TW202128961A - 細胞激素融合蛋白及其醫藥組合物及治療應用 - Google Patents

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Abstract

本文提供包含第一細胞激素域及第二細胞激素域及半衰期延長域之融合蛋白；及其醫藥組合物。本文亦提供其用於治療、預防或改善增生性疾病之一或多種症狀之方法。

Description

細胞激素融合蛋白及其醫藥組合物及治療應用
本文提供包含第一細胞激素域及第二細胞激素域及半衰期延長域之融合蛋白；及其醫藥組合物。本文亦提供其用於治療、預防或改善增生性疾病之一或多種症狀之方法。
細胞激素調節先天性及適應性免疫系統，且控制白血球之增殖、分化、效應功能及存活。Conlon等人，J. Interferon Cytokine Res. 2019，39 ，6-21。由於免疫系統識別且破壞癌細胞之能力，因此已探索細胞激素作為用於癌症治療之治療劑。同上。
介白素-2 (IL-2)為協調免疫效應(Teff)細胞及調節T (Treg)細胞之增殖、存活及功能以維持免疫穩態之多效細胞激素。Bluestone，N. Engl. J. Med. 2011 ，365 ，2129-31；Boyman等人，Nat. Rev. Immunol. 2012 ，12 ，180-90。IL-2驅動T細胞生長，增強自然殺手(NK)溶胞活性，誘導調節T (Treg)細胞分化，且介導活化誘導之細胞死亡。Liao等人，Curr. Opin. Immunol. 2011 ，23 ，598-604。
介白素-2受體(IL-2R)以自三種不同介白素-2受體鏈：α鏈(IL-2Rα或CD25)、β鏈(IL-2Rβ或CD122)及γ鏈(IL-2Rγ、γc 或CD132)產生的三種不同形式存在。Wang等人，Science 2005 ，310 ，1159-63。IL-2以低親和力(K d ≈ 10 nM)結合IL-2Rα。同上。四級IL-2信號傳導複合物之晶體結構中，IL-2上的十五個胺基酸殘基(K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、K64、P65、E68、L72及Y107)經識別為介於IL-2與IL-2Rα之間的界面殘基。Stauber等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2006 ，103 ，2788-93。IL-2以中等親和力(K d ≈ 1 nM)結合表現於記憶T細胞及NK細胞上之IL-2Rβ及IL-2Rγ之異二聚體複合物。Wang等人，Science 2005 ，310 ，1159-63。IL-2以高親和力(K d ≈ 10 pM)結合表現於Treg細胞上之IL-2Rα、IL-2Rβ及IL-2Rγ之異三聚體複合物。同上。 IL-2以約100 nM之解離常數(K d )單獨結合IL-2Rβ。同上。IL-2Rα本身沒有信號轉導活性。同上。IL-2透過中間親和力異二聚體IL-2Rβ/γ複合物或高親和力異三聚體IL-2Rα/β/γ複合物傳導信號。Liao等人，Curr. Opin. Immunol. 2011 ，23 ，598-604。IL-2與中等親和力異二聚體IL-2Rβ/γ複合物之結合會導致免疫刺激Teff細胞之活化及增殖，而Il-2與高親和力異三聚體IL-2Rα/β/γ複合物之結合會導致免疫抑制Treg細胞之活化及增殖。Malek等人，Immunity 2010 ，33 ，153-65；Bluestone，N. Engl. J. Med. 2011 ，365 ，2129-2131；Boyman等人，Nat. Rev. Immunol. 2012 ，12 ，180-90；Spangler等人，Annu. Rev. Immunol. 2015 ，33 ，139-67。免疫刺激及免疫抑制之此種雙重對立功能在開發IL-2作為安全且有效之治療劑方面提出重大挑戰。Skrombolas等人，Expert Rev. Clin. Immunol. 2014 ，10 ，207-17；Abbas等人，Sci. Immunol .2018 ，3 ，eaat 1482。
阿地介白素(Aldesleukin) (一種重組人類IL-2)於1992年經FDA批准用於轉移性腎細胞癌且於1998年經批准用於轉移性黑色素瘤。Rosenberg，J. Immunol. 2014 ，192 ，5451-8。患有轉移性黑色素瘤或腎癌的患者經歷5%至10%的癌症完全消退率，另有10%經歷部分消退。Atkins等人，J. Clin. Oncol. 1999 ，17 ，2105-16；Klapper等人，Cancer 2008 ，113 ，293-301。約70%的IL-2療法完全反應者不會復發。Rosenberg，Sci. Transl. Med. 2012 ，4 ，127ps8。然而，IL-2之嚴重毒性及有限功效阻礙其作為癌症免疫療法之成功。其作為抗癌劑之功效之一個主要限制因素係由於Treg細胞之IL-2驅動之優先擴增導致之免疫抑制。Abbas等人，Sci. Immunol. 2018 ， 3 ，eaat1482。此外，為使IL-2在癌症治療中有效，需要高劑量治療劑時程表。Bluestone，N. Engl. J. Med. 2011 ，365 ，2129-31；Abbas等人，Sci. Immunol .2018 ，3 ，eaat 1482。然而，此種給藥方案導致血管滲漏症候群且導致IL-2在癌症治療中之有限應用。Abbas等人，Sci. Immunol .2018 ，3 ，eaat 1482。此外，在5分鐘靜脈內輸注後，阿地介白素在人體內具有僅約13至85分鐘之半衰期。PROLEUKIN®標籤(2012)。
介白素15 (IL-15)係結構上類似於IL-2之細胞激素。Waldmann，Cancer Immunol. Res. 2015 ，3 ，219-227。其亦共有兩個常見受體亞單元：CD122 (IL-2Rβ/IL-15Rβ)及CD132 (IL-2Rγ)。Waldmann等人，Nat. Rev. Immunol. 2006 ，6 ，595-601。IL-15在控制淋巴細胞之生死中起著樞紐性作用。同上。然而，像阿地介白素，臨床試驗中用於治療轉移性黑色素瘤或轉移性腎細胞癌之重組IL-2於靜脈內輸注後在人體內具有僅約2.5小時之半衰期。Conlon等人，J. Clin. Oncol. 2015 ，33 ，74-82。
介白素-21 (IL-21)係調節先天性及特異性免疫之活性之多效細胞激素。Croce等人，J. Immunol. Res. 2015 ，696578。IL-21刺激T及自然殺手(NK)細胞增殖及功能且調節B細胞存活及分化及樹突細胞之功能。同上。已顯示介白素-21受體(IL-21R)在多種造血性惡性疾病中表現，該等疾病包括慢性淋巴球性白血病(CLL)、濾泡性淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)及套細胞淋巴瘤。Conlon等人，J. Interferon Cytokine Res. 2019 ，39 ，6-21。若干臨床前研究顯示，IL-21透過涉及NK及T或B細胞反應之活化之機制，在不同腫瘤模型中具有抗腫瘤活性。Croce等人，J. Immunol. Res. 2015 ，696578。然而，就像阿地介白素，臨床試驗中用於治療轉移性黑色素瘤之重組IL-2於靜脈內輸注後在人體內具有僅約1至4小時之半衰期。Davis等人，Clin. Cancer Res. 2007 ，13 ，3630-36。
因此，需要一種具有改良之半衰期之有效免疫療法用於癌症治療。
本文提供包含第一細胞激素域及第二細胞激素域及半衰期延長域之融合蛋白；其中該第一細胞激素域及該第二細胞激素域係不同。在一個實施例中，該半衰期延長域為白蛋白結合域、片段可結晶(Fc)域、血清白蛋白、聚乙二醇或脂肪醯基。
本文亦提供融合蛋白，該融合蛋白包含介白素域，該介白素域造成該融合蛋白透過包含CD122 (IL-2Rβ/IL-15Rβ)及CD132 (IL-2Rγ)亞單元之受體信號傳導；介白素-21域及半衰期延長域。
另外，本文提供包含介白素-2域、介白素-21域及半衰期延長域之融合蛋白。
此外，本文提供包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域之融合蛋白。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該介白素-2域的羧基端(C 端)係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-21域的胺基端(N 端)；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-2的N 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-21域的N 端；及該白蛋白-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域及片段可結晶(Fc)域之融合蛋白。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該介白素-2域的N 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端。
本文提供包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子之融合蛋白；其中該介白素-2域的N 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端。
本文提供包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子及第三肽連接子之融合蛋白；其中該第一介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；該第二介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端。
本文提供包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子及第三肽連接子之融合蛋白；其中該第一介白素-2域的N 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；該第二介白素-2域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端。
本文提供包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、第一介白素-21域及第二介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子、第三肽連接子及第四肽連接子之融合蛋白；其中該第一介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；該第二介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端；該第一介白素-21域的N 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；及該第二介白素-21域的N 端係直接或經由第四肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端。
本文提供包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、第一介白素-21域及第二介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子、第三肽連接子及第四肽連接子之融合蛋白；其中該第一介白素-2域的N 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；該第二介白素-2域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端；該第一介白素-21域的C 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；及該第二介白素-21域的C 端係直接或經由第四肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端。
本文提供包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、第一介白素-21域及第二介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子、第三肽連接子及第四肽連接子之融合蛋白；其中該第一介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；該第二介白素-2域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端；該第一介白素-21域的N 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；及該第二介白素-21域的C 端係直接或經由第四肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端。
本文提供包含本文所提供的融合蛋白及醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組合物。
本文提供一種治療、預防或改善個體之增生性疾病之一或多種症狀之方法，該方法包括對有此需要的個體投與治療有效量之本文所提供的融合蛋白。
本文提供一種活化免疫效應細胞之方法，該方法包括使該細胞與有效量之本文所提供的融合蛋白接觸。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2019年11月20日申請之美國臨時申請案第62/938,275號之優先權；該案之揭示內容之全文係以引用之方式併入本文中。
為促進理解本文闡述的揭示內容，以下定義多個術語。
一般而言，本文所用的命名法及本文所述的生物化學、生物學、細胞生物學、分子生物學、免疫學及藥理學中之實驗室程序係此項領域中熟知且常用之彼等。除非另有定義，否則本文所用的所有技術及科學術語一般具有與本發明所屬領域一般技術者通常所理解相同的含義。
術語「個體」係指動物，包括(但不限於)靈長類動物(例如人類)、牛、豬、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠或小鼠。術語「個體」及「患者」在本文中可互換用於指例如哺乳動物個體，諸如人類個體。在一個實施例中，該個體為人類。
術語「治療(treat)」、「治療(treating)」及「治療(treatment)」意欲包括減輕或消除病症、疾病或病狀、或與該病症、疾病或病狀相關之一或多種症狀；或減輕或消除該病症、疾病或病狀本身之病因。
術語「預防(prevent)」、「預防(preventing)」及「預防(prevention)」意欲包括一種延遲及/或阻止病症、疾病或病狀及/或其伴隨症狀之發作；禁止個體罹患病症、疾病或病狀；或降低個體罹患病症、疾病或病狀風險之方法。
術語「緩解(alleviate)」及「緩解(alleviating)」係指緩和或減輕病症、疾病或病狀之一或 多種症狀(例如疼痛)。該術語亦可指減輕與活性成分相關之副作用。有時，個體自預防劑或治療劑獲得的有益作用不會導致病症、疾病或病狀之治癒。
術語「接觸(contacting)」及「接觸(contact)」係指將治療劑與細胞或組織在一起使得由於此種接觸而發生生理及/或化學作用。接觸可在活體外、離體或活體內進行。在一個實施例中，使治療劑與細胞培養物中之細胞接觸(活體外)以確定治療劑對於細胞之作用。在另一個實施例中，治療劑與細胞或組織之接觸包括對具有待進行接觸之細胞或組織的個體投與治療劑。
術語「治療有效量」或「有效量」意欲包括化合物之在投與時足以防止所治療的病症、疾病或病狀之一或多種症狀發展或在某種程度上減輕之量。術語「治療有效量」或「有效量」亦指化合物之足以引起研究人員、獸醫、醫生或臨床醫生正在尋找的生物分子(例如蛋白質、酵素、RNA或DNA)、細胞、組織、系統、動物或人類之生物或醫學反應之量。
術語「醫藥上可接受之載劑」、「醫藥上可接受之賦形劑」、「生理上可接受之載劑」或「生理上可接受之賦形劑」係指醫藥上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、溶劑或包封材料。在一個實施例中，各組分在與醫藥調配物之其他成分相容之意義上係「醫藥上可接受」，且適用於與個體(例如人類或動物)之組織或器官接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應、免疫原性或其他問題或併發症(符合合理效益/風險比)。參見，Remington: The Science and Practice of Pharmacy ，第22版；Allen編；The Pharmaceutical Press：2012；Handbook of Pharmaceutical Excipients ，第8版；Sheskey等人編；The Pharmaceutical Press：2017；Handbook of Pharmaceutical Additives ，第3版；Ash及Ash編；Synapse Information Resources, Inc.：2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation ，第2版；Gibson編；CRC Press：2009。
術語「約」或「近似」意指由熟習此項技術者測定的特定值之可接受誤差，該誤差部分取決於如何測量或測定該值。在某些實施例中，術語「約」或「近似」意指在1、2、3或4個標準偏差之內。在某些實施例中，術語「約」或「近似」意指在給定值或範圍之50%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.05%之內。
術語「實質上純」及「實質上均質」意指足夠均質以顯示不含可容易檢測到之雜質，此係藉由熟習此項技術者所使用的標準分析方法(包括(但不限於)凝膠電泳、高效液相層析(HPLC)及質譜法(MS))測定；或足夠純以致進一步純化將不會可檢測地改變該物質之物理、化學、生物及/或藥理性質，諸如酵素活性及生物活性。在某些實施例中，「實質上純」及「實質上均質」係指分子之集合，其中至少約50重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約98重量%，至少約99重量%或至少約99.5重量%之分子係單一化合物，藉由標準分析方法測定。 細胞激素融合蛋白
在一個實施例中，本文提供包含第一細胞激素域及第二細胞激素域及半衰期延長域之融合蛋白；其中該第一細胞激素域及該第二細胞激素域係不同。
在一個實施例中，該第一細胞激素域為介白素域。在另一個實施例中，該第二細胞激素域為介白素域。在又另一個實施例中，該第一細胞激素域及第二細胞激素域各為介白素域。
在某些實施例中，與相應游離野生型細胞激素相比，半衰期延長域延長活體內第一細胞激素域及/或第二細胞激素域之半衰期。在某些實施例中，與相應游離野生型細胞激素相比，半衰期延長域延長活體內第一細胞激素域之半衰期。在某些實施例中，與相應游離野生型細胞激素相比，半衰期延長域延長活體內第二細胞激素域之半衰期。
在某些實施例中，半衰期延長域包含白蛋白結合域、片段可結晶(Fc)域、血清白蛋白、聚乙二醇(PEG)或脂肪醯基。在一個實施例中，半衰期延長域為白蛋白結合域。在另一個實施例中，半衰期延長域為Fc域。在又另一個實施例中，半衰期延長域為具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域。在又另一個實施例中，半衰期延長域為血清白蛋白。在又另一個實施例中，半衰期延長域包含PEG。在又另一個實施例中，半衰期延長域包含脂肪醯基。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白具有低於對第二細胞激素域之受體之親和力的對第一細胞激素域之受體之親和力。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白具有對第一細胞激素域之受體之親和力，其相比對第二細胞激素域之受體之親和力低不小於約2倍、不小於約5倍、不小於約10倍、不小於約20倍、或不少於約50倍。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白具有相比對第二細胞激素域之受體之親和力低不小於約2倍的對第一細胞激素域之受體之親和力。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白具有相比對第二細胞激素域之受體之親和力低不小於約5倍的對第一細胞激素域之受體之親和力。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白具有相比對第二細胞激素域之受體之親和力低不小於約10倍的對第一細胞激素域之受體之親和力。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白具有相比對第二細胞激素域之受體之親和力低不小於約20倍的對第一細胞激素域之受體之親和力。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白具有相比對第二細胞激素域之受體之親和力低不小於約50倍的對第一細胞激素域之受體之親和力。
在某些實施例中，第一細胞激素域包含介白素-2或其變異體或突變蛋白；或介白素-15或其變異體或突變蛋白之胺基酸序列。在某些實施例中，第一細胞激素域包含介白素-2或其變異體或突變蛋白之胺基酸序列。在某些實施例中，第一細胞激素域包含介白素-15或其變異體或突變蛋白之胺基酸序列。在某些實施例中，第二細胞激素域包含介白素-21或其變異體或突變蛋白之胺基酸序列。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白具有第一細胞激素域之相應細胞激素之生物活性，該活性相比相應游離細胞激素之生物活性高不小於約2倍、不小於約5倍、不小於約10倍、不小於約20倍、或不小於約50倍。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白具有第一細胞激素域之相應細胞激素之生物活性，該活性相比相應游離細胞激素之生物活性高不小於約2倍。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白具有第一細胞激素域之相應細胞激素之生物活性，該活性相比相應游離細胞激素之生物活性高不小於約5倍。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白具有第一細胞激素域之相應細胞激素之生物活性，該活性相比相應游離細胞激素之生物活性高不小於約10倍。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白具有第一細胞激素域之相應細胞激素之生物活性，該活性相比相應游離細胞激素之生物活性高不小於約20倍。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白具有第一細胞激素域之相應細胞激素之生物活性，該活性相比相應游離細胞激素之生物活性高不小於約50倍。
在某些實施例中，生物活性係人類T細胞中之STAT5磷酸化。在某些實施例中，生物活性係經活化之人類T細胞之增殖。在某些實施例中，生物活性係自人類T細胞分泌促發炎細胞激素。
在另一個實施例中，本文提供融合蛋白，該融合蛋白包含第一介白素域，該第一介白素域造成該融合蛋白透過包含CD122 (IL-2Rβ/IL-15Rβ)及CD132 (IL-2Rγ)亞單元之受體信號傳導；介白素-21域及半衰期延長域。
在一個實施例中，第一介白素域包含介白素-2或其變異體或突變蛋白；或介白素-15或其變異體或突變蛋白之胺基酸序列。在另一個實施例中，第一介白素域包含介白素-2或其變異體或突變蛋白之胺基酸序列。在又另一個實施例中，第一介白素域包含介白素-15或其變異體或突變蛋白之胺基酸序列。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域為野生型介白素-15域。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域為野生型人類介白素-15域。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域為介白素-15變異體。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域為介白素-15突變蛋白。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約70%、不小於約75%、不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、或不小於約99%的一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約70%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約75%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約80%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約85%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約90%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約91%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約92%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約93%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約94%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約95%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約96%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約97%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約98%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域包含與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約99%的一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約70%、不小於約75%、不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、或不小於約99%的一致性。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約70%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約75%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約80%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約85%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約90%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約91%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約92%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約93%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約94%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約95%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約96%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約97%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約98%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-15域與SEQ ID NO: 172之胺基酸序列具有不小於約99%的一致性。
在又另一個實施例中，本文提供包含介白素-2域、介白素-21域及半衰期延長域之融合蛋白。
在某些實施例中，分別與SEQ ID NO: 1之野生型介白素-2或SEQ ID NO: 156之野生型介白素-21相比，半衰期延長域延長活體內介白素-2域及/或介白素-21域之半衰期。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 1之野生型介白素-2相比，半衰期延長域延長活體內介白素-2域之半衰期。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 156之野生型介白素-21相比，半衰期延長域延長活體內介白素-21域之半衰期。在某些實施例中，分別與SEQ ID NO: 1之野生型介白素-2或SEQ ID NO: 156之野生型介白素-21相比，半衰期延長域延長活體內介白素-2域及介白素-21域之半衰期。
在又另一個實施例中，本文提供包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域之融合蛋白。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-21域的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-21域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-2域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-2域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-2域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域及一個白蛋白結合域組成。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域及一個白蛋白結合域組成；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域及一個白蛋白結合域組成；其中該介白素-2域的N 端係直接連接至白蛋白結合域的C 端；及該白蛋白結合域的N 端係直接連接至介白素-21域的C 端。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的N 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的C 端；及該白蛋白結合域的N 端係直接連接至介白素-21域的C 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的N 端係直接連接至白蛋白結合域的C 端；及該白蛋白結合域的N 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的C 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-21域的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端。
在一個實施例中，白蛋白結合域為結合至白蛋白之抗體或其片段。在另一個實施例中，白蛋白結合域為結合至人類血清白蛋白(HSA)之抗體或其片段。
在某些實施例中，白蛋白結合域以在約10 pM至約1,000 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，白蛋白結合域以在約1 nM至約500 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，白蛋白結合域以在約1 nM至約200 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，白蛋白結合域以在約1 nM至約100 nM範圍內之K d 結合至HSA。
在一個實施例中，白蛋白結合域為抗體或其片段，其包含：(I) SEQ ID NO: 101之互補決定區1 (CDR1)、SEQ ID NO: 102之互補決定區2 (CDR2)及SEQ ID NO: 103之互補決定區3 (CDR3)；或(ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3。在另一個實施例中，白蛋白結合域包含SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3。在又另一個實施例中，白蛋白結合域包含SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3。在某些實施例中，本文所提供的CDR使用IMGT編號系統進行編號。在又另一個實施例中，白蛋白結合域具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列。在又另一個實施例中，白蛋白結合域具有SEQ ID NO: 108之胺基酸序列。在又另一個實施例中，白蛋白結合域具有SEQ ID NO: 115之胺基酸序列。
在某些實施例中，白蛋白結合域具有揭示於WO 2019/246003 A1或WO 2019/246004 A1中之抗HSA抗體中之一者之胺基酸序列，該各案之揭示內容之全文係以引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，抗體或其片段為人類抗體。在某些實施例中，抗體或其片段為人源化抗體。
在另一個實施例中，白蛋白結合域為結合至白蛋白之單域抗體(sdAb)。在某些實施例中，白蛋白結合域為結合至HSA之sdAb。
在某些實施例中，sdAb以在約10 pM至約1,000 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，sdAb以在約1 nM至約500 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，sdAb以在約1 nM至約200 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，sdAb以在約1 nM至約100 nM範圍內之K d 結合至HSA。
在一個實施例中，sdAb包含：(i) SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3；或(ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3。在某些實施例中，本文所提供的CDR使用IMGT編號系統進行編號。在另一個實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3。在又另一個實施例中，sdAb包含SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3。
在一個實施例中，sdAb具有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4之結構，其中： CDR1、CDR2及CDR3為： (i)  SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3；或 (ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3； FR1為SEQ ID NO: 104或112之胺基酸序列； FR2為SEQ ID NO: 105或113之胺基酸序列； FR3為SEQ ID NO: 106之胺基酸序列；及 FR4為SEQ ID NO: 107或114之胺基酸序列。
在另一個實施例中，sdAb具有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4之結構，其中： CDR1、CDR2及CDR3為： (i)  SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3；或 (ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3； FR1為SEQ ID NO: 104之胺基酸序列； FR2為SEQ ID NO: 105之胺基酸序列； FR3為SEQ ID NO: 106之胺基酸序列；及 FR3為SEQ ID NO: 107之胺基酸序列。
在又另一個實施例中，sdAb具有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4之結構，其中： CDR1、CDR2及CDR3為： (i)  SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3；或 (ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3； FR1為SEQ ID NO: 112之胺基酸序列； FR2為SEQ ID NO: 113之胺基酸序列； FR3為SEQ ID NO: 106之胺基酸序列；及 FR3為SEQ ID NO: 114之胺基酸序列。
在一個實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列。在另一個實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 108之胺基酸序列。在又另一個實施例中，sdAb具有SEQ ID NO: 115之胺基酸序列。
在某些實施例中，sdAb具有揭示於WO 2019/246003 A1或WO 2019/246004 A1中之抗HSA sdAbs中之一者之胺基酸序列，該各案之揭示內容之全文係以引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，sdAb為人類抗體。在某些實施例中，sdAb為人源化抗體。
在又另一個實施例中，本文提供包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域之融合蛋白；其中該白蛋白結合域為sdAb。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-21域的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-2域的C端係直接連接至白蛋白結合域的N端；及該白蛋白結合域的C端係直接連接至介白素-21域的N端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-21域的C端係直接連接至白蛋白結合域的N端；及該白蛋白結合域的C端係直接連接至介白素-2域的N端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域及一個白蛋白結合域組成；其中該白蛋白結合域為sdAb。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域及一個白蛋白結合域組成；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端；其中該白蛋白結合域為sdAb。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域及一個白蛋白結合域組成；其中該介白素-2域的N 端係直接連接至白蛋白結合域的C 端；及該白蛋白結合域的N 端係直接連接至介白素-21域的C 端；其中該白蛋白結合域為sdAb。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該白蛋白結合域為sdAb。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的N 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的C 端；及該白蛋白結合域的N 端係直接連接至介白素-21域的C 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素的-2域的N 端係直接連接至白蛋白結合域的C 端；及該白蛋白結合域的N 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的C 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-21域的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為sdAb。
在又另一個實施例中，白蛋白結合域為結合至白蛋白之VH H單域抗體。在某些實施例中，白蛋白結合域為結合至HSA之VH H單域抗體。
在某些實施例中，VH H單域抗體以在約10 pM至約1,000 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，VH H單域抗體以在約1 nM至約500 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，VH H單域抗體以在約1 nM至約200 nM範圍內之K d 結合至HSA。在某些實施例中，VH H單域抗體以在約1 nM至約100 nM範圍內之K d 結合至HSA。
在一個實施例中，VH H單域抗體包含：(i) SEQ ID NO: 101之重鏈CDR1、SEQ ID NO: 102之重鏈CDR2及SEQ ID NO: 103之重鏈CDR3；或(ii)SEQ ID NO: 109之重鏈CDR1、SEQ ID NO: 110之重鏈CDR2及SEQ ID NO: 111之重鏈CDR3。在某些實施例中，本文所提供的CDRs使用IMGT編號系統進行編號。在另一個實施例中，VH H單域抗體包含SEQ ID NO: 101之重鏈CDR1、SEQ ID NO: 102之重鏈CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3。在又另一個實施例中，VH H單域抗體包含SEQ ID NO: 109之重鏈CDR1、SEQ ID NO: 110之重鏈CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3。
在一個實施例中，VH H單域抗體具有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4之結構，其中： CDR1、CDR2及CDR3為： (i)  SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3；或 (ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3； FR1為SEQ ID NO: 104或112之胺基酸序列； FR2為SEQ ID NO: 105或113之胺基酸序列； FR3為SEQ ID NO: 106之胺基酸序列；及 FR4為SEQ ID NO: 107或114之胺基酸序列。
在另一個實施例中，VH H單域抗體具有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4之結構，其中： CDR1、CDR2及CDR3為： (i)  SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3；或 (ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3； FR1為SEQ ID NO: 104之胺基酸序列； FR2為SEQ ID NO: 105之胺基酸序列； FR3為SEQ ID NO: 106之胺基酸序列；及 FR4為SEQ ID NO: 107之胺基酸序列。
在又另一個實施例中，VH H單域抗體具有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4之結構，其中： CDR1、CDR2及CDR3為： (i)  SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2及SEQ ID NO: 103之CDR3；或 (ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3； FR1為SEQ ID NO: 112之胺基酸序列； FR2為SEQ ID NO: 113之胺基酸序列； FR3為SEQ ID NO: 106之胺基酸序列；及 FR4為SEQ ID NO: 114之胺基酸序列。
在一個實施例中，VH H單域抗體具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列。在另一個實施例中，VH H單域抗體具有SEQ ID NO: 108之胺基酸序列。在又另一個實施例中，VH H單域抗體具有SEQ ID NO: 115之胺基酸序列。
在某些實施例中，VH H單域抗體具有揭示於WO 2019/246003 A1或WO 2019/246004 A1中之VH H單域抗體中之一者之胺基酸序列，該各案之揭示內容之全文係以引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，VH H單域抗體為人類抗體。在某些實施例中，VH H單域抗體為人源化抗體。
在又另一個實施例中，本文提供包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域之融合蛋白；其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-21域的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-21域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係經由第一肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域及一個白蛋白結合域組成；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由介白素-2域、一個介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域及一個白蛋白結合域組成；其中該介白素-2域的N 端係直接連接至白蛋白結合域的C 端；及白蛋白結合域的N 端係直接連接至介白素-21域的C 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的C 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的N 端係經由肽連接子連接至白蛋白結合域的C 端；及該白蛋白結合域的N 端係直接連接至介白素-21域的C 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白由一個介白素-2域、一個介白素-21域、一個白蛋白結合域及一個肽連接子組成；其中該介白素-2域的N 端係直接連接至白蛋白結合域的C 端；及該白蛋白結合域的N 端係經由肽連接子連接至介白素-21域的C 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-21域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至介白素-21域的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至介白素-2域的N 端；且其中該白蛋白結合域為VH H單域抗體。
在又另一個實施例中，本文提供包含介白素-2域、介白素-21域及Fc域之融合蛋白。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的N 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的N 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子及第三肽連接子；其中該第一介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；該第二介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子及第三肽連接子；其中該第一介白素-2域的N 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；該第二介白素-2域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端。
在又另一個實施例中，本文提供包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、第一介白素-21域及第二介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子、第三肽連接子及第四肽連接子之融合蛋白；其中該第一介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；該第二介白素-2域的C 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端；該第一介白素-21域的N 端係直接或經由第三肽連接子連接至第一肽鏈的C 端；及該第二介白素-21域的N 端係直接或經由第四肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端。
在又另一個實施例中，本文提供包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、第一介白素-21域及第二介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子、第三肽連接子及第四肽連接子之融合蛋白；其中該第一介白素-2域的N 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；該第二介白素-2域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端；該第一介白素-21域的C 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；及該第二介白素-21域的C 端係直接或經由第四肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端。
在又另一個實施例中，本文提供包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、第一介白素-21域及第二介白素-21域、具有第一肽連接子及第二肽連接子之Fc域及視需要第一肽連接子、第二肽連接子、第三肽連接子及第四肽連接子之融合蛋白；其中該第一介白素-2域的C 端係直接或經由第一肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的N 端；該第二介白素-2域的N 端係直接或經由第二肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的C 端；該第一介白素-21域的N 端係直接或經由第三肽連接子連接至Fc域之第一肽鏈的C 端；及該第二介白素-21域的C 端係直接或經由第四肽連接子連接至Fc域之第二肽鏈的N 端。
在一個實施例中，Fc域為hIgG1 Fc域或其突變蛋白或其片段。在另一個實施例中，Fc域為hIgG1 Fc鏈1或其突變蛋白或其片段。在又另一個實施例中，Fc域為hIgG1 Fc鏈2或其突變蛋白或其片段。在又另一個實施例中，Fc域為hIgG2 Fc域或其突變蛋白或其片段。在又另一個實施例中，Fc域為hIgG4 Fc域或其突變蛋白或其片段。
在一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 116、117、118、119、120、121、122或123之胺基酸序列。在又另一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 116之胺基酸序列。在另一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 117之胺基酸序列。在又另一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 118之胺基酸序列。在又另一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 119之胺基酸序列。在又另一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 120之胺基酸序列。在又另一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 121之胺基酸序列。在又另一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列。在又另一個實施例中，Fc域包含SEQ ID NO: 123之胺基酸序列。
在一個實施例中，Fc域包含以杵-臼(knobs-in-holes)構型的一對鏈。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域包含野生型介白素-2之胺基酸序列。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域包含野生型人類介白素-2之胺基酸序列。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域具有SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域經糖基化。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域經N -糖基化。
在一個實施例中，與野生型介白素-2相比，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有降低之對介白素-2受體-α (IL-2Rα)鏈之結合親和力。在某些實施例中，融合蛋白對介白素-2受體-α (IL-2Rα)之結合親和力藉由其締合常數(K a )來衡量，該締合常數為其解離常數(K d )的倒數。
在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有相比野生型介白素-2對IL-2Rα之K d 高不小於約2倍、不小於約5倍、不小於約10倍、不小於約100倍、或不小於約1,000倍的對IL-2Rα之K d 。在一個實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有相比野生型介白素-2對IL-2Rα之K d 高不小於約2倍的對IL-2Rα之K d 。在另一個實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有相比野生型介白素-2對IL-2Rα之K d 高不小於約5倍的對IL-2Rα之K d 。在又另一個實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有相比野生型介白素-2對IL-2Rα之K d 高不小於約10倍的對IL-2Rα之K d 。在又另一個實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有相比野生型介白素-2對IL-2Rα之K d 高不小於約100倍的對IL-2Rα之K d 。在又另一個實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有相比野生型介白素-2對IL-2Rα之K d 高不小於約1,000倍的對IL-2Rα之K d 。
在一個實施例中，野生型介白素-2為人類野生型介白素-2。在另一個實施例中，人類野生型介白素-2具有SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列。在又另一個實施例中，人類野生型介白素-2具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列。在又另一個實施例中，人類野生型介白素-2具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列。在又另一個實施例中，人類野生型介白素-2具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列。在又另一個實施例中，人類野生型介白素-2具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列。在又另一個實施例中，人類野生型介白素-2具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列。
在一個實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不小於約20 nM、不小於約50 nM、不小於約100 nM、不小於約1 µM、不小於約10 µM、不小於約100 µM、或不小於約1 mM之對IL-2Rα之K d 。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不小於約20 nM之對IL-2Rα之K d 。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不小於約50 nM之對IL-2Rα之K d 。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不小於約100 nM之對IL-2Rα之K d 。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不小於約1 µM之對IL-2Rα之K d 。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不小於約10 µM之對IL-2Rα受體(CD25)之K d 。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不小於約100 µM之對IL-2Rα之K d 。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不小於約1 mM之對IL-2Rα之K d 。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不可測量之對IL-2Rα之結合。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不可檢測之對IL-2Rα之結合，如利用表面電漿共振(SPR)方法所測量。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不可檢測之對IL-2Rα之結合，如利用生物層干涉測量法(BLI)所測量。
在又另一個實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有對IL-2Rβ比對IL-2Rα優先之選擇率；其中該選擇率為不大於約1、不大於約0.5、不大於約0.2、不大於約0.1、不大於約0.01或、不大於約0.001；且其中該選擇率係經測量為融合蛋白對IL-2Rβ之K d 相對於融合蛋白對IL-2Rα之K d 之比。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不大於約1之選擇率。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不大於約0.5之選擇率。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不大於約0.2之選擇率。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不大於約0.1之選擇率。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不大於約0.01之選擇率。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不大於約0.001之選擇率。
在一個實施例中，IL-2Rα為人類IL-2Rα。在另一個實施例中，人類IL-2Rα具有SEQ ID NO: 98之胺基酸序列。
在一個實施例中，IL-2Rβ為人類IL-2Rβ。在另一個實施例中，人類IL-2Rβ具有SEQ ID NO: 99之胺基酸序列。
在一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rα之解離常數利用表面電漿共振(SPR)方法來測定。在另一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rα之解離常數利用BIACORE®分析來測定。在又另一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rα之解離常數利用生物層干涉測量法(BLI)來測定。在又另一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rα之解離常數利用OCTET®分析來測定。
在一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rβ之解離常數利用SPR方法來測定。在另一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rβ之解離常數利用BIACORE®分析來測定。在又另一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rβ之解離常數利用BLI來測定。在又另一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rβ之解離常數利用OCTET®分析來測定。
在又另一個實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有對IL-2Rβ及IL-2Rγ複合物比對IL-2Rα優先之選擇率；其中該選擇率為不大於約0.01或不大於約0.001；及其中該選擇率係經測量為融合蛋白對IL-2Rβ及IL-2Rγ複合物之K d 相對於融合蛋白對IL-2Rα之K d 之比。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不大於約0.01之選擇率。在某些實施例中，含有N -糖基化介白素-2域之融合蛋白具有不大於約0.001之選擇率。在一個實施例中，融合蛋白對IL-2Rα、及IL-2Rβ及IL-2Rγ複合物之解離常數係如Richert等人，J. Mol. Biol. 2004 ，339 ，1115-9中所述來測定。
在一個實施例中，IL-2Rγ為人類IL-2Rγ。在另一個實施例中，人類IL-2Rγ具有SEQ ID NO: 100之胺基酸序列。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域為133個胺基酸之N- 糖基化多肽。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之一個、兩個、三個、四個或更多個取代。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109或T111處之胺基酸取代。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置K35、M39、A73或D109處之胺基酸取代。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111之兩個取代。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、Q74、Y107、D109及/或T111處之兩個取代。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之三個取代。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置R38、L40、F42、Y45、E61、E62、K64、P65及/或L66處之三個取代。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之四個取代。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置R38、L40、F42及Y45處之四個取代。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之一個、兩個、三個或四個取代。在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之一個取代。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之兩個取代。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之R38N及Y45N之取代。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之三個取代。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之四個取代。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含一個、兩個、三個或更多個N -糖基化位點，各獨立地具有NXT或NXS之胺基酸序列，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NXT或NXS之胺基酸序列之N -糖基化位點，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含兩個N -糖基化位點，各獨立地具有NXT或NXS之胺基酸序列，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NFT之N -糖基化位點及NMT之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含三個N -糖基化位點，各獨立地具有NXT或NXS之胺基酸序列，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。
在一個實施例中，各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在另一個實施例中，各X獨立地為A、C、D、G、H、K、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在又另一個實施例中，各X獨立地為A、E、F、K、L、M、R、V、W或Y。在又另一個實施例中，各X獨立地為F或M。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NAT、NAS、NET、NES、NFT、NFS、NKT、NKS、NLT、NLS、NMT、NMS、NRT、NRS、NVT、NVS、NWT、NWS、NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NAT或NAS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NET或NES之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NFT或NFS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NKT或NKS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NLT或NLS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NMT或NMS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NRT或NRS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NVT或NVS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NWT或NWS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NAT、NAS、NET、NES、NFT、NFS、NKT、NKS、NLT、NLS、NMT、NMS、NRT、NRS、NVT、NVS、NWT、NWS、NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34、35、37、38、39、41、42、43、44、45、61、62、64、65、66、68、69、71、72、107或109處開始。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NKT或NKS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34或42處開始。
在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NLT或NLS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置35、39、62、65、69或71處開始。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NRT或NRS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置37處開始，。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NMT或NMS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置38或45處開始。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NFT或NFS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置41或43處開始。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置44處開始。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NET或NES之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置61、66或109處開始。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NAT或NAS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置64、72或107處開始。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含具有NVT或NVS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置68處開始。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NA、NE、NK、NM或NW之胺基酸序列。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NA之胺基酸序列。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NE之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NK之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NM之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NW之胺基酸序列。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NA、NE、NK、NM或NW之胺基酸序列，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34、38、42、45、61、64、66、72、107或109處開始。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NK之胺基酸序列，在位置34或42處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NM之胺基酸序列，在位置38或45處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NE之胺基酸序列，在位置61、66或109處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含NA之胺基酸序列，在位置64、72或107處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NK、NM、NE、NW或NA之胺基酸序列之N -糖基化位點。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NK之胺基酸序列之N -糖基化位點。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NM之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NE之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NW之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NA之胺基酸序列之N -糖基化位點。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NK、NM、NE、NW或NA之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34、38、42、45、61、64、66、72、107或109處開始。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NK之胺基酸序列之N -糖基化位點，在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34或42處開始。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NM之胺基酸序列之N -糖基化位點，在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置38或45處開始。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NE之胺基酸序列之N -糖基化位點，在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置61、66或109處開始。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域包含包含NA之胺基酸序列之N -糖基化位點，在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置64、72或107處開始。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代P34N，其中在位置34處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代K35N，其中在位置35處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代T37N，其中在位置37處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代R38N，其中在位置38處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代M39N，其中在位置39處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代T41N，其中在位置41處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代F42N，其中在位置42處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代K43N，其中在位置43處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代F44N，其中在位置44處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代Y45N，其中在位置45處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代E61N，其中在位置61處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代E62N，其中在位置62處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代K64N，其中在位置64處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代P65N，其中在位置65處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代L66N，其中在位置66處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代E68N，其中在位置68處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代V69N，其中在位置69處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代A73T或A73S，其中在位置71處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代L72N，其中在位置72處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代Y107N，其中在位置107處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代D109N，其中在位置109處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在介於介白素-2與介白素-2受體-α (IL-2Rα)鏈之間的界面殘基處之N -糖基化位點。
在一個實施例中，界面殘基為如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、K64、P65、E68、L72或Y107。在另一個實施例中，界面殘基為K35，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為T37，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為R38，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為T41，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為F42，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為K43，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為F44，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為Y45，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為E61，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為E62，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為K64，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為P65，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為E68，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為L72，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為Y107，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代K35N，其中在位置35處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代T37N，其中在位置37處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代R38N，其中在位置38處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代T41N，其中在位置41處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代F42N，其中在位置42處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代K43N，其中在位置43處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代F44N，其中在位置44處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代Y45N，其中在位置45處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代E61N，其中在位置61處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代E62N，其中在位置62處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代K64N，其中在位置64處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代P65N，其中在位置65處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代E68N，其中在位置68處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代L72N，其中在位置72處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代Y107N，其中在位置107處之天冬醯胺酸係經N -糖基化。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、K64、P65、E68、L72或Y107處之N -糖基化位點。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置K35處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置T37處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置R38處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置T41處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置F42處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置K43處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置F44處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置Y45處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置E61處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置E62處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置K64處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置P65處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置E68處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置L72處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含在位置Y107處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、不小於約99%的一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約80%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約85%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約90%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約91%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約92%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約93%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約94%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約95%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約96%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約97%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約98%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約99%的一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、或不小於約99%的一致性。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約80%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約85%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約90%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約91%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約92%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約93%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約94%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約95%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約96%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約97%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約98%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約99%的一致性。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代：K35N、M39N、A73T、A73S或D109N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代：K35N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 10、11、12或13之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 10、11、12或13。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代：M39N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 86或87之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 86或87。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代：A73T或A73S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 70、71、72或73之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 70、71、72或73。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含胺基酸取代：D109N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 82、83、84或85之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 82、83、84或85。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含選自下列之兩個胺基酸取代組合：(i) P34N及L36T或L36S；(ii) K35N及T37S；(iii) T37N及M39T或M39S；(iv) R38N及L40T或L40S；(v) T41N及K43T或K43S；(vi) F42N及F44T或F44S；(vii) K43N及Y45T或Y45S；(viii) F44N及M46T或M46S；(ix) Y45N及P47T或P47S；(x) E61N及L63T或L63S；(xi) E62N及K64T或K64S；(xii) P65N及E67T或E67S；(xiii) L66N及E68T或E68S；(xiv) E68N及L70T或L70S；(xv) V69N及N71T或N71S；(xvi) L72N及Q74T或Q74S；(xvii) Y107N及D109T或D109S；及(xviii) D109N及T111S；如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) P34N及(ii) L36T或L36S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 6、7、8或9之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 6、7、8或9。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：K35N及T37S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 11或13之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 11或13。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) T37N及(ii) M39T0或M39S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 14、15、16或17之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 14、15、16或17。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) R38N及(ii) L40T或L40S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 18、19、20或21之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 18、19、20或21。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) T41N及(ii) K43T或K43S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 22、23、24或25之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 22、23、24或25。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) F42N及(ii) F44T或F44S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 26、27、28或29之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 26、27、28或29。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) K43N及(ii) Y45T或Y45S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 30、31、32或33之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 30、31、32或33。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) F44N及(ii) M46T或M46S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 34、35、36或37之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 34、35、36或37。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) Y45N及(ii) P47T或P47S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 38、39、40或41之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 38、39、40或41。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) E61N及(ii) L63T或L63S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 42、43、44或45之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 42、43、44或45。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) E62N及(ii) K64T或K64S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 46、47、48或49之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 46、47、48或49。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) P65N及(ii) E67T或E67S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 54、55、56或57之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 54、55、56或57。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) L66N及(ii) E68T或E68S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 58、59、60或61之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 58、59、60或61。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) E68N及(ii) L70T或L70S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 62、63、64或65之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 62、63、64或65。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) V69N及(ii) N71T或N71S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 66、67、68或69之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 66、67、68或69。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) L72N及(ii) Q74T或Q74S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 74、75、76或77之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 74、75、76或77。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) Y107N及(ii) D109T或D109S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 78、79、80或81之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 78、79、80或81。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) D109N及(ii) T111S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 83或85之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 83或85。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含三個胺基酸取代：(i) R38N，(ii) L40T或L40S，及(iii) F42A、Y45A、E61A或E62A，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 90、91、92、93、94、95、96或97之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 90，91、92、93、94、95、96或97。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含三個胺基酸取代：(i) K64N，(ii) P65A，及(iii) L66T或L66S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 50、51、52或52之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 50、51、52或52。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含四個胺基酸取代：(i) R38N，(ii) L40T或L40S，(iii) K43N，及(iv) Y45T或Y45S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含SEQ ID NO: 88或89之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域之胺基酸序列為SEQ ID NO: 88或89。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含選自SEQ ID NO: 6至97之胺基酸序列。
在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N -糖基化介白素-2域包含選自SEQ ID NO: 18至21、30至33及88至97之胺基酸序列。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域具有一個聚醣。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域具有一個連接至天冬醯胺酸殘基之側鏈中之氮的聚醣。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域具有兩個聚醣。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域具有兩個聚醣，其中至少一個聚醣係連接至天冬醯胺酸殘基之側鏈中之氮。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域具有兩個聚醣，其各者係連接至天冬醯胺酸殘基之側鏈中之氮。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域具有三個聚醣。
在一個實施例中，聚醣為N -聚醣。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域上的N -聚醣為寡甘露糖型(oligomannose-type)。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域上的N -聚醣為複合物型。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域上的N -聚醣為氫化物型。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域上的N -聚醣為雙觸(biantennary)複合物型。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域上的N -聚醣為三觸(triantennary)複合物型。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域上的N -聚醣為四觸(tetraantennary)複合物型。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域上的N -聚醣為描述於圖7中之聚醣中之一者。Szabo等人，J. Proteome. Res. 2018 ，17 ，1559-74，其揭示內容之全文係以引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之N- 糖基化介白素-2域進一步包括一或多個另外取代、缺失及/或插入；及/或一或多個另外轉譯後修飾。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-2域為介白素-2突變蛋白。在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之一個、兩個、三個、四個或更多個取代。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109或T111處之胺基酸取代。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置K35、M39、A73或D109處之胺基酸取代。
在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之兩個取代。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、Q74、Y107、D109及/或T111處之兩個取代。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之三個取代。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置R38、L40、F42、Y45、E61、E62、K64、P65及/或L66處之三個取代。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109或T111處之四個取代。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置R38、L40、F42及Y45處之四個取代。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含選自P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之一個、兩個、三個或四個取代，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含選自P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之一個取代，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含選自P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之兩個取代，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含R38N及Y45N之取代，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含選自P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之三個取代，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含選自P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之四個取代，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含一個、兩個、三個或更多個N -糖基化位點，各獨立地具有NXT或NXS之胺基酸序列，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NXT或NXS之胺基酸序列之N -糖基化位點，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個N -糖基化位點，各獨立地具有NXT或NXS之胺基酸序列，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NFT之N -糖基化位點及NMT之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含四個N -糖基化位點，各獨立地具有NXT或NXS之胺基酸序列，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。
在一個實施例中，各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、M、N、Q、R、S、T、V或Y。在另一個實施例中，各X獨立地為A、C、D、G、H、K、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。在又另一個實施例中，各X獨立地為A、E、F、K、L、M、R、V、W或Y。在又另一個實施例中，各X獨立地為F或M。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NAT、NAS、NET、NES、NFT、NFS、NKT、NKS、NLT、NLS、NMT、NMS、NRT、NRS、NVT、NVS、NWT、NWS、NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NAT或NAS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NET或NES之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NFT或NFS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NKT或NKS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NLT或NLS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NMT或NMS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NRT或NRS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NVT或NVS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NWT或NWS之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NAT、NAS、NET、NES、NFT、NFS、NKT、NKS、NLT、NLS、NMT、NMS、NRT、NRS、NVT、NVS、NWT、NWS、NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34、35、37、38、39、41、42、43、44、45、61、62、64、65、66、68、69、71、72、107或109處開始。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NKT或NKS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34或42處開始。
在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NLT或NLS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置35、39、62、65、69或71處開始。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NRT或NRS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置37處開始。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NMT或NMS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置38或45處開始。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NFT或NFS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之在位置41或43處開始。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置44處開始。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NET或NES之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置61、66或109處開始。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NAT或NAS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置64、72或107處開始。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含具有NVT或NVS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置68處開始。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NA、NE、NK、NM或NW之胺基酸序列。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NA之胺基酸序列。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NE之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NK之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NM之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NW之胺基酸序列。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NA、NE、NK、NM或NW之胺基酸序列，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34、38、42、45、61、64、66、72、107或109處開始。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NK之胺基酸序列，在位置34或42處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NM之胺基酸序列，在位置38或45處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NE之胺基酸序列，在位置61、66或109處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含NA之胺基酸序列，在位置64、72或107處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NK、NM、NE、NW或NA之胺基酸序列之N -糖基化位點。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NK之胺基酸序列之N -糖基化位點。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NM之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NE之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NW之胺基酸序列之N -糖基化位點。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NA之胺基酸序列之N -糖基化位點。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NK, NM、NE、NW或NA之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34、38、42、45、61、64、66、72、107或109處開始。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NK之胺基酸序列之N -糖基化位點，在位置34或42處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NM之胺基酸序列之N -糖基化位點，在位置38或45處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NE之胺基酸序列之N -糖基化位點，在位置61、66或109處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含包含NA之胺基酸序列之N -糖基化位點，在位置64、72或107處開始，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在介於介白素-2與介白素-2受體-α (IL-2Rα)鏈之間的界面殘基處之N -糖基化位點。
在一個實施例中，界面殘基為K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、K64、P65、E68、L72或Y107，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在另一個實施例中，界面殘基為K35，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為T37，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為R38，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為T41，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為F42，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為K43，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為F44，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為Y45，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為E61，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為E62，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為K64，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為P65，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為E68，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為L72，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。在又另一個實施例中，界面殘基為Y107，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5中所述。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、K64、P65、E68、L72或Y107處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置K35處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置T37處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置R38處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置T41處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置F42處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置K43處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置F44處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置Y45處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置E61處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置E62處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置K64處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置P65處之N -糖基化位點，胺基酸序列為SEQ ID NO: 1、2、3、4或5。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置E68之處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置L72處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含在位置Y107處之N -糖基化位點，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、或不小於約99%的一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約80%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約85%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約90%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約91%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約92%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約93%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約94%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約95%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約96%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約97%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約98%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約99%的一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%或不小於約99%的一致性。
在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約80%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約85%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約90%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約91%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約92%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約93%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約94%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約95%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約96%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約97%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約98%的一致性。在某些實施例中，介白素-2突變蛋白與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列具有不小於約99%的一致性。
在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含胺基酸取代：K35N、M39N、A73T、A73S或D109N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含胺基酸取代：K35N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 10、11、12或13之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 10、11、12或13。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含胺基酸取代：M39N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 86或87之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 86或87。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含胺基酸取代：A73T或A73S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 70、71、72或73之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 70、71、72或73。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含胺基酸取代：D109N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 82、83、84或85之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 82、83、84或85。
在某些實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代組合，該兩個胺基酸取代組合選自(i) P34N及L36T或L36S；(ii) K35N及T37S；(iii) T37N及M39T或M39S；(iv) R38N及L40T或L40S；(v) T41N及K43T或K43S；(vi) F42N及F44T或F44S；(vii) K43N及Y45T或Y45S；(viii) F44N及M46T或M46S；(ix) Y45N及P47T或P47S；(x) E61N及L63T或L63S；(xi) E62N及K64T或K64S；(xii) P65N及E67T或E67S；(xiii) L66N及E68T或E68S；(xiv) E68N及L70T或L70S；(xv) V69N及N71T或N71S；(xvi) L72N及Q74T或Q74S；(xvii) Y107N及D109T或D109S；或(xviii) D109N及T111S；如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) P34N及(ii) L36T或L36S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 6、7、8或9之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 6、7、8或9。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：K35N及T37S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 11或13之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 11或13。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) T37N及(ii) M39T或M39S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 14、15、16或17之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 14、15、16或17。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) R38N及(ii) L40T或L40S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 18、19、20或21之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 18、19、20或21。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) T41N及(ii) K43T或K43S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 22、23、24或25之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 22、23、24或25。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) F42N及(ii) F44T或F44S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 26、27、28或29之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 26、27、28或29。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) K43N及(ii) Y45T或Y45S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 30、31、32或33之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 30、31、32或33。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) F44N及(ii) M46T或M46S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 34、35、36或37之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 34、35、36或37。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) Y45N及(ii) P47T或P47S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 38、39、40或41之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 38、39、40或41。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) E61N及(ii) L63T或L63S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 42、43、44或45之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 42、43、44或45。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) E62N及(ii) K64T或K64S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 46、47、48或49之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 46、47、48或49。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) P65N及(ii) E67T或E67S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 54、55、56或57之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 54、55、56或57。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) L66N及(ii) E68T或E68S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 58、59、60或61之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變體之胺基酸序列為SEQ ID NO: 58、59、60或61。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) E68N及(ii) L70T或L70S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 62、63、64或65之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 62、63、64或65。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) V69N及(ii) N71T或N71S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 66、67、68或69之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 66、67、68或69。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) L72N及(ii) Q74T或Q74S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 74、75、76或77之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 74、75、76或77。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) Y107N及(ii) D109T或D109S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 78、79、80或81之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 78、79、80或81。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含兩個胺基酸取代：(i) D109N及(ii) T111S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 83或85之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 83或85。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含三個胺基酸取代：(i) R38N，(ii) L40T或L40S，及(iii) F42A、Y45A、E61A或E62A，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 90，91、92、93、94、95、96或97之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 90，91、92、93、94、95、96或97。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含三個胺基酸取代：(i) K64N，(ii) P65A，及(iii) L66T或L66S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 50、51、52或52之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 50、51、52或52。
在一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含四個胺基酸取代：(i) R38N，(ii) L40T，(iii) K43N，或(iv) Y45T或Y45S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含SEQ ID NO: 88或89之胺基酸序列。在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO: 88或89。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 6至97之胺基酸序列。
在又另一個實施例中，介白素-2突變蛋白包含選自SEQ ID NO: 18至21、30至33及88至97。
在某些實施例中，介白素-2突變蛋白進一步包括一或多個另外取代、缺失及/或插入；及/或一或多個另外轉譯後修飾。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域為野生型介白素-21域。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域為野生型人類介白素-21域。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域為介白素-21變異體。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域為介白素-21突變蛋白。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約70%、不小於約75%、不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、或不小於約99%的一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約70%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約75%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約80%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約85%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約90%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約91%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約92%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約93%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約94%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約95%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約96%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約97%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約98%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域包含與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約99%的一致性之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約70%、不小於約75%、不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、或不小於約99%的一致性。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約70%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約75%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約80%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約85%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約90%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約91%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約92%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約93%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約94%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約95%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約96%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約97%的一致性。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約98%的一致性之胺基酸序列。在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列具有不小於約99%的一致性。
在某些實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少約1至約10個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少一個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少兩個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少三個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少四個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少五個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少六個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少七個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少八個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少九個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。在又另一個實施例中，介白素-21變異體在S124與S133之間缺少十個胺基酸，如在SEQ ID NO: 156之胺基酸序列中所述。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域具有SEQ ID NO: 156、157或158之胺基酸序列。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域具有SEQ ID NO: 156之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域具有SEQ ID NO: 157之胺基酸序列。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域具有SEQ ID NO: 158之胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供的融合蛋白中之介白素-21域進一步包括一或多個另外取代、缺失及/或插入；及/或一或多個另外轉譯後修飾。
在某些實施例中，融合蛋白具有在約1 pM至約100 nM、約2 pM至約10 nM、約5 pM至約2 nM、或約10 pM至約0.5 nM之範圍內之IL-21Rα解離常數。在某些實施例中，融合蛋白具有在約1 pM至約100 nM之範圍內之IL-21Rα解離常數。在某些實施例中，融合蛋白具有在約2 pM至約10 nM之範圍內之IL-21Rα解離常數。在某些實施例中，融合蛋白具有在約5 pM至約2 nM之範圍內之IL-21Rα解離常數。在某些實施例中，融合蛋白具有在約10 pM至約0.5 nM之範圍內之IL-21Rα解離常數。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之各肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第一肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第二肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第三肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中一者之胺基酸序列之肽連接子。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO: 124、125或126之胺基酸序列之GSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 127、128、129或130之胺基酸序列之G3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 131、132、133或134之胺基酸序列之G4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 135、136、137或138之胺基酸序列之SGSG連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 139、140、141或142之胺基酸序列之SG3S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 143、144、145或146之胺基酸序列之SG4S連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 147、148、149或150之胺基酸序列之EAAAK連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 151、152、153或154之胺基酸序列之PAPAP連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白中之第四肽連接子獨立地包含具有SEQ ID NO: 155之胺基酸序列之連接子。
在一個實施例中，本文提供一種融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 1至97中之任何一者之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156至158中之任何一者之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列之VH H單域抗體；及視需要一個或兩個肽連接子，各獨立地具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之任何一者之胺基酸序列。
在另一個實施例中，本文提供一種融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 2或8之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156或157之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列之VH H單域抗體；及視需要一個或兩個肽連接子，各獨立地具有SEQ ID NO: 126或133之胺基酸序列。
在又另一個實施例中，本文提供一種融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 1至97中之任何一者之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156至158中之任何一者之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列之VH H單域抗體；及一個具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之任何一者之胺基酸序列之肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係連接至肽連接子的N 端，該肽連接子的C 端係連接至VH H單域抗體的N 端，及該VH H單域抗體的C 端係連接至介白素-21域的N 端；或其中該介白素-21域的C 端係連接至VH H單域抗體的N 端，該VH H單域抗體的C 端係連接至肽連接子的N 端，及該肽連接子的C 端係連接至介白素-2域的N 端。
在又另一個實施例中，本文提供一種融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 2或8之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156或157之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列之VH H單域抗體；一個具有SEQ ID NO: 126或133之胺基酸序列之肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係連接至肽連接子的N 端，該肽連接子的C 端係連接至VH H單域抗體的N 端，及該VH H單域抗體的C 端係連接至介白素-21域的N 端；或其中該介白素-21域的C 端係連接至VH H單域抗體的N 端，該VH H單域抗體的C 端係連接至肽連接子的N 端，及該肽連接子的C 端係連接至介白素-2域的N 端。
在又另一個實施例中，本文提供具有SEQ ID NO: 159至171中之任何一者之胺基酸序列之介白素-2及介白素-21融合蛋白。
在一個實施例中，本文提供一種融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 1至97中之任何一者之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156至158中之任何一者之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 116至123中之任何一者之胺基酸序列之Fc域；及視需要一個或兩個肽連接子，各獨立地具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之任何一者之胺基酸序列。
在另一個實施例中，本文提供一種融合蛋白，其包含兩個介白素-2域，各獨立地具有SEQ ID NO: 1至97中之任何一者之胺基酸序列；一個具有SEQ ID NO: 156至158中之任何一者之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 116至123中之任何一者之胺基酸序列之Fc域；及視需要一個、兩個或三個肽連接子，各獨立地具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之任何一者之胺基酸序列。
在一個實施例中，本文所提供的融合蛋白係自酵母細胞、昆蟲細胞、哺乳動物細胞、人類細胞或植物細胞產生。在另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白係自酵母細胞產生。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白係自昆蟲細胞產生。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白係自哺乳動物細胞產生。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白係自CHO細胞產生。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白係自人類細胞產生。在又另一個實施例中，本文所提供的融合蛋白係自植物細胞產生。 醫藥組合物
在一個實施例中，本文提供包含本文所提供的融合蛋白及醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組合物。
在一個實施例中，醫藥組合物係調配成單劑型。
在一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物為固體調配物。在另一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物為凍乾固體調配物。在又另一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物為溶液。在又另一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物為水性溶液。在又另一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物係經滅菌。
在一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物係調配成用於非經腸投與之劑型。在另一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物係調配成用於靜脈內投與之劑型。在又另一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物係調配成用於肌肉內投與之劑型。在又另一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物係調配成用於皮下投與之劑型。在又另一個實施例中，本文所提供的醫藥組合物係調配成用於瘤內投與之劑型。 使用方法
在一個實施例中，本文提供一種用於治療、預防或改善個體增生性疾病之方法，該方法包括對有此需要的個體投與治療有效量之本文所提供的融合蛋白。
在一實施例中，增生性疾病為癌症。在另一個實施例中，增生性疾病為轉移性癌症。在又另一個實施例中，增生性疾病為腎細胞癌(RCC)或黑色素瘤。在又另一個實施例中，增生性疾病為轉移性腎細胞癌(RCC)或轉移性黑色素瘤。
在另一個實施例中，本文提供一種活化免疫效應細胞之方法，該方法包括使該細胞與有效量之本文所提供的融合蛋白接觸。
在某些實施例中，治療有效量在約0.001至100 mg/kg個體體重/天(mg/kg/天)、約0.01至約75 mg/kg/天、約0.1至約50 mg/kg/天、約0.5至約25 mg/kg/天、或約1至約20 mg/kg/天之範圍內，該治療有效量可以單劑量或多劑量投與。在此範圍內，劑量可在每天約0.005至約0.05、約0.05至約0.5、約0.5至約5.0、約1至約15、約1至約20、或約1至約50 mg/kg之範圍內。
在某些實施例中，個體為哺乳動物。在某些實施例中，個體為人類。
將藉由以下非限制性實例進一步理解本發明。 實例 實例1 IL-2及IL-21融合蛋白之選殖、表現及純化
人類IL-2及IL-21之胺基酸序列係自UniProt獲得(IL-2：P60568，21-153 aa；IL-21：Q9HBE4，25-162 aa)。編碼人類IL-2及IL-21之去氧寡核苷酸序列針對CHO細胞表現經密碼子最佳化。人類IL-2、IL-21及其突變蛋白之去氧寡核苷酸序列係商業合成。
含有(i)人類IL-2或其突變蛋白，(ii)人類IL-21或其突變蛋白，及(iii)抗人類血清白蛋白(HSA)抗體之融合蛋白之某些構型繪示於圖1中。含有(i)人類IL-2或其突變蛋白，(ii)人類IL-21或其突變蛋白，及(iii)人類IgG Fc或其突變蛋白之某些構型繪示於圖4中。
編碼人類IL-2、IL-21、肽連接子及抗HSA VH H抗體或人類IgG Fc之去氧寡核苷酸序列藉由與市售套組同源組裝選殖而無縫地組裝在一起。將融合蛋白之寡核苷酸各獨立地插入UCOE®表現載體CET1019-AS-Puro中以用於CHO細胞表現。
編碼融合蛋白之寡核苷酸序列在EXPICHO™細胞中瞬時表現。簡言之，在第-1天，將EXPICHO-S™細胞與EXPICHO™表現培養基以3至4 x 106 個細胞/mL接種在通風愛倫美氏振盪燒瓶中。將燒瓶放在具有8% CO2 之37℃培養箱中的125 rpm軌道振盪器上。在第0天，將質體DNA與EXPIFECTAMINE™ CHO試劑混合。然後將混合物慢慢添加至細胞。16小時後，將細胞轉移至具有5% CO2 之32℃培養箱。在第1天及第5天用EXPICHO™飼料餵養細胞兩次。在第8天至第12天收穫CHO細胞。
於CHO細胞中產生之融合蛋白藉由兩步驟純化製程進行純化，該純化製程包含使用蛋白質A (例如AMSPHERE™ A3)樹脂之蛋白質A親和層析及離子交換層析(例如CAPTO™ S ImpAct)。
對於蛋白質A親和層析，蛋白質A親和管柱經加載澄清CHO培養基且然後用20 mM磷酸鈉洗滌兩次及用20 mM磷酸鈉與0.5M NaCl (pH 7.5)洗滌一次。融合蛋白用提供有1%異丙醇(以體積計)之50 mM乙酸鈉(pH 3.0)洗脫。
然後在AKTA™純化之準備中，將經純化之融合蛋白緩衝液交換至20 mM磷酸鈉(pH 6.0)中。將融合蛋白加載於1 mL HITRAP CAPTO™ S IMPACT管柱上。加載後，用pH 6.0的20 mM磷酸鈉洗滌管柱達10倍管柱體積(CV)。洗滌後，將融合蛋白用pH 6.0的20 mM磷酸鈉加上1M NaCl以0至100%之梯度以22.5 CV洗脫。以約12 mS/cm洗脫出融合蛋白。將經洗脫之溶離份組併在一起且經緩衝液交換至含有5 mM組胺酸、20 mM NaCl及0.02% TWEEN-80之溶液(pH 4.0)中以進行儲存。 實例2 IL-2/IL-21融合蛋白對於STAT3信號傳導之作用
在STAT3信號傳導分析中評價IL-2/IL-21融合蛋白。
將Pfeiffer細胞保持在含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。將用作為對照的hIL-21-抗HSA融合蛋白(C1 )；或IL-2/IL-21融合蛋白在37℃及5% CO2 下於含有10 mM HEPES之漢克氏(Hanks)平衡鹽溶液中處理Pfeiffer細胞(100,000個) 30分鐘。使用磷酸化STAT3 (Tyr705)均相時差式螢光(HTRF)分析，測量磷酸化STAT3。將在665 nm/620 nm處之信號比乘以1000，作圖，且使用劑量反應曲線(Graphpad Prism)擬合以計算EC50 值。測定的EC50 值概述於下表1中。
在該表中，C1 代表hIL-21-抗HSA融合蛋白，其包含SEQ ID NO: 156之胺基酸序列之IL-21域及SEQ ID NO: 108之sdAb，其中該IL-21域的C 端係直接連接至sdAb的N 端。
A1 代表SEQ ID NO: 159之IL-2/IL-21融合蛋白，其包含SEQ ID NO: 2之IL-2域、SEQ ID NO: 156之IL-21域、SEQ ID NO: 108之sdAb、及SEQ ID NO: 126之肽連接子，其中該IL-21域的C 端係直接連接至sdAb的N 端，其N 端係直接連接至肽連接子的C 端，其N 端係直接連接至IL-2域的C 端。
A2 代表SEQ ID NO: 160之IL-2/IL-21融合蛋白，其包含SEQ ID NO: 20之IL-2域、SEQ ID NO: 156之IL-21域、SEQ ID NO: 108之sdAb、及SEQ ID NO: 126之肽連接子，其中該IL-2域的C 端係直接連接至肽連接子的N 端，其N 端係直接連接至sdAb的C 端，其N 端係直接連接至IL-21域的C 端。
A3 代表SEQ ID NO: 161之IL-2/IL-21融合蛋白，其包含SEQ ID NO: 20之IL-2域、SEQ ID NO: 156之IL-21域、SEQ ID NO: 108之sdAb、及SEQ ID NO: 126之肽連接子，其中該IL-21域的C 端係直接連接至sdAb的N 端，其N 端係直接連接至肽連接子的C 端，其N 端係直接連接至IL-2域的C 端。
A4 代表SEQ ID NO: 163之IL-2/IL-21融合蛋白，其包含SEQ ID NO: 20之IL-2域、SEQ ID NO: 157之IL-21域、SEQ ID NO: 108之sdAb、及SEQ ID NO: 126之肽連接子，其中該IL-21域的C 端係直接連接至sdAb的N 端，其N 端係直接連接至肽連接子的C 端，其N 端係直接連接至IL-2域的C 端。 表1
   C1 A1 A2 A3 A4
EC50 (pM) 95 82 89 61 199
結果顯示，IL-2/IL-21融合蛋白在活化STAT3信號傳導路徑方面具有與hIL-21-抗HSA融合蛋白(C1 )類似的信號傳導效力。 實例3 IL-2/IL-21融合蛋白對於STAT5信號傳導之作用
在STAT5信號傳導分析中評價IL-2/IL-21融合蛋白。
將Lousy細胞保持在含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。將用作為對照的hIL-2-抗HSA融合蛋白(hIL-2-抗HSA (C2 )或hIL-2突變體-抗HSA (C3 ))、或IL-2/IL-21融合蛋白在37℃及5% CO2 於含有10 mM HEPES之漢克氏平衡鹽溶液中處理Loucy細胞(100,000個) 30分鐘。使用磷酸化STAT5 (Tyr694)均相時差式螢光(HTRF)分析測量磷酸化STAT5。將在665 nm/620 nm處之信號比乘以1000，作圖，且使用劑量反應曲線(Graphpad Prism)擬合以計算EC50 值。測定的EC50 值概述於下表2中。
在該表中，C2 代表hIL-2-抗HSA融合蛋白，其包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列之IL-2域、SEQ ID NO: 108之sdAb、及SEQ ID NO: 126之肽連接子，其中該IL-2域的C 端係直接連接至肽連接子的N 端，其C 端係直接連接至sdAb的N 端。C3 代表hIL-2-抗HSA融合蛋白，其包含SEQ ID NO: 20之IL-2域、SEQ ID NO: 108之sdAb、及SEQ ID NO: 126之肽連接子，其中該IL-2域的C 端係直接連接至肽連接子的N 端，其C 端係直接連接至sdAb的N 端。 表2
   C2 C3 A1 A2 A3 A4
EC50 (nM) 9.0 5.1 1.5 2.2 1.6 3.2
結果顯示，在僅表現IL-2Rβ及IL-2Rγ之細胞中，與hIL-2-抗HSA (C2 )及糖基化hIL-2-抗HSA (C3 )相比，IL-2/IL-21融合蛋白具有更佳信號傳導效力。 實例4 利用CD3/CD28活化T細胞之IL-2/IL-21融合蛋白之活體外效力
藉由定量經CD3/CD28刺激之CD3+ T細胞對N87 (胃癌)細胞殺死之改良來測定hIL-21-抗HSA (C1 )、hIL-2-抗HSA (C2 )或融合蛋白(A1 、A2 及A3 )之活體外效力。
將N87癌細胞維持在含有10%胎牛血清及青黴素/鏈黴素之RPMI-1640中。在第0天，將10,000個N87細胞/孔接種在96孔平底板的培養基中。在第1天，將30,000個CD3+ T細胞/孔及1:300稀釋之抗CD3/抗CD28抗體複合物連同hIL-21-抗HAS (C1 )、hIL-2-抗HSA (C2 )或融合蛋白(A1 、A2 及A3 )一起添加至癌細胞。將板在37℃及5% CO2 下培養72小時。然後將細胞用4%多聚甲醛固定且用SYTOX™橙使細胞核染色。使用CYTATION™ 1藉由計數各孔中剩餘的癌細胞核數來計算剩餘癌細胞數。測定的IC50 值概述於下表3中。 表3
   C1 C2 A1 A2 A3
IC50 (pM) 13.7 9.8 5.4 3.4 1.6
實例5 IL-2/IL-21融合蛋白與人類IL-2Rα之結合研究
OCTET® RED96用於表徵IL-2/IL-21融合蛋白與人類IL-2Rα之相互作用。簡言之，將IL-2Rα-Fc融合蛋白加載於抗人類IgG Fc捕獲(AHC)生物感測器上。然後將生物感測器浸入含有100、200、400或800 nM之IL-2/IL-21融合蛋白之溶液中。利用整體擬合來分析主要實驗數據以測定解離常數(K d )。 實例6 IL-2/IL-21融合蛋白與人類IL-2Rβ之結合研究
OCTET® RED96用於表徵IL-2/IL-21融合蛋白與人類IL-2Rβ之相互作用。簡言之，將IL-2Rβ-Fc融合蛋白加載於抗人類IgG Fc捕獲(AHC)生物感測器上。然後將生物感測器浸入含有200、400或800 nM之IL-2/IL-21融合蛋白之溶液中。利用整體擬合來分析主要實驗數據以測定解離常數(K d )。 實例7 聚醣分析
使用AdvanceBio GLY-X™N -聚醣製劑，利用INSTANTPC™套組來分析融合蛋白之聚醣譜。該域經變性且使N -聚醣在50℃下由N -聚醣酶釋放。經釋放的N-聚醣藉由INSTANTPC™染料標記且然後利用Gly-X™清理。在HPLC系統上分析經標記之聚醣，該HPLC系統配備有ACQUITY UPLC聚醣BEH醯胺管柱(130 Å，1.7 µm，2.1 mm X 150 mm)，該管柱連接至與RF-20A螢光檢測器耦合的Shimadzu Nexera-i LC-2040C 3D MT。N -聚醣藉由將其與來自Agilent Technologies的INSTANTPC™標記之聚醣標準庫比較而加以識別。
以上所述之實例係經提供以使熟習此項技術者獲得如何製作及使用所主張的實施例之完整揭示內容及描述，而非意圖限制本文揭示內容之範疇。熟習此項技術者顯見的修改意欲在以下申請專利範圍之範疇內。本說明書中引用的所有公開案、專利及專利申請案均以引用之方式併入本文中，就如同明確及個別地指出此類公開案、專利或專利申請案各者以引用之方式併入本文中般。
圖1顯示包含介白素-2 (IL-2)域、介白素-21 (IL-21)域及抗HSA抗體作為半衰期延長域之一個實例之示例性融合蛋白之構型。
圖2顯示包含介白素-15 (IL-15)域、IL-21域及抗HSA抗體作為半衰期延長域之一個實例之示例性融合蛋白之構型。
圖3顯示包含IL-15可變域、IL-21域及抗HSA抗體作為半衰期延長域之一個實例之示例性融合蛋白之構型。
圖4顯示包含IL-2域、IL-21域及具有兩條肽鏈之Fc域作為半衰期延長域之一個實例之示例性融合蛋白之構型。
圖5顯示包含IL-15域、IL-21域及具有兩條肽鏈之Fc域作為半衰期延長域之一個實例之示例性融合蛋白之構型。
圖6顯示包含IL-15可變域、IL-21域及具有兩條肽鏈之Fc域作為半衰期延長域之一個實例之示例性融合蛋白之構型。
圖7說明某些N- 聚醣之結構。
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Claims (123)

  1. 一種融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域及半衰期延長域。
  2. 如請求項1之融合蛋白，其中該半衰期延長域包含白蛋白結合域、片段可結晶域、血清白蛋白、聚乙二醇或脂肪醯基。
  3. 如請求項1或2之融合蛋白，其中該半衰期延長域為白蛋白結合域。
  4. 如請求項1至3中任一項之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C端係直接或經由該第一肽連接子連接至該介白素-21域的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該白蛋白結合域的N 端。
  5. 如請求項1至3中任一項之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該白蛋白結合域的N 端。
  6. 如請求項1至3中任一項之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該介白素-21的N 端。
  7. 如請求項6之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至該介白素-21域的N 端。
  8. 如請求項6之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係經由該肽連接子連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至該介白素-21域的N 端。
  9. 如請求項6之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由該肽連接子連接至該介白素-21域的N 端。
  10. 如請求項6之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係經由該第一肽連接子連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由該第二肽連接子連接至該介白素-21域的N 端。
  11. 如請求項1至3中任一項之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該介白素-2域的N 端。
  12. 如請求項11之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域及白蛋白結合域；其中該介白素-21域的C 端係直接連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至該介白素-2域的N 端。
  13. 如請求項11之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係直接連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由該肽連接子連接至該介白素-2域的N 端。
  14. 如請求項11之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係經由該肽連接子連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係直接連接至該介白素-2域的N 端。
  15. 如請求項11之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-21域的C 端係經由該第一肽連接子連接至該白蛋白結合域的N 端；及該白蛋白結合域的C 端係經由該第二肽連接子連接至該介白素-2域的N 端。
  16. 如請求項1至3中任一項之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該介白素-2域的N 端；及該介白素-2域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該介白素-21域的N 端。
  17. 如請求項1至3中任一項之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、白蛋白結合域及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該白蛋白結合域的C 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該介白素-21域的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該介白素-2域的N 端。
  18. 如請求項3至17中任一項之融合蛋白，其中該白蛋白結合域為結合至人類血清白蛋白之抗體或其片段。
  19. 如請求項3至18中任一項之融合蛋白，其中該白蛋白結合域為單域抗體。
  20. 如請求項19之融合蛋白，其中該單域抗體為VH H單域抗體。
  21. 如請求項19或20之融合蛋白，其中該單域抗體包含：(i) SEQ ID NO: 101之CDR1、SEQ ID NO: 102之CDR2、及SEQ ID NO: 103之CDR3；或(ii) SEQ ID NO: 109之CDR1、SEQ ID NO: 110之CDR2及SEQ ID NO: 111之CDR3。
  22. 如請求項19至21中任一項之融合蛋白，其中該單域抗體具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列。
  23. 如請求項1或2之融合蛋白，其中該半衰期延長域為片段可結晶域。
  24. 2或23之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之片段可結晶域、及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該片段可結晶域之第一肽鏈的N 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該片段可結晶域之第二肽鏈的N 端。
  25. 2或23之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之片段可結晶域、及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的N 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該片段可結晶域之第一肽鏈的C 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該片段可結晶域之第二肽鏈的C 端。
  26. 2或23之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之片段可結晶域、及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該片段可結晶域之第一肽鏈的N 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該片段可結晶域之第二肽鏈的C 端。
  27. 2或23之融合蛋白，其包含介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之片段可結晶域、及視需要第一肽連接子及第二肽連接子；其中該介白素-2域的N 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該片段可結晶域之第一肽鏈的C 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該片段可結晶域之第二肽鏈的N 端。
  28. 2或23之融合蛋白，其包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之片段可結晶域、及視需要第一肽連接子、第二肽連接子及第三肽連接子；其中該第一介白素-2域的C 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該片段可結晶域之第一肽鏈的N 端；該第二介白素-2域的C 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該片段可結晶域之第二肽鏈的N 端；及該介白素-21域的N 端係直接或經由該第三肽連接子連接至該片段可結晶域之第一肽鏈的C 端。
  29. 2或23之融合蛋白，其包含第一介白素-2域及第二介白素-2域、介白素-21域、具有第一肽鏈及第二肽鏈之片段可結晶域、及視需要第一肽連接子、第二肽連接子及第三肽連接子；其中該第一介白素-2域的N 端係直接或經由該第一肽連接子連接至該片段可結晶域之第一肽鏈的C 端；該第二介白素-2域的N 端係直接或經由該第二肽連接子連接至該片段可結晶域之第二肽鏈的C 端；及該介白素-21域的C 端係直接或經由該第三肽連接子連接至該片段可結晶域之第一肽鏈的N 端。
  30. 如請求項2及23至29中任一項之融合蛋白，其中該片段可結晶域為hIgG1片段可結晶域、hIgG1片段可結晶域鏈1、hIgG1片段可結晶域鏈2、hIgG2片段可結晶域、hIgG4片段可結晶域或其突變蛋白(mutein)；或其片段。
  31. 如請求項2及23至30中任一項之融合蛋白，其中該片段可結晶域具有SEQ ID NO: 116、117、118、119、120、121、122或123之胺基酸序列。
  32. 如請求項1至31中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含野生型人類介白素-2之胺基酸序列。
  33. 如請求項1至31中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含SEQ ID NO: 1至5中之任何一者之胺基酸序列。
  34. 如請求項1至31中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域係經N -糖基化。
  35. 如請求項34之融合蛋白，其對介白素-2受體-α鏈之結合親和力比對野生型介白素-2降低。
  36. 如請求項35之融合蛋白，其對介白素-2受體-α鏈之解離常數比野生型介白素-2對介白素-2受體-α鏈之解離常數高不小於約2倍、不小於約5倍、不小於約10倍、不小於約100倍、或不小於約1,000倍。
  37. 如請求項34至36中任一項之融合蛋白，其中該野生型介白素-2具有SEQ. ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列。
  38. 如請求項34至37中任一項之融合蛋白，其對介白素-2受體-α鏈之解離常數不小於約20 nM、不小於約50 nM、不小於約100 nM、不小於約1 µM、不小於約10 µM、不小於約100 µM、或不小於約1 mM。
  39. 如請求項34至38中任一項之融合蛋白，其具有不大於約1、不大於約0.5、不大於約0.2、不大於約0.1、不大於約0.01、或不大於約0.001之選擇率；其中該選擇率之測定為該經N -糖基化介白素-2對介白素-2受體-β鏈之解離常數與該經N -糖基化介白素-2對介白素-2受體-α鏈之解離常數之比值。
  40. 如請求項34至39中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之一個、兩個、三個、四個或更多個取代。
  41. 如請求項40之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109或T111處之胺基酸取代。
  42. 如請求項40之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置K35、M39、A73或D109處之胺基酸取代。
  43. 如請求項40之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之兩個胺基酸取代。
  44. 如請求項40之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、Q74、Y107、D109及/或T111處之兩個胺基酸取代。
  45. 如請求項40之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之三個胺基酸取代。
  46. 如請求項40之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置R38、L40、F42、Y45、E61、E62、K64、P65及/或L66處之三個胺基酸取代。
  47. 如請求項40之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置P34、K35、L36、T37、R38、M39、L40、T41、F42、K43、F44、Y45、M46、P47、E61、E62、L63、K64、P65、L66、E67、E68、V69、L70、N71、L72、A73、Q74、Y107、D109及/或T111處之四個胺基酸取代。
  48. 如請求項40之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置R38、L40、F42及Y45處之四個取代。
  49. 如請求項34至48中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之一個、兩個、三個、四個或更多個取代。
  50. 如請求項49之融合蛋白，其中該介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之取代。
  51. 如請求項49之融合蛋白，其中該介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之兩個取代。
  52. 如請求項49之融合蛋白，其中該介白素-2域包含選自如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之P34N、K35N、T37N、R38N、M39N、T41N、F42N、K43N、F44N、Y45N、E61N、E62N、K64N、P65N、L66N、E68N、V69N、L72N、Y107N及D109N之三個取代。
  53. 如請求項34至52中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NXT或NXS之胺基酸序列之N -糖基化位點，其中各X獨立地為A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y。
  54. 如請求項34至53中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含一個N -糖基化位點。
  55. 如請求項34至53中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含兩個N -糖基化位點。
  56. 如請求項34至53中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含三個N -糖基化位點。
  57. 如請求項53至56中任一項之融合蛋白，其中各X獨立地為A、E、F、K、L、M、R、V、W或Y。
  58. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NAT、NAS、NET、NES、NFT、NFS、NKT、NKS、NLT、NLS、NMT、NMS、NRT、NRS、NVT、NVS、NWT、NWS、NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點。
  59. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NAT、NAS、NET、NES、NFT、NFS、NKT、NKS、NLT、NLS、NMT、NMS、NRT、NRS、NVT、NVS、NWT、NWS、NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34、35、37、38、39、41、42、43、44、45、61、62、64、65、66、68、69、71、72、107或109處開始。
  60. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NLT或NLS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置35、39、62、65、69或71處開始。
  61. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NRT或NRS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置37處開始。
  62. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NMT或NMS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置38或45處開始。
  63. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NFT或NFS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置41或43處開始。
  64. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NYT或NYS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置44處開始。
  65. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NET或NES之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置61、66或109處開始。
  66. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NAT或NAS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置64、72或107處開始。
  67. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有NVT或NVS之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置68處開始。
  68. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含含有NK、NM、NE、NW或NA之胺基酸序列之N -糖基化位點。
  69. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含含有NK、NM、NE、NW或NA之胺基酸序列之N -糖基化位點，各獨立地在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34、38、42、45、61、64、66、72、107或109處開始。
  70. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含含有NK之胺基酸序列之N -糖基化位點，在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置34或42處開始。
  71. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含含有NM之胺基酸序列之N -糖基化位點，在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置38或45處開始。
  72. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含含有NE之胺基酸序列之N -糖基化位點，在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置61、66或109處開始。
  73. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含含有NA之胺基酸序列之N -糖基化位點，在如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之位置64、72或107處開始。
  74. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在介白素-2與介白素-2受體-α鏈之間的界面殘基處之N -糖基化位點。
  75. 如請求項34至57中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含在介白素-2與介白素-2受體-α鏈之間的界面殘基處之N -糖基化位點。
  76. 如請求項75之融合蛋白，其中該界面殘基為如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之K35、T37、R38、T41、F42、K43、F44、Y45、E61、E62、K64、P65、E68、L72或Y107。
  77. 如請求項75或76之融合蛋白，其中該界面殘基為如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述之R38。
  78. 如請求項34至77中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含具有與SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列的一致性不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、或不小於約99%之胺基酸序列。
  79. 如請求項34至78中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含胺基酸取代：K35N、M39N、A73T、A73S或D109N，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
  80. 如請求項34至78中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含選自下列之兩個胺基酸取代組合：(i) P34N及L36T或L36S；(ii) K35N及T37S；(iii) T37N及M39T或M39S；(iv) R38N及L40T或L40S；(v) T41N及K43T或K43S；(vi) F42N及F44T或F44S；(vii) K43N及Y45T或Y45S；(viii) F44N及M46T或M46S；(ix) Y45N及P47T或P47S；(x) E61N及L63T或L63S；(xi) E62N及K64T或K64S；(xii) P65N及E67T或E67S；(xiii) L66N及E68T或E68S；(xiv) E68N及L70T或L70S；(xv) V69N及N71T或N71S；(xvi) L72N及Q74T或Q74S；(xvii) Y107N及D109T或D109S；及(xviii) D109N及T111S；如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
  81. 如請求項34至78中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含兩個胺基酸取代：(i) R38N及(ii) L40T或L40S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
  82. 如請求項34至78中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含三個胺基酸取代：(i) R38N，(ii) L40T或L40S，及(iii) F42A、Y45A、E61A或E62A，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
  83. 如請求項82之融合蛋白，其中該介白素-2域包含三個胺基酸取代：(i) K64N，(ii) P65A，及(iii) L66T或L66S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
  84. 如請求項34至78中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含四個胺基酸取代：(i) R38N，(ii) L40T或L40S，(iii) K43N，或(iv) Y45T或Y45S，如在SEQ ID NO: 1、2、3、4或5之胺基酸序列中所述。
  85. 如請求項34至84中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含選自SEQ ID NO: 6至97之胺基酸序列。
  86. 如請求項34至85中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含選自SEQ ID NO: 8、18至21、30至33、及88至97之胺基酸序列。
  87. 如請求項34至86中任一項之融合蛋白，其中該介白素-2域包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列。
  88. 如請求項1至87中任一項之融合蛋白，其中該介白素-21域包含野生型人類介白素-21之胺基酸序列。
  89. 如請求項1至87中任一項之融合蛋白，其中該介白素-21域包含介白素-21突變蛋白或變異體之胺基酸序列。
  90. 如請求項1至87中任一項之融合蛋白，其中該介白素-21域包含SEQ ID NO: 156、157或158之胺基酸序列。
  91. 如請求項1至87中任一項之融合蛋白，其中該介白素-21域與SEQ ID NO: 156之胺基酸序列的一致性不小於約70%、不小於約75%、不小於約80%、不小於約85%、不小於約90%、不小於約91%、不小於約92%、不小於約93%、不小於約94%、不小於約95%、不小於約96%、不小於約97%、不小於約98%、或不小於約99%。
  92. 如請求項88至91中任一項之融合蛋白，其中該融合蛋白對IL-21Rα之解離常數在約1 pM至約100 nM、約2 pM至約10 nM、約5 pM至約2 nM、或約10 pM至約0.5 nM之範圍內。
  93. 如請求項1至92中任一項之融合蛋白，其中各肽連接子獨立地為具有GSG或SEQ ID NO:124至155中之一者之胺基酸序列之肽連接子。
  94. 如請求項93之融合蛋白，其中各肽連接子獨立地為具有SEQ ID NO: 126或133之胺基酸序列之肽連接子。
  95. 如請求項1至22中任一項之融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 1至97中之任何一者之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156至158中之任何一者之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列之VH H單域抗體；及視需要一個或兩個肽連接子，各獨立地具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之任何一者之胺基酸序列。
  96. 如請求項1至22中任一項之融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 2或8之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156或157之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列之VH H單域抗體；及視需要一個或兩個肽連接子，各獨立地具有SEQ ID NO: 126或133之胺基酸序列。
  97. 如請求項1至22中任一項之融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 1至97中之任何一者之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156至158中之任何一者之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列之VH H單域抗體；及一個具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之任何一者之胺基酸序列之肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係連接至該肽連接子的N 端，該肽連接子的C 端係連接至該VH H單域抗體的N 端，及該VH H單域抗體的C 端係連接至該介白素-21域的N 端；或其中該介白素-21域的C 端係連接至該VH H單域抗體的N 端，該VH H單域抗體的C 端係連接至該肽連接子的N 端，及該肽連接子的C 端係連接至該介白素-2域的N 端。
  98. 如請求項1至22中任一項之融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 2或8之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156或157之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 108或115之胺基酸序列之VH H單域抗體；及一個具有SEQ ID NO: 126或133之胺基酸序列之肽連接子；其中該介白素-2域的C 端係連接至該肽連接子的N 端，該肽連接子的C 端係連接至該VH H單域抗體的N 端，及該VH H單域抗體的C 端係連接至該介白素-21域的N 端；或其中該介白素-21域的C 端係連接至該VH H單域抗體的N 端，該VH H單域抗體的C 端係連接至該肽連接子的N 端，及該肽連接子的C 端係連接至該介白素-2域的N 端。
  99. 如請求項1至22中任一項之融合蛋白，其具有選自SEQ ID NO: 158至171之胺基酸序列。
  100. 2及23至31中任一項之融合蛋白，其包含一個具有SEQ ID NO: 1至97中之任何一者之胺基酸序列之介白素-2域；一個具有SEQ ID NO: 156至158中之任何一者之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 116至123中之任何一者之胺基酸序列之Fc域；及視需要一個或兩個肽連接子，各獨立地具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之任何一者之胺基酸序列。
  101. 2及23至31中任一項之融合蛋白，其包含兩個介白素-2域，各獨立地具有SEQ ID NO: 1至97中之任何一者之胺基酸序列；一個具有SEQ ID NO: 156至158中之任何一者之胺基酸序列之介白素-21域；一個具有SEQ ID NO: 116至123中之任何一者之胺基酸序列之Fc域；及視需要一個、兩個或三個肽連接子，各獨立地具有GSG或SEQ ID NO: 124至155中之任何一者之胺基酸序列。
  102. 一種包含第一細胞激素域及第二細胞激素域及半衰期延長域之融合蛋白；其中該第一細胞激素域及該第二細胞激素域係不同。
  103. 如請求項102之融合蛋白，其中該融合蛋白對第一細胞激素域之受體具有之親和力低於對第二細胞激素域之受體之親和力。
  104. 如請求項102或103之融合蛋白，其中該融合蛋白具有之生物活性比相應游離細胞激素之生物活性高不小於約2倍、不小於約5倍、不小於約10倍、不小於約20倍、或不小於約50倍。
  105. 如請求項104之融合蛋白，其中該生物活性係在人類T細胞中之STAT5磷酸化。
  106. 如請求項104之融合蛋白，其中該生物活性係經活化之人類T細胞之增殖。
  107. 如請求項104之融合蛋白，其中該生物活性係自人類T細胞分泌促發炎細胞激素。
  108. 如請求項102至107中任一項之融合蛋白，其中該第一細胞激素域為介白素-2域或介白素-15域。
  109. 如請求項102至108中任一項之融合蛋白，其中該第二細胞激素域為介白素-21域。
  110. 一種融合蛋白，其包含介白素-21域、半衰期延長域及多肽，該多肽造成該融合蛋白透過包含CD122 (IL-2Rβ/IL-15Rβ)及CD132 (IL-2Rγ)亞單元之受體傳導信號。
  111. 如請求項110之融合蛋白，其中該多肽為介白素-2域或介白素-15域。
  112. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至111中任一項之融合蛋白及醫藥上可接受之賦形劑。
  113. 如請求項112之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係呈單劑型。
  114. 如請求項112或113之醫藥組合物，其中該醫藥組合物為固體。
  115. 如請求項112或113之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係呈非經腸劑型。
  116. 如請求項115之醫藥組合物，該醫藥組合物係呈靜脈內劑型。
  117. 如請求項112、113、115及116中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物為溶液。
  118. 預防或改善個體之增生性疾病之一或多種症狀之治療一或多種症狀之方法，該方法包括對該個體投與治療有效量之如請求項1至111中任一項之融合蛋白或如請求項112至117中任一項之醫藥組合物。
  119. 如請求項118之方法，其中該增生性疾病為癌症。
  120. 如請求項118或119之方法，其中該增生性疾病為轉移性癌症。
  121. 如請求項118至120中任一項之方法，其中該增生性疾病為腎細胞癌(RCC)或黑色素瘤。
  122. 如請求項121之方法，其中該增生性疾病為轉移性腎細胞癌(RCC)或轉移性黑色素瘤。
  123. 一種活化免疫效應細胞之方法，該方法包括使該細胞與有效量之如請求項1至111中任一項之融合蛋白或如請求項112至117中任一項之醫藥組合物接觸。
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