽固醇之低密度脂蛋白(LDL)發生胞吞的受體。
「脂質」係指在結構上多種多樣的一類有機化合物，其為脂肪酸衍生物或固醇或可為脂質樣材料，如類脂質(實例C 12-200)或聚合物結合的脂質，且特徵為不溶於水中、但可溶於多種有機溶劑中。
如本文所用，「脂蛋白(lipoprotein)」或「脂蛋白(lipoproteins)」係指含有蛋白質與脂質的生物化學組裝體。脂質或其衍生物可共價或非共價結合至蛋白質。多種酶、轉運體、結構蛋白、抗原、黏附素及毒素為脂蛋白。實例包括血液中的高密度及低密度脂蛋白、粒線體及葉綠體的跨膜蛋白，及細菌脂蛋白。
如本文所用，「脂質體」為包括圍封水性內部之含脂質膜的結構。脂質體可具有一或多層脂質膜。脂質體包括單層狀脂質體(在此項技術中亦稱為單層脂質體)及多層狀脂質體(在此項技術中亦稱為多層脂質體)。
如本文所用，「低密度脂蛋白」或「LDL」為尺寸可變(約22 nm)的脂蛋白，其可含有數目變化的三酸甘油酯及膽固醇酯，其實際上具有質量及尺寸分佈。各原生LDL顆粒含有單一脂蛋白元B-100分子(Apo B-100，具有4536個胺基酸胺基酸殘基的蛋白質)及包圍三酸甘油酯及膽固醇酯的磷脂包衣，使得其可溶於水性環境中。LDL通常稱為壞膽固醇。LDL膽固醇為與LDL相關的膽固醇。當血液中循環的LDL膽固醇過多時，其可在饋入心臟及腦的動脈內壁緩慢積聚。其可與其他物質一起形成斑塊，一種可使動脈狹窄且使其彈性減小的厚硬沈積物。此病狀稱為動脈粥樣硬化。若形成凝塊且阻塞變窄的動脈，則可引起心臟病發作或中風。
如本文所用，「mRNA」係指信使核糖核酸。mRNA可為天然存在的或非天然存在的。舉例而言，mRNA可包括經修飾及/或非天然存在之組分，諸如一或多個核鹼基、核苷、核苷酸或連接子。mRNA可包括帽結構、鏈終止核苷、莖環、聚腺苷酸序列及/或聚腺苷酸化信號。mRNA可具有編碼多肽的核苷酸序列。mRNA的轉譯(例如mRNA在哺乳動物細胞內的活體內轉譯)可產生多肽。
如本文所用，「奈米粒子」係指任一種結構形貌體之尺度小於約1000 nm的顆粒，相較於相同材料的塊狀樣品，該顆粒展現新穎特性。常規地，奈米顆粒之任一種結構形貌體的尺度小於約500 nm、小於約200 nm或約100 nm。亦常規地，奈米顆粒之任一種結構形貌體的尺度為約50 nm至約500 nm、約50 nm至約200 nm，或約70 nm至約120 nm。在例示性實施例中，奈米顆粒為一或多個維度約1-1000 nm的顆粒。在其他例示性實施例中，奈米顆粒為一或多個維度約10-500 nm的顆粒。在其他例示性實施例中，奈米顆粒為一或多個維度約50-200 nm的顆粒。球形奈米顆粒將具有例如約50-100或70-120奈米之間的直徑。奈米顆粒就其轉運及特性而言最通常作為單元體現。應注意，使奈米顆粒有別於相應塊狀材料的新穎特性典型地在低於1000 nm的尺寸規模下形成，或在約100 nm的尺寸下形成，但奈米顆粒可具有較大尺寸，例如當顆粒呈長橢圓形、管狀及其類似形狀時。儘管大部分分子的尺寸符合上文所概述，但個別分子通常不稱為奈米顆粒。
如本文所用，術語「核酸」在其最廣泛的意義上使用且涵蓋包括核苷酸聚合物的任何化合物及/或物質。此等聚合物通常稱為聚核苷酸。本發明之例示性核酸或聚核苷酸包括(但不限於)核糖核酸(RNA)、去氧核糖核酸(DNA)、DNA-RNA雜交體、RNAi誘導劑、RNAi藥劑、siRNA、shRNA、miRNA、反義RNA、核糖核酸酶、催化DNA、誘導三螺旋形成的RNA、異赤藻糖核酸(TNA)、二醇核酸(GNA)、胜肽核酸(PNA)、鎖定核酸(LNA，包括具有b-D-核糖組態的LNA、具有-L-核糖組態的-LNA (LNA的非對映異構體)、具有2'-胺基官能化的2'-胺基-LNA，及具有2'-胺基官能化的2'-胺基-a-LNA)或其雜交體。聚核苷酸係指任何長度之核苷酸(去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)之聚合物形式，或其類似物。聚核苷酸可具有任何三維結構，且可執行任何已知或未知的功能。以下為聚核苷酸之非限制性實例：基因或基因片段之編碼區或非編碼區、利用連鎖分析所定義之基因座(loci/locus)、外顯子、內含子、信使RNA (mRNA)、轉移RNA、核糖體RNA、核糖核酸酶、cDNA、合成聚核苷酸、重組聚核苷酸、分支聚核苷酸、質體、載體、經分離之任何序列DNA、經分離之任何序列RNA、核酸探針及引子。聚核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及核苷酸類似物。若存在，則可在聚合物組裝之前或之後將修飾賦予核苷酸結構。核苷酸序列可間雜有非核苷酸組分。可進一步修飾聚核苷酸，諸如藉由與標記組分結合來修飾。
片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷範疇內，適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症、與合理益處/風險比相匹配之彼等化合物、物質、組合物及/或劑型。
如本文所用，片語「醫藥學上可接受之載劑」意謂醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料。
組合物亦可包括一或多種化合物之鹽。鹽可為醫藥學上可接受之鹽。如本文所用，「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示之化合物的衍生物，其中藉由將現有酸或鹼部分轉化成其鹽形式(例如藉由使游離鹼基團與適合有機酸反應)來改變母化合物。醫藥學上可接受之鹽的實例包括(但不限於)鹼性殘基(諸如胺)之無機或有機酸鹽；酸性殘基(諸如羧酸)之鹼鹽或有機鹽；及其類似鹽。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、褐藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫溴化物、氫氯化物、氫碘化物、2-羥基-乙烷磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似鹽。代表性鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及其類似物，以及無毒性銨、季銨及胺陽離子，包括(但不限於)銨、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺及其類似物。本發明之醫藥學上可接受之鹽包括例如由無毒無機或有機酸形成之母化合物的習知無毒鹽。本發明之醫藥學上可接受之鹽可由含有鹼性或酸性部分之母化合物藉由習知化學方法合成。一般而言，此類鹽可由此等化合物之游離酸或鹼形式與化學計量之量的適當鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者之混合物中反應來製備；一般而言，非水性介質(如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈)較佳。適合鹽之清單見於Remington's Pharmaceutical Sciences, 第17版, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, 第1418頁, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. H. Stahl and C. G. Wermuth (編), Wiley-VCH, 2008, 及Berge等人, Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)，各文獻以全文引用的方式併入本文中。
如本文所用，「磷脂」為包括磷酸酯部分及一或多個諸如不飽和脂肪酸鏈之碳鏈的脂質。
術語「多肽」係指胺基酸聚合物及其等效物且並非指產物的特定長度；因此，多肽定義內包括胜肽、寡肽及蛋白質。此術語亦非指或排除多肽的修飾，例如糖基化、乙醯化、磷酸化及其類似修飾。該定義內包括例如含有胺基酸(包括例如天然胺基酸等)之一或多個類似物的多肽、具有經取代之鍵聯的多肽，以及此項技術中已知的其他修飾(天然存在的與非天然存在的)。
如本文所用，「預防」病症或病狀之治療組合物係指在統計學樣本中，相對於未治療之對照樣本，使經治療之樣本的病症或病狀發生率減小，或相對於未治療之對照樣本，延遲病症或病狀之一或多種症狀發作或降低其嚴重度的組合物。
如本文所用，「逆向」、「逆向取向」、「逆向類似物」或「逆向序列」係指相較於非逆向的胜肽，胜肽或該胜肽的一部分具有逆向胺基酸序列(亦即，原始序列自右向左讀取(或書寫))。舉例而言，若一種胜肽具有胺基酸序列ABCDE，則其逆向類似物或具有其逆向序列的胜肽如下：EDCBA。在雙域胜肽(例如Ac-hE-18A-NH2)中，hE序列自右向左讀取或18A序列自右向左讀取。LRKLRKRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF (SEQ ID NO: 10)的逆向類似物可為RLLRKRLKRL-DWLKAFYDKVAEKLKEAF (SEQ ID NO: 15)或LRKLRKRLLR-FAEKLKEAVKDYFAKLWD (SEQ ID NO: 16)。
如本文所用，「RNA」係指可天然存在或非天然存在的核糖核酸。舉例而言，RNA可包括經修飾及/或非天然存在之組分，諸如一或多個核鹼基、核苷、核苷酸或連接子。RNA可包括帽結構、鏈終止核苷、莖環、聚腺苷酸序列及/或聚腺苷酸化信號。RNA可具有編碼所關注多肽的核苷酸序列。舉例而言，RNA可為信使RNA (mRNA)。編碼特定多肽之mRNA的轉譯，例如mRNA在哺乳動物細胞內部的活體內轉譯，可產生所編碼的多肽。RNA可選自由以下組成之非限制群組：小干擾RNA (siRNA)、不對稱干擾RNA (aiRNA)、微小RNA (miRNA)、內切酶基質RNA (dsRNA)、小髮夾RNA (shRNA)、mRNA、長非編碼RNA (lncRNA)及其混合物。
如本文所用，「亂序」、「亂序版」或「亂序胜肽」係指胺基酸序列的組成與未亂序胜肽相同，然而，胺基酸序列被改變，從而使得胜肽不能形成α-兩親媒性螺旋或不具有脂質結合(或HSPG結合)特性。然而，在一些情況下，如本發明中所述，亂序胜肽仍能夠形成不同螺旋結構，諸如π螺旋。舉例而言，若一種胜肽具有胺基酸序列ABCDE，則胜肽的亂序版可具有胺基酸序列DEABC。亂序胜肽通常表示為在胜肽之亂序部分之前具有「Sc」。舉例而言，Sc-hE-18A表示胜肽的hE部分為亂序的。
如本文所用，「轉染」係指將物種(例如RNA)引入細胞中。轉染可發生於例如活體外、離體或活體內。
術語「治療」包括預防性及/或治療性治療。術語「預防性或治療性」治療係此項技術中公認的且包括向個體投與本發明組合物中之一或多者。若其在非所需病狀(例如宿主動物之疾病或其他非所需狀態)臨床表現之前投與，則治療為預防性的(亦即，其保護宿主以免產生非所需病狀)，而若其在非所需病狀表現之後投與，則治療為治療性的(亦即，希望減輕、改善或穩定現有非所需病狀或其副作用)。
如本文所用，「極低密度脂蛋白」(VLDL)為脂蛋白亞類。VLDL係由膽固醇及脂蛋白元在肝臟中組裝而成。脂蛋白在血流中轉化成低密度脂蛋白(LDL)。VLDL顆粒具有30-80 nm之直徑。VLDL轉運內源產物，而乳糜微粒轉運外源(飲食)產物。
「兩性離子型脂質」係指具有正電荷與負電荷的脂質分子。 脂質奈米粒子(LNP)組合物
本發明提供基於脂質之組合物，尤其是包含脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽及一或多種脂質的脂質奈米顆粒(LNP)。在各種態樣中，本發明提供用於遞送至目標細胞或目標細胞群之包含藥劑(例如蛋白質或核酸分子)的LNP；用於增強藥劑(例如蛋白質或核酸分子)遞送至目標細胞或目標細胞群的方法；將此類LNP遞送至會因調節目標細胞活性而受益的個體的方法；及治療此類個體之疾病或病症的方法。 脂質組分
因此，本文提供包含脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽及一或多種脂質的LNP組合物。
本文提供的本發明描述的脂質顆粒為包含脂質組分及承載物的組裝體。脂質顆粒可為例如脂質體、脂質微胞、固體脂質顆粒、脂質複合體、脂質奈米顆粒(LNP)或脂質穩定化聚合物顆粒，其包含一種生物相容性脂質或不同生物相容性脂質之混合物。此等脂質顆粒的結構組織可產生水性內部與最小雙層，如脂質體，或脂質顆粒可具有固體內部，如固體核酸脂質奈米顆粒。
在較佳實施例中，本文提供的脂質顆粒為脂質奈米顆粒(LNP)。在一些實施例中，LNP包含可離子化脂質、結構性脂質、非陽離子型輔助脂質及/或PEG脂質。在一些實施例中，LNP包含下文描述的其他脂質組分。 可離子化脂質
在某些實施例中，一或多種脂質包含可離子化脂質。本發明之可離子化脂質可包含中心胺部分及至少一個生物可降解基團。本文所述之可離子化脂質可有利地用於本發明之脂質奈米顆粒中以便將承載物遞送至哺乳動物細胞或器官中。
在一些實施例中，可離子化脂質在LNP組合物之約20 mol%至約80 mol%範圍內。在一些實施例中，可離子化脂質在LNP組合物之約30 mol%至約70 mol%、約35 mol%至約65 mol%、或約40 mol%至約60 mol%範圍內。
在一些實施例中，可離子化脂質為化合物A，或其衍生物或類似物：
Figure 02_image001
在一些實施例中，可離子化脂質為化合物B，或其衍生物或類似物：
Figure 02_image003
在一些實施例中，可離子化脂質為化合物C，或其衍生物或類似物：
Figure 02_image005
在一些實施例中，可離子化脂質為化合物D，或其衍生物或類似物：
Figure 02_image007
在一些實施例中，可離子化脂質為化合物E，或其衍生物或類似物：
Figure 02_image009
在一些實施例中，可離子化脂質為化合物F，或其衍生物或類似物：
Figure 02_image011
在一些實施例中，可離子化脂質為化合物G，或其衍生物或類似物：
Figure 02_image013
在一些實施例中，可離子化脂質為化合物H，或其衍生物或類似物：
Figure 02_image015
在一些實施例中，可離子化脂質包括(但不限於)：
Figure 02_image017
Figure 02_image019
Figure 02_image021
Figure 02_image023
；
及其任何組合。
本發明之其他可離子化脂質可選自由以下組成之非限制性群組：3-(雙十二烷基胺基)-N1,N1,4-三(十二烷基)-1-哌嗪乙胺(KL10)、N1-[2-(雙十二烷基胺基)乙基]-N1,N4,N4-三(十二烷基)-1,4-哌嗪二乙胺(KL22)、14,25-雙十三烷基-15,18,21,24-四氮雜-三十八烷(KL25)、1,2-二亞麻油基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DLin-DMA)、2,2-二亞麻油基-4-二甲胺基甲基-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-K-DMA)、4-(二甲胺基)丁酸三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基酯(DLin-MC3-DMA)、2,2-二亞麻油基-4-(2-二甲胺基乙基)-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-KC2-DMA)、1,2-二油基氧基-N,N-二甲基胺基丙烷(DODMA)、(13Z,165Z)-N,N-二甲基-3-壬基二十二碳-13,16-二烯-1-胺(L608)、2-({8-[(3b)-膽甾-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(辛基-CLinDMA)、(2R)-2-({8-[(3b)-膽甾-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(辛基-CLinDMA (2R))，及(2S)-2-({8-[(3b)-膽甾-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(辛基-CLinDMA (2S))。此外，可離子化脂質亦可為包括環胺基團之脂質。
在一些實施例中，可離子化脂質為PCT公開案第WO 2015/074805號、第WO 2015/199952號、第WO 2017/112865號、第WO 2017/075531號及第WO 2021/026358號中所述的一或多種化合物，該等公開案以全文引用的方式併入本文中。適於調配本發明之組合物的其他可離子化脂質可以包括US 2015/0239834中所述的彼等物，該文獻以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，可離子化脂質包含胺基。在一些此類實施例中，胺基為胺頭基。
在一些實施例中，可離子化脂質包含兩個或更多個脂族尾基，例如兩個至四個脂族尾基。在某些實施例中，脂族尾基為疏水性尾基，例如各自獨立地為烷基或烯基。
在一些實施例中，可離子化脂質為陽離子型脂質。在其他實施例中，可離子化脂質為中性脂質。在一些實施例中，可離子化脂質為兩性離子型脂質。
在較佳實施例中，可離子化脂質在生理pH質子化。 結構性脂質
在一些實施例中，一或多種脂質包含結構性脂質。結構性脂質併入脂質奈米顆粒中可有助於減少其他脂質在顆粒中的聚集。結構性脂質可包括(但不限於)膽固醇、糞固醇、麥角固醇、菜籽固醇、番茄次鹼、蕃茄鹼、熊果酸、α-生育酚及其混合物。
在一些實施例中，結構性脂質在LNP組合物之約5 mol%至約65 mol%範圍內。在一些實施例中，結構性脂質在LNP組合物之約20 mol%至約60 mol%、約25 mol%至約55 mol%、或約30 mol%至約50 mol%範圍內。
在某些實施例中，結構性脂質為膽固醇。在某些實施例中，結構性脂質包括膽固醇及皮質類固醇(諸如普賴蘇穠(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、普賴蘇(prednisone)及氫皮質酮(hydrocortisone))或其組合。在一些實施例中，結構性脂質為固醇。如本文所定義，「固醇」類固醇醇類。在某些實施例中，結構性脂質為類固醇。在某些實施例中，結構性脂質為膽固醇。在某些實施例中，結構性脂質為膽固醇類似物。在某些實施例中，結構性脂質為α-生育酚。
在一些實施例中，結構性脂質為植物固醇。在一些實施例中，植物固醇單獨或組合地為植固醇、豆固醇、菜油固醇、穀固醇、菜油固烷醇、菜籽固醇、海藻固醇、β-植固醇、豆固烷醇、β-穀固醇、麥角固醇、羽扇豆醇、環木菠蘿烯醇、D5-燕麥固醇、D7-燕麥固醇或D7-豆固醇，包括其類似物、鹽或酯。在一些實施例中，本發明之LNP的植物固醇組分為單一植物固醇。在一些實施例中，本發明之LNP的植物固醇組分為不同植物固醇(例如2、3、4、5或6種不同植物固醇之混合物)。在一些實施例中，本發明之LNP的植物固醇組分為一或多種植物固醇與一或多種動物固醇之摻合物，諸如植物固醇(例如植固醇，諸如β-植固醇)與膽固醇之摻合物。
在一些實施例中，一或多種脂質包含結構性脂質，視情況包含類固醇，諸如固醇，例如膽固醇。 非陽離子型輔助脂質
在某些實施例中，一或多種脂質可包含非陽離子型輔助脂質。
在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質在LNP組合物之約5 mol%至約50 mol%範圍內。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質在LNP組合物之約5 mol%至約50 mol%、約10 mol%至約40 mol%、或約10 mol%至約30 mol%範圍內。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質在LNP組合物之約5 mol%至約25 mol%範圍內。
在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質為磷脂。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質為磷脂替代物或替換物。在一些實施例中，「非陽離子型輔助脂質」為包含長度為至少8個碳之至少一條脂肪酸鏈及至少一個極性頭基部分的脂質。在其他實施例中，輔助脂質不為磷脂醯膽鹼(PC)。在某些實施例中，非陽離子型輔助脂質為磷脂或磷脂替代物。在一些實施例中，磷脂或磷脂替代物可為例如一或多種飽和或(多)不飽和磷脂或磷脂替代物或其組合。一般而言，磷脂包含磷脂部分及一或多種脂肪酸部分。磷脂部分可選自例如由以下組成之非限制性群組：磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、磷脂醯絲胺酸、磷脂酸、2-溶血磷脂醯膽鹼及神經鞘磷脂。脂肪酸部分可選自例如由以下組成之非限制性群組：月桂酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、芥子酸、植烷酸、花生酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二烷酸、二十二碳五烯酸及二十二碳六烯酸。磷脂包括(但不限於)甘油磷脂，諸如磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲胺酸、磷脂醯肌醇、磷脂醯甘油及磷脂酸。磷脂亦包括磷神經鞘脂，諸如神經鞘磷脂。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質為DSPC類似物、DSPC替代物、油酸或油酸類似物。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質為非磷脂醯膽鹼(PC)兩性離子型脂質、DSPC類似物、油酸、油酸類似物，或1,2-二硬脂醯基-i77-甘油-3-磷酸膽鹼(DSPC)替代物。
在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質為磷脂，例如一或多種飽和或(多)不飽和磷脂或其組合。一般而言，磷脂包含磷脂部分及一或多種脂肪酸部分。磷脂可包括一或多個多鍵(例如雙鍵或參鍵)(例如一或多個不飽和度)。磷脂或其類似物或衍生物可包括膽鹼。磷脂或其類似物或衍生物可不包括膽鹼。特定磷脂可促進與膜之融合。舉例而言，陽離子型磷脂可與膜(例如細胞膜或細胞內膜)之一或多種帶負電磷脂相互作用。磷脂與膜的融合可允許含脂質組合物的一或多個元件通過膜，從而允許例如將一或多個元件遞送至細胞中。磷脂部分可選自例如由以下組成之非限制性群組：磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、磷脂醯絲胺酸、磷脂酸、2-溶血磷脂醯膽鹼及神經鞘磷脂。脂肪酸部分可選自例如由以下組成之非限制性群組：月桂酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、芥子酸、植烷酸、花生酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二烷酸、二十二碳五烯酸及二十二碳六烯酸。特定磷脂可促進與膜之融合。舉例而言，陽離子型磷脂可與膜(例如細胞膜或細胞內膜)之一或多種帶負電磷脂相互作用。磷脂與膜之融合可允許含脂質組合物(例如LNP)之一或多種成分(例如治療劑)穿過該膜，從而允許例如將該一或多個成分遞送至目標組織。本發明之脂質奈米顆粒的脂質組分可包括一或多種磷脂，諸如一或多種(多)不飽和脂質。磷脂可組裝成一或多個脂質雙層。一般而言，磷脂可包括磷脂部分及一或多種脂肪酸部分。
磷脂部分可選自由以下組成之非限制性群組：磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、磷脂醯絲胺酸、磷脂酸、2-溶血磷脂醯膽鹼及神經鞘磷脂。脂肪酸部分可選自由以下組成之非限制性群組：月桂酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、芥子酸、植烷酸、花生酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二烷酸、二十二碳五烯酸及二十二碳六烯酸。亦考慮非天然物種，包括具有修飾及取代(包括分支、氧化、環化及炔烴)的天然物種。舉例而言，磷脂可經一或多種炔烴(例如一或多個雙鍵經參鍵置換之烯基)官能化或與之交聯。在適當反應條件下，炔基可在暴露於疊氮化物後經歷銅催化之環加成。此類反應可適用於LNP之脂質雙層官能化，以促進膜滲透或細胞識別或促進LNP與適用組分(諸如靶向或成像部分(例如染料))結合。各種可能性代表本發明之各別實施例。適用於本文所述之組合物及方法中的磷脂可選自由以下組成之非限制性群組：1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DSPC)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二亞麻油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DLPC)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-磷酸膽鹼(DMPC)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DOPC)、1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DPPC)、1,2-雙十一醯基-sn-甘油-磷酸膽鹼(DUPC)、1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(POPC)、1,2-二-O-十八烯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(18:0二醚PC)、1-油醯基-2-膽固醇半丁二醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(OChemsPC)、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(C16 Lyso PC)、1,2-二次亞麻油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(18:3 (cis) PC)、1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DAPC)、1,2-雙二十二碳六烯醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(22:6 (cis) PC)、1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(4ME 16.0 PE)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)、1,2-二亞麻油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(PE (18:2/18:2)、1,2-二次亞麻油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(PE 18:3 (9Z,12Z,15Z)、1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DAPE 18:3 (9Z,12Z,15Z)、1,2-雙二十二碳六烯醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(22:6 (cis) PE)、1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸-外消旋-(1-甘油)鈉鹽(DOPG)，及神經鞘磷脂。各種可能性代表本發明之各別實施例。在一些實施例中，LNP包括DSPC。在某些實施例中，LNP包括DOPE。在一些實施例中，LNP包括DMPE。在一些實施例中，LNP包括DSPC與DOPE。在其他實施例中，用於LNP中的非陽離子型輔助脂質係選自由以下組成之群：DSPC、DMPE及DOPC或其組合。磷脂包括(但不限於)甘油磷脂，諸如磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲胺酸、磷脂醯肌醇、磷脂醯甘油及磷脂酸。磷脂亦包括磷神經鞘脂，諸如神經鞘磷脂。
在某些實施例中，一或多種脂質包含非陽離子型輔助脂質。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質為磷脂。在一些實施例中，非陽離子型輔助脂質包含二醯基甘油基團。在某些實施例中，非陽離子型輔助脂質為甘油磷脂，諸如磷脂醯膽鹼。或者，非陽離子型輔助脂質不為磷脂醯膽鹼。
在一些實施例中，磷脂為二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)。 PEG 脂質
在一些實施例中，一或多種脂質包含含有與PEG基團共價鍵結之脂質基團的PEG-脂質。在一些此類實施例中，脂質基團為磷脂。在某些實施例中，脂質基團包含二醯基甘油、二烷基甘油或二烷基胺基。在某些較佳實施例中，脂質基團為甘油磷脂基團。在一些實施例中，脂質基團為二肉豆蔻醯基甘油。
在一些實施例中，PEG脂質在LNP組合物之約0.1 mol%至約25 mol%、約1 mol%至約25 mol%、或約5 mol%至約20 mol%範圍內。在一些實施例中，一或多種脂質包含含有與PEG基團共價鍵結之脂質基團的PEG-脂質。PEG脂質可影響奈米顆粒在活體內(例如在血液中)可存在的時間長度。PEG脂質可藉由例如減少顆粒聚集及控制粒度而有助於調配製程。本文所用之PEG脂質可調節LNP之藥物動力學特性。典型地，PEG脂質包含脂質部分及基於PEG (有時稱為聚(環氧乙烷))之聚合物部分(PEG部分)。其他適合的PEG脂質揭示於PCT公開案第WO 2015/095340號(第31頁第14行至第37頁第6行)、第WO 2006/007712號及第WO 2011/076807號(「隱形脂質」)中，該等文獻以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，脂質部分可衍生自二醯基甘油或二醯基甘油醯胺(diacylglycamide)，包括包含二烷基甘油或二烷基甘油醯胺基團的彼等物，其烷基鏈長度獨立地包含約C4至約C40飽和或不飽和碳原子，其中該鏈可包含一或多個官能基，諸如醯胺或酯。在一些實施例中，烷基鏈長度包含約C10至C20。二烷基甘油或二烷基甘油醯胺基團可進一步包含一或多個經取代之烷基。鏈長可為對稱的或不對稱的。
除非另外指明，否則如本文所用之術語「PEG」意謂任何聚乙二醇或其他聚伸烷基醚聚合物，諸如乙二醇或環氧乙烷之視情況經取代之線性或分支聚合物。在某些實施例中，PEG部分未經取代。或者，PEG部分可經例如一或多個烷基、烷氧基、醯基、羥基或芳基取代。舉例而言，PEG部分可包含PEG共聚物，諸如PEG-聚胺基甲酸酯或PEG-聚丙烯(參見例如J.Milton Harris, Poly(ethylene glycol) chemistry: biotechnical and biomedical applications (1992))；或者，PEG部分可為PEG均聚物。在某些實施例中，PEG部分之分子量為約130至約50,000，諸如約150至約30,000或甚至約150至約20,000。類似地，PEG部分之分子量可為約150至約15,000、約150至約10,000、約150至約6,000或甚至約150至約5,000。在某些較佳實施例中，PEG部分之分子量為約150至約4,000、約150至約3,000、約300至約3,000、約1,000至約3,000、或約1,500至約2,500。
在某些較佳實施例中，PEG部分為「PEG-2K」，亦稱為「PEG 2000」，其平均分子量為約2,000道爾頓。PEG-2K在本文中由下式I表示：
Figure 02_image025
其中n為45，意謂數目平均化聚合度包含約45個亞單元。然而，可使用此項技術中已知之其他PEG實施例，包括例如其中數目平均化聚合度包含約23個亞單元(n=23)及/或68個亞單元(n=68)之彼等物。在一些實施例中，n可在約30至約60範圍內。在一些實施例中，n可在約35至約55範圍內。在一些實施例中，n可在約40至約50範圍內。在一些實施例中，n可在約42至約48範圍內。在一些實施例中，n可為45。在一些實施例中，R可選自H、經取代之烷基及未經取代之烷基。在一些實施例中，R可為未經取代之烷基，諸如甲基。
在本文所述的任一實施例中，PEG脂質可選自PEG-二月桂醯基甘油、PEG-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG)(目錄號GM-020，日本東京NOF)、PEG-二棕櫚醯基甘油、PEG-二硬脂醯基甘油(PEG-DSPE)(目錄號DSPE-020CN，日本東京NOF)、PEG-二月桂基甘油醯胺、PEG-二肉豆蔻基甘油醯胺、PEG-二棕櫚醯基甘油醯胺及PEG-二硬脂醯基甘油醯胺、PEG-膽固醇(1-[8'-(膽甾-5-烯-3[β]-氧基)甲醯胺基-3',6'-二氧雜辛基]胺甲醯基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)、PEG-DMB (3,4-雙十四烷氧基苯甲基-[ω]-甲基-聚(乙二醇)醚)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DMG)(目錄號880150P，Avanti Polar Lipids, Alabaster, Alabama, USA)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DSPE)(目錄號880120C，Avanti Polar Lipids, Alabaster, Alabama, USA)、1,2-二硬脂醯基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇(PEG2k-DSG；GS-020，日本東京NOF)、聚(乙二醇)-2000-二甲基丙烯酸酯(PEG2k-DMA)，及1,2-二硬脂醯氧基丙基-3-胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000] (PEG2k-DSA)。在某些此類實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DMG。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSG。在其他實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSPE。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DMA。在又其他實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C-DMA。在某些實施例中，PEG脂質可為WO2016/010840 (段落[00240]至[00244])中所揭示的化合物S027。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-DSA。在其他實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C11。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C14。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C16。在一些實施例中，PEG脂質可為PEG2k-C18。
PEG脂質之其他實例包括具有PEG鏈的脂質，諸如氫化大豆磷脂醯膽鹼(HSPC)、膽固醇(CHE)、1,2-二硬脂醯基-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(PEG)-2000] (DSPE-PEG2000)、鏈1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[順丁烯二醯亞胺(PEG)-2000]之末端經順丁烯二醯亞胺基團修飾的1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(PEG)-2000]、DSPE-PEG2000-MAL、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-550] (DMPE-PEG550)、1,2-二油醯基-l-3-三甲基銨丙烷(DOTAP)，及具有甘油主鏈的彼等物，例如DMG-PEG、DSG-PEG (DMG-PEG2000)等。
PEG脂質之其他實例包括DMG-PEG (1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油、甲氧基聚乙二醇-PEG)、DMA-PEG (聚(乙二醇)-二甲基丙烯酸酯-PEG)及DMPE-PEG550 (1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-550]), PEG)、單唾液酸神經節苷脂Gml，及聚醯胺寡聚物(PAO)，諸如美國專利第6,320,017號中所述的彼等物。在本文教示的任一種調配物中，脂質奈米顆粒可以包括可經DMPE-PEG2000取代的DMPE-PEG2000或DMG-PEG。其他適合的PEG脂質包括(但不限於)經PEG修飾之磷脂醯乙醇胺及磷脂酸、PEG-神經醯胺結合物(例如PEG-CerC14或PEG-CerC20)(諸如美國專利第5,820,873號中所述的彼等物)、經PEG修飾之二烷基胺及經PEG修飾之1,2-二醯基氧基丙-3-胺、經PEG修飾之二醯基甘油及二烷基甘油、mPEG (mw2000)-二硬脂醯磷醯乙醇胺(PEG-DSPE)。 其他脂質組分
在一些實施例中，脂質奈米顆粒視情況包含中性脂質。適用於本發明之脂質組合物中的中性脂質包括例如各種中性、不帶電或兩性離子型脂質。中性脂質當存在時可為多種脂質物種中的任一者，其在生理pH下以不帶電或中性兩性離子形式存在。此類脂質包括例如二醯基磷脂醯膽鹼、二醯基磷脂醯乙醇胺、神經醯胺、神經鞘磷脂、二氫鞘磷脂、腦磷脂及腦苷脂。在一些實施例中，中性脂質組分為具有兩個醯基之脂質(例如二醯基磷脂醯膽鹼及二醯基磷脂醯乙醇胺)。在一些實施例中，中性脂質包含碳鏈長度在C10至C20範圍內(包括端點)的飽和脂肪酸。在一些實施例中，中性脂質包括碳鏈長度在C10至C20範圍內(包括端點)的單或二不飽和脂肪酸。適合的中性脂質包括(但不限於) DPPC (二棕櫚醯磷脂醯膽鹼)、POPC (棕櫚醯油醯磷脂醯膽鹼)、DOPE (1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、DSPC (二硬脂醯磷脂醯膽鹼)、卵L-α-磷脂醯膽鹼(EPC)；1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DPPE)；及SM (神經鞘磷脂)。
在一些實施例中，脂質奈米顆粒視情況包含陽離子脂質。適用於本發明之脂質組合物中的陽離子脂質包括(但不限於)氯化N,N-二油基-N,N-二甲基銨(DODAC)、溴化N,N-二硬脂醯基-N,N-二甲基銨(DDAB)、氯化N-(1-(2,3-二油醯氧基)丙基)-N,N,N-三甲基銨(DOTAP)、1,2-二油醯基-3-二甲基銨-丙烷(DODAP)、氯化N-(1-(2,3-二油基氧基)丙基)-N,N,N-三甲基銨(DOTMA)、1,2-二油醯基胺甲醯基-3-二甲基銨-丙烷(DOCDAP)、1,2-二亞麻油醯基-3-二甲基銨-丙烷(DLINDAP)、二月桂基(C12:0)三甲基銨丙烷(DLTAP)、雙十八烷基醯胺基甘胺醯基精胺(DOGS)、DC-Choi、二油醯氧基-N-[2-(精胺甲醯胺基)乙基]-N,N-二甲基-1-丙銨三氟乙酸鹽(DOSPA)、溴化1,2-二肉豆蔻氧基丙基-3-二甲基-羥基乙基銨(DMRIE)、3-二甲基胺基-2-(膽甾-5-烯-3-β-氧基丁-4-氧基)-1-(順,順-9,12-十八碳二烯氧基)丙烷(CLinDMA)、N,N-二甲基-2,3-二油基氧基)丙胺(DODMA)、2-[5'-(膽甾-5-烯-3[β]-氧基)-3'-氧雜戊烯氧基)-3-二甲基-1-(順,順-9',1-2'-十八碳二烯氧基)丙烷(CpLinDMA)、N,N-二甲基-3,4-二油基氧基苯甲胺(DMOBA)，及1,2-N,N'-二油基胺甲醯基-3-二甲基胺基丙烷(DOcarbDAP)。在某些實施例中，陽離子型脂質為DOTAP或DLTAP。
多種陽離子型脂質及其製備方法描述於例如美國專利第5,208,036號、第5,264,618號、第5,279,833號、第5,283,185號、第5,753,613號、第5,785,992號、第5,830,430號、第6,056,938號、第7,893,302號、第7,404,969號、第8,034,376號、第8,283,333號及第8,642,076號；美國專利公開案第2006/0083780號及第2006/0240554號；以及PCT公開案第WO 2010/054406號、第WO 2010/054401號、第WO 2010/054405號、第WO 2010/054384號、第WO 2012/040184號、第WO 2011/153120號、第WO 2011/149733號、第WO 2011/090965號、第WO 2011/043913號、第WO 2011/022460號、第WO 2012/061259號、第WO 2012/054365號、第WO 2012/044638號、第WO 2010/080724號、第WO 2010/21865號及第WO 2008/103276號，該等文獻以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，脂質奈米顆粒視情況包含陰離子型脂質。陰離子型脂質亦可包括(但不限於)脂肪酸(例如油酸、亞麻油酸、次亞麻油酸)；膽固醇基半丁二酸酯(CHEMS)；1,2-二-0十四烷基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-外消旋-甘油)(二醚PG)；1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-外消旋-甘油)(鈉鹽)；1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-3-磷酸-L-絲胺酸(鈉鹽)；1-十六烷醯基,2-(9Z,12Z)-十八碳二烯醯基-sn-甘油-3-磷酸酯；1,2-二油醯基-sn-甘油-3-[磷酸-外消旋-(1-甘油)](DOPG)；二油醯基磷脂酸(DOPA)；1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸-L-絲胺酸(DOPS)；及其衍生物。適合陰離子型脂質之其他實例包括(但不限於)脂肪酸，諸如油酸、亞麻油酸及次亞麻油酸；及膽固醇基半丁二酸酯。此類脂質可單獨或組合使用，以用於多種目的，諸如使配位體連接至脂質體表面。
在一些實施例中，本文所述之脂質奈米顆粒進一步包含能夠增強脂質奈米顆粒被細胞攝入或在胞溶質中之分佈的一或多種化合物，及/或其囊封之組合物(例如小分子藥物、基於蛋白質之藥物或基於核酸之藥物等)。可增強細胞攝入的化合物可以包括左旋多巴(levodopa)、萘唑啉鹽酸鹽(naphazoline hydrochloride)、乙醯苯磺醯環己脲(acetohexamide)、氯硝柳胺(niclosamide)、二羥丙茶鹼(diprophylline)及伊索昔康(isoxicam)，或其組合。可增強胞溶質分佈的化合物可以包括8-氮鳥嘌呤、異氟潑尼龍乙酸鹽(isoflupredone acetate)、氯奎(chloroquine)、三甲氧苯醯胺鹽酸鹽(trimethobenzamide hydrochloride)、異克舒令鹽酸鹽(isoxsuprine hydrochloride)及二苯馬尼甲基硫酸鹽(diphemanil methylsulfate)，或其組合。
在一些實施例中，脂質奈米顆粒包含脂質雙層，該等脂質雙層囊封本發明所涵蓋的一或多種藥劑，諸如小分子藥物、基於蛋白質之藥物或基於核酸之藥物。在一些實施例中，脂質奈米顆粒經調配以促進攝入細胞中。在一些實施例中，脂質奈米顆粒經調配以促進攝入單核球、樹突狀細胞及/或巨噬細胞中。
在一些實施例中，脂質奈米顆粒可進一步包含其他藥劑。在一些實施例中，脂質奈米顆粒進一步包含一或多種抗氧化劑。抗氧化劑可有助於使脂質奈米顆粒穩定且防止、減少及/或抑制陽離子型脂質降解及/或脂質奈米顆粒中所囊封之活性劑降解。在一些實施例中，抗氧化劑為親水性抗氧化劑、親脂性抗氧化劑、金屬螯合劑、初級抗氧化劑、二級抗氧化劑，或其鹽或混合物。在一些實施例中，抗氧化劑包含EDTA或其鹽。在一些實施例中，脂質奈米顆粒進一步包含EDTA與一種、兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種或更多種其他抗氧化劑(例如初級抗氧化劑、二級抗氧化劑或其他金屬螯合劑)的組合。抗氧化劑之實例包括(但不限於)親水性抗氧化劑、親脂性抗氧化劑及其混合物。親水性抗氧化劑之非限制性實例包括螯合劑(例如金屬螯合劑)，諸如乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸鹽、乙二醇四乙酸(EGTA)、1,2-雙(鄰胺基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)、二伸乙基三胺五乙酸(DTPA)、2,3-二巰基-1-丙磺酸(DMPS)、二巰基丁二酸(DMSA)、cc-類脂酸、水楊醛異菸鹼醯腙(SIR)、己基硫乙胺鹽酸鹽(HTA)、去鐵草醯胺(desferrioxamine)、其鹽及其混合物。其他親水性抗氧化劑包括抗壞血酸、半胱胺酸、麩胱甘肽、二氫類脂酸、2-巰基乙烷磺酸、2-巰基苯并咪唑磺酸、6-羥基-2,5,7,8-四甲基色滿-2-甲酸、偏亞硫酸氫鈉、其鹽及其混合物。親脂性抗氧化劑之非限制性實例包括維生素E異構體，諸如α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚及δ-生育酚以及α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚及δ-生育三烯酚；多酚，諸如2-三級丁基-4-甲基苯酚、2-三級丁基-5-甲基苯酚及2-三級丁基-6-甲基苯酚；丁基化羥基甲氧苯(BHA)(例如2-三級丁基-4-羥基苯甲醚及3-第三丁基-4-羥基苯甲醚)；丁基羥基甲苯(BHT)；三級丁基氫醌(TBHQ)；抗壞血酸棕櫚酸酯；rc-沒食子酸丙酯；其鹽；及其混合物。
在一些實施例中，基於脂質之顆粒為pH敏感性奈米顆粒。此類pH敏感性奈米顆粒(PNSDS)可有益於遞送生物活性劑(例如siRNA分子(Tang等人, SiRNA Crosslinked Nanoparticles for the Treatment of Inflammation-induced Liver Injury, Advanced Science, 2016, 4(2), e1600228))。
在一些實施例中，使用先前在Semple等人(2010) Nat. Biotechnol. 28172-28176中所述的自發形成囊泡的調配程序調配脂質奈米顆粒(LNP)以囊封藥劑，諸如小分子藥物、基於蛋白質之藥物或基於核酸之藥物。
在一些實施例中，可對脂質奈米顆粒進行工程改造，以改變顆粒表面特性，使得脂質奈米顆粒可穿透黏膜障壁。黏液位於黏膜組織上，諸如(但不限於)口腔(例如面頰及食道膜及扁桃體組織)、眼、胃腸(例如胃、小腸、大腸、結腸、直腸)、鼻、呼吸道(例如鼻、咽、氣管及支氣管膜)、生殖器(例如陰道、子宮頸及尿道膜)。
經工程改造以滲透黏液的脂質奈米顆粒可包含(但不限於)聚合物材料(亦即，聚合物核心)及/或聚合物-維生素結合物及/或三嵌段共聚物。聚合物材料可包括(但不限於)多元胺、聚醚、聚醯胺、聚酯、聚胺基甲酸酯、聚脲、聚碳酸酯、聚(苯乙烯)、聚醯亞胺、聚碸、聚胺基甲酸酯、聚乙炔、聚乙烯、聚乙烯亞胺、聚異氰酸酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯腈及聚芳酯。聚合物材料可具有生物可降解性及/或生物相容性。聚合物材料可另外經照射。作為非限制性實例，聚合物材料可經γ照射(例如PCT公開案第WO 2012/082165號，該文獻以全文引用的方式併入本文中)。特定聚合物之非限制性實例包括聚(己內酯)(PCL)、乙烯乙酸乙烯酯聚合物(EVA)、聚(乳酸)(PLA)、聚(L-乳酸)(PLLA)、聚(乙醇酸)(PGA)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚(L-乳酸-共-乙醇酸)(PLLGA)、聚(D,L-乳酸交酯)(PDLA)、聚(L-丙交酯)(PLLA)、聚(D,L-乳酸交酯-共-己內酯)、聚(D,L-乳酸交酯-共-己內酯-共-乙交酯)、聚(D,L-乳酸交酯-共-PEO-共-D,L-乳酸交酯)、聚(D,L-乳酸交酯-共-PPO-共-D,L-乳酸交酯)、聚氰基丙烯酸烷酯、聚胺基甲酸酯、聚-L-離胺酸(PLL)、甲基丙烯酸羥丙酯(HPMA)、聚乙二醇、聚-L-麩胺酸、聚(醇酸)、聚酸酐、聚原酸酯、聚(酯醯胺)、聚醯胺、聚(酯醚)、聚碳酸酯、聚伸烷(諸如聚乙烯及聚丙烯)、聚烷二醇(諸如聚(乙二醇)(PEG))、聚環氧烷(PEO)、聚對苯二甲酸烷二酯(諸如聚(對苯二甲酸乙二酯))、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯醚、聚乙烯酯(諸如聚(乙酸乙烯酯))、聚鹵乙烯(諸如聚(氯乙烯)(PVC))、聚乙烯吡咯啶酮、聚矽氧烷、聚苯乙烯(PS)、聚胺基甲酸酯、衍生化纖維素(諸如烷基纖維素、羥基烷基纖維素、纖維素醚、纖維素酯、硝基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素)、丙烯酸聚合物(諸如聚((甲基)丙烯酸甲酯)(PMMA)、聚((甲基)丙烯酸乙酯)、聚((甲基)丙烯酸丁酯、聚((甲基)丙烯酸異丁酯)、聚((甲基)丙烯酸己酯)、聚((甲基)丙烯酸異癸酯)、聚((甲基)丙烯酸月桂酯)、聚((甲基)丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)、聚(丙烯酸十八烷酯)及其共聚物及混合物、聚二氧環己酮及其共聚物、聚羥基烷酸酯、聚反丁烯二酸丙二酯、聚甲醛、泊洛沙姆(poloxamers)、聚(鄰)酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(丙交酯-共-己內酯)及碳酸三亞甲酯、聚乙烯吡咯啶酮。脂質奈米顆粒可用共聚物塗覆或與共聚物締合，諸如(但不限於)嵌段共聚物及(聚(乙二醇))-(聚(環氧丙烷))-(聚(乙二醇))三嵌段共聚物(參見例如美國專利公開案第2012/0121718號及第2010/0003337號；及美國專利第8,263,665號)。共聚物可為公認安全(GRAS)的聚合物且脂質奈米顆粒可以不產生新化學實體的方式形成。舉例而言，脂質奈米顆粒可包含泊洛沙姆塗覆的PLGA奈米顆粒，其在不形成新化學實體的情況下仍然能夠快速滲透人類黏液(Yang等人(2011) Angew. Chem. Int. Ed. 50:2597-2600)。
在一些實施例中，本發明所涵蓋的藥劑可為持續釋放型調配物，諸如囊封於奈米顆粒中，或快速排除型奈米顆粒，且接著可將奈米顆粒或快速排除型奈米顆粒囊封於本文所述及/或此項技術中已知之聚合物、水凝膠及/或外科密封劑中。作為非限制性實例，聚合物、水凝膠或外科密封劑可為PLGA、乙烯乙酸乙烯酯(EVAc)、泊洛沙姆、GELSITE® (Nanotherapeutics, Inc. Alachua, FL)、HYLENEX® (Halozyme Therapeutics, San Diego CA)、外科密封劑，諸如血纖維蛋白原聚合物(Ethicon Inc. Cornelia, GA)、TISSELL® (Baxter International, Inc., Deerfield, IL)、基於PEG之密封劑及COSEAL® (Baxter International, Inc., Deerfield, IL)。可將奈米顆粒囊封於此項技術中已知的任何聚合物中，該聚合物當注入個體中時可形成凝膠。作為非限制性實例，可將奈米顆粒囊封於生物可降解的聚合物基質中。
在一些實施例中，本發明所涵蓋的組合物可調配為控制釋放型奈米顆粒。在一個實例中，用於控制釋放及/或靶向遞送的奈米顆粒調配物可進一步包括至少一層控制釋放包衣。控制釋放包衣包括(但不限於) OPADRY®、聚乙烯吡咯啶酮/乙酸乙烯酯共聚物、聚乙烯吡咯啶酮、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、EUDRAGIT RL®、EUDRAGIT RS®及纖維素衍生物，諸如乙基纖維素水性分散液(AQUACOAT®及SURELEASE®)。在另一實例中，控制釋放及/或靶向遞送調配物可包含至少一種可含有聚陽離子側鏈的可降解聚酯。可降解聚酯包括(但不限於)聚(絲胺酸酯)、聚(L-丙交酯-共-L-離胺酸)、聚(4-羥基-L-脯胺酸酯)及其組合。
在一些實施例中，本發明所涵蓋的組合物可調配為脂質複合體，諸如(但不限於)來自Silence Therapeutics (英國倫敦)的ATUPLEXTM系統、DACC系統、DBTC系統及其他結合物-脂質複合體技術、來自STEMGENT® (Cambridge, MA)之STEMFECTTM，及基於聚乙烯亞胺(PEI)或魚精蛋白之靶向及非靶向治療劑遞送(Aleku等人, (2008) Cancer Res. 68: 9788-9798; Strumberg等人, (2012) Int. J. Clin. Pharmacol. Ther. (2012) 50:76-78; Santel等人, (2006) Gene Ther. 13:1222-1234; Santel等人, (2006) Gene Ther. 13:1360-1370; Gutbier等人, (2010) Pulm. Pharmacol. Ther. 23:334-344; Kaufmann等人, (2010) Microvasc. Res. 80:286-293; Weide等人, (2009) J. Immunother. 32:498-507; Weide等人, (2008) J. Immunother. 31:180-188; Pascolo (2004) Exp. Opin. Biol. Ther. 4:1285-1294; Fotin-Mleczek等人, (2011) J. Immunother. 34:1-15; Song等人, (2005) Nature Biotechnol. 23:709-717; Peer等人, (2007) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 6:4095-4100; 及deFougerolles (2008) Hum. Gene Ther. 19:125-132)。
在一些實施例中，本發明所涵蓋的治療劑及組合物可囊封於合成奈米載體中、連接至合成奈米載體及/或與合成奈米載體締合。合成奈米載體包括(但不限於)以下文獻中所述的彼等物：國際公開案第WO 2010/005740號、第WO 2010/030763號、第WO 2012/13501號、第WO 2012/149252號、第WO 2012/149255號、第WO 2012/149259號、第WO 2012/149265號、第WO 2012/149268號、第WO 2012/149282號、第WO 2012/149301號、第WO 2012/149393號、第WO 2012/149405號、第WO 2012/149411號及第WO 2012/149454號，以及美國專利公開案第2011/0262491號、第2010/0104645號、第2010/0087337號及第2012/0244222號，該等文獻以全文引用的方式併入本文中。合成奈米載體調配物可凍乾，諸如藉由以下文獻中所述的方法凍乾：PCT公開案第WO 2011/072218號及美國專利第8,211,473號，其以全文引用的方式併入本文中。
合成奈米載體可含有釋放本文所述之結合物的反應性基團(例如PCT公開案第WO 2012/0952552號及美國專利公開案第2012/0171229號，該等文獻以全文引用的方式併入本文中)。合成奈米載體可調配成靶向釋放，例如在指定pH下及/或在所需時間間隔之後釋放治療劑。作為非限制性實例，合成奈米顆粒可調配成在24小時之後及/或在pH 4.5下釋放結合物(例如PCT公開案第WO 2010/138193號及第WO 2010/138194號及美國專利公開案第2011/0020388號及第2011/0027217號，該等文獻以全文引用的方式併入本文中)。在一些實施例中，合成奈米載體可調配成用於本文所述之結合物的控制及/或持續釋放。作為非限制性實例，用於持續釋放的合成奈米載體可藉由此項技術中已知、本文所述及/或如以下文獻中所述之方法調配：PCT公開案第WO 2010/138192號及美國專利公開案第2010/0303850號，該等文獻以全文引用的方式併入本文中。 LNP 尺寸
LNP尺寸可藉由此項技術中已知的各種分析方法量測。在一些實施例中，LNP尺寸可使用不對稱流場流動分級分離-多角度光散射(AF4-MALS)量測。在某些實施例中，LNP尺寸可如下量測：根據流體動力學半徑分離組合物中的顆粒，隨後量測經分級分離之顆粒的分子量、流體動力學半徑及均方根半徑。在一些實施例中，LNP尺寸及顆粒濃度可藉由奈米顆粒追蹤分析加以量測。在某些實施例中，將LNP樣品適當地稀釋且注射至顯微鏡載片上。在顆粒緩慢輸注通過視場時，相機記錄散射光。在拍攝影片之後，奈米顆粒追蹤分析藉由追蹤像素及計算擴散係數來處理影片。此擴散係數可換算成顆粒的流體動力學半徑。此類方法亦可對個別顆粒之數目進行計數以得到顆粒濃度。在一些實施例中，LNP尺寸、形態及結構特徵可藉由低溫電子顯微法(「cryo-EM」)測定。
本文所揭示之LNP組合物中的LNP具有約1至約500 nm的尺寸(例如Z-平均直徑)。在一些實施例中，LNP具有約10至約250 nm的尺寸。在其他實施例中，LNP具有約50至約200 nm的尺寸。在一些實施例中，LNP具有約75至約200 nm或約100至200 nm的尺寸。在一些實施例中，LNP具有約75至約150 nm的尺寸。
在一些實施例中，平均脂質粒徑大於300 nm。在一些實施例中，脂質顆粒之直徑為約300 nm或更小、250 nm或更小、200 nm或更小、150 nm或更小、100 nm或更小、或50 nm或更小，例如約50至約150 nm。與較大顆粒相比，較小顆粒在活體內通常展現延長的循環壽命。與較大奈米顆粒相比，較小顆粒到達腫瘤部位的能力增強。在某些此類實施例中，脂質顆粒具有約15至約50 nm之直徑。 承載物
經由LNP組合物遞送的承載物可為生物活性劑。在某些實施例中，承載物為或包含一或多種生物活性劑，諸如抗體(例如單株、嵌合、人類化、奈米抗體及其片段等)、膽固醇、激素、胜肽、蛋白質、化學治療劑及其他類型之抗惡性腫瘤劑、mRNA、低分子量藥物、維生素、輔因子、核苷、核苷酸、寡核苷酸、酶核酸、反義核酸、形成三螺旋體的寡核苷酸、反義DNA或RNA組合物、嵌合DNA:RNA組合物、異位酶、適體、核糖核酸酶、誘餌(decoy)及其類似物、質體及其他類型的載體，及小核酸分子、RNAi藥劑、短干擾核酸(siNA)、短干擾RNA (siRNA)、雙股RNA (dsRNA)、微小RNA (miRNA)、短髮夾RNA (shRNA)及「自複製RNA」(編碼複製酶活性及能夠引導其自身在活體內複製或擴增)分子、胜肽核酸(PNA)、鎖定核酸核糖核苷酸(LNA)、N-𠰌啉基核苷酸、異赤藻糖核酸(TNA)、二醇核酸(GNA)、sisiRNA (小內部分段干擾RNA)及iRNA (不對稱干擾RNA)。上述生物活性劑清單僅具例示性且不希望具有限制性。此類化合物可經純化或部分純化，可為天然存在的或合成的，且可經化學修飾。 脂質奈米顆粒製備方法
在一些實施例中，LNP係藉由將生物活性劑水溶液與基於有機溶劑之脂質溶液混合而形成。適合溶液或溶劑包括或可含有：水、PBS、Tris緩衝液、NaCl、檸檬酸鹽緩衝液、乙酸鹽緩衝液、乙醇、氯仿、乙醚、環己烷、四氫呋喃、甲醇、異丙醇。舉例而言，有機溶劑可為100%乙醇。醫藥學上可接受之緩衝液可用於例如LNP之活體內投藥。在某些實施例中，緩衝液用於將包含LNP之組合物的pH維持在或高於pH 6.5。在某些實施例中，緩衝液用於將包含LNP之組合物的pH維持在或高於pH 7.0。在某些實施例中，組合物具有約7.2至約7.7範圍內之pH。在其他實施例中，組合物具有約7.3至約7.7範圍內或約7.4至約7.6範圍內的pH。在其他實施例中，組合物之pH為約7.2、7.3、7.4、7.5、7.6或7.7。組合物之pH可用微型pH探針進行量測。
在一些實施例中，將低溫保護劑與包含LNP的組合物混合。低溫保護劑之非限制性實例包括蔗糖、海藻糖、甘油、DMSO及乙二醇。包含LNP之組合物可包括至多10%低溫保護劑，諸如蔗糖。在某些實施例中，包含LNP的組合物可包含tris鹽水蔗糖(TSS)。在某些實施例中，包含LNP的組合物可包括約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%低溫保護劑。在某些實施例中，包含LNP的組合物可包括約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%蔗糖。在一些實施例中，包含LNP之組合物可包括緩衝液。在一些實施例中，緩衝液可包含磷酸鹽緩衝液(PBS)、Tris緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液及其混合物。在某些例示性實施例中，緩衝液包含NaCl。在某些實施例中，緩衝液缺乏NaCl。NaCl之例示性量可在約20 mM至約45 mM範圍內。NaCl之例示性量可在約40 mM至約50 mM範圍內。在一些實施例中，NaCl之量為約45 mM。在一些實施例中，緩衝液為Tris緩衝液。Tris之例示性量可在約20 mM至約60 mM範圍內。Tris之例示性量可在約40 mM至約60 mM範圍內。在一些實施例中，Tris之量為約50 mM。在一些實施例中，緩衝液包含NaCl及Tris。LNP組合物之某些例示性實施例在Tris緩衝液含有5%蔗糖及45 mM NaCl。在其他例示性實施例中，包含LNP之組合物可以含有約5% w/v之量的蔗糖、約45 mM NaCl及約50 mM Tris (pH 7.5)。鹽、緩衝液及低溫保護劑的量可變化以便維持總體組合物之滲透重量莫耳濃度。舉例而言，最終滲透重量莫耳濃度可維持低於450 mOsm/L。在其他實施例中，滲透重量莫耳濃度在350與250 mOsm/L之間。某些實施例具有300 +/- 20 mOsm/L或310 +/- 40 mOsm/L之最終滲透重量莫耳濃度。
在一些實施例中，對有機溶劑中之RNA水溶液與脂質溶液利用微流體混合、T混合或逆流混合。在某些此類實施例中，可改變流量、接合點大小、接合點幾何形狀、接合點形狀、管徑、溶液及/或RNA及脂質濃度。LNP或LNP組合物可例如經由透析、離心過濾、切向流過濾或層析加以濃縮或純化。LNP可以例如懸浮液、乳液或凍乾粉末形式儲存。在一些實施例中，LNP組合物係在2至8℃下儲存。在某些態樣中，LNP組合物係在室溫下儲存。在其他實施例中，LNP組合物係冷凍儲存，例如在-20℃或-80℃下儲存。在其他實施例中，LNP組合物係在約0℃至約-80℃範圍內的溫度下儲存。冷凍的LNP組合物可在使用前解凍，例如在冰上、在室溫下或在25℃下解凍。
在一些實施例中，本發明所涵蓋的LNP組合物亦可使用天然及/或合成聚合物調配，以減少或抑制非所需物質(諸如細菌)附著至LNP，或增強LNP的藥物遞送。可用於遞送藥物之聚合物的非限制性實例包括(但不限於) DYNAMIC POLYCONJUGATE® (Arrowhead Research Corp., Pasadena, CA)、獲自MIRUS® Bio (Madison, WI)及Roche Madison (Madison, WI)之調配物、PHASERXTM聚合物調配物(諸如但不限於SMARTT POLYMER TECHNOLOGY™ (Seattle, WA))、DMRI/DOPE、泊洛沙姆、獲自Vical (San Diego, CA)之VAXFECTIN®佐劑、聚葡萄胺糖、獲自Calando Pharmaceuticals (Pasadena, CA)之環糊精、樹枝狀聚合物及聚(乳酸-共-乙醇酸) (PLGA)聚合物、RONDELTM (RNAi/寡核苷酸奈米顆粒遞送)聚合物(Arrowhead Research Corporation, Pasadena, CA)及pH反應性共嵌段共聚物，諸如但不限於PHASERXTM (Seattle, WA)。舉例而言，本發明所涵蓋的藥劑及組合物可調配於包括以下各者之醫藥化合物中：聚(乙烯亞胺)、生物可降解陽離子型脂質聚合物、生物可降解嵌段共聚物、生物可降解聚合物或生物可降解無規共聚物、生物可降解聚酯嵌段共聚物、生物可降解聚酯聚合物、生物可降解聚酯無規共聚物、生物可降解線性共聚物、PAGA、生物可降解交聯陽離子型多嵌段共聚物或其組合。
本發明中使用的聚合物可已經歷處理以減少或抑制非所需物質(諸如細菌)附著於LNPs。藉由此項技術中已知及/或所述及/或PCT公開案第WO 2011/50467號中所述之方法處理該聚合物，該文獻以全文引用的方式併入本文中。 Apo E模擬胜肽
本文所揭示之LNP組合物包含脂蛋白元E模擬胜肽。ApoE模擬胜肽可為單域或雙域胜肽。
本發明揭示包含ApoE受體結合域及脂質結合胜肽的ApoE模擬胜肽。在一些實施例中，ApoE模擬胜肽進一步包含胺基己酸，諸如乙醯化胺基己酸(Ac-Aha)。
在某些實施例中，Ac-Aha位於胜肽之N端。在其他實施例中，可將Aha插入包含A類兩親媒性螺旋域之脂質結合胜肽之間。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含Ac-Aha，其中脂質結合胜肽包含A類兩親媒性螺旋域。舉例而言，A類兩親媒性螺旋域為DWLKAFYDKVAEKLKEAF (SEQ ID NO: 1)、DWLRAFYDKVAEKLREAF (SEQ ID NO: 2)、DWLRALYDKVAEKLREAL (SEQ ID NO: 3)、DLLRAL YDKVAEKLREAW (SEQ ID NO: 4)或FAEKLKEAVKDYFAKLWD (SEQ ID NO: 5)。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含Ac-Aha，其中脂質結合胜肽包含A類兩親媒性螺旋域，其中ApoE之受體結合域可與脂質結合胜肽共價連接。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含Ac-Aha，其中該胜肽係在C端使用醯胺基保護。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含Ac-Aha，其中ApoE之受體結合域可為LRKLRKRLLR (SEQ ID NO: 6)、LRRLRRR LLR (SEQ ID NO: 7)、LRKMRKRLMR (SEQ ID NO: 8)或RLTRKRGLK (SEQ ID NO: 9)。ApoE之受體結合域亦可為(但不限於)LRKLRKRFFR (SEQ ID NO: 17)、LRKLPKRLLR (SEQ ID NO: 18)、LRNVRKRLVR (SEQ ID NO: 19)、MRKLRKRVLR (SEQ ID NO: 20)、LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)、LRKLRKRFFR (SEQ ID NO: 17)、LRKLRKRLLR (SEQ ID NO: 6)或LRKMRKRLMR (SEQ ID NO: 8)。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含Ac-Aha，其中ApoE模擬胜肽可為Ac-Aha-hE18A-NH 2或Ac-Aha-[R]hE18A-NH 2。Ac-Aha-hE18A-NH 2之ApoE模擬胜肽為Ac-Aha-LRKLRKRLLRDWLKAFY DKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 21)。Ac-Aha-[R]hE18A-NH 2之ApoE模擬胜肽為Ac-Aha-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 22)。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含脂肪酸部分、ω胺基脂肪酸部分，或乙醯化ω-胺基脂肪酸部分。
在某些實施例中，ApoE之受體結合域可與脂質結合胜肽共價連接。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽係在C端使用醯胺基加以保護。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽可為： 丁醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 23); 己醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 24); 辛醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 11)； 癸醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 25)； 月桂醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 26)； 肉豆蔻醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 12)； 棕櫚醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 13)； 硬脂醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 27)； 棕櫚油醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 28)； 花生醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 29)； 二十二烷醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 30)； 油醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 14)； 蓖麻油醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 31)； 次亞麻油醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 32)； 異油醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 33)； 鱈油醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 34)； 芥酸醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 35)； 鯨蠟醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 36)； 神經醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 37)； 腎上腺醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 38)； α-次亞麻油醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 39)； γ-次亞麻油醯基-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 40)； EPA-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 41)；或 DHA-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 42)。 在前述內容中，脂肪酸部分顯示於左側且連接至肽LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)。「EPA」表示衍生自5,8,11,14,17-二十碳五烯酸的部分；且「DHA」表示衍生自4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸的部分。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含衍生自天然油或脂肪(例如魚油)的脂肪酸部分，其中ApoE模擬胜肽可為： (魚油)-LRRLRRRLLR-DWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 43)。 在前述內容中，「(魚油)」表示魚油(包括(但不限於)魚油組分，諸如EPA及DHA)中的脂肪酸連接至胜肽LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)。因此，ApoE模擬胜肽為包含衍生自製備所用魚油之脂肪酸基團之胜肽的混合物。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽可為包含脂肪酸之所揭示胜肽中的任一者。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽可為包含乙醯化脂肪酸之所揭示胜肽中的任一者。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含Ac-Aha，其中脂蛋白元E的受體結合域被亂序。ApoE之亂序受體結合域的實例提供於下文中。
在某些實施例中，受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽，其中脂蛋白元E的受體結合域與脂質結合胜肽均被亂序。ApoE之亂序受體結合域及亂序脂質結合胜肽的實例提供於下文中。
脂蛋白元E模擬胜肽具有直接的膽固醇降低效應(藉由向肝臟上的受體提供替代配位體，以清除致動脈粥樣硬化的含有脂蛋白元B之脂蛋白(LDL、VLDL及β-VLDL))與針對動脈壁之直接有益效果。Apo E模擬胜肽可增強膽固醇自動脈壁的移除，從而協同HDL發揮作用，增加貧脂質preβ-HDL的形成，該貧脂質preβ-HDL接受來自巨噬細胞的膽固醇。Apo E模擬胜肽可刺激巨噬細胞介導清除動脈壁中之死細胞及正在死亡之細胞(胞葬作用)，藉由增加PON-1水準及降低血漿脂質氫過氧化物水準來改良HDL品質，減少動脈粥樣硬化病變中的巨噬細胞含量，從而使病變更穩定，且減少動脈壁的炎症。因此，Apo E模擬胜肽使動脈粥樣硬化病變尺寸減小的速度比apoA-I模擬胜肽更快且比抑制素(HMG-CoA還原酶抑制劑)更快。在Apo E模擬胜肽處理的動物中，動脈粥樣硬化病灶持續消退，即使膽固醇水準與生理鹽水處理的動物相同。 脂蛋白元E
脂蛋白元E (Apo E)在富含三酸甘油酯之脂蛋白(諸如極低密度脂蛋白(VLDL)及乳糜微粒)之代謝中起重要作用。脂蛋白元E介導含有Apo E之脂蛋白以高親和力結合至低密度脂蛋白(LDL)受體(Apo B、E受體)及其基因家族成員，包括LDL受體相關蛋白(LRP)、極低密度脂蛋白受體(VLDLR)及Apo E2受體(Apo E2R)。
Apo E為結合脂質且具有兩個主要結構域的蛋白質(Mahley, R.W.等人, J. Lipid Res. 1999, 40:622-630)。X射線晶體學研究已顯示22 kDa胺基端域為4螺旋集束(Wilson, C.等人, Science 1991;252:1817-1822)且含有帶正電荷之受體結合域。為了讓此區域介導極低密度脂蛋白(VLDL)結合至其受體，脂蛋白元必須與脂蛋白表面締合；C端兩親媒性螺旋區域能夠實現此目的。若含有帶正電之受體結合域的4螺旋集束不能向脂蛋白表面敞開，則VLDL在結合至受體時是有缺陷的。因此，Apo E之帶正電的富精胺酸(Arg)叢集域與C端兩親媒性螺旋域係增強致動脈粥樣硬化之含Apo E脂蛋白的攝入所必需的。
Apo E係以分子量為34,200的299個胺基酸殘基蛋白質形式分泌。基於Apo E被凝血酶裂解成兩個片段，最初提出雙域假說來解釋以下事實：Apo E的C端區域(192-299)係其結合至高三酸甘油酯血症VLDL所必需的且N端22 kDa域(1-191)係其結合至LDL-R所必需的。 脂肪酸
本文所揭示之LNP組合物可連接至脂肪酸部分、ω-胺基脂肪酸部分，或乙醯化ω-胺基脂肪酸部分。在各種實施例中，脂肪酸部分、ω-胺基脂肪酸部分或乙醯化ω-胺基脂肪酸部分經由胜肽之N端胺基連接至所揭示的胜肽。
在某些實施例中，脂肪酸部分、ω-胺基脂肪酸部分或乙醯化ω-胺基脂肪酸部分與胜肽之N端胺基之間的鍵聯分別具有下式II至IV所示的結構：
Figure 02_image027
， 其中A為具有2至32個碳原子的脂族基團。在較佳實施例中，脂族基團為烷基。在某些實施例中，脂族基團包含0至3個雙鍵。在某些此類實施例中，脂族基團為烯基。
在某些實施例中，連接至所揭示之胜肽的脂肪酸部分衍生自純化脂肪酸。在一些實施例中，連接至所揭示之胜肽的脂肪酸部分衍生自飽和脂肪酸。在其他實施例中，連接至所揭示之胜肽的脂肪酸部分衍生自不飽和脂肪酸，諸如具有兩個或更多個雙鍵之多不飽和脂肪酸。
衍生脂肪酸部分的例示性脂肪酸包括(但不限於)丁酸、己酸、羊羶酸、癸酸、羊脂酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、十五烷酸、硬脂酸、花生酸、二十二烷酸、芥子酸、二十四烷酸、十七烷酸、肉豆蔻油酸、棕櫚油酸、油酸、鱈油酸、蓖麻油酸、牛油酸、亞麻油酸、次亞麻油酸、α-次亞麻油酸、γ-次亞麻油酸、十八碳三烯酮酸(licanic acid)、順十八碳烯酸(margaroleic acid)、花生酸、鱈油酸、神經酸、花生四烯酸、二十二碳五烯酸(DPA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)及其類似物。
例示性飽和脂肪酸包括(但不限於)丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、十九烷酸、花生酸、二十一烷酸、二十二烷酸、二十三烷酸、二十四烷酸、二十五烷酸、二十六烷酸、二十七烷酸、二十八烷酸、二十九烷酸、三十烷酸、三十一烷酸、三十二烷酸、三十三烷酸、三十四烷酸、三十五烷酸及三十六烷酸。
例示性不飽和脂肪酸包括(但不限於)肉豆蔻油酸、棕櫚油酸、十六碳烯酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、花生四烯酸、(EPA)、芥子酸、二十二碳六烯酸(DHA)及二十二碳五烯酸。
在某些實施例中，連接至所揭示之胜肽的脂肪酸部分衍生自未純化脂肪酸或脂肪酸混合物，諸如天然油或脂肪。典型地，天然油或脂肪為包含一或多種脂肪酸之通常呈疏水性之化合物的非均質混合物。脂肪酸來源可包含天然油或脂肪，諸如(但不限於)動物脂肪、生物油或植物油，諸如豆油、椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、菜籽油、棉籽油、亞麻籽油、葵花籽油、魚油、海藻油及其類似物。
在某些此類實施例中，天然油或脂肪為含有或富含一或多種Ω-3脂肪酸的天然油或脂肪，例如海洋動物油，例如魚油、磷蝦油及海藻油。可使用含有DHA及/或EPA的任何油。在某些實施例中，天然油或脂肪含有至少70重量%或約70重量%的DHA，例如至少75重量%或約75重量%、至少80重量%或約80重量%、至少85重量%或約85重量%、或至少90重量%或約90重量%的DHA。在一些實施例中，以重量計，天然油或脂肪含有5%或約5%與15%或約15%之間的EPA，例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15%的EPA。在某些實施例中，天然油或脂肪含有不超過10%或約10%的EPA或小於10%或約10%的EPA。
在某些實施例中，脂肪酸部分衍生自Ω-3脂肪酸。如本文所用，術語「Ω-3多不飽和脂肪酸」或「Ω-3脂肪酸」係指n-3位置共有碳-碳鍵(亦即，來自分子之甲基末端的第三鍵)的一系列不飽和脂肪羧酸。典型地，其含有約16至約24個碳原子及三至六個碳-碳雙鍵。Ω-3多不飽和脂肪酸可在自然界中發現，且此等天然Ω-3多不飽和脂肪酸的所有碳-碳雙鍵通常皆呈順式組態。
例示性Ω-3脂肪酸包括(但不限於) 7,10,13-十六碳三烯酸(有時縮寫為16:3 (n-3))；9,12,15-十八碳三烯酸(α-次亞麻油酸(ALA)，18:3 (n-3))；6,9,12,15-十八碳四烯酸(硬脂四烯酸(STD)，18:4 (n-3))；11,14,17-二十碳三烯酸(二十碳三烯酸(ETE)，20:3 (n-3))；8,11,14,17-二十碳四烯酸(二十碳四烯酸(ETA)，20:4 (n-3))；5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(二十碳五烯酸(EPA)，(20:5 (n-3))；7,10,13,16,19-二十二碳五烯酸(二十二碳五烯酸(DPA)，22:5 (n-3))；4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(二十二碳六烯酸(DHA)，22:6 (n-3))；9,12,15,18,21-二十四碳五烯酸(二十四碳五烯酸，24:5 (n-3))；及6,9,12,15,18,21-二十四碳六烯酸(二十四碳六烯酸，24:6 (n-3))。二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)發現於自然界的魚油中，且已用於多種飲食/治療組合物中。
考慮了各種長度的脂肪酸。在某些實施例中，脂肪酸包含C6與C24之間、C10與C24之間、C10與C28之間或C10與C32之間的鏈長，包括碳數為奇數的合成脂肪酸。在某些此類實施例中，脂肪酸包含選自C10、C12、C14、C16、C18、C20、C20、C22及C24的鏈長，較佳選自C14、C16及C18的鏈長。在其他實施例中，脂肪酸具有選自C13、C15及C17的鏈長。在某些實施例中，脂肪酸具有4至28個碳。
在本發明之某些實施例中，脂肪酸脂族鏈包含4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30或32個碳原子。
在某些實施例中，脂肪酸係天然存在之脂肪酸。在某些此類實施例中，脂肪酸為短鏈脂肪酸(例如小於六個碳)、中鏈脂肪酸(例如6至12個碳)、長鏈脂肪酸(例如長於12個碳)，或極長鏈脂肪酸(例如長於22個碳)。在一些實施例中，脂肪酸為呈順式組態之不飽和脂肪酸。在其他實施例中，脂肪酸為呈反式組態之不飽和脂肪酸。
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽包含ω-胺基脂肪酸部分。
例示性ω-胺基-脂肪酸部分衍生自ω-胺基-脂肪酸，包括但不限於4-胺基-丁酸、6-胺基-己酸、8-胺基-羊羶酸、10-胺基-羊脂酸(10-胺基-癸酸)、12-胺基-月桂酸(12-胺基-十二烷酸)、14-胺基-肉豆蔻酸(14-胺基-十四烷酸)、14-胺基-肉豆蔻油酸、16-胺基-棕櫚酸(16-胺基-十六烷酸)、18-胺基-硬脂酸、18-胺基-油酸、16-胺基-棕櫚油酸、18-胺基-亞麻油酸、18-胺基-次亞麻油酸及20-胺基-花生四烯酸。在某些實施例中，ω-胺基-脂肪酸部分衍生自6-胺基-己酸。
在其他實施例中，ω-胺基脂肪酸部分為4-胺基-丁醯基、6-胺基-己醯基、8-胺基-辛醯基、10-胺基-癸醯基、12-胺基-月桂醯基、14-胺基-肉豆蔻醯基、14-胺基-肉豆蔻油醯基、16-胺基-棕櫚醯基、18-胺基-硬脂醯基、18-胺基-油醯基、16-胺基-棕櫚油醯基、18-胺基-亞麻油醯基、18-胺基-次亞麻油醯基，或20-胺基-花生四烯醯基。在某些較佳實施例中，ω-胺基脂肪酸部分為6-胺基-己醯基(或替代地稱為6-胺基己醯基)。
在某些實施例中，ω-胺基-脂肪酸部分衍生自具有以下結構的ω-胺基-脂肪酸：
Figure 02_image029
， 其中A為具有2至32個碳原子的脂族基團。在某些實施例中，脂族基團為烷基。在一些實施例中，脂族基團包含0至3個雙鍵。在一些此類實施例中，脂族基團為烯基。在某些較佳實施例中，A為-(CH 2) 5-。
在某些實施例中，ω-胺基-脂肪酸部分經由胜肽之N端胺基連接至胜肽，且在連接至胜肽之後，ω-胺基-脂肪酸部分具有以下結構：
Figure 02_image031
， 其中A為具有2至32個碳原子的脂族基團。在某些實施例中，脂族基團為烷基。在一些實施例中，脂族基團包含0至3個雙鍵。在一些此類實施例中，脂族基團為烯基。在某些較佳實施例中，A為-(CH 2) 5-。
在一些實施例中，ApoE模擬胜肽包含乙醯化ω-胺基脂肪酸部分。在某些實施例中，所揭示之胜肽可連接至所揭示之ω-胺基-脂肪酸中的任一者，且接著進一步在ω-胺基上包含乙醯基部分。
在某些實施例中，ω-胺基-脂肪酸部分經由胜肽之N端胺基連接至胜肽，且在連接至胜肽之後，ω-胺基發生乙醯化，且ω-胺基-脂肪酸部分具有以下結構：
Figure 02_image033
， 其中A為具有2至32個碳原子的脂族基團。在某些實施例中，脂族基團為烷基。在一些實施例中，脂族基團包含0至3個雙鍵。在一些此類實施例中，脂族基團為烯基。在某些較佳實施例中，A為-(CH 2) 5-。
衍生脂肪酸部分的脂肪酸可市購且可藉由不同化學方法製備(Recent Developments in the Synthesis of Fatty Acid Derivatives, Editors: Knothe G及Derksen JTB, AOCS Press 1999, ISBN 1-893997-00-6)。 受體結合域胜肽
Apo E模擬物的受體結合域胜肽可為Apo E之人類受體結合域胜肽。舉例而言，所揭示之Apo E模擬物的受體結合域胜肽可包含胺基酸序列LRKLRKRLLR (SEQ ID NO: 6)、LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)或LRKLRKRFFR (SEQ ID NO: 17)。此類Apo E模擬物之受體結合域胜肽亦可來自選自由以下組成之群的物種：小鼠、兔、猴、大鼠、牛、豬及犬。
可用於所揭示之Apo E模擬物中的受體結合域胜肽實例提供於表1中。
表 1 ：所揭示之 Apo E 模擬物 .
物種 起始殘基 NO: 序列 SEQ ID NO:
人類 141 LRKLR KRLL R 6
兔 134 LRKLR KRLL R 6
猴 141 LRKLR KRLL R 6
小鼠 133 LRK MR KRL M R 8
大鼠 133 LRK MR KRL M R 8
牛 140 LRKL PKRL L R 18
豬 140 LR NVR KRL V R 19
犬 133 MRKLRKR VLR 20
R經修飾 141 LR RLR R RLL R 7
F經修飾 141 LRKLR KR FFR 17
ApoB    RLTRKRGLK 9
表1中之斜體殘基指示相對於人類序列的變化；然而，胺基酸特性係保守的。表1中之加粗斜體殘基指示在該位置處相對於人類序列的差異。
Apo E模擬物的受體結合域胜肽亦可為脂蛋白元B (ApoB)的LDL受體(LDLR)結合域。ApoB的LDL受體(LDLR)結合域可具有序列RLTRKRGLK (SEQ ID NO: 9)。ApoB-100為550,000 Da醣蛋白，其中九個胺基酸(3359-3367)充當LDL受體的結合域(Segrest等人, J. Lipid. Res. 42, 第1346頁-第1367頁 (2001))。LDL結合至LDLR格形蛋白所塗覆之凹點後，經由胞吞被內化且移動至內體中，在內體中pH降低引起受體與LDL解離。受體循環返回至細胞表面，同時LDL移動至溶酶體中，在溶酶體中使顆粒降解(Goldstein等人, Ann. Rev. Cell Biol. 1, 第1頁-第39頁(1985))。ApoB的LDL受體(LDLR)結合域當聯合所揭示之胜肽使用時，亦可如本申請案中針對Apo E所述加以改變及/或修飾。舉例而言，ApoB的LDL受體(LDLR)結合域可聯合所揭示之脂質結合胜肽使用，其中ApoB的LDL受體(LDLR)結合域共價連接至該脂質結合胜肽。另外，ApoB的LDL受體(LDLR)結合域可亂序，逆向，可為如下文所述之域交換胜肽的一部分。 脂質結合胜肽
脂質結合胜肽可單獨或與Apo E模擬胜肽組合使用。用於此等Apo E模擬物的脂質結合胜肽可為(但不限於) A類兩親媒性螺旋胜肽、非極性表面中具有芳族或脂族殘基的apoA-I的A類兩親媒性螺旋胜肽模擬物、小胜肽(包括五胜肽、四胜肽、三胜肽、二胜肽及胺基酸對)、Apo-J (G*胜肽)，及胜肽模擬物，例如如下文所述。 a. A類兩親媒性螺旋胜肽
在某些實施例中，所揭示之方法中使用的脂質結合胜肽包括A類兩親媒性螺旋胜肽，例如如美國專利第6,664,230號及PCT公開案WO 2002/15923及WO 2004/034977中所述，該等文獻以全文引用的方式併入本文中。發現包含A類兩親媒性螺旋的胜肽(「A類胜肽」)能夠緩解動脈粥樣硬化的一或多種症狀以及治療其他病症。
A類胜肽的特徵為形成α螺旋，引起極性殘基與非極性殘基分離，從而形成極性表面及非極性表面，其中帶正電的殘基存在於極性-非極性界面且帶負電的殘基存在於極性表面的中心(參見例如Anantharamaiah (1986) Meth. Enzymol, 128: 626-668)。應注意，apo A-I的第四外顯子當以每匝3.667個殘基摺疊時，產生A類兩親媒性螺旋結構。
命名為18A的一種A類胜肽(參見例如Anantharamaiah (1986) Meth. Enzymol, 128: 626-668)如本文所述經修飾，以產生高效抑制或預防動脈粥樣硬化之一或多種症狀及/或本文所述之其他適應症的可經口投與之胜肽。不受特定理論束縛，咸信所揭示之胜肽可在活體內藉由拾取減少LDL氧化之接種分子來發揮作用。
增加18A疏水性表面上的Phe殘基數目可增強脂質親和力，以藉由以下文獻中所述的計算所測定：Palgunachari等人(1996) Arteriosclerosis, Thrombosis, & Vascular Biol. 16: 328-338。理論上，18A非極性表面上的殘基經Phe系統性取代可產生六種胜肽。具有額外2、3及4個Phe的胜肽分別具有13、14及15個單位的脂質親和力(λ)理論值。然而，若額外Phe自4增加至5，則λ值突增四個單位(至19個λ單位)。增至6或7個Phe將引起不太顯著的增加(分別增至20及21個λ單位)。
製得多種此等A類胜肽，包括命名為4F、D4F、5F及D5F的胜肽及其類似物。多種A類胜肽抑制易患動脈粥樣硬化之小鼠及兔中的病灶發展。另外，胜肽在緩解本文所述之多種病變的一或多種症狀方面顯示不同、但顯著程度的功效。多種此類胜肽說明於表2中。 表 2 ： A 類胜肽.
胜肽名稱 胺基酸序列 SEQ ID NO:
18A D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F 1
2F Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 44
3F Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 45
3F14 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 46
4F Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 47
5F Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 48
6F Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 49
7F Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 50
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 51
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 52
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 53
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 54
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 48
Ac-E-W-L-K-L-F-Y-E-K-V-L-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 55
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-ID-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 56
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 57
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 58
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 59
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 60
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 61
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 62
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 63
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 63
Ac-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 64
Ac-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 64
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 65
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 66
Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 67
Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 68
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 69
Ac-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-NH 2 70
Ac-L-F-Y-E-K-V-L-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 71
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 65
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F- NH 2 73
Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 67
Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 74
Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 69
Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F NH 2 75
Ac-D-W-L-K-A-L-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-L-NH 2 76
Ac-D-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 77
Ac-D-W-F-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 72
Ac-E-W-L-K-A-L-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-L-NH 2 78
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 79
Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH 2 80
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 81
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-F- F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 82
Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F- F-NH 2 83
Ac-D-F-L-K-A-W-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-W-NH 2 84
Ac-E-F-L-K-A-W-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-W-NH 2 85
Ac-D-F- W-K- A-W-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-W-W-NH 2 86
Ac-E-F-W-K-A-W-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-W-W-NH 2 87
Ac-D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F -E-W-A-K-E-A-F-NH 2 88
Ac-D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-NH 2 89
Ac-E-K-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F- NH 2 90
Ac-E-K-W-K-A-V-Y-E-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L- NH 2 91
Ac-D-W-L-K-A-F-V-D-K-F-A-E-K-F-K-E-A-Y- NH 2 92
Ac-E-K-W-K-A-V-Y-E-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-NH 2 93
Ac-D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F-NH 2 94
Ac-E-W-L-K-A-F-V-Y-E-K-V-F-K-L-K-E-F-F-NH 2 95
Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 96
Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 97
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F- NH 2 98
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 99
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH 2 100
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH 2 101
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH 2 102
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH 2 103
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-R-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH 2 104
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-R-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH 2 105
Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH 2 106
Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH 2 107
Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 108
Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH 2 109
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-R-E-A-F-NH 2 110
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-R-E-A-F-NH 2 111
Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH 2 112
Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH 2 113
D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F -P-D-W L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F 114
D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F -P-D-W L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F 115
D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F -P-D-W F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F 116
D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F -P-D-K L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-L-K-E-A-F 117
D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L -P-D-K W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L 118
D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F -P-D-W F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F 119
D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F -P-D-W L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F 120
D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F -P-D-W L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F 121
Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 122
Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-NH 2 123
Ac-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-NH 2 124
Ac-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-NH 2 125
NMA-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-NH 2 126
NMA-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-NH 2 127
NMA-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 128
NMA-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 129
NMA-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH 2 130
NMA-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-NH 2 131
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 48
NMA-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 132
Ac-E-W-L- K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 82
NMA-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 133
Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 134
NMA-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 135
Ac-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 136
NMA-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH 2 137
Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-NH 2 138
NMA-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-NH 2 139
Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-NH 2 140
NMA-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-NH 2 141
Ac-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-NH 2 142
NMA-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-NH 2 143
Ac-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-NH 2 144
NMA-L-K-A- F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-NH 2 145
*連接子加有下劃線；NMA為N-甲基鄰胺基苯甲醯基
在某些實施例中，胜肽包括4F (表2中的D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F (SEQ ID NO:47))的變異體，亦稱為L-4F (其中所有殘基為L型胺基酸)或D-4F (其中一或多個殘基為D型胺基酸)。在本文所述之任一種胜肽中，C端及/或N端及/或內部殘基可用如本文所述的一或多種封端基團封端。
儘管表2中的多種胜肽顯示有保護胺基端的乙醯基或N-甲基鄰胺基苯甲醯基及保護羧基端的醯胺基，但此等保護基團中的任一者可消去及/或經如本文所述的另一種保護基取代。胜肽可包含如本文所述的一或多個D型胺基酸。在某些實施例中，表2中之胜肽的每個胺基酸(例如每個對掌性胺基酸)為D型胺基酸。
亦應注意，表2並非完全包括性的。利用本文提供的教示內容，可常規地產生其他適合的A類兩親媒性螺旋胜肽(例如藉由保守或半保守取代(例如E置換D)、延伸、缺失及其類似方式產生)。因此，舉例而言，可在本文所示的任一或多種胜肽(例如表2中標示為2F、3F、3F 14、4F、5F、6F或7F的胜肽)中產生截斷。因此，舉例而言，A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F (SEQ ID NO: 62)說明包含來自18A之C端之14個胺基酸的胜肽，該18A包含一或多個D胺基酸，而其他胜肽說明其他截斷。
較長胜肽亦適合。此類較長胜肽可整個形成A類兩親媒性螺旋，或A類兩親媒性螺旋(螺旋)可形成胜肽的一或多個域。另外，本發明考慮了胜肽的多聚體形式(例如多聯體)。因此，舉例而言，本文中說明的胜肽可偶聯在一起(直接或經由具有一或多個中間胺基酸的連接子(例如碳連接子，或一或多個胺基酸)偶聯在一起)。說明性聚合物胜肽包括18A-Pro-18A及下表(表2B)中的胜肽，在某些實施例中，該等胜肽包含一或多個D胺基酸，更佳地，其中每個胺基酸為如本文所述的D胺基酸且/或一個或兩個末端被保護。 表 2B ：多聚體胜肽 .
胺基酸序列 SEQ ID NO:
D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F -P-D-W L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F 114
D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F -P-D-W L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F 115
D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F -P-D-W F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F 116
D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F -P-D-K L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-L-K-E-A-F 117
D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L -P-D-K W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L 118
D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F -P-D-W F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F 119
D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F -P-D-W L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F 120
D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F -P-D-W L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F 121
b. apoA-I之A類兩親媒性螺旋胜肽模擬物在非極性表面中具有芳族或脂族殘基
本文所揭示之LNP組合物包含經修飾之A類兩親媒性螺旋胜肽。某些較佳胜肽在非極性表面中心併入一或多個芳族殘基，例如3F Cπ(如存在於4F中)，或在非極性表面中心併入一或多個脂族殘基，例如3F Iπ，參見例如表3。不受特定理論束縛，胜肽3F Cπ之非極性表面上的中心芳族殘基因非極性表面中心存在π電子而可允許水分子滲透至胜肽-脂質複合物之疏水性脂質烷基鏈附近，此又能夠讓活性含氧物(諸如脂質氫過氧化物)進入，從而將其與細胞表面隔開。非極性表面中心具有脂族殘基的胜肽(例如3F Iπ)可以類似地發揮作用，但不如3F Cπ那樣非常有效。
在某些實施例中，胜肽可將促炎性HDL轉化成消炎性HDL或使消炎性HDL的消炎作用更強，且/或減少LDL誘導動脈壁細胞產生單核球趨化活性，此減少的程度等於或大於表2中所示的D4F或其他胜肽。 表 3 ：經修飾之 A 類胜肽 .
名稱 序列
(3F cn) (3F 1n) Ac-DKWKAVYDKFAEAFKEFL-NH 2(SEQ ID NO: 89) Ac-DKLKAFYDKVFEWAKEAF-NH 2(SEQID NO: 88)
c. 其他A類及一些Y類兩親媒性螺旋胜肽.
A類兩親媒性螺旋胜肽的胺基酸組成與一或多種上述A類兩親媒性螺旋胜肽一致。因此，舉例而言，在某些實施例中，本發明考慮了胺基酸組成與4F一致的胜肽。因此，在某些實施例中，本發明包括活性劑，其包含由18個胺基酸組成的胜肽，其中該等18個胺基酸由以下組成：3個丙胺酸(A)、2個天冬胺酸(D)、2個麩胺酸(E)、4個苯丙胺酸(F)、4個離胺酸(K)、1個纈胺酸(V)、1個色胺酸(W)及1個酪胺酸(Y)；且其中該胜肽形成A類兩親媒性螺旋；且保護磷脂以防被氧化劑氧化。在某些實施例中，胜肽包含至少一個「D」胺基酸殘基；且在某些實施例中，胜肽包含所有「D」型胺基酸殘基。多種此類肽說明於表4中。亦考慮此等胜肽的逆向(逆-)、倒轉、逆-倒轉及循環排列形式。表4提供代表性的18個胺基酸長度A類兩親媒性螺旋胜肽的序列及標識符名稱，該等胜肽的胺基酸組成包含3個丙胺酸(A)、2個天冬胺酸(D)、2個麩胺酸(E)、4個苯丙胺酸(F)、4個離胺酸(K)、1個纈胺酸(V)、1個色胺酸(W)及1個酪胺酸(Y)。
在表4中，加下劃線的加粗殘基指示對各種類似物產生的變化。舉例而言，變化可為交換D-E、逆轉W-2、F-3位置，或交換F-6與Y-7位置。 表 4 ： 18 個 胺基酸長度的 A 類兩親媒性螺旋胜肽 .
名稱 序列 SEQ ID NO:
[交換D-E]-4F類似物      
[交換D-E]-1-4F Ac- E WFKAFY E KVA D KFK D AF-NH 2 146
[交換D-E]-2-4F Ac- E WFKAFYDKVADKFK E AF-NH 2 147
[交換D-E]-3-4F Ac-DWFKAFY E KVA D KFKEAF-NH 2 148
[交換D-E]-4-4F Ac-DWFKAFY E KVAEKFK D AF-NH 2 149
[逆轉W-2,F-3位置]      
4F-2 Ac-D FW KAFYDKVAEKFKEAF-NH 2 150
[交換D-E]-1-4F-2 Ac- E FWKAFY E KVA D KFK D AF-NH 2 151
[交換D-E]-2-4F-2 Ac- E FWKAFYDKVADKFK E AF-NH 2 152
[交換D-E]-3-4F-2 Ac-DFWKAFY E KVA D KFKEAF-NH 2 153
[交換D-E]-4-4F-2 Ac-DFWKAFY E KVAEKFK D AF-NH 2 154
[交換F-6與Y-7位置]      
4F-3 Ac-DWFKA YF DKVAEKFKEAF-NH 2 155
[交換D-E]-1-4F-5 Ac- E WFKAYF E KVA D KFK D AF-NH 2 156
[交換D-E]-2-4F-5 Ac- E WFKAYFDKVADKFK E AF-NH 2 157
[交換D-E]-3-4F-5 Ac-DWFKAYF E KVA D KFKEAF-NH 2 158
[交換D-E]-4-4F-5 Ac-DWFKAYFEKVA E KFK D AF-NH 2 159
[交換Y-l與10V位置]      
4F-4 Ac-DWFKAF V DK Y AEKFKEAF-NH 2 160
[交換D-E]-1-4F-4 Ac- E WFKAFV E KYA D KFK D AF-NH 2 161
[交換D-E]-2-4F-4 Ac- E WFKAFVDKYADKFK E AF-NH 2 162
[交換D-E]-3-4F-4 Ac-DWFKAFV E KYA D KFKEAF-NH 2 163
[交換D-E]-4-4F Ac-DWFKAFV E KYAEKFK D AF-NH 2 164
[V-10與A-11交換]      
4-F-5 Ac-DWFKAFYDK AV EKFKEAF-NH 2 165
[交換D-E]-1-4F-5 Ac- E WFKAFY E KAV D KFK D AF-NH 2 166
[交換D-E]-2-4F-5 Ac- E WFKAFYDKAVDKFK E AF-NH 2 167
[交換D-E]-3-4F-5 Ac-DWFKAFY E KAV D KFKEAF-NH 2 168
[交換D-E]-4-4F-5 Ac-DWFKAFY E KAVEKFK D AF-NH 2 169
[A-11與F-14交換]      
4F-6 Ac-DWFKAFYDKV F EK A KEAF-NH 2 170
[交換D-E]-1-4F-6 Ac- E WFKAFY E KVF D KAK D AF-NFI 2 171
[交換D-E]-2-4F-6 Ac- E WFKAFYDKVFDKAK E AF-NH 2 172
[交換D-E]-3-4F-6 Ac-DWFKAFY E KVF D KAKEAF-NH 2 173
[交換D-E]-4-4F-6 Ac-DWFKAFY E KVFEKAK D AF-NH 2 174
[F-14與A-17交換]      
4F-7 Ac-DWFKAFYDKVAEK A KE F F-NH 2 175
[交換D-E]-1-4F-7 Ac- E WFKAFY E KVA D KAK D FF-NH 2 176
[交換D-E]-2-4F-7 Ac- E WFKAFYDKVADKAK E FF-NH 2 177
[交換D-E]-3-4F-7 Ac-DWFKAFY E KVA D KAKEFF-NH 2 178
[交換D-E]-4-4F-7 Ac-DWFKAFY E KVAEKAK D FF-NH 2 179
[A-17與F-18交換]      
4F-8 Ac-DWFKAFYDKVAEKFKE FA -NH 2 180
[交換D-E]-1-4F-8 Ac- E WFKAFY E KVA D KFK D FA-NH 2 181
[交換D-E]-2-4F-8 Ac- E WFKAFYDKVADKFK E FA-NH 2 182
[交換D-E]-3-4F-8 Ac-DWFKAFY E KVA D KFKEFA-NH 2 183
[交換D-E]-4-4F-8 Ac-DWFKAFY E KVAEKFK D FA-NH 2 184
[W-2與A-17交換]      
4F-9 Ac-D A FKAFYDKVAEKFKE W F-NH 2 185
[交換D-E]-1-4F-9 Ac- E AFKAFY E KVA D KFK D WF-NH 2 186
[交換D-E]-2-4F-9 Ac- E AFKAFYDKVADKFK E WF-NH 2 187
[交換D-E]-3-4F-9 Ac-DAFKAFY E KVA D KFKEWF-NH 2 188
[交換D-E]-4-4F-9 Ac-DAFKAFY E KVAEKFK D WF-NH 2 189
[W-2與A-11交換]      
4F-10 Ac-D A FKAFYDKV W EKFKEAF-NH 2 190
[交換D-E]-1-4F-10 Ac- E AFKAFY E KVW D KFK D AF-NH 2 191
[交換D-E]-2-4F-10 Ac- E AFKAFYDKVWDKFK E AF-NH 2 192
[交換D-E]-3-4F-10 Ac-DAFKAFY E KVW D KFKEAF-NH 2 193
[交換D-E]-4-4F-10 Ac-DAFKAFY E KVWEKFK D AF-NH 2 194
[W-2與Y-7交換]      
4F-11 Ac-D Y FKAF W DKVAEKFKEAF-NH 2 195
[交換D-E]-1-4F-11 Ac- E YFKAFW E KVA D KFK D AF-NH 2 196
[交換D-E]-2-4F-11 Ac- E YFKAFWDKVADKFK E AF-NH 2 197
[交換D-E]-3-4F-11 Ac-DYFKAFW E KVA D KFKEAF-NH 2 198
[交換D-E]-4-4F-11 Ac-DYFKAFW E KVAEKFK D AF-NH 2 199
[F-3與A-17交換]      
4F-12 Ac-DW A KAFYDKVAEKFKE F F-NH 2 200
[交換D-E]-1-4F-12 Ac- E WAKAFY E KVA D KFK D FF-NH 2 201
[交換D-E]-2-4F-12 Ac- E WAKAFYDKVADKFK E FF-NH 2 202
[交換D-E]-3-4F-12 Ac-DWAKAFY E KVA D KFKEFF-NH 2 203
[交換D-E]-4-4F-12 Ac-DWAKAFY E KVAEKFK D FF-NH 2 204
[F-6與A-17交換]      
4F-13 Ac-DWFKA A YDKVAEKFKE F F-NH 2 205
[交換D-E]-1-4F-13 Ac- E WFKAAY E KVA D KFK D FF-NH 2 206
[交換D-E] -2-4F-13 Ac- E WFKAAYDKVADKFK E FF-NH 2 207
[交換D-E]-3-4F-13 Ac-DWFKAAY E KVA D KFKEFF-NH 2 208
[交換D-E]-4-4F-13 Ac-DWFKAAY E KVAEKFK D FF-NH 2 209
[Y-7與A-17交換      
4F-14 Ac-DWFKAF A DKVAEKFKE Y F-NH 2 210
[交換D-E]-1-4F-14 Ac- E WFKAFA E KVA D KFK D YF-NH 2 211
[交換D-E]-2-4F-14 Ac- E WFKAFADKVADKFK E YF-NH 2 212
[交換D-E]-3-4F-14 Ac-DWFKAFA E KVA D KFKEYF-NH 2 213
[交換D-E]-4-4F Ac-DWFKAFA E KVAEKFK D YF-NH 2 214
[V-10與A-17交換]      
4F-15 Ac-DWFKAFYDK A AEKFKE V F-NH 2 215
[交換D-E]-1-4F-15 Ac- E WFKAFY E KAA D KFK D VF-NH 2 216
[交換D-E]-2-4F-15 Ac- E WFKAFYDKAADKFK E VF-NH 2 217
[交換D-E]-3-4F-15 Ac-DWFKAFY E KAA D KFKEVF-NH 2 218
[交換D-E]-4-4F-15 Ac-DWFKAFY E KAAEKFK D VF-NH 2 219
[F3與Y-7交換]      
4F-16 Ac-DW Y KAF F DKVAEKFKEAF-NH 2 220
[交換D-E]-1-4F-16 Ac- E WYKAFF E KVA D KFK D AF-NH 2 221
[交換D-E]-2-4F-16 Ac- E WYKAFFDKVADKFK E AF-NH 2 222
[交換D-E]-3-4F-16 Ac-DWYKAFF E KVA D KFKEAF-NH 2 223
[交換D-E]-4-4F-16 Ac-DWYKAFF E KVAEKFK D AF-NH 2 224
[F-3與V-10交換]      
4F-17 Ac-DW V KAFYDK F AEKFKEAF-NH 2 225
[交換D-E]-1-4F-17 Ac- E WVKAFY E KFA D KFK D AF-NH 2 226
[交換D-E]-2-4F-17 Ac- E WVKAFYDKFADKFK E AF-NH 2 227
[交換D-E]-3-4F-17 Ac-DWVKAFY E KFA D KFKEAF-NH 2 228
[交換D-E]-4-4F-17 Ac-DWVKAFY E KFAEKFK D AF-NH 2 229
[Y-7與F-14交換]      
4F-18 Ac-DWFKA F FDKVAEK Y KEAF-NH 2 230
[交換D-E]-1-4F-18 Ac- E WFKAFF E KVA D KYK D AF-NH 2 231
[交換D-E]-2-4F-18 Ac- E WFKAFFDKVADKYK E AF-NH 2 232
[交換D-E]-3-4F-18 Ac-DWFKAFF E KVA D KYKEAF-NH 2 233
[交換D-E]-3-4F-18 Ac-DWFKAFF E KVA D KYKEAF-NH 2 234
[Y-7與F-18交換]      
4F-19 Ac-DWFKAF F DKVAEKFKEA Y -NH 2 235
[交換D-E]-1-4F-19 Ac- E WFKAFF E KVA D KFK D AY-NH 2 236
[交換D-E]-2-4F-19 Ac- E WFKAFFDKVADKFK E AY-NH 2 237
[交換D-E]-3-4F-19 Ac-DWFKAFF E KVA D KFKEAY-NH 2 238
[交換D-E]-4-4F-19 Ac-DWFKAFF E KVAEKFK D AY-NH 2 239
[V-10與F-18交換]      
4F-20 Ac-DWFKAFYDK F AEKFKEA V -NH 2 240
[交換D-E]-1-4F-20 Ac- E WFKAFY E KFA D KFK D AV-NH 2 241
[交換D-E]-2-4F-20 Ac- E WFKAFYDKFADKFK E AV-NH 2 242
[交換D-E]-3-4F-20 Ac-DWFKAFY E KFA D KFKEAV-NH 2 243
[交換D-E]-4-4F-20 Ac-DWFKAFY E KFAEKFK D AV-NH 2 244
[W-2與K13交換]      
4F-21 Ac-D K FKAFYDKVAEKF W EAF-NH 2 245
[交換D-E]-1-4F-21 Ac- E KFKAFY E KVA D KFW D AF-NH 2 246
[交換D-E]-2-4F-21 Ac- E KFKAFYDKVADKFW E AF-NH 2 247
[交換D-E]-3-4F-21 Ac-DKFKAFY E KVA D KFWEAF-NH 2 248
[交換D-E]-4-4F-21 Ac-DKFKAFY E KVAEKFW D AF-NH 2 249
[W-3、F-13與K-2 4F]      
4F-22 Ac-D KW KAFYDKVAEKF F EAF-NH 2 250
[交換D-E]-1-4F-22 Ac- E KWKAFY E KVA D KFF D AF-NH 2 251
[交換D-E]-2-4F-22 Ac- E KWKAFYDKVADKFF E AF-NH 2 252
[交換D-E]-3-4F-22 Ac-DKWKAFY E KVA D KFFEAF-NH 2 253
[交換D-E]-4-4F-22 Ac-DKWKAFYEKVA E KFF D AF-NH 2 254
[K-2、W10、V-13]      
4F-23 Ac-DKF K AFYDK W AE V FKEAF-NH 2 255
[交換D-E]-4F類似物      
[交換D-E]-1-4F-23 Ac- E KFKAFY E KWA D VFK D AF-NH 2 256
[交換D-E]-2-4F-23 Ac- E KFKAFYDKWADVFK E AF-NH 2 257
[交換D-E]-3-4F-23 Ac-DKFKAFY E KWA D VFKEAF-NH 2 258
[交換D-E]-4-4F-23 Ac-DKFKAFY E KWAEVFK D AF-NH 2 259
[K-2、F-13、W-14 4F]      
4F-24 Ac-D K FKAFYDKVAE FW KEAF-NH 2 260
[交換D-E]-4F類似物      
[交換D-E]-1-4F-24 Ac- E KFKAFY E KVA D FWK D AF-NH 2 261
[交換D-E]-2-4F-24 Ac- E KFKAFYDKVADFWK E AF-NH 2 262
[交換D-E]-3-4F-24 Ac-DKFKAFY E KVA D FWKEAF-NH 2 263
[交換D-E]-4-4F-24 Ac-DKFKAFY E KVAEFWK D AF-NH 2 264
逆向4F類似物      
Rev-4F Ac-FAEKFKEAVKDYFAKFWD-NH 2 265
[交換D-E]-1-Rev-4F Ac-FA D KFK D AVK E YFAKFW E -NH 2 266
[交換D-E]-2-Rev-4F Ac-FA D KFKEAVKDYFAKFW E -NH 2 267
[交換D-E]-3-Rev-4F Ac-FAEKFK D AVKEYFAKFWD-NH 2 268
[交換D-E]-4-Rev-4F Ac-FAEKFK D AVKDYFAKFW E -NH 2 269
[A-2與W-17交換]      
Rev-4F-1 Ac-F W EKFKEAVKDYFAKF A D-NH 2 270
[交換D-E]-1-Rev-4F-1 Ac-FW D KFK D AVK E YFAKFA E -NH 2 271
[交換D-E]-2-Rev-4F-1 Ac-FA D KFKEAVKDYFAKFW E -NH 2 272
[交換D-E]-3-Rev-4F-1 Ac-FAEKFK D AVK E YFAKFWD-NH 2 273
[交換D-E]-4-Rev-4F-1 Ac-FAEKFK D AVKDYFAKFW E -NH 2 274
[交換A-2與F-16]      
Rev-4F-2 Ac-F F EKFKEAVKDYFAK A WD-NH 2 275
[交換D-E]-1-Rev-4F-2 Ac-FF D KFK D AVK E YFAKAW E -NH 2 276
[交換D-E]-2-Rev-4F-2 Ac-FF D KFKEAVKDYFAKAW E -NH 2 277
[交換D-E]-3-Rev-4F-2 Ac-FFEKFK D AVK E YFAKAWD-NH 2 278
[交換D-E]-4-Rev-4F-2 Ac-FFEKFK D AVKDYFAKAW E -NH 2 279
[交換F-5與A-8]      
Rev-4F-3 Ac-FAEK A KE F VKDYFAKFWD-NH 2 280
[交換D-E]-1-Rev-4F-3 Ac-FA D KAK D FVK E YFAKFW E -NH 2 281
[交換D-E]-2-Rev-4F-3 Ac-FA D KAKEFVKDYFAKFW E -NH 2 282
[交換D-E]-3-Rev-4F-3 Ac-FAEKAK D FVK E YFAKFWD-NH 2 283
[交換D-E]-4-Rev-4F-3 Ac-FAEKAK D FVKDYFAKFW E -NH 2 284
[交換A-8與V9]      
Rev-4F-4 Ac-FAEKFKE VA KDYFAKFWD-NH 2 285
[交換D-E]-1-Rev-4F-4 Ac-FA D KFK D VAK E YFAKFW E -NH 2 286
[交換D-E]-2-Rev-4F-4 Ac-FA D KFKEVAKDYFAKFW E -NH 2 287
[交換D-E]-3-Rev-4F-4 Ac-FAEKFK D VAK E YFAKFWD-NH 2 288
[交換D-E]-4-Rev-4F-4 Ac-FAEKFK D VAKDYFAKFW E -NH 2 289
[交換V-9與Y-12]      
Rev-4F-5 Ac-FAEKFKEA Y KD V FAKFWD-NH 2 290
[交換D-E]-1-Rev-4F-5 Ac-FA D KFK D AYK E VFAKFW E -NH 2 291
[交換D-E]-2-Rev-4F-5 Ac-FA D KFKEAYKDVFAKFW E -NH 2 292
[交換D-E]-3-Rev-4F-5 Ac-FAEKFK D AYK E VFAKFWD-NH 2 293
[交換D-E]-4-Rev-4F-5 Ac-FAEKFK D AYKDVFAKFW E -NH 2 294
[交換Y-12與F-13]      
Rev-4F-6 Ac-FAEKFKEAVKD FY AKFWD-NH 2 295
[交換D-E]-1-Rev-4F-6 Ac-FA D KFK D AVK EFYAKFW E -NH 2 296
[交換D-E]-2-Rev-4F-6 Ac-FA D KFKEAVKDFYAKFW E -NH 2 297
[交換D-E]-3-Rev-4F-6 Ac-FAEKFK D AVK E FYAKFWD-NH 2 298
[交換D-E]-4-Rev-4F-6 Ac-FAEKFK D AVKDFYAKFW E -NH 2 299
[交換K-6與W-17]      
Rev-4F-7 Ac-FAEKF W EAVKDYFAKF K D-NH 2 300
[交換D-E]-1-Rev-4F-7 Ac-FA D KFW D AVK E YFAKFK E -NH 2 301
[交換D-E]-2-Rev-4F-7 Ac-FA D KFWEAVKDYFAKFK E -NH 2 302
[交換D-E]-3-Rev-4F-7 Ac-FAEKFW D AVK E YFAKFKD-NH 2 303
[交換D-E]-4-Rev-4F-7 Ac-FAEKFW D AVKDYFAKFK E -NH 2 304
[交換F-1與A-2]      
Rev-4F-8 Ac- A F EKFKEAVKDYFAKFWD-NH 2 305
[交換D-E]-1-Rev-4F-8 Ac-AF D KFK D AVK E YFAKFW E -NH 2 306
[交換D-E]-2-Rev-4F-8 Ac-AF D KFKEAVKDYFAKFW E -NH 2 307
[交換D-E]-3-Rev-4F-8 Ac-AFEKFK D AVK E YFAKFWD-NH 2 308
[交換D-E]-4-Rev-4F-8 Ac-AFEKFK D AVKDYFAKFW E -NH 2 309
[F-1與V-9交換]      
Rev-F-9 Ac- V AEKFKEA F KDYFAKFWD-NH 2 310
[交換D-E]-1-Rev-4F-9 Ac-VA D KFK D AFK E YFAKFW E -NH 2 311
[交換D-E]-2-Rev-4F-9 Ac-VA D KFKEAFKDYFAKFW E -NH 2 312
[交換D-E]-3-Rev-4F-9 Ac-VAEKFK D AFK E YFAKFWD-NH 2 313
[交換D-E]-4-Rev-4F-9 Ac-VAEKFK D AFKDYFAKFW E-NH 2 314
[F-1與Y-12交換]      
Rev-4F-10 Ac- Y AEKFKEAVKD F FAKFWD-NH 2 315
[交換D-E]-1-Rev-4F-10 Ac-YA D KFK D AVK E FFAKFW E -NH 2 316
[交換D-E]-2-Rev-4F-10 Ac-YA D KFKEAVKDFFAKFW E -NH 2 317
[交換D-E]-3-Rev-4F-10 Ac-YAEKFK D AVK E FFAKFWD-NH 2 318
[交換D-E]-4-Rev-4F-10 Ac-YAEKFK D AVKDFFAKFW E -NH 2 319
[F-1與A-8交換]      
Rev-4F-11 Ac- A AEKFKE F VKDYFAKFWD-NH 2 320
[交換D-E]-1-Rev-4F-11 Ac-AA D KFK D FVK E YFAKFW E -NH 2 321
[交換D-E]-2-Rev-4F-11 Ac-AA D KFKEFVKDYFAKFW E -NH 2 322
[交換D-E]-3-Rev-4F-11 Ac-AAEKFK D FVK E YFAKFWD-NH 2 323
交換D-E]-4-Rev-4F-11 Ac-AAEKFKDFVK D YFAKFW E -NH 2 324
[A-2與F-5交換]      
Rev-4F-12 Ac-F F EK A KEAVKDYFAKFWD-NH 2 325
[交換D-E]-1-Rev-4F-12 Ac-FF D KAK D AVK E YFAKFW E -NH 2 326
[交換D-E]-2-Rev-4F-12 Ac-FF D KAKEAVKDYFAKFW E -NH 2 327
[交換D-E]-3-Rev-4F-12 Ac-FF-EKAK D AVK E YFAKFWD-NH 2 328
[交換D-E]-4-Rev-4F-12 Ac-FF-EKAK D AVKDYFAKFW E -NH 2 329
[A-2與Y12交換      
Rev-4F-13 Ac-F Y EKFKEAVKD A FAKFWD-NH 2 330
[交換D-E]-1-Rev-4F-13 Ac-FY D KFK D AVK E AFAKFW E -NH 2 331
[交換D-E]-2-Rev-4F-13 Ac-FY D KFKEAVKDAFAKFW E -NH 2 332
[交換D-E]-3-Rev-4F-13 Ac-FYEKFK D AVK E AFAKFWD-NH 2 333
[交換D-E]-4-Rev-4F-13 Ac-FYEKFK D AVKDAFAKFW E -NH 2 334
[A-2與V-9交換]      
Rev-4F-14 Ac-F V EKFKEA A KDYFAKFWD-NH 2 335
[交換D-E]-1-Rev-4F-14 Ac-FV D KFK D AAK E YFAKFW E -NH 2 336
[交換D-E]-2-Rev-4F-14 Ac-FV D KFKEAAKDYFAKFW E -NH 2 337
[交換D-E]-3-Rev-4F-14 Ac-FVEKFK D AAK E YFAKFWD-NH 2 338
[交換D-E]-4-Rev-4F-14 Ac-FVEKFK D AAKDYFAKFW E -NH 2 339
[F-5與Y-12交換]      
Rev-4F-15 Ac-FAEK Y KEAVKD F FAKFWD-NH 2 340
[交換D-E]-1-Rev-4F-15 Ac-FA D KYK D AVK E FFAKFW E -NH 2 341
[交換D-E]-2-Rev-4F-15 Ac-FA D KYKEAVKDFFAKFW E -NH 2 342
[交換D-E]-3-Rev-4F-15 Ac-FAEKYK D AVK E FFAKFWD-NH 2 343
[交換D-E]-4-Rev-4F-15 Ac-FAEKYK D AVKDFFAKFW E -NH 2 344
[F-5與V-9交換]      
Rev-4F-16 Ac-FAEK V KEA F KDYFAKFWD-NH 2 345
[交換D-E]-1-Rev-4F-16 Ac-FA D KVK D AFK E YFAKFW E -NH 2 346
[交換D-E]-2-Rev-4F-16 Ac-FA D KVKEAFKDYFAKFW E -NH 2 347
[交換D-E]-3-Rev-4F-16 Ac-FAEKVK D AFK E YFAKFWD-NH 2 348
[交換D-E]-4-Rev-4F-16 Ac-FAEKVK D AFKDYFAKFW E -NH 2 349
[A-8與Y-12交換]      
Rev-4F-17 Ac-FAEKFKE Y VKD A FAKFWD-NH 2 350
[交換D-E]-1-Rev-4F-17 Ac-FA D KFK D YVK E AFAKFW E -NH 2 351
[交換D-E]-2-Rev-4F-17 Ac-FA D KFKEYVKDAFAKFW E -NH 2 352
[交換D-E]-3-Rev-4F-17 Ac-FAEKFK D YVK E AFAKFWD-NH 2 353
[交換D-E]-4-Rev-4F-17 Ac-FAEKFK D YVKDAFAKFW E -NH 2 354
[V-9與F-13交換]      
Rev-4F-18 Ac-FAEKFKEA F KDY V AKFWD-NH 2 355
[交換D-E]-1-Rev-4F-18 Ac-FA D KFK D AFK E YVAKFW E -NH 2 356
[交換D-E]-2-Rev-4F-18 Ac-FA D KFKEAFKDYVAKFW E -NH 2 357
[交換D-E]-3-Rev-4F-18 Ac-FAEKFK D AFK E YVAKFWD-NH 2 358
[交換D-E]-4-Rev-4F-18 Ac-FAEKFK D AFKDYVAKFW E -NH 2 359
[V-9與F-16交換]      
Rev-4F-19 Ac-FAEKFKEA F KDYFAK V WD-NH 2 360
[交換D-E]-1-Rev-4F-19 Ac-FA D KFK D AFK E YFAKVW E -NH 2 361
[交換D-E]-2-Rev-4F-19 Ac-FA D KFKEAFKDYFAKVW E -NH 2 362
[交換D-E]-3-Rev-4F-19 Ac-FAEKFK D AFK E YFAKVWD-NH 2 363
交換D-E]-4-Rev-4F-19 Ac-FAEKFK D AFKDYFAKVW E -NH 2 364
[Y-12與F-16交換      
Rev-4F-20 Ac-FAEKFKEAVKD F FAK Y WD-NH 2 365
[交換D-E]-1-Rev-4F-20 Ac-FA D KFK D AVK E FFAKYW E -NH 2 366
[交換D-E]-2-Rev-4F-20 Ac-FA D KFKEAVKDFFAKYW E -NH 2 367
[交換D-E]-3-Rev-4F-20 Ac-FAEKFK D AVK E FFAKYWD-NH 2 368
[交換D-E]-4-Rev-4F-20 Ac-FAEKFK D AVKDFFAKYW E -NH 2 369
[W-1、F-6與K-17 Rev 4F]      
Rev-4F-21 Ac- W AEKF F EAVKDYFAKF K D-NH 2 370
[交換D-E]-1-Rev-4F-7 Ac-WA D KFF D AVKEYFAKFK E -NH 2 371
[交換D-E]-2-Rev-4F-7 Ac-WA D KFFEAVKDYFAKFK E -NH 2 372
[交換D-E]-3-Rev-4F-7 Ac-WAEKFF D AVK E YFAKFKD-NH 2 373
交換D-E]-4-Rev-4F-7 Ac-WAEKFF D AVKDYFAKFK E -NH 2 374
[W-5, F-6與K-17 Rev-4F]      
Rev-4F-22 Ac-FAEK WF EAVKDYFAKF K D-NH 2 375
[交換D-E]-1-Rev-4F-22 Ac-FA D KWF D AVK E YFAKFK E -NH 2 376
[交換D-E]-2-Rev-4F-22 Ac-FA D KWFEAVKDYFAKFK E -NH 2 377
[交換D-E]-3-Rev-4F-22 Ac-FAEKWF D AVK E YFAKFKD-NH 2 378
[交換D-E]-4-Rev-4F-22 Ac-FAEKWF D AVKDYFAKFK E -NH 2 379
[V-6, W-9, K-17 Rev-4F]      
Rev-4F-23 Ac-FAEKF V EA W KDYFAKF K D-NH 2 380
[交換D-E]-1-Rev-4F-23 Ac-FA D KFV D AWK E YFAKFK E -NH 2 381
[交換D-E]-2-Rev-4F-23 Ac-FA D KFVEAWKDYFAKFK E -NH 2 382
[交換D-E]-3-Rev-4F-23 Ac-FAEKFV D AWK E YFAKFKD-NH 2 383
[交換D-E]-4-Rev-4F-23 Ac-FAEKFV D AWKDYFAKFK E -NH 2 384
[Y-2, A-4, W-12, K-17 Rev-4F]      
Rev-4F-24 Ac-F Y EKF A EAVKD W FAKF K D-NH 2 385
[交換D-E]-1-Rev-4F-24 Ac-FY D KFA D AVK E WFAKFKE-NH 2 386
[交換D-E]-2-Rev-4F-24 Ac-FY D KFAEAVKDWFAKFK E -NH 2 387
[交換D-E]-3-Rev-4F-24 Ac-FYEKFA D AVK E WFAKFKD-NH 2 388
[交換D-E]-4-Rev-4F-24 Ac-FYEKFA D AVKDWFAKFK E -NH 2 389
熟習此項技術者可容易鑑別具有生物活性的適用胜肽。因此，舉例而言，已準確地鑑別出以下胜肽具有活性：3F1；3F2；4F、其逆向(逆)形式及其逆-倒轉形式。脂質結合胜肽可包含具有18個胺基酸長度且形成A類兩親媒性螺旋的胜肽。在一些實施例中，胜肽包含以下胺基酸組成：2個天冬胺酸、2個麩胺酸、4個離胺酸、1個色胺酸、1個酪胺酸、不超過一個白胺酸、不超過1個纈胺酸、不少於1個且不超過3個丙胺酸，且其中3至6個胺基酸來自以下群組：苯丙胺酸、α-萘胺、β-萘胺、組胺酸。在一些實施例中，在A類兩親媒性螺旋之螺旋輪示意圖中，胜肽在極性表面上包含9或10個胺基酸。在一些實施例中，胜肽包含在中性pH下帶有正電荷的4個胺基酸。在一些實施例中，極性表面與非極性表面之間的界面處存在兩個帶正電殘基。在一些實施例中，存在於極性表面上之四個帶正電殘基中的兩個鄰接。在一些實施例中，非極性表面上的兩個胺基酸殘基來自以下群組：苯丙胺酸、α-萘胺、β-萘胺、組胺酸。在一些實施例中，非極性表面上的兩個胺基酸殘基亦鄰接，且若來自該組的4個或更多個胺基酸存在於非極性表面上，則來自該組的至少2個殘基亦不鄰接。在一些情況下，所有酸性胺基酸皆為麩胺酸，而非兩個天冬胺酸及兩個麩胺酸。在一些實施例中，脂質結合胜肽可為18A，其中18A中的各酸性胺基酸為Glu殘基。
揭示某些Y類以及A類兩親媒性螺旋胜肽。Y類兩親媒性螺旋胜肽已為熟習此項技術者所知(參見例如Segrest等人(1992) J. Lipid Res. 33: 141-166; Oram及Heinecke (2005) Physiol Rev. 85: 1343-1372，及類似文獻)。此等胜肽包括(但不限於)式V所述的形成A類兩親媒性螺旋或Y類兩親媒性螺旋之18胺基酸肽： D X X K Y X X D K X Y D K X K D Y X            (V) 其中D獨立地為Asp或Glu；K獨立地為Lys或Arg；X獨立地為Leu、norLeu、Val、Ile、Trp、Phe、Tyr、β-Nal或α-Nal，且所有X殘基皆位於非極性表面上(例如當檢視螺旋輪圖時)，但其中一個殘基可位於極性表面上的兩個K殘基之間；Y獨立地為Ala、His、Ser、Gln、Asn或Thr非極性表面(例如當檢視螺旋輪圖時)，且Y獨立地為極性表面上的一個Ala、一個His、一個Ser、一個Gln、一個Asn或極性表面上的一個Thr (例如當檢視螺旋輪圖時)，其中不超過兩個K鄰接(例如當檢視螺旋輪圖時)；且其中不超過3個D鄰接(例如當檢視螺旋輪圖時)且第四個D與其他D被Y分隔。此類代表性胜肽(包括具有組胺酸及/或α-及/或β-萘胺的胜肽)顯示於表5中。亦考慮此等胜肽的逆向(逆-)、倒轉、逆-倒轉及循環排列形式。 表 5 ： Y 類兩親媒性螺旋胜肽 .
簡稱 胜肽序列 SEQ ID NO:
[A-5＞H]4F Ac-DWFKHFYDKVAEKFKEAF-NH 2 390
[A-5＞H、D-E交換] 4F Ac-EWFKHFYEKVADKFKDAF-NH 2 391
[A-5＞H、D-1＞E]4F Ac-EWFKHFYDKVAEKFKEAF-NH 2 392
[A-5＞H、D-8＞E]4-F Ac-DWFKHFYEKVAEKFKEAF-NH 2 393
[A-5＞H、E-12＞D]4F Ac-DWFKHFYDKVADKFKEAF-NH 2 394
[A-5＞H、E-16＞D]4F Ac-DWFKHFYDKVAEKFKDAF-NH 2 395
[F-3＞H、A-5＞F]-4F Ac-DWHKFFYDKVAEKFKEAF-NH 2 396
[F-3＞H、A-5＞F、D-E交換]-4F Ac-EWHKFFYEKVADKFKDAF-NH 2 397
[F-3＞H、A-5＞F、D-1＞E]-4F Ac-EWHKFFYDKVAEKFKEAF-NH 2 398
[F-3＞H、A-5＞F、D-8＞E]-4F Ac-DWHKFFYEKVAEKFKEAF-NH 2 399
[F-3＞H、A-5＞F、E- 12＞D]-4F Ac-DWHKFFYDKVADKFKEAF-NH 2 400
[F-3＞H、A-5＞F、E-16＞D]-4F Ac-DWHKFFYDKVAEKFKDAF-NH 2 401
[A-5＞F、F-6＞H]4F Ac-DWFKFHYDKVAEKFKEAF-NH 2 402
[A-5＞F、F-6＞H、D-E交換]4F Ac-EWFKFHYEKVADKFKDAF-NH 2 403
[[A-5＞F、F-6＞H、D- 1＞E]4F Ac-EWFKFHYDKVAEKFKEAF-NH 2 404
[A-5＞F、F-6＞H、D-8＞E]4F Ac-DWFKFHYEKVAEKFKEAF-NH 2 405
[A-5＞F、F-6＞H、E-12＞D]4F Ac-DWFKFHYDKVADKFKEAF-NH 2 406
[A-5＞F、F-6＞H、E- 16＞D]4F Ac-DWFKFHYDKVAEKFKDAF-NH 2 407
[A-5＞V、V-10＞H]4F Ac-DWFKVFYDKHAEKFKEAF-NH 2 408
[A-5＞V、V-10＞H、D-E交換]4F Ac-EWFKVFYEKHADKFKDAF-NH 2 409
[A-5＞V、V-10＞H、D-1＞E]4F Ac-EWFKVFYDKHAEKFKEAF-NH 2 410
[A-5＞V、V-10＞H、D-8＞E]4F Ac-DWFKVFYEKHAEKFKEAF-NH 2 411
[A-5＞V、V-10＞H、E-12＞D]4F Ac-DWFKVFYDKHADKFKEAF-NH 2 412
[A-5＞V、V-10＞H、E16＞D]4F Ac-DWFKVFYDKHAEKFKDAF-NH 2 413
[[A-17＞H]4F Ac-DWFKAFYDKVAEKFKEHF-NH 2 414
[A-17＞H、D-E交換]4F Ac-EWFKAFYEKVADKFKDHF-NH 2 415
[[A-17＞H、D-1＞E]4F Ac-EWFKAFYDKVAEKFKEHF-NH 2 416
[[A-17＞H、D-8＞E]4F Ac-DWFKAFYEKVAEKFKEHF-NH 2 417
[[A-17＞H、E-12＞D]4F Ac-DWFKAFYDKVADKFKEHF-NH 2 418
[[A-17＞H、E16＞D]4F Ac-DWFKAFYDKVAEKFKDHF-NH 2 419
[A-17＞F、F-18＞H]4F Ac-DWFKAFYDKVAEKFKEFH-NH 2 420
[A-17＞F、F-18＞H、D-E交換]4F Ac-EWFKAFYEKVADKFKDFH-NH 2 421
[A-17＞F、F-18＞H、D-1＞E]-4F Ac-EWFKAFYDKVAEKFKEFH-NH 2 422
[A-17＞F、F-18＞H]4F Ac-DWFKAFYDKVAEKFKEFH-NH 2 423
[A-17＞F、F-18＞H、D-8＞E]-4F Ac-DWFKAFYEKVAEKFKEFH-NH 2 424
[A-17＞F、F-18＞H、E-12＞D]4F Ac-DWFKAFYDKVAEKFKEFH-NH 2 425
[A-17＞F、F-18＞H]、E-16＞D]-4F Ac-DWFKAFYDKVAEKFKDFH-NH 2 426
Rev-4F Ac-FAEKFKEAVKDYFAKFWD-NH 2 427
[A-2＞H]Rev4F Ac-FHEKFKEAVKDYFAKFWD-NH 2 428
Rev-[A-2＞H、D＞E]-4F Ac-FHEKFKEAVKEYFAKFWE-NH 2 429
Rev-[A-2＞H、E＞D]4F Ac-FHDKFKDAVKDYFAKFWD-NH 2 430
[A-2＞H、D-E交換]Rev-4F Ac-FHDKFKDAVKEYFAKFWE-NH 2 431
[A-2＞H、E-3＞D]Rev-4F Ac-FHDKFKEAVKDYFAKFWD-NH 2 432
[A-2＞H、E-7＞D]Rev-4F Ac-FHEKFKDAVKDYFAKFWD-NH 2 433
[A-2＞2H、D-11＞E]Rev-4F Ac-FHEKFKEAVKEYFAKFWD-NH 2 434
[A-2＞H、D-18＞E]Rev-4F Ac-FHEKFKEAVKDYFAKFWE-NH 2 435
[F-1＞H、A-2＞F]Rev-4F Ac-HFEKFKEAVKDYFAKFWD-NH 2 436
[F-1＞H、A-2＞F,D-E交換]Rev-4F Ac-HFDKFKDAVKEYFAKFWE-NH 2 437
[F-1＞H、A-2＞F、D＞E]Rev-4F Ac-HFEKFKEAVKEYFAKFWE-NH 2 438
[F-1＞H、A-2＞F、E-3＞D]Rev-4F Ac-HFDKFKEAVKDYFAKFWD-NH 2 439
[F-1＞H、A-2＞F、E-7＞D]Rev-4F Ac-HFEKFKDAVKDYFAKFWD-NH 2 440
[F-1＞H、A-2＞F、D-11＞E]Rev-4F Ac-HFEKFKEAVKEYFAKFWD-NH 2 441
[F-1＞H、A-2＞F、D-18＞E]Rev-4F Ac-HFEKFKEAVKDYFAKFWE-NH 2 442
[A-2＞F、F-5＞H] Rev D-4F Ac-FFEKHKEAVKDYFAKFWD-NH 2 443
[A-2＞F、F-5＞H、D-E交換]Rev D-4F Ac-FFDKHKDAVKEYFAKFWE-NH 2 444
[A-2＞F、F-5＞H、D＞E]Rev D-4F Ac-FFEKHKEAVKEYFAKFWE-NH 2 445
[A-2＞F、F-5＞H、E＞D]Rev D-4F [ Ac-FFDKHKDAVKDYFAKFWD-NH 2 446
A-2＞F、F-5＞H、E-3＞D]Rev Ac-FFDKHKEAVKDYFAKFWD-NH 2 447
D-4F [A-2＞F、F-5＞H、D-11＞E]Rev D-4F Ac-FFEKHKEAVKEYFAKFWD-NH 2 448
[A-2＞F、F-5＞H、D-18＞E]Rev D-4F Ac-FFEKHKEAVKDYFAKFWE-NH 2 449
[A-2＞V、V-9＞H]Rev D-4F Ac-FVEKFKEAHKDYFAKFWD-NH 2 450
[A-2＞V、V-9＞H、D- E交換]Rev D-4F Ac-FVDKFKDAHKEYFAKFWE-NH 2 451
[A-2＞V、V-9＞H、D＞E]Rev D-4F Ac-FVEKFKEAHKEYFAKFWE-NH 2 452
[A-2＞V、V-9＞H、E＞D]Rev D-4F Ac-FVDKFKDAHKDYFAKFWD-NH 2 453
[A-2＞V、V-9＞H、E-3＞D]Rev D-4F Ac-FVDKFKEAHKDYFAKFWD-NH 2 454
[A-2＞V、V-9＞H、E-7＞D]Rev D-4F Ac-FVEKFKDAHKDYFAKFWD-NH 2 455
[A-2＞V、V-9＞H、D-11＞E]Rev D-4F Ac-FVEKFKEAHKEYFAKFWD-NH 2 456
[A-2＞V、V-9＞H、D-18＞E]Rev D-4F Ac-FVEKFKEAHKDYFAKFWE-NH 2 457
[A-8＞H]Rev-4F Ac-FAEKFKEHVKDYFAKFWD-NH 2 458
[A-8＞H、D-E交換]Rev-4F Ac-FADKFKDHVKEYFAKFWE-NH 2 459
[A-8＞H、D＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEHVKEYFAKFWE-NH 2 460
[A-8＞H、E＞D]Rev-4F Ac-FADKFKDHVKDYFAKFWD-NH 2 461
[A-8＞H、E-3＞D]Rev-4F Ac-FADKFKEHVKDYFAKFWD-NH 2 462
[A-8＞H、E-7＞D]Rev-4F Ac-FAEKFKDHVKDYFAKFWD-NH 2 463
[A-8＞H、D-11＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEHVKEYFAKFWD-NH 2 464
[A-8＞H、D-18＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEHVKDYFAKFWE-NH 2 465
[A-8＞F、F-13＞H]Rev-4F Ac-FAEKFKEFVKDYHAKFWD-NH 2 466
[A-8＞F、F-13＞H、D-E交換]Rev-4F Ac-FADKFKDFVKEYHAKFWE-NH 2 467
[A-8＞F、F-13＞H、E-3＞D]Rev-4F Ac-FADKFKEFVKDYHAKFWD-NH 2 468
[A-8＞F、F-13＞H、E-7＞D]Rev-4F Ac-FAEKFKDFVKDYHAKFWD-NH 2 469
[A-8＞F、F-13＞H、E＞D]Rev-4F Ac-FADKFKDFVKDYHAKFWD-NH 2 470
[A-8＞F、F-13＞H、D＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEFVKEYHAKFWE-NH 2 471
[A-8＞F、F-13＞H、D-11＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEFVKEYHAKFWD-NH 2 472
[A-8＞F、F-13＞H、D-18＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEFVKDYHAKFWE-NH 2 473
[A-8＞F、F16＞H]Rev-4F Ac-FAEKFKEFVKDYFAKHWD-NH 2 474
[A-8＞F、F16＞H、D-E交換]Rev-4F Ac-FADKFKDFVKEYFAKHWE-NH 2 475
[A-8＞F、F16＞H、D＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEFVKEYFAKHWE-NH 2 476
[A-8＞F、F16＞H、E＞D]Rev-4F Ac-FADKFKDFVKDYFAKHWD-NH 2 477
[A-8＞F、F16＞H、E- 3＞D]Rev-4F Ac-FADKFKEFVKDYFAKHWD-NH 2 478
[A-8＞F、F16＞H、E-7＞D]Rev-4F Ac-FAEKFKDFVKDYFAKHWD-NH 2 479
[A-8＞F、F16＞H、D- 11＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEFVKEYFAKHWD-NH 2 480
[A-8＞F、F16＞H、D-18＞E]Rev-4F Ac-FAEKFKEFVKDYFAKHWE-NH 2 481
具有β-Nph之A類4F及Rev 4F類似物之實例顯示如下。類似地，可設計α-Nph類似物。另外，可將His併入Nph類似物。D＞E類似物、E＞D類似物及D -E交換類似物具有額外可能性。
Figure 02_image035
Figure 02_image037
如上文關於4Nph所述，下文針對各種類似物示出最少7種額外類似物。
Figure 02_image039
對於下文所述的各種類似物，藉由交換D-E、D＞E及E＞D及單一D或E類似物可存在最少7種額外類似物，如上文所述。
Figure 02_image041
Figure 02_image043
對於下述類似物，藉由併入His或α-Nph及β-Nph可存在額外類似物。
Figure 02_image045
Figure 02_image047
對於下述各種類似物，可存在額外的H及Nph類似物(使用上述實例)。各種類似物可產生具有上述變化的7種類似物。
Figure 02_image049
Figure 02_image051
Figure 02_image053
亦應注意，除本文中鑑別的相應天然胺基酸之外或作為此等天然胺基酸的替代，本文所述之任一種胜肽亦可包含非天然胺基酸。此類修飾包括(但不限於)乙醯化、醯胺化、甲醯化、甲基化、硫酸化及其類似修飾。說明性非天然胺基酸包括(但不限於)鳥胺酸、正白胺酸、正纈胺酸、N-甲基纈胺酸、6-N-甲基離胺酸、N-甲基異白胺酸、N-甲基甘胺酸、肌胺酸、肌苷、別異白胺酸、異鎖鏈離胺酸、4-羥基脯胺酸、3-羥基脯胺酸、別羥基離胺酸、羥基離胺酸、N-乙基天冬醯胺酸、N-乙基甘胺酸、2,3-二胺基丙酸、2,2'-二胺基丙酸、鎖鏈離胺酸、2,4-二胺基丁酸、2-胺基庚二酸、3-胺基異丁酸、2-胺基異丁酸、2-胺基庚酸、6-胺基己酸、4-胺基丁酸、2-胺基丁酸、β-丙胺酸、3-胺基己二酸、2-胺基己二酸及其類似物。在某些實施例中，本文所述胜肽中的一或多個天然胺基酸可經相應的非天然胺基酸取代(例如如上文所述)。
在某些實施例中，本發明特別考慮了使用經修飾之離胺酸。此類修飾包括(但不限於) ε離胺酸的生物素修飾及/或ε離胺酸的甲基化。包含ε甲基化離胺酸的說明性胜肽包括(但不限於)：Ac-D-W-F-K(eCH 3) 2-A-F-Y-D-K(eCH 3) 2-V-A-E-K(eCH 3)- 2-F-K(eCH 3) 2-E-A-F-NH(CH 3) 2(SEQ ID NO: 622)及Ac-DWFK(eCH 3) 2AFYDK(eCH 3) 2VAEK(eCH 3) 2FK (eCH 3) 2EAF-NH(CH 3) (SEQ ID NO: 623)。經修飾之其他胺基酸包括(但不限於)鳥胺酸類似物及高胺基丙胺酸類似物(作為離胺酸中之(CH 2) 4--NH 2的替代，其可為Haa中的--(CH 2) 2--NH 2及Orn中的--(CH 2) 3--NH 2]及其類似物。應注意，此等修飾具說明性而非旨在限制。具有經修飾之胺基酸的說明性4F類似物顯示於表6中。 表 6 ：包含經修飾之胺基酸的說明性 4F 類似物 . 4F 的 εN- 二甲基 -Lys 衍生物 (εN-Dime)
Ac-D-W-F-K(εN-Dime)-A-F-Y-D-K(εN-Dime)-V-A-E-K(εN-Dime)-F-K(εN- Dime)-E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 624)
Ac-D-W-F-K-(εN-Dime)-A-F-Y-D-K(εN-Dime)-V-A-E-K(εN-Dime)-F-K((εN- Dime)-E-A-F-NH-Me (SEQ ID NO: 625)
Ac-D-W-F-K-(εN-Dime)-A-F-Y-D-K(εN-Dime)-V-A-E-K(εN-Dime)-F-K(εN- Dime)-E-A-F-N-(Me) 2(SEQ ID NO: 626)
4F 的 εN- 二乙基 -Lys 衍生物 (εN-Diet)
Ac-D-W-F-K(εN-Diet) -A-F-Y-D-K(εN-Diet)-V-A-E-K(εN-Diet)-F-K(εN-Diet)- E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 627)
Ac-D-W-F-K(εN -Diet)-A-F-Y-D-K(εN -Diet)-V-A-E-K(εN -Diet)-F-K(εN -Diet)- E-A-F-NH-Et (SEQ ID NO: 628)
Ac-D-W-F-K(εN -Diet)-A-F-Y-D-K(εN -Diet)-V-A-E-K(εN -Diet)-F-K(εN -Diet)- E-A-F-NH-(Et) 2(SEQ ID NO: 629)
4F 的 εN- 單甲基 -Lys 衍生物 (εN-Me)
Ac-D-W-F-K(εN -Me)-A-F-Y-D-K(εN -Me)-V-A-E-K(εN -Me)-F-K(εN -Me)- E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 630)
Ac-D-W-F-K(εN -Me)-A-F-Y-D-K(εN -Me)-V-A-E-K(εN -Me)-F-K(εN -Me)- E-A-F-NH-Me (SEQ ID NO: 631)
Ac-D-W-F-K(εN -Me)-A-F-Y-D-K(εN -Me)-V-A-E-K(εN -Me)-F-K(εN -Me)- E-A-F-N-(Me) 2(SEQ ID NO: 632)
4F 的 εN- 乙基 Lys 衍生物 (εN-Et)
Ac—D-W-F-K(εN -Et) -A-F-Y-D-K(εN -Et)-V-A-E-K(εN -Et)-F-K(εN -Et)-E- A-F-NH 2(SEQ ID NO: 633)
Ac—D-W-F-K(εN -Et)-A-F-Y-D-K(εN -Et)-V-A-E-K(εN -Et)-F-K(εN -E0-E- A-F-NH-Et (SEQ ID NO: 634)
Ac—D-W-F-K(εN -Et)-A-F-Y-D-K(εN -Et)-V-A-E-K(εN -Et)-F-K(εN -Et)-E- A-F-NH-(Et) 2(SEQ ID NO: 635)
4F 的 HomoLys 類似物 (hK) (--CH 2) 5-NH 2
Ac-D-W-F-hK-A-F-Y-D-hK-V-A-E-hK-F-hK-E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 636)
Ac-D-W-F-hK(εN-Dime)-A-F-Y-D-hK(εN -Dime)-V-A-E-hK(εN -Dime)-F- hK(εN -Dime)-E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 637)
Ac-D-W-F-hK(εN -Dime)-A-F-Y-D-hK(εN -Dime)-V-A-E-hK(εN -Dime)-F- hK(εN -Dime)-E-A-F-N-(Me) 2(SEQ ID NO: 638)
Ac-D-W-F-hK(εN -Dime) - A -F -Y - D - hK(εN -Dime)-V-A-E-hK(εN -Dime)-F- hK(εN -Dime)-E-A-F-NH-Me (SEQ ID NO: 639)
Ac—D-W-F-hK(εN -Diet)-A-F-Y-D-hK(εN -Diet)-V-A-E-hK(εN -Diet)-F- hK(εN -Diet)-E-A-F-NH-Et (SEQ ID NO: 640)
Ac-D-W-F-hK(εN -Me)-A-F-Y-D-hK(εN -Me)-V-A-E-hK(εN -Me)-F- hK(εN -Me)-E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 641)
Ac-D-W-F-hK(εN -Me)-A-F-Y-D-hK(εN -Me)-V-A-E-hK(εN -Me)-F- hK(εN -Me)-E-A-F-NH-Me (SEQ ID NO: 642)
Ac-D-W-F-hK(εN -Me)-A-F-Y-D-hK(εN -Me)-V-A-E-hK(εN -Me)-F- hK(εN -Me)-E-A-F-N-(Me) 2(SEQ ID NO: 643)
Ac-D-W-F-hK(εN -Et)-A-F-Y-D-hK(εN -Et)-V-A-E-hK(εN -Et)-F- hK(εN -Et)-E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 644)
Ac-D-W-F-hK(εN-Et-A-F-Y-D-hK(εN -Et)-V-A-E-hK(εN -Et)-F- hK(εN -Et)-E-A-F-NH-Et (SEQ ID NO: 645)
Ac-D-W-F-hK(εN -Et)-A-F-Y-D-hK(εN -Et)-V-A-E-hK(εN -Et)-F- hK(εN -Et)-E-A-F-NH-(Et) 2(SEQ ID NO: 646)
其中K被O置換的4F類似物(O=鳥胺酸，--(CH 2) 3-NH 2)
Ac-D-W-F-O-A-F-Y-D-O-V-A-E-O-F-O-E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 647)
Ac-D-W-F-O(δN-Dime)  -A -F- -Y- D-O(δN-Dime)-V-A-E-O(δN -Dime)-F-O(δN - Dime)-E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 648)
Ac-D-W-F-O(δN -Dime)-A-F-Y-D-O(δN -Dime)-V-A-E-O(δN -Dime)-F-O(δN - Dime)-E-A-F-N-(Me) 2(SEQ ID NO: 649)
Ac-D-W-F-O(δN -Dime)-A-F-Y-D-O(δN -Dime)-V-A-E-O(δN -Dime)-F-O(δN - Dime)-E-A-F-NH-Me (SEQ ID NO: 650)
Ac-D-W-F-O(δN -Diet)-A-F-Y-D-O(δN -Diet)-V-A-E-O(δN -Diet)-F-O(δN - Diet)-E-A-F-NH-Et (SEQ ID NO: 651)
Ac-D-W-F-O(δN -Me)-A-F-Y-D-O(δN -Me)-V-A-E-O(δN -Me)-F-O(δN -Me)- E-A-F-NH 2(SEQ ID NO: 652)
Ac-D-W-F-O(δN -Me)-A-F-Y-D-O(δN -Me)-V-A-E-O(δN -Me)-F-O(δN -Me)- E-A-F-NH-Me (SEQ ID NO: 653)
Ac-D-W-F-O(δN -Me)-A-F-Y-D-O(δN -Me)-V-A-E-O(δN -Me)-F-O(δN -Me)- E-A-F-N-(Me) 2(SEQ ID NO: 654)
Ac-D-W-F-O(δN -Et)-A-F-Y-D-O(δN -Et)-V-A-E-O(δN -Et)-F-O(δN -Et)-E- A-F-NH 2(SEQ ID NO: 655)
Ac-D-W-F-O(δN -Et)-A-F-Y-D-O(δN -Et)-V-A-E-O(δN -Et)-F-O(δN -Et)-E- A-F-NH-Et (SEQ ID NO: 656)
Ac-D-W-F-O(δN -Et)-A-F-Y-D-O(δN-Et)-V-A-E-OdεN-Et)-F-O(δN-Et)-E- A-F-NH-(Et) 2(SEQ ID NO: 657)
單域胜肽
揭示單域Apo E模擬物。單域Apo E模擬物可包含Apo E的受體結合域或脂質結合胜肽。 雙域胜肽
亦揭示雙域胜肽。雙域胜肽可為Apo E模擬胜肽，其包含脂蛋白元E之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中該受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽。
亦揭示Apo E模擬胜肽，其包含脂蛋白元B之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中該受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽。所揭示之Apo E模擬胜肽之非限制性實例提供於表7中。所揭示之Apo E模擬胜肽亦可使用乙醯基及胺基在N端加以保護。表7提供所揭示之包含雙域之Apo E模擬胜肽的非限制性代表性實例。 表 7 ：雙域胜肽 .
Apo E 的受體結合域 SEQ ID NO: 脂質結合胜肽 SEQ ID NO:
LRKLR KRLL R 6 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LRKLR KRLL R 6 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LRKLR KRLL R 6 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LRK MR KRL M R 8 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LRK MR KRL M R 8 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LRKL PKRL L R 18 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LR NVR KRL V R 19 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
MRKLRKR VLR 20 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LR RLR R RLL R 7 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LRKLR KR FFR 17 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
LRKLR KRLL R 6 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LRKLR KRLL R 6 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LRKLR KRLL R 6 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LRK MR KRL M R 8 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LRK MR KRL M R 8 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LRKL PKRL L R 18 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LR NVR KRL V R 19 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
MRKLRKR VLR 20 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LR RLR R RLL R 7 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LRKLR KR FFR 17 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
域交換胜肽
亦揭示Apo E模擬胜肽，其包含脂蛋白元E之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中該受體結合域與該脂質結合胜肽以域交換方向共價連接。亦揭示Apo E模擬物，其包含脂蛋白元B之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中該受體結合域與該脂質結合胜肽以域交換方向共價連接。此等胜肽可稱為「域交換」、「交換域」或「交換」胜肽。舉例而言，亦揭示Apo E模擬物，其由脂蛋白元E之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合組成，其中該受體結合域以上文及表7所述之域交換方向與該脂質結合胜肽共價連接。特定而言，脂質結合胜肽共價連接至脂蛋白元E之受體結合域，使得脂質結合胜肽位於脂蛋白元E模擬胜肽的N端。表8提供所揭示之Apo E模擬物之非限制性實例，其包含脂蛋白元E之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中該受體結合域與該脂質結合胜肽以域交換方向共價連接。 表 8 ：域交換胜肽 .
脂質結合胜肽 SEQ ID NO: Apo E 的受體結合域 SEQ ID NO:
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LRKLR KRLL R 6
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LRKLR KRLL R 6
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LRKLR KRLL R 6
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LRK MR KRL M R 8
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LRK MR KRL M R 8
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LRKL PKRL L R 18
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LR NVR KRL V R 19
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 MRKLRKR VLR 20
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LR RLR R RLL R 7
DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1 LRKLR KR FFR 17
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LRKLR KRLL R 6
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LRKLR KRLL R 6
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LRKLR KRLL R 6
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LRK MR KRL M R 8
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LRK MR KRL M R 8
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LRKL PKRL L R 18
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LR NVR KRL V R 19
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 MRKLRKR VLR 20
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LR RLR R RLL R 7
DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47 LRKLR KR FFR 17
在某些實施例中，域交換Apo E模擬物亦可使用乙醯基及胺基在N端加以保護。 具有逆向的胜肽
本文所揭示之LNP組合物包含Apo E模擬胜肽，其包含脂蛋白元E之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中該受體結合域與該脂質結合胜肽以逆向共價連接。舉例而言，揭示Apo E模擬胜肽，其脂蛋白元E之所揭示之受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中受體結合域的序列或脂質結合胜肽的序列或兩者的序列均呈逆向。亦揭示Apo E模擬胜肽，其包含脂蛋白元B之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中該受體結合域與該脂質結合胜肽以逆向共價連接。表9提供所揭示之Apo E模擬胜肽之非限制性實例，其包含脂蛋白元E之所揭示受體結合域與所揭示之脂質結合胜肽的組合，其中該受體結合域與該脂質結合胜肽以逆向共價連接。 表 9 ：逆向胜肽 .
Apo E 的受體結合域 SEQ ID NO; 脂質結合胜肽 SEQ ID NO:
RLLRKRLKRL 658 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RLLRKRLKRL 658 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RLLRKRLKRL 658 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RMLRKRMKRL 659 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RMLRKRMKRL 659 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RLLRKPLKRL 660 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RVLRKRVNRL 661 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RLVRKRLKRM 662 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RLLRRRLRRL 663 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RFFRKRLKRL 664 DWLKAFYDKVAEKLKEAF 1
RLLRKRLKRL 658 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RLLRKRLKRL 658 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RLLRKRLKRL 658 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RMLRKRMKRL 659 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RMLRKRMKRL 659 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RLLRKPLKRL 660 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RVLRKRVNRL 661 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RLVRKRLKRM 662 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RLLRRRLRRL 663 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
RFFRKRLKRL 664 DWFKAFYDKVAEKFKEAF 47
LRKLRKRLLR 6 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LRKLRKRLLR 6 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LRKLRKRLLR 6 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LRK MRKRL MR 8 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LRK MRKRL MR 8 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LRKL PKRLLR 18 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LR NVRKRL VR 19 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
MRKLRKR VLR 20 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LR RLR RRLLR 7 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LRKLRKR FFR 17 FAEKLKEAVKDYFAKLWD 5
LRKLRKRLLR 6 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
LRKLRKRLLR 6 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
LRKLRKRLLR 6 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
LRK MRKRL MR 8 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
LRK MRKRL MR 8 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
LRKL PKRLLR 18 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
LR NVRKRL VR 19 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
MRKLRKR VLR 20 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
LR RLR RRLLR 7 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
LRKLRKR FFR 17 FAEKFKEAVKDYFAKFWD 265
亂序的胜肽
本文所揭示之LNP組合物包含Apo E模擬胜肽，其包含：脂蛋白元E之受體結合域及脂質結合胜肽，其中該受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽，其中脂蛋白元E的受體結合域被亂序。舉例而言，揭示脂蛋白元E模擬胜肽，其包含：脂蛋白元E的受體結合域，該受體結合域包含胺基酸序列D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F (SEQ ID NO: 94)；及脂質結合胜肽，其中該受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽。亦揭示Apo E模擬胜肽，其包含：脂蛋白元B的受體結合域及脂質結合胜肽，其中該受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽，其中脂蛋白元B的受體結合域被亂序。
在某些實施例中，Apo E模擬胜肽包含：脂蛋白元E的受體結合域及脂質結合胜肽，其中該受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽，其中該脂質結合胜肽被亂序。舉例而言，本文揭示一種Apo E模擬胜肽，包含：脂蛋白元E的脂質結合域，該脂質結合域包含胺基酸序列E-W-L-K-A-F-V-Y-E-K-V-F-K-L-K-E-F-F (SEQ ID NO: 95)；及受體結合域胜肽，其中該脂質結合域共價連接至該受體結合域胜肽。
在某些實施例中，Apo E模擬物包含：脂蛋白元E的受體結合域及脂蛋白元E的脂質結合胜肽，其中受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽，其中受體結合域與脂質結合胜肽均被亂序。表10提供所揭示之亂序Apo E模擬物之非限制性實例，其包含脂蛋白元E的受體結合域及脂質結合胜肽，其中該受體結合域共價連接至該脂質結合胜肽，其中脂蛋白元E的受體結合域被亂序。 表 10 ： 亂序的域胜肽 .
名稱 Apo E 的受體結合域 脂質結合胜肽
hE-Sc18A (具有Sc18A的hE亦稱為Sc2F) LRKLRKRLLR (SEQ ID NO: 6) KAFEEVLAKKFYDKALWD (SEQ ID NO: 666)
SchE-18A LRLLRKLKRR (SEQ ID NO: 665) DWLKAFYDKVAEKLKEAF (SEQ ID NO: 1)
所揭示之亂序Apo E模擬物亦可使用乙醯基及醯胺基在N端及C端加以保護。所揭示之亂序Apo E模擬物亦可如上文所述呈逆向。 鍵聯
在某些實施例中，ApoE模擬胜肽可包含使ApoE之受體結合域與脂質結合胜肽連接在一起的連接子。任何適合的連接子可根據本發明使用。胜肽鍵聯可選自由以下組成之群組：--CH 2NH--、--CH 2S--、--CH 2--CH 2--、--CH═CH-- (順式及反式)、--COCH 2--、--CH(OH)CH 2--、--CH 2SO--等，其藉由此項技術中已知及以下參考文獻中進一步描述的方法選擇：Spatola (1983) Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides, and Proteins第267頁, B. Weinstein編, Marcel Dekker, New York; Spatola (1983) Vega Data 1(3) Peptide Backbone Modifications. (總論); Morley (1980) Trends Pharm Sci 第463-468頁(總論); Hudson等人(1979) Int J PeptProt Res 14:177-185 (--CH 2NH--, CH 2CH 2--); Spatola等人(1986) Life Sci 38:1243-1249 (--CH 2--S); Hann, (1982) J ChemSoc Perkin Trans I 307-314 (--CH--CH--, cis and trans); Almquist等人(1980) J Med. Chem. 23:1392-1398 (--COCH 2--); Jennings-White等人(1982) Tetrahedron Lett. 23:2533 (--COCH 2--); Szelke等人, European Appln. EP 45665 (1982) CA: 97:39405 (1982) (--CH(OH)CH2-); Holladay等人(1983) Tetrahedron Lett 24:4401-4404 (--C(OH)CH 2--); 及Hruby (1982) Life Sci., 31:189-199 (--CH 2--S--))。
一種尤佳非肽鍵聯為--CH 2NH--。此類胜肽模擬物可具有優於多肽實施例的顯著優勢，包括例如：生產更經濟、化學穩定性更大、藥理學特性(半衰期、吸收、效能、功效等)增強、抗原性減少及其他等。
在某些實施例中，連接子為可裂解連接子。僅舉數例，可裂解連接子包括蛋白酶可裂解肽連接子、核酸酶敏感性核酸連接子、脂肪酶敏感性脂質連接子、糖苷酶敏感性碳水化合物連接子、pH敏感性連接子、低氧敏感性連接子、光可裂解連接子、熱不穩定性連接子、酶可裂解連接子(例如酯酶可裂解連接子)、超音波敏感性連接子、x射線可裂解連接子等。 變異體
受體結合域或脂質結合胜肽可如上文所述修飾或改變。舉例而言，受體結合域或脂質結合胜肽可經突變、亂序及/或逆向。本文針對雙域多肽揭示的任何其他修飾或變化亦可用於單域胜肽。
亦考慮本文所揭示之胜肽的多種其他變異體或衍生物。舉例而言，亂序胜肽亦可呈逆向，或可呈交換方向。另外，逆向胜肽可呈交換方向。亦考慮所揭示之胜肽的所有其他組合。本文中已描述胜肽之非限制性實例(參見例如表1-5)。如本文所用，術語「類似物」可與「變異體」及「衍生物」互換使用。變異體及衍生物為熟習此項技術者充分瞭解且可涉及胺基酸序列修飾。此類胺基酸序列修飾典型地屬於三類中的一或多者：實質性變異體：插入型變異體；或缺失型變異體。插入包括單個或多個胺基酸殘基之胺基及/或羧基端融合以及序列內插入。插入通常為比胺基或羧基端融合插入小的插入，例如約一至四個殘基。此等變異體通常藉由編碼該蛋白質之DNA中之核苷酸進行位點特異性誘變，由此產生編碼變異體之DNA，及隨後在重組細胞培養物中表現該DNA而製備。在具有已知序列之DNA中之預定位點產生取代型突變的技術已熟知，例如M13引子誘變及PCR誘變。胺基酸取代典型為單個殘基取代，但可一次發生於多個不同位置。取代、缺失、插入或其任何組合可進行組合以獲得最終衍生物或類似物。取代型變異體為其中已移除至少一個殘基且在其位置插入不同殘基的變異體。此類取代通常根據表11及12產生且稱為保守取代。
功能或免疫特性之實質性變化係如下產生：選擇保守性比表11中之取代更低的取代，亦即選擇在維持以下方面之作用更顯著不同的殘基：(a)多肽主鏈在取代區域中之結構，例如呈片狀或螺旋狀構形，(b)分子在目標位點處的電荷或疏水性，或(c)側鏈之體積。通常預期使蛋白質特性產生最大變化的取代為如下取代：(a)親水性殘基(例如絲胺醯基或蘇胺醯基)取代疏水性殘基(例如白胺醯基、異白胺醯基、苯丙胺醯基、纈胺醯基或丙胺醯基；色胺酸、酪胺酸基)(或被該疏水性殘基取代)；(b)半胱胺酸或脯胺酸取代任何其他殘基(或被任何其他殘基取代)；(c)具有正電性側鏈的殘基(例如離胺醯基、精胺醯基或組胺醯基)取代負電性殘基(例如麩胺醯基或天冬胺醯基)(或被負電性殘基取代)；(d)具有龐大側鏈的殘基(例如苯丙胺酸)取代不具有側鏈的殘基(在此情況下，例如甘胺酸)(或被不具有側鏈的殘基取代)；或(e)增加硫酸化及/或糖基化位點數目。 表 11 ：胺基酸取代
原始殘基 非限制性例示性保守取代
Ala Ser
Arg Gly; Gln; Lys
Asn Gln; His
Asp Glu
Cys Ser
Gln Asn; Lys
Glu Asp
Gly Ala
His Asn; Gln
Ile Leu; Val
Leu Ile; Val
Lys Arg; Gln
Met Leu; Ile
Phe Met; Leu; Tyr
Ser Thr
Thr Ser
Trp Tyr
Tyr Trp; Phe
Val Ile; Leu
表 12 ：胺基酸縮寫
胺基酸 縮寫
丙胺酸 Ala (A)
別異白胺酸 AIle
精胺酸 Arg (R)
天冬醯胺酸 Asn (N)
天冬胺酸 Asp (D)
半胱胺酸 Cys (C)
麩胺酸 Glu (E)
麩醯胺酸 Gln (Q)
甘胺酸 Gly (G)
組胺酸 His (H)
異白胺酸 Ile (I)
白胺酸 Leu (L)
離胺酸 Lys (K)
苯丙胺酸 Phe (F)
脯胺酸 Pro (P)
焦麩胺酸 PGlu (U)
絲胺酸 Ser (S)
蘇胺酸 Thr (T)
酪胺酸 Tyr (Y)
色胺酸 Trp (W)
纈胺酸 Val (V)
在某些實施例中，本文所揭示之Apo E模擬物及其他蛋白質或胜肽與本文中特別引述之Apo E模擬物具有至少70%或至少75%或至少80%或至少85%或至少90%或至少95%同源性。熟習此項技術者容易瞭解如何測定兩種蛋白質之同源性。
多肽可藉由天然過程(諸如轉譯後處理)修飾，或藉由此項技術中已熟知的化學修飾技藝修飾。修飾可發生在多肽中之任何位置，包括胜肽主鏈、胺基酸側鏈及胺基端或羧基端。指定多肽中的若干位點處可存在相同或不同程度的同類型修飾。此外，指定多肽可具有多種類型的修飾。修飾包括(但不限於)乙醯化、醯基化、ADP核糖基化、醯胺化、共價交聯或環化、黃素共價連接、血紅素部分共價連接、核苷酸或核苷酸衍生物共價連接、脂質或脂質衍生物共價連接、磷脂醯肌醇共價連接、二硫鍵形成、去甲基化、半胱胺酸或焦麩胺酸鹽形成、甲醯化、γ-羧基化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、碘化、甲基化、豆蔻醯化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解處理、磷酸化、異戊烯化、外消旋化、硒化、硫酸化，及轉運RNA介導胺基酸添加至蛋白質中，諸如精胺醯化。(參見Proteins - Structure and Molecular Properties第2版, T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, New York (1993); Posttranslational Covalent Modification of Proteins, B.C. Johnson編, Academic Press, New York, 第1-12頁(1983))。
變異體亦可包括肽模擬物。肽模擬物典型地為胺基酸的短序列，其在生物特性方面模擬特定蛋白質的一或多種功能。胜肽類似物增強原始胜肽的一些特性，諸如增加穩定性、增加功效、增強遞送、延長半衰期等。基於已知多肽序列製備肽模擬物的方法描述於例如美國專利第5,631,280號、第5,612,895號及第5,579,250號。肽模擬物的使用可涉及經由非醯胺鍵聯將非胺基酸殘基併入指定位置。本發明涵蓋其中一鍵、胜肽主鏈或胺基酸組分經適合模擬物置換的肽模擬物。可為適合胺基酸模擬物之非天然胺基酸的一些非限制性實例包括β-丙胺酸、L-α-胺基丁酸、L-γ-胺基丁酸、L-α-胺基異丁酸、L-ε-胺基己酸、7-胺基庚酸、L-天冬胺酸、L-麩胺酸、N-ε-Boc-N-α-CBZ-L-離胺酸、N-ε-Boc-N-α-Fmoc-L-離胺酸、L-甲硫胺酸碸、L-正白胺酸、L-正纈胺酸、N-α-Boc-N-δCBZ-L-鳥胺酸、N-δ-Boc-N-α-CBZ-L-鳥胺酸、Boc-對硝基-L-苯丙胺酸、Boc-羥基脯胺酸及Boc-L-硫代脯胺酸。 核酸
亦揭示可編碼本文所述之多肽序列的核酸。此將包括與特定多肽序列相關之所有簡倂序列，亦即，具有編碼一種特定多肽序列之序列的所有核酸，以及編碼蛋白質序列之所揭示變異體及衍生物的所有核酸，包括簡倂核酸。因此，儘管各種特定核酸序列在本文中可未寫出，但應瞭解本文中實際上經由所揭示之多肽序列揭示及描述所有序列。 封端/保護基團及D殘基
本文所提供之LNP組合物可包含乙醯基及其後的保護基。保護基可為(但不限於)脂肪酸。脂肪酸可為飽和、不飽和或必需脂肪酸。脂肪酸可以包括(但不限於) DHA、EPA、亞麻油酸或任何其他飽和胺基酸，諸如肉豆蔻酸。
在某些實施例中，本文所提供之LNP組合物可攜帶一個、兩個、三個、四個或更多個保護基團。可使保護基團與胜肽的C端及/或N端偶聯及/或與構成胜肽的一或多個內部殘基偶聯(例如可將組成性胺基酸上的一或多個R基團封端)。因此，舉例而言，在某些實施例中，本文所述之任一種胜肽可攜帶例如保護胺基端的乙醯基及/或保護羧基端的醯胺基。此類「雙重保護胜肽」的一個實例為具有封端基團的Ac-LRKLRKRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 10)，此等保護基團中的任一者或兩者可消去及/或經如本文所述的另一種保護基取代。不受特定理論束縛，本發明發現將本發明之標的物胜肽的胺基及/或羧基端封端可改善經口遞送且亦可延長血清半衰期。
有多種保護基團適合於此目的。此類基團包括(但不限於)乙醯基、醯胺及烷基，其中乙醯基及烷基尤其較佳用於N端保護，且醯胺基較佳用於羧基端保護。舉例而言，保護基團可以包括(但不限於)脂肪酸、丙醯基、甲醯基及其他基團中的烷基鏈。羧基保護基團包括醯胺、酯，且亦可使用形成醚的保護基團。舉例而言，乙醯基可用於保護胺基端且醯胺基可用於保護羧基端。此等封端基團增強胜肽的螺旋形成傾向。其他封端基團包括各種長度的烷基，例如具有下式的基團：CH 3(CH 2) nCO，其中n在約1至約20範圍內，較佳在約1至約16或18範圍內，更佳在約3至約13範圍內且最佳在約3至約10範圍內。
另外，保護基團包括(但不限於)脂肪酸、丙醯基、甲醯基及其他基團中的烷基鏈。舉例而言，羧基保護基團可以包括醯胺、酯及形成醚的保護基團。此等封端基團可增強胜肽的螺旋形成傾向。封端基團可以包括各種長度的烷基，例如具有下式的基團：CH 3(CH 2) nCO，其中n在約3至約20範圍內，較佳在約3至約16範圍內，更佳在約3至約13範圍內且最佳在約3至約10範圍內。
其他保護基團包括(但不限於) Fmoc、三級丁氧基羰基(t-BOC)、9-茀乙醯基、1-茀羧基、9-茀羧基、9-茀酮-1-羧基、苯甲氧羰基、黃嘌呤酸基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2,3,6-三甲基-苯磺醯基(Mtr)、均三甲苯-2-磺醯基(Mts)、4,4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺醯基(Tos)、2,2,5,7,8-五甲基色滿-6-磺醯基(Pmc)、4-甲基苯甲基(MeBzl)、4-甲氧基苯甲基(MeOBzl)、苯甲氧基(BzlO)、苯甲基(Bzl)、苯甲醯基(Bz)、3-硝基-2-吡啶亞磺醯基(Npys)、1-(4,4-二薄荷基-2,6-二氧雜亞環己基)乙基(Dde)、2,6-二氯苯甲基(2,6-DiCl-Bzl)、2-氯苯甲氧羰基(2-Cl-Z)、2-溴苯甲氧基-羰基(2-Br-Z)、苯甲氧基甲基(Bom)、環己氧基(cHxO)、三級丁氧基甲基(Bum)、三級丁氧基(tBuO)、三級丁基(tBu)、乙醯基(Ac)及三氟乙醯基(TFA)。
保護/封端基團以及使此類基團與包含本發明之胜肽的適當殘基耦聯的方法已為熟習此項技術者所熟知(參見例如Greene等人, (1991) Protective Groups in Organic Synthesis, 第2版, John Wiley & Sons, Inc. Somerset, N.J.)。舉例而言，可在合成期間(此時，胜肽位於樹脂上)使用乙酸酐完成乙醯化。可藉由選擇適用於合成的樹脂來達成醯胺保護。
本文所揭示之組合物亦可包含一或多個如本文所述的D型(右旋，而非左旋)胺基酸。舉例而言，至少兩個對映異構體胺基酸、至少4個對映異構體胺基酸或至少8或10個對映異構體胺基酸可為「D」型胺基酸。另外，本文所述胜肽之每個其他或甚至每個胺基酸(例如每個對映異構體胺基酸)為D型胺基酸。
另外，至少50%對映異構體胺基酸可為「D」型，至少80%對映異構體胺基酸為「D」型，至少90%或甚至所有對映異構體胺基酸可為「D」型胺基酸。
可使用標準胺基酸鏈延長程序(使用HOBt+DCC或HBTU作為縮合劑)，將FMOC-Aha作為最後一個胺基酸添加至生長的鏈中。使用含20%哌啶之DMF移除FMOC基團之後，可使用過量乙酸酐在鹼性條件下或藉由使用肽鏈延長用的胺基酸縮合劑使乙酸縮合而將NH2乙醯化。 醫藥組合物
在某些態樣中，本文提供包含脂質奈米顆粒(LNP)的醫藥組合物，該脂質奈米顆粒包含一或多種脂質及脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽，其中該ApoE模擬胜肽包含ApoE的受體結合域及脂質結合域。
在某些實施例中，本文提供的組合物及方法可用於治療有需要之個體。在某些實施例中，個體為哺乳動物，諸如人類，或非人類哺乳動物。當投與個體(諸如人類)時，組合物較佳作為醫藥組合物及醫藥學上可接受之載劑投與。醫藥學上可接受之載劑在此項技術中已熟知，且包括例如水溶液，諸如水或生理緩衝鹽水，或其他溶劑或媒劑，諸如二醇、甘油、油(諸如橄欖油)或可注射有機酯。在某些實施例中，當此類醫藥組合物投與人類、尤其藉由侵入性投藥途徑(亦即，避開經由上皮細胞障壁輸送或擴散的途徑，諸如注射或植入)投與人類時，水溶液不含熱原質，或基本上不含熱原質。可選擇賦形劑，例如為了實現藥劑延遲釋放或選擇性靶向一或多種細胞、組織或器官來選擇。醫藥組合物可為單位劑型，諸如錠劑、膠囊(包括噴撒型膠囊及明膠膠囊)、顆粒、復原用凍乾物、散劑、溶液、糖漿、栓劑、注射劑或其類似物。組合物亦可存在於經皮遞送系統(例如皮膚貼片)中。組合物亦可存在於適於體表投與之溶液(諸如滴眼劑)中。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含醫藥學上可接受之載劑。醫藥學上可接受之載劑可含有生理學上可接受之藥劑，該等藥劑等作用為例如穩定組合物、增加組合物的溶解度或增加組合物的吸收。生理學上可接受之此類藥劑包括例如碳水化合物，諸如葡萄糖、蔗糖或聚葡萄糖；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或麩胱甘肽；螯合劑、低分子量蛋白質或其他穩定劑或賦形劑。醫藥學上可接受之載劑(包括生理學上可接受之藥劑)的選擇取決於例如組合物之投與途徑。製劑或醫藥組合物可為自乳化藥物遞送系統或自微乳化藥物遞送系統。醫藥組合物(製劑)亦可為其中可併有例如治療化合物的脂質體或其他聚合物基質。脂質體(例如包含磷脂或其他脂質的脂質體)為生理學上可接受且可代謝之無毒載劑，其製造及投與相對簡單。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物可藉由多種投藥途徑中之任一者投與個體，包括例如經口(例如水性或非水性溶液或懸浮液形式之頓服藥、錠劑、膠囊(包括噴撒型膠囊及明膠膠囊)、推注、散劑、顆粒、施用於舌頭之糊劑)；經由口腔黏膜吸收(例如舌下)；肛門、直腸或陰道(例如子宮托、乳膏或發泡體形式)；非經腸(包括肌肉內、靜脈內、皮下或鞘內投與，例如以無菌溶液或懸浮液形式投與)；鼻；腹膜內；皮下；經皮(例如施用於皮膚之貼片)；以及體表(例如施用於皮膚之乳膏、軟膏或噴霧劑，或滴眼劑)。組合物亦可調配成用於吸入。在某些實施例中，組合物可簡單地溶解或懸浮於無菌水中。適當投藥途徑及適合該投藥途徑之組合物的細節可見於例如美國專利第6,110,973號、第5,763,493號、第5,731,000號、第5,541,231號、第5,427,798號、第5,358,970號及第4,172,896號中，以及其中所援引之專利中。
調配物宜以單位劑型呈遞且可藉由製藥技術中熟知之任何方法來製備。可與載劑物質合併製備單一劑型之活性成分的量將視所治療之宿主、特定投藥模式而變化。可與載劑物質合併產生單一劑型的活性成分之量通常將為產生治療作用之組合物的量。一般而言，以百分之一百計，此量的範圍為約1%至約99%活性成分，較佳為約5%至約70%，最佳為約10%至約30%。
製備此等調配物或組合物之方法包括將活性組合物與載劑及視情況存在之一或多種附屬成分合併之步驟。一般而言，藉由將組合物與液體載劑或細粉狀固體載劑或兩者均一且緊密地合併且必要時接著使產物成形來製備調配物。
適於口服的調配物可呈膠囊(包括噴撒型膠囊及明膠膠囊)、扁囊劑、丸劑、錠劑、口含錠(使用調味基質，通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠)、凍乾物、散劑、顆粒形式，或水性或非水性液體中之溶液或懸浮液形式，或水包油或油包水之液體乳液形式，或酏劑或糖漿形式，或片劑(使用惰性基質，諸如明膠及甘油，或蔗糖及阿拉伯膠)及/或漱口水形式及其類似形式，其各含有預定量的組合物作為活性成分。組合物亦可以推注、舐劑或糊劑形式投與。
為了製備口服固體劑型(膠囊(包括噴撒型膠囊及明膠膠囊)、錠劑、丸劑、糖衣藥丸、散劑、顆粒及其類似形式)，將活性成分與一或多種醫藥學上可接受之載劑(諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣)及/或以下中任一者混合：(1)填充劑或增量劑，諸如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及/或矽酸；(2)黏合劑，諸如羧甲基纖維素、褐藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，諸如甘油；(4)崩解劑，諸如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、褐藻酸、某些矽酸鹽及碳酸鈉；(5)溶解阻滯劑，諸如石蠟；(6)吸收加速劑，諸如季銨化合物；(7)濕潤劑，諸如鯨蠟醇及甘油單硬脂酸酯；(8)吸收劑，諸如高嶺土及膨潤土；(9)潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物；(10)錯合劑，諸如修飾及未修飾之環糊精；以及(11)著色劑。在膠囊(包括噴撒型膠囊及明膠膠囊)、錠劑及丸劑之情況下，醫藥組合物亦可包含緩衝劑。類似類型的固體組合物亦可作為填充劑用於軟及硬填充明膠膠囊中，該等明膠膠囊使用賦形劑，諸如乳糖或牛乳糖以及高分子量聚乙二醇及其類似物。
錠劑可藉由視情況與一或多種附屬成分一起壓縮或成型來製造。可使用黏合劑(例如明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如乙醇酸澱粉鈉或交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑製備壓縮錠劑。可藉由使經惰性液體稀釋劑濕潤之粉末狀組合物的混合物在適合機器中成型來製造成型錠劑。
醫藥組合物之錠劑及其他固體劑型，諸如糖衣藥丸、膠囊(包括噴撒型膠囊及明膠膠囊)、丸劑及顆粒，可視情況刻痕或經製備而具有包衣及殼層，諸如腸溶包衣及醫藥調配技術中熟知之其他包衣。其亦可使用例如不同比例之羥丙基甲基纖維素(以提供所要釋放分佈)、其他聚合物基質、脂質體及/或微球體來調配以便提供其中活性成分之緩慢或控制釋放。其可如下滅菌：例如經由細菌截留過濾器過濾，或併入呈無菌固體組合物形式之滅菌劑，該等滅菌劑可在臨用前溶解於無菌水或一些其他無菌可注射介質中。此等組合物亦可視情況含有遮光劑且可具有使得其僅在或優先在胃腸道之某一部分中釋放活性成分、視情況以延遲方式釋放活性成分之組成。可使用之包埋組合物的實例包括聚合物質及蠟。適當時，活性成分亦可與一或多種上述賦形劑一起呈微囊封形式。
適用於口服的液體劑型包括醫藥學上可接受之乳液、復原用的凍乾物、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。除了活性成分之外，液體劑型可含有此項技術中常用之惰性稀釋劑，諸如水或其他溶劑；環糊精及其衍生物；增溶劑及乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特定而言，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇，及去水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及其混合物。
除惰性稀釋劑外，口服組合物亦可包括佐劑，諸如濕潤劑，乳化劑及懸浮劑，甜味劑、調味劑、著色劑、芳香劑以及防腐劑。
除活性組合物之外，懸浮液亦可含有懸浮劑，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇及去水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂-瓊脂及黃蓍膠及其混合物。
用於直腸、陰道或尿道投與之醫藥組合物的調配物可以栓劑形式呈遞，其可藉由將一或多種活性化合物與一或多種適合無刺激性賦形劑或載劑(包含例如可可脂、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸酯)混合來製備，且其在室溫下為固體，但在體溫下為液體，且因此熔融於直腸或陰道腔中且釋放活性組合物。
替代地或另外，組合物可調配成經由導管、血管內支架、導線或其他管腔內裝置遞送。經由此類裝置遞送尤其可適用於遞送至膀胱、尿道、輸尿管、直腸或腸。
適於陰道投與之調配物亦包括子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、發泡體或噴霧劑調配物，其含有諸如此項技術中已知適當之載劑。
用於體表或經皮投與之劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠、溶液、貼片及吸入劑。活性組合物可在無菌條件下與醫藥學上可接受之載劑及與可能需要之任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。
除活性組合物之外，軟膏、糊劑、乳膏及凝膠亦可含有賦形劑，諸如動物及植物脂肪、油、蠟、石蠟、澱粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、聚矽氧、膨潤土、矽酸、滑石及氧化鋅，或其混合物。
除活性組合物之外，散劑及噴霧劑亦可含有賦形劑，諸如乳糖、滑石、矽酸、氫氧化鋁、矽酸鈣及聚醯胺粉末，或此等物質之混合物。噴霧劑可另外含有慣用推進劑，諸如氯氟烴及未經取代之揮發烴，諸如丁烷及丙烷。
如本文所用，片語「非經腸投藥(parenteral administration)」及「非經腸投與(administered parenterally)」意謂除經腸及體表投藥之外的投藥模式，通常為注射，且包括(不限於)靜脈內、肌肉內、動脈內、鞘內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內及胸骨內注射及輸注。適於非經腸投與之醫藥組合物包含一或多種活性組合物與一或多種醫藥學上可接受之無菌等張水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液或無菌粉末的組合，無菌粉末可在臨用前復原成無菌可注射溶液或分散液，該等醫藥組合物可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、使得調配物與指定接受者之血液等張之溶質，或懸浮劑或增稠劑。
可用於醫藥組合物中之適合水性及非水性載劑的實例包括水、乙醇、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇及其類似物)及其適合混合物、植物油(諸如橄欖油)及可注射有機酯(諸如油酸乙酯)。適當流動性可例如藉由使用包衣材料(諸如卵磷脂)、在分散液之情況下藉由維持所需粒度及藉由使用界面活性劑來維持。
此等組合物亦可含有佐劑，諸如防腐劑、濕潤劑、乳化劑及分散劑。防止微生物作用可藉由包含各種抗細菌劑及抗真菌劑(例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸及其類似物)來確保。組合物中亦可能需要包括等張劑，諸如糖類、氯化鈉及其類似物。另外，可注射醫藥形式之吸收延長可藉由包括吸收延遲劑(諸如單硬脂酸鋁及明膠)來達成。
在一些情況下，為延長藥物作用，需要減緩皮下或肌肉內注射之藥物吸收。此可藉由使用具有不良水溶性之結晶或非晶形物質之液體懸浮液來實現。藥物吸收速率則視其溶解速率而定，而溶解速率又可視晶體尺寸及結晶形式而定。或者，非經腸投與之藥物形式係藉由將藥物溶解或懸浮於油性媒劑中來實現延遲吸收。
可注射積存形式係藉由以諸如聚丙交酯-聚乙交酯之可生物降解聚合物形成本發明組合物之微囊封基質而製成。視藥物與聚合物之比率及所用特定聚合物的性質而定，可控制藥物釋放速率。其他生物可降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。積存式可注射調配物亦藉由將藥物截留於與身體組織相容之脂質體或微乳液中而製備。
在某些實施例中，活性組合物可本身給與或作為含有例如0.1至99.5% (更佳0.5至90%)活性成分與醫藥學上可接受之載劑之組合的醫藥組合物給與。
亦可藉由可再裝填或生物可降解裝置達成引入方法。近年來已開發且活體內測試用於可控遞送藥物(包括蛋白質生物藥劑)之各種緩慢釋放聚合物裝置。包括生物可降解與不可降解聚合物的多種生物相容性聚合物(包括水凝膠)可用於形成在特定目標位點持續釋放組合物的植入物。
在某些實施例中，化合物可單獨使用或聯合另一種類型之治療劑(例如抗病毒劑)投與。
在某些實施例中，相對於組合物或一或多種其他治療劑的各自個別投與，治療組合物與一或多種其他治療劑(例如一或多種其他化學治療劑)的聯合投與使得功效改良。在某些此類實施例中，聯合投藥提供相加效應，其中相加效應係指治療組合物及一或多種其他治療劑個別投與之各種效應的總和。
本文提供方法中之組合物的醫藥學上可接受之鹽。在某些實施例中，所考慮的鹽包括但不限於烷基、二烷基、三烷基或四烷基銨鹽。在某些實施例中，所考慮的鹽包括(但不限於) L-精胺酸、苄苯乙胺(benenthamine)、苄星青黴素(benzathine)、甜菜鹼、氫氧化鈣、膽鹼、丹醇、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙胺基)乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、海卓胺(hydrabamine)、1H-咪唑、鋰、L-離胺酸、鎂、4-(2-羥基乙基)𠰌啉、哌嗪、鉀、1-(2-羥基乙基)吡咯啶、鈉、三乙醇胺、緩血酸胺以及鋅鹽。在某些實施例中，所考慮的鹽包括(但不限於) Na、Ca、K、Mg、Zn、銅、鈷、鎘、錳或其他金屬鹽。
在某些實施例中，本文所述之組合物可包含濕潤劑、乳化劑及/或潤滑劑，諸如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑。
醫藥學上可接受之抗氧化劑實例包括：(1)水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉及其類似物；(2)油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基甲氧苯(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚及其類似物；及(3)金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸及其類似物。 劑量
包含含有一或多種脂質及脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽之脂質奈米顆粒(LNP)之組合物的治療有效劑量為約0.01 mg/kg至約500 mg/kg、約0.05 mg/kg至約250 mg/kg、約0.1 mg/kg至約100 mg/kg、約0.5 mg/kg至約50 mg/kg、或約1 mg/kg至約25 mg/kg。
包含含有一或多種脂質及脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽之脂質奈米顆粒(LNP)之組合物的治療有效劑量為約0.01 mg/kg至約500 mg/kg。在一些實施例中，包含脂質奈米顆粒(LNP)之組合物的治療有效劑量較佳為約0.01 mg/kg至100 mg/kg。
脂質奈米顆粒可例如每天投與一次，每天投與兩次，每兩週投與一次，或每月投與一次。脂質奈米顆粒的持續投與時間可視個體所罹患之疾病嚴重度或疾病階段而定。舉例而言，脂質奈米顆粒可投與至少1或2週。亦考慮更長的持續投藥時間。
為了使活性成分的量有效達成特定個體的所需治療反應、組合物及投藥模式而對個體無毒，可改變醫藥組合物中之活性成分的實際劑量水準。
必要時，活性組合物的有效日劑量可作為一次、兩次、三次、四次、五次、六次或更多次亞劑量投與，該等亞劑量在全天的適當間隔時間分開投與，視情況以單位劑型投與。在某些實施例中，活性組合物每日投與兩次或三次。在一些實施例中，活性組合物每日投與一次。 治療疾病之方法
在某些態樣中，本文提供的組合物及方法適用於治療或預防疾病、病症或病狀。 免疫病症
在一些實施例中，本文所述之組合物及方法與治療或預防病理學免疫反應相關疾病或病症有關，諸如自體免疫疾病、過敏反應及/或發炎疾病。在一些實施例中，疾病或病症為發炎性腸病(例如克羅恩氏病(Crohn's disease)或潰瘍性結腸炎)。在一些實施例中，疾病或病症為牛皮癬。在一些實施例中，疾病或病症為異位性皮炎。
本文所述之組合物及方法可用於治療有需要之任何個體。
本文所述之醫藥組合物可作為例如醫藥組合物用於預防或治療自體免疫疾病，諸如慢性發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、穆-韋二氏症候群(muckle-wells syndrome)、類風濕性關節炎、多發性硬化症或橋本氏病(Hashimoto's disease)；過敏性疾病，諸如食物過敏、花粉病或哮喘；感染性疾病，諸如艱難梭菌(Clostridium difficile)感染；發炎疾病，諸如TNF介導之發炎疾病(例如胃腸道發炎疾病，諸如結腸袋炎；心血管發炎病狀，諸如動脈粥樣硬化；或發炎性肺病，諸如慢性阻塞性肺病；纖維化疾病或囊腫性纖維化)；用於抑制器官移植排斥或可能發生組織排斥之其他情形的醫藥組合物；用於改善免疫功能之增補劑、食物或飲料；或用於抑制免疫細胞增殖或功能之試劑。
在一些實施例中，本文所提供之組合物及方法適用於治療炎症。在某些實施例中，本文所述之醫藥組合物可用於預防或治療身體之任何組織及器官的炎症，包括肌肉骨胳炎症、血管炎症、神經炎症、消化系統炎症、眼炎症、生殖系統炎症及其他炎症，如下文所論述。
肌肉骨胳系統之免疫病症包括(但不限於)影響骨骼關節(包括手、手腕、肘、肩、頜、脊椎、頸、髖、膝蓋、踝及足之關節)之彼等病狀，及影響連接肌肉與骨骼之組織(諸如肌腱)的病狀。可用本文所述之方法及組合物治療的此類免疫病症實例包括(但不限於)關節炎(包括例如骨關節炎、類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎、僵直性脊椎炎、急性及慢性感染性關節炎、與痛風及假性痛風相關之關節炎及幼年特發性關節炎)、肌腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑囊炎、纖維組織炎(纖維肌痛)、上髁炎、肌炎及骨炎(包括例如佩吉特氏病(Paget's disease)、恥骨骨炎及囊性纖維性骨炎)。
眼免疫病症係指影響眼之任何結構(包括眼瞼)之免疫病症。可用本文所述之組合物及方法治療的眼免疫病症之實例包括(但不限於)瞼炎、眼瞼鬆弛、結膜炎、淚腺炎、角膜炎、乾燥性角膜結膜炎(乾眼)、鞏膜炎、倒睫及葡萄膜炎。
可用本文所述之組合物及方法治療的神經系統免疫病症實例包括(但不限於)腦炎、格-巴二氏症候群(Guillain-Barre syndrome)、腦膜炎、神經肌強直、發作性睡病、多發性硬化症、脊髓炎及精神分裂症。可用本文所述之組合物及方法治療的血管或淋巴系統炎症實例包括(但不限於)關節硬化、關節炎、靜脈炎、血管炎及淋巴管炎。
可用本文所述之組合物及方法治療的消化系統免疫病症實例包括(但不限於)膽管炎、膽囊炎、腸炎、小腸結腸炎、胃炎、胃腸炎、發炎性腸病、迴腸炎及直腸炎。發炎性腸病包括例如此項技術中公認的一組相關病狀之某些形式。已知發炎性腸病之若干嚴重形式，其中克羅恩氏病(局部腸病，例如非活躍及活躍形式)及潰瘍性結腸炎(例如非活躍及活躍形式)為此等病症中最常見的。此外，發炎性腸病涵蓋大腸急躁症、顯微性結腸炎、淋巴球性-漿細胞腸炎、腹腔病、膠原性結腸炎、淋巴球性結腸炎及嗜伊紅血球小腸結腸炎。IBD之其他不太常見形式包括不確定性結腸炎、偽膜性結腸炎(壞死性結腸炎)、缺血性發炎性腸病、白塞氏病(Behcet's disease)、類肉瘤病、硬皮病、IBD相關發育不良、發育不良相關腫塊或病變，及原發性硬化性膽管炎。
可用本文所述之組合物及方法治療的生殖系統免疫病症實例包括(但不限於)子宮頸炎、絨膜羊膜炎、子宮內膜炎、附睪炎、臍帶炎、卵巢炎、睪丸炎、輸卵管炎、輸卵管卵巢膿腫、尿道炎、陰道炎、外陰炎及外陰疼痛。
本文所述之組合物及方法可用於治療具有發炎組分之自體免疫病狀。此類病狀包括(但不限於)急性散播性全身性禿髮症、白塞氏病、蔡格司氏病(Chagas' disease)、慢性疲勞症候群、自主神經障礙、腦脊髓炎、關節黏連性脊椎炎、再生不全性貧血、化膿性汗腺炎、自體免疫性肝炎、自體免疫性卵巢炎、乳糜瀉、克羅恩氏病、1型糖尿病、巨大細胞動脈炎、古巴士德氏症候群、格雷氏病、格-巴二氏症候群、橋本氏病、亨偌-絲奇恩賴紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、川崎氏病(Kawasaki's disease)、紅斑狼瘡、顯微鏡下結腸炎、顯微鏡下多動脈炎、混合結締組織疾病、穆-韋二氏症候群、多發性硬化症、重症肌無力、斜視眼陣攣肌陣攣症候群、視神經炎、奧德氏甲狀腺炎(ord's thyroiditis)、天疱瘡、結節性多動脈炎、多肌痛、類風濕性關節炎、萊特爾氏症候群(Reiter's syndrome)、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、顳動脈炎、韋格納氏肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)、溫抗體型自體免疫性溶血性貧血、間質性膀胱炎、萊姆病(Lyme disease)、硬斑病、牛皮癬、類肉瘤病、硬皮病、潰瘍性結腸炎及白斑病。
本文所述之組合物及方法可用於治療具有發炎組分之T細胞介導過敏性疾病。此類病狀包括(但不限於)接觸性過敏、接觸性皮膚炎(包括由於野葛(poison ivy)所致)、蕁麻疹、皮膚過敏、呼吸道過敏(花粉熱、過敏性鼻炎、室內塵蟎過敏)及麩質敏感性腸病(乳糜瀉)。
可用本文所述之組合物及方法治療的其他免疫病症包括例如闌尾炎、皮炎、皮肌炎、心內膜炎、纖維組織炎、齒齦炎、舌炎、肝炎、化膿性汗腺炎、虹膜炎、喉炎、乳腺炎、心肌炎、腎炎、耳炎、胰臟炎、腮腺炎、心包炎、腹膜炎、咽炎、胸膜炎、肺炎、前列腺炎、腎盂腎炎及口腔炎、移植排斥(涉及諸如腎臟、肝臟、心臟、肺、胰臟(例如胰島細胞)、骨髓、角膜、小腸之器官、皮膚同種異體移植、皮膚同種移植及心瓣膜異種移植、血清病及移植物抗宿主疾病)、急性胰臟炎、慢性胰臟炎、急性呼吸窘迫症候群、塞紮里氏症候群(Sexary's syndrome)、先天性腎上腺增生、非化膿性甲狀腺炎、與癌症相關之高鈣血症、天疱瘡、大皰性疱疹樣皮炎、重度多形性紅斑、剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、季節性或常年性過敏性鼻炎、支氣管哮喘、接觸性皮炎、異位性皮炎、藥物超敏反應、過敏性結膜炎、角膜炎、帶狀疱疹病毒眼症、虹膜炎及虹膜睫狀體炎、脈絡膜視網膜炎、視神經炎、症狀性類肉瘤病、爆發性或播散性肺結核化療、成人特發性血小板減少性紫癜、成人繼發性血小板減少症、獲得性(自體免疫性)溶血性貧血、成人白血病及淋巴瘤、兒童期急性白血病、區域性腸炎、自體免疫性脈管炎、多發性硬化症、慢性阻塞性肺病、實體器官移植排斥、敗血症。較佳治療包括移植排斥、類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎、多發性硬化症、1型糖尿病、哮喘、發炎性腸病、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、慢性阻塞性肺病及感染性病狀伴隨炎症(例如敗血症)的治療。 代謝病症
在一些實施例中，本文所述之組合物及方法與治療或預防代謝疾病或病症有關，諸如II型糖尿病、葡萄糖耐受性異常、抗胰島素症、肥胖症、高血糖症、高胰島素血症、脂肪肝、非酒精性脂肪變性肝炎、高膽固醇血症、高血壓、高脂蛋白血症、高脂質血症、高三酸甘油酯血症、酮酸症、低血糖症、血栓性病症、血脂異常、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肝炎(NASH)或相關疾病。在一些實施例中，相關疾病為心血管疾病、動脈粥樣硬化、腎臟疾病、腎病變、糖尿病性神經病變、糖尿病性視網膜病變、性功能障礙、皮膚病、消化不良或水腫。在一些實施例中，本文所述之組合物及方法與治療非酒精性脂肪肝病(NAFLD)及非酒精性脂肝炎(NASH)有關。
本文所述之組合物及方法可用於治療有需要之任何個體。 心血管疾病
在一些實施例中，本文所述之組合物及方法與治療高血壓、冠狀動脈疾病、中風、心血管疾病、周邊動脈疾病、大腦血管疾病、糖尿病源心血管疾病，或充血性心臟衰竭有關。
在一些實施例中，本文所述之組合物與治療心臟病、血管疾病及/或心血管疾病或心血管系統疾病有關，例如急性及慢性心臟衰竭、動脈性高血壓、冠心病、穩定及不穩定心絞痛、心肌缺血、心肌梗塞、冠狀動脈微血管功能異常、微血管阻塞、無複流現象、休克、動脈粥樣硬化、冠狀動脈疾病、周邊動脈疾病、周邊動脈疾病、間歇性跛行、重度間歇性跛行、肢體局部缺血、嚴重肢體缺血、心臟肥大、任何病因之心肌病(諸如擴張型心肌病、限制型心肌病、肥厚性心肌病、缺血性心肌症)、心臟纖維化、心房及心室心律不齊、暫時性及/或局部缺血性發作、中風、局部缺血及/或子癇前症、發炎性心血管疾病、代謝疾病、糖尿病、I型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病、周邊及自主神經病變、糖尿病性神經病、糖尿病性微血管病、糖尿病性視網膜病變、肢體糖尿病性潰瘍、壞疽、CREST症候群、高膽固醇血症、高三酸甘油酯血症、脂質代謝病症、代謝症候群、血纖維蛋白原及低密度脂蛋白(亦即，LDL)的水準增加、纖維蛋白溶酶原活化因子抑制劑1 (PAI-1)的濃度增加，以及周邊血管及心臟血管疾病、周邊循環病症、原發及繼發雷諾氏症候群(Raynaud syndrome)、微循環紊亂、動脈肺高血壓、冠狀動脈及周邊動脈痙攣、血栓形成、血栓栓塞疾病、水腫形成，諸如肺水腫、腦水腫、腎水腫、心肌水腫、與心臟衰竭相關的心肌水腫，亦即，血栓溶解療法、經皮-經管腔血管成形術(PTA)、經管腔冠狀動脈血管成形術(PTCA)、心臟移植、搭橋手術之後的再狹窄，以及微血管及大血管損傷(例如血管炎)、再灌注損傷、動脈及靜脈血栓形成、微白蛋白尿、心機能不全、內皮功能障礙。根據本發明，心臟衰竭包括更特定或相關類型之疾病，諸如急性失代償性心臟衰竭、右側心臟衰竭、左側心臟衰竭、全域功能障礙、缺血性心肌病變、擴張型心肌病變、先天性心臟缺陷、瓣膜疾病、與瓣膜疾病有關之心臟衰竭、二尖瓣狹窄、二尖瓣功能障礙、主動脈瓣膜狹窄、主動脈瓣膜功能障礙、三尖瓣狹窄、三尖瓣功能障礙、肺動脈瓣狹窄、肺動脈瓣功能障礙、組合型瓣膜缺損、心肌發炎(心肌炎)、慢性心肌炎、急性心肌炎、病毒性心肌炎、細菌性心肌炎、糖尿病性心臟衰竭、酒精性心肌病變、心臟儲積症、射出分率正常型心臟衰竭(HFpEF)、舒張性心臟衰竭、射出分率降低型心臟衰竭(HFrEF)、收縮性心臟衰竭。在本發明之上下文中，術語心房心律不齊及心室心律不齊亦包括更特定的相關疾病實體，諸如：心房纖顫、陣發性心房纖顫、間歇性心房纖顫、持久性心房纖顫、永久性心房纖顫、心房顫動、竇性心律不整、竇性心搏過速、被動型異位移植、主動型異位移植、置換型收縮、早搏、脈搏傳導紊亂、病態竇性症候群、頸動脈竇過敏、心搏過速、AV結節折返性心搏過速、房室折返性心搏過速、WPW症候群(沃夫-巴金森-懷特症候群(Wolff-Parkinson-White syndrome))、房束心搏過速、隱藏型輔助路徑/通道、永久連接折返性心搏過速、局灶性心房心搏過速、連接異位心搏過速、心房折返性心搏過速、心室性心搏過速、心室顫動、心室纖顫、心因性猝死。在本發明之上下文中，術語冠心病亦包括更特定或相關疾病實體，諸如：缺血性心臟病、穩定心絞痛、急性冠狀動脈症候群、不穩定心絞痛、NSTEMI (非ST段抬高型心肌梗塞)、STEMI (ST段抬高型心肌梗塞)、心臟局部缺血損傷、心律不齊及心肌梗塞。 癌症
在一些實施例中，本文所述之組合物及方法與癌症治療有關。在一些實施例中，可使用本文所述之方法治療任何癌症。可由本文所述之組合物及方法治療的癌症實例包括(但不限於)膀胱、血液、骨骼、骨髓、腦、乳房、結腸、食道、胃腸、齒齦、頭、腎臟、肝臟、肺、鼻咽、頸、卵巢、前列腺、皮膚、胃、睪丸、舌或子宮的癌細胞。另外，癌症尤其可為以下組織類型之一，但其不限於此等癌症：惡性贅瘤；癌瘤；未分化癌瘤；巨細胞及梭狀細胞癌瘤；小細胞癌瘤；乳頭狀癌；鱗狀細胞癌；淋巴上皮癌瘤；基底細胞癌；毛母質癌；移行細胞癌；乳頭狀移行細胞癌；腺癌；惡性胃泌素瘤；膽管癌；肝細胞癌；組合的肝細胞癌與膽管癌；小樑腺癌；腺樣囊性癌症；腺瘤性息肉腺癌；家族性結腸息肉病腺癌；實體癌瘤；惡性類癌瘤；細支氣管-肺泡腺癌；乳頭狀腺癌；嫌色細胞癌瘤；嗜酸性癌瘤；嗜氧性腺癌；嗜鹼性球癌瘤；透明細胞腺癌；粒狀細胞癌瘤；濾泡性腺癌；乳頭狀及濾泡性腺癌；無包膜硬化性癌瘤；腎上腺皮質癌瘤；子宮內膜樣癌瘤；皮膚附件癌瘤；大汗腺腺癌；皮脂腺腺癌；耵聹腺癌；黏液表皮樣癌瘤；囊腺癌；乳頭狀囊腺癌；乳頭狀漿液性囊腺癌；黏液性囊腺癌；黏液性腺癌；戒環細胞癌；浸潤性導管癌；髓質癌；小葉癌；發炎性癌瘤；乳腺佩吉特氏病；腺泡細胞癌瘤；腺鱗癌瘤；腺癌伴鱗狀轉移癌；惡性胸腺瘤；惡性卵巢基質腫瘤；惡性泡膜細胞瘤；惡性粒層細胞腫瘤；及惡性神經母細胞瘤；塞特利氏細胞癌(sertoli cell carcinoma)；惡性萊迪希氏細胞腫瘤(leydig cell tumor)；惡性脂質細胞腫瘤；惡性副神經節瘤；惡性乳腺外副神經節瘤；嗜鉻細胞瘤；血管球肉瘤；惡性黑色素瘤；無黑色素性黑色素瘤；淺表擴散性黑素瘤；巨色素痣惡性黑色素瘤；上皮樣細胞黑色素瘤；惡性藍痣；肉瘤；纖維肉瘤；惡性纖維狀組織細胞瘤；黏液肉瘤；脂肉瘤；平滑肌肉瘤；橫紋肌肉瘤；胚胎性橫紋肌肉瘤；腺泡狀橫紋肌肉瘤；基質肉瘤；惡性混合型腫瘤；穆勒氏混合型腫瘤；腎母細胞瘤；肝母細胞瘤；癌肉瘤；惡性間葉瘤；惡性布倫納氏瘤(brenner tumor)；惡性葉狀腫瘤；滑膜肉瘤；惡性間皮瘤；無性細胞瘤；胚胎性癌；惡性畸胎瘤；惡性卵巢甲狀腺腫；絨毛膜癌；惡性中腎瘤；血管內皮瘤；惡性血管內皮瘤；卡波西氏肉瘤(kaposi's sarcoma)；惡性血管外皮瘤；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；皮質旁骨肉瘤；軟骨肉瘤；惡性軟骨母細胞瘤；間葉軟骨肉瘤；骨骼巨細胞瘤；尤文氏肉瘤(ewing's sarcoma)；惡性牙源性腫瘤；成釉細胞牙肉瘤；惡性成釉細胞瘤；成釉細胞纖維肉瘤；惡性松果體瘤；脊索瘤；惡性神經膠質瘤；室管膜瘤；星形細胞瘤；原生質星形細胞瘤；肌原纖維性星形細胞瘤；星形母細胞瘤；神經膠母細胞瘤；寡樹突神經膠質瘤；寡突神經膠質母細胞瘤；原始神經外胚層瘤；小腦肉瘤；神經節母細胞瘤；神經母細胞瘤；視網膜母細胞瘤；嗅覺神經性腫瘤；惡性腦膜瘤；神經纖維肉瘤；惡性神經鞘瘤；惡性粒狀細胞腫瘤；惡性淋巴瘤；霍奇金氏病(Hodgkin's disease)；霍奇金氏淋巴瘤；類肉芽腫；小淋巴球性惡性淋巴瘤；大細胞彌散性惡性淋巴瘤；濾泡性惡性淋巴瘤；蕈樣黴菌病；其他特定非霍奇金氏淋巴瘤；惡性組織細胞增多症；多發性骨髓瘤；肥大細胞肉瘤；免疫增殖性小腸疾病；白血病；淋巴白血病；漿細胞白血病；紅白血病；淋巴肉瘤細胞白血病；骨髓性白血病；嗜鹼性球白血病；嗜酸性球白血病；單核球性白血病；肥大細胞白血病；巨核母細胞白血病；骨髓肉瘤；或毛細胞白血病。
在一些實施例中，癌症包含乳癌(例如三陰性乳癌)。
在一些實施例中，癌症包含結腸直腸癌(例如小型隨體穩定性(MSS)結腸直腸癌)。
在一些實施例中，癌症包含腎細胞癌。
在實施例中，癌症包含肺癌(例如非小細胞肺癌)。
在一些實施例中，癌症包含膀胱癌。
在一些實施例中，癌症包含胃食道癌。
在一些實施例中，本文所提供之組合物及方法與白血病治療有關。術語「白血病」寬泛地包括造血器官/系統之漸進性惡性疾病，且通常以血液及骨髓中之白血球及其前驅體之畸變增殖及發育為特徵。白血病之非限制性實例包括急性非淋巴球性白血病、慢性淋巴球性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前髓細胞性白血病、成人T細胞白血病、白血球缺乏性白血病、白血球性白血病、嗜鹼性球白血病、母細胞白血病、牛白血病、慢性骨髓細胞性白血病、皮膚白血病、胚胎白血病、嗜酸性球性白血病、格羅斯白血病(Gross' leukemia)、里德爾細胞白血病(Rieder cell leukemia)、希林氏白血病(Schilling's leukemia)、幹細胞白血病、亞白血病性白血病、未分化型細胞白血病、毛細胞白血病、血母細胞性白血病、血胚細胞性白血病、組織細胞性白血病、幹細胞白血病、急性單核球性白血病、白血球減少性白血病、淋巴性白血病、淋巴母細胞白血病、淋巴球性白血病、淋巴生成性白血病、淋巴性白血病、淋巴肉瘤細胞白血病、肥大細胞白血病、巨核細胞白血病、小骨髓母細胞性白血病、單核球性白血病、骨髓母細胞白血病、骨髓細胞性白血病、骨髓顆粒球性白血病、骨髓單核球性白血病、納吉尼白血病(Naegeli leukemia)、漿細胞白血病、漿球性白血病及前髓細胞性白血病。
在一些實施例中，本文所提供之組合物及方法與癌瘤治療有關。術語「癌瘤」係指由上皮細胞構成之惡性生長，其傾向於浸潤周圍組織及/或抵抗生理及非生理細胞死亡信號且引起轉移。非限制性例示性癌瘤類型包括腺泡癌瘤、腺泡狀癌瘤、腺囊癌瘤、腺樣囊性癌症、腺癌瘤、腎上腺皮質癌、肺泡癌、肺泡細胞癌、基底細胞癌、基底樣細胞癌、基底樣癌、基底鱗狀細胞癌、細支氣管肺泡癌、細支氣管癌、支氣管癌、腦樣癌、膽管細胞癌、絨毛膜癌、膠質癌、粉刺性癌、子宮體癌、篩狀癌、鎧甲狀癌、皮膚癌、柱狀癌、柱狀細胞癌、導管癌、硬癌、胚癌、髓樣癌、表皮樣癌、腺狀上皮癌、外生性癌、潰瘍性癌、纖維癌、膠樣癌、膠狀癌、巨細胞癌、印戒細胞癌、單純性癌、小細胞癌、馬鈴薯狀癌、球形細胞癌、梭狀細胞癌、髓狀癌、鱗狀癌、鱗狀細胞癌、繩捆癌、毛細管擴張癌、血管擴張癌、移行細胞癌、塊狀癌、結節性癌、疣狀癌、絨毛狀癌、巨細胞癌、腺癌瘤、粒層細胞癌、毛髮基質癌、血樣癌、肝細胞癌、赫托細胞癌(Hurthle cell carcinoma)、透明癌、腎上腺樣癌、嬰兒胚胎癌、原位癌、表皮內癌、上皮內癌、克隆佩徹氏癌(Krompecher's carcinoma)、庫爾契茨基癌(Kulchitzky-cell carcinoma)、大細胞癌瘤、豆狀癌(lenticular carcinoma)、豆狀癌(carcinoma lenticulare)、脂瘤性癌瘤、淋巴上皮癌、髓樣癌、髓質癌、黑色素癌、軟癌、黏液性癌(mucinous carcinoma)、黏液癌(carcinoma muciparum)、黏液細胞癌、黏液表皮樣癌、黏膜癌、黏液癌(mucous carcinoma)、黏液瘤樣癌瘤、鼻咽癌、燕麥細胞癌、骨化性癌、骨樣癌、乳頭狀癌、門脈周性癌、原位癌、棘細胞癌、腦樣癌、腎臟腎細胞癌、貯備細胞癌、肉瘤樣癌瘤、施耐德癌(schneiderian carcinoma)、硬癌及陰囊癌。
在一些實施例中，本文所提供之組合物及方法與肉瘤治療有關。術語「肉瘤」通常係指由如胚胎結締組織之物質構成且通常由包埋於纖維狀非均質或均質物質中之緊密堆積細胞構成的腫瘤。肉瘤包括(但不限於)軟骨肉瘤、纖維肉瘤、淋巴肉瘤、黑色素肉瘤、黏液肉瘤、骨肉瘤、子宮內膜肉瘤、基質肉瘤、尤文氏肉瘤、筋膜肉瘤、纖維母細胞肉瘤、巨細胞肉瘤、艾伯西式肉瘤(Abemethy's sarcoma)、脂肪肉瘤、脂肉瘤、軟組織肺泡狀肉瘤、成釉細胞肉瘤、葡萄樣肉瘤、綠色肉瘤、絨膜癌瘤、胚胎肉瘤、威耳姆士腫瘤肉瘤(Wilms' umor sarcoma)、顆粒球性肉瘤、霍奇金氏肉瘤、特發性多重色素沉著出血性肉瘤、免疫母細胞B細胞肉瘤、淋巴瘤、免疫母細胞T細胞肉瘤、詹恩遜氏肉瘤(Jensen's sarcoma)、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、庫弗細胞肉瘤(Kupffer cell sarcoma)、血管肉瘤、白血病性肉瘤、惡性間葉瘤肉瘤、骨膜外肉瘤、網狀細胞肉瘤、勞斯肉瘤(Rous sarcoma)、漿液囊性肉瘤、滑膜肉瘤及毛細管擴張性肉瘤。
可使用本文所述之組合物及方法治療的其他例示性贅瘤包括霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、多發性骨髓瘤、神經母細胞瘤、乳癌、卵巢癌、肺癌、橫紋肌肉瘤、原發血小板增多症、原發巨球蛋白血症、小細胞肺腫瘤、原發腦瘤、胃癌、結腸癌、惡性胰島瘤、惡性類癌、惡變前皮膚病變、睪丸癌、淋巴瘤、甲狀腺癌、神經母細胞瘤、食道癌、泌尿生殖道癌、惡性高鈣血症、子宮頸癌、子宮內膜癌、漿細胞瘤、結腸直腸癌、直腸癌及腎上腺皮質癌。
在一些實施例中，所治療之癌症為黑色素瘤。術語「黑色素瘤」意指由皮膚及其他器官之黑色素細胞系統產生之腫瘤。黑色素瘤之非限制性實例為哈-帕二氏黑色素瘤(Harding-Passey melanoma)、幼年型黑色素瘤、惡性雀斑樣痣黑色素瘤、惡性黑色素瘤、肢端雀斑黑色素瘤、無黑色素性黑色素瘤、良性幼年型黑色素瘤、克勞德曼黑色素瘤(Cloudman's melanoma)、S91黑色素瘤、結節性黑色素瘤、陰囊黑色素瘤及淺表擴散性黑色素瘤。
可使用本文所述之組合物及方法治療的特定腫瘤類別包括淋巴增生病症、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、骨癌、肝癌、胃癌、結腸癌、胰臟癌、甲狀腺癌、頭頸癌、中樞神經系統癌、周邊神經系統癌、皮膚癌、腎臟癌以及所有上述者之轉移。特定類型之腫瘤包括肝細胞癌、肝腫瘤、肝母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、食道癌、甲狀腺癌、神經節母細胞瘤、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內皮肉瘤、尤文氏腫瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、侵襲性乳腺管癌、乳頭狀腺癌、黑色素瘤、肺鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌(高分化型、中分化型、低分化型或不分化型)、細支氣管肺泡癌、腎細胞癌、腎上腺樣瘤、腎上腺樣腺癌、膽管癌、絨毛膜癌、精細胞癌、胚胎性瘤、威耳姆士腫瘤、睪丸腫瘤、肺癌(包括小細胞、非小細胞及大細胞肺癌)、膀胱癌、神經膠質瘤、星形細胞瘤、神經管母細胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、視網膜母細胞瘤、神經母細胞瘤、結腸癌、直腸癌、造血性惡性病，包括所有類型之白血病及淋巴瘤，包括：急性骨髓性白血病、急性骨髓細胞性白血病、急性淋巴球性白血病、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴球性白血病、肥大細胞白血病、多發性骨髓瘤、骨髓淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、漿細胞瘤、結腸直腸癌及直腸癌。
在某些實施例中，所治療之癌症亦包括癌變前病變，例如光化性角化症(日光性角化症)、痣(發育異常痣)、光化性唇炎(農夫唇)、皮膚角、巴雷斯特氏食道症(Barrett's esophagus)、萎縮性胃炎、先天性角化不良、缺鐵性吞咽困難、扁平苔癬、口腔黏膜下纖維化、光化性(日光性)彈性組織變性及子宮頸發育不良。
在一些實施例中，所治療之腫瘤包括例如內胚層、外胚層或間葉細胞源之非癌性或良性腫瘤，包括(但不限於)膽管瘤、結腸息肉、腺瘤、乳頭瘤、囊腺瘤、肝細胞腺瘤、水囊狀胎塊、腎小管腺瘤、鱗狀細胞乳頭瘤、胃息肉、血管瘤、骨瘤、軟骨瘤、脂肪瘤、纖維瘤、淋巴管瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤、星形細胞瘤、痣、腦脊髓膜瘤及神經節細胞瘤。 肝病
在一些實施例中，本文所述之組合物及方法與肝病治療有關。此類疾病包括(但不限於)阿拉吉症候群(Alagille Syndrome)、酒精相關肝臟疾病、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、自體免疫肝炎、良性肝臟腫瘤、膽道閉鎖、肝硬化、半乳糖血症、吉爾伯特氏症候群(Gilbert Syndrome)、血色素沈著症、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、肝性腦病、妊娠之肝內膽汁鬱積(ICP)、溶酶體酸脂肪酶缺乏症(LAL-D)、肝臟囊腫、肝癌、新生兒黃疸、原發性膽汁膽管炎(PBC)、原發性硬化性膽管炎(PSC)、雷氏症候群(Reye Syndrome)、I型肝糖貯積病及威爾遜病(Wilson Disease)。 神經退化性疾病
本文所述之組合物及方法及/或固體劑型可用於治療神經退化性疾病及神經疾病。在某些實施例中，神經退化性疾病及/或神經疾病為帕金森氏病(Parkinson's disease)、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、普里昂疾病(prion disease)、亨廷頓氏病(Huntington's disease)、黃斑變性、運動神經元疾病(MND)、脊髓小腦共濟失調、脊髓性肌萎縮、肌肉緊張不足、特發性顱內高血壓、癲癇症、神經系統疾病、中樞神經系統疾病、運動障礙、多發性硬化症、腦病變、周邊神經病變及術後認知功能障礙。 LNP 的 遞送及被細胞內化
在某些態樣中，本文所提供之組合物及方法適用於LNP的遞送及被細胞內化。
在一些實施例中，本文所述之組合物及方法適用於將承載物(例如生物活性劑)遞送至肝細胞(例如肝細胞、肝星形細胞、庫弗細胞或肝竇狀細胞)或遞送至癌細胞或腫瘤細胞(例如原發腫瘤或轉移癌細胞)。在某些實施例中，組合物及方法適用於將承載物(例如生物活性劑)遞送至皮膚、脂肪、肌肉或淋巴結(例如藉由皮下給藥)。在其他實施例中，組合物及方法適用於將承載物(例如生物活性劑)遞送至腦細胞、脾臟細胞(例如脾細胞)、卵巢細胞、肺細胞、腸細胞、心臟細胞、皮膚細胞、眼細胞、骨骼肌細胞、非免疫細胞、T細胞、幹細胞(例如造血細胞)、肺細胞或腎細胞。
在一些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如直接注射、門靜脈注射、導管插入術、支架術)使肝臟或肝細胞與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在某些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如直接注射、導管插入術、支架術)使腎臟或腎細胞與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在一些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如直接注射、導管插入術、支架術)使腫瘤或腫瘤細胞與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在某些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如直接注射、導管插入術、支架術、滲透泵投藥(例如鞘內或心室))使CNS或CNS細胞(例如腦細胞及/或脊髓細胞)與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在一些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如直接注射)使PNS或PNS細胞與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在某些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如投與肺，直接投與肺組織及細胞)使肺或肺細胞與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在一些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如夾鉗、導管插入術、支架術)使血管或血管細胞與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在某些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如直接真皮施用、離子導入療法)使皮膚或皮膚細胞(例如真皮細胞及/或濾泡細胞)與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在一些實施例中，經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如直接注射、眼內注射、眼周注射、視網膜下、離子導入療法、使用滴眼劑、植入體)使眼或眼細胞(例如黃斑、中央窩、角膜、視網膜)與本文所述之組合物接觸，以促進承載物(例如生物活性劑)遞送。
在某些實施例中，正如此項技術中通常所知，使耳或耳細胞(例如內耳、中耳及/或外耳的細胞)與本文所述之組合物接觸，諸如經由非經腸投藥(例如靜脈內、肌肉內、皮下投藥)或局部投藥(例如直接注射)來注射，以促進遞送。
在一些實施例中，使免疫系統細胞(例如抗原呈遞細胞，包括專門的抗原呈遞細胞)與本文所述之組合物在肌肉內接觸，隨後，免疫細胞可浸潤遞送位點且處理所遞送的RNA且/或處理非免疫細胞(諸如肌肉細胞)所產生的經編碼抗原。此類免疫細胞可以包括巨噬細胞(例如骨髓源巨噬細胞)、樹突狀細胞(例如骨髓源漿細胞樣樹突狀細胞及/或骨髓源骨髓樹突狀細胞)、單核球(例如人類周邊血液單核球)等(例如WO2012/006372，該文獻以全文引用的方式併入本文中)。 以引用的方式併入
本文中所提及之所有公開案、專利及專利申請案均以引用的方式併入本文中，其引用的程度如同各個別公開案、專利或專利申請案經具體且個別地指示以引用的方式併入一般。在有抵觸的情況下，以本申請案(包括本文中之任何定義)為凖。 等效物
熟習此項技術者將認識到，或僅使用常規實驗便能夠確定本文所述之本發明特定實施例的許多等效物。希望此類等效物被以下申請專利範圍涵蓋。
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Claims (82)

  1. 一種脂質奈米顆粒(LNP)，其包含一或多種脂質及脂蛋白元E (ApoE)模擬胜肽，其中該ApoE模擬胜肽包含ApoE的受體結合域及脂質結合域。
  2. 如請求項1之LNP，其中該LNP為可離子化LNP。
  3. 如請求項1或2之LNP，其中該一或多種脂質包含可離子化脂質。
  4. 如請求項3之LNP，其中該可離子化脂質包含胺基。
  5. 如請求項4之LNP，其中該胺基為胺頭基。
  6. 如請求項3至5中任一項之LNP，其中該可離子化脂質包含兩個或更多個脂族尾基。
  7. 如請求項6之LNP，其中該可離子化脂質包含二至四個脂族尾基。
  8. 如請求項6或7之LNP，其中該等脂族尾基係疏水性尾基。
  9. 如請求項6至8中任一項之LNP，其中該等脂族尾基各自獨立地為烷基或烯基。
  10. 如請求項3至9中任一項之LNP，其中該可離子化脂質為陽離子型脂質。
  11. 如請求項3至9中任一項之LNP，其中該可離子化脂質為中性脂質。
  12. 如請求項3至11中任一項之LNP，其中該可離子化脂質為兩性離子型脂質。
  13. 如請求項3至12中任一項之LNP，其中該可離子化脂質在生理pH質子化。
  14. 如前述請求項中任一項之LNP，其中該一或多種脂質包含結構性脂質。
  15. 如請求項14之LNP，其中該結構性脂質為類固醇。
  16. 如請求項15之LNP，其中該類固醇為固醇。
  17. 如請求項16之LNP，其中該固醇為膽固醇。
  18. 如前述請求項中任一項之LNP，其中該一或多種脂質包含非陽離子型輔助脂質。
  19. 如請求項18之LNP，其中該非陽離子型輔助脂質為磷脂。
  20. 如請求項18或19之LNP，其中該非陽離子型輔助脂質包含二醯基甘油基團。
  21. 如請求項18至20中任一項之LNP，其中該非陽離子型輔助脂質為甘油磷脂。
  22. 如請求項18至21中任一項之LNP，其中該非陽離子型輔助脂質為磷脂醯膽鹼。
  23. 如請求項18至21中任一項之LNP，其中該非陽離子型輔助脂質不為磷脂醯膽鹼。
  24. 如請求項18之LNP，其中該磷脂為二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)。
  25. 如前述請求項中任一項之LNP，其中該一或多種脂質包含PEG-脂質，其包含與PEG基團共價鍵結的脂質基團。
  26. 如請求項25之LNP，其中該脂質基團為磷脂。
  27. 如請求項25或26之LNP，其中該脂質基團包含二醯基甘油、二烷基甘油或二烷基胺基團。
  28. 如請求項25至27中任一項之LNP，其中該脂質基團為甘油磷脂基團。
  29. 如請求項25之LNP，其中該脂質基團為二肉豆蔻醯基甘油。
  30. 如前述請求項中任一項之LNP，其中該脂質結合域包含A類兩親媒性螺旋域。
  31. 如請求項30之LNP，其中該A類兩親媒性螺旋域為DWLKAFYDKV AEKLKEAF (SEQ ID NO: 1)、DWLRAFYDKVAEKLREAF (SEQ ID NO: 2)、DWLRALYDKVAEKLREAL (SEQ ID NO: 3)、DLLRALYDKVAEKLR EAW (SEQ ID NO: 4)或FAEKLKEAVKDYFAKLWD (SEQ ID NO: 5)。
  32. 如請求項30之LNP，其中該A類兩親媒性螺旋域為DWLKAFYDKV AEKLKEAF (SEQ ID NO: 1)。
  33. 如前述請求項中任一項之LNP，其中ApoE之受體結合域能夠結合至LDL受體。
  34. 如前述請求項中任一項之LNP，其中ApoE之受體結合域為LRKLRKRLLR (SEQ ID NO: 6)、LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)、LRKMRKRLMR (SEQ ID NO: 8)或RLTRKRGLK (SEQ ID NO: 9)。
  35. 如請求項34之LNP，其中ApoE之受體結合域為LRKLRKRLLR (SEQ ID NO: 6)或LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)。
  36. 如請求項34之LNP，其中ApoE之受體結合域為LRRLRRRLLR (SEQ ID NO: 7)。
  37. 如前述請求項中任一項之LNP，其中ApoE之受體結合域共價鍵結至該脂質結合域。
  38. 如請求項37之LNP，其中ApoE之受體結合域的C端共價鍵結至該脂質結合域的N端。
  39. 如前述請求項中任一項之LNP，其中胺基鍵結至該脂質結合域之C端。
  40. 如前述請求項中任一項之LNP，其中醯基鍵結至ApoE之受體結合域的N端。
  41. 如前述請求項中任一項之LNP，其中該ApoE模擬胜肽包含脂肪酸部分。
  42. 如請求項1至39中任一項之LNP，其中該ApoE模擬胜肽包含脂肪酸部分，且該脂肪酸部分鍵結至ApoE之受體結合域的N端。
  43. 如請求項41或42之LNP，其中該脂肪酸部分包含4至20個碳原子之鏈。
  44. 如請求項41至43中任一項之LNP，其中該脂肪酸部分為飽和脂肪酸部分。
  45. 如請求項41至43中任一項之LNP，其中該脂肪酸部分包含一個、兩個或三個烯基團。
  46. 如請求項41或42之LNP，其中該脂肪酸部分係丁醯基、己醯基、辛醯基、癸醯基、月桂醯基、肉豆蔻醯基、肉豆蔻油醯基、棕櫚醯基、硬脂醯基、油醯基、棕櫚油醯基、亞麻油醯基、次亞麻油醯基或花生四烯醯基。
  47. 如請求項46之LNP，其中該脂肪酸部分為辛醯基、肉豆蔻醯基、棕櫚醯基或油醯基。
  48. 如請求項41至45中任一項之LNP，其中該脂肪酸部分包含ω-胺基。
  49. 如請求項48之LNP，其中該脂肪酸部分為4-胺基-丁醯基、6-胺基-己醯基、8-胺基-辛醯基、10-胺基-癸醯基、12-胺基-月桂醯基、14-胺基-肉豆蔻醯基、14-胺基-肉豆蔻油醯基、16-胺基-棕櫚醯基、18-胺基-硬脂醯基、18-胺基-油醯基、16-胺基-棕櫚油醯基、18-胺基-亞麻油醯基、18-胺基-次亞麻油醯基，或20-胺基-花生四烯醯基。
  50. 如請求項48或49之LNP，其中該ω-胺基包含醯基。
  51. 如請求項50之LNP，其中該脂肪酸部分為Ac-Aha。
  52. 如請求項1至29中任一項之LNP，其中該ApoE模擬胜肽為Ac-LRKLRKRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 10)；辛醯基-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 11)；肉豆蔻醯基-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 12)；棕櫚醯基-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEAF-NH 2(SEQ ID NO: 13)；或油醯基-LRRLRRRLLRDWLKAFYDKVAEKLKEA F-NH 2(SEQ ID NO:14)。
  53. 如請求項1至29中任一項之LNP，其中該ApoE模擬胜肽為Ac-Aha-hE18A-NH 2或Ac-Aha-[R]hE18A-NH 2。
  54. 如前述請求項中任一項之LNP，其進一步包含有效負載(payload)。
  55. 如請求項54之LNP，其中該有效負載包含藥物。
  56. 如請求項54或55之LNP，其中該有效負載包含胜肽、多肽、蛋白質或核酸。
  57. 如請求項56之LNP，其中該有效負載包含選自RNA、mRNA、dsRNA、siRNA、反義RNA、核糖核酸酶、CRISPR/Cas9、ssDNA及DNA的核酸。
  58. 如請求項57之LNP，其中該有效負載包含編碼分泌型蛋白、膜結合型蛋白、細胞內蛋白、抗體分子或酶的mRNA。
  59. 如前述請求項中任一項之LNP，其中該LNP經調配用於全身遞送。
  60. 如前述請求項中任一項之LNP，其中該LNP經調配用於非經腸遞送，例如靜脈內、肌肉內、皮下、鞘內或皮內遞送；或經腸遞送，例如經口、直腸或舌下遞送。
  61. 如前述請求項中任一項之LNP，其中該LNP不在生物體中。
  62. 一種醫藥組合物，其包含如前述請求項中任一項之LNP及醫藥學上可接受之載劑。
  63. 一種治療疾病之方法，其包含向個體投與如請求項1至61中任一項之LNP或如請求項62之醫藥組合物。
  64. 如請求項63之方法，其中該疾病為冠狀動脈疾病、類風濕性關節炎、糖尿病、神經退化性疾病、阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、周邊動脈疾病、大腦血管疾病、糖尿病源心血管疾病、黃斑變性、充血性心臟衰竭、全身狼瘡、癌症及增殖性疾病、遺傳病(例如囊腫性纖維化)、自體免疫疾病、心血管疾病、腎血管疾病、代謝疾病、免疫病症、纖維化疾病、炎症及/或感染性疾病。
  65. 如請求項63或64之方法，其中該LNP係全身性遞送至該個體。
  66. 如請求項63至65中任一項之方法，其中該LNP係非經腸遞送至該個體，例如靜脈內、肌肉內、皮下、鞘內或皮內遞送至該個體；或經腸遞送至該個體，例如經口、直腸或舌下遞送至該個體。
  67. 如請求項63至66中任一項之方法，其中該LNP係以約0.01 mg/kg至約500 mg/kg之量投與。
  68. 如請求項63至67中任一項之方法，其中該LNP由細胞內化。
  69. 如請求項68之方法，其中該LNP與不含該ApoE模擬胜肽的相同LNP相比，由細胞內化增加。
  70. 如請求項68或69之方法，其中該細胞為肝臟細胞，例如肝細胞、肝星形細胞、庫弗細胞(Kupffer cell)或肝竇狀細胞。
  71. 如請求項68或69之方法，其中該細胞為腦細胞。
  72. 如請求項68或69之方法，其中該細胞為脾臟細胞，例如脾細胞。
  73. 如請求項68或69之方法，其中該細胞為卵巢細胞、肺細胞、腸細胞、心臟細胞、皮膚細胞、眼細胞或骨骼肌細胞。
  74. 如請求項68至73中任一項之方法，其中該細胞為非免疫細胞。
  75. 如請求項68至74中任一項之方法，其中該細胞為癌細胞。
  76. 如請求項68至75中任一項之方法，其中該細胞為T細胞。
  77. 如請求項68至76中任一項之方法，其中該細胞為幹細胞。
  78. 如請求項77之方法，其中該幹細胞為造血細胞。
  79. 如請求項68至78中任一項之方法，其中該細胞為肺細胞。
  80. 如請求項68至79中任一項之方法，其中該細胞為腎細胞。
  81. 如請求項63至80中任一項之方法，其中該個體的總血漿膽固醇濃度降低。
  82. 如請求項63至81中任一項之方法，其中該個體的血漿LDL濃度、血漿VLDL濃度或兩者均降低。
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