TW202203974A - 透明質酸複合物及透明質酸複合物的用途 - Google Patents

透明質酸複合物及透明質酸複合物的用途 Download PDF

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Abstract

在此揭示透明質酸複合物用於治療肺部發炎的用途，包含急性與慢性肺部發炎。此處亦揭示所述透明質酸複合物用於治療病毒感染的用途。所述透明質酸複合物為透明質酸-尼美舒利複合物。

Description

透明質酸複合物及透明質酸複合物的用途
本揭示內容一般是關於透明質酸(hyaluronic acid，簡稱HA)複合物，特別是用於治療肺部發炎的透明質酸複合物。
發炎反應是人體免疫系統回應刺激的過程，所述刺激如病原體、刺激物和損傷等等。發炎反應有兩種類型：急性發炎和慢性發炎。急性發炎的主要徵象包括疼痛、發紅、腫脹和發熱，這些症狀往往持續數天。另一方面，慢性發炎可以持續數月甚至數年。慢性發炎的常見症狀包括疼痛和疲勞；相反，其他症狀往往取決於與慢性發炎相關的疾病，如過敏、關節炎、牛皮癬、類風濕性關節炎、糖尿病、心血管疾病和慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)。
發炎反應是源於刺激部位的一連串非常複雜的事件所導致的結果。這種複雜的反應是由細胞激素(cytokine)所介導的。細胞激素是發炎反應的關鍵調節因子，會涉入適應性免疫、促發炎信號傳導途徑和抗發炎信號傳導途徑。細胞激素的例子包括但不限於趨化因子(chemokine)、介白介素(interleukin，簡稱IL)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，簡稱TNF；例如TNF-α和TNF-β)、干擾素(interferon，簡稱IFN；例如IFN-α、IFN-β和IFN-γ)、群落刺激因子(colony stimulating factor，簡稱CFS；如粒細胞CSF (G-CSF)和粒細胞/巨噬細胞CSF (GM-CSF)、巨噬細胞CSF(M-CSF)和紅血球生成素)以及轉化生長因子β (transforming growth factor beta，簡稱TGF-β)。趨化因子是一個小型細胞激素家族(8-12 kDa)，由細胞產生，主要是為了招募白血球到刺激的部位。根據其前兩個N端半胱胺酸殘基的間距，趨化因子可分為四組：CC趨化因子、C趨化因子、CXC趨化因子和CX3C趨化因子。
IL-6是一種多功能的細胞激素，其通過啟動急性期反應、免疫反應和造血功能，參與宿主對急性環境刺激(如感染和組織損傷)的防禦。然而，IL-6的連續生產失調可能導致各種自體免疫性疾病和慢性發炎性疾病的發生和發展。此外，IL-6和其他一些細胞激素(如IFN-γ和IL-10)的高度表現可能導致細胞激素釋放綜合征(細胞激素release syndrome，簡稱CRS)，或稱細胞激素風暴，這是一種全身性的急性發炎併發症。目前COVID-19的大流行給許多國家的醫療資源和社會經濟帶來了壓力。COVID-19是一種由嚴重急性呼吸道症候群冠狀病毒2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，簡稱SARS-CoV-2)引起的傳染病。在COVID-19的重症患者中，會出現不同程度的CRS，而這些患者的IL-6表現量往往會升高。由於CRS可能引發嚴重的肺部損傷，並可能導致急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，簡稱ARD)和死亡，阻斷IL-6介導的級聯反應或許能夠降低疾病的嚴重性。
因此，IL-6阻斷一直是自體免疫性疾病、發炎性疾病和細胞激素風暴的治療策略。然而，由於免疫反應是相當複雜和動態的，只有少數IL-6阻斷藥物被批准，另有幾個候選藥物正在進行臨床試驗。儘管如此，所有這些藥物都是抗體類的生物製劑，往往非常昂貴，尤其是在上市初期。
有鑒於此，本領域亟需一種能夠有效治療肺部感染的小分子藥物。
發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。發明內容的主要目的在於以簡化的形式提出此處揭露的某些概念，以作為下文提出之實施方式的前序。
本揭示內容的一態樣是關於一種治療有需要之個體的肺部發炎的方法。
根據本揭示內容某些實施方式，所述方法包含對該個體投予有效量的透明質酸複合物，其中所述透明質酸複合物具有至少一個以下結構的雙糖單元：
Figure 02_image003
(I)，或其藥學上可接受的鹽類。
在某些實施方式中，所述個體為哺乳類動物，包括人類。
根據本揭示內容某些實施方式，所述肺部發炎可以是急性肺部發炎(如，肺炎、急性呼吸窘迫症候群(acute respiratory distress syndrome，簡稱ARDS)以及急性肺損傷(acute lung injury，簡稱ALI))、慢性肺部發炎(如，慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，簡稱COPD)、氣喘、肺部纖維化或自發性肺部纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis，簡稱IPF))或過敏性肺炎(外因性過敏性肺泡炎(extrinsic allergic alveolitis))。
根據本揭示內容多種實施方式，所述肺炎是由細菌(例如，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa )、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae )、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae )和分枝桿菌(Mycobacteria ))、病毒(例如，流感病毒、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial viruses，簡稱RSV)、腺病毒、單純皰疹病毒(herpes simplex viruse，簡稱HSV)和冠狀病毒)或寄生蟲(如利什曼病原蟲(Leishmania)、瘧原蟲(Plasmodium)和血吸蟲(Schistosoma))。能夠引起人類肺炎的冠狀病毒的例子包括但不限於：嚴重急性呼吸道症候群綜合征相關冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome-related coronavirus，簡稱SARS-CoV)、嚴重急性呼吸道症候群相關冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)以及中東呼吸道症候群相關冠狀病毒(Middle East respiratory syndrome-related coronavirus，簡稱MERS-CoV)。
在某些實施方式中，所述透明質酸複合物透過靜脈 (i.v.)注射投予。
根據本揭示內容某些實施方式，所述透明質酸複合物的平均分子量(MW)為10至2,000 kDa；較佳為50至250 kDa；更佳為100至200 kDa。
根據本揭示內容某些實施方式，所述透明質酸複合物的取代度(degree of substitution，簡稱DS)為約0.5%至35%；亦即，每1,000個雙糖單元帶有約5到100個氫化尼美舒利(hydrogenated nimesulid)分子與其複合。在某些較佳的實施方式中，本案提出的透明質酸複合物的DS為約0.75至9%；較佳為約1%至8%；較佳為約1.25%至7%；較佳為約1.5%至6%；較佳為約1.75%至5.5%；較佳為約2%至5%；較佳為約2.25%至4.5%。
根據本揭示內容某些實施方式，所述透明質酸複合物僅包含一個雙糖單元，其具有以下結構：
Figure 02_image005
(II)，或其藥學上可接受的鹽類。
根據本揭示內容某些實施方式，所述透明質酸複合物僅包含兩個雙糖單元，其具有以下結構：
Figure 02_image007
Figure 02_image009
或
Figure 02_image011
(III)，或其藥學上可接受的鹽類。
本揭示內容的另一態樣涵蓋了用以治療肺部發炎的藥學組合物。
根據某些實施方式，所述藥學組合物包含有效量之上述透明質酸複合物，以及藥學上可接受的賦型劑。
本揭示內容的其他態樣還涵蓋了透明質酸複合物於製備可用以治療肺部發炎的藥物的用途，還有透明質酸複合物於治療肺部發炎的用途。
在參閱下文實施方式與附隨圖式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本揭示內容之諸多特徵與優點。
下文連同附隨圖式揭示的實施方式旨在說明此處提出之例式，且不應視為用以建構或實施本揭示內容之實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的功能以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。
為了便於說明，此處整理了說明書、實施例與附隨申請專利範圍中所用的某些詞彙。除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙的含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。
在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞亦涵蓋該名詞的單數型。此外，在本說明書與申請專利範圍中，「至少一」與「一或更多」等表述方式的意義相同，兩者都代表包含了一、二、三或更多。更有甚者，在本說明書與申請專利範圍中，「A、B及C其中至少一者」、「A、B或C其中至少一者」以及「A、B和/或C其中至少一者」係指涵蓋了僅有A、僅有B、僅有C、A與B兩者、B與C兩者、A與C兩者、以及A、B與C三者等情形。
雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10％、5％、1％或0.5％之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。當可理解，除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比(例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者)均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。在此處，將數值範圍表示成由一端點至另一端點或介於二端點之間；除非另有說明，此處所述的數值範圍皆包含端點
「治療(treatment或治療)」一詞係指預防性(如，預防用藥)、療癒性或緩和性的處置，藉以達到所欲的藥學和/或生理學效果；而治療的行為在此包括上述預防性、療癒性或緩和性的處置。具體來說，治療在此係指對於可能患有一醫療疾患或與此疾患相關的症狀、由此疾患所生的疾病或異常、或易於罹患此疾患的個體施用或投予本發明提出的透明質酸複合物或包含此透明質酸複合物的藥學組合物，以期能部分地或完全地緩和、改善、減輕特定異常和/或病症的一或多種症狀或特徵，或是延緩其發生、阻礙其進展、減輕其嚴重性和/或減低發生率。亦可對尚未表出現疾病、異常和/或病症徵兆的個體和/或出現早期徵兆的個體進行治療，以期降低發展出與該疾病、異常和/或病症相關的病理變化的風險。
「個體(subject)」或「患者(patient)」等詞在此可交互使用，且是指可接受本揭示內容之透明質酸複合物、藥學組合物和/或方法處置的動物(包含人類)。因此，「個體」或「患者」包含任何可因本揭示內容的處置而獲益的哺乳類動物。所述「哺乳類動物」涵蓋哺乳動物綱的所有成員，包括人類、靈長類動物、家畜和農畜(如兔子、豬、綿羊和牛)、動物園動物或競賽用動物、寵物，以及齧齒類動物(如，小鼠和大鼠)。「非人類哺乳動物」一詞則涵蓋除了人類以外的所有哺乳動物綱成員。在一實例中，所述患者為人類。除非另有指明，「個體」或「患者」一般包含雄性與雌性。
「施用(application)」與「投予(administration)」等詞在此可交替使用，其係指將本發明之透明質酸複合物或藥學組合物提供給需要治療的個體。
在此處，「有效量(effective amount)」一詞係指本發明透明質酸複合物的用量足以招致所欲的治療反應。藥劑的有效量不必然能夠治癒疾病或病症，但能夠延緩、阻礙或防止該疾病或病症的發生，或是可緩減與疾病或病症相關的病徵。可將治療有效量可分成一、二或更多劑，而以適當的劑型在指定期間內施用一次、二次或更多次。具體的治療有效量取決於多種因素，例如欲治療的特定狀況、個體的生理條件(如，個體體重、年齡或性別)、接受治療的哺乳類動物或動物類型、治療持續時間、併行治療(如果有的話)的本質以及所用的具體配方和化合物或其衍生物的結構。舉例來說，可將治療有效量表示成透明質酸複合物的總重量或透明質酸複合物所含4-胺基尼美舒利(4-amino nimesulide)的均等重量，譬如以克、毫克或微克來表示；或表示成透明質酸複合物重量或透明質酸複合物所含4-胺基尼美舒利的均等重量相對於體重的比例，譬如表示為每公斤體重多少毫克(mg/kg)。
舉例來說，根據本揭示內容某些實驗例，用以透過降低小鼠(約20克)體內IL-6、KC-GRO與MCP-1的表現量進而治療小鼠(約20克)發炎反應的有效量為每劑25至150 mg/公斤體重。因此，治療小鼠之透明質酸複合物有效量為25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149或150 mg/公斤體重/劑。以體重約60公斤的成年人類而言，從上述小鼠劑量換算所得之透明質酸複合物的均等量之人類均等劑量(human equivalent dose，簡稱HED)為約2至120 mg/公斤體重/劑。
當可理解，上文所述的劑量範圍是對成人投予本案藥學組合物之指引。舉例來說，醫師或本領域具有通常知識者可決定對兒童或青少年投予之劑量，且此劑量可以低於或等同於給予成人之劑量。考量患者的年齡、體重與健康狀況後，對人類個體而言，透明質酸複合物對人類個體的有效量可以是約1至200 mg/公斤體重/劑。
具體來說，對人類個體而言，本案透明質酸複合物的有效量可以是1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199或200 mg/公斤體重/劑。
此外，用以治療小鼠(約00克)之有效量可表示為透明質酸複合物中4-胺基尼美舒利的均等量，其有效量為約50 ng/公斤體重至6 μg/公斤體重；舉例來說，約50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830、840、850、860、870、880、890、900、910、920、930、940、950、960、970、980或990 ng/公斤體重/劑，或1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5或6 μg/公斤體重/劑。
相似地，以體重約60公斤的成年人類而言，由上述小鼠劑量(換算因子：0.08)換算得到的透明質酸複合物中4-胺基尼美舒利的均等量之HED為約4至480 ng/公斤體重/劑。總結來說，本案提出的透明質酸複合物的HED為約80 ng/公斤體重至400 μg/公斤體重/劑。考量患者的年齡、體重與健康狀況後，對人類個體的有效量可以是約20至840 ng/公斤體重/劑。
具體來說，對人類個體的有效量可以是20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800、810、820、830或840 ng/公斤體重/劑。
根據本揭示內容某些實施例，在試驗期中，每週投予透明質酸複合物三次，持續兩週。當可理解，可隨著投藥間隔與持續時間來調整有效量。於一些實施方式中，當對個體多次投藥時，對該個體投予多次藥物的頻率可為每日三劑、每日兩劑、每日一劑、每兩日一劑、每三日一劑、每四日一劑、每五日一劑、每六日一劑、每週一劑、每兩週一劑、每三週一劑、每月一劑或每兩月一劑。於一些實施方式中，對該個體投予多次藥物的頻率可為每日一劑。於一些實施方式中，對該個體投予多次藥物的頻率可為每日兩劑。於一些實施方式中，當對個體多次投藥時，第一劑與最後一劑間的間隔可以是一天、兩天、四天、一週、兩週、三週、一個月、兩個月、三個月、四個月、六個月、九個月、一年、兩年、三年、四年、五年、七年、十年、十五年、二十年或該個體之終生。於一些實施方式中，多次投藥之第一劑與最後一劑間的間隔可以是三個月、六個月或一年。於一些實施方式中，多次投藥之第一劑與最後一劑間的間隔可以是該個體的終生。於一特定實施方式中，對該個體投予多次藥物的頻率可為每週三劑。
此外，根據下文提出的實驗例，可透過靜脈內注射來投予透明質酸複合物；然而，此方式僅為實施本揭示內容之例示，本揭示內容不限於此。
舉例來說，可將透明質酸複合物和藥學上可接受的賦型劑調製為適用於所欲給藥方式的藥學組合物。根據此處揭示與請求保護之發明性概念所製備的某些藥學組合物可以是適用於以下給藥途徑的單一劑型：口服、黏膜(如，經鼻腔、舌下含服、陰道、口腔或直腸)、腸胃外(如皮下、靜脈內、靜脈推注、肌肉內或動脈內)、玻璃體內或經皮膜給藥。適用之藥物劑型的實施例包括但不限於：錠劑、膠囊型錠劑(caplets)、膠囊(如：軟彈性明膠膠囊)、扁囊(cachets)、口含錠(troches)、喉頭錠劑(lozenges)、分散液、栓劑、藥膏、泥敷劑(cataplasms，如膏藥)、糊劑、粉劑、敷料、乳膏、膏藥、溶液、貼片、噴霧劑(如鼻噴霧劑或吸入劑)、凝膠、適合患者口服或黏膜給藥的液體劑型(包括懸浮液(如，水性或非水性液體懸浮液、水包油型乳劑或油包水型液體乳劑)、溶液以及酏劑(elixirs))、及劑型、適合於對一名患者進行腸胃外給藥的液體劑型、及無菌固體(如，結晶或無定形固體)、適用於對患者進行腸胃外給藥的液態劑型、及滅菌固體(如，結晶或非晶型固體)，其可經復水以製得適用於對患者進行腸胃外給藥的液態劑型。當可理解，這些藥學組合物亦屬於本揭示內容之範圍。
在此處「藥學上可接受賦型劑」(pharmaceutically acceptable excipient)指一種藥學上可接受的材料、組合物或媒劑(vehicle)，諸如液體或固體填充物、稀釋劑(diluent)、載體(carrier)、溶劑或包覆材料，其可用以攜帶或運送標的成分由身體的一器官或部分到達身體的另一器官或部份。「可接受」的賦型劑係指其可和組合物中的其他成分相容。藥學製劑(pharmaceutical formulation)包含本案所述的化合物以及一或多種藥學上可接受的賦型劑。上述賦型劑可以是譬如固態、半固態或液態稀釋劑、乳霜或膠囊。這些藥學配方亦屬於本發明之範圍。一般來說，在藥學配方中，活性成分的的重量通常佔總重的0.1-95%，在腸胃外給藥時較佳佔總重的0.2-20%，在口服給藥時較佳佔總重的1-50%。於臨床上運用本發明之方法時，可將本案所述的藥學組合物配製成適合所欲給藥途徑的配方。
在此處，HA複合物的「取代度」(degree of substitution，簡稱DS)係指HA的每一個雙醣單元上連接有取代基(即，氫化尼美舒利)的平均比例。根據本揭示內容多種實施方式，此處提出的透明質酸複合物的取代度(DS)為0.5至35%。舉例來說，DS可以是0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或35%。
根據本揭示內容某些實施方式，本案透明質酸複合物之HA的重量平均分子量(Mw)約為10 kDa 至300 kDa，譬如約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550、1600、1650、1700、1750、1800、1850、1900、1950或2000 kDa。可利用黏度劑來計算上述平分子量，且根據本揭示內容多種實施方式，所述透明質酸複合物的黏度為約0.1至1 m3 /kg；譬如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1 m3 /kg。根據本揭示內容某些實施方式，所述透明質酸複合物包含兩個糖單元(即，一個透明質酸單體)或四個糖單元(即，兩個透明質酸單體)。
在此處，「透明質酸」(HA或hyaluronate或hyaluronic acid)是一種陰離子、未硫酸化的糖胺聚醣，其係由至少一個雙醣單元所組成，所述雙醣是指D-葡萄醣醛酸與N-乙醯基-D-葡萄糖胺(-4GlcUAβ1-3GlcNAcβ1-)。在本揭示內容的某些實施方式中，所述HA係由單一個雙糖單元(即，HA雙糖)所組成。在本揭示內容的某些實施方式中，所述HA係由兩個雙糖單元(即，HA四糖)所組成。所述HA的分子量從379道爾頓(Da)(單一個雙醣單元)至數百萬道爾頓不等。HA透過與細胞表面的透明質酸介導之運動性受體(receptor for HA-mediated motility，簡稱RHAMM)與CD44受體互動，而影響細胞運動以及免疫細胞黏附。「HA衍生物」一詞係指一HA的一或多個HA雙醣單元之羥基、羧基、醯胺基或乙醯胺基中的任一個經過修飾。根據本揭示內容某些實施方式，所述HA複合物為金屬鹽類之形式，較佳為鹼土族金屬鹽類，且更佳為鈉鹽或甲鹽。
本揭示內容至少部分是基於發現到在過度表現IL-6的小鼠中，本案所述的透明質酸複合物能夠減低IL-6的表現量，以及種下游調控物的表現量，包括CCL2 (或單核細胞趨化蛋白(monocyte chemoattractant protein-1，簡稱MCP-1))以及CXCL1/2 (或角質細胞趨化(keratinocyte chemoattractant，簡稱KC)趨化因子、小鼠同源人類生長調控致癌基因(growth-regulated oncogenes，簡稱GRO))。相對應地，本案提出的透明質酸複合物可用以阻斷IL-6下游的信息傳導級聯。由於已知IL-6阻斷對於實驗動物與人類的發炎相關疾病都有所助益，本案提出的透明質酸複合物來抑制IL-6信息傳導能夠防止或反轉某些通常與發炎反應相關的併發症。
本揭示內容進一步基於發現到本案提出的透明質酸複合物至少可透過阻斷病毒進入而用於抑制冠狀病毒(如，SARS-CoV-2)感染。根據本揭示內容多種實施方式，本案提出的透明質酸複合物在治療SARS-CoV-2病毒感染(包括2019冠狀病毒疾病(coronavirus disease 2019，簡稱COVID-19))時，可發揮以下的雙重效用：(1)阻斷IL-6依賴的信息傳導；以及(2)阻斷病毒進入。
有鑑於上文所述，本揭示內容提出用以治療發炎反應的方法，特別是利用此處提出的透明質酸複合物來治療肺部發炎。本揭示內容的某些實施方式係關於利用所述透明質酸複合物來治療與肺部發炎相關或繼發的症狀或病症。此處亦提供了所述透明質酸複合物在治療肺部發炎的用途，還有其用於製備藥物以用於上述治療目的的用途。所述藥物(即，包含該透明質酸複合物的藥學組合物)當然也是本申請保護的標的之一。
下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。
實驗例 1
NIM-HA 複合物的合成與定性分析
(1)氫化尼美舒利(H-NIM)的製備
利用商業購得的尼美舒利(N-(4-硝基-2-苯氧基苯基)甲磺醯胺)來製備氫化尼美舒利(N-(4-胺基-2-苯氧基苯基)甲磺醯胺，或4-胺基尼美舒利)。簡言之，將500 mg的尼美舒利完全溶解於20 ml乙酸乙酯中，然後將200 mg的5%鈀/碳(Pd/C)作為催化劑加入溶液中。在持續攪拌下，抽出瓶中的空氣，並以最高1大氣壓的氫氣代替空氣，然後攪拌24小時以得到氫化尼美舒利(H-NIM)。
以薄層色譜法(thin-layer chromatography，TLC)來測定H-NIM的純度；於將樣本放置於預塗有矽膠60 F254的TLC板上，並使用254 nm的紫外光；流動相：己烷：乙酸乙酯=2：1。
過濾除去Pd/C催化劑，將濾液在旋轉蒸發儀上濃縮除去殘留溶劑。然後將氫化產物溶解在己烷-乙酸乙酯(1:1)溶液中，並在矽膠管柱上進一步純化。用洗脫液(己烷-乙酸乙酯=1:1)洗脫管柱。收集有顏色的部分並冷凍乾燥。分別用UV和NMR確定所得產物的濃度和結構。
(2) H-NIM與HA的複合
將50 mg的透明質酸(平均分子量(MW)約90-200 kDa)溶解於25 ml二次離子水中。在1 ml二次離子水中混合25.1 mg的1-乙基-3-(二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)以及15.1 mg的N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)，並在室溫下攪拌5分鐘。將3.65 mg的H-NIM溶解於1 ml的二甲亞碸(DMSO)溶液，之後在3分鐘內利用針筒將該溶液緩緩滴入HA/EDC/NHS溶液中。在室溫下於黑暗中持續攪拌反應混合物12小時，之後置於透析袋(MWCO：3,500 Da)中以過量的二次離子水透析2至3天。之後收集透析袋中的部分並將其凍乾，以得到NIM-HA (CA102N)粉末。
(3) NIM-HA複合物的定性分析
根據歐洲藥典(HA專著N°1472)定義的步驟來測定複合物的本質黏度(約0.2至0.6 m3 /kg)，而由本質黏度計算的複合物平均分子量約為53至231 kDa。使用尺寸排除層析多角度光散射 (size exclusion chromatography multi-angle light scattering，SEC-MALS)測定的分子量多分散指數(Polydispersity Index)約為2.5。
分別使用Pharmpur法PPCA025以及Pharmpur法PPCA017 SEC/UV的步驟來測定複合物中透明質酸鈉和尼美舒利的含量，結果顯示在每1克乾重的NIM-HA複合物中，至少有800 mg的HA含量以及至少15 mg的NIM含量。接著根據HA的雙糖單元和H-NIM之間的莫耳比來計算複合物的取代度(DS)。DS約為2.5%至5%，這意味著對於每1,000個雙糖單元，有25至50個H-NIM分子與其複合。
(4) NIM-HA雙糖複合物的合成
使D-葡萄醣醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖組成的雙糖單元(HA雙糖)和4-胺基尼美舒利反應，以製得具有以下結構的NIM-HA雙糖複合物:
Figure 02_image013
(II)。
(5) NIM-HA四糖複合物的合成
使兩個由D-葡萄醣醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖組成的雙糖單元(HA四糖)和4-胺基尼美舒利反應，以製得NIM-HA四糖複合物(下文簡稱NIM-tetra)。簡言之，將50 mg的HA四糖(HA4) (0.06437 mmol)溶解於3 mL的二次離子水中；然後，將 5 mL的DMSO添加到HA4溶液中。將9.1mg的Oxyma(0.06437mmol)溶解在0.5mL的DMSO中，然後在攪拌下加入到HA4溶液中並持續攪拌6分鐘；接著，將17.9 mg的尼美舒利-Boc (0.07081 mmol)脫保護，再溶解於0.5 mL的DMSO中並加入到HA4溶液中。在攪拌下將14 µL的DIC (0.09656 mmol)溶解於0.5 mL的DMSO，並持續攪拌1分鐘，然後加入HA4溶液中。將最終反應混合物在室溫下攪拌48小時，將所得溶液冷凍乾燥三天並通過RP-TLC (Merck, 1.05559.0001)純化。利用以上方式合成的NIM-tetra具有以下結構：
Figure 02_image014
Figure 02_image016
或
Figure 02_image017
(III)。
實驗例 2
NIM-HA 複合物對荷瘤小鼠 PGI2 表現量之影響
根據常規手段得到負有CT26腫瘤的小鼠，當腫瘤體積到達25-50 mm3 時，將荷瘤小鼠隨機分派到以下四組：對照媒劑、50 mg/kg (相當於1.3 mg/kg Nim) NIM-HA複合物、100 mg/kg (相當於2.6 mg/kg Nim) NIM-HA複合物以及200 mg/kg (相當於5.2 mg/kg Nim) NIM-HA複合物。媒劑或測試樣本以靜脈內注射給藥，每週三次，持續兩週。
每週三次測量小鼠的體重與腫瘤體積。在經過兩週治療後，犧牲小鼠。透過心臟穿刺採血，接著分離血清並儲存於-80℃冰箱中。採用速凍法採集腫瘤組織。血清組織用於後續相關分析。
使用常規手段測定小鼠血清中的前列環素(PGI2)量。圖1的結果顯示給予50、100或200 mg/kg (相當於1.3、2.6或5.2 mg/kg Nim) NIM-HA複合物可以降低PGI2量，且相較於對照媒劑具有統計上的顯著差異。
實驗例 3
NIM-HA 複合物對荷瘤小鼠 IL-6 及 IL-6 下游趨化因子表現量之影響
如上文實驗例2所述方式處置小鼠。當腫瘤體積到達25-50 mm3 時，，將荷瘤小鼠隨機分派到以下六組：對照媒劑、50 mg/kg NIM-HA (相當於1.3 mg/kg Nim)複合物、100 mg/kg (相當於2.6 mg/kg Nim) NIM-HA複合物、200 mg/kg (相當於5.2 mg/kg Nim) NIM-HA複合物、1.5 mg/kg尼美舒利以及5.3 mg/kg尼美舒利。媒劑或測試樣本以靜脈內注射給藥，每週三次，持續兩週。
使用常規手段測定小鼠血清中的IL-6與IL-6下游趨化因子(KC/GRO與MCP-1)的表現量。圖2的結果顯示給予50mg/kg (相當於1.3 mg/kg Nim) NIM-HA複合物可以降低IL-6、KC/GRO與MCP-1的表現量，且相較於對照媒劑具有統計上的顯著差異。此外，相較於對照媒劑，給予100 mg/kg (相當於2.6 mg/kg Nim) NIM-HA複合物可以顯著降低血清中IL-6與MCP-1的表現量。另一方面，給予高量的NIM-HA複合物(200 mg/kg (相當於5.2 mg/kg Nim))則無法降低血清中IL-6及其下游趨化因子的表現量。更有甚者，NIM-HA複合物的劑量與IL-6阻斷效果呈現劑量相依性。此外，單獨給予尼美舒利則無法引發任何IL-6阻斷效果。
實驗例 4
NIM-HA 複合物對 LPS- 誘導之 A549 細胞中 IL-6 表現量之影響
於本實驗例中，利用A549細胞(人肺泡基底上皮細胞)來評估本案提出的NIM-HA複合物(CA102N)對IL-6表現量的影響。
將600 μL F-12K培養基中的A549細胞以每24孔5×104 個細胞的密度播於培養盤並培育一夜。隔日，棄置培養基並以新鮮培養基取代，所述新鮮培養基含有1 μg/mL的LPS以及0、0.1、0.2、0.4與0.8 mg/mL的CA102N複合物(相當於0、5.9、11.8、23.6與47.2 μM NIM)或5 μg/mL (12.7 μM)的地塞米松，之後再培養48小時。接著，收集將300 μL的上清液，之後利用Human IL-6 Uncoated ELISA套組(型錄編號：88-7066；Invitrogen)來測定IL-6表現量。未接受LPS處理的細胞作為負對照組，而接受LPS處理但未接受CA102N處理的細胞作為正對照組。結果摘要整理於圖3，且數據表示為平均值±標準偏差(SD)。
圖3中的數據顯示，相較於未經過LPS誘導的負對照組，LPS誘導可導致IL-6表現量顯著提升(#，p＜0.05)。相對於正對照組中僅經過LPS處裡的細胞，經本案提出的NIM-HA複合物(CA102N)處理後，能夠顯著降低經LPS處理之細胞內的IL-6表現量(*，p＜0.05)。
將600 μL F-12K培養基中的A549細胞以每24孔2×104 個細胞的密度播於培養盤並培育一夜。隔日，棄置培養基並以新鮮培養基取代，所述新鮮培養基含有0.5 μg/mL的LPS以及0、4.94、14.81、44.4、133.3與400 μM的NIM-HA雙糖複合物或10 μM的地塞米松，之後再培養48小時。接著，收集將300 μL的上清液，之後利用Human IL-6 Uncoated ELISA套組(型錄編號：88-7066；Invitrogen)來測定IL-6表現量。未接受LPS處理的細胞作為負對照組，而接受LPS處理但未接受NIM-HA雙糖複合物處理的細胞作為正對照組。結果摘要整理於圖4，且數據表示為平均值±標準偏差(SD)。
圖4中的數據顯示，相較於未經過LPS誘導的負對照組，LPS誘導可導致IL-6表現量顯著提升(#，p＜0.05)。此外，相對於正對照組中僅經過LPS處裡的細胞，經本案提出的NIM-HA雙糖複合物處理後，能夠顯著降低經LPS處理之細胞內的IL-6表現量(*，p＜0.05)，且呈現劑量相依性。
實驗例 5
NIM-HA 複合物對 LPS 誘發之急性肺損傷小鼠之影響
於本實驗例中，利用LPS在BALB/cByJNarl小鼠重誘發急性肺損傷(ALI)。檢視多種與肺損傷相關的指標，以評估本案提出的透明質酸複合物對ALI的效果。
簡言之，5-6週齡的雄性BALB/cByJNarl小鼠係購自國家實驗動物中心(台北，台灣)並於中山醫學大學(CSMU)動物中心(台中，台灣)飼育一週使其穩定。在以LPS處理前，先將小鼠禁食12小時，但允許隨隨意飲水。將動物隨機分派到以下5組(每組n=7): (1) WT組，對照媒劑組(僅給予50 μL水)；(2) LPS組，假性對照(僅給予50 μL LPS)；(3) LPS+C組，正對照組(2 mg/kg甲基普賴蘇濃(methylprednisolone)預處理/50 μL LPS/2 mg/kg甲基普賴蘇濃；(4) LPS+L組，低劑量NIM-HA複合物(CA102N)處理(50 μL LPS/25 mg/kg CA102N (相當於0.58 mg/kg尼美舒利))；以及(5) LPS+M組，中劑量NIM-HA複合物(CA102N)處理(50 μL LPS/50 mg/kg CA102N (相當於1.16 mg/kg尼美舒利))。
第(1)組的小鼠經氣管內注射50 μL水。第(2)組的小鼠經氣管內注射50 μL LPS (1 mg/mL)。第(3)組的小鼠經餵食2 mg/kg甲基普賴蘇濃；1小時後，對小鼠經氣管內注射50 μL LPS (1 mg/mL)以誘發急性肺損傷；且在LPS注射1小時後，對小鼠經口投予2 mg/kg甲基普賴蘇濃。第(4)與第(5)組的小鼠經氣管內注射50 μL LPS (1 mg/mL)；在LPS注射1小時後，分別透過尾靜脈內注射，對每一組的小鼠分別投予25 mg/kg CA102N或50 mg/kg CA102N。
LPS注射18小時後，透過頸椎脫臼犧牲小鼠。以1.5 ml的PBS灌洗液沖洗支氣管肺泡，以收集支氣管肺泡沖洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，在4℃下以500 X g離心5分鐘，以收集 BALF上清液。將上清液保存在-70°C中，以供後續分析。
犧牲小鼠後，取其肺部，立即稱濕重。然後將肺在65°C下乾燥48小時，稱乾重。計算肺濕重/乾重比，以評估肺水腫情況。對於細胞激素分析，使用ELISA套組(Invitrogen)測定BALF中幾種細胞激素的表現，包括TNF-α、IL-1β和IL-6。使用Bradford蛋白檢測來測定蛋白質濃度。
摘要整理於圖5的試驗結果顯示，LPS處理與肺水腫相關。另一方面，相較於LPS組，以常用於抑制免疫系統和減少發炎反應的皮質類固醇藥物—甲基普賴蘇濃—還有低劑量與中劑量NIM-HA複合物(CA102N)處理，能夠有效減輕肺水腫程度(p ＜0.05)，且投予低劑量與中劑量NIM-HA複合物的效果更為突出。
圖6A顯示BALF中的總蛋白濃度，而圖6B至圖6D分別顯示BALF中TNF-α、IL-1β與IL-6的表現量。由圖6A可以看出，相較於WT對照媒劑組，經過LPS處理之小鼠的總蛋白質濃度顯著提升。相較於LPS組，給予甲基普賴蘇濃，低劑量或中劑量NIM-HA複合物(CA102N)可降低總蛋白質濃度，且可達到統計上的顯著差異(p ＜0.05)。應注意到LPS+M組(以中劑量NIM-HA複合物(CA102N)處理的小鼠)中的總蛋白質濃度略低於LPC+C組(以甲基普賴蘇濃處理的小鼠)。
LPS誘導會導致BALF中TNF-α (圖6B)、IL-1β (圖6C)以及IL-6 (圖6D)表現量增加；相較於LPS組，給予對照組藥物(甲基普賴蘇濃)以及低劑量或中劑量NIM-HA複合物(CA102N)能夠降低BALF中上述細胞激素的表現量，其中某些組別達到統計上的顯著差異(p ＜0.05)。應注意到，相較於甲基普賴蘇濃，給予低劑量NIM-HA複合物(CA102N)處理在抑制TNF-α與IL-1β表現量的效果較佳。
總結來說，本揭示內容實驗例1到5顯示本案提出的NIM-HA複合物(CA102N)能夠有效阻斷IL-6依賴的信息傳導級聯。更有甚者，本揭示內容提出的劑量就足以引發此一效應。
實驗例 6
NIM-HA 複合物與 NIM-Tetra 複合物對 SARS-CoV-2 假病毒進入的影響
以含有不同濃度之測試化合物(尼美舒利、NIM-tetra、CA102N、HA與HA四糖(tetra))的DMEM (補充添加10% FBS、100 U/ml青黴素/鏈黴素)將可穩定表現人類ACE2基因的HEK-293T細胞在37°C下預先處理1小時，之後和1,000 TU的SARS-CoV-2假型慢病毒(SARS-CoV-2假病毒)共同培育。在感染後6或16小時以新鮮DMEM (補充添加10% FBS、100 U/ml青黴素/鏈黴素)替換培養基。此外，在CA102N (預培養)組中，先將1,000 TU的SARS-CoV-2假型慢病毒和含有不同濃度之CA102N的DMEM在37°C下預先處理1小時，接著和HEK-293T/ACE2細胞共同培育6或16小時。以未受到假型慢病毒感染且未添加任何測試化合物的HEK-293T細胞作為負對照組(NC)，而受到假型慢病毒感染但未添加任何測試化合物的HEK-293T細胞則作為正對照組(PC)。之後，將細胞連續培養48小時，再進行螢光酶分析(Promega Bright-GloTM Luciferase Assay System)，以給予測試化合物後的螢光酶讀數(luciferase readout，RLU)相對於未給予化合物之對照組的減少量來計算抑制百分比，可表示為：抑制% = [(RLU對照-RLU血清)/RLU對照] *100%。圖7A與7B (阻止進入：6小時)以及圖8A與8B (阻止進入：16小時)顯示RLU與抑制百分比的結果。
圖7A與圖7B摘要整理的試驗數據顯示，單獨給予尼美舒利無法透過阻止病毒進入而抑制SARS-CoV-2假病毒感染。相反地，在感染後6小時，NIM-tetra、CA102N、HA以及HA四糖在某些試驗濃度可以實現至少50%的抑制效果。特別是，NIM-tetra展現了理想的病毒抑制效果，且呈現劑量相依性。更有甚者，以CA102N預先處理SARS-CoV-2假病毒和時，在感染後6小時能夠抑制40至60%的病毒進入。
圖7A與圖7B摘要整理的試驗數據顯示，單獨給予尼美舒利無法透過阻止病毒進入而抑制SARS-CoV-2假病毒感染。另外，所有測試濃度下的HA四糖在感染後第16小時僅有邊際抑制效果(低於50%抑制率)。此外，CA102N和HA則在最高試驗濃度才能展現高於50%的抑制效果。相反地，NIM-tetra展現了理想的病毒抑制效果，且呈現劑量相依性。相似地，以CA102N預先處理SARS-CoV-2假病毒和時，在感染後16小時最高劑量組別可以抑制50%的病毒進入。
實驗例 7
NIM-Tetra 複合物對細胞存活率的影響
以含有不同濃度之測試化合物(NIM-tetra與HA四糖)的DMEM (補充添加10% FBS、100 U/ml青黴素/鏈黴素)將可穩定表現人類ACE2基因的HEK-293T細胞在37°C下預先處理。在6小時或16小時後，以新鮮DMEM (補充添加10% FBS、100 U/ml青黴素/鏈黴素)替換培養基，之後，將細胞連續培養48小時，再進行細胞存活率分析(Invitrogen™ alamarBlue™ reagent)。接著，加入alamarBlue試劑，並在560 nm激發波常與590 nm發射波長下，測定試鹵靈(resorufin)的螢光發光強度。以媒劑處理的細胞所得之信號強度對應為100%存活細胞，對所得數據進行標準化，並將細胞存活率表示為：細胞存活率% = [(實驗RFU – 空白RFU) / (對照RFU – 空白RFU)] *100%。圖9A與圖9B顯示以NIM-tetra或HA四糖處理6或16小時候的細胞存活率。
圖9A與圖9B的數據顯示Nim-tetra有抑制區ˋ，且在較長期的處理組別(16小時)可觀察到劑量相依性。
實驗例 8
NIM-HA 複合物對活體內 SARS-CoV-2 假病毒感染的影響
使8週齡雌性BALB/c小鼠(購自BioLASCO Taiwan Co., Ltd.)適應實驗室環境1至2週。適應後，通過靜脈注射給予小鼠200 μl的測試樣品(CA102N 2：2 mg/kg尼美舒利當量；CA102N 4：4 mg/kg尼美舒利當量；或尼美舒利4：4 mg/kg尼美舒利當量) 1小時，然後透過氣管內注射SARS-CoV-2假病毒(10^10 PFU/小鼠)。感染後24小時，通過腹腔注射給予小鼠 100 μl螢光素(luciferin)，並使用IVIS® Spectrum In VIVO成像系統(PerkinElmer Inc.)檢測和分析肺部的發光信號。曝光時間為1分鐘。以未受假型慢病毒感染且未受任何測試化合物處理的小鼠作為負對照(HC組)。相比之下，被假型慢病毒感染但未受任何測試化合物處理的小鼠作為正對照組(病毒組)。
圖10A和10B中摘要整理的數據顯示，與陽性對照相比，在尼美舒利、CA102N 2和CA102N 4組中，SARS-CoV-2假病毒感染被顯著抑制(Kruskal-Wallis檢驗和Poisson回歸分析；p＜0.05)。進一步分析顯示CA102N 2或CA102N 4與尼美舒利4之間沒有統計學差異。另一方面，HA組和正對照組之間沒有顯著差異。
實驗例 9
NIM-Tetra 複合物對 SARS-CoV-2 病毒減少的效果
將Vero B6以每孔105 個細胞的密度播於48孔盤中。將藥物(3.13 μM和12.5 μM Nim-tetra和2.5 μM瑞德西韋；n=4)與100 μl含有SARS CoV-2病毒的培養基(MOI=0.03)預先培育1小時，然後取出孔盤中的培養基之後，將其加入每孔中的Vero E6細胞上。對照組包括：(1)背景對照(無細胞)，(2)用於標準化的模擬感染對照(細胞僅用培養基處理)，和(3)病毒對照(細胞僅用病毒處理)。細胞與細胞培育1小時。此後，除去培養基(連同藥物和病毒)，並用37°C預熱的PBS將每孔中的細胞沖洗三次。每孔(對照除外)用200 μl藥物稀釋液培育24小時，收集每孔上清液進行病毒qRT-PCR，以測定病毒Ct值。使用已知的Ct對病毒拷貝數的標準曲線，將病毒Ct值表示為每毫升病毒拷貝數。
圖11中摘要整理的數據顯示，以3.13及12.5 　M的Nim-tetra (Nim-HA4)處理，可降低Vero E6細胞中的病毒拷貝數，且以12.5 μM的Nim-tetra處理的組別相較於病毒對照組，達到統計上的顯著差異。此外，以12.5 μM的Nim-tetra處理的組別和經過2.5 mM瑞德西韋(remdesivir)處理的組別，對於SARS CoV-2病毒感染有相近(甚至略佳)的抑制效果。
總結來說，本揭示內容實驗例6至9中提供的結果表明，此處提出的NIM-HA複合物(CA102N或Nim-tetra)至少可以藉由阻斷病毒進入來有效抑制病毒感染。此外，本揭示內容提出了足以引起這種效果的劑量。
本揭示內容確立了此處提出的NIM-HA複合物可以透過(1)阻斷IL-6依賴性信息傳導級聯和(2)阻止病毒進入，進而以雙重方式用於治療SARS-CoV-2病毒感染(包括2019年冠狀病毒病(COVID-19))。先前的研究表明尼美舒利與肝毒性顯著相關。本文提供的實驗數據表明，本發明的NIM-HA複合物可以以尼美舒利劑量的二分之一劑量給予，同時實現基本相似的活體內效果。本案提出的NIM-HA複合物的優點還在於具有更長的血清半衰期，與一般的尼美舒利相比，進一步增強了其治療效果。
當可理解，上文所述的實施方式僅為例示，且所屬技術領域中具有通常知識者可做出各種修改。上文的說明、實驗例與數據完整地描述了本發明的例示性實施方式的結構與運用。雖然上文實施方式已具體地或參照一或多個個別的實施方式揭露了本發明的多種實施方式，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，當可對其進行各種更動而不至於悖離本發明之原理與精神。
無
為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與下文實施例、附隨申請專利範圍與圖式能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：
圖1的直方圖說明根據本揭示內容一實驗例，不同實驗組中小鼠的PGI2表現量。
圖2的直方圖說明根據本揭示內容一實驗例，不同實驗組中小鼠的平均細胞激素濃度。
圖3的直方圖說明根據本揭示內容一實驗例，NIM-HA對LPS-誘導之A549細胞的IL-6表現量的影響。
圖4的直方圖說明根據本揭示內容一實驗例，NIM-HA雙糖對LPS-誘導之A549細胞的IL-6表現量的影響。
圖5的直方圖說明根據本揭示內容一實驗例，NIM-HA對LPS-誘導之ALI小鼠的肺部濕重/乾重比的影響。
圖6A至6D的直方圖說明根據本揭示內容一實驗例，NIM-HA對LPS-誘導之ALI小鼠BALF中總蛋白表現量、TNF-α、IL-1β及IL-6表現量的影響。
圖7A與圖7B的直方圖說明NIM-HA與NIM-HA4複合物對SARS-CoV-2假病毒進入的影響(阻斷進入：6小時)。
圖8A與圖8B的直方圖與折線圖說明NIM-HA與NIM-HA4複合物對SARS-CoV-2假病毒進入的影響(阻斷進入：16小時)。
圖9A與圖9B的直方圖說明NIM-HA4複合物對細胞存活率的影響。
圖10A與圖10B的分布圖說明NIM-HA對小鼠受到SARS-CoV-2假病毒感染的活體內影響。
圖11的直方圖說明NIM-HA4複合物對SARS CoV-2病毒的抑制效果。
Figure 110120822-A0101-11-0002-1

Claims (17)

  1. 一種透明質酸複合物於製備藥物的用途，該藥物係用以治療一有需要的個體之肺部發炎的，其中該透明質酸複合物具有至少一個以下結構的雙糖單元：
    Figure 03_image018
    (I)，或其藥學上可接受的鹽類。
  2. 如請求項1所述的透明質酸複合物的用途，其中該個體為人類。
  3. 如請求項1所述的透明質酸複合物的用途，其中該肺部發炎為急性肺部發炎或慢性肺部發炎。
  4. 如請求項3所述的透明質酸複合物的用途，其中該急性肺部發炎是由肺炎、急性呼吸窘迫症候群或急性肺損傷所造成或與其相關。
  5. 如請求項4所述的透明質酸複合物的用途，其中該肺炎是由細菌感染、病毒感染或寄生蟲感染所造成。
  6. 如請求項5所述的透明質酸複合物的用途，其中： 該細菌感染是由金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、肺炎克雷伯菌或分枝桿菌所造成； 該病毒感染是由流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、單純皰疹病毒或冠狀病毒所造成；以及 該寄生蟲感染是由利什曼病原蟲、瘧原蟲或血吸蟲所造成。
  7. 如請求項6所述的透明質酸複合物的用途，其中該冠狀病毒為嚴重急性呼吸道症候群相關冠狀病毒2。
  8. 如請求項3所述的透明質酸複合物的用途，其中該慢性肺部發炎是由慢性阻塞性肺病、氣喘、肺部纖維化或自發性肺部纖維化所造成或與其相關。
  9. 如請求項1所述的透明質酸複合物的用途，其中該肺部發炎外因性過敏性肺泡炎。
  10. 如請求項1所述的透明質酸複合物的用途，其中該透明質酸複合物的平均分子量(MW)為10至2000 kDa。
  11. 如請求項1所述的透明質酸複合物的用途，其中該透明質酸複合物具有以下結構：
    Figure 03_image020
    (II)，或其藥學上可接受的鹽類。
  12. 如請求項1所述的透明質酸複合物的用途，其中該透明質酸複合物具有以下結構：
    Figure 03_image014
    Figure 03_image023
    或
    Figure 03_image025
    (III)，或其藥學上可接受的鹽類。
  13. 如請求項1所述的透明質酸複合物的用途，其中該透明質酸複合物的取代度為0.5%至35%。
  14. 一種透明質酸複合物，其具有以下結構：
    Figure 03_image026
    (II)，或其藥學上可接受的鹽類。
  15. 一種藥學組合物，包含一有效量的如請求項14所述的透明質酸複合物，以及一藥學上可接受的賦型劑。
  16. 一種透明質酸複合物，其具有以下結構：
    Figure 03_image028
    或
    Figure 03_image025
    (III)，或其藥學上可接受的鹽類。
  17. 一種藥學組合物，包含一有效量的如請求項16所述的透明質酸複合物，以及一藥學上可接受的賦型劑。
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