TW202208402A - Mybpc3多肽及其用途 - Google Patents

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呂福建
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Abstract

本文提供了用於治療與異常RYR2功能相關聯之病症(例如，心律不整或心力衰竭)之組成物及方法。在一些實施例中，方法包括投與需要其之受試者有效量的包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C末端域之多肽或編碼此種多肽之核酸或rAAV。

Description

MYBPC3多肽及其用途
相關申請案之交互參照
本申請案依專利法主張2020年7月8日提交之美國臨時申請案第63/049,398號之權益，該臨時申請案以全文引用之方式併入本文中。 政府支援
本發明係在政府支持的情況下、根據美國國家衛生研究院(National Institutes of Health)授予之資助號R01HL146634與UG3HL141798進行。美國政府在本發明中享有某些權利。 經由EFS網作為文本文件提交的序列表之引用
本申請案含有已經由EFS網以ASCII格式提交且據此以全文引用之方式併入本文中之序列表。2021年7月6日創建之該ASCII複本經命名為C123370191WO00-SEQ-RE且大小為257,367位元組。
本揭露係關於MYBPC3多肽及其用途。
許多形式的心髒病及心律不整係由心肌細胞中Ca2+ 釋放之不當調節直接或間接引起的。心肌細胞中Ca2+ 釋放發生在稱為二分體之特殊結構中。Ca2+ 釋放之關鍵調節因子係RYR2 (2型蘭尼鹼受體(ryanodine receptor type 2))，此係一種Ca2+ 通道，Ca2+ 穿過該通道自肌質網釋放至細胞質中。異常Ca2+ 釋放導致的心律不整之一個例子係CPVT (兒茶酚胺能多形性心室性心搏過速(Catecholaminergic Polymorphic Ventricular Tachycardia))，此係一種惡性遺傳性心律不整，其中患者在運動時有發生致命性心律不整之風險。CPVT具有1:10000的估計患病率，並導致約15%的年輕人中不明原因的突然死亡之屍檢陰性病例。60%的CPVT病例係由RYR2之突變引起的。在RYR2中，在編碼序列之4個「熱點」區域內聚類的超過160種不同突變導致CPVT。目前CPVT不能藉由可用選擇充分治療，並且患者繼續遭受猝死或流產猝死以及當前療法引起的發病率。其他形式的心律不整，諸如心房震顫，涉及RYR2釋放Ca2+的異常調節。RYR2之異常Ca2+ 釋放亦可導致遺傳性及獲得性形式的心力衰竭之收縮功能障礙。
本揭露至少部分基於在內源性心臟蛋白MYBPC3之C-末端與RYR2之間的相互作用之驚人發現，並且此相互作用域之過度表現抑制異常RYR2活性並減輕心律不整。在一些態樣中，本揭露提供了用於治療與異常RYR2功能相關聯之病症(例如，遺傳性或獲得性心律不整或心力衰竭)之組成物及方法。在一些實施例中，使用本文所述之方法治療的受試者係心律不整受試者，其對現有醫療管理的反應係次最佳化的。
本揭露之一些態樣提供治療與異常2型蘭尼鹼受體(RYR2)功能相關聯之病症之方法。在一些實施例中，該方法包括投與需要其之受試者有效量的包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (Cardiac Myosin binding protein C，MYBPC3)之C末端域之多肽。在一些實施例中，該方法包括投與需要其之受試者有效量的核酸，該核酸包含編碼心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C末端域之多肽之核苷酸序列。
在一些實施例中，異常RYR2功能係由RYR2之一個或多個突變引起的。在一些實施例中，RYR2之突變導致受試者之心肌細胞中過度的舒張Ca2+ 釋放。
在一些實施例中，多肽包含與SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者至少80%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，多肽包含SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者之胺基酸序列。
在一些實施例中，核苷酸序列可操作地連接於啟動子。在一些實施例中，核酸為載體。在一些實施例中，載體為表現載體。在一些實施例中，表現載體為病毒載體。在一些實施例中，病毒載體係選自慢病毒載體、逆轉錄病毒載體或重組腺相關病毒(recombinant adeno-associated virus，rAAV)載體。
在一些實施例中，病毒載體為rAAV載體，該rAAV載體還包含位於編碼多肽的核苷酸序列及啟動子側翼之兩個AAV反向末端重複(inverted terminal repeats，ITR)。在一些實施例中，其中rAAV載體被包裝在rAAV粒子中。在一些實施例中，rAAV粒子還包含殼體蛋白。在一些實施例中，殼體蛋白屬於選自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV.rh8、AAV.rh10、AAV.rh39、AAV.43、AAV2/2-66、AAV2/2-84及AAV2/2-125或其變異體之血清型。在一些實施例中，殼體蛋白屬於血清型AAV9。在一些實施例中，rAAV為自互補AAV (self- complementary AAV，scAAV)。在一些實施例中，編碼多肽之核苷酸序列係密碼子優化的。在一些實施例中，核酸為信使RNA (messenger RNA，mRNA)。在一些實施例中，mRNA為經修飾mRNA。
在一些實施例中，將多肽或核酸遞送於受試者之心肌細胞。
在一些實施例中，病症為心律不整。在一些實施例中，心律不整為遺傳性的或獲得性的。在一些實施例中，遺傳性心律不整為兒茶酚胺能多形性心室性心搏過速(CPVT)。在一些實施例中，獲得性心律不整為室性心律不整或室上性心律不整。在一些實施例中，室性心律不整為心室性心搏過速、心室性震顫或心室性早期收縮。在一些實施例中，室上性心律不整為心房震顫、心房撲動、心房心搏過速、心房早期收縮或陣發性室上性心搏過速。在一些實施例中，病症為心力衰竭。
在一些實施例中，投與多肽或核酸降低受試者之心肌細胞中過度的舒張Ca2+ 釋放。
在一些實施例中，受試者為人類。在一些實施例中，投與係經由注射。
本揭露的一些態樣提供治療心律不整之方法，該方法包括投與需要其之受試者有效量的重組腺相關病毒(rAAV)，其中rAAV包含血清型AAV9之殼體蛋白及編碼包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C末端域之多肽之核苷酸序列。
本揭露的其他態樣提供了重組腺相關病毒(rAAV)，該重組腺相關病毒包含殼體蛋白及編碼包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C-末端域之多肽之核苷酸序列。
在一些實施例中，多肽包含SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者之胺基酸序列。
本文進一步提供了本文所述之rAAV在治療與異常2型蘭尼鹼受體(RYR2)功能相關聯之病症中之用途。在一些實施例中，病症為心律不整。在一些實施例中，心律不整為遺傳性的或獲得性的。在一些實施例中，遺傳性心律不整為兒茶酚胺能多形性心室性心搏過速(CPVT)。在一些實施例中，獲得性心律不整為室性心律不整或室上性心律不整。在一些實施例中，室性心律不整為心室性心搏過速、心室性震顫或心室性早期收縮。在一些實施例中，室上性心律不整為心房震顫、心房撲動、心房心搏過速、心房早期收縮或陣發性室上性心搏過速。在一些實施例中，病症為心力衰竭。
上文發明內容旨在以非限制性方式說明本文揭示之技術之一些實施例、優點、特徵及用途。本文揭示之技術之其他實施例、優點、特徵及用途將自實施方式、圖式、例子及申請專利範圍中顯而易見。
CPVT (兒茶酚胺能多形性心室性心搏過速)係一種惡性遺傳性心律不整，其中患者在運動時有發生致命性心律不整之風險。CPVT係由心肌細胞Ca2+ 處理基因之突變引起的。超過60%的病例係由基因RYR2 (2型蘭尼鹼受體)之突變引起的，該基因編碼主要的細胞內Ca2+ 釋放通道。吾人已發現一種在內源性心肌蛋白之C末端與RYR2 之間之新相互作用。此相互作用域之過度表現抑制異常RYR2 活性，此心律不整係CPVT中之根本原因。此過度表現策略使人類iPSC衍生心肌細胞中之Ca2+ 處理正常化，且抑制CPVT之小鼠模型中之心律不整。重要地，RYR2之功能障礙係多種心律不整之最終共同途徑。吾人對CPVT之發現可用作概念驗證。吾人相信吾人的治療概念可能適用於其他遺傳性及獲得性心律不整。
在一些態樣中，本揭露提供了用於與異常RYR2功能相關聯之病症之組成物及方法(例如，基因療法或蛋白質療法)。本文證明包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C末端域之多肽或編碼此類多肽之核酸可有效治療心律不整。在一些實施例中，本文所述之組成物及方法可用於治療遺傳性或獲得性心律不整或心力衰竭，包括動脈震顫。
因此，本揭露之一些態樣提供治療心律不整之方法。在一些實施例中，該方法包括投與需要其之受試者有效量的包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C末端域之多肽。在一些實施例中，該方法包括投與需要其之受試者有效量的核酸，該核酸包含編碼MYBPC3之C末端域之多肽之核苷酸序列。
「心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)」存在於心肌細胞中。在此等細胞中，已知MYBPC3與稱為肌節之結構相關聯，肌節係肌肉收縮之基本單元。肌節由粗細長纖維組成。本文驚人地發現，MYBPC3蛋白之C末端域片段定位於肌節中之二分體，RYR2蛋白定位於該二分體中，而全長MYBPC3定位於肌節之不同部分。人類MYBPC3蛋白質序列以GenBank登錄號NP_000247提供。小鼠MYBPC3蛋白質序列以GenBank登錄號NP_032679.2提供。MYBPC3之域結構描述於Sadayappan等人(Biophys Rev. 2012年6月; 4(2): 93-106，其以引用之方式併入本文中)中，並且亦在第2A圖中繪示。
在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含MYBPC3之C末端域(例如，如第2A圖所展示之C7-C8域)。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含MYBPC3之C7及C8域。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽由MYBPC3之C7及C8域組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含MYBPC3之C7域。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽由MYBPC3之C7域組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含MYBPC3之C8域。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽由MYBPC3之C8域組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含MYBPC3之C6、C7、C8、C9及C10域。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含MYBPC3之C6、C7、C8及C9域。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含MYBPC3之C6、C7及C8域。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含MYBPC3之C6及C7域。在一些實施例中，在所述方法中使用之多肽包含全長MYBPC3。可用於本文所述之方法中之多肽之胺基酸序列或編碼此類多肽之核苷酸序列之例子提供於表1中。
在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含全長小鼠MYBPC3 SEQ ID NO: 1，基本上由全長小鼠MYBPC3 SEQ ID NO: 1組成，或由全長小鼠MYBPC3 SEQ ID NO: 1組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 2)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 2)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 2)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 3)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 3)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 3)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 4)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 4)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 4)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 5)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 5)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 5)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 6)，基本上由小鼠MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 6)組成，或由小鼠MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 6)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C9-C10 (SEQ ID NO: 7)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 7)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 7)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 8)，基本上由小鼠MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 8)組成，或由小鼠MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 8)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 59)，基本上由小鼠MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 59)組成，或由小鼠MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 59)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 60)，基本上由小鼠MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 60)組成，或由小鼠MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 60)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 61)，基本上由小鼠MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 61)組成，或由小鼠MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 61)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 62)，基本上由小鼠MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 62)組成，或由小鼠MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 62)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 63)，基本上由小鼠MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 63)組成，或由小鼠MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 63)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含小鼠MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 64)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 64)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 64)組成。
在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含全長人類MYBPC3 SEQ ID NO: 9，基本上由全長人MYBPC3 SEQ ID NO: 9組成，或由全長人類MYBPC3 SEQ ID NO: 9組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 10)，基本上由人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 10)組成，或由人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 10)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 11)，基本上由人類MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 11)組成，或由人類MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 11)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 12)，基本上由人類MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 12)組成，或由人類MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 12)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 13)，基本上由人類MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 13)組成，或由人類MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 13)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 14)，基本上由人類MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 14)組成，或由人類MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 14)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C9-C10 (SEQ ID NO: 15)，基本上由人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 15)組成，或由人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 15)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 16)，基本上由人類MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 16)組成，或由人類MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 16)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 53)，基本上由人類MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 53)組成，或由人類MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 53)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 54)，基本上由人類MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 54)組成，或由人類MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 54)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 55)，基本上由人類MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 55)組成，或由人類MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 55)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 56)，基本上由人類MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 56)組成，或由人類MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 56)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 57)，基本上由人類MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 57)組成，或由人類MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 57)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含人類MYPBC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 58)，基本上由人類MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 58)組成，或由人類MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 58)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含全長小鼠MYBPC3 (SEQ ID NO: 17)，基本上由全長小鼠MYBPC3 (SEQ ID NO: 17)組成，或由全長小鼠MYBPC3 (SEQ ID NO: 17)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 18)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 18)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 18)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 19)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 19)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 19)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 20)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 20)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 20)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 21)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 21)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 21)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 22)，基本上由小鼠MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 22)組成，或由小鼠MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 22)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C9-C10 (SEQ ID NO: 23)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 23)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 23)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 24)，基本上由小鼠MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 24)組成，或由小鼠MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 24)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 71)，基本上由小鼠MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 71)組成，或由小鼠MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 71)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 72)，基本上由小鼠MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 72)組成，或由小鼠MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 72)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 73)，基本上由小鼠MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 73)組成，或由小鼠MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 73)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 74)，基本上由小鼠MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 74)組成，或由小鼠MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 74)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 75)，基本上由小鼠MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 75)組成，或由小鼠MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 75)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含小鼠MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 76)，基本上由小鼠MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 76)組成，或由小鼠MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 76)組成。
在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含全長人類MYBPC3 (SEQ ID NO: 25)，基本上由全長人類MYBPC3 (SEQ ID NO: 25)組成，或由全長人類MYBPC3 (SEQ ID NO: 25)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 26)，基本上由人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 26)組成，或由人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 26)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 27)，基本上由人類MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 27)組成，或由人類MYBPC3 C6-C8 (SEQ ID NO: 27)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 28)，基本上由人類MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 28)組成，或由人類MYBPC3 C6-C9 (SEQ ID NO: 28)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 29)，基本上由人類MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 29)組成，或由人類MYBPC3 C6-C10 (SEQ ID NO: 29)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 30)，基本上由人類MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 30)組成，或由人類MYBPC3 C8-C10 (SEQ ID NO: 30)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C9-C10 (SEQ ID NO: 31)，基本上由人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 31)組成，或由人類MYBPC3 C6-C7 (SEQ ID NO: 31)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 32)，基本上由人類MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 32)組成，或由人類MYBPC3 C10 (SEQ ID NO: 32)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 65)，基本上由人類MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 65)組成，或由人類MYBPC3 C7-C8 (SEQ ID NO: 65)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 66)，基本上由人類MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 66)組成，或由人類MYBPC3 C7 (SEQ ID NO: 66)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 67)，基本上由人類MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 67)組成，或由人類MYBPC3 C8 (SEQ ID NO: 67)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 68)，基本上由人類MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 68)組成，或由人類MYBPC3 C7-C10 (SEQ ID NO: 68)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 69)，基本上由人類MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 69)組成，或由人類MYBPC3 C6、C8-C10 (SEQ ID NO: 69)組成。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多核苷酸包含人類MYPBC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 70)，基本上由人類MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 70)組成，或由人類MYBPC3 C6-C7、C9-C10 (SEQ ID NO: 70)組成。 表1.MYBPC3多肽
多肽 胺基酸序列： DNA序列
小鼠全長MYBPC3 PGVTVLKMPEPGKKPVSAFNKKPRSAEVTAGSAAVFEAETERSGVKVRWQRDGSDITANDKYGLAAEGKRHTLTVRDASPDDQGSYAVIAGSSKVKFDLKVTEPAPPEKAESEVAPGAPKEVPAPATELEESVSSPEGSVSVTQDGSAAEHQGAPDDPIGLFLMRPQDGEVTVGGSIVFSARVAGASLLKPPVVKWFKGKWVDLSSKVGQHLQLHDSYDRASKVYLFELHITDAQTTSAGGYRCEVSTKDKFDSCNFNLTVHEAIGSGDLDLRSAFRRTSLAGAGRRTSDSHEDAGTLDFSSLLKKRDSFRRDSKLEAPAEEDVWEILRQAPPSEYERIAFQHGVTDLRGMLKRLKGMKQDEKKSTAFQKKLEPAYQVNKGHKIRLTVELADPDAEVKWLKNGQEIQMSGSKYIFESVGAKRTLTISQCSLADDAAYQCVVGGEKCSTELFVKEPPVLITRSLEDQLVMVGQRVEFECEVSEEGAQVKWLKDGVELTREETFKYRFKKDGRKHHLIINEATLEDAGHYAVRTSGGQSLAELIVQEKKLEVYQSIADLAVGAKDQAVFKCEVSDENVRGVWLKNGKELVPDNRIKVSHIGRVHKLTIDDVTPADEADYSFVPEGFACNLSAKLHFMEVKIDFVPRQEPPKIHLDCPGSTPDTIVVVAGNKLRLDVPISGDPAPTVVWQKTVTQGKKASTGPHPDAPEDAGADEEWVFDKKLLCETEGRVRVETTKDRSVFTVEGAEKEDEGVYTVTVKNPVGEDQVNLTVKVIDVPDAPAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPVLGYILERKKKKSYRWMRLNFDLLRELSHEARRMIEGVAYEMRVYAVNAVGMSRPSPASQPFMPIGPPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDKPSPPQDIRIVETWGFNVALEWKPPQDDGNTEIWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVSELIIGNGYYFRVFSHNMVGSSDKAAATKEPVFIPRPGITYEPPKYKALDFSEAPSFTQPLANRSIIAGYNAILCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFCKQGVLTLEIRKPCPYDGGVYVCRATNLQGEAQCECRLEVRVPQ (SEQIDNO:1) CCTGGTGTGACTGTTCTCAAGATGCCGGAGCCAGGGAAGAAACCAGTGTCAGCCTTCAACAAGAAGCCAAGGTCAGCGGAGGTGACCGCTGGCAGTGCTGCCGTGTTCGAGGCTGAGACGGAGCGGTCAGGCGTGAAGGTGCGGTGGCAGCGGGATGGCAGCGACATCACCGCCAATGACAAGTATGGTTTGGCAGCAGAGGGCAAGCGACACACACTGACAGTGCGGGATGCGAGCCCTGATGACCAGGGTTCCTACGCGGTCATTGCAGGCTCCTCAAAGGTCAAGTTTGACCTCAAGGTCACAGAGCCAGCCCCTCCAGAGAAGGCAGAATCTGAAGTTGCTCCAGGAGCCCCCAAAGAAGTCCCTGCTCCAGCCACTGAGTTGGAAGAAAGTGTCTCAAGTCCTGAAGGGTCAGTCTCGGTAACCCAGGATGGCTCAGCTGCAGAGCATCAGGGAGCCCCTGATGACCCTATTGGCCTCTTTCTGATGCGACCACAGGATGGTGAGGTGACCGTGGGCGGCAGCATTGTCTTCTCAGCCCGAGTGGCTGGGGCCAGCCTCCTGAAACCGCCTGTGGTCAAGTGGTTCAAGGGCAAGTGGGTGGACCTGAGCAGCAAAGTGGGCCAGCACCTGCAGCTGCATGACAGCTATGACAGAGCCAGCAAGGTCTACTTGTTTGAGTTGCACATCACAGATGCTCAGACCACTTCTGCTGGGGGCTACCGCTGTGAGGTGTCTACCAAGGACAAATTTGACAGCTGTAACTTCAACCTCACTGTCCATGAGGCCATTGGTTCTGGAGACCTGGACCTCAGATCAGCTTTCCGACGCACGAGCCTGGCGGGAGCAGGTCGGAGAACCAGTGACAGCCATGAAGATGCTGGGACTCTGGACTTTAGTTCCCTGCTGAAGAAGAGAGACAGTTTCCGGAGGGACTCAAAGCTGGAGGCACCTGCTGAAGAAGACGTGTGGGAGATCCTGAGACAGGCACCGCCGTCAGAATATGAGCGCATCGCCTTCCAGCACGGAGTCACAGACCTTCGAGGCATGCTGAAGAGGCTCAAGGGCATGAAGCAGGATGAAAAGAAGAGCACAGCCTTTCAGAAGAAGCTGGAGCCTGCCTACCAGGTAAACAAGGGCCACAAGATTCGGCTTACTGTGGAACTGGCTGATCCGGACGCCGAAGTCAAGTGGCTTAAGAATGGACAGGAGATCCAGATGAGTGGCAGCAAGTACATCTTCGAGTCCGTCGGTGCCAAGCGCACCCTGACCATCAGCCAGTGCTCACTGGCTGACGACGCAGCCTACCAGTGTGTGGTGGGGGGCGAGAAGTGCAGCACGGAGCTCTTTGTCAAAGAGCCCCCGGTGCTGATCACTCGGTCCCTGGAAGACCAGCTGGTGATGGTGGGTCAGCGGGTGGAGTTTGAGTGTGAGGTCTCAGAAGAAGGGGCCCAAGTCAAATGGCTGAAGGATGGGGTTGAGCTGACACGTGAGGAGACCTTCAAATACCGGTTCAAGAAAGATGGGCGGAAACACCACTTGATCATCAATGAAGCAACCCTGGAGGATGCAGGACACTATGCAGTACGCACAAGTGGAGGCCAGTCACTGGCTGAGCTCATTGTGCAAGAGAAGAAGTTGGAGGTATACCAAAGCATCGCGGACCTGGCAGTGGGAGCCAAGGACCAGGCTGTGTTTAAGTGTGAGGTTTCAGATGAGAATGTACGCGGCGTGTGGCTGAAGAATGGGAAGGAACTGGTGCCTGACAACCGCATAAAGGTGTCCCATATAGGCCGGGTCCACAAACTGACCATTGACGATGTCACACCTGCTGATGAGGCTGACTACAGCTTTGTCCCTGAAGGGTTTGCCTGCAACCTGTCTGCCAAGCTCCACTTCATGGAGGTCAAGATTGACTTTGTGCCTAGGCAGGAACCTCCCAAGATCCACTTGGATTGTCCCGGCAGCACACCAGACACCATTGTGGTTGTTGCTGGGAACAAGTTACGCCTGGATGTCCCTATTTCTGGAGACCCTGCTCCCACTGTGGTCTGGCAGAAGACTGTAACACAGGGGAAGAAGGCCTCAACTGGGCCACACCCTGATGCCCCAGAAGATGCTGGTGCTGATGAGGAGTGGGTGTTTGATAAGAAGCTGTTGTGTGAGACTGAGGGCCGGGTCCGGGTGGAGACCACCAAAGACCGCAGCGTCTTTACAGTCGAAGGGGCAGAGAAGGAAGATGAAGGTGTCTACACAGTCACAGTAAAGAACCCCGTGGGCGAGGACCAGGTCAACCTCACAGTCAAGGTCATCGATGTCCCAGATGCTCCTGCGGCCCCTAAGATCAGCAACGTGGGCGAGGACTCCTGCACTGTGCAGTGGGAACCGCCTGCCTATGATGGCGGGCAGCCGGTCCTGGGATACATCCTGGAGCGCAAGAAGAAAAAGAGCTACAGGTGGATGAGGCTCAACTTTGATCTGCTGCGGGAGCTGAGCCACGAGGCGAGGCGCATGATCGAGGGTGTAGCCTATGAGATGCGAGTCTACGCAGTCAATGCCGTGGGAATGTCCAGGCCCAGCCCTGCCTCTCAGCCCTTCATGCCTATTGGGCCCCCTGGCGAACCAACCCACTTGGCTGTGGAGGATGTGTCAGACACCACTGTCTCACTCAAGTGGCGGCCCCCAGAGCGCGTGGGGGCCGGTGGCCTGGACGGATACAGCGTGGAGTACTGCCAGGAGGGATGCTCCGAGTGGACACCTGCTCTGCAGGGGCTGACAGAGCGCACATCGATGCTGGTGAAGGACCTACCCACTGGGGCACGGCTGCTGTTCCGAGTACGGGCACACAATGTGGCAGGTCCTGGAGGCCCTATCGTCACCAAGGAGCCTGTGACAGTGCAGGAGATACTGCAACGACCACGGCTCCAACTGCCCAGACACCTGCGCCAGACCATCCAGAAGAAAGTTGGGGAGCCTGTGAACCTCCTCATCCCTTTCCAGGGCAAACCCCGGCCTCAGGTGACCTGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCTGGCAGGTGAGGAGGTGAGCATCCGGAACAGCCCCACAGACACGATCTTGTTCATCCGAGCTGCCCGCCGCACCCACTCGGGCACCTACCAGGTGACAGTTCGCATTGAGAACATGGAGGACAAGGCAACGCTGATCCTGCAGATTGTGGACAAGCCAAGTCCTCCCCAGGATATCCGGATCGTTGAGACTTGGGGTTTCAATGTGGCTCTGGAGTGGAAGCCACCCCAAGATGATGGCAATACAGAGATCTGGGGTTATACTGTACAGAAAGCTGACAAGAAGACCATGGAGTGGTTCACGGTTTTGGAACACTACCGACGCACTCACTGTGTGGTATCAGAGCTTATCATTGGCAATGGCTACTACTTCCGGGTCTTCAGCCATAACATGGTGGGTTCCAGTGACAAAGCTGCCGCCACCAAGGAGCCAGTCTTTATTCCAAGACCAGGCATCACATATGAGCCACCCAAATACAAGGCCCTGGACTTCTCTGAGGCCCCAAGCTTCACCCAGCCCTTGGCAAATCGCTCCATCATTGCAGGCTATAATGCCATCCTCTGCTGTGCTGTCCGAGGTAGTCCTAAGCCCAAGATTTCCTGGTTCAAGAATGGCCTGGATCTGGGAGAAGATGCTCGCTTCCGCATGTTCTGCAAGCAGGGAGTATTGACCCTGGAGATCAGGAAACCCTGCCCCTATGATGGTGGTGTCTATGTCTGCAGGGCCACCAACTTGCAGGGCGAGGCACAGTGTGAGTGCCGCCTGGAGGTGCGAGTTCCTCAG(SEQIDNO:17)
小鼠 MYBPC3 C6-C7 APAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPVLGYILERKKKKSYRWMRLNFDLLRELSHEARRMIEGVAYEMRVYAVNAVGMSRPSPASQPFMPIGPPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEI(SEQIDNO:2) GCTCCTGCGGCCCCTAAGATCAGCAACGTGGGCGAGGACTCCTGCACTGTGCAGTGGGAACCGCCTGCCTATGATGGCGGGCAGCCGGTCCTGGGATACATCCTGGAGCGCAAGAAGAAAAAGAGCTACAGGTGGATGAGGCTCAACTTTGATCTGCTGCGGGAGCTGAGCCACGAGGCGAGGCGCATGATCGAGGGTGTAGCCTATGAGATGCGAGTCTACGCAGTCAATGCCGTGGGAATGTCCAGGCCCAGCCCTGCCTCTCAGCCCTTCATGCCTATTGGGCCCCCTGGCGAACCAACCCACTTGGCTGTGGAGGATGTGTCAGACACCACTGTCTCACTCAAGTGGCGGCCCCCAGAGCGCGTGGGGGCCGGTGGCCTGGACGGATACAGCGTGGAGTACTGCCAGGAGGGATGCTCCGAGTGGACACCTGCTCTGCAGGGGCTGACAGAGCGCACATCGATGCTGGTGAAGGACCTACCCACTGGGGCACGGCTGCTGTTCCGAGTACGGGCACACAATGTGGCAGGTCCTGGAGGCCCTATCGTCACCAAGGAGCCTGTGACAGTGCAGGAGATA(SEQIDNO:18)
小鼠 MYBPC3 C6-C8 APAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPVLGYILERKKKKSYRWMRLNFDLLRELSHEARRMIEGVAYEMRVYAVNAVGMSRPSPASQPFMPIGPPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDK (SEQIDNO:3) GCTCCTGCGGCCCCTAAGATCAGCAACGTGGGCGAGGACTCCTGCACTGTGCAGTGGGAACCGCCTGCCTATGATGGCGGGCAGCCGGTCCTGGGATACATCCTGGAGCGCAAGAAGAAAAAGAGCTACAGGTGGATGAGGCTCAACTTTGATCTGCTGCGGGAGCTGAGCCACGAGGCGAGGCGCATGATCGAGGGTGTAGCCTATGAGATGCGAGTCTACGCAGTCAATGCCGTGGGAATGTCCAGGCCCAGCCCTGCCTCTCAGCCCTTCATGCCTATTGGGCCCCCTGGCGAACCAACCCACTTGGCTGTGGAGGATGTGTCAGACACCACTGTCTCACTCAAGTGGCGGCCCCCAGAGCGCGTGGGGGCCGGTGGCCTGGACGGATACAGCGTGGAGTACTGCCAGGAGGGATGCTCCGAGTGGACACCTGCTCTGCAGGGGCTGACAGAGCGCACATCGATGCTGGTGAAGGACCTACCCACTGGGGCACGGCTGCTGTTCCGAGTACGGGCACACAATGTGGCAGGTCCTGGAGGCCCTATCGTCACCAAGGAGCCTGTGACAGTGCAGGAGATACTGCAACGACCACGGCTCCAACTGCCCAGACACCTGCGCCAGACCATCCAGAAGAAAGTTGGGGAGCCTGTGAACCTCCTCATCCCTTTCCAGGGCAAACCCCGGCCTCAGGTGACCTGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCTGGCAGGTGAGGAGGTGAGCATCCGGAACAGCCCCACAGACACGATCTTGTTCATCCGAGCTGCCCGCCGCACCCACTCGGGCACCTACCAGGTGACAGTTCGCATTGAGAACATGGAGGACAAGGCAACGCTGATCCTGCAGATTGTGGACAAG(SEQIDNO:19)
小鼠 MYBPC3 C6-C9 APAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPVLGYILERKKKKSYRWMRLNFDLLRELSHEARRMIEGVAYEMRVYAVNAVGMSRPSPASQPFMPIGPPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDKPSPPQDIRIVETWGFNVALEWKPPQDDGNTEIWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVSELIIGNGYYFRVFSHNMVGSSDKAAATKEPVFIPRP (SEQIDNO:4) GCTCCTGCGGCCCCTAAGATCAGCAACGTGGGCGAGGACTCCTGCACTGTGCAGTGGGAACCGCCTGCCTATGATGGCGGGCAGCCGGTCCTGGGATACATCCTGGAGCGCAAGAAGAAAAAGAGCTACAGGTGGATGAGGCTCAACTTTGATCTGCTGCGGGAGCTGAGCCACGAGGCGAGGCGCATGATCGAGGGTGTAGCCTATGAGATGCGAGTCTACGCAGTCAATGCCGTGGGAATGTCCAGGCCCAGCCCTGCCTCTCAGCCCTTCATGCCTATTGGGCCCCCTGGCGAACCAACCCACTTGGCTGTGGAGGATGTGTCAGACACCACTGTCTCACTCAAGTGGCGGCCCCCAGAGCGCGTGGGGGCCGGTGGCCTGGACGGATACAGCGTGGAGTACTGCCAGGAGGGATGCTCCGAGTGGACACCTGCTCTGCAGGGGCTGACAGAGCGCACATCGATGCTGGTGAAGGACCTACCCACTGGGGCACGGCTGCTGTTCCGAGTACGGGCACACAATGTGGCAGGTCCTGGAGGCCCTATCGTCACCAAGGAGCCTGTGACAGTGCAGGAGATACTGCAACGACCACGGCTCCAACTGCCCAGACACCTGCGCCAGACCATCCAGAAGAAAGTTGGGGAGCCTGTGAACCTCCTCATCCCTTTCCAGGGCAAACCCCGGCCTCAGGTGACCTGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCTGGCAGGTGAGGAGGTGAGCATCCGGAACAGCCCCACAGACACGATCTTGTTCATCCGAGCTGCCCGCCGCACCCACTCGGGCACCTACCAGGTGACAGTTCGCATTGAGAACATGGAGGACAAGGCAACGCTGATCCTGCAGATTGTGGACAAGCCAAGTCCTCCCCAGGATATCCGGATCGTTGAGACTTGGGGTTTCAATGTGGCTCTGGAGTGGAAGCCACCCCAAGATGATGGCAATACAGAGATCTGGGGTTATACTGTACAGAAAGCTGACAAGAAGACCATGGAGTGGTTCACGGTTTTGGAACACTACCGACGCACTCACTGTGTGGTATCAGAGCTTATCATTGGCAATGGCTACTACTTCCGGGTCTTCAGCCATAACATGGTGGGTTCCAGTGACAAAGCTGCCGCCACCAAGGAGCCAGTCTTTATTCCAAGACCA(SEQIDNO:20)
小鼠 MYBPC3 C6-C10 APAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPVLGYILERKKKKSYRWMRLNFDLLRELSHEARRMIEGVAYEMRVYAVNAVGMSRPSPASQPFMPIGPPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDKPSPPQDIRIVETWGFNVALEWKPPQDDGNTEIWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVSELIIGNGYYFRVFSHNMVGSSDKAAATKEPVFIPRPGITYEPPKYKALDFSEAPSFTQPLANRSIIAGYNAILCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFCKQGVLTLEIRKPCPYDGGVYVCRATNLQGEAQCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:5) GCTCCTGCGGCCCCTAAGATCAGCAACGTGGGCGAGGACTCCTGCACTGTGCAGTGGGAACCGCCTGCCTATGATGGCGGGCAGCCGGTCCTGGGATACATCCTGGAGCGCAAGAAGAAAAAGAGCTACAGGTGGATGAGGCTCAACTTTGATCTGCTGCGGGAGCTGAGCCACGAGGCGAGGCGCATGATCGAGGGTGTAGCCTATGAGATGCGAGTCTACGCAGTCAATGCCGTGGGAATGTCCAGGCCCAGCCCTGCCTCTCAGCCCTTCATGCCTATTGGGCCCCCTGGCGAACCAACCCACTTGGCTGTGGAGGATGTGTCAGACACCACTGTCTCACTCAAGTGGCGGCCCCCAGAGCGCGTGGGGGCCGGTGGCCTGGACGGATACAGCGTGGAGTACTGCCAGGAGGGATGCTCCGAGTGGACACCTGCTCTGCAGGGGCTGACAGAGCGCACATCGATGCTGGTGAAGGACCTACCCACTGGGGCACGGCTGCTGTTCCGAGTACGGGCACACAATGTGGCAGGTCCTGGAGGCCCTATCGTCACCAAGGAGCCTGTGACAGTGCAGGAGATACTGCAACGACCACGGCTCCAACTGCCCAGACACCTGCGCCAGACCATCCAGAAGAAAGTTGGGGAGCCTGTGAACCTCCTCATCCCTTTCCAGGGCAAACCCCGGCCTCAGGTGACCTGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCTGGCAGGTGAGGAGGTGAGCATCCGGAACAGCCCCACAGACACGATCTTGTTCATCCGAGCTGCCCGCCGCACCCACTCGGGCACCTACCAGGTGACAGTTCGCATTGAGAACATGGAGGACAAGGCAACGCTGATCCTGCAGATTGTGGACAAGCCAAGTCCTCCCCAGGATATCCGGATCGTTGAGACTTGGGGTTTCAATGTGGCTCTGGAGTGGAAGCCACCCCAAGATGATGGCAATACAGAGATCTGGGGTTATACTGTACAGAAAGCTGACAAGAAGACCATGGAGTGGTTCACGGTTTTGGAACACTACCGACGCACTCACTGTGTGGTATCAGAGCTTATCATTGGCAATGGCTACTACTTCCGGGTCTTCAGCCATAACATGGTGGGTTCCAGTGACAAAGCTGCCGCCACCAAGGAGCCAGTCTTTATTCCAAGACCAGGCATCACATATGAGCCACCCAAATACAAGGCCCTGGACTTCTCTGAGGCCCCAAGCTTCACCCAGCCCTTGGCAAATCGCTCCATCATTGCAGGCTATAATGCCATCCTCTGCTGTGCTGTCCGAGGTAGTCCTAAGCCCAAGATTTCCTGGTTCAAGAATGGCCTGGATCTGGGAGAAGATGCTCGCTTCCGCATGTTCTGCAAGCAGGGAGTATTGACCCTGGAGATCAGGAAACCCTGCCCCTATGATGGTGGTGTCTATGTCTGCAGGGCCACCAACTTGCAGGGCGAGGCACAGTGTGAGTGCCGCCTGGAGGTGCGAGTTCCTCAG(SEQIDNO:21)
小鼠 MYBPC3 C8-C10 PRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDKPSPPQDIRIVETWGFNVALEWKPPQDDGNTEIWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVSELIIGNGYYFRVFSHNMVGSSDKAAATKEPVFIPRPGITYEPPKYKALDFSEAPSFTQPLANRSIIAGYNAILCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFCKQGVLTLEIRKPCPYDGGVYVCRATNLQGEAQCECRLEVRVPQ (SEQIDNO:6) CCACGGCTCCAACTGCCCAGACACCTGCGCCAGACCATCCAGAAGAAAGTTGGGGAGCCTGTGAACCTCCTCATCCCTTTCCAGGGCAAACCCCGGCCTCAGGTGACCTGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCTGGCAGGTGAGGAGGTGAGCATCCGGAACAGCCCCACAGACACGATCTTGTTCATCCGAGCTGCCCGCCGCACCCACTCGGGCACCTACCAGGTGACAGTTCGCATTGAGAACATGGAGGACAAGGCAACGCTGATCCTGCAGATTGTGGACAAGCCAAGTCCTCCCCAGGATATCCGGATCGTTGAGACTTGGGGTTTCAATGTGGCTCTGGAGTGGAAGCCACCCCAAGATGATGGCAATACAGAGATCTGGGGTTATACTGTACAGAAAGCTGACAAGAAGACCATGGAGTGGTTCACGGTTTTGGAACACTACCGACGCACTCACTGTGTGGTATCAGAGCTTATCATTGGCAATGGCTACTACTTCCGGGTCTTCAGCCATAACATGGTGGGTTCCAGTGACAAAGCTGCCGCCACCAAGGAGCCAGTCTTTATTCCAAGACCAGGCATCACATATGAGCCACCCAAATACAAGGCCCTGGACTTCTCTGAGGCCCCAAGCTTCACCCAGCCCTTGGCAAATCGCTCCATCATTGCAGGCTATAATGCCATCCTCTGCTGTGCTGTCCGAGGTAGTCCTAAGCCCAAGATTTCCTGGTTCAAGAATGGCCTGGATCTGGGAGAAGATGCTCGCTTCCGCATGTTCTGCAAGCAGGGAGTATTGACCCTGGAGATCAGGAAACCCTGCCCCTATGATGGTGGTGTCTATGTCTGCAGGGCCACCAACTTGCAGGGCGAGGCACAGTGTGAGTGCCGCCTGGAGGTGCGAGTTCCTCAG(SEQIDNO:22)
小鼠 MYBPC3 C9-C10 PPQDIRIVETWGFNVALEWKPPQDDGNTEIWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVSELIIGNGYYFRVFSHNMVGSSDKAAATKEPVFIPRPGITYEPPKYKALDFSEAPSFTQPLANRSIIAGYNAILCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFCKQGVLTLEIRKPCPYDGGVYVCRATNLQGEAQCECRLEVRVPQ (SEQIDNO:7) CCTCCCCAGGATATCCGGATCGTTGAGACTTGGGGTTTCAATGTGGCTCTGGAGTGGAAGCCACCCCAAGATGATGGCAATACAGAGATCTGGGGTTATACTGTACAGAAAGCTGACAAGAAGACCATGGAGTGGTTCACGGTTTTGGAACACTACCGACGCACTCACTGTGTGGTATCAGAGCTTATCATTGGCAATGGCTACTACTTCCGGGTCTTCAGCCATAACATGGTGGGTTCCAGTGACAAAGCTGCCGCCACCAAGGAGCCAGTCTTTATTCCAAGACCAGGCATCACATATGAGCCACCCAAATACAAGGCCCTGGACTTCTCTGAGGCCCCAAGCTTCACCCAGCCCTTGGCAAATCGCTCCATCATTGCAGGCTATAATGCCATCCTCTGCTGTGCTGTCCGAGGTAGTCCTAAGCCCAAGATTTCCTGGTTCAAGAATGGCCTGGATCTGGGAGAAGATGCTCGCTTCCGCATGTTCTGCAAGCAGGGAGTATTGACCCTGGAGATCAGGAAACCCTGCCCCTATGATGGTGGTGTCTATGTCTGCAGGGCCACCAACTTGCAGGGCGAGGCACAGTGTGAGTGCCGCCTGGAGGTGCGAGTTCCTCAG(SEQIDNO:23)
小鼠MYBPC3 C10 PSFTQPLANRSIIAGYNAILCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFCKQGVLTLEIRKPCPYDGGVYVCRATNLQGEAQCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:8) CCAAGCTTCACCCAGCCCTTGGCAAATCGCTCCATCATTGCAGGCTATAATGCCATCCTCTGCTGTGCTGTCCGAGGTAGTCCTAAGCCCAAGATTTCCTGGTTCAAGAATGGCCTGGATCTGGGAGAAGATGCTCGCTTCCGCATGTTCTGCAAGCAGGGAGTATTGACCCTGGAGATCAGGAAACCCTGCCCCTATGATGGTGGTGTCTATGTCTGCAGGGCCACCAACTTGCAGGGCGAGGCACAGTGTGAGTGCCGCCTGGAGGTGCGAGTTCCTCAG(SEQIDNO:24)
人類全長MYBPC3 PEPGKKPVSAFSKKPRSVEVAAGSPAVFEAETERAGVKVRWQRGGSDISASNKYGLATEGTRHTLTVREVGPADQGSYAVIAGSSKVKFDLKVIEAEKAEPMLAPAPAPAEATGAPGEAPAPAAELGESAPSPKGSSSAALNGPTPGAPDDPIGLFVMRPQDGEVTVGGSITFSARVAGASLLKPPVVKWFKGKWVDLSSKVGQHLQLHDSYDRASKVYLFELHITDAQPAFTGSYRCEVSTKDKFDCSNFNLTVHEAMGTGDLDLLSAFRRTSLAGGGRRISDSHEDTGILDFSSLLKKRDSFRTPRDSKLEAPAEEDVWEILRQAPPSEYERIAFQYGVTDLRGMLKRLKGMRRDEKKSTAFQKKLEPAYQVSKGHKIRLTVELADHDAEVKWLKNGQEIQMSGSKYIFESIGAKRTLTISQCSLADDAAYQCVVGGEKCSTELFVKEPPVLITRPLEDQLVMVGQRVEFECEVSEEGAQVKWLKDGVELTREETFKYRFKKDGQRHHLIINEAMLEDAGHYALCTSGGQALAELIVQEKKLEVYQSIADLMVGAKDQAVFKCEVSDENVRGVWLKNGKELVPDSRIKVSHIGRVHKLTIDDVTPADEADYSFVPEGFACNLSAKLHFMEVKIDFVPRQEPPKIHLDCPGRIPDTIVVVAGNKLRLDVPISGDPAPTVIWQKAITQGNKAPARPAPDAPEDTGDSDEWVFDKKLLCETEGRVRVETTKDRSIFTVEGAEKEDEGVYTVTVKNPVGEDQVNLTVKVIDVPDAPAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPILGYILERKKKKSYRWMRLNFDLIQELSHEARRMIEGVVYEMRVYAVNAIGMSRPSPASQPFMPIGPPSEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCPEGCSEWVAALQGLTEHTSILVKDLPTGARLLFRVRAHNMAGPGAPVTTTEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRVHSGTYQVTVRIENMEDKATLVLQVVDKPSPPQDLRVTDAWGLNVALEWKPPQDVGNTELWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVPELIIGNGYYFRVFSQNMVGFSDRAATTKEPVFIPRPGITYEPPNYKALDFSEAPSFTQPLVNRSVIAGYTAMLCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFSKQGVLTLEIRKPCPFDGGIYVCRATNLQGEARCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:9) 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人類 MYBPC3 C6-C7 APAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPILGYILERKKKKSYRWMRLNFDLIQELSHEARRMIEGVVYEMRVYAVNAIGMSRPSPASQPFMPIGPPSEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCPEGCSEWVAALQGLTEHTSILVKDLPTGARLLFRVRAHNMAGPGAPVTTTEPVTVQEI (SEQIDNO:10) GCACCTGCGGCCCCCAAGATCAGCAACGTGGGAGAGGACTCCTGCACAGTACAGTGGGAGCCGCCTGCCTACGATGGCGGGCAGCCCATCCTGGGCTACATCCTGGAGCGCAAGAAGAAGAAGAGCTACCGGTGGATGCGGCTGAACTTCGACCTGATTCAGGAGCTGAGTCATGAAGCGCGGCGCATGATCGAGGGCGTGGTGTACGAGATGCGCGTCTACGCGGTCAACGCCATCGGCATGTCCAGGCCCAGCCCTGCCTCCCAGCCCTTCATGCCTATCGGTCCCCCCAGCGAACCCACCCACCTGGCAGTAGAGGACGTCTCTGACACCACGGTCTCCCTCAAGTGGCGGCCCCCAGAGCGCGTGGGAGCAGGAGGCCTGGATGGCTACAGCGTGGAGTACTGCCCAGAGGGCTGCTCAGAGTGGGTGGCTGCCCTGCAGGGGCTGACAGAGCACACATCGATACTGGTGAAGGACCTGCCCACGGGGGCCCGGCTGCTTTTCCGAGTGCGGGCACACAATATGGCAGGGCCTGGAGCCCCTGTTACCACCACGGAGCCGGTGACAGTGCAGGAGATC(SEQIDNO:26)
人類 MYBPC3 C6-C8 APAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPILGYILERKKKKSYRWMRLNFDLIQELSHEARRMIEGVVYEMRVYAVNAIGMSRPSPASQPFMPIGPPSEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCPEGCSEWVAALQGLTEHTSILVKDLPTGARLLFRVRAHNMAGPGAPVTTTEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRVHSGTYQVTVRIENMEDKATLVLQVVDK(SEQIDNO:11) GCACCTGCGGCCCCCAAGATCAGCAACGTGGGAGAGGACTCCTGCACAGTACAGTGGGAGCCGCCTGCCTACGATGGCGGGCAGCCCATCCTGGGCTACATCCTGGAGCGCAAGAAGAAGAAGAGCTACCGGTGGATGCGGCTGAACTTCGACCTGATTCAGGAGCTGAGTCATGAAGCGCGGCGCATGATCGAGGGCGTGGTGTACGAGATGCGCGTCTACGCGGTCAACGCCATCGGCATGTCCAGGCCCAGCCCTGCCTCCCAGCCCTTCATGCCTATCGGTCCCCCCAGCGAACCCACCCACCTGGCAGTAGAGGACGTCTCTGACACCACGGTCTCCCTCAAGTGGCGGCCCCCAGAGCGCGTGGGAGCAGGAGGCCTGGATGGCTACAGCGTGGAGTACTGCCCAGAGGGCTGCTCAGAGTGGGTGGCTGCCCTGCAGGGGCTGACAGAGCACACATCGATACTGGTGAAGGACCTGCCCACGGGGGCCCGGCTGCTTTTCCGAGTGCGGGCACACAATATGGCAGGGCCTGGAGCCCCTGTTACCACCACGGAGCCGGTGACAGTGCAGGAGATCCTGCAACGGCCACGGCTTCAGCTGCCCAGGCACCTGCGCCAGACCATTCAGAAGAAGGTCGGGGAGCCTGTGAACCTTCTCATCCCTTTCCAGGGCAAGCCCCGGCCTCAGGTGACCTGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCTGGCAGGCGAGGAGGTGAGCATCCGCAACAGCCCCACAGACACCATCCTGTTCATCCGGGCCGCTCGCCGCGTGCATTCAGGCACTTACCAGGTGACGGTGCGCATTGAGAACATGGAGGACAAGGCCACGCTGGTGCTGCAGGTTGTTGACAAG (SEQIDNO:27)
人類 MYBPC3 C6-C9 APAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPILGYILERKKKKSYRWMRLNFDLIQELSHEARRMIEGVVYEMRVYAVNAIGMSRPSPASQPFMPIGPPSEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCPEGCSEWVAALQGLTEHTSILVKDLPTGARLLFRVRAHNMAGPGAPVTTTEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRVHSGTYQVTVRIENMEDKATLVLQVVDKPSPPQDLRVTDAWGLNVALEWKPPQDVGNTELWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVPELIIGNGYYFRVFSQNMVGFSDRAATTKEPVFIPRP(SEQIDNO:12) GCACCTGCGGCCCCCAAGATCAGCAACGTGGGAGAGGACTCCTGCACAGTACAGTGGGAGCCGCCTGCCTACGATGGCGGGCAGCCCATCCTGGGCTACATCCTGGAGCGCAAGAAGAAGAAGAGCTACCGGTGGATGCGGCTGAACTTCGACCTGATTCAGGAGCTGAGTCATGAAGCGCGGCGCATGATCGAGGGCGTGGTGTACGAGATGCGCGTCTACGCGGTCAACGCCATCGGCATGTCCAGGCCCAGCCCTGCCTCCCAGCCCTTCATGCCTATCGGTCCCCCCAGCGAACCCACCCACCTGGCAGTAGAGGACGTCTCTGACACCACGGTCTCCCTCAAGTGGCGGCCCCCAGAGCGCGTGGGAGCAGGAGGCCTGGATGGCTACAGCGTGGAGTACTGCCCAGAGGGCTGCTCAGAGTGGGTGGCTGCCCTGCAGGGGCTGACAGAGCACACATCGATACTGGTGAAGGACCTGCCCACGGGGGCCCGGCTGCTTTTCCGAGTGCGGGCACACAATATGGCAGGGCCTGGAGCCCCTGTTACCACCACGGAGCCGGTGACAGTGCAGGAGATCCTGCAACGGCCACGGCTTCAGCTGCCCAGGCACCTGCGCCAGACCATTCAGAAGAAGGTCGGGGAGCCTGTGAACCTTCTCATCCCTTTCCAGGGCAAGCCCCGGCCTCAGGTGACCTGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCTGGCAGGCGAGGAGGTGAGCATCCGCAACAGCCCCACAGACACCATCCTGTTCATCCGGGCCGCTCGCCGCGTGCATTCAGGCACTTACCAGGTGACGGTGCGCATTGAGAACATGGAGGACAAGGCCACGCTGGTGCTGCAGGTTGTTGACAAGCCAAGTCCTCCCCAGGATCTCCGGGTGACTGACGCCTGGGGTCTTAATGTGGCTCTGGAGTGGAAGCCACCCCAGGATGTCGGCAACACGGAGCTCTGGGGGTACACAGTGCAGAAAGCCGACAAGAAGACCATGGAGTGGTTCACCGTCTTGGAGCATTACCGCCGCACCCACTGCGTGGTGCCAGAGCTCATCATTGGCAATGGCTACTACTTCCGCGTCTTCAGCCAGAATATGGTTGGCTTTAGTGACAGAGCGGCCACCACCAAGGAGCCCGTCTTTATCCCCAGACCA (SEQIDNO:28)
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人類 MYBPC3 C8-C10 PRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRVHSGTYQVTVRIENMEDKATLVLQVVDKPSPPQDLRVTDAWGLNVALEWKPPQDVGNTELWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVPELIIGNGYYFRVFSQNMVGFSDRAATTKEPVFIPRPGITYEPPNYKALDFSEAPSFTQPLVNRSVIAGYTAMLCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFSKQGVLTLEIRKPCPFDGGIYVCRATNLQGEARCECRLEVRVPQ (SEQIDNO:14) CCACGGCTTCAGCTGCCCAGGCACCTGCGCCAGACCATTCAGAAGAAGGTCGGGGAGCCTGTGAACCTTCTCATCCCTTTCCAGGGCAAGCCCCGGCCTCAGGTGACCTGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCTGGCAGGCGAGGAGGTGAGCATCCGCAACAGCCCCACAGACACCATCCTGTTCATCCGGGCCGCTCGCCGCGTGCATTCAGGCACTTACCAGGTGACGGTGCGCATTGAGAACATGGAGGACAAGGCCACGCTGGTGCTGCAGGTTGTTGACAAGCCAAGTCCTCCCCAGGATCTCCGGGTGACTGACGCCTGGGGTCTTAATGTGGCTCTGGAGTGGAAGCCACCCCAGGATGTCGGCAACACGGAGCTCTGGGGGTACACAGTGCAGAAAGCCGACAAGAAGACCATGGAGTGGTTCACCGTCTTGGAGCATTACCGCCGCACCCACTGCGTGGTGCCAGAGCTCATCATTGGCAATGGCTACTACTTCCGCGTCTTCAGCCAGAATATGGTTGGCTTTAGTGACAGAGCGGCCACCACCAAGGAGCCCGTCTTTATCCCCAGACCAGGCATCACCTATGAGCCACCCAACTATAAGGCCCTGGACTTCTCCGAGGCCCCAAGCTTCACCCAGCCCCTGGTGAACCGCTCGGTCATCGCGGGCTACACTGCTATGCTCTGCTGTGCTGTCCGGGGTAGCCCCAAGCCCAAGATTTCCTGGTTCAAGAATGGCCTGGACCTGGGAGAAGACGCCCGCTTCCGCATGTTCAGCAAGCAGGGAGTGTTGACTCTGGAGATTAGAAAGCCCTGCCCCTTTGACGGGGGCATCTATGTCTGCAGGGCCACCAACTTACAGGGCGAGGCACGGTGTGAGTGCCGCCTGGAGGTGCGAGTGCCTCAG (SEQIDNO:30)
人類 MYBPC3 C9-C10 PPQDLRVTDAWGLNVALEWKPPQDVGNTELWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVPELIIGNGYYFRVFSQNMVGFSDRAATTKEPVFIPRPGITYEPPNYKALDFSEAPSFTQPLVNRSVIAGYTAMLCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFSKQGVLTLEIRKPCPFDGGIYVCRATNLQGEARCECRLEVRVPQ (SEQIDNO:15) CCTCCCCAGGATCTCCGGGTGACTGACGCCTGGGGTCTTAATGTGGCTCTGGAGTGGAAGCCACCCCAGGATGTCGGCAACACGGAGCTCTGGGGGTACACAGTGCAGAAAGCCGACAAGAAGACCATGGAGTGGTTCACCGTCTTGGAGCATTACCGCCGCACCCACTGCGTGGTGCCAGAGCTCATCATTGGCAATGGCTACTACTTCCGCGTCTTCAGCCAGAATATGGTTGGCTTTAGTGACAGAGCGGCCACCACCAAGGAGCCCGTCTTTATCCCCAGACCAGGCATCACCTATGAGCCACCCAACTATAAGGCCCTGGACTTCTCCGAGGCCCCAAGCTTCACCCAGCCCCTGGTGAACCGCTCGGTCATCGCGGGCTACACTGCTATGCTCTGCTGTGCTGTCCGGGGTAGCCCCAAGCCCAAGATTTCCTGGTTCAAGAATGGCCTGGACCTGGGAGAAGACGCCCGCTTCCGCATGTTCAGCAAGCAGGGAGTGTTGACTCTGGAGATTAGAAAGCCCTGCCCCTTTGACGGGGGCATCTATGTCTGCAGGGCCACCAACTTACAGGGCGAGGCACGGTGTGAGTGCCGCCTGGAGGTGCGAGTGCCTCAG(SEQIDNO:31)
人類 MYBPC3 C10 PSFTQPLVNRSVIAGYTAMLCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFSKQGVLTLEIRKPCPFDGGIYVCRATNLQGEARCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:16) CCAAGCTTCACCCAGCCCCTGGTGAACCGCTCGGTCATCGCGGGCTACACTGCTATGCTCTGCTGTGCTGTCCGGGGTAGCCCCAAGCCCAAGATTTCCTGGTTCAAGAATGGCCTGGACCTGGGAGAAGACGCCCGCTTCCGCATGTTCAGCAAGCAGGGAGTGTTGACTCTGGAGATTAGAAAGCCCTGCCCCTTTGACGGGGGCATCTATGTCTGCAGGGCCACCAACTTACAGGGCGAGGCACGGTGTGAGTGCCGCCTGGAGGTGCGAGTGCCTCAG (SEQIDNO:32)
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人類 MYBPC3 C7 PPSEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCPEGCSEWVAALQGLTEHTSILVKDLPTGARLLFRVRAHNMAGPGAPVTTTEPVTVQEILQRPR(SEQIDNO:54) CCCCCCAGCGAACCCACCCACCUGGCAGUAGAGGACGUCUCUGACACCACGGUCUCCCUCAAGUGGCGGCCCCCAGAGCGCGUGGGAGCAGGAGGCCUGGAUGGCUACAGCGUGGAGUACUGCCCAGAGGGCUGCUCAGAGUGGGUGGCUGCCCUGCAGGGGCUGACAGAGCACACAUCGAUACUGGUGAAGGACCUGCCCACGGGGGCCCGGCUGCUUUUCCGAGUGCGGGCACACAAUAUGGCAGGGCCUGGAGCCCCUGUUACCACCACGGAGCCGGUGACAGUGCAGGAGAUCCUGCAACGGCCACGG (SEQIDNO:66)
人類 MYBPC3 C8 ILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRVHSGTYQVTVRIENMEDKATLVLQVVDKPSP (SEQIDNO:55) AUCCUGCAACGGCCACGGCUUCAGCUGCCCAGGCACCUGCGCCAGACCAUUCAGAAGAAGGUCGGGGAGCCUGUGAACCUUCUCAUCCCUUUCCAGGGCAAGCCCCGGCCUCAGGUGACCUGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCUGGCAGGCGAGGAGGUGAGCAUCCGCAACAGCCCCACAGACACCAUCCUGUUCAUCCGGGCCGCUCGCCGCGUGCAUUCAGGCACUUACCAGGUGACGGUGCGCAUUGAGAACAUGGAGGACAAGGCCACGCUGGUGCUGCAGGUUGUUGACAAGCCAAGUCCU(SEQIDNO:67)
人類 MYBPC3 C7-C10 PPSEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCPEGCSEWVAALQGLTEHTSILVKDLPTGARLLFRVRAHNMAGPGAPVTTTEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRVHSGTYQVTVRIENMEDKATLVLQVVDKPSPPQDLRVTDAWGLNVALEWKPPQDVGNTELWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVPELIIGNGYYFRVFSQNMVGFSDRAATTKEPVFIPRPGITYEPPNYKALDFSEAPSFTQPLVNRSVIAGYTAMLCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFSKQGVLTLEIRKPCPFDGGIYVCRATNLQGEARCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:56) CCCCCCAGCGAACCCACCCACCUGGCAGUAGAGGACGUCUCUGACACCACGGUCUCCCUCAAGUGGCGGCCCCCAGAGCGCGUGGGAGCAGGAGGCCUGGAUGGCUACAGCGUGGAGUACUGCCCAGAGGGCUGCUCAGAGUGGGUGGCUGCCCUGCAGGGGCUGACAGAGCACACAUCGAUACUGGUGAAGGACCUGCCCACGGGGGCCCGGCUGCUUUUCCGAGUGCGGGCACACAAUAUGGCAGGGCCUGGAGCCCCUGUUACCACCACGGAGCCGGUGACAGUGCAGGAGAUCCUGCAACGGCCACGGCUUCAGCUGCCCAGGCACCUGCGCCAGACCAUUCAGAAGAAGGUCGGGGAGCCUGUGAACCUUCUCAUCCCUUUCCAGGGCAAGCCCCGGCCUCAGGUGACCUGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCUGGCAGGCGAGGAGGUGAGCAUCCGCAACAGCCCCACAGACACCAUCCUGUUCAUCCGGGCCGCUCGCCGCGUGCAUUCAGGCACUUACCAGGUGACGGUGCGCAUUGAGAACAUGGAGGACAAGGCCACGCUGGUGCUGCAGGUUGUUGACAAGCCAAGUCCUCCCCAGGAUCUCCGGGUGACUGACGCCUGGGGUCUUAAUGUGGCUCUGGAGUGGAAGCCACCCCAGGAUGUCGGCAACACGGAGCUCUGGGGGUACACAGUGCAGAAAGCCGACAAGAAGACCAUGGAGUGGUUCACCGUCUUGGAGCAUUACCGCCGCACCCACUGCGUGGUGCCAGAGCUCAUCAUUGGCAAUGGCUACUACUUCCGCGUCUUCAGCCAGAAUAUGGUUGGCUUUAGUGACAGAGCGGCCACCACCAAGGAGCCCGUCUUUAUCCCCAGACCAGGCAUCACCUAUGAGCCACCCAACUAUAAGGCCCUGGACUUCUCCGAGGCCCCAAGCUUCACCCAGCCCCUGGUGAACCGCUCGGUCAUCGCGGGCUACACUGCUAUGCUCUGCUGUGCUGUCCGGGGUAGCCCCAAGCCCAAGAUUUCCUGGUUCAAGAAUGGCCUGGACCUGGGAGAAGACGCCCGCUUCCGCAUGUUCAGCAAGCAGGGAGUGUUGACUCUGGAGAUUAGAAAGCCCUGCCCCUUUGACGGGGGCAUCUAUGUCUGCAGGGCCACCAACUUACAGGGCGAGGCACGGUGUGAGUGCCGCCUGGAGGUGCGAGUGCCUCAG(SEQIDNO:68)
人類 MYBPC3 C6、C8-C10 VPDAPAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPILGYILERKKKKSYRWMRLNFDLIQELSHEARRMIEGVVYEMRVYAVNAIGMSRPSPASQPFMPILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRVHSGTYQVTVRIENMEDKATLVLQVVDKPSPPQDLRVTDAWGLNVALEWKPPQDVGNTELWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVPELIIGNGYYFRVFSQNMVGFSDRAATTKEPVFIPRPGITYEPPNYKALDFSEAPSFTQPLVNRSVIAGYTAMLCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFSKQGVLTLEIRKPCPFDGGIYVCRATNLQGEARCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:57) GUGCCAGACGCACCUGCGGCCCCCAAGAUCAGCAACGUGGGAGAGGACUCCUGCACAGUACAGUGGGAGCCGCCUGCCUACGAUGGCGGGCAGCCCAUCCUGGGCUACAUCCUGGAGCGCAAGAAGAAGAAGAGCUACCGGUGGAUGCGGCUGAACUUCGACCUGAUUCAGGAGCUGAGUCAUGAAGCGCGGCGCAUGAUCGAGGGCGUGGUGUACGAGAUGCGCGUCUACGCGGUCAACGCCAUCGGCAUGUCCAGGCCCAGCCCUGCCUCCCAGCCCUUCAUGCCUAUCCUGCAACGGCCACGGCUUCAGCUGCCCAGGCACCUGCGCCAGACCAUUCAGAAGAAGGUCGGGGAGCCUGUGAACCUUCUCAUCCCUUUCCAGGGCAAGCCCCGGCCUCAGGUGACCUGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCUGGCAGGCGAGGAGGUGAGCAUCCGCAACAGCCCCACAGACACCAUCCUGUUCAUCCGGGCCGCUCGCCGCGUGCAUUCAGGCACUUACCAGGUGACGGUGCGCAUUGAGAACAUGGAGGACAAGGCCACGCUGGUGCUGCAGGUUGUUGACAAGCCAAGUCCUCCCCAGGAUCUCCGGGUGACUGACGCCUGGGGUCUUAAUGUGGCUCUGGAGUGGAAGCCACCCCAGGAUGUCGGCAACACGGAGCUCUGGGGGUACACAGUGCAGAAAGCCGACAAGAAGACCAUGGAGUGGUUCACCGUCUUGGAGCAUUACCGCCGCACCCACUGCGUGGUGCCAGAGCUCAUCAUUGGCAAUGGCUACUACUUCCGCGUCUUCAGCCAGAAUAUGGUUGGCUUUAGUGACAGAGCGGCCACCACCAAGGAGCCCGUCUUUAUCCCCAGACCAGGCAUCACCUAUGAGCCACCCAACUAUAAGGCCCUGGACUUCUCCGAGGCCCCAAGCUUCACCCAGCCCCUGGUGAACCGCUCGGUCAUCGCGGGCUACACUGCUAUGCUCUGCUGUGCUGUCCGGGGUAGCCCCAAGCCCAAGAUUUCCUGGUUCAAGAAUGGCCUGGACCUGGGAGAAGACGCCCGCUUCCGCAUGUUCAGCAAGCAGGGAGUGUUGACUCUGGAGAUUAGAAAGCCCUGCCCCUUUGACGGGGGCAUCUAUGUCUGCAGGGCCACCAACUUACAGGGCGAGGCACGGUGUGAGUGCCGCCUGGAGGUGCGAGUGCCUCAGUGA (SEQIDNO:69)
人類 MYBPC3 C6-C7、C9-C10 VPDAPAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPILGYILERKKKKSYRWMRLNFDLIQELSHEARRMIEGVVYEMRVYAVNAIGMSRPSPASQPFMPIGPPSEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCPEGCSEWVAALQGLTEHTSILVKDLPTGARLLFRVRAHNMAGPGAPVTTTEPVTVQEILQRPRQVVDKPSPPQDLRVTDAWGLNVALEWKPPQDVGNTELWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVPELIIGNGYYFRVFSQNMVGFSDRAATTKEPVFIPRPGITYEPPNYKALDFSEAPSFTQPLVNRSVIAGYTAMLCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFSKQGVLTLEIRKPCPFDGGIYVCRATNLQGEARCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:58) GUGCCAGACGCACCUGCGGCCCCCAAGAUCAGCAACGUGGGAGAGGACUCCUGCACAGUACAGUGGGAGCCGCCUGCCUACGAUGGCGGGCAGCCCAUCCUGGGCUACAUCCUGGAGCGCAAGAAGAAGAAGAGCUACCGGUGGAUGCGGCUGAACUUCGACCUGAUUCAGGAGCUGAGUCAUGAAGCGCGGCGCAUGAUCGAGGGCGUGGUGUACGAGAUGCGCGUCUACGCGGUCAACGCCAUCGGCAUGUCCAGGCCCAGCCCUGCCUCCCAGCCCUUCAUGCCUAUCGGUCCCCCCAGCGAACCCACCCACCUGGCAGUAGAGGACGUCUCUGACACCACGGUCUCCCUCAAGUGGCGGCCCCCAGAGCGCGUGGGAGCAGGAGGCCUGGAUGGCUACAGCGUGGAGUACUGCCCAGAGGGCUGCUCAGAGUGGGUGGCUGCCCUGCAGGGGCUGACAGAGCACACAUCGAUACUGGUGAAGGACCUGCCCACGGGGGCCCGGCUGCUUUUCCGAGUGCGGGCACACAAUAUGGCAGGGCCUGGAGCCCCUGUUACCACCACGGAGCCGGUGACAGUGCAGGAGAUCCUGCAACGGCCACGGCAGGUUGUUGACAAGCCAAGUCCUCCCCAGGAUCUCCGGGUGACUGACGCCUGGGGUCUUAAUGUGGCUCUGGAGUGGAAGCCACCCCAGGAUGUCGGCAACACGGAGCUCUGGGGGUACACAGUGCAGAAAGCCGACAAGAAGACCAUGGAGUGGUUCACCGUCUUGGAGCAUUACCGCCGCACCCACUGCGUGGUGCCAGAGCUCAUCAUUGGCAAUGGCUACUACUUCCGCGUCUUCAGCCAGAAUAUGGUUGGCUUUAGUGACAGAGCGGCCACCACCAAGGAGCCCGUCUUUAUCCCCAGACCAGGCAUCACCUAUGAGCCACCCAACUAUAAGGCCCUGGACUUCUCCGAGGCCCCAAGCUUCACCCAGCCCCUGGUGAACCGCUCGGUCAUCGCGGGCUACACUGCUAUGCUCUGCUGUGCUGUCCGGGGUAGCCCCAAGCCCAAGAUUUCCUGGUUCAAGAAUGGCCUGGACCUGGGAGAAGACGCCCGCUUCCGCAUGUUCAGCAAGCAGGGAGUGUUGACUCUGGAGAUUAGAAAGCCCUGCCCCUUUGACGGGGGCAUCUAUGUCUGCAGGGCCACCAACUUACAGGGCGAGGCACGGUGUGAGUGCCGCCUGGAGGUGCGAGUGCCUCAG(SEQIDNO:70)
小鼠 MYBPC3 C7-C8 PPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDKPSP(SEQIDNO:59) CCCCCUGGCGAACCAACCCACUUGGCUGUGGAGGAUGUGUCAGACACCACUGUCUCACUCAAGUGGCGGCCCCCAGAGCGCGUGGGGGCCGGUGGCCUGGACGGAUACAGCGUGGAGUACUGCCAGGAGGGAUGCUCCGAGUGGACACCUGCUCUGCAGGGGCUGACAGAGCGCACAUCGAUGCUGGUGAAGGACCUACCCACUGGGGCACGGCUGCUGUUCCGAGUACGGGCACACAAUGUGGCAGGUCCUGGAGGCCCUAUCGUCACCAAGGAGCCUGUGACAGUGCAGGAGAUACUGCAACGACCACGGCUCCAACUGCCCAGACACCUGCGCCAGACCAUCCAGAAGAAAGUUGGGGAGCCUGUGAACCUCCUCAUCCCUUUCCAGGGCAAACCCCGGCCUCAGGUGACCUGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCUGGCAGGUGAGGAGGUGAGCAUCCGGAACAGCCCCACAGACACGAUCUUGUUCAUCCGAGCUGCCCGCCGCACCCACUCGGGCACCUACCAGGUGACAGUUCGCAUUGAGAACAUGGAGGACAAGGCAACGCUGAUCCUGCAGAUUGUGGACAAGCCAAGUCCU(SEQIDNO:71)
小鼠MYBPC3 C7 PPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEILQRPR(SEQIDNO:60) CCCCCUGGCGAACCAACCCACUUGGCUGUGGAGGAUGUGUCAGACACCACUGUCUCACUCAAGUGGCGGCCCCCAGAGCGCGUGGGGGCCGGUGGCCUGGACGGAUACAGCGUGGAGUACUGCCAGGAGGGAUGCUCCGAGUGGACACCUGCUCUGCAGGGGCUGACAGAGCGCACAUCGAUGCUGGUGAAGGACCUACCCACUGGGGCACGGCUGCUGUUCCGAGUACGGGCACACAAUGUGGCAGGUCCUGGAGGCCCUAUCGUCACCAAGGAGCCUGUGACAGUGCAGGAGAUACUGCAACGACCACGG (SEQIDNO:72)
小鼠 MYBPC3 C8 ILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDKPSP (SEQIDNO:61) AUACUGCAACGACCACGGCUCCAACUGCCCAGACACCUGCGCCAGACCAUCCAGAAGAAAGUUGGGGAGCCUGUGAACCUCCUCAUCCCUUUCCAGGGCAAACCCCGGCCUCAGGUGACCUGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCUGGCAGGUGAGGAGGUGAGCAUCCGGAACAGCCCCACAGACACGAUCUUGUUCAUCCGAGCUGCCCGCCGCACCCACUCGGGCACCUACCAGGUGACAGUUCGCAUUGAGAACAUGGAGGACAAGGCAACGCUGAUCCUGCAGAUUGUGGACAAGCCAAGUCCU (SEQIDNO:73)
小鼠 MYBPC3 C7-C10 PPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDKPSPPQDIRIVETWGFNVALEWKPPQDDGNTEIWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVSELIIGNGYYFRVFSHNMVGSSDKAAATKEPVFIPRPGITYEPPKYKALDFSEAPSFTQPLANRSIIAGYNAILCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFCKQGVLTLEIRKPCPYDGGVYVCRATNLQGEAQCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:62) CCCCCUGGCGAACCAACCCACUUGGCUGUGGAGGAUGUGUCAGACACCACUGUCUCACUCAAGUGGCGGCCCCCAGAGCGCGUGGGGGCCGGUGGCCUGGACGGAUACAGCGUGGAGUACUGCCAGGAGGGAUGCUCCGAGUGGACACCUGCUCUGCAGGGGCUGACAGAGCGCACAUCGAUGCUGGUGAAGGACCUACCCACUGGGGCACGGCUGCUGUUCCGAGUACGGGCACACAAUGUGGCAGGUCCUGGAGGCCCUAUCGUCACCAAGGAGCCUGUGACAGUGCAGGAGAUACUGCAACGACCACGGCUCCAACUGCCCAGACACCUGCGCCAGACCAUCCAGAAGAAAGUUGGGGAGCCUGUGAACCUCCUCAUCCCUUUCCAGGGCAAACCCCGGCCUCAGGUGACCUGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCUGGCAGGUGAGGAGGUGAGCAUCCGGAACAGCCCCACAGACACGAUCUUGUUCAUCCGAGCUGCCCGCCGCACCCACUCGGGCACCUACCAGGUGACAGUUCGCAUUGAGAACAUGGAGGACAAGGCAACGCUGAUCCUGCAGAUUGUGGACAAGCCAAGUCCUCCCCAGGAUAUCCGGAUCGUUGAGACUUGGGGUUUCAAUGUGGCUCUGGAGUGGAAGCCACCCCAAGAUGAUGGCAAUACAGAGAUCUGGGGUUAUACUGUACAGAAAGCUGACAAGAAGACCAUGGAGUGGUUCACGGUUUUGGAACACUACCGACGCACUCACUGUGUGGUAUCAGAGCUUAUCAUUGGCAAUGGCUACUACUUCCGGGUCUUCAGCCAUAACAUGGUGGGUUCCAGUGACAAAGCUGCCGCCACCAAGGAGCCAGUCUUUAUUCCAAGACCAGGCAUCACAUAUGAGCCACCCAAAUACAAGGCCCUGGACUUCUCUGAGGCCCCAAGCUUCACCCAGCCCUUGGCAAAUCGCUCCAUCAUUGCAGGCUAUAAUGCCAUCCUCUGCUGUGCUGUCCGAGGUAGUCCUAAGCCCAAGAUUUCCUGGUUCAAGAAUGGCCUGGAUCUGGGAGAAGAUGCUCGCUUCCGCAUGUUCUGCAAGCAGGGAGUAUUGACCCUGGAGAUCAGGAAACCCUGCCCCUAUGAUGGUGGUGUCUAUGUCUGCAGGGCCACCAACUUGCAGGGCGAGGCACAGUGUGAGUGCCGCCUGGAGGUGCGAGUUCCUCAG(SEQIDNO:74)
小鼠MYBPC3 C6、C8-C10 VPDAPAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPVLGYILERKKKKSYRWMRLNFDLLRELSHEARRMIEGVAYEMRVYAVNAVGMSRPSPASQPFMPILQRPRLQLPRHLRQTIQKKVGEPVNLLIPFQGKPRPQVTWTKEGQPLAGEEVSIRNSPTDTILFIRAARRTHSGTYQVTVRIENMEDKATLILQIVDKPSPPQDIRIVETWGFNVALEWKPPQDDGNTEIWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVSELIIGNGYYFRVFSHNMVGSSDKAAATKEPVFIPRPGITYEPPKYKALDFSEAPSFTQPLANRSIIAGYNAILCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFCKQGVLTLEIRKPCPYDGGVYVCRATNLQGEAQCECRLEVRVPQ(SEQIDNO:63) GUCCCAGAUGCUCCUGCGGCCCCUAAGAUCAGCAACGUGGGCGAGGACUCCUGCACUGUGCAGUGGGAACCGCCUGCCUAUGAUGGCGGGCAGCCGGUCCUGGGAUACAUCCUGGAGCGCAAGAAGAAAAAGAGCUACAGGUGGAUGAGGCUCAACUUUGAUCUGCUGCGGGAGCUGAGCCACGAGGCGAGGCGCAUGAUCGAGGGUGUAGCCUAUGAGAUGCGAGUCUACGCAGUCAAUGCCGUGGGAAUGUCCAGG CCCAGCCCUGCCUCUCAGCCCUUCAUGCCUAUACUGCAACGACCACGGCUCCAACUGCCCAGACACCUGCGCCAGACCAUCCAGAAGAAAGUUGGGGAGCCUGUGAACCUCCUCAUCCCUUUCCAGGGCAAACCCCGGCCUCAGGUGACCUGGACCAAAGAGGGGCAGCCCCUGGCAGGUGAGGAGGUGAGCAUCCGGAACAGCCCCACAGACACGAUCUUGUUCAUCCGAGCUGCCCGCCGCACCCACUCGGGCACCUACCAGGUGACAGUUCGCAUUGAGAACAUGGAGGACAAGGCAACGCUGAUCCUGCAGAUUGUGGACAAGCCAAGUCCUCCCCAGGAUAUCCGGAUCGUUGAGACUUGGGGUUUCAAUGUGGCUCUGGAGUGGAAGCCACCCCAAGAUGAUGGCAAUACAGAGAUCUGGGGUUAUACUGUACAGAAAGCUGACAAGAAGACCAUGGAGUGGUUCACGGUUUUGGAACACUACCGACGCACUCACUGUGUGGUAUCAGAGCUUAUCAUUGGCAAUGGCUACUACUUCCGGGUCUUCAGCCAUAACAUGGUGGGUUCCAGUGACAAAGCUGCCGCCACCAAGGAGCCAGUCUUUAUUCCAAGACCAGGCAUCACAUAUGAGCCACCCAAAUACAAGGCCCUGGACUUCUCUGAGGCCCCAAGCUUCACCCAGCCCUUGGCAAAUCGCUCCAUCAUUGCAGGCUAUAAUGCCAUCCUCUGCUGUGCUGUCCGAGGUAGUCCUAAGCCCAAGAUUUCCUGGUUCAAGAAUGGCCUGGAUCUGGGAGAAGAUGCUCGCUUCCGCAUGUUCUGCAAGCAGGGAGUAUUGACCCUGGAGAUCAGGAAACCCUGCCCCUAUGAUGGUGGUGUCUAUGUCUGCAGGGCCACCAACUUGCAGGGCGAGGCACAGUGUGAGUGCCGCCUGGAGGUGCGAGUUCCUCAG (SEQIDNO:75)
小鼠MYBPC3 C6-C7、C9-C10 VPDAPAAPKISNVGEDSCTVQWEPPAYDGGQPVLGYILERKKKKSYRWMRLNFDLLRELSHEARRMIEGVAYEMRVYAVNAVGMSRPSPASQPFMPIGPPGEPTHLAVEDVSDTTVSLKWRPPERVGAGGLDGYSVEYCQEGCSEWTPALQGLTERTSMLVKDLPTGARLLFRVRAHNVAGPGGPIVTKEPVTVQEILQRPRQIVDKPSPPQDIRIVETWGFNVALEWKPPQDDGNTEIWGYTVQKADKKTMEWFTVLEHYRRTHCVVSELIIGNGYYFRVFSHNMVGSSDKAAATKEPVFIPRPGITYEPPKYKALDFSEAPSFTQPLANRSIIAGYNAILCCAVRGSPKPKISWFKNGLDLGEDARFRMFCKQGVLTLEIRKPCPYDGGVYVCRATNLQGEAQCECRLEVRVPQ (SEQIDNO:64) GUCCCAGAUGCUCCUGCGGCCCCUAAGAUCAGCAACGUGGGCGAGGACUCCUGCACUGUGCAGUGGGAACCGCCUGCCUAUGAUGGCGGGCAGCCGGUCCUGGGAUACAUCCUGGAGCGCAAGAAGAAAAAGAGCUACAGGUGGAUGAGGCUCAACUUUGAUCUGCUGCGGGAGCUGAGCCACGAGGCGAGGCGCAUGAUCGAGGGUGUAGCCUAUGAGAUGCGAGUCUACGCAGUCAAUGCCGUGGGAAUGUCCAGGCCCAGCCCUGCCUCUCAGCCCUUCAUGCCUAUUGGGCCCCCUGGCGAACCAACCCACUUGGCUGUGGAGGAUGUGUCAGACACCACUGUCUCACUCAAGUGGCGGCCCCCAGAGCGCGUGGGGGCCGGUGGCCUGGACGGAUACAGCGUGGAGUACUGCCAGGAGGGAUGCUCCGAGUGGACACCUGCUCUGCAGGGGCUGACAGAGCGCACAUCGAUGCUGGUGAAGGACCUACCCACUGGGGCACGGCUGCUGUUCCGAGUACGGGCACACAAUGUGGCAGGUCCUGGAGGCCCUAUCGUCACCAAGGAGCCUGUGACAGUGCAGGAGAUACUGCAACGACCACGGCAGAUUGUGGACAAGCCAAGUCCUCCCCAGGAUAUCCGGAUCGUUGAGACUUGGGGUUUCAAUGUGGCUCUGGAGUGGAAGCCACCCCAAGAUGAUGGCAAUACAGAGAUCUGGGGUUAUACUGUACAGAAAGCUGACAAGAAGACCAUGGAGUGGUUCACGGUUUUGGAACACUACCGACGCACUCACUGUGUGGUAUCAGAGCUUAUCAUUGGCAAUGGCUACUACUUCCGGGUCUUCAGCCAUAACAUGGUGGGUUCCAGUGACAAAGCUGCCGCCACCAAGGAGCCAGUCUUUAUUCCAAGACCAGGCAUCACAUAUGAGCCACCCAAAUACAAGGCCCUGGACUUCUCUGAGGCCCCAAGCUUCACCCAGCCCUUGGCAAAUCGCUCCAUCAUUGCAGGCUAUAAUGCCAUCCUCUGCUGUGCUGUCCGAGGUAGUCCUAAGCCCAAGAUUUCCUGGUUCAAGAAUGGCCUGGAUCUGGGAGAAGAUGCUCGCUUCCGCAUGUUCUGCAAGCAGGGAGUAUUGACCCUGGAGAUCAGGAAACCCUGCCCCUAUGAUGGUGGUGUCUAUGUCUGCAGGGCCACCAACUUGCAGGGCGAGGCACAGUGUGAGUGCCGCCUGGAGGUGCGAGUUCCUCAG(SEQIDNO:76)
在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含與SEQ ID NO:1-16或53-64中任一者至少80% (例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%)一致之胺基酸序列。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含與SEQ ID NO:1-16或53-64中任一者80%、85%、90%、95%或99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之多肽包含SEQ ID NO: 1-16或53-64之胺基酸序列。
在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之核酸包含編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之核酸包含與SEQ ID NO:17-32或65-76中任一者至少80% (例如，至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%)一致之核苷酸序列。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之核酸包含與SEQ ID NO:17-32或65-76中任一者80%、85%、90%、95%或99%一致之核苷酸序列。在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之核酸包含SEQ ID NO: 17-32或65-76之核苷酸序列。
如本文所用，「核酸」可為或可包括例如核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)、脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)、蘇糖核酸(threose nucleic acid，TNA)、乙二醇核酸(glycol nucleic acid，GNA)、肽核酸(peptide nucleic acid，PNA)、鎖核酸(locked nucleic acid，LNA，包括具有β-D-核糖構型之LNA、具有α-L-核糖構型之α-LNA (LNA之非鏡像異構物)、具有2'-胺基官能化之2'-胺基-LNA及具有2'-胺基官能化之2'-胺基-α-LNA)、乙烯核酸 (ethylene nucleic acid，ENA)、環己烯基核酸(cyclohexenyl nucleic acid，CeNA)或其嵌合體或組合。本揭露之核酸分子可為DNA或RNA。熟習技術者將理解，除非另外說明，否則本揭露陳述之核酸序列將在代表性DNA序列中列舉「T」，但在序列代表RNA時，「T」將經取代為「U」。
在一些實施例中，編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列可操作地連接於啟動子。
「啟動子」係核酸之控制區域，核酸剩餘部分之轉錄之起始及速率在該區域得以控制。啟動子還可包含調節蛋白及分子(諸如轉錄因子)結合之亞區域。本揭露之啟動子可係組成型的、誘導型的、可活化的、可阻遏的、組織特異性的或其任何組合。啟動子驅動啟動子調節之核酸之表現或驅動該核酸之轉錄。當啟動子相對於核酸處於正確功能位置及取向時，它被認為係「可操作地連接的」，該啟動子調節該核酸以控制(「驅動」)其轉錄起始及/或表現。在一些實施例中，啟動子為組成型啟動子。在一些實施例中，啟動子為誘導型啟動子(亦稱為可調節啟動子)。
組成型啟動子之例子包括但不限於逆轉錄病毒勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RSV) LTR啟動子(可選地具有RSV增強子)、钜細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)啟動子(可選地具有CMV增強子) [參見例如,Boshart等人,Cell,41:521-530 (1985)]、SV40啟動子、二氫葉酸還原酶啟動子、β-肌動蛋白啟動子、磷酸甘油激酶(phosphoglycerol kinase，PGK)啟動子及EFla啟動子[Invitrogen]。在一些實施例中，啟動子為增強的雞β-肌動蛋白啟動子。在一些實施例中，啟動子為U6啟動子。在一些實施例中，本揭露中使用之啟動子為CAG啟動子(例如，包含CMV增強子、來自雞β-肌動蛋白基因之啟動子及第一個外顯子及第一個內含子、及兔β-珠蛋白基因之剪接受體，如Okabe等人,FEBS Lett.1997年5月5日;407(3):313-9；及Alexopoulou等人,BMC Cell Biology 9: 2,2008中所述，其以引用之方式併入本文中)。
誘導型啟動子允許調節基因表現並且可藉由外源供應之化合物、環境因素諸如溫度、或特定生理狀態(例如急性期、細胞之特定分化狀態或僅在復制細胞中)之存在來調節。誘導型啟動子及誘導型系統可購自多種商業來源，包括但不限於Invitrogen、Clontech及Ariad。許多其他系統已經描述並且可易於由熟習此項技術者加以選擇。藉由外源供應之啟動子調節之誘導型啟動子之例子包括鋅誘導型綿羊金屬硫蛋白(metallothionine，MT)啟動子、地塞米松(dexamethasone，Dex)誘導型小鼠乳腺腫瘤病毒(mouse mammary tumor virus，MMTV)啟動子、T7聚合酶啟動子系統(WO 98/10088)；蛻皮素昆蟲啟動子(No等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,93:3346-3351 (1996))、四環素阻遏型系統(Gossen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551 (1992))、四環素誘導型系統(Gossen等人,Science,268:1766-1769 (1995)，還參見Harvey等人,Curr. Opin. Chem. Biol.,2:512-518 (1998))、RU486誘導型系統(Wang等人,Nat. Biotech.,15:239-243 (1997)及Wang等人,Gene Ther.,4:432-441 (1997))及雷帕黴素誘導型系統(Magari等人,J. Clin.Invest.,100:2865-2872 (1997))。在這種情況下可用的其他類型之誘導型啟動子為受特定生理狀態(例如溫度、急性期、細胞之特定分化狀態或僅在復制細胞中)調節之啟動子。
在一些實施例中，可使用包括具有操縱子之阻遏物之誘導型啟動子。在一個實施例中，來自大腸桿菌(Escherichia coli)之lac阻遏物可作為轉錄調節子發揮作用，以調節攜帶lac操縱子之哺乳動物細胞啟動子之轉錄[M. Brown等人,Cell,49:603-612 (1987)]；Gossen及Bujard (1992)；[M. Gossen等人,Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551 (1992)]將四環素阻遏物(tetracycline repressor，tetR)與轉錄活化子(VP 16)組合以創建tetR-哺乳動物細胞轉錄活化子融合蛋白tTa (tetR-VP 16)，與來源於人類钜細胞病毒(human cytomegalovirus，hCMV)主要立即早期啟動子之攜帶tetO之最小啟動子組合以創建tetR-tet操縱系統來控制哺乳動物細胞中之基因表現。在一個實施例中，使用四環素誘導型開關(Yao等人,Human Gene Therapy；Gossen等人,Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551 (1992)；Shockett等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,92:6522-6526 (1995))。
在一些實施例中，使用MYBPC3之天然啟動子。當需要轉殖基因之表現模擬天然表現時，天然啟動子可為較佳的。當轉殖基因之表現必須在時間或發育上、或以組織特異性方式、或響應於特定轉錄刺激進行調節時，可使用天然啟動子。在另一實施例中，亦可使用其他天然表現控制元件，諸如增強子元件、聚腺苷酸化位點或Kozak共通序列，來模擬天然表現。
在一些實施例中，啟動子為含有賦予組織特異性基因表現能力之調節序列之組織特異性啟動子。在一些情況下，組織特異性調節序列結合以組織特異性方式誘導轉錄之組織特異性轉錄因子。此類組織特異性調節序列(例如，啟動子、增強子等)係此項技術中熟知的。示範性組織特異性調節序列包括但不限於以下組織特異性啟動子：肝臟特異性甲狀腺素結合球蛋白(hyroxin binding globulin，TBG)啟動子、胰島素啟動子、胰高血糖素啟動子、生長抑素啟動子、胰多肽(pancreatic polypeptide，PPY)啟動子、突觸蛋白-1 (synapsin-1，Syn)啟動子、肌酸激酶(creatine kinase，MCK)啟動子、哺乳動物結蛋白(mammalian desmin，DES)啟動子、a-肌球蛋白重鏈(a-myosin heavy chain，a-MHC)啟動子或心臟肌鈣蛋白T (cardiac Troponin T，cTnT)啟動子。其他示範性啟動子包括β-肌動蛋白啟動子，B型肝炎病毒核心啟動子，Sandig等人,Gene Ther.,3:1002-9 (1996)；甲型胎兒蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)啟動子，Arbuthnot等人,Hum.Gene Ther.,7:1503-14 (1996))，骨鈣化素啟動子(Stein等人,Mol. Biol. Rep.,24:185-96 (1997))；骨唾液蛋白啟動子(Chen等人,J. Bone Miner.Res.,11:654-64 (1996))，CD2啟動子(Hansal等人,J. Immunol.,161:1063-8 (1998)；免疫球蛋白重鏈啟動子；T細胞受體α鏈啟動子，神經元諸如神經元特異性烯醇酶(neuron-specific enolase，NSE)啟動子(Andersen等人,Cell. Mol. Neurobiol.,13:503-15 (1993))，神經絲輕鏈基因啟動子(Piccioli等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:5611-5 (1991))，及神經元特異性vgf基因啟動子(Piccioli等人,Neuron,15:373-84 (1995))，及其他對於熟習技術者而言顯而易見之啟動子。
在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之核酸係信使RNA (mRNA)。「信使RNA」 (mRNA)係指編碼(至少一種)多肽(天然存在的、非天然存在的或經修飾的胺基酸聚合物)並且可在體外、體內、原位或離體翻譯以產生該編碼多肽之核苷酸。在一些較佳實施例中，mRNA在體內被翻譯。熟習技術者將理解，除非另外說明，否則本申請案陳述之多核苷酸序列將在代表性DNA序列中列舉「T」，但在序列代表RNA (例如，mRNA)時，「T」將經取代為「U」。因此，藉由特定序列識別號所識別之DNA編碼之RNA多核苷酸中任一者亦可包含DNA編碼之對應RNA (例如，mRNA)序列，其中DNA序列之各「T」均被「U」取代。一般技藝人士將理解如何基於對應DNA序列識別mRNA序列。
mRNA分子之基本組分通常包括至少一個編碼區、5'非轉譯區(untranslated region，UTR)、3' UTR、5'帽及poly-A尾。本揭露之多核苷酸可作為mRNA發揮作用但可在其功能及/或結構設計特徵上區別於野生型mRNA，這用於克服使用基於核酸之治療劑有效表現多肽之現有問題。
在一些實施例中，本文所述之mRNA包含一種或多種化學修飾(例如，包含一種或多種經修飾核苷酸)。術語「化學修飾」及「經化學修飾的」係指相對於腺苷(A)、鳥苷(G)、尿苷(U)、胸苷(T)或胞苷(C)核糖核苷或脫氧核苷對其位置、模式、百分比或群體中至少一者之修飾。通常，此等術語不指代天然存在的5'末端mRNA帽部分中之核糖核苷酸修飾。
一些實施例，本文所述之mRNA包含多種(多於一種)不同修飾。在一些實施例中，mRNA之特定區域含有一種、兩種或更多種(可選地不同)核苷或核苷酸修飾。在一些實施例中，相對於未經修飾mRNA，引入細胞或生物體之經修飾mRNA分別在細胞或生物體中表現出降低的降解。在一些實施例中，引入細胞或生物體之經修飾mRNA可分別在細胞或生物體中表現出降低的免疫原性(例如，降低的先天反應)。
多核苷酸之修飾包括但不限於本文所述之修飾。本揭露之經修飾mRNA可包含天然存在的、非天然存在的修飾，或者多核苷酸可包含天然存在及非天然存在的修飾之組合。mRNA可包含任何可用修飾，例如糖、核鹼基或核苷間鍵聯(例如，連接磷酸、磷酸二酯鍵聯或磷酸二酯主鏈)之任何可用修飾。
在一些實施例中，本文所述之mRNA包含在多核苷酸合成期間或合成後引入之非天然經修飾核苷酸以實現所需功能或特性。修飾可存在於核苷酸間鍵聯、嘌呤或嘧啶鹼基或糖上。修飾可經化學合成或經聚合酶在鏈之末端或鏈中之任何其他地方引入。多核苷酸之任一區域皆可經化學修飾。
在一些實施例中，經修飾mRNA包含一種或多種經修飾核苷及核苷酸。「核苷」係指含有糖分子(例如，戊糖或核糖)或其衍生物與有機鹼(例如，嘌呤或嘧啶)或其衍生物(在本文中亦稱為「核鹼基」)之組合之化合物。「核苷酸」係指核苷，包含磷酸基團。經修飾核苷酸可藉由任何可用方法(例如像，化學、酶或重組方法)合成，以包含一種或多種經修飾或非天然核苷。多核苷酸可包含經連接核苷之一個或多個區域。此類區域可具有可變主鏈鍵聯。鍵聯可為標準磷酸二酯鍵聯，在這種情況下多核苷酸將包含核苷酸區域。
在一些實施例中，本文所述之經修飾mRNA中之經修飾核鹼基選自由以下所組成之群組：假尿苷(ψ)、N 1-甲基假尿苷(m1ψ)、N 1-乙基假尿苷、2-硫尿苷、4'-硫尿苷、5-甲基胞嘧啶、2-硫基-1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫基-1-甲基-假尿苷、2-硫基-5-氮雜-尿苷、2-硫基-二氫假尿苷、2-硫基-二氫尿苷、2-硫基-假尿苷、4-甲氧基-2-硫基-假尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-硫基-1-甲基-假尿苷、4-硫基-假尿苷、5-氮雜-尿苷、二氫假尿苷、5-甲氧基尿苷及2,-O-甲基尿苷。
在一些實施例中，在本文所述之方法中使用之核酸為載體(例如，克隆載體或表現載體)。載體可包含例如以下之部分或全部：可選擇標記物基因，諸如用於選擇哺乳動物細胞中之穩定或瞬時轉染子之新黴素基因；用於高水準轉錄之來自人類CMV直接早期基因之增強子/啟動子序列；用於mRNA穩定性之來自SV40之轉錄終止及RNA加工信號；用於正確遊離複製之SV40多瘤複製起點及ColE1；內部核醣體結合位點(internal ribosome binding site，IRES)，通用多個克隆位點；及用於有義及反義RNA之體外轉錄之T7及SP6 RNA啟動子。合適的載體及用於產生含有轉殖基因之載體之方法係此項技術中熟知的且可用的。
包含核酸之表現載體可藉由習知技術(例如，電穿孔、脂質體轉染及磷酸鈣沉澱)轉移至宿主細胞，然後藉由習知技術培養經轉染細胞以產生本文所述之多肽。在一些實施例中，本文所述之多肽之表現由組成型、誘導型或組織特異性啟動子調節。
根據本揭露，可利用多種宿主-表現載體系統。此類宿主-表現系統表示可用於產生本文所述之核苷酸序列且隨後進行純化之媒劑，而且表示當用適當核苷酸編碼序列轉型或轉染時可原位表現多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之細胞。此等包括但不限於微生物，諸如用含有編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列之重組噬菌體DNA、質體DNA或黏質體DNA表現載體轉型之細菌(例如大腸桿菌及枯草芽孢桿菌(B. subtilis)；用含有編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列之重組酵母表現載體轉型之酵母(例如，畢赤酵母(Saccharomyces pichia))；用含有編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列之重組病毒表現載體(例如，桿狀病毒)感染之昆蟲細胞系統；用重組病毒表現載體(例如，花椰菜花葉病毒(cauliflower mosaic virus，CaMV)及菸草花葉病毒(tobacco mosaic virus，TMV)感染或用含有編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列之重組質體表現載體(例如，Ti質體)轉型之植物細胞系統；或攜帶含有來源於哺乳動物細胞基因組之啟動子(例如，金屬硫蛋白啟動子)或來源於哺乳動物病毒之啟動子(例如，腺病毒晚期啟動子；痘苗病毒7.5K啟動子)之重組表現構築體之哺乳動物細胞系統(例如，COS、CHO、BHK、293、293T、3T3細胞、淋巴細胞(參見美國專利第5,807,715號)、Per C.6 細胞(由Crucell開發之人類視網膜細胞)。
在一些實施例中，本揭露之載體為病毒載體。在一些實施例中，病毒載體適用於多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之哺乳動物表現。合適的病毒載體包括慢病毒載體、逆轉錄病毒載體或重組腺相關病毒(rAAV)載體。
「慢病毒載體」係指來源於慢病毒基因組(例如，HIV)之載體。慢病毒載體已常用於基因療法，以例如將有益基因插入宿主細胞或生物體，或刪除或修飾宿主細胞或生物體之基因。慢病毒載體係哺乳動物細胞中基因轉移之有效媒劑，因為它們能夠在非分裂劑分裂細胞中穩定表現目標基因。
「逆轉錄病毒載體」係指來源於逆轉錄病毒基因組之載體。逆轉錄病毒載體由可容納目標基因之原病毒序列組成，以允許將兩者併入靶細胞中。載體還包含病毒及細胞基因啟動子諸如CMV啟動子，以增強目標基因在靶細胞中之表現。逆轉錄病毒載體已常用於基因療法。
「重組腺相關病毒(rAAV)載體」通常至少由轉殖基因及其調控序列(例如，啟動子)以及5’及3'AAV反向末端重複(ITR)組成。轉殖基因可包含如本文別處所揭露之核苷酸序列，該核苷酸序列編碼例如包含如本揭露之別處所述之MYBPC3之C-末端域之多肽。
通常，ITR序列長度為約145 bp。較佳地，基本上在分子中使用編碼ITR之完整序列，儘管允許對此等序列進行一定程度的微小修飾。修飾此等ITR序列之能力在此項技術範圍內。(參見例如，諸如以下的文本：Sambrook等人,「Molecular Cloning.A Laboratory Manual」,第2版.,Cold Spring Harbor Laboratory,New York (1989)；及K. Fisher等人,J Virol.,70:520 532 (1996))。本發明中採用之這種分子之例子為含有轉殖基因之「順式作用」質體，其中選定轉殖基因序列及相關調節元件之側翼為5’及3'AAV ITR序列。AAV ITR序列可自任何已知AAV獲得，包括目前鑑定的哺乳動物AAV類型。在一些實施例中，本文所述之rAAV載體包含位於編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列側翼之兩個ITR (在被側接之序列之各端一個ITR)。在一些實施例中，編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列可操作地連接於啟動子，並且本文所述之rAAV載體包含位於編碼多肽(例如，包含本文所述之MYBPC3之C末端域之多肽)之核苷酸序列及啟動子側翼之兩個ITR (在被側接之序列之各端一個ITR)。
在一些實施例中，ITR具有選自AAV1、AAV2、AAV2i8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAV9、AAVrh10、AAV2/2-66、AAV2/2-84、AAV2/2-125及其變異體之血清型。在一些實施例中，rAAV載體包含血清型AAV2之ITR。在一些實施例中，在本文所述之rAAV載體中使用之ITR包含以下核苷酸序列：
Figure 02_image001
在一些實施例中，本揭露之rAAV載體係自互補AAV載體(scAAV)。「自互補AAV載體」(scAAV)係指含有雙鏈載體基因組之載體，該基因組係由AAV之ITR之一的末端解析位點(terminal resolution site，TR)缺失而產生的(例如，如McCarthy (2008) Molecular Therapy 16(10):1648-1656中所述，其以引用之方式併入本文中)。TR之缺失阻止了在不存在TR時載體末端之複製起始。一般而言，scAAV載體產生單鏈反向重複基因組，其中各端有一野生型(wt) AAV TR並且中間有一突變TR (mTR)。本發明部分基於以下認識，即編碼RNA髮夾結構(例如，shRNA、miRNA及AmiRNA)之DNA片段在病毒基因組複製期間可起到類似於突變反向末端重複(mutant inverted terminal repeat，mTR)之功能，從而產生自互補AAV載體基因組。在一些實施例中，在本文所述之scAAV載體中使用之ITR包含以下核苷酸序列：
Figure 02_image003
在一些態樣中，本文還提供了包含殼體蛋白及本文所述之核酸分子中任一種之重組腺相關病毒(rAAV)。在一些實施例中，「殼體蛋白」係指由AAV之CAP基因編碼之結構蛋白。AAV包含三種殼體蛋白，即病毒粒子蛋白1至3 (命名為VP1、VP2及VP3)，所有此等蛋白皆係經由替代剪接自單個cap基因轉錄而來的。在一些實施例中，VP1、VP2及VP3之分子量分別為約87 kDa、約72 kDa及約62 kDa。在一些實施例中，在轉譯時，殼體蛋白在病毒基因組周圍形成球形60聚體蛋白殼。在一些實施例中，殼體蛋白之功能係保護病毒基因組、遞送基因組並與宿主相互作用。
在一些實施例中，AAV殼體蛋白屬於選自由以下所組成之群組之AAV血清型：AAV1、AAV2、AAV2i8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAV9、AAVrh10、AAV2/2-66、AAV2/2-84、AAV2/2-125。在一些實施例中，AAV殼體蛋白屬於來源於非人類靈長類動物之血清型，例如scAAV.rh8、AAV.rh39或AAV.rh43血清型。在一些實施例中，AAV殼體蛋白屬於AAV9血清型。在一些實施例中，AAV殼體蛋白屬於AAV2i8血清型。殼體蛋白之胺基酸序列之非限制性例子提供為 SEQ ID NO: 35-52。
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用於獲得具有所需殼體蛋白之重組AAV之方法係此項技術中熟知的。(參見例如，US 2003/0138772)，其內容以全文引用之方式併入本文中)。通常，此等方法涉及培養含有編碼AAV殼體蛋白之核酸序列；功能性rep基因；由AAV反向末端重複(ITR)及轉殖基因組成之重組AAV載體；以及足夠的輔助功能以允許將重組AAV載體包裝到AAV殼體蛋白中之宿主細胞。
在宿主細胞中培養以將rAAV載體包裝在AAV殼體中之組分可以反式提供於宿主細胞。替代地，所需組分(例如，重組AAV載體、rep序列、cap序列及/或輔助功能)中任一種或多種可由穩定宿主細胞提供，該宿主細胞已使用熟習此項技術者已知之方法設計為含有所需組分中任一種或多種。最合適地，此種穩定的宿主細胞將含有在誘導型啟動子控制下之所需成分。然而，所需組分可處於組成型啟動子之控制之下。在討論適合與轉殖基因一起使用之調節元件時，本文提供了合適的誘導型及組成型啟動子之例子。在另一個替代方案中，選定的穩定宿主細胞可含有在組成型啟動子控制下之選定組分及在一個或多個誘導型啟動子控制下指其他選定組分。例如，可產生來源於293細胞(其含有在組成型啟動子控制下之E1輔助功能)但含有在誘導型啟動子控制下之rep及/或cap蛋白之穩定宿主細胞。熟習此項技術者可產生其他穩定的宿主細胞。
可以使用任何適當的遺傳元件(載體)將產生本揭露之rAAV所需要之重組AAV載體、rep序列、cap序列及輔助功能遞送於包裝宿主細胞。選定的遺傳元件可藉由任何合適的方法遞送，包括本文所述之方法。用於構築本揭露之任何實施例之方法係熟習核酸操作技術者已知的，並且包括遺傳工程、重組工程及合成技術。參見例如，Sambrook等人,Molecular Cloning: A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harbor,N.Y。類似地，產生rAAV病毒粒子之方法係熟知的，並且合適方法之選擇不為對本揭露之限制。參見例如，K. Fisher等人,J. Virol.,70:520-532 (1993)及美國專利第5,478,745號。
在一些實施例中，重組AAV可使用三重轉染方法產生(如美國專利第6,001,650號中詳述)。通常，重組AAV藉由用重組AAV載體(包含轉殖基因)轉染宿主細胞來產生，以被包裝到AAV粒子、AAV輔助功能載體及附屬(accessory)功能載體中。AAV輔助功能載體編碼「AAV輔助功能」序列(亦即，rep及cap)，其以反式起作用以用於生產性AAV複製及包殼(encapsidation)。較佳地，AAV輔助功能載體支持有效AAV載體生產而不產生任何可偵測的野生型AAV病毒粒子(亦即，包含功能性rep及cap基因的AAV病毒粒子)。適合與本揭露一起使用之載體之非限制性例子包括美國專利第6,001,650號所述之pHLP19及美國專利第6,156,303所述之pRep6cap6載體，此等專利之全部內容以引用之方式併入本文中。附屬功能載體編碼非AAV衍生的病毒及/或細胞功能之核苷酸序列，AAV複製依賴於此等功能(亦即，「附屬功能」)。附屬功能包括AAV複製所需要之彼等功能，包括但不限於，彼等參與AAV基因轉錄活化、階段特異性AAV mRNA剪接、AAV DNA複製、cap表現產物合成及AAV殼體組裝之部分。基於病毒之附屬功能可來源於已知輔助病毒中任一種，諸如腺病毒、疱疹病毒(1型單純疱疹病毒除外)及痘苗病毒。
在一些態樣，本揭露提供了rAAV載體轉染之宿主細胞。術語「轉染」用於指細胞攝取外源DNA，並且當外源DNA經引入細胞膜內部時，細胞已被「轉染」。多種轉染技術係此項技術中一般已知的。參見例如，Graham等人(1973) Virology,52:456，Sambrook等人(1989) Molecular Cloning,a laboratory manual,Cold Spring Harbor Laboratories,New York，Davis等人(1986) Basic Methods in Molecular Biology,Elsevier，及Chu等人(1981) Gene 13:197。此類技術可用於將一種或多種外源核酸，諸如核苷酸整合載體及其他核酸分子，引入合適的宿主細胞。
「宿主細胞」係指包含或能夠攜帶目標物質之任何細胞。宿主細胞經常為哺乳動物細胞。在一些實施例中，宿主細胞為細菌細胞、酵母細胞、昆蟲細胞(Sf9)或哺乳動物(例如，人類、嚙齒動物、非人類靈長類動物等)細胞。宿主細胞可用作AAV輔助構築體、AAV小基因質體、附屬功能載體或與重組AAV生產相關聯之其他轉移DNA之受體。該術語包括已被轉染之原始細胞之後代。因此，如本文所用，「宿主細胞」可指已用外源DNA序列轉染之細胞。應理解，由於自然、偶然或蓄意的突變，單個親本細胞之後代在形態學或基因組或總DNA補體方面可能不一定與原始親本完全相同。在一些實施例中，根據本揭露之宿主細胞為心肌細胞。
在一些實施例中，將多肽或編碼該多肽之核酸(例如，mRNA、病毒載體或rAAV)調配成用於投與受試者以治療心律不整之組成物(例如，醫藥組成物)。在一些實施例中，組成物還包含醫藥學上可接受之載劑。
片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷範疇內適合與人類及動物之組織接觸使用而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，符合合理的效益/風險比之彼等化合物、材料、組成物及/或劑型。術語「醫藥學上可接受之載劑」意指涉及將主題藥劑自身體之一個器官或部分運載或運輸至身體之另一器官或部分之醫藥學上可接受之材料、組成物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料。各載劑必須在可與該調配物之其他成分相容且對患者之組織無害(例如，生理上相容、無菌、生理pH等)之意義上為「可接受的」。術語「載劑」表示天然或合成的有機或無機成分，活性成分與其結合以促進應用。醫藥組成物之組分還能夠與本揭露之分子及彼此以使得不存在會顯著損害所需醫藥功效之相互作用之方式共混合。可用作醫藥學上可接受之載劑之材料之一些例子包括：(1)糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)澱粉，諸如玉米澱粉及馬鈴薯澱粉；(3)纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素及乙酸纖維素；(4)粉末狀黃蓍膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉及滑石；(8)賦形劑，諸如可可脂及栓劑蠟；(9)油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；(10)二醇，諸如丙二醇；(11)多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇(PEG)；(12)酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無熱原水；(17)等張生理食鹽水；(18)林格氏溶液(Ringer's solution)；(19)乙醇；(20) pH緩衝溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯及/或聚酐；(22)填充劑，諸如多肽及胺基酸；(23)血清組分，諸如血清白蛋白、HDL及LDL；(22) C2-C12醇，諸如乙醇；(23)用於醫藥調配物之其他無毒相容物質。潤濕劑、著色劑、脫模劑、包衣劑、甜味劑、調味劑、加香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於調配物中。
考慮到組成物(例如，醫藥組成物)所針對之適應症，熟習此項技術者可容易地選擇合適的載劑。例如，一種合適的載劑包括鹽水，其可與多種緩衝溶液(例如，磷酸鹽緩衝鹽水)一起調配。其他示範性載劑包括無菌鹽水、乳糖、蔗糖、磷酸鈣、明膠、葡聚醣、瓊脂、果膠、花生油、芝麻油及水。載劑之選擇不構成對本揭露之限制。
通常，組成物(例如，醫藥組成物)可含有至少約0.1%之活性化合物或更多，儘管活性成分百分比當然可變化且可方便地在總調配物之重量或體積之約1或2%與約70%或80%之間、或更多。自然，各治療上有用的組成物中之活性化合物量可以一種方式製備，使得在化合物之任何給定單位劑量下將獲得合適劑量。諸如溶解度、生物利用度、生物半衰期、投與途徑、產品貨架壽命、以及其他藥理學考慮等因素將由熟習製備此類醫藥調配物技術者考慮，且因此，多種劑量及治療方案可能係合意的。
在一些實施例中，組成物包含本文所述之rAAV中任一種。在一些實施例中，此等組成物被調配成減少組成物中AAV粒子之聚集，特別是在存在高rAAV濃度(例如，～1013 GC/ml或更高)時。用於減少rAAV聚集之方法係此項技術中熟知的，並且包括例如添加界面活性劑、調節pH、調節鹽濃度等。(參見例如，Wright FR,等人,Molecular Therapy (2005) 12,171-178，其內容以引用之方式併入本文中)。
醫藥組成物可方便地以單位劑型提供且可藉由藥劑學技術中熟知之方法中任一種來製備。當用於指代本揭露之醫藥組成物時，術語「單位劑量」係指對受試者適合作為單一劑量之物理離散單位，各單位含有經計算產生所需治療效果之預定量活性材料與所需稀釋劑(亦即，載劑)或媒劑。
醫藥組成物之調配可依賴於投與途徑。適用於非經腸投與或瘤內、瘤周圍、病灶內或病灶周圍投與之可注射製劑包括例如無菌可注射水性或油性懸浮液，並且可使用合適的分散劑或濕潤劑及懸浮劑根據已知技術來調配。無菌可注射製劑亦可為於無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液、懸浮液或乳液，例如呈於1,3丙二醇或1,3丁二醇中之溶液形式。可採用之可接受之媒劑及溶劑包括水、U.S.P.林格氏溶液及等張氯化鈉溶液。此外，習慣上將無菌、非揮發性油用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成單酸甘油酯或二酸甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸可用於可注射劑之製備。可例如藉由透過濾菌過濾器(bacterial-retaining filter)之過濾或藉由併入呈無菌固體組成物形式之滅菌劑來將可注射調配物滅菌，此等無菌固體組成物可於使用之前溶解或分散於無菌水或其他無菌可注射介質中。
關於局部投與，醫藥組成物可被調配成如此項技術中一般已知之軟膏、油膏、凝膠或乳膏。局部投與可利用此項技術中熟知之經皮遞送系統。一個例子為皮膚貼劑。
適用於經口投與之組成物可以離散單位諸如膠囊、錠劑、口含錠存在，各單位含有預定量的抗炎劑。其他組成物包括在水性液體或非水性液體中之懸浮液，諸如糖漿、酏劑或乳液。
其他遞送系統可包括時間釋放、延遲釋放、或持續釋放遞送系統。此類系統可避免消炎劑重複投與，從而為受試者及醫師增加便利。許多類型的釋放遞送系統為可用的且為一般技藝人士所熟知。它們包括聚合物基礎系統，諸如聚(丙交酯-乙交酯)、共聚草酸酯、聚己內酯、聚酯醯胺、聚原酸酯、聚羥基丁酸及聚酐。含有藥物之前述聚合物之微膠囊描述於例如美國專利第5,075,109號中。遞送系統還包括，以下非聚合物系統：脂質，包括甾醇，諸如膽固醇、膽固醇酯及脂肪酸或中性脂肪，諸如甘油單酯、甘油二酯及甘油三酯；水凝膠釋放系統；sylastic系統；基於肽之系統；蠟包衣；使用習知黏合劑及賦形劑之壓片；部分融合之植入物；及其類似物。具體實例包括但不限於：(a)消炎劑以某種形式包含在基質中之侵蝕系統，諸如美國專利第4,452,775、4,667,014、4,748,034及5,239,660號中描述的彼等系統，及(b)其中活性成分以受控速率自聚合物中滲透之擴散系統，諸如美國專利第3,832,253及3,854,480號中所述。此外，可使用基於泵之硬體遞送系統，其中一些適用於植入。
使用長期持續釋放植入物可特別適於治療慢性病況。如本文所用，長期釋放意指植入物經構築及排列以遞送治療水準的活性成分達至少30日，且較佳達60日。長期持續釋放植入物係一般技藝人士所熟知的，並且包括上述釋放系統中之一些。
在一些實施例中，用於治療性投與之醫藥組成物必須係無菌的。滅菌可藉由透過無菌過濾膜(例如，0.2微米膜)之過濾來輕易達成。替代地，防腐劑可用於防止微生物之生長或活動。各種防腐劑係熟知的，並且包括例如苯酚及抗壞血酸。若多肽、核酸、rAAV或醫藥組成物對熱變性及氧化變性高度穩定，則一般以凍乾形式或作為水性溶液儲存。製劑之pH通常為約6至8，但在某些情況下更高或更低pH值亦可能係適當的。
適用於可注射用途之醫藥形式包括無菌水性溶液或分散液及用於臨時製備無菌注射液或分散液之無菌粉末。亦可於甘油、液體聚乙二醇、及其混合物中及於油中製備分散液。在一般儲存及使用條件下，此類製劑含有防腐劑以防止微生物生長。在許多情況下，該形式為無菌的且流動性應達到易於注射之程度。其應在製造及儲存條件下穩定且必須免受諸如細菌及真菌之微生物的污染作用而保藏。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物)、其合適混合物及/或植物油之溶劑或分散介質。適當流動性可例如藉由使用包衣(諸如卵磷脂(lecithin))、在分散液之情況下藉由維持所需粒度及藉由使用界面活性劑加以維持。微生物作用之預防可藉由多種抗細菌劑及抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞及其類似物來引起。在許多情況下，將較佳的係包括等張劑，例如糖或氯化鈉。可注射組成物之延長吸收可藉由在組成物中使用延遲吸收之劑(例如單硬脂酸鋁及明膠)來引起。
例如，對於可注射水性溶液之投與，該溶液必要時可適當地經緩衝，並且該液體稀釋劑首先用足夠生理鹽水或葡萄糖變得等張。此等特定水性溶液特別適用於靜脈內、肌肉內、皮下及腹膜內投與。在這方面，可採用之無菌水性介質係熟習此項技術者已知的。例如，一個劑量可溶解於1 ml等張NaCl溶液，並且添加至1000 ml皮下灌注流體或注射在建議輸注部位(參見例如「Remington's Pharmaceutical Sciences」第15版,第1035-1038頁及第1570-1580頁)。根據宿主之病況，劑量必然會發生一些變化。在任何情況下，負責投與者皆將決定個體宿主之適當劑量。
無菌可注射溶液藉由將所需量之活性劑與所需的多種在本文列舉之其他成分一起併入適當溶劑中，隨後過濾滅菌來製備。一般而言，分散液藉由將各種已滅菌之活性成分併入含有基礎分散介質及來自上文列舉之成分的所需要之其他成分之無菌媒劑來製備。在用於製備無菌可注射溶液之無菌粉末的情況下，較佳製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥技術，其產生活性成分加來自先前其無菌過濾之溶液的任何額外所需成分之粉末。
諸如脂質體、奈米膠囊、微粒、微球、脂質粒子、囊泡及其類似物遞送媒劑可用於將本揭露之組成物引入合適的宿主細胞中。特別地，核酸、蛋白質或rAAV可被調配用於遞送或者封裝在脂質粒子、脂質體、囊泡、奈米球或奈米粒子等中。
對於引入本文揭露之核酸、蛋白質或rAAV之醫藥學上可接受的調配物，此類調配物係較佳的。脂質體之形成及使用一般係熟習此項技術者已知的。最近，已開發了具有改進的血清穩定性及循環半衰期之脂質體(美國專利第5,741,516號)。此外，已描述了脂質體及脂質體樣製劑作為潛在藥物載劑之各種方法(美國專利第5,567,434；5,552,157；5,565,213；5,738,868及5,795,587號)。
脂質體已成功用於許多正常對藉由其他程序之轉染具有抗性之細胞類型。此外，脂質體不受對於基於病毒之遞送系統典型的DNA長度限制。脂質體已被有效用於將基因、藥物、放射治療劑、病毒、轉錄因子及異位效應子引入各種培養的細胞系及動物中。此外，已完成了若干項檢查脂質體介導的藥物遞送之有效性之成功臨床試驗。
脂質體由分散於水性介質中並自發形成多層同心雙層囊泡(亦稱為多層囊泡(multilamellar vesicle，MLV))之磷脂形成。MLV一般具有25 nm至4 μm之直徑。MLV之超音處理導致形成直徑在200至500 Å範圍內之小單層囊泡(small unilamellar vesicle，SUV)，核心中含有所需溶液。
替代地，可使用活性劑之奈米膠囊調配物。奈米膠囊一般可以穩定且可再現之方式捕獲物質。為了避免由於細胞內聚合物過載而引起的副作用，此類超細粒子(尺寸經設計為約0.1 μm)應使用能夠在體內降解之聚合物來設計。考慮使用滿足此等要求之可生物降解的聚氰基丙烯酸烷基酯奈米粒子。
除了上述遞送方法之外，還考慮以下技術作為將組成物遞送至宿主之替代方法。在美國專利第5,656,016號中已使用且描述了超音波導入術(亦即，超音波)作為用於提高藥物滲透進入且透過循環系統之速率及功效之裝置。考慮的其他藥物遞送替代方案為骨內注射(美國專利第5,779,708號)，微芯片裝置(美國專利第5,797,898號)，眼科調配物(Bourlais等人,1998)，經皮基質(美國專利第5,770,219及5,783,208號)及反饋控制遞送(美國專利第5,697,899號)。
本文揭露之組成物亦可被調配成中性或鹽形式。醫藥學上可接受的鹽，包括酸加成鹽(與蛋白質之遊離胺基形成)，以及與無機酸(例如像，鹽酸或磷酸)或有機酸(諸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸及其類似物)形成的鹽。與游離羧基形成的鹽亦可來源於無機鹼例如像氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵，以及有機鹼諸如異丙胺、三甲胺、組胺酸、普魯卡因及其類似物。在調配時，溶液將以與劑量調配物相容之方式且以治療有效量投與。調配物易於以多種劑型投與，諸如可注射溶液、藥物釋放膠囊及其類似物。
本揭露之其他態樣提供本文所述之多肽、核酸、rAAV或組成物中任一種用於治療心律不整。在一些實施例中，治療心律不整之方法包括投與需要其之受試者有效量的重組腺相關病毒(rAAV)，其中rAAV包含殼體蛋白(例如，血清型AAV9之殼體蛋白)及編碼包含MYBPC3之C末端域之多肽(例如，SEQ ID NO: 1-16中任一項之多肽)之核苷酸序列。
在最廣泛意義上，術語「治療」或「以治療」係指治療性治療及預防性治療。若受試者需要治療疾病(例如，心律不整)，「治療病況」係指改善、減輕或消除與疾病(例如，心律不整)相關聯之一種或多種症狀或預防疾病之任何進一步進展。若需要治療之受試者係處於患有心律不整風險中之受試者，則治療受試者係指降低受試者患有心律不整之風險或防止受試者發生心律不整。
受試者應意指人類或脊椎動物或哺乳動物，包括但不限於嚙齒動物，例如大鼠或小鼠、狗、貓、馬、牛、豬、綿羊、山羊、火雞、雞及靈長類動物，例如猴。本揭露之方法可用於治療需要其之受試者。
本揭露之術語「治療有效量」係指實現所需生物效應所必需或足夠之量。例如，與本揭露相關聯之多肽或編碼其之核酸之治療有效量可為足以改善心律不整之一種或多種症狀之量。結合本文提供之教導，藉由在各種活性化合物及權衡因素諸如效力、相對生物利用度、患者體重、不良副作用之嚴重程度及較佳投與方式中進行選擇，可計劃有效的預防性或治療性治療方案，該方案不會引起實質性毒性並且對治療特定受試者完全有效。任何特定應用之有效量可根據諸如所治療之疾病或病況、所投與之特定治療性化合物、受試者之體重或疾病或病況之嚴重程度等因素而變化。一般技藝人士可憑經驗決定與本揭露相關聯之特定治療性化合物之有效量，而無需過度實驗。
在一些實施例中，rAAV之「有效量」係足以靶向感染動物、靶向所需組織(例如，心臟組織)之量。有效量將主要取決於諸如受試者之物種、年齡、體重、健康及待靶向之組織等因素，並且因此可因動物及組織而變化。例如，rAAV之有效量一般在約1 ml至約100 ml含有約109 至1016 個基因組拷貝之溶液之範圍內。在一些實施例中，約1013 至1015 個rAAV基因組拷貝之間之劑量係適當的。
rAAV以足以轉染所需組織之細胞，並提供足夠水準之基因轉移及表現，而不產生過度副作用之量來投與。習知且醫藥學上可接受之投與途徑包括但不限於，直接遞送至選定器官(例如，遞送至心臟)、經口、吸入(包括鼻內及氣管內遞送)、眼內、靜脈內、肌肉內、皮下、皮內、瘤內及其他非經腸投與途徑。若需要，可組合投與途徑。
可以根據此項技術中已知之任何適當方法將本揭露之多肽、核酸、rAAV及包含其之組成物以組成物形式遞送於受試者。例如，可將較佳地懸浮於生理相容載劑(例如，組成物)中之rAAV投與受試者，例如宿主動物，諸如人類、小鼠、大鼠、貓、狗、綿羊、兔、馬、牛、山羊、豬、豚鼠、倉鼠、雞、火雞或非人類靈長類動物(例如，獼猴(Macaque))。在一些實施例中，宿主動物不包括人類。
多肽、核酸、rAAV劑組成物向哺乳動物受試者之遞送可藉由例如肌肉內注射或藉由向哺乳動物受試者之血流中投與。可藉由注射到靜脈、動脈或任何其他血管導管中來向血流中投與。在一些實施例中，如本揭露所述之多肽、核酸、rAAV及組成物藉由靜脈內注射投與。在一些實施例中，多肽、核酸、rAAV及組成物藉由肌肉內注射投與。在一些實施例中，多肽、核酸、rAAV及組成物藉由注射到心臟中投與。在一些實施例中，多肽、核酸、rAAV及組成物被遞送於受試者之心肌細胞。
在一些實施例中，藉由肌內注射向受試者投與多肽、核酸、rAAV或組成物劑量，每個日曆日(例如，24小時週期)不超過一次。在一些實施例中，藉由肌內注射向受試者投與多肽、核酸、rAAV或組成物劑量，每2、3、4、5、6或7個日曆日不超過一次。在一些實施例中，向受試者投與多肽、核酸、rAAV或組成物劑量，每個日曆週(例如，7個日曆日)不超過一次。在一些實施例中，向受試者投與多肽、核酸、rAAV或組成物劑量，每兩週不超過一次(例如，兩個日曆週週期中一次)。在一些實施例中，向受試者投與rAAV劑量，每個日曆月不超過一次(例如，30個日曆日中一次)。在一些實施例中，向受試者投與多肽、核酸、rAAV或組成物劑量，每留個日曆月不超過一次。在一些實施例中，向受試者投與多肽、核酸、rAAV或組成物劑量，每個日曆年(例如，365天或閏年366天)不超過一次。在一些實施例中，向受試者投與多肽、核酸、rAAV或組成物劑量，作為單劑量療法。
可使用本文所述之方法治療之病症與異常2型蘭尼鹼受體(RYR2)功能相關聯。在一些實施例中，異常RYR2功能係由RYR2之一個或多個(例如，1、2、3、4、5個或更多個)突變引起的。在一些實施例中，異常RYR2功能(例如，由RYR2之突變引起)與受試者心肌細胞中之過度的(例如，至少20%、至少50%、至少100%、至少2倍、至少10倍、至少100倍或更多)舒張Ca2+ 釋放相關聯。引起心肌細胞中之過度的舒張Ca2+ 釋放之RYR2之突變係此項技術中已知的，例如，如Jiang等人,PNAS August 31,2004 101 (35) 13062-13067；Liu等人,PLoS One.2017; 12(9): e0184177；及Postma等人,J Med Genet.Nov;42(11):863-70中所述，此等文獻以引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，與異常RYR2功能相關聯之病症為心律不整。在一些實施例中，心律不整為遺傳性的或獲得性的。在一些實施例中，遺傳性心律不整為兒茶酚胺能多形性心室性心搏過速(CPVT)。在一些實施例中，CPVT與RYR2之突變相關聯。在一些實施例中，獲得性心律不整為室性心律不整或室上性心律不整。在一些實施例中，室性心律不整為心室性心搏過速、心室性震顫或心室性早期收縮。在一些實施例中，室上性心律不整為心房震顫、心房撲動、心房心搏過速、心房早期收縮或陣發性室上性心搏過速。在一些實施例中，與異常RYR2功能相關聯之病症為心力衰竭。
在一些實施例中，投與多肽、核酸或rAAV減少受試者心肌細胞中之過度的舒張Ca2+ 釋放(例如，至少20%、至少50%或至少90%)。在一些實施例中，投與多肽、核酸或rAVV將受試者之心肌細胞中舒張Ca2+ 釋放恢復至正常水準。在一些實施例中，正常水準為健康受試者中舒張Ca2+ 釋放水準。 實例實例 1
CPVT (兒茶酚胺能多形性心室性心搏過速)係一種惡性遺傳性心律不整，其中患者在運動時有發生致命性心律不整之風險1 。CPVT具有1:10000的估計患病率，並導致約15%的年輕人中不明原因的突然死亡之屍檢陰性2病例2 。60% CPVT病例係藉由2型蘭尼鹼受體(RYR2)之突變引起的1,3 ，係心肌細胞之主要細胞內Ca2+ 釋放通道。在RYR2中，已知在編碼序列之4個「熱點」區域內聚類的超過160種不同突變4 導致CPVT。目前CPVT不能藉由可用選擇充分治療，並且患者繼續遭受猝死或流產猝死以及當前療法引起的發病率5 。因此，直接概念驗證市場空間為對醫療管理之反應次最佳化之CPVT患者。最終，預計基因療法可成為CPVT之標準治療。
CPVT之突變干擾正常心肌細胞Ca2+ 處理。隨著每次心跳，Ca2+ 水準在收縮期上升，向肌節發出收縮信號，並且在舒張期下降，導致肌節放鬆。此等細胞質Ca2+ 濃度變化係藉由質膜之去極化啟動的，該去極化打開L型Ca2+ 通道以允許少量細胞外Ca2+ 進入細胞。這種Ca2+ 進入刺激位於肌質網之RYR2以打開並釋放更多Ca2+ 。這種Ca2+ 誘導之Ca2+ 釋放迅速增加細胞溶質Ca2+ ，這協調肌節收縮。L型Ca2+ 通道及RYR2之時間依賴性關閉以及細胞溶質Ca2+ 藉由ATP依賴性泵(SERCA2A)主動返回肌質網，使Ca2+ 濃度在舒張期恢復至低水準。少量Ca2+ 經由Na+ /Ca2+ 交換器NCX (Na+ /Ca2+ exchanger)返回細胞外空間。CPVT突變導致過度的舒張Ca2+ 穿過RYR2之釋放。升高的舒張Ca2+ 驅動更大的Na+ /Ca2+ 交換。由於這種交換係生電的，升高的交換導致膜去極化(後去極化)，這可導致另一個動作電位(「觸發活動」)或產生可導致心律不整衝動傳播(「再進入」)之複極異質性6,7 。
本文所述之治療劑之作用機制為限制RYR2之過度活性，此係CPVT發病機制之核心。重要地，RYR2之功能障礙係許多類型心髒病之最終共同途徑，並且因此這種抗心律不整療法之適應症可能會擴大以包括其他類型的遺傳性或獲得性心肌病，包括心房震顫8 (患病率，人口之1%及80歲以上患者之9%)。
CPVT患者藉由當前醫療及手術選擇治療效果不佳5,9,10 。當前醫療選擇有很大副作用，並且提供不完全保護。
我們當前的醫療選擇為運動限制。運動限制對兒童及青少年而言係困難的，並且限制運動具有終生社會心理及醫學意義。運動之長期益處越來越多地得到認可，並且與心血管、代謝及炎性病症以及乳腺、子宮內膜及結腸惡性腫瘤之終生風險相關聯。11-13
另一個當前選擇為利用高劑量β受體阻斷劑。由於對整體能量水準及情緒之影響，高劑量β受體阻斷通常難以耐受。因此，不依從β受體阻滯劑或低於治療性給藥的情況很常見。在最近一項研究中，主要使用β阻斷劑管理之患者中有25%至33%之患者出現治療失敗(暈厥或心臟驟停)5,14 。在此等治療失敗中，分別有41%及48%的患者出現次最佳化給藥及不依從處方療法之情況5 。
另一種當前醫療選擇為氟卡尼(flecainide)。已發現β受體阻斷劑加氟卡尼(一種鈉通道阻斷劑)之組合對CPVT患者有效15。在成年心髒病試驗中，氟卡尼具有很大的促心律不整影響並增加死亡率16 。氟卡尼是否增加CPVT之長期存活尚不清楚。在急性運動測試中，76%的患者對氟卡尼有反應，而24%沒有17 。在隨訪時間有限(中值為1.7年)之回溯性研究中，氟卡尼似乎很有希望，儘管38%的患者有持續症狀5 。
另一種當前醫療選擇為左心交感神經去神經支配術(left cardiac sympathetic denervation，LCSD)。手術切斷左頸交感神經鏈減少心臟之腎上腺素能刺激，並且對一些突發性心律不整之CPVT患者在醫療管理上係有益的。LCSD應在專業中心進行，並且霍納氏綜合徵等手術併發症並不少見。LCSD降低心臟事件之頻率，但在中值37個月之隨訪中，24%的患者至少有一次復發性心臟事件18 。
另一種當前醫療選擇為植入式心臟除顫器(implanted cardiac defibrillator，ICD)。在患有CPVT之兒童及青少年中，ICD併發症很常見，並且與高電擊負擔相關聯10 。ICD可有效終止心室性震顫，但不能有效終止心室性心搏過速9 。此外，清醒患者之ICD放電會導致兒茶酚胺釋放，使得可能發生進一步心律不整，從而導致可能致命的「電風暴」。最近的證據表明，對於繼發於CPVT之心臟驟停患者，ICD沒有存活益處。由於此等原因，應儘可能避免為CPVT放置ICD，儘管這會導致患者依賴藥物治療，並伴隨著依從性及突發性事件之相關問題19 。
儘管CPVT相對罕見，但該疾病仍然係其他方面健康、功能正常兒童之發病率及死亡之主要原因，其社會及經濟成本非常高。反復到醫院進行臨床評估及手術規程使患者及機構面臨巨大成本。
本揭露提出用於治療CPVT之組成物及方法。該組成物包含AAV-CTDP，其中具有心肌細胞選擇性啟動子之腺相關病毒表現肽CTDP (MYBPC3 C末端衍生肽)，其降低RYR2之異常活性，此係CPVT之心律不整以及許多其他遺傳性及獲得性心律不整之根本原因。
目標人群為所有CPVT患者，儘管醫療管理(β阻斷劑及氟卡尼之突發性心律不整)失敗之患者亦開始使用。基因療法載體藉由靜脈輸注遞送，作為單劑量治療。本文所述之基因療法降低死亡率及突發性心律不整，減少對LCSD及ICD之需要，減少或消除對高劑量β阻斷劑之需要，並允許一定水準之運動。此等變化將極大地改進CPVT患者之生活品質。成功基因療法將減少醫療依從性對患者結果之影響，此係此等青少年及年輕成年患者生死攸關之難題。此等益處係基於在CPVT小鼠模型及攜帶CPVT突變之人類iPSC衍生的心肌細胞中初步決定之功效而預期的。
預計本文所述之組成物及方法可擴展到比CPVT更常見之其他心律不整，其中RYR2之異常Ca2+ 釋放係疾病發病機制之核心20 。一種可能的擴大適應症為心房震顫，其影響9%的80歲及以上患者。
AAV介導的CTDP之遞送之一種潛在替代方案係作為細胞穿透肽遞送。與AAV基因療法相比，肽療法具有與習知藥品更相似的特性及成本。然而，肽水準及心臟特異性可能低於AAV基因療法。此外，要在臨床上有效，該產品將需要經口可用，這對肽療法而言可能係一項挑戰。由於此等原因，主要策略為AAV基因療法，其中基於肽之療法係一種潛在替代方案，這取決於細胞穿透肽技術之改進。結果
進行鄰近蛋白質組學以鑑定定位於二分體之蛋白質，RYR2定位於該二分體處。這鑑定了來源於一種肌節蛋白MYBPC3之C末端之肽(第1A-1F圖)。全長MYBPC3定位於肌節之不同部分(「A帶」)。與這一發現一致，MYBPC3-RYR2相互作用先前在酵母2-雜交篩選中被注意到22 。使用對蛋白質之最C末端域C10域具有特異性之單株抗體進行之免疫染色，證明內源性C10與RYR2共定位(第2B圖)。在對照實驗中，表明此單株抗體在MYBPC3 KO小鼠中不產生顯著免疫螢光信號。MYBPC3-C10及RYR2之鄰近性使用鄰近連接檢定(PLA)進一步證實，PLA係一種用於兩種蛋白質之間相互作用之原位檢定(第2C及2D圖)。
為了決定此相互作用之功能意義，開發了AAV以將MYBPC3 C末端之部分遞送於小鼠心臟。MYBPC3由若干個標記為C1-C10之免疫球蛋白樣及纖維連接蛋白樣域組成(第2A圖)。將C10的分佈與全長MYBPC3進行比較，兩者均藉由AAV遞送，並且證實此等蛋白質定位於不同位點：C10定位模式與RYR2靠近肌節Z線(二分體定位於此處)一致，而全長蛋白質定位於MYBPC3在肌節A帶內之完善位置(第2E圖)。
人類基因療法之可行性之一個重要考慮因素為需要轉導以實現功效之心肌細胞之百分比。一個平行問題係部分心肌轉導及所產生的心肌異質性是否可能為促心律不整的。儘管相對於AAV-MYBPC3之此等問題之答案尚未決定，但其他CPVT之基因療法研究之結果係有益的。在由CASQ2缺陷引起的CPVT (CPVT之常染色體隱性形式)之AAV基因置換療法中，Priori及其同事報道了在用約40%之心肌細胞轉導的小鼠中之治療功效及無促心律不整24,25 。類似地，在AAV介導的CaMKII抑制以治療由RYR2突變引起的CPVT之報道中，在用50%心肌細胞轉導的小鼠中觀察到治療功效而沒有促心律不整21 。正式劑量反應實驗正在進行中，以決定功效所需的最小轉導效率；基於具有少量重複之先導實驗，據信大約為20%。該機制可能基於稱為「源-匯不匹配」的概念：因為心肌細胞與其相鄰細胞電連接，因此一個心肌細胞之活動藉由其與相鄰細胞之相互作用而穩定。為了使心肌細胞異常去極化，需要產生足夠的電流以使鄰近細胞去極化。以這種方式，一小部分對異常活動有抵抗力之心肌細胞可穩定細胞網絡。
評估MYBPC3對人類CPVT患者來源的iPSC-CM之Ca2+ 處理之影響。MYBPC3表現降低用一種β-腎上腺素能藥物異丙醇刺激之CPVT iPSC-CM中Ca2+ 放電之頻率(第3D圖)。這證明了在人類細胞中之功效以及在人類iPSC-CM培養及此等細胞之Ca2+ 處理特徵化方面之專業性。
使用沒有報告基因之治療性候選載體進行劑量反應實驗會使轉導效率之量測變得困難。然而，這係衡量物種之間劑量之關鍵參數。為了克服這一困難，實驗室建立了RNA原位雜交方法。例如，對於使用AAV-TAZ治療Barth綜合徵小鼠模型之單獨項目，使用RNAscope RNA原位雜交來量測轉導的心肌細胞之分數。此處使用此相同技術來量測轉導效率，而無需依賴嵌入在治療性候選載體中之報告基因。
當前護理標準已有效降低CPVT患者心臟驟停及死亡之風險。然而，保護係不完全的，並且心臟驟停及死亡仍然係一項威脅。對當前SOC之不完全保護係由於(1)當前管理之無法耐受的副作用，導致不依從；(2)未能靶向CPVT的根本原因，即RYR2功能障礙。運動限制、β阻斷劑及心臟交感神經去神經支配術被設計以使觸發CPVT患者之心律不整之β-腎上腺素能信號之促心律不整作用最小化。然而，最近的一項回溯性研究表明，CPVT中約五分之一的心臟事件並非由可識別興奮性刺激引起的5 ，這表明去除腎上腺素能信號本身可能並不能完全保護。運動限制、β阻斷劑5,14 及甚至手術交感神經去神經支配術對許多患者之不完全保護表明僅靶向該信號通路係不夠的18 。同樣，氟卡尼之保護作用亦不完全--在急性測試中，24%的患者沒有反應，並且在短期隨訪中，38%的患者在使用氟卡尼同時繼續發生重大事件17 。
本文證明AAV-CTDP藉由用當前護理標準解決這兩個問題來改進結果。RYR2及MYBPC3皆係心臟特異性蛋白，並且AAV將選擇性地直接表現於心臟。因此，預期心肌細胞以外之影響最小。CTDP直接與RYR2相互作用並減少自發Ca2+ 穿過突變RYR2通道之釋放。這種對受影響通道之作用機制比當前β阻斷劑或氟卡尼策略更直接。重要地，此等策略可能互補，因此可設想一個多層策略來提供最大保護，同時使副作用最小化。例如，投與AAV-CTDP可直接降低異常RYR2活性。額外保護可由β阻斷劑可能以更容易耐受之較低劑量提供，或由氟卡尼提供。若療法高度有效，一些患者可在可穿戴心率監測器之指導下恢復一定水準之身體活動。
總之，本文所述之AAV-CTDP可能會代替當前護理標準，並且足以作為單一療法。至少，AAV-CTDP能夠與當前護理標準協同作用，並允許較低水準的β阻斷劑以及不太嚴格的運動限制，使得可更好地保護患者免受猝死風險，同時減少副作用，並由此提高依從性。實例 2.
接下來優化治療性候選載體設計。此等優化實驗係在人類iPSC-CM及CPVT小鼠(RYR2-R176Q/+及RYR2-R4650I/+)成年CM中進行的。有兩個參數需要考慮。
第一個需要考慮之參數為RYR2抑制肽。初步數據表明，MYBPC3之C末端有效降低含有CPVT突變之RYR2之異常活性。構築表現不同C末端肽(C6-C10、C6-C8、C8-10、C9-C10、C10、C6-C9、C7-C9、C8-C9、C9)之AAV。最初體外數據表明，包含C6-C8及C6-C9以及C10域之肽結合於與RYR2相同之亞細胞位置(第2A-2F圖)。還測試了包含C6、C7、C8、C9及/或C10域之肽片段在RYR2S404R/wt 小鼠中降低VT之能力。數據表明C6-C8及C6-C10在降低VT方面最有效(第5B-5C圖)並且不損害心臟收縮(第5A-5C圖)。C6-C10片段還表明使用EKG降低CT (第5C圖)並突出地減少異常鈣(第5D-5E圖)。最小有效 MYBPC3 片段之作圖
與RYR2相互作用之MYPBC3片段使用生物分子螢光互補檢定(Biomolecular fluorescence complementation assay，BiFC)進行鑑定，如第6圖所示。在BiFC檢定中，MYBPC3片段及RYR2各自融合至Venus螢光蛋白之一半。若給定MYBPC3片段與RYR2相互作用，則Venus之一半會聚在一起，並鑑定螢光信號。MYBPC3片段係基於已知域結構(第9A圖)並在表2中列出。對於BiFC中之相互作用，PLN-Serca2相互作用用作陽性對照，而Serca-RYR2相互作用用作陰性對照(第7-8圖)。 表2：BiPC檢定中使用之蛋白質及蛋白質片段。
蛋白質1：MYBPC3截斷形式(AA位置) 蛋白質2：RyR2截斷形式 陽性對照 陽性對照 陰性對照 陰性對照
C6C10 (771-1274) mRyR2 1-906 PLN Serca2 Junctin Serca2
C6C10 (871-1274)
C6C10 (771-870，971-1274)
C6C10 (771-970，1071-1274)
C6C10 (771-1070，1171-1274)
C6C10 (771-1170)
C6C10 (971-1274)
C6C10 (1071-1274)
C6C10 (1171-1274)
C6C10 (771-1070)
C6C10 (771-970)
C6C10 (771-870)
cDNA來源 PCR 合成 小鼠 大鼠 小鼠
注釋 C末端之Split-FP N末端之Split-FP N末端之Split-FP N末端之Split-FP N末端之Split-FP
BiFC之結果證明MYBPC3之C7及C8區域為MYBPC3與RYR2之間相互作用之主要貢獻者。測試MCBPC3之不同片段與RYR2之結合。C9-C10、C10、C6-C10、C7-C10及C8-C10之結果強烈表明C7及C8 區域皆有助於結合(第9C-9D圖)。然後測試MYBPC3之C6-C8區域與RYR2之結合，並且發現單獨C6片段不結合RYR2，但C6-C7及C6-C8片段確實與RYR2結合(第9E圖)。進一步實驗決定C7-C8足以結合RYR2，並且缺少C7或C8之MYBPC3片段可與RYR2結合，儘管親和力較低(第9F圖)。第9A-9F圖中螢光圖像在第11圖中進行定量，並進一步證明，與不含C7及C8之片段相比，含有C7及/或C8之片段與RYR2結合。額外的實驗表明MYBPC3與RYR2之間之相互作用主要藉由C7片段發生(第13A-13B圖)。各MYBPC3與RYR2之結合功效以圖形方式總結於第12圖中，其中遞增數量之「+++」表示更高的相互作用親和力。還表明，非相互作用之MYPBC3域與RYR2共表現並穩健表現，這排除了表現技術故障作為低Venus信號原因(第10圖)。AAV 表現之 MYBPC3 片段在心肌細胞中之定位
MYBPC3在心肌細胞中建立的定位為肌節之A帶。然而，RYR2位於靠近肌節Z線之接合SR/days中。進行實驗以決定MYBCP3片段是否位於Z線附近，並因此與RYR2位於同一區域。為此，製備MYBPC3構築體，其中在N末端帶有HA標籤，並且在C末端帶有Myc標籤(第14A圖)。此構築體由AAV遞送於心肌細胞。觀察到同一視野中之不同心肌細胞具有不同的HA-MYBPC3-Myc蛋白染色模式。一些細胞具有Z線染色模式，而其他細胞具有A帶染色模式(第14B圖)。進一步分析表明，含有HA之片段主要與A帶結合，而含有Myc之片段主要與Z線結合(第14C-14E圖)。這表明MYBCP3在投與細胞後被切割。
為了測試這一點，將來自野生型、野生型 + HA-MYBPC3-MYC及MYBPC3 KO心臟之心肌細胞裂解物使用HA或C10 (識別MYBPC3之最C末端域之單株抗體)抗體進行探測(第15圖)。KO樣品表明此等抗體不識別裂解物中之其他蛋白質。C10抗體識別全長(箭)及較小蛋白質(箭頭)，而HA抗體僅識別全長蛋白質。野生型及野生型 + HA-MYBPC3-MYC中皆存在較小蛋白質，這表明一部分外源性及內源性MYBPC3在內部被切割以產生包括其C末端域之較小蛋白質。
為了決定C7-C8片段在體內心肌細胞中是否定位成Z線模式，將小鼠用AAV-cTnT-HA-C7C8-P2A-GFP (SEQ ID NO: 78)治療。將心臟切片用HA及ACTN2 (Z線標記物)染色。沿著平行於心肌細胞長軸之線之共聚焦圖像及信號強度表明HA染色具有與Z線共定位之條紋模式，這表明C7-C8片段在體內定位於與RYR2蛋白相同之位置(第16A-16B圖)。人類 CPVT iPSC-CM 對 MYBPC3 之過度表現之反應
進一步證明C6-C10 MYBC3片段抑制由RYR2-S404突變引起的患有CPVT之人類iPSC-CM之異常鈣釋放(第17圖)。細胞加載有Ca2+敏感染料並以1 Hz進行電起搏。對每20秒中異常Ca2+釋放事件之數量進行定量。MYBPC3抑制CPVT突變細胞中之異常Ca2+釋放事件。實例 3
RYR2為四聚體，其具有更高階的聚類，這對於正常Ca2+ 誘導的Ca2+ 釋放很重要。這種結構組織表明多聚化MYBPC3衍生的相互作用蛋白可增加效力或功效。使用上文鑑定之體內抗心律不整作用所需要之最小區域(例如，C7-C8或C7)，生成多聯體，其中2或3個拷貝被撓性接頭分隔。使用體外及體內檢定比較此等構築體之功效。還藉由超音波心動圖檢查對心臟功能之影響。優化的治療性構築體被命名為C末端衍生肽「CTDP」。當優化治療性候選載體時要考慮的第二個參數為用於驅動心肌細胞表現之啟動子。
測試啟動子及增強子以鑑定具有最大表現水準及心肌細胞選擇性之組合。先前開發了大規模平行報告基因檢定以並行測試數千個候選增強子34 ，並且此檢定目前正用於尋找最有效且最具心臟特異性之增強子及啟動子，以驅動AAV表現。
此等實驗用AAV9殼體進行，因為它已被決定為有效的小鼠基因療法載體，並且先前已用於FDA批準之人類產品。
接下來評估治療機制。據信MYBPC3之C末端區域與RYR2相互作用並降低舒張Ca2+ 通量。量測了CTDP對RYR2野生型及RYR2R176Q/+舒張Ca2+ 通量之影響。將RYR2-R176Q/+及同窩對照小鼠用對照AAV (AAV-GFP)或AAV-GFP-CTDP治療。分離出6週齡心肌細胞，並使用既定協定量測舒張肌質網Ca2+ 洩漏33 。
為了進一步測試MYBPC3是否直接與RYR2相互作用，使用了異源表現系統及平面脂質雙層。將RYR2野生型或RYR2R176Q表現質體轉染於HEK293細胞內，並且純化內質網囊泡。囊泡用於接種平面脂質雙層。在用增加濃度之重組CTDP治療後量測透過雙層之Ca2+ 電流。CTDP使RYR2R176Q之Ca2+ 釋放正常化。
接下來，在小鼠CPVT模型中進行劑量反應及毒性研究。使用優化的治療性候物，在CPVT小鼠中進行劑量反應實驗，以決定必須轉導以抑制心律不整之心肌細胞之最小百分比。在初步實驗中，使用AAV-CTDP進行劑量發現及生物分佈研究。向4週齡小鼠靜脈注射AAV-CTDP或對照(AAV-GFP)。在第8週時，將小鼠安樂死並收集組織(心臟、肺、脾、肝、腎、睾丸/卵巢、骨骼肌及腦)用於組織學及分子研究。分析冷凍切片之GFP表現。心臟樣品藉由RNAscope原位雜交進行分析，以直接量測AAV-CTDP轉導之心肌細胞之分數。分子研究量測GFP或CTDP之RNA表現以及每個宿主基因組之病毒基因組拷貝。
已決定了產生10%、30%及50%心肌細胞轉導之病毒劑量後，接下來進行劑量反應研究。使用了兩種不同小鼠CPVT模型，RYR2-R176Q/+及RYR2-R4650I/+。此等CPVT突變發生在蛋白質兩端之不同突變熱點區域。使用這兩種基因型有助於表明該治療對多種不同的CPVT引起的RYR2突變有效。研究了CPVT模型及同窩對照小鼠。小鼠在4週齡時使用這三種劑量之AAV-CTDP或使用轉導50%的心肌細胞之劑量之AAV-GFP進行治療。4週後，小鼠接受超音波心動圖，然後進行電生理學研究。電生理學研究涉及將八極起搏/記錄導管穿過右頸動脈插入並進入右心室。小鼠用腎上腺素能刺激(異丙腎上腺素加腎上腺素)及最近描述之程式化心室刺激進行治療21 。在電生理學研究之後，將小鼠安樂死並保存組織用於組織學檢定及分子檢定。此等研究在無視基因型及治療組的情況下進行。每組有10只動物，3種基因型，以及3種劑量，加上1個對照載體劑量。這項研究需要對120隻小鼠進行給藥及電生理學研究。
接下來測試在兔CPVT模型中之功效。小鼠心臟生理學與人類顯著不同。例如，小鼠心率比人類快10倍，而心臟質量則小2000倍。相比之下，兔心臟生理學與人類更相似-兔心率比人類快約2倍，而質量比人類低約10倍。心率及大小對心臟離子通道之表現以及對心律不整之易感性具有重要意義。兔與人類心臟電生理學之間之更密切比對表明，在兔模型中證明功效及安全性將顯著降低治療策略之風險。兔模型在兔繁殖及飼養以及生產足夠的AAV方面皆很昂貴。因此，如所述在小鼠模型中進行起始劑量發現研究，然後在兔模型中進行驗證。
正在開發兔CPVT模型(R4650I/+)。比較對照及治療的CPVT兔對兒茶酚胺刺激或程式化心室刺激之心律不整反應。
在使用AAV-GFP之初始劑量發現及生物分佈研究中，測試了若干種劑量之治療性載體，並量測了心臟及其他組織之轉導，如上文對於小鼠之任務二所述。用AAV-GFP靜脈內治療幼兔(8週齡)。四週後，在心臟、肺、脾、肝、腎、睾丸/卵巢、骨骼肌及腦中量測轉導及表現。使用RNAscope原位雜交，用相當劑量之AAV-CTDP治療兔以確認等效心臟轉導效率。
CPVT及同窩對照兔用一定劑量之病毒治療，該劑量可將心肌細胞轉導於任務2中所述之對小鼠有效的水準。第三同齡群之CPVT兔未進行治療。治療四週後，兔接受超音波心動圖，然後進行電生理學研究。電生理學研究由在腎上腺素能應激(丙腎上腺素加腎上腺素)及程式化心室刺激期間之表面EKG及心內記錄組成。每組總計10隻兔子，三組總計30隻兔子。
接下來測試在一系列CPVT基因型之人類iPSC-CM中之功效。測試來自具有若干種不同CPVT基因型的患者之iPSC-CM上之AAV-CTDP，此等基因型映射至4個CPVT突變熱點區域中之每一個。AAV2殼體可用於轉染經培養細胞。使用Ca2+ 放電頻率作為主要讀數，跨基因型量測治療性候選物之功效。參考文獻
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等價物及範圍
熟習此項技術者將認識到或僅僅使用常規實驗即能夠探悉本文中描述之實施例之若干等價物。本揭露之範圍不旨在局限於上述說明書，而係如所附申請專利範圍所陳述。
除非相反指示或另外由上下文清楚，否則冠詞諸如「一個」、「一種」、及「該」可意謂一者或多於一者。除非相反指示或另外由上下文清楚，否則在一組之兩個或多個成員之間包括「或」之申請專利範圍或說明書認為滿足組成員之一者、多於一者、或全部存在。在兩個或更多個組成員之間包括「或」的組之揭露提供了其中恰好存在該組之一個成員之實施例、其中存在多於一個組成員之實施例以及其中存在所有組成員之實施例。出於簡潔目的，此等實施例沒有在本文中單獨闡述，但應理解，此等實施例中之每一個均在本文中提供並且可被明確要求保護或放棄。
應理解，本揭露涵蓋所有變化、組合及排列，其中來自一個或多個申請專利範圍或說明書之一個或多個相關部分之一個或多個限制、元素、條款或描述性術語被引入另一申請專利範圍。例如，附屬於另一申請專利範圍的申請專利範圍可修改成包括一或多個附屬於相同基礎申請專利範圍的任何其他申請專利範圍中存在的限制。此外，當申請專利範圍敘述組成物時，應理解，除非相反指示或另外由一般技藝人士清楚很明顯會出現矛盾或不一致，否則包括根據本文揭露之任一製備或使用方法或根據此項技術已知方法(若有的話)製備或使用組成物之方法。
在元素如列表呈現(例如，在Markush組形式中)時，應理解亦揭露該等元素之每個可能子組，且可自該組去除任一元素或元素之子組。還應注意，術語「包括」旨在係開放的並且允許包括額外的元素或步驟。應理解，一般而言，當實施例、產品或方法被稱為包括特定元素、特徵或步驟時，亦提供由或基本上由此類元素、特徵或步驟組成之實施例、產品或方法。出於簡潔目的，此等實施例沒有在本文中單獨闡述，但應理解，此等實施例中之每一個均在本文中提供並且可被明確要求保護或放棄。
在給出範圍之情況下，包括端點。此外，應理解，除非相反指示或另外由上下文及一般技藝人士之理解清楚，否則表述為範圍的值可假定為在一些實施例中在所說明之範圍內的任何特定值，除非上下文另有明確說明，否則至該範圍之下限之十分之一單位。出於簡潔目的，各範圍之值沒有在本文中單獨闡述，但應理解，此等值中之每一個均在本文中提供並且可被明確要求保護或放棄。此應理解，除非相反指示或另外由上下文及一般技藝人士之理解清楚，否則表述為範圍的值可假定為在給定範圍內的任何子範圍，其中子範圍之端點以與該範圍下限單位的十分之一相同的準確度。
在提供網站的情況下，URL位址作為非瀏覽器可執行代碼提供，其中括號中係相應網址的時段。實際網址不含括號。
此外，應理解，本揭露之任何特定實施例可明確地排除在申請專利範圍之任一項或多項之外。在給定範圍的情況下，該範圍內的任何值可明確地自申請專利範圍之任一項或多項中排除。本揭露之組成物及/或方法之任何實施例、元素、特徵、應用或態樣可自申請專利範圍之任一項或多項中排除。出於簡潔目的，本文未明確陳述排除了一個或多個元素、特徵、目的或態樣的所有實施例。
無
隨附圖式不意欲按比例繪製。在圖式中，各個圖中說明之各相同或接近相同之組件係由相同數字表示。為達成清楚之目的，並非在每一圖式中每一組件均可得到標記。本專利或申請文件含有至少一幅彩圖。具有彩圖之本專利或專利申請公開案之複本將在請求且支付必要費用後由專利局提供。在圖式中：
第1A-1F圖展示了存在於二分體中之MYBPC3。第1A圖.描繪了鑑定二分體中之蛋白質之鄰近蛋白質組學策略的示意圖。AAV9指導心肌細胞表現在Junctin (J)或Triadin (T)與BirA*之間的融合蛋白，該融合蛋白催化短壽命生物素自由基形成。Junctin及Triadin及在心肌細胞二分體中與RYR2密切相關聯之蛋白質，它們係此等細胞之特殊Ca2+ 釋放結構。第1B圖.實驗的時間表。將AAV遞送於新生小鼠。在壽命第三週，藉由注射生物素誘導生物素鄰近標記。在P28收集樣品。生物素標記的蛋白質在固定化之鏈黴親和素上分離，並藉由質譜分析。第1C圖.myc標記之融合蛋白在心臟切片內在心肌細胞中之定位。第1D圖.展示融合蛋白與CAV3共定位於解離心肌細胞中之T小管處之更高放大。第1E圖.使用鏈黴親和素-HRP (生物素化蛋白質，左)或總蛋白染色(右)可視化輸入及鏈黴親和素結合之蛋白質。NC，陰性對照AAV (AAV-cTNT-GFP)。第1F圖.質譜分析鑑定了NC心肌細胞及表現BirA*-Triadin或BirA*-Junctin之心肌細胞中之蛋白質。重點係Triadin及Junctin融合蛋白樣品中均富含之蛋白質集，而非對照樣品(勾勒出的區域)。MYBPC3係此蛋白質集中之一者。在177個目標蛋白質中豐富之基因本體術語(在右圖展示)。此等功能註釋高度豐富了心肌細胞相關術語。
第2A-2F圖展示了Mybpc3及Mybpc3衍生肽在心肌細胞中酯亞細胞定位。第2A圖.全長MYBPC3之域結構。域被標記為C0到C10。第2B圖.MYBPC3之內源性C末端域與RYR2相比在野生型心肌細胞中之定位(左)。使用對C10域(胺基酸1213-1229)具有特異性之單株抗體偵測MYBPC3蛋白。此抗體對MYBPC3無效心肌細胞未表現出免疫反應性(右)。與RYR2共定位於二分體之C10免疫反應性。第2C圖.藉由鄰近連接檢定(proximity ligation assay，PLA) MYBPC3及RYR2之共定位。MYBPC3-C10及RYR2抗體標記了原位共定位之蛋白質，如藉由PLA信號(點)所決定的。條 = 10 μm。第2D圖.用RYR2抗體單獨或與MYBPC3-C10抗體組合染色之樣品中PLA信號之定量。第2E-2F圖.AAV表現之HA標記之蛋白質之定位。HA標記之全長及MYBPC3 C末端肽表現出兩種不同染色模式，顏色編碼為紅色及藍色。全長及包含域C6-C10(紅色，上圖)之片段具有雙重(bifid)免疫染色模式螢光信號譜(第2F圖)，與主要定位於肌節A帶一致。然而，此模式不排除定位於二分體之蛋白質子集。包含C6-C8及C6-C9以及單獨的C10域之肽具有獨特螢光染色模式及信號譜(藍色，下圖)，與定位於二分體一致。條 = 10 μm。
第3A-3D圖展示了MYBPC3過度表現使CPVT hiPSC-CM中之Ca2+ 處理正常化。將來自由於雜合RYR2R4651I突變導致的CPVT患者的人類iPSC分化為心肌細胞(iPSC-CM)，然後用表現MYBPC3之腺病毒或對照轉導。第3A-3B圖.對iPSC-CM中Ad-HA-Mybpc3介導之蛋白質表現之驗證。西方墨點法(第3A圖)展示了Ad-HA-Mybpc3誘導之全長MYBPC3之約2.8倍過度表現。將GAPDH用作內部對照。MYBPC3與對照iPSC-CM相比之相對水準由各泳道上方之數字表示。藉由使用HA抗體對iPSC-CM進行免疫染色，進一步證實了蛋白質表現。第3C圖.在正常或異丙腎上腺素刺激下，用對照或Ad-hMYBPC3腺病毒治療的CPVT iPSC-CM之Ca2+ 信號之共聚焦線掃描圖像。第3D圖.Ca2+ 釋放事件頻率、幅度、FWHM (半寬全寬(full width at half width))及FDHM ((半幅值脈寬(full duration at half maximum))的比較。曼-惠特尼檢驗：***，P＜0.001。
第4A-4H圖展示了FL-MYBPC3過度表現使成年CPVT (RYR2R176Q/+)心肌細胞及小鼠中之Ca2+ 處理正常化。第4A圖.AAV載體之結構。GFP標記經轉導之細胞。第4B圖.AAV轉導細胞之心臟切片。第4C-4D圖.展示MYBPC3之過度表現(overexpression，OE)及其定量之西方墨點法(第4D圖)。第4E-4F圖.藉由MYBPC3過度表現對分離的CPVT (RYR2R176Q/+)成年心肌細胞中異常起搏後Ca2+ 波之抑制。將野生型或CPVT小鼠用指定AAV治療。自成年心臟中分離出心肌細胞並加載Ca2+ 敏感染料。心肌細胞經起搏(加粗虛線)，然後突然停止起搏。藉由共焦線掃描記錄起搏後活動。展示了代表性跡線。RYR2-R176Q/+心肌細胞之起搏後事件頻率之比較(第4F圖)展示了在MYBPC3治療後此等事件之頻率較低。t檢驗：P＜0.001。第4G-4H圖.MYBPC3過度表現降低了CPVT小鼠之VT易感性。顯示了AAV-GFP (對照)及AAV-MYBPC3治療的CPVT小鼠之代表性EKG跡線。在GFP治療的小鼠中用過早刺激啟動之VT起搏(加粗虛線)。RYR2-R176Q/+小鼠中誘導之VT之頻率藉由全長MYBPC3之過度表現而降低(Fisher精確：P=0.0012；第4H圖)並且變得與野生型小鼠無法區分。數字表示具有誘導型VT之小鼠及總小鼠數量。
第5A-5E圖展示了MYBPC3片段抑制CPVT小鼠中之VT之功效。第5A-5B圖展示了多種不同MYBPC3 C末端片段抑制CPVT小鼠中之VT之活性之體內試驗。將新生小鼠用5.5 x 1010 vg/g AAV治療，從而表現指定蛋白質。測試成年小鼠(8-16週齡)之收縮功能(如第5A圖所展示)及VT易損性(如第5B圖所展示)。第5A圖展示了MYBPC3肽對RYR2R176Q/+小鼠心臟功能之影響，如藉由超音波心動圖所決定的。儘管大多數片段未顯著影響心臟功能，但C6C9及C6C7肽減少了心臟收縮。與GFP對照治療相比，使用Dunnett事後檢驗之單向方差分析。展現了經調整p值。條中之數字表示每組小鼠之數量。第5B圖展示了MYBPC3肽對RYR2R176Q/+小鼠之VT易損性之影響。小鼠經歷了無β-激動劑、隨後用異丙腎上腺素刺激、然後用腎上腺素加咖啡因刺激之程式化心室刺激之分級方案。EP研究在無視治療組之情況下進行。樣品大小藉由條中之數字表示。與GFP對照組相比，藉由Fisher精確檢驗評估統計顯著性。標稱p值展示在條上方。低於Bonferroni校正p值閾值(0.05/8 = 0.0065)之那些p值用星號標記。第5C圖展示了用AAV-GFP或AAV-C6C10治療的RYR2R176Q/+小鼠之代表性程式化心室刺激。星號線表示程式化心室刺激。第5D圖展示了用Ad-LacZ (對照)或Ad-C6C10治療的RYR2S404R/野生型人類iPSC-CM之代表性Ca2+示蹤。箭頭突出顯示異常Ca2+釋放事件(abnormal Ca2+ release events，aCRE)。第5E圖展示了aCRE之頻率之定量。*，P＜0.05。
第6圖展示了雙分子螢光互補檢定(bimolecular fluorescence complementation assay，BiFC)的示意圖，該檢定用於對與RYR2相互作用之MYBPC3之最小片段作圖。MYBPC3片段及RYR2區域各自融合至Venus螢光蛋白之一半。當MYBPC3及RYR2結合時，兩個一半會靠近並產生螢光信號。
第7圖展示了BiFC實驗的陰性(RYR2)對照。RYR2及SERCA2各自融合至Venus之N末端一半及C末端一半(分別為VN155及VC155)。沒有可偵測到的Venus螢光信號，與缺乏RYR2-SERCA2相互作用一致。
第8圖展示了BiFC實驗的陽性(PLN)對照。PLN及SERCA2各自融合至Venus之N末端一半及C末端一半(分別為VN155及VC155)。存在明亮的Venus螢光信號，與已知的PLN-SERCA2相互作用一致。
第9A-9F圖展示了使用BiFC測試的與RYR2結合之MYBPC3蛋白區域及測試結果。第9A圖展示了測試的與RYR2結合之MYBPC3蛋白區域。第9B圖展示了BiFC實驗之設計。MYBPC3片段經融合至Venus之C末端片段(VC155)，而RYR2經融合至Venus之N末端片段(VN155)。第9C及9D圖提供了MYBPC3之C6-C8區域促進與RYR2之相互作用之證據。第9E圖藉由平鋪缺失C6-C8片段之C末端到N末端來展示C7-C8係與RYR2之主要相互作用域。第9F圖展示了C7域或C8域之缺失並未完全消除與RYR2之結合，這證明C7-C8與RYR2穩健地相互作用。
第10圖藉由免疫染色顯展示了MYBCP3及RYR2之非相互作用片段被穩健表現，這排除了表現技術故障作為低Venus信號原因。
第11圖展示了包含C7-C8片段之MYPBC3片段與RYR2結合並且C7-C8係MYPBC3與RYR2之間相互作用之關鍵區域。
第12圖展示了測試的不同MYPBC3片段及與RYR2之結合親和力之概要示意圖。
第13A-13B圖展示了C7片段足以結合RYR2並且係與人類(第13A圖)及小鼠(第13B圖)中之RYR2之主要相互作用域。
第14A-14E圖展示了MYBPC3在體內被切割並且MYBPC3之兩個片段主要與Z-線或A-帶結合。第14A圖展示了在第14A-14E圖中使用的MYBPC3構築體。該構築體係具有C末端Myc標籤及N末端HA標籤之MYBPC3。第14B圖展示了同一視野中之不同心肌細胞如何具有不同染色模式、Z線模式或A帶模式。第14C圖展示了C末端Myc標籤具有主要的Z線模式，而N末端HA標籤具有主要的A帶模式。第14D-14E圖展示了N末端HA及C末端Myc具有不同亞細胞定位模式，如藉由電子顯微鏡所決定的。
第15圖表明一部分MYPBC3被內部切割以產生包含其C末端域之較小蛋白質。將來自野生型、野生型 + HA-MYBPC3-MYC及MYBPC3 KO 心臟之心肌細胞裂解物使用HA或C10 (識別MYBPC3之最C末端域之單株抗體)抗體進行探測。
第16A-16B圖展示了在心肌細胞中以Z線模式定位之C7-C8片段。第16A圖將小鼠用AAV-cTnT-HA-C7C8-P2A-GFP治療。將心臟切片用HA及ACTN2 (Z線標記物)染色。方框區域被放大到右圖。第16B圖展示了C7-C8域結合與肌節α肌動蛋白(SAA或ACTN2)之間之相關存在。
第17圖展示了MYBPC3 C6-C10抑制來源於分化為心肌細胞之人類誘導多能幹細胞(induced pluripotent stem cells differentiated into cardiomyocytes，iPSC-CM)之CPVT RYR2-S404R突變細胞中之異常Ca2+釋放事件。
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Claims (39)

  1. 一種治療與異常2型蘭尼鹼受體(RYR2)功能相關聯之病症之方法，該方法包括以下步驟：投與需要其之受試者有效量的包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C末端域之多肽。
  2. 一種治療與異常2型蘭尼鹼受體(RYR2)功能相關聯之病症之方法，該方法包括以下步驟：投與需要其之受試者有效量的包含編碼心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C末端域之多肽之核苷酸序列之核酸。
  3. 如請求項1或請求項2所述之方法，其中該異常RYR2功能係由RYR2之一個或多個突變引起的。
  4. 如請求項3所述之方法，其中該RYR2之突變導致該受試者之心肌細胞中過度的舒張Ca2+ 釋放。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之方法，其中該多肽包含與SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者至少80%一致之胺基酸序列。
  6. 如請求項5所述之方法，其中該多肽包含SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者之核苷酸序列。
  7. 如請求項2至6中任一項所述之方法，其中該核苷酸序列可操作地連接於啟動子。
  8. 如請求項2至7中任一項所述之方法，其中該核酸為載體。
  9. 如請求項8所述之方法，其中該載體為表現載體。
  10. 如請求項9所述之方法，其中該表現載體為病毒載體。
  11. 如請求項10所述之方法，其中該病毒載體係選自慢病毒載體、逆轉錄病毒載體或重組腺相關病毒(rAAV)載體。
  12. 如請求項11所述之方法，其中該病毒載體為rAAV載體，該rAAV載體還包含位於編碼該多肽之核苷酸序列及該啟動子側翼之兩個AAV反向末端重複(ITR)。
  13. 如請求項11所述之方法，其中該rAAV載體被包裝在rAAV粒子中。
  14. 如請求項13所述之方法，其中該rAAV粒子還包含殼體蛋白。
  15. 如請求項14所述之方法，其中該殼體蛋白屬於選自以下之血清型： AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV.rh8、AAV.rh10、AAV.rh39、AAV.43、AAV2/2-66、AAV2/2-84及AAV2/2-125或其變異體。
  16. 如請求項15所述之方法，其中該殼體蛋白屬於血清型AAV9。
  17. 如請求項11至16中任一項所述之方法，其中該rAAV為自互補AAV (scAAV)。
  18. 如請求項2至12中任一項所述之方法，其中編碼該多肽之該核苷酸序列係密碼子優化的。
  19. 如請求項2至6中任一項所述之方法，其中該核酸為信使RNA (mRNA)。
  20. 如請求項19所述之方法，其中該mRNA為經修飾mRNA。
  21. 如請求項1至20中任一項所述之方法，其中該多肽或該核酸被遞送於該受試者之心肌細胞。
  22. 如請求項1至21中任一項所述之方法，其中該病症為心律不整。
  23. 如請求項22所述之方法，其中該心律不整為遺傳性的或獲得性的。
  24. 如請求項23所述之方法，其中該遺傳性心律不整為兒茶酚胺能多形性心室性心搏過速(CPVT)。
  25. 如請求項23所述之方法，其中該獲得性心律不整為室性心律不整或室上性心律不整。
  26. 如請求項25所述之方法，其中該室性心律不整為心室性心搏過速、心室性震顫或心室性早期收縮。
  27. 如請求項25所述之方法，其中該室上性心律不整為心房震顫、心房撲動、心房心搏過速、心房早期收縮或陣發性室上性心搏過速。
  28. 如請求項1至21中任一項所述之方法，其中該病症為心力衰竭。
  29. 如請求項25所述之方法，其中投與該多肽或該核酸降低該受試者之心肌細胞中過度的舒張Ca2+ 釋放。
  30. 如請求項1至29中任一項所述之方法，其中該受試者為人類。
  31. 如請求項1至30中任一項所述之方法，其中該投與係經由注射。
  32. 一種治療心律不整之方法，該方法包括以下步驟：投與需要其之受試者有效量的重組腺相關病毒(rAAV)，其中該rAAV包含血清型AAV9之殼體蛋白及編碼包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C末端域之多肽之核苷酸序列。
  33. 如請求項32所述之方法，其中該多肽包含與SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者至少80%一致之胺基酸序列。
  34. 如請求項32或請求項33所述之方法，其中該多肽包含SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者之胺基酸序列。
  35. 如請求項32所述之方法，其中該多肽由SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者之胺基酸序列組成。
  36. 一種重組腺相關病毒(rAAV)，包含殼體蛋白及編碼包含心臟肌球蛋白結合蛋白C (MYBPC3)之C-末端域之多肽之核苷酸序列。
  37. 如請求項33所述之rAAV，其中該多肽包含SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者之胺基酸序列。
  38. 如請求項33所述之rAAV，其中該多肽由SEQ ID NO: 1-16或53-64中任一者之胺基酸序列組成。
  39. 如請求項33或請求項34所述之rAAV在治療與異常2型蘭尼鹼受體(RYR2)功能相關聯之病症中之用途。
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