TW202309288A - 調節基因表現之組合物及方法 - Google Patents

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克拉斯 彼得 祖德維爾德
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Abstract

本發明係關於用於調節基因表現之組合物及方法，包含重組聚核酸或RNA構築體，該等構築體包含編碼所關注之基因的第一RNA序列及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列。本文所描述之重組RNA構築體在人類細胞中誘導的免疫反應低於由相應重組RNA構築體誘導之免疫反應，該相應重組RNA構築體包含編碼所關注之基因的該第一RNA序列及包含該等至少兩種遺傳元件中之至多一者的相應第二RNA序列。本文亦揭示該等組合物用於治療疾病及調節兩種或更多種基因之表現的用途。

Description

調節基因表現之組合物及方法
許多人類疾病及病症係由某些蛋白質相比於此等蛋白質在不患有該疾病或病症之人類中之表現量的較高及/或較低表現量之組合所導致。可以使用單一構築體選擇性地增加目標蛋白質之表現且降低另一不同目標蛋白質之表現的RNA治療劑可具有治療作用。然而，外源性RNA可觸發不合需要之先天性免疫反應。因此，需要開發具有降低之免疫原性以避免非吾人所樂見的先天性免疫活化的RNA治療劑。
本發明提供使用一種重組聚核酸或RNA構築體來同時調節兩種或三種或更多種蛋白質之表現的組合物及方法。舉例而言，本文提供之組合物及方法可用於增加第一蛋白質之表現及降低第二蛋白質之表現。舉例而言，本文提供之組合物及方法可用於增加第一蛋白質之表現、降低第二蛋白質之表現且降低第三蛋白質之表現。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的該第一RNA序列及(ii)的相應第二RNA序列，其具有至少兩種遺傳元件中之至多一者。在一些實施例中，該重組RNA構築體包含一或多個尿苷。在一些實施例中，該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。在一些實施例中，該核苷酸變異體包含經修飾之尿苷。在一些實施例中，該經修飾之尿苷包含N1-甲基假尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體不包含核苷酸變異體。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體不包含N1-甲基假尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體僅包含未經修飾之核苷酸或天然核苷酸。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體包含尿苷，其中(a)該等重組RNA構築體中所包含之所有尿苷均為未經修飾或天然核苷酸；或(b)該等重組RNA構築體中所包含之該等尿苷中之至少一者為未經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供用於調節兩種或更多種基因於細胞中之表現的組合物。在一些態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含治療有效量之本文所描述之組合物及醫藥學上可接受之賦形劑中之任一者。在一些態樣中，本文提供一種載體，其包含編碼本文所描述之組合物中之任一者的重組聚核酸構築體。在一些態樣中，本文提供一種細胞，其包含本文所描述之組合物中之任一者或本文所描述之載體中之任一者。
在一些態樣中，本文提供一種在細胞中同時表現來自單一RNA轉錄本之siRNA及mRNA的方法，其包含將本文所描述之組合物中之任一者或本文所描述之載體中之任一者引入至該細胞中。
在一些態樣中，本文提供一種治療疾病或病狀之方法，其包含向有需要之個體投與本文所描述之組合物中之任一者或本文所描述之醫藥組合物中之任一者。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-8 (IL-8) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IGF-1之該mRNA及(ii)的能夠結合至該IL-8 mRNA之該等至少兩種siRNA中之至多一者。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-1β (IL-1β) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IGF-1之該mRNA及(ii)的能夠結合至該IL-1β mRNA之該至少兩種siRNA中之至多一者。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IL-4之該mRNA及(ii)的能夠結合至該TNF-α mRNA之該至少兩種siRNA中之至多一者。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA及介白素17 (IL-17)之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IL-4之該mRNA及(ii)的能夠結合至該TNF-α mRNA及IL-17 mRNA之該等至少兩種siRNA中之至多一者。
在一些態樣中，本文提供一種組合物，其包含重組聚核酸構築體，該構築體包含選自由SEQ ID NO: 1-24、42、125、97-108、121-122及127-128組成之群之核酸序列。
相關申請之交叉引用
本申請案主張2021年6月23日申請之美國臨時申請案第63/213,829號之權益，該申請案以全文引用的方式併入本文中。 參考文獻併入
本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案均以引用之方式併入本文中，其引用的程度如同各個別公開案、專利或專利申請案經特定及個別地指示以引用的方式併入一般。
本文提供用於調節兩種或更多種基因之表現的組合物及方法，該等組合物包含重組聚核酸或RNA構築體，該等構築體包含至少一種編碼所關注之基因的核酸序列及至少兩種各自編碼或包含調節目標RNA之表現之遺傳元件的核酸序列。與包含本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體之組合物接觸的一或多種細胞可具有降低之先天性免疫活性程度及降低之免疫反應，且可增加調節兩種或更多種基因在一或多種細胞中之表現的效率。
本文所提供之重組聚核酸或RNA構築體組合物可進一步包含一或多種連接子。在一種情況下，重組聚核酸或RNA構築體可包含編碼或包含至少兩種調節一或多種目標RNA及一或多種連接子之表現的遺傳元件之核酸序列，其中連接子可存在於至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件中之各者之間。在另一情況下，重組聚核酸或RNA構築體可包含編碼一或多種所關注之基因及一或多種連接子的核酸序列，其中連接子可存在於一或多種所關注之基因中之各者之間。在一些情況下，重組聚核酸或RNA構築體可包含編碼一或多種所關注之基因的核酸序列、編碼或包含至少兩種調節一或多種目標RNA及一或多種連接子之表現之遺傳元件的核酸序列，其中連接子可存在於編碼一或多種所關注之基因的核酸序列與編碼或包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現之遺傳元件的核酸序列之間，存在於至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件中之各者之間，及/或存在於一或多種所關注之基因中之各者之間。在一些實施例中，本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體可包含至少三種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。在一些實施例中，本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體可包含至少六種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。
本文亦提供包含本文所描述之重組聚核酸構築體或編碼本文所描述之重組RNA構築體的載體。本文提供包含本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體組合物或載體的細胞。本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體組合物可調配成醫藥組合物。本文進一步提供用於同時調節兩種或更多種基因之表現的組合物及方法。
本文提供用於治療疾病或病狀之組合物及方法，其包含向有需要之個體投與本文所描述之組合物或醫藥組合物。本文所提供之重組聚核酸或RNA構築體組合物可包含第一RNA序列及第二RNA序列。在一個實例中，第一RNA序列或第二RNA序列可包含一或多個信使RNA (mRNA)，且可增加由mRNA編碼之蛋白質的含量。在另一實例中，第一RNA序列或第二RNA序列可為調節目標RNA之表現的遺傳元件。舉例而言，第一RNA序列或第二RNA序列可包含能夠結合至一或多種目標RNA之小干擾RNA (siRNA)，且可下調由目標RNA編碼之蛋白質的含量。舉例而言，mRNA及目標RNA可具有與本文所描述之疾病及病狀相關之基因。
除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習本發明所屬領域者通常所理解相同的含義。儘管類似或等效於本文中所描述之方法及材料可用於實踐或測試本發明，但下文描述合適方法及材料。 定義
本說明書之某些特定細節按順序闡述以提供對各個實施例之透徹理解。然而，熟悉本技藝者應理解，本揭示內容可在無此等細節之情況下實踐。在其他個例中，尚未展示或詳細描述熟知結構以避免實施例之不必要的模糊描述。除非上下文另有要求，否則在本說明書及隨後申請專利範圍中，詞語「包含(comprise)」及其變化形式(諸如「包含(comprises及comprising)」)應視為開放的包涵含義，亦即視為「包括(但不限於)」。另外，本文中所提供之標題僅為方便起見，而不解釋所主張之揭示內容之範疇或含義。
除非上下文另外明確規定，否則如本說明書及所附申請專利範圍中所使用，單數形式「一(a/an)」及「該/該等(the)」包括複數個參考物。亦應注意，除非內容明確指定，否則術語「或」通常以其包括「及/或」之含義而採用。如本文所用，術語「及/或」及「其任何組合」及其文法等效物可互換使用。此等術語可表達特異性涵蓋任何組合。僅出於說明之目的，以下片語「A、B及/或C」或「A、B、C或其任何組合」可意謂「個別地A；個別地B；個別地C；A及B；B及C；A及C；及A、B及C」。除非上下文特定指分開使用，否則術語「或」可結合或分開使用。
術語「約」或「大約」可意謂在如一般熟習此項技術者所判定的特定值之可接受誤差範圍內，其將部分視量測或判定該值之方式(亦即量測系統之侷限性)而定。舉例而言，根據本領域中之實踐，「約」可意謂在1或大於1個標準差內。可替代地，「約」可意謂既定值之至多20%、至多10%、至多5%或至多1%之範圍。可替代地，尤其相對於生物系統或方法，該術語可意謂在值之數量級內，5倍內或2倍內。若特定值描述於本申請案及申請專利範圍中，除非另有說明，否則應假設術語「約」意謂在特定值之可接受誤差範圍內。
如本說明書及申請專利範圍中所用，片語「包含(comprising)」(及包含之任何形式，諸如「包含(comprise)」及「包含(comprises)」)、「具有(having)」(及具有之任何形式，諸如「具有(have)」及「具有(has)」)、「包括(including)」(及包括之任何形式，諸如「包括(includes)」及「包括(include)」)或「含有(containing)」(及含有之任何形式，諸如「含有(contains)」及「含有(contain)」)為包括性或開放的且不排除額外未列出之要素或方法步驟。預期在本說明書中論述之任何實施例可利用本發明之任何方法或組合物實施，且反之亦然。此外，本發明之組合物可用於達成本發明之方法。
本說明書中對「實施例」、「某些實施例」、「較佳實施例」、「特定實施例」、「一些實施例」、「一實施例」、「一個實施例」或「其他實施例」之提及意謂結合實施例所描述之特定特徵、結構或特性包括在本發明之至少一些實施例中，但不一定包括在所有實施例中。為有助於對本發明之理解，下文定義多個術語及片語。
如本文所用之術語「RNA」包括編碼胺基酸序列(例如，mRNA等)之RNA以及未編碼胺基酸序列(例如，siRNA、shRNA、miRNA等)之RNA。如本文所使用之RNA可為編碼RNA，亦即編碼胺基酸序列之RNA。此類RNA分子亦被稱作mRNA (信使RNA)且為單股RNA分子。如本文所使用之RNA可為非編碼RNA，亦即不編碼胺基酸序列或不轉譯成蛋白質之RNA。非編碼RNA可包括(但不限於)小干擾RNA (siRNA)、短或小髮夾RNA (shRNA)、微小RNA (miRNA)、piwi互動型RNA (piRNA)及長非編碼RNA (IncRNA)。如本文所使用之siRNA可包含雙股RNA (dsRNA)區、髮夾結構、環結構其任何組合。在一些實施例中，siRNA可包含至少一個shRNA、至少一個dsRNA區或至少一個環結構。在一些實施例中，siRNA可自dsRNA或shRNA處理。在一些實施例中，siRNA可藉由內源性蛋白質，諸如切丁酶(DICER)，自shRNA處理或裂解。在一些實施例中，髮夾結構或環結構可自siRNA裂解或移除。舉例而言，shRNA之髮夾結構或環結構可裂解或移除。在一些實施例中，本文所描述之RNA可藉由一般熟習此項技術者已知之合成、化學或酶促方法，藉由一般熟習此項技術者已知之重組技術製備，或自天然來源分離，或藉由其任何組合製備。RNA可包含經修飾或未經修飾之核苷酸或其混合物，例如該RNA可視情況包含此項技術中已知之化學及天然存在之核苷修飾(例如，N 1-甲基假尿苷亦在本文中稱為甲基假尿苷)。
術語「核酸序列」、「聚核酸序列」及「核苷酸序列」在本文中可互換地使用，且在本文中具有相同含義且係指DNA或RNA。在一些實施例中，核酸序列為包含核苷酸單體或由核苷酸單體組成之聚合物，該等核苷酸單體藉由糖/磷酸酯主鏈之磷酸二酯鍵彼此共價連接。術語「核酸序列」、「聚核酸序列」及「核苷酸序列」可涵蓋未經修飾之核酸序列，亦即包含未經修飾之核苷酸或天然核苷酸。術語「核酸序列」、「聚核酸序列」及「核苷酸序列」亦可涵蓋經修飾之核酸序列，諸如經鹼基修飾、經糖修飾或經主鏈修飾等DNA或RNA。
術語「天然核苷酸」及「標準核苷酸」在本文中可互換使用且在本文中具有相同含義且係指天然存在之核苷酸鹼基腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)、胸(腺)嘧啶(T)。
術語「未經修飾之核苷酸」在本文中係指天然未經修飾之天然核苷酸，其例如未在活體內表觀遺傳或轉錄後修飾。較佳地，術語「未經修飾之核苷酸」在本文中用以指天然未經修飾之天然核苷酸，其例如未在活體內進行表觀遺傳或轉錄後修飾，且其未經化學修飾，例如其未經活體外化學修飾。
術語「經修飾之核苷酸」在本文中用以指天然經修飾之核苷酸，諸如表觀遺傳或轉錄後修飾之核苷酸，及經化學修飾之核苷酸，例如活體外化學修飾之核苷酸。 重組 RNA 構築體
本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含至少一種編碼所關注之基因的核酸序列及/或至少兩種各自包含調節目標RNA之表現之遺傳元件的核酸序列。在一些情況下，調節一或多種目標RNA，例如siRNA之表現的遺傳元件可包含含有有義siRNA股及反義siRNA股之核酸序列。舉例而言，在一些情況下，重組RNA構築體可包含調節一或多種目標RNA之表現的至少1個種類之遺傳元件，例如至少1個種類之siRNA，諸如包含siRNA之有義股的核酸序列及包含siRNA之反義股的核酸序列。調節一或多種目標RNA之表現的1個種類之遺傳元件，例如如本文所描述之1個種類之siRNA可指1個種類之有義股siRNA及1個種類之反義股siRNA。在一些情況下，重組RNA構築體可包含調節一或多種目標RNA之表現的至少兩個種類之遺傳元件，例如至少兩個種類之siRNA。舉例而言，重組RNA構築體可包含調節一或多種目標RNA之表現的2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個種類之遺傳元件，例如包含siRNA之有義股及siRNA之反義股的2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個種類的siRNA。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含調節一或多種目標RNA之表現的1至20個種類之遺傳元件，例如1至20個種類之siRNA。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含調節一或多種目標RNA之表現的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或至少10個種類之遺傳元件，例如至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或至少10個種類之siRNA。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含調節一或多種目標RNA之表現的至多2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或至多20個種類之遺傳元件，例如至多2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或至多20個種類之siRNA。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含調節一或多種目標RNA之表現的至多3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或至多20個種類之遺傳元件，例如至多3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或至多20個種類之siRNA。
在一些實施例中，重組RNA構築體可包含2種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與10種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間，3種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與10種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間，4種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與10種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間，5種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與10種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間，6種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與10種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間，7種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與10種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間，9種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與10種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間，較佳2種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與6種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間，3種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與6種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間或4種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件與6種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間。在較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含調節一或多種目標RNA之表現的至少2個種類之遺傳元件。在另一較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含調節一或多種目標RNA之表現的至少3個種類之遺傳元件。在另一較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含調節一或多種目標RNA之表現的至少6個種類之遺傳元件。舉例而言，重組RNA構築體可包含在2 siRNA與10 siRNA之間、在3 siRNA與10 siRNA之間、在4 siRNA與10 siRNA之間、在5 siRNA與10 siRNA之間、在6 siRNA與10 siRNA之間、在7 siRNA與10 siRNA之間、在9 siRNA與10 siRNA之間，較佳在2 siRNA與6 siRNA之間、在3 siRNA與6 siRNA之間或在4 siRNA與6 siRNA之間。在較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含至少2個種類之siRNA。在另一較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含至少3個種類之siRNA。在另一較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含至少6個種類之siRNA。
本文提供之重組RNA構築體組合物可進一步包含一或多種連接子。在一種情況下，重組RNA構築體可包含含有至少兩種調節一或多種目標RNA及一或多種連接子之表現的遺傳元件之核酸序列，其中連接子可存在於至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件中之各者之間。在另一情況下，重組RNA構築體可包含編碼一或多種所關注之基因及一或多種連接子的核酸序列，其中連接子可存在於一或多種所關注之基因中之各者之間。在一些情況下，重組RNA構築體可包含編碼一或多種所關注之基因的核酸序列、包含至少兩種調節一或多種目標RNA及一或多種連接子之表現之遺傳元件的核酸序列，其中連接子可存在於編碼一或多種所關注之基因的核酸序列與包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現之遺傳元件的核酸序列之間；存在於至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件中之各者之間；及/或存在於一或多種所關注之基因中之各者之間。
本文提供用於調節兩種或更多種基因之表現的組合物，其包含重組RNA構築體，該等重組RNA構築體包含至少一種編碼所關注之基因的核酸序列及/或至少兩種各自包含調節目標RNA之表現之遺傳元件的核酸序列。本文進一步提供用於治療疾病或病狀之組合物，其包含重組RNA構築體，該等重組RNA構築體包含至少一種編碼所關注之基因的核酸序列及/或至少兩種各自包含調節目標RNA之表現之遺傳元件的核酸序列。本文所提供之重組RNA構築體組合物可包含第一RNA序列及第二RNA序列。在一個實例中，第一RNA序列或第二RNA序列可包含一或多個信使RNA (mRNA)，且可增加由mRNA編碼之蛋白質的含量。在另一實例中，第一RNA序列或第二RNA序列可為調節目標RNA之表現的遺傳元件。在一些實施例中，調節目標RNA之表現的遺傳元件可為能夠結合至一或多種目標RNA之小干擾RNA (siRNA)。舉例而言，第一RNA序列或第二RNA序列可包含能夠結合至一或多種目標RNA之siRNA，且可下調由目標RNA編碼之蛋白質的含量。在一些情況下，調節目標RNA之表現的遺傳元件未抑制所關注之基因之表現。在一些情況下，mRNA及目標RNA可具有與本文所描述之疾病及病狀相關之基因。本文亦提供使用單一RNA轉錄本同時調節兩種或更多種基因之表現的組合物及方法。
本文進一步提供重組聚核酸或RNA構築體，該等構築體包含所關注之基因及至少兩種降低另一基因之表現的遺傳元件(諸如siRNA)，其中該所關注之基因及降低另一基因之表現的遺傳元件(諸如siRNA)可以順序方式自在5'至3'方向存在，如 圖 1中所示，或自3'至5'方向。在一個實例中，所關注之基因(例如，IGF-1或IL-4)可存在於減少另一基因之表現的遺傳元件(諸如siRNA)之5'或上游處，且該所關注之基因可藉由連接子(mRNA至siRNA/shRNA連接子，亦可被稱為「間隔子」)連接至siRNA，如 圖 1中所示。在另一實例中，所關注之基因可存在於減少另一基因之表現的遺傳元件(諸如siRNA)之3'或下游處，且siRNA可藉由連接子(siRNA/shRNA至mRNA連接子，亦可被稱為「間隔子」)連接至所關注之基因。本文提供之重組聚核酸或RNA構築體可包含超過一個種類之siRNA及超過一個種類之siRNA中之各者可藉由連接子(siRNA至siRNA連接子或shRNA至shRNA連接子)連接。在一些實施例中，mRNA至siRNA (或siRNA至mRNA)連接子之序列及siRNA至siRNA (或shRNA至shRNA)連接子之序列可能不同。在一些實施例中，mRNA至siRNA/shRNA (或siRNA/shRNA至mRNA)連接子之序列及siRNA至siRNA (或shRNA至shRNA)連接子之序列可能相同。本文提供之重組聚核酸或RNA構築體可包含超過一個所關注之基因及超過一個所關注之基因中之各者可藉由連接子(mRNA至mRNA連接子)連接。在一些情況下，所關注之基因可包含在N端處之訊息肽序列，如 圖 1中所示。在一些情況下，所關注之基因可包含未經修飾之(WT)訊息肽序列或經修飾之訊息肽序列。本文提供之重組聚核酸構築體(例如，DNA構築體)亦可包含用於RNA聚合酶結合之啟動子序列。舉例而言，DNA構築體可包含用於DNA依賴性RNA聚合酶結合之啟動子序列以表現本文所描述之RNA構築體。作為一實例，用於T7 RNA聚合酶結合之T7啟動子如 圖 1所示。在一些實施例中，本文所描述之RNA構築體可能不包含啟動子序列。
重組聚核酸或重組RNA可指並非天然存在且經活體外合成或操控之聚核酸或RNA。重組聚核酸或RNA可在實驗室中合成，且可藉由使用重組DNA或RNA技術藉由使用DNA或RNA之酶促修飾(諸如酶促限制消化、接合、選殖及/或活體外轉錄)製備。重組聚核酸可在活體外轉錄以產生信使RNA (mRNA)，且重組mRNA可經分離、純化並用於轉染至細胞中。本文所使用之重組聚核酸或RNA可編碼蛋白質、多肽、目標模體、訊息肽及/或非編碼RNA (諸如小干擾RNA (siRNA))。在一些實施例中，在適合之條件下，重組聚核酸或RNA可併入至細胞中且在細胞內表現。
諸如包括重組RNA之重組聚核酸的外源性核酸在引入細胞中時可誘導先天性免疫反應。外源性RNA可由不同類型之先天性免疫受體識別，包括細胞表面、胞內體及胞溶質先天性免疫受體。胞內體先天性免疫受體包括(但不限於)鐸樣受體3 (TLR3)、TLR7及TLR8。細胞溶質先天性免疫受體之實例包括(但不限於)視黃酸誘導性基因1 (RIG1)、黑素瘤分化相關基因5 (MDA5)、NOD樣受體、含比林域3 (NLRP3)及核苷酸結合及含低聚合域2 (NOD2)。TLR3、RIG1及MDA5可識別雙股RNA (dsRNA)，且TLR7及TLR8可識別單股RNA (ssRNA)及RNA降解產物(例如，富含尿苷及鳥苷-尿苷之片段)。此等RNA感測器(例如，TLR3、TLR7、TLR8、RIG1、MDA5、NOD2等)可活化干擾素調節因子(IRF)-介導之傳訊及核因子κB (NF-κB)-介導之傳訊，以增加產生I型干擾素(IFN-α/β)及促發炎細胞介素，或在NLRP3情況下，可起始炎性體形成及處理細胞介素以使其成熟。因此，重要的是開發誘發較低先天性免疫反應之聚核酸及RNA治療劑。如本文所描述之重組聚核酸或重組RNA組合物可提供調節兩種或更多種與先天性免疫活性程度降低及免疫反應降低並行之基因的方式。
本文提供用於調節兩種或更多種基因之表現的組合物及方法，其包含重組RNA構築體，該等重組RNA構築體包含編碼至少一種所關注之基因的第一RNA序列及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現之遺傳元件的第二RNA序列。如本文所描述之重組RNA構築體，其包含編碼至少一種所關注之基因的RNA序列及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現之遺傳元件的RNA序列，且與包含編碼至少一種所關注之基因之RNA序列及包含低於兩種(例如，0或1種)調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之RNA序列的重組RNA構築體相比，可有利於降低或誘導更低免疫反應程度。舉例而言，使細胞與本文所描述之重組RNA構築體接觸可產生的免疫反應低於與包含編碼所關注之基因之第一RNA序列及包含至多一種調節目標RNA之表現的遺傳元件之相應第二RNA序列的相應重組RNA構築體接觸之細胞的免疫反應。在一些實施例中，相應重組RNA構築體可包含含有一種調節目標RNA之表現之遺傳元件的第二RNA序列。在一些實施例中，相應重組RNA構築體可包含不含任何調節目標RNA之表現之遺傳元件的第二RNA序列。在一些實施例中，細胞具有人類來源。
如本文所描述之免疫反應可藉由此項技術中已知之任何方法量測。在一個實例中，免疫反應可藉由量測細胞介素之分泌、DC活化標記物之表現或充當適應性免疫反應之佐劑的能力來評估。在另一實例中，免疫反應可使用此項技術中已知之任何套組，例如可商購套組進行量測。用於量測免疫反應之方法的細節描述於實例中。在一些實施例中，本文所描述之免疫反應為人類免疫反應。在一些實施例中，免疫反應為人類TLR7免疫反應、人類TLR3免疫反應或IFNα/β免疫反應或其任何組合。在一些實施例中，本文所描述之免疫反應為人類免疫反應。在一些實施例中，免疫反應為人類TLR7免疫反應或IFNα/β免疫反應或其任何組合。
人類TLR7免疫反應可藉由使用人類TLR7免疫原性分析量測。在一些實施例中，該人類TLR7免疫原性分析可在經工程化以表現人類TLR7基因及報導基因之HEK293細胞中進行。在一些實施例中，報導基因可為分泌型報導基因。舉例而言，分泌型報導基因可包括(但不限於)分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。在一些實施例中，報導基因可處於具有一或多種NF-κB及/或活化劑蛋白質1 (AP1)結合位點之啟動子的控制下。在一些實施例中，該啟動子為IFN-β最小啟動子。在一些實施例中，該人類TLR7免疫原性分析可量測NF-κB及/或AP1之活化。
人類TLR3免疫反應可藉由使用人類TLR3免疫原性分析量測。在一些實施例中，該人類TLR3免疫原性分析可在經工程化以表現人類TLR3基因及報導基因之HEK293細胞中進行。在一些實施例中，報導基因可為分泌型報導基因。舉例而言，分泌型報導基因可包括(但不限於)分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。在一些實施例中，報導基因可處於具有一或多個NF-κB及/或AP1結合位點之啟動子的控制下。在一些實施例中，該啟動子為IFN-β最小啟動子。在一些實施例中，該人類TLR3免疫原性分析可量測NF-κB及/或AP1之活化。
IFNα/β免疫反應可藉由使用IFNα/β免疫原性分析量測。在一些實施例中，IFNα/β免疫原性分析可在經工程化以表現人類訊息轉導與轉錄活化因子2 (STAT2)基因及/或IRF9基因及報導基因的HEK293細胞中進行。在一些實施例中，報導基因可為分泌型報導基因。舉例而言，分泌型報導基因可包括(但不限於)分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。在一些實施例中，該報導基因可處於具有一或多個STAT2及/或IRF9結合位點之啟動子的控制下。在一些實施例中，啟動子為干擾素刺激之包含含有54 (ISG54)啟動子。在一些實施例中，該IFNα/β免疫原性分析可量測詹納斯(Janus)激酶(JAK)-STAT及/或ISG3之活化。
在一些實施例中，使該人類細胞與本文所描述之重組RNA構築體接觸可產生的免疫反應低於與包含至多一種根據本文所描述之人類TLR7免疫原性分析調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之相應重組RNA構築體接觸之該人類細胞的免疫反應。在一些實施例中，使該人類細胞與本文所描述之重組RNA構築體接觸可產生的免疫反應低於與包含至多一種根據本文所描述之人類TLR3免疫原性分析調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之相應重組RNA構築體接觸之該人類細胞的免疫反應。在一些實施例中，使該人類細胞與本文所描述之重組RNA構築體接觸可產生的免疫反應低於與包含至多一種根據本文所描述之IFNα/β免疫原性分析調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之相應重組RNA構築體接觸之該人類細胞的免疫反應。在一些實施例中，與重組RNA構築體接觸之該人類細胞的免疫反應可比與包含至多一種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之相應重組RNA構築體接觸之該人類細胞的免疫反應低至少約1.1倍、約1.2倍、約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2.0倍、約2.1倍、約2.2倍、約2.3倍、約2.4倍、約2.5倍、約2.6倍、約2.7倍、約2.8倍、約2.9倍、約3.0倍、約3.1倍、約3.2倍、約3.3倍、約3.4倍、約3.5倍、約3.6倍、約3.7倍、約3.8倍、約3.9倍、約4.0倍、約4.1倍、約4.2倍、約4.3倍、約4.4倍、約4.5倍、約4.6倍、約4.7倍、約4.8倍、約4.9倍、約5.0倍、約10倍、約15倍、約20倍、約25倍、約30倍、約35倍、約40倍、約45倍、約50倍、約55倍、約60倍、約65倍、約70倍、約75倍、約80倍、約85倍、約90倍、約95倍、約100倍、約105倍、約110倍、約115倍、約120倍、約125倍、約130倍、約135倍、約140倍、約145倍或至少約150倍。在一些實施例中，與重組RNA構築體接觸之該人類細胞的免疫反應可比與包含至多一種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之相應重組RNA構築體接觸之該人類細胞的免疫反應低約1.1倍至約10倍、約1.5倍至約15倍、約2.0倍至約20倍、約2.5倍至約25倍、約3.0倍至約30倍、約3.5倍至約35倍、約4.0倍至約40倍、約4.5倍至約45倍、約5.0倍至約50倍、約5.5倍至約55倍、約6.0倍至約60倍、約6.5倍至約65倍、約7.0倍至約70倍、約7.5倍至約75倍、約8.0倍至約80倍、約8.5倍至約85倍、約9.0倍至約90倍、約9.5倍至約95倍、約10倍至約100倍、約15倍至約150倍、約20倍至約200倍、約25倍至約250倍、約30倍至約300倍、約35倍至約350倍、約40倍至約400倍、約45倍至約450倍或約50倍至約500倍。在一些實施例中，與本文所描述之重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之免疫反應與包含至多一種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之免疫反應相比降低至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或至少99.9%。
在一些情況下，本文所描述之重組RNA構築體可能不會觸發任何可偵測免疫反應，如藉由本文所描述之任何方法所量測。舉例而言，使人類細胞與本文所描述之重組RNA構築體接觸可能不會根據本文所描述之免疫原性分析產生實質性免疫反應(例如，人類TLR3免疫原性分析、人類TLR7免疫原性分析或IFNα/β免疫原性分析等)。
本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含第一RNA序列及第二RNA序列，其中該第一RNA序列及/或該第二RNA序列可編碼所關注之基因或調節目標RNA之表現的遺傳元件。在一個實例中，該第一RNA序列或該第二RNA序列可為編碼所關注之基因的mRNA。在另一實例中，第一RNA序列或第二RNA序列可為減少目標RNA之表現的遺傳元件，諸如能夠結合至目標RNA之小干擾RNA (siRNA)。在一些實施例中，能夠結合至目標RNA之siRNA不為所關注之基因之內含子序列的一部分。在一些情況下，所關注之基因在沒有RNA剪接的情況下表現。在一些情況下，能夠結合至目標RNA之siRNA並未由該所關注之基因的內含子序列編碼或不包括該所關注之基因的內含子序列。在一些情況下，能夠結合至目標RNA的siRNA結合至目標RNA之外顯子。在一些情況下，能夠結合至目標RNA之siRNA特異性結合至一個目標RNA。
本文提供之重組RNA構築體可包含所關注之基因的多個複本，其中所關注之基因的多個複本中之各者編碼相同蛋白質。本文亦提供包含含有多個所關注之基因之重組RNA構築體的組合物，其中多個所關注之基因中之各者編碼不同蛋白質。在一些實施例中，本文提供之重組RNA構築體可包含編碼相同蛋白質之所關注之基因之多個複本與其中各者編碼不同蛋白質之所關注之多個基因的組合。
本文提供之重組RNA構築體可包含超過一種編碼所關注之基因的核酸序列。舉例而言，重組RNA構築體可包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多種編碼所關注之基因的核酸序列。在一些情況下，兩種或更多種核酸序列中之各者可編碼相同所關注之基因，其中由相同所關注之基因編碼之mRNA與siRNA目標mRNA不同。在一些情況下，兩種或更多種核酸序列中之各者可編碼不同所關注之基因，其中由不同所關注之基因編碼的mRNA不為包含於相同RNA構築體中之siRNA的目標。在一些情況下，重組RNA構築體可包含三種或更多種編碼所關注之基因的核酸序列，其中三種或更多種核酸序列中之各者可編碼相同所關注之基因或不同所關注之基因，且其中由相同或不同所關注之基因編碼的mRNA不為包含於相同RNA構築體中之siRNA的目標。舉例而言，重組RNA構築體可包含四個編碼所關注之基因的核酸序列，其中四個核酸序列中之三者編碼相同所關注之基因，且四個核酸序列中之一者編碼不同所關注之基因，且其中由相同或不同所關注之基因編碼的mRNA不為包含於相同RNA構築體中之siRNA的目標。
本文提供之重組RNA構築體可包含多個種類之siRNA，其中多個種類之siRNA中之各者能夠結合至相同目標RNA。在一些實施例中，多個種類之siRNA中之各者可結合至相同目標RNA之相同區域。在一些實施例中，多個種類之siRNA中之各者可結合至相同目標RNA之不同區域。在一些實施例中，多個種類之siRNA中之一些可與相同目標RNA結合，且多個種類之siRNA中之一些可與相同目標RNA之不同區域結合。本文亦提供重組RNA構築體，其包含多個種類之siRNA，其中多個種類之siRNA中之各者能夠結合至相同目標RNA。在一些實施例中，目標RNA為非編碼RNA。在一些實施例中，目標RNA為信使(mRNA)。
本文提供之重組RNA構築體可包含靶向與本文所描述之疾病或病狀相關之基因之RNA的至少兩個種類之siRNA。舉例而言，本文提供之重組RNA構築體可包含靶向相同RNA或不同RNA之2-10個種類之siRNA。在一些情況下，靶向相同RNA之2-10個種類之siRNA中之各者可包含相同序列，亦即2-10個種類之siRNA中之各者結合至目標RNA之相同區域。在一些情況下，靶向相同RNA之2-10個種類之siRNA中之各者可包含不同序列，亦即2-10個種類之siRNA中之各者結合至目標RNA之不同區域。舉例而言，本文提供之重組RNA構築體可包含靶向一個RNA之3個種類之siRNA，且3個種類之siRNA中之各者包含相同核酸序列以靶向RNA之相同區域。在此實例中，3個種類之siRNA中之各者可包含相同核酸序列以靶向外顯子1。在另一實例中，3個種類之siRNA中之各者可包含不同核酸序列以靶向RNA之不同區域。在此實例中，3個種類之siRNA中之一者可包含靶向外顯子1之核酸序列及3個種類之siRNA中之另一者可包含靶向外顯子2之核酸序列等。在又另一實例中，3個種類之siRNA中之各者可包含不同核酸序列以靶向不同RNA。在所有態樣中，本文提供之重組RNA構築體中之siRNA可不影響所關注之基因之表現，由相同RNA構築體組合物中之mRNA表現。在一些實施例中，本文提供之重組RNA構築體可包含能夠結合至一或多種目標RNA之6個種類之siRNA。在一些實施例中，目標RNA為mRNA。
本文提供包含重組RNA構築體之組合物可進一步包含連接子。在一些情況下，本文所描述之連接子可具有以下之結構 ：式 (I)X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數，且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)。在一些情況下，本文所描述之連接子可具有以下之結構 ：式 (II)X pTCCCX r，其中X為任何核苷酸，p為0至17之整數，且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。在一個實施例中，第一RNA序列或第二RNA序列可包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件，且該連接子RNA序列可連接至少兩種調節一或多種目標RNA (例如，siRNA至siRNA連接子或shRNA至shRNA連接子)之表現的遺傳元件中之各者。在另一實施例中，第一RNA序列可編碼所關注之基因且第二RNA序列可包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件，且該連接子RNA序列可連接所關注之基因及至少兩種調節一或多種目標RNA (例如，mRNA至siRNA連接子、siRNA至mRNA、mRNA至shRNA連接子、或shRNA至mRNA連接子)之表現的遺傳元件。在一些實施例中，mRNA至siRNA/shRNA (或siRNA/shRNA至mRNA)連接子之序列及siRNA至siRNA (或shRNA至shRNA)連接子之序列可能不同。在一些實施例中，mRNA至siRNA/shRNA (或siRNA/shRNA至mRNA)連接子之序列及siRNA至siRNA (或shRNA至shRNA)連接子之序列可能相同。在一些實施例中，該第一RNA序列可編碼所關注之基因且該第二RNA序列可包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件，且該相同RNA連接子序列可連接所關注之基因及至少兩種調節一或多種目標RNA (例如，mRNA至siRNA/shRNA連接子或siRNA/shRNA至mRNA連接子)之表現的遺傳元件且在調節一或多種目標RNA (例如，siRNA/shRNA至siRNA/shRNA連接子)之表現的至少兩種遺傳元件中之各者之間。
在一些實施例中，連接子之長度為約4至約50、約4至約45、或約4至約40、約4至約35、或約4至約30個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為約4至約27個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為約4至約18個核苷酸。舉例而言，連接子之長度為約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、約40、約41、約42、約43、約44、約45、約46、約47、約48、約49或約50個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度可為至多約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、約40、約41、約42、約43、約44、約45、約46、約47、約48、約49或至多約50個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為4個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為7個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為11個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為12個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為18個核苷酸。
在一些情況下，本文所描述之連接子可具有以下之結構 ： 式 (I)X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數，且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；且m為1且n為0。在一些情況下，本文所描述之連接子可包含含有CAACAA (SEQ ID NO: 91)、TCCC (SEQ ID NO: 89)或ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。在一些實施例中，連接子可包含選自由以下組成之群的序列：ATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 87)、ACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 88)、TCCC (SEQ ID NO: 89)、ACAACAATCCC (SEQ ID NO: 90)及ACAACAA (SEQ ID NO: 85)。在一些實施例中，連接子可包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)、ATAGTGAGTCGTATTATCCC (SEQ ID NO: 92)、ATAGTGAGTCGTATTAACAACAATCCC (SEQ ID NO: 93)、ATAGTGAGTCGTATTAACAACAA (SEQ ID NO: 94)、ATAGTGAGTCGTATTAATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 95)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)之序列。在一些實施例中，連接子可包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。在一些實施例中，本文所描述之連接子可包含選自由SEQ ID NO: 27、28、85-95組成之群的序列。在一些實施例中，本文所描述之連接子可能不包含含有TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 28)之序列。在一些實施例中，本文所描述之連接子可能不包含含有ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)之序列。在一些實施例中，本文所描述之連接子不包含TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 28)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)。
在一些情況下，可使用tRNA連接子。tRNA系統跨活有機體為進化上保守的，且利用內源性RNases P及Z以處理多順反子構築體(Dong等人，2016)。在一些情況下，本文所描述之tRNA連接子可包含含有AACAAAGCACCAGTGGTCTAGTGGTAGAATAGTACCCTGCCACGGTACAGACCCGGGTTCGATTCCCGGCTGGTGCA (SEQ ID NO: 96)之核酸序列。在一些情況下，包含含有ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)之核酸序列的連接子可用於連接該第一RNA序列及該第二RNA序列。在一些實施例中，包含含有TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 28)之核酸序列的連接子可用於連接1-20個或更多個種類的siRNA中之各者。
在一些情況下，本文所描述之連接子可能不會形成二級結構。舉例而言，本文所描述之連接子可能不會結合至本文提供之重組RNA構築體的核酸序列或與其鹼基配對。在一些實施例中，根據RNAfold WebServer，本文所描述之連接子RNA序列未形成二級結構。在一些實施例中，本文所描述之siRNA序列可根據RNAfold WebServer形成二級結構。
本文進一步提供包含1-20個或更多個種類的siRNA之重組RNA構築體組合物，其中1-20個或更多個種類的siRNA中之各者經具有選自由以下組成之群之結構的連接子連接： 式 (I)：X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；及 式 (II)：X pTCCCX r，其中X為任何核苷酸，p為0至17之整數且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。
在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可被裂解。舉例而言，本文提供之重組RNA構築體可在細胞吸收之後內源性裂解。在一些實施例中，重組RNA構築體可藉由細胞內蛋白質或內源性蛋白質裂解。在一些實施例中，重組RNA構築體可藉由切丁酶，例如內源性切丁酶裂解。在一些實施例中，包含第一RNA序列、第二RNA序列及連接子RNA序列之重組RNA構築體，其中該連接子RNA序列連接第一RNA序列及該第二RNA序列，可在第一RNA序列與第二RNA序列之間被裂解。在一些實施例中，本文提供之重組RNA構築體包含第一RNA序列、第二RNA序列及連接子。在此實施例中，第一RNA序列或第二RNA序列可包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件，且重組RNA構築體可在至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件中之各者之間被裂解。在另一實施例中，第一RNA序列可編碼所關注之基因且第二RNA序列可包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件，且重組RNA構築體可在所關注之基因與至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間裂解。在一些實施例中，該第一RNA序列可編碼所關注之基因且該第二RNA序列可包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件，且重組RNA構築體可在所關注之基因與至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之間及/或在至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件中之各者之間裂解。
在一些情況下，重組RNA構築體之裂解與不包含本文所描述之連接子的相應RNA構築體之裂解相比增強。舉例而言，包含第一RNA序列、第二RNA序列及本文所描述之連接子中之一或多者的重組RNA構築體之裂解與不包含本文所描述之連接子的RNA構築體之裂解相比增強。舉例而言，包含第一RNA序列、第二RNA序列及本文所描述之連接子RNA序列的重組RNA構築體之裂解與包含不具有選自由以下組成之群之結構之連接子的RNA構築體的裂解相比增強： 式 (I)：X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；及 式 (II)：X pTCCCX r，其中X任何核苷酸，p為0至17之整數且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。舉例而言，包含第一RNA序列、第二RNA序列及本文所描述之連接子RNA序列的重組RNA構築體之裂解與包含不包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列之連接子的RNA構築體之裂解相比增強。舉例而言，包含第一RNA序列、第二RNA序列及本文所描述之連接子RNA序列之重組RNA構築體的裂解與包含形成二級結構之連接子的RNA構築體之裂解相比增強。
在一些情況下，來自本文提供之重組RNA構築體的所關注之基因之表現與來自不包含本文所描述之連接子之相應重組RNA構築體的所關注之基因之表現相比增強。舉例而言，來自包含第一RNA序列、第二RNA序列及本文所描述之連接子RNA序列的重組RNA構築體之所關注之基因的表現與來自不包含本文所描述之連接子的RNA構築體的所關注之基因之表現相比增強。舉例而言，來自包含第一RNA序列、第二RNA序列及本文所描述之連接子RNA序列之重組RNA構築體的所關注之基因的表現與包含不具有選自由以下組成之群之結構之連接子的RNA構築體的裂解相比增強： 式 (I)：X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；及 式 (II)：X pTCCCX r，其中X任何核苷酸，p為0至17之整數且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。舉例而言，來自包含第一RNA序列、第二RNA序列及本文所描述之連接子RNA序列的重組RNA構築體的所關注之基因之表現與來自包含不包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列之連接子的RNA構築體的所關注之基因之表現相比增強。舉例而言，來自包含第一RNA序列、第二RNA序列及本文所描述之連接子RNA序列的重組RNA構築體之所關注之基因的表現與來自包含形成二級結構之連接子之RNA構築體的所關注之基因之表現相比增強。
在一些實施例中，所關注之基因之表現或重組RNA構築體之裂解的相對增加或增強為至少約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍、約10倍、約15倍、約17倍、約18倍、約19倍、約20倍、約21倍、約22倍或至少約25倍。在一些實施例中，所關注之基因之表現或重組RNA構築體之裂解的相對增加為約1.3倍至約3倍、約1.5倍至約4倍、約2倍至約5倍、約2倍至約10倍、約2倍至約15倍、約2倍至約17倍、約2倍至約18倍、約2倍至約19倍、約2倍至約20倍、約2倍至約21倍、約2倍至約22倍、約2倍至約25倍、約2倍至約30倍、約5倍至約10倍、約5倍至約15倍、約5倍至約17倍、約5倍至約18倍、約5倍至約19倍、約5倍至約20倍、約5倍至約21倍、約5倍至約22倍、約5倍至約25倍、約5倍至約30倍、約10倍至約15倍、約10倍至約17倍、約10倍至約18倍、約10倍至約19倍、約10倍至約20倍、約10倍至約21倍、約10倍至約22倍、約10倍至約25倍、約10倍至約30倍、約15倍至約17倍、約15倍至約18倍、約15倍至約19倍、約15倍至約20倍、約15倍至約21倍、約15倍至約22倍、約15倍至約25倍、約15倍至約30倍、約17倍至約18倍、約17倍至約19倍、約17倍至約20倍、約17倍至約21倍、約17倍至約22倍、約17倍至約25倍、約17倍至約30倍、約18倍至約19倍、約18倍至約20倍、約18倍至約21倍、約18倍至約22倍、約18倍至約25倍、約18倍至約30倍、約19倍至約20倍、約19倍至約21倍、約19倍至約22倍、約19倍至約25倍、約19倍至約30倍、約20倍至約21倍、約20倍至約22倍、約20倍至約25倍、約20倍至約30倍、約21倍至約22倍、約21倍至約25倍、約21倍至約30倍、約22倍至約25倍、約22倍至約30倍或約25倍至約30倍。在一些實施例中，所關注之基因之表現或重組RNA構築體之裂解的相對增加為約1.3倍、約1.4倍、約1.5倍、約1.6倍、約1.7倍、約1.8倍、約1.9倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約9倍、約10倍、約15倍、約17倍、約18倍、約19倍、約20倍、約21倍、約22倍、約25倍或約30倍。在一些實施例中，所關注之基因之表現或重組RNA構築體之裂解的相對增加為至多約2倍、約3倍、約5倍、約10倍、約15倍、約17倍、約18倍、約19倍、約20倍、約21倍、約22倍、約25倍或約30倍。
在一些實施例中，本文提供之重組RNA構築體可為裸RNA。在一些實施例中，本文提供之重組RNA構築體可進一步包含5'端帽、Kozak序列及/或內部核糖體進入位點(IRES)及/或特定言之為聚(A)尾以改進轉譯。在一些情況下，重組RNA構築體可進一步包含一或多個促進任何熟習此項技術者已知之轉譯的區域。5'端帽之非限制性實例可包括抗反向CAP類似物、無端帽、端帽0、端帽1、端帽2或鎖核酸端帽(LNA-端帽)。在一些情況下，5'端帽可包含m 2 7,3'-OG(5')ppp(5')G、m7G、m7G(5')G、m7GpppG或m7GpppGm。在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可包含在編碼所關注之基因的RNA序列之上游或5'的IRES。在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可包含緊鄰編碼所關注之基因的RNA序列之上游或5'的IRES。在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可包含在編碼至少一個調節目標RNA之表現的遺傳元件之RNA序列之下游或3'的IRES，其中編碼至少一個調節目標RNA之表現的遺傳元件之該RNA序列存在於編碼所關注之基因的RNA序列之上游。
本文提供之重組RNA構築體可進一步包含聚(A)尾。在一些情況下，聚(A)尾包含1至220個聚(A)鹼基對(SEQ ID NO: 131)。舉例而言，聚(A)尾包含1、3、5、8、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215或220個聚(A)鹼基對(SEQ ID NO: 131)。在一些實施例中，聚(A)尾包含1至20、1至40、1至60、1至80、1至100、1至120、1至140、1至160、1至180、1至200、1至220、20至40、20至60、20至80、20至100、20至120、20至140、20至160、20至180、20至200、20至220、40至60、40至80、40至100、40至120、40至140、40至160、40至180、40至200、40至220、60至80、60至100、60至120、60至140、60至160、60至180、60至200、60至220、80至100、80至120、80至140、80至160、80至180、80至200、80至220、100至120、100至140、100至160、100至180、100至200、100至220、120至140、120至160、120至180、120至200、120至220、140至160、140至180、140至200、140至220、160至180、160至200、160至220、180至200、180至220或200至220個聚(A)鹼基對(SEQ ID NO: 131)。在一些實施例中，聚(A)尾包含1、20、40、60、80、100、120、140、160、180、200或220個聚(A)鹼基對(SEQ ID NO: 131)。在一些實施例中，聚(A)尾包含至少1、20、40、60、80、100、120、140、160、180或至少200個聚(A)鹼基對(SEQ ID NO: 132)。在一些實施例中，聚(A)尾包含至多20、40、60、80、100、120、140、160、180、200或至多220個聚(A)鹼基對(SEQ ID NO: 131)。在一些實施例中，聚(A)尾包含120個聚(A)鹼基對(SEQ ID NO: 133)。
本文提供之重組RNA構築體可進一步包含Kozak序列。Kozak序列可指充當蛋白質轉譯起始位點之核酸序列模體。Kozak序列在例如Kozak, M.之Gene 299(1-2):1-34之文獻中詳細描述，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，本文所描述之Kozak序列可包含含有GCCACC (SEQ ID NO: 25)之序列。在一些實施例中，本文提供之重組RNA構築體可進一步包含核定位訊號(NLS)。
在一個態樣中，本文所描述之重組RNA構築體可能不包含核苷酸變異體。在一些情況下，本文所描述之重組RNA構築體可包含一或多個尿苷。在一些情況下，本文所描述之重組RNA構築體可能不包含經修飾之尿苷。在一些情況下，本文所描述之重組RNA構築體可能不包含一或多種N1-甲基假尿苷。在一些實施例中，包含於重組RNA構築體中之該一或多個尿苷的99%與1%之間、98%與2%之間、97%與3%之間、96%與4%之間、95%與2%之間、94%與6%之間、93%與7%之間、92%與8%之間、91%與9%之間、90%與10%之間、97%與3%之間未經修飾。在一些實施例中，包含於重組RNA構築體中之一或多個尿苷的至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%或至少99.9%未經修飾。在一些實施例中，包含於重組RNA構築體中之一或多個尿苷的至多1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%或至少99.9%係經修飾。在一個實施例中，本文所描述之重組RNA構築體僅包含未經修飾之核苷酸。舉例而言，本文所描述之重組RNA構築體僅包含天然核苷酸。舉例而言，本文所描述之重組RNA構築體僅包含標準核苷酸。在一較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含一或多個尿苷，其中一或多個尿苷中之所有未經修飾。在另一態樣中，本文所描述之重組RNA構築體可包括一或多種核苷酸變異體，包括非標準核苷酸、非天然核苷酸、核苷酸類似物及/或經修飾之核苷酸。經修飾之核苷酸的實例包括(但不限於)二胺基嘌呤、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-乙醯基胞嘧啶、5-(羧基羥甲基)尿嘧啶、5-羧甲基胺基甲基-2-硫代尿苷、5-羧甲基胺基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、β-D-半乳糖苷基Q核苷(beta-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-異戊烯基腺嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-甲基腺苷、7-甲基鳥嘌呤、5-甲基胺基甲基尿嘧啶、5-甲氧基胺基甲基-2-硫尿嘧啶、β-D-甘露糖苷基Q核苷、5'-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-異戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧基乙酸(v)、懷丁氧苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、Q核苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧基乙酸甲酯、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-胺基-3-N-2-羧丙基)尿嘧啶、(acp3)w、2,6-二胺基嘌呤、N 1-甲基假尿苷及其類似者。在一些情況下，核苷酸可包括其磷酸酯部分中之修飾，包括對三磷酸酯部分之修飾。此類修飾之非限制性實例包括長度更高且用硫醇部分修飾的磷酸酯鏈。在一些實施例中，磷酸酯鏈可包含4、5、6、7、8、9、10或更多個磷酸酯部分。在一些實施例中，硫醇部分可包括(但不限於) α-硫代三磷酸酯及β-硫代三磷酸鹽。在一些實施例中，本文所描述之重組RNA構築體不包含5-甲基胞嘧啶及/或N6-甲基腺苷。
在一些情況下，本文所描述之重組RNA構築體可在鹼基部分、糖部分或磷酸酯主鏈處修飾。舉例而言，修飾可在一或多個通常可用於形成具有互補核苷酸之氫鍵及/或在一或多個通常不能夠與互補核苷酸形成氫鍵之原子處進行。在一些實施例中，主鏈修飾包括(但不限於)硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯、胺基磷酸酯及二胺基磷酸酯鍵。硫代磷酸酯鍵用硫原子取代磷酸酯主鏈中之非橋接氧，且延遲寡核苷酸之核酸酶降解。二胺基磷酸酯鍵(N3'→P5')允許防止核酸酶識別及降解。在一些實施例中，主鏈修飾包括在主鏈結構中具有肽鍵而非磷，或包括胺基甲酸酯、醯胺及線性及環狀烴基之連接基團。舉例而言，N-(2-胺基乙基)-甘胺酸單元可藉由肽核酸中之肽鍵連接。具有經修飾主鏈之寡核苷酸綜述於以下文獻中：Micklefield, Backbone modification of nucleic acids: synthesis, structure and therapeutic applications, Curr. Med. Chem., 8 (10): 1157-79, 2001；及Lyer等人, Modified oligonucleotides-synthesis, properties and applications, Curr. Opin. Mol. Ther., 1 (3): 344-358, 1999。
本文提供之重組RNA構築體可包含經修飾及未經修飾之核苷酸的組合。在一些情況下，含有腺苷、鳥苷及胞嘧啶核苷之核苷酸未經修飾或經部分修飾。在一些情況下，對於經修飾之RNA構築體，1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%之尿苷核苷酸可經修飾。在一些實施例中，5%至25%之尿苷核苷酸在重組RNA構築體中經修飾。經修飾尿苷核苷酸之非限制性實例可包含假尿苷、N 1-甲基假尿苷或N1-甲基假UTP，且可利用此項技術中已知的任何經修飾尿苷核苷酸。在一些實施例中，重組RNA構築體可含有經修飾及未經修飾之核苷酸的組合，其中1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%之尿苷核苷酸可包含假尿苷、N 1-甲基假尿苷、N1-甲基假-UTP或此項技術中已知之任何其他經修飾之尿苷核苷酸。在一些實施例中，重組RNA構築體可含有經修飾及未經修飾之核苷酸的組合，其中1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%之尿苷核苷酸可包含N 1-甲基假尿苷。
本文提供之重組RNA構築體可經密碼子最佳化。一般而言，密碼子最佳化係指一種修飾核酸序列以在所關注之宿主細胞中表現的過程，其係藉由用更常或最常用於該宿主細胞之基因中之密碼子替代原生序列之至少一個密碼子(例如，多於1、2、3、4、5、10、15、20、25、50或更多個密碼子)，同時維持原生胺基酸序列。密碼子使用表為現成可用的，例如在「密碼子使用資料庫」處，且此等表可以多種方式應用。用於對特定序列進行密碼子最佳化以在特定宿主細胞中表現的電腦演算法亦為可用的，諸如較佳為Gene Forge ®(Aptagen，PA)及GeneOptimizer ®(ThermoFischer，MA)。在一些實施例中，重組RNA構築體可未經密碼子最佳化。
在一些情況下，重組RNA構築體可包含含有選自由SEQ ID NO: 1-12及97-108組成之群之序列的核酸序列。 RNA 干擾及小干擾 RNA (siRNA)
RNA干擾(RNAi)或RNA沉默為其中RNA分子藉由中和目標mRNA分子而抑制基因表現或轉譯的過程。RNAi方法描述於以下文獻中：Mello及Conte (2004) Nature 431, 338-342；Meister及Tuschl (2004) Nature 431, 343-349；Hannon及Rossi (2004) Nature 431, 371-378；及Fire (2007) Angew. Chem. Int. Ed. 46, 6966-6984。簡言之，在天然過程中，反應以藉由dsRNA特異性核酸內切酶切丁酶將較長雙股RNA (dsRNA)裂解成具有髮夾結構(亦即，shRNA)之較小dsRNA片段或siRNA而開始。此等較小dsRNA片段或siRNA隨後整合至RNA誘導型沉默複合物(RISC)中，且將RISC引導至目標mRNA序列。在干擾期間，siRNA雙螺旋體解旋，且反義股維持與RISC複合以將RISC引導至目標mRNA序列，從而誘導降解以及後續蛋白質轉譯遏制。不同於可商購的合成siRNA，本發明中之siRNA可利用細胞之細胞質中之內源性切丁酶及RISC路徑以自重組RNA構築體(例如，包含mRNA及至少兩種siRNA之重組RNA構築體)中裂解且遵循上文詳述之天然方法，因為本發明之重組RNA構築體中之siRNA包含髮夾環結構。另外，由於重組RNA構築體之其餘部分(亦即，mRNA)在藉由切丁酶裂解siRNA之後保持完整，因此獲得本發明之重組RNA構築體中之所關注之基因的所需蛋白質表現。
本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含至少兩種各自包含調節一或多種目標RNA之表現之遺傳元件的核酸序列。在一些情況下，調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件可為能夠結合至目標RNA之siRNA。在一些情況下，本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含至少一個包含能夠結合至目標RNA之siRNA的核酸序列。在一些情況下，該目標RNA為非編碼RNA。在一些情況下，目標RNA為mRNA。在一些實施例中，siRNA能夠結合至5'非轉譯區中之目標mRNA。在一些實施例中，siRNA能夠結合至3'非轉譯區中之目標mRNA。在一些實施例中，siRNA能夠結合至外顯子中之目標mRNA。
在一些實施例中，重組RNA構築體可包含含有有義siRNA股之核酸序列。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含含有反義siRNA股之核酸序列。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含含有有義siRNA股之核酸序列及含有反義siRNA股之核酸序列。包含於本發明中之siRNA的細節描述於Cheng等人. (2018) J. Mater. Chem. B., 6, 4638-4644中，其以引用之方式併入本文中。
在一些情況下，調節一或多種目標RNA，例如siRNA之表現的遺傳元件可包含含有有義siRNA股及反義siRNA股之核酸序列。舉例而言，在一些情況下，重組RNA構築體可包含至少1個種類之siRNA，亦即包含siRNA之有義股的核酸序列及包含siRNA之反義股的核酸序列。如本文所描述，1個種類之siRNA可指1個種類之有義股siRNA及1個種類之反義股siRNA。在一些情況下，重組RNA構築體可包含超過1個種類之siRNA，例如包含siRNA之有義股及siRNA之反義股的2、3、4、5、6、7、8、9、10個或更多個種類的siRNA。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含1至20個種類之siRNA。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或至少10個種類之siRNA。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含至多3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或至多20個種類之siRNA。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含在2 siRNA與10 siRNA之間、在3 siRNA與10 siRNA之間、在4 siRNA與10 siRNA之間、在5 siRNA與10 siRNA之間、在6 siRNA與10 siRNA之間、在7 siRNA與10 siRNA之間、在9 siRNA與10 siRNA之間，較佳在2 siRNA與6 siRNA之間、在3 siRNA與6 siRNA之間或在4 siRNA與6 siRNA之間。在較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含至少2個種類之siRNA。在另一較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含至少3個種類之siRNA。在另一較佳實施例中，本文所描述之重組RNA構築體包含至少6個種類之siRNA。
本文提供包含1-20個或更多個種類的siRNA之重組RNA構築體的組合物，其中1-20個或更多個種類的siRNA中之各者能夠結合至目標RNA。在一些實施例中，目標RNA為mRNA或非編碼RNA。在一些情況下，siRNA種類中之各者結合至相同目標RNA。在一個例子中，siRNA種類中之各者可包含相同序列且結合至相同目標RNA之相同區域或序列。舉例而言，重組RNA構築體可包含1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA且1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA中之各者包含靶向目標RNA之相同區域的相同序列，亦即重組RNA構築體可包含1、2、3、4、5、6種或更多個其他種類之siRNA。在另一情況下，siRNA種類中之各者可包含不同序列且結合至相同目標RNA之不同區域或序列。舉例而言，重組RNA構築體可包含1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA且1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA中之各者可包含靶向相同目標RNA之不同區域的不同序列。在此實例中，1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA之一個siRNA可靶向外顯子1，且1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA之另一個siRNA可靶向相同mRNA之外顯子2等。在一些情況下，重組RNA構築體可包含能夠結合至相同目標RNA之相同及不同區域的1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA。舉例而言，重組RNA構築體可包含1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA，且1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA中之2者可包含相同序列且結合至目標RNA之相同區域，且1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA或複本中之3者或更多者可包含不同序列且結合至相同目標RNA之不同區域。在一些情況下，siRNA種類中之各者結合至不同目標RNA。在一些情況下，重組RNA構築體可包含能夠結合至相同及不同目標RNA之1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA。舉例而言，重組RNA構築體可包含1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA，且1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA中之2者可包含能夠結合至目標RNA之相同或不同區域的序列，且1、2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA中之3者或更多者可包含能夠結合至不同目標RNA之序列。在一些實施例中，目標RNA可為mRNA及/或非編碼RNA。
本文提供包含1-20個或更多個種類的siRNA之重組RNA構築體的組合物，其中1-20個或更多個種類的siRNA中之各者經本文所描述之連接子連接。在一些情況下，連接子可為不可裂解連接子。在一些情況下，連接子可為可裂解連接子，諸如可自裂解連接子。在一些情況下，連接子可藉由蛋白質，例如細胞內或內源性蛋白質裂解。在一些情況下，連接子具有選自由以下組成之群的結構： 式 (I)：X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；及 式 (II)：X pTCCCX r，其中X任何核苷酸，p為0至17之整數且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。在一些情況下，連接子可包含含有以下之序列：ACAACAA (SEQ ID NO: 85)、ATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 87)、ACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 88)、TCCC (SEQ ID NO: 89)或ACAACAATCCC (SEQ ID NO: 90)。在一些實施例中，連接子可包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)、ATAGTGAGTCGTATTATCCC (SEQ ID NO: 92)、ATAGTGAGTCGTATTAACAACAATCCC (SEQ ID NO: 93)、ATAGTGAGTCGTATTAACAACAA (SEQ ID NO: 94)、ATAGTGAGTCGTATTAATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 95)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)之序列。在一些實施例中，連接子可包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。在一些實施例中，連接子不包含含有TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 28)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)之序列。
在一些情況下，連接子之長度為約4至約50、約4至約45、或約4至約40、約4至約35、或約4至約30個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為約4至約27個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為約4至約18個核苷酸。舉例而言，連接子之長度為約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、約40、約41、約42、約43、約44、約45、約46、約47、約48、約49或約50個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度可為至多約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12、約13、約14、約15、約16、約17、約18、約19、約20、約21、約22、約23、約24、約25、約26、約27、約28、約29、約30、約31、約32、約33、約34、約35、約36、約37、約38、約39、約40、約41、約42、約43、約44、約45、約46、約47、約48、約49或至多約50個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為4個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為7個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為11個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為12個核苷酸。在一些實施例中，連接子之長度為18個核苷酸。
在一些情況下，連接子可具有以下之結構 ： 式 (I)X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸；m為1至12之整數且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；且m為1且n為0。在一些情況下，連接子可包含含有CAACAA (SEQ ID NO: 91)、TCCC (SEQ ID NO: 89)或ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。在一些實施例中，連接子可包含選自由以下組成之群的序列：ATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 87)、ACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 88)、TCCC (SEQ ID NO: 89)、ACAACAATCCC (SEQ ID NO: 90)及ACAACAA (SEQ ID NO: 85)。在一些實施例中，連接子可包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)、ATAGTGAGTCGTATTATCCC (SEQ ID NO: 92)、ATAGTGAGTCGTATTAACAACAATCCC (SEQ ID NO: 93)、ATAGTGAGTCGTATTAACAACAA (SEQ ID NO: 94)、ATAGTGAGTCGTATTAATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 95)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)之序列。在一些實施例中，連接子可包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。在一些實施例中，連接子可包含選自由SEQ ID NO: 27、28、85-95組成之群的序列。
在一些情況下，連接子可為tRNA連接子。tRNA系統跨活有機體為進化上保守的，且利用內源性RNase P及Z來加工多順反子構築體(Dong等人，2016)。在一些實施例中，tRNA連接子可包含含有AACAAAGCACCAGTGGTCTAGTGGTAGAATAGTACCCTGCCACGGTACAGACCCGGGTTCGATTCCCGGCTGGTGCA (SEQ ID NO: 96)之核酸序列。在一些實施例中，包含含有TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 28)之核酸序列的連接子可用於連接1-20個或更多個種類的siRNA中之各者。
在一些情況下，siRNA與其目標mRNA之特異性結合引起對目標mRNA之正常功能的干擾，從而引起調節，例如由目標mRNA編碼之蛋白質的表現量、功能及/或活性下調，且存在足夠程度之互補性以避免siRNA在需要特異性結合之條件下，亦即在活體內分析或治療性處理之情況下在生理條件下及在其中在活體外分析之情況下進行分析的條件下非特異性結合至非目標核酸序列。
如本文所用之蛋白質可指通常包含一或多種肽或多肽的分子。肽或多肽通常為藉由肽鍵連接的胺基酸殘基鏈。肽通常包含2至50個胺基酸殘基。多肽通常包含多於50個胺基酸殘基。蛋白質通常摺疊成該蛋白質發揮其生物功能可能需要的3維形式。如本文所用之蛋白質可包括蛋白質之片段、蛋白質之功能性變異體及融合蛋白質。如本文所用之功能性變異體可指全長分子、其片段或其變異體。舉例而言，變異體分子可包含藉由一或多個胺基酸(在蛋白質序列之情況下)或一或多個核苷酸(在核酸序列之情況下)之插入、缺失及/或取代修飾的序列。舉例而言，變異體分子可包含或編碼突變體蛋白質，包括(但不限於)功能獲得型或功能喪失型突變體。片段可為核酸分子(如DNA或RNA)或蛋白質之全長序列的較短部分。因此，片段通常由包含與全長序列內之對應延伸段相同的序列。在一些實施例中，序列之片段可包含至少5%至至少80%之片段所衍生之全長核苷酸或胺基酸序列。在一些實施例中，蛋白質可為哺乳動物蛋白質。在一些實施例中，蛋白質可為人類蛋白質。在一些實施例中，蛋白質可為自細胞分泌之蛋白質。在一些實施例中，蛋白質可為細胞膜上之蛋白質。在一些實施例中，如本文所提及之蛋白質可為經分泌並經由細胞表面上之受體局部或全身性地起作用(通常涉及免疫反應或涉及病毒感染之其他宿主蛋白質)之作為目標細胞傳訊調節劑的蛋白質。適用於本發明之上下文中的蛋白質(包括由所關注之基因編碼之蛋白質)的核苷酸及胺基酸序列為此項技術中已知的，且可在文獻中獲得。舉例而言，在UniProt資料庫中可獲得適用於本發明之上下文中之蛋白質(包括由所關注之基因編碼之蛋白質)的核苷酸及胺基酸序列。
本文提供重組RNA構築體之組合物，其包含能夠結合至目標mRNA以調節目標mRNA之表現的siRNA。在一些情況下，目標mRNA之表現(例如，由目標mRNA編碼之蛋白質的含量)由能夠結合至目標mRNA之siRNA下調。在一些實施例中，目標mRNA之表現藉由能夠結合至目標mRNA之siRNA抑制。如本文所描述，目標mRNA之表現的抑制或下調可指但不限於干擾目標mRNA，以干擾來自目標mRNA之蛋白質的轉譯；因此，目標mRNA之表現的抑制或下調可指但不限於與在不存在包含能夠結合至目標mRNA之siRNA的重組RNA構築體之情況下由目標mRNA表現的蛋白質含量相比，由目標mRNA表現之蛋白質含量降低。蛋白質表現之含量可藉由使用此項技術中熟知之任何方法量測，且此等方法包括(但不限於)西方印漬術、流式細胞量測術、ELISA、放射免疫分析(RIA)及各種蛋白質體學技術。用於量測或偵測多肽之例示性方法為免疫分析，諸如ELISA。此類型之蛋白質量化可基於能夠捕捉特定抗原之抗體以及能夠偵測所捕捉抗原之第二抗體。用於偵測及/或量測多肽之例示性分析描述於Harlow, E.及Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual, (1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press中。
本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含至少兩種含有能夠結合至一或多種目標mRNA之siRNA的核酸序列及至少一種編碼所關注之基因的核酸序列，其中該目標mRNA不同於由所關注之基因編碼的mRNA。本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含至少兩種含有能夠結合至一或多種目標mRNA之siRNA的核酸序列及至少一種編碼所關注之基因的核酸序列，其中該siRNA不影響所關注之基因之表現。在一些情況下，siRNA未能夠結合至由所關注之基因編碼的mRNA。在一些情況下，siRNA不抑制所關注之基因的表現。在一些情況下，siRNA未下調所關注之基因之表現。如本文所描述，所關注之基因之表現的抑制或下調可指但不限於干擾來自重組RNA構築體之蛋白質的轉譯；因此，所關注之基因之表現的抑制或下調可指但不限於與在不存在包含能夠結合至目標mRNA之siRNA的重組RNA構築體之情況下表現之蛋白質含量相比，蛋白質含量降低。蛋白質表現之含量可藉由使用此項技術中熟知之任何方法量測，且此等方法包括(但不限於)西方印漬術、流式細胞量測術、ELISA、RIA及各種蛋白質體學技術。用於量測或偵測多肽之例示性方法為免疫分析，諸如ELISA。此類型之蛋白質量化可基於能夠捕捉特定抗原之抗體以及能夠偵測所捕捉抗原之第二抗體。用於偵測及/或量測多肽之例示性分析描述於Harlow, E.及Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual, (1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press中。
本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含至少兩種包含能夠結合至一或多種目標mRNA之siRNA的核酸序列。siRNA能夠與其結合之目標mRNA的非限制性實例之清單包括包含以下之基因的mRNA：腫瘤壞死因子α (TNF-α或TNF-α)、介白素8 (IL-8)、介白素1β (IL-1β)、介白素17 (IL-17)、Turbo綠色螢光蛋白質(Turbo GFP)或其功能變異體。在一些實施例中，Turbo GFP序列可由橈腳類羽小角水蚤( Pontellina plumate)衍生。如本文所用之功能性變異體可指全長分子、其片段或其變異體。舉例而言，變異體分子可包含藉由一或多個胺基酸(在蛋白質序列之情況下)或一或多個核苷酸(在核酸序列之情況下)之插入、缺失及/或取代修飾的序列。
在一些實施例中，TNF-α包含SEQ ID NO: 40中所列出之序列。在一些實施例中，IL-8包含SEQ ID NO: 37中所列出之序列。在一些實施例中，IL-1β包含SEQ ID NO: 38中所列出之序列。在一些實施例中，IL-17包含SEQ ID NO: 39中所列出之序列。在一些實施例中，Turbo GFP包含SEQ ID NO: 41中所列出之序列。
在一些態樣中，siRNA包含由選自SEQ ID NO: 57-70之序列編碼的有義股。在一些態樣中，siRNA包含由選自SEQ ID NO: 71-84之序列編碼的反義股。在一些態樣中，siRNA包含由選自SEQ ID NO: 57-70之序列編碼的有義股，及由選自SEQ ID NO: 71-84之序列編碼的相應反義股。 所關注之基因
本文提供重組RNA構築體，其包含編碼所關注之基因之核酸序列的一或多個複本。舉例而言，重組RNA構築體可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個編碼所關注之基因之核酸序列的複本。在一些情況下，編碼所關注之基因之核酸序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個複本中之各者編碼相同所關注之基因。在一些情況下，重組RNA構築體可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個編碼細胞介素之核酸序列之複本。
本文亦提供重組RNA構築體，其包含編碼所關注之基因之核酸序列的兩個或更多個複本，其中兩個或更多個核酸序列中之各者可編碼不同的所關注之基因。在一些情況下，兩個或更多個編碼不同所關注之基因之核酸序列中之各者可包含編碼分泌性蛋白質之核酸序列。在一些情況下，兩種或更多種編碼不同所關注之基因的核酸序列中之各者可包含編碼細胞介素，例如介白素4 (IL-4)之核酸序列。在一些實施例中，編碼不同所關注之基因的兩個或更多個核酸序列中之各者可編碼不同分泌性蛋白質。在一些情況下，兩個或更多個編碼不同所關注之基因的核酸中之各者可包含編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之核酸序列。本文進一步提供包含本文所描述之連接子的重組RNA構築體。在一些實施例中，連接子可連接兩個或更多個編碼所關注之基因的核酸序列中之各者。在一些情況下，連接子可為不可裂解連接子。在一些情況下，連接子可為可裂解連接子。在一些情況下，連接子可為可自裂解連接子。在一些情況下，連接子可藉由蛋白質，例如細胞內蛋白質或內源性蛋白質裂解。在一些情況下，連接子選自由以下組成之群： 式 (I)：X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；及 式 (II)：X pTCCCX r，其中X任何核苷酸，p為0至17之整數且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。在一些情況下，連接子包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。在一些實施例中，連接子選自由SEQ ID NO: 27、28、85-95組成之群。
連接子之其他實例包括(但不限於)可撓性連接子、2A肽連接子(或2A自裂解肽)，諸如T2A、P2A、E2A或F2A及tRNA連接子等。tRNA系統跨活有機體為進化上保守的，且利用內源性RNase P及Z來加工多順反子構築體(Dong等人，2016)。在一些實施例中，tRNA連接子可包含含有AACAAAGCACCAGTGGTCTAGTGGTAGAATAGTACCCTGCCACGGTACAGACCCGGGTTCGATTCCCGGCTGGTGCA (SEQ ID NO: 96)之核酸序列。
本文提供重組RNA構築體，其包含編碼所關注之基因的RNA以調節所關注之基因的表現。舉例而言，可調節由所關注之基因之mRNA編碼的蛋白質之表現。舉例而言，所關注之基因之表現係藉由在重組RNA構築體中由所關注之基因的mRNA編碼之蛋白質表現上調。舉例而言，所關注之基因之表現係藉由增加在重組RNA構築體中由所關注之基因的mRNA編碼之蛋白質含量來上調。蛋白質表現之水準可藉由使用此項技術中熟知之任何方法量測，且此等方法包括但不限於西方印漬術、流式細胞量測術、ELISA、RIA及各種蛋白質體學技術。用於量測或偵測多肽之例示性方法為免疫分析，諸如ELISA。此類型之蛋白質量化可基於能夠捕捉特定抗原之抗體以及能夠偵測所捕捉抗原之第二抗體。用於偵測及/或量測多肽之例示性分析描述於Harlow, E.及Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual, (1988), Cold Spring Harbor Laboratory Press中。
本文提供包含編碼所關注之基因之RNA的重組RNA構築體，其中所關注之基因編碼所關注之蛋白質。在一些情況下，所關注之蛋白質係治療性蛋白質。在一些情況下，所關注之蛋白質具有人類來源，亦即為人類蛋白質。在一些情況下，所關注之基因編碼分泌性蛋白質。在一些實施例中，所關注之基因編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)。在一些實施例中，所關注之蛋白質為IGF-1。在一些情況下，所關注之基因編碼細胞介素。在一些實施例中，細胞介素包含介白素。在一些實施例中，所關注之蛋白質為介白素4 (IL-4)或其功能變異體。
在一些情況下，包含編碼所關注之基因之核酸序列的重組RNA構築體可包含編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF-1)之核酸序列。在一些情況下，如本文所用之IGF-1可指人類IGF-1之天然序列(Uniprot資料庫：P05019且在Genbank資料庫中：NM_001111285.3)、片段或其功能變異體。在一個實施例中，重組RNA構築體可為包含編碼IGF-1之核酸序列的裸RNA。在此實施例中，重組RNA構築體可包含編碼成熟人類IGF-1之核酸序列。編碼人類IGF-1之天然DNA序列可經密碼子最佳化。人類IGF-1之天然序列包含具有21個胺基酸(核苷酸1-63)之訊息肽、具有27個胺基酸(核苷酸64-144)之前肽、具有70個胺基酸(核苷酸145-354)之成熟人類IGF-1及具有77個胺基酸(核苷酸355-585)之E-肽。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含編碼IGF-1之前肽(亦稱為前域)的核酸序列、編碼IGF-1之成熟蛋白質的核酸序列或IGF-1之E-肽(亦稱為E-域) (亦即，具有羧基端延伸之IGF-1)。在一些實施例中，重組RNA構築體不包含編碼IGF-1之E-肽的核酸序列。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含編碼IGF-1之前肽的核酸序列、編碼IGF-1之成熟蛋白質的核酸序列及編碼大腦衍生神經滋養因子(BDNF)之訊息肽的核酸序列。在一些實施例中，IGF-1為人類IGF-1。
在一些實施例中，重組RNA構築體可包含編碼IGF-1 (較佳具有27個胺基酸之人類IGF-1)之前肽的核酸序列以及編碼成熟IGF-1 (較佳具有70個胺基酸之成熟人類IGF-1)的核酸序列，且較佳不包含編碼IGF-1之E-肽的核苷酸序列，且較佳不包含編碼IGF-1之人類E-肽的核酸序列。在一些實施例中，重組RNA構築體可包含編碼IGF-1 (較佳具有27個胺基酸之人類IGF-1)之前肽的核酸序列、編碼成熟IGF-1 (較佳具有70個胺基酸之成熟人類IGF-1)的核酸序列以及編碼大腦衍生神經營養因子(BDNF)之訊息肽的核酸序列。在一些實施例中，重組RNA構築體不包含編碼IGF-1之E-肽的核酸序列，更佳不包含編碼IGF-1之人類E-肽的核酸序列。
在一些實施例中，本文提供之重組RNA構築體可包含編碼具有27個胺基酸之人類IGF-1之前肽的核酸序列及編碼具有70個胺基酸之成熟人類IGF-1的核酸序列，且較佳不包含編碼人類IGF-1之E-肽的核酸序列，其中編碼具有27個胺基酸之人類IGF-1之前肽的核酸序列及編碼具有70個胺基酸之成熟人類IGF-1的核酸序列及編碼E-肽之核酸序列在Uniprot資料庫中稱為UniProtKB - P05019。在一些實施例中，本文所描述之IGF-1可具有包含SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 36之胺基酸序列。
在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可包含編碼IGF-1之mRNA。在一些實施例中，編碼IGF-1之mRNA可指包含編碼具有27個胺基酸之人類IGF-1之前肽的核苷酸序列及/或編碼具有70個胺基酸之成熟人類IGF-1的核苷酸序列的mRNA。編碼人類IGF-1之前肽的核苷酸序列及編碼成熟人類IGF-1之核苷酸序列可經密碼子最佳化。在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可包含1個IGF-1 mRNA複本。在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可包含2個或更多個IGF-1 mRNA複本。
在一些情況下，如本文所用之介白素4 (IL-4)或IL-4可指人類IL-4之天然序列(Uniprot資料庫：P05112且在Genbank資料庫中：NM_000589.4)、片段或其功能變異體。編碼人類IL-4之天然DNA序列可經密碼子最佳化。人類IL-4之天然序列包含具有24個胺基酸(核苷酸1-72)之訊息肽及具有153個胺基酸(核苷酸73-459)之成熟人類IL-4。在一些實施例中，訊息肽為未經修飾之IL-4訊息肽。在一些實施例中，訊息肽為藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾的IL-4訊息肽。在一些實施例中，如本文所用之介白素4 (IL-4)或IL-4可指成熟人類IL-4。在一些實施例中，成熟蛋白可指在內質網中合成且經由高基氏器在表現且分泌蛋白質之細胞中分泌的蛋白質。在一些實施例中，成熟IL-4可指在內質網中合成且經由高基氏器在表現且分泌IL-4之細胞中分泌的IL-4蛋白質。在一些實施例中，成熟人類IL-4可指在內質網中合成且經由高基氏器在表現且分泌IL-4之細胞中分泌的IL-4蛋白質且通常含有由如SEQ ID NO: 31中所示之核苷酸編碼的胺基酸。在一些實施例中，本文所描述之IL-4可具有包含SEQ ID NO: 32或SEQ ID NO: 42之胺基酸序列。
編碼IL-4之mRNA可指包含編碼具有153個胺基酸之人類IL-4之前肽的核苷酸序列或編碼具有129個胺基酸之成熟人類IL-4的核苷酸序列的mRNA。編碼人類IL-4之前肽的核苷酸序列及編碼成熟人類IL-4之核苷酸序列可經密碼子最佳化。在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可包含1個IL-4 mRNA複本。在一些情況下，本文提供之重組RNA構築體可包含2個或更多個IL-4 mRNA複本。 目標模體
本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含目標模體。如本文所使用之術語目標模體或靶向模體可指預定用於細胞膜、細胞外區室或細胞內區室中除細胞質或細胞溶質以外的任何部分的新合成多肽或蛋白質中存在的任何短肽。在一些實施例中，肽可指一個連接至另一個，通常藉由相鄰胺基酸殘基之α-胺基與羧基之間的肽鍵連接之一系列胺基酸殘基。細胞內區室包括(但不限於)細胞內胞器，諸如核、核仁、胞內體、蛋白酶體、核糖體、染色質、核套膜、核孔、胞外體、黑素體、高基氏體、過氧化體、內質網(ER)、溶酶體、中心體、微管、粒線體、葉綠體、微絲、中間絲或質膜。在一些實施例中，訊息肽可稱為訊息序列、靶向訊號、定位訊號、定位序列、轉接肽、前導序列或前導肽。在一些實施例中，目標模體可操作地連接至編碼所關注之基因的核酸序列。在一些實施例中，術語「可操作地連接」可指在兩個或更多個核酸序列之間的功能關係，例如轉錄調節性或訊息序列與經轉錄序列之間的功能關係。舉例而言，若目標模體或編碼目標模體之核酸以參與使得由編碼序列編碼之多肽靶向細胞膜、細胞內區室或細胞外區室的前蛋白之形式表現，則該目標模體或編碼目標模體之核酸可操作地連接至該編碼序列。舉例而言，若訊息肽或編碼訊息肽之核酸經表現為參與分泌由編碼序列編碼之多肽的前蛋白，則該訊息肽或編碼訊息肽之核酸可操作地連接至該編碼序列。舉例而言，若啟動子刺激或調控編碼序列之轉錄，則該啟動子可操作地連接。目標模體之非限制性實例包含訊息肽、核定位訊號(NLS)、核仁定位訊號(NoLS)、溶酶體靶向訊號、粒線體靶向訊號、過氧化體靶向訊號、微管尖端定位訊號(MtLS)、胞內體靶向訊號、葉綠體靶向訊號、高基氏體靶向訊號、內質網(ER)靶向訊號、蛋白酶體靶向訊號、膜靶向訊號、跨膜靶向訊號、中心體定位訊號(CLS)或使蛋白質靶向細胞膜、細胞外區室或細胞內區室之特定部分的任何其他訊號。
訊息肽係存在於新合成蛋白質之N端的短肽，其預定朝向分泌路徑。本發明之訊息肽長度可為10至40個胺基酸。訊息肽可位於所關注之蛋白質之N端或所關注之蛋白質之前蛋白質形式的N端。訊息肽可具有真核來源。在一些實施例中，訊息肽可為哺乳動物蛋白質。在一些實施例中，訊息肽可為人類蛋白質。在一些情況下，訊息肽可為同源訊息肽(亦即，來自相同蛋白質)或異源訊息肽(亦即，來自不同蛋白質或合成訊息肽)。在一些情況下，訊息肽可為蛋白質之天然存在的訊息肽或經修飾之訊息肽。
本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含目標模體，其中該目標模體可選自由以下組成之群：(a)與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的目標模體；(b)與由該所關注之基因編碼之蛋白質異源的目標模體，其中與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的目標模體藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾；(c)與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的目標模體；(d)與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的目標模體，其中與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的目標模體藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾；及(e)不具有天然目標模體之功能的天然存在之胺基酸序列，其中該天然存在之胺基酸序列視情況藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾。
本文提供包含重組RNA構築體之組合物，該等重組RNA構築體包含目標模體，其中該目標模體係訊息肽。在一些實施例中，訊息肽選自由以下組成之群：(a)與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的訊息肽；(b)與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的訊息肽，其中與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的訊息肽藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾，其限制條件為該蛋白質不為氧化還原酶；(c)與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的訊息肽；(d)與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的訊息肽，其中與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的訊息肽藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾；且(e)天然存在之胺基酸序列，其在自然界中不具有訊息肽之功能，其中天然存在之胺基酸序列視情況藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾。在一些情況下，訊息肽之N端的胺基酸1至9的平均疏水性評分高於2。
在一些情況下，如本文所用，與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的目標模體或與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的訊息肽可指天然存在之目標模體或訊息肽，其不同於天然存在之蛋白質之目標模體或訊息肽。舉例而言，目標模體或訊息肽未衍生自所關注之基因。通常，與給定蛋白質異源的目標模體或訊息肽為來自另一蛋白質之目標模體或訊息肽，其與給定蛋白質無關。舉例而言，與給定蛋白質異源的目標模體或訊息肽之胺基酸序列與給定蛋白質之目標模體或訊息肽的胺基酸序列相差超過50%、60%、70%、80%、90%或相差超過95%。儘管異源序列可源於相同生物體，但其天然地不出現在相同核酸分子中，諸如相同mRNA中。與一種蛋白質異源之目標模體或訊息肽及其中該目標模體或訊息肽與其異源之蛋白質可具有相同或不同來源。在一些實施例中，其具有真核來源。在一些實施例中，其具有相同真核生物體。在一些實施例中，其具有哺乳動物來源。在一些實施例中，其具有相同哺乳動物生物體。在一些實施例中，其為人源性。舉例而言，RNA構築體可包含編碼人類IL-4基因之核酸序列及另一人類蛋白之訊息肽。在一些實施例中，RNA構築體可包含與蛋白質異源之訊息肽，其中訊息肽及蛋白質具有相同來源，亦即人類來源。
在一些情況下，如本文所用，與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的目標模體或與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的訊息肽可指天然存在之目標模體或蛋白質之訊息肽。與蛋白質同源的目標模體或訊息肽為由蛋白質之基因以其天然存在之形式編碼的目標模體或訊息肽。與蛋白質同源之目標模體或訊息肽通常為真核來源。在一些實施例中，與蛋白質同源之目標模體或訊息肽具有哺乳動物來源。在一些實施例中，與蛋白質同源之目標模體或訊息肽具有人源性。
在一些情況下，如本文所用，不具有天然目標模體之功能的天然存在之胺基酸序列或不具有天然訊息肽之功能的天然存在之胺基酸序列可指天然存在且與天然存在之任何目標模體或訊息肽之胺基酸序列不同的胺基酸序列。自然界中不具有目標模體或訊息肽之功能的天然存在之胺基酸序列之長度可在10至50個胺基酸之間。在一些實施例中，自然界中不具有目標模體或訊息肽之功能的天然存在之胺基酸序列具有真核來源且不與真核來源之任何目標模體或訊息肽一致。在一些實施例中，自然界中不具有目標模體或訊息肽之功能的天然存在之胺基酸序列具有哺乳動物來源且與哺乳動物來源之任何目標模體或訊息肽不一致。在一些實施例中，自然界中不具有目標模體或訊息肽之功能的天然存在之胺基酸序列具有人源性且與自然界中存在之人類來源的任何目標模體或訊息肽不一致。不具有天然目標模體或訊息肽之功能的天然存在之胺基酸序列通常為蛋白質之編碼序列之胺基酸序列。如本文所使用，術語「天然存在」、「天然」及「自然界中」具有相同含義。
在一些情況下，如本文所用，訊息肽之N端的胺基酸1至9可指訊息肽之胺基酸序列之N端的前九個胺基酸。類似地，如本文所使用，訊息肽之N端之胺基酸1至7係指訊息肽之胺基酸序列之N端的前七個胺基酸，且訊息肽之N端之胺基酸1至5可指訊息肽之胺基酸序列之N端的前五個胺基酸。
在一些情況下，藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代修飾之胺基酸序列可指包括胺基酸序列內至少一個胺基酸之胺基酸取代、插入及/或缺失的胺基酸序列。舉例而言，如本文所用，與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的目標模體藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾或與由所關注之基因編碼之蛋白質異源的訊息肽藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾可指與包括在其天然存在之胺基酸序列內之至少一個胺基酸之胺基酸取代、插入及/或缺失的蛋白質異源之天然存在之目標模體或訊息肽的胺基酸序列。舉例而言，如本文所用，與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的目標模體藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾或與由所關注之基因編碼之蛋白質同源的訊息肽藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代可指與包括在其天然存在之胺基酸序列內至少一個胺基酸蛋白質之胺基酸取代、插入及/或缺失同源的天然存在之目標模體或訊息肽。在一些實施例中，天然存在之胺基酸序列可藉由至少一個胺基酸之插入、缺失及/或取代而經修飾，且天然存在之胺基酸序列可在其天然存在之胺基酸序列內包括至少一個胺基酸之胺基酸取代、插入及/或缺失。胺基酸取代或取代可指胺基酸或多肽序列中之特定位置處之胺基酸經另一胺基酸置換。舉例而言，取代R34K係指其中位置34處之精胺酸(Arg或R)經離胺酸(Lys或K)取代之多肽。對於前述實例，34K指示位置34處之胺基酸經離胺酸(Lys或K)取代。在一些實施例中，多個取代通常由斜線分離。舉例而言，R34K/L38V係指包含取代R34K及L38V之變異體。胺基酸插入或插入可指在胺基酸或多肽序列中之特定位置處添加胺基酸。舉例而言，插入-34表示位置34處之插入。胺基酸缺失或缺失可指移除胺基酸或多肽序列中之特定位置處之胺基酸。舉例而言，R34-表示位置34處之精胺酸(Arg或R)之缺失。
在一些情況下，缺失之胺基酸為疏水性評分低於-0.8、-0.7、-0.6、-0.5、-0.4、-0.3、-0.2、-0.1、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8或低於1.9之胺基酸。在一些情況下，取代胺基酸為具有比經取代胺基酸之疏水性評分高的疏水性評分之胺基酸。舉例而言，取代胺基酸為具有2.8及更高，或3.8及更高之疏水性評分的胺基酸。在一些情況下，插入之胺基酸為疏水性評分為2.8及更高或3.8及更高的胺基酸。
在一些情況下，本文所描述之胺基酸序列可包含1至15個胺基酸插入、缺失及/或取代。在一些實施例中，本文所描述之胺基酸序列可包含1至7個胺基酸插入、缺失及/或取代。在一些情況下，本文所描述之胺基酸序列可能不包含胺基酸插入、缺失及/或取代。在一些情況下，本文所描述之胺基酸序列可包含目標模體或訊息肽之胺基酸序列之N端的胺基酸1-30內的1至15個胺基酸插入、缺失及/或取代。在一些實施例中，本文所描述之胺基酸序列可包含目標模體或訊息肽之胺基酸序列之N端的胺基酸1-30內的1至9個胺基酸插入、缺失及/或取代。在一些情況下，本文所描述之胺基酸序列可包含目標模體或訊息肽之胺基酸序列之N端的胺基酸1-20內的1至15個胺基酸插入、缺失及/或取代。在一些實施例中，本文所描述之胺基酸序列可包含目標模體或訊息肽之胺基酸序列之N端的胺基酸1-20內的1至9個胺基酸插入、缺失及/或取代。在一些情況下，本文所描述之胺基酸序列的至少一個胺基酸可視情況藉由缺失及/或取代來修飾。
在一些情況下，與無修飾之訊息肽相比，經修飾之訊息肽的胺基酸序列之N端的前九個胺基酸之平均疏水性評分增加1.0個單位或更高。在一些情況下，疏水性評分或疏水性評分可與本文中之親水性評分同義地使用，且可指根據Kyte-Doolittle標度(Kyte J., Doolittle R.F.; J. Mol. Biol. 157:105-132(1982))所計算之胺基酸的疏水性程度。根據Kyte-Doolittle標度之胺基酸疏水性得分如下：
表 A.胺基酸疏水性評分
胺基酸 單字母碼 疏水性評分
異白胺酸 I 4.5
纈胺酸 V 4.2
白胺酸 L 3.8
苯丙胺酸 F 2.8
半胱胺酸 C 2.5
甲硫胺酸 M 1.9
丙胺酸 A 1.8
甘胺酸 G -0.4
蘇胺酸 T -0.7
絲胺酸 S -0.8
色胺酸 W -0.9
酪胺酸 Y -1.3
脯胺酸 P -1.6
組胺酸 H -3.2
麩胺酸 E -3.5
麩醯胺 Q -3.5
天冬胺酸 D -3.5
天冬醯胺 N -3.5
離胺酸 K -3.9
精胺酸 R -4.5
在一些情況下，胺基酸序列之平均疏水性評分可藉由使根據胺基酸序列之胺基酸中之各者的凱特-杜利特量表的疏水性評分相加除以胺基酸之數目來計算。舉例而言，訊息肽之胺基酸序列之N端的胺基酸1至9之平均疏水性評分可藉由使九個胺基酸中之各者的疏水性評分相加除以九來計算。
根據Zimmerman極性指標來計算極性(Zimmerman J.M., Eliezer N., Simha R.; J. Theor. Biol. 21:170-201(1968))。在一些實施例中，胺基酸序列之平均極性可藉由使根據胺基酸序列之胺基酸中之各者的Zimmerman極性索引計算之極性值相加除以胺基酸之數目來計算。舉例而言，訊息肽之胺基酸序列之N端的胺基酸1-9之平均極性可藉由使N端之胺基酸1-9的九個胺基酸中之各者之平均極性相加除以九來計算。根據Zimmerman極性指數之胺基酸極性如下：
表 B.胺基酸極性
胺基酸 單字母碼 極性
異白胺酸 I 0.13
纈胺酸 V 0.13
白胺酸 L 0.13
苯丙胺酸 F 0.35
半胱胺酸 C 1.48
甲硫胺酸 M 1.43
丙胺酸 A 0
甘胺酸 G 0
蘇胺酸 T 1.66
絲胺酸 S 1.67
色胺酸 W 2.1
酪胺酸 Y 1.61
脯胺酸 P 1.58
組胺酸 H 51.6
麩胺酸 E 49.9
麩醯胺 Q 3.53
天冬胺酸 D 49.7
天冬醯胺 N 3.38
離胺酸 K 49.5
精胺酸 R 52
在一些情況下，類胰島素生長因子1 (IGF-1)之天然存在之訊息肽可藉由一或多種取代、缺失及/或插入修飾，其中IGF-1之天然存在之訊息肽稱為在Uniprot資料庫中作為P05019及在Genbank資料庫中作為NM_001111285.3的IGF-1胺基酸序列之胺基酸1-20。在一些情況下，IGF-1訊息肽之胺基酸序列可藉由選自由G2L、K3-、S5L、T9L、Q10L及C15-組成之群的一或多個取代、缺失及/或插入修飾。在一些情況下，IGF-1之天然存在之訊息肽可經另一蛋白質之訊息肽置換。在一些情況下，IGF-1之天然存在之訊息肽可經另一蛋白質之天然存在之訊息肽置換。舉例而言，IGF-1之天然存在之訊息肽可經大腦衍生神經滋養因子(BDNF)之天然存在之訊息肽置換。在一些實施例中，野生型(WT) IGF-1訊息肽胺基酸序列包含含有SEQ ID NO: 49之序列。在一些情況下，經修飾之IGF-1訊息肽具有包含含有由如SEQ ID NO: 44中所示之DNA序列編碼的SEQ ID NO: 45之序列的胺基酸序列。在一些實施例中，經修飾之IGF-1訊息肽可包含來自另一蛋白質之訊息肽。在一些情況下，經修飾之IGF-1訊息肽具有包含含有由如SEQ ID NO: 51中所示之DNA序列編碼的SEQ ID NO: 52之序列的胺基酸序列。
SEQ ID NO: 44 Met-Leu-Ile-Leu-Leu-Leu-Pro-Leu-Leu-Leu-Phe-Lys-Cys-Phe-Cys-Asp-Phe-Leu-Lys
SEQ ID NO: 45 ATGCTGATTCTGCTGCTGCCCCTGCTGCTGTTCAAGTGCTTCTGCGACTTCCTGAAA
SEQ ID NO: 51 MTILFLTMVISYFGCMKA
SEQ ID NO: 52 ATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCC
在一些情況下，IGF-1之前肽可經修飾。在一些實施例中，IGF-1之前肽的天然存在之胺基酸序列，其在自然界中不具有訊息肽之功能(Uniprot資料庫作為P05019)，藉由刪除側接前肽之N端的22-31的十個胺基酸殘基VKMHTMSSSH (SEQ ID NO: 48)而修飾且較佳具有如由如SEQ ID NO: 45中所示之DNA序列編碼的SEQ ID NO: 46中所示之胺基酸序列。
SEQ ID NO: 46 Met-Leu-Phe-Tyr-Leu-Ala-Leu-Cys-Leu-Leu-Thr-Phe-Thr-Ser-Ser-Ala-Thr-Ala
SEQ ID NO: 47 ATGCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCC
在一些情況下，包含編碼IGF-1之前肽的核酸序列及編碼成熟IGF-1之核酸序列，但不包含編碼IGF-1之E-肽的核酸序列可指包含編碼具有27個胺基酸之人類IGF-1之前肽的核苷酸序列及編碼具有70個胺基酸之成熟人類IGF-1的核苷酸序列，但不包含編碼人類IGF-1之E-肽的核苷酸序列，亦即不包含編碼Ea-、Eb-或Ec-域之核苷酸序列的mRNA。編碼具有27個胺基酸之人類IGF-1之前肽的核苷酸序列及編碼具有70個胺基酸之成熟人類IGF-1之核苷酸序列可經密碼子最佳化。
在一些情況下，天然存在之介白素4 (IL-4)的訊息肽可藉由一或多種取代、缺失及/或插入而經修飾，其中該天然存在之IL-4的訊息肽稱為在Uniprot資料庫中作為P05112及在Genbank資料庫中作為NM_000589.4的IL-4胺基酸序列之胺基酸1-24。在一些情況下，野生型(WT) IL-4訊息肽胺基酸序列包含如SEQ ID NO: 53中所示之序列。在一些情況下，WT IL-4訊息肽由如SEQ ID NO: 54中所示之DNA序列編碼。在一些情況下，經修飾之IL-4訊息肽具有包含如SEQ ID NO: 55中所示之序列的胺基酸序列。在一些情況下，經修飾之IL-4訊息肽由如SEQ ID NO: 56中所示之DNA序列編碼。 連接子
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：第一RNA序列、第二RNA序列及連接子RNA序列，其中：(i)該第一RNA序列為第一小干擾RNA (siRNA)序列；(ii)該第二RNA序列為第二siRNA序列或編碼所關注之基因(GOI)的第一信使RNA (mRNA)序列；且(iii)該連接子RNA序列連接第一RNA序列與第二RNA序列，其中該連接子RNA序列具有選自由以下組成之群的結構：式(I)：X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；及式(II)：X pTCCCX r，其中X任何核苷酸，p為0至17之整數且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：第一RNA序列、第二RNA序列及連接子RNA序列，其中：(i)該第一RNA序列為第一小干擾RNA (siRNA)序列；(ii)該第二RNA序列為第二siRNA序列或編碼所關注之基因(GOI)的第一信使RNA (mRNA)序列；且(iii)該連接子RNA序列連接第一RNA序列與第二RNA序列，其中該連接子RNA序列包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：第一RNA序列、第二RNA序列及連接子RNA序列，其中：(i)該第一RNA序列為第一小干擾(siRNA)序列；(ii)該第二RNA序列為第二siRNA序列或編碼所關注之基因(GOI)的第一信使(mRNA)序列；及(iii)該連接子RNA序列連接該第一RNA序列及該第二RNA序列，其中(a)該連接子RNA序列不為TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 28)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)；或(b)根據RNAfold WebServer，該連接子RNA序列未形成二級結構。
在一些實施例中，第二RNA序列為第二siRNA序列。在一些實施例中，該連接子RNA序列包含ACAACAA (SEQ ID NO: 85)、ATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 87)、ACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 88)、TCCC (SEQ ID NO: 89)或ACAACAATCCC (SEQ ID NO: 90)。在一些實施例中，該重組RNA構築體進一步包含編碼GOI之第一mRNA序列。在一些實施例中，第二RNA序列為編碼GOI之第一mRNA序列。
在一些實施例中，該連接子RNA序列包含ACAACAA (SEQ ID NO: 85)、ATAGTGAGTCGTATTATCCC (SEQ ID NO: 92)、ATAGTGAGTCGTATTAACAACAATCCC (SEQ ID NO: 93)、ATAGTGAGTCGTATTAACAACAA (SEQ ID NO: 94)、ATAGTGAGTCGTATTAATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 95)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)。
在一些實施例中，該重組RNA構築體進一步包含編碼GOI之第二mRNA序列。在一些實施例中，該重組RNA構築體進一步包含第二siRNA序列。在一些實施例中，該重組RNA構築體包含第三siRNA序列。在一些實施例中，重組RNA構築體進一步包含四個、五個或更多個siRNA序列。在一些實施例中，該等siRNA序列中之各者結合至目標RNA，且調節該目標RNA之表現。
在一些實施例中，siRNA序列中之各者能夠結合至：(a)不同目標RNA；(b)相同目標RNA之不同區域；(c)相同目標RNA之相同區域；或(d)其任何組合。在一些實施例中，(c)之siRNA序列相同。在一些實施例中，該重組RNA構築體包含三個、四個、五個或更多個mRNA序列，其各自編碼GOI。在一些實施例中，mRNA序列中之各者編碼相同GOI。在一些實施例中，mRNA序列中之各者編碼不同GOI。
在一些實施例中，siRNA序列之間的該連接子RNA序列之長度為約4至約27個核苷酸。在一些實施例中，siRNA序列之間的該連接子RNA序列之長度為約4至約18個核苷酸。在一些實施例中，m為1且n為0。在一些實施例中，在siRNA序列之間的該連接子RNA序列為ACAACAATCCC (SEQ ID NO: 90)。在一些實施例中，連接子RNA序列為ACAACAA (SEQ ID NO: 85)。在一些實施例中，連接子RNA序列包含選自由SEQ ID NO: 85、87-95組成之群的序列。在一些實施例中，連接子RNA序列包含根據SEQ ID NO: 85之序列。
在一些實施例中，調節該GOI之該表現。在一些實施例中，藉由由該GOI編碼之蛋白質的表現上調該GOI之該表現。在一些實施例中，調節該目標RNA之該表現。在一些實施例中，該目標RNA之該表現係藉由能夠結合至該目標RNA之該等siRNA序列下調。在一些實施例中，能夠結合至該目標RNA之該siRNA序列未抑制該GOI之該表現。
在一些實施例中，根據RNAfold WebServer，在siRNA序列之間的該RNA連接子序列未形成二級結構。在一些實施例中，siRNA序列根據RNAfold WebServer形成二級結構。
在一些實施例中，重組RNA構築體經裂解。在一些實施例中，該重組RNA構築體係藉由細胞內蛋白質裂解。在一些實施例中，該重組RNA構築體係藉由內源性蛋白質裂解。在一些實施例中，該重組RNA構築體係藉由內源性切丁酶裂解。
在一些實施例中，該重組RNA構築體之該裂解與不包含具有選自由式(I)及式(II)組成之群的結構之連接子之RNA構築體的裂解相比增強。在一些實施例中，該重組RNA構築體之該裂解與不包含連接子之RNA構築體的該裂解相比增強，該連接子包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。在一些實施例中，該重組RNA構築體之該裂解與包含形成二級結構之連接子的RNA構築體之該裂解相比增強。
在一些實施例中，該所關注基因之該表現與來自不包含具有選自由式(I)及式(II)組成之群的結構之連接子之RNA構築體之所關注基因的表現相比增強。在一些實施例中，該所關注之基因之該表現與來自不包含連接子之RNA構築體之所關注之基因的表現相比增強，該連接子包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。
在一些態樣中，本文提供一種組合物，其包含重組聚核酸構築體，該構築體包含選自由SEQ ID NO: 1-24及97-108組成之群之核酸序列。 表現載體及 RNA 構築體之產生
本文提供包含編碼本文所描述之重組RNA構築體之重組聚核酸構築體的組合物。本文提供包含重組聚核酸構築體之組合物，該等重組聚核酸構築體編碼包含第一RNA序列及第二RNA序列之重組RNA構築體。在一些情況下，該第一RNA序列或該第二RNA序列可編碼所關注之基因。在一些實施例中，該第一RNA序列或該第二RNA序列可為編碼所關注之基因的mRNA。在一些情況下，該第一RNA序列或該第二RNA序列可包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。在一些實施例中，該第一RNA序列或該第二RNA序列可包含至少兩種各自能夠結合至目標RNA之siRNA。舉例而言，編碼所關注之基因的mRNA可為IL-4或IGF-1之mRNA。舉例而言，目標RNA可為TNF-α、IL-17、IL-8、IL-1β或Turbo GFP之mRNA。
在相關態樣中，編碼重組RNA構築體之重組聚核酸構築體可編碼2、3、4、5個或更多個種類的siRNA。在相關態樣中，編碼重組RNA構築體之重組聚核酸構築體可編碼針對目標mRNA之2個種類之siRNA。在相關態樣中，編碼重組RNA構築體之重組聚核酸構築體可編碼各自針對目標mRNA之3種siRNA。在相關態樣中，siRNA種類中之各者可包含相同序列、不同序列或其組合。舉例而言，編碼重組RNA構築體之重組聚核酸構築體可編碼各自針對目標mRNA之相同區域或序列的3種siRNA。舉例而言，編碼重組RNA構築體之重組聚核酸構築體可編碼各自針對目標mRNA之不同區域或序列的3種siRNA。在一些態樣中，編碼重組RNA構築體之重組聚核酸構築體可編碼3個種類之siRNA，其中3個種類之siRNA中之各者係針對不同目標mRNA。在一些實施例中，目標mRNA可為TNF-α mRNA、IL-8 mRNA、IL-17 mRNA、Turbo GFP mRNA或IL-1β mRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含選自由SEQ ID NO: 13-24組成之群的序列。
本文所描述之聚核酸構築體可藉由此項技術中已知之任何方法獲得，諸如藉由化學合成DNA鏈、藉由PCR或藉由Gibson組裝方法。藉由化學合成或PCR方法或Gibson組裝方法之組合構築聚核酸構築體之優勢為密碼子可經最佳化以確保融合蛋白質在宿主細胞中以高位準表現。密碼子最佳化可指用於在所關注之宿主細胞中表現之修飾核酸序列的方法，藉由用更頻繁地或最常用於該宿主細胞之基因中之密碼子置換至少一個原生序列之密碼子(例如，大於1、2、3、4、5、10、15、20、25、50或更多個密碼子)，同時維持原生胺基酸序列。密碼子使用表為現成可用的，例如在「密碼子使用資料庫」處，且此等表可以多種方式應用。用於對特定序列進行密碼子最佳化以在特定宿主細胞中表現的電腦演算法亦為可用的，諸如Gene Forge ®(Aptagen，PA)及GeneOptimizer ®(ThermoFischer，MA)。所獲得之聚核苷酸一經可併入適合之載體中。如本文所用，載體可指天然存在或以合成方式產生的用於活體內或活體外吸收、增殖、表現或傳輸核酸的構築體，例如質體、微型環、噬菌粒、黏質體、人工染色體/微型染色體、噬菌體、病毒(諸如桿狀病毒、反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、單純疱疹病毒)、噬菌體。用於構築載體之方法為熟習此項技術者熟知的，且描述於各種公開案中。特定言之，用於構築合適載體之技術，包括諸如啟動子、強化子、終止及聚腺苷酸化訊號、選擇標記物、複製起點及剪接訊號之功能性及調節組分之描述，為熟習此項技術者已知的。多種載體為此項技術中所熟知且一些可購自諸如以下之公司：Agilent Technologies, Santa Clara, Calif.; Invitrogen, Carlsbad, Calif.; Promega, Madison, Wis.; Thermo Fisher Scientific;或Invivogen, San Diego, Calif。用於活體外轉錄之載體的非限制性實例包括pT7CFE1-CHis、pMX (諸如pMA-T, pMA-RQ, pMC, pMK, pMS, pMZ)、pEVL、pSP73、pSP72、pSP64及pGEM (諸如pGEM®-4Z、pGEM®-5Zf(+)、pGEM®-11Zf(+)、pGEM®-9Zf(-)、pGEM®-3Zf(+/-)、pGEM®-7Zf(+/-))。在一些情況下，重組聚核酸構築體可為DNA。
如本文所描述之聚核酸構築體可為環狀或線性的。舉例而言，環狀聚核酸構築體可包括載體系統，諸如pMX、pMA-T、pMA-RQ或pT7CFE1-CHis。舉例而言，線性聚核酸構築體可包括線性載體，諸如pEVL或線性化載體。在一些情況下，重組聚核酸構築體可進一步包含啟動子。在一些情況下，啟動子可存在於編碼第一RNA序列及第二RNA序列之序列上游或5'處。啟動子之非限制性實例可包括T3、T7、SP6、P60、Syn5及KP34。在一些情況下，本文提供之重組聚核酸構築體可包含T7啟動子，該T7啟動子包含含有TAATACGACTCACTATA (SEQ ID NO: 26)之序列。在一些情況下，重組聚核酸構築體進一步包含編碼Kozak序列之序列。Kozak序列可指充當蛋白質轉譯起始位點之核酸序列模體。Kozak序列在例如Kozak, M.之Gene 299(1-2):1-34之文獻中詳細描述，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，重組聚核酸構築體包含編碼包含含有GCCACC (SEQ ID NO: 25)之序列之Kozak序列的序列。在一些情況下，本文所描述之重組聚核酸構築體可經密碼子最佳化。
本文提供包含重組聚核酸構築體之組合物，該等重組聚核酸構築體編碼本文所描述之RNA構築體，該等RNA構築體包含至少兩種各自編碼能夠結合至一或多種目標RNA之siRNA的核酸序列及一或多種編碼所關注之基因的核酸序列，其中能夠結合至目標RNA之該siRNA不為由所關注之基因編碼的內含子序列之一部分。在一些情況下，所關注之基因在沒有RNA剪接的情況下表現。在一些情況下，能夠結合至目標RNA之siRNA並未由該所關注之基因的內含子序列編碼或不包括該所關注之基因的內含子序列。在一些情況下，能夠結合至目標RNA的siRNA結合至目標RNA之外顯子。在一些情況下，能夠結合至目標RNA之siRNA特異性結合至一個目標RNA。在一些情況下，重組聚核酸構築體可包含含有選自由SEQ ID NO: 13-24組成之群之序列的核酸序列。
本文提供產生本文所描述之RNA構築體組合物的方法。舉例而言，重組RNA構築體可由自包含以下之聚核酸構築體活體外轉錄而產生：RNA聚合酶之啟動子、至少一種編碼所關注之基因之核酸序列、至少兩種編碼能夠結合至一或多種目標mRNA之siRNA的核酸序列及編碼聚(A)尾之核酸序列。活體外轉錄反應可進一步包含RNA聚合酶、核苷酸三磷酸酯(NTP)之混合物及/或封端酶。使用活體外轉錄產生RNA以及分離並純化所轉錄RNA之細節為此項技術中熟知的，且可見於例如Beckert及Masquida ((2011) Synthesis of RNA by In vitro Transcription. RNA. Methods in Molecular Biology (Methods and Protocols), 第703卷. Humana Press)中。活體外轉錄套組之非限制性清單包括MEGAscript™ T3轉錄套組、MEGAscript T7套組、MEGAscript™ SP6轉錄套組、MAXIscript™ T3轉錄套組、MAXIscript™ T7轉錄套組、MAXIscript™ SP6轉錄套組、MAXIscript™ T7/T3轉錄套組、MAXIscript™ SP6/T7轉錄套組、mMESSAGE mMACHINE™ T3轉錄套組、mMESSAGE mMACHINE™ T7轉錄套組、mMESSAGE mMACHINE™ SP6轉錄套組、MEGAshortscript™ T7轉錄套組、HiScribe™ T7高產量RNA合成套組、HiScribe™ T7活體外轉錄套組、AmpliScribe™ T7-Flash™轉錄套組、AmpliScribe™ T7高產量轉錄套組、AmpliScribe™ T7-Flash™生物素RNA轉錄套組、T7轉錄套組、高產量T7 RNA合成套組、DuraScribe® T7轉錄套組等。
活體外轉錄反應可進一步包含轉錄緩衝液系統、核苷酸三磷酸酯(NTP)及RNase抑制劑。在一些實施例中，轉錄緩衝液系統可包含二硫蘇糖醇(DTT)及鎂離子。NTP可為天然存在或非天然存在(經修飾)之NTP。非天然存在(經修飾)之NTP之非限制性實例包括N 1-甲基假尿苷、假尿苷、N 1-乙基假尿苷、N 1-甲氧基甲基假尿苷、N 1-丙基假尿苷、2-硫代尿苷、4-硫代尿苷、5-甲氧基尿苷、5-甲基尿苷、5-羧甲基酯尿苷、5-甲醯基尿苷、5-羧基尿苷、5-羥基尿苷、5-溴尿苷、5-碘尿苷、5,6-二氫尿苷、6-氮雜尿苷、噻吩并尿苷、3-甲基尿苷、1-羧甲基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、二氫尿苷、二氫假尿苷、2-甲氧基尿苷、2-甲氧基-4-硫代-尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、5-甲基胞苷、5-甲氧基胞苷、5-羥甲基胞苷、5-甲醯基胞苷、5-羧基胞苷、5-羥基胞苷、5-碘胞苷、5-溴胞苷、2-硫代胞苷、5-氮雜胞苷、假異胞苷、3-甲基-胞苷、N 4-乙醯基胞苷、5-甲醯基胞苷、N 4-甲基胞苷、5-羥甲基胞苷、1-甲基-假異胞苷、4-甲氧基-假異胞苷及4-甲氧基-1-甲基-假異胞苷、N 1-甲基腺苷、N 6-甲基腺苷、N 6-甲基-2-胺基腺苷、N 6-異戊烯基腺苷、N 6,N 6-二甲基腺苷、7-甲基腺嘌呤、2-甲硫基-腺嘌呤及2-甲氧基-腺嘌呤。DNA依賴型RNA聚合酶之非限制性實例包括T3、T7、SP6、P60、Syn5及KP34 RNA聚合酶。在一些實施例中，RNA聚合酶係選自由以下組成之群：T3 RNA聚合酶、T7 RNA聚合酶、SP6 RNA聚合酶、P60 RNA聚合酶、Syn5 RNA聚合酶及KP34 RNA聚合酶。
如本文所描述之經轉錄RNA可自活體外轉錄反應混合物中分離且純化。舉例而言，經轉錄RNA可使用管柱純化來分離及純化。自活體外轉錄反應混合物分離及純化經轉錄RNA之細節為此項技術中熟知的，且可使用任何市售套組。RNA純化套組之非限制性清單包括MEGAclear套組、Monarch® RNA清潔套組、EasyPure® RNA純化套組、NucleoSpin® RNA清潔等。 療法應用
本文提供適用於治療疾病或病狀之組合物。在一些態樣中，組合物以足以治療或預防疾病或病狀之量存在或投與。在一些態樣中，本文提供一種治療疾病或病狀之方法，其包含向有需要之個體投與本文所描述之組合物或醫藥組合物。在一些態樣中，本文提供本文所描述之組合物或醫藥組合物，其用於治療有需要之個體之疾病或病狀的方法中。在一些態樣中，本文提供本文所描述之組合物或醫藥組合物的用途，其係用於製造用以治療有需要之個體之疾病或病狀的藥劑。在一些實施例中，該疾病或病狀包含皮膚疾病或病狀或關節疾病或病狀。在一些實施例中，皮膚疾病或病況包含發炎性皮膚病症。在一些實施例中，發炎性皮膚病症包含牛皮癬。在一些實施例中，關節退化包含椎間盤疾病(IVDD)或骨關節炎(OA)。本文提供重組聚核酸或RNA構築體組合物，其包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含編碼所關注之基因的第一RNA序列及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件中之至多一者的相應第二RNA序列。在一些情況下，該第一RNA序列或該第二RNA序列可編碼所關注之基因。在一些實施例中，所關注之基因可包含IL-4或IGF-1。在一些情況下，該第一RNA序列或該第二RNA序列可包含至少兩種降低與本文所描述之疾病或病狀相關的基因之表現的遺傳元件。在一些實施例中，可降低與疾病或病狀相關之基因表現的遺傳元件可包含靶向TNF-α mRNA或功能性變異體的siRNA。在一些實施例中，可降低與疾病或病狀相關之基因表現的遺傳元件可包含靶向IL-8 mRNA之siRNA或功能變異體。在一些實施例中，可降低與疾病或病狀相關之基因表現的遺傳元件可包含靶向IL-1β mRNA之siRNA或功能變異體。在一些實施例中，可降低與疾病或病狀相關之基因表現的遺傳元件可包含靶向IL-17 mRNA之siRNA或功能性變異體。
本文亦提供醫藥組合物，其包含本文所描述之任何重組RNA構築體組合物及醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥組合物可表示包含治療有效量之活性醫藥成分以及待向有需要之個體投與的一或多種醫藥學上可接受之賦形劑的混合物或溶液。術語「醫藥學上可接受之」表示適用於製備醫藥組合物之材料的屬性，該醫藥組合物通常為安全的、無毒的且在生物學上或其他方面均不是不合需要的，且對於獸醫以及人類醫藥用途為可接受的。術語「醫藥學上可接受之」可指不會消除化合物之生物活性或特性且相對無毒之材料，諸如載劑或稀釋劑，亦即該材料可向個體投與而不會產生不合需要之生物效應或以有害方式與含有其之組合物之組分中之任一者相互作用。醫藥學上可接受之賦形劑可指在醫藥組合物中之任何醫藥學上可接受之成分，其不具有治療活性且對所投與之個體無毒性，諸如用於調配醫藥產品之崩解劑、黏合劑、填充劑、溶劑、緩衝液、張力劑、穩定劑、抗氧化劑、界面活性劑、載劑、稀釋劑、賦形劑、防腐劑或潤滑劑。醫藥組合物可有助於向生物體投與化合物，且可以習知方式使用一或多種促進活性化合物加工成醫藥學上可使用之製劑的醫藥學上可接受之非活性成分調配。適當調配物視所選擇之投與途徑而定且醫藥組合物之概述可見於例如以下中：Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980;及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 1999)，其以引用的方式併入本文中。在一些實施例中，醫藥組合物可藉由將活性物質(例如，本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體)溶解於水溶液中調配以注射至疾病組織或疾病細胞中。在一些實施例中，醫藥組合物可藉由將活性物質(例如，本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體)溶解於水溶液中以便直接注射至疾病組織或疾病細胞中來調配。
本文亦提供治療有需要之個體之疾病或病狀的方法，其包含向該個體投與治療有效量之本文所描述之聚核酸構築體或重組RNA構築體組合物或醫藥組合物。如本文中所使用之術語「有效量」或「治療有效量」係指足以在一定程度上減輕所治療之疾病或病狀之一或多種症狀的所投與藥劑或化合物之量。例如，減輕及/或緩解疾病之一或多種病徵、症狀或病因、或生物系統之任何其他所要改變。舉例而言，用於治療用途之「有效量」可為使一或多種疾病症狀在臨床上顯著減少之藥劑的量。適當「有效」量可在個別情況下使用諸如劑量遞增研究之技術來測定。
如本文中所使，術語「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」包括預防性及/或治療性緩解、緩和或改善疾病或病狀之至少一種症狀；預防額外症狀；抑制疾病或病狀，例如遏制疾病或病狀之發展；減輕疾病或病狀；致使疾病或病狀消退；減輕疾病或病狀所引起之病症；或使疾病或病狀之症狀停止。在一些實施例中，治療疾病或病狀包含降低疾病組織或疾病細胞之尺寸。在一些實施例中，治療個體之疾病或病狀包含增加個體之存活。在一些實施例中，治療疾病或病狀包含降低或改善疾病之嚴重程度，延遲疾病發作，抑制疾病之進展，減少個體住院或住院時長，改善個體之生活品質，減少與疾病有關之症狀的數目，降低或改善與疾病相關之症狀的嚴重程度，降低與疾病相關之症狀的持續時間，預防與疾病相關之症狀復發，抑制疾病之症狀的發展或發作，或抑制與疾病相關之症狀的進展。
在一些情況下，個體可涵蓋哺乳動物。哺乳動物之實施例包括(但不限於)哺乳動物類之任何成員:人類、非人類靈長類動物，諸如黑猩猩及其他猿及猴物種；農畜，諸如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家畜，諸如兔、狗及貓；實驗室動物，包括嚙齒動物(諸如大鼠、小鼠及天竺鼠)及其類似者。在一些情況下，哺乳動物為人類。在一些情況下，個體可為動物。在一些情況下，動物可包含人類及非人類動物。在一個實施例中，非人類動物為哺乳動物，例如嚙齒動物，諸如大鼠或小鼠。在另一實施例中，非人類動物可為小鼠。在一些情況下，該個體係哺乳動物。在一些情況下，個體為人類。在一些情況下，個體為成人、兒童或嬰兒。在一些情況下，個體為伴侶動物。在一些情況下，個體為貓、犬或嚙齒動物。在一些情況下，個體為犬或貓。
在一些態樣中，本文提供一種治療個體之疾病或病狀的方法，該方法包含向該個體投與本文所描述之重組RNA構築體組合物或醫藥組合物，其包含編碼所關注之基因的mRNA及至少兩種能夠結合至目標mRNA之siRNA。在一些實施例中，目標mRNA包含TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-17、Turbo GFP或其功能變異體之mRNA。在一些實施例中，編碼所關注之基因的mRNA編碼IGF-1或其功能變異體。在一些實施例中，編碼所關注之基因的mRNA編碼細胞介素。在一些實施例中，細胞介素為IL-4或其功能變異體。
在一些態樣中，本文提供一種治療個體之疾病或病狀的方法，該方法包含向個體投與本文所描述之重組RNA構築體組合物或醫藥組合物，其包含編碼IGF-1之mRNA及能夠結合至IL-8之mRNA的siRNA。在一些態樣中，本文提供一種治療個體之疾病或病狀的方法，該方法包含向個體投與本文所描述之重組RNA構築體組合物或醫藥組合物，其包含編碼IGF-1之mRNA及能夠結合至IL-1β之mRNA的siRNA。在一些態樣中，本文提供一種治療個體之疾病或病狀的方法，該方法包含向該個體投與本文所描述之重組RNA組合物或醫藥組合物，該等組合物包含編碼IL-4之mRNA及能夠結合至TNF-α之mRNA的siRNA。在一些態樣中，本文提供一種治療個體之疾病或病狀的方法，該方法包含向該個體投與本文所描述之重組RNA構築體組合物或醫藥組合物，該等組合物包含編碼IL-4之mRNA及能夠結合至IL-17之mRNA的siRNA。在一些態樣中，本文提供一種治療個體之疾病或病狀的方法，該方法包含向該個體投與本文所描述之重組RNA構築體組合物或醫藥組合物，該等組合物包含編碼IL-4之mRNA、能夠結合至TNF-α之mRNA的siRNA及能夠結合至IL-17之mRNA的siRNA。在一些實施例中，該疾病或病狀包含皮膚疾病或病狀或關節疾病或病狀。在一些實施例中，皮膚疾病或病況包含發炎性皮膚病症。在一些實施例中，發炎性皮膚病症包含牛皮癬。在一些實施例中，關節疾病或病況包含關節退化。在一些實施例中，關節退化包含椎間盤疾病(IVDD)或骨關節炎(OA)。
在一些態樣中，向有需要之個體投與之組合物或醫藥組合物包含重組聚核酸構築體或RNA構築體，其包含：(i)編碼IL-4之mRNA；及(ii)至少兩種能夠結合至TNF-α mRNA的siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含針對TNF-α mRNA之2種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含各自針對TNF-α mRNA之3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含如SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 100、SEQ ID NO: 101、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:104或SEQ ID NO: 105 (Cpd.4-Cpd.9)中所闡述之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含如SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20或SEQ ID NO: 21 (Cpd.4-Cpd.9)中所闡述之序列。
在一些態樣中，向有需要之個體投與之組合物或醫藥組合物包含重組聚核酸構築體或RNA構築體，其包含：(i)編碼IGF-1之mRNA；及(ii)至少兩種能夠結合至IL-8 mRNA之siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含針對IL-8 mRNA之2種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含各自針對IL-8 mRNA之3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含如SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 97或SEQ ID NO: 98 (Cpd.1或Cpd.2)中所闡述之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含如SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 14 (Cpd.1或Cpd.2)中所闡述之序列。
在一些態樣中，向有需要之個體投與之組合物或醫藥組合物包含重組聚核酸構築體或RNA構築體，其包含：(i)編碼IGF-1之mRNA；及(ii)至少兩種能夠結合至IL-1β mRNA之siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含針對IL-1β mRNA之2種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含各自針對IL-1β mRNA之3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含如SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 99 (Cpd.3)中所闡述之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含如SEQ ID NO: 15 (Cpd.3)中所闡述之序列。
在一些態樣中，向有需要之個體投與之組合物或醫藥組合物包含重組聚核酸構築體或RNA構築體，其包含：(i)編碼IL-4之mRNA；及(ii)至少兩種能夠結合至IL-17 mRNA之siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含針對IL-17 mRNA之2種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含各自針對IL-17 mRNA之3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含如SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 100 (Cpd.4)中所闡述之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含如SEQ ID NO: 16 (Cpd.4)中所闡述之序列。
在一些態樣中，向有需要之個體投與之組合物或醫藥組合物包含重組聚核酸構築體或RNA構築體，其包含：(i)編碼IL-4之mRNA；(ii)至少兩種能夠結合至TNF-α mRNA之siRNA；及(iii)至少兩種能夠結合至IL-17 mRNA之siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含針對TNF-α mRNA之2種siRNA及針對IL-17 mRNA之2種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含各自針對TNF-α mRNA或IL-17 mRNA之3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可編碼或包含各自針對TNF-α mRNA或IL-17 mRNA之6種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含6種siRNA，3種針對TNF-α mRNA及3種針對IL-17 mRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含如SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 100 (Cpd.4)中所闡述之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含如SEQ ID NO: 16 (Cpd.4)中所闡述之序列。
在一些態樣中，向有需要之個體投與之組合物或醫藥組合物包含重組聚核酸構築體或RNA構築體，其包含：(i) IGF-1 mRNA；及(ii)至少一個能夠結合至Turbo GFP mRNA之siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可編碼或包含至少1、2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含針對Turbo GFP mRNA之1種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含各自針對Turbo GFP mRNA之2或3種siRNA。在相關態樣中，至少2種或至少3種siRNA中之各者可相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或RNA構築體可包含如SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 107或SEQ ID NO:108 (Cpd.10-Cpd.12)中所闡述之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含如SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23或SEQ ID NO: 24 (Cpd.10-Cpd.12)中所闡述之序列。
本文所描述之重組RNA構築體組合物可呈組合療法形式投與。具有兩種或更多種治療劑或療法之組合療法可使用藉由不同作用機制起作用之藥劑及療法。使用具有不同作用機制之藥劑或療法的組合療法可引起加成或協同作用。組合療法可允許與單一療法中所用相比更低劑量之各藥劑，由此降低毒性副作用及/或增加藥劑之治療指數。組合療法可降低產生抗性疾病細胞之可能性。在一些情況下，組合療法包含影響免疫反應(例如，增強或活化反應)之治療劑或療法及影響(例如，抑制或殺滅)疾病細胞之治療劑。在一些情況下，組合療法可包含(i)本文所描述之重組RNA組合物或醫藥組合物；及(ii)一或多種此項技術中已知的用於本文所描述之疾病的額外療法。在一些實施例中，本文所描述之重組RNA組合物或醫藥組合物可在投與一或多種用於組合療法之額外療法之前、同時及/或之後向患有疾病或病狀之個體投與。在一些實施例中，一或多種額外療法可包含1、2、3種或更多種額外治療劑或療法。
本文所描述之組合物及醫藥組合物可使用此項技術中已知之任何適合方法投與個體。用於本發明之合適調配物及遞送方法一般為此項技術中熟知的。舉例而言，本文所描述之組合物可以各種方式向個體投與，該等方式包括非經腸、經靜脈內、經皮內、經肌肉內、經結腸、經直腸或經腹膜內。在一些實施例中，本文所描述之組合物藉由對個體進行腹膜內注射、肌肉內注射、皮下注射或靜脈內注射而投與。在一些實施例中，本文所描述之組合物可非經腸、經靜脈內、經肌肉內或經口投與。在一些實施例中，本文所描述之組合物可經由注射至疾病組織或細胞中投與。在一些實施例中，本文所描述之組合物可以用於注射至疾病組織或細胞中之水溶液形式投與。
本文所描述之組合物及醫藥組合物中之任一者可連同說明書手冊一起提供。說明書手冊可包含熟習此項技術者或主治醫師如何治療(或預防)根據本發明之如本文所描述之疾病或病症(例如，諸如頭頸癌之癌症)的指南。在一些實施例中，說明書手冊可包含分別關於本文所描述之遞送/投與模式及遞送/投與方案(例如遞送/投與途徑、給藥方案、遞送/投與時間、遞送/投與頻率等)的指導。在一些實施例中，說明書手冊可包含本發明之組合物如何投與或注射及/或準備用於投與或注射之說明書。原則上，在本文其他處已描述的分別關於遞送/投與模式及遞送/投與方案之內容可以各別說明之形式包含在說明書手冊中。
本文所描述之組合物及醫藥組合物可用於基因療法中。在某些實施例中，包含本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體的組合物可遞送至基因療法載體中之細胞。基因療法載體及基因遞送方法為此項技術中所熟知。此等方法之非限制性實例包括：病毒載體遞送系統，包括DNA及RNA病毒，該等病毒在遞送至細胞之後具有附加或整合之基因體；非病毒載體遞送系統，包括DNA質體、裸核酸及與遞送載體複合之核酸；轉位子系統(用於遞送及整合至宿主基因體中；Moriarity等人(2013) Nucleic Acids Res 41(8), e92；Aronovich等人, (2011) Hum. Mol. Genet. 20(R1), R14-R20)；反轉錄病毒介導之DNA傳遞(例如Moloney小鼠白血病病毒、脾臟壞死病毒、反轉錄病毒(諸如勞氏肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus))、哈維肉瘤病毒(Harvey Sarcoma Virus)、禽類白血病病毒、長臂猿白血病病毒、人類免疫缺乏病毒、腺病毒、骨髓增生性肉瘤病毒及乳房腫瘤病毒；參見例如Kay等人(1993) Science 262, 117-119, Anderson (1992) Science 256, 808-813)；及DNA病毒介導之DNA傳遞，包括腺病毒、疱疹病毒、小病毒及腺相關病毒(例如Ali等人(1994) Gene Therapy 1, 367-384)。病毒載體亦包括(但不限於)腺相關病毒、腺病毒、慢病毒、反轉錄病毒及單純疱疹病毒載體。能夠整合在宿主基因體中之載體包括(但不限於)反轉錄病毒或慢病毒。
在一些實施例中，包含本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體的組合物可經由直接DNA轉移而遞送至細胞(Wolff等人. (1990) Science 247, 1465-1468)。重組聚核酸或RNA構築體可在暫時滲透細胞之細胞膜之輕度機械破壞之後遞送至細胞。細胞膜之此類輕度機械破壞可藉由輕輕地迫使細胞通過小孔而實現(Sharei等人PLOS ONE (2015) 10(4), e0118803)。在另一實施例中，包含本文所描述之重組聚核酸或RNA構築體的組合物可經由脂質體介導之DNA傳遞而遞送至細胞(例如，Gao & Huang (1991) Biochem. Ciophys. Res. Comm. 179, 280-285, Crystal (1995) Nature Med. 1, 15-17, Caplen等人. (1995) Nature Med. 3, 39-46)。脂質體可涵蓋藉由產生封閉脂質雙層或聚集物形成的多種單層及多層脂質媒劑。重組聚核酸或RNA構築體可囊封在脂質體之含水內部中、穿插在脂質體之脂質雙層內、經由與脂質體及寡核苷酸兩者有關之連接分子附接至脂質體、包覆在脂質體中或與脂質體複合。 基因表現之調節
本文提供在細胞中表現來自單一RNA轉錄本之mRNA及至少兩種siRNA的方法，其包含引入至包含本文所描述之任何重組聚核酸或RNA構築體的細胞組合物中。本文進一步提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體編碼或包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該等至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件包含能夠結合至目標信使RNA (mRNA)之小干擾RNA (siRNA)，且其中該目標mRNA不同於由所關注之基因編碼的mRNA，藉此調節來自單一RNA轉錄本之目標mRNA及所關注之基因的表現。在一些情況下，如本文所用，聚核酸、基因、DNA或RNA之表現可指聚核酸、基因、DNA或RNA之轉錄及/或轉譯。在一些情況下，如本文中所用，調節、增加、上調、降低或下調聚核酸、基因(諸如，所關注之基因)、DNA或RNA (諸如，目標mRNA)之表現可指藉由影響聚核酸、基因(諸如，所關注之基因)、DNA或RNA (諸如，目標mRNA)之轉錄及/或轉譯來調節、增加、上調、減少、下調由該聚核酸、基因(諸如，所關注之基因)、DNA或RNA (諸如，目標mRNA)編碼之蛋白質的位準。在一些情況下，抑制聚核酸、基因(諸如，所關注之基因)、DNA或RNA (諸如，目標mRNA)之表現可指影響該聚核酸、基因(諸如，所關注之基因)、DNA或RNA (諸如，目標mRNA)之轉錄及/或轉譯，使得由該聚核酸、基因(諸如所關注之基因)、DNA或RNA (諸如，目標mRNA)編碼之蛋白質的含量降低或消除。
舉例而言，本文提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體編碼或包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA序列編碼IL-4，且其中該第二RNA序列編碼能夠結合至TNF-α mRNA之小干擾RNA (siRNA)，藉此調節來自單一RNA轉錄本之TNF-α mRNA及IL-4之表現。
舉例而言，本文提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體編碼或包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA序列編碼IGF-1，且其中該第二RNA序列編碼能夠結合至IL-8 mRNA之小干擾RNA (siRNA)，藉此調節來自單一RNA轉錄本之IL-8 mRNA及IGF-1之表現。
舉例而言，本文提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體編碼或包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA序列編碼IGF-1，且其中該第二RNA序列編碼能夠結合至IL-1β mRNA之小干擾RNA (siRNA)，藉此調節來自單一RNA轉錄本之IL-1β mRNA及IGF-1之表現。
舉例而言，本文提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體編碼或包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA序列編碼IL-4，且其中該第二RNA序列編碼能夠結合至IL-17 mRNA之小干擾RNA (siRNA)，藉此調節來自單一RNA轉錄本之IL-17 mRNA及IL-4之表現。
舉例而言，本文提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體編碼或包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA序列編碼IL-4，且其中該第二RNA序列編碼能夠結合至TNF-α mRNA之小干擾RNA (siRNA)及能夠結合至IL-17 mRNA之siRNA，藉此調節來自單一RNA轉錄本之TNF-α mRNA、IL-17 mRNA及IL-4之表現。
舉例而言，本文提供調節細胞中之兩種或更多種基因之表現的方法，其包含引入至包含編碼或包含第一RNA序列、第二RNA序列及連接子RNA序列之重組聚核酸或RNA構築體的細胞組合物中，其中該連接子RNA序列連接該第一RNA序列與該第二RNA序列，其中該第一RNA序列編碼IGF-1，且其中該第二RNA序列編碼能夠結合至Turbo GFP mRNA之小干擾RNA (siRNA)，藉此調節來自單一RNA轉錄本之Turbo GFP mRNA及IGF-1的表現。
本文提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA編碼IL-4，且其中該第二RNA編碼能夠結合至TNF-α mRNA之小干擾RNA (siRNA)；其中同時調節IL-4及TNF-α之表現，亦即上調IL-4之表現且同時下調TNF-α之表現。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對TNF-α mRNA之相同區域的3種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對TNF-αmRNA之3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可針對相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組RNA構築體可包含SEQ ID NO: 4-9或100-105 (Cpd.4-Cpd.9)中所示之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含SEQ ID NO: 16-21 (Cpd.4-Cpd.9)中所示之序列。
本文亦提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA編碼IGF-1，且其中該第二RNA編碼能夠結合至IL-8 mRNA之小干擾RNA (siRNA)；其中同時調節IGF-1及IL-8之表現，亦即上調IGF-1之表現且同時下調IL-8之表現。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對IL-8 mRNA之相同區域的3種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對IL-8 mRNA之不同區域的3種siRNA。在相關態樣中，至少3種siRNA中之各者可針對相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組RNA構築體可包含含有SEQ ID NO: 1 (Cpd.1)、SEQ ID NO: 97 (Cpd.1)、SEQ ID NO: 2 (Cpd.2)或SEQ ID NO: 98 (Cpd.2)之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含含有SEQ ID NO: 13 (Cpd.1)或SEQ ID NO: 14 (Cpd.2)之序列。
本文亦提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA編碼IGF-1，且其中該第二RNA編碼能夠結合至IL-1β mRNA之小干擾RNA (siRNA)；其中同時調節IGF-1及IL-1β之表現，亦即上調IGF-1之表現且同時下調IL-1β之表現。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對IL-1β mRNA之相同區域的3種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對IL-1β mRNA之不同區域的3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可針對相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組聚核酸構築體或重組RNA構築體可包含含有SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 99 (Cpd.3)之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含含有SEQ ID NO: 15 (Cpd.3)之序列。
本文亦提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA編碼IL-4，且其中該第二RNA編碼能夠結合至IL-17 mRNA之小干擾RNA (siRNA)；其中同時調節IL-4及IL-17之表現，亦即上調IL-4之表現且同時下調IL-17之表現。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對IL-17 mRNA之相同區域的3種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對IL-17 mRNA之不同區域的3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可針對相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組RNA構築體可包含含有SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 100 (Cpd.4)之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含含有SEQ ID NO: 16 (Cpd.4)之序列。
本文亦提供調節兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，該方法包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體包含編碼所關注之基因的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第一RNA編碼IL-4，且其中該第二RNA編碼能夠結合至TNF-α mRNA之小干擾RNA (siRNA)及能夠結合至IL-17 mRNA之siRNA；其中同時調節IL-4、TNF-α及IL-17之表現，亦即上調IL-4之表現且同時下調TNF-α及IL-17之表現。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含至少2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對TNF-α mRNA之相同區域的3種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對IL-17 mRNA之相同區域的3種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對TNF-α及/或IL-17 mRNA之不同區域的3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可針對相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含6種siRNA，其中6種siRNA中之3者係針對TNF-α之不同區域，且另外6種siRNA係針對IL-17 mRNA之不同區域。在相關態樣中，重組RNA構築體可包含含有SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 100 (Cpd.4)之序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含含有SEQ ID NO: 16 (Cpd.4)之序列。
本文亦提供調節細胞中之兩種或更多種基因之表現的方法，其包含引入至包含含有第一RNA序列、第二RNA序列及連接子RNA序列之重組聚核酸或RNA構築體的細胞組合物中，其中該連接子RNA序列連接該第一RNA序列及該第二RNA序列，其中該第一RNA編碼IGF-1，且其中該第二RNA編碼能夠結合至Turbo GFP mRNA之小干擾RNA (siRNA)；其中IGF-1及Turbo GFP之表現係同時調節，亦即IGF-1之表現上調且Turbo GFP之表現同時下調。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含至少1、2、3、4、5、6種或更多種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對Turbo GFP mRNA之相同區域的3種siRNA。在相關態樣中，重組聚核酸或RNA構築體可編碼或包含各自針對Turbo GFP mRNA之不同區域的3種siRNA。在相關態樣中，至少3個siRNA中之各者可針對相同、不同或其組合。在相關態樣中，重組RNA構築體可包含選自由SEQ ID NO: 10-12及106-108 (Cpd.10-Cpd.12)組成之群的序列。在相關態樣中，重組聚核酸構築體可包含選自由SEQ ID NO: 22-24 (Cpd.10-Cpd.12)組成之群的序列。
本文提供上調且下調兩種或更多種基因在細胞中之表現的方法，其包含引入至包含重組聚核酸或RNA構築體之細胞組合物中，該等構築體編碼或包含編碼所關注之基因(例如，IL-4或IGF-1)的第一RNA序列，及包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該第二RNA編碼能夠結合至目標mRNA (例如，TNF-α IL-8、IL-17、Turbo GFP或IL-1beta)之小干擾RNA (siRNA)；其中該目標mRNA不同於由所關注之基因編碼的mRNA，且其中下調目標mRNA之表現且同時上調所關注之基因的表現。在一些實施例中，目標mRNA之表現藉由能夠結合於目標mRNA之siRNA下調。在一些實施例中，所關注之基因之表現藉由表現由所關注之基因編碼之mRNA或蛋白質而上調。 說明性實施例
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的該第一RNA序列及(ii)的相應第二RNA序列，其具有至少兩種遺傳元件中之至多一者。在一些實施例中，該重組RNA構築體包含一或多個尿苷。在一些實施例中，該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體不包含核苷酸變異體。在一些實施例中，該核苷酸變異體包含經修飾之尿苷。在一些實施例中，該經修飾之尿苷包含N1-甲基假尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體不包含N1-甲基假尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體僅包含未經修飾之核苷酸或天然核苷酸。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及(ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列，其中該重組RNA構築體包含尿苷，其中(a)該等重組RNA構築體中所包含之所有尿苷均為未經修飾或天然核苷酸；或(b)該等重組RNA構築體中所包含之該等尿苷中之至少一者為未經修飾之尿苷。
在一些實施例中，該相應重組RNA構築體不包含調節一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件中之任一者。在一些實施例中，該第二RNA序列包含至少三種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。在一些實施例中，該第二RNA序列包含至少六種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。在一些實施例中，該第二RNA序列包含至少兩種或至少四種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。在一些實施例中，該第二RNA序列包含兩種或四種或更多種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。
在一些實施例中，該第一RNA序列為信使RNA (mRNA)序列。在一些實施例中，該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者包含二級結構。在一些實施例中，該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者包含髮夾結構或環結構。在一些實施例中，該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者為短或小髮夾RNA (shRNA)。在一些實施例中，該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者係藉由細胞內蛋白質處理或裂解。在一些實施例中，該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者係藉由細胞之內源性蛋白質處理或裂解。在一些實施例中，該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者係藉由內源性切丁酶處理或裂解。在一些實施例中，該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者包含小干擾RNA (siRNA)。在一些實施例中，該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者能夠結合至該等一或多種目標RNA。在一些實施例中，該第二RNA序列包含至少兩種或至少四種調節一或多種目標RNA之表現的siRNA。在一些實施例中，該第二RNA序列包含兩種或四種或更多種調節一或多種目標RNA之表現的siRNA。
在一些實施例中，該免疫反應為人類鐸樣受體7 (TLR7)免疫反應、干擾素α/β (IFNα/β)免疫反應、人類鐸樣受體3 (TLR3)免疫反應、人類鐸樣受體8 (TLR8)免疫反應或其任何組合。在一些實施例中，根據人類鐸樣受體7 (TLR7)免疫原性分析，使該人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應。在一些實施例中，該人類TLR7免疫原性分析量測NF-κB及/或AP1之活化。在一些實施例中，該人類TLR7免疫原性分析係在HEK293細胞或其衍生物中進行。在一些實施例中，該等HEK293細胞經工程化以表現hTLR7及報導基因。在一些實施例中，報導基因為分泌型報導基因。在一些實施例中，該分泌型報導基因為分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。在一些實施例中，該報導基因係處於具有一或多個NF-κB及/或AP1結合位點之啟動子的控制下。在一些實施例中，該啟動子為IFN-β最小啟動子。在一些實施例中，與該重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之該免疫反應比與該相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之該免疫反應低至少1.5倍或至少2倍。
在一些實施例中，根據干擾素α/β (IFNα/β)免疫原性分析，使該人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應。在一些實施例中，該IFNα/β免疫原性分析量測JAK-STAT及/或ISG3之活化。在一些實施例中，IFNα/β免疫原性分析係在HEK293細胞或其衍生物中進行。在一些實施例中，該等HEK293細胞經工程化以表現人類STAT2及/或IRF9基因及報導基因。在一些實施例中，報導基因為分泌型報導基因。在一些實施例中，該分泌型報導基因為分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。在一些實施例中，該報導基因係處於具有一或多個STAT2及/或IRF9結合位點之啟動子的控制下。在一些實施例中，該啟動子為ISG54啟動子。在一些實施例中，與該重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之該免疫反應比與該相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之該免疫反應低至少1.5倍、至少2倍或至少100倍。
在一些實施例中，根據人類鐸樣受體3 (TLR3)免疫原性分析，使該人類細胞與該重組RNA構築體接觸未產生實質性免疫反應。在一些實施例中，該人類TLR3免疫原性分析量測NF-κB及/或AP1之活化。在一些實施例中，該人類TLR3免疫原性分析係在HEK293細胞或其衍生物中進行。在一些實施例中，該等HEK293細胞經工程化以表現hTLR3及報導基因。在一些實施例中，報導基因為分泌型報導基因。在一些實施例中，該分泌型報導基因為分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。在一些實施例中，該報導基因係處於具有一或多個NF-κB及/或AP1結合位點之啟動子的控制下。在一些實施例中，該啟動子為IFN-β最小啟動子。
在一些實施例中，根據人類鐸樣受體8 (TLR8)免疫原性分析，使該人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應。在一些實施例中，該人類TLR8免疫原性分析量測NF-κB、AP1及/或IRF之活化。在一些實施例中，該人類TLR8免疫原性分析係在HEK293細胞或其衍生物中進行。在一些實施例中，該等HEK293細胞經工程化以表現hTLR8及報導基因。在一些實施例中，報導基因為分泌型報導基因。在一些實施例中，該分泌型報導基因為分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。在一些實施例中，該報導基因係處於具有一或多個NF-κB及/或AP1結合位點之啟動子的控制下。在一些實施例中，該啟動子為IFN-β最小啟動子。
在一些實施例中，該免疫反應誘導促發炎細胞介素在細胞中之表現。在一些實施例中，該促發炎細胞介素包含介白素6 (IL-6)。在一些實施例中，該細胞包含人類肺上皮癌細胞(A549)或人類單核球白血病細胞(THP-1)。
在一些實施例中，該第二RNA序列包含2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA，其中該等2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA包括能夠結合至以下之siRNA：(i)不同目標RNA；(ii)相同目標RNA之不同區域；(iii)相同目標RNA之相同區域；或(iv)其任何組合。在一些實施例中，該第二RNA序列包含至少3個種類之siRNA。在一些實施例中，該第二RNA序列包含至少6個種類之siRNA。
在一些實施例中，該重組RNA構築體進一步包含一或多種連接子。在一些實施例中，該一或多種連接子中之各者具有選自由以下組成之群的結構：式(I)：X mCAACAAX n，其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數，且n為0至4之整數SEQ ID NO: 129)；及式(II)：X pTCCCX r，其中X為任何核苷酸，p為0至17之整數，且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。在一些實施例中，該一或多種連接子中之各者包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。在一些實施例中，該一或多種連接子中之各者不為(a) TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 28)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)；或(b)根據RNAfold WebServer，未形成二級結構。在一些實施例中，該一或多種連接子中之各者(a)存在於該第一RNA序列與該第二RNA序列之間，(b)存在於該第二RNA序列之2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA中之各者之間，或(c) (a)及(b)兩者。在一些實施例中，一或多種連接子中之各者包含獨立地選自由SEQ ID NO: 27、28、85-95組成之群的序列。
在一些實施例中，調節該所關注之基因的該表現。在一些實施例中，該所關注之基因之該表現在包含該重組RNA構築體之細胞中上調。在一些實施例中，由該所關注之基因編碼的蛋白質之該表現在包含該重組RNA構築體之細胞中上調。
在一些實施例中，調節該一或多種目標RNA之該表現。在一些實施例中，該一或多種目標RNA之該表現係藉由調節該一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件下調。在一些實施例中，調節該一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件未抑制該所關注之基因之該表現。
在一些實施例中，該所關注之基因選自由介白素4 (IL-4)及類胰島素生長因子1 (IGF-1)組成之群。在一些實施例中，該一或多種目標RNA包含非編碼RNA或信使RNA (mRNA)。在一些實施例中，該一或多種目標RNA中之各者為非編碼RNA。在一些實施例中，該一或多種目標RNA中之各者為mRNA。在一些實施例中，該目標RNA為編碼包含以下之蛋白質的mRNA：介白素8 (IL-8)、介白素1β (IL-1β)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)、介白素17 (IL-17)或其功能變異體。
在一些實施例中，調節該一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件結合至該一或多種目標RNA之外顯子。在一些實施例中，調節該一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件特異性結合至一種目標RNA。在一些實施例中，調節該一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件並未由該所關注之基因的內含子序列編碼或不包括該所關注之基因的內含子序列。在一些實施例中，所關注之基因在沒有RNA剪接的情況下表現。
在一些實施例中，該第一RNA序列存在於該第二RNA序列之下游或3'。在一些實施例中，該第一RNA序列存在於該第二RNA序列之上游或5'。在一些實施例中，該RNA構築體包含在該第一RNA序列之上游或5'處的內部核糖體進入位點(IRES)。
在一些實施例中，本文所描述之組合物進一步包含聚(A)尾、5'端帽或Kozak序列。在一些實施例中，該第一RNA序列及該第二RNA序列均為重組的。在一些實施例中，siRNA包含選自SEQ ID NO: 57-70之有義股序列。
在一些態樣中，本文提供用於調節兩種或更多種基因於細胞中之表現的組合物。在一些態樣中，本文提供一種醫藥組合物，其包含治療有效量之本文所描述之組合物及醫藥學上可接受之賦形劑中之任一者。在一些態樣中，本文提供一種載體，其包含編碼本文所描述之組合物中之任一者的重組聚核酸構築體。在一些態樣中，本文提供一種細胞，其包含本文所描述之組合物中之任一者或本文所描述之載體中之任一者。
在一些態樣中，本文提供一種在細胞中同時表現來自單一RNA轉錄本之siRNA及mRNA的方法，其包含將本文所描述之組合物中之任一者或本文所描述之載體中之任一者引入至該細胞中。
在一些態樣中，本文提供一種治療疾病或病狀之方法，其包含向有需要之個體投與本文所描述之組合物中之任一者或本文所描述之醫藥組合物中之任一者。
在一些實施例中，該疾病或病狀包含皮膚疾病或病狀或關節疾病或病狀。在一些實施例中，皮膚疾病或病況包含發炎性皮膚病症。在一些實施例中，發炎性皮膚病症包含牛皮癬。在一些實施例中，關節疾病或病況包含關節退化。在一些實施例中，關節退化包含椎間盤疾病(IVDD)或骨關節炎(OA)。在一些實施例中，該個體為人類。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-8 (IL-8) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IGF-1之該mRNA及(ii)的能夠結合至該IL-8 mRNA之該至少兩種siRNA中之至多一者。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-1β (IL-1β) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IGF-1之該mRNA及(ii)的能夠結合至該IL-1β mRNA之該至少兩種siRNA中之至多一者。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IL-4之該mRNA及(ii)的能夠結合至該TNF-α mRNA之該至少兩種siRNA中之至多一者。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA及介白素17 (IL-17)之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IL-4之該mRNA及(ii)的能夠結合至該TNF-α mRNA及IL-17 mRNA之該至少兩種siRNA中之至多一者。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-8 (IL-8) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含核苷酸變異體。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-8 (IL-8) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-8 (IL-8) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含N1-甲基假尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-8 (IL-8) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體包含尿苷，其中(a)該等重組RNA構築體中所包含之所有尿苷均為未經修飾或天然核苷酸；或(b)該等重組RNA構築體中所包含之該等尿苷中之至少一者為未經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-1β (IL-1β) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含核苷酸變異體。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-1β (IL-1β) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-1β (IL-1β) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含N1-甲基假尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至介白素-1β (IL-1β) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體包含尿苷，其中(a)該等重組RNA構築體中所包含之所有尿苷均為未經修飾或天然核苷酸；或(b)該等重組RNA構築體中所包含之該等尿苷中之至少一者為未經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含核苷酸變異體。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含N1-甲基假尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體包含尿苷，其中(a)該等重組RNA構築體中所包含之所有尿苷均為未經修飾或天然核苷酸；或(b)該等重組RNA構築體中所包含之該等尿苷中之至少一者為未經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA及介白素17 (IL-17)之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含核苷酸變異體。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA及介白素17 (IL-17)之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA及介白素17 (IL-17)之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體不包含N1-甲基假尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種包含重組RNA構築體之組合物，該重組RNA構築體包含：(i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及(ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA及介白素17 (IL-17)之至少兩種小干擾RNA (siRNA)，其中該重組RNA構築體包含尿苷，其中(a)該等重組RNA構築體中所包含之所有尿苷均為未經修飾或天然核苷酸；或(b)該等重組RNA構築體中所包含之該等尿苷中之至少一者為未經修飾之尿苷。
在一些態樣中，本文提供一種組合物，其包含重組聚核酸構築體，該構築體包含選自由SEQ ID NO: 1-24、42、125、97-108、121-122及127-128組成之群之核酸序列。
在較佳實施例中，由第一RNA序列編碼的所關注之基因不為介白素2 (IL-2)且由至少兩種第二RNA序列中所包含之遺傳元件調節的一或多種目標RNA不為血管內皮生長因子A (VEGFA)、VEGFA之同功型、MHC類I鏈相關序列A (MICA)或MHC類I鏈相關序列B (MICB)。
在一較佳實施例中，由第一RNA序列編碼的所關注之基因不為介白素2 (IL-2)、其片段或其功能變異體且由至少兩種第二RNA序列中所包含之遺傳元件調節的一或多種目標RNA不為血管內皮生長因子A (VEGFA)、VEGFA之同功型、MHC類I鏈相關序列A (MICA)、MHC類I鏈相關序列B (MICB)、其片段或其功能變異體。 實例
此等實例僅為了說明目的而提供且不限制本文所提供之申請專利範圍之範疇。
實例 1 ：構築體設計、序列及合成
構築體設計
siRNA及所關注之基因兩者同時由由活體外轉錄產生之單一轉錄本表現( 表 1；SEQ ID NO: 1-12及97-108)。IL-4及IGF-1編碼序列源於智人且對於IL-4 (hIL-4：NP_000580.1；SEQ ID NO: 31及32；Cpd.4-Cpd.9)及IGF-1構築體中之一些(Cpd.10-Cpd.13；IGF-1：NP_000609.1)，未引入所得胺基酸序列之變化。為了增加自經轉染細胞中分泌mRNA誘導之IGF-1 (NP_000609.1)，內源性IGF-1前域(訊息肽；SEQ ID NO: 33及34)在Cpd.1至Cpd.4 mRNA構築體中由BDNF (NP_733931.1；SEQ ID NO: 35及36)訊息肽(BDNF-pro-IGF-1)交換。此外，構築體含有編碼具有70個胺基酸(SEQ ID NO: 35及36)之成熟人類IGF-1之完整編碼序列的序列。未將C端E-域添加至構築體中。針對IL-8 (NM_000584.3；SEQ ID NO: 37)、IL-1β (NM_000576.2；SEQ ID NO: 38)、IL-17 (NM_002190.2；SEQ ID NO: 39)及TNF-α (NM_000594.3；SEQ ID NO: 40)之siRNA目標序列源於智人且對引入之序列無變化。Turbo GFP序列衍生自橈腳類羽小角水蚤(SEQ ID NO: 41)。為了比較具有siRNA結構及不具有siRNA結構之mRNA，使用具有經最佳化訊息肽之IL-4分子(SEQ ID NO: 42及43)。
聚核酸構築體可包含Kozak序列(5' GCCACC 3'；SEQ ID NO:25)。另外，聚核酸構築體可包含所關注之基因序列上游之T7啟動子序列(5' TAATACGACTCACTATA 3'；SEQ ID NO:26)，以便於RNA聚合酶結合且成功活體外轉錄單一轉錄本中之所關注之基因及siRNA兩者。可使用替代啟動子，例如SP6、T3、P60、Syn5及KP34。使用經設計以側接T7啟動子、所關注之基因及siRNA序列之引子，藉由PCR產生轉錄模板以產生mRNA。反向引子包括一段胸苷(T)鹼基(120) (SEQ ID NO: 134)，以將120 bp長之聚(A)尾(SEQ ID NO: 133)添加至mRNA中。一些聚核苷酸或RNA構築體經工程化以包括以下中所描述之siRNA設計：Cheng,等人. (2018) J. Mater. Chem. B., 6, 4638-4644，且進一步包含一或多種具有連接至不同RNA片段之連接子的siRNA序列之上游或下游處之所關注之基因(所關注之基因mRNA連接至siRNA (SEQ ID NO: 27)，或siRNA連接至siRNA (SEQ ID NO:28))。重組構築體可編碼或包含超過一個靶向相同或不同目標mRNA之siRNA序列。類似地，構築體可包含兩個或更多個所關注之基因的核酸序列。
構築體合成
如 表 1中所示之構築體(化合物ID編號Cpd.1-Cpd.14)藉由GeneArt，Germany (Thermo Fisher Scientific)在pMA-RQ質體-主鏈載體中合成，該等構築體含有具有密碼子最佳化(GeneOptimizer演算法)之T7 RNA聚合酶啟動子。 表 1展示對於各化合物(Cpd.)，待經由結合至相應mRNA (siRNA目標)之siRNA下調的蛋白質、化合物中之siRNA位置、化合物中之siRNA數目、所關注之基因及對應病症。各構築體之序列展示於 表 2中且如下表所指示標註(SEQ ID NO: 1-12、42、125、97-108及121-122)。各構築體之質體-主鏈序列展示於 表 3中且化合物序列呈粗體且加下劃線(SEQ ID NO: 13-24及127-128)。
表 1.化合物之概述
化合物ID siRNA 目標 siRNA 位置 siRNA 之數值 蛋白質目標 病症
未經修飾之1 * IL-8 5' 1x IGF-1 OA、IVDD
經修飾之1 **
未經修飾之2 * IL-8 5' 3x IGF-1 OA、IVDD
經修飾之2 **
未經修飾之3 * IL-1β 5' 3x IGF-1 OA、IVDD
經修飾之3 **
未經修飾之4 * TNF-α/IL-17 5' 6x IL-4 牛皮癬
經修飾之4 **
未經修飾之5 * TNF-α 5' 3x IL-4 牛皮癬
經修飾之5 **
未經修飾之6 * TNF-α 3' 3x IL-4 牛皮癬
經修飾之6 **
未經修飾之7 * TNF-α 5' 1x IL-4 牛皮癬
經修飾之7 **
未經修飾之8 * TNF-α 3' 1x IL-4 牛皮癬
經修飾之8 **
未經修飾之9 *# TNF-α 3' 3x IL-4 牛皮癬
經修飾之9 **#
未經修飾之10 * Turbo GFP 3' 1x IGF-1 NA
經修飾之10 **
未經修飾之11 * Turbo GFP 3' 2x IGF-1 NA
經修飾之11 **
未經修飾之12 * Turbo GFP 3' 3x IGF-1 NA
經修飾之12 **
未經修飾之13 * NA NA NA IGF-1 NA
經修飾之13 **
未經修飾之14 * NA NA NA IL-4 NA
經修飾之14 **
*未經修飾：所有尿苷均為未經修飾之尿苷且所有其他核苷酸為未經修飾或天然核苷酸，**經修飾：所有尿苷均為經修飾(N 1-甲基假尿苷)且所有其他核苷酸為未經修飾或天然核苷酸，#：A2連接子，IL-8：介白素-8，IGF-1：類胰島素生長因子-1，OA：骨關節炎；IVDD：椎間盤疾病；IL-1β介白素1β；TNF-α：腫瘤壞死因子-α，IL-17：介白素-17；IL-4：介白素-4，Turbo GFP：Turbo綠色螢光蛋白(由橈腳類羽小角水蚤衍生)。
表 2.化合物之序列
SEQ ID NO 化合物 序列 (5' 至 3')
1 未經修飾之化合物1 ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA CAAGGAAGTGCTAAAGAAACTTG TTCTTTAGCACTTCCTTG TTTATCTTAGAGGCATATCCCT GCCACC ATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCCGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGCTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAATTTATCTTAGAGGCATATCCCT
2 未經修飾之化合物2 ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA CAAGGAGTGCTAAAGAAACTTG TTCTTTAGCACTCCTTG TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GAGAGTGATTGAGAGTGGACTTG CCACTCTCAATCACTCTC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GAGAGCTCTGTCTGGACCACTTG GGTCCAGACAGAGCTCTC TTTATCTTAGAGGCATATCCCT GCCACC ATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCCGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGCTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAATTTATCTTAGAGGCATATCCCT
3 未經修飾之化合物3 ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA GAAAGATGATAAGCCCACTCTACTTG AGAGTGGGCTTATCATCTTTC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GGTGATGTCTGGTCCATATGAACTTG TCATATGGACCAGACATCACC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GATGATAAGCCCACTCTAACTTG TAGAGTGGGCTTATCATC TTTATCTTAGAGGCATATCCCT GCCACC ATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCCGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGCTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAATTTATCTTAGAGGCATATCCCT
4 未經修飾之化合物4 ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA GGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTG TTATCTCTCAGCTCCACGCC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GGGCCTGTACCTCATCTACTACTTG AGTAGATGAGGTACAGGCCC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GGTATGAGCCCATCTATCTACTTG AGATAGATGGGCTCATACC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GCAATGAGGACCCTGAGAGATACTTG ATCTCTCAGGGTCCTCATTGC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GCTGATGGGAACGTGGACTAACTTG TAGTCCACGTTCCCATCAGC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GGTCCTCAGATTACTACAAACTTG TTGTAGTAATCTGAGGACC TTTATCTTAGAGGCATATCCCT GCCACC ATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGATTTATCTTAGAGGCATATCCCT
5 未經修飾之化合物5 ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA GGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTG TTATCTCTCAGCTCCACGCC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GGGCCTGTACCTCATCTACTACTTG AGTAGATGAGGTACAGGCCC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GGTATGAGCCCATCTATCTACTTG AGATAGATGGGCTCATACC TTTATCTTAGAGGCATATCCCT GCCACC ATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGATTTATCTTAGAGGCATATCCCT
6 未經修飾之化合物6 GCCACC ATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA GGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTG TTATCTCTCAGCTCCACGCC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GGGCCTGTACCTCATCTACTACTTG AGTAGATGAGGTACAGGCCC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA GGTATGAGCCCATCTATCTACTTG AGATAGATGGGCTCATACC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT
7 未經修飾之化合物7 ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA GGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTG TTATCTCTCAGCTCCACGCC TTTATCTTAGAGGCATATCCCT GCCACC ATGGGCCTGACATCTCAGTTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTAGTTTATCTTAGAGGCATATCCCT
8 未經修飾之化合物8 GCCACC ATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGAATAGTGAGTCGTATTA ACGTACCAACAA GGCG TGGAGCTGAGAGATAAACTTG TTATCTCTCAGCTCCACGCC TTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT
9 未經修飾之化合物9 GCCACC ATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGAACAACAA GGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTG TTATCTCTCAGCTCCACGCC ACAACAA GGGCCTGTACCTCATCTACTACTTG AGTAGATGAGGTACAGGCCC ACAACAA GGTATGAGCCCATCTATCTACTTG AGATAGATGGGCTCATACC ACAACAATTTATCTTAGAGGCATATCCCT
10 未經修飾之化合物10 GCCACC ATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA CAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTG TTGGTGCTCTTCATCTTGTTG TTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT
11 未經修飾之化合物11 GCCACC ATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA CAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTG TTGGTGCTCTTCATCTTGTTG TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA CAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTG TTGGTGCTCTTCATCTTGTTG TTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT
12 未經修飾之化合物12 GCCACC ATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA CAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTG TTGGTGCTCTTCATCTTGTTG TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA CAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTG TTGGTGCTCTTCATCTTGTTG TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA CAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTG TTGGTGCTCTTCATCTTGTTG TTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT
125 未經修飾之化合物13 GCCACC ATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAA
42 未經修飾之化合物14 GCCACC ATGTTGCTGCTGCCTCTGTTCTTCCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGA
粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列
表 3.質體序列
SEQ ID NO 化合物編號 序列 (5 ' à 3 ' 方向 )
13 pMA-RQ中之化合物1 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAACAAGGAAGTGCTAAAGAAACTTGTTCTTTAGCACTTCCTTGTTTATCTTAGAGGCATATCCCTGCCACCATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCCGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGCTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAATTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
14 pMA-RQ中之化合物2 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAACAAGGAGTGCTAAAGAAACTTGTTCTTTAGCACTCCTTGTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGAGAGTGATTGAGAGTGGACTTGCCACTCTCAATCACTCTCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGAGAGCTCTGTCTGGACCACTTGGGTCCAGACAGAGCTCTCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTGCCACCATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCCGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGCTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAATTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
15 pMA-RQ中之化合物3 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAAGAAAGATGATAAGCCCACTCTACTTGAGAGTGGGCTTATCATCTTTCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGGTGATGTCTGGTCCATATGAACTTGTCATATGGACCAGACATCACCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGATGATAAGCCCACTCTAACTTGTAGAGTGGGCTTATCATCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTGCCACCATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCCGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGCTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAGTTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
16 pMA-RQ中之化合物4 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAAGGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTGTTATCTCTCAGCTCCACGCCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGGGCCTGTACCTCATCTACTACTTGAGTAGATGAGGTACAGGCCCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGGTATGAGCCCATCTATCTACTTGAGATAGATGGGCTCATACCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGCAATGAGGACCCTGAGAGATACTTGATCTCTCAGGGTCCTCATTGCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGCTGATGGGAACGTGGACTAACTTGTAGTCCACGTTCCCATCAGCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGGTCCTCAGATTACTACAAACTTGTTGTAGTAATCTGAGGACCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTGCCACCATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGATTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
17 pMA-RQ中之化合物5 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAAGGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTGTTATCTCTCAGCTCCACGCCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGGGCCTGTACCTCATCTACTACTTGAGTAGATGAGGTACAGGCCCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGGTATGAGCCCATCTATCTACTTGAGATAGATGGGCTCATACCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTGCCACCATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGATTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
18 pMA-RQ中之化合物6 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT GCCACCATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAAGGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTGTTATCTCTCAGCTCCACGCCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGGGCCTGTACCTCATCTACTACTTGAGTAGATGAGGTACAGGCCCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAAGGTATGAGCCCATCTATCTACTTGAGATAGATGGGCTCA TACCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCTCTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
19 pMA-RQ中之化合物7 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAAGGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTGTTATCTCTCAGCTCCACGCCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTGCCACCATGGGCCTGACATCTCAGTTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTAGTTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
20 pMA-RQ中之化合物8 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT GCCACCATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAAGGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTGTTATCTCTCAGCTCCACGCCTTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
21 pMA-RQ中之化合物9 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT GCCACCATGGGACTGACATCTCAACTGCTGCCTCCACTGTTCTTTCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGAACAACAAGGCGTGGAGCTGAGAGATAAACTTGTTATCTCTCAGCTCCACGCCACAACAAGGGCCTGTACCTCATCTACTACTTGAGTAGATGAGGTACAGGCCCACAACAAGGTATGAGCCCATCTATCTACTTGAGATAGATGGGCTCATACCACAACAATTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
22 pMA-RQ中之化合物10 CTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT GCCACCATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAACAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTGTTGGTGCTCTTCATCTTGTTGTTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
23 pMA-RQ中之化合物11 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT GCCACCATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAACAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTGTTGGTGCTCTTCATCTTGTTGTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAACAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTGTTGGTGCTCTTCATCTTGTTGTTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
24 pMA-RQ中之化合物12 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCGCAT GCCACCATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAAATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAACAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTGTTGGTGCTCTTCATCTTGTTGTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAACAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTGTTGGTGCTCTTCATCTTGTTGTTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAACAACAAGATGAAGAGCACCAAACTTGTTGGTGCTCTTCATCTTGTTGTTTATCTTAGAGGCATATCCCTTTTATCTTAGAGGCATATCCCT CTGGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
127 pMA-T中之化合物13 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCACGTGTCTTGTCCAGAGCTCGGATCC GCCACCATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATC T GGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAA GAATTCGGTACCTGGAGCACAAGACTGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
128 pMA-T中之化合物14 CTAAATTGTAAGCGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGGCCGCTACAGGGCGCTCCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGTTTCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGACGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGCGGAAGGCCGTCAAGGCCACGTGTCTTGTCCAGAGCTC GCCACCATGTTGCTGCTGCCTCTGTTCTTCCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGA GGTACCTGGAGCACAAGACTGGCCTCATGGGCCTTCCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAACATGGTCATAGCTGTTTCCTTGCGTATTGGGCGCTCTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAATCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCCATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGAGGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAACCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAGCCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGCCTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTAGTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACAGGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAGCTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGTTGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTCAGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGCACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTCTGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTATGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAATACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAAAACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTGAGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTCAGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAGGAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGAAATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCAC
粗體及底線 = 化合物序列
實例 2: RNA 構築體之活體外轉錄及資料分析
基於PCR之活體外轉錄係使用編碼Cpd.1-Cpd.14之pMA-RQ/pMA-T載體進行以產生mRNA。藉由PCR使用 表 4(SEQ ID NO: 29及30)中之正向及反向引子產生轉錄模板。在模板中編碼聚(A)尾，產生120 bp之聚(A)尾(SEQ ID NO: 133)。鑒於siRNA側接區域之重複序列，視需要進行最佳化以實現特異性擴增。最佳化包括：1)降低載體之質體DNA的量；2)改變DNA聚合酶(Q5熱啟動聚合酶，新英格蘭生物實驗室)；3)減少各PCR循環之變性時間(30秒至10秒)及擴展時間(45秒/kb至10秒/kb)；4)增加各PCR循環之黏著(10秒至30秒)；及5)增加各PCR循環之最終擴展時間(多達15分鐘)。另外，為了避免非特異性引子結合，在冰上製備PCR反應混合物，包括解凍試劑，且將PCR循環數目減少至25。
對於活體外轉錄，在37℃下使用T7 RNA聚合酶(MEGAscript套組，Thermo Fisher Scientific)持續2小時。合成RNA經100% N1-甲基假-UTP化學修飾(經修飾之RNA)以降低免疫原性，或使用標準UTP未經修飾(未經修飾之RNA)。所有合成之RNA在5'端處經抗反向CAP類似物(ARCA；[m 2 7,3'-OG(5')ppp(5')G])共轉錄封端(Jena Bioscience)。在活體外轉錄之後，RNA使用MEGAclear套組(Thermo Fisher Scientific)進行管柱純化且使用Nanophotometer-N60 (Implen)進行量化。
表 4. 用於模板產生之引子
SEQ ID NO 引子方向 序列(5' 至3')
29 正向 GCTGCAAGGCGATTAAGTTG
30 反向 U(2'OMe)U(2'OMe)U(2'OMe)TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCAGCTATGACCATGTTAATGCAG
使用活體外轉錄，Cpd.1- Cpd.14作為RNA構築體產生且在用於免疫原性調節之各種活體外模型中進行測試。
構築體之分子量的確定如下進行。各構築體的分子量係根據各序列藉由測定存在於各序列中之各鹼基(A、C、G、T或N1-UTP)的總數目且使該數目乘以對應分子量(例如，A：347.2 g/mol；C 323.2 g/mol；G 363.2 g/mol；N1-UTP：338.2 g/mol)來確定。藉由針對各鹼基獲得之所有重量及817.4 g/mol之ARCA分子量之總和來確定分子量。各構築體之分子量用於計算用於各孔中轉染至奈莫耳(nM)濃度之RNA的量。SEAP活性係使用QUANTI-Blue™且在620 nm下讀取光學密度(O.D.)來評定。未經轉染之細胞的上清液用作背景對照且自所測試之樣品中獲得的O.D.值減去。使用GraphPad Prism 8 (San Diego，USA)來分析資料。使用用以比較各組之間的顯著差異之史都登氏t測試進行統計分析。
實例 3 ： 免疫原性分析
用於 NF-κB 活化 之 HEK-Blue™ hTLR7 免疫原性分析
在兩種不同細胞株中進行之具有經修飾之RNA及未經修飾之RNA的不同化合物之免疫原性表示免疫原性之主要路徑。第一分析利用HEK-Blue™ hTLR7 (Invivogen，目錄編碼：hkb-htlr7)細胞，該等細胞經設計用於藉由監測NF-κB/AP1之活化來研究人類TLR7 (hTLR7)活化。胞內體TLR7受體偵測單股RNA中之尿苷及鳥苷鹼基且引起作為抗病毒反應之免疫反應。此等細胞由人類胚胎腎臟HEK293細胞株衍生，且經工程化以在具有五個NF-κB及AP-1結合位點之IFN-β最小啟動子的控制下表現hTLR7及分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因。在TLR7活化後，產生SEAP且可用HEK-Blue™偵測細胞培養基在細胞培養物上清液中即時地確定。HEK-Blue™ hTLR7細胞之刺激藉由直接轉染經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.1至Cpd.12；0.3-0.45 µg/孔)來實現。
將HEK-Blue™ hTLR7細胞維持於補充有10% (v/v)胎牛血清(FBS)之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle's medium，DMEM，Sigma Aldrich)中。將抗生素殺稻瘟菌素(Blasticidin) (10 µg/mL)及吉歐黴素(Zeocin) (100 µg/mL)添加至培養基中以選擇含有hTLR7及SEAP轉殖基因質體之細胞。將細胞以每孔40,000個細胞接種於96孔培養盤中，且在轉染之前在37℃下、在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。使細胞在含有10% FBS之DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到＜80%之匯合度。其後，遵循製造商說明書，HEK-293細胞經0.3-0.45 µg/孔之特異性RNA構築體使用脂染胺2000 (Thermo Fisher Scientific)轉染，其中RNA與脂染胺之比率為1:1 w/v。移除100 µl DMEM，且替換為50 µl Opti-MEM及50 µl含RNA及脂染胺2000複合物之Opti-MEM (Thermo Fisher Scientific)。5小時後，將培養基更換為新鮮生長培養基，且將培養盤在37℃下、在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。R848 (雷西莫特(Resiquimod)；1 µg/ml；Invivogen，目錄編碼：tlrl-r848) hTLR7促效劑用作陽性對照。在培育24小時之後，使用QUANTI-Blue™ (20 µl細胞培養物上清液+ 180 µl QUANTI-Blue™溶液)評定SEAP活性且在620 nm下在SpectraMax i3多模式盤讀取器(Molecular Device)中讀取光學密度(O.D.)。未經轉染之樣品用作背景對照。
用以 監測 ISGF3 路徑之活化 的 HEK-Blue™ IFN-α/β 細胞 免疫原性分析
HEK-Blue™ IFN-α/β細胞(Invivogen，目錄編碼：hkb-ifnab)，其經設計用於研究JAK-STAT之活化及由I型干擾素誘導之ISG3。I型IFN之活化為IVT mRNA之初級免疫原性路徑，如藉由主要RNA感測器來偵測。HEK293細胞經工程化以穩定表現人類STAT2及IRF9基因以活化I型IFN傳訊路徑。IFN路徑之活化引起SEAP之分泌，該SEAP係處於ISG54啟動子之控制下，且其隨後在細胞培養物上清液中偵測到。將HEK-Blue™ IFN-α/β細胞維持於補充有10% (v/v)胎牛血清(FBS)之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(DMEM，Sigma Aldrich)中。將抗生素殺稻瘟菌素(10 µg/mL)及吉歐黴素(100 µg/mL)添加至培養基中以選擇含有STAT2、IRF9及SEAP轉殖基因質體之細胞。將細胞以每孔40,000個細胞接種於96孔培養盤中，且在轉染之前在37℃下、在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。使細胞在含有10% FBS之DMEM生長培養基中生長，以在刺激前達到＜80%之匯合度。HEK-Blue™ IFN-α/β細胞之刺激藉由重組IFN-α (1 µg/ml)或由20 µl HEK293細胞上清液衍生之IFN-α/β來實現，該上清液先前用經修飾及未經修飾之化合物(Cpd.1至Cpd.12；0.3-0.6 µg/孔)轉染，詳情如下。
將人類胚胎腎細胞293 (HEK293T；ATCC，CRL-1573，Rockville，MD，USA)維持於補充有10% (v/v)胎牛血清(FBS)之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(DMEM，Sigma Aldrich)中。將細胞以20,000或40,000個細胞/孔接種於96孔培養盤中且在轉染之前，在37℃下在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。使細胞在含有10% FBS之DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到＜80%之匯合度。其後，遵循製造商說明書，HEK293細胞用經修飾及未經修飾之RNA化合物(Cpd.1至Cpd.12；0.3-0.6 µg/孔)使用脂染胺2000 (Thermo Fisher Scientific)轉染，其中RNA與脂染胺之比率為1:1 w/v。移除100 µl DMEM，且替換為50 µl Opti-MEM (Thermo Fisher Scientific)及50 µl含RNA及脂染胺2000複合物之Opti-MEM。5小時後，將培養基更換為新鮮生長培養基，且將培養盤在37℃下、在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。收集細胞培養物上清液(20 µl)且添加至HEK-Blue™ IFN-α/β細胞之培養基中以經由JAK-STAT及ISG3路徑之刺激來量測所分泌之IFN活性。重組人類IFN-α10 (1 µg/ml)用作陽性對照(Invivogen，目錄編碼：rcyc-hifna10)。在培育2小時之後，使用QUANTI-Blue™ (20 µl細胞培養物上清液+ 180 µl QUANTI-Blue™溶液)評定SEAP活性且在620 nm下在SpectraMax i3多模式盤讀取器(Molecular Device)中讀取光學密度(O.D.)。未經轉染之樣品用作背景對照且自所測試之樣品中獲得的O.D.值減去。
結果
Cpd.1 至 Cpd.6 之免疫原性評估
以實驗方式證實藉由直接轉染經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.1至Cpd.6；0.3 µg/孔)實現的HEK-Blue™ hTLR7細胞中之NF-κB路徑的活化。R848 (雷西莫特；1 µg/ml)，用作陽性對照之hTLR7促效劑，誘導高位準(O.D. ＞2)之TLR7活化，如所預期。使用具有經修飾及未經修飾之Cpd.1-Cpd.6的HEK-Blue™ hTLR7細胞之免疫原性分析證明，經N1-甲基假-UTP化學修飾與其未經修飾之對應物相比顯著減少免疫活化(**， P＜0.01； 圖 2A)。具有3x siRNA (Cpd.2、Cpd.3、Cpd.5及Cpd.6)或6x siRNA (Cpd.4)之未經修飾之化合物展現出與不含siRNA之未經修飾化合物(僅IL-4 mRNA)或具有1x siRNA之Cpd. 1相比降低之hTLR7活化(***， P＜0.001； 圖 2A)。同樣地，經重組IFN-α (1 µg/ml)或由HEK293細胞之上清液衍生的IFN-α/β刺激HEK-Blue™ IFN-α/β細胞以實驗方式使用IFNα作為陽性對照證實，該等HEK293細胞之上清液先前用經修飾或未經修飾之Cpd.1-Cpd.6 (0.6 µg)轉染。根據hTLR7活化，經修飾之化合物與未經修飾之對應物相比展現出顯著降低之IFNα/β路徑活化(***， P＜0.001； 圖 2B)。分析揭露，經具有3x或6x siRNA (Cpd.2-Cpd.6)之未經修飾化合物轉染的細胞上清液與不含siRNA之未經修飾化合物或具有1x siRNA之Cpd.1相比展現出降低之JAK-STAT及ISG3路徑活化(***， P＜0.001； 圖 2B)。另外，與具有靶向存在於IL-4之上游或5'處之TNF-α之3x siRNA的Cpd. 6相比，具有靶向存在於IL-4之下游或3'處之TNF-α之3x siRNA的Cpd.5以顯著方式降低免疫原性(* ， P＜0.05； 圖 2B)。總體而言，兩種分析均證實強烈降低之活體外免疫原性，從而提供未經修飾之化合物的可能較佳之安全概況。
Cpd.6 至 Cpd.9 及 Cpd.4 之 免疫原性評估
Cpd.6-Cpd.9及Cpd.4表示具有編碼mRNA之IL-4的構築體，其中靶向TNF-α之siRNA的數目增加。Cpd.7及Cpd.8含有分別在IL-4編碼序列之5' (或上游)及3' (或下游)處之1x siRNA。Cpd.6含有具有A1連接子之3x siRNA，而Cpd.9包含具有A2連接子之3x siRNA。Cpd.4含有6x siRNA (3x靶向TNF-α且3x靶向IL-17)。使用經修飾或未經修飾之Cpd.6-Cpd.9及Cpd.4之直接轉染(0.3 µg/孔)刺激HEK-Blue™ hTLR7細胞展現出不同活化程度之NF-κB路徑，如由24小時後經轉染細胞中之SEAP分泌所量測。經修飾之化合物針對所有測試之構築體展現出降低之免疫原性(***， P＜0.001； 圖 3A)。儘管發現具有存在於IL-4編碼序列之5'處(或上游)之1x siRNA的未經修飾之Cpd.7具有高度免疫原性，但將相同siRNA重新定位至IL-4之3'處(或下游)引起NF-κB路徑活化之3倍降低(***， P＜0.001； 圖 3A)。將3x或6x siRNA添加至Cpd.6、Cpd.9及Cpd.4中消除對於RNA構築體使用經修飾鹼基以逃避hTLR7結合之需要( 圖 3A)。陽性對照R848誘導高位準之TLR7活化，如所預期。使用經具有增加數目之siRNA之未經修飾化合物(3x於Cpd.6或Cpd.9中或6x於Cpd.4中)轉染的細胞培養物上清液對HEK-Blue™ IFN-α/β細胞中之Cpd.6-Cpd.8及Cpd.4進行免疫原性評定展現出IFN傳訊位準與使用經具有1x siRNA之未經修飾化合物(Cpd.7及Cpd.8； 圖 3A)轉染的細胞培養物之上清液相比為不可偵測的。如在hTRL7活化下所觀測，化合物中之1x siRNA位置的改變(所關注之基因的5'至3')引起4倍降低之免疫原性(***， P＜0.001； 圖 3B)。總而言之，兩種分析證實siRNA複本數依賴性(例如，siRNA之數目)在未經修飾化合物之免疫活化中下降。
Cpd.10 至 Cpd.12 之免疫原性評估
Cpd.10至Cpd.12表示具有編碼mRNA之IGF-1的構築體及增加數目之(分別為1x、2x及3x)靶向Turbo GFP的siRNA。免疫刺激HEK-Blue™ hTLR7細胞中之未經修飾Cpd.10-Cpd.12展現出NF-κB路徑之活化的劑量依賴性(構築體中之siRNA數目)降低，如藉由SEAP分泌所量測，如 圖 4A中所示(***， P＜0.001)。同樣地，對HEK-Blue™ IFN-α/β細胞中之Cpd.9-Cpd.11進行免疫原性評定展現出IFN傳訊之劑量依賴性(構築體中之siRNA數目)降低( 圖 4B)。總而言之，具有至少2x siRNA之化合物適當地降低hTLR7活化位準且顯著地降低IFN傳訊。
針對 NF-κB/AP-1 活化 之 HEK-Blue™ hTLR3 免疫原性分析
組合構築體(mRNA + siRNA)具有含更短dsRNA結構之髮夾環(約20個核苷酸)且可經由偵測雙股RNA (dsRNA)模體之胞內體TLR3配位體潛在地誘導非所需免疫反應。胞內體TLR3受體偵測dsRNA且引起作為抗微生物反應之免疫反應。HEK-Blue™ hTLR3 (Invivogen，目錄編碼：hkb-htlr3)細胞，其經設計用於藉由監測NF-κB/AP1傳訊級聯之活化來研究人類TLR3 (hTLR3)之活化。此等細胞衍生自人類胚胎腎臟HEK293細胞株且經工程化以在NF-kB及AP-1誘導性啟動子控制下表現hTLR3及分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因。在TLR3活化後，產生SEAP且可用細胞培養物上清液中之HEK-Blue™偵測細胞培養基即時地確定。HEK-Blue™ hTLR3之刺激藉由直接轉染經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.13及Cpd.14；0.6 µg/孔)來實現。
將HEK-Blue™ hTLR3細胞維持於補充有10% (v/v)胎牛血清(FBS)之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(DMEM，Sigma Aldrich)中。將抗生素殺稻瘟菌素(10 µg/mL)及吉歐黴素(100 µg/mL)添加至培養基中以選擇含有hTLR3及SEAP轉殖基因質體之細胞。將細胞以每孔40,000個細胞接種於96孔培養盤中，且在轉染之前在37℃下、在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。使細胞在含有10% FBS之DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到＜80%之匯合度。其後，遵循製造商說明書，HEK-293細胞經0.6 µg/孔之特異性RNA構築體使用脂染胺2000 (Thermo Fisher Scientific)轉染，其中RNA與脂染胺之比率為1:1 w/v。移除100 µl DMEM，且替換為90 µl Opti-MEM (Thermo Fisher Scientific)及10 µl含RNA及脂染胺2000複合物之Opti-MEM。在37℃下將盤在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。聚(I:C) HMW (1 µg/ml；Invivogen，目錄編碼tlrl-pic)用作陽性對照。在培育24小時之後，使用QUANTI-Blue™ (20 µl細胞培養物上清液+ 180 µl QUANTI-Blue™溶液)評定SEAP活性且在620 nm下在SpectraMax i3多模式盤讀取器(Molecular Device)中讀取光學密度(O.D.)。未經轉染之樣品用作背景對照。
結果
Cpd.3 、 Cpd.13 及 Cpd. 14 之免疫原性評估
以實驗方式證實藉由直接轉染經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3及Cpd.13；0.6 µg/孔)實現的HEK-Blue™ hTLR3細胞中之NF-κB/AP1路徑活化。聚(I:C) HMW (1 µg/ml)，hTLR3促效劑用作陽性對照，誘導高位準之(O.D. ＞ 1.95) TLR3活化，如所預期。使用具有經修飾及未經修飾之Cpd.3、Cpd.13及Cpd.14之HEK-Blue™ hTLR3細胞進行的免疫原性分析展現出使用N1-甲基假-UTP之化學修飾與其作為針對dsRNA而非感測尿苷(U)或鳥苷(G)模體之胞內體TLR3配位體的未經修飾之對應物相比對TLR3活化不具有任何影響。具有靶向IL-1β之具有IGF-1之3x siRNA的未經修飾之Cpd.3與不含siRNA之未經修飾之化合物，Cpd.13 (***， P＜0.001； 圖 5A)或Cpd.14 (*， P＜0.05； 圖 5A)相比展現出顯著降低之hTLR3活化。類似地，未經修飾之Cpd.3中存在之3x siRNA與經修飾之Cpd.3相比減弱TLR8介導之免疫活化(***， P＜0.001； 圖 5B)。
NF-κB/AP-1/IRF 活化 之 HEK-Blue™ hTLR8 免疫原性分析
HEK-Blue™ hTLR8 (Invivogen，目錄編碼：hkb-htlr8)細胞經設計用於藉由監測NF-κB/AP1/IRF傳訊級聯之活化來研究人類TLR8 (hTLR8)之活化。胞內體TLR8受體偵測單股RNA中之尿苷及鳥苷模體且引起作為抗病毒反應之免疫反應。HEK-Blue™ hTLR8細胞由人類胚胎腎臟HEK293細胞株衍生且經工程化以在具有五個NF-κB及AP-1結合位點之IFN-β最小啟動子控制下表現hTLR8及分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因。在TLR8活化後，產生SEAP且可用細胞培養物上清液中之HEK-Blue™偵測細胞培養基即時地確定。HEK-Blue™ hTLR7之刺激藉由直接轉染經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.13及Cpd.14；0.6 µg/孔)來實現。
將HEK-Blue™ hTLR8細胞維持於補充有10% (v/v)胎牛血清(FBS)之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(DMEM，Sigma Aldrich)中。將抗生素殺稻瘟菌素(10 µg/mL)及吉歐黴素(100 µg/mL)添加至培養基中以選擇含有hTLR8及SEAP轉殖基因質體之細胞。將細胞以每孔40,000個細胞接種於96孔培養盤中，且在轉染之前在37℃下、在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。使細胞在含有10% FBS之DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到＜80%之匯合度。其後，遵循製造商說明書，HEK-293細胞經0.6 µg/孔之特異性RNA構築體使用脂染胺2000 (Thermo Fisher Scientific)轉染，其中RNA與脂染胺之比率為1:1 w/v。移除100 µl DMEM，且替換為90 µl Opti-MEM (Thermo Fisher Scientific)及10 µl含RNA及脂染胺2000複合物之Opti-MEM。在37℃下將盤在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。R848 (雷西莫特；1 µg/ml；Invivogen，目錄編碼：tlrl-r848) hTLR7/8促效劑用作陽性對照。在培育24小時之後，使用QUANTI-Blue™ (20 µl細胞培養物上清液+ 180 µl QUANTI-Blue™溶液)評定SEAP活性且在620 nm下在SpectraMax i3多模式盤讀取器(Molecular Device)中讀取光學密度(O.D.)。未經轉染之樣品用作背景對照。
結果
Cpd.3 、 Cpd.13 及 Cpd. 14 之免疫原性評估
以實驗方式證實藉由直接轉染經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3及Cpd.13；0.6 µg/孔)實現的HEK-Blue™ hTLR8細胞中之NF-κB/AP1/IRF路徑活化。R848 (1 µg/ml)，hTLR7/8促效劑用作陽性對照，誘導適度含量之TLR8活化(O.D. ＞ 0.45)，不同於HEK-Blue™ hTLR7細胞。使用具有經修飾及未經修飾之Cpd.3、Cpd.13及Cpd.14之HEK-Blue™ hTLR8細胞進行的免疫原性分析展現出使用N1-甲基假-UTP之化學修飾與其未經修飾之對應物相比對TLR8活化無影響。儘管已知TLR8配位體偵測尿苷(U)模體，但對於經修飾及未經修飾之構築體，TLR8活化無差異。此可藉由以下報導解釋：觀測到TLR8之結合親和力在HEK-Blue™ hTLR8細胞中具有鳥苷模體特異性(Hu等人., Bioorg Med Chem. 2018 January 01; 26(1): 77-83)。具有靶向IL-1β之具有IGF-1之3x siRNA的未經修飾之Cpd.3與不含siRNA之未經修飾之化合物，亦即Cpd.13 (***，P＜0.001； 圖 5B)或Cpd.14 (*，P＜0.05； 圖 5B)相比展現出顯著降低之hTLR8活化。類似地，未經修飾之Cpd.3中存在之3x siRNA與經修飾之Cpd.3相比減弱TLR8介導之免疫活化(***，P＜0.001； 圖 5B)。
藉由刺激 A549 細胞中內源性 IL-6 表現之免疫原性評定
人類肺上皮癌細胞(A549；Sigma-Aldrich目錄號6012804)細胞用於藉由監測在直接轉染mRNA之後介白素6 (IL-6)之內源性表現研究針對活體外轉錄之mRNA (IVT mRNA)的免疫反應。針對IVT mRNA刺激免疫原性係藉由RNA感測器(例如，TLR、PKR)觸發且誘導包括IL-6之若干促發炎細胞介素之表現，從而在針對IVT mRNA之免疫活化中起主要作用。將A549細胞維持於補充有10% (v/v)胎牛血清(FBS，VWR，目錄號97068-091)之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基較高葡萄糖(DMEM，Sigma-Aldrich)中。A549細胞以10,000個細胞/孔接種於96孔培養盤中且在轉染之前在37℃下在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。使細胞在含有10% FBS之DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到＜70%之匯合度。其後，遵循製造商說明書，使用脂染胺2000 (Invitrogen)用特定mRNA構築體(0.3 µg)對A549細胞進行轉染，其中mRNA與脂染胺之比率為1:1 w/v。移除100 µl DMEM，且向各孔中添加50 µl Opti-MEM (www.thermofisher.com)，接著添加50 µl含mRNA及脂染胺2000複合物之Opti-MEM。培育5小時後，將培養基更換為新鮮生長培養基，且將培養盤在37℃下、在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。收集細胞培養物上清液以使用ELISA (ThermoFisher目錄號887066)量測所分泌之人類IL-6。
結果
Cpd.3 、 Cpd.4 、 Cpd.13 及 Cpd. 14 之免疫原性評估
以實驗方式證實藉由直接轉染經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13及Cpd.14；0.3 µg/孔)在A549細胞中之IL-6的內源性表現。在經修飾或未修飾之RNA化合物轉染的細胞之間的IL-6含量之明顯差異( 圖 6A)展現出使用N1-甲基假-UTP 之化學修飾減少A549細胞中之免疫活化。對於經修飾之化合物，相對於不具有siRNA之對應化合物，siRNA結構之存在(3x於Cpd.3中；6x於Cpd.4中)顯著進一步降低IL-6含量(參見例如，Cpd.3相比於Cpd.13 (**，＜0.01)；Cpd.4相比於Cpd.14 (***，＜0.001))。注意到相對於存在或不存在siRNA，未經修飾之化合物的IL-6含量顯著降低。具有靶向IL-1β之具有IGF-1之3x siRNA的未經修飾之Cpd.3與包含不具有siRNA之IGF-1的未經修飾之化合物，亦即Cpd.13 (***，P＜0.001； 圖 6A)相比展現出顯著降低之IL-6含量。類似地，在未經修飾之Cpd.4中存在之6x siRNA (靶向TNF-α之3x及靶向IL-17之3x)以及IL-4 mRNA與包含不具有siRNA之編碼IL-4之mRNA的未經修飾之Cpd.14相比展現出降低之IL-6含量(***， P＜0.001； 圖 6A)。未經修飾之Cpd.3 (3x)及Cpd.4 (6x)的比較展現出增加之siRNA降低IL-6刺激(*， P＜0.05； 圖 6A)。
藉由刺激 THP-1 細胞中內源性 IL-6 表現之免疫原性評定
人類單核球白血病細胞株THP-1 (Sigma-Aldrich，目錄號88081201)用於藉由監測在直接轉染mRNA之後IL-6之內源性表現研究針對經活體外轉錄之mRNA (IVT mRNA)的免疫反應 。針對IVT mRNA刺激免疫原性係藉由RNA感測器(例如，TLR、PKR)觸發且誘導包括IL-6之若干促發炎細胞介素之表現，從而在針對IVT mRNA之免疫活化中起主要作用。將THP-1細胞維持於生長培養基(補充有10% FBS及2 mM麩醯胺之RPMI 1640)中。將細胞以40,000個THP-1細胞接種於96孔細胞培養盤中且使用脂染胺MessengerMax (Thermo Fisher Scientific)經特異性mRNA (0.3 µg/孔)反向轉染。在37℃下將盤在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。轉染後，收集細胞培養物上清液且使用ELISA (ThermoFisher目錄號887066)定量人類IL-6。
結果
Cpd.3 、 Cpd.4 、 Cpd.13 及 Cpd. 14 之免疫原性評估
以實驗方式證實藉由直接轉染經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13及Cpd.14；0.3 µg/孔)在THP-1細胞中之IL-6的內源性表現，然而該等表現量與A549細胞中之表現量相比較低。與A549細胞類似，在經修飾及未經修飾之RNA化合物之間注意到IL-6含量之差異( 圖 7A)。觀測到相對於存在或不存在siRNA，未經修飾之化合物的IL-6含量顯著降低。具有靶向IL-1β之具有IGF-1之3x siRNA的未經修飾之Cpd.3與僅包含IGF-1的未經修飾之化合物，亦即Cpd.13 (***，P＜0.001； 圖 7A)相比展現出顯著降低之IL-6含量。類似地，在未經修飾之Cpd.4中存在之6x siRNA (靶向TNF-α之3x及靶向IL-17之3x)以及IL-4 mRNA與包含不具有siRNA之編碼IL-4之mRNA的未經修飾之Cpd.14相比展現出降低之IL-6含量(***，P＜0.001； 圖 7A)。
針對 STAT-3 活化 之 HEK-Blue™ IL-6 報導分析
在A549及THP-1活體外模型中之所分泌之IL-6的功能活性係在HEK-Blue™ IL-6報導細胞(Invivogen，目錄編碼：hkb-il6)中測試，該等報導細胞經設計用於藉由監測STAT-3路徑之活化研究IL-6傳訊。HEK-Blue™ IL-6細胞由人類胚胎腎臟HEK293細胞株衍生且經工程化以表現IL-6受體(IL-6R)及轉錄之訊息轉導活化劑3 (STAT3)。IL-6傳訊藉由在融合至四個STAT3結合位點之IFN-β最小啟動子之控制下表現分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)的報導基因來偵測。在IL-6刺激之後，HEK-Blue™ IL-6細胞引發STAT3之活化且SEAP之後續分泌可經由在細胞培養物上清液中之HEK-Blue™偵測細胞培養基即時地確定。HEK-Blue™ IL-6細胞之刺激藉由等效體積之由A549細胞或已經Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13或Cpd.14 (0.3 µg/孔)轉染之THP-1細胞之細胞培養物上清液衍生的(20 µl) IL-6來實現，詳情如下。
將HEK-Blue™ IL-6細胞維持於補充有10% (v/v)胎牛血清(FBS)之達爾伯克氏改良伊格爾氏培養基(DMEM，Sigma Aldrich)中。將抗生素HEK-Blue™選擇(用培養基1:250稀釋)添加至培養基中，以選擇含有IL6R、STAT3及SEAP轉殖基因質體之細胞。將細胞以每孔40,000個細胞接種於96孔培養盤中，且在轉染之前在37℃下、在含有5% CO 2之潮濕氛圍中培育24小時。使細胞在含有10% FBS之DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到＜80%之匯合度。收集等效體積之來自A549及已經Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13或Cpd.14 (0.3 µg/孔)轉染之THP-1細胞的(20µl)細胞培養物上清液且添加至HEK-Blue™ IL-6細胞之培養基，以量測IL-6受體募集，接著STAT3路徑活化。rhIL-6 (100 ng/mL)用作陽性對照。在培育24小時之後，使用QUANTI-Blue™ (20 µl細胞培養物上清液+ 180 µl QUANTI-Blue™溶液)評定SEAP活性且在620 nm下在SpectraMax i3多模式盤讀取器(Molecular Device)中讀取光學密度(O.D.)。未經轉染之樣品用作背景對照且自所測試之樣品中獲得的O.D.值減去。
結果
Cpd.3 、 Cpd.4 、 Cpd.13 及 Cpd. 14 之免疫原性評估
在所有樣品中觀測到使用由A549或已經修飾或未經修飾Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13或Cpd.14之轉染的THP-1細胞之細胞培養物上清液衍生的rhIL-6或IL-6刺激HEK-Blue™ IL-6細胞作為SEAP產生起作用( 圖 6B 及圖 7B)。如所預期，自A549及用經N1-甲基假尿苷修飾之RNA化合物轉染的THP-1細胞衍生之上清液誘導與自A549及用未經修飾之化合物轉染的THP-1細胞衍生之上清液相比更低的STAT-3傳訊( 圖 6B 及圖 7B)。自A549及用具有靶向IL-1β之具有IGF-1 mRNA之3x siRNA的未經修飾之Cpd.3轉染的THP-1細胞衍生之上清液展現出與自A549及用僅包含IGF-1 mRNA之未經修飾之化合物，亦即Cpd.13轉染的THP-1細胞衍生之上清液相比顯著降低的IL-6傳訊( 圖 6B 及圖 7B)。同樣地，對於自A549及THP-1細胞兩者衍生之上清液，與包含不含siRNA之編碼IL-4之mRNA的未經修飾之Cpd.14相比，未經修飾Cpd.4中存在之6x siRNA (靶向TNF-α之3x及靶向IL-17之3x)以及IL-4 mRNA展現出降低的IL-6介導之STAT-3活化(***， P＜0.001； 圖 6B 及圖 7B)。未經修飾之Cpd.3 (3x)及Cpd.4 (6x)比較展現出siRNA之數目3x增加至6x，從而降低IL-6介導之免疫活化(A549細胞，*， P＜0.05； 圖 6B ；THP-1細胞，**， P＜0.01； 圖 7B)。
本文中描述之實例及實施例僅為達成說明之目的且熟習此項技術者所提出之各種修改或變化將包括在本申請案之精神及範圍及隨附申請專利範圍之範疇內。 表 5. 所列出之序列表
蛋白質或核酸 序列 SEQ ID NO:
化合物1-14核酸序列 參見表2及表3 1-24、42、125及127-128
Kozak序列 GCCACC 25
T7啟動子 TAATACGACTCACTATA 26
A1-連接子：mRNA與siRNA連接子 ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA 27
A1-連接子：siRNA與siRNA連接子 TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA 28
正向引子 GCTGCAAGGCGATTAAGTTG 29
反向引子 U(2'OMe)U(2'OMe)U(2'OMe)TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCAGCTATGACCATGTTAATGCAG 30
IL-4    人類IL-4核苷酸(Genbank NM_000589.4) ATCGTTAGCTTCTCCTGATAAACTAATTGCCTCACATTGTCACTGCAAATCGACACCTATTAATGGGTCTCACCTCCCAACTGCTTCCCCCTCTGTTCTTCCTGCTAGCATGTGCCGGCAACTTTGTCCACGGACACAAGTGCGATATCACCTTACAGGAGATCATCAAAACTTTGAACAGCCTCACAGAGCAGAAGACTCTGTGCACCGAGTTGACCGTAACAGACATCTTTGCTGCCTCCAAGAACACAACTGAGAAGGAAACCTTCTGCAGGGCTGCGACTGTGCTCCGGCAGTTCTACAGCCACCATGAGAAGGACACTCGCTGCCTGGGTGCGACTGCACAGCAGTTCCACAGGCACAAGCAGCTGATCCGATTCCTGAAACGGCTCGACAGGAACCTCTGGGGCCTGGCGGGCTTGAATTCCTGTCCTGTGAAGGAAGCCAACCAGAGTACGTTGGAAAACTTCTTGGAAAGGCTAAAGACGATCATGAGAGAGAAATATTCAAAGTGTTCGAGCTGAATATTTTAATTTATGAGTTTTTGATAGCTTTATTTTTTAAGTATTTATATATTTATAACTCATCATAAAATAAAGTATATATAGAATCTAA 31
IL-4 人類IL-4胺基酸(Genbank NP_000580.1) 加下劃線：訊息序列 MGLTSQLLPPLFFLLACAGNFVHGHKCDITLQEIIKTLNSLTEQKTLCTELTVTDIFAASKNTTEKETFCRAATVLRQFYSHHEKDTRCLGATAQQFHRHKQLIRFLKRLDRNLWGLAGLNSCPVKEANQSTLENFLERLKTIMREKYSKCSS 32
IGF-1    人類IGF-1 核苷酸(Genbank NM_000618.4) ATGGGAAAAATCAGCAGTCTTCCAACCCAATTATTTAAGTGCTGCTTTTGTGATTTCTTGAAGGTGAAGATGCACACCATGTCCTCCTCGCATCTCTTCTACCTGGCGCTGTGCCTGCTCACCTTCACCAGCTCTGCCACGGCTGGACCGGAGACGCTCTGCGGGGCTGAGCTGGTGGATGCTCTTCAGTTCGTGTGTGGAGACAGGGGCTTTTATTTCAACAAGCCCACAGGGTATGGCTCCAGCAGTCGGAGGGCGCCTCAGACAGGCATCGTGGATGAGTGCTGCTTCCGGAGCTGTGATCTAAGGAGGCTGGAGATGTATTGCGCACCCCTCAAGCCTGCCAAGTCAGCTCGCTCTGTCCGTGCCCAGCGCCACACCGACATGCCCAAGACCCAGAAGGAAGTACATTTGAAGAACGCAAGTAGAGGGAGTGCAGGAAACAAGAACTACAGGATGTAG 33
IGF-1 人類IGF-1胺基酸(Genbank NP_000609.1) 加下劃線：訊息序列 MGKISSLPTQLFKCCFCDFLKVKMHTMSSSHLFYLALCLLTFTSSATAGPETLCGAELVDALQFVCGDRGFYFNKPTGYGSSSRRAPQTGIVDECCFRSCDLRRLEMYCAPLKPAKSARSVRAQRHTDMPKTQKEVHLKNASRGSAGNKNYRM       34
IGF-1 人類IGF-1 核苷酸(使用BDNF SP及不使用E-肽之最佳化IGF-1) ATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCCGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGCTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAA 35
IGF-1 人類IGF-1 胺基酸(使用BDNF SP及不使用E-肽之最佳化IGF-1) 加下劃線：訊息序列 MTILFLTMVISYFGCMKAVKMHTMSSSHLFYLALCLLTFTSSATAGPETLCGAELVDALQFVCGDRGFYFNKPTGYGSSSRRAPQTGIVDECCFRSCDLRRLEMYCAPLKPAKSA 36
人類IL-8 核苷酸(Genbank NM_000584.3) 粗體及斜體： siRNA結合區 ATGACTTCCAAGCTGGCCGTGGCTCTCTTGGCAGCCTTCCTGATTTCTGCAGCTCTGTGTGAAGGTGCAGTTTTGC CAAGGAGTGCTAAAGAA CTTAGATGTCAGTGCATAAAGACATACTCCAAACCTTTCCACCCCAAATTTATCAAAGAACT GAGAGTGATTGAGAGTGG ACCACACTGCGCCAACACAGAAATTATTGTAAAGCTTTCTGATGGAA GAGAGCTCTGTCTGGACCCCAAGGAAAACTGGGTGCAGAGGGTTGTGGAGAAGTTTTTGAAGAGGGCTGAGAATTCATAA 37
人類IL-1β 核苷酸(Genbank NM_000594.3) 粗體及斜體： siRNA結合區 第二siRNA結合位點加下劃線 ATGGCAGAAGTACCTGAGCTCGCCAGTGAAATGATGGCTTATTACAGTGGCAATGAGGATGACTTGTTCTTTGAAGCTGATGGCCCTAAACAGATGAAGTGCTCCTTCCAGGACCTGGACCTCTGCCCTCTGGATGGCGGCATCCAGCTACGAATCTCCGACCACCACTACAGCAAGGGCTTCAGGCAGGCCGCGTCAGTTGTTGTGGCCATGGACAAGCTGAGGAAGATGCTGGTTCCCTGCCCACAGACCTTCCAGGAGAATGACCTGAGCACCTTCTTTCCCTTCATCTTTGAAGAAGAACCTATCTTCTTCGACACATGGGATAACGAGGCTTATGTGCACGATGCACCTGTACGATCACTGAACTGCACGCTCCGGGACTCACAGCAAAAAAGCTT GGTGATGTCTGGTCCATATGA ACTGAAAGCTCTCCACCTCCAGGGACAGGATATGGAGCAACAAGTGGTGTTCTCCATGTCCTTTGTACAAGGAGAAGAAAGTAATGACAAAATACCTGTGGCCTTGGGCCTCAAGGAAAAGAATCTGTACCTGTCCTGCGTGTT GAAA GATGATAAGCCCACTCTA CAGCTGGAGAGTGTAGATCCCAAAAATTACCCAAAGAAGAAGATGGAAAAGCGATTTGTCTTCAACAAGATAGAAATCAATAACAAGCTGGAATTTGAGTCTGCCCAGTTCCCCAACTGGTACATCAGCACCTCTCAAGCAGAAAACATGCCCGTCTTCCTGGGAGGGACCAAAGGCGGCCAGGATATAACTGACTTCACCATGCAATTTGTGTCTTCCTAA 38
人類IL-17 核苷酸(Genbank NM_002190.2) 粗體及斜體： siRNA結合區 ATGACTCCTGGGAAGACCTCATTGGTGTCACTGCTACTGCTGCTGAGCCTGGAGGCCATAGTGAAGGCAGGAATCACAATCCCACGAAATCCAGGATGCCCAAATTCTGAGGACAAGAACTTCCCCCGGACTGTGATGGTCAACCTGAACATCCATAACCGGAATACCAATACCAATCCCAAAA GGTCCTCAGATTACTACAA CCGATCCACCTCACCTTGGAATCTCCACC GCAATGAGGACCCTGAGAGAT ATCCCTCTGTGATCTGGGAGGCAAAGTGCCGCCACTTGGGCTGCATCAAC GCTGATGGGAACGTGGACTA CCACATGAACTCTGTCCCCATCCAGCAAGAGATCCTGGTCCTGCGCAGGGAGCCTCCACACTGCCCCAACTCCTTCCGGCTGGAGAAGATACTGGTGTCCGTGGGCTGCACCTGTGTCACCCCGATTGTCCACCATGTGGCCTAA 39
人類TNF-α 核苷酸(Genbank NM_000594.3) 粗體及斜體： siRNA結合區       ATGAGCACTGAAAGCATGATCCGGGACGTGGAGCTGGCCGAGGAGGCGCTCCCCAAGAAGACAGGGGGGCCCCAGGGCTCCAGGCGGTGCTTGTTCCTCAGCCTCTTCTCCTTCCTGATCGTGGCAGGCGCCACCACGCTCTTCTGCCTGCTGCACTTTGGAGTGATCGGCCCCCAGAGGGAAGAGTTCCCCAGGGACCTCTCTCTAATCAGCCCTCTGGCCCAGGCAGTCAGATCATCTTCTCGAACCCCGAGTGACAAGCCTGTAGCCCATGTTGTAGCAAACCCTCAAGCTGAGGGGCAGCTCCAGTGGCTGAACCGCCGGGCCAATGCCCTCCTGGCCAAT GGCGTGGAGCTGAGAGATAA CCAGCTGGTGGTGCCATCAGA GGGCCTGTACCTCATCTACT CCCAGGTCCTCTTCAAGGGCCAAGGCTGCCCCTCCACCCATGTGCTCCTCACCCACACCATCAGCCGCATCGCCGTCTCCTACCAGACCAAGGTCAACCTCCTCTCTGCCATCAAGAGCCCCTGCCAGAGGGAGACCCCAGAGGGGGCTGAGGCCAAGCCCT GGTATGAGCCCATCTATCT GGGAGGGGTCTTCCAGCTGGAGAAGGGTGACCGACTCAGCGCTGAGATCAATCGGCCCGACTATCTCGACTTTGCCGAGTCTGGGCAGGTCTACTTTGGGATCATTGCCCTGTGA 40
Turbo GFP 粗體及斜體 ： siRNA結合區       ATGGAGAGCGACGAGAGCGGCCTGCCCGCCATGGAGATCGAGTGCCGCATCACCGGCACCCTGAACGGCGTGGAGTTCGAGCTGGTGGGCGGCGGAGAGGGCACCCCCGAGCAGGGCCGCATGAC CAACAAGATGAAGAGCACCAA AGGCGCCCTGACCTTCAGCCCCTACCTGCTGAGCCACGTGATGGGCTACGGCTTCTACCACTTCGGCACCTACCCCAGCGGCTACGAGAACCCCTTCCTGCACGCCATCAACAACGGCGGCTACACCAACACCCGCATCGAGAAGTACGAGGACGGCGGCGTGCTGCACGTGAGCTTCAGCTACCGCTACGAGGCCGGCCGCGTGATCGGCGACTTCAAGGTGATGGGCACCGGCTTCCCCGAGGACAGCGTGATCTTCACCGACAAGATCATCCGCAGCAACGCCACCGTGGAGCACCTGCACCCCATGGGCGATAACGATCTGGATGGCAGCTTCACCCGCACCTTCAGCCTGCGCGACGGCGGCTACTACAGCTCCGTGGT GGACAGCCACATGCACTTCAA GAGCGCCATCCACCCCAGCATCCTGCAGAACGGGGGCCCCATGTTCGCCTTCCGCCGCGTGGAGGAGGATCACAGCAACACCGAGCTGGGCATCGTGGAGTACCAGCACGCCTTCAAGACCCCGGATGCAGATGCCGGTGAAGAATAA 41
IL-4 人類IL-4 核苷酸(使用經修飾SP之最佳化IL-4) GCCACCATGTTGCTGCTGCCTCTGTTCTTCCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGCCACAAGTGCGACATCACCCTGCAAGAGATCATCAAGACCCTGAACAGCCTGACCGAGCAGAAAACCCTGTGCACCGAGCTGACCGTGACCGATATCTTTGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACATTCTGCAGAGCCGCCACCGTGCTGAGACAGTTCTACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGATGCCTGGGAGCTACAGCCCAGCAGTTCCACAGACACAAGCAGCTGATCCGGTTCCTGAAGCGGCTGGACAGAAATCTGTGGGGACTCGCCGGCCTGAATAGCTGCCCTGTGAAAGAGGCCAACCAGTCTACCCTGGAAAACTTCCTGGAACGGCTGAAAACCATCATGCGCGAGAAGTACAGCAAGTGCAGCAGCTGA 42
IL-4 具有經修飾SP之人類IL-4 加下劃線：訊息序列 MLLLPLFFLLACAGNFVHGHKCDITLQEIIKTLNSLTEQKTLCTELTVTDIFAASKNTTEKETFCRAATVLRQFYSHHEKDTRCLGATAQQFHRHKQLIRFLKRLDRNLWGLAGLNSCPVKEANQSTLENFLERLKTIMREKYSKCSS 43
IGF-1之經修飾訊息肽 MLILLLPLLLFKCFCDFLK 44
IGF-1之經修飾訊息肽-編碼序列 ATGCTGATTCTGCTGCTGCCCCTGCTGCTGTTCAAGTGCTTCTGCGACTTCCTGAAA 45
經修飾之IGF-1前域 MLFYLALCLLTFTSSATA 46
經修飾之IGF-1前域-編碼序列 ATGCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCC 47
缺失之IGF-1前域序列 VKMHTMSSSH 48
WT IGF-1訊息肽 MGKISSLPTQLFKCCFCDFLK 49
WT IGF-1訊息肽編碼序列 ATGGGAAAAATCAGCAGTCTTCCAACCCAATTATTTAAGTGCTGCTTTTGTGATTTCTTGAAG 50
IGF-1之經修飾訊息肽 MTILFLTMVISYFGCMKA 51
IGF-1之經修飾訊息肽-編碼序列 ATGACCATCCTGTTTCTGACAATGGTCATCAGCTACTTCGGCTGCATGAAGGCC 52
WT IL-4訊息肽 MGLTSQLLPPLFFLLACAGNFVHG 53
WT IL-4訊息肽編碼序列 ATGGGTCTCACCTCCCAACTGCTTCCCCCTCTGTTCTTCCTGCTAGCATGTGCCGGCAACTTTGTCCACGGA 54
IL-4之經修飾訊息肽 MLLLPLFFLLACAGNFVHG 55
IL-4之經修飾訊息肽-編碼序列 ATGTTGCTGCTGCCTCTGTTCTTCCTGCTGGCCTGCGCCGGCAATTTTGTGCACGGC 56
IL-8 siRNA有義股(Cpd.1) CAAGGAAGTGCTAAAGAA    57
IL-8 siRNA有義股(Cpd.2-1) CAAGGAGTGCTAAAGAA 58
IL-8 siRNA有義股(Cpd.2-2) GAGAGTGATTGAGAGTGG 59
IL-8 siRNA有義股(Cpd.2-3) GAGAGCTCTGTCTGGACC 60
IL-1β siRNA有義股(Cpd.3-1) GAAAGATGATAAGCCCACTCT 61
IL-1β siRNA有義股(Cpd.3-2) GGTGATGTCTGGTCCATATGA 62
IL-1β siRNA有義股(Cpd.3-3) GATGATAAGCCCACTCTA 63
TNF-α siRNA有義股(Cpd.4-1、Cpd.5-1、Cpd.6-1、Cpd.7及Cpd.8) GGCGTGGAGCTGAGAGATAA 64
TNF-α siRNA有義股(Cpd.4-2、Cpd.5-2及Cpd.6-2) GGGCCTGTACCTCATCTACT 65
TNF-α siRNA有義股(Cpd.4-3、Cpd.5-3及Cpd.6-3) GGTATGAGCCCATCTATCT 66
IL-17 siRNA有義股(Cpd.4-1) GCAATGAGGACCCTGAGAGAT 67
IL-17 siRNA有義股(Cpd.4-2) GCTGATGGGAACGTGGACTA 68
IL-17 siRNA有義股(Cpd.4-3) GGTCCTCAGATTACTACAA 69
Turbo GFP siRNA有義股(Cpd.9、Cpd.10-1、Cpd.10-2、Cpd.11-1、Cpd.11-2、Cpd.11-3) AACAAGATGAAGAGCACCAA 70
IL-8 siRNA反義股(Cpd.1) TTCTTTAGCACTTCCTTG    71
IL-8 siRNA反義股(Cpd.2-1) TTCTTTAGCACTCCTTG 72
IL-8 siRNA反義股(Cpd.2-2) CCACTCTCAATCACTCTC 73
IL-8 siRNA反義股(Cpd.2-3) GGTCCAGACAGAGCTCTC 74
IL-1β siRNA反義股(Cpd.3-1) AGAGTGGGCTTATCATCTTTC 75
IL-1β siRNA反義股(Cpd.3-2) TCATATGGACCAGACATCACC 76
IL-1β siRNA反義股(Cpd.3-3) TAGAGTGGGCTTATCATC 77
TNF-α siRNA反義股(Cpd.4-1、Cpd.5-1、Cpd.6-1、Cpd.7及Cpd.8) TTATCTCTCAGCTCCACGCC 78
TNF-α siRNA反義股(Cpd.4-2、Cpd.5-2及Cpd.6-2) AGTAGATGAGGTACAGGCCC 79
TNF-α siRNA反義股(Cpd.4-3、Cpd.5-3及Cpd.6-3) AGATAGATGGGCTCATACC 80
IL-17 siRNA反義股(Cpd.4-1) ATCTCTCAGGGTCCTCATTGC 81
IL-17 siRNA反義股(Cpd.4-2) TAGTCCACGTTCCCATCAGC 82
IL-17 siRNA反義股(Cpd.4-3) TTGTAGTAATCTGAGGACC 83
Turbo GFP siRNA反義股(Cpd.9、Cpd.10-1、Cpd.10-2、Cpd.11-1、Cpd.11-2、Cpd.11-3) TTGGTGCTCTTCATCTTGTTG 84
A2-連接子 ACAACAA 85
連接子 ATAGTGAGTCGTATTA 86
連接子 ATCCCTACGTACCAACAA 87
連接子 ACGTACCAACAA 88
連接子 TCCC 89
連接子 ACAACAATCCC 90
連接子 CAACAA 91
連接子 ATAGTGAGTCGTATTATCCC 92
連接子 ATAGTGAGTCGTATTAACAACAATCCC 93
連接子 ATAGTGAGTCGTATTAACAACAA 94
連接子 ATAGTGAGTCGTATTAATCCCTACGTACCAACAA 95
tRNA連接子 AACAAAGCACCAGTGGTCTAGTGGTAGAATAGTACCCTGCCACGGTACAGACCCGGGTTCGATTCCCGGCTGGTGCA 96
未經修飾之化合物1 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAAGGAAGUGCUAAAGAAACUUG UUCUUUAGCACUUCCUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGACCAUCCUGUUUCUGACAAUGGUCAUCAGCUACUUCGGCUGCAUGAAGGCCGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGCUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 97
未經修飾之化合物2 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAAGGAGUGCUAAAGAAACUUG UUCUUUAGCACUCCUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GAGAGUGAUUGAGAGUGGACUUG CCACUCUCAAUCACUCUC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GAGAGCUCUGUCUGGACCACUUG GGUCCAGACAGAGCUCUC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGACCAUCCUGUUUCUGACAAUGGUCAUCAGCUACUUCGGCUGCAUGAAGGCCGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGCUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 98
未經修飾之化合物3 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GAAAGAUGAUAAGCCCACUCUACUUG AGAGUGGGCUUAUCAUCUUUC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUGAUGUCUGGUCCAUAUGAACUUG UCAUAUGGACCAGACAUCACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GAUGAUAAGCCCACUCUAACUUG UAGAGUGGGCUUAUCAUC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGACCAUCCUGUUUCUGACAAUGGUCAUCAGCUACUUCGGCUGCAUGAAGGCCGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGCUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 99
未經修飾之化合物4 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGGCCUGUACCUCAUCUACUACUUG AGUAGAUGAGGUACAGGCCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUAUGAGCCCAUCUAUCUACUUG AGAUAGAUGGGCUCAUACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GCAAUGAGGACCCUGAGAGAUACUUG AUCUCUCAGGGUCCUCAUUGC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GCUGAUGGGAACGUGGACUAACUUG UAGUCCACGUUCCCAUCAGC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUCCUCAGAUUACUACAAACUUG UUGUAGUAAUCUGAGGACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 100
未經修飾之化合物5 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGGCCUGUACCUCAUCUACUACUUG AGUAGAUGAGGUACAGGCCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUAUGAGCCCAUCUAUCUACUUG AGAUAGAUGGGCUCAUACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 101
未經修飾之化合物6 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAAUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGGCCUGUACCUCAUCUACUACUUG AGUAGAUGAGGUACAGGCCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUAUGAGCCCAUCUAUCUACUUG AGAUAGAUGGGCUCAUACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 102
未經修飾之化合物7 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGGGCCUGACAUCUCAGUUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUAGUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 103
未經修飾之化合物8 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAAUAGUGAGUCGUAUUA ACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 104
未經修飾之化合物9 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAACAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC ACAACAA GGGCCUGUACCUCAUCUACUACUUG AGUAGAUGAGGUACAGGCCC ACAACAA GGUAUGAGCCCAUCUAUCUACUUG AGAUAGAUGGGCUCAUACC ACAACAAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 105
未經修飾之化合物10 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGCAAGAUUAGCAGCCUGCCUACACAGCUGUUCAAGUGCUGCUUCUGCGACUUCCUGAAAGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGUUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAAUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 106
未經修飾之化合物11 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGCAAGAUUAGCAGCCUGCCUACACAGCUGUUCAAGUGCUGCUUCUGCGACUUCCUGAAAGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGUUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAAUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 107
未經修飾之化合物12 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGCAAGAUUAGCAGCCUGCCUACACAGCUGUUCAAGUGCUGCUUCUGCGACUUCCUGAAAGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGUUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAAUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU 108
經修飾之化合物1    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAAGGAAGUGCUAAAGAAACUUG UUCUUUAGCACUUCCUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGACCAUCCUGUUUCUGACAAUGGUCAUCAGCUACUUCGGCUGCAUGAAGGCCGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGCUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 109
經修飾之化合物2 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAAGGAGUGCUAAAGAAACUUG UUCUUUAGCACUCCUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GAGAGUGAUUGAGAGUGGACUUG CCACUCUCAAUCACUCUC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GAGAGCUCUGUCUGGACCACUUG GGUCCAGACAGAGCUCUC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGACCAUCCUGUUUCUGACAAUGGUCAUCAGCUACUUCGGCUGCAUGAAGGCCGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGCUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 110
經修飾之化合物3 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GAAAGAUGAUAAGCCCACUCUACUUG AGAGUGGGCUUAUCAUCUUUC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUGAUGUCUGGUCCAUAUGAACUUG UCAUAUGGACCAGACAUCACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GAUGAUAAGCCCACUCUAACUUG UAGAGUGGGCUUAUCAUC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGACCAUCCUGUUUCUGACAAUGGUCAUCAGCUACUUCGGCUGCAUGAAGGCCGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGCUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 111
經修飾之化合物4 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGGCCUGUACCUCAUCUACUACUUG AGUAGAUGAGGUACAGGCCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUAUGAGCCCAUCUAUCUACUUG AGAUAGAUGGGCUCAUACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GCAAUGAGGACCCUGAGAGAUACUUG AUCUCUCAGGGUCCUCAUUGC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GCUGAUGGGAACGUGGACUAACUUG UAGUCCACGUUCCCAUCAGC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUCCUCAGAUUACUACAAACUUG UUGUAGUAAUCUGAGGACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 112
經修飾之化合物5 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGGCCUGUACCUCAUCUACUACUUG AGUAGAUGAGGUACAGGCCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUAUGAGCCCAUCUAUCUACUUG AGAUAGAUGGGCUCAUACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 113
經修飾之化合物6 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAAUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGGCCUGUACCUCAUCUACUACUUG AGUAGAUGAGGUACAGGCCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA GGUAUGAGCCCAUCUAUCUACUUG AGAUAGAUGGGCUCAUACC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 114
經修飾之化合物7 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 AUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU GCCACC AUGGGCCUGACAUCUCAGUUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUAGUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 115
經修飾之化合物8 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAAUAGUGAGUCGUAUUA ACGUACCAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 116
經修飾之化合物9 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGACUGACAUCUCAACUGCUGCCUCCACUGUUCUUUCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGAACAACAA GGCGUGGAGCUGAGAGAUAAACUUG UUAUCUCUCAGCUCCACGCC ACAACAA GGGCCUGUACCUCAUCUACUACUUG AGUAGAUGAGGUACAGGCCC ACAACAA GGUAUGAGCCCAUCUAUCUACUUG AGAUAGAUGGGCUCAUACC ACAACAAUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 117
經修飾之化合物10 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGCAAGAUUAGCAGCCUGCCUACACAGCUGUUCAAGUGCUGCUUCUGCGACUUCCUGAAAGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGUUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAAUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 118
經修飾之化合物11 RNA序列 粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGCAAGAUUAGCAGCCUGCCUACACAGCUGUUCAAGUGCUGCUUCUGCGACUUCCUGAAAGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGUUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAAUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 119
經修飾之化合物12 RNA序列    粗體=有義siRNA股 粗體及斜體 =反義siRNA股 加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGCAAGAUUAGCAGCCUGCCUACACAGCUGUUCAAGUGCUGCUUCUGCGACUUCCUGAAAGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGUUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAAAUAGUGAGUCGUAUUAACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUACGUACCAACAA CAACAAGAUGAAGAGCACCAAACUUG UUGGUGCUCUUCAUCUUGUUG UUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCUUUUAUCUUAGAGGCAUAUCCCU (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 120
經修飾之化合物13 RNA序列    加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGCAAGAUUAGCAGCCUGCCUACACAGCUGUUCAAGUGCUGCUUCUGCGACUUCCUGAAAGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGUUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAA 121
經修飾之化合物14 RNA序列    加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGUUGCUGCUGCCUCUGUUCUUCCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGA 122
經修飾之化合物13 RNA序列    加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGGGCAAGAUUAGCAGCCUGCCUACACAGCUGUUCAAGUGCUGCUUCUGCGACUUCCUGAAAGUGAAGAUGCACACCAUGAGCAGCAGCCACCUGUUCUAUCUGGCCCUGUGCCUGCUGACCUUUACCAGCUCUGCUACCGCCGGACCUGAGACACUUUGUGGCGCUGAACUGGUGGACGCCCUGCAGUUUGUGUGUGGCGACAGAGGCUUCUACUUCAACAAGCCCACAGGCUACGGCAGCAGCUCUAGAAGGGCUCCUCAGACCGGAAUCGUGGACGAGUGCUGUUUCAGAAGCUGCGACCUGCGGCGGCUGGAAAUGUAUUGUGCCCCUCUGAAGCCUGCCAAGAGCGCCUAA (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 123
經修飾之化合物14 RNA序列    加下劃線=訊息肽 斜體= Kozak序列 GCCACC AUGUUGCUGCUGCCUCUGUUCUUCCUGCUGGCCUGCGCCGGCAAUUUUGUGCACGGCCACAAGUGCGACAUCACCCUGCAAGAGAUCAUCAAGACCCUGAACAGCCUGACCGAGCAGAAAACCCUGUGCACCGAGCUGACCGUGACCGAUAUCUUUGCCGCCAGCAAGAACACAACCGAGAAAGAGACAUUCUGCAGAGCCGCCACCGUGCUGAGACAGUUCUACAGCCACCACGAGAAGGACACCAGAUGCCUGGGAGCUACAGCCCAGCAGUUCCACAGACACAAGCAGCUGAUCCGGUUCCUGAAGCGGCUGGACAGAAAUCUGUGGGGACUCGCCGGCCUGAAUAGCUGCCCUGUGAAAGAGGCCAACCAGUCUACCCUGGAAAACUUCCUGGAACGGCUGAAAACCAUCAUGCGCGAGAAGUACAGCAAGUGCAGCAGCUGA (所有U皆經修飾；N 1-甲基假尿苷) 124
IGF-1 人類IGF-1 核苷酸    (使用內源性SP及不使用E-肽之最佳化IGF-1) GCCACC ATGGGCAAGATTAGCAGCCTGCCTACACAGCTGTTCAAGTGCTGCTTCTGCGACTTCCTGAAAGTGAAGATGCACACCATGAGCAGCAGCCACCTGTTCTATCTGGCCCTGTGCCTGCTGACCTTTACCAGCTCTGCTACCGCCGGACCTGAGACACTTTGTGGCGCTGAACTGGTGGACGCCCTGCAGTTTGTGTGTGGCGACAGAGGCTTCTACTTCAACAAGCCCACAGGCTACGGCAGCAGCTCTAGAAGGGCTCCTCAGACCGGAATCGTGGACGAGTGCTGTTTCAGAAGCTGCGACCTGCGGCGGCTGGAAATGTATTGTGCCCCTCTGAAGCCTGCCAAGAGCGCCTAA 125
IGF-1 人類IGF-1 胺基酸    (使用BDNF SP及不使用E-肽之最佳化IGF-1)    加下劃線：訊息序列 MGKISSLPTQLFKCCFCDFLKVKMHTMSSSHLFYLALCLLTFTSSATAGPETLCGAELVDALQFVCGDRGFYFNKPTGYGSSSRRAPQTGIVDECCFRSCDLRRLEMYCAPLKPAKSA 126
本發明之特徵在隨附申請專利範圍中細緻闡述。將參考以下其中利用本發明原理之闡述說明性實施例之實施方式及附圖來獲得對本發明之特點及優點的較佳理解，該等附圖：
圖 1描繪構築體設計之示意性表示。聚核酸(例如，DNA)構築體可包含所關注之基因序列上游之T7啟動子序列用於T7 RNA聚合酶結合及兩種所關注之基因(例如，IGF-1或IL-4)及siRNA在單個RNA轉錄本中之成功活體外轉錄。所關注之基因的訊息肽突出顯示於灰色方框中。將mRNA連接至siRNA或將siRNA連接至siRNA之連接子分別用具有水平條紋之框或具有方格條紋之框指示。T7：T7啟動子，siRNA：短小干擾RNA。
圖 2A為藉由用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.1至Cpd.6；0.3 µg/孔)轉染來活化HEK-Blue™ hTLR7細胞中之NF-κB路徑的圖。X軸指示用於刺激HEK-Blue™ hTLR7細胞之不同構築體樣品。R848用作陽性對照物。不具有siRNA結構之IL-4 mRNA用於比較(經修飾及未經修飾)。未經轉染之樣品用作背景(BG)對照。Y軸指示BG校正之OD 620以展示在HEK-Blue™ hTLR7細胞中之NF-κB路徑的活化含量。資料表示每Cpd4次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。
圖 2B為藉由已用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.1至Cpd.6；0.6 µg/孔)轉染的人類胚胎腎(HEK293)細胞之上清液活化HEK-Blue™ IFN-α/β細胞中之JAK-STAT及ISG3路徑的圖。X軸指示用於刺激HEK-Blue™ IFN-α/β細胞之不同樣品。IFN-α用作陽性對照物。未經轉染之HEK293細胞的上清液用作背景對照。Y軸指示BG校正之OD 620以展示在HEK-Blue™ IFN-α/β細胞中之JAK-STAT及ISG3路徑的活化含量。資料表示每Cpd4次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。
圖 3A為藉由用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.4、Cpd.6至Cpd.9；0.3 µg/孔)轉染來活化HEK-Blue™ hTLR7細胞中之NF-κB路徑的圖。未經轉染之樣品用作背景(BG)對照。R848用作陽性對照物。X軸指示用於刺激HEK-Blue™ hTLR7細胞之不同構築體樣品且Y軸指示OD 620(BG校正)以展示NF-κB路徑之活化含量。資料表示每Cpd4次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。顯著性(***，＜0.001)藉由評定斯圖登氏t測試未經修飾之Cpd.7 (在位置5'處之1x siRNA)及未經修飾之Cpd. 8 (在位置3'處之1x siRNA)用於相對於siRNA位置之NF-κB路徑活化。
圖 3B為藉由已用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.4、Cpd.6至Cpd.9；0.3 µg/孔)轉染的人類胚胎腎(HEK293)細胞之上清液活化HEK-Blue™ IFN-α/β細胞中之JAK-STAT及ISG3路徑的圖。未經轉染之HEK293細胞的上清液用作背景(BG)對照。IFN-α用作陽性對照物。X軸指示用於刺激HEK-Blue™ IFN-α/β細胞之不同樣品且Y軸指示OD 620(BG校正)以展示JAK-STAT及ISG3路徑之活化含量。資料表示每Cpd4次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。藉由未經修飾之Cpd.7及未經修飾之Cpd.8之斯圖登氏t測試顯著性(***，＜0.001)用於相對於siRNA位置之JAK-STAT及ISG3路徑活化。
圖 4A為藉由用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.10至Cpd.12；0.45 µg/孔)轉染來活化HEK-Blue™ hTLR7細胞中之NF-κB路徑的圖。未經轉染之樣品用作背景對照。R848用作陽性對照物。X軸指示用於刺激HEK-Blue™ hTLR7細胞之不同構築體樣品且Y軸指示OD 620(BG校正)以展示NF-κB路徑之活化含量。資料表示每Cpd4次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。
圖 4B為藉由已用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.10至Cpd.12；0.6 µg/孔)轉染的人類胚胎腎(HEK293)細胞之上清液活化HEK-Blue™ IFN-α/β細胞中之JAK-STAT及ISG3路徑的圖。未經轉染之HEK293細胞的上清液用作背景對照。IFN-α用作陽性對照物。X軸指示用於刺激HEK-Blue™ IFN-α/β細胞之不同樣品且Y軸指示OD 620(背景校正)以展示JAK-STAT及ISG3路徑之活化含量。資料表示每Cpd4次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。
圖 5A為藉由用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.13及Cpd.14；0.6 µg/孔)轉染活化HEK-Blue™ hTLR3細胞中之NF-κB及AP-1傳訊路徑的圖。未經轉染之樣品用作背景(BG)對照。聚(I:C) HMW用作陽性對照物。X軸指示用於刺激HEK-Blue™ hTLR3細胞之不同構築體樣品且Y軸指示OD 620(BG校正)以展示NF-κB/AP1路徑之活化含量。資料表示每Cpd 8次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。針對相對於siRNA之存在或不存在TLR3介導之NF-κB/AP1活化，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.3相對於未經修飾之Cpd.13的斯圖登氏t測試評定。針對相對於siRNA之存在或不存在TLR3介導之NF-κB/AP1活化，顯著性(*，＜0.05)藉由未經修飾之Cpd.3相對於未經修飾之Cpd.14的斯圖登氏t測試評定。
圖 5B為藉由用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.13及Cpd.14；0.6 µg/孔)轉染活化HEK-Blue™ hTLR8細胞中之NF-κB/AP-1及IRF介導之傳訊路徑的圖。未經轉染之樣品用作背景(BG)對照。R848用作陽性對照物。X軸指示用於刺激HEK-Blue™ hTLR8細胞之不同構築體樣品且Y軸指示OD 620(BG校正)以展示NF-κB/AP1及IRF路徑之活化含量。資料表示每Cpd 8次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。針對相對於siRNA之存在或不存在TLR8介導之NF-κB/AP1/IRF活化，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.3相對於未經修飾之Cpd.13的斯圖登氏t測試評定。針對相對於siRNA之存在或不存在TLR3介導之NF-κB/AP1/IRF活化，顯著性(*，＜0.05)藉由未經修飾之Cpd.3相對於未經修飾之Cpd.14的斯圖登氏t測試評定。
圖 6A為作為針對24小時後經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13及Cpd.14；0.3 µg/孔)的轉染之免疫反應的人類高加索肺癌(A549)細胞中之IL-6表現的圖。X軸指示用於刺激A549細胞中之IL-6表現的不同構築體樣品且Y軸指示人類IL-6含量(pg/mL)。資料表示每Cpd. 8次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。針對相對於siRNA之存在或不存在作為免疫反應之IL-6表現，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.3及未經修飾之Cpd.13的斯圖登氏t測試評定。針對相對於siRNA之存在或不存在作為免疫反應之IL-6表現，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.4及未經修飾之Cpd.14的斯圖登氏t測試評定。
圖 6B為藉由由已用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13及Cpd.14；0.3 µg/孔)轉染的人類高加索肺癌(A549)細胞衍生之等效體積之(20 µl)上清液來活化HEK-Blue™人類IL-6報導細胞中之STAT-3路徑的圖。未經轉染之A549細胞的上清液(20 µl)用作背景(BG)對照。重組IL-6 (100 ng/mL)用作陽性對照。X軸指示用於刺激HEK-Blue™人類IL-6報導細胞之不同樣品且Y軸指示OD 620(BG校正)以展示STAT-3路徑之活化含量。資料表示每Cpd 8次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。針對相對於siRNA之存在或不存在STAT3路徑活化，顯著性(**，＜0.01)藉由未經修飾之Cpd.3及未經修飾之Cpd.13的斯圖登氏t測試評定。針對相對於siRNA之存在或不存在STAT3路徑活化，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.4及未經修飾之Cpd.14的斯圖登氏t測試評定。
圖 7A為作為針對24小時後經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13及Cpd.14；0.3 µg/孔)的轉染之免疫反應的人類血液單核球(THP-1)細胞中之IL-6表現的圖。X軸指示用於刺激THP-1細胞中之IL-6表現的不同構築體樣品且Y軸指示人類IL-6含量(pg/mL)。資料表示每Cpd 8次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。針對相對於siRNA之存在或不存在作為免疫反應之IL-6表現，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.3及未經修飾之Cpd.13的斯圖登氏t測試評定。針對相對於siRNA之存在或不存在作為免疫反應之IL-6表現，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.4及未經修飾之Cpd.14的斯圖登氏t測試評定。
圖 7B為藉由由已用經修飾或未經修飾之化合物(Cpd.3、Cpd.4、Cpd.13及Cpd.14；0.3 µg/孔)轉染的人類血液單核球(THP-1)細胞衍生之等效體積之(20 µl)上清液來活化HEK-Blue™人類IL-6報導細胞中之STAT-3路徑的圖。未經轉染之THP1細胞的上清液用作背景(BG)對照。重組IL-6 (100 ng/mL)用作陽性對照。X軸指示用於刺激HEK-Blue™人類IL-6報導細胞之不同樣品且Y軸指示OD 620(BG校正)以展示STAT-3路徑之活化含量。資料表示每Cpd. 8次重複實驗之平均值±平均值之標準誤差。經修飾之Cpd.呈現為黑線且未經修飾之Cpd.顯示為虛線。針對相對於siRNA之存在或不存在STAT3路徑活化，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.3及未經修飾之Cpd.13的斯圖登氏t測試評定。針對相對於siRNA之存在或不存在STAT3路徑活化，顯著性(***，＜0.001)藉由未經修飾之Cpd.4及未經修飾之Cpd.14的斯圖登氏t測試評定。 

          <![CDATA[<110> 瑞士商渥莎梅股份有限公司(VERSAMEB AG)]]>
          <![CDATA[<120> 調節基因表現之組合物及方法]]>
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          atagtgagtc gtattaacgt accaacaaca aggaagtgct aaagaaactt gttctttagc       60
          acttccttgt ttatcttaga ggcatatccc tgccaccatg accatcctgt ttctgacaat      120
          ggtcatcagc tacttcggct gcatgaaggc cgtgaagatg cacaccatga gcagcagcca      180
          cctgttctat ctggccctgt gcctgctgac ctttaccagc tctgctaccg ccggacctga      240
          gacactttgt ggcgctgaac tggtggacgc cctgcagttt gtgtgtggcg acagaggctt      300
          ctacttcaac aagcccacag gctacggcag cagctctaga agggctcctc agaccggaat      360
          cgtggacgag tgctgcttca gaagctgcga cctgcggcgg ctggaaatgt attgtgcccc      420
          tctgaagcct gccaagagcg cctaatttat cttagaggca tatccct                    467
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          <![CDATA[<400> 2]]>
          atagtgagtc gtattaacgt accaacaaca aggagtgcta aagaaacttg ttctttagca       60
          ctccttgttt atcttagagg catatcccta cgtaccaaca agagagtgat tgagagtgga      120
          cttgccactc tcaatcactc tctttatctt agaggcatat ccctacgtac caacaagaga      180
          gctctgtctg gaccacttgg gtccagacag agctctcttt atcttagagg catatccctg      240
          ccaccatgac catcctgttt ctgacaatgg tcatcagcta cttcggctgc atgaaggccg      300
          tgaagatgca caccatgagc agcagccacc tgttctatct ggccctgtgc ctgctgacct      360
          ttaccagctc tgctaccgcc ggacctgaga cactttgtgg cgctgaactg gtggacgccc      420
          tgcagtttgt gtgtggcgac agaggcttct acttcaacaa gcccacaggc tacggcagca      480
          gctctagaag ggctcctcag accggaatcg tggacgagtg ctgcttcaga agctgcgacc      540
          tgcggcggct ggaaatgtat tgtgcccctc tgaagcctgc caagagcgcc taatttatct      600
          tagaggcata tccct                                                       615
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          atagtgagtc gtattaacgt accaacaaga aagatgataa gcccactcta cttgagagtg       60
          ggcttatcat ctttctttat cttagaggca tatccctacg taccaacaag gtgatgtctg      120
          gtccatatga acttgtcata tggaccagac atcaccttta tcttagaggc atatccctac      180
          gtaccaacaa gatgataagc ccactctaac ttgtagagtg ggcttatcat ctttatctta      240
          gaggcatatc cctgccacca tgaccatcct gtttctgaca atggtcatca gctacttcgg      300
          ctgcatgaag gccgtgaaga tgcacaccat gagcagcagc cacctgttct atctggccct      360
          gtgcctgctg acctttacca gctctgctac cgccggacct gagacacttt gtggcgctga      420
          actggtggac gccctgcagt ttgtgtgtgg cgacagaggc ttctacttca acaagcccac      480
          aggctacggc agcagctcta gaagggctcc tcagaccgga atcgtggacg agtgctgctt      540
          cagaagctgc gacctgcggc ggctggaaat gtattgtgcc cctctgaagc ctgccaagag      600
          cgcctaattt atcttagagg catatccct                                        629
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          <![CDATA[<400> 4]]>
          atagtgagtc gtattaacgt accaacaagg cgtggagctg agagataaac ttgttatctc       60
          tcagctccac gcctttatct tagaggcata tccctacgta ccaacaaggg cctgtacctc      120
          atctactact tgagtagatg aggtacaggc cctttatctt agaggcatat ccctacgtac      180
          caacaaggta tgagcccatc tatctacttg agatagatgg gctcatacct ttatcttaga      240
          ggcatatccc tacgtaccaa caagcaatga ggaccctgag agatacttga tctctcaggg      300
          tcctcattgc tttatcttag aggcatatcc ctacgtacca acaagctgat gggaacgtgg      360
          actaacttgt agtccacgtt cccatcagct ttatcttaga ggcatatccc tacgtaccaa      420
          caaggtcctc agattactac aaacttgttg tagtaatctg aggaccttta tcttagaggc      480
          atatccctgc caccatggga ctgacatctc aactgctgcc tccactgttc tttctgctgg      540
          cctgcgccgg caattttgtg cacggccaca agtgcgacat caccctgcaa gagatcatca      600
          agaccctgaa cagcctgacc gagcagaaaa ccctgtgcac cgagctgacc gtgaccgata      660
          tctttgccgc cagcaagaac acaaccgaga aagagacatt ctgcagagcc gccaccgtgc      720
          tgagacagtt ctacagccac cacgagaagg acaccagatg cctgggagct acagcccagc      780
          agttccacag acacaagcag ctgatccggt tcctgaagcg gctggacaga aatctgtggg      840
          gactcgccgg cctgaatagc tgccctgtga aagaggccaa ccagtctacc ctggaaaact      900
          tcctggaacg gctgaaaacc atcatgcgcg agaagtacag caagtgcagc agctgattta      960
          tcttagaggc atatccct                                                    978
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          atagtgagtc gtattaacgt accaacaagg cgtggagctg agagataaac ttgttatctc       60
          tcagctccac gcctttatct tagaggcata tccctacgta ccaacaaggg cctgtacctc      120
          atctactact tgagtagatg aggtacaggc cctttatctt agaggcatat ccctacgtac      180
          caacaaggta tgagcccatc tatctacttg agatagatgg gctcatacct ttatcttaga      240
          ggcatatccc tgccaccatg ggactgacat ctcaactgct gcctccactg ttctttctgc      300
          tggcctgcgc cggcaatttt gtgcacggcc acaagtgcga catcaccctg caagagatca      360
          tcaagaccct gaacagcctg accgagcaga aaaccctgtg caccgagctg accgtgaccg      420
          atatctttgc cgccagcaag aacacaaccg agaaagagac attctgcaga gccgccaccg      480
          tgctgagaca gttctacagc caccacgaga aggacaccag atgcctggga gctacagccc      540
          agcagttcca cagacacaag cagctgatcc ggttcctgaa gcggctggac agaaatctgt      600
          ggggactcgc cggcctgaat agctgccctg tgaaagaggc caaccagtct accctggaaa      660
          acttcctgga acggctgaaa accatcatgc gcgagaagta cagcaagtgc agcagctgat      720
          ttatcttaga ggcatatccc t                                                741
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          gccaccatgg gactgacatc tcaactgctg cctccactgt tctttctgct ggcctgcgcc       60
          ggcaattttg tgcacggcca caagtgcgac atcaccctgc aagagatcat caagaccctg      120
          aacagcctga ccgagcagaa aaccctgtgc accgagctga ccgtgaccga tatctttgcc      180
          gccagcaaga acacaaccga gaaagagaca ttctgcagag ccgccaccgt gctgagacag      240
          ttctacagcc accacgagaa ggacaccaga tgcctgggag ctacagccca gcagttccac      300
          agacacaagc agctgatccg gttcctgaag cggctggaca gaaatctgtg gggactcgcc      360
          ggcctgaata gctgccctgt gaaagaggcc aaccagtcta ccctggaaaa cttcctggaa      420
          cggctgaaaa ccatcatgcg cgagaagtac agcaagtgca gcagctgaat agtgagtcgt      480
          attaacgtac caacaaggcg tggagctgag agataaactt gttatctctc agctccacgc      540
          ctttatctta gaggcatatc cctacgtacc aacaagggcc tgtacctcat ctactacttg      600
          agtagatgag gtacaggccc tttatcttag aggcatatcc ctacgtacca acaaggtatg      660
          agcccatcta tctacttgag atagatgggc tcataccttt atcttagagg catatccctt      720
          ttatcttaga ggcatatccc t                                                741
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          gcgacatcac cctgcaagag atcatcaaga ccctgaacag cctgaccgag cagaaaaccc      240
          tgtgcaccga gctgaccgtg accgatatct ttgccgccag caagaacaca accgagaaag      300
          agacattctg cagagccgcc accgtgctga gacagttcta cagccaccac gagaaggaca      360
          ccagatgcct gggagctaca gcccagcagt tccacagaca caagcagctg atccggttcc      420
          tgaagcggct ggacagaaat ctgtggggac tcgccggcct gaatagctgc cctgtgaaag      480
          aggccaacca gtctaccctg gaaaacttcc tggaacggct gaaaaccatc atgcgcgaga      540
          agtacagcaa gtgcagcagc tagtttatct tagaggcata tccct                      585
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
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          ttgagataga tgggctcata ccacaacaat ttatcttaga ggcatatccc t               651
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 10]]>
          gccaccatgg gcaagattag cagcctgcct acacagctgt tcaagtgctg cttctgcgac       60
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          ct                                                                     482
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          <![CDATA[<211> 563]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          gccaccatgg gcaagattag cagcctgcct acacagctgt tcaagtgctg cttctgcgac       60
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          <![CDATA[<400> 13]]>
          ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc       60
          attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga      120
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          gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg      300
          acggccagtg agcgcgacgt aatacgactc actatagggc gaattggcgg aaggccgtca      360
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          ttctttagca cttccttgtt tatcttagag gcatatccct gccaccatga ccatcctgtt      480
          tctgacaatg gtcatcagct acttcggctg catgaaggcc gtgaagatgc acaccatgag      540
          cagcagccac ctgttctatc tggccctgtg cctgctgacc tttaccagct ctgctaccgc      600
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          gcctcatggg ccttccgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg      900
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          aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc     1200
          cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct     1260
          cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg     1320
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          cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga     1440
          ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa     1500
          gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta     1560
          gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc     1620
          agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct acggggtctg     1680
          acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgagatta tcaaaaagga     1740
          tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa atcaatctaa agtatatatg     1800
          agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct taatcagtga ggcacctatc tcagcgatct     1860
          gtctatttcg ttcatccata gttgcctgac tccccgtcgt gtagataact acgatacggg     1920
          agggcttacc atctggcccc agtgctgcaa tgataccgcg agaaccacgc tcaccggctc     1980
          cagatttatc agcaataaac cagccagccg gaagggccga gcgcagaagt ggtcctgcaa     2040
          ctttatccgc ctccatccag tctattaatt gttgccggga agctagagta agtagttcgc     2100
          cagttaatag tttgcgcaac gttgttgcca ttgctacagg catcgtggtg tcacgctcgt     2160
          cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt cccaacgatc aaggcgagtt acatgatccc     2220
          ccatgttgtg caaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc gatcgttgtc agaagtaagt     2280
          tggccgcagt gttatcactc atggttatgg cagcactgca taattctctt actgtcatgc     2340
          catccgtaag atgcttttct gtgactggtg agtactcaac caagtcattc tgagaatagt     2400
          gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg cgtcaatacg ggataatacc gcgccacata     2460
          gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa aacgttcttc ggggcgaaaa ctctcaagga     2520
          tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg tgcacccaac tgatcttcag     2580
          catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa     2640
          aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt tttcaatatt     2700
          attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga     2760
          aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccac                  2808
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 2956]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc       60
          attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga      120
          gatagggttg agtggccgct acagggcgct cccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt      180
          gggaagggcg tttcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt      240
          gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg      300
          acggccagtg agcgcgacgt aatacgactc actatagggc gaattggcgg aaggccgtca      360
          aggccgcata tagtgagtcg tattaacgta ccaacaacaa ggagtgctaa agaaacttgt      420
          tctttagcac tccttgttta tcttagaggc atatccctac gtaccaacaa gagagtgatt      480
          gagagtggac ttgccactct caatcactct ctttatctta gaggcatatc cctacgtacc      540
          aacaagagag ctctgtctgg accacttggg tccagacaga gctctcttta tcttagaggc      600
          atatccctgc caccatgacc atcctgtttc tgacaatggt catcagctac ttcggctgca      660
          tgaaggccgt gaagatgcac accatgagca gcagccacct gttctatctg gccctgtgcc      720
          tgctgacctt taccagctct gctaccgccg gacctgagac actttgtggc gctgaactgg      780
          tggacgccct gcagtttgtg tgtggcgaca gaggcttcta cttcaacaag cccacaggct      840
          acggcagcag ctctagaagg gctcctcaga ccggaatcgt ggacgagtgc tgcttcagaa      900
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          ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt     1260
          cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc     1320
          ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct     1380
          tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc     1440
          gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta     1500
          tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca     1560
          gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag     1620
          tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag     1680
          ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt     1740
          agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa     1800
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          attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga     1920
          agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta     1980
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          tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa     2640
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          aggccgcatg ccaccatggg actgacatct caactgctgc ctccactgtt ctttctgctg      420
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
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          acaacaagat gaagagcacc aaacttgttg gtgctcttca tcttgttgtt tatcttagag      900
          gcatatccct acgtaccaac aacaacaaga tgaagagcac caaacttgtt ggtgctcttc      960
          atcttgttgt ttatcttaga ggcatatccc ttttatctta gaggcatatc cctctgggcc     1020
          tcatgggcct tccgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat     1080
          taacatggtc atagctgttt ccttgcgtat tgggcgctct ccgcttcctc gctcactgac     1140
          tcgctgcgct cggtcgttcg ggtaaagcct ggggtgccta atgagcaaaa ggccagcaaa     1200
          aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg     1260
          acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa     1320
          gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc     1380
          ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac     1440
          gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac     1500
          cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg     1560
          taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt     1620
          atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa     1680
          cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct     1740
          cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga     1800
          ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg     1860
          ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct     1920
          tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt     1980
          aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc     2040
          tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg     2100
          gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga accacgctca ccggctccag     2160
          atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt     2220
          tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag     2280
          ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt     2340
          ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca     2400
          tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg     2460
          ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat     2520
          ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta     2580
          tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca     2640
          gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct     2700
          taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat     2760
          cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa     2820
          agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt     2880
          gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa     2940
          ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccac                     2985
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
          gccacc                                                                   6
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 17]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          taatacgact cactata                                                      17
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 28]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          atagtgagtc gtattaacgt accaacaa                                          28
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 34]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          tttatcttag aggcatatcc ctacgtacca acaa                                   34
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成引子]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          gctgcaaggc gattaagttg                                                   20
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 143]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成引子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 組合之DNA/RNA分子之描述：合成引子]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          uuuttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt       60
          tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt      120
          cagctatgac catgttaatg cag                                              143
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 615]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          atcgttagct tctcctgata aactaattgc ctcacattgt cactgcaaat cgacacctat       60
          taatgggtct cacctcccaa ctgcttcccc ctctgttctt cctgctagca tgtgccggca      120
          actttgtcca cggacacaag tgcgatatca ccttacagga gatcatcaaa actttgaaca      180
          gcctcacaga gcagaagact ctgtgcaccg agttgaccgt aacagacatc tttgctgcct      240
          ccaagaacac aactgagaag gaaaccttct gcagggctgc gactgtgctc cggcagttct      300
          acagccacca tgagaaggac actcgctgcc tgggtgcgac tgcacagcag ttccacaggc      360
          acaagcagct gatccgattc ctgaaacggc tcgacaggaa cctctggggc ctggcgggct      420
          tgaattcctg tcctgtgaag gaagccaacc agagtacgtt ggaaaacttc ttggaaaggc      480
          taaagacgat catgagagag aaatattcaa agtgttcgag ctgaatattt taatttatga      540
          gtttttgata gctttatttt ttaagtattt atatatttat aactcatcat aaaataaagt      600
          atatatagaa tctaa                                                       615
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 153]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Met Gly Leu Thr Ser Gln Leu Leu Pro Pro Leu Phe Phe Leu Leu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Cys Ala Gly Asn Phe Val His Gly His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln 
                      20                  25                  30          
          Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys 
                  35                  40                  45              
          Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp Ile Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr 
              50                  55                  60                  
          Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Ser His His Glu Lys Asp Thr Arg Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln 
                          85                  90                  95      
          Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala 
                  115                 120                 125             
          Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met 
              130                 135                 140                 
          Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys Ser Ser 
          145                 150             
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 462]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 33]]>
          atgggaaaaa tcagcagtct tccaacccaa ttatttaagt gctgcttttg tgatttcttg       60
          aaggtgaaga tgcacaccat gtcctcctcg catctcttct acctggcgct gtgcctgctc      120
          accttcacca gctctgccac ggctggaccg gagacgctct gcggggctga gctggtggat      180
          gctcttcagt tcgtgtgtgg agacaggggc ttttatttca acaagcccac agggtatggc      240
          tccagcagtc ggagggcgcc tcagacaggc atcgtggatg agtgctgctt ccggagctgt      300
          gatctaagga ggctggagat gtattgcgca cccctcaagc ctgccaagtc agctcgctct      360
          gtccgtgccc agcgccacac cgacatgccc aagacccaga aggaagtaca tttgaagaac      420
          gcaagtagag ggagtgcagg aaacaagaac tacaggatgt ag                         462
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 153]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 34]]>
          Met Gly Lys Ile Ser Ser Leu Pro Thr Gln Leu Phe Lys Cys Cys Phe 
          1               5                   10                  15      
          Cys Asp Phe Leu Lys Val Lys Met His Thr Met Ser Ser Ser His Leu 
                      20                  25                  30          
          Phe Tyr Leu Ala Leu Cys Leu Leu Thr Phe Thr Ser Ser Ala Thr Ala 
                  35                  40                  45              
          Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 
              50                  55                  60                  
          Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 
                          85                  90                  95      
          Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 
                      100                 105                 110         
          Lys Pro Ala Lys Ser Ala Arg Ser Val Arg Ala Gln Arg His Thr Asp 
                  115                 120                 125             
          Met Pro Lys Thr Gln Lys Glu Val His Leu Lys Asn Ala Ser Arg Gly 
              130                 135                 140                 
          Ser Ala Gly Asn Lys Asn Tyr Arg Met 
          145                 150             
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 348]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          atgaccatcc tgtttctgac aatggtcatc agctacttcg gctgcatgaa ggccgtgaag       60
          atgcacacca tgagcagcag ccacctgttc tatctggccc tgtgcctgct gacctttacc      120
          agctctgcta ccgccggacc tgagacactt tgtggcgctg aactggtgga cgccctgcag      180
          tttgtgtgtg gcgacagagg cttctacttc aacaagccca caggctacgg cagcagctct      240
          agaagggctc ctcagaccgg aatcgtggac gagtgctgct tcagaagctg cgacctgcgg      300
          cggctggaaa tgtattgtgc ccctctgaag cctgccaaga gcgcctaa                   348
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 115]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 36]]>
          Met Thr Ile Leu Phe Leu Thr Met Val Ile Ser Tyr Phe Gly Cys Met 
          1               5                   10                  15      
          Lys Ala Val Lys Met His Thr Met Ser Ser Ser His Leu Phe Tyr Leu 
                      20                  25                  30          
          Ala Leu Cys Leu Leu Thr Phe Thr Ser Ser Ala Thr Ala Gly Pro Glu 
                  35                  40                  45              
          Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe Val Cys Gly 
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly Ser Ser Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys Phe Arg Ser 
                          85                  90                  95      
          Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu Lys Pro Ala 
                      100                 105                 110         
          Lys Ser Ala 
                  115 
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 300]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 37]]>
          atgacttcca agctggccgt ggctctcttg gcagccttcc tgatttctgc agctctgtgt       60
          gaaggtgcag ttttgccaag gagtgctaaa gaacttagat gtcagtgcat aaagacatac      120
          tccaaacctt tccaccccaa atttatcaaa gaactgagag tgattgagag tggaccacac      180
          tgcgccaaca cagaaattat tgtaaagctt tctgatggaa gagagctctg tctggacccc      240
          aaggaaaact gggtgcagag ggttgtggag aagtttttga agagggctga gaattcataa      300
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<211> 810]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 38]]>
          atggcagaag tacctgagct cgccagtgaa atgatggctt attacagtgg caatgaggat       60
          gacttgttct ttgaagctga tggccctaaa cagatgaagt gctccttcca ggacctggac      120
          ctctgccctc tggatggcgg catccagcta cgaatctccg accaccacta cagcaagggc      180
          ttcaggcagg ccgcgtcagt tgttgtggcc atggacaagc tgaggaagat gctggttccc      240
          tgcccacaga ccttccagga gaatgacctg agcaccttct ttcccttcat ctttgaagaa      300
          gaacctatct tcttcgacac atgggataac gaggcttatg tgcacgatgc acctgtacga      360
          tcactgaact gcacgctccg ggactcacag caaaaaagct tggtgatgtc tggtccatat      420
          gaactgaaag ctctccacct ccagggacag gatatggagc aacaagtggt gttctccatg      480
          tcctttgtac aaggagaaga aagtaatgac aaaatacctg tggccttggg cctcaaggaa      540
          aagaatctgt acctgtcctg cgtgttgaaa gatgataagc ccactctaca gctggagagt      600
          gtagatccca aaaattaccc aaagaagaag atggaaaagc gatttgtctt caacaagata      660
          gaaatcaata acaagctgga atttgagtct gcccagttcc ccaactggta catcagcacc      720
          tctcaagcag aaaacatgcc cgtcttcctg ggagggacca aaggcggcca ggatataact      780
          gacttcacca tgcaatttgt gtcttcctaa                                       810
          <![CDATA[<210> 39]]>
          <![CDATA[<211> 468]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 39]]>
          atgactcctg ggaagacctc attggtgtca ctgctactgc tgctgagcct ggaggccata       60
          gtgaaggcag gaatcacaat cccacgaaat ccaggatgcc caaattctga ggacaagaac      120
          ttcccccgga ctgtgatggt caacctgaac atccataacc ggaataccaa taccaatccc      180
          aaaaggtcct cagattacta caaccgatcc acctcacctt ggaatctcca ccgcaatgag      240
          gaccctgaga gatatccctc tgtgatctgg gaggcaaagt gccgccactt gggctgcatc      300
          aacgctgatg ggaacgtgga ctaccacatg aactctgtcc ccatccagca agagatcctg      360
          gtcctgcgca gggagcctcc acactgcccc aactccttcc ggctggagaa gatactggtg      420
          tccgtgggct gcacctgtgt caccccgatt gtccaccatg tggcctaa                   468
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 702]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 智人]]>
          <![CDATA[<400> 40]]>
          atgagcactg aaagcatgat ccgggacgtg gagctggccg aggaggcgct ccccaagaag       60
          acaggggggc cccagggctc caggcggtgc ttgttcctca gcctcttctc cttcctgatc      120
          gtggcaggcg ccaccacgct cttctgcctg ctgcactttg gagtgatcgg cccccagagg      180
          gaagagttcc ccagggacct ctctctaatc agccctctgg cccaggcagt cagatcatct      240
          tctcgaaccc cgagtgacaa gcctgtagcc catgttgtag caaaccctca agctgagggg      300
          cagctccagt ggctgaaccg ccgggccaat gccctcctgg ccaatggcgt ggagctgaga      360
          gataaccagc tggtggtgcc atcagagggc ctgtacctca tctactccca ggtcctcttc      420
          aagggccaag gctgcccctc cacccatgtg ctcctcaccc acaccatcag ccgcatcgcc      480
          gtctcctacc agaccaaggt caacctcctc tctgccatca agagcccctg ccagagggag      540
          accccagagg gggctgaggc caagccctgg tatgagccca tctatctggg aggggtcttc      600
          cagctggaga agggtgaccg actcagcgct gagatcaatc ggcccgacta tctcgacttt      660
          gccgagtctg ggcaggtcta ctttgggatc attgccctgt ga                         702
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 699]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 羽小角水蚤]]>
          <![CDATA[<400> 41]]>
          atggagagcg acgagagcgg cctgcccgcc atggagatcg agtgccgcat caccggcacc       60
          ctgaacggcg tggagttcga gctggtgggc ggcggagagg gcacccccga gcagggccgc      120
          atgaccaaca agatgaagag caccaaaggc gccctgacct tcagccccta cctgctgagc      180
          cacgtgatgg gctacggctt ctaccacttc ggcacctacc ccagcggcta cgagaacccc      240
          ttcctgcacg ccatcaacaa cggcggctac accaacaccc gcatcgagaa gtacgaggac      300
          ggcggcgtgc tgcacgtgag cttcagctac cgctacgagg ccggccgcgt gatcggcgac      360
          ttcaaggtga tgggcaccgg cttccccgag gacagcgtga tcttcaccga caagatcatc      420
          cgcagcaacg ccaccgtgga gcacctgcac cccatgggcg ataacgatct ggatggcagc      480
          ttcacccgca ccttcagcct gcgcgacggc ggctactaca gctccgtggt ggacagccac      540
          atgcacttca agagcgccat ccaccccagc atcctgcaga acgggggccc catgttcgcc      600
          ttccgccgcg tggaggagga tcacagcaac accgagctgg gcatcgtgga gtaccagcac      660
          gccttcaaga ccccggatgc agatgccggt gaagaataa                             699
          <![CDATA[<210> 42]]>
          <![CDATA[<211> 453]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 42]]>
          gccaccatgt tgctgctgcc tctgttcttc ctgctggcct gcgccggcaa ttttgtgcac       60
          ggccacaagt gcgacatcac cctgcaagag atcatcaaga ccctgaacag cctgaccgag      120
          cagaaaaccc tgtgcaccga gctgaccgtg accgatatct ttgccgccag caagaacaca      180
          accgagaaag agacattctg cagagccgcc accgtgctga gacagttcta cagccaccac      240
          gagaaggaca ccagatgcct gggagctaca gcccagcagt tccacagaca caagcagctg      300
          atccggttcc tgaagcggct ggacagaaat ctgtggggac tcgccggcct gaatagctgc      360
          cctgtgaaag aggccaacca gtctaccctg gaaaacttcc tggaacggct gaaaaccatc      420
          atgcgcgaga agtacagcaa gtgcagcagc tga                                   453
          <![CDATA[<210> 43]]>
          <![CDATA[<211> 148]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 43]]>
          Met Leu Leu Leu Pro Leu Phe Phe Leu Leu Ala Cys Ala Gly Asn Phe 
          1               5                   10                  15      
          Val His Gly His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln Glu Ile Ile Lys Thr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Ser Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys Thr Glu Leu Thr Val 
                  35                  40                  45              
          Thr Asp Ile Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr Glu Lys Glu Thr Phe 
              50                  55                  60                  
          Cys Arg Ala Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr Ser His His Glu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Thr Arg Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln Phe His Arg His Lys 
                          85                  90                  95      
          Gln Leu Ile Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg Asn Leu Trp Gly Leu 
                      100                 105                 110         
          Ala Gly Leu Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala Asn Gln Ser Thr Leu 
                  115                 120                 125             
          Glu Asn Phe Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met Arg Glu Lys Tyr Ser 
              130                 135                 140                 
          Lys Cys Ser Ser 
          145             
          <![CDATA[<210> 44]]>
          <![CDATA[<211> 19]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 44]]>
          Met Leu Ile Leu Leu Leu Pro Leu Leu Leu Phe Lys Cys Phe Cys Asp 
          1               5                   10                  15      
          Phe Leu Lys 
          <![CDATA[<210> 45]]>
          <![CDATA[<211> 57]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 45]]>
          atgctgattc tgctgctgcc cctgctgctg ttcaagtgct tctgcgactt cctgaaa          57
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          <![CDATA[<211> 18]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成肽]]>
          <![CDATA[<400> 46]]>
          Met Leu Phe Tyr Leu Ala Leu Cys Leu Leu Thr Phe Thr Ser Ser Ala 
          1               5                   10                  15      
          Thr Ala 
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          <![CDATA[<400> 47]]>
          atgctgttct atctggccct gtgcctgctg acctttacca gctctgctac cgcc             54
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          <![CDATA[<400> 48]]>
          Val Lys Met His Thr Met Ser Ser Ser His 
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          <![CDATA[<400> 49]]>
          Met Gly Lys Ile Ser Ser Leu Pro Thr Gln Leu Phe Lys Cys Cys Phe 
          1               5                   10                  15      
          Cys Asp Phe Leu Lys 
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          atgggaaaaa tcagcagtct tccaacccaa ttatttaagt gctgcttttg tgatttcttg       60
          aag                                                                     63
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          <![CDATA[<400> 51]]>
          Met Thr Ile Leu Phe Leu Thr Met Val Ile Ser Tyr Phe Gly Cys Met 
          1               5                   10                  15      
          Lys Ala 
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          <![CDATA[<400> 52]]>
          atgaccatcc tgtttctgac aatggtcatc agctacttcg gctgcatgaa ggcc             54
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          Met Gly Leu Thr Ser Gln Leu Leu Pro Pro Leu Phe Phe Leu Leu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Cys Ala Gly Asn Phe Val His Gly 
                      20                  
          <![CDATA[<210> 54]]>
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          Met Leu Leu Leu Pro Leu Phe Phe Leu Leu Ala Cys Ala Gly Asn Phe 
          1               5                   10                  15      
          Val His Gly 
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          atgttgctgc tgcctctgtt cttcctgctg gcctgcgccg gcaattttgt gcacggc          57
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          acaacaatcc c                                                            11
          <![CDATA[<210> 91]]>
          <![CDATA[<211> 6]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
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          caacaa                                                                   6
          <![CDATA[<210> 92]]>
          <![CDATA[<211> 20]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
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          atagtgagtc gtattatccc                                                   20
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          atagtgagtc gtattaacaa caatccc                                           27
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          atagtgagtc gtattaacaa caa                                               23
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          atagtgagtc gtattaatcc ctacgtacca acaa                                   34
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          <![CDATA[<212> DNA]]>
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          <![CDATA[<400> 96]]>
          aacaaagcac cagtggtcta gtggtagaat agtaccctgc cacggtacag acccgggttc       60
          gattcccggc tggtgca                                                      77
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          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400> 97]]>
          auagugaguc guauuaacgu accaacaaca aggaagugcu aaagaaacuu guucuuuagc       60
          acuuccuugu uuaucuuaga ggcauauccc ugccaccaug accauccugu uucugacaau      120
          ggucaucagc uacuucggcu gcaugaaggc cgugaagaug cacaccauga gcagcagcca      180
          ccuguucuau cuggcccugu gccugcugac cuuuaccagc ucugcuaccg ccggaccuga      240
          gacacuuugu ggcgcugaac ugguggacgc ccugcaguuu guguguggcg acagaggcuu      300
          cuacuucaac aagcccacag gcuacggcag cagcucuaga agggcuccuc agaccggaau      360
          cguggacgag ugcugcuuca gaagcugcga ccugcggcgg cuggaaaugu auugugcccc      420
          ucugaagccu gccaagagcg ccuaauuuau cuuagaggca uaucccu                    467
          <![CDATA[<210> 98]]>
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          <![CDATA[<400> 98]]>
          auagugaguc guauuaacgu accaacaaca aggagugcua aagaaacuug uucuuuagca       60
          cuccuuguuu aucuuagagg cauaucccua cguaccaaca agagagugau ugagagugga      120
          cuugccacuc ucaaucacuc ucuuuaucuu agaggcauau cccuacguac caacaagaga      180
          gcucugucug gaccacuugg guccagacag agcucucuuu aucuuagagg cauaucccug      240
          ccaccaugac cauccuguuu cugacaaugg ucaucagcua cuucggcugc augaaggccg      300
          ugaagaugca caccaugagc agcagccacc uguucuaucu ggcccugugc cugcugaccu      360
          uuaccagcuc ugcuaccgcc ggaccugaga cacuuugugg cgcugaacug guggacgccc      420
          ugcaguuugu guguggcgac agaggcuucu acuucaacaa gcccacaggc uacggcagca      480
          gcucuagaag ggcuccucag accggaaucg uggacgagug cugcuucaga agcugcgacc      540
          ugcggcggcu ggaaauguau ugugccccuc ugaagccugc caagagcgcc uaauuuaucu      600
          uagaggcaua ucccu                                                       615
          <![CDATA[<210> 99]]>
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          <![CDATA[<212> RNA]]>
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          <![CDATA[<400> 99]]>
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          ggcuuaucau cuuucuuuau cuuagaggca uaucccuacg uaccaacaag gugaugucug      120
          guccauauga acuugucaua uggaccagac aucaccuuua ucuuagaggc auaucccuac      180
          guaccaacaa gaugauaagc ccacucuaac uuguagagug ggcuuaucau cuuuaucuua      240
          gaggcauauc ccugccacca ugaccauccu guuucugaca auggucauca gcuacuucgg      300
          cugcaugaag gccgugaaga ugcacaccau gagcagcagc caccuguucu aucuggcccu      360
          gugccugcug accuuuacca gcucugcuac cgccggaccu gagacacuuu guggcgcuga      420
          acugguggac gcccugcagu uugugugugg cgacagaggc uucuacuuca acaagcccac      480
          aggcuacggc agcagcucua gaagggcucc ucagaccgga aucguggacg agugcugcuu      540
          cagaagcugc gaccugcggc ggcuggaaau guauugugcc ccucugaagc cugccaagag      600
          cgccuaauuu aucuuagagg cauaucccu                                        629
          <![CDATA[<210> 100]]>
          <![CDATA[<211> 978]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
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          auagugaguc guauuaacgu accaacaagg cguggagcug agagauaaac uuguuaucuc       60
          ucagcuccac gccuuuaucu uagaggcaua ucccuacgua ccaacaaggg ccuguaccuc      120
          aucuacuacu ugaguagaug agguacaggc ccuuuaucuu agaggcauau cccuacguac      180
          caacaaggua ugagcccauc uaucuacuug agauagaugg gcucauaccu uuaucuuaga      240
          ggcauauccc uacguaccaa caagcaauga ggacccugag agauacuuga ucucucaggg      300
          uccucauugc uuuaucuuag aggcauaucc cuacguacca acaagcugau gggaacgugg      360
          acuaacuugu aguccacguu cccaucagcu uuaucuuaga ggcauauccc uacguaccaa      420
          caagguccuc agauuacuac aaacuuguug uaguaaucug aggaccuuua ucuuagaggc      480
          auaucccugc caccauggga cugacaucuc aacugcugcc uccacuguuc uuucugcugg      540
          ccugcgccgg caauuuugug cacggccaca agugcgacau cacccugcaa gagaucauca      600
          agacccugaa cagccugacc gagcagaaaa cccugugcac cgagcugacc gugaccgaua      660
          ucuuugccgc cagcaagaac acaaccgaga aagagacauu cugcagagcc gccaccgugc      720
          ugagacaguu cuacagccac cacgagaagg acaccagaug ccugggagcu acagcccagc      780
          aguuccacag acacaagcag cugauccggu uccugaagcg gcuggacaga aaucuguggg      840
          gacucgccgg ccugaauagc ugcccuguga aagaggccaa ccagucuacc cuggaaaacu      900
          uccuggaacg gcugaaaacc aucaugcgcg agaaguacag caagugcagc agcugauuua      960
          ucuuagaggc auaucccu                                                    978
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          <![CDATA[<211> 741]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
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          <![CDATA[<400> 101]]>
          auagugaguc guauuaacgu accaacaagg cguggagcug agagauaaac uuguuaucuc       60
          ucagcuccac gccuuuaucu uagaggcaua ucccuacgua ccaacaaggg ccuguaccuc      120
          aucuacuacu ugaguagaug agguacaggc ccuuuaucuu agaggcauau cccuacguac      180
          caacaaggua ugagcccauc uaucuacuug agauagaugg gcucauaccu uuaucuuaga      240
          ggcauauccc ugccaccaug ggacugacau cucaacugcu gccuccacug uucuuucugc      300
          uggccugcgc cggcaauuuu gugcacggcc acaagugcga caucacccug caagagauca      360
          ucaagacccu gaacagccug accgagcaga aaacccugug caccgagcug accgugaccg      420
          auaucuuugc cgccagcaag aacacaaccg agaaagagac auucugcaga gccgccaccg      480
          ugcugagaca guucuacagc caccacgaga aggacaccag augccuggga gcuacagccc      540
          agcaguucca cagacacaag cagcugaucc gguuccugaa gcggcuggac agaaaucugu      600
          ggggacucgc cggccugaau agcugcccug ugaaagaggc caaccagucu acccuggaaa      660
          acuuccugga acggcugaaa accaucaugc gcgagaagua cagcaagugc agcagcugau      720
          uuaucuuaga ggcauauccc u                                                741
          <![CDATA[<210> 102]]>
          <![CDATA[<211> 741]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 102]]>
          gccaccaugg gacugacauc ucaacugcug ccuccacugu ucuuucugcu ggccugcgcc       60
          ggcaauuuug ugcacggcca caagugcgac aucacccugc aagagaucau caagacccug      120
          aacagccuga ccgagcagaa aacccugugc accgagcuga ccgugaccga uaucuuugcc      180
          gccagcaaga acacaaccga gaaagagaca uucugcagag ccgccaccgu gcugagacag      240
          uucuacagcc accacgagaa ggacaccaga ugccugggag cuacagccca gcaguuccac      300
          agacacaagc agcugauccg guuccugaag cggcuggaca gaaaucugug gggacucgcc      360
          ggccugaaua gcugcccugu gaaagaggcc aaccagucua cccuggaaaa cuuccuggaa      420
          cggcugaaaa ccaucaugcg cgagaaguac agcaagugca gcagcugaau agugagucgu      480
          auuaacguac caacaaggcg uggagcugag agauaaacuu guuaucucuc agcuccacgc      540
          cuuuaucuua gaggcauauc ccuacguacc aacaagggcc uguaccucau cuacuacuug      600
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          agcccaucua ucuacuugag auagaugggc ucauaccuuu aucuuagagg cauaucccuu      720
          uuaucuuaga ggcauauccc u                                                741
          <![CDATA[<210> 103]]>
          <![CDATA[<211> 585]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 103]]>
          auagugaguc guauuaacgu accaacaagg cguggagcug agagauaaac uuguuaucuc       60
          ucagcuccac gccuuuaucu uagaggcaua ucccugccac caugggccug acaucucagu      120
          ugcugccucc acuguucuuu cugcuggccu gcgccggcaa uuuugugcac ggccacaagu      180
          gcgacaucac ccugcaagag aucaucaaga cccugaacag ccugaccgag cagaaaaccc      240
          ugugcaccga gcugaccgug accgauaucu uugccgccag caagaacaca accgagaaag      300
          agacauucug cagagccgcc accgugcuga gacaguucua cagccaccac gagaaggaca      360
          ccagaugccu gggagcuaca gcccagcagu uccacagaca caagcagcug auccgguucc      420
          ugaagcggcu ggacagaaau cuguggggac ucgccggccu gaauagcugc ccugugaaag      480
          aggccaacca gucuacccug gaaaacuucc uggaacggcu gaaaaccauc augcgcgaga      540
          aguacagcaa gugcagcagc uaguuuaucu uagaggcaua ucccu                      585
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          <![CDATA[<211> 585]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 104]]>
          gccaccaugg gacugacauc ucaacugcug ccuccacugu ucuuucugcu ggccugcgcc       60
          ggcaauuuug ugcacggcca caagugcgac aucacccugc aagagaucau caagacccug      120
          aacagccuga ccgagcagaa aacccugugc accgagcuga ccgugaccga uaucuuugcc      180
          gccagcaaga acacaaccga gaaagagaca uucugcagag ccgccaccgu gcugagacag      240
          uucuacagcc accacgagaa ggacaccaga ugccugggag cuacagccca gcaguuccac      300
          agacacaagc agcugauccg guuccugaag cggcuggaca gaaaucugug gggacucgcc      360
          ggccugaaua gcugcccugu gaaagaggcc aaccagucua cccuggaaaa cuuccuggaa      420
          cggcugaaaa ccaucaugcg cgagaaguac agcaagugca gcagcugaau agugagucgu      480
          auuaacguac caacaaggcg uggagcugag agauaaacuu guuaucucuc agcuccacgc      540
          cuuuaucuua gaggcauauc ccuuuuaucu uagaggcaua ucccu                      585
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          gccaccaugg gacugacauc ucaacugcug ccuccacugu ucuuucugcu ggccugcgcc       60
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          agacacaagc agcugauccg guuccugaag cggcuggaca gaaaucugug gggacucgcc      360
          ggccugaaua gcugcccugu gaaagaggcc aaccagucua cccuggaaaa cuuccuggaa      420
          cggcugaaaa ccaucaugcg cgagaaguac agcaagugca gcagcugaac aacaaggcgu      480
          ggagcugaga gauaaacuug uuaucucuca gcuccacgcc acaacaaggg ccuguaccuc      540
          aucuacuacu ugaguagaug agguacaggc ccacaacaag guaugagccc aucuaucuac      600
          uugagauaga ugggcucaua ccacaacaau uuaucuuaga ggcauauccc u               651
          <![CDATA[<210> 106]]>
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          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 106]]>
          gccaccaugg gcaagauuag cagccugccu acacagcugu ucaagugcug cuucugcgac       60
          uuccugaaag ugaagaugca caccaugagc agcagccacc uguucuaucu ggcccugugc      120
          cugcugaccu uuaccagcuc ugcuaccgcc ggaccugaga cacuuugugg cgcugaacug      180
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          uaaauaguga gucguauuaa cguaccaaca acaacaagau gaagagcacc aaacuuguug      420
          gugcucuuca ucuuguuguu uaucuuagag gcauaucccu uuuaucuuag aggcauaucc      480
          cu                                                                     482
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          <![CDATA[<211> 563]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 107]]>
          gccaccaugg gcaagauuag cagccugccu acacagcugu ucaagugcug cuucugcgac       60
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          ugaagagcac caaacuuguu ggugcucuuc aucuuguugu uuaucuuaga ggcauauccc      540
          uuuuaucuua gaggcauauc ccu                                              563
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          <![CDATA[<212> RNA]]>
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          agcugcgacc ugcggcggcu ggaaauguau ugugccccuc ugaagccugc caagagcgcc      360
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          gugcucuuca ucuuguuguu uaucuuagag gcauaucccu acguaccaac aacaacaaga      480
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          uuuaucuuag aggcauaucc cuuuuaucuu agaggcauau cccu                       644
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          gacacuuugu ggcgcugaac ugguggacgc ccugcaguuu guguguggcg acagaggcuu      300
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          cguggacgag ugcugcuuca gaagcugcga ccugcggcgg cuggaaaugu auugugcccc      420
          ucugaagccu gccaagagcg ccuaauuuau cuuagaggca uaucccu                    467
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          cuugccacuc ucaaucacuc ucuuuaucuu agaggcauau cccuacguac caacaagaga      180
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          ccaccaugac cauccuguuu cugacaaugg ucaucagcua cuucggcugc augaaggccg      300
          ugaagaugca caccaugagc agcagccacc uguucuaucu ggcccugugc cugcugaccu      360
          uuaccagcuc ugcuaccgcc ggaccugaga cacuuugugg cgcugaacug guggacgccc      420
          ugcaguuugu guguggcgac agaggcuucu acuucaacaa gcccacaggc uacggcagca      480
          gcucuagaag ggcuccucag accggaaucg uggacgagug cugcuucaga agcugcgacc      540
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          uagaggcaua ucccu                                                       615
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          <![CDATA[<211> 629]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
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          auagugaguc guauuaacgu accaacaaga aagaugauaa gcccacucua cuugagagug       60
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          guaccaacaa gaugauaagc ccacucuaac uuguagagug ggcuuaucau cuuuaucuua      240
          gaggcauauc ccugccacca ugaccauccu guuucugaca auggucauca gcuacuucgg      300
          cugcaugaag gccgugaaga ugcacaccau gagcagcagc caccuguucu aucuggcccu      360
          gugccugcug accuuuacca gcucugcuac cgccggaccu gagacacuuu guggcgcuga      420
          acugguggac gcccugcagu uugugugugg cgacagaggc uucuacuuca acaagcccac      480
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          cagaagcugc gaccugcggc ggcuggaaau guauugugcc ccucugaagc cugccaagag      600
          cgccuaauuu aucuuagagg cauaucccu                                        629
          <![CDATA[<210> 112]]>
          <![CDATA[<211> 978]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
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          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 112]]>
          auagugaguc guauuaacgu accaacaagg cguggagcug agagauaaac uuguuaucuc       60
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          caagguccuc agauuacuac aaacuuguug uaguaaucug aggaccuuua ucuuagaggc      480
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          ccugcgccgg caauuuugug cacggccaca agugcgacau cacccugcaa gagaucauca      600
          agacccugaa cagccugacc gagcagaaaa cccugugcac cgagcugacc gugaccgaua      660
          ucuuugccgc cagcaagaac acaaccgaga aagagacauu cugcagagcc gccaccgugc      720
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          aguuccacag acacaagcag cugauccggu uccugaagcg gcuggacaga aaucuguggg      840
          gacucgccgg ccugaauagc ugcccuguga aagaggccaa ccagucuacc cuggaaaacu      900
          uccuggaacg gcugaaaacc aucaugcgcg agaaguacag caagugcagc agcugauuua      960
          ucuuagaggc auaucccu                                                    978
          <![CDATA[<210> 113]]>
          <![CDATA[<211> 741]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
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          <![CDATA[<400> 113]]>
          auagugaguc guauuaacgu accaacaagg cguggagcug agagauaaac uuguuaucuc       60
          ucagcuccac gccuuuaucu uagaggcaua ucccuacgua ccaacaaggg ccuguaccuc      120
          aucuacuacu ugaguagaug agguacaggc ccuuuaucuu agaggcauau cccuacguac      180
          caacaaggua ugagcccauc uaucuacuug agauagaugg gcucauaccu uuaucuuaga      240
          ggcauauccc ugccaccaug ggacugacau cucaacugcu gccuccacug uucuuucugc      300
          uggccugcgc cggcaauuuu gugcacggcc acaagugcga caucacccug caagagauca      360
          ucaagacccu gaacagccug accgagcaga aaacccugug caccgagcug accgugaccg      420
          auaucuuugc cgccagcaag aacacaaccg agaaagagac auucugcaga gccgccaccg      480
          ugcugagaca guucuacagc caccacgaga aggacaccag augccuggga gcuacagccc      540
          agcaguucca cagacacaag cagcugaucc gguuccugaa gcggcuggac agaaaucugu      600
          ggggacucgc cggccugaau agcugcccug ugaaagaggc caaccagucu acccuggaaa      660
          acuuccugga acggcugaaa accaucaugc gcgagaagua cagcaagugc agcagcugau      720
          uuaucuuaga ggcauauccc u                                                741
          <![CDATA[<210> 114]]>
          <![CDATA[<211> 741]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<40]]>0> 114]]&gt;
          <br/><![CDATA[gccaccaugg gacugacauc ucaacugcug ccuccacugu ucuuucugcu ggccugcgcc       60
          ggcaauuuug ugcacggcca caagugcgac aucacccugc aagagaucau caagacccug      120
          aacagccuga ccgagcagaa aacccugugc accgagcuga ccgugaccga uaucuuugcc      180
          gccagcaaga acacaaccga gaaagagaca uucugcagag ccgccaccgu gcugagacag      240
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          ggccugaaua gcugcccugu gaaagaggcc aaccagucua cccuggaaaa cuuccuggaa      420
          cggcugaaaa ccaucaugcg cgagaaguac agcaagugca gcagcugaau agugagucgu      480
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          agcccaucua ucuacuugag auagaugggc ucauaccuuu aucuuagagg cauaucccuu      720
          uuaucuuaga ggcauauccc u                                                741
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          <![CDATA[<211> 585]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 115]]>
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          ugaagcggcu ggacagaaau cuguggggac ucgccggccu gaauagcugc ccugugaaag      480
          aggccaacca gucuacccug gaaaacuucc uggaacggcu gaaaaccauc augcgcgaga      540
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          agacacaagc agcugauccg guuccugaag cggcuggaca gaaaucugug gggacucgcc      360
          ggccugaaua gcugcccugu gaaagaggcc aaccagucua cccuggaaaa cuuccuggaa      420
          cggcugaaaa ccaucaugcg cgagaaguac agcaagugca gcagcugaau agugagucgu      480
          auuaacguac caacaaggcg uggagcugag agauaaacuu guuaucucuc agcuccacgc      540
          cuuuaucuua gaggcauauc ccuuuuaucu uagaggcaua ucccu                      585
          <![CDATA[<210> 117]]>
          <![CDATA[<211> 651]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 117]]>
          gccaccaugg gacugacauc ucaacugcug ccuccacugu ucuuucugcu ggccugcgcc       60
          ggcaauuuug ugcacggcca caagugcgac aucacccugc aagagaucau caagacccug      120
          aacagccuga ccgagcagaa aacccugugc accgagcuga ccgugaccga uaucuuugcc      180
          gccagcaaga acacaaccga gaaagagaca uucugcagag ccgccaccgu gcugagacag      240
          uucuacagcc accacgagaa ggacaccaga ugccugggag cuacagccca gcaguuccac      300
          agacacaagc agcugauccg guuccugaag cggcuggaca gaaaucugug gggacucgcc      360
          ggccugaaua gcugcccugu gaaagaggcc aaccagucua cccuggaaaa cuuccuggaa      420
          cggcugaaaa ccaucaugcg cgagaaguac agcaagugca gcagcugaac aacaaggcgu      480
          ggagcugaga gauaaacuug uuaucucuca gcuccacgcc acaacaaggg ccuguaccuc      540
          aucuacuacu ugaguagaug agguacaggc ccacaacaag guaugagccc aucuaucuac      600
          uugagauaga ugggcucaua ccacaacaau uuaucuuaga ggcauauccc u               651
          <![CDATA[<210> 118]]>
          <![CDATA[<211> 482]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 118]]>
          gccaccaugg gcaagauuag cagccugccu acacagcugu ucaagugcug cuucugcgac       60
          uuccugaaag ugaagaugca caccaugagc agcagccacc uguucuaucu ggcccugugc      120
          cugcugaccu uuaccagcuc ugcuaccgcc ggaccugaga cacuuugugg cgcugaacug      180
          guggacgccc ugcaguuugu guguggcgac agaggcuucu acuucaacaa gcccacaggc      240
          uacggcagca gcucuagaag ggcuccucag accggaaucg uggacgagug cuguuucaga      300
          agcugcgacc ugcggcggcu ggaaauguau ugugccccuc ugaagccugc caagagcgcc      360
          uaaauaguga gucguauuaa cguaccaaca acaacaagau gaagagcacc aaacuuguug      420
          gugcucuuca ucuuguuguu uaucuuagag gcauaucccu uuuaucuuag aggcauaucc      480
          cu                                                                     482
          <![CDATA[<210> 119]]>
          <![CDATA[<211> 563]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 119]]>
          gccaccaugg gcaagauuag cagccugccu acacagcugu ucaagugcug cuucugcgac       60
          uuccugaaag ugaagaugca caccaugagc agcagccacc uguucuaucu ggcccugugc      120
          cugcugaccu uuaccagcuc ugcuaccgcc ggaccugaga cacuuugugg cgcugaacug      180
          guggacgccc ugcaguuugu guguggcgac agaggcuucu acuucaacaa gcccacaggc      240
          uacggcagca gcucuagaag ggcuccucag accggaaucg uggacgagug cuguuucaga      300
          agcugcgacc ugcggcggcu ggaaauguau ugugccccuc ugaagccugc caagagcgcc      360
          uaaauaguga gucguauuaa cguaccaaca acaacaagau gaagagcacc aaacuuguug      420
          gugcucuuca ucuuguuguu uaucuuagag gcauaucccu acguaccaac aacaacaaga      480
          ugaagagcac caaacuuguu ggugcucuuc aucuuguugu uuaucuuaga ggcauauccc      540
          uuuuaucuua gaggcauauc ccu                                              563
          <![CDATA[<210> 120]]>
          <![CDATA[<211> 644]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 120]]>
          gccaccaugg gcaagauuag cagccugccu acacagcugu ucaagugcug cuucugcgac       60
          uuccugaaag ugaagaugca caccaugagc agcagccacc uguucuaucu ggcccugugc      120
          cugcugaccu uuaccagcuc ugcuaccgcc ggaccugaga cacuuugugg cgcugaacug      180
          guggacgccc ugcaguuugu guguggcgac agaggcuucu acuucaacaa gcccacaggc      240
          uacggcagca gcucuagaag ggcuccucag accggaaucg uggacgagug cuguuucaga      300
          agcugcgacc ugcggcggcu ggaaauguau ugugccccuc ugaagccugc caagagcgcc      360
          uaaauaguga gucguauuaa cguaccaaca acaacaagau gaagagcacc aaacuuguug      420
          gugcucuuca ucuuguuguu uaucuuagag gcauaucccu acguaccaac aacaacaaga      480
          ugaagagcac caaacuuguu ggugcucuuc aucuuguugu uuaucuuaga ggcauauccc      540
          uacguaccaa caacaacaag augaagagca ccaaacuugu uggugcucuu caucuuguug      600
          uuuaucuuag aggcauaucc cuuuuaucuu agaggcauau cccu                       644
          <![CDATA[<210> 121]]>
          <![CDATA[<211> 363]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 121]]>
          gccaccaugg gcaagauuag cagccugccu acacagcugu ucaagugcug cuucugcgac       60
          uuccugaaag ugaagaugca caccaugagc agcagccacc uguucuaucu ggcccugugc      120
          cugcugaccu uuaccagcuc ugcuaccgcc ggaccugaga cacuuugugg cgcugaacug      180
          guggacgccc ugcaguuugu guguggcgac agaggcuucu acuucaacaa gcccacaggc      240
          uacggcagca gcucuagaag ggcuccucag accggaaucg uggacgagug cuguuucaga      300
          agcugcgacc ugcggcggcu ggaaauguau ugugccccuc ugaagccugc caagagcgcc      360
          uaa                                                                    363
          <![CDATA[<210> 122]]>
          <![CDATA[<211> 453]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 122]]>
          gccaccaugu ugcugcugcc ucuguucuuc cugcuggccu gcgccggcaa uuuugugcac       60
          ggccacaagu gcgacaucac ccugcaagag aucaucaaga cccugaacag ccugaccgag      120
          cagaaaaccc ugugcaccga gcugaccgug accgauaucu uugccgccag caagaacaca      180
          accgagaaag agacauucug cagagccgcc accgugcuga gacaguucua cagccaccac      240
          gagaaggaca ccagaugccu gggagcuaca gcccagcagu uccacagaca caagcagcug      300
          auccgguucc ugaagcggcu ggacagaaau cuguggggac ucgccggccu gaauagcugc      360
          ccugugaaag aggccaacca gucuacccug gaaaacuucc uggaacggcu gaaaaccauc      420
          augcgcgaga aguacagcaa gugcagcagc uga                                   453
          <![CDATA[<210> 123]]>
          <![CDATA[<211> 363]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 123]]>
          gccaccaugg gcaagauuag cagccugccu acacagcugu ucaagugcug cuucugcgac       60
          uuccugaaag ugaagaugca caccaugagc agcagccacc uguucuaucu ggcccugugc      120
          cugcugaccu uuaccagcuc ugcuaccgcc ggaccugaga cacuuugugg cgcugaacug      180
          guggacgccc ugcaguuugu guguggcgac agaggcuucu acuucaacaa gcccacaggc      240
          uacggcagca gcucuagaag ggcuccucag accggaaucg uggacgagug cuguuucaga      300
          agcugcgacc ugcggcggcu ggaaauguau ugugccccuc ugaagccugc caagagcgcc      360
          uaa                                                                    363
          <![CDATA[<210> 124]]>
          <![CDATA[<211> 453]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 124]]>
          gccaccaugu ugcugcugcc ucuguucuuc cugcuggccu gcgccggcaa uuuugugcac       60
          ggccacaagu gcgacaucac ccugcaagag aucaucaaga cccugaacag ccugaccgag      120
          cagaaaaccc ugugcaccga gcugaccgug accgauaucu uugccgccag caagaacaca      180
          accgagaaag agacauucug cagagccgcc accgugcuga gacaguucua cagccaccac      240
          gagaaggaca ccagaugccu gggagcuaca gcccagcagu uccacagaca caagcagcug      300
          auccgguucc ugaagcggcu ggacagaaau cuguggggac ucgccggccu gaauagcugc      360
          ccugugaaag aggccaacca gucuacccug gaaaacuucc uggaacggcu gaaaaccauc      420
          augcgcgaga aguacagcaa gugcagcagc uga                                   453
          <![CDATA[<210> 125]]>
          <![CDATA[<211> 363]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400]]>> 125]]&gt;
          <br/><![CDATA[gccaccatgg gcaagattag cagcctgcct acacagctgt tcaagtgctg cttctgcgac       60
          ttcctgaaag tgaagatgca caccatgagc agcagccacc tgttctatct ggccctgtgc      120
          ctgctgacct ttaccagctc tgctaccgcc ggacctgaga cactttgtgg cgctgaactg      180
          gtggacgccc tgcagtttgt gtgtggcgac agaggcttct acttcaacaa gcccacaggc      240
          tacggcagca gctctagaag ggctcctcag accggaatcg tggacgagtg ctgtttcaga      300
          agctgcgacc tgcggcggct ggaaatgtat tgtgcccctc tgaagcctgc caagagcgcc      360
          taa                                                                    363
          <![CDATA[<210> 126]]>
          <![CDATA[<211> 118]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成多肽]]>
          <![CDATA[<400> 126]]>
          Met Gly Lys Ile Ser Ser Leu Pro Thr Gln Leu Phe Lys Cys Cys Phe 
          1               5                   10                  15      
          Cys Asp Phe Leu Lys Val Lys Met His Thr Met Ser Ser Ser His Leu 
                      20                  25                  30          
          Phe Tyr Leu Ala Leu Cys Leu Leu Thr Phe Thr Ser Ser Ala Thr Ala 
                  35                  40                  45              
          Gly Pro Glu Thr Leu Cys Gly Ala Glu Leu Val Asp Ala Leu Gln Phe 
              50                  55                  60                  
          Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Tyr Phe Asn Lys Pro Thr Gly Tyr Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Ser Ser Arg Arg Ala Pro Gln Thr Gly Ile Val Asp Glu Cys Cys 
                          85                  90                  95      
          Phe Arg Ser Cys Asp Leu Arg Arg Leu Glu Met Tyr Cys Ala Pro Leu 
                      100                 105                 110         
          Lys Pro Ala Lys Ser Ala 
                  115             
          <![CDATA[<210> 127]]>
          <![CDATA[<211> 2749]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 127]]>
          ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc       60
          attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga      120
          gatagggttg agtggccgct acagggcgct cccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt      180
          gggaagggcg tttcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt      240
          gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg      300
          acggccagtg agcgcgacgt aatacgactc actatagggc gaattggcgg aaggccgtca      360
          aggccacgtg tcttgtccag agctcggatc cgccaccatg ggcaagatta gcagcctgcc      420
          tacacagctg ttcaagtgct gcttctgcga cttcctgaaa gtgaagatgc acaccatgag      480
          cagcagccac ctgttctatc tggccctgtg cctgctgacc tttaccagct ctgctaccgc      540
          cggacctgag acactttgtg gcgctgaact ggtggacgcc ctgcagtttg tgtgtggcga      600
          cagaggcttc tacttcaaca agcccacagg ctacggcagc agctctagaa gggctcctca      660
          gaccggaatc gtggacgagt gctgtttcag aagctgcgac ctgcggcggc tggaaatgta      720
          ttgtgcccct ctgaagcctg ccaagagcgc ctaagaattc ggtacctgga gcacaagact      780
          ggcctcatgg gccttccgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct      840
          gcattaacat ggtcatagct gtttccttgc gtattgggcg ctctccgctt cctcgctcac      900
          tgactcgctg cgctcggtcg ttcgggtaaa gcctggggtg cctaatgagc aaaaggccag      960
          caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc     1020
          cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta     1080
          taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg     1140
          ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc     1200
          tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac     1260
          gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac     1320
          ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg     1380
          aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga     1440
          agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt     1500
          agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag     1560
          cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct     1620
          gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg     1680
          atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat     1740
          gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc     1800
          tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg     1860
          gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagaaccacg ctcaccggct     1920
          ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca     1980
          actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg     2040
          ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg     2100
          tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc     2160
          cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag     2220
          ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg     2280
          ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag     2340
          tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat     2400
          agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg     2460
          atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca     2520
          gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca     2580
          aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat     2640
          tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag     2700
          aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccac                 2749
          <![CDATA[<210> 128]]>
          <![CDATA[<211> 2827]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之]]>描述：合成聚核苷酸
          <![CDATA[<400> 128]]>
          ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc       60
          attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga      120
          gatagggttg agtggccgct acagggcgct cccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt      180
          gggaagggcg tttcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt      240
          gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg      300
          acggccagtg agcgcgacgt aatacgactc actatagggc gaattggcgg aaggccgtca      360
          aggccacgtg tcttgtccag agctcgccac catgttgctg ctgcctctgt tcttcctgct      420
          ggcctgcgcc ggcaattttg tgcacggcca caagtgcgac atcaccctgc aagagatcat      480
          caagaccctg aacagcctga ccgagcagaa aaccctgtgc accgagctga ccgtgaccga      540
          tatctttgcc gccagcaaga acacaaccga gaaagagaca ttctgcagag ccgccaccgt      600
          gctgagacag ttctacagcc accacgagaa ggacaccaga tgcctgggag ctacagccca      660
          gcagttccac agacacaagc agctgatccg gttcctgaag cggctggaca gaaatctgtg      720
          gggactcgcc ggcctgaata gctgccctgt gaaagaggcc aaccagtcta ccctggaaaa      780
          cttcctggaa cggctgaaaa ccatcatgcg cgagaagtac agcaagtgca gcagctgagg      840
          tacctggagc acaagactgg cctcatgggc cttccgctca ctgcccgctt tccagtcggg      900
          aaacctgtcg tgccagctgc attaacatgg tcatagctgt ttccttgcgt attgggcgct      960
          ctccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cgggtaaagc ctggggtgcc     1020
          taatgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt     1080
          ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg     1140
          cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc     1200
          tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc     1260
          gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc     1320
          aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac     1380
          tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt     1440
          aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct     1500
          aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc     1560
          ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt     1620
          ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg     1680
          atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc     1740
          atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa     1800
          tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag     1860
          gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg     1920
          tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga     1980
          gaaccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag     2040
          cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa     2100
          gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc     2160
          atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca     2220
          aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg     2280
          atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat     2340
          aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc     2400
          aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg     2460
          gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg     2520
          gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt     2580
          gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca     2640
          ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata     2700
          ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac     2760
          atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa     2820
          gtgccac                                                               2827
          <![CDATA[<210> 129]]>
          <![CDATA[<211> 22]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> mo]]>dified_base
          <![CDATA[<222> (1)..(12)]]>
          <![CDATA[<223> a、c、u、g、未知或其他]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> misc_feature]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(12)]]>
          <![CDATA[<223> 此區域可涵蓋1-12個核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> modified_base]]>
          <![CDATA[<222> (19)..(22)]]>
          <![CDATA[<223> a、c、u、g、未知或其他]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> misc_feature]]>
          <![CDATA[<222> (19)..(22)]]>
          <![CDATA[<223> 此區域可涵蓋0-4個核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 129]]>
          nnnnnnnnnn nncaacaann nn                                                22
          <![CDATA[<210> 130]]>
          <![CDATA[<211> 34]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> modified_base]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(17)]]>
          <![CDATA[<223> a、c、t、g、未知或其他]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> misc_feature]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(17)]]>
          <![CDATA[<223> 此區域可涵蓋0-17個核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> modified_base]]>
          <![CDATA[<222> (22)..(34)]]>
          <![CDATA[<223> a、c、t、g、未知或其他]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> misc_feature]]>
          <![CDATA[<222> (22)..(34)]]>
          <![CDATA[<223> 此區域可涵蓋0-13個核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 130]]>
          nnnnnnnnnn nnnnnnntcc cnnnnnnnnn nnnn                                   34
          <![CDATA[<210> 131]]>
          <![CDATA[<211> 220]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> misc_feature]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(220)]]>
          <![CDATA[<223> 此區域可涵蓋1-220個核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 關於取代及較佳實施例之詳細描述，參見所申請之說明書]]>
          <![CDATA[<400> 131]]>
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa       60
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa      120
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa      180
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa                            220
          <![CDATA[<210> 132]]>
          <![CDATA[<211> 200]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221> misc_feature]]>
          <![CDATA[<222> (1)..(200)]]>
          <![CDATA[<223> 此區域可涵蓋1-200個核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 關於取代及較佳實施例之詳細描述，參見所申請之說明書]]>
          <![CDATA[<400> 132]]>
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa       60
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa      120
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa      180
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa                                                  200
          <![CDATA[<210> 133]]>
          <![CDATA[<211> 120]]>
          <![CDATA[<212> RNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 133]]>
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa       60
          aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa      120
          <![CDATA[<210> 134]]>
          <![CDATA[<211> 120]]>
          <![CDATA[<212> DNA]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223> 人工序列之描述：合成聚核苷酸]]>
          <![CDATA[<400> 134]]>
          tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt       60
          tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttttttttt      120
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
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Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045
Figure 12_A0101_SEQ_0046
Figure 12_A0101_SEQ_0047
Figure 12_A0101_SEQ_0048
Figure 12_A0101_SEQ_0049
Figure 12_A0101_SEQ_0050
Figure 12_A0101_SEQ_0051
Figure 12_A0101_SEQ_0052
Figure 12_A0101_SEQ_0053
Figure 12_A0101_SEQ_0054
Figure 12_A0101_SEQ_0055
Figure 12_A0101_SEQ_0056
Figure 12_A0101_SEQ_0057
Figure 12_A0101_SEQ_0058
Figure 12_A0101_SEQ_0059
Figure 12_A0101_SEQ_0060
Figure 12_A0101_SEQ_0061
Figure 12_A0101_SEQ_0062
Figure 12_A0101_SEQ_0063
Figure 12_A0101_SEQ_0064
Figure 12_A0101_SEQ_0065
Figure 12_A0101_SEQ_0066
Figure 12_A0101_SEQ_0067
Figure 12_A0101_SEQ_0068
Figure 12_A0101_SEQ_0069
Figure 12_A0101_SEQ_0070
Figure 12_A0101_SEQ_0071
Figure 12_A0101_SEQ_0072
Figure 12_A0101_SEQ_0073
Figure 12_A0101_SEQ_0074
Figure 12_A0101_SEQ_0075
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Figure 12_A0101_SEQ_0077
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Figure 12_A0101_SEQ_0080
Figure 12_A0101_SEQ_0081
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Figure 12_A0101_SEQ_0083
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Claims (107)

  1. 一種組合物，其包含重組RNA構築體，該重組RNA構築體包含： (i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及 (ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列， 其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的該第一RNA序列及(ii)的相應第二RNA序列，該相應第二RNA序列包含該等至少兩種遺傳元件中之至多一者。
  2. 如請求項1之組合物，其中該重組RNA構築體包含一或多個尿苷。
  3. 如請求項1或2之組合物，其中該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
  4. 一種組合物，其包含重組RNA構築體，該重組RNA構築體包含： (i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及 (ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列， 其中該重組RNA構築體不包含核苷酸變異體。
  5. 一種組合物，其包含重組RNA構築體，該重組RNA構築體包含： (i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及 (ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列， 其中該重組RNA構築體不包含經修飾之尿苷。
  6. 一種組合物，其包含重組RNA構築體，該重組RNA構築體包含： (i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及 (ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列， 其中該重組RNA構築體不包含N1-甲基假尿苷。
  7. 一種組合物，其包含重組RNA構築體，該重組RNA構築體包含： (i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及 (ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列， 其中該重組RNA構築體僅包含未經修飾之核苷酸或天然核苷酸。
  8. 一種組合物，其包含重組RNA構築體，該重組RNA構築體包含： (i)編碼所關注之基因的第一RNA序列，及 (ii)包含至少兩種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件之第二RNA序列， 其中該重組RNA構築體包含尿苷，其中： (a)該等重組RNA構築體中所包含之所有尿苷均為未經修飾或天然核苷酸；或 (b)該等重組RNA構築體中所包含之該等尿苷中之至少一者為未經修飾之尿苷。
  9. 如請求項4之組合物，其中該核苷酸變異體包含經修飾之尿苷。
  10. 如請求項3、5及9中任一項之組合物，其中該經修飾之尿苷包含N1-甲基假尿苷。
  11. 如請求項1至3中任一項之組合物，其中該相應重組RNA構築體不包含調節一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件中之任一者。
  12. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列包含至少三種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。
  13. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列包含至少六種調節一或多種目標RNA之表現的遺傳元件。
  14. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第一RNA序列為信使RNA (mRNA)序列。
  15. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者包含二級結構。
  16. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者包含髮夾結構或環結構。
  17. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者為短或小髮夾RNA (shRNA)。
  18. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者係藉由細胞內蛋白質處理或裂解。
  19. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者係藉由細胞之內源性蛋白質處理或裂解。
  20. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者係藉由內源性切丁酶(DICER)處理或裂解。
  21. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者包含小干擾RNA (siRNA)。
  22. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第二RNA序列之該等至少兩種遺傳元件中之各者能夠結合至該等一或多種目標RNA。
  23. 如請求項1至3或11至22中任一項之組合物，其中該免疫反應為人類鐸樣受體7 (TLR7)免疫反應、干擾素α/β (IFNα/β)免疫反應、人類鐸樣受體3 (TLR3)免疫反應、人類鐸樣受體8 (TLR8)免疫反應或其任何組合。
  24. 如請求項1至3或11至23中任一項之組合物，其中根據人類鐸樣受體7 (TLR7)免疫原性分析，使該人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與該相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應。
  25. 如請求項24之組合物，其中該人類TLR7免疫原性分析量測NF-κB及/或AP1之活化。
  26. 如請求項24或25之組合物，其中該人類TLR7免疫原性分析係在HEK293細胞或其衍生物中進行。
  27. 如請求項26之組合物，其中該等HEK293細胞經工程化以表現hTLR7及報導基因。
  28. 如請求項27之組合物，其中該報導基因為分泌型報導基因。
  29. 如請求項28之組合物，其中該分泌型報導基因為分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。
  30. 如請求項27至29中任一項之組合物，其中該報導基因係處於具有一或多個NF-κB及/或AP1結合位點之啟動子的控制下。
  31. 如請求項30之組合物，其中該啟動子為IFN-β最小啟動子。
  32. 如請求項24至31中任一項之組合物，其中與該重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之免疫反應比與該相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之免疫反應低至少1.5倍或至少2倍。
  33. 如請求項1至3或11至23中任一項之組合物，其中根據干擾素α/β (IFNα/β)免疫原性分析，使該人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與該相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應。
  34. 如請求項33之組合物，其中該IFNα/β免疫原性分析量測JAK-STAT及/或ISG3之活化。
  35. 如請求項33或34之組合物，其中該IFNα/β免疫原性分析係在HEK293細胞或其衍生物中進行。
  36. 如請求項35之組合物，其中該等HEK293細胞經工程化以表現人類STAT2及/或IRF9基因及報導基因。
  37. 如請求項36之組合物，其中該報導基因為分泌型報導基因。
  38. 如請求項37之組合物，其中該分泌型報導基因為分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。
  39. 如請求項36至38中任一項之組合物，其中該報導基因係處於具有一或多個STAT2及/或IRF9結合位點之啟動子的控制下。
  40. 如請求項39之組合物，其中該啟動子為ISG54啟動子。
  41. 如請求項33至40中任一項之組合物，其中與該重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之免疫反應比與該相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞中之免疫反應低至少1.5倍、至少2倍或至少100倍。
  42. 如請求項1至3或11至23中任一項之組合物，其中根據人類鐸樣受體3 (TLR3)免疫原性分析，使該人類細胞與該重組RNA構築體接觸未產生實質性免疫反應。
  43. 如請求項42之組合物，其中該人類TLR3免疫原性分析量測NF-κB及/或AP1之活化。
  44. 如請求項42或43之組合物，其中該人類TLR3免疫原性分析係在HEK293細胞或其衍生物中進行。
  45. 如請求項44之組合物，其中該等HEK293細胞經工程化以表現hTLR3及報導基因。
  46. 如請求項45之組合物，其中該報導基因為分泌型報導基因。
  47. 如請求項46之組合物，其中該分泌型報導基因為分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。
  48. 如請求項45至47中任一項之組合物，其中該報導基因係處於具有一或多個NF-κB及/或AP1結合位點之啟動子的控制下。
  49. 如請求項48之組合物，其中該啟動子為IFN-β最小啟動子。
  50. 如請求項1至3或11至23中任一項之組合物，其中根據人類鐸樣受體8 (TLR8)免疫原性分析，使該人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與該相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應。
  51. 如請求項50之組合物，其中該人類TLR8免疫原性分析量測NF-κB、AP1及/或IRF之活化。
  52. 如請求項50或51之組合物，其中該人類TLR8免疫原性分析係在HEK293細胞或其衍生物中進行。
  53. 如請求項52之組合物，其中該等HEK293細胞經工程化以表現hTLR8及報導基因。
  54. 如請求項53之組合物，其中該報導基因為分泌型報導基因。
  55. 如請求項54之組合物，其中該分泌型報導基因為分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)。
  56. 如請求項53至55中任一項之組合物，其中該報導基因係處於具有一或多個NF-κB及/或AP1結合位點之啟動子的控制下。
  57. 如請求項56之組合物，其中該啟動子為IFN-β最小啟動子。
  58. 如請求項1至3或11至22中任一項之組合物，其中該免疫反應誘導促發炎細胞介素在細胞中之表現。
  59. 如請求項58之組合物，其中該促發炎細胞介素包含介白素6 (IL-6)。
  60. 如請求項58或59之組合物，其中該細胞包含人類肺上皮癌細胞(A549)或人類單核球白血病細胞(THP-1)。
  61. 如請求項21至60中任一項之組合物，其中該第二RNA序列包含2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA，其中該等2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA包括能夠結合至以下之siRNA： (i)不同目標RNA； (ii)相同目標RNA之不同區域； (iii)相同目標RNA之相同區域；或 (iv)其任何組合。
  62. 如請求項61之組合物，其中該第二RNA序列包含至少3個種類的siRNA。
  63. 如請求項61之組合物，其中該第二RNA序列包含至少6個種類的siRNA。
  64. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該重組RNA構築體進一步包含一或多種連接子。
  65. 如請求項64之組合物，其中該等一或多種連接子中之各者具有選自由以下組成之群的結構： 式(I)：X mCAACAAX n， 其中X為任何核苷酸，m為1至12之整數，且n為0至4之整數(SEQ ID NO: 129)；及 式(II)：X pTCCCX r， 其中X為任何核苷酸，p為0至17之整數，且r為0至13之整數(SEQ ID NO: 130)。
  66. 如請求項64之組合物，其中該等一或多種連接子中之各者包含含有ACAACAA (SEQ ID NO: 85)之序列。
  67. 如請求項64之組合物，其中該等一或多種連接子中之各者不為(a) TTTATCTTAGAGGCATATCCCTACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 28)或ATAGTGAGTCGTATTAACGTACCAACAA (SEQ ID NO: 27)；或(b)根據RNAfold WebServer，未形成二級結構。
  68. 如請求項64至67中任一項之組合物，其中該等一或多種連接子中之各者(a)存在於該第一RNA序列與該第二RNA序列之間，(b)存在於該第二RNA序列之該等2、3、4、5、6個或更多個種類的siRNA中之各者之間，或(c) (a)及(b)兩者。
  69. 如請求項64至68中任一項之組合物，其中該等一或多種連接子中之各者包含獨立地選自由SEQ ID NO: 27、28、85-95組成之群的序列。
  70. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該所關注之基因的該表現受到調節。
  71. 如請求項70之組合物，其中該所關注之基因之該表現在包含該重組RNA構築體之細胞中上調。
  72. 如請求項70之組合物，其中由該所關注之基因編碼的蛋白質之表現在包含該重組RNA構築體之細胞中上調。
  73. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該等一或多種目標RNA之該表現受到調節。
  74. 如請求項73之組合物，其中該等一或多種目標RNA之該表現係藉由調節該等一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件下調。
  75. 如前述請求項中任一項之組合物，其中調節該等一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件未抑制該所關注之基因之該表現。
  76. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該所關注之基因選自由介白素4 (IL-4)及類胰島素生長因子1 (IGF-1)組成之群。
  77. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該一或多種目標RNA包含非編碼RNA或信使RNA (mRNA)。
  78. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該一或多種目標RNA中之各者為非編碼RNA。
  79. 如請求項1至77中任一項之組合物，其中該一或多種目標RNA中之各者為mRNA。
  80. 如請求項1至77中任一項之組合物，其中該目標RNA為編碼包含以下之蛋白質的mRNA：介白素8 (IL-8)、介白素1β (IL-1β)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)、介白素17 (IL-17)或其功能變異體。
  81. 如前述請求項中任一項之組合物，其中調節該等一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件結合至該等一或多種目標RNA之外顯子。
  82. 如前述請求項中任一項之組合物，其中調節該等一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件特異性結合至一種目標RNA。
  83. 如前述請求項中任一項之組合物，其中調節該等一或多種目標RNA之表現的該等遺傳元件並未由該所關注之基因的內含子序列編碼或不包括該所關注之基因的內含子序列。
  84. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該所關注之基因在無RNA剪接下表現。
  85. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第一RNA序列存在於該第二RNA序列之下游或3'。
  86. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第一RNA序列存在於該第二RNA序列之上游或5'。
  87. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該RNA構築體包含在該第一RNA序列之上游或5'處的內部核糖體進入位點(IRES)。
  88. 如前述請求項中任一項之組合物，其進一步包含聚(A)尾、5'端帽或Kozak序列。
  89. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該第一RNA序列及該第二RNA序列均為重組的。
  90. 如前述請求項中任一項之組合物，其中該siRNA包含選自SEQ ID NO: 57-70之有義股序列。
  91. 如前述請求項中任一項之組合物，其用於調節兩種或更多種基因在細胞中之表現。
  92. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如請求項1至90中任一項之組合物及醫藥學上可接受之賦形劑。
  93. 一種載體，其包含編碼如請求項1至90中任一項之組合物的重組聚核酸構築體。
  94. 一種細胞，其包含如請求項1至90中任一項之組合物或如請求項93之載體。
  95. 一種在細胞中同時表現來自單一RNA轉錄本之siRNA及mRNA的方法，該方法包含將如請求項1至90中任一項之組合物或如請求項93之載體引入至該細胞中。
  96. 一種治療疾病或病狀之方法，其包含向有需要之個體投與如請求項1至90中任一項之組合物或如請求項92之醫藥組合物。
  97. 如請求項96之方法，其中該疾病或病狀包含皮膚疾病或病狀或關節疾病或病狀。
  98. 如請求項97之方法，其中該皮膚疾病或病狀包含發炎性皮膚病症。
  99. 如請求項98之方法，其中該發炎性皮膚病症包含牛皮癬。
  100. 如請求項97之方法，其中該關節疾病或病狀包含關節退化。
  101. 如請求項100之方法，其中該關節退化包含椎間盤疾病(IVDD)或骨關節炎(OA)。
  102. 如請求項96至101中任一項之方法，其中該個體為人類。
  103. 一種組合物，其包含重組RNA構築體，該重組RNA構築體包含： (i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及 (ii)能夠結合至介白素-8 (IL-8) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)， 其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IGF-1之該mRNA及(ii)的能夠結合至該IL-8 mRNA之該等至少兩種siRNA中之至多一者。
  104. 一種組合物，其包含重組RNA構築體，該重組RNA構築體包含： (i)編碼類胰島素生長因子1 (IGF-1)之信使RNA (mRNA)，及 (ii)能夠結合至介白素-1β (IL-1β) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)， 其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之該免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IGF-1之該mRNA及(ii)的能夠結合至該IL-1β mRNA之該等至少兩種siRNA中之至多一者。
  105. 一種組合物，其包含重組RNA構築體： (i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及 (ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA之至少兩種小干擾RNA (siRNA)， 其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IL-4之該mRNA及(ii)的能夠結合至該TNF-α mRNA之該等至少兩種siRNA中之至多一者。
  106. 一種組合物，其包含重組RNA構築體： (i)編碼介白素-4 (IL-4)之信使RNA (mRNA)，及 (ii)能夠結合至腫瘤壞死因子α (TNF-α) mRNA及介白素17 (IL-17)之至少兩種小干擾RNA (siRNA)， 其中使人類細胞與該重組RNA構築體接觸產生的免疫反應低於與相應重組RNA構築體接觸的該人類細胞之免疫反應，該相應重組RNA構築體包含(i)的編碼IL-4之該mRNA及(ii)的能夠結合至該TNF-α mRNA及IL-17 mRNA之該等至少兩種siRNA中之至多一者。
  107. 一種組合物，其包含重組聚核酸構築體，該構築體包含選自由SEQ ID NO: 1-24、42、125、97-108、121-122及127-128組成之群的核酸序列。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001060983A2 (en) * 2000-02-18 2001-08-23 Rhode Island Hospital, A Lifespan Partner Treatment for bone disorders
AU2006315099C1 (en) * 2005-11-21 2013-01-10 Johnson & Johnson Research Pty Limited Multitargeting interfering RNAs and methods of their use and design
EP1938802A1 (en) * 2006-12-22 2008-07-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Interfering RNAs targeting pro-inflammatory cytokines
PL3737765T3 (pl) * 2018-01-12 2022-04-11 Curocell Inc. Komórki układu odpornościowego wzmocnione z użyciem podwójnego shrna i kompozycja zawierająca te komórki
MA54503A (fr) * 2018-12-19 2021-10-27 Versameb Ag Arn codant pour une protéine
US20220202863A1 (en) * 2019-05-02 2022-06-30 Celyad Cells with multiplexed inhibitory rna
BR112022012324A2 (pt) * 2019-12-23 2022-10-11 Versameb Ag Composições e métodos para modular simultaneamente expressão de genes

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