TW202144431A - 工程化抗her2雙特異性蛋白 - Google Patents

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度真 金
艾欣 關
家恒 唐
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Abstract

在一態樣中，提供能夠特異性地結合至人類HER2之亞結構域II及人類HER2之亞結構域IV二者之雙特異性蛋白。在另一態樣中，提供使用特異性地結合至人類HER2之亞結構域II及亞結構域IV之雙特異性蛋白治療癌症或治療癌症之腦轉移之方法。

Description

工程化抗HER2雙特異性蛋白
目前，治療諸如乳癌等癌症之腦轉移展現令人生畏之臨床挑戰。在乳癌患者中，腦轉移之發病率高達50%。臨床資料指示，HER2陽性乳癌有轉移至腦中之傾向。值得注意的是，已證明抗HER2療法可用於控制顱外腫瘤，但不能用於控制顱內病灶。該等療法不能控制轉移性病灶(諸如HER2陽性乳癌之腦轉移)之原因主要在於治療劑不能穿過血腦障壁(BBB)及進入腦實質。
在一態樣中，本揭示案提供蛋白質，其包含：  (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與單鏈可變片段(scFv)融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   輕鏈多肽，其與(a)中所列舉之該Fd部分配對以形成Fab， 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。在一些實施例中，該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV。在其他實施例中，該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
在此蛋白質之一些實施例中，第二Fc多肽經由第一連接體與scFv融合。第一連接體之長度可為1至20個胺基酸，例如GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118)。
在此蛋白質之一些實施例中，scFv包含經由第二連接體連結之VL 區及VH 區。該第二連接體之長度可為1至20個胺基酸，例如以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4S)2-G4)、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，含有本文所闡述之產生TfR結合位點之序列修飾中之任一者)。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366W取代，且第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。在其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且第二Fc多肽包含T366W取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。在某些實施例中，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
在此蛋白質之一些實施例中，鉸鏈區或其一部分連接至第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N端。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在特定實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:21之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:20之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:19之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:18之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:15或17之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:14之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:13之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:11或12之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ix) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:22之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (x) (a)包含與SEQ ID NO:5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:18之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在一些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在另一態樣中，本揭示案係關於蛋白質，其包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽在C端與scFv融合，或 其中(a)及/或(b)中之該Fd部分在N端與scFv融合，或 其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與scFv融合且(a)或(b)中之該Fd部分在N端與scFv融合，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽在C端與scFv融合。在一些實施例中，(a)及/或(b)中之Fd部分在N端與scFv融合。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽在C端與scFv融合且(a)或(b)中之Fd部分在N端與scFv融合。
在此蛋白質之一些實施例中，Fab結合至人類HER2之亞結構域II且scFv結合至人類HER2之亞結構域IV。在其他實施例中，Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
在此蛋白質之一些實施例中，與第一Fc多肽及/或第二Fc多肽融合之scFv包含一致的序列。在其他實施例中，與(a)及/或(b)中之Fd部分融合之scFv包含一致的序列。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽經由第一連接體與scFv融合。在一些實施例中，(a)及/或(b)中之Fd部分經由第一連接體與scFv融合。在某些實施例中，第一連接體之長度為1至20個胺基酸，例如以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4S)2-G4)、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在此蛋白質之一些實施例中，scFv包含經由第二連接體連結之VL 區及VH 區。在一些實施例中，第二連接體之長度為1至20個胺基酸，例如以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4S)2-G4)、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，含有本文所闡述之產生TfR結合位點之序列修飾中之任一者)。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366W取代，且第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。在其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且第二Fc多肽包含T366W取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。在某些實施例中，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。在一些實施例中，鉸鏈區或其一部分連接至第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N端。在某些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在特定實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:31之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:37或39之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ix) (a)包含與SEQ ID NO:37之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (x) (a)包含與SEQ ID NO:157之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:31之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:37或39之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:33之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:38之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:43之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:45或46之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:49之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ix) (a)包含與SEQ ID NO:44之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (x) (a)包含與SEQ ID NO:50之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (xi) (a)包含與SEQ ID NO:156之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:43之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:45之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:49之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:45之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:50之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:46之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:156之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽在C端與scFv融合且(a)或(b)中之Fd部分在N端與scFv融合，且其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:31之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:43之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:45之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:37或39之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:49之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在一些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在另一態樣中，本揭示案提供蛋白質，其包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中該等輕鏈多肽中之一者或兩者在N端與scFv融合，或 其中該等輕鏈多肽中之一者或兩者在C端與scFv融合，或 其中第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
在此蛋白質之一些實施例中，輕鏈多肽中之一者或兩者在N端與scFv融合。在一些實施例中，輕鏈多肽中之一者或兩者在C端與scFv融合。
在此蛋白質之一些實施例中，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合。
在此蛋白質之一些實施例中，Fab結合至人類HER2之亞結構域II且scFv結合至人類HER2之亞結構域IV。在一些實施例中，Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
在此蛋白質之一些實施例中，與輕鏈多肽中之一者或兩者融合之scFv包含一致的序列。
在此蛋白質之一些實施例中，輕鏈多肽中之一者或兩者經由第一連接體與scFv融合。在一些實施例中，第一連接體之長度為1至20個胺基酸，以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4S)2-G4)、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在此蛋白質之一些實施例中，scFv包含經由第二連接體連結之VL 區及VH 區。在一些實施例中，第二連接體之長度為1至20個胺基酸，以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4S)2-G4)、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，含有本文所闡述之產生TfR結合位點之序列修飾中之任一者)。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366W取代，且第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且第二Fc多肽包含T366W取代。在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。在一些實施例中，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
在此蛋白質之一些實施例中，鉸鏈區或其一部分連接至第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N端。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在特定實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO: 135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在一些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在另一態樣中，本揭示案提供蛋白質，其包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與Fv片段之VH 區或VL 區融合，且 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之VH 區或VL 區中之另一者融合，且 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
在此蛋白質之一些實施例中，Fab結合至人類HER2之亞結構域II且Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV。在一些實施例中，Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
在此蛋白質之一些實施例中，(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端經由第一連接體與VH 區或VL 區融合。在一些實施例中，第一連接體之長度為1至20個胺基酸，例如ASTKGPSVF (SEQ ID NO:125)之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，該兩個輕鏈多肽各自在N端經由第二連接體與VH 區或VL 區融合。在一些實施例中，第二連接體之長度為1至20個胺基酸，例如 RTVAAPSVFI (SEQ ID NO:126)之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與Fv片段之VH 區融合，且該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之VL 區融合。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，含有本文所闡述之產生TfR結合位點之序列修飾中之任一者)。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。在一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366W取代，且第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。在其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且第二Fc多肽包含T366W取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。在特定實施例中，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
在此蛋白質之一些實施例中，鉸鏈區或其一部分連接至第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N端。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在特定實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO: 135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:58之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:61之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:78之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:59之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:60之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:78之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:63之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:66之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:79之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:64之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:65之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:79之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (v) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:63之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:67之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:79之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:68之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:71之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:80之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:69之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:70之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:80之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:73之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:76之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:81之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) 第一多肽包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:74之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:75之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:81之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在其他實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在另一態樣中，本揭示案提供蛋白質，其包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，且在C端與Fv片段之VH 區或VL 區融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，且在C端與(a)中所列舉之VH 區或VL 區中之另一者融合， 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段，且其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。在一些實施例中，該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV。在一些實施例中，該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽與Fv片段之VH 區融合且第二Fc多肽與Fv片段之VL 區融合。在一些實施例中，第一Fc多肽與Fv片段之VL 區融合且第二Fc多肽與Fv片段之VH 區融合。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽在C端經由第一連接體與VH 區或VL 區融合。
在此蛋白質之一些實施例中，第一連接體之長度為1至20個胺基酸，例如以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5)、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4S)2)、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4S)3)、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4S)2-G4)、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，含有本文所闡述之產生TfR結合位點之序列修飾中之任一者)。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。在一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366W取代，且第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。在其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且第二Fc多肽包含T366W取代。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。在某些實施例中，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
在此蛋白質之一些實施例中，鉸鏈區或其一部分連接至第一Fc多肽及/或第二Fc多肽之N端。
在此蛋白質之一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之其他實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中， (i) (a)包含與SEQ ID NO:82或83之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:99或100之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:84之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:98之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:85之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:97之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:86或88之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:95或96之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:89或90之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:105或107之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:91之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:104之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:92之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:103之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:93之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:102之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (ix) (a)包含與SEQ ID NO:82之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:99之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (x) (a)包含與SEQ ID NO:82之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:100之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (xi) (a)包含與SEQ ID NO:90之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:107之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；或 (xii} (a)包含與SEQ ID NO:90之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:158之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在此蛋白質之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在其他實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在本揭示案之另一態樣中，本揭示案提供醫藥組合物，其包含本文所闡述蛋白質中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。
在本揭示案之另一態樣中，本揭示案提供經分離之多核苷酸，其包含編碼本文所闡述蛋白質之核苷酸序列。 在本揭示案之另一態樣中，本揭示案提供載體，其包含前述態樣之多核苷酸。
在本揭示案之另一態樣中，本揭示案提供宿主細胞，其包含該多核苷酸或該載體。
在本揭示案之另一態樣中，本揭示案提供治療個體之癌症或治療癌症之腦轉移之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之本文所闡述蛋白質或含有其之醫藥組合物。
在該方法之一些實施例中，該蛋白質係與化學療法或放射療法組合投與。
在該方法之一些實施例中，該癌症係轉移性癌症。在一些實施例中，癌症係乳癌。在一些實施例中，癌症係HER2陽性癌症。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2020年2月19日提出申請之美國臨時申請案第62/978,758號之優先權，其揭示內容出於所有目的係以全文引用的方式併入本文中。 I.     引言
在一態樣中，提供可結合至人類HER2之亞結構域II及人類HER2之亞結構域IV二者之雙特異性蛋白。雙特異性蛋白通常可在沒有輕鏈錯配或操縱之情形下產生。在一些實施例中，雙特異性蛋白單價結合至人類HER2之每一靶標亞結構域。在一些實施例中，雙特異性蛋白單價結合至人類HER2之一個靶標亞結構域且二價結合至人類HER2之另一靶標亞結構域(例如，單價結合至亞結構域II且二價結合至亞結構域IV，或單價結合至亞結構域IV且二價結合至亞結構域II)。在一些實施例中，雙特異性蛋白二價結合至人類HER2之每一靶標亞結構域。本文進一步詳細地闡述雙特異性蛋白之各種結構。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含結合至人類HER2之亞結構域II (或亞結構域IV)之scFv及結合至人類HER2之亞結構域IV (或亞結構域II)之Fab (例如，參見部分III中之「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」結構)。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含一或多個連結至該雙特異性蛋白之重鏈N端或C端之scFv，其中該scFv結合至人類HER2之亞結構域II (或亞結構域IV)且該雙特異性蛋白中之Fab結合至人類HER2之亞結構域IV (或亞結構域II) (例如，參見部分III中之「mAb/N端或C端scFv在HC上」結構)。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含一或多個連結至該雙特異性蛋白之輕鏈N端或C端之scFv，其中該scFv結合至人類HER2之亞結構域II (或亞結構域IV)且該雙特異性蛋白中之Fab結合至人類HER2之亞結構域IV (或亞結構域II) (例如，參見部分III中之「mAb/N端或C端scFv在HC上 mAb/N端或C端scFv在LC上」結構)。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含Fv片段中連結至重鏈N端之VH 區(或VL 區)及該Fv片段中連結至輕鏈N端之VL 區(或VH 區)，其中該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II (或亞結構域IV)且該雙特異性蛋白中之Fab結合至人類HER2之亞結構域IV (或亞結構域II) (例如，參見「部分III中之mAb/N端VH VL 在HC及LC上」結構)。在其他實施例中，雙特異性蛋白包含Fv片段中連結至該雙特異性蛋白中之兩個重鏈中之一者的C端之VH 區(或VL 區)及該Fv片段中連結至該兩個重鏈中之另一者的C端之VL 區(或VH 區)，其中該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II (或亞結構域IV)且該雙特異性蛋白中之Fab結合至人類HER2之亞結構域IV (或亞結構域II) (例如，參見「部分III中之HC上之mAb/C端VH VL 」結構)。
先前療法無法控制HER2陽性乳癌之腦轉移之原因主要在於治療劑不能穿過血腦障壁(BBB)及進入腦實質。因此，業內需要可穿過BBB並靶向腦實質中之HER2之新的治療劑。吾人先前闡述使用運鐵蛋白受體(TfR)結合作為使得能夠跨腦內皮進行BBB遞送之方法，此乃因TfR之表現在腦內皮細胞中高度表現且可使得能夠經由受體介導之胞吞轉送作用進行BBB遞送。令人感興趣的是，TfR在各種癌症中高度表現，包括HER2陽性乳癌。癌細胞之TfR表現增加之機制有可能與腫瘤細胞增殖及代謝需求(諸如鐵攝取)增加有關。實際上，公共微陣列資料集展示TfR表現與乳癌預後之相關性(Miller等人，Cancer Res. 71:6728，2011)。亦有一些關於使用TfR作為各種類型癌症之藥理學靶標之報導。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含一或多種特異性地結合至BBB受體(例如TfR)之經修飾之Fc多肽(亦即，結合TfR之Fc多肽)。在一些實施例中，雙特異性蛋白能夠穿過BBB轉運。在一些實施例中，與結合至單獨HER2之其他治療劑相比，如本文所闡述之結合至HER2及TfR二者之抗HER2雙特異性蛋白在結合至亦表現高水準TfR之HER2陽性腫瘤細胞時可提供額外抗腫瘤益處。具體而言，由於該等蛋白質可同時結合TfR及HER2二者，故此可增強其效能及/或功效。 II.   定義
除非上下文另外明確指示，否則如本文所用，單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數個指示物。因此，舉例而言，對「抗體」之提及視情況包括兩種或更多種此等分子之組合及諸如此類。
如本文所用，術語「約」及「大約」在用於修飾以數值或範圍指定之量時，指示該數值以及自熟習此項技術者已知值之合理偏差(例如± 20%、± 10%或± 5%)係在所列舉值之預期含義內。
如本文所用，術語「抗體」係指經由其可變區特異性地結合至抗原的具有免疫球蛋白摺疊之蛋白質。該術語涵蓋完整多株抗體、完整單株抗體、單鏈抗體、多特異性抗體(諸如雙特異性抗體)、單特異性抗體、單價抗體、嵌合抗體、人類化抗體及人類抗體。如本文所用，術語「抗體」亦包括保留抗原結合特異性之抗體片段，包括(但不限於) Fab、F(ab’)2 、Fv、scFv及二價scFv。抗體可含有分類為κ或λ之輕鏈。抗體可含有分類為γ、μ、α、δ或ε之重鏈，其依次分別定義免疫球蛋白類別IgG、IgM、IgA、IgD及IgE。
例示性免疫球蛋白(抗體)結構單元包含四聚體。每一四聚體係由兩個相同的多肽鏈對構成，每一對具有一條「輕鏈」(約25 kD)及一條「重鏈」(約50-70 kD)。每一鏈之N端定義主要負責抗原識別的具有約100個至110個或更多個胺基酸之可變區。術語「可變輕鏈」(VL )及「可變重鏈」(VH )分別係指該等輕鏈及重鏈。
術語「可變區」或「可變結構域」係指源自生殖系可變(V)基因、多樣性(D)基因或連接(J)基因(且不源自恆定(Cμ及Cδ)基因區段)之抗體重鏈或輕鏈中之結構域，且其給予抗體對結合至抗原之特異性。典型地，抗體可變區包含四個保守「框架」區，其與三個超變「互補決定區」間雜排列。
術語「互補決定區」或「CDR」係指每一鏈中之三個超變區，其使由輕鏈及重鏈可變區確立之四個框架區中斷。CDR主要負責抗體與抗原之抗原決定基之結合。每一鏈之CDR典型地稱為CDR1、CDR2及CDR3，其自N端開始依序編號，且典型地亦由特定CDR所位於之鏈鑑別。因此，VH CDR3或CDR-H3位於發現其之抗體重鏈之可變區中，而VL CDR1或CDR-L1係來自發現其之抗體輕鏈可變區之CDR1。
不同輕鏈或重鏈之「框架區」或「FR」在一種物種內係相對保守的。抗體之框架區(亦即組成型輕鏈及重鏈之組合框架區)用於定位並對齊三維空間中之CDR。框架序列可自包括生殖系抗體基因序列之公共DNA資料庫或已發表之參考文獻中獲得。舉例而言，人類重鏈及輕鏈可變區基因之生殖系DNA序列可在人類及小鼠序列之「VBASE2」生殖系可變基因序列資料庫中發現。
可使用此項技術中之各種熟知定義來確定CDR及框架區之胺基酸序列，例如Kabat、Chothia、國際ImMunoGeneTics資料庫(IMGT)、AbM及所觀察到之抗原觸點(「接觸」)。在一些實施例中，根據接觸定義來確定CDR。參見MacCallum等人， J. Mol. Biol. 262:732-745，1996。在一些實施例中，藉由Kabat、Chothia及/或接觸CDR定義之組合來確定CDR。
術語「Fd部分」係指免疫球蛋白重鏈之N端部分。典型地，Fd部分包括重鏈可變(VH)區及重鏈恆定(CH1)區。
術語「Fab」係指由輕鏈可變區、輕鏈恆定區、重鏈可變區及重鏈CH1恆定區組成之抗原結合片段。
術語「單鏈可變片段」或「scFv」係指由經由肽連接體連接在一起的重鏈可變區及輕鏈可變區組成之抗原結合片段。scFv缺少恆定區。
術語「Fv片段」係指由一起形成抗原結合位點之重鏈可變區及輕鏈可變區組成之抗原結合片段。
術語「抗原決定基」係指抗原中由分子(例如抗體之CDR)特異性地結合之區域或區，且可包括幾個胺基酸或幾個胺基酸之部分，例如5或6個或更多個(例如20或更多個)胺基酸或彼等胺基酸之部分。在一些情形中，抗原決定基包括非蛋白質組分，例如來自碳水化合物、核酸或脂質。在一些情形中，抗原決定基係三維部分。因此，舉例而言，倘若靶標為蛋白質，則抗原決定基可包含連續胺基酸(例如線性抗原決定基)，或來自蛋白質之不同部分且藉由蛋白質摺疊而靠近之胺基酸(例如不連續或構形抗原決定基)。
如本文所用，關於抗體所用之片語「識別抗原決定基」意指抗體CDR在該抗原決定基或含有該抗原決定基之抗原部分處與抗原相互作用或與其特異性結合。
「人類化抗體」係源自非人類來源(例如鼠類)之嵌合免疫球蛋白，其在CDR外含有最少量的源自非人類免疫球蛋白之序列。一般而言，人類化抗體將包含至少一個(例如兩個)可變結構域，其中CDR區實質上對應於非人類免疫球蛋白之彼等CDR區且框架區實質上對應於人類免疫球蛋白序列之彼等框架區。在一些情況下，人類免疫球蛋白之某些框架區殘基可經來自非人類物種之相應殘基替代，以(例如)改良特異性、親和力及/或血清半衰期。人類化抗體亦可包含免疫球蛋白恆定區(Fc) (典型地為人類免疫球蛋白序列)之至少一部分。抗體人類化之方法為此項技術中所已知。
「人類抗體」或「全人類抗體」係具有典型地源自人類生殖系基因之人類重鏈及輕鏈序列之抗體。在一些實施例中，抗體係由人類細胞、由利用人類抗體譜之非人類動物(例如經遺傳工程化以表現人類抗體序列之基因轉殖小鼠)或由噬菌體展示平臺產生。
術語「特異性地結合」係指結合至抗原決定基或靶標之分子(例如Fab、scFv或經修飾之Fc多肽(或其靶標結合部分))以相較於其與另一抗原決定基或非靶標化合物(例如在結構上不同之抗原)之結合更大之親和力、更大之親合力及/或更長之持續時間結合至樣品中之該抗原決定基或靶標。在一些實施例中，特異性地結合至抗原決定基或靶標之Fab、scFv或經修飾之Fc多肽(或其靶標結合部分)係如下Fab、scFv或經修飾之Fc多肽(或其靶標結合部分)：其與該抗原決定基或靶標之結合親和力為與其他抗原決定基或非靶標化合物之親和力的至少5倍，例如至少6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、25倍、50倍、100倍、1000倍、10,000倍或更大。如本文所用，術語「特異性結合特定抗原決定基或靶標」、「特異性地結合至特定抗原決定基或靶標」或「對特定抗原決定基或靶標具有特異性」可(例如)藉由分子對其所結合抗原決定基或靶標之平衡解離常數KD 為例如10-4 M或更小(例如10-5 M、10-6 M、10-7 M、10-8 M、10-9 M、10-10 M、10-11 M或10-12 M)來展現。熟習此項技術者將認識到，特異性地結合至來自一種物種之靶標之Fab或scFv亦可特異性地結合至該靶標之直向同源物。
術語「結合親和力」在本文中用於指兩種分子之間(例如Fab或scFv與抗原之間或經修飾之Fc多肽(或其靶標結合部分)與靶標之間)的非共價相互作用之強度。因此，舉例而言，除非另有指示或自上下文明顯可見，否則該術語可指Fab或scFv與抗原之間或經修飾之Fc多肽(或其靶標結合部分)與靶標之間的1:1相互作用。結合親和力可藉由量測平衡解離常數(KD )來量化，該常數係指解離速率常數(kd ，時間-1 )除以締合速率常數(ka ，時間-1 M-1 )。KD 可藉由量測複合物形成及解離之動力學來測定，例如使用表面電漿子共振(SPR)方法，例如Biacore™系統；動力學排斥分析，諸如KinExA® ；及生物層干涉(例如使用ForteBio® Octet平臺)。如本文所用，「結合親和力」不僅包括正式之結合親和力，諸如反映Fab或scFv與抗原之間或經修飾之Fc多肽(或其靶標結合部分)與靶標之間的1:1相互作用之彼等親和力，且亦包括KD 經計算可反映親合結合之表觀親和力。
如本文所用，「運鐵蛋白受體」或「TfR」係指運鐵蛋白受體蛋白1。人類運鐵蛋白受體1多肽序列在SEQ ID NO:150中列出。亦已知來自其他物種之運鐵蛋白受體蛋白1序列(例如黑猩猩，登錄號XP_003310238.1；恒河猴，NP_001244232.1；狗，NP_001003111.1；牛，NP_001193506.1；小鼠，NP_035768.1；大鼠，NP_073203.1；及雞，NP_990587.1)。術語「運鐵蛋白受體」亦涵蓋例示性參照序列(例如人類序列)之等位基因變異體，其由運鐵蛋白受體蛋白1染色體基因座處之基因編碼。全長運鐵蛋白受體蛋白包括短的N端細胞內區、跨膜區及大的細胞外結構域。細胞外結構域之特徵在於三個結構域：蛋白酶樣結構域、螺旋結構域及頂端結構域。
如本文所用，術語「Fc多肽」係指天然免疫球蛋白重鏈多肽之C端區，其特徵在於Ig摺疊作為結構域。Fc多肽含有至少包括CH2結構域及/或CH3結構域之恆定區序列，且可含有鉸鏈區之至少一部分，但不含可變區。
「經修飾之Fc多肽」係指與野生型免疫球蛋白重鏈Fc多肽序列相比具有至少一個突變(例如取代、缺失或插入)，但保留天然Fc多肽之總體Ig摺疊或結構之Fc多肽。
如本文所用，「FcRn」係指新生Fc受體。Fc多肽與FcRn之結合降低Fc多肽之清除率且延長其血清半衰期。人類FcRn蛋白係由大小為約50 kDa之類似於主要組織相容性(MHC) I類蛋白之蛋白質及大小為約15 kDa之β2-微球蛋白構成之異二聚體。
如本文所用，「FcRn結合位點」係指Fc多肽中結合至FcRn之區。在人類IgG中，如使用EU索引所編號，FcRn結合位點包括L251、M252、I253、S254、R255、T256、M428、H433、N434、H435及Y436。該等位置對應於SEQ ID NO:130之位置21至26、198及203至206。
如本文所用，「天然FcRn結合位點」係指Fc多肽中結合至FcRn且與天然Fc多肽中結合至FcRn之區具有相同胺基酸序列之區。
如本文所用，術語「CH3結構域」及「CH2結構域」係指免疫球蛋白恆定區結構域多肽。出於本申請案之目的，CH3結構域多肽係指如根據EU編號方案所編號自約位置341至約位置447之胺基酸區段，且CH2結構域多肽係指如根據EU編號方案所編號自約位置231至約位置340之胺基酸區段且不包括鉸鏈區序列。CH2及CH3結構域多肽亦可藉由IMGT (ImMunoGeneTics)編號方案來編號，其中根據IMGT Scientific圖表編號(IMGT網站)，CH2結構域編號係1-110且CH3結構域編號係1-107。CH2及CH3結構域係免疫球蛋白Fc區之一部分。Fc區係指如根據EU編號方案所編號自約位置231至約位置447之胺基酸區段，但如本文所用，可包括抗體鉸鏈區之至少一部分。說明性鉸鏈區序列係人類IgG1鉸鏈序列EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:127)。
關於CH3或CH2結構域所用之術語「野生型」、「天然(native及naturally occurring)」係指具有自然界中存在的序列之結構域。
如本文所用，關於突變體多肽或突變體多核苷酸所用之術語「突變體」可與「變異體」互換使用。關於給定野生型CH3或CH2結構域參照序列之變異體可包括天然等位基因變異體。「非天然」CH3或CH2結構域係指不存在於天然細胞中且係藉由對天然CH3結構域或CH2結構域多核苷酸或多肽進行遺傳修飾(例如使用遺傳工程技術或誘變技術)產生之變異體或突變體結構域。「變異體」包括相對於野生型包含至少一個胺基酸突變之任一結構域。突變可包括取代、插入及缺失。
關於核酸或蛋白質所用之術語「經分離」表示該核酸或蛋白質基本上不含在天然狀態下與其締合之其他細胞組分。其較佳呈均質狀態。典型地使用諸如電泳(例如聚丙烯醯胺凝膠電泳)或層析(例如高效液相層析)等分析化學技術來測定純度及均質性。在一些實施例中，經分離之核酸或蛋白質為至少85%純、至少90%純、至少95%純或至少99%純。
術語「胺基酸」係指天然及合成胺基酸，以及作用方式與天然胺基酸類似之胺基酸類似物及胺基酸模擬物。天然胺基酸係由遺傳密碼編碼之彼等胺基酸，以及隨後經修飾之彼等胺基酸，例如羥脯胺酸、γ-羧基麩胺酸鹽及O-磷酸絲胺酸。天然α-胺基酸包括(但不限於)丙胺酸(Ala)、半胱胺酸(Cys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、苯丙胺酸(Phe)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、精胺酸(Arg)、離胺酸(Lys)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、天冬醯胺(Asn)、脯胺酸(Pro)、麩醯胺酸(Gln)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、纈胺酸(Val)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)及其組合。天然α-胺基酸之立體異構物包括(但不限於) D-丙胺酸(D-Ala)、D-半胱胺酸(D-Cys)、D-天冬胺酸(D-Asp)、D-麩胺酸(D-Glu)、D-苯丙胺酸(D-Phe)、D-組胺酸(D-His)、D-異白胺酸(D-Ile)、D-精胺酸(D-Arg)、D-離胺酸(D-Lys)、D-白胺酸(D-Leu)、D-甲硫胺酸(D-Met)、D-天冬醯胺(D-Asn)、D-脯胺酸(D-Pro)、D-麩醯胺酸(D-Gln)、D-絲胺酸(D-Ser)、D-蘇胺酸(D-Thr)、D-纈胺酸(D-Val)、D-色胺酸(D-Trp)、D-酪胺酸(D-Tyr)及其組合。「胺基酸類似物」係指與天然胺基酸具有相同基礎化學結構(亦即，α碳結合至氫、羧基、胺基及R基)之化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此等類似物具有經修飾之R基(例如，正白胺酸)或經修飾之肽主鏈，但保留與天然胺基酸相同之基礎化學結構。「胺基酸模擬物」係指結構與胺基酸之一般化學結構不同，但作用方式與天然胺基酸類似之化合物。胺基酸在本文中可由其通常已知之三字母符號或由IUPAC-IUB生化命名委員會(Biochemical Nomenclature Commission)推薦之單字母符號來提及。
術語「多肽」及「肽」在本文中可互換使用，以指呈單鏈之胺基酸殘基聚合物。該等術語適用於其中一或多個胺基酸殘基係相應天然胺基酸之人工化學模擬物之胺基酸聚合物，以及天然胺基酸聚合物及非天然胺基酸聚合物。胺基酸聚合物可包含完全L-胺基酸、完全D-胺基酸或L及D胺基酸之混合物。
如本文所用之術語「蛋白質」係指多肽或單鏈多肽之二聚體(亦即兩種)或多聚體(亦即三種或更多種)。蛋白質之單鏈多肽可藉由共價鍵(例如二硫鍵)或非共價相互作用接合。
如本文所用，術語「連接體」係指將兩種肽或多肽(例如，在Fc多肽與scFv之間)連接(例如共價連接)以連結或融合該等肽或多肽之部分。在一些實施例中，連接體包含化學鍵聯。在一些實施例中，連接體包含長度為一或多個胺基酸殘基之肽。可基於連接體之性質(諸如連接體之長度、疏水性、撓性、剛性或可裂解性)選擇用於連結或融合肽或多肽之適宜連接體。
術語「多核苷酸」及「核酸」可互換地指具有任何長度之核苷酸鏈，且包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼基及/或其類似物或任一可藉由DNA或RNA聚合酶摻入至鏈中之受質。多核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。本文所考慮之多核苷酸之實例包括單股及雙股DNA、單股及雙股RNA以及具有單股及雙股DNA及RNA混合物之雜合分子。
術語「保守取代」及「保守突變」係指使得胺基酸經可歸類為具有類似特徵之另一胺基酸取代之改變。以此方式定義之保守胺基酸群組類別之實例可包括：「帶電/極性群組」，包括Glu (麩胺酸或E)、Asp (天冬胺酸或D)、Asn (天冬醯胺或N)、Gln (麩醯胺酸或Q)、Lys (離胺酸或K)、Arg (精胺酸或R)及His (組胺酸或H)；「芳香族群組」，包括Phe (苯丙胺酸或F)、Tyr (酪胺酸或Y)、Trp (色胺酸或W)及(組胺酸或H)；及「脂肪族群組」，包括Gly (甘胺酸或G)、Ala (丙胺酸或A)、Val (纈胺酸或V)、Leu (白胺酸或L)、Ile (異白胺酸或I)、Met (甲硫胺酸或M)、Ser (絲胺酸或S)、Thr (蘇胺酸或T)及Cys (半胱胺酸或C)。在每一群組內，亦可鑑別出亞群。舉例而言，可將帶電或極性胺基酸群組細分成包括以下之亞群：「帶正電亞群」，其包含Lys、Arg及His；「帶負電亞群」，其包含Glu及Asp；及「極性亞群」，其包含Asn及Gln。在另一實例中，可將芳香族或環狀群組細分成包括以下之亞群：「氮環亞群」，其包含Pro、His及Trp；及「苯基亞群」，其包含Phe及Tyr。在另一進一步實例中，可將脂肪族群組細分成亞群，例如「脂肪族非極性亞群」，其包含Val、Leu、Gly及Ala；及「脂肪族略微極性亞群」，其包含Met、Ser、Thr及Cys。保守突變類別之實例包括上述亞群內胺基酸之胺基酸取代，諸如(但不限於)：Lys取代Arg或反之亦然，使得可維持正電荷；Glu取代Asp或反之亦然，使得可維持負電荷；Ser取代Thr或反之亦然，使得可維持游離-OH；及Gln取代Asn或反之亦然，使得可維持游離-NH2 。在一些實施例中，疏水性胺基酸取代天然疏水性胺基酸(例如在活性部位中)以保持疏水性。
在兩個或更多個多肽序列之情況下，術語「一致」或「一致性」百分比係指，當在比較窗口或指定區域內進行比較及對齊以獲得最大對應時，如使用序列比較演算法或藉由人工對齊及目視檢查所量測，兩個或更多個序列或子序列相同或在指定區域內具有指定百分比(例如至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%或至少95%或更大)之一致胺基酸殘基。
對於多肽之序列比較，典型地一個胺基酸序列用作參照序列，候選序列與其進行比較。可使用熟習此項技術者可獲得之各種方法來實施對齊，例如目視對齊或使用可公開獲得之軟體使用已知演算法來達成最大對齊。此等程式包括BLAST程式、ALIGN、ALIGN-2 (Genentech，South San Francisco，Calif.)或Megalign (DNASTAR)。熟習此項技術者可確定用於對齊以達成最大對齊之參數。出於本申請案之目的，對於多肽序列之序列比較，使用BLASTP演算法，其為利用預設參數用於對齊兩個蛋白質序列之標準蛋白質BLAST。
當在鑑別多肽序列中之給定胺基酸殘基之情況下使用時，術語「對應於」、「參照......確定」或「參照......編號」係指在給定胺基酸序列與參照序列最大程度地對齊及比較時，指定參照序列之該殘基之位置。因此，舉例而言，在與SEQ ID NO:130進行最佳對齊時，當經修飾之Fc多肽中之一個胺基酸殘基與SEQ ID NO:130中之一個胺基酸對齊時，該殘基「對應於」SEQ ID NO:130中之該胺基酸。與參照序列對齊之多肽不需要與參照序列之長度相同。
如在本文中可互換使用之術語「個體(subject、individual)」及「患者」係指哺乳動物，包括(但不限於)人類、非人類靈長類動物、齧齒類動物(例如大鼠、小鼠及天竺鼠)、兔、牛、豬、馬及其他哺乳動物物種。在一個實施例中，患者係人類。
術語「治療(treatment、treating)」及諸如此類在本文中通常用於意指獲得期望之藥理學及/或生理學效應。「治療(treating或treatment)」可指在治療或改善神經退化性疾病(例如阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)或本文所闡述之另一神經退化性疾病)方面獲得成功之任何指標，包括任何客觀或主觀參數，諸如減輕、緩解、患者存活改良、存活時間或存活率增加、症狀減少或使患者更能耐受該疾病、使退化或衰退之速率減緩或改良患者之身體或精神健康狀況。症狀之治療或改善可基於客觀或主觀參數。可將治療效應與不接受該治療之個體或個體群進行比較，或與在治療之前或在治療期間之不同時間之同一患者進行比較。
術語「醫藥學上可接受之賦形劑」係指在生物學上或藥理學上適用於人類或動物之非活性醫藥成分，諸如(但不限於)緩衝劑、載劑或防腐劑。
如本文所用，劑之「治療量」或「治療有效量」係該劑(例如本文所闡述蛋白質中之任一者)治療個體疾病之量。
術語「投與」係指將劑、化合物或組合物遞送至生物作用之期望部位之方法。該等方法包括(但不限於)局部遞送、非經腸遞送、靜脈內遞送、真皮內遞送、肌內遞送、鞘內遞送、結腸遞送、直腸遞送或腹膜內遞送。在一個實施例中，靜脈內投與如本文所闡述之蛋白質。 III.  抗HER2雙特異性蛋白
在一態樣中，提供能夠特異性地結合至人類HER2之亞結構域II及人類HER2之亞結構域IV二者之雙特異性蛋白。在一些實施例中，雙特異性蛋白之一個或全部兩個Fc多肽係經修飾之Fc多肽(例如，經修飾以促進TfR結合及/或增強Fc多肽之異二聚化)。 Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含與Fab之一部分及scFv融合之Fc多肽。此一雙特異性蛋白之示意圖示於圖1A及圖1B中。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與單鏈可變片段(scFv)融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   輕鏈多肽，其與(a)中所列舉之該Fd部分配對以形成Fab， (d)  其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。在一些實施例中，蛋白質中之Fab結合至人類HER2之亞結構域II且scFv結合至人類HER2之亞結構域IV。在其他實施例中，蛋白質中之Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
Fab係自Fab之Fd部分(其與第一Fc多肽之N端融合)與輕鏈之配對形成。在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域II之Fab包含與SEQ ID NO:108之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域IV之Fab包含與SEQ ID NO:109之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。
在一些實施例中，雙特異性蛋白之第二Fc多肽在N端與scFv片段融合。在一些實施例中，第二Fc多肽在N端經由第一連接體與scFv片段融合。在一些實施例中，第一連接體之長度為約1至約50個胺基酸，例如約1至約40個、約1至約30個、約1至約25個、約1至約20個、約1至約15個、約1至約10個、約2至約40個、約2至約30個、約2至約20個、約2至約10個、約5至約40個、約5至約30個、約5至約25個或約5至約20個胺基酸。在一些實施例中，第一連接體之長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45或50個胺基酸。本文進一步詳細地闡述各種連接體。在一些實施例中，第一連接體包含GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118)之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白中之scFv包含經由第二連接體連結之VH 區及VL 區。在一些實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VL 區-VH 區-(C端)，其中scFv之C端經由第一連接體接合至Fc多肽之N端。在其他實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VH 區-VL 區-(C端)，其中scFv之C端經由第一連接體接合至Fc多肽之N端。
在一些實施例中，scFv之VL 區及VH 區經由第二連接體連結。在一些實施例中，第二連接體之長度為約10至約25個胺基酸，例如約10至約20個、約12至約25個、約12至約20個、約14至約25個或約14至約20個胺基酸。在一些實施例中，第二連接體之長度為約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸。在一些實施例中，第二連接體包含撓性連接體。本文進一步詳細地闡述各種連接體。在一些實施例中，第二連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在一些實施例中，scFv之VL 區及VH 區二者均含有Cys取代。在一些實施例中，VL 區及VH 區中之Cys取代可形成二硫鍵且有助於穩定scFv之結構。在一些實施例中，根據Kabat可變結構域編號，scFv在位置VH 44及VL 100中之每一者處包含半胱胺酸。在一些實施例中，scFv在位置VH 44與VL 100處之半胱胺酸之間包含二硫鍵。
舉例而言，抗HER2DII VL 區在SEQ ID NO:110之位置100處可具有Gln至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DII VL 區可具有SEQ ID NO:114之序列。在一些實施例中，抗HER2DIV VL 區在SEQ ID NO:111之位置100處可具有Gln至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DIV VL 區可具有SEQ ID NO:115之序列。
舉例而言，抗HER2DII VH 區在SEQ ID NO:108之位置44處可具有Gly至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DII VH 區可具有SEQ ID NO:112之序列。在一些實施例中，抗HER2DIV VH 區在SEQ ID NO:109之位置44處可具有Gly至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DIV VH 區可具有SEQ ID NO:113之序列。
在一些實施例中，在具有結構「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」之雙特異性蛋白之部分(a)中，第一Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。在一些實施例中，在具有結構「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」之雙特異性蛋白之部分(b)中，第二Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與scFv融合。說明性鉸鏈區序列係人類IgG1鉸鏈序列EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:127)。部分鉸鏈區係指SEQ ID NO:127之序列之一部分，例如，具有DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:128)之序列之部分鉸鏈區。
在其他實施例中，在具有結構「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」之雙特異性蛋白之部分(b)中，鉸鏈區(例如SEQ ID NO:127)或部分鉸鏈區(例如SEQ ID NO:128)係在第二Fc多肽之N端融合。在某些實施例中，當鉸鏈區在第二Fc多肽之N端融合時，相對於SEQ ID NO:127之序列，該鉸鏈區可在位置5處含有Cys至Ser突變。舉例而言，具有Cys至Ser突變之鉸鏈區可具有EPKSSDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:129)之序列。
在具有結構「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」之雙特異性蛋白中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如結合TfR之Fc多肽)。本文進一步詳細地闡述不同的Fc多肽及其修飾。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽可各自包含促進異二聚化之修飾。舉例而言，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366W取代且第二Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代。在另一實例中，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代且第二Fc多肽可包含T366W取代。此外，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可獨立地包含降低效應功能之修飾。舉例而言，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。在具有結構「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」之雙特異性蛋白之特定實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)係包含T366W取代以及L234A及L235A取代之結合TfR之Fc多肽，且根據EU編號，第二Fc多肽(或第一Fc多肽)包含T366S、L368A及Y407V取代。舉例而言，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二Fc多肽(或第一Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代，且第二Fc多肽不包括L234A或L325A取代。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽不包括L234A或L325A取代，且第二Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代。 例示性雙特異性「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」蛋白質
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的單鏈可變片段(scFv)融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   輕鏈多肽，其與(a)中所列舉之該Fd部分配對以形成Fab。
在一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:21或22之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:20之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:19之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:4或5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:18之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:23之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:24之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。注意，在該兩個實例中，scFv部分均含有具有Gln至Cys取代之抗HER2DIV VL 區(SEQ ID NO:115)及具有Gly至Cys取代之抗HER2DIV VH 區(SEQ ID NO:113)。此外，在兩個構築體中，(b)中之鉸鏈區在位置5處具有Cys至Ser突變(EPKSSDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:129))。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的單鏈可變片段(scFv)融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   輕鏈多肽，其與(a)中所列舉之該Fd部分配對以形成Fab。
在一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:15、16或17之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:14之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:13之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:9或10之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:11或12之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在一些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，一個或全部兩個Fc多肽之C端離胺酸可去除(例如，根據EU編號，在Fc多肽之位置447處之Lys殘基)。在一些實施例中，去除Fc多肽中之C端離胺酸可改良雙特異性蛋白之穩定性。 mAb/N端或C端scFv在HC上
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含在每一N端與特異性地結合至人類HER2之亞結構域II或IV之Fab融合的Fc多肽，且一個或全部兩個Fc多肽在C端與特異性地結合至人類HER2之亞結構域II或IV之scFv融合。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含在每一N端與特異性地結合至人類HER2之亞結構域II或IV之Fab融合的Fc多肽，且一個或全部兩個Fab在N端與特異性地結合至人類HER2之亞結構域II或IV之scFv融合。此一雙特異性蛋白之示意圖示於圖2A至圖2D中。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab， 其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽在C端與scFv融合，或 其中(a)及/或(b)中之該Fd部分在N端與scFv融合，或 其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與scFv融合且(a)或(b)中之該Fd部分在N端與scFv融合，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。在一些實施例中，該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV。在其他實施例中，該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域II之Fab包含與SEQ ID NO:108之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域IV之Fab包含與SEQ ID NO:109之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。
在某些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽在C端與scFv融合。在特定實施例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽在C端與scFv融合。在特定實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽各自在C端與scFv融合。在某些實施例中，(a)及/或(b)中之Fd部分在N端與scFv融合。在特定實施例中，(a)或(b)中之Fd部分在N端與scFv融合。在特定實施例中，(a)及(b)中之Fd部分各自在N端與scFv融合。在其他實施例中，第一Fc多肽或第二Fc多肽在C端與scFv融合且(a)或(b)中之Fd部分在N端與scFv融合。
在一些實施例中，當第一Fc多肽及第二Fc多肽各自在C端與scFv融合時，該兩個scFv可包含一致的序列。在一些實施例中，當(a)中之Fd部分及(b)中之Fd部分各自在N端與scFv融合時，該兩個scFv可包含一致的序列。在一些實施例中，當第一Fc多肽或第二Fc多肽在C端與scFv融合且(a)或(b)中之Fd部分在N端與scFv融合時，該兩個scFv可包含一致的序列。
在一些實施例中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽在C端經由第一連接體與scFv融合。在其他實施例中，(a)中之Fd部分及/或(b)中之Fd部分在N端經由第一連接體與scFv融合。在一些實施例中，第一連接體之長度為約1至約50個胺基酸，例如約1至約40個、約1至約30個、約1至約25個、約1至約20個、約1至約15個、約1至約10個、約2至約40個、約2至約30個、約2至約20個、約2至約10個、約5至約40個、約5至約30個、約5至約25個或約5至約20個胺基酸。在一些實施例中，第一連接體之長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45或50個胺基酸。本文進一步詳細地闡述各種連接體。在某些實施例中，第一連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在一些實施例中，雙特異性蛋白中之scFv包含經由第二連接體連結之VH 區及VL 區。在一些實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VL 區-VH 區-(C端)，其中scFv之C端經由第一連接體接合至(a)或(b)中之Fd部分之N端。在其他實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VH 區-VL 區-(C端)，其中scFv之C端經由第一連接體接合至(a)或(b)中之Fd部分之N端。在一些實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VL 區-VH 區-(C端)，其中scFv之N端經由第一連接體接合至第一Fc多肽或第二Fc多肽之C端。在其他實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VH 區-VL 區-(C端)，其中scFv之N端經由第一連接體接合至第一Fc多肽或第二Fc多肽之C端。
在一些實施例中，連結scFv中之VL 及VH 區之第二連接體之長度為約10至約25個胺基酸，例如約10至約20個、約12至約25個、約12至約20個、約14至約25個或約14至約20個胺基酸。在一些實施例中，第二連接體之長度為約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸。在一些實施例中，第二連接體包含撓性連接體。本文進一步詳細地闡述各種連接體。在一些實施例中，第二連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在一些實施例中，scFv之VL 區及VH 區二者均含有Cys取代。在一些實施例中，VL 區及VH 區中之Cys取代可形成二硫鍵且有助於穩定scFv之結構。在一些實施例中，根據Kabat可變結構域編號，scFv在位置VH 44及VL 100中之每一者處包含半胱胺酸。在一些實施例中，scFv在位置VH 44與VL 100處之半胱胺酸之間包含二硫鍵。
舉例而言，抗HER2DII VL 區在SEQ ID NO:110之位置100處可具有Gln至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DII VL 區可具有SEQ ID NO:114之序列。在一些實施例中，抗HER2DIV VL 區在SEQ ID NO:111之位置100處可具有Gln至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DIV VL 區可具有SEQ ID NO:115之序列。
舉例而言，抗HER2DII VH 區在SEQ ID NO:108之位置44處可具有Gly至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DII VH 區可具有SEQ ID NO:112之序列。在一些實施例中，抗HER2DIV VH 區在SEQ ID NO:109之位置44處可具有Gly至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DIV VH 區可具有SEQ ID NO:113之序列。
在一些實施例中，在具有結構「mAb/N端或C端scFv在HC上」之雙特異性蛋白之部分(a)中，第一Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。在一些實施例中，在具有結構「mAb/N端或C端scFv在HC上」之雙特異性蛋白之部分(b)中，第二Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。說明性鉸鏈區序列係人類IgG1鉸鏈序列EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:127)。部分鉸鏈區係指SEQ ID NO:127之序列之一部分，例如，具有DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:128)之序列之部分鉸鏈區。
在具有結構「mAb/N端或C端scFv在HC上」之雙特異性蛋白中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，結合TfR之Fc多肽)。本文進一步詳細地闡述不同的Fc多肽及其修飾。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽可各自包含促進異二聚化之修飾。舉例而言，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366W取代且第二Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代。在另一實例中，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代且第二Fc多肽可包含T366W取代。此外，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可獨立地包含降低效應功能之修飾。舉例而言，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。在具有結構「mAb/N端或C端scFv在HC上」之雙特異性蛋白之特定實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)係包含T366W取代以及L234A及L235A取代之結合TfR之Fc多肽，且根據EU編號，第二Fc多肽(或第一Fc多肽)包含T366S、L368A及Y407V取代。舉例而言，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二Fc多肽(或第一Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代，且第二Fc多肽不包括L234A或L325A取代。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽不包括L234A或L325A取代，且第二Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代。 例示性雙特異性「mAb/N端或C端scFv在HC上」蛋白質
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4或5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:31或32之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9或10之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:37、38或39之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽各自在C端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:31或32之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽各自在C端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:37、38或39之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中(a)或(b)中之Fd部分在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4或5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:43或44之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中(a)或(b)中之Fd部分在N端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:45或46之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9或10之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:49或50之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中(a)及(b)中之Fd部分各自在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:43或44之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中(a)及(b)中之Fd部分各自在N端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:45之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:49或50之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合且(a)或(b)中之該Fd部分在N端與該scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:31或32之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:43或44之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab， 其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合且(a)或(b)中之該Fd部分在N端與該scFv融合。
在一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:45之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:37、38或39之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:49或50之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在一些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，一個或全部兩個Fc多肽之C端離胺酸可去除(例如，根據EU編號，在Fc多肽之位置447處之Lys殘基)。在一些實施例中，去除Fc多肽中之C端離胺酸可改良雙特異性蛋白之穩定性。 mAb/N端或C端scFv在LC上
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含在N端及/或C端與特異性地結合至人類HER2之亞結構域II或IV之scFv融合的輕鏈。此一雙特異性蛋白之示意圖示於圖3A至圖3D中。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中該等輕鏈多肽中之一者或兩者在N端與scFv融合，或 其中該等輕鏈多肽中之一者或兩者在C端與scFv融合，或 其中第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域II之Fab包含與SEQ ID NO:108之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域IV之Fab包含與SEQ ID NO:109之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。
在某些實施例中，輕鏈多肽中之一者或兩者在N端與scFv融合。在特定實施例中，輕鏈多肽中之一者在N端與scFv融合。在特定實施例中，兩個輕鏈多肽各自在N端與scFv融合。在某些實施例中，輕鏈多肽中之一者或兩者在C端與scFv融合。在特定實施例中，輕鏈多肽中之一者在C端與scFv融合。在特定實施例中，兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合。在其他實施例中，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合。
在一些實施例中，當兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合時，該兩個scFv可包含一致的序列。在一些實施例中，當兩個輕鏈多肽各自在N端與scFv融合時，該兩個scFv可包含一致的序列。
在一些實施例中，輕鏈多肽中之一者或兩者經由第一連接體與scFv融合。在一些實施例中，第一連接體之長度為約1至約50個胺基酸，例如約1至約40個、約1至約30個、約1至約25個、約1至約20個、約1至約15個、約1至約10個、約2至約40個、約2至約30個、約2至約20個、約2至約10個、約5至約40個、約5至約30個、約5至約25個或約5至約20個胺基酸。在一些實施例中，第一連接體之長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45或50個胺基酸。本文進一步詳細地闡述各種連接體。在某些實施例中，第一連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在一些實施例中，雙特異性蛋白中之scFv包含經由第二連接體連結之VH 區及VL 區。在一些實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VL 區-VH 區-(C端)，其中scFv之C端經由第一連接體接合至輕鏈多肽之N端。在其他實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VH 區-VL 區-(C端)，其中scFv之C端經由第一連接體接合至輕鏈多肽之N端。在一些實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VL 區-VH 區-(C端)，其中scFv之N端經由第一連接體接合至輕鏈多肽之C端。在其他實施例中，scFv中VL 區及VH 區之定向為(N端)-VH 區-VL 區-(C端)，其中scFv之N端經由第一連接體接合至輕鏈多肽之C端。
在一些實施例中，連結scFv中之VL 及VH 區之第二連接體之長度為約10至約25個胺基酸，例如約10至約20個、約12至約25個、約12至約20個、約14至約25個或約14至約20個胺基酸。在一些實施例中，第二連接體之長度為約10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25個胺基酸。在一些實施例中，第二連接體包含撓性連接體。本文進一步詳細地闡述各種連接體。在一些實施例中，第二連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在一些實施例中，scFv之VL 區及VH 區二者均含有Cys取代。在一些實施例中，VL 區及VH 區中之Cys取代可形成二硫鍵且有助於穩定scFv之結構。在一些實施例中，根據Kabat可變結構域編號，scFv在位置VH 44及VL 100中之每一者處包含半胱胺酸。在一些實施例中，scFv在位置VH 44與VL 100處之半胱胺酸之間包含二硫鍵。
舉例而言，抗HER2DII VL 區在SEQ ID NO:110之位置100處可具有Gln至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DII VL 區可具有SEQ ID NO:114之序列。在一些實施例中，抗HER2DIV VL 區在SEQ ID NO:111之位置100處可具有Gln至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DIV VL 區可具有SEQ ID NO:115之序列。
舉例而言，抗HER2DII VH 區在SEQ ID NO:108之位置44處可具有Gly至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DII VH 區可具有SEQ ID NO:112之序列。在一些實施例中，抗HER2DIV VH 區在SEQ ID NO:109之位置44處可具有Gly至Cys取代。在特定實施例中，含有Cys取代之抗HER2DIV VH 區可具有SEQ ID NO:113之序列。
在一些實施例中，在具有結構「mAb/N端或C端scFv在LC上」之雙特異性蛋白之部分(a)中，第一Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。在一些實施例中，在具有結構「mAb/N端或C端scFv在LC上」之雙特異性蛋白之部分(b)中，第二Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。說明性鉸鏈區序列係人類IgG1鉸鏈序列EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:127)。部分鉸鏈區係指SEQ ID NO:127之序列之一部分，例如，具有DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:128)之序列之部分鉸鏈區。
在具有結構「mAb/N端或C端scFv在LC上」之雙特異性蛋白中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，結合TfR之Fc多肽)。本文進一步詳細地闡述不同的Fc多肽及其修飾。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽可各自包含促進異二聚化之修飾。舉例而言，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366W取代且第二Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代。在另一實例中，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代且第二Fc多肽可包含T366W取代。此外，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可獨立地包含降低效應功能之修飾。舉例而言，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。在具有結構「mAb/N端或C端scFv在HC上」之雙特異性蛋白之特定實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)係包含T366W取代以及L234A及L235A取代之結合TfR之Fc多肽，且根據EU編號，第二Fc多肽(或第一Fc多肽)包含T366S、L368A及Y407V取代。舉例而言，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二Fc多肽(或第一Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代，且第二Fc多肽不包括L234A或L325A取代。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽不包括L234A或L325A取代，且第二Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代。例示性雙特異性「 mAb/N 端或 C 端 scFv 在 LC 上」蛋白質
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中該等輕鏈多肽中之一者在C端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4或5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中該等輕鏈多肽中之一者在C端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9或10之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中該兩個輕鏈多肽各自在C端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合。
在一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4或5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： 一些實施例，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中該兩個輕鏈多肽各自在C端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合。
在一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9或10之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中該等輕鏈多肽中之一者在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4或5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中該等輕鏈多肽中之一者在N端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合。
在一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9或10之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4或5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9或10之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中第一輕鏈多肽在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV之scFv融合且第二輕鏈多肽在C端與該scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4或5之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中第一輕鏈多肽在N端與結合至人類HER2之亞結構域II之scFv融合且第二輕鏈多肽在C端與該scFv融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9或10之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在一些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，一個或全部兩個Fc多肽之C端離胺酸可去除(例如，根據EU編號，在Fc多肽之位置447處之Lys殘基)。在一些實施例中，去除Fc多肽中之C端離胺酸可改良雙特異性蛋白之穩定性。 mAb/N端VH VL 在HC及LC上
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含在兩個重鏈中之每一者之N端融合的VH 區(或VL 區)及在兩個輕鏈中之每一者之N端融合的VL 區(或VH 區)。此一雙特異性蛋白之示意圖示於圖4中。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與Fv片段之VH 區或VL 區融合，且 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之VH 區或VL 區中之另一者融合，且 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
在雙特異性蛋白之一些實施例中，(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與Fv片段之VH 區融合，且該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之VL 區融合。在其他實施例中，(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與Fv片段之VL 區融合，且該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之VH 區融合。
在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域II之Fab包含與SEQ ID NO:108之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域IV之Fab包含與SEQ ID NO:109之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。
在一些實施例中，第一連接體將VH 區或VL 區連結至(a)及(b)中之該等Fd部分中之每一者之N端。在一些實施例中，第二連接體將VH 區或VL 區連接至該兩個輕鏈多肽中之每一者之N端。在一些實施例中，第一連接體或第二連接體之長度為約1至約50個胺基酸，例如約1至約40個、約1至約30個、約1至約25個、約1至約20個、約1至約15個、約1至約10個、約2至約40個、約2至約30個、約2至約20個、約2至約10個、約5至約40個、約5至約30個、約5至約25個或約5至約20個胺基酸。在一些實施例中，第一連接體之長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45或50個胺基酸。本文進一步詳細地闡述各種連接體。在某些實施例中，第一連接體包含ASTKGPSVF (SEQ ID NO:125)之序列。在某些實施例中，第二連接體包含RTVAAPSVFI (SEQ ID NO:126)之序列。
在一些實施例中，在具有結構「mAb/N端VH VL 在HC及LC上」之雙特異性蛋白之部分(a)中，第一Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。在一些實施例中，在具有結構「mAb/N端VH VL 在HC及LC上」之雙特異性蛋白之部分(b)中，第二Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。說明性鉸鏈區序列係人類IgG1鉸鏈序列EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:127)。部分鉸鏈區係指SEQ ID NO:127之序列之一部分，例如，具有DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:128)之序列之部分鉸鏈區。
在具有結構「mAb/N端VH VL 在HC及LC上」之雙特異性蛋白中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，結合TfR之Fc多肽)。本文進一步詳細地闡述不同的Fc多肽及其修飾。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽可各自包含促進異二聚化之修飾。舉例而言，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366W取代且第二Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代。在另一實例中，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代且第二Fc多肽可包含T366W取代。此外，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可獨立地包含降低效應功能之修飾。舉例而言，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。在具有結構「mAb/N端VH VL 在HC及LC上」之雙特異性蛋白之特定實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)係包含T366W取代以及L234A及L235A取代之結合TfR之Fc多肽，且根據EU編號，第二Fc多肽(或第一Fc多肽)包含T366S、L368A及Y407V取代。舉例而言，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二Fc多肽(或第一Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代，且第二Fc多肽不包括L234A或L325A取代。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽不包括L234A或L325A取代，且第二Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代。例示性雙特異性「 mAb/N 端 VH VL 在 HC 及 LC 上」蛋白質
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fv片段之VH 區融合，且 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之另一VL 區融合，且 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段。
在一個實例中，雙特異性蛋白包含第一多肽，其包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:58之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:61或62之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:78之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，雙特異性蛋白包含第一多肽，其包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:59之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:60之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:78之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fv片段之VH 區融合，且 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之另一VL 區融合，且 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段。
在一個實例中，雙特異性蛋白包含第一多肽，其包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:63之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:66或67之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:79之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，第一多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:64之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，第二多肽包含在N端與Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:65之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第三及第四多肽各自包含在N端與Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:79之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fv片段之VL 區融合，且 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之另一VH 區融合，且 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段。
在一個實例中，雙特異性蛋白包含第一多肽，其包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:68之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:71或72之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:80之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，雙特異性蛋白包含第一多肽，其包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:69之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:70之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:80之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之該等Fd部分中之每一者配對以形成該Fab； 其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fv片段之VL 區融合，且 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之另一VH 區融合，且 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段。
在一個實例中，雙特異性蛋白包含第一多肽，其包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:73之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:76或77之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:81之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，雙特異性蛋白包含第一多肽，其包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:74之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:75之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:81之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在一些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，一個或全部兩個Fc多肽之C端離胺酸可去除(例如，根據EU編號，在Fc多肽之位置447處之Lys殘基)。在一些實施例中，去除Fc多肽中之C端離胺酸可改良雙特異性蛋白之穩定性。 mAb/C端VH VL 在HC上
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含在兩個Fc多肽中之一者之C端融合的VH 區(或VL 區)及在兩個Fc多肽中之另一者之C端融合的VL 區(或VH 區)。此一雙特異性蛋白之示意圖示於圖5中。在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，且在C端與Fv片段之VH 區或VL 區融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，且在C端與(a)中所列舉之VH 區或VL 區中之另一者融合， 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段，且其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)   兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
在雙特異性蛋白之一些實施例中，第一Fc多肽與Fv片段之VH 區融合且第二Fc多肽與Fv片段之VL 區融合。在一些實施例中，第一Fc多肽與Fv片段之VL 區融合且第二Fc多肽與Fv片段之VH 區融合。
在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域II之Fab包含與SEQ ID NO:108之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。在一些實施例中，特異性地結合至人類HER2之亞結構域IV之Fab包含與SEQ ID NO:109之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之VH 區。
在一些實施例中，第一連接體將VH 區或VL 區連結至Fc多肽之C端。在一些實施例中，第一連接體或第二連接體之長度為約1至約50個胺基酸，例如約1至約40個、約1至約30個、約1至約25個、約1至約20個、約1至約15個、約1至約10個、約2至約40個、約2至約30個、約2至約20個、約2至約10個、約5至約40個、約5至約30個、約5至約25個或約5至約20個胺基酸。在一些實施例中，第一連接體之長度為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45或50個胺基酸。本文進一步詳細地闡述各種連接體。在一些實施例中，第一連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在一些實施例中，在具有結構「mAb/C端VH VL 在HC上」之雙特異性蛋白之部分(a)中，第一Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。在一些實施例中，在具有結構「mAb/C端VH VL 在HC上」之雙特異性蛋白之部分(b)中，第二Fc多肽在N端經由鉸鏈區或部分鉸鏈區與Fab之Fd部分融合。說明性鉸鏈區序列係人類IgG1鉸鏈序列EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:127)。部分鉸鏈區係指SEQ ID NO:127之序列之一部分，例如，具有DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:128)之序列之部分鉸鏈區。
在具有結構「mAb/C端VH VL 在HC上」之雙特異性蛋白中，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可特異性地結合至運鐵蛋白受體(例如，結合TfR之Fc多肽)。本文進一步詳細地闡述不同的Fc多肽及其修飾。在一些實施例中，第一Fc多肽及第二Fc多肽可各自包含促進異二聚化之修飾。舉例而言，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366W取代且第二Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代。在另一實例中，根據EU編號，第一Fc多肽可包含T366S、L368A及Y407V取代且第二Fc多肽可包含T366W取代。此外，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽可獨立地包含降低效應功能之修飾。舉例而言，根據EU編號，降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。在具有結構「mAb/N端VH VL 在HC上」之雙特異性蛋白之特定實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)係包含T366W取代以及L234A及L235A取代之結合TfR之Fc多肽，且根據EU編號，第二Fc多肽(或第一Fc多肽)包含T366S、L368A及Y407V取代。舉例而言，第一Fc多肽(或第二Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:137之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且第二Fc多肽(或第一Fc多肽)可包含與SEQ ID NO:133之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代，且第二Fc多肽不包括L234A或L325A取代。在某些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽不包括L234A或L325A取代，且第二Fc多肽係結合TfR之Fc多肽且含有L234A及L235A取代。例示性雙特異性「 mAb/C 端 VH VL 在 HC 上」蛋白質
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fab之Fd部分融合，且在C端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fv片段之VH 區融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，且在C端與該Fv片段之VL 區融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:82或83之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:99、100或101之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:84之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:98之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:85之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:97之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:86、87或88之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:95或96之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在一些實施例中，雙特異性蛋白包含： (a)   第一Fc多肽，其在N端與結合至人類HER2之亞結構域IV的Fab之Fd部分融合，且在C端與結合至人類HER2之亞結構域II的Fv片段之VH 區融合； (b)  第二Fc多肽，其在N端與該Fab之Fd部分融合，且在C端與該Fv片段之VL 區融合。
在雙特異性蛋白之一個實例中，(a)包含與SEQ ID NO:89或90之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:105、106或107之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:91之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:104之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在另一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:92之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:103之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。在又一實例中，(a)包含與SEQ ID NO:93或94之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:102之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列，且(c)中之兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在一些實施例中，根據EU編號，第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。在某些實施例中，該蛋白質包括下文所闡述之順式LALA構形。
在上述雙特異性蛋白之一些實施例中，一個或全部兩個Fc多肽之C端離胺酸可去除(例如，根據EU編號，在Fc多肽之位置447處之Lys殘基)。在一些實施例中，去除Fc多肽中之C端離胺酸可改良雙特異性蛋白之穩定性。 IV.  Fc多肽及其修飾
在一些態樣中，本文所闡述之任一抗HER2雙特異性蛋白包含Fc多肽二聚體，其中該二聚體中之任一或全部兩個Fc多肽相對於野生型Fc多肽含有胺基酸修飾。在一些實施例中，Fc多肽(例如經修飾之Fc多肽)中之胺基酸修飾可導致Fc多肽二聚體與BBB受體(例如TfR)之結合，促進二聚體中兩種Fc多肽之異二聚化，調節效應功能，延長血清半衰期，影響糖基化及/或降低人類中之免疫原性。在一些實施例中，雙特異性蛋白中所存在之Fc多肽獨立地具有與相應野生型Fc多肽(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽)至少約85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%之胺基酸序列一致性。經修飾之Fc多肽(例如，結合TfR之Fc多肽)之實例及說明可參見(例如)國際專利公開案第 WO 2018/152326號，該案係以全文引用的方式併入本文中。 用於BBB受體結合之Fc多肽修飾
本文提供能夠穿過BBB轉運之抗HER2雙特異性蛋白。此一蛋白質包含結合至BBB受體之經修飾之Fc多肽。BBB受體在BBB內皮上以及其他細胞及組織類型中表現。在一些實施例中，BBB受體係TfR。結合至TfR之經修飾之Fc多肽亦稱為具有TfR結合位點。
在各種Fc修飾中指定之胺基酸殘基、包括在結合至BBB受體(例如TfR)之經修飾之Fc多肽中引入的彼等胺基酸殘基在本文中使用EU索引編號進行編號。任何Fc多肽(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽)可在如本文所闡述之一或多個位置處具有修飾(例如胺基酸取代)。在一些實施例中，針對BBB (例如TfR)受體結合活性而經修飾之結構域係人類Ig CH3結構域，諸如IgG1 CH3結構域。CH3結構域可具有任何IgG亞型，亦即來自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG1抗體之情況下，CH3結構域係指如根據EU編號方案所編號自約位置341至約位置447處之胺基酸區段。
在一些實施例中，特異性地結合至TfR之經修飾之Fc多肽結合至TfR之頂端結構域，且可結合至TfR而不阻斷或以其他方式抑制運鐵蛋白與TfR之結合。在一些實施例中，運鐵蛋白與TfR之結合實質上不受抑制。在一些實施例中，對運鐵蛋白與TfR之結合之抑制小於約50% (例如，小於約45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%)。
在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含一或多個、至少一個、兩個或三個取代；且在一些實施例中，根據EU編號方案，至少四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個在包含266、267、268、269、270、271、295、297、298及299之胺基酸位置處之取代。在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含至少一個、兩個或三個取代；且在一些實施例中，根據EU編號方案，至少四個、五個、六個、七個、八個或九個在包含274、276、283、285、286、287、288、289及290之胺基酸位置處之取代。在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含至少一個、兩個或三個取代；且在一些實施例中，根據EU編號方案，至少四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個在包含268、269、270、271、272、292、293、294、296及300之胺基酸位置處之取代。在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含至少一個、兩個或三個取代；且在一些實施例中，根據EU編號方案，至少四個、五個、六個、七個、八個或九個在包含272、274、276、322、324、326、329、330及331之胺基酸位置處之取代。在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含至少一個、兩個或三個取代；且在一些實施例中，根據EU編號方案，至少四個、五個、六個或七個在包含345、346、347、349、437、438、439及440之胺基酸位置處之取代。
在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含至少一個、兩個或三個取代；且在一些實施例中，根據EU編號方案，至少四個、五個、六個、七個、八個或九個在胺基酸位置384、386、387、388、389、390、413、416及421處之取代。
在一些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含至少一個相對於SEQ ID NO:130具有取代之位置，如下所示：在位置384處之Leu、Tyr、Met或Val；在位置386處之Leu、Thr、His或Pro；在位置387處之Val、Pro或酸性胺基酸；在位置388處之芳香族胺基酸，例如Trp或Gly (例如Trp)；在位置389處之Val、Ser或Ala；在位置413處之酸性胺基酸、Ala、Ser、Leu、Thr或Pro；在位置416處之Thr或酸性胺基酸；或在位置421處之Trp、Tyr、His或Phe。在一些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽可在集合中之一或多個位置處包含指定胺基酸之保守取代，例如，相同電荷分組、疏水性分組、側鏈環結構分組(例如芳香族胺基酸)或大小分組及/或極性或非極性分組中之胺基酸。因此，舉例而言，Ile可存在於位置384、386及/或位置413處。在一些實施例中，在位置387、413及416中之一者、兩者或每一者位置處之酸性胺基酸係Glu。在其他實施例中，在位置387、413及416中之一者、兩者或每一者處之酸性胺基酸係Asp。在一些實施例中，位置384、386、387、388、389、413、416及421中之兩者、三者、四者、五者、六者、七者或所有八者具有如此段中所指定之胺基酸取代。
在一些實施例中，在胺基酸位置384、386、387、388、389、390、413、416及/或421處具有修飾之Fc多肽在位置390處包含天然Asn。在一些實施例中，Fc多肽在位置390處包含Gly、His、Gln、Leu、Lys、Val、Phe、Ser、Ala或Asp。在一些實施例中，Fc多肽在包含380、391、392及415之位置處進一步包含一個、兩個、三個或四個取代。在一些實施例中，Trp、Tyr、Leu或Gln可存在於位置380處。在一些實施例中，Ser、Thr、Gln或Phe可存在於位置391處。在一些實施例中，Gln、Phe或His可存在於位置392處。在一些實施例中，Glu可存在於位置415處。
在某些實施例中，Fc多肽包含兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個或十個選自以下之位置：在位置380處之Trp、Leu或Glu；在位置384處之Tyr或Phe；在位置386處之Thr；在位置387處之Glu；在位置388處之Trp；在位置389處之Ser、Ala、Val或Asn；在位置390處之Ser或Asn；在位置413處之Thr或Ser；在位置415處之Glu或Ser；在位置416處之Glu；及/或在位置421處之Phe。在一些實施例中，Fc多肽包含如下所有十一個位置：在位置380處之Trp、Leu或Glu；在位置384處之Tyr或Phe；在位置386處之Thr；在位置387處之Glu；在位置388處之Trp；在位置389處之Ser、Ala、Val或Asn；在位置390處之Ser或Asn；在位置413處之Thr或Ser；在位置415處之Glu或Ser；在位置416處之Glu；及/或在位置421處之Phe。
在某些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含在位置384處之Leu或Met；在位置386處之Leu、His或Pro；在位置387處之Val；在位置388處之Trp；在位置389處之Val或Ala；在位置413處之Pro；在位置416處之Thr；及/或在位置421處之Trp。在一些實施例中，Fc多肽進一步包含在位置391處之Ser、Thr、Gln或Phe。在一些實施例中，Fc多肽進一步包含在位置380處之Trp、Tyr、Leu或Gln及/或在位置392處之Gln、Phe或His。在一些實施例中，Trp存在於位置380處及/或Gln存在於位置392處。在一些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽在位置380處不具有Trp。
在其他實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含在位置384處之Tyr；在位置386處之Thr；在位置387處之Glu或Val；在位置388處之Trp；在位置389處之Ser；在位置413處之Ser或Thr；在位置416處之Glu；及/或在位置421處之Phe。在一些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含在位置390處之天然Asn。在某些實施例中，Fc多肽進一步包含在位置380處之Trp、Tyr、Leu或Gln；及/或在位置415處之Glu。在一些實施例中，Fc多肽進一步包含在位置380處之Trp及/或在位置415處之Glu。
在一些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽包含以下取代中之一或多者：在位置380處之Trp；在位置386處之Thr；在位置388處之Trp；在位置389處之Val；在位置413處之Ser或Thr；在位置415處之Glu；及/或在位置421處之Phe。
在其他實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽進一步包含一個、兩個或三個選自以下之位置：位置414為Lys、Arg、Gly或Pro；位置424為Ser、Thr、Glu或Lys；且位置426為Ser、Trp或Gly。
在一些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽具有SEQ ID NO:135之序列。在本文所闡述之雙特異性蛋白之一些實施例中，Fc多肽二聚體中之兩個Fc多肽中之一者可為具有SEQ ID NO:135之序列的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽，而該Fc多肽二聚體中之另一Fc多肽可具有野生型Fc多肽之序列(例如SEQ ID NO:130)。在本文所闡述之雙特異性蛋白之其他實施例中，Fc多肽二聚體中之全部兩個Fc多肽可為具有SEQ ID NO:135之序列的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽。
在本文所闡述之雙特異性蛋白之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在本文所闡述之雙特異性蛋白之一些實施例中，Fc多肽二聚體中之兩個Fc多肽中之一者可為結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:135之序列具有至少90%一致性之序列，而該Fc多肽二聚體中之另一Fc多肽可具有野生型Fc多肽之序列(例如SEQ ID NO:130)。
在本文所闡述之雙特異性蛋白之一些實施例中，根據EU編號，第一Fc多肽及/或第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ala、在位置413處之Thr、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:140-144之序列具有至少90% (例如91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%)一致性之序列。
在本文所闡述之雙特異性蛋白之一些實施例中，Fc多肽二聚體中之兩個Fc多肽中之一者可為結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ala、在位置413處之Thr、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:140之序列具有至少90%一致性之序列，而該Fc多肽二聚體中之另一Fc多肽可具有野生型Fc多肽之序列(例如SEQ ID NO:130)。
在一些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽具有SEQ ID NO:140之序列。在本文所闡述之雙特異性蛋白之一些實施例中，Fc多肽二聚體中之兩個Fc多肽中之一者可為具有SEQ ID NO:140之序列的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽，而該Fc多肽二聚體中之另一Fc多肽可具有野生型Fc多肽之序列(例如SEQ ID NO:130)。在本文所闡述之雙特異性蛋白之其他實施例中，Fc多肽二聚體中之全部兩個Fc多肽可為具有SEQ ID NO:140之序列的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽。
在一些實施例中，結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽具有SEQ ID NO:145之序列。在本文所闡述之雙特異性蛋白之一些實施例中，Fc多肽二聚體中之兩個Fc多肽中之一者可為具有SEQ ID NO:145之序列的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽，而該Fc多肽二聚體中之另一Fc多肽可具有野生型Fc多肽之序列(例如SEQ ID NO:130)。在本文所闡述之雙特異性蛋白之其他實施例中，Fc多肽二聚體中之全部兩個Fc多肽可為具有SEQ ID NO:145之序列的結合BBB受體(例如TfR)之Fc多肽。 用於異二聚化之Fc多肽修飾
在一些實施例中，本文所闡述之任一雙特異性蛋白中所存在之Fc多肽包括隆凸及孔洞突變以促進異二聚體形成並阻礙同二聚體形成。通常，該等修飾在第一多肽之界面處引入突起(「隆凸」)且在第二多肽之界面中引入相應空腔(「孔洞」)，從而使得突起可定位於空腔中以便促進異二聚體形成且由此阻礙同二聚體形成。藉由用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)替代來自第一多肽界面之小胺基酸側鏈來構築突起。藉由用較小胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)替代大的胺基酸側鏈在第二多肽之界面中產生大小與突起相同或相似之補償性空腔。在一些實施例中，此等其他突變在Fc多肽中之位置不會對多肽與BBB受體(例如TfR)之結合具有負面效應。
在用於二聚化之隆凸及孔洞方法之一個說明性實施例中，存在於雙特異性蛋白中之一個Fc多肽之位置366 (根據EU編號方案編號)包含色胺酸代替天然蘇胺酸。二聚體中之另一Fc多肽在位置407處(根據EU編號方案編號)具有纈胺酸代替天然酪胺酸。另一Fc多肽可進一步包含取代，其中位置366處(根據EU編號方案編號)之天然蘇胺酸經絲胺酸取代且位置368處(根據EU編號方案編號)之天然白胺酸經丙胺酸取代。因此，本文所闡述之雙特異性蛋白之一個Fc多肽具有T366W隆凸突變且另一Fc多肽具有Y407V突變，其典型地伴隨有T366S及L368A孔洞突變。
在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的一個或全部兩個Fc多肽亦可經工程化以含有用於異二聚化之其他修飾，例如對CH3-CH3界面內作為天然帶電或疏水性補丁修飾之接觸殘基進行靜電工程化。
舉例而言，在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有Fc多肽二聚體，該二聚體之一個Fc多肽具有T366W隆凸突變且與SEQ ID NO:131之序列具有至少90% (例如 , 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%)一致性，且另一Fc多肽具有T366S、L368A及Y407V孔洞突變且與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性。在某些實施例中，Fc多肽二聚體中之一個或全部兩個Fc多肽可為結合TfR之Fc多肽。在特定實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)具有SEQ ID NO:133之序列之第一Fc多肽，及(ii)具有SEQ ID NO:136之序列之第二Fc多肽。在特定實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)具有SEQ ID NO:133之序列之第一Fc多肽，及(ii)具有SEQ ID NO:141之序列之第二Fc多肽。在特定實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之第一Fc多肽，及(ii)具有SEQ ID NO:146之序列之第二Fc多肽。 用於調節效應功能之Fc多肽修飾
在一些實施例中，本文所闡述之任一雙特異性蛋白中所存在之一個或全部兩個Fc多肽可包含降低效應功能之修飾，亦即，在結合至在介導效應功能之效應細胞上表現的Fc受體時誘導某些生物學功能之能力降低。抗體效應功能之實例包括(但不限於) C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞介導之吞噬作用(ADCP)、下調細胞表面受體(例如B細胞受體)及B細胞活化。效應功能可隨抗體類別而變化。舉例而言，天然人類IgG1及IgG3抗體可在結合至存在於免疫系統細胞上之適當Fc受體時引發ADCC及CDC活性；且天然人類IgG1、IgG2、IgG3及IgG4可在結合至存在於免疫細胞上之適當Fc受體時引發ADCP功能。
在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的一個或全部兩個Fc多肽可包含降低或消除效應功能之修飾。降低效應功能之說明性Fc多肽突變包括(但不限於) CH2結構域中之取代，例如，根據EU編號方案在位置234及235處。舉例而言，在一些實施例中，一個或全部兩個Fc多肽可包含在位置234及235處之丙胺酸殘基。因此，一個或全部兩個Fc多肽可具有L234A及L235A (在本文中亦稱為「LALA」)取代。
調節效應功能之其他Fc多肽突變包括(但不限於)以下：位置329可具有突變，其中脯胺酸經甘胺酸、丙胺酸、絲胺酸或精胺酸或足夠大至破壞Fc/Fcγ受體界面之胺基酸殘基取代，該Fc/Fcγ受體界面係在Fc之脯胺酸329與FcγRIII之色胺酸殘基Trp 87及Trp 110之間形成。根據EU編號方案，其他說明性取代包括S228P、E233P、L235E、N297A、N297D及P331S。亦可存在多個取代，例如根據EU編號方案，人類IgG1 Fc區之L234A及L235A；人類IgG1 Fc區之L234A、L235A及P329G；人類IgG4 Fc區之S228P及L235E；人類IgG1 Fc區之L234A及G237A；人類IgG1 Fc區之L234A、L235A及G237A；人類IgG2 Fc區之V234A及G237A；人類IgG4 Fc區之L235A、G237A及E318A；及人類IgG4 Fc區之S228P及L236E。在一些實施例中，一個或全部兩個Fc多肽可具有一或多個調節ADCC之胺基酸取代，例如根據EU編號方案在位置298、333及/或334處之取代。「順式 LALA 」構形
在本文所闡述之任一雙特異性蛋白之一些實施例中，雙特異性蛋白中之兩個Fc多肽中僅一者(而不是全部兩個Fc多肽)經修飾以降低效應功能並結合TfR。另一Fc多肽不含TfR結合位點或任何降低效應功能之修飾。在雙特異性蛋白中之Fc多肽二聚體中，兩個Fc多肽中僅一者同時含有TfR結合位點及降低FcγR結合之修飾(例如LALA取代)，而另一Fc多肽不含TfR結合位點或任何降低FcγR結合之修飾稱為具有順式LALA構形。
舉例而言，在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有具有順式LALA構形之Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)具有SEQ ID NO:137之序列之第一Fc多肽，其具有TfR結合位點及LALA取代二者以及隆凸修飾，及(ii)與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之第二Fc多肽，其僅具有孔洞修飾。在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有具有順式LALA構形之Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)具有SEQ ID NO:142之序列之第一Fc多肽，其具有TfR結合位點及LALA取代二者以及隆凸修飾，及(ii)與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之第二Fc多肽，其僅具有孔洞修飾。在一些實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有具有順式LALA構形之Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)具有SEQ ID NO:147之序列之第一Fc多肽，其具有TfR結合位點及LALA取代二者以及隆凸修飾，及(ii)與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之第二Fc多肽，其僅具有孔洞修飾。
在特定實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有具有順式LALA構形之Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)第一Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列，及(ii)第二Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列。
在特定實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有具有順式LALA構形之Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)第一Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列，及(ii)第二Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列。
在特定實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有具有順式LALA構形之Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)第一Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ala、在位置413處之Thr、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:142之序列具有至少90%一致性之序列，及(ii)第二Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列。
在特定實施例中，本文所闡述之雙特異性蛋白可含有具有順式LALA構形之Fc多肽二聚體，該二聚體具有(i)第一Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列，及(ii)第二Fc多肽，根據EU編號，其包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ala、在位置413處之Thr、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:142之序列具有至少90%一致性之序列。 用於延長血清半衰期之Fc多肽修飾
在一些實施例中，可將用以增強血清半衰期之修飾引入至本文所闡述之任一雙特異性蛋白中。舉例而言，在一些實施例中，如根據EU編號方案所編號，本文所闡述之雙特異性蛋白中所存在的一個或全部兩個Fc多肽可包含在位置252處之酪胺酸、在位置254處之蘇胺酸及在位置256處之麩胺酸。因此，一個或全部兩個Fc多肽可具有M252Y、S254T及T256E取代。或者，如根據EU編號方案所編號，一個或全部兩個Fc多肽可具有M428L及N434S取代。或者，一個或全部兩個Fc多肽可具有N434S或N434A取代。 C端離胺酸殘基去除之Fc多肽
在本文所闡述之雙特異性蛋白之一些實施例中，一個或全部兩個Fc多肽之C端離胺酸可去除(例如，根據EU編號，在Fc多肽之位置447處之Lys殘基)。C端離胺酸殘基在跨越許多物種之免疫球蛋白中高度保守，且可藉由細胞機構在蛋白質產生期間完全或部分地去除。在一些實施例中，去除Fc多肽中之C端離胺酸可改良雙特異性蛋白之穩定性。 V.   連接體
如本文所闡述，雙特異性蛋白可含有一或多個連接體。連接體係指雙特異性蛋白中兩個元件之間的鍵聯(亦即，VH 區與VL 區之間、 scFv與Fc多肽之間、scFv與Fd部分之間、scFv與輕鏈之間、VH 區或VL 區與Fd部分之間、VH 區或VL 區與輕鏈之間或VH 區或VL 區與Fc多肽之間)。在一些實施例中，連接體可為可將雙特異性蛋白中之兩個元件連接以提供空間及/或撓性之肽連接體。
在一些實施例中，連接體可包括1-100個胺基酸(例如1-90個、1-80個、1-70個、1-90個、1-60個、1-50個、1-40個、1-30個、1-20個、1-10個、1-8個、1-6個、1-4個、5-100個、10-100個、15-100個、20-100個、30-100個、40-100個、50-100個、60-100個、70-100個、80-100個、90-100個、10-90個、10-80個、10-70個、10-60個、10-50個、10-40個、10-30個、10-25個、10-20個或10-15個胺基酸)。在一些實施例中，兩個Fc結構域單體之間的連接體係含有1-30個胺基酸(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個胺基酸)之胺基酸間隔體。連接體可含有天然胺基酸、非天然胺基酸或其組合。在一些實施例中，連接體可為撓性連接體，例如含有諸如Gly、Asn、Ser、Thr、Ala及諸如此類等胺基酸。此等連接體可使用已知參數來設計，且可具有任何長度並含有任何數目之任何長度之重複單元(例如，Gly及Ser殘基之重複單元)。舉例而言，連接體可具有重複序列，諸如兩個、三個、四個、五個或更多個GGGGS (SEQ ID NO:117)、GGSG (SEQ ID NO:151)、GSGG (SEQ ID NO:152)或SGGG (SEQ ID NO:153)重複序列或單一GGGGS (SEQ ID NO:117)、GGSG (SEQ ID NO:151)、GSGG (SEQ ID NO:152)或SGGG (SEQ ID NO:153)。含有Gly及Ser殘基之撓性連接體之實例包括(但不限於) GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
在一些實施例中，連接體亦可含有除甘胺酸及絲胺酸以外之胺基酸，例如GGGGSEPKSS (SEQ ID NO:124)、ASTKGPSVF (SEQ ID NO:125)或RTVAAPSVFI (SEQ ID NO:126)。此項技術中亦闡述其他連接體之實例，例如，參見Chen等人， Adv. Drug Deliv Rev. 65(10):1357-1369，2013。 VI.  雙特異性蛋白之製備
為製備本文所闡述之雙特異性蛋白，可使用此項技術中已知之許多技術。在一些實施例中，編碼所關注抗體之重鏈及輕鏈之基因可自細胞(例如自雜交瘤)中選殖。編碼單株抗體之重鏈及輕鏈之基因文庫亦可自雜交瘤或漿細胞中製得。或者，可使用噬菌體或酵母展示技術來鑑別特異性地結合至所選抗原之抗體及Fab片段。
可使用許多表現系統(包括原核及真核表現系統)來產生雙特異性蛋白。在一些實施例中，表現系統係哺乳動物細胞表現系統，諸如雜交瘤或CHO細胞表現系統。許多此等系統可自商業供應商廣泛獲得。在一些實施例中，可使用單一載體(例如)在二順反子表現單元中或在不同啟動子之控制下表現編碼構成雙特異性蛋白之多肽之多核苷酸。在其他實施例中，可使用單獨載體來表現編碼構成雙特異性蛋白之多肽之多核苷酸。
在一些態樣中，本揭示案提供經分離之核酸，其包含編碼構成如本文所闡述之雙特異性蛋白之任一多肽之核酸序列；包含此等核酸之載體；及其中引入該等核酸之宿主細胞，其用於複製該等核酸及/或表現雙特異性蛋白。
在一些實施例中，多核苷酸(例如經分離之多核苷酸)包含編碼構成如本文所揭示之雙特異性蛋白的多肽之核苷酸序列(例如，如上文部分III中所闡述)。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼下文非正式序列表中所揭示之一或多個胺基酸序列(例如 重鏈、輕鏈及/或Fc多肽序列)之核苷酸序列。在一些實施例中，多核苷酸包含編碼與下文非正式序列表中所揭示之序列具有至少85%序列一致性(例如至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性)之胺基酸序列之核苷酸序列。在一些實施例中，如本文所闡述之多核苷酸可操作地連接至異源核酸，例如異源啟動子。
含有編碼本揭示案之抗體或其片段的多核苷酸之適宜載體包括選殖載體及表現載體。儘管所選之選殖載體可根據意欲使用之宿主細胞而變化，但可用選殖載體通常能夠自我複製，可具有特定限制性內核酸酶之單一靶標及/或可攜帶可用於選擇含有該載體之純系的標記物之基因。實例包括質體及細菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript (例如pBS SK+)及其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA及穿梭載體(諸如pSA3及pAT28)。該等及許多其他選殖載體可自商業供應商獲得，諸如BioRad、Strategene及Invitrogen。
表現載體通常係含有本揭示案之核酸的可複製之多核苷酸構築體。表現載體可作為游離基因體或作為染色體DNA之組成部分在宿主細胞中複製。適宜表現載體包括(但不限於)質體、病毒載體(包括腺病毒、腺相關病毒、反轉錄病毒)及任何其他載體。
用於選殖或表現如本文所闡述之多核苷酸或載體之適宜宿主細胞包括原核或真核細胞。在一些實施例中，宿主細胞係原核的。在一些實施例中，宿主細胞係真核的，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞。在一些實施例中，宿主細胞係人類細胞，例如人類胚腎(HEK)細胞。
在另一態樣中，提供製備如本文所闡述之雙特異性蛋白之方法。在一些實施例中，該方法包括在適於表現該雙特異性蛋白之條件下培養如本文所闡述之宿主細胞(例如表現如本文所闡述之多核苷酸或載體之宿主細胞)。在一些實施例中，隨後自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該雙特異性蛋白。在一些實施例中，純化該雙特異性蛋白，例如藉由層析。 VII. 治療方法
在一些態樣中，本文提供治療個體之癌症(例如HER2陽性癌症)或治療癌症(例如HER2陽性癌症)之腦轉移之方法，其係藉由向該個體投與治療有效量之本文所闡述之任一雙特異性蛋白或含有其之醫藥組合物來實施。本文亦提供跨內皮胞吞轉送能夠結合HER2 (例如人類HER2)之抗體可變區或其抗原結合片段之方法。在一些實施例中，該等方法包括使內皮與包含本文所闡述之雙特異性蛋白之組合物接觸。在一些實施例中，內皮係血腦障壁(BBB)。
可根據本文所提供之方法治療的HER2陽性癌症之非限制性實例包括HER2陽性乳癌、卵巢癌、膀胱癌、唾液腺癌、子宮內膜癌、胰臟癌及非小細胞肺癌(NSCLC)，以及HER2陽性胃腺癌及/或HER2陽性胃食管接合部腺癌。在一些實施例中，HER2陽性癌症係HER2陽性乳癌。在一些實施例中，HER2陽性癌症係HER2陽性胃腺癌及/或HER2陽性胃食管接合部腺癌。在一些實施例中，HER2陽性癌症係轉移性癌症。
在其他態樣中，本文提供治療癌症(例如HER2陽性癌症)之轉移之方法。在一些實施例中，該等方法包括向該個體投與治療有效量之本文所闡述之抗HER2雙特異性蛋白。在一些實施例中，轉移係上文所闡述HER2陽性癌症之腦轉移。在一些實施例中，轉移係HER2陽性乳癌之腦轉移。在一些實施例中，轉移係HER2陽性胃腺癌及/或HER2陽性胃食管接合部腺癌之腦轉移。
在一些實施例中，治療益處可包含腫瘤生長減少或減緩、腫瘤大小(例如體積)減少、腫瘤細胞存活率降低、轉移性病灶數減少、癌症(例如HER2陽性癌症)之一或多個徵象或症狀改善及/或患者存活增加。在一些實施例中，腫瘤細胞存活、腫瘤生長、腫瘤大小及/或轉移性病灶數減少至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。
在一些實施例中，抗HER2雙特異性蛋白拮抗HER2活性。在一些實施例中，HER2活性受抑制(例如，抑制至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多)。
本文所闡述之抗HER2雙特異性蛋白之投與途徑可為經口、腹膜內、經皮、皮下、靜脈內、肌內、鞘內、吸入、經局部、病灶內、經直腸、支氣管內、經鼻、經黏膜、經腸、經眼或經耳遞送，或此項技術中已知之任何其他方法。在一些實施例中，經口、靜脈內或腹膜內投與抗HER2雙特異性蛋白。 VIII.      醫藥組合物及套組
在其他態樣中，提供包含根據本揭示案之抗HER2雙特異性蛋白之醫藥組合物及套組。 醫藥組合物
製備用於本揭示案中之調配物之指南可參見熟習此項技術者已知之許多關於醫藥製備及調配之手冊。
在一些實施例中，醫藥組合物包含如本文所闡述之抗HER2雙特異性蛋白，且進一步包含一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或賦形劑。醫藥學上可接受之載劑包括在生理學上相容且不干擾或以其他方式抑制活性劑活性之任何溶劑、分散介質或包衣。
在一些實施例中，雙特異性蛋白可經調配用於藉由注射非經腸投與。典型地，用於活體內投與之醫藥組合物係無菌的，例如熱滅菌、蒸汽滅菌、無菌過濾或輻照。
本文所闡述之醫藥組合物之劑量及期望藥物濃度可端視於所設想之具體用途而變化。 套組
在一些實施例中，提供包含本文所闡述之雙特異性蛋白的用於治療癌症(例如HER2陽性癌症)之套組。在一些實施例中，套組進一步包含一或多種額外治療劑。舉例而言，在一些實施例中，套組包含如本文所闡述之雙特異性蛋白，且進一步包含一或多種用於治療癌症之額外治療劑。在一些實施例中，套組進一步包含指導性材料，該等指導性材料含有用於實踐本文所闡述方法之指示(亦即方案) (例如，使用該套組投與雙特異性蛋白之說明書)。儘管指導性材料典型地包含書面或印刷材料，但其並不限於此。本揭示案考慮能夠儲存此等說明書且將其傳遞給最終使用者之任何媒體。此等媒體包括(但不限於)電子儲存媒體(例如磁碟、磁帶、盒式磁盤、晶片)、光學媒體(例如CD-ROM)及諸如此類。此等媒體可包括提供此等指導性材料之網際網路站點之地址。 IX.  實例
將藉助具體實例更詳細地闡述本發明。以下實例僅出於說明性目的而提供，且不意欲以任何方式限制本發明。 實例1. 雙特異性蛋白之產生
產生具有如本文所闡述且示於圖1至圖5中之雙特異性蛋白結構之工程化蛋白質，以靶向人類HER2之亞結構域II及人類HER2之亞結構域IV。在一些構築體中，Fc多肽之C端離胺酸被去除。在一些構築體中，Fd部分(VH + CH1)被選殖至包含編碼Fc多肽之序列之表現載體中。在一些實施例中，使Fc多肽經工程化以具有TfR結合位點。在構築體之一些實施例中，一個Fc多肽含有TfR結合位點及「隆凸」(T366W)突變(例如SEQ ID NO:137)，而另一Fc多肽含有「孔洞」(T366S/L368A/Y407V)突變(例如SEQ ID NO:133)。另外，一個或全部兩個Fc多肽亦含有突變L234A/L235A，其使FcγR結合減弱。
將載體與相應輕鏈載體一起以1:1:2之隆凸:孔洞:輕鏈比率共轉染至ExpiCHO或Expi293細胞中。藉由將上清液加載在蛋白質A管柱上，自條件化培養基純化所表現之蛋白質。用10個管柱體積之PBS (pH 7.4)洗滌管柱。用50 mM檸檬酸鈉(pH 3.0，含150 mM NaCl)溶析蛋白質，且立即用200 mM精胺酸、137 mM琥珀酸(pH 5.0)中和。藉由粒徑篩析層析(SEC) (GE Superdex200)，使用200 mM精胺酸、137 mM琥珀酸(pH 5.0)作為運行緩衝液進一步純化蛋白質。藉由完整質量LC/MS確認所純化之蛋白質，且藉由SDS-PAGE及分析型HPLC-SEC確認純度＞ 95%。產生含有未經修飾之人類IgG1恆定區之抗HER2雙特異性蛋白。下表1提供抗HER2雙特異性蛋白及兩種對照抗HER2抗體之序列。 表1
   重鏈 1 重鏈 2 輕鏈
1號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:6 SEQ ID NO:10 SEQ ID NO:26
2號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:22 SEQ ID NO:25
3號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:18 SEQ ID NO:5 SEQ ID NO:25
4號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:6 SEQ ID NO:37 SEQ ID NO:26
5號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:38 SEQ ID NO:26
6號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:63 SEQ ID NO:66 SEQ ID NO:79
7號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:82 SEQ ID NO:99 SEQ ID NO:25
8號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:90 SEQ ID NO:107 SEQ ID NO:26
9號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:44 SEQ ID NO:25
10號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:6 SEQ ID NO:50 SEQ ID NO:26
11號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:6 SEQ ID NO:156 SEQ ID NO:26
12號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:45 SEQ ID NO:50 SEQ ID NO:26
13號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:46 SEQ ID NO:156 SEQ ID NO:26
14號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:6 SEQ ID NO:157 SEQ ID NO:26
15號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:63 SEQ ID NO:67 SEQ ID NO:79
16號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:82 SEQ ID NO:100 SEQ ID NO:25
17號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:90 SEQ ID NO:158 SEQ ID NO:26
18號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:1 SEQ ID NO:23 SEQ ID NO:25
19號雙特異性蛋白 SEQ ID NO:24 SEQ ID NO:5 SEQ ID NO:25
抗HER2DIV對照 SEQ ID NO:154 SEQ ID NO:154 SEQ ID NO:26
抗HER2DII對照 SEQ ID NO:155 SEQ ID NO:155 SEQ ID NO:25
實例2. 雙特異性蛋白之Biacore評價
使用Biacore T200或Biacore 8K，藉由SPR量測雙特異性蛋白之親和力。Biacore™ Series S CM5感測器晶片固定有用於HER2親和力量測之單株小鼠抗人類IgG (Fc)抗體或用於TfR親和力量測之小鼠抗人類Fab (來自GE Healthcare之人類抗體或Fab捕獲套組)。以30 µL/min之流速注射分析物(重組HER2細胞外結構域或重組TfR頂端結構域)之3倍連續稀釋液。對每一樣品進行分析，針對HER2細胞外結構域結合使用3分鐘締合及10分鐘解離且針對人類TfR頂端結構域結合使用40秒締合及3分鐘解離。在每次注射後，使用3 M MgCl2 或50 mM甘胺酸(pH 2.0)使晶片再生。藉由自以相似密度捕獲無關IgG之流動槽減去RU來校正結合反應。使用同時擬合k締合及k解離之1:1 Languir模型進行動力學分析。構築體「抗HER2_DIV/DII_scFv_1」之KD 為2.3 nM，且構築體「抗HER2_DIV/DII_scFv_2」之KD 為1.9 nM。該兩種構築體闡述於下文中。
構築體「抗HER2_DIV/DII_scFv_1」及「抗HER2_DIV/DII_scFv_2」二者均具有「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」結構。在構築體「抗HER2_DIV/DII_scFv_1」中，(a)包含SEQ ID NO:1之序列 (抗HER2DII Fab經由鉸鏈區與具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4之N端融合)，(b)包含SEQ ID NO:23之序列(抗HER2DIV scFv經由鉸鏈區與具有孔洞突變之Fc多肽之N端融合)，且(c)包含SEQ ID NO:25之序列。在構築體「抗HER2_DIV/DII_scFv_2」中，(a)包含SEQ ID NO:5之序列(抗HER2DII Fab經由鉸鏈區與具有孔洞突變之Fc多肽之N端融合)，(b)包含SEQ ID NO:24之序列(抗HER2DIV scFv經由鉸鏈區與具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4之N端融合)，且(c)包含SEQ ID NO:25之序列。在該兩種構築體中，scFv部分均含有在位置100處具有Gln至Cys取代之抗HER2DIV VL 區(SEQ ID NO:115)及在位置44處具有Gly至Cys取代之抗HER2DIV VH 區(SEQ ID NO:113)。此外，在該兩種構築體中，(b)中之鉸鏈區在位置5處具有Cys至Ser突變(EPKSSDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:129))。
下表2進一步顯示抗HER2雙特異性蛋白之HER2結合KD 及TfR結合KD 。 表2
HER2 結合 KD (nM) TfR 結合 KD (nM)
抗HER2DIV對照 3.0 不適用
抗HER2DII對照 2.9 不適用
1號雙特異性蛋白 3.0 460
2號雙特異性蛋白 0.024 480
3號雙特異性蛋白 0.027 450
4號雙特異性蛋白 0.019 470
5號雙特異性蛋白 0.031 540
6號雙特異性蛋白 0.0074 490
7號雙特異性蛋白 0.0038 350
8號雙特異性蛋白 0.0031 290
9號雙特異性蛋白 0.0033 500
10號雙特異性蛋白 0.0017 520
11號雙特異性蛋白 0.0028 470
12號雙特異性蛋白 0.0006 560
13號雙特異性蛋白 0.0008 600
實例3. 共靶向TfR及HER2亞結構域II及IV
許多腫瘤細胞及腫瘤細胞株(諸如BT474及OE19)表現HER2及TfR二者。雖然已充分確立靶向HER2亞結構域IV之抗體能夠在一些HER2+ 細胞株中抑制腫瘤細胞生長且降低腫瘤細胞存活率，但吾人尋求瞭解共靶向HER2亞結構域IV及TfR是否將使得細胞殺死增強。
使用具有「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」結構之兩種構築體。構築體「抗HER2_DIV/DII_scFv_1」及構築體「抗HER2_DIV/DII_scFv_2」闡述於先前實例中。
吾人首先在對抗HER2療法敏感之HER2+ 腫瘤細胞株BT474之生長抑制分析中將該兩種構築體與對照單株抗HER2抗體進行比較。將BT474細胞以10,000個細胞/孔平鋪於96孔板中隔夜，利用60 µL以166 nM (25,000 ng/mL)開始的所關注分子之1:3連續稀釋液處理。在第3天補充培養基(RPMI)及藥物。在第6天，使用5 µL WST-1試劑(Sigma Aldrich)在50 µL生長培養基中測定細胞生長。將板在WST-1試劑存在下培育4小時，且在440 nm下測定吸光度。基於A440 nM計算生長抑制/增殖百分比且以未經處理之對照作正規化。如圖6A中所示，抗HER2-DIV與抗HER2-DII之組合相對於對照降低BT474細胞存活率，其中最大抑制為約87%。類似地，與抗HER2-DIV及抗HER2-DII相比，抗HER2_DIV/DII_scFv_1及抗HER2_DIV/DII_scFv_2顯示相似之最大生長抑制(圖6A)。
接下來，吾人利用對抗HER2治療具有抗性之另一HER2+ 癌細胞株OE19對該兩種構築體與對照單株抗HER2抗體進行比較。如圖6B中所示，不同於BT474 (在其中該兩種抗HER2_DIV/DII_scFv構築體以及抗HER2-DIV與抗HER2-DII之組合的最大生長抑制效應之間沒有差異)，OE19細胞株在抗HER2_DIV/DII_scFv_1及抗HER2_DIV/DII_scFv_2處理時最大抑制為約80%，而該等細胞對抗HER2-DIV與抗HER2-DII之組合之反應極小。該等結果指示，與僅靶向HER2亞結構域相比，靶向HER2亞結構域IV、HER2亞結構域II及TfR可使得抗HER2抗性細胞株中細胞生長抑制增強。值得注意的是，若細胞株已對抗HER2療法敏感，則任何增強均可能被掩蓋。 實例4. 抗HER2雙特異性蛋白之活體內藥物動力學性質
為評估在不存在TfR結合之情形下抗HER2雙特異性蛋白之活體內血漿藥物動力學，向C57BL/6小鼠靜脈內投與10 mg/kg之抗HER2雙特異性蛋白。在單一劑量後30 min、1 d、4 d及7 d收集血液，處理成血漿且儲存在-80℃下直至分析。使用抗人類IgG夾心式ELISA (圖7)且使用適當投藥溶液作為標準品來量化血漿中雙特異性蛋白之總治療濃度。將板用抗人類IgG包覆隔夜，接著用洗滌緩衝液洗滌3次。使標準品及相關稀釋樣品在室溫下攪動培育2小時。培育後，將板用洗滌緩衝液洗滌3次。將偵測抗體稀釋於封阻緩衝液中，且將板在室溫下攪動培育1小時。在最後3次洗滌後，藉由添加TMB受質且培育5-10分鐘使板顯影。使反應淬滅，且使用450 nM吸光度(Biotek讀板儀)讀數。所有抗HER2雙特異性蛋白均顯示清除率值在正常IgG範圍內。 實例5. 抗HER2雙特異性蛋白之活體內腦攝取
為評估抗HER2雙特異性蛋白至腦中之活體內攝取，向TfRmu/hu KI小鼠靜脈內投與50 mg/kg之抗HER2雙特異性蛋白。在投藥後大約24小時，經由心臟穿刺將全血收集至EDTA包覆管中，接著用冰冷的PBS對動物進行灌注。使用新鮮全血評估臨床血液化學及網狀紅血球定量(圖8A)，且將單獨的等分試樣處理成血漿。與對照治療之小鼠相比，大多數抗HER2雙特異性蛋白顯示網狀紅血球值在正常範圍內。
使血漿及新鮮腦在乾冰上速凍且儲存在-80℃下。使用Qiagen組織溶解儀II，利用按組織重量計10倍體積的於PBS中之1% NP40緩衝液(含有蛋白酶及磷酸酶抑制劑)對腦進行均質化；將上清液儲存在-80℃下。使用夾心式ELISA量化抗HER2雙特異性蛋白之血漿(圖8B)及腦溶解物(圖8C)濃度。血漿濃度展現預期的TfR介導之藥物處置；腦中抗HER2雙特異性蛋白之腦濃度係在大約15 nM至52 nM範圍內，此展示該等分子能夠結合至血腦障壁上之TfR並轉運至腦中。所得腦對血漿濃度百分比介於大約1%-2%之間(圖8D)，其大約為缺少TfR或其他受體介導之胞吞轉送作用靶向之抗體的預期值之十倍。此數據展示並支持如本文所闡述的具有不同架構之多種抗HER2雙特異性蛋白係腦滲透性的。 實例6. 抗HER2雙特異性蛋白之活體外生長抑制
利用對抗HER2療法敏感之各種HER2+ 腫瘤細胞株(BT474 (圖9A至圖9F)、OE19 (圖9G至圖9I)及ZR75 (圖9J至圖9L))評估抗HER2雙特異性蛋白及現有抗HER2療法之活體外生長抑制功效。將腫瘤細胞以10,000個細胞/孔平鋪於96孔板中隔夜，利用60 µL以166 nM (25,000 ng/mL)開始的所關注分子之1:3連續稀釋液處理。在第3天補充培養基(RPMI)及藥物。對於神經調節蛋白1 (NRG1)處理之BT474組(圖9D至圖9F)，使細胞在50 ng/ml NRG1存在下培育。在第6天，使用5 µL WST-1試劑(Sigma Aldrich)在50 µL生長培養基中測定細胞生長。將板在WST-1試劑存在下培育4小時，且在440 nm下測定吸光度。基於A440 nM計算生長抑制/增殖百分比且以未經處理之對照作正規化。下表3進一步顯示抗HER2雙特異性蛋白及抗HER2對照在三種不同的HER2+ 細胞株中之生長抑制功效。圖9A至圖9L及表3顯示，總體抗HER2雙特異性蛋白顯示與具有野生型Fc之抗HER2DIV對照及抗HER2DII對照等效或優於其之生長抑制。在具有某些抗HER2雙特異性蛋白之一些細胞株中，與具有野生型Fc之抗HER2DIV對照或抗HER2DII對照相比，生長抑制降低，此可能係由於在某些構形中對結合位點之競爭所致。 表3
BT-474 BT474 + NRG1 OE19 ZR75-30
最低細胞存活率 (%) IC50 (nM) 最低細胞存活率 (%) IC50 (nM) 最低細胞存活率 (%) IC50 (nM) 最低細胞存活率 (%) IC50 (nM)
抗HER2DIV對照 34 0.76 92 ND 82 ND 52 0.42
抗HER2DII對照 80 ND* 93 ND 95 ND 81 ND
抗HER2DIV對照+抗HER2DII對照 28 0.77 36 5.0 83 ND 41 0.34
1號雙特異性蛋白 35 0.62 ND ND 40 0.56 97 ND
2號雙特異性蛋白 22 0.59 38 4.0 26 0.42 61 1.2
3號雙特異性蛋白 23 0.68 36 3.7 26 0.65 52 1.2
4號雙特異性蛋白 28 0.64 59 8.2 64 1.1 40 0.43
5號雙特異性蛋白 19 1.3 50 12 66 3.1 66 0.82
6號雙特異性蛋白 26 0.61 40 5.1 42 0.86 85 ND
7號雙特異性蛋白 35 0.74 50 4.6 76 ND 75 ND
8號雙特異性蛋白 28 0.56 78 4.0 53 1.2 49 0.43
9號雙特異性蛋白 21 2.3 37 3.5 57 1.1 87 ND
10號雙特異性蛋白 25 0.69 29 2.4 49 0.64 ND ND
11號雙特異性蛋白 22 0.69 41 2.9 42 0.58 ND ND
12號雙特異性蛋白 27 0.71 51 2.7 39 0.69 91 ND
13號雙特異性蛋白 30 0.73 50 4.5 44 0.82 95 ND
* ND -未測定 非正式序列表
SEQ ID NO 序列 描述
1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4
2 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4
3 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之Fc
4 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之Fc
5 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII Fab-具有孔洞之Fc
6 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4
7 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4
8 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之Fc
9 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之Fc
10 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV Fab-具有孔洞之Fc
11 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4 (VL -VH scFv)
12 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4 (VH -VL scFv)
13 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4
14 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-具有隆凸LALA之Fc
15 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-具有孔洞LALA之Fc (VL -VH scFv)
16 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-具有孔洞之Fc (VL -VH scFv)
17 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-具有孔洞LALA之Fc (VH -VL scFv)
18 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV scFv-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4 (VL -VH scFv)
19 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV scFv-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4
20 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV scFv-具有隆凸LALA之Fc
21 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV scFv-具有孔洞LALA之Fc (VL -VH scFv)
22 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV scFv-具有孔洞之Fc (VL -VH scFv)
23 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGCGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKCLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV scFv-具有孔洞之Fc (VL -VH scFv) (在scFv中具有兩個Cys突變且在鉸鏈中具有一個Cys突變)
24 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGCGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKCLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV scFv-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4 (VL -VH scFv) (在scFv中具有兩個Cys突變且在鉸鏈中具有一個Cys突變)
25 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC LC抗HER2DII Fab
26 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC LC抗HER2DIV Fab
27 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV scFv (VL -VH scFv)
28 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV scFv (VH -VL scFv)
29 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV scFv
30 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之Fc-抗HER2DIV scFv
31 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之Fc-抗HER2DIV scFv (VL -VH scFv)
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33 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DII scFv (VL -VH scFv)
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45 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4 (VL -VH scFv)
46 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4 (VH -VL scFv)
47 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4
48 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之Fc (VL -VH scFv)
49 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之Fc (VL -VH scFv)
50 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-抗HER2DIV Fab-具有孔洞之Fc (VL -VH scFv)
51 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之Fc (VH -VL scFv)
52 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS LC抗HER2DII Fab-抗HER2DIV scFv (VL -VH scFv)
53 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS LC抗HER2DIV Fab-抗HER2DII scFv (VL -VH scFv)
54 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK LC抗HER2DIV Fab-抗HER2DII scFv (VH -VL scFv)
55 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 抗HER2DIV scFv-LC抗HER2DII Fab (VL -VH scFv)
56 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 抗HER2DII scFv-LC抗HER2DIV Fab (VL -VH scFv)
57 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 抗HER2DII scFv-LC抗HER2DIV Fab (VH -VL scFv)
58 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VH -抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4
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60 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VH -抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之Fc
61 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VH -抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之Fc
62 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VH -抗HER2DII Fab-具有孔洞之Fc
63 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII VH -抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4
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65 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII VH -抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之Fc
66 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII VH -抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之Fc
67 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII VH -抗HER2DIV Fab-具有孔洞之Fc
68 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VL -抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4
69 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VL -抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4
70 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VL -抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之Fc
71 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VL -抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之Fc
72 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV VL -抗HER2DII Fab-具有孔洞之Fc
73 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII VL -抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4
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75 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII VL -抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之Fc
76 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKASTKGPSVFEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII VL -抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之Fc
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79 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 抗HER2DII VL -LC抗HER2DIV Fab
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81 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSRTVAAPSVFIDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 抗HER2DII VH -LC抗HER2DIV Fab
82 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV VH
83 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV VH
84 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV VH
85 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之Fc-抗HER2DIV VH
86 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之Fc-抗HER2DIV VH
87 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII Fab-具有孔洞之Fc-抗HER2DIV VH
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89 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DII VH
90 VQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DII VH
91 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DII VH
92 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之Fc-抗HER2DII VH
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94 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV Fab-具有孔洞之Fc-抗HER2DII VH
95 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV VL
96 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV VL
97 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DIV VL
98 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DII Fab-具有隆凸LALA之Fc-抗HER2DIV VL
99 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之Fc-抗HER2DIV VL
100 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DII Fab-具有孔洞之Fc-抗HER2DIV VL
101 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DII Fab-具有孔洞LALA之Fc-抗HER2DIV VL
102 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DII VL
103 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之CH3C.35.23.4-抗HER2DII VL
104 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 抗HER2DIV Fab-具有隆凸LALA之Fc-抗HER2DII VL
105 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之Fc-抗HER2DII VL
106 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 抗HER2DIV Fab-具有孔洞之Fc-抗HER2DII VL
107 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 抗HER2DIV Fab-具有孔洞LALA之Fc-抗HER2DII VL
108 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII VH 區
109 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV VH 區
110 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 抗HER2DII VL 區
111 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK 抗HER2DIV VL 區
112 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKCLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DII VH 區_Gly取代為Cys
113 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKCLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV VH 區_Gly取代為Cys
114 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGCGTKVEIK 抗HER2DII VL 區_Gln取代為Cys
115 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGCGTKVEIK 抗HER2DIV VL 區_Gln取代為Cys
116 GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (GGSG)5 連接體
117 GGGGS (G4 S) 連接體
118 GGGGSGGGGS ((G4 S)2 ) 連接體
119 GGGGSGGGGSGGGGS ((G4 S)3 ) 連接體
120 GGGGSGGGGSGGGG ((G4 S)2 -G4 ) 連接體
121 GGGGSGGGGSGG 連接體
122 GGGGGSGGGGS 連接體
123 GGGGGSGGGGGSGGGGS 連接體
124 GGGGSEPKSS 連接體
125 ASTKGPSVF 連接體
126 RTVAAPSVFI 連接體
127 EPKSCDKTHTCPPCP 人類IgG1鉸鏈區
128 DKTHTCPPCP 部分鉸鏈區
129 EPKSSDKTHTCPPCP 具有Cys至Ser突變之鉸鏈區
130 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 野生型人類Fc序列 位置231-447 EU索引編號
131 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有隆凸突變之Fc序列
132 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有隆凸及LALA突變之Fc序列
133 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞突變之Fc序列
134 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALA突變之Fc序列
135 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 純系CH3C.35.23.4
136 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有隆凸突變之純系CH3C.35.23.4
137 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有隆凸及LALA突變之純系CH3C.35.23.4
138 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞突變之純系CH3C.35.23.4
139 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWSNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVSKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALA突變之純系CH3C.35.23.4
140 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 純系CH3C.35.23.2
141 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有隆凸突變之純系CH3C.35.23.2
142 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有隆凸及LALA突變之純系CH3C.35.23.2
143 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞突變之純系CH3C.35.23.2
144 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESYGTEWANYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALA突變之純系CH3C.35.23.2
145 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESFGTEWSSYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 純系CH3C.35.20.1
146 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESFGTEWSSYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有隆凸突變之純系CH3C.35.20.1
147 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESFGTEWSSYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有隆凸及LALA突變之純系CH3C.35.20.1
148 APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESFGTEWSSYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞突變之純系CH3C.35.20.1
149 APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESFGTEWSSYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVTKEEWQQGFVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 具有孔洞及LALA突變之純系CH3C.35.20.1
150 MMDQARSAFSNLFGGEPLSYTRFSLARQVDGDNSHVEMKLAVDEEENADNNTKANVTKPKRCSGSICYGTIAVIVFFLIGFMIGYLGYCKGVEPKTECERLAGTESPVREEPGEDFPAARRLYWDDLKRKLSEKLDSTDFTGTIKLLNENSYVPREAGSQKDENLALYVENQFREFKLSKVWRDQHFVKIQVKDSAQNSVIIVDKNGRLVYLVENPGGYVAYSKAATVTGKLVHANFGTKKDFEDLYTPVNGSIVIVRAGKITFAEKVANAESLNAIGVLIYMDQTKFPIVNAELSFFGHAHLGTGDPYTPGFPSFNHTQFPPSRSSGLPNIPVQTISRAAAEKLFGNMEGDCPSDWKTDSTCRMVTSESKNVKLTVSNVLKEIKILNIFGVIKGFVEPDHYVVVGAQRDAWGPGAAKSGVGTALLLKLAQMFSDMVLKDGFQPSRSIIFASWSAGDFGSVGATEWLEGYLSSLHLKAFTYINLDKAVLGTSNFKVSASPLLYTLIEKTMQNVKHPVTGQFLYQDSNWASKVEKLTLDNAAFPFLAYSGIPAVSFCFCEDTDYPYLGTTMDTYKELIERIPELNKVARAAAEVAGQFVIKLTHDVELNLDYERYNSQLLSFVRDLNQYRADIKEMGLSLQWLYSARGDFFRATSRLTTDFGNAEKTDRFVMKKLNDRVMRVEYHFLSPYVSPKESPFRHVFWGSGSHTLPALLENLKLRKQNNGAFNETLFRNQLALATWTIQGAANALSGDVWDIDNEF 人類運鐵蛋白受體蛋白1 (TFR1)
151 GGSG 連接體
152 GSGG 連接體
153 SGGG 連接體
154 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DIV Fab-野生型人類Fc序列   
155 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII Fab-野生型Fc序列
156 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 抗HER2DII scFv-抗HER2DIV Fab-具有孔洞之Fc
157 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKGGSGGGSGGGSGGGSGGGSGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS 抗HER2DIV Fab-具有孔洞之Fc-抗HER2DII scFv (VL -VH scFv)
158 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGGSGGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK 抗HER2DIV Fab-具有孔洞之Fc-抗HER2DII VL
圖1A係顯示具有「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中scFv經由鉸鏈或部分鉸鏈區與具有TfR結合位點(加星形)及隆凸突變之Fc多肽之N端融合，而另一Fc多肽具有孔洞突變。 圖1B係顯示具有「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中scFv經由鉸鏈或部分鉸鏈區與具有孔洞突變之Fc多肽之N端融合，而另一Fc多肽具有TfR結合位點(加星形)及隆凸突變。 圖2A係顯示具有「mAb/N端或C端scFv在HC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中scFv與具有孔洞突變之Fc多肽之C端融合，而另一Fc多肽具有TfR結合位點(加星形)及隆凸突變。 圖2B係顯示具有「mAb/N端或C端scFv在HC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中scFv經由連接體與Fd部分之N端融合。scFv與含有具有孔洞突變之Fc多肽的重鏈Fd部分融合，而另一Fc多肽具有TfR結合位點(加星形)及隆凸突變。 圖2C係顯示具有「mAb/N端或C端scFv在HC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中兩個scFv各自經由連接體與重鏈Fd部分之N端融合。Fc多肽上之TfR結合位點由星形表示。 圖2D係顯示具有「mAb/N端或C端scFv在HC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中兩個scFv各自經由連接體與重鏈Fc多肽之C端融合。Fc多肽上之TfR結合位點由星形表示。 圖3A係顯示具有「mAb/N端或C端scFv在LC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中scFv經由連接體與輕鏈之C端融合。Fc多肽上之TfR結合位點由星形表示。 圖3B係顯示具有「mAb/N端或C端scFv在LC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中scFv經由連接體與輕鏈之N端融合。Fc多肽上之TfR結合位點由星形表示。 圖3C係顯示具有「mAb/N端或C端scFv在LC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中兩個scFv各自經由連接體與輕鏈之N端融合。Fc多肽上之TfR結合位點由星形表示。 圖3D係顯示具有「mAb/N端或C端scFv在LC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中兩個scFv各自經由連接體與輕鏈之C端融合。Fc多肽上之TfR結合位點由星形表示。 圖4係顯示具有「mAb/N端VH VL 在HC及LC上」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中兩個VH 區各自與重鏈Fd部分之N端融合且兩個VL 區各自與輕鏈之N端融合。VH 區及VL 區形成Fv片段。Fc多肽上之TfR結合位點由星形表示。 圖5係顯示具有「mAb/C上之HC端VH VL 」結構之例示性雙特異性蛋白之示意圖，其中VH 區與具有孔洞突變之Fc多肽之C端融合且VL 區與具有TfR結合位點(加星形)及隆凸突變之Fc多肽之C端融合。VH 區及VL 區形成Fv片段。 圖6A及圖6B分別顯示具有「Fab-Fc多肽/scFv-Fc多肽」結構之雙特異性蛋白在BT474及OE19細胞之生長抑制分析中在第6天及第3天對癌細胞增殖之抑制。 圖7係顯示C57/BL6小鼠中抗HER2雙特異性蛋白及抗HER2對照之血漿PK概況之圖。 圖8A係顯示靜脈內投與抗HER2雙特異性蛋白或抗HER2對照之TfRmu/hu KI小鼠中的網狀紅血球定量之圖。 圖8B係顯示TfRmu/hu KI小鼠中抗HER2雙特異性蛋白及抗HER2對照之血漿PK概況之圖。 圖8C係顯示TfRmu/hu KI小鼠中抗HER2雙特異性蛋白及抗HER2對照之腦PK概況之圖。 圖8D係顯示TfRmu/hu KI小鼠中抗HER2雙特異性蛋白及抗HER2對照之腦對血漿濃度百分比之圖。 圖9A至圖9F顯示在有(圖9A至圖9C)或沒有(圖9D至圖9F) NRG1之情形下，抗HER2雙特異性蛋白及抗HER2對照對BT474細胞之生長抑制分析。 圖9G至圖9I顯示抗HER2雙特異性蛋白及抗HER2對照對OE19細胞之生長抑制分析。 圖9J至圖9L顯示抗HER2雙特異性蛋白及抗HER2對照對ZR75細胞之生長抑制分析。
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Claims (148)

  1. 一種蛋白質，其包含： (a)     第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)     第二Fc多肽，其在N端與單鏈可變片段(scFv)融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)     輕鏈多肽，其與(a)中所列舉之該Fd部分配對以形成Fab， 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
  2. 如請求項1之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV。
  3. 如請求項1之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
  4. 如請求項1至3中任一項之蛋白質，其中該第二Fc多肽經由第一連接體與該scFv融合。
  5. 如請求項4之蛋白質，其中該第一連接體之長度為1至20個胺基酸。
  6. 如請求項4或5之蛋白質，其中該第一連接體包含序列GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118)。
  7. 如請求項1至6中任一項之蛋白質，其中該scFv包含經由第二連接體連結之VL 區及VH 區。
  8. 如請求項7之蛋白質，其中該第二連接體之長度為1至20個胺基酸。
  9. 如請求項7或8之蛋白質，其中該第二連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
  10. 如請求項1至9中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體。
  11. 如請求項1至10中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。
  12. 如請求項11之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366W取代，且該第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。
  13. 如請求項11之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且該第二Fc多肽包含T366W取代。
  14. 如請求項1至13中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。
  15. 如請求項14之蛋白質，其中根據EU編號，該等降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
  16. 如請求項1至15中任一項之蛋白質，其中鉸鏈區或其一部分連接至該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽之N端。
  17. 如請求項1至16中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90%一致性之序列。
  18. 如請求項1至17中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  19. 如請求項1至18中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  20. 如請求項1至19中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列。
  21. 如請求項1至19中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列。
  22. 如請求項1至21中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:21之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:20之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:19之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:18之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:15或17之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:14之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:13之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:11或12之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ix) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:22之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (x) (a)包含與SEQ ID NO:5之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:18之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列。
  23. 如請求項22之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  24. 如請求項22或23之蛋白質，其中根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  25. 一種蛋白質，其包含： (a)     第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)     第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)     兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽在C端與scFv融合，或 其中(a)及/或(b)中之該Fd部分在N端與scFv融合，或 其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與scFv融合且(a)或(b)中之該Fd部分在N端與scFv融合，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
  26. 如請求項25之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽在C端與該scFv融合。
  27. 如請求項25之蛋白質，其中(a)及/或(b)中之該Fd部分在N端與該scFv融合。
  28. 如請求項25之蛋白質，其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與該scFv融合且(a)或(b)中之該Fd部分在N端與該scFv融合。
  29. 如請求項25至28中任一項之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV。
  30. 如請求項25至28中任一項之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
  31. 如請求項25至30中任一項之蛋白質，其中與該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽融合之該scFv包含一致的序列。
  32. 如請求項25至30中任一項之蛋白質，其中與(a)及/或(b)中之該Fd部分融合之該scFv包含一致的序列。
  33. 如請求項25至32中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽經由第一連接體與該scFv融合。
  34. 如請求項25至33中任一項之蛋白質，其中(a)及/或(b)中之該Fd部分經由第一連接體與該scFv融合。
  35. 如請求項33或34之蛋白質，其中該第一連接體之長度為1至20個胺基酸。
  36. 如請求項33至35中任一項之蛋白質，其中該第一連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
  37. 如請求項25至36中任一項之蛋白質，其中該scFv包含經由第二連接體連結之VL 區及VH 區。
  38. 如請求項37之蛋白質，其中該第二連接體之長度為1至20個胺基酸。
  39. 如請求項37或38之蛋白質，其中該第二連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
  40. 如請求項25至39中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體。
  41. 如請求項25至40中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。
  42. 如請求項41之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366W取代，且該第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。
  43. 如請求項41之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且該第二Fc多肽包含T366W取代。
  44. 如請求項25至43中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。
  45. 如請求項44之蛋白質，其中根據EU編號，該等降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
  46. 如請求項25至45中任一項之蛋白質，其中鉸鏈區或其一部分連接至該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽之N端。
  47. 如請求項25至46中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90%一致性之序列。
  48. 如請求項25至47中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  49. 如請求項25至48中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  50. 如請求項25至49中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列。
  51. 如請求項25至49中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列。
  52. 如請求項25至51中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:31之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:37或39之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ix) (a)包含與SEQ ID NO:37之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (x) (a)包含與SEQ ID NO:157之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  53. 如請求項25至51中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:31之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:37或39之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:33之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:38之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  54. 如請求項25至51中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:43之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:45或46之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:49之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ix) (a)包含與SEQ ID NO:44之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (x) (a)包含與SEQ ID NO:50之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (xi) (a)包含與SEQ ID NO:156之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  55. 如請求項25至51中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:43之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:45之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:49之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:45之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:50之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:46之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:156之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  56. 如請求項25至51中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽或該第二Fc多肽在C端與該scFv融合且(a)或(b)中之該Fd部分在N端與該scFv融合，且其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:40之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:31之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:41之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:30之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:42之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:29之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:43之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:27或28之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:45之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:37或39之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:47之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:36之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:48之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:35之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:49之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:33或34之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈多肽各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  57. 如請求項52至56中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  58. 如請求項52至57中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  59. 一種蛋白質，其包含： (a)     第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)     第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)     兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中該等輕鏈多肽中之一者或兩者在N端與scFv融合，或 其中該等輕鏈多肽中之一者或兩者在C端與scFv融合，或 其中第一輕鏈多肽在N端與scFv融合且第二輕鏈多肽在C端與scFv融合，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
  60. 如請求項59之蛋白質，其中該等輕鏈多肽中之一者或兩者在N端與該scFv融合。
  61. 如請求項59之蛋白質，其中該等輕鏈多肽中之一者或兩者在C端與該scFv融合。
  62. 如請求項59之蛋白質，其中第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且第二輕鏈多肽在C端與該scFv融合。
  63. 如請求項59至62中任一項之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該scFv結合至人類HER2之亞結構域IV。
  64. 如請求項59至62中任一項之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該scFv結合至人類HER2之亞結構域II。
  65. 如請求項59至64中任一項之蛋白質，其中與該等輕鏈多肽中之一者或兩者融合之該scFv包含一致的序列。
  66. 如請求項59至65中任一項之蛋白質，其中該等輕鏈多肽中之該一者或兩者經由第一連接體與該scFv融合。
  67. 如請求項66之蛋白質，其中該第一連接體之長度為1至20個胺基酸。
  68. 如請求項66或67之蛋白質，其中該第一連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
  69. 如請求項59至68中任一項之蛋白質，其中該scFv包含經由第二連接體連結之VL 區及VH 區。
  70. 如請求項69之蛋白質，其中該第二連接體之長度為1至20個胺基酸。
  71. 如請求項69或70之蛋白質，其中該第二連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
  72. 如請求項59至71中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體。
  73. 如請求項59至72中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。
  74. 如請求項73之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366W取代，且該第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。
  75. 如請求項73之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且該第二Fc多肽包含T366W取代。
  76. 如請求項59至75中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。
  77. 如請求項76之蛋白質，其中根據EU編號，該等降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
  78. 如請求項59至77中任一項之蛋白質，其中鉸鏈區或其一部分連接至該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽之N端。
  79. 如請求項59至78中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90%一致性之序列。
  80. 如請求項59至79中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO: 135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  81. 如請求項59至80中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  82. 如請求項59至81中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列。
  83. 如請求項59至81中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列。
  84. 如請求項59至83中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  85. 如請求項59至83中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90%一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90%一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90%一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90%一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90%一致性之序列。
  86. 如請求項59至83中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  87. 如請求項59至83中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90%一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90%一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90%一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90%一致性之序列，且該兩個輕鏈多肽各自在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90%一致性之序列。
  88. 如請求項59至83中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:1之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:4之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:2之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:3之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:55之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:52之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:6之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:9之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90%一致性之序列，包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:7之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:8之序列具有至少90%一致性之序列，第一輕鏈多肽在N端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:56或57之序列具有至少90%一致性之序列，且第二輕鏈多肽在C端與該scFv融合且包含與SEQ ID NO:53或54之序列具有至少90%一致性之序列，包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  89. 如請求項84至88中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  90. 如請求項84至88中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  91. 一種蛋白質，其包含： (a)     第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合； (b)     第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)     兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與Fv片段之VH 區或VL 區融合，且 其中該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之VH 區或VL 區中之另一者融合，且 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段，且 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
  92. 如請求項91之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV。
  93. 如請求項91之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
  94. 如請求項91至93中任一項之蛋白質，其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端經由第一連接體與VH 區或VL 區融合。
  95. 如請求項94之蛋白質，其中該第一連接體之長度為1至20個胺基酸。
  96. 如請求項94或95之蛋白質，其中該第一連接體包含ASTKGPSVF (SEQ ID NO:125)之序列。
  97. 如請求項91至96中任一項之蛋白質，其中該兩個輕鏈多肽各自在N端經由第二連接體與VH 區或VL 區融合。
  98. 如請求項97之蛋白質，其中該第二連接體之長度為1至20個胺基酸。
  99. 如請求項97或98之蛋白質，其中該第二連接體包含RTVAAPSVFI (SEQ ID NO:126)之序列。
  100. 如請求項91至99中任一項之蛋白質，其中(a)及(b)中之該等Fd部分各自在N端與Fv片段之VH 區融合，且該兩個輕鏈多肽各自在N端與該Fv片段之VL 區融合。
  101. 如請求項91至99中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體。
  102. 如請求項91至101中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。
  103. 如請求項102之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366W取代，且該第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。
  104. 如請求項102之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且該第二Fc多肽包含T366W取代。
  105. 如請求項91至104中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。
  106. 如請求項105之蛋白質，其中根據EU編號，該等降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
  107. 如請求項91至106中任一項之蛋白質，其中鉸鏈區或其一部分連接至該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽之N端。
  108. 如請求項91至107中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90%一致性之序列。
  109. 如請求項91至108中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO: 135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  110. 如請求項91至109中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  111. 如請求項91至110中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列。
  112. 如請求項91至110中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列。
  113. 如請求項91至112中任一項之蛋白質，其中該蛋白質包含： (i) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:58之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:61之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:78之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:59之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:60之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:78之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:63之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:66之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:79之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:64之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:65之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:79之序列具有至少90%一致性之序列；或 (v) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(a)及與SEQ ID NO:63之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之(b)及與SEQ ID NO:67之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:79之序列具有至少90%一致性之序列。
  114. 如請求項91至112中任一項之蛋白質，其中該蛋白質包含： (i) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:68之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:71之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:80之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:69之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:70之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:80之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:73之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:76之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:81之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) 第一多肽，其包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之(a)及與SEQ ID NO:74之序列具有至少90%一致性之序列；第二多肽，其包含在N端與該Fv片段之VL 區融合之(b)及與SEQ ID NO:75之序列具有至少90%一致性之序列；以及第三及第四多肽，其各自包含在N端與該Fv片段之VH 區融合之輕鏈多肽且各自包含與SEQ ID NO:81之序列具有至少90%一致性之序列。
  115. 如請求項113之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  116. 如請求項113之蛋白質，其中根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  117. 一種蛋白質，其包含： (a)     第一Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，且在C端與Fv片段之VH 區或VL 區融合； (b)     第二Fc多肽，其在N端與Fab之Fd部分融合，且在C端與(a)中所列舉之VH 區或VL 區中之另一者融合， 其中該VH 區及該VL 區一起形成該Fv片段，且其中該第一及該第二Fc多肽形成Fc二聚體；及 (c)     兩個輕鏈多肽，其各自與(a)及(b)中所列舉之每一Fd部分配對以形成Fab； 其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV，或其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
  118. 如請求項117之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域II且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域IV。
  119. 如請求項117之蛋白質，其中該Fab結合至人類HER2之亞結構域IV且該Fv片段結合至人類HER2之亞結構域II。
  120. 如請求項117至119中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽與該Fv片段之VH 區融合且該第二Fc多肽與該Fv片段之VL 區融合。
  121. 如請求項117至119中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽與該Fv片段之VL 區融合且該第二Fc多肽與該Fv片段之VH 區融合。
  122. 如請求項117至121中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽在C端經由第一連接體與該VH 區或該VL 區融合。
  123. 如請求項122之蛋白質，其中該第一連接體之長度為1至20個胺基酸。
  124. 如請求項122或123之蛋白質，其中該第一連接體包含以下中之任一者之序列：GGSGGGSGGGSGGGSGGGSG (SEQ ID NO:116；(GGSG)5 )、GGGGS (SEQ ID NO:117；G4 S)、GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118；(G4 S)2 )、GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:119；(G4 S)3 )、GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120；(G4 S)2 -G4 )、GGGGSGGGGSGG (SEQ ID NO:121)、GGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:122)及GGGGGSGGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:123)。
  125. 如請求項117至124中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽特異性地結合至運鐵蛋白受體。
  126. 如請求項117至125中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及該第二Fc多肽各自包含促進異二聚化之修飾。
  127. 如請求項126之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366W取代，且該第二Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代。
  128. 如請求項126之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含T366S、L368A及Y407V取代，且該第二Fc多肽包含T366W取代。
  129. 如請求項117至128中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含降低效應功能之修飾。
  130. 如請求項129之蛋白質，其中根據EU編號，該等降低效應功能之修飾為L234A及L235A取代。
  131. 如請求項117至130中任一項之蛋白質，其中鉸鏈區或其一部分連接至該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽之N端。
  132. 如請求項117至131中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自由SEQ ID NO:131-149組成之群之序列具有至少90%一致性之序列。
  133. 如請求項117至132中任一項之蛋白質，其中該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  134. 如請求項117至133中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽及/或該第二Fc多肽獨立地包含在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與選自SEQ ID NO:135-139之序列具有至少90%一致性之序列。
  135. 如請求項117至134中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列。
  136. 如請求項117至134中任一項之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置366處之Ser、在位置368處之Ala及在位置407處之Val，以及與SEQ ID NO:133之序列具有至少90%一致性之序列，且 根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234處之Ala、在位置235處之Ala、在位置366處之Trp、在位置384處之Tyr、在位置386處之Thr、在位置387處之Glu、在位置388處之Trp、在位置389處之Ser、在位置413處之Ser、在位置415處之Glu、在位置416處之Glu及在位置421處之Phe，以及與SEQ ID NO:137之序列具有至少90%一致性之序列。
  137. 如請求項117至136中任一項之蛋白質，其中： (i) (a)包含與SEQ ID NO:82或83之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:99或100之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ii) (a)包含與SEQ ID NO:84之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:98之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iii) (a)包含與SEQ ID NO:85之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:97之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (iv) (a)包含與SEQ ID NO:86或88之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:95或96之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (v) (a)包含與SEQ ID NO:89或90之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:105或107之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vi) (a)包含與SEQ ID NO:91之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:104之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (vii) (a)包含與SEQ ID NO:92之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:103之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (viii) (a)包含與SEQ ID NO:93之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:102之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (ix) (a)包含與SEQ ID NO:82之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:99之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (x) (a)包含與SEQ ID NO:82之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:100之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:25之序列具有至少90%一致性之序列；或 (xi) (a)包含與SEQ ID NO:90之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:107之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列；或 (xii} (a)包含與SEQ ID NO:90之序列具有至少90%一致性之序列，(b)包含與SEQ ID NO:158之序列具有至少90%一致性之序列，且(c)中之該兩個輕鏈各自包含與SEQ ID NO:26之序列具有至少90%一致性之序列。
  138. 如請求項137之蛋白質，其中根據EU編號，該第一Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  139. 如請求項137之蛋白質，其中根據EU編號，該第二Fc多肽包含在位置234及235處之Leu。
  140. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至139中任一項之蛋白質及醫藥學上可接受之載劑。
  141. 一種經分離之多核苷酸，其包含編碼如請求項1至139中任一項之蛋白質之核苷酸序列。
  142. 一種載體，其包含如請求項141之多核苷酸。
  143. 一種宿主細胞，其包含如請求項141之多核苷酸或如請求項142之載體。
  144. 一種治療個體之癌症或治療癌症之腦轉移之方法，該方法包括向該個體投與治療有效量之如請求項1至139中任一項之蛋白質或如請求項140之醫藥組合物。
  145. 如請求項144之方法，其中該蛋白質係與化學療法或放射療法組合投與。
  146. 如請求項144或145之方法，其中該癌症係轉移性癌症。
  147. 如請求項144至146中任一項之方法，其中該癌症係乳癌。
  148. 如請求項144至147中任一項之方法，其中該癌症係HER2陽性癌症。
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