TW202041228A - 用於治療腫瘤的中藥組合物、其製備方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種用於治療腫瘤的中藥組合物及其製備方法，由以下原料製備而成：苦參、野菊花、金銀花、薄荷、茯苓、蒼朮、肉桂、丁香、黃芪、靈芝、川芎、木香和甘草。本發明的中藥組合物的配方經大小白鼠藥效試驗證明抗腫瘤效果顯著，並且藥材獲取簡便，製備方法簡單。

Description

用於治療腫瘤的中藥組合物、其製備方法及其用途

本發明屬於中藥領域，關於一種用於治療腫瘤的中藥組合物及其製備方法和用途。

目前，惡性腫瘤的治療主要採用手術治療、化學治療或放射線治療等，其中手術治療術後恢復困難，化學治療和放射線治療等對人體傷害較大。

現在的惡性腫瘤的治療中，抗腫瘤藥物市場近年來呈逐年增長的勢頭，但由於腫瘤病人逐年增加，且多數抗腫瘤藥物毒副作用較大，因此開發一種效果明顯，且副作用小的抗癌藥物具有重要的意義。

本發明一方面提供一種用於治療腫瘤的中藥組合物，另一方面提供一種用於治療腫瘤的中藥組合物的製備方法，再一方面提供所述用於治療腫瘤的中藥組合物的用途和一種治療腫瘤的方法。

本發明的用於治療腫瘤的中藥組合物，由以下重量配比的原料製成： 苦參3％-12％，野菊花5％-15％，金銀花2％-12％，薄荷5％-15％，茯苓5％-15％，蒼朮10％-20％，肉桂0.5％-3％，丁香0.5％-3％，黃芪3％-12％，靈芝5％-15％，川芎10％-20％，木香5％-12％，甘草2％-10％。

在一個實施例中，所述用於治療腫瘤的中藥組合物由以下重量配比的原料製成：苦參5％-10％，野菊花5％-10％，金銀花3％-8％，薄荷5％-10％，茯苓5％-10％，蒼朮12％-20％，肉桂0.5％-3％，丁香0.5％-3％，黃芪5％-10％，靈芝5％-10％，川芎11％-15％，木香8％-12％，甘草3％-8％。

在一個實施例中，所述用於治療腫瘤的中藥組合物由以下重量配比的原料製成：苦參6％-10％，野菊花6％-9％，金銀花3％-6％，薄荷6％-9％，茯苓6％-9％，蒼朮15％-18％，肉桂1％-3％，丁香0.5％-1.5％，黃芪6％-10％，靈芝6％-10％，川芎12％-15％，木香8％-11％，甘草3％-6％。

在一個實施例中，所述用於治療腫瘤的中藥組合物由以下重量配比的原料製成：苦參8％，野菊花9％，金銀花4％，薄荷6％，茯苓6％，蒼朮17％，肉桂2％，丁香1％，黃芪8％，靈芝10％，川芎13％，木香9％，甘草7％。

在一個實施例中，所述用於治療腫瘤的中藥組合物由以下重量配比的原料製成：苦參7％，野菊花7％，金銀花6％，薄荷8％，茯苓8％，蒼朮15％，肉桂2％，丁香1.5％，黃芪7％，靈芝8％，川芎15％，木香10％，甘草5.5％。

在一個實施例中，所述用於治療腫瘤的中藥組合物由以下重量配比的原料製成：苦參8％，野菊花7％，金銀花5％，薄荷6％，茯苓9％，蒼朮18％，肉桂1.5％，丁香0.5％，黃芪6％，靈芝9％，川芎16％，木香9％，甘草5％。

在一個實施例中，所述用於治療腫瘤的中藥組合物由以下重量配比的原料製成：苦參6％，野菊花9％，金銀花8％，薄荷5％，茯苓9％，蒼朮19％，肉桂1％，丁香1％，黃芪6％，靈芝15％，川芎11％，木香9％，甘草10％。

在一個實施例中，所述用於治療腫瘤的中藥組合物由以下重量配比的原料製成：苦參9％，野菊花8％，金銀花3％，薄荷9％，茯苓8％，蒼朮16.5％，肉桂1％，丁香1％，黃芪9％，靈芝9％，川芎13.5％，木香10％，甘草3％。

在一個實施例中，所述用於治療腫瘤的中藥組合物的劑型為：注射劑、蜜煉丸劑、水丸劑、膠囊、片劑、滴丸劑、散劑、口服液、凝膠劑、煎膏劑、浸膏劑或膜劑。

另一方面，本發明還提供所述的用於治療腫瘤的中藥組合物的製備方法，包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取各中藥原料，分別粉碎，過篩後混合均勻； 步驟(2)：將步驟(1)所製備的中藥粉採用乙醇水溶液浸潤，然後加入滲漉桶中； 步驟(3)：將乙醇水溶液加入步驟(2)的滲漉桶中，浸泡後，進行滲漉；滲漉後的藥渣備用，並將所得醇滲漉液濃縮並乾燥得中藥複合粉末A； 步驟(4)：將步驟(3)所得藥渣加水煎煮，然後過濾，將所得藥液濃縮並乾燥得到中藥複合粉末B； 步驟(5)：將步驟(3)所得中藥複合粉末A和步驟(4)所得中藥複合粉末B混合均勻，即得所述中藥組合物。

在一個較佳的實施例中，所述步驟(1)中各種藥材粉碎細微性至10-100 目，較佳20-40目，最佳24目。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(2)和(3)中所用乙醇水溶液的濃度為40％-95％，較佳60％-80％，最佳70％。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(2)中將混合均勻後的中藥粉浸潤10-48小時，較佳18-30小時，最佳24小時。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(3)中的浸泡時間為2-48小時，較佳18-36小時。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(4)中水的用量為藥渣重量的2-10倍，水煎煮的次數為1-3次，每次煎煮0.5-2小時。

在一個實施例中，所述的用於治療腫瘤的中藥組合物的製備方法包括以下步驟： 步驟(1)：按照上述之一重量配比稱取各中藥原料，分別粉碎至細微性至10目-100目過篩後混合均勻； 步驟(2)：配製濃度為40％-95％的乙醇溶液備用；採用所配製的濃度為40％-95％的乙醇溶液將混合均勻後的中藥浸潤10-48小時，將浸潤後的中藥混合物分次加入滲漉桶，輕壓鋪平； 步驟(3)：將所配製的濃度為40％-95％的乙醇溶液加入到步驟(2)中的滲漉桶中，加至超過藥材表面1-2cm，浸泡預設時間後，將剩餘乙醇進行滲漉，保留藥渣備用；所得醇液減壓濃縮，乾燥得到中藥複合粉末A； 步驟(4)：將所述藥渣加2-10倍藥渣量的水，水煎提取0.5-2小時，離心過濾，藥液減壓濃縮乾燥得到中藥複合粉末B，將所述中藥複合粉末A和中藥複合粉末B混合均勻得到中藥組合物。

在一個較佳的實施例中，所述步驟(1)中各種藥材粉碎細微性至20-40目；最佳24目；所述步驟(2)和(3)中所配製的乙醇濃度為60％-80％，最佳70％。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(2)中將混合均勻後的中藥浸潤18-30小時；最佳24小時；所述步驟(3)中浸泡時間為2-48小時，較佳18-36小時。

另一方面，本發明還提供所述的用於治療腫瘤的中藥組合物的製備方法，包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取川芎、蒼朮、木香、丁香、肉桂、薄荷加適量水提取揮發油後，加環糊精包合；將提取揮發油後的水煎液過濾，收集濾液備用，並將所得藥渣備用； 步驟(2)：將步驟(1)中的提取揮發油後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓、黃芪、野菊花、靈芝、金銀、苦參和甘草混合，加水煎煮，濾出藥液，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到中藥混合藥液； 步驟(3)：將步驟(2)得到的中藥混合藥液濃縮至清膏，加入乙醇進行沉澱，過濾後得到混合醇液，備用； 步驟(4)：將步驟(3)所得的混合醇液濃縮並乾燥後，加入步驟(1)中的揮發油環糊精包合物，混勻而製得所述中藥組合物。

在一個較佳的實施例中，所述步驟(1)中提取揮發油所使用的水的量為所述藥材量的4-15倍，較佳4-8倍，最佳6倍，提取時間2-12小時；將得到的揮發油在40℃以下進行環糊精包合，包合時間為1-10小時，較佳2-8小時，最佳6小時。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(2)包括：將步驟(1)中提取揮發油後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓、黃芪、野菊花、靈芝、金銀花、苦參和甘草混合，加入10-15倍藥材量的水煎煮2-5次，每次1-2小時；然後過濾，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到中藥混合藥液。

在另一個較佳實施例中，所述步驟(3)包括：將步驟(2)得到的中藥混合藥液通過水浴進行濃縮，濃縮至相對密度為1.06-1.08的清膏，加入乙醇使含醇量達60％，靜置12-72小時，過濾後得到混合醇液。

在一個實施例中，所述的用於治療腫瘤的中藥組合物的製備方法包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取川芎、蒼朮、木香、丁香、肉桂、薄荷加適量水提取揮發油後，加環糊精包合，水煎液過濾另器收集作為濾液備用； 步驟(2)：將揮發油提取後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓，黃芪，野菊花，靈芝，金銀花，苦參，甘草加水煎煮，過濾藥液，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到中藥混合藥液； 步驟(3)：將得到的中藥混合藥液通過水浴濃縮至清膏，醇沉，加乙醇使含醇量達到50％-80％得到中藥混合醇液； 步驟(4)：將所述中藥混合醇液進行減壓濃縮，乾燥後，加入揮發油環糊精包合物製得中藥組合物。

在一個較佳的實施例中，所述步驟(1)中揮發油提取溶劑用量為4-15倍所述藥材量的水，提取時間2-12小時；得到的揮發油在40℃以下進行環糊精包合，包合時間1-10小時。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(1)中揮發油提取溶劑用量為4-8倍所述藥材量的水，最佳的可以為6倍；所述步驟(1)中進行環糊精包合時間為2-8小時，最佳6小時。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(2)包括：將揮發油提取後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓，黃芪，野菊花，靈芝，金銀花，苦參，甘草加10-15倍藥材量的水煎煮2-5次，每次1-2小時；將煎煮得到的藥液進行過濾，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到中藥混合藥液。

在另一個較佳的實施例中，所述步驟(3)包括：將得到的中藥混合藥液通過水浴進行濃縮，濃縮至相對密度為1.06-1.08的清膏，加入乙醇使含醇量達60％，靜置12小時以上得到中藥混合醇液。

另一方面，本發明還提供所述的用於治療腫瘤的中藥組合物的製備方法，包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取各中藥原料，混合均勻； 步驟(2)：向步驟(1)的混合均勻的中藥中加入乙醇水溶液，較佳為40％-80％的乙醇水溶液，加熱回流提取1-4次，每次1-2小時，將提取液合併，減壓回收乙醇後濃縮並乾燥，得到所述中藥組合物。

在一個較佳的實施例中，所述步驟(2)中的乙醇水溶液的濃度為50％-70％，最佳為60％。

在一個實施例中，所述的用於治療腫瘤的中藥組合物的製備方法包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取各中藥原料； 步驟(2)：配製濃度為40％-80％的乙醇溶液備用；將混合均勻的中藥中加入所配製的乙醇溶液，加熱回流提取1-4次，每次1-2小時，將提取液合併，減壓回收乙醇後進行濃縮乾燥，得到中藥組合物。

在一個較佳的實施例中，所述步驟(2)中配製濃度為50％-70％的乙醇溶液備用，較佳的配置濃度為60％的乙醇溶液。

再一方面，本發明還提供所述的用於治療腫瘤的中藥組合物在製備用於治療腫瘤的藥物中的用途。

再一方面，本發明還提供一種治療腫瘤的方法，其中將本發明所述的用於治療腫瘤的中藥組合物給予需要其的受試者。

再一方面，本發明還提供所述的用於治療腫瘤的中藥組合物，其用於治療腫瘤。

本發明的中藥組合物以苦參大苦大寒、清熱燥濕重用為君。苦參大苦大寒，其退熱泄降，蕩滌濕火之效，能殺濕熱所生之毒。以野菊花、金銀花、薄荷、茯苓和蒼朮為臣藥，共奏清熱燥濕解毒之效；其中野菊花、金銀花和薄荷疏風清熱，以清肺衛之熱毒；茯苓、蒼朮健脾祛濕，以祛脾胃之濕滯。濕熱一去，則陽亦衰微矣。故大隊苦寒中，少佐丁香、肉桂補火助陽以為反佐，防濕去陽微而功虧一簣。黃芪、靈芝益氣扶正，固本培元。溫陽與益氣共用，可防止諸藥苦寒太過、傷人脾胃。川芎、木香活血行氣、通達氣血，使氣行血暢，壅滯之濕熱毒邪自可隨氣血而去。故以肉桂、丁香、黃芪、靈芝、川芎和木香共為佐藥。甘草用於調和諸藥，補氣固表，溫中，調和藥物偏性，不傷正氣，為使藥。

本發明所述的中藥組合物的組方經大小白鼠藥效試驗證明抗腫瘤效果顯著，具有增強機體免疫功能和抗腫瘤的作用。並且藥材獲取簡單，製備方法簡單，成本相對低廉。

實施例1

一種用於治療腫瘤的中藥組合物包括以下重量配比的原料製成：苦參8％，野菊花9％，金銀花4％，薄荷6％，茯苓6％，蒼朮17％，肉桂2％，丁香1％，黃芪8％，靈芝10％，川芎13％，木香9％，甘草7％。

該中藥組合物的製備方法為：按照上述重量配比稱取各中藥原料，分別粉碎至細微性至20目過篩後混合均勻；配製濃度為70％的乙醇溶液備用；採用所配製的濃度為70％的乙醇溶液將混合均勻後的中藥浸潤至少24小時，將浸潤後的中藥混合物分次加入滲漉桶，輕壓鋪平；將所配製的濃度為70％的乙醇溶液加入到滲漉桶中，加至超過藥材表面1-2cm，浸泡18-30小時(最佳為浸泡20小時)後，將剩餘乙醇進行滲漉，保留藥渣備用；所得醇液減壓濃縮，乾燥得浸泡到中藥複合粉末A；將所述藥渣加2-10倍(最佳為8倍)藥渣量的水，水煎提取0.5-2小時(最佳為1小時)，離心過濾，藥液減壓濃縮乾燥得到中藥複合粉末B，將所述中藥複合粉末A和中藥複合粉末B混合均勻得到中藥組合物。

實施例2

一種用於治療腫瘤的中藥組合物包括以下重量配比的原料製成：苦參7％，野菊花7％，金銀花6％，薄荷8％，茯苓8％，蒼朮15％，肉桂2％，丁香1.5％，黃芪7％，靈芝8％，川芎15％，木香10％，甘草5.5％。

該中藥組合物的製備方法為：按照所述重量配比稱取川芎、蒼朮、木香、丁香、肉桂、薄荷加適量揮發油提取溶劑提取揮發油，揮發油提取溶劑用量為6倍所述藥材量的水，提取時間2-12小時(最佳為10小時)；提取揮發油後，在40℃以下進行環糊精包合，包合時間6小時；水煎液過濾另器收集作為濾液備用；將揮發油提取後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓、黃芪、野菊花、靈芝、金銀花、苦參和甘草混合，加入10-15倍(最佳為12倍)藥材量的水煎煮2-5次(最佳為3次)，每次1-2小時(最佳為1.5小時)；將煎煮得到的藥液進行過濾，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到中藥混合藥液；將得到的中藥混合藥液通過水浴進行濃縮，濃縮至相對密度為1.06-1.08的清膏，加入乙醇使含醇量達60％，靜置12小時以上(最佳為48小時)得到中藥混合醇液；將所述中藥混合醇液進行減壓濃縮，乾燥後，加入揮發油環糊精包合物製得中藥組合物。

實施例3

一種用於治療腫瘤的中藥組合物包括以下重量配比的原料製成：苦參8％，野菊花7％，金銀花5％，薄荷6％，茯苓9％，蒼朮18％，肉桂1.5％，丁香0.5％，黃芪6％，靈芝9％，川芎16％，木香9％，甘草5％。

該中藥組合物的製備方法為：按照所述重量配比稱取各中藥原料；配製濃度為60％的乙醇溶液備用；將混合均勻的中藥中加入6倍量所述配製的乙醇溶液，加熱回流提取2次(加熱至微沸騰進行回流提取)，每次1-2小時(最佳為1.5小時)，將2次提取液合併，減壓回收乙醇後進行濃縮乾燥，得到中藥組合物。

實施例4

一種用於治療腫瘤的中藥組合物包括以下重量配比的原料製成：苦參6％，野菊花9％，金銀花8％，薄荷5％，茯苓9％，蒼朮19％，肉桂1％，丁香1％， 黃芪6％，靈芝15％，川芎11％，木香9％，甘草10％。

該中藥組合物的製備方法為：按照上述重量配比稱取各中藥原料，分別粉碎至細微性至30目過篩後混合均勻；配製濃度為65％的乙醇溶液備用；採用所配製的濃度為65％的乙醇溶液將混合均勻後的中藥浸潤36小時，將浸潤後的中藥混合物分次加入滲漉桶，輕壓鋪平；將所述配製的濃度為65％的乙醇溶液加入到滲漉桶中，加至超過藥材表面1-2cm，浸泡18小時後，將剩餘乙醇進行滲漉，保留藥渣備用；所得醇液減壓濃縮，乾燥得浸泡到中藥複合粉末A；將所述藥渣加5倍藥渣量的水，水煎提取1-2小時(最佳為1.5小時)，離心過濾，藥液減壓濃縮乾燥得到中藥複合粉末B，將所述中藥複合粉末A和中藥複合粉末B混合均勻得到中藥組合物。

實施例5

一種用於治療腫瘤的中藥組合物包括以下重量配比的原料製成：苦參9％，野菊花8％，金銀花3％，薄荷9％，茯苓8％，蒼朮16.5％，肉桂1％，丁香1％，黃芪9％，靈芝9％，川芎13.5％，木香10％，甘草3％。

該中藥組合物的製備方法為：按照所述重量配比稱取川芎、蒼朮、木香、丁香、肉桂、薄荷加適量揮發油提取溶劑提取揮發油，揮發油提取溶劑用量為4倍所述藥材量的水，提取時間2-12小時(最佳為10小時)；提取揮發油後，在40℃以下進行環糊精包合，包合時間5小時；水煎液過濾另器收集作為濾液備用；將揮發油提取後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓、黃芪、野菊花、靈芝、金銀花、苦參和甘草加10-15倍(最佳為12倍)藥材量的水煎煮2-5次(最佳為3次)，每次1-2小時(最佳為1.5小時)；將煎煮得到的藥液進行過濾，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到中藥混合藥液；將得到的中藥混合藥液通過水浴進行濃縮，濃縮至相對密度為1.06-1.08的清膏，加入乙醇使含醇量達60％，靜置12小時以上(最佳為24小時)得到中藥混合醇液；將所述中藥混合醇液進行減壓濃縮，乾燥後，加入揮發油環糊精包合物製得中藥組合物。

藥效試驗

為了驗證本發明的中藥組合物在治療腫瘤方面的效果，採用實施例1和實施例2方法製得的中藥組合物(分別稱為中藥組合物1號和中藥組合物2號)用於以下藥效試驗。

本發明的用於治療腫瘤的中藥組合物成人臨床推薦劑量為生藥量7.6g生藥/60kg/d，換算成裸小鼠等效用量為1.4g/kg/d。試驗中採用2.8、1.4、0.7g/kg/d三個劑量組(分別相當於人臨床用量的2倍、等倍、1/2倍)。

本發明的用於治療腫瘤的中藥組合物對人肺腺癌細胞株(A549)裸小鼠模型的抑制作用。

本發明的實施例1和2所得樣品的各劑量組腫瘤體積在給藥後與模型對照組比較均有所下降，在給藥8天後腫瘤體積與模型對照組比較下降明顯(P＜0.01，P＜0.05)。與模型對照組比較，中藥組合物1號的高劑量組和中藥組合物2號的中劑量組的相對腫瘤增殖率在28-70％之間。2個樣品各劑量組瘤塊重量與模型對照組比較下降明顯(P＜0.01)。綜合本次試驗資料後發現：2號樣品中劑量組腫瘤體積在給藥4-20天5個檢測時間點與模型對照組比較均有差異，其相對腫瘤增殖率在給藥8天後在40以下，該給藥組瘤塊重量最小。

1試驗材料

1.1 受試藥物中藥組合物1號，中藥組合物2號；用法用量：口服，臨床推薦劑量為每日生藥量7.6g。

1.2 陽性對照藥複方環磷醯胺片，生產單位：通化茂祥製藥有限公司。適應症：惡性淋巴瘤、多發性骨髓瘤、淋巴細胞白血病、神母細胞瘤、卵巢癌、乳癌以及各種肉瘤及肺癌等。批號：160702，生產日期：2016.07.25，有效期至：2018.06。成分：複方製劑，組份為環磷醯胺(50mg)和人參莖葉總皂苷(50mg)。性狀：腸溶衣片，除去包衣後顯黃褐色或灰褐色。規格：每片含環磷醯胺50mg，人參莖葉總皂苷50mg，12片/板，2板/盒。用法用量：口服，成人一次1片，一日3-4次。儲存條件：遮光，密封，30℃以下保存。

1.3 試驗動物

品系	級別	體重	數量	性別	許可證號	合格證號	來源
裸小鼠 BALB/ c Nude	SPF級	19±1g	88	雌雄各半	SCXK(京)2012-0001	1140070 0187753	北京維通利華實驗動物技術有限公司

1.4 腫瘤細胞株

細胞名稱	用途	來源
A549人小細胞肺癌傳代細胞	製備裸小鼠肺癌移植瘤模型	中國醫學科學院基礎醫學研究所基礎醫學細胞中心

2試驗方法

2.1 劑量設計

2.1.1用於治療腫瘤的中藥組合物：成人臨床推薦劑量為7.6g生藥/60kg/d，試驗中按人與動物體表面積換算，小鼠用量為人用量的11倍，小鼠的給藥劑量為(7.6/60)×11＝1.4g生藥/kg/d，送檢藥液濃度配成2g生藥/ml，小鼠的給藥劑量換為體積為(1.4/2)*1＝0.7ml/kg/d，故三種提取物大、中、小劑量為1.4ml/kg/d、0.7ml/kg/d、0.35ml/kg/d(分別相當於人臨床用量的2倍、等倍及1/2倍)。

2.1.2 複方環磷醯胺片：成人臨床推薦劑量175mg/60kg/d，試驗中按人與動物體表面積換算，小鼠用量按人用量的11倍計算，小鼠的給藥劑量為(175/60)×11＝32mg/kg/d。

2.2人肺腺癌細胞株(A549)的培養細胞株培養在完全培養基中(DMEM培養液+10％胎牛血清，pH7.2)，置於37℃5％CO₂ 恆溫培養箱內，每天更換培養液，細胞培養至80％-90％融合率，0.25％胰蛋白酶消化，離心後傳代，待細胞培養至一定數量，用PBS稀釋成腫瘤細胞懸液接種於試驗動物體內。

2.3細胞體外活性檢測及腫瘤細胞懸浮液的製備在無菌條件下取生長良好的A549腫瘤細胞，用0.25％胰蛋白酶消化，離心後，混懸細胞，採用台盼藍染色法，使用全自動細胞計數儀檢測細胞活性並計數。用PBS稀釋成2×10⁷ 個細胞/ml濃度的腫瘤細胞懸浮液。

2.4 接種A549腫瘤細胞製備人肺癌移植瘤模型取體重為18+2g的裸小鼠，雌雄各半，在實驗動物中心適應性飼養7日。在無菌條件下，將裸鼠用75％乙醇皮膚消毒後，在裸鼠右腋皮下接種人肺腺癌A549細胞懸液0.2ml，接種後將裸鼠送回籠具，定期觀察小鼠的精神、飲食及排便等情況。接種1周左右，可見接種部位皮下長出米粒大小的硬結，為移植瘤模型建成。

2.5 分組及給藥接種腫瘤細胞2周後，挑選瘤塊、體重均勻的裸小鼠，隨機分為8組，分別為模型對照組、環磷醯胺陽性對照組、中藥組合物1號高、中、低三個劑量組、中藥組合物2號高、中、低三個劑量組，每組7只，分組當天開始給藥，每日一次，給藥量為0.2ml/10g，口服給藥，連續給藥3周。

2.6 觀察指標給藥當天測定裸鼠的體重、腫瘤體積，隔3日測定一次，三周後稱重處死裸小鼠，取出腫瘤組織稱重，計算每組平均瘤重、腫瘤生長抑制率、腫瘤體積、相對腫瘤體積、相對腫瘤增殖率。

計算方法：

腫瘤體積(tumor  volume，TV)的計算公式為：V＝1/2×a×b² 。其中a、b分別表示長寬高。

相對腫瘤體積(relative tumor volume，RTV)的計算公式為：RTV＝Vt/V0。其中V0為分籠給藥時(即d0)測量所得腫瘤體積，Vt為每一次測量時的腫瘤體積。

相對腫瘤增殖率T/C(％)(抗腫瘤活性的評價指標)的計算公式為：T/C％＝TRTV/CRTV×100％。(TRTV：治療組RTV；CRTV：陰性對照組RTV)。

2.7 統計學處理實驗資料經Excel表建庫整理後，用SPSS13.0統計套裝軟體進行分析，計量資料以

表示，兩組間比較用t檢驗，多組間比較用單因素方差分析， P＜0.05為差異有統計學意義。

3 試驗結果

3.1 A549腫瘤細胞計數(接種時細胞濃度)將細胞離心後，用PBS混懸，取10ul細胞懸液稀釋一倍後加20ul台盼藍染色劑，吹打均勻後加入細胞計數板內，插入全自動細胞計數儀內進行檢測。總細胞數：2.14×10⁷ /ml；活細胞數：1.5×10⁷ /ml；死細胞數：6.42×10⁶ /ml；細胞存活率：95.04％。

3.2 對人肺腺癌細胞株(A549)裸小鼠模型腫瘤體積生長情況的影響

表1中藥組合物對人肺腺癌細胞株(A549)裸小鼠模型腫瘤體積生長情況的影響

註：與模型對照組比較，

從結果可以看出中藥組合物2種工藝樣品在給藥2天後起腫瘤體積與模型對照組比較均有所下降。2個樣品在給藥8-20天後腫瘤體積與模型對照組比較明顯下降(P＜0.01，P＜0.05)，其中2號藥品中劑量組腫瘤體積在給藥4-20天5個檢測時間點與模型對照組比較均有差異(P＜0.01)，從數值上看差異也最為顯著。

3.3 對人肺腺癌細胞株(A549)裸小鼠相對腫瘤增殖體積(RTV)及相對腫瘤增殖率的影響

表2 中藥組合物對人肺腺癌細胞株(A549)裸小鼠相對腫瘤增殖體積(RTV)及相對腫瘤增殖率(T/C％)的影響

註：與模型對照組比較，

結果顯示：中藥組合物2號中劑量組的相對腫瘤增殖體積在給藥期間與模型對照組比較有差異(P＜0.05)，其餘各用藥組與模型組無差異。與模型對照組比較，中藥組合物1號高劑量組、中藥組合物2號中劑量組的相對腫瘤增殖率在28-70％之間，其餘用藥組的相對腫瘤增殖率在50-90％之間。

3.4 對人肺腺癌細胞株(A549)裸小鼠相對腫瘤重量的影響

表3中藥組合物對人肺腺癌細胞株(A549)裸小鼠模型腫瘤重量的影響

註：與模型對照組比較，

中藥組合物各劑量組瘤塊重量與模型對照組比較均有差異(P＜0.01)，本發明的中藥組合物2號中劑量組腫瘤塊重量最小。

4結論

本發明的中藥組合物對人肺腺癌細胞株(A549)裸鼠的腫瘤增長有一定的抑制作用。兩種提取工藝製得的樣品均可明顯降低裸鼠腫瘤體積、相對腫瘤增殖體積、腫瘤增殖率、腫瘤重量。整體藥效從高到低排序為：2號樣品＞1號樣品＞複方環磷醯胺片。

以上所述僅為本發明的較佳實施例，它們用於說明本發明的用於治療腫瘤的中藥組合物，而非限制本發明的範圍。本發明的保護範圍以申請專利範圍中記載的內容為準。

無。

無。

無。

Claims (17)

1. 一種用於治療腫瘤的中藥組合物，所述中藥組合物由以下重量配比的原料製成：  苦參3％-12％，野菊花5％-15％，金銀花2％-12％，薄荷5％-15％，茯苓5％-15％，蒼朮10％-20％，肉桂0.5％-3％，丁香0.5％-3％，黃芪3％-12％，靈芝5％-15％，川芎10％-20％，木香5％-12％，甘草2％-10％； 較佳地，所述中藥組合物由以下重量配比的原料製成： 苦參5％-10％，野菊花5％-10％，金銀花3％-8％，薄荷5％-10％，茯苓5％-10％，蒼朮12％-20％，肉桂0.5％-3％，丁香0.5％-3％，黃芪5％-10％，靈芝5％-10％，川芎11％-15％，木香8％-12％，甘草3％-8％； 更佳地，所述中藥組合物由以下重量配比的原料製成： 苦參6％-10％，野菊花6％-9％，金銀花3％-6％，薄荷6％-9％，茯苓6％-9％，蒼朮15％-18％，肉桂1％-3％，丁香0.5％-1.5％，黃芪6％-10％，靈芝6％-10％，川芎12％-15％，木香8％-11％，甘草3％-6％； 還更佳地，所述中藥組合物由以下重量配比的原料製成： 苦參8％，野菊花9％，金銀花4％，薄荷6％，茯苓6％，蒼朮17％，肉桂2％，丁香1％，黃芪8％，靈芝10％，川芎13％，木香9％，甘草7％； 或者，所述中藥組合物由以下重量配比的原料製成： 苦參7％，野菊花7％，金銀花6％，薄荷8％，茯苓8％，蒼朮15％，肉桂2％，丁香1.5％，黃芪7％，靈芝8％，川芎15％，木香10％，甘草5.5％； 或者，所述中藥組合物由以下重量配比的原料製成： 苦參8％，野菊花7％，金銀花5％，薄荷6％，茯苓9％，蒼朮18％，肉桂1.5％，丁香0.5％，黃芪6％，靈芝9％，川芎16％，木香9％，甘草5％； 或者，所述中藥組合物由以下重量配比的原料製成： 苦參6％，野菊花9％，金銀花8％，薄荷5％，茯苓9％，蒼朮19％，肉桂1％，丁香1％，黃芪6％，靈芝15％，川芎11％，木香9％，甘草10％； 或者，所述中藥組合物由以下重量配比的原料製成： 苦參9％，野菊花8％，金銀花3％，薄荷9％，茯苓8％，蒼朮16.5％，肉桂1％，丁香1％，黃芪9％，靈芝9％，川芎13.5％，木香10％，甘草3％。
2. 如請求項1所述之中藥組合物，其中，所述中藥組合物的劑型為：注射劑、蜜煉丸劑、水丸劑、膠囊、片劑、滴丸劑、散劑、口服液、凝膠劑、煎膏劑、 浸膏劑或膜劑。
3. 一種如請求項1或2所述之中藥組合物的製備方法，包括以下步驟：  步驟(1)：按照所述重量配比稱取各中藥原料，分別粉碎，過篩後混合均勻； 步驟(2)：將步驟(1)所製備的中藥粉採用乙醇水溶液浸潤，然後加入滲漉桶中； 步驟(3)：將乙醇水溶液加入步驟(2)的滲漉桶中，浸泡後，進行滲漉；滲漉後的藥渣備用，並將所得醇滲漉液濃縮並乾燥得中藥複合粉末A； 步驟(4)：將步驟(3)所得藥渣加水煎煮，然後過濾，將所得藥液濃縮並乾燥得到中藥複合粉末B；及 步驟(5)：將步驟(3)所得中藥複合粉末A和步驟(4)所得中藥複合粉末B混合均勻，即得所述中藥組合物。
4. 如請求項3所述之中藥組合物的製備方法，其中， 所述步驟(1)中各種藥材粉碎細微性至10-100目，較佳20-40目； 所述步驟(2)和所述步驟(3)中所用乙醇水溶液的濃度為40％-95％，較佳60％-80％； 所述步驟(2)中將混合均勻後的中藥粉浸潤10-48小時，較佳18-30小時； 所述步驟(3)中的浸泡時間為2-48小時； 所述步驟(4)中水的用量為藥渣重量的2-10倍，水煎煮的次數為1-3次，每次煎煮0.5-2小時。
5. 一種如請求項1或2所述之中藥組合物的製備方法，包括以下步驟：  步驟(1)：按照所述重量配比稱取各中藥原料，分別粉碎至細微性為10-100目，過篩後混合均勻； 步驟(2)：配製濃度為40％-95％的乙醇溶液備用；採用所製備的濃度為40％-95％的乙醇溶液將混合均勻後的中藥浸潤10-48小時，將浸潤後的中藥混合物分次加入滲漉桶，輕壓鋪平； 步驟(3)：將所述配製的濃度為40％-95％的乙醇溶液加入到步驟(2)中的滲漉桶中，加至超過藥材表面1-2cm，浸泡預設時間後，將剩餘乙醇進行滲漉，保留藥渣備用；所得醇液減壓濃縮，乾燥得到中藥複合粉末A；及 步驟(4)：將所述藥渣加2-10倍藥渣量的水，水煎提取0.5-2h，離心過濾，藥液減壓濃縮乾燥得到中藥複合粉末B，將所述中藥複合粉末A和所述中藥複合粉末B混合均勻得到所述中藥組合物。
6. 如請求項5所述之中藥組合物的製備方法，其中， 所述步驟(1)中各種藥材粉碎細微性至20-40目； 所述步驟(2)和所述步驟(3)中所配製的乙醇濃度為60％-80％； 所述步驟(2)中將混合均勻後的中藥浸潤18-30小時； 所述步驟(3)中的浸泡時間為2-48小時。
7. 一種如請求項1或2所述之中藥組合物的製備方法，包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取川芎、蒼朮、木香、丁香、肉桂、薄荷加適量水提取揮發油後，加環糊精包合；將提取揮發油後的水煎液過濾，收集濾液備用，並將所得藥渣備用； 步驟(2)：將步驟(1)中的提取揮發油後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓、黃芪、野菊花、靈芝、金銀、苦參和甘草混合，加水煎煮，濾出藥液，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到中藥混合藥液； 步驟(3)：將步驟(2)得到的中藥混合藥液濃縮至清膏，加入乙醇進行沉澱，過濾後得到混合醇液，備用； 及 步驟(4)：將步驟(3)所得的混合醇液濃縮並乾燥後，加入步驟(1)中的揮發油環糊精包合物，混勻而製得所述中藥組合物。
8. 如請求項7所述之中藥組合物的製備方法，其中， 所述步驟(1)中提取揮發油所使用的水的量為所述藥材量的4-15倍，提取時間2-12小時；將得到的揮發油在40℃以下進行環糊精包合，包合時間為1-10小時； 所述步驟(2)包括：將步驟(1)中提取揮發油後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓、黃芪、野菊花、靈芝、金銀花、苦參和甘草混合，加入10-15倍藥材量的水煎煮2-5次，每次1-2小時；然後過濾，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到所述中藥混合藥液； 所述步驟(3)包括：將步驟(2)得到的中藥混合藥液通過水浴進行濃縮，濃縮至相對密度為1.06-1.08的清膏，加入乙醇使含醇量達60％，靜置12-72小時，過濾後得到所述混合醇液。
9. 一種請求項1或2所述之中藥組合物的製備方法，包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取川芎、蒼朮、木香、丁香、肉桂、薄荷加適量水提取揮發油後，加環糊精包合，水煎液過濾另器收集作為濾液備用； 步驟(2)：將揮發油提取後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓、黃芪、野菊花、靈芝、金銀花、苦參和甘草加水煎煮，過濾藥液，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到中藥混合藥液； 步驟(3)：將得到的中藥混合藥液通過水浴濃縮至清膏，醇沉，加乙醇使含醇量達到50％-80％得到中藥混合醇液；及 步驟(4)：將所述中藥混合醇液進行減壓濃縮，乾燥後，加入揮發油環糊精包合物製得所述中藥組合物。
10. 如請求項9所述之中藥組合物的製備方法，其中，所述步驟(1)中揮發油提取溶劑用量為4-15倍所述藥材量的水，提取時間2-12小時；得到的揮發油在40℃以下進行環糊精包合，包合時間1-10小時。
11. 如請求項9所述之中藥組合物的製備方法，其中，所述步驟(2)包括：將揮發油提取後得到的藥渣與按所述重量配比稱取的茯苓，黃芪，野菊花，靈芝，金銀花，苦參，甘草加10-15倍藥材量的水煎煮2-5次，每次1-2小時；將煎煮得到的藥液進行過濾，將過濾後的藥液與提取揮發油後得到的濾液合併得到所述中藥混合藥液。
12. 如請求項9所述之中藥組合物的製備方法，其中，所述步驟(3)包括：將得到的中藥混合藥液通過水浴進行濃縮，濃縮至相對密度為1.06-1.08的清膏，加入乙醇使含醇量達60％，靜置12小時以上得到所述中藥混合醇液。
13. 一種如請求項1或2所述之中藥組合物的製備方法，包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取各中藥原料，混合均勻； 步驟(2)：向步驟(1)的混合均勻的中藥中加入乙醇水溶液，較佳為40％-80％的乙醇水溶液，加熱回流提取1-4次，每次1-2小時，將提取液合併，減壓回收乙醇後濃縮並乾燥，得到所述中藥組合物。
14. 一種如請求項1或2所述之中藥組合物的製備方法，包括以下步驟： 步驟(1)：按照所述重量配比稱取各中藥成分； 步驟(2)：配製濃度為40％-80％的乙醇溶液備用；將混合均勻的中藥中加入所述配製的乙醇溶液，加熱回流提取1-4次，每次1-2小時，將提取液合併，減壓回收乙醇後進行濃縮乾燥，得到所述中藥組合物。
15. 一種如請求項1或2所述之中藥組合物在製備用於治療腫瘤的藥物中的用途。
16. 一種治療腫瘤的方法，其係將如請求項1或2所述之中藥組合物給予需要其的受試者。
17. 如請求項1或2所述的中藥組合物，其係用於治療腫瘤。