TW202210516A - 用於癌症之治療的抗b7h3抗體 - Google Patents

用於癌症之治療的抗b7h3抗體 Download PDF

Info

Publication number
TW202210516A
TW202210516A TW110120297A TW110120297A TW202210516A TW 202210516 A TW202210516 A TW 202210516A TW 110120297 A TW110120297 A TW 110120297A TW 110120297 A TW110120297 A TW 110120297A TW 202210516 A TW202210516 A TW 202210516A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
antigen
binding fragment
seq
cancer
Prior art date
Application number
TW110120297A
Other languages
English (en)
Inventor
索尼亞 塞奎拉
瑪希丁 艾哈邁德
王琳琳
Original Assignee
美商Ｙ單克隆抗體製藥有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商Ｙ單克隆抗體製藥有限公司 filed Critical 美商Ｙ單克隆抗體製藥有限公司
Publication of TW202210516A publication Critical patent/TW202210516A/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本發明係有關於人源化抗體及抗原結合片段。更具體地，本發明係有關於人源化抗體及抗原結合片段，其能夠結合至抗原，其中所述抗體或抗原結合片段包含至少50%與所述抗體或抗原結合片段之人類種系之胺基酸相同的胺基酸。本發明進一步係有關於具有最小免疫原性潛力的抗體，其藉由腹膜內或全身投予以治療B7-H3(+)實體腫瘤。本發明進一步係有關於對抗B7-H3的完全人源化抗體，其具有高人類含量、與B7-H3之強烈結合、高穩定性、高純度，以及高表現力價。

Description

用於癌症之治療的抗B7H3抗體
發明領域
本說明書包含與本申請案一起提交之電腦可讀形式的序列表。該序列表形成本揭露的一部分，且其全部內容被併入本說明書中。
本發明係有關於人源化抗體及抗原結合片段。更具體地，本發明係有關於人源化抗體及抗原結合片段，其能夠結合至抗原，其中所述抗體或抗原結合片段包含較佳地至少50%、更佳地至少75%與所述抗體或抗原結合片段之人類種系之胺基酸相同的胺基酸。本發明進一步係有關於具有最小免疫原性潛力的抗體，其藉由腹膜內或全身投予以治療B7-H3(+)實體腫瘤。本發明進一步係有關於對抗B7-H3的完全人源化抗體，其具有高人類含量、與B7-H3之強烈結合、高穩定性、高純度，以及高表現力價。
發明背景
人類B7-H3 (亦稱為CD276)係B7/CD28免疫球蛋白超家族的成員。根據Chapoval et al，B7-H3被鑑定為一I型跨膜蛋白質，其包含兩種同功異型物，其中2Ig B7H3具有單一細胞外V樣及C樣Ig域[1]，且根據Steinberger et al，4Ig B7H3具有串聯之V樣及C樣Ig域的重複[2]。根據Steinberger et al，最初發現B7-H3係一種可以誘導IFN-γ的共刺激分子。後來證明B7-H3會抑制T細胞增殖，並且與IFN-γ的產量下降有關聯[2]。
根據國際專利申請案WO2016033225，其描述8H9抗體之人源化及/或親和力成熟版本。根據WO2016033225，已製造四種人源化8H9 (hu8H9) IgG1s。含有最多人類含量的變異體與B7-H3之結合不如其他三種變異體那麼強烈，儘管沒有一種變異體顯現出最佳結合能力。將六個突變引入至該等hu8H9抗體中的其中一者以產生hu8H9 H3L3，並且將另外12個人源化突變併入至hu8H9 H3L3以產生hu8H9 4.1。將六個親和力成熟突變併入至hu8H9 H3L3序列以產生hu8H9 3.1 scFv及IgG1變異體。將五個親和力成熟突變併入至hu8H9 H3L3以產生hu8H9 5.1 scFv及IgG1變異體。
發明概要
根據Loos et al及Modak et al，B7-H3在多種人類實體腫瘤上廣泛地表現，包括小兒實體腫瘤，諸如腦瘤及肉瘤[3、4]。然而，在正常人體組織中的表現係有限的。此外，已發現在實體腫瘤上的B7-H3表現與不佳的患者存活率、臨床癌症復發之風險的增加、在多種癌症中的癌症特異性死亡等等有關聯，所述癌症包括前列腺癌、胰臟癌、胃癌、卵巢癌、骨肉瘤、神經母細胞瘤及神經膠質母細胞瘤等等[5-11]。B7-H3係免疫療法的一理想標靶[12-14]。抗B7-H3小鼠單株抗體8H9已成功地被使用作為一放射性免疫療法，藉由腔室鞘內遞送以治療具有復發性轉移性中樞神經系統神經母細胞瘤的患者[15]，並且在臨床試驗中藉由單一腹膜內投予給具有結締組織增生性小圓細胞腫瘤(desmoplastic small round cell tumors)及其他涉及腹膜之實體腫瘤的病患。
作為全球癌症相關死亡的主要原因之一，轉移性胃癌的預後不佳，據報導其中位生存期為一年[16]。具有轉移性上皮性卵巢癌之女性的5年存活率維持在30% [Siegel et al. 2020, American Cancer Society, 2020]。為了最小化抗B7-H3抗體之免疫原性的潛力，並藉由腹膜內或全身投予以治療這些及其他B7-H3(+)實體腫瘤，在此我們提供完全人源化抗體，亦即對抗B7-H3之Hu8H9抗體，其具有高人類含量、與B7-H3之強烈結合、高穩定性、高純度，以及高表現力價。先前試圖對鼠類mAb 8H9進行人源化，其導致在可變域中具有低人類種系含量(在V-κ域中有73%人類種系含量，在VH域中有76.5%人類種系含量)，並且需要在CDR區中進行三個親和力成熟突變以恢復鼠類8H9的親和力[17]。
為了放射性有效負載(radioactive payload)的B7-H3標靶遞送，並消除抗體與效應細胞或補體的相互作用，我們在IgGs的Fc上製造突變「N298A及K323A」以及「L235A、L236A及K323A」(根據Kabat係編號為N297A及K322A；L234A、L235A及K322A)以消除ADCC (抗體依賴性細胞性細胞毒性)、ADCP (抗體依賴性細胞性吞噬作用)，及補體活化。該經修飾的Fc在效應功能方面係沉默的，亦即無效Fc (null Fc)。
基於主要候選物的序列，我們亦描述一類新穎的SADA (自組裝及分解)抗體，其結合至人類B7-H3及DOTA (十二烷四乙酸，1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸，用於金屬之螯合劑)兩者以用於預標靶放射性免疫療法。該SADA抗體含有一對抗B7-H3的ScFv以及一對抗DOTA的ScFv (基於來自於專利案WO2016130539A2的人源化C825抗體，其全部內容係藉由引用方式併入本文)。此種類型的構建體可以在體內四聚化及單體化，以便在不使用清除劑的情況下更快地清除。
在特定的實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段係連接至一自組裝分解(SADA)多肽，其係揭露於國際專利申請公開號WO2018204873中，其全部內容係藉由引用方式併入本文。
在特定的實施態樣中，該四聚化域係與SEQ ID NO. 139相同。
在特定的實施態樣中，該抗體或其抗原結合片段包含一對於DOTA螯合物具有高親和力的經工程改造蛋白質，其係揭露於美國專利號US8648176或國際專利申請公開號WO2010099536中，其全部內容係藉由引用方式併入本文。
根據一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至B7H3抗原，其包含CDR區及FR區，其中該等CDR區與選自於SEQ ID No. 25-30或64-99的CDR序列具有總共至少90%一致性，且其中該等FR區與選自於SEQ ID No. 40-63或108-131的FR序列具有總共至少70%一致性。
較佳地至少75%。
CDR區係指互補決定區(CDR)，而FR區係指框架區。一框架區係該抗體之可變區(Fab)的一細分部分。該可變區係由七個胺基酸區所組成，其中四個係框架區，且其中三個係高變區。該等框架區係負責充當作為一支架，以用於該Fab之互補決定區(CDR)，其中該互補決定區(CDR)亦稱為高變區。
以某種方式對一鼠類抗體進行人源化以保留其對於抗原的親和力，同時引入一定程度的人源化以避免諸如副作用的不良反應係一個問題。獲得展現良好穩定性的一抗體，且該抗體在功效及安全性方面具有被使用作為藥物的潛力係另一個問題。
在特定的實施態樣中，可以使用本領域已知的技術來改善抗體或抗體片段的穩定性，諸如引入額外的二硫鍵以及取代氧化不穩定殘基。二硫鍵可在半胱胺酸殘基的硫醇基團之間形成。引入額外的二硫鍵可藉由檢查該抗體或抗體片段的結構、在合適的二硫鍵距離內鑑定在該等框架區中的殘基，以及使用可形成該等二硫鍵的半胱胺酸殘基取代在此等位置中的胺基酸來完成。用於引入半胱胺酸殘基以形成額外二硫鍵的合適位置的較佳實例係在LFR4中的位置3以及在HFR2中的位置9。在不受理論約束的情況下，出乎意料的是，藉由改變該等LFR區可以使得該等CDR區的序列接近於或相同於該非人源化鼠類抗體，因此保留親和力，並且仍然允許該抗體的高度人源化。
LFR可被定義為一輕鏈框架區。HFR可被定義為一重鏈框架區。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至B7H3抗原，其包含以下區域：與SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93具有總共至少90%一致性的區域，較佳地至少95%一致性，例如至少96%一致性，例如至少97%一致性，例如至少98%一致性，例如至少99%一致性，或較佳地100%一致性；具有SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99中之一者的序列的區域，或者具有在位置1、2或3中不同於SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99中之一者的序列的區域，其中該等差異係選自於取代、缺失或插入；與根據SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59 或108-119之序列具有總共至少75%一致性的區域；以及與根據SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63或120-131之序列具有總共至少75%一致性的區域。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93具有總共至少90%、更佳地95%一致性的區域，及/或與SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59或108-119具有總共至少75%一致性的區域。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59或108-119具有總共至少80%、更佳地85%、較佳地90%、更佳地95%一致性的區域。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99具有總共至少90%、更佳地95%一致性的區域，及/或與SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63或120-131具有總共至少75%一致性的區域。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63或120-131具有總共至少80%、更佳地85%、較佳地90%、更佳地95%一致性的區域。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含選自於SEQ ID No. 25-30及64-99的區域。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含以下區域：選自於SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93的區域；選自於SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99的區域；選自於SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59或108-119的區域；以及選自於SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63或120-131的區域。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含Fc、Fc2或無效Fc。
根據另一個態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至B7H3抗原，其中所述抗體或抗原結合片段包含與選自於序列SEQ ID No. 36、37、38及39中之任一者具有至少70%一致性的序列。
根據另一個態樣，本發明涉及一種抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至一抗原，其中所述抗體或抗原結合片段包含根據SEQ ID No. 15、16、17或132的一序列。
根據另一個態樣，本發明涉及一種自組裝分解(SADA)多肽，其中所述多肽係連接至根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據另一個態樣，本發明涉及一種多肽複合體，其包含：根據本發明之自組裝分解(SADA)多肽，以及根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據另一個態樣，本發明涉及一種多肽複合體，其包含一自組裝分解(SADA)多肽，且其中所述複合體進一步包含根據本發明之雙特異性抗體，其中所述第一抗原係B7H3，且其中所述第二抗原係DOTA。
根據另一個態樣，本發明涉及一種多肽複合體，其包含一自組裝分解(SADA)多肽，以及至少一第一結合域，其中該第一結合域結合至一第一標靶並且係共價地連接至該SADA多肽。
根據另一個態樣，本發明涉及一種經分離的核酸分子，其編碼根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據另一個態樣，本發明涉及一種經分離的核酸分子，其包含根據SEQ ID No. 18、19、20、21或22的一序列。
根據另一個態樣，本發明涉及一種重組載體，其包含根據本發明之經分離的核酸分子。
根據另一個態樣，本發明涉及一種宿主細胞，其包含根據本發明之重組載體。
根據另一個態樣，本發明涉及一種用於產生根據本發明之抗體或其抗原結合片段的方法，其包含以下一步驟：在允許該抗體或片段表現的條件下在一培養基中培養根據本發明之宿主細胞，並且從該培養基分離該抗體或片段。
根據另一個態樣，本發明涉及一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據另一個態樣，本發明涉及一種CAR-T細胞，其表現一CAR。
根據另一個態樣，本發明涉及一種CAR-T細胞的群體。
根據另一個態樣，本發明涉及一種組成物，其包含CAR-T細胞的群體。
根據另一個態樣，本發明涉及一種CAR-NK細胞，其表現一CAR。
根據另一個態樣，本發明涉及一種CAR-NK細胞的群體。
根據另一個態樣，本發明涉及一種組成物，其包含CAR-NK細胞的群體。
根據另一個態樣，本發明涉及一種醫藥組成物，其包含根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據另一個態樣，本發明涉及一種T細胞，其裝備有根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據另一個態樣，本發明涉及一種治療、預防、減緩及/或診斷一受試者中一醫學病況之症狀的方法，其包含以下一步驟：將一抗體、一抗原結合片段、一雙特異性抗體、一三特異性抗體、一多肽複合體、一組成物及/或一CAR投予至腹膜中，且其中所述醫學病況的特徵在於B7H3抗原的表現。
根據另一個態樣，本發明涉及一種將腹膜中的腫瘤成像的方法，其中所述成像包含使用一抗體或其抗原結合片段，其中所述腫瘤的特徵在於B7H3抗原的表現，且其中將一抗體或其抗原結合片段投予至腹膜中的一步驟已處於該成像方法之前。
根據另一個態樣，本發明涉及一種根據本發明之組成物的用途，其係用於製備一用於治療癌症的醫藥品，以供在根據本發明之方法中使用。
根據另一個態樣，本發明涉及一種根據本發明之抗原結合片段之抗體的用途，其係用於製備一用於治療癌症及/或用於根據本發明之方法的醫藥品。
根據另一個態樣，本發明涉及一種根據本發明之抗體或其抗原結合片段的體外用途。
根據另一個態樣，本發明涉及一種治療、預防、減緩及/或診斷一受試者中一醫學病況之症狀的方法，其包含以下步驟：將根據本發明之抗體或抗原結合片段投予至腹膜中，且其中所述醫學病況的特徵在於B7H3抗原的表現。
根據另一個態樣，本發明涉及一種對腹膜中的腫瘤進行成像的方法，其中所述成像包含使用根據本發明之抗體或其抗原結合片段，其中所述醫學腫瘤的特徵在於B7H3抗原的表現，且其中將根據本發明之抗體或其抗原結合片段投予至腹膜中的一步驟已處於該成像方法之前。
詳細揭示
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至B7H3抗原，其包含CDR區及FR區，其中該等CDR區與選自於SEQ ID No. 25-30或64-99的CDR序列具有總共至少90%一致性，且其中該等FR區與選自於SEQ ID No. 40-63或108-131的FR序列具有總共至少70%一致性。
較佳地至少75%。
CDR區係指互補決定區(CDR)，而FR區係指框架區。一框架區係該抗體之可變區(Fab)的一細分部分。該可變區係由七個胺基酸區所組成，其中四個係框架區，且其中三個係高變區。該等框架區係負責充當作為一支架，以用於該Fab之互補決定區(CDR)，其中該互補決定區(CDR)亦稱為高變區。
以某種方式對一鼠類抗體進行人源化以保留其對於抗原的親和力，同時引入一定程度的人源化以避免諸如副作用的不良反應係一個問題。獲得展現良好穩定性的一抗體，且該抗體在功效及安全性方面具有被使用作為藥物的潛力係另一個問題。
在不受理論約束的情況下，出乎意料的是，藉由改變該等LFR區可以使得該等CDR區更接近於該非人源化鼠類抗體，因此保留親和力，並且仍然允許該抗體的高度人源化。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至B7H3抗原，其包含以下區域：與SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93具有總共至少90%一致性的區域；與SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99具有總共至少90%一致性的區域；與根據SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59 或108-119之序列具有總共至少75%一致性的區域；以及與根據SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63或120-131之序列具有總共至少75%一致性的區域。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93具有總共至少90%、更佳地95%一致性的區域，及/或與SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59或108-119具有總共至少75%一致性的區域。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59或108-119具有總共至少80%、更佳地85%、較佳地90%、更佳地95%一致性的區域。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99具有總共至少90%、更佳地95%一致性的區域，及/或與SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63或120-131具有總共至少75%一致性的區域。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63或120-131具有總共至少80%、更佳地85%、較佳地90%、更佳地95%一致性的區域。根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含選自於SEQ ID No. 25-30及64-99的區域。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含以下區域：選自於SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93的區域；選自於SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99的區域；選自於SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59或108-119的區域；以及選自於SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63或120-131的區域。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其包含Fc、Fc2或無效Fc。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種人源化抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至B7H3抗原，其中所述抗體或抗原結合片段包含與選自於序列SEQ ID No. 36、37、38及39中之任一者具有至少70%一致性的序列。
根據一個實施態樣，本發明涉及根據本發明之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含與選自於序列SEQ ID No. 36、37、38或39中之任一者具有至少75%一致性的序列。
根據一個實施態樣，本發明涉及根據本發明之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含至少一個選自於以下的序列：根據SEQ ID No. 25、64、70、76、82、88、94及97的一重鏈可變區CDR1、根據SEQ IN No. 26、65、71、77、83、89、95及98的一重鏈可變區CDR2、根據SEQ IN No. 27、 66、72、78、84、90、96及99的一重鏈可變區CDR3、根據SEQ ID No. 28、67、73、79、85及91的一輕鏈可變區CDR1、根據SEQ ID No. 29、68、74、80、86及92的一輕鏈可變區CDR2，以及根據 SEQ ID No. 30、69、75、81、87及93的一輕鏈可變區CDR3。
根據一個實施態樣，本發明涉及根據本發明之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體包含根據SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、7、8或9的一重鏈序列，及/或根據SEQ ID No. 10、11、12、13或14的一輕鏈序列。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述抗體包含一重鏈序列及/或一輕鏈序列，其中該重鏈序列與SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、7、8或9所示之序列具有至少約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約 97%、約98%，或者約99%序列一致性，且其中該輕鏈序列與SEQ ID No. 10、11、12、13或14所示之序列具有至少約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約 97%、約98%，或者約99%序列一致性。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含至少50%與所述抗體或抗原結合片段之人類種系之胺基酸相同的胺基酸，至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少77.5%、至少80%、至少82%、至少84%、至少86%、至少88%，或者至少90%。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段結合至一表位，且其中所述表位係B7H3的一表位。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中抗原結合片段之抗體結合至根據SEQ ID No.: 33的序列。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段結合至一抗原，且其中所述抗原包含選自於SEQ ID No. 31及32的一序列。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述抗原係存在於一癌細胞上。
根據一個實施態樣，本發明涉及根據本發明之抗體或抗原結合片段，其中所述癌細胞係來自於一轉移瘤(metastasis)。
根據一個實施態樣，本發明涉及根據本發明之抗體或抗原結合片段，其中所述癌細胞及/或轉移瘤係前列腺癌、一結締組織增生性小圓細胞腫瘤、卵巢癌、胃癌、胰臟癌、肝癌、腎癌、乳癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、齒槽橫紋肌肉瘤(alveolar rhabdomyosarcoma)、胚胎性橫紋肌肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、威爾姆斯氏腫瘤(Wilms tumor)、神經母細胞瘤，神經節神經母細胞瘤、神經節細胞瘤、髓母細胞瘤、高級神經膠質瘤、瀰漫型內因性橋腦神經膠質瘤、多層菊形團胚胎性腫瘤(embryonal tumors with multilayered rosettes)，或者一表現B7H3之癌症。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其包含不與一Fc γ受體相互作用的一Fc區。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其進一步包含一Fc區，其中所述Fc區不具反應性或展現極少反應性。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述抗體包含一無效Fc。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段具有小於50%、小於45%、小於40%、小於35%、小於30%、小於25%、小於20%、小於15%，或者約10%的免疫原性。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述試劑或抗體係一鼠類抗體或其抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述試劑或抗體係一嵌合抗體或其抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述試劑或抗體係一人源化抗體或其抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段係經一放射性同位素放射性標記。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述放射性同位素係選自於一PET標記以及或者一SPECT標記。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述PET標記係選自於124 I、225 Ac及89 Zr。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述SPECT標記係選自於131 I、177 Lu、99 mTc、64 Cu及89 Zr。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段係綴合至一螯合劑化合物。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述螯合劑化合物係結合至一放射性同位素。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述放射性同位素係選自於124 I、131 I及177 Lu或99 mTc、64 Cu及89 Zr。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述螯合劑化合物係選自於DOTA、DTPA、NOTA及DFO。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述DOTA係DOTA的一變異體，諸如苄基-DOTA。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或其抗原結合片段，其中所述DTPA係DTPA的一變異體，諸如CHX-A’’-DTPA。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述放射性同位素係一α、β或正電子發射放射性核種。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其包含選自於IgG、IgG1、IgG2、IgG3及IgG4的一結構。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其包含選自於IgG、IgM、IgA、IgD及IgE的一結構。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至一抗原，其中所述抗體或抗原結合片段包含根據SEQ ID No. 15、16、17或132的一序列。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種自組裝分解(SADA)多肽，其中所述多肽係連接至根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段係一雙特異性及/或三特異性結合抗體。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述雙特異性及/或三特異性結合抗體包含根據本發明之第一抗體或其抗原結合片段以及第二抗體或抗原結合片段，其中該第一抗體或其抗原結合片段係用於結合至一第一抗原，且其中該第二抗體或抗原結合片段係用於結合至一第二抗原。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述第二抗體或其抗原結合片段結合至DOTA及/或DTPA。
DOTA(十二烷四乙酸)亦稱為1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸，並且具有分子式(CH2 CH2 NCH2 CO2 H)4 。
DTPA(二乙烯三胺五乙酸)的IUPAC名稱係2-[雙[2-[雙(羧甲基)胺基]乙基]胺基]乙酸。DTPA具有分子式C14H23N3O10。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段係連接至一自組裝分解(SADA)多肽。
在特定的實施態樣中，其抗原結合片段之抗體係連接至在國際專利申請公開號WO2018204873中所揭露之一自組裝分解(SADA)多肽，其全部內容係藉由引用方式併入本文。
根據一個實施態樣，本發明涉及該抗體或抗原結合片段，其中所述自組裝分解(SADA)多肽具有與一人類同源多聚化多肽的胺基酸序列顯示至少75%一致性的一胺基酸序列，且特徵在於一或多個多聚化解離常數(KD)。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種多肽複合體，其包含：根據本發明之自組裝分解(SADA)多肽以及根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種多肽複合體，其包含一自組裝分解(SADA)多肽，且其中所述複合體進一步包含根據本發明之雙特異性抗體，其中所述第一抗原係B7H3，且其中所述第二抗原係DOTA。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種多肽複合體，其包含一自組裝分解(SADA)多肽以及至少一個第一結合域，其中該第一結合域結合至一第一標靶並且共價地連接至該SADA多肽。
根據一個實施態樣，本發明涉及該多肽複合體，其中所述自組裝分解(SADA)多肽具有與一人類同源多聚化多肽的胺基酸序列顯示至少75%一致性的一胺基酸序列，且其特徵在於一或多個多聚化解離常數(KD)；且其中所述複合體被構建並且被配置使得其採取一第一多聚化狀態以及一或多個高階多聚化狀態，其中：該第一多聚化狀態的尺寸係小於約70 kDa，該等高階多聚化狀態之至少一者係尺寸大於150 kDa的同源四聚體或高階同源多聚體，其中當該複合體係以高於該SADA多肽KD的濃度存在時，該高階同源多聚化複合體在水溶液中係穩定的，且當該複合體的濃度係低於該SADA多肽KD時，該複合體在生理條件下從該(等)高階多聚化狀態轉變成該第一多聚化狀態。
根據一個實施態樣，本發明涉及該多肽複合體，其中所述複合體包含一螯合劑。
根據一個實施態樣，本發明涉及該複合體，其中所述螯合劑包含一金屬離子。
根據一個實施態樣，本發明涉及該複合體，其中該金屬離子係一放射性核種。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種經分離的核酸分子，其編碼本發明之抗體或抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種經分離的核酸分子，其包含根據SEQ ID No. 18、19、20、21或22的一序列。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種重組載體，其包含本發明之經分離的核酸分子。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種宿主細胞，其包含根據本發明之重組載體。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種用於產生根據本發明之抗體或其抗原結合片段的方法，其包含以下一步驟：在允許該抗體或片段表現的條件下在一培養基中培養根據本發明之宿主細胞，並且從該培養基分離該抗體或片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種CAR-T細胞，其表現一CAR。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種CAR-T細胞的群體。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種組成物，其包含CAR-T細胞的群體。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種CAR-NK細胞，其表現一CAR。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種CAR-NK細胞的群體。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種組成物，其包含CAR-NK細胞的群體。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種醫藥組成物，其包含根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種T細胞，其裝備有根據本發明之抗體或抗原結合片段。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種治療、預防、減緩及/或診斷一受試者中一醫學病況之症狀的方法，其包含以下一步驟：將一抗體、一抗原結合片段、一雙特異性抗體、一三特異性抗體、一多肽複合體、一組成物及/或一CAR投予至腹膜中，且其中所述醫學病況的特徵在於B7H3抗原的表現。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種對腹膜中的腫瘤進行成像的方法，其中所述成像包含使用一抗體或其抗原結合片段，其中所述腫瘤的特徵在於B7H3抗原的表現，且其中將一抗體或其抗原結合片段投予至腹膜中的一步驟已處於該成像方法之前。
根據一個實施態樣，本發明涉及該方法，其中所述抗體、抗原結合片段、雙特異性抗體、三特異性抗體、多肽複合體、組成物及/或CAR係根據本發明之抗體、抗原結合片段、雙特異性抗體、三特異性抗體、多肽複合體、組成物及/或CAR。
根據一個實施態樣，本發明涉及該方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含至少一個選自於以下的序列：根據SEQ ID No.25的一重鏈可變區CDR1、根據SEQ IN No. 26的一重鏈可變區CDR2、根據SEQ IN No. 27的一重鏈可變區CDR3、根據SEQ ID No. 28的一輕鏈可變區CDR1、根據SEQ ID No. 29的一輕鏈可變區CDR2，以及根據SEQ ID No. 30的一輕鏈可變區CDR3。
根據一個實施態樣，本發明涉及該方法，其中所述抗體包含根據SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、7、8、9或23的一重鏈序列，及/或根據SEQ ID No. 10、11、12、13、14或24的一輕鏈序列。
根據一個實施態樣，本發明涉及該方法，其中抗體包含一重鏈序列及/或一輕鏈序列，其中該重鏈序列與SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、7、8、9或23所示之序列具有至少約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約 97%、約98%，或者約99%序列一致性，且其中該輕鏈序列與SEQ ID No. 10、11、12、13、14或24所示之序列具有至少約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約 97%、約98%，或者約99%序列一致性。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種根據本發明之組成物的用途，其係用於製備一治療癌症的醫藥品，以用於在根據本發明之方法中使用。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種根據本發明之抗原結合片段之抗體的用途，其係用於製備一治療癌症的醫藥品，及/或用於在根據本發明之方法中使用。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種根據本發明之抗體或其抗原結合片段的體外用途。
根據一個實施態樣，本發明涉及該方法，其中所述醫學病況係一癌症。
根據一個實施態樣，本發明涉及該方法，其中所述癌症及/或所述腫瘤係一轉移瘤。
根據一個實施態樣，本發明涉及該方法，其中所述癌症、所述腫瘤及/或所述轉移瘤係前列腺癌、一結締組織增生性小圓細胞腫瘤、卵巢癌、胃癌、胰臟癌、肝癌、腎癌、乳癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、齒槽橫紋肌肉瘤、胚胎性橫紋肌肉瘤、尤文氏肉瘤、威爾姆斯氏腫瘤、神經母細胞瘤，神經節神經母細胞瘤、神經節細胞瘤、髓母細胞瘤、高級神經膠質瘤、瀰漫型內因性橋腦神經膠質瘤、多層菊形團胚胎性腫瘤，或者一表現B7H3之癌症。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種治療、預防、減緩及/或診斷一受試者中一醫學病況之症狀的方法，其包含以下一步驟：將根據本發明之抗體或抗原結合片段投予至腹膜中，且其中所述醫學病況的特徵在於B7H3抗原的表現。
根據一個實施態樣，本發明涉及一種將腹膜中的腫瘤成像的方法，其中所述成像包含使用根據本發明之抗體或其抗原結合片段，其中所述醫學腫瘤的特徵在於B7H3抗原的表現，且其中將根據本發明之抗體或其抗原結合片段投予至腹膜中的一步驟已處於該成像方法之前。
為了提供對本說明書及申請專利範圍，包括欲給出此類術語之範疇的清楚且一致的理解，而提供以下定義。
親和力：如本領域已知的，「親和力」係一特定的配位體(例如，一抗體)結合至其配偶體(例如，一表位)之緊密度的量測。親和力可以以不同的方式測量。
抗體：術語「抗體」係本領域公認之術語，且旨在包括結合至已知抗原之分子或分子的活性片段。結合至已知抗原之分子的活性片段的實例包括Fab及F(ab’)2片段。此等活性片段可以藉由多種技術而衍生自本發明之抗體。舉例而言，經純化的單株抗體可以被一諸如胃蛋白酶的酶裂解，並經受HPLC凝膠過濾。然後可以收集含有Fab片段之適當的分餾物並且藉由膜過濾等等進行濃縮。術語「抗體」亦包括雙特異性及嵌合抗體及其他可用形式。
抗體片段：一抗體片段係一抗體的一部分，諸如F(ab’)2、F(ab)2、Fab’、Fab、Fv、sFv等等。不論結構如何，一抗體片段會與被該完整抗體識別的相同抗原結合。舉例而言，一3F8單株抗體片段會與被3F8識別的一表位結合。術語「抗體片段」亦包括像一抗體一樣藉由結合至一特定抗原以形成一複合物的任何合成或經基因工程改造的蛋白質。舉例而言，抗體片段包括由該等可變區所構成的分離片段，諸如由該等重鏈及輕鏈之可變區所構成的「Fv」片段、其中輕可變區及重可變區係藉由一肽連接子(linker)所連接的重組單鏈多肽分子(「scFv蛋白質」)，以及由該等模擬該高變區之胺基酸殘基所構成的最小識別單元。
雙特異性抗體：一雙特異性抗體係可以同時結合至兩個具有不同結構之標靶的一抗體。雙特異性抗體(bsAb)及雙特異性抗體片段(bsFab)具有至少一個會特異性地結合至例如GD2之一抗原的臂，以及至少另一個會特異性地結合至例如帶有治療劑或診斷劑之可靶向複合體之另一抗原的臂。可以使用分子工程產生多種雙特異性融合蛋白質。在一種形式中，該雙特異性融合蛋白質係二價，舉例而言，其係由具有針對一抗原之單一結合位置的一scFv以及具有針對第二抗原之單一結合位置的一Fab片段所構成。在另一種形式中，該雙特異性融合蛋白質係四價，舉例而言，其係由具有針對一抗原之兩個結合位置的一IgG以及針對第二抗原的兩個相同scFv所構成。
嵌合抗體：一嵌合抗體係一重組蛋白質，其含有衍生自一物種之一抗體之包括該等互補決定區(CDRs)的該等可變域，其例如係衍生自一囓齒類抗體；而該抗體分子的該等恆定域係衍生自一人類抗體的該等恆定區。該嵌合抗體的該等恆定域亦可以係衍生自其他物種的恆定區，諸如貓或狗。
有效量：如在本文中所使用，術語「有效量」係指一給定化合物、複合體或組成物的量，其對於實現一所欲的生物效應而言係必需的或充足的。根據本發明之方法的給定化合物、複合體或組成物的一有效量係達成此經選擇之結果的量，且此量可以由本領域技術人員依常規測定，而不需要過度的實驗。
人源化抗體：一人源化抗體係一重組蛋白，其中來自於一物種之一抗體，例如一囓齒類抗體的該等CDRs係從該囓齒類抗體的重可變鏈及輕可變鏈被轉移至人類重可變域及輕可變域中。該抗體分子的恆定域係衍生自一人類抗體的該等恆定域。
一人類抗體可以係從基因轉殖小鼠所獲得的一抗體，其已被「工程改造」以產生特異性人類抗體以回應抗原挑戰。在此技術中，將人類重鏈及輕鏈基因座的要素引入衍生自胚胎幹細胞系的小鼠品系中，其含有內源性重鏈及輕鏈基因座之靶向破壞。該等基因轉殖小鼠可以合成對人類抗原具有特異性之人類抗體，且該等小鼠可以被用於產生分泌人類抗體之融合瘤。
免疫原性：免疫原性可被定義為一治療性蛋白質產物對自身及相關蛋白質產生免疫反應或者誘發免疫相關不良臨床事件(FDA)的傾向。 免疫原性可以係指一分子或物質激發一免疫反應的能力。不需要的免疫原性可以係一生物體對抗一治療性抗原的一免疫反應。患者中抗治療性抗體反應的頻率係被描述為該患者群組的百分比。
免疫原性可藉由ELISA檢測HAMA(人類抗小鼠抗體)。在此技術中，血清樣品係經由一已建立之ELISA檢定進行分析，並使用小鼠抗體作為捕獲抗原。
預防：如在本文中所使用，該等術語「預防(prevent)」、「預防(preventing)」及「預防(prevention)」係指因為投予一預防劑或治療劑而預防在一受試者中的一病症的一或多個症狀的復發或發作。
放射性同位素：可以被綴合至抗體以用於診斷或治療的放射性同位素的實例包括但不限於：211 At、14 C、51 Cr、57 Co、58 Co、67 Cu、152 Eu、67 Ga、3 H、111 In、59 Fe、212 Pb、177 Lu、32 P、223 Ra、224 Ra、186 Re、188 Re、75 Se、35 S、99m Tc、227 Th、89 Zr、90 Y、123 I、124 I、125 I、131 I、94m Tc、64 Cu、68 Ga、66 Ga、76 Br、86 Y、82 Rb、110m In、13 N、11 C、18 F以及α-發射粒子。α-發射粒子的非限制性實例包括209 Bi、211 Bi、212 Bi、213 Bi、210 Po、211 Po、212 Po、214 Po、215 Po、216 Po、218 Po、211 At、215 At、217 At、218 At、218 Rn、219 Rn、220 Rn、222 Rn、226 Rn、221 Fr、223 Ra、224 Ra、226 Ra、225 Ac、227 Ac、227 Th、228 Th、229 Th、230 Th、232 Th、231 Pa、233 U、234 U、235 U、236 U、238 U、237 Np、238 Pu、239 Pu、240 Pu、244 Pu、241 Am、244 Cm、245 Cm、248 Cm、249 Cf以及252 Cf。
序列比對：序列比對簡單地係指任何比對兩個序列的方法，其中一個序列係位於另一個序列的下方。其係一種排列DNA、RNA或蛋白質之序列的方法，以識別在該等序列之間相似的區域。存在有不同的比對演算法，其等通常具有一評分函數，其針對每個比對分配一個數字分數，以表示一個比對的好壞程度，並且嘗試根據其評分函數找到最佳比對。
序列一致性：在本文中所使用之術語「序列一致性」係兩個胺基酸或核酸序列之關聯性的測量。為了計算在兩個序列之間的序列一致性，比對該等序列並且鑑定最長的重疊。序列一致性係計算為在該重疊之總長度的重疊中，在對應位置中的相同殘基的百分比。
熟習此項技術者可使用多種計算演算法來產生序列比對並且計算序列一致性。如在本文中所使用，序列比對係指成對比對。數種演算法進行此操作，包括序列比對程式FASTA，其使用史密斯-華特曼演算法(Smith-Waterman algorithm)。
如在本文中所使用，該序列比對可以係指以下演算法及參數： 演算法：FASTA (3.8 Nov 2011) [最佳化] 參數：BL50 matrix (15:-5), open/ext: -10/-2 ktup: 2, E-join: 1 (1), E-opt: 0.2 (1), width: 16
受試者：「受試者」或「個體」或「動物」或「患者」或「哺乳類」係指任何需要診斷、預後或治療的受試者，特別係一哺乳類受試者。哺乳類受試者包括人類及其他靈長類、家畜、農場動物，以及動物園動物、運動動物或寵物動物，諸如狗、貓、天竺鼠、兔子、大鼠、小鼠、馬、牛、母牛等等。
治療：如在本文中所使用，該等術語「治療(treatment)」、「治療(treat)」、「經治療的(treated)」或「治療(treating)」係指預防(prophylaxis)及/或療法(therapy)，特別是其中該目的係預防或減緩(減輕)一非所欲的生理變化或病症，諸如多發性硬化症的進展。有益的或所欲的臨床結果包括但不限於症狀緩解、疾病程度減輕、疾病狀態穩定(亦即不惡化)、疾病進展延遲或減慢、疾病狀態改善或緩和，以及緩解(無論是部分或是全部)，無論是可偵測的或是不可偵測的。相較於未接受治療的預期存活期，「治療」亦可以意指延長存活期。需要治療的對象包括已經患有該病況或病症的對象，以及易患有該病況或病症的對象，或者欲預防該病況或病症的對象。
所有引用的參考文獻係藉由引用方式併入本文。
提供附圖及實施例以解釋而不是限制本發明。對於本領域技術人員將清楚的是，本發明之態樣、實施態樣、申請專利範圍及任何項目可被組合。
除非另有說明，否則所有百分比係以重量/重量而計。除非另有說明，否則所有測量係在標準條件(環境溫度及壓力)下進行。除非另有說明，否則測試條件係按照歐洲藥典8.0。 實施例 實施例1：設計人源化抗B7-H3抗體
將包含根據SEQ ID No. 23之重鏈序列及根據SEQ ID No. 24之輕鏈序列的鼠類8H9抗體人源化，藉由將該等IMGT CDR殘基移植至一人類IgG1骨幹上，使用該等人類種系序列IGKV6-21*02 (SEQ ID No. 37)用於該κ可變域以及IGHV1-8*01 (SEQ ID No. 38)用於該可變重域。然後基於包含根據 SEQ ID No. 34之重鏈序列及根據SEQ ID No. 35之輕鏈序列的鼠類8H9抗體Fab片段(蛋白質數據庫結構5CMA：抗B7H3單株抗體ch8H9 Fab片段)的晶體結構的合理設計及分子模擬，將選擇回復突變插入以產生6個人源化VH候選物以及4個人源化VL候選物，每個候選物具有＞85%的人類種系含量。使用Biovia Discovery Studio軟體(Dassault Systemes)完成計算模擬。每個人源化序列係經合理地工程改造以保留鼠類8H9的親和力。 實施例2：人源化抗B7-H3抗體的產生及特徵
嵌合抗體及人源化抗體係使用利用高度同源人類種系序列之CDR移植方法而產生。將六種不同的人源化VH以及四種人源化VL序列組合以產生24種不同的人源化IgG1抗體。該等抗體在HEK293細胞中表現，並使用蛋白質A樹脂進行純化。抗體被緩衝液交換至PBS中，並藉由OD280進行定量，並計算力價。藉由分析性粒徑篩析層析法(SEC-HPLC)測定樣品純度及聚集狀態，其基於分子質量以及流體力學體積來分離分子。每個峰的面積百分比係基於該等峰的總面積而計算。計算峰對稱性以測定峰前延(＜1)或峰拖尾(＞1)。使用300A孔徑的管柱在280 nm處檢測，並使用PBS作為運行緩衝液。在一Carterra LSA儀器上進行表面電漿子共振研究以評估結合親和力。藉由胺偶合在一HC30M晶片上製備一抗人類Fc抗體「草坪(lawn)」。使用同等體積的100 mM MES pH 5.5、100 mM S-NHS及400 mM EDC活化該晶片。固定該抗人類IgG Fc抗體。使用1 M乙醇胺pH 8.5去活化該晶片。將抗體稀釋並且印在該抗人類Fc草坪上。製備4Ig人類B7-H3的8點系列。為了動力學研究，觀察結合5分鐘並且觀察解離15分鐘。
包括表現力價(每公升培養物之經純化蛋白質的毫克數)、純度(藉由分析性SEC-HPLC的單體峰百分比)，以及藉由SPR的親和力測量(ka、kd及KD)的特徵數據係總結於表1以及圖1至圖4中。
表1。嵌合及人源化抗B7H3抗體之特徵
抗體名稱 力價 (mg/L) HPLC peak % ka (M-1 s-1 ) kd (s-1 ) KD (M)
嵌合 365.16 93.24 7.8E+04 7.9E-04 1.0E-08
L1H1 617.23 100.00 3.1E+04 4.3E-04 1.5E-08
L1H2 470.88 96.95 2.9E+04 4.1E-04 1.4E-08
L1H3 518.95 100.00 4.3E+04 3.5E-04 8.1E-09
L1H4 596.64 96.30 4.3E+04 4.1E-04 9.5E-09
L1H5 524.47 100.00 3.9E+04 4.2E-04 1.1E-08
L1H6 297.43 93.60 2.6E+04 6.6E-04 2.5E-08
L2H1 618.12 100.00 3.9E+04 4.1E-04 1.1E-08
L2H2 493.54 98.52 3.3E+04 3.7E-04 1.1E-08
L2H3 450.01 98.94 3.4E+04 3.4E-04 9.9E-09
L2H4 623.94 97.63 4.4E+04 3.6E-04 8.2E-09
L2H5 533.95 100.00 4.2E+04 4.0E-04 9.4E-09
L2H6 365.41 95.75 2.1E+04 5.1E-04 2.4E-08
L3H1 479.33 98.07 3.4E+04 3.4E-04 1.0E-08
L3H2 275.53 96.05 3.2E+04 3.5E-04 1.1E-08
L3H3 396.32 98.45 3.2E+04 3.2E-04 9.7E-09
L3H4 415.63 96.24 4.0E+04 3.3E-04 8.4E-09
L3H5 434.70 100.00 3.8E+04 3.5E-04 9.2E-09
L3H6 94.34 89.95 2.5E+04 5.0E-04 2.0E-08
L4H1 662.55 100.00 2.4E+04 5.5E-04 2.3E-08
L4H2 511.13 100.00 3.6E+04 3.9E-04 1.1E-08
L4H3 522.19 100.00 3.1E+04 3.9E-04 1.3E-08
L4H4 607.17 98.16 3.4E+04 3.6E-04 1.1E-08
L4H5 504.25 100.00 4.3E+04 4.0E-04 9.3E-09
L4H6 434.71 96.28 4.3E+04 4.2E-04 9.6E-09
該IMGT/DomainGapAlign (imgt.org)工具係用於計算重鏈H1-H6及輕鏈L1-L4之該等可變區的人類種系含量(表2)。
表2。人源化可變區的人類種系含量。
候選物 %人類種系含量
VH1 87.8
VH2 85.7
VH3 87.8
VH4 87.8
VH5 89.8
VH6 85.7
VL1 89.5
VL2 89.5
VL3 86.3
VL4 85.3
基於與該嵌合IgG相比之表現力價、%純度、結合親和力，以及人類種系含量，三種構建體L2H3、L2H4及L2H5被選擇作為主要候選物。在三者之中，L2H5具有最高的人類含量(VH5及VL2兩者)及純度(圖1至圖4)，其所有皆高於該親本嵌合抗體。此外，L2H5與該嵌合IgG具有幾乎相同的親和力(分別為9.4 nM及10 nM KD )。因此，選擇L2H5以進行進一步的研究，包括抗B7H3 x 抗DOTA雙特異性SADA(自組裝及分解)抗體構建體的產生。 實施例 3：用於放射性免疫療法的抗B7-H3 SADAs的產生及特徵
如圖5所示，設計了三種抗B7H3 x 抗DOTA雙特異性SADA構建體(3BH-1、3BH-2、3BH-3)。3BH-1係由來自於該小鼠8H9抗體之處於VH-VL之方位的抗B7H3 scFv所構成，其中該小鼠8H9抗體包含根據SEQ ID No. 23之重鏈序列及根據SEQ ID No.24之輕鏈序列。3BH-2係由來自於該L2H5序列之處於VH-VL之方位的抗B7H3 scFv所構成，且3BH-3在L2H5(藉由Kabat編號為Nh44-VL100)的ScFv中具有二硫鍵以改善穩定性。所有三種構建體皆包括同樣的抗DOTA scFv (人源化C825)，其具有VH-VL二硫化物穩定性。 實施例 4：SADA結合至B7H3(+)細胞系經由流式細胞分析技術
將兩個癌細胞系與SADA蛋白質在4°C下培養30分鐘，並分別進行一系列的滴定。在一洗滌步驟之後，將該等細胞與經螢光團綴合之第二抗體(anti-His)在4°C下培養30分鐘。再次洗滌之後，使用流式細胞儀分析該等細胞。3BH-1及3BH-3展現與神經膠質母細胞瘤細胞系U-87 MG及卵巢腺癌細胞系SK-OV-3的濃度依賴性結合(圖6)，其等係B7-H3陽性細胞系。 實施例5：經131 I標記之抗B7-H3抗體在體內的抗腫瘤效應
為了評估該等人源化抗B7H3抗體的抗腫瘤效應，可以將經螢光素酶轉染的人類卵巢癌SKOV-3細胞或胃癌NCI-N87注射至裸鼠的腹腔中。在該經計劃的方案中，經碘-131(131 I)標記之具有無效Fc的YB8-L2H5將以不同劑量作為單次注射來投予，並且使用生物發光成像每週評估腫瘤負荷。
以下提供額外的相關序列。 SEQ ID NO: 1: 嵌合重鏈(親本) QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 2: YB8 H1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTLTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 3: YB8 H2 QVQLQQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGRATLTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 4: YB8 H3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFKGRVTLTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 5: YB8 H4 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 6: YB8 H5 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 7: YB8 H5 N297A以及K322A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 8: YB8_H5 L234A、L235A以及K322A QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 9: YB8 H6 QVQLQQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWIGWIFPGDGSTQYAQKFQGRATLTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 10: 嵌合輕鏈(親本) DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 11: YB8 L1 EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTLTCRASQSISDYLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSISGVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 12: YB8 L2 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDYLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSISGVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 13: YB8 L3 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTLTCRASQSISDYLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSISGVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 14: YB8 L4 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTLTCRASQSISDYLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVEAEDAGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 15: 3BH-1 QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTDYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGSYPYNYFDAWGCGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQQKPGQCPRGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLLGGKAALTLLGAQPEDEAEYYCALWYSDHWVIGGGTKLTVLGTPLGDTTHTSGKPLDGEYFTLQIRGRERFEMFRELNEALELKDAQAGKEPGGSGGAPHHHHHH SEQ ID NO: 16: 3BH-2 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQGLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDYLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSISGVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTDYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGSYPYNYFDAWGCGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQQKPGQCPRGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLLGGKAALTLLGAQPEDEAEYYCALWYSDHWVIGGGTKLTVLGTPLGDTTHTSGKPLDGEYFTLQIRGRERFEMFRELNEALELKDAQAGKEPGGSGGAPHHHHHH SEQ ID NO: 17: 3BH-3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQCLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDYLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSISGVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYCQNGHSFPLTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTDYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGSYPYNYFDAWGCGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQQKPGQCPRGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLLGGKAALTLLGAQPEDEAEYYCALWYSDHWVIGGGTKLTVLGTPLGDTTHTSGKPLDGEYFTLQIRGRERFEMFRELNEALELKDAQAGKEPGGSGGAPHHHHHH SEQ ID NO: 18: YB8 L2H5重鏈 CAGGTTCAGTTGCAGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAACTACGACATCAACTGGGTCCGACAGGCTACCGGACAGGGACTCGAATGGATCGGCTGGATCTTTCCTGGCGACGGCTCTACCCAGTACGCCCAGAAATTTCAGGGGAGAGCTACCCTGACCACCAACACCTCTATCTCCACCGCCTACATGGAACTGTCCAGCCTGAGATCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGTGCCAGACAGACCACCGCCACTTGGTTTGCTTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTTTCTTCCGCTTCTACCAAGGGACCCAGCGTGTTCCCTCTGGCTCCTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGCGGAACAGCTGCTCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTTCCTGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCTCTGACATCTGGCGTGCACACCTTTCCAGCTGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCTCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCTTCCAGCTCTCTGGGAACCCAGACCTACATCTGCAATGTGAACCACAAGCCTTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACAAGACCCACACCTGTCCTCCATGTCCTGCTCCAGAACTGCTCGGCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCTCGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCTCACGAGGACCCAGAAGTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCTCCTATCGAAAAGACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTTTACACCTTGCCTCCATCTCGGGACGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTCGTGAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCTAATGGCCAGCCAGAGAACAACTACAAGACAACCCCTCCTGTGCTGGACTCCGACGGCTCATTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACAGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACACAGAAGTCTCTGTCTCTGAGCCCCGGCAAGTGA SEQ ID NO: 19: YB8 L2H5輕鏈 GAGATCGTGATGACCCAGTCTCCTGACTTCCAGAGCGTGACCCCTAAAGAGAAAGTCACCATCACCTGTCGGGCCAGCCAGTCCATCTCTGACTACCTGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGATCAGTCCCCTAAGCTGCTGATTAAGTACGCCAGCCAGAGCATCTCCGGCGTGCCATCCAGATTTTCTGGCTCCGGCTCTGGCTCTGACTTCACCCTGACCATCAATTCCCTGGAAGCCGAGGATGCCGCCACCTACTACTGTCAGAATGGCCACAGCTTCCCTCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAGAGAACCGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCATCTGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACTCTACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCTAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAAGTGACCCACCAGGGACTGTCTAGCCCCGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGTTGA SEQ ID NO: 20: YB8 L2H5 N297A K322A (無效Fc) 重鏈 CAGGTGCAGTTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCTGGCTACACCTTTACCAACTACGACATCAACTGGGTCCGACAGGCTACCGGACAGGGACTTGAGTGGATGGGATGGATTTTCCCTGGCGACGGCAGCACCCAGTACAACGAGAAGTTTCAGGGCAGAGTGACCATGACCACCAACACCTCCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGTCCAGCCTGAGATCTGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGACAGACCACCGCCACTTGGTTTGCTTATTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACCGTGTCCTCTGCTTCTACCAAGGGACCCTCTGTGTTCCCTCTGGCTCCTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGTGGAACCGCTGCTCTGGGCTGCCTGGTCAAGGATTACTTTCCTGAGCCTGTGACCGTGTCTTGGAACTCTGGTGCTCTGACCTCCGGCGTGCACACATTTCCAGCTGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCTCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCTTCTAGCTCTCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCTTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACAAGACCCACACCTGTCCTCCATGTCCTGCTCCAGAACTGCTCGGCGGTCCAAGCGTTTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCTCGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCTCACGAGGACCCAGAAGTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTACGCCTCCACCTACAGAGTGGTGTCTGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCGCCGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCTCCTATCGAAAAGACCATCTCCAAGGCTAAGGGCCAGCCTCGGGAACCTCAGGTTTACACACTGCCTCCATCTCGGGACGAGCTGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACCTGCCTCGTGAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCTAACGGCCAGCCAGAGAACAACTACAAGACAACCCCTCCTGTGCTGGACTCTGACGGCTCATTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACAGTGGACAAGTCTCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGTTCTGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCTCTGTCTCTGAGCCCCGGCAAGTGA SEQ ID NO: 21: YB8 L2H5 L234A L235A K322A (無效Fc) 重鏈 CAGGTGCAGTTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCTGGCTACACCTTTACCAACTACGACATCAACTGGGTCCGACAGGCTACCGGACAGGGACTTGAGTGGATGGGATGGATTTTCCCTGGCGACGGCAGCACCCAGTACAACGAGAAGTTTCAGGGCAGAGTGACCATGACCACCAACACCTCCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGTCCAGCCTGAGATCTGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGACAGACCACCGCCACTTGGTTTGCTTATTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACCGTGTCCTCTGCTTCTACCAAGGGACCCTCTGTGTTCCCTCTGGCTCCTTCCAGCAAGTCTACCTCTGGTGGAACCGCTGCTCTGGGCTGCCTGGTCAAGGATTACTTTCCTGAGCCTGTGACCGTGTCTTGGAACTCTGGTGCTCTGACCTCCGGCGTGCACACATTTCCAGCTGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCTCTGTCCTCTGTCGTGACCGTGCCTTCTAGCTCTCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCTTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAACCCAAGTCCTGCGACAAGACCCACACCTGTCCTCCATGTCCTGCTCCAGAAGCTGCTGGCGGTCCAAGCGTTTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCTCGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCTCACGAGGACCCAGAAGTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTACAACTCCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCGCCGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCTCCTATCGAAAAGACCATCTCCAAGGCTAAGGGCCAGCCTCGGGAACCTCAGGTTTACACACTGCCTCCATCTCGGGACGAGCTGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACCTGCCTCGTGAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCTAACGGCCAGCCAGAGAACAACTACAAGACAACCCCTCCTGTGCTGGACTCTGACGGCTCATTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACAGTGGACAAGTCTCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGTTCTGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACACAGAAGTCTCTGTCTCTGAGCCCCGGCAAGTGA SEQ ID NO: 22: 3BH-3 CAGGTGCAGTTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAACCTGGCGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCTGGCTACACCTTTACCAACTACGACATCAACTGGGTCCGACAGGCCACCGGACAGTGTTTGGAGTGGATGGGATGGATCTTCCCTGGCGACGGCTCTACCCAGTACAACGAGAAGTTTCAGGGCAGAGTGACCATGACCACCAACACCTCCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGTCCAGCCTGAGATCTGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGACAGACCACCGCCACTTGGTTTGCTTATTGGGGCCAGGGCACACTGGTCACAGTTTCTAGCGGAGGCGGAGGAAGTGGTGGCGGAGGTTCTGGTGGCGGCGGATCAGGCGGTGGTGGATCTGGCGGCGGTGGAAGTGGCGGAGGCGGCTCTGAAATTGTGATGACCCAGTCTCCTGACTTCCAGAGCGTGACCCCTAAAGAGAAAGTCACCATCACCTGTCGGGCCAGCCAGTCCATCTCTGACTACCTGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGATCAGTCCCCTAAGCTGCTGATTAAGTACGCCAGCCAGAGCATCTCCGGCGTGCCATCCAGATTTTCTGGCTCCGGCTCTGGCTCTGACTTCACCCTGACCATCAATTCCCTGGAAGCCGAGGATGCCGCCACCTACTACTGTCAGAATGGCCACAGCTTCCCTCTGACCTTCGGCTGTGGCACCAAGCTGGAAATCAAAGGCGGCGGAGGCTCAGGCGGAGGTGGAAGCGGAGGTGGCGGTTCCGGCGGTGGCGGAAGTCATGTTCAACTGGTTGAATCCGGCGGAGGATTGGTGCAGCCAGGCGGATCTCTGAGACTGTCTTGTGCCGCTTCCGGCTTCTCCCTGACTGATTATGGCGTGCACTGGGTTCGACAAGCCCCTGGCAAAGGACTGGAATGGCTGGGAGTTATTTGGAGCGGCGGAGGAACCGCCTACAACACCGCTCTGATCTCCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCTCTGAGAGCCGAAGATACCGCTGTGTATTACTGCGCTCGGAGAGGCAGCTACCCCTACAACTACTTTGATGCTTGGGGCTGCGGAACCCTGGTTACAGTCTCTTCTGGCGGCGGAGGCAGCGGAGGTGGTGGTTCTGGCGGAGGCGGATCTGGTGGCGGAGGTAGTGGCGGCGGTGGAAGCGGTGGCGGAGGATCTCAAGCTGTGGTCACACAAGAGCCCAGCCTGACAGTTTCTCCTGGCGGAACCGTTACACTGACCTGTGGATCTTCTACCGGCGCTGTGACCGCCTCTAACTACGCTAACTGGGTGCAGCAGAAACCCGGCCAGTGTCCTAGAGGCCTGATCGGCGGACACAACAATAGACCTCCAGGCGTGCCCGCTAGATTCTCTGGATCTCTGCTTGGCGGCAAGGCTGCTCTGACACTTTTGGGCGCTCAGCCTGAGGATGAGGCTGAGTACTATTGCGCCCTGTGGTACTCCGACCATTGGGTTATCGGCGGAGGGACCAAACTGACCGTTCTGGGAACACCTCTGGGCGACACCACACATACCTCTGGAAAGCCTCTGGACGGCGAGTACTTCACACTGCAGATCCGGGGCAGAGAACGCTTCGAGATGTTCAGAGAGCTGAACGAGGCCCTGGAACTGAAGGATGCCCAGGCTGGAAAAGAACCTGGTGGTTCAGGTGGCGCCCCTCACCACCATCATCACCATTAAGGATCCAAGG SEQ ID NO: 23: 鼠類8H9重鏈 QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSAAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK SEQ ID NO: 24: 鼠類8H9輕鏈 DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC SEQ ID NO: 25: 8H9重鏈CDR-1 NYDIN SEQ ID NO: 26: 8H9重鏈CDR-2 WIFPGDGSTQYNEKFKG SEQ ID NO: 27: 8H9重鏈CDR-3 QTTATWFAY SEQ ID NO: 28: 8H9輕鏈CDR-1 RASQSISDYLH SEQ ID NO: 29: 8H9輕鏈CDR-2 YASQSIS SEQ ID NO: 30: 8H9輕鏈CDR-3 QNGHSFPLT SEQ ID NO: 31: 4Ig-B7H3 MLRRRGSPGMGVHVGAALGALWFCLTGALEVQVPEDPVVALVGTDATLCCSFSPEPGFSLAQLNLIWQLTDTKQLVHSFAEGQDQGSAYANRTALFPDLLAQGNASLRLQRVRVADEGSFTCFVSIRDFGSAAVSLQVAAPYSKPSMTLEPNKDLRPGDTVTITCSSYQGYPEAEVFWQDGQGVPLTGNVTTSQMANEQGLFDVHSILRVVLGANGTYSCLVRNPVLQQDAHSSVTITPQRSPTGAVEVQVPEDPVVALVGTDATLRCSFSPEPGFSLAQLNLIWQLTDTKQLVHSFTEGRDQGSAYANRTALFPDLLAQGNASLRLQRVRVADEGSFTCFVSIRDFGSAAVSLQVAAPYSKPSMTLEPNKDLRPGDTVTITCSSYRGYPEAEVFWQDGQGVPLTGNVTTSQMANEQGLFDVHSVLRVVLGANGTYSCLVRNPVLQQDAHGSVTITGQPMTFPPEALWVTVGLSVCLIALLVALAFVCWRKIKQSCEEENAGAEDQDGEGEGSKTALQPLKHSDSKEDDGQEIA SEQ ID NO: 32: 2Ig-B7H3 MLRRRGSPGMGVHVGAALGALWFCLTGALEVQVPEDPVVALVGTDATLCCSFSPEPGFSLAQLNLIWQLTDTKQLVHSFAEGQDQGSAYANRTALFPDLLAQGNASLRLQRVRVADEGSFTCFVSIRDFGSAAVSLQVAAPYSKPSMTLEPNKDLRPGDTVTITCSSYRGYPEAEVFWQDGQGVPLTGNVTTSQMANEQGLFDVHSVLRVVLGANGTYSCLVRNPVLQQDAHGSVTITGQPMTFPPEALWVTVGLSVCLIALLVALAFVCWRKIKQSCEEENAGAEDQDGEGEGSKTALQPLKHSDSKEDDGQEIA SEQ ID NO: 33: B7H3表位 IRFD SEQ ID NO: 34: 抗體ch8H9 Fab重鏈 QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKS SEQ ID NO: 35: 抗體ch8H9 Fab輕鏈 DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE SEQ ID NO: 36: IGKV3D-11 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGPGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWH SEQ ID NO: 37: IGKV6-21 EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCHQSSSLP SEQ ID NO: 38: IGHV1-8 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEQ ID NO: 39: IGHV1-46 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEQ ID NO: 40: LFR1 VL L2H5 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTITC SEQ ID NO: 41: LFR2 VL L2H5 WYQQKPDQSPKLLIK SEQ ID NO: 42: LFR3 VL L2H5 GVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYC SEQ ID NO: 43: LFR4 VL L2H5 FGQGTKLEIK SEQ ID NO: 44: HFR1 VH L2H5 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SEQ ID NO: 45: HFR2 VH L2H5 WVRQATGQGLEWMG SEQ ID NO: 46: HFR3 VH L2H5 RVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEQ ID NO: 47: HFR4 VH L2H5 WGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 48: LFR1 VL L2H3 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTITC SEQ ID NO: 49: LFR2 VL L2H3 WYQQKPDQSPKLLIK SEQ ID NO: 50: LFR3 VL L2H3 GVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYC SEQ ID NO: 51: LFR4 VL L2H3 FGQGTKLEIK SEQ ID NO: 52: HFR1 VH L2H3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SEQ ID NO: 53: HFR2 VH L2H3 WVRQATGQGLEWMG SEQ ID NO: 54: HFR3 VH L2H3 RVTLTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR SEQ ID NO: 55: HFR4 VH L2H3 WGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 56: LFR1 VL L2H4 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTITC SEQ ID NO: 57: LFR2 VL L2H4 WYQQKPDQSPKLLIK SEQ ID NO: 58: LFR3 VL L2H4 GVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYC SEQ ID NO: 59: LFR4 VL L2H4 FGQGTKLEIK SEQ ID NO: 60: HFR1 VH L2H4 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SEQ ID NO: 61: HFR2 VH L2H4 WVRQATGQGLEWIG SEQ ID NO: 62: HFR3 VH L2H4 RVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR SEQ ID NO: 63: HFR4 VH L2H4 WGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 64: IMGT CDR鼠類8H9重鏈CDR1 GYTFTNYD SEQ ID NO: 65: IMGT CDR鼠類8H9重鏈CDR2 IFPGDGST SEQ ID NO: 66: IMGT CDR鼠類8H9重鏈CDR3 ARQTTATWFAY SEQ ID NO: 67: IMGT CDR鼠類8H9輕鏈CDR1 QSISDY SEQ ID NO: 68: IMGT CDR鼠類8H9輕鏈CDR2 YA SEQ ID NO: 69: IMGT CDR鼠類8H9輕鏈CDR3 QNGHSFPLT SEQ ID NO: 70: IMGT CDR H1重鏈CDR1 GYTFTNYD SEQ ID NO: 71: IMGT CDR H1重鏈CDR2 IFPGDGST SEQ ID NO: 72: IMGT CDR H1重鏈CDR3 ARQTTATWFAY SEQ ID NO: 73: IMGT CDR L1輕鏈CDR1 QSISDY SEQ ID NO: 74: IMGT CDR L1輕鏈CDR2 YA SEQ ID NO: 75: IMGT CDR L1輕鏈CDR3 QNGHSFPLT SEQ ID NO: 76: IMGT CDR H2重鏈CDR1 GYTFTNYD SEQ ID NO: 77: IMGT CDR H2重鏈CDR2 IFPGDGST SEQ ID NO: 78: IMGT CDR H2重鏈CDR3 ARQTTATWFAY SEQ ID NO: 79: IMGT CDR L2輕鏈CDR1 QSISDY SEQ ID NO: 80: IMGT CDR L2輕鏈CDR2 YA SEQ ID NO: 81: IMGT CDR L2輕鏈CDR3 QNGHSFPLT SEQ ID NO: 82: IMGT CDR H3重鏈CDR1 GYTFTNYD SEQ ID NO: 83: IMGT CDR H3重鏈CDR2 IFPGDGST SEQ ID NO: 84: IMGT CDR H3重鏈CDR3 ARQTTATWFAY SEQ ID NO: 85: IMGT CDR L3輕鏈CDR1 QSISDY SEQ ID NO: 86: IMGT CDR L3輕鏈CDR2 YA SEQ ID NO: 87: IMGT CDR L3輕鏈CDR3 QNGHSFPLT SEQ ID NO: 88: IMGT CDR H4重鏈CDR1 GYTFTNYD SEQ ID NO: 89: IMGT CDR H4重鏈CDR2 IFPGDGST SEQ ID NO: 90: IMGT CDR H4重鏈CDR3 ARQTTATWFAY SEQ ID NO: 91: IMGT CDR L4輕鏈CDR1 QSISDY SEQ ID NO: 92: IMGT CDR L4輕鏈CDR2 YA SEQ ID NO: 93: IMGT CDR L4輕鏈CDR3 QNGHSFPLT SEQ ID NO: 94: IMGT CDR H5重鏈CDR1 GYTFTNYD SEQ ID NO: 95: IMGT CDR H5重鏈CDR2 IFPGDGST SEQ ID NO: 96: IMGT CDR H5重鏈CDR3 ARQTTATWFAY SEQ ID NO: 97: IMGT CDR H6重鏈CDR1 GYTFTNYD SEQ ID NO: 98: IMGT CDR H6重鏈CDR2 IFPGDGST SEQ ID NO: 99: IMGT CDR H6重鏈CDR3 ARQTTATWFAY SEQ ID NO: 100: m8H9 LFR1 DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSC SEQ ID NO: 101: m8H9 LFR2 WYQQKSHESPRLLIK SEQ ID NO: 102: m8H9 LFR3 GIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYC SEQ ID NO: 103: m8H9 LFR4 FGAGTKLELK SEQ ID NO: 104: m8H9 HFR1 QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT SEQ ID NO: 105: m8H9 HFR2 WVRQRPEQGLEWIG SEQ ID NO: 106: m8H9 HFR3 KATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCAR SEQ ID NO: 107: m8H9 HFR4 WGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 108: L1 LFR1 EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTLTC SEQ ID NO: 109: L1 LFR2 WYQQKPDQSPKLLIK SEQ ID NO: 110: L1 LFR3 GVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYC SEQ ID NO: 111: L1 LFR4 FGQGTKLEIK SEQ ID NO: 112: L3 LFR1 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTLTC SEQ ID NO: 113: L3 LFR2 WYQQKPDQSPKLLIK SEQ ID NO: 114: L3 LFR3 GVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAGVYYC SEQ ID NO: 115: L3 LFR4 FGQGTKLEIK SEQ ID NO: 116: L4 LFR1 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTLTC SEQ ID NO: 117: L4 LFR2 WYQQKPDQSPKLLIK SEQ ID NO: 118: L4 LFR3 GIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVEAEDAGVYYC SEQ ID NO: 119: L4 LFR4 FGQGTKLEIK SEQ ID NO: 120: H1 HFR1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SEQ ID NO: 121: H1 HFR2 WVRQATGQGLEWIG SEQ ID NO: 122: H1 HFR3 RVTLTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEQ ID NO: 123: H1 HFR4 WGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 124: H2 HFR1 QVQLQQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SEQ ID NO: 125: H2 HFR2 WVRQATGQGLEWIG SEQ ID NO: 126: H2 HFR3 RATLTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR SEQ ID NO: 127: H2 HFR4 WGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 128: H6 HFR1 QVQLQQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFT SEQ ID NO: 129: H6 HFR2 WVRQATGQGLEWIG SEQ ID NO: 130: H6 HFR3 RATLTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR SEQ ID NO: 131: H6 HFR4 WGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 132: 無His標籤之3BH-3 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQCLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDYLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSISGVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYCQNGHSFPLTFGCGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSHVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLTDYGVHWVRQAPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGSYPYNYFDAWGCGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQQKPGQCPRGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLLGGKAALTLLGAQPEDEAEYYCALWYSDHWVIGGGTKLTVLGTPLGDTTHTSGKPLDGEYFTLQIRGRERFEMFRELNEALELKDAQAGKEPGGSGGAP SEQ ID NO: 133: LFR4 VL L2H5替代 FGCGTKLEIK SEQ ID NO: 134: HFR2 VH L2H5替代 WVRQATGQCLEWMG SEQ ID NO: 135: YB8 H5替代 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQCLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 136: YB8 H5 N297A以及K322A替代 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQCLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 137: YB8_H5 L234A、L235A以及K322A替代 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQATGQCLEWMGWIFPGDGSTQYNEKFQGRVTMTTNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCAVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 138: YB8 L2替代 EIVMTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSISDYLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSISGVPSRFSGSGSGSDFTLTINSLEAEDAATYYCQNGHSFPLTFGCGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 139: 四聚化域，SADA多肽 KPLDGEYFTLQIRGRERFEMFRELNEALELKDAQAGKEP 參考文獻
1. Chapoval, A.I., et al.,B7-H3: A costimulatory molecule for T cell activation and IFN-γ production. Nature Immunology, 2001. 2(3): p. 269-274.
2. Steinberger, P., et al.,Molecular Characterization of Human 4Ig-B7-H3, a Member of the B7 Family with Four Ig-Like Domains. The Journal of Immunology, 2004. 172(4): p. 2352-2359.
3. Loos, M., et al.,B7-H3 and Its Role in Antitumor Immunity. Clinical and Developmental Immunology, 2010. 2010: p. 1-7.
4. Modak, S., et al.,Monoclonal antibody 8H9 targets a novel cell surface antigen expressed by a wide spectrum of human solid tumors. Cancer Res, 2001. 61(10): p. 4048-54.
5. Roth, T.J., et al.,B7-H3 ligand expression by prostate cancer: a novel marker of prognosis and potential target for therapy. Cancer Res, 2007. 67(16): p. 7893-900.
6. Zang, X., et al.,B7-H3 and B7x are highly expressed in human prostate cancer and associated with disease spread and poor outcome. Proc Natl Acad Sci U S A, 2007. 104(49): p. 19458-63.
7. Crispen, P.L., et al.,Tumor cell and tumor vasculature expression of B7-H3 predict survival in clear cell renal cell carcinoma. Clin Cancer Res, 2008. 14(16): p. 5150-7.
8. Zang, X., et al.,Tumor associated endothelial expression of B7-H3 predicts survival in ovarian carcinomas. Modern Pathology, 2010. 23(8): p. 1104-1112.
9. Lemke, D., et al.,Costimulatory Protein 4IgB7H3 Drives the Malignant Phenotype of Glioblastomaby Mediating Immune Escape and Invasiveness. Clinical Cancer Research, 2012. 18(1): p. 105-117.
10. Wang, L., et al.,B7-H3 is overexpressed in patients suffering osteosarcoma and associated with tumor aggressiveness and metastasis. PLoS One, 2013. 8(8): p. e70689.
11. Gregorio, A., et al.,Small round blue cell tumours: diagnostic and prognostic usefulness of the expression of B7-H3 surface molecule. Histopathology, 2008. 53(1): p. 73-80.
12. Du, H., et al.,Antitumor Responses in the Absence of Toxicity in Solid Tumors by Targeting B7-H3 via Chimeric Antigen Receptor T Cells. Cancer Cell, 2019. 35(2): p. 221-237 e8.
13. Majzner, R.G., et al.,CAR T Cells Targeting B7-H3, a Pan-Cancer Antigen, Demonstrate Potent Preclinical Activity Against Pediatric Solid Tumors and Brain Tumors. Clin Cancer Res, 2019. 25(8): p. 2560-2574.
14. Castellanos, J.R., et al.,B7-H3 role in the immune landscape of cancer. American Journal of Clinical and Experimental Immunology, 2017. 6(4): p. 66-75.
15. Kramer, K., et al.,Compartmental intrathecal radioimmunotherapy: results for treatment for metastatic CNS neuroblastoma. J Neurooncol, 2010. 97(3): p. 409-18.
16. Van Cutsem, E., et al.,Gastric cancer. Lancet, 2016. 388(10060): p. 2654-2664.
17. Ahmed, M., et al.,Humanized Affinity-matured Monoclonal Antibody 8H9 Has Potent Antitumor Activity and Binds to FG Loop of Tumor Antigen B7-H3. Journal of Biological Chemistry, 2015. 290(50): p. 30018-30029.
18. Siegel, RL. et al.Cancer statistics, 2020. CA: A Cancer Journal for Clinicians, Vol 70, Issue 1, Jan/Feb 2020, p. 7-30
19. American Cancer Society website, survival rates https://www.cancer.org/cancer/ovarian-cancer/detection-diagnosis-staging/survival-rates.html Accessed May 26, 2020
(無)
圖1顯示嵌合IgG的SEC-HPLC結果。 圖2顯示L2H3的SEC-HPLC結果。 圖3顯示L2H4的SEC-HPLC結果。 圖4顯示L2H5的SEC-HPLC結果。 圖5顯示SADA的示意設計。該四聚化域係經由一連接子連接至對抗DOTA的ScFv，該對抗DOTA的ScFv係經由一第二連接子連接至對抗B7-H3的ScFv。 圖6顯示SADA與卵巢癌及神經膠質母細胞瘤細胞系的結合。
(無)

Claims (86)

  1. 一種能夠結合至B7H3抗原之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含： CDR區，與選自於SEQ ID No. 25-30或64-99的CDR序列具有總共至少90%一致性，以及 FR區，與選自於SEQ ID No. 40-63、108-131、133或134的FR序列具有總共至少70%一致性。
  2. 一種能夠結合至B7H3抗原之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含以下區域： 與SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93具有總共至少90%一致性的區域； 與SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99具有總共至少90%一致性的區域； 與根據SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59、108-119或133之序列具有總共至少75%一致性的區域；以及 與根據SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63、120-131或134之序列具有總共至少75%一致性的區域。
  3. 一種如前述請求項中任一項之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含以下區域： 與SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93具有總共至少90%、較佳地至少95%一致性的區域，例如至少96%一致性，例如至少97%一致性，例如至少98%一致性，例如至少99%一致性，或者100%一致性；及/或 與SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59、108-119或133具有總共至少75%一致性的區域。
  4. 一種如前述請求項中任一項之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59、108-119或133具有總共至少80%、更佳地85%、較佳地90%、更佳地95%一致性的區域。
  5. 一種如前述請求項中任一項之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含以下區域： 與SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99具有總共至少90%、較佳地至少95%一致性的區域，例如至少96%一致性，例如至少97%一致性，例如至少98%一致性，例如至少99%一致性，或者100%一致性；及/或 與SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63、120-131或134具有總共至少75%一致性的區域。
  6. 一種如前述請求項中任一項之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含與SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63、120-131或134具有總共至少80%、更佳地85%、較佳地90%、更佳地95%一致性的區域。
  7. 一種如前述請求項中任一項之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含選自於SEQ ID No. 25-30及64-99的區域。
  8. 一種如前述請求項中任一項之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含以下區域： 選自於SEQ ID No. 28-30、67-69、73-75、79-81、85-87、91-93的區域； 選自於SEQ ID No. 25-27、64-66、70-72、76-78、82-84、88-90、94-99的區域； 選自於SEQ ID No. 40-43、48-51、56-59、108-119或133的區域；以及 選自於SEQ ID No. 44-47、52-55、60-63、120-131或134的區域。
  9. 一種如前述請求項中任一項之人源化抗體或其抗原結合片段，其包含Fc、Fc2或無效Fc。
  10. 一種人源化抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至B7H3抗原，其中所述抗體或抗原結合片段包含與選自於序列SEQ ID No. 36、37、38及39中之任一者具有至少70%一致性的序列。
  11. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含與選自於序列SEQ ID No. 36、37、38或39中之任一者具有至少75%一致性的序列。
  12. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含至少一個選自於以下的序列： 根據SEQ ID No. 25、64、70、76、82、88、94及97的一重鏈可變區CDR1； 根據SEQ IN No. 26、65、71、77、83、89、95及98的一重鏈可變區CDR2； 根據SEQ IN No. 27、 66、72、78、84、90、96及99的一重鏈可變區CDR3； 根據SEQ ID No. 28、67、73、79、85及91的一輕鏈可變區CDR1； 根據SEQ ID No. 29、68、74、80、86及92的一輕鏈可變區CDR2；以及 根據 SEQ ID No. 30、69、75、81、87及93的一輕鏈可變區CDR3。
  13. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體包含根據SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、135、136或137的一重鏈序列，及/或根據SEQ ID No. 10、11、12、13、14或138的一輕鏈序列。
  14. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體包含一重鏈序列及/或一輕鏈序列，該重鏈序列與SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、135、136或137所載之序列具有至少約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約 97%、約98%，或者約99%序列一致性，該輕鏈序列與SEQ ID No. 10、11、12、13、14或138所載之序列具有至少約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約 97%、約98%，或者約99%序列一致性。
  15. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含與所述抗體或抗原結合片段之人類種系之胺基酸至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少77.5%、至少80%、至少82%、至少84%、至少86%、至少88%，或者至少90%相同的胺基酸。
  16. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段結合至一表位，且其中所述表位係B7H3的一表位。
  17. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中抗原結合片段之抗體結合至根據SEQ ID No.: 33的序列。
  18. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段結合至一抗原，且其中所述抗原包含選自於SEQ ID No. 31及32的一序列。
  19. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗原係存在於一癌細胞上。
  20. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述癌細胞係來自於一轉移瘤(metastasis)。
  21. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述癌細胞及/或轉移瘤係前列腺癌、一結締組織增生性小圓細胞腫瘤(desmoplastic small round cell tumors)、卵巢癌、胃癌、胰臟癌、肝癌、腎癌、乳癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、齒槽橫紋肌肉瘤(alveolar rhabdomyosarcoma)、胚胎性橫紋肌肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing sarcoma)、威爾姆斯氏腫瘤(Wilms tumor)、神經母細胞瘤，神經節神經母細胞瘤、神經節細胞瘤、髓母細胞瘤、高級神經膠質瘤、瀰漫型內因性橋腦神經膠質瘤、多層菊形團胚胎性腫瘤(embryonal tumors with multilayered rosettes)，或者一表現B7H3之癌症。
  22. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含不與一Fc γ受體相互作用的一Fc區。
  23. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其進一步包含一Fc區，其中所述Fc區無反應性或展現極少反應性。
  24. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體包含一無效Fc。
  25. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段具有小於50%、小於45%、小於40%、小於35%、小於30%、小於25%、小於20%、小於15%，或者約10%的免疫原性。
  26. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述試劑或抗體係一鼠類抗體或其抗原結合片段。
  27. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述試劑或抗體係一嵌合抗體或其抗原結合片段。
  28. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述試劑或抗體係一人源化抗體或其抗原結合片段。
  29. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段係以一放射性同位素而被放射性標記。
  30. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述放射性同位素係選自於一PET標記以及或者一SPECT標記。
  31. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述PET標記係選自於124 I、225 Ac及89 Zr。
  32. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述SPECT標記係選自於131 I、177 Lu、99 mTc、64 Cu及89 Zr。
  33. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段係複合至一螯合劑化合物。
  34. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述螯合劑化合物係結合至一放射性同位素。
  35. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述放射性同位素係選自於124 I、131 I及177 Lu或99 mTc、64 Cu及89 Zr。
  36. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述螯合劑化合物係選自於DOTA、DTPA、NOTA及DFO。
  37. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述DOTA係DOTA的一變異體，諸如苄基-DOTA。
  38. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述DTPA係DTPA的一變異體，諸如CHX-A’’-DTPA。
  39. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述放射性同位素係一α、β或正電子發射放射性核種。
  40. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含選自於IgG、IgG1、IgG2、IgG3及IgG4的一結構。
  41. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其包含選自於IgG、IgM、IgA、IgD及IgE的一結構。
  42. 一種抗體或其抗原結合片段，其能夠結合至一抗原，其中所述抗體或抗原結合片段包含根據SEQ ID No. 15、16、17或132的一序列。
  43. 如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其藉由引入額外的雙硫鍵而進一步穩定，及/或藉由引入移除氧化不穩定殘基之缺失及/或取代而進一步穩定。
  44. 如請求項43之抗體或其抗原結合片段，其中所述額外的雙硫鍵及/或缺失及/或取代係位於該等CDR區之外。
  45. 如請求項44之抗體或其抗原結合片段，其中所述額外的雙硫鍵係藉由使用半胱胺酸殘基取代在LFR4中的位置3以及在HFR2中的位置9的該等胺基酸殘基而引入。
  46. 一種自組裝分解(SADA)多肽，其中所述多肽係連接至如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段。
  47. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段係一雙特異性及/或三特異性結合抗體。
  48. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述雙特異性及/或三特異性結合抗體包含用於結合至一第一抗原之如前述請求項中任一項之第一抗體或其抗原結合片段，以及用於結合至一第二抗原之第二抗體或抗原結合片段。
  49. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述第二抗體或其抗原結合片段結合至DOTA及/或DTPA。
  50. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段係連接至一自組裝分解(SADA)多肽。
  51. 如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段，其中所述自組裝分解(SADA)多肽具有與一人類同源多聚化多肽的胺基酸序列顯示至少75%一致性的一胺基酸序列，且特徵在於一或多個多聚化解離常數(KD)。
  52. 一種多肽複合體，其包含如前述請求項中任一項之自組裝分解(SADA)多肽，以及如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段。
  53. 一種多肽複合體，其包含一自組裝分解(SADA)多肽，且其中所述複合體進一步包含如前述請求項中任一項之雙特異性抗體，其中所述第一抗原係B7H3，且其中所述第二抗原係DOTA。
  54. 一種多肽複合體，其包含一自組裝分解(SADA)多肽，以及至少一第一結合域，該第一結合域結合至一第一標靶並且係共價地連接至該SADA多肽。
  55. 如前述請求項中任一項之多肽複合體，其中所述自組裝分解(SADA)多肽具有與一人類同源多聚化多肽的胺基酸序列顯示至少75%一致性的一胺基酸序列，且特徵在於一或多個多聚化解離常數(KD)；且其中所述複合體被構建並且被配置使得其採取一第一多聚化狀態以及一或多個高階多聚化狀態，其中：該第一多聚化狀態的尺寸係小於約70 kDa，該等高階多聚化狀態之至少一者係尺寸大於150 kDa的同源四聚體或高階同源多聚體，其中當該複合體係以高於該SADA多肽KD的濃度存在時，該高階同源多聚化複合體在水溶液中係穩定的，且當該複合體的濃度係低於該SADA多肽KD時，該複合體在生理條件下從該(等)高階多聚化狀態轉變成該第一多聚化狀態。
  56. 如前述請求項中任一項之多肽複合體，其中所述複合體包含一螯合劑。
  57. 如前述請求項中任一項之複合體，其中所述螯合劑包含一金屬離子。
  58. 如前述請求項中任一項之複合體，其中該金屬離子係一放射性核種。
  59. 一種經分離的核酸分子，其編碼如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段。
  60. 一種經分離的核酸分子，其包含根據SEQ ID No. 18、19、20、21或22的一序列。
  61. 一種重組載體，其包含如前述請求項中任一項之經分離的核酸分子。
  62. 一種宿主細胞，其包含如前述請求項中任一項之重組載體。
  63. 一種用於產生如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段的方法，其包含以下步驟：在允許該抗體或片段表現的條件下在一培養基中培養如前述請求項中任一項之宿主細胞，並且從該培養基分離該抗體或片段。
  64. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段。
  65. 一種CAR-T細胞，其表現如前述請求項中任一項之CAR。
  66. 一種如前述請求項中任一項之CAR-T細胞的群體。
  67. 一種組成物，其包含如前述請求項中任一項之CAR-T細胞的群體。
  68. 一種CAR-NK細胞，其表現如前述請求項中任一項之CAR。
  69. 一種如前述請求項中任一項之CAR-NK細胞的群體。
  70. 一種組成物，其包含如前述請求項中任一項之CAR-NK細胞的群體。
  71. 一種醫藥組成物，其包含如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段。
  72. 一種T細胞，其裝備有如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段。
  73. 預防、減緩及/或診斷一受試者中一醫學病況之症狀的方法，其包含以下步驟：將一抗體、一抗原結合片段、一雙特異性抗體、一三特異性抗體、一多肽複合體、一組成物及/或一CAR投予至腹膜中，且其中所述醫學病況的特徵在於B7H3抗原的表現。
  74. 一種將腹膜中的腫瘤成像的方法，其中所述成像包含使用一抗體或其抗原結合片段，其中所述腫瘤的特徵在於B7H3抗原的表現，且其中將一抗體或其抗原結合片段投予至腹膜中的一步驟已處於該成像方法之前。
  75. 如前述請求項中任一項之方法，其中所述抗體、抗原結合片段、雙特異性抗體、三特異性抗體、多肽複合體、組成物及/或CAR係如前述請求項中任一項之抗體、抗原結合片段、雙特異性抗體、三特異性抗體、多肽複合體、組成物及/或CAR。
  76. 如前述請求項中任一項之方法，其中所述抗體或其抗原結合片段包含至少一個選自於以下的序列：根據SEQ ID No.25的一重鏈可變區CDR1、根據SEQ IN No. 26的一重鏈可變區CDR2、根據SEQ IN No. 27的一重鏈可變區CDR3、根據SEQ ID No. 28的一輕鏈可變區CDR1、根據SEQ ID No. 29的一輕鏈可變區CDR2，以及根據SEQ ID No. 30的一輕鏈可變區CDR3。
  77. 如前述請求項中任一項之方法，其中所述抗體包含根據SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、23、135、136或137的一重鏈序列，及/或根據SEQ ID No. 10、11、12、13、14、24或138的一輕鏈序列。
  78. 如前述請求項中任一項之方法，其中抗體包含一重鏈序列及/或一輕鏈序列，該重鏈序列與SEQ ID No. 1、2、3、4、5、6、7、8、9、23、135、136或137所載之序列具有至少約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約 97%、約98%，或者約99%序列一致性，該輕鏈序列與SEQ ID No. 10、11、12、13、14 、24或138所載之序列具有至少約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約 97%、約98%，或者約99%序列一致性。
  79. 一種如前述請求項中任一項之組成物的用途，其係用於製備一用於治療癌症的醫藥品，以供在如前述請求項中任一項之方法中使用。
  80. 一種如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段的用途，其係用於製備一用於治療癌症及/或用於如前述請求項中任一項之方法的醫藥品。
  81. 一種如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段的體外用途。
  82. 如前述請求項中任一項之方法，其中所述醫學病況係一癌症。
  83. 如前述請求項中任一項之方法，其中所述癌症及/或所述腫瘤係一轉移瘤。
  84. 如前述請求項中任一項之方法，其中所述癌症、所述腫瘤及/或所述轉移瘤係前列腺癌、一結締組織增生性小圓細胞腫瘤、卵巢癌、胃癌、胰臟癌、肝癌、腎癌、乳癌、非小細胞肺癌、黑色素瘤、齒槽橫紋肌肉瘤、胚胎性橫紋肌肉瘤、尤文氏肉瘤、威爾姆斯氏腫瘤、神經母細胞瘤，神經節神經母細胞瘤、神經節細胞瘤、髓母細胞瘤、高級神經膠質瘤、瀰漫型內因性橋腦神經膠質瘤、多層菊形團胚胎性腫瘤，或者一表現B7H3之癌症。
  85. 預防、減緩及/或診斷一受試者中一醫學病況之症狀的方法，其包含以下步驟：將如前述請求項中任一項之抗體或抗原結合片段投予至腹膜中，且其中所述醫學病況的特徵在於B7H3抗原的表現。
  86. 一種將腹膜中的腫瘤成像的方法，其中所述成像包含使用如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中所述醫學腫瘤的特徵在於B7H3抗原的表現，且其中將如前述請求項中任一項之抗體或其抗原結合片段投予至腹膜中的一步驟已處於該成像方法之前。
TW110120297A 2020-06-04 2021-06-03 用於癌症之治療的抗b7h3抗體 TW202210516A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063034592P 2020-06-04 2020-06-04
US63/034,592 2020-06-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202210516A true TW202210516A (zh) 2022-03-16

Family

ID=76502644

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110120297A TW202210516A (zh) 2020-06-04 2021-06-03 用於癌症之治療的抗b7h3抗體

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20230312721A1 (zh)
EP (1) EP4161649A1 (zh)
JP (1) JP2023528344A (zh)
KR (1) KR20230024326A (zh)
CN (1) CN115768522A (zh)
AU (1) AU2021284808A1 (zh)
BR (1) BR112022024211A8 (zh)
CA (1) CA3178510A1 (zh)
TW (1) TW202210516A (zh)
WO (1) WO2021244721A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023110045A1 (en) * 2021-12-15 2023-06-22 Y-Mabs Therapeutics, Inc. Scfv and antibodies with reduced multimerisation
CN114380910B (zh) * 2022-01-07 2023-04-28 苏州旭光科星抗体生物科技有限公司 靶向人b7-h3分子的人源化单克隆抗体及其应用
CN116836281A (zh) * 2022-03-25 2023-10-03 英诺湖医药(杭州)有限公司 B7h3抗体及包含其的双功能抗体
WO2024027771A1 (zh) * 2022-08-03 2024-02-08 南京维立志博生物科技有限公司 靶向FAP和TGFβ的抗体融合蛋白及其用途

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2010523478A (ja) * 2007-03-22 2010-07-15 スローン − ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ モノクローナル抗体８ｈ９の使用
US8648176B2 (en) 2009-02-27 2014-02-11 Massachusetts Institute Of Technology Engineered proteins with high affinity for DOTA chelates
US9150656B2 (en) * 2010-03-04 2015-10-06 Macrogenics, Inc. Antibodies reactive with B7-H3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
BR112017003582B1 (pt) 2014-08-27 2024-01-09 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Agente de anticorpo, uso do mesmo, composição farmacêutica e receptor de antígeno quimérico
WO2016130539A2 (en) 2015-02-09 2016-08-18 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Multi-specific antibodies with affinity for human a33 antigen and dota metal complex and uses thereof
WO2018204873A1 (en) 2017-05-05 2018-11-08 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Modular self assembly disassembly (sada) technologies

Also Published As

Publication number Publication date
BR112022024211A8 (pt) 2023-02-23
WO2021244721A1 (en) 2021-12-09
BR112022024211A2 (pt) 2023-01-31
CA3178510A1 (en) 2021-12-09
CN115768522A (zh) 2023-03-07
KR20230024326A (ko) 2023-02-20
JP2023528344A (ja) 2023-07-04
AU2021284808A1 (en) 2022-12-15
US20230312721A1 (en) 2023-10-05
EP4161649A1 (en) 2023-04-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6925264B2 (ja) 抗体、組成物および使用
US20230312721A1 (en) Anti-B7H3 Antibodies for the Treatment of Cancer
CN102209556B (zh) 改良的抗cd19抗体
TW201909926A (zh) Ｂ７ｈ３抗體－藥物偶聯物及其醫藥用途
KR20180050321A (ko) 분자를 표적화하기 위한 항원 결합 구조체
JP2007528209A (ja) 抗ｃｄ１９抗体
JP2018505681A (ja) ヒトａ３３抗原とｄｏｔａ金属複合体に親和性を有する多重特異性抗体及びその使用
JP7433236B2 (ja) 抗葉酸受容体１抗体及びその使用
EP4335456A1 (en) Binding molecule against dll3 and use thereof
US20230312742A1 (en) CD38 antibodies for the treatment of human diseases
EA046422B1 (ru) Антитела против рецептора фолата 1 и их применения