JP2024512770A - 遺伝子送達における非ウイルスベクターとしての樹状構造 - Google Patents

Abstract

インビトロ及びインビボの両方において核酸の細胞内送達を容易にするために、他の脂質成分と組み合わせて使用して核酸を有するナノ粒子を形成することができる新規な樹状構造が本明細書に開示される。この化合物を含むナノ粒子組成物、及び疾患若しくは状態を治療又は予防するためのそれらの使用方法も提供される。【選択図】図９Ｂ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月２日に出願され、発明の名称「ＤＥＮＤＲＩＴＩＣ ＡＲＣＨＩＴＥＣＴＵＲＥＳ ＦＯＲ ＮＵＣＬＥＩＣ ＡＣＩＤ ＤＥＬＩＶＥＲＹ」の米国仮特許出願第６３／１７０，１１９号の利益を主張し、この米国仮特許出願は、参照により、あたかも完全に示されているかのように本明細書に組み込まれる。

分野
本開示は、疾患及び／若しくは障害を治療又は予防するための対象への核酸の効率的な送達のための非ウイルスベクター又は担体としての樹状構造、並びにこの担体及び核酸を含むナノ粒子組成物に関する。本開示は、このナノ粒子組成物を製剤化する方法、並びにそのようなナノ粒子組成物を用いて対象における疾患及び／又は障害を治療する方法にも関する。

核酸ワクチン及び核酸治療薬は、いくつかの疾患又は状態を予防及び治療するための有望なアプローチとして出現している。特定の核酸は、細胞又は血漿中で限られた期間のみ安定であり、それらの高度に荷電した性質は、細胞膜を横切る送達をさらに複雑にする。それゆえ、このような薬剤を安定化し細胞に送達することができる組成物は、特に興味深い（Ｍｅｎｄｅｓら、２０１７、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２２（９）、１４０１；Ｊｏｎｅｓら、２０１３、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １０、４０８２－４０９８；並びにＮｉｓｈｉｋａｗａ及びＨｕａｎｇ、２００１ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． １２、８６１－８７０）。核酸送達ベクターは、理想的には、エンドヌクレアーゼによる核酸分解、細胞内在化、エンドソーム脱出、ベクターからのペイロード放出及び所望の標的へのアクセス等の異なる細胞外及び細胞内の障壁を、そのすべてが最小限の毒性で克服すべきである（Ｊｏｎｅｓら、２０１３、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １０、４０８２－４０９８；Ｎｉｓｈｉｋａｗａ及びＨｕａｎｇ、２００１ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． １２、８６１－８７０；Ｇｏｍｅｓら、２０１４ ＭＲＳ Ｂｕｌｌ． ３９、６０－７０；並びにＤｕｆｅｓら、２００５、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． ５７、２１７７－２２０２）。

脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）系は、その高い核酸封入化効率及び強力なトランスフェクション等のため、遺伝子薬物のための最も高度な送達系であるが、軽度から中程度の局所及び全身性の有害事象が観察されている（Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ． ２０１９年４月１５日；１５：１－１１；Ｔｈｅｒ Ｄｅｌｉｖ． ２０１６；７（５）：３１９－３３４． ｄｏｉ：１０．４１５５／ｔｄｅ－２０１６－０００６）。

生体適合性であるか又はインビボで天然代謝産物に分解可能であることが公知である基本単位（構成要素）を有する、ポリエステルデンドロンと呼ばれるものが報告されている（Ｃａｒｎａｈａｎ及びＧｒｉｎｓｔａｆｆ、２００１、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． １２３、２９０５；Ｃａｒｎａｈａｎ及びＧｒｉｎｓｔａｆｆ、２００１、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ３４、７６４８；並びにＣａｒｎａｈａｎ及びＧｒｉｎｓｔａｆｆ、２００６、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ３９、６０９）。

Ｍｅｎｄｅｓら、２０１７、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２２（９）、１４０１ Ｊｏｎｅｓら、２０１３、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １０、４０８２－４０９８ Ｎｉｓｈｉｋａｗａ及びＨｕａｎｇ、２００１ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． １２、８６１－８７０ Ｇｏｍｅｓら、２０１４ ＭＲＳ Ｂｕｌｌ． ３９、６０－７０ Ｄｕｆｅｓら、２００５、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ． ５７、２１７７－２２０２ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ． ２０１９年４月１５日；１５：１－１１ Ｔｈｅｒ Ｄｅｌｉｖ． ２０１６；７（５）：３１９－３３４． ｄｏｉ：１０．４１５５／ｔｄｅ－２０１６－０００６ Ｃａｒｎａｈａｎ及びＧｒｉｎｓｔａｆｆ、２００１、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． １２３、２９０５ Ｃａｒｎａｈａｎ及びＧｒｉｎｓｔａｆｆ、２００１、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ３４、７６４８ Ｃａｒｎａｈａｎ及びＧｒｉｎｓｔａｆｆ、２００６、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ３９、６０９

一態様では、本発明は、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ若しくはＩｆのデンドロン又はデンドリマーを含む核酸担体に関する。

上記式中、ＰＥは、コアと、１つ以上の世代を形成する複数のモノマー状のポリエステル単位とを含むポリエステル（ＰＥ）デンドロンであり、Ａはアミンであり、Ｂは疎水性単位であり、ｚは表面基の数である。

一態様では、本発明は、本明細書に開示される核酸担体のいずれか１つと、その中に封入された治療用又は免疫原性の核酸剤と、コンジュゲートされた脂質とを含むナノ粒子組成物に関する。一態様では、本発明は、本明細書に開示される核酸担体のいずれか１つと、その中に封入された治療用又は免疫原性の核酸剤と、本明細書に開示される１つのコンジュゲートされた脂質（例えば、ＰＥＧ－脂質）と、細胞内送達及びインビボでのナノ粒子安定性を改善するためのリン脂質及びコレステロール又はその誘導体の混合物とを含むナノ粒子組成物に関する。

一態様では、本発明は、対象における疾患若しくは状態を治療又は予防する方法に関する。この方法は、本明細書に開示されるナノ粒子組成物のいずれか１つを提供する工程と、治療有効量のこれらのナノ粒子組成物を対象に投与する工程とを含む。

本発明の好ましい実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むとより良く理解されるであろう。本発明を説明する目的で、特定の実施形態が図面に示されている。しかしながら、本発明は、示されたまさにその配置及び手段に限定されるわけではないことが理解される。

図１は、ナノ粒子組成物（核酸担体としてのＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジン、ｐＨ５．０で製剤化）のサイズ分布プロファイルを示す動的光散乱（ＤＬＳ）分析を示す。 図２は、ナノ粒子組成物（核酸担体としてのＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジン、ｐＨ６．０で製剤化）のサイズ分布プロファイルを示す動的光散乱（ＤＬＳ）分析を示す 図３は、ＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジンとＲＮＡとの結合を示すアガロースゲルの写真を示す。ゲルは臭化エチジウム（ＥＢ）で染色され、ゲル画像はＳｙｎｇｅｎｅ Ｇ Ｂｏｘイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ（シンジーン）、米国）で撮影された。 図４は、ＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジンナノ粒子に製剤化され、投与の１日後、４日後、及び６日後にマウスから収集された分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レプリコンＲＮＡのインビボでのＳＥＡＰ発現を示す。 図５は、ナノ粒子組成物（核酸担体としてのＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ２－リノール酸、ｐＨ５．０で製剤化）のサイズ分布プロファイルを示す動的光散乱（ＤＬＳ）分析を示す。 図６は、ＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ２－リノール酸とＲＮＡとの結合を示すアガロースゲルの写真を示す。ゲルは臭化エチジウム（ＥＢ）で染色され、ゲル画像はＳｙｎｇｅｎｅ Ｇ Ｂｏｘイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ、米国）で撮影された。 図７は、ＳＥＡＰレプリコンＲＮＡ及びＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ２－リノール酸を含むナノ粒子についてのｑｕａｎｔｉｂｌｕｅアッセイによるインビトロでのＳＥＡＰ発現を示す。 図８Ａ及び図８Ｂは、核酸担体としてのＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸及びＳＥＡＰレプリコンＲＮＡを含有するナノ粒子組成物のサイズ分布プロファイルを示す動的光散乱（ＤＬＳ）分析を示す。 図８Ａ及び図８Ｂは、核酸担体としてのＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸及びＳＥＡＰレプリコンＲＮＡを含有するナノ粒子組成物のサイズ分布プロファイルを示す動的光散乱（ＤＬＳ）分析を示す。 図９Ａは、ＳＥＡＰレプリコンＲＮＡ及びＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸を含有するナノ粒子についてのｑｕａｎｔｉｂｌｕｅアッセイによるインビトロでのＳＥＡＰ発現を示す。 図９Ｂは、ＳＥＡＰレプリコンＲＮＡ及びＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸を含有するナノ粒子についての、投与の３日後にマウスから収集されたインビボでのＳＥＡＰ発現を示す。 図１０は、ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸送達材料とともに製剤化されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクレプリコンＲＮＡによるワクチン接種後のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質に特異的なマウス血清ＩｇＧのエンドポイント希釈抗体価を示す。

特定の用語は、以下の説明において便宜上のみ使用され、限定するものではない。

用語「置換」は、すべての原子の原子価が親構造上で維持されるという条件で、１つの官能基又はその中に含まれる部分を、分子上で別の官能基に変化させることができるということを指す。置換された基は、本明細書において「置換（物）」又は「置換基」と互換的に呼ばれる。任意の所与の構造における複数の位置が特定の群から選択される複数の置換基で置換されている場合、その置換基は、すべての位置で同じであってもよいし異なっていてもよい。

用語「アミン」は、形式的にはアンモニアの誘導体であって、１個以上の水素原子がアルキル基等の置換基で置き換えられているものである。

本明細書で使用される用語「表面基」は、樹状分子の表面上の末端基を意味する。核酸担体の表面は、自己組織化特性を補助し、核酸を集める（ｃｏｎｄｅｎｓｅ）ために、疎水性尾部（本明細書では成分「Ｂ」として記載される）又はアミン（本明細書では成分「Ａ」として記載される）で修飾される。

本明細書で使用される用語「アルキル」は、１～２８個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖炭化水素を意味する。アルキル鎖長は、核酸担体の疎水性及び自己組織化特性を制御するために有用であってもよい。アルキルの代表例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、３－メチルヘキシル、２，２－ジメチルペンチル、２，３－ジメチルペンチル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、及びｎ－デシルが挙げられるが、これらに限定されない。

請求項及び明細書の対応する箇所で使用される用語「ａ」及び「ｏｎｅ（１つ）」は、特に断らない限り、参照される項目の１つ以上を含むものとして定義される。この用語は、上記で具体的に言及した単語、その派生語、及び同様の意味の単語を含む。「Ａ、Ｂ、又はＣ」等の２つ以上の項目のリストに続く「少なくとも１つ」という語句は、Ａ、Ｂ、又はＣの任意の個々の１つ、及びそれらのいずれかの組み合わせを意味する。

非ウイルスベクターは、発癌、免疫原性、及び広範な向性を含む、ウイルスベクターに関連する多くの制限に対処する可能性を有する。「ナノ粒子組成物」は、核酸担体及び核酸ペイロードを含む組成物を指す。核酸ペイロードは、核酸担体によって「担持」されており、核酸担体によって封入されてもよい。

一実施形態は、核酸を集めるため、及び核酸を分解から保護するナノ粒子組成物に自己組織化するためにアミン及び疎水性尾部で修飾された基本単位としてのポリエステルデンドロン（その非限定的な例は２，２－ビスメチロールプロピオン酸（ビス－ＭＰＡ）モノマー系デンドロンである）を含む。一実施形態では、このデンドロンは核酸を細胞に輸送してもよい。

一実施形態は、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ又はＩｆを有する核酸担体を含む。

上記式中、ＰＥはポリエステルデンドロンであって、コアと、このコアの周囲に層状に重なって樹状の構造を形成するモノマー状のポリエステル単位とを含み、各層は世代（Ｇ）と呼ばれ、Ａはアミンであり、Ｂは疎水性単位であり、ｚは表面基の数である。

ＰＥは式ＩＩを有してもよい。

Ｇは、デンドロンの層又は世代であり、ｎは世代数であり、その値は１～１０の範囲にあり、モノマー状のポリエステル単位は、２，２－ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸又は２，２－ビス（ヒドロキシメチル）酪酸であってもよいが、これに限定されない。Ｚは式ＩＩＩを有する。
ｚ＝ｂ^ｎ、式ＩＩＩ
上記式中、ｂは分岐点多重度、又は各分岐点における分岐数であり、ｎは世代数である。

モノマー状のポリエステル単位として２，２－ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸又は２，２－ビス（ヒドロキシメチル）酪酸を含む核酸担体において、分岐点多重度又は各分岐点における分岐数ｂは２である。

コアの構造は、得られる核酸担体のアミン密度及び／又は電荷密度、直径、並びに柔軟性（可撓性）に影響を及ぼしてもよい。これらの属性は、核酸担体の物理化学的特性、核酸とのその相互作用、及び遺伝子導入活性に影響を及ぼしてもよい。

一実施形態では、コアは、以下の足場から選択されてもよく、

上記式中、Ａはアミンであり、Ｂは疎水性単位である。

アミンＡは、孤立電子対を有する１つ以上の窒素原子を含有することによって核酸担体分子にプロトン受容機能性を付与する部分である。従って、アミンは、酸性条件下で遊離プロトン（Ｈ＋）を受け入れることができる。好ましい実施形態では、窒素原子は、第２級アミン又は第３級アミンの形態で存在する。アミンは、以下の部分から選択されてもよい：１－（２－アミノエチル）ピペラジン、１－ピペリジンエタンアミン、１－ジメチルアミノ－２－プロピルアミン、１－（３－アミノプロピル）ピロリジン、１－（２－アミノエチル）ピロリジン、１－（２－アミノエチル）ピペリジン、２－（１－ピペラジニル）エチルアミン、２－（４－メチル－ピペラジン－１－イル）－エチルアミン、３－（ジメチルアミノ）－１－プロピルアミン、３－（ジエチルアミノ）プロピルアミン、（４－アミノブチル）ジメチルアミン、４－（１－ピロリジニル）－１－ブチルアミン、４－モルホリンエタンアミン、４－モルホリンプロパンアミン、４－メチル－１－ピペラジンエタンアミン、４－（ジエチルアミノ）ブチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルジプロピレントリアミン、Ｎ，Ｎ’－ジメチル－Ｎ，Ｎ’－ビス（３－メチルアミノプロピル）トリメチレンジアミン、Ｎ１－（２－アミノエチル）－Ｎ１－メチルプロパン－１，３－ジアミン、Ｎ１－（３－アミノプロピル）－Ｎ１－メチルブタン－１，４－ジアミン、Ｎ１－（４－アミノブチル）－Ｎ１－メチルブタン－１，４－ジアミン、Ｎ１－（３－アミノプロピル）プロパン－１，３－ジアミン、Ｎ１－（３－アミノプロピル）－Ｎ１－メチルプロパン－１，３－ジアミン、３－（（３－アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロパン－１－オール、１－ジメチルアミノ－２－プロパノール、１－［ビス［３－（ジメチルアミノ）プロピル］アミノ］－２－プロパノール、２－ジメチルアミノエタノール、２－（ジエチルアミノ）エタノール、２－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］エタノール、２－（２－アミノエトキシ）エタノール、２－｛［２－（ジメチルアミノ）エチル］メチルアミノ｝エタノール、３－ジメチルアミノ－１－プロパノール、３－ジエチルアミノ－１－プロパノール、４－（ジメチルアミノ）－１－ブタノール、４－ジエチルアミノ－２－ブチン－１－オール、Ｎ－メチルジエタノールアミン、４－（ジエチルアミノ）ブタン－１－オール、３－（アゼチジン－１－イル）プロパン－１－オール、３－（ピロリジン－１－イル）プロパン－１－オール、３－（ピペリジン－１－イル）プロパン－１－オール、４－（アゼチジン－１－イル）ブタン－１－オール、４－（ピロリジン－１－イル）ブタン－１－オール、４－（ピペリジン－１－イル）ブタン－１－オール、３－モルホリノプロパン－１－オール、４－モルホリノブタン－１－オール、３－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロパン－１－オール、４－（４－メチルピペラジン－１－イル）ブタン－１－オール。これらは以下に示すとおりである。

式Ｉの疎水性単位Ｂは、ＰＥデンドロンを脂肪酸又はその誘導体等の官能性試薬と接触させることによって導入されてもよい。脂肪酸は、Ｃ_４～Ｃ_２８鎖を有する飽和又は不飽和の脂肪酸であってもよい。脂肪酸は、アラキドン酸、オレイン酸、エイコサペンタン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、又はリノレン酸であってもよいが、これらに限定されない。脂肪酸誘導体は、１２－ヒドロキシ－９－ｃｉｓ－オクタデセン酸、１２－メチルテトラデカン酸、１２－メチルトリデカン酸、１４－メチルヘキサデカン酸、１４－メチルヘキサデカン酸、１８－メチルノナデカン酸、１９－メチルアラキジン酸、イソパルミチン酸、イソステアリン酸、フィタン酸、（±）－２－ヒドロキシオクタン酸、（±）－３－ヒドロキシデカン酸、（±）－３－ヒドロキシオクタン酸、１０－ヒドロキシデカン酸、１２－ヒドロキシオクタデカン酸、１５－ヒドロキシペンタデカン酸、１６－ヒドロキシヘキサデカン酸、２－ヒドロキシヘキサデカン酸、２－ヒドロキシテトラデカン酸、２－ヒドロキシドデカン酸、ＤＬ－α－ヒドロキシステアリン酸、ＤＬ－β－ヒドロキシラウリン酸、ＤＬ－β－ヒドロキシミリスチン酸、又はＤＬ－β－ヒドロキシパルミチン酸であってもよいが、これらに限定されない。

一実施形態では、当該核酸担体は、インビトロ及びインビボで送達材料を追跡するのに適した官能基を含んでもよい。当該核酸担体は、^１３Ｃ又は^２Ｈ（本明細書では重水素、Ｄ又はｄとも呼ばれる）等の炭素（Ｃ）又は水素（Ｈ）の安定同位体を含有する脂肪酸を有してもよい。この核酸担体がレプリコンＲＮＡ等の核酸とともにナノ粒子に製剤化される場合、そのナノ粒子は、質量分析又は核磁気共鳴画像法等の技術によって、投与後にインビトロ及びインビボで追跡されてもよい。安定同位体の包含は送達分子の特定に有益であってもよい。というのも、これらの同位体は組織中で豊富な^１２Ｃ及び^１Ｈ同位体とは異なるためである。追跡は、投与後のナノ粒子の生体内分布、物質クリアランス及び分子安定性、並びに関連する項目を特定するために有用であってもよい。同位体標識された脂肪酸は、オクタン酸－１－^１３Ｃ、オクタン酸－８－^１３Ｃ、オクタン酸－８，８，８－^２Ｈ３、オクタン酸－^２Ｈ１５、デカン酸－１－^１３Ｃ、デカン酸－１０－^１３Ｃ、デカン酸－１０，１０，１０－^２Ｈ３、デカン酸－^２Ｈ１９、ウンデカン酸－１－^１３Ｃ、ラウリン酸－１２，１２，１２－^２Ｈ３、ラウリン酸－^２Ｈ２３、ラウリン酸－１－^１３Ｃ、ラウリン酸－１，１２－^１３Ｃ２、トリデカン酸－２，２－^２Ｈ２、ミリスチン酸－１４－^１３Ｃ、ミリスチン酸－１－^１３Ｃ、ミリスチン酸－１４，１４，１４－^２Ｈ３、ミリスチン酸－ｄ２７、パルミチン酸－１－^１３Ｃ、パルミチン酸－１６－^１３Ｃ、パルミチン酸－１６－^１３Ｃ，１６，１６，１６－^２Ｈ３、パルミチン酸－^２Ｈ３１、ステアリン酸－１－^１３Ｃ、ステアリン酸－１８－^１３Ｃ、ステアリン酸－１８，１８，１８－^２Ｈ３、ステアリン酸－^２Ｈ３５、オレイン酸－１－^１３Ｃ、オレイン酸－^２Ｈ３４、リノレン酸－１－^１３Ｃ、リノール酸－^２Ｈ３２、アラキドン酸－５，６，８，９，１１，１２，１４，１５－^２Ｈ８、又はエイコサン酸－^２Ｈ３９であってもよいが、これらに限定されない。

一実施形態では、本明細書に記載される核酸担体のいずれか１つを含むナノ粒子組成物が提供される。本開示のナノ粒子組成物は、薬剤を細胞に導入するのに有用であってもよい。薬剤は核酸であってもよい。本開示のナノ粒子組成物は、ワクチンとして有用であってもよい。本開示のナノ粒子組成物は、治療用製剤として有用であってもよい。本開示のナノ粒子組成物は、トランスフェクション剤として有用であってもよい。本開示のナノ粒子組成物は、疾患を治療又は予防する方法において有用であってもよい。

一実施形態では、ナノ粒子組成物は、核酸担体の混合物を含んでもよい。混合物中の核酸担体のうちの１つ以上は、その混合物中の他の核酸担体と比較して、異なるアミン、異なるアミン密度、又は異なる側鎖のうちの少なくとも１つを含んでもよい。これらの核酸担体は、混合物中で固定比であってもよい。３種の樹状分子との混合物の例に関して、第１の核酸担体対第２の核酸担体及び第３の核酸担体の比は、ｉ：ｊ：ｋであってもよく、ｉ、ｊ及びｋは、独立に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、若しくは２０、又は上記の数値の任意の２つの間の値から選択される。

一実施形態では、当該ナノ粒子組成物は、１種以上の治療用又は免疫原性の核酸剤を含んでもよい。本明細書で使用される場合、用語「核酸」は、任意の天然若しくは合成のＤＮＡ若しくはＲＮＡ分子、又はそれらのハイブリッドを指す。核酸は、天然及び／又は合成のヌクレオチドを含んでもよい。核酸分子は、抗体、ホルモン、又は受容体等の治療的利益を有するタンパク質をコードしてもよい。核酸分子は、ウイルス病原体若しくは細菌病原体等の疾患に由来する、又は癌性細胞に由来するタンパク質免疫原をコードしてもよい。核酸分子は、タンパク質をコードしなくてもよく、代わりに、例えばｓｉＲＮＡの形態で、細胞シグナル伝達又はタンパク質発現の調節を介して生物学的効果を発揮してもよい。

一実施形態では、上記治療用又は免疫原性の核酸剤は、ＲＮＡ分子又はＤＮＡ分子であってもよい。核酸剤は、１つ以上の異なるＲＮＡ分子、ＤＮＡ分子、又はそれら２つの組み合わせの混合物であってもよい。用語「ＤＮＡ」又は「ＤＮＡ分子」又は「デオキシリボ核酸分子」は、デオキシリボヌクレオチドのポリマーを指す。ＤＮＡ分子は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、又はｃＤＮＡであってもよい。ＤＮＡ分子は、野生型又は操作されたタンパク質、ペプチド又はポリペプチド、例えば抗原をコードしてもよい。用語「ＲＮＡ」又は「ＲＮＡ分子」又は「リボ核酸分子」は、複数のリボヌクレオチド（例えば、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、又はそれより多いリボヌクレオチド）のポリマーを指す。ＲＮＡ分子は、レプリコンＲＮＡ（ｒｅｐＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、又は転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）であってもよい。レプリコンＲＮＡ（ｒｅｐＲＮＡ）は、感染性子孫ビリオンを産生することができない複製能力のある子孫欠損ＲＮＡウイルスゲノムを指す。ｒｅｐＲＮＡとしての使用のために典型的に改変されるウイルスゲノムは、「プラス鎖」ＲＮＡウイルスを含む。改変されたウイルスゲノムは、ｍＲＮＡ及び複製のための鋳型の両方として機能する。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、ＲＮＡ干渉を誘導又は媒介することができる約１０～５０ヌクレオチド（又はヌクレオチド類似体）を含むＲＮＡ（又はＲＮＡ類似体）を指す。マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、コードｍＲＮＡの安定性及び翻訳のいずれか又は両方に影響を及ぼすことによって真核生物における遺伝子発現の転写後調節に関与する小さい（２０～２４ｎｔ）調節性非コードＲＮＡを指す。メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、通常、一本鎖ＲＮＡであり、１つ以上のポリペプチド鎖のアミノ酸配列を規定する。この情報は、リボソームがｍＲＮＡに結合するタンパク質合成中に翻訳される。ＤＮＡ分子又はＲＮＡ分子は、核酸骨格、リボース糖部分及び核酸塩基自体において化学的に修飾されてもよい。

ＲＮＡ分子は、単シストロン性又は多シストロン性のｍＲＮＡであってもよい。単シストロン性のｍＲＮＡは、タンパク質ポリペプチド又はペプチドをコードする１つの配列のみを含むｍＲＮＡを指す。多シストロン性のｍＲＮＡは、典型的には、２つ以上のタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードする２つ以上の配列を指す。ｍＲＮＡは、抗原として作用するタンパク質、ポリペプチド、又はペプチドをコードしてもよい。

一実施形態では、ＤＮＡ分子は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、又はｃＤＮＡであってもよい。ＲＮＡ分子は、レプリコンＲＮＡ（ｒｅｐＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、又は転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）であってもよい。上記治療用又は免疫原性の核酸剤は、核酸担体に非共有結合で結合されてもよく、又は共有結合で結合されてもよい。治療用又は免疫原性の核酸剤は、イオン結合を介して荷電核酸担体に静電的に結合されてもよい。

一実施形態では、本明細書に記載されるナノ粒子組成物は、抗原をコードする免疫原性又は治療用の核酸剤を含んでもよい。

本明細書で使用される場合、「封入された（る）」は、完全封入、部分封入、又はその両方で、核酸（例えば、メッセンジャーＲＮＡ）等の活性薬剤又は治療剤を提供するナノ粒子を指すことができる。好ましい実施形態では、核酸は、ナノ粒子中に完全に封入されている。核酸治療剤の文脈において、完全封入は、Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ（登録商標）アッセイによって決定されてもよい。ＲｉｂｏＧｒｅｅｎ（登録商標）は、溶液中のオリゴヌクレオチド及び一本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡを定量するための超高感度蛍光核酸染色剤である（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（サーモフィッシャーサイエンティフィック）、米国から入手可能）。

本明細書で使用される「抗原」は、免疫応答を誘発する分子として定義される。免疫応答は、抗体産生、若しくは特定の免疫学的に活性な細胞の活性化のいずれか、又はその両方を含んでもよい。抗原は、タンパク質、ペプチド、又はポリペプチド等の高分子を含む、免疫応答を刺激することができる任意の分子を指してもよい。抗原は、病原体又は癌細胞の構造成分であってもよい。抗原は、宿主において合成されてもよく、組換えによって産生されてもよく、又は組織試料、細胞、若しくは生体液を含むがこれらに限定されない生体試料に由来してもよい。

抗原は、ワクチン抗原、寄生虫抗原、細菌抗原、腫瘍抗原、環境抗原、治療抗原又はアレルゲンであってもよいが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、ヌクレオチドワクチンは、抗原（複数種可）を送達することによって対象の体内で適応免疫応答を刺激することができるＤＮＡ又はＲＮＡベースの予防又は治療用の組成物である。ワクチン接種によって誘導される免疫応答は、典型的には、免疫記憶の発生、及び抗原又は感染因子とのその後の遭遇に迅速に応答する生物の能力をもたらす。

核酸の担体としての本開示における「核酸担体」の使用が好ましく、これが理由で「核酸担体」という名称が適用される。しかしながら、実施形態は、本開示の核酸担体と、負又は部分的に負の電荷を含有する薬剤との組み合わせも含む。この薬剤は薬物であってもよい。

一実施形態では、当該ナノ粒子組成物は、負又は部分的に負の電荷を含有する薬物を含むように製剤化されてもよい。当該ナノ粒子は、核酸担体中のプロトン化アミン基の正電荷との負電荷の静電会合を介して製剤化されてもよい。負に荷電した薬物は、イオン性薬物であってもよい。用語「イオン性薬物」は、水溶性であり、蒸留水の溶液中でイオン化可能である電気的に非対称な分子を指す。イオン性薬物は、リン酸官能基、ホスホン酸官能基、又はホスフィン酸官能基を含有してもよい。リン酸基を含む薬物は、リン酸含有ヌクレオチド類似体、例えば、癌の治療及びウイルス化学療法のために使用される薬物であってもよい。リン酸含有薬物は、プリン及びピリミジンヌクレオシド類似体、アラビノシルシトシン（ａｒａ－Ｃ）、ａｒａ－Ｃ一リン酸（ａｒａ－ＣＭＰ）、アジドチミジン（ＡＺＴ）、ＡＺＴ一リン酸（ＡＺＴＭＰ）、２’３’－ジデオキシシチジン（ｄｄＣＤ）、環状アデノシド一リン酸（ｃＡＭＰ）、テノホビル、又はアデホビルであってもよいが、これらに限定されない。

一実施形態では、本明細書に記載されるナノ粒子組成物は、１種以上の「脂質コンジュゲート」を含んでもよい。脂質コンジュゲートは、粒子の凝集を防ぐのに有用であってもよい。企図される脂質コンジュゲートには、ＰＥＧ－脂質コンジュゲートが含まれるが、これに限定されない。ＰＥＧ－脂質コンジュゲートは、脂質に結合したＰＥＧ（例えば、ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００又はＡＬＣ ０１５９）、リン脂質に結合したＰＥＧ（例えば、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）、コレステロール又はその誘導体にコンジュゲートされたＰＥＧ、及びこれらの混合物であってもよいが、これらに限定されない。ある特定の場合において、ＰＥＧは、アルキル基、アルコキシ基、アシル基、又はアリール基によって随意に置換されてもよい。

様々な鎖長及び飽和度の様々なアシル鎖基を有するホスファチジルエタノールアミンをＰＥＧにコンジュゲートして脂質コンジュゲートを形成することができる。ホスファチジルエタノールアミンは市販されているか、又は従来の技術を用いて単離若しくは合成することができる。ホスファチジルエタノールアミンは、Ｃ_１０～Ｃ_２０の範囲の炭素鎖長を有する飽和又は不飽和脂肪酸を含んでもよい。ホスファチジルエタノールアミンは、一価不飽和脂肪酸又は多価不飽和脂肪酸、並びに飽和脂肪酸及び不飽和脂肪酸の混合物を含んでもよい。企図されるホスファチジルエタノールアミンとしては、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、及びジステアロイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。

ＰＥＧ－脂質は、コレステロール又はコレステロール誘導体にコンジュゲートされたＰＥＧを含んでもよい。コレステロール誘導体の例としては、コレスタノール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、コレステリル－２’－ヒドロキシエチルエーテル、コレステリル－４’－ヒドロキシブチルエーテル、及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。

ＰＥＧは、２つの末端ヒドロキシル基を有するエチレンＰＥＧ繰り返し単位の直鎖水溶性ポリマーである。ＰＥＧは、その分子量によって分類される。例えば、ＰＥＧ２０００は約２，０００ダルトンの平均分子量を有し、ＰＥＧ５０００は約５，０００ダルトンの平均分子量を有する。ＰＥＧは、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（アバンティ・ポーラー・リピド）から市販されている。本明細書に記載されるＰＥＧ－脂質コンジュゲートのＰＥＧ部分は、約５５０ダルトン～約１０，０００ダルトンの範囲の平均分子量を含んでもよい。

当該ナノ粒子組成物中に含まれるＰＥＧ－脂質のサイズ、相対量及び分布は、ナノ粒子組成物の物理的特性に影響を及ぼしてもよい。制御することができる物理的特性は、ナノ粒子の直径、ナノ粒子が凝集する傾向、各ナノ粒子内の核酸分子の数、若しくはナノ粒子組成物中のナノ粒子の濃度、治療用及び免疫原性の核酸剤の細胞内送達の有効性、並びに／又は細胞によるナノ粒子の取り込みの有効性であってもよいが、これらに限定されない。ａ）ＰＣＴ／ＵＳ１９／６７４０２（Ｐｏｕｌａｍｉ Ｔａｌｕｋｄｅｒ、Ｊａｓｄａｖｅ Ｓ． Ｃｈａｈａｌ、Ｊｕｓｔｉｎｅ Ｓ． ＭｃＰａｒｔｌａｎ、Ｏｍａｒ Ｋｈａｎ、Ｋａｒｌ Ｒｕｐｉｎｇ． Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｍａｋｉｎｇ ａｎｄ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｓａｍｅ；ｂ）Ｍｕｉ，Ｂａｒｂａｒａ Ｌら、「Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ Ｌｉｐｉｄ Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｒａｔｅｓ ｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｓｉＲＮＡ Ｌｉｐｉｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ． Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ 第２巻、１２ ｅ１３９． ２０１３年１２月１７日、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｔｎａ．２０１３．６６を参照。これらの文献は、参照により、あたかも完全に示されているかのように本明細書に組み込まれる。

当該ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１０モル％以下のＰＥＧ－脂質を含んでもよい。当該ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり約１０モル％、約９モル％、約８モル％、約７モル％、約６モル％、約５モル％、約４モル％、約３モル％、約２モル％、若しくは約１モル％、又は上述の整数の任意の２つの間の任意の量のＰＥＧ－脂質を含んでもよい。ＰＥＧ－脂質を含むナノ粒子組成物は、ＰＥＧ－脂質を欠く組成物のナノ粒子よりも小さい直径を有するナノ粒子を含んでもよい。当該ナノ粒子組成物は、ＰＥＧ－脂質を欠く組成物のナノ粒子よりも高い凝集傾向を有するナノ粒子も含んでもよい。

ナノ粒子組成物は、「両親媒性脂質」を含んでもよい。本明細書で使用される場合、「両親媒性脂質」は、非極性疎水性「尾部」及び極性「頭部」を有する任意の材料を指す。極性基としては、リン酸基、カルボン酸基、硫酸（スルファト）基、アミノ基、スルフヒドリル基、ニトロ基、ヒドロキシル基、又は他の同様の基を挙げてもよい。非極性基としては、長鎖の飽和及び不飽和の脂肪族炭化水素基、並びに１つ以上のシクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール又は複素環基で置換されたそのような基を挙げてもよいが、これらに限定されない。両親媒性脂質の例としては、リン脂質、アミノ脂質、及びスフィンゴ脂質が挙げられるが、これらに限定されない。リン脂質の代表例としては、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、及びジリノレオイルホスファチジルコリンが挙げられるが、これらに限定されない。

当該ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１０モル％～１５モル％の範囲の量の両親媒性脂質で両親媒性脂質を含んでもよい。

一実施形態では、当該ナノ粒子組成物は、コレステロール又はコレステロール誘導体を含んでもよい。コレステロール誘導体の例としては、コレスタノール、５，６－エポキシコレスタノール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、コレステリル－２’－ヒドロキシエチルエーテル、コレステリル－４’－ヒドロキシブチルエーテル、２４－エチルコレステロール、２４－メチルコレステロール、コレン酸、３－ヒドロキシ－５－コレステン酸、パルミチン酸コレステリル、アラキドン酸コレステリル、アラキジン酸コレステリル、ミリスチン酸コレステリル、パルミトレイン酸コレステリル、リグノセリン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル、ステアリン酸コレステリル、エルカ酸コレステリル、α－リノレン酸コレステロール、リノール酸コレステリル、ホモ－γ－リノレン酸コレステリル、４－ヒドロキシコレステロール、６－ヒドロキシコレステロール、７－ヒドロキシコレステロール、１９－ヒドロキシコレステロール、２０－ヒドロキシコレステロール、２２－ヒドロキシコレステロール、２４－ヒドロキシコレステロール、２５－ヒドロキシコレステロール、２７－ヒドロキシコレステロール、２７－アルキンコレステロール、７－ケトコレステロール、７－デヒドロコレステロール、８－デヒドロコレステロール、２４－デヒドロコレステロール、５α－ヒドロキシ－６－ケトコレステロール、２０，２２－ジヒドロキシコレステロール、７，２５－ジヒドロキシコレステロール、７，２７－ジヒドロキシコレステロール、７－ケト－２５－ヒドロキシコレステロール、フコステロール、フィトステロール、１１，１４－エイコサジエン酸コレステリル、ジメチルヒドロキシエチルアミノプロパンカルバモイルコレステロールヨウ化物及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。コレステロール誘導体は、マンノース、ガラクトース等の糖部分を含んでもよい。コレステロール誘導体は、糖部分及び／又はアミノ酸、例えばセリン、トレオニン、リジン、ヒスチジン、アルギニン若しくはそれらの誘導体を含んでもよい。当該ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり５０モル％～７５モル％の範囲の量のコレステロール又はその誘導体でコレステロール又はコレステロール誘導体を含んでもよい。

一実施形態では、当該ナノ粒子組成物は、薬学的に許容できる担体を含んでもよい。本明細書中で使用される場合、用語「薬学的に許容できる担体」は、対象化合物を１つの器官又は身体の一部から別の器官又は身体の部分へ運搬又は輸送することに関与する薬学的に許容できる材料、組成物又はビヒクル、例えば、液体若しくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、滑沢剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム若しくはステアリン酸亜鉛、若しくはステアリン酸）、若しくは溶媒封入材料を意味する。各薬学的に許容できる担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者に有害でないという意味で「許容できる」。薬学的に許容できる担体として役立ち得る材料のいくつかの例としては、以下が挙げられる：（１）糖、例えばラクトース、グルコース、マンノース及び／若しくはスクロース；（２）デンプン、例えばトウモロコシデンプン及び／若しくはジャガイモデンプン；（３）セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース及び／若しくは酢酸セルロース；（４）粉末トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及び／若しくはタルク；（８）賦形剤、例えば、カカオ脂及び／若しくは坐剤ワックス；（９）油、例えば落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及び／若しくは大豆油；（１０）グリコール、例えばプロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えばグリセリン、ソルビトール、及び／若しくはマンニトール；（１２）エステル、例えばグリセリド、オレイン酸エチル及び／若しくはラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び／若しくは水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）発熱物質を含まない水；（１７）希釈剤、例えば等張食塩水及び／若しくはＰＥＧ４００；（１８）リンゲル液；（１９）Ｃ２～Ｃ１２アルコール、例えばエタノール；（２０）脂肪酸；（２１）ｐＨ緩衝溶液；（２２）増量剤、例えばポリペプチド及び／若しくはアミノ酸；（２３）血清成分、例えば血清アルブミン、ＨＤＬ及びＬＤＬ；（２４）界面活性剤、例えばポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ８０）及び／若しくはポロキサマー；並びに／又は（２５）医薬製剤に採用される他の非毒性適合性物質：例えば、充填剤、結合剤、湿潤剤、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、矯味矯臭剤、芳香剤、保存剤及び／若しくは抗酸化剤。用語「賦形剤」、「担体」、「薬学的に許容できる担体」等は、本明細書において互換的に使用される。

一実施形態は、対象における疾患若しくは状態を治療又は予防する方法を含む。当該方法は、本明細書に記載されるナノ粒子組成物のいずれか１つを提供する工程を含んでもよい。この方法は、治療有効量の当該ナノ粒子組成物を対象に投与する工程を含んでもよい。

本明細書で使用される場合、用語「治療有効量」は、所望の治療効果をもたらすのに有効なナノ粒子組成物の量を指す。治療効果は、動物における細胞の少なくとも亜集団において見られるものであってもよい。治療効果は、医学的治療に適用可能な妥当な利益／リスク比で達成されてもよい。「治療有効量」は、血清中に抗原特異的抗体の出現を生じさせるのに十分な量を指してもよい。「治療有効量」は、疾患症状の減少を引き起こすのに十分な量を指してもよい。「治療有効量」は、疾患症状の消失を引き起こすのに十分な量を指してもよい。ウイルス感染を治療する場合、疾患症状の減少は、糞便中、体液中、又は分泌産物中のウイルスの減少によって評価されてもよい。当該ナノ粒子組成物は、免疫応答を生じさせるのに有効な量及び投与経路を用いて投与されてもよい。当該ナノ粒子組成物は、免疫応答を調節するのに有効な量及び投与経路を用いて投与されてもよい。当該ナノ粒子組成物は、免疫寛容を誘導するために、すなわち、コードされた抗原に対する対象の免疫応答を低減するために投与されてもよい。例えば、一実施形態は、免疫寛容を誘導するためにナノ粒子組成物を投与することを含んでもよい、アレルギー性疾患又は自己免疫疾患を治療する方法を含む。

治療有効性は、所望の結果を達成するために必要な有効量の活性薬剤及び投与時間に依存してもよい。ナノ粒子組成物の投与は、予防措置であってもよい。ナノ粒子組成物の投与は、感染因子に対する免疫を促進し、とりわけ免疫系が弱い患者、高齢者又は乳児における免疫の遅発に関連する合併症を最小限に抑えるための治療措置であってもよい。

正確な投与量は、様々な要因に基づき、個々の患者を考慮して臨床医によって選択されてもよい。投与量及び投与は、十分なレベルの活性薬剤（複数種可）を提供するように、又は所望の効果を維持するように調整されてもよい。例えば、考慮されてもよい因子は、疾患の種類及び重症度；患者の年齢及び性別；薬物の組み合わせ；並びに治療に対する個々の応答を含んでもよい。

ナノ粒子組成物中の活性薬剤の治療有効性及び毒性は、標準的な薬学的手順によって、例えば、インビトロで培養した細胞又は実験動物における集団の５０％における治療有効用量（ＥＤ５０）及び集団の５０％に対する致死用量（ＬＤ５０）を決定することによって決定されてもよい。ナノ粒子組成物は、治療指数と呼ばれる毒性対治療効果の用量比（ＬＤ５０／ＥＤ５０）に基づいて評価されてもよく、その大きい値が評価に使用されてもよい。細胞及び動物研究から得られたデータは、ヒトへの使用のための投与量を策定（処方）する際に使用されてもよい。

治療有効用量は、最初は、細胞培養アッセイから推定されてもよい。治療有効用量は、細胞培養において決定されるＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量の阻害を達成する治療薬の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように動物モデルにおいて策定されてもよい。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定されてもよい。任意の特定の投与量の効果は、適切なバイオアッセイによってモニターされてもよい

投与されるナノ粒子製剤の量は、使用される特定の治療剤（例えば、核酸）、治療される疾患又は障害、患者の年齢、体重、及び状態、並びに臨床医の判断に依存する。治療有効用量は、対象の体重１キログラムあたり０．００１ｎｇ～５０ｍｇの治療用又は免疫原性の核酸であってもよい。治療有効用量は、対象の体重１キログラムあたり０．００１ｎｇ、０．００２ｎｇ、０．００３ｎｇ、０．００４ｎｇ、０．００５ｎｇ、０．００６ｎｇ、０．００７ｎｇ、０．００８ｎｇ、０．００９ｎｇ、０．０１ｎｇ、０．０２ｎｇ、０．０３ｎｇ、０．０４ｎｇ、０．０５ｎｇ、０．０６ｎｇ、０．０７ｎｇ、０．０８ｎｇ、０．０９ｎｇ、０．１ｎｇ、０．２ｎｇ、０．３ｎｇ、０．４ｎｇ、０．５ｎｇ、０．６ｎｇ、０．７ｎｇ、０．８ｎｇ、０．９ｎｇ、０．００１μｇ、０．００２μｇ、０．００３μｇ、０．００４μｇ、０．００５μｇ、０．００６μｇ、０．００７μｇ、０．００８μｇ、０．００９μｇ、０．０１μｇ、０．０２μｇ、０．０３μｇ、０．０４μｇ、０．０５μｇ、０．０６μｇ、０．０７μｇ、０．０８μｇ、０．０９μｇ、０．１μｇ、０．２μｇ、０．３μｇ、０．４μｇ、０．５μｇ、０．６μｇ、０．７μｇ、０．８μｇ、０．９μｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、４９ｍｇ、若しくは５０ｍｇ、又は上述の値の任意の２つの間の範囲内の値の治療用又は免疫原性の核酸であってもよい。治療用及び免疫原性の核酸は、治療用量に従って使用される異なる核酸の組み合わせであってもよい。用語「対象」及び「個体」は、本明細書において互換的に使用され、ヒト又は動物を意味する。好ましくは、動物は、霊長類、げっ歯類、家畜又は狩猟動物等の脊椎動物である。霊長類には、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、及びマカク、例えばアカゲザルが含まれる。げっ歯類は、マウス、ラット、モルモット、ウッドチャック、フェレット、ウサギ及びハムスターから選択されてもよい。家畜又は狩猟動物は、ウシ、ウマ、ブタ、シカ、バイソン、バッファロ、ネコ種、例えば飼いネコ、イヌ種、例えばイヌ、キツネ、オオカミ、トリ種、例えばニワトリ、エミュー、ダチョウ、及び魚類、例えばマス、ナマズ、及びサケから選択されてもよい。患者又は対象は、上述のもの又は上述のもののサブセットから選択されてもよい。患者又は対象は、ヒト、霊長類又はげっ歯類等の１つ以上の群又は種を除外するが上記のすべて、から選択されてもよい。一実施形態では、患者又は対象は、哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトであってもよい。用語「患者」及び「対象」は、本明細書では互換的に使用される。用語「患者」及び「対象」は、本明細書では互換的に使用される。

好ましくは、対象は哺乳動物である。哺乳動物は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、又はウシであってもよいが、これらの例に限定されない。ヒト以外の哺乳動物は、疾患又は障害の動物モデルを表す対象であってもよい。加えて、本明細書に記載される方法は、家畜及び／又はペットを治療することに向けられてもよい。対象は男性（雄性）又は女性（雌性）であってもよい。

本明細書で使用される場合、用語「投与する」、「投与すること」、「投与」等は、対象への組成物の配置を指す。投与は、所望の効果がもたらされるように、所望の部位での組成物の少なくとも部分的な局在化をもたらす方法又は経路によってもよい。本明細書に記載されるナノ粒子組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、気道（エアロゾル）、肺、鼻腔、直腸、若しくは局所（口腔及び舌下を含む）の投与を含む非経口又は経口経路を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において公知の任意の適切な経路によって投与されてもよい。

例示的な投与様式としては、注射、注入、点滴注入、吸入、又は摂取が挙げられるが、これらに限定されない。「注射」には、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、外皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、脳脊髄内、及び胸骨内の注射並びに注入が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、上記組成物は、静脈内への注入又は注射によって投与されてもよい。

当該ナノ粒子組成物は、遺伝子発現を調節する治療用ＤＮＡ又はＲＮＡの送達のために使用されてもよい。治療用核酸は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）又は二本鎖低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）であってもよい。典型的には、ｓｉＲＮＡは２１～２３ヌクレオチド長である。ｓｉＲＮＡは、宿主細胞内で発現される場合、標的遺伝子のｍＲＮＡ転写物に含まれる配列に相補的な配列を含んでもよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、モルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチドであってもよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的遺伝子のｍＲＮＡ転写物に含まれる配列に相補的な配列を含んでもよい。治療用又は免疫原性の核酸は、特定の標的生物内の特定の標的遺伝子に対する干渉ＲＮＡ（ｉＲＮＡ）であってもよい。ｉＲＮＡは、標的ポリヌクレオチドの発現又は翻訳の配列特異的サイレンシングを誘導し、これにより遺伝子発現を下方制御又は防止してもよい。ｉＲＮＡは、標的遺伝子の発現を完全に阻害してもよい。ｉＲＮＡは、未処置対照の発現レベルと比較して、標的遺伝子の発現レベルを低下させてもよい。治療用又は免疫原性の核酸は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）であってもよい。ｍｉＲＮＡは、短いＲＮＡ、例えばヘアピンＲＮＡ（ｈｐＲＮＡ）であってもよい。ｍｉＲＮＡは、内因性細胞酵素の活性によって標的細胞内で生物学的に活性なｄｓＲＮＡに切断されてもよい。ＲＮＡは、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）であってもよい。ｄｓＲＮＡは、少なくとも２５ヌクレオチド長であってもよく、又はより長くてもよい。ｄｓＲＮＡは、標的遺伝子（複数種可）の配列に相補的な配列を含有してもよい。

一実施形態では、治療用又は免疫原性の核酸は、標的タンパク質をコードする１つ以上の遺伝子の活性若しくは合成を全体的若しくは部分的に低減、阻害、干渉、又は調節する薬剤であってもよく、又はその薬剤をコードしてもよい。標的遺伝子は、宿主生物のゲノムに含まれる任意の遺伝子であってもよい。治療用又は免疫原性の核酸の配列は、標的遺伝子の核酸配列に対して１００％相補的又は同一でなくてもよい。

一実施形態では、ナノ粒子組成物は、対象における遺伝情報の標的化された特定の改変のために使用されてもよい。一実施形態は、本開示のナノ粒子組成物の投与を含む、対象において治療的又は免疫原性の影響を有するのに十分な遺伝情報の標的化された特定の改変を含む。本明細書で使用される場合、用語「改変」は、対象の細胞におけるゲノムの任意の変化を指す。改変は、標的遺伝子の配列におけるヌクレオチドの挿入又は欠失であってもよい。「挿入」は、標的遺伝子の配列への１つ以上のヌクレオチドの付加を指す。用語「欠失」は、標的遺伝子の配列中の１つ以上のヌクレオチドの喪失又は除去を指す。改変は、標的遺伝子の配列の修正であってもよい。「修正」は、例えば挿入、欠失又は置換による、標的遺伝子の配列における１つ以上のヌクレオチドの改変であって、宿主生物の遺伝子型及び／又は表現型の改善によって顕在化される当該遺伝子のより好ましい発現をもたらす可能性があるものを指す。

遺伝情報の改変は、ゲノム編集技術を介して達成されてもよい。本明細書で使用される場合、「ゲノム編集」は、正確な又は制御された様式でゲノム中のヌクレオチド配列を変更するプロセスを指す。

例示的なゲノム編集システムは、例えば２０１８年８月３０日に公開され、参照により、あたかも完全に示されているかのように本明細書に組み込まれる国際公開第２０１８／１５４３８７号パンフレットに記載されているＣｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｒｅｇｕｌａｒｌｙ Ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ Ｓｈｏｒｔ Ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ Ｒｅｐｅａｔｓ（クラスター化され、規則的に間隔があいた短い回文構造の繰り返し：ＣＲＩＳＰＲ）システムである。一般に、「ＣＲＩＳＰＲシステム」は、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）遺伝子、例えばＣａｓ遺伝子をコードする配列、ｔｒａｃｒ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ）配列、ｔｒａｃｒ－ｍａｔｅ配列、ガイド配列、又はＣＲＩＳＰＲ遺伝子座からの他の配列及び転写物、の発現に関与する転写物及び他のエレメントを指す。１つ以上のｔｒａｃｒ－ｍａｔｅ配列は、ヌクレアーゼによるプロセシング前にガイド配列に、又はプロセシング後にｃｒＲＮＡに作動可能に連結されてもよい。ｔｒａｃｒＲＮＡ及びｃｒＲＮＡは連結されてもよく、加えて、Ｃｏｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１５：３３９（６１２１）：８１９－８２３（２０１３）及びＪｉｎｅｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３３７（６０９６）：８１６－２１（２０１２）（これらの文献は、参照により、あたかも完全に示されているかのように本明細書に組み込まれる）に記載されるように、成熟ｃｒＲＮＡが合成ステムループを介して部分的ｔｒａｃｒＲＮＡに融合されて、天然ｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ二本鎖を模倣するキメラｃｒＲＮＡ－ｔｒａｃｒＲＮＡハイブリッドを形成してもよい。単一の融合ｃｒＲＮＡ－ｔｒａｃｒＲＮＡ構築物は、本明細書において、ガイドＲＮＡ若しくはｇＲＮＡ、又は一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）とも称される。ｓｇＲＮＡ内では、ｃｒＲＮＡ部分は「標的配列」として特定され、ｔｒａｃｒＲＮＡは「足場」と呼ばれることが多い。一実施形態では、本明細書に記載されるナノ粒子組成物は、ｓｇＲＮＡを送達するために使用されてもよい。

一実施形態では、当該ナノ粒子組成物は、メガヌクレアーゼ、ホーミングエンドヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮベースのシステム、又はジンクフィンガーヌクレアーゼを含めた他の例示的なゲノム編集システムを適用するために使用されてもよい。当該ナノ粒子組成物は、これらの遺伝子編集ツールのための配列をコードする核酸（ＲＮＡ及び／又はＤＮＡ）、並びに実際の遺伝子産物、タンパク質、又は他の分子を送達するために使用されてもよい。

一実施形態では、当該ナノ粒子組成物は、例えば、対象から細胞を単離し、遺伝子を編集し、編集した細胞を対象に移植して戻すことによって、対象におけるインビボ又はエキソビボでの標的遺伝子組換え（ジーンターゲッティング）に使用されてもよい。一実施形態は、本開示のナノ粒子組成物を対象から単離された細胞に投与することを含む方法を含む。この方法は、標的遺伝子組換えを含んでもよい。この方法は、編集された細胞を対象に移植して戻すことを含んでもよい。

一実施形態は、薬剤を細胞に導入する方法を含む。この方法は、細胞を本開示のナノ粒子組成物に曝露することを含んでもよい。薬剤は核酸であってもよい。この方法は、薬剤が核酸である場合のトランスフェクションの方法であってもよい。

実施形態リスト － 以下のリストは、実施形態の非限定的なリストであり、本明細書に別途記載又は例示される実施形態を限定しない。このリスト中の実施形態は、本明細書中の任意の他の実施形態又は実施例からの１つ又は複数の要素で補足されてもよい。このリストにおける一実施形態における要素は、本明細書における任意の他の実施形態又は実施例からの１つ又は複数の要素によって置き換えられてもよい。

１． 式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ若しくはＩｆのデンドロン又はデンドリマーを含む核酸担体であって、

上記式中、ＰＥは、コアと、１つ以上の世代を形成する複数のモノマー状のポリエステル単位とを含むポリエステルデンドロンであり、Ａはアミンであり、Ｂは疎水性単位であり、ｚは表面基の数である、核酸担体。

２． ＰＥは式ＩＩを有し、

上記式中、Ｇはデンドロンの層又は世代であり、ｎは世代数であり、１～１０の範囲にある実施形態１に記載の核酸担体。

３． 上記複数のモノマー状のポリエステル単位は２，２－ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸又は２，２－ビス（ヒドロキシメチル）酪酸を含み、好ましくは、上記複数のモノマー状のポリエステル単位のすべてが２，２－ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸又は２，２－ビス（ヒドロキシメチル）酪酸のいずれかである実施形態１又は２に記載の核酸担体。

４． ｚは式ＩＩＩを有し、
ｚ＝ｂ^ｎ、ＩＩＩ
上記式中、ｂは分岐点多重度、又は各分岐点における分岐数であり、ｎは世代数であり、１～１０の範囲にある実施形態１から実施形態３のいずれか１つに記載の核酸担体。

５． Ａは、１－（２－アミノエチル）ピペラジン、１－ピペリジンエタンアミン、１－ジメチルアミノ－２－プロピルアミン、１－（３－アミノプロピル）ピロリジン、１－（２－アミノエチル）ピロリジン、１－（２－アミノエチル）ピペリジン、２－（１－ピペラジニル）エチルアミン、２－（４－メチル－ピペラジン－１－イル）－エチルアミン、３－（ジメチルアミノ）－１－プロピルアミン、３－（ジエチルアミノ）プロピルアミン、（４－アミノブチル）ジメチルアミン、４－（１－ピロリジニル）－１－ブチルアミン、４－モルホリンエタンアミン、４－モルホリンプロパンアミン、４－メチル－１－ピペラジンエタンアミン、４－（ジエチルアミノ）ブチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルジプロピレントリアミン、Ｎ，Ｎ’－ジメチル－Ｎ，Ｎ’－ビス（３－メチルアミノプロピル）トリメチレンジアミン、Ｎ１－（３－アミノプロピル）プロパン－１，３－ジアミン、Ｎ１－（３－アミノプロピル）－Ｎ１－メチルプロパン－１，３－ジアミン、３－（（３－アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロパン－１－オール、１－ジメチルアミノ－２－プロパノール、１－［ビス［３－（ジメチルアミノ）プロピル］アミノ］－２－プロパノール、２－ジメチルアミノエタノール、２－（ジエチルアミノ）エタノール、２－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］エタノール、２－（２－アミノエトキシ）エタノール、２－｛［２－（ジメチルアミノ）エチル］メチルアミノ｝エタノール、３－ジメチルアミノ－１－プロパノール、３－ジエチルアミノ－１－プロパノール、４－（ジメチルアミノ）－１－ブタノール、４－ジエチルアミノ－２－ブチン－１－オール、Ｎ－メチルジエタノールアミン、４－（ジエチルアミノ）ブタン－１－オール、３－（アゼチジン－１－イル）プロパン－１－オール、３－（ピロリジン－１－イル）プロパン－１－オール、３－（ピペリジン－１－イル）プロパン－１－オール、４－（アゼチジン－１－イル）ブタン－１－オール、４－（ピロリジン－１－イル）ブタン－１－オール、４－（ピペリジン－１－イル）ブタン－１－オール、３－モルホリノプロパン－１－オール、４－モルホリノブタン－１－オール、３－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロパン－１－オール、又は４－（４－メチルピペラジン－１－イル）ブタン－１－オールである実施形態１から実施形態４のいずれか１つに記載の核酸担体。

６． Ｂは脂肪酸（Ｃ４～Ｃ２８）又はその誘導体に由来する実施形態１から実施形態５のいずれか１つに記載の核酸担体。

７． 上記脂肪酸は、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸及びエイコサペンタン酸からなる群から選択される実施形態６に記載の核酸担体。

８． 上記脂肪酸誘導体は、１２－ヒドロキシ－９－ｃｉｓ－オクタデセン酸、１２－メチルテトラデカン酸、１２－メチルトリデカン酸、１４－メチルヘキサデカン酸、１４－メチルヘキサデカン酸、１８－メチルノナデカン酸、１９－メチルアラキジン酸、イソパルミチン酸、イソステアリン酸、フィタン酸、（±）－２－ヒドロキシオクタン酸、（±）－３－ヒドロキシデカン酸、（±）－３－ヒドロキシオクタン酸、１０－ヒドロキシデカン酸、１２－ヒドロキシオクタデカン酸、１５－ヒドロキシペンタデカン酸、１６－ヒドロキシヘキサデカン酸、２－ヒドロキシヘキサデカン酸、２－ヒドロキシテトラデカン酸、２－ヒドロキシドデカン酸、ＤＬ－α－ヒドロキシステアリン酸、ＤＬ－β－ヒドロキシラウリン酸、ＤＬ－β－ヒドロキシミリスチン酸、及びＤＬ－β－ヒドロキシパルミチン酸からなる群から選択される実施形態６に記載の核酸担体。

９． 上記脂肪酸又は誘導体は、１つ以上の安定同位体を含む実施形態６から実施形態８のいずれか１つに記載の核酸担体。

１０． 上記安定同位体は、炭素又は水素の安定同位体である実施形態９に記載の核酸担体。

１１． 炭素の安定同位体は^１３Ｃである実施形態１０に記載の核酸担体。

１２． 水素の安定同位体は^２Ｈである実施形態１０に記載の核酸担体。

１３． 上記安定同位体を含む上記脂肪酸は、オクタン酸－１－１３Ｃ、オクタン酸－８－１３Ｃ、オクタン酸－８，８，８－ｄ３、オクタン酸－２Ｈ１５、デカン酸－１－１３Ｃ、デカン酸－１０－１３Ｃ、デカン酸－１０，１０，１０－ｄ３、デカン酸－ｄ１９、ウンデカン酸－１－１３Ｃ、ラウリン酸－１２，１２，１２－２Ｈ３、ラウリン酸－２Ｈ２３、ラウリン酸－１－１３Ｃ、ラウリン酸－１，１２－１３Ｃ２、トリデカン酸－２，２－２Ｈ２、ミリスチン酸－１４－１３Ｃ、ミリスチン酸－１－１３Ｃ、ミリスチン酸－１４，１４，１４－２Ｈ３、ミリスチン酸－２Ｈ２７、パルミチン酸－１－１３Ｃ、パルミチン酸－１６－１３Ｃ、パルミチン酸－１６－１３Ｃ，１６，１６，１６－２Ｈ３、パルミチン酸－２Ｈ３１、ステアリン酸－１－１３Ｃ、ステアリン酸－１８－１３Ｃ、ステアリン酸－１８，１８，１８－２Ｈ３、ステアリン酸－２Ｈ３５、オレイン酸－１－１３Ｃ、オレイン酸－２Ｈ３４、リノレン酸－１－１３Ｃ、リノール酸－２Ｈ３２、アラキドン酸－５，６，８，９，１１，１２，１４，１５－２Ｈ８、及びエイコサン酸－２Ｈ３９からなる群から選択される実施形態１０に記載の核酸担体。

１４． 実施形態１から実施形態１３のいずれか１つに記載の核酸担体と、その中に完全に又は部分的に封入された治療用又は免疫原性の核酸剤とを含むナノ粒子組成物。

１５． 上記治療用又は免疫原性の核酸剤は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｒｅｐＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ及びｍＲＮＡからなる群から選択される実施形態１４に記載のナノ粒子組成物。

１６． 上記治療用又は免疫原性の核酸剤は、感染性疾患（感染症）、病原体、癌、自己免疫疾患及びアレルゲン性疾患（アレルギー誘発性疾患、ａｌｌｅｒｇｅｎｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ）からなる群から選択される１つ以上の抗原をコードする実施形態１４に記載のナノ粒子組成物。

１７． 上記治療用又は免疫原性の核酸剤は、遺伝子の活性をサイレンシング、阻害若しくは変更することができるＲＮＡ又はＤＮＡを含む実施形態１４に記載のナノ粒子組成物。

１８． ＰＥＧ－脂質をさらに含む実施形態１４から実施形態１７のいずれか１つに記載のナノ粒子組成物。

１９． 上記ＰＥＧ－脂質は１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］又は１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００である実施形態１８に記載のナノ粒子組成物。

２０． 上記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１モル％～１０モル％のＰＥＧ－脂質の範囲で上記ＰＥＧ－脂質を含む実施形態１８又は実施形態１９に記載のナノ粒子組成物。

２１． リン脂質及びコレステロール又はその誘導体をさらに含む実施形態１８から実施形態２０のいずれか１つに記載のナノ粒子組成物。

２２． 上記リン脂質は、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）又はジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）である請求項２１に記載のナノ粒子組成物。

２３． 上記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１０モル％～１５モル％のリン脂質の範囲で上記リン脂質を含む実施形態２１又は実施形態２２に記載のナノ粒子組成物。

２４． 上記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり５０モル％～７５モル％のコレステロール又はその誘導体の範囲で上記コレステロール又はその誘導体を含む実施形態２１から実施形態２３のいずれか１つに記載のナノ粒子組成物。

２５． 対象における疾患若しくは状態を治療又は予防する方法であって、治療有効量の実施形態１から実施形態２４のいずれか１つに記載のナノ粒子組成物を対象に投与する工程を含む、方法。

２６． 上記治療有効量の上記ナノ粒子組成物は、上記対象の体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇの核酸～１０ｍｇの核酸の範囲で上記治療用又は免疫原性の核酸剤を含む実施形態２５に記載の方法。

２７． 上記対象は哺乳動物である実施形態２５又は実施形態２６の方法。

２８． 上記哺乳動物は、げっ歯類、イヌ、霊長類、ウマ、高価値農業動物、及びヒトからなる群から選択される実施形態２５から実施形態２７のいずれか１つに記載の方法。

以下の非限定的な実施例は、特定の実施形態を例示するために提供される。全体を通して、実施形態は、以下の１つ以上の実施例からの１つ以上の詳細で補足されてもよく、及び／又はある実施形態からの１つ以上の要素は、以下の１つ以上の実施例からの１つ以上の詳細で置換されてもよい。

理想的な核酸担体は、生体内蓄積及びその後の細胞毒性を防ぐために生分解性であることができよう。高世代はより高いパッケージングを有し、従って生分解が困難である。生分解性を維持し細胞毒性を回避しながら、核酸と複合体を形成し細胞膜を横断して移行することができる低世代デンドロンが必要とされている。

実施例１． 式［Ｉ］ａの核酸担体
一実施形態では、モノマー単位上に存在する化学結合はエステル結合であり、低世代ポリエステルデンドロンの末端層はアミド結合を介してアミンで置換した。これは、アミン表面基とその焦点における親油性単位とを有する界面活性剤様デンドロンがどのように自己組織化し、その後高親和性で核酸に結合することができるかについての構造－活性関係の理解を発展させる。

スキーム１は、第２世代の修飾ポリエステルデンドロン及び修飾に使用することができるアミン（Ａ）の概略図である。このスキームでは、アルキル鎖Ｂは、Ｃ_１０～Ｃ_２８のいずれか１つから選択することができる。ＰＥ－デンドロン－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジンの合成の例は以下の通りである。

化合物１：５０ｍｌの丸底フラスコ（ＲＢＦ）に入れた１ｍｌのＴＨＦにヘキサデシルアジド（ＭＷ：２６７．２、１０６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を溶解し、次いでＴＨＦ（０．５ｍｌ）に溶解したアルキン、ＰＥ－Ｇ２－アセチレン－ＯＨ（８０ｍｇ、０．２ｍｏｌ）をＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（７．８ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ、１０モル％）及びアスコルビン酸ナトリウム（１２．３ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ、２０モル％）、及び脱気したＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ、１：１）とともに加えた。この反応混合物を２３℃で１６時間（ｈ）撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は６５％移動相ｂで溶出し（１：１の移動相ａ／移動相ｂにおいてＲ_ｆ＝０．６）、所望の生成物を黄色油状物として収量１２０ｍｇ（９０％）で得た。

化合物２：化合物１（１２０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ又はＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）に溶解し、ピリジン（０．３ｍｌ、１．４４ｍｍｏｌ）を加え、続いて乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解したクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（５８０ｍｇ、２．８８ｍｍｏｌ、ＭＷ２０１．６、１６当量）を加えた。翌日、反応混合物を１．３３Ｍ ＮａＨＳＯ_４で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｒｏｔａｖａｐで濃縮し、ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。この化合物は８．５％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶出した（９：１ ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃにおいてＲ_ｆ＝０．７）。反応物の収量は１７５ｍｇ（７４％）であった。１Ｈ ＮＭＲ（３０１ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ０．８３－０．８９（ｍ，３Ｈ） １．２０－１．３５（ｍ，４０Ｈ） １．７９－１．９０（ｍ，２Ｈ） ２．０２－２．０４（ｍ，３Ｈ） ４．０６－４．１５（ｍ，２Ｈ） ４．２６－４．４５（ｍ，１３Ｈ） ４．４５－４．４９（ｍ，１Ｈ） ５．２５－５．３０（ｍ，２Ｈ） ７．３３－７．４１（ｍ，８Ｈ） ７．５７－７．６１（ｍ，１Ｈ） ８．１８－８．３０（ｍ，８Ｈ）。

^１３Ｃ ＮＭＲ（７６ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ １４．０９（ｓ，１Ｃ） １４．１７（ｓ，１Ｃ） １７．５８（ｓ，１Ｃ） １７．６２（ｓ，１Ｃ） ２１．０３（ｓ，１Ｃ） ２２．６５（ｓ，１Ｃ） ２６．４５（ｓ，１Ｃ） ２８．９５（ｓ，１Ｃ） ２９．３１（ｓ，１Ｃ） ２９．３６（ｓ，１Ｃ） ２９．４９（ｓ，１Ｃ） ２９．５６（ｓ，１Ｃ） ２９．６１（ｓ，１Ｃ） ２９．６４（ｓ，１Ｃ） ３０．２２（ｓ，１Ｃ） ３１．８８（ｓ，１Ｃ） ４６．５３（ｓ，１Ｃ） ４６．６７（ｓ，１Ｃ） ５０．４４（ｓ，１Ｃ） ５８．４２（ｓ，１Ｃ） ６０．３７（ｓ，１Ｃ） ６５．７０（ｓ，１Ｃ） ６９．０８（ｓ，１Ｃ） ７７．２０（ｓ，１Ｃ） １２１．７５（ｓ，１Ｃ） １２３．９１（ｓ，１Ｃ） １２５．２６（ｓ，１Ｃ） １２５．２８（ｓ，１Ｃ） １２５．３０（ｓ，１Ｃ） １４１．６１（ｓ，１Ｃ） １４５．５４（ｓ，１Ｃ） １５２．０７（ｓ，１Ｃ） １５５．１７（ｓ，１Ｃ） １７０．９７（ｓ，１Ｃ） １７２．０１（ｓ，１Ｃ）。

化合物３：乾燥ＤＣＭ（０．９ｍＬ）に溶解した化合物２（９０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した過剰のアミン１－（３－アミノプロピル）ピロリジン（７２ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）に加えた。ＤＭＡＰ（１７ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．０５ｍｍｏｌ、０．５６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加え、この反応混合物をアルゴン雰囲気下、２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は８０％移動相ｂで溶出し（Ｒ_ｆ＝０．２（７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ）、所望の生成物を黄色油状物（３０ｍｇ、３５％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_６６Ｈ_１１６Ｎ_１０Ｏ_１５に対する計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｚ １２８９．７、実測値１２８９．７。

実施例２． 式［Ｉ］ｂの核酸担体
本出願では、モノマー単位上に存在する化学結合はエステル結合であり、焦点にアミンを有する低世代ポリエステルデンドロンの末端層は、エステル結合を介して疎水性尾部で置換し、これにより構造全体を加水分解しやすくし、従って生分解性にした。アルキル鎖を有するそのような低世代デンドロンは、核酸と非共有結合的に組み合わされて、それらの動的平衡化性質を通してナノ粒子を形成することができる。これは、疎水性単位表面基（Ｂ）とその焦点におけるアミン（Ａ）とを有する界面活性剤様デンドロンがどのように自己組織化し、その後高親和性で核酸に結合することができるかについての構造－活性関係の理解を発展させる。本実施例の代表的な構造を以下に示す。

実施例３． 式［Ｉ］ｃの核酸担体
この構造は、異なる世代であってもよい２つの共有結合した樹状セグメントを含み、直鎖が樹状セグメントの１つに結合している。合成戦略は、銅触媒アジド－アルキン環状付加（ＣｕＡＡＣ）反応の化学選択性を利用した。焦点にアジド及び一級アセチレンを有する２つの別々のデンドロンをＴＨＦ中で効率的にカップリングさせた。一方のデンドロンは周囲（末梢）にアミンを有し、他方のデンドロンは周囲に疎水性尾部を有する。本実施例の代表的な構造を以下に示す。

化合物４：出発物質ＰＥデンドロンＧ２アセチレン－ＯＨ（３００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（６ｍＬ）に溶解し、ピリジン（０．９ｍｌ、４．９６ｍｍｏｌ）を加え、続いて乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解したクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（２．１ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え、この反応混合物を０℃から室温（ｒｔ）で１６時間撹拌した。翌日、ＴＬＣは生成物の形成を示した。この反応混合物を１．３３Ｍ ＮａＨＳＯ_４で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、Ｒｏｔａｖａｐで蒸発させた。次いで、この粗生成物を、ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。この化合物は４５％ＥｔＯＡｃで溶出し始め（１：９ ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭにおいてＲ_ｆ＝０．９）、所望の生成物を淡黄色油状物（５５３ｍｇ、７０％）として得た。

化合物５：乾燥ＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解した化合物４（１５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した過剰のＮＭｅ_２ＥＤＡ（０．０８ｍｌ、０．７ｍｍｏｌ）に加えた。ＤＭＡＰ（３４ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．１ｍｌ、０．５６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加え、この反応混合物を窒素雰囲気下、２３℃で１６時間撹拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、２４ｇカラムにロード（負荷）し、６０％ウルトラ／ＤＣＭで溶出した（７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．２５）；収量１２０ｍｇ（９０％）。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_３８Ｈ_６８Ｎ_８Ｏ_１４に対する計算値 ［Ｍ］＋ ｍ／ｚ ８６１．００、実測値８６１．４。

化合物６：ＰＥ－Ｇ２－アジド－ＯＨ（ＭＷ：４９１．５４、５４ｍｇ、１１４μｍｏｌ）を５０ｍｌのＲＢＦに入れ、次いでＴＨＦ（０．６ｍＬ）に溶解したアルキン（ＭＷ：８６０、９８ｍｇ、１１４μｍｏｌ）をＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（３ｍｇ、１１．４μｍｏｌ、１０モル％、ＭＷ２４９．６９）、アスコルビン酸ナトリウム（４．５ｍｇ、２２．８μｍｏｌ、２０モル％、ＭＷ１９８．１１）及び脱気したＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ、１：１）とともに加え、この反応混合物を２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は７０％移動相ｂで溶出した（移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．２）；収量１２０ｍｇ（９０％）。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_５９Ｈ_１０５Ｎ_１１Ｏ_２４に対する計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｚ １３５２．７３、実測値１３５２．６。

化合物７：化合物６（３０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）をピリジン（２ｍｌ）に溶解した。氷浴中、アルゴンで１０分間フラッシュした後、塩化リノレオイル（０．０４ｍｌ、０．１１ｍｍｏｌ、５．５当量、ＭＷ２９８、ＳＤ０．９３）を滴下し、０℃から２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は、９０％移動相ｂで溶出した（移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．４５）；収量２０ｍｇ（３６％）。１Ｈ ＮＭＲ（３０１ＭＨｚ、クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ０．８２－０．９０（ｍ，１２Ｈ） １．１２－１．１６（ｍ，６Ｈ） １．１９－１．３９（ｍ，７９Ｈ） １．５０－１．６７（ｍ，９Ｈ） １．９７－２．０７（ｍ，１６Ｈ） ２．１６－２．２４（ｍ，２４Ｈ） ２．２４－２．３１（ｍ，９Ｈ） ２．３７－２．４５（ｍ，６Ｈ） ２．７１－２．７９（ｍ，７Ｈ） ３．１８－３．２８（ｍ，６Ｈ） ４．０１－４．２９（ｍ，２４Ｈ） ４．３２－４．３９（ｍ，１Ｈ） ５．２４－５．４０（ｍ，１６Ｈ） ５．５９－５．７０（ｍ，２Ｈ） ７．７１－７．７６（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_１３１Ｈ_２２５Ｎ_１１Ｏ_２８に対する計算値 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ｍ／ｚ １２０１．３、実測値１２０１．８。

化合物８：ＰＥ－Ｇ２－アジド－ＯＨ（２５０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（６ｍＬ）に溶解し、ピリジン（０．９ｍｌ、１１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて乾燥ＤＣＭ（１６ｍＬ）に溶解したクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（１．６ｇ、８．１６ｍｍｏｌ、ＭＷ２０１．６、１６当量）を加え、この反応混合物を０℃から２３℃で１６時間撹拌した。翌日、ＴＬＣは生成物の形成を示した。この反応混合物を１．３３Ｍ ＮａＨＳＯ_４で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、Ｒｏｔａｖａｐで蒸発させた。次いで、この粗生成物を、ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。この化合物は４％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶出した（Ｒ_ｆ＝０．８（１９：１ ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ））。収量１３５ｍｇ（２３％）。

化合物９：乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した化合物８（１３５ｍｇ、０．１１７ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した過剰のＮＭｅ２ＥＤＡ（０．０７７ｍｌ、０．７ｍｍｏｌ）に加えた。ＤＭＡＰ（２９ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．０８ｍｌ、０．４６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加え、この反応混合物をアルゴン雰囲気下、２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は６０％移動相ｂで溶出した（移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．３５）。収量７０ｍｇ（６３％）。

化合物１０：化合物９（７０ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を５０ｍｌのＲＢＦに入れ、１ｍｌのＴＨＦに溶解したアルキン（２９．９ｍｇ、０．０７４ｍｏｌ）をアジドに加え、ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（２ｍｇ、０．００７４ｍｍｏｌ、１０モル％）をアスコルビン酸ナトリウム（３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、２０モル％）及び脱気したＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ、１：１）とともに加えた。この反応混合物を２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は７０％移動相ｂで溶出した（移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．２５）。収量５０ｍｇ（５０％）。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_５９Ｈ_１０５Ｎ_１１Ｏ_２４に対する計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｚ １３５２．７３、実測値１３５２．６。

化合物１１：化合物１０（５０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）をピリジン（２ｍｌ）に溶解した。氷浴中、アルゴンで１０分間フラッシュした後、塩化リノレオイル（０．０６５ｍｌ、０．２０３ｍｍｏｌ、５．５当量、ＭＷ２９８、ＳＤ０．９３）を滴下し、０℃から２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（４０ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は７０％移動相ｂで溶出した（移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．８５）；収量３０ｍｇ（３４％）。１Ｈ ＮＭＲ（３０１ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ０．８２－０．９１（ｍ，１２Ｈ） １．１４－１．４１（ｍ，８４Ｈ） １．５０－１．６８（ｍ，１０Ｈ） １．９６－２．０７（ｍ，１５Ｈ） ２．１７－２．２５（ｍ，２６Ｈ） ２．２６－２．３１（ｍ，６Ｈ） ２．３６－２．４５（ｍ，７Ｈ） ２．７０－２．７９（ｍ，７Ｈ） ３．１７－３．２７（ｍ，６Ｈ） ４．０７－４．２４（ｍ，２２Ｈ） ４．２７－４．３８（ｍ，３Ｈ） ５．２２－５．４１（ｍ，１６Ｈ） ５．５７－５．６６（ｍ，２Ｈ） ７．６５－７．６９（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_１３１Ｈ_２２５Ｎ_１１Ｏ_２８に対する計算値 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ｍ／ｚ １２０１．３、実測値１２０１．８。

実施例４． 式［Ｉ］ｄの核酸担体
この構造は、異なる世代であってもよい２つの共有結合した樹状セグメントを含み、直鎖が樹状セグメントの１つに結合している。この合成戦略も、ＣｕＡＡＣ反応の化学選択性を利用した。焦点にアジド及び一級アセチレンを有する２つの別々のデンドロンをＴＨＦ中で効率的にカップリングさせた。本実施例の実施形態は、同じ構造における異なる種類の尾部の導入を可能にする。本実施例の代表的な構造を以下に示す。

化合物１２：乾燥ＤＣＭ（６ｍＬ）に溶解した化合物４（４３８ｍｇ）の溶液を、乾燥ＤＣＭ（６ｍＬ）に溶解した過剰のモノ－Ｂｏｃ－ＤＡＰＭＡ（０．４５ＭＬ）に加えた。ＤＭＡＰ（１００ｍｇ）及びＤＩＰＥＡ（０．２９ｍｌ）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加え、この反応混合物をアルゴン雰囲気下、２３℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣにより、反応が完了したことを確認した。粗生成物をＲｏｔａｖａｐ中、減圧下で濃縮し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は、４５％移動相ｂで溶出し（１：１移動相ａ／移動相ｂにおけるＲ_ｆ＝０．４）、所望の生成物を淡黄色油状物（４０４ｍｇ、６６％）として得た。

化合物１３：ＰＥ－Ｇ２－アジド－ＯＨ（ＭＷ：４９１．５４、５８ｍｇ、１１４μｍｏｌ）を５０ｍｌのＲＢＦに入れ、次いでＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解した化合物１２（ＭＷ：１４７５．８２、１７３ｍｇ、１１４μｍｏｌ）をＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（３ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、１０モル％、ＭＷ２４９．６９）及びアスコルビン酸ナトリウム（４．６ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、２０モル％、ＭＷ１９８．１１）及び脱気したＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ、１：１）とともに加えた。この反応混合物を２３℃で１６時間撹拌した。翌日、ＴＬＣにより反応が完了したことを確認した。この反応混合物を、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は５６％移動相ｂで溶出し（Ｒ_ｆ＝０．４（７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ）、所望の生成物を黄色油状物（１４０ｍｇ、６０％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_９１Ｈ_１６５Ｎ_１５Ｏ_３２に対する計算値 ［Ｍ＋４Ｈ］４＋ ｍ／ｚ ７９５．５、実測値７９４．９；［Ｍ＋３Ｈ］３＋ ｍ／ｚ １０５９．９６、実測値１０６０．２。

化合物１４：化合物１３（１３７ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）をピリジン（２ｍｌ）に溶解した。氷浴中、アルゴンで１０分間フラッシュした後、塩化リノレオイル（０．１３ｍｌ、０．４１ｍｍｏｌ、６当量、ＭＷ２９８、ＳＤ０．９３）を滴下し、０℃から２３℃で１６時間撹拌した。この反応混合物を２３℃で１６時間撹拌した。翌日、ＴＬＣにより反応が完了したことを確認した。この反応混合物をＲｏｔａｖａｐで蒸発させ、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は５０％移動相ｂで溶出し（Ｒ_ｆ＝０．６（７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ）、所望の生成物を黄色油状物（１００ｍｇ、４８％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_１６３Ｈ_２８５Ｎ_１５Ｏ_３６に対する計算値 ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋ ｍ／ｚ １５１５．５、実測値１５１６．１；［Ｍ＋３Ｈ］^３＋ ｍ／ｚ １０１０．３、実測値１０１１．０；１Ｈ ＮＭＲ（３０１ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ０．８４－０．９０（ｍ，１２Ｈ） １．１１－１．３６（ｍ，９１Ｈ） １．４０－１．４３（ｍ，４０Ｈ） １．５２－１．７０（ｍ，２６Ｈ） １．９８－２．０７（ｍ，１５Ｈ） ２．１６－２．２９（ｍ，２０Ｈ） ２．３４－２．４５（ｍ，１５Ｈ） ２．７０－２．７８（ｍ，６Ｈ） ３．０７－３．２５（ｍ，１７Ｈ） ４．０１－４．２５（ｍ，２６Ｈ） ４．３２－４．４０（ｍ，１Ｈ） ５．２７－５．４３（ｍ，１９Ｈ） ５．９３－６．２０（ｍ，１Ｈ） ７．７１－７．７７（ｍ，１Ｈ）。

化合物１５（ＰＥデンドロン－Ａ１－リシノール酸．ＰＥデンドロン－リノール酸）：１００ｍｇの化合物１４（０．０３３ｍｍｏｌ）を、その化合物を３ｍｌのＭｅＯＨに溶解した後、２０当量のＡｃＣｌ（０．０４７ｍｌ、０．６６ｍｍｏｌ）で処理し、この反応物を０℃から２３℃で４時間撹拌し、蒸発乾固させ、この粗生成物の半分を２ｍｌのＤＭＦに溶解し、０．０４５ｍｌのＥｔ_３Ｎ（０．３３ｍｍｏｌ）を加え、続いて１ｍｌのＤＭＦに溶解したリシノール酸－ＮＨＳ（３９ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）を加えた。翌日、この反応混合物を濃縮し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は、４５％移動相ｂで溶出し（Ｒ_ｆ＝０．８５（７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ）、所望の生成物を黄色油状物（５０ｍｇ、４１％）として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３０１ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ） δ ｐｐｍ ０．８４－０．８９（ｍ，２２Ｈ） １．０６－１．１７（ｍ，１４Ｈ） １．２０－１．３３（ｍ，１３３Ｈ） １．４１－１．４６（ｍ，１３Ｈ） １．５３－１．７０（ｍ，３７Ｈ） １．９８－２．０７（ｍ，２２Ｈ） ２．１１－２．２１（ｍ，３４Ｈ） ２．２３－２．３２（ｍ，７Ｈ） ２．３５－２．４４（ｍ，１８Ｈ） ２．７１－２．７８（ｍ，４Ｈ） ３．１３－３．３０（ｍ，１９Ｈ） ３．５５－３．６３（ｍ，５Ｈ） ３．６６－３．７８（ｍ，１Ｈ） ４．０２－４．３９（ｍ，２７Ｈ） ５．１８－５．５７（ｍ，２０Ｈ） ６．１７－６．２８（ｍ，２Ｈ） ６．８２－６．９１（ｍ，２Ｈ） ７．７０－７．８０（ｍ，１Ｈ）。

実施例５． 式［Ｉ］ｅの核酸担体
この構造は、異なる世代であってもよい２つの共有結合した樹状セグメントと、樹状セグメントの１つに結合している直鎖とを含む。焦点にアジド及び一級アセチレンを有する２つの別々のデンドロンはカップリングしてヘテロ官能性樹状構造を形成し、一方のセグメントは表面上にアミンを組み込むように修飾され、他方のセグメントはアミン及び尾部の両方を組み込むように修飾される。本発明は、１つのアミンが核酸を集めてもよいのに対して、他のアミンはエンドソーム内部で強い緩衝能を有してもよく、従って塩酸及び水のさらなる流入を有してもよく最終的にペイロードのエンドソーム破裂をもたらす、同じ構造に異なるタイプのアミンを導入することを可能にする。本実施例の代表的な構造を以下に示す。

化合物１６：乾燥ＤＣＭ（０．５ｍＬ）に溶解した化合物８（９０ｍｇ、ＭＷ１１５１．９５、０．０７８ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した過剰の４－（２－アミノエチル）モルホリン（８０ｍｇ、０．９９２ｇ／ｍｌ、ＭＷ１３０．１９、０．６３ｍｍｏｌ、８当量）に加えた。ＤＭＡＰ（１９ｍｇ、ＭＷ１２２．１７、０．１５６ｍｍｏｌ、２当量）及びＤＩＰＥＡ（０．３１２ｍｍｏｌ、ＭＷ１２９．２４、ｄ０．７４２ｇ／ｍｌ、４当量）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加え、この反応混合物をアルゴン雰囲気下、２３℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣにより、反応が完了したことを確認した。この粗生成物をＲｏｔａｖａｐ中、減圧下で濃縮し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いる２４ｇのシリカカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は２４％移動相ｂで溶出し（１：１移動相ａ／移動相ｂにおけるＲ_ｆ＝０．７）、所望の生成物を淡黄色油状物（７９ｍｇ，９１％）として得た。

化合物１７：化合物１６（ＭＷ：１１１６、７９ｍｇ、８０μｍｏｌ）を５０ｍｌのＲＢＦに入れ、次いでＴＨＦ（０．６ｍＬ）に溶解したアルキン、ＰＥ－Ｇ２－アセチレン－Ｂｏｃアミン１又は化合物１２（ＭＷ：１４８９、１０５ｍｇ、７０μｍｏｌ）をＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（２ｍｇ、０．０７μｍｏｌ、１０モル％、ＭＷ２４９．６９）及びアスコルビン酸ナトリウム（３ｍｇ、１４．８μｍｏｌ、２０モル％、ＭＷ１９８．１１）及び脱気したＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ、１：１）とともに加えた。この反応混合物を２３℃で１６時間撹拌した。翌日、ＴＬＣにより反応が完了したことを確認した。この反応混合物を、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いる２４ｇシリカカラム上でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は６５％移動相ｂで溶出し（Ｒ_ｆ＝０．２（２：１移動相ｂ／移動相ａ））、所望の生成物を黄色油状物（７５ｍｇ、４１％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_１１９Ｈ_２１３Ｎ_２３Ｏ_４０に対する計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋ ｍ／ｚ ８６９．４、実測値８６９．１８。

化合物１８：５０ｍｇの化合物１７（０．０１９ｍｍｏｌ）を、その化合物を３ｍｌのＭｅＯＨに溶解した後、２０当量の（０．０２４ｍｌ、０．３８ｍｍｏｌ）で処理し、この反応物を０℃から２３℃で４時間撹拌し、蒸発乾固させ、この粗生成物を２ｍｌのＤＭＦに溶解し、Ｅｔ_３Ｎ（０．０５３ｍｌ、０．３８ｍｍｏｌ、ＭＷ１０１．１９、ｄ０．７２６）を加え、続いて１ｍｌのＤＭＦに溶解したリシノール酸－ＮＨＳ（４６ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ、ＭＷ３９５．２７）を加えた。翌日、この反応混合物を濃縮し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は７５％移動相ｂで溶出し（Ｒ_ｆ＝０．５５（７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ））、所望の生成物を黄色油状物（５０ｍｇ、４１％）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_１７１Ｈ_３０９Ｎ_２３Ｏ_４０に対する計算値 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ｍ／ｚ １６６４．６、実測値１６６４．４。

実施例６． 式［Ｉ］ｆの核酸担体
この構造は、異なる世代であってもよい２つの共有結合した樹状セグメントと、樹状セグメントの１つに結合している直鎖とを含む。焦点にそれぞれアジド及び一級アセチレンを有する２つの別々のデンドロンがカップリングして、ホモ官能性樹状構造を形成する。本実施例の代表的な構造を以下に示す。

化合物１９：ＰＥ－Ｇ１－アジド－ＯＨ（２５０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ、ＭＷ２５９．３）を乾燥ＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、ピリジン（０．６ｍｌ、７．６８ｍｍｏｌ、８当量）を加え、続いて乾燥ＤＣＭ（８ｍｌ）に溶解したクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（５２５ｍｇ、ｍｍｏｌ、ＭＷ２０１．６、２．７当量）を加え、この反応混合物を０℃から２３℃で１６時間撹拌した。翌日、ＴＬＣは生成物の形成を示した。この反応混合物を１．３３Ｍ ＮａＨＳＯ_４で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、Ｒｏｔａｖａｐで蒸発させた。次いで、この粗生成物を、ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。この化合物を２％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭで溶出した（Ｒ_ｆ＝０．８（１９：１ ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ）。収量１９０ｍｇ（３３％）。

化合物２０：乾燥ＤＣＭ（０．５ｍＬ）に溶解した化合物１９（１９０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、５８９．５１）の溶液を、乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した過剰のＢｏｃアミン１（２３７ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ、３当量）に加えた。ＤＭＡＰ（７９ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．２２ｍｌ、１．２８ｍｍｏｌ、ＭＷ１２９．２４、ｄ０．７４２）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加え、この反応混合物をアルゴン雰囲気下、２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は４０％移動相ｂで溶出した（移動相ａ／移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．５５）。収量１４０ｍｇ（５４％）。

化合物２１：ＰＥ－Ｇ１－アセチレン－ＯＨ（６４１ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（６ｍＬ）に溶解し、（５．４ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を加え、続いて乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶解したクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（２ｇ、１０ｍｍｏｌ、２．７当量）を加え、この反応混合物を０℃から２３℃で１６時間撹拌した。翌日、ＴＬＣは生成物の形成を示した。反応混合物を１．３３Ｍ ＮａＨＳＯ_４で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、Ｒｏｔａｖａｐで蒸発させた。次いで、この粗生成物を、ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。この化合物をＤＣＭで溶出した（Ｒ_ｆ＝０．７（１９：１ ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ）。収量７６５ｍｇ（４１％）。

化合物２２：乾燥ＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解した化合物２１（３５０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、ＭＷ５０２．４）の溶液を、乾燥ＤＣＭ（６ｍＬ）に溶解した過剰のＢｏｃアミン１（５１３ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ、ＭＷ２４５．４）に加えた。ＤＭＡＰ（１７０ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４９ｍｌ、２．８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加え、この反応混合物をアルゴン雰囲気下、２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（４０ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は５０％移動相ｂで溶出した（移動相ａ／移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．５５）。収量３００ｍｇ（６０％）。

化合物２３：アジドである化合物２０（ＭＷ：８０２．０３、７０ｍｇ、０．０８７ｍｏｌ）を５０ｍｌのＲＢＦに溶解し、次いで、ＴＨＦ（０．６ｍＬ）に溶解したアルキンである化合物２２（ＭＷ：７４２．４８、６５ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）を、ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（７ｍｇ、３０モル％、ＭＷ２４９．６９）及びアスコルビン酸ナトリウム（１１ｍｇ、６０モル％、ＭＷ１９８．１１）、及び脱気したＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ、１：１）とともに加えた。この反応混合物を２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は６５％移動相ｂで溶出した（１：１移動相ａ／移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．６５）。収量７０ｍｇ（５０％）。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_７１Ｈ_１３３Ｎ_１５Ｏ_２０に対する計算値 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ｍ／ｚ ７５９．０、実測値７５８．６。

化合物２４：７０ｍｇの化合物２３（０．０２７ｍｍｏｌ）を、この化合物を３ｍｌのＭｅＯＨに溶解した後、２０当量のＡｃＣｌ（０．０４ｍｌ、０．５４ｍｍｏｌ）で処理し、この反応物を０℃から２３℃で５時間撹拌し、蒸発乾固させ、この粗生成物を２ｍｌのＤＭＦに溶解し、Ｅｔ_３Ｎ（０．０８ｍｌ、０．５４ｍｍｏｌ）を加え、続いて１ｍｌのＤＭＦに溶解したリシノール酸－ＮＨＳ（６４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、６当量）を加えた。翌日、この反応混合物を濃縮し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は７４％移動相ｂで溶出し（Ｒ_ｆ＝０．８５（２：１移動相ｂ／移動相ａ））、所望の生成物を黄色油状物（３２ｍｇ、３１％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_１２３Ｈ_２２９Ｎ_１５Ｏ_２０に対する計算値 ［Ｍ＋２Ｈ］２＋ ｍ／ｚ １１１９．９、実測値１１１９．３；［Ｍ＋３Ｈ］３＋ ｍ／ｚ ７４６．６、実測値７４６．５。

化合物２５：アジド、ＰＥ－Ｇ１－アジド－ＯＨ（２３０ｍｇ、０．８９ｍｏｌ、ＭＷ２５９．３）を２５ｍｌのＲＢＦに入れ、次いで、ＴＨＦ（０．６ｍＬ）に溶解したアルキン、ＰＥ－Ｇ２－アセチレン－ＯＨ（３２７ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、ＭＷ４０４．４）を、ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（２２ｍｇ、１０モル％、ＭＷ２４９．６９、３５ｍｇを使用した）及びアスコルビン酸ナトリウム（３５ｍｇ、２０モル％、ＭＷ１９８．１１：実際の５０ｍｇを加えた）、及び脱気したＴＨＦ：Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ、１：１）とともに加え、この反応混合物を２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は６５％移動相ｂで溶出した（１：１移動相ａ／移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．６０）。収量３９８ｍｇ（７４％、ＭＷ６６３．３２）。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_２９Ｈ_４９Ｎ_３Ｏ_１４に対する計算値 ［Ｍ＋Ｈ］＋ ｍ／ｚ ６６３．３、実測値６６３．８。

化合物２６：化合物２５（３４９ｍｇ、０．５２６ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（８．５ｍＬ）に溶解し、それに、ドライアイス中で冷却して、ピリジン（０．３４ｍｌ、４．２１ｍｍｏｌ、８当量）を加え、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解したクロロギ酸ｐ－ニトロフェニル（１．７ｇ、８．４２ｍｍｏｌ、２０１．５ＭＷ）を加え、この反応混合物を０℃から室温で１６時間撹拌した。翌日、ＴＬＣは生成物の形成を示した。この反応混合物を１．３３Ｍ ＮａＨＳＯ_４及びブラインで洗浄し、蒸発させた。次いで、ロードした化合物を、ＤＣＭ（Ａ）／ＥｔＯＡｃ（Ｂ）を用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。生成物を２％ＥｔＯＡｃで溶出した（Ｒ_ｆ＝０．４（１９：１ ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ））。収量５７３ｍｇ（６６％）。

化合物２７：乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した化合物２６（２５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）に溶解した過剰のＢｏｃアミン１（２２３ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）に加えた。ＤＭＡＰ（３７ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．１１ｍｌ、１．２６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）溶液を加え、この反応混合物をアルゴン雰囲気下、２３℃で１６時間撹拌した。次いで、翌日、溶媒を真空中で除去し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム（２４ｇ）上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は５３％移動相ｂで溶出した（１：１移動相ａ／移動相ｂにおけるシリカゲルＴＬＣ Ｒ_ｆ＝０．６）。収量２６０ｍｇ（７５％）。

化合物２８（ＰＥデンドロン－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥデンドロン－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸）：１００ｍｇの化合物２７（０．０４４ｍｍｏｌ、ＭＷ２２９０．４６）を、その化合物を３ｍｌのＭｅＯＨに溶解した後、２０当量のＡｃＣｌ（０．０６ｍｌ、０．８７ｍｍｏｌ）で処理し、この反応物を０℃から２３℃で５時間撹拌し、蒸発乾固させ、この粗生成物を２ｍｌのＤＭＦに溶解した。０．１２ｍｌのＥｔ_３Ｎ（０．８７ｍｍｏｌ）を加え、続いて１ｍｌのＤＭＦに溶解したリシノール酸－ＮＨＳ（１３８ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加えた。翌日、この反応混合物を濃縮し、１００％ＣＨ_２Ｃｌ_２（移動相ａ）から７５：２２：３ ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ／ＮＨ_４ＯＨａｑ（体積による、移動相ｂ）への４０分にわたる勾配溶出を用いるシリカカラム上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物は６０％移動相ｂで溶出し（１：１の移動相ａ／移動相ｂにおけるＲ_ｆ＝０．７）、所望の生成物を黄色油状物（９８ｍｇ、４５％）として得た。ＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ_１８５Ｈ_３４３Ｎ_２１Ｏ_３２に対する計算値 ［Ｍ＋３Ｈ］３＋ ｍ／ｚ １１２５．６、実測値１１２５．２；［Ｍ＋４Ｈ］４＋ ｍ／ｚ ８４３．９、実測値８４４．１。

実施例７． 式Ｉａの核酸担体を含有するナノ粒子製剤
１：０．５：２．４：０．０４のモル比のＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジン：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＤＭＧ－ＰＥＧ２ｋを含有するナノ粒子を、ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ Ｂｅｎｃｈｔｏｐ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ＮａｎｏＳｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ（プレシジョン・ナノシステムズ）、バンクーバー、ブリティッシュコロンビア州、カナダ）を使用して製剤化した（ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）。ＲＮＡをＤＮａｓｅ／ＲＮａｓｅフリー、エンドトキシンフリー蒸留水及び滅菌クエン酸緩衝液で最終所望のｐＨまで希釈した。総流量は、Ｂｅｎｃｈｔｏｐ上での製剤化のために、水相対有機相の３：１比で１２ｍＬ／分で維持した。２５０℃で２４時間加熱することによって発熱物質を除去したガラス製品を使用して、ナノ粒子を、２０，０００分子量カットオフ透析を使用して、無菌のエンドトキシンフリーのＰＢＳに対して透析した。透析したナノ粒子を、０．２ミクロン（０．２μｍ）のポリ（エーテルスルホン）フィルタを用いて滅菌濾過し、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ ＮａｎｏＺＳ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ（マルバーン））を用いて特徴付けた。封入効率は、Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ（登録商標）アッセイ（Ｇｅａｌｌら、１０．１０７３／ｐｎａｓ．１２０９３６７１０９（参照により、完全に示されているかのように本明細書に組み込まれる））を使用して、ＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジン及びＳＥＡＰレプリコンＲＮＡを含有するナノ粒子組成物（ｐＨ５で製剤化）について９０％であると測定された。

流体力学的サイズ測定
図１及び図２に示すように、ＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジン及びＳＥＡＰレプリコンＲＮＡを含有するナノ粒子組成物のサイズの関数としての「Ｚ平均」を、動的光散乱（ＤＬＳ）によって決定した。「Ｚ平均」は、動的光散乱（ＤＬＳ）により測定した粒子のアンサンブル集団（ｅｎｓｅｍｂｌｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）の強度加重平均流体力学的サイズである。図１に示すように、最も強い強度が、サイズ１９２．５ｄ．ｎｍのナノ粒子について観察された（ｐＨ５．０の製剤）。このサイズ分布は、低い多分散指数を有する単一のピークを特徴とし、これは、比較的単分散のサイズを示す。

ゲル遅延度アッセイ
公知の方法（Ｇｅａｌｌら、１０．１０７３／ｐｎａｓ．１２０９３６７１０９（これは、参照により、あたかも完全に示されているかのように本明細書に組み込まれる））に従って、デンドロン担体とＲＮＡとの結合を評価するためにアガロースゲル電気泳動を行った。図３は、ＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジンとレプリコンＲＮＡとの結合を示すアガロースゲルの写真である。ゲルを臭化エチジウム（ＥＢ）で染色し、ゲル画像をＳｙｎｇｅｎｅ Ｇ Ｂｏｘイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ、米国）で撮影した。図３に示すように、レーン１は、ＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジン及びＳＥＡＰレプリコンＲＮＡの製剤化の生成物（ｐＨ５．０の製剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ））を含有し、レーン２は、ＰＥ－Ｇ２－ヘキサデシル－プロピルピロリジン及びＳＥＡＰレプリコンＲＮＡの製剤化の生成物（ｐＨ６．０の製剤）を含有し、レーン３は、未製剤化のＳＥＡＰ ｍＲＮＡを含有した。ロードの前に、試料をホルムアルデヒドローディング色素とともにインキュベートし、６５℃で１０分間変性させ、２３℃に冷却した。ゲルを９０Ｖで泳動し、ゲル画像をＳｙｎｇｅｎｅ Ｇ Ｂｏｘイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ、米国）で撮影した。ＲＮＡ検出のために、ゲルを臭化エチジウムで染色した。図３に示すように、下側のバンドは、小さいサイズの遊離ＲＮＡに対応し（レーン３）、上側のバンドは、核酸担体へのＲＮＡの結合によって形成される大きいサイズのナノ粒子を表す。

インビボＳＥＡＰ産生結果
式Ｉａの核酸担体の製剤を試験するために、分泌型胎盤アルカリホスファターゼＳＥＡＰレポーター系を使用した。インビボ試験のために、マウスに５μｇの用量のＳＥＡＰレプリコンＲＮＡでナノ粒子を注射し、投与の１日後、４日後及び６日後にマウスから血清を採取した。ＳＥＡＰ検出のためのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（インビトロジェン） ＮｏｖａＢｒｉｇｈｔ（商標）Ｐｈｏｓｐｈａ－Ｌｉｇｈｔ（商標）ＥＸＰ Ａｓｓａｙキットを製造業者のプロトコルに従って使用して定量した。マウス血清試料中のＳＥＡＰの量を、ＢｉｏＴｅｋ（バイオテック） Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴＸマイクロプレートリーダーで測定して、任意単位（Ａ．Ｕ．）で報告する。エラーバーは±Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。図４に示すように、より弱い結合のためにｐＨ６．０製剤からＲＮＡがより早く放出されるので、ＳＥＡＰ量はｐＨ５．０と比較してｐＨ６．０製剤でより高いことが観察された。

実施例８． 式Ｉｄの核酸担体を含有するナノ粒子製剤
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］（ＰＥＧ－脂質、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ）と組み合わせた式Ｉｄの核酸担体（例えば、ＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ２－リノール酸）を含有するエタノール相３０μｌと、１０ｍＭの最終クエン酸塩濃度まで超高純度、ＤＮａｓｅ／ＲＮａｓｅフリー、エンドトキシンフリー蒸留水（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び滅菌１００ｍＭ（ｐＨ５．０）ＱＢクエン酸緩衝液（Ｔｅｋｎｏｖａ（テクノバ））で希釈したＳＥＡＰレプリコンＲＮＡ９０μｌとの直接混合物によって、ナノ粒子を製剤化した。得られたナノ粒子は、１６：２．３：６の質量比の核酸担体対ＰＥＧ－脂質対レプリコンＲＮＡを含有した。Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ（マルバーン・パナリティカル））を用いた粒子サイズ分布、Ｚ平均の分析のために、製剤を１０００倍希釈した。

流体力学的サイズ測定
図５は、ナノ粒子のサイズ（ｄ．ｎｍ；ｎｍ単位の直径）に基づく強度として測定したナノ粒子組成物の分布を示す。図５に示すように、「Ｚ平均」は、動的光散乱（ＤＬＳ）により測定した粒子のアンサンブル集団の強度加重平均流体力学的サイズである。図５に示すように、サイズ２３４．５ｄ．ｎｍのナノ粒子について最も強い強度が観察された。

ゲル遅延度アッセイ
公知の方法（Ｇｅａｌｌら、１０．１０７３／ｐｎａｓ．１２０９３６７１０９（これは、参照により、あたかも完全に示されているかのように本明細書に組み込まれる））に従って、ＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ２－リノール酸とＲＮＡとの結合を評価するためにアガロースゲル電気泳動を行った。図６は、ＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ２－リノール酸とＳＥＡＰレプリコンＲＮＡとの結合を示すアガロースゲルの写真である。ゲルを臭化エチジウム（ＥＢ）で染色し、ゲル画像をＳｙｎｇｅｎｅ Ｇ Ｂｏｘイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ、米国）で撮影した。図６に示すように、レーン１は未製剤化のＳＥＡＰ ＲＮＡレプリコンを含有し、レーン２はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ２－リノール酸及びＳＥＡＰレプリコンＲＮＡの製剤化の生成物を含有した。ロードの前に、試料をホルムアルデヒドローディング色素とともにインキュベートし、６５℃で１０分間変性させ、２３℃に冷却した。ゲルを９０Ｖで泳動し、ゲル画像をＳｙｎｇｅｎｅ Ｇ Ｂｏｘイメージングシステム（Ｓｙｎｇｅｎｅ、米国）で撮影した。ＲＮＡ検出のために、ゲルを臭化エチジウムで染色した。図６に示すように、下側のバンドは、小さいサイズの遊離ＲＮＡに対応し（レーン１）、上側のバンドは、核酸担体へのＲＮＡの結合によって形成される大きいサイズのナノ粒子を表す（レーン２）。

インビトロＳＥＡＰ産生結果
上記ナノ粒子組成物がインビトロでＳＥＡＰを発現する能力を試験するために、ＢＨＫ細胞をナノ粒子で処理した。ＢＨＫの１２ウェルディッシュの各ウェルを、１：１ Ｏｐｔｉｍｅｍ：ＰＢＳ混合物を用いて５００μＬの最終体積に希釈した製剤生成物の１０μＬ（約１μｇ）で処理した。非処理ウェルは、５００μＬの５０／５０ＰＢＳ／ＯｐｔｉＭＥＭを有した。処理又はトランスフェクションの２４時間後、各培養物から馴化培地を回収した。ＱｕａｎｔｉＢｌｕｅアッセイ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（インビボジェン））を用いて培地を分析した。１５０μＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ試薬を５０μＬの培地と混合した。製造業者のプロトコルによって指示されるように６５０ｎｍでの吸光度を測定することによって、１０分後に読み取りを行った。無処理試料又は陰性対照については、ナノ粒子で処理していないウェルからの培地５０μＬを１５０μＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ試薬に加えた。図７は、核酸担体としてＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ２－リノール酸を含有するナノ粒子製剤のインビトロでのＳＥＡＰ発現を示す。

実施例９． 式Ｉｆの核酸担体を含有するナノ粒子製剤
１：０．６：２．８８：０．１のモル比のＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ－ＰＥＧ２ｋを含有するナノ粒子を、ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒ Ｂｅｎｃｈｔｏｐ（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ＮａｎｏＳｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ、バンクーバー、ブリティッシュコロンビア州、カナダ）を使用して製剤化した。ＲＮＡをＤＮａｓｅ／ＲＮａｓｅフリー、エンドトキシンフリー蒸留水及び滅菌クエン酸緩衝液で最終所望のｐＨまで希釈した。総流量は、Ｂｅｎｃｈｔｏｐ上での製剤化のために、水相対有機相の３：１比で１０ｍＬ／分で維持した。２５０℃で２４時間加熱することによって発熱物質を除去したガラス製品を使用して、ナノ粒子を、２０，０００分子量カットオフ透析を使用して、無菌のエンドトキシンフリーのＰＢＳに対して透析した。透析したナノ粒子を、０．２ミクロン（０．２μｍ）のポリ（エーテルスルホン）フィルタを用いて滅菌濾過し、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ ＮａｎｏＺＳ装置（Ｍａｌｖｅｒｎ）を用いて特徴付けた。封入効率は、Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ（登録商標）アッセイ（Ｇｅａｌｌら、１０．１０７３／ｐｎａｓ．１２０９３６７１０９（参照により、完全に示されているかのように本明細書に組み込まれる））を使用して、ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸及びＳＥＡＰレプリコンＲＮＡ（ｐＨ６で製剤化）を含有するナノ粒子組成物について９３％及び９０％であると測定された。

流体力学的サイズ測定
図８Ａ及び図８Ｂは、ナノ粒子のサイズ（ｄ．ｎｍ；ｎｍ単位の直径）に基づく強度として測定されたナノ粒子組成物の分布を示す。図８Ａ及び図８Ｂに示すように、それぞれ、サイズ８６．９０ｄ．ｎｍ及びサイズ１０２．６ｄ．ｎｍのナノ粒子について最も強い強度が観察された。これらのサイズ分布は、低い多分散指数を有する単一のピークを特徴とし、これは、比較的単分散のサイズを示す。

インビトロＳＥＡＰ産生結果
上記ナノ粒子組成物がインビトロでＳＥＡＰを発現する能力を試験するために、ＢＨＫ細胞をナノ粒子で処理した。ＢＨＫの１２ウェルディッシュの各ウェルを、１：１ Ｏｐｔｉｍｅｍ：ＰＢＳ混合物を用いて５００μＬの最終体積に希釈した製剤生成物の１０μＬ（約１μｇ）で処理した。非処理ウェルは、５００μＬの５０／５０ＰＢＳ／ＯｐｔｉＭＥＭを有した。処理又はトランスフェクションの２４時間後、各培養物から馴化培地を回収した。ＱｕａｎｔｉＢｌｕｅアッセイ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いて培地を分析した。１５０μＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ試薬を５０μＬの培地と混合した。製造業者のプロトコルによって指示されるように６５０ｎｍでの吸光度を測定することによって、１０分後に読み取りを行った。無処理試料又は陰性対照については、ナノ粒子で処理していないウェルからの培地５０μＬを１５０μＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ試薬に加えた。図９Ａは、核酸担体としてＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸を含有するナノ粒子製剤のインビトロでのＳＥＡＰ発現を示す。

インビボＳＥＡＰ産生結果
ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸又はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸を含む製剤をインビボで試験するために、マウスに２μｇの用量のＳＥＡＰレプリコンＲＮＡでナノ粒子を注射し、投与の３日後にマウスから血清を採取した。ＳＥＡＰ検出のためのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＮｏｖａＢｒｉｇｈｔ（商標）Ｐｈｏｓｐｈａ－Ｌｉｇｈｔ（商標）ＥＸＰ Ａｓｓａｙキットを製造業者のプロトコルに従って使用して定量した。マウス血清試料中のＳＥＡＰの量を、ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴＸマイクロプレートリーダーで測定して、任意単位（Ａ．Ｕ．）で報告する。エラーバーは±Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。図９Ｂに示すように、ＳＥＡＰ量はＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸と比較してＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸を用いた場合に高いことが観察された。

ＣＯＶＩＤ－１９武漢（Ｗｕｈａｎ）スパイクＲＢＤ直接血清ＥＬＩＳＡ
マウス（ＢＡＬＢ／ｃ）に、ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸及びＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸とともに製剤化した２μｇのスパイクレプリコンＲＮＡ（総体積１００μＬのＰＢＳ中）を脚筋の両側にＩＭ注射によってワクチン接種した。マウスを注射後１４日間飼育し、凝固させた試料を１００００ＲＣＦで１．５分間遠心分離することによって全血から血清を単離した。この血清を、直接ＥＬＩＳＡによって抗スパイクＲＢＤ抗体価についてアッセイした。Ｇｒｅｉｎｅｒ（グライナー） Ｂｉｏ Ｈｉｇｈ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｌｏｎ ＥＬＩＳＡプレートを、組換え武漢スパイクＲＢＤタンパク質を含有するＰＢＳで、４℃で一晩コーティングした。ウェルをＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡを用いて室温で１時間ブロックした。血清試料を、１：５０希釈から開始し、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ中で１：６４００までの連続１：２希釈でウェルに加えた。試料を室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでヤギ抗マウスＩｇＧ ＨＲＰをＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ中１：２０，０００希釈で添加し、１時間インキュベートした。プレートを再度ＰＢＳＴで５回洗浄し、発色性ＨＲＰ基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を用いて発色させた。０．５Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４の添加によって反応を停止させ、吸光度を４５０ｎｍ及び５７０ｎｍで測定した。エンドポイント抗体価は、４５０における吸光度－５７０における吸光度の値が≧０．０８である最高希釈として指定した。２週目に、ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸及びＰＥ－Ｇ２－Ａ１－リシノール酸．ＰＥ－Ｇ１－Ａ１－リシノール酸を用いて製剤化したナノ粒子ワクチン２μｇで免疫した群のエンドポイント希釈抗体価（図１０）は２００～１６００であった。これは、抗体価がベースラインに留まった免疫しなかった血清陰性群とは対照的である。

参考文献：
本出願を通して引用される参考文献は、あたかも各参考文献が完全に示されているかのように、本明細書及び参考文献自体において明らかなすべての目的のために組み込まれる。提示のために、これらの参考文献のうちの特定の参考文献が本明細書の特定の箇所で引用される。特定の箇所における参考文献の引用は、参考文献の教示が組み込まれる様式を示す。しかしながら、特定の箇所における参考文献の引用は、引用された参考文献の教示のすべてがすべての目的のために組み込まれる様式を限定するものではない。

（１）（ａ）Ｊｏｎｅｓ，Ｃ．Ｈ．、Ｃｈｅｎ，Ｃ．－Ｋ．、Ｒａｖｉｋｒｉｓｈｎａｎ，Ａ．、Ｒａｎｅ，Ｓ．及びＰｆｅｉｆｅｒ，Ｂ．Ａ． （２０１３） Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｎｏｎｖｉｒａｌ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｂａｒｒｉｅｒｓ：ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ． Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １０、４０８２－４０９８．（ｂ）Ｇｏｍｅｓ，Ｃ．Ｐ．、Ｌｏｐｅｓ，Ｃ．Ｄ．Ｆ．、Ｍｏｒｅｎｏ，Ｐ．Ｍ．Ｄ．、Ｖａｒｅｌａ－Ｍｏｒｅｉｒａ，Ａ．、Ａｌｏｎｓｏ，Ｍ．Ｊ．及びＰｅｇｏ，Ａ．Ｐ．（２０１４） Ｔｒａｎｓｌａｔｉｎｇ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｔｏ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ－ｂａｓｅｄ ｄｒｕｇｓ． ＭＲＳ Ｂｕｌｌ． ３９、６０－７０．（ｃ）Ｍｅｎｄｅｓ，Ｌ．Ｐ．、Ｐａｎ，Ｊ．、Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｖ．Ｐ．（２０１７） Ｄｅｎｄｒｉｍｅｒｓ ａｓ Ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ． Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２２（９）、１４０１．（ｄ）Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｍ．及びＨｕａｎｇ，Ｌ．（２００１） Ｎｏｎｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｗ ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ：ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｂａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ． Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． １２、８６１－８７．（ｅ）Ｃｌａｒｅ，Ｅ．Ｔ．、Ａｎｊａ，Ｅ．及びＭａｒｋ，Ａ．Ｋ．（２００３） Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ａｎｄ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ． Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ． ４、３４６－３５８．（ｆ）Ｍｉｎｔｚｅｒ，Ｍ．Ａ．及びＳｉｍａｎｅｋ，Ｅ．Ｅ．（２００９） Ｎｏｎｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ． Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ． １０９、２５９－３０２．
（２）（ａ）Ｈａｓｓｅｔｔ ＫＪ、Ｂｅｎｅｎａｔｏ ＫＥ、Ｊａｃｑｕｉｎｅｔ Ｅ、Ｌｅｅ Ａ、Ｗｏｏｄｓ Ａ、Ｙｕｚｈａｋｏｖ Ｏ、Ｈｉｍａｎｓｕ Ｓ、Ｄｅｔｅｒｌｉｎｇ Ｊ、Ｇｅｉｌｉｃｈ ＢＭ、Ｋｅｔｏｖａ Ｔ、Ｍｉｈａｉ Ｃ、Ｌｙｎｎ Ａ、ＭｃＦａｄｙｅｎ Ｉ、Ｍｏｏｒｅ ＭＪ、Ｓｅｎｎ ＪＪ、Ｓｔａｎｔｏｎ ＭＧ、Ａｌｍａｒｓｓｏｎ Ｏ、Ｃｉａｒａｍｅｌｌａ Ｇ、Ｂｒｉｔｏ ＬＡ． Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ Ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍＲＮＡ Ｖａｃｃｉｎｅｓ． Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ． ２０１９年４月１５日；１５：１－１１． ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｏｍｔｎ．２０１９．０１．０１３． ２０１９年２月７日電子公開． ＰＭＩＤ：３０７８５０３９；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ６３８３１８０．（ｂ）Ｒｅｉｃｈｍｕｔｈ ＡＭ、Ｏｂｅｒｌｉ ＭＡ、Ｊａｋｌｅｎｅｃ Ａ、Ｌａｎｇｅｒ Ｒ、Ｂｌａｎｋｓｃｈｔｅｉｎ Ｄ． ｍＲＮＡ ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｕｓｉｎｇ ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ［公開された訂正がＴｈｅｒ Ｄｅｌｉｖ． ２０１６年６月；７（６）：４１１に見られる］． Ｔｈｅｒ Ｄｅｌｉｖ． ２０１６；７（５）：３１９－３３４． ｄｏｉ：１０．４１５５／ｔｄｅ－２０１６－０００６．
（３）（ａ）Ｗｅｌｓｈ，Ｄ．Ｊ．、Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．Ｐ．及びＳｍｉｔｈ，Ｄ．Ｋ．（２００９） “Ｏｎ－ｏｆｆ” ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ：ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｄｅｎｄｒｏｎｓ ｆｏｒ ｔｅｍｐｏｒａｒｙ ｈｉｇｈａｆｆｉｎｉｔｙ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ． Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ． ４８、４０４７－４０５１．
（４）（ａ）Ｗｅｌｓｈ，Ｄ．Ｊ．、Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．Ｐ．及びＳｍｉｔｈ，Ｄ．Ｋ．（２００９） “Ｏｎ－ｏｆｆ” ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ：ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｄｅｎｄｒｏｎｓ ｆｏｒ ｔｅｍｐｏｒａｒｙ ｈｉｇｈａｆｆｉｎｉｔｙ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ． Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ． ４８、４０４７－４０５１．
（ｂ）Ｂａｒｎａｒｄ，Ａ．、Ｐｏｓｏｃｃｏ，Ｐ．、Ｐｒｉｃｌ，Ｓ．、Ｃａｌｄｅｒｏｎ，Ｍ．、Ｈａａｇ，Ｒ．、Ｈｗａｎｇ，Ｍ．Ｅ．、Ｓｈｕｍ，Ｖ．Ｗ．、Ｐａｃｋ，Ｄ．Ｗ．及びＳｍｉｔｈ，Ｄ．Ｋ．（２０１１） Ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｓｅｌｆ－ａｓｓｅｍｂｌｉｎｇ ｄｅｎｄｒｏｎｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｂａｒｒｉｅｒｓ ｔｏ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｔａｋｅ． Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． １３３、２０２８８－２０３００．
（５）（ａ）Ｍ．Ａ．Ｃａｒｎａｈａｎ、Ｍ．Ｗ．Ｇｒｉｎｓｔａｆｆ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． １２３（２００１） ２９０５．（ｂ）Ｍ．Ａ．Ｃａｒｎａｈａｎ、Ｍ．Ｗ．Ｇｒｉｎｓｔａｆｆ、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ３４（２００１） ７６４８．（ｃ）Ｍ．Ａ．Ｃａｒｎａｈａｎ、Ｍ．Ｗ．Ｇｒｉｎｓｔａｆｆ、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ３９（２００６） ６０９．
（６） ＬＵＮＤＢＥＲＧ，Ａ．、ＫＵＬＫＡＲＮＩ，Ｓ．、ＫＬＥＩＮ，Ｌ．、ＰＡＤＭＡＮＡＢＨＡＮ，Ｈ．Ｋ．、ＡＲＡＴＹＮ，Ｙ．Ｓ． ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ ＦＯＲ ＧＥＮＥ ＥＤＩＴＩＮＧ、国際公開第２０１８／１５４３８７号．
（７）Ｇｅａｌｌ ＡＪ、Ｖｅｒｍａ Ａ、Ｏｔｔｅｎ ＧＲ、Ｓｈａｗ ＣＡ、Ｈｅｋｅｌｅ Ａ、Ｂａｎｅｒｊｅｅ Ｋ、Ｃｕ Ｙ、Ｂｅａｒｄ ＣＷ、Ｂｒｉｔｏ ＬＡ、Ｋｒｕｃｋｅｒ Ｔ、Ｏ’Ｈａｇａｎ ＤＴ、Ｓｉｎｇｈ Ｍ、Ｍａｓｏｎ ＰＷ、Ｖａｌｉａｎｔｅ ＮＭ、Ｄｏｒｍｉｔｚｅｒ ＰＲ、Ｂａｒｎｅｔｔ ＳＷ、Ｒａｐｐｕｏｌｉ Ｒ、Ｕｌｍｅｒ ＪＢ、Ｍａｎｄｌ ＣＷ． Ｎｏｎｖｉｒａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｅｌｆ－ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ＲＮＡ ｖａｃｃｉｎｅｓ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ． ２０１２年９月４日；１０９（３６）：１４６０４－９． ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１２０９３６７１０９． ２０１２年８月２０日電子公開． ＰＭＩＤ：２２９０８２９４；ＰＭＣＩＤ：ＰＭＣ３４３７８６３．
（９）Ｐｏｕｌａｍｉ Ｔａｌｕｋｄｅｒ、Ｊａｓｄａｖｅ Ｓ． Ｃｈａｈａｌ、Ｊｕｓｔｉｎｅ Ｓ． ＭｃＰａｒｔｌａｎ、Ｏｍａｒ Ｋｈａｎ、Ｋａｒｌ Ｒｕｐｉｎｇ． Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｍａｋｉｎｇ ａｎｄ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｓａｍｅ． 国際公開第２０２０／１３２１９６（ＰＣＴ／ＵＳ１９／６７４０２）号．
（１０）Ｍｕｉ，Ｂａｒｂａｒａ Ｌら、“Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ Ｌｉｐｉｄ Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｒａｔｅｓ ｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｓｉＲＮＡ Ｌｉｐｉｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ”． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ． Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ 第２巻、１２ ｅ１３９． ２０１３年１２月１７日、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｍｔｎａ．２０１３．６６

Claims (48)

1. 式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、Ｉｅ若しくはＩｆのデンドロン又はデンドリマーを含む核酸担体であって、
   

   

   前記式中、ＰＥは、コアと、１つ以上の世代を形成する複数のモノマー状のポリエステル単位とを含むポリエステルデンドロンであり、Ａはアミンであり、Ｂは疎水性単位であり、ｚは表面基の数である、核酸担体。
2. ＰＥは式ＩＩを有し、
   

   

   前記式中、Ｇはデンドロンの層又は世代であり、ｎは世代数であり、１～１０の範囲にある請求項１に記載の核酸担体。
3. 前記複数のモノマー状のポリエステル単位は２，２－ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸又は２，２－ビス（ヒドロキシメチル）酪酸である請求項１に記載の核酸担体。
4. ｚは式ＩＩを有し、
   ｚ＝ｂ^ｎ、ＩＩＩ
   前記式中、ｂは分岐点多重度、又は各分岐点における分岐数であり、ｎは世代数であり、１～１０の範囲にある請求項１に記載の核酸担体。
5. Ａは、１－（２－アミノエチル）ピペラジン、１－ピペリジンエタンアミン、１－ジメチルアミノ－２－プロピルアミン、１－（３－アミノプロピル）ピロリジン、１－（２－アミノエチル）ピロリジン、１－（２－アミノエチル）ピペリジン、２－（１－ピペラジニル）エチルアミン、２－（４－メチル－ピペラジン－１－イル）－エチルアミン、３－（ジメチルアミノ）－１－プロピルアミン、３－（ジエチルアミノ）プロピルアミン、（４－アミノブチル）ジメチルアミン、４－（１－ピロリジニル）－１－ブチルアミン、４－モルホリンエタンアミン、４－モルホリンプロパンアミン、４－メチル－１－ピペラジンエタンアミン、４－（ジエチルアミノ）ブチルアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルジプロピレントリアミン、Ｎ，Ｎ’－ジメチル－Ｎ，Ｎ’－ビス（３－メチルアミノプロピル）トリメチレンジアミン、Ｎ１－（３－アミノプロピル）プロパン－１，３－ジアミン、Ｎ１－（３－アミノプロピル）－Ｎ１－メチルプロパン－１，３－ジアミン、３－（（３－アミノプロピル）（メチル）アミノ）プロパン－１－オール、１－ジメチルアミノ－２－プロパノール、１－［ビス［３－（ジメチルアミノ）プロピル］アミノ］－２－プロパノール、２－ジメチルアミノエタノール、２－（ジエチルアミノ）エタノール、２－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］エタノール、２－（２－アミノエトキシ）エタノール、２－｛［２－（ジメチルアミノ）エチル］メチルアミノ｝エタノール、３－ジメチルアミノ－１－プロパノール、３－ジエチルアミノ－１－プロパノール、４－（ジメチルアミノ）－１－ブタノール、４－ジエチルアミノ－２－ブチン－１－オール、Ｎ－メチルジエタノールアミン、４－（ジエチルアミノ）ブタン－１－オール、３－（アゼチジン－１－イル）プロパン－１－オール、３－（ピロリジン－１－イル）プロパン－１－オール、３－（ピペリジン－１－イル）プロパン－１－オール、４－（アゼチジン－１－イル）ブタン－１－オール、４－（ピロリジン－１－イル）ブタン－１－オール、４－（ピペリジン－１－イル）ブタン－１－オール、３－モルホリノプロパン－１－オール、４－モルホリノブタン－１－オール、３－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロパン－１－オール、又は４－（４－メチルピペラジン－１－イル）ブタン－１－オールである請求項１に記載の核酸担体。
6. Ｂは脂肪酸（Ｃ４～Ｃ２８）又はその誘導体に由来する請求項１から請求項５のいずれか１項に記載の核酸担体。
7. 前記脂肪酸は、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、及びエイコサペンタン酸からなる群から選択される請求項６に記載の核酸担体。
8. 前記脂肪酸誘導体は、１２－ヒドロキシ－９－ｃｉｓ－オクタデセン酸、１２－メチルテトラデカン酸、１２－メチルトリデカン酸、１４－メチルヘキサデカン酸、１４－メチルヘキサデカン酸、１８－メチルノナデカン酸、１９－メチルアラキジン酸、イソパルミチン酸、イソステアリン酸、フィタン酸、（±）－２－ヒドロキシオクタン酸、（±）－３－ヒドロキシデカン酸、（±）－３－ヒドロキシオクタン酸、１０－ヒドロキシデカン酸、１２－ヒドロキシオクタデカン酸、１５－ヒドロキシペンタデカン酸、１６－ヒドロキシヘキサデカン酸、２－ヒドロキシヘキサデカン酸、２－ヒドロキシテトラデカン酸、２－ヒドロキシドデカン酸、ＤＬ－α－ヒドロキシステアリン酸、ＤＬ－β－ヒドロキシラウリン酸、ＤＬ－β－ヒドロキシミリスチン酸、及びＤＬ－β－ヒドロキシパルミチン酸からなる群から選択される請求項６に記載の核酸担体。
9. 前記脂肪酸又は誘導体は、１つ以上の安定同位体を含む請求項６に記載の核酸担体。
10. 前記安定同位体は炭素又は水素の安定同位体である請求項９に記載の核酸担体。
11. 炭素の前記安定同位体は^１３Ｃである請求項１０に記載の核酸担体。
12. 水素の前記安定同位体は^２Ｈである請求項１０に記載の核酸担体。
13. 前記安定同位体を含む前記脂肪酸は、オクタン酸－１－１３Ｃ、オクタン酸－８－１３Ｃ、オクタン酸－８，８，８－ｄ３、オクタン酸－２Ｈ１５、デカン酸－１－１３Ｃ、デカン酸－１０－１３Ｃ、デカン酸－１０，１０，１０－ｄ３、デカン酸－ｄ１９、ウンデカン酸－１－１３Ｃ、ラウリン酸－１２，１２，１２－２Ｈ３、ラウリン酸－２Ｈ２３、ラウリン酸－１－１３Ｃ、ラウリン酸－１，１２－１３Ｃ２、トリデカン酸－２，２－２Ｈ２、ミリスチン酸－１４－１３Ｃ、ミリスチン酸－１－１３Ｃ、ミリスチン酸－１４，１４，１４－２Ｈ３、ミリスチン酸－２Ｈ２７、パルミチン酸－１－１３Ｃ、パルミチン酸－１６－１３Ｃ、パルミチン酸－１６－１３Ｃ，１６，１６，１６－２Ｈ３、パルミチン酸－２Ｈ３１、ステアリン酸－１－１３Ｃ、ステアリン酸－１８－１３Ｃ、ステアリン酸－１８，１８，１８－２Ｈ３、ステアリン酸－２Ｈ３５、オレイン酸－１－１３Ｃ、オレイン酸－２Ｈ３４、リノレン酸－１－１３Ｃ、リノール酸－２Ｈ３２、アラキドン酸－５，６，８，９，１１，１２，１４，１５－２Ｈ８、及びエイコサン酸－２Ｈ３９からなる群から選択される請求項１０に記載の核酸担体。
14. 請求項１から請求項１３のいずれか１項に記載の核酸担体と、その中に完全に又は部分的に封入された治療用又は免疫原性の核酸剤とを含むナノ粒子組成物。
15. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｒｅｐＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ及びｍＲＮＡからなる群から選択される請求項１４に記載のナノ粒子組成物。
16. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、感染性疾患、病原体、癌、自己免疫疾患及びアレルゲン性疾患からなる群から選択される１つ以上の抗原をコードする請求項１４に記載のナノ粒子組成物。
17. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、遺伝子の活性をサイレンシング、阻害若しくは変更することができるＲＮＡ又はＤＮＡを含む請求項１４に記載のナノ粒子組成物。
18. ＰＥＧ－脂質をさらに含む請求項１４に記載のナノ粒子組成物。
19. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｒｅｐＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ及びｍＲＮＡからなる群から選択される請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
20. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、感染性疾患、病原体、癌、自己免疫疾患及びアレルゲン性疾患からなる群から選択される１つ以上の抗原をコードする請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
21. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、遺伝子の活性をサイレンシング、阻害若しくは変更することができるＲＮＡ又はＤＮＡを含む請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
22. 前記ＰＥＧ－脂質は１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］又は１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００である請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
23. 前記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１モル％～１０モル％のＰＥＧ－脂質の範囲で前記ＰＥＧ－脂質を含む請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
24. リン脂質及びコレステロール又はその誘導体をさらに含む請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
25. 前記ＰＥＧ－脂質は１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］又は１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００である請求項２４に記載のナノ粒子組成物。
26. 前記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１モル％～１０モル％のＰＥＧ－脂質の範囲で前記ＰＥＧ－脂質を含む請求項２４に記載のナノ粒子組成物。
27. 前記リン脂質は、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）又はジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）である請求項２４に記載のナノ粒子組成物。
28. 前記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１０モル％～１５モル％のリン脂質の範囲で前記リン脂質を含む請求項２４に記載のナノ粒子組成物。
29. 前記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり５０モル％～７５モル％のコレステロール又はその誘導体の範囲で前記コレステロール又はその誘導体を含む請求項２４に記載のナノ粒子組成物。
30. 対象における疾患若しくは状態を治療又は予防する方法であって、治療有効量の請求項１４に記載のナノ粒子組成物を対象に投与する工程を含む、方法。
31. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｒｅｐＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ及びｍＲＮＡからなる群から選択される請求項３０に記載の方法。
32. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、感染性疾患、病原体、癌、自己免疫疾患及びアレルゲン性疾患からなる群から選択される１つ以上の抗原をコードする請求項３０に記載の方法。
33. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、遺伝子の活性をサイレンシング、阻害若しくは変更することができるＲＮＡ又はＤＮＡを含む請求項３０に記載の方法。
34. 前記ナノ粒子組成物はＰＥＧ－脂質をさらに含む請求項３０に記載の方法。
35. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｒｅｐＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｇＲＮＡ及びｍＲＮＡからなる群から選択される請求項３４に記載のナノ粒子組成物。
36. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、感染性疾患、病原体、癌、自己免疫疾患及びアレルゲン性疾患からなる群から選択される１つ以上の抗原をコードする請求項３４に記載のナノ粒子組成物。
37. 前記治療用又は免疫原性の核酸剤は、遺伝子の活性をサイレンシング、阻害若しくは変更することができるＲＮＡ又はＤＮＡを含む請求項３４に記載のナノ粒子組成物。
38. 前記ＰＥＧ－脂質は１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］又は１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００である請求項３４に記載のナノ粒子組成物。
39. 前記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１モル％～１０モル％のＰＥＧ－脂質の範囲で前記ＰＥＧ－脂質を含む請求項３４に記載のナノ粒子組成物。
40. 前記ナノ粒子組成物は、リン脂質及びコレステロール又はその誘導体をさらに含む請求項３９に記載のナノ粒子組成物。
41. 前記ＰＥＧ－脂質は１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００］又は１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００である請求項４０に記載のナノ粒子組成物。
42. 前記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１モル％～１０モル％のＰＥＧ－脂質の範囲で前記ＰＥＧ－脂質を含む請求項４０に記載のナノ粒子組成物。
43. 前記リン脂質は、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）又はジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）である請求項４０に記載のナノ粒子組成物。
44. 前記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり１０モル％～１５モル％のリン脂質の範囲で前記リン脂質を含む請求項４０に記載のナノ粒子組成物。
45. 前記ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物あたり５０モル％～７５モル％のコレステロール又はその誘導体の範囲で前記コレステロール又はその誘導体を含む請求項４０に記載のナノ粒子組成物。
46. 前記治療有効量の前記ナノ粒子組成物は、前記対象の体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇ核酸～１０ｍｇ核酸の範囲で前記治療用又は免疫原性の核酸剤を含む請求項３０に記載の方法。
47. 前記対象は哺乳動物である請求項４６に記載の方法。
48. 前記哺乳動物は、げっ歯類、イヌ、霊長類、ウマ、高価値農業動物、及びヒトからなる群から選択される請求項４７に記載の方法。

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