TW202304439A - 治療急性缺血性中風的方法 - Google Patents

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Abstract

本發明針對治療人的急性缺血性腦中風的方法，該方法包括施用多種低劑量DC009中的一種劑量，其中所述劑量為約0.01-0.075 mg/kg/劑。低劑量施用對於治療人受試者中的急性缺血性腦中風是安全且有效的。

Description

治療急性缺血性中風的方法
本發明涉及使用低劑量的3S-6,7-二羥基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氫-異喹啉-3-醯基-Lys (Pro-Ala-Lys) (CAS RN: 1639303-73-3)治療人類急性缺血性腦中風的方法。
腦中風的典型特徵是由於血管原因引起的中樞神經系統急性局灶性損傷導致的神經功能缺損。缺血性腦中風約占所有腦中風的87%；10%是腦內出血性腦中風，而3%是蛛網膜下腔出血性腦中風。每年，全世界有1500萬人罹患腦中風；在美國，平均每40秒就有一人經歷腦中風。在全球範圍內，腦中風是60歲以上死亡的第二大原因，也是導致殘疾的主要原因。
阿替普酶(Activase®)是一種重組組織纖維蛋白溶酶原活化物 (rtPA)，是1996年美國食品和藥物管理局批准用於治療缺血性腦中風的第一種藥物(BLA103172/S-1055)。儘管阿替普酶已被證明可改善急性缺血性腦中風(AIS)受試者的預後，但其使用受到限制，因為它僅被批准在症狀出現後3小時(在美國)或4.5小時內施用，並且它會導致近5倍出現有症狀的腦出血的風險。
由於上述原因，阿替普酶的使用率較低，僅對約5%的腦中風患者施用了阿替普酶。因此，需要開發可以提供與阿替普酶相似的功效但出血增加較少和/或治療時間窗較長的治療方法。
DC009是一種肽-四氫異喹啉綴合物，其化學名稱為3S-6,7-二羥基-1,1-二甲基-1,2,3,4-四氫-異喹啉-3-醯基-Lys(Pro-Ala-Lys)或L-賴氨酸,N6-(L-脯氨醯-L-丙氨醯-L-賴氨醯)-N2-[[(3S)-1,2,3,4-四氫-6,7-二羥基-1,1-二甲基-3-異喹啉基]羰基] (CASRN:1639303-73-3)。DC009是一種二元綴合物，可通過經賴氨酸連接臂偶聯溶栓肽(Pro-Ala-Lys)和具有兩個C1-4烷基的四氫異喹啉化合物形成。DC009的結構如圖1A所示，賴氨酸連接臂和Pro-Ala-Lys肽之間的醯胺鍵如圖1B所示。
藥物開發是一個循序漸進的過程，涉及對動物和人類藥效和安全性資訊的評估。非臨床安全性評價的目標通常包括對毒性作用的特性分析；該資訊用於估計人體試驗的初始安全起始劑量和劑量範圍，並用於確認臨床監測潛在不良反應的參數。所有相關的臨床前數據，包括有關化合物的藥理活性劑量、完整毒理學特徵以及藥物的藥代動力學(吸收、分佈、代謝和排泄)的資訊皆應考慮。
在成年健康志願者中進行新穎結構藥物的首次人體臨床試驗的最大推薦起始劑量(MRSD)應通過將源自未觀察到不良反應水準(NOAEL)的動物的人等效劑量(HED)除以一安全係數來確定。通常使用的默認安全係數是10，這是歷史公認值，但應根據可用資訊進行評估。這是FDA和藥物評估與研究中心(CDER)的非約束性建議。但是，10的安全係數可能不適用於所有情況。當有理由提高顧慮時，應提高安全係數，並在由於提供額外安全保證的可用資料而降低顧慮時降低安全係數(行業指南“成人健康志願者中的治療劑初始臨床試驗中的最大安全起始劑量的估計(Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)”，www.fda.gov/media/72309/download)。
由於急性缺血性腦中風(AIS)的病理生理學和臨床方面的複雜性，這種異質性高的疾病的療法的開發是一項艱巨且具有挑戰性的工作。在腦中風發作後3小時內啟用的重組組織纖維蛋白溶酶原活化物(rtPA)是目前唯一核准的AIS療法。只有有限的經驗值來評估動物模型在AIS療法開發中的使用。大量治療手段在AIS的動物模型中顯示出療效，而這些治療手段(主要是神經保護劑)並未顯示可改善患者的AIS預後(Fisher等，Stroke，第36卷，第10期，2005年10月1日；2324-2325頁)。與神經保護劑相關的結果在動物實驗中相比於臨床試驗的差異是一個主要問題。雖然許多神經保護劑已被證明在各種動物缺血性腦中風模型中有效，但尚未有一種在臨床試驗中顯示有效(Xu等，Med Sci Monit Basic Res. 2013年1月28日;19:37-45. doi: 10.12659/msmbr.883750)。
存在一種治療急性缺血性腦中風的方法的需要。該方法應該是有效的並且具有最小的副作用或毒性。
鑒於DC009在大鼠中的溶栓和自由基清除作用，發明人發現了一種治療人類受試者急性缺血性腦中風的方法。該方法包括向有需要的受試者施用有效量的DC009或其藥學上可接受的鹽，其中DC009的量為有效治療疾病並提供具有最小的觀察到的副作用程度的安全C max值。本方法提供了適當的劑量；該劑量可有效治療人類受試者的急性缺血性腦中風，並提供最小的出血風險和延長治療時間窗的潛力。
根據發明人對迷你豬的DC009的臨床前毒性結果，發明人將迷你豬的血漿暴露上限值設定為1177 ng/mL。之後，發明人設置安全係數以提供安全劑量範圍以保護接受初始臨床劑量的人類受試者。如背景技術中所述，默認安全係數為10，但可以根據可用的安全資料進行調整。在本發明中，DC009在人類受試者中的施用劑量被限制為最終血漿C max不超過約200 ng/mL、優選不超過約150 ng/mL或不超過約110 ng/mL的。
發明人已經發現用於治療人類受試者的急性缺血性腦中風的DC009的有效和安全量是約0.01-0.075mg/kg/劑或約0.025-0.05mg/kg/劑的低劑量。例如，有效且安全的劑量為約0.025mg/kg/劑，或約0.05mg/kg/劑。
在本申請中使用的“約”是指所述值±10%。
發明人發現，本發明的低劑量DC009可有效治療急性缺血性腦中風並提供低血漿藥物濃度，這降低了潛在的藥物毒性。DC009的消除半衰期極短(消除半衰期＜5分鐘)，DC009在施用後不久就被從迴圈中消除，其在施用後30分鐘後在人類血漿中幾乎無法測量。多劑量施用DC009不會導致DC009的累積，DC009的療效是通過每一次給藥的藥物暴露來實現的。
DC009的藥學上可接受的鹽(參見圖1A和圖1B)包括藥學上可接受的任何鹽；例如，鹽酸鹽，即，N6-(L-脯氨醯-L-丙氨醯-L-賴氨醯)-N2-[[(3S)-1,2,3,4-四氫-6,7-二羥基-1,1-二甲基-3-異喹啉基]羰基] L-賴氨酸-鹽酸鹽(1:3) (CASRN:2419930-71-3)。DC009的分子式為C32H51N7O8，游離堿的分子量為661.8 g/mol。
DC009化合物的製備公開於美國公開2016-0083423號的實施例63中，其通過引用併入本文。本發明使用包含一種或多種藥學上可接受的載體和DC009化合物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物。
本領域技術人員可以使用常規標準選擇作為非活性成分的藥學上可接受的載體。藥學上可接受的載體可以包含包括但不限於以下成分的成分：生理食鹽水和電解質水溶液；離子和非離子滲透劑，例如氯化鈉、氯化鉀、甘油和右旋葡萄糖；pH調節劑和緩沖劑，例如氫氧化物鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、硼酸鹽；和三乙醇胺；抗氧化劑，例如亞硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、焦亞硫酸鹽、硫代亞硫酸鹽、抗壞血酸、乙醯半胱氨酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯、生育酚和抗壞血酸棕櫚酸酯的鹽、酸和/或堿；表面活性劑，例如卵磷脂、磷脂，包括但不限於磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺和磷脂醯肌醇；泊洛沙姆(poloxamers)和泊洛沙胺(poloxamines)，聚山梨醇酯例如聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯60和聚山梨醇酯20，聚醚例如聚乙二醇和聚丙二醇；聚乙烯類如聚乙烯醇和聚維酮；纖維素衍生物如甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素及其鹽；丙烯酸聚合物如羧基聚亞甲基凝膠和疏水改性的交聯丙烯酸酯共聚物；多糖如葡聚糖，和糖胺聚糖如透明質酸鈉。此類藥學上可接受的載體可以使用公知的防腐劑來防止細菌污染，這些防腐劑包括但不限於苯紮氯銨、乙二胺四乙酸及其鹽、苄索氯銨、氯己定、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯、硫柳汞和苯乙醇，或可配製成用於單次或多次使用的非防腐製劑。
一種人用藥物組合物是凍幹粉末，其包含DC009的鹽酸鹽(C32H51N7O8·3HCl)；主要賦形劑是甘露醇。DC009在施用前用生理食鹽水進一步稀釋至合適濃度。
在一些實施方式中，用於治療人類受試者的急性缺血性腦中風的DC009劑量為約0.01-0.075mg/kg/劑。在一些實施方式中，用於治療人類受試者的急性缺血性腦中風的DC009的劑量為約0.025-0.05mg/kg/劑。在一個實施方式中，用於治療人類受試者的急性缺血性腦中風的DC009的劑量為約0.025mg/kg/劑。在一個實施方式中，用於治療人類受試者的急性缺血性腦中風的DC009的劑量為約0.05mg/kg/劑。
在一些實施方式中，每天至少施用一次劑量。在一些實施方式中，該劑量每天施用一次。在一些實施方式中，該劑量每天施用兩次。在一些實施方式中，該劑量每天施用三次。如在本申請中所使用的，劑量是指DC009的劑量。
在一些實施方式中，以約3-12小時的給藥間隔施用劑量。在一些實施方式中，以3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時的給藥間隔施用劑量。在一些實施方式中，以約3小時、6小時、9小時或12小時的給藥間隔施用劑量。在一些實施方式中，以約3小時的給藥間隔施用劑量。在一些實施方式中，以約6小時的給藥間隔施用劑量。在一些實施方式中，以約12小時的給藥間隔施用劑量。
在一些實施方式中，將劑量地用於受試者1-6天。例如，將劑量施用於受試者1、2、3、4、5或6天。在一個實施方式中，將劑量施用於受試者1天。在一個實施方式中，將劑量施用於受試者2天。在一個實施方式中，將劑量施用於受試者3天。在一個實施方式中，將劑量施用於受試者4天。在一個實施方式中，將劑量施用於受試者5天。在一個實施方式中，將劑量施用於受試者6天。在一些實施方式中，每天一次至三次向受試者施用該劑量，持續1-6天。在一個實施方式中，每天三次將劑量施用於受試者，持續3天。在一個實施方式中，將該劑量每天兩次施用於受試者，持續3天。在一個實施方式中，將該劑量每天兩次施用於受試者，持續6天。在一個實施方式中，將該劑量每天一次施用於受試者，持續6天。
在一個實施方式中，劑量為約0.025mg/kg/劑，並且以單劑量施用於受試者。在一個實施方式中，劑量為約0.05mg/kg/劑，並且以單劑量施用於受試者。
在一個實施方式中，劑量為約0.025mg/kg/劑，並且每天兩次施用於受試者，持續3天。在一個實施方式中，劑量為約0.05mg/kg/劑，並且每天兩次施用於受試者，持續3天。在一個實施方式中，劑量為約0.025mg/kg/劑，並且每天3次施用於受試者，持續3天。在一個實施方式中，劑量為約0.05mg/kg/劑，並且每天3次施用於受試者，持續3天。
在一些實施方式中，在急性缺血性腦中風發作後立即、或在1-24小時內、或3-24小時內向受試者施用所述化合物或藥物組合物。在一個實施方式中，所述化合物或藥物組合物在急性缺血性腦中風發作後立即施用於受試者。在一個實施方式中，所述化合物或藥物組合物在急性缺血性腦中風發作後1-24小時內施用於受試者。在一個實施方式中，所述化合物或藥物組合物在急性缺血性腦中風發作後3-24小時內施用於受試者。在一些實施方式中，所述化合物或藥物組合物在急性缺血性腦中風發作後3小時、6小時、9小時或24小時內施用於受試者。在一些實施方式中，所述化合物或藥物組合物在急性缺血性腦中風發作後3小時內施用於受試者。在一些實施方式中，所述化合物或藥物組合物在急性缺血性腦中風發作後24小時內施用於受試者。
美國國立衛生研究院腦中風量表(NIHSS)是急性缺血性腦中風(AIS)預後的預測指標，其預測具有時間依賴性。在一些實施方式中，適合通過本發明治療的AIS患者具有4-30的NIHSS。在一些實施方式中，AIS患者具有4-25的NIHSS。在一些實施方式中，AIS患者具有6-25的NIHSS。在一些實施方式中，AIS患者具有6-12的NIHSS。在一些實施方式中，AIS患者具有13-25的NIHSS。在一些實施方式中，AIS患者的NIHSS≥6。在一些實施方式中，AIS患者的NIHSS≥4。
在一些實施方式中，AIS患者患有大動脈粥樣硬化。
在一些實施方式中，AIS患者的年齡小於65歲。在一些實施方式中，AIS患者的年齡小於80歲。在一些實施方式中，AIS患者的年齡大於65歲。在一些實施方式中，AIS患者的年齡大於80歲。
在一些實施方式中，AIS患者在6小時內具有腦中風症狀發作。在一些實施方式中，AIS患者在9小時內具有腦中風症狀發作。在一些實施方式中，AIS患者在12小時內具有腦中風症狀發作。在一些實施方式中，AIS患者在16小時內具有腦中風症狀發作。在一些實施方式中，AIS患者具有大於16小時的腦中風症狀發作。
在一些實施方式中，AIS患者在M1大腦的中動脈處具有症狀性顱內閉塞。在一些實施方式中，AIS患者在M2大腦的中動脈處具有症狀性顱內閉塞。
在一些實施方式中，AIS患者在MRI (核磁共振造影)或CTP (電腦斷層掃描灌注影像)上具有壞死區與缺血區不批配特徵：缺血核心體積≤70mL，壞死區與缺血區不匹配比＞1.2和不匹配體積≥5mL。在一些實施方式中，AIS患者的缺血核心≤20mL。在一些實施方式中，AIS患者的缺血核心≤30mL。在一些實施方式中，AIS患者的缺血核心≤50mL。
在一些實施方式中，AIS患者的壞死區與缺血區不匹配比＞1.8。在一些實施方式中，AIS患者的壞死區與缺血區不匹配體積＞10mL。在一些實施方式中，AIS患者的壞死區與缺血區不匹配體積＞20mL。
靜脈內(IV)注射將藥物組合物輸送到血流中，在那裡組合物可以被快速吸收並具有最大有效性。靜脈內施用治療劑可以通過推注、團注或通過連續輸注施用。在30秒內進行靜脈推注(IV推注)以實現這種快速反應；靜脈推注不依賴於滴液袋。靜脈團注(IV團注)易於執行，不需要輸液幫浦。靜脈輸注(IV輸注)需要更長的時間來施用藥劑，同時提供穩定狀態濃度的治療劑。
在一些實施方式中，包含DC009化合物的本發明藥物組合物通過靜脈輸注施用。在一些實施方式中，本發明的藥物組合物通過靜脈輸注在5-60分鐘的時間內施用。在一些實施方式中，本發明的藥物組合物通過靜脈輸注在15-30分鐘的時間內施用。在一個實施方式中，藥物組合物通過靜脈輸注在15分鐘內施用。在一些實施方式中，藥物組合物通過靜脈輸注在30分鐘內施用。
在一些實施方式中，藥物組合物通過靜脈團注施用。
在一些實施方式中，藥物組合物通過靜脈團注然後靜脈輸注施用。
在一些實施方式中，通過任何可通入的靜脈將藥物組合物施用于AIS患者。
在一個實施例中，劑量為約0.05mg/kg/劑，並且藥物組合物通過靜脈輸注在30分鐘內施用。
在另一個實施例中，劑量為約0.025mg/kg/劑，並且藥物組合物在15分鐘內通過靜脈輸注施用。
在另一個實施例中，劑量為約0.025mg/kg/劑，並且該藥物組合物通過靜脈輸注在30分鐘內施用。
在一些實施方式中，藥物組合物與阿司匹林、氯吡格雷、阿哌沙班或達比加群共同施用。在一個實施方式中，藥物組合物與阿司匹林共同施用。在一個實施方式中，藥物組合物與氯吡格雷共同施用。在一個實施方式中，藥物組合物與阿哌沙班共同施用。在一個實施方式中，藥物組合物與達比加群共同施用。
在一些實施方式中，在血管內血栓移除術之前、期間或之後對人類受試者施用。在一些實施方式中，在血管內血栓移除術之前對人類受試者施用。在一些實施方式中，在血管內血栓移除術期間對人類受試者施用。在一些實施方式中，在血管內血栓移除術之前、之後對人類受試者施用。
在一些實施方式中，血管內血栓移除術和DC009的施用均發生在腦中風發作的24小時內。
在一些實施方式中，人受試者在治療期間的血漿藥物濃度低於200 ng/mL。在一些實施方式中，人受試者在治療期間的血漿藥物濃度低於150 ng/mL。在一些實施方式中，人受試者在治療期間的血漿藥物濃度低於110 ng/mL。
DC009的療效結果可以通過神經學結果來評估，例如通過施用後特定時期NIHSS的變化來評估。在一些實施方式中，AIS患者的NIHSS與基線相比降低≥4。在一些實施方式中，AIS患者的NIHSS與基線相比降低≥8。在一些實施方式中，AIS患者在施用後的結果為NIHSS≤2。在一些實施方式中，AIS患者在施用後的結果為NIHSS≤4。
DC009的療效結果可以通過功能結果來評估，例如通過在施用後特定時期的改良Rankin量表(mRS)的變化來評估。在一些實施方式中，AIS患者的mRS與基線相比降低≥1。在一些實施方式中，AIS患者在治療後的結果為mRS 0-2。在一些實施方式中，AIS患者在治療後的結果為mRS 0-1。
DC009的療效結果可以通過功能結果進行評估，在給藥後的特定時期通過Barthel指數進行評估。
DC009的療效結果可以通過造影結果來評估，例如MRI/CTP獲得的梗塞體積相對於基線的變化，腦灌注加權影像MRI/CTP獲得的低灌注病變相對於基線的變化。在一些實施方式中，AIS患者的結果為梗塞生成減少10%。在一些實施方式中，AIS患者的結果為梗塞生成減少20%。
在一些實施方式中，與未治療相比，用DC009治療的AIS患者的結果為實現＞50%再灌注的患者多出10%、20%或30%。在一些實施方式中，與未治療相比，用DC009治療的AIS患者的結果為實現＞90%再灌注的患者多出10%、20%或30%。在一些實施方式中，與未治療相比，用DC009治療的AIS患者的結果為實現血管再開通的患者多出10%、20%或30%。
總之，本發明涉及一種治療人類受試者的急性缺血性腦中風的方法，其包括向有需要的受試者施用DC009化合物，其中劑量為約0.01-0.075mg/kg/劑。在一個實施方式中，劑量為約0.025-0.05mg/kg/劑。在一個實施方式中，劑量為約0.025mg/kg/劑。在另一個實施方式中，劑量為約0.05mg/kg/劑。
在本方法中，該化合物每天施用至少一次。在一個實施方式中，該化合物每天施用兩次。在另一個實施方式中，化合物以約3-12小時的給藥間隔施用。在另一個實施方式中，該化合物每天施用至少一次，持續2天或3天。在又一個實施方式中，所述化合物每天施至少用兩次，持續3天。在又一個實施方式中，化合物以約12小時的給藥間隔施用。
在本方法中，在急性缺血性腦中風發作後立即或在1-24小時內將化合物施用於受試者。
在本方法中，化合物通過靜脈輸注和/或團注施用。在一個實施方式中，化合物通過靜脈輸注施用。在一個實施方式中，該化合物通過靜脈輸注在5-60分鐘的時間內施用。
在本方法中，所述化合物可以與阿司匹林、氯吡格雷、阿哌沙班或達比加群共同施用。
在本方法中，給藥後受試者血漿中的C max小於200ng/mL。在一些實施方式中，施用後受試者血漿中的C max小於150ng/mL。
以下實施例進一步對本發明進行說明。這些實施例僅旨在說明本發明而不應解釋為限制。
縮寫表 縮寫            定義 —————————————————————————————————— AE               不良事件 AIS              急性缺血性腦中風 aICH            無症狀顱內出血 AUC            血藥濃度-時間曲線下的面積 Aptt             部份凝血活酶時間 BID             “bis in die”，一天兩次 ECG                   心電圖 C max最大血漿濃度 C trough給藥前谷濃度 CDER                 藥物評價與研究中心 CT                      電腦斷層掃描 CTA                   電腦斷層掃描血管造影 CCA                   頸總動脈 CL                      藥物從血漿中的全身清除率 ECA                   頸外動脈 EVT                   血管內血栓移除術 HE                      蘇木精及伊紅 HED                   人體等效劑量 ICA                    頸內動脈 IV                       靜脈內 mRS                   改良Rankin量表 mTICI                改良式腦梗塞溶栓治療分級 MRSD                最大推薦起始劑量 MRI/CTP            核磁共振造影或電腦斷層掃描灌注影像 MRA                  核磁共振血管造影 MCAO                大腦的中動脈閉塞 MoCA                蒙特利爾認知評估 NIHSS                美國國家衛生研究院腦中風量表 NOAEL                     無明顯不良反應劑量 NSS                    神經功能損傷嚴重程度評分 NDS                   神經功能缺損評分 PK                      藥代動力學 PPA                    翼齶動脈 PT                       凝血酶原時間 rtPA                    重組組織纖維蛋白溶酶原活化物 RT                      室溫 RBC                   紅細胞 RP2D                 推薦的臨床II期劑量 rCBF                  局部腦血流 SAE                   嚴重不良事件 SBP/DBP           收縮壓和舒張壓 SD大鼠             Sprague-Dawley大鼠 sICH                   症狀性顱內出血 PIT                    光化學誘導血栓形成 T 1/2消除半衰期 TEAE                 治療中出現的不良事件 T max達到最大血漿濃度的時間 TID                     "ter in die"，一天三次 TT                      凝血酶時間 TTC                    2,3,5-三苯基四唑氯化物 V ss穩態分佈體積 實施例 1. SD 大鼠的栓塞性腦中風模型
將10%水合氯醛溶液(400mg/kg)腹膜內注射到SD雄性大鼠(240-320g)中進行麻醉。在右側靠近頸部中心處造長約2cm的垂直切口，沿胸鎖乳突肌內側邊緣分離右側頸總動脈(CCA)、頸外動脈(ECA)和頸內動脈(ICA)。分別用無創動脈夾夾住頸內動脈和頸總動脈近端的切口。在頸外動脈上造小切口，結紮頸外動脈的遠端。鬆開頸總動脈近端的動脈夾，抽取10 μl血液。抽血後，再次用無創動脈夾夾住頸總動脈的近端。將抽取的10µl血液置於1mL EP小瓶中並在室溫下保持30分鐘以使血液凝結，然後轉移到-20℃冰箱中1小時以形成固體凝結物。1小時後取出血凝塊，加入1mL生理食鹽水，然後用鋼藥匙將血凝塊打碎成比較均勻的微血栓。然後將微血栓懸浮液轉移到1mL注射器中使用。當鬆開大鼠頸內動脈上的夾子時，將注射器中的1mL血栓懸浮液從大鼠頸外動脈緩慢注射到其近端，然後經頸內動脈注入大鼠腦內。隨後，結紮頸外動脈近端，鬆開頸內動脈和頸總動脈上的動脈夾，並恢復血流。分離頸總靜脈，然後注射生理食鹽水或測試化合物。將靜脈結紮。將3滴青黴素滴在傷口上。將傷口縫合，等待動物蘇醒。
大鼠蘇醒24小時後，採用Zealonga法評價神經功能損傷程度。0分表示無神經功能喪失跡象，1分表示健側前肢不能伸展，2表示向健側行走，3表示追尾向健側繞圈行走，4表示意識障礙不自主行走，5表示死亡。對評價結果進行統計分析並進行t檢驗。
大鼠蘇醒24小時並用Zealonga法評估其神經功能損傷程度後，用氨基甲酸酯麻醉，然後立即斷頭並摘除大腦。腦組織在-20℃冰箱中保存2小時，從前額端依次切取約2mm的冠狀切片，共5片，然後置於2% TTC溶液中37℃避光溫育30分鐘。觀察腦切片顏色變化：正常腦組織被TTC染成紅色，而缺血性腦組織呈白色。用數碼相機拍照，用圖像統計軟體處理，並計算腦組織梗塞體積和冠狀切片正常腦組織面積。統計各組腦梗塞體積的比例並進行t檢驗。 實施例 2. 大腦的中動脈閉塞 (MCAO) 模型
Wistar 大鼠的 MCAO 術
在第0天，麻醉大鼠從股動脈收集血液以製備同源血凝塊。用顯微剪刀創建部分動脈切開術，然後沿動脈插入無菌PE-50管(40-50 mm)。在此長度的PE-50管中收集的動脈血通常會產生約10個單獨的適合MCAO的血凝塊。將血凝塊在室溫下保存在試管中2小時，然後在4℃下保存22小時。
在第1天，為了準備栓塞，將含有血凝塊的PE-50管切成長32 mm的片段，並用3ml生理食鹽水填充的23G針頭注射器將片段連接。推動注射器將血凝塊從PE-50管中沖洗到充滿生理食鹽水的培養皿中。將血凝塊抽入和沖出PE-10管(從血凝塊末端抽取以避免血凝塊折疊和扭曲)，各10-15次，以沖洗掉大部分滯留的紅細胞，直到血凝塊沒有進一步的紅細胞釋放。將PE-10管連接到改造的PE-50導管並將血凝塊轉移到PE-50導管中。然後，將改造的PE-50導管連接到100µl Hamilton微量注射器。血凝塊現準備好待用。
在第1天，麻醉大鼠。沿頸總動脈(CCA)鈍器剝離頸動脈鞘，直到ECA (同側頸外動脈)、PPA (翼齶動脈)和ICA (頸內動脈)分叉暴露。剝離枕動脈和甲狀腺上動脈(ECA的第一和第二分支)，並使用雙極微凝器從ECA中取出血管。準備鐳射多普勒流量探頭進入頭管。用夾子暫時夾住CCA、PPA和ICA，並在ECA的主幹附近分叉處鬆散地進行4-0絲線縫合。緩慢鬆開夾子並進一步推進ICA內的導管進入ICA顱內段，直到感覺到阻力。已推進的導管總長度距離ECA動脈切開部位約19至22 mm。回撤導管1至2 mm，並以10 µl/min的速度緩慢注入5-10 µl生理食鹽水。血凝塊注入後，局部腦血流(rCBF)的百分比降低至約20-30%。等待30分鐘，讓血凝塊在ICA穩定。回撤導管，直到其尖端到達ECA/ICA分叉處。重新用夾子暫時夾住CCA和ICA，然後從動脈切開部取出導管。收緊ECA主幹周圍的4-0絲線縫合以結紮動脈切開部。取下夾子。再等30分鐘以確保動物穩定並且沒有流血問題。關閉切口並終止麻醉。
神經功能檢查
在MCAO術後24小時評估神經功能缺損。神經功能以0-18的等級分級，0代表正常功能，18代表最大神經缺陷(見圖2)。
TTC 染色和梗塞體積和腫脹率計算
MCAO誘導24小時後，用5%異氟醚麻醉大鼠，用生理食鹽水進行心臟灌注(150ml)。將大鼠斷頭並收集大腦。使用前用PBS沖洗收集的盤和基質。拍照後撕掉凝塊。在冰上將大腦冠狀切片成帶大腦基質的四個2-mm切片(將大腦切成8塊)。在室溫下(避光)在1X PBS中用2% 2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC) (Sigma-Aldrich)溫育腦切片20分鐘，並通過照片記錄結果。然後，使用ImageJ確定梗塞的體積和程度。
使用數碼相機掃描所有TTC切片的尾側，並將圖像存儲為JPEG。使用imageJ (ImageJ, Bethesda, MD)軟體測量非缺血性和缺血性半球梗塞區域。所有八個梗塞體積測量值均以切片之間距離2mm計算。使用這些測量值，計算每個大腦的總梗塞體積(%)。 -       每個切片的梗塞體積(%)計算：100*[(健康半球體積-同側未病變半球體積)/健康半球體積] -       總梗塞體積(%)：八個切片之和/ 8 -       每個切片的腦腫脹率(%)計算：100*[(梗塞半球體積-健康半球體積)/健康半球體積] -       總腫脹率(%)：八個切片之和/ 8
測量腦血流量 (rCBF)
從骨骼中解剖顳肌以測量rCBF (此時，必須用雙極電凝器控制皮膚和肌肉的出血，尤其是在使用rtPA的情況下)。通過鑽孔使前囟後部2 mm和前囟外側6 mm處骨薄化。用強力膠安置鐳射多普勒流量探頭並開始監測局部腦血流量(rCBF)。 實施例 3. 光化學誘導的血栓形成 (PIT) 腦中風模型
腦的中動脈的光化學誘導的血栓形成
在麻醉下，左大腦的中動脈(MCA)被光照射部位產生的血栓阻塞。左側MCA通過經眶方法暴露。在左眼眶和外耳道之間造垂直切口。翻開顳肌，在不去除顴弓的情況下進行顳下開顱手術。在顱骨底部打開直徑約3mm的視窗。通過該視窗可以看到左側MCA的主幹。MCA中的內皮細胞因孟加拉玫瑰紅染料和綠色照明(λ 540nm，600,000 Lux)之間的光化學反應而受到局部損傷。孟加拉玫瑰紅染料(20mg/kg)以靜脈內施用，然後將MCA暴露在綠光下10分鐘。在手術過程中，將動物放在設定為38℃的加熱墊上。
大鼠神經功能缺損評分評估
血栓栓塞後24小時(±2小時)和接下來的5天每天一次，根據Ederson等( Stroke, 1986, 17: 472-476)所述的改進方法對神經功能缺損進行評分。總分“0”表示沒有缺陷，而最高分“15”表示嚴重缺陷。 1)前肢屈曲 通過尾巴輕輕抓住大鼠，懸吊在離地約10cm處，觀察前肢屈曲情況 0：雙前肢朝向地板 1：前肢伸展略有不同 2：輕度手腕屈曲和肩部內收，肘部伸展 3：劇烈的姿勢，手腕、肘部屈曲，肩部內收並內旋 2)後肢屈曲 在大鼠休息時，將足底朝上的後肢輕輕拉向尾部。 0：後肢之間的回縮反應沒有差異 1：右後肢的回縮反應弱于左後肢 2：右後肢異常伸展，但用手指觸摸足底時可縮回 3：右後肢異常伸展，用手指觸摸足底時無法縮回 3)旋轉行為 從尾部輕輕握住大鼠，將前肢放在地板上，觀察轉圈行為。 0：向前走 1：通常向前走，不能向左走 2：通常向右走，可以向前走 3：向右走，不能向前走。 4)側向位移 在大鼠休息時，從任一方向在大鼠肩後施加溫和的側向壓力。 0：在任一方向上同等地抵抗滑動 1：對向右側推的抗力略有降低 2：對向右側推的抗力明顯降低 3：對向右側推的抗力明顯降低，且大鼠仰翻 5)一般姿勢 在大鼠休息時，觀察一般姿勢。 0：術後一般姿勢與正常大鼠無差異 1：從上方看大鼠時，可以看到左前肢和後肢 2：身體微微傾斜 3：明顯的身體傾斜
蘇木精和伊紅染色的大腦
用大鼠腦基質(2mm間隔)將每個大腦切成六個冠狀塊。大腦在3.1-6.2℃下在4%多聚甲醛中後固定過夜，儲存在磷酸鹽緩衝鹽水中並送去進行組織學處理。每個冠狀塊都包埋在石蠟中。從每個塊中取一個冠狀切片並用蘇木精和伊紅(HE)染色。
從HE染色切片中，梗塞區域(mm 2)使用OsiriX 8.0.2版 (PixmeoSARL, Bernex, 瑞士)手動標記。缺血性梗塞的體積(mm 3)計算為每個冠狀切片的梗塞體積的總和(每個大腦六個冠狀切片)。計算大腦皮層和基底神經節的梗塞體積。通過將基底神經節和大腦皮層的梗塞體積相加來計算總梗塞體積。 實施例 4. 單劑 DC009 在大鼠栓塞性腦中風模型中的臨床前功效 ( 腦中風後 3 小時的治療時間視窗 )
本研究的目的是評價在如實施例1所述的Sprague-Dawley大鼠栓塞腦中風模型中腦中風發作後3小時單次施用0.007mg/kg DC009的功效。
雄性Sprague-Dawley大鼠大腦的中動脈的栓塞閉塞是通過將血凝塊引入頸動脈而引起的。大鼠在腦中風發作3小時後用載劑(生理食鹽水)、rtPA (10 mg/kg，靜脈團注)或DC009 (0.007 mg/kg，靜脈團注)治療(每個治療組n=12-13)。施用後24小時，用神經功能缺損量表(NDS)評估大鼠(0=沒有神經功能喪失跡象，1=左前肢不能伸展，2=向左側行走，3=向左側逐尾繞圈行走，4=不自主行走伴意識障礙，5=死亡)。神經學評估後，犧牲動物，冠狀腦切片(2mm厚)用TTC染色。使用電腦輔助圖像分析技術對梗塞體積進行量化。
腦中風後24小時大鼠的NDS和梗塞體積總結在下表1中。 表1
組 治療 平均神經功能缺損評分 (NDS) 梗塞體積 (% 半球 )
生理食鹽水 0.9 % NaCl 3.00 ± 1.60 14.07 ± 12.04%
DC009 0.007 mg/kg 1.54 ± 1.20* 8.39 ± 7.95%
rtPA 10 mg/kg 2.13 ± 1.173 12.74 ± 9.02%
*P ≤ 0.05 vs 生理食鹽水
與生理食鹽水治療組相比，DC009治療組(0.007 mg/kg)顯示出改善的神經行為評分和減少的腦梗塞體積。因此，在腦中風後3小時以0.007 mg/kg靜脈團注施用的DC009藥物製劑在臨床前大鼠栓塞性腦中風模型中是有效的。 實施例 5. 大鼠栓塞性腦中風模型中單劑量 DC009 的臨床前功效 ( 腦中風後 6 小時的治療時間窗 )
本研究的目的是評估在如實施例1所述的雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠的栓塞腦中風模型中腦中風發作後6小時單次施用0.007 mg/kg DC009的功效。
通過將血凝塊引入頸動脈，誘導雄性SD大鼠大腦的中動脈栓塞。將同源全血製成的血凝塊緩慢注入大鼠頸外動脈至其近端，然後通過頸內動脈注入。大鼠在腦中風發作6小時後給予載劑(生理食鹽水)、rtPA (3mg/kg，靜脈團注)或DC009 (0.007 mg/kg，靜脈團注) (每個治療組n=11-12)。在施用後24小時，用6分神經功能缺損量表評估大鼠。神經學評估後，處死動物，冠狀腦切片(2mm厚)用TTC染色。使用電腦輔助圖像分析技術對梗塞體積進行量化。
腦中風後24小時大鼠的NDS和梗塞體積總結在下表2中。 表2
組 治療 平均神經功能缺損評分 (NDS) 梗塞體積 (% 半球 )
生理食鹽水 0.9 % NaCl 2.25 ± 0.97 20.13 ± 12.31%
DC009 0.007 mg/kg 1.67 ±1.37* 8.68 ± 5.93%*
rtPA 3 mg/kg 3.27±1.85 17.90 ±7.47%
*P ≤ 0.05 vs 生理食鹽水
與生理食鹽水治療組相比，DC009治療組(0.007 mg/kg)表現出改善的神經行為評分和減少的腦梗塞體積。因此，在腦中風後6小時單次靜脈團注(0.007 mg/kg)施用的DC009藥物製劑在臨床前大鼠栓塞性腦中風模型中是有效的。 實施例 6. 大鼠栓塞性腦中風模型中多劑量 DC009 的臨床前功效 ( 腦中風後 24 小時的治療時間窗， QD6)
本研究的目的是評價在實施例1所述的大鼠栓塞腦中風模型中以0.0007 mg/kg、0.007 mg/kg和0.07 mg/kg的劑量連續6天重複施用DC009的功效。
通過將血凝塊引入頸動脈誘導雄性Sprague-Dawley大鼠大腦的中動脈栓塞。大鼠在腦中風發作24小時後、附加每天一次持續5天使用載劑(生理食鹽水)或DC009 (0.0007 mg/kg、0.007 mg/kg和0.07 mg/kg，靜脈團注)治療 (每個治療組n=9-10)。在施用後24小時和每天一次施用前，用神經功能缺損量表評估大鼠。在最後一次神經學評估後，犧牲動物，冠狀腦切片(2mm厚)用TTC染色。使用電腦輔助圖像分析技術對梗塞體積進行量化。
腦中風後7天大鼠的梗塞體積總結於下表3中。 表3
組 治療 梗塞體積 (% 半球 )
生理食鹽水 0.9 % NaCl 16.61 ± 10.94%
DC009 0.0007 mg/kg 9.95 ± 10.32%
DC009 0.007 mg/kg 5.23 ± 7.72%*
DC009 0.07mg/kg 5.73 ± 3.24*
*P ≤ 0.05 vs 生理食鹽水
雖然還評估了神經學結果，但資料解讀受治療組之間基線評分的差異所干擾(資料未示出)。總之，在臨床前大鼠栓塞性腦中風模型中，連續6天以0.007 mg/kg和0.07 mg/kg重複靜脈團注DC009是有效的。
來自實施例4-6的資料顯示，實施例1的大鼠栓塞腦中風模型中DC009治療的有效劑量為0.007-0.07mg/kg。腦中風後24小時也顯示出療效，表明該效力具有良好的臨床應用前景。 實施例 7. 單劑量 DC009 在大鼠 MCAO 模型中的臨床前功效 ( 腦中風後 3 小時的治療時間視窗， SD)
本研究的目的是評估單次施用0.05 mg/kg和0.005 mg/kg DC009在如實施例2所述的栓塞大腦的中動脈閉塞(MCAO)大鼠中的治療功效。
通過將血凝塊引入頸動脈來誘導雄性Wistar大鼠大腦的中動脈的栓塞性閉塞。將同源全血製成的血凝塊緩慢注入頸內動脈。腦中風發作後3小時用載劑(生理食鹽水)或rtPA (10 mg/kg，初始10%靜脈團注，然後剩餘藥物輸注30分鐘)或15分鐘靜脈輸注DC009 (0.05或0.005 mg/kg)對大鼠進行治療(每個治療組n=8-9)。在治療前、MCAO術後3小時和MCAO術後24小時評估神經功能缺損。神經功能損傷嚴重程度評分 (NSS)以0-18的等級分級，0代表正常，18代表嚴重損傷。將手術後三小時NSS＞7的動物置於治療組中的一組。然後在手術後24小時評估治療動物的神經功能。神經學評估後，對動物施安樂死，並用2% 2,3,5-三苯基氯化四唑(TTC)溶液對大腦進行染色，以量化梗塞體積。ImageJ軟體用於計算缺血百分率和腦腫脹率。 表4
組 治療 平均神經學嚴重程度評分 (NDS) 梗塞體積 (% 半球 )
生理食鹽水 0.9 % NaCl 7.22 ± 1.09 49.29 ± 10.73
DC009 0.005 mg/kg 7.13 ± 0.64 31.95± 10.53*
DC009 0.05 mg/kg 6 ± 0.76 * 23.53 ± 13.75*** a
rtPA 10 mg/kg 6.38 ± 0.74 43.23 ± 11.03
*p＜0.05 vs生理食鹽水；*** p＜0.001 vs生理食鹽水，p＜0.01 vs rtPA
在MCAO模型中，在腦中風後24小時，以0.05mg/kg的劑量水準的DC009治療後的NSS顯著低於生理食鹽水治療。與rtPA和生理食鹽水治療相比，0.005 mg/kg和0.05 mg/kg劑量水準的DC009也顯著減少了梗塞體積(表4)。 實施例 8. 單劑量 DC009 在大鼠 MCAO 模型中的臨床前功效 ( 腦中風後 1 小時的治療時間窗 )
本研究的目的是評估單次施用0.05 mg/kg、0.1 mg/kg、0.2 mg/kg和0.4 mg/kg DC009在如實施例2所述的栓塞大腦的中動脈閉塞(MCAO)大鼠中的治療功效。
通過將血凝塊引入頸動脈來誘導雄性Wistar大鼠大腦的中動脈的栓塞性閉塞。將同源全血製成的血凝塊緩慢注入頸內動脈。在腦中風發作後1小時用載劑(生理食鹽水)或rtPA (10 mg/kg，初始10%靜脈團注，然後剩餘藥物輸注30分鐘)或15分鐘靜脈輸注DC009 (0.05mg/kg、0.1mg/kg/、0.2mg/kg和0.4mg/kg)對大鼠進行治療(每個治療組n=5-8)。測量血流3小時。
在圖3中，資料顯示與生理食鹽水處理組相比，rtPA和所有的DC009處理組的血流量增加(p＜0.0001 vs生理食鹽水)。0.05mg/kg的低劑量DC009在恢復大鼠閉塞的血流方面表現出良好功效。 實施例 9. 大鼠 MCAO 模型中多劑量 DC009 的臨床前功效 ( 腦中風後 3 小時的治療時間窗，每天兩次 )
本研究的目的是評估每天兩次施用DC009一天對如實施例2所述的栓塞MACO大鼠的治療功效。
共22只大鼠在MCAO術後3小時接受生理食鹽水(n=8)、10mg/kg rtPA (n=8)治療，並在MCAO術後3小時和6小時接受0.025 mg/kg DC009 (n=6)治療。腦中風後24小時犧牲所有動物，用腦切片模具將腦組織切成八塊。切片進一步用2% 2,3,5-三苯四唑氯化物(TTC)溶液染色，用ImageJ軟體計算缺血區百分比和腦腫脹率。結果表明，與生理食鹽水和rtPA治療組相比，一天兩次施用DC009導致梗塞體積顯著更小(圖4)。
實施例 10. 單劑量 DC009 在大鼠光化學誘導血栓性腦中風模型中的臨床前功效 ( 腦中風後 1 小時和 3 小時的治療時間窗 )
該研究的目的是評價在實施例3中描述的大鼠光化學誘導血栓形成(PIT)腦中風模型中每天一次以0.007 mg/kg施用DC009的功效。
在腦中風發作1小時後用載劑(生理食鹽水)、rtPA (10 mg/kg)、DC009 (0.007 mg/kg，15分鐘IV輸注)，或在腦中風發作3小時後用DC009 (0.007 mg/kg，15分鐘IV輸注)對大鼠進行治療(每個治療組n=10)。在藥物施用後24小時，用神經功能缺損評分(NDS)評估大鼠。
PIT術後24小時，對大鼠實施安樂死，並對大腦進行TTC染色。梗塞體積總結在下表5中。 表5
組 治療 時間 基底神經節 大腦皮層 總計
載劑 0.9% NaCl   97.8 ± 7.3 267.5 ± 20.0 365.3 ± 25.0
rtPA 10 mg/kg PIT後1小時 80.7 ± 4.3 200.0 ± 18.1 280.7± 20
rtPA 10 mg/kg PIT後3小時 87.0 ± 7.0 173.5 ± 19.4 ** 260.6± 23.9 **
DC009 0.007 mg/kg PIT後1小時 63.7 ± 10.3 ** 210.6 ± 26.4 274.4± 33.2 *
DC009 0.007 mg/kg PIT後3小時 94.8 ± 6.2 227.7 ± 18.4 322.5 ± 23.0
* P＜ 0.05 vs 載劑；** P＜ 0.01 vs 載劑
與載劑治療相比，在PIT術後的不同時間施用的DC009或rtPA減少了梗塞。與載劑治療相比，早期rtPA治療(PIT術後1小時)減少了總腦梗塞體積。與載劑治療相比，PIT術後1小時的DC009治療也顯著減少了總腦梗塞。
實施例 11. 試驗 101 ： DC009 藥物製劑在健康受試者中的安全性、耐受性和藥代動力學
這項1期、雙盲、隨機、安慰劑對照研究的主要目標是確定在健康受試者中通過15分鐘靜脈輸注施用的單次遞增劑量DC009藥物的安全性、耐受性和藥代動力學。次要目標區別是單次遞增劑量的藥效學特徵，探索單次遞增劑量的藥代動力學-藥效學關係，並確定DC009藥物製劑的RP2D。
受試者人群是年齡在18至65歲之間的健康成年男性和女性受試者。16名健康受試者完成了這項試驗。所有受試者均接受單劑量DC009藥物製劑或安慰劑，通過15分鐘靜脈輸注施用。
組別1 (8名受試者)施用0.05 mg/kg DC009藥物製劑或安慰劑，而組別0 (8名受試者)施用0.025 mg/kg DC009藥物製劑或安慰劑。劑量和設計總結在表6中。 表6
組別 劑量濃度 (mg/kg) DC009 藥物製劑的受試者人數 安慰劑的受試者人數 施用時間
0 0.025 mg/kg 6 2 15分鐘靜脈輸注
1 0.05 mg/kg 6 2 15分鐘靜脈輸注
主要終點：• 不良事件(AE)的性質和嚴重程度以及發生AE的受試者人數 • 與基線相比生命表征、心電圖(ECG)結果、檢驗異常、纖溶酶-抗纖溶酶複合物、優球蛋白凝塊溶解時間、血小板聚集和體格檢查結果的變化 • 藥代動力學參數：最大血漿濃度(C max)、達到觀察到的最大(峰值)濃度的時間(T max)、從時間零到最後可量化濃度的時間的血漿濃度-時間曲線下面積(AUC 0-t)，血漿濃度-時間曲線下從時間零到最後可量化濃度的時間(AUC 0-t)、消除半衰期(T 1/2)、藥物從血漿中的全身清除率(CL)和體積分配
次要終點• 施用後至48小時內的DC009藥物製劑對血壓、凝血酶時間(TT)、凝血酶原時間(PT)、優球蛋白凝塊溶解時間和部分凝血酶活酶時間(aPTT)的藥效學影響 • DC009血漿濃度與選定的PD和安全參數之間的關係 • RP2D (推薦的臨床II期劑量)
結果
DC009藥物製劑在兩個劑量組別中都是安全且耐受性良好的。兩個組別均未報告嚴重不良事件(SAE)。在組別0中沒有報告AE。在組別1中，0.05mg/kg劑量組的2名受試者報告了TEAE (頭痛、接觸性皮膚炎)，接受安慰劑的1名受試者報告了TEAE (注射部位血腫)。
本研究中收集的安全資料還包括生命表徵(心率、血壓、呼吸頻率和體溫)、心電圖、臨床檢驗數值、尿分析、血液學、凝血參數和糞便潛血試驗。在測量的任何安全參數中都沒有臨床上顯著的發現。
評估的DC009藥物製劑的藥代動力學參數包括最大血漿濃度(C max)、達到C max的時間(T max)、從時間零到至無窮大的血漿濃度-時間曲線下面積(AUC 0- ∞)、從時間零到最後可量化濃度時間的血漿濃度-時間曲線下面積(AUC 0-t)、消除半衰期(T 1/2)、藥物從血漿中的全身清除率(CL)和穩態分佈體積(V ss)。在以下時間點採集單一血樣用於定量血漿中DC009：施用前、5、10、15 (輸注結束)、20、25、30和45分鐘；開始輸注後的1、2、4、6、12、18和24小時。
表8中的資料顯示DC009迅速從體循環中清除，僅在輸注開始後的前半小時內可在血漿樣品中測量。T 1/2的平均值為0.054小時，介於0.05和0.07小時之間。T max發生在6到18分鐘之間。與0.025 mg/kg劑量相比，0.05 mg/kg劑量後的分佈體積和清除率更高。數據顯示，DC009藥物製劑中的DC009暴露與劑量大致成正比。0.05 mg/kg劑量給藥後的AUC和C max略低於0.025 mg/kg劑量給藥後的兩倍。0.025 mg/kg劑量與0.05 mg/kg劑量的劑量標準化幾何平均比值對於AUC 0-inf為1.40，對於C max為1.46。
數據顯示，0.05 mg/kg和0.025 mg/kg的平均C max均低於DC009的安全110ng/mL血漿暴露極限。來自受試者001-008 (C max為152ng/mL)和受試者001-042 (C max為120ng/mL)的結果表明，DC009在人類中C max約為150ng/mL時是可耐受的。 表7
受試者 ID AUC 0-t(ng*hr/mL) C max(ng/mL) 消除半衰期 ( 分鐘 )
組別 1,0.05 mg/kg
001-084 4.62 24.7 N/A
001-008 31.86 152 N/A
001-029 19.18 65.7 4.2
001-045 19.84 87.8 N/A
001-042 26.42 120 3.0
001-070 23.80 94.9 3.6
平均值 ± SEM 21.0 ± 3.8 90.9 ± 17.9 3.60 ± 0.2
組別 0,0.025 mg/kg
001-142 15.23 65.1 N/A
001-156 10.07 57.5 N/A
001-153 12.05 51.6 N/A
001-155 16.06 68.7 3.0
001-150 11.18 42.5 3.6
001-145 14.83 73.8 N/A
平均值 ± SEM 13.2 ± 1.0 59.9 ± 4.7 3.30 ± 0.2
實施例 12. 試驗 103 ： DC009 藥物製劑在健康受試者中的安全性、耐受性和藥代動力學
這項I期、雙盲、隨機、安慰劑對照研究的目標是評估多劑量DC009藥物製劑在健康成人受試者中的安全性、耐受性和藥代動力學。 表8
劑量濃度 (mg/kg) DC009 藥物製劑的受試者人數 安慰劑的受試者人數 施用時間
0.025 mg/kg 10 2 15分鐘靜脈輸注, BID Q12h, 3 days (*)
0.05 mg/kg 11 1 30分鐘靜脈輸注, BID, Q12h, 3天(*)
* 每天2次，第二劑應在第一劑之後12小時施用
主要終點：• AE的性質和嚴重程度以及AE受試者的數量 • 與基線相比生命表徵、心電圖(ECG)結果、檢驗異常和體格檢查結果的變化 • 藥代動力學參數：最大血漿濃度(C max)、達到觀察到的最大(峰值)濃度的時間(T max)、從時間零到無窮大的血漿濃度-時間曲線下面積(AUC 0- ∞)、從時間零到最後可量化濃度時間的血漿濃度-時間曲線下面積(AUC 0-t)、消除半衰期(T 1/2)、藥物從血漿中的總體清除率(CL)和分佈容積。
次要終點• 施用後至24小時內DC009藥物製劑對血壓、凝血酶原時間(PT)和部分凝血活酶時間(aPTT)的藥效學影響
結果
評估的DC009藥物製劑的藥代動力學參數包括最大血漿濃度(C max)、達到C max的時間(T max)、從時間零至無窮大的血漿濃度-時間曲線下面積(AUC 0- ∞)、從時間零到最後可量化濃度時間的血漿濃度-時間曲線下面積(AUC 0-t)、消除半衰期(T 1/2)、藥物從血漿中的全身清除率(CL)和穩態分佈體積(V ss)。對於0.025 mg/kg組，在以下時間點採集第1次施用(第1天)和第5次施用(第3天)後的單一血液樣本進行血漿中DC009的定量：施用前、5、10、15 (輸注結束)、20、25、30、45和60分鐘。對於0.05 mg/kg組，在以下時間點採集第1次施用(第1天)和第5次施用(第3天)後的單一血樣進行血漿中DC009的定量：施用前、10、20、30 (輸注結束)、35、40、45、50、60和70分鐘。 表9
組 AUC 0-t(ng*hr/mL) 平均值 ± SD C max(ng/mL) 平均值 ± SD 最大 C max(ng/mL) 消除半衰期 ( 分鐘 ) 平均值 ± SD
0.025 mg/kg 15分鐘輸注 第1次施用 13.32 ± 2.94 56.28 ±12.54 78.7 2.84 ± 0.71
0.025 mg/kg, 15分鐘輸注 第5次施用 13.54 ± 3.40 56.84 ±14.52 72.6   2.61 ± 0.44
0.05 mg/kg 30分鐘輸注 第1次施用 21.96 ± 4.75 50.16 ± 11.39 75.2 3.67 ± 1.31
0.05 mg/kg 30分鐘輸注 第5次施用 24.74 ± 4.51 57.32 ± 11.01 72.5 5.47 ± 3.58
DC009藥物製劑在受試者中施用時(每天兩次，持續3天)，在0.025mg/kg (15分鐘輸注)和0.05mg/kg (30分鐘輸注)中安全且耐受良好。報告的AE程度均被定義為I級，並被認為不相關或不太可能相關。安全風險良好可控。
單次和多次施用0.025 mg/kg (15分鐘輸注)和0.05 mg/kg (30分鐘輸注)後的T max和C max相似。0.05 mg/kg組的AUC 0-t、AUC 0- ∞高於0.025 mg/kg組。兩組的C max均低於110ng/mL暴露極限。
在0.025 mg/kg和0.05 mg/kg施用後，未觀察到對血壓(SBP/DBP)和凝血因數(PT/APTT)的顯著影響。
根據本試驗健康受試者的安全性結果，3天多劑量DC009藥物製劑的靜脈輸注在健康受試者中是安全且耐受良好的，C max遠低於暴露極限。
實施例 13. 試驗 105 ： DC009 藥物製劑在健康受試者中的安全性、耐受性和藥代動力學
這項雙盲、隨機、安慰劑對照的1期研究的目標是評估多劑量DC009藥物製劑在健康成人受試者中的安全性、耐受性和藥代動力學以及藥物-藥物相互作用。
A 部分
為確定在健康受試者中在一天內的每個劑量之間，3天每天三次(TID)使用的DC009藥品(Q3h靜脈輸注施用)的安全性、耐受性和藥代動力學。A部分是雙盲、安慰劑對照研究，該研究將檢查多劑量DC009藥物製劑在健康受試者中的安全性和藥代動力學特徵。 表10
劑量濃度 (mg/kg) DC009 藥物製劑的受試者人數 安慰劑的受試者人數 施用時間
0.025 mg/kg 12 4 15分鐘靜脈輸注, TID, Q3h, 3天(*)
*一天3次，第2劑應在第1劑後3小時服用，第3劑應在第2劑後3小時服用
終點 - AE的性質和嚴重程度以及AE受試者的數量 - 與基線相比體格檢查、生命表徵、心電圖評估、血氧飽和度、凝血和臨床檢驗數值的變化。 - 血漿和尿液藥代動力學參數 - 對收縮壓和舒張壓(SBP/DBP)、凝血酶原時間(PT)、部分凝血活酶時間(aPTT)和凝血酶時間(TT)的影響。
B 部分
一項開放試試驗，用於評估DC009與阿司匹林、氯吡格雷、阿哌沙班或達比加群聯合施用時的安全性和藥代動力學。 表11
組 DC009 施用時間 藥物劑量 受試者數
阿司匹林 第1天: 單次15分鐘靜脈輸注0.025 mg/kg 第6-8天: 15分鐘靜脈輸注0.025 mg/kg, TID, Q3h* 第2天: 325 mg阿司匹林 第3-8天: 81 mg阿司匹林 12
氯吡格雷 第1天: 單次15分鐘靜脈輸注0.025 mg/kg 第7-9天: 15分鐘靜脈輸注0.025 mg/kg, TID, Q3h* 第2天: 300 mg氯吡格雷 第3-9天: 75 mg 阿司匹林 12
阿哌沙班 第1天: 單次15分鐘靜脈輸注0.025 mg/kg 第5-7天: 15分鐘靜脈輸注0.025 mg/kg, TID, Q3h* 第2-7天: 5mg阿哌沙班, BID, Q12h**   12
達比加群 第1天: 單次15分鐘靜脈輸注0.025 mg/kg 第5-7天: 15分鐘靜脈輸注0.025 mg/kg, TID, Q3h* 第2-7天: 110 mg達比加群, BID, Q12h**   12
*一天3次，第2劑應在第1劑後3小時施用，第3劑應在第2劑後3小時施用
**一天2次，第2劑應在第1劑後12小時施用
終點 -AE的性質和嚴重程度以及AE受試者的數量 -與基線相比體格檢查、生命表徵、心電圖評估、血氧飽和度、凝血和臨床檢驗數值的變化。 -DC009的血漿藥代動力學參數 -阿司匹林、氯吡格雷、阿哌沙班和達比加群的血漿藥代動力學參數。
結果
DC009藥物製劑在單獨施用和與阿司匹林、氯吡格雷、阿哌沙班或達比加群聯合施用時大致是安全且耐受性良好的。
報告的TEAE的嚴重程度是輕度的，沒有一個是重度的，也沒有一個導致受試者退出試驗。最常報導的TEAE是A部分中的月經不調、腹痛、口腔皰疹和頭痛，以及B部分中的腹痛和頭痛。沒有與異常臨床檢驗數值相關的TEAE。在試驗中任何部分，臨床檢驗參數(血液學、臨床化學和尿液分析)、生命表徵、心電圖和脈搏血氧飽和度結果均未報導有臨床意義的變化。
DC009藥物製劑在與阿哌沙班和達比加群共同施用時對凝血的影響有限。DC009藥物製劑與阿司匹林和氯吡格雷共同施用時對COL/ADP和COL/EPI的影響有限。
在所有受試者(N=12)的情況下，DC009藥物製劑的平均C max在第1天為40.14 ng/mL，在第3天為48.86 ng/mL。DC009藥物製劑的峰值血漿濃度在施用後10-15分鐘達到，且DC009藥物製劑在施用後15分鐘開始消除。在中國人種受試者中(N=6)，DC009藥物製劑的平均C max在第1天為37.30 ng/mL，在第3天為40.00 ng/mL。在非亞裔人種受試者中(N=6)，DC009藥物製劑的平均C max在第1天為42.98 ng/mL，在第3天為57.72 ng/mL。DC009藥物製劑的平均AUC 0-last、C trough和T max在中國和非亞裔人種間相當。 表12
劑量 : 0.025 mg/kg (N = 12) 第 1 天 第 1 劑 第 3 天 第 9 劑
AUC 0-last(ng*hr/mL) 平均值± SD 9.258 ±2.797 11.87 ± 3.364
C max(ng/mL) 平均值± SD 40.14  ±12.5 48.86 ±17.06
最大C max(ng/mL) 57.50 95.00
為了研究DC009的劑量是否在多劑量方案中累積，通過比較DC009的多日TID每日三次的給藥方案中首劑和末劑的藥代動力學參數來評估潛在的劑量累積效應。比較是在單獨使用DC009或與阿司匹林、氯吡格雷、阿哌沙班或達比加群聯合施用的情況下進行的。用於比較的藥代動力學參數包括AUC 0-t和C max。結果表明，DC009藥物製劑的3天TID施用的結果是平均C max為48.86 ng/mL，最大C max為95 ng/mL，此為安全範圍內的受試者血漿累積。
實施例 14. 試驗 201 ： 2 期急性缺血性腦中風患者的單劑量研究
這項2期、雙盲、單劑量、隨機、安慰劑對照研究的目的是評估DC009藥物製劑在急性缺血性腦中風(AIS)患者中的安全性、耐受性和潛在功效。這項2期研究的安全性和潛在功效結果將引導急性缺血性腦中風患者未來試驗的設計。符合條件的患者將按2:1隨機分配接受經15分鐘靜脈輸注的DC009藥物製劑或安慰劑，收案總共約24名可評估患者。符合條件的患者將在腦中風症狀發作後24小時內接受單次0.025 mg/kg劑量的DC009藥物製劑或安慰劑。 表13
劑量濃度 (mg/kg) 施用時間 受試者數 治療時間窗
0.025 mg/kg 單次15分鐘靜脈輸注 16 腦中風症狀發作後24小時內
安慰劑 單次15分鐘靜脈輸注 8 腦中風症狀發作後24小時內
關鍵收案標準如下：受試者a)在篩選時年齡為18-90歲(含)，b) NIHSS為4-30，c)在腦中風症狀後24小時內臨床診斷為AIS發作。
組織纖維蛋白溶酶原活化物(阿替普酶)是美國唯一獲批的腦中風治療藥物，根據仿單，必須在腦中風症狀出現後3小時內施用。其他國家批准的施用時間窗有所不同。由於在美國沒有獲批的急性缺血性腦中風藥物治療超過3小時的腦中風症狀發作，因此安慰劑對照研究在倫理上是可接受的，並且是客觀評估藥物效果的必要條件。初步功效將通過評估梗塞體積、復發性腦中風的發生、NIHSS測量的神經系統結果和改良Rankin量表(mRS)測量的功能獨立性來評估。
主要終點-施用後36小時內出現症狀性顱內出血(sICH)，臨床惡化定義為NIHSS增加4分以上，並通過電腦斷層掃描或核磁共振造影確認。
次要終點：-施用後7天內出現症狀性顱內出血(sICH)和無症狀性顱內出血(aICH) -施用後24小時、7天、30天和90天內因腦內或其他嚴重出血併發症而發生的死亡。 -施用後90天內AE的數量和嚴重程度 -施用後90天內發生復發性腦中風 -功能結果，例如mRS -神經系統結果，例如30天時NIHSS -24小時和7天的CT或MRI檢查中梗塞體積的變化 -DC009的血漿PK參數
結果
基線表徵 表14
基線​ DC009 (N=16)​ 安慰劑 (N=8)​
年齡​ 平均值±SD ​ 62.1 ± 12.6​ 67.6 ± 9.2​
發作到治療時間 中位數(hr, 範圍)​ 21 (7-24)​ 18.5 (9-23)​
平均值(hr, ±SD)​ 17.9 ± 5.9​ 18.0 ± 5.0​
mRS 中位數(範圍)​ 4 (2-5)​ 3.5 (2-5)​
平均值(±SD)​ 3.9 ± 0.9​ 3.5 ± 1.1​
NIHSS 中位數(範圍)​ 6 (4-24)​ 5 (4-17)​
平均值(±SD)​ 10.1 ± 7.5​ 7.3 ± 4.8​
安全性結果
試驗期間7天內沒有受試者報導有sICH。90天內沒有受試者因腦內出血或其他嚴重出血併發症而死亡。30天內沒有受試者因任何原因死亡。
在第30天，觀察到安慰劑組1名受試者(14.3%)的NIHSS增加≥4分，DC009藥品組中沒有受試者的NIHSS增加≥4分。
DC009藥品組4名受試者(25%)和安慰劑組2名受試者(25%)報告了嚴重的TEAE，所有這些都被認為與研究產品無關或不太可能相關。在這6名受試者中，有2名受試者(每組各1人)在第90天死於嚴重的TEAE。
除安慰劑組中的1名受試者外，安全性數據集中的所有受試者都報告了至少1次TEAE。試驗期間報導的最常見TEAE包括DC009藥物製劑組中10名受試者(62.5%)和安慰劑組中4名受試者(50.0%)報告的便秘，以及DC009藥物製劑中5名受試者(31.3%)和安慰劑組中的2名受試者(25%)報告的高血壓。研究期間報告的大多數TEAE與研究產品無關或不太可能相關。沒有受試者被報導有與試驗產品肯定相關的TEAE。研究期間報告的大多數TEAE為輕度或中度。沒有受試者因為TEAE而停用研究產品。
臨床檢驗參數、生命表徵、心電圖和神經系統檢查未觀察到有臨床意義的趨勢。
功效結果
與安慰劑組(14.3%)相比，第30天DC009藥物製劑中較高比例的受試者(46.7%)報告NIHSS減少≥4。應該注意，與安慰劑組(7.3[±4.77])相比，DC009藥物製劑組的基線NIHSS更高(10.1[±7.45])，這意味著NIHSS在基線處並不平衡，而DC009藥物製劑組中的受試者起始就具有更差的NIHSS。 表15
NIHSS​ DC009 藥物製劑 安慰劑​
從基線至第30天的NIHSS 改善≥4分(%受試者)​ * IV rtPA早期臨床試驗中的功效終點​ 47%​ 14%​
從基線至第30天的NIHSS改善≥4分+ 第30天的NIHSS ≤1 (% 受試者)​ * AIS早期臨床試驗的推薦終點​ 47%​ 29%​
從基線至第30天的NIHSS 變化(平均值± SD) ​ -3.1 ± 2.8​ -1.1 ± 3.3​
基線NIHSS ≥ 6的患者中從基線至第30天的NIHSS 變化(平均值± SD) ​ -4.3 ± 3​ 3.5±2.1​
圖6顯示了來自NIHSS基線≥6的亞群的從基線的NIHSS評分變化。DC009藥品組的平均得分變化為-4.3±3分，這表明神經系統結果有所進步，而安慰劑組的平均得分變化為3.5±2.1分，表明神經系統結果退步。結果表明DC009藥物製劑的功效可以在神經缺陷更嚴重的患者亞群中觀察到。
在第90天，DC009藥物製劑組中3名受試者(21.4%)和安慰劑組中1名受試者(14.3%)報告了mRS為0-1；DC009藥物製劑組中7名受試者(50.0%)和安慰劑組中3名受試者(57.2%)報告了mRS為0-2。在所有訪視中，兩個治療組之間報告mRS0-2的受試者比例相當。在腦中風發生後的基線，DC009藥物製劑組中13名受試者(81.3%)和安慰劑組中4名受試者(50.0%)報告了mRS為4-5。mRS結果總結在表16中。 表16
mRS​ DC009 安慰劑 ​
描述​ 評分​ 施用前​ 第90天 施用前​ 第90天​
重度殘疾需要持續護理關注、臥床不起、失禁 5​ 81%​ 21%​ 50%​ 29%​
中度至重度殘疾在無協助情況下無法照顧自身身體需求，無法無協助地行走 4​
中度殘疾需要一定的協助，但能無協助地行走 3​ 6%​ 29%​ 25%​ 14%​
輕度殘疾能夠在無協助情況下關照自身情況，但無法進行所有以前的活動 ​ 2​ 13%​ 29%​ 25%​ 43%​
無顯著殘疾能夠進行通常活動，但有一些症狀 1​ 0%​ 21%​ 0%​ 14%​
無症狀 0
試驗201的結果表明，DC009藥物製劑在患有AIS的受試者中是安全且耐受性良好的。與安慰劑組相比，0.025 mg/kg劑量的DC009藥物製劑在治療AIS患者方面顯示出功效。
實施例 15. 試驗 202 ： 2 期急性缺血性腦中風患者的多劑量研究
這項2期、雙盲、多劑量、隨機、安慰劑對照研究的目的是評估DC009藥物製劑在AIS受試者中的安全性、耐受性和潛在功效。 表17
劑量濃度 (mg/kg) 施用時間 受試者數 治療窗口
0.025 mg/kg 30分鐘靜脈輸注, BID, Q3-12h*, 3天 1X 腦中風發作後24小時內
0.05 mg/kg 30分鐘靜脈輸注, BID, Q3-12h*, 3天 1X 腦中風發作後24小時內
安慰劑 30分鐘靜脈輸注, BID, Q3-12h*, 3天 1X 腦中風發作後24小時內
*每天兩次，每天的第二劑將在第一次施用後3-12小時內施用。
關鍵收案標準如下：受試者a)篩查時年齡為18-80歲(含)，b) NIHSS為4-25，c)腦中風發作後24小時內臨床診斷為AIS。
安全性終點 -施用後sICH和aICH的發生 -施用後因腦內或其他嚴重出血併發症而導致死亡的發生 -施用後死亡的發生 -施用後90天內AE的數量和嚴重程度
主要終點 - mRS為0-2的患者的比例 -施用後NIHSS下降4分以上及NIHSS≤1的患者的比例
次要終點： -功能結果，例如施用後特定時期的改良Rankin量表(mRS)的變化 -與基線相比，施用後特定時期NIHSS的變化等神經學結果 -在施用後特定時期通過巴氏量表評估的日常生活活動和生活品質 實施例 16. 試驗 203 ： 2 期急性缺血性腦中風患者的單劑量和多劑量研究
本研究是一項2期、兩部分、雙盲、隨機、安慰劑對照研究，旨在評估DC009藥物製劑在接受血管內血栓移除術(EVT)的AIS受試者中的安全性和功效。
關鍵收案標準如下：受試者a)在篩選時年齡為18-90歲(含)，b) NIHSS≥6，c)有資格在腦中風症狀發作後24小時內接受EVT治療，d)在EVT前和腦中風症狀發作後24小時內接受研究產品，e)根據核磁共振血管造影(MRA)/電腦斷層血管造影(CTA)在以下位置確認有症狀性顱內閉塞：M2分叉之前的M1大腦的中動脈(MCA)，f)在MRI (包括灌注)或CTP上具有以下目標壞死區與缺血區不批配特徵(Target Mismatch Profile)：缺血核心體積≤70mL，壞死區與缺血區不批配比＞1.2。 表18. A部分設計
劑量濃度 (mg/kg) 施用時間 受試者數 治療時間窗
0.025 mg/kg 15分鐘靜脈輸注，單劑 2x 腦中風症狀發作後24小時內且血管內血栓移除術(EVT)前
安慰劑 15分鐘靜脈輸注，單劑 1x 腦中風症狀發作後24小時內且血管內血栓移除術(EVT)前
A部分研究的目的是確定單劑量DC009藥物製劑在接受血管內血栓移除術(EVT)的急性缺血性腦中風(AIS)受試者中靜脈內施用的安全性和功效。
主要終點 -單次施用後24小時內發生sICH；臨床惡化定義為NIHSS增加4分以上，並通過核磁共振(MR)/電腦斷層掃描(CT)造影確認
次要終點 (1)安全性結果 - sICH、aICH的發生和死亡率 - AE的數量和嚴重程度以及AE受試者的數量 (2)功能結果 -具有獨立功能結果的受試者比例，定義為施用後mRS≤2 -具有優異功能結果的受試者比例，定義為施用後mRS≤1 -相對於基線的mRS的每一等級的受試者比例變化 -復發性腦中風的發生 (3)神經學結果 -神經系統結果改善的受試者比例，定義為NIHSS相對於基線的減少/變化 -施用後NIHSS≤2的受試者比例 (4)影像結果 -通過MRI/CTP的相對於基線的梗塞體積變化。 -通過腦灌注加權影像MRI/CTP的相對於基線的低灌注病變變化。 -通過腦灌注加權影像MRI/CTP的相對於基線的低灌注病變減少90%的受試者比例。 - EVT術前後的血管再開通率。 -具有完全血管再開通/大量血管造影再灌注的受試者比例，定義為EVT術後改良式腦梗塞溶栓治療分級(mTICI) ≥2b。 表19. B部分設計
劑量濃度 (mg/kg) 施用時間 受試者數 治療時間窗
0.025 mg/kg 15分鐘靜脈輸注，BID, Q3-12h, 3天* 2x 腦中風症狀發作後24小時內，第1劑DC009將在血管內血栓移除術(EVT)前施用
安慰劑 15分鐘靜脈輸注，BID, Q3-12h*, 3天* 1x 腦中風症狀發作後24小時內，第1劑將在血管內血栓移除術(EVT)前施用
*每天兩次，每天的第二劑將在第一次施用後3至12小時內施用。
B部分研究的目的是確定多劑量DC009藥物製劑在接受EVT的AIS受試者中的功效和安全性。
主要終點 -神經系統結果改善的受試者比例，定義為NIHSS比基線下降4分以上。
次要終點 (1)功能結果： -具有獨立功能結果的受試者比例，定義為首次施用後mRS≤2。 -具有優異功能結果的受試者比例，定義為施用後mRS≤1 -相對於基線的mRS的每一等級的受試者比例變化 (2)神經學結果 -神經學結果改善的受試者比例，定義為NIHSS相對於基線的減少/變化 -首次施用後NIHSS≤2的受試者比例 (3)腦中風復發的發生 (4)蒙特利爾認知評估(MoCA)的認知評估與基線相比的變化。 (5)影像結果 -通過MRI/CTP的相對於基線的梗塞體積變化。 -通過腦灌注加權影像MRI/CTP的相對於基線的低灌注病變變化。 -通過腦灌注加權影像MRI/CTP的相對於基線的低灌注病變減少90%的受試者比例。 -EVT術前、EVT後、24小時和7天的血管再開通率。 -具有完全血管再開通/大量血管造影再灌注的受試者比例，定義為在EVT術後改良式腦梗塞溶栓治療分級(mTICI)≥2b。 (6)安全性結果 - sICH和aICH的發生 -死亡的發生。 - AE的數量和嚴重程度以及AE受試者的數量。 實施例 17. 試驗 205 ： 2 期急性缺血性腦中風患者的多劑量研究
這項II期、雙盲、隨機、安慰劑對照研究的目的是評估多劑量DC009藥物製劑在急性缺血性腦中風(AIS)受試者中的安全性和功效。 表20
劑量濃度 (mg/kg) 施用時間 受試者數 治療時間窗
0.05 mg/kg 30分鐘靜脈輸注, BID, Q3-12h, 3天 1x 第1劑DC009在腦中風症狀發作後24小時內施用
安慰劑 30分鐘靜脈輸注, BID, Q3-12h, 3天 1x 第1劑安慰劑在腦中風症狀發作後24小時內施用 
*每天兩次，每天的第二劑將在第一次施用後3至12小時內施用。
關鍵收案標準如下：受試者a)篩查時年齡為18-90歲(含)，b) NIHSS為6-25，c) 具有MRI或CTP目標壞死區與缺血區不批配特徵：缺血核心體積≤70mL，壞死區與缺血區不批配比＞1.2，壞死區與缺血區體積≥5mL。
主要終點 -在第一次施用後90天內被判斷為可能或肯定與DC009藥物製劑相關的治療緊急不良事件(TEAE)的受試者比例。
次要終點 (1)功能成果 -第一次施用後mRS≤2的受試者比例。 -第一次施用後mRS≤1的受試者比例。 -第一次施用後，相對於基線的mRS的每一等級的受試者比例變化 (2)神經學結果 -相對於基線的NIHSS≥4分的受試者比例。 -神經學結果改善的受試者比例，定義為第一次施用後相對於基線的NIHSS下降≥4分或NIHSS為0至1分。 -NIHSS≤2和NIHSS≤1的受試者比例。 -第一次施用後相對於基線的NIHSS變化。 -復發性腦中風的發生。 -蒙特利爾認知評估(MoCA)的認知評估相對於基線的變化。 (c)成像結果 -通過MRI/CTP的相對於基線的梗塞體積變化。 -通過腦灌注加權影像MRI/CTP的相對於基線的低灌注病變變化。 -通過腦灌注加權影像MRI/CTP的相對於基線的低灌注病變減少90%的受試者比例。 (d)安全性結果 - sICH和aICH的發生；臨床惡化定義為NIHSS增加4分以上，並通過核磁共振(MR)/電腦斷層掃描(CT)影像確認。 -第一次施用後因任何原因發生的死亡。 - AE的數量和嚴重程度以及AE受試者的數量。 實施例 18. DC009 在 Sprague Dawley 大鼠中單次靜脈內施用後的藥代動力學研究
在單次靜脈團注施用DC009後，在SD大鼠中研究了DC009的血漿藥代動力學。雄性SD大鼠以0.001、0.01、0.1、1和10mg/kg的劑量通過靜脈團注施用DC009，劑量體積為1mL/kg (每個治療組n=3)。 表21
Group 治療
動物數 / 性別 測試品 劑量水準 (mg/kg) 途徑 劑量體積
1 3 雄性 DC009 0.001 靜脈團注 1 mL/kg
2 3雄性 0.01
3 3雄性 0.1
4 3雄性 1
5 3雄性 10
血漿採集 施用前，單次靜脈團注後2 分鐘、5 分鐘、15 分鐘、30 分鐘、60 分鐘、120 分鐘、240 分鐘
表22
組 1* 2* 3 4 5
劑量濃度 (mg/kg) 0.001 0.01 0.1 1 10
劑量 (nmol/kg) 1.5 15 15 1500 15000
  平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD 平均值 SD
C max(ng/mL) 1.6 1.1 6.1 3.0 59.9 4.1 426.0 4.1 8117.2 1049.9
AUC last(min*ng/mL) 105.5 118.9 200.9 56.1 473.2 149.1 3165.1 200.4 56161.9 3854.8
AUC 0~∞(min*ng/mL) 113.0 128.4 242.4 96.9 498.7 167.7 3189.5 178.3 56199.0 3803.6
*在施用組1和2中，一些血漿樣品的測量濃度低於5 ng/mL (LLOQ，定量下限)
0.1至10 mg/kg組劑量的結果表明，增加DC009的劑量導致SD大鼠中C max和AUC 0- ∞大致與劑量成比例增加。
實施例 19. 藥物製劑、劑量和施用 ( 針對實施例 11-14)
DC009化合物的製備公開於美國專利公開2016-0083423號的實施例63中。
DC009藥物製劑(注射用凍乾粉)是一種可注射產品，以無防腐劑、無菌、凍幹材料的形式提供在用丁基橡膠塞和可翻轉鋁壓接密封件密封的玻璃小瓶中。每個小瓶包含相當於20毫克游離堿的DC009藥物物質作為凍乾餅或粉末。安慰劑的成分、組成和外觀與DC009藥物製劑相同，但不含活性化合物。
在DC009藥物製劑的製造中，首先將甘露醇溶解在注射用水(WFI)中，然後加入DC009的鹽酸鹽(C32H51N7O8·3HCl)。將pH值調節至4.5後，用WFI將溶液稀釋至目標重量，並檢查溶液的滲透壓，然後使用0.2 µm PVDF濾膜通過無菌過濾進行滅菌。預製劑含有10 mg/mL DC009和3.8 w/w%的甘露醇。在每個小瓶填充至±2%以內的目標重量後，將小瓶用20-mm瓶塞進行半密封，然後放入凍乾機用托盤中。冷凍乾燥循環完成後，用氮氣打破真空以在成品藥物製劑中提供惰性頂部空間。
DC009藥物製劑在使用前用0.9%生理食鹽水回溶至4mg/mL，並用生理食鹽水進一步稀釋至合適濃度並通過靜脈輸注施用。在實施例11-14中，將適量的藥物製劑稀釋至90mL，輸注體積為60mL。
在實施例15-17中，DC009的藥物配方、劑量和施用方式與上述相似，不同之處在於每個藥品小瓶中DC009藥物物質的量、生理食稀釋倍數和輸注體積可根據常規實踐進行修改。
本發明以及製備和使用它的方式和過程現在以完整、清晰、簡潔和準確的術語進行了描述，以使本領域技術人員對其進行製備和使用。應當理解，前文描述了本發明的優選實施方式，並且可以不背離如權利要求中所述的本發明的範圍的情況下進行修改。為了特別指出和清楚地要求被視為發明的主題，本說明書以所附權利要求進行總結。
無
圖1A顯示了DC009的化學結構。圖1B顯示了DC009的化學結構以及NH-Lys-Ala-Pro的細節。 圖2顯示了神經功能缺損評估的方法。 圖3顯示了單劑量DC009在大鼠MCAO模型中的血流結果。 圖4顯示了大鼠MCAO模型中多劑量DC009的梗塞體積結果。 圖5總結了實施例1-10 (大鼠模型)。 圖6顯示DC009在人類受試者中的神經學改善。 圖7總結了實施例11-16 (人體臨床試驗結果或方案)。
國內寄存資訊(請依寄存機構、日期、號碼順序註記) 無 國外寄存資訊(請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記) 無
Figure 02_image001
Figure 111110429-A0304-11-0002-1

Claims (16)

  1. 一種化合物DC009用於治療人類急性缺血性腦中風的用途，                     DC009，其中DC009劑量係約0.01-0.075 mg/kg/劑。
  2. 如請求項1所述化合物的用途，其中所述劑量係約0.025-0.05 mg/kg/劑。
  3. 如請求項2所述化合物的用途，其中所述劑量係約0.025 mg/kg/劑。
  4. 如請求項2所述化合物的用途，其中所述劑量係約0.05 mg/kg/劑。
  5. 如請求項1至4中任一項所述化合物的用途，其中所述劑量以每天至少一次施用。
  6. 如請求項5所述化合物的用途，其中所述劑量以每天兩次施用。
  7. 如請求項1至6中任一項所述化合物的用途，其中所述劑量以約3-12小時的給藥間隔施用。
  8. 如請求項1至7中任一項所述化合物的用途，其中所述劑量以每天至少一次，施用2天或3天。
  9. 如請求項4所述化合物的用途，其中所述劑量以每天至少兩次，施用3天。
  10. 如請求項9所述化合物的用途，其中所述劑量以約3-12小時的給藥間隔施用。
  11. 如請求項1至10中任一項所述化合物的用途，其中係在急性缺血性腦中風發作後立即地或在1-24小時之內對受試者施用所述化合物。
  12. 如請求項1至11中任一項所述化合物的用途，其中所述化合物係通過靜脈輸注及/或團注施用。
  13. 如請求項1至11中任一項所述化合物的用途，其中所述化合物係通過靜脈輸注施用。
  14. 如請求項13所述化合物的用途，其中所述化合物係通過靜脈輸注5-60分鐘的時間來施用。
  15. 如請求項1至14中任一項所述化合物的用途，其中所述化合物與阿司匹林、氯吡格雷、阿哌沙班或達比加群共同施用。
  16. 如請求項1至15中任一項所述化合物的用途，其中在給藥後所述受試者的血漿中的C max係小於200 ng/mL。
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