TW202132571A - 含有環狀四糖的糖組成物、其用途及製造方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係以提供一種即使在作為比較高濃度之糖質水溶液(水飴)之情況下，黏度及水分活性及黏度充分低，充分低著色性且低熱量，於保存中糖的結晶難以析出，適用於含有環狀四糖之水飴的糖組成物，其用途以及製造方法為課題。 本發明係藉由提供一種具有下述(1)至(3)之特徵的含有環狀四糖之糖組成物，與該用途以及製造方法而解決上述課題； (1)除前述環狀四糖以外，亦含有於前述環狀四糖中鍵結1分子或2分子以上葡萄糖之分支環狀四糖，對前述糖組成物使葡萄澱粉酶及α-葡萄糖苷酶作用時，所得之糖組成物的每全固體成分物中之前述環狀四糖含量以無水物換算時為38質量%以上； (2)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4鍵結葡萄糖所佔有的比例為9%超15%以下； (3)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4,6鍵結葡萄糖所佔有的比例為未達6%。

Description

含有環狀四糖的糖組成物、其用途及製造方法
本發明係關於一種新穎糖組成物，詳細為含有環{→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→}所示環狀四糖之新穎糖組成物與其用途以及製造方法。
具有環{→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→}所示結構之環狀四糖(以下僅稱為「環狀四糖」)係於1994年由Cote所發現的由4分子的葡萄糖所成的環狀糖質(非專利文獻1)，在2000年代由與本案之相同申請人確立使用來自土壤微生物的酵素的製法(專利文獻1、2)。環狀四糖中，由於該結構而使其未具有還原力而穩定性高，在產業利用上寄予很高的期望，並以建立前述製造方法為契機，此後，應用研究得到廣泛而有力的推進。其結果，作為環狀四糖所具有代表性的作用，至今已知有例如低著色性(專利文獻1、2)、低熱量性(專利文獻1、2)、食物纖維性(專利文獻1、2)、自由基生成抑制作用(專利文獻3)、脂質調節作用(專利文獻4)、礦物質吸收促進作用(專利文獻5)等。根據這些發現，將含有環狀四糖或環狀四糖之糖組成物在例如水飴之形態下，若可作為食品材料等廣泛地被普及，故可滿足對安心、安全、健康等日益提高的現代社會之需求。
一般而言，水飴因係由將澱粉經酵素或酸進行水解後，藉由脫色、脫鹽進行純化並濃縮所得者，故可在比較低成本下製造，且在與其他材料進行混合等而完成最終製品為止的步驟中，無須將固體成分的糖質溶解於水中，故作為食品製品之材料而廣泛地被利用。作為該水飴之一般需求的性質，例如可舉出(a)黏度不會太高，與(b)水分活性低。(a)之性質的需求來自於最終製品之製造中與其他材料之混合等步驟的操作性不要受到妨礙的觀點，(b)之性質為來自避開保存中之微生物污染的觀點而要求之性質。又，若考慮到含有環狀四糖之水飴的利用時，除具有此等(a)及(b)之性質以外，可活化環狀四糖本來的特徵，達到(c)充分低著色性且(d)低熱量之需求。且無庸置疑地，即使在(e)高濃度之水溶液(固體成分物濃度70質量%等)之情況下，要求於保存中不會有糖結晶析出。於專利文獻2等中，已揭示種種含有環狀四糖之水飴，依據本申請人所知，該過去的水飴因未達到此等(a)至(e)之項目的食品領域中要求的水準而未達成實用化，而未提供可滿足如此水準的水飴之技術提案。 [先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1] 國際公開第WO2002/010361號手冊 [專利文獻2] 國際公開第WO2001/903338號手冊 [專利文獻3] 國際公開第WO2004/020552號手冊 [專利文獻4] 國際公開第WO2004/899964號手冊 [專利文獻5] 國際公開第WO2005/007171號手冊 [非專利文獻]
[非專利文獻1] European Journal of Biochemistry、第226卷、第641至648頁(1994年) [非專利文獻2] Journal of Bioscience and Bioengineering、第94卷、第4號、第336至342頁(2002年) [非專利文獻3] Luminacoid research、第22卷、第1號、第29至33頁(2018年)
[發明所解決的問題]
有鑑於該狀況，本發明係以提供一種即使作為比較高濃度之糖質水溶液(水飴)的情況下，黏度及水分活性充分低，充分低著色性且低熱量，另外具有於保存中糖結晶難析出的性質的適用於含有環狀四糖之水飴的糖組成物、其用途以及製造方法作為課題。 [解決課題的手段]
對於上述專利文獻1等所記載的澱粉部分分解物使α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素進行作用而製造含有環狀四糖之糖組成物的製造方法中，通常生成環狀四糖之同時，生成於環狀四糖鍵結1分子或2分子以上的葡萄糖之具有分支結構的環狀四糖(以下稱為「分支環狀四糖」)。其中，本發明者們在檢討欲解決本發明所要解決的課題時，首先藉由酵素反應所得之糖組成物中，使環狀四糖及分支環狀四糖之總量成為糖組成中最大而將擔保環狀四糖原來的特徵之一的低熱量性成為最低限之必要條件下，詳細檢討其他課題之解決方策。欲符合該必要條件，如專利文獻1等所記載的製造方法，即對澱粉部分分解物組合α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素而使其作用產生環狀四糖之方法為最佳。然而，透過有關環狀四糖及其他糖質之製造的長年經驗，即使充分利用本申請人的累積知識與關鍵技術，亦無法得到保持低熱量性下，亦無法得到具備良好操作性與兼具低著色性之糖組成物。因此，本發明者們排除過去的技術常識而進一步地重複詳細檢討。
即，在本案申請前，針對對於澱粉部分分解物組合α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素而使其作用之環狀四糖的製造，若藉由異澱粉酶等進行作為基質之糖質的切枝反應時，環狀四糖之生成率會降低，藉由該酵素的環狀四糖之生成中，隔著α-1,6葡萄糖苷鍵結之分支結構存在於基質者為較佳(非專利文獻2)，此被視為該領域的技術常識。該狀況下，除調製出含有併用澱粉脫支酶以外，亦調製出含有藉由各種酵素之組合的環狀四糖之糖組成物，將該物性廣泛地比較且進行檢討。
其結果，評論出具有下述(1)至(3)之特徵的含有環狀四糖之糖組成物具有上述所示水所有性質者 (1)除前述環狀四糖以外，亦含有於前述環狀四糖中鍵結1分子或2分子以上葡萄糖之分支環狀四糖，對前述糖組成物使葡萄澱粉酶及α-葡萄糖苷酶作用時，所得之糖組成物的每全固體成分物中之前述環狀四糖含量以無水物換算時為38質量%以上； (2)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4鍵結葡萄糖所佔有的比例為超過9%且15%以下；及 (3)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4,6鍵結葡萄糖所佔有的比例為未達6%。
如後述的實驗及實施例所示，因具有上述(1)之特徵，可成為具有充分低熱量之糖組成物，又因具有上述(2)及(3)之特徵，故可兼具良好操作性與低著色性，另外符合此等(1)至(3)之要件的糖組成物作為水溶液時，顯示充分的低水分活性，且成為高濃度之水溶液時，在保存中結晶亦難以析出而成為劃時代的糖組成物。
具有上述特徵之含有環狀四糖及分支環狀四糖的糖組成物，初次藉由對於使用α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素的環狀四糖之生成反應藉由併用澱粉脫支酶而可得到，此絕對無法由過去技術常識獲得，其為完全新穎的糖組成物。
另外，本發明者們確認上述糖組成物不僅可作為食品或食品材料用之水飴而利用，對於化妝品、準醫藥品等各種用途上亦為有用。
即，本發明為藉由提供具有下述(1)至(3)之特徵的含有環狀四糖之糖組成物而解決課題者： (1)除前述環狀四糖以外，亦含有於前述環狀四糖中鍵結1分子或2分子以上葡萄糖之分支環狀四糖，對前述糖組成物使葡萄澱粉酶及α-葡萄糖苷酶作用時，所得之糖組成物的每全固體成分物中之前述環狀四糖含量以無水物換算時為38質量%以上； (2)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4鍵結葡萄糖所佔有的比例為超過9%且15%以下；及 (3)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4,6鍵結葡萄糖所佔有的比例為未達6%。
另外，本發明為藉由提供含有具有上述特徵之糖組成物的組成物而可解決課題者。
如上述，含有具有上述(1)至(3)之特徵的環狀四糖及分支環狀四糖之糖組成物為，初次藉由使用α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素的環狀四糖之生成反應中併用澱粉脫支酶而得到者。因此，本發明為藉由提供含有對於澱粉部分分解物使α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素作用，生成前述環狀四糖之步驟(步驟1)，與使含有所生成之前述環狀四糖的酵素反應物進行純化而採取之步驟(步驟2)，且對於步驟1，併用澱粉脫支酶而使其作用者作為特徵之本發明的糖組成物之製造方法，進而解決課題者。 [發明之效果]
依據本發明，例如即使對於作為固體成分物濃度70質量%程度以上的比較高濃度之糖質水溶液(水飴)之情況下，可得到提供其操作性良好，可避開微生物污染，且在充分低熱量下，著色性低，難析出結晶之含有環狀四糖之糖組成物之優點。又，依據本發明之製造方法，可得到容易且便宜地製造本發明有關糖組成物的優點。有關如此所得之本發明相關糖組成物如上述所示，因具備一般水飴製品所要求的各種特性，故具備可廣泛利用於食品其他各種用途之優點。
[實施發明的型態] 1.用語之定義
對於本說明書，以下所示用語各具有以下所示意思。
1.1 環狀四糖 對於本說明書僅記載為「環狀四糖」時表示葡萄糖4分子隔著α-1,6鍵結與α-1,3鍵結而交互鍵結之環狀葡萄四糖，即表示環{→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→}所示環狀四糖
1.2 分支環狀四糖 對於本說明書僅記載為「分支環狀四糖」時，若無特別說明，表示於環狀四糖中具有1或2分子以上葡萄糖隔著葡萄糖苷鍵結進行結合的分支結構的糖質。作為分支環狀四糖之具體例子，可舉出於環狀四糖中1個葡萄糖隔著α-1,4葡萄糖苷鍵結而結合的糖質、於環狀四糖中1個異麥芽糖隔著α-1,3葡萄糖苷鍵結而結合的糖質等。
1.3 總環狀四糖含量 對於本說明書若記載「總環狀四糖含量」時，表示對於含有環狀四糖與分支環狀四糖之糖組成物，使葡萄澱粉酶與α-葡萄糖苷酶作用而得之糖組成物的每全固體成分物中之以無水物換算的環狀四糖含量(質量%)。總環狀四糖含量為，含有環狀四糖及分支環狀四糖之糖組成物因反映在活體內經消化而生成的環狀四糖之多寡，故可作為該糖組成物之能量值的高低指標。
1.4 共存糖質 對於本說明書若僅記載「共存糖質」時，表示含於一糖組成物之環狀四糖及分支環狀四糖以外的所有糖質而言。作為共存糖質，例如可舉出葡萄糖、麥芽糖、異麥芽糖、其他鍵結樣式的葡萄二糖、麥芽三糖、異麥芽三糖、潘糖、其他鍵結樣式的葡萄三糖、環狀四糖及分支環狀四糖以外之各種鍵結樣式的聚合度4以上之葡萄寡聚糖或葡聚醣。
1.5 α-1,4鍵結葡萄糖、α-1,4,6鍵結葡萄糖等以及此等比率 在本說明書所謂的「α-1,4鍵結葡萄糖」表示，欲決定構成葡聚醣之各葡萄糖殘基的鍵結樣式而藉由一般使用的甲基化分析所檢測出的第1位與第4位的羥基各與其他葡萄糖殘基以α-葡萄糖苷鍵結而結合的葡萄糖殘基之意思。同樣地，第1位、第4位及第6位的羥基各與其他葡萄糖殘基以α-葡萄糖苷鍵結而結合時，該葡萄糖殘基稱為「α-1,4,6鍵結葡萄糖」。進一步以其他部位的羥基使一葡萄糖殘基與其他葡萄糖殘基進行連結時，表示賦予該鍵結的羥基之位置的號碼，同樣地稱為該葡萄糖殘基(賦予鍵結的羥基之位置及其組合在本說明書中有時稱為「鍵結樣式」)。構成糖組成物之每全葡萄糖殘基的各鍵結樣式之葡萄糖殘基(α-1,4鍵結葡萄糖、α-1,4,6鍵結葡萄糖等)所佔有的比率(以下有時稱為各鍵結樣式之葡萄糖殘基的「含量」)可由上述甲基化分析而求得。且，僅第1位羥基與其他葡萄糖殘基進行鍵結的葡萄糖殘基，即非還原末端之葡萄糖殘基在本發明中並非稱為「α-1鍵結葡萄糖」，僅稱為「非還原末端葡萄糖」。且，甲基化分析之原理及方法則如Ciucanu們、Carbohydrate Research、第131卷、第2號、209-217頁(1984))詳述。
1.6 α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素 在本說明書所謂的「α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素」表示，作為非還原末端之鍵結樣式，由具有α-1,4葡萄糖苷鍵結之葡萄糖聚合度為2以上之糖質，實質上無增加還原力下藉由α-葡萄糖基轉移，生成具有作為非還原末端之鍵結樣式的α-1,6葡萄糖苷鍵結與作為非還原末端以外之鍵結樣式的α-1,4葡萄糖苷鍵結之葡萄糖聚合度為3以上的糖質之酵素而言。α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素之酵素活性為，將麥芽三糖作為基質使其反應後，將自麥芽三糖將非還原末端之葡萄糖轉移至其他糖的反應而生成的麥芽糖藉由定量測定而得者。酵素活性1單位定義為自麥芽三糖經1分鐘生成1μmol之麥芽糖的酵素量。
1.7 α-異麥芽糖基轉移酵素 作為本說明書中所謂的「α-異麥芽糖基轉移酵素」表示，作為非還原末端的鍵結樣式，作為α-1,6葡萄糖苷鍵結與非還原末端以外的鍵結樣式，由具有α-1,4葡萄糖苷鍵結的葡萄糖聚合度為3以上之糖質，藉由含有α-異麥芽糖基轉移之反應，生成環狀四糖之酵素而言。α-異麥芽糖基轉移酵素之酵素活性為，將潘糖作為基質使其反應，由潘糖將異麥芽糖轉移至其他糖的反應所生成的葡萄糖藉由定量測定而得。酵素活性1單位定義為由潘糖經1分鐘生成1μmol之葡萄糖的酵素量。
1.8 環狀四糖生成酵素與其酵素活性單位 對於本說明書僅記載為「環狀四糖生成酵素」時，表示含有α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素，而實質上未含其他酵素的酵素組成物而言。對於本說明書，環狀四糖生成酵素之酵素活性1單位為，由可溶性糊精經1分鐘將環狀四糖及分支環狀四糖以環狀四糖換算時合計生成1μmol之酵素量。
1.9 異澱粉酶之酵素活性單位 對於本說明書，異澱粉酶之酵素活性如以下而定義。即，對於含有0.83%(w/v)林特納(Lintner)可溶性蠟質玉米澱粉、0.1M乙酸緩衝液(pH3.5)之基質水溶液3mL，加入適宜稀釋的酵素液0.5mL，將基質溶液保持在40℃下，經反應30秒後與30分30秒後，各取樣出基質溶液0.5mL，立即各加上0.02N硫酸溶液15mL，使反應停止，將各作為對照液及反應液。對於所得之對照液及反應液中各加入0.01N碘溶液0.5mL，在25℃進行15分鐘呈色後，藉由吸光光度計測定各於波長610nm中之吸光度，藉由下述式[1]而算出澱粉分解活性。所謂異澱粉酶之活性1單位定義為，在該測定條件下，使波長610nm之吸光度增加至0.004的酵素量。
Figure 02_image001
1.10 支鏈澱粉酶之酵素活性單位 對於本說明書，支鏈澱粉酶之酵素活性定義如以下所示。即，將1.25%(w/v)支鏈澱粉(林原股份有限公司製之支鏈澱粉酶活性測定用)水溶液作為基質溶液。將該基質溶液4mL與0.1M乙酸緩衝液(pH5.0)0.5mL以試驗管取出，於30℃進行預熱。使用0.01M乙酸緩衝液(pH6.0)，加入適宜稀釋的酵素液0.5mL，將基質溶液保持在30℃下，於反應30秒後與30分30秒後各取出基質溶液0.5mL，立即注入鉛銅液(Somogy copper liquid)2mL而使反應停止，各作為「對照液」及「反應液」。將所得之對照液及反應液提供於索莫吉･尼爾森(Somogyi Nelson)法中，藉由吸光光度計測定各波長520nm中之吸光度而測定所生成的還原糖量，藉由下述式[2]算出支鏈澱粉分解活性。所謂支鏈澱粉酶之活性1單位定義為，在該測定條件下，於1分鐘游離相當於1μmol之麥芽三糖的還原糖之酵素量。
Figure 02_image003
1.11 環麥芽糊精･葡聚醣轉移酶之酵素活性 對於本說明書，環麥芽糊精･葡聚醣轉移酶(以下稱為「CGTase」)之酵素活性定義如以下所示。即，對於含有0.3%(w/v)可溶性澱粉、20mM乙酸緩衝液(pH5.5)、1mM氯化鈣之基質水溶液5mL，加入經適宜稀釋的酵素液0.2mL，將基質溶液保持在40℃下，於反應0分後及反應10分後各取出基質溶液0.5mL，立即加入於0.02N硫酸溶液15mL中使反應停止後，對於各硫酸溶液各加入0.1N碘溶液0.2mL而使其呈色，經20分後，藉由吸光光度計各測定出於波長660nm中之吸光度，藉由下述式[3]算出澱粉分解活性。CGTase活性1單位定義為在該測定條件下，使溶液中之澱粉15mg的碘呈色完全消失的酵素量。
Figure 02_image005
1.12 還原力 在本說明書中所謂的「還原力」表示，將D-葡萄糖作為標準物質使用，藉由該領域中廣泛被使用的索莫吉･尼爾森(Somogyi Nelson)法及硫酸蒽酮法，求得糖組成物之還原糖量及全糖量之各D-葡萄糖換算值，表示使用下述式[4]而求得的對於糖組成物中之全糖量的還原糖量之百分率(%)。
Figure 02_image007
以下具體說明本發明之糖組成物、其用途及製造方法。
2. 本發明之糖組成物 本發明之糖組成物具有下述(1)至(3)之特徵： (1)除前述環狀四糖以外，亦含有於前述環狀四糖中鍵結1分子或2分子以上葡萄糖之分支環狀四糖，對前述糖組成物使葡萄澱粉酶及α-葡萄糖苷酶作用時，所得之糖組成物的每全固體成分物中之前述環狀四糖含量以無水物換算時為38質量%以上； (2)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4鍵結葡萄糖所佔有的比例為超過9%且15%以下；及 (3)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4,6鍵結葡萄糖所佔有的比例為未達6%。
本發明之糖組成物為含有環狀四糖及分支環狀四糖之同時，亦含有其他共存糖質之糖組成物。如專利文獻2所示，環狀四糖及分支環狀四糖未有該本身或非還原性著色之顧慮，且雖然不容易成為能量源，但其他共存糖質通常因具有還原力故成為著色之原因，且可成為能量源。因此，上述(1)之特徵直接與具有環狀四糖結構之糖質的總量成為糖組成中最大者有關，其為欲擔保該糖組成物之低熱量性時的必要條件。總環狀四糖含量若下降38質量%時，必然地成為著色原因及能量源之共存糖質的比率會提高，而難以實現低熱量且低著色性之有關本發明之糖組成物的特徵。
上述(2)及(3)之特徵為，本發明之糖組成物為構成此的葡萄糖殘基藉由鍵結樣式而賦予特徵者。對於甲基化分析，於全葡萄糖殘基中，α-1,4鍵結葡萄糖殘基所佔比例的下限超過9%，以9.2%以上為佳，較佳為9.5%以上，更佳為10%以上，上限為15%以下，以14.5%以下為佳，較佳為14%以下之範圍，若α-1,4,6鍵結葡萄糖所佔比例未達6%時，即使成為高濃度水溶液時，亦可兼具充分的低黏度與低著色性。另外，具有以上特徵之本發明的糖組成物，在與一般水飴同樣固體成分物濃度的水溶液時，顯示充分低水分活性。
作為本發明之糖組成物的較佳具體例子之一，除上述(1)至(3)之特徵以外，另可舉出(4)每全固體成分物中，以無水物換算時的環狀四糖之含量為25質量%以上之特徵的糖組成物。上述(4)之特徵係將計算食物能量值時的係數之能量換算係數規定為0kcal/g之環狀四糖(如後述參考試驗所示)的含量之下限值者，藉此作為全體，可提高低熱量之本發明的糖組成物，且於全固體成分物中之無水物換算的環狀四糖之含量設定在30質量%以上者為較佳。
作為本發明之糖組成物之較佳其他具體例子，進一步可舉出(5)每全固體成分物中以無水物換算時，合計下含有16質量%以下的聚合度1及2之糖質； (6)每全固體成分物中以無水物換算時，合計下含有超過37質量％的除去環狀四糖與葡萄糖鍵結1分子或2分子的分支環狀四糖之聚合度4至13的糖質的本發明之糖組成物。上述(5)之特徵，成為能量源下，規定對著色性產生壞影響的聚合度1及2之糖類含量的上限值者，藉此作為全體，可提供無著色性之問題，且更低熱量之本發明的糖組成物，將同含量設定在15質量%以下時更佳。上述(6)之特徵為，本發明們獨自發現的可更顯著發揮低熱量性與低著色性之指標，具本申請人所知，其為製造含有環狀四糖之水飴的過去技術之單純組合絕對於達成的特徵。且，對於上述(6)之特徵，於前述環狀四糖中鍵結3分子以上葡萄糖的分支環狀四糖未由聚合度4至13的糖質除去理由為，於前述環狀四糖鍵結3分子以上的葡萄糖之分支環狀四糖與相同聚合度的其他糖質進行分離在一般情況下圍困難，很難僅取出而定量，且對於有關本發明之製造方法，雖生成前述於環狀四糖鍵結有3分子以上的葡萄糖之分支環狀四糖，但該生成量為極微量之故。
如以上所示，當具有特徵之本發明的糖組成物做成固體成分物濃度73質量%之水溶液時，在15℃之環境下，通常表示35Pa･s以下，較佳為30Pa･s以下，更佳為27Pa･s之黏度。該黏度為，在過去含有環狀四糖之糖組成物的水溶液為無法兼具低著色性的低水準，對於在維持低著色性下，即使在比較低溫之作業環境下，自容器取出，與其他材料進行混合，直到完成最終製品的操作性可擔保良好特性者。又，本發明之糖組成物作為相同濃度之水溶液時，水分活性通常未達0.88，較佳為未達0.87，更佳為未達0.86，對於食品製造因可抑制雜菌污染，故可充分達成一般要求的水準。
進一步作為本發明之糖組成物的有用特徵，可舉出表示食物纖維性者。本發明之糖組成物中由高速液體色譜儀法(酵素-HPLC法)所求得之水溶性食物纖維含量，通常為40質量%以上，較佳為50質量%以上，更佳為60質量%以上。又，本發明之糖組成物亦可藉由還原力而賦予特徵者，該還原力通常為7.5%以上17%以下，較佳為8.0%以上15%以下。
如以上說明的本發明之糖組成物，可提供依據常法藉由氫化而成為該糖組成物之還原物。
3. 含有本發明之糖組成物的組成物 如上述，本發明之糖組成物及其還原物的黏度及水分活性充分低，充分具有低著色性且低熱量，作為水溶液時的結晶析出為難，故調整為高濃度水溶液作為含有環狀四糖之水飴，又亦可直接作為食品，且例如作為使用在化妝品、準醫藥品、醫藥品、飼料、餌料、肥料等用途的粉末化基材、結著劑或賦形劑等，進一步與適宜的其他材料進行組合後，例如可有利地利用於飲食物、飲食物材料、化妝品材料、準醫藥品材料、醫藥品材料、飼料材料、餌料材料、肥料材料等。本發明係為提供如此含有本發明之糖組成物與其他材料的組成物者。
將本發明之糖組成物或該還原物作為水溶液，作為含有環狀四糖之水飴至含有環狀四糖之糖組成物的還原水飴而利用時，該固體成分物濃度通常為70質量%以上，以71質量%以上為佳，較佳為73質量%上。作為添加含有環狀四糖之水飴至含有環狀四糖之糖組成物的還原水飴之形態的組成物(以下稱為「本發明之含有環狀四糖之水飴」)或可加工成飲食物之具體例子，可舉出合成酒、醸造酒、清酒、果實酒、發泡酒、啤酒、水果酒(liqueur)等之酒類、碳酸飲料、乳飲料、冰沙(Smoothie)、蔬菜汁、果凍飲料、運動飲料、醋飲料、豆漿飲料、含鐵飲料、乳酸菌飲料、綠茶、紅茶、可可、咖啡、非酒精飲料等之飲料、米飯、稀飯、年糕、Toppogi、麵包等之主食類、烏龍麵、蕎麥麵、麵線、冷麥麵、拉麵等之麵類、意大利直條麵、寬麵條、螺旋通心粉、粗管通心粉等之義大利麵、春捲皮、餃子皮等之小麥粉加工品、味噌湯、冬陰湯、蛤蜊雜燴、首爾湯等湯類、優格、起司、奶粉等之乳製品、香腸、火腿等之牲畜肉製品、魚板、竹輪、魚漿板(Hanpen)、魚肉香腸等之魚肉製品、海鮮類之罐頭、海鮮乾燥物、鹽漬魷魚(鹽辛)、魚卵鹽漬品(松前漬)等之水產加工品、天婦羅、油炸物、漢堡包、章魚燒、燒賣、日式炸薯泥年糕(可樂年糕)、長期護理食品、液態食品等調理食品及將此等冷凍之冷凍食品、軟糖、硬糖果、水果軟糖(Gummies)、果凍、曲奇年糕、軟曲奇年糕、米年糕乾、米香粒(Arare)、米香年糕(Okoshi)、α化米、日式涼糕(日式涼糕(求肥))、年糕類、蕨年糕、蒸饅頭、日式水羊羹(Uiro)、餡豆沙類、羊羹、水羊羹、日式果凍(日式果凍(錦玉))、果凍、果膠果凍、慕斯、巴伐利亞(Bavarian)、蜂蜜蛋糕、小年糕乾(Biscuit)、年糕乾(cracker)、派年糕、嘌呤、牛油乳霜、卡士達乳霜、鮮奶油、鮮奶油、華夫年糕(waffle)、海綿蛋糕、年糕子、鬆年糕、甜甜圈、巧克力、密釘巧克力(ganache)、穀物棒(cereal bar)、口香糖、焦糖、牛軋糖、花膠、花生膠、水果膠、果醬、果肉醬、棉花糖、蛋白質棒、穀物棒(cereal bar)、能量棒(Energy bar)等之菓子、冰淇淋、果子露(sherbet)、意式冰淇淋(Gelato)等冰菓，以及醬油、粉末醬油、味噌、粉末味噌、日式甜豆瓣(Moromi)、日式甜豆瓣(Hishio)、拌飯調味料(furikake)、蛋黃醬、沙拉醬、醋、三杯醋、壽司醋粉、中國料理調味料、天婦羅沾醬、麵湯醬油、西洋醬料、番茄西洋醬料、蕃茄醬、烤肉醬、烤雞醬、紅燒醬、油炸裹粉、天婦羅粉、麵包粉(Batter flour)、章魚燒粉、大阪燒粉、麵包屑、咖哩醬、濃湯調味料、湯調味素、高湯調味素、滷味醬、煮魚用調味液、魚卵調味液、乾燥物之調味液、複合調味料、味霖、新味霖等各種調味料或調理加工品等。且，有關藉由發酵所製得的飲食品，不僅將本發明之環狀四糖水飴添加於發酵後，亦可在發酵前添加的本發明之環狀四糖水飴作為發酵原料者。
環狀四糖除自身為穩定物質以外，因具有保濕、離水防止、蛋白質變性防止、脂質劣化防止等效果，故本發明之含有環狀四糖之水飴可添加於化妝品而有利地利用實施。對於該化妝品，本發明之含有環狀四糖之水飴通常可添加適用於皮膚的可被接受的其他成分之1種或2種以上，例如可適宜地選自對皮膚的外用可被接受的油脂類、蠟類、烴類、脂肪酸類、酯類、醇類、界面活性劑、色素、香料、荷爾蒙類、維他命類、植物萃取物、動物萃取物、微生物萃取物、鹽類、紫外線吸收劑、感光色素、抗酵素化劑、防腐･殺菌劑、抑汗･消臭劑、清涼劑、螯合劑、美白劑、消炎劑、酵素、糖質、胺基酸類、增黏劑等1種或2種以上者。作為添加本發明之含有環狀四糖的水飴之化妝品，例如，洗劑(lotion)、乳霜、乳液、凝膠、粉末、糊、團塊等型態、肥皂、化妝肥皂、洗顏乳霜、洗臉泡沫、面部護素、沐浴露、護髮素、洗髮精、潤髮(rinse)、洗髮粉等之清淨用化妝品、造型乳液、噴髮水、髮水、髮霜、噴髮劑、護髮液、護髮水、洗髮乳液、育毛料、染髮劑、頭皮保養劑、瓶裝油、拋光油、髮油、梳髮油等之頭髪化妝品、化妝水、遮斑霜、潤膚霜、潤膚乳液、敷臉用化妝料(凝膠狀脫離型、凝膠擦拭型、糊狀沖水型、粉末狀等)、洗臉乳霜、冷霜、護手霜、護手乳液、乳液、保濕液、剃鬍後乳液、剃鬍後乳液、剃鬍前乳液、剃鬍後乳霜、剃鬍後泡沫、剃鬍前乳霜、化妝油、嬰兒油等之基礎化妝品、粉底(液狀、乳霜狀等)、滑石粉、嬰兒爽身粉、身體粉、香水粉、化妝基底、白色蜜粉(Oshiroi)(乳霜狀、糊狀、液狀、粉末等)、眼影、眼霜、睫毛膏、眉筆、睫毛化妝料、腮紅、兩頰化妝水等之彩妝化妝品、香水、香水膏、粉末香水、科隆(Cologne)、Perfume colon、淡香水等之芳香化妝品、防曬、防曬乳(lotion)、防曬油、防曬乳霜、防曬洗劑(lotion)、防曬油等防曬化妝品、美甲顏料、腳甲油(Pedicure)、指甲顏料、指甲油(Nail lacquer)、搪瓷去除劑、指甲乳霜、指甲油等、眼線化妝品、口紅、唇乳霜、練紅(Neri Beni)、唇彩(Lip gloss)等之唇部化妝品、牙膏、漱口水等之口腔化妝品、浴鹽、沐浴油、浴用化妝料等之入浴用化妝品等。
本發明之含有環狀四糖之水飴因本身為低熱量，而且具有使組合添加其他成分穩定化之效果，故亦有利而利用作為醫藥品之添加劑、賦形劑等。作為添加本發明之含有環狀四糖的水飴之醫藥品，例如可舉出青黴素、紅黴素、氯黴素(Chloramphenicol)、四細胞週期蛋白、鏈黴素、硫酸卡那黴素等之抗生物質製劑、硫胺素、核黃素、L-抗壞血酸、肝油、類胡蘿蔔素、麥角甾醇、生育酚等之維他命製劑、脂肪酶、酯酶、尿激酶(Urokinase)、蛋白酶、β-澱粉酶、葡聚醣酶(Glucanase)、乳糖酶(Lactase)等之酵素製劑、藥用人參萃取物、甲魚萃取物、小球藻萃取物、蘆薈萃取物、蜂膠萃取物等之萃取物製劑、巨噬細胞遊走阻止因子、群體刺激因子、胰島素、成長荷爾蒙、催乳素、促腎上腺皮質激素(Elytropoetin)、卵細胞刺激荷爾蒙等之荷爾蒙含有液、BCG疫苗、日本腦炎疫苗、麻疹疫苗、小兒麻痺症生疫苗、痘苗、破傷風類毒素、樞紐抗毒素、人類免疫球蛋白等之生物製劑等，此等醫藥品可以液狀、糊狀、半固狀、錠片狀等劑型提供。
本發明之糖組成物對應最終用途等目的，在以與其他材料進行組合的組成物之形態下，亦可作為中間製品或預混料等提供。作為使用於飲食物或經口攝取的準醫藥品、醫藥品之用途的可利用的其他材料，若為可作為經口攝取的材料而被接受者即可並無特別限制，例如可舉出山梨醇、麥芽糖醇、異麥芽糖醇、麥芽三糖醇、赤蘚糖醇、木糖醇、乳糖醇、Panitol、海藻糖、醣苷基海藻糖、七葉糖、塞拉吉諾寡聚糖(Seragino oligosaccharide)、α-環糊精、β-環糊精、γ-環糊精等之含有糖醇類之非還原性糖質；異麥芽糊精、難消化性葡聚醣、聚葡萄糖、葡聚醣、菊粉(Inulin)、低聚果糖等之水溶性食物纖維；阿拉伯樹膠、瓜爾膠(Guar gum)、刺槐豆膠、卡拉膠、果膠(Pectin)、半纖維素、支鏈澱粉等之水溶性多糖類；二氫查耳酮(Chalcone)、甜菊糖、α-醣苷基甜菊糖、萊鮑迪甙(Rebaudioside)、甘草酸苷、L-天冬胺醯基-L-苯基丙胺酸甲基酯、安賽蜜K、索馬甜(Thaumatin)、莫尼糖等之高甜味度甜味料；甘胺酸、丙胺酸、谷胺酸、谷胺酸鹽、大豆肽等之胺基酸及蛋白質；肌苷酸、肌苷酸鹽、鳥苷酸基酸、鳥苷酸基酸鹽等之核酸；甘油脂肪酸酯、山梨糖醇脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、卵磷脂、皂素、酪蛋白鈉等之乳化劑；維他命C及其糖衍生物、菸酸、泛酸、葉酸、生物素、橙皮苷及其糖衍生物、柚皮甙及其糖衍生物等之維他命類；綠茶、烏龍茶、如意寶茶、茉莉花茶、咖啡、果汁等之、茶葉、果實等其他植物的萃取物所得之搾汁等。作為可使用於化妝品或皮膚外用的準醫藥品、醫藥品之用途的可利用的其他材料，若為可提供作為皮膚外用的材料而可被接受者即可，並無特別限制，作為使用於飲食物的用途之上述例示以外的其他材料，例如可舉出櫨籽(Quince seed)、海藻酸鈉、陽離子化纖維素、羥基乙基纖維素、羧基甲基纖維素、羧基甲基澱粉、海藻酸丙二醇、膠原、角蛋白、酪蛋白、白蛋白、明膠、羥基丙基三甲基銨氯化物醚、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯吡咯啶酮-乙烯基乙酸酯共聚物、聚乙烯亞胺、聚丙烯酸鈉、聚乙烯甲基醚、羧基乙烯基聚合物等之水溶性高分子；抗壞血酸2-葡萄糖苷、曲酸(Kojic acid)、乳酸、鄰胺基苯甲酸、香豆素、苯並三唑、咪唑啉、嘧啶、二噁烷、呋喃、吡喃酮、菸鹼酸、熊果苷、黃芩苷(Baicalin)、黃芩素(Baicalein)等之美白劑；没食子酸丙基、没食子酸丁基、没食子酸辛基、没食子酸十二烷基、降冰片酸(Nordihydroguaireic acid)、丁基羥基苯甲醚、二丁基羥基甲苯、4-羥基甲基1-2,6-二第三丁基酚等之抗氧化劑；陰離子系界面活性劑、陽離子系界面活性劑、兩離子系界面活性劑、非離子系界面活性劑等之界面活性劑等。
含有具有如以上特徵的本發明之糖組成物的組成物以及含有環狀四糖之水飴可作為添加於使用於家畜、家禽、寵物、其他蜜蜂、蠶、魚介類、蛇、螃蟹等之甲殼類、海膽、海參等之棘皮動物、昆蟲的幼蟲、幼體、成體等的飼料、餌料的材料，又可作為添加於賦予發芽植物、幼苗、移植菌等幼體的肥料之材料等而有利地利用。
4. 本發明之糖組成物的製造方法 以下對於本發明之糖組成物的製造法進行說明。本發明之糖組成物的製造方法為，含有對澱粉部分分解物使α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素進行作用，生成含有環狀四糖的糖組成物之步驟(步驟1)、使藉由步驟1所生成的糖組成物進純化並採取的步驟(步驟2)之糖組成物的製造方法，其特徵為對於步驟1中合併澱粉脫支酶使其作用者。
在本發明之製造方法所使用的α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素及α-異麥芽糖基轉移酵素不僅為生成本發明之糖組成物者，該供給來源並無特別限制。作為供給來源，具體可舉出於專利文獻2等所揭示的芽孢桿菌屬(Bacillus genus)或關節桿菌屬(Arthrobacter)的微生物，故Bacillus globisporus C9株(FERM BP-7143)、Bacillus Globisporus C11株(FERM BP-7144)、Bacillus Globisporus N75株(FERM BP-7951)或此等變異株、 Arthrobacter globformisN75株(FERM BP-7591)或此等變異株作為該兩酵素之供給來源為佳。該兩酵素可為各經分離純化後的純化酵素，亦可為含有該兩酵素之粗純化酵素，更可為供給來源微生物等萃取物或培養物等。上述所例示的微生物株或此等變異株若以常法進行培養時，通常該兩酵素亦可在培養基中產生，故將自該培養物的菌體進行過濾所得之濾液的濃縮液可作為含有該兩酵素的環狀四糖生成酵素劑而利用，該酵素劑因在該製造所花費的成本或勞力較少，故較佳。又，無庸置疑地亦可使用經分離編碼該兩酵素的基因後，藉由基因重組所得之酵素。
作為上述2種酵素所生成的環狀四糖之材料，使用澱粉部分分解物。澱粉之起源並無特別限制，可為來自玉蜀黍、小麥、米等的地上澱粉，亦可為馬鈴薯、蕃薯、木薯等地下澱粉。該澱粉之部分加水部分解物可藉由常法將澱粉藉由酸或α-澱粉酶等進行處理而得到。水解程度越低，環狀四糖之生成率越高而較佳，作為表示水解程度的指標，已知有DE(Dextrose Equivalent)，通常為20以下，以12以下為佳，較佳為7以下。
本發明之糖組成物的製造方法中，對於如上述對於澱粉部分分解物使α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素及α-異麥芽糖基轉移酵素進行作用而生成環狀四糖的步驟1中，併用澱粉脫支酶使其作用為主要特徵之一。作為在本發明所使用的澱粉脫支酶，若可生成本發明之糖組成物即可，該種類或供給來源並無特別限制，例如可舉出異澱粉酶(EC 3.2.1.68)、支鏈澱粉酶(EC 3.2.1.41)、寡-1,6-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.10)、澱粉-1,6-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.33)等，其中假單胞菌(Pseudomonas)･Pseudomonas amyloderamosa所產生之異澱粉酶或芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)微生物所產生的支鏈澱粉酶不會妨礙環狀四糖之生成反應，且所具有的使作為結果所得之糖組成物的黏度降低的效果為高，故特別適用。
對於藉由上述酵素作用而生成環狀四糖之步驟1，若併用CGTase(EC 2.4.1.19)使其作用時，可進一步提高環狀四糖之生成率，故除上述酵素以外，亦可隨意地併用CGTase。CGTase的供給來源並無特別限制，例如作為該供給來源，可舉出Geobacillus stearothermophilus、Paenibacillus illinoisensis、Paenibacillus pabuli、 Paenibacillus amylolyticus等，其中Geobacillus stearothermophilus所產生的CGTase所具有的提高環狀四糖之生成率的效果為高，故特別有用。
對於本發明之糖組成物的製造方法，通過該全步驟，未使用外切型澱粉酶時，與將該糖組成物作為水飴而利用時做比較，其為具有更低黏度且更低著色性者，故較佳。於生成環狀四糖的步驟中或該步驟後，若使該外切型澱粉酶進行作用時，會提高還原性的單糖或二糖等含量，作為結果，實現低著色性變困難，變得難達成本發明之目的。作為對於本發明之糖組成物的製造方法推薦不使用的外切型(Exo type)澱粉酶，可舉出葡萄澱粉酶(EC 3.2.1.20)、α-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.20)、β-澱粉酶(EC 3.2.1.2)等具有生成單糖或二糖之作用者。且，對於藉由酵素的一般水飴之製造，在酵素反應之最終段階中，作為加工完成，其為使α-澱粉酶等之終端類型(End type)澱粉酶進行作用者。於生成水飴之糖組成物的酵素反應終了時，將僅殘存的高分子之葡聚醣進行低分子化，其目的為提高其後的純化步驟之效率。通常在該操作中糖組成於實質上並無變化。對於本發明之糖組成物的製造方法，作為加工完成，使終端類型澱粉酶進行作用亦為隨意，作為該終端類型澱粉酶，液化型澱粉酶為更佳。又，視必要在難生成單糖或二糖，可隨意併用具有生成聚合度3以上的麥芽寡聚醣之作用的外切型澱粉酶，較佳為可隨意併用具有生成聚合度4以上的麥芽寡聚醣之作用的外切型澱粉酶者。
於生成環狀四糖的步驟1中使酵素產生作用之條件，例如原料的濃度、反應時間、反應溫度、反應pH等可配合欲達成的總環狀四糖含量之值、使用的酵素種類、起源等目的或狀況，做適宜選擇即可，但反應溫度通常為40℃至60℃，較佳為45℃至55℃，反應pH通常超過4.5且未達7.0，較佳為5.0至6.7，更佳為5.5至6.3。設定在48小時結束酵素反應時，作為原料之澱粉部分分解物的濃度，作為固體成分物濃度，下限通常以1質量%以上為佳，上限通常以40%以下為佳，以35質量%以下為更佳，以33質量%以下為特佳。酵素之作用量在作為α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素及α-異麥芽糖基轉移酵素使用環狀四糖生成酵素時，原料的固體成分物每1g中，通常為0.2單位至5單位，以0.7單位至4單位為佳，較佳為1單位至3單位，更佳為1.2單位至2.5單位之範圍，作為澱粉脫支酶使用異澱粉酶時，原料之固體成分物每1g中，通常100單位至2000單位，以200單位至1000單位為佳，較佳為400單位至600單位之範圍，使用支鏈澱粉酶時，原料的固體成分物每1g中，通常為0.5單位至10單位，以1單位至8單位為佳，較佳為2單位至6單位之範圍，使用CGTase時，原料的固體成分物每1g中，通常0.1單位至5單位，以0.2單位至3單位為佳，較佳為0.4單位至2單位之範圍。全反應時間設定在48小時以外時，配合該長短，僅將酵素作用量適宜地加減即可。添加酵素的時間點並無特別限制，可同時添加所有使用的酵素，亦可逐次添加。雖依據原料之裝入濃度或其他條件而不同，但由不提高所得之糖組成物的著色性而提高總環狀四糖含量之觀點來看，以逐次添加為佳，此時以環狀四糖生成酵素，其次CGTase，最後澱粉脫支酶之順序為佳，澱粉脫支酶之添加的時間點，通常為經過全反應時間之1/2的時點以前，較佳為經過全反應時間之1/5的時點以前。雖依據原料的固體成分物濃度為30質量%以上之情況等各條件而被左右，但環狀的糖之生成達到突起(plateau)後，藉由添加澱粉脫支酶，所得之糖組成物的黏度會有不會充分降低的情況產生，故依據其他各條件並未推薦。作為環狀四糖生成反應之完成，使用終端類型澱粉酶時，作為該作用量，設定為2小時程度之反應時間時，原料的固體成分物每1g，通常為1單位至40單位，較佳為2單位至25單位，更佳為4單位至15單位。
如以上所示，終止生成環狀四糖的反應之反應液為，移至下一個步驟2，進行純化並採取。純化為依據該領域中之常法即可，作為常法，例如可舉出矽藻土過濾、藉由活性碳之脫色、藉由H型、OH型之離子交換樹脂的脫鹽等。純化後經適宜濃度調整後，藉由噴霧乾燥、真空乾燥、冷凍乾燥等，可採取固體，於純化後進行濃縮後並調整為所望濃度，亦可作為水飴方式採取。因此，可製造本發明之糖組成物。又，對於本發明之糖組成物的製造方法，藉由酵素之環狀四糖的生成反應後，直到採取可依據常法進行氫化，亦可隨意地得到該糖組成物之還原物。且，以上說明的本發明之糖組成物的製造方法，欲得到本發明之糖組成物之較佳例子，僅得到具有上述(1)至(3)之特徵的本發明之糖組成物，例如可於高純度環狀四糖中適宜地添加另外調製的分支環狀四糖及共存糖質而製造。
以下依據實驗及實施例說明本發明，但此等僅為一具體例子，本發明並非受到此等限定者。
＜實驗1：各種含有環狀四糖之水飴的調製與物性之評估＞ ＜實驗1-1：各種含有環狀四糖之水飴的調製＞ 對於藉由α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素及α-異麥芽糖基轉移酵素之環狀四糖的生成反應，與其他糖質相比較，將判斷為顯示充分高值的總環狀四糖含量之過去技術的反應系統(後述被驗試料1中之反應系統)作為基礎，變更種種所使用的酵素或其添加時間點，作為被驗試料調製出計7種類之含有環狀四糖之糖組成物(水飴)。
＜實驗1-1-1：材料＞ ･環狀四糖生成反應之原料 作為環狀四糖生成反應之原料，使用將玉米澱粉依據常法以高溫液化酵素進行部分水解而得之液化液。將固體成分物濃度與DE依據常法求得後，各為30質量%及DE5。
･酵素 作為含有α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素及α-異麥芽糖基轉移酵素之環狀四糖生成酵素，使用依據專利文獻1之實驗3的方法，培養Bacillus globisporus C9株(FERM BP-7143)，依據常法，將該培養物藉由SF膜除菌而得之濾液以UF膜進行濃縮者。酵素活性測定如以下進行。即，將適宜地稀釋的該環狀四糖生成酵素之液體500μL，與含有2%(w/v)之可溶性糊精(商品名『Paindex#100』、松谷化學工業股份有限公司製)的50mM乙酸緩衝液(pH6.0)500μL進行混合，在40℃保持1小時並使其反應後，經10分鐘煮沸使反應停止，其後提供於總環狀四糖含量分析(後述)，並定量在上述反應所生成的總環狀四糖，求得酵素活性。所得之環狀四糖生成酵素的活性為492單位/mL。
作為α-葡萄糖苷酶，使用Amano Enzyme股份有限公司製之同酵素(商品名『反式葡萄糖苷酶L「Amano」』，13,000單位/mL)。作為葡萄澱粉酶，使用Nagase Chemtex股份有限公司製之同酵素(商品名『Dena Team GSA/R』，3,800單位/g)。作為異澱粉酶，使用林原股份有限公司製之同酵素(來自Pseudomonas amyloderamosa，553,500單位/g)。作為支鏈澱粉酶，使用Amano Enzyme股份有限公司製的同酵素(商品名『支鏈澱粉酶「Amano」3』，3,000單位/g)。作為CGTase使用林原股份有限公司製之同酵素(硬脂酸地芽孢桿菌(來自Geobacillus stearothermophyllus，1,634單位/g)。作為α-澱粉酶，使用Nagase Chemtex股份有限公司製之同酵素(商品名『新唾液酸酶(Neospitase)PK-6/R』，37,500單位/g)。
＜實驗1-1-2：各種含有環狀四糖之水飴的調製＞ ･被驗試料1 依據記載於專利文獻1的實施例A-9之方法，對於原料(玉米澱粉液化液，DE5，固體成分物濃度30質量%)，加入對於該固體成分物1g之2單位環狀四糖生成酵素，與對於同固體成分物1g之1單位CGTase，在pH6.0且50℃下保持48小時，進行環狀四糖生成反應。其後，將反應液在95℃保持30分鐘並使反應停止，冷卻至常溫後，依據常法，進行過濾並藉由H型及OH型離子交換樹脂進行脫鹽，進一步以活性碳進行脫色，以蒸發器進行濃縮後調製出固體成分物濃度73質量%，得到被驗試料1。 ･被驗試料2 在環狀四糖生成反應開始後經過5小時的時間點，除對於原料之固體成分物1g中添加500單位異澱粉酶以外，進行與被驗試料1之相同操作，得到被驗試料2。 ･被驗試料3 在環狀四糖生成反應開始後經過5小時的時間點，除對於原料的固體成分物1g添加5單位支鏈澱粉酶以外，進行與被驗試料1之相同操作，得到被驗試料3。 ･被驗試料4 於結束環狀四糖生成反應後，除增加對原料之固體成分物1g添加5單位α-澱粉酶，在pH6.0且50℃下保持20小時，其後在95℃保持30分鐘使反應停止的操作以外，進行與被驗試料1的相同操作，得到被驗試料4。 ･被驗試料5 於結束環狀四糖生成反應後，除增加對原料的固體成分物1g添加500單位的異澱粉酶，在pH6.0且50℃下保持20小時，其後在95℃且30分鐘下保持並停止反應的操作，進行與被驗試料1的相同操作，得到被驗試料5。 ･被驗試料6 於結束環狀四糖生成反應後，加入對原料的固體成分物1g添加5單位α-澱粉酶、對同1g添加1單位葡萄澱粉酶及對同1g添加500單位異澱粉酶，在pH6.0且50℃下保持20小時，其後在95℃保持30分鐘並停止反應的操作，進行與被驗試料1的相同操作，得到被驗試料6。 ･被驗試料7 於結束環狀四糖生成反應後，加入對原料的固體成分物1g添加5單位α-澱粉酶、對同1g添加1單位葡萄澱粉酶及對同1g添加5單位支鏈澱粉酶，在pH6.0且50℃下保持20小時，其後在95℃保持30分鐘使反應停止的操作，進行與被驗試料1的相同操作，得到被驗試料7。 ･被驗試料8 於環狀四糖生成反應時，加入對原料的固體成分物1g添加2.5單位環狀四糖生成酵素、對同1g添加0.5單位CGTase、在環狀四糖生成反應開始後經過5小時的時間點，對原料的固體成分物1g添加400單位異澱粉酶，於環狀四糖生成反應之開始後保持56小時，及於結束環狀四糖生成反應後，對原料的固體成分物1g添加5單位α-澱粉酶，在80℃進行2小時反應，進行與被驗試料1的相同操作，得到被驗試料8。
＜實驗1-2：分析＞ ･糖組成分析 於所得之被驗試料所含的環狀四糖等糖質的全固體成分物中以無水物換算之含量(質量%)為，將被驗試料提供於使用以下條件下的販售之高速液體層析法系統(商品名『Prominence』、島津股份有限公司製作所製)之高速液體層析法(以下稱為「HPLC」)，依據所得之色譜以百分率法計算而求得。該分析中，各求得環狀四糖、葡萄糖以1分子或2分子鍵結之分支環狀四糖的合計、作為聚合度1或2之糖質的葡萄糖、麥芽糖及異麥芽糖之合計，及其他所有糖質之合計的「其他」之含量。
＜HPLC條件＞ 管柱：將2根『MCI GEL CK04SS』(三菱化學股份有限公司製)以直列方式連結 試樣濃度：固體成分物濃度為1質量% 試樣注入量：20μL 溶離液：超純水 流速：0.4mL/分 溫度：80℃ 檢測：差示折射率
･總環狀四糖含量分析 於所得之被驗試料中的總環狀四糖含量係由下述所求得；將調整為固體成分物濃度2質量%之溶液0.5mL、含有400單位/mL之α-葡萄糖苷酶及10單位/mL之葡萄澱粉酶的50mM乙酸緩衝液(pH5.0)0.5mL進行混合，在50℃保持24小時，完全分解環狀四糖以外之葡萄糖彼此的鍵結，經10分鐘煮沸停止消化反應，依據常法進行脫鹽，藉由膜過濾器進行過濾後，依據在下述條件下進行HPLC所得色譜而藉由面積百分率法求得。且，藉由在該條件下的酵素反應，由如被驗試料之環狀四糖、分支環狀四糖及共存糖質所成的糖組成物，成為環狀四糖以外之糖鏈部分完全被水解的葡萄糖，作為結果，反應後成為實質上僅由環狀四糖與葡萄糖所成的糖組成物。
＜HPLC條件＞ 管柱：『Shodex Sugar KS-801(Na型)』(昭和電工股份有限公司製) 流速：0.5mL/分 溫度：60℃ 且，於此未表示的裝置、條件與上述糖組成分析(低聚合度側)之情況相同。
･黏度測定 各被驗試料之黏度為使用流變儀(商品名『MCR102』，Anton Paar Japan股份有限公司製)，在試料溫度及環境溫度15℃之條件下進行測定而求得。
･水分活性測定 各被驗試料之水分活性為使用水分活性測定系(商品名『AquaLab Series4TDL』、Inex Co., Ltd.製)而測定。
＜實驗1-3：結果及考察＞ 將在實驗1-1所得之被驗試料1～8提供於依據在實驗1-2所示的方法之糖組成分析、總環狀四糖含量分析、黏度測定、水分活性分析的結果如表1所示。且，於表1中合併表示使用於被驗試料1至8之調製時的酵素種類與添加時間點，表中之「+」表示添加該酵素者，「-」表示未添加者。
Figure 02_image009
如表1所示，表1所記載的酵素中，除環狀四糖生成酵素及CGTase以外，亦使其他酵素進行作用時(被驗試料2～8)，總環狀四糖含量顯示與藉由過去方法所得之被驗試料1之同等水準值。欲計算食物能量值之係數的能量換算係數，若合併考慮到相對於葡萄糖4kcal/g之環狀四糖0kcal/g(如後述參考試驗所示)，及後述實驗4、實施例1及比較例1中之能量值的計算結果時，若總環狀四糖含量為38質量%以上，作為糖質材料可達成令人滿意的低熱量。又，對於水分活性，皆顯示可避開於食品中之微生物污染的必要值的0.88以下值，此點亦無庸置疑地完美無缺。由黏度之觀點來看，相對於過去技術之被驗試料145.6Pa･s而言，於生成環狀四糖之反應中使澱粉脫支酶之異澱粉酶或支鏈澱粉酶進行作用的被驗試料2、3及8中，黏度各為26.4Pa･s、18.1Pa･s及32.4Pa･s，與依據過去法所得之被驗試料1進行比較下顯示顯著降低。
另一方面，因澱粉脫支酶不會起作用，故於生成環狀四糖之反應後，使作為終端類型澱粉酶之α-澱粉酶進行作用的被驗試料4，或非在同反應中而在反應後使作為澱粉脫支酶之異澱粉酶進行作用之被驗試料5，與被驗試料1進行比較，未確認到黏度降低(黏度各為36.1Pa･s及38.3Pa･s)。又，對於將具有生成單糖的活性之外切型澱粉酶的葡萄澱粉酶，及終端類型澱粉酶之α-澱粉酶，同時與澱粉脫支酶之異澱粉酶或支鏈澱粉酶，於生成環狀四糖之反應後使其作用的被驗試料6及7中，黏度基本上與被驗試料1進行比較，顯著降低(各為18.7Pa･s及13.4Pa･s)。另一方面，亦對於使於生成環狀四糖之反應中的澱粉脫支酶之異澱粉酶進行作用，於反應後僅使終端類型澱粉酶之α-澱粉酶進行作用的被驗試料8，黏度為32.4Pa･s，與被驗試料1進行比較，可降至實用上可被接受的水準之35Pa･s以下。
僅觀察黏度之測定值時，雖然被驗試料2、3、6、7及8可達成解決本發明揭示的課題，但該黏度之測定值如何反應實際操作性之程度依然不明，又對於著色性，僅由以上結果無法判斷。
＜實驗2：各種含有環狀四糖之水飴的操作性、著色性之評估＞ 接受實驗1之結果後，在實驗2中，以解明以下課題為目的而進行評估。 (i)判斷在實驗1確認到的各被驗試料之黏度相異，是否影響到實際操作性。 (ii)判斷在實驗1所得之各被驗試料的著色性是否相異。
＜實驗2-1：方法＞ ･操作性之評估方法 將環境溫度及所使用的材料之溫度全部設定在15℃之條件下，於1L容量的玻璃製燒杯中，放入在實驗1所調製之各被驗試料500g，於此靜靜加入脫離子水200g，以金屬製抹刀對全體進行混合至均勻。作為對照組，重新調整固體成分物濃度73質量%的販售品之含有麥芽四糖的水飴(商品名『Tetrap』，林原股份有限公司製。麥芽四糖含量50質量%以上。)在相同條件下進行相同處理，以金屬製抹刀混合全體至均勻。將混合全體被驗試料至均勻為止所要的時間與力，與混合全體對照試料至均勻為止所要的時間及力進行比較，以以下3段階進行評估。 「○」(操作性「優」)：與對照組同等 「△」(操作性「良」)：與對照組相比較，需要的時間與力比較多，但無操作上之障礙 「×」(操作性「不良」)：與對照組相比較，明顯地需要更多時間與力，且有操作上之障礙
･著色性之評估方法 將含有10質量％作為固體成分物的被驗試料1～8，含有1質量％的甘胺酸之50mM乙酸緩衝液(pH6.0)封入於密閉容器中，將此在沸騰水浴中保持1小時。作為對照組，將上述販售之含有麥芽四糖的水飴進行相同操作。在沸騰水浴中保持1小時並結束後，急速冷卻，依據常法測定在460nm中之吸光度，同時藉由目視，相互比較著色度。對照試料之吸光度為0.100。將各被驗試料之結果與對照試料進行比較，將著色性以以下3段階進行評估。 「○」(著色性「低」)：吸光度為對照組的1.3倍以下，在目視下與對照組相比較，著色度幾乎無確認到差異 「△」(著色性「中」)：吸光度為對照組超過1.3倍且1.6倍以下，在目視下與對照組相比較，確認到若干著色，但判斷為對於一般食品製造為可被接受的範圍 「×」(著色性「高」)：吸光度為對照組超過1.6倍，在目視下，與對照組相比較，確認到明顯強著色，判斷為對於一般食品製造為不被接受的範圍
＜2-2：結果及考察＞ 結果如表2所示。
Figure 02_image011
如表2所示，被驗試料2、3及8在與黏度有關的操作上被評估為「○」(優)，在操作性並無問題，在著色性之點亦評估為「○」(低)或「△」(中)，其為未有問題者。另一方面，對於相同低黏度之被驗試料6及7，對於操作性皆被評估為「○」(優)，但在著色性之點上為未能令人滿意者。著色性被評估為「×」(高)之被驗試料6、7為含有聚合度1或2之糖質超過16質量%者，欲使其著色性不要成為問題，認為將聚合度1或2之糖質的含有量設定在16質量%以下者即可。又，被驗試料4、5的著色性被評估為「○」(優)，但操作性被評估為「×」(不良)。合併在實驗1被確認的低熱量性與低水分活性，由以上可得知，被驗試料2、3、8為可解決本發明之課題者。
其次，對於被驗試料2、3及8與其他被驗試料進行比較，無關總環狀四糖含量未有顯著差異，但對於與低黏度且顯示良好操作性相關的結構上之特徵進行探討而進行下述所示實驗3。
＜實驗3：有關含有環狀四糖之水飴的操作性之結構的探討＞ 欲解明影響到各被驗試料之操作性的相異性的結構上之差異，著重於各被驗試料中之各鍵結樣式的葡萄糖殘基之含量與中程度的聚合度之糖質的含量，進行下述分析。
＜實驗3-1：方法＞ ･甲基化分析 依據Ciucanu們的Carbohydrate Research、第131卷、第2號、第209-217頁(1984))所記載的方法，對於在實驗1所得之各被驗試料，首先使游離的羥基進行甲基化，得到完全水解之甲基化葡萄糖，將此進行還原後做成甲基化山梨醇，最後將所得之甲基化山梨醇的羥基經乙醯化後得到甲基化葡萄糖乙酸酯。因此將由各被驗試料所得的甲基化葡萄糖乙酸酯，在如下述所示條件下，提供於使用販售的氣體層析法系統(商品名『GC-2010Plus』、島津股份有限公司製作所製)之氣體層析法(以下稱為「GC」)，求得於各被驗試料中之鍵結樣式相異的葡萄糖殘基之含量(%)。
＜GC條件＞ 管柱：InertCap5 毛細管管柱(內徑0.25mm×長度30m×膜厚0.25μm，GL Science公司製) 載氣體：氦 管柱溫度：在130℃保持3分鐘後，以5℃/分升溫至250℃，在250℃保持10分鐘 流速：1.0mL/分 檢測：FID 注入量：1μL(分量1/50) 分析時間：46分
･中程度之聚合後的糖質之含量的測定 在與實驗1中以糖組成分析之目的而進行的HPLC之相同條件下，分析聚合度變得明確的麥芽寡聚醣之混合物，其結果將所得之色譜，與在實驗1對各被驗試料所得之色譜進行對比，在實驗1進行詳細評估，並未檢討的中程度之聚合度的糖質，即判斷為相當於聚合度4至13之糖質(但，在上述條件下的HPLC之特性上，於此未含有在環狀四糖與環狀四糖上鍵結葡萄糖1分子或2分子之分支環狀四糖)之含量藉由面積百分率法而測定。
･還原力之測定 對於還原力，將D-葡萄糖作為標準物質使用，藉由以下所記載的索莫吉･尼爾森(Somogyi Nelson)法，將還原糖量藉由硫酸蒽酮法測定出各全糖量，將此等代入上述式［4］，經計算後求得。
･藉由索莫吉･尼爾森(Somogyi Nelson)法之測定 混合鉛銅液試藥2mL與稀釋至標準曲線之範圍的試料1mL後，進行10分鐘煮沸，並以流動水進行冷卻。其後，於冷卻後的液體中，快速加入尼爾森試藥2mL並混合。放置至尼爾森試藥添加後之黃綠色變為藍色後，加入水5mL並進行攪拌，測定在波長520nm之吸光度。藉由所測定之吸光度與標準曲線求得還原糖量。標準曲線為使用D-葡萄糖標準溶液而作成。
･藉由硫酸蒽酮法之測定 於在冰水中預冷的0.2%蒽酮試藥5mL中，靜靜地注入稀釋的試料0.5 mL到達標準曲線之範圍內，經充分混合並經10分鐘煮沸後在流水中冷卻，測定在波長620nm之吸光度。由所測定之吸光度與標準曲線求得全糖量。標準曲線為使用D-葡萄糖標準溶液而作成。
＜實驗3-2：結果及考察＞ 於表3表示，將各被驗試料藉由甲基化分析而求得之各鍵結樣式之葡萄糖殘基的含量。又，藉由中程度之聚合度的糖質之含量的測定，確認各被驗試料所示黏度與相當於聚合度4至13之糖質的含量之間為一定關係，故將相當於該聚合度之糖質的含量合併表示於表3。操作性與著色性之結果係由表2轉記者。
Figure 02_image013
･對於鍵結樣式與黏度及著色性之關係 由表3所示結果可得知，由觀察操作性及著色性與藉由甲基化分析所得之各鍵結樣式的葡萄糖殘基之含量的關連性來看，判定為α-1,4鍵結葡萄糖及α-1,4,6鍵結葡萄糖之含量與操作性及著色性有著特徵性的關連性。即，對於操作性被評估為「不良」的被驗試料1、4、5，其α-1,4鍵結葡萄糖之含有量比較高(各為15.4%、15.3%、15.6%)，另一方面，操作性雖評估為「優」但著色性被評估為「高」，在著色性之點上具有問題之被驗試料6、7，其α-1,4鍵結葡萄糖之含有量被認為有比較低之傾向(各為8.2%、6.3%)。又，由α-1,4,6鍵結葡萄糖含量來看，判定被驗試料1、4、5的含量比較高，被驗試料6、7的含量比較低之傾向。由以上可得知，操作性較差者，在著色性點上並無問題，此等為α-1,4鍵結葡萄糖之含量較高者，相反地，操作性雖良好但著色性上有問題者則被認為α-1,4鍵結葡萄糖及α-1,4,6鍵結葡萄糖之含量皆有較低的傾向。
合併之後詳述的實施例1及比較例1，由綜合地來看，對於藉由於澱粉部分分解物使α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素進行作用的環狀四糖之生成反應所得之糖組成物，除了如被驗試料2、3及8，與環狀四糖生成反應並行而使澱粉脫支酶進行作用之情況以外，一般若α-1,4鍵結葡萄糖之含量超過15%，或α-1,4,6鍵結葡萄糖之含量成為6%以上時，雖然於操作性上產生問題，但由著色性之點來看，有著可成為沒有問題之糖組成物的傾向。相反地，若α-1,4鍵結葡萄糖之含量成為9%以下時，α-1,4,6鍵結葡萄糖之含量低於6%，雖然在操作性並無問題，但有著成為具有著色性之問題的糖組成物之傾向。
相對於此，對於與環狀四糖生成反應並行而使澱粉脫支酶進行作用的被驗試料2、3及8，α-1,4鍵結葡萄糖超過9%且15%以下，α-1,4,6鍵結葡萄糖會低於6%。然後組合此，被驗試料2、3及8為未有操作性問題，著色性之點上亦無問題者。亦合併後述實施例1及比較例1之結果，由以上可得知，α-1,4鍵結葡萄糖之含量即使超過9%亦僅止於15%以下，且若使α-1,4,6鍵結葡萄糖之含量設定在未達6%時，可得到無操作性之問題，且著色性之點上亦無問題的含有環狀四糖之水飴。且被驗試料2、3及8之黏度如先前的表1所示，各為26.4Pa･s、18.1Pa･s及32.4 Pa･s，與藉由過去製造方法所製造之被驗試料1的45.6Pa･s相比較，其為顯著的低值。另外，由黏度各評估為36.1 Pa･s及38.3Pa･s之被驗試料4、5的操作性被評估為「不良」(×)，由此可判斷，有關本發明之糖組成物的黏度以35.0Pa･s以下為佳，較佳為33.0Pa･s以下。
藉由於使用α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素的環狀四糖之生成反應中併用澱粉脫支酶而所得之上述發現為本發明者們獨自發現的全新且劃時代的發現。
･對於操作性及著色性與製造方法之關連性 由與製造方法之關連性的觀點來看，顯示操作性良好且低著色性之α-1,4鍵結葡萄糖的含量超過9%並15%以下，且α-1,4,6鍵結葡萄糖之含量未達6%之含有環狀四糖之水飴如表1、2及4之結果可得知，藉由於環狀四糖生成反應之進行中使澱粉脫支酶作用可有效率地得到。另一方面，使未使澱粉脫支酶作用而使終端類型澱粉酶的α-澱粉酶作用之情況(被驗試料4)，或使澱粉脫支酶於環狀四糖之生成反應後作用之情況(被驗試料5)，同時與澱粉脫支酶使外切型澱粉酶之葡萄澱粉酶作用時(被驗試料6、7)，無法得到α-1,4鍵結葡萄糖及α-1,4,6鍵結葡萄糖的含量在上述範圍之含有環狀四糖之糖組成物(水飴)，未使澱粉脫支酶作用而僅使終端類型澱粉酶作用之情況，或即使使澱粉脫支酶作用，將此在環狀四糖的生成反應終了後再作用之情況，同時與澱粉脫支酶使外切型澱粉酶作用之情況，皆難以達成本發明之目的。
･對於聚合度為中程度之糖質的含量與操作性及著色性之關係 由求得如表3所示的聚合度為中程度(聚合度4至13)之糖質含量的結果可得知，對於在操作性及著色性之點上沒有問題之被驗試料2、3及8，聚合度為4至13之糖質(但，除於環狀四糖與環狀四糖鍵結葡萄糖1分子或2分子之分支環狀四糖以外)的含有量與其他情況相比較時顯著高，而超過37質量%。藉此，可判斷聚合度4至13的糖質含量，與具有操作性良好及低著色性等不兼容特性有關，除上述特定鍵結樣式之葡萄糖殘基以外，聚合度為4至13之糖質含量亦可利用作為含有環狀四糖之糖組成物是否兼具良好操作性與低著色性的指標上。
＜實驗4：其他分析與評估＞ 由上述所示實驗1、2及3可得知，由被驗試料2、3及8具有良好操作性與低著色性之點來看，確認可解決本發明所揭示的課題。在實驗4中，進行於保存中未析出糖質、其為低熱量性之其他課題的評估試驗，合併可進行食物纖維性之評估。
＜實驗4-1：材料＞ 將在實驗1-1-2所調製之被驗試料2、3及8作為評估對象。
＜實驗4-2：方法＞ ･於保存中之結晶的析出性之評估 將被驗試料2、3、8，及作為對照組之與在實驗2使用的相同含有麥芽四糖之水飴，各等量取入於玻璃製燒杯中，在4℃進行1週保持後，藉由目視評估析出物之有無。
･能量值之計算 如後述參考試驗所示，求得環狀四糖之能量換算係數的0kcal/g。另一方面，對於如在實驗1所調製之含有環狀四糖之水飴被預想在活體內被消化，於共存糖質及分支環狀四糖中之分支結構部分全部成為葡萄糖且成為能量源。依據以上，將被驗試料2、3及8的總環狀四糖含量(質量%)減去100質量%所得之值再乘以葡萄糖之能量換算係數的4kcal/g，即求得各被驗試料之能量值。
･食物纖維含量之測定 對各被驗試料2、3及8取出各固體成分物之精密重量100mg，將此依據營養表示基準(平成8年5月厚生省告示第146號)中之營養成分等分析方法等(營養表示基準別表第1第3欄所揭示的方法)、8.食物纖維、(2)依據高速液體色譜儀法(酵素-HPLC法)所記載的方法，使用販售的總食物纖維測定套組(商品名『Dietary Fiber Total Assay Control Kit』，Sigma公司製)，提供於α-澱粉酶消化、蛋白酶消化及澱粉葡萄糖苷酶消化中，其次，依據常法，經脫鹽且濃縮後，定量於25mL。將該處理後之溶液提供於以下條件下的HPLC，求得對於該處理中之葡萄糖的其他成分(即食物纖維)之吸收峰面積比。
＜HPLC條件＞ 管柱：將2根TGKgel G2500PWXL(內徑7.8mm×長度300mm，Tosoh股份有限公司製)直列連結者 溶離液：超純水 試料糖濃度：0.8質量% 管柱溫度：80℃ 流速：0.5mL/分 檢測：差示折射率 注入量：20μL 分析時間：50分 且，於此未記載的裝置、條件與在實驗1-2所示糖組成分析之情況相同。
其次，將含於在上述所得的各處理液之葡萄糖量(mg)藉由一般葡萄糖酵素化酶法進行定量，將該定量值乘以在上述所求的對於上述處理液中之葡萄糖的其他成分(即、食物纖維)之吸收峰面積比，計算出含於上述處理液之食物纖維量(mg)，依據該結果與各被驗試料之開始的固體成分物質量(100mg)，求得於各被驗試料中之食物纖維含量(質量%)。
＜實驗4-3：結果及考察＞ 結果如表4所示。
Figure 02_image015
如表4所示，被驗試料2、3及8與作為對照組的含有麥芽四糖之水飴同樣地，在上述條件下完全無結晶析出。且環狀四糖的結晶性高，例如如專利文獻1之實驗30所示，純度98質量%之環狀四糖調整為固體成分物濃度50質量%之水溶液時，容易析出結晶。由此點可得知，被驗試料2、3及8為充分具備以下要件者，該要件為，作為水飴即使調整為高濃度水溶液時亦難析出結晶之要件。能量值在被驗試料2、3及8為2kcal/g，完全被消化吸收之糖質僅為4kcal/g即可達到充分低熱量之訴求。亦關於食物纖維含量，可達到如期待之比較高的水準。藉由上述確認，被驗試料2、3及8為可解決本發明揭示的所有課題的含有環狀四糖之糖組成物。
＜參考試驗：環狀四糖之能量換算係數的計算＞ 1. 背景與目的 由初步評估得知，在人體被經口攝取的環狀四糖未被消化吸收而可達到大腸，另一方面，其後是否藉由腸內細菌被發酵則不明。如此未被消化吸收，完全到達大腸之糖質的能量換算係數可判斷未被消化吸收而經腸內細菌進行完全發酵，且藉由比較該能量換算係數已明確的如低聚果糖(能量換算係數為2kcal/g)之材料，進而定量性地求得發酵性程度為必要(非專利文獻3)。若將藉由腸內細菌發酵的糖質經口攝取時，已知有著取決該攝取量之呼氣中的氫氣提高的傾向，故例如藉由比較經低聚果糖之攝取產生在呼氣中的氫氣總量，與評估對象藉由糖質攝取而產生在呼氣中的氫氣總量，求得對於評估對象之糖質發酵性程度低之聚果糖的百分比，該低聚果糖之能量換算係數的2kcal/g乘上所求得之百分比後，計算出評估對象之能量換算係數。 依據以上背景，使用下述材料與方法，計算出環狀四糖之能量換算係數。
2. 材料 作為被驗物質，使用依據專利文獻1記載的方法而調製之環狀四糖之結晶標品，作為對照物質，使用低聚果糖(商品名『Meioligo』，明治股份有限公司製)。
3. 方法及結果 ･被驗者 被驗者為健康的成人男女總計13名。 ･食事、被驗物質、對照物質之攝取及呼氣的採取 在試驗前一天的下午9點為止，讓全被驗者攝取未含有食物纖維及發酵性材料的相同菜單之餐點。試驗當日的上午7點，在確認沒有不舒服狀況下，使用下述呼氣採取器具採取自己的最後呼出的氣，其後在2分鐘內攝取溶解有固體成分物換算為5g被驗物質的100mL水溶液。在經攝取後14小時內，間隔1小時進行相同的最後呼氣採取。其間每隔3小時提供未含有食物纖維及發酵性材料的相同菜單之餐點，但該攝取有無及量則自由選擇。同時常常提供未含有食物纖維及發酵性材料的特定飲料品，該攝取時間點及量亦自由選擇，砂糖的添加亦自由決定。 進行攝取被驗物質的試驗後1個月，取代被驗物質使用對照物質，對被驗者進行相同的攝取及呼氣採取。
･呼氣中之氫氣濃度的測定 對於呼氣的採取，使用販售的呼氣採取器具(商品名『終末呼氣(肺胞氣)採取系統』，呼氣生化學營養代謝研究所股份有限公司製)。採取的呼氣中之氫氣濃度則藉由販售之呼氣氣體分析裝置(商品名『呼氣氫･甲烷分析裝置 BGA-1000D』、呼氣生化學營養代謝研究所股份有限公司製)測定。
･依據呼氣中之氫氣濃度的測定結果計算出環狀四糖之能量換算係數 於各被驗者的呼氣中所排出之氫氣量為，將呼氣的採取時間點作為橫軸，將氫氣濃度作為縱軸而畫出圖表，該圖表中將試驗中在各時間點所測定的呼氣中之氣體濃度以點圖畫出曲線，並測定曲線下面積(Area Under Curve (AUC))而進行評估。求得對於各被驗者中之對照物質的AUC之被驗物質的AUC%，及其平均值。將該百分比的平均值乘上低聚果糖之能量換算係數的2kcal/g，將該計算值依據以下標準而進行評估，該標準為將能量換算係數以小數點以下第1位數以四捨五入方式表示的該領域的標準(非專利文獻3)，其評估結果之環狀四糖的能量換算係數以0kcal/g為結論。 [實施例1]
＜含有環狀四糖之水飴＞ ･實施例1-1 作為原料，使用DE5、固體成分物濃度20質量%之馬鈴薯澱粉液化液，加入對於原料的固體成分物1g為2.5單位之環狀四糖生成酵素(來自Bacillus globisporus(FERM BP-7143)，林原股份有限公司製)、對於同1g為1.2單位之CGTase(來自硬脂酸地芽孢桿菌(Geobacillus stearothermophyllus)，林原股份有限公司製)，及對於同1g為300單位之異澱粉酶(來自Pseudomonas amyloderamosa，林原股份有限公司製)，保持差pH6.0且50℃下48小時，進行環狀四糖生成反應。其後將反應液在95℃保持30分鐘而使反應停止，冷卻至常溫後，依據常法，進行過濾並提供於藉由H型及OH型離子交換樹脂之脫鹽，進一步以活性碳進行脫色，以蒸發器進行濃縮後調製出固體成分物濃度73質量%，得到本發明之含有環狀四糖之水飴(實施例1-1)。
･實施例1-2 在上述條件下進行環狀四糖生成反應，於停止反應後，將α-澱粉酶(商品名『新唾液酸酶(Neospitase)PK-6/R』，Nagase Chemtex股份有限公司製)對於原料之固體成分物1g添加5單位，在80℃進行2小時反應，其後將反應液保持在95℃且30分鐘使其反應停止以外，與上述實施例1-1的含有環狀四糖之水飴的調製同樣地操作，得到本發明的含有環狀四糖之水飴(實施例1-2)。
･實施例1-3 對於環狀四糖生成反應，將環狀四糖生成酵素之添加量設定成對於原料的固體成分物1g中為1單位，將CGTase之添加量設定成對於同1g中為0.5單位，將異澱粉酶之添加量設定成對於同1g中為250單位，進行環狀四糖生成反應，使其停止後，添加與實施例1-2之相同α-澱粉酶以外，與上述實施例1-1之含有環狀四糖之水飴的調製同樣地操作下，得到本發明之含有環狀四糖之水飴(實施例1-3)。
[比較例1] ･比較例1-1 對於實施例1-1的含有環狀四糖之水飴的調製條件，省略異澱粉酶之添加，取代此，添加對於原料的固體成分物1g為10單位之使用於實施例1-2的含有環狀四糖之水飴所調製的α-澱粉酶以外，與實施例1-1之情況相同的操作下，得到本發明外的含有環狀四糖之水飴(比較例1-1)。 ･比較例1-2 對於實施例1-1的含有環狀四糖之水飴的調製條件，將異澱粉酶之添加量變更為原料之固體成分物每1g中為200單位，於環狀四糖生成酵素之添加時，添加對於原料之固體成分物1g為2單位之使用於實施例1-2的α-澱粉酶，同時添加對於同1g為0.2單位之使用於實驗1的葡萄澱粉酶以外，與實施例1-1之情況相同的操作，得到本發明外之含有環狀四糖之水飴(比較例1-2)。
對於在上述實施例1(實施例1-1、1-2及1-3)及比較例1(比較例1-1及1-2)所得的含有環狀四糖之水飴，依據實驗1-2所示的總環狀四糖含量分析、糖組成分析、水分活性測定，依據實驗2-2所示的因黏度引起的操作性之評估、著色性之評估，依據實驗3-1所示的甲基化分析、中程度之聚合度的糖質之含量測定，依據實驗4-2所示的能量值之計算，進行此等分析與評估。將分析及評估的結果與各含有環狀四糖之水飴的調製方法之概略方式歸納於下述表5中。
Figure 02_image017
所得之實施例1-1至1-3的含有環狀四糖之水飴皆為操作性、著色性皆良好的水飴。此為總環狀四糖含量38質量%以上，於甲基化分析中之α-1,4鍵結葡萄糖含量超過9%且15%以下，且α-1,4,6鍵結葡萄糖含量未達6%的具有本案發明之糖組成物的特徵者。且水分活性及黏度充分低。依據此等特徵，所得之實施例1-1至1-3的含有環狀四糖之水飴為，低著色性且操作性良好的高品質的含有環狀四糖之水飴，可廣泛地使用於食品、化妝品、準醫藥品、醫藥品、飼料、餌料、肥料等用途上。且，將實施例1-1至1-3的含有環狀四糖之水飴依據於實驗4-2所示的食物纖維含量之測定，經測定食物纖維含量後，皆為60%以上，此等含有環狀四糖之水飴具有食物纖維性。
另一方面，所得之比較例1-1的含有環狀四糖之水飴為，黏度40Pa･s之高值，操作性較差者。由糖組成等構成來看，如對應黏度高度及操作性差度，藉由甲基化分析的α-1,4,6鍵結葡萄糖之含量顯示7%，此為比本發明者還高之值。又，比較例1-2之環狀四糖水飴係由黏度、操作性的觀點來看並無問題者，但糖組成中之聚合度1或2的糖質(DP1+DP2)之含量為比較多的18質量%，故著色性高，其為無法達到本發明之目的者。 [實施例2]
＜含有環狀四糖之糖組成物＞ 將在實施例1所得之本發明的含有環狀四糖之水飴(實施例1-1)，依據常法進行噴霧乾燥，得到粉末狀本發明之含有環狀四糖的糖組成物。本品可有利地直接利用作為可補給食物纖維之低熱量的食品。又，本品可適宜地與其他糖質、高甜度料、脂質、蛋白質、核酸、胺基酸、維他命、界面活性劑、乳化劑、滑澤劑、收斂劑、香料、色素等進行混合，可有利地作為食品材料、化妝品材料、準醫藥品材料、醫藥品材料、飼料材料、餌料材料、肥料材料等利用。 [實施例3]
＜含有環狀四糖之糖組成物的還原物＞ 將在實施例1所得的本發明之含有環狀四糖的水飴(實施例1-2)依據常法，在鎳觸媒之存在下進行氫化反應，反應停止後，依據常法進行純化並調整濃度後，得到水溶液形態之本發明的含有環狀四糖之糖組成物的還原物。本品中作為原料而含有的環狀四糖之水飴中所含的共存糖質因轉換為糖醇，故可有用做為低熱量且低著色性食品材料、準醫藥品材料、醫藥品材料等。又，可活用其低著色性而作為化妝品或皮膚外用之準醫藥品用的材料而特別有用。 [實施例4]
＜戚風蛋糕＞ 依據常法，混合蛋黃150質量份、砂糖60質量份、牛乳54質量份、沙拉油54質量份、低筋麵粉126質量份，調製出蛋黃麵團。另外，將蛋白260質量份、砂糖68質量份與在實施例1調製的本發明之含有環狀四糖的水飴(實施例1-1)56質量份(固體成分物為41質量份)依據常法進行混合，調製出酥皮。盡可能減少攪拌經調製的蛋黃麵團與酥皮的次數至成均勻混合，流入於戚風蛋糕用模型，烤至麵團有裂口且成為薄褐色為止後得到戚風蛋糕。且，該食譜相當於對於一般戚風蛋糕的食譜中之砂糖量的20%取代為含有環狀四糖之水飴的固體成分物者。
所得之戚風蛋糕呈現濕潤食感，且溫和甜味，其為風味良好者。本品與一般的食譜相比較，不僅熱量低且可安心食用，因有添加含有環狀四糖之水飴而含有食物纖維，故其為維持且增加健康之效果可受到期待之高品質戚風蛋糕。且，即使將一般的食譜中之砂糖的取代比例至40%，其食感、呈味、風味亦為良好者。 [實施例5]
＜烏龍麵＞ 依據常法，混合水31質量份及食鹽4質量份，與在實施例1所調製的本發明之含有環狀四糖的水飴(實施例1-1)15質量份，使食鹽完全溶解。於此添加中筋麵粉100質量份，經20分鐘以上的充分混練，調製出烏龍麵麵團。直接將該狀態熟成1小時後，以麵團棒推廣成厚度3mm程度之麵團，折疊後再切出寬度4mm程度而得到烏龍麵。
所得之烏龍麵以沸騰水煮15分鐘程度後，進一步加入冷水後，沾上經加溫的醬汁後食用，其為具有糅軟食感與通喉調和之良質烏龍麵，風味亦良好。本品亦作為安心、安全且良質食物纖維強化用之烏龍麵亦為有用。且對於上述食譜，即使將含有環狀四糖之水飴的添加量變更為20質量份，同樣可得到良質烏龍麵。 [實施例6]
＜餡料＞ 將水700質量份與砂糖560質量份放入鍋中，以火直接加熱並使其完全溶解後，於此將煮熟紅豆後並充分磨爛而得之餡料原料1000質量份，溫和地一邊攪拌一邊分3次投入，再以弱火繼續加熱，再充分地煮爛。於此，加入在實施例1所得的本發明之含有環狀四糖的水飴(實施例1-1)320質量份，再繼續加熱，煮至Brix(蔗糖換算之固體成分物濃度)成為58%，得到餡料。且，該食譜相當於一般餡料食譜中所含有的砂糖量30%取代為含有環狀四糖之水飴的固體成分物者。
所得之餡料為呈現豐富光澤且高級品味的甜味者。又即使減少餡料原料中之砂糖的使用量，亦完全未見到通常呈現的保形性降低。又，本品在製造過程中之黏度上昇並不激烈，製造時之操作性亦為良好。本品與一般食譜比較，其熱量較低，且因添加含有環狀四糖之水飴，故含有食物纖維，不僅可安心食用，其為維持且增加健康之效果可受到期待之高品質的餡料原料。且，將所得之餡料使用寒天等使其固化時，亦可作成羊羹。且，即使將一般食譜中之砂糖的取代比例上升至70%，其亦為食感、呈味、風味良好者。 [實施例7]
＜水果軟糖＞ 將砂糖100質量份、麥芽糖水飴(商品名『Maltrap』，林原股份有限公司製)60質量份、在實施例1所得之本發明的含有環狀四糖之水飴(實施例1-1)87質量份、明膠18質量份、水36質量份、50質量%檸檬酸水溶液7.5質量份、香料0.6質量份與適量著色料依據常法一邊混合一邊加熱，煮爛至總量到300質量份，Brix成為80%為止，經成型後得到水果軟糖。且，該食譜相當於一般水果軟糖之食譜中的麥芽糖水飴量的60%由含有環狀四糖之水飴取代者。
所得的水果軟糖與未由環狀四糖水飴取代的一般水果軟糖相比較，其呈現完全不遜色的色澤以外，比一般水果軟糖在咀嚼時具有強反動力，食感為良好，且為無表面黏沾感的高品質水果軟糖。又，本品在製造過程中之黏度上昇不會變得激烈，製造時的操作性亦良好。本品與一般食譜比較，其熱量較低，且因添加含有環狀四糖之水飴，故含有食物纖維，不僅可安心食用，其為維持且增加健康之效果可受到期待之高品質的水果軟糖。 [實施例8]
＜硬糖果＞ 依據常法，混合砂糖6質量份、麥芽糖水飴(商品名『Maltrap』、林原股份有限公司製)2質量份、在實施例1所得之本發明的含有環狀四糖之水飴(實施例1-2)2質量份、水10重量份與適量香料，在155℃加熱，充分煮爛並成型而得到硬糖果。作為比較對照組，取代本發明之含有環狀四糖之水飴，使用將澱粉在酸存在下焙煎，除去經酵素消化所生成的葡萄糖等而調製之難消化性葡聚醣，經同樣操作後得到糖果。
由上述所得之含有本發明的含有環狀四糖之水飴的硬糖果呈現琥珀色，相對於此，比較對象的硬糖果為濃褐色。由該結果可得知，本發明之含有環狀四糖之水飴為低著色性者，與其他材料調配後，對經加熱所調製的製品之色彩並未造成壞影響。
本品與一般硬糖果比較，其熱量較低，且因添加含有環狀四糖之水飴，故含有食物纖維，不僅可安心食用，其為維持且增加健康之效果可受到期待之高品質的硬糖果。 [實施例9]
＜冰淇淋＞ 依據常法，將35%鮮奶油150質量份、脫脂粉乳45質量份、椰子油50質量份、在實施例1所得之本發明的含有環狀四糖之水飴(實施例1-3)266質量份、刺槐豆膠2質量份、蔗糖脂肪酸酯1質量份在弱火下一邊加溫一邊混合均勻為止，其次在常溫下激烈攪拌混合後，放入容器後在 -20℃下冷凍，得到冰淇淋。且該食譜係將標準冰淇淋食譜中之果糖葡萄糖液糖全有含有環狀四糖之水飴取代者。
所得之冰淇淋即使經過冷凍3天在與容器之間亦不會產生隙間的所謂收縮(Shrink)之現象，又在經過冷凍7天的時間點自容器取出後觀察時，於表面有著極為滑潤，故其為良質冰淇淋。又，本品在製造過程中之黏度上昇不會變得激烈，製造時的操作性亦良好。呈味亦為清爽甜味，其食感、風味亦良好。本品與一般食譜比較，其熱量較低，且因添加含有環狀四糖之水飴，故含有食物纖維，不僅可安心食用，其為維持且增加健康之效果可受到期待之高品質的冰淇淋。 [實施例10]
＜銅鑼燒的皮＞ 於蛋65質量份、砂糖50質量份、在實施例1所調製的本發明之含有環狀四糖的水飴(實施例1-1)20質量份(固體成分物15質量份)、蜂蜜5質量份、味霖2質量份中加入水20質量份並充分混合，於此加入溶解於水2質量份之碳酸氫鈉0.6質量份、過篩小麥粉63質量份後作成麵團。使麵團經1小時熟成後，以鐵板燒烤後得到銅鑼燒之皮。
所得之銅鑼燒的皮膨鬆，其為具有高品質的甜味。本品與一般食譜比較，其熱量較低，且因添加含有環狀四糖之水飴，故含有食物纖維，不僅可安心食用，其為維持且增加健康之效果可受到期待之高品質的銅鑼燒之皮。進一步夾入在實施例6所得的餡料，可成為於皮與餡料雙方中含有食物纖維之高品質銅鑼燒。 [實施例11]
＜黑糖蒸饅頭＞ 混合蛋60質量份、黑糖180質量份、在實施例1所調製之本發明的含有環狀四糖之水飴(實施例1-2)140質量份(固體成分物102質量份)、水160質量份而成為混合物，以水浴法(湯煎)加溫至30℃程度。於加溫後的前述混合物中，混合低筋麵粉200質量份、過篩之膨脹劑(Ispata)5質量份，進一步加入白麻油30質量份並仔細混合。將完成的麵團放於模型中，經20分鐘蒸煮後得到黑糖蒸饅頭。
所得之蒸饅頭為具有膨鬆之高品質甜味，且良好食感･食味的蒸饅頭。本蒸饅頭因添加有含有環狀四糖之水飴，故含有食物纖維故增進健康之效果亦可期待。 [實施例12]
＜柳橙果凍＞ 充分混合砂糖200質量份、κ卡拉膠2.5質量份、刺槐豆膠2.5質量份、檸檬酸鈉2.5質量份、氯化鉀1質量份、安賽蜜鉀0.2質量份，於放有水650質量份之鍋子中不要產生塊狀物下加入。於此加入在實施例1所調製的本發明之含有環狀四糖的水飴(實施例1-3)140質量份(固體成分物102質量份)後，經烹煮而蒸發水分至成為800質量份。其後，冷卻至70℃程度，加入200質量份之橙汁其適量柳橙香料，使用50%檸檬酸水溶液調整至Ph控制在3.2～4.0的範圍內。將該溶液填充於果凍杯中，靜置在冷藏庫中至凝固，得到柳橙果凍。
所得之果凍因添加含有環狀四糖之水飴而含有食物纖維，故保形性高且具有質地柔和且清爽感的甜味。且即使將凝膠化劑取代為明膠、黃原膠、寒天、果膠等，亦未見到離水現像，其為可具有良好食感之果凍。 [實施例13]
＜曲奇餅＞ 將無鹽牛油100質量份以水浴法使其融解，於此加入過篩的砂糖40質量份、低筋麵粉170質量份並混合。於此加入蛋黃20質量份及在實施例1所調製的本發明之含有環狀四糖之水飴(實施例1-1)50質量份，進一步混合後完成麵團。將完成的麵團在冷藏庫中熟成後，調整形狀後在烤箱中燒烤後得到曲奇餅。
所得之曲奇餅除具有膨鬆食感以外，亦因添加含有環狀四糖之水飴而含有食物纖維，故其為健康良好曲奇餅。且亦因添加維他命類、礦物質類、粉末蛋白質等，可使其成為營養補給品的曲奇餅。 [實施例14]
＜碳酸飲料＞ 將在實施例1所調製的本發明之含有環狀四糖之水飴(實施例1-2)60質量份、果糖葡萄糖液糖20質量份、安賽蜜鉀0.1質量份、三氯蔗糖0.02質量份、檸檬酸2質量份、檸檬酸鈉0.5質量份，與水170質量份進行混合，並充分混合至其溶解。於此加入適量檸檬香料，並充分攪拌後，加入碳酸水750質量份後得到碳酸飲料。
所得之碳酸飲料因添加含有環狀四糖之水飴，故既含有食物纖維之低熱量，亦具有合併清爽甜味與良好體驗感之碳酸飲料。且對於上述食譜，即使對於不要添加果糖葡萄糖液糖，僅為增加本發明之含有環狀四糖之水飴(實施例1-2)至140質量份的配方(水90質量份)，亦無異味與異臭，可成為合併具有清爽良好甜味與良好體驗感之容易入口的碳酸飲料。相反地，對於上述食譜，減少本發明的含有環狀四糖之水飴(實施例1-2)減至20質量份，且欲填補甜味而增加安賽蜜鉀至0.15質量份的配方中，可成為不僅固體成分少且具有良好體驗感之碳酸飲料。 [實施例15] ＜調酒＞
將在實施例1所調製的本發明之含有環狀四糖的水飴(實施例1-3)40質量份、安賽蜜鉀0.1質量份、三氯蔗糖0.02質量份、檸檬酸4質量份、檸檬酸鈉1質量份，與含有50%(v/v)醇之伏特加酒(Nikka Whiskey Company, Wilkinson Vodka 50°)170質量份混合，並充分混合至溶解。於此加入適量檸檬香料並充分攪拌後，加入碳酸水750質量份後得到調酒。
所得之調酒不僅為酒精9%之高酒精度數的調酒，亦未感到醇的刺激臭或味道，其為容易入口的調酒。又，不僅未含有砂糖，亦為具有強烈體驗感且耐人回味的調酒。且，亦對於減少本發明之環狀四糖水飴(實施例1-3)至10質量份的配方(減少的份量由碳酸水補充)，未感到醇的刺激臭，且為具有體驗感之調酒。 [實施例16]
＜罐裝咖啡＞ 將焙煎後的阿拉比卡種之咖啡豆100質量份粉碎至L值(以色差計進行測定之咖啡豆的明亮度)成為18後以熱水進行萃取。對於將咖啡豆萃取液調整至Brix2的液體500質量份，加入鮮奶150質量份、在實施例1所調製的本發明之含有環狀四糖之水飴(實施例1-1)150質量份、水200質量份、適量乳化劑及香料，進行均質處理。於所得之均質後液體中，進行pH調整後封裝於罐子容器中，經殺菌消毒後得到罐裝咖啡。
所得之罐裝咖啡因添加含有環狀四糖之水飴，故含有食物纖維，並無異味及異臭，且為清爽容易入口的罐裝咖啡。食物纖維量可藉由調整含有環狀四糖之水飴的添加量而可任意調整，且甜味可由砂糖或人工甜味料進行調整。 [產業上可利用性]
如以上所示，本發明係提供即使作為較高濃度的糖質水溶液(水飴)之情況下，黏度及水分活性亦充分低，著色性亦充分低且低熱量，於保存中糖結晶難析出的高品質含有環狀四糖之水飴者。過去雖對於該物性或功能性之層面上有著極大的期待，但在實用化並未成功。對於環狀四糖之實用化有著貢獻之本發明的含有環狀四糖之水飴可廣泛地利用於食品、化妝品、準醫藥品、醫藥品、飼料、餌料、肥料等用途上，可謂產業上利用價值非常高之發明。

Claims (15)

  1. 一種含有環狀四糖之糖組成物，該環狀四糖為環{→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→}所示者，其為具有下述(1)至(3)之特徵者： (1)除前述環狀四糖以外，亦含有於前述環狀四糖中鍵結1分子或2分子以上葡萄糖之分支環狀四糖，對前述糖組成物使葡萄澱粉酶及α-葡萄糖苷酶作用時，所得之糖組成物的每全固體成分物中之前述環狀四糖含量以無水物換算時為38質量%以上； (2)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4鍵結葡萄糖所佔有的比例為超過9%且15%以下；及 (3)對於甲基化分析，構成該糖組成物之每全葡萄糖殘基中，α-1,4,6鍵結葡萄糖所佔有的比例為未達6%。
  2. 如請求項1之糖組成物，其中進一步具有下述(4)之特徵： (4)每全固體成分物中以無水物換算時，前述環狀四糖的含量為25質量%以上。
  3. 如請求項1或2之糖組成物，其中進一步具有下述(5)及(6)之特徵： (5)每全固體成分物中以無水物換算時，含有在合計，16質量％以下的聚合度1或2之糖質；及 (6)每全固體成分物中以無水物換算時，含有在合計，超過37質量％之除前述環狀四糖與於前述環狀四糖中鍵結1分子或2分子的葡萄糖之分支環狀四糖以外的聚合度4至13之糖質。
  4. 如請求項1至3中任一之糖組成物，其中在固體成分物濃度73質量%之水溶液時的在15℃之黏度為35Pa･s以下者。
  5. 如請求項1至4中任一之糖組成物，其中在固體成分物濃度73質量%之水溶液時的水分活性為未達0.88者。
  6. 一種還原物，其為如請求項1至5中任一項之糖組成物。
  7. 一種組成物，其中含有如請求項1至5中任一項之糖組成物及/或如請求項6之還原物與其他材料。
  8. 如請求項1至5中任一項之糖組成物或如請求項6之還原物或如請求項7之組成物，其為水溶液之形態。
  9. 如請求項8之組成物，其中固體成分物濃度為70質量%以上。
  10. 如請求項1至5中任一項之糖組成物或如請求項6之還原物或如請求項7至9中任一項之組成物，其作為食品、食品材料、化妝品材料、準醫藥品材料、醫藥品材料、飼料材料、餌料材料、肥料材料。
  11. 一種如請求項1至5中任一項之糖組成物的製造方法，其特徵為含有對澱粉部分分解物使α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素作用，生成前述環狀四糖之步驟(步驟1)，與使含有所生成之前述環狀四糖的酵素反應物進行純化並採取之步驟(步驟2)，其中對於步驟1合併澱粉脫支酶而使其作用者。
  12. 如請求項11之糖組成物的製造方法，其中未含有使外切型澱粉酶作用的步驟。
  13. 如請求項11或12之糖組成物的製造方法，其中作為澱粉脫支酶使用異澱粉酶或支鏈澱粉酶。
  14. 如請求項11至13中任一項之糖組成物的製造方法，其中對於步驟1，合併環麥芽糊精･葡聚醣轉移酶使其作用。
  15. 一種如請求項6之糖組成物的還原物之製造方法，其特徵為含有對於澱粉部分分解物使α-異麥芽糖基葡萄糖質生成酵素與α-異麥芽糖基轉移酵素作用，生成前述環狀四糖之步驟(步驟1)，與使含有所生成之前述環狀四糖的酵素反應物進行純化並採取之步驟(步驟2)，其中對於步驟1合併澱粉脫支酶而使其作用者，及於步驟1之後至步驟2中之採取為止的期間中含有使其氫化的步驟者。
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