TW202220675A

TW202220675A - 降低ｚ－ａａｔ蛋白水準之方法

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Publication number: TW202220675A
Application number: TW110134359A
Authority: TW
Inventors: 棠恩克絲汀安森; 詹姆士Ｃ漢彌頓; 布魯斯齊文; 馬丁賈維爾聖
Original assignee: 美商愛羅海德製藥公司
Priority date: 2020-09-15
Filing date: 2021-09-15
Publication date: 2022-06-01
Also published as: CA3192372A1; BR112023004756A2; EP4214316A2; MX2023003066A; KR20230067648A; CO2023003958A2; AU2021345026A1; AU2021345026A9; WO2022060721A2; JP2023541170A; US20230348905A1; WO2022060721A3

Abstract

本文闡述藉由使用包括AAT RNAi劑之醫藥組合物來降低具有α-1抗胰蛋白酶(AAT)之PiZZ基因型之人類個體中的肝臟Z-AAT蛋白水準之方法。本文所揭示之該等包括AAT RNAi劑之醫藥組合物在投與具有PiZZ突變之人類個體時可降低肝臟Z-AAT蛋白水準，包括可溶性Z-AAT蛋白及不溶性Z-AAT蛋白二者。此等降低可治療與AAT缺乏相關之肝臟疾病，例如慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌風險增加、轉胺酶升高、膽汁淤積、纖維化、猛爆性肝衰竭及其他肝臟相關疾病。

Description

降低Z-AAT蛋白水準之方法

本文揭示使用醫藥組合物降低具有α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)之Z突變之人類個體中之肝臟Z-AAT蛋白水準的方法，該等醫藥組合物包括抑制α-1抗胰蛋白酶基因表現之RNA干擾(RNAi)劑。

α-1抗胰蛋白酶(AAT、α1-抗胰蛋白酶或A1AT)係在人類中由 SERPINA1基因編碼之屬於絲胺酸蛋白酶抑制劑超家族之蛋白酶抑制劑。正常AAT蛋白係在肝臟中主要由肝細胞合成且分泌至血液中之循環糖蛋白蛋白酶抑制劑。AAT之已知生理功能係抑制嗜中性球蛋白酶，其用於保護宿主組織免於發炎時段期間之非特異性損傷。

AATD係體染色體共顯性遺傳病症，其產生低AAT循環水準且引起成人早期肺病以及兒童及成人肝臟疾病。AATD之流行範圍為每1,500至5,000人中有約1人，且最通常侵襲具有歐洲血統之人。

AATD之臨床上最顯著且最嚴重之形式係由Z突變(稱為PiZZ基因型)之純合性引起，其中編碼麩胺酸之單核苷酸多型性經成熟蛋白質之位置342處之離胺酸取代(Glu342Lys)。Z突變體對偶基因經由單一點突變使得突變體Z型AAT蛋白(「Z-AAT蛋白」)易於異常折疊，從而導致肝細胞之內質網(ER)中之細胞內駐留。其他較罕見突變亦在肝細胞中產生錯誤折疊之累積蛋白質。突變體Z-AAT蛋白單體能夠集合成聚合物聚集物，有時稱為「小球」。聚合Z-AAT對ER產生應力且觸發連續肝細胞損傷及愈合週期，從而導致纖維化、肝硬化、及肝細胞癌風險增加。另外，循環抗蛋白酶活性缺乏使得肺易患嗜中性球彈性蛋白酶之損傷，尤其在肺發炎之環境下，導致罹患呼吸系統併發症(例如肺氣腫或其他肺病)。

具有純合PiZZ基因型之個體具有功能性AAT之重度缺乏。每週使用AAT強化療法、使用經純化之人類AAT有助於預防受侵襲個體之肺損傷。此類目前出售之產品包括例如PROLASTIN®-C、PROLASTIN®、GLASSIA ^TM、ARALAST® NP及ZEMAIRA®。然而，儘管投與經純化之AAT可改善或幫助預防由內源分泌性AAT之不存在或低水準引起之肺損傷，但AATD患者(具有引起聚合物形成之AAT-突變)仍易患由過度異常折疊之AAT蛋白之沈積及累積引起之內質網肝臟儲積病。肝細胞中「小球」構形之累積的Z-AAT蛋白係AATD肝臟疾病之熟知組織學特徵且認為導致患有AATD之個體之蛋白毒性效應，其負責誘導肝臟損傷，包括肝臟細胞損壞及死亡以及慢性肝臟損傷(參見例如D. Lindblad等人，Hepatology 2007, 46: 1228-1235)。據報導，不產生AAT之空/空患者罹患重度肺病，但具有正常肝臟形態，從而提供突變體AAT累積且非缺乏循環AAT導致肝病之證據(Feldman, G.等人， The Ultrastructure of Hepatocytes in alpha-1 antitrypsin deficiency with genotype Pi_, Gut.1975; 16:796-799)。

AATD使個體易患兒童及成人肝臟疾病及成人早期發作型肺氣腫。患有AATD之患者通常罹患肝臟疾病，其可為重度或致死的，甚至在嬰兒中亦如此。儘管一些患有AATD之患者最初避開偵測，但最終纖維化會累積且導致臨床上明顯之肝臟疾病。肝臟損傷之臨床呈現包括慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌風險增加、轉胺酶升高(transaminitis)、膽汁淤積、纖維化及甚至猛爆性肝衰竭。

肝細胞中之Z-AAT蛋白累積已清楚地鑑別為AATD患者中進行性肝臟疾病之病因。消除肝細胞中之突變體蛋白累積可阻止肝臟疾病之進展。去除突變體蛋白損傷亦可使已存在之纖維化消退。目前無臨床上批準之治療來預防由AATD引起之肝臟疾病之發作，減緩其進展或以其他方式來治療。

RNAi劑已成為治療AATD患者之有希望的途徑。給藥策略係用RNAi劑治療AATD之重要考慮因素。較不頻繁之給藥為患者所看重，可增加順從性，且較小給藥量在藥物之總體安全性特徵中可能有利。因此，業內需要低劑量、不頻繁之治療AATD之方法。

本文闡述降低具有AATD之Z突變之人類個體中之肝臟Z-AAT蛋白水準的方法。在一個態樣中，該等方法包括向人類個體投與醫藥組合物，其包括表2中所述之組合物(即AAT RNAi原料藥，在本文中亦稱為ADS-001或其鹽)，AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)之劑量介於約5 mg與約300 mg之間，其中醫藥組合物係例如皮下投與且劑量之間間隔例如約一個月或約四週。在一些實施例中，用於本文所揭示方法中之醫藥組合物包含如表3.1中所述之經調配AAT RNAi原料藥(在本文中亦稱為ADS-001-1或其鹽)或表3.2之調配物(在本文中亦稱為ADS-001-2)，由其組成或基本上由其組成。如本文所用且端視上下文而定，術語「約」或「大約」意指在給定值或範圍之5%內，例如在5%內、在4%內、在3%內、在2%內或在1%內。

另外，本文闡述降低具有AATD之Z突變之人類個體中之Z-AAT肝臟蛋白水準的方法，該等方法包括向人類個體投與醫藥組合物，其包括劑量介於約5 mg與約200 mg之間的如表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)，其中醫藥組合物係例如皮下投與且在劑量投與之間間隔例如至少約一個月(即約每月給藥)。

本文進一步闡述治療有需要之人類個體之AATD之方法，該等方法包括向人類個體投與醫藥組合物，其包括劑量介於約5 mg與約300 mg之間的如表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)，其中醫藥組合物係例如皮下投與且在劑量投與之間間隔例如約三個月(即每季度給藥)。

本文亦闡述治療有需要之人類個體之AATD之方法，該等方法包括向人類個體投與醫藥組合物，其包括劑量介於約5 mg與約200 mg之間的如表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)，其中醫藥組合物係例如皮下投與且在劑量投與之間間隔例如約三個月(即每季度給藥)。

本文闡述治療有需要之人類個體之AATD之方法，該等方法包括向人類個體投與醫藥組合物，其包括劑量介於約5 mg與約300 mg之間的如表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)，其中醫藥組合物係例如皮下投與，且其中初始劑量之後為例如約四週或約一個月後之第二劑量，且此後對於後續劑量，在劑量投與之間間隔例如約三個月。

本文闡述治療有需要之人類個體之AATD之方法，該等方法包括向人類個體投與醫藥組合物，其包括劑量介於約5 mg與約200 mg之間的如表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)，其中醫藥組合物係例如皮下投與，且其中初始劑量之後為例如約一個月後之第二劑量，且此後對於後續劑量，在劑量投與之間間隔例如約三個月。

在一些實施例中，在每一劑量中投與之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)之劑量介於例如約25 mg與約200 mg之間。在一些實施例中，在每一劑量中投與之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)之劑量介於約100 mg與約200 mg之間。在一些實施例中，在每一劑量中投與之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)之劑量為約100 mg。在一些實施例中，在每一劑量中投與之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)之劑量為約200 mg。在一些實施例中，在每一劑量中投與之AAT RNAi原料藥之劑量不大於200 mg。

本文所揭示之治療方法可減緩或阻止患有AATD之人類個體之肝臟疾病進展，此可允許纖維變性組織修復。在一些實施例中，本文所揭示方法可治療AATD肝臟疾病，包括纖維化、肝硬化、肝細胞癌風險增加、慢性肝炎、轉胺酶升高、膽汁淤積、猛爆性肝衰竭及由AATD引起之其他肝臟相關疾患及疾病。在一些態樣中，本文所揭示之方法可預防本文所揭示AATD肝臟疾病之症狀、併發症及/或後遺症、延遲其發作或改善該等症狀、併發症及/或後遺症。

可將包括本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之醫藥組合物投與人類個體以抑制個體中α-1抗胰蛋白酶基因之表現。在一些實施例中，個體係先前已經診斷患有AATD之人類。

本發明之另一態樣提供表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)於治療有需要之人類個體之α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)的用途，其中該用途包括向個體投與醫藥組合物，其包含表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)，AAT RNAi原料藥之劑量介於約5 mg至約300 mg之間，其中醫藥組合物係每月一次例如藉由皮下注射投與。

本發明之另一態樣提供表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)於治療有需要之人類個體之α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)的用途，其中該用途包括向個體投與醫藥組合物，其包含表2中所述之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)，AAT RNAi原料藥之劑量介於約5 mg至約300 mg之間，其中醫藥組合物係每三個月一次例如藉由皮下注射投與。

在一些態樣中，本揭示案提供降低具有α-1抗胰蛋白酶之PiZZ基因型之人類個體中之肝臟Z-AAT蛋白水準的方法，該方法包括(i) 向個體投與初始劑量之醫藥組合物，其包含表2中所述之AAT RNAi原料藥，AAT RNAi原料藥之劑量介於約5 mg至約300 mg之間，(ii) 在初始劑量後約四週或約一個月向個體投與第二劑量之醫藥組合物，及(iii) 在第二劑量後約12週或約三個月向個體投與第三劑量之醫藥組合物，其中劑量係藉由皮下注射來投與。

在一些態樣中，AAT RNAi原料藥之劑量介於約25 mg與約300 mg之間。在一些態樣中，AAT RNAi原料藥之劑量介於約25 mg與約200 mg之間。在一些態樣中，AAT RNAi原料藥之劑量介於約100 mg與約200 mg之間。在一些態樣中，AAT RNAi原料藥之劑量為約100 mg。在一些態樣中，AAT RNAi原料藥之劑量為約200 mg。在一些態樣中，AAT RNAi原料藥之劑量為約200 mg或更少。在一些態樣中，可溶性肝臟Z-AAT蛋白水準降低。在一些態樣中，不溶性肝臟Z-AAT蛋白水準降低。在一些態樣中，不溶性肝臟Z-AAT蛋白水準及可溶性肝臟Z-AAT蛋白水準皆降低。

在一些態樣中，該方法進一步包括在第三劑量後投與額外劑量，其中額外劑量係在此後約每12週或約每三個月投與。在一些態樣中，肝臟Z-AAT蛋白水準在距初始劑量六個月內降低。在一些態樣中，肝臟Z-AAT蛋白水準在距初始劑量約一年內降低。在一些態樣中，Z-AAT蛋白水準在投與僅三個劑量之AAT RNAi原料藥後降低。在一些態樣中，肝臟不顯示纖維化惡化或改良。在一些態樣中，肝酶ALT (丙胺酸胺基轉移酶)、GGT (γ-麩胺醯轉移酶)或二者減少。在一些態樣中，纖維生成標記物Pro-C3減少。在一些態樣中，門靜脈肝臟發炎減輕。在一些態樣中，藉由瞬時彈性成像(FIBROSCAN®)之肝臟硬度之非侵入性量測有所改良。

在一些態樣中，向個體進一步投與用於治療AATD之另一治療劑。在一些態樣中，向個體進一步投與用於治療肺損傷、肺氣腫或由內源分泌性AAT蛋白缺乏引起之其他肺疾病或病症的治療劑。在一些態樣中，另一治療劑包含人類AAT蛋白、經純化之人類α-1蛋白酶抑制劑或重組AAT蛋白。

在一些態樣中，包含表2中所述之AAT RNAi原料藥之醫藥組合物包裝於套組、容器、包、分配器、預填充注射器或小瓶中。在一些態樣中，醫藥組合物包含表3.1或表3.2中所述之經調配AAT RNAi原料藥，由其組成或基本上由其組成。在一些態樣中，投與一或多個劑量之醫藥組合物係由個體來實施。在一些態樣中，投與一或多個劑量之醫藥組合物係由醫療專業人員來實施。在一些態樣中，個體係成人。

本揭示案亦提供治療具有α-1抗胰蛋白酶之PiZZ基因型之人類個體之AATD的方法，該方法包括(i)向個體投與初始劑量之醫藥組合物，其包含表2中所述之AAT RNAi原料藥，AAT RNAi原料藥之劑量介於約5 mg至約300 mg之間，(ii)在初始劑量後約四週或約一個月向個體投與第二劑量之醫藥組合物，及(iii)在第二劑量後約12週或約三個月向個體投與第三劑量之醫藥組合物，其中劑量係藉由皮下注射來投與。在一些態樣中，由AATD引起之疾患或疾病係肝臟疾病。在一些態樣中，肝臟疾病係慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌風險增加、轉胺酶升高、膽汁淤積、纖維化或猛爆性肝衰竭。在一些態樣中，AAT RNAi原料藥之劑量介於約100 mg與約200 mg之間。在一些態樣中，AAT RNAi原料藥之劑量為約200 mg或更少。

在本文所揭示方法之一些態樣中，單體(可溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準降低。在一些態樣中，不溶性肝臟Z-AAT蛋白水準降低。在一些態樣中，不溶性肝臟Z-AAT蛋白水準及可溶性肝臟Z-AAT蛋白水準皆降低。在本文所揭示治療具有α-1抗胰蛋白酶之PiZZ基因型之人類個體之AATD的方法之一些態樣中，該方法進一步包括在第三劑量後投與額外劑量，其中額外劑量係在此後約每12週或約每三個月投與。在一些態樣中，肝臟Z-AAT蛋白水準在初始劑量之約六個月內降低。在一些態樣中，肝臟Z-AAT蛋白水準在初始劑量之約一年內降低。在一些態樣中，Z-AAT蛋白水準在投與僅三個劑量之AAT RNAi原料藥後降低。

在本文所揭示方法之一些態樣中，向人類個體投與包含表2中所述之AAT RNAi原料藥(ADS-001)之醫藥組合物會引起(i)纖維化減輕；(ii)門靜脈周圍肝細胞之水準降低；(iii)血清Z-AAT減少；(iv)總肝臟Z-AAT減少；(v)可溶性肝臟Z-AAT減少；(vi)不溶性肝臟Z-AAT減少；(vii) ALT減少；(viii) GGT減少；(ix) Pro-C3減少；(x)脂肪變性之組織學改良，或(xi)其組合。

在一些態樣中，血清Z-AAT之減少為至少約70%。在一些態樣中，血清Z-AAT之減少介於約70%與約100%之間。在一些實施例中，血清Z-AAT之減少為約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約97%或約99%。在一些態樣中，總肝臟Z-AAT之減少為至少約70%。在一些態樣中，總肝臟Z-AAT之減少介於約70%與約100%之間。在一些實施例中，總肝臟Z-AAT之減少為約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約97%或約99%。在一些態樣中，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約50%。在一些態樣中，可溶性肝臟Z-AAT之減少介於約50%與約97%之間。在一些實施例中，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約55%、約60%、約65%、約70%、約80%、約85%、約90%或約95%。在一些態樣中，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約40%。在一些態樣中，不溶性肝臟Z-AAT之減少介於約40%與約97%之間。在一些實施例中，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%或約95%。在一些態樣中，ALT減少為至少約30%。在一些態樣中，ALT減少介於約30%與約75%之間。在一些實施例中，ALT減少為約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%或約70%。在一些態樣中，GGT減少為至少約25%。在一些態樣中，GGT減少介於約25%與約85%之間。在一些實施例中，GGT減少為約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%或約80%。在一些態樣中，纖維化減輕為至少約15%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些態樣中，纖維化減輕介於約15%與約90%之間，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，纖維化減輕為約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%或約85%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些態樣中，Pro-C3減少為至少約15%。在一些態樣中，Pro-C3減少介於約15%與約90%之間。在一些態樣中，人類個體具有脂肪變性之組織學改良。在一些實施例中，Pro-C3減少為約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%或約85%。在一些態樣中，向人類個體投與包含表2中所述之AAT RNAi原料藥(ADS-001)之醫藥組合物可改良纖維化、門靜脈發炎、界面性肝炎、整體門靜脈道累及、PAS+D區域定位、1區「小球」門靜脈周圍累及或其任一組合。

根據以下詳細描述、附圖及申請專利範圍，將明瞭本發明之其他目標、特徵、態樣及優點。

電子提交之序列表之參考

與本申請案一起提出申請之ASCII文字檔案(名稱：3817_0840001_SequenceListing.txt；大小：5,628個位元組；及創建日期：2021年4月27日)中之電子提交之序列表的內容之全文皆以引用方式併入本文中。 RNAi 劑

本文所述之方法包括向人類個體投與醫藥組合物，其中醫藥組合物包括含有能夠抑制AAT基因表現之RNAi劑(在本文及此項技術中稱為RNAi劑或RNAi觸發物)之組合物，例如ADS-001或其鹽。在一些實施例中，本文所述之方法包括向人類個體投與醫藥組合物，其中醫藥組合物包括表2中所述之AAT RNAi原料藥(亦稱為ADS-001或其醫藥學上可接受之鹽)。在本揭示案之上下文中，術語「其鹽」及「其醫藥學上可接受之鹽」視為等效及可互換的。如本文所用之術語「包括」及「包含」係可互換的。

適用於本文所揭示方法中之組合物包含抑制人類個體中之AAT基因表現之RNAi劑，及靶向部分或靶向基團。在一些實施例中，RNAi劑包括表1.1及表1.2中所提供之核苷酸序列，例如SEQ ID NO: 2之反義寡核苷酸及SEQ ID NO: 4之有義寡核苷酸，其中RNAi劑之有義股(例如SEQ ID NO: 4之有義寡核苷酸)進一步連接或結合至包含三個N-乙醯基-半乳糖胺靶向部分之靶向基團(參見例如表B)。抑制人類個體中之AAT基因表現之RNAi劑稱為「AAT RNAi劑」。術語「連接」及「結合」係指兩個部分(例如SEQ ID NO: 4之有義寡核苷酸及靶向部分(例如去唾液酸糖蛋白受體靶向部分，例如N-乙醯基-半乳糖胺(例如NAG37)))之間之共價連接。在一些實施例中，「連接」或「結合」係指靶向部分與寡核苷酸序列之連接，作為例如使用包含一或多個N-乙醯基-半乳糖胺部分之亞磷醯胺化合物之固相合成製程(SPSS)之步驟。在一些實施例中，「連接」或「結合」係指SEQ ID NO: 4之有義寡核苷酸及靶向部分(例如去唾液酸糖蛋白受體靶向部分，例如N-乙醯基-半乳糖胺(例如NAG37))之共價連接，作為例如藉由使用雙功能試劑之SPSS後之單獨步驟。如本文所用之術語「連接」及「結合」可互換使用。

一般而言，AAT RNAi劑包含有義股(亦稱為過客股)及反義股(亦稱為引導股)，其退火形成雙鏈體。本文所揭示之AAT RNAi劑包括能夠以序列特異性方式降解或抑制AAT mRNA之信使RNA (mRNA)轉錄物轉譯的 RNA或RNA樣(例如經化學修飾之RNA)寡核苷酸分子。本文所揭示之AAT RNAi劑可經由RNA干擾機制(即經由與哺乳動物細胞之RNA干擾路徑機構(RNA誘導之沈默複合物或RISC)相互作用來誘導RNA干擾)或藉由任何替代機制或路徑起作用。儘管認為如本文所用之術語AAT RNAi劑主要經由RNA干擾機制起作用，但所揭示之RNAi劑並不受任一特定路徑或作用機制約束或限制。RNAi劑一般而言包含長度各自為16至49個核苷酸之有義股及反義股，且包括(但不限於)：短或小干擾RNA (siRNA)、雙股RNA (dsRNA)、微小RNA (miRNA)、短髮夾RNA (shRNA)及dicer受質。

AAT RNAi劑有義股之長度通常為16至49個核苷酸，且AAT RNAi劑反義股之長度通常為18至49個核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股之長度獨立地係17至26個核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股之長度獨立地係21至26個核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股之長度獨立地係21至24個核苷酸。在一些實施例中，有義股及/或反義股之長度獨立地係16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個或30個核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股之長度皆為21個核苷酸。有義股及反義股可為相同之長度或不同之長度。有義股及反義股亦可在AAT RNAi劑之一端或兩端形成懸突核苷酸。

AAT RNAi劑抑制、沈默或敲低AAT基因表現。如本文所用之術語「沈默」、「降低」、「抑制」、「下調」或「敲低」在提及AAT表現時意指，如藉由其中使基因轉錄之細胞、細胞之群、組織、器官或個體中自基因轉錄之RNA水準或自mRNA轉譯之多肽、蛋白質或蛋白質次單元之水準所量測，當用RNAi劑處理細胞、細胞之群、組織、器官或個體時，與尚未經如此處理之第二細胞、細胞之群、組織、器官或個體相比，基因之表現減少。在一些情況下，基因表現之減少係藉由比較人類個體中在投與包含AAT RNAi劑之組合物之前之基線AAT mRNA或AAT蛋白水準與投與治療劑後之AAT mRNA或AAT蛋白水準來量測。

AAT基因抑制、沈默或敲低可藉由此項技術中已知之任一適當分析或方法來量測。本文所示之非限制性實例以及國際專利申請公開案第WO 2018/132432號(其全文皆以引用方式併入本文中)中所示之實例提供適於量測AAT基因表現抑制之分析之某些實例。正常野生型人類之參考AAT mRNA基因轉錄物(SERPINA1) (稱為轉錄物變異體1；GenBank NM_000295.4)可參見SEQ ID NO:1。

適用於本文所揭示方法中之AAT RNAi劑可共價連接或結合至包括一或多個N-乙醯基-半乳糖胺部分之靶向基團，例如包含去唾液酸糖蛋白受體靶向部分(例如N-乙醯基-半乳糖胺)之肝臟靶向基團。在實施例中，適用於本文所揭示方法中之AAT RNAi劑共價連接或結合至包括一或多個N-乙醯基-半乳糖胺部分之靶向基團，藉此形成表2中所述之AAT RNAi原料藥，即包含SEQ ID NO: 6之有義股及SEQ ID NO:2之反義股的雙鏈體RNA (雙股RNA)。

在一些實施例中，本文所述之方法包括投與表2中所述之AAT RNAi原料藥，即包含SEQ ID NO: 6之有義股及SEQ ID NO:2之反義股的雙鏈體RNA (雙股RNA)。表2中所述之AAT RNAi原料藥包括表1.1 (SEQ ID NO: 2之反義股)及表1.2 (SEQ ID NO: 4之有義股)中所顯示之AAT RNAi劑。N-乙醯基-半乳糖胺部分有助於AAT RNAi劑靶向容易存在於肝細胞表面上之去唾液酸糖蛋白受體(ASGPr)，此可藉由胞吞作用或其他方式使AAT RNAi劑內化。

可適用於本文所揭示方法中之AAT RNAi劑包括與AAT mRNA之至少一部分(即AAT mRNA靶序列)具有互補區之反義股。適用於所揭示方法中之AAT RNAi劑及AAT RNAi原料藥闡述於國際專利申請公開案第WO 2018/132432號中，如先前所述該國際專利申請公開案之全文皆以引用方式併入本文中。

如本文所用之術語「序列」及「核苷酸序列」意指使用標準命名法用一連串字母闡述之一連串或一系列核鹼基或核苷酸。除非另外指明，否則核苷酸序列係以5'至3'之取向自左至右書寫。如本文所用之術語「核鹼基」及「核苷酸」具有與此項技術中所通常理解相同之含義。因此，如本文所用之術語「核苷酸」係指包含糖部分、鹼基部分及共價連接基團(鍵聯基團，例如磷酸酯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯基團)之糖苷，且涵蓋天然核苷酸(例如DNA或RNA)及包含經修飾糖及/或鹼基部分之非天然核苷酸二者，該等非天然核苷酸在本文中亦稱為核苷酸類似物。在本文中，單核苷酸可稱為單體或單元。

如本文所用之術語「互補」在用於闡述與第二核苷酸序列(例如RNAi劑有義股或靶向mRNA序列)相關之第一核苷酸序列(例如RNAi劑反義股)時意指，包括第一核苷酸序列之寡核苷酸與包括第二核苷酸序列之寡核苷酸雜交(在哺乳動物生理條件(或其他適宜條件)下形成鹼基對氫鍵及在某些標準條件下形成雙鏈體或雙螺旋結構)的能力。熟習此項技術者將能夠選擇最適於雜交測試之條件之集合。互補序列包括沃森-克里克鹼基對(Watson-Crick base pair)或非沃森-克里克鹼基對且包括天然或經修飾核苷酸或核苷酸模擬物，其程度至少滿足上述雜交要求。序列一致性或互補性與修飾無關。舉例而言，出於確定一致性或互補性之目的，如本文所定義之a及Af與U (或T)互補且與A一致。

如本文所用之「完全互補」或「全部互補」意指，第一寡核苷酸之連續序列中之所有(100%)鹼基將與第二寡核苷酸之連續序列中之相同數量的核苷酸雜交。連續序列可包含第一核苷酸序列或第二核苷酸序列之全部或一部分。

如本文所用之「部分互補」意指，在核苷酸序列之雜交對中，第一寡核苷酸之連續序列中之至少70%而非所有鹼基將與第二多核苷酸之連續序列中之相同數量的鹼基雜交。

如本文所用之「實質上互補」意指，在核苷酸序列之雜交對中，第一寡核苷酸之連續序列中之至少85%而非所有鹼基將與第二多核苷酸之連續序列中之相同數量的鹼基雜交。術語「互補」、「全部互補」、「部分互補」及「實質上互補」在本文中用於RNAi劑之有義股與反義股之間或RNAi劑之反義股與AAT mRNA之序列之間的核苷酸匹配。

如本文所用之術語「實質上一致」或「實質上一致性」在應用於核酸序列時意指，核酸序列包含與參考序列相比具有至少約85%序列一致性或更大、例如至少90%、至少95%或至少99%一致性之序列。序列一致性百分比係藉由在比較窗內比較兩條最佳比對序列來確定。百分比係藉由以下方式來計算：確定在兩條序列中出現一致核酸鹼基之位置數以獲得匹配位置數，用匹配位置數除以比較窗中之總位置數且用結果乘以100，以獲得序列一致性百分比。本文所揭示之發明涵蓋實質上與本文所揭示之彼等核苷酸序列一致之核苷酸序列。

本文所述之化合物可含有若干不對稱中心且可以光學純鏡像異構物、鏡像異構物之混合物(例如外消旋物)、非鏡像異構物之混合物、非鏡像異構外消旋物或非鏡像異構外消旋物之混合物形式存在。在一些實施例中，不對稱中心可為不對稱碳原子。

術語「一致的」或「一致性」%在兩個或更多個核酸之上下文中係指，在比較並比對(若需要，引入空位)以獲得最大對應性時，兩條或更多條序列相同或具有指定百分比之相同核苷酸，不將任何保守取代視為序列一致性之一部分。一致性%可使用序列比較軟體或算法或藉由視覺檢查來量測。此項技術中已知可用於獲得核苷酸序列比對之多種算法及軟體。

序列比對可使用此項技術中已知之方法(例如MAFFT、Clustal (ClustalW、Clustal X或Clustal Omega)、MUSCLE等)來實施。

與多核苷酸參考序列比對之單一多核苷酸靶序列內之不同區域各自可具有其自身序列一致性%。應注意，序列一致性%值捨入至十分位。舉例而言，80.11、80.12、80.13及80.14向下捨入至80.1，而80.15、80.16、80.17、80.18及80.19向上捨入至80.2。亦應注意，長度值始終為整數。

在某些實施例中，一致性百分比(ID%)或第一核酸序列與第二核酸序列之一致性百分比計算為ID% = 100 × (Y/Z)，其中Y係在第一序列及第二序列之比對中(如藉由視覺檢查或特定序列比對程式所比對)評分為一致匹配之核鹼基數，且Z係第二序列中之總殘基數。若第一序列之長度長於第二序列，則第一序列與第二序列之一致性%將高於第二序列與第一序列之一致性%。

單位、前綴及符號以其國際單位製(Système International de Unites，SI)接受之形式表示。數字範圍包括限定範圍之數字。當列舉值之範圍時應理解，亦特定揭示介於該範圍之所列舉上限與下限之間的每一中間整數值及其每一分數以及此類值之間之每一子範圍。任一範圍之上限及下限可獨立地包括或不包括在該範圍中，且包括任一限值、不包括任一限值或包括兩個限值之每一範圍亦涵蓋於本揭示案內。因此，本文所列舉之範圍應理解為該範圍內之所有值之簡寫，包括所列舉終點。舉例而言，1至10之範圍應理解為包括由1、2、3、4、5、6、7、8、9及10組成之群之任一數字、數字之組合或子範圍。

當明確列舉值時應理解，與所列舉值大約相同之數量或量之值亦在本揭示案之範圍內。當揭示組合時，亦特定揭示該組合之元素之每一子組合，且在本揭示案之範圍內。相反，當個別地揭示不同元素或元素之群時，亦揭示其組合。當揭示案之任一元素揭示為具有複數個替代時，在此亦揭示本揭示案之實例，其中每一替代經單一地排除或以與其他替代之任何組合之方式排除；揭示案之一個以上之元素可具有此類排除，且在此揭示具有此類排除之元素之所有組合。 經修飾核苷酸及經修飾核苷間鍵聯

本文所揭示之AAT RNAi劑(例如靶向AAT mRNA轉錄物之dsRNA)可包含經修飾核苷酸，其可保持RNAi劑之活性，同時增加血清穩定性，以及最小化活化人類中之干擾素活性之可能性。如本文所用之「經修飾核苷酸」係除核糖核苷酸(2′-羥基核苷酸)外之核苷酸。在一些實施例中，至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%之核苷酸係經修飾核苷酸。在一些實施例中，約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%、約97%、約98%、約99%或約100%之核苷酸係經修飾核苷酸。在一些實施例中，約50%至約60%、約60%至約70%、約70%至約80%、約80%至約90%、約90%至約95%或約95%至約100%之核苷酸係經修飾核苷酸。如本文所用之經修飾核苷酸包括此項技術中已知之任何已知之經修飾核苷酸，包括(但不限於)去氧核糖核苷酸、核苷酸模擬物、2′-經修飾核苷酸、反向核苷酸、包含經修飾之核鹼基之核苷酸、橋接核苷酸、肽核酸(PNA)、2′,3′斷核苷酸模擬物(解鎖之核鹼基類似物)、鎖定之核苷酸、3′-O-甲氧基(2′核苷間連接之)核苷酸、2'-F-阿糖核苷酸、5'-Me, 2'-氟核苷酸、嗎啉基核苷酸、含膦酸乙烯酯之核苷酸及含膦酸環丙基酯之核苷酸。在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之經修飾核苷酸係2′-經修飾核苷酸(即，在5員糖環之2′位具有除羥基外之基團之核苷酸)。2′-經修飾核苷酸包括(但不限於) 2′O甲基核苷酸、2′-去氧-2′-氟核苷酸(通常簡稱為2’-氟核苷酸)、2′-去氧核苷酸、2′-甲氧基乙基(2′-O-2-甲氧基乙基)核苷酸、2′-胺基核苷酸及2′-烷基核苷酸。其他2’-經修飾核苷酸為此項技術中已知。給定RNAi劑中之所有核苷酸不必均一地經修飾。另外，可將一種以上之修飾納入單一AAT RNAi劑中或甚至納入其單核苷酸中。AAT RNAi劑有義股及反義股可藉由此項技術中已知之方法合成及/或修飾。一個核苷酸處之修飾獨立於另一核苷酸處之修飾。

在一些實施例中，核鹼基(通常簡稱為「鹼基」)可經修飾。如此項技術中通常使用，天然核鹼基包括主要嘌呤鹼基腺嘌呤及鳥嘌呤，及主要嘧啶鹼基胞嘧啶、胸腺嘧啶及尿嘧啶。核鹼基可經修飾以包括(但不限於)通用鹼基、疏水鹼基、混雜鹼基、大小擴展鹼基及氟化鹼基。參見例如Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P.編輯，Wiley-VCH, 2008。此類經修飾核鹼基(包括包含經修飾核鹼基之亞磷醯胺化合物)之合成為此項技術中已知。

經修飾核鹼基包括例如5-取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶及N-2、N-6及O-6取代之嘌呤(例如2胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶或5-丙炔基胞嘧啶)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5羥甲基胞嘧啶、肌苷、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤及鳥嘌呤之6-烷基(例如6-甲基、6-乙基、6-異丙基或6-正丁基)衍生物、腺嘌呤及鳥嘌呤之2-烷基(例如2-甲基、2-乙基、2-異丙基或2-正丁基)及其他烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶、2-硫胞嘧啶、5-鹵基尿嘧啶、胞嘧啶、5丙炔基尿嘧啶、5丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4硫尿嘧啶、8-鹵基、8胺基、8-硫氫基、8-硫烷基、8-羥基及其他8-取代之腺嘌呤及鳥嘌呤、5-鹵基(例如5-溴)、5-三氟甲基及其他5-取代之尿嘧啶及胞嘧啶、7甲基鳥嘌呤及7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤及8-氮雜腺嘌呤、7去氮雜鳥嘌呤、7去氮雜腺嘌呤、3-去氮雜鳥嘌呤及3-去氮雜腺嘌呤。

在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之所有或實質上所有之核苷酸係經修飾核苷酸。如本文所用之RNAi劑(其中所存在之實質上所有之核苷酸係經修飾核苷酸)係在有義股及反義股二者中具有四個或更少(即0個、1個、2個、3個或4個)作為核糖核苷酸(即未經修飾)之核苷酸之RNAi劑。如本文所用之有義股(其中所存在之實質上所有之核苷酸係經修飾核苷酸)係在有義股中具有兩個或更少(即0個、1個或2個)作為核糖核苷酸之核苷酸之有義股。如本文所用之反義有義股(其中所存在之實質上所有之核苷酸係經修飾核苷酸)係在有義股中具有兩個或更少(即0個、1個或2個)作為核糖核苷酸之核苷酸之反義股。

在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之一或多個核苷酸藉由非標準鍵聯或骨架(即經修飾之核苷間鍵聯或經修飾骨架)連接。經修飾核苷間鍵聯或骨架包括(但不限於)硫代磷酸酯基團、手性硫代磷酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、胺基烷基-磷酸三酯、烷基膦酸酯(例如甲基膦酸酯或3′-伸烷基膦酸酯)、手性膦酸酯、次膦酸酯、胺基磷酸酯(例如3′-胺基胺基磷酸酯、胺基烷基胺基磷酸酯或硫羰胺基磷酸酯)、硫羰烷基-膦酸酯、硫羰烷基磷酸三酯、嗎啉基鍵聯、具有正常3′-5′鍵聯之硼代磷酸酯、硼代磷酸酯之2′-5′連接類似物或具有反向極性之硼代磷酸酯，其中相鄰核苷單元對之連接由3′-5′變成5′-3′或由2′-5′變成5′-2′。在一些實施例中，經修飾核苷間鍵聯或骨架缺少磷原子。缺少磷原子之經修飾核苷間鍵聯包括(但不限於)短鏈烷基或環烷基糖間鍵聯、混合雜原子及烷基或環烷基糖間鍵聯或一或多個短鏈雜原子或雜環糖間鍵聯。在一些實施例中，經修飾核苷間骨架包括(但不限於)矽氧烷骨架、硫化物骨架、亞砜骨架、砜骨架、甲醯基及硫代甲醯基骨架、亞甲基甲醯基及硫代甲醯基骨架、含烯烴之骨架、胺基磺酸酯骨架、亞甲基亞胺基及亞甲基肼基骨架、磺酸酯及磺醯胺骨架、醯胺骨架以及具有混合N、O、S及CH ₂組分之其他骨架。

在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股可含有1個、2個、3個、4個、5個或6個硫代磷酸酯鍵聯，AAT RNAi劑之反義股可含有1個、2個、3個、4個、5個或6個硫代磷酸酯鍵聯，或有義股及反義股二者可獨立地含有1個、2個、3個、4個、5個或6個硫代磷酸酯鍵聯。在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股可含有1個、2個、3個或4個硫代磷酸酯鍵聯，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之反義股可含有1個、2個、3個或4個硫代磷酸酯鍵聯，或有義股及反義股二者可獨立地含有1個、2個、3個或4個硫代磷酸酯鍵聯。

在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股含有至少兩個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在一些實施例中，至少兩個硫代磷酸酯核苷間鍵聯位於有義股之3′端之位置1-3處之核苷酸之間。在一些實施例中，至少兩個硫代磷酸酯核苷間鍵聯位於有義股之5'端之位置1-3、2-4、3-5、4-6、4-5或6-8處之核苷酸之間。在一些實施例中，硫代磷酸酯核苷間鍵聯用於連接有義股中之末端核苷酸與存在於核苷酸序列之5’端、3’端或5’端及3’端之封端殘基。在一些實施例中，硫代磷酸酯核苷間鍵聯用於連接靶向基團與有義股。

在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之反義股含有三個或四個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之反義股含有三個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在一些實施例中，三個硫代磷酸酯核苷間鍵聯位於反義股之5′端之位置1-3處之核苷酸之間及5′端之位置19-21、20-22、21-23、22-24、23-25或24-26處之核苷酸之間。在一些實施例中，本文所揭示之AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)在有義股中含有至少兩個硫代磷酸酯核苷間鍵聯且在反義股中含有三個或四個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。

在一些實施例中，本文所揭示之AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)含有一或多個經修飾核苷酸及一或多個經修飾核苷間鍵聯。在一些實施例中，2′經修飾核苷與經修飾核苷間鍵聯組合。 封端殘基或部分

在一些實施例中，有義股可包括一或多個封端殘基或部分，在此項技術中有時稱為「帽」、「端帽」或「封端殘基」。如本文所用之「封端殘基」係可納入本文所揭示RNAi劑之核苷酸序列之一或多個末端的非核苷酸化合物或其他部分。在一些情況下，封端殘基可提供具有某些有益性質(例如防止核酸外切酶降解)之RNAi劑。在一些實施例中，添加反向無鹼基殘基(invAb) (在此項技術中亦稱為「反向無鹼基位點」)作為封端殘基(參見表A)。(參見例如F. Czauderna, Nucleic Acids Res., 2003, 31(11), 2705-16)。封端殘基可包括例如反向無鹼基殘基以及碳鏈，例如末端C ₃H ₇(丙基)、C ₆H ₁₃(己基)或C ₁₂H ₂₅(十二烷基)。在一些實施例中，封端殘基存在於本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股之5′末端、3′末端或5′末端及3′末端二者。在一些實施例中，本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股之5’端及/或3′端可包括一個以上之反向無鹼基去氧核糖部分作為封端殘基。

在一些實施例中，一或多個反向無鹼基殘基(invAb)添加至本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股之3′端。在一些實施例中，一或多個反向無鹼基殘基(invAb)添加至本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股之5′端。在一些實施例中，一或多個反向無鹼基殘基或反向無鹼基位點插入本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之靶向配位體與有義股之核苷酸序列之間。在一些實施例中，在本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股之一或多個末端處或附近納入一或多個反向無鹼基殘基或反向無鹼基位點可增強RNAi劑之活性或其他期望性質。

在一些實施例中，一或多個反向無鹼基殘基(invAb)添加至本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之有義股之5′端。在一些實施例中，一或多個反向無鹼基殘基可插入本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之靶向配位體與有義股之核苷酸序列之間。在一些實施例中，反向無鹼基殘基可經由磷酸酯、硫代磷酸酯(例如在本文中顯示為(invAb)s))或其他核苷間鍵聯來連接。反向無鹼基去氧核糖殘基之化學結構顯示於下表A中以及圖1A至圖1E及圖2A至圖2E中所顯示之化學結構中。表 A.反向無鹼基(去氧核糖)化學結構

當內部定位於寡核苷酸上時：

(invAb)

當內部定位於寡核苷酸上時：

(invAb)s

當定位於寡核苷酸之3′末端時：

(invAb)

靶向部分及基團

本文所揭示之AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)可包含結合至一或多個非核苷酸基團之寡核苷酸序列，例如SEQ ID NO: 4之有義序列，該一或多個非核苷酸基團包括(但不限於)靶向部分或靶向基團。靶向部分或靶向基團可增強RNAi劑之靶向或遞送。在一些實施例中，靶向部分或靶向基團包含例如肝臟靶向部分。在一些實施例中，肝臟靶向部分可特異性結合至去唾液酸糖蛋白受體。在一些實施例中，去唾液酸糖蛋白受體結合部分包含N-乙醯基半乳糖胺(NAG或GalNAc)。在一些實施例中，NAG係NAG37。用於本文表2中所述之AAT RNAi原料藥中之(NAG37)s靶向基團(其包括本文所揭示之三個N-乙醯基-半乳糖胺靶向部分)之具體實例提供於表B中。靶向部分或靶向基團可共價連接至有義股(例如SEQ ID NO: 4之AAT RNAi劑有義股)及/或反義股(例如SEQ ID NO: 2之AAT RNAi劑反義股)之3′端及/或5′端。在一些實施例中，AAT RNAi劑含有連接至有義股(例如SEQ ID NO: 4之AAT RNAi劑有義股)之3′端及/或5′端之靶向基團。在一些實施例中，靶向基團連接至AAT RNAi劑有義股(例如SEQ ID NO: 4之AAT RNAi劑有義股)之5′端。在一些實施例中，靶向基團包含結構(NAG37)s、基本上由其組成或由其組成，且連接至AAT RNAi劑有義股(例如SEQ ID NO: 4之AAT RNAi劑有義股)之5′端。靶向基團可直接連接至RNAi劑，或經由連接體/連接基團間接連接至RNAi劑。在一些實施例中，靶向基團經由不穩定、可裂解或可逆鍵或連接體連接至RNAi劑。在一些實施例中，靶向基團連接至有義股之5’端之反向無鹼基殘基。

靶向基團或靶向部分可增強其所連接之結合物或RNAi劑之藥物動力學或生物分佈性質，以改良結合物或RNAi劑之細胞特異性分佈及細胞特異性攝取。在一些實施例中，靶向基團增強RNAi劑之胞吞作用。靶向基團可為單價、二價、三價、四價，或對其所針對之靶具有更高化合價。代表性靶向基團包括(但不限於)對細胞表面分子具有親和力之化合物、細胞受體配位體、半抗原、抗體、單株抗體、抗體片段及對細胞表面分子具有親和力之抗體模擬物。

在一些實施例中，靶向基團包含去唾液酸糖蛋白受體配位體。在一些實施例中，去唾液酸糖蛋白受體配位體包括一或多種半乳糖衍生物或由其組成。如本文所用之術語半乳糖衍生物包括半乳糖及對去唾液酸糖蛋白受體之親和力等於或大於半乳糖之親和力的半乳糖衍生物。半乳糖衍生物包括(但不限於)：半乳糖、半乳糖胺、N-甲醯基半乳糖胺、N-乙醯基-半乳糖胺、N丙醯基-半乳糖胺、N-正丁醯基-半乳糖胺及N-異丁醯基-半乳糖胺(參見例如：S.T. Iobst及K. Drickamer, J.B.C., 1996, 271, 6686)。可用於使寡核苷酸及其他分子活體內靶向肝臟之半乳糖衍生物及半乳糖衍生物簇為此項技術中已知(參見例如Baenziger及Fiete, 1980, Cell, 22, 611-620；Connolly等人，1982, J. Biol. Chem., 257, 939-945)。

半乳糖衍生物已用於經由其結合至在肝細胞表面上表現之去唾液酸糖蛋白受體使分子活體內靶向肝細胞。去唾液酸糖蛋白受體配位體與去唾液酸糖蛋白受體之結合促進細胞特異性靶向肝細胞及分子胞吞至肝細胞中。去唾液酸糖蛋白受體配位體可為單體(例如具有單一半乳糖衍生物)或多聚體(例如具有多個半乳糖衍生物)。半乳糖衍生物或半乳糖衍生物「簇」可使用此項技術中已知之方法連接至本文所揭示RNAi劑之有義股或反義股之3′端或5′端。

在一些實施例中，靶向基團包含半乳糖衍生物簇。如本文所用之半乳糖衍生物簇包含具有兩個至四個末端半乳糖衍生物之分子。末端半乳糖衍生物經由其C-1碳連接至分子。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇係半乳糖衍生物三聚體(亦稱為三觸角半乳糖衍生物或三價半乳糖衍生物)。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包含N-乙醯基-半乳糖胺。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包含三個N-乙醯基-半乳糖胺。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇係半乳糖衍生物四聚體(亦稱為四觸角半乳糖衍生物或四價半乳糖衍生物)。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包含四個N-乙醯基-半乳糖胺。

如本文所用之半乳糖衍生物三聚體含有三個半乳糖衍生物，其各自連接至中心分枝點。如本文所用之半乳糖衍生物四聚體含有四個半乳糖衍生物，其各自連接至中心分枝點。半乳糖衍生物可經由糖之C-1碳連接至中心分枝點。在一些實施例中，半乳糖衍生物經由連接體或間隔體連接至分枝點。在一些實施例中，連接體或間隔體係撓性親水性間隔體，例如PEG基團(參見例如美國專利第5,885,968號；Biessen等人，J. Med. Chem. 1995，第39卷，第1538-1546頁)。分枝點可為容許連接三個半乳糖衍生物且進一步容許分枝點連接至RNAi劑之任何小分子。分枝點基團之實例係二離胺酸或二麩胺酸。分枝點與RNAi劑之連接可經由連接體或間隔體來進行。在一些實施例中，連接體或間隔體包含撓性親水性間隔體，例如(但不限於) PEG間隔體。在一些實施例中，連接體包含剛性連接體，例如環狀基團。在一些實施例中，半乳糖衍生物包含N-乙醯基-半乳糖胺或由其組成。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包含半乳糖衍生物四聚體，其可為例如N-乙醯基-半乳糖胺四聚體。

靶向基團(例如包括N-乙醯基-半乳糖胺之半乳糖衍生物簇)之製備闡述於例如國際專利申請公開案第WO 2018/044350號(專利申請案第PCT/US2017/021147號)及國際專利申請公開案第WO 2017/156012號(專利申請案第PCT/US2017/021175號)中，該兩個國際專利申請公開案之內容之全文皆以引用方式併入本文中。

舉例而言，結合至表1.1及表1.2中所述之AAT RNAi劑，即包含(i)包含SEQ ID NO:2、由其組成或基本上由其組成之反義股及(ii)包含SEQ ID NO:4、由其組成或基本上由其組成之有義股的dsRNA之靶向配位體具有(NAG37)s之化學結構，如下表B中所顯示。表 B.(NAG37)s之化學結構。

(以鈉鹽形式顯示之(NAG37)s)

(以游離酸形式顯示之(NAG37)s)

AAT RNAi 劑及 AAT RNAi 原料藥 (ADS-001)

在一些實施例中，用於本文所揭示方法中之AAT RNAi劑具有表2中所顯示之AAT RNAi原料藥(ADS-001)或其鹽之核苷酸序列。在AAT RNAi原料藥中發現之AAT RNAi劑之核苷酸序列包括如呈現於下表1.1中之SEQ ID NO:2中所示之反義股核苷酸序列，及如呈現於下表1.2中之SEQ ID NO: 4中所示之有義股核苷酸序列。表 1.1.AAT RNAi劑反義股序列

SEQ ID NO.	反義序列 ( 經修飾 )(5' → 3')	SEQ ID NO.	基礎鹼基序列 (5' → 3')
2	usGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgCfsu	3	UGUUAAACAUGCCUAAACGCU

表 1.2.AAT RNAi劑有義股核苷酸序列(顯示為AAT RNAi原料藥中不含反向無鹼基殘基或NAG靶向基團之經修飾形式)

SEQ ID NO.	有義序列 ( 經修飾 )(5' → 3')	SEQ ID NO.	基礎鹼基序列 (5' → 3')
4	agcguuuaGfGfCfauguuuaaca	5	AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA

如本文表1.1、表1.2及表2中所用，使用以下注解來指示經修飾核苷酸、靶向基團及連接基團：A、G、C及U分別表示腺苷、胞苷、鳥苷及尿苷；a、c、g及u分別表示 2′-O-甲基腺苷、2′-O-甲基胞苷、2′-O-甲基鳥苷及2′-O-甲基尿苷；Af、Cf、Gf及Uf分別表示2′-氟腺苷、2′-氟胞苷、2′-氟鳥苷及2′-氟尿苷；s表示硫代磷酸酯鍵聯；(invAb)表示反向無鹼基去氧核糖殘基(參見表A)；且(NAG37)s表示上表B中所顯示之結構。

如熟習此項技術者將容易地理解，除非序列(例如硫代磷酸酯鍵聯「s」)另外指明，否則當存在於有義股或反義股中時，核苷酸單體藉由5’-3’-磷酸二酯鍵互相連接。如熟習此項技術者將清楚地理解，納入如本文所揭示之經修飾核苷酸序列中所顯示之硫代磷酸酯鍵聯會替代通常存在於寡核苷酸中之磷酸二酯鍵聯。另外，熟習此項技術者將容易地理解，給定寡核苷酸序列3’ 端之末端核苷酸通常將在給定單體之各別3’位具有羥基(-OH)，而非離體磷酸酯部分。另外，對於本文所揭示之實施例，當觀察各別股5’ à 3’時，插入反向無鹼基殘基，使得去氧核糖之3’位連接在各別股上之前面單體之3’端。另外，如熟習此項技術者將容易地理解及瞭解，儘管本文所繪示之硫代磷酸酯化學結構通常顯示硫原子之陰離子，但本文所揭示之發明涵蓋所有硫代磷酸酯互變異構物(例如，其中硫原子具有雙鍵且陰離子處於氧原子上)。除非本文另外明確指明，否則在闡述AAT RNAi劑及包括本文所揭示之AAT RNAi劑之組合物時，使用熟習此項技術者之此類理解。

每一有義股及/或反義股可具有上文所列之任何靶向基團或連接基團，以及結合至有義股及/或反義股寡核苷酸序列之5′端及/或3′端之其他靶向或連接基團。

本文所揭示AAT RNAi劑之反義股序列(例如SEQ ID NO:2之反義股)經設計以靶向正常AAT基因及突變體AAT基因二者之AAT mRNA轉錄物，藉此使用患有AATD之人類個體之RNA干擾機制來沈默突變體Z-AAT蛋白之轉譯。

在一些實施例中，本文所揭示之方法使用下表2中所示之AAT RNAi原料藥。因此，在一些實施例中，AAT RNAi原料藥包含含有SEQ ID NO: 6之有義股之雙股RNA (dsRNA)。在一些實施例中，AAT RNAi原料藥包含含有SEQ ID NO: 2之反義股之dsRNA。在一些實施例中，AAT RNAi原料藥包含含有SEQ ID NO: 6之有義股及SEQ ID NO: 2之反義股之dsRNA。因此，在一些實施例中，AAT RNAi原料藥包含含有由SEQ ID NO: 6組成之有義股之雙股RNA (dsRNA)。在一些實施例中，AAT RNAi原料藥包含含有由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA。在一些實施例中，AAT RNAi原料藥包含含有由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股的dsRNA。表 2.AAT RNAi原料藥(ADS-001)

有義股及反義股 (有義股及反義股退火形成雙鏈體)：
有義股(經修飾序列) (5' → 3')：	(NAG37)s(invAb)sagcguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb)	(SEQ ID NO:6)
反義股(經修飾序列) (5' → 3')：	usGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgCfsu	(SEQ ID NO:2)

表 2.1 表2中所述之AAT RNAi原料藥(ADS-001)之性質

化學式：	C493H610F11N163Na43O312P43S6 (Na+形式)
	C493H653F11N163O312P43S6 (H+形式)
分子量：	16532.9 Da (Na+形式)
	15587.6 Da (H+形式)
物理外觀：	白色至灰白色粉末

AAT RNAi原料藥(ADS-001)之示意性表示顯示於圖3中，且完整化學結構表示顯示於圖1A至圖1E (鈉鹽形式)及圖2A至圖2E (游離酸形式)中。在一些實施例中，AAT RNAi原料藥(例如ADS-001)係以鹽、混合鹽或游離酸形式製備或提供。在一些實施例中，AAT RNAi原料藥(例如ADS-001)係以鈉鹽形式製備或提供。 醫藥組合物及調配物

適用於本文所揭示方法中之AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)可製備為醫藥組合物或調配物來投與人類個體。醫藥組合物可用於治療患有將受益於AAT mRNA表現之抑制或AAT蛋白水準之降低之疾病或病症之個體，例如患有AATD之人類個體。在一些實施例中，該等方法包括向需要治療之個體投與連接至如本文所述之靶向基團或靶向配位體(例如肝臟靶向NAG部分)之AAT RNAi劑。在一些實施例中，將一或多種醫藥學上可接受之賦形劑(包括媒劑、載劑、稀釋劑及/或遞送聚合物)添加至包括本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之醫藥組合物中，藉此形成適於活體內遞送至人類個體之醫藥調配物。

包括本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之醫藥組合物在使用本文所揭示之方法投與人類個體時會降低個體中AAT mRNA之水準。

在一些實施例中，包括本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之所述醫藥組合物用於治療或管控患有AATD之個體之臨床呈現，例如慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌風險增加、轉胺酶升高、膽汁淤積、纖維化及甚至猛爆性肝衰竭。在一些實施例中，將治療或預防有效量之包括本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之一或多種醫藥組合物投與需要該治療之個體。在一些實施例中，投與本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)可用於降低個體之疾病症狀之數量、嚴重程度及/或頻率。

如本文所用之「有效量」意欲包括，在投與患者用於治療患有AATD之個體時，足以實現疾病之治療(例如藉由減少、改善或維持現有疾病或疾病或其相關合併症之一或多種症狀)的劑或組合物之量。「有效量」可端視劑或組合物、其投與方式、疾病及其嚴重程度及病史、年齡、體重、家族史、遺傳組成、由AATD介導之病理過程之階段、先前或伴隨治療(若有)之類型及欲治療患者之其他個體特徵而變化。

包括本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之所述醫藥組合物可用於治療患有將受益於AAT mRNA表現減少或抑制之疾病或病症之個體之至少一種症狀。在一些實施例中，向個體投與治療有效量之包括本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)之一或多種醫藥組合物，藉此治療症狀。在其他實施例中，向個體投與預防有效量之一或多種本文所揭示AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)，藉此預防至少一種症狀。

本文所揭示之AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)可經由任何適宜途徑以針對具體途徑適當調整之製劑來投與。因此，本文所述之醫藥組合物可藉由注射(例如靜脈內或皮下注射)來投與。在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物係經由皮下注射來投與。

如本文所用之醫藥組合物或藥物包括藥理有效量之至少一種本文所揭示之AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥學上可接受之賦形劑(賦形劑)係有意納入藥物遞送系統中之除活性醫藥成分(API，治療性產品，例如AAT RNAi劑)外之物質。賦形劑在預期劑量下並不發揮或不欲發揮治療效應。賦形劑可用於a)幫助在製造期間處理藥物遞送系統，b)保護、支持或增強API之穩定性、生物利用度或患者可接受性，c)有助於產品鑑別，及/或d)增強API在儲存或使用期間遞送之總體安全性、有效性之任何其他屬性。醫藥學上可接受之賦形劑可為或可不為惰性物質。

賦形劑可包括(但不限於)：吸收增強劑、抗黏著劑、抗起泡劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝劑、載劑、包衣劑、著色劑、遞送增強劑、遞送聚合物、葡聚糖、右旋糖、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、增量劑、填充劑、矯味劑、助流劑、保濕劑、潤滑劑、油、聚合物、防腐劑、鹽水、鹽、溶劑、糖、懸浮劑、持續釋放基質、甜味劑、增稠劑、張力劑、媒劑、防水劑及潤濕劑。

適於可注射用途之醫藥組合物包括無菌水溶液(倘若為水溶性)。對於皮下或靜脈內投與，適宜載劑可包括生理鹽水、抑菌水、CREMOPHOR® ELTM (BASF, Parsippany, NJ)或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。其在製造及儲存條件下應係穩定的且應防止微生物(例如細菌及真菌)之污染作用。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇)及其適宜混合物之溶劑或分散介質。

無菌可注射溶液可藉由將所需量之活性化合物與上文所列舉之一種成分或成分之組合(視需要)一起納入適當溶劑中、然後過濾滅菌來製備。通常，分散液係藉由將活性化合物納入含有基本分散介質及來自上文所列舉成分之所需其他成分之無菌媒劑中來製備。

在一些實施例中，適用於本文所揭示方法中之醫藥組合物包括下表3.1或下表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥中所鑑別之組分。

本文所揭示之AAT RNAi劑(例如ADS-001或其鹽)可以劑量單位形式調配於組合物中以便於投與及劑量均勻性。劑量單位形式係指適宜作為單位劑量用於欲治療個體之物理離散單位；每一單位含有經計算以與所需醫藥載劑一起產生期望治療效應之預定量之活性化合物。

在一些實施例中，劑量單位為約5 mg至約300 mg之AAT RNAi原料藥，例如表3.1或表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥。在一些實施例中，劑量單位為約25 mg至約200 mg之AAT RNAi原料藥，例如表3.1或表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥。在一些實施例中，劑量單位為約100 mg至約200 mg之AAT RNAi原料藥，例如表3.1或表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥。在一些實施例中，劑量單位為約100 mg之AAT RNAi原料藥，例如表3.1或表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥。在一些實施例中，劑量單位為約200 mg之AAT RNAi原料藥，例如表3.1或表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥。在一些實施例中，劑量單位為至少約5 mg、至少約10 mg、至少約15 mg、至少約20 mg、至少約25 mg、至少約30 mg、至少約35 mg、至少約40 mg、至少約45 mg、至少約50 mg、至少約55 mg、至少約60 mg、至少約65 mg、至少約70 mg、至少約75 mg、至少約80 mg、至少約85 mg、至少約90 mg、至少約95 mg、至少約100 mg、至少約110 mg、至少約120 mg、至少約130 mg、至少約140 mg、至少約150 mg、至少約160 mg、至少約170 mg、至少約180 mg、至少約190 mg或至少約200 mg之AAT RNAi原料藥，例如表3.1或表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥。在一些實施例中，劑量單位為約5 mg、約10 mg、約15 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約35 mg、約40 mg、約45 mg、約50 mg、約55 mg、約60 mg、約65 mg、約70 mg、約75 mg、約80 mg、約85 mg、約90 mg、約95 mg、約100 mg、約110 mg、約120 mg、約130 mg、約140 mg、約150 mg、約160 mg、約170 mg、約180 mg、約190 mg或約200 mg之AAT RNAi原料藥，例如表3.1或表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥。在一些實施例中，劑量單位為約5 mg至約10 mg、約10 mg至約15 mg、約15 mg至約20 mg、約20 mg至約25 mg、約25 mg至約30 mg、約30 mg至約35 mg、約35 mg至約40 mg、約40 mg至約45 mg、約45 mg至約50 mg、約50 mg至約55 mg、約55 mg至約60 mg、約60 mg至約65 mg、約65 mg至約70 mg、約70 mg至約75 mg、約75 mg至約80 mg、約80 mg至約85 mg、約85 mg至約90 mg、約90 mg至約95 mg、約95 mg至約100 mg、約100 mg至約110 mg、約110 mg至約120 mg、約120 mg至約130 mg、約130 mg至約140 mg、約140 mg至約150 mg、約150 mg至約160 mg、約160 mg至約170 mg、約170 mg至約180 mg、約180 mg至約190 mg或約190 mg至約200 mg之AAT RNAi原料藥，例如表3.1或表3.2中所提供之經調配AAT RNAi原料藥。

醫藥組合物可含有通常在醫藥組合物中發現之其他額外組分。此類額外組分包括(但不限於)：抗搔癢藥、收斂劑、局部麻醉劑或抗發炎劑(例如抗組織胺、苯海拉明(diphenhydramine)等)。

如本文所用之「藥理有效量」、「治療有效量」或簡單地「有效量」係指產生藥理、治療或預防結果之RNAi劑之量。

所述醫藥學上可接受之調配物可包裝至套組、容器、包或分配器中。本文所述之醫藥組合物可包裝於預填充注射器或小瓶中。 經調配之 AAT RNAi 原料藥

在一些實施例中，將如表2中所提供之AAT RNAi原料藥(例如ADS-001或其鹽)與一或多種醫藥學上可接受之賦形劑一起調配以形成適於投與人類個體之醫藥組合物。

在一些實施例中，表2中所述之AAT RNAi原料藥以230 mg/mL調配於水性磷酸鈉緩衝液(0.5 mM磷酸二氫鈉、0.5 mM磷酸氫二鈉)中，形成表3.1中所顯示之經調配AAT RNAi原料藥(ADS-001-1)：表 3.1.每1.0 mL經調配AAT RNAi原料藥之組成

組分	功能	品質/等級	濃度
ADS-001	活性成分	內部	230 mg
磷酸二氫鈉單水合物	懸浮劑	USP, Ph. Eur	0.061 mg
無水磷酸氫二鈉	懸浮劑	USP, Ph. Eur	0.062 mg
注射用水(WFI)	媒劑	USP, Ph. Eur	879.2 mg

在一些實施例中，表2中所述之AAT RNAi原料藥以200 mg/mL調配於水性磷酸鈉緩衝液(0.5 mM磷酸二氫鈉、0.5 mM磷酸氫二鈉)中，形成表3.2中所顯示之經調配AAT RNAi原料藥(ADS-001-2)：表 3.2.每1.0 mL經調配AAT RNAi原料藥之組成

組分	功能	品質/等級	濃度
ADS-001	活性成分	內部	200 mg
磷酸二氫鈉單水合物	懸浮劑	USP, Ph. Eur	約0.061 mg
無水磷酸氫二鈉	懸浮劑	USP, Ph. Eur	約0.063 mg
注射用水(WFI)	媒劑	USP, Ph. Eur	約891 mg

在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含每1 mL 150 mg至250 mg之本文所揭示AAT RNAi原料藥，例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽。在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含每1 mL至少約150 mg、至少約160 mg、至少約170 mg、至少約180 mg、至少約190 mg、至少約200 mg、至少約210 mg、至少約220 mg、至少約230 mg、至少約240 mg或至少約250 mg之本文所揭示AAT RNAi原料藥，例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽。在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含每1 mL約150 mg、約160 mg、約170 mg、約180 mg、約190 mg、約200 mg、約210 mg、約220 mg、約230 mg、約240 mg或約250 mg之本文所揭示AAT RNAi原料藥，例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽。在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含每1 mL約150 mg至約160 mg、約160 mg至約170 mg、約170 mg至約180 mg、約180 mg至約190 mg、約190 mg至約200 mg、約200 mg至約210 mg、約210 mg至約220 mg、約220 mg至約230 mg、約230 mg至約240 mg或約240 mg至約250 mg之本文所揭示AAT RNAi原料藥，例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽。

在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含每1 mL約0.120 mg之懸浮劑。在一些實施例中，懸浮劑包含磷酸鹽或其組合。在一些實施例中，懸浮劑包含磷酸鈉或其組合。在一些實施例中，懸浮劑包含磷酸二氫鈉。在一些實施例中，懸浮劑包含磷酸氫二鈉。在一些實施例中，懸浮劑包含磷酸二氫鈉及磷酸氫二鈉。在一些實施例中，磷酸二氫鈉係磷酸二氫鈉單水合物。在一些實施例中，磷酸氫二鈉係無水磷酸氫二鈉。在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含大約等效量之磷酸二氫鈉單水合物及無水磷酸氫二鈉。在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含每1 mL大約0.061 mg之磷酸二氫鈉單水合物。在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含每1 mL大約0.062 mg無水磷酸氫二鈉。在一些實施例中，本揭示案之經調配AAT RNAi原料藥包含每1 mL大約0.061 mg之磷酸二氫鈉單水合物及大約0.062 mg無水磷酸氫二鈉。

表3.1及表3.2之經調配AAT RNAi原料藥製備為無菌調配物。在一些實施例中，經調配AAT RNAi原料藥包裝於容器(例如玻璃小瓶)中。在一些實施例中，經調配AAT RNAi原料藥包裝於填充體積為約1.1 mL之玻璃小瓶中，且期望投與體積可基於欲投與之期望劑量水準來計算。

在一些實施例中，表3.1及表3.2中所示之經調配AAT RNAi原料藥係使用本文所揭示方法投與人類個體。套組

套組中可包含本文所述之任一組合物，例如AAT RNAi劑、AAT RNAi原料藥(ADS-001)或其鹽、AAT RNAi劑或AAT RNAi原料藥(ADS-001)或其鹽之醫藥組合物及調配物、或經調配AAT RNAi原料藥(ADS-001)。在非限制性實例中，套組包含AAT RNAi原料藥(ADS-001)或其鹽。

套組可進一步包括用於在個體中使用本文所述之組合物之試劑或說明書。其亦可包括一或多種緩衝劑。

在一些實施例中，套組可進一步包括有效量之用於治療AATD之另一治療劑。

套組之組分可包裝於水性介質中或以凍乾形式包裝。套組之容器構件通常將包括至少一個小瓶、測試管、燒瓶、瓶、注射器或其他容器構件，組分可置於其中且較佳地適當等分。當套組中存在一種以上之組分(標記試劑及標記可包裝在一起)時，套組通常亦將含有第二、第三或其他額外容器，額外組分可單獨置於其中。套組亦可包含含有醫藥學上可接受之無菌緩衝劑及/或其他稀釋劑之第二容器構件。然而，小瓶中可包含組分之各個組合。本發明之套組通常亦將包括含有本發明組合物(例如AAT RNAi原料藥(ADS-001)或其鹽)之構件及用於商業銷售之密閉之任何其他試劑容器。

當套組之組分提供於一種及/或多種液體溶液中時，液體溶液係水溶液，且無菌水溶液係尤佳的。然而，套組之組分可以乾燥粉末提供。當試劑及/或組分係以乾燥粉末提供時，粉末可藉由添加適宜溶劑來復原。設想溶劑亦可提供於另一容器構件中。 預填充注射器

本文所述之任一組合物(例如AAT RNAi劑、AAT RNAi原料藥(ADS-001)或其鹽、AAT RNAi劑或AAT RNAi原料藥(ADS-001)或其鹽之醫藥組合物及調配物、或經調配AAT RNAi原料藥(ADS-001))可包裝於注射器中。在非限制性實例中，預填充注射器包含AAT RNAi原料藥(ADS-001)或其鹽。在一些實施例中，預填充注射器包含呈劑量單位(例如約100 mg或約200 mg)之AAT RNAi原料藥(ADS-001)。患有 AATD 及經診斷患有 AATD 之人類個體

本文所揭示方法包括使用本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽，例如包含表2中所述之AAT RNAi原料藥之醫藥組合物)治療有需要之人類個體之α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)，包括治療人類個體之由AATD引起之症狀及疾病。在一些實施例中，醫藥組合物包含表3.1或表3.2中所示之經調配AAT RNAi原料藥。

在一些實施例中，人類個體在投與之前經診斷患有AATD。如本文所述，AATD係由引起AAT蛋白之突變體形式轉譯之基因轉錄物突變引起之遺傳病症，易於異常折疊之一些突變體形式導致肝細胞中之細胞內滯留。儘管已鑑別出 SERPINA1基因之多種突變，但AATD之最常見且嚴重之形式PiZZ基因型係由單鹼基對取代引起。在具有PiZZ基因型之個體中，循環AAT水準通常報告為水準小於正常人類之15%。在許多情形下，個體最初經診斷患有COPD、氣喘或其他肺疾病而未鑑別出潛在病因。隨時間推移，肝臟疾病(例如纖維化及肝硬化)可因錯誤折疊(「Z-AAT」)之蛋白質之細胞間滯留及無法正確地自肝臟細胞分泌蛋白質而發展。小兒個體通常呈現肝臟疾病之臨床症狀，其可包括無症狀性慢性肝炎、成長遲緩、進食較差或肝腫大及脾腫大。AATD可經由個體血液樣品之標準基因分型來診斷及確認。 給藥及 AAT 基因表現之抑制

通常，投與有需要之個體之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之有效量將在約0.1 mg/kg至約10 mg/kg體重/劑量、例如約0.25 mg/kg至約5 mg/kg體重/劑量之範圍內。

在一些實施例中，本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之有效量將在約0.5 mg/kg至約4 mg/kg體重/劑量之範圍內。

在一些實施例中，本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之有效量為至少約0.2 mg/kg、至少約0.4 mg/kg、至少約0.6 mg/kg、至少約0.8 mg/kg、至少約1 mg/kg、至少約1.2 mg/kg、至少約1.4 mg/kg、至少約1.6 mg/kg、至少約1.8 mg/kg、至少約2 mg/kg、至少約2.2 mg/kg、至少約2.4 mg/kg、至少約2.6 mg/kg、至少約2.8 mg/kg、至少約3 mg/kg、至少約3.2 mg/kg、至少約3.4 mg/kg、至少約3.6 mg/kg、至少約3.8 mg/kg、至少約4 mg/kg、至少約4.2 mg/kg、至少約4.4 mg/kg、至少約4.6 mg/kg、至少約4.8 mg/kg、至少約5 mg/kg、至少約5.2 mg/kg、至少約5.4 mg/kg、至少約5.6 mg/kg、至少約5.8 mg/kg、至少約6 mg/kg、至少約6.2 mg/kg、至少約6.4 mg/kg、至少約6.6 mg/kg、至少約6.8 mg/kg、至少約7 mg/kg、至少約7.2 mg/kg、至少約7.4 mg/kg、至少約7.6 mg/kg、至少約7.8 mg/kg、至少約8 mg/kg、至少約8.2 mg/kg、至少約8.4 mg/kg、至少約8.6 mg/kg、至少約8.8 mg/kg、至少約9 mg/kg、至少約9.2 mg/kg、至少約9.4 mg/kg、至少約9.6 mg/kg、至少約9.8 mg/kg、至少約10 mg/kg體重/劑量。

在一些實施例中，本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之有效量為約0.2 mg/kg、約0.4 mg/kg、約0.6 mg/kg、約0.8 mg/kg、約1 mg/kg、約1.2 mg/kg、約1.4 mg/kg、約1.6 mg/kg、約1.8 mg/kg、約2 mg/kg、約2.2 mg/kg、約2.4 mg/kg、約2.6 mg/kg、約2.8 mg/kg、約3 mg/kg、約3.2 mg/kg、約3.4 mg/kg、約3.6 mg/kg、約3.8 mg/kg、約4 mg/kg、約4.2 mg/kg、約4.4 mg/kg、約4.6 mg/kg、約4.8 mg/kg、約5 mg/kg、約5.2 mg/kg、約5.4 mg/kg、約5.6 mg/kg、約5.8 mg/kg、約6 mg/kg、約6.2 mg/kg、約6.4 mg/kg、約6.6 mg/kg、約6.8 mg/kg、約7 mg/kg、約7.2 mg/kg、約7.4 mg/kg、約7.6 mg/kg、約7.8 mg/kg、約8 mg/kg、約8.2 mg/kg、約8.4 mg/kg、約8.6 mg/kg、約8.8 mg/kg、約9 mg/kg、約9.2 mg/kg、約9.4 mg/kg、約9.6 mg/kg、約9.8 mg/kg、約10 mg/kg體重/劑量。

在一些實施例中，本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之有效量為約1 mg/kg至約2 mg/kg、約2 mg/kg至約3 mg/kg、約3 mg/kg至約4 mg/kg、約4 mg/kg至約5 mg/kg、約5 mg/kg至約6 mg/kg、約6 mg/kg至約7 mg/kg、約7 mg/kg至約8 mg/kg、約8 mg/kg至約9 mg/kg及約9 mg/kg至約10 mg/kg體重/劑量。

在一些實施例中，有效量係固定劑量。在一些實施例中，介於5 mg至300 mg之間之本文所揭示AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，介於25 mg至200 mg之間之本文所揭示AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。所投與量將可能端視諸如以下之變量而定：個體之總體年齡及健康狀況、所遞送化合物之相對生物效力、藥物之調配物、調配物中賦形劑之存在及類型以及投與途徑。在一些實施例中，約10 mg、約15 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約35 mg、約40 mg、約45 mg、約50 mg、約55 mg、約60 mg、約65 mg、約70 mg、約75 mg、約80 mg、約85 mg、約90 mg、約95 mg、約100 mg、約120 mg、約140 mg、約160 mg、約180 mg、約200 mg、約220 mg、約240 mg、約260 mg或約280 mg至約15 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約35 mg、約40 mg、約45 mg、約50 mg、約55 mg、約60 mg、約65 mg、約70 mg、約75 mg、約80 mg、約85 mg、約90 mg、約95 mg、約100 mg、約120 mg、約140 mg、約160 mg、約180 mg、約200 mg、約220 mg、約240 mg、約260 mg、約280 mg或約300 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，約25 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，約50 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，約75 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，約100 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，約125 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，約150 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，約175 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。在一些實施例中，約200 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之固定劑量係有效劑量。

另外，應理解，所投與之初始劑量在一些情況下可增加超過上述上限水準以快速達成期望血液水準或組織水準，或初始劑量在一些情況下可小於最佳劑量。舉例而言，在一些實施例中，投與約25 mg至約200 mg、例如約25 mg、約50 mg、約75 mg、約100 mg、約125 mg、約150 mg、約175 mg或約200 mg之本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之初始劑量，然後在大約四週或1個月後投與約25 mg至200 mg之第二劑量，且此後約每12週或約每三個月一次(即約每季度一次)投與額外劑量(概念類似於「維持劑量」)。

為治療疾病或為形成治療疾病之藥物或組合物，包括本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之本文所述醫藥組合物可與賦形劑或與第二治療劑或治療組合，包括(但不限於)：第二RNAi劑或其他RNAi劑、小分子藥物、抗體、抗體片段、肽及/或適配體。

在本文所揭示方法之一些態樣中，向有需要之人類個體投與包括本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之醫藥組合物可引起(i)纖維化減輕；(ii)門靜脈周圍肝細胞之水準降低；(iii)血清Z-AAT減少；(iv)總肝臟Z-AAT減少；(v)可溶性肝臟Z-AAT減少；(vi)不溶性肝臟Z-AAT減少；(vii) ALT減少；(viii) GGT減少；(ix) Pro-C3減少；或(x)其組合。

在一些實施例中，向有需要之人類個體投與包括本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之醫藥組合物可改良纖維化、門靜脈發炎、界面性肝炎、整體門靜脈道累及、PAS+D區域定位、1區「小球」門靜脈周圍累及或其任一組合。

在一些實施例中，投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中AAT基因之基因表現水準及/或mRNA水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或大於99%。個體中之基因表現水準及/或mRNA水準在個體之細胞、細胞之群及/或組織中有所降低。在一些實施例中，個體中之基因表現水準及/或mRNA水準在個體之肝臟細胞(例如肝細胞、肝星形細胞、肝臟細胞之群及/或肝臟)中有所降低。

在一些實施例中，投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中AAT基因之基因表現水準及/或mRNA水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或大於99%。

在一些實施例中，投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中AAT基因之基因表現水準及/或mRNA水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、約45%至約50%、約50%至約55%、約55%至約60%、約60%至約65%、約65%至約70%、約70%至約75%、約75%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%或約95%至100%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中AAT之蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或大於約99%。個體中之蛋白水準在個體之細胞、細胞之群、組織、血液及/或其他流體中有所降低。在一些實施例中，個體中之蛋白水準在個體之肝臟細胞(例如肝細胞、肝星形細胞、肝臟細胞之群及/或肝臟)中有所降低。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中AAT之蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或大於約99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中AAT之蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、約45%至約50%、約50%至約55%、約55%至約60%、約60%至約65%、約65%至約70%、約70%至約75%、約75%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%或約95%至100%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之患有AATD之個體中之肝臟Z-AAT蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或大於99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之患有AATD之個體中之肝臟Z-AAT蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或大於99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之患有AATD之個體中之肝臟Z-AAT蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、約45%至約50%、約50%至約55%、約55%至約60%、約60%至約65%、約65%至約70%、約70%至約75%、約75%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%或約95%至100%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之患有AATD之個體中之肝臟Z-AAT可溶性或單體蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或大於約99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之患有AATD之個體中之肝臟Z-AAT可溶性或單體蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或大於約99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之患有AATD之個體中之肝臟Z-AAT可溶性或單體蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、約45%至約50%、約50%至約55%、約55%至約60%、約60%至約65%、約65%至約70%、約70%至約75%、約75%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%或約95%至100%。

在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約50%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約50%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約55%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約55%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約60%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約60%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約65%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約65%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約95%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，可溶性肝臟Z-AAT之減少為約95%。在一些實施例中，可溶性肝臟Z-AAT之減少介於約50%與約97%之間。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中之肝臟Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或大於約99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中之肝臟Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或大於約99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中之肝臟Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水準相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、約45%至約50%、約50%至約55%、約55%至約60%、約60%至約65%、約65%至約70%、約70%至約75%、約75%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%或約95%至100%。

在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約40%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約40%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約45%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約45%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約50%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約50%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約55%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約55%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約60%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約60%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約65%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約65%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約95%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少為約95%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，不溶性肝臟Z-AAT之減少介於約40%與約97%之間。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中之肝臟Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水準及Z-AAT可溶性或單體蛋白水準二者相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或大於約99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中之肝臟Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水準及Z-AAT可溶性或單體蛋白水準二者相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或大於約99%。

在一些實施例中，已投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)之個體中之肝臟Z-AAT不溶性或聚合物蛋白水準及Z-AAT可溶性或單體蛋白水準二者相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體降低約5%至約10%、約10%至約15%、約15%至約20%、約20%至約25%、約25%至約30%、約30%至約35%、約35%至約40%、約40%至約45%、約45%至約50%、約50%至約55%、約55%至約60%、約60%至約65%、約65%至約70%、約70%至約75%、約75%至約80%、約80%至約85%、約85%至約90%或約95%至100%。

在一些實施例中，向有需要之個體投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體血清Z-AAT減少至少約70%。

在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為至少約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為至少約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為至少約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為至少約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為至少約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為至少約95%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為約95%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少為約100%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，血清Z-AAT之減少介於約70%與約100%之間。

在一些實施例中，向有需要之個體投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體產生至少約70%之總肝臟Z-AAT減少。

在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為至少約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為至少約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為至少約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為至少約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為至少約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為至少約95%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為約95%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少為約100%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，總肝臟Z-AAT之減少介於約70%與約100%之間。

在一些實施例中，向有需要之個體投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體產生至少約30%之ALT減少。

在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為至少約30%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為約30%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為至少約35%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為約35%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為至少約40%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為約40%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為至少約45%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為約45%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為至少約50%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少為約50%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，ALT之減少介於約30%與約50%之間。

在一些實施例中，向有需要之個體投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體產生至少約25%之GGT減少。

在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為至少約25%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為約25%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為至少約30%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為約30%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為至少約35%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為約35%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為至少約40%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為約40%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為至少約45%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少為約45%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，GGT之減少介於約25%與約45%之間。

在一些實施例中，向有需要之個體投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體產生至少約15%之Pro-C3減少。

在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約15%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約15%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約20%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約20%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約25%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約25%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約30%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約30%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約35%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約35%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約40%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約40%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約45%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約45%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約50%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約50%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約55%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約55%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約60%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約60%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約65%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約65%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約70%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約75%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約80%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約85%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為至少約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少為約90%。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，Pro-C3之減少介於約15%與約90%之間。

在一些實施例中，向有需要之個體投與本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)相對於投與AAT RNAi原料藥之前之個體或未接受AAT RNAi原料藥之個體產生至少約15%之纖維化減輕，如藉由FIBROSCAN®所量測。

在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約15%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約15%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約20%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約20%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約25%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約25%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約30%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約30%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約35%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約35%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約40%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約40%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約45%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約45%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約50%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約50%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約55%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約55%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約60%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約60%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約65%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約65%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約70%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約70%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約75%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約75%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約80%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約80%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約85%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約85%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為至少約90%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕為約90%，如藉由FIBROSCAN®所量測。在一些實施例中，在向有需要之個體投與ADS-001或其鹽後，纖維化之減輕介於約15%與約90%之間，如藉由FIBROSCAN®所量測。

AAT基因表現(包括PiZZ基因型)、AAT mRNA (包括PiZZ基因型)或AAT蛋白水準(包括Z-AAT蛋白)之降低可藉由此項技術中已知之一般方法來評價及量化。本文所揭示之實例闡釋用於評價AAT基因表現抑制及AAT蛋白水準降低之眾所周知之方法。AAT mRNA水準及/或蛋白水準(包括Z-AAT可溶性蛋白水準及Z-AAT不溶性蛋白水準)之降低或減少在本文中統稱為AAT之降低或減少或者抑制或降低AAT之表現。

如本文所用之術語「肝臟Z-AAT蛋白之量」、「肝臟Z-AAT蛋白水準」、「肝臟Z-AAT蛋白負荷」係指在人類個體之肝臟中量測之Z-AAT蛋白之數量，且除非另外明確指明，否則此類術語在本文中可互換使用。如本文非限制性實例中更全面揭示，可自個體獲得肝臟生檢，且可將彼等樣品均質化且然後評價所存在Z-AAT蛋白之總量。可以類似方式量化所存在可溶性Z-AAT蛋白(主要為單體形式之Z-AAT蛋白)之量，且然後可藉由自總量減去可溶性數量來計算所存在不溶性(聚合物) Z-AAT蛋白之水準。

如本文所用之術語「治療(treat)」、「治療(treatment)」及諸如此類意指用於提供個體疾病之一或多種症狀之數量、嚴重程度及/或頻率之緩解或緩和的方法或步驟。如本文所用之「治療(treat)」及「治療(treatment)」可包括預防、管控、預防性治療及/或抑制個體疾病之一或多種症狀之數量、嚴重程度及/或頻率。

如本文所用之「每月給藥」或「每月」投與意指每28天。如本文所用之「每季度給藥」或「每季度」投與意指每84天。術語「約」在結合每月給藥使用時意指每月給藥+/- 3天。術語「約」在結合每季度給藥使用時意指每季度給藥+/- 9天。術語「約」在結合多週給藥使用時意指+/- 1週。

如本文所用之片語「引入細胞中」在提及本文所揭示之AAT RNAi原料藥(例如包含由SEQ ID NO: 6組成之有義股及由SEQ ID NO: 2組成之反義股之dsRNA，例如ADS-001或其鹽)時意指將RNAi劑功能性遞送至細胞中。片語「功能性遞送」意指將RNAi劑以使得RNAi劑能夠具有預期生物活性(例如序列特異性基因表現抑制)之方式遞送至細胞。

除非另有說明，否則使用符號

如本文所用意指，符合本文所述發明之範圍之任一或多個基團可與其連接。

如本文所用，除非在結構中特定鑑別為具有特定構形，否則對於其中存在不對稱中心且因此產生鏡像異構物、非鏡像異構物或其他立體異構構形之每一結構，本文所揭示之每一結構意欲表示所有此類可能的異構物，包括其光學純形式及外消旋形式。舉例而言，本文所揭示之結構意欲涵蓋非鏡像異構物之混合物以及單一立體異構物。

如本文申請專利範圍中所用之片語「由……組成」不包括申請專利範圍中未指定之任何元素、步驟或成分。當用於本文申請專利範圍中時，片語「基本上由……組成」將申請專利範圍之範圍限於指定材料或步驟及實質上不影響所主張發明之基本及新穎特徵之彼等材料或步驟。

熟習此項技術者將容易地理解並瞭解，本文所揭示之化合物及組合物可具有呈質子化或去質子化狀態之某些原子(例如N、O或S原子)，此端視化合物或組合物所處之環境而定。因此，如本文所用，本文所揭示之結構設想，某些官能基(例如OH、SH或NH)可經質子化或去質子化。本文之揭示案意欲涵蓋所揭示化合物及組合物，而與其基於環境(例如pH)之質子化狀態無關，如熟習此項技術者將容易地理解。

除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語具有與熟習此項技術者所通常理解相同之含義。儘管類似或等效於本文所述方法及材料之方法及材料可用於實踐或測試本發明，但適宜方法及材料闡述於下文中。本文所提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻之全文皆以引用方式併入。倘若出現衝突，則以本說明書(包括定義)為準。另外，材料、方法及實例僅具有說明性且不欲具有限制性。

在標題為Methods For The Treatment Of Alpha-1 Antitrypsin Deficiency (AATD)之國際專利申請案第PCT/US20/36359號中，申請者闡述正常健康志願者(HBV)之1期AAT RNAi原料藥(ADS-001)研究之資料。為完整起見，該資訊闡釋於實例2及其圖4-圖11中。在本申請案中，申請者闡釋經診斷患有AATD之人類個體之開放標記2期研究之初始資料。驚人地且出人意料的是，僅在6個月及三個劑量之AAT RNAi原料藥(ADS-001)後，肝臟Z-AAT蛋白水準明顯降低。

現使用以下非限制性實例說明上文所提供之實施例及項目。實例實例 1. AAT RNAi 原料藥 (ADS-001) 之合成及調配

適用於本文所揭示方法中之AAT RNAi原料藥可使用如此項技術中已知之基於固相寡核苷酸合成之標準亞磷醯胺技術來合成。可使用市售寡核苷酸合成儀(例如MERMADE96E® (Bioautomation)或MERMADE12® (Bioautomation))。合成可在由受控孔玻璃(CPG, 500 Å或600Å，自Prime Synthesis, Aston, PA, USA獲得)製成之固體支撐物上實施。定位於各別股3’端之單體可連接至固體支撐物作為合成起點。所有RNA、2′修飾之RNA亞磷醯胺及反向無鹼基亞磷醯胺可在市面上購得。可合成適於添加至有義股之5’端之含靶向基團之亞磷醯胺。可使用如此項技術中已知之標準裂解、去保護、純化及退火步驟。關於AAT RNAi劑合成之其他描述可參見例如國際專利申請公開案第WO 2018/132432號(申請案第PCT/US2018/013102號)及國際專利申請公開案第WO 2018/044350號(PCT/US2017/021147)，其各自之全文皆以引用方式併入本文中。AAT RNAi原料藥然後可藉由溶解於此項技術中眾所周知之標準醫藥學上可接受之賦形劑中來調配。舉例而言，表3.1及表3.2顯示適用於本文所揭示方法中之經調配AAT RNAi原料藥。實例 2. 正常健康人類志願者 (NHV) 中之 AAT RNAi 原料藥 (ADS-001) 之 I 期臨床試驗。

以下實例先前呈現於標題為Methods For The Treatment Of Alpha-1 Antitrypsin Deficiency (AATD)之國際專利申請案第PCT/US20/36359號中，且申請者為完整起見希望在此重申該資訊。

在健康志願者(NHV)中實施1期、單劑量及多劑量遞增劑量研究以評估AAT RNAi原料藥(ADS-001)之安全性、耐受性、藥物動力學及對血清AAT水準之效應。研究個體群體包括BMI介於19.0 kg/m²與35.0 kg/m²之間之18-52歲之健康成年男性及女性。

將NHV個體分成總共7個隊列。將隊列1至4隨機化以接受以皮下注射投與之35 mg (隊列1)之單一遞增劑量及100 mg (隊列2)、200 mg (隊列3)及300 mg (隊列4)之多個遞增劑量之AAT RNAi原料藥或安慰劑(4個活性劑:4個安慰劑)。使隊列1至4雙盲化。隊列2b、3b及4b係由接受100 mg、200 mg及300 mg單劑量之AAT RNAi原料藥之4個個體組成之開放標記。總共44個個體完成研究。圖4顯示I期臨床試驗之最終研究設計。研究參數匯總於下表4中。表 4. I 期臨床研究參數

開發期	1期：首次人類試驗
研究目標	主要目標： • 確定在正常健康人類志願者(NHV)中使用遞增單劑量及遞增多劑量，與治療可能或大概相關之不良事件之發生率及頻率作為AAT RNAi原料藥(ADS-001)之安全性及耐受性之量度。次要目標： • 評估NHV中之AAT RNAi原料藥之單劑量及多劑量藥物動力學。 • 確定因應AAT RNAi原料藥之血清AAT減少作為藥物活性之量度。探究性目標： • 評估NHV中單劑量之AAT RNAi原料藥對細胞介素之效應(細胞介素組A：介白素-6 [IL-6]、單核球趨化蛋白-1 [MCP-1]、腫瘤壞死因子-α [TNF-α]、介白素-8 [IL-8]、介白素-1β [IL-1β]、干擾素α [IFN α]、IL-10、IL-12 [p40]、IL-12 [p70]、巨噬細胞發炎蛋白-1α [Mip-1α])。 • 評估NHV中單一遞增劑量之AAT RNAi原料藥對補體因子Bb、CH50、C5a、C4a及C3a之效應。 • 收集NHV之血漿樣品用於後續代謝物鑑別(報告於本研究外之單獨報告中)。 • 收集NHV之尿液樣品用於後續測定尿液排泄及代謝物鑑別(報告於本研究外之單獨報告中)。
研究設計	隊列1至4：隨機化、雙盲、安慰劑對照隊列2b、3b及4b：開放標記
研究群體	在BMI介於19.0與35.0 kg/m²之間之年齡為18-52歲之成年男性及女性NHV中實施本研究。
研究產品	AAT RNAi原料藥(ADS-001) (參見表2)，以經調配AAT RNAi原料藥(ADS-001-1) (參見表3.1)投與
劑量及頻率	隊列1：隨機化以接受35 mg單劑量之AAT RNAi原料藥(ADS-001)或安慰劑(4個活性劑:4個安慰劑)，以單一皮下注射投與。隊列2-4：隨機化以經由皮下注射接受100 mg (隊列2)、200 mg (隊列3)或300 mg (隊列4) AAT RNAi原料藥或安慰劑(4個活性劑:4個安慰劑)之每月三個(即第1天、第29天及第57天)劑量。隊列2b、3b及4b：入選以接受100 mg (隊列2b)、200 mg (隊列3b)或300 mg (隊列4b)單劑量之AAT RNAi原料藥(4個活性劑)，以單一皮下注射投與。如上文剛剛所述，AAT RNAi原料藥之所有皮下注射皆係以經調配AAT RNAi原料藥(ADS-001-1) (參見表3.1)來投與。
參考調配物	安慰劑(PBO)：生理鹽水(0.9%)，以匹配體積皮下投與。
安全性評估準則	• 安全性係藉由不良事件、嚴重不良事件、身體檢查、生命跡象量測(血壓、心率、體溫及呼吸速率)、靜止ECG量測、臨床實驗室測試、伴隨藥物/療法、注射位點反應(ISR)、治療中斷之原因及第29天後90天(隊列1)及第113天後90天(所有其他隊列)之妊娠隨訪來評價。
藥物動力學評估	將在劑量1後(隊列1)以及劑量1及3後(隊列2、3及4)自每一個體收集血液樣品用於藥物動力學分析。
資料分析	篩選、順從性、耐受性及安全性資料：將實施安全性分析，且按隊列匯總結果。將根據SOC、PT及嚴重程度按隊列來匯總不良事件(AE)、嚴重不良事件(SAE)、相關AE、相關SAE及導致中斷之AE之發生率及頻率。將匯總每一排定時間下之其他安全性參數。藥物動力學(僅NHV個體)：將使用AAT RNAi原料藥成分之血漿濃度來計算以下PK參數：觀察到之最大血漿濃度(Cmax)、時間0至24小時之血漿濃度時間曲線下面積(AUC) (AUC0-24)、時間0外推至無窮大之AUC (AUCinf)及終末消除半衰期(t½)。藥物動力學參數將使用非分室方法來測定。PK參數之描述性統計學將包括平均值、標準偏差(SD)、變異係數、中值、最小值及最大值。將分析PK結果之劑量比例及性別差異。

研究之血清AAT減少結果顯示，投與劑量為35 mg至300 mg之AAT RNAi原料藥使得血清AAT與安慰劑相比深度減少。最初，建議以400 mg之AAT RNAi原料藥/劑量進行隊列研究作為臨床試驗方案之一部分。然而，鑑於35 mg、100 mg、200 mg及300 mg劑量下之出人意料之功效，自研究方案去除400 mg隊列。35 mg、100 mg及200 mg之劑量產生實質性血清AAT減少，且在I期研究中100 mg及200 mg在多個劑量後達到大約90%之平均血清AAT減少。圖5至圖11報告I期研究中之多個隊列之血清AAT減少。

在所有劑量水準下無明顯的劑量依賴性反應，此乃因驚人地且出人意料的是，100 mg及200 mg之劑量水準產生實質性(達到大約90%)且與300 mg更高劑量相似的敲低。儘管35 mg之最低劑量仍很有活性，但其不如以單劑量投與之100 mg有活性，此指示一定程度之劑量反應。

自35 mg單劑量開始，血清AAT減少(＞58%)之持續時間長於最初預期之持續時間，持續至劑量投與後16週且隨後返回至基線。舉例而言，在35 mg單劑量後之三十四週，一個個體之血清AAT水準已返回至90 mg/dL以上，而第二個體之血清AAT水準保持在40 mg/dL (自基線降低60.4%)。100 mg至300 mg單劑量之AAT RNAi原料藥之反應持續時間無顯著差異，在單劑量後8週與16週之間開始返回至基線。

一般而言，多劑量之AAT RNAi原料藥維持血清AAT深度減少之持續時間長於單一劑量。該等資料表明，在第29天(即距初始劑量一個月後)接受之第二劑量可進一步降低血清AAT水準或維持降低，且可每12週(即每季度)投與後續劑量以維持最大血清AAT降低。

在I期研究中無死亡，無嚴重不良事件(SAE)且無評定為強度重度之不良事件(AE)。在接受AAT RNAi原料藥之個體中，兩個個體報告中等強度之三起AE (上呼吸道感染、鼻漏、一般性胸痛)。在接受安慰劑之個體中，三個個體報告中等強度之三起AE (2-胃腸炎、左側肌肉骨骼胸痛)。所有其他AE已報告為輕度。大多數個體報告不與研究治療相關之AE。在接受AAT之個體中發生一起AE，導致療法提前中斷，但個體繼續進行研究隨訪。在接受至少單劑量之經調配AAT RNAi原料藥之28個個體中報告九十四起AE。在接受安慰劑之17個個體中報告四十六起AE。無AE頻率或強度隨著劑量遞增而增加之明顯模式。

在所有經調配AAT RNAi原料藥隊列中，在6個個體中在注射位點發生六起AE，其皆係在接受藥物之個體中發生。在安慰劑個體中無注射位點AE。所報告之注射位點反應包括注射位點淤血、紅斑及疼痛。21.4%之接受經調配AAT RNAi原料藥之個體報告該等組合注射位點AE。經調配AAT RNAi原料藥之50次注射中之6次或12%產生注射位點AE。在單一個體中未報告一次以上之注射位點AE。所有注射位點AE之強度已視為輕度。實例 3. 患有 AAT 相關之肝臟疾病之患者中之 AAT RNAi 原料藥 (ADS-001) 之 II 期臨床試驗。

在患有α-1抗胰蛋白酶缺乏相關之肝臟疾病(AATD)之患者中實施先導開放標記、多劑量、2期研究以評價ARO-AAT之安全性及效力。研究個體群體包括18-75歲之PiZZ患者(基於基線處完成之基因型或來自來源可驗證文件) AAT個體。

將PiZZ個體分成總共三個隊列。要求所有個體在初始劑量之前進行肝臟生檢。圖12顯示II期臨床試驗之研究設計。

隊列1及隊列1b係由接受以皮下注射投與之200 mg (隊列1)或100 mg (隊列1b)之總共三個劑量之AAT RNAi原料藥的至多4個個體組成。劑量係在第1天、初始劑量後4週及第二劑量後12週投與。在第三劑量後二十四(24)週(在初始劑量後約40週或約6個月)，獲取第二生檢。

隊列2將由接受以皮下注射投與之200 mg之總共五個劑量之AAT RNAi原料藥的至多8個個體組成。劑量係在第1天、初始劑量後4週及第二劑量後12週、第三劑量後12週及第四劑量後12週(即第1天及第4週、第16週、第28週及第40週)投與。在第三劑量後四十八(48)週(在初始劑量後約88週或約1年)，獲取第二生檢。

研究參數匯總於下表5中。表 5. II 期臨床研究參數

開發期	2期
研究目標	主要目標：評估患有AAT相關之肝臟疾病之患者之肝臟中，總、可溶性及不溶性Z-AAT濃度隨時間自基線之變化次要目標： • 確定相對於基線，多劑量之ARO-AAT對循環Z-AAT α-1抗胰蛋白酶水準隨時間之效應 • 評估ARO-AAT對ALT隨時間變化之效應。 • 評估ARO-AAT對GGT隨時間變化之效應。 • 評估ARO-AAT對FIB4及APRI隨時間變化之效應。 • 評估ARO-AAT對PRO-C3隨時間變化之效應。 • 評估基於FIBROSCAN®相對於基線，ARO-AAT對肝硬度隨時間變化之效應(可用時)。 • 評估患有AAT相關之肝臟疾病之患者中，ARO-AAT對肝臟疾病之組織學度量隨時間之效應。 • 評估ARO-AAT治療之患者中，Metavir纖維化得分隨時間自基線之變化。 • 確定與治療可能或大概相關之不良事件之發生率及頻率作為ARO-AAT之安全性及耐受性之量度。探究性目標： • 評估基於磁共振彈性成像(MRE)，相對於基線，ARO-AAT對肝硬度隨時間變化之效應(視情況存在)。 • 評估相對於基線，因應多劑量之ARO-AAT之肝SERPINA1 mRNA表現隨時間之變化(若足夠樣品可用)。 • 評估相對於基線，肝臟纖維化基因表現隨時間之變化(若在科學上可行且足夠樣品可用)。 • 評估基於IHC相對於基線，肝臟PAS+D染色之小球大小及數量隨時間之變化。 • 評估相對於基線，使用生物標記物、特殊染色劑及成像[馬森三色(Masson’s Trichrome)、天狼星紅(Sirius Red)、鐵]，ARO-AAT對肝臟膠原及鐵含量隨時間變化之效應(若在科學上可行且足夠樣品可用)。 • 確定相對於基線在多個劑量後時間點，多劑量之ARO-AAT對循環總α-1抗胰蛋白酶水準之效應(將單獨評估進行及不進行AAT強化療法之患者)。
研究設計	開放標記
研究群體	患有α-1抗胰蛋白酶缺乏之PiZZ患者 18-75歲之男性及女性皆合格
研究產品 (ARO-AAT)	AAT RNAi原料藥(ADS-001) (參見表2)，以經調配AAT RNAi原料藥(參見表3.1)投與
劑量及頻率	隊列1：接受劑量為200 mg之AAT RNAi原料藥(ADS-001)，在第1天、第4週及第16週經由皮下注射投與。隊列1b：接受劑量為100 mg之AAT RNAi原料藥(ADS-001)，在第1天、第4週及第16週經由皮下注射投與。隊列2：接受劑量為200 mg之AAT RNAi原料藥(ADS-001)，在第1天、第4週、第16週、第28週及第40週經由皮下注射投與。如上文剛剛所述，AAT RNAi原料藥之所有皮下注射皆係以經調配AAT RNAi原料藥(ADS-001-1) (參見表3.1)來投與。
安全性評估準則	• 安全性係藉由不良事件、嚴重不良事件、身體檢查、生命跡象量測(血壓、心率、體溫及呼吸速率)、靜止ECG量測、肺功能測試(肺活量測量法，包括FEV1及DLCO)、臨床實驗室測試、伴隨藥物/療法、注射位點反應(ISR)、治療中斷之原因及末次劑量後12週之妊娠隨訪來評價。
資料分析	篩選、耐受性及安全性資料：將實施安全性分析，且匯總結果。將使用基線後記錄之量測比較基線安全性評價。將根據SOC及較佳項按劑量來匯總不良事件(AE)、嚴重不良事件(SAE)、相關AE、相關SAE及導致退出、劑量修改或治療中斷之AE之發生率及頻率。將匯總每一排定時間下之其他安全性參數。藥效學資料：將使用適當方法呈現主要終點、次要終點及探究性終點之描述性匯總。將以EOS匯總與基線相比之組織學變化，包括Ishak纖維化得分。

隊列1

對於隊列1，血清Z-AAT減少結果顯示，投與200 mg劑量之AAT RNAi原料藥產生血清Z-AAT蛋白水準及總肝臟Z-AAT蛋白水準二者之深度降低。(參見例如圖13)。

使用UHPLC-MS/MS經由包括Z-AAT突變之胰蛋白酶肽定量地量測血清Z-AAT。亦使用UHPLC-MS/MS經由包括Z-AAT突變之胰蛋白酶肽定量地量測總肝臟Z-AAT蛋白及可溶性肝臟Z-AAT蛋白。將肝臟組織均質化後，使用UHPLC-MS/MS測定總Z-AAT蛋白水準。然後對單獨等分試樣實施離心以分離可溶性流份及不溶性流份。分離後，使用UHPLC-MS/MS評價可溶性流份之Z-AAT蛋白水準。藉由自所測定之肝臟Z-AAT蛋白之總量減去所量測之可溶性流份來導出未量測之流份(不溶性)。

替代地，可使用諸如西方墨點法(Western blot)或半定量免疫組織化學之方法藉由使用特異性針對Z-AAT蛋白之探針或抗體定量或半定量地測定Z-AAT蛋白。此類方法為眾所周知且試劑及工具在市面上有售或以其他方式為熟習此項技術者已知。

下表6尤其顯示總肝臟(即肝內) Z-AAT蛋白水準、單體(可溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準、聚合物(不溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準、ALT酶水準及GGT酶水準。對每一個體之劑量前及第24週之肝臟生檢進行FIBROSCAN®評價，且在第52週時對每一個體進行額外評價，其結果亦顯示於表6中。表 6. 來自隊列 1 之個體中自基線至第 24 週或第 52 週之相對變化。

	個體數
藥效學反應	1	2	3	4
∆血清Z-AAT% 第24週第52週	-92.3% -91.0%	-93.1% -94.3%	-86.7% -85.2%	-85.8% -77.6%
總肝臟Z-AAT基線*、第24週∆ nmol/總蛋白質第24週∆ %	33.9 -26.6 -78.6%	15.2 -14.4 -95.1%	35.2 -25.4 -72.2%	146 -107.2 -73.4%
可溶性肝臟Z-AAT基線*、第24週∆ nmol/總蛋白質第24週∆ %	16.8 -15.1 -89.8%	13.6 -12.9 -94.9%	33.3 -28.9 -86.8%	33.5 -27.2 -81.2%
第24週∆不溶性肝臟Z-AAT*、第24週∆ %	-11.6 -67.6%	-1.5 -96.6%	3.5 183.7%	-80 -71.1%
∆ ALT 第24週第52週	-66.4% -72.7%	-54.9% -52.7%	-35.7% -39.3%	-50.0% -59.2%
∆ GGT 第24週第52週	-42.6% -51.5%	-43.2% -29.7%	-57.7% -52.6%	-55.3% -81.2%
第24週∆ FIBROSCAN®%	-25.8%	-22.4%	-0.8%	-20.9%
第24週∆ Pro-C3, ng/mL 第24週∆ % 第52週∆ Pro-C3, ng/mL 第52週∆ %	-19.7 -51.4% -23.4 -61.1%	0.9 5.5% -4.2 -25.6%	-6.9 -30.9% -7.0 -31.4%	-8.4 -35.6% -9.4 -39.8%

*nmol/總蛋白質

如上表6中所顯示，每一個體獲得大於70%之總肝臟Z-AAT蛋白水準降低(∆ %)及大於80%之單體(可溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準降低。另外，除一個外之所有個體顯示聚合物(不溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準降低，且4個個體中之3個展示介於68%-97%範圍內之Z-AAT聚合物(不溶性)蛋白水準降低。

肝臟Z-AAT蛋白水準降低亦產生臨床相關生物標記物之改良，包括在第24週時與基線相比，所有個體顯示介於36%-66%範圍內之ALT減少，且所有個體顯示介於43%-58%範圍內之GGT減少。

所有個體進一步顯示FIBROSCAN®評分之改良，且4個個體中之3個在第24週時展示與基線相比大於20%之減小。另外，4名患者中之3名展示在第24週時介於31%-51%範圍內之纖維生成生物標記物Pro-C3減少。

在基線及第24週時由兩位病理學家實施肝臟生檢之組織學評價，且第三位病理學家用作任何評估偏差事件之裁定者。在第24週時，所有個體顯示至少一個組織學參數與其基線生檢相比之改良，例如門靜脈發炎、小葉發炎、界面性肝炎、肝細胞死亡及纖維化(Metavir)。兩個個體具有纖維化改良且兩個個體無纖維化惡化。所有個體不顯示門靜脈發炎之惡化或改良。另外，所有個體顯示Z-AAT負荷之改良，其係藉由如下表7中所顯示之PAS+D (過碘酸希夫(Periodic acid-Schiff) +澱粉酶)染色來評價。表 7. 在來自隊列 1 之個體中來自基線及第 24 週之肝臟中 Z-AAT 聚合物 ( 「小球」 ) 之組織學評價。

	基線	第 24 週
個體 1	累及1區及2區	僅1區
2/3以上之門靜脈道	不到1/3之門靜脈道
1/3至2/3之門靜脈周圍肝細胞	不到1/3之門靜脈周圍肝細胞
大約等於紅血球(「RBC」)之最大小球	小於RBC之最大小球
大於RBC之小球佔總顆粒之＜10%	皆不大於RBC
個體 2	僅1區	無小球
不到1/3之門靜脈道
不到1/3之門靜脈周圍肝細胞
大約等於RBC之最大小球
個體 3	1區及2區	無變化
2/3以上之門靜脈道	不到1/3之門靜脈道
2/3以上之門靜脈周圍肝細胞	不到1/3之門靜脈周圍肝細胞
大約等於RBC之最大小球	小於RBC之最大小球
大於RBC之小球佔總顆粒之＜10%	無變化
個體 4	所有區域，或僅2區及3區	僅1區及2區
2/3以上之門靜脈道	無變化
2/3以上之門靜脈周圍肝細胞	1/3至2/3之門靜脈周圍肝細胞
大約等於RBC之最大小球	無變化
皆不大於RBC	大於RBC之小球佔總顆粒之＜10%

取自第52週時之隊列1個體之血清樣品顯示，ALT、GGT及血清Z-AAT水準自基線之下降仍維持與第24週時表6中所顯示之彼等水準下降相似。隊列2

對於隊列2，五名患者截至第16週之初步血清Z-AAT減少結果顯示於圖14中，其顯示Z-AAT蛋白水準降低與第24週時隊列1之Z-AAT蛋白水準降低相似。

在第48週時，下表8尤其顯示，達到48週時間點之隊列2中之前5個個體之總肝臟(即肝內) Z-AAT蛋白水準、單體(可溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準、聚合物(不溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準、ALT酶水準及GGT酶水準。對每一個體之劑量前及第48週之肝臟生檢進行FIBROSCAN®評價，其結果亦顯示於表8中。表 8. 來自隊列 2 之個體中自基線至第 48 週之相對變化。

	個體數
藥效學反應	1	2	3	4	5
∆血清Z-AAT%	-96.7%	-79.4%	-86.1%	-86.7%	-90.3%
總肝臟Z-AAT基線*、 ∆nmol/總蛋白質、 ∆ %	64.1 -57.5 -89.7%	60.2 -48.2 -80.1%	23.0 -20.6 -89.4%	31.9 -24.6 -77.0%	83.7 -81.2 -97.0%
可溶性肝臟Z-AAT基線*、 ∆ nmol/總蛋白質、 ∆ %	21.8 -21.1 -96.7%	19.7 -15.5 -78.5%	14.5 -12.7 -87.8%	22.7 -20.7 -91.1%	25.9 -25.1 -97.0%
∆不溶性肝臟Z-AAT*、 ∆ %	-36.5 -86.2%	-32.7 -80.8%	-7.8 -92.1.%	-3.9 -42.2%	-56.1 -97.1%
∆ ALT%	-50.0%**	-42.6%	-34.5%	-60.8%**	-51.5%
∆ GGT%	-34.4%	-43.9%	-40.4%	-25.7%	-29.4%
∆ FibroScan®%	-17.7%	-17.0%	NM	-67.8%	-35.6%
∆ Pro-C3, ng/mL ∆ %	-8.6 -36.6%	-2.4 -17.6%	-4.2 -25.5%	-5.8 -28.3%	-5.7 -30.8%

*nmol/總蛋白質 **第40週量測值 NM - 未量測

如上表8中所顯示，每一所報告個體獲得大於75%之總肝臟Z-AAT蛋白水準降低(∆ %)及單體(可溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準降低。另外，所有個體顯示聚合物(不溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準降低，且5個所報告個體中之4個展示介於80%-97%範圍內之Z-AAT聚合物(不溶性)蛋白水準降低，且一個個體展示42.4%之降低。

肝臟Z-AAT蛋白水準降低亦產生臨床相關生物標記物之改良，包括在第48週時與基線相比，所有個體顯示介於34%-61%範圍內之ALT減少，且所有個體顯示介於26%-44%範圍內之GGT減少。

所有所報告個體顯示FIBROSCAN®得分之改良，且分別降低17.7%、17.0%、67.8%及35.6% (僅量測5個個體中之4個)。另外，所有5名患者展示在第48週時介於18%-37%範圍內之纖維生成生物標記物Pro-C3減少。

在第48週時，5個個體中之4個顯示纖維化(METAVIR)改良至少1分，且在第5個個體中未見纖維化惡化。5個個體中之3個具有門靜脈發炎改良，且其他2個個體未顯示惡化。另外，所有個體具有Z-AAT負荷之改良，其係藉由PAS+D (過碘酸希夫+澱粉酶)染色來評價。隊列1及隊列2之組織學評價

以盲化方式(對於患者及時間點)由兩位獨立的病理學家實施第24週(對於隊列1)及第48週(對於隊列2)時肝臟生檢之組織學評價，且第三位病理學家在前兩位病理學家之間之評價出現分歧時參與。藉由METAVIR對纖維化階段進行評分，且對以下中之每一者，Z-AAT小球負荷基於陽性PAS+D染色評分為0-3 (3係最重度或最大之負荷)：含有小球之門靜脈道之範圍、含有小球之門靜脈周圍肝細胞之範圍及區域定位。改良大於或等於1分之關鍵組織學特徵報告於下表9中：表 9. 肝臟組織學相對於基線之改良 ( 肝臟組織學特徵改良 ≥ 1 分之個體之百分比 ) 。

改良 ≥ 1 分
關鍵組織學特徵	隊列 1 ( 第 24 週 ) N=4	隊列 2 ( 第 48 週 ) N=5	總計 N=9
纖維化(Metavir)	50% (2/4)	80% (4/5)	67% (6/9)
門靜脈發炎	67% (2/3***)	60% (3/5)	63% (5/8***)
界面性肝炎	0% (0/3***)	80% (4/5)	50% (4/8***)
整體門靜脈道累及	75% (3/4)	100% (5/5)	89% (8/9)
PAS+D區域定位	75% (3/4)	100% (5/5)	89% (8/9)
1區「小球」門靜脈周圍累及	100% (4/4)	100% (5/5)	100% (9/9)

***不包括在基線處無證據之個體

可自隊列1及隊列2獲得之資料證實，ARO-AAT治療引起肝內Z-AAT蛋白(Z-AAT單體及Z-AAT聚合物二者)之一致及實質性減少；組織學小球負荷之一致降低；纖維化之改良；及肝臟健康之其他相關生物標記物之改良。另外，在患有基線脂肪變性肝臟疾病之個體中可見脂肪變性之組織學改良。研究安全性匯總

在II期研究中，截至2021年3月15日之數據提取日，16個個體已接受總共71個劑量(59個200 mg劑量及12個100 mg劑量)且無因不良事件所致之死亡及退出。在長達1年之治療後，ARO-AAT總體耐受良好。無治療緊急不良事件(TEAE)相關之研究藥物中斷、劑量間斷或提前退出研究。在200 mg隊列中報告三起嚴重不良事件(SAE)，病毒性心肌炎、憩室炎及呼吸困難。所有不良事件之嚴重程度皆為中度且皆已消退。病毒性心肌炎與EBV感染相關，憩室炎發生在具有風險因子之個體(具有PiZZ基因型及闌尾切除史之63歲個體)中，且呼吸困難發生在具有非阻塞性肺氣腫病史及延遲肺部護理之個體中。AAT RNAi原料藥已耐受良好且無任何明確的安全性信號，包括自基線至第48週未觀察到臨床上有意義之ppFEV1減少(預測之一秒中用力呼氣量百分比)。截至2021年8月30日之數據提取日，隊列1、2及1b之更新的經編譯數據匯總

如上文所述，總共16個純合PiZZ個體參與2期臨床試驗。隊列1及隊列1b係由接受以皮下注射投與之200 mg (隊列1)或100 mg (隊列1b)之總共三個劑量之AAT RNAi原料藥的4個個體組成，且劑量係在第1天、初始劑量後4週及第二劑量後12週投與。隊列2係由接受以皮下注射投與之200 mg之總共五個劑量之AAT RNAi原料藥之8個個體組成，且劑量係在第1天、初始劑量後4週及第二劑量後12週、第三劑量後12週及第四劑量後12週(即第1天及第4週、第16週、第28週及第40週)投與。平均年齡為52歲(範圍為20-66歲)，且16個個體中之14個為男性。

在基線及基線後(對於組1及組2為第24週及第48週，且對於組1b為第24週)收集成對生檢，且截至2021年8月30日之截止數據提取日，可獲得16個個體中之14個之成對生檢。由對於個體及時間點盲化之3位病理學家來評價及裁定組織學。關鍵終點包括METAVIR纖維化、肝臟Z-AAT水準及總小球負荷(針對門靜脈道及1區門靜脈周圍肝細胞累及範圍以及區域定位之PAS+D染色之和)。

對於具有成對生檢之14個個體，11個在基線處具有大於或等於F2之METAVIR纖維化階段。ARO-AAT在第一劑量後實質上減少所有患者中之血清Z-AAT蛋白，此在整個觀察期間持續存在。在第24週或第48週時，平均總肝臟Z-AAT蛋白減少%介於80%至89%範圍內。所有患者具有減小的小球負荷(在基線處平均得分為7.3 (最大值為9)，其在第24週或第48週時減小至平均得分2.5)。在投與200 mg AAT RNAi原料藥之11名患者(即來自隊列1及隊列2之個體)中之6名中達成纖維化之改良(≥ 1階段)，而投與100 mg劑量(隊列1b)之三名患者皆不顯示改良。儘管隊列2中之兩名患者自基線至第48週顯示纖維化惡化(二者皆自F2至F3)，但兩個個體之小球負荷卻明顯降低(基線處之得分分別為9及4，至第48週時二者之得分為0)，且在治療後ALT及GGT水準正常化。

所有組顯示ALT及GGT之正常化。平均ALT減少%介於42%至56%範圍內，且在第28週與第72週之間介於33%至54%範圍內。

ARO-AAT耐受良好，且無持續的臨床上有意義之ppFEV1自基線之變化且無導致研究或研究藥物中斷之不良事件。報告四起SAE：EBV相關之心肌炎、憩室炎、呼吸困難及前庭神經原炎。某些匯總數據提供於下表10中：表 10. 截至 2021 年 8 月 31 日數據截止之組合隊列匯總數據

	ARO-AAT 200 mg	ARO-AAT 100 mg
	組1 (N=4)	組2 (N=8)	組1b (N=4)
平均血清Z-AAT 變化% (SD)
第24週(隊列1、隊列1b) /第28週(隊列2)	-89.5% (3.7)	-85.1% (7.8)	-83.9% (5.4)
第52週	-87.0% (7.3)	-82.4% (10.0)	NA
第72週	-92.0% (3.3)	NA	NA
平均總肝臟Z-AAT 變化% (SD)
第24週	-79.8% (10.5)	NA	-83.1% (5.8)
第48週	NA	-88.8% (9.0)	NA

PAS+D 總小球負荷，n/N (%)
自BL至第24週或第48週改良≥1分	4/4 (100%)	7/7 (100%) ^*	4/4 (100%)
自BL至第24週或第48週無變化	0/4 (0%)	0/7 (0%)	0/4 (0%)
METAVIR 纖維化階段， n/N (%)
自基線至第24週或第48週改良≥1分	2/4 (50%)	4/7 (57.1%)	0/3 (0%) **
自基線至第24週或第48週無變化	2/4 (50%)	1/7 (14.3%)	3/3 (100%)
自BL至第24週或第48週惡化≥1分	0/4 (0%)	2/7(28.6%)	0/3 (0%)

NA = 不適用；在第24週時收集組1及組1b之肝臟生檢，且在第48週時收集組2之肝臟生檢。 * 在數據截止時，組2中之一個個體尚未到達第48週且未納入分析中 ** 組1b中之一個個體具有無法評估METAVIR纖維化之基線生檢。

總之，ARO-AAT減少所有患者中之血清及肝臟Z-AAT及小球負荷。該等資料證實，在AATD肝臟疾病中去除病因因素Z-AAT會改善疾病活動度，且可改良纖維化。 其他實施例

應理解，儘管已結合詳細描述闡述本發明，但前述描述意欲說明且不限制本發明之範圍，本發明之範圍係由所附申請專利範圍之範圍來定義。其他態樣、優點及修改在所附申請專利範圍之範圍內。

圖 1A 至圖 1E. 表2中所述之AAT RNAi原料藥(在本文中稱為ADS-001；即在有義股之5’末端結合至三齒N-乙醯基-半乳糖胺靶向基團之AAT RNAi劑)之化學結構表示，以鈉鹽形式顯示。圖 2A 至圖 2E. 表2中所述之AAT RNAi原料藥之化學結構表示，以游離酸形式顯示。圖 3.表2中所述之AAT RNAi原料藥(在本文中稱為ADS-001；即在有義股之5’末端結合至三齒N-乙醯基-半乳糖胺靶向基團之AAT RNAi劑)之經修飾有義股及反義股的示意圖。在圖3中使用以下縮寫：a、c、g及u係2′-O-甲基修飾之核苷酸；Af、Cf、Gf及Uf係2′-氟(在此項技術中亦稱為2’-去氧-2’-氟)修飾之核苷酸；o係磷酸二酯鍵聯；s係硫代磷酸酯鍵聯；invAb係反向無鹼基殘基或次單元；且(NAG37)s係具有以下化學結構之三齒N-乙醯基-半乳糖胺靶向配位體：

(以鈉鹽形式顯示)，或

(以游離酸形式顯示)。圖 4.實例2中所述之I期臨床研究之最終I期研究設計及劑量遞增時間表。圖 5.顯示來自實例2中所述之I期臨床研究之投與安慰劑(所有隊列)或35 mg AAT RNAi原料藥(隊列1)之正常健康人類志願者(NHV)中的血清AAT水準之圖。如圖5至圖11中所顯示，「活性劑」係指表2中所述之AAT RNAi原料藥(作為如表3.1中所述之經調配AAT RNAi原料藥投與)。圖 6.顯示來自實例2中所述之I期臨床研究之投與安慰劑(所有隊列)或單一100 mg劑量之AAT RNAi原料藥(隊列2b)之NHV中的血清AAT水準之圖。圖 7.顯示來自實例2中所述之I期臨床研究之投與安慰劑(所有隊列)或單一200 mg劑量之AAT RNAi原料藥(隊列3b)之NHV中的血清AAT水準之圖。圖 8.顯示來自實例2中所述之I期臨床研究之投與安慰劑(所有隊列)或單一300 mg劑量之AAT RNAi原料藥(隊列4b)之NHV中的血清AAT水準之圖。圖 9.顯示來自實例2中所述之I期臨床研究之投與安慰劑(所有隊列)或每月投與的三個100 mg劑量之AAT RNAi原料藥(隊列2)之NHV中的血清AAT水準之圖。圖 10.顯示來自實例2中所述之I期臨床研究之投與安慰劑(所有隊列)或每月投與的三個200 mg劑量之AAT RNAi原料藥(隊列3)之NHV中的血清AAT水準之圖。圖 11.顯示來自實例2中所述之I期臨床研究之投與安慰劑(所有隊列)或每月投與的三個300 mg劑量之AAT RNAi原料藥(隊列4)之NHV中的血清AAT水準之圖。圖 12.實例3中所述之II期臨床研究之II期研究設計及劑量遞增時間表。圖 13.顯示來自實例3中所述之II期臨床研究之投與三個200 mg劑量之AAT RNAi原料藥(隊列1)之PiZZ基因型個體中的血清Z-AAT水準之圖。x軸上指向下方之箭頭指示投與時間。LLOQ：定量下限。圖 14.顯示來自實例3中所述之II期臨床研究之投與三個100 mg劑量之AAT RNAi原料藥(隊列2)之PiZZ基因型個體中的血清Z-AAT水準之圖。x軸上指向下方之箭頭指示投與時間。LLOQ：定量下限。


          <![CDATA[<110>  美商愛羅海德製藥公司(ARROWHEAD PHARMACEUTICALS, INC.)]]>
          <![CDATA[<120>  降低Z-AAT蛋白水準之方法]]>
          <![CDATA[<130>  3817.0840001]]>
          <![CDATA[<160>  6]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  3220]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  智人絲胺酸蛋白酶抑制劑家族A成員1 (SERPINA1)基因轉錄物變異體1 (NM_000295.4)]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          acaatgactc ctttcggtaa gtgcagtgga agctgtacac tgcccaggca aagcgtccgg     60
          gcagcgtagg cgggcgactc agatcccagc cagtggactt agcccctgtt tgctcctccg     120
          ataactgggg tgaccttggt taatattcac cagcagcctc ccccgttgcc cctctggatc     180
          cactgcttaa atacggacga ggacagggcc ctgtctcctc agcttcaggc accaccactg     240
          acctgggaca gtgaatcgac aatgccgtct tctgtctcgt ggggcatcct cctgctggca     300
          ggcctgtgct gcctggtccc tgtctccctg gctgaggatc cccagggaga tgctgcccag     360
          aagacagata catcccacca tgatcaggat cacccaacct tcaacaagat cacccccaac     420
          ctggctgagt tcgccttcag cctataccgc cagctggcac accagtccaa cagcaccaat     480
          atcttcttct ccccagtgag catcgctaca gcctttgcaa tgctctccct ggggaccaag     540
          gctgacactc acgatgaaat cctggagggc ctgaatttca acctcacgga gattccggag     600
          gctcagatcc atgaaggctt ccaggaactc ctccgtaccc tcaaccagcc agacagccag     660
          ctccagctga ccaccggcaa tggcctgttc ctcagcgagg gcctgaagct agtggataag     720
          tttttggagg atgttaaaaa gttgtaccac tcagaagcct tcactgtcaa cttcggggac     780
          accgaagagg ccaagaaaca gatcaacgat tacgtggaga agggtactca agggaaaatt     840
          gtggatttgg tcaaggagct tgacagagac acagtttttg ctctggtgaa ttacatcttc     900
          tttaaaggca aatgggagag accctttgaa gtcaaggaca ccgaggaaga ggacttccac     960
          gtggaccagg tgaccaccgt gaaggtgcct atgatgaagc gtttaggcat gtttaacatc     1020
          cagcactgta agaagctgtc cagctgggtg ctgctgatga aatacctggg caatgccacc     1080
          gccatcttct tcctgcctga tgaggggaaa ctacagcacc tggaaaatga actcacccac     1140
          gatatcatca ccaagttcct ggaaaatgaa gacagaaggt ctgccagctt acatttaccc     1200
          aaactgtcca ttactggaac ctatgatctg aagagcgtcc tgggtcaact gggcatcact     1260
          aaggtcttca gcaatggggc tgacctctcc ggggtcacag aggaggcacc cctgaagctc     1320
          tccaaggccg tgcataaggc tgtgctgacc atcgacgaga aagggactga agctgctggg     1380
          gccatgtttt tagaggccat acccatgtct atcccccccg aggtcaagtt caacaaaccc     1440
          tttgtcttct taatgattga acaaaatacc aagtctcccc tcttcatggg aaaagtggtg     1500
          aatcccaccc aaaaataact gcctctcgct cctcaacccc tcccctccat ccctggcccc     1560
          ctccctggat gacattaaag aagggttgag ctggtccctg cctgcatgtg actgtaaatc     1620
          cctcccatgt tttctctgag tctccctttg cctgctgagg ctgtatgtgg gctccaggta     1680
          acagtgctgt cttcgggccc cctgaactgt gttcatggag catctggctg ggtaggcaca     1740
          tgctgggctt gaatccaggg gggactgaat cctcagctta cggacctggg cccatctgtt     1800
          tctggagggc tccagtcttc cttgtcctgt cttggagtcc ccaagaagga atcacagggg     1860
          aggaaccaga taccagccat gaccccaggc tccaccaagc atcttcatgt ccccctgctc     1920
          atcccccact cccccccacc cagagttgct catcctgcca gggctggctg tgcccacccc     1980
          aaggctgccc tcctgggggc cccagaactg cctgatcgtg ccgtggccca gttttgtggc     2040
          atctgcagca acacaagaga gaggacaatg tcctcctctt gacccgctgt cacctaacca     2100
          gactcgggcc ctgcacctct caggcacttc tggaaaatga ctgaggcaga ttcttcctga     2160
          agcccattct ccatggggca acaaggacac ctattctgtc cttgtccttc catcgctgcc     2220
          ccagaaagcc tcacatatct ccgtttagaa tcaggtccct tctccccaga tgaagaggag     2280
          ggtctctgct ttgttttctc tatctcctcc tcagacttga ccaggcccag caggccccag     2340
          aagaccatta ccctatatcc cttctcctcc ctagtcacat ggccataggc ctgctgatgg     2400
          ctcaggaagg ccattgcaag gactcctcag ctatgggaga ggaagcacat cacccattga     2460
          cccccgcaac ccctcccttt cctcctctga gtcccgactg gggccacatg cagcctgact     2520
          tctttgtgcc tgttgctgtc cctgcagtct tcagagggcc accgcagctc cagtgccacg     2580
          gcaggaggct gttcctgaat agcccctgtg gtaagggcca ggagagtcct tccatcctcc     2640
          aaggccctgc taaaggacac agcagccagg aagtcccctg ggcccctagc tgaaggacag     2700
          cctgctccct ccgtctctac caggaatggc cttgtcctat ggaaggcact gccccatccc     2760
          aaactaatct aggaatcact gtctaaccac tcactgtcat gaatgtgtac ttaaaggatg     2820
          aggttgagtc ataccaaata gtgatttcga tagttcaaaa tggtgaaatt agcaattcta     2880
          catgattcag tctaatcaat ggataccgac tgtttcccac acaagtctcc tgttctctta     2940
          agcttactca ctgacagcct ttcactctcc acaaatacat taaagatatg gccatcacca     3000
          agccccctag gatgacacca gacctgagag tctgaagacc tggatccaag ttctgacttt     3060
          tccccctgac agctgtgtga ccttcgtgaa gtcgccaaac ctctctgagc cccagtcatt     3120
          gctagtaaga cctgcctttg agttggtatg atgttcaagt tagataacaa aatgtttata     3180
          cccattagaa cagagaataa atagaactac atttcttgca                           3220
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  RNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAT RNAi劑反義股經修飾之序列]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          uguuaaacau gccuaaacgc u                                         21
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  RNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAT RNAi劑反義股基礎鹼基序列]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          uguuaaacau gccuaaacgc u                                         21
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  RNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAT RNAi劑有義股經修飾之序列]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
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          <![CDATA[<212>  RNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAT RNAi劑有義股基礎鹼基序列]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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Claims

一種降低具有α-1抗胰蛋白酶之PiZZ基因型之人類個體中之肝臟Z-AAT蛋白水準的方法，該方法包括： a. 向該個體投與初始劑量之醫藥組合物，其包含表2中所述之AAT RNAi原料藥，該AAT RNAi原料藥之劑量介於約5 mg至約300 mg之間， b. 在該初始劑量後約四週或約一個月，向該個體投與第二劑量之該醫藥組合物，及 c. 在該第二劑量後約12週或約三個月，向該個體投與第三劑量之該醫藥組合物，其中該等劑量係藉由皮下注射來投與。
如請求項1之方法，其中該AAT RNAi原料藥之劑量介於約25 mg與約300 mg之間。
如請求項1之方法，其中該AAT RNAi原料藥之劑量介於約25 mg與約200 mg之間。
如請求項1之方法，其中該AAT RNAi原料藥之劑量介於約100 mg與約200 mg之間。
如請求項1之方法，其中該AAT RNAi原料藥之劑量為約100 mg。
如請求項1之方法，其中該AAT RNAi原料藥之劑量為約200 mg。
如請求項1之方法，其中該AAT RNAi原料藥之劑量為約200 mg或更少。
如請求項1至7中任一項之方法，其中可溶性肝臟Z-AAT蛋白水準降低。
如請求項1至8中任一項之方法，其中不溶性肝臟Z-AAT蛋白水準降低。
如請求項1至9中任一項之方法，其中不溶性肝臟Z-AAT蛋白水準及可溶性肝臟Z-AAT蛋白水準皆降低。
如請求項1至10中任一項之方法，其進一步包括在該第三劑量後投與額外劑量，其中該等額外劑量係在此後約每12週或約每三個月投與。
如請求項1至11中任一項之方法，其中該肝臟Z-AAT蛋白水準在距該初始劑量六個月內降低。
如請求項1至12中任一項之方法，其中該肝臟Z-AAT蛋白水準在距該初始劑量約一年內降低。
如請求項1至13中任一項之方法，其中該Z-AAT蛋白水準在投與僅三個劑量之AAT RNAi原料藥後降低。
如請求項1至14中任一項之方法，其中該肝臟不顯示纖維化惡化或改良。
如請求項1至15中任一項之方法，其中肝酶ALT、GGT或二者減少。
如請求項1至16中任一項之方法，其中纖維生成標記物Pro-C3減少。
如請求項1至17中任一項之方法，其中門靜脈肝臟發炎減輕。
如請求項1至18中任一項之方法，其中藉由瞬時彈性成像(FibroScan®)之肝臟硬度之非侵入性量測有所改良。
如請求項1至19中任一項之方法，其中向該個體進一步投與用於治療AATD之另一治療劑。
如請求項1至20中任一項之方法，其中向該個體進一步投與用於治療肺損傷、肺氣腫或由內源分泌性AAT蛋白缺乏引起之其他肺疾病或病症的治療劑。
如請求項21之方法，其中該另一治療劑包含人類AAT蛋白、經純化之人類α-1蛋白酶抑制劑或重組AAT蛋白。
如請求項1至22中任一項之方法，其中該醫藥組合物包裝於套組、容器、包、分配器、預填充注射器或小瓶中。
如請求項1至23中任一項之方法，其中該醫藥組合物包含表3.1或表3.2中所述之經調配AAT RNAi原料藥，由其組成或基本上由其組成。
如請求項1至24中任一項之方法，其中該醫藥組合物之一或多個劑量之該投與係由該個體實施。
如請求項1至25中任一項之方法，其中該醫藥組合物之一或多個劑量之該投與係由醫療專業人員來實施。
如請求項1至26中任一項之方法，其中該個體係成人。
一種治療具有α-1抗胰蛋白酶之PiZZ基因型之人類個體之AATD的方法，該方法包括： a. 向該個體投與初始劑量之醫藥組合物，其包含表2中所述之AAT RNAi原料藥，該AAT RNAi原料藥之劑量介於約5 mg至約300 mg之間， b. 在該初始劑量後約四週或約一個月，向該個體投與第二劑量之該醫藥組合物，及 c. 在該第二劑量後約12週或約三個月，向該個體投與第三劑量之該醫藥組合物，其中該等劑量係藉由皮下注射來投與。
如請求項28之方法，其中由AATD引起之疾患或疾病係肝臟疾病。
如請求項29之方法，其中該肝臟疾病係慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌風險增加、轉胺酶升高(transaminitis)、膽汁淤積、纖維化或猛爆性肝衰竭。
如請求項28至30中任一項之方法，其中該AAT RNAi原料藥之劑量介於約100 mg與約200 mg之間。
如請求項28至30中任一項之方法，其中該AAT RNAi原料藥之劑量為約200 mg或更少。
如請求項28至32中任一項之方法，其中單體(可溶性)肝臟Z-AAT蛋白水準降低。
如請求項28至33中任一項之方法，其中不溶性肝臟Z-AAT蛋白水準降低。
如請求項28至34中任一項之方法，其中不溶性肝臟Z-AAT蛋白水準及可溶性肝臟Z-AAT蛋白水準皆降低。
如請求項28至35中任一項之方法，其進一步包括在該第三劑量後投與額外劑量，其中該等額外劑量係在此後約每12週或約每三個月投與。
如請求項28至36中任一項之方法，其中該肝臟Z-AAT蛋白水準在該初始劑量之約六個月內降低。
如請求項28至36中任一項之方法，其中該肝臟Z-AAT蛋白水準在該初始劑量之約一年內降低。
如請求項28至38中任一項之方法，其中該Z-AAT蛋白水準在投與僅三個劑量之AAT RNAi原料藥後降低。
如請求項1至39中任一項之方法，其中向該人類個體投與包含表2中所述之該AAT RNAi原料藥(ADS-001)之該醫藥組合物會引起 (i) 纖維化減輕； (ii) 門靜脈周圍肝細胞之水準降低； (iii) 血清Z-AAT減少； (iv) 總肝臟Z-AAT減少； (v) 可溶性肝臟Z-AAT減少； (vi) 不溶性肝臟Z-AAT減少； (vii) ALT減少； (viii) GGT減少； (ix) Pro-C3減少； (x) 脂肪變性之組織學改良，或 (xi) 其組合。
如請求項40之方法，其中該血清Z-AAT之減少為至少約70%。
如請求項40之方法，其中該血清Z-AAT之減少介於約70%與約100%之間。
如請求項40之方法，其中該總肝臟Z-AAT之減少為至少約70%。
如請求項40之方法，其中該總肝臟Z-AAT之減少介於約70%與約100%之間。
如請求項40之方法，其中該可溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約50%。
如請求項40之方法，其中該可溶性肝臟Z-AAT之減少介於約50%與約97%之間。
如請求項40之方法，其中該不溶性肝臟Z-AAT之減少為至少約40%。
如請求項40之方法，其中該不溶性肝臟Z-AAT之減少介於約40%與約97%之間。
如請求項40之方法，其中該ALT減少為至少約30%。
如請求項40之方法，其中該ALT減少介於約30%與約75%之間。
如請求項40之方法，其中該GGT減少為至少約25%。
如請求項40之方法，其中該GGT減少介於約25%與約85%之間。
如請求項40之方法，其中該纖維化減輕為至少約15%，如藉由FIBROSCAN®所量測。
如請求項40之方法，其中該纖維化減輕介於約15%與約90%之間，如藉由FIBROSCAN®所量測。
如請求項40之方法，其中該Pro-C3減少為至少約15%。
如請求項40之方法，其中該Pro-C3減少介於約15%與約90%之間。
如請求項40之方法，其中該人類個體具有脂肪變性之組織學改良。
如請求項1至57中任一項之方法，其中向該人類個體投與包含表2中所述之該AAT RNAi原料藥(ADS-001)之該醫藥組合物可改良纖維化、門靜脈發炎、界面性肝炎、整體門靜脈道累及、PAS+D區域定位、1區「小球」門靜脈周圍累及或其任一組合。