TW202045168A - 用於治療溶體儲積症相關的症狀和病症之方法（二） - Google Patents

Abstract

本揭示文係關於使用式(I)之

啶(quinuclidine)化合物，視需要與酵素替代治療組合，供治療或防止與溶體儲積症相關的特定症狀和病症之方法。此係包括具有例如高雪氏症(Gaucher disease)或尼曼匹克症C型(Niemann-Pick disease,type C)病患中之核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺，以及認知缺陷或步態障礙。亦揭示用於該等方法之包括

Description

用於治療溶體儲積症相關的症狀和病症之方法(二) 相關申請案之交互參照

本申請案為一國際申請案，其係聲請2019年2月4日申請之案號62/800,996號，2019年3月22日申請之案號62/851,433，2019年8月30日申請之案號62/894,167，2019年11月19日申請之案號62/937,618，2020年1月17日申請之案號62/962,647的美國臨時申請案之優先權和利益，其各自的內容係以全文引用的方式併入本文中。

本揭示文係關於使用式(I)之

啶(quinuclidine)化合物，視需要與酵素替代治療組合，供治療或防止與溶體儲積症相關的特定症狀和病症之方法。此係包括具有例如高雪氏症(Gaucher disease)或尼曼匹克症C型(Niemann-Pick disease,type C)病患中之核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺，以及認知缺陷或步態障礙。

溶體儲積症

溶體儲積症(LSD)為一群約50種罕見遺傳代謝疾病，是由於溶體功能的缺陷所造成。一般而言，患有ISD的病患因負責代謝基質的酵素缺乏或缺陷，或由於供適當酵素運作所需的酵素活化因子缺乏，而在溶體中累積有害 量的物質(亦即物質儲積)。大多數的LSD係由於單一酵素缺陷或缺乏所造成，通常為涉及脂質或醣蛋白代謝的酵素。一些較常見的LSD包括高雪氏症(Gaucher disease)、法布瑞氏症(Fabry disease)和尼曼匹克症(C型)(Niemann-Pick disease,type C)。高雪氏症、法布瑞氏症和尼曼匹克症為鞘髓磷脂儲積症之實例。這些疾病各自係與一群直接或間接由潛在的遺傳缺陷所造成之症狀有關。因此，能否有效地以不同治療方法來治療與這些有關的症狀或病症，常常難以預測。常見的跨越數種LSD之症狀包括瞬眼移動(saccadic eye movement)、認知功能不全和步態障礙，例如共濟失調(ataxia)之改變。這些症狀在高雪氏症(第3型)和尼曼匹克症(C型)中特別常見。

LSD之瞬眼移動缺陷

有數種眼睛移動的功能類別存在，包括眼瞬動(saccades)、平滑追視(smooth pursuit)、視動眼震(optokinetic nystagmus)(OKN)、前庭反射(vestibular reflexes)和輻奏運動(vergence)，各自係由不同的皮質、腦幹和小腦核上網路所控制。腦幹核上跳視中心失能，造成核上凝視麻痺，亦稱為眼瞬動凝視麻痺。「核上」係指在腦幹之中腦(動眼神經、滑車神經)或腦幹之橋腦中(外旋神經)相關腦神經核上方的缺陷位置。動眼神經、滑車神經和外旋神經為僅有的控制眼睛移動之小肌肉的腦神經，且神經本身的病灶並不會造成共軛凝視麻痺。

眼瞬動為二眼以相同的方向在二或多個固定相位之間快速、同時移動。眼瞬動與平滑追視移動相反，在平滑追視中眼睛係在無跳躍下平滑移動眼睛，通常係在視野內追蹤目標時。眼瞬動係用作為視覺固定、快速眼睛移動和快相的視動眼震之機制。眼瞬動係由額葉皮質的額葉眼動區區域以皮質控制，或由上丘(中腦的區域)以皮質下控制。眼瞬動在閱讀期間和在掃描緊鄰的週遭環境時特別重要。因為視網膜的高解析區域，中央窩(fovea)非常小(大約視野的1-2度)，瞬眼移動在解析視野內小的目標上為至關重要。熟練的讀者在閱讀期間以 平均每250毫秒移動其眼睛，且在每次眼瞬動期間，持續20-40毫秒，凝視目標平均橫移7-9個字(範圍1-20個字)。

在人類中一個眼瞬動期間眼睛的高峰角轉速可達到至高每秒900度。回應一意外刺激的眼瞬動一般僅花費大約200毫秒啟動，並依照振幅持續約20毫秒至200毫秒。眼瞬動的振幅為眼睛在眼睛移動期間游移的角距。頭部固定的眼瞬動可具有至高90度的振幅，但在大多數的情況下，任何大於20度的凝視移位係伴隨頭部移動。在這些凝視眼瞬動期間，眼睛首先經歷眼瞬動用以將凝視轉移到目標，且當眼睛保持聚焦在目標的同時，頭部較緩慢跟隨。後者係稱為前庭眼反射(VOR)，且其係運作用以與頭部移動相反的方向緩慢轉動眼睛，以便於保持視網膜中的視覺焦點。因為頭部幾乎總是動作輕微，所以幾乎在所有的環境下VOR必須穩定視線，尤其是在閱讀期間。

眼瞬動凝視麻痺可能係因水平、垂直或二者的眼瞬動變慢所致，且可能有或無範圍限制。水平或垂直眼瞬動麻痺存在與否在病理上係依照所涉及的確切腦部區域而定。

高雪氏症(GD)為一種罕見、體染色體隱性的溶體儲積症。GD病患係在編碼葡萄糖神經醯胺酶(GC)，亦稱為的β-葡萄糖腦苷脂酶的GBA1基因上具有一突變。此酵素係負責將醣神經鞘脂質(glycosphingolipid)分解成其組份，例如將葡萄糖神經醯胺(GLC；亦稱為葡萄糖腦苷脂)分解成葡萄糖和神經醯胺。單核細胞和巨噬細胞具有特別高含量之含有GLC的溶體，且在GD病患中這些細胞增大及堆積有毒濃度的GLC。這些所謂的「高雪氏細胞」堆積在數種器官中，包括骨骼、骨髓、脾、肝、肺和腦。全身性地，其造成脾腫大、肝腫大、貧血、血小板減少症、白血球減少症、骨質缺乏、骨壞死和其他病理異常。

高雪氏症有三種亞型，其差異在於發作的年齡、嚴重度和神經表徵的存在。第1型高雪氏症(GD-1)，無神經病變的GD，為最常見的類型，其診 斷出的中位數年齡為28歲，且些微壽命減短。在GD-1中，GC酵素保留一些功能性，且無涉及神經病患。第2型GD為急性神經病變性GD，係在嬰兒期期間診斷出，涉及嚴重的神經病變，且通常在二歲內死亡。第2型GD病患的GC酵素，相較於GD-1在功能上更減低。第3型GD為慢性神經病變性GD，係在孩童時期診斷出，涉及逐步惡化的神經且壽命通常不會超過30歲。GD-3的症狀包括脾和肝異常、疲勞、出血、痙攣和核上凝視麻痺。GD-3病患的神經表徵在疾病期間逐漸發展。更使人衰弱的特徵之一為凝視麻痺，其為一控制瞬眼移動之神經核路徑的缺陷。在疾病的早期，有水平眼瞬動漸慢。疾病進行至完全水平眼瞬動麻痺以及各種程度的垂直眼瞬動麻痺。在GD-3病患中亦可能有VOR障礙。這些疾病特性對於GD-3病患的生活品質具有深遠影響，且可能阻礙受教育和工作的機會。

GD-1和GD-3之現有的治療侷限在使用伊米苷酶、維拉苷酶(velaglucerase)或他利苷酶(taliglucerase)的重組酵素取代療法(ERT)和使用麥格司他(miglustat)或依利格魯司他(eliglustat)的基質減量療法(SRT)。參見，例如Lunawati L.Bennett & Chris Fellner,Pharmacotherapy of Gaucher Disease：Current and Future Options,P&T 43(5)：274-280,309(2018)。伊米苷酶，領先的治療療法，為一重組版的人類GC，係以中國倉鼠卵巢細胞製造並藉由每1-2週緩慢靜脈內注射來給藥(典型地1-2小時期間)。從1998年在美國已可取得。維拉苷酶為另一種重組的人類GC類似物，其係以纖維肉瘤細胞株所製，並在2010年經FDA核准。他利苷酶為類似的，係使用基因改造的胡蘿蔔植株根細胞所製，且自2012已經核准。這些治療全部需要在醫院或其他醫療環境中IV給藥且重組酵素無法穿越血-腦屏障，且因此不能治療GD之神經症狀。因此，當這些ERT療法在治療GD-1病患上已證明為有效的同時，在GD-3病患中僅在治療疾病的非神經症狀為有效的。

基質減量療法為一種治療GD的替代方法。此治療的目標為藉由抑制負責合成GLC的酵素，降低GLC堆積。葡萄糖神經醯胺合成酶(GCS)，亦稱為UDP-葡萄糖神經醯胺合成酶，為催化神經醯胺之最初醣基化步驟形成葡萄糖神經醯胺的酵素。

GCS抑制劑已建議用於治療各種疾病，包括醣脂儲積症和溶體儲積症，包括高雪氏症。參見，例如WO 2005/068426(Actelion Pharm.Ltd.)。麥格司他(Zavesca)為一種亞胺基葡萄糖GCS抑制劑。其為N-烷基化的亞胺基糖且在酵素活性位置結合係作為GCS之可逆的競爭抑制劑。當其開發用於治療GD、GD-2和GD-3之神經病變形式時，FDA僅核准用於治療輕度至中度GD-1的病患，且僅作為二線治療(必須是無法接受ERT治療的病患)。而麥格司他可穿越血-腦屏障，其在臨床試驗中發現在治療GD-3的神經表徵上為無效的。依利格魯司他亦為一種GCS抑制劑，且其為一種神經醯胺的類似物。FDA僅核准用於治療GD-1病患的全身性症狀。

尼曼匹克症C型(NPC)亦為一種溶體儲積症，雖然他的成因與高雪氏症相當不同，但在某些方面，總結果為類似的。NPC係由NPC1或NPC2基因突變所造成。NPC1為一種媒介胞內膽固醇運輸至後-溶體目的地之膜蛋白。特言之，NPC1係與NPC2作用一致，用以提升胞內體/溶體隔室之膽固醇出口。在晚期胞內體/溶體之內腔中，從低密度脂蛋白釋放出的未酯化膽固醇係藉由NPC2轉送到NPC1的膽固醇-結合口袋。大約95%的NPC病患具有NPC1突變，而其餘大部分具有NPC2突變。此紊亂的膽固醇運輸的效應之一為膽固醇和醣神經鞘脂質(包括GLC)堆積在肝、脾和腦細胞中。NPC的特徵之一，如同GD3，為進行性發展核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動麻痺。

另一群常與眼瞬動凝視麻痺有關的疾病和病症包括GM2-神經節苷脂儲積症(例如戴薩克斯症(Tay Sachs disease)、山德霍夫症(Sandhoff disease) 和AB變異GM2神經節苷脂儲積症)。

GM2神經節苷脂儲積症，與高雪氏症、溶體儲積症相類似，特徵為醣神經鞘脂質代謝的基因缺陷。GM2神經節苷脂儲積症特徵為負責將GM2分解為GM3之酵素己醣胺酶A及/或其共因子GM2活化蛋白缺損。GM2和GM3為相關神經節苷脂，其為葡萄糖神經醯胺中相同代謝路徑的部分，係降解為神經醯胺。因此，GM3係藉由逐步程序所製造，由神經醯胺轉變為葡萄糖神經醯胺開始(藉由GLC)，接著轉變為半乳糖基-葡萄糖神經醯胺，接著轉變為GM3(N-乙醯基-a-神經胺基-半乳糖基-葡萄糖神經醯胺)，接著轉變為GM2(N-乙醯基-半乳糖基N-乙醯基-a-神經胺基-半乳糖基-葡萄糖神經醯胺)。GM2的病態堆積為GM2神經節苷脂儲積症的標記，其因此可能藉由抑制葡萄糖神經醯胺的早期合成步驟之GCS抑制劑來改善。

文中所述的

啶化合物具有作為酵素葡萄糖神經醯胺合成酶(GCS)之抑制劑的活性。這些化合物已揭示一般可用於治療溶體儲積症，例如法布瑞氏症、高雪氏症和尼曼匹克症。參見，例如WO 2012/129084和U.S.2016/0361301。

在此技術中對於開發有效用於減輕或管理與高雪氏症第3型有關的神經症狀，尤其是瞬眼移動缺陷之治療劑有實際需求。

本發明係關於根據式(I)之

啶化合物(化合物1)，

或其醫藥上可接受鹽或前藥，其中：

R¹係選自氫、鹵素(例如，氟)、氰基、硝基、羥基、硫基、胺基、C_1-6-烷基(例如，甲基或乙基)、C_2-6-烯基、C_2-6-炔基、C_1-6-烷氧基、C_2-6-烯氧基和C_2-6-炔氧基，其中該烷基、烯基、炔基、烷氧基、烯氧基或炔氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、氰基、硝基、羥基、硫基或胺基之基團取代；

R²和R³獨立地係選自C_1-3-烷基，其視需要經一或多個(例如，1、2或3個)鹵素取代，或R²和R³共同形成一環丙基或環丁基基團，視需要係經一或多個(例如，1或2個)鹵素取代；

R⁴、R⁵和R⁶各自獨立地係選自氫、鹵素、硝基、羥基、硫基、胺基、C_1-6-烷基和C_1-6-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、羥基、氰基和C_1-6-烷氧基之基團取代；及

A為5-或6-員芳基或雜芳基基團，視需要係經1、2或3個獨立選自鹵素、羥基、硫基、胺基、硝基、C_1-6烷氧基或C_1-6烷基之基團取代。

在第一方面，本申請案係於有此需要的對象中提供用於治療或防止核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺之方法，該方法包括投予該對象一有效量之如文中所述的

啶化合物，例如，根據式I之化合物。在另外的方面，本申請案進一步係提供文中所述之

啶化合物用於治療或防止核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺之用途，以及用於製造醫藥品供治療或防止核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺之用途。

文中所揭示的化合物、組成物和方法之另外的特質和利益從下列詳細說明(實施方式)將顯而易見。

圖1和2係顯示如實例5中所述在五位病患中所測量的水平瞬眼移動(圖1係顯示病患1-3而圖2係顯示病患4-5)。當目標以15°(灰點)或30°(黑 點)從中間位置以向左或向右方向水平移動時，測量眼瞬動振幅和尖峰速度。眼睛向右移動以正尖峰速度表示而向左移動則以負的尖峰速度表示。各圖上灰色陰影區域代表在各特定振幅的正常尖峰速度範圍。

雖然現在將參照製備和流程描述本發明之特定具體實例，但應了解，此等實施例只是舉例且僅為許多可代表本揭示文原理之應用的可能特定具體實例的小部份說明。受益於本揭示文，對於熟習本項技術者，各種變化和修改應為明顯的且係視為在進一步於所附之申請專利範圍定義的本揭示文之精神和範圍內。

定義

除非另有定義，否則文中所用的所有的技術和科學術語係具有與本揭示文所屬技術中之一般技術者一般理解的意義。雖然任何類似或等同文中所述之方法和物質可用於施行或試驗本發明，但示例的方法、裝置和材料為現在所述。文中所引述之所有技術和專利公開案係以全文引用的方式併入本文中。在文中不應解釋為承認本發明無權先於此等憑藉先前發明之揭示。

除非另有指出，否則本揭示文之施行將應用習用的組織培養、免疫學、分子生物學、微生物學、細胞生物學和重組DNA之技術，其係在本項技術之技術中。

所有的數字標號例如pH、溫度、時間、濃度、分子量，包括範圍，為大約值，若適當，其變化(+)或(-)為0.1或1.0之增加量。應了解，雖然並不一定明確地陳述所有數字標號，但其係以術語「大約」處理。亦應了解，雖然並不一定明確地陳述，但文中所述的試劑僅為示例且彼等之同等物已為本項技術所知。

如文中所用，術語「視需要經取代」係指相當於「非取代」和「經...取代」之詞語。

如文中所用，詞語「在治療或防止的方法中」(例如在「治療或防止核上凝視麻痺的方法中」詞語中)係指相當於「在..治療或防止中」(例如在「核上凝視麻痺的治療或防止中」詞語中)。

除非內容另有明確指出，否則如本說明書和申請專利範圍中所用，單數型「一」和「此」係包括多數型的參照物。例如，術語「一細胞」包括多數個細胞，包括其混合。除非有特別陳述或內文中為明顯的，否則如文中所用，術語「或」應理解為包括在內。術語「包括」用於文中係指「包括但不限於」之詞語，並可與其交換使用。

如文中所用，術語「包括」希望係指包括所述元素之組成物和方法，但不排除其他。「基本上由...組成」當用於定義組成物和方法時，應指排除其他任何所述目的之組合的基本意義元素。因此，一基本上由文中所定義的元素所組成之組成物不應排除來自分離和純化法之微量汙染物及醫藥上可接受載劑，例如磷酸緩衝食鹽水、防腐劑及其類似物。「由...組成」應指排除多於其他成份的微量元素及用於投予本發明組成物之實質方法步驟或製造組成物或達到所欲結果之方法步驟。由各自這些過渡術語所定義的具體實例係在本發明之範圍內。文中術語「包括」之用法希望涵蓋「基本上由...組成」及「由...組成」。

一「對象」、「個體」或「病患」在文中係交換使用且係指脊椎動物，例如哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)鼠科、大鼠、兔、猿猴、牛、羊、豬、犬類、貓類、農用動物、運動動物、寵物、馬、靈長類和人類。在一具體實例中，此哺乳動物包括馬、狗和貓。在某些具體實例中，此哺乳動物為人類，例如，患有特定疾病或病症，如高雪氏症(例如，GD-3)或尼曼匹克症C型的人類。

「投予」在文中係定義為以一方式提供一藥劑或含有此藥劑之組成物給予一對象使得該藥劑在該對象體內的方法。此投予可藉由任何路徑，包括(不限於)口服、經皮(例如陰道、直腸、口腔黏膜)，藉由注射(例如皮下、靜脈內、腸道外、腹膜內、注射入CNS)或藉由吸入(例如經口或鼻部)。醫藥製備物當然係以適合各給藥路徑的形式來給予。

「治療」疾病一般係包括：(1)抑制疾病，亦即遏止或降低疾病發生或其臨床症狀；及/或(2)減輕疾病，亦即使疾病或其臨床症狀消退。

如文中所用，「治療」亦指消除核上凝視麻痺或讓核上凝視麻痺穩定。其係因為文中所述的疾病和病症為進行性病症一在缺乏治療下，核上凝視麻痺將會持續惡化直到完全麻痺(亦即癱瘓)結果。例如，在疾病的早期，病患可能經歷減緩或抑制性瞬眼移動，但因疾病進行，病患可能發展成完全無法眼瞬動。治療因此係包括減緩此進行性惡化(例如穩定化)，以及消退此進行性惡化(例如改善)。

「防止」疾病一般係包括於可能易罹患此疾病但尚未經歷或出現此疾病症狀之患者中使得此疾病的臨床症狀不發生。

如文中所用，「防止」亦包括在疑似患有或經診斷患有文中所述之疾病或病症的對象中防止核上凝視麻痺發生。因為文中所述的疾病和病症為進行性病症，可能進行性表現不同的徵象和症狀作為疾病進展。因此，例如，一病患在發生核上凝視麻痺之前可能經診斷患有GD-3或NPC。在此一病患中，文中所述的治療方法在防止核上凝視麻痺發生上就可能為有效的。

術語「麻痺(palsy)」為「癱瘓(paralysis)」的同義詞並包括一和多項骨骼肌之任何程度的運動功能喪失。如文中所用，術語「麻痺」因此係包括完全麻痺，亦即完全癱瘓，以及部分麻痺。完全麻痺係指肌肉或肌肉群，例如眼外肌肉已喪失收縮能力。因此，受影響的單眼或雙眼可能無法移動。部分麻 痺可能表現為移動受到抑制，移動減緩或其他移動缺陷。這些可能包括喪失一運動的範圍。當用於眼瞬動時，此項可包括啟動眼瞬動之抑制(例如對刺激的反應)，眼瞬動頻率改變，眼瞬動的尖峰速度改變，眼瞬動的振幅改變，眼瞬動之間的延遲改變及/或喪失支撐凝視或轉移凝視之能力。如文中所用，在某些具體實例中，麻痺係包括眼球運動功能障礙及/或眼肌麻痺。因此，此術語係包括眼外肌肉變弱和癱瘓。眼外肌肉包括眼睛的任何一和多項上直肌、下直肌、內直肌、外直肌、下斜肌和上斜肌。變弱和癱瘓可能括一和多項的水平移動、垂直移動或旋轉移動。

術語「罹患」當其與術語「治療」有關時係指已診斷出患有此疾病之病患或個體。術語「罹患」當其與術語「防止」有關時係指易患有此疾病之病患或個體。病患亦可指因為其家族病史或因為有與此疾病相關的基因突變存在而處於疾病「罹患之風險」。處於疾病風險之病患係尚未發展出所有或某些疾病的特徵病理。

「有效量」或「治療上有效量」為一足以產生有利的或所欲結果之量。一有效量可以一或多次投予、施用或劑量來給藥。此遞送係依照許多的變數而定，包括所使用的個別劑量單位之時間週期、治療劑的生物可利用性及給藥路徑等。請了解，就任何特定對象，特定的本發明治療劑之劑量係依照各種因素而定，包括，例如所用的特定化合物之活性、該對象的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食、給藥時間、排泄率、藥物組合及所治療之特定病症的嚴重度及給藥形式。治療劑量一般可經滴定使安全性和效力最佳化。典型地，來自活體外及/或活體內試驗的劑量-效用關係最初可提供病患給藥之適當劑量的有用指南。一般而言，係希望投予一化合物之量其為有效達到相當於活體外發現的有效濃度之血清量。測定這些參數完全係在本項技術之技術中。這些考量，以及有效調配物和給藥程序已為本項技術所熟知且係描述於標準教科書中。 與此定義一致，如文中所用，術語「治療上有效量」為在活體外、試管內或活體內一足以治療(例如改善)一或多項與文中所述的疾病或病症有關的症狀之量(例如，在任何方法1及其後的方法或方法4及其後的方法)。

如文中所用，術語「醫藥上可接受賦形劑」係涵蓋任何標準的醫藥賦形劑，包括載劑例如磷酸緩衝食鹽水溶液、水，和乳液例如油/水或水/油乳液，及各種類型的濕化劑。醫藥組成物亦可包括安定劑和防腐劑。就載劑、安定劑和佐劑之實例請參見Remington’s Pharmaceutical Sciences(20th ed.,Mack Publishing Co.2000)。

如文中所用，術語「前藥」係指母藥分子之藥理學衍生物，其在生物體內需要自發性或酵素性生物轉化，以釋放活性藥物。例如，前藥為文中所述的

啶化合物的變體或衍生物，其具有在特定代謝條件下可裂解的基團，當其裂解時，變成文中所述的

啶化合物，例如式I之化合物。此等前藥，當其於生理條件下經過溶劑分解或經過酵素降解時，在活體內則具有醫藥活性。文中之前藥化合物，依照在生物體內釋出活性藥物的生物轉化步驟次數以及存在前驅物形式的功能基數目，可稱為單前藥、雙前藥或三前藥等。前藥形式在哺乳動物體中通常係提供溶解度、組織相容性或延遲釋放之優點。

在本項技術中一般已知的前藥包括熟知的酸衍生物，例如，舉例而言，藉由酸化合物與適合的醇反應所製備的酯類，藉由酸化合物與胺反應所製備的醯胺類，及鹼性基團反應而形成醯化的鹼衍生物等。其他的前藥衍生物可與文中所揭示的其他特質組合用以增進生物可利用率。就此，熟習本項技術者應了解，具有，例如游離胺基或羥基基團之當前所揭示的特定化合物可轉變成前藥。前藥包括具有一胺基酸殘基，或二或多個(例如二、三或四個)胺基酸殘基之多肽鏈的化合物，其係經由本文所揭示的化合物之胜肽鍵與游離的胺基、羥基或羧酸基團共價連接。胺基酸殘基包括通常以三個字母符號來標示之20種 天然生成的胺基酸且亦包括4-羥基脯胺酸、羥基離胺酸、鎖鏈素(demosine)、異鎖鏈素(isodemosine)、3-甲基組胺酸、正纈胺酸、β-丙胺酸、γ-胺基丁酸、瓜胺酸、高半胱胺酸、高絲胺酸、鳥胺酸和甲硫胺酸碸。前藥亦包括與任何文中所揭示的上述取代基共價鍵結之具有碳酸酯、胺甲酸酯、醯胺或烷基酯基團的化合物。

如文中所用，術語「醫藥上可接受鹽」係指當前所揭示之化合物的醫藥上可接受酸加成鹽或醫藥上可接受鹼加成鹽，其可在無生成任何實質上不欲的生物效應或與其中可能含有的醫藥組成物之任何其他組份產生任何有害交互作用下給藥。

如文中所用，術語「C_1-6-烷基」係指基本上由1至6個碳原子及對應數目之氫原子所組成的飽和直鏈或支鏈游離基。示例的C_1-6-烷基基團包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基和異丁基。受益於本揭示文，其他的C_1-6-烷基基團對熟習本項技術者為顯而易見的。術語「C_1-3-烷基」、「C_1-4-烷基」等係具有同等意義，亦即基本上由1至3個(或4個)碳原子及對應數目之氫原子所組成的飽和直鏈或支鏈游離基。

如文中所用，術語「C_2-6-烯基」係指基本上由2至6個碳原子及對應數目之氫原子所組成的不飽和直鏈或支鏈游離基，該游離基係包括至少一個碳-碳雙鍵。示例的C_2-6-烯基基團包括乙烯基、丙-1-烯基、丙-2-烯基、異丙烯基、丁-1-烯基、2-甲基-丙-1-烯基和2-甲基-丙-2-烯基。受益於本揭示文，其他的C_2-6-烯基基團對熟習本項技術者為顯而易見的。

如文中所用，術語「C_2-6-炔基」係指基本上由2至6個碳原子及對應數目之氫原子所組成的不飽和直鏈或支鏈游離基，該游離基係包括至少一個碳-碳叁鍵。示例的C_2-6-炔基基團包括乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1- 炔基和3-甲基-丁-1-炔基等。受益於本揭示文，其他的C_2-6-炔基基團對熟習本項技術者為顯而易見的。

如文中所用，術語「C_1-6-烷氧基」係指基本上由1至6個碳原子(及對應數目之氫原子)和一氧原子所組成的飽和直鏈或支鏈游離基。C_1-6-烷氧基基團係經由氧原子相連接。示例的C_1-6-烷氧基基團包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基和異丁氧基。受益於本揭示文，其他的C_1-6-烷氧基基團對熟習本項技術者為顯而易見的。術語「C_1-3-烷氧基」、「C_1-4-烷氧基」及其類似基團係具有同等意義，亦即基本上由1至3個(或4個)碳原子(及對應數目之氫原子)和一氧原子所組成的飽和直鏈或支鏈游離基，其中該基團係經由氧原子相連接。

如文中所用，術語「C_2-6-烯氧基」係指基本上由2至6個碳原子(及對應數目之氫原子)和一氧原子所組成的不飽和直鏈或支鏈游離基，該游離基係包括至少一個碳-碳雙鍵。C_2-6-烯氧基基團係經由氧原子相連接。示例的C_2-6-烯氧基基團有乙烯氧基；受益於本揭示文，其他的基團對熟習本項技術者為顯而易見的。

如文中所用，術語「C_2-6-炔氧基」係指基本上由2至6個碳原子(及對應數目之氫原子)和一氧原子所組成的不飽和直鏈或支鏈游離基，該游離基係包括至少一個碳-碳叁鍵。C_2-6-烯氧基基團係經由氧原子相連接。示例的C_2-6-炔氧基基團為乙炔氧基；受益於本揭示文，其他的基團對熟習本項技術者為顯而易見的。

如文中所用，術語「雜芳基」係指具有5或6個原子(亦即環原子)其形成一個環之芳香游離基，其中1至5個環原子為碳而其餘的1至5個環原子(亦即雜環原子)係獨立地由氮、硫和氧組成之群中選出。示例的5-員雜芳基基團包括呋喃基、噻吩基、噻唑基(例如噻唑-2-基)、吡唑基、異噻唑基、

唑基、異

唑基、吡咯基、三唑基、咪唑基、

二唑基及噻二唑基。示例的6-員雜芳基基團包括吡啶基、嘧啶基、吡

基、嗒

基、1,2,4-三

基、苯并

唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并異

唑基和苯并咪唑基。受益於本揭示文，其他的雜芳基基團對熟習本項技術者為顯而易見的。一般而言，雜芳基基團典型地係經由碳原子與主結構相連接。然而，熟習本項技術者應能了解特定的其他原子，例如雜環原子可與主結構相連接。

如文中所用，術語「芳基」係指具有5或6個原子(亦即環原子)其形成一個環之芳香游離基，其中所有的環原子為碳。一示例的芳基基團為苯基基團。

如文中所用，術語「脂肪族」係指含有碳和氫原子，例如含有1至9個碳原之非芳香化合物子。脂肪族化合物可為直鏈或支鏈，可含有一或多個環結構，且可含有一或多個碳-碳雙鍵(其限制條件為該化合物不包含具有芳香特性之不飽和環結構)。示例的脂肪族化合物包括乙烷、丙烯、環丁烷和環己二烯。

如文中所用，術語「鹵基」和「鹵素」係指氟、氯、溴或碘。這些術語可交換使用並可指鹵素游離基團或鹵素原子本身。有鑑於其中此術語係用於本揭示文之內文中，熟習本項技術者應能容易確認鑑別。

如文中所用，術語「氰基」係指具有經由叁鍵連接氮原子之碳原子的游離基。此氰基係經由其碳原子相連接。

如文中所用，術語「硝基」係指經由其氮原子相連接之-NO₂基。

如文中所用，術語「羥基」係指經由其氧原子相連接之-OH基。術語「硫基」係指經由其硫原子相連接之-SH基。

如文中所用，術語「胺基」係指具有1個氮原子及1或2個氫原子之游離基。因此，術語「胺基」一般係指一級和二級胺。就此，如文中所用， 三級胺係以通式RR’N-代表，其中R和R’為可能相同或可能不同的碳基。然而，術語「胺基」一般於文中可用來描述一級、二級或三級胺，且有鑑於其中此術語係用於本揭示文之內文中，熟習本項技術者應能容易確認鑑別。

如文中所用，術語「側氧基」係指經由雙鍵相連接之氧基。當與此氧原子鍵結的原子為碳原子時，則此碳-氧雙鍵可以(C=O)表示並可稱為酮。

在任何文中可變基定義中之化學基團列表敘述係包括任何單一基團或所列基團之組合的可變基定義。就文中之可變基或態樣之具體實例的敘述包括任何單一實施例或任何其他實施例或其部份的組合。

文中所提供的任何組成物或方法可與一或多種文中所提供的任何其他組成物和方法組合。

文中係使用下列縮寫：

br 廣波訊號

CDI 羰基二咪唑

CNS 中樞神經系統

d 二重峰

DAPI 4',6-二脒基-2-苯基吲哚

dd 雙二重峰

DME 二甲氧基乙烷

DMEM 杜氏伊格爾修飾培養基

DMSO-d6 二甲基亞碸-d6

DMF 二甲基甲醯胺

DNA 去氧核糖核酸

DTBZ 碳-11二氫四苯喹

(Carbon-11 dihydrotetrabenazine)

EDTA 乙二胺四乙酸

ELISA 酵素-連接的免疫吸附分析

Et₂O 乙醚

EtMgBr 乙基溴化鎂

EtOAc 乙酸乙酯

GL1 葡萄糖神經醯胺(GlcCer)

GM1 單唾液酸四己糖神經節苷脂

GM3 單唾液酸二己糖神經節苷脂

GSL 醣神經鞘脂質

H&E 蘇木精和伊紅染色

HPLC 高壓/高效液相層析

HSA 人類血清白蛋白

IPA 異丙醇

J 偶合常數

LCMS 液相層析質譜

m 多重峰

ppm 百萬分之一

rHA 重組的人類白蛋白

s 單峰

TBME 第三丁基甲基醚

THF 四氫呋喃

Tris 叁(羥基甲基)胺基甲烷

TWEEN20 聚山梨醇酯20

TWEEN80 聚山梨醇酯80

WT 野生型

UPLCMS 超高效液相層析質譜

化合物

本揭示文係關於用於有關治療或防止文中所討論的疾病和病症之治療方法中的混啶化合物。在所有其各種態樣中，本發明係關於根據式(I)之

啶化合物(化合物1)，

或其醫藥上可接受鹽或前藥，其中：

R¹係選自氫、鹵素(例如，氟)、氰基、硝基、羥基、硫基、胺基、C_1-6-烷基(例如，甲基或乙基)、C_2-6-烯基、C_2-6-炔基、C_1-6-烷氧基、C_2-6-烯氧基和C_2-6-炔氧基，其中該烷基、烯基、炔基、烷氧基、烯氧基或炔氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、氰基、硝基、羥基、硫基或胺基之基團取代；

R²和R³獨立地係選自C_1-3-烷基，視需要經一或多個(例如，1、2或3個)鹵素取代，或R²和R³共同形成一環丙基或環丁基基團，視需要經一或多個(例如，1或2個)鹵素取代；

R⁴、R⁵和R⁶各自獨立地係選自氫、鹵素、硝基、羥基、硫基、胺基、C_1-6-烷基和C_1-6-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、羥基、氰基和C_1-6-烷氧基之基團取代；及

A為5-或6-員芳基或雜芳基基團(例如，苯基或噻唑基)，視需要係經1、2或3個獨立地選自鹵素、羥基、硫基、胺基、硝基、C_1-6烷氧基和C_1-6烷基之基團取代。

在本揭示文之任何方面的另外具體實例中，本揭示文進一步係關於如下之化合物：

1.1 化合物1，其中R¹係選自氫、鹵素、氰基、硝基、羥基、硫基、胺基、C_1-6-烷基、C_1-6-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、氰基、硝基、羥基、硫基或胺基之基團取代；

1.2 化合物1，其中R¹係選自氫、鹵素、C_1-6-烷基、C_1-6-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、氰基、硝基、羥基、硫基或胺基之基團取代；

1.3 化合物1，其中R¹係選自氫、鹵素、C_1-4-烷基、C_1-4-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、氰基、硝基、羥基、硫基或胺基之基團取代；

1.4 化合物1，其中R¹係選自氫、鹵素、C_1-4-烷基、C_1-4-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3或1或2個)選自氰基、硝基、羥基、硫基或胺基之基團取代；

1.5 化合物1，其中R¹係選自氫、鹵素和C_1-4-烷基，其中該烷基視需要係經一或多個(例如，1或2個)選自鹵素、羥基、硫基或胺基之基團取代；

1.6 化合物1，其中R¹係選自氫、氟、甲基和乙基，其中該甲基或乙基視需要係經1或2個選自鹵素、羥基、硫基或胺基之基團取代；

1.7 化合物1，其中R¹係選自氫和甲基，其中該甲基視需要係經1或2個鹵素取代；

1.8 化合物1，其中R¹為氫；

1.9 化合物1或任何1.1-1.8，其中R¹不與

啶基的氮原子相連接；

1.10 化合物1或任何1.1-1.9，其中R²和R³各自獨立地為C_1-3-烷基，視需要經一或多個(例如，1、2或3個)鹵素取代；

1.11 化合物1.11，其中R²和R³各自獨立地為甲基或乙基，視需要係經1或2個鹵素取代；

1.12 化合物1.11，其中R²和R³各自獨立地係選自甲基和乙基，視需要經一或多個氟、例如，1、2或4個氟取代；

1.13 化合物1.11，其中R²和R³各自獨立地為經0、1、2或3個氟取代之甲基；

1.14 化合物1.11，其中R²和R³各自為甲基或三氟甲基；

1.15 化合物1.11，R²和R³各自為甲基；

1.16 化合物1或任何1.1-1.9，其中R²和R³共同形成一環丙基或環丁基基團，視需要經一或多個(例如，1或2個)鹵素取代；

1.17 化合物1.16，其中R²和R³共同形成一環丙基基團；

1.18 化合物1或任何1.1-1.9，其中R²和R³各自為甲基，或R²和R³共同形成一環丙基基團；

1.19 化合物1或任何1.1-1.9，其中R⁴、R⁵和R⁶各自獨立地係選自氫、鹵素、C_1-6-烷基和C_1-6-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、羥基、氰基和C_1-6-烷氧基之基團取代；

1.20 化合物1或任何1.1-1.9，其中R⁴、R⁵和R⁶各自獨立地係選自氫、鹵素、C_1-3-烷基和C_1-3-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、羥基、氰基和C_1-3-烷氧基之基團取代；

1.21 化合物1.19，其中R⁴、R⁵和R⁶各自獨立地係選自氫、鹵素、C_1-3-烷基和C_1-3-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、氰基和C_1-3-烷氧基之基團取代；

1.22 化合物1.19，其中R⁴、R⁵和R⁶各自獨立地係選自氫、鹵素、C_1-3-烷基和C_1-3-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個) 選自視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素和C_1-3-烷氧基之基團取代；

1.23 化合物1.19，其中R⁴、R⁵和R⁶各自獨立地係選自鹵素、C_1-3-烷基和C_1-3-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素和C_1-3-烷氧基之基團取代

1.24 化合物1或任何1.19-1.23，R⁴係選自氫、鹵素、C_1-3-烷基和C_1-3-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素和C_1-3-烷氧基之基團取代；

1.25 化合物1.24，R⁴係選自鹵素(例如，氟)、C_1-3-烷基(例如，甲基)和C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素和C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)之基團取代；

1.26 化合物1.26，R⁴係選自鹵素(例如，氟)和C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)，其中該烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素和C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)之基團取代；

1.27 化合物1.26，R⁴為氟或視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素和C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基)之基團取代的C_1-3-烷氧基(例如，乙氧基)；

1.28 化合物1.26，其中R⁴為氟或視需要經一或多個(例如，1、2或3個)C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基)取代的乙氧基，；

1.29 化合物1或任何1.19-1.28，其中R⁶為氫；

1.30 化合物1或任何1.19-1.28，其中R⁵和R⁶各自為氫；

1.31 化合物1或任何1.19-1.28，R⁵和R⁶各自為氫，而R⁴為氟或C_1-3-烷氧基(例如，乙氧基)，視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自視需要係經一 或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素和C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基)之基團取代；

1.32 化合物1.31，其中R⁵和R⁶各自為氫，而R⁴為氟或視需要經一或多個(例如，1、2或3個)C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基)取代的乙氧基；

1.33 化合物1.32，其中R⁵和R⁶各自為氫，而R⁴為氟或經甲氧基取代的乙氧基(例如，2-甲氧基乙氧基)；

1.34 化合物1.32，其中R⁴為氟或2-甲氧基乙氧基；

1.35 化合物1或任何1.1-1.34，其中R⁴、R⁵和R⁶至少一項不為氫；

1.36 化合物1或任何1.1-1.35，其中R⁶為氫，而R⁴和R⁵係位於與其相連接之苯環的2、4或6位置(亦即A取代基的鄰位或對位)；

1.37 化合物1或任何1.1-1.35，其中R⁶為氫，而R⁴和R⁵係獨立地位於與其相連接之苯環(就A取代基而言)的2和3位置(亦即，鄰近的鄰位和間位)、3和4位置(亦即，鄰近的間位和對位)或3和5位置(亦即，間位)；

1.38 化合物1或任何1.1-1.35，其中R⁶為氫，而R⁴和R⁵係位於與其相連接之苯環(就A取代基而言)的3和5位置(亦即，間位)；

1.39 化合物1或任何1.1-1.35，其中R⁵和R⁶為氫，而R⁴係位於與其相連接之苯環的2、3或4位置(例如，A取代基的鄰位、間位或對位)；

1.40 化合物1或任何1.1-1.35，其中R⁵和R⁶為氫，而R⁴係位於與其相連接之苯環的2或4位置(例如，A取代基的鄰位或對位)；

1.41 化合物1或任何1.1-1.35，其中R⁵和R⁶為氫，而R⁴係位於與其相連接之苯環的4位置(例如，A取代基的對位)；

1.42 化合物1或任何1.1-1.35，其中R⁴、R⁵和R⁶皆不為氫，且各R⁴、R⁵和R⁶係獨立地位於與其相連接之苯環的2、4或6位置(亦即，A取代基的鄰位或對位)；

1.43 化合物1或任何1.1-1.42，其中R⁴係位於與其相連接之苯環的4位置(亦即，A取代基的對位)；

1.44 化合物1或任何1.1-1.43，其中A為6-員芳基基團、5-員雜芳基基團(例如，在雜芳基環中含有1、2或3個選自N、O和S之雜原子)或6-員雜芳基基團(例如，在雜芳基環中含有1、2或3個氮原子)；

1.45 化合物1.44，其中A為6-員芳基基團或5-員雜芳基基團(例如，在雜芳基環中含有1、2或3個選自N、O和S之雜原子)，視需要其中該5-員雜芳基基團係含有1或2個選自N和S之雜原子(例如，一個N及/或一個S)；

1.46 化合物1.44或1.45，其中A係由苯基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、異噻唑基、

唑基、異

唑基、吡咯基、三唑基、咪唑基、

二唑基及噻二唑基組成之群中選出；

1.47 化合物1.46，其中A係由苯基、噻吩基、噻唑基、吡咯基和咪唑基組成之群中選出；

1.48 化合物1.46，其中A係由苯基和噻唑基組成之群中選出，例如，2-噻唑-4-基或4-噻唑-2-基；

1.49 化合物1或任何1.1-1.48，其中A為未經取代

1.50 化合物1或任何1.1-1.48，其中A係經一或多個(例如，1、2或3個)獨立地選自鹵素、羥基、硫基、胺基、硝基、C_1-6烷氧基和C_1-6烷基(例如，甲基)之基團取代；

1.51 化合物1.50，其中A為經一個鹵素(例如，氟)或C_1-6烷基(例如，甲基)取代的噻唑基；

1.52 化合物1.50，其中A為經1、2或3個獨立地選自鹵素(例如，氟)和C_1-6烷基(例如，甲基)取代的苯基；

1.53 化合物1.52，其中A為經1或2個氟或甲基基團取代的苯基；

1.54 化合物1或任何1.1-1.53，其中與A取代基相連接的二個基團(亦即，苯基環(-(C₆H₂R⁴R⁵R⁶))和-C(R²R³)-基團)係位在彼此互為1,2-、1,3-或1,4-關係之位置(亦即，鄰位、間位或對位)；

1.55 化合物1.54，其中與A取代基相連接的二個基團係位在彼此互為1,3-關係之位置(亦即，間位)；

1.56 化合物1.54，其中與A取代基相連接的二個基團係位在彼此互為1,4-關係之位置(亦即，對位)；

1.57 任何的化合物1.54至1.56，其中A取代基為5-員雜芳基基團且與A取代基相連接的二個基團中至少一個(亦即，苯環(-(C₆H₂R⁴R⁵R⁶))或-C(R²R³)-基團)係與雜芳基環的一碳原子相連接，視需要其中此二個基團係與雜芳基環的碳原子相連接；

1.58 化合物1或任何1.1-1.57，其中式I化合物可以任何一或多個下列結構來表示：

(IV)；

1.59 化合物1或任何1.1-1.58，其中式I或任何的式II至XII之化合物係具有(S)組態；

1.60 化合物1或任何1.1-1.58，其中式I或任何的式II至XII之化合物係具有(R)組態；

1.61 化合物1或任何1.1-1.60，其中式I或任何的式II至XII之化合物係具有至少90%，例如，至少92%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%的鏡像異構物超越值(例如，(S)組態)；

1.62 化合物1或任何1.1-1.58，其中式I或任何的式II至XII之化合物為外消旋(亦即大約50：50比例的鏡像異構物)或某些其他比例的鏡像異構物之混合物(例如，低於50：50或大於50：50)；

1.63 化合物1或任何1.1-1.62，其中式I化合物係由下列組成之群中選出：

1.64 化合物1或任何1.1-1.63，其中該化合物係由

啶-3-基(2-(4'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)丙-2-基)胺甲酸酯、(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯和(S)-

啶-3-基(2-(4’-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1’-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯選出；

1.65 化合物1或任何1.1-1.63，其中該化合物為

啶-3-基(2-(4'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)丙-2-基)胺甲酸酯；

1.66 化合物1或任何1.1-1.63，其中該化合物為

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯，例如(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯；

1.67 化合物1或任何1.1-1.66，其中式I或任何的式II至XII之化合物為游離鹼形式；

1.68 化合物1或任何1.1-1.66，其中式I或任何的式II至XII之化合物為醫藥上可接受鹽形式；

1.69 化合物1.68，其中該鹽形式為酸加成鹽形式；

1.70 化合物1.69，其中該酸加成鹽形式為選自下列之鹽：鹽酸鹽、溴酸鹽、碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、酒石酸氫鹽、琥珀酸鹽、羥基琥珀酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、延胡酸酸鹽、葡萄糖酸鹽、蔗糖酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽和雙羥萘酸鹽(pamoate)；

1.71 化合物1.70，其中該酸加成鹽形式係選自鹽酸鹽、羥基琥珀酸鹽(例如，2-羥基琥珀酸鹽)和蘋果酸鹽；

1.72 化合物1.68，其中該鹽形式為一鹼加成鹽形式；

1.73 化合物1或任何1.1-1.72，其中該化合物為(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯之蘋果酸鹽形式；

1.74 化合物1或任何1.1-1.73，其中式I或任何的式II至XII之化合物為如文中所述之前藥形式；

1.75 化合物1或任何1.1-1.74，其中式I或任何的式II至XII之化合物為水合物、溶劑化物及/或同質異形物之形式。

鹽類

本質上為鹼性之當前所揭示的化合物，例如，任何的化合物1或1.1-1.75，一般能與各種無機及/或有機酸形成廣泛的各種不同鹽類。雖然此等鹽類一般就投予動物和人類為醫藥上可接受的，但其通常在實施上希望於開始時從反應混合物將化合物分離為醫藥上不可接受的鹽及然後將其藉由以鹼性試劑 處理，單純地變回游離的鹼化合物，及隨後將游離鹼轉變成醫藥上可接受的酸加成鹽。此等鹼化合物的酸加成鹽可使用習用技術容易地製備，例如藉由將鹼化合物以實質上等量所選的無機或有機酸於水性溶劑媒劑或於適合的有機溶劑中，例如甲醇或乙醇中處理。小心的蒸發溶劑後，得到所欲的固體鹽。帶正電之當前所揭示的化合物，例如含有四級銨，其亦可與各種無機及/或有機酸之陰離子組份形成鹽類。

可用於製備

啶化合物之醫藥上可接受鹽類之酸為該等可形成無毒酸加成鹽者，例如含有藥理學上可接受陰離子之鹽類，例如氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸鹽或硫酸氫鹽、磷酸鹽或酸性磷酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽或酸性檸檬酸鹽、酒石酸鹽或酒石酸氫鹽、琥珀酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、葡萄糖酸鹽、蔗糖酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽和雙羥萘酸鹽(pamoate)[亦即1,1'-伸甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)]。

本質上為酸性之當前所揭示的化合物，例如含有硫醇基團之化合物，一般能與各種無機及/或有機鹼形成廣泛的各種不同鹽類。雖然此等鹽類一般就投予動物和人類為醫藥上可接受的，但其通常在實施上希望於開始時從反應混合物將化合物分離為醫藥上不可接受的鹽及然後將其藉由以酸性試劑處理，單純地變回游離的酸化合物，及隨後將游離酸轉變成醫藥上可接受的鹼加成鹽。這些鹼加成鹽可使用習用技術容易地製備，例如藉由將對應的酸性化合物以含有所欲的藥理學可接受陽離子之水性溶液處理，及然後將生成的溶液，例如於減壓下蒸發至乾。另一種選擇，其亦可藉由將此等酸性化物的低碳醇溶液與所欲的鹼金屬醇化物共同混合，及然後以如同之前的方式將所生成的溶液蒸發至乾來製備。在任一情況下，可使用試劑的化學計量以確保反應完全及所欲固體鹽之最大產率。

可用於製備

啶化合物之醫藥上可接受鹼加成鹽的鹼為該等可形成無毒鹼加成鹽者，例如含有藥理學上可接受陽離子之鹽類，例如鹼金屬陽離子(例如鉀和鈉)、鹼土金屬陽離子(例如鈣和鎂)、銨或其他水溶性胺加成鹽類例如N-甲基葡萄糖胺(葡甲胺)、低碳烷醇銨及其他此等有機胺之鹼。

在一具體實例中，此醫藥上可接受鹽為琥珀酸鹽。在另外的具體實例中，此醫藥上可接受鹽為2-羥基琥珀酸鹽，例如(S)-2-羥基琥珀酸鹽。在另外的具體實例中，此醫藥上可接受鹽為鹽酸鹽(亦即帶有HCl之鹽)。在另外的具體實例中，此醫藥上可接受鹽為蘋果酸鹽。

前藥

本揭示文進一步係包括化合物1和1.1-1.75之前藥。文中所揭示的醫藥上可接受前藥為

啶化合物之衍生物，其在活體內可轉變成文中所述的

啶化合物。本身可能具有某些活性之前藥，當其經歷例如於生理條件下溶劑分解或酵素降解時，在活體內變成具醫藥活性。以本揭示文為基礎，用於製備如文中所述之化合物前藥的方法對於熟習本項技術者應為顯而易見的。

在一具體實例中，

啶化合物的胺甲酸酯基團係經修飾。例如

啶化合物之胺甲酸酯基團可藉由添加水及/或一或二種脂肪族醇類加以修飾。在此情況下，胺甲酸酯基團的碳-氧雙鍵係採取可視為半縮醛或縮醛功能基。在一具體實例中，此

啶化合物之胺甲酸酯基團可藉由加入脂肪族二元醇，例如1,2-乙二醇加以修飾。

在一具體實例中，

啶化合物上的一或多個羥基、硫基或胺基基團係經修飾。例如，

啶化合物上的一或多個羥基、硫基及/或胺基基團可經修飾形成酸衍生物，例如酯類、硫酯類(或硫醇酯類)及/或醯胺。此等酸衍生物可，例如藉由將包括一或多個羥基、硫基或胺基基團之

啶化合物與一醯化劑反應 而形成。醯化劑之實例包括酸酐，例如乙酸酐、氯酸例如苯甲基氯，及二碳酸酯例如二碳酸二第三丁酯。

立體化學

本揭示文進一步係包括化合物1和1.1-1.75之立體異構物及立體異構物的混合物。當前所揭示的化合物之立體異構物(例如順式和反式異構物)及所有的光學異構物(例如R-和S-鏡像異構物)以及外消旋、非對映異構物及此等異構物之其他混合物係在本揭示文之範圍內。

在一具體實例中，如文中所定義之

啶化合物的

啶-3-基基團係具有R-組態。因此，此

啶化合物可由式(Ia)至(XIIa)化合物組成之群及其醫藥上可接受鹽類和前藥中選出：

在另外的具體實例中，如文中所定義之

啶化合物的

啶-3-基基團係具有S-組態。因此，此

啶化合物可由式(Ib)至(XIIb)化合物組成之群及其醫藥上可接受鹽類和前藥中選出：

在一具體實例中，此

啶化合物為式(Xb)之化合物或其醫藥上可接受鹽或前藥。在另外的具體實例中，此

啶化合物為式(XIIb)之化合物或其醫藥上可接受鹽或前藥。

在一具體實例中，如文中所定義之

啶化合物的

啶-3-基基團係以具有R-和S-組態之異構物的混合物存在。例如，此

啶化合物可為由下列組成之群中選出的化合物之混合物：式(Ia)和(Ib)、(IIa)和(IIb)、(IIIa)和(IIIb)、(IVa)和(IVb)、(Va)和(Vb)、(VIa)和(VIb)、(VIIa)和(VIIb)、(VIIIa)和(VIIIb)、(IXa)和(IXb)、(Xa)和(Xb)、(XIa)和(XIb)，以及(XIIa)和(XIIb)，與其醫藥上可接受鹽類或前藥。在一具體實例中，此

啶化合物係以外消旋混合物存在，例如

啶-3-基基團的R-和S-異構物係以大約同等量存在。在另外的具體實例中，此

啶化合物係以具有R-和S-組態之異構物的混合物存在，其中該R-和S-異構物係以不同的量存在。在一具體實例中，此S-異構物係以至少約5%、10%、25%、40%、70%、80%、90%、95%、97%、98%或99%，例如約100%的鏡像異構物超越值存在。在另外的具體實例中，此R-異構物係以至少約5%、10%、25%、40%、70%、80%、90%、95%、97%、98%或99%，例如約100%的鏡像異構物超越值存在。

以本揭示文為基礎，製備富含鏡像異構物及/或鏡像異構上純的

啶化合物之方法對於熟習本項技術者應為顯而易見的。

當前所揭示的化合物可以數種互變異構物的形式存在，包括烯醇和亞胺形式，以及酮和烯胺形式以及幾何異構物和其混合物。互變異構物係以成組的互變異構物之混合物存在溶液中。在固體形式中，通常有一互變異構物佔優勢。即使可能僅描述一種互變異構物，但所有的互變異構物係在本揭示文之範圍內。

阻轉異構物亦在本揭示文之範圍內。阻轉異構物係指可分離成旋轉上受限的異構物之化合物。

其他形式

本揭示文進一步係包括化合物1和1.1-1.75之水合物、溶劑化物及同質異形物。文中所述的

啶化合物之醫藥上可接受水合物、溶劑化物、同質異形物係在本揭示文之範圍內。文中所述的

啶化合物可為非晶形式及/或一或多種晶體形式。

同位素標定的化合物亦在本揭示文之範圍內。如文中所用，「同位素標定的化合物」係指當前所揭示的化合物，包括其醫藥鹽類和前藥，各自如文中所述，其中一或多個原子係經具有原子量或質量數不同於一般自然界中所發現的原子量或質量數之原子所取代。可併入當前所揭示的化合物中之同位素實例包括氫、碳、氮、氧、硫、磷、氟和氯之同位素，分別例如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。

醫學適應症

文中所述之

啶化合物和包含彼等之醫藥組成物可用於一患有例如高雪氏症之病患中治療，尤其是核上凝視麻痺之治療，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺、神經缺損，包括失智症和步態障礙。根據文中所述之方法所治 療對象包括脊椎動物，例如哺乳動物。在特定的實施例中，該哺乳動物為人類患者。

在一第一方面，本發明係於一有此需要之對象中提供用於治療或防止核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺的方法(方法1)，，該方法係包括投予該對象一有效量之如文中所述的

啶化合物，例如，根據式I之化合物或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75。亦提供如文中所述之

啶化合物，例如，根據式I之化合物或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75，於一有此需要之對象中供用於治療或防止核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺，例如，供用於方法1或任何1.1-1.62。進一步係提供如文中所述的

啶化合物，例如，根據式I之化合物或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物化合物1或1.1至1.75於製造醫藥品供在有此需要之對象中用於治療或防止核上凝視麻痺，包括水平和垂直眼瞬動凝視麻痺之方法中，例如製造供用於方法1或任何1.1-1.62中的醫藥品。

在方法1之特定進一步的具體實例中，本揭示文係提供：

1.1 方法1，其中該方法係包括投予該對象一有效量之根據式I之化合物或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或任何1.1至1.75；

1.2 方法1，其中該方法係包括投予該對象一有效量之化合物1或任何一或多種的化合物1.1至1.75；

1.3 方法1或任何1.1-1.2，其中該方法係包括投予該對象一有效量之包括根據式I之化合物或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或任何1.1至1.75的醫藥組成物；

1.4 方法1或任何1.1-1.2，其中該方法係包括投予該對象一有效量之包括化合物1或任何一或多種化合物1.1至1.75的醫藥組成物；

1.5 方法1.3或1.4，其中該醫藥組成物進一步係包括至少一種如文中所述之醫藥上可接受賦形劑；

1.6 方法1或任何1.1-1.5，其中該方法係包括投予一包含一有效量之化合物或一有效量之醫藥組成物的醫藥劑型；

1.7 方法1.6，其中該劑型為一口服劑型(例如，藥片、膠囊、橢圓形藥錠、錠劑、糖衣錠、散劑、顆粒、膜片、口含錠或液體)；

1.8 方法1.7，其中該劑型為可咀嚼錠劑；

1.9 方法1.6，其中該劑型為一腸道外劑型(例如，其中醫藥組成物係經調配供注射用)；

1.10 方法1.9，其中該注射為靜脈、肌肉內、鞘內或皮下注射，視需要為無菌注射；

1.11 方法1.6，其中該劑型為局部或直腸劑型；

1.12 方法1.6，其中該劑型鼻內劑(例如，氣霧劑)；

1.13 方法1或任何1.1至1.12，其中該方法進一步係包括同時投予一第二活性劑，例如，如文中所述，在有此需要的病患中能治療或防止核上凝視麻痺的第二化合物；

1.14 方法1.13，其中該第二活性劑係以如同

啶化合物之相同醫藥組成物或劑型來給藥；

1.15 方法1.13或1.14，其中該第二活性劑為一GCS抑制劑(例如，麥格司他或依利格魯司他)；

1.16 方法1或任何1.1-1.15，其中該對象為哺乳動物；

1.17 方法1.16，其中該對象為靈長類動物；

1.18 方法1.17，其中該對象為人類；

1.19 方法1或任何1.1-1.18，其中該核上凝視麻痺為共軛的凝視麻痺；

1.20 方法1或任何1.1-1.19，其中該核上凝視麻痺係包括水平眼瞬動凝視麻痺、垂直眼瞬動凝視麻痺、前庭眼反射障礙、定點凝視障礙、水平平稳追視退化及/或垂直平稳追視退化；

1.21 方法1或任何1.1-1.20，其中該核上凝視麻痺係包括水平眼瞬動凝視麻痺；

1.22 方法1或任何1.1-1.21，其中該核上凝視麻痺係包括垂直眼瞬動凝視麻痺；

1.23 方法1或任何1.1-1.22，其中該核上凝視麻痺為完全麻痺(例如，癱瘓)；

1.24 方法1或任何1.1-1.23，其中該對象係具有高雪氏症第3型；

1.25 方法1或任何1.1-1.24，其中該對象係具有尼曼匹克症C型；

1.26 方法1或任何1.1-1.24，其中該對象係具有GM2-神經節苷脂儲積症(例如戴薩克斯症(Tay Sachs disease)、山德霍夫症(Sandhoff disease)和AB變異GM2神經節苷脂儲積症)；

1.27 方法1或任何1.1-1.24，其中該對象經診斷係在基因GBA1中帶有突變；

1.28 方法1或任何1.1-1.24，其中該對象經診斷係在基因NPC1及/或NPC2中帶有突變；

1.29 方法1或任何1.1-1.24，其中該對象經診斷係在基因HEXA(編碼己醣胺酶A)中帶有突變；及/或在基因HEXB(編碼己醣胺酶B)中帶有突變及/或在基因GM2A中帶有突變(編碼GM2神經節苷脂活化蛋白)；

1.30 方法1或任何1.1-1.29，其中該對象經診斷係患有帕金森氏症；

1.31 方法1或任何1.1-1.30，其中該對象係經歷同時以酵素替代治療(ERT)，例如，使用葡萄糖腦苷脂酶(例如伊米苷酶(imiglucerase)、維拉苷酶(velaglucerase)或他利苷酶(taliglucerase))，視需要其中此酵素各自為重組的酵素；

1.32 方法1.31，其中該對象係經歷同時以一或多種伊米苷酶(imiglucerase)、維拉苷酶(例如維拉苷酶α(velaglucerase α))和利他苷酶(例如利他苷酶α (taliglucerase α))治療；

1.33 方法1.32，其中該對象係經歷同時以伊米苷酶治療；

1.34 方法1.33，其中該對象係經歷同時以每1至3週2.5單位/kg體重至80單位/kg體重之劑量的伊米苷酶治療，例如，每2週40至60單位/kg體重(1單位的伊米苷酶為在37℃每分鐘催化1微莫耳的合成基質p-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷水解之酵素量)；

1.35 方法1.34，其中該對象每次投予的伊米苷酶劑量(例如每1至3週，例如每2週)係在1-3小時的時間(例如1-2小時)以靜脈內(IV)輸注來給藥；

1.36 方法1或任何1.1-1.35，其中該對象在開始以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療前，已給予酵素替代治療(例如，伊米苷酶、維拉苷酶及/或利他苷酶)；

1.37 方法1.36，其中該對象在開始以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療前，已給予伊米苷酶治療至少6個月，例如至少12個月(1年)，或至少18個月，或至少2年，至少3年。

1.38 方法1.36或1.37，其中該對象在開始以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療前，已給予穩定劑量的伊米苷酶治療至少6個月；

1.39 方法1或任何1.1-1.38，其中該方法進一步係包括將該對象從ERT療法(例如伊米苷酶、維拉苷酶或他利苷酶)過渡至以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療的步驟；

1.40 方法1或任何1.1-1.39，其中該對象就女性係具有至少11g/dL及男性係具有至少12g/dL之血紅素量；

1.41 方法1或任何1.1-1.40，其中該對象係具有至少100,000位方毫米之血小板數；

1.42 方法1或任何1.1-1.41，其中該對象係具有少於正常10倍(MN)之脾體積及/或少於1.5MN的肝體積；

1.43 方法1或任何1.1-1.42，其中該對象經診斷係患有動眼失用症(oculomotor apraxia)，例如特徵為水平眼瞬動異常之動眼失用症；

1.44 方法1或任何1.1-1.43，其中該對象在開始以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療時為至少18歲(例如18-30歲)；

1.45 方法1或任何1.1-1.44，其中該對象係具有至少4.4-11.1ng/mL之腦脊液(CSF)中，及4.9-8.3μg/mL之血漿中葡萄糖神經醯胺(GL1)濃度；

1.46 方法1或任何1.1-1.45，其中該對象係具有20.1-67.6pg/mL之CSF中，及8.8-159.0ng/mL之血漿中葡萄糖基鞘氨醇(lyso-GL1)濃度；

1.47 方法1或任何1.1-1.46，其中該對象係投予每日劑量約1mg至約150mg的根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75)，例如，從5至50mg或從10至40mg或從10至30mg或從10至20mg或從20至30mg或從30至40mg或從40至50mg或從5至25mg或從20至50mg或從5至15mg或從15至30mg或約15mg或選自2、5、15、25、50、100或150mg；

1.48 方法1或任何1.1-1.47，其中該對象為成年人類病患，例如，年齡從18至80歲，例如，從18至60歲或從18至40歲或從18至30歲或從18至25歲；

1.49 方法1或任何1.1-1.47，其中該對象為人類兒科病患，例如，年齡從0至18歲，例如，從1至15歲或從1至5歲或從5至10歲或從10至15歲或從10 至18歲；

1.50 方法1或任何1.1-1.49，其中該方法係有效穩定核上凝視麻痺之進行，例如至少6個月，或至少9個月，或至少12個月；

1.51 方法1或任何1.1-1.49，其中該方法係有效逆轉核上凝視麻痺之進行，例如至少6個月，或至少9個月，或至少12個月；

1.52 方法1或任何1.1-1.51，其中該方法在治療6個月後造成CSF中及/或血漿中葡萄糖神經醯胺濃度下降至少30%，例如至少40%，至少50%，至少60%或至少70%；

1.53 方法1或任何1.1-1.52，其中該方法在治療6個月後造成CSF中及/或血漿中葡萄糖基鞘氨醇濃度增加至少30%，例如至少40%，至少50%，至少60%或至少70%；

1.54 方法1或任何1.1-1.53，其中該方法在治療6個月後使得神經疾病之修訂的嚴重度評分量表(mSST)數值在統計上或臨床上無變化；

1.55 方法1或任何1.1-1.54，其中根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75)或其醫藥上可接受鹽或前藥係藉由全身性給藥來投予，例如經由腸道外路徑或非腸道外路徑；

1.56 方法1.55，其中該給藥路徑為口服(經腸道)；

1.57 方法1.55，其中該給藥路徑為腸道外，例如，藉由注射，例如藉由靜脈注射；

1.58 方法1或任何1.1-1.57，其中該根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75)或其醫藥上可接受鹽或前藥，係藉由局部投予來給藥，例如，藉由局部給藥；

1.59 方法1或任何1.1-1.58，其中該化合物為(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯或

啶-3-基(2-(4'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)丙-2-基)胺甲 酸酯；

1.60 方法1.59，其中該化合物的劑量為口服給藥15mg/天；

1.61 方法1.60，其中該化合物的劑量為單一口服給劑15mg/天；

1.62 方法1或任何1.1-1.61，其中該對象係經投予單一每日劑量5mg、10mg、15mg或20mg的化合物，例如，(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯，視需要蘋果酸鹽之酸加成鹽的型式。

例如引起核上凝視麻痺的疾病和病症通常係與一或多項基因突變有關。在某些本揭示文的具體實例中，此對象為經診斷具有特定疾病或病症和亦經診斷具有特定基因突變，例如一已知為造成所論及之疾病或病症之成因的突變，雖然通常不能證明此特定病患的疾病或病症係由該位已診斷具有該特定的突變所致。如此方式所用，術語「經診斷具有一特定的基因突變」係指一對象或病患經例如，以DNA或RNA定序、蛋白圖譜分析或其他適合的方法檢測並發現具有所論及的突變。然而，如下文之進一步論述，許多的基因疾病和病症可能具有多重的基因成因(例如，突變)，且病患可能具有多重的突變，其各自在某些環境可能足以造成此疾病或病症，無須進行證明一特定突變造成了一特定病患中的特定疾病或病症。

根據方法1及其後的方法對於已診斷患有溶體儲積症，例如高雪氏症第3型或尼曼皮克症C型，但尚未經歷與此疾病狀態有關的眼部症狀之對象，可能為有利的。根據方法1及其後的方法對於處於發生溶體儲積症，例如高雪氏症第3型或尼曼皮克症C型之風險的對象，由於，例如已知造成此疾病的對象或對象的家族譜系中的突變，亦可能為有利的。因此，在本文中所述的方法之某些具體實例中，此對象係經診斷為處於發生該疾病或病症之風險，且該方法係防止或延遲在該對象中疾病或病症之眼部症狀(例如，核上凝視麻痺)的發作及/或發生。在某些具體實例中，該對象係憑藉具有如本文中所述的基因 中突變，經診斷係處於發生該疾病或症病之風險。

在第二方面，本發明係提供在有此需要之對象中用於治療或防止與溶體儲積症有關的認知功能不全及/或步態障礙，包括共濟失調(ataxia)之方法(方法4)，該方法包括投予該對象一有效量之如文中所述的

啶化合物，例如，根據式I之化合物或任何II-XII，Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75。亦提供如文中所述之

啶化合物，例如，根據式I之化合物或任何II-XII，Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75，在有此需要之對象中供用於治療或防止與溶體儲積症有關的認知功能不全及/或步態障礙，包括共濟失調(ataxia)之方法中，例如方法4或任何4.1-4.62。進一步係提供如文中所述之

啶化合物，例如，根據式I之化合物或任何II-XII，Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75，於製造醫藥品供在有此需要之對象中用於治療或防止與溶體儲積症有關的認知功能不全及/或步態障礙，包括共濟失調(ataxia)之方法中的用途，例如，製造醫藥品供用於方法4或任何4.1-4.62中。

在特定進一步的方法4之具體實例中，本揭示文係提供：

4.1 方法4，其中該方法係包括投予該對象一有效量之根據式I之化合物或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或任何1.1至1.75；

4.2 方法4，其中該方法係包括投予該對象一有效量之化合物1或任何一或多項的化合物1.1至1.75；

4.3 方法4或任何4.1-4.2，其中該方法係包括投予該對象一有效量之包括根據式I之化合物或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或任何1.1至1.75的醫藥組成物；

4.4 方法4或任何4.1-4.2，其中該方法係包括投予該對象一有效量之包括化合物1或任何一或多種化合物1.1至1.75的醫藥組成物；

4.5 方法4.3或4.4，其中該醫藥組成物進一步係包括至少一種如文中所述之醫藥上可接受賦形劑；

4.6 方法4或任何4.1-4.5，其中該方法係包括投予一包含一有效量之化合物或一有效量之醫藥組成物的醫藥劑型；

4.7 方法4.6，其中該劑型為一口服劑型(例如，藥片、膠囊、橢圓形藥錠、錠劑、糖衣錠、散劑、顆粒、膜片、口含錠或液體)；

4.8 方法4.7，其中該劑型為可咀嚼錠劑；

4.9 方法4.6，其中該劑型為一腸道外劑型(例如，其中醫藥組成物係經調配供注射用)；

4.10 方法4.9，其中該注射為靜脈內、肌肉內、鞘內或皮下注射，視需要為無菌注射；

4.11 方法4.6，其中該劑型為局部或直腸劑型；

4.12 方法4.6，其中該劑型鼻內劑(例如，氣霧劑)；

4.13 方法4或任何4.1至4.12，其中該方法進一步係包括同時投予一第二活性劑，例如，如文中所述，在有此需要的病患中能治療或防止認知功能不全及/或步態障礙的第二化合物；

4.14 方法4.13，其中該第二活性劑係以如同

啶化合物之相同醫藥組成物或劑型來給藥；

4.15 方法4.13或4.14，其中該第二活性劑為GCS抑制劑(例如，麥格司他或依利格魯司他)；

4.16 方法4或任何4.1-4.15，其中該對象為哺乳動物；

4.17 方法4.16，其中該對象為靈長類動物；

4.18 方法4.17，其中該對象為人類；

4.19 方法4或任何4.1-4.18，其中該共濟失調為小腦共濟失調；

4.20 方法4.19，其中該共濟失調係顯現由下列選出之症狀：步態不穩、衰弱、不協調、反應時間延遲、時間分辨障礙、發音困難、吞嚥障礙、辨距困難、辨距過小、伸展近度、輪替運動困難、語言不清、聲帶顫動、失調型呼吸、姿勢保持反射障礙及其組合，例如，其中主要的共濟失調缺陷為步態不穩；

4.21 方法4.19或4.20，其中該對象在根據本發法治療開始時，於共濟失調等級量表(SARA)上係具有至少0.5分的基線共濟失調得分，例如至少1分，或至少2分，或至少3分，或至少4分，或至少5分，或至少10分或至少20分的基線SARA得分；

4.22 方法4或任何4.1-4.21，其中認知功能不全為失智症；

4.23 方法4.22，其中該失智症係在下列顯現缺陷徵象：視覺搜尋速度、處理之掃描速度、心理彈性及/或執行功能，例如證據為TMT-A大於30秒，或大於45秒，或大於60秒及/或TMT-B大於70秒，或大於90秒，或大於120秒，或大於150秒，或大於180秒及/或其中TMT-B減去TMT-A係大於40秒，或大於60秒，或大於90秒，或大於120秒；

4.24 方法4或任何4.4-4.23，其中該對象係具有高雪氏症第3型；

4.25 方法4或任何4.1-4.24，其中該對象係具有尼曼皮克症C型；

4.26 方法4或任何4.1-4.24，其中該對象係具有GM2-神經節苷脂儲積症(例如戴薩克斯症、山德霍夫症和AB變異GM2神經節苷脂儲積症)；

4.27 方法4或任何4.1-4.24，其中對象經診斷係在基因GBA1中帶有突變；

4.28 方法4或任何4.1-4.24，其中對象經診斷係在基因NPC1及/或NPC2中帶有突變；

4.29 方法4或任何4.1-4.24，其中該對象經診斷係在基因HEXA(編碼己醣胺酶A)中帶有突變；及/或在基因HEXB(編碼己醣胺酶B)中帶有突變及/或在基因GM2A(編碼GM2神經節苷脂活化蛋白)中帶有突變；

4.30 方法4或任何4.1-4.29，其中該對象經診斷係患有帕金森氏症；

4.31 方法4或任何4.1-4.30，其中該對象係經歷同時以酵素替代治療(ERT)，例如，使用葡萄糖腦苷脂酶(例如伊米苷酶(imiglucerase)、維拉苷酶或他利苷酶)，視需要其中此酵素各自為重組的酵素；

4.32 方法4.31，其中係經歷同時以一或多種伊米苷酶(imiglucerase)、維拉苷酶(例如維拉苷酶α)和他利苷酶(例如他利苷酶α)治療；

4.33 方法4.32，其中該對象係經歷同時以伊米苷酶治療；

4.34 方法4.33，其中該對象係經歷同時以每1至3週2.5單位/kg體重至80單位/kg體重之劑量的伊米苷酶治療，例如，每2週40至60單位/kg體重(1單位的伊米苷酶為在37℃每分鐘催化1微莫耳的合成基質p-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷水解之酵素量)；

4.35 方法4.34，其中該對象每次投予的伊米苷酶劑量(例如每1至3週，例如每2週)係在1-3小時的時間(例如1-2小時)以靜脈內(IV)輸注來給藥；

4.36 方法4或任何4.1-4.35，其中該對象在開始以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療前，已給予酵素替代治療(例如，伊米苷酶、維拉苷酶及/或他利苷酶)；

4.37 方法4.36，其中該對象在開始以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療前，已給予伊米苷酶治療至少6個月，例如至少12個月(1年)，或至少18個月，或至少2年，至少3年。

4.38 方法4.36或4.37，其中該對象在開始以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療前，已給予穩定劑量的伊米苷酶治療至少6個月；

4.39 方法4或任何4.1-4.38，其中該方法進一步係包括將該對象從ERT療法(例如伊米苷酶、維拉苷酶或他利苷酶)過渡至以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療的步驟；

4.40 方法4或任何4.1-4.39，其中該對象就女性係具有至少11g/dL及男性係具有至少12g/dL之血紅素量；

4.41 方法4或任何4.1-4.40，其中該對象係具有至少100,000/立方毫米之血小板數；

4.42 方法1或任何1.1-1.41，其中該對象係具有少於正常10倍(MN)之脾體積及/或少於1.5 MN的肝體積；

4.43 方法4或任何4.1-4.42，其中該對象經診斷係患有失智症，例如阿茲海默症或帕金森氏症；

4.44 方法4或任何4.1-4.43，其中該對象在開始以根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb，或任何化合物1或1.1至1.75)治療時為至少18歲(例如18-30歲)；

4.45 方法4或任何4.1-4.44，其中該對象係具有至少4.4-11.1ng/mL之腦脊液(CSF)中，及4.9-8.3μg/mL之血漿中葡萄糖神經醯胺(GL1)濃度；

4.46 方法4或任何4.1-4.45，其中該對象係具有20.1-67.6pg/mL之CSF中，及8.8-159.0ng/mL之血漿中葡萄糖基鞘氨醇(lyso-GL1)濃度；

4.47 方法4或任何4.1-4.46，其中該對象係投予每日劑量約1mg至約150mg的根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75)，例如，從5至50mg或從10至40mg或從10至30mg或從10至20mg或從20至30mg或從30至40mg或從40至50mg或從5至25mg或從20至50mg或從5至15mg或從15至30mg或約15mg或選自2、5、15、25、50、100或150mg；

4.48 方法4或任何4.1-4.47，其中該對象為成年人類病患，例如，年齡從18至80歲，例如，從18至60歲或從18至40歲或從18至30歲或從18至25歲；

4.49 方法4或任何4.1-4.47，其中該對象為人類兒科病患，例如，年齡從0至18歲，例如，從1至15歲或從1至5歲或從5至10歲或從10至15歲或從10至18歲；

4.50 方法4或任何4.1-4.49，其中該方法係有效提供降低SARA共濟失調評分至少0.5分，例如降低至少1分，或至少2分，或至少3分，或至少5分，或至少10分的SARA得分；或其中該方法係有效將SARA得分下降至0.00和3.00之間，或0.00和2.00之間，或0.00和1.50之間，或0.00和1.00之間，或0.00和0.50之間。

4.51 方法4或任何4.1-4.50，其中該方法係有效改善認知能力或降低認知障礙，例如，測量完成軌跡追蹤測驗(TMT)，TMT-A及/或TMT-B所花費的時間下降，TMT-A時間和TMT-B時間的時間差下降(TMT-A-TMT-B)，例如下降至少10%，或至少20%，或至少30%，或至少40%，或至少50%(例如，其中TMT-A下降5-20%，及/或TMT-B下降25-30%，及/或TMT-A-TMT-B]下降25-30%)，

4.52 方法4或任何4.1-4.51，其中該方法在治療6個月後造成CSF中及/或血漿中葡萄糖神經醯胺濃度下降至少30%，例如至少40%，至少50%，至少60%或至少70%；

4.53 方法4或任何4.1-4.52，其中該方法在治療6個月後造成CSF中及/或血漿中葡萄糖基鞘氨醇濃度增加至少30%，例如至少40%，至少50%，至少60%或至少70%；

4.54 方法4或任何4.1-4.53，其中該方法在治療6個月後使得神經疾病之修訂的嚴重度評分量表(mSST)數值在統計上或臨床上無變化；

4.55 方法4或任何4.1-4.54，其中根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75)或其醫藥上可接受鹽或前藥係藉由全身性給藥來投予，例如經由腸道外路徑或非腸道外路徑；

4.56 方法4.55，其中該給藥路徑為口服(經腸道)；

4.57 方法4.55，其中該給藥路徑為腸道外，例如，藉由注射，例如藉由靜脈注射；

4.58 方法4或任何4.1-4.57，其中該根據式I之化合物(或任何II-XII、Ia-XIIa或Ib-XIIb或任何化合物1或1.1至1.75)或其醫藥上可接受鹽或前藥，係藉由局部投予來給藥，例如，藉由局部給藥；

4.59 方法4或任何4.1-4.58，其中該化合物為(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑 -4-基)丙-2-基)胺甲酸酯或

啶-3-基(2-(4'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)丙-2-基)胺甲 酸酯；

4.60 方法4.59，其中該化合物的劑量為口服給藥15mg/天；

4.61 方法4.60，其中該化合物的劑量為單一口服給劑15mg/天；

4.62 方法4或任何4.1-4.61，其中該對象係經投予單一每日劑量5mg、10mg、15mg或20mg的化合物，例如，(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯，視需要為蘋果酸加成鹽形式。

在某些本揭示文的具體實例中，此對象為經診斷具有特定疾病或病症和亦經診斷具有特定基因突變，例如一已知為造成所論及之疾病或病症之成因的突變，雖然通常不能證明此特定病患的疾病或病症係由該位已診斷具有該特定的突變所致。如此方式所用，術語「經診斷具有一特定的基因突變」係指一對象或病患經例如，以DNA或RNA定序、蛋白圖譜分析或其他適合的方 法檢測並發現具有所論及的突變。然而，如下文之進一步論述，許多的基因疾病和病症可能具有多重的基因成因(例如，突變)，且病患可能具有多重的突變，其各自在某些環境可能足以造成此疾病或病症，無須進行證明一特定突變造成了一特定病患中的特定疾病或病症。

根據方法4及其後的方法對於已診斷患有溶體儲積症，例如高雪氏症第3型或尼曼皮克症C型，但尚未經歷與此疾病狀態有關的認知及/或共濟失調症狀之對象，可能為有利的。根據方法4及其後的方法對於處於發生溶體儲積症，例如高雪氏症第3型或尼曼皮克症C型之風險的對象，由於，例如已知造成此疾病的對象或對象的家族譜系中的突變，亦可能為有利的。因此，在某些文中所述的方法之具體實例中，此對象係經診斷為處於發生該疾病或病症之風險，且該方法係防止或延遲在該對象中疾病或病症之認知及/或共濟失調症狀(例如，核上凝視麻痺)的發作及/或發生。在某些具體實例中，該對象係憑藉具有如文中所述的基因中突變，經診斷係處於發生該疾病或症病之風險。

醫藥組成物

本揭示文亦提供包括至少一種如文中所述之

啶化合物和至少一種醫藥上可接受賦形劑之醫藥組成物，例如供用於根據文中所揭示的方法中。醫藥上可接受賦形劑可為任何本項技術中已知的此賦形劑，包括該等描述於，例如Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)中的賦形劑。當前所揭示的化合物之醫藥組成物可藉由本項技術中已知的習用方法來製備，包括例如，將至少一種當前所揭示的化合物與一醫藥上可接受賦形劑混合。

因此，在一方面，本揭示文係提供包括如文中所述之

啶化合物及醫藥上可接受賦形劑之醫藥劑型，其中該劑型係經調配，當給藥時(例如當口服給藥時)用以提供一係足以治療如文中所述的疾病或病症的定量該化合物(例 如，以任何方法1及其後的方法或方法4及其後的方法)。

本發明之醫藥組成物或劑型可包括一藥劑和另外的載劑，例如惰性或活性的化合物或組成物，例如可偵測劑、標定劑、輔助劑、稀釋劑、結著劑、安定劑、緩衝劑、鹽類、親脂性溶劑、防腐劑、佐劑等。載劑亦包括醫藥賦形劑和添加劑，例如蛋白質、胜肽、胺基酸、脂質和碳水化合物(例如糖類，包括單糖、雙糖、三糖、四糖和寡糖；衍生的糖類，例如醛糖醇、醛糖酸，酯化糖類等；及多糖類或糖聚合物)，其可單獨或組合存在，包括單獨或1至99.99%重量比或體積比之組合。示例的蛋白質賦形劑包括血清白蛋白，例如人類血清白蛋白(HSA)、重組的人類白蛋白(rHA)、明膠、酪蛋白等。亦可能具緩衝能力作用之代表性胺基酸/抗體組份包括丙胺酸、甘胺酸、精胺酸、甜菜鹼、組胺酸、麩胺酸、天門冬胺酸、半胱胺酸、離胺酸、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、阿斯巴甜等。碳水化合物賦形劑亦希望在本發明之範圍內，其實例包括但不限於單糖例如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、核糖等；雙糖，例如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖等；多糖類，例如棉子糖、松三糖、麥芽糊精、葡聚糖、澱粉等；及醛糖醇，例如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、山梨糖醇(葡萄糖醇)和肌醇。

可使用的載劑包括緩衝劑或pH調節劑；典型地，緩衝劑為一從有機酸或鹼所製備的鹽。代表性的緩衝劑包括有機酸鹽類，例如檸檬酸、抗壞血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或酞酸之鹽類；Tris、胺丁三醇(tromethamine)鹽酸鹽或磷酸鹽緩衝劑。另外的載劑包括聚合性賦形劑/添加劑，例如聚乙烯吡咯酮、ficolls(一種聚合糖)、葡聚糖(dextrates)(例如環狀糊精，例如2-羥丙基-β-環狀糊精)、聚乙二醇、調味劑、抗微生物劑、甜味劑、抗氧化劑、抗靜電劑、界面活性劑(例如聚山梨醇酯，如「TWEEN 20」和「TWEEN 80」)、脂質(例如磷脂質、脂肪酸)、類固醇(例如膽固醇)及螯合劑(例如EDTA)。

本揭示文亦提供醫藥組成物，及包括該組成物之套組，其係含有至少一種如文中所述之

啶化合物及至少一種另外的醫藥活性劑。這些醫藥組成物和套組可經調整而得以同時、先後及/或分開投予此

啶化合物和另外的活性劑。例如，此

啶化合物和另外的活性劑可調配成分開的劑型，例如分開的錠劑、膠囊、凍乾物或液體，或其可調配於相同的劑型中，例如相同的錠劑、膠囊、凍乾物或液體中。當此

啶化合物和另外的活性劑係調配於相同的劑型中時，此

啶化合物和另外的活性劑可實質上混合於錠劑的錠心內，或其可實質上存在此劑型的分散區中，例如相同錠劑的不同層。在一具體實例中，此醫藥劑型係包括另一種藥劑，其例如在患有、經診斷有或易罹患溶體儲積症，例如高雪氏症第3型或尼曼匹克症C型或疼痛的患者中，例如，在患有、經診斷有或易罹患溶體儲積症，例如如本文中所述之法布瑞氏症中係能治療或防止核上凝視麻痺。

在另一方面，本揭示文係提供一醫藥組成物，其係包括：(i)如文中所述之

啶化合物；(ii)另一種活性劑；及(iii)醫藥上可接受賦形劑。在一具體實例中，此另外的活性劑為例如，在患有、經診斷有或易罹患溶體儲積症，例如如文中所述高雪氏症第3型或尼曼匹克症C型之病患中，能治療或防止核上凝視麻痺、步態障礙或認知功能不全(例如，失智症)之藥劑。

當前所揭示的

啶化合物及醫藥組成物可用於動物或人類。因此，當前所揭示的化合物可調配成醫藥組成物供口服、頰內、腸道外(例如靜脈內、肌肉內或皮下)、局部、直腸或鼻內給藥或為適合以吸入或吹入給藥之形式。在特定的具體實例中，此

啶化合物或醫藥組成物係經調配供全身性給藥，例如經由非腸道外路徑。在一具體實例中，此

啶化合物或醫藥組成物係經調配供口服給藥，例如固體形式。此等給藥模式和製備適當醫藥組成物之方法已有描述，例如在Gibaldi’s Drug Delivery Systems in Pharmaceutical Care(1st ed., American Society of Health-System Pharmacists 2007)中。

醫藥組成物可使用，例如提供所欲釋放樣貌之不同比例的羥基丙基甲基纖維素，其他聚合物基質、微脂體及/或微球體調配，而得以提供緩慢、延長或控制釋放其中的活性成份。醫藥組成物亦可視需要含有失透劑並可為僅釋放此活性成份，或較佳地在胃腸道的特定部份，視需要以延遲的方式，例如藉由使用腸膜衣之組成物。包埋組成物之實例包括聚合物質和蠟。活性成份亦可為微膠化形式，若適當，具有一或多種本項技術熟知的醫藥上可接受載劑、賦形劑或稀釋劑(參見，例如Remington’s)。根據本項技術之一般技術者所熟知的方法，當前所揭示的化合物可經調配供持續遞送。此等調配物之實例可參見美國專利3,119,742；3,492,397；3,538,214；4,060,598；和4,173,626。

在口服給藥的固體劑型中(例如膠囊、錠劑、藥片、糖衣錠、散劑、顆粒等)，活性成份係與一或多種醫藥上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑混合，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，及/或任何下列物質：(1)填充劑或增量劑，例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、微晶纖維素、磷酸鈣及/或矽酸；(2)結著劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、明膠化玉米澱粉、聚乙烯吡咯酮、羥丙基甲基纖維素、蔗糖及/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，例如甘油；(4)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、甘醇酸澱粉鈉、馬鈴薯或樹薯澱粉、海藻酸、特定的矽酸鹽和碳酸鈉；(5)溶液阻滯劑，例如石蠟；(6)吸收加速劑，例如四級銨化合物；(7)濕化劑，例如月桂基磷酸鈉、乙醯醇和甘油單硬脂酸酯；(8)吸附劑，例如高嶺土和膨潤土；(9)潤滑劑，例如滑石、氧化矽、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物；和(10)調色劑。在膠囊、錠劑和藥片的情況下，醫藥組成物亦可包括緩衝劑。類似形式的固體組成物亦可使用軟式和硬式-填充明膠膠囊之填充劑，及賦形劑例如乳糖以及高分子量聚乙二醇等來製備。

錠劑可藉由壓製或模鑄來製造，視需要帶有一或多種附屬成份。壓製錠劑可使用結著劑(例如明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如甘醇酸澱粉鈉或交鏈羧甲基纖維素鈉)、界面活性劑及/或分散劑來製備。模鑄錠劑可藉由以一適合的機器將濕化的粉末活性成份與惰性液體稀釋劑之混合物塑模來製造。此等錠劑和其他固體劑型，例如糖衣錠、膠囊、藥片和顆粒，可視需要刻痕或帶有膜衣和外殼，例如腸衣和本項技術中熟知的其他膜衣來製備。

在具體實例中，醫藥組成物係以液體形式口服給藥。供活性成份口服給藥之液體劑型包括醫藥上可接受乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。口服給藥之液體製備物可以乾燥產物呈現供使用前以水或適合的媒劑重建。除了活性成份外，液體劑型可含有本項技術中常用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑、安定劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲基酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油類(例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和山梨醇酐之脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀釋劑之外，液體醫藥組成物可包括輔助劑，例如濕潤劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、調味劑、色劑、香料和防腐劑等。懸浮液，除了活性成份之外可含有懸浮劑，例如(但不限於)乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨醇酐酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂和黃蓍膠及其混合物。適合的液體製備物可藉由習用的方法以醫藥上可接受添加劑來製備，例如懸浮劑(例如山梨醇糖漿、甲基纖維素或氫化食用油脂)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；非水性媒劑(例如杏仁油、油性酯類或乙醇)；及/或防腐劑(例如對-羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。活性成份亦可以大丸劑、舐劑或糊劑來給藥。

就頰內給藥，此組成物可採以習用方法調配的錠劑或口含錠之形式。

在具體實例中，醫藥組成物係以非口服的方式給藥，例如以局部塗覆、經皮塗覆、注射等。在相關的具體實例中，此等醫藥組成物係藉由注射、輸注或植入(例如靜脈內、肌肉內、動脈內、皮下等)以非腸道外給藥。

當前所揭示的化合物可經調配供藉由注射以腸道外給藥，包括使用習用的導管技術或輸注。注射用之調配物可以單位劑型呈現，例如以帶有添加防腐劑的安瓶或以多劑量容器。組成物可採諸如懸浮液、溶液或溶於油性或水性媒劑之乳液的形式，且可含有一調配劑，例如熟習本項技術者已知的懸浮劑、安定劑及/或分散劑。另一種選擇，活性成份可為散劑形式供使用前以適合的媒劑例如無菌無熱源的水重建。

醫藥組成物可直接投予中樞神經系統。因此，在特定的具體實例中，此等組成物係直接投予中樞神經系統以避開血腦屏障。在某些具體實例中，此組成物可經由直接脊椎注射來給藥。在具體實例中，此組成物係藉由脊椎內注射來給藥。在某些具體實例中，此組成物係藉由側腦室內注射來給藥。在具體實例中，此組成物係投予至大腦側室。在具體實例中，此組成物係投予至二個大腦側室。在另外的具體實例中，此組成物係經由海馬迴內注射來給藥。此等組成物可以一次注射或以多次注射來給藥。在其他的具體實例中，此組成物係投予一個以上的位置(例如中樞神經系統中的二個位置)。

此等醫藥組成物可為無菌注射液形式。此等醫藥組成物可藉由，例如經由細菌截留過濾器過濾，或藉由在使用前可立即溶於無菌水或某些其他無菌可注射媒劑之無菌固體組成物形式中併入殺菌劑，來殺菌。就製備此一組成物，係將活性成份溶於或懸浮於腸道外可接受的液體媒劑中。示例的媒劑和溶劑包括(但不限於)水、藉由加入適量的鹽酸、氫氧化鈉或適合的緩衝劑調整至 適合pH的水、1,3-丁二醇、林格氏液和等張氯化鈉溶液。此醫藥組成物亦可含有一或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸甲酯、乙酯或正丙酯。就改善溶解度，可加入助溶劑或增溶劑，或此溶劑可含10-60% w/w的丙二醇或類似物。

醫藥組成物可含有一或多種醫藥上可接受無菌等張水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液或可在使用前重建成無菌可注射溶液或分散液之無菌散劑。此等醫藥組成物可含有抗氧化劑；緩衝劑；抑菌劑；可幫助調配物與希望接受者之血液等張的溶質；懸浮劑；增稠劑；防腐劑等。

可用於本發明醫藥組成物中之適合的水性和非水性載劑包括水、乙醇、多醇類(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其適合的混合物、植物油，例如橄欖油和可注射有機酯類，例如油酸乙酯。例如，可藉由使用塗膜物質，例如卵磷脂，就分散液的情況係藉由維持所需的顆粒大小，及藉由使用界面活性劑，保持適當的流動性。在某些具體實例中，為了延長活性成份的效用，係希望延緩化合物從皮下或肌肉內注射之吸收。此項可藉由使用水溶性差的晶體或非晶物質之液體懸浮液來達成。活性成份的吸收率則係依照其溶解率而定，其因而可依照晶體大小和晶型而定。另一種選擇，延長腸道外給藥的活性成份之吸收係藉由將化合物溶解或懸浮於油媒劑中來達成。此外，延長可注射醫藥形式之吸收可藉由納入延遲吸收的試劑，例如單硬脂酸鋁和明膠來進行。

控制釋放的腸道外組成物可為水性懸浮液、微球體、微膠囊、磁性微球體、油溶液、油懸浮液、乳液之形式，或此活性成份可併入生物相容的載劑、微脂體、奈米粒子、植入或輸注裝置。用於製備微球體及/或微膠囊之物質包括(但不限於)生物可降解的/生物蝕解的聚合物，例如聚乳糖(polyglactin)、聚-(異丁基氰基丙烯酸酯)、聚(2-羥乙基-L-麩醯胺酸)及聚(乳酸)。當調配一控制釋放腸道外調配物時，可使用的生物相容載劑包括碳水化合物例如葡聚醣，蛋白例如白蛋白、脂蛋白或抗體。用於植入物的物質可為非生物降解性的，例如 聚二甲基矽氧烷，或生物可降解的例如聚(己內酯)、聚(乳酸)、聚(甘醇酸)或聚(原酸酯)。

就局部給藥，當前所揭示的化合物可調配成軟膏或乳霜。當前所揭示的化合物亦可調配在直腸組成物中，例如栓劑或保留灌腸，例如含有習用栓劑基底如可可脂或其他甘油酯。

就鼻內給藥或以吸入給藥，當前所揭示的化合物可方便地以溶液或懸浮液的形式由病患擠壓或抽吸幫浦噴霧容器，或為加壓容器或霧化器之氣霧噴霧呈現，以使用適合的推進劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合的氣體來遞送。就加壓氣霧之情況，此劑型可藉由提供一遞送計量的閥來測量。加壓容器或霧化器可含有當前所揭示的化合物之溶液或懸浮液。用於吸入器或吹入器中的膠囊和卡匣(例如以明膠所製)可經調配含有當前所揭示的化合物和適合的散劑基底例如乳糖或澱粉之粉末混合物。

一般而言，文中所述的藥劑和組成物係以一有效量或足以在一有此需要的對象中治療或防止核上凝視麻痺之量來給藥。典型地，此劑量可在以例如年齡、身體狀況、體重、性別、飲食、給藥時間和其他臨床因素為基礎之範圍內調整。決定一有效量係完全在熟習本項技術者之能力範圍內。

文中已大體上描述，提供下列非限定實例用以進一步說明本發明。

實例

用於化學合成之通用製程

通用製程A：以三光氣形成胺甲酸酯

於胺鹽酸鹽(1當量)和三乙胺(3-4當量)溶於THF之懸浮液中(濃度~0.2M)於室溫加入三光氣(0.35當量)。將反應混合物攪拌10min並加入小量的醚(1-2mL)。將三乙銨鹽過濾出，得到異氰酸酯溶於THF/醚之澄清溶液。

於醇(1.5當量)溶於THF之溶液中(濃度~0.2M)於室溫加入NaH[60%，油](1.5當量)。將反應混合物攪拌15min並逐滴加入上述溶液(異氰酸酯溶於THF/醚)。以一標準的後處理，用鹽水中止反應。以EtOAc萃取溶液並將有機層以Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮。於組合快速層析上(combiflash)將粗物質純化(SiO₂濾心，CHCl₃和2N NH₃之MeOH溶液)，得到對應的胺甲酸酯。

通用製程B：以有機鈰烷化

將CeCl₃(4當量)溶於THF之懸浮液(濃度~0.2M)於室溫攪拌1h。將懸浮液冷卻至-78℃並逐滴加入MeLi/醚[1.6M](4當量)。讓有機鈰複合物形成歷時1h的時間並逐滴加入腈(1當量)溶於THF之溶液(濃度2.0M)。讓反應混合物升至室溫並攪拌18h。讓溶液冷卻至0℃並以水(~1mL)中止反應，接著加入50%氫氧化銨水溶液(~3mL)，直到沉澱形成及沉降在燒瓶底部。將混合物經由一矽藻土墊過濾並濃縮。以HCl/二

烷之溶液[4.0M]處理此粗物質。將中間物芳基丙-2-胺鹽酸鹽以醚濕磨並直接用於下個步驟。另一種選擇，將粗的游離鹼胺於組合快速層析上純化(SiO₂濾心，CHCl₃和2N NH₃之MeOH溶液)，得到對應的芳基丙基胺。

通用製程C：鈴木偶合

於芳基鹵化物(1當量)溶於DME/水[4：1]混合物之溶液中(濃度~0.2M)加入硼酸(2當量)、鈀催化劑(0.1-0.25當量)和碳酸鈉(2當量)。將反應混合物於150℃微波25min。經由一矽藻土塞過濾及濃縮後，將粗產物於組合快速層析上純化(SiO₂濾心，CHCl₃和2N NH₃之MeOH溶液)，得到對應的偶合加合物。

另一種選擇：於芳基鹵化物(1當量)溶於甲苯/水[20：1]混合物之溶液中(濃度~0.2M)加入硼酸(1.3-2.5當量)、鈀催化劑(0.05-0.15當量)、三環己基膦(0.15-0.45當量)和磷酸鉀(5當量)。將反應混合物於150℃微波25min。經由 一矽藻土塞過濾及濃縮後，將粗產物於組合快速層析上純化(SiO₂濾心，CHCl₃和2N NH₃之MeOH溶液)，得到對應的偶合加合物。

通用製程D：環丙基化

於-70℃下攪拌中的芳基腈(1當量)和Ti(Oi-Pr)₄(1.7當量)之混合物中逐滴加入EtMgBr[3.0M之醚溶液](1.1當量)。讓反應混合物升溫至25℃並攪拌1h。於上述混合物中於25℃逐滴加入BF₃．Et₂0(3當量)。添加後，將混合物另再攪拌2h，及然後以HCI水溶液[2M]中止反應。然後將生成的溶液藉由加入NaOH水溶液[2M]鹼化。以乙醚萃取有機物質。將有機層組合，以Na₂SO₄乾燥，過濾及濃縮。將粗物質藉由矽膠管柱層析純化(以石油醚/EtOAc：10/1至1/1溶析)，得到對應的1-芳基-環丙胺。

通用製程E：使用鈴木條件之二芳基偶合

於一經攪拌的芳基鹵化物組分(1當量)溶於5：1(v/v)二

烷/水(~0.15M)或5：1(v/v)N,N-二甲基甲醯胺(~0.15M)之溶液中加入芳基硼酸酯或芳基硼酸組份(1-1.5當量)、碳酸鈉(2-3當量)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)(0.05當量)。將混合物加熱(90℃)至隔夜及然後經由一矽藻土塞過濾。以乙酸乙酯沖洗矽藻土並將組合的濾液以鹽水沖洗、乾燥(Na₂SO₄)和濃縮。將殘餘物以快速層析於矽膠上純化。

通用製程F：使用經由一混合的酸酐/庫爾提斯重排路徑(Curtius Rearrangement route)所產生的異氰酸酯形成胺甲酸酯

於一經攪拌的羧酸組份(1當量)溶於四氫呋喃之溶液中(~0.1M)加入三乙胺(2當量)。將反應冷卻(0℃)並以氯甲酸異丁酯(1.5當量)處理。於0℃、1小時後，加入疊氮鈉(2當量)之水溶液(~1M)並讓反應升溫至室溫。攪拌至隔夜後，將反應以水稀釋並以乙酸乙酯萃取。將組合的萃取液以碳酸氫鈉水溶液和鹽水清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將粗的醯疊氮進一步經由與甲苯共蒸發加以乾 燥，及然後以甲苯(~0.1M)處理。將經攪拌的溶液回流2-2.5小時，冷卻及以醇組份(1.25-2當量)處理。將反應加熱回流至隔夜及然後濃縮。將殘餘物以乙酸乙酯或氯仿處理並以碳酸鈉水溶液清洗、乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將粗產物以快速層析於矽膠上使用氯仿/甲醇(較低極性胺甲酸酯)或氯仿/甲醇/氨(較高極性胺甲酸酯)溶劑梯度純化

實例1：合成

啶化合物

1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基[2-(4'-氟聯苯-3-基)丙-2-基]胺甲酸酯(化合物1)

使用通用製程C、1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基[2-(3-溴苯基)丙-2-基]胺甲酸酯(600mg,1.63mmol)、4-氟苯基硼酸(457mg,3.27mmol)和乙酸鈀(II)，得到標題化合物為白色固體(373mg；60%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.56(s,IH),7.52(dd,J=5.4,8.4Hz,2H),7.42-7.38(m,3H),7.12(m,2H),5.18(5,1H),4.62(s,1H),2.66(m,6H),1.72(s,6H),2.01-0.83(m,5H)ppm.¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ 125.0,124.0,123.8,116.0,116.0,71.3,55.9,55.5,47.6,46.7,29.6,25.6,24.8,19.8ppm.純度：98.0% UPLCMS(210nm)；滯留時間0.95min；(M+1)382.9.C₂₃H₂₇FN₂O₂．0.37(CHCl₃)之分析理論值：C,65.86；H,6.47；N,6.57.實測值：C,65.85；H,6.69；N,6.49.

(S)-

啶-3-基2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基胺甲酸酯(化合物2)

於經攪拌的4-氟硫代苯甲醯胺(8.94g,57.6mmol)溶於乙醇(70mL)之溶液中加入4-氯乙醯基乙酸乙酯(7.8mL,58mmol)。將反應加熱回流4小時，以另外一等份的4-氯乙醯基乙酸乙酯(1.0mL,7.4mmol)處理並另再回流3.5小時。然後將反應濃縮並將殘餘物置於乙酸乙酯(200mL)和NaHCO₃水溶液(200mL)之間分溶。將有機層與水層的反萃取液(乙酸乙酯，1 x 75mL)組合，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將生成的琥珀色油狀物藉由快速層析使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)乙酸乙酯，為低熔點、近乎無色的固體(13.58g, 89%)。

於經攪拌的2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)乙酸乙酯(6.28g,23.7mmol)溶於DMF(50mL)之溶液中加入氫化鈉[60%礦物油懸浮液](2.84g,71.0mmol)。將起泡沫的混合物攪拌15分鐘，之後於冰浴上冷卻並加入碘甲烷(4.4mL,71mmol)。將反應攪拌至隔夜，讓冷卻浴緩慢升溫至室溫。然後將混合物濃縮並將殘餘物置於乙酸乙酯(80mL)和水(200mL)之間分溶。以第二份的水(1 x 200mL)清洗有機層，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將生成的琥珀色油狀物藉由快速層析使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸乙酯為無色油狀物(4.57g,66%)。

於經攪拌的2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸乙酯(4.56g,15.5mmol)溶於1：1：1 THF/乙醇/水(45mL)之溶液中加入氫氧化鋰單水合物(2.93g,69.8mmol)。將反應攪拌至隔夜，濃縮並再溶於水(175mL)。以乙醚(1 x 100mL)清洗溶液，藉由加入1.0N HCl(80mL)的酸化，並以乙酸乙酯(2 x 70mL)萃取。將組合的萃取液乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸為白色固體(4.04g,98%)。將此物質用於下個步驟無純化。

於經攪拌和冷卻(0℃)的2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸(4.02g,15.2mmol)溶於THF(100mL)之溶液中加入三甲基胺(4.2mL,30mmol)，接著加入氯甲酸異丁酯(3.0mL,23mmol)。將反應另再冷攪拌1小時，之後加入疊氮鈉(1.98g,30.5mmol)之水中溶液(20mL)。將反應攪拌至隔夜，讓冷卻浴緩慢地升溫至室溫。然後將混合物以水(100mL)稀釋並以乙酸乙酯(2 x 60mL)萃取。將組合的萃取物以NaHCO₃水溶液(1 x 150mL)和鹽水(1 x 100mL)清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。與甲苯(2 x 50mL)共蒸發後，將生成的白色固體置於甲苯(100mL)中處理並再回流4小時。然後加入(S)-3-

啶醇(3.87g,30.4mmol)並持續回流至隔夜。將反應濃縮並將殘餘物置於乙酸乙酯(100mL)和NaHCO₃水溶液(150 mL)之間分溶。以水(1 x 150mL)清洗有機層，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將生成的灰白色固體藉由快速層析使用氯仿/甲醇/氨梯度純化，得到標題化合物為白色固體(4.34g,73%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.96-7.88(m,2H),7.16-7.04(m,3H),5.55(br s,1H),4.69-4.62(m,1H),3.24-3.11(m,1H),3.00-2.50(m,5H),2.01-1.26(m,11H)ppm.¹³C NMR(400MHz,CDCl₃)δ 166.4,165.1,163.8(d,J=250.3Hz),162.9,155.0,130.1(d,J=3.3Hz),128.4(d,J=8.5Hz),115.9(d,J=22.3Hz),112.5,71.2,55.7,54.2,47.5,46.5,28.0,25.5,24.7,19.6ppm.純度：100% UPLCMS(210nm & 254nm)；滯留時間0.83min；(M+1)390.

(S)-

啶-3-基(2-(4'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物3)

使用通用製程E和反應投入物2-(4-溴苯基)-2-甲基丙酸乙酯及4-(2-甲氧基乙氧基)苯基硼酸，製備2-(4'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸乙酯為灰白色固體。於一經攪拌的此化合物(3.01g,8.78mmol)溶於1：1：1(v/v/v)四氫呋喃/乙醇/水(45mL)之溶液中加入氫氧化鋰單水合物(1.47g,61.4mmol)。將混合物加熱回流至隔夜及然後濃縮。將殘餘物溶於水，以1N鹽酸(65mL)處理並以乙酸乙酯萃取。將組合的有機層以鹽水清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到2-(4'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸為白色固體(2.75g,100%)。根據通用製程F將此中間物和(S)-

啶-3-醇反應，產生標題化合物為無色玻璃狀固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.62-7.29(m,7H),7.01(d,J=8.9Hz,2H),4.47-4.37(m,1H),4.17-4.08(m,2H),3.72-3.62(m,2H),3.32(s,3H),3.09-2.25(m,6H),2.05-1.18(m,11H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d ₆ )δ 157.9,154.5,146.7,137.4,132.5,127.5,125.7,125.2,114.8,70.4,70.0,66.9,58.2,55.4,54.2,46.9,45.9,29.4,25.3,24.2,19.2ppm.純度：100%,100%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.87min；(M+H⁺)439.5.

1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基[2-(聯苯-3-基)丙-2-基]胺甲酸酯(化合物4)

使用通用製程C、1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基[2-(3-溴苯基)丙-2-基]胺甲酸酯(600mg,1.63mmol)、苯基硼酸(398mg,3.27mmol)和乙酸鈀(II)，得到標題化合物為白色固體(379mg,64%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.61(s,1H),7.56(d,J=7.4Hz,2H),7.50-7.38(m,4H),7.34(m,2H),5.16(s,1H),4.63(s,1H),3.39-2.09(m,6H),1.72(s,6H),2.02-0.73(m,5H)ppm.¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ 154.8,147.8,141.6,129.0,129.0,128.6,127.5,125.8,125.0,124.0,71.6,71.3,55.9,55.5,47.6,46.8,31.5,30.2,30.0,29.5,25.6,24.8,19.8ppm.純度：99% UPLCMS(210nm)；滯留時間0.84min；(M+1)365.0.C₂₃H₂₈N₂O₂．0.29(CHCl₃)之分析理論值：C,70.02；H,7.14；N,7.01.實測值：C,70.02；H,7.37；N,6.84.

(S)-

啶-3-基2-(聯苯-4-基)丙-2-基胺甲酸酯(化合物5)

使用通用製程B，將溴苯腈(2.00g,11.0mmol)轉變成對應的2-(4-溴苯基)丙-2-胺(1.20g,51%)為棕色油狀物。

使用通用製程A、2-(4-溴苯基)丙-2-胺(1.0g,4.7mmol)和(S)-

啶-3-醇，得到(S)-

啶-3-基2-(4-溴苯基)丙-2-基胺甲酸酯(1.0g,58%)為棕色油狀物。

使用通用製程C、上述溴化物(200mg,0.540mmol)、苯基硼酸(133mg,1.10mmol)和[PdCl₂(pddf)]CH₂Cl₂，得到標題化合物為白色固體(70mg,35%)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ 7.60-7.53(m,4H),7.47(d,J=8.5Hz,2H),7.42(t,J=7.5Hz,2H),7.33(t,J=7.5Hz,1H),5.26(br s,1H),4.64(m,1H),3.33-3.15(m,1H),3.10-2.45(m,5H),2.40-1.80(m,2H),1.78-1.58(m,7H),1.55-1.33(m,2H)ppm.¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ 154.5,146.1,140.8,139.5,128.7,127.2,127.1,127.1,125.2,70.9,55.5,55.1,47.4,46.4,31.1,29.5,25.3,24.5,19.5ppm.純度：100% LCMS(214nm & 254nm)；滯留時間1.56min；(M+1)365.

啶-3-基1-(聯苯-4-基)環丙基胺甲酸酯(化合物6)

使用通用製程D，溴苯腈(3.00g,16.5mmol)轉變為對應的1-(4-溴苯基)環丙胺(1.80g,51%)為黃色固體。

使用通用製程A、1-(4-溴苯基)環丙胺(1.0g,4.7mmol)和

啶-3-醇，得到

啶-3-基1-(4-溴苯基)環丙基-胺甲酸酯(1.3g,75%)為白色半固體。

使用通用製程C、上述胺甲酸酯(400mg,1.12mmol)、苯基硼酸(267mg,2.22mmol)和[PdCl₂(pddf)]CH₂Cl₂標題化合物為黏稠油狀物(100mg,25%)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ 7.47(d,J=7.5Hz,2H),7.43(d,J=8.0Hz,2H),7.33(t,J=7.5Hz,2H),7.26-7.15(m,3H),5.93(br s,0.6H),5.89(br s,0.4H),4.67(m,1H),3.20-3.06(m,1H),2.88-2.42(m,5H),1.98-1.08(m,9H)ppm.¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ 155.0,141.0,139.7,138.2,127.7,126.1,126.0,124.8,124.1,70.0,54.5,46.3,45.4,34.1,24.3,23.2,18.3,17.0ppm.純度：100% LCMC(214nm & 254nm)；滯留時間1.52min；(M+1)363.

(S)-

啶-3-基1-(4'-氟聯苯-4-基)環丙基胺甲酸酯(化合物7)

使用通用製程C、(S)-

啶-3-基1-(4-溴苯基)環丙基胺甲酸酯、4-F-苯基硼酸和[PdCl₂(pddf)]CH₂Cl₂，得到標題化合物為白色固體(45%)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d ₆)δ 8.06-7.83(d,1H),7.69-7.66(m,2H),7.59-7.55(m,2H),7.29-7.22(m,4H),4.56-4.54(m,1H),3.13-2.32(m,6H),1.91-1.19(m,9H)ppm.¹³C NMR(125MHz,DMSO-d ₆)δ 163.2,161.2,156.4,143.7,136.9,128.9,128.8,126.8,125.6,116.2,116.0,70.7,55.8,47.4,46.4,34.8,25.7,24.6,19.6,18.7,18.6ppm.純度：>97% LCMS(214nm & 254nm)；滯留時間1.96min；(M+1)381.2.

(S)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基[1-(2',4'-二氟聯苯-4-基)環丙基]胺甲酸酯(化合物8)

使用通用製程C、(S)-

啶-3-基1-(4-溴苯基)環丙基胺甲酸酯(0.446g,1.22mmol)、2,4-二氟苯基硼酸(0.386g,2.44mmol)和Pd(OAc)₂(0.015g, 0.067mmol)，得到標題化合物為棕褐色固體(0.111g,23%)。¹H NMR(CDCl₃)δ 7.43(dd,J=8.4,1.6Hz,2H),7.40-7.33(m,1H),7.31(d,J=7.7Hz,2H),6.99-6.81(m,2H),5.54(d,J=48.0Hz,1H),4.82-4.65(m,1H),3.30-3.07(m,1H),2.98-2.44(m,5H),1.97(d,J=32.7Hz,1H),1.83(d,J=10.3Hz,1H),1.64(s,1H),1.52(s,1H),1.39(s,1H),1.31(d,J=6.8Hz,4H)ppm.¹³C NMR主要旋轉異構物(CDCl₃)δ 162.2(dd,J=12.8,249.1Hz),159.8(dd,J=11.8,251.0Hz),156.9,156.0,142.6,133.1,131.3(m),128.9,125.6,124.9,111.5(dd,J=3.9,21.2Hz)104.4(dd,J=25.2,29.4Hz),72.1,71.6,55.7,47.4,46.5,35.7,35.3,25.5,24.6,24.4,19.5,18.1ppm.純度：LCMS>99.3%(214nm & 254nm)；滯留時間0.90min；(M+1)399.0.

1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基[1-(4'-甲氧基聯苯-4-基)環丙基]胺甲酸酯(化合物9)

使用通用製程C、

啶-3-基1-(4-溴苯基)環丙基胺甲酸酯(0.485g,1.33mmol)、4-甲氧基苯基硼酸(0.404g,2.66mmol)和Pd(OAc)₂(0.016g,0.071mmol)，得到標題化合物為灰色固體(0.337mg,65%)。¹H NMR(CDCl₃)δ 7.48(dd,J=8.6,5.5Hz,4H),7.29(d,J=7.6Hz,2H),6.96(d,J=8.8Hz,2H),5.58(d,J=48.7Hz,1H),4.83-4.63(m,1H),3.84(s,3H),3.20(dd,J=24.0,15.5Hz,1H),2.97-2.42(m,5H),1.97(d,J=30.9Hz,1H),1.81(s,1H),1.75-1.33(m,3H),1.28(d,J=6.8Hz,4H)ppm.¹³C NMR主要旋轉異構物(CDCl₃)δ 159.1,156.0,141.4,139.0,133.4,128.0,126.7,125.9,114.2,71.5,55.7,55.3,47.4,46.5,35.3,25.5,24.6,19.6,17.8ppm.純度：LCMS>97.1%(214nm & 254nm)；滯留時間0.88min；(M+1)393.4.

啶-3-基2-(5-(4-氟苯基)噻吩-3-基)丙-2-基胺甲酸酯(化合物10)

於經攪拌和冷卻的(0℃)5-溴噻吩-3-羧酸乙酯(13.30g,56.57mmol)溶於THF(100mL)之溶液中於20分鐘期間逐滴加入甲基溴化鎂之乙醚溶液[3.0M](55.0mL,165mmol)。2小時後，將反應溶液濃縮。將殘餘物置於NH₄Cl水溶液(200mL)中處理並以乙酸乙酯(2 x 100mL)萃取。將組合的萃取物乾燥 (Na₂SO₄)及濃縮。將生成的琥珀色油狀物藉由快速層析使用使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(5-溴噻吩-3-基)丙-2-醇為淡琥珀色油狀物(8.05g,64%)。

於經攪拌的2-(5-溴噻吩-3-基)丙-2-醇(8.03g,36.3mmol)溶於二氯甲烷(80mL)之溶液加入疊氮鈉(7.08g,109mmol)接著加入三氟乙酸(8.0mL；於5-6分鐘期間逐滴加入)。將此濃稠的懸浮液攪拌1.5小時，之後以水(350mL)稀釋並以乙酸乙酯(1 x 200mL)萃取。將有機層以NaHCO₃水溶液(1 x 250mL)清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到粗的疊氮產物。於經攪拌的此物質之THF(160mL)溶液中加入水(11mL)接著加入三苯基膦(23.8g,90.7mmol)。將反應攪拌2天，之後濃縮。將生成的殘餘物溶於乙酸乙酯(250mL)並以1N HCl水溶液(4 x 75mL)萃取。將組合的萃取物以濃NH₄OH鹼化並以乙酸乙酯(2 x 100mL)萃取。將這些萃取物輪流乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將生成的琥珀色油狀物藉由快速層析使用二氯甲烷/甲醇/氨梯度純化，得到2-(5-溴噻吩-3-基)丙-2-胺和三苯基膦氧化物之混合物(~70/30比率)為黏稠琥珀色油狀物(1.32g,17%)。

於經攪拌的3-

啶醇(3.00g,23.6mmol)溶於THF(100mL)之溶液中加入氯甲酸4-硝基苯基酯(5.94g,29.5)。攪拌4小時後，將沉澱濾出，以THF沖洗並於多孔玻璃上於室內真空下風乾。將濾餅溶解於乙酸乙酯(150mL)並以NaHCO₃水溶液(1 x 150mL)和水(2 x 150mL)清洗。將有機層乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到粗的4-硝基苯基

啶-3-基碳酸酯產物，將其用於下個步驟無純化。

於經攪拌的2-(5-溴噻吩-3-基)丙-2-胺(0.366g,1.66mmol)溶於THF(10mL)之溶液中加入4-硝基苯基

啶-3-基碳酸酯(0.571g,1.95mmol)和一些的4-(二甲基胺基)吡啶顆粒。將混合物回流至隔夜，濃縮並置於乙酸乙酯(50mL)和NaHCO₃水溶液(50mL)間分溶。將有機層再次以NaHCO₃水溶液(1 x 50mL)清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將生成的髒黃色膠狀物藉由快速層析使用氯仿/甲 醇/氨梯度純化，得到

啶-3-基(1-(5-溴噻吩-3-基)環丙基)胺甲酸酯為灰白色固體(0.305g,49%)。

使用通用製程C、

啶-3-基(1-(5-溴噻吩-3-基)環丙基)胺甲酸酯(0.227g,0.742mmol)、4-氟苯基硼酸(0.208g,1.49mmol)、三環己基膦(0.021g,0.075mmol)、磷酸鉀(0.866,4.08mmol)和乙酸鈀(8.0mg,36μmol)，得到標題化合物為灰色固體(0.142g,49%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.60-7.45(m,2H),7.24-7.19(m,1H),7.10-6.97(m,3H),5.23(br s,1H),4.72-4.61(m,1H),3.30-3.04(m,1H),3.03-2.25(m,5H),2.09-1.02(m,11H)ppm.¹³C NMR(400MHz,CDCl₃)δ 162.3(d,J=247.1Hz),154.5,149.8,143.6,130.7,127.4(d,J=8.1Hz),121.8,118.9,115.8(d,J=21.6Hz),70.8,55.5,53.4,47.3,46.4,29.0,25.4,24.4,19.4ppm.純度：95.8% UPLCMS(210nm & 254nm)；滯留時間0.90min；(M+1)389.

(S)-

啶-3-基2-(3-(4-氟苯基)異噻唑-5-基)丙-2-基胺甲酸酯(化合物11)

於經攪拌的2-(3-(4-氟苯基)異噻唑-5-基)丙-2-胺(1.21g,5.12mmol)溶於甲苯之溶液加入光氣之甲苯溶液[~1.9M](10.8mL,20.5mmol)。將反應加熱回流二小時及然後濃縮。將殘餘物與甲苯(2 x 15mL)共蒸發，得到粗的異氰酸酯中間物為金色油狀物。將此物質置於甲苯中(10mL)處理並以(S)-3-

啶醇(0.749g,5.89mmol)處理。將反應加熱回流至隔夜及濃縮。將殘餘物藉由快速層析使用氯仿/甲醇/氨梯度純化，得到標題化合物為白色固體(0.971g,49%)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 8.09-8.00(m,2H),7.87(br s,1H),7.75(s,1H),7.35-7.25(m,2H),4.54-4.45(m,1H),3.14-2.92(m,1H),2.87-2.17(m,5H),1.98-0.98(m,11H)ppm.¹³C NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 180.1,165.6,162.6(d,J=246.4Hz),154.7,131.2(d,J=3.0Hz),128.7(d,J=8.4Hz),118.2,115.7(d,J=21.8Hz),70.6,55.3,52.8,46.9,45.9,29.9,25.2,24.2,19.2ppm.純度：100% UPLCMS(210nm & 254nm)；滯留時間0.82min；(M+1)390.

(S)-

啶-3-基2-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)丙-2-基胺甲酸酯(化合物12)

於經攪拌的3-胺基-3-硫代丙酸乙酯(20.00g,135.9mmol)溶於乙醇(120mL)之溶液中加入2-溴-4’-氟苯乙酮(29.49g,135.9mmol)。將混合物回流1小時，濃縮並置於乙酸乙酯(300mL)和NaHCO₃水溶液(400mL)之間分溶。將有機層與水層的反萃取物(乙酸乙酯，1 x 100mL)組合，乾燥(Na₂SO₄)並濃縮。將生成的棕色固體藉由快速層析使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)乙酸乙酯為灰白色固體(29.92g,83%)。

於經攪拌和冷卻的(-78℃)2-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)乙酸乙酯(10.00g,37.69mmol)溶於THF(250mL)之溶液中在15分鐘期間逐滴加入第三丁醇鉀溶於THF之溶液[1.0M](136mL,136mmol)，接著加入18-冠-6(1.6mL,7.5mmol)。於-78℃另再30分鐘後，於5分鐘期間逐滴加入碘甲烷(8.5mL)。將反應另再冷攪拌2小時，之後倒入水(450mL)並以乙酸乙酯(2 x 150mL)萃取。將組合的萃取液以鹽水(1 x 200mL)清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將生成的棕色油狀物藉由快速層析使用使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2-甲基丙酸乙酯為淡琥珀色油狀物(8.64g,78%)。

於經攪拌的2-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2-甲基丙酸乙酯(0.900g,3.07mmol)溶於1：1：1THF/乙醇/水(15mL)之溶液中加入氫氧化鋰單水合物(0.451g,10.7mmol)。攪拌至隔夜後，將反應濃縮並再溶解於水中(80mL)。以乙醚(1 x 50mL)清洗溶液，加入1N HCl(15mL)酸化並以乙酸乙酯(2 x 50mL)萃取。將組合的萃取液乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到2-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2-甲基丙酸為淡金黃色固體(0.808g,99%)。

於經攪拌和冷卻的(0℃)2-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2-甲基丙酸(0.784g,2.96mmol)溶於THF(25mL)之溶液中加入三乙胺(0.82mL,5.9mmol)，接著加入氯甲酸異丙酯(0.58mL,4.4mmol)。將反應另再冷攪拌1小時，之後加 入疊氮鈉(0.385g,5.92mmol)之水溶液(7mL)。將反應攪拌至隔夜後，讓冷卻浴緩慢升溫至室溫。然後以水(100mL)稀釋混合物並以乙酸乙酯(2 x 60mL)萃取。將組合的萃取液以NaHCO₃水溶液(1 x 150mL)和鹽水(1 x 100mL)清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。與甲苯(2 x 30mL)共蒸發後，將生成的灰白色固體置於甲苯(25mL)中處理並回流4小時。然後加入(S)-3-

啶醇(0.753g,5.92mmol)並持續回流3小時。將反應濃縮並將殘餘物藉由快速層析使用氯仿/甲醇/氨梯度純化，得到標題化合物為白色固體(0.793g,69%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.90-7.81(m,2H),7.32(s,1H),7.14-7.05(m,2H),5.76(br s,1H),4.72-4.65(m,1H),3.26-3.10(m,1H),3.03-2.37(m,5H),2.05-1.23(m,11H)ppm.¹³C NMR(400MHz,CDCl₃)δ 177.6,162.6(d,J=248.4Hz),154.8,153.6,130.8(d,J=3.2Hz),128.1(d,J=8.1Hz),115.9(d,J=21.7Hz),112.2,71.6,55.7,47.4,46.5,29.1,25.4,24.7,19.6ppm.純度：100% UPLCMS(210nm & 254nm)；滯留時間0.82min；(M+1)390.

啶-3-基(2-(4'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物13)

使用通用製程F和反應投入物2-(4'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸(如實例3中所述製備)和

啶-3-醇，產生標題化合物為無色玻璃狀固體(23%)。NMR數據與實例3的數據相符。純度：100%,99.1%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.87min；(M+H⁺)439.0.

啶-3-基(2-(3'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物14)

將4-(2-甲氧基乙氧基)苯基硼酸換成3-(2-甲氧基乙氧基)苯基硼酸，使用實例3中所述的反應程序製備2-(3'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸。根據通用製程F將此中間物和

啶-3-醇反應，產生標題化合物為玻璃狀無色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.63-7.31(m,6H),7.24-7.10(m,2H),6.92(dd,J=8.2,1.9Hz,1H),4.51-4.34(m,1H),4.21-4.08(m,2H),3.72-3.64(m,2H),3.32(s,3H),3.09-2.26(m,5H),2.04-1.22(m,9H)ppm.¹³C NMR(100MHz, DMSO-d ₆ )δ 158.9,154.6,147.6,141.5,137.6,129.9,126.3,125.2,118.9,113.2,112.5,70.4,70.0,66.9,58.2,55.4,54.2,46.9,45.9,29.4,25.3,24.2,19.2ppm.純度：100%,100%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.91min；15(M+H⁺)439.4.

啶-3-基(2-(4'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-3-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物15)

將2-(4-溴苯基)-2-甲基丙酸乙酯換成2-(3-溴苯基)-2-甲基丙酸乙酯，使用實例3中所述的反應程序製備2-(4'-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1'-聯苯]-3-基)-2-甲基丙酸。根據通用製程F將此中間物和

啶-3-醇反應，產生標題化合物為黃色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.62-7.20(m,7H),7.03(d,J=8.7Hz,2H),4.48-4.35(m,2H),4.18-4.08(m,2H),3.72-3.62(m,2H),3.32(s,3H),3.10-2.19(m,6H),2.10-1.10(m,11H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d ₆ )δ 158.0,154.6,148.8,139.5,133.1,128.5,127.7,123.8,123.2,122.7,114.8,70.4,69.9,67.0,58.2,55.3,54.5,47.0,45.9,29.4,25.3,24.2,19.2ppm.純度：97.4%,94.6%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.88min；(M+H⁺)439.3.

啶-3-基(2-(4'-(3-甲氧基丙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物16)

於經攪拌的4-碘苯酚(10.05g,45.68mmol)溶於乙腈(100mL)之溶液中加入碳酸鉀(6.95g,50.2mmol)和1-氯-3-甲氧基丙烷(6.4mL,57.1mmol)。將混合物加熱回流至隔夜及然後濃縮。將殘餘物置於水中處理並以乙酸乙酯萃取。將組合的萃取液以碳酸氫鈉水溶液清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將粗物質藉由快速層析於矽膠上使用己烷/乙酸乙酯溶析液純化，得到1-碘-4-(3-甲氧基丙氧基)苯為無色油狀物(4.39g,33%)。根據通用製程E將此中間物和2-甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯基)丙酸乙酯反應，產生2-(4'-(3-甲氧基丙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸乙酯。於經攪拌的此化合物(0.693g,1.94mmol)溶於1：1：1(v/v/v)四氫呋喃/乙醇/水(10mL)之溶液中加入氫氧化鋰單水合物(0.326g,7.77mmol)。將混合物加熱回流至隔夜及然後濃縮。將殘餘物 溶於水，以1N鹽酸(10mL)處理並以乙酸乙酯萃取。將組合的有機層以鹽水清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到2-(4'-(3-甲氧基丙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸為蠟狀灰白色固體(0.630g,99%)。根據通用製程F將此中間物和

啶-3-醇反應，產生標題化合物為玻璃狀無色固體(62%)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.61-7.29(m,7H),7.00(d,J=8.8Hz,2H),4.47-4.36(m,1H),4.05(t,J=6.4Hz,2H),3.48(t,J=6.3Hz,2H),3.26(s,3H),3.10-2.25(m,6H),2.04-1.74(m,4H),1.65-1.23(m,9H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ 158.0,154.5,146.7,137.4,132.4,127.5,125.7,125.2,114.8,69.9,68.5,64.6,57.9,55.4,54.2,46.9,46.0,29.4,29.0,25.2,24.1,19.2ppm.純度：97.7%,98.2%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.96min；(M+H⁺)453.5.

啶-3-基(2-(4'-(羥甲基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物17)

使用通用製程E和反應投入物2-(4-溴苯基)-2-甲基丙酸乙酯和4-甲醯基苯基硼酸，製備2-(4'-甲醯基-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸乙酯為淡琥珀色固體。根據通用製程F將此中間物和

啶-3-醇反應，產生

啶-3-基(2-(4'-甲醯基-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯為泡沫狀黃色固體。於經攪拌的此物質(0.755g,1.92mmol)溶於2：1(v/v)四氫呋喃/乙醇(15mL)之溶液中加入硼氫化鈉(0.073g,1.93mmol)。45分鐘後，以水稀釋反應並以氯仿萃取。將組合的萃取液乾燥(Na₂SO₄)及濃縮在矽膠上。以快速層析於矽膠上使用氯仿/甲醇/氨溶析液，得到標題化合物為白色固體(0.323g,43%)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.66-7.29(m,9H),5.18(t,J=5.7Hz,1H),4.53(d,J=5.7Hz,2H),4.46-4.37(m,1H),3.11-2.19(m,6H),2.11-1.10(m,11H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d ₆ )δ 154.7,147.3,141.5,138.4,137.7,127.0,126.2,126.1,125.3,70.0,62.6,55.4,54.2,46.9,45.9,29.4,25.3,24.2,19.2ppm.純度：97.5%,99.1%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.73min；(M+H⁺)395.

啶-3-基(2-(4'-(2-羥乙基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物18)

使用通用製程E和反應投入物1-(2-(苯甲氧基)乙基)-4-溴苯和2-甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯基)丙酸乙酯，製備2-(4'-(2-(苯甲氧基)乙基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸乙酯為無色膠狀物。於經攪拌的此化合物(1.34g,3.33mmol)溶於1：1：1(v/v/v)四氫呋喃/乙醇/水(18mL)之溶液中加入氫氧化鋰單水合物(0.698g,16.6mmol)。加熱回流至隔夜後，將反應濃縮並置於水和乙醚間分溶。將生成的乳液重複以0.2N氫氧化鈉水溶液萃取(5 x 50mL)。每次皆將水層的澄清部分移出。然後將組合的水層以1.0N鹽酸(80mL)處理並將生成的白色固體之懸浮液以乙酸乙酯萃取。將組合的有機層乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到2-(4'-(2-(苯甲氧基)乙基)-[1,1'-聯苯]-4-基)-2-甲基丙酸為白色固體(1.20g,96%)。根據通用製程F將此化合物和

啶-3-醇反應，產生

啶-3-基(2-(4'-(2-苯甲氧基乙基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯。於經攪拌的此物質(0.435g,0.806mmol)溶於甲醇之溶液中加入1.0N鹽酸(1mL)和10%鈀碳(50%水；0.087g)。將混合物於真空和通入數次氮之間循環，在最後排空後再填入氫。1.25小時後，將反應經由矽藻土過濾並濃縮。將殘餘物置於碳酸鈉水溶液中處理並以4：1(v/v)氯仿/丙醇萃取。將組合的萃取液乾燥(Na₂SO₄)及濃縮於矽膠上。以快速層析於矽膠上使用氯仿/甲醇/氨梯度，得到純的標題化合物為無色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.85-7.63(m,1H),7.63-7.19(m,8H),4.78-4.62(m,2H),3.71-2.78(m,8H),2.76(t,J=6.8Hz,2H),2.26-1.96(m,2H),1.96-1.40(m,9H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d ₆ )δ 153.8,146.8,138.7,137.9,137.6,129.4,126.3,126.1,125.3,66.2,62.1,54.4,52.8,45.4,44.5,38.6,29.5,29.2,24.0,19.9,16.6ppm.純度：100%,100%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.75min；(M+H⁺)409.

啶-3-基(2-(2-(4-(3-甲氧基丙氧基)苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物19)

於經攪拌的4-甲氧基硫代苯甲醯胺(9.99g,59.7mmol)溶於乙醇(75mL)之懸浮液中加入4-氯乙醯乙酸乙酯(8.1mL,60mmol)。將混合物加熱回流4小時，之後冷卻，加入另外的4-氯乙醯乙酸乙酯(0.81mL,6.0mmol)並重新回流。再加熱4個多小時後，將反應濃縮並置於乙酸乙酯和碳酸氫鈉水溶液間分溶。將有機層與另外的乙酸乙酯萃取物組合，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將粗產物藉由快速層析純化於矽膠上使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(2-(4-甲氧基苯基)噻唑-4-基)乙酸乙酯為淡琥珀色油狀物(14.51g,87%)。於經攪拌的此化合物(14.48g,52.2mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(125mL)之溶液中於15分鐘期間分次加入氫化鈉(60%礦物油懸浮液；6.27g,157mmol)。將生成的紅色懸浮液冷卻(0℃)及於10分鐘內逐滴以碘甲烷(9.80mL,157mmol)處理。移除冷卻浴並讓反應攪拌4小時，之後濃縮及將殘餘物置於乙酸乙酯和水之間分溶。將有機層以水清洗二次以上，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將殘餘物藉由快速層析於矽膠上使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(2-(4-甲氧基苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸乙酯為淡琥珀色油狀物(14.12g,89%)。於經攪拌的此中間物(14.12g,46.24mmol)溶於二氯甲烷(250mL)之溶液中於5分鐘期間逐滴加入三溴化硼(11.0mL,116mmol)。攪拌至隔夜後，藉由緩慢加入甲醇(~20mL)中止反應及然後濃縮。將殘餘物置於甲醇(250mL)及濃硫酸(7.0mL)中處理。將此經攪拌的溶液加熱回流2小時，濃縮並置於乙酸乙酯和碳酸氫鈉水溶液間分溶。將有機層與水層的第二乙酸乙酯萃取物組合，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到2-(2-(4-羥基苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸甲酯為白色固體(12.56g,98%)。於經攪拌的1-溴-3-甲氧基丙烷(1.66g,10.8mmol)溶於丙酮(30mL)之溶液中加入酚中間物(2.00g,7.21mmol)和碳酸鉀(1.25g,9.04mmol)。將混合物加熱回流置隔夜，過濾及濃縮。將殘餘物藉由快速層析 於矽膠上使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(2-(4-(3-甲氧基丙氧基)苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸甲酯為微琥珀色膠狀物(2.47g,98%)。於經攪拌的此化合物(2.45g,7.01mmol)溶於1：1：1(v/v/v)四氫呋喃/乙醇/水(45mL)之溶液中加入氫氧化鋰單水合物(1.47g,35.0mmol)。攪拌至隔夜後，將反應濃縮並置於水和乙醚間分溶。以1.0N鹽酸(40mL)處理水層並以乙酸乙酯萃取。將組合的萃取液乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到2-(2-(4-(3-甲氧基丙氧基)苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸為白色固體(2.19g,4093%)。根據通用製程F將此化合物和

啶-3-醇反應，產生標題化合物為軟的微琥珀色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.82(d,J=8.9Hz,2H),7.36(br s,1H),7.24(br s,1H),7.03(d,J=8.9Hz,2H),4.49-4.41(m,1H),4.07(t,J=6.4Hz,2H),3.48(t,J=6.4Hz,2H),3.26(s,3H),3.09-2.26(m,6H),2.02-1.91(m,2H),1.91-1.03(m,11H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ 165.8,162.4,160.0,154.6,127.5,126.1,114.9,112.1,70.1,68.4,64.8,57.9,55.4,53.5,46.9,45.9,28.9,28.3,25.2,24.2,19.2ppm.純度：100%,100%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.87min；(M+H⁺)460.

啶-3-基(2-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物20)

於經攪拌的2-溴乙基甲基醚(1.88g,13.5mmol)溶於丙酮之溶液中加入2-(2-(4-羥基苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸甲酯(如實例19所述製備，2.00g,7.21mmol)和碳酸鉀(1.56g,11.3mmol)。加熱回流至隔夜後，以另外的2-溴乙基甲基醚(1.88g,13.5mmol)和碳酸鉀(1.56g,11.3mmol)處理混合物。將反應加熱回流第二晚，過濾及濃縮。將殘餘物藉由快速層析於矽膠上使用己烷/乙酸乙酯梯度純化，得到2-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸甲酯為白色固體(2.71g,90%)。於經攪拌的此化合物(2.71g,8.08mmol)溶於1：1：1(v/v/v)四氫呋喃/乙醇/水(50mL)之溶液中加入氫氧化鋰單水合物(1.70g,40.5mmol)。攪拌 至隔夜後，將反應濃縮並置於水和乙醚間分溶。以1.0N鹽酸(41mL)處理水層並以乙酸乙酯萃取。將組合的萃取液乾燥(Na₂SO₄)及濃縮，得到2-(2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)噻唑-4-基)-2-甲基丙酸為白色固體(2.57g,99%)。根據通用製程F將此化合物和

啶-3-醇反應，產生標題化合物為化合物為淡琥珀色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.82(d,J=8.8Hz,2H),7.36(br s,1H),7.24(br s,1H),7.04(d,J=8.8Hz,2H),4.49-4.41(m,1H),4.19-4.12(m,2H),3.71-3.65(m,2H),3.32(s,3H),3.11-2.87(m,1H),2.86-2.19(m,5H),1.92-1.16(m,11H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d ₆ )δ 165.7,162.9,159.9,154.6,127.5,126.2,114.9,112.2,70.3,70.1,67.1,58.2,55.4,53.5,46.9,45.9,28.3,25.2,24.3,19.2ppm.純度：100%,100%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.85min；(M+H⁺)446.

啶-3-基2-(5-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)丙-2-基胺甲酸酯(化合物21)

使用通用製程E和反應投入物5-溴氰基吡啶和2-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環，製備5-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)氰基吡啶。將三氯化鈰(8.05g,21.6mmol)載入燒瓶中並於真空下藉由加熱(170℃)乾燥3小時。將此固體置於四氫呋喃(20mL)中處理並劇烈攪拌30分鐘。經此懸浮液冷卻至-78℃並逐滴以3.0M的甲基鋰之乙醚溶液(7.2mL,21.6mmol)處理。添加後，將反應於-78℃攪拌1小時，之後加入上述芳基硼酸酯(1.83g,7.20mmol)溶於四氫呋喃(20mL)之溶液。將混合物維持在-78℃歷時2小時及然後加入氫氧化銨水溶液(10mL)及經由矽藻土塞過濾。以乙酸乙酯萃取濾液，將組合的萃取液以鹽水清洗，乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將殘餘物藉由快速層析於矽膠上使用乙酸乙酯溶析液純化，得到2-(5-(4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)吡啶-2-基)丙-2-胺為黃色固體(0.800g,39%)。於經攪拌的此中間物(0.500g,1.75mmol)溶於水(10mL)和濃鹽酸(0.44mL)之懸浮液中加入甲苯(10mL)。將混合物冷卻(0℃)並同時於1小時期間以三光氣(0.776g,2.62mmol)溶於甲苯(10mL)和碳酸氫鈉(2.2g,26mmol)溶於 水(20mL)之溶液處理。添加後，將反應另再攪拌30分鐘，之後移出上層甲苯層並乾燥(Na₂SO₄)。同時，將一經攪拌的

啶-3-醇(0.445g,3.64mmol)溶於四氫呋喃(10mL)之溶液以氫化鈉(60%礦物油懸浮液；0.154g,3.85mmol)處理。將此混合物攪拌5分鐘及然後加入粗異氰酸酯溶於甲苯之溶液。將反應攪拌10分鐘，加入鹽水(5mL)中止反應並以乙酸乙酯萃取。將組合的萃取液乾燥(Na₂SO₄)及濃縮。將殘餘物藉由快速層析於逆相矽膠上純化，得到標題化合物為淡黃色固體(0.100g,13%)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ 8.70-8.70(d,J=2.0Hz,1H),7.83-7.81(m,1H),7.49-7.47(d,J=9.0Hz,2H),7.45-7.43(d,J=8.0Hz,1H),7.03-7.01(d,J=8.5Hz,2H),6.63(br s,1H),4.68-4.66(m,1H),4.16(t,J=5.0Hz,2H),3.77(t,J=5.0Hz,2H),3.45(s,3H),3.19-2.70(m,6H),2.15-1.89(m,2H),1.76(s,6H),1.73-1.36(m,3H)ppm.¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ 162.7,158.9,154.9,145.9,134.8,134.3,130.1,128.1,119.2,115.2,71.0,70.8,67.4,59.2,55.9,55.7,47.4,46.5,46.4,27.9,25.4,24.6,19.5ppm.純度：>99%(214 & 254nm)LCMS；滯留時間：1.32min；(M+H⁺)440.2.

啶-3-基(2-(4'-(3-氰基丙氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物22)

於經攪拌的4-溴苯酚(17.1g,98.8mmol)溶於乙腈(150mL)之溶液中加入1-溴丁腈(12.3mL,124mmol)和碳酸鉀(15.0g,109mmol)。將混合物加熱回流至隔夜，冷卻並濃縮。將殘餘物置於水中處理並以乙酸乙酯萃取。將殘餘物置於水中處理並以乙酸乙酯萃取。將組合的萃取液乾燥(Na₂SO₄)及濃縮並將粗物質藉由快速層析於矽膠上使用己烷/乙酸乙酯溶析液純化，得到4-(4-溴苯氧基)丁腈為白色固體(20.8g,88%)。於經攪拌的此產物溶於N,N-二甲基甲醯胺(100mL)之溶液中加入雙聯頻哪醇硼酸酯(4.60g,18.1mmol)、乙酸鉀(7.41g,75.5mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯化鈀(II)與二氯甲烷之複合物(0.616g,1.04mmol)。將混合物加熱回流至隔夜及然後濃縮。將殘餘物置於乙酸乙酯中處理並 以水和鹽水清洗。將有機層乾燥(Na₂SO₄)及濃縮並將粗產物藉由快速層析於矽膠上使用己烷/乙酸乙酯溶析液純化，得到4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯氧基)丁腈為白色固體(3.43g,79%)。根據通用製程E將此產物和

啶-3-基(2-(4-溴苯基)丙-2-基)胺甲酸酯(使用通用製程F藉由

啶-3-醇和2-(4-溴苯基)丙-2-胺之反應所製備)反應，產生標題化合物為白色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.67-7.26(m,7H),7.02(d,J=8.8Hz,2H),4.50-4.33(m,1H),4.08(t,J=6.0Hz,2H),3.14-2.18(m,8H),2.04(quin,J=6.7Hz,2H),1.94-1.70(m,11H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d ₆ )δ 157.7,154.5,146.8,137.4,132.7,127.6,125.7,125.2,120.2,114.9,70.0,65.8,55.4,54.2,46.9,45.9,29.4,25.3,24.7,24.2,19.2,13.4ppm.純度：100%,98.9%(210 & 254mm)UPLCMS；滯留時間：0.88min；(M+H⁺)448.6.

啶-3-基(2-(4'-(氰基甲氧基)-[1,1'-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯(化合物23)

使用通用製程E和反應投入物

啶-3-基(2-(4-溴苯基)丙-2-基)胺甲酸酯(使用通用製程F藉由

啶-3-醇和2-(4-溴苯基)丙-2-胺之反應所製備)及4-(氰基甲氧基)苯基硼酸，製備標題化合物為淡琥珀色固體。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.65(d,J=8.2Hz,2H),7.60-7.31(m,5H),7.15(d,J=8.9Hz,2H),5.21(s,2H),4.53-4.30(m,1H),3.18-2.19(m,6H),2.05-1.18(m,11H)ppm.¹³C NMR(100MHz,DMSO-d ₆ )δ 155.8,154.6,147.2,137.2,134.4,127.8,126.0,125.3,116.7,115.3,70.0,55.4,54.2,53.5,46.9,45.9,29.4,25.2,24.2,19.2ppm.純度：100%,100%(210 & 254nm)UPLCMS；滯留時間：0.85min；(M+H⁺)420.3.

實例2：製備(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯游離鹼

步驟1：以碘甲烷二甲基化

將一3N RB燒瓶裝上一溫度計、添加漏斗及氮入料口。將燒瓶通入氮氣及秤取第三丁醇鉀(MW 112.21,75.4mmol,8.46g,4.0當量，白色粉末)並經由粉體漏斗加到燒瓶中，接著加入THF(60mL)。大部分的第三丁醇鉀溶解，得到一混濁溶液。將混合物以冰水浴冷卻至0-2℃(內部溫度)。在一分開的燒瓶中，將起始的酯(MW 265.3,18.85mmol,5.0g,1.0當量)溶於THF(18mL+2mL作為清洗液)並轉置到添加漏斗。將此溶液於25-30min的時間內逐滴加到冷卻的混合物中，添加期間將內部溫度保持在5℃以下。將反應混合物冷卻回到0-2℃。以一分開的燒瓶，製備碘甲烷(MW 141.94,47.13mmol,6.7g,2.5當量)之THF溶液(6mL)並轉置到添加漏斗。然後將含有碘甲烷溶液的燒瓶以THF(1.5mL)沖洗，然後將其轉置於已含有澄清無色碘甲烷之THF溶液的添加漏斗中。將此溶液於30-40min的時間內小心地逐滴加到深棕色的反應混合物中，添加期間一直將內部溫度保持在10℃以下。添加完成後，將輕微混濁的混合物另再攪拌1h，於此期間內部溫度降至0-5℃。於0-5℃攪拌1小時後，將反應混合物於5-7min的時間內逐滴加入5.0M HCl水溶液(8mL)中止反應。在此添加期間內部溫度係維持在20℃以下。添加後，加入水(14mL)並將混合物攪拌2-3min。停止攪拌並使其分離成二層。然後將二層轉置於250mL 1NRB燒瓶並於真空下盡可能的蒸發THF，得到THF/產物和水的雙相層。讓二層分離。將步驟1產物之THF溶液用於下個反應。

步驟2：以LiOH單水合物水解乙基酯

將粗酯之THF溶液加到反應燒瓶中。分開地，稱取LiOH.H₂O(MW 41.96,75.0mmol,3.15克，2.2當量)於一100mL燒杯中，於其中加入一攪拌棒。加入水(40mL)並攪拌混合物直到所有的固體溶解，得到澄清的無色溶液。然後將此水溶液加到含有酯之四氫呋喃(THF)溶液的250mL RB燒瓶中。將一冷凝器連接到燒瓶的瓶頸並在冷凝器上方連接一氮氣入料口。將混合物加熱回流16小時。16小時後，停止加熱並將混合物冷卻至室溫。真空蒸發THF得到一棕色溶液。將一等份的棕色水溶液以HPLC和LC/MS進行乙基酯完全水解之分析。加入水(15mL)並將此鹼性水溶液以TBME(2 x 40mL)萃取以移除第三丁基酯。將此鹼性水溶液以冰水浴冷卻至0-10℃並於攪拌下逐滴加入濃HCl酸化至pH~1。於此膠狀固體之酸性水溶液中加入TBME(60mL)並震盪混合物及然後劇烈攪拌以便將所有的酸溶解至TBME層。將此二層轉置於分液漏斗並將TBME層分離出。以TBME(40mL)再萃取淡黃色的酸性水溶液並將TBME層分離及與前面的TBME層組合。將酸性水層丟棄。將組合的TBME層於無水Na₂SO₄上乾燥，過濾並真空蒸發以移除TBME並得到粗酸為橙色/深黃色油狀物，其在高真空下固化成髒黃色固體。將此粗酸稱重並藉由於庚烷/TBME(3：1,5mL/g的粗物質)中加熱結晶，得到的酸為黃色固體。

步驟3：以NH ₂ OH.HCl形成羥肟酸

稱取羧酸(MW 265.3,18.85mmol,5.0g,1.0當量)並於氮氣下轉置於25mL 1NRB燒瓶。加入THF(5.0mL)且此酸很快溶解，得到澄清深黃色至棕色溶液。將此溶液以冰浴冷卻至0-2℃(浴溫)並於10-15分鐘期間內小量緩慢加入N,N’-羰基二咪唑(CDI；MW 162.15,20.74mmol,3.36g,1.1當量)。移除冰浴並將溶液於室溫攪拌1h。攪拌1h後，再次以冰水浴將溶液冷卻至0-2℃(浴溫)。於3-5分鐘期間內小量緩慢加入固體羥基胺鹽酸鹽(NH₂OH.HCl；MW 69.49,37.7mmol,2.62g,2.0當量)，因為此添加為放熱。添加完成後，於2分鐘期間內逐滴將水(1.0mL)加到非均質的混合物中並將反應混合物於0-10℃於冰水浴中攪拌5分鐘。移除冷卻浴並將反應混合物於氮氣、室溫下攪拌至隔夜歷時20-22h。溶液變成澄清因為所有的NH₂OH.HCl皆溶解。20-22h後，將一等份的反應混合物以高壓液相層析(HPLC)分析。然後於真空下蒸發THF並將殘餘物置於二氯甲烷(120mL)和水(60mL)中處理。將混合物轉置於分液漏斗，將其震盪並使其分離成二層。將水層丟棄並以1N鹽酸(HCl；60mL)清洗二氯甲烷層。將酸層丟棄。將二氯甲烷層以無水Na₂SO₄乾燥，過濾並於真空蒸發溶劑，得到粗的羥肟酸，將其於高真空下乾燥至隔夜為淡黃色固體。

繼續步驟3：將羥肟酸轉變成環狀中間物(未分離)

將粗的羥肟酸(MW 280.32,5.1g)轉置於帶有一氮氣入料口之250mL 1N RB燒瓶中。加入一攪拌棒接著加入乙腈(50mL)。此固體不溶於乙腈。將此黃色非均質混合物於氮氣下攪拌2-3分鐘並於室溫一次加入CDI(MW 162.15,20.74mmol,3.36g,1.1當量)。無觀察到放熱。此固體立即溶解並將此澄 清黃色溶液於室溫攪拌2-2.5h.。2-2.5h後，將一等份以HPLC和LC/MS分析，其顯示羥肟酸轉變成所欲的環狀中間物。

然後於真空蒸發乙腈，得到粗的環狀中間物為淡紅色濃稠油狀物。將此油狀物置於甲苯(60mL)中處理並將此淡紅色的混合物加熱回流2小時，在此期間環狀中間物釋放CO₂並重排形成異氰酸酯(參見下文)。

繼續步驟3：將異氰酸酯轉變成游離鹼

將反應混合物冷卻至50-60℃並一次性將固體(S)-(+)-

啶醇(MW 127.18,28.28mmol,3.6g,1.5當量)加到混合物中。將混合物再加熱回流18h。18h後，將一等份以HPLC和LC/MS分析，其顯示異氰酸酯完全轉變成所欲的產物。將反應混合物轉置於分液漏斗並加入甲苯(25mL)。以水(2 x 40mL)清洗混合物並將水層分離。將組合的水層以甲苯(30mL)再萃取並將水層丟棄。將組合的甲苯層以1N HCl(2 x 60mL)萃取並丟棄甲苯層(含有O-醯基雜質)。將組合的HCl層轉置於500mL配置有攪拌棒之艾氏燒瓶中。將攪拌中的澄清黃色/淡紅橙色溶液藉由逐滴添加50% w/w NaOH水溶液，鹼化至pH 10-12。所欲的游離鹼從溶液沉澱出，為髒黃色膠狀固體，其陷在攪拌棒上。於此混合物中加入乙酸異丙酯(100mL)並當膠狀固體進入乙酸異丙酯時，將混合物劇烈攪拌5分 鐘。停止攪拌並使其分離成二層。將黃色乙酸異丙酯層分離並以乙酸異丙酯(30mL)再萃取鹼性水層。將鹼性水層丟棄並將組合的乙酸異丙酯層以無水Na₂SO₄乾燥，過濾至預先秤重的RB燒瓶中並真空蒸發溶劑，得到粗的游離鹼，將其於高真空下乾燥至隔夜為米黃色至黃褐色的固體。

繼續步驟3：粗游離鹼之再結晶

將米黃色至黃褐色的粗游離鹼稱重並從庚烷/乙酸異丙酯(3：1,9.0mL的溶劑/每克粗游離鹼)再結晶。將適量的庚烷/乙酸異丙酯沿著攪拌棒加到粗游離鹼中並將混合物加熱回流10min(游離鹼起初為部份可溶的但當加熱回流時溶解成澄清淡紅的橙色溶液)。移除熱源且當白色沉澱形成時，以攪拌讓混合物冷卻至室溫。於室溫攪拌3-4h後，於管真空下使用布氏漏斗將沉澱濾出，以庚烷(20mL)清洗並於管真空下於布氏漏斗上乾燥至隔夜。將沉澱轉置於結晶盤並於真空烘箱中以55℃乾燥至隔夜。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.04-7.83(m,2H),7.20-6.99(m,3H),5.53(s,1H),4.73-4.55(m,1H),3.18(dd,J=14.5,8.4Hz,1H),3.05-2.19(m,5H),2.0-1.76(m,11H)ppm.¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ 166.38,165.02,162.54,162.8-155.0(d,C-F),130.06,128.43,128.34,116.01,115.79,112.46,71.18,55.70,54.13,47.42,46.52,27.94,25.41,24.67,19.58ppm.實例3：製備晶體形式之(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯鹽類

(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯之晶體鹽類可從如實例23描述所製備的游離鹼來形成。

例如，將(S)-

啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯之游離鹼(約50mmol)於室溫溶於IPA(140ml)並過濾。將濾液加到配置有上方攪拌器和氮氣入料/出料口之1L r.b.燒瓶中。將L-蘋果酸(約50mmol)於室溫溶於IPA(100+30ml)並過濾。將濾液加到上述的1公升燒瓶中。將生成的溶液於 氮氣下於室溫攪拌(有或無晶種)4至24小時。在此期間結晶形成。過濾收集產物並以小量的IPA(30ml)清洗。將晶體固體於真空烘箱中以55℃乾燥72小時，得到所欲的蘋果酸鹽。

其他鹽類，例如帶有琥珀酸或HCl之酸加成鹽的晶體形式，可以類似的方法來製備。

實例4：活體外GCS抑制(化合物2和類似物)

葡萄糖神經醯胺合成酶活性之抑制可以一或多種分析來測量。第一種分析為微粒體分析，其係藉由HPLC直接測量神經醯胺轉變成葡萄糖神經醯胺。在微粒體分析中，微粒體為一種葡萄糖神經醯胺合成酶活性的來源。第二種分析為以細胞為基礎的表型分析，其係藉由抗體媒介的免疫螢光監測下游脂質GM3的細胞表面表現。特定的方法係提供如下。

葡萄糖神經醯胺合成酶活性微粒體分析：

一種使用微粒體作為葡萄糖神經醯胺合成酶活性來源的酵素分析。將螢光神經醯胺基質遞送至膜結合酵素為帶有白蛋白之複合物。反應後，將神經醯胺和葡萄糖神經醯胺分離並藉由逆相HPLC以螢光偵測來定量。酵素活性係使用螢光標定的基質並以微粒體做為葡萄糖神經醯胺合成酶的來源加以評估。C₆-NBD-神經醯胺係與白蛋白複合供遞送至微粒體，將其根據下述之程序分離。儲存液中C₆-NBD-神經醯胺的最終濃度為0.5mM；BSA的最終濃度為0.5mM。藉由逆相HPLC以螢光偵測進行基質和產物(葡萄糖神經醯胺)的分離及定量。

從A375人類黑色素瘤細胞製備微粒體；

從A375人類黑色素瘤細胞分離微粒體。藉由胰蛋白酶化收取800萬至1000萬個細胞並以冰冷的PBS沖洗。將細胞再懸浮於含有蛋白酶抑制劑之冰冷的解離緩衝液中。將細胞解離液於冰上使用探針超音波破碎儀進行超音波 處理。超音波處理後，將細胞解離液藉由於4℃以10,000g離心10分鐘從碎片中分離。將上清液移出及藉由於4℃以100,000g另再離心1小時使其澄清。然後將團塊再懸浮於解離緩衝液中，分成等分及在使用前儲存於-80℃。

葡萄糖神經醯胺合成酶分析

就測定葡萄糖神經醯胺合成酶抑制作用，係將2x之Km的基質(螢光神經醯胺和UDP-葡萄糖，分別為3μM和4μM)和微粒體(1：50稀釋)以1：1組合並於室溫盤式震盪器上在黑暗中培養1小時。藉由加入150μL的100μM C₈-神經醯胺溶於50%異丙醇水溶液之溶液，停止反應；於HPLC上(帶有螢光偵測器)分析10μL的最終混合物。移動相為添加1%甲酸的81%甲醇/19%水，流速為0.5mL/min。以λ_ex=470nm和λ_em=530nm偵測螢光。在這些條件下，NBD-C₆-GluCer具有大約1.7min之滯留時間及在約2.1min.後有來自管柱的NBD-C₆-Cer溶析液。將二種波峰相互和基線分離並藉由HPLC軟體自動積分。使用基質轉變為產物的百分比作為抑制作用或檢測的讀出值。

GM3螢光-連接免疫吸附分析(FLISA)：

此項為一表型分析，其係測量在以試驗化合物治療後，B16小鼠黑色素瘤或C32人類黑色素瘤細胞中的GM3表現。細胞表面GM3表現係藉由抗體媒介的螢光來測定。

以培養基稀釋化合物並置入384孔盤中的DMSO中。以分別每孔20,000個細胞/ml和62,500個細胞/ml的密度分析B16和C32細胞。各滴定曲線係含有10個點，其在各試驗中係以雙重複來分析。將各盤於37℃,5% CO2培養48小時，及然後以TBS沖洗一次。將抗-GM3抗體加入個孔槽中及然後將各盤於室溫另再培養1小時。隨後將各盤沖洗二次並以標定的第二抗體另再培養1小時。在最終培養後，將各盤沖洗二次並於螢光判讀儀上以λ_ex=D640/20nm和λ_em=657nm偵測螢光。

分析結果

在這些分析中，特定示例化合物的個別分析結果係如下表所示。微粒體分析之結果係以「GCS IC₅₀」表示，其係代表造成葡萄糖神經醯胺合成酶活性50%抑制作用之化合物濃度。以細胞為基礎的分析結果就係B16分析和C32分析分別係以「GM3 B16 IC₅₀」或「GM3 C32 IC₅₀」表示。這些數值係代表造成50%抑制GM3表現在細胞表面的化合物濃度。

這些比較的結果係驗證了根據本揭示文之化合物具有與DCS抑制劑相當的活體外活性，且因此，預期展現類似的活體內利益。

實例5：化合物2在GD-3病患中的臨床研究

於患有高雪氏症第3型以伊米苷酶穩定疾病的成人病患中開始一化合物2結合伊米苷酶(imiglucerase)之156-週、多部份、開放性、多國的安全性、耐受性、藥物動力學、藥效動力學和探索效用之研究。

本研究係納入在招收前具有GD3的臨床診斷及已登載缺乏酸性β-葡萄糖苷酶活性已接受ERT治療至少3年及施用伊米苷酶(思而贊(Cerezyme))穩定的每月給劑至少6個月之年齡18歲或更大的病患。病患必須達到下列GD治療目標：女性的血紅素量

11.0g/dL及男性

12.0g/dL；血小板數

100000/mm³；脾體積<正常的10倍(MN)或全脾切除(其限條件為脾切除需發生在隨機分配前>3年)；肝體積<1.5 MN；及在最近一年內無骨危象及無有症狀的骨疾病，例如歸因於骨壞死及/或病理性骨折的骨骼疼痛。病患必須具有其特徵為水平瞬眼移動異常之GD3特徵性眼球運動失用(核上凝視麻痺)。

(A)26-週之期中分析

當5位病患已完成26週的(1)於各病患建立療法下之伊米苷酶(來自Sanofi Genzyme的思而贊(Cerezyme))，及(2)化合物2以15mg/天的單一劑量口服給藥之同時治療時，則進行一期中分析。在研究期間，病患係就安全性和耐受性、CSF和血漿生物標記(葡萄糖神經醯胺GL-1；葡萄糖基鞘氨醇(lyso-GL1)、藥物動力學、全身性疾病的標記(以核磁共振(MRI)測量脾臟和肝臟體積，血小板 數、血紅素量)、間質性肺疾病之指標(高解析肺部電腦斷層掃瞄(CT))和水平的瞬眼移動進行評估。

在基線時，如使用修訂的嚴重度評分量表所測(mSST；Davies,et al.,2011)，四位病患具有輕微神經問題及1位具有中度神經問題。以胸部CT為基準，所有的病患皆顯現間質性肺疾病之證據。一位病患以10.6g/dL的血漿血紅素量證明具有貧血。

所有的病患提報皆無嚴重的或持續的治療中出現的不良事件。最常提報的事件為頭痛和背痛，且這些在持續時間上僅視為輕度至中度和過渡性(可能與CSG檢測所進行的脊椎穿刺有關)。

如下表所驗證，發現在所有的病患中化合物2有效通過血-腦屏障：

在26週所看到的化合物2之CSF濃度的較高變化係歸因於其中一位病患(病患5)在第12至26週不明原因的暴露下降。因為樣本收集錯誤，所以將病患1從第26週CSF測定排除。

已發現在26週時，血漿和CSF中生物標記GD-3有顯著改善。在基線時，CSF中的平均(±SD)GL-1濃度為7.1±2.8ng/mL(範圍4.4-11.1ng/mL)， 而在CSF中平均(±SD)lyso-GL-1濃度為39.3±22.9pg/mL(範圍20.1-67.6pg/mL)。就比較上，健康的CSF中GL-1濃度為4.5-5.9ng/mL，而健康的CSF中lyso-GL-1量係低於5.0pg/mL。在4週和26週時，發現個別的CSF生物標記下降係如下(顯示的為與基線CSF濃度相比之下降百分比)：

間質性肺疾病之嚴重度的特徵為，如高解析CT在四個肺部區域(主動脈弓、氣管隆突、下部區L3和下部區L4)所測，受到ILD侵襲的肺體積百分比。將病患分級為具有嚴重ILD(51-100%的肺體積受侵襲)、中度ILD(26-50%的肺體積受侵襲)、輕度ILD(1-25%的肺體積受侵襲)或正常(0%的肺體積顯現ILD)。在基線時所有的病患顯現ILD，而在治療26週後，5位病患中有4位顯現ILD復原(病患5顯現輕微的ILD惡化)：

所有的病患皆顯現無全身性惡化。二位病患顯示脾體積下降10%或更多。血紅素量並無臨床上有意義的變化。平均上，血小板數從基線到第26週上升17%，而具有最低基線血小板數的三位病患在第26週顯示個別增加23-42%。個別病患的血小板數之數據係顯示於下表中(以10⁹個血小板/L表示)：

於全部5位病患中進行水平和垂直瞬眼移動之量化(分別為HSEM和VSEM)。在五位病患中，水平向右15°瞬動的平均高峰速度在基線時為50.8°/s(+/- 8.1°/s)而在第26週時為47.5°/min(+/- 12.6°/s)；水平向右15°瞬動的平均PV在基線時為44.7°/s(+/- 17.9°/s)而在第26週時為32.3°/s(+/- 15.9°/s)。 較慢的速度意味著更顯著程度的神經障礙。水平向右30°瞬動的平均PV在基線時為77.7°/s(+/- 16.4°/s)而在第26週時為68.1°/min(+/- 24.7°/s)；水平向左30°瞬動的平均PV在基線時為58.7°/s(+/- 21.5°/s)而在第26週時為49.9°/s(+/- 8.5°/s)。正常的15°和30°水平瞬動之範圍先前提出的報告為>200°/s和>400°/s(Bremova-Ertl et al,2018)。各5位病患的HSEM測量係顯示於圖1和2中。總言之，在26-週治療期間內在HSEM中並無觀察到臨床上有意義的變化。如同HSEM，VSEM測量值在基線和26週之間為穩定的。

於第4和26週定量GD3病患之血漿、血清及/或CSF中四種探索的生物標記：測量CSF和血清中的幾丁三糖酶(chitotriosidase)(CHITO；一種已知在GD病患中會升高的酵素)；測量CSF和血漿中的GM3(一種已知在GD病患中會升高的醣神經鞘脂質標記)；以及測量CSF中的醣蛋白非轉移性黑色素瘤蛋白B(GPNMB；據報導為一種神經病變GD3的生物標記。結果係如下表所示為與基線相比在第4週和第26週就各參數之百分比變化：

(B)52-週之期中分析

當前面的6位病患達成52-週的治療時，如上面(A)章節中所述，進行一第二期中分析。此分析係包括如(A)章節中所述病患1-5以及一位新的病患6。所有六位病患皆具有L444P(1448T/C)同合子高雪氏症表型。

在52週，所有的病患仍登錄在本研究中。在六位病患中提出總計30件治療中出現的不良事件，其全部為輕度或中度之嚴重度，且皆不認為與化合物2或伊米苷酶之治療有關。該等事件主要為頭痛和背痛，可能與腰椎穿刺有關。

化合物2的血漿和CSF濃度分析顯示大多與在第26週所得到的數值相當。然而發現病患5在第26週具有大約50%較低的血漿和CSF中之化合物2濃度，且在第52週則偵測不到濃度。咸信係由於遵從性或劑量錯誤，因此重複分析而不納入病患5的第26和52週之數據。數據支持在第4週或之前於血漿和CSF中達到穩態的化合物2濃度之結果：

在第52週，數據進一步顯示血漿和CSF中GD-3之生物標記持續明顯的改善。結果係與在第26週所得到的結果相類似。在整體六位GD3病患中，血漿和CSF之GL-1及lyso-GL-1濃度係如下：

因此，在第52週時相較於基線，血漿和CSF濃度變化如下：

此外，定量GD3病患之CSF中的探索生物標記：神經醯胺(GL-1的前驅物)、幾丁三糖酶(CHITO)、GM3和GPNMB。治療52週後，在CSF中並無觀察到神經醯胺、CHITO或GPNMB濃度之明顯變化。六位病患中有四位基線時具有可測量的GM3濃度，且發現這些病患各自在第4週、第26週和第52週時於CSF中已偵測不到GM3。

在第52週，於全部6位病患中，以如(A)章節中所述的類似方法 進行水平和垂直瞬眼移動之量化。然而，確信用於進行噪音的方法(例如，因眨眼或頭轉動所致)可能會在結果中導入偏差。因此修改用於噪音的方法，並開發一套控制標準來評估由眼動判讀儀所得到的數據組之變異。就重新評估26-週眼瞬動數據及評估52-週的數據上，發現噪音級等太高使得無法從數據中引出任何結論。

此外，在第52週時，6位病患中有5位在共濟失調上顯現改善。藉由評估共濟失調等級量表(SARA；Schmitz-Hübsch et al.[2006])來評估基線時和整個研究的共濟失調程度，該量表係以0-40分來評估8個不同屬性的小腦共濟失調。此8種屬性為步態、姿勢、坐、言語障礙、手指追蹤、鼻-手指試驗、快速手翻轉運動及腳跟-脛骨滑行。全部6位病患之SARA共濟失調評分結果係如下表所示：

如表中所示，6位病患中有5位在基線時為輕度共濟失調，平均的SARA積分為2.8(SD=1.2)。在基線時最常見的缺陷為步態障礙。由於病患5中化合物2的低暴露量及該病患實質上正常的基線共濟失調得分(僅0.5)而將此患病排除，然後5位病患中有4位在第52週時顯示共濟失調改善(平均改善=- 0.9；SD=3.2)。病患4具有增加的共濟失調得分，其中在基線的得分為3而在第52週為7.5。應注意，此明顯的惡化幾乎全係由於「姿勢」評分參數之變化所致(在基線和第26週姿勢得分=1；在第52週=5)且該病患在檢驗時抱怨左膝疼痛。此外，在檢驗之前該受試者的左腳姆趾已受傷；此傷在檢驗後11天被認為已解決。排除病患4的這些離群效應，經化合物2治療造成第26週的平均SARA得分顯著下降，其在第52週進一步些微改善。

軌跡追蹤測驗(TMT)係用來評估病患的認知功能。TMT為最廣泛使用的神經心理學試驗之一且係包括在多數試驗題組中。TMT為一種評估一般智力和認知功能不全之診斷工具(Tombaugh et al.[2004]；Cavaco et al.[2013])。在TMT的A部分中，係要求受試者以遞增的順序連接一組數字。此項任務為視覺搜尋和一般目視及運動運作速度之組合。B部分係呈現一數字和字母交替的序列。當將其以遞增方式連接時，受試者必須主動地在二類別間切換，但交替順序。因此，此項任務被認為係包括一執行功能成份，因為當連接該等符號時，受試者必須在各類別間主動切換(MacPherson et al.[2017])。

TMT-A主要係評估感性的和心理運動速度。TMT-B更特定地係評估心理彈性和變換能力。TMT B減掉TMT A分數係用來移除可歸因於TMT A的書寫運動和目視掃描成份的變數。此項所衍生的得分係反映TMT B的獨特任務要求。

在一社區居民年齡18-89歲(n=911)之TMT A和TMT B的規範性數據研究中，在18-24歲的群組中(n=155)，平均(SD)值就TMT A為22.9(6.9)而TMT B為49(12.7)(Tombauch et al.[2004])。相反的，在本研究中病患完成軌跡A和軌跡B所花費的平均時間分別為67.8秒(SD=60.3s)和193.8秒(SD=197.0)。在基線時，完成軌跡B減去軌跡A所花費的平均時間差為126.0秒(SD=142.9秒)。此項顯示在本研究中GD-3病患在基線時展現某種程度的認知功能不全。

在第52週，完成軌跡A所花費的平均時間為56.5秒(SD=55.2秒)而軌跡B為122.7秒(SD=91.8秒)。6位病患中有4位在完成軌跡A所花費的時間上展現下降而6位病患中有6位在完成軌跡B所花費的時間上展現下降。由於在病患5中低量的化合物2暴露，因此排除此病患，6位病患中有4位展現TMT-A下降以及5位病患中有5位展現TMT-B下降。

在第52週，6位病患中有5位展現(TMT B-TMT A)時間下降。個別的結果係如下表所示。

在52週，完成軌跡B所花費的時間減去軌跡A的平均差為66.2秒(SD=54.3)。排除病患5，在第52週5位病患中有4位在軌跡B減去軌跡A上展現改善，其中平均改善為-71.4秒(--31.6%)(SD 99.3秒(37.6%))。

使用功能性磁共振造影(fMRI)進一步評估神經功能。因為在第52週會議時無收集到fMRI數據而排除病患2。在基線篩選、第26週和第52週訪診時進行休息狀態的fMRI篩選會議。4位受試者(病患1、3、4和5)的連接推定進入第二期分析為「符合」組。如上述，由於可能對於研究用藥不遵從，而將病患5隔除。如他處所述進行分析(Smith et al.[2009])。

發現「符合」組的受試者在更廣泛腦部區域之分布位置之間比不未符合組展現增進的連接性，其中在後側和前側之間強度漸增為最顯著的特點。在解剖學層面上，符合組的受試者在枕-頂結構和額部、顳部及邊緣目標之間展現廣泛和堅實的強化連接。病患5中連結的變化更適度且限制在空間上近端結構。在功能的層面上，在每位病患中(病患5除外)皆可看到預設模式和內側額葉網路之間增強的連接。此項顯示這些不同網路內的訊號變得更凝聚，使得腦活動可以在認知儲備(後部)和較高階執行功能(前部)之間更有效轉移。休息狀態網路(RSN)2和3(「認知-語言-正確拼字」和「認知-空間」)至RSN 8和9(執行和左額頂)之一致互應的定位亦為明顯的。連接性變化的空間分布對病患5更為重要，其主要係反映額內側和額頂網路之間的重疊。此二項透視顯示完全遵守治療協議的病患在腦後部和前部之間發展更佳的凝聚，使得整個腦部變得更易於有效的資訊轉移。其中明顯的，病患5之改變的連接出現在前腦區域的較窄位置並代表治療利益之較低完整性的證據。

此等結果係彙整於下表中。進行不同的腦部解剖學區域間的連結之空間分析用以定義退化的體素平均強度之相關係數來進行。此等結果顯示在病患1、3、4和6中預設模式網路和執行功能網路間的連結增加，但在病患5中則下降。

另外發現，二位病患在第52週經歷脾體積下降及平均血小板濃度平均上增加9.3%(範圍-8.2%至+45.3%)，所有的病患維持在大於120 x 10⁹/L血小板數之治療目標。平均血小板濃度增加主要是6位病患中有3位是增加的。在血紅素量上並無臨床上有意義的變化。

實例6：在健康人類志願者中化合物2的藥物動力學

進行二個第1期臨床研究用以評估化合物2在有或無食物的存在下於健康人類志願者中之藥物動力學、藥效動力學、安全性和耐受性。化合物2亦稱為venglustat。

研究1

研究1為在健康成年男性志願者中的2-部分、單一中心試驗。第1部分為雙盲、隨機、安慰劑對照的先後漸增單一劑量之化合物2的安全性、耐受性和PK研究。第2部分為在有或無高脂飲食下化合物2之PK的開放性、單世代、隨機、2-順序、2-時期、2-治療交叉研究。

研究的第1部分招收及隨機分配55位健康男性(安慰劑，n=14；2-、5-、15、25-、50和100-mg劑量，各n=6；150-mg劑量，n=5)。8位健康男性參與第2部分。

在第1部分中受試者係隨機分配在第一天早上至少10-小時禁食後接受2、5、15、25、50、100或150mg的化合物2(L-蘋果酸鹽形式)或匹配的安慰劑。在第2部分中，受試者係隨機分配在禁食(至少給藥的10小時之前和4小時之後)或標準化的高脂早餐(~815kcal)後30分鐘，接受單一口服劑量的5mg化合物2。7-天清除期之後，讓參加者交叉投入其他條件。

在研究1第1部分中，在研究藥物給藥(0小時)時及給劑後0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、24、48、72和96小時的時間進行化合物2之血漿濃度的血液採樣。在研究藥物投予前2小時開始至之後的48小時，收集尿液樣本進行化合物2濃度的分析。

在研究1第2部分中，係在給劑後0、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、24和48小時進行化合物2之血漿濃度的血液採樣。

從第1部分中，發現在2至150mg劑量的化合物2的單一口服給劑後，在3-5.5小時的中位數時間時發生最大血漿濃度(C_max)，之後血漿濃度以28.9小時的幾何平均t_1/2開始指數性下降。整個劑量範圍中增加的暴露接近與劑量成比例：75-倍劑量增加分別造成97.3-、89.2-和85.9-倍的幾何平均C_max、AUC_last和AUC_inf值增加。PK結果係顯示於下表中(AUC=為最後可測量濃度或外推至無限之時間濃度曲線下的面積；t_1/2=終半衰期；CL/F=血漿之表觀總清除率；CV=變異係數；SD=標準差；t_max=達到C_max的時間；Vss/F=穩態的表觀分布體積)：

從第2部分，發現投予5mg劑量和高脂飲食，相較於禁食條件對於化合物2暴露並無影響。無論有飲食或禁食，中位數t_max為6.00小時。飲食/禁食幾何平均比率就C_max和AUC_last分別為0.92和0.91。受試者內的變異(亦即飲食與禁食)係佔總受試者變異的一半以下。

研究2

研究2為在健康成年男性和女性志願者中的單一中心、雙盲、隨機、安慰劑對照、先後遞增重複給劑的化合物2之安全性、耐受性、PK和藥物動力學研究。

本研究係招收及隨機分配36位健康成人(19位男性和17位女性)(各組n=9)。受試者係經隨機分配於至少10-小時禁食後接受每天一次的5、10或20mg化合物2劑量(以5-mg的L-蘋果酸鹽形式之膠囊提供)或安慰劑進行 14天。

用於化合物2之血漿濃度的血液取樣係如下：第1天，給劑後0、0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12和16小時；在第2-5、8、11和13天，於0h；在第14天，給劑後0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12小時；在第15-17天，分別為第14天給劑後24、48和72小時。於第1天(給劑後0小時)及繼續於第14天給劑後的0-24小時，收集尿液樣本進行化合物2濃度分析。於第1-5、8、11、13和14天在給劑後0小時；及於第15天在第14天給劑後24小時，評估藥物動力學的療效指標(血漿GL-1、GL-3和GM3濃度)。

發現在接受每天一次5、10或20mg的化合物2歷時14天的受試者中，血漿C_max發生在第1天和第14天給劑後2-5小時的中位數時間時。在第5天之後C_trough值達到高峰。在5-20mg的劑量範圍內增加的化合物2暴露接近與劑量成比例：此4-倍劑量增加分別造成幾何平均C_max和AUC_0-24值在第14天3.76-和3.69-倍增加。研究2的PK結果係彙整於下表中：

14個每天一次的化合物2劑量後，其24-小時無變化尿液排泄分率(平均fe_0-24)範圍介於26.3%和33.1%之間，無任何明顯劑量-相關性。平均CL_R(0-24)範圍介於1.49L/h和2.07L/h之間，低於觀察到的血漿CL/F大約3.18-3.86-倍。

安慰劑病患中的血漿GL-1、GL-3和GM3整體仍然與基線時相類似，而在整體3個化合物2給劑組，血漿GL-1和GM3量與基線相比為時間-和劑量依賴地下降，如下表中所示(在重複遞增劑量的研究中於第15天，就葡萄糖神經醯胺(GL-1)、醯基鞘氨醇三己糖苷(GL-3)和GM3神經節苷脂(GM3)之治療比率的評估點)：

對GL-1之最大持續效應於5-和10-mg組係發生在第11天及20-mg組為第8天。與基線相比平均計算的GL-1下降於第15天在5-、10-和20-mg組分別為41.9%、69.6%和74.6%。在基線時於5-mg化合物2接受者中有1位，及於第15天在5-、10-和20-mg組分別有3、5和9位受試者，GL-1值係低於定量下限(LLOQ)。

於第13天開始最大持續GM3下降發生在所有化合物2給劑組。平均第15天血漿GM3量就5-、10-和20-mg劑量組分別為基線的42.7%、49.4%和57.8%。在第15天於10-和20-mg劑量組中分別有1和2位受試者GM3低於LLOQ。

在所有的化合物2給劑組中，血漿GL-3亦隨時間下降，但變量和低基線GL-3值相對於LLOQ限制平均計算的GL-3下降。在安慰劑、5-、10-和20-mg劑量組中在基線時分別有1、3、1和6位受試者，及在第15天分別有4、9、7和9位受試者GL-3值係低於LLOQ。

與基線相比歸因於化合物2的平均估算血漿GL-1下降(90% CI)C_trough在5、10和20mg劑量組中(分別為19.0、47.5和69.9ng/mL)分別為67.0% (54.4-79.7%)、74.4%(63.7-85.2%)和76.3%(64.8-87.8%)。

結論

在這些研究中，當以範圍從2-150mg之單一劑量或範圍從5-20mg每天一次重複給藥歷時14天時，健康受試者中的化合物2暴露(C_max和AUC)係接近與劑量成比例。相較於禁食，高脂飲食對於接受單一5-mg劑量的受試者之暴露並無影響。就5-20mg重複的每天一次劑量，係在5天內達到穩態；年齡或性別皆不會影響累積。雖然GL-3的基線量太低而無法用作為藥物動力學的生物標記，但在藥物動力學上，重複每天一次的化合物2劑量以時間-和劑量-依賴的方式降低了GL-1和GM3的血漿濃度，與化合物2-媒介的GCS抑制作用一致。劑量-依賴的GL-1降低證實了化合物2預期的作用機制：藉由GCS抑制神經醯胺形成GL-1。

在所有的研究中，安全性樣貌係藉由在最後的研究醫藥給劑後經由10天監測治療中出現的不良事件(TEAE)，包括嚴重不良事件[SAE])、ECG監測、實驗室數值和身體檢查來評估。

在任何的此等研究中並無死亡、SAE、嚴重TEAE或TEA導致研究中斷。

在任何的此等研究中並無臨床上相關的血液學或生化學異常的報告。在任何的此等研究中生命徵象與基線相比並無顯示相關變化。在單一漸增的劑量和食物效應研究中，ECG參數顯示無相關變化；在多重遞增劑量研究中，在任何劑量的化合物2接受者中，對照安慰劑，與平均基線相比ECG參數並無統計上顯著的變化。應了解，當已結合上述具體實例描述本發明的同時，前述說明和實例係希望用於說明而非限制本發明之範圍。在本發明範圍內的其他態樣、優點和修改對於熟習本發明所屬技術之技術者為顯而易見的。

實例7：在法布瑞氏症病患中化合物2的臨床研究

方法

於年輕典型法布瑞氏症病患中進行一化合物2之三年開放性研究，用以評估化合物2在成年男性法布瑞氏症病患中的長期安全性、藥物動力學和探索性療效。在本研究中招收11位受試者，且有7位受試者完成所有方面的研究。全部的受試者，經基因型和殘餘α-半乳糖苷酶活性低於偵測量確認，為經診斷患有典型法布瑞氏症男性(11位中有9位在GLA基因上具有無意義突變)。所有的受試者在血漿中具有至少65ng/mL的lyso-GL3量且之前並無法布瑞氏症-特定的治療。受試者的中位數年齡為24歲(19-37歲範圍)。

病患係投予15mg化合物2之每日口服劑量。GL-3沉積的清除係藉由於第12、26、52和156週採取切片來監測，其係以光學顯微鏡半定量評估(重點放在皮膚微血管內皮細胞)。各樣本係由3位病理學家就GL-3包涵物的存在以四分量表獨立評分，並根據Eng et al.,N.Engl.J.Med.345：9-16(2001)分等級為0分(無/微量)、1分(輕度)、2分(中度)或3分(嚴重)。每位病患每個時間點的單一得分係採用三位病理學家過半數的評分所產生。若無法產生過半數的得分，則使用中位數的得分(造成某些為分數之得分)。在基線及第12、26、52和156週時亦分析血漿樣本之GL-3、lyso-GL-3、GL-1和GM3。在基線及第12、26、52和156週時使用SF-36評分準則分析疼痛得分和腹部症狀。

從基線至第156週在多次的訪診中使用簡明版Short Form-36(SF-36)問卷評估病患。其為用於測量8個不同健康面向的36-項目問卷調查[活力(vitality)、身體功能(physical functioning)、身體疼痛(bodily pain)、整體健康自覺狀況(general health perceptions)、身體角色功能(physical role functioning)、情感角色功能(emotional role functioning)、社會角色功能(social role functioning)和精神健康(mental health)]。各8各面向之得分範圍從0(最大失能)至100(無失能)，且因此，較高的分數係表示較佳的健康狀況。此外，腸胃症狀，包括腹痛、腹 脹和排便，係使用修訂版的發炎性腸道嚴重度評分系統來評估。做為這些評估的部分所問的問題包括：(1)病患在最近10日內是否有腹痛，(2)在最近10日內所經歷的腹痛之嚴重度為何，使用0(無疼痛)至100(非嚴重疼痛)等級，及(3)在最近10日內病患發生腹痛有幾天。

結果

在第156週，五位病患在皮膚GL-3評分上顯示下降1-分，二位病患已完全清除GL-3包涵物，一位病患無變化，及一位病患缺少樣本。在156-週的研究期間，平均血漿GL-1量下降69%，平均血漿GM3量下降60%，平均血漿GL-3量下降77%，及平均血漿lyso-GL3量下降52%。血漿GL-1和GM3在治療的前面2-4週內顯現非常快速的下降。全部四種測量皆顯示持續的保持血漿載量下降，其在第52週大多已穩定。

血漿和尿液數據係彙整於下表中：

這些結果展現投予15mg/天之化合物2以整體漸進的方式一貫地降低體內GL-1、lyso-GL-1和GM3。

另外，分析來自之前完成的agalsidase β(Fabrazyme)之安慰劑對照的第3期試驗數據，進行比較(參見Eng et al.,N.Eng.J.Med.,345：9(2001)。與agalsidase β相較，歷史對照臂為第3期試驗中經agalsidase β治療的病患，並將在多個時間點至高三年之血漿GL-3的變化相比較。納入標準和基線特徵在二個研究間為相似的。為了加強比較，以傾向評分為基準使用年齡、血漿GL-3、性別、UPCR(<500mg/g對500-1000mg/g對>1000mg/g)及eGFR(<80對

80mL/min/1.73m²)之基線變數，將接受化合物2的病患與第3期研究的病患進行配對。就安慰劑比較，11位接受化合物2的病患與19位病患匹配，而agalsidase β比較則有28位病患。在三組中的所有病患皆為男性且展現升高的血漿GL-3、UPCR<500mg/g及eGFR

80mL/min/1.73m²。在三組中平均年齡為相似的。比較顯示以化合物2治療26週，相較於安慰劑使得血漿GL-3顯著下降，-3.62μg/mL對-1.06μg/mL(P<0.0001)。當相較於agalsidase β，以化合物2治療在52週產生類似的血漿GL-3下降，在104週和在156週化合物治療的血漿GL-3下降明顯(在104週，p=0.0351；在156週，p=0.0081)。相較於以agalsidase β治療病患的4.44μg/mL，以化合物2治療的病患在156週後，血漿GL-3量為1.90μg/mL。

皮膚GL-3包涵物評分之詳細結果係顯示於下表中(0分代表無GL-3包涵物)：

除了以光學顯微鏡評分GL-3皮膚包涵物，亦使用電子顯微鏡造影之計點藉由遮罩的判讀儀估算內皮細胞細胞質中GL-3包涵物所佔的體積分量。使用7500x放大率的電子顯微鏡得到至少50個淺層內皮細胞微血管影像。使用雙邊t試驗評估基線和各時間點治療後數值之間的差異。結果係如下表所示：

這些結果顯示投予15mg/天的化合物2以總體漸進的方式一貫地降低皮膚中GL-3包涵物的量。一般而言，相較於深層血管內皮細胞和其他皮膚組織，結果對淺層血管內皮而言更為明顯。

9位病患中有7位在第26週整體身體疼痛改善(SF-36)，而6位病患中有3位在第156週整體身體疼痛評分改善(SF-36)。在基線時具有腸胃疼痛的病患中，在第26週疼痛(腹痛)嚴重度下降的在5位病患中有4位，而在第156週4位病患中有4位。腸胃疼痛天數下降的在第26週5位病患中有5位，在第 156週4位病患中有3位。

腹痛測量的詳細結果係顯示於下表中。

這些結果顯示投予15mg/天的化合物2以總體漸進的方式一貫地降低腹痛和身體的不適。

此外，當本發明之特質或態樣係根據馬庫西群組(Markush group)描述時，熟習本項技術者應了解，本發明亦據此根據馬庫西群組之任何個別成員或成員之亞群族描述。

所有的出版品、專利申請案、專利和其他文中所提的參考文獻係明確地以全文引用的方式併入本文中，如同其各自個别地以引用的方式併入之程度。在有衝突之情況下，則以本說明書，包括定義為主。

Claims (27)

1. 一種於有此需要之對象中供治療或防止核上凝視麻痺(例如，與溶體儲積症相關)之方法，該方法係包括投予該對象一有效量之式(I)化合物，

   

   或其醫藥上可接受鹽或前藥，其中：

   R¹係選自氫、鹵素(例如，氟)、氰基、硝基、羥基、硫基、胺基、C_1-6-烷基(例如，甲基或乙基)、C_2-6-烯基、C_2-6-炔基、C_1-6-烷氧基、C_2-6-烯氧基和C_2-6-炔氧基，其中該烷基、烯基、炔基、烷氧基、烯氧基或炔氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、氰基、硝基、羥基、硫基或胺基之基團取代；

   R²和R³獨立地係選自C_1-3-烷基，視需要經一或多個(例如，1、2或3個)鹵素取代，或R²和R³共同形成一環丙基或環丁基基團，其視需要經一或多個(例如，1或2個)鹵素取代；

   R⁴、R⁵和R⁶各自獨立地係選自氫、鹵素、硝基、羥基、硫基、胺基、C_1-6-烷基和C_1-6-烷氧基，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、羥基、氰基和C_1-6-烷氧基之基團取代；及

   A為5-或6-員芳基或雜芳基基團(例如，苯基或噻唑基)，其視需要經1、2或3個獨立地選自鹵素、羥基、硫基、胺基、硝基、C_1-6烷氧基和C_1-6烷基之基團取代。
2. 如請求項1之方法，其中R¹係選自氫、氟、甲基和乙基，其中該甲基或乙基視需要係經1或2個選自鹵素、羥基、硫基或胺基之基團取代。
3. 如請求項1或2之方法，其中R²和R³各自獨立地係選自甲基和乙基基團，其視需要經一或多個氟取代。
4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中R⁴係選自鹵素(例如，氟)、C_1-3-烷基(例如，甲基)和C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)，其中該烷基或烷氧基視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素和C_1-3-烷氧基(例如，甲氧基或乙氧基)之基團取代。
5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中R⁵和R⁶各自為氫。
6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中R⁴為氟或2-甲氧基乙氧基，而R⁵和R⁶為氫。
7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中R⁴係位於與其相連接之苯環的4位置(亦即A取代基的對位)。
8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中A為苯基，其視需要係經一或多個(例如，1、2或3個)選自鹵素、羥基、硫基、胺基、硝基、C_1-6烷氧基和C_1-6烷基(例如，甲基)之基團取代。
9. 如請求項8之方法，其中與A取代基相連接的二個基團係位在彼此互為1,3-或1,4-關係之位置(亦即，間位或對位)。
10. 如請求項1至7中任一項之方法，其中A為含有1或2個選自N和S之雜原子的5-員雜芳基基團。
11. 如請求項10之方法，其中與A取代基相連接的二個基團係位在彼此互為1,3-關係之位置(亦即，間位)。
12. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該化合物為式(II)、(III)或(IV)之化合物，

    

    

    

    或其醫藥上可接受鹽或前藥。
13. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該化合物為式(V)之化合物，

    

    或其醫藥上可接受鹽或前藥。
14. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該化合物為式(VI)、(VII)或(VIII)之化合物，

    

    

    

    或其醫藥上可接受鹽或前藥。
15. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該化合物為式(IX)或(XI)之化合物

    

    (IX)

    

    或其醫藥上可接受鹽或前藥。
16. 如請求項15之方法，其中R⁴為氟。
17. 如請求項1之方法，其中該化合物係選自：

    

    啶-3-基(2-(4'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)丙-2-基)胺甲酸酯；(S)-

    

    啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯；(S)-

    

    啶-3-基(2-(4’-(2-甲氧基乙氧基)-[1,1’-聯苯]-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯；及其醫藥上可接受鹽類和前藥。
18. 如請求項1之方法，其中該化合物為

    

    啶-3-基(2-(4'-氟-[1,1'-聯苯]-3-基)丙-2-基)胺甲酸酯。
19. 如請求項1之方法，其中該化合物為(S)-

    

    啶-3-基(2-(2-(4-氟苯基)噻唑-4-基)丙-2-基)胺甲酸酯。
20. 如請求項1至19中任一項之方法，其中該對象係具有高雪氏症第3型(Gaucher disease Type 3)或尼曼匹克症C型(Niemann-Pick disease,type C)。
21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該核上凝視麻痺為共軛凝視麻痺。
22. 如請求項1至21中任一項之方法，其中該對象為哺乳動物，例如人類。
23. 如請求項1至22中任一項之方法，其中該化合物或其醫藥上可接受鹽或前藥係藉由全身給藥，例如經由非腸道外路徑來投予。
24. 如請求項23之方法，其中該化合物或其醫藥上可接受鹽或前藥係以口服給藥。
25. 如請求項1至24中任一項之方法，，其中該對象係經歷同時以酵素替代治療(ERT)，例如，使用葡萄糖腦苷脂酶(glucocerebrosidase)(例如，伊米苷酶(imiglucerase)、維拉苷酶(velaglucerase)或利他苷酶(taliglucerase))。
26. 如請求項1至25中任一項之方法，，其中該對象係投予約1mg至約50mg的化合物，例如5至50mg或從10至40mg或從10至30mg或從10至20mg或從20至30mg或從30至40mg或從40至50mg或從5至25mg或從20至50mg或從5至15mg或從15至30mg或約15mg的每日劑量。
27. 一種如請求項1至19中任一項所定義的化合物或其醫藥上可接受鹽或前藥，其係在有此需要的對象中用於治療或防止核上凝視麻痺(例如，與溶體儲積症相關)之方法中。

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