TW202104592A - 重複投予基因療法載體之方法 - Google Patents

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Abstract

本發明通常係關於向已進行第一基因療法方案之個體重複投與或重複投予第二或後續基因療法方案之投藥的方法，其中該第一基因療法載體及第二基因療法載體包含不同的AAV衣殼，但攜帶適用於治療相同疾病或病症之轉基因或聚核苷酸。

Description

重複投予基因療法載體之方法
本發明係關於重複投與或重複投予基因療法載體，例如AAV載體，以避免對初始載體之免疫反應，或避開對第一AAV載體之免疫反應且使後續劑量之AAV載體能夠治療性表現的方法。
腺相關病毒(AAV)視為一種最具有前景的用於人類基因療法之病毒載體。AAV具有有效感染分裂以及未分裂之人類細胞的能力。野生型AAV病毒基因組整合至宿主細胞基因組中之單一染色體位點中，且最重要的係，儘管AAV存在於大多數人類中，但其與任何疾病尚不相關。鑒於此等優點，在大量基因療法臨床試驗中評估重組腺相關病毒(rAAV)之多種不同臨床指示。
腺相關病毒(AAV) (一種細小病毒家族成員)為小的複製缺陷型非包膜二十面體病毒，其具有4.7千鹼基(kb)至6 kb之單股線性DNA基因組。AAV血清型2 (AAV2)基因組之核苷酸序列呈現於如由Ruffing等人,J. Gen. Virol. , 75: 3385-3392 (1994)修正之Srivastava等人,J. Virol. , 45: 555-564 (1983)中。AAV之生命週期及遺傳學經評述於Muzyczka,Current Topics in Microbiology and Immunology , 158: 97-129 (1992)中。
AAV具有使其例如在基因療法及表現治療性肽/多肽及聚核苷酸中作為將外源DNA遞送至細胞之載體具有引人注目之獨特特徵。培養物中之細胞的AAV感染為非細胞病變的，且人類及其他動物之天然感染為隱性及無症狀的。此外，AAV感染許多哺乳動物細胞，使得可能活體內靶向許多不同的組織。AAV前病毒基因組作為質體中選殖之DNA具有感染性，其使得重組基因組之構築變得可行。此外，由於指導AAV複製、基因組衣殼化及整合之信號係包含在AAV基因組之ITR內，故基因組內部大約4.3 kb中的一些或全部(編碼複製及結構性衣殼蛋白，rep-cap)可經外源DNA (諸如含有啟動子之基因卡匣)、所關注DNA及聚腺苷酸化信號置換。rep及cap蛋白可反式提供。AAV之另一個顯著特徵在於其係極其穩定且豐盛之病毒。其容易承受用於滅活腺病毒之條件(56℃至65℃持續數小時)，使得rAAV-載體之冷藏不那麼重要。甚至可將AAV凍乾。最後，經AAV感染之細胞對重複感染不具有抗性。
成功投與AAV載體之一個主要挑戰為克服暴露於野生型AAV或基於AAV之載體後產生的中和抗體(免疫球蛋白) (NAb)之存在。在兩種情況下，針對病毒衣殼蛋白之中和血清型-特異性抗體可降低相同血清型之AAV基因轉移的效率(Scallon等人, Blood. 107:1810-7, 2006；Hurlbut等人, Mol Ther. 18:1983-1994, 2010)。AAV通常在環境中發現且天然、預先存在之免疫力(諸如針對許多已知AAV之中和抗體)存在於包括兒童之大部分人類群體中(Fu等人, Hum Gene Ther Clin Dev. 28:187-196, 2017)。因此，該領域中之普遍共識為避免治療具有完全NAb效價之患者。因此，目前臨床上關於預先存在之免疫力的實踐涉及若患者具有針對AAV衣殼之中和抗體，則篩選人類患者進行排除(Brimble等人, Expert Opin Biol Ther 2016, 16(1):79-92及Boutin等人, Hum Gene Ther 2010, 21:704-712)。已嘗試免疫抑制方案以便在第一次投藥後減少NAb之形成以允許第二次投藥(Corti等人, Mol Ther-Meth Clin Dev (2014) 1, 14033；Mingozzi等人, Mol Ther, 第20卷, 第7號, 1410-1416；McIntosh等人, Gene Ther 2012, 19, 78-85)。此外，已提出克服預先存在之抗體的策略，其包括血漿交換及免疫抑制方案之使用(例如Chicoine等人, Mol Ther 2014, 第22卷, 第2號, 338-347；Hurlbut等人, Mol Ther 2010, 第18卷, 第11號, 1983-1984及Mingozzi等人, Mol Ther, 第20卷, 第7號, 1410-1416)。此等策略已在動物模型中測試，獲得有限成功。
AAV載體基因轉移平台之另一挑戰為效果之持久性。儘管迄今為止在人類臨床基因療法試驗中取得令人興奮之結果，其中AAV表明當靶向如肝臟(George等人, N. Engl. J. Med. 377, 2215-2227 (2017)；Manno等人, Nat. Med. 12, 342-347 (2006)；Miesbach等人, Blood 131, 1022-1031 (2018)；Nathwani等人, N. Engl. J. Med. 371, 1994-2004 (2014)；Nathwani等人, N. Engl. J. Med. 365, 2357-2365 (2011)；Rangarajan等人, N. Engl. J. Med. 377, 2519-2530 (2017))、運動神經元(Mendell等人, N. Engl. J. Med. 377, 1713-1722 (2017))及視網膜(Russell等人, Lancet 390, 849-860 (2017))之組織時，在治療性水準上具有持久的表現，但對於許多代謝及退化性疾病，在不可逆組織損傷開始之前，在生命早期就迫切需要治療(Fagiuoli等人, J. Hepatol. 59, 595-612 (2013)；Soriano等人, J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 35(增刊1), S51-S54 (2002))。然而，由於其非整合性質，在兒科患者中用AAV載體之系統基因療法經預期受到與器官生長相關之組織增殖的限制，其導致隨時間推移之顯著載體稀釋(Bortolussi等人, Hum. Gene Ther. 25, 844-855 (2014)；Ronzitti等人, Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 3, 16049 (2016)；Wang等人, Hum. Gene Ther. 23, 533-539 (2012))。因此，維持重複投與AAV之可能性為在兒科患者中實現隨時間推移之持續性治療功效的重要目標。另外，在兒科及成人患者兩者中之載體重複投藥將期望實現載體滴定，以增加達至治療性轉基因表現量的患者之比例，同時避免超生理轉基因表現及與較大載體劑量相關之潛在毒性(Hinderer等人, Hum. Gene Ther. 29, 285-298 (2018))。
然而，載體免疫原性表示重複投與AAV載體之主要限制(Mingozzi等人, Annu Rev. Virol. 4, 511-534 (2017))。載體投藥後觸發持續性高效價中和抗體(NAb) (Nathwani等人, N. Engl. J. Med. 371, 1994-2004 (2014))，其消除重複基於AAV之治療的任何益處。另外，人類試驗中之經驗表明誘導衣殼特異性CD8+ T細胞反應可導致清除經AAV載體轉導之細胞(Manno等人, Nat. Med. 12, 342-347 (2006)；Nathwani等人, N. Engl. J. Med. 371, 1994-2004 (2014)；Nathwani等人, N. Engl. J. Med. 365, 2357-2365 (2011)；Mingozzi等人, Nat. Med. 13, 419-422 (2007))。
因此，此項技術中需要能夠在具有或可懷疑具有AAV中和抗體之人類患者中投與rAAV基因療法載體。此外，迫切地需要旨在降低AAV載體免疫原性之安全且有效的策略，其允許穩定之轉基因表現及載體重複投予。
本發明提供向個體重複投與或重複投予基因療法載體之方法，其中用於第二次或後續投予事件之載體包含不同於第一基因療法AAV投予方案之AAV衣殼。假設使用彼此具有低衣殼序列同源性且在系統發生學上相異之第一及第二AAV載體，與重複投與相同基因療法載體相比，將不受到對第一AAV載體之體液性免疫反應之影響，藉此允許個體中更佳的轉導效率及轉基因表現。
本文提供一種用多次劑量之重組腺相關病毒(rAAV)載體治療個體之方法，該方法包含向個體投與第一rAAV載體，其包含包括治療性分子之轉基因及第一衣殼；及向個體投與第二rAAV載體，其包含包括治療性分子之轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含相同治療性分子或不同治療性分子。
在一特定實施例中，本文提供一種用多次劑量之rAAV載體治療個體之方法，該方法包含：向個體投與第一rAAV載體，其包含治療性分子之轉基因及第一衣殼；及向個體投與第二rAAV載體，其包含包括治療性分子之轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含與第一rAAV載體中之轉基因相同的治療性分子或不同的治療性分子。
本文亦涵蓋一種用多次劑量之重組腺相關病毒(rAAV)載體治療有需要之個體的疾病或病症之方法，該方法包含：向個體投與第一rAAV載體，其包含包括適用於治療該疾病或病症之治療性分子之轉基因及第一衣殼；及向個體投與第二rAAV載體，其包含包括適用於治療該疾病或病症之治療性分子之轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含適用於治療該疾病或病症之相同治療性分子或不同治療性分子。
在一特定實施例中，本文提供一種用多次劑量之rAAV載體治療有需要之個體的疾病或病症之方法，該方法包含：向個體投與第一rAAV載體，其包含包括適用於治療該疾病或病症之治療性分子之轉基因及第一衣殼；及向個體投與第二rAAV載體，其包含包括適用於治療該疾病或病症之治療性分子之轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含適用於治療該疾病或病症的與第一rAAV載體中之轉基因相同的治療性分子或不同的治療性分子。
在各種實施例中，治療性分子為治療性蛋白質、抑制性RNA、mRNA或CRISPR/Cas引導聚核苷酸。預期第一衣殼中之治療性分子可選自治療性蛋白質、抑制性RNA、mRNA或CRISPR/Cas引導聚核苷酸。進一步預期第二衣殼中之治療性分子選自治療性蛋白質、抑制性RNA、mRNA或CRISPR/Cas引導聚核苷酸。
在各種實施例中，該第一及第二衣殼在系統發生學上為相異的。在各種實施例中，系統發生學差異係基於序列同源性之臨限值水準。在各種實施例中，相對於衣殼胺基酸序列，或相對於VP1、VP2或VP3衣殼蛋白中之任一者，序列同源性之臨限值水準大約小於或等於90%序列同源性。在各種實施例中，第一及第二衣殼具有小於或等於約90%之胺基酸序列同源性。在各種實施例中，第一及第二衣殼在VP1衣殼蛋白中具有小於或等於約90%同源性，在VP2衣殼蛋白中具有小於或等於約90%同源性及/或在VP3衣殼蛋白中具有小於或等於約90%同源性。在各種實施例中，衣殼或衣殼蛋白之序列同源性可小於或等於90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%或更低。在各種實施例中，衣殼或衣殼蛋白之序列同源性可為約30%至90%同源、約45%至87%同源、約40%至86%同源、約50%至85%同源、或約60%至80%同源或約65%至75%同源。
在各種實施例中，第一衣殼及/或第二衣殼在個體中展現較低的預先存在之免疫力。在一特定實施例中，個體對第一衣殼、第二衣殼或第一及第二衣殼兩者展現較低的預先存在之免疫力。在一些實施例中，量測AAV衣殼之中和抗體之活體外分析用於判定個體是否對第一衣殼、第二衣殼或第一及第二衣殼兩者展現預先存在之免疫力。
在各種實施例中，個體為人類。在各種實施例中，個體為人類且對第一及/或第二AAV載體為免疫學上未處理的。在各種實施例中，個體在血清中具有小於1:2、1:5、1:10、1:20、1:50、1:100、1:200、1:300、1:400、1:500或1:1000的中和抗體比第一或第二AAV載體。在某些實施例中，個體在來自個體之生物樣本(例如，血液、血清或血漿)中具有小於1:2、1:5或1:10之抗第一AAV載體中和抗體效價或小於1:100之總抗第一AAV載體-IgG效價。在某些實施例中，個體具有小於1:2、1:5或1:10之抗第二AAV載體中和抗體效價或小於1:100之總抗第二AAV載體-IgG效價。在一些實施例中，個體在來自個體之生物樣本(例如，血液、血清或血漿)中具有小於1:10、1:20、1:50、1:80、1:100、1:200、1:300、1:400或1:500之總抗第一AAV載體-IgG效價。在某些實施例中，個體具有小於1:10之抗第二AAV載體中和抗體效價或小於1:10、1:20、1:50、1:80、1:100、1:200、1:300、1:400或1:500之總抗第二AAV載體-IgG效價。在各種實施例中，在中和抗體分析中量測中和抗體含量。
在各種實施例中，第一衣殼係選自由以下組成之群：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV3b、LK03、rh74.j、rh10、AAVbo (在本文中亦稱為「牛類」)、AAVGoat、Bba.41、Bba.47、Bba.49、Bba.33、Bba.45、Bba.46、Bba.50、Bba.51、RN35、Anc110_9VR、AAV_go.1、表4中所列之AAV、表5、表6中所列之AAV及/或其變體。在各種實施例中，第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV3b、LK03、rh74.j、rh10、牛類、AAVGoat、Bba.41、Bba.47、Bba.49、Bba.33、Bba.45、Bba.46、Bba.50、Bba.51、RN35、Anc110_9VR、AAV_go.1、表4中所列之AAV、表5、表6中所列之AAV及/或其變體，其中病毒之間存在足夠的系統發生學距離，使得針對第一衣殼蛋白之任何預先存在的免疫原性對於第二衣殼蛋白無顯著交叉反應性。
在一些實施例中，來自個體之生物樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第一衣殼蛋白抗體不與第二衣殼蛋白結合，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法(Western blot)、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)或本文所描述之技術所評定。在某些實施例中，來自個體之生物樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第一衣殼抗體對於第一衣殼蛋白之親和力比第二衣殼蛋白大5倍、10倍、15倍、20倍、25倍或更多倍，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)或本文所描述之技術所評定。在一些實施例中，來自個體之生物樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第二衣殼蛋白抗體不與第一衣殼蛋白結合，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)或本文所描述之技術所評定。在某些實施例中，來自個體之生物樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第二衣殼抗體對於第二衣殼蛋白之親和力比第一衣殼蛋白大5倍、10倍、15倍、20倍、25倍或更多倍，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)或本文所描述之技術所評定。
在一些實施例中，來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第一rAAV載體抗體不與第二rAAV載體結合，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)或本文所描述之技術所評定。在某些實施例中，來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第一rAAV載體抗體對於第一rAAV載體之親和力比第二rAAV載體大5倍、10倍、15倍、20倍、25倍或更多倍，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、流式細胞量測術或BIACore)所評定。
在一些實施例中，來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第二rAAV載體抗體不與第一rAAV載體結合，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、流式細胞量測術或BIACore)或本文所描述之技術所評定。在某些實施例中，來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第二rAAV載體抗體對於第二rAAV載體之親和力比第一rAAV載體大5倍、10倍、15倍、20倍、25倍或更多倍，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、流式細胞量測術或BIACore)所評定。
在各種實施例中，第一衣殼及/或第二衣殼為經工程改造之衣殼或嵌合衣殼。
在各種實施例中，第一或第二衣殼包含嵌合衣殼蛋白，其具有包含可變區I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII及IX之受體骨架AAV衣殼的VP1胺基酸序列，除了其中可變區I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII或IX中之一或多者經來自一或多個供體AAV衣殼之對應可變區置換。在各種實施例中，來自受體AAV衣殼之一或多個可變區經來自供體AAV衣殼之對應可變區置換。在各種實施例中，受體AAV衣殼序列為SEQ ID NO:1-89或158-164中之任一者且供體AAV衣殼序列係選自由SEQ ID NO:1-89或158-164組成的序列之群，且受體AAV衣殼序列及該供體AAV衣殼序列係不同的。在各種實施例中，嵌合衣殼蛋白包含SEQ ID NO:90-157中之任一者的胺基酸序列(參見例如，下文表7)。
在各種實施例中，第一或第二衣殼包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一或第二衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:15-89中之任一者，(ii) SEQ ID NO:15-89中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:15-89中之任一者的VP3區。
在各種實施例中，第一衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP3區。
在各種實施例中，第二衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第二衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP3區。
在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP3區。
在各種實施例中，載體包含編碼具有與以下至少95%一致之胺基酸序列之腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白的核酸序列：(i) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者的VP3區。在各種實施例中，載體包含編碼具有以下之胺基酸序列之腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白的核酸序列：(i) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者的VP3區。在一些實施例中，核酸序列可操作地連接於控制衣殼蛋白於宿主細胞中之表現的異源調節元件。
在各種實施例中，宿主細胞為肝臟細胞或肌肉細胞。
在各種實施例中，第一衣殼及/或第二衣殼為肌肉靶向衣殼。在特定實施例中，肌肉靶向衣殼係選自由以下組成之群：Anc110_9VR、Bba.26、Bba.41、Bba.42、Bba.43及Bba.44。在特定實施例中，肌肉靶向衣殼為Bba.41。在各種實施例中，肌肉靶向衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者，(ii) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者的VP3區。在各種實施例中，肌肉靶向衣殼包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者，(ii) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者的VP3區。在特定實施例中，肌肉靶向衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:28，(ii) SEQ ID NO: 28之VP2區或(iii) SEQ ID NO: 28之VP3區。
在各種實施例中，第一衣殼及/或第二衣殼為肝臟靶向衣殼。在特定實施例中，肝臟靶向衣殼係選自由以下組成之群：Bba.45、Bba.46、Bba.47、Bba.48、Bba.49、Bba.50及Bba.51。在特定實施例中，肝臟靶向衣殼為Bba.47。在特定實施例中，肝臟靶向衣殼為Bba.49。在各種實施例中，肝臟靶向衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO:158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:158-164中之任一者的VP3區。在各種實施例中，肝臟靶向衣殼包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO:158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:158-164中之任一者的VP3區。在特定實施例中，肝臟靶向衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:160，(ii) SEQ ID NO:160之VP2區或(iii) SEQ ID NO:160之VP3區。在特定實施例中，肝臟靶向衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:162，(ii) SEQ ID NO:162之VP2區或(iii) SEQ ID NO:162之VP3區。
在各種實施例中，第一或第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV5、Bba.49、Bba.47及牛類。在各種實施例中，第一衣殼係選自由以下組成之群：AAV5、Bba.49、Bba.47及牛類且第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV5、Bba.49、Bba.47及牛類。在各種實施例中，第一或第二衣殼係選自由以下組成之群：LK03、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一衣殼係選自由以下組成之群：LK03、AAV5、Bba.49及牛類，且第二衣殼係選自由以下組成之群：LK03、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一衣殼或第二衣殼係選自由以下組成之群：rh10、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一衣殼係選自由以下組成之群：Rh10、AAV5、Bba.49及牛類，且第二衣殼係選自由以下組成之群：rh10、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一或第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV8、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一衣殼係選自由以下組成之群：AAV8、AAV5、Bba.49及牛類，且第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV8、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一衣殼或第二衣殼係選自由AAV9及Bba.41組成之群。在各種實施例中，第一衣殼係選自由AAV9及Bba.41組成之群且第二衣殼係選自由AAV9及Bba.41組成之群。
在各種實施例中，個體中由轉基因表現之異源蛋白質維持在治療有效量。
在各種實施例中，異源蛋白質係選自由以下組成之群：因子VIII、因子IX、ATP7B蛋白、C1酯酶抑制劑(C1-INH)、α1抗胰蛋白酶及半乳糖-1-磷酸尿苷醯轉移酶(GALT)、肌縮蛋白、迷你肌縮蛋白、微小肌縮蛋白、苯丙胺酸羥化酶(PAH)、α-半乳糖苷酶A及葡糖腦苷脂酶。
在各種實施例中，異源蛋白質之表現足以治療選自由以下組成之群的病症或疾病：A型血友病、B型血友病、威爾森氏病(Wilson's disease)、遺傳性血管水腫(HAE)、α1抗胰蛋白酶缺乏症、半乳糖血症、杜興氏肌肉萎縮症(Duchenne's Muscular Dystrophy)或其他肌肉萎縮症、苯酮尿症(PKU)、法布立病(Fabry Disease)及高歇氏病(Gaucher Disease)。在各種實施例中，方法涉及將轉基因遞送至肌肉細胞或肝臟細胞。
在各種實施例中，方法利用作為肌肉靶向衣殼之第一衣殼及/或第二衣殼。在特定實施例中，方法利用選自由以下組成之群的肌肉靶向衣殼：Anc110_9VR、Bba.26、Bba.41、Bba.42、Bba.43及Bba.44。在特定實施例中，方法利用Bba.41肌肉靶向衣殼。在各種實施例中，方法利用包含與以下至少95%一致之胺基酸序列的肌肉靶向衣殼蛋白：(i) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者，(ii) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者的VP3區。在各種實施例中，方法利用包含以下之胺基酸序列的肌肉靶向衣殼：(i) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者，(ii) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:16、28、29、30或31中之任一者的VP3區。在特定實施例中，方法利用包含以下之胺基酸序列的肌肉靶向衣殼蛋白：(i) SEQ ID NO:28，(ii) SEQ ID NO:28之VP2區或(iii) SEQ ID NO:28之VP3區。在各種實施例中，方法利用作為肝臟靶向衣殼之第一衣殼及/或第二衣殼。在特定實施例中，方法利用選自由以下組成之群的肝臟靶向衣殼：Bba.45、Bba.46、Bba.47、Bba.48、Bba.49、Bba.50及Bba.51。在特定實施例中，方法利用Bba.47肝臟靶向衣殼。在特定實施例中，方法利用Bba.49肝臟靶向衣殼。在各種實施例中，方法利用包含與以下至少95%一致之胺基酸序列的肝臟靶向衣殼蛋白：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO:158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:158-164中之任一者的VP3區。在各種實施例中，方法利用包含以下之胺基酸序列的肝臟靶向衣殼：(i) SEQ ID NO:158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO:158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:158-164中之任一者的VP3區。在特定實施例中，方法利用包含以下之胺基酸序列的肝臟靶向衣殼蛋白：(i) SEQ ID NO:160，(ii) SEQ ID NO:160之VP2區或(iii) SEQ ID NO:160之VP3區。在特定實施例中，方法利用包含以下之胺基酸序列的肝臟靶向衣殼蛋白：(i) SEQ ID NO:162，(ii) SEQ ID NO:162之VP2區或(iii) SEQ ID NO:162之VP3區。
在各種實施例中，在投與第二基因療法載體之前或之後，向個體投與免疫抑制劑。在各種實施例中，免疫抑制劑係選自由以下組成之群：T細胞抑制劑、鈣調神經磷酸酶抑制劑、mTOR抑制劑及類固醇。在各種實施例中，免疫抑制劑為抗胸腺細胞球蛋白(ATG)、他克莫司(tacrolimus)、環孢靈(cyclosporine)、黴酚酸嗎啉乙酯、黴酚酸鈉、硫唑嘌呤、西羅莫司(sirolimus) (雷帕黴素(rapamycin))或潑尼松(prednisone)。在各種實施例中，經由諸如脂質體或奈米顆粒之遞送媒劑遞送免疫抑制劑。
在各種實施例中，在投與第二基因療法載體之前或之後，向個體投與靜脈內免疫球蛋白(IVIG)。
在各種實施例中，在第一次投與第一基因療法載體之後6個月、1年、1.5年、2年、2.5年、3年、4年、5年或6年或更長時間投與第二基因療法載體。
本發明亦涵蓋具有衣殼蛋白且進一步具有轉基因之腺相關病毒(AAV)之用途，該衣殼蛋白具有與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP3區，其中轉基因由可操作地連接於控制異源基因在宿主細胞中之表現的調節序列之異源基因構成。在另一實施例中，衣殼蛋白具有以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP3區。在又一實施例中，AAV具有AAV反向末端重複序列。在其他實施例中，AAV與生理學上相容的載劑混合。
在各種實施例中，本發明提供經分離腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白在方法中之用途，其中衣殼蛋白包含(i)與SEQ ID NO: 15-89或158-171中之任一者的VP1胺基酸序列或SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2或VP3區至少95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列或(ii)包含SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者或SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2或VP3區之VP1胺基酸序列。在某些實施例中，衣殼蛋白連接至異源胺基酸序列。本發明亦提供具有或包含此等衣殼蛋白中之任一者的非天然存在之AAV顆粒。在某些實施例中，包含上述VP1、VP2或VP3衣殼蛋白中之任一者的非天然存在之AAV顆粒包含具有AAV反向末端重複序列之核酸及包含可操作地連接於引導異源基因在宿主細胞中之表現的調節序列之異源基因的轉基因。在其他實施例中，包含本文所描述之VP1、VP2或VP3衣殼序列中之任一者的非天然存在之AAV顆粒包含可操作地連接於控制宿主細胞中之轉基因表現的調節序列之異源轉基因。如本文所使用，術語「異源基因」或「異源調節序列」意謂所提及之基因或調節序列不係天然存在於AAV載體或顆粒中的，而係人工引入其中的。術語「轉基因」係指包含異源基因及可操作地連接於控制該基因在宿主細胞中之表現的異源基因之調節序列兩者的核酸。預期本文中之轉基因包含治療性分子(其可為治療性蛋白質)、治療性RNA、抑制性RNA (RNAi)、mRNA、微RNA或CRISPR/Cas引導之核酸內切酶系統。
本發明亦提供包含編碼腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白之核苷酸序列之聚核苷酸的用途，其中衣殼蛋白包含(i)與SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP1胺基酸序列或SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2或VP3區至少95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列或(ii)包含SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者或SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2或VP3區之VP1胺基酸序列，其中聚核苷酸以可操作方式連接至異源調節控制序列。因此，應理解本文所描述之聚核苷酸為非天然存在的。本發明亦提供包含可操作地連接於異源調節序列之此等聚核苷酸序列中之任一者的AAV載體及包含此等AAV載體之組合物，包括醫藥組合物。
在另一實施例中，本發明提供一種經分離腺相關病毒(AAV)載體，其包含編碼衣殼蛋白之聚核苷酸序列及異源轉基因序列，其中衣殼蛋白包含(i)與SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP1胺基酸序列或SEQ ID NO: 158-164中之任一者的VP2或VP3區至少95%、96%、97%、98%或99%一致之胺基酸序列或(ii)包含SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者或SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2或VP3區之VP1胺基酸序列。本發明亦提供包含此等AAV載體之組合物，包括醫藥組合物。
在各種實施例中，適用於本文方法中之哺乳動物衍生之AAV衣殼VP1蛋白的胺基酸序列如SEQ ID NO:15-89或158-164所示，且本文亦描述各別VP2及VP3序列之相關位置。另外，本發明提供新穎經工程改造之嵌合AAV衣殼蛋白，其具有衍生自一個AAV衣殼序列之骨架胺基酸序列及衍生自至少一個不同AAV衣殼序列之衣殼蛋白序列片段。例示性經工程改造之嵌合AAV衣殼VP1蛋白之胺基酸序列如SEQ ID NO: 90-157所示。衣殼蛋白在本文中統稱為「AAV衣殼蛋白」。術語「非天然存在」當關於本文所描述之物質之任何組合物使用時意謂組合物不為天然產物，而實際上係藉由重組或其他方法人工合成的。
在另一實施例中，本發明提供載體及具有嵌合衣殼蛋白之AAV的用途，其中嵌合衣殼蛋白具有受體骨架AAV衣殼之VP1胺基酸序列，該受體骨架AAV衣殼具有可變區I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII及IX，除了其中可變區I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII及IX中之一或多者經來自一或多個供體AAV衣殼之對應可變區置換。在另一實施例中，僅受體衣殼之一個可變區經來自供體衣殼之對應可變區置換。在另一實施例中，受體衣殼之兩個或多於兩個可變區經來自單一供體AAV衣殼之對應可變區置換。在又一實施例中，受體AAV衣殼之兩個或多於兩個可變區經來自兩個或多於兩個供體AAV衣殼之對應可變區置換。在另一實施例中，受體AAV衣殼之所有九個可變區經來自單一供體衣殼之對應可變區置換。在又一實施例中，受體AAV衣殼具有GBS區或GH環區且GBS區或GH環區經來自一或多個供體AAV衣殼之對應區置換。在另一實施例中，受體AAV衣殼之所有九個可變區及GBS區經來自一或多個供體AAV衣殼之對應可變區及GBS區置換。在又一實施例中，受體AAV衣殼之所有九個可變區及GBS區經來自兩個或多於兩個供體AAV衣殼之對應區及GBS區置換。在另一實施例中，受體AAV衣殼之GH環經來自供體AAV衣殼之對應GH環區置換。在另一實施例中，受體AAV衣殼之所有九個可變區及GH環區經來自一或多個供體AAV衣殼之對應可變區及GH環區置換。在一個實施例中，受體AAV衣殼序列為SEQ ID NO:1-14中之任一者且供體AAV衣殼序列係選自SEQ ID NO:1-14中之任一者且其中受體AAV衣殼及供體AAV衣殼係不同的。在另一實施例中，受體AAV衣殼序列為SEQ ID NO:1-89或158-164中之任一者且供體AAV衣殼序列係選自SEQ ID NO:1-89或158-164中之任一者且其中受體AAV衣殼及供體AAV衣殼係不同的。在又一實施例中，嵌合衣殼具有SEQ ID NO:90-157中之任一者的胺基酸序列。
在另一實施例中，本發明提供一種將轉基因遞送至細胞之方法，該方法涉及使細胞與本文中揭示之任何AAV接觸的步驟。在另一實施例中，本發明提供一種治療個體之與內源性蛋白之異常活性相關之病症或疾病的方法，該方法包含向個體投與有效量的本文所揭示之AAV之步驟，其中AAV具有編碼蛋白質之生物活性複本之轉基因，或提供治療性聚核苷酸(諸如mRNA、抑制性RNA、微RNA或CRISPR/CAs引導聚核苷酸)之轉基因。
在一實施例中，本發明提供包含本文所揭示之載體或AAV之組合物的用途，其用於將轉基因遞送至細胞。在另一實施例中，本發明提供包含有效量的本文所揭示之載體或AAV之組合物的用途，其用於治療與內源性蛋白之異常活性相關之病症或疾病，其中AAV之載體具有編碼適用於治療該疾病或病症之蛋白質之生物活性複本的轉基因，或提供治療性聚核苷酸(諸如mRNA、抑制性RNA、微RNA或CRISPR/CAs引導聚核苷酸)之轉基因。在某些實施例中，組合物將轉基因遞送至肌肉細胞或肝臟細胞。
本發明亦提供本文所揭示之載體或AAV之用途，其用於製備可有效治療患有與內源性蛋白之異常活性相關之病症或疾病的個體之藥劑，其中載體或AAV具有編碼如本文所描述之蛋白質之生物活性複本的轉基因，或提供治療性聚核苷酸(諸如mRNA、抑制性RNA、微RNA或CRISPR/CAs引導聚核苷酸)之轉基因。在又一實施例中，藥劑將轉基因遞送至肌肉細胞或肝臟細胞。在各種實施例中，藥劑適用於重複投予基因療法載體以治療本文所陳述之疾病或病症，例如，A型血友病、B型血友病、威爾森氏病、遺傳性血管水腫(HAE)、α1抗胰蛋白酶缺乏症、半乳糖血症、杜興氏肌肉萎縮症或其他肌肉萎縮症、苯酮尿症(PKU)、法布立病及高歇氏病。
本發明提供本文所揭示之AAV衣殼蛋白中之任一者的保留AAV衣殼蛋白之生物活性之片段的用途。例示性片段包括衣殼蛋白之VP2及VP3剪接變體，及包含衣殼蛋白之可變區(VR)中之一或多者及/或衣殼蛋白之聚糖結合序列(GBS)及/或GH環的片段。本發明亦提供包含衣殼蛋白片段之新穎非天然存在之AAV顆粒及包含與具體定義之衣殼蛋白片段具有至少90、91、92、93、94、95、96、97、98或99%序列一致性之衣殼蛋白片段的彼等顆粒。
在方法中亦適用的係使用嵌合AAV以向個體遞送及重複投予基因療法載體。AAV VP1衣殼序列包含九個不同可變區、GBS區及GH環區，且用至少第二不同AAV VP1衣殼序列之對應區置換一個AAV VP1衣殼序列中之此等區中之一或多者可產生其相關AAV為官能性的嵌合AAV衣殼，能夠轉導細胞且遞送異源轉基因，且具有可以重組方式經工程改造成嵌合AAV之獨特特性。關於各種可變區以及GBS區及GH環區，術語「對應」意謂兩個不同AAV衣殼序列之間的相同區域。舉例而言，第一AAV衣殼序列中「對應」於VR I之區域為第二不同AAV衣殼序列中之相同區域(亦即，VR I區)。與AAV衣殼序列有關之術語「嵌合」係指所關注之AAV衣殼序列包含衍生自兩個或多於兩個不同AAV衣殼序列之胺基酸序列的事實。
因此，本發明亦提供經分離非天然存在之嵌合腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白之用途，其中嵌合衣殼蛋白包含衍生自第一AAV衣殼序列之胺基酸序列，該第一AAV衣殼序列具有經來自不同於第一AAV衣殼序列之第二AAV衣殼序列之可變區取代的至少一個可變區。第一AAV衣殼序列(在本文中稱為「受體」)提供骨架胺基酸序列，其中一或多個可變區經來自第二AAV衣殼序列(在本文中稱為「供體」)之一或多個可變區調換或取代。第二AAV衣殼序列不同於第一AAV衣殼序列且將提供經取代或插入至骨架或受體衣殼序列之序列中之一或多個可變區的序列。本發明亦提供包含本文所描述之嵌合衣殼蛋白中之任一者的非天然存在之AAV病毒或AAV顆粒。在某些實施例中，包含本文所描述之嵌合衣殼蛋白中之任一者的非天然存在之AAV顆粒亦包含可操作地連接於控制宿主細胞中之轉基因表現之調節序列的異源轉基因。
「可變區」係指AAV衣殼蛋白之VP1序列內的九個可變區。視情況，可變區可自供體AAV衣殼序列調換至受體骨架衣殼序列中。可變區(VR)在本文中稱為VR I、VR II、VR III、VR IV、VR V、VR VI、VR VII、VR VIII及VR IX，且本文描述其在各種VP1序列中之各別位置。VR在AAV VP1衣殼序列內展現最高序列及結構變異，且亦可在受體附著、轉基因之轉錄活化、組織轉導及抗原性中起作用。
「聚糖結合序列(GBS)」或「GBS結構域」或「GBS區」係指位於VR IV與VR V之間的控管病毒衣殼之聚糖結合特異性之胺基酸序列。本文描述各種AAV VP1胺基酸序列中之GBS區的位置，且其他AAV VP1胺基酸序列之彼等GBS區位置為此項技術中已知的及/或可常規鑑定。
「GH環」係指在衣殼蛋白之內部β-桶內側接有β-股G及β-股H之環序列。「GH環」序列包含可變區VR IV至VR VIII，包括所涵蓋之GBS序列及來自供體之所有穿插的保守性骨架序列。本文描述各種AAV VP1胺基酸序列中之GH環區的位置，且其他AAV VP1胺基酸序列之彼等GH環區位置可常規地鑑定。
關於本文所描述之VR區、GBS區及GH環區之位置，應注意，彼等區域之N端及/或C端末端的位置可與如本文中所描述之彼等區域之胺基酸位置相差至多1個胺基酸、2個胺基酸、3個胺基酸、4個胺基酸或5個胺基酸(特定言之在表4或表5中)。本發明涵蓋衣殼序列，其包含如本文所定義之在N端及/或C端末端上相差至多5個胺基酸之經取代VR、GBS及/或GH環區。
在一個實施例中，本發明提供經分離非天然存在之嵌合腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白之用途，其中嵌合衣殼蛋白包含衍生自第一AAV衣殼序列之胺基酸序列，該第一AAV衣殼序列具有經衍生自至少第二不同AAV衣殼序列之可變區取代的至少一個可變區。預期用於方法中之嵌合衣殼之額外揭示內容陳述於實施方式中。
本發明進一步提供製備重組腺相關病毒(AAV)顆粒之方法，其包含以下步驟：培養已經本發明之AAV載體中之任一者轉染的細胞且自經轉染細胞之上清液回收重組AAV顆粒。另外，本發明提供包含本發明之病毒載體或衣殼蛋白中之任一者的病毒顆粒及包含此等病毒載體之細胞。
本發明之一個實施例提供一種藉由培養病毒產生細胞來製備本文所描述之重組AAV中之任一者的方法，該病毒產生細胞中已引入第一核酸載體及第二核酸載體，該第一核酸載體具有側接轉基因之5'及3' AAV反向末端重複序列，該轉基因具有可操作地連接於控制異源基因在宿主細胞中之表現的調節序列之異源基因，該第二核酸載體具有AAV rep及cap核酸序列。在各種實施例中，該cap核酸序列編碼與SEQ ID NO: 15-164中之任一者至少95%一致之AAV衣殼；及自病毒產生細胞培養物之上清液回收AAV。在各種實施例中，病毒產生細胞為哺乳動物細胞。在一較佳實施例中，哺乳動物細胞為HEK293細胞。在各種實施例中，病毒產生細胞為昆蟲細胞。在一較佳實施例中，昆蟲細胞為Sf9細胞。
在另一實施例中，藉由利用含有第一核酸載體之桿狀病毒感染病毒產生細胞而將第一核酸載體引入至病毒產生細胞中。在又一實施例中，藉由利用含有第一核酸載體之第一桿狀病毒及含有第二核酸載體之第二桿狀病毒感染病毒產生細胞而將第一及第二核酸載體引入至病毒產生細胞中。在其他實施例中，藉由本文所提供之製備方法製備本發明AAV。
在另一實施例中，本發明提供治療患有病症或疾病之患者的方法，其包含向患者投與有效量的本文所描述之AAV載體或病毒中之任一者。
在另一實施例中，本發明提供本發明之AAV載體或病毒中之任一者的用途，其用於製備供治療病症或疾病之藥劑。本發明亦提供包含用於治療疾病或病症的本發明之AAV載體或病毒中之任一者之組合物。
在又一實施例中，個體中之疾病或病症與內源性蛋白之異常活性相關。如本文所使用，「內源性蛋白」意謂由患有疾病或病症之個體的基因組編碼之蛋白質或基因產物。
「AAV病毒粒子」或「AAV病毒顆粒」或「AAV載體顆粒」或「AAV病毒」係指由至少一種AAV衣殼蛋白及衣殼化聚核苷酸AAV載體構成之病毒顆粒。若顆粒包含異源聚核苷酸(亦即，除野生型AAV基因組，諸如待遞送至哺乳動物細胞之轉基因以外的聚核苷酸)，則其通常稱為「AAV載體顆粒」或簡稱為「AAV載體」。因此，AAV載體顆粒之產生必定包括AAV載體之產生，因此載體包含於AAV載體顆粒內。如一般熟習此項技術者將容易瞭解，本文所提及之任何AAV可為重組AAV (rAAV)。
本發明亦提供包含本文所描述之AAV載體中之任一者的細胞，及藉由此等細胞產生之病毒顆粒。
如本文所使用之術語「反向末端重複序列(ITR)」係指順式充當DNA複製起點及病毒基因組之封裝信號的在AAV基因組之5'及3'端處發現的此項技術公認之區域。AAV ITR連同AAV rep編碼區一起提供自質體載體之有效切除及拯救，及插入於兩個側接ITR之間的核苷酸序列整合至宿主細胞基因組中。某些AAV相關之ITR之序列由Yan等人, J. Virol. 79(1):364-379 (2005)揭示，其以全文引用之方式併入本文中。
如本文所使用之片語「用於產生生產性AAV感染之輔助功能」係指AAV衍生之編碼序列可經表現以提供AAV基因產物，該AAV基因產物反過來起反式生產性AAV複製的作用。因此，AAV輔助功能包括rep及cap區。rep表現產物已表明具有許多功能，尤其包括：DNA複製之AAV起點的識別、結合及切口(nicking)；DNA解旋酶活性；及AAV (或其他異源)啟動子之轉錄調節。cap表現產物提供必需的封裝功能。AAV輔助功能在本文中用以補充AAV載體中缺失之反式AAV功能。用於產生生產性AAV感染之輔助功能亦可包括來自桿狀病毒、疱疹病毒、腺病毒或牛痘病毒之某些輔助功能。
在一些實施例中，病毒構築體包含編碼AAV rep及cap基因之核苷酸序列。
如本文所使用之術語「AAV rep基因」係指AAV基因組之此項技術公認之編碼病毒複製蛋白之區域，該病毒複製蛋白為複製病毒基因組及在潛伏感染期間將病毒基因組插入宿主基因組中所需的。對於AAV rep編碼區之進一步描述，參見例如Muzyczka等人, Current Topics in Microbiol.及Immunol. 158:97-129 (1992)；Kotin等人, Human Gene Therapy 5:793-801 (1994)，其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。如本文所使用之rep編碼區可衍生自任何病毒血清型，諸如上述AAV血清型。該區域不需要包括所有的野生型基因，但可例如藉由核苷酸之插入、缺失或取代來改變，只要在適合受體細胞中表現時，rep基因保留所要功能特徵即可。
如本文所使用之術語「AAV cap基因」係指AAV基因組之此項技術公認之編碼病毒鞘蛋白之區域，該病毒鞘蛋白為封裝病毒基因組所需的。對於cap編碼區之進一步描述，參見例如Muzyczka等人, Current Topics in Microbiol.及Immunol. 158:97-129 (1992)；Kotin等人, Human Gene Therapy 5:793-801 (1994)，其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。如本文所使用之AAV cap編碼區可衍生自如上文所描述之任何AAV血清型。該區域不需要包括所有的野生型cap基因，但可例如藉由核苷酸之插入、缺失或取代來改變，只要在連同AAV載體一起存在於宿主細胞中時，基因提供足夠的封裝功能即可。
術語「轉染」用於指細胞對外源DNA之攝取。當外源DNA已經引入細胞膜內時，細胞已經「轉染」。此項技術中通常已知多種轉染技術。參見例如Graham等人, Virology 52:456 (1973)；Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York (1989)；Davis等人, Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier (1986)；Chu等人, Gene 13:197 (1981)，其揭示內容以全文引用之方式併入本文中。此類技術可用於將一或多個外源DNA部分(諸如核苷酸整合載體及其他核酸分子)引入至適合宿主細胞中。該術語獲得化學、電學及病毒介導之轉染程序。
在一些實施例中，病毒構築體為呈能夠在任何細胞類型中有效轉化、轉染或感染之桿狀病毒載體之形式。在一些實施例中，病毒構築體包含至少一個編碼異源蛋白質之核苷酸序列。
在又一態樣中，本文描述一種藉由本文所描述之方法產生的AAV顆粒。在一些實施例中，AAV顆粒在其基因組中包含至少一個編碼異源蛋白質之核苷酸。
術語「異源蛋白質或肽」係指不由野生型AAV表現之任何蛋白質，包括標籤，諸如六組胺酸、FLAG、myc、聚組胺酸，或標記或免疫原、佐劑、選擇標記物、治療性蛋白質或靶向蛋白質或肽，僅舉幾例。
本文所描述之例示性異源蛋白質包括但不限於β-血球蛋白、血紅素、組織纖維蛋白溶酶原活化因子及凝血因子；集落刺激因子(CSF)；介白素，諸如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9等；生長因子，諸如角質細胞生長因子(KGF)、幹細胞因子(SCF)、纖維母細胞生長因子(FGF，諸如鹼性FGF及酸性FGF)、肝細胞生長因子(HGF)、胰島素樣生長因子(IGF)、骨形態生成蛋白(BMP)、表皮生長因子(EGF)、生長分化因子-9 (GDF-9)、肝癌衍生生長因子(HDGF)、肌肉抑制素(GDF-8)、神經生長因子(NGF)、神經營養素、血小板衍生生長因子(PDGF)、血小板生成素(TPO)、轉化生長因子α (TGF-α)、轉化生長因子β (TGF-β)及類似者；可溶性受體，諸如可溶性TNF-α受體、可溶性介白素受體(例如，可溶性IL-1受體及可溶性II型IL-1受體)、可溶性γ/Δ T細胞受體、可溶性受體之配體結合片段及類似者；酶類，諸如α-葡糖苷酶、伊米苷酶、β-葡糖腦苷脂酶及阿糖腦苷酶；酶活化劑，諸如組織纖維蛋白溶酶原活化因子；趨化介素，諸如1P-10、藉由干擾素-γ誘導之單核因子(Mig)、Groα/IL-8、RANTES、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、PF-4及類似者；血管生成劑，諸如血管內皮生長因子(VEGF，例如，VEGF121、VEGF165、VEGF-C、VEGF-2)、神經膠質瘤衍生生長因子、血管生成素、血管生成素-2；及類似者；抗血管生成劑，諸如可溶性VEGF受體；蛋白質疫苗；神經活性肽，諸如神經生長因子(NGF)、緩激肽、膽囊收縮素、胃泌素(gastin)、腸泌素、催產素、促性腺激素釋放激素、β-內啡肽、腦啡肽、物質P、生長抑素、催乳素、甘丙胺素、生長激素釋放激素、鈴蟾素(bombesin)、強啡肽、華法林(warfarin)、神經調壓素、腸動素、促甲狀腺素、神經肽Y、促黃體生成激素、降鈣素、胰島素、升糖素、血管加壓素、血管緊張素II、促甲狀腺素釋放激素、血管活性腸肽、睡眠肽及類似者；溶栓劑；心房利尿鈉肽；鬆弛素；膠質原纖維酸性蛋白；激濾泡素(FSH)；人類α-1抗胰蛋白酶；白血病抑制因子(LIF)；組織因子，促黃體生成激素；巨噬細胞活化因子；腫瘤壞死因子(TNF)；嗜中性白血球趨化因子(NCF)；金屬蛋白酶之組織抑制劑；血管活性腸肽；血管生成素；促血管素；纖維蛋白；水蛭素；IL-1受體拮抗劑；睫狀神經營養因子(CNTF)；腦源性神經營養因子(BDNF)；神經營養素3及4/5 (NT-3及4/5)；膠細胞源性神經營養因子(GDNF)；芳族胺基酸去羧酶(AADC)；因子VIII、因子IX、因子X；肌縮蛋白或迷你肌縮蛋白；溶酶體酸脂肪酶；苯丙胺酸羥化酶(PAH)；肝糖貯積病相關酶，諸如葡萄糖-6-磷酸酶、酸麥芽糖酶、肝糖去分支酶、肌肉肝糖磷酸化酶、肝糖原磷酸化酶、肌肉磷酸果糖激酶、磷酸化酶激酶、葡萄糖轉運蛋白、醛縮酶A、β-烯醇酶、肝糖合成酶；及溶酶體酶。
應理解本文所描述之各特徵或實施例或組合為本發明之態樣中之任一者的非限制性、示意性實例，且因此意謂可與本文所描述之任何其他特徵或實施例或組合進行組合。舉例而言，若特徵用諸如「一個實施例」、「一些實施例」、「其他實施例」、「特定例示性實施例」及/或「另一實施例」之措辭描述，則此等類型之實施例中之每一者為特徵的非限制性實例，其意欲與本文所描述之任何其他特徵或特徵組合進行組合，而不必列出每一種可能的組合。此類特徵或特徵組合適用於本發明態樣中之任一者。當揭示屬於範圍內之值之實例時，預期此等實例中之任一者儘可能為範圍之端點，涵蓋在此類端點之間的任何及所有數值，且設想上端點及下端點之任何及所有組合。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2019年5月14日申請之美國臨時申請案第62/847,908號之權益，其以全文引用之方式併入本文中。以電子方式提交之序列表的引用
本申請案以引用之方式併入以ASCII文本格式隨本申請案一起提交之序列表的電腦可讀形式(CRF)，其名稱為「11808-459-185_SEQ_LISTING.txt」，2020年5月11日創建且具有1,065,489個位元組大小。
本發明提供重複投與或重複投予基因療法載體之方法，其使針對接受基因療法之個體引發之第二次病毒投與的免疫反應最小化。假設投與第一AAV載體，隨後投與與第一載體在系統發生學上不同之第二AAV載體將不受對第一衣殼之任何免疫反應所抑制，藉此允許個體中更佳的轉導效率及轉基因表現。
「重複投與」或「重複投予」基因療法載體係指向先前已接受至少一次基因療法載體投藥以治療疾病或病症之個體投藥，第二次或隨後投與另一不同基因療法載體以治療相同疾病或病症。重複投予可係指基因療法載體之多次劑量，亦即2、3或更多劑量。AAV 載體
如本文中所使用，術語「AAV」為腺相關病毒之標準縮寫。腺相關病毒為僅在其中某些功能由共感染輔助病毒提供之細胞中生長之單股DNA小病毒。已表徵多種AAV之血清型，其實例如下表1展示。AAV之總體資訊及綜述可見於例如Carter,Handbook of Parvoviruses , 第1卷, 第169-228頁 (1989)，及Berns,Virology , 第1743-1764頁, Raven Press, (New York, 1990)中。然而，完全預期此等相同原理將適用於額外AAV血清型，因為熟知各種血清型在結構上及功能上相當緊密相關，甚至在基因層級上亦如此。(參見例如Blacklowe,Parvoviruses and Human Disease 之第165-174頁, J. R. Pattison編(1988)；及Rose,Comprehensive Virology 3:1-61 (1974))。舉例而言，所有AAV血清型明顯展現由同源rep基因介導之極類似複製特性；且全都帶有三種相關的衣殼蛋白，諸如在AAV6中表現之衣殼蛋白。相關性程度進一步藉由揭露血清型之間沿基因組長度之廣泛交叉雜交之異雙螺旋分析；及在末端存在對應於「反向末端重複序列」(ITR)之類似自黏接片段來表明。類似感染性模式亦表明各血清型中之複製功能處於類似的調節控制下。
如本文所使用之「AAV載體」係指包含側接AAV末端重複序列(ITR)之一或多個所關注聚核苷酸(或轉基因，包括編碼治療性蛋白質、RNAi、mRNA、CRISPR/Cas引導聚核苷酸)之載體。當存在於經編碼及表現rep及cap基因產物之載體轉染的宿主細胞中時，此類AAV載體可複製且封裝至感染性病毒顆粒中。
「AAV病毒粒子」或「AAV病毒顆粒」或「AAV載體顆粒」或「AAV病毒」係指由至少一種AAV衣殼蛋白及衣殼化聚核苷酸AAV載體構成之病毒顆粒。若顆粒包含異源聚核苷酸(亦即，除野生型AAV基因組，諸如待遞送至哺乳動物細胞之轉基因以外的聚核苷酸)，則其通常稱為「AAV載體顆粒」或簡稱為「AAV載體」。因此，AAV載體顆粒之產生必定包括AAV載體之產生，因此載體包含於AAV載體顆粒內。
AAV「rep」及「cap」基因分別為編碼複製及衣殼化蛋白之基因。AAV rep及cap基因已在至目前為止檢查之所有AAV血清型中經發現，且描述於本文及所引用之參考文獻中。在野生型AAV中，一般發現rep及cap基因在病毒基因組中彼此鄰接(亦即，其作為鄰接或重疊轉錄單元「偶聯」在一起)，且其一般在AAV血清型中為保守的。AAV rep及cap基因亦個別地且統稱為「AAV封裝基因」。根據本發明之AAV cap基因編碼能夠在rep及腺輔助功能存在之情況下封裝AAV載體且能夠結合目標細胞受體的Cap蛋白。在一些實施例中，AAV cap基因編碼具有衍生自特定AAV血清型，例如表1中所示之血清型之胺基酸序列的衣殼蛋白。表 1. AAV 血清型
AAV血清型 Genbank寄存編號
AAV-1 NC_002077.1
AAV-2 NC_001401.2
AAV-3 NC_001729.1
AAV-3B AF028705.1
AAV-4 NC_001829.1
AAV-5 NC_006152.1
AAV-6 AF028704.1
AAV-7 NC_006260.1
AAV-8 NC_006261.1
AAV-9 AX753250.1
AAV-10 AY631965.1
AAV-11 AY631966.1
AAV-12 DQ813647.1
AAV-13 EU285562.1
用於產生AAV之AAV序列可衍生自任何AAV血清型之基因組。AAV血清型判定AAV病毒之組織感染特異性(或趨向性)。「血清型」係基於一種病毒與另一種病毒相比，抗體之間缺乏交叉反應性來進行傳統定義的。此類交叉反應性差異通常歸因於衣殼蛋白序列/抗原決定子中之差異(例如，歸因於AAV血清型之VP1、VP2及/或VP3序列差異)。根據傳統定義，血清型意謂已針對所有現有及經表徵之血清型具有特異性的血清測試所關注之病毒的中和活性，且尚未發現中和所關注之病毒的抗體。由於發現更多天然存在之病毒分離株且產生衣殼突變體，可存在或可不存在與當前現有血清型中之任一者的血清學差異。
AAV亦可根據分枝系或純系來指代。此係指天然衍生之AAV的系統發生學關係，且通常係指可追溯至共同祖先且包括其所有後代之AAV的系統發生學分組。另外，AAV可根據特定分離株來指代，亦即自然界中發現之特定AAV之基因分離株。術語基因分離株描述與其他天然存在之AAV進行有限基因混合之AAV群體，藉此定義在基因層級上可識別之獨特群體。
舉例而言，基於AAV胺基酸序列之比對，可使用鄰近歸併演算法(Neighbor-Joining algorithm)及泊松校正(Poisson correction)距離量測來確定AAV之間的系統發生學關係、距離或類似性。鄰近歸併演算法已描述於文獻中。參見例如M. Nei及S. Kumar, Molecular Evolution and Phylogenetics (Oxford University Press, New York (2000))。可獲得可用於實施此演算法的電腦程式。舉例而言，MEGA v2.1程式實施經修改之Nei-Gojobori方法。使用此等技術及電腦程式，及AAV衣殼蛋白之序列，熟習此項技術者可容易地確定所選擇之AAV係包含於本文鑑定之分枝系中之一者中、包含於另一分枝系中，抑或係在此等分枝系之外。參見例如G Gao等人, J Virol, 2004年6月；78(10): 6381-6388。亦參見WO 2005/033321。用於建立不同天然存在之AAV衣殼之間的系統發生學關係之序列比較亦可用於表徵及歸類經工程改造/合成之AAV衣殼。
技術人員可基於其公共常識選擇用於本發明之適當的AAV之血清型、分枝系、純系或分離株。
一般而言，AAV血清型在胺基酸及核酸層級具有顯著同源性之基因組序列，提供一組類似的遺傳功能，產生在物理上及功能上基本上等效之病毒粒子，且藉由幾乎一致之機制複製及組裝。對於AAV血清型之基因組序列及基因組類似性之論述，參見例如GenBank寄存編號U89790；GenBank寄存編號J01901；GenBank寄存編號AF043303；GenBank寄存編號AF085716；Chlorini等人,J .Vir . 71:6823-33(1997)；Srivastava等人,J. Vir . 45:555-64 (1983)；Chlorini等人,J. Vir . 73:1309-1319 (1999)；Rutledge等人,J. Vir . 72:309-319 (1998)；及Wu等人,J. Vir . 74: 8635-47 (2000)。
所有已知AAV血清型之基因組組織極為類似。AAV之基因組為長度小於約5,000個核苷酸(nt)之直鏈單股DNA分子。反向末端重複序列(ITR)側接用於非結構性複製(Rep)蛋白及結構性(VP)蛋白之獨特編碼核苷酸序列。VP蛋白形成衣殼。末端145 nt為自身互補型且經組織以使得可形成形成T形髮夾之能量穩定的分子內雙螺旋體。此等髮夾結構充當病毒DNA複製起點，充當細胞DNA聚合酶複合物之引子。Rep基因編碼Rep蛋白Rep78、Rep68、Rep52及Rep40。Rep78及Rep68由p5啟動子轉錄，且Rep52及Rep40由p19啟動子轉錄。cap基因編碼VP蛋白VP1、VP2及VP3。cap基因由p40啟動子轉錄。
在一些實施例中，編碼AAV衣殼蛋白之核酸序列可操作地連接於調節表現控制序列以在諸如Sf9或HEK細胞之特定細胞類型中表現。熟習此項技術者已知用於在昆蟲宿主細胞或哺乳動物宿主細胞中表現外源基因之技術可用於實踐本發明。用於在昆蟲細胞中分子工程改造及表現多肽之方法經描述於例如Summers及Smith.A Manual of Methods for Baculovirus Vectors and Insect Culture Procedures , Texas Agricultural Experimental Station Bull.第7555號, College Station, Tex. (1986)；Luckow.1991中。在Prokop等人,Cloning and Expression of Heterologous Genes in Insect Cells with Baculovirus Vectors' Recombinant DNA Technology and Applications , 97-152 (1986)；King, L. A.及R. D. Possee,The baculovirus expression system , Chapman and Hall, United Kingdom (1992)；O'Reilly, D. R., L. K. Miller, V. A. Luckow,Baculovirus Expression Vectors: A Laboratory Manual , New York (1992)；W.H. Freeman及Richardson, C. D.,Baculovirus Expression Protocols, Methods in Molecular Biology , 第39卷(1995)；美國專利第4,745,051號；US2003148506；及WO 03/074714中。用於編碼AAV衣殼蛋白之核苷酸序列之轉錄的尤其適合之啟動子為例如多面體啟動子。然而，此項技術中已知在昆蟲細胞中具有活性之其他啟動子，例如p10、p35或IE-1啟動子，且亦涵蓋上文參考文獻中所描述之其他啟動子。
使用昆蟲細胞表現異源蛋白質為有據可查的，因為其為將核酸，諸如載體(例如昆蟲-細胞相容性載體)引入至此類細胞中之方法及將此類細胞維持於培養物中之方法。參見例如METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY , Richard編, Humana Press, NJ (1995)；O'Reilly等人,BACULOVIRUS EXPRESSION VECTORS, A LABORATORY MANUAL , Oxford Univ. Press (1994)；Samulski等人,J .Vir. 63:3822-8 (1989)；Kajigaya等人,Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 88:4646-50 (1991)；Ruffing等人,J. Vir . 66:6922-30 (1992)；Kirnbauer等人,Vir . 219:37-44 (1996)；Zhao等人,Vir. 272:382-93 (2000)；及Samulski等人, 美國專利第6,204,059號。在一些實施例中，昆蟲細胞中編碼AAV之核酸構築體為昆蟲細胞-相容性載體。如本文所使用之「昆蟲細胞-相容性載體」或「載體」係指能夠有效轉化或轉染昆蟲或昆蟲細胞之核酸分子。例示性生物載體包括質體、線性核酸分子及重組病毒。可使用任何載體，只要其為昆蟲細胞-相容性的即可。載體可整合至昆蟲細胞之基因組中，但載體在昆蟲細胞中不必永久存在且亦包括短暫游離型載體。載體可藉由任何已知方法引入，例如藉由化學處理細胞、電穿孔或感染。在一些實施例中，載體為桿狀病毒、病毒載體或質體。在一更佳實施例中，載體為桿狀病毒，亦即構築體為桿狀病毒載體。桿狀病毒載體及其使用方法描述於上文所引用之關於昆蟲細胞之分子工程改造的參考文獻中。
桿狀病毒為節肢動物之包膜DNA病毒，其兩個成員為用於在細胞培養物中產生重組蛋白質之熟知表現載體。桿狀病毒具有環狀雙股基因組(80-200 kbp)，其可經工程改造以允許將大基因組內含物遞送至特定細胞。用作載體之病毒通常為加洲苜蓿夜蛾多衣殼核多角體病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus；AcMNPV)或家蠶(Bm)NPV (Kato等人,Appl. Microbiol. Biotechnol. 85(3):459-470 (2010))。桿狀病毒通常用於感染昆蟲細胞以表現重組蛋白。特定言之，異源基因在昆蟲中之表現可如以下中所描述實現：例如美國專利案第4,745,051號；Friesen等人, Curr. Top. Microbiol. Immunol . 131:31-49. (1986)；EP 127,839；EP 155,476；Miller等人,Ann. Rev. of Microbiol. 42: 177-199 (1988)；Carbonell等人, Gene 73(2):409-18 (1988)；Maeda等人, Nature 315(6020):592-4 (1985)；Lebacq-Verheyden等人, Mol. Cell. Biol. 8(8):3129-35 (1988)；Smith等人, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 82(24):8404-8(1985)；Miyajima等人, Gene 58(2-3):273-81(1987)；及馬丁等人, DNA 7(2):99-106(1988)。可用於產生蛋白質之多種桿狀病毒株及變體以及允許的對應昆蟲宿主細胞描述於Luckow等人,Nature Biotechnology 6:47-55 (1988)；及Maeda等人,Nature 315(6020):592-4 (1985)中。AAV 衣殼蛋白
在一第一態樣中，本發明提供自各種哺乳動物組織分離之AAV衣殼蛋白之用途。AAV VP1衣殼蛋白如下文所陳述及SEQ ID NO: 15-89及158-164中所陳述提供且本文描述相關VP2及VP3區之位置。
本發明亦提供包含編碼此等新穎AAV衣殼蛋白之核苷酸序列的聚核苷酸。本發明提供包括本文所描述之經工程改造嵌合衣殼蛋白之新穎AAV衣殼蛋白(本文中統稱為「本發明之AAV衣殼蛋白」)的胺基酸序列，及編碼本發明之AAV衣殼蛋白之核酸序列。亦提供本發明之此等AAV衣殼核酸及胺基酸序列之片段。此等序列中之每一者可容易地用於多種載體系統及宿主細胞中。衣殼VP1蛋白之所期望的片段包括VP2、VP3及可變區、GBS結構域及GH環及編碼此等蛋白質之聚核苷酸序列。此等片段可容易地用於多種載體系統及宿主細胞中。此類片段可單獨使用，與其他AAV序列或片段組合使用，或與來自其他AAV或非AAV病毒序列之元件組合使用。在一個特定實施例中，載體含有本文所描述之AAV衣殼序列。
本發明之AAV衣殼序列及其片段適用於產生rAAV，且亦適用作反義遞送載體、基因療法載體或疫苗載體。本發明進一步提供含有本發明之新穎AAV衣殼序列之核酸分子、基因遞送載體及宿主細胞。
可使用本文所提供之資訊確定適合片段。「序列同源性」可藉由使用多種公開或商業上可獲得之多個序列比對程式中之任一者比對兩個肽或兩個核苷酸序列來進行測定，諸如可經由網際網路上之網頁伺服器訪問的「Clustal W」。替代地，亦使用Vector NTI公用程式。此項技術中亦已知多種可用於量測核苷酸序列一致性之演算法，包括上述程式中所含有之彼等演算法。作為另一實例，可使用6.1版GCG中之程式FASTA比較聚核苷酸序列。FASTA提供查詢及搜尋序列之間的最佳重疊區域之比對及序列一致性百分比。舉例而言，核酸序列之間的序列一致性百分比可使用FASTA以其預設參數(字號為6且NOPAM因子用於計分矩陣)來測定，如6.1版GCG中所提供，其以引用之方式併入本文中。類似程式可用於胺基酸序列，例如「Clustal X」程式。可使用之額外序列比對工具由(蛋白質序列比對；(http://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/ ))及(核酸比對；http://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/nucleotide.html ))提供。一般而言，此等程式中之任一者在預設設置下使用，但熟習此項技術者可根據需要改變此等設置。替代地，熟習此項技術者可利用另一演算法或電腦程式，其至少提供與由所提及之演算法及程式所提供之一致性或比對水準一樣的一致性或比對水準。
當提及核酸或其片段時，術語「實質性一致性」、「實質性同源性」或「實質性類似性」指示，當與另一核酸(或其互補鏈)最佳比對有適當的核苷酸插入或缺失時，在至少約95%至99%之比對序列中存在核苷酸序列一致性，諸如95%一致性、96%一致性、97%一致性、98%一致性及99%一致性。較佳地，同源性覆蓋所比較的兩個序列之全長，或其開放閱讀框架，或長度為至少15個核苷酸之另一適合片段。本文描述適合片段之實例。在本發明之核酸序列中亦包括編碼本發明之AAV衣殼之核酸及其互補鏈的天然變體及經工程改造修飾。此類修飾包括例如此項技術中已知之標記、甲基化及用簡併核苷酸取代天然存在之核苷酸中之一或多者。
當提及胺基酸或其片段時，術語「實質性一致性」、「實質性同源性」或「實質性類似性」指示，當與另一胺基酸(或其互補鏈)最佳比對有適當的胺基酸插入或缺失時，在至少約95%至99%之比對序列中存在胺基酸序列一致性，諸如95%一致性、96%一致性、97%一致性、98%一致性及99%一致性。較佳地，同源性覆蓋所比較的兩個序列之全長，或其蛋白質，例如，外表面或表面蛋白質、cap蛋白、rep蛋白或其長度為至少8個胺基酸，或更理想地至少15個胺基酸之片段。本文描述適合片段之實例。
術語「高度保守」意謂至少80%一致性，較佳至少90%一致性，且更佳地，超過97%一致性。藉由採取熟習此項技術者已知之演算法及電腦程式，熟習此項技術者容易地測定一致性。
術語「序列一致性百分比」或「一致」在核酸序列或胺基酸序列之上下文中係指兩個序列中比對為最大對應性時相同的殘基。序列一致性比較之長度可超過所比較的兩個序列之全長、基因編碼序列之全長，或至少約500至5000個核苷酸之片段為所期望的。然而，較小片段之間的一致性，例如至少約九個核苷酸，通常至少約20至24個核苷酸、至少約28至32個核苷酸、至少約36或更多個核苷酸之較小片段之間的一致性亦可為適宜的。類似地，在蛋白質全長或其片段上可容易地測定胺基酸序列之「序列一致性百分比」。適當地，片段長度為至少約8個胺基酸，且可為至多約700個胺基酸。本文描述適合片段之實例。
如本文所描述，含有或包含AAV衣殼蛋白之本發明之載體尤其適合用於其中中和抗體降低其他基於AAV血清型之載體以及其他病毒載體之效果的應用中。本發明之rAAV載體在rAAV重複投與及重複基因療法中特別有利。
本發明內亦包括編碼本發明之AAV衣殼蛋白的核酸片段、其互補鏈、與其互補之cDNA及RNA。適合片段之長度為至少15個核苷酸，且涵蓋功能片段，亦即，生物學上感興趣的片段。此類片段包括編碼衣殼之三種可變蛋白(VP)之序列，該三種可變蛋白為替代性剪接變體：VP1、VP2及VP3。編碼本發明之AAV衣殼之核酸的其他適合片段包括含有衣殼蛋白之起始密碼子之片段，及本文所描述之編碼VP1衣殼蛋白之可變區的片段。
本發明不限於由本發明之AAV核酸序列表現之AAV衣殼胺基酸序列、肽及蛋白質且涵蓋藉由此項技術中已知之其他方法(包括例如，藉由化學合成、藉由其他合成技術或藉由其他方法)產生之胺基酸序列、肽及蛋白質。舉例而言，可使用多種技術容易地產生本文所描述之衣殼中之任一者的序列。
適合的製備技術為熟習此項技術者所熟知。參見例如Sambrook等人,Molecular Cloning: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Press (Cold Spring Harbor, N.Y.)。替代地，肽亦可藉由熟知固相肽合成方法來合成(Merrifield,J .Am .Chem .Soc ., 85:2149 (1962)；Stewart及Young,Solid Phase Peptide Synthesis Freeman, (San Francisco, 1969)第27-62頁)。此等及其他適合的製備方法在熟習此項技術者之知識範圍內，且不係對本發明之限制。
AAV衣殼由三種蛋白質VP1、VP2及VP3構成，其為替代性剪接變體。全長衣殼序列稱為VP1，其涵蓋稱為VP2及VP3之剪接變體。本發明亦提供本發明之AAV衣殼蛋白之其他功能片段。衣殼蛋白之其他適宜片段包括可變區(VR)、位於可變區之間的恆定區、GBS結構域及GH環。衣殼蛋白之其他適宜片段包括HPV本身。
已開發演算法以確定AAV2中之序列分異度區域。(Chiorini等人,J .Virol , 73:1309-19 (1999)；Rutledge等人,J .Virol ., 72:309-319 (1998))。使用本文所描述之此演算法及/或比對技術，確定AAV衣殼序列之VR。使用本文所提供之使用Clustal X程式在預設設置下或使用其他商業上或公開可用的比對程式在預設設置下執行的比對，熟習此項技術者可容易地確定本發明之新穎AAV衣殼之對應片段。
適當地，AAV衣殼蛋白之片段的長度為至少8個胺基酸，或長度為至少9個胺基酸，或長度為至少10個胺基酸，或長度為至少20個胺基酸，或長度為30個胺基酸，或長度為至少50個胺基酸，或長度為至少75個胺基酸，或長度為至少100個胺基酸，或長度為200個胺基酸，或長度為250個胺基酸，或長度為300個胺基酸，或長度為350個胺基酸，或長度為400個胺基酸。然而，可容易地利用具有其他適宜長度之片段。所有本發明之片段均保留衣殼AAV蛋白之生物活性。此類片段可以重組產生或藉由其他適合方法產生，例如化學合成。
本發明之序列、蛋白質及片段可藉由任何適合的方法產生，包括重組產生、化學合成或其他合成方法。此類製備方法在熟習此項技術者之知識範圍內，且不係對本發明之限制。
除了包括序列表中提供之核酸序列之外，本發明亦包括經設計以表現本發明之AAV衣殼蛋白的胺基酸序列、蛋白質及肽之核酸分子及序列。因此，本發明包括編碼以下AAV衣殼胺基酸序列之核酸序列及使用此等序列及/或其獨特片段產生的人工AAV衣殼蛋白。
可藉由任何適合的技術使用本發明之AAV衣殼蛋白序列(例如，VP1衣殼蛋白之片段)與可自另一AAV血清型(已知或新穎)、相同AAV血清型之非鄰接部分、自非AAV病毒來源或自非病毒來源獲得之異源序列組合來產生人工衣殼或經工程改造之衣殼蛋白。人工AAV血清型可為(不限於)嵌合AAV衣殼、重組AAV衣殼或「人類化」AAV衣殼。嵌合 AAV 衣殼
在一個實施例中，方法涵蓋經分離非天然存在之嵌合腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白之用途，其中嵌合衣殼蛋白包含衍生自第一AAV衣殼序列之胺基酸序列，該第一AAV衣殼序列具有至少一個經衍生自至少第二不同AAV衣殼序列之可變區取代的可變區。在某些實施例中，非天然存在之衣殼蛋白為VP1衣殼蛋白。在其他實施例中，嵌合衣殼蛋白進一步包含來自不同於第一受體AAV衣殼序列之AAV衣殼序列的GBS結構域及/或GH環區。舉例而言，本發明之嵌合AAV衣殼蛋白具有衍生自第一AAV衣殼序列(受體)之骨架序列及來自第二不同AAV衣殼序列(供體)之至少一個經取代可變區。在某些實施例中，本發明之嵌合AAV衣殼蛋白具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個或所有九個經來自不同於第一受體衣殼序列之一或多個供體AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區。在其他實施例中，本發明之AAV衣殼蛋白具有衍生自不同於受體衣殼序列之供體衣殼序列的GBS結構域或GH環區序列。替代地，本發明之嵌合AAV衣殼具有至少一個取代可變區及來自不同於第一AAV衣殼序列之相同AAV衣殼序列的GBS。本發明亦提供包含本文所描述之嵌合AAV衣殼蛋白中之任一者的非天然存在之AAV顆粒。此類AAV亦可包含可操作地連接於控制轉基因在宿主細胞中之表現的調節序列之異源轉基因。
另外，本發明提供經分離AAV衣殼蛋白之用途，其中衣殼蛋白包含來自第一AAV衣殼序列之胺基酸序列，該第一AAV衣殼序列具有兩個經來自不同於第一AAV衣殼序列之至少一個AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區，或至少三個經來自不同於第一AAV衣殼序列之至少一個AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區，或至少四個經來自不同於第一AAV衣殼序列之至少一個AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區，或至少五個經來自不同於第一AAV衣殼序列之至少一個AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區，或至少六個經來自不同於第一AAV衣殼序列之至少一個AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區，或至少七個經來自不同於第一AAV衣殼序列之至少一個AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區，或至少八個經來自不同於第一AAV衣殼序列之至少一個AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區，或所有九個經來自不同於第一AAV衣殼序列之至少一個AAV衣殼序列之各別可變區取代的可變區。舉例而言，經取代可變區來自相同AAV衣殼序列或經取代可變區來自不同於第一AAV衣殼序列之兩個或多於兩個不同AAV衣殼序列。另外，在本發明之此等AAV衣殼蛋白中之任一者中，GBS及/或GH環亦經取代且可衍生自不同於第一AAV衣殼序列之任何AAV供體衣殼序列。
在本發明之嵌合AAV衣殼中之任一者中，第一/受體AAV衣殼序列及第二/供體AAV衣殼序列可為任何已知或本文所描述之AAV衣殼序列，包括(例如)與以下AAV序列相關之衣殼序列：AAV-1、AAV-2、AAV-3、AAV-3B、AAV-4、AAV-5、AAV-6、AAV-7、AAV-8、AAV-9、AAV-10、AAV-11、AAV-12、AAV-13、AAVbo、AAVmo、AAV6.2、AAVRH.8、AAV4.10、AAVanc80L65或AAVanc110，或本文所描述之其他AAV血清型或衣殼序列中之任一者。假型化rAAV之產生揭示於例如WO 01/83692中。亦設想其他類型之rAAV變體，例如具有衣殼突變之rAAV。參見例如Marsic等人, Molecular Therapy, 22(11): 1900-1909 (2014)。
在某些實施例中，本發明之嵌合AAV衣殼蛋白可包含SEQ ID NO:90-157中之任一者的胺基酸序列(參見下文表7)，其中之每一者具有與受體骨架序列中之各別可變區調換的來自供體AAV血清型之至少一個可變區。
在本發明之嵌合AAV衣殼蛋白中之任一者中，來自第一AAV衣殼序列之骨架序列或胺基酸序列衍生自SEQ ID NO: 1-89 (例如，1-73或15-89，或158-164)中之任一者的胺基酸序列。另外，在本發明之嵌合AAV衣殼蛋白中之任一者中，來自第二AAV血清型之供體序列或胺基酸序列衍生自SEQ ID NO:1-89 (例如，1-73或15-89，或158-164)中之任一者的一或多個可變區、GBS結構域及/或GH環之胺基酸序列。
在另一實施例中，本發明提供一種經分離聚核苷酸序列，其包含編碼本發明之經工程改造嵌合AAV衣殼蛋白中之任一者的核苷酸序列。另外，本發明提供包含此等聚核苷酸序列之經分離AAV載體及包含編碼本發明之嵌合AAV衣殼蛋白中之任一者的聚核苷酸序列之AAV載體。本發明亦提供包含此等AAV載體之組合物，包括醫藥組合物。本發明亦提供包含本文所描述之非天然存在之嵌合AAV衣殼蛋白中之任一者的AAV病毒之用途。
例示性衣殼包括AAV1、AAV2、AAV4、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV3b、LK03、rh74.j、rh10、牛類、AAVGoat、Bba.41、Bba.47、Bba.49、Bba.33、Bba.45、Bba.46、Bba.50、Bba.51、RN35、Anc110_9VR、AAV_go.1、表4中所列之AAV、表5中所列之AAV、表6中所列之AAV、表7中所列之嵌合AAV及/或其變體。用於重複投予之衣殼對
在各種實施例中，預期向接受基因療法之個體投與包含第一AAV衣殼之基因療法載體，且若需要，可向個體投與第二劑量之基因療法，其包含投與包含不同於向個體投與之第一AAV衣殼的第二AAV衣殼之基因療法載體。第一及第二AAV衣殼可稱為「衣殼對」。
基於基因組分析及AAV之不同菌株與其他經鑑定菌株之同源性或多樣性，已將AAV劃分成六個不同分枝系，A-F (Gao等人, J Virol 78:6381-6388, 2004)。具有高同源性之AAV菌株歸類於相同分枝系中，且咸信來源於類似譜系。根據Gao等人(見上文)，大部分AAV菌株屬於不同分枝系，但AAV1及AAV6似乎與AAV2及AAV4屬於相同分枝系。
預期衣殼對之成員(或第一及第二衣殼)在系統發生學上為多樣化且具有有限量之序列同源性。舉例而言，在各種實施例中，系統發生學差異或多樣性係基於序列同源性之臨限值水準。在各種實施例中，衣殼對歸類於不同分枝系中。在另一實施例中，衣殼對來源於感染不同宿主之AAV，例如，藉由AAV菌株感染之人類、狒狒或其他非人類靈長類動物、山羊、有蹄類動物及其他動物。
在各種實施例中，衣殼對在一或多個共用抗體結合抗原決定基中展現序列同源性差異。舉例而言，衣殼對(或第一及第二衣殼)在AAV衣殼中發現之兩個或多於兩個、三個或多於三個、四個或多於四個抗體抗原決定基中具有同源性差異。在各種實施例中，序列同源性差異處於使兩個衣殼之間的抗體交叉反應性最小化之臨限值水準。
在各種實施例中，相對於衣殼胺基酸序列，或相對於VP1、VP2或VP3衣殼蛋白中之任一者，序列同源性之臨限值水準大約小於或等於90%序列同源性。在各種實施例中，第一及第二衣殼(衣殼對)具有小於或等於約90%之胺基酸序列同源性。在各種實施例中，第一及第二衣殼在VP1衣殼蛋白中具有小於或等於約90%同源性，在VP2衣殼蛋白中具有小於或等於約90%同源性及/或在VP3衣殼蛋白中具有小於或等於約90%同源性。在各種實施例中，衣殼或衣殼蛋白之序列同源性可小於或等於90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%或更低。在各種實施例中，衣殼或衣殼蛋白之序列同源性可為約30%至90%同源、約45%至87%同源、約40%至86%同源、約50%至85%同源、或約60%至80%同源或約65%至75%同源。
兩種衣殼蛋白之間同源性之降低限制個體在接受第二基因療法劑量後可產生之對第二衣殼的交叉反應性免疫反應。
舉例而言，所選擇之AAV載體衣殼之一致性百分比陳述於表2及圖16及圖17中。基於VP3區之序列同源性之例示性系統發生學樹陳述於圖14中。表 2 ：衣殼蛋白同源性百分比
AAV5 Bba.49 牛類 Bba.41
AAV5    55 56 59
Bba.49 55    77 65
牛類 56 77    60
Bba.41 59 65 60   
AAV9 59 63 59 79
Rh74 58 64 60 81
LK03 60 63 60 82
AAV8 59 63 59 82
Rh10 59 64 60 81
在一非限制性實例中，衣殼對陳述於表3中，其中第一衣殼可與列為第二衣殼之AAV中的任一者配對。以類似方式，任何列為第二衣殼之AAV可作為第一衣殼投與，其限制條件為不同衣殼作為第二衣殼投與。表 3 ：例示性衣殼對
第一衣殼 第二衣殼
AAV5 Bba.49，牛類
LK03 AAV5，Bba.49，牛類
AAV8 AAV5，Bba.49，牛類
Rh10 AAV5，Bba.49，牛類
如本文所描述，適用於本文所描述之重複投予方法之衣殼對之第一及第二衣殼彼此不同。考慮到此點，在各種實施例中，第一及第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV5、Bba.49、Bba.47及牛類。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 1、5、160或162，(ii) SEQ ID NO: 1、5、160或162中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 1、5、160或162中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:1、5、160或162中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 1、5、160或162中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 1、5、160或162中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含SEQ ID NO:1、5、160或162中之任一者的胺基酸序列。
在各種實施例中，第一及第二衣殼係選自由以下組成之群：LK03、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 1、5、162或173，(ii) SEQ ID NO: 1、5、162或173中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 1、5、162或173中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 1、5、162或173中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 1、5、162或173中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 1、5、162或173中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含SEQ ID NO: 1、5、162或173中之任一者的胺基酸序列。
在各種實施例中，第一及第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV8、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 1、5、9或162，(ii) SEQ ID NO: 1、5、9或162中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 1、5、9或162中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 1、5、9或162中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 1、5、9或162中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 1、5、9或162中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含SEQ ID NO: 1、5、9或162中之任一者的胺基酸序列。
在各種實施例中，第一及第二衣殼係選自由以下組成之群：rh10、AAV5、Bba.49及牛類。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 1、5、12或162，(ii) SEQ ID NO: 1、5、12或162中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 1、5、12或162中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO: 1、5、12或162中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 1、5、12或162中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 1、5、12或162中之任一者的VP3區。在各種實施例中，第一及第二衣殼蛋白包含SEQ ID NO: 1、5、12或162中之任一者的胺基酸序列。
在某些實施例中，第一衣殼蛋白及第二衣殼蛋白來自兩個不同分枝系。在一些實施例中，第一衣殼蛋白及第二衣殼蛋白來自相同分枝系，但序列同源性相對於VP1、VP2或VP3衣殼蛋白中之任一者、兩者或三者為大約小於或等於90%序列同源性。
本文亦設想若需要第三次或後續劑量之基因療法以在個體中重複表現所關注之轉基因，則另一相異AAV衣殼用於重複投予療法或重複投與轉基因，且第三或後續載體不同於先前向個體投與之第一或第二載體。
在各種實施例中，針對第一衣殼之中和抗體將不干擾第2衣殼之轉導。在各種實施例中，與在第二次投與包含相同第一AAV衣殼之載體後的轉導水準相比，投與第二AAV衣殼允許提高個體中之轉導效率。
在各種實施例中，第一衣殼及第二衣殼在個體中展現較低的預先存在之免疫力。
在各種實施例中，個體為人類。在各種實施例中，個體為人類且對第一及第二AAV載體為免疫學上未處理的。
Colella等人, (Mol Ther Methods Clin Dev . 8: 87-104, 2018)論述AAV療法中之某些問題，且描述在非人類靈長類動物中投與AAV8-FIX 載體後，低至約1:5之NAb效價可阻斷肝臟之轉導。在各種實施例中，個體針對血清中之第一或第二AAV載體之中和效價小於1:2、1:5、1:10、1:20、1:50、1:100、1:200或1:300。
在某些實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之技術所評定，具有較低的預先存在之免疫力之個體在來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中具有小於1:2、1:5或1:10的抗第一AAV載體中和抗體效價或小於1:100之總抗第一AAV載體-IgG效價，諸如例如Meadows等人, Mol Ther Methods Clin Dev. 13: 453-462, 2019。在某些實施例中，具有較低的預先存在之免疫力之個體具有小於1:2、1:5或1:10之抗第二AAV載體中和抗體效價或小於1:100之總抗第二AAV載體-IgG效價。在一些實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之技術所評定，具有較低的預先存在之免疫力之個體在來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中具有小於1:10的抗第一AAV載體中和抗體或小於1:20、1:50、1:80、1:100、1:200、1:300、1:400或1:500之總抗第一AAV載體-IgG效價，諸如例如Meadows等人, Mol Ther Methods Clin Dev. 13: 453-462, 2019。在某些實施例中，具有較低的預先存在之免疫力之個體具有小於1:10之抗第二AAV載體中和抗體效價或小於1:10、1:20、1:50、1:80、1:100、1:200、1:300、1:400或1:500之總抗第二AAV載體-IgG效價(Meadows等人, Mol Ther Methods Clin Dev. 13: 453-462, 2019)。
在一些實施例中，如藉由本文所描述(例如，在實例部分中)之技術所評定，具有較低的預先存在之免疫力之個體在來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中具有小於320、312、310、300、275、250、200、175、150、125、100、75、50、30或25之抗第一AAV載體中和抗體的NC50效價。在某些實施例中，如藉由本文所描述(例如，在實例部分中)之技術所評定，具有較低的預先存在之免疫力之個體在來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中具有小於320、312、310、300、275、250、200、175、150、125、100、75、50、30或25之抗第二AAV載體中和抗體的NC50效價。
在各種實施例中，在中和抗體分析中量測中和抗體含量。偵測預先存在之AAV免疫力的方法包括基於細胞之活體外TI分析、活體內(例如小鼠) TI分析及總抗衣殼抗體(TAb)分析之基於酶聯免疫吸附分析(ELISA)之偵測。(Masat等人, Discov Med 2013 15:379-389；Boutin等人, Hum Gene Ther 2010 21:704-712)。TAb分析可能夠偵測低於TI分析之臨限值的低效能NAb，但其可能無法偵測非抗體中和因子。活體內及活體外TI分析篩選抗AAV Nab之樣本(Manno等人, Nat Med 2006, 12:342-347, Boutin等人,Hum Gene Ther 2010；21: 704-712, Calcedo等人,Clin Vaccine Immunol 2011；18: 1586-1588, Mingozzi等人,Gene Ther 2013；20: 417-424, Calcedo等人,J Infect Dis 2009；199: 381-390, Halbert等人,Hum Gene Ther 2006；17: 440-447, Li等人,Gene Ther 2012；19: 288-294, Moskalenko等人,J Virol 2000；74: 1761-1766, Wang等人,Mol Ther 2010；18: 126-134, Grimm等人,J Virol 2008；82: 5887-5911, Greenberg等人,Gene Ther 2016；23: 313-319, Meliani等人,Hum Gene Ther Methods 2015；26: 45-53, Sun等人,J Immunol Methods 2013；387: 114-120)及調節AAV轉導效率之其他因素(Berry等人,Mol Ther 2016；24(增刊1): S14 (摘要30), Weinberg等人,J Virol 2014；88: 12472-12484, Hirosue等人,Virology 2007；367: 10-18, Virella-Lowell等人,Gene Ther 2000；7: 1783-1789, Mitchell等人,J Virol 2013；87: 13035-13041, Mitchell等人,J Virol 2013；87: 4571-4583, Berry等人,J Biol Chem 2016；291: 939-947, Nonnenmacher等人,Gene Ther 2012；19: 649-658)。
在一些實施例中，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)所評定，若不存在可偵測之抗體與第二衣殼蛋白的結合，則來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第一衣殼蛋白抗體不與第二衣殼蛋白顯著交叉反應。在某些實施例中，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)所評定，若抗體對第一衣殼蛋白之親和力比第二衣殼蛋白大5倍、10倍、15倍、20倍、25倍或更多倍，則來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第一衣殼抗體不與第二衣殼顯著交叉反應。在一些實施例中，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)所評定，若不存在可偵測之抗體與第一衣殼蛋白的結合，則來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第二衣殼蛋白抗體不與第一衣殼蛋白顯著交叉反應。在某些實施例中，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、FACS或BIACore)所評定，若抗體對第二衣殼蛋白之親和力比第一衣殼蛋白大5倍、10倍、15倍、20倍、25倍或更多倍，則來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第二衣殼抗體不與第一衣殼顯著交叉反應。
在一些實施例中，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、流式細胞量測術或BIACore)或本文所描述之技術所評定，若不存在可偵測之抗體與第二AAV載體的結合，則來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第一AAV載體抗體不與第二AAV載體顯著交叉反應。在某些實施例中，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、流式細胞量測術或BIACore)所評定，若抗體對第一AAV載體之親和力比第二AAV載體大5倍、10倍、15倍、20倍、25倍或更多倍，則來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第一AAV載體抗體不與第二AAV載體顯著交叉反應。在一些實施例中，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、流式細胞量測術或BIACore)或本文所描述之技術所評定，若不存在可偵測之抗體與第一AAV載體的結合，則來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第二AAV載體抗體不與第一AAV載體顯著交叉反應。在某些實施例中，如藉由此項技術中已知之技術(例如，ELISA、西方墨點法、生物層干擾量測法、流式細胞量測術或BIACore)所評定，若抗體對第二AAV載體之親和力比第一AAV載體大5倍、10倍、15倍、20倍、25倍或更多倍，則來自個體之樣本(例如，血液、血清或血漿)中存在之抗第二AAV載體抗體不與第一AAV載體顯著交叉反應。在一特定實施例中，如本文所提供之實例中所闡述來測定第一衣殼蛋白與第二衣殼蛋白之間的交叉反應性。
在各種實施例中，本文所描述之重複投予方法可用於一或多種組織靶向衣殼蛋白。為測定本文所揭示之AAV衣殼之組織特異性感染性，諸如描述於WO2018/022608或WO2019/222136中之彼等的方法，其中之每一者以其全部內容併入本文中且尤其用於其組織特異性AAV感染性分析及揭示內容。簡言之，可藉由以一或多個濃度及在感染後之適當時間(例如，感染後3週及5週)將AAV引入至測試動物中而在動物(例如，Balb/C小鼠)中產生及測試包含測試衣殼且表現一或多個可偵測轉基因(例如螢光素酶轉基因(例如，Fluc或Fluc2基因)及/或綠色螢光蛋白(GFP)轉基因)之AAV，可進行可偵測之一或多個標記物之量測，例如成像。
舉例而言，在螢光素酶標記物之情況下，可採用活體內生物發光成像，利用標準生物發光基板及成像裝置。可使用整個動物成像及/或器官成像。舉例而言，可使用4.5.2版即時影像軟體(PerkinsElmer Waltham, MA)處理且分析影像資料。可圍繞各動物以及個別器官追蹤所關注區域以定量由螢光素酶活性所釋放之總通量(TF) (光子/秒)。總通量活性為各器官系統之AAV感染性之代表。
關於肌肉特異性，將衣殼歸類為肌肉特異性之一種方法為計算腓腸肌通量/肝臟通量之比率。若此比率大於指定比率，例如通量增加2倍，且無其他非肌肉組織之通量大於肝臟之通量，則衣殼蛋白可表徵為肌肉特異性。關於肝臟特異性，將衣殼歸類為肝臟特異性之一種方法為使衣殼與肝臟通量相對於其他測試之組織增加至少2倍，例如增加至少5-10倍相關聯。
亦可評定藉由衣殼(例如藉由利用GFP轉基因)賦予之組織特異性感染性，從而可採集及切片來自經感染測試動物(例如，小鼠)之組織，且可定量不同組織或器官，例如肌肉或肝臟組織或器官的表現GFP之細胞之百分比。
利用諸如上文所描述之分析，且如WO2018/022608及/或WO2019/222136中所證明，AAV衣殼蛋白Bba.45、Bba.46、Bba.47、Bba.49、Bba.50及Bba.51已經鑑定為親肝臟的，亦即，展現高度之肝臟特異性，而AAV衣殼蛋白AAVancl 10_9VR、Bba.26、Bba41、Bba.42、Bba.43及Bba.44已經鑑定為親肌肉的，亦即，展現高度之肌肉特異性。產生具有衣殼蛋白之 AAV
本發明涵蓋AAV衣殼蛋白序列及編碼此等蛋白質之核酸，其不含自然界中與此等病毒相關之DNA及/或細胞材料。在另一態樣中，本發明提供利用本發明之新穎AAV序列(包括其片段)之分子，以用於產生適用於將異源基因或其他核酸序列遞送至目標細胞之分子。
在另一態樣中，本發明提供利用本發明之AAV衣殼蛋白序列(包括其片段)之分子，以用於產生適用於將異源基因或其他核酸序列遞送至目標細胞之病毒載體。
用於構築本發明之任何實施例之方法為核酸操作領域之技術人員已知的，且包括基因工程、重組工程及合成技術。參見例如Sambrook等人,Molecular Cloning: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y。
在一個實施例中，本發明之載體至少含有編碼本發明之AAV衣殼或其片段的序列。在另一實施例中，本發明之載體至少含有編碼AAV rep蛋白或其片段之序列。視情況，此類載體可含有AAV cap及rep蛋白兩者。在同時提供AAV rep及cap之載體中，AAV rep及AAV cap序列皆可具有相同的AAV血清型來源。替代地，本發明提供其中rep序列來自與提供cap序列之AAV血清型不同之AAV血清型的載體。在一個實施例中，rep及cap序列由分開之來源(例如，分開之載體或宿主細胞及載體)表現。在另一實施例中，此等rep序列與不同AAV血清型之cap序列框內融合以形成嵌合AAV載體。視情況，載體進一步含有包含側接AAV 5' ITR及AAV 3' ITR之所選轉基因之袖珍基因。
因此，在一個實施例中，本文所描述之載體含有編碼胺基酸序列SEQ ID 1-89，例如1-73或15-89，或158-164中之任一者的完整AAV衣殼蛋白之核酸序列。替代地，此等載體含有編碼人工衣殼之序列，該人工衣殼含有一或多個與異源AAV或非AAV衣殼蛋白(或其片段)融合之SEQ ID NO: 1-89，例如1-73或15-89，或158-164中之衣殼的片段。此等人工衣殼蛋白係選自本發明之AAV衣殼蛋白中之任一者的非鄰接部分或選自其他AAV血清型之衣殼。
在另一實例中，可期望將VP3蛋白之起始密碼子改為GTG。替代地，rAAV可含有本發明之AAV衣殼蛋白中之一或多者的可變區中之一或多者，或其他片段。此等修飾可在所選表現系統中增加表現、產量及/或改善純化，或用於另一所期望之目的(例如，改變趨向性或改變中和抗體抗原決定基)。
本文所描述之載體，例如質體，適用於多種目的，但特別適用於產生含有包含AAV序列或其片段之衣殼的rAAV。本文詳細描述此等載體，包括rAAV、其元件、結構及用途。來自狒狒肝臟之衣殼蛋白
自狒狒肝臟分離之AAV VP1衣殼蛋白揭示於共同擁有之PCT申請案第PCT/US19/32097號中，其作為WO2019/222136公開且其以全文引用之方式併入本文中。
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.45)之VP1序列如SEQ ID NO:158 (胺基酸1-742)所示且在下表4中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:158之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:158之胺基酸206-742。
Figure 02_image001
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.46)之VP1序列如SEQ ID NO: 159 (胺基酸1-742)所示且在下表4中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 159之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 159之胺基酸206-742。
Figure 02_image003
Figure 02_image005
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.47)之VP1序列如SEQ ID NO: 160 (胺基酸1-742)所示且在下表4中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 160之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 160之胺基酸206-742。
Figure 02_image007
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.48)之VP1序列如SEQ ID NO: 161 (胺基酸1-742)所示且在下表4中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 161之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 161之胺基酸206-742。
Figure 02_image009
Figure 02_image011
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.49)之VP1序列如SEQ ID NO: 162 (胺基酸1-742)所示且在下表4中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 162之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 162之胺基酸206-742。
Figure 02_image013
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.50)之VP1序列如SEQ ID NO: 163 (胺基酸1-742)所示且在下表4中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 163之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 163之胺基酸206-742。
Figure 02_image015
Figure 02_image017
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.51)之VP1序列如SEQ ID NO: 164 (胺基酸1-742)所示且在下表4中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 164之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO: 164之胺基酸206-742。
Figure 02_image019
編碼上文所提及之衣殼蛋白之對應核酸序列如下所示：SEQ ID NO:165/Bba.45；SEQ ID NO:166/Bba.46；SEQ ID NO:167/Bba.47；SEQ ID NO:168/Bba.48；SEQ ID NO:169/Bba.49；SEQ ID NO:170/Bba.50；及SEQ ID NO:171/Bba.51。
在下表4中，「VR」係指可變區且數字係指胺基酸序列中各可變區或GBS區及GH環區之胺基酸殘基。表 4
AAV VRI VRII VRIII VRIV GBS VRV VRVI VRVII VRVIII VRIX GH 環
AAVBba.45 265-268 325-330 380-386 452-462 467-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.46 265-268 325-330 380-386 452-462 467-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.47 265-268 325-330 380-386 452-462 467-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.48 265-268 325-330 380-386 452-462 467-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.49 265-268 325-330 380-386 452-462 467-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.50 265-268 325-330 380-386 452-462 467-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.51 265-268 325-330 380-386 452-462 467-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAV 之衣殼蛋白
適用於本文所描述之方法的自以下哺乳動物：狒狒、食蟹獼猴(crab-eating macaque/cynomolgus macaque)、狨猴(marmoset)及豬之組織分離之衣殼蛋白亦描述於共同擁有之國際專利公開案第WO 2018/022608號中，其以引用的方式併入本文中。
預期用於方法的係經工程改造之嵌合AAV衣殼蛋白(及包含彼等衣殼蛋白之AAV)，其中骨架(或受體)衣殼蛋白序列中之一或多個可變區、GBS區及/或GH環經來自不同AAV衣殼序列供體之一或多個可變區、GBS區及/或GH環取代。受體及供體序列可來源於任何先前已知之AAV血清型或衣殼序列，或本文所描述之任何新穎AAV衣殼序列。藉由將來自一個衣殼序列之至少一個可變區、GBS區或GH環區調換成受體衣殼序列中之各別區域來產生經工程改造AAV衣殼蛋白。就此而言，應注意受體VP1衣殼序列中之一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個或所有九個VR可經來自一或多個不同VP1衣殼序列之各別區域置換。本文涵蓋可藉由本文所描述之VR區調換方法產生之經工程改造嵌合AAV衣殼序列的任何及所有各種組合(及包含彼等嵌合衣殼序列之所有相關AAV病毒)。
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.21)之VP1序列如SEQ ID NO:15 (胺基酸1-742)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:15之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:15之胺基酸206-742。
Figure 02_image021
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.26)之VP1序列如SEQ ID NO:16 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:16之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:16之胺基酸206-739。
Figure 02_image023
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.27)之VP1序列如SEQ ID NO:17 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:17之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:17之胺基酸206-739。
Figure 02_image025
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.29)之VP1序列如SEQ ID NO:18 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:18之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:18之胺基酸206-739。
Figure 02_image027
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.30)之VP1序列如SEQ ID NO:19 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:19之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:19之胺基酸206-739。
Figure 02_image029
Figure 02_image031
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.31)之VP1序列如SEQ ID NO:20 (胺基酸1-742)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:20之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:20之胺基酸206-742。
Figure 02_image033
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.32)之VP1序列如SEQ ID NO:21 (胺基酸1-742)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:21之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:21之胺基酸206-742。
Figure 02_image035
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.33)之VP1序列如SEQ ID NO:22 (胺基酸1-742)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:22之胺基酸138-742且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:22之胺基酸206-742。
Figure 02_image037
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.34)之VP1序列如SEQ ID NO:23 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:23之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:23之胺基酸206-739。
Figure 02_image039
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.35)之VP1序列如SEQ ID NO:24 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:24之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:24之胺基酸206-739。
Figure 02_image041
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.36)之VP1序列如SEQ ID NO:25 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:25之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:25之胺基酸206-739。
Figure 02_image043
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.37)之VP1序列如SEQ ID NO:26 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:26之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:26之胺基酸206-739。
Figure 02_image045
Figure 02_image047
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.38)之VP1序列如SEQ ID NO:27 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:27之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:27之胺基酸206-739。
Figure 02_image049
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.41)之VP1序列如SEQ ID NO:28 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:28之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:28之胺基酸206-739。
Figure 02_image051
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.42)之VP1序列如SEQ ID NO:29 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:29之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:29之胺基酸206-739。
Figure 02_image053
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.43)之VP1序列如SEQ ID NO:30 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:30之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:30之胺基酸206-739。
Figure 02_image055
自狒狒分離之AAV衣殼(表示為Bba.44)之VP1序列如SEQ ID NO:31 (胺基酸1-739)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:31之胺基酸138-739且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:31之胺基酸206-739。
Figure 02_image057
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.14)之VP1序列如SEQ ID NO:32 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:32之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:32之胺基酸203-736。
Figure 02_image059
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.15)之VP1序列如SEQ ID NO:33 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:33之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:33之胺基酸203-736。
Figure 02_image061
Figure 02_image063
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.16)之VP1序列如SEQ ID NO:34 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:34之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:34之胺基酸203-736。
Figure 02_image065
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.17)之VP1序列如SEQ ID NO:35 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:35之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:35之胺基酸203-736。
Figure 02_image067
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.18)之VP1序列如SEQ ID NO:36 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:36之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:36之胺基酸203-736。
Figure 02_image069
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.20)之VP1序列如SEQ ID NO:37 (胺基酸1-733)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:37之胺基酸138-733且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:37之胺基酸203-733。
Figure 02_image071
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.35)之VP1序列如SEQ ID NO:38 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:38之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:38之胺基酸199-730。
Figure 02_image073
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.36)之VP1序列如SEQ ID NO:39 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:39之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:39之胺基酸199-730。
Figure 02_image075
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.39)之VP1序列如SEQ ID NO:40 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:40之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:40之胺基酸203-736。
Figure 02_image077
Figure 02_image079
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.40)之VP1序列如SEQ ID NO:41 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:41之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:41之胺基酸203-736。
Figure 02_image081
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.41)之VP1序列如SEQ ID NO:42 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:42之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:42之胺基酸203-736。
Figure 02_image083
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.42)之VP1序列如SEQ ID NO:43 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:43之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:43之胺基酸203-736。
Figure 02_image085
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.43)之VP1序列如SEQ ID NO:44 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:44之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:44之胺基酸199-730。
Figure 02_image087
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.44)之VP1序列如SEQ ID NO:45 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:45之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:45之胺基酸199-730。
Figure 02_image089
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.45)之VP1序列如SEQ ID NO:46 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:46之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:46之胺基酸199-730。
Figure 02_image091
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bce.46)之VP1序列如SEQ ID NO:47 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:47之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:47之胺基酸199-730。
Figure 02_image093
Figure 02_image095
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bcy.20)之VP1序列如SEQ ID NO:48 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:48之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:48之胺基酸199-730。
Figure 02_image097
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bcy.22)之VP1序列如SEQ ID NO:49 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:49之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:49之胺基酸199-730。
Figure 02_image099
自食蟹獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bcy.23)之VP1序列如SEQ ID NO:50 (胺基酸1-730)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:50之胺基酸138-730且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:50之胺基酸199-730。
Figure 02_image101
自狨猴分離之AAV衣殼(表示為Bma.42)之VP1序列如SEQ ID NO:51 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:51之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:51之胺基酸203-736。
Figure 02_image103
自狨猴分離之AAV衣殼(表示為Bma.43)之VP1序列如SEQ ID NO:52 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:52之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:52之胺基酸203-736。
Figure 02_image105
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.1)之VP1序列如SEQ ID NO:53 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:53之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:53之胺基酸184-716。
Figure 02_image107
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.2)之VP1序列如SEQ ID NO:54 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:54之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:54之胺基酸184-716。
Figure 02_image109
Figure 02_image111
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.3)之VP1序列如SEQ ID NO:55 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:55之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:55之胺基酸184-716。
Figure 02_image113
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.4)之VP1序列如SEQ ID NO:56 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:56之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:56之胺基酸184-716。
Figure 02_image115
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.6)之VP1序列如SEQ ID NO:57 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:57之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:57之胺基酸184-716。
Figure 02_image117
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.8)之VP1序列如SEQ ID NO:58 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:58之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:58之胺基酸184-716。
Figure 02_image119
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.13)之VP1序列如SEQ ID NO:59 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:59之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:59之胺基酸184-716。
Figure 02_image121
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.18)之VP1序列如SEQ ID NO:60 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:60之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:60之胺基酸184-716。
Figure 02_image123
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.20)之VP1序列如SEQ ID NO:61 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:61之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:61之胺基酸184-716。
Figure 02_image125
Figure 02_image127
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.23)之VP1序列如SEQ ID NO:62 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:62之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:62之胺基酸184-716。
Figure 02_image129
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.24)之VP1序列如SEQ ID NO:63 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:63之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:63之胺基酸184-716。
Figure 02_image131
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.27)之VP1序列如SEQ ID NO:64 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:64之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:64之胺基酸184-716。
Figure 02_image133
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.28)之VP1序列如SEQ ID NO:65 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:65之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:65之胺基酸184-716。
Figure 02_image135
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.29)之VP1序列如SEQ ID NO:66 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:66之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:66之胺基酸184-716。
Figure 02_image137
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.33)之VP1序列如SEQ ID NO:67 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:67之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:67之胺基酸184-716。
Figure 02_image139
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.35)之VP1序列如SEQ ID NO:68 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:68之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:68之胺基酸184-716。
Figure 02_image141
Figure 02_image143
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.36)之VP1序列如SEQ ID NO:69 (胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:69之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:69之胺基酸184-716。
Figure 02_image145
自豬分離之AAV衣殼(表示為Bpo.37)之VP1序列如SEQ ID NO:70及(胺基酸1-716)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:70之胺基酸137-716且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:70之胺基酸184-716。
Figure 02_image147
自恆河獼猴分離之AAV衣殼(表示為Brh.26)之VP1序列如SEQ ID NO:71及(胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:71之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:71之胺基酸203-736。
Figure 02_image149
自恆河獼猴分離之AAV衣殼(表示為Brh.27)之VP1序列如SEQ ID NO:72及(胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:72之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:72之胺基酸203-736。
Figure 02_image151
自恆河獼猴分離之AAV衣殼(表示為Brh.28)之VP1序列如SEQ ID NO:73及(胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:73之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:73之胺基酸203-736。
Figure 02_image153
自恆河獼猴分離之AAV衣殼(表示為Brh.29)之VP1序列如SEQ ID NO:74及(胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:74之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:74之胺基酸203-736。
Figure 02_image155
自恆河獼猴分離之AAV衣殼(表示為Brh.30)之VP1序列如SEQ ID NO:75及(胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:75之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:75之胺基酸203-736。
Figure 02_image157
Figure 02_image159
自恆河獼猴分離之AAV衣殼(表示為Brh.31)之VP1序列如SEQ ID NO:76及(胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:76之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:76之胺基酸203-736。
Figure 02_image161
自恆河獼猴分離之AAV衣殼(表示為Brh.32)之VP1序列如SEQ ID NO:77及(胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:77之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:77之胺基酸203-736。
Figure 02_image163
自恆河獼猴分離之AAV衣殼(表示為Brh.33)之VP1序列如SEQ ID NO:78及(胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:78之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:78之胺基酸203-736。
Figure 02_image165
自臺灣獼猴(Formosan macaque)分離之AAV衣殼(表示為Bfm.17)之VP1序列如SEQ ID NO:79及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:79之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:79之胺基酸203-736。
Figure 02_image167
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.18)之VP1序列如SEQ ID NO:80及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:80之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:80之胺基酸203-736。
Figure 02_image169
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.20)之VP1序列如SEQ ID NO:81及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:81之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:81之胺基酸203-736。
Figure 02_image171
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.21)之VP1序列如SEQ ID NO:82及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:82之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:82之胺基酸203-736。
Figure 02_image173
Figure 02_image175
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.24)之VP1序列如SEQ ID NO:83及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:83之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:83之胺基酸203-736。
Figure 02_image177
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.25)之VP1序列如SEQ ID NO:84及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:84之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:84之胺基酸203-736。
Figure 02_image179
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.27)之VP1序列如SEQ ID NO:85及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:85之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:85之胺基酸203-736。
Figure 02_image181
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.32)之VP1序列如SEQ ID NO:86及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:86之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:86之胺基酸203-736。
Figure 02_image183
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.33)之VP1序列如SEQ ID NO:87及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:87之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:87之胺基酸203-736。
Figure 02_image185
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.34)之VP1序列如SEQ ID NO:88及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:88之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:88之胺基酸203-736。
Figure 02_image187
自臺灣獼猴分離之AAV衣殼(表示為Bfm.35)之VP1序列如SEQ ID NO:89及(胺基酸1-737)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:89之胺基酸138-736且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:89之胺基酸203-736。
Figure 02_image189
Figure 02_image191
AAV5衣殼之VP1序列如SEQ ID NO:5 (胺基酸1-724)所示且在下表5定義中相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:5之胺基酸137-724 (TAPTGK…TRPL)且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:5之胺基酸193-724 (MSAGGG…TRPL)。
AAV8衣殼之VP1序列如SEQ ID NO:9 (胺基酸1-738)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:9之胺基酸138-738 (TAPGKK…TRNL)且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:9之胺基酸204-738 (MAAGGG…TRNL)。
AAVBo衣殼之VP1序列如SEQ ID NO:1 (胺基酸1-736)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:1之胺基酸140-736 (TAPAAK…TNHL)且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:1之胺基酸204-736 (MRAAGG…TNHL)。
Rh10衣殼之VP1序列如SEQ ID NO:12 (胺基酸1-738)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:12之胺基酸138-738 (TAPGKK…TRNL)且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:12之胺基酸204-738 (MAAGGG…TRNL)。
LK03衣殼之VP1序列如SEQ ID NO:173 (胺基酸1-738)所示且在下表5中定義相關的可變區及GBS區及GH環區之位置。VP2衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:173之胺基酸138-738 (TAPGKK…TRNL)且VP3衣殼蛋白跨越SEQ ID NO:173之胺基酸204-738 (MAAGGG…TRNL)。
在下表5中，「VR」係指可變區且數字係指各可變區或GBS區及GH環區在胺基酸序列中所跨越之胺基酸殘基。表 5
AAV VRI VRII VRIII VRIV GBS VRV VRVI VRVII VRVIII VRIX GH 環
AAV2 (SEQ ID NO:3) 262-268 325-330 380-384 450-459 464-475 487-504 526-538 544-557 580-592 703-711 446-600
AAV4 (SEQ ID NO:4) 256-260 316-321 372-378 444-454 459-470 481-504 526-536 542-556 579-591 702-710 440-599
AAV5 (SEQ ID NO:5) 252-258 316-321 372-377 443-446 452-462 474-491 513-525 531-547 570-582 692-700 439-590
AAV6 (SEQ ID NO:6) 262-269 326-331 381-385 451-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 447-601
AAV6.2 (SEQ ID NO:7) 262-269 326-331 381-385 451-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 447-601
AAV7 (SEQ ID NO:8) 263-270 327-332 382-386 452-462 467-478 490-507 529-541 547-559 582-594 705-713 448-602
AAV8 (SEQ ID NO:9) 263-271 328-333 383-387 453-462 467-478 490-507 529-541 548-560 583-595 706-714 449-603
AAV9 (SEQ ID NO:10) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVrh8 (SEQ ID NO:11) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVrh10 (SEQ ID NO:12) 263-271 328-333 383-387 453-462 467-478 490-507 529-541 548-560 583-595 706-714 449-603
AAVbo (SEQ ID NO:1) 258-262 318-323 374-380 446-456 462-472 484-506 528-538 544-558 581-593 704-712 442-601
AAVBba.21 (SEQ ID NO:15) 265-269 325-330 381-386 452-462 468-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.31 (SEQ ID NO:20) 265-269 325-330 381-386 452-462 468-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.32 (SEQ ID NO:21) 265-269 325-330 381-386 452-462 468-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBba.33 (SEQ ID NO:22) 265-269 325-330 381-386 452-462 468-478 490-512 534-544 550-564 587-599 710-718 448-607
AAVBpo.1 (SEQ ID NO:53) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.2 (SEQ ID NO:54) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.3 (SEQ ID NO:55) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.4 (SEQ ID NO:56) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.6 (SEQ ID NO:57) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.8 (SEQ ID NO:58) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.13 (SEQ ID NO:59) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.18 (SEQ ID NO:60) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.20 (SEQ ID NO:61) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.23 (SEQ ID NO:62) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.24 (SEQ ID NO:63) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.27 (SEQ ID NO:64) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.28 (SEQ ID NO:65) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.29 (SEQ ID NO:66) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.33 (SEQ ID NO:67) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.35 (SEQ ID NO:68) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.36 (SEQ ID NO:69) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVBpo.37 (SEQ ID NO:70) 243-249 307-312 363-368 434-437 443-453 465-483 505-517 523-539 562-574 684-692 430-582
AAVmo (SEQ ID NO:2) 249-252 310-315 366-371 437-439 443-455 467-484 507-519 525-533 556-568 679-689 433-576
AAVBce.14 (SEQ ID NO:32) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.15 (SEQ ID NO:33) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.16 (SEQ ID NO:34) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.17 (SEQ ID NO:35) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.18 (SEQ ID NO:36) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.20 (SEQ ID NO:37) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBma.42 (SEQ ID NO:51) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBma.43 (SEQ ID NO:52) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.39 (SEQ ID NO:40) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.40 (SEQ ID NO:41) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.41 (SEQ ID NO:42) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVBce.42 (SEQ ID NO:43) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVanc110 (SEQ ID NO:14) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-602
AAVanc80 (SEQ ID NO:13) 262-269 326-331 381-385 451-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 447-601
AAVBce.35 (SEQ ID NO:38) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBce.36 (SEQ ID NO:39) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBce.43 (SEQ ID NO:44) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBce.44 (SEQ ID NO:45) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBce.45 (SEQ ID NO:46) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBce.46 (SEQ ID NO:47) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBcy.20 (SEQ ID NO:48) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBcy.22 (SEQ ID NO:49) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBcy.23 (SEQ ID NO:50) 258-265 322-327 377-381 447-455 460-471 483-500 522-534 540-552 575-587 698-706 443-595
AAVBba.26 (SEQ ID NO:16) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.27 (SEQ ID NO:17) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.29 (SEQ ID NO:18) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.30 (SEQ ID NO:19) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.34 (SEQ ID NO:23) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.35 (SEQ ID NO:24) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.36 (SEQ ID NO:25) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.37 (SEQ ID NO:26) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.38 (SEQ ID NO:27) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.41 (SEQ ID NO:28) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.42 (SEQ ID NO:29) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.43 (SEQ ID NO:30) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBba.44 (SEQ ID NO:31) 265-271 328-333 383-387 453-464 469-480 492-508 531-543 549-561 584-596 707-715 449-604
AAVBrh.26 (SEQ ID NO:71) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-601
AAVBrh.27 (SEQ ID NO:72) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-601
AAVBrh.28 (SEQ ID NO:73) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-601
AAVBrh.29 (SEQ ID NO:74) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-601
AAVBrh.30 (SEQ ID NO:75) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-601
AAVBrh.31 (SEQ ID NO:76) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-601
AAVBrh.32 (SEQ ID NO:77) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-601
AAVBrh.33 (SEQ ID NO:78) 262-270 327-332 382-386 452-460 465-476 488-505 527-539 545-558 581-593 704-712 448-601
AAVBfm.17 (SEQ ID NO:79) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.18 (SEQ ID NO:80) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.20 (SEQ ID NO:81) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.21 (SEQ ID NO:82) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.24 (SEQ ID NO:83) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.25 (SEQ ID NO:84) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.27 (SEQ ID NO:85) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.32 (SEQ ID NO:86) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.33 (SEQ ID NO:87) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.34 (SEQ ID NO:88) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVBfm.35 (SEQ ID NO:89) 262-270 327-332 382-386 452-461 466-477 489-506 528-540 546-559 582-594 705-713 448-602
AAVLK03 (SEQ ID NO:173) 263-271 328-333 383-387 453-462 467-478 490-507 529-541 547-560 583-595 706-714 449-603
轉基因
轉基因為側接該轉基因之載體序列的異源核酸序列，其編碼所關注之多肽、蛋白質或其他產物。核酸編碼序列以允許轉基因在宿主細胞中轉錄、轉譯及/或表現之方式可操作地連接至調節組分。
轉基因序列之組成將視所得載體之用途而定。舉例而言，一種類型之轉基因序列包括報導序列，其在表現時產生可偵測信號。此類報導序列包括(但不限於)編碼以下之DNA序列：β-內醯胺酶、β-半乳糖苷酶(LacZ)、鹼性磷酸酶、胸苷激酶、綠色螢光蛋白(GFP)、氯黴素乙醯轉移酶(CAT)、螢光素酶、膜結合蛋白(包括例如CD2、CD4、CD8)、流感血球凝集素蛋白及此項技術中熟知之其他存在或可藉由習知方法產生針對其之高親和力抗體的物質，及包含與尤其來自血球凝集素或Myc之抗原標籤結構域適當融合的膜結合蛋白之融合蛋白。
此等編碼序列在與驅動其表現之調節元件相關時，提供可藉由習知方式偵測之信號，習知方式包括酶促、放射性、比色、螢光或其他光譜分析，螢光活化細胞分選分析及免疫分析，包括酶聯免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)及免疫組織化學。舉例而言，在標記序列為LacZ基因之情況下，藉由針對β-半乳糖苷酶活性之分析來偵測攜帶信號之載體的存在。在轉基因為綠色螢光蛋白或螢光素酶之情況下，攜帶信號之載體可藉由光度計中之顏色或光產生而目視量測。
然而，理想地，轉基因為編碼適用於生物學及醫學中之產物的非標記序列，諸如蛋白質、肽、RNA、酶、顯性負突變體或催化性RNA。所期望的RNA分子包括tRNA、dsRNA、核糖體RNA、催化性RNA、siRNA、小髮夾RNA、反式剪接RNA及反義RNA。適用之RNA序列之一個實例為抑制或消除靶向核酸序列在經處理動物中之表現的序列。通常，適合的目標序列包括致癌性目標及病毒性疾病。對於此類目標之實例，參見下文在與免疫原相關之部分中鑑定的致癌性目標及病毒。
轉基因可用於校正或改善基因缺陷，該基因缺陷可包括其中正常基因之表現量低於正常表現量之缺陷或其中功能性基因產物未表現之缺陷。較佳類型之轉基因序列編碼在宿主細胞中表現之治療性蛋白質或多肽。本發明進一步包括使用多個轉基因，例如以校正或改善由多次單元蛋白質引起之基因缺陷。在某些情況下，不同的轉基因可用於編碼蛋白質之各次單元，或用於編碼不同的肽或蛋白質。當編碼蛋白質次單元之DNA的大小較大時，例如對於免疫球蛋白、血小板衍生之生長因子或肌縮蛋白，此係所期望的。為了使細胞產生多次單元蛋白質，用含有不同次單元中之每一者的重組病毒感染細胞。替代地，可藉由相同的轉基因編碼蛋白質之不同次單元。在此情況下，單個轉基因包括編碼次單元中之每一者的DNA，各次單元之DNA藉由內部核糖核酸酶進入位點(IRES)隔開。當編碼次單元中之每一者的DNA之大小較小時，例如，編碼次單元之DNA及IRES的總大小小於五千鹼基，此係所期望的。作為IRES之替代物，DNA可藉由編碼在轉譯後事件中自分裂之2A肽的序列隔開。參見例如Donnelly等人,J. Gen. Virol ., 78(Pt 1):13-21 (1997年1月)；Furler等人,Gene Ther. , 8(11):864-873 (2001年6月)；Klump等人,Gene Ther ., 8(10):811-817 (2001年5月)。此2A肽顯著地小於IRES，使得其較適合在空間為限制因素時使用。更常見的係，當轉基因較大，由多次單元組成，或兩個轉基因經共同遞送時，共同投與攜帶所要轉基因或次單元之rAAV以允許其在活體內多連體化(concatamerize)從而形成單一載體基因組。在此類實施例中，第一AAV可攜帶表現單一轉基因之表現卡匣且第二AAV可攜帶表現不同轉基因以在宿主細胞中共表現之表現卡匣。然而，所選擇之轉基因可編碼任何生物活性產物或其他產物，例如研究所需的產物。
適合的轉基因可藉由熟習此項技術者容易地選擇。不認為轉基因之選擇係對本發明之限制。
在一些實施例中，轉基因為異源蛋白質，且此異源蛋白質為治療性蛋白質。例示性治療性蛋白質包括但不限於血液因子，諸如β-血球蛋白、血紅素、組織纖維蛋白溶酶原活化因子及凝血因子；集落刺激因子(CSF)；介白素，諸如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9等；生長因子，諸如角質細胞生長因子(KGF)、幹細胞因子(SCF)、纖維母細胞生長因子(FGF，諸如鹼性FGF及酸性FGF)、肝細胞生長因子(HGF)、胰島素樣生長因子(IGF)、骨形態生成蛋白(BMP)、表皮生長因子(EGF)、生長分化因子-9 (GDF-9)、肝癌衍生生長因子(HDGF)、肌肉抑制素(GDF-8)、神經生長因子(NGF)、神經營養素、血小板衍生生長因子(PDGF)、血小板生成素(TPO)、轉化生長因子α (TGF-α.)、轉化生長因子β (TGF-.β.)及類似者；可溶性受體，諸如可溶性TNF-α.受體、可溶性VEGF受體、可溶性介白素受體(例如，可溶性IL-1受體及可溶性II型IL-1受體)、可溶性γ/δ T細胞受體、可溶性受體之配位體結合片段及類似者；酶類，諸如α-葡糖苷酶、伊米苷酶、β-葡糖腦苷脂酶及阿糖腦苷酶；酶活化劑，諸如組織纖維蛋白溶酶原活化因子；趨化介素，諸如1P-10、藉由干擾素-γ誘導之單核因子(Mig)、Groα/IL-8、RANTES、MIP-1α、MIP-1β.、MCP-1、PF-4及類似者；血管生成劑，諸如血管內皮生長因子(VEGF，例如，VEGF121、VEGF165、VEGF-C、VEGF-2)、神經膠質瘤衍生生長因子、血管生成素、血管生成素-2；及類似者；抗血管生成劑，諸如可溶性VEGF受體；蛋白質疫苗；神經活性肽，諸如神經生長因子(NGF)、緩激肽、膽囊收縮素、胃泌素、腸泌素、催產素、促性腺激素釋放激素、β-內啡肽、腦啡肽、物質P、生長抑素、催乳素、甘丙胺素、生長激素釋放激素、鈴蟾素、強啡肽、華法林、神經調壓素、腸動素、促甲狀腺素、神經肽Y、促黃體生成激素、降鈣素、胰島素、升糖素、血管加壓素、血管緊張素II、促甲狀腺素釋放激素、血管活性腸肽、睡眠肽及類似者；溶栓劑；心房利尿鈉肽；鬆弛素；膠質原纖維酸性蛋白；激濾泡素(FSH)；人類α-1抗胰蛋白酶；白血病抑制因子(LIF)；組織因子，促黃體生成激素；巨噬細胞活化因子；腫瘤壞死因子(TNF)；嗜中性白血球趨化因子(NCF)；金屬蛋白酶之組織抑制劑；血管活性腸肽；血管生成素；促血管素；纖維蛋白；水蛭素；IL-1受體拮抗劑；及類似者。所關注蛋白質之一些其他非限制性實例包括睫狀神經營養因子(CNTF)；腦源性神經營養因子(BDNF)；神經營養素3及4/5 (NT-3及4/5)；膠細胞源性神經營養因子(GDNF)；芳族胺基酸去羧酶(AADC)；血友病相關凝血蛋白，諸如因子VIII、因子IX、因子X；肌縮蛋白；迷你肌縮蛋白或微小肌縮蛋白；溶酶體酸脂肪酶；苯丙胺酸羥化酶(PAH)；肝糖貯積病相關酶，諸如葡萄糖-6-磷酸酶、酸麥芽糖酶、肝糖去分支酶、肌肉肝糖磷酸化酶、肝糖原磷酸化酶、肌肉磷酸果糖激酶、磷酸化酶激酶(例如，PHKA2)、葡萄糖轉運蛋白(例如，GLUT2)、醛縮酶A、β-烯醇酶及肝糖合成酶；溶酶體酶(例如，β-N-乙醯基己醣胺酶A)；及其任何變體。
在各種實施例中，異源蛋白質係選自由以下組成之群：因子VIII、因子IX、ATP7B蛋白、C1酯酶抑制劑(C1-INH)、α1抗胰蛋白酶及半乳糖-1-磷酸尿苷醯轉移酶(GALT)、肌縮蛋白、迷你肌縮蛋白、微小肌縮蛋白、苯丙胺酸羥化酶(PAH)、α-半乳糖苷酶A及葡糖腦苷脂酶。調節控制元件
AAV載體亦包括以允許其在用質體載體轉染或用本文所描述之病毒感染之細胞中轉錄、轉譯及/或表現的方式可操作地連接至轉基因之習知控制元件或序列。如本文所使用，「可操作地連接」之序列包括與所關注基因相鄰之表現控制序列及以反式起作用或在一定距離起作用以控制所關注基因之表現控制序列兩者。
表現控制序列包括適當的轉錄起始、終止、啟動子及強化子序列；有效RNA加工信號，諸如剪接及聚腺苷酸化(polyA)信號；使細胞質mRNA穩定之序列；增強轉譯效率之序列(亦即，Kozak共同序列)；增強蛋白質穩定性之序列；及必要時，增強經編碼產物之分泌的序列。此項技術中已知且可利用大量表現控制序列，包括天然、組成性、誘導性及/或組織特異性之啟動子。
組成性啟動子之實例包括但不限於反轉錄病毒勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus；RSV) LTR啟動子(視情況具有RSV強化子)、巨細胞病毒(CMV)啟動子(視情況具有CMV強化子) (參見例如Boshart等人,Cell , 41:521-530 (1985))、SV40啟動子、二氫葉酸還原酶啟動子、β-肌動蛋白啟動子、磷酸甘油激酶(PGK)啟動子及EF1啟動子[Invitrogen]。誘導性啟動子允許基因表現之調節且可藉由以下調節：外源提供之化合物；環境因素，諸如溫度；或特定生理狀態(例如急性期，細胞之特定分化狀態或僅在複製細胞中)之存在。誘導性啟動子及誘導性系統購自多種商業來源，包括但不限於Invitrogen、Clontech及Ariad。已描述許多其他系統且其可藉由熟習此項技術者容易地選擇。藉由外源提供之化合物調節之誘導性啟動子之實例包括鋅誘導性綿羊金屬硫蛋白(MT)啟動子、地塞米松(Dex)-誘導性小鼠乳腺腫瘤病毒(MMTV)啟動子、T7聚合酶啟動子系統[WO 98/10088]；蛻皮激素昆蟲啟動子[No等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 93:3346-3351 (1996)]、四環素-可抑制型系統[Gossen等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 89:5547-5551 (1992)]、四環素-誘導性系統[Gossen等人,Science , 268:1766-1769 (1995), 亦參見Harvey等人,Curr. Opin. Chem. Biol ., 2:512-518 (1998)]、RU486-誘導性系統[Wang等人,Nat. Biotech. , 15:239-243 (1997)及Wang等人,Gene Ther ., 4:432-441 (1997)]及雷帕黴素(rapamycin)-誘導性系統[Magari等人,J. Clin. Invest ., 100:2865-2872 (1997)]。可適用於此背景下之其他類型的誘導性啟動子為藉由特定生理狀態(例如溫度、急性期、細胞之特定分化狀態或僅在複製細胞中)調節之彼等啟動子。
在另一實施例中，使用轉基因之天然啟動子。當期望轉基因之表現應模擬天然表現時，天然啟動子可為較佳的。當轉基因之表現必須在時間上或發育上，或以組織特異性方式，或回應於特定轉錄刺激調節時，可使用天然啟動子。在另一實施例中，其他天然表現控制元件，諸如強化子元件、聚腺苷酸化位點或Kozak共同序列，亦可用於模擬天然表現。
轉基因之另一實施例包括可操作地連接於組織特異性啟動子之基因。舉例而言，若骨骼肌中之表現為所期望的，則應使用在肌肉中有活性之啟動子。此等啟動子包括來自編碼骨骼β-肌動蛋白、肌凝蛋白輕鏈2A、肌縮蛋白、肌肉肌酸激酶之基因的啟動子，以及活性高於天然存在之啟動子的合成肌肉啟動子(參見Li 等人,Nat. Biotech. , 17:241-245 (1999))。具有組織特異性之啟動子的實例為吾人所知：肝臟(白蛋白，Miyatake等人,J. Virol ., 71:5124-32 (1997)；B型肝炎病毒核心啟動子，Sandig等人,Gene Ther ., 3:1002-9 (1996)；α-胎蛋白(AFP)，Arbuthnot等人,Hum. Gene Ther ., 7:1503-14 (1996))；骨骼骨鈣化素(Stein等人,Mol. Biol. Rep ., 24:185-96 (1997))；骨骼唾液蛋白(Chen等人,J. Bone Miner. Res. , 11:654-64 (1996))；淋巴細胞(CD2，Hansal等人,J. Immunol. , 161:1063-8 (1998)；免疫球蛋白重鏈；T細胞受體鏈)；神經元，諸如神經元特異性烯醇酶(NSE)啟動子(Andersen等人,Cell. Mol. Neurobiol ., 13:503-15 (1993))、神經絲輕鏈基因(Piccioli等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 88:5611-5 (1991))及神經元特異性vgf基因(Piccioli等人,Neuron , 15:373-84 (1995))以及其他。
視情況，攜帶治療上有用之轉基因的質體亦可包括可選標記物或報導基因尤其可包括編碼遺傳黴素(geneticin)、潮黴素(hygromicin)或嘌呤黴素(purimycin)抗性之序列。此類可選報導或標記基因(較佳位於待藉由本產生方法拯救之病毒基因組的外部)可用於用信號表示細菌細胞中質體之存在，諸如安比西林(ampicillin)抗性。質體之其他組分可包括複製起點。此等及其他啟動子及載體元件之選擇為習知的且可獲得許多此類序列[參見例如Sambrook等人及其中所引用之參考文獻]。產生重組 AAV 之方法
本發明提供在昆蟲或哺乳動物細胞中產生重組AAV之材料及方法。在一些實施例中，病毒構築體進一步包含啟動子及啟動子下游之限制位點以允許插入編碼一或多種所關注蛋白質之聚核苷酸，其中啟動子及限制位點位於5' AAV ITR之下游及3' AAV ITR之上游。在一些實施例中，病毒構築體進一步包含在限制位點之下游及3' AAV ITR之上游的轉錄後調節元件。在一些實施例中，病毒構築體進一步包含插入於限制位點處且與啟動子可操作地連接之聚核苷酸，其中聚核苷酸包含所關注蛋白質之編碼區。如熟習此項技術者應瞭解，本申請案中所揭示之AAV載體中之任一者可在該方法中用作病毒構築體以產生重組AAV。
在一些實施例中，輔助功能藉由包含腺病毒或桿狀病毒輔助基因之一或多種輔助質體或輔助病毒提供。腺病毒或桿狀病毒輔助基因之非限制性實例包括但不限於E1A、E1B、E2A、E4及VA，其可向AAV封裝提供輔助功能。
AAV之輔助病毒為此項技術中已知的且包括例如來自腺病毒科(Adenoviridae )及疱疹病毒科(Herpesviridae )之病毒。AAV之輔助病毒之實例包括但不限於描述於美國公開案第20110201088號(其揭示內容以引用的方式併入本文中)中之SAdV-13輔助病毒及SAdV-13樣輔助病毒、輔助載體pHELP (應用病毒學(Applied Viromics))。熟習此項技術者應瞭解，本文中可使用可向AAV提供足夠輔助功能之AAV之任何輔助病毒或輔助質體。
在一些實施例中，AAV cap基因存在於質體中。質體可進一步包含AAV rep基因。本文中來自任何AAV血清型之cap基因及/或rep基因(包括但不限於AAV1、AAV2、AAV4、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV3b、LK03、rh74.j、rh10、牛類、AAVGoat、Bba.41、Bba.47、Bba.49、Bba.33、Bba.45、Bba.46、Bba.50、Bba.51、RN35、Anc110_9VR、AAV_go.1、表4中所列之AAV、表5中所列之AAV及/或其變體)可用於產生重組AAV。在一些實施例中，AAV cap基因編碼來自血清型1、血清型2、血清型4、血清型5、血清型6、血清型7、血清型8、血清型9、血清型10、血清型11、血清型12、血清型13或其變體之衣殼。
在一些實施例中，昆蟲或哺乳動物細胞可用輔助質體或輔助病毒、病毒構築體及編碼AAV cap基因之質體轉染；且可在共轉染之後的各個時間點收集重組AAV病毒。舉例而言，重組AAV病毒可在共轉染之後約12小時、約24小時、約36小時、約48小時、約72小時、約96小時、約120小時或其中任何兩個時間點之間的時間收集。
重組AAV亦可使用此項技術中已知適用於產生感染性重組AAV之任何習知方法產生。在一些情況下，可藉由使用穩定表現用於AAV顆粒產生之一些必需組分的昆蟲或哺乳動物細胞來產生重組AAV。舉例而言，包含AAV rep及cap基因之質體(或多個質體)及可選標記物(諸如新黴素抗性基因)可整合至細胞之基因組中。昆蟲或哺乳動物細胞接著可用輔助病毒(例如，提供輔助功能之腺病毒或桿狀病毒)及包含5'及3' AAV ITR (及必要時，編碼異源蛋白質之核苷酸序列)之病毒載體共感染。此方法之優點為細胞為可選的且適合於大規模產生重組AAV。作為另一非限制性實例，腺病毒或桿狀病毒而非質體可用於將rep及cap基因引入至封裝細胞中。作為又一非限制性實例，含有5'及3' AAV LTR之病毒載體及rep-cap基因均可穩定整合至生產細胞之DNA中，且輔助功能可藉由野生型腺病毒提供以產生重組AAV。AAV 產生中所使用之細胞類型
可使用任何允許產生AAV或生物產物且可維持於培養物中之無脊椎動物細胞類型產生包含本文所描述之AAV載體的病毒顆粒。舉例而言，使用之昆蟲細胞株可來自草地黏蟲(Spodoptera frugiperda )，諸如Sf9、SF21、SF900+；果蠅細胞株；蚊子細胞株，例如白紋伊蚊(Aedes albopictus )衍生之細胞株；家蠶細胞株，例如家蠶(Bombyxmori)細胞株；粉紋夜蛾(Trichoplusia ni )細胞株，諸如High Five細胞；或鱗翅目(Lepidoptera)細胞株，諸如小菜蛾(Ascalapha odorata )細胞株。較佳之昆蟲細胞為來自易受桿狀病毒感染之昆蟲物種的細胞，包括High Five、Sf9、Se301、SeIZD2109、SeUCR1、Sf900+、Sf21、BTI-TN-5B1-4、MG-1、Tn368、HzAm1、BM-N、Ha2302、Hz2E5及Ao38。
桿狀病毒為節肢動物之包膜DNA病毒，其兩個成員為用於在細胞培養物中產生重組蛋白質之熟知表現載體。桿狀病毒具有環狀雙股基因組(80-200 kbp)，其可經工程改造以允許將大基因組內含物遞送至特定細胞。用作載體之病毒通常為加洲苜蓿夜蛾(Autographa californica )多衣殼核多角體病毒(AcMNPV)或家蠶(Bm-NPV) (Kato等人, 2010)。
桿狀病毒通常用於感染昆蟲細胞以表現重組蛋白。特定言之，異源基因於昆蟲中之表現可如以下各者中所描述來實現：例如美國專利第4,745,051號；Friesen等人(1986)；EP 127,839；EP 155,476；Vlak等人(1988)；Miller等人(1988)；Carbonell等人(1988)；Maeda等人(1985)；Lebacq-Verheyden等人(1988)；Smith等人(1985)；Miyajima等人(1987)；及Martin等人(1988)。可用於產生蛋白質之多種桿狀病毒株及變體以及對應允許的昆蟲宿主細胞描述於Luckow等人(1988)、Miller等人(1986)；Maeda等人(1985)及McKenna (1989)中。
在本發明之另一態樣中，方法亦用任何允許AAV之複製或生物產物之產生且可維持於培養物中之哺乳動物細胞類型來進行。所使用之較佳哺乳動物細胞可為HEK293、HeLa、CHO、NS0、SP2/0、PER.C6、Vero、RD、BHK、HT 1080、A549、Cos-7、ARPE-19及MRC-5細胞。在活體外產生異源蛋白質
作為非限制性實例，本文中所揭示之重組AAV可用於在活體外，例如在細胞培養物中產生所關注蛋白質。作為一個非限制性實例，在一些實施例中，一種用於在活體外產生所關注蛋白質之方法，其中方法包括：提供包含編碼異源蛋白質之核苷酸序列的重組AAV；及使重組AAV與細胞培養物中之細胞接觸，由此重組AAV在細胞中表現所關注蛋白質。編碼所關注蛋白質之核苷酸序列的大小可變化。舉例而言，核苷酸序列可為至少約1.4 kb、至少約1.5 kb、至少約1.6 kb、至少約1.7 kb、至少約1.8 kb、至少約2.0 kb、至少約2.2 kb、至少約2.4 kb、至少約2.6 kb、至少約2.8 kb、至少約3.0 kb、至少約3.2 kb、至少約3.4 kb、至少約3.5 kb長度、至少約4.0 kb長度、至少約5.0 kb長度、至少約6.0 kb長度、至少約7.0 kb長度、至少約8.0 kb長度、至少約9.0 kb長度或至少約10.0 kb長度。在活體內產生異源蛋白質
本文中所揭示之重組AAV可用於在活體內，例如在諸如哺乳動物之動物中產生所關注蛋白質。一些實施例提供一種用於在活體內產生所關注蛋白質之方法，其中方法包括：提供包含編碼所關注蛋白質之核苷酸序列的重組AAV；及向個體投與重組AAV，由此重組AAV在個體中表現所關注蛋白質。在一些實施例中，個體可為非人類哺乳動物，例如猴、狗、貓、小鼠或牛。編碼所關注蛋白質之核苷酸序列的大小可變化。舉例而言，核苷酸序列可為至少約1.4 kb、至少約1.5 kb、至少約1.6 kb、至少約1.7 kb、至少約1.8 kb、至少約2.0 kb、至少約2.2 kb、至少約2.4 kb、至少約2.6 kb、至少約2.8 kb、至少約3.0 kb、至少約3.2 kb、至少約3.4 kb、至少約3.5 kb長度、至少約4.0 kb長度、至少約5.0 kb長度、至少約6.0 kb長度、至少約7.0 kb長度、至少約8.0 kb長度、至少約9.0 kb長度或至少約10.0 kb長度。治療性用途
藉由本文所描述之方法產生之重組AAV可用於表現一或多種治療性蛋白質以治療各種疾病或病症。疾病之非限制性實例包括癌症，諸如癌瘤、肉瘤、白血病或淋巴瘤。可使用本文所揭示之AAV載體、重組病毒及方法治療之額外疾病包括遺傳病症，包括鐮狀細胞貧血、囊腫性纖維化、溶酶體酸性脂肪酶(LAL)缺乏症1、泰-薩克斯病(Tay-Sachs disease)、苯酮尿症、黏多醣貯積症、肝糖貯積病(GSD，例如GSD I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X、XI、XII、XIII及XIV型)、半乳糖血症、肌肉萎縮症(例如，杜興氏肌肉萎縮症)、血友病，諸如A型血友病(典型血友病)及B型血友病(克氏病(Christmas Disease))、威爾森氏病、遺傳性血管水腫(HAE)、α1抗胰蛋白酶缺乏症、苯酮尿症(PKU)、法布立病及高歇氏病。
在各種實施例中，病症或疾病係選自由以下組成之群：A型血友病、B型血友病、威爾森氏病、遺傳性血管水腫(HAE)、α1抗胰蛋白酶缺乏症、半乳糖血症、杜興氏肌肉萎縮症或其他肌肉萎縮症、苯酮尿症(PKU)、法布立病及高歇氏病。本文涵蓋之額外病症或疾病包括可藉由在肝臟中或肌肉中局部表現或藉由自肝臟(或肌肉)分泌蛋白質之表現來治療的彼等病症或疾病。在個體(例如，個體之血清)中表現之異源蛋白質之量可變化。舉例而言，在一些實施例中，蛋白質在個體之血清中可按以下量表現：至少約9 µg/ml、至少約10 µg/ml、至少約50 µg/ml、至少約100 µg/ml、至少約200 µg/ml、至少約300 µg/ml、至少約400 µg/ml、至少約500 µg/ml、至少約600 µg/ml、至少約700 µg/ml、至少約800 µg/ml、至少約900 µg/ml或至少約1000 µg/ml。在一些實施例中，所關注蛋白質在個體之血清中按以下量表現：約9 µg/ml、約10 µg/ml、約50 µg/ml、約100 µg/ml、約200 µg/ml、約300 µg/ml、約400 µg/ml、約500 µg/ml、約600 µg/ml、約700 µg/ml、約800 µg/ml、約900 µg/ml、約1000 µg/ml、約1500 µg/ml、約2000 µg/ml、約2500 µg/ml或介於此等值中之任兩者之間的範圍。熟習此項技術者將理解，使該方法有效所需之所關注蛋白質之表現量可視非限制性因素而變化，諸如所關注之特定蛋白質及接受治療之個體，且蛋白質之有效量可容易地藉由熟習此項技術者使用此項技術中已知之習知方法測定而無需過多的實驗。
本文涵蓋一種用多次劑量之重組腺相關病毒(rAAV)載體治療患有如本文所描述之疾病或病症之個體的方法，該方法包含：向個體投與包含轉基因及第一衣殼蛋白之第一rAAV載體，及向個體投與具有包含與第一基因療法載體相同的轉基因之第二衣殼蛋白之第二rAAV載體。
另外，本文涵蓋用多次劑量之rAAV載體治療個體之方法中所使用的第一rAAV載體，其中該方法包含：(a)向個體投與第一rAAV載體，其中第一rAAV載體包含轉基因，該轉基因包含包括治療性分子之轉基因及第一衣殼，及(b)向個體投與第二rAAV載體，其中第二rAAV載體包含轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含與第一rAAV載體中之轉基因相同的治療性分子或不同的治療性分子。
本文亦涵蓋用多次劑量之rAAV載體治療有需要之個體的疾病或病症之方法中所使用的第一rAAV載體，該方法包含：(a)向個體投與第一rAAV載體，其包含包括適用於治療疾病或病症之治療性分子之轉基因及第一衣殼，及(b)向個體投與第二rAAV載體，其包含包括適用於治療疾病或病症之治療性分子之轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含適用於治療疾病或病症的與第一rAAV載體中之轉基因相同的治療性分子或不同的治療性分子。
另外，本文涵蓋涉及投與多次劑量之rAAV載體之基因療法方法中所使用的第一rAAV載體，其中該方法包含：(a)向個體投與第一rAAV載體，其中第一rAAV載體包含包括治療性分子之轉基因及第一衣殼，及(b)向個體投與第二rAAV載體，其中第二rAAV載體包含轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含相同的治療性分子或不同的治療性分子。
本文亦涵蓋涉及投與多次劑量之rAAV載體之基因療法方法中所使用的第一rAAV載體，該方法包含：(a)向有需要之個體投與第一rAAV載體，其包含包括適用於治療疾病或病症之治療性分子之轉基因及第一衣殼，及(b)向個體投與第二rAAV載體，其包含包括適用於治療疾病或病症之治療性分子之轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含適用於治療疾病或病症的與第一rAAV載體中之轉基因相同的治療性分子或不同的治療性分子。
進一步預期第一及第二衣殼蛋白為系統發生學上相異之衣殼蛋白。預期第二或後續AAV包含在病毒之間具有足夠系統發生學距離的衣殼，使得個體中預先存在之免疫原性針對第二衣殼蛋白無顯著交叉反應性。在各種實施例中，第一衣殼蛋白係選自由以下組成之群：AAV1、AAV2、AAV4、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV3b、LK03、rh74.j、rh10、牛類、AAVGoat、Bba.41、Bba.47、Bba.49、Bba.33、Bba.45、Bba.46、Bba.50、Bba.51、RN35、Anc110_9VR、AAV_go.1、表4中所列之AAV、表5中所列之AAV及/或其變體。在各種實施例中，第二衣殼蛋白係選自由以下組成之群：AAV1、AAV2、AAV4、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV3b、LK03、rh74.j、rh10、牛類、AAVGoat、Bba.41、Bba.47、Bba.49、Bba.33、Bba.45、Bba.46、Bba.50、Bba.51、RN35、Anc110_9VR、AAV_go.1、表4中所列之AAV、表5中所列之AAV及/或其變體。
在一些實施例中，以體重之約1 × 109 vg/kg至約1 × 1015 vg/kg之劑量向個體投與第一rAAV載體、第二rAAV載體或兩者。在某些實施例中，以體重之約1 × 1012 vg/kg至約1 × 1015 vg/kg之劑量向個體投與第一rAAV載體、第二rAAV載體或兩者。
在各種實施例中，在投與第二基因療法載體之前或之後，向個體投與免疫抑制劑。在各種實施例中，免疫抑制劑係選自由以下組成之群：T細胞抑制劑、鈣調神經磷酸酶抑制劑、mTOR抑制劑及類固醇。在各種實施例中，免疫抑制劑為抗胸腺細胞球蛋白(ATG)、他克莫司、環孢靈、黴酚酸嗎啉乙酯、黴酚酸鈉、硫唑嘌呤、西羅莫司(雷帕黴素)或潑尼松。在各種實施例中，經由諸如脂質體或奈米顆粒之遞送媒劑遞送免疫抑制劑。
在各種實施例中，在投與第二基因療法載體之前或之後，向個體投與靜脈內免疫球蛋白(IVIG)。
在各種實施例中，在第一次投與基因療法載體之後6個月、1年、1.5年、2年、2.5年、3年、4年、5年或6年或更長時間投與第二基因療法載體。
在各種實施例中，靜脈內或皮下投與基因療法。套組
本文涵蓋在第一容器中包含第一rAAV載體；及在第二容器中包含第二rAAV載體之醫藥套組，其中第一rAAV載體包含包括治療性分子之轉基因及第一衣殼且第二rAAV載體包含包括治療性分子之轉基因及第二衣殼，其中第二rAAV載體中之轉基因包含與第一rAAV載體中之轉基因相同或不同的治療性分子。在一特定實施例中，第一衣殼與第二rAAV載體之第二衣殼在系統發生學上相異。在某些實施例中，第一容器中第一rAAV之濃度為約1 × 1012 vg/mL至約1 × 1015 vg/mL。在某些實施例中，位於第二容器中之第二rAAV的濃度為約1 × 1012 vg/mL至約1 × 1015 vg/mL。在某些實施例中，套組包含在用於治療有需要之個體的疾病或病症之方法中或在涉及多次投與AAV之基因療法方法中使用套組之說明書。在某些實施例中，說明書包含投藥方法。在某些實施例中，說明書包含投予方法。在某些實施例中，投予方法包含向個體投予第一rAAV載體、第二rAAV載體或兩者之時序。
以下實例意謂說明性而非限制性的。 實例1：AAV衣殼預先存在之免疫力之分析
基因療法投藥之一個副作用可為針對基因療法載體中之病毒衣殼蛋白產生之免疫反應。另外，人類可能已暴露於AAV且對一些衣殼展現預先存在之免疫力，其可限制藉由載體之轉導。然而，與其他基因療法載體相比，一些基因療法載體可展現較低的預先存在之免疫力。舉例而言，Liu等人(Gene Ther.21(8):732-8, 2014)先前描述與AAV2或AAV8相比，健康中國人群中預先存在之針對AAV5之免疫力較低。當確定基因療法載體是否可向個體投與或重複投予而不引發限制載體之功效且減少向個體表現之轉基因量的免疫級聯時，針對病毒載體之低預先存在之免疫力可為有幫助的及較佳的。
為了確定何種AAV載體可具有最低預先存在之免疫力，進行中和分析以確定在平均人類血清中對各種衣殼之轉導抑制活性的量。IVIG (其為自5000名個體收集之IgG)用於評估人類血清中之平均預先存在之免疫力。簡言之，在添加載體前20小時，將293T細胞以4 × 104 個細胞/孔均勻地接種於96孔不透明的白色盤中。藉由在DMEM + 1% BSA中連續稀釋2倍來製備100 mg/mL IVIG (Gammagard)之稀釋液，自20 mg/mL至0.04 mg/mL及0 mg/mL對照。藉由在DMEM + 1% BSA + 100 μM依託泊苷(Etoposide)中將載體儲備液稀釋至4 × 109 vg/mL來製備載體溶液。所有載體用相同的RSV-螢火蟲螢光素酶報導子封裝，藉由雙重CsCl梯度純化且藉由qPCR效價進行vg/mL定量。藉由銀染色凝膠評定恆定的總衣殼蛋白。將IVIG稀釋液及載體溶液1:1混合且在37℃下培育1小時。隨後將來自混合盤之20微升/孔一式兩份地添加至先前製備之細胞盤中的對應孔中。將細胞盤在37℃下培育72小時。在基質添加及細胞裂解之後，螢火蟲螢光素酶表現係藉由RLU定量且視為相對於0 mg/mL IVIG對照之表現。藉由導致細胞之50%基因轉導之IVIG濃度計算中和效價(NC50)。使用此通用方案之微小變化產生小鼠、NHP及人類之血清及血漿的中和效價。
圖1說明針對包含本文所描述及文獻中已知之AAV衣殼之各種基因療法載體的預先存在之免疫力。圖1展示與其他AAV相比，人類IVIG含有針對牛類、Bba.49、AAV5及Bba.47之較少中和抗體。
圖2展示與AAV2、AAV8及AAV5相比，人類針對Bba.33載體之預先存在之免疫力較低。類似地，圖3展示與AAV5、AAV8及AAV9相比，人類針對AAV12樣變體Bba.45、Bba.45、Bba.46、Bba.47、Bba.49、Bba.50及Bba.51之預先存在之免疫力亦較低。
圖4展示在個別人類供體中針對不同AAV載體之預先存在之中和抗體的效價。熱圖藉由如描述於右側圖例中之效價加陰影。效價越高，陰影越暗。圖4表明人類對多種衣殼具有預先存在之NAb效價，且彼等效價之特異性與AAV VP3系統發生學緊密相關。舉例而言，若人類個體對AAV5或AAV12具有預先存在之NAb效價，則資料表明其對常見NHP/人類AAV分離株亦將具有NAb效價。在所有50個測試之人類樣本中，AAV12特異性抗體效價通常類似於或低於AAV5。 實例2：活體內衣殼蛋白之交叉反應性
為了確定重複投予包含不同AAV衣殼之第二基因療法載體是否為可能的，在已接受表現轉基因之第一AAV載體的個體中評估對第二載體之交叉反應性。非人類靈長類動物(NHP)中預先存在之NAb篩選已顯示較低的AAV5血清陽性，但其他「靈長類動物衣殼」之效價較高。圖5展示AAV9、AAV12及其他衣殼之預先存在之NAb效價的分析結果。對所有動物投予6 × 1013 vg/kg AAV5-FVIII且在8週內檢測hFVIII蛋白之血漿表現。
在進一步實驗中，在AAV5-FVIII投予前及投予後，分析接受AAV5-FVIII的對AAV5具有或不具有預先存在之免疫力的NHP對Bba.49之交叉反應中和抗體。使用總抗體分析(TAb)評估NHP對AAV5之預先存在之抗體且使用如先前所描述之基於細胞之活體外TI分析確定轉導之抑制劑。(參見例如Falese L等人(2017) Gene Therapy；Sandberg H等人(2001) Thromb Haemost；85(1): 93-100)。在MSDTM平台上使用夾心電化學發光分析(ECLA)偵測血漿中針對AAV5之總結合抗體(TAb)。基於細胞之轉導抑制分析測試血漿阻斷藉由AAV5-CMV-GFP載體活體外轉導HEK293T/17細胞之能力。
圖6展示在AAV5投予前(-2週)及AAV5投予後2週及AAV5投予後7週，在所有投予之NHP中對Bba.49之中和抗體效價。在AAV5投予後，對Bba.49的預先存在之中和抗體效價並未顯著影響對Bba.49之交叉反應效價。
圖7展示在具有不同含量之針對AAV5的預先存在之中和抗體的NHP中，在-2週(投予前)及在AAV5投予後2週及AAV5投予後7週，對AAV5之抗體效價之水準。如所預期，所有投予AAV5載體之動物產生穩固且持續之抗AAV5體液反應，無論其是否具有預先存在之抗AAV5效價。
在9/15動物中，投與AAV5載體並未顯著改變對Bba49之中和效價。6/15動物具有＜20的預先存在之效價且彼等中無一者展示效價之顯著增加。9/15動物具有＞20的預先存在之效價且彼等動物中之5隻僅在AAV5投予後2或7週展示效價之適當增加。相對於由AAV5載體產生之特異性抗AAV5效價，此等增加(≤10倍)較小，圖7中所見。量測之Bba49中和效價之少量增加可能係由於間接提昇預先存在之Ig水準及/或抗體親和力成熟過程固有的廣泛性，兩者很可能為暫時的且不大可能與臨床重複投予應用有關。此並不排除在AAV5與Bba49之間共用中和抗原決定基之可能性，但由AAV5載體產生之大部分中和活性確鑿地未經共用。在預先存在之抗Bba49效價較低之動物中，缺乏AAV5投予後產生之任何Bba49交叉反應性中和效價，及在少數預先存在之抗Bba49效價較高的動物中之適當增加支援AAV5與Bba49之間有限的體液交叉反應性結論。
在NHP中評估針對AAV9、RN35及Bba.41之預先存在之中和抗體。儘管一些NHP樣本展示對一種或另一種衣殼具有特異性之預先存在之效價(圖8)，但NHP針對AAV9及Bba.41具有較高的血清流行率，其表明AAV9及Bba.41可為血清學上相異的。在先前投予AAV9、RN35或Bba.41之NHP中測試對Bba.41之中和活性。在無預先存在之效價的NHP中，中和活性展示對投予之AAV之特異性。僅投予Bba.41之NHP展示針對Bba.41之中和抗體(圖9)。高度類似之衣殼蛋白表明交叉反應性(圖10)。舉例而言，AAV9及RN35具有高度類似之衣殼蛋白序列(92.9%序列ID；RN35經設計以模擬AAV9之衣殼表面)。如所預期，投予AAV9之NHP展示對RN35之交叉反應性。投予與Bba.41具有低序列一致性之AAV9的NHP展示對Bba.41之有限交叉反應性。此等結果表明捕獲NHP似乎具有更特異性的預先存在之NAb效價，假設係由於更獨立/急性的暴露於AAV。
在接受6 × 1012 vg/kg、2 × 1013 vg/kg、4 × 1013 vg/kg或6 × 1013 vg/kg之AAV5-FVIII療法之人類患者中量測對Bba.49之中和效價(圖11)。在初始投予後1.5至2.5年獲得之臨床試驗期間，對接受AAV5-FVIII療法之人類個體之血清樣本進行活體外Bba.49轉導抑制分析。IVIG之中和效價表示人類血清與陰性對照中進行比較的平均效價。總體而言，AAV5投予後針對Bba.49之低NAb效價指示有限之交叉中和活性。一名患者具有較高之效價，但尚不知效價係預先存在的抑或係由AAV5投予引起的。
在接受4 × 1013 vg/kg (圖13A-E)或6 × 1013 vg/kg (圖12A-E)之AAV5-FVIII療法之人類患者中，在投予前及投予後8週及1.5至2年量測對不同衣殼(AAV5、AAV2、AAV6、AAV8及AAVrh10)之額外交叉反應性。在投予之後，人類中之AAV5抗體效價在第8週上升至數萬/數十萬且在投予後1.5至2.5年增加至數百萬。針對其他衣殼之抗體通常在投予後1.5至2.5年處於「預先存在」之效價水準(圖12A-E至13A-E)。然而，4 × 1013 vg/kg組中之一名患者對AAV2及AAV6兩者具有預先存在之效價且展現抗AAV2及AAV6效價遠高於其預先存在之TAb+水準(圖13B-C)。 實例3-活體內雙重投予/重複投予實驗
為了確定用不同AAV基因療法載體重複投予動物之可行性，進行小鼠實驗。
對8至10週齡之野生型雄性小鼠(C57BL/6J，Jackson Laboratories #000664)靜脈內注射6 × 1013 vg/kg (4 ul/gm)的含於AAV5或AAV9血清型衣殼中之螢光素酶(LUC)基因。在此投藥後四週，對用AAV5-螢光素酶處理之小鼠靜脈內注射6 × 1013 vg/kg的含於AAV5、Bba.47或Bba.49衣殼中之絨膜促性腺激素β鏈(βCG)基因(4 ul/gm)。對最初用AAV9-螢光素酶處理之小鼠注射6 × 1013 vg/kg (4 ul/gm)的含βCG基因之AAV9或Bba.41衣殼。
將溶胞物及血清樣本懸浮於含有8M尿素及L×LEPADNPFLPQ (SEQ ID NO: 172) (Pepscan)樣本之穩定同位素肽之緩衝液中，其中接著用二硫蘇糖醇(DTT) (Sigma)還原、用碘乙醯胺(IAA) (VWR)烷基化且在37℃下用胰蛋白酶/Lys-C (Promega)隔夜消化。用10%甲酸淬滅消化。在Waters正壓歧管上使用Waters Sep-Pak C18 SPE盤淨化經消化樣本。將溶離樣本使用旋轉蒸發器(Thermo)乾燥且在連接至6500 AB Sciex之Waters H-Class UPLC上注射之前再懸浮於0.1%甲酸/水中。使用Sciex MultiQuant軟體進行峰積分。
僅在研究開始前及在實驗期間每2週藉由使用無菌手術刀片在尾部之側向靜脈中之一者上劃長度大約0.1 cm之橫向切口來收集血液樣本。此得到大約100 μL之血液樣本，將其收集且離心(在4℃下5000 rpm持續10分鐘)以得到血清。將血清傾析至1.5 mL埃彭道夫管(eppendorf tube)中，儲存於-80℃下，且轉移用於βCG表現及活體外轉導抑制之分析。在最初AAV5-螢光素酶或AAV9-螢光素酶投與後12週殺滅動物，且收集肝臟、心臟及腓腸肌並儲存以用於將來可能的分析。
圖15A展示在AAV5-LUC之後4週投予之AAV5-βCG在投藥後6週或8週之血清中未產生任何可量測的βCG。相比之下，在AAV5-LUC之後4週投予之Bba.47-βCG及Bba.49-βCG產生與單獨投予媒劑前之小鼠等效的βCG血清表現。類似地，圖15B展示在媒劑之後投予之AAV9-βCG在血清中產生βCG表現，而在AAV9-LUC之後投予之AAV9-βCG並未展示。相比之下，Bba.41-βCG在投予媒劑或AAV9-LUC前產生βCG表現。
總而言之，此等研究將表明在AAV5處理之後，Bba.47及Bba.49可投予動物，而無任何可觀測的中和作用。類似地，Bba.41-βCG可在AAV9-LUC之後投予，而無任何可觀測的βCG表現損失。表 6 (VP1 序列 ( 胺基酸序列及代表性核酸編碼序列 )
SEQ ID NO. AAV 序列
1 AAVbo MSFVDHPPDWLESIGDGFREFLGLEAGPPKPKANQQKQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGDPVNFADEVAREHDLSYQKQLEAGDNPYLKYNHADAEFQEKLASDTSFGGNLGKAVFQAKKRILEPLGLVETPDKTAPAAKKRPLEQSPQEPDSSSGVGKKGKQPARKRLNFDDEPGAGDGPPPEGPSSGAMSTETEMRAAAGGNGGDAGQGAEGVGNASGDWHCDSTWSESHVTTTSTRTWVLPTYNNHLYLRLGSSNASDTFNGFSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNHWGLRPKSMQVRIFNIQVKEVTTSNGETTVSNNLTSTVQIFADSTYELPYVMDAGQEGSLPPFPNDVFMVPQYGYCGLVTGGSSQNQTDRNAFYCLEYFPSQMLRTGNNFEMVYKFENVPFHSMYAHSQSLDRLMNPLLDQYLWELQSTTSGGTLNQGNSATNFAKLTKTNFSGYRKNWLPGPMMKQQRFSKTASQNYKIPQGRNNSLLHYETRTTLDGRWSNFAPGTAMATAANDATDFSQAQLIFAGPNITGNTTTDANNLMFTSEDELRATNPRDTDLFGHLATNQQNATTVPTVDDVDGVGVYPGMVWQDRDIYYQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLIGGFGLKSPPPQIFIKNTPVPANPATTFSPARINSFITQYSTGQVAVKIEWEIQKERSKRWNPEVQFTSNYGAQDSLLWAPDNAGAYKEPRAIGSRYLTNHL
2 AAVmo MSFFDWLGKQYAQGAAEFWDLKSGPPAPKKARKDGSAGFNFPGHKYLGPGNSLDRGDPVDADDAAAQKHDQSYQEQLEAGDNPYLKYNHADREFQEALKDDTSFEGNLARGLFEAKKLVAEPLGLVEPELAPPSGRKRPVQSSQESGYSSSQDKRPNLDVDEEDREFAAAAAETETGSAPPTGNLGPGTMAGGGSAPIDDGSYGADGVGNASGDWHCDSTWLDNCVITRTTRTWNLPTYNNHIYKRLNGTTSGDQSYFGFSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGLRPKSLRFKIFNIQVKEVTTQDSTKIISNNLTSTVQVFADTEYQLPYVIGSAHEGCLPPFPADVFMLPQYGYCTRQDGNSNNPTPRSAFYCLEYFPSKMLRTGNSFEFTYNFEKVPFHSMWAHNQSLDRLMNPLIDQYLYYLDVTSSTGFTYQKGVHTNLPEQERNWLPGPGIRNQAWFNSATGNNPLTGTWQYSNKYVLENRASKIAPGPAMGIESTKFDGNGIIFSKEYITNVNTANPNQVNITRETEINSTNPLAGGSLGAHANNSQNTTTAPTLDHTNVMGVFPGSVWQDRDIYLQGQIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKNPPPQILIKNTPVPADPPTEFNANKISSFITQYSTGQVTVEMEWELQKETSKRWNPEIQYSDDSSSTSGSILHFAPDDVGNYKEFRSIGTRYLTRPL
3 AAV2 MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
4 AAV4 MTDGYLPDWLEDNLSEGVREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQQRLQGDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEQAGETAPGKKRPLIESPQQPDSSTGIGKKGKQPAKKKLVFEDETGAGDGPPEGSTSGAMSDDSEMRAAAGGAAVEGGQGADGVGNASGDWHCDSTWSEGHVTTTSTRTWVLPTYNNHLYKRLGESLQSNTYNGFSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGMRPKAMRVKIFNIQVKEVTTSNGETTVANNLTSTVQIFADSSYELPYVMDAGQEGSLPPFPNDVFMVPQYGYCGLVTGNTSQQQTDRNAFYCLEYFPSQMLRTGNNFEITYSFEKVPFHSMYAHSQSLDRLMNPLIDQYLWGLQSTTTGTTLNAGTATTNFTKLRPTNFSNFKKNWLPGPSIKQQGFSKTANQNYKIPATGSDSLIKYETHSTLDGRWSALTPGPPMATAGPADSKFSNSQLIFAGPKQNGNTATVPGTLIFTSEEELAATNATDTDMWGNLPGGDQSNSNLPTVDRLTALGAVPGMVWQNRDIYYQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLIGGFGLKHPPPQIFIKNTPVPANPATTFSSTPVNSFITQYSTGQVSVQIDWEIQKERSKRWNPEVQFTSNYGQQNSLLWAPDAAGKYTEPRAIGTRYLTHHL
5 AAV5 MSFVDHPPDWLEEVGEGLREFLGLEAGPPKPKPNQQHQDQARGLVLPGYNYLGPGNGLDRGEPVNRADEVAREHDISYNEQLEAGDNPYLKYNHADAEFQEKLADDTSFGGNLGKAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPTGKRIDDHFPKRKKARTEEDSKPSTSSDAEAGPSGSQQLQIPAQPASSLGADTMSAGGGGPLGDNNQGADGVGNASGDWHCDSTWMGDRVVTKSTRTWVLPSYNNHQYREIKSGSVDGSNANAYFGYSTPWGYFDFNRFHSHWSPRDWQRLINNYWGFRPRSLRVKIFNIQVKEVTVQDSTTTIANNLTSTVQVFTDDDYQLPYVVGNGTEGCLPAFPPQVFTLPQYGYATLNRDNTENPTERSSFFCLEYFPSKMLRTGNNFEFTYNFEEVPFHSSFAPSQNLFKLANPLVDQYLYRFVSTNNTGGVQFNKNLAGRYANTYKNWFPGPMGRTQGWNLGSGVNRASVSAFATTNRMELEGASYQVPPQPNGMTNNLQGSNTYALENTMIFNSQPANPGTTATYLEGNMLITSESETQPVNRVAYNVGGQMATNNQSSTTAPATGTYNLQEIVPGSVWMERDVYLQGPIWAKIPETGAHFHPSPAMGGFGLKHPPPMMLIKNTPVPGNITSFSDVPVSSFITQYSTGQVTVEMEWELKKENSKRWNPEIQYTNNYNDPQFVDFAPDSTGEYRTTRPIGTRYLTRPL
6 AAV6 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDKDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNLQSSSTDPATGDVHVMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL
7 AAV6.2 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDKDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNLQSSSTDPATGDVHVMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL
8 AAV7 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPAKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSSVGSGTVAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSETAGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLRFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTIQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQSVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYSFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLARTQSNPGGTAGNRELQFYQGGPSTMAEQAKNWLPGPCFRQQRVSKTLDQNNNSNFAWTGATKYHLNGRNSLVNPGVAMATHKDDEDRFFPSSGVLIFGKTGATNKTTLENVLMTNEEEIRPTNPVATEEYGIVSSNLQAANTAAQTQVVNNQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPEVFTPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNFEKQTGVDFAVDSQGVYSEPRPIGTRYLTRNL
9 AAV8 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGATNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLSFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFTYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTGGTANTQTLGFSQGGPNTMANQAKNWLPGPCYRQQRVSTTTGQNNNSNFAWTAGTKYHLNGRNSLANPGIAMATHKDDEERFFPSNGILIFGKQNAARDNADYSDVMLTSEEEIKTTNPVATEEYGIVADNLQQQNTAPQIGTVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQSKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTSVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
10 AAV9 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
11 AAVrh8 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGLGPNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNEGTKTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQALGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLVRTQTTGTGGTQTLAFSQAGPSSMANQARNWVPGPCYRQQRVSTTTNQNNNSNFAWTGAAKFKLNGRDSLMNPGVAMASHKDDDDRFFPSSGVLIFGKQGAGNDGVDYSQVLITDEEEIKATNPVATEEYGAVAINNQAANTQAQTGLVHNQGVIPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPLTFNQAKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
12 AAVrh10 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAGPSGLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYQFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFSQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTDGTYSEPRPIGTRYLTRNL
13 AAVanc80 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGSNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLNFKLFNIQVKEVTTNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTSGTAGNRTLQFSQAGPSSMANQAKNWLPGPCYRQQRVSKTTNQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMATHKDDEDKFFPMSGVLIFGKQGAGNSNVDLDNVMITNEEEIKTTNPVATEEYGTVATNLQSANTAPATGTVNSQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSTNVDFAVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
14 AAVanc110 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNEGTKTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTGTAGTQTLQFSQAGPSSMANQARNWVPGPCYRQQRVSTTTNQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLMNPGVAMASHKDDEDRFFPSSGVLIFGKQGAGNDNVDYSQVMITNEEEIKTTNPVATEEYGAVATNNQSANTQAQTGLVHNQGVLPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
173 LK03 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRPL
165 Bba.45 atggctgctgacggttatcttccagattggctcgaggacaacctctctgaaggcattcgcgagtggtgggcgctgaaacctggagccccacagcccaaggcaaatcgacaacatcaagacaacgctcggggtcttgtgcttccgggttacaaatacttgggacccggtaacggactcgacaagggagagccggtcaacgaggcagacgccgcggccctcgagcacgacaaggcctacgaccagcagctcaagtcgggagacaacccgtacctcaagtacaaccacgcggacgccgagttccagcagcgcttggcgaccgacacctcttttgggggcaacctcggcaaggcagtcttccaggccaaaaagaggattctcgagcctctgggtctggttgaagagggcgttaaaacggctcctggaaagaaacgcccattagaaaagactccaaatcggccgaccaacccggactctgggaaggccccggccaagaaaaagcaaaaagacggcgagacagccgactctgctagaagggcactcgactttgaagactctggagcaggagacggaccccctgagggatcatcttccggagaaatgtctcatgatgctgagatgcgtgcggcgccaggcggaaatgctgtcgaggcgggacaaggtgccgatggagtgggtaatgcctccggtgattggcattgcgattccacctggtcagagggccgagtcaccaccaccagcacccgaacctgggtcctgcccacctacaacaaccacctgtacctgcgaatcggaacaacggccaacagcaacacctacaatggattctccaccccctggggatactttgactttaaccgcttccactgccacttttccccacgcgactggcagcgactcatcaacaacaactggggactcaggccgaaatcgatgcgtgttaaaatcttcaacatccaggtcagggaggtcactacgtcaaacggcgagactacggtcgctaataaccttaccagcacggttcagatctttgcggattcaacgtatgaactcccatacgtgatggacgccggtcaggaggggagccttcctccgttccccaacgacgtgtttatggttccccaatacgggtactgcggagtcgtcactggagaaaaccagaaccaaacagacagaaatgccttttactgtctggagtactttccatcccaaatgctaagaactggcaacaactttgaaatcagttaccaatttgaaaaagttcctttccattcaatgtacgcgcacagccagagcctggacagaatgatgaatcctttgctggatcagtacctgtggcatctgcaatcgaccactaccggaaattcccttaatcaaggaacagctaccaccacgtacgggaaaattaccactggggactttgcctactacaggaaaaactggttacctggagcctgcattaaacaacaaaaattttcaaagaatgccagtcaaaactacaagattcccgccagcgggggagacgcccttttaaagtatgacacgcataccactttaaatgggcgatggagtaacatggctcctggtcctccaatggccaccgcaggtgccggggactcggattttagcaacagccagctgatctttgccggacccaatcagagcggtaacacgaccacgtcttcaaacaatttgttgtttacctcagaagaggagattgccacaacaaacccacgagacacggacatgtttggacagattgcagataataatcaaaatgccaccaccgcccctcacatcgctaacctggacgctatgggaattgttcccggaatggtctggcaaaacagagacatctactaccagggccctatttgggccaaggtccctcacacggacggacactttcacccttcgccgctgatgggaggatttggactgaaacacccgcctccgcagattttcatcaaaaacacccccgtacccgccaatcccaatactacctttagcgctgcaaggatcaattcttttttgacgcagtacagcaccggacaagtcgccgttcagatcgactgggaaattcagaaggagcactccaaacgctggaatcccgaagtccaatttacttcaaactacggcactcaaaattctatgctgtgggctcccgacaacgccggcaactaccacgaaccccgggctattgggtcccgtttcctcacccaccacttgtaa
166 Bba.46 atggctgctgacggttatcttccagattggctcgaggacaacctctctgaaggcattcgcgagtggtgggcgctgaaacctggagccccacagcccaaggcaaatcaacaacatcaagacaacgctcggggtcttgtgcttccgggttacaaatacttgggacccggtaacggactcgacaagggagagccggtcaacgaggcagacgccgcggccctcgagcacgacaaggcctacgaccagcagctcaagtcgggagacaacccgtacctcaagtacaaccacgcggacgccgagttccagcagcgcttggcgaccgacacctcttttgggggcaacctcggcaaggcagtcttccaggccaaaaagaggattctcgagcctctgggtctggttgaagagggcgttaaaacggctcctggaaagaaacgcccattagaaaagactccaaatcggccgaccaacccggactctgggaaggccccggccaagaaaaagcaaaaagacggcgagacagccgactctgctagaaggacactcgactttgaagactctggagcaggagacggaccccctgagggatcatcttccggagaaatgtctcatgacgctgagatgcgtgcggcgccaggcggaaatgctgtcgaggcgggacaaggtgccgatggagtgggtaatgcctccggtgattggcattgcgattccacctggtcagagggccgagtcaccaccaccagcacccgaacctgggtcctgcccacctacaacaaccacctgtacctgcgaatcggaacaacggccaacagcaacacctacaatggattctccaccccctggggatgctttgactttaaccgcttccactgccacttttccccacgcgactggcagcgactcatcaacaacaactggggactcaggccgaaatcgatgcgtgttaaaatcttcaacatccaggtcaaggaggtcactacgtcaaacggcgagactacggtcgctaataaccttaccagcacggttcagatctttgcggattcaacgtatgaactcccatacgtgatggacgccggtcaggaggggagccttcctccgttccccaacgacgtgtttatggttccccaatacgggtactgcggagtcgtcactggagaaaaccagaaccaaacagacagaaatgccttttactgtctggagtactttccatcccaaatgctaagaactggcaacaactttgaaatcagttaccaatttgaaaaagttcctttccattcaatgtacgcgcacagccagagcctggacagaatgatgaatcctttgctggatcagtacctgtggcatctgcaatcgaccactaccggaaattcccttaatcaaggagcagctaccaccacgtacgggaaaattaccactggggactttgcctactacaggaaaaactggttgcctggagcctgcattaaacaacaaaaattttcaaagaatgccagtcaaaactacaagatccccgccagcgggggagacgcccttttaaagtatgacacgcataccactttaaatgggcgatggagtaacatggctcctggtcctccaatggccaccgcaggtgccggggactcggattttagcaacagccagctgatctttgccggacccaatcagagcggtaacacgaccacgtcttcaaacaatttgttgtttacctcagaagaggagattgccacaacaaacccacgagacacggacatgtttggacagattgcagataataatcaaaatgccaccaccgcccctcacatcgctaacctggacgctatgggaattgttcccggaatggtctggcaaaacagagacatctactaccagggccctatttgggccaaggtccctcacacggacggacactttcacccttcgccgctgatgggaggatttggactgaaacacccgcctccgcagattttcatcaaaaacacccccgtacccgccaatcccaatactacctttagcgctgcaaggatcaattcttttttgacgcagtacagcaccggacaagtcgccgttcagatcgactgggaaattcagaaggagcactccaaacgctggaatcccgaagtccaatttacttcaaactacggcactcaaaattctatgctgtgggctcccgacaacgccggcaactaccacgaaccccgggctattgggtcccgtttcctcacccaccacttgtaa
167 Bba.47 atggctgctgacggttatcttccagattggctcgaggacaacctctctgaaggcattcgcgagtggtgggcgctgaaacctggagccccacagcccaaggcaaatcaacaacatcaagacaacgctcggggtcttgtgcttccgggttacaaatacttgggacccggtaacggactcgacaagggagagccggtcaacgaggcagacgccgcggccctcgagcacgacaaggcctacgaccagcagctcaagtcgggagacaacccgtacctcaagtacaaccacgcggacgccgagttccagcagcgcttggcgaccgacacctcttttgggggcaacctcggcaaggcagtcttccaggccaaaaagaggattctcgagcctctgggtctggttgaagagggcgttaaaacggctcctggaaagaaacgcccattagaaaagactccaaatcggccgaccaacccggactctgggaaggccccggccaagaaaaagcaaaaagacggcgagacagccgactctgctagaaggacactcgactttgaagactctggagcaggagacggacctcctgagggatcatcttccggagaaatgtctcatgatgctgagatgcgtgcggcgccaggcggaaatgctgtcgaggcgggacaaggtgccgatggagtgggtaatgcctccggtgattggcattgcgattccacctggtcagagggccgagtcaccaccaccagcacccgaacctgggtcctgcccacctacaacaaccacctgtacctgcgaatcggaacaacggccaacagcaacacctacaatggattctccaccccctggggatactttgactttaaccgcttccactgccacttttccccacgcgactggcagcgactcatcaacaacaactggggactcaggccgaaatcgatgcgtgttaaaatcttcaacatccaggtcaaggaggtcactacgtcaaacggcgagactacggtcgctaataaccttaccagcacggttcagatctttgcggattcaacgtatgaactcccatacgtgatggacgccggtcaggaggggagccttcctccgttccccaacgacgtgtttatggttccccaatacgggtactgcggagtcgtcactggagaaaaccagaaccaaacagacagaaatgccttttactgtctggagtactttccatcccaaatgctaagaactggcaacaactttgaaatcagttaccaatttgaaaaagttcctttccattcaatgtacgcgcacagccagagcctggacagaatgatgaatcctttgctggatcagtacctgtggcatctgcaatcgaccactaccggaaattcccttaatcaaggaacagctaccaccacgtacgggaaaattaccactggggactttgcctactacaggaaaaactggttgcctggagcctgcattaaacaacaaaaattttcaaagaatgccagtcaaaactacaagattcccgccagcgggggagacgcccttttaaagtatgacacgcataccactttaaatgggcgatggagtaacatggctcctggtcctccaatggccaccgcaggtgccggggactcggattttagcaacagccagctgatctttgccggacccaatcagagcggtaacacgaccacgtcttcaaacaatttgttgtttacctcagaagaggagattgccacaacaaacccacgagacacggacatgtttgggcagattgcagataataatcaaaatgccaccaccgcccctcacatcgctaacctggacgctatgggaattgttcccggaatggtctggcaaaacagagacatctactaccagggccctatttgggccaaggtccctcacacggacggacactttcacccttcgccgctgatgggaggatttggactgaaacacccgcctccgcagattttcatcaaaaacacccccgtacccgccaatcccaatactacctttagcgctgcaaggatcaattcttttttgacgcagtacagcaccggacaagtcgccgttcagatcgactgggaaattcagaaggagcactccaaacgctggaatcccgaagtccaatttacttcaaactacggcactcaaaattctatgctgtgggctcccgacaacgccggcaactaccacgaaccccgggctattgggtcccgtttcctcacccaccacttgtaa
168 Bba.48 atggctgctgacggttatcttccagattggctcgaggacaacctctctgaaggcattcgcgagtggtgggcgctgaaacctggagccccacagcccaaggcaaatcaacaacatcaagacaacgctcggggtcttgtgcttccgggttacaaatacttgggacccggtaacggactcgacaagggagagccggtcaacgaggcagacgccgcggccctcgagcacgacaaggcctacgaccagcagctcaagtcgggagacaacccgtacctcaagtacaaccacgcggacgccgagtttcaggagcgtcttcaagaagatacgtcttttgggggcaacctcgggcgagcagtcttccaggccaaaaagaggattctcgagcctctgggtctggttgaagagggcgttaaaacggctcctggaaagaaacgcccattagaaaagactccaaatcggccgaccaacccggactctgggaaggccccggccaagaaaaagcaaaaagacggcgagacagccgactctgctagaaggacactcgactttgaagactctggagcaggagacggaccccctgagggatcatcttccggagaaatgtctcatgatgctgagatgcgtgcggcgccaggcggaaatgctgtcgaggcgggacaaggtgccgatggagtgggtaatgcctccggtgattggcattgcgattccacctggtcagagggccgagtcaccaccaccagcacccgaacctgggtcctgcccacctacaacaaccacctgtacctgcgaatcggaacaacggccaacagcaacacctacaatggattctccaccccctggggatactttgactttaaccgcttccactgccgcttttccccgcgcgactggcagcgactcatcaacaacaactggggactcaggccgaaatcgatgcgtgttaaaatcttcaacatccaggtcaaggaggtcactacgtcaaacggcgagactacggtcgctaataaccttaccagcacggttcagatctttgcggattcaacgtatgaactcccatacgtgatggacgccggtcaggaggggagccttcctccgttccccaacgacgtgtttatggttccccaatacgggtactgcggagtcgtcactggagaaaaccagaaccaaacagacagaaatgccttttactgtctggagtactttccatcccaaatgctaagaactggcaacaactttgaaatcagttaccaatttgaaaaagttcctttccattcaatgtacgcgcacagccagagcctggacagaatgatgaatcctttgctggatcagtacctgtggcatctgcaatcgaccactaccggaaattcccttaatcaaggaacagctatcaccacgtacgggaaaattaccactggggactttgcctactacaggaaaaactggttgcctggagcctgcattaaacaacaaaaattttcaaagaatgccagtcaaaactacaagattcccgccagcgggggagacgcccttttaaagtatgacacgcataccactttaaatgggcgatggagtaacatggctcctggtcctccaatggccaccgcaggtgccggggactcggattttagcaacagccagctgatctttgccggacccaatcagagcggtaacacgaccacgtcttcaaacaatttgttgtttacctcagaagaggagattgccacaacaaacccacgagacacggacatgtttggacagattgcagataataatcaaaatgccgccaccgcccctcacatcgctaacctggacgctatgggaattgttcccggaatggtctggcaaaacagagacatctactaccagggccctatttgggccaaggtccctcacacggacggacactttcacccttcgccgctgatgggaggatttggactgaaacacccgcctccgcagattttcatcaaaaacacccccgtacccgccaatcccaatactacctttagcgctgcaaggatcaattcttttttgacgcagtacagcaccggacaagtcgccgttcagatcgactgggaaattcagaaggagcactccaaacgctggaatcccgaagtccaatttacttcaaactacggcactcaaaattctatgctgtgggctcccgacaacgccggcaactaccacgaaccccgggctattgggtcccgtttcctcacccaccacttgtaa
169 Bba.49 atggctgctgacggttatcttccagattggctcgaggacaacctctctgaaggcattcgcgagtggtgggcgctgaaacctggagccccacagcccaaggcaaatcaacaacatcaagacaacgctcggggtcttgtgcttccgggttacaaatacttgggacccggtaacggactcgacaagggagagccggtcaacgaggcagacgccgcggccctcgagcacgacaaggcctacgaccagcagctcaagtcgggagacaacccgtacctcaagtacaaccacgcggacgccgagtttcaggagcgtcttcaagaagatacgtcttttgggggcaacctcgggcgagcagtcttccaggccaaaaagaggattctcgagcctctgggtctggttgaagagggcgttaaaacggctcctggaaagaaacgcccattagaaaagactccaaatcggccgaccaacccggactctgggaaggccccggccaagaaaaagcaaaaagacggcgagacagccgactctgctagaaggacactcgactttgaagactctggagcaggagacggaccccctgagggatcatcttccggagaaatgtctcatgatgctgagatgcgtgcggcgccaggcggaaatgctgtcgaggcgggacaaggtgccgatggagtgggtaatgcctccggtgattggcattgcgattccacctggtcagagggccgagtcaccaccaccagcacccgaacctgggtcctgcccacctacaacaaccacctgtacctgcgaatcggaacaacggccaacagcaacacctacaatggattctccaccccctggggatactttgactttaaccgcttccactgccacttttccccacgcgactggcagcgactcatcaacaacaactggggactcaggccgaaatcgatgcgtgttaaaatcttcaacatccaggtcaaggaggtcactacgtcaaacggcgagactacggtcgctaataaccttaccagcacggttcagatctttgcggattcaacgtatgaactcccatacgtgatggacgccggtcaggaggggagccttcctccgttccccaacgacgtgtttatggttccccaatacgggtactgcggagtcgtcactggagaaaaccagaaccaaacagacagaaatgccttttactgtctggagtactttccatcccaaatgctaagaactggcaacaactttgaaatcagttaccaatttgaaaaagttcctttccattcaatgtacgcgcacagccagagcctggacagaatgatgaatcctttgctggatcagtacctgtggcatctgcaatcgaccactaccggaaattcccttaatcaaggaacagctatcaccacgtacgggaaaattaccactggggactttgcctactacaggaaaaactggttgcctggagccggcattaaacaacaaaaattttcaaagaatgccagtcaaaactacaagattcccgccagcgggggagacgcccttttaaagtatgacacgcataccactttaaatgggcgatggagtaacatggctcctggtcctccaatggccaccgcaggtgccggggactcggattttagcaacagccagctgatctttgccggacccaatcagagcggtaacacgaccacgtcttcaaacaatttgttgtttacctcagaagaggagattgccacaacaaacccacgagacacggacatgtttggacagattgcagataataatcaaaatgccaccaccgcccctcacatcgctaacctggacgctatgggaattgttcccggaatggtctggcaaaacagagacatctactaccagggccctatttgggccaaggtccctcacacggacggacactttcacccttcgccgctgatgggaggatttggactgaaacacccgcctccgcagattttcatcaaaaacacccccgtacccgccaatcccaatactacctttagcgctgcaaggatcaattcttttttgacgcagtacagcaccggacaagtcgccgttcagatcgactgggaaattcagaaggagcactccaaacgctggaatcccgaagtccaatttacttcaaactacggcactcaaaattctatgctgtgggctcccgacaacgccggcaactaccacgaaccccgggctattgggtcccgtttcctcacccaccacttgtaa
170 Bba.50 atggctgctgacggttatcttccagattggctcgaggacaacctctctgaaagcattcgcgagtggtgggcgctgaaacctggagccccacggcccaaggcaaatcaacaacatcaagacgacgctcggggtcttgtgcttccgggttacaaatacttgggacccggtaacggactcgacaagggagagccggtcaacgaggcagacgccgcggccctcgagcacgacaaggcctacgaccagcagctcaagtcgggagacaacccgtacctcaagtacaaccacgcggacgccgagttccagcagcgcttggcgaccgacacctcttttgggggcaacctcggcaaggcagtcttccaggccaaaaagaggattctcgagcctctgggtctggttgaagagggcgttaaaacggctcctggaaggaaacgcccattagaaaagactccaaatcggccgaccaacccggactctgggaaggccccggccaagaaaaagcaaaaagacggcgagacagccgactctgctagaaggacactcgactttgaagactctggagcaggagacggaccccctgagggatcatcttccggagaaatgtctcatgatgctgagatgcgtgcggcgccaggcggaaatgctgtcgaggcgggacaaggtgccgatggagtgggtaatgcctccggtgattggcattgcgattccacctggtcagagggccgagtcaccaccaccagcacccgaacctgggtcctgcccacctacaacaaccacctgtacctgcgaatcggaacaacggccaacagcaacacctacaatggattctccaccccctggggatactttgactttaaccgcttccactgccacttttccccacgcgactggcagcgactcatcaacaacaactggggactcaggccgaaatcgatgcgtgttaaaatcttcaacatccaggtcaaggaggtcactacgtcaaacggcgagactacggtcgctaataaccttaccagcacggttcagatctttgcggattcaacgtatgaactcccatacgtgatggacgccggtcaggaggggagccttcctccgttccccaacgacgtgtttatggttccccaatacgggtactgcggagtcgtcactggagaaaaccagaaccaaacagacagaaatgccttttactgtctggagtactttccatcccaaatgctaagaactggcaacaactttgaaatcagttaccaatttgaaaaagttcctctccattcaatgtacgcgcacagccagagcctggacagaatgatgaatcctttgctggatcagtacctgtggcatctgcaatcgaccactaccggaaattcccttaatcaaggaacagctaccaccacgtacgggaaaattaccactggggactttgcctactacaggaaaaactggttgcctggagcctgcattaaacaacaaaaattttcaaagaatgccagtcaaaactacaagattcccgccagcggggaagacgcccttttaaagtatgacacgcataccactttaaatgggcgatggagtaacatggctcctggtcctccaatggccaccgcaggtgccggggactcggattttagcaacagccagctgatctttgccggacccaatcagagcggtaacacgaccacgtcttcaaacaatttgttgtttacctcagaagaggagattgccacaacaaacccacgagacacggacatgtttggacagattgcagataataatcaaaatgccaccaccgcccctcacatcgctaacctggacgctatgggaattgttcccggaatggtctggcaaaacagagacatctactaccagggccctatctgggccaaggtccctcacacggacggacactttcacccttcgccgctgatgggaggatttggactgaaacacccgcctccgcagattttcatcaaaaacacccccgtacccgccaatcccaatactacctttagcgctgcaaggatcaattcttttttgacgcagtacagcaccggacaagtcgccgttcagatcgactgggaaattcagaaggagcactccaaacgctggaatcccgaagtccaatttacttcaaactacggcactcaaaattctatgctgtgggctcccgacaacgccggcaactaccacgaaccccgggctattgggtcccgtttcctcacccaccacttgtaa
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表 7
嵌合AAV 衣殼蛋白
SEQ ID NO. 序列
90 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAGPSGLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYQFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFSQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTDGTYSEPRPIGTRYLTRNL
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92 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDSPDSTSGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDAESVPDPQPIGEPPAAPSGLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGNRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSSSSGATNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLRFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQSVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYEFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPETFTPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYDKQTGVDFAVDTQGVYSEPRPIGTRYLTRNL
93 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDSPDSTSGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDAESVPDPQPIGEPPAAPSGLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGNRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLRFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYEFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLARTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQSKNWLPGPCFRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGATKYHLNGRNSLTNPGVPMASHKEGEDRFFPLSGSLVFGKQGTGRDNVDADKVLMTDEEEIKATNPVATEEYGVVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPETFTPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
94 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPAKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSSVGSGTVAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLRFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTIQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYSFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLARTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQAKNWLPGPCFRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGATKYHLNGRNSLVNPGVAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKLMTNEEEIRPTNPVATEEYGIVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPEVFTPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNFYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
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96 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQPKNWLPGPCYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKEGEDRFFPLSGSMIFGKQGTGRDNVDADKVMITDEEEIKATNPVATERFGTVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGLYTEPRPIGTRYLTRPL
97 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL
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99 MSFFDWLGKQYAQGAAEFWDLKSGPPAPKKARKDGSAGFNFPGHKYLGPGNSLDRGDPVDADDAAAQKHDQSYQEQLEAGDNPYLKYNHADREFQEALKDDTSFEGNLARGLFEAKKLVAEPLGLVEPELAPPSGRKRPVQSSQESGYSSSQDKRPNLDVDEEDREFAAAAAETETGSAPPTGNLGPGTMAGGGSAPIDDGSYGADGVGNASGDWHCDSTWLDNCVITRTTRTWNLPTYNNHIYKRLSSQSGASNDNHSYFGFSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGLRPKSLRFKIFNIQVKEVTQNDGTTTISNNLTSTVQVFADTEYQLPYVIGSAHEGCLPPFPADVFMLPQYGYCTLNNGSQPTPRSAFYCLEYFPSKMLRTGNSFEFTYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVFPGSVWQDRDIYLQGQIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKNPPPQILIKNTPVPADPPTEFNANKISSFITQYSTGQVTVEMEWELQKETSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVHFAPDDVGNYKEFRSIGTRYLTRPL
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預期熟習此項技術者想到上文說明性實例中所闡述之本發明中的大量修改及變化。因此，僅在隨附申請專利範圍中呈現之此類限制應列入本發明中。
圖1.活體外轉導抑制。此圖式展示人類個體中對不同AAV衣殼的平均預先存在之免疫力，如藉由人類靜脈內免疫球蛋白(IVIG)中之中和抗體含量所量測。人類IVIG含有來自5000名個體之混合IgG。
圖2.活體外轉導抑制。此圖式展示與人類中之新穎分離Bba.33衣殼相比，對AAV2、AAV5及AAV8衣殼的平均預先存在之免疫力，如藉由人類IVIG中之中和抗體含量所量測。
圖3展示與人類中AAV5、AAV8及AAV9預先存在之免疫力相比，對AAV12樣衣殼的平均預先存在之免疫力，如藉由人類IVIG中之中和抗體含量所量測。
圖4.此熱圖說明50名正常人類供體中對不同衣殼的預先存在之免疫力水準，如藉由活體外中和效價所量測。
圖5展示非人類靈長類動物(NHP)對不同AAV衣殼之預先存在之中和抗體效價之水準。對於各動物，條形圖之次序自左至右為Bba.41、AAV2、AAV8、Anc110_9Vr、AAV9、AAV12及AAV5。
圖6表示在AAV5載體投與前/後，非人類靈長類動物(NHP)中針對Bba.49之中和抗體的含量。在AAV5投藥前2週(-2)、AAV5投藥後2週及AAV5投藥後7週量測的Bba.49中和效價。
圖7展示在投與AAV5載體前/後，在AAV5投藥前2週(-2)、AAV5投藥後2週及AAV5投藥後7週量測的NHP中針對AAV5之中和抗體的含量。
圖8.用於研究選擇之NHP之預先存在的NAb效價篩選；使用NAb中和分析之NC50效價。此圖式展示NHP中針對AAV9、RN35及Bba.41 AAV載體之預先存在之中和抗體的含量。圖9說明投予AAV9、RN35及Bba.41之NHP中針對Bba.41之交叉反應中和抗體的含量。自圖8及隨附實例描述中概述之研究中選擇動物用於此研究中。特定言之，向動物1504447、1504165及1410437投予Bba.49；向動物1505673、1412911及1405945投予Rn35且向動物1410197、1502593及1410649投予AAV9。
圖10展示投予AAV9、RN35及Bba.41之NHP中針對AAV9之交叉反應中和抗體的含量。自圖8及隨附實例描述中概述之研究中選擇動物用於此研究中。特定言之，向動物1504447、1504165及1410437投予Bba.49；向動物1505673、1412911及1405945投予Rn35且向動物1410197、1502593及1410649投予AAV9。
圖11說明在投予後大約1.5至2.5年，用AAV5-FVIII治療之患者血清中針Bba.49載體之中和效價。
圖12A至E分別說明在AAV投予前，在投予後8週及大約1.5至2.5年，用6e13 vg/kg AAV5-FVIII治療之患者血清中針對AAV5、AAV2、AAV6、AAV8及AAVrh10之中和效價。
圖13A至E分別說明在AAV投予前，在投予後8週及大約1.5至2.5年，用4e13 vg/kg AAV5-FVIII治療之患者血清中針對AAV5、AAV2、AAV6、AAV8及AAVrh10之中和效價。
圖14說明AAV載體與不同病毒分枝系之間的系統發生學差異。使用來自MUSCLE之VP3序列之MSA輸入用PhyML產生AAV系統發生學樹。
圖15A展示在投與AAV5-LUC後四週，最初用AAV5-bCG4，接著用Bba.47--bCG或Bba.49-bCG投予之小鼠中之bCG轉基因表現量。圖15B展示在投與AAV9-LUC後四週，投予AAV9-bCG或Bba.41-bCG 4之小鼠中之bCG轉基因表現量。
圖16展示VP1 AAV衣殼之不同菌株之間的AAV衣殼同源性。
圖17展示VP3 AAV衣殼之不同菌株之間的AAV衣殼同源性。
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Claims (32)

  1. 一種用多次劑量之重組腺相關病毒(rAAV)載體治療個體之方法，該方法包含： 向個體投與第一rAAV載體，其包含包括治療性分子之轉基因及第一衣殼，及 向個體投與第二rAAV載體，其包含包括治療性分子之轉基因及第二衣殼， 其中該第二rAAV載體中之該轉基因包含與該第一rAAV載體中之該轉基因相同的治療性分子或不同的治療性分子。
  2. 一種用多次劑量之重組腺相關病毒(rAAV)載體治療有需要之個體的疾病或病症之方法，該方法包含： 向個體投與第一rAAV載體，其包含包括適用於治療該疾病或病症之治療性分子之轉基因及第一衣殼，及 向個體投與第二rAAV載體，其包含包括適用於治療該疾病或病症之治療性分子之轉基因及第二衣殼， 其中該第二rAAV載體中之該轉基因包含適用於治療該疾病或病症的與該第一rAAV載體中之該轉基因相同的治療性分子或不同的治療性分子。
  3. 如請求項1至2中任一項之方法，其中該第一及第二衣殼在系統發生學上為相異的。
  4. 如請求項3之方法，其中該系統發生學差異係基於序列同源性之臨限值水準。
  5. 如請求項3或4之方法，其中該第一及第二衣殼具有小於或等於約90%之胺基酸序列同源性。
  6. 如請求項3至5中任一項之方法，其中該第一及第二衣殼在VP1衣殼蛋白中具有小於或等於約85%同源性及/或在VP3衣殼蛋白中具有小於或等於約85%同源性。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該第一衣殼及/或第二衣殼在該個體中展現較低的預先存在之免疫力。
  8. 如前述請求項中任一項之方法，其中該個體為人類。
  9. 如前述請求項中任一項之方法，其中該個體為人類且對該第一及/或第二AAV載體為免疫學上未處理的。
  10. 如請求項9之方法，其中該個體在血清中具有小於1:2、1:5、1:10、1:20、1:50、1:100、1:200或1:300、1:500、1:1000的中和抗體比該第一或第二AAV載體。
  11. 如請求項10之方法，其中在中和抗體分析中量測該中和抗體含量。
  12. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該第一衣殼係選自由以下組成之群：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV3b、LK03、rh74.j、rh10、牛類、AAVGoat、Bba.41、Bba.47、Bba.49、Bba.33、Bba.45、Bba.46、Bba.50、Bba.51、RN35、Anc110_9VR、AAV_go.1、表4中所列之AAV、表5中所列之AAV及/或其變體。
  13. 如請求項1至12中任一項之方法，其中該第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV1、AAV2、AAV4、AAV3、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV3b、LK03、rh74.j、rh10、牛類、AAVGoat、Bba.41、Bba.47、Bba.49、Bba.33、Bba.45、Bba.46、Bba.50、Bba.51、RN35、Anc110_9VR、AAV_go.1、表4中所列之AAV、表5中所列之AAV及/或其變體。
  14. 如請求項1至13中任一項之方法，其中該第一或第二衣殼具有與SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者至少95%一致的胺基酸序列。
  15. 如請求項1至14中任一項之方法，其中該第一衣殼及/或第二衣殼為經工程改造之衣殼或嵌合衣殼。
  16. 如請求項1至15中任一項之方法，其中該第一或第二衣殼包含嵌合衣殼蛋白，其具有包含可變區I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII及IX之受體骨架AAV衣殼的VP1胺基酸序列，除了其中可變區I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII或IX中之一或多者經來自一或多個供體AAV衣殼之對應可變區置換。
  17. 如請求項16之方法，其中來自該受體AAV衣殼之一或多個可變區經來自該供體AAV衣殼之對應可變區置換。
  18. 如請求項16或17之方法，其中該受體AAV衣殼序列為SEQ ID NO:1-89或158-164中之任一者且該供體AAV衣殼序列係選自由SEQ ID NO:1-89或158-164組成的序列之群，且該受體AAV衣殼序列及該供體AAV衣殼序列係不同的。
  19. 如請求項15至18中任一項之方法，其中該嵌合衣殼蛋白包含SEQ ID NO:90-157中之任一者的胺基酸序列。
  20. 如請求項1至19中任一項之方法，其中該第一或第二衣殼包含與以下至少95%一致之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO: 15-89或158-164中之任一者的VP3區。
  21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該第一或第二衣殼蛋白包含以下之胺基酸序列：(i) SEQ ID NO:15-89中之任一者，(ii) SEQ ID NO:15-89中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:15-89中之任一者的VP3區。
  22. 如請求項1至21中任一項之方法，其中該載體包含編碼具有與以下至少95%一致之胺基酸序列之腺相關病毒(AAV)衣殼蛋白的核酸序列：(i) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者，(ii) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者的VP2區或(iii) SEQ ID NO:15-89或158-164中之任一者的VP3區。
  23. 如請求項22之方法，其中該核酸序列可操作地連接於控制該衣殼蛋白在宿主細胞中之表現的異源調節元件。
  24. 如請求項23之方法，其中該宿主細胞為肝臟細胞或肌肉細胞。
  25. 如請求項1至24中任一項之方法，其中該第一衣殼係選自由以下組成之群：AAV5、Bba.49、Bb47及牛類且該第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV5、Bba.49、Bb47及牛類。
  26. 如請求項1至24中任一項之方法，其中該第一衣殼係選自由以下組成之群：LK03、AAV5、Bba.49及牛類，且該第二衣殼係選自由以下組成之群：LK03、AAV5、Bba.49及牛類。
  27. 如請求項1至24中任一項之方法，其中該第一衣殼係選自由以下組成之群：rh10、AAV5、Bba.49及牛類，且該第二衣殼係選自由以下組成之群：rh10、AAV5、Bba.49及牛類。
  28. 如請求項1至24中任一項之方法，其中該第一衣殼係選自由以下組成之群：AAV8、AAV5、Bba.49及牛類，且該第二衣殼係選自由以下組成之群：AAV8、AAV5、Bba.49及牛類。
  29. 如請求項1至28中任一項之方法，其中該第一衣殼或第二衣殼係選自由AAV9及Bba.41組成之群。
  30. 如前述請求項中任一項之方法，其中該個體中由該轉基因表現之該異源蛋白質維持在治療有效量。
  31. 如請求項30之方法，其中該異源蛋白質係選自由以下組成之群：因子VIII、因子IX、ATP7B蛋白、C1酯酶抑制劑(C1-INH)、α1抗胰蛋白酶及半乳糖-1-磷酸尿苷醯轉移酶(GALT)、肌縮蛋白、迷你肌縮蛋白、微小肌縮蛋白、苯丙胺酸羥化酶(PAH)、α-半乳糖苷酶A及葡糖腦苷脂酶。
  32. 如請求項31之方法，其中該異源蛋白質之表現足以治療選自由以下組成之群的病症或疾病：A型血友病、B型血友病、威爾森氏病(Wilson's disease)、遺傳性血管水腫(HAE)、α1抗胰蛋白酶缺乏症、半乳糖血症、杜興氏肌肉萎縮症(Duchenne's Muscular Dystrophy)或其他肌肉萎縮症、苯酮尿症(PKU)、法布立病(Fabry Disease)及高歇氏病(Gaucher Disease)。
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6994018B2 (ja) 2016-07-26 2022-01-14 バイオマリン ファーマシューティカル インコーポレイテッド 新規アデノ随伴ウイルスキャプシドタンパク質
SG11202010830WA (en) 2018-05-09 2020-11-27 Biomarin Pharm Inc Methods of treating phenylketonuria
TW202005978A (zh) 2018-05-14 2020-02-01 美商拜奧馬林製藥公司 新穎肝靶向腺相關病毒載體
AU2021372262A1 (en) 2020-11-02 2023-06-01 Biomarin Pharmaceutical Inc. Process for enriching adeno-associated virus
WO2023034994A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Biomarin Pharmaceutical Inc. Aav capsid compositions and methods for delivery
WO2023034990A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Biomarin Pharmaceutical Inc. Aav capsid compositions and methods for delivery
WO2023034980A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Bomarin Pharmaceutical Inc. Aav capsid compositions and methods for delivery
WO2023034997A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Biomarin Pharmaceutical Inc. Aav capsid compositions and methods for delivery
WO2023034996A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Biomarin Pharmaceutical Inc. Aav capsid compositions and methods for delivery
WO2023034989A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Biomarin Pharmaceutical Inc. Aav capsid compositions and methods for delivery
WO2024064863A2 (en) 2022-09-22 2024-03-28 Biomarin Pharmaceutical Inc. Treatment of arrhythmogenic cardiomyopathy with aav gene therapy vectors
WO2024064856A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 Biomarin Pharmaceutical Inc. Treatment of cardiomyopathy with aav gene therapy vectors

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0127839B1 (en) 1983-05-27 1992-07-15 THE TEXAS A&M UNIVERSITY SYSTEM Method for producing a recombinant baculovirus expression vector
US4745051A (en) 1983-05-27 1988-05-17 The Texas A&M University System Method for producing a recombinant baculovirus expression vector
ZA848495B (en) 1984-01-31 1985-09-25 Idaho Res Found Production of polypeptides in insect cells
US6204059B1 (en) 1994-06-30 2001-03-20 University Of Pittsburgh AAV capsid vehicles for molecular transfer
WO1998010088A1 (en) 1996-09-06 1998-03-12 Trustees Of The University Of Pennsylvania An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase
JP4060531B2 (ja) * 1998-05-28 2008-03-12 アメリカ合衆国 Ａａｖ５ベクターおよびその使用
US6221349B1 (en) * 1998-10-20 2001-04-24 Avigen, Inc. Adeno-associated vectors for expression of factor VIII by target cells
US7056502B2 (en) 2000-04-28 2006-06-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Recombinant aav vectors with AAV5 capsids and AAV5 vectors pseudotyped in heterologous capsids
US6723551B2 (en) 2001-11-09 2004-04-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Production of adeno-associated virus in insect cells
AU2003212708A1 (en) 2002-03-05 2003-09-16 Stichting Voor De Technische Wetenschappen Baculovirus expression system
ES2648241T3 (es) 2003-09-30 2017-12-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Clados de virus adenoasociados (AAV), secuencias, vectores que contienen el mismo, y usos de los mismos
WO2006073496A2 (en) * 2004-07-30 2006-07-13 Targeted Genetics Corporation Recombinant aav based vaccine methods
CA2591544A1 (en) * 2004-12-15 2006-06-22 The University Of North Carolina At Chapel Hill Chimeric vectors
WO2007120542A2 (en) * 2006-03-30 2007-10-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Aav capsid library and aav capsid proteins
US7943379B2 (en) 2008-04-30 2011-05-17 Nationwide Children's Hospital, Inc. Production of rAAV in vero cells using particular adenovirus helpers
SG11201808812RA (en) * 2016-04-15 2018-11-29 Univ Pennsylvania Novel aav8 mutant capsids and compositions containing same
JP6994018B2 (ja) 2016-07-26 2022-01-14 バイオマリン ファーマシューティカル インコーポレイテッド 新規アデノ随伴ウイルスキャプシドタンパク質
US20210228738A1 (en) * 2017-07-17 2021-07-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Compositions and methods for increasing or enhancing transduction of gene therapy vectors and for removing or reducing immunoglobulins
TW202005978A (zh) 2018-05-14 2020-02-01 美商拜奧馬林製藥公司 新穎肝靶向腺相關病毒載體

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