TW202132332A - ＩＬ—２Ｒβγｃ結合化合物 - Google Patents

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威廉Ｊ 道爾
邁克爾 Ｃ 尼德斯
羅納德Ｗ 巴雷特
艾麗絲 Ｖ 巴克
史蒂文 Ｅ 科維拉
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美商麥地金公司
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Abstract

公開了IL-2Rβγc結合化合物，以及包含所述IL-2Rβγc結合化合物的藥物組合物。IL-2Rβγc結合化合物可以用作IL-2R激動劑並且可以用於治療癌症、自體免疫疾病和發炎性疾病。

Description

與IL-2Rβγc　結合的化合物
本申請根據35 U.S.C. § 119(e)要求於2019年11月5日遞交的美國臨時申請第62/930,758號的權益，其全部內容藉由引用併入本文。 本公開涉及IL-2Rβγc結合化合物。IL-2Rβγc結合化合物可以用作IL-2R激動劑或部分IL-2R激動劑。 序列表
本申請包含序列表，該序列表被包括在本申請中，並且該序列表的副本將以ASCII格式藉由電子方式提交，並藉由引用整體併入本文。
重組人白細胞介素2(IL-2)是臨床上研究的首批免疫腫瘤劑之一，並且在20世紀90年代被FDA批准用於治療一些特別具有挑戰性的癌症(如黑色素瘤和腎癌)。IL-2是有效的，在多達10%的患有這些腫瘤的患者中產生持久應答，但其效用受到非常嚴重的劑量限制性毒性的限制。另外，IL-2在定向T細胞介導的抗腫瘤應答中的功效受到同時發生的IL-2驅動的T細胞抑制系統上調的損害。一直在尋找減少IL-2療法毒性並避免抗腫瘤活性的免疫抑制限制的策略。迄今為止，已經開發了適度有效的策略來控制該有效生物製劑的全身性暴露，從而控制毒性。對IL-2的複雜生物學的闡明導致對天然IL-2分子的修飾以改變腫瘤毒性和抑制的平衡。但是，這些方法受到使用天然IL-2作為範本的限制，從而保留了母體分子不期望的、結構驅動的生物活性的元素。
IL-2的抗腫瘤性質至關重要，它對NK和細胞毒性CD8+ T細胞發揮有效的刺激作用。然而，抗腫瘤作用被IL-2定向刺激的調節性T細胞(Treg)反常地抑制了，所述IL-2定向刺激的調節性T細胞(Treg)有效鈍化了抗腫瘤免疫應答。IL-2的這種雙重作用很大程度上受負責免疫內穩態的各種細胞上表達的IL-2受體(IL-2R)亞基性質的控制。IL-2被三個受體亞基的組合所識別，所述三個受體亞基在許多類型的免疫細胞上有差異地和有條件地表達。當藉由與IL-2結合正確定向並置時，兩個信號傳導亞基(被稱為IL-2Rβ(β)和IL-2Rγ-共有(γc))可啟動信號傳導。IL-2以約1 nM的IC50 與IL-2Rβγc結合來形成活性三元複合物。大多數免疫細胞以不同水準表達IL-2Rβ和IL-2Rγc亞基。還有第三個非信號傳導的IL-2R亞基(IL-2Rα(CD25))，其在免疫細胞(尤其是Treg)的子集上表達。IL-2Rαβγc的複合物對IL-2具有非常高的親和力(約10 pM)，因此表達所有三個亞基的細胞對IL-2更加敏感。改善IL-2R激動劑抗腫瘤功效的流行且得到充分支援的策略涉及工程化IL-2R選擇性，以減少IL-2與IL-2Rα亞基的結合，同時維持IL-2Rβγc的結合和信號傳導以促進細胞毒性效應T細胞(Teff細胞)相對於腫瘤部位處的Treg的浸潤和刺激。
在臨床環境中，IL-2毒性的原因尚不清楚；但據認為是表達IL-2Rβγc的T細胞的過度外周免疫刺激伴隨著發炎性細胞因數過度釋放的結果。由於天然細胞因數的半衰期短，頻繁施用維持足夠的腫瘤暴露所需的高劑量IL-2會誘發毒性。
解決IL-2限制性的策略是一種有用的免疫腫瘤療法，它利用突變體、融合蛋白或化學修飾的IL-2來改變免疫調節劑的複雜生物學特性。然而，在臨床前和臨床開發過程中，很難最佳化修飾IL-2的選擇性IL-2Rβγc的結合和信號傳導。這限制了使用具有生物活性的IL-2蛋白作為賦予多種新特性的起點。
根據本發明的IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體包含式(1)-(1d)、式(2)-(2d)、式(3)-(3e)和式(4)-(4f)中任一項的氨基酸序列，SEQ ID NO:805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926和2929-2939中任一項的氨基酸序列，前述中任一項的截短的氨基酸序列，前述中任一項的取代的氨基酸序列，具有側接氨基酸的前述氨基酸序列中的任一項，和與前述中的任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
根據本發明的IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體包含式(5)-(5e)中任一項的氨基酸序列；SEQ ID NO:944-1028、1032-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列，前述中任一項的截短的氨基酸序列，前述中任一項的取代的氨基酸序列，具有側接氨基酸的上述氨基酸序列中的任一項，和與前述中的任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
根據本發明，IL-2Rβγc配體包含根據本發明的IL-2Rβ配體和根據本發明的IL-2Rγc配體。
根據本發明，IL-2Rβγc結合化合物包含根據本發明的IL-2Rβ配體和根據本發明的IL-2Rγc配體。
根據本發明，IL-2Rβγc結合化合物包含根據本發明的IL-2Rβγc配體。
根據本發明，藥物組合物包含根據本發明的IL-2Rβγc結合化合物。
根據本發明，治療患者疾病的方法包括向需要此類治療的患者施用治療有效量的根據本發明的IL-2Rβγc結合化合物或根據本發明的藥物組合物。
根據本發明，擴增免疫細胞的方法包括離體或體內使免疫細胞群與有效量的根據本發明的IL-2Rβ配體、根據本發明的IL-2Rγc配體、或根據本發明的IL-2Rβγc結合化合物接觸。
根據本發明，細胞療法的方法包括將細胞進行工程化以表達根據本發明的IL-2Rβγc結合化合物。
根據本發明，強化疫苗的方法包括向患者施用疫苗和治療有效量的根據本發明的IL-2Rβγc結合化合物或根據本發明的藥物組合物。
根據本發明，修改免疫應答的方法包括向患者施用有效量的根據本發明的IL-2Rβγc結合化合物或根據本發明的藥物組合物。
根據本發明，核酸編碼根據本發明的IL-2Rβ配體、根據本發明的IL-2Rγc配體、根據本發明的IL-2Rβγc配體、或根據本發明的IL-2Rβγc結合化合物。
不在兩個字母或符號之間的破折號(“–”)被用於表示部分或取代基的連接點。例如，–CONH2 藉由碳原子連接，–X1 -X2 –表示氨基酸X1 和X2 藉由單鍵共價鍵合。
“烷基”是指藉由從母體烷烴、烯烴或炔烴的單個碳原子上除去一個氫原子而得到的飽和、支鏈或直鏈單價烴基。烷基的實例包括甲基；乙基，例如乙烷基、乙烯基和乙炔基；丙基，如丙-1-基、丙-2-基、丙-1-烯-1-基、丙-1-烯-2-基、丙-2-烯-1-基(烯丙基)、丙-1-炔-1-基、丙-2-炔-1-基等；丁基，如丁-1-基、丁-2-基、2-甲基-丙-1-基、2-甲基-丙-2-基、丁-1-烯-1-基、丁-1-烯-2-基、2-甲基-丙-1-烯-1-基、丁-2-烯-1-基、丁-2-烯-2-基、丁-1,3-二烯-1-基、丁-1,3-二烯-2-基、丁-1炔-1-基、丁-1炔-3-基、丁-3-炔-1-基等；等等。術語“烷基”特別旨在包括具有任何飽和度或飽和水準的基團，即僅具有碳-碳單鍵的基團、具有一個或多個碳-碳雙鍵的基團、具有一個或多個碳-碳三鍵的基團以及具有碳-碳單鍵、雙鍵和三鍵組合的基團。當預期達到特定的飽和水準時，使用術語鏈烷基、鏈烯基和炔基。在某些實施方案中，烷基是C1-6 烷基、C1-5 烷基、C1-4 烷基、C1-3 烷基，並且在某些實施方案中，是乙基或甲基。
“環烷基”是指飽和或部分不飽和的環狀烷基。在某些實施方案中，環烷基是C3-6 環烷基、C3-5 環烷基、C5-6 環烷基、環丙基、環戊基，並且在某些實施方案中是環己基。在某些實施方案中，環烷基選自環丙基、環丁基、環戊基和環己基。
“雜環烷基”本身或作為另一取代基的一部分是指飽和或不飽和的環烷基基團，其中一個或多個碳原子(和某些相關的氫原子)獨立地被相同或不同的雜原子替代；或者是指母體芳環體系，其中一個或多個碳原子(和某些相關的氫原子)獨立地被相同或不同的雜原子替代，使得該環體系違反休克爾規則(Hückel-rule)。替代一個或多個碳原子的雜原子的實例包括N、P、O、S和Si。雜環烷基的實例包括衍生自以下的基團：環氧化物、吖吮(azirines)、環硫乙烷、咪唑啶、嗎福啉、呱嗪、呱啶、吡唑烷、吡咯烷、奎寧環等。在某些實施方案中，雜環烷基是C5 雜環烷基，並且選自：吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫硫苯基(tetrahydrothiophenyl)、咪唑啶基、噁唑烷基、噻唑烷基、doxolanyl和二硫戊環基(dithiolanyl)。在某些實施方案中，雜環烷基是C6 雜環烷基，並且選自：呱啶基、四氫吡喃基、piperizinyl、噁嗪基、二硫雜環己基(dithianyl)和二氧雜環己基(dioxanyl)。雜環烷基是C3-6 雜環烷基、C3-5 雜環烷基、C5-6 雜環烷基，並且在某些實施方案中，是C5 雜環烷基或C6 雜環烷基。雜原子基團可以選自：-O-、-S-、-NH-、-N(-CH3 -)、-SO-和-SO2 -，在某些實施方案中，雜原子基團選自-O-和-NH-，並且在某些實施方案中，雜原子基團是-O-或-NH-。
“結合親和力”是指單個生物分子與其配體/結合伴侶之間結合相互作用的強度。結合親和力表示為IC50 。
“激動劑”是指生物活性配體，其與其互補的生物活性受體或亞基結合，並啟動受體以引起由受體介導的生物應答，或增強由受體介導的預先存在的生物活性。
“部分激動劑”是指提供啟動水準的化合物，即例如，提供小於最大啟動的75%，最大啟動的小於50%、小於25%、小於10%或小於1%的啟動水準的化合物。部分IL-2R激動劑展現出的啟動水準低於由IL-2提供的啟動水準。例如，部分IL-2R激動劑展現出的啟動水準低於由IL-2提供的啟動水準，並且部分IL-2R激動劑展現出的啟動水準低於由IL-2提供的啟動水準。
“拮抗劑”是指結合其互補受體或亞基並阻斷或降低受體的生物應答的生物活性配體或化合物。例如，IL-2R拮抗劑以小於100 μM的IC50 與IL-2R結合，並且如例如使用實施例中所公開的任何功能測定法所確定的抑制IL-2的功能活性。例如，IL-2R拮抗劑以小於100 μM的IC50 與IL-2R結合，並且如例如使用實施例中所公開的任何功能測定法所確定的抑制IL-2的功能活性。
氨基酸殘基縮寫如下：丙氨酸是Ala或A；精氨酸是Arg是R；天冬醯胺是Asn或N；天冬氨酸是Asp或D；半胱氨酸是Cys或C；谷氨酸是Glu或E；穀氨醯胺是Gln或Q；甘氨酸是Gly或G；組氨酸是His或H；異白氨酸是Ile或I；白氨酸是Leu或L；賴氨酸是Lys或K；甲硫氨酸是Met或M；苯丙氨酸是Phe或F；脯氨酸是Pro或P；絲氨酸是Ser或S；蘇氨酸是Thr或T；色氨酸是Trp或W；酪氨酸是Tyr或Y；並且纈氨酸是Val或V。
“非天然氨基酸”包括例如β-氨基酸、高氨基酸、脯氨酸和丙酮酸衍生物、咪唑環上連接有烷基或雜原子部分的組氨酸衍生物、具有含吡啶側鏈的氨基酸、3-取代的丙氨酸衍生物、甘氨酸衍生物、環取代的苯基丙氨酸和酪氨酸衍生物以及N-甲基氨基酸。
具有大疏水側鏈的氨基酸包括異白氨酸(I)、白氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、纈氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)。
具有小疏水側鏈的氨基酸包括丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、絲氨酸(S)和蘇氨酸(T)。
具有鹼性側鏈的氨基酸包括精氨酸(R)、賴氨酸(K)和組氨酸(H)。
具有酸性側鏈的氨基酸包括天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)。
具有極性/中性側鏈的氨基酸包括組氨酸(H)、天冬醯胺(N)、穀氨醯胺(Q)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)和酪氨酸(Y)。
具有芳族側鏈的氨基酸包括苯丙氨酸(F)、組氨酸(H)、色氨酸(W)和酪氨酸(Y)。
具有羥基側鏈的氨基酸包括絲氨酸(S)、蘇氨酸T)和酪氨酸(Y)。
“保守性氨基酸取代”意指以下組的每個中的氨基酸可以被該組中的另一個氨基酸取代：具有小疏水側鏈的氨基酸，包括丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、絲氨酸(S)和蘇氨酸(T)；具有含羥基側鏈的氨基酸，包括絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)和酪氨酸(Y)；具有酸性側鏈的氨基酸，包括天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)；包含極性中性側鏈的氨基酸，包括組氨酸(H)、天冬醯胺(N)、穀氨醯胺(Q)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)和酪氨酸(Y)；具有鹼性側鏈的氨基酸，包括精氨酸(R)、賴氨酸(K)和組氨酸(H)；具有大疏水側鏈的氨基酸，包括異白氨酸(I)、白氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、纈氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W))；和具有芳族側鏈的氨基酸，包括苯丙氨酸(F)、組氨酸(H)、色氨酸(W)和酪氨酸(Y)。
“PEG”、“聚乙二醇”和“聚(乙二醇)”是指任何合適的非肽水溶性聚(環氧乙烷)。PEG可以包含結構-(OCH2 CH2 )n -其中，n是例如1至4,000的整數。PEG還可以包括諸如-CH2 CH2 -O(CH2 CH2 )n -CH2 CH2 -和/或-(OCH2 CH2 )n O-的部分，這取決於例如在合成轉化過程中末端氧是否已經被替代。PEG可以用合適的端基封端。PEG中至少50%的重複單位可以具有結構-CH2 CH2 -。PEG可以具有任何合適的分子量、結構和/或幾何形狀(如支鏈的、線性的、叉形的或多官能的)。
“生理上可切割的”或“可水解的”或“可降解的”鍵是在生理條件下與水反應(即被水解)的鍵。鍵在水中水解的趨勢將不僅取決於連接兩個中心原子的鍵聯的一般類型，而且取決於與這些中心原子連接的取代基。合適的水解不穩定或弱鍵聯包括，例如，羧酸酯、磷酸酯、酸酐、縮醛、縮酮、醯氧基烷基醚、亞胺、原酸酯、肽和寡核苷酸。
“可酶促降解的鍵聯”是指可被一種或多種酶降解或切割的化學鍵聯。
“水解穩定的”鍵聯或鍵是指化學鍵(如共價鍵)，其在水中基本上是穩定的，使得化學鍵在生理條件下在較長時間內不會發生任何明顯程度的水解。水解穩定的鍵聯的實例包括但不限於以下：碳-碳鍵(例如，在脂肪鏈中)、醚、醯胺、聚氨酯等。通常，水解穩定的鍵聯是指在生理條件下展現出每天低於約1%至2%的水解速率。
“IL-2Rα配體”是指能夠以小於100 μM的IC50 與哺乳動物IL-2受體(如人IL-2受體)的IL-2Rα亞基結合的肽。
“IL-2Rβ配體”是指能夠以小於100 μM的IC50 與哺乳動物IL-2受體(如人IL-2受體)的IL-2Rβ亞基結合的肽。
“IL-2Rβ配體”或“由本公開提供的IL-2Rβ配體”包括例如，具有以下氨基酸序列的肽：SEQ ID NO：805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986和2989-2939中任一項的氨基酸序列，基於SEQ ID NO：805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986和2989-2939的截短的氨基酸序列，具有SEQ ID NO：805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986和2989-2939以及側翼氨基酸的氨基酸序列，基於SEQ ID NO：805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986和2989-2939的具有一個或多個保守性或非保守性氨基酸取代的氨基酸序列；摻入了具有SEQ ID NO：805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2986和2989-2939的一個或多個氨基酸序列的化合物；或前述任一項的組合。
“IL-2Rγc配體”是指能夠以小於100 μM的IC50 與哺乳動物IL-2受體(如人IL-2受體)的IL-2Rγc亞基結合的肽。
“IL-2Rγc配體”或“由本公開提供的IL-2Rγc配體”包括例如，具有以下氨基酸序列的肽：SEQ ID NO：944-1028、1032-1060和1601-1613中的任一項的氨基酸序列肽，基於SEQ ID NO：944-1028、1032-1060和1601-1613的截短氨基酸序列，具有SEQ ID NO：944-1028、1032-1060和1601-1613和側翼氨基酸的氨基酸序列，基於SEQ ID NO：944-1028、1032-1060和1601-1613的具有一個或多個保守性或非保守性氨基酸取代的氨基酸序列；摻入具有SEQ ID NO：944-1028、1032-1060和1601-1613的一項或多項氨基酸序列的化合物；或前述任一項的組合。
“IL-2Rβγc配體”或“由本公開提供的IL-2Rβγc配體”包括例如由本公開提供的至少一種IL-2Rβ配體和由本公開提供的至少一種IL-2Rγc配體。
包含具有SEQ ID NO：的氨基酸序列的配體是指具有以下氨基酸序列的配體：由SEQ ID NO：鑒定的氨基酸序列，基於SEQ ID NO：的截短的氨基酸序列，具有SEQ ID NO：和側翼氨基酸的氨基酸序列，基於SEQ ID NO：的具有一個或多個保守性或非保守性氨基酸取代的氨基酸序列；摻入具有SEQ ID NO：的一項或多項氨基酸序列的化合物；或前述任一項的組合。
“hIL-2Rβ亞基”是指人(智人(homo sapiens))白細胞介素2受體亞基β前體NCBI參考序列NP_000689.1。
“hIL-2Rγc亞基”是指人(智人)白細胞介素2受體亞基γ前體NCBI參考序列NP_000197.1。
“cyano-IL-2Rβ亞基”是指食蟹猴白細胞介素2受體亞基β前體NCBI參考序列NP_001244989.1。
“cyano-IL-2Rγc亞基”是指食蟹猴白細胞介素2受體亞基α前體NCBI參考序列XP_005593949。
重組“配體融合蛋白”是指藉由重組DNA技術製備的蛋白，其中哺乳動物IL-2受體的配體的翻譯閱讀框與另一種蛋白(即IL-2R配體融合伴侶)的翻譯閱讀框融合，以產生單個重組多肽。配體融合蛋白可以包含IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體和/或串聯IL-2Rβγc配體。融合伴侶可以是IgG分子的Fc結構域，其中IL-2Rβγc配體與Fc結構的兩個C末端連接。配體融合蛋白可以包括肽基接頭(如位於IL-2R配體和包含融合蛋白的融合蛋白伴侶之間的氨基酸序列)，以使肽基接頭氨基酸序列不衍生自IL-2R配體或融合蛋白伴侶。肽基接頭可以作為間隔子摻入融合蛋白中，以促進適當的蛋白折疊和組分蛋白部分的穩定性，來改善蛋白表達，和/或使兩種融合伴侶具有更好的生物活性。肽基接頭可以包括例如柔性肽或剛性肽。
“IL-2Rβγc配體”是指由一個或多個IL-2Rβ配體和一個或多個IL-2Rγc配體組成的化合物，或包含一個或多個IL-2Rβ配體和一個或多個IL-2Rγc配體的化合物。一個或多個IL-2Rβ配體和一個或多個IL-2Rγc配體可以與IL-2Rβγc配體接頭結合。IL-2Rβγc配體可以包含含有兩個或更多個IL-2Rβγc配體的串聯IL-2Rβγc配體，或者它可以包含同時與IL-2R1亞基和IL-2Rγc亞基結合的單個配體。IL-2Rβγc配體能夠以小於100µM的IC50 與IL-2R的IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基結合。
“IL-2Rβγc配體構建體”是指包含與構建體伴侶結合的一個或多個IL-2Rβγc配體的化合物。IL-2Rβγc配體構建體還包括其中一個或多個IL-2Rβ配體和一個或多個IL-2Rγc配體與構建體伴侶結合的化合物。
“IL-2Rβγc結合化合物”是指能夠與IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基兩者結合的化合物，並且包括IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體、IL-2Rβγc配體構建體，以及包含IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的構建體。IL-2Rβγc結合化合物可以以例如小於100µM(如小於10µM、小於1µM或小於0.1µM)的IC50 與IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基結合。
生物等排體是符合等排體最廣泛定義的原子或分子。生物等排性的概念是基於這樣一個概念，即具有化學和物理相似性的單個原子、基團、部分或整個分子會產生相似的生物效應。母體化合物的生物等排體仍然可以被其適當的靶標識別和接受，但是與母體分子相比，其功能將發生改變。受生物等排置換影響的參數包括例如，大小、構象、誘導和仲介效應、極化性、靜電相互作用能力、電荷分佈、H鍵形成能力、pKa(酸度)、溶解度、疏水性、親油性、親水性、極性、效價、選擇性、反應性、或化學和代謝穩定性、ADME (吸收、分佈、代謝和排泄)。雖然在藥物中很常見，但是母體分子中的羧基或羧酸官能團(-CO2 H)可以用合適的替代物或(生物)等排體來替換，以克服化學或生物缺點，同時保留帶有一個或多個羧基或羧酸官能團(-CO2 H)的母體分子的所期望的屬性。
“等排體”或“等排體置換”是指任何氨基酸或具有與特定氨基酸相似的物理化學和/或結構性質的其它類似物部分。氨基酸的“等排體”或“合適的等排體”是同一類別的另一種氨基酸，其中基於側鏈與極性溶劑(如水)接觸的傾向，氨基酸屬於以下類別：疏水的(與水接觸的傾向低)、極性的或帶電的(在能量上有利於與水的接觸)。帶電氨基酸殘基的實例包括賴氨酸(+)、精氨酸(+)、天冬氨酸(-)和谷氨酸(-)。極性氨基酸的實例包括絲氨酸、蘇氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺、組氨酸和酪氨酸。說明性疏水氨基酸包括丙氨酸、纈氨酸、白氨酸、異白氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、半胱氨酸和甲硫氨酸。氨基酸甘氨酸沒有側鏈，並且很難歸入上述類別之一。然而，甘氨酸通常存在於蛋白質的表面，通常在環內，為這些區域提供了高度的靈活性，並且等排體可能具有類似的特徵。脯氨酸具有相反的作用，藉由在多肽鏈的片段上施加一定的扭轉角來為蛋白質結構提供剛性。等排體可以是氨基酸的衍生物，例如與參考氨基酸相比具有一個或多個經修飾的側鏈的衍生物。IL-2Rβγc配體包括由本公開提供的IL-2Rβγc配體的等排體。
“環化”是指其中肽或多肽分子的一部分與肽或多肽分子的另一部分連接形成閉環的反應，諸如藉由形成二硫橋或其它類似鍵(例如內醯胺鍵)。在具體實施方案中，本文中所述的肽單體化合物或肽二聚體化合物的單體亞單位經由肽單體或單體亞單位中存在的兩個氨基酸殘基之間的分子內鍵而環化。
“患者”是指哺乳動物，例如人類。
“肽”是指其中單體包括藉由醯胺鍵連接在一起的氨基酸的聚合物。肽可以包含例如少於200個氨基酸、少於100個氨基酸、少於50個氨基酸、少於40個氨基酸、少於30個氨基酸或少於20個氨基酸。肽可以包含天然存在的氨基酸、非天然存在的氨基酸或其組合。
除了僅由天然氨基酸組成的肽之外，還提供了肽模擬物或肽類似物。結構上類似於治療上有用的肽的肽模擬物可以被用於產生等同或增強的治療或預防效果。通常，肽類比物在結構上類似於範例肽(例如，具有生物或藥理學活性的肽，諸如天然存在的受體結合肽)，但是藉由本領域已知的方法，具有任選被諸如-CH2 -NH-、-CH2 -S-、-CH2 -CH2 -、-CH = CH-(順式和反式)、-COCH2 -、-CH(OH)CH2 -和-CH2 SO-的鍵聯取代的一個或多個肽鍵聯。
共有序列的一個或多個氨基酸被相同類型的D-氨基酸取代(如用D-賴氨酸替換L-賴氨酸)，可以被用來產生更穩定的肽。此外，包含共有序列或基本相同的共有序列變異的拘束性肽(constrained peptide)可以藉由本領域已知的方法產生；例如，藉由添加能夠形成使肽環化的分子內二硫橋的內部半胱氨酸殘基。
合成的或非天然存在的氨基酸是指在體內不是天然存在的氨基酸，但是其可以摻入本公開提供的肽配體中。合成氨基酸的合適的實例包括天然存在的L-α氨基酸的D-α氨基酸以及由式H2 NCHR5 COOH表示的非天然存在的D-和L-α氨基酸，其中R5 是C1-6 烷基、C3-8 環烷基、C3-8 雜環烷基；6至10個碳原子的芳族殘基，任選在芳族核上具有選自羥基、低級烷氧基、氨基和羧基的1至3個取代基；-亞烷基-Y，其中亞烷基是具有1至7個碳原子的亞烷基，並且Y選自具有3至7個碳原子的羥基、氨基、環烷基和環烯基；具有6至10個碳原子的芳基，諸如芳族核上選自羥基、低級烷氧基、氨基和羧基的1至3個取代基；具有3至7個碳原子和1至2個選自氧、硫和氮的雜原子的雜環；-C(O)R2 ，其中R2 選自氫、羥基、低級烷基、低級烷氧基；以及-NR3 R4 ，其中R3 和R4 各自獨立地選自氫和低級烷基；-S(O)n R6 ，其中n為1或2，R6 為C1-6 烷基，並且條件是R6 不限定天然氨基酸的側鏈。
其它合成氨基酸的實例包括其中氨基與羧基被多於一個碳原子分開的氨基酸，諸如β -丙氨酸、γ-氨基丁酸等。
合適的合成氨基酸的實例包括天然存在L -氨基酸的D-氨基酸、L -1-萘基-丙氨酸、L -2-萘基丙氨酸、L -環己基丙氨酸、L -2-氨基異丁酸、甲硫氨酸的亞碸和碸衍生物 (即HOOC-(H2 NCH)CH2 CH2 -S(O)n R，其中n和R為如上所限定)、以及甲硫氨酸的低級烷氧基衍生物(即HOOC-(H2 NCH)CH2 CH2 OR，其中R為如上所限定的)。
“N-末端”是指肽或多肽的末端(如IL-2Rβγc配體、IL-2Rβγc配體構建體、IL-2Rβ配體或IL-2Rγc配體的N-末端)，其帶有氨基，而羧基末端帶有羧酸基。
“C-末端”是指肽或多肽的末端(如IL-2Rβγc配體、IL-2Rβγc配體構建體、IL-2Rβ配體或IL-2Rγc配體的C-末端)，其帶有羧酸基，而氨基末端帶有氨基。在某些合成的肽中，N-末端不帶有氨基和/或C-末端不帶有羧基。在這種情況下，命名法是指肽主鏈的方向。
“藥學上可接受的”是指由聯邦政府或州政府的監管機構批准或認可的，或在美國藥典或其它公認的藥典中列出的用於動物，並且更具體地用於人。
“藥學上可接受的鹽”是指化合物的鹽，其具有母體化合物的所期望的藥理學活性。此類鹽包括酸加成鹽，其由無機酸與母體化合物內的一個或多個可質子化官能團(如伯胺、仲胺或叔胺)形成。無機酸的實例包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸和磷酸。可以與有機酸形成鹽，例如所述有機酸為乙酸、丙酸、己酸、環戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲醯基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基二環[2.2.2]-辛-2-烯-羧酸、葡萄庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羥基萘酸、水楊酸、硬脂酸、己二烯二酸等。當母體化合物中存在的一個或多個酸性質子被金屬離子(例如鹼金屬離子、鹼土金屬離子或鋁離子或其組合)替代時；或者與有機鹼(如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺)配位時，可以形成鹽。藥學上可接受的鹽可以是鹽酸鹽。藥學上可接受的鹽可以是鈉鹽。化合物可以具有兩個或更多個可電離基團，並且藥學上可接受的鹽可以包含一個或多個相對離子(如雙鹽，例如二鹽酸鹽)。
“藥學上可接受的鹽”是指水合物和其它溶劑合物，以及結晶或非結晶形式的鹽。在所公開的具體藥學上可接受的鹽的情況下，應當理解的是，具體的鹽(例如鹽酸鹽)是鹽的實例，並且可以使用本領域技術人員已知的技術形成其它鹽。此外，使用本領域公知的技術將藥學上可接受的鹽轉化成相應的化合物、游離鹼和/或游離酸。另參見：Stahl和Wermuth, C.G. (編輯), Handbook of Pharmaceutical Salts, Wiley-VCH, 魏因海姆，德國，2008。
“藥學上可接受的媒介物”是指藥學上可接受的稀釋劑、藥學上可接受的佐劑、藥學上可接受的賦形劑、藥學上可接受的載體或上任意的組合，本公開提供的化合物可以與它們一起施用於患者，並且當以足以提供治療有效量的化合物的劑量施用時，其不破壞其藥理學活性並且無毒。
“溶劑合物”是指化合物與化學計量或非化學計量的量的一種或多種溶劑分子的分子複合物。此類溶劑分子是製藥領域中常用的那些，已知它們對患者無害，例如水、乙醇等。化合物或化合物的部分與溶劑的分子複合物可以藉由非共價分子內力(如靜電力、范德華力或氫鍵)來穩定。術語“水合物”是指其中一種或多種溶劑分子是水的溶劑合物。
“藥物組合物”是指由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物(如IL-2Rβγc配體或其藥學上可接受的鹽以及IL-2Rβγc配體構建體或其藥學上可接受的鹽)和至少一種藥學上可接受的媒介物，藉由該媒介物將所述IL-2Rβγc結合化合物或其藥學上可接受的鹽施用於患者。
“預防(preventing/prevention)”是指獲得疾病或病症的風險降低(如例如，在可能暴露於疾病或易患疾病但尚未經歷或顯示疾病的症狀的患者中，導致疾病的至少一種臨床症狀不發展)。在一些實施方案中，“預防”是指藉由以預防性方式服用化合物來減少疾病的症狀。
“治療有效量”是指當向患者施用以用於治療疾病或疾病的至少一種臨床症狀時，足以治療該疾病或其症狀的化合物的量。“治療有效量”可以根據例如化合物、疾病和/或疾病的症狀、疾病的嚴重性和/或疾病或病症的症狀、待治療患者的年齡、體重和/或健康以及處方醫生的判斷而變化。任何給定情況下的適當量可以由本領域技術人員確定，或者能夠藉由常規實驗確定。
“治療有效劑量”是指對患者的疾病或病症提供有效治療的劑量。治療有效劑量可能因化合物而異，因患者而異，並且可能取決於如患者的狀況和遞送途徑等因素。治療有效劑量可以根據本領域技術人員已知的常規藥理學程序來確定。
疾病的“治療(treating/treatment)”是指阻止或改善疾病或者疾病或病症的至少一種臨床症狀，降低獲得疾病或疾病的至少一種臨床症狀的風險，降低疾病或者疾病的至少一種臨床症狀的發展，或降低發展疾病或者疾病的至少一種臨床症狀的風險。“治療”還指在物理上(例如，可辨別症狀的穩定)、生理上(例如，物理參數的穩定)或兩者都抑制疾病，並指抑制患者可辨別或不可辨別的至少一種物理參數或表現。在某些實施方案中，“治療”是指延遲患者的疾病或其至少一種或多種症狀的發作，所述患者可能暴露於或易患疾病或病症，即使該患者尚未經歷或顯示該疾病的症狀。
“Treg”或“Treg細胞”是指調節性T細胞。調節性T細胞是抑制其它免疫細胞活性的一類T細胞，並且用流式細胞術藉由細胞標記物表型CD4+/CD25+/FOXP3+、CD4+CD25+CD127lo或CD4+/CD25+/FOXP3+/CD127lo來限定。由於FOXP3是一種細胞內蛋白質，並且需要細胞固定和透化以便進行染色，所以細胞表面表型CD4+CD25+CD127lo-可以被用於限定活Treg。Treg還包括各種Treg亞類，如tTreg(胸腺衍生的)和pTreg(外周衍生的，自外周中的幼稚T細胞分化)。Treg在誘導和維持對抗原(包括腫瘤表達的那些抗原)的外周自我耐受中起關鍵作用。“CD4+T細胞”是一類淋巴細胞，其藉由刺激諸如巨噬細胞、B淋巴細胞(B細胞)、CD8淋巴細胞(CD8細胞)等其它免疫細胞對抗感染，從而起到協調免疫反應的作用。CD4+T細胞識別存在於MHC II類分子上的肽，這些分子存在於抗原遞呈細胞上。
與CD4+ T細胞一樣，“CD8+(細胞毒性)T細胞”在胸腺中產生並表達T細胞受體。細胞毒性T細胞表達二聚共受體CD8，所述CD8通常包含一個CD8α鏈和一個CD8β鏈。CD8+T細胞識別由存在於大多數有核細胞上的MHC 1類分子遞呈的肽。CD8異二聚體在T細胞/抗原遞呈細胞相互作用過程中與MHC 1類的保守部分結合。CD8+T細胞(細胞毒性T淋巴細胞，或CTL)對於針對包括病毒和細菌在內的細胞內病原體的免疫防禦和腫瘤監視非常重要。
“NK(自然殺傷)細胞”是固有免疫系統的淋巴細胞，並且被歸類為第一類固有淋巴細胞(ILC)。NK細胞對多種病理挑戰作出應答，包括殺死病毒感染的細胞以及檢測和控制癌症的早期病徵。
“細胞的功能啟動”是指在細胞(如例如T細胞和NK細胞)中由IL-2介導的應答。用於細胞的功能啟動的測定包括刺激pSTAT5、細胞增殖或增殖標誌物(如Ki67)、免疫細胞類型比率的變化和刺激效應蛋白的水準。
“效應細胞”是指介導輔助性細胞(CD4+細胞)和細胞毒性(CD8+和NK細胞)作用的淋巴細胞群。效應細胞包括效應T細胞，諸如CD4+輔助性T細胞、CD8+細胞毒性T細胞、NK細胞、淋巴因數啟動的殺傷(LAK)細胞和巨噬細胞/單核細胞。
“幼稚T細胞”是指在骨髓中已經分化並經歷了胸腺中的中樞選擇的正負過程的T細胞。幼稚T細胞包括幼稚形式的輔助性T細胞(CD4+ T細胞)和幼稚細胞毒性T細胞(CD8+ T細胞)。幼稚T細胞通常以L-選擇素(CD62L)和C-C趨化因數受體7(CCR7)的表面表達和IL-7R(CD127)的表達以及缺少啟動標誌物CD25、CD44和CD69為特徵。
“記憶T細胞”是T淋巴細胞的子集，其包括CD4+和CD8+兩者。記憶T細胞的主要功能是藉由將相關抗原或病原體重新引入體內而使這些細胞再次啟動後迅速增強免疫應答。
“抗原結合部分”是指與抗原決定簇特異性結合的多肽分子。抗原結合部分可以例如將其連接的實體(如細胞因數或第二抗原結合部分)引導至靶位點(例如至具有抗原決定簇的特定類型的腫瘤細胞或腫瘤基質)。抗原結合部分包括抗體及其片段。抗原結合部分的實例包括包含抗體重鏈可變區和抗體輕鏈可變區的抗體的抗原結合結構域。抗原結合部分可以包括抗體恒定區。有用的重鏈恒定區可以包括五個同種型中的任何一個：α、δ、ε、y或µ。有用的輕鏈恒定區可以包括兩個同種型K和A中的任何一個。
“多肽”是指由藉由醯胺鍵(也被稱為肽鍵)線性連接的單體(氨基酸)組成的分子。術語“多肽”是指兩個或更多個氨基酸的任何鏈，並不是指產物的特定長度。因此，在“多肽”的定義中包括肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白質”、“氨基酸鏈”或用於指代兩個或更多個氨基酸鏈的任何其它術語，並且可以使用術語“多肽”替換這些術語中的任何術語，或與這些術語中的任何術語互換。術語“多肽”還旨在指多肽的表達後修飾的產物，包括例如糖基化、乙醯化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/封閉基團的衍生化、蛋白水解切割和/或藉由非天然存在的氨基酸進行修飾。多肽可以源自天然生物來源或藉由重組技術產生，但不一定從指定的核酸序列翻譯而來。多肽可以以任何方式產生，包括藉由重組方法或藉由化學合成產生。多肽可以具有例如多於100個氨基酸、多於200個氨基酸、多於500個氨基酸、多於1,000個氨基酸或多於2,000個氨基酸。多肽可以具有限定的三維結構，儘管它們不一定具有這種結構。具有限定的三維結構的多肽被稱為折疊的，不具有限定的三維結構但可以採用大量不同構象的多肽被稱為未折疊的。
“多核苷酸”是指分離的核酸分子或構建體，例如信使RNA (mRNA)、病毒衍生的RNA或質粒DNA (pDNA)。多核苷酸可以包含常規的磷酸二酯鍵或非常規的鍵，如醯胺鍵，如在肽核酸(PNA)中發現的鍵。
“核酸分子”是指多核苷酸中存在的任何一個或多個核酸片段，如DNA或RNA片段。
“載體”或“表達載體”與“表達構建體”同義，是指用於在靶細胞中引入和引導與其可操作地締合的特定基因的表達的DNA分子。載體可以是自我複製的核酸結構，也可以是摻入已引入其的宿主細胞基因組中的載體。表達載體可以包含表達盒。表達載體允許轉錄大量穩定的mRNA。一旦表達載體進入靶細胞內部，由該基因編碼的核糖核酸分子或蛋白質就藉由細胞轉錄和/或翻譯機制產生。表達載體可以包含表達盒，所述表達盒包含編碼由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物(如IL-2Rβγc配體或由本公開提供的IL-2Rβγc配體構建體)的多核苷酸序列。
“宿主細胞”、“宿主細胞系”和“宿主細胞培養物”是指已引入外源核酸的細胞，包括此類細胞的後代。宿主細胞包括例如“轉化子”和“轉化細胞”，其包括原代轉化細胞和源自原代轉化細胞的後代，而與傳代次數無關。
廣義上的“抗體”涵蓋各種抗體結構，其包括例如單複製抗體、多複製抗體、多特異性抗體(如雙特異性抗體)和展現出所期望的抗原結合活性的抗體片段。術語“抗體”可以縮寫為“ab”，諸如在表達Fab或抗噬菌體Ab中。
“全長抗體”、“完全抗體”和“整個抗體”是指具有與天然抗體結構基本相似的結構或具有同時含有Fab和Fe區的重鏈的抗體。
“抗體片段”是指除完全抗體以外的分子，其包含結合完全抗體所結合的抗原的完全抗體的一部分。抗體片段的實例包括Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、雙體抗體、線性抗體，單鏈抗體分子(如scFv)和由抗體片段形成的多特異性抗體。雙體抗體是具有可以是二價或雙特異性的兩個抗原結合位點的抗體片段。抗體片段可以藉由多種技術製備，包括但不限於完全抗體的蛋白水解消化以及藉由重組宿主細胞(如大腸桿菌(E. coli )或噬菌體)產生。
“Fab”或“Fab區”是指通常在兩條不同的多肽鏈上包含VH、CHI、VL和CL (如一條鏈上的VH-CH1和另一條鏈上的VL-CL)免疫球蛋白結構域的多肽。Fab可以單獨指代該區域，或在雙特異性抗體的情況下指該區域。在Fab的情況下，除了CHI和CL結構域之外，Fab還包含Fv區。
“Fv”或“Fv片段”或“Fv區”是指包含ABD的VL和VH結構域的多肽。Fv區可以被格式化為Fab (通常也包括恒定區的兩個不同的多肽)和scFv，其中vi和vh結構域組合 (如所討論，通常用接頭)以形成scFv。
“單鏈Fv”或“scFv”是指通常使用如本文中所討論的scFv接頭可變重鏈結構域與可變輕鏈結構域共價連接以形成scFv或scFv結構域。scFv結構域可以在多肽的N-末端或C-末端處與VL結構域處於任一取向，而對於VH結構域則相反。
“效應子功能”是指由抗體Fc區與Fc受體或配體相互作用產生的生化事件。效應子功能包括例如抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)和補體依賴性細胞毒性(CDC)。
“Fc”或“Fc區”或“Fc鏈”是指包含抗體恒定區的多肽，在某些情況下，不包括第一恒定區免疫球蛋白結構域(例如，CHI)或其部分的全部或部分，並且在某些情況下，還不包括鉸鏈的全部或一部分。因此，Fc可以指IgA、IgD和IgG的最後兩個恒定區免疫球蛋白結構域(例如，CH2和CH3)，IgE和IgM的最後三個恒定區免疫球蛋白結構域，以及任選地柔性鉸鏈N-末端至這些結構域的全部或一部分。對於IgA和IgM，Fc可以包括J鏈。對於IgG，Fc鏈包含免疫球蛋白結構域CH2和CH3 (Cy2和Cy3)，以及任選地在CHI (Cyl)和CH2(Cy2)之間的鉸鏈區的全部或一部分。儘管Fc區的邊界可以變化，但是人IgG重鏈Fc區通常被限定為在其羧基末端包括殘基E216、C226或A231，其中編號是根據Kabat中的EU索引進行的。可以對Fc區進行氨基酸修飾，例如以改變與一個或多個FcγR或與FcRn的結合。在針對人IgG1的EU編號中，CH2-CH3結構域包含氨基酸231至447，並且鉸鏈為216至230。因此，Fc鏈的限定包括氨基酸231-447(CH2-CH3)或216-447(鉸鏈-CH2-CH3)或其片段。如通常可以基於大小(例如，非變性色譜、尺寸排阻色譜等)使用標準方法所檢測的，Fc片段可以含有來自N-末端和C-末端的任一個或兩者的較少氨基酸，從而保留了與另一條Fc鏈或Fc片段形成二聚體的能力。人IgG Fc鏈特別有用，並且可以是來自人IgG1、IgG2或IgG4的Fc鏈。
“重鏈恒定區”是指抗體或其片段的CH1-鉸鏈-CH2-CH3部分，其不包括可變重鏈結構域；在對人IgG1的EU編號中，如氨基酸118-447。
“重鏈恒定區片段”是指重鏈恒定區，其含有來自N-末端和C-末端的任一個或兩者的較少氨基酸，從而保留了與另一個重鏈恒定區形成二聚體的能力。
“免疫球蛋白”是指具有天然存在的抗體結構的蛋白質。例如，IgG類的免疫球蛋白是約150,000Da的異四聚體糖蛋白，其由藉由二硫鍵結合在一起的兩條輕鏈和兩條重鏈組成。從N-末端到C-末端，每條重鏈都有可變區(VH) (也被稱為可變重鏈結構域或重鏈可變結構域)，其後是三個恒定結構域(CHI、CH2和CH3) (也被稱為重鏈恒定區)。類似地，從N-末端到C-末端，每個輕鏈都有一個可變區(VL) (也被稱為可變輕鏈結構域或輕鏈可變結構域)，其後是恒定輕鏈(CL)結構域 (也被稱為輕鏈恒定區)。免疫球蛋白的重鏈可以被指定為五類中的一類(被稱為α(IgA)、Ii(IgD)、E(IgE)、y(IgG)或µ(IgM))，其中一些可以被進一步分為亞類(例如γ1(IgG1)、γ2(IgG2)、γ3(IgG3)、γ4(gG4)、α1(IgA1)和α2(IgA2))。基於其恒定結構域的氨基酸序列，免疫球蛋白的輕鏈可以被指定為兩種類型中的一種，κ(k)或λ(L)。免疫球蛋白基本上由兩個Fab分子和一條Fc鏈組成，它們經由免疫球蛋白的鉸鏈區相連。
“免疫綴合物”是指包括至少一個IL-2Rβγc配體和至少一個抗原結合部分的多肽分子。免疫綴合物可以包含至少一個IL-2Rβγc配體和至少兩個抗原結合部分。免疫綴合物可以包含至少一個IL-2Rβγc配體和藉由一個或多個接頭序列連接的兩個抗原結合部分。抗原結合部分可以藉由多種相互作用和多種構型與IL-2Rβγc配體連接。例如，IL-2Rβγc配體可以藉由接頭與抗原結合部分結合。
“接頭”是指將一種化合物與另一種化合物結合的部分。接頭可以包括IL-2Rβγc配體接頭、串聯的IL-2Rβγc配體接頭和IL-2Rβγc配體構建體接頭。接頭可以是合成接頭。接頭可以是氨基酸接頭。例如，由本公開提供的接頭可以促進IL-2Rβγc配體與IL-2R相互作用，以低IC50 與IL-2R結合和/或啟動IL-2R的能力。接頭可以包含肽或非肽。非肽接頭包括含有例如衍生自Cu(I)催化的炔烴和疊氮化物官能性反應的三唑部分的那些接頭。IL-2Rβγc配體接頭是指將至少一種IL-2R配體(如IL-2Rβ配體和/或IL-2Rγc配體)與另一IL-2R配體結合的部分。接頭可以與另一個IL-2R配體結合，所述另一個IL-2R配體可以是相同的IL-2R配體或不同的IL-2R配體。接頭也可以與提供所期望的生理功能的一個或多個另外的部分結合。接頭可以是二價或多價的。接頭可以是水解穩定的，或者可以包括生理上可水解的或酶可降解的或可切割的鍵聯。接頭可以結合IL-2R配體以形成二聚體、三聚體或更高階的多配體肽(異聚體)和化合物。
“柔性接頭”是指包含柔性氨基酸(如甘氨酸和絲氨酸)的肽基接頭。柔性接頭可以包含例如1至100個氨基酸，諸如1至50個、1至40個、1至30個、1至20個、1至10個或1至5個氨基酸，其中每個氨基酸獨立地選自甘氨酸和絲氨酸。柔性接頭的實例包括(G)n (SEQ ID NO：9380)、(GS)n (SEQ ID NO：9381)、(GGS)n (SEQ ID NO：9382)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9383)或(GGGGS)n (SEQ ID NO：9384)，其中n可以是1到20的整數；(G)n (SEQ ID NO：9385)、(GS)n (SEQ ID NO：9386)、(GGS)n (SEQ ID NO：9387)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9388)或(GGGGS)n (SEQ ID NO：9389)，其中n可以是1至10的整數；或(G)n (SEQ ID NO：9390)、(GS)n (SEQ ID NO：9391)、(GGS)n (SEQ ID NO：9392)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9393)或(GGGGS)n (SEQ ID NO：9394)、其中n可以是1至5的整數。(柔性接頭可以具有氨基酸序列，例如(GGGGS)(SEQ ID NO：9395)、(GGGGS)2(SEQ ID NO：9396)、(GGGGS)3(SEQ ID NO：9397)、(GGGGS)4(SEQ ID NO：9398)、(GG)(SEQ ID NO：9399)、(GGG)(SEQ ID NO：9400)、(GGGGG)(SEQ ID NO：9401)、(GGS)(SEQ ID NO：9402)、(GGGS)(SEQ ID NO：9403)、(GGGGSGG)(SEQ ID NO：9404)、(GGS)2(SEQ ID NO：9405)、(G)5(SEQ ID NO：9406)或(GS)10(SEQ ID NO：9407)。
“剛性接頭”是指富含脯氨酸的肽基接頭，並且可以包括其他氨基酸(如丙氨酸、賴氨酸和/或谷氨酸)。剛性接頭可以包含例如1至100個氨基酸，諸如1至50個、1至40個、1至30個、1至20個、1至10個或1至5個氨基酸，其中每個氨基酸獨立地選自脯氨酸、丙氨酸、賴氨酸和谷氨酸。剛性接頭可以包含例如1至100個氨基酸，諸如1至50個、1至40個、1至30個、1至20個、1至10個或1至5個氨基酸，其中每個氨基酸獨立地選自脯氨酸和丙氨酸。剛性接頭可以具有序列(P)n (SEQ ID NO：9420)或(PA)n (SEQ ID NO：9421)，其中n是1至20的整數。剛性接頭可以具有序列(P)n (SEQ ID NO：9422)或(PA)n (SEQ ID NO：9423)，其中n是1至10的整數。剛性接頭可以具有序列(P)n (SEQ ID NO：9424)或(PA)n (SEQ ID NO：9425)，其中n是1至5的整數。剛性接頭可以具有序列(PA)5 (SEQ ID NO：9426)、(PA)7 (SEQ ID NO ：9427)或(PA)10 (SEQ ID NO：9428)。
“蛋白質”是指至少兩個共價連接的氨基酸，其包括蛋白質、多肽、寡肽和肽。另外，構成抗體的多肽可以包括一個或多個側鏈或末端的合成衍生化、糖基化、PEG化、循環排列、環化、與其他分子的接頭、與蛋白質或蛋白質結構域的融合以及肽標籤或標記的添加。當生物學功能分子包含兩種或更多種蛋白質時，每種蛋白質可以被稱為“單體”或“亞基”或“結構域”；並且生物功能分子可以被稱為“複合物”。
“結合親和力”是指單個生物分子與其配體/結合伴侶之間結合相互作用的強度。結合親和力表示為IC50 。例如，IL-2Rβγc結合化合物的結合親和力是指使用例如實施例中所述的方法確定的IC50 。
“氨基酸序列相似性”是指其中氨基酸的一個或多個氨基酸已被化學相似的氨基酸替代的氨基酸序列。化學上相似的氨基酸的實例包括：(a)具有小的疏水側鏈的氨基酸，諸如丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、絲氨酸(S)或蘇氨酸(T)；(b)具有含羥基的側鏈的氨基酸，諸如絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)或酪氨酸(Y)；(c)具有酸性側鏈的氨基酸，諸如天冬氨酸(D)或谷氨酸(E)；(d)具有極性中性側鏈的氨基酸，諸如組氨酸(H)、天冬醯胺(N)、穀氨醯胺(Q)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)或酪氨酸(Y)；(e)具有鹼性側鏈的氨基酸，諸如精氨酸(R)、賴氨酸(K)或組氨酸(H)；(f)具有大疏水側鏈的氨基酸，諸如異白氨酸(I)、白氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、纈氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；和(g)具有芳族側鏈的氨基酸，其包含苯丙氨酸(F)、組氨酸(H)、色氨酸(W)或酪氨酸(Y)。化學相似的氨基酸可以包含天然存在的氨基酸或非天然氨基酸。
藉由比較主題配體和參考配體中相同氨基酸的數目來確定“序列相似性百分比(%)”。由本公開提供的配體可以包括例如與參考配體具有大於70%、大於80%或大於90%的序列相似性。例如，基於具有SEQ ID NO：9001的參考配體，具有SEQ ID NO：9002-9007的配體具有1、2、3、4或5個氨基酸，其中參考配體的氨基酸已經被被氨基酸丙氨酸取代或替代。具有SEQ ID NO：9002-9007的配體的特徵在於與參考配體的序列相似性分別為95%、90%、85%、80%、75%或70%。
SEQ ID NO: 9001 Y P C W L A R V G E L C D L D S G D V H   
SEQ ID NO: 9002 A P C W L A R V G E L C D L D S G D V H   
SEQ ID NO: 9003 A P C A L A R V G E L C D L D S G D V H   
SEQ ID NO: 9004 A P C A L A A V G E L C D L D S G D V H   
SEQ ID NO: 9005 A P C A L A A V G A L C D L D S G D V H   
SEQ ID NO: 9006 A P C A L A A V G A L C D L A S G D V H   
SEQ ID NO: 9007 A P C A L A A V G A L C D L A A G D V H   
例如，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物(如IL-2Rβγc配體)可以具有其中例如參考氨基酸序列的1至10個氨基酸或1至5個氨基酸被另一個氨基酸取代的氨基酸序列。
例如，衍生自參考結合化合物的結合化合物可以具有1至5個氨基酸取代，1至4個、1至3個或1至2個氨基酸取代。例如，衍生自參考結合化合物的結合化合物可以具有1個氨基酸取代、2個氨基酸取代、3個氨基酸取代、4個氨基酸取代或5個氨基酸取代。
氨基酸取代可以獨立於其他氨基酸取代。
每個氨基酸取代可以獨立地是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。
例如，參考配體可以具有SEQ ID NO：9011的氨基酸序列。具有SEQ ID NO：9012-9016的配體表示取代的配體，其中具有SEQ ID NO：9011的參考配體已經分別被1至5個保守氨基酸取代取代。
SEQ ID NO: 9011 Y W C W M A Q V G E L C D L
SEQ ID NO: 9012 Y H C W M A Q V G E L C D L
SEQ ID NO: 9013 Y H C W M G Q V G E L C D L
SEQ ID NO: 9014 Y H C W M G Q M G E L C D L
SEQ ID NO: 9015 Y H C W M G Q M G E L C E L
SEQ ID NO: 9016 Y H C W M G Q M G E L C E M
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物(如IL-2Rβγc配體構建體)可以與IL-2Rβγc結合化合物(如藉由由本公開提供的特定SEQ ID NO：所鑒定的IL-2Rβγc配體構建體)具有例如大於80%、大於85%、大於90%、大於95%、大於96%、大於98%或大於99%的序列相似性。
由本公開提供的配體(如IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc配體)可以包含截短的配體。“截短的配體”是指這樣的配體，其中例如從相應參考配體的N-末端、C-末端或同時從N-末端和C-末端獨立地去除了1至10個或1至5個氨基酸。衍生自相應參考配體的截短的配體可獨立地具有從參考配體的N-末端、C-末端或同時從N-末端和C-末端獨立地去除的例如1至5個氨基酸，諸如1至4個氨基酸、1至3個氨基酸或1至2個氨基酸。衍生自相應配體的截短的配體可以獨立地具有從參考配體的N-末端、C-末端或同時從N-末端和C-末端去除的例如1個氨基酸、2個氨基酸、3個氨基酸、4個氨基酸或5個氨基酸。
例如，參考配體可以具有SEQ ID NO：9021的氨基酸序列。從具有SEQ ID NO：9021的參考配體衍生的截短的配體的實例包括具有SEQ ID NO：9022-9029的氨基酸序列的截短的配體。
SEQ ID NO: 9021 M G F Y P C W T A Q L G E L C D L S V D   
SEQ ID NO: 9022    G F Y P C W T A Q L G E L C D L S V D   
SEQ ID NO: 9023       F Y P C W T A Q L G E L C D L S V D   
SEQ ID NO: 9024          Y P C W T A Q L G E L C D L S V D   
SEQ ID NO: 9025 M G F Y P C W T A Q L G E L C D L S V      
SEQ ID NO: 9026 M G F Y P C W T A Q L G E L C D L S         
SEQ ID NO: 9027 M G F Y P C W T A Q L G E L C D L            
SEQ ID NO: 9028    G F Y P C W T A Q L G E L C D L S V      
SEQ ID NO: 9029       F Y P C W T A Q L G E L C D L            
SEQ ID NO：9022-9024的截短的配體分別具有從參考配體的N-末端去除的1至3個氨基酸；具有SEQ ID NOS：9025至9027的截短的結合化合物配體分別具有從參考配體的C-末端去除的1至3個氨基酸；和具有SEQ ID NO：9028和9029的截短的配體具有同時從參考配體的N-末端和C-末端去除的氨基酸。
作為另一個實例，參考配體可以包含式(A)的氨基酸序列： –X1 –X2 –C–X3 –X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –C–X11 –X12 –                       (A) 其中每個–X–獨立代表一個氨基酸。式(A1)-(A5)的氨基酸序列表示衍生自包含式(A)氨基酸序列的參考配體的截短配體的實例： –X2 –C–X3 –X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –C–X11 –X12 –                     (A1) –C–X3 –X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –C–X11 –X12 –            (A2) –C–X3 –X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –C–                 (A3) –X3 –X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –C–X11 –               (A4) –X3 –X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –           (A5)
由本公開提供的配體可以包括例如其中1至3個側翼氨基酸(如甘氨酸)獨立地結合至參考配體的N-末端、C-末端或N-末端和C-末端兩者。
例如，參考配體可以具有SEQ ID NO：9031。具有SEQ ID NO：9032-9034的配體分別具有結合至參考配體的N-末端的1至3個甘氨酸；具有SEQ ID NO：9035-9037的配體分別具有結合至參考配體的C-末端的1至3個甘氨酸；並且具有SEQ ID NO：9038-9039的配體具有結合至參考配體的N-末端和C-末端兩者的1或2個甘氨酸。
SEQ ID NO: 9031          K Y C G F A Q L G E L C V L         
SEQ ID NO: 9032       G K Y C G F A Q L G E L C V L         
SEQ ID NO: 9033    G G K Y C G F A Q L G E L C V L         
SEQ ID NO: 9034 G G G K Y C G F A Q L G E L C V L         
SEQ ID NO: 9035          K Y C G F A Q L G E L C V L G      
SEQ ID NO: 9036          K Y C G F A Q L G E L C V L G G   
SEQ ID NO: 9037          K Y C G F A Q L G E L C V L G G G
SEQ ID NO: 9038       G K Y C G F A Q L G E L C V L G      
SEQ ID NO: 9039    G G K Y C G F A Q L G E L C V L G      
由本公開提供的配體可以包含例如一個或多個側翼氨基酸，例如在相應配體的N-末端和/或C-末端的側翼甘氨酸基團。例如，配體可以包含具有SEQ ID NO：9380-9407和9420-9428中的任一項的氨基酸序列的一個或多個側翼氨基酸。
“IL-2Rβγc結合化合物”是指由本公開提供的IL-2Rβγc配體、由本公開提供的串聯IL-2Rβγc配體、由本公開提供的IL-2Rβγc配體構建體和包含由本公開提供的至少一種IL-2Rβ配體和至少一種IL-2Rγc配體的構建體。IL-2Rβ結合化合物可以以例如小於100 µM、小於10 µM、小於1 µM、小於0.1 µM或小於0.01 µM的IC50 與IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基結合。
IL-2R、IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基分別指哺乳動物IL-2R、IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基，諸如分別指人IL-2R、人IL-2Rβ亞基和人IL-2Rγc亞基。
表述“至少一個”是指“一個或多個”。例如，表述“至少一個”可以指1至10個、1至8個、1至6個、1至5個、1至4個、1至3個或1至2個。例如，表述“至少一個”可以指1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個。
現在詳細提及化合物、組合物和方法的某些實施方案。所公開的實施方案不旨在限制請求項。相反，請求項旨在涵蓋所有替代物、修改和等同物。
白細胞介素-1(IL-2)藉由具有免疫刺激和免疫調控功能，在調控免疫應答和維持外周自耐受中起關鍵作用。IL-2主要作為一種T細胞生長因數，並且對T細胞的增殖和存活以及效應T細胞和記憶T細胞的產生是必需的。IL-2是一種四α-螺旋束細胞因數，其屬於包括IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21的結構相關細胞因數家族。IL-2由啟動的CD4+ T細胞應答於抗原刺激而產生，並且也可由CD8+ T細胞和固有免疫細胞(如啟動的樹突細胞(DC)和自然殺傷(NK)細胞)產生。
IL-2與多種形式(特別是單體、二聚體和三聚體形式)的IL-2受體(IL-2R)結合。單體IL-2R由膜相關IL-2Rα (CD25)鏈組成，其也以可溶性形式存在；然而，IL-2Rα不能誘導信號傳導事件。三聚體IL-2R由IL-2Rα、IL-2Rβ (CD122)和IL-2Rγc組成，也被稱為共有γ鏈(γc)或CD132，並且由IL-2細胞因數家族的所有成員共用。二聚IL-2R包含IL-2Rγc亞基和IL-2Rβ亞基。與單體IL-2R相反，二聚體IL-2R和三聚體IL-2R在IL-2結合後的啟動均導致下游信號傳導級聯。IL-2以高親和力結合三聚體IL-2R，但以低-中親和力結合二聚體IL-2R，從而改變細胞對IL-2的敏感性。此外，IL-2可以與啟動的樹突細胞表面表達的IL-2Rα結合，用於向鄰近細胞(包括表達IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基的抗原特異性幼稚T細胞和NK細胞)的反式遞呈。IL-2的這種反式遞呈已被證明有助於最初的高親和力IL-2信號傳導，這是免疫應答早期針對主要幼稚T細胞以產生IL-2所必需的。
IL-2首先被IL-2Rα捕獲，引起IL-2的構象改變並增加其對IL-2Rβ的親和力。IL-2與IL-2Rβγc亞基的締合誘導IL-2Rβ和IL-2Rγc的胞質尾部的信號傳導基序的二聚化，從而導致Janus激酶、JAK1和JAK3的磷酸化/啟動，這進而對IL-2Rβ亞基的尾部中的關鍵酪氨酸殘基發揮激酶活性。
下游信號傳導經由三個主要通路發生，即JAK-STAT通路、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)-AKT通路和絲裂原啟動的蛋白激酶(MAPK)通路。這些通路藉由銜接蛋白Shc 和轉錄因數STAT5的募集，最終導致有助於IL-2依賴性生物作用的靶基因的轉錄。IL-2信號傳導的靶基因包括細胞週期蛋白D2 、bcl-2 、fasL 、cd25 (編碼IL-2Rα)、socs1-2 和編碼轉錄因數BLIMP1的IL-2沉默基因prdm1。負調控因數IL-2 BLIMP1的產生維持了效應T細胞和Treg細胞之間的平衡，這對於免疫體內平衡至關重要。
IL-2藉由刺激T細胞的增殖和分化以及藉由維持和擴增免疫抑制性Treg細胞群，在T細胞啟動方面發揮雙重作用。幼稚CD4+和CD8+ T細胞表達二聚體IL-2R，因此需要高濃度的IL-2來誘導它們的初始增殖。一旦被啟動，這些T細胞表達高親和力的三聚體IL-2R，驅動T細胞分化為效應細胞(Teff)或記憶細胞。這種分化取決於IL-2信號的強度和持續時間。
在低至中等水準的IL-2存在下的CD8+ T細胞的初級擴增過程中，CD8+ T細胞的子集分化為記憶T細胞。細胞藉由下調CD25以及上調CD127 (IL-7R)和CD62 (L-選擇素)來做到這一點，CD127和CD62是與再感染後二次應答相關的受體。在急性感染期間，持續高水準的IL-2導致CD25的快速上調和CD8+細胞向細胞毒性效應細胞的分化。上調誘導IL-2驅動的死亡受體fas 和fasL 的表達，從而在病原體清除後導致啟動誘導的細胞死亡(AICD)。對於CD4+ T細胞，IL-2對STAT5信號傳導的啟動藉由調控每次應答的適當受體的表達來影響它們向多種輔助性T細胞群(包括Th1、Th2和Th17)的分化。
藉由維持FOXP3和CD25的表達，IL-2的體內平衡或背景水準對於Treg細胞的存活和功能很重要。Treg細胞天然存在於胸腺中，並且一旦與自身肽接觸就會被啟動。此外，Treg細胞可以藉由在與外周淋巴器官中的抗原相互作用時刺激常規CD4+ T細胞而產生。因為Treg細胞不產生IL-2，所以Treg細胞依賴於產生IL-2的細胞(如常規的T細胞)。此外，由於它們高表達IL-2Rα (CD25)，Treg能夠消耗和限制IL-2的全身濃度，確保免疫平衡的調控。在缺乏IL2的情況下，Treg細胞的數量減少，並且效應T細胞的數量增加，導致對自身免疫和炎症病症的易感性增強。因此，在低水準的IL-2下Treg細胞的獨特啟動(不啟動CD4+或CD8+ T細胞)使得IL-2作為自身免疫性和發炎性疾病的有希望的治療劑而得以發展。
由免疫系統的兩種類型產生IL-2突出了這種細胞因數在感染早期和二次適應性應答中的重要性。此外，IL-2在保護性免疫和免疫耐受中的雙重功能使得IL-2作為免疫刺激劑和免疫抑制劑，分別對於癌症和自體免疫疾病的看似相反的療法中成為潛在的治療劑。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體包括IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體以及偶聯IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的IL-2Rβγc配體接頭。IL-2Rβγc配體可以是IL-2R激動劑、部分IL-2R激動劑或IL-2R拮抗劑。因為IL-2Rβγc配體不與IL-2Rα結合，所以IL-2Rβγc配體不會優先啟動Treg，具有降低受體介導的清除率的潛力，並可以展現降低的毒性。
由本公開提供的串聯IL-2Rβγc配體包含藉由一個或多個串聯接頭偶聯在一起的兩個或更多個IL-2Rβγc配體。
由本公開提供的IL-2Rβγc構建體可以包含與另一分子偶聯的至少一個IL-2Rβγc配體，所述另一分子被稱為構建體伴侶，諸如例如，聚合物、蛋白質、Fc片段、免疫球蛋白片段或抗體。
由本公開提供的IL-2Rβγc構建體可以包含與另一分子偶聯的至少一個IL-2Rβ配體和至少一個IL-2Rγc，所述另一分子被稱為構建體伴侶，諸如聚合物、蛋白質、Fc片段、免疫球蛋白片段或抗體。
IL-2Rβγc配體可以包含IL-2Rβ配體。合適的IL-2Rβ配體的實例在美國申請公開第2020/0040034 A1號中公開，其藉由引用整體併入本文。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以以例如小於100μM、小於10μM、小於1μM、小於0.1μM或小於0.01µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合。
IL-2Rβ配體可以以例如1pM至100µM、10pM至10µM、100pM至1µM、0.001µM至1µM或0.01µM至1µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以以小於100μM、小於10μM、小於1μM、小於0.1μM或小於0.01的IC50 與哺乳動物IL-2Rβ亞基結合。
IL-2Rβ配體可以以例如1pM至100µM、10pM至10µM、100pM至1µM、0.001µM至1µM或0.01µM至1µM的IC50 與哺乳動物IL-2Rβ亞基結合。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以以例如小於100μM、小於10μM、小於1µM、小於0.1µM或小於0.01µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基和人IL-2Rγc亞基中的每一個結合。
IL-2β配體可以包含式(1)(SEQ ID NO：805)、式(1a)(SEQ ID NO：806)、式(1b)(SEQ ID NO：807)、式(1c)(SEQ ID NO：808)和/或式(1d)(SEQ ID NO：809)的氨基酸序列： –X211 –X212 –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –X225 –  (1) –X212 –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –            (1a) –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –                (1b) –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –                  (1c) –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–                  (1d) 其中，X211 可以選自氨基酸；X212 可以選自包含芳族側鏈的氨基酸；X213 可以選自包含大的疏水性側鏈或芳族側鏈的氨基酸；X214 可以為P；X215 可以選自包含芳族側鏈的氨基酸；X216 可以選自包含大的疏水性側鏈的氨基酸；X217 可以為A；X218 可以選自包含鹼性側鏈或極性/中性側鏈的氨基酸；X219 可以選自包含大的疏水性側鏈的氨基酸；X220 可以為G；X221 可以選自包含酸性側鏈或極性/中性側鏈的氨基酸； X222可以為L；X223 可以為D；X224 可以選自包含大的疏水性側鏈的氨基酸；並且X225 可以選自包含酸性側鏈的氨基酸。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自氨基酸；X212 可以選自F、H、W和Y；X213 可以選自F、H、I、L、M、V、W和Y；X214 可以為P；X215 可以選自F、H、W和Y；X216 可以選自F、I、L、M、V、W和Y；X217 可以為A；X218 可以選自K、R、H、N、Q、S、T和Y；X219 可以選自F、I、L、M、V、W和Y；X220 可以為G；X221 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X222 可以為L；X223 可以為D；X224 可以選自F、I、L、M、V、W和Y；和X225 可以選自D和E。
在式(1)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自氨基酸。
在式(1)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自H、K和R。
在式(1)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自H和R。
在式(1)-(1a)的IL-2Rβ配體中，X212 可以選自F、H、W和Y。
在式(1)-(1a)的IL-2Rβ配體中，X212 可以為W。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配體中，X213 可以選自F、H、I、L、M、V、W和Y。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配體中，X213 可以為L。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配體中，X213 可以為Y。
在式(1)-(1c)的IL-2Rβ配體中，X214 可以為P。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X215 可以選自F、H、W和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X215 可以為W。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X216 可以選自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X216 可以為M。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X217 可以為A。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X218 可以選自K、R、H、N、Q、S、T和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X218 可以選自K和R。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X218 可以為Q。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X219 可以選自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X219 可以為L。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X220 可以為G。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X221 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X221 可以為E。
在式(1)-(1d)的IL-2Rβ配體中，X222 可以為L。
在式(1)-(1c)的IL-2Rβ配體中，X223 可以為D。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配體中，X224 可以選自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(1)-(1b)的IL-2Rβ配體中，X224 可以為L。
在式(1)-(1a)的IL-2Rβ配體中，X225 可以選自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自H、K和R；X212 可以為W；X213 可以為Y；X214 可以為P；X215 可以為W；X216 可以為M；X217 可以為A；X218 可以選自N和Q；X219 可以選自L和V；X220 可以為G；X221 可以選自E、D和Q；X222 可以為L；X223 可以為D；X224 可以選自L和M；和X225 可以選自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自A、D、E、G、H、L、M、N、Q、R、S、T和V；X212 可以選自C、F、W和Y；X213 可以選自F、H、K、L、N、Q、R、S、W和Y；X214 可以為P；X215 可以選自W和Y；X216 可以選自F、I、K、L、M、R、S、T和V；X217 可以為A；X218 可以選自D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S和Y；X219 可以選自L、P和V；X220 可以選自G、H和W；X221 可以選自D、E和Q；X222 可以選自L和M；X223 可以為D；X224 可以選自L、M、Q和V；X225 可以選自A、D、E、F、G、H、L、N、Q、T和V。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自H和R；X212 可以選自F和W；X213 可以選自F、L、W和Y；X214 可以為P；X215 可以選自W和Y；X216 可以選自F、I、L、M和V；X217 可以為A；X218 可以選自D、E、H、K、N、Q和R；X219 可以選自L和V；X220 可以為G；X221 可以選自D、E和Q；X222 可以選自L和M；X223 可以為D；X224 可以選自L、M和V；和X225 可以選自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自H和R；X212 可以為W；X213 可以為Y；X214 可以為P；X215 可以為W；X216 可以為M；X217 可以為A；X218 可以為Q；X219 可以為L；X220 可以為G；X221 可以是Q；X222 可以為L；X223 可以為D；X224 可以為L；和X225 可以選自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配體中，X211可以選自H和R；X212 可以為W；X213 可以為L；X214 可以為P；X215 可以為W；X216 可以為M；X217 可以為A；X218 可以為Q；X219 可以為L；X220 可以為G；X221 可以為Q；X222 可以為L；X223 可以為D；X224 可以為L；和X225 可以選自D和E。
在式(1)、(1a)、(1b)、(1c)和/或(1d)的IL-2Rβ配體中，X211 可以選自H和R；X212 可以為W；X213 可以為Y；X214 可以為P；X215 可以為W；X216 可以為M；X217 可以為A；X218 可以選自K和R；X219 可以為L；X220 可以為G；X221 可以為Q；X222 可以為L；X223 可以為D；X224 可以為L；和X225 可以選自D和E。
IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：810-903中任一項的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 810 Q P C W L A Q V G D L C D L L W P G P L               
SEQ ID NO: 811 W L P C W I A R L G D L C D L E                           
SEQ ID NO: 812 W Y P C W M A L L G E L C D Q E                           
SEQ ID NO: 813 W Y P C Y R A R L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 814 W Q R E W R W F P C W M A K L G D M C D L D         
SEQ ID NO: 815 Q D E A V E W F P C W M A R L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 816 Y Y P C W M A R L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 817 S V V V N N W L P C W M A Q L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 818 W Y P C W L A Q L G D L C D L D                           
SEQ ID NO: 819 V M S P T R W L P C W I A K L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 820 W F P C W M A Q L G Q L C D L E                           
SEQ ID NO: 821 W R P C W R A Y L G E L C D L E A M P R A T         
SEQ ID NO: 822 I R S C S P C W S A D V G E L C D L E C E W         
SEQ ID NO: 823 S G H W Y P C W M A R L G E L C D M E E R A         
SEQ ID NO: 824 W Y P C W M A Q L G E L C D L Q T M G Y S H         
SEQ ID NO: 825 A G D W L P C W M A E L G E L C D L E G P T         
SEQ ID NO: 826 W L P C W I A S L G E L C D L D T G K R Q G         
SEQ ID NO: 827 W L P C W M A H L G Q L C D L D L P G K S M         
SEQ ID NO: 828 E G V F F P C W I A R L G E L C D L D H G L         
SEQ ID NO: 829 T G R W K P C W M A G L H E L C D L E G F R         
SEQ ID NO: 830 R K H F Y P C W M A Q L G E L C D L E G M P         
SEQ ID NO: 831 D I G Y Y P C W M A Q V G D L C D L D D E K         
SEQ ID NO: 832 D S D W W P C W M A Q L G E L C D L E D A R         
SEQ ID NO: 833 G E R W K P C W I A Q L G E L C D L D F N W         
SEQ ID NO: 834 W W P C W M A Q L G E M C D L E Y P Y V P G         
SEQ ID NO: 835 Q T K L E G W Y P C W M A Q L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 836 W G R K E Q W L P C W K A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 837 V P R A N A W H P C W M A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 838 G R Q Q K G W Y P C W L A Q L G E L C D M E         
SEQ ID NO: 839 W L N R H L F N P C W M A R L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 840 A Q V R R E W Y P C W M A Q L G E L C D L T         
SEQ ID NO: 841 E T E Q M S W Y P C W V A Q L W E L C D L D         
SEQ ID NO: 842 W L P C W L A K L G E L C D L E W L P C W            
SEQ ID NO: 843 E R R P D T W F P C W R A L V G E L C D L E         
SEQ ID NO: 844 W G R N R S W Y P C W M A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 845 Q D R R S P W Y P C W M A K L G E L C D L A         
SEQ ID NO: 846 T R R W Y P C Y L A K L G E L C D L F E G G T R   
SEQ ID NO: 847 S E Q W W P C W I A R L G E L C D L D R E L S E   
SEQ ID NO: 848 W Y P C W V A Q L G E I C D L E M T G P D S W Y P
SEQ ID NO: 849 Q D G W L P C W M A Q L G E L C D L E Y K R         
SEQ ID NO: 850 N R R W Y P C W M A Q L G E L C D L D S R P         
SEQ ID NO: 851 F Y P C W M A H L G E L C D L D G D T D S M         
SEQ ID NO: 852 K S N F F P C W I A Q L G Q L C D L E P E T         
SEQ ID NO: 853 F Y P C W M A N L G E L C D L D F L R E L N         
SEQ ID NO: 854 H A S W L P C W L A Q L G E L C D L E P N P         
SEQ ID NO: 855 N G A W Y P C W M A Q V G E L C D L E E R W         
SEQ ID NO: 856 W R R W Y P C W V A Q V G E L C D L E I E A         
SEQ ID NO: 857 R Q A W Y P C W M A Q L G E L C D L E A E L         
SEQ ID NO: 858 R Q R W Y P C W M A R L G E L C D L D E P T         
SEQ ID NO: 859 N N S R E G W F P C W L A K L G D L C D L D         
SEQ ID NO: 860 Y Y P C W M A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 861 W Y P C W L A Q L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 862 S W H A E T W Y P C W L A Q V G E L C D L D         
SEQ ID NO: 863 K M H K A V W L P C W M A Q V G E L C D L E         
SEQ ID NO: 864 D V L G D R W Y P C W I A K L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 865 W Y P C W M A Q L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 866 K L Q S W R W Y P C W M A Q L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 867 N E P E G G F Y P C W L A Q L G E L C D L H         
SEQ ID NO: 868 W Y P C W M A R L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 869 F Y P C W T A L L G E L C D L E P G P P A M         
SEQ ID NO: 870 W G T T W R W Y P C W M A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 871 A K G W D T W K P C W L A N L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 872 R D E S A G Y Y P C W I A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 873 W Y P C W I A K L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 874 W Y P C W I A Q L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 875 W Y P C W L A K L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 876 Q G P V R L W Y P C W M A Q L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 877 W Y P C W M A Q P G E L C D V D                           
SEQ ID NO: 878 W H P C W I A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 879 W Y P C W I A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 880 V R P M G V W Y P C W I A Q L G E L C D L V         
SEQ ID NO: 881 V P R W Y P C W I A Q L G E L C D L D S D D         
SEQ ID NO: 882 Y R G W L P C W R A K L G D L C D L G Q P M         
SEQ ID NO: 883 G E A W Y P C W L A R L G E L C D M D P R V         
SEQ ID NO: 884 W Y P C W M A Q L G E L C D L D E S T R L T         
SEQ ID NO: 885 I G S W W P C W M A Q L G E L C D L E P E L         
SEQ ID NO: 886 G T T W Y P C W L A Q L G E L C D L D V L E         
SEQ ID NO: 887 W W P C W M A Q L G D L C D L E E T S G G T         
SEQ ID NO: 888 W Y P C W M A Q L G E L C D L G P T E S N L         
SEQ ID NO: 889 W Y P C W M A N L G E L C D L E Y P S W A Q         
SEQ ID NO: 890 R G M C Y P C W F A R L G E L C D L E C D Q         
SEQ ID NO: 891 W Y P C W M A Q L G E L C D L D A G A R H L         
SEQ ID NO: 892 K S G W Y P C W M A K L G E L C D L E A Q P         
SEQ ID NO: 893 G P R F Y P C W I A Q L G E L C D L E D M G         
SEQ ID NO: 894 R V T W Y P C W M A Q L G E L C D L E E S V         
SEQ ID NO: 895 W L P C W M A Q L G D L C D L E Q Y V P L P         
SEQ ID NO: 896 Y L P C W M A H L G E L C D L D S P L K A R         
SEQ ID NO: 897 W Y P C W M A Q L G E L C D L D D H W P A M         
SEQ ID NO: 898 W Y P C W R A Q L G E L C D L D P P I A V E         
SEQ ID NO: 899 W Y P C W M A N L G E L C D L E A E R S P V         
SEQ ID NO: 900 R D Q Y Y P C W M A Q L G E L C D L D E V F         
SEQ ID NO: 901 W Y P C W M A Q L G D L C D L E K P V T E R         
SEQ ID NO: 902 W Y P C W I A R L G E L C D L E T S G G F P         
SEQ ID NO: 903 S G H C Y P C W L A G L G E L C D L N C G            
IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：805-903中任一項的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上被一個或多個氨基酸封端。例如，氨基酸序列可以包括末端甘氨酸和/或絲氨酸。例如，IL-2Rβ配體可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上包含–G–G–部分。
IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：805-903中任一項的氨基酸序列，其中每個氨基酸獨立地包含以下保守取代中的一個或多個：具有小的疏水性側鏈的氨基酸，其包含丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、絲氨酸(S)或蘇氨酸(T)；具有含羥基側鏈的氨基酸，其包含絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)或酪氨酸(Y)；具有酸性側鏈的氨基酸，其包含天冬氨酸(D)或谷氨酸(E)；具有極性中性側鏈的氨基酸，其包含組氨酸(H)、天冬醯胺(N)、穀氨醯胺(Q)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)或酪氨酸(Y)；具有鹼性側鏈的氨基酸，其包含精氨酸(R)、賴氨酸(K)或組氨酸(H)；和具有大的疏水性側鏈的氨基酸，其包含異白氨酸(I)、白氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、纈氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；具有芳族側鏈的氨基酸，其包含苯丙氨酸(F)、組氨酸(H)、色氨酸(W)或酪氨酸(Y)。
SEQ ID NO：805-903的IL-2Rβ配體可以以小於100μM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合。
IL-2Rβ配體可以包含與SEQ ID NO：805-903中任一項氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95的氨基酸序列相似性。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含SEQ ID NO ：805-903中任一項的截短的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：805-903中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：805-903中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上獨立地包含1至4個甘氨酸(G)。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：805-903中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：805-903中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸取代(如1-5個氨基酸取代)。氨基酸取代可以包含保守氨基酸取代。
IL-2Rβ配體可以包含與SEQ ID NO：805-903的任一氨基酸序列或SEQ ID NO：805-903的任一截短氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：805-903中任一項的IL-2Rβ配體可以以小於10μM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：805-903中任一項的IL-2Rβ配體、SEQ ID NO：805-903中任一項的截短的IL-2Rβ配體或SEQ ID NO：805-903中任一項的取代的IL-2Rβ配體可以以小於100µM或小於10µM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含式(2)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2575)、式(2a)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2576)、式(2b)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2577)、式(2c)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2578)或式(2d)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2579)： –X1 –X2 –X3 –C–X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –C–X12 –X13 –X14 –                (2) –X2 –X3 –C–X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –C–X12 –X13 –                      (2a) –X3 –C–X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –C–X12 –                   (2b) –C–X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –C–                        (2c) –X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –                 (2d) 其中， X1 可以選自E、F、G、I、L、R、S、W和Y； X2 可以選自F、H、K、L、N、Q、S、T、V、W和Y; X3 可以選自E、G、L、P和S； X4 可以選自E、F、G、H、Q、R、S、W和Y； X5 可以選自E、I、K、L、M、N、R、S、T和V； X6 可以選自A、D、G和Y； X7 可以選自A、C、D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S和T; X8 可以選自D、F、L、M、P、R和V； X9 可以選自G、R、W和Y； X10 可以選自A、D、E、Q、W和Y； X11 可以選自I、L、Q、V和Y； X12 可以選自D、E、G、H、V和Y； X13 可以選自D、F、H、I、K、L、M和V；以及 X14 可以選自A、D、E、G、H、K、L、N、Q、V和W。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X1 可以選自S、W和Y。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X1 可以為W。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X2 可以選自K、L、W和Y。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X3 可以為P。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X4 可以為W。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X5 可以選自I、L和M。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X6 可以為A。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X7 可以為Q。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X8 可以為L。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X9 可以為G。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X10 可以選自D和E。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X11 可以為L。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X12 可以選自D和E。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X13 可以為L。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，X14 可以選自D和E。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中，IL-2Rβ配體可以藉由如緊接在前十六(16)段中所限定的X1 至X14 的任意組合來限定。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中， X1 可以選自S、W和Y； X2 可以選自K、L、W和Y； X3 可以為P； X4 可以為W； X5 可以選自I、L和M； X6 可以為A； X7 可以為Q； X8 可以為L； X9 可以為G； X10 可以選自D和E； X11 可以為L； X12 可以選自D和E； X13 可以為L；以及 X14 可以選自D和E。
在式(2)-(2d)的IL-2Rβ配體中， X1 可以為W； X2 可以選自K、L、W和Y； X3 可以為P； X4 可以為W； X5 可以選自I、L和M； X6 可以為A； X7 可以為Q； X8 可以為L； X9 可以為G； X10 可以選自D和E； X11 可以為L； X12 可以選自D和E； X13 可以為L；和 X14 可以選自D和E。
IL-2Rβ配體可以包含SEQ ID NO：2580-2655中任一項的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 2580 V R A W Y P C W I A R L G E L C D L E V D            
SEQ ID NO: 2581 W F P C W M A Q L G E V C D L D                           
SEQ ID NO: 2582 W Y P C H M A K L R E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2583 S L P C W M A Q L G D L C E L H                           
SEQ ID NO: 2584 S N P C W M A Q L W E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2585 Y K P C W I A Q L G E L C E L E                           
SEQ ID NO: 2586 W Q P C W M A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2587 W K P C W L A Q L G D L C E M E                           
SEQ ID NO: 2588 W L P C W M A K L G D L C E L E                           
SEQ ID NO: 2589 W L P C W M A Q L G E L C V M E                           
SEQ ID NO: 2590 L H P C W M A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2591 S L P C W M A Q L G E L C D L V                           
SEQ ID NO: 2592 W K P C W M A G L G E L C E L D                           
SEQ ID NO: 2593 W W P C S S A E L G E I C D F D                           
SEQ ID NO: 2594 W Q P C W R A K L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2595 W S P C W I A T L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2596 W N P C W I A Q L G D L C D M V                           
SEQ ID NO: 2597 W L P C W L A H L G D I C D L Q                           
SEQ ID NO: 2598 W L S P P S Y L P C W M A Q L G E L C D L V        
SEQ ID NO: 2599 W D V H A I R N P C W L A K L G D L C D L D        
SEQ ID NO: 2600 G A G V L H R W P C W M A K L G D L C D L D        
SEQ ID NO: 2601 D T G R D G W K P C W M A L L G E L C E L E        
SEQ ID NO: 2602 E Q G M L G Y F P C W K A L L G D V C D L D        
SEQ ID NO: 2603 W R V T A S L Q P C W M A Q L G E L C D L N        
SEQ ID NO: 2604 G Q V V E T S L P C W E A Q L G E L C V L D        
SEQ ID NO: 2605 T V G Q F E W Y P C S T A Q L G E L C D L D        
SEQ ID NO: 2606 A L V G G T F Y P C Y V A H L G E L C D I E        
SEQ ID NO: 2607 I D R A D G W K P C W I A Q V G E L C V L E        
SEQ ID NO: 2608 Y R R E R V E F P C W L A Q L G E L C D K E        
SEQ ID NO: 2609 A V S H G N W L P C Y I A Q L G E L C D L D        
SEQ ID NO: 2610 I P K G E S W F P C W M A A M G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2611 W Y P C W I A Q L G E V C D L E K Q T G S V         
SEQ ID NO: 2612 W Y P C W M A H L G D V C D L E S F G Q T E         
SEQ ID NO: 2613 Y K P C Q M A Q L G E L C D L D V D N K A E         
SEQ ID NO: 2614 F K P C W I A N L G E L C D M D D E R S S E         
SEQ ID NO: 2615 W K P C W M A R L G E L C D I E D T K V N A         
SEQ ID NO: 2616 S L P C W I A R L G E L C D L D G Y D G E E         
SEQ ID NO: 2617 F Y P C W K A R L G E L C E L E E L R G Y Y         
SEQ ID NO: 2618 W K P C W I A D L G E L C D L A P A W H E Y         
SEQ ID NO: 2619 R L P C W R A Q L G D L C E L D W G L D M G         
SEQ ID NO: 2620 S K P C W M A Q L G E L C D L D V W N L Q M         
SEQ ID NO: 2621 G Y P C W L A Q L G D Y C D L D A G A P S W         
SEQ ID NO: 2622 S W P C W M A Q L G D L C D L D G S A G A S         
SEQ ID NO: 2623 W K P C W L A Q L G E L C D L E R P S T T S         
SEQ ID NO: 2624 W Y S C G K A Q L G E L C D L D V E S Q P G         
SEQ ID NO: 2625 Y V P C Y M A R L G E L C E L E A N R P G Q         
SEQ ID NO: 2626 S K P C W L A Q L G D L C D F D W T A A D H         
SEQ ID NO: 2627 W F P C W M A Q L G D L C E L E P D S V P A         
SEQ ID NO: 2628 W T P C W I A H L G D L C D L E P Q D D T D         
SEQ ID NO: 2629 W K P C F I A S L G E L C D L D Q G S V E V         
SEQ ID NO: 2630 W K P C W M A A L G E L C D L E R S V G K V         
SEQ ID NO: 2631 W K P C W R A Q L G E L C D L E L G P S E R         
SEQ ID NO: 2632 F F P C W M G Q L G D L C D L E V R S M Q K         
SEQ ID NO: 2633 Y W P C S M A S L G E L C D L E W Q G R L P         
SEQ ID NO: 2634 W Y P C Y M A S L G E L C D L Q S S I S P R         
SEQ ID NO: 2635 W Y P C W M A Q L G E L C D H E W P S Y G A         
SEQ ID NO: 2636 M G S W L P C W M A Q L G D L C D V E G G M         
SEQ ID NO: 2637 Q K G F L P C W R A Q L G Q L C D M E S Q Y         
SEQ ID NO: 2638 G S G W Q P C W M A D L G E L C D L D N E K         
SEQ ID NO: 2639 W R R W Y P C W M A Q L G E L C D L D Q W T         
SEQ ID NO: 2640 R R S W Y P C R I A Q L G E L C D L D P R V         
SEQ ID NO: 2641 A Y R I Y P C W K A Q L G E L C D L D N A D         
SEQ ID NO: 2642 Q R N S F P C W L A Q L G D L C D L G D W A         
SEQ ID NO: 2643 Q P A W L P C W L A Q L G E L C D L G T G A         
SEQ ID NO: 2644 S R F W Q P C W M A Q L G E L C H L D P Q M         
SEQ ID NO: 2645 Y L N F N P C W T A Q L G E L C D L A S G E         
SEQ ID NO: 2646 S T G W Y P C W I A E F G E L C D L V K P H         
SEQ ID NO: 2647 A H W S Q P C W T A Q L G E L C D L D M G D         
SEQ ID NO: 2648 H P V R Y P C W V A Q L G E L C D L E N G N         
SEQ ID NO: 2649 Q T G S Y P C W I A H L G E L C D L E G S A         
SEQ ID NO: 2650 T G W W Y P C W M A Q L G E L C D L Q Q T            
SEQ ID NO: 2651 D L W Q P C W M A R L G E L C D L K G                  
SEQ ID NO: 2652 M G T G W Q N Y C R Y A Q L G E L C L L               
SEQ ID NO: 2653 W Y P C G V A Q P G D L C D L E                           
SEQ ID NO: 2654 M L G E W L C E M D Q L G Y L C Y L D H G D         
SEQ ID NO: 2655 W D G W E C G M D H D G W V C E F W G E               
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含SEQ ID NO：2575-2655中任一項的截短的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：2575-2655中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：2575-2655中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端獨立地包含1至4個甘氨酸。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：2575-2655中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：2575-2655中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸取代(如1至5個氨基酸取代)。氨基酸取代可以包含保守性氨基酸取代。
IL-2Rβ配體可以包含具有與SEQ ID NO：2575-2655中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：2575-2655中任一項的截短氨基酸序列的大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：2575-2655中任一項的IL-2Rβ配體、SEQ ID NO：2575-2655中任一項的截短的IL-2Rβ配體或SEQ ID NO：2575-2655中任一項的取代的IL-2Rβ配體可以以小於100µM或小於10µM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合，並且以小於100µM或小於10µM的IC50 與cyIL-2Rβ亞基結合。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：2580-2655中任一項的IL-2Rβ配體以小於100μM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含式(3)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2661)、式(3a)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2662)、式(3b)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2663)、式(3c)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2664)、式(3d)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2665)、式(3e)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2666)： –X1 –X2 –X3 –X4 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–X13 –X14 –X15 –X16 –X17 –           (3) –X2 –X3 –X4 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–X13 –X14 –X15 –               (3a) –X3 –X4 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–X13 –X14 –            (3b) –X4 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–X13 –                  (3c) –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–                               (3d) –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –                                (3e) 其中， X1 可以選自A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y； X2 可以選自C、D、F、G、I、L、M、R、S、V、W和Y； X3 可以選自A、D、F、H、K、L、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y； X4 可以選自A、D、F、L、N、P、Q、S、T和W； X5 可以選自D、E、F、G、L、M、Q、R、S、W和Y； X6 可以選自A、F、I、K、L、M、N、Q、R、S、V、W和Y； X7 可以選自A、D、E、I、S、T、V和W； X8 可以選自A、E、F、G、H、K、L、N、P、Q、R、S、V、W和Y； X9 可以選自A、E、I、L、M、P、Q、V和W； X10 可以選自F、G和V； X11 可以選自D、E、N、P、Q、S、V、W和Y； X12 可以選自D、F、H、I、L、M、Q、S、T、V和W； X13 可以選自A、D、E、L、N、Q、S、T和V； X14 可以選自A、E、F、I、K、L、M、Q、R、S、T、V和W; X15 可以選自A、D、E、F、G、I、K、L、N、P、Q、R、T、V、W和Y; X16 可以選自A、C、D、E、F、G、H、I、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；以及 X17 可以選自A、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X1 可以選自A、D、E、G、R、S、T、V和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X1 可以選自G、R和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X2 可以選自F、L、S、V、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X2 可以選自F和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X3 可以選自F、H、K、L、N、Q、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X3 可以選自F、H、L、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X4 可以選自D和P。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X5 可以選自F、L、S、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X5 可以選自F、W和Y。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X6 可以選自F、I、K、L、M、R和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X6 可以選自I、L和M。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X7 可以為A。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X8 可以選自H、K、L、Q、R和S。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X8 可以為Q。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X9 可以選自I、L和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X9 可以選自L和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X10 可以為G。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X11 可以選自D和E。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X11 可以為E。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X12 可以選自L和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X12 可以為L。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X13 可以選自D和E。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X13 可以為D。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X14 可以選自F、I、L和M。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X14 可以為L。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X15 可以選自D、E、F、G和V。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X15 可以選自D、E、F和G。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X16 可以選自D、E、G、K、P、V和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X16 可以為G。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X17 可以選自A、E、G、P、Q、S、T、V和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，X17 可以為G。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中，IL-2Rb配體可以由如緊接在前三十一(31)段中所限定的X1 至X17 的任意組合來限定。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中， X1 可以選自A、D、E、G、R、S、T、V和W； X2 可以選自F、L、S、V、W和Y； X3 可以選自F、H、K、L、N、Q、W和Y； X4 可以選自D和P； X5 可以選自F、L、S、W和Y； X6 可以選自F、I、K、L、M、R和V； X7 可以為A； X8 可以選自H、K、L、Q、R和S； X9 可以選自I、L和V； X10 可以為G； X11 可以選自D和E； X12 可以選自L和V； X13 可以選自D和E； X14 可以選自F、I、L和M； X15 可以選自D、E、F、G和V； X16 可以選自D、E、G、K、P、V和W； X17 可以選自A、E、G、P、Q、S、T、V和W。
在式(3)-(3e)的IL-2Rβ配體中， X1 可以選自G、R和W； X2 可以選自F和W； X3 可以選自F、H、L、W和Y； X4 可以選自D和P； X5 可以選自F、W和Y； X6 可以選自I、L和M； X7 可以為A； X8 可以為Q； X9 可以選自L和V； X10 可以為G； X11 可以為E； X12 可以為L； X13 可以為D； X14 可以為L； X15 可以選自D、E、F和G； X16 可以為G；以及 X17 可以為G。
IL-2Rβ配體可以包含SEQ ID NO：2667-2891中任一項的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 2667 W Y P C W I A Q L G E L C D L D A K G Q R R      
SEQ ID NO: 2668 T N N F Y P C W L A K L G D L C D F D D L N      
SEQ ID NO: 2669 W Y P C W I A R V G E L C D L E E G P V N R      
SEQ ID NO: 2670 A V E F Y P C W L A R I G E L C D L V E P         
SEQ ID NO: 2671 W Y P C W I A H L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2672 W Y P C W I A R V G E L C D M E                        
SEQ ID NO: 2673 R R E W Y P C W I A Q V G E L C D L P L I         
SEQ ID NO: 2674 R W P W Y P C E I A R I G E L C D L E Q A N      
SEQ ID NO: 2675 F G A F Y P C W K A Q L G E L C D L E P V T      
SEQ ID NO: 2676 H G R W F P C W M A Q V G D L C D L E H S N      
SEQ ID NO: 2677 W Y P C W L A K L G E L C D L D R A E A L P      
SEQ ID NO: 2678 V W F P C W F A Q L G D L C D L D Q D P            
SEQ ID NO: 2679 E T L G S V W Y P C W I A S I G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2680 W Y S C W I A Q L G E L C D L D D M G D R V      
SEQ ID NO: 2681 W F P C W L A Q L G E L C D K E                        
SEQ ID NO: 2682 W Y P C W I A Q L G E L C D L V                        
SEQ ID NO: 2683 S H L W F P C W M A Q L G E L C D L E G G P      
SEQ ID NO: 2684 R R W L P C W M A H V G E L C D L E L G N         
SEQ ID NO: 2685 Y W C W F A R V G E L C D L D D G G V P S         
SEQ ID NO: 2686 W Y S C W I A Q I G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2687 M N P V G T F Y P C W I A K L G E L C D L Q      
SEQ ID NO: 2688 H G G V I G W Y P C W M A K V G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2689 W Y P C S I A L L G E L C D L E S V H E K S      
SEQ ID NO: 2690 E Q R N R Q W W P C W L A R L G D L C D L D      
SEQ ID NO: 2691 W Y P C W L A Q L G E L C D L D                        
SEQ ID NO: 2692 W L P C W M A H L G D L C D L E                        
SEQ ID NO: 2693 R P S W A P C W L A Q V G E L C D L D H P E      
SEQ ID NO: 2694 E S K E P A F W P C W M A Q L G D L C D L E      
SEQ ID NO: 2695 R S L R E S W F P C W M A K L G D L C D L E      
SEQ ID NO: 2696 W H P C W L A R V G D L C D L D                        
SEQ ID NO: 2697 S R S A G E Y Y P C W L A Q L G E L C D L A      
SEQ ID NO: 2698 R Q V P K Q W Y P C W M A A L G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2699 W Y P C W L A H L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2700 Q V M R L W Y P C W M A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2701 W Y P C W M A Q L G E L C D L D E A P V Q P      
SEQ ID NO: 2702 R D I W W P C W V A Q L G E L C D L D D P Q      
SEQ ID NO: 2703 S A T W Y P C F L A N L G E L C D L E Q E N      
SEQ ID NO: 2704 Y A E W Y P C W M A R V G E V C D L E V T P      
SEQ ID NO: 2705 R S G D K A F F P C W L A Q L G D L C D L D      
SEQ ID NO: 2706 W Y P C W M A Q L G E L C D M D                        
SEQ ID NO: 2707 R V S Y P C W L A R L G E L C D M D L E E         
SEQ ID NO: 2708 T E S W Y P C W L A N L G D L C D L E W S A      
SEQ ID NO: 2709 W L P C W M A D V G D L C D L D                        
SEQ ID NO: 2710 W H P C W M A R L G E L C D L D                        
SEQ ID NO: 2711 Q G T K W H W N P C W M A Q L G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2712 K N G P K S W Y P C W M A Q V G D L C D L D      
SEQ ID NO: 2713 S G T G P A W Y P C F L A S L G Q L C D L E      
SEQ ID NO: 2714 W Y P C W M A R M G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2715 W L P C W R A Q L G Q L C D L D                        
SEQ ID NO: 2716 L F P C W L A Q L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2717 R Y P C W I A Q L G E L C D L D                        
SEQ ID NO: 2718 W H P C W I A H L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2719 M Y P C W I A H L G E L C D L D                        
SEQ ID NO: 2720 W Y P C S I A S L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2721 W L P C Y M A Q L G D L C D L E                        
SEQ ID NO: 2722 W H P C W M A Q V G E V C D L D                        
SEQ ID NO: 2723 W Y P C W L A S L G E V C D L E                        
SEQ ID NO: 2724 W W P C S I A R L G Q L C D L D                        
SEQ ID NO: 2725 W Y P C W L A H L G E L C D L A                        
SEQ ID NO: 2726 W Y P C W L A Q L G E L C D A E                        
SEQ ID NO: 2727 W K P C W M A L L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2728 R Y P C W R A K L G E L C D L D                        
SEQ ID NO: 2729 E E Q S R G F L P C W M A L L G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2730 L G S K R Q W Y P C W V A H L G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2731 E S E G R G W Y P C W N A L L G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2732 R W T Q A Q W Y P C W L A Q L G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2733 L H A G R W N P C W L A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2734 L S S K G W Y P C W K A R L G D L C D L E         
SEQ ID NO: 2735 D M F T H R W Y P C S M A K L G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2736 M T D R A F W N P C W V A R L G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2737 N V T Y T Q W F P C W L A R L G E L C D L V      
SEQ ID NO: 2738 V R T R I W Y P C W S A Q L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2739 A M A R R Y L P C W I A K L G E L C E L D         
SEQ ID NO: 2740 A R G E Y R W F P C W M A R L G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2741 Y L E R S R W Y P C F I A Q L G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2742 F R V S R D W F P C W M A Q L G E V C D L E      
SEQ ID NO: 2743 I E R A W E W R P C W L A S V G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2744 V A S E R F Y P C W I A R L G E L C D V E         
SEQ ID NO: 2745 W Y P C W I A K L G E V C D L D Q G T T R Q      
SEQ ID NO: 2746 W Y P C W L A H L G E L C D L D W K G R N D      
SEQ ID NO: 2747 W Y P C W R A Q L G E L C D L V D L G S H L      
SEQ ID NO: 2748 W S P C W M A S L G D L C D L E E T R Q T E      
SEQ ID NO: 2749 W T P C W I A Q L G E L C D L E G R H G T V      
SEQ ID NO: 2750 L P C W I A Q L G D L C D L E P E P S P E         
SEQ ID NO: 2751 F Y P C W A A H L G D L C D L E Y Q E A G P      
SEQ ID NO: 2752 W L P C W L A P L G D L C D M D M S A V M N      
SEQ ID NO: 2753 W R P C W M A H L G D L C D L E M A N E N P      
SEQ ID NO: 2754 W Y P C W L A Q L G E V C D L D D G G G V F      
SEQ ID NO: 2755 W W P C W L A Q L G E L C D L E V N G S L I      
SEQ ID NO: 2756 T E M W Y P C W M A Y Q G E L C D L D M T Y      
SEQ ID NO: 2757 A R T W W P C W R A K L G E L C D L V V P E      
SEQ ID NO: 2758 H Q G F Y S C R L A R L G E L C D L D T G W      
SEQ ID NO: 2759 V D E F Y P C S M A G L G E L C D L E R Q N      
SEQ ID NO: 2760 A W D W Y P C S V A A L G E I C D L D I Q D      
SEQ ID NO: 2761 R P P W Y P C W M A R L G E V C D M D I M L      
SEQ ID NO: 2762 S Q R W Y P C W V A H L G E L C D L E G V V      
SEQ ID NO: 2763 K G S W Q P C W F A K L G E L C D L H P T S      
SEQ ID NO: 2764 Q T W Y L P C W M A K L G E L C D L G E R D      
SEQ ID NO: 2765 E P R W Y P C W M A Q M G E L C D M E M S D      
SEQ ID NO: 2766 W G G R Y W C W M A K L G D L C D L E D E W      
SEQ ID NO: 2767 W W P C W I A Q V G E L C D L D G P G R P T      
SEQ ID NO: 2768 R L V Y D C L F A Q V G D L C E V I S               
SEQ ID NO: 2769 W R I L W M Q Q C W R S H V V N Q C A L            
SEQ ID NO: 2770 W Y P C W I A Q V G E L C D L D E V S H G R      
SEQ ID NO: 2771 T G E W W P C W V A E V G E L C D L E R G P      
SEQ ID NO: 2772 A R T Q G W Y D C L F A Q V G E L C D L            
SEQ ID NO: 2773 F H P C W R A L L G E L C D L E T A L G P S      
SEQ ID NO: 2774 L Q I R K L W A C R I D L V G P F C L L            
SEQ ID NO: 2775 A E Y S G R Y D C Y I A K V G E L C D I            
SEQ ID NO: 2776 S W R F L W Q D C G R A H V G E L C D L            
SEQ ID NO: 2777 N R W W H P C W M A R V G E L C D L E P D A      
SEQ ID NO: 2778 W W P C W V A K L G E L C D L E G D A S R V      
SEQ ID NO: 2779 W Y P C E F A Q L G E L C D L L P F P Y P A      
SEQ ID NO: 2780 S Y M H D C F M A Q V G D L C D R F I S            
SEQ ID NO: 2781 W W P C W I A Q V G E L C D L E E E S R E S      
SEQ ID NO: 2782 K W A W N P C Y I A R L G E L C D L V E P E      
SEQ ID NO: 2783 W W P C W I A D L G E L C D L E G P P R G R      
SEQ ID NO: 2784 P T L I T W Y D C L F A E V G E L C D M            
SEQ ID NO: 2785 E I S N W F L D C M F A D V G D L C D L            
SEQ ID NO: 2786 A Q V W Y P C W L A K V G E L C D L D Q W N      
SEQ ID NO: 2787 F G G K M D W Y P C W I A N L G E L C D L K      
SEQ ID NO: 2788 W F P C W M A K V G D L C D V D E H Q D P S      
SEQ ID NO: 2789 M G D S S S W F P C W M A Q L G E L C D M E      
SEQ ID NO: 2790 M F R Y Y P C W I A S I G E L C D L E W G V      
SEQ ID NO: 2791 E R R W Y P C W L A S V G E L C D L D M G D      
SEQ ID NO: 2792 W Y P C W V A Q L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2793 R W D Y W P C Y I A Q V G E L C D L E V Y E      
SEQ ID NO: 2794 S L A H R S W Y P C W L A Q V G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2795 Q N A S K G W Y P C W I A H V G E L C D W D      
SEQ ID NO: 2796 H R W Y P C W L A H L G E L C D L D P M S         
SEQ ID NO: 2797 F Y P C W I A F V G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2798 E G H W Y P C W I A Q L G E L C D L D W            
SEQ ID NO: 2799 W T G W S A F Y P C S I A N L G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2800 W E K L Q N W Y P C W I A Q M G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2801 T N G V L D W W P C W M A Q V G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2802 W Y P C W V A K L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2803 A Y Y P C E L A Q L G E L C D L Y N I               
SEQ ID NO: 2804 W Y P C W M A H L G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2805 N D H T A W W P C Y F A Q V G D L C D L V         
SEQ ID NO: 2806 W W P C E I A Q I G E L C D L E W V R H A E      
SEQ ID NO: 2807 W W P C D F A Q I G E L C D L G P R F T G E      
SEQ ID NO: 2808 R D W W L P C E F A L I G E L C D L E R S W      
SEQ ID NO: 2809 M R T T F W Y D C Y I A Q V G E L C D F            
SEQ ID NO: 2810 S W H A E T W Y P C W L A Q V G E L C D L D      
SEQ ID NO: 2811 E W F H D C F L A K V G D L C D L F L W            
SEQ ID NO: 2812 S G K T Q M W N P C Y V A K V G E L C D L V      
SEQ ID NO: 2813 D K A G P N F Y P C W L A H V G E L C D Q A      
SEQ ID NO: 2814 A G F R G R W W P C E Y A Q V G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2815 W F P C W L A K V G E L C D R D D L A G P S      
SEQ ID NO: 2816 W W P C E W A R I G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2817 K G S S W F P C Y F A Q V G D L C D L Y            
SEQ ID NO: 2818 W Y P C W L A Q V G E L C D R E                        
SEQ ID NO: 2819 R G V Y F P C W L A K V G D L C D S D E F         
SEQ ID NO: 2820 R A W W W P C E L A Q V G E L C D L E P S S      
SEQ ID NO: 2821 W Y P C W L A K V G E L C D Q E                        
SEQ ID NO: 2822 R Y V P D C L K A Q V G D L C D F F A W            
SEQ ID NO: 2823 W W P C Y L A Q I G E L C D L V                        
SEQ ID NO: 2824 W Y P C W M A K V G E L C D M E                        
SEQ ID NO: 2825 Q I T D S G W Y P C W V A K V G E L C D M D      
SEQ ID NO: 2826 Y R W W Y P C D I A Q V G E L C D L D Y L L      
SEQ ID NO: 2827 C Y M H D C F M A Q V G D L C D R F I S            
SEQ ID NO: 2828 W L P C W I A K I G D L C D L D                        
SEQ ID NO: 2829 S R V W H P C W L A R V G E L C D L E V S D      
SEQ ID NO: 2830 W E H E F T W Y P C W I A Q V G E L C D M D      
SEQ ID NO: 2818 H R G W V G W Y P C E Y A L P G Q L C D L E      
SEQ ID NO: 2832 W Y P C W L A Q L G E L C D Q D W D T P S         
SEQ ID NO: 2833 R V R R H S W W P C E I A V V G E L C D L E      
SEQ ID NO: 2834 D G W W P C W I A Q V G E L C D L E D P V         
SEQ ID NO: 2835 L P F Q D C Y I A Q V G E L C D L P G T            
SEQ ID NO: 2836 R W M F D C L F A R V G E L C D I R P W            
SEQ ID NO: 2837 G G Y Y D C L I A E V G E L C D M P G Q            
SEQ ID NO: 2838 V V C Y A C D I A H V G E L C D L T C R            
SEQ ID NO: 2839 T P W Y D C Y I A N V G D L C D F A S A            
SEQ ID NO: 2840 L E S L D C F F A R I G D L C E I W D V            
SEQ ID NO: 2841 W Q I F D C Y L A Q V G E L C D L Q D T            
SEQ ID NO: 2842 G R Y P D C Y I A H V G E L C E F Y D G            
SEQ ID NO: 2843 F G D D F C R F I P L F E M C T T D V E            
SEQ ID NO: 2844 L V Y Y D C Y M A Q V G E L C D L P S L            
SEQ ID NO: 2845 V S R Y D C Y I A K V G E L C D F F E F            
SEQ ID NO: 2846 V T V Q D C Y F A R V G D L C D L F S P            
SEQ ID NO: 2847 W E W Y D C L M A Q V G E L C D F E G N            
SEQ ID NO: 2848 W A F Y D C R N A Q V G D F C D L W E F            
SEQ ID NO: 2849 S M D Q D C Y F A Q V G E L C V L F N Q            
SEQ ID NO: 2850 G G Y Y D C L I A E V G E L C D I Y G R            
SEQ ID NO: 2851 S N W H D C L F A Q V G E L C D L P G S            
SEQ ID NO: 2852 Y D C Y I A Q V G E L C D I                              
SEQ ID NO: 2853 S W L S D L Q D C Y I A Q V G D L C Q I            
SEQ ID NO: 2854                                                                        
SEQ ID NO: 2855 R L A S D W W D C Y I A K V G E L C D F            
SEQ ID NO: 2856 R L L R D C F L A K V G D L C E L F V W            
SEQ ID NO: 2857 Q W F H N C F L A R V G D T C D L F L W            
SEQ ID NO: 2858 E L L V D C F K V K V G E L C D L F F G            
SEQ ID NO: 2859 R Y V H D C F I A Q V G D L C D L F L H            
SEQ ID NO: 2860 K W V H D C F L A K V G D V C D L F V V            
SEQ ID NO: 2861 R S L V D C F L V K V G D L C D F F N W            
SEQ ID NO: 2862 R Y L Y D C F L A L V G D L C V K F H Q            
SEQ ID NO: 2863 A H F Y D C F W A K A G E L C D L W P S            
SEQ ID NO: 2864 K W F H D C F L A K V G D L C D L F L W            
SEQ ID NO: 2865 W G K L V R D C F L A K V G D L C D L F L W      
SEQ ID NO: 2866 T H V H D C F L A K V G D L C D L F I V            
SEQ ID NO: 2867 H W V R D C F L A K V G E L C D L F L W            
SEQ ID NO: 2868 H G I L D C Y F A K V G E L C E L F D W            
SEQ ID NO: 2869 Q F V K D C F L A Q V G D L C E L F L W            
SEQ ID NO: 2870 D W L P D C Y F A N V G D L C S L F G S            
SEQ ID NO: 2871 H W F L D C F L A N V G D L C D F F G N            
SEQ ID NO: 2872 N W L P D C L F A N V G E L C D I F P W            
SEQ ID NO: 2873 E I F K D C L F A N V G E L C E I F P S            
SEQ ID NO: 2874 N W F H D C F L A R V G D L C D L F L D            
SEQ ID NO: 2875 Y S F K D C Y F A K V G E L C E L F L W            
SEQ ID NO: 2876 E F F H D C Y V A R V G E L C D L F G W            
SEQ ID NO: 2877 S Y L C W L D H W G V I C E E D                        
SEQ ID NO: 2878 W Y T C M M D W L G V H C E L E                        
SEQ ID NO: 2879 Q M V W W D C W S T Q E G P V C E L N W T A      
SEQ ID NO: 2880 Y W C S V W Q L G S V C E M N N E E T Q            
SEQ ID NO: 2881 W T C W L T Q L G Y D C N L D V V D Q S L G      
SEQ ID NO: 2882 D G S W Y T C W F T Q L G E W C E Q D D A K      
SEQ ID NO: 2883 E F W G W Q C W Q E P L G W S C D L E W M D      
SEQ ID NO: 2884 W Y P C W I A R V G E L C D L E                        
SEQ ID NO: 2885 W Y P C W L A Q V G E L C D L D                        
SEQ ID NO: 2886 L V D C F K V K V G E L C D L F                        
SEQ ID NO: 2887 V H D C F I A Q V G D L C D L F                        
SEQ ID NO: 2888 W P C W A A L G E L C D L D                              
SEQ ID NO: 2889 W P C W A L G E L C D L D                                 
SEQ ID NO: 2890 W P C W L G E L C D L D                                    
SEQ ID NO: 2891 W Y P C W G E L C D L D                                    
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含SEQ ID NO：2661-2891中任一項的截短的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：2661-2891中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：2661-2891中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上獨立地包含1至4個甘氨酸(G)。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：2661-2891中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：2661-2891中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸取代(如1-5個氨基酸取代)。氨基酸取代可以包含保守性氨基酸取代。
IL-2Rβ配體可以包含與SEQ ID NO：2661-2891中任一項氨基酸序列或SEQ ID NO：2661-2891中任一項截短的氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：2661-2891中任一項的IL-2Rβ配體、SEQ ID NO：2661-2891中任一項的截短的IL-2Rβ配體或SEQ ID NO：2661-2891中任一項的取代的IL-2Rβ配體可以以小於100µM或小於10µM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合，並以小於100µM或小於10µM的IC50 與cynoIL-2Rβ亞基結合。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：2667-2891中任一項的IL-2Rβ配體以小於100μM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含式(4)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2900)、式(4a)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2901)、式(4b)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2902)、式(4c)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2903)、式(4d)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2904)、式(4e)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2905)或式(4f)的氨基酸序列(SEQ ID NO：2906)： –X1 –X2 –X3 –X4 –X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –X15 –X16 –X17 –X18 –           (4) –X2 –X3 –X4 –X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –X15 –X16 –X17 –         (4a) –X3 –X4 –X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –X15 –X16 –              (4b) –X4 – X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –X15 –                  (4c) –X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –                (4d) –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–                              (4e) –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –                               (4f) 其中， X1 可以選自A、D、E、H、K、N、Q、R和T； X2 可以選自F、G、H、I、L、S、W和Y； X3 可以選自F、I、L和V； X4 可以選自H、K、L、P、R、V和Y； X5 可以為D； X6 可以選自F、L和Y； X7 可以選自F、I、K、L、V和W； X8 可以選自A和V； X9 可以選自K、L、N、Q和R； X10 可以選自A和V； X11 可以為G； X12 可以選自D和E； X13 可以選自L、T和V； X14 可以選自D、E、S和V； X15 可以選自F、I、K和L； X16 可以選自F和W； X17 可以選自D、F、G、I、L、N、P、V；以及 X18 可以選自D、G、H、N、Q、S、V和W。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X2 可以為W。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X6 可以為F。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X7 可以選自F和L
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X8 可以為A。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X9 可以為K。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X10 可以為V。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X13 可以為L。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X14 可以為D。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X15 可以為L。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X16 可以為F。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X17 可以為L。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，X18 可以為W。
在式(4)-(4e)的IL-2Rβ配體中，IL-2Rb配體可以由如緊接在前十二(12)段[273]-[286]中所限定的X1 至X18 的任意組合來限定。
IL-2Rβ配體可以包含SEQ ID NO：2907-2926中任一項的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 2907 A F F H D C F F A K A G D L C D F F D D         
SEQ ID NO: 2908 D F F H D C F F A K V G D L C D F F F G         
SEQ ID NO: 2909 E G F H D C F F A K V G D L C D I F G H         
SEQ ID NO: 2910 E H F H D C F F A K V G D L C D I F G N         
SEQ ID NO: 2911 E H F H D C F F A K V G D L C D K F G Q         
SEQ ID NO: 2912 H I F H D C F I A K V G D L C D L F H S         
SEQ ID NO: 2913 H L F H D C F K A K V G D L C D L F I S         
SEQ ID NO: 2914 H L F K D C F L A K V G D L C D L F L S         
SEQ ID NO: 2915 W G K S I K D C F L A K V G D L C D L F L V   
SEQ ID NO: 2916 K S L K D C F L A K V G D L C D L F L V         
SEQ ID NO: 2917 K W L L D C F L A L V G D L C D L F L W         
SEQ ID NO: 2918 N W L L D C F L A N V G D L C D L F L W         
SEQ ID NO: 2919 N W L P D C F L A N V G E L C D L F L W         
SEQ ID NO: 2920 Q W L P D C F L A N V G E L C D L F L W         
SEQ ID NO: 2921 Q W V R D C L L A N V G E L C E L F L W         
SEQ ID NO: 2922 R W V R D C L L A Q V G E L C E L F N W         
SEQ ID NO: 2923 R W V V D C Y L A Q V G E L C E L F P W         
SEQ ID NO: 2924 R W V V D C Y L A R V G E L C E L F P W         
SEQ ID NO: 2925 T Y V Y D C Y V V R V G E T C S L F P W         
SEQ ID NO: 2926 Y Y V Y N C Y W V R V G E V C V L W V W         
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含SEQ ID NO：2900-2926中任一項的截短的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：2900-2926中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：2900-2926中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上獨立地包含1至4個甘氨酸(G)。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：2900-2926中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：2900-2926中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸取代(如1-5個氨基酸取代)。氨基酸取代可以包含保守性氨基酸取代。
IL-2Rβ配體可以包含與SEQ ID NO：2900-2926中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：2900-2926中任一項的截短氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
如使用噬菌體ELISA競爭測定法所確定的，SEQ ID NO：2900-2926中任一項的IL-2Rβ配體、SEQ ID NO：2900-2926中任一項的截短的IL-2Rβ配體或SEQ ID NO：2900-2926中任一項的取代的IL-2Rβ配體可以以小於100µM或小於10µM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
如使用噬菌體ELISA競爭測定法所確定的，SEQ ID NO：2907-2926中任一項的IL-2Rβ配體以小於100μM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
如使用噬菌體ELISA競爭測定法所確定的，具有SEQ ID NO：2575-2655、2661-2891、2900-2986和2929-2939的某些IL-2Rβ配體以小於100µM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合，並以小於100µM的IC50 與cyno-IL-2Rβ亞基結合。
IL-2Rβ配體可以具有SEQ ID NO：911-930、2929-2939、9301和9308中任一項的氨基酸序列：
SEQ ID NO: 911 G G Y D C R I A Q V G E L C D L G G                          
SEQ ID NO: 912 G V Q Y K K C W M A Q L G D L C E L D P S G G           
SEQ ID NO: 913 G G Y P C W M A Q L G E L C D L G G R R                    
SEQ ID NO: 9301 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G                    
SEQ ID NO: 915 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G R R              
SEQ ID NO: 916 G G Y P C H M A Q L G E L C D L W S W G D I G G R R  
SEQ ID NO: 917 F Y P C W T A L L G E L C D L E P G P P A M G G        
SEQ ID NO: 918 W R R W Y P C W V A Q V G E L C D L E I E A G G        
SEQ ID NO: 919 R Q R W Y P C W M A R L G E L C D L D E P T G G        
SEQ ID NO: 920 W Y P C W M A Q L G D L C D L E K P V T E R G G        
SEQ ID NO: 9308 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D                          
SEQ ID NO: 921 G G F Y P C W T A L L G E L C D L E P G P P A M G G  
SEQ ID NO: 922 G G W G T T W R W Y P C W M A Q L G E L C D L E G G  
SEQ ID NO: 923 G G D V L G D R W Y P C W I A K G E L C D L D G G     
SEQ ID NO: 924 G G W P C W I A Q L G E L C D L D G G                       
SEQ ID NO: 925 G G W Y P C W L A K L G E L C D L D G G                    
SEQ ID NO: 926 G G W Y P C W M A Q L G D L C D L E K P V T E R G G  
SEQ ID NO: 927 G G W R R W Y P C W V A Q V G E L C D L E I E A G G  
SEQ ID NO: 928 G G R Q R W Y P C W M A R L G E L C D L D E P T G G  
SEQ ID NO: 929 G G V Q Y K K C W M A Q L G D L C E L D P S G G        
SEQ ID NO: 930 G G Y P C H M A Q L G E L C D L W S W G D I G G        
SEQ ID NO: 2930 G G W Y P C W I A R V G E L C D L E E G P V N R   
SEQ ID NO: 2931 G G A V E F Y P C W L A R I G E L C D L V E P      
SEQ ID NO: 2932 G G W Y P C W I A R V G E L C D M E                     
SEQ ID NO: 2933 G G E W F H D C F L A K V G D L C D L F L G G E W
SEQ ID NO: 2934 G G R Y V H D C F I A Q V G D L C D L F L H         
SEQ ID NO: 2935 G G R S L V D C F L V K V G D L C D F F N W         
SEQ ID NO: 2936 G G W Y P C W I A R V G E L C D L E                     
SEQ ID NO: 2937 G G W Y P C W L A Q V G E L C D L D                     
SEQ ID NO: 2938 G G L V D C F K V K V G E L C D L F                     
SEQ ID NO: 2939 G G W Y S C W M A Q L G E L C D L D                     
如表1中所示的，IL-2Rβ配體可以選自IL-2Rβ配體(BL1)-(BL12)中的任一個，並且可以具有SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875或901。 表1. IL-2Rβ配體。
(BL1) SEQ ID NO: 671 V Q Y K K C W M A Q L G D L C E L D P S         
(BL2) SEQ ID NO: 664 Y P C H M A Q L G E L C D L W S W G D I         
(BL3) SEQ ID NO: 612 Y P C W M A Q L G E L C D L                           
(BL4) SEQ ID NO: 865 W Y P C W M A Q L G E L C D L D                     
(BL5) SEQ ID NO: 870 W G T T W R W Y P C W M A Q L G E L C D L E   
(BL6) SEQ ID NO: 869 F Y P C W T A L L G E L C D L E P G P P A M   
(BL7) SEQ ID NO: 856 W R R W Y P C W V A Q V G E L C D L E I E A   
(BL8) SEQ ID NO: 858 R Q R W Y P C W M A R L G E L C D L D E P T   
(BL9) SEQ ID NO: 864 D V L G D R W Y P C W I A K L G E L C D L D   
(BL10) SEQ ID NO: 901 W Y P C W M A Q L G D L C D L E K P V T E R   
(BL11) SEQ ID NO: 874 W Y P C W I A Q L G E L C D L D                     
(BL12) SEQ ID NO: 875 W Y P C W L A K L G E L C D L D                     
IL-2Rβ配體可以包含與SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項具有氨基酸序列的大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的截短的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的截短氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以獨立地包含在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上的1至4個甘氨酸(G)。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以包含選自SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的截短氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸取代(如1至5個氨基酸取代)。氨基酸取代可以包含保守性氨基酸取代。
IL-2Rβ配體可以包含與SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
如使用噬菌體ELISA競爭測定法所確定的，SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的IL-2Rβ配體可以以小於10µM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
如使用噬菌體ELISA競爭測定法所確定的，SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的IL-2Rβ配體，SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的截短的IL-2Rβ配體，或SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的取代的IL-2Rβ配體可以以小於100µM或小於10µM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
由本公開提供的某些IL-2Rβ配體可以與hIL-2Rβ亞基上的特異性結合位點結合，所述特異性結合位點與IL-2結合的hIL-2Rβ亞基上的hIL-2Rβ結合位點不同。
這些IL-2Rβ配體不與IL-2競爭與特定IL-2結合位點的結合，與hIL-2Rγc亞基無可檢測的結合，並且以小於10µM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
hIL-2Rβ亞基上的特異性結合位點可以至少由以下特性表徵：(1)IL-2Rβ配體組以小於10µM的IC50 與IL-2Rβ亞基上的特異性結合位點結合；(2)該組中的每個IL-2Rβ配體與該組中的其他IL-2Rβ配體中的每個競爭性結合IL-2Rβ亞基上的特異性結合位點；(3)具有SEQ ID NO：1044的氨基酸序列的肽不與IL-2Rβ配體組中的肽競爭結合IL-2Rβ亞基上的特異性結合位點；(4)具有SEQ ID NO：58、169和1042的IL-2Rβ配體不與結合IL-2Rβ的IL-2競爭性結合，表明該IL-2Rβ配體結合位點不同於IL-2。
IL-2Rβ配體組至少包括具有SEQ ID NO：58、83、142、169、170和663中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβ配體。
具有SEQ ID NO：224的氨基酸序列的IL-2Rγc配體不與IL-2Rβ配體組競爭結合至特異性結合位點。
可以使用例如在實施例27和28中所述的競爭性結合測定來表徵IL-2Rβ配體組結合的IL-2Rβ亞基上的該特異性結合位點。
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以是pH偏倚性IL-2Rβ配體。
pH偏倚性IL-2Rβ配體可以在pH 6時以比在pH 7.5時與IL-2Rβ亞基結合的IC50 至少小10%的IC50 與IL-2Rβ亞基結合。
例如，在pH 6.0時結合人IL-2Rβ配體的IC50 可以是0.5μM，在pH 7.5時結合相同IL-2Rβ配體的IC50 可以是1μM。pH偏倚性IL-2Rβ配體可以在pH 6.0時以比在pH 7.5時與人IL-2Rβ亞基結合的IC50 至少小10%的IC50 與IL-2Rβ亞基結合，以比在pH 7.5時與人IL-2Rβ亞基結合的IC50 至少小25%、至少小50%、至少小100%或至少小200%的IC50 與IL-2Rβ亞基結合。
可以如實施例24-27中所述確定pH偏倚性結合親和力(IC50 )。
pH偏倚性IL-2Rβ配體可以包含例如5至30個氨基酸。
pH偏倚性IL-2Rβ配體可以在pH 6.0時例如以1pM至100µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合，並且可以在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rβ配體可以在pH 6.0時例如以0.1µM至50µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合，並且可以在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rβ配體可以在pH 6.0時例如以小於100µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合，並且可以在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rβ配體可以在pH 6.0時例如以小於100µM的IC50 與哺乳動物IL-2Rβ亞基結合，並且可以在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與人IL-2Rβ亞基結合。
可以使用實施例23和24中所述的方法鑒定pH偏倚性IL-2Rβ配體。基於酸性偏倚親和力選擇，這些方法已被用於鑒定在與實體瘤微環境相對應的小於pH 6.5的pH時結合親和力增加並且在與正常組織相對應的大於pH 7.0的pH時結合親和力降低的IL-2Rβ配體。
IL-2Rγc配體可以包括在美國申請公開第2020/0040036 A1號(其藉由引用整體併入)中公開的IL-2Rγc配體。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以以小於100μM、小於10μM、小於1μM、小於0.1μM或小於0.01的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合至。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以以1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1µM或0.01µM至1µM的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以以例如小於100μM、小於10μM、小於1μM、小於0.1μM或小於0.01µM的IC50 與哺乳動物IL-2Rγc亞基結合。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以以例如1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001μM至1µM或0.01µM至1µM的IC50 與哺乳動物IL-2Rγc亞基結合。。
IL-2Rγc配體可以包含式(5)(SEQ ID NO：944)、式(5a)(SEQ ID NO：945)、式(5b)(SEQ ID NO：946)的氨基酸序列、式(5c)(SEQ ID NO：947)、式(5d)(SEQ ID NO：948)和/或式(5e)(SEQ ID NO：949)的氨基酸序列： –X171 –X172 –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –X187 –X188 –     (5) –X172 –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –X187 –           (5a) –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –                 (5b) –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –            (5c) –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –                                (5d) –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–                           (5e) 其中，X171 可以選自包含鹼性側鏈的氨基酸；X172 可以選自包含含羥基的側鏈的氨基酸；X173 可以選自包含酸性側鏈或大的疏水性側鏈的氨基酸；X174 可以選自包含大的疏水側鏈的氨基酸；X175 可以選自包含酸性側鏈或大的疏水性側鏈的氨基酸；X176 可以選自包含酸性側鏈或極性/中性側鏈的氨基酸；X177 可以選自包含酸性側鏈的氨基酸；X178 可以選自包含大的疏水性側鏈或芳族側鏈的氨基酸；X179 可以選自包含酸性側鏈或極性/中性側鏈的氨基酸；X180 可以為G；X181 可以為V；X182 可以是E；X183 可以為L；X184 可以為W；X185 可以選自包含大的疏水性側鏈的氨基酸；X186 可以為E；X187 可以選自氨基酸；和X188 可以選自包含酸性側鏈的氨基酸。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自H、K和R；X172 可以選自S、T和Y；X173 可以選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y中選擇；X174 可以選自F、I、L、M、V、W和Y中選擇；X175 可以選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X176 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X177 可以選自D和E；X178 可以選自F、H、I、L、M、V、W和Y；X179 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X180 可以為G；X181 可以為V；X182 可以為E；X183 可以為L；X184 可以為W；X185 可以選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；X186 可以為E；X187 可以選自氨基酸；和X188 可以選自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自D、E、G、H、K、M、N、P、Q、R、S和T；X172 可以選自A、D、E、G、I、K、L、P、Q、R、S、T、V、W和Y；X173 可以選自A、D、E、F、G、I、Q、S、T、V、W和Y；X174 可以選自A、I、E、I、L、M、N、Q、R、S、T和V；X175 可以選自A、E、I、L、M、N、Q、R、S、T和V；X176 可以選自D、E、H、L、Q、R和V；X177 可以選自D、E、N、T和V；X178 可以選自F、S、W和Y；X179 可以選自A、D、E、G、H、K、N、Q、R和Y；X180 可以選自G和R；X181 可以為V；X182 可以選自D、E和Y；X183 可以選自F、I和L；X184 可以為W；X185 可以選自C、H、I、L、P、Q、T、V和Y；X186 可以選自A、D、E、G、M、R、S、T和V；X187 可以選自A、D、E、F、G、I、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；和X188 可以選自A、C、D、E、F、G、I、K、L、N、P、Q、R、S和V。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自H、K和R；X172 可以選自S、T和Y；X173 可以選自D、E、F、I和V；X174 可以選自I和V；X175 可以選自E、I、L、M和V；X176 可以選自D、E和Q；X177 可以選自D和E；X178 可以選自F和W；X179 可以選自D、E、N和Q；X180 可以為G；X181 可以為V；X182 可以選自D和E；X183 可以為L；X184 可以為W；X185 可以選自I、L、Q和V；X186 可以選自D和E；X187 可以選自A、D、E、F、G、I、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；和X188 可以選自D、E、N和Q。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自K和R；X172 可以選自S、T和Y；X173 可以選自D、E、F、I和V；X174 可以為V；X175 可以選自E、L、M和V；X176 可以為Q；X177 可以選自D和E；X178 可以為W；X179 可以選自D、E、N和Q；X180 可以為G；X181 可以為V；X182 可以為E；X183 可以為L；X184 可以為W；X185 可以選自I、L、Q和V；X186 可以選自D和E；X187 可以選自A、D、E、F、G、I、M、N、P、Q、R、S、T、V、W和Y；和X188 可以選自D、E、N和Q。
在式(5)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自H、K和R。
在式(5)-(5a)的IL-2Rγc配體中，X172 可以選自S、T和Y。
在式(5)-(5b)的IL-2Rγc配體中，X173 可以選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5b)的IL-2Rγc配體中，X173 可以選自D和E。
在式(5)-(5b)的IL-2Rγc配體中，X173 可以選自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5c)的IL-2Rγc配體中，X174 可以選自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5c)的IL-2Rγc配體中，X174 可以為V。
在式(5)-(5d)的IL-2Rγc配體中，X175 可以選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5d)的IL-2Rγc配體中，X175 可以選自D和E。
在式(5)-(5d)的IL-2Rγc配體中，X175 可以選自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X176 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X176 可以選自E和Q。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X177 可以選自D和E。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X178 可以選自F、H、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X178 可以選自F、H、W和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X178 可以為W。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X179 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X179 可以選自D、E和Q。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X180 可以為G。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X181 可以為V。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X182 可以為E。
在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中，X183 可以為L。
在式(5)-(5d)的IL-2Rγc配體中，X184 可以為W。
在式(5)-(5c)的IL-2Rγc配體中，X185 可以選自F、I、L、M、V、W和Y。
在式(5)-(5c)的IL-2Rγc配體中，X185 可以為L。
在式(5)-(5b)的IL-2Rγc配體中，X186 可以為E。
在式(5)-(5a)的IL-2Rγc配體中，X187 可以選自氨基酸。
在式(5)的IL-2Rγc配體中，X188 可以選自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自H、K和R；X172 可以選自S、T和Y；X173 可以選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X174 可以選自F、I、L、M、V、W和Y；X175 可以選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X176 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X177 可以選自D和E；X178 可以選自F、H、I、L、M、V、W和Y；X179 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X180 可以為G；X181 可以為V；X182 可以為E；X183 可以為L；X184 可以選自W；X185 可以選自F、I、L、M、V、W和Y中選擇；X186 可以為E；X187 可以選自氨基酸；和X188 可以選自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自H、K和R；X172 可以選自S、T和Y；X173 可以選自D和E；X174 可以為V；X175 可以選自D和E；X176 可以選自E和Q；X177 可以選自D和E；X178 可以選自F、H、W和Y；X179 可以選自D、E和Q；X180 可以為G；X181 可以為V；X182 可以為E；X183 可以為L；X184 可以為W；X185 可以選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；X186 可以為E；X187 可以選自氨基酸；和X188 可以選自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自H、K和R；X172 可以選自S、T和Y；X173 可以選自F、I、L、M、V、W和Y；X174 可以為V；X175 可以選自F、I、L、M、V、W和Y；X176 可以選自E和Q；X177 可以選自D和E；X178 可以選自F、H、W和Y；X179 可以選自D、E和Q；X180 可以為G；X181 可以為V；X182 可以為E；X183 可以為L；X184 可以為W；X185 可以選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；X186 可以為E；X187 可以選自氨基酸；和X188 可以選自D和E。
在式(5)、(5a)、(5b)、(5c)、(5d)和/或(5e)的IL-2Rγc配體中，X171 可以選自H、K和R；X172 可以選自S、T和Y；X173 可以選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X174 可以為V；X175 可以選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y；X176 可以選自D、E、H、N、Q、S、T和Y；X176 可以選自E和Q；X177 可以選自D和E；X178 可以為W；X179 可以選自D、E和Q；X180 可以為G；X181 可以為V；X182 可以為E；X183 可以為L；X184 可以為W；X185 可以選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T；X186 可以為E；X187 可以選自氨基酸；和X188 可以選自D和E。
IL-2Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：950-1028中任一項的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 950 I E C D T S Y G V Y I C W Q                              
SEQ ID NO: 951 I E C E E W R G V E L C W Q                              
SEQ ID NO: 952 P E G R E V V V C R D W Y G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 953 I W G R T V V E C Q D W E G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 954 L A L R K E V V C Q E Y Y G V E L C W I            
SEQ ID NO: 955 H E A R E V V V C Q D W Y G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 956 M V N R E V V V C E D W Y G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 957 T A N Q T V V E C Q V W G G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 958 V E C Q E W G G V E L C W C                              
SEQ ID NO: 959 D V E C V D W G G V E L C W H                           
SEQ ID NO: 960 I V C E E W R G V E L C W L                              
SEQ ID NO: 961 D F E R S Y V V C Q D W D G V E L C W I            
SEQ ID NO: 962 A H S R Q E V V C E E W Y G V E L C W I            
SEQ ID NO: 963 S A P E R W V E C E D W Q G V E L C W V            
SEQ ID NO: 964 Y S R E L Y V Q C E D W E G V E L C W I            
SEQ ID NO: 965 V V C Q D W E G V E L C W Q                              
SEQ ID NO: 966 D V V C Q N W E G V D L C W H                           
SEQ ID NO: 967 S A G R Q E V V C Q D W N G V E L C W I            
SEQ ID NO: 968 G Q G R E V V V C H D W Y G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 969 D W R R S V V E C Q D W Y G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 970 D V V C Q N W D G V D L C W H                           
SEQ ID NO: 971 T L G R T V V E C Q D W G G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 972 R L L N S V V E C L D W E G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 973 I V C E D W R G V E L C W I                              
SEQ ID NO: 974 V V C Q E W E G V E L C W C                              
SEQ ID NO: 975 G D R P K E V V C E D W K G V E L C W I            
SEQ ID NO: 976 E R P R S F I E C Q E W E G V E L C W L            
SEQ ID NO: 977 E G S T T T I E C E E W A G V E L C W L            
SEQ ID NO: 978 A N Q N T V V E C Q D W H G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 979 R S D D E V V V C Q E W E G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 980 I E C E E W A G V E L C W L                              
SEQ ID NO: 981 T W N M S E L E C Q D W N G V E I C W H            
SEQ ID NO: 982 G N D D S Y I V C E E W K G V E L C W I            
SEQ ID NO: 983 F A H H G V V E C Q E W Y G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 984 L N R S V W I E C E E Y E G V E L C W L            
SEQ ID NO: 985 W S K K A E V V C E E W G G V E F C W I            
SEQ ID NO: 986 R S N Q T V V E C Q D W E G V E L C W Q            
SEQ ID NO: 987 V V C Q E W E G V E L C W Y A G E C M Q            
SEQ ID NO: 988 I L C Q E F E G V E L C W L E E S L A E            
SEQ ID NO: 989 K S Q V E C Q D W E G V E L C W V V S E            
SEQ ID NO: 990 K I T V E C Q D W D G V E L C W P T W I            
SEQ ID NO: 991 R P Q I E C Q E W Q G V E L C W T R E E            
SEQ ID NO: 992 V S C Q E W D G V E L C W V D G D L A A            
SEQ ID NO: 993 I M C Q E W D G V E L C W L E R D K A N            
SEQ ID NO: 994 G L E I A C E D W Y G V E L C W L R R A            
SEQ ID NO: 995 G Y G V L C Q E W Q G V E L C W P V Q R E A G V
SEQ ID NO: 996 P Y G V V C Q D W A G V E L C W V E N R            
SEQ ID NO: 997 K L T V E C Q D W D G V E L C W V G V E            
SEQ ID NO: 998 I N C Q T W N G V E L C W V D E G L Y Q            
SEQ ID NO: 999 V V C Q E W E G V E L C W V E P P L L P            
SEQ ID NO: 1000 R V Q V E C E D W N G V E L C W P V R V            
SEQ ID NO: 1001 D R Q V V C E E W D G V E L C W I E E S            
SEQ ID NO: 1002 K T T V A C Q D W G G V E L C W V E R V            
SEQ ID NO: 1003 R P E V V C Q E W E G V E L C W I S P L            
SEQ ID NO: 1004 R L G V E C Q E W E G V D L C W I S A F            
SEQ ID NO: 1005 K P V V V C E E W Q G V E L C W L E I Q            
SEQ ID NO: 1006 V V C E V F Q G V E L C W C E N E E F T            
SEQ ID NO: 1007 T D E V S C Q E W E G V E L C W I E R Q            
SEQ ID NO: 1008 P V E V R C Q E W E G V E L C W V V G I            
SEQ ID NO: 1009 G P E V V C E E F N R V E L C W V E Y N            
SEQ ID NO: 1010 K Y I V E C Q E W G G V E L C W P E M V            
SEQ ID NO: 1011 V T C Q E Y E G V E L C W T V G C A Y S            
SEQ ID NO: 1012 V V C Q E W E G V E L C W Q T G P G A H A         
SEQ ID NO: 1013 I V C E E Y N G V E L C W V E T S V K P            
SEQ ID NO: 1014 E Q Q V V C Q E W N G V E L C W I E A G            
SEQ ID NO: 1015 Q L G V E C Q N W R G V E L C W V S E I            
SEQ ID NO: 1016 T A E V V C Q E W D G V E L C W I E V L            
SEQ ID NO: 1017 S P S I V C E E W A G V E L C W V D Y S            
SEQ ID NO: 1018 A V C Q D W Y G V E L C W C M Q D I L D            
SEQ ID NO: 1019 V E C E E W G G V E L C W L A D E V M W            
SEQ ID NO: 1020 H S T V I C Q D W D G V E L C W I E N D            
SEQ ID NO: 1021 K K I V V C Q D W G G V E L C W T E D D            
SEQ ID NO: 1022 S V E V V C E E W H G V E L C W P V F I            
SEQ ID NO: 1023 R W A V S C Q D W Q G I E L C W P E W D            
SEQ ID NO: 1024 R T G V E C Q D W H G V E L C W P V W E            
SEQ ID NO: 1025 G Y G V V C E D F R G V E L C W L E R K            
SEQ ID NO: 1026 R T E V E C E D W E G V E L C W L                     
SEQ ID NO: 1027 I L C E E W Q G V E L C W L E G G G S               
SEQ ID NO: 1028 V G I E C E E W A G V E L C W L                        
IL-2Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端、或同時在N-末端和C-末端上以側翼氨基酸(如–G–G–)封端。
IL-2Rβγc配體可以包含選自SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端、或同時在N-末端和C-末端上以一個或多個氨基酸封端。例如，氨基酸序列可以包括末端甘氨酸和/或絲氨酸。例如，IL-2Rγc配體可以在N-末端、C-末端、或同時在N-末端和C-末端上包含–G–G–部分。
IL-2Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列，其中每個氨基酸獨立地包含以下保守性取代中的一個或多個：具有小的疏水性側鏈的氨基酸，其包含丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、脯氨酸(P)、絲氨酸(S)或蘇氨酸(T)；具有含羥基側鏈的氨基酸，其包含絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)或酪氨酸(Y)；具有酸性側鏈的氨基酸，其包含天冬氨酸(D)或谷氨酸(E)；具有極性中性側鏈的氨基酸，其包含組氨酸(H)、天冬醯胺(N)、穀氨醯胺(Q)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)或酪氨酸(Y)；具有鹼性側鏈的氨基酸，其包含精氨酸(R)、賴氨酸(K)或組氨酸(H)；具有大的疏水性側鏈的氨基酸，其包含異白氨酸(I)、白氨酸(L)、甲硫氨酸(M)、纈氨酸(V)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)或色氨酸(W)；和具有芳族側鏈的氨基酸，其包括苯丙氨酸(F)、組氨酸(H)、色氨酸(W)或酪氨酸(Y)。
SEQ ID NO：944-1028的IL-2Rγc配體以小於100μM的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合。
IL-2Rγc配體可以包含與SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以包含SEQ ID NO：944-1028中任一項的截短的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列、或SEQ ID NO：944-1028中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上獨立地包含1至4個甘氨酸(G)。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列、或SEQ ID NO：944-1028中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸取代(如1至5個氨基酸取代)。氨基酸取代可以包括保守性氨基酸取代。
IL-2Rγc配體可以包含與SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：944-1028中任一項的截短的氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：944-1028中任一項的IL-2Rγc配體可以以小於10μM的IC50 與hIL-2Rγc亞基結合。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：944-1028中任一項的IL-2Rγc配體、SEQ ID NO：944-1028中任一項的截短的IL-2Rγc配體或SEQ ID NO：944-1028中任一項的取代的IL-2Rγc配體可以以小於100µM或小於10µM的IC50 與hIL-2Rγc亞基結合。
IL-2Rγc配體可以包含選自具有SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028的IL-2Rγc配體(GL1)-(GL7)中的任一項的氨基酸序列。這些IL-2Rγc配體的氨基酸序列如表2中所示。 表2. IL-2Rγc配體。
(GL1) SEQ ID NO: 980 I E C E E W A G V E L C W L                     
(GL2) SEQ ID NO: 965 V V C Q D W E G V E L C W Q                     
(GL3) SEQ ID NO: 985 W S K K A E V V C E E W G G V E F C W I   
(GL4) SEQ ID NO: 1024 R T G V E C Q D W H G V E L C W P V W E   
(GL5) SEQ ID NO: 1028 V G I E C E E W A G V E L C W L               
(GL6) SEQ ID NO: 981 T W N M S E L E C Q D W N G V E I C W H   
(GL7) SEQ ID NO: 1026 R T E V E C E D W E G V E L C W L            
IL-2Rγc配體可以包含與SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以包含SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的截短的氨基酸序列。
有本公開提供的IL-2Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中的任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上獨立地包含1至4個甘氨酸(G)。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸取代(如1至5個氨基酸取代)。氨基酸取代可以包括保守性氨基酸取代。
IL-2Rγc配體可以包含與SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的截短的氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的IL-2Rγc配體可以以小於10µM的IC50 與hIL-2Rγc亞基結合。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的IL-2Rγc配體，SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的截短的IL-2Rγc配體，或SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的取代的IL-2Rγc配體可以以小於100µM或小於10µM的IC50 與hIL-2Rγc亞基結合。
Rγc配體可以具有SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中的任一項。
SEQ ID NO: 1032 S L L K C Y N A S T C A S V F                           
                                                                          
SEQ ID NO: 1034 C G M A I G D L C M W T                                    
SEQ ID NO: 1042 R W G D V G D L L M P L                                    
SEQ ID NO: 1044 R S C Y Y K R P R L W C S E                              
                                                                          
SEQ ID NO: 1051 D C S M W E G V E L C W G G R R                        
SEQ ID NO: 1052 G G V V C Q D W E G V E L C W Q G G R R            
SEQ ID NO: 1053 G G V M C E R W Q G V E L C W L G G                  
SEQ ID NO: 1054 G G R T G V E C Q D W H G V E L C W P V W E G G
SEQ ID NO: 1055 G G V G I E C E E W A G V E L C W L G G            
SEQ ID NO: 1056 G G T W N M S E L E C Q D W N G V E I C W H G G
SEQ ID NO: 1057 G G R T E V E C E D W E G V E L C W L G G         
SEQ ID NO: 1058 G G W S K K A E V V C E E W G G V E F C W I G G
SEQ ID NO: 1059 W S K K A E V V C E E W G G V E F C W I            
SEQ ID NO: 1060 Y S R E L Y V Q C E D W E G V E L C W I            
SEQ ID NO: 1601 G G D C S M W E G V E L C W G G                        
SEQ ID NO: 1602 G G V M C E R W Q G V E L C W L G G                  
SEQ ID NO: 1603 G G V G I E C E E W A G V E L C W L G G            
SEQ ID NO: 1604 G G T W N M S E L E C Q D W N G V E I C W H G G
SEQ ID NO: 1605 G G R T E V E C E D W E G V E L C W L G G         
SEQ ID NO: 1606 G G R T G V E C Q D W H G V E L C W P V W E G G
SEQ ID NO: 1607 G G V V C Q D W E G V Abu L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1608 G G V V C Q D W E G V Alb L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1609 G G V V C Q D W E G V DA L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1610 G G V V C Q D W E G V S L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1611 G G V V C Q D W E G V G L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1612 G G V V C Q D W E G V E L C W Q P P A               
SEQ ID NO: 1613 G G V V C Q D W E G V E L C W Q G P P A            
由本公開提供的Rγc配體可以包含SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的截短的氨基酸序列。
由本公開提供的Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以在N-末端、C-末端或同時在N-末端和C-末端上獨立地包含1至4個甘氨酸(G)。
由本公開提供的Rγc配體可以包含選自SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的截短的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列包含一個或多個氨基酸取代(如1-5個氨基酸取代)。氨基酸取代可以包括保守性氨基酸取代。
Rγc配體可以包含與SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列或SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的截短的氨基酸序列具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的Rγc配體，SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的截短的Rγc配體，或SEQ ID NO：1032、1034、1042、1044、1051-1060和1601-1613中任一項的取代的Rγc配體可以以小於100µM或小於10µM的IC50 與hRγc亞基結合。
SEQ ID NO：1601-1613中任一項的Rγc配體以小於100μM的IC50 與hRγc亞基結合。
由本公開提供的某些IL-2Rγc配體可以與IL-2Rγc亞基上的特異性結合位點結合，所述特異性結合位點不同於IL-2結合的IL-2Rγc亞基上的IL-2Rγc結合位點。
這些IL-2Rγc配體不與IL-2競爭結合特異性IL-2Rγc結合位點，與IL-2Rβ亞基沒有可檢測的結合，並且以小於10μM的IC50 與IL-2Rγc亞基結合。
IL-2Rγc亞基上的特異性結合位點至少可以具有以下特性：(1)IL-2Rγc配體組以小於10µM的IC50 與hIL-2Rγc亞基上的特異性結合位點結合；(2)該組中的IL-2Rγc配體與該組中的其他IL-2Rγc配體競爭性結合IL-2Rγc亞基上的特異性結合位點；(3)該組內的IL-2Rγc配體不與具有SEQ ID NO：1032的氨基酸序列的IL-2Rγc配體競爭結合特異性結合位點。
具有SEQ ID NO：58的氨基酸序列的IL-2Rβ配體不與IL-2Rγc配體組競爭結合結合位點。
IL-2Rγc配體組包含具有SEQ ID NO：198、202、224、236、248和266的氨基酸序列的IL-2Rγc配體。
IL-2Rγc配體組中的IL-2Rγc配體以小於100μM的IC50 與IL-2Rγc亞基結合，並以大於100μM的IC50 與IL-2Rβ亞基結合。
這些IL-2Rγc配體的IL-2Rβ亞基的特異性結合位點可以使用例如實施例24-27中所述的競爭性結合測定來表徵。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以包含pH偏倚性IL-2Rγc配體。
pH偏倚性IL-2Rγc配體在pH 6時以比在pH 7.5時相同的IL-2Rγc配體與IL-2Rγc亞基結合的IC50 小的IC50 與IL-2Rγc亞基結合。可以如實施例24-27中所述確定pH偏倚性結合親和力。
pH偏倚性IL-2Rγc配體可以在pH 6時以比在pH 7.5時與人IL-2Rγc亞基結合的IC50 至少小10%的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合，以比在pH 7.5時與人IL-2Rγc亞基結合的IC50 至少小25%、至少小50%、至少小100%或至少小200%的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rγc配體可以包含例如5至30個氨基酸。
pH偏倚性IL-2Rγc配體可以在pH 6.0時以1pM至100µM的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合，並且可以在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rγc配體可以在pH 6.0時以0.1µM至50µM的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合，並在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與與人IL-2Rγc亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rγc配體可以在pH 6.0下以小於100µM的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rγc配體可以以小於100µM的IC50 與每個人IL-2Rγc亞基結合以及與人IL-2Rγc亞基結合，並且在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rγc配體可以在pH 6.0時以小於100µM的IC50 與哺乳動物IL-2Rγc亞基結合，並且在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與人IL-2Rγc亞基結合。
pH偏倚性IL-2Rγc配體可以使用實施例23和24中所述的方法進行鑒定。
IL-2Rβ配體 IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc配體可以不包含任何與該配體的N-末端和/或C-末端結合的側翼氨基酸。
IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體可以包含與該配體的N-末端和/或C-末端結合的一個或多個側翼氨基酸。
側翼氨基酸可以將與IL-2R相互作用的配體的部分與配體(IL-2Rβγc配體)和/或配體構建體的其他部分分開。
配體可以包含與配體的N-末端和/或C-末端結合的側翼氨基酸，諸如例如1至20個氨基酸，1至10個氨基酸，諸如1至8個氨基酸、2至6個氨基酸或2至4氨基酸。
側翼氨基酸可以包含任何合適的天然存在或非天然存在的氨基酸。
側翼氨基酸可以選自絲氨酸和柔性氨基酸(如絲氨酸)。
配體可以包含各自配體的N-末端和/或C-末端上的側翼氨基酸，諸如例如末端甘氨酸基團。例如，配體可以包含具有SEQ ID NO：9380-9407和9420-9428中的任一項的氨基酸序列的側翼氨基酸。例如，IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體或IL-2Rβγc配體可以獨立地包含側翼氨基酸(如1、2或3個末端甘氨酸)。
IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc配體可以包含與IL-2Rβ和IL-2Rγc配體的N-末端和/或C-末端結合的例如1至20個氨基酸，1至10個氨基酸，諸如1至8個氨基酸、2至6個氨基酸、或2至4個氨基酸。
側翼氨基酸可以包含任何合適的天然存在或非天然存在的氨基酸。
側翼氨基酸可以選自柔性氨基酸 (如甘氨酸和絲氨酸)。IL-2Rβ配體和/或IL-2Rγc配體可以在各自配體的N-末端和/或C-末端包含例如末端甘氨酸基團。例如，IL-2Rβ和IL-2Rγc配體可以包含(G)n 個甘氨酸基團(SEQ ID.NO：9380)，其中n為1至20。例如，IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體各自可以獨立地包含1、2或3個末端甘氨酸基團。例如，具有SEQ ID NO：878的配體(其氨基酸序列為–W–H–P–C–W–I–A–Q–L–G–E–L–C–D–L–E–)可以在N-末端和/或C-末端上獨立包括例如一個、兩個或三個甘氨酸，使得所述配體可以具有氨基酸序列–G–W–H–P–C–W–I–A–Q–L–G–E–L–C–D–L–E–G– (SEQ ID NO：1209)、–G–G–W–H–P–C–W–I–A–Q–L–G–E–L–C–D–L–E–G–G– (SEQ ID NO：1210)、或–G–G–G–W–H–P–C–W–I–A–Q–L–G–E–L–C–D–L–E–G–G–G– (SEQ ID NO：1211)。
由本公開提供的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc配體可以包含例如氨基酸取代，諸如1至10個氨基酸取代，1至8個氨基酸取代，1至6個氨基酸取代，1至4個氨基酸取代，諸如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個氨基酸取代。氨基酸取代可以是保守性氨基酸取代。
配體可以包含截短的氨基酸序列。
截短的氨基酸序列是指不包括一個或多個末端氨基酸的氨基酸序列。例如，在截短的肽中，一個或多個氨基酸從N-末端、C-末端或同時從N-末端和C-末端中被去除。從由本公開提供的氨基酸序列的N-末端和/或C-末端去除一個或多個氨基酸可以導致改善的特性。因此，由本公開提供的配體(如IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體)包括截短的IL-2Rβ配體和截短的Rγc配體。
基於SEQ ID NO：9301的截短的IL-2Rβ配體的實例包括具有SEQ ID NO：9301-9314、865和612中任一項的氨基酸序列的配體。
SEQ ID NO: 9301 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G            
SEQ ID NO: 9302    G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G            
SEQ ID NO: 9303       W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G            
SEQ ID NO: 9304          Y P C W M A Q L G E L C D L D G G            
SEQ ID NO: 9305             P C W M A Q L G E L C D L D G G            
SEQ ID NO: 9306                C W M A Q L G E L C D L D G G            
SEQ ID NO: 9307 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G               
SEQ ID NO: 9308 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D                  
SEQ ID NO: 9309 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L                     
SEQ ID NO: 9310 G G W Y P C W M A Q L G E L C D                        
SEQ ID NO: 9311 G G W Y P C W M A Q L G E L C                           
SEQ ID NO: 9312    G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G               
SEQ ID NO: 9313       W Y P C W M A Q L G E L C D L D G               
SEQ ID NO: 865       W Y P C W M A Q L G E L C D L D                  
SEQ ID NO: 612          Y P C W M A Q L G E L C D L                     
SEQ ID NO: 9314             P C W M A Q L G E                                 
基於SEQ ID NO：9340的截短的IL-2Rγc配體的實例包括具有SEQ ID NO：9340-9353和965中任一項的氨基酸序列的配體。
SEQ ID NO: 9340 G G V V C Q D W E G V E L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 9341    G V V C Q D W E G V E L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 9342       V V C Q D W E G V E L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 9343          V C Q D W E G V E L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 9344             C Q D W E G V E L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 9345 G G V V C Q D W E G V E L C W Q G                     
SEQ ID NO: 9346 G G V V C Q D W E G V E L C W Q                        
SEQ ID NO: 9347 G G V V C Q D W E G V E L C W                           
SEQ ID NO: 9348 G G V V C Q D W E G V E L C                              
SEQ ID NO: 9349    G V V C Q D W E G V E L C W Q G                     
SEQ ID NO: 965       V V C Q D W E G V E L C W Q                        
SEQ ID NO: 9350          V C Q D W E G V E L C W Q                        
SEQ ID NO: 9351          V C Q D W E G V E L C W                           
SEQ ID NO: 9352             C Q D W E G V E L C W                           
SEQ ID NO: 9353             C Q D W E G V E L C                              
由本公開提供的IL-2Rβ配體可以與SEQ ID NO：805-903中任一項具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性。由本公開提供的IL-2Rβ配體可以與SEQ ID NO：865具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以與SEQ ID NO：944-1028中任一項具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性。由本公開提供的IL-2Rγc配體可以與SEQ ID NO：965具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性。
由本公開提供的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc配體可以在N-末端包含乙醯基端基，並且在C-末端包含羧酸醯胺基。
IL-2Rβγc配體可以包含與IL-2Rβγc配體接頭結合的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體。
IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體中的每一個可以藉由各自配體的N-末端或C-末端獨立地與IL-2Rβγc配體接頭共價結合。例如，IL-2Rβ配體可以藉由N-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合，並且IL-2Rγc配體可以藉由N-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合，IL-2Rβ配體可以藉由N-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合，並且IL-2Rγc配體可以藉由C-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合；IL-2Rβ配體可以藉由C-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合，並且IL-2Rγc配體可以藉由N-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合；或者IL-2Rβ配體可以藉由C-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合，並且IL-2Rγc配體可以藉由C-末端與IL-2Rβγc接頭結合。
在圖1中顯示了具有IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的各種取向的IL-2Rβγc配體的實例。如圖1中所示的，具有IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的各種C/N取向的IL-2Rβγc配體可以使用點擊化學來合成。三唑鍵聯是IL-2Rγc配體接頭的示意代表，其可以包含各種化學部分並且可以具有各種長度和特性。表3中示出了某些IL-2Rβγc配體接頭的實例。
IL-2Rβγc配體接頭可以被配置為促進IL-2Rβγc配體與IL-2R的IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基結合。例如，可以將IL-2Rβγc配體接頭配置為促進IL-2Rβγc配體對IL-2R的啟動。例如，IL-2Rβγc配體可以被配置為在TF-1β細胞和NK-92細胞中誘導IL-2R介導的STAT5磷酸化。
IL-2Rβγc配體接頭的長度例如可以為2Å至100Å、2Å至80Å、2Å至60Å、2Å至40Å、2Å至20Å、4Å至18Å、6Å至16Å、或8Å至14Å。配體接頭的長度例如可以小於100Å、小於80Å、小於60Å、小於40Å、小於20Å、小於15Å或小於10Å。
IL-2Rβγc配體接頭可以包含具有以下數量鍵的主鏈：例如2至50個鍵、2至45個鍵、2至40個鍵、2至35個鍵、2至30個鍵、2至25個鍵、2至20個鍵、4至18個鍵、6至16個鍵或8至14個鍵。IL-2Rβγc配體接頭可以包含具有以下數量鍵的主鏈：例如少於50個鍵、少於40個鍵、少於30個鍵、少於20個鍵或少於10個鍵。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體接頭可以包含肽基IL-2Rβγc配體或化學IL-2Rβγc接頭。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體接頭可以包含肽基IL-2Rβγc配體接頭。
肽基配體接頭可以包含例如2至100個氨基酸、2至80個氨基酸、2至60個氨基酸、2至40個氨基酸、2至20個氨基酸、5至10個氨基酸、或2至5個氨基酸。肽基配體接頭可以包含例如少於100個氨基酸、少於80個氨基酸、少於40個氨基酸、少於20個氨基酸、少於15個氨基酸、少於10個氨基酸或少於5個氨基酸。形成肽基IL-2Rβγc配體接頭的氨基酸可以包含天然存在的氨基酸和/或非天然存在的氨基酸。
肽基IL-2Rβγc配體接頭可以包含例如柔性氨基酸(如甘氨酸、絲氨酸和/或蘇氨酸)。柔性接頭可以包括小的非極性氨基酸(如甘氨酸)或極性氨基酸(如絲氨酸或蘇氨酸)。這些氨基酸的小尺寸提供了柔韌性，並允許連接的功能結構域的移動。絲氨酸或蘇氨酸的摻入可以藉由與水分子形成氫鍵來維持接頭在水性溶液中的穩定性，從而減少接頭與蛋白質部分之間的不利相互作用。可以包括諸如賴氨酸和谷氨酸的氨基酸以改善溶解性。可以選擇肽基IL-2Rβγc接頭的長度以提供IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體之間的適當間隔，以促進與IL-2R的所期望的相互作用(如增強激動劑活性)。柔性接頭的實例包括具有SEQ ID NO：9380-9407中任一項的氨基酸序列的肽。
肽基IL-2Rβγc配體接頭可以是剛性接頭。剛性接頭可以富含脯氨酸，並且可以包括其他氨基酸(如丙氨酸、賴氨酸和/或谷氨酸)。剛性肽基配體接頭的實例包括具有SEQ ID NO：9420-9428中任一項的氨基酸序列的肽。
包含肽基IL-2Rβγc配體接頭的IL-2Rβγc配體可以使用非重組方法(如使用如實施例1中所述的固相合成)或者可以使用重組DNA技術來合成。
IL-2Rβγc配體接頭可以包含合成化學IL-2Rβγc配體接頭。合成化學IL-2Rβγc配體接頭是指使用化學方法合成的接頭並且可以包括或不包括氨基酸。合成化學IL-2Rβγc配體接頭可以包含三唑部分。
合成化學配體接頭可以具有例如表3中所示的式(L2)-(L13)的結構。 表3. IL-2Rβγc合成化學接頭的實例。
式編號 化學結構
(L1)
Figure 02_image001
(L2)
Figure 02_image003
  n=2
(L3)
Figure 02_image005
(L4)
Figure 02_image007
  n = 2
(L5)
Figure 02_image009
 n=2
(L6)
Figure 02_image011
 n=2
(L7)
Figure 02_image013
m=4且n =2
(L8)
Figure 02_image015
(L9)
Figure 02_image017
(L10)
Figure 02_image019
(L11)
Figure 02_image021
(L12)
Figure 02_image023
  m = 2, n = 1
(L13)
Figure 02_image023
  m = 2, n = 4
(L14)
Figure 02_image025
  
(L15)
Figure 02_image027
  
(L16)
Figure 02_image029
  
(L17)
Figure 02_image031
     
在IL-2Rγc配體接頭(L2)、(L4)-(L7)、(L12)和L13)中，m和/或n可以為整數，例如1至10。
可以使用點擊化學合成化學的IL-2Rβγc配體接頭，以提供具有IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的各種C/N取向的IL-2Rβγc配體。C/N取向是指與IL-2Rβγc配體接頭結合的IL-2Rβ和IL-2Rγc的末端。例如，對於具有C/N取向的IL-2Rβγc配體，將IL-2Rβ配體的C-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合，並且將IL-2Rγc配體的N-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合。作為另一個實例，對於具有N/C取向的IL-2Rβγc配體，將IL-2Rβ配體的N-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合，並且將IL-2Rγc配體的C末端與IL-2Rβγc配體接頭結合。
實施例2中描述了製備具有合成配體接頭的IL-2Rβγc配體的方法的實例。
可以使用標準的固相肽合成和Fmoc保護的氨基酸來製備IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體。可以用Fmoc-炔丙基甘氨酸的活化溶液或2-(Fmoc-NH)-疊氮基戊酸處理膨脹的樹脂，以提供相應的Fmoc保護的樹脂。含炔的部分和含疊氮化物的部分可以被配置為具有例如所期望的長度、剛性/柔性、極性、親脂性和/或空間特性。受保護的樹脂可以經受具有HATU活化和Fmoc去除的Fmoc氨基酸偶聯的重複循環，以合成各自的IL-2Rβ配體或IL-2Rγc配體。從IL-2Rβ或IL-2Rγc配體的最終氨基酸中去除Fmoc並將末端胺基醯化後，可以將配體從樹脂上切割並純化。
可以例如在CuSO4 和金屬螯合劑的存在下使含炔部分和含疊氮化物的部分反應以提供包含合成化學IL-2Rβγc配體接頭的IL-2Rβγc配體。反應的含炔部分和含疊氮化物的部分形成化學配體接頭。例如，參考表3-5，可使表4中的式(AL)的含炔部分與表5中的式(AZ)的含疊氮化物的部分反應以提供表3中的式(L)的化學的IL-2Rβγc配體接頭。
使用這種點擊化學方法，可以合成包含IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的IL-2Rβγc配體，所述IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體具有不同的N-末端和C-末端取向以及不同的配體接頭長度。
表4中提供了含炔部分的實例，表5中提供了含疊氮化物的實例。 表4. 含炔部分的實例。
式編號 化學結構
(AL1)
Figure 02_image033
(AL2)
Figure 02_image035
(AL3)
Figure 02_image037
(AL4)
Figure 02_image039
(AL5)
Figure 02_image041
 n = 4
(AL6)
Figure 02_image043
  m = 2且n = 1
(AL7)
Figure 02_image043
  m=2且n=4
(AL8)
Figure 02_image046
 m=1至10且n =1至10
(AL9)
Figure 02_image048
m=1至10且n=1至10
表5. 含疊氮化物部分的實例
式編號 化學結構
(AZ1)
Figure 02_image050
  n = 2
(AZ2)
Figure 02_image052
(AZ3)
Figure 02_image054
   n = 2
(AZ4)
Figure 02_image056
(AZ5)
Figure 02_image058
IL-2Rβγc配體可以包含N-末端和/或C-末端修飾，以防止或最小化氨基肽酶和羧肽酶的降解。末端基團的實例包括在N-末端上的乙醯基和在C-末端上的羧酸醯胺基。 IL-2Rβγc配體
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以包含例如具有式(6)的結構的部分： –BL–L–GL–                                          (6) 其中BL包含IL-2Rβ配體，L包含IL-2Rβγc配體接頭，並且GL包含IL-2Rγc配體。
式(6)的部分可以以小的化學部分封端並且可以具有以下分子量：例如小於12,000Da、小於11,000Da、小於10,000Da、小於9,000Da、小於8,000Da、小於7,000Da或小於6,000Da。IL-2Rβγc配體可以具有以下分子量：例如6,000Da至12,000Da、7,000Da至11,000Da或8,000Da至10,000Da。
在式(6)的IL-2Rβγc配體中，BL可以包含IL-2Rβ配體，其具有SEQ ID NO：805-903中任一項的氨基酸序列或具有與SEQ ID NO：805-903中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列；GL可以包含IL-2Rγc配體，其具有SEQ ID NO：944-1028的氨基酸序列，或者與SEQ ID NO：944-1028中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列；和L可以包含肽基IL-2Rβγc配體接頭或化學IL-2Rβγc配體接頭。合適的肽基IL-2Rβγc配體接頭的實例如圖21A-21C中所公開的，表3中公開了合適的化學配體接頭的實例。
在式(6)的IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體的N-末端或C-末端可以與IL-2Rβγc配體接頭結合，並且IL-2Rγc配體的N-末端或C-末端可以與IL-2Rβγc配體接頭結合。例如，IL-2Rβ配體(BL)的C-末端可以與接頭(L)結合，而IL-2Rγc配體(GL)的N-末端可以與接頭(L)結合。
在式(6)的IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體中的每一個可以獨立地包含與該配體的N-末端和/或C-末端結合的一個或多個側翼氨基酸。例如，IL-2Rβ配體的N-末端和C-末端均可以包含(G)n (SEQ ID NO：9380)，並且IL-2Rγc配體的N-末端和C-末端均可以包含包含–(G)n (SEQ ID NO：9380)。側翼氨基酸可以與IL-2Rβγc配體接頭結合。
式(6)的IL-2Rβγc配體可以在N-末端包含乙醯基端基，並且在C-末端包含羧酸醯胺基團。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以包含式(6a)的結構： –(A)n –BL–(A)n –L–(A)n –GL–(A)n –                        (6a) 其中， 每個n獨立地為0至10的整數； BL是IL-2Rβ配體，其包含： 選自SEQ ID NO：805-903中任一項的氨基酸序列； 與SEQ ID NO：805-903中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%或大於90%的序列同一性的氨基酸序列； SEQ ID NO：805-903中任一項的截短的氨基酸序列；或 上述任何一項的組合； GL是IL-2Rγc配體，其包含： 選自SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列； 與SEQ ID NO：944-1028中的任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%或大於90%的序列同一性的氨基酸序列； SEQ ID NO：944-1028中任一項的截短的氨基酸序列；或 上述任何一項的組合； 每個A獨立地選自氨基酸；以及 L是包含1至50個氨基酸的肽基配體接頭。
在式(6a)的IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體的C-末端可以與肽基配體接頭結合，並且IL-2Rγc配體的N-末端可以與肽基配體接頭結合。
在式(6a)的IL-2Rβγc配體中，每個n可以獨立地選自以下整數：例如0至8、0至6、0至4或0至2。例如，n可以為0、1、2或3。(A)n 代表側翼氨基酸。
每個A可以獨立地選自天然存在或非天然存在的氨基酸。每個A可以獨立地選自柔性氨基酸(如甘氨酸和絲氨酸)。每個A可以為甘氨酸。
L可以包含例如1至40個氨基酸、1至30個氨基酸、1至20個氨基酸、1至10個氨基酸或1至5個氨基酸。La 可以選自肽基配體接頭。例如，L可以為具有SEQ ID NO：9380-9407和9420-9428中任一項的氨基酸序列的肽基配體接頭。
在圖19A-圖19C中列出了具有化學IL-2Rβγc配體接頭的IL-2Rβγc配體的實例。
在圖21A-圖21C中列出了具有肽基IL-2Rβγc配體接頭的IL-2Rβγc配體的實例。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以包含二硫鍵。IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體可以包含至少兩個半胱氨酸。IL-2Rβ配體的至少兩個半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合，並且IL-2Rγc配體的至少兩個半胱氨酸中的每一個可以藉由二硫鍵結合。
在IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體的兩個半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合在一起和/或IL-2Rγc配體的兩個半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合在一起。在IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體的半胱氨酸可以藉由二硫鍵與IL-2Rγc配體的半胱氨酸結合，或者IL-2Rβ配體的兩個半胱氨酸中的每一個都可以與IL-2Rγc配體的半胱氨酸結合。例如，在具有式(7)的結構的IL-2Rβγc配體中： –X–C1 –X–C2 –X–L–Y–C3 –Y–C4 –Y–                            (7) 其中–X–C1 -X–C2 -X–表示具有兩個半胱氨酸的IL-2Rβ配體的氨基酸序列(如SEQ ID NO：805-903中的任一項)，其中每個X獨立地為一個或多個氨基酸，–Y–C3 –Y–C4 -Y–表示具有兩個半胱氨酸的IL-2Rγc配體的氨基酸序列(如SEQ ID NO：944-1028中的任一項)，其中每個Y獨立地是一個或多個氨基酸，和–L–是偶聯IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的IL-2Rβγc配體接頭。
在式(7)的IL-2Rβγc配體中，C1 可以藉由二硫鍵與C2 結合並且C3 可以藉由二硫鍵與C4 結合；C1 可以藉由二硫鍵與C3 結合並且C2 可以藉由二硫鍵與C4 結合，或者C1 可以藉由二硫鍵與C4 結合並且C2 可以藉由二硫鍵與C3 結合。
IL-2Rβγc配體可以包含由本公開提供的IL-2Rβ配體(如選自SEQ ID NO：805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926和2929-2939中的任一項的氨基酸序列，由本公開提供的IL-2Rβ配體的IL-2Rβ配體的取代氨基酸序列，由本公開提供的在N-末端和/或C-末端上具有1至5個側翼甘氨酸的IL-2Rβ配體的氨基酸序列，與由本公開提供的IL-2Rβ配體具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列，或上述任一項的組合)和由本公開提供的Rγc配體(如選自SEQ ID NOS：944-1028、1032-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列，由本公開提供的IL-2Rγc配體的取代氨基酸序列，由本公開提供的IL-2Rγc配體的截短的氨基酸序列，由本公開提供的在N-末端和/或C-末端上具有1至5個側翼甘氨酸的IL-2Rγc配體，與由本公開提供的IL-2Rγc配體具有大於60%序列相似性的氨基酸序列，或上述任一項的組合)。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以包含IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體，所述IL-2Rβ配體具有SEQ ID No：865和9301-9314中任一項的氨基酸序列，或具有與SEQ ID No：865和9301-9314中任一項具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列，所述IL-2Rγc配體具有SEQ ID NO：965和9340-9353中任一項的氨基酸序列，或與SEQ ID No：865和9301-9314中任一項具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以包含IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體，所述IL-2Rβ配體具有SEQ ID NO：865或與SEQ ID NO：865具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%，大於90%或大於95序列相似性的氨基酸序列，所述IL-2Rγc配體具有SEQ ID NO：965或與SEQ ID NO：965具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列。
在IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體的C-末端可以與IL-2Rγc配體的N-末端連接。
IL-2Rβγc配體可以包含具有SEQ ID NO：865的截短的氨基酸序列的IL-2Rβ配體和具有SEQ ID NO：965的截短的氨基酸序列的IL-2Rγc配體。
IL-2Rβγc配體可以包含具有取代的SEQ ID NO：865的IL-2Rβ配體和具有取代的SEQ ID NO：965的IL-2Rγc配體，其中所述取代可以包含1至5個保守性氨基酸取代或非保守氨基酸取代(如1至2個保守性氨基酸取代或非保守性氨基酸取代)。
IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體中的每一個可以獨立地包含一個或多個側翼氨基酸(如一個或多個甘氨酸)。例如，IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的N-末端和C-末端各自可以獨立地包含1至5個甘氨酸。
IL-2Rβ配體的N-末端可以藉由包含例如1至10個氨基酸的柔性接頭與IL-2Rγc配體的C-末端偶聯。接頭可以是例如具有SEQ ID NO：9380-9407和9420-9428中的任一項的氨基酸序列的肽基接頭。
IL-2Rβγc配體可以包含氨基酸序列SEQ ID NO：1263(–GGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG–)，或與SEQ ID NO：1263具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列。
IL-2Rβγc配體可以包含SEQ ID NO：1264的氨基酸序列(–WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ–)或與SEQ ID NO：1264具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列。
IL-2Rβγc配體可以包含SEQ ID NO：1265的氨基酸序列(–WYPCWMAQLGELCDLDGG–X300 –GGVVCQDWEGVELCWQ–)，或可以包含與SEQ ID NO：1265具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列，其中X300 可以包含1至20個氨基酸。例如，X300 可以選自具有SEQ ID NO：9380-9407和9420-9428中任一項的氨基酸序列的肽基接頭。可以選擇X300 以使SEQ ID NO：1263-1265中任一項的IL-2Rβγc配體或與SEQ ID NO：1263-1265中任一項具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列是IL-2R的激動劑或IL-2R的部分激動劑。
IL-2Rβγc配體可以包含SEQ ID NO：1266的氨基酸序列(–WYPCWMAQLGELCDLD–X301 –VVCQDWEGVELCWQ–)或與SEQ ID NO：1266具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列，其中X301 包括1至30個氨基酸。可以選擇X301 以使SEQ ID NO：1266的IL-2Rβγc配體或與SEQ ID NO：1266具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列是IL-2R的激動劑或IL-2R的部分激動劑。
在SEQ ID NO：1263-1270中任一項的IL-2Rβγc配體或與SEQ ID NO：1263-1270中任一項具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性的氨基酸序列中，IL-2Rβ配體的半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合在一起，並且IL-2Rγc配體的半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合在一起。在某些IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體的半胱氨酸可以與IL-2Rγc配體的半胱氨酸結合。
IL-2Rβγc配體可以包含選自SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列、SEQ ID NO：1263-1270中任一項的取代的氨基酸序列、SEQ ID NO：1263-1270中任一項的截短的氨基酸序列、在N-末端和/或C-末端上具有1至5個側翼甘氨酸的SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列、與SEQ ID NO：1263-1270中任一項具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列、或上述任一項的組合。
SEQ ID NO: 1263 –GGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG–
SEQ ID NO: 1264 –WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ–
SEQ ID NO: 1265 –WYPCWMAQLGELCDLDGG–X300 –GGVVCQDWEGVELCWQ–
SEQ ID NO: 1266 –WYPCWMAQLGELCDLD–X301 –VVCQDWEGVELCWQ–
SEQ ID NO: 1267 –GWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQG–
SEQ ID NO: 1268 –GGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQG–
SEQ ID NO: 1269 –GWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG–
SEQ ID NO: 1270 –(X301 )n ) –WYPCWMAQLGELCDLD–X300 –VVCQDWEGVELCWQ–(X301 )n –
在具有SEQ ID NO：1265和1270中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體中，X300 可以包含1至20個氨基酸。例如，X300 可以選自SEQ ID NO：9380-9407中任一項的氨基酸序列。例如，X300 可以為GGS(SEQ ID NO：9402)或GGGGSGG(SEQ ID NO：9404)。例如，X300 可以選自具有SEQ ID NO：9420-9428中任一項的氨基酸序列的肽基接頭。
在具有SEQ ID NO：1266和1270的配體中，每個X301 可以獨立地包含側翼氨基酸(如甘氨酸)，其中每個n獨立地為0至5的整數。
具有SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體，IL-2Rβ配體的半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合在一起，並且Rγc配體的半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合在一起。在某些IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體的半胱氨酸可以與Rγc配體的半胱氨酸結合。
IL-2Rβγc配體可以與SEQ ID NO：1263-1270中任一項具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性。
IL-2Rβγc配體可以包含選自SEQ ID NO：4070-4085中任一項的氨基酸序列、SEQ ID NO：4070-4085中任一項的取代的氨基酸序列、SEQ ID NO：4070-4085中任一項的截短的氨基酸序列、在N-末端和/或C-末端上具有1至5個側翼甘氨酸的SEQ ID NO：4070-4085中任一項的氨基酸序列、與SEQ ID NO：4070-4085中任一項具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列、或上述任一項的組合。
SEQ ID NO: 4070 GGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4071 GGAVEFYPCWLARIGELCDLVEPGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4072 GGWYPCWIARVGELCDMEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4073 GGEWFHDCFLAKVGDLCDLFLWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4074 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4075 GGRSLVDCFLVKVGDLCDFFNWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4076 GGWYPCWIARVGELCDLEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4077 GGWYPCWLAQVGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4078 GGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4079 GGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4080 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4081 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4082 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4083 GGLVDCFKVKVGELCDLFGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4084 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4085 GGWYSCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
具有SEQ ID NO：4070-4085中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體，所述IL-2Rβ配體的半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合在一起，並且所述Rγc配體的半胱氨酸可以藉由二硫鍵結合在一起。在某些IL-2Rβγc配體中，IL-2Rβ配體的半胱氨酸可以與Rγc配體的半胱氨酸結合。
IL-2Rβγc配體可以與SEQ ID NOS：4070-4085中任一項具有大於60%、大於70%、大於75%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的序列相似性 。
在具有SEQ ID NO：4070-4085的IL-2Rβγc配體中，配體接頭可以是另一種配體接頭(如本文中所公開的那些中的任一個)。
IL-2Rβγc配體可以具有SEQ ID NO：4090-4094中任一項的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 4090 Ac-WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ-OH
SEQ ID NO: 4091 Ac-WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVALCWQ-OH
SEQ ID NO: 4092 Ac-WYPCW(Abu)AQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ-OH
SEQ ID NO: 4093 Ac-WYPCW(Abu)AQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVALCWQ-OH
SEQ ID NO: 4094 Ac-WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ-OH
具有SEQ ID NO：4090-4094中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體可以以小於100μM的IC50 結合hIL-2Rβ亞基和hIL-2Rγc亞基。
ILIL-2Rβγc配體可以具有SEQ ID NO：4095-4099中任一個的氨基酸序列。
SEQ ID NO: 4095 Ac-GGELLVDCFKVKVGELCDLFFGGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 4096 Ac-GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 4097 Ac-GGKWVHDCFLAKVGDVCDLFVVGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 4098 Ac-GGRSLVDCFLVKVGDLCDFFNWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 4099 Ac-GGEWFHDCFLAKVGDLCDLFLWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
具有SEQ ID NO：4095-4099中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體可以以小於100μM的IC50 與hIL-2Rβ亞基和hIL-2Rγc亞基結合。
具有SEQ ID NO：1263-1270、4070-4085和4090-4099中任一項的氨基酸序列的某些IL-2Rβγc配體可以以小於100μM的IC50 將hIL-2Rβ亞基與hIL-2Rγc亞基、cyno-IL-2Rβ亞基和cyno-IL-2Rγc亞基結合。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以以1pM至100μM、10pM至10μM、100pM至1μM、0.001µM至1µM或0.01µM至1µM的IC50 與IL-2R(如人IL-2R)結合。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以以小於100μM、小於10μm、小於1μm、小於100pM、小於10pM或小於1pM的IC50 與IL-2R(人IL-2R)結合。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以以1pM至100µM、10pM至10µM、100pM至1µM、0.001µM至1µM或0.01µM至1µM的IC50 與IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基中的每一個(如人IL-2Rβ亞基和人IL-2Rγc亞基中的每一個)。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以以小於100µm、小於10µm、小於1µm、小於100pM、小於10pM或小於1pM的IC50 與IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基中的每一個(如人IL-2Rβ亞基和人IL-2Rγc亞基中的每一個)結合。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以在TF-1β細胞和/或NK-92細胞中展現出例如小於100μM、小於10μM、小於1µM、小於100pM、小於10pM或小於1pM的STAT5磷酸化的EC50 。
由本公開提供的IL-2Rγc配體可以在TF-1β細胞和/或NK-92細胞中展現出例如從1pM至100µM、從10pM至10µM、從100pM至1µM、從0.001µM至1µM或從0.01µM至1µM的STAT5磷酸化的EC50 。
實體瘤展現出與正常組織的代謝差異。實體瘤對糖酵解代謝的依賴性更大，產生了更酸性的腫瘤微環境。例如，實體瘤微環境的pH可以比大多數正常組織的pH小1個pH至2個pH單位。相對於正常外周組織中的活性，可以利用該pH差異來增強實體瘤中治療劑的活性。
使用合適的pH選擇性篩選方法，可以鑒定在低pH下以比在中性pH下結合的IC50 小的IC50 與IL-2R結合的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體。例如，在小於6的pH下結合的IC50 可以比在大於6的pH下結合的IC50 小至少10倍或至少100倍。可以將這些pH偏倚性IL-2Rβ配體和/或IL-2Rγc配體摻入到IL-2Rβγc配體中以提供pH偏倚性IL-2Rβγc配體。
IL-2Rβγc配體可以包括pH偏倚性IL-2Rβ配體和/或pH偏倚性IL-2Rγc配體。這些pH偏倚性IL-2Rβγc配體在靶向實體瘤的細胞毒性增加和對正常組織的毒性降低方面可以展現出增強的治療指數。
包含pH偏倚性IL-2Rβ配體和/或pH偏倚性IL-2Rβγc配體的IL-2Rβγc配體可以展現出對IL-2Rβ亞基和/或與IL-2Rβ亞基的pH偏倚性結合親和力(IC50 )。
例如，pH偏倚性IL-2Rβγc配體可以在pH 6下以比在pH 7.5時與IL-2R(如人IL-2R)結合的IC50 至少小10%的IC50 與IL-2R(如人IL-2R)結合，以比在pH 7.5時與IL-2R(如人IL-2R)結合的IC50 至少小25%、至少小50%、至少小100%或至少小200%的IC50 與IL-2R(如人IL-2R)結合。
pH偏倚性IL-2Rβγc配體可以在pH 6.0時以1pM至100µM的IC50 與IL-2R(例如人IL-2R)結合；並在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與IL-2R(例如人IL-2R)結合。
pH偏倚性IL-2Rβγc配體可以在pH 6.0時以0.1µM至50µM的IC50 與人IL-2Rγc(如人IL-2Rγc)結合；並在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與IL-2Rγc(如人IL-2Rγc)結合。
pH偏倚性IL-2Rβγc配體可以在pH 6.0時以小於100µM的IC50 與IL-2Rγc(如人IL-2Rγc)結合；並在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與IL-2Rγc(如人IL-2Rγc)結合。
pH偏倚性IL-2Rβγc配體可以在pH 6.0時以小於100µM的IC50 與IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基(如人IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基)中的每一個結合，並在pH 7.5時以大於100µM的IC50 與IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基(如人IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基)中的每一個結合。
pH偏倚性IL-2Rβγc配體可以用於，例如，與中性和高pH環境中的細胞相比，在低pH細胞環境(如實體瘤)中選擇性啟動表達IL-2R的細胞。
使用合適的pH選擇性篩選方法，可以鑒定出pH偏倚性IL-2Rβγc配體，其在較低pH下與IL-2R具有較高的結合親和力(較低的IC50 )，並且在中性pH時具有較低的結合親和力(較高的IC50 )。IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc配體構建體可以包括一個或多個pH偏倚性IL-2Rβ配體和/或一個或多個pH偏倚性IL-2Rγc配體。這些pH偏倚性IL-2Rβγc配體、pH偏倚串聯的IL-2Rβγc配體和pH偏倚性IL-2Rβγc配體構建體可以展現出增強的治療指數，起反映出靶向實體瘤的細胞毒性增加，並且對正常組織的毒性降低。
類似地，使用pH選擇性功能篩選方法，可以選擇與較高pH(例如pH 7)相比，在較低pH(例如pH 6)下展現出增強的IL-2R激動劑活性的IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體。例如，在TF-1β細胞和/或NK-92細胞中，相對於在pH 7.5時相同的IL-2Rβγc配體的EC50 ，由本公開提供的pH偏倚性IL-2Rβγc配體可以在pH 6.0時提供STAT5磷酸化較低的EC50 。這種pH偏倚性IL-2Rβγc配體在較低pH下展現出增強的IL-2R激動劑活性或部分激動劑活性。
例如，pH偏倚性IL-2Rβγc配體在pH 6時可以在TF-1β和NK-92細胞中展現出比在pH 7.5時在TF-1β和NK-92細胞中的STAT5磷酸化的EC50 至少小10%的STAT5磷酸化的EC50 ，比在pH 7.5時在TF-1β和NK-92細胞中的STAT5磷酸化的EC50 至少小25%、至少小50%、至少小100%或至少小200%的STAT5磷酸化的EC50 。
使用類似於實施例中所述的那些的pH選擇性篩選方法，可以鑒定具有其他pH偏倚性pH偏倚性IL-2Rβ配體和/或IL-2Rγc配體(如其他pH偏倚性功能特性或pH值大於正常健康組織時降低的IC50 或EC50 )，並將其併入IL-2Rβγc配體中，以提供其他有偏倚性IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體。
由本公開提供的串聯IL-2Rβγc配體可以包含兩個或更多個IL-2Rβγc配體。兩個或更多個IL-2Rβγc配體可以結合在一起以形成線性或非線性結構。例如，串聯IL-2Rβγc配體可以具有式(8a)或式(8b)的結構： BGL–(–Lt1 –BGL–)n1 –Lt1 –BGL                                      (8a) Lt2 {(–Lt1 –BGL–)n2 –Lt1 –BGL}p (9b) 其中， 每個BGL獨立地選自IL-2Rβγc配體；和 Lt1 為二價串聯接頭； Lt2 為p價串聯接頭； n1為1至6的整數；和 n2為0至6的整數；和 p為3到8的整數。
在式(8a)和(8b)的串聯IL-2Rβγc配體中，每個IL-2Rβγc配體可以相同。
在式(8a)和(8b)的串聯IL-2Rβγc配體中，至少一個IL-2Rβγc配體可以不同於另一IL-2Rβγc配體。
在式(8a)和(8b)的串聯IL-2Rβγc配體中，每個IL-2Rβγc配體可以藉由各自IL-2Rβγc配體的N-末端或藉由C-末端獨立地與串聯接頭結合。
在式(8a)和(8b)的串聯IL-2Rβγc配體中，每個IL-2Rβγc配體可以包含一個或多個側翼氨基酸。
串聯接頭Lt1 和Lt2 可以是肽基串聯接頭，並且可以是例如1至50個氨基酸、2至40個氨基酸或5至30個氨基酸。
串聯接頭可以包含化學接頭(如由本公開提供的含三唑的接頭)。
每個二價串聯接頭Lt1 可以與其他每個二價串聯接頭相同，或者至少一個二價串聯接頭可以與另一個串聯接頭不同。
在式(8a)的串聯IL-2Rβγc配體中，n可以為例如1、2、3、4、5或6。
在式(8b)的串聯IL-2Rβγc配體中，每個n可以獨立地選自0、1、2、3、4、5或6。
在式(8b)的串聯IL-2Rβγc配體中，p可以為例如3、4、5、6、7或8。
p價串聯接頭可以包含任何合適的多官能化學部分。例如，式(8a)和(8b)的串聯IL-2Rβγc配體的分子量可以小於10,000Da、小於6,000Da、小於2,000Da、小於1,000Da或小於500Da。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以與天然存在的蛋白質或合成分子結合以提供IL-2Rβγc配體構建體。合適的構建體伴侶的實例包括聚合物、蛋白質、Fc片段、免疫球蛋白片段和抗體。
IL-2Rβγc配體構建體可以被配置為提供所期望的藥物代謝動力學特性，提供降低的免疫原性，靶向特定細胞群和/或提供增強的治療功效。
IL-2Rβγc配體可以藉由構建體接頭與構建體伴侶結合。
IL-2Rβγc配體構建體可以包含與構建體伴侶結合的單個IL-2Rβγc配體或與構建體伴侶結合的兩個或更多個IL-2Rβγc配體。
結合至構建體伴侶的兩個或多個IL-2Rβγc配體中的每一個可以是相同的，或者至少一個IL-2Rβγc配體可以與結合至構建體伴侶的至少一個其他IL-2Rβγc配體不同。IL-2Rβγc配體可以在例如IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體接頭和/或側翼氨基酸方面不同。
每個IL-2Rβγc配體可以藉由各自的構建體接頭獨立地與構建體伴侶結合。每個相應的構建體接頭可以相同，或者至少一個構建體接頭可以與至少一個其他構建體接頭不同。構建體接頭可以例如在長度和/或化學組成方面不同。
每個IL-2Rβγc配體可以藉由各自的IL-2Rβγc配體的N-末端或C-末端獨立地與構建伴侶結合。
IL-2Rβγc配體構建體可以包含與構建體伴侶結合的串聯IL-2Rβγc配體。串聯IL-2Rβγc配體可以藉由構建體接頭與構建體伴侶結合。
IL-2Rβγc配體構建體可以包含與構建體伴侶結合的單個串聯IL-2Rβγc配體或與構建體伴侶結合的兩個或更多個串聯IL-2Rβγc配體。
與構建伴侶結合的兩個或更多個串聯IL-2Rβγc配體中的每一個可以相同，或至少一個串聯IL-2Rβγc配體可以與與構建伴侶結合的至少一個其他串聯IL-2Rβγc配體不同。串聯IL-2Rβγc配體在例如IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體接頭，串聯接頭和/或側翼氨基酸方面可以不同。
每個串聯IL-2Rβγc配體可以藉由各自的構建體接頭與構建體伴侶結合。各自構建體接頭中的每一個可以相同，或者至少一個構建體接頭可以與至少一個其他構建體接頭不同。構建體接頭可以例如在長度和/或化學組成方面不同。
每個串聯IL-2Rβγc配體可以藉由各自串聯IL-2Rβγc配體的N-末端或C-末端獨立地與構建體伴侶結合。
IL-2Rβγc配體構建體可以包含與構建體伴侶結合的至少一個IL-2Rβ配體和至少一個串聯IL-2Rγc配體。至少一個IL-2Rβ配體和至少一個IL-2Rγc配體中的每一個可以藉由構建體接頭獨立地與構建體伴侶結合。例如，IL-2Rβγc配體構建體可以包含由本公開提供的1至10個IL-2Rβ配體和由本公開提供的1至10個IL-2Rγc配體。
IL-2Rβγc配體構建體可以包含例如至少一個IL-2Rβγc配體、至少一個串聯IL-2Rβγc配體、至少一個IL-2Rβ配體和/或至少一個IL-2Rγc配體，條件是IL-2Rβγc配體包含至少一個IL-2Rβ配體和至少一額IL-2Rγc配體。
IL-2Rβγc配體構建體可以容納(compromise)與分子(如形成聚合物或蛋白質的氨基酸)側鏈結合的一個或多個IL-2Rβγc配體。
IL-2Rβγc配體構建體可以容納一個或多個IL-2Rβγc配體，其中所述一個或多個IL-2Rβγc配體被摻入到聚合物或多肽的主鏈中。因此，IL-2Rβγc配體構建體可以包含一個或多個IL-2Rβγc配體，其中所述一個或多個IL-2Rβγc配體與多肽的N-末端結合，與多肽的C-末端結合，與多肽的氨基酸側鏈結合，和/或摻入到多肽的氨基酸序列中。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體構建體包括融合蛋白。
合適的融合蛋白伴侶的實例包括Fc片段、免疫球蛋白(如IgG1、IgG2和IgG4)、免疫球蛋白片段(如IgG1、IgG2和IgG4片段)、天然存在的蛋白(如人血清白蛋白(HSA)、抗體，其他人類蛋白質及其突變體和/或變體；蛋白質和多肽。融合蛋白伴侶可以是天然存在的蛋白、經修飾的天然存在的蛋白或合成蛋白。
融合伴侶可以被用於提供期望的藥物代謝動力學概況，用於細胞靶向，用於雙重藥理和/或用於增強治療功效。
例如，可以將由本公開提供的IL-2Rβγc配體與增加IL-2Rβγc配體的循環半衰期的蛋白質融合。治療性蛋白質與IgG或IgG-Fc鏈的融合可以藉由增加蛋白質的流體動力學半徑(從而降低腎臟清除率)以及藉由新生兒Fc受體(FcRn)介導的融合蛋白再循環(從而延長循環週期)來實現這點目的。可以設計其他融合蛋白來定制特性(如藥物代謝動力學、生物分佈、藥效學、藥理學、細胞毒性、選擇性和/或靶向性)。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體融合蛋白可以包含與融合蛋白伴侶結合的一個或多個IL-2Rβγc配體。一個或多個IL-2Rβγc配體中的每一個可以藉由各自的IL-2Rβγc配體的N-末端或藉由C-末端獨立地與融合蛋白伴侶結合。一個或多個IL-2Rβγc配體中的每一個可以相同。一個或多個IL-2Rβγc配體中的至少一個可以與至少一個其他IL-2Rβγc配體不同。IL-2Rβγc配體和融合伴侶蛋白之間的連接處的氨基酸序列可以是兩個蛋白序列的直接融合，或者可以是與中間肽基融合(構建體)接頭的融合。可以包括肽基接頭作為IL-2Rβγc配體與融合伴侶之間的間隔子。肽基接頭可以促進組分蛋白質和一個或多個IL-2Rβγc配體的適當蛋白質折疊和穩定性，改善蛋白質表達，和/或可以增強IL-2Rβγc配體和/或融合伴侶的生物活性。
IL-2Rβγc配體融合蛋白中使用的肽基接頭可以被設計為非結構化的柔性肽。肽基接頭可以例如富含甘氨酸和絲氨酸(如序列的重複)，例如具有SEQ ID NO：9380-9401中任一項的肽基接頭，其中n為1至10的整數。具有完全延伸的β鏈構象的柔性肽基接頭可以具有例如每個殘基3.5Å的端對端長度。因此，具有5、10、15或10個殘基的肽基接頭可以具有的最大完全延伸長度分別為17.5Å、35Å、52.5Å、70Å，140Å或大於140Å。
肽基接頭可以是剛性接頭，諸如包括脯氨酸和其他氨基酸(如丙氨酸、賴氨酸或谷氨酸)的接頭。例如，剛性接頭可以具有SEQ ID NO：9420-9425中任一項的氨基酸序列。肽基接頭可以促進提供單個融合蛋白部分的適當構象和取向，以促進IL-2Rβγc配體與IL-2R的IL-2Rβ亞基和/或IL-2Rγc亞基接合，促進L-2R的2Rβγc配體與IL-2R的結合，使融合蛋白的再循環成為可能，和/或延長IL-2Rβγc配體的循環半衰期。
設計和構建包含一個或多個IL-2Rβγc配體的融合蛋白有多種選擇，並且可以選擇以獲得具有所期望生物學活性和藥物特性的IL-2Rβγc融合蛋白。設計選擇包括，例如，IL-2Rβγc配體(其包括IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc配體接頭的選擇)；融合伴侶蛋白結合部分；融合蛋白中融合伴侶結合部分的構型；結合IL-2Rβγc配體與融合伴侶的肽基接頭；以及融合伴侶蛋白。
總之，由本公開提供的IL-2Rβγc配體融合蛋白的製備可以使用公認的重組DNA技術來製備，所述重組DNA技術包括例如聚合酶鏈式擴增反應(PCR)、質粒DNA的製備、DNA的限制性酶切割、寡核苷酸的製備、DNA的連接、mRNA的分離、將DNA導入合適的細胞、宿主的轉化或轉染以及宿主的培養。另外，IL-2Rβγc配體融合蛋白可以使用離液劑並使用眾所周知的電泳、離心和色譜方法進行分離和純化。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體融合蛋白可以包含一個或多個小的泛素相關修飾物(SUMO)蛋白。泛素樣修飾物SUMO對細胞蛋白質的修飾可以調孔多種細胞過程(如核轉運、信號轉導和蛋白質穩定化)。一旦與細胞靶標共價連接，SUMO就會調控蛋白質/蛋白質和蛋白質/DNA相互作用，以及定位和穩定靶蛋白質。
例如，IL-2Rβγc配體可以與與SUMO蛋白結合的第一接頭結合，還與將SUMO蛋白結合至融合伴侶(如IgG或Fc片段)的第二接頭結合。SUMO融合體可以增強表達、促進溶解性和/或促進最佳化的蛋白質折疊。高度穩定的結構(如泛素或SUMO的結構)在融合伴侶蛋白的N-末端或C-末端處的連接可以藉由增加穩定性來提高產量。泛素和泛素樣蛋白的增溶作用也可以部分地由泛素和SUMO核心結構的外部親水性和內部疏水性來解釋，從而對其它不溶的蛋白發揮去污劑樣的作用。
一個或多個IL-2Rβγc配體可以與提供所期望的藥物代謝動力學性質的構建體伴侶結合。例如，一個或多個IL-2Rβγc配體可以與合成聚合物或蛋白質(如天然存在的蛋白)結合，其在體循環中展現出延長的半衰期。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體可以與延長IL-2Rβγc配體的血清半衰期的分子綴合或融合，而不會增加此類半衰期延長會增加患者的副作用或不良事件的可能性或強度。延長血清半衰期IL-2Rβγc配體的劑量可以允許延長靶標的覆蓋範圍，同時降低全身性最大暴露量(Cmax )。延長的血清半衰期可以允許使用更低的施用劑量和/或更低頻率給藥方案的IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體。
可以藉由任何合適的方法來延長IL-2Rβγc配體的血清半衰期。此類方法包括將IL-2Rβγc配體連接至與新生兒Fc受體結合的肽，或將IL-2Rβγc配體連接至具有延長的血清半衰期的蛋白質(如IgG、IgG Fc片段或人血清白蛋白(HSA))。
IL-2Rβγc配體藥物動力學構建體的實例包括：(a)將一個或多個IL-2Rβγc配體重組融合至天然的長半衰期蛋白質或蛋白質結構域(如Fc融合、轉鐵蛋白融合或白蛋白融合)；(b)將一個或多個IL-2Rβγc配體重組融合至惰性多肽上，如XTEN®、高氨基酸聚合物(HAP，HAP化)、脯氨酸-丙氨酸-絲氨酸聚合物(PAS，PAS化)、彈性蛋白樣肽(ELP，ELP化)或明膠樣蛋白GLK聚合物；(c)藉由將一個或多個IL-2Rβγc配體化學綴合至重複的化學部分(如PEG化或透明質酸)來增加流體動力學半徑；(d)藉由多唾液酸化或藉由融合至帶負電荷的高度唾液酸化的肽(如羧基末端肽，絨毛膜促性腺激素(CG)β鏈的CTP)來增加一個或多個IL-2Rβγc配體的負電荷；或(e)將一個或多個IL-2Rβγc配體與正常長的半衰期蛋白(如人血清白蛋白(HSA)、轉鐵蛋白)的、與人免疫球蛋白IgG的恒定片段Fc鏈融合的、或與非天然多肽(如XTEN®)融合的肽或蛋白結合結構域綴合。
一個或多個IL-2Rβγc配體可以與合成聚合物結合。
例如，IL-2Rβγc配體可以與聚乙二醇(PEG)鏈綴合以延長IL-2Rβγc配體在體循環中的半衰期。PEG可以具有以下分子量：例如5kDa至100kD、10kDa至80kDa、或20kDa至60kDa。
可以化學或酶促地實現PEG化，並且綴合物的生物物理和生化特性可以取決於例如PEG鏈的結構、大小、數量和位置。PEG化可以藉由掩蔽蛋白水解切割位點和/或藉由增加配體的有效流體力學半徑來延長IL-2Rβγc配體的循環半衰期，從而降低腎臟清除率。
IL-2Rβγc配體可以與線性或支鏈的單甲氧基聚乙二醇(mPEG)綴合，導致分子品質和流體動力學半徑的增加，並降低腎小球濾過率。PEG是一種高度柔性的不帶電荷的、主要是非免疫原性的、親水性的且不可生物降解的分子，與等效大小的蛋白質相比，它產生更大的流體動力學半徑。PEG化已被廣泛用於延長藥理活性化合物的半衰期。
與IgG相似，血清白蛋白顯示出異常長的循環半衰期。這些功能和結構上不相關的蛋白質的半衰期延長主要源自與FcRn的相互作用。儘管HSA與IgG的結合位點與FcRn的結合位點不同，但兩種相互作用都是pH依賴性的，並導致FcRn介導的細胞分解代謝的挽救。能夠延長循環半衰期的IL-2Rβγc配體構建體包括，例如，與HSA的基因融合、與HSA結合部分的綴合以及與HSA結合的抗體或抗體片段的融合。
一個或多個IL-2Rβγc配體可以與XTEN®多肽(Amunix Pharmaceuticals Inc.)結合。XTEN®多肽的長度通常為200個氨基酸或更多，被設計用來掩蔽scFv的抗原結合區域，使其無結構且免疫原性低。XTEN®多肽可以延長治療劑的循環半衰期。可以將一個或多個IL-2Rβγc配體與XPAT®多肽(Amunix Pharmaceuticals，Inc.)結合。XPAT®多肽包括蛋白酶的底物，並且可以被設計為對一種或多種蛋白酶具有活性，以選擇切割速率並賦予特異性。
一個或多個IL-2Rβγc配體與血清轉鐵蛋白(Tf)的基因融合可以產生增強的藥物代謝動力學。血清轉鐵蛋白是一種80 kDa的糖蛋白，其介導鐵從全身性循環進入細胞和組織。當與鐵離子結合時，轉鐵蛋白對大多數細胞類型表面上顯示的轉鐵蛋白受體(TfR)具有很高的親和力。相互作用後，Tf/TfR複合物經由受體介導的內吞作用被內化到內體中，在那裡釋放鐵，然後Tf/TfR循環到細胞表面。蛋白質治療劑與Tf或TfR結合抗體的融合可以被用於延長半衰期，靶向過表達TfR的惡性細胞以及靶向rai 毛細血管內皮，以藉由血腦屏障轉運治療劑。
IL-2Rβγc配體與IgG或Fc融合可以增加IL-2Rβγc配體的親合力，可以經由蛋白G./A親和色譜純化，並可以延長IL-2Rβγc配體的循環半衰期。
IL-2Rβγc配體/IgG融合蛋白的半衰期延長是由於分子大小增加和FcRn介導的再循環導致腎清除率降低的組合。
一個或多個IL-2Rβγc配體可以與任何合適的IgG(包括例如IgG1、IgG2或IgG4)結合。一個或多個IL-2Rβγc配體可以與IgG的任何合適部分(如輕鏈VL或重鏈VH，並包括N-末端、C-末端、氨基酸側鏈)結合，或者可以被摻入至IgG的輕鏈或重鏈的氨基酸序列中。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體構建體可以包含IL-2Rβγc配體/IgG構建體。
IgG構建體包含至少一條重鏈和至少一條輕鏈。IL-2Rβγc配體可以與重鏈的N-末端結合，與輕鏈的N-末端結合，或與重鏈的N-末端以及輕鏈的N-末端結合。
IL-2Rβγc配體可以與重鏈的C-末端結合，例如，與CH3結構域結合，與重鏈的N-末端結合和/或與輕鏈的N-末端結合。
在IgG構建體中，IL-2Rβγc配體可以與一條或兩條重鏈的N-末端結合，與一條或兩條輕鏈的N-末端結合，和/或與重鏈的一個或兩個C-末端結合。
在IgG構建體中，IL-2Rβγc配體可以與IgG的氨基酸側鏈結合。
在IgG構建體中，IgG重鏈和/或IgG輕鏈可以包含摻入形成IgG重鏈和/或IgG輕鏈的氨基酸序列中的一個或多個IL-2Rβγc配體。
在圖20A-圖20J中顯示了IL-2Rβγc配體IgG構建體的實例。
在IL-2Rβγc構建體中，將IL-2Rβγc配體與IgG結合的每個接頭可以獨立地相同或可以不同。
例如，IL-2Rβγc配體可以與一條或兩條IgG重鏈的C-末端結合，與一條或兩條IgG輕鏈的C-末端，與一條或兩條IgG重鏈的N-末端結合，和/或與一條或兩條IgG輕鏈的N-末端結合。顯示IL-2Rβγc配體構建體的實例，其中圖20A-圖20J中顯示了IL-2Rβγc配體與IgG重鏈和/或輕鏈結合。每個IL-2Rβγc配體可以藉由合適的構建體接頭與IgG結合。
一個或多個IL-2Rβγc配體可以與IgG片段(如單個輕鏈VL結構域、單個重鏈VH結構域或Fc區)結合。片段可以源自任何合適的免疫球蛋白(如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)。片段可以源自任何合適的IgG(如例如IgG1、IgG2或IgG4)。
一個或多個IL-2Rβγc配體可以與Fc片段結合。Fc片段可以是單體的，可以是二聚體的或可以是經修飾的Fc片段。二聚體Fc片段可以在N-末端上包含一個或多個二硫鍵。修飾的實例是杵臼(knob-into-hole)修飾，其包括在免疫球蛋白重鏈之一的CH3結構域中的杵修飾和在另一免疫球蛋白重鏈中的臼修飾。
由本公開提供的構建體包括IL-2Rβγc配體-Fc融合蛋白。Fc鏈可以包括兩條不同的多肽，其自組裝成同二聚體Fc鏈或異二聚體Fc鏈。融合蛋白可以包括Fc鏈、一個或多個Fc連結頭以及一個或多個IL-2Rβγc配體。Fc連結頭將由本公開提供的IL-2Rβγc配體與Fc鏈結合。
Fc鏈可以包含任何合適的免疫球蛋白同種型(包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM免疫球蛋白同種型)的Fc鏈。Fc片段可以源自任何合適的IgG免疫球蛋白，包括例如IgG1、IgG2或IgG4。
IL-2Rβγc配體Fc融合蛋白可以包含一個或多個IL-2Rβγc配體。一個或多個IL-2Rβγc配體中的每一個可以與與Fc鏈結合的其他IL-2Rβγc配體相同或不同。
IL-2Rβγc配體Fc片段構建體(即IL-2Rβγc Fc融合體)可以包含與Fc片段的一條Fc鏈的C-末端或Fc片段的兩條Fc鏈的C-末端結合的IL-2Rβγc配體。
IL-2Rβγc配體Fc融合體可以包含與Fc片段的N-末端或與Fc片段的N-末端的兩個IL-2Rβγc配體結合的一個IL-2Rβγc配體。
IL-2Rβγc配體Fc融合體可以包含與Fc片段的C-末端結合的一個或兩個IL-2Rβγc配體以及可以與Fc片段的N-末端結合的一個或兩個IL-2Rβγc配體。
每個IL-2Rβγc配體可以藉由Fc接頭與Fc片段共價結合。將IL-2Rβγc配體與Fc片段結合的每個Fc接頭可以相同或不同。
每個IL-2Rβγc配體可以藉由IL-2Rβγc配體的N-末端或藉由C-末端獨立地與Fc接頭結合。
在圖20A-圖20J和圖21A-圖21C中顯示了IL-2Rβγc配體Fc片段構建體的實例。
表6提供了包含與hIgG1或hIgG2免疫球蛋白Fc片段結合的IL-2Rβγc配體的構建體的實例。 表6. 配體免疫球蛋白構建體。
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SEQ ID NO: 8071 hIgG2-Fc-(PA)10 IL-2Rβγc配體    ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8072 hIgG2-Fc-(PA)10 IL-2Rβγc配體    ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8073 hIgG2-Fc-(PA)10 IL-2Rβγc配體    ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8074 hIgG2-Fc-(PA)10 IL-2Rβγc配體    ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG          
SEQ ID NO: 8075 ZW1 A-(PA)10 IL-2Rβγc配體    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGLVDCFKVKVGELCDLFGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8076 ZW1_B    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG   
SEQ ID NO: 8077 Cys-杵-(PA)10 IL-2Rβγc配體    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGLVDCFKVKVGELCDLFGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8078  Cys-臼 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG   
SEQ ID NO: 8079  ZW1_A-(PA)10 IL-2Rβγc配體    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8080 Cys-杵-(PA)10 IL-2Rβγc配體    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8081 ZW1_A- (GS)10 IL-2Rβγc配體    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGGWYSCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8082 Cys-杵-(GS)10 IL-2Rβγc配體    DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGGWYSCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
表7中總結了具有SEQ ID NO：8061-8082的IL-2Rβγc配體構建體的組分。 表7. IL-2Rβγc配體構建體的組分
IL-2Rβγc配體構建體 構建體 接頭 IL-2Rβ配體 IL-2Rβγc配體接頭 IL-2Rγc配體
SEQ ID NO: 8061 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2930 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8062 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2931 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8063 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2932 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8064 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2933 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8065 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2934 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8066 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2935 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8067 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2936 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8068 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2937 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8069 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2930 (GGGGS)2 SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8070 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2930 (GGGGS)3 SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8071 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2930 (GGGGS)4 SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8072 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2934 (GGGGS)2 SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8073 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2934 (GGGGS)3 SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8074 hIgG2-Fc (PA)10 SEQ ID NO: 2934 (GGGGS)4 SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8075 ZW1_A (PA)10 SEQ ID NO: 2938 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8076 ZW1_B – – – –
SEQ ID NO: 8077 Cys-杵 (PA)10 SEQ ID NO: 2934 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8078 Cys-臼 – – – –
SEQ ID NO: 8079 ZW1-A (PA)10 SEQ ID NO: 2934 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8080 Cys-杵 (PA)10 SEQ ID NO: 2934 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8081 ZW1_A (GS)10 SEQ ID NO: 2939 GGGGS SEQ ID NO: 9340
SEQ ID NO: 8082 Cys-杵 (GS)10 SEQ ID NO: 2939 GGGGS SEQ ID NO: 9340
Fc融合蛋白可以包含兩條Fc鏈，其中至少一條Fc鏈包含融合的IL-2Rβγc配體和任選的Fc接頭。可以將二聚體Fc融合蛋白配置為具有一個IL-2Rβγc配體，可以將其稱為單價IL-2Rβγc配體-Fc融合體，其中IL-2Rβγc配體與Fc鏈之一共價結合，並且其他Fc鏈不與IL-2Rβγc配體結合。在二價IL-2Rβγc配體Fc融合體中，IL-2Rβγc配體與每個Fc鏈融合。
除了同二聚體二價IL-2Rβγc配體Fc融合蛋白之外，在單價IL-2Rβγc配體Fc融合蛋白中，一個Fc鏈可以是空的，並且異二聚化變體可以被用於將兩條Fc鏈結合在一起。這些實施方案依賴於兩個不同的變異Fc序列的使用，它們可以自組裝形成異二聚體Fc鏈和異二聚體Fe融合蛋白。有許多機制可以被用於生成異二聚體。另外，可以組合這些機制以確保高異二聚化。異二聚化變體可以包括空間變體(如杵和臼或偏斜變體)、電荷對變體和pH變體。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體構建體包括其中一個或多個IL-2Rβ配體與構建體伴侶結合並且獨立地一個或多個IL-2Rγc配體與構建體伴侶結合的構建體。例如，IL-2Rβ配體可以與Fc片段或免疫球蛋白的C-末端結合，並且IL-2Rγc配體可以與Fc片段或免疫球蛋白的N-末端結合。作為另一個實例，IL-2Rβ配體可以與Fc片段或免疫球蛋白的一條重鏈的C-末端結合，並且IL-2Rγc配體可以與Fc片段或免疫球蛋白的另一條重鏈結合。
包含一個或多個IL-2Rβ配體和/或一個或多個IL-2Rγc配體的構建體可以包含與構建體伴侶結合的一個或多個IL-2Rβγc配體。圖22和圖23分別顯示了Fc片段和免疫球蛋白的實例，其中配體與構建伴侶的C-末端和/或N-末端結合。每個配體可以獨立地選自IL-2Rβγc配體、IL-2Rβ配體或IL-2Rγc配體。
在包含蛋白質或合成聚合物的構建體中，一個或多個IL-2Rβ配體、一個或多個IL-2Rγc配體和/或一個或多個IL-2Rβγc配體可以與構建體伴侶結合。例如，配體可以與蛋白質的C-末端和N-末端結合或與聚合物的末端基團結合，和/或與官能化的側鏈結合。
一個或多個IL-2Rβ配體和一個或多個IL-2Rγc配體中的每一個可以藉由構建體接頭獨立地與構建體伴侶結合。構建體接頭可以為例如本文所公開的任何剛性或柔性接頭，並且可以選擇以促進與IL-2R的所期望的相互作用。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體構建體可以包含將IL-2Rβγc配體或串聯IL-2Rβγc配體與構建體伴侶共價結合的構建體接頭，所述構建體伴侶包括例如本文所公開的任何肽、聚合物、Fc片段、免疫球蛋白片段和抗體。
構建體接頭可以被配置為促進IL-2Rβγc配體與IL-2R上的結合位點的結合。可以配置構建體接頭以促進藉由IL-2Rβγc配體啟動IL-2R。
構建體接頭可以為肽基構建體接頭。肽基構建體接頭可以包含例如2至30個氨基酸、2至25個氨基酸、2至20個氨基酸、2至15個氨基酸或2至10個氨基酸。肽基構建體接頭可以包含例如少於30個氨基酸、少於25個氨基酸、少於20個氨基酸、少於15個氨基酸、少於10個氨基酸或少於5個氨基酸。肽基構建體接頭可以包含例如多於2個氨基酸、多於4個氨基酸、多於8個氨基酸、多於12個氨基酸或多於16個氨基酸。
肽基構建體接頭的長度可以為例如5至500Å，如10至400Å、50Å至300Å或100Å至200Å。肽基構建體接頭的長度可以為例如大於5Å、大於10Å、大於50Å、大於100Å、大於200Å、大於300Å或大於400Å。
構建體接頭可以為化學構建體接頭。化學構建體接頭的長度可以為例如5Å至500Å，例如10Å至400Å、5Å至300Å、或100Å至200Å。化學接頭的長度可以為例如大於5Å、大於10Å、大於50Å、大於100Å、大於200Å、大於300Å或大於400Å。
化學構建體接頭可以包含主鏈，所述主鏈包含例如3至100個鍵、5至90個鍵、10至80個鍵或20至60個鍵。化學構建體接頭可以包含主鏈，所述主鏈包含例如大於3個鍵、大於5個鍵、大於10個鍵、大於20個鍵、大於50個鍵或大於100個鍵。
合適的肽基構建體接頭的實例包括具有SEQ ID NO：9380-9401和9420-9425中任一項的肽，其中n可以為1至30(如2至25、2至20、2至16、3至12、4至10、或6至8)的整數。
IL-2Rβγc配體可以藉由IL-2Rβγc配體的N-末端或C-末端與構建體接頭結合。
在圖19A-圖19C中顯示了具有不同接頭構型的IL-2Rβγc配體構建體的實例。
在具有多於一個IL-2Rβγc配體的IL-2Rβγc配體構建體中，每個IL-2Rβγc配體可以藉由獨立的構建體與構建體伴侶結合。每個構建體接頭可以相同或至少一個構建體接頭可以不同。可以藉由IL-2Rβγc配體的N-末端或C-末端將多於一個IL-2Rβγc配體中的每一個與各自的構建退伴侶結合。
構建體接頭可以包含可切割的構建體接頭。可切割的構建體接頭可以例如在一定pH的情況下酶促或藉由施加能量(如藉由施加包括紫外線或紅外輻射的電磁輻射)在體內被切割。
IL-2Rβγc配體構建體可以包含與檢查點抑制劑(如PD-1檢查點抑制劑，其包括例如抗體檢查點抑制劑(如派姆單抗和西米普利單抗))結合的一個或多個IL-2Rβγc配體。
在IL-2Rβγc檢查點抑制劑構建體中，一個或多個IL-2Rβγc配體可以具有SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：1263-1270中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
在IL-2Rβγc檢查點抑制劑抗體構建體中，一個或多個IL-2Rβγc配體可以具有SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列，或IL-2Rβγc配體具有與SEQ ID NO：1263-1270中任一項氨基酸序列相似性，所述SEQ ID NO：1263-1270中任一項與一條重鏈的C-末端、兩條重鏈的C-末端、一條重鏈的N-末端、兩條重鏈的N-末端、輕鏈的N-末端、兩個輕鏈的N-末端或上述任意的組合結合。一個或多個IL-2Rβγc配體中的每一個可以藉由構建體接頭獨立地與檢查點抑制劑抗體結合，所述構建體接頭可以包含例如1至50個氨基酸。
IL-2Rβγc配體的N-末端可以藉由構建體接頭與檢查點抑制劑抗體結合。
IL-2Rβγc配體構建體可以是派姆單抗/IL-2Rβγc融合蛋白，其中輕鏈具有SEQ ID NO：1218(FP7)的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：1219(FP8)具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列；並且重鏈具有SEQ ID NO：1219(FP8)的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：1219(FP8)具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
派姆單抗/IL-2Rβγc融合蛋白可以包含兩條派姆單抗重鏈和兩條派姆單抗輕鏈，其中具有SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：1263-1270具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體與一條重鏈的C-末端、兩條重鏈的C-末端、一條重鏈的N-末端、兩條重鏈的N-末端、一條輕鏈的N-末端、兩條輕鏈的N-末端、或上述任意的組合結合。一個或多個IL-2Rβγc配體中的每一個可以藉由構建體接頭獨立地與派姆單抗抗體結合，所述構建體接頭可以包含例如1至50個氨基酸。
IL-2Rβγc配體的N-末端可以藉由構建體接頭與派姆單抗結合。
IL-2Rβγc配體構建體可以是西米普利單抗/IL-2Rβγc融合蛋白，其中輕鏈具有SEQ ID NO：1220(FP9)的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：1220(FP9)具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列；並且重鏈具有SEQ ID NO：1221(FP10)的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：1221(FP10)具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
西米普利單抗/IL-2Rβγc融合蛋白可以包含兩條西米普利單抗重鏈和兩條西米普利單抗輕鏈，其中具有SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：1263-1270中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體與一條重鏈的C-末端、兩條重鏈的C-末端、一條重鏈的N-末端、兩條重鏈的N-末端、一條輕鏈的N-末端、兩條輕鏈的N-末端、或上述任意的組合結合。一個或多個IL-2Rβγc配體中的每一個可以藉由構建體接頭獨立地與西米普利單抗抗體結合，所述構建體接頭可以包含例如1至50個氨基酸。
IL-2Rβγc配體的N-末端可以藉由構建體接頭與西米普利單抗結合。
IL-2Rβγc配體構建體可以為hIgG2/IL-2Rβγc融合蛋白，其中hIgG2具有SEQ ID NO：1268的氨基酸序列或與SEQ ID NO：1268具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列，並且具有SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列或與SEQ ID NO：1263-1270任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列的一個或多個IL-2Rβγc配體的氨基酸序列結合與hIgG2的一個C-末端、hIgG2的兩個C-末端、hIgG2的一個N-末端、hIgG2的兩個N-末端或上述任意的組合結合。一個或多個IL-2Rβγc配體中的每一個可以藉由構建體接頭獨立地與IgG2結合，所述構建體接頭可以包含例如1至50個氨基酸。 IgG融合伴侶可以是hIgG1或hIgG4，並且一個或多個IL-2Rβγc配體可以如針對hIgG2所述與hIgG1或hIgG4融合伴侶結合。
IL-2Rβγc配體的N-末端可以藉由構建體接頭與hIgG2結合。
IL-2Rβγc配體/免疫球蛋白融合蛋白可以包含與免疫球蛋白(如hIgG1、hIgG2、hIgG3或hIgG4)結合的一個或多個IL-2Rβγc配體。在圖23A-圖23F中顯示了IL-2Rβγc配體/免疫球蛋白構建體的實例，其中免疫球蛋白包含重鏈231和輕鏈232，以及與重鏈231和/或輕鏈232的C-末端和/或N-末端結合的IL-2Rβγc配體233。
IL-2Rβγc配體構建體可以包含與免疫球蛋白Fc片段結合的一個或多個IL-2Rβγc配體。一個或多個IL-2Rβγc配體可以具有SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：1263-1270中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。IL-2Rβγc配體可以與C-末端和/或N-末端以及Fc片段的一條或兩條Fc鏈結合。如圖圖22A-圖22F所示的，IL-2Rβγc配體223可以與Fc鏈221和222的一條或兩條結合。
Fc片段可以衍生自例如任何合適的免疫球蛋白(如hIgG1、hIgG2、hIgG3或hIgG4)。
IL-2Rβγc配體的N-末端可以藉由構建體接頭與Fc片段結合。所述構建體接頭可以選自例如具有SEQ ID NO：9380-9407中任一項的氨基酸序列的構建體接頭。所述構建體接頭可以選自例如具有SEQ ID NO：9420-9428中任一項的氨基酸序列的肽基構建體接頭。構建體接頭可以包含例如1至100個氨基酸，如1至50個、1至20個、1至10個或1至5個氨基酸，其中每個氨基酸獨立地選自S和G。構建體接頭可以包含例如1至100個氨基酸，如1至50個、1至20個、1至10個或1至5個氨基酸，其中每個氨基酸獨立地選自脯氨酸、丙氨酸、賴氨酸和谷氨酸。構建體接頭可以包含例如(PA)n (SEQ ID NO：9420)，其中n可以是例如1至20的整數。可以選擇每個構建體接頭，使得與它結合的IL-2Rβγc配體是IL-2R激動劑。接頭可以是例如選自SEQ ID NO：9384、9389和9394-9398中任一項的肽基接頭。
在功能上，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以是，例如，完全IL-2R激動劑、部分IL-2R激動劑、診斷試劑、成像試劑、靶向化合物、細胞毒性化合物和/或展現出雙重藥理作用的化合物。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以與賦予該化合物增強治療功效的特性的一個或多個部分連接。特性的實例包括效力、水溶性、極性、親脂性、藥物代謝動力學、靶向、生物利用度、pH依賴性結合、生物活性、藥效學、細胞活性、代謝、功效、可逆失能(鎖定(caging)、選擇性或上述任意的組合。
細胞特異性靶向部分可以包含對細胞表面上的組分(如受體、蛋白質或表位)具有親和力的部分。靶向部分可以包含例如對細胞表面組分具有親和力的配體或抗體。
靶向部分可以將包含IL-2Rβγc結合化合物的化合物引導和濃縮在靶向部分靶向的細胞、細胞群體或組織上。
靶向部分可以增強IL-2R激動作用或IL-2R拮抗作用對被靶向細胞或細胞群的效力。
靶向部分可以對被靶向細胞和未被靶向部分靶向的細胞之間的IL-2R激動作用或IL-2R拮抗作用提供不同的應答。
靶向部分可以在具有高表達水準的靶組分的細胞與具有較低表達水準的靶組分的細胞之間提供對IL-2R激動作用或IL-2R拮抗作用的不同的應答。
IL-2Rβγc結合化合物還可以包含生物活性部分或生物活性分子。IL-2Rβγc化合物可以被用於將生物活性部分或生物活性分子遞送至表達IL-2Rβ亞基和Rγc亞基的細胞、細胞群或組織。
生物活性部分或分子可以是不可切割的，並且當與IL-2Rβγc結合化合物結合時能夠發揮生物活性。
生物活性部分或分子可以是可切割的。該部分可以藉由任何合適的機制(如pH、酶促、熱和/或電磁機制)被切割。電磁機制包括，例如，使化合物暴露於紅外線、可見或紫外線輻射，其中生物活性部分藉由能夠被輻射切割的光不穩定部分與包含配體的化合物連接。
生物活性分子可以是不可切割的，但是可以是其他方式啟動的，諸例如，藉由暴露於電磁輻射來啟動。
可以選擇在特定pH下具有增強的與IL-2Rβ和/或Rγc亞基的結合的配體。例如，在低pH(與實體瘤微環境相當的pH)下pH選擇性配體對IL-2Rβ和/或Rγc亞基可以具有更大的結合親和力。與在健康組織相關的正常pH環境中的細胞相比，包含低pH選擇性配體的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於在低pH環境中優先啟動表達IL-2Rβ亞基和Rγc亞基的細胞。
因此，包含選擇性IL-2Rβ配體和/或Rγc配體(如pH選擇性IL-2Rβ配體和/或Rγc配體)的IL-2Rβγc結合化合物可以與其他pH選擇性生物活性部分和分子一起使用。
生物活性部分或生物活性分子本身可以對特定細胞群具有選擇性。例如，生物活性部分或生物活性分子可以在被選擇性配體靶向的細胞上展現出或多或少的結合親和力、效力和/或活性。例如，當被pH選擇性配體靶向時，該生物活性部分或分子在低pH腫瘤微環境中可以展現出更大的生物活性。在該實施例中，生物活性部分藉由pH選擇性配體針對位於低pH腫瘤微環境中的細胞，該細胞表達IL-2Rβ亞基。因此，在低pH腫瘤微環境中增強了pH選擇性生物活性部分的活性。
IL-2Rβγc結合化合物還可以包含細胞毒性部分或細胞毒性分子。此類化合物可以被用於將細胞毒性部分或化合物遞送至表達IL-2Rβγc亞基的細胞。當與化合物結合時，細胞毒性部分或分子可以發揮細胞毒性，或者可以是可切割的，並且當從化合物釋放時，該部分或分子可以是細胞毒性的；或者細胞毒性部分可以被電磁輻射啟動。
細胞毒性部分或分子可以被用於消耗被靶向的表達IL-2Rβ亞基的細胞。
具有細胞毒性的IL-2Rβγc結合化合物可以具有多於一個II-2Rβγc配體，因此與較低IL-2Rβ亞基表達水準的細胞相比，對高表達IL-2Rβ亞基的細胞、細胞群和組織可以展現出更高的親和力和/或選擇性。
細胞毒性IL-2Rβγc結合化合物還可以包括細胞表面靶向組分。此類細胞毒性化合物可以對表達IL-2Rβ亞基和表面靶成分的細胞、細胞群和組織展現出增強的功效。
合適的細胞毒性分子的實例包括抗微管劑、烷基化劑和DNA小溝結合劑。
IL-2Rβγc結合化合物可以包含具有除藉由IL-2受體的啟動介導的藥理活性之外的其他藥理活性的部分。藥理活性可以為具有與IL-2R激動劑或拮抗劑活性協同的治療功效的活性，或者藥理活性可以為具有與IL-2R激動劑或拮抗劑活性的治療功效不協同的活性。合適的藥理部分的實例包括作為檢查點分子、促凋亡和抗凋亡分子、細胞毒性分子、趨化因數激動劑、趨化因數拮抗劑、細胞因數、生長因數和其他細胞表面受體的抑制劑、以及配體和細胞表面黏附分子(如整合素)的抑制劑的抗體和抗體片段。
由本公開提供的一個或多個配體可以與包含靶向部分的分子結合，所述靶向部分賦予將一個或多個IL-2Rβγc配體靶向患者的特定組織或細胞的能力。靶向部分可以對在靶組織或靶細胞的表面上表達的細胞表面蛋白或受體具有親和力，從而可以將雙重配體引導至靶組織或細胞。靶向部分的實例包括抗原結合部分，所述抗原結合部分包括對細胞表面蛋白、配體、生物受體和抗原具有特異性的抗體及其片段。
抗體可以與在靶細胞類型表面表達的抗原結合。該抗體可能沒有任何有用的或已知的有用的藥理功能，但是與不表達靶抗原或具有低於靶細胞類型或組織的靶抗原表達水準的靶抗原表達水準的細胞類型或組織相比，起著引導IL-2Rβγc結合構建體優先靶向細胞類型或組織的作用。抗體當與細胞表面抗原結合後可以具有有用的藥理功能。這些構建體被稱為雙重藥理學IL-2Rβγc結合構建體。
IL-2Rβγc結合化合物可以包括例如腫瘤靶向部分，諸如腫瘤特異性抗體、腫瘤特異性抗體片段、腫瘤特異性蛋白、腫瘤特異性肽、非肽基腫瘤細胞配體或上述任意的組合。
IL-2Rβγc結合化合物可以包括免疫細胞靶向部分，諸如例如免疫細胞特異性抗體、免疫細胞特異性抗體片段、免疫細胞特異性蛋白、免疫細胞特異性肽、非肽基免疫細胞配體或上述任意的組合。
一個或多個IL-2Rβγc配體可以與包含靶向部分的分子結合，所述靶向部分賦予將一個或多個IL-2Rβγc配體靶向患者的特定組織或細胞的能力。靶向部分可以對在靶組織或靶細胞的表面上表達的細胞表面蛋白或受體具有親和力，從而可以將IL-2Rβγc配體引導至靶組織或細胞。靶向部分的實例包括抗原結合部分，其包括特異性針對細胞表面蛋白、配體、生物受體和抗原的抗體及其片段。
抗體可以與在靶細胞類型的表面上表達的抗原結合。所述抗體可能沒有任何有用的或已知的有用的藥理功能，但是與不表達靶抗原或具有低於靶細胞類型或組織的靶抗原表達水準的靶抗原表達水準的細胞類型或組織相比，起著引導IL-2Rβγc結合構建體優先靶向細胞類型或組織的作用。抗體當與細胞表面抗原結合後可以具有有用的藥理功能。這些構建體被稱為雙重藥理學IL-2Rβγc配體構建體。
IL-2Rβγc配體融合蛋白可以包含一個或多個抗原結合部分。另外兩個抗原結合部分可以針對相同抗原或不同抗原。
靶向部分可以為抗原結合部分，並且IL-2Rβγc融合蛋白可以為免疫綴合物。免疫綴合物可以包含能夠與細胞表面上表達的、在病毒感染的細胞表面上、在血清中和/或細胞外基質中的患病細胞表面上表達的抗原結合的一個或多個抗原結合部分。
抗原結合部分可以包含抗體或抗體片段。抗原結合部分可以為免疫球蛋白分子，諸如例如IgG類免疫球蛋白，其包括IgG1、IgG2或IgG4同種型。IL-2Rβγc配體可以與一條或兩條重鏈結合，諸如在CH3結構域的C-末端。抗原結合部分可以為Fab分子、scFv分子或肽。
抗原結合部分可以針對任何特異性抗原，諸如例如在腫瘤細胞表面或在腫瘤細胞環境中表達的抗原、在免疫細胞上表達的抗原、在主要表達IL-2R的IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基的細胞(如CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、Treg或NK細胞)表面上表達的抗原。
在腫瘤細胞上表達的合適抗原靶標的實例包括成纖維細胞啟動蛋白(FAP)、腱生蛋白C的A1結構域(TNC A1)、腱生蛋白C的A2結構域(TNC A2)、纖連蛋白的外結構域B(EDB)、癌胚抗原(CEA)和與黑色素瘤相關的硫酸軟骨素蛋白聚糖(MCSP)。
可以被用於靶向的合適腫瘤抗原的其他實例包括MAGE、MART-1/黑色素-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脫氨酶結合蛋白(ADAbp)、親環蛋白b、結腸直腸相關抗原(CRC)-0017-A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、amll、前列腺特異性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、T細胞受體/CD3-ζ鏈、腫瘤抗原的MAGE家族(例如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGEA3、MAGE-A4、MAGE-AS、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-AS、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-All、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1，MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-CS)、腫瘤抗原的GAGE家族(如GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE- 5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、a-甲胎蛋白、E-鈣黏著蛋白、a-連環蛋白、-連環蛋白和y-連環蛋白、p120ctn、gp100 Pmel117、PRAME、NY-ES0-1、cdc27、腺瘤性息肉病大腸桿菌蛋白(APC)、鐵蛋白、連接蛋白37、Ig獨特型、p15、gp75、GM2和GD2神經節苷脂、病毒產物(如人乳頭瘤病毒蛋白)、腫瘤抗原的Smad家族、lmp-1、PIA、EBY編碼核抗原(EBNA)-1、腦糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1和CT-7和c-erbB-2。
病毒抗原的實例包括流感病毒血凝素、愛潑斯坦-巴爾(Epstein–Barr)病毒LMP-1、C型肝炎病毒E2糖蛋白、HIV gp160和HIV gp120。
ECM抗原的例子包括多配體蛋白聚糖、乙醯肝素酶、整合素、骨橋蛋白、鏈節、鈣黏蛋白、層黏連蛋白、EGF型層黏連蛋白、凝集素、纖連蛋白、洛奇蛋白（notch）、肌腱蛋白和基質蛋白。
靶向的IL-2Rβγc配體融合蛋白可以被配置為例如與選自以下的細胞表面抗原結合：FAP、Her2、EGFR、IGF-1R、CD2(T細胞表面抗原)、CD3(與TCR相關的異源多聚體)、CD22(B細胞受體)、CD23(低親和力IgE受體)、CD30(細胞因數受體)、CD33(骨髓細胞表面抗原)、CD40(腫瘤壞死因數受體)、IL-6R(IL6受體)、CD20、MCSP和PDGFR(血小板衍生的生長因數受體)。
靶向的IL-2Rβγc配體構建體可以包含能夠與也表達IL-2R的細胞表面上表達的抗原或受體結合的抗原結合部分。表達IL-2R的細胞的實例包括，例如，Treg細胞、NK細胞、CD8+ T細胞、CD4+ T細胞和啟動的T細胞。
靶向的IL-2Rβγc配體構建體可以包含能夠與由表達IL-2R的IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基的細胞表達的抗原或受體結合的抗原結合部分。表達IL-2R的IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基的細胞的實例包括，例如，NK細胞、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞和啟動的T細胞。
在幼稚CD4+ T細胞表面上表達的抗原的實例包括CD4+、CD45RA+、CD45RO-、CCR7+和CD25。
在CD8+ T細胞表面上表達的抗原的實例包括NKG2D、CD8+、CD45RA+、CD45O+、CCR7+和CD28+。
在CD4+ T細胞表面上表達的抗原的實例包括Th1細胞標誌物(如CD4+、CXCR3+、CCR5+和IL12Rβ2+)；Th2細胞標誌物(如CD4+、CCR4+和IL12Rβ2+)；Th9細胞標誌物(如CD4+、CCR3+和CCR5+)；Th17細胞標誌物(如CD4+、CCR6+、CCR4+和NK1.1+)；Th22細胞標誌物(如CD4+、CCR10+、CCR4+和CCR6+)；Treg細胞標誌物(如CD4+、CD127+、CD24+和CTLA-4+)；Tfh細胞標誌物(如CD4+、CXCR5+、CD40L+和ICOS+)。
在細胞毒性CD8+ T細胞表面上表達的抗原的實例包括CD8+和CCR7-。
記憶T細胞抗原的實例包括CCR5、CCR7、CD11a、CD27、CD28、CD45RA、CD45RO、CD57和/CD62。
幼稚T細胞抗原的例子包括CD45RA、CCR7、CD62L、CD127和CD132。
在NK細胞表面上表達的抗原的實例包括TRAIL、CD16、NKp30ab、NKG2C、NKG2D、2B4、DNAM-1、NKH2A、KIR、CD137、OX40、CD27、CD16、CD56、CD57和CD27。
靶向的IL-2Rβγc配體構建體可以包含能夠與在細胞表面上表達的具有調控免疫應答作用的抗原或受體結合的抗原結合部分。
與調控免疫應答相關的細胞表達的抗原的實例包括PD-1、CTLA-4、CD20和CD30。
靶向的IL-2Rβγc配體構建體可以包含能夠與Treg細胞表面上表達的抗原或受體(如CD25)結合的抗原結合部分。例如，靶向Treg細胞的構建體可以包含IL-2Rβγc配體/達利珠單抗抗體融合體。
由本公開提供的雙重藥理學IL-2Rβγc配體構建體可以包含由本公開提供的IL-2Rβγc配體和藥理部分。藥理部分可以對表達IL-2R的細胞或除表達IL-2R的那些細胞以外的細胞發揮治療作用。一個或多個IL-2Rβγc配體可以與包括治療化合物的生物試劑連接，所述生物化合物為諸如例如抗腫瘤劑、抗微生物劑、激素、免疫調節劑和抗發炎劑。
雙重藥理學IL-2Rβγc配體構建體可以包含例如蛋白質(如抗體)。抗體可以為IgA同種型、IgD同種型、IgE同種型、IgG同種型或IgM同種型。雙重藥理學IL-2Rβγc配體構建體可以包含藉由接頭與藥理活性抗體偶聯的IL-2Rβγc配體。接頭可以是天然存在的分子或合成分子。
雙重藥理學IL-2Rβγc配體構建體可以包含具有抗原結合部分的抗體以及藉由Fc接頭與Fc鏈結合的一個或多個IL-2Rβγc配體。
抗體可以包含針對細胞特異性抗原的抗體。針對細胞特異性抗原的抗體的實例包括阿侖單抗(alemtuzumab) (CD52抗原)、曲妥珠單抗(trastuzumab) (Her2蛋白)、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan) (CD20抗原)、本妥昔單抗(brentuximab vedotin) (CD30抗原)、曲妥珠單抗-美坦新偶聯物(ado-trastuzumab emtansine) (Her2蛋白)、博納吐單抗(blinatumomab) (CD19蛋白和CD3蛋白)。
雙重藥理學IL-2Rβγc配體構建體可以包含已知可用於治療癌症的部分。已知可用於治療癌症的單複製抗體的實例包括：阿侖單抗、阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、本妥昔單抗、西米普利單抗(cemiplimab)、西妥昔單抗(cetuximab)、曲妥珠單抗、地諾單抗(denosumab)、利妥昔單抗(rituximab)、易普利姆瑪(ipilimumab)、納武單抗(nivolumab)、奧濱尤妥珠單抗(obinutuzumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、帕尼單抗(panitumumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、利妥昔單抗和曲妥珠單抗。
雙重藥理學IL-2Rβγc配體構建體可以包含已知為檢查點抑制劑(如CTLA-4抑制劑、PD-1抑制劑、PD-L1和PD-L2抑制劑)的部分。
合適的PD-1抑制劑的實例包括納武單抗、西米普利單抗和派姆單抗。CTLA-4抑制劑的實例包括易普利姆瑪；PD-L1抑制劑的實例包括阿特珠單抗和德瓦魯單抗(durvalumab)。
可用於治療自體免疫疾病和發炎性疾病的單複製抗體的實例包括阿昔單抗(Abciximab)、阿達木單抗(adalimumab)、阿法賽特(alefacept)、阿侖單抗、巴厘昔單抗(basiliximab)、貝利木單抗(belimumab)、bezlotuxumab、卡那單抗(canakinumab)、賽妥珠單抗(certolizumab)、達利珠單抗、地諾單抗、依法利珠單抗(efalizumab)、戈利木單抗(golimumab)、inflectra、易普利姆瑪、ixekizumab、 natlizumab、納武單抗、奧拉單抗(olaratumab)、amalizumab、帕利珠單抗(palivizumab)、帕尼單抗、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、利妥昔單抗、托珠單抗(tocilizumab)、曲妥珠單抗、蘇金單抗(secukinumab)和烏司奴單抗(ustekinumab)。
雙重藥理學IL-2Rβγc配體抗體構建體可以包含針對檢查點抑制劑的抗體。檢查點抑制劑的抗體包括CTLA-4阻斷物阻斷抗體、PD-1抑制劑(如納武單抗、帕博利珠單抗和spartalzumab)；PD-L1抑制劑(如alezolizumab)；以及靶向內在檢查點阻斷物的其他抗體(如CISH)。
合適的FDA批准的抗體檢查點抑制劑包括伊匹單抗(ipilimumab)(CTLA-4)、納武單抗(PD-1)、派姆單抗(PD-1)、alezolzumab(PD-1)、阿維單抗(avelumab)(PD-1)、德瓦魯單抗(PD-1)和西米普利單抗(PD-1)。
雙重藥理學IL-2Rβγc配體構建體可以包含細胞因數融合體。IL-2Rβγc配體細胞因數構建體可以包含一個或多個IL-2Rβγc配體以及與天然存在或合成分子結合的一個或多個細胞因數。例如，一個或多個IL-2Rβγc配體以及一個或多個細胞因數可以與多肽或蛋白質(如IgG或Fc片段)結合。細胞因數可以選自例如白細胞介素、趨化因數、集落刺激因數、干擾素、轉化生長因數和腫瘤壞死因數。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合構建體可以包含病毒學構建體。IL-2Rβγc結合病毒學構建體可以包含由本公開提供的配體，該配體與在病毒表面表達的蛋白質、在該病毒靶向的細胞表面表達的抗原、該病毒靶向的細胞表面抗原或病毒樣顆粒或疫苗。
可以使用重組DNA技術合成由本公開提供的某些IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體。
可以使用合成有機化學方法合成由本公開提供的某些IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體是IL-2R的激動劑。
IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體可以與IL-2Rβ的IL-2Rβ亞基和/或IL-2Rγc亞基結合，並且可以啟動IL-2R。IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體與IL-2Rβ亞基和/或與IL-2Rγc亞基的結合親和力(IC50 )可以獨立地為例如小於100μM、小於10μM、小於1µM、小於100nM、小於10nM或小於1nM。
IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體與IL-2Rβ亞基和/或對IL-2Rγc亞基的結合親和力(IC50 )可以例如小於100μM、小於10µM、小於1µM、小於100nM、小於10nM或小於1nM。IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體可以與IL-2競爭性或非競爭性地與IL-2Rβ亞基和/或IL-2Rγc亞基結合。
IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體可以被配置為更有效地啟動表達IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基的細胞，從而藉由控制IL-2Rβγc配體激動劑或IL-2Rβγc配體構造激動劑的劑量來促進差異啟動不同的細胞類型表面上表達的IL-2R的能力。例如，當與IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體一起孵育時，表達IL-2Rβγc亞基磷酸化信號轉導子和轉錄啟動因數5(STAT5)的初級人外周血單個核細胞(PBMC)。
由IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體誘導的TF-1β或NK-92細胞中STAT5磷酸化的EC50 可以例如小於100µM、小於10µM、小於1µM、小於100nM、小於10nM或小於1nM。
由IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體誘導的TF-1β或NK-92細胞中STAT5磷酸化的EC50 的範圍可以為例如1pM至100μm、10pM至10µm或100pM至1µm。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體可以啟動NK-92細胞中的STAT5磷酸化通路、AKT磷酸化通路和ERK1/2磷酸化通路。
IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體可以部分啟動IL-2R。部分啟動是指啟動水準，即例如小於最大啟動的75%、小於最大啟動的50%、小於25%、小於10%或小於1%。IL-2R的最大啟動(Emax )是指在高激動劑濃度(如IL-2的高濃度)下可達到的細胞信號振幅(啟動)。部分IL-2R激動劑可以有效調節IL-2R對表達IL-2R的不同細胞類型中IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基啟動的應答水準。例如，已知不同的細胞類型會改變每個IL-2R亞基(IL-2Rα、IL-2Rβ和IL-2Rγc)的表達水準，並對IL-2R激動劑展現出不同的敏感性。
IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體可以包含經修飾的IL-2Rβ配體和/或IL-2Rγc配體。可以選擇或設計經修飾的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體以結合和啟動IL-2R，但是對IL-2R具有低或中等的親和力和效力。此類IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體在高表達IL-2Rα的細胞與低水準IL-2Rα表達的細胞之間(例如，在具有高表達IL-2Rα的Treg和具有低表達IL-2Rα水準的Teff細胞之間)對IL-2R啟動具有更大的差異敏感性。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體可以充當完全IL-2R激動劑、部分IL-2R激動劑、偏倚性IL-2R激動劑或pH偏倚性IL-2R激動劑。
如實施例8中所示的，在NK-92細胞中，關於NK-92細胞中的STAT5磷酸化、AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化，IL-2Rβγc配體(BGL21)充當與IL-2相當的完全激動劑。
如實施例3-6和相應的圖2-圖5B中所示的，由本公開提供的其他IL-2Rβγc配體在TF-1β細胞中展現出STAT5磷酸化活性，其小於IL-2Rβγc配體(BGL21)的STAT5磷酸化活性，並且可以被認為是關於TF-1β細胞中STAT5磷酸化的部分激動劑。
如實施例9中所示的，關於靜息CD8 T細胞、靜息Treg細胞和靜息CD4 T細胞中的STAT5磷酸化，IL-2Rβγc配體(BGL21)展現出約1E-9的非選擇性激動劑活性(EC50 )。相反，IL-2的EC50 變化約兩(2)個數量級，並且在靜止的Treg細胞中對STAT5磷酸化展現出高的選擇性。
對IL-2Rβγc配體構建體觀察到類似的效果，其中TF-1β細胞中藉由STAT5磷酸化所確定的激動劑活性根據IL-2Rβγc配體、構建體接頭、構建體伴侶和構建體伴侶上的結合位點而改變。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體可以充當IL-2R拮抗劑。由本公開提供的IL-2Rβγc配體拮抗劑和IL-2Rβγc配體構建體拮抗劑可以以例如小於100μM、小於10μM、小於1μM、小於0.1μM或小於0.01μM的IC50 與IL-2R結合，並且沒有展現出如例如使用實施例中所公開的任何功能測定(如STAT5磷酸化測定)所確定的可檢測的功能活性。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物當與某些疫苗(包括癌症新抗原疫苗)組合時可以是有用的。腫瘤DNA中的突變產生了對身體來說是外來的新的蛋白質序列。可以設計疫苗來針對腫瘤特異性新抗原特異性啟動患者的免疫系統。當與新抗原疫苗組合施用時，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以在腫瘤微環境中擴增和增殖新抗原特異性T細胞，從而驅動疫苗誘導的新抗原特異性T細胞的最大擴增以用於治療癌症。
例如，在臨床前腫瘤模型中，將據報導為有偏倚性IL-2Rβγc激動劑的bempegaldesleukin (NKTR-214)與新抗原疫苗VB10.NEO組合。觀察到對新抗原特異性T細胞應答的協同作用。在CD4和CD8 T細胞中也觀察到協同作用，對CD8 T細胞的作用最明顯。新抗原疫苗VB10.NEO與NKTR-214和抗PD-1組合誘導小腫瘤與持久穩定的大腫瘤快速、持久地腫瘤消退。NKTR-214和新抗原疫苗VB10.NEO的組合目前正在人體試驗中進行研究。
另一個實例是，將IL-15突變體與據報導是IL-2Rβγ激動劑的IL-15R的IL-15Rα亞基(ALT-803)的Fc融合體的複合物在致癌物誘發的大鼠非肌肉浸潤性膀胱癌(NMIBC)模型中，與卡介苗芽孢桿菌(Bacillus Calmette-Guérin，BCG)、免疫刺激劑和結核病疫苗在血管內共同施用。與對照相比，ALT-803作為單一治療劑可以將腫瘤負荷降低35%，而單獨使用BCG只能將腫瘤負荷降低15%。與對照相比，ALT-803和BCG的組合可以將腫瘤負荷降低46%。目前正在人類臨床試驗中研究該組合。
因此，由本公開提供的IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc構建體可以被用作佐劑。佐劑是指在不直接參與保護性免疫的情況下增強疫苗功效的化合物。例如，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以與癌症疫苗結合使用。
當由本公開提供的IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體被工程化為在也表達IL-2Rβγc亞基的細胞的膜表面上表達時，可以用於細胞療法。目前正在研究使用NK細胞或使用重新靶向的嵌合抗原受體(CAR)T細胞的過繼免疫療法，作為腫瘤和病毒感染的治療方法。這些細胞療法的挑戰之一是輸注細胞的次佳持續生存。
可以使用標準技術構建編碼以使得在細胞的細胞外表面上表達IL-2Rβγc配體的方式與膜蛋白融合的IL-2Rβγc配體的DNA。當表達包含IL-2Rβγc配體的融合蛋白時，細胞上的IL-2受體被啟動，導致細胞的長期存留。
作為實例，已經報導了經由肽基接頭(CIRB)連接的新型的IL-2嵌合IL-2/IL-2Rβ融合蛋白及其受體亞基IL-2Rβ。表達CIRB的NK-92細胞(NK-92CIRB )被高度啟動並無限期擴增，而沒有外源IL-2。與分泌IL-2的NK-92細胞系相比，NK-92CIRB 細胞比NK-92細胞具有更高的啟動性、細胞毒性和抗生長抑制性。在癌細胞存在的情況下，NK-92CIRB 細胞展現出增強的細胞毒性，從而在小鼠中產生優異的體內抗腫瘤作用。
作為另一個實例，已經報導了CAR和膜結合的嵌合IL-15(mbIL15)的共表達。已知IL-15藉由啟動IL-2Rβγc起作用。mbIL15-CAR T細胞在動物模型中顯示出獨立於CAR信號傳導的T細胞持久性，並實現了CD19+白血病的有效抑制。長期存在的T細胞具有記憶樣的轉錄譜。結果表明，可以藉由mbIL15信號傳導維持記憶幹細胞表型，從而發展CAR+ T細胞的長期持久性。
可以將編碼IL-2Rβγc配體的DNA摻入細胞中，並且可以對其進行配置以產生由本公開提供的IL-2Rβγc配體。IL-2Rβγc配體可以從細胞分泌，並且可以與分泌細胞(即自分泌信號傳導)和/或分泌細胞附近的細胞(即旁分泌信號傳導)相互作用。由本公開提供的分泌的IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體可以為IL-2R激動劑，並且可以被設計成定位在分泌細胞附近。
由本公開提供的IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體可以被用於擴增患者體內或生物樣品內的非調節性T細胞。增加非調節性T細胞與Treg細胞的比例的方法可以包括使T細胞群與有效量的IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體接觸。可以藉由確定T細胞群中CD3+ FOXP3+細胞與CD3+FOXP3-細胞的比例來測量該比例。人血中典型的Treg頻率為CD4+CD3+ T細胞總數的5%至10%，但是，在某些疾病中，該百分比可能更低或更高。
IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體可以被用於擴增NK細胞。已經證明，用將免疫細胞的活性重定向至靶癌細胞的嵌合抗原受體(CAR)修飾的NK細胞，從而展現出改善的抗腫瘤應答。CAR可以包含抗體衍生的胞外結構域，所述胞外結構域與所期望的腫瘤相關抗原(TAA)結合並觸發細胞內信號傳導級聯，從而啟動針對靶細胞的免疫細胞。
可以對NK細胞進行基因工程化，以增強一種或多種腫瘤靶向受體(如NKG2D)與膜結合的IL-2Rβγc配體的表達，從而可以延長NK細胞的持久性和效力。
可以對CAR T細胞進行基因工程化以共表達由本公開提供的束縛形式的IL-2Rβγc配體，以支持體內持久性和維持未成熟分化狀態並展現出體內抗腫瘤活性。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物(即IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體構建體)可以被摻入藥物組合物中以藉由任何合適的施用途徑(其包括皮內、肌內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外、口服、經口、舌下、腦內、陰道內、經皮、直腸、吸入或局部施用)向患者施用。由本公開提供的藥物組合物可以是可注射製劑。由本公開提供的藥物組合物可以是可注射的靜脈內製劑。由本公開提供的藥物組合物可以是口服製劑。口服製劑可以是口服劑型。可以配製藥物組合物用於靜脈內施用或皮下施用。
由本公開提供的藥物組合物可以包含治療有效量的IL-2Rβγc結合化合物以及合適量的一種或多種藥學上可接受的媒介物，從而提供用於向患者適當施用的組合物。在本領域中描述了合適的藥物媒介物和製備藥物組合物的方法。
評估單個患者對治療的應答並使患者有資格獲得最佳治療是現代醫療保健面臨的最大挑戰之一，並且與個性化醫學的趨勢有關。IL-2Rβγc結合化合物可以對某些癌症和免疫細胞具有靶向選擇性。用於正電子發射斷層掃描(PET)或單光子發射電腦斷層掃描(SPECT)的放射性標記的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於基於單項研究、患者個案分析來預測治療靶標，從而排除那些預計不會從治療中受益的患者。一旦與濃度相關，使用IL-2Rβγc結合化合物進行的PET/SPECT掃描便可以提供三維分佈圖，然後可以將其用於宏觀劑量計算。
因此，測定和使用IL-2Rβγc結合化合物和/或其藥物組合物用於治療在本領域技術人員的能力範圍內。
IL-2Rβγc結合化合物和/或其藥物組合物通常可以以有效的量使用來實現預期目的。為了用於治療諸如癌症、自體免疫疾病或發炎性疾病的疾病，可以以治療有效量施用或應用IL-2Rβγc結合化合物和/或其藥物組合物。
對本文所公開的特定病症或病況的治療有效的IL-2Rβγc結合化合物和/或上述任一項的藥物組合物的量將部分取決於病症或病況的性質，並且可以藉由本領域已知的標準臨床技術確定。另外，可以任選地採用體外或體內測定來幫助鑒定最佳劑量範圍。施用的IL-2Rβγc結合化合物和/或上述任一項的藥物組合物的量將取決於除其他因素外，所治療的患者、患者的體重、痛苦的嚴重程度、施用方式和處方醫師的判斷。
在用於人類之前，可以在體外和體內測定IL-2Rβγc結合化合物的所期望的治療活性。例如，可以使用體外測定來確定施用的特定化合物或化合物的組合是否為較佳的。也可以使用動物模型系統來證明該化合物是有效和安全的。
在某些實施方案中，治療有效劑量的IL-2Rβγc結合化合物和/或上述任一項的藥物組合物將提供治療益處而不會引起實質性毒性。IL-2Rβγc結合化合物的毒性和/或上述任一項的藥物組合物的毒性可以使用標準藥學程序來確定，並且可以由技術人員容易地確定。毒性和治療效果之間的劑量比是治療指數。IL-2Rβγc結合化合物和/或上述任一項的藥物組合物在治療疾病和病症中展現出特別高的治療指數。IL-2Rβγc結合化合物和/或上述任一項的藥物組合物的劑量將在循環濃度的範圍內，所述循環濃度包括具有最小毒性的有效劑量。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以包括在試劑盒中，所述試劑盒可以被用於將所述化合物施用於患者以用於治療目的。試劑盒可以包括藥物組合物，所述藥物組合物包含由本公開提供的適於向患者施用的IL-2Rβγc結合化合物，以及用於向患者施用藥物組合物的說明書。試劑盒可以是用於治療癌症，用於治療自體免疫疾病或用於治療發炎性疾病的試劑盒。用於治療患者癌症的試劑盒可以包含由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物，用於施用該化合物的藥學上可接受的媒介物以及用於向患者施用該化合物的說明書。
藥物組合物可以與施用說明書一起包括在容器、包裝或分配器中。
試劑盒隨附的說明書可以作為例如電子可讀媒體、錄影帶、錄音帶、快閃記憶體設備進行印刷和/或提供，或者可以作為電子資訊在網際網路網站上發佈或分發給病人和/或醫療保健提供者。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物當與某些疫苗(包括癌症新抗原疫苗)組合時可以是有用的。腫瘤DNA中的突變產生了對身體來說是外來的新的蛋白質序列。可以設計疫苗來針對腫瘤特異性新抗原特異性啟動患者的免疫系統。當與新抗原疫苗組合施用時，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以在腫瘤微環境中擴增和增殖新抗原特異性T細胞，從而驅動疫苗誘導的新抗原特異性T細胞的最大擴增以用於治療癌症。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以被用作佐劑。佐劑是指在不直接參與保護性免疫的情況下增強疫苗功效的化合物。例如，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以與癌症疫苗或病毒疫苗結合使用。
當由本發明所提供的IL-2Rβγc結合化合物被工程化為在也表達IL-2Rβ亞基和Rγc亞基的細胞的膜表面上表達時，可以用於細胞療法。目前正在研究使用NK細胞或使用重新靶向的嵌合抗原受體(CAR)T細胞的過繼免疫療法，作為腫瘤和病毒感染的治療方法。這些細胞療法的挑戰之一是輸注細胞的次佳持續生存。
可以使用標準技術構建編碼以使得在細胞的細胞外表面上表達IL-2Rβγc結合化合物的方式與膜蛋白融合的配體的DNA。當表達包含IL-2Rβγc配體和/或IL-2Rβγc配體的融合蛋白時，細胞上的IL-2受體被啟動，導致細胞的長期存留。
可以將編碼配體的DNA摻入細胞中，並可以對其進行配置以產生由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物。IL-2Rβγc結合化合物可以從細胞分泌，並且可以與分泌細胞(即自分泌信號傳導)和/或分泌細胞附近的細胞(即旁分泌信號傳導)相互作用。由本公開提供的分泌的IL-2Rβγc結合化合物可以是IL-2R激動劑，並且可以被設計成定位在分泌細胞附近。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於擴增患者體內或生物樣品內的T細胞。增加非調節性T細胞與Treg細胞的比例的方法可以包括使T細胞群與有效量的IL-2Rβγc結合化合物接觸。可以藉由確定T細胞群中CD3+FOXP3+細胞與CD3+FOXP3-細胞的比例來測量該比例。人血中典型的Treg頻率為CD4+CD3+ T細胞總數的5%至10%，但是，在某些疾病中，該百分比可能更低或更高。
IL-2Rβγc結合化合物可以被用於擴增T細胞。已經證明，用將免疫細胞的活性重定向至靶癌細胞的嵌合抗原受體(CAR)修飾的T細胞，從而展現出改善的抗腫瘤應答。CAR可以包含抗體衍生的胞外結構域，所述胞外結構域與所期望的腫瘤相關抗原(TAA)結合並觸發細胞內信號傳導級聯，從而啟動針對靶細胞的免疫細胞。
固定在表面上的IL-2Rβγc結合化合物可以在體外或離體暴露於T細胞群以誘導細胞群的擴增。在轉移給患者之前。可以藉由暴露於固定形式的IL-2Rβγc結合化合物來擴增CAR-T細胞。在將CAR-T細胞轉移至患者之前，可以將固定的IL-2Rβγc結合化合物與CAR-T細胞分離。
可以對CAR T細胞進行基因工程化以共表達由本公開提供的束縛形式的IL-2Rβγc結合化合物，以支持體內持久性和維持未成熟分化狀態並展現出體內抗腫瘤活性。
評估單個患者對治療的應答並使患者有資格獲得最佳治療是現代醫療保健面臨的最大挑戰之一，並且與個性化醫學的趨勢有關。IL-2Rβγc結合化合物可以對某些癌症和免疫細胞具有靶向選擇性。用於正子斷層掃描(PET)或單光子發射電腦斷層掃描(SPECT)的放射性標記的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於基於單項研究、患者個案分析來預測治療靶標，從而排除那些預計不會從治療中受益的患者。一旦與濃度相關，使用IL-2Rβγc結合化合物進行的PET/SPECT掃描便可以提供三維分佈圖，然後可以將其用於宏觀劑量計算。
IL-2Rβγc結合化合物可以包含一種或多種顯影劑。IL-2Rβγc結合化合物可以將化合物引導和定位到表達IL-2R的細胞、細胞群和組織中。成像化合物可以包含一種或多種顯影劑，諸如放射性標記、螢光標記、酶標記或PET顯影劑。
顯影劑可以被用於確定表達IL-2R的細胞數量，表達IL-2R的細胞的表達水準或IL-2R的特性(如特定IL-2Rβγc結合化合物對IL-2R的結合親和力)。顯影劑可以被用於例如評估表達IL-2Rβ亞基和Rγc亞基的癌細胞，或用於評估Treg和/或Teff細胞。
可以檢測標記以確定化合物在患者中的生物分佈或評估治療功效的潛力。例如，表達高水準的IL-2R的腫瘤可以是由本公開提供的治療性IL-2Rβγc結合化合物的有吸引力的靶標。
顯影劑可以被用於評估在治療之前、治療期間和/或治療之後表達IL-2R的細胞。
包含配體的顯影劑還可以包含能夠與細胞表面結合(特別是與細胞表面上表達的蛋白質結合)的部分。蛋白質可以指示某種細胞類型，並被稱為細胞表面標誌物。既包含配體又包含細胞表面標誌物的顯影劑可以被用於評估表達IL-2R和細胞表面標誌物的細胞、細胞群和/或組織。評估可以包括確定表達IL-2R和細胞表面標誌物的細胞數量，IL-2R和細胞表面標誌物的表達水準，和/或顯影劑對IL-2R和/或對細胞表面標記的結合親和力。
顯影劑可以被用於在治療之前、治療期間和/或治療之後評估表達IL-2R和細胞表面標誌物的細胞。
可以標記由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物。標記的化合物可以用於診斷。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以用可檢測的標記物來標記。標記可以被用於確定化合物在患者體內的生物分佈或評估治療功效的潛力。例如，表達高水準的IL-2R的腫瘤可以是由本公開提供的選擇性IL-2R激動劑和IL-2Rβγc結合化合物的有吸引力的靶標。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物包括標記的化合物。標記的化合物可以是可檢測的標誌物，例如，放射性標記的氨基酸或生物素基部分與多肽的連接，其中連接的生物素基部分可以藉由可以藉由光學或比色法進行檢測的標記的抗生物素蛋白(如含有螢光標誌物的鏈黴親和素)或酶活性來檢測。標記多肽和糖蛋白的各種方法是本領域已知的並且可以使用。多肽的標記的實例包括例如放射性同位素(如3 H、14 C、35 S、125 I和131 I)、螢光標記(如FITC、羅丹明和鑭系元素磷)、酶標記(如辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶，螢光素酶和鹼性磷酸酶)、生物素基基團、由二級報告分子識別的預定多肽表位(如白氨酸拉鍊對序列)、二級抗體的結合位點、金屬配體和表位標籤。可以藉由各種長度的間隔臂連接標籤，以減少潛在的空間位阻。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於例如治療疾病，諸如癌症、發炎性疾病、自體免疫疾病、免疫缺陷或感染性疾病，包括病毒性疾病(如COVID-19)。
可以將上述任一項的由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物和藥物組合物施用於患者以治療器官移植。
由本公開內容提供的IL-2Rβγc結合化合物和上述任一項的藥物組合物可以與用於治療物件的發炎性疾病或自體免疫疾病的另一種化合物一起施用於患者。至少一種其他治療劑可以為由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物。IL-2Rβγc結合化合物和至少一種其他治療劑可以相加或協同作用。至少一種其他治療劑可以包括在包含IL-2Rβγc結合化合物的同一藥物組合物或媒介物中，或者可以在單獨的藥物組合物或媒介物中。因此，由本公開提供的方法除了施用IL-2Rβγc結合化合物外，還包括施用有效治療發炎性疾病或自體免疫疾病或與發炎性疾病或自體免疫疾病不同的疾病、病症或病況的一種或多種治療劑。由本公開提供的方法包括施用IL-2Rβγc結合化合物和一種或多種其他治療劑，條件是組合施用不抑制IL-2Rβγc結合化合物的治療功效和/或不產生不利的組合作用。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物包括治療患者的疾病(如癌症、發炎性疾病或自體免疫疾病)，其包括向有需要的患者施用治療有效量的能夠以小於100μM、小於10μM、小於1μM、小於100nM或小於10nM的IC50 與IL-2R的IL-2Rβ亞基和/或Rγc亞基的特異性結合位點結合的化合物。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於治療患者的癌症。癌症可以是例如實體瘤或轉移瘤。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以被施用以治療已知藉由啟動IL-2R而被治療的癌症。可以施用由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物以治療已知藉由IL-2Rβγc亞基的啟動而被治療的癌症，並且其中IL-2Rα亞基的同時啟動損害治療功效和/或引起有害的副作用。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以被用於治療例如以下癌症中的一種或多種：急性成淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、腎上腺皮質癌、闌尾癌、星形細胞瘤、非典型畸胎樣/橫紋肌樣腫瘤、基底細胞癌(非黑素瘤)、B細胞淋巴瘤、膀胱癌、骨癌、腦和脊髓腫瘤、腦幹癌、腦腫瘤、乳腺癌、支氣管腫瘤、伯基特淋巴瘤、類癌瘤、頭頸癌、中樞神經系統胚胎性腫瘤、小腦星形細胞瘤、腦星形細胞瘤/惡性膠質瘤、子宮頸癌、脊索瘤、慢性淋巴細胞白血病、慢性骨髓性白血病、結腸直腸癌、顱咽管瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、促結締組織增生小圓細胞瘤、導管癌、染料癌(dye cancer)、內分泌胰腺腫瘤(胰島細胞瘤)、子宮內膜癌、室管膜瘤、食道癌、嗅神經母細胞瘤、尤因家族腫瘤、顱外生殖細胞瘤、肝外膽管癌、膽囊癌、胃癌、胃腸類癌瘤、胃腸間質瘤、妊娠滋養層腫瘤、成膠質細胞瘤、膠質瘤、毛細胞白血病、頭頸癌、心臟癌、淋巴譜系造血腫瘤、肝細胞癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、下丘腦和視覺通路膠質瘤、ID相關淋巴瘤、眼內黑素瘤、胰島細胞瘤、卡波西肉瘤、腎癌、朗格漢斯細胞組織細胞增生症、喉癌、白血病、唇和口腔癌、男性乳腺癌、惡性纖維組織細胞瘤、惡性生殖細胞瘤、惡性間皮瘤、髓母細胞瘤、黑素瘤、默克爾細胞癌、間皮瘤、口腔癌、多發性內分泌腫瘤綜合症、多發性骨髓瘤、蕈樣真菌病、脊髓發育不良、骨髓增生性腫瘤、鼻腔和副鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小細胞肺癌、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖細胞瘤、卵巢低惡性潛能腫瘤、胰腺癌、胰腺神經內分泌腫瘤(胰島細胞瘤)、乳頭狀瘤病、副神經節瘤、副鼻竇和鼻腔癌、甲狀旁腺癌、陰莖癌、咽癌、嗜鉻細胞瘤、松果體實質腫瘤、松果體母細胞瘤和幕上原始神經外胚層腫瘤、垂體腫瘤、漿細胞瘤/多發性骨髓瘤、胸膜肺母細胞瘤、妊娠期乳腺癌、原發性中樞神經系統淋巴瘤、原發性肝癌、隱匿性原發性轉移性鱗狀頸癌、前列腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂和輸尿管、呼吸道癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞紮裡綜合症(Sézary syndrome)、皮膚癌、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌(非黑素瘤)、胃癌、幕上原始神經外胚層腫瘤、T細胞淋巴瘤、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲狀腺癌、移行細胞癌、尿道癌、子宮肉瘤、陰道癌、視通路和下丘腦神經膠質瘤、外陰癌、華氏巨球蛋白血症 (Waldenström macroglobulinemia)、威爾姆氏瘤 (Wilms tumor)、以及上述任一種的全身性和中心轉移。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以被用於治療實體瘤。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以被用於治療腫瘤轉移。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以被用於治療循環中的腫瘤細胞。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以被用於治療例如選自以下的癌症：原發性成人和兒童腦和CNS癌症包括成膠質細胞瘤(GBM)和星形細胞瘤；皮膚癌，包括黑素瘤；肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)以及大細胞肺癌；乳腺癌，包括三陰性乳腺癌(TNBC)；血液癌症，包括骨髓增生異常綜合症(MDS)、多發性骨髓瘤(MM)和急性骨髓性白血病(AML)；前列腺癌，包括去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)、肝癌，包括肝細胞癌(HCC)；食道癌和胃癌以及上述任何一種的任何全身性和中樞性轉移。
在癌症的治療中將是有效的由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物的量可以至少部分取決於疾病的性質，並且可以是藉由本領域已知的標準臨床技術確定。另外，可以採用體外或體內測定來幫助確定最佳劑量範圍。給藥方案和給藥間隔也可以藉由本領域技術人員已知的方法來確定。施用的由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物的量可以取決於除其他因素外，所治療的患者、患者的體重、疾病的嚴重程度、施用途徑以及處方醫師的判斷。
對於全身性施用，可以首先從體外測定中估算治療有效劑量。還可以使用本領域已知的技術，從體內資料(例如動物模型)估算初始劑量。此類資訊可以被用於更準確地確定對人有用的劑量。本領域普通技術人員可以基於動物資料最佳化對人的施用。
可以選擇由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物的劑量和適當的給藥間隔，以在患者的血液中維持由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物的持續治療有效濃度，並且在某些實施方案中，不超過最小不利濃度。
包含由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物的藥物組合物可以例如每週一次、每2週一次、每3週一次、每4週一次、每5週一次或每6週一次施用。給藥可以單獨提供，也可以與其他藥物組合提供，並且可以持續有效治療疾病所需的時間。也可以經一段時間使用連續或半連續施用進行給藥。給藥包括以飼喂或禁食狀態將藥物組合物施用於哺乳動物(如人類)。
藥物組合物可以單一劑型或多種劑型或經一段時間以連續或累積劑量施用。當使用多種劑型時，在多種劑型的每一種中包含的由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物的量可以相同或不同。
合適的每日施用劑量範圍可以為例如每千克體重約2μg至約200mg的由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物。
合適的每日施用劑量範圍可以為，例如，每平方米(m2 )身體表面約1μg至約50mg的由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以以例如0.001mg/天至100mg/天的量或以任何其他合適的日劑量施用以治療患者的癌症。劑量可以為例如0.01μg/kg體重/周至100μg/kg體重/周或任何其他合適的劑量。
可以施用包含由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物的藥物組合物以治療患者的癌症，從而在患者的血液或血漿中提供治療有效濃度的由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物。在患者血液中，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物化合物治療有效濃度可以為例如0.01μg/L至1,000μg/L、0.1μg/L至500μg/L、1μg/L至250μg/L、或約10μg/L至約100μg/L。在患者血液中，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物治療有效濃度可以為例如至少0.01μg/L、至少0.1μg/L、至少1μg/L、至少約10μg/L或至少100μg/L。在患者血液中，IL-2Rβγc結合化合物的治療有效濃度可以例如小於引起不可接受的不利作用(包括對體內平衡的不利影響)的量。在患者血液中，IL-2Rβγc結合化合物的治療有效濃度可以為足以恢復和/或維持患者體內平衡的量。
可以施用包含IL-2Rβγc結合化合物的藥物組合物以治療患者的疾病，從而在患者血液中提供延長的時間段(如例如，至少1天、至少1周、至少2周、至少4周、至少5周或至少6周)的治療有效濃度的IL-2Rβγc結合化合物。
在治療方案中，IL-2Rβγc結合化合物的施用量可以變化。
由本公開提供的藥物組合物除了由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物之外，還可以包含一種或多種藥物活性化合物。可以提供此類化合物，例如以治療用IL-2Rβγc結合化合物正在治療的癌症或治療除用IL-2Rβγc結合化合物治療的癌症以外的疾病、病症或病況，以治療藉由施用IL-2Rβγc結合化合物引起的副作用，以增強IL-2Rβγc結合化合物的功效，和/或調節IL-2Rβγc結合化合物的活性。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以與至少一種其他治療劑組合使用。IL-2Rβγc結合化合物可以與另一種用於治療患者癌症的化合物一起施用於患者。所述至少一種其他治療劑可以是第二種不同的IL-2Rβγc結合化合物。IL-2Rβγc結合化合物和至少一種其他治療劑可以與另一種IL-2Rβγc結合化合物相加或在某些實施方案中協同作用。至少一種其他治療劑可以包括在包含IL-2Rβγc結合化合物的同一藥物組合物或媒介物中，或者可以在單獨的藥物組合物或媒介物中。因此，由本公開提供的方法除了施用IL-2Rβγc結合化合物外，還包括施用有效治療癌症或與癌症不同的疾病、病症或病況的一種或多種治療劑。由本公開提供的方法包括施用IL-2Rβγc結合化合物和一種或多種其他治療劑，條件是組合施用不抑制IL-2Rβγc結合化合物的治療功效和/或不產生不利的組合作用。
包含IL-2Rβγc結合化合物的藥物組合物可以與施用的另一種治療劑同時施用，所述另一種治療劑可以是與包含IL-2Rβγc結合物的藥物組合物相同一藥物組合物的一部分，或在與包含IL-2Rβγc結合物的藥物組合物不同的藥物組合物中。IL-2Rβγc結合化合物可以在另一種治療劑的施用之前或之後施用。在某些組合療法中，組合療法可以包括在施用IL-2Rβγc結合化合物與包含另一種治療劑的組合物之間交替，例如以使與特定藥物相關的不良藥物作用最小化。當將IL-2Rβγc結合化合物與可能會產生藥物不良作用(包括例如毒性)的另一種治療劑同時施用時，所述另一種治療劑應以低於引發不良藥物反應門檻值的劑量施用。
包含由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物的藥物組合物可以與一種或多種物質一起施用，例如以增強、調節和/或控制IL-2Rβγc結合化合物的釋放、生物利用度、治療功效、治療效力和/或穩定性。例如，包含IL-2Rβγc結合化合物的藥物組合物可以與具有增強IL-2Rβγc結合化合物的治療功效的藥理作用的活性劑共同施用。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與已知的或被認為可有效治療如用IL-2Rβγc結合化合物正在治療的相同的疾病的患者的疾病(如癌症、自體免疫疾病或發炎性疾病)的試劑聯合施用。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與已知的或被認為干擾細胞增殖的試劑聯合施用。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與以下試劑聯合施用：已知的或被認為會干擾細胞代謝、成為抗代謝物、干擾RNA轉錄、干擾RNA翻譯、干擾細胞蛋白合成、干擾DNA合成和複製前體的合成、干擾嘌呤合成、干擾核苷合成、與mTOR相互作用、成為mTOR抑制劑、干擾細胞週期檢查點。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與包括以下檢查點抑制劑聯合施用：CTLA-4抑制劑(如易普利姆瑪)、PD-1抑制劑(如派姆單抗和納武單抗)和/或PD-LI抑制劑(如阿特珠單抗、阿維魯單抗和德瓦魯單抗)。IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與免疫調節劑(如CD137/4-1BB、CD27、GIYR和/或OC40)聯合施用。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與以下試劑聯合施用：已知的或被認為具有細胞毒性、引起DNA損傷、引起細胞週期停滯或引起有絲分裂災變。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與以下試劑聯合施用：已知的或被認為調節谷胱甘肽濃度、調節細胞內谷胱甘肽濃度、降低細胞內谷胱甘肽濃度、減少谷胱甘肽攝取進入細胞、減少谷胱甘肽合成或減少細胞內的谷胱甘肽合成。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與以下試劑聯合施用：已知的或被認為干擾新血管形成、減少新血管形成或促進新血管形成。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與以下試劑聯合施用：已知的或被認為干擾激素體內平衡、干擾激素合成、干擾激素受體結合或干擾激素信號轉導。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與以下試劑聯合施用：已知的或被認為干擾生長因數體內平衡、干擾生長因數受體表達、干擾生長因數與生長因數受體結合、干擾生長因數受體信號轉導、干擾Hedgehog(Hh)信號傳導、抑制Hedgehog通路信號傳導、抑制ALK(間變性淋巴瘤激酶)通路信號傳導或抑制非同源末端連接(NHEJ)通路。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與已知的或被認為是以下的一種或多種試劑聯合施用：VEGFR(血管內皮生長因數受體)抑制劑、RTK(受體酪氨酸激酶)抑制劑、鈉通道電流阻斷劑、aFAK(黏著斑激酶)抑制劑、GLI(膠質瘤相關致癌基因)抑制劑、GLI1抑制劑、GLI2抑制劑、GLI3抑制劑、MASK(絲裂原活化蛋白激酶)抑制劑、MASK/ERK途徑(也稱為Ras-Raf-MEK-ERK途徑)抑制劑、MEK1抑制劑、MEK2抑制劑、MEK5抑制劑、MEK5/ERK5抑制劑、aRTA(腎小管酸中毒)抑制劑、ALK(間變性淋巴瘤激酶)抑制劑、Aa LK激酶抑制劑、核易位抑制劑、PORCN(豪豬)抑制劑、5-ARI(5α-還原酶抑制劑)、拓撲異構酶抑制劑、Ras(大鼠肉瘤)抑制劑、K-ras抑制劑、CERK (神經醯胺激酶)抑制劑、PKB (蛋白激酶B，也稱為AKT) 抑制劑、AKT1抑制劑、EZH2 (Zeste基因增強子同源物2)抑制劑、BET (溴結構域和超末端結構域基序(bromodomain and extraterminal domain motif))抑制劑、SYK(脾臟氨酸激酶)抑制劑、JAK(janus激酶)抑制劑、SYK/JAK抑制劑、IDO(吲哚胺-吡咯-2,3-雙加氧酶)抑制劑、IDO1抑制劑、RXR(維甲酸X受體)活化劑、選擇性RXR活化劑、p-糖蛋白抑制劑、ERK抑制劑、PI3K (磷脂醯肌醇-4,5-二磷酸3-激酶)抑制劑、BRD(含溴結構域蛋白)抑制劑、BRD2抑制劑、BRD3抑制劑、BRD4抑制劑、BRDT(溴結構域睾丸特異性蛋白)、逆轉錄酶抑制劑、NRT(核苷類似物逆轉錄酶)抑制劑、PIM(莫洛尼病毒前病毒整合)抑制劑、EGFR(表皮生長因數受體)抑制劑、光敏劑、放射增敏劑、ROS(原癌基因、受體酪氨酸激酶)抑制劑、ROS1(原癌基因1)抑制劑、CK(酪蛋白激酶)抑制劑、CK2抑制劑、Bcr-Abl(斷裂點叢集區-阿貝爾森原癌基因)酪氨酸激酶抑制劑諸如達沙替尼(dasatinib)、微管穩定劑、微管解聚/分解抑制劑、DNA嵌入劑、雄激素受體拮抗劑、化學保護劑、HDAC(組蛋白去乙醯化酶)抑制劑、DPP(二肽基肽酶)抑制劑、DPP-4抑制劑、BTK(布魯頓酪氨酸激酶)抑制劑、激酶抑制劑如伊馬替尼(imatinib)、酪氨酸激酶抑制劑如尼祿替尼(nilotinib)、ARP(聚(ADP-核糖)聚合酶)抑制劑、CDK(細胞週期蛋白依賴性激酶)抑制劑、CDK4抑制劑、CDK6抑制劑、CDK4/6抑制劑、HIF1α (缺氧誘導因數1- α)抑制劑、DNA連接酶抑制劑、DNA連接酶IV抑制劑、NHEJ(非同源末端連接)抑制劑、DNA連接酶IV、NHEJ抑制劑和RAF抑制劑、TKI和RAF抑制劑、TKI和RAF抑制劑如索拉非尼(sorafenib)、PDT(光動力療法)敏化劑、ATR(共濟失調毛細血管擴張症和Rad3相關蛋白激酶)抑制劑或上述任意的組合。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與一種或多種化學治療劑聯合施用，所述化學治療劑為如例如：VEGFR抑制劑如呋喹替尼(fruquintinib)、莫特塞尼(motesanib)/AMG-706、瓦他拉尼(vatalanib)；RTK抑制劑，如帕那替尼(ponatinib)；鈉通道阻滯劑，如GS967；FAK抑制劑，如TAE226；GLI1和GLI2抑制劑，如GANT61；MEK抑制劑，如比米替尼(binimetinib)；RTA抑制劑，如利尼伐尼(linifanib)；ALK抑制劑，如布格替尼(brigstinib)；溴丙酮酸；DNA烷化劑，如噻替派(thiotepa)；核轉移因素，如JSH-23；PORCn抑制劑，如Wnt-C59；5α-還原酶抑制劑，如度他雄胺(dutasteride)；拓撲異構酶抑制劑，如卡柔比星(carubicin)；RAS抑制劑，如Kobe0065；CerK抑制劑，如NVP-231；AKT抑制劑，如優普色替(uprosertib)；EZH2抑制劑，如GSK-503；BET溴結構域抑制劑，如OTX015；MEK5/ERK5抑制劑，如BIX02189；Syl/JAK抑制劑，如賽度替尼(cerdulatinib)；IDO1抑制劑，如NLG919；視黃醛X受體活化劑，如貝沙羅汀(bexsrotene)；PGP抑制劑，如鹽酸阿替米胺(acotiamide HCl)或鹽酸阿考替胺(actotiamide HCl)；Erk抑制劑，如SCH772984；PI3K抑制劑，如gedatolisib；JAK抑制劑，如盧梭利替尼(ruxolitinib)；AKT抑制劑，如afuresertib或afuresertib鹽酸鹽；ALK1抑制劑，如色瑞替尼(ceritinib)； HDAC抑制劑，如艾貝司他(abexinostat)；DPP抑制劑，如奧格列汀(oamarigliptin)；EGFR抑制劑，如吉非替尼(gefittinib)；EZH2抑制劑，如GSK126；BTK抑制劑，如依魯替尼(ibrutinib)；激酶抑制劑，如鹽酸伊馬替尼(imatinin HCl)；IDO抑制劑，如INCB024360；DNA交聯劑，如絲裂黴素C；酪氨酸激酶抑制劑，如尼祿替尼；PARP抑制劑，如奧拉帕尼(olaparib)；微管蛋白穩定促進劑，如紫杉醇；CDK4/6抑制劑，如帕博西尼(palbociclib)；RTK抑制劑，如舒尼替尼(sunitinib)；PDT敏化劑，如他拉泊芬(tslsporfin)；p-糖蛋白抑制劑，如ariquidar；ATR抑制劑，如VE-822；HDAC抑制劑，如PCI-24781；DPP抑制劑，如奧格列汀(omarigliptin)；EGFR抑制劑，如gefinib；EZH2抑制劑，如GSK126；BTK抑制劑，如依魯替尼(irbrutinib)；IDO抑制劑，如INCB024360；或上述任意的組合。
例如，IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與另一種化學治療劑聯合施用，所述化學治療劑為如例如：N -乙醯半胱氨酸(NAC)、阿黴素(Adriamycin)、阿侖單抗(alemtuzumab)、氨磷汀(amifostine)、三氧化二砷、抗壞血酸、苯達莫司汀(bendamustine)、貝伐單抗(bevacizumab)、硼替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、丁硫氨酸-亞碸亞胺(buthionine sulfoxime)、卡非佐米(carfilzomib)、卡莫司汀(carmustine)、氯法拉濱(clofarabine)、環磷醯胺、環孢菌素、阿糖胞苷、達沙替尼、放線菌素、去纖苷酸(defibrotide)、地塞米松、多西他賽、多柔比星(doxorubicin)、依託泊苷(etoposide)、非格司亭(filgrastim)、氟尿苷、氟達拉濱(fludarabine)、吉西他濱(gemcitabine)、干擾素α、易普利姆瑪、來那度胺(lenalidomide)、亞葉酸(leucovorin)、美法侖(melphalan)、黴酚酸酯(mycofenolate mofetil)、紫杉醇、帕利夫明(palifermin)、帕比司他(panobinostat)、培非格司亭(pegfilrastim)、潑尼松龍(prednisolone)、潑尼松(prednisone)、來那度胺(revlimid)、利妥昔單抗(rituximab)、西羅莫司(sirolimus)、2-巰基乙烷磺酸鈉(MESNA)、硫代硫酸鈉、他克莫司(tacrolimus)、替莫唑胺(temozolomide)、沙利度胺(thalidomide)、硫鳥嘌呤、噻替派、拓撲替康(topotecan)、萬珂(velcade)或上述任意的組合。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與其他化學治療劑聯合施用，所述化學治療劑包括一種或多種抗代謝物，例如葉酸類似物；嘧啶類似物，如氟尿嘧啶、氟尿苷和胞嘧啶阿糖胞苷；嘌呤類似物，如巰基嘌呤、硫鳥嘌呤和噴司他丁(pentostatin)；天然產物，如長春花鹼、長春新鹼、依託泊苷、tertiposide、放線菌素D、道諾黴素(daunorubicin)、多柔比星(doxurubicin)、博萊黴素(bleomycin)、mithamycin、絲裂黴素C、L-天冬醯胺酶和干擾素α；鉑配位絡合物，例如順鉑和卡鉑；米托蒽醌；羥基脲；甲基苄肼(procarbazine)；激素和拮抗劑如潑尼松、己酸羥孕酮、醋酸甲羥孕酮、醋酸甲地孕酮、己烯雌酚、乙炔雌二醇、他莫昔芬(tamoxifen)、丙酸睾酮、氟甲睾酮、氟他胺(flutamide)和亮丙瑞林；抗血管生成劑或抑制劑如血管抑素、視黃酸、紫杉醇、雌二醇衍生物和噻唑並嘧啶衍生物；凋亡預防劑；雷公藤內酯(triptolide)；秋水仙鹼；盧利康唑(luliconazole)；和放射療法。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與抑制DNA修復的化合物(如例如O6-苄基鳥嘌呤(O6-BG))共同施用。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與一種或多種化學治療劑聯合施用，所述化學治療劑為如例如：阿巴瑞克(abarelix)、阿比特龍(abiraterone)、醋酸阿比特龍、n -乙醯半胱氨酸、鹽酸阿柔比星(aclarubicin hydrochloride)、阿黴素、腺嘌呤、阿法替尼(afatinib)、馬來酸阿法替尼、阿侖單抗、阿侖膦酸鈉、阿利維A酸(alitretinoin)、別嘌醇鈉(allopurinol sodium)、六甲蜜胺、氨磷汀、氨魯米特(aminoglutethimide)、氨基乙醯丙酸、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、血管抑素(angiostatin)、阿普斯特(apremilast)、阿瑞匹坦(aprepitant)、三氧化二砷、抗壞血酸、l-天冬醯胺酶、阿紮胞苷、硫唑嘌呤鈉(azathioprine sodium)、巴多昔芬(bazedoxifene)(serm)、貝利司他(belinostat)、苯達莫司汀hcl、O6-苄基鳥嘌呤、貝伐單抗、貝沙羅汀(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、比立考達(biricodar)、硫酸博萊黴素、硼替佐米、博舒替尼(bosutinib)、溴夫定(brivudine)、布舍瑞林(buserelin)、白消安、丁硫氨酸-亞碸亞胺、卡巴他賽(cabazitaxel)、卡博替尼(cabozantinib)、卡培他濱(capecitabine)、卡鉑、卡波醌、卡非佐米、卡莫氟(carmofur)、卡莫司汀、色瑞替尼、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、順鉑、克拉屈濱、氯屈膦酸二鈉(clodronate disodium)、氯法拉濱、克唑替尼(crizotinib)、環磷醯胺、環孢菌素、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷、達拉非尼(dabrafenib)、達卡巴嗪(dacarbazine)、放線菌素D、達沙替尼、放線菌素D(datinomycin)、道諾黴素、地西他濱(decitabine)、去纖苷酸(defribrotide)、醋酸地加瑞克(degarelix acetate)、地塞米松、鹽酸右雷佐生(dexrazoxane hydrochloride)、地吖醌(diaziquone)、己烯雌酚(diethyl stilbestrol)、多西他賽(docetaxel)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、鹽酸多柔比星、多柔比星游離鹼、屈他雄酮丙酸酯(dromostanolone propionate)、度他雄胺、艾曲波帕(eltrombopag)、恩雜魯胺(enzalutamide)、鹽酸表柔比星(epirubicin hydrochloride)、甲磺酸艾日布林(eribulin mesylate)、鹽酸埃羅替尼(erlotinib hydrochloride)、雌莫司汀磷酸鈉(estramustine phosphate sodium)、乙炔雌二醇(ethinyl estradiol)、磷酸依託泊苷、依託泊苷、伊維莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、芬太尼(fentanyl)、非格司亭、芬戈莫德(fingolimod)、氟尿苷、磷酸氟達拉濱、氟尿嘧啶、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟他胺、福美司坦(formestane)、甲醯美法侖(formylmelphalan)、福沙吡坦(fosaprepitant)、福莫司汀(fotemustine)、氟維司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、鹽酸吉西他濱、吉西他濱游離鹼、谷胱甘肽、磷醯胺氮芥(glyciphosphoramide)、甘磷醯芥(glyfosfin)、醋酸戈舍瑞林、鹽酸格拉司瓊(granisetron hydrochloride)、庚鉑(heptaplatin)、5-氨基乙醯丙酸己酯、醋酸組氨瑞林(histrelin acetate)、己酸羥孕酮(hydroxyprogesterone caproate)、羥基脲、伊班膦酸鈉(ibandronate sodium)、依魯替尼、埃克替尼(icotinib)、鹽酸依達比星(idarubicin HCl)、艾代拉裡斯(idelalisib)、碘苷、異環磷醯胺、干擾素α、甲磺酸伊馬替尼、咪喹莫特(imiquimod)、巨大戟醇甲基丁烯酸酯(ngenol mebutate)、易普利姆瑪、鹽酸伊立替康(irinotecan hydrochloride)、伊沙匹隆(ixabepilone)、蘭瑞肽乙酸鹽(lanreotide acetate)、拉帕替尼(lapatinib)游離鹼、二甲苯磺酸拉帕替尼、拉索昔芬(lasofoxifene)、來那度胺、來曲唑(letrozole)、亞葉酸鈣、醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、鹽酸左旋咪唑(levamisole hydrochloride)、左旋亞葉酸鈣(levoleucovorin calcium)、碘苄胍(iobenguane)、洛鉑(lobaplatin)、洛莫司汀(lomustine)、馬羅匹坦(maropitant)、馬索羅酚(masoprocol)、鹽酸氮芥(mechlorethamine hydrochloride)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、醋酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone acetate)、鹽酸美法侖、巰嘌呤、巰乙磺酸鈉(mercaptoethane sulfonate sodium)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、氨基乙醯丙酸甲酯、亞甲藍(methylene blue)、異甲靛(methylisoindigotin)、米伐木肽(mifamurtide)、米替福新(miltefosine)、米鉑(miriplatin)、光神黴素(mithamycin)、二溴甘露醇(mitobronitol)、絲裂黴素C、米托坦(mitotane)、鹽酸米托蒽醌(mitoxantrone hydrochloride)黴酚酸酯(mycophenolate mofetil)、nabiximols、那法瑞林(nafarelin)、諾龍(nandrolone)、奈達鉑(nedaplatin)、奈拉濱(nelarabine)、奈妥吡坦(netupitant)、尼祿替尼、尼魯米特(nilutamide)、尼莫司汀(nimustine)、尼達尼布(nintedanib)、諾考達唑(nocodazole)、奧曲肽(octreotide)、奧拉帕尼、高三尖杉酯鹼(omacetaxine mepesuccinate)、鹽酸昂丹司瓊(ondansetron hydrochloride)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、紫杉醇、帕博西尼、帕利夫明、鹽酸帕洛諾司瓊(palonosetron hydrochloride)、帕米膦酸二鈉(pamidronate disodium)、帕比司他、帕瑞肽(pasireotide)、鹽酸帕唑帕尼(pazopanib hydrochloride)、聚乙二醇化非格司亭(pegfilrastim)、培美曲塞二鈉(pemetrexed disodium)、噴司他丁、培洛黴素(peplomycin)、呱泊溴烷(pipobroman)、吡柔比星(pirarubicin)、普樂沙福(plerixafor)、普卡黴素(plicamycin)、泊馬度胺(pomalidomide)、帕納替尼(ponatinib)、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、泊非黴素(porfiromycin)、普拉曲沙(pralatrexate)、潑尼莫司汀(prednimustine)、潑尼松龍(prednisolone)、潑尼松、鹽酸甲基苄肼、鹽酸喹高利特(quinagolide hydrochloride)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲塞(raltitrexed)、拉多替尼(radotinib)、雷莫司汀(ranimustine)、維甲酸、來那度胺(revlimide)、利妥昔單抗(rituxinab)、羅米地辛(romidepsin)、盧梭利替尼(ruxolitinib)、磷酸盧梭利替尼、司莫司汀(semustine)、西羅莫司、硫代硫酸鈉、索拉非尼游離鹼、索拉非尼甲苯磺酸酯、鏈脲菌素(streptozocin)、舒芬太尼(sufentanil)、舒尼替尼、他克莫司、他拉泊芬鈉(talaporfin sodium)、他米巴羅汀(tamibarotene)、檸檬酸他莫昔芬、他噴他多(tapentadol)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺、替西羅莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、特立氟胺(teriflunomide)、替尼泊苷(tertiposide)、睾內酯(testolactone)、丙酸睾酮(testosterone propionate)、沙利度胺、硫鳥嘌呤、噻替派、胸腺法新(thymalfasin)、托西尼布磷酸鹽(toceranib phosphate)、鹽酸拓撲替康、檸檬酸托瑞米芬(toremifene citrate)、曲貝替定(trabectedin)、曲美替尼(trametinib)、維甲酸(tretinoin)、曲洛司坦(trilostane)、曲普瑞林(triptorelin)、托烷司瓊(tropisetron)、烏拉莫司汀(uramustine)、戊柔比星(valrubicin)、凡德他尼(vandetanib)、vedotin、維莫非尼(vemurafenib)、維替泊芬(verteporfin)、長春花鹼、硫酸長春新鹼、長春新鹼游離鹼、長春地辛、酒石酸長春瑞濱(vinorelbine tartrate)、伏立諾他(vorinostat)和唑來膦酸(zoledronic acid)。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與一種或多種化學治療劑聯合施用，所述化學治療劑為如例如：玻瑪西尼(abemaciclib)、醋酸阿比特龍(abiraterone acetate)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、阿卡拉布替尼(acalabrutinib)AC-T、ADE、曲妥珠單抗-美坦新偶聯物(ado-trastuzumab emtansine)、馬來酸阿法替尼、阿地白介素(aldesleukin)、艾樂替尼(alectinib)、阿侖單抗、alpelisib、氨磷汀、氨基乙醯丙酸鹽酸鹽、阿那曲唑、阿帕魯胺(apalutamide)、阿瑞匹坦、三氧化二砷、軟腐歐文氏菌天冬醯胺酶(asparaginase erwinia chrysanthemi)、阿特珠單抗、阿維魯單抗、axicabtagene ciloleucel、阿西替尼(axitinib)、阿紮胞苷(azacitidine)、BEACOPP、貝利司他、鹽酸苯達莫司汀、BEP、貝伐單抗、貝沙羅汀、比卡魯胺、比米替尼、硫酸博萊黴素、博納吐單抗(blinatumomab)、硼替佐米、博舒替尼、本妥昔單抗(brentuximab vedotin)、布加替尼(brigatinib)、BuMel、白消安、卡巴他賽、蘋果酸卡博替尼(cabazantinib-s-malate)、CAF、calasplasase pegol-mknl、卡培他濱、卡拉珠單抗(caplacizumab)-yhdp、CAPOX、卡鉑、卡鉑-紫杉醇、卡非佐米、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、CEM、塞普利單抗(cemilimab)-rwlc、色瑞替尼、西妥昔單抗(cetuximab)、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-潑尼松、CHOP、順鉑、克拉屈濱(cladribine)、氯法拉濱、CMF、考比替尼(cobimetinib)、鹽酸庫潘尼西(copanlisib hydrochloride)、COPDAC、COPP、COPP-ABV、克唑替尼、CVP、環磷醯胺、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂質體、甲磺酸達拉非尼、達卡巴嗪、達克替尼(dacomitinib)、放線菌素D、達雷木單抗(daratumumab)、阿法達貝泊汀(darbepoetin α)、達沙替尼、鹽酸道諾黴素、鹽酸道諾黴素和阿糖胞苷脂質體、地西他濱、去纖苷酸鈉、地加瑞克、地尼白介素(denileukin diftitox)、地諾單抗(denosumab)、地塞米松、鹽酸右雷佐生、地努圖希單抗(dinutuximab)、多西他賽、鹽酸多柔比星、鹽酸多柔比星脂質體、德瓦魯單抗(durvalumab)、度維利塞(duvelisib)、埃羅妥珠單抗(elotuzumab)、艾曲波帕乙醇胺(eltrombopag olamine)、依馬利人單抗(emapalumab)-lzsg、恩西地平(enasidenib mesylate)、康奈非尼(encorafenib)、恩雜魯胺、鹽酸表柔比星、EPOCH、阿法依伯汀(epoetin alfa)、厄達替尼(erdafitinib)、甲磺酸艾日布林、鹽酸埃羅替尼、依託泊苷、磷酸依託泊苷、伊維莫司、依西美坦、fec、非格司亭、磷酸氟達拉濱、氟尿嘧啶注射液、氟尿嘧啶局部用藥、氟他胺、folfiri、folfiri -貝伐單抗、folfiri -西妥昔單抗、folfirinox、folfox、福他替尼二鈉鹽(fostamatinib disodium)、FU-LV、氟維司群、吉非替尼、鹽酸吉西他濱、吉西他濱-順鉑、吉西他濱-奧沙利鉑、吉妥單抗(gemtuzumab ozogamicin)、富馬酸吉特替尼(gilteritinib fumarate)、馬來酸格拉吉布(glasdegib maleate)、穀卡匹酶(glucarpidase)、醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、格拉司瓊、HPV二價疫苗、HPV二價疫苗、重組HPV九價疫苗、HPV九價疫苗、重組HPV四價疫苗、重組HPV四價疫苗、羥基脲、hyper-CVAD、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、依魯替尼、ICE、鹽酸伊達比星、艾代拉裡斯、異環磷醯胺、甲磺酸伊馬替尼、咪喹莫特、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)、干擾素α-2b重組體、碘苄胍131 I、易普利姆瑪、鹽酸伊立替康、鹽酸伊立替康脂質體、易武西單抗(ivosidenib)、伊沙匹隆、檸檬酸伊沙唑米(ixazomib citrate)、JEB、蘭瑞肽乙酸鹽、拉帕替尼二甲苯磺酸鹽(lapatinib ditosylate)、硫酸拉羅替尼(larotrectinib sulfate)、來那度胺、甲磺酸樂伐替尼(lenvatinib mesylate)、來曲唑、亞葉酸鈣、醋酸亮丙瑞林、洛莫司汀、蘿拉替尼(lorlatinib)、鑥177注射液(lutetium Lu 177-dotatate)、鹽酸氮芥、醋酸甲地孕酮、美法侖、鹽酸美法侖、巰嘌呤、2-巰基乙烷磺酸鈉、甲氨蝶呤、溴化甲基納曲酮(methylnaltrexone bromide)、米哚妥林(midostaurin)、絲裂黴素c、鹽酸米托蒽醌、莫戈美珠單抗(mogamulizumab-kpkc)、moxetumomab pasudotox-tdfk、MVAC、耐昔妥珠單抗(necitumumab)、奈拉濱、馬來酸來那替尼(neratinib maleate)、netupitant和帕洛諾司瓊鹽酸鹽、尼祿替尼、尼魯米特、甲苯磺酸尼拉帕尼一水物(niraparib tosylate monohydrate)、納武單抗、奧濱尤妥珠單抗(obinutuzumab)、OEPA、奧法木單抗(ofatumumab)、OFF、奧拉帕尼、奧拉單抗(olaratumab)、高三尖杉酯鹼、鹽酸昂丹司瓊、OPPA、甲磺酸奧希替尼(osimertinib mesylate)、奧沙利鉑、紫杉醇、紫杉醇白蛋白穩定的納米顆粒製劑、PAD、帕博西尼、帕利夫明、鹽酸帕洛諾司瓊、鹽酸帕洛諾司瓊和netupitant、帕米膦酸二鈉、帕尼單抗(panitumumab)、帕比司他、鹽酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培門冬酶(pegaspargase)、聚乙二醇化非格司亭、聚乙二醇干擾素α-2b、帕博利珠單抗、培美曲塞二鈉、帕妥珠單抗(pertuzumab)、普樂沙福、polatuzumab vedotin-piiq、泊馬度胺、鹽酸帕納替尼、普拉曲沙、潑尼松、鹽酸甲基苄肼、鹽酸普萘洛爾(propranolol hydrochloride)、鐳223二氯、鹽酸雷洛昔芬、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、拉布立酶(rasburicase)、依庫麗單抗(ravulizumab-cwvz)、R-CHOP、R-CVP、重組HPV二價疫苗、重組HPV九價疫苗、重組HPV四價疫苗、重組干擾素α-2b、瑞格非尼(regorafenib)、R-EPOCH、瑞博西尼(ribociclib)、R-ICE、利妥昔單抗、利妥昔單抗和人透明質酸酶、鹽酸羅拉吡坦(rolapitant hydrochloride)、羅米地辛、羅米司亭(romiplostim)、瑞卡帕布樟腦磺酸鹽(rucaparib camsylate)、磷酸盧梭利替尼、司妥昔單抗(siltuximab)、sipuleucel-t、索尼得吉(sonidegib)、甲苯磺酸索拉非尼、STANFORD V、蘋果酸舒尼替尼、TAC、tagraxofusp-erzs、甲苯磺酸他拉唑帕尼(talazoparib tosylate)、滑石、拉他莫金(talimogene laherparepvec)、檸檬酸他莫昔芬、替莫唑胺、替西羅莫司、沙利度胺、硫鳥嘌呤、噻替派、tisagenlecleucel、托珠單抗(tocilizumab)、鹽酸拓撲替康、托瑞米芬、TPF、曲貝替定、曲美替尼、曲妥珠單抗、曲妥珠單抗和透明質酸酶-oysk、三氟尿苷和替比嘧啶鹽酸鹽、尿苷三乙酸酯、VAC、戊柔比星、VAMP、凡德他尼、VeIP、維莫非尼、維奈托克(venetoclax)、硫酸長春花鹼(vinblastine sulfate)、硫酸長春新鹼脂質體、酒石酸長春瑞濱、vip、維莫德吉(vismodegib)、伏立諾他、XELIRI、XELOX、阿柏西普(Ziv-aflibercept)、唑來膦酸和上述任意的組合。
可以使用體外和動物研究以及在臨床試驗中評估施用IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物治療癌症的功效。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物在治療癌症中的適用性可以藉由本領域中描述的方法來確定。例如，開發用於證明溶瘤劑抗腫瘤活性的篩選方法是已知的(Miller等人，J Med Chem ，1977，20(3)，409-413；Sweeney等人，Cancer Res ，1978，38(9)，2886-2891;以及Weiss和Von Hoff，Semin Oncol ，1985，12(3增刊4)，69-74)。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以用於治療發炎性疾病。
可以施用IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物以治療發炎性疾病。
發炎性疾病的實例包括：過敏、阿茲海默症、貧血、僵直性脊椎炎、關節炎、動脈粥狀硬化、哮喘、孤獨症、關節炎、腕管綜合症、乳糜瀉、結腸炎、克羅恩病、充血性心力衰竭、皮炎、糖尿病、憩室炎、濕疹、纖維肌痛、纖維化、膽囊疾病胃食道逆流病、橋本氏甲狀腺炎、心臟病發作、肝炎、腸易激綜合症、腎衰竭、狼瘡、多發性硬化、腎炎、神經病、胰腺炎、帕金森氏病、銀屑病、風濕性多肌痛、類風濕性關節炎、硬皮病、中風、手術併發症和潰瘍性結腸炎。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以用於治療自體免疫疾病。自體免疫疾病可以限定為人類疾病，其中免疫系統攻擊其自身的蛋白質、細胞和/或組織。自體免疫疾病的完整列表和綜述可見於The Autoimmune Diseases (Rose和Mackay, 2014, Academic Press)。
可以施用IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物以治療自體免疫疾病。
自體免疫疾病的實例包括愛迪生氏病(Addison’s disease)、無丙種球蛋白血症、斑禿、澱粉樣變性、僵直性脊椎炎、抗GBM/抗TBN腎炎、抗磷脂綜合症、自身免疫性血管性水腫、自身免疫性自主異常、自身免疫性腦脊髓炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性內耳疾病、自身免疫性心肌炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性視網膜病、自身免疫性蕁麻疹、軸突和神經元神經病、Balo病、白塞氏病(Behcet’s disease)、良性黏膜類天皰瘡、大皰性類天皰瘡、卡斯爾曼病(Castleman disease)、乳糜瀉、查加斯病(Chagas disease)、慢性炎症性脫髓鞘性多發性神經病、慢性復發性多病灶性骨髓炎、查格-施特勞斯病(Churg-Strauss)、瘢痕性類天皰瘡(cicatricial pemphigoid)、Cogan綜合症(Cogan’ syndrome)、冷凝集素病、先天性心臟病、柯薩奇心肌炎(Coxcackie myocarditits)、CREST綜合症、克羅恩病、皰疹樣皮炎、皮肌炎、Devic氏病(Devic’s disease)、盤狀狼瘡、德雷斯勒綜合症(Dressler’s syndrome)、子宮內膜異位症、嗜酸性食管炎、嗜酸性筋膜炎、結節性紅斑、原發性混合冷球蛋白血症、埃文斯綜合症(Evans syndrome)、纖維肌痛、纖維化肺泡炎、巨細胞動脈炎、巨細胞心肌炎、腎小球腎炎、古德佩斯特氏綜合症(Goodpasture’s syndrome)、肉芽腫性多血管炎、格雷夫斯病(Graves’ disease)、格林－巴厘綜合症(Gullain-Barre syndrome)、橋本甲狀腺炎(Hashimoto’ thyroiditis)、溶血性貧血、Henoch-Schonlein紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、妊娠皰疹或妊娠性類天皰瘡、低丙種球蛋白血症、IgA腎病、IgG4相關硬化性病、免疫性血小板減少性紫癜、包涵體肌炎、間質性膀胱炎、幼年型關節炎、幼年型糖尿病、幼年型肌炎、川崎氏病(Kawasaki disease)、Lambert-Eaton綜合症(Lambert-Eaton syndrome)、白血球破碎性血管炎(leukocytoclastic vasculitis)、扁平苔蘚、硬化性苔蘚、木樣結膜炎、線性IgA疾病、狼瘡、慢性萊姆病、梅尼埃病(Meniere’s diseases)、顯微鏡下多血管炎、混合結締組織病、莫倫角膜潰瘍(Mooren’s ulcer)、Mucha-Habermann病(Mucha-Habermann disease)、多發性硬化、重症肌無力、肌炎、發作性睡病、視神經神經脊髓炎(neuromyelitis, optica)、中性粒細胞減少症、眼部瘢痕性天皰瘡、視神經炎、復發性風濕病、PANDAS、副腫瘤性小腦變性、陣發性夜間血紅蛋白尿、帕羅綜合症(Parry Romberg syndrome)、睫狀體扁平部炎、帕森納-特納綜合症(Parsonnage-Turner syndrome)、天皰瘡、周圍神經病、靜脈周腦脊髓炎、惡性貧血、POEMS綜合症、結節性多動脈炎、多腺性綜合症、風濕性多肌痛、多肌炎、心肌梗死後綜合症、心包切開術後綜合症、原發性膽汁性肝硬化、原發性硬化性膽管炎、孕酮性皮炎、銀屑病、銀屑病性關節炎、純紅細胞再生障礙、壞疽性膿皮病、雷諾現象(Raynaud’s phenomenon)、反應性關節炎、反射性交感神經營養不良、復發性多軟骨炎、不寧腿綜合症、腹膜後纖維化、風濕熱、類風濕性關節炎、結節病、施密特綜合症(Schmidt syndrome)、鞏膜炎、硬皮病、乾燥綜合症(Sjogren’s syndrome)、精子和睾丸自身免疫、僵人綜合症、亞急性細菌性心內膜炎、Susac綜合症、交感性眼炎、大動脈炎(Takayasu’s arteritis)、顳動脈炎、血小板減少性紫癜、Tolosa-Hunt綜合症、橫貫性脊髓炎、第1型糖尿病、潰瘍性結腸炎、未分化結締組織病、葡萄膜炎、血管炎(vaculitis)、白斑症和韋格納肉芽腫。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以用於治療自體免疫疾病，如例如狼瘡、移植物抗宿主病、C型肝炎誘導的血管炎、第1型糖尿病、多發性硬化、自然流產、特應性疾病和發炎性腸病。
IL-2Rβγc結合化合物可以與用於治療自體免疫疾病的一種或多種另外的治療劑一起施用。IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與一種或多種免疫抑制劑聯合施用，所述免疫抑制劑包括例如：皮質類固醇如潑尼松、布地奈德(budesonide)和潑尼松龍；Janus激酶抑制劑，如托法替尼(tofacitinib)；鈣調神經磷酸酶抑制劑，如環孢菌素和他克莫司；mTOR抑制劑，如西羅莫司和依維莫司；IMDH抑制劑，如硫唑嘌呤、來氟米特(leflunomide)和黴酚酸酯；生物製劑，如阿巴西普阿達木單抗(abatacept adalimumab)、阿那白滯素(anakinra)、賽妥珠單抗(certolizumab)、依那西普(etanercept)、戈利木單抗(golimumab、英夫利西單抗(infliximab)、ixekizumab、那他珠單抗(natalizumab)、利妥昔單抗、蘇金單抗(secukinumab)、托珠單抗(tocilizumab)、烏司奴單抗(ustekinumab)和維多珠單抗(vedolizumab)；和單複製抗體，如巴厘昔單抗(basiliximab)和達利珠單抗(daclizumab)。
可以將IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物施用於患者以治療與T細胞的啟動、增殖、代謝和/或分化相關的疾病。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以施用於患者以治療器官移植。
IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物可以與以下的試劑聯合施用：已知的或被認為干擾增殖、干擾有絲分裂、干擾DNA複製或干擾DNA修復。
可以將IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物施用於患者以治療免疫缺陷病。
原發性免疫缺陷病的實例包括自身免疫性淋巴細胞增生綜合症、自身免疫性多腺體綜合症1型、BENTA疾病、半胱天冬酶8缺陷狀態、CARD9缺乏症、慢性肉芽腫性疾病、普通變化型免疫缺陷病、先天性中性粒細胞減少綜合症、CTLA4缺乏症、DOCK8缺乏症、GATA2缺乏症、糖基化病症、高免疫球蛋白E綜合症、高免疫球蛋白M綜合症、干擾素γ、白細胞介素12和白細胞介素23缺乏症、白細胞黏附缺乏症、LRBA缺乏症、PI2激酶疾病、PLCG2相關的抗體缺乏症和免疫失調、重症綜合性免疫缺陷、STAT3顯性負效疾病、STAT3獲得功能疾病、疣、低丙球蛋白血症、感染和骨髓粒細胞缺乏症(myelokathexis)綜合症、Wiskott-Aldrich綜合症、X連鎖無丙種球蛋白血症、X連鎖淋巴細胞增生性疾病和XMEN疾病。
繼發性免疫缺陷病在免疫系統受到環境因素(如感染、化學療法、嚴重燒傷或營養不良)的損害時發生。繼發性免疫缺陷病的實例包括新生兒免疫缺陷，如不成熟的淋巴器官、缺乏記憶免疫、低母體IgG水準、減少的中性粒細胞儲存池、降低的中性粒細胞功能和降低的自然殺傷細胞活性；老年相關的免疫缺陷，如抗原特異性細胞免疫降低、T細胞寡複製(oligoconality)和受限制的B細胞庫；營養不良相關的免疫缺陷，如降低的細胞免疫應答和變弱的黏膜屏障；糖尿病相關的免疫缺陷，如降低的有絲分裂原誘導的淋巴細胞增殖、缺陷型吞噬作用和降低的趨化性；慢性尿毒癥相關的免疫缺陷如降低的細胞免疫應答、降低的記憶抗體應答的產生和降低的趨化性；遺傳綜合症，如缺陷型吞噬作用、缺陷型趨化性和抗原特異性免疫應答的可變缺陷；以及抗炎、免疫調節和免疫抑制藥物治療相關的免疫缺陷，如淋巴細胞減少症、降低的細胞免疫應答和無變應性、降低的促炎細胞因數、降低的吞噬作用、降低的趨化性、中性粒細胞減少和變弱的黏膜屏障；環境條件，如增加的淋巴細胞凋亡、增加的致耐受性細胞因數的分泌、血球減少、降低的細胞免疫和無變應性和應激誘導的非特異性免疫活化；以及感染性疾病如T細胞淋巴細胞減少症、降低的細胞免疫應答和無變應性和缺陷型抗原特異性抗體應答。
可以向患者施用IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物，以增加免疫受損患者的免疫應答。
可以將IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物施用於患者以增加患者的免疫應答。
可以將IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物施用於患者以治療感染性疾病。
感染性疾病的實例包括：不動桿菌感染、放線菌病、非洲昏睡病(非洲錐蟲病)、AIDS(後天免疫缺乏症候群)、阿米巴病、邊蟲病、血管圓線蟲病、異尖線蟲病、炭疽、溶血隱秘桿菌(Arcanobacterium haemolyticum )感染、阿根廷出血熱(Argentine hemorrhagic fever)、蛔蟲病、麯黴病、星狀病毒感染、巴貝西蟲病、蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus )感染、細菌性腦膜炎、細菌性肺炎、細菌性陰道病、擬桿菌感染、小袋蟲病、巴爾通氏體病、蛔蟲感染、非性病性梅毒、梅毒、雅司病、BK病毒感染、黑毛結節病(black piedra)、芽囊原蟲病(blastocystosis)、芽生菌病、玻利維亞出血熱、肉毒中毒(和嬰兒肉毒中毒)、巴西出血熱、布氏菌病、黑死病、伯克氏菌感染、布路裡潰瘍、杯狀病毒感染(諾如病毒和札幌病毒(Sapovirus))、彎桿菌病、念珠菌病(candidiasis)(念珠菌病(Moniliasis)；鵝口瘡)、毛細線蟲病、卡裡翁氏病(carrion's disease)、貓抓病、蜂窩組織炎、查加斯病(美洲錐蟲病)、軟下疳(chancroid)、水痘、基孔肯雅熱、衣原體、肺炎嗜衣原體(Chlamydophila pneumonia )感染(臺灣急性呼吸試劑或TWAR)、霍亂、著色芽生菌病、壺菌病、支睾吸蟲病、難辨梭菌結腸炎(Clostridium difficile colitis)、球孢子菌病、科羅拉多壁虱熱(CTF)、感冒(急性病毒性鼻咽炎；急性鼻炎、冠狀病毒疾病2019(COVID-19)、克雅氏病(CJD)、克裡米亞剛果出血熱(CCHF)、隱球菌病、隱孢子蟲病、皮膚幼蟲移行症(CLM)、圓孢球蟲病、囊尾幼蟲病、巨細胞病毒感染、登革熱、柵藻(desmodesmus)感染、dientamoebiasis、白喉、裂頭絛蟲病、麥迪那龍線蟲病、埃博拉出血熱、包蟲病、埃裡希體病、蟯蟲病(蟯蟲感染)、腸球菌感染、腸病毒感染、流行性斑疹傷寒、愛潑斯坦-巴爾病毒感染單核細胞增多症(Mono)、感染性紅斑(第五病)、fxanthem subitum(第六病)、肝片吸蟲病、薑片蟲病、致命性家族性失眠症(FFI)、絲蟲病、藉由(產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens ))的食物中毒、獨立生存的阿米巴感染、梭菌感染、氣性壞疽(gas gangrene/Clostridial myonecrosis)、地黴病、Gerstmann-Sträussler-Scheinker綜合症 (GSS)、賈第蟲病、鼻疽病、顎口線蟲病、淋病、腹股溝肉芽腫(杜諾凡病)、A組鏈狀球菌感染、B組鏈狀球菌感染、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae )感染、手足口病(HFMD)、漢坦病毒肺綜合症(HPS)、中原病毒(Heartland virus)疾病、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori )感染、溶血性尿毒癥綜合症(HUS)、腎綜合症出血熱(HFRS)、亨得拉病毒感染、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、D型肝炎、E型肝炎、單純性皰疹、組織胞漿菌病、鉤蟲感染、人博卡病毒感染、人伊氏埃立克體病(human ewingii ehrlichiosis)、人粒細胞無形體病(HGA)、人偏肺病毒感染、人單核細胞埃立克體病、人乳頭瘤病毒(HPV)感染、人副流感病毒感染、膜殼絛蟲病、流行性感冒(flu)、等孢球蟲病、川崎病、角膜炎、金格桿菌(Kingella kingae)感染、苦魯病、拉沙熱、軍團桿菌病(Legionellosis) (軍團病(Legionnaires' disease))、利什曼病、麻風病、鉤端螺旋體病、李氏桿菌病、萊姆病(萊姆疏螺旋體病)、淋巴絲蟲病(象皮病)、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎、瘧疾、瑪律堡出血熱(MHF)、麻疹、類鼻疽(惠特莫爾氏病(Whitmore's disease))、腦膜炎、腦膜炎球菌病、後殖吸蟲病、微孢子蟲病、中東呼吸綜合症(MERS)、感染性軟疣(MC)、猴痘、腮腺炎、鼠型斑疹傷寒(地方性斑疹傷寒)、足分支菌病、生殖支原體(mycoplasma genitalium)感染、支原體肺炎、蠅蛆病、新生兒結膜炎(新生兒眼炎)、尼帕病毒感染、諾卡菌病、諾如病毒(兒童和嬰兒)、盤尾絲蟲病(河盲症)、後睾吸蟲病、副球孢子菌病(南美芽生菌病)、肺吸蟲病、巴斯德菌病、頭蝨病(頭蝨)、體虱病(體虱)、陰虱病(陰虱、毛虱)、骨盆發炎性疾病(PID)、百日咳(頓咳)、瘟疫、肺炎球菌感染、肺孢子蟲性肺炎(PCP)、肺炎、脊髓灰質炎、龐提阿克熱、普氏菌感染、原發性阿米巴腦膜炎(PAM)、進行性多灶性白質腦病、鸚鵡熱、Q熱、狂犬病、回歸熱、呼吸道合胞體病毒感染、鼻孢子蟲病、鼻病毒感染、立克次氏體感染、立克次氏體痘、裡夫特裂谷熱(RVF)、洛磯山斑疹熱(RMSF)、輪狀病毒感染、風疹、沙門氏菌病、SARS(嚴重急性呼吸綜合症)、疥瘡、猩紅熱、血吸蟲病、敗血症、志賀氏菌病(桿菌痢疾)、帶狀皰疹(shingles/Herpes zoster)、天花(痘症)、孢子絲菌病、葡萄球菌食物中毒、葡萄球菌感染、類圓線蟲病、亞急性硬化性全腦炎、絛蟲病、破傷風(牙關緊閉症)、顏面癬(須癬)、頭癬(頭皮癬)、體癬(tinea corporis/ringworm of the body)、股癬(tinea cruris/Jock itch)、手癬(tinea manum/ringworm of the hand)、黑癬、腳癬(足癬)、甲癬(甲真菌病)、花斑癬(花斑糠疹)、弓蛔蟲病(眼幼蟲移行症(OLM))、弓蛔蟲病(內臟幼蟲移行症(VLM))、弓形體病、沙眼、旋毛蟲病、滴蟲病、鞭蟲病(鞭蟲感染)、結核病、兔熱病、傷寒、斑疹傷寒、解脲支原體(Ureaplasma urealyticum)感染、溪穀熱、委內瑞拉馬腦炎、委內瑞拉出血熱、副溶血弧菌腸炎(vibrio parahaemolyticus enteritis)、創傷弧菌(vibrio vulnificus)感染、病毒性肺炎、西尼羅河熱、白毛結節病(white piedra)(白禿瘡(tinea blanca))、黃熱病、假結核耶爾森菌(Yersinia pseudotuberculosis )感染、耶氏症(yersiniosis)、zeaspora、寨卡熱和接合菌病。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以單獨或組合用於治療疾病，所述疾病包括：急性髓樣白血病、B細胞淋巴瘤、慢性骨髓性白血病、抑鬱症、牙齦萎縮、C型肝炎、HIV感染、人乳頭瘤病毒、特發性CD4淋巴細胞減少症、繼發於器官移植的免疫缺陷、脂肪代謝障礙、卡波西肉瘤淋巴瘤、淋巴細胞減少症、套細胞淋巴瘤、多發性硬化症、骨髓增生異常綜合症、非霍奇金淋巴瘤、復發的成人彌漫性大細胞淋巴瘤、復發的濾泡性淋巴瘤、類風濕性關節炎、敗血症和第2型糖尿病。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於治療癌症，諸如轉移性乳腺癌、乳腺癌、結腸癌、膀胱癌、轉移性前列腺癌、IV期前列腺癌、去勢耐受性前列腺癌、成神經細胞瘤、黑色素瘤、腎癌、骨髓增殖性贅生物、肉瘤和神經表層瘤(neurodermal tumors)。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以與替莫唑胺組合使用以治療大的成膠質細胞瘤，與阿特珠單抗組合使用以治療皮膚癌(如MCC、C5CC和黑色素瘤)，與派姆單抗組合使用以治療三陰性乳腺癌，以及與CAR-T療法組合使用以治療兒童急性淋巴細胞白血病。
可以將IL-2Rβγc結合化合物或其藥物組合物與另一種化合物一起施用於患者，以治療患者的發炎性疾病或自體免疫疾病。至少一種其他治療劑可以是由本公開提供的不同的IL-2Rβγc結合化合物。IL-2Rβγc結合化合物和至少一種其他治療劑可以相加或協同作用。至少一種其他治療劑可以包括在包含IL-2Rβγc結合化合物的同一藥物組合物或媒介物中，或者可以在單獨的藥物組合物或媒介物中。因此，由本公開提供的方法除了施用IL-2Rβγc結合化合物外，還包括施用有效治療發炎性疾病或自體免疫疾病或與發炎性疾病或自體免疫疾病不同的疾病、病症或病況的一種或多種治療劑。由本公開提供的方法包括施用IL-2Rβγc結合化合物和一種或多種其他治療劑，條件是組合施用不抑制IL-2Rβγc結合化合物的治療功效和/或不產生不利的組合作用。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以在體外用作用於理解IL-2的生物學作用(包括評估被認為影響IL-2的產生和受體結合過程並受IL-2的產生和受體結合過程影響的許多因素)的工具。本發明的化合物還用於開發與IL-2R結合並啟動IL-2R的其他化合物，因為本發明化合物提供了有關結構和活性之間關係的有用資訊，這些資訊應促進這種開發。
IL-2Rβγc結合化合物還用作篩選新的IL-2受體激動劑和拮抗劑的測定中的競爭性結合劑。在此類測定中，可以不經修飾地使用IL-2Rβγc結合化合物，或者可以以多種方式對IL-2Rβγc結合化合物進行修飾，所述方式為例如藉由標記，諸如共價或非共價連接直接或間接提供可檢測信號的部分。在任何這些測定中，可以直接或間接標記其材料。直接標記的可能性包括標記基團，諸如：放射性標記物(如125 I)、酶(如過氧化物酶和鹼性磷酸酶)以及能夠監控螢光強度、波長偏移或螢光偏振變化的螢光標記。間接標記的可能性包括一種成分的生物素化，然後與偶聯至上述標記基團之一的抗生物素蛋白結合。在其中化合物要連接到固體載體上的情況下，化合物還可以包括間隔子或接頭。
基於它們與IL-2R結合的能力，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以被用作檢測例如在活細胞上、固定細胞上、在生物流液中、在組織勻漿中、在純化的天然生物材料中IL-2R的試劑。例如，藉由標記此類肽，可以鑒定表達IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基的細胞。另外，基於它們與IL-2R結合的能力，本公開的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於例如原位染色、FACS(螢光啟動細胞分選)、蛋白質印跡和ELISA中。另外，基於它們與IL-2R結合的能力，由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物可以被用於受體純化、或用於純化在細胞表面(或透化細胞內部)表達IL-2R的細胞。
由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物也可以被用作用於各種醫學研究和診斷用途的商業試劑。此類用途包括，例如：(1) 在各種功能測定中用作定量候選IL-2激動劑活性的校準標準；(2) 用於維持IL-2依賴性細胞系的增殖和生長；(3) 藉由共結晶用於IL-2R的結構分析中；(4) 用於研究IL-2信號轉導/受體啟動的機制；和(5) 其他研究和診斷應用，其中已啟動IL-2R或針對已知量的IL-2R激動劑方便地校準了此類啟動。
本發明的方面包括編碼由本公開提供的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體、IL-2Rβγc配體構建體和IL-2Rβγc結合化合物的核酸。
編碼由本公開提供的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc結合化合物的核酸/分離的多核苷酸可以摻入部分地依賴於用於產生所述IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc結合化合物的宿主細胞表達載體。通常，可以將核酸可操作地連接至許多調控元件(如例如啟動子、複製起點、選擇性標誌物、核糖體結合位點和/或誘導物)。表達載體可以為染色體外或整合載體。
可以將核酸和/或表達轉化至許多不同類型的宿主細胞(包括哺乳動物細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆蟲細胞和/或真菌細胞，其中哺乳動物細胞為如CHO細胞)中。
編碼IL-2Rβγc配體的核酸可以包含編碼IL-2Rβ配體的第一核酸序列；編碼肽基配體接頭的第二核酸序列；和編碼IL-2Rγc配體的第三核酸序列。
編碼IL-2Rβγc配體融合蛋白的核酸可以包含編碼由本發明提供的IL-2Rβγc配體的第一核酸序列；和編碼融合伴侶的第二核酸序列。編碼IL-2Rβγc配體融合蛋白的核酸可以包含編碼IL-2Rβγc配體和融合伴侶的核酸。編碼IL-2Rβγc配體融合蛋白的核酸還可以包含編碼構建體接頭的核酸片段，並且編碼IL-2Rβγc配體融合蛋白的核酸可以包含編碼IL-2Rβγc配體、融合伴侶和構建體接頭的核酸。
融合伴侶可以包含例如HSA、Fc片段、IgG、針對細胞特異性抗原的抗體和針對細胞特異性受體的抗體。
編碼IL-2Rβγc融合蛋白的核酸還可以包含編碼肽基接頭的核酸，其中肽基接頭被配置為將IL-2Rβγc配體與融合伴侶結合。
由本公開提供的核酸可以編碼融合蛋白，所述融合蛋白包含IL-2Rβγc配體和將IL-2Rβγc配體的C-末端與HSA結合的接頭。
由本公開提供的核酸可以編碼融合蛋白，所述融合蛋白包含IgG1、IgG2或IgG4的二聚化Fc片段，IL-2Rβγc配體和將IL-2Rβγc配體的N-末端與二聚化Fc片段的一個CH3結構域的C-末端結合的接頭。
由本公開提供的核酸可以編碼融合蛋白，所述融合蛋白包含IgG1、IgG2或IgG4的二聚化Fc片段，兩個IL-2Rβγc配體以及將兩個IL中的每一個的N-末端與二聚化Fc片段的每個CH3結構域的C-末端結合的接頭。
由本公開提供的核酸可以編碼融合蛋白，所述融合蛋白包含免疫球蛋白分子(如IgG1、IgG2或IgG4)的重鏈、IL-2Rβγc配體和將IL-2Rβγc配體的N-末端與Fc區的C-末端結合的Fc接頭。
由本公開提供的核酸可以包含編碼由本公開提供的IL-2Rβγc結合化合物的核酸以及RNA和/或DNA疫苗。
由本公開提供的核酸可以包含編碼IL-2Rβγc結合疫苗構建體的核酸。疫苗可以包括例如癌症疫苗或病毒疫苗。
由本公開提供的核酸可以包含編碼包含病毒表面抗原的IL-2Rβγc結合構建體的核酸。
由本公開提供的核酸可以包含編碼包含病毒樣顆粒的IL-2Rβγc結合構建體的核酸。
由本公開提供的核酸可以編碼由本公開提供的IL-2Rβ配體，或者可以編碼包含與由本發明提供的IL-2Rβ配體具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼包含SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβ配體，或可以編碼包含與SEQ ID NO：612、664、671、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼由本公開提供的IL-2Rγc配體，或者可以編碼包含與由本公開提供的IL-2Rγc配體具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼包含SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的氨基酸序列的IL-2Rγc配體，或者可以編碼包含與SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼由本公開提供的IL-2Rβγc配體，或者可以編碼包含與由本公開提供的IL-2Rβγc配體具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼包含SEQ ID NO：1263-1270中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體，或者可以編碼包含與SEQ ID NO：1263-1270中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼由本公開提供的IL-2Rβγc配體融合蛋白，或者可以編碼包含與由本公開提供的IL-2Rβγc配體融合蛋白具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼包含SEQ ID NO：1212-1252中任一項的氨基酸序列的IL-2Rβγc配體融合蛋白，或者可以編碼包含與SEQ ID NO：1212-1252中任一項具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼IL-2Rβγc配體構建體，其包含含有SEQ ID NO：865的氨基酸序列的IL-2Rβ配體或者與SEQ ID NO：865具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列；以及包含含有SEQ ID NO：965的氨基酸序列的IL-2Rγc配體或者與SEQ ID NO：965具有大於60%、大於70%、大於80%、大於85%、大於90%或大於95%序列相似性的氨基酸序列的氨基酸序列。
由本公開提供的核酸可以編碼串聯的IL-2Rβγc配體，其包含由本公開提供的兩個或更多個IL-2Rβγc配體。
本發明的方面包括表達載體，其包含編碼由本公開提供的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體的核酸。
本發明的方面還包括宿主細胞，其包含表達載體，所述表達載體包含編碼由本公開提供的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體的核酸。
由本公開提供的方法包括製備由本公開提供的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體的方法，包括在表達IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體的條件下，培養宿主細胞，其中所述宿主細胞包含表達載體，所述表達載體包含編碼由本公開提供的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體的核酸，以及回收表達的IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體、IL-2Rβγc配體、串聯IL-2Rβγc配體或IL-2Rβγc配體構建體。發明方面
本發明由以下方面進一步限定。
方面1. IL-2Rβγc配體，其包含： (a) IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體包含式(1) (SEQ ID NO：805)、式(1a) (SEQ ID NO：806)、式(1b) (SEQ ID NO：807)、式(1c) (SEQ ID NO：808)或式(1d) (SEQ ID NO：809)的氨基酸序列，或與(1) (SEQ ID NO：805)、式(1a) (SEQ ID NO：806)、式(1b) (SEQ ID NO：807)、式(1c) (SEQ ID NO：808)或式(1d) (SEQ ID NO：809)的氨基酸序列具有大於60%序列相似性的氨基酸序列： –X211 –X212 –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –X225 –        (1) –X212 –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –        (1a) –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –         (1b) –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –                   (1c) –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–                    (1d) 其中， X211 選自氨基酸； X212 選自F、H、W和Y； X213 選自F、H、I、L、M、V、W和Y; X214 為P； X215 選自F、H、W和Y； X216 選自F、I、L、M、V、W和Y； X217 為A； X218 選自K、R、H、N、Q、S、T和Y； X219 選自F、I、L、M、V、W和Y； X220 為G； X221 選自D、E、H、N、Q、S、T和Y； X222 為L； X223 為D； X224 選自F、I、L、M、V、W和Y；和 X225 選自D和E； (b) IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體包含式(5) (SEQ ID NO：944)、式(5a) (SEQ ID NO：945)、式(5b) (SEQ ID NO：946)、式(5c) (SEQ ID NO：947)、式(5d) (SEQ ID NO：948)或式(5e) (SEQ ID NO：949)的氨基酸序列，或與式(5) (SEQ ID NO：944)、式(5a) (SEQ ID NO：945)、式(5b) (SEQ ID NO：946)、式(5c) (SEQ ID NO：947)、式(5d) (SEQ ID NO：948)或式(5e) (SEQ ID NO：949)的氨基酸序列具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列： –X171 –X172 –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –X187 –X188 –    (5) –X172 –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –X187 –   (5a) –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –         (5b) –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –                (5c) –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –                 (5d) –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–                        (5e) 其中， X171 選自H、K和R； X172 選自S、T和Y； X173 選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y； X174 選自F、I、L、M、V、W和Y； X175 選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y； X176 選自D、E、H、N、Q、S、T和Y； X177 選自D和E； X178 選自F、H、I、L、M、V、W和Y； X179 選自D、E、H、N、Q、S、T和Y； X180 為G； X181 為V； X182 為E； X183 為L； X184 選自W； X185 選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T； X186 為E； X187 選自氨基酸；和 X188 選自D和E；以及 (c) 將IL-2Rβ配體與IL-2Rγc配體結合的IL-2Rβγc配體接頭。
方面2. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rβ配體中： X211 選自H、K和R； X212 為W； X213 為Y； X214 為P； X215 為W； X216 為M； X217 為A； X218 選自N和Q； X219 選自L和V； X220 為G； X221 選自E、D和Q； X222 為L； X223 為D； X224 選自L和M；和 X225 選自D和E。
方面3. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rβ配體中： X211 選自A、D、E、G、H、L、M、N、Q、R、S、T和V； X212 選自C、F、W和Y； X213 選自F、H、K、L、N、Q、R、S、W和Y； X214 為P； X215 選自W和Y； X216 選自F、I、K、L、M、R、S、T和V； X217 為A； X218 選自D、E、G、H、K、L、N、Q、R、S和Y； X219 選自L、P和V； X220 選自G、H和W； X221 選自D、E和Q； X222 選自L和M； X223 為D； X224 選自L、M、Q和V；和 X225 選自A、D、E、F、G、H、L、N、Q、T和V。
方面4. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rβ配體中： X211 選自H和R； X212 選自F和W； X213 選自F、L、W和Y； X214 為P； X215 選自W和Y； X216 選自F、I、L、M和V； X217 為A； X218 選自D、E、H、K、N、Q和R； X219 選自L和V； X220 為G； X221 選自D、E和Q； X222 選自L和M； X223 為D； X224 選自L、M和V；和 X225 選自D和E。
方面5. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rβ配體中： X211 選自H和R； X212 為W； X213 為Y； X214 為P； X215 為W； X216 為M； X217 為A； X218 選自K和R； X219 為L； X220 為G； X221 選自E和Q； X222 為L； X223 為D； X224 為L；和 X225 選自D和E。
方面6. 方面1至方面5中任一項的IL-2Rβγc配體，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中： X171 選自H、K和R； X172 選自S、T和Y； X173 選自D和E； X174 為V； X175 選自D和E； X176 選自E和Q； X177 選自D和E； X178 選自F、H、W和Y； X179 選自D、E和Q； X180 為G； X181 為V； X182 為E； X183 為L； X184 為W； X185 選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T； X186 為E； X187 選自氨基酸；和 X188 選自D和E。
方面7. 方面1至方面5中任一項的IL-2Rβγc配體，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中： X171 選自H、K和R； X172 選自S、T和Y； X173 選自F、I、L、M、V、W和Y； X174 為V； X175 選自F、I、L、M、V、W和Y； X176 選自E和Q； X177 選自D和E； X178 選自F、H、W和Y； X179 選自D、E和Q； X180 為G； X181 為V； X182為E； X183 為L； X184 為W； X185 選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T； X186 為E； X187 選自氨基酸；和 X188 選自D和E。
方面8. 方面1至方面5中任一項的IL-2Rβγc配體，其中在式(5)-(5e)的IL-2Rγc配體中： X171 選自H、K和R； X172 選自S、T和Y； X173 選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y； X174 為V； X175 選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y； X176 選自D、E、H、N、Q、S、T和Y； X176 選自E和Q； X177 選自D和E； X178 為W； X179 選自D、E和Q； X180 為G； X181 為V； X182 為E； X183 為L； X184 為W； X185 選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T； X186 為E； X187 選自氨基酸；和 X188 選自D和E。
方面9. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中(a)所述IL-2Rβ配體包含式(1)、式(1a)、式(1b)、式(1c)或式(1d)的氨基酸序列；和(b)所述IL-2Rγc配體包含式(5)、式(5a)、式(5b)、式(5c)、式(5d)或式(5e)的氨基酸序列。
方面10. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中，(a)所述IL-2Rβ配體包含與式(1)、式(1a)、式(1b)、式(1c)或式(1d)的氨基酸序列具有大於60%序列相似性的氨基酸序列；和(b)所述IL-2Rγc配體包含與式(5)、式(5a)、式(5b)、式(5c)、式(5d)或式(5e)的氨基酸序列具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列。
方面11. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體包含選自SEQ ID NO：805-903中任一項的氨基酸序列；和所述IL-2Rγc配體包含選自SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列。
方面12. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體包含選自SEQ ID NO：612、664、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項的氨基酸序列；和所述IL-2Rγc配體包含選自SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項的氨基酸序列。
方面13. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體與SEQ ID NO：805-903中的任一項具有大於60%的氨基酸序列相似性。
方面14. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rγc配體與SEQ ID NO：944-1028中任一項具有大於60%的氨基酸序列相似性。
方面15. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體與SEQ ID NO：612、664、865、856、858、864、869、870、874、875和901中任一項具有大於60%的氨基酸序列相似性；和所述IL-2Rγc配體與SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項具有大於60%的氨基酸序列相似性。
方面16. 方面1至方面15中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體在所述IL-2Rβ配體的兩個半胱氨酸之間包含二硫鍵。
方面17. 方面1至方面15中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rγc配體在所述IL-2Rβγc配體的兩個半胱氨酸之間包含二硫鍵。
方面18. 方面1至方面15中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體在所述IL-2Rβ配體的半胱氨酸與所述IL-2Rγc配體的半胱氨酸之間包含二硫鍵。
方面19. 方面1至方面15中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的每個半胱氨酸藉由二硫鍵與所述IL-2Rγc配體的半胱氨酸結合。
方面20. 方面1至方面19中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體是pH偏倚性IL-2Rβ配體和/或所述IL-2Rγc配體是pH偏倚性IL- 2Rγc配體。
方面21. 方面1至方面20中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體是pH偏倚性IL-2Rβγc配體。
方面22. 方面1至方面21中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體與IL-2Rβ亞基的特異性結合位點結合，其中IL-2、包含SEQ ID NO：1044的氨基酸序列的IL-2Rβ配體和包含SEQ ID NO：224的IL-2Rγc配體不與IL-2Rβ配體競爭結合IL-2Rβ亞基上的特異性結合位點。
方面23. 方面1至方面22中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體以小於100μM的IC50 與IL-2Rβ亞基結合；並且所述IL-2Rβ配體以大於100µM的IC50 與IL-2Rγc亞基結合。
方面24. 方面1至方面23中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rγc配體與所述IL-2Rγc亞基的特異性結合位點結合，其中IL-2、包括SEQ ID NO：1032的氨基酸序列的IL-2Rγc配體和包含SEQ ID NO：58的IL-2Rβ配體不與所述IL-2Rγc配體競爭結合IL-2Rγc亞基上的特異性結合位點。
方面25. 方面1至方面24中任一項的IL-2Rβγc配體，其中，所述IL-2Rγc配體以小於100μM的IC50 與IL-2Rγc亞基結合；並且所述IL-2Rγc配體以大於100µM的IC50 與IL-2Rβ亞基結合。
方面26. 方面1至方面25中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的C-末端和/或N-末端各自獨立地包含2至10個側翼氨基酸。
方面27. 方面1至方面26中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的C-末端和/或N-末端各自獨立地包含選自–G–(SEQ ID NO：9390)、–GG–(SEQ ID NO：9400)或–GGRR–(SEQ ID NO：9402)的側翼氨基酸。
方面28. 方面1至方面27中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rγc配體的C-末端和/或N-末端各自獨立地包含2至10個側翼氨基酸。
方面29. 方面1至方面28中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rγc配體的C-末端和/或N-末端各自獨立地包含選自–G–(SEQ ID NO：9390)、–GG–(SEQ ID NO：9400)或–GGRR–(SEQ ID NO：9402)的側翼氨基酸。
方面30. 方面1至方面29中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的C-末端和所述IL-2Rγc配體的C-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合。
方面31. 方面1至方面29中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的C-末端和所述IL-2Rγc配體的N-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合。
方面32：方面1至方面29中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的N-末端和所述IL-2Rγc配體的C-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合。
方面33. 方面1至方面29中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的N-末端和所述IL-2Rγc配體的N-末端與IL-2Rβγc配體接頭結合。
方面34. 方面1至方面33中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體接頭的長度為5Å至200Å。
方面35. 方面1至方面34中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體接頭被配置為促進所述IL-2Rβγc配體與IL-2R的結合。
方面36. 方面1至方面35中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體接頭被配置為啟動IL-2R。
方面37. 方面1至方面36中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體接頭包含合成的IL-2Rβγc配體接頭。
方面38. 方面1至方面36中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述合成的IL-2Rβγc配體接頭包含三唑。
方面39. 方面1至方面36中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體接頭包含肽基IL-2Rβγc配體接頭。
方面40. 方面37的IL-2Rβγc配體，其中所述肽基IL-2Rβγc配體接頭包含2至20個氨基酸。
方面41. 方面37的IL-2Rβγc配體，其中所述肽基IL-2Rβγc配體接頭包含(G)n (SEQ ID NO：9380)、(GS)n (SEQ ID NO：9381)、(GGS)n (SEQ ID NO：9382)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9383)或(GGGGS)n (SEQ ID NO：9384)，其中n為1至20的整數。
方面42. 方面1至方面41中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc接頭包含可切割的IL-2Rβγc配體接頭。
方面43. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體包含：含有SEQ ID NO：865的氨基酸序列的IL-2Rβ配體；和含有SEQ ID NO：965的氨基酸序列的IL-2Rγc配體。
方面44. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體包含：IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體，所述IL-2Rβ配體包含與SEQ ID NO：865具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列，所述IL-2Rγc配體包含與SEQ ID NO：965具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列。
方面45. 方面44的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體接頭包含(G)n (SEQ ID NO：9380)、(GS)n (SEQ ID NO：9381)、(GGS)n (SEQ ID NO：9382)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9383)或(GGGGS)n (SEQ ID NO：9384)，其中n為1至20的整數。
方面46. 方面44的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體接頭包含-GGS-(SEQ ID NO：9392)。
方面47. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體包含SEQ ID NO：1263的氨基酸序列或與SEQ ID NO：1263具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面48. 方面47的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體包含一個或多個側翼甘氨酸。
方面49. 方面1的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體包含SEQ ID NO：1264的氨基酸序列或與SEQ ID NO：1264具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面50. 方面49的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的半胱氨酸藉由二硫鍵彼此結合；和所述IL-2Rγc配體的半胱氨酸藉由二硫鍵彼此結合。
方面51. 方面49的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβ配體的半胱氨酸與所述IL-2Rγc配體的半胱氨酸結合。
方面52. 方面1至方面51中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體是完全IL-2R激動劑。
方面53. 方面1至方面51中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體是部分IL-2R激動劑。
方面54. 方面1至方面53中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體是pH偏倚性IL-2R激動劑。
方面55. 方面1至方面51中任一項的IL-2Rβγc配體，其中所述IL-2Rβγc配體是用於NK-92細胞和TF-1β細胞中STAT5磷酸化、AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化通路的IL-2R激動劑。
方面56. 串聯IL-2Rβγc配體，其中所述串聯IL-2Rβγc配體包含方面1至方面55中任一項的兩個或更多個IL-2Rβγc配體。
方面57. 方面56的串聯IL-2Rβγc配體，其中兩個或更多個IL-2Rβγc配體中的每一個是相同的。
方面58. 方面56至方面57中任一項的串聯IL-2Rβγc配體，其中兩個或更多個IL-2Rβγc配體中的至方少一個不同於另一個IL-2Rβγc配體。
方面59. 方面56至方面58中任一項的串聯IL-2Rβγc配體，其中兩個或更多個IL-2Rβγc配體中的每一個藉由串聯接頭與另一個IL-2Rβγc配體結合。
方面60. 方面56至方面59中任一項的串聯IL-2Rβγc配體，其中，第一IL-2Rβγc配體的C-末端與串聯接頭結合；並且第二IL-2Rβγc配體的N-末端與串聯接頭結合。
方面61. 方面56至方面60中任一項的串聯IL-2Rβγc配體，其中所述串聯接頭包含肽基串聯接頭。
方面62. 方面61的串聯IL-2Rβγc配體，其中所述肽基串聯接頭包含2至20個氨基酸。
方面63. 方面61至方面62中任一項的串聯IL-2Rβγc配體，其中所述肽基串聯接頭的長度為5Å至200Å。
方面64. IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體包含與構建體伴侶結合的方面1至方面55中任一項的IL-2Rβγc配體中的一個或多個。
方面65. 方面64的IL-2Rβγc配體構建體，其中，所述IL-2Rβγc配體構建體包含兩個或更多個IL-2Rβγc配體；並且所述兩個或更多個IL-2Rβγc配體中的每一個相同。
方面66. 方面64的IL-2Rβγc配體構建體，其中，所述IL-2Rβγc配體構建體包含兩個或更多個IL-2Rβγc配體；並且所述兩個或更多個IL-2Rβγc配體中的至少一個不同於其他IL-2Rβγc配體中的至少一個。
方面67. 方面64至方面66中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其還包含構建體接頭，其中所述IL-2Rβγc配體藉由所述構建體接頭與所述構建體伴侶結合。
方面68. 方面67的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體藉由所述IL-2Rβγc配體的C-末端與所述構建體接頭結合。
方面69. 方面67的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體藉由所述IL-2Rβγc配體的N-末端與所述構建體接頭結合。
方面70. 方面67至方面69中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體接頭包含肽基構建體接頭。
方面71. 方面70的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基構建體接頭包含2至200個氨基酸。
方面72. 方面70至方面71中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基構建體接頭的長度為5Å至200Å。
方面73. 方面70的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基構建體接頭包含(G)n (SEQ ID NO：9380)、(GS)n (SEQ ID NO：9381)、(GGS)n (SEQ ID NO：9382)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9383)、(GGGGS)n (SEQ ID NO：9384)或(PA)n (SEQ ID NO：9421)，其中n為1至20的整數。
方面74. 方面67的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體接頭包含可切割的構建體接頭。
方面75. 方面64至方面74中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包含多肽；並且所述IL-2Rβγc配體與多肽的C-末端和/或N-末端結合。
方面76. 方面64至方面74中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包含多肽；並且所述IL-2Rβγc配體與氨基酸側鏈結合。
方面77. 方面64至方面74中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包括多肽；並且IL-2Rβγc配體被整合到多肽中。
方面78. 方面64至方面77中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包含被配置為在患者的全身性循環中賦予所述IL-2Rβγc配體期望的藥物代謝動力學特性的化合物。
方面79. 方面64至方面78中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包含被配置為在患者體內賦予所述IL-2Rβγc配體期望的生物分佈特性的化合物。
方面80. 方面64至方面79中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶選自聚合物、多肽、Fc片段、免疫球蛋白片段和抗體。
方面81. 方面64至方面79中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶選自人血清白蛋白、多肽和聚乙二醇。
方面82. 方面64至方面79中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體包含重組融合蛋白。
方面83. 方面64至方面82中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體包含選自SEQ ID NO：1212-1252中任一項的氨基酸序列或與SEQ ID NO：1212-1252中任一項具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列。
方面84. 方面64至方面82中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體包含SEQ ID NO：1263的氨基酸序列或與SEQ ID NO：1263具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列。
方面85. 方面64至方面84中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包含Fc片段。
方面86. 方面85的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述Fc片段衍生自IgG1、IgG2或IgG4、或上述任一項的突變體。
方面87. 方面85至方面86中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體與Fc片段的C-末端結合。
方面88. 方面87的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體與Fc片段的N-末端結合。
方面89. 方面87的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體藉由Fc片段接頭與Fc片段結合。
方面90. 方面89的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述Fc片段接頭包含肽基Fc片段接頭。
方面91. 方面89的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基Fc片段接頭包含2至200個氨基酸。
方面92. 方面89的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基Fc片段接頭的長度為5Å至200Å。
方面93. 方面89的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基Fc片段接頭包含(G)n (SEQ ID NO：9380)、(GS)n (SEQ ID NO：9381)、(GGS)n (SEQ ID NO：9382)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9383)、(GGGGS)n (SEQ ID NO：9384)或(PA)n (SEQ ID NO：9421)，其中n為1至20的整數。
方面94. 方面64至方面84中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶是免疫球蛋白片段。
方面95. 方面94的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述免疫球蛋白片段選自IgG1片段、IgG2片段和IgG4片段。
方面96. 方面94的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體與免疫球蛋白片段的C-末端結合。
方面97. 方面94的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體與免疫球蛋白片段的N-末端結合。
方面98. 方面94的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體藉由免疫球蛋白接頭與免疫球蛋白片段結合。
方面99. 方面98的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述免疫球蛋白接頭包含肽基免疫球蛋白接頭。
方面100. 方面99的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基免疫球蛋白接頭包含2至200個氨基酸。
方面101. 方面99的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基免疫球蛋白接頭的長度為5Å至200Å。
方面102. 方面99的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述肽基免疫球蛋白接頭包含(G)n (SEQ ID NO：9380)、(GS)n (SEQ ID NO：9381)、(GGS)n (SEQ ID NO：9382)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9383)、(GGGGS)n (SEQ ID NO：9384)或(PA)n (SEQ ID NO：9421)，其中n為1至20的整數。
方面103. 方面89的IL-2Rβγc配體構建體，其中至少一個IL-2Rβγc配體與免疫球蛋白重鏈結合。
方面104. 方面89的IL-2Rβγc配體構建體，其中至少一個IL-2Rβγc配體與免疫球蛋白輕鏈結合。
方面105. 方面64至方面84中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包含抗體。
方面106. 方面99的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述抗體針對腫瘤抗原。
方面107. 方面106的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述腫瘤抗原選自CEA和FAP。
方面108. 方面105的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述抗體針對檢查點抑制劑。
方面109. 方面108的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述檢查點抑制劑是PD-1。
方面110. 方面109的IL-2Rβγc配體構建體，其中PD-1抗體選自西米普利單抗和派姆單抗。
方面111. 方面105的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述抗體針對細胞特異性抗原。
方面112. 方面111的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述細胞特異性抗原選自CD25、NK62D和CD8。
方面113. 方面105的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述抗體還包含細胞因數。
方面114. 方面113的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述細胞因數包含白細胞介素。
方面115. 方面64至方面84中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體包含細胞靶向部分。
方面116. 方面115的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述靶向細胞的部分包含腫瘤靶向部分。
方面117. 方面115的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述細胞靶向部分包含免疫細胞靶向部分。
方面118. 方面64至方面84中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體還包含泛素樣修飾劑。
方面119. 方面64至方面118中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體除包含所述IL-2Rβγc配體之外還包含治療有效部分。
方面120. 方面64至方面119中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體是完全IL-2R激動劑。
方面121. 方面64至方面119中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體是部分IL-2R激動劑。
方面122. 方面64至方面121中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體是pH偏倚性IL-2R激動劑。
方面123. IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβγc配體構建體包含構建體伴侶，與所述構建體伴侶結合的至少一個IL-2Rβ配體和與所述構建體伴侶結合的至少一個IL-2Rγc配體，其中， (a) 所述IL-2Rβ配體包含式(11)(SEQ ID NO：805)、式(11a)(SEQ ID NO：806)、式(11b)(SEQ ID NO：807)、式(11c)(SEQ ID NO：808)或式(11d)(SEQ ID NO：809)的氨基酸序列，或與式(11)(SEQ ID NO：805)、式(11a)(SEQ ID NO：806)、式(11b)(SEQ ID NO：807)、式(11c)(SEQ ID NO：808)或式(11d)(SEQ ID編號：809)的氨基酸序列具有大於60%序列相似性的氨基酸序列： –X211 –X212 –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –X22 –    (11) –X212 –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –        (11a) –X213 –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –X224 –         (11b) –X214 –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–X223 –                   (11c) –C–X215 –X216 –X217 –X218 –X219 –X220 –X221 –X222 –C–                    (11d) 其中， X211 選自氨基酸； X212 選自F、H、W和Y； X213 選自F、H、I、L、M、V、W和Y; X214 為P; X215 選自F、H、W和Y； X216 選自F、I、L、M、V、W和Y; X217 為A; X218 選自K、R、H、N、Q、S、T和Y； X219 選自F、I、L、M、V、W和Y; X220 為G; X221 選自D、E、H、N、Q、S、T和Y; X222 為L； X223 為D; X224 選自F、I、L、M、V、W和Y；和 X225 選自D和E；和 (b) 所述IL-2Rγc配體包含與式(5) (SEQ ID NO：944)、式(5a) (SEQ ID NO：945)、式(5b) (SEQ ID NO：946)、式(5c) (SEQ ID NO：947)、式(5d) (SEQ ID NO：948)或式(5e) (SEQ ID NO：1949)的氨基酸序列，或與式(5) (SEQ ID NO：944)、式(5a) (SEQ ID NO：945)、式(5b) (SEQ ID NO：946)、式(5c) (SEQ ID NO：947)、式(5d) (SEQ ID NO：948)或式(5e) (SEQ ID NO：1949)的氨基酸序列具有大於60%序列相似性的氨基酸序列： –X171 –X172 –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –X187 –X188 –      (5) –X172 –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –X187 –   (5a) –X173 –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –X186 –  (5b) –X174 –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –X185 –                (5c) –X175 –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–X184 –                 (5d) –C–X176 –X177 –X178 –X179 –X180 –X181 –X182 –X183 –C–                        (5e) 其中， X171 選自H、K和R； X172 選自S、T和Y； X173 選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y; X174 選自F、I、L、M、V、W和Y; X175 選自D、E、F、I、L、M、V、W和Y; X176 選自D、E、H、N、Q、S、T和Y; X177 選自D和E； X178 選自F、H、I、L、M、V、W和Y; X179 選自D、E、H、N、Q、S、T和Y; X180 為G; X181 為V; X182 為E; X183 為L; X184 選自W； X185 選自F、I、L、M、V、W、Y、H、N、Q、S和T; X186 為E; X187 選自氨基酸；和 X188 選自D和E。
方面124. 方面123的IL-2Rβγc配體，其中，所述IL-2Rβ配體包含SEQ ID NO：865的氨基酸序列，或與SEQ ID：865具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列；和所述IL-2Rγc配體包含SEQ ID NO：965的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：965具有大於60%的序列相似性的氨基酸序列。
方面125. 方面123至方面124中任一項的IL-2Rβγc配體，其中，所述IL-2Rβ配體的半胱氨酸藉由二硫鍵彼此結合；並且所述IL-2Rγc配體的半胱氨酸藉由二硫鍵彼此結合。
方面126. 方面123至方面125中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述至少一個IL-2Rβ配體中的每一個和所述至少一個IL-2Rγc配體中的每一個藉由構建體接頭與所述構建體伴侶結合。
方面127. 方面123至方面126中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述至少一個IL-2Rβ配體中的每一個相同，並且所述至少一個IL-2Rγc配體中的每一個相同。
方面128. 方面123至方面127中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述IL-2Rβ配體中的至少一個不同於其他IL-2Rβ配體中的至少一個和/或所述IL-2Rγc配體中至少一個與其他IL-2Rγc配體中的至少一個不同。
方面129. 方面123至方面128中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包含Fc片段、免疫球蛋白片段或免疫球蛋白。
方面130. 方面123至方面128中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其中所述構建體伴侶包含多肽或聚合物。
方面131. 方面123至方面130中任一項的IL-2Rβγc配體構建體，其還包含至少一個IL-2Rβγc配體。
方面132. 治療患者癌症的方法，其包括向需要此類治療的患者施用治療有效量的方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體、方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體、方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、或上述任意的組合。
方面133. 治療患者的自體免疫疾病的方法，其包括向需要此類治療的患者施用治療有效量的方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體、方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體、方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、或上述任意的組合。
方面134. 治療患者的發炎性疾病的方法，其包括向需要此類治療的患者施用治療有效量的方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體、方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體、方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、或上述任意的組合。
方面135. 擴增免疫細胞的方法，其包括使免疫細胞群離體或體內與有效量的方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體、方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體、方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、或上述任意的組合接觸。
方面136. 細胞治療的方法，其包括使細胞工程化以表達方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體或方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體，使得IL-2Rβγc配體或串聯IL-2Rβγc配體在細胞表面表達和/或由細胞分泌。
方面137. 加強疫苗的方法，其包括向患者施用疫苗和治療有效量的方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體、方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體、方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、或上述任意的組合。
方面138. 改變免疫應答的方法，其包括向患者施用有效量的方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體、方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體、方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、或上述任意的組合。
方面139. 藥物組合物，其包含方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體、方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體、方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體、或上述任意的組合。
方面140. 方面139的藥物組合物，其還包含化學治療劑、免疫調節劑、檢查點抑制劑、疫苗或上述任意的組合。
方面141. 核酸，其編碼方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體、方面56至方面63中任一項的串聯的IL-2Rβγc配體、方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體和/或方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體。
方面142. 編碼IL-2Rβ配體的核酸，其中所述IL-2Rβ配體包含選自SEQ ID NO：805-903中任一項的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：805-903中任一項具有大於60%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面143. 編碼IL-2Rβ配體的核酸，其中所述IL-2Rβ配體包含選自SEQ ID NO：612、664、865、856、856、864、869、870、874、875和901中任一項的氨基酸序列，或SEQ ID NO：612、664、865、856、856、864、869、870、874、875和901中任一項具有大於60%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面144. 編碼IL-2Rγc配體的核酸，其中所述IL-2Rγc配體包含選自SEQ ID NO：944-1028中任一項的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：944-1028中任一項具有大於60%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
[994] 方面145. 編碼IL-2Rγc配體的核酸，其中所述IL-2Rγc配體包含選自SEQ ID NO：965、980、981、985、1024和1026中任一項的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：965、980、981、985、1024、1026和1028中任一項具有大於60%氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面146. 編碼方面1至方面155中任一項的IL-2Rβγc配體的核酸。
方面147. 方面146的核酸，其中所述IL-2Rβγc配體包含：IL-2Rβ配體，其包含SEQ ID NO：865的氨基酸序列或與SEQ ID NO：865具有大於60%氨基酸序列相似性的氨基酸序列；以及IL-2Rγc配體，其包含SEQ ID NO：965的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：865具有大於60%氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面148. 方面146的核酸，其中所述IL-2Rβγc配體包含含有SEQ ID NO：1205的氨基酸序列，或與SEQ ID NO：1205具有大於60%的氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面149. 編碼方面56至方面63中任一項的串聯IL-2Rβγc配體的核酸，其中，所述IL-2Rβγc配體接頭中的每一個獨立地包含肽基IL-2Rβγc配體接頭，並且串聯接頭中的每一個獨立地包含肽基串聯接頭。
方面150. 編碼方面64至方面122中任一項的IL-2Rβγc配體構建體的核酸，其中所述構建體接頭包含肽基構建體接頭。
方面151. 編碼方面150的IL-2Rβγc配體構建體的核酸，其中所述IL-2Rβγc配體構建體具有與SEQ ID NO：1202-1252中任一項具有大於60%氨基酸序列相似性的氨基酸序列。
方面152. 編碼IL-2Rβγc配體構建體的核酸，其中所述IL-2Rβγc配體構建體包含選自SEQ ID NO：1202-1252中任一項的氨基酸序列。
方面153. 編碼方面123至方面131中任一項的IL-2Rβγc配體構建體的核酸。
方面1A. IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體包含式(1)-(1d)、式(2)-(2d)、式(3)-(3e)和式(4)-(4f)中任一項的氨基酸序列，上述任一項的截短氨基酸序列，上述任一項的取代氨基酸序列，前述具有側翼氨基酸的氨基酸序列中的任一項以及與上述任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面2A. IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體包含SEQ ID NO：805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926和2929-2939中任一項的氨基酸序列，上述任一項的截短氨基酸序列，上述任一項的取代氨基酸序列，具有側翼氨基酸的上述氨基酸序列中的任一項以及與上述任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面3A. IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體包含式(1)-(1d)、式(2)-(2d)、式(3)-(3e)或式(4)-(4f)中任一項的氨基酸序列。
方面4A. IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體包含SEQ ID NO：805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926或2929-2939中任一項的氨基酸序列。
方面5A. IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體包含SEQ ID NO：865的氨基酸序列、其截短的氨基酸序列、上述任一項的取代氨基酸序列、具有側翼氨基酸的上述氨基酸序列中的任一項以及與上述任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面6A. 方面1A至方面5A中任一項的IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體在IL-2Rβ配體的兩個半胱氨酸之間包含二硫鍵。
方面7A. 方面1A至方面6A中任一項的IL-2Rβ配體，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rβ配體以小於100μM的IC50 與IL-2Rβ亞基的特異性結合位點結合。
方面8A. 方面1A至方面7A中任一項的IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體對TF-1β細胞和/或NK-92細胞中的STAT5磷酸化展現出小於100μM的EC50 。
方面9A. 方面1A至方面8A中任一項的IL-2Rβ配體，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rβ配體以小於100μM的IC50 與hIL-2Rβ亞基結合。
方面10A. 方面1A至方面9A中任一項的IL-2Rβ配體，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rβ配體以小於100μM的IC50 與cyno-IL-2Rβ亞基結合。
方面11A. IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體包含式(5)-(5e)中任一項的氨基酸序列；上述任一項的截短氨基酸序列，上述任一項的取代氨基酸序列，具有側翼氨基酸的上述氨基酸序列中的任一項以及與上述任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面12A. IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體包含SEQ ID NO：944-1028、1032-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列；上述任一項的截短氨基酸序列，上述任一項的取代氨基酸序列，具有側翼氨基酸的上述氨基酸序列中的任一項以及與上述任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面13A. IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體包含式(5)-(5e)中任一項的氨基酸序列。
方面14A. IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體包含SEQ ID NO：944-1028、1032-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列。
方面15A. IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體包含SEQ ID NO：965的氨基酸序列、其截短的氨基酸序列、上述任一項的取代氨基酸序列、具有側翼氨基酸的上述氨基酸序列中的任一項以及與上述任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面16A. 方面11A至方面15A中任一項的IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體在IL-2Rγc配體的兩個半胱氨酸之間包含二硫鍵。
方面17A. 方面11A至方面16A中任一項的IL-2Rγc配體，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rγc配體以小於100μM的IC50 與IL-2Rγc亞基的特異性結合位點結合。
方面18A. 方面11A至方面17A中任一項的IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體對TF-1β細胞和/或NK-92細胞中的STAT5磷酸化展現出小於100μM的EC50 。
方面19A. 方面11A至方面18A中任一項的IL-2Rγc配體，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rγc配體以小於100μM的IC50 與hIL-2Rγc亞基結合。
方面20A. 方面11A至方面19A中任一項的IL-2Rγc配體，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rγc配體以小於100μM的IC50 與cyno-IL-2Rγc亞基結合。
方面21A. IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物包含：方面1A至方面10A中任一項的IL-2Rβ配體；和方面11A至方面20A中任一項的IL-2Rγc配體。
方面22A. 方面21A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物包含IL-2Rβγc配體，其中所述2Rβγc配體包括：配體接頭；與配體接頭結合的IL-2Rβ配體；和與配體接頭結合的IL-2Rγc配體。
方面23A. 方面22A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體在所述IL-2Rβγc配體的兩個半胱氨酸之間包含二硫鍵。
方面24A. 方面21A至方面22A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβ配體和所述IL-2Rγc配體以C/C取向、C/N取向、N/C取向或N/N取向與所述配體接頭結合。
方面25A. 方面21A至方面24A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述配體接頭包含肽基配體接頭。
方面26A. 方面21A至方面24A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述配體接頭包含化學配體接頭。
方面27A. 方面21A至方面24A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述配體接頭包含(G)n (SEQ ID NO：9380)、(GS)n (SEQ ID NO：9381)、(GGS)n (SEQ ID NO：9382)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9383)或(GGGGS)n (SEQ ID NO：9384)，其中n為1至20的整數。
方面28A. 方面21A至方面24A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體包含SEQ ID NO：1263-1270、4070-4085和4090至4099中任一項的氨基酸序列，上述任一項的截短氨基酸序列，上述任一項的取代氨基酸序列，具有側翼氨基酸的上述氨基酸序列中的任一項以及與上述任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面29A. 方面21A至方面24A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體包含SEQ ID NO：1263-1270、4070-4085和4090至4099中任一項的氨基酸序列。
方面30A. 方面21A至方面29A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體為完全IL-2R激動劑或部分IL-2R激動劑。
方面31A. 方面21A至方面30A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體對TF-1β細胞和/或NK-92細胞中STAT5磷酸化展現出小於100μM的EC50 。
方面32A. 方面21A至方面31A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rβγc配體以小於100μM的IC50 與hIL-2R結合。
方面33A. 方面21A至方面32A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rβγc配體以小於100μM的IC50 與cyno-IL-2R結合。
方面34A. 方面21A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物包含構建體伴侶，其中所述IL-2Rβ配體和所述IL-2Rγc配體與所述構建體伴侶結合。
方面35A. 方面22A至方面33A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物包含IL-2Rβγc配體，並且所述IL-2Rβγc配體與所述構建體伴侶結合。
方面36A. 方面35A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體藉由所述IL-2Rβγc配體的C-末端或N-末端與所述構建體伴侶結合。
方面37A. 方面35A至方面36A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體藉由構建體接頭與構建體伴侶結合。
方面38A. 方面37A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體接頭包含肽基配體接頭。
方面39A. 方面37A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體接頭包含化學配體接頭。
方面40A. 方面37A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體接頭包含(G)n (SEQ ID NO：9380)、(GS)n (SEQ ID NO：9381)、(GGS)n (SEQ ID NO：9382)、(GGGS)n (SEQ ID NO：9383)或(GGGGS)n (SEQ ID NO：9384)，其中n為1至20的整數。
方面41A. 方面34A至方面40A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶選自聚合物、多肽、Fc片段、免疫球蛋白片段和抗體。
方面42A. 方面34A至方面40A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶選自人血清白蛋白、多肽和聚乙二醇。
方面43A. 方面34A至方面40A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶包含病毒表面抗原或病毒樣顆粒。
方面44A. 方面34A至方面40A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶包含細胞因數。
方面45A. 方面34A至方面40A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中化合物包含重組融合蛋白。
方面46A. 方面45A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述重組融合蛋白選自hIgG-Fc重組融合蛋白和hIgG1-Fc重組融合蛋白。
方面47A. 方面34A至方面40A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶包含抗體，並且所述抗體針對腫瘤抗原。
方面48A. 方面34A至方面40A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶包含細胞靶向部分。
方面49A. 方面48A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述細胞靶向部分包括腫瘤靶向部分、免疫細胞靶向部分或其組合。
方面50A. 方面35A的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物包含SEQ ID NO：1212-1252和8061-8082中任一項的氨基酸序列、上述任一項的截短氨基酸序列、上述任一項的取代氨基酸序列、具有側翼氨基酸的上述氨基酸序列中的任一項以及與上述任一項具有大於60%序列相似性的氨基酸序列。
方面51A. 方面34A至方面50A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物為完全IL-2R激動劑或部分IL-2R激動劑。
方面52A. 方面34A至方面51A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物對TF-1β細胞和/或NK-92細胞中的STAT5磷酸化展現出小於100 μM的EC50 。
方面53A. 方面34A至方面52A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rβγc結合化合物以小於100μM的IC50 與hIL-2R結合。
方面54A. 方面34A至方面53A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物，其中，如使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的，所述IL-2Rβγc結合化合物以小於100μM的IC50 與cyno-IL-2R結合。
方面55A. 藥物組合物，其包含方面21A至方面54A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物。
方面56A. 方面55A的藥物組合物，其還包含化學治療劑、免疫調節劑、檢查點抑制劑、疫苗或上述任意的組合。
方面57A. 治療患者疾病的方法，其包括向需要此類治療的患者施用治療有效量的方面21A至方面54A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物或方面55A至方面56A中任一項的藥物組合物.
方面58A. 方面57A的方法，其中所述疾病選自癌症、自體免疫疾病、發炎性疾病、感染性疾病和病毒性疾病。
方面59A. 擴增免疫細胞的方法，其包括使免疫細胞群離體或體內與有效量的方面1A至方面10A中任一項的IL-2Rβ配體、方面11A至方面20A中任一項的IL-2Rγc配體或方面21A至方面54A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物接觸。
方面60A. 細胞治療的方法，其包括使細胞工程化以表達方面21A至方面54A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物。
方面61A. 加強疫苗的方法，其包括向患者施用疫苗和治療有效量的方面21A至方面54A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物或方面55A至方面56A中任一項的藥物組合物。
方面62A. 改變免疫應答的方法，其包括向患者施用有效量的方面21A至方面54A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物或方面55A至方面56A中任一項的藥物組合物。
方面63A. 核酸，其編碼方面1A至方面10A任一項的IL-2Rβ配體、方面11A至方面21A中任一項的IL-2Rγc配體或方面22A至方面54A中任一項的IL-2Rβγc結合化合物。實施例
以下實施例詳細描述了由本公開提供的合成IL-2Rβγc配體的方法、合成IL-2Rβγc構建體的方法以及確定IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc配體活性的方法。以下實施例還詳細描述了確定由本公開提供的IL-2Rβγc配體和IL-2Rβγc構建體的特性的方法。對於本領域技術人員顯而易見的是，可以在不脫離本發明範圍的情況下對材料和方法進行許多修改。
在實施例中，IL-2Rβ亞基是指人IL-2Rβ(CD122蛋白，Fc標籤)(27-239)，登錄號為NP_000869.1，並且獲自ACRObiosystems，Inc.，產品編號為ILB-H5253。
IL-2Rγc亞基是指人IL-2Rγc(CD132蛋白，Fc標籤)(23-254)，登錄號為AAH14972，並且獲自ACRObiosystems，Inc.，產品編號為ILG-H5256。
cyano-IL-2Rβ亞基是指食蟹猴IL-2Rβ亞基，登錄號為NP_000869.1，並且獲自Sino Biological Inc.，產品編號為90328-C02H。
在實施例中，IL-2Rγc亞基是指食蟹猴Rγc亞基，登錄號為XP_005503949.1。實施例 1 IL-2Rβ 配體、 IL-2Rγc 配體和肽基 IL-2Rβγc 配體的合成
藉由單鏈固相合成法合成IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和肽基IL-2Rβγc配體。
將2-氯三苯甲基(2-Cholorotrityl)樹脂(1g，1.5mmol/g，來自Anaspec)用DMF(2×)洗滌，然後在50mL的DMF中放置10min。用Fmoc-甘氨酸活化溶液處理溶脹樹脂的單獨部分，並將混合物在25°C輕輕攪拌30min，所述活化溶液由以0.5M溶解在DMF中的5當量的氨基酸和5當量的HATU，然後添加10當量的DIEA製備。處理溶脹的樹脂，然後加入10當量的DIEA，並在25°C將混合物輕輕攪拌30min。洗滌樹脂(DMF、THF、DCM和MeOH)並乾燥，得到Fmoc保護的樹脂。然後藉由在30%呱啶的DMF中輕輕搖動樹脂20min，然後洗滌(DMF、THF、DCM和MeOH)並乾燥來除去Fmoc基團。然後對樹脂進行重複循環的Fmoc氨基酸偶聯和HATU活化以及用呱啶進行Fmoc去除，以構建所期望的氨基酸序列。除序列中的四個半胱氨酸殘基外，使用標準的95%TFA不穩定氨基酸側鏈保護基。對於樹脂近端的兩個半胱氨酸殘基，使用了Trt保護，並且對於樹脂遠端的兩個半胱氨酸殘基，使用了Acm保護。從二聚體序列的最終氨基酸去除Fmoc後，將末端胺基在DMF中用乙酸酐(10當量)和DIEA(20當量)醯化20min，然後如上所述進行洗滌。
藉由在25°C在TFA(95 vol%)、水(2.5 vol%)和三異丙基矽烷(2.5 vol%)的溶液中懸浮3h，從樹脂上切割完成的肽。將TFA溶液冷卻至5°C並倒入Et2 O中以沉澱肽。過濾並減壓乾燥，得到所期望的肽。經由使用C18柱的製備型HPLC純化，得到具有還原狀態的兩個C-末端巰基的純肽。將該肽溶於20%DMSO/水(1mg幹重肽/mL)中，並允許其在25°C靜置36h，然後藉由反相HPLC純化，以提供具有藉由二硫橋連接的兩個C-末端巰基的肽。然後藉由將0.1毫摩爾的肽溶解在25mL的50%乙酸/水和2.5 mL的1M HCl中並加入5 mL的0.1M碘(在冰醋酸中;5當量)在氮氣氣氛下攪拌下逐滴加入，對兩個N-末端Acm保護的半胱氨酸殘基脫保護。使脫保護/氧化反應在25°C進行2h，同時進行頻繁監測(分析型HPLC)以確保反應完全。藉由添加冰冷卻的二乙醚(9體積當量)來終止反應。將所得溶液在乾冰上冷卻(3min)，小心倒出乙醚溶液，並將所得淺黃色固體藉由製備型反相HPLC純化(95%)，得到最終的單鏈肽二聚體。實施例 2 使用點擊化學合成 IL-2Rβγc 配體
如實施例1中所述，使用標準的固相合成條件和Fmoc保護的氨基酸分別合成IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的肽序列。
將Rink醯胺-MBHA樹脂(1g, 1.5mmole/g, Anaspec)用DMF(2×)洗滌，然後允許在50mL DMF中靜置10 min。用Fmoc-炔丙基甘氨酸(IL-2Rβ配體)或2-(Fmoc-NH)-5-疊氮基-戊酸(IL-Rγc配體)的活化溶液處理溶脹樹脂的單獨部分，並將混合物在25°C輕輕攪拌30 min，所述活化溶液由以0.5M溶解在DMF中的5當量的氨基酸和5當量的HATU，然後添加10當量的DIEA製備。洗滌樹脂(DMF、THF、DCM和MeOH)並乾燥，得到Fmoc保護的樹脂。然後藉由在30%呱啶的DMF中輕輕搖動樹脂20min，然後洗滌(DMF、THF、DCM和MeOH)並乾燥，去除Fmoc基團。然後對樹脂進行重複循環的Fmoc氨基酸偶聯和HATU活化以及用呱啶進行Fmoc去除，以提供所期望的IL-2Rβ配體氨基酸序列和所期望的IL-Rγc配體氨基酸序列。標準的95% TFA-不穩定的氨基酸側鏈保護基團用於所有殘基。在從每個配體序列的最終氨基酸中進行Fmoc去除後，用含乙酸酐(10當量)和DIEA (20當量)的DMF醯化末端胺基20 min。
藉由在25°C在TFA(95%)、水(2.5%)和三異丙基矽烷(2.5%)的溶液中懸浮3 h，從樹脂中切割每個完成的配體。將TFA溶液冷卻至5°C並倒入Et2 O中以沉澱肽。過濾並減壓乾燥，得到所期望的配體。經由用C18柱的製備性HPLC純化，得到具有還原狀態的兩個巰基的純肽。將配體分別溶解在20% DMSO/水 (1mg幹重肽/mL)中，允許其在25°C靜置36h，然後藉由反相HPLC純化，以提供具有經由分子內二硫橋連接的兩個巰基的IL-2Rβ和IL-2Rγc配體。
藉由將配體溶解在1: 1 H2 O/tBuOH中，製備十分之二 (0.2) mL的2.0 mM純化的含炔烴的IL-2Rβ配體溶液。類似地，使用相同的溶劑製備0.2 mL的純化的含疊氮化物的配體的2.4 mM溶液。將兩種配體溶液與0.1mL 100mM CuSO4 的H2 O溶液，含0.1 mL 250 mM的Cu(I)螯合劑(如DIEPA、吡啶或THPTA(三(3-羥基丙基三唑基甲基)胺))的3:1 DMSO/tBuOH，0.1mL 0.5M抗壞血酸的H2 O溶液和0.3 mL 3:2 tBuOH/H2 O混合，並且使反應在厭氧條件下在45°C進行。藉由LC/MS頻繁地監測反應進程，並且添加另外的含疊氮化物的配體和CuSO4 以驅動反應完成。在消耗了最大量的炔烴後(大約3 h)，藉由添加大約8mL的1:1 H2 O/CAN淬滅反應，並且使用製備級C18 HPLC柱純化肽二聚體(95%)。
在實驗例中使用的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的結構提供在表8和表9以及圖19A-圖19C中。 表8. IL-2Rβ配體。
SEQ ID NO: 58 Y D C R I A Q V G E L C D L                           
SEQ ID NO: 671 V Q Y K K C W M A Q L G D L C E L D P S         
SEQ ID NO: 664 Y P C H M A Q L G E L C D L W S W G D I         
SEQ ID NO: 612 Y P C W M A Q L G E L C D L                           
SEQ ID NO: 865 W Y P C W M A Q L G E L C D L D                     
SEQ ID NO: 869 F Y P C W T A L L G E L C D L E P G P P A M   
SEQ ID NO: 870 W G T T W R W Y P C W M A Q L G E L C D L E   
SEQ ID NO: 864 D V L G D R W Y P C W I A K L G E L C D L D   
SEQ ID NO: 874 W Y P C W I A Q L G E L C D L D                     
SEQ ID NO: 875 W Y P C W L A K L G E L C D L D                     
SEQ ID NO: 901 W Y P C W M A Q L G D L C D L E K P V T E R   
SEQ ID NO: 856 W R R W Y P C W V A Q V G E L C D L E I E A   
SEQ ID NO: 858 R Q R W Y P C W M A R L G E L C D L D E P T   
表9.IL-2Rγc配體。
SEQ ID NO: 222 V M C E R W Q G V E L C W L                     
SEQ ID NO: 224 D C S M W E G V E L C W                           
SEQ ID NO: 965 V V C Q D W E G V E L C W Q                     
SEQ ID NO: 985 W S K K A E V V C E E W G G V E F C W I   
SEQ ID NO: 1024 R T G V E C Q D W H G V E L C W P V W E   
SEQ ID NO: 1028 V G I E C E E W A G V E L C W L               
SEQ ID NO: 981 T W N M S E L E C Q D W N G V E I C W H   
SEQ ID NO: 1026 R T E V E C E D W E G V E L C W L            
實施例 3 在 具有不同配體 / 取向 / 接頭的 IL-2Rβγc 配體的情況下 TF-1β 細胞中的 STAT5 磷酸化
評估IL-2Rβγc配體誘導TF-1β細胞中的STAT5磷酸化。TF-1β細胞衍生自生長因數依賴性人紅白血病細胞系TF-1(ATCC #CRL-2003)，其天然表達IL-2Rγc但不表達IL-2Rβ。藉由用人全長IL-2Rβ轉染將細胞工程化為IL-2應答的。藉由在IL-2中生長來選擇表達較高水準的IL-2Rβ的細胞系，並且藉由qPCR和FACS分析來驗證IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基兩者的表達水準。
為了測試化合物誘導STAT5磷酸化，在T75燒瓶中，將TF-1β細胞以5×105 個細胞/mL在饑餓培養基(RPMI 1640 + 2.5g/L葡萄糖+ 5% FBS + 2mM L-穀氨醯胺+1mM NaPyr+10mM HEPES，沒有GM-CSF或rhIL-2補充劑)中饑餓過夜。第二天，將細胞以2×105 個細胞/孔鋪板在96孔V-底板中。將在饑餓培養基中的IL-2Rβγc配體或IL-2的三倍連續稀釋液加入到細胞中並且在37°C孵育30 min。藉由將10 ×細胞裂解緩衝液(Cell Signaling Technology #9803)和1×HALT磷酸酶和蛋白酶抑制劑混合物(Thermo Fisher #78442)的混合物直接加入到孔中來製備細胞提取物。將板在25°C攪拌5min以製備細胞提取物用於立即使用或在-80°C儲存。使用PathScan® Phospho-Stat5 (Tyr694)夾心ELISA試劑盒(Cell Signaling Technology #7113)進行pSTAT5的檢測。將細胞提取物加入到用小鼠抗磷酸-STAT5抗體預包覆的微孔中並在4°C孵育過夜。然後用PBS洗滌孔並藉由加入兔抗STAT5檢測抗體並在37°C孵育1h來檢測結合的磷酸-STAT5(Tyr694)。用PBS洗滌孔並向每個孔中加入抗兔IgG HRP連接的抗體。在最後一次洗滌後，加入TMB底物溶液以測量每個孔中的HRP的量。在酶標儀中讀取450 nm處的吸光度。產生的信號與每個細胞提取物中磷酸化STAT5的量成比例。
結果呈現在圖2中。
圖2中評價的IL-2Rβγc配體的結構提供在圖19A-圖19C中。實施例 4 在 含有具有 C/C 取向並且具有相同配體接頭的不同 IL-2R β 配體 和 R γ c 配體的 IL-2Rβγc 配體的情況下 NK-92 細胞中的 STAT5 磷酸化
評估IL-2Rβγc配體誘導NK-92細胞(表達所有三種IL-2受體亞基並且對IL-2Rβγc-偏倚性變體以及野生型IL-2有應答的人細胞系)中的STAT5磷酸化。為了測試用於誘導STAT5磷酸化的化合物，在37°C，在T75燒瓶中，將NK-92細胞在饑餓培養基(RPMI 1640 + 20% FBS + 2 mM L-穀氨醯胺+ 1 mM NaPyr + 10 mM HEPES + 0.1 mM BME，沒有rhIL-2補充劑)中饑餓過夜。第二天，將NK-92細胞以2×105 個細胞/孔鋪板在96孔V-底板中。將在饑餓培養基中的測試化合物或IL-2的三倍連續稀釋液加入到細胞中並在37°C孵育30 min。
製備細胞提取液，並使用如實施例3中所述的PathScan® Phospho-Stat5(Tyr694)夾心ELISA試劑盒測量磷酸化STAT5的量。
結果呈現在圖3中。
圖3中評估的IL-2Rβγc配體的結構提供在圖19A-圖19C中。實施例 5 在具有不同取向的 IL-2Rβγc 配體的情況下 NK-92 細胞中的 STAT5 磷酸化
在NK-92細胞中使用STAT5磷酸化測定評估IL-2Rβγc配體的激動劑活性，所述IL-2Rβγc配體包含與相同配體接頭結合但具有不同N/C取向的相同IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體。
將IL-2Rβγc配體與NK-92細胞一起孵育，並使用實施例4中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
結果呈現在圖4中。
圖4中評估的IL-2Rβγc配體的結構提供在圖19A-圖19C中。實施例 6 在具有不同配體的 IL-2Rβγc 配體的情況下 TF-1β 細胞中的 STAT5 磷酸化
在TF-1β細胞中使用STAT5磷酸化測定評估IL-2Rβγc配體的激動劑活性，所述IL-2Rβγc配體包含與相同合成配體接頭結合但具有相同N/C方向的不同IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體。
將化合物與TF-1β細胞一起孵育，並使用實施例3中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
結果呈現在圖5A和5B中。
圖5A和圖5B中評估的IL-2Rβγc配體的結構提供在圖19A-圖19C中。實施例 7 在具有不同接頭的 IL-2Rβγc 配體的情況下 NK-92 細胞中的 STAT5 磷酸化
在NK-92細胞中使用STAT5磷酸化測定評估IL-2Rβγc配體的激動劑活性，所述IL-2Rβγc配體包含與合成IL-2Rβγc配體接頭(IL-2Rβγc配體(BGL20))或肽基IL-2Rβγc配體接頭(IL-2Rβγc配體(BGL21))結合並且具有相同N/C方向的相同IL-2Rβ和IL-2Rγc配體。
將IL-2Rβγc配體與NK-92細胞一起孵育，並使用實施例4中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
結果呈現在圖6中。
圖6中評估的IL-2Rβγc配體的結構提供在圖19A-圖19C中。實施例 8 在 IL-2 和 IL-2Rβγc 配體的情況下， NK-92 細胞中的 STAT5 、 AKT 和 ERK1/2 磷酸化
在NK-92細胞中使用STAT5磷酸化、AKT磷酸化和ERK1/2磷酸化測定評估IL-2和IL-2Rβγc配體(BGL21)的激動劑活性。
將化合物與NK-92細胞一起孵育，並使用實施例4中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。使用PathScan® Phospho-AKT(Thr308)夾心ELISA試劑盒(Cell Signaling Technology #7252)進行磷酸化AKT的檢測。使用PathScan® Phospho-p44/42 MAPK(Thr202/Tyr204)夾心ELISA試劑盒(Cell Signaling Technology #7177)進行磷酸化ERK1/2的檢測。
結果呈現在圖7A中(對於STAT5磷酸化)，圖7B中(對於AKT磷酸化)和圖7C中(對於ERK1/2磷酸化)。
圖7A-圖7C中評估的IL-2Rβγc配體的結構提供在圖19A-圖19C中。實施例 9 在 IL-2 和 IL-2Rβγc 配體的情況下 NK-92 的增殖
將NK-92細胞鋪板在饑餓培養基(無生長因數)中，並與IL-2Rβγc配體(BGL21)或IL-2的連續稀釋液在37°C孵育48 h。藉由使用CellTiter-Glo®測定試劑盒(Promega #G7571)測量作為代謝活性細胞的指標的ATP水準來定量每個孔中存在的活細胞數。將等體積的CellTiter-Glo®試劑加入到每個孔中，並在25°C孵育10 min。使用Wallac Victor 1420讀板器測量發光信號。將值(以相對光單位(RLU)計)作為測試化合物濃度的函數作圖。
結果提供在圖8A中。
還使用Ki67染色測量應答於IL-2Rβγc配體(BGL21)或IL-2的NK-92細胞增殖。核蛋白Ki67存在於細胞週期的所有活躍階段，但在靜息細胞中不存在。將NK-92細胞重懸於饑餓培養基中，並以2×105 個細胞/孔鋪板於96孔板中。然後將測試化合物的三倍連續稀釋液加入細胞中保持48h。在孵育期後，將細胞用Live/Dead® Fixable Aqua Dye (ThermoFisher #L34966)處理30min，以對活細胞進行染色。然後將細胞用PBS洗滌，然後固定並用Foxp3 Transcription Factor Fix/Perm® 緩衝液(eBioscience #00-5523)在25°C透化1 h。將細胞洗滌，然後用抗Ki67 PE抗體染色。在最後一次洗滌後，在LSR II儀器(Becton Dickinson)上藉由流式細胞術分析細胞。使用FlowJo軟體進行資料分析。將Ki67+細胞的中位數螢光強度作為測試化合物濃度的函數作圖。
結果提供在圖8B中。
IL-2Rβγc配體(BGL21)的結構提供在圖19A-圖19C中。實施例 10 靜息 CD8+T 細胞、 CD4+T 細胞和 Treg 細胞中的 STAT-5 磷酸化
使用STAT5磷酸化測定評估IL-2和IL-2Rβγc配體(IL-2Rβγc配體(BGL21))在靜息CD8+T細胞、CD4+T細胞和Treg細胞中的激動劑活性。
使用Lymphoprep® (Stemcell Technologies #07811)密度梯度離心從血沉棕黃層分離人外周血單個核細胞(PBMC)。將回收的PBMC以2×106 個細胞/mL重懸於T細胞培養基(CTS OpTmizer®培養基+2 mM L-穀氨醯胺+ Pen/Strep，沒有血清或IL-2)中，並在37°C孵育3h。然後將PBMC以106 個細胞/孔加入到96孔深孔板中。將IL-2Rβγc配體(BGL21)或IL-2的三倍連續稀釋液加入到細胞中，並在37°C孵育30min。然後將細胞在冰上的Fix/Perm®緩衝液 (Transcription Factor Phospho Buffer Set, BD Biosciences #563239)中固定50min，然後在冰上的Perm Buffer III中透化2min。使用Perm/Wash®緩衝液將細胞洗滌數次。用於細胞表面和細胞內染色的抗體綴合物顯示在表10中。 表10. 用於細胞表面和細胞內染色的抗體綴合物
標誌物 複製 通道 供應商 目錄號
CD127 eBioRDR5 FITC Invitrogen 11-1278-42
pSTAT5 47 PE BD1 612567
CD25 M-A251 PE-CF594 BD 562403
CD56 CMSSB PerCP-eFl710 Invitrogen 46-0567-42
CD16 eBioCB16 Invitrogen 46-0168-42
Foxp3 236A/E7 AF647 BD 561184
CD3 UCHT1 BV421 BD 562426
CD8 SK1 BV510 BD 563919
1 BD Biosciences.
將抗體混合物加入到細胞中，在冰上孵育30 min並避光。將細胞用Perm/Wash®緩衝液洗滌，並重懸於PBS + 2% FBS中。在LSR II儀器(Becton Dickinson)上藉由流式細胞術分析每個測試樣品。使用FlowJo軟體進行資料分析。將每個血細胞群中pSTAT5+細胞的百分比作為測試化合物濃度的函數作圖。
結果呈現在圖9A-圖9C中。實施例 11 來自人 PBMC 的 NK 細胞的增殖
藉由密度梯度離心 (Lymphoprep®, Stemcell Technologies #07811)從血沉棕黃層分離人PBMC，並在T75燒瓶中以3×106 個細胞/mL在T細胞培養基 (CTS OpTmizer®, ThermoFisher #A1048501)中培養過夜。第二天，將細胞重懸於新鮮培養基中，並以5×105 個細胞/孔鋪板於96孔細胞培養板中。將IL-2或IL-2Rβγc配體(BGL21)的三倍連續稀釋液加入到細胞中，並在37°C孵育3天。在處理後，將細胞在活性染料(Live/Dead® Fixable Aqua Cell Stain Kit, ThermoFisher #L34965)中在37°C孵育30 min，然後在冰上的PBS + 2% FBS中進行表面抗體染色30 min。將細胞固定，並用在冰上的固定/透化緩衝液(eBioscience Foxp3/Transcription Staining Buffer Set, ThermoFisher #00-5523-00)透化30 min。在冰上的透化緩衝液中進行細胞內(Ki-67)染色30 min，並在FACS分析之前將處理的細胞重懸於PBS+2% FBS中。NK細胞被鑒定為來自CD3-和CD20- (非T，非B細胞)群的CD56+和/或CD159a+細胞。用於細胞表面和細胞內染色的抗體綴合物顯示在表11中。 表11. 用於細胞表面和細胞內染色的抗體綴合物
標誌物 CD3 Ki-67 CD56 CD20 CD45RA CD8 CD159a 活的/死的
Fluor FITC PE PerCP-eFluor710 PE-Cy7 APC BV421 BV650 Aqua
複製 UCHT1 SolA15 CMSSB 2H7 HI100 SK1 131411 -
供應商 Invitrogen Invitrogen Invitrogen BioLegend BD BioLegend BD Invitrogen
目錄號 CD0301 12-2698-82 46-0567-42 302312 550855 344748 747920 L349650
結果呈現在圖10A和圖10B中。實施例 12 A549 腫瘤細胞中 PD-LI 的上調和腫瘤細胞裂解 PD-L1 上調
藉由密度梯度離心從血沉棕黃層中分離人外周血單個核細胞 (PBMC)。將人肺癌A549細胞(ATCC CCL-185)以106 個細胞/孔接種在6孔板中過夜。第二天，將新鮮分離的PBMC以107 個細胞/孔加入到A549細胞中，最終效應子與靶標的比例(E:T)為10:1。將IL-2Rβγc配體(BGL21) 或IL-2的連續稀釋液加入到孔中，並將細胞在37°C孵育48 h。然後從孔中吸出PBMC，並使用0.25% (w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液收集貼壁的A549細胞。將細胞用PBS洗滌並用表12中顯示的抗體混合物染色以定量A549細胞上的PD-L1表達水準並從分析中排除PBMC。 表12. 細胞染色抗體混合物
標誌物 CD14 PD-L1 CD56 CD20 CD3
通道 FITC PE PerCP-eFl710 PE-Cy7 BV421
在LSR II儀器(Becton Dickinson)上藉由流式細胞術分析樣品。將PD-L1染色陽性的A549細胞的百分比作為測試化合物濃度的函數作圖。
結果呈現在圖11A中。 實施例 13 PBMC 腫瘤細胞裂解
將新鮮分離的PBMC(效應細胞)重懸於T細胞培養基(CTS OpTmizer培養基+ 2mM L-穀氨醯胺+ Pen/Strep，沒有血清或hIL-2)中，並以6×105 個細胞/孔鋪板於96孔細胞培養板中。將人結腸癌細胞系LS180 (ATCC CL-187)和COLO 205 (ATCC CCL-222) (靶細胞)以3×104 個細胞/孔加入PBMC中，最終E: T比為20: 1。然後將IL-2Rβγc配體(BGL21)或IL-2的稀釋液加入到孔中，並將細胞在37°C孵育48小時。藉由離心收集細胞上清液，並將來自每個孔的50 µL轉移到96孔板中。藉由用Promega CytoTox 96®非放射性細胞毒性測定試劑盒(#G1780)測量LDH釋放來定量腫瘤細胞裂解。向每個孔中加入等體積的CytoTox 96®試劑，並在25°C孵育30 min。然後向每個孔中加入終止溶液 (50 μL)以終止反應，並且在Wallac Victor 1420®讀板器中在490 nm處測量吸光度信號。藉由將針對每個樣品獲得的值除以從用裂解緩衝液處理的孔獲得的上清液獲得的最大值來計算細胞毒性百分比。
結果呈現在圖11B和圖11C中。實施例 14 摻入 IL-2Rβγc 配體的重組融合蛋白
免疫球蛋白融合物：構建多種哺乳動物表達載體以表達與全長人IgG，或者由人IgG1、IgG2或IgG4的重鏈的CH2和CH3結構域以及鉸鏈區組成的Fc片段連接的IL-2Rβγc配體。每個載體含有強的組成型啟動子(CMV或hEF1-HTLV)和用於將融合蛋白分泌到培養基中的IL-2信號肽序列。設計載體以使肽配體能夠與免疫球蛋白的N-或C-末端融合，並在IL-2Rβγc配體和IgG之間摻入不同長度的構建體接頭。
藉由使用聚乙烯亞胺試劑PEI MAX (Polysciences, Inc.)將質粒DNA轉染到293人胚腎細胞 (FreeStyle® 293-F)中而在該細胞中暫態表達融合蛋白。在以125 rpm旋轉的定軌搖床上，在37°C加濕CO2 培養箱中的搖瓶中，在FreeStyle®293表達培養基(Thermo Fisher)中使轉染的細胞生長。轉染後96 h藉由離心收穫培養物，並使用蛋白質A親和色譜法從上清液中純化分泌的融合蛋白。
將蛋白質A瓊脂糖樹脂與培養物上清液混合，並在室溫孵育數小時。然後將樹脂用PBS洗滌三次，並用0.1 M甘氨酸緩衝液(pH 2.8) 洗脫結合的IgG IL-2Rβγc配體融合物。用1 M Tris緩衝液中和洗出液並藉由使用NanoDrop®分光光度計測量280 nm處的吸光度來定量。使用從蛋白質的一級序列得到的計算的消光係數確定蛋白質濃度。在生物測定中測量融合蛋白的活性之前，使用尺寸排阻色譜法以去除高分子量雜質。
人血清白蛋白融合物：構建哺乳動物表達載體以表達與人血清白蛋白(HSA)的C-末端連接的IL-2Rβγc配體。為了純化的目的，將6×-His標籤與HSA的N-末端連接。該載體含有強的組成型啟動子 (hEF1-HTLV)和用於將融合蛋白分泌到培養基中的IL-2信號肽序列。
藉由使用聚乙烯亞胺試劑PEI MAX(Polysciences, Inc.)將質粒DNA首先轉染到293人胚腎細胞(FreeStyle® 293-F)中而在該細胞中暫態表達HSA-IL-2Rβγc配體融合蛋白。在以125 rpm旋轉的定軌搖床上，在37°C加濕CO2 培養箱中的搖瓶中，在FreeStyle®293表達培養基(Thermo Fisher)中使轉染的細胞生長。轉染後96h藉由離心收穫培養物，並藉由Ni-NTA親和色譜法從上清液中純化分泌的HSA-IL-2Rβγc配體融合蛋白。
將Ni-NTA瓊脂糖樹脂加入到培養上清液中，並在室溫孵育數小時。然後用TBS洗滌緩衝液(25 mM Tris pH 8.0, 150 mM NaCl, 20 mM咪唑)將樹脂洗滌三次。用洗脫緩衝液(25 mM Tris pH 8.0, 150 mM NaCl, 250 mM咪唑)從樹脂洗脫結合的HSA-IL-2Rβγc配體融合蛋白，然後使用Zeba®旋轉柱(Thermo Fisher)進行緩衝液交換以去除咪唑。藉由使用NanoDrop®分光光度計測量280 nm處的吸光度來定量蛋白質，並使用從蛋白質的一級序列得到的計算的消光係數確定濃度。
在實驗例中使用的IL-2Rβγc配體融合蛋白的氨基酸序列提供在圖20A-圖20J和圖21A-圖21C中。
hIgG2 Fc片段是指由IgG2重鏈的CH2和CH3結構域組成的Fc區和鉸鏈區。鉸鏈區的第一個和第二個半胱氨酸被絲氨酸替換以防止不利的二硫橋。為了融合穩定性，Fc區的最後一個氨基酸(賴氨酸)被丙氨酸替換。IgG2 Fc構建體的N-末端從Ala-Pro-Leu(來源於InvivoGen載體)開始。
hIgG1v Fc片段是指由IgG1重鏈的CH2和CH3結構域組成的Fc區和鉸鏈區。鉸鏈區的第一個半胱氨酸被絲氨酸替換以防止不利的二硫橋。為了融合穩定性，Fc區的最後一個氨基酸(賴氨酸)被丙氨酸替換。效應子沉默突變P329G、L234A/L235A(LALA)包括在IgG1v Fc-(BGL21)構建體(FP2) (SEQ ID NO:1213)中。IgG1v Fc構建體的N-末端從Ala (來源於InvivoGen載體)開始。
hIgG4 Fc片段是指由IgG4重鏈的CH2和CH3結構域組成的Fc區和鉸鏈區。效應子沉默突變P329G、S228P/L235E(SPLE)包括在hIgG4 Fc變體(FP3)(SEQ ID NO:1214)中。
Fc-杵是指人鉸鏈杵 Fc IgG1 LALA-dK(降低的效應子功能和低的C-末端異質性) (L252A、L253A、T384W)。
Fc-臼是指人鉸鏈臼 Fc IgG1 LALA-dK(降低的效應子功能和低的C-末端異質性) (L252A、L253A、T384S、L386A、Y425V)。
hIgG1 Fc片段是指由IgG1重鏈的CH2和CH3結構域組成的Fc區和鉸鏈區。為了融合穩定性，Fc區的最後一個氨基酸(賴氨酸)被丙氨酸替換。構建體包括效應子沉默突變N297A。
hIgG2 Fc片段是指由IgG2重鏈的CH2和CH3結構域組成的Fc區和鉸鏈區。鉸鏈的第一個和第二個半胱氨酸被絲氨酸替換以防止不理的二硫橋。為了融合穩定性，Fc區的最後一個氨基酸(賴氨酸)被丙氨酸替換。
實驗例中使用的IL-2Rβγc配體融合蛋白的氨基酸序列提供於圖20A-圖20J中。實施例 15 在 IL-2Rβγc 配體融合蛋白的情況下 TF-1β 細胞中的 STAT5 磷酸化
如實施例14中所述，將IL-2Rβγc配體(BGL21)與IgG Fc片段融合 (C-末端融合物SEQ ID NO:1212；N-末端融合物SEQ ID NO:1215)，所述IgG Fc片段由人IgG2的重鏈的CH2和CH3結構域以及鉸鏈區組成。IL-2Rβγc配體(BGL21)也與異二聚化Fc片段 (杵-入-臼(Knob-into-holes))變體融合，所述變體由人IgG1的重鏈的CH2和CH3結構域以及鉸鏈區組成。IL-2Rβγc配體(BGL21)與含有“杵”突變(T366W)和效應子沉默突變(L234A/L235A)的杵-Fc片段(SEQ ID NO:1216)的C-末端融合。構建體與含有“臼”突變 (T366S、L368A、Y407V)和效應子沉默突變(L234A/L235A)的臼-Fc片段 (SEQ ID NO:1217)共表達，以產生在融合蛋白的C-末端具有單個拷貝的IL-2Rβγc配體 (BGL21)的異二聚化Fc片段。如實施例11中所述的，除了與Fc片段的融合物外，IL-2Rβγc配體 (BGL21)也與人血清白蛋白的C-末端(SEQ ID NO:1252)融合。
將融合蛋白與TF-1β細胞一起孵育，並使用實施例3中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
IL-2Rβγc配體融合蛋白的結構提供在圖20A-圖20J和圖21A-圖21C中。
結果呈現在圖12中。實施例 16 在不同的 IL-2Rβγc 配體 IgG2 Fc 片段融合蛋白的情況下 TF-1β 細胞中的 STAT5 磷酸化
如實施例14中所述的，將一系列的IL-2Rβγc配體與由人IgG2的重鏈的CH2和CH3結構域以及鉸鏈區組成的IgG2 Fc片段的C-末端融合。IL-2Rβγc配體包括展現出對IL-2R的各種結合親和力的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體，其用兩個肽序列之間的柔性接頭(GGGGS)2 (SEQ ID NO:9396)連接在一起。
將融合蛋白與TF-1β細胞一起孵育，並使用實施例3中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
評估的Fc-IL-2Rβγc配體融合蛋白的結構以SEQ ID NO: 1212、1239、1243、1244、1250和1251提供在圖20和圖23中。
結果呈現在圖13中。實施例 17 在包括與不同的 IgG 同種型的 Fc 片段結合的 IL-2Rβγc 配體的融合蛋白情況下 NK-92 細胞中的 STAT5 磷酸化
將IL-2Rβγc配體(BGL21)與由人IgG的三種不同的同種型的重鏈的CH2和CH3結構域以及鉸鏈區組成的Fc片段融合。在第一個構建體 (FP2；SEQ ID NO:1213)中，將IL-2Rβγc配體(BGL21)與人IgG1 Fc片段變體的C末端融合，其中鉸鏈區中的第一個半胱氨酸被絲氨酸替換以防止不利的二硫橋並且為了融合穩定性，最後一個氨基酸(賴氨酸)被丙氨酸替換。效應子沉默突變也包括在該變體(P329G, L234A/L235A)中。在第二個構建體(FP1；SEQ ID NO:1212)中，IL-2Rβγc配體(BGL21)與人IgG2 Fc片段變體的C-末端融合，其中鉸鏈區中的第一個和第二個半胱氨酸被絲氨酸替換以防止二硫橋並且為了融合穩定性，最後一個氨基酸(賴氨酸)被丙氨酸替換。在第三個構建體(FP3;SEQ ID NO:1214)中，IL-2Rβγc配體(BGL21)與含有效應子沉默突變(P329G, S228P/L235)的人IgG4 Fc片段變體的C-末端融合。如實施例14中所述表達和純化每種融合蛋白。
將融合蛋白與TF-1β細胞一起孵育，並使用實施例3中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
IgG Fc-IL-2Rβγc配體融合蛋白(FP1)-(FP3)的結構提供在圖20A-圖20J和圖21A-圖21C中，並且對應於SEQ ID NO:1212、1213和1214。
結果呈現在圖14中。實施例 18 在具有不同 Fc 接頭的 IL-2Rβγc 配體 IgG2 Fc 片段融合蛋白的情況下 TF-1β 細胞中的 STAT5 磷酸化
如實施例14中所述製備IL-2Rβγc配體 (BGL21) IgG2 Fc片段變體，其在Fc片段與IL-2Rβγc配體(BGL21)的C-末端之間含有一系列的具有甘氨酸或甘氨酸/絲氨酸重複的柔性構建體接頭，或者具有脯氨酸/丙氨酸重複的剛性構建體接頭。
將融合蛋白與TF-1β細胞一起孵育，並使用實施例3中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
Fc-IL-2Rβγc配體融合蛋白的結構提供在圖20A-圖20J和圖21A-圖21C中，並且對應於對應於有SEQ ID NO:1227-1235的IL-2Rβγc配體融合蛋白(FP16)-(FP24)。
結果呈現在圖15中。實施例 19 在具有不同 Fc 接頭的 IL-2Rβγc 配體 IgG2 Fc 片段融合蛋白的情況下 TF-1β 細胞和 NK-92 中的 STAT5 磷酸化
如實施例14中所述製備IL-2Rβγc配體(BGL21) IgG2 Fc片段變體，其在IgG2 Fc片段與IL-2Rβγc配體(BGL21)的C-末端之間含有由(GS)10 (SEQ ID NO:9407)柔性接頭組成的柔性接頭(參見FP14；SEQ ID NO:1225)或者由(PA)10 (SEQ ID NO:9428)組成的剛性接頭(參見FP15；SEQ ID NO:1226)。
將融合蛋白與TF-1β細胞一起孵育，並使用實施例3中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。還在NK-92細胞增殖測定中使用Ki67染色測試每種融合蛋白以定量應答於實施例9中所述的化合物而增殖的細胞。
Fc-IL-2Rβγc配體融合蛋白的結構提供在圖20A-圖20J和圖21A-圖21C中。在圖21A-圖21C中，參考了親本IL-2Rβ配體和親本IL-2Rγc配體的氨基酸序列。Fc-IL-2Rγc融合蛋白中使用的每個IL-2Rβ配體和每個IL-2Rγc配體在親本配體的N-末端和C-末端的每個上包括兩個側翼甘氨酸。例如，具有SEQ ID NO：1212的IL-2Rβγc配體融合蛋白(FP1)包括與具有SEQ ID NO：1052的IL-2Rγc配體結合的具有SEQ ID NO：914的IL-2Rβ配體，所述IL-2Rβ配體對應於在N-末端和C-末端的每個上有甘氨酸的具有SEQ ID NO：865(BL4)的親本IL-2Rβ配體，所述IL-2Rγc配體對應於在N-末端和C-末端的每個上有兩個甘氨酸的具有SEQ ID NO：965(GL2)的親本IL-2Rγc配體。
結果呈現在圖16A和圖16B中。 實施例 20 抗 PD-1 抗體 -IL-2Rβγc 配體 (BGL21) 融合蛋白的 PD-1 結合和 IL-2 激動劑活性
如實施例14中針對與IgG Fc片段的異二聚化肽融合物所述的，將IL-2Rβγc配體(BGL21)與兩種治療檢查點抑制劑抗體的重鏈的C-末端融合，所述兩種治療檢查點抑制劑抗體靶向PD-1(派姆單抗(FP8)(SEQ ID NO:1219)；和西米普利單抗(FP10)(SEQ ID NO:1221))。將構建體與它們相應的輕鏈構建體((派姆單抗(FP7；SEQ ID NO:1218)；西米普利單抗(FP9；SEQ ID NO:1220))在HEK-293F細胞中暫態共表達以產生完全IgG IL-2Rβγc配體(BGL21)融合物。
藉由ELISA評估純化的蛋白與PD-1靶蛋白的結合。將重組的人PD-1 his標記的蛋白(R&D Systems 8986-PD-100)以1 μg/mL溶解於PBS中並藉由吸收直接固定在微量滴定孔中，然後用PBS/1% BSA封閉。將派姆單抗和西米普利單抗抗體或相應的IL-2Rβγc配體(BGL21)融合蛋白的連續稀釋液加入到孔中，並在4°C孵育1h。然後用PBS洗滌孔，將抗人IgG HRP連接的抗體加入到每個孔中，並在4°C孵育1小時。在最後一次洗滌後，加入TMB底物溶液以測量每個孔中的HRP的量。在酶標儀中讀取450 nm處的吸光度。產生的信號與每個孔中結合PD-1的抗體的量成比例。與PD-1結合的結果顯示在圖17A和圖17C。
將派姆單抗和西米普利單抗IL-2Rβγc配體(BGL21)融合蛋白與TF-1β細胞一起孵育，並使用實施例3中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。STAT5磷酸化測定的結果分別顯示在圖17B和圖17D中。
Fc-IL-2Rβγc配體融合蛋白的結構提供在圖20A-圖20J和圖21A-圖21C中。實施例 21 PEG 化的 IL-2Rβγc 配體 (BGL21) 構建體的合成
如實施例1中所述製備IL-2Rβγc配體(BGL21)的類似物，除了替換用乙酸酐乙醯化N-末端伯胺外，使用最終的HATU介導的偶聯步驟將Fmoc-PEG10 -CH2 CH2 -CO2 H (Anaspec, Hayward, CA)加入到N-末端，並且如先前所述去除Fmoc保護基團。如實施例1中所述進行從樹脂的切割和二硫化物形成，以提供具有游離N-末端伯胺的氧化肽。將IL-2Rβγc配體(BGL21) (1.5摩爾當量)與40kD分支的PEG試劑的NHS-酯(1.0摩爾當量)(NOF Corp.,東京,日本)在無水DMF中混合。在25°C溫和攪拌15 min後，加入DIEA (10摩爾當量)，並使反應進行至完成 (大約4 h；藉由分析型C18反相HPLC分析)。藉由C18反相HPLC純化最終產物(PEG-8)，並藉由MALDI ToF (飛行時間)質譜和反相HPLC確認PEG化肽的結構。實施例 22 PEG-IL-2Rβγc 配體的激動劑活性
將實施例21中合成的PEG-IL-2Rβγc配體構建體(PEG-8)或IL-2與NK-92細胞一起孵育，並使用實施例3和4中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
結果呈現在圖18中。 實施例 23 生產方法
製備哺乳動物細胞表達構建體，其中IL-2Rβγc配體(BGL21)與人IgG1 Fc片段變體(FP13；SEQ ID NO:1224)的C-末端融合。鉸鏈區中的第一個半胱氨酸被絲氨酸替換以防止不利的二硫橋的形成，並且為了融合穩定性，最後一個氨基酸(賴氨酸)被丙氨酸替換。效應子沉默突變也包括在該變體(N297A)中。柔性接頭(GS)10 (SEQ ID NO:9407)位於Fc片段與IL-2Rβγc配體(BGL21)之間。
製備另外的哺乳動物細胞表達構建體，其中IL-2Rβγc配體(BGL21)與人IgG2 Fc片段變體的C-末端融合，其中鉸鏈區中的第一個半胱氨酸和第二個半胱氨酸被絲氨酸替換以防止不利的二硫橋的形成，並且為了融合穩定性，最後一個氨基酸(賴氨酸)被甘氨酸替換。柔性接頭(GS)10 (SEQ ID NO:0407) (參見FP14；SEQ ID NO:1225)或剛性接頭(PA)10 (SEQ ID NO:9428) (參見FP15；SEQ ID NO:1226)位於Fc片段與IL-2Rβγc配體(BGL21)之間。
將表達質粒轉染到CHO-K1細胞中，並且在含有抗生素的培養基中選擇表達IL-2Rβγc配體(BGL21) IgG Fc片段融合物的穩定池。藉由有限稀釋從這些池中分離單獨複製並測試高表達的IL-2Rβγc配體(BGL21) IgG Fc片段融合蛋白。藉由離心收穫高表達複製的大規模培養物，並使用蛋白質A親和色譜法從上清液中純化分泌的融合蛋白。使用尺寸排阻色譜法以去除高分子量雜質。實施例 24 pH 選擇性篩選
用兩個肽文庫篩選IL-2Rβ和IL-2Rγc配體以鑒定對各自受體亞基展現出pH依賴性親和力的肽。篩選方法利用在各種酸性和中性pH條件下結合和洗脫的循環。
使用噬菌體ELISA在兩個靶標pH值下確定噬菌體與IL-2Rβ-GPI或IL-2Rγc-GPI的結合，並計算在pH7.4時的結合相對於在pH6.0時的結合的變化百分比。
對於pH依賴性噬菌體滴定，使用前述段落中所述的ELISA篩選方案，但具有以下差異：(1)所有96孔ELISA板含有IL-2Rβ-GPI靶標；或IL-2Rγc-GPI靶標，以及(2)在兩種不同的PBT pH緩衝液(pH6.0和pH7.4)中製備噬菌體上清液的滴定。
使用以下程序在96孔聚丙烯板中進行噬菌體滴定。製備噬菌體在PBT pH6緩衝液和pH7.4緩衝液中的3倍稀釋液。將一百(100) μL的稀釋的噬菌體轉移到靶標包覆的測定板中，並在4°C孵育1h。
用冷的PT(pH6.0)洗滌pH 6.0孔3次，並用冷的PT(pH7.4)洗滌pH7.4孔2次。
用抗M13-HRP檢測結合的噬菌體。實施例 25 生物素化的肽 pH 依賴性結合的 ELISA 方案 (IL-2Rβ/Fc 受體結合 / 多價 )
對於待測定的每種肽，用中性抗生物素蛋白(10 µg/mL於PBS pH 7.2中)以50 μL/孔包覆十六(16)個ELISA板孔。將包覆的孔在25°C孵育至少1 h。
從每個孔中去除中性抗生物素蛋白。將三百(300) μL封閉緩衝液(1×PBS pH 7.2, 1% BSA)加入到中性抗生物素蛋白包覆的板的每個孔中。覆蓋所有板並將其保持在25°C保持1h或在4°C過夜。
用PT(1×PBS pH 7.2, 0.05% Tween®20)緩衝液將孵育的板洗滌4次。
將生物素化的肽在PBT pH7.2緩衝液中稀釋至1μM，並將50 μL加入到適當的16個孔中(對於每種結合pH為8) 。將板在25°C孵育至少1 h。
在聚丙烯板中使用PBT pH6.0和pH7.4以2 μg/mL開始並稀釋3倍來製備IL-2Rβ-Fc蛋白的兩(2)種滴定。
用PT (1×PBS pH 7.2, 0.05% Tween®20)緩衝液將板洗滌4次。
將五十(50)μL的IL-2Rβ-Fc蛋白稀釋液加入到在pH6.0或pH7.4緩衝的測定板中，並在4°C孵育1h。
用相應的pH緩衝液PT (50 mM PBS pH 6.0, 0.05% Tween®20或50 mM PBS pH 7.4, 0.05% Tween®20)將孵育的板洗滌3次。
將在冷的PBT(pH6.0)中以1:2500稀釋的五十(50)μL山羊抗huIgG-HRP加入到每個孔中。然後將板在4°C孵育1h。然後用冷的緩衝液PT(pH6.0)將板洗滌4次。然後向每個孔中加入五十(50) μL的TMB，並將孔在25°C孵育1-10min。向每個孔中加入五十(50) μL的“終止”溶液，並在450 nm下讀取板。實施例 26 在具有 pH 偏倚性 IL-2Rβ 配體 的 IL-2Rβγc 配體的情況下 NK-92 細胞中的 STAT5 磷酸化
使用在NK-92細胞中的STAT5磷酸化測定來評估pH偏倚性IL-2Rβγc配體的IL-2R激動劑活性，所述IL-2Rβγc配體包含對IL-2Rβ具有pH偏倚性親和力的IL-2Rβ配體。
將IL-2Rβγc配體與NK-92細胞一起孵育，並使用實施例4中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化，其中將饑餓培養基調節至pH6.0或pH7.4。
結果呈現在圖24中。實施例 27 IL-2Rβ 配體 pH 偏倚性結合的競爭 ELISA 方案
對於待測定的每種肽，將十六(16)個ELISA板孔在25°C用IL-2Rβ-Fc(50 ng/孔)包覆至少1h或在4°C過夜。
從每個孔中去除IL-2Rβ-Fc。將三百(300)μL的封閉緩衝液(1×PBS pH 7.2, 1% BSA)加入到IL-2Rβ-Fc-包覆的板的每個孔中。覆蓋所有板並將其在25°C保持至少1h。
用PT(1×PBS pH 7.2, 0.05% Tween®20)緩衝液將孵育的板洗滌3次。
將具有pH偏倚性IL-2Rβ配體的pH偏倚性IL-2Rβγc配體在PBT pH6.0和pH7.2緩衝液中稀釋至2倍終濃度(20μM)，並將50 μL加入到適當的16孔中(對於每種結合pH為8)。然後將板在4°C孵育1h。
將在pH6.0和7.4下結合親和力相同的與測試肽競爭的生物素化形式的肽配體與中性抗生物素蛋白-HRP綴合物組合至少45min以製備肽-HRP複合物，然後將其在pH6.0或pH7.4 PBT中稀釋。
在沒有洗滌的情況下，將五十(50) μL肽-HRP複合物稀釋液加入到在pH6.0或pH7.4時緩衝的測定板中，並在4°C孵育1h。
用相應的pH緩衝液PT(50 mM PBS pH 6.0, 0.05% Tween®20或50 mM PBS pH 7.4, 0.05% Tween®20)將孵育的板洗滌3次。
然後向每個孔中加入五十(50 μL)的TMB (3,3’5,5’-四甲基聯苯胺(3,3’5,5’-tetramethylbensidine))，並將孔在25°C孵育1至15 min。向每個孔中加入50 μL的終止溶液，並在450nm下讀取板。結果呈現在圖25中。實施例 28 競爭性結合
進行競爭性結合測定以表徵IL-2Rβ配體、IL-2Rγc配體和IL-2Rβγc配體的IL-2R結合位點。
對於IL-2Rβ配體，展示來自IL-2Rβ配體家族的肽的代表性噬菌體複製與固定在微量滴定孔中的IL-2Rβ亞基的胞外結構域(ECD)結合。在存在和不存在合成測試肽的情況下進行噬菌體結合，以確定噬菌體肽和測試肽是否競爭結合IL-2Rβ上的相同位點。選擇合成測試肽以代表來自IL-2Rβ配體家族的肽，以及陽性對照肽和陰性對照肽。評估的IL-2Rβ配體家族序列和特定IL-2Rβ配體提供在表13中。 表13. IL-2Rβ配體家族和配體。
IL-2Rβ配體家族 特異性IL-2Rβ SEQ ID NO: 肽序列
1 58 Y D C R I A Q V G E L C D L
2A 169 N M C L V G D Y W P S C Q I
2A 170 Q I C D V G Q W W P D C Q V
2B 83 C C Y Q A M V G D L C D F C
2C 1034 C G M A I G D L C M W T      
2C 1042 R W G D V G D L L M P L      
4 1044 R S C Y Y K R P R L W C S E
IL-2Rγc配體 224 D C S M W E G V E L C W      
IL-2Rβ配體以小於100 µM的IC50 與IL-2Rβ亞基結合，並以大於100μM的IC50 與IL-2Rγc亞基結合。
藉由用針對噬菌體外殼蛋白的抗體(抗噬菌體Ab)染色，用針對抗噬菌體Ab的標記二級抗染色，並藉由在微量滴定板光學閱讀器中讀取OD進行評分，來檢測與固定化IL-2RβECD結合的噬菌體。
比較在存在和不存在測試肽的情況下，每種噬菌體結合的ELISA信號，以確定哪些合成肽與哪些噬菌體肽競爭結合IL-2Rβ亞基。展現出競爭性結合(即交叉抑制)的肽對被認為在IL-2受體的相同功能位點結合。結果呈現在表14中。 表14. IL-2Rβ配體與IL-2R的結合。
         噬菌體複製
   IL-2Rβ 配體 SEQ ID NO: 58 170 83 1034 1044
IL-2Rβ配體 SEQ ID NO: IL-2β家族 1 2A 2B 2C 4
58 1 +1 + + + –
169 2A + + + + –
1042 2C + + + + –
1044 4 –2 – – – +
224 IL-2Rγc配體 – – – – –
1 IL-2Rβ配體與噬菌體結合競爭。2 IL-2Rβ配體不與噬菌體結合競爭。
IL-2Rβ配體不與IL-2競爭性地結合IL-2Rβ亞基的結合位點。
進行了類似的研究以評估IL-2Rγc配體的結合。評估的IL-2Rγc配體家族序列和特異性IL-2Rγc配體提供在表15中。 表15. IL-2Rγc配體家族和配體。
IL-2Rγc 配體家族 特異性IL-2Rγc SEQ ID NO: 肽序列
1A 198 K V C E M W G G V L L C W N   
1A 202 R T C T E W E N V V L C W V   
1B 224 D C S M W E G V E L C W         
2 236 M C W L E W G E W V G S C L   
3 248 D L S D L S T F W L S Q         
4 266 C P S M L Q G P E R T W V C   
5 1032 S L L K C Y N A S T C A S V F
IL-2Rβ配體 58 Y D C R I A Q V G E L C D L   
IL-2Rγc配體以小於100µM的IC50 與IL-2Rγc亞基結合，並以大於100μM的IC50 與IL-2Rβ亞基結合。
競爭性結合測定的結果呈現自表16中。 表16. IL-2Rγc配體與IL-2R的結合。
      噬菌體複製
   IL-2Rγc配體 SEQ ID NO: 198 224 236 248 266 1032
IL-2Rγc配體 SEQ ID NO: IL-2Rγc家族 1A 1B 2 3 4 5
202 1A +1 + + + + –
224 1B + + + + + –
236 2 + + + + + –
248 3 + + + + + –
1032 5 –2 – – – – +
58 IL-2Rβ配體 – – – – – –
1 IL-2Rγc配體與噬菌體結合競爭。2 IL-2Rγc配體不與噬菌體結合競爭。實施例 29 PEG-IL-2Rβγc 配體構建體的激動劑活性
如實施例21中所述合成PEG-IL-2Rβγc配體構建體。PEG-IL-2Rβγc配體構建體的結構顯示在圖27-圖33中。用於每種構建體的IL-2Rβγc配體具有SEQ ID NO:1263。將PEG構建體與NK-92細胞一起孵育，並分別使用實施例3和4中所述的方法測量作為濃度的函數的STAT5磷酸化。
結果呈現在表17中。 表17. PEG-IL-2Rβγc配體構建體的激動劑活性
構建體 PEG 連接末端 PEG 大小 PEG/肽 接頭 PEG 結構 IL-2Rβ IC50 IL-2Rγc IC50 EC50 (STAT5，NK92)
PEG-1 N– 40kD 1 PEG10 分支的 31 nM 26 nM 5.8 nM
PEG-2 C– 40kD 1 PEG4 分支的 8 nM 690 nM 273 nM
PEG-3 N– 40kD (AP)6 分支的 14 nM 4.3 nM 2.3 nM
PEG-4 C– 40kD 1 PEG10 分支的 8.5 nM 3.7 nM 24 nM
PEG-5 N– 20kD 1 PEG20 線性的 33 nM 4.1 nM 1.0 nM
PEG-6 N– 40kD 1 PEG20 線性的 17 nM 3.4 nM 1.6 nM
PEG-7 N– 40kD 1 PEG20 分支的 3.4 nM 1.7 nM 8.3 nM
1 作為Fmoc-NH-(PEGn )–CH2 CH2 –COOH摻入，其中n = 4、10或20。實施例 30 CD-1 小鼠中的 IL-2Rβγc PEG- 肽激動劑 PK 分析
在CD-1雄性小鼠中進行IL-2Rβγc PEG-肽激動劑的藥物代謝動力學研究。將IL-2Rβγc PEG-肽激動劑(PEG-6)以1mg/kg的單劑量靜脈內施用至每只小鼠(n=5)。在0h(給藥前)、給藥後1、2、6、24、48、72和96h將血液樣品收集到血清分離器小瓶中。將樣品在4°C以10,000×g離心5 min，並將血清轉移到新管中。在測試之前將樣品冷凍並在-80°C儲存。
如實施例3中所述的TF-1β STAT5磷酸化生物測定用於定量每個血清樣品中存在的PEG-6的量。將在饑餓培養基中的每個血清樣品或化合物參考標準品的三倍連續稀釋液加入到細胞中並與細胞一起孵育30 min。如實施例3中所述製備細胞提取物並確定磷酸化STAT5的量。使用從參考標準品產生的標準曲線計算每個血清樣品中的PEG-6濃度。
結果呈現在圖26中。實施例 31 針對在磁珠上 Fc 受體融合物的噬菌體展示 pIII 文庫淘選 ( 酸洗脫 ) 文庫淘選 (Panning) 程序
以下方案或類似方案用於篩選與hIL-2Rβ亞基和hIL-2Rγc亞基結合的肽以及與cyno-IL-2Rβ亞基和cyno-IL-2Rγc亞基結合的一些肽。
將五十(50) μL蛋白質G Dynabeads® (Invitrogen)用於每個文庫樣品。在重懸於儲液瓶後，將期望體積的珠轉移到無菌微量離心管中並施加到磁體上。
在磁體上具有珠的情況下，去除上清液，並用1 mL PT緩衝液(1×PBS, 0.05% Tween®20)洗滌珠。
去除上清液，加入PBS + 1% BSA + 0.05% Tween®20，並在25°C混合至少1小時以封閉珠。
將管施加到磁體上並去除封閉溶液。對於待測試的每個文庫，每輪將5 μg目的Fc融合受體加入到每個文庫樣品中，以使總體積達到至少400 μL。將樣品在25°C混合至少1h。將樣品施加到磁體上並去除上清液。
對於每50 μL珠，加入兩百(200) μL PT緩衝液。將樣品充分混合，並將200 μL等分試樣轉移到管中，所述管針對待篩選的每個文庫為預先標記的。將另外的500 μL PT加入到每個管中，將樣品混合，然後施加到磁體上。總共700 μL/管用於洗滌。
將一(1) mL文庫的等分試樣從-20°C冰箱中取出。將一百(100) μL 10 × BT緩衝液(5% BSA, 0.5% Tween®20在1×PBS中)加入到每個管中並渦旋。將文庫樣品轉移到含有珠的預先標記的管中。然後將樣品在旋轉器上在4°C孵育至少2 h。對於另外幾輪的篩選，使用來自每個文庫的前一輪的1 mL等分試樣擴增物。用磁體回收珠並去除噬菌體溶液。用1mL PT緩衝液洗滌珠2×。加入五百(500) μL的PT緩衝液，並將懸浮液轉移到乾淨的管中。在磁體上回收珠並去除最後的洗滌液。
將四百七十五(475) μL的噬菌體洗脫緩衝液加入到每個孔中(0.2 M 甘氨酸-HCL, pH 2.2, 1.0 mg/mL BSA)。將樣品在25°C在旋轉器上孵育10 min。在磁體上回收珠，並將洗脫的噬菌體轉移到乾淨的管中。
將二十五(25) μL的中和緩衝液(2 M Tris鹼)加入到475 μL洗脫液中。將中和的樣品保持在4°C直至TG1細胞準備擴增。在篩選之後將樣品儲存在-20°C。將五十(50)μL (總體積的約10%)轉移到1.5mL微量離心管中，並在-20°C儲存以用於深度測序。實施例 32 TG1 培養和文庫擴增
在將文庫加入到珠中後，使新鮮的TG1 (或OmniMax)培養物生長約1至1.5 h。將2X-YT培養基 (10mL)置於50 mL Falcon®管中。將過夜的二百(200) μL的TG1加入到falcon管中。將2X-YT培養基 (600 μL)置於比色皿中，用於OD600空白。將培養物在250 rpm和37°C生長，在60 min後進行第一次OD測量。在使用時，TG1細胞應該處於對數期，OD600為0.5-0.7。
在50 mL Falcon®管中將洗脫的噬菌體(400 μL至450 μL)加入到1.0 mL的OD600為0.5-0.7的TG1細胞中。在不搖動的情況下，將噬菌體和TG1細胞在37°C孵育30 min。留出約50 μ L至100 μ L用於滴定和表徵。
將2YT培養基(10.5 mL)加入到12 μL羧苄青黴素(carb)(100 mg/mL以製備100 µg/mL)和24 μL 50%葡萄糖(以製備0.1%葡萄糖)中，並將細胞在37°C以250 rpm搖動的同時孵育1 h。
然後加入M13K07輔助噬菌體(5×1010 pfu, 24 µL原液, 2×1012 pfu/mL)並渦旋混合。在不搖動的情況下，將噬菌體和細胞在37°C孵育30 min。
在2YT培養基/羧苄青黴素-100/0.1%葡萄糖中，將卡那黴素稀釋至3mg/mL，並將阿拉伯糖稀釋至2.4%，並且向每次擴增中加入100 μL。將混合物在37°C和250 rpm下孵育過夜。
將培養物轉移到50mL高速VWR離心管中並在JSP-F50C離心機中於4°C以8,000 g離心15 min以沉澱細胞。
將上清液轉移到50mL高速VWR離心管中，並加入0.2體積的PEG/NaCl (將體積乘以0.25 mL至3 mL PEG/NaCl，用於12 mL擴增)，混合，並在冰上孵育30分鐘。
然後將細胞在JSP-F50C離心機中於4°C以10,500 g離心15 min。去除上清液，並藉由移液將噬菌體沉澱重懸於總共1 mL的PBT (1×PBS, 0.05% Tween®20, 0.5% BSA)中。
將樣品轉移到Eppendorf管中，渦旋，並以12,000 rpm離心30 sec。將上清液轉移到乾淨的Eppendorf管中並在4°C儲存。將該擴增的噬菌體樣品(250-500 μL)用於下一輪篩選。實施例 33 從單個集落製備培養物
在深孔板的九十六(96)個孔中填充1mL的2YT肉湯/氨苄青黴素-50/0.1%葡萄糖。使用P20尖端將九十六(96)個集落放入孔中。將尖端留在孔中以標記位置。在完成整個板後，使用多通道移液管移除尖端。用透氣膜覆蓋該板。
在37°C，將接種的板在振盪器中孵育，直到培養物變得渾濁，通常在250 rpm下4h內。
將板從培養箱中取出，並將來自每個孔的50 μL培養物轉移到另一個深孔塊(被命名為“Archive Block”)中，其含有1 mL的2YT肉湯/氨苄青黴素-50/0.1%葡萄糖。用透氣膜覆蓋該板並在37°C和250 rpm下孵育過夜。
在孵育過夜後，將M13K07輔助噬菌體加入到含2×1010 pfu/mL的2YT肉湯/氨苄青黴素-50/0.1%葡萄糖(以製備6.0 mL/塊)中。將五十(50)μ L稀釋的M13K07加入到深孔塊中的每個培養孔中。用透氣膜覆蓋深孔塊並在37°C和250 rpm孵育30min。
在2YT肉湯/氨苄青黴素-50/0.1%葡萄糖中，將卡那黴素稀釋至0.5 mg/mL，並且將阿拉伯糖稀釋至0.4% (製備6.0mL/塊)，並將50 μL加入到每個孔中。用透氣膜覆蓋該板並在37°C和250 rpm下孵育過夜。
將“Archive Block”培養物從培養箱中去除，並將50 µL轉移到含有50 µL 50%甘油的96孔板中。將板用箔密封並在-80°C儲存。將塊中的剩餘培養物用箔密封件覆蓋並在4°C儲存。
將塊以4000rpm離心15 min並用M13K07接種。在避免細菌沉澱的同時，將850 μL的噬菌體上清液轉移到新鮮的深孔板中，用箔密封件覆蓋，並在4°C儲存。實施例 34 Fc 融合物的 ELISA 方案：
對於待測定的每個塊，用Fc融合物(1μg/mL於PBS中)以50 μL/孔包覆1×96孔ELISA板。將孔在25°C孵育至少1h。
從每個孔中去除Fc融合物。將三百(300)μL的封閉緩衝液(1×PBS，1% BSA)加入到受體包覆的板的每個孔中。另外，將300 μL的封閉緩衝液加入到單獨的未包覆的96孔ELISA板中以用作陰性對照。用膜覆蓋兩個板，並在37°C放置1h或在4°C放置過夜。
用PT (1×PBS, 0.05% Tween® 20)緩衝液將板洗滌4次。向每個孔中加入五十(50) μL的PBT。將來自該塊的五十(50)μL噬菌體上清液加入到每個孔中並在4°C孵育1 h。用冷的PT將板洗滌4次。向每個孔中加入在冷的PBT中以1: 5000稀釋的100 μL抗M13-HRP抗體。將孔在4°C孵育1h。
然後用冷的PT將板洗滌4次。然後向每個孔中加入五十(50) μL的TMB，並將孔在25°C孵育1-10 min。加入五十(50) μL的“終止”溶液，並在450 nm處讀板。實施例 35 肽異二聚體使 IL-2R βγc 二聚化並啟動 IL-2 應答細胞能力的評估
在鑒定展現出IL-2Rβ和IL-2Rγc結合活性的肽基配體後，將鑒定展現出IL-2R激動劑活性的化合物。這將涉及在基於細胞的測定中評定肽使IL-2Rβγc亞基二聚化和發信號的能力。二聚化是啟動受體信號傳導的必要但不充分的步驟。為了在基於細胞的測定中評定激動劑活性，將測試IL-2應答細胞系的IL-2信號傳導、STAT5的磷酸化的指標。然後在原代人外周血單個核細胞(PBMC)中測試在這些細胞系中展現出IL-2Rβγc激動劑活性的化合物的IL-2R激動作用，以及有利於表達IL-2Rβγc亞基，但具有低的或沒有IL-2Rα(CD25)亞基表達的細胞類型活啟動的期望選擇性。
將使用β-Gal互補系統評定二聚化潛力，其中每個相應的IL-2受體亞基的胞內結構域的一部分被β-Gal的功能性互補片段替換，所述β-Gal的功能性互補片段在充分接近時恢復催化活性。當用IL-2處理時，表達這些構建體的細胞產生β-Gal活性，ED50 為約26 nM(參見DiscoverX產品說明書)。將使用該測定測試所有合成的潛在激動劑、肽。
將在兩種細胞系中對候選化合物誘導STAT5磷酸化進行評分：(1)CTLL-2細胞，一種小鼠細胞毒性T-淋巴細胞系，其表達所有三種IL-2受體亞基並對IL-2Rβγc-偏倚性變體以及野生型IL-2有應答；以及(2)TF-1β細胞，其衍生自人紅白血病細胞系TF-1，僅天然表達IL-2Rγc，並且藉由轉染IL-2Rβ而被工程化為IL-2應答的。構建TF-1β，並且藉由QPCR和FACS分析來驗證IL-2R亞基在兩種細胞系中的表達水準。
將在兩種細胞系中測試化合物。將進行劑量應答測定以確定測試化合物的EC50 並比較測試化合物與IL-2作為IL-2Rβγc受體偏倚的指標。為了進一步表徵亞基偏倚，在針對人IL-2Rβ亞基的中和抗體存在下進行平行測定。
作為證實陽性化合物藉由刺激IL-2受體起作用的對照，還將用細胞進行測定，所述細胞用中和抗huIL-2Rβ抗體處理。為了確定化合物活性不是由於細胞因數的污染，用針對天然IL-2Rβγc激動劑、IL-2和IL-15的中和抗體(R&D Systems)處理測試化合物。
在細胞系中展現出IL-2R激動劑活性的化合物將在從個體供體(可從Lonza商購獲得)收集的人原代免疫細胞、PBMC，以及在一些情況下在純化的CD4+細胞(Lonza)中測試。來自正常供體的很大一部分PBMC對IL-2有應答。為了評定測試化合物的IL-2激動劑活性，將細胞暴露於化合物或IL-2並藉由蛋白質印跡分析對STAT5磷酸化進行評分。作為證實陽性化合物藉由刺激IL-2受體起作用的對照，還將用細胞進行測定，所述細胞用中和抗huRβ抗體處理。
展現出PBMC的STAT5啟動的那些化合物將進行後續測定，所述後續測定被設計用於評定與IL-2相比化合物的亞基偏倚。該測定將涉及經30 min確定測試化合物和IL-2(1至1000 IU)的劑量應答，其藉由基於FACS的方案評分，允許檢測作為IL-2R啟動的指標的細胞內pSTAT5，和細胞表面CD25、IL-2Rβ亞基。表達三種IL-2R亞基、IL-2Rβγc的細胞以非常高的親和力(約10 pM)結合IL-2，因此對低濃度的IL-2敏感；然而僅表達IL-2Rβγc的細胞(約1 nM親和力)需要暴露於顯著更高的IL-2水準以進行啟動。因為由本公開提供的化合物被選擇用於IL-2Rβ亞基和IL-2Rγc亞基結合，但不與IL-2Rα結合，所以預期所述化合物的效力與細胞上IL-2Rα的表達水準不相關；並且用由本公開內容提供的化合物處理或用IL-2處理的細胞的應答曲線的比較應該揭示任何偏倚。實施例 36 鑒定的肽
已經篩選了與人IL-2Rβ亞基或人Il-2Rγc亞基結合的隨機文庫，其中每個文庫含有大約1010 個獨立的重組體，每個複製潛在地展示獨特的肽序列。實施例 36 用於測試 hIL-2R 的 STAT5 啟動的 NK-92 細胞的製備
將NK-92細胞以4×105 個細胞/1mL饑餓培養基(SM)接種在24孔板中，並在37°C、5% CO2 下孵育過夜。饑餓培養基含有RPMI 1640+20% FBS+2 mM L-穀氨醯胺+1 mM NaPyr+10 mM HEPES+0.1 mM BME(沒有rhIL-2補充劑)。
處理混合物為1 µg/mL抗hIL-2中和抗體(0.2 mg/mL儲液)或製備山羊IgG對照(1 mg/mL儲液)。
將處理混合物和抗體混合物在37°C、5% CO2 下加入到細胞中保持30 min。然後將每個樣品轉移到1.5 mL微量離心管中並在1,500 RPM下離心5分鐘。將細胞在1 mL PBS中洗滌並再次離心。
將磷酸酶和蛋白酶抑制劑混合物(Thermo #78442)以1:100的稀釋度加入到mPER緩衝液中。在細胞沉澱後，將50 μL的mPER緩衝液加入到每個樣品中並反覆吸取以均質化。
將裂解物在RT下以14,000 RPM離心5 min。將上清液轉移到乾淨的管中，並在-80°C冷凍儲存。
人IL-2抗體(山羊IgG)獲自R&D Systems No. AF-202-NA；正常山羊IgG對照獲自R&D Systems No. AB-108-C；抗STAT5抗體(兔)，Cell Signaling No. 94205S，抗pSTAT5抗體(兔)，Cell Signaling No. 4322S以及山羊抗兔IgG-HRP獲自Jackson Immunoresearch No. 111-035-144。
每個樣品的抗體、處理和工作儲液製劑提供在表18中。化合物A和B是由本公開提供的IL-2Rβγc激動劑。 表18. NK-92細胞中的STAT5啟動樣品
編號 抗體 體積 (µL) 處理 體積 (µL) 工作儲液製劑
1 抗hIL-2 IgG 5 A 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
2 抗hIL-2 IgG 5 A 1 µM 10 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
3 抗hIL-2 IgG 5 A 0.1 µM 1 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
4 抗hIL-2 IgG 5 B 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
5 抗hIL-2 IgG 5 B 1 µM 10 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
6 抗hIL-2 IgG 5 B 0.1 µM 1 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
7 抗hIL-2 IgG 5 rh-IL2 1 ng/mL 10 100 ng/mL (1:1000的100 µg/mL儲液於SM中)
8 抗hIL-2 IgG 5 rhIL-2 0.1 ng/mL 1 100 ng/mL (1:1000的100 µg/mL儲液於SM中)
9 抗hIL-2 IgG 5 rhIL-2 0.1 ng/mL + 1% DMSO 1 100 ng/mL (1:1000的100 µg/mL儲液於SM中)+ 10 µL DMSO
10 抗hIL-2 IgG 5 饑餓培養基(SM) N/A N/A
11 山羊IgG對照 1 A 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
12 山羊IgG對照 1 A 1 µM 10 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
13 山羊IgG對照 1 A 0.1 µM 1 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
14 山羊IgG對照 1 B 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
15 山羊IgG對照 1 B 1 µM 10 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
16 山羊IgG對照 1 B 0.1 µM 1 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
17 山羊IgG對照 1 rh-IL2 1 ng/mL 10 100 ng/mL (1:1000的100 µg/mL儲液於SM中)
18 山羊IgG對照 1 rhIL-2 0.1 ng/mL 1 100 ng/mL (1:1000的100 µg/mL儲液於SM中)
19 山羊IgG對照 1 rhIL-2 0.1 ng/mL + 1% DMSO 1 100 ng/mL (1:1000的100 µg/mL儲液於SM中) + 10 µL DMSO
20 山羊IgG對照 1 饑餓培養基(SM) N/A N/A
將樣品施加到蛋白質印跡上。處理試劑包括抗STAT5抗體(兔)，Cell Signaling No. 94205S；抗pSTAT5抗體(兔)，Cell Signaling No. 4322S；以及山羊抗兔IgG-HRP，Jackson Immunoresearch No. 111-035-144。
為了進行測定，將NK-92細胞以20,000個細胞/孔鋪板在96孔板中的饑餓培養基中。將處理物以3倍連續稀釋液加入到每個孔中，其中肽的最大濃度為10 μM並且rhL-2的最大濃度為6.67 nM。然後將細胞在37°C孵育48 h。加入CellTiter-Glo®試劑，並在進行發光讀數之前將細胞在25°C孵育10 min。實施例 37 用於測試 hIL-2R 的 STAT5 啟動的 TF-1β 和 TF-1 細胞的製備
對TF-1β和TF-1親代細胞進行計數。收集細胞並將2.5×106 個細胞以200×g沉澱5分鐘。將沉澱的細胞用25 mL不含添加劑的RPMI洗滌。
將TF-1β和TF-1親代細胞以5×105 個細胞接種在含5 mL饑餓培養基(SM)的T25燒瓶中，並在5% CO2 下於37°C用直立的燒瓶孵育過夜。
對TF-1β和TF-1親代細胞進行計數，並測定活力。如果需要，將細胞在SM中稀釋至5×105 個細胞/mL，然後將1 mL懸浮液加入到24孔培養皿的6個孔/細胞系中，並在5% CO2 下於 37°C孵育。
在5% CO2 下於37°C，將處理物加入到細胞中保持30 min。將處理的細胞轉移到1.5 mL微量離心管中，並以1,500 RPM離心5 min。將細胞在1 mL PBS中洗滌，再次離心，並吸出上清液。處理試劑包括抗STAT5抗體(兔)，Cell Signaling No. 94205S；抗pSTAT5抗體(兔)，Cell Signaling No. 4322S；以及山羊抗兔IgG-HRP, Jackson Immunoresearch No. 111-035-144。
將磷酸酶和蛋白酶抑制劑混合物(Thermo No. 78442)以1:100的稀釋度加入到mPER緩衝液中。在細胞沉澱後，將50μL的mPER緩衝液加入到每個樣品中並反覆吸取混合物以均質化。
將裂解物在25°C以14,000 RPM離心5 min。將上清液轉移到乾淨的管中，並在-80°C冷凍儲存。
每個樣品的抗體、處理和工作儲液製劑提供在表20中。 表20. TF-1β和TF-1細胞中的STAT5啟動樣品
# 細胞系 處理 體積(µL) 工作儲液製劑
1 TF-1β A 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
2 TF-1β B 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
3 TF-1β C 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
4 TF-1β rhIL-2 1 ng/mL 10 100 ng/mL (1:1000的100 µg/mL儲液於SM中)
5 TF-1β 饑餓培養基1 (SM) 100 N/A
6 TF-1 A 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
7 TF-1 B 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
8 TF-1 C 10 µM 100 100 µM (1:100的10 mM儲液於SM中)
9 TF-1 rhIL-2 1 ng/mL 10 100 ng/mL (1:1000的100 µg/mL儲液於SM中)
10 TF-1 饑餓培養基1 (SM) 100 N/A
1 饑餓培養基：RPMI 1640，2.5 g/L葡萄糖(總計4.5 g/L)，5% FBS，2 mM L-穀氨醯胺，1 mM NaPyr和10 mM HEPES(沒有GM-CSF補充劑)。
最後，應注意，存在實現本文所公開的實施方案的替代方式。因此，本發明的實施方案被認為是說明性的而不是限制性的，並且請求項不限於本文給出的細節，而是可以在其範圍和等同物內進行修改。
221:Fc鏈
222:Fc鏈
223:IL-2Rβγc配體
231:重鏈
232:輕鏈
233:IL-2Rβγc配體
本文所述的附圖僅用於說明性目的。附圖並非旨在限制本公開的範圍。
圖1顯示了具有不同C/N取向的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體的IL-2Rβγc配體的實例。
圖2顯示了暴露於各種IL-2Rβγc配體的TF-1β細胞中的STAT5的磷酸化，所述IL-2Rβγc配體具有有不同C/N取向和不同配體接頭長度的不同的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體。
圖3顯示了暴露於各種IL-2Rβγc配體的NK-92細胞中的STAT5的磷酸化，所述IL-2Rβγc配體具有有C/C取向和相同IL-2Rβγc配體接頭的不同的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體。
圖4顯示了暴露於IL-2Rβγc配體的NK-92細胞中的STAT5的磷酸化，所述IL-2Rβγc配體具有有不同C/N取向的SEQ ID NO:865(BL4)的IL-2Rβ配體和SEQ ID NO:965(GL2)的IL-2Rγc配體。
圖5A和圖5B顯示了暴露於IL-2Rβγc配體的TF-1β細胞中的STAT5的磷酸化，所述IL-2Rβγc配體具有有C/N取向和相同IL-2Rβγc配體接頭的不同的IL-2Rβ配體和IL-2Rγc配體。在圖5A中，IL-2Rβ配體是(BL4)(SEQ ID NO:865)，並且與不同的IL-2Rγc配體偶聯。在圖5B中，IL-2Rγc配體是(GL2)(SEQ ID NO:965)，並且與不同的IL-2Rβ配體偶聯。
圖6顯示了暴露於IL-2Rβγc配體的NK-92細胞中的STAT5的磷酸化，所述IL-2Rβ配體具有SEQ ID NO:865(BL4)的IL-2Rβ配體和SEQ ID NO:965(GL2)的IL-2Rγc配體，具有-GGGGS–(G4S)(SEQ ID NO:9395)的氨基酸接頭(IL-2Rβγc配體(BGL21))或點擊化學衍生的含三唑的接頭 (IL-2Rβγc配體(BGL20))。
圖7A-圖7C分別顯示了在暴露於IL-2Rβγc配體(BGL21)或IL-2之後，NK-92細胞中的STAT5的磷酸化、NK-92細胞中的AKT的磷酸化和NK-92細胞中的ERK1/2的磷酸化。
圖8A和圖8B分別顯示了以活細胞數或Ki-67+細胞百分比表示的在暴露於IL-2或IL-2Rβγc配體(BGL21)之後的NK-92細胞的增殖。
圖9A-圖9C分別顯示了在暴露於IL-2或IL-2Rβγc配體(BGL21)之後，靜息CD8+ T細胞、Treg細胞或CD4+ T細胞中的STAT5的磷酸化。
圖10A和圖10B分別顯示了以Ki-67+細胞百分比和中位數螢光強度表示的在暴露於IL-2或IL-2Rβγc配體(BGL21)之後的NK-92細胞的增殖。
圖11A顯示了在與PBMC和IL-2或IL-2Rβγc配體(BGL21)共培養後，A549腫瘤細胞中PD-L1表達的上調。
圖11B和圖11C分別顯示了在與PBMC和IL-2或IL-2Rβγc配體(BGL21)共培養之後，LS180細胞中的細胞毒性百分比和COLO205細胞中的細胞毒性百分比。
圖12顯示了在暴露於IL-2或各種IL-2Rβγc配體 (BGL21)-融合蛋白之後，TF-1β細胞中的STAT5的磷酸化。
圖13顯示了在暴露於IL-2或具有不同IL-2Rβγc配體的各種IL-2Rβγc配體-Fc融合蛋白之後，TF-1β細胞中的STAT5的磷酸化。
圖14顯示了在暴露於衍生自不同IgG同種型的各種IL-2Rβγc配體(BGL21)-Fc融合蛋白之後，TF-1β細胞中的STAT5的磷酸化。
圖15顯示了在暴露於具有不同Fc接頭的IL-2Rβγc配體(BGL21)-Fc融合蛋白之後，TF-1β細胞中的STAT5的磷酸化。
圖16A和圖16B顯示了在暴露於IL-2Rβγc配體(BGL21)或暴露於具有不同Fc接頭的IL-2Rβγc配體(BGL21)-Fc融合蛋白之後，TF-1β細胞中的STAT5的磷酸化(圖16A)或NK-92細胞中的Ki-67活性百分比(圖16B)。
圖17A-圖17D顯示了在暴露於抗PD-1抗體(派姆單抗或西米普利單抗)、IL-2Rβγc配體(BGL21)-Fc融合蛋白(FP1)(SEQ ID NO:1212)或IL-2Rβγc配體(BGL21)-抗PD-1抗體(FP8)(SEQ ID NO:1219)和(FP10)(SEQ ID NO:1221)之後，TF-1β細胞中的PD-1的結合親和力(圖17A和圖17C)和如藉由STAT5的磷酸化所確定IL-2R激動劑活性(圖17B和17D)。
圖18顯示了在暴露於IL-2、IL-2Rβγc配體(BGL21)或PEG化的IL-2Rβγc配體(BGL21)之後，NK-92細胞中的STAT5的磷酸化。
圖19A-圖19C顯示了由本公開提供的某些IL-2Rβγc配體的氨基酸序列和接頭結構。如圖19A-圖19C中所示的，IL-2Rβ配體藉由接頭結構(L)與IL-2Rγc配體偶聯。例如，在IL-2Rβγc配體(BGL1)中，具有SEQ ID NO:58的IL-2Rβ配體的C末端藉由具有結構(L2)的接頭與具有SEQ ID NO:224的IL-2Rγc配體的C末端偶聯。如所述，藉由將在N末端具有H2 N–基團和在C末端具有炔基部分(AL1)的SEQ ID NO:58的IL-2Rβ配體與在N末端具有H2 N–基團和在C末端具有疊氮基部分(AZ1)的SEQ ID NO:224的IL-2Rγc配體反應來合成IL-2Rβγc配體(BGL1)。
圖20A-圖20J顯示了由本公開提供的某些IL-2Rβγc配體融合蛋白的氨基酸序列。
圖21A-圖21C提供了圖20A-圖20J中所提供的IL-2Rβγc配體構建體的亞結構的總結。
圖22A-圖22F顯示了由本公開提供的IL-2Rβγc配體fc片段融合蛋白的各種構型的實例。
圖23A-圖23F顯示了由本公開提供的IL-2Rβγc配體免疫球蛋白融合蛋白的各種構型的實例。
圖24顯示了在pH 6.0和pH 7.5下暴露於pH偏倚的IL-2Rβγc配體之後，NK-92細胞中的STAT5的磷酸化。
圖25顯示了在pH 6.0和pH 7.4下pH偏倚的IL-2Rβγc配體與IL-2Rβ亞基競爭性結合的歸一化的ELISA信號。
圖26顯示了在向小鼠施用之後，PEG-IL-2Rβγc配體構建體(PEG-1)的PK譜。
圖27-圖33分別顯示了PEG-IL-2Rβγc配體構建體PEG-1至PEG-7的實例。IL-2Rβγc配體具有SEQ ID NO:1263。
序列 ID 表
SEQ ID NO: 58 Y D C R I A Q V G E L C D L                                    
SEQ ID NO: 83 C C Y Q A M V G D L C D F C                                    
SEQ ID NO: 142 E D A L L G D F                                                      
SEQ ID NO: 169 N M C L V G D Y W P S C Q I                                    
SEQ ID NO: 170 Q I C D V G Q W W P D C Q V                                    
SEQ ID NO: 198 K V C E M W G G V L L C W N                                    
SEQ ID NO: 202 R T C T E W E N V V L C W V                                    
SEQ ID NO: 222 V M C E R W Q G V E L C W L                                    
SEQ ID NO: 224 D C S M W E G V E L C W                                          
SEQ ID NO: 236 M C W L E W G E W V G S C L                                    
SEQ ID NO: 248 D L S D L C T F W L S Q D                                       
SEQ ID NO: 266 C P S M L Q G P E R T W V C                                    
SEQ ID NO: 612 Y P C W M A Q L G E L C D L                                    
SEQ ID NO: 663 Y D C R I A Q V G E L C D L                                    
SEQ ID NO: 664 Y P C H M A Q L G E L C D L W S W G D I                  
SEQ ID NO: 671 V Q Y K K C W M A Q L G D L C E L D P S                  
SEQ ID NO: 805 X211 X212 X213 X214 C X215 X216 X217 X218 X219 X220 X221 X222 C X223 X224 X225                           
SEQ ID NO: 806 X212 X213 X214 C X215 X216 X217 X218 X219 X220 X221 X222 C X223 X224                                 
SEQ ID NO: 807 X213 X214 C X215 X216 X217 X218 X219 X220 X221 X222 C X223 X224                                    
SEQ ID NO: 808 X214 C X215 X216 X217 X218 X219 X220 X221 X222 C X223                                          
SEQ ID NO: 809 C X215 X216 X217 X218 X219 X220 X221 X222 C                                                
SEQ ID NO: 810 Q P C W L A Q V G D L C D L L W P G P L                  
SEQ ID NO: 811 W L P C W I A R L G D L C D L E                              
SEQ ID NO: 812 W Y P C W M A L L G E L C D Q E                              
SEQ ID NO: 813 W Y P C Y R A R L G E L C D L D                              
SEQ ID NO: 814 W Q R E W R W F P C W M A K L G D M C D L D            
SEQ ID NO: 815 Q D E A V E W F P C W M A R L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 816 Y Y P C W M A R L G E L C D L D                              
SEQ ID NO: 817 S V V V N N W L P C W M A Q L G E L C D L D            
SEQ ID NO: 818 W Y P C W L A Q L G D L C D L D                              
SEQ ID NO: 819 V M S P T R W L P C W I A K L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 820 W F P C W M A Q L G Q L C D L E                              
SEQ ID NO: 821 W R P C W R A Y L G E L C D L E A M P R A T            
SEQ ID NO: 822 I R S C S P C W S A D V G E L C D L E C E W            
SEQ ID NO: 823 S G H W Y P C W M A R L G E L C D M E E R A            
SEQ ID NO: 824 W Y P C W M A Q L G E L C D L Q T M G Y S H            
SEQ ID NO: 825 A G D W L P C W M A E L G E L C D L E G P T            
SEQ ID NO: 826 W L P C W I A S L G E L C D L D T G K R Q G            
SEQ ID NO: 827 W L P C W M A H L G Q L C D L D L P G K S M            
SEQ ID NO: 828 E G V F F P C W I A R L G E L C D L D H G L            
SEQ ID NO: 829 T G R W K P C W M A G L H E L C D L E G F R            
SEQ ID NO: 830 R K H F Y P C W M A Q L G E L C D L E G M P            
SEQ ID NO: 831 D I G Y Y P C W M A Q V G D L C D L D D E K            
SEQ ID NO: 832 D S D W W P C W M A Q L G E L C D L E D A R            
SEQ ID NO: 833 G E R W K P C W I A Q L G E L C D L D F N W            
SEQ ID NO: 834 W W P C W M A Q L G E M C D L E Y P Y V P G            
SEQ ID NO: 835 Q T K L E G W Y P C W M A Q L G E L C D L D            
SEQ ID NO: 836 W G R K E Q W L P C W K A Q L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 837 V P R A N A W H P C W M A Q L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 838 G R Q Q K G W Y P C W L A Q L G E L C D M E            
SEQ ID NO: 839 W L N R H L F N P C W M A R L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 840 A Q V R R E W Y P C W M A Q L G E L C D L T            
SEQ ID NO: 841 E T E Q M S W Y P C W V A Q L W E L C D L D            
SEQ ID NO: 842 W L P C W L A K L G E L C D L E                              
SEQ ID NO: 843 E R R P D T W F P C W R A L V G E L C D L E            
SEQ ID NO: 844 W G R N R S W Y P C W M A Q L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 845 Q D R R S P W Y P C W M A K L G E L C D L A            
SEQ ID NO: 846 T R R W Y P C Y L A K L G E L C D L F E G G T R      
SEQ ID NO: 847 S E Q W W P C W I A R L G E L C D L D R E L S E      
SEQ ID NO: 848 W Y P C W V A Q L G E I C D L E M T G P D S W Y P   
SEQ ID NO: 849 Q D G W L P C W M A Q L G E L C D L E Y K R            
SEQ ID NO: 850 N R R W Y P C W M A Q L G E L C D L D S R P            
SEQ ID NO: 851 F Y P C W M A H L G E L C D L D G D T D S M            
SEQ ID NO: 852 K S N F F P C W I A Q L G Q L C D L E P E T            
SEQ ID NO: 853 F Y P C W M A N L G E L C D L D F L R E L N            
SEQ ID NO: 854 H A S W L P C W L A Q L G E L C D L E P N P            
SEQ ID NO: 855 N G A W Y P C W M A Q V G E L C D L E E R W            
SEQ ID NO: 856 W R R W Y P C W V A Q V G E L C D L E I E A            
SEQ ID NO: 857 R Q A W Y P C W M A Q L G E L C D L E A E L            
SEQ ID NO: 858 R Q R W Y P C W M A R L G E L C D L D E P T            
SEQ ID NO: 859 N N S R E G W F P C W L A K L G D L C D L D            
SEQ ID NO: 860 Y Y P C W M A Q L G E L C D L E                              
SEQ ID NO: 861 W Y P C W L A Q L G E L C D L D                              
SEQ ID NO: 862 S W H A E T W Y P C W L A Q V G E L C D L D            
SEQ ID NO: 863 K M H K A V W L P C W M A Q V G E L C D L E            
SEQ ID NO: 864 D V L G D R W Y P C W I A K L G E L C D L D            
SEQ ID NO: 865 W Y P C W M A Q L G E L C D L D                              
SEQ ID NO: 866 K L Q S W R W Y P C W M A Q L G E L C D L D            
SEQ ID NO: 867 N E P E G G F Y P C W L A Q L G E L C D L H            
SEQ ID NO: 868 W Y P C W M A R L G E L C D L E                              
SEQ ID NO: 869 F Y P C W T A L L G E L C D L E P G P P A M            
SEQ ID NO: 870 W G T T W R W Y P C W M A Q L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 871 A K G W D T W K P C W L A N L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 872 R D E S A G Y Y P C W I A Q L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 873 W Y P C W I A K L G E L C D L E                              
SEQ ID NO: 874 W Y P C W I A Q L G E L C D L D                              
SEQ ID NO: 875 W Y P C W L A K L G E L C D L D                              
SEQ ID NO: 876 Q G P V R L W Y P C W M A Q L G E L C D L D            
SEQ ID NO: 877 W Y P C W M A Q P G E L C D V D                              
SEQ ID NO: 878 W H P C W I A Q L G E L C D L E                              
SEQ ID NO: 879 W Y P C W I A Q L G E L C D L E                              
SEQ ID NO: 880 V R P M G V W Y P C W I A Q L G E L C D L V            
SEQ ID NO: 881 V P R W Y P C W I A Q L G E L C D L D S D D            
SEQ ID NO: 882 Y R G W L P C W R A K L G D L C D L G Q P M            
SEQ ID NO: 883 G E A W Y P C W L A R L G E L C D M D P R V            
SEQ ID NO: 884 W Y P C W M A Q L G E L C D L D E S T R L T            
SEQ ID NO: 885 I G S W W P C W M A Q L G E L C D L E P E L            
SEQ ID NO: 886 G T T W Y P C W L A Q L G E L C D L D V L E            
SEQ ID NO: 887 W W P C W M A Q L G D L C D L E E T S G G T            
SEQ ID NO: 888 W Y P C W M A Q L G E L C D L G P T E S N L            
SEQ ID NO: 889 W Y P C W M A N L G E L C D L E Y P S W A Q            
SEQ ID NO: 890 R G M C Y P C W F A R L G E L C D L E C D Q            
SEQ ID NO: 891 W Y P C W M A Q L G E L C D L D A G A R H L            
SEQ ID NO: 892 K S G W Y P C W M A K L G E L C D L E A Q P            
SEQ ID NO: 893 G P R F Y P C W I A Q L G E L C D L E D M G            
SEQ ID NO: 894 R V T W Y P C W M A Q L G E L C D L E E S V            
SEQ ID NO: 895 W L P C W M A Q L G D L C D L E Q Y V P L P            
SEQ ID NO: 896 Y L P C W M A H L G E L C D L D S P L K A R            
SEQ ID NO: 897 W Y P C W M A Q L G E L C D L D D H W P A M            
SEQ ID NO: 898 W Y P C W R A Q L G E L C D L D P P I A V E            
SEQ ID NO: 899 W Y P C W M A N L G E L C D L E A E R S P V            
SEQ ID NO: 900 R D Q Y Y P C W M A Q L G E L C D L D E V F            
SEQ ID NO: 901 W Y P C W M A Q L G D L C D L E K P V T E R            
SEQ ID NO: 902 W Y P C W I A R L G E L C D L E T S G G F P            
SEQ ID NO: 903 S G H C Y P C W L A G L G E L C D L N C G               
                                                                                
SEQ ID NO: 911 G G Y D C R I A Q V G E L C D L G G                        
SEQ ID NO: 912 G V Q Y K K C W M A Q L G D L C E L D P S G G         
SEQ ID NO: 913 G G Y P C W M A Q L G E L C D L G G R R                  
SEQ ID NO: 9301 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G                  
SEQ ID NO: 915 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G R R            
SEQ ID NO: 916 G G Y P C H M A Q L G E L C D L W S W G D I G G R R
SEQ ID NO: 917 F Y P C W T A L L G E L C D L E P G P P A M G G      
SEQ ID NO: 918 W R R W Y P C W V A Q V G E L C D L E I E A G G      
SEQ ID NO: 919 R Q R W Y P C W M A R L G E L C D L D E P T G G      
SEQ ID NO: 920 W Y P C W M A Q L G D L C D L E K P V T E R G G      
SEQ ID NO: 9308 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D                        
SEQ ID NO: 921 G G F Y P C W T A L L G E L C D L E P G P P A M G G
SEQ ID NO: 922 G G W G T T W R W Y P C W M A Q L G E L C D L E G G
SEQ ID NO: 923 G G D V L G D R W Y P C W I A K G E L C D L D G G   
SEQ ID NO: 924 G G W P C W I A Q L G E L C D L D G G                     
SEQ ID NO: 925 G G W Y P C W L A K L G E L C D L D G G                  
SEQ ID NO: 926 G G W Y P C W M A Q L G D L C D L E K P V T E R G G
SEQ ID NO: 927 G G W R R W Y P C W V A Q V G E L C D L E I E A G G
SEQ ID NO: 928 G G R Q R W Y P C W M A R L G E L C D L D E P T G G
SEQ ID NO: 929 G G V Q Y K K C W M A Q L G D L C E L D P S G G      
SEQ ID NO: 930 G G Y P C H M A Q L G E L C D L W S W G D I G G      
                                                                                
SEQ ID NO: 944 X171 X172 X173 X174 X175 C X176 X177 X178 X179 X180 X181 X182 X183 C X184 X185 X186 X187 X188                  
SEQ ID NO: 945 X172 X173 X174 X175 C X176 X177 X178 X179 X180 X181 X182 X183 C X184 X185 X186 X187                        
SEQ ID NO: 946 X173 X174 X175 C X176 X177 X178 X179 X180 X181 X182 X183 C X184 X185 X186                              
SEQ ID NO: 947 X174 X175 C X176 X177 X178 X179 X180 X181 X182 X183 C X184 X185                                    
SEQ ID NO: 948 X175 C X176 X177 X178 X179 X180 X181 X182 X183 C X184                                          
SEQ ID NO: 949 C X176 X177 X178 X179 X180 X181 X182 X183 C                                                
SEQ ID NO: 950 I E C D T S Y G V Y I C W Q                                    
SEQ ID NO: 951 I E C E E W R G V E L C W Q                                    
SEQ ID NO: 952 P E G R E V V V C R D W Y G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 953 I W G R T V V E C Q D W E G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 954 L A L R K E V V C Q E Y Y G V E L C W I                  
SEQ ID NO: 955 H E A R E V V V C Q D W Y G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 956 M V N R E V V V C E D W Y G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 957 T A N Q T V V E C Q V W G G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 958 V E C Q E W G G V E L C W C                                    
SEQ ID NO: 959 D V E C V D W G G V E L C W H                                 
SEQ ID NO: 960 I V C E E W R G V E L C W L                                    
SEQ ID NO: 961 D F E R S Y V V C Q D W D G V E L C W I                  
SEQ ID NO: 962 A H S R Q E V V C E E W Y G V E L C W I                  
SEQ ID NO: 963 S A P E R W V E C E D W Q G V E L C W V                  
SEQ ID NO: 964 Y S R E L Y V Q C E D W E G V E L C W I                  
SEQ ID NO: 965 V V C Q D W E G V E L C W Q                                    
SEQ ID NO: 966 D V V C Q N W E G V D L C W H                                 
SEQ ID NO: 967 S A G R Q E V V C Q D W N G V E L C W I                  
SEQ ID NO: 968 G Q G R E V V V C H D W Y G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 969 D W R R S V V E C Q D W Y G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 970 D V V C Q N W D G V D L C W H                                 
SEQ ID NO: 971 T L G R T V V E C Q D W G G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 972 R L L N S V V E C L D W E G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 973 I V C E D W R G V E L C W I                                    
SEQ ID NO: 974 V V C Q E W E G V E L C W C                                    
SEQ ID NO: 975 G D R P K E V V C E D W K G V E L C W I                  
SEQ ID NO: 976 E R P R S F I E C Q E W E G V E L C W L                  
SEQ ID NO: 977 E G S T T T I E C E E W A G V E L C W L                  
SEQ ID NO: 978 A N Q N T V V E C Q D W H G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 979 R S D D E V V V C Q E W E G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 980 I E C E E W A G V E L C W L                                    
SEQ ID NO: 981 T W N M S E L E C Q D W N G V E I C W H                  
SEQ ID NO: 982 G N D D S Y I V C E E W K G V E L C W I                  
SEQ ID NO: 983 F A H H G V V E C Q E W Y G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 984 L N R S V W I E C E E Y E G V E L C W L                  
SEQ ID NO: 985 W S K K A E V V C E E W G G V E F C W I                  
SEQ ID NO: 986 R S N Q T V V E C Q D W E G V E L C W Q                  
SEQ ID NO: 987 V V C Q E W E G V E L C W Y A G E C M Q                  
SEQ ID NO: 988 I L C Q E F E G V E L C W L E E S L A E                  
SEQ ID NO: 989 K S Q V E C Q D W E G V E L C W V V S E                  
SEQ ID NO: 990 K I T V E C Q D W D G V E L C W P T W I                  
SEQ ID NO: 991 R P Q I E C Q E W Q G V E L C W T R E E                  
SEQ ID NO: 992 V S C Q E W D G V E L C W V D G D L A A                  
SEQ ID NO: 993 I M C Q E W D G V E L C W L E R D K A N                  
SEQ ID NO: 994 G L E I A C E D W Y G V E L C W L R R A                  
SEQ ID NO: 995 G Y G V L C Q E W Q G V E L C W P V Q R E A G V      
SEQ ID NO: 996 P Y G V V C Q D W A G V E L C W V E N R                  
SEQ ID NO: 997 K L T V E C Q D W D G V E L C W V G V E                  
SEQ ID NO: 998 I N C Q T W N G V E L C W V D E G L Y Q                  
SEQ ID NO: 999 V V C Q E W E G V E L C W V E P P L L P                  
SEQ ID NO: 1000 R V Q V E C E D W N G V E L C W P V R V                  
SEQ ID NO: 1001 D R Q V V C E E W D G V E L C W I E E S                  
SEQ ID NO: 1002 K T T V A C Q D W G G V E L C W V E R V                  
SEQ ID NO: 1003 R P E V V C Q E W E G V E L C W I S P L                  
SEQ ID NO: 1004 R L G V E C Q E W E G V D L C W I S A F                  
SEQ ID NO: 1005 K P V V V C E E W Q G V E L C W L E I Q                  
SEQ ID NO: 1006 V V C E V F Q G V E L C W C E N E E F T                  
SEQ ID NO: 1007 T D E V S C Q E W E G V E L C W I E R Q                  
SEQ ID NO: 1008 P V E V R C Q E W E G V E L C W V V G I                  
SEQ ID NO: 1009 G P E V V C E E F N R V E L C W V E Y N                  
SEQ ID NO: 1010 K Y I V E C Q E W G G V E L C W P E M V                  
SEQ ID NO: 1011 V T C Q E Y E G V E L C W T V G C A Y S                  
SEQ ID NO: 1012 V V C Q E W E G V E L C W Q T G P G A H A               
SEQ ID NO: 1013 I V C E E Y N G V E L C W V E T S V K P                  
SEQ ID NO: 1014 E Q Q V V C Q E W N G V E L C W I E A G                  
SEQ ID NO: 1015 Q L G V E C Q N W R G V E L C W V S E I                  
SEQ ID NO: 1016 T A E V V C Q E W D G V E L C W I E V L                  
SEQ ID NO: 1017 S P S I V C E E W A G V E L C W V D Y S                  
SEQ ID NO: 1018 A V C Q D W Y G V E L C W C M Q D I L D                  
SEQ ID NO: 1019 V E C E E W G G V E L C W L A D E V M W                  
SEQ ID NO: 1020 H S T V I C Q D W D G V E L C W I E N D                  
SEQ ID NO: 1021 K K I V V C Q D W G G V E L C W T E D D                  
SEQ ID NO: 1022 S V E V V C E E W H G V E L C W P V F I                  
SEQ ID NO: 1023 R W A V S C Q D W Q G I E L C W P E W D                  
SEQ ID NO: 1024 R T G V E C Q D W H G V E L C W P V W E                  
SEQ ID NO: 1025 G Y G V V C E D F R G V E L C W L E R K                  
SEQ ID NO: 1026 R T E V E C E D W E G V E L C W L                           
SEQ ID NO: 1027 I L C E E W Q G V E L C W L E G G G S                     
SEQ ID NO: 1028 V G I E C E E W A G V E L C W L                              
                                                                                
SEQ ID NO: 1032 S L L K C Y N A S T C A S V F                                 
                                                                                
SEQ ID NO: 1034 C G M A I G D L C M W T                                          
SEQ ID NO: 1042 R W G D V G D L L M P L                                          
SEQ ID NO: 1044 R S C Y Y K R P R L W C S E                                    
                                                                                
SEQ ID NO: 1051 D C S M W E G V E L C W G G R R                              
SEQ ID NO: 1052 G G V V C Q D W E G V E L C W Q G G R R                  
SEQ ID NO: 1053 G G V M C E R W Q G V E L C W L G G                        
SEQ ID NO: 1054 G G R T G V E C Q D W H G V E L C W P V W E G G      
SEQ ID NO: 1055 G G V G I E C E E W A G V E L C W L G G                  
SEQ ID NO: 1056 G G T W N M S E L E C Q D W N G V E I C W H G G      
SEQ ID NO: 1057 G G R T E V E C E D W E G V E L C W L G G               
SEQ ID NO: 1058 G G W S K K A E V V C E E W G G V E F C W I G G      
SEQ ID NO: 1059 W S K K A E V V C E E W G G V E F C W I                  
SEQ ID NO: 1060 Y S R E L Y V Q C E D W E G V E L C W I                  
                                                                                
SEQ ID NO: 1209 G W H P C W I A Q L G E L C D L E G                        
SEQ ID NO: 1210 G G W H P C W I A Q L G E L C D L E G G                  
SEQ ID NO: 1211 G G G W H P C W I A Q L G E L C D L E G G G            
                                                                                
SEQ ID NO: 1212 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1213 AEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1214 APPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLGSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1215 GGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGGGGSGGGGSGGGGSRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK         
SEQ ID NO: 1216 GITVAEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1217 EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG         
SEQ ID NO: 1218 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC         
SEQ ID NO: 1219 QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGAGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1220 DIQMTQSPSSLSASVGDSITITCRASLSINTFLNWYQQKPGKAPNLLIYAASSLHGGVPSRFSGSGSGTDFTLTIRTLQPEDFATYYCQQSSNTPFTFGPGTVVDFRRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC         
SEQ ID NO: 1221 EVQLLESGGVLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNFGMTWVRQAPGKGLEWVSGISGGGRDTYFADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLKGEDTAVYYCVKWGNIYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGAGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1222 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCSASSSISYMHWYQQKPGKAPKLLIYTTSNLASGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCHQRSTYPLTFGQGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC         
SEQ ID NO: 1223 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYRMHWVRQAPGQGLEWIGYINPSTGYTEYNQKFKDKATITADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGGVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1224 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1225 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1226 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1227 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1228 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1229 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1230 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1231 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGGGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1232 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1233 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTPAPAPAPAPAGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1234 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1235 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1236 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGVQYKKCWMAQLGDLCELDPSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1237 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGYPCHMAQLGELCDLWSWGDIGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1238 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGYPCWMAQLGELCDLGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1239 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGWSKKAEVVCEEWGGVEFCWIGG         
SEQ ID NO: 1240 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGRTGVECQDWHGVELCWPVWEGG         
SEQ ID NO: 1241 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVGIECEEWAGVELCWLGG         
SEQ ID NO: 1242 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGTWNMSELECQDWNGVEICWHGG         
SEQ ID NO: 1243 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGRTEVECEDWEGVELCWLGG         
SEQ ID NO: 1244 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGFYPCWTALLGELCDLEPGPPAMGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1245 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWGTTWRWYPCWMAQLGELCDLEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1246 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGDVLGDRWYPCWIAKLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1247 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWIAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1248 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWLAKLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1249 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGDLCDLEKPVTERGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1250 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGWRRWYPCWVAQVGELCDLEIEAGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1251 APLERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGARTGGGGSGGGGSGGRQRWYPCWMARLGELCDLDEPTGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1252 GGHHHHHHGGDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLRTGGGGSGGGGSGGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG         
SEQ ID NO: 1263 –GGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG–      
SEQ ID NO: 1264 –WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ–      
SEQ ID NO: 1265 –WYPCWMAQLGELCDLDGG–X300 –GGVVCQDWEGVELCWQ–      
SEQ ID NO: 1266 –WYPCWMAQLGELCDLD–X301 –VVCQDWEGVELCWQ–      
SEQ ID NO: 1267 –GWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQG–      
SEQ ID NO: 1268 –GGWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQG–      
SEQ ID NO: 1269 –GWYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG–      
SEQ ID NO: 1270 –(X301 )n ) –WYPCWMAQLGELCDLD–X300 –VVCQDWEGVELCWQ–(X301 )n –      
SEQ ID NO: 1601 G G D C S M W E G V E L C W G G                        
SEQ ID NO: 1602 G G V M C E R W Q G V E L C W L G G                  
SEQ ID NO: 1603 G G V G I E C E E W A G V E L C W L G G            
SEQ ID NO: 1604 G G T W N M S E L E C Q D W N G V E I C W H G G
SEQ ID NO: 1605 G G R T E V E C E D W E G V E L C W L G G         
SEQ ID NO: 1606 G G R T G V E C Q D W H G V E L C W P V W E G G
SEQ ID NO: 1607 G G V V C Q D W E G V Abu L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1608 G G V V C Q D W E G V Alb L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1609 G G V V C Q D W E G V DA L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1610 G G V V C Q D W E G V S L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1611 G G V V C Q D W E G V G L C W Q G G                  
SEQ ID NO: 1612 G G V V C Q D W E G V E L C W Q P P A               
SEQ ID NO: 1613 G G V V C Q D W E G V E L C W Q G P P A            
SEQ ID NO: 2575 –X1 –X2 –X3 –C–X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –C–X12 –X13 –X14 –        
SEQ ID NO: 2576 –X2 –X3 –C–X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –C–X12 –X13 –      
SEQ ID NO: 2577 –X3 –C–X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –C–X12 –      
SEQ ID NO: 2578 –C–X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –C–      
SEQ ID NO: 2579 –X4 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –      
SEQ ID NO: 2580 V R A W Y P C W I A R L G E L C D L E V D            
SEQ ID NO: 2581 W F P C W M A Q L G E V C D L D                           
SEQ ID NO: 2582 W Y P C H M A K L R E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2583 S L P C W M A Q L G D L C E L H                           
SEQ ID NO: 2584 S N P C W M A Q L W E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2585 Y K P C W I A Q L G E L C E L E                           
SEQ ID NO: 2586 W Q P C W M A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2587 W K P C W L A Q L G D L C E M E                           
SEQ ID NO: 2588 W L P C W M A K L G D L C E L E                           
SEQ ID NO: 2589 W L P C W M A Q L G E L C V M E                           
SEQ ID NO: 2590 L H P C W M A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2591 S L P C W M A Q L G E L C D L V                           
SEQ ID NO: 2592 W K P C W M A G L G E L C E L D                           
SEQ ID NO: 2593 W W P C S S A E L G E I C D F D                           
SEQ ID NO: 2594 W Q P C W R A K L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2595 W S P C W I A T L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2596 W N P C W I A Q L G D L C D M V                           
SEQ ID NO: 2597 W L P C W L A H L G D I C D L Q                           
SEQ ID NO: 2598 W L S P P S Y L P C W M A Q L G E L C D L V         
SEQ ID NO: 2599 W D V H A I R N P C W L A K L G D L C D L D         
SEQ ID NO: 2600 G A G V L H R W P C W M A K L G D L C D L D         
SEQ ID NO: 2601 D T G R D G W K P C W M A L L G E L C E L E         
SEQ ID NO: 2602 E Q G M L G Y F P C W K A L L G D V C D L D         
SEQ ID NO: 2603 W R V T A S L Q P C W M A Q L G E L C D L N         
SEQ ID NO: 2604 G Q V V E T S L P C W E A Q L G E L C V L D         
SEQ ID NO: 2605 T V G Q F E W Y P C S T A Q L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2606 A L V G G T F Y P C Y V A H L G E L C D I E         
SEQ ID NO: 2607 I D R A D G W K P C W I A Q V G E L C V L E         
SEQ ID NO: 2608 Y R R E R V E F P C W L A Q L G E L C D K E         
SEQ ID NO: 2609 A V S H G N W L P C Y I A Q L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2610 I P K G E S W F P C W M A A M G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2611 W Y P C W I A Q L G E V C D L E K Q T G S V         
SEQ ID NO: 2612 W Y P C W M A H L G D V C D L E S F G Q T E         
SEQ ID NO: 2613 Y K P C Q M A Q L G E L C D L D V D N K A E         
SEQ ID NO: 2614 F K P C W I A N L G E L C D M D D E R S S E         
SEQ ID NO: 2615 W K P C W M A R L G E L C D I E D T K V N A         
SEQ ID NO: 2616 S L P C W I A R L G E L C D L D G Y D G E E         
SEQ ID NO: 2617 F Y P C W K A R L G E L C E L E E L R G Y Y         
SEQ ID NO: 2618 W K P C W I A D L G E L C D L A P A W H E Y         
SEQ ID NO: 2619 R L P C W R A Q L G D L C E L D W G L D M G         
SEQ ID NO: 2620 S K P C W M A Q L G E L C D L D V W N L Q M         
SEQ ID NO: 2621 G Y P C W L A Q L G D Y C D L D A G A P S W         
SEQ ID NO: 2622 S W P C W M A Q L G D L C D L D G S A G A S         
SEQ ID NO: 2623 W K P C W L A Q L G E L C D L E R P S T T S         
SEQ ID NO: 2624 W Y S C G K A Q L G E L C D L D V E S Q P G         
SEQ ID NO: 2625 Y V P C Y M A R L G E L C E L E A N R P G Q         
SEQ ID NO: 2626 S K P C W L A Q L G D L C D F D W T A A D H         
SEQ ID NO: 2627 W F P C W M A Q L G D L C E L E P D S V P A         
SEQ ID NO: 2628 W T P C W I A H L G D L C D L E P Q D D T D         
SEQ ID NO: 2629 W K P C F I A S L G E L C D L D Q G S V E V         
SEQ ID NO: 2630 W K P C W M A A L G E L C D L E R S V G K V         
SEQ ID NO: 2631 W K P C W R A Q L G E L C D L E L G P S E R         
SEQ ID NO: 2632 F F P C W M G Q L G D L C D L E V R S M Q K         
SEQ ID NO: 2633 Y W P C S M A S L G E L C D L E W Q G R L P         
SEQ ID NO: 2634 W Y P C Y M A S L G E L C D L Q S S I S P R         
SEQ ID NO: 2635 W Y P C W M A Q L G E L C D H E W P S Y G A         
SEQ ID NO: 2636 M G S W L P C W M A Q L G D L C D V E G G M         
SEQ ID NO: 2637 Q K G F L P C W R A Q L G Q L C D M E S Q Y         
SEQ ID NO: 2638 G S G W Q P C W M A D L G E L C D L D N E K         
SEQ ID NO: 2639 W R R W Y P C W M A Q L G E L C D L D Q W T         
SEQ ID NO: 2640 R R S W Y P C R I A Q L G E L C D L D P R V         
SEQ ID NO: 2641 A Y R I Y P C W K A Q L G E L C D L D N A D         
SEQ ID NO: 2642 Q R N S F P C W L A Q L G D L C D L G D W A         
SEQ ID NO: 2643 Q P A W L P C W L A Q L G E L C D L G T G A         
SEQ ID NO: 2644 S R F W Q P C W M A Q L G E L C H L D P Q M         
SEQ ID NO: 2645 Y L N F N P C W T A Q L G E L C D L A S G E         
SEQ ID NO: 2646 S T G W Y P C W I A E F G E L C D L V K P H         
SEQ ID NO: 2647 A H W S Q P C W T A Q L G E L C D L D M G D         
SEQ ID NO: 2648 H P V R Y P C W V A Q L G E L C D L E N G N         
SEQ ID NO: 2649 Q T G S Y P C W I A H L G E L C D L E G S A         
SEQ ID NO: 2650 T G W W Y P C W M A Q L G E L C D L Q Q T            
SEQ ID NO: 2651 D L W Q P C W M A R L G E L C D L K G                  
SEQ ID NO: 2652 M G T G W Q N Y C R Y A Q L G E L C L L               
SEQ ID NO: 2653 W Y P C G V A Q P G D L C D L E                           
SEQ ID NO: 2654 M L G E W L C E M D Q L G Y L C Y L D H G D         
SEQ ID NO: 2655 W D G W E C G M D H D G W V C E F W G E               
                                                                             
SEQ ID NO: 2661 –X1 –X2 –X3 –X4 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–X13 –X14 –X15 –X16 –X17 –      
SEQ ID NO: 2662 –X2 –X3 –X4 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–X13 –X14 –X15 –      
SEQ ID NO: 2663 –X3 –X4 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–X13 –X14 –      
SEQ ID NO: 2664 –X4 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–X13 –      
SEQ ID NO: 2665 –C–X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –C–      
SEQ ID NO: 2666 –X5 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –      
SEQ ID NO: 2667 W Y P C W I A Q L G E L C D L D A K G Q R R         
SEQ ID NO: 2668 T N N F Y P C W L A K L G D L C D F D D L N         
SEQ ID NO: 2669 W Y P C W I A R V G E L C D L E E G P V N R         
SEQ ID NO: 2670 A V E F Y P C W L A R I G E L C D L V E P            
SEQ ID NO: 2671 W Y P C W I A H L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2672 W Y P C W I A R V G E L C D M E                           
SEQ ID NO: 2673 R R E W Y P C W I A Q V G E L C D L P L I            
SEQ ID NO: 2674 R W P W Y P C E I A R I G E L C D L E Q A N         
SEQ ID NO: 2675 F G A F Y P C W K A Q L G E L C D L E P V T         
SEQ ID NO: 2676 H G R W F P C W M A Q V G D L C D L E H S N         
SEQ ID NO: 2677 W Y P C W L A K L G E L C D L D R A E A L P         
SEQ ID NO: 2678 V W F P C W F A Q L G D L C D L D Q D P               
SEQ ID NO: 2679 E T L G S V W Y P C W I A S I G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2680 W Y S C W I A Q L G E L C D L D D M G D R V         
SEQ ID NO: 2681 W F P C W L A Q L G E L C D K E                           
SEQ ID NO: 2682 W Y P C W I A Q L G E L C D L V                           
SEQ ID NO: 2683 S H L W F P C W M A Q L G E L C D L E G G P         
SEQ ID NO: 2684 R R W L P C W M A H V G E L C D L E L G N            
SEQ ID NO: 2685 Y W C W F A R V G E L C D L D D G G V P S            
SEQ ID NO: 2686 W Y S C W I A Q I G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2687 M N P V G T F Y P C W I A K L G E L C D L Q         
SEQ ID NO: 2688 H G G V I G W Y P C W M A K V G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2689 W Y P C S I A L L G E L C D L E S V H E K S         
SEQ ID NO: 2690 E Q R N R Q W W P C W L A R L G D L C D L D         
SEQ ID NO: 2691 W Y P C W L A Q L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2692 W L P C W M A H L G D L C D L E                           
SEQ ID NO: 2693 R P S W A P C W L A Q V G E L C D L D H P E         
SEQ ID NO: 2694 E S K E P A F W P C W M A Q L G D L C D L E         
SEQ ID NO: 2695 R S L R E S W F P C W M A K L G D L C D L E         
SEQ ID NO: 2696 W H P C W L A R V G D L C D L D                           
SEQ ID NO: 2697 S R S A G E Y Y P C W L A Q L G E L C D L A         
SEQ ID NO: 2698 R Q V P K Q W Y P C W M A A L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2699 W Y P C W L A H L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2700 Q V M R L W Y P C W M A Q L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 2701 W Y P C W M A Q L G E L C D L D E A P V Q P         
SEQ ID NO: 2702 R D I W W P C W V A Q L G E L C D L D D P Q         
SEQ ID NO: 2703 S A T W Y P C F L A N L G E L C D L E Q E N         
SEQ ID NO: 2704 Y A E W Y P C W M A R V G E V C D L E V T P         
SEQ ID NO: 2705 R S G D K A F F P C W L A Q L G D L C D L D         
SEQ ID NO: 2706 W Y P C W M A Q L G E L C D M D                           
SEQ ID NO: 2707 R V S Y P C W L A R L G E L C D M D L E E            
SEQ ID NO: 2708 T E S W Y P C W L A N L G D L C D L E W S A         
SEQ ID NO: 2709 W L P C W M A D V G D L C D L D                           
SEQ ID NO: 2710 W H P C W M A R L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2711 Q G T K W H W N P C W M A Q L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2712 K N G P K S W Y P C W M A Q V G D L C D L D         
SEQ ID NO: 2713 S G T G P A W Y P C F L A S L G Q L C D L E         
SEQ ID NO: 2714 W Y P C W M A R M G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2715 W L P C W R A Q L G Q L C D L D                           
SEQ ID NO: 2716 L F P C W L A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2717 R Y P C W I A Q L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2718 W H P C W I A H L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2719 M Y P C W I A H L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2720 W Y P C S I A S L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2721 W L P C Y M A Q L G D L C D L E                           
SEQ ID NO: 2722 W H P C W M A Q V G E V C D L D                           
SEQ ID NO: 2723 W Y P C W L A S L G E V C D L E                           
SEQ ID NO: 2724 W W P C S I A R L G Q L C D L D                           
SEQ ID NO: 2725 W Y P C W L A H L G E L C D L A                           
SEQ ID NO: 2726 W Y P C W L A Q L G E L C D A E                           
SEQ ID NO: 2727 W K P C W M A L L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2728 R Y P C W R A K L G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2729 E E Q S R G F L P C W M A L L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2730 L G S K R Q W Y P C W V A H L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2731 E S E G R G W Y P C W N A L L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2732 R W T Q A Q W Y P C W L A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2733 L H A G R W N P C W L A Q L G E L C D L E            
SEQ ID NO: 2734 L S S K G W Y P C W K A R L G D L C D L E            
SEQ ID NO: 2735 D M F T H R W Y P C S M A K L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2736 M T D R A F W N P C W V A R L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2737 N V T Y T Q W F P C W L A R L G E L C D L V         
SEQ ID NO: 2738 V R T R I W Y P C W S A Q L G E L C D L D            
SEQ ID NO: 2739 A M A R R Y L P C W I A K L G E L C E L D            
SEQ ID NO: 2740 A R G E Y R W F P C W M A R L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2741 Y L E R S R W Y P C F I A Q L G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2742 F R V S R D W F P C W M A Q L G E V C D L E         
SEQ ID NO: 2743 I E R A W E W R P C W L A S V G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2744 V A S E R F Y P C W I A R L G E L C D V E            
SEQ ID NO: 2745 W Y P C W I A K L G E V C D L D Q G T T R Q         
SEQ ID NO: 2746 W Y P C W L A H L G E L C D L D W K G R N D         
SEQ ID NO: 2747 W Y P C W R A Q L G E L C D L V D L G S H L         
SEQ ID NO: 2748 W S P C W M A S L G D L C D L E E T R Q T E         
SEQ ID NO: 2749 W T P C W I A Q L G E L C D L E G R H G T V         
SEQ ID NO: 2750 L P C W I A Q L G D L C D L E P E P S P E            
SEQ ID NO: 2751 F Y P C W A A H L G D L C D L E Y Q E A G P         
SEQ ID NO: 2752 W L P C W L A P L G D L C D M D M S A V M N         
SEQ ID NO: 2753 W R P C W M A H L G D L C D L E M A N E N P         
SEQ ID NO: 2754 W Y P C W L A Q L G E V C D L D D G G G V F         
SEQ ID NO: 2755 W W P C W L A Q L G E L C D L E V N G S L I         
SEQ ID NO: 2756 T E M W Y P C W M A Y Q G E L C D L D M T Y         
SEQ ID NO: 2757 A R T W W P C W R A K L G E L C D L V V P E         
SEQ ID NO: 2758 H Q G F Y S C R L A R L G E L C D L D T G W         
SEQ ID NO: 2759 V D E F Y P C S M A G L G E L C D L E R Q N         
SEQ ID NO: 2760 A W D W Y P C S V A A L G E I C D L D I Q D         
SEQ ID NO: 2761 R P P W Y P C W M A R L G E V C D M D I M L         
SEQ ID NO: 2762 S Q R W Y P C W V A H L G E L C D L E G V V         
SEQ ID NO: 2763 K G S W Q P C W F A K L G E L C D L H P T S         
SEQ ID NO: 2764 Q T W Y L P C W M A K L G E L C D L G E R D         
SEQ ID NO: 2765 E P R W Y P C W M A Q M G E L C D M E M S D         
SEQ ID NO: 2766 W G G R Y W C W M A K L G D L C D L E D E W         
SEQ ID NO: 2767 W W P C W I A Q V G E L C D L D G P G R P T         
SEQ ID NO: 2768 R L V Y D C L F A Q V G D L C E V I S                  
SEQ ID NO: 2769 W R I L W M Q Q C W R S H V V N Q C A L               
SEQ ID NO: 2770 W Y P C W I A Q V G E L C D L D E V S H G R         
SEQ ID NO: 2771 T G E W W P C W V A E V G E L C D L E R G P         
SEQ ID NO: 2772 A R T Q G W Y D C L F A Q V G E L C D L               
SEQ ID NO: 2773 F H P C W R A L L G E L C D L E T A L G P S         
SEQ ID NO: 2774 L Q I R K L W A C R I D L V G P F C L L               
SEQ ID NO: 2775 A E Y S G R Y D C Y I A K V G E L C D I               
SEQ ID NO: 2776 S W R F L W Q D C G R A H V G E L C D L               
SEQ ID NO: 2777 N R W W H P C W M A R V G E L C D L E P D A         
SEQ ID NO: 2778 W W P C W V A K L G E L C D L E G D A S R V         
SEQ ID NO: 2779 W Y P C E F A Q L G E L C D L L P F P Y P A         
SEQ ID NO: 2780 S Y M H D C F M A Q V G D L C D R F I S               
SEQ ID NO: 2781 W W P C W I A Q V G E L C D L E E E S R E S         
SEQ ID NO: 2782 K W A W N P C Y I A R L G E L C D L V E P E         
SEQ ID NO: 2783 W W P C W I A D L G E L C D L E G P P R G R         
SEQ ID NO: 2784 P T L I T W Y D C L F A E V G E L C D M               
SEQ ID NO: 2785 E I S N W F L D C M F A D V G D L C D L               
SEQ ID NO: 2786 A Q V W Y P C W L A K V G E L C D L D Q W N         
SEQ ID NO: 2787 F G G K M D W Y P C W I A N L G E L C D L K         
SEQ ID NO: 2788 W F P C W M A K V G D L C D V D E H Q D P S         
SEQ ID NO: 2789 M G D S S S W F P C W M A Q L G E L C D M E         
SEQ ID NO: 2790 M F R Y Y P C W I A S I G E L C D L E W G V         
SEQ ID NO: 2791 E R R W Y P C W L A S V G E L C D L D M G D         
SEQ ID NO: 2792 W Y P C W V A Q L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2793 R W D Y W P C Y I A Q V G E L C D L E V Y E         
SEQ ID NO: 2794 S L A H R S W Y P C W L A Q V G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2795 Q N A S K G W Y P C W I A H V G E L C D W D         
SEQ ID NO: 2796 H R W Y P C W L A H L G E L C D L D P M S            
SEQ ID NO: 2797 F Y P C W I A F V G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2798 E G H W Y P C W I A Q L G E L C D L D W               
SEQ ID NO: 2799 W T G W S A F Y P C S I A N L G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2800 W E K L Q N W Y P C W I A Q M G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2801 T N G V L D W W P C W M A Q V G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2802 W Y P C W V A K L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2803 A Y Y P C E L A Q L G E L C D L Y N I                  
SEQ ID NO: 2804 W Y P C W M A H L G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2805 N D H T A W W P C Y F A Q V G D L C D L V            
SEQ ID NO: 2806 W W P C E I A Q I G E L C D L E W V R H A E         
SEQ ID NO: 2807 W W P C D F A Q I G E L C D L G P R F T G E         
SEQ ID NO: 2808 R D W W L P C E F A L I G E L C D L E R S W         
SEQ ID NO: 2809 M R T T F W Y D C Y I A Q V G E L C D F               
SEQ ID NO: 2810 S W H A E T W Y P C W L A Q V G E L C D L D         
SEQ ID NO: 2811 E W F H D C F L A K V G D L C D L F L W               
SEQ ID NO: 2812 S G K T Q M W N P C Y V A K V G E L C D L V         
SEQ ID NO: 2813 D K A G P N F Y P C W L A H V G E L C D Q A         
SEQ ID NO: 2814 A G F R G R W W P C E Y A Q V G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2815 W F P C W L A K V G E L C D R D D L A G P S         
SEQ ID NO: 2816 W W P C E W A R I G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2817 K G S S W F P C Y F A Q V G D L C D L Y               
SEQ ID NO: 2818 W Y P C W L A Q V G E L C D R E                           
SEQ ID NO: 2819 R G V Y F P C W L A K V G D L C D S D E F            
SEQ ID NO: 2820 R A W W W P C E L A Q V G E L C D L E P S S         
SEQ ID NO: 2821 W Y P C W L A K V G E L C D Q E                           
SEQ ID NO: 2822 R Y V P D C L K A Q V G D L C D F F A W               
SEQ ID NO: 2823 W W P C Y L A Q I G E L C D L V                           
SEQ ID NO: 2824 W Y P C W M A K V G E L C D M E                           
SEQ ID NO: 2825 Q I T D S G W Y P C W V A K V G E L C D M D         
SEQ ID NO: 2826 Y R W W Y P C D I A Q V G E L C D L D Y L L         
SEQ ID NO: 2827 C Y M H D C F M A Q V G D L C D R F I S               
SEQ ID NO: 2828 W L P C W I A K I G D L C D L D                           
SEQ ID NO: 2829 S R V W H P C W L A R V G E L C D L E V S D         
SEQ ID NO: 2830 W E H E F T W Y P C W I A Q V G E L C D M D         
SEQ ID NO: 2818 H R G W V G W Y P C E Y A L P G Q L C D L E         
SEQ ID NO: 2832 W Y P C W L A Q L G E L C D Q D W D T P S            
SEQ ID NO: 2833 R V R R H S W W P C E I A V V G E L C D L E         
SEQ ID NO: 2834 D G W W P C W I A Q V G E L C D L E D P V            
SEQ ID NO: 2835 L P F Q D C Y I A Q V G E L C D L P G T               
SEQ ID NO: 2836 R W M F D C L F A R V G E L C D I R P W               
SEQ ID NO: 2837 G G Y Y D C L I A E V G E L C D M P G Q               
SEQ ID NO: 2838 V V C Y A C D I A H V G E L C D L T C R               
SEQ ID NO: 2839 T P W Y D C Y I A N V G D L C D F A S A               
SEQ ID NO: 2840 L E S L D C F F A R I G D L C E I W D V               
SEQ ID NO: 2841 W Q I F D C Y L A Q V G E L C D L Q D T               
SEQ ID NO: 2842 G R Y P D C Y I A H V G E L C E F Y D G               
SEQ ID NO: 2843 F G D D F C R F I P L F E M C T T D V E               
SEQ ID NO: 2844 L V Y Y D C Y M A Q V G E L C D L P S L               
SEQ ID NO: 2845 V S R Y D C Y I A K V G E L C D F F E F               
SEQ ID NO: 2846 V T V Q D C Y F A R V G D L C D L F S P               
SEQ ID NO: 2847 W E W Y D C L M A Q V G E L C D F E G N               
SEQ ID NO: 2848 W A F Y D C R N A Q V G D F C D L W E F               
SEQ ID NO: 2849 S M D Q D C Y F A Q V G E L C V L F N Q               
SEQ ID NO: 2850 G G Y Y D C L I A E V G E L C D I Y G R               
SEQ ID NO: 2851 S N W H D C L F A Q V G E L C D L P G S               
SEQ ID NO: 2852 Y D C Y I A Q V G E L C D I                                 
SEQ ID NO: 2853 S W L S D L Q D C Y I A Q V G D L C Q I               
SEQ ID NO: 2854                                                                           
SEQ ID NO: 2855 R L A S D W W D C Y I A K V G E L C D F               
SEQ ID NO: 2856 R L L R D C F L A K V G D L C E L F V W               
SEQ ID NO: 2857 Q W F H N C F L A R V G D T C D L F L W               
SEQ ID NO: 2858 E L L V D C F K V K V G E L C D L F F G               
SEQ ID NO: 2859 R Y V H D C F I A Q V G D L C D L F L H               
SEQ ID NO: 2860 K W V H D C F L A K V G D V C D L F V V               
SEQ ID NO: 2861 R S L V D C F L V K V G D L C D F F N W               
SEQ ID NO: 2862 R Y L Y D C F L A L V G D L C V K F H Q               
SEQ ID NO: 2863 A H F Y D C F W A K A G E L C D L W P S               
SEQ ID NO: 2864 K W F H D C F L A K V G D L C D L F L W               
SEQ ID NO: 2865 W G K L V R D C F L A K V G D L C D L F L W         
SEQ ID NO: 2866 T H V H D C F L A K V G D L C D L F I V               
SEQ ID NO: 2867 H W V R D C F L A K V G E L C D L F L W               
SEQ ID NO: 2868 H G I L D C Y F A K V G E L C E L F D W               
SEQ ID NO: 2869 Q F V K D C F L A Q V G D L C E L F L W               
SEQ ID NO: 2870 D W L P D C Y F A N V G D L C S L F G S               
SEQ ID NO: 2871 H W F L D C F L A N V G D L C D F F G N               
SEQ ID NO: 2872 N W L P D C L F A N V G E L C D I F P W               
SEQ ID NO: 2873 E I F K D C L F A N V G E L C E I F P S               
SEQ ID NO: 2874 N W F H D C F L A R V G D L C D L F L D               
SEQ ID NO: 2875 Y S F K D C Y F A K V G E L C E L F L W               
SEQ ID NO: 2876 E F F H D C Y V A R V G E L C D L F G W               
SEQ ID NO: 2877 S Y L C W L D H W G V I C E E D                           
SEQ ID NO: 2878 W Y T C M M D W L G V H C E L E                           
SEQ ID NO: 2879 Q M V W W D C W S T Q E G P V C E L N W T A         
SEQ ID NO: 2880 Y W C S V W Q L G S V C E M N N E E T Q               
SEQ ID NO: 2881 W T C W L T Q L G Y D C N L D V V D Q S L G         
SEQ ID NO: 2882 D G S W Y T C W F T Q L G E W C E Q D D A K         
SEQ ID NO: 2883 E F W G W Q C W Q E P L G W S C D L E W M D         
SEQ ID NO: 2884 W Y P C W I A R V G E L C D L E                           
SEQ ID NO: 2885 W Y P C W L A Q V G E L C D L D                           
SEQ ID NO: 2886 L V D C F K V K V G E L C D L F                           
SEQ ID NO: 2887 V H D C F I A Q V G D L C D L F                           
SEQ ID NO: 2888 W P C W A A L G E L C D L D                                 
SEQ ID NO: 2889 W P C W A L G E L C D L D                                    
                                                                             
SEQ ID NO: 2900 –X1 –X2 –X3 –X4 –X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –X15 –X16 –X17 –X18 –      
SEQ ID NO: 2901 –X2 –X3 –X4 –X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –X15 –X16 –X17 –      
SEQ ID NO: 2902 –X3 –X4 –X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –X15 –X16 –      
SEQ ID NO: 2903 –X4 – X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –X15 –      
SEQ ID NO: 2904 –X5 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–X14 –      
SEQ ID NO: 2905 –C–X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –C–      
SEQ ID NO: 2906 –X6 –X7 –X8 –X9 –X10 –X11 –X12 –X13 –      
SEQ ID NO: 2907 A F F H D C F F A K A G D L C D F F D D               
SEQ ID NO: 2908 D F F H D C F F A K V G D L C D F F F G               
SEQ ID NO: 2909 E G F H D C F F A K V G D L C D I F G H               
SEQ ID NO: 2910 E H F H D C F F A K V G D L C D I F G N               
SEQ ID NO: 2911 E H F H D C F F A K V G D L C D K F G Q               
SEQ ID NO: 2912 H I F H D C F I A K V G D L C D L F H S               
SEQ ID NO: 2913 H L F H D C F K A K V G D L C D L F I S               
SEQ ID NO: 2914 H L F K D C F L A K V G D L C D L F L S               
SEQ ID NO: 2915 W G K S I K D C F L A K V G D L C D L F L V         
SEQ ID NO: 2916 K S L K D C F L A K V G D L C D L F L V               
SEQ ID NO: 2917 K W L L D C F L A L V G D L C D L F L W               
SEQ ID NO: 2918 N W L L D C F L A N V G D L C D L F L W               
SEQ ID NO: 2919 N W L P D C F L A N V G E L C D L F L W               
SEQ ID NO: 2920 Q W L P D C F L A N V G E L C D L F L W               
SEQ ID NO: 2921 Q W V R D C L L A N V G E L C E L F L W               
SEQ ID NO: 2922 R W V R D C L L A Q V G E L C E L F N W               
SEQ ID NO: 2923 R W V V D C Y L A Q V G E L C E L F P W               
SEQ ID NO: 2924 R W V V D C Y L A R V G E L C E L F P W               
SEQ ID NO: 2925 T Y V Y D C Y V V R V G E T C S L F P W               
SEQ ID NO: 2926 Y Y V Y N C Y W V R V G E V C V L W V W               
                                                                             
SEQ ID NO: 2930 G G W Y P C W I A R V G E L C D L E E G P V N R   
SEQ ID NO: 2931 G G A V E F Y P C W L A R I G E L C D L V E P      
SEQ ID NO: 2932 G G W Y P C W I A R V G E L C D M E                     
SEQ ID NO: 2933 G G E W F H D C F L A K V G D L C D L F L G G E W
SEQ ID NO: 2934 G G R Y V H D C F I A Q V G D L C D L F L H         
SEQ ID NO: 2935 G G R S L V D C F L V K V G D L C D F F N W         
SEQ ID NO: 2936 G G W Y P C W I A R V G E L C D L E                     
SEQ ID NO: 2937 G G W Y P C W L A Q V G E L C D L D                     
SEQ ID NO: 2938 G G L V D C F K V K V G E L C D L F                     
SEQ ID NO: 2939 G G W Y S C W M A Q L G E L C D L D                     
SEQ ID NO: 4070 GGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4071 GGAVEFYPCWLARIGELCDLVEPGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4072 GGWYPCWIARVGELCDMEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4073 GGEWFHDCFLAKVGDLCDLFLWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4074 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4075 GGRSLVDCFLVKVGDLCDFFNWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4076 GGWYPCWIARVGELCDLEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4077 GGWYPCWLAQVGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4078 GGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4079 GGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4080 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4081 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4082 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4083 GGLVDCFKVKVGELCDLFGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4084 GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4085 GGWYSCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG
SEQ ID NO: 4090 Ac-WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ-OH
SEQ ID NO: 4091 Ac-WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVALCWQ-OH
SEQ ID NO: 4092 Ac-WYPCW(Abu)AQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ-OH
SEQ ID NO: 4093 Ac-WYPCW(Abu)AQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVALCWQ-OH
SEQ ID NO: 4094 Ac-WYPCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQ-OH
SEQ ID NO: 4095 Ac-GGELLVDCFKVKVGELCDLFFGGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 4096 Ac-GGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 4097 Ac-GGKWVHDCFLAKVGDVCDLFVVGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 4098 Ac-GGRSLVDCFLVKVGDLCDFFNWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 4099 Ac-GGEWFHDCFLAKVGDLCDLFLWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG-OH
SEQ ID NO: 8061 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8062 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGAVEFYPCWLARIGELCDLVEPGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8063 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDMEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8064 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGEWFHDCFLAKVGDLCDLFLWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8065 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8066 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRSLVDCFLVKVGDLCDFFNWGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8067 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDLEGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8068 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWLAQVGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8069 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8070 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8071 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGWYPCWIARVGELCDLEEGPVNRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8072 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8073 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8074 ERKSSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG        
SEQ ID NO: 8075 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGLVDCFKVKVGELCDLFGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8076 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG   
SEQ ID NO: 8077 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGLVDCFKVKVGELCDLFGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8078 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG   
SEQ ID NO: 8079 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8080 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAPAPAPAPAPAPAPAPAPAPAGGRYVHDCFIAQVGDLCDLFLHGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8081 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGGWYSCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 8082 DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGSGSGSGSGSGSGSGSGSGSGGWYSCWMAQLGELCDLDGGGGSGGVVCQDWEGVELCWQGG   
SEQ ID NO: 9001 Y P C W L A R V G E L C D L D S G D V H         
SEQ ID NO: 9002 A P C W L A R V G E L C D L D S G D V H         
SEQ ID NO: 9003 A P C A L A R V G E L C D L D S G D V H         
SEQ ID NO: 9004 A P C A L A A V G E L C D L D S G D V H         
SEQ ID NO: 9005 A P C A L A A V G A L C D L D S G D V H         
SEQ ID NO: 9006 A P C A L A A V G A L C D L A S G D V H         
SEQ ID NO: 9007 A P C A L A A V G A L C D L A A G D V H         
                                                                       
SEQ ID NO: 9011 Y W C W M A Q V G E L C D L                           
SEQ ID NO: 9012 Y H C W M A Q V G E L C D L                           
SEQ ID NO: 9013 Y H C W M G Q V G E L C D L                           
SEQ ID NO: 9014 Y H C W M G Q M G E L C D L                           
SEQ ID NO: 9015 Y H C W M G Q M G E L C E L                           
SEQ ID NO: 9016 Y H C W M G Q M G E L C E M                           
                                                                       
SEQ ID NO: 9021 M G F Y P C W T A Q L G E L C D L S V D         
SEQ ID NO: 9022    G F Y P C W T A Q L G E L C D L S V D         
SEQ ID NO: 9023       F Y P C W T A Q L G E L C D L S V D         
SEQ ID NO: 9024          Y P C W T A Q L G E L C D L S V D         
SEQ ID NO: 9025 M G F Y P C W T A Q L G E L C D L S V            
SEQ ID NO: 9026 M G F Y P C W T A Q L G E L C D L S               
SEQ ID NO: 9027 M G F Y P C W T A Q L G E L C D L                  
SEQ ID NO: 9028    G F Y P C W T A Q L G E L C D L S V            
SEQ ID NO: 9029       F Y P C W T A Q L G E L C D L                  
                                                                       
SEQ ID NO: 9031          K Y C G F A Q L G E L C V L                  
SEQ ID NO: 9032       G K Y C G F A Q L G E L C V L                  
SEQ ID NO: 9033    G G K Y C G F A Q L G E L C V L                  
SEQ ID NO: 9034 G G G K Y C G F A Q L G E L C V L                  
SEQ ID NO: 9035          K Y C G F A Q L G E L C V L G               
SEQ ID NO: 9036          K Y C G F A Q L G E L C V L G G            
SEQ ID NO: 9037          K Y C G F A Q L G E L C V L G G G         
SEQ ID NO: 9038       G K Y C G F A Q L G E L C V L G               
SEQ ID NO: 9039    G G K Y C G F A Q L G E L C V L G               
                                                                       
SEQ ID NO: 9301 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G         
SEQ ID NO: 9302    G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G         
SEQ ID NO: 9303       W Y P C W M A Q L G E L C D L D G G         
SEQ ID NO: 9304          Y P C W M A Q L G E L C D L D G G         
SEQ ID NO: 9305             P C W M A Q L G E L C D L D G G         
SEQ ID NO: 9306                C W M A Q L G E L C D L D G G         
SEQ ID NO: 9307 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G            
SEQ ID NO: 9308 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L D               
SEQ ID NO: 9309 G G W Y P C W M A Q L G E L C D L                  
SEQ ID NO: 9310 G G W Y P C W M A Q L G E L C D                     
SEQ ID NO: 9311 G G W Y P C W M A Q L G E L C                        
SEQ ID NO: 9312    G W Y P C W M A Q L G E L C D L D G            
SEQ ID NO: 9313       W Y P C W M A Q L G E L C D L D G            
SEQ ID NO: 865       W Y P C W M A Q L G E L C D L D               
SEQ ID NO: 612          Y P C W M A Q L G E L C D L                  
SEQ ID NO: 9314             P C W M A Q L G E                              
                                                                       
SEQ ID NO: 9340 G G V V C Q D W E G V E L C W Q G G               
SEQ ID NO: 9341    G V V C Q D W E G V E L C W Q G G               
SEQ ID NO: 9342       V V C Q D W E G V E L C W Q G G               
SEQ ID NO: 9343          V C Q D W E G V E L C W Q G G               
SEQ ID NO: 9344             C Q D W E G V E L C W Q G G               
SEQ ID NO: 9345 G G V V C Q D W E G V E L C W Q G                  
SEQ ID NO: 9346 G G V V C Q D W E G V E L C W Q                     
SEQ ID NO: 9347 G G V V C Q D W E G V E L C W                        
SEQ ID NO: 9348 G G V V C Q D W E G V E L C                           
SEQ ID NO: 9349    G V V C Q D W E G V E L C W Q G                  
SEQ ID NO: 965       V V C Q D W E G V E L C W Q                     
SEQ ID NO: 9350          V C Q D W E G V E L C W Q                     
SEQ ID NO: 9351          V C Q D W E G V E L C W                        
SEQ ID NO: 9352             C Q D W E G V E L C W                        
SEQ ID NO: 9353             C Q D W E G V E L C                           
                                                                       
SEQ ID NO: 9380 (G)n n = 1-20
SEQ ID NO: 9381 (GS)n     n = 1-20
SEQ ID NO: 9382 (GGS)n      n = 1-20
SEQ ID NO: 9383 (GGGS)n      n = 1-20
SEQ ID NO: 9384 (GGGGS)n    n = 1-20
SEQ ID NO: 9385 (G)n n = 1-10
SEQ ID NO: 9386 (GS)n n = 1-10
SEQ ID NO: 9387 (GGS)n      n = 1-10
SEQ ID NO: 9388 (GGGS)n   n = 1-10
SEQ ID NO: 9389 (GGGGS)n       n = 1-10
SEQ ID NO: 9390 (G)n      n = 1-5
SEQ ID NO: 9391 (GS)n      n = 1-5
SEQ ID NO: 9392 (GGS)n      n = 1-5
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Claims (20)

  1. 一種IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物包含IL-2Rβγc配體，其中所述2Rβγc配體包含： 配體接頭； 與所述配體接頭結合的IL-2Rβ配體，其中所述IL-2Rβ配體包含SEQ ID NO: 805-903、911-930、2575-2655、2661-2891、2900-2926或2929-2939中任一項的氨基酸序列；和 與所述配體接頭結合的IL-2Rγc配體，其中所述IL-2Rγc配體包含SEQ ID NO: 944-1028、1032-1060和1601-1613中任一項的氨基酸序列。
  2. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβ配體包含SEQ ID NO: 911-930、2929-2939、9301和9308中任一項的氨基酸序列。
  3. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中， 所述IL-2Rβ配體包含具有SEQ ID NO:865的氨基酸序列；和 所述IL-2Rγc配體包含具有SEQ ID NO:965的氨基酸序列。
  4. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體包括在所述IL-2Rβγc配體的兩個半胱氨酸之間的二硫鍵。
  5. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述配體接頭包含肽基配體接頭。
  6. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體包含SEQ ID NO:1263-1270、4070-4085和4090至4099中任一項的氨基酸序列。
  7. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體包含具有SEQ ID NO:1263的氨基酸序列。
  8. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體是完全IL-2R激動劑或部分IL-2R激動劑。
  9. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中， 所述IL-2Rβγc配體在TF-1β細胞和/或NK-92細胞中對STAT5磷酸化的EC50 小於100 µM；和 所述IL-2Rβγc配體與hIL-2R結合，在使用噬菌體ELISA競爭測定所確定的IC50 小於100 µM。
  10. 如請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物包含構建體伴侶，其中所述IL-2Rβγc配體與所述構建體伴侶結合。
  11. 如請求項10所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc配體藉由構建體接頭與所述構建體伴侶結合。
  12. 如請求項11所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體接頭包含肽基配體接頭。
  13. 如請求項10所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶選自：聚合物、多肽、Fc片段、免疫球蛋白片段、抗體、病毒表面抗原或病毒樣顆粒、細胞因數和重組融合蛋白。
  14. 如請求項10所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述IL-2Rβγc結合化合物選自：聚乙二醇、hIgG-Fc重組融合蛋白和hIgG1-Fc重組融合蛋白。
  15. 如請求項10所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶包含抗體，並且所述抗體針對腫瘤抗原。
  16. 如請求項10所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述構建體伴侶包含細胞靶向部分。
  17. 如請求項16所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述細胞靶向部分包括腫瘤靶向部分、免疫細胞靶向部分或所述腫瘤靶向部分與所述免疫細胞靶向部分的組合。
  18. 一種藥物組合物，其包含請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物。
  19. 一種治療患者疾病的方法，其包括向需要此類治療的患者施用治療有效量的請求項1所述的IL-2Rβγc結合化合物，其中所述疾病選自：癌症、自體免疫疾病、發炎性疾病、感染性疾病和病毒性疾病。
  20. 一種治療患者疾病的方法，其包括向需要此類治療的患者施用治療有效量的請求項18所述的藥物組合物，其中所述疾病選自：癌症、自體免疫疾病、發炎性疾病、感染性疾病和病毒性疾病。
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