TW202312992A - 微脂體組合物及其製備方法 - Google Patents

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本發明提供製備微脂體組合物之方法。在此方法中之一包含步驟：提供包裹鉑金為基礎的前驅物之前驅微脂體；以及將前驅微脂體置於鹽溶液中進行培養以使鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而製得微脂體組合物。此前驅微脂體是藉由以下步驟而得：使鉑金為基礎的藥物水合以製得鉑金為基礎的前驅物；以及將鉑金為基礎的前驅物添加至脂雙層載體以製得前驅微脂體。藉由此方法製得之微脂體組合物具備較好的包覆率和較強的藥載能力。

Description

微脂體組合物及其製備方法
本專利申請案主張於2020年3月10日申請之美國臨時案申請號62/987366，其全部內容以引用方式併入本專利申請案。
本發明有關於一種微脂體組合物，尤其是一種包裹鉑金為基礎的前驅物之微脂體組合物及其製備方法。
順-二胺二氯鉑( cis-diaminedichloroplatinum (II)，CDDP，也稱為順鉑(cisplatin))為已知悉之常用化療藥物。然而，此藥物有水溶性差，以及其高毒性會導致多種不良的副作用等缺點。
為了改善順-二胺二氯鉑(CDDP)的溶解度和降低其毒性，在本發明之一些實施例提供一種製備微脂體組合物之方法。此方法包含步驟：提供包裹鉑金為基礎的前驅物之前驅微脂體；以及將前驅微脂體置於鹽溶液中進行培養以使鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而形成微脂體組合物。
本發明之另一實施例提供一種製備微脂體組合物之方法。此方法包含步驟：提供包裹鹽之鹽微脂體；以及將鹽微脂體和鉑金為基礎的前驅物混合以使鉑金為基礎的前驅物進入鹽微脂體並與鹽反應，據此將鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而形成微脂體組合物。
本發明之另一實施例提供一種製備微脂體組合物之方法。此方法包含步驟：提供包裹鉑金為基礎的前驅物之前驅微脂體，和提供包裹鹽之鹽微脂體；以及將前驅微脂體和鹽微脂體混合以使鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而形成微脂體組合物。
本發明之另一實施例還提供一種製備微脂體組合物之方法。此方法包含步驟：提供包裹鉑金為基礎的前驅物之前驅物核心，以及提供包裹鹽之鹽核心；將前驅物核心和鹽核心混合以使鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而形成微脂體核心；以及將微脂體核心與第一脂質配方混合而形成微脂體組合物。
本發明之另一實施例還提供一種微脂體組合物。此微脂體組合物是由前述製備方法任一者所製得。此微脂體組合物的藥載率(%)至少10 %。
根據本發明之任一實施例的微脂體組合物提供了一種有效的解決方案，其可提高鉑金為基礎的藥物的溶解度和微脂體顆粒的包覆率。藉由本發明之實施例的製備方法，前驅微脂體可以透過方便且低成本的製備方法轉化成被微脂體包裹之鉑金為基礎的藥物。此些製備方法也提供一種有效工具，其用於提升微脂體組合物的藥載率(%)。
透過以下僅用於說明而非限制本發明的詳細描述，本發明將變得更充分地理解。
請參閱圖1。在本發明之第一實施例中，提供一種製備微脂體組合物之方法。此方法可以包含步驟：提供包裹鉑金為基礎的前驅物之前驅微脂體；以及將前驅微脂體置於鹽溶液中進行培養以使鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而形成微脂體組合物。具體而言，前驅微脂體可以透過藉由以下步驟而製得：使鉑金為基礎的藥物水合以形成鉑金為基礎的前驅物；以及將鉑金為基礎的前驅物添加至脂雙層載體以形成前驅微脂體。
使鉑金為基礎的藥物進行水合作用可以透過將鉑金為基礎的藥物以硝酸銀(AgNO 3)、硫酸銀(Ag 2SO 4)、磷酸銀(Ag 3PO 4)、硝酸鈣(Ca(NO 3) 2)、硫酸鈣(CaSO 4)、磷酸鈣(Ca 3(PO 4) 2)、硝酸鎂(Mg(NO 3) 2)、硫酸鎂(MgSO 4)、以及/或磷酸鎂(Mg(H 2PO 4) 2) 進行培養之方式。
在一些實施例中，鉑金為基礎的藥物可以包含至少一個鉑鹵化學鍵(platinum-halides bond)(例如，鉑-氟化學鍵、鉑-氯化學鍵、鉑-溴化學鍵、或鉑-碘化學鍵)。在一些範例中，鉑金為基礎的藥物可以包含順鉑(cisplatin)、三鉑(triplatin)、菲奈修布雷頓(phenanthriplatin)、吡鉑(picoplatin)、沙佐布雷頓(satraplatin)、順-二胺二碘鉑(II)、順-二胺二氟鉑(II)、以及順-二胺二溴鉑(II)。
請參閱圖2。鉑金為基礎的前驅物可以為單水(monoaqua)型和/或雙水(diaqua)型之鉑金為基礎的藥物；例如， cis-[Pt(NH 3) 2(H 2O) 2](NO 3) 2或 cis-[Pt(NH 3) 2(H 2O) 2] 2+。由於可溶於水的特性，鉑金為基礎的前驅物可以被脂雙層載體(例如微脂體奈米顆粒)包裹。
脂雙層載體的製備可以藉由將脂質配方混合於有機溶液，例如氯仿、環己烷、甲醇、乙醇、或其任意組合之有機溶液。脂質配方可以包含一種由膽鹼磷脂、膽固醇以及聚乙二醇基(PEG-based)化合物所組合之組合物。較佳地，膽鹼磷脂可以包含中性脂質，例如：1,2-二硬脂醯-錫-甘油-3-磷酸膽鹼(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DSPC)、1,2-二油醯-錫-甘油-3-磷酸膽鹼(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DOPC)、1,2-二軟脂醯-錫-甘油-3-磷酸膽鹼(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DPPC)、1,2-二月桂醯-錫-甘油-3-磷酸膽鹼(1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DLPC)、1,2-二肉豆蔻醯-錫-甘油-3-磷酸膽鹼(1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DMPC)、十六烷基磷酸膽鹼(hexadecyl phosphorylcholine，HePC) 、1-硬脂醯-2-油醯-錫-甘油-3-磷酸膽鹼(1-stearoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，SOPC)、1,2-二植烷醯-錫-甘油-3-磷酸膽鹼(1,2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，diPhyPC)、或其任意組合。聚乙二醇基(PEG-based)化合物可以是二硬脂醯磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇(distearoylphosphatidyl ethanolamine (DSPE)-PEG)化合物，例如：N-(羰基-甲氧聚乙二醇-200)-1,2-二硬脂醯-錫-甘油-3-磷酸乙醇胺 (N-(carbonyl-methoxypolyethylene glycol-200)-1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine，DSPE-PEG-200 或是 DSPE-mPEG-200)、DSPE-PEG-400(或是DSPE-mPEG-400)、DSPE-PEG-800(或是DSPE-mPEG-800)、DSPE-PEG-1000(或是DSPE-mPEG-1000)、DSPE-PEG-2000(或是DSPE-mPEG-2000)、DSPE-PEG-2500(或是DSPE-mPEG-2500)、DSPE-PEG-3000(或是DSPE-mPEG-3000)、DSPE-PEG-4000(或是 DSPE-mPEG-4000)、DSPE-PEG-5000(或是DSPE-mPEG-5000)、DSPE-PEG-6000(或是DSPE-mPEG-6000)、DSPE-PEG-10000(或是DSPE-mPEG-10000)、或其任意組合。在一些實施例中，聚乙二醇(PEG)基化合物可以選自由DSPE-PEG-胺乙基對甲氧苯甲醯胺(DSPE-PEG-aminoethyl anisamide，DSPE-PEG-AEAA)、DSPE-PEG-單株抗體(DSPE-PEG-mAb)、以及具有其他配體部分的DSPE-PEG。
脂質配方可以是在水環境下，經由疏水性作用和/或由凡得瓦交互作用可自組地形成脂雙層載體。在一個或多個較佳的實施例中，脂質配方的中性性質提供與被包裹的活性藥物成分(API)或其前驅物鍵結的最小能量，使之促進活體內的藥物釋放。此外，因為中性的脂雙層載體不會與帶電的前驅物相互作用，所以於此發生的藥物轉化作用不會受到影響或阻礙。
在一些實施例中，微脂體組合物的脂雙層載體與順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)之體積比在1:1至20:1之範圍間。順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)與脂雙層載體的莫耳比在0.1:1至1:1之範圍間。於脂雙層載體中加入順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)，且其體積比(即油與水的比例)在1:0.01至1:0.8之範圍間。鉑金為基礎的前驅物在脂雙層載體或在前驅微脂體中的濃度在25 mM至600 mM之範圍間，較佳地是在1.5 mM至5 mM之範圍間。
為了從鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物，可以將前驅微脂體置於鹽溶液中進行培養，使鹽得以進入前驅微脂體中。在此實施例中，鹽溶液可以包含氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、或鹵素基團的其他鹽類。鹽溶液的濃度在0.2 M至4 M之範圍間；具體而言，當使用氯化鈉作為前述轉化作用中的鹽，氯化鈉濃度可以在0.4 M至3.9 M之範圍間；當使用氯化鉀作為前述轉化作用中的鹽，氯化鉀濃度可以在0.4 M至3.0 M之範圍間。在一些實施例中，前驅微脂體可以被置於4-65 ℃的鹽溶液中培養培養1-24小時，以使鹽進入前驅微脂體中以及將雙水型的順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)轉化成順-二胺二氯鉑。舉例來說，前驅微脂體可以在4-7 ℃的鹽溶液中過夜培養，或是在10-50 ℃的鹽溶液中培養2-15小時後進行冷卻，以穩定微脂體組合物的結構。
在一個或多個實施例中，高濃度的鹽溶液會產生滲透壓力，其滲透壓力會不可逆地將鹵素離子推擠經過脂雙層載體，而在不影響微脂體結構的穩定性下，使鹵素離子滯留於前驅微脂體內。因為在前驅微脂體內的鹵素離子會被消耗用以進行活性成分藥物(API)轉化作用，所以會有更多的鹵素離子持續地擴散進入前驅微脂體中。這種基於滲透作用的方法提供了一種驅動前驅微脂體內藥物轉化途徑，其具有成本效益和時間效率。
在第一實施例中，為了製備由DSPC、膽固醇和DSPE-PEG-2000組成的脂雙層載體並包裹以順-二胺二氯鉑(CDDP)為鉑金為基礎的藥物之微脂體組合物(以下簡稱LipoCis)，順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)之製備可以經由將0.2-0.4 mmol之順-二胺二氯鉑(CDDP)於0.3-0.4 mmol之硝酸銀水溶液(AgNO 3(aq))中，以25℃中培養16-18小時，或以60℃中培養3-4小時而製得。接著，在30-60℃，以100-400 rpm之轉速下，將DSPC、膽固醇和DSPE-PEG-2000以40-50:25-50:10-30 w/w%重量比混合10-60分鐘，以形成脂雙層載體。然後，於脂雙層載體中將順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)加入，其油與水的體積比例在1:0.01至1:0.8。其中此加入過程可以利用微量滴管以1 mL/min之速度加入，或是以手動搖晃或以攪拌子均勻混合15-30分鐘的大量式混合方式加入，以形成前驅微脂體。然後，再將包裹順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)的前述微脂體以循環次數1-10 passes進行均質化，以得到60-250 nm之尺寸大小的微脂體。最後，將均質化後的前驅微脂體於0.2-3.9 M之氯化鉀或氯化鈉溶液中，在25-50℃下均勻攪拌培養2-24小時，使得微脂體內的順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)轉化成順-二胺二氯鉑。然後，利用切向流過濾(tangential flow filtration, TFF)系統將多餘的鹽移以純化得到產物LipoCis，並將此產物置換於含有10 mM之HEPE和5%之葡萄糖的緩衝液(pH值6.5-7.6)、含有10 mM之HEPE和0.9%之鹽水的緩衝液(pH值6.5-7.6)、含有0.9 %之鹽水和5%之葡萄糖的溶液、或二次純水中保存。所得的產物LipoCis的藥脂比(drug-to-lipid，D/L)可達到每莫耳0.05-0.8之範圍。
請參閱圖3。在第二實施例中，提供了另一種製備微脂體組合物之方法。此方法包含步驟：提供包裹鹽之鹽微脂體；以及將鹽微脂體和鉑金為基礎的前驅物進行培養以使鉑金為基礎的前驅物進入鹽微脂體並與鹽反應，據此將鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而形成微脂體組合物。具體而言，鹽微脂體的製備可以藉由將鹽添加至脂雙層載體而形成的鹽微脂體。於第二實施例的製備方法所使用的成分和步驟細節和第一實施例所述相似，請參閱前段相關說明。
請參閱圖4。在第三實施例，提供了另一種製備微脂體組合物之方法。此方法包含步驟：提供包裹鉑金為基礎的前驅物之前驅微脂體，和提供包裹鹽之鹽微脂體；以及將前驅微脂體和鹽微脂體混合以使鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而形成微脂體組合物。具體而言，前驅微脂體的製備可以藉由以下步驟而製得：使鉑金為基礎的藥物水合以形成鉑金為基礎的前驅物；以及將鉑金為基礎的前驅物添加至脂雙層載體用以形成前驅微脂體。同樣地，鹽微脂體的製備可以藉由將鹽添加至脂雙層載體而形成的鹽微脂體之步驟而得。於第三實施例的製備方法所使用的成分和步驟細節和第一實施例所述相似，請參閱前段相關說明。
請參閱圖5。在第四實施例，還提供了另一種製備微脂體組合物之方法。此方法包含步驟：提供包裹鉑金為基礎的前驅物之前驅物核心，以及提供包裹鹽之鹽核心；將前驅物核心和鹽核心混合以使鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物而形成微脂體核心；以及將微脂體核心與第一脂質配方混合而形成微脂體組合物。具體而言，前驅物核心可以藉由以下步驟而製得：使鉑金為基礎的藥物水合以形成鉑金為基礎的前驅物；以及將鉑金為基礎的前驅物添加至脂雙層載體用以形成前驅物核心。同樣地，鹽核心可以藉由將鹽添加至脂單層載體而形成的鹽核心之步驟而製得。於第四實施例的製備方法所使用的成分和步驟細節和第一實施例所述相似，請參閱前段相關說明。
在一些實施例中，第一脂質配方可以包含膽固醇和聚乙二醇基(PEG-based)化合物。第一脂質配方可以溶解於有機溶液(例如氯仿、乙醇)，然後和微脂體核心於25-45℃下混合25-60分鐘。舉例來說，如圖5所示，在添加脂質配方之後，膽固醇會穩定單層的微脂體核心，DSPE-PEG-2000會包覆於此微脂體核心之外而造成雙層的微脂體組合物。
脂單層載體可以透過將溶於有機溶液(例如氯仿、乙醇)的第二脂質配方進行混合而製得。此第二脂質配方可以包含DSPC和/或其他膽鹼磷脂。當使用氯仿或其他油類溶液時，脂單層載體可以於此些溶液中立即地形成。在水互溶性系統(例如乙醇)中，則可能需要加熱至45-60℃進行15-30分鐘作用才能形成脂單層載體。
如表1所證實的高轉化率和藥載率(%)，前述之本發明實施例的製備方法可以有效地包覆並將鉑金為基礎的前驅物轉化成鉑金為基礎的藥物。據此，透過本發明實施例之製備方法而製得的微脂體組合物，其計算的藥載率(%)可以高達62%。
表1，實施例中LipoCis的藥載率 (Drug loading，DL) (%)
樣品 以HPLC量測到的順-二胺二氯鉑(CDDP)濃度 (mg/mL) 以ICP量測到的順-二胺二氯鉑(CDDP)濃度 (mg/mL) 轉化率 (%) 藥載率DL (%)
以氯化鈉製得的LipoCis 0.38 0.41 93 62
以氯化鉀製得LipoCis 0.36 0.40 90 62
請參閱圖6和圖7。在一範例中，順-二胺二氯鉑(CDDP)被包裹並沉澱於由DSPC、膽固醇和DSPE-PEG-2000組成的脂雙層中，而形成LipoCis奈米顆粒(NPs)。此LipoCis奈米顆粒(LipoCis NPs)可以透過不同方法被確認。如圖6和圖7所示的範例中，透過奈米粒徑及電位分析儀(美商Malvern公司生產的Zetasizer Nano系列機型)量測LipoCis奈米顆粒的顆粒尺寸和ZETA電位(zeta-potential)。透過低溫電子顯微鏡(cryogenic electron microscopy，Cryo-EM)觀測LipoCis奈米顆粒(LipoCis NPs)的形態。順-二胺二氯鉑(CDDP)的數量則利用高效能液相層析(high performance liquid chromatography，HPLC)進行量測。利用電感耦合電漿體原子發射光譜法(inductively coupled plasma-atomic emission spectroscopy，ICP-AES)或電感耦合電漿體光學發射光譜法(inductively coupled plasma-optical emission spectroscopy，ICP-OES)量測LipoCis奈米顆粒(LipoCis NPs)中的鉑含量。賦形劑濃度則利用HPLC揮發性光散射偵測器(evaporative light scattering detectors，ELSD)進行量測。如圖6所示，低溫電子顯微鏡所拍攝到的LipoCis奈米顆粒(LipoCis NPs)形態是具有完整且均勻的單分散性，其估計的顆粒尺寸在於80-150 nm之範圍，此數值結果與透過動態光射散(dynamic light scattering，DLS)量測結果一致。如圖7所示，LipoCis奈米顆粒(LipoCis NPs)的所有相互作用聚合物層析(interaction polymer chromatography，IPC)數值皆被量測。
請參閱圖8。根據本發明第一實施例所製得的LipoCis，將其在大鼠動物模式中的藥物代謝動力學進行分析。如表2所示，LipoCis於活體內是呈現低的清除率(clearance，CL)、高的曲線下面積(area under curve，AUC)、以及長久的循環時間(即，LipoCis的分布容積(Vz)和穩定態分布容積(Vss)數值低於活性成分藥物(API)的Vz和Vss數值)。根據藥物半衰期和平均滯留時間(mean residence time，MRT)的量測結果，LipoCis和活性成分藥物(API)兩者間沒有呈現統計上顯著差異。根據此些藥物代謝動力學的結果可知LipoCis在活體內是具有緩釋(sustained release)特性。
表2
清除率(CL) (mL/min) 分布容積(Vz) (mL) 穩定態分布容積(Vss) (mL) 曲線下面積(AUC) (μg-min/mL) 藥物半衰期 (min) 平均滯留時間(MRT) (min)
LipoCis (n=3) 0.31±0.26 566±570 482±485 4047±2381 1164±245 1434±335
活性成分藥物(API) (n=3) 1.39±0.28 1463±250 1278±359 623±140 771±312 987±511
為了評估LipoCis對於腫瘤生長的抑制潛力，將進行21天的異種移植實驗並且每日觀測所測試的異種移植動物。在實驗中，將人類癌症細胞株(1x10 6cells/每200 μL之PBS-Martigel 1:1溶液)皮下注射於Balb/c裸鼠的右後腿中。在出現明顯尺寸的腫瘤後，每天或每隔一天量測腫瘤尺寸並以(長度x寬度x高度)/2之公式計算其腫瘤尺寸。當腫瘤尺寸到達預定尺寸時(例如100-210 mm 3)，對LipoCis組的實驗鼠進行藥物的靜脈注射，每周一次，持續3周。
請參閱圖9至圖11。採用三種肺癌細胞株(包含人類非小細胞肺癌(NSCLC)H1975細胞和A549細胞，以及人類大細胞癌(human large cell carcinoma)H460細胞)進行實驗並檢測LipoCis奈米顆粒(LipoCis NPs)在活體內的效率。如圖9所示，在肺腺癌H1975細胞的異種移植小鼠模式中，經過本發明實施例所製備的LipoCis處理的實驗結果呈現較顯著的細胞凋亡反應(根據免疫染色的實驗結果)，以及相較於順-二胺二氯鉑(CDDP)處理的實驗結果，LipoCis處理的實驗結果呈現具有較強的腫瘤抑制效果。如圖10至圖11所示，於肺腺癌A549細胞的異種移植小鼠模式和於肺大細胞癌H460細胞的異種移植小鼠模式中都可以觀測到類似的實驗結果。
請參照圖12和圖13。建立一種人類口腔鱗狀細胞癌(HOSCC) 異種移植動物模式。從每200 μL之Martigel(美商康寧生命科學公司生產的Martigel細胞培養基)含有5x10 6cells人類口腔癌SAS細胞取出160 μL，並用28-gauge注射針頭將其皮下注射於7至9周大的雄性裸鼠(品系名稱為BALB/cAnN.Cg- Foxn1 nu ，購自於台灣台北國家實驗動物中心)的右下背側中。將SAS細胞異種移植的實驗鼠隨機分成三組，分別以以下藥物處理：(i)磷酸鹽緩衝生理鹽水(PBS)；(ii)順-二胺二氯鉑(CDDP)；以及(iii) LipoCis奈米顆粒(LipoCis NPs)。所有的藥物處理皆以靜脈注射方式施打。藥物CDDP和藥物LipoCis NPs皆給予3.0 mg/kg的藥物劑量。當腫瘤尺寸到達200.1 mm 3± 3.5 (或是195-210 mm 3)時，才進行藥物施打。腫瘤尺寸以長度x寬度x高度x0.5之公式進行計算。每組的實驗鼠於第12天犧牲以進行數據收集。將切除下來的腫瘤和器官進行組織切片並固定於10%的福馬林中，以進行後續實驗。所述實驗研究之進行皆遵守和符合台灣中原大學實驗動物照護及使用委員會所規定之指引規則。
為了驗證LipoCis奈米顆粒(LipoCis NPs)於活體內的效率，將腫瘤體積為200.1±3.5 mm 3之SAS細胞異種移植的實驗鼠隨機分成三組，分別為：(i)以磷酸鹽緩衝生理鹽水處理的PBS組；(ii)以順-二胺二氯鉑處理的CDDP組；以及(iii)以LipoCis奈米顆粒的LipoCis NPs組。每組進行兩次藥物處理，每次藥物處理的間隔時間為6天。如同圖9和圖10所示的實驗結果，LipoCis對SAS細胞也具有抑制腫瘤生長之潛力。
根據上述本發明之實施例，LipoCis提供了一種有效解決方案，其可提高鉑金為基礎的藥物的溶解度和微脂體顆粒的包覆率。藉由本發明之實施例的製備方法，前驅微脂體可以透過方便且低成本的製備方法轉化成被微脂體包裹之鉑金為基礎的藥物。此些製備方法也提供一種有效工具，其用於提升微脂體組合物的藥載率(%)。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明。相對地，在不脫離後附之申請專利範圍所界定範圍及精神下所作些許之修改與類似潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內。所述的界定範圍應給予最廣泛解釋，以涵蓋有此類修改與類似潤飾。
無
圖1為根據本發明之一示範實施例的微脂體組合物之製備的化學反應示意圖。 圖2為根據本發明之一示範實施例的微脂體組合物的順-二胺二氯鉑前驅物(CDDP precursor)之製備的化學反應示意圖。 圖3為根據本發明之另一示範實施例的微脂體組合物之製備的化學反應示意圖。 圖4為根據本發明之另一示範實施例的微脂體組合物之製備的化學反應示意圖。 圖5為根據本發明之另一示範實施例的微脂體組合物之製備的化學反應示意圖。 圖6為根據本發明之一示範實施例的微脂體組合物之冷凍電子顯微(Cryo-EM)影像圖。 圖7為根據本發明之一示範實施例的微脂體組合物之尺寸分布結果圖。 圖8為根據本發明之一示範實施例，於動物模式中微脂體組合物之藥物代謝動力學分析結果圖。 圖9為人類非小細胞肺癌(non-small-cell-lung-cancer，NSCLC)腺癌H1975細胞異種移植老鼠模式，分別經過PBS、順-二胺二氯鉑(CDDP)、和LipoCis處理實驗之腫瘤成長率以及腫瘤體積變化結果圖。 圖10為A549細胞異種移植老鼠模式，分別經過PBS和LipoCis處理實驗之腫瘤成長率、腫瘤體積、以及體重變化結果圖。 圖11為H460細胞異種移植老鼠模式，分別經過PBS和LipoCis處理實驗之隨著作用劑量變化的腫瘤體積、體重、腫瘤成長率以及體重變化結果圖。 圖12為人類口腔鱗狀細胞癌(human oral squamous cell carcinoma ，HOSCC) SAS細胞異種移植老鼠模式，分別經過PBS、順-二胺二氯鉑(CDDP)、和LipoCis處理實驗之腫瘤體積變化結果圖。 圖13為根據本發明之一示範實施例的人類口腔鱗狀細胞癌(HOSCC) 老鼠模式中轉移的SAS細胞之腫瘤縮小效果結果圖。

Claims (36)

  1. 一種製備一微脂體組合物之方法，包含： 提供包裹一鉑金為基礎的前驅物之一前驅微脂體；以及 將該前驅微脂體置於一鹽溶液中進行培養以使該鉑金為基礎的前驅物轉化成一鉑金為基礎的藥物而形成該微脂體組合物。
  2. 如請求項1所述之方法，其中該前驅微脂體是藉由以下步驟而製得： 使該鉑金為基礎的藥物水合以形成該鉑金為基礎的前驅物； 將一脂質配方混合以形成一脂雙層載體；以及 將該鉑金為基礎的前驅物添加至該脂雙層載體以形成該前驅微脂體， 其中該脂質配方包含DSPC、膽固醇以及選自由DSPE-PEG-2000、DSPE-PEG-3000、DSPE-PEG-4000、DSPE-PEG-5000、及DSPE-PEG-10000所組成的群組中之一者。
  3. 如請求項2所述之方法，其中使該鉑金為基礎的藥物水合之該步驟是將該鉑金為基礎的藥物和至少一化合物進行培養，而該至少一化合物選自由AgNO 3、Ag 2SO 4、Ag 3PO 4、Ca(NO 3) 2、CaSO 4、Ca 3(PO 4) 2、Mg(NO 3) 2、MgSO 4、以及Mg(H 2PO 4) 2所組成的群組。
  4. 如請求項2所述之方法，其中該脂質配方是混合於包含氯仿或乙醇之一有機溶液。
  5. 如請求項2所述之方法，其中該脂雙層載體與該鉑金為基礎的前驅物的體積比在1:1至20:1之一範圍間。
  6. 如請求項2所述之方法，其中該鉑金為基礎的藥物與該脂雙層載體的莫耳比在0.1:1至1:1之一範圍間。
  7. 如請求項2所述之方法，其中將該鉑金為基礎的前驅物添加至該脂雙層載體之該步驟中，該脂雙層載體的油與水的比例在1:0.01至1:0.8之一範圍間。
  8. 如請求項1所述之方法，其中該鉑金為基礎的藥物包含至少一個鉑鹵化學鍵(platinum-halides bond)。
  9. 如請求項1所述之方法，其中該鉑金為基礎的藥物選自由順鉑(cisplatin)、三鉑(triplatin)、菲奈修布雷頓(phenanthriplatin)、吡鉑(picoplatin)以及沙佐布雷頓(satraplatin)所組成的群組。
  10. 如請求項1所述之方法，其中該鉑金為基礎的前驅物為單水(monoaqua)型之該鉑金為基礎的藥物和雙水(diaqua)型之該鉑金為基礎的藥物中至少一種。
  11. 如請求項1所述之方法，其中該鹽溶液包含氯化物或溴化物。
  12. 如請求項1所述之方法，其中該鉑金為基礎的前驅物在該前驅微脂體的濃度在25 mM至600 mM之一範圍間。
  13. 如請求項1所述之方法，其中用於培養該前驅微脂體之該鹽溶液的濃度在0.2 M至4 M之一範圍間。
  14. 如請求項1所述之方法，其中該前驅微脂體被置於4-65 ℃的該鹽溶液中培養1-24小時。
  15. 一種製備一微脂體組合物之方法，包含： 提供包裹一鹽之一鹽微脂體；以及 將該鹽微脂體和一鉑金為基礎的前驅物進行培養以使該鉑金為基礎的前驅物進入該鹽微脂體並與該鹽反應，以將該鉑金為基礎的前驅物轉化成一鉑金為基礎的藥物而形成該微脂體組合物。
  16. 如請求項15所述之方法，其中該鹽微脂體是藉由以下步驟而製得： 將一脂質配方混合以形成一脂雙層載體；以及 將該鹽添加至該脂雙層載體以形成該鹽微脂體， 其中該脂質配方包含DSPC、膽固醇以及選自由DSPE-PEG-2000、DSPE-PEG-3000、DSPE-PEG-4000、DSPE-PEG-5000、及DSPE-PEG-10000所組成的群組中之一者。
  17. 如請求項16所述之方法，其中該脂質配方是混合於包含氯仿或乙醇之一有機溶液。
  18. 如請求項16所述之方法，其中該脂雙層載體與該鹽的體積比在1:1至20:1之一範圍間。
  19. 如請求項16所述之方法，其中該鹽與該脂雙層載體的莫耳比在0.1:1至1:1之一範圍間。
  20. 如請求項16所述之方法，其中該鹽被添加於溶於一油與水的比例在1:0.01至1:0.8之一範圍間的該脂雙層載體。
  21. 如請求項15所述之方法，其中該鉑金為基礎的藥物包含至少一個鉑鹵化學鍵(platinum-halides bond)。
  22. 如請求項15所述之方法，其中該鉑金為基礎的藥物選自由順鉑(cisplatin)、三鉑(triplatin)、菲奈修布雷頓(phenanthriplatin)、吡鉑(picoplatin)以及沙佐布雷頓(satraplatin)所組成的群組。
  23. 如請求項15所述之方法，其中該鉑金為基礎的前驅物為單水(monoaqua)型之該鉑金為基礎的藥物和雙水(diaqua)型之該鉑金為基礎的藥物中至少一種。
  24. 如請求項15所述之方法，其中該鹽微脂體和該鉑金為基礎的前驅物於4-65 ℃中混合1-24小時。
  25. 一種製備一微脂體組合物之方法，包含： 提供包裹一鉑金為基礎的前驅物之一前驅微脂體，和提供包裹一鹽之一鹽微脂體；以及 將該前驅微脂體和該鹽微脂體混合以使該鉑金為基礎的前驅物轉化成一鉑金為基礎的藥物而形成該微脂體組合物。
  26. 如請求項25所述之方法，其中該前驅微脂體是藉由以下步驟而製得： 使該鉑金為基礎的藥物水合以形成該鉑金為基礎的前驅物；以及 將該鉑金為基礎的前驅物添加至一脂雙層載體以形成該前驅微脂體。
  27. 如請求項26所述之方法，其中使該鉑金為基礎的藥物水合之該步驟是將該鉑金為基礎的藥物和至少一化合物進行培養，而該至少一化合物選自由AgNO 3、Ag 2SO 4、Ag 3PO 4、Ca(NO 3) 2、CaSO 4、Ca 3(PO 4) 2、Mg(NO 3) 2、MgSO 4、以及Mg(H 2PO 4) 2所組成的群組。
  28. 如請求項26所述之方法，其中該脂雙層載體之製備是透過將包含DSPC、膽固醇以及選自由DSPE-PEG-2000、DSPE-PEG-3000、DSPE-PEG-4000、DSPE-PEG-5000、及DSPE-PEG-10000所組成的群組中之一者的一脂質配方進行混合。
  29. 如請求項28所述之方法，其中該脂質配方是混合於包含氯仿或乙醇之一有機溶液。
  30. 如請求項26所述之方法，其中該脂雙層載體與該鉑金為基礎的前驅物的體積比在1:1至20:1之一範圍間。
  31. 如請求項26所述之方法，其中該鉑金為基礎的藥物與該脂雙層載體的莫耳比在0.1:1至1:1之一範圍間。
  32. 如請求項25所述之方法，其中該鉑金為基礎的前驅物為單水(monoaqua)型之該鉑金為基礎的藥物和雙水(diaqua)型之該鉑金為基礎的藥物中至少一種。
  33. 如請求項25所述之方法，其中該鹽包含氯化物或溴化物。
  34. 如請求項25所述之方法，其中該鉑金為基礎的前驅物在該前驅微脂體的濃度在25 mM至600 mM之一範圍間。
  35. 如請求項25所述之方法，其中該鹽在該鹽微脂體的濃度在0.2 M至4 M之一範圍間。
  36. 如請求項25所述之方法，其中將該前驅微脂體和該鹽微脂體於4-65 ℃中混合1-24小時。
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