TW202039505A

TW202039505A - Il-17a抑制劑

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Publication number: TW202039505A
Application number: TW109100073A
Authority: TW
Inventors: 大衛安德魯寇特; 卡瓦米弗林蓬; 威廉葛林赫樓威; 史賓塞布萊恩瓊斯; 亞當馬克勒維森; 查爾士威爾斯三世拉格爾; 麥克殷里可里齊特; 布萊恩摩根華森; 麥可愛德華烏德曼
Original assignee: 美商美國禮來大藥廠
Priority date: 2019-01-07
Filing date: 2020-01-02
Publication date: 2020-11-01
Also published as: KR102600451B1; PE20212304A1; CA3125788A1; CA3125788C; AU2020207196A1; SG11202105776WA; SA521422452B1; JP2022516654A; US20220073526A1; CN113286795B; KR20210100143A; AU2020207196B2; WO2020146194A1; MX2021008176A; BR112021011095A2; ECSP21050201A; CO2021008776A2; TW202214648A; EP3908585B1; JOP20210179A1

Abstract

本發明提供作為IL-17A抑制劑之式II之某些二氟環己基-咪唑并嗒嗪基-咪唑啶酮化合物、其醫藥組合物，及使用式II化合物治療牛皮癬、類風濕性關節炎或多發性硬化症之某些症狀之方法。

Description

IL-17A抑制劑

本發明提供某些二氟環己基-咪唑并嗒嗪基-咪唑啶酮化合物、其醫藥組合物，及其用於治療牛皮癬、脊椎關節炎、類風濕性關節炎或多發性硬化症之方法。

免疫功能對於維持動態平衡及對疾病有效反應係關鍵的，及異常免疫反應為自體免疫性疾病之病理生理學之既定貢獻者。於某些疾病狀態下，已發現有助於此等異常自體免疫反應之關鍵路徑中之一些為用於治療性干預之有效方法。一個最近實例為開發介白素(IL)-17抑制劑。IL-17A為公認的促發炎細胞介素，其於慢性發炎中起著關鍵作用且為組織損傷之主要驅動者。IL-17A誘導對病原體之正常免疫及發炎反應，且亦可有助於慢性自體免疫性疾病，包括牛皮癬、脊椎關節炎、類風濕性關節炎及多發性硬化症。

IL-17家族由六種細胞介素(IL-17A至IL-17F)組成。IL-17受體(IL-17R)係指由IL-17RA及IL-17RC亞單元形成之異二聚體。IL-17A為自Th17細胞分泌之主要病理學細胞介素，其可充當同型二聚體或異二聚體以通過IL-17R信號傳導。(Isono, F.等人，Inhibiting RORgt/Th17 axis for autoimmune disorders,Drug Discovery Today (2014)第19卷(8) 1205-1211)。於皮膚及關節內，IL-17A作用於包括角化細胞、內皮細胞、纖維母細胞、破骨細胞、軟骨細胞及骨母細胞之細胞靶以刺激產生各種抗微生物肽、趨化因子及促發炎性及增殖性細胞介素，其繼而促進組織發炎及骨重塑。IL-23/IL-17A軸對牛皮癬疾病之發病機理之關鍵重要性已產生靶向此等細胞介素之許多新穎生物治療。此等生物製劑顯著改善患有中度至嚴重牛皮癬及牛皮癬性關節炎之患者之皮膚及關節症狀。

目前不存在針對中度至嚴重牛皮癬之高效口服投與治療。小分子IL-17A抑制劑可提供與抗IL-17A抗體相當的對牛皮癬及/或其他IL-17A依賴性疾病(諸如牛皮癬性關節炎)之功效。雖然IL-17A之抑制於一些情況下可增加機會感染之易感性，但是具有相對短半衰期之口服可獲得的小分子抑制劑可提供用於管理此風險之改良之藥劑。口服藥劑可使患者能停止服藥，及自身體快速清理抑制劑，因此使能更快速恢復對感染反應之能力。此外，對抗抗IL-17A抗體之抗藥物抗體可於一些患者中出現，且可降低針對IL-17A之抗體隨時間之功效。此失活路徑將針對小分子IL-17A抑制劑不起作用。

WO 2014/066726詳述作為IL-17活性之調節劑之某些化合物及其於治療醫學病狀(諸如發炎性疾病及其他IL-17相關病症)中之用途。

仍需要小分子IL-17A抑制劑以提供用於IL-17介導之疾病之改善之及/或口服可獲得的治療。本發明提供為IL-17A抑制劑之某些新穎化合物且證實藥理學性質，諸如例如強效抑制IL-17A及口服生物可利用率之有利組合。因而，據信本發明之化合物可用於治療牛皮癬、類風濕性關節炎及多發性硬化症。本發明之化合物可提供此等病症之替代治療。本發明之化合物可提供IL-17A之抑制劑，其針對某些患者具有功效、安全性及/或耐受性之改善之組合。

本發明提供式II化合物：

(II) 其中： X為CH或N； R¹ 為-CH₃ 、-CH₂ F、-CHF₂ 、-CF₃ 、-CH₂ CH₃ 、-CH₂ CF₃ 、-CH(CH₃ )₂ 、-CH₂ CHF₂ 、-CH₂ CH₂ F、-CF(CH₃ )₂ 、-CF₂ CH₃ 、-OCH₃ 、

、

、

、

及

；且 R² 為-H或-CH₂ OCH₃ ；或其醫藥上可接受之鹽。

本發明提供式I化合物：

(I) 其中： X為CH或N， R¹ 為-CH₃ 、-CH₂ F、-CHF₂ 、-CF₃ 、-CH₂ CH₃ 、-CH₂ CF₃ 、-CH(CH₃ )₂ 、-CH₂ CHF₂ 、-CH₂ CH₂ F、-CF(CH₃ )₂ 、-CF₂ CH₃ 、-OCH₃ 、

、

及

，或其醫藥上可接受之鹽。

特定式I化合物為式Ia化合物：

(Ia) 或其醫藥上可接受之鹽，其亦可被稱作N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺。

特定式I化合物為式Ib化合物：

(Ib) 或其醫藥上可接受之鹽，其亦可被稱作4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺。

特定式II化合物為式IIa化合物：LSN3436689异构体

(IIa) 或其醫藥上可接受之鹽，其亦可被稱作N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺。

另外，本發明提供醫藥組合物，其包含式I及/或II化合物，或其醫藥上可接受之鹽，及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。

下列特定實施例為式II化合物及/或其鹽。

本發明提供式II化合物，其中X為CH。

本發明提供式II化合物，其中X為N。

本發明提供式II化合物，其中R² 為-CH₂ OCH₃ 。

下列特定實施例為式I化合物及/或其鹽。

本發明提供式I化合物，其中X為CH。

本發明提供式I化合物，其中X為N。

本發明提供化合物，其為3-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺，或其醫藥上可接受之鹽。

本發明提供化合物，其為N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(二氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺，或其醫藥上可接受之鹽。

本發明提供化合物，其為4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺，或其醫藥上可接受之鹽。

本發明提供化合物，其為N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(三氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺，或其醫藥上可接受之鹽。

本發明提供化合物，其為N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺，或其醫藥上可接受之鹽。

另外，本發明提供選自由以下組成之群之化合物： 3-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-乙基-異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-甲基-異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(二氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1,1-二氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(2,2-二氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(2-氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺； 3-(3,3-二氟環丁基)-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(三氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-氟環丙基)異噁唑-4-甲醯胺； 3-[環丙基(二氟)甲基]-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-甲基環丙基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-氟-1-甲基-乙基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-異丙基-異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-乙基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； 4-異丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲氧基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； 4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； 3-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺；及 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(三氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺，或其醫藥上可接受之鹽。

另外，本發明提供醫藥組合物，其包含上述即時列表之特定實施例中之一者之化合物及/或其鹽，及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。

本發明化合物為IL-17A之強效抑制劑，及在向有需要患者投與後可提供治療效益，同時避免與生物IL-17A信號傳導拮抗劑(諸如IL-17抗體)相關之某些問題。因而，據信本發明化合物可用於治療其中過量IL-17A介導之信號傳導起作用之病狀及諸如牛皮癬、類風濕性關節炎、脊椎關節炎及多發性硬化症，包括某些免疫介導之症狀之減輕。亦據信本發明化合物可用於改善牛皮癬、類風濕性關節炎、脊椎關節炎、多發性硬化症、牛皮癬性關節炎、中軸脊椎關節炎、僵直性脊柱炎、化膿性汗腺炎、全身性紅斑狼瘡、掌蹠膿皰病(PPP)、異位性皮炎、哮喘及COPD之疾病症狀。

另外，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。另外，本發明提供式Ia及/或IIa化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於療法中。

於另一實施例中，本發明提供醫藥組合物，其包含式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。此外，本發明之此實施例提供用於治療牛皮癬之醫藥組合物，其包含式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，及一或多種醫藥上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。於另一實施例中，本發明提供用於治療類風濕性關節炎之醫藥組合物，其包含式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，及一或多種醫藥上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。於另一實施例中，本發明提供用於治療多發性硬化症之醫藥組合物，其包含式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，及一或多種醫藥上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。

另外，本發明提供一種治療選自由牛皮癬、類風濕性關節炎、脊椎關節炎、多發性硬化症、牛皮癬性關節炎、中軸脊椎關節炎、僵直性脊柱炎、化膿性汗腺炎、全身性紅斑狼瘡、掌蹠膿皰病(PPP)、異位性皮炎、哮喘及/或COPD組成之群之疾病或病症之方法，其包括向有需要患者投與有效量之式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽。另外，本發明提供一種治療牛皮癬之方法，其包括向有需要患者投與有效量之式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽。另外，本發明提供一種治療類風濕性關節炎之方法，其包括向有需要患者投與有效量之式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽。另外，本發明提供一種治療多發性硬化症之方法，其包括向有需要患者投與有效量之式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽。另外，本發明提供一種治療脊椎關節炎之方法，其包括向有需要患者投與有效量之式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽。

於一個實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療牛皮癬。於另一特定實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療類風濕性關節炎。於另一特定實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療多發性硬化症。於另一特定實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療脊椎關節炎。於另一特定實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療選自由以下組成之群之疾病或病症：牛皮癬、類風濕性關節炎、脊椎關節炎、多發性硬化症、牛皮癬性關節炎、中軸脊椎關節炎、僵直性脊柱炎、化膿性汗腺炎、全身性紅斑狼瘡、掌蹠膿皰病(PPP)、異位性皮炎、哮喘及/或COPD。

於又一實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療牛皮癬之藥劑。於又一實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療類風濕性關節炎之藥劑。於又一實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療多發性硬化症之藥劑。於又一實施例中，本發明提供式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療脊椎關節炎之藥劑。

本發明之化合物或鹽通常以醫藥組合物之形式投與，該等醫藥組合物包含式I及/或II化合物或其醫藥上可接受之鹽作為活性成分，及至少一種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。此等組合物可藉由各種途徑(包括口服、舌下、鼻、皮下、靜脈內及肌肉內)投與。此等醫藥組合物及其製備方法係此項技術中熟知。參見例如，Remington: The Science and Practice of Pharmacy (University of the Sciences in Philadelphia編輯，第21版，Lippincott Williams & Wilkins Co., 2005)。

式I及/或Ia及/或Ib及/或II及/或IIa化合物或其醫藥上可接受之鹽之組合物較佳調配成單位劑型，各劑量含有約0.5至約800 mg活性成分。術語「單位劑型」係指針對人類個體及其他哺乳動物適宜作為單位劑量之物理離散單元，各單元含有為產生所需治療效果所計算之預定量之活性物質，與至少一種適宜醫藥上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑之結合。應瞭解實際投與之化合物之量將藉由醫師根據相關情況(包括待治療之病狀、所選投與途徑、所投與之實際化合物、個別患者之年齡、體重及反應、及患者之症狀之嚴重度)確定。期望本發明之化合物（如例如本發明之醫藥組合物）將藉由長期投與用於治療牛皮癬、類風濕性關節炎及/或多發性硬化症。

本申請案主張分別在2019年1月7日及2019年5月3日申請之美國臨時申請案序列號62/789,247及62/842,770根據35 U.S.C. §119(e)之權利，其揭示內容係以引用的方式併入本文中。

如本文中所用，術語「患者」係指哺乳動物，較佳地人類。如本文中所用，術語「治療(treatment/treating)」或「減輕」意欲係指其中可減慢、中斷、抑制、控制或停止現有病症之進展及/或減少其症狀，但是不一定指示所有症狀之總消除之所有方法。如本文中所用，術語式I及/或Ia及/或II及/或IIa化合物之「有效量」係指量，其為有效抑制患者之IL-17A介導之反應之劑量。較佳「有效量」經測定為與未經治療之患者相比，可治療或消除患者之中等至嚴重牛皮癬之徵兆及症狀的量。於測定式I及/或II化合物之有效量或劑量中，考慮許多因素，包括(但不限於)待投與之化合物及其特定調配物；患者大小、年齡及一般健康；涉及程度或病症之嚴重度；個別患者之反應；投與模式；及其他相關情況。

「醫藥上可接受之鹽(Pharmaceutically acceptable salts / a pharmaceutically acceptable salt)」係指本發明化合物之相對無毒無機及有機鹽。熟習技工應瞭解本發明化合物能形成鹽。本發明化合物含有鹼性雜環，及因此與許多無機酸及有機酸中之任一者反應以形成醫藥上可接受之酸加成鹽。此等醫藥上可接受之酸加成鹽及其製備之常見方法係此項技術中熟知。參見例如，P. Stahl等人，HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2008)；S.M. Berge等人，「Pharmaceutical Salts」，Journal of Pharmaceutical Sciences ，第66卷，第1期，1977年1月。

某些縮略語係如下定義：「CDI」係指1,1’-羰二咪唑；「DAST」係指二乙胺基三氟化硫；「DBU」係指1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯；「DCC」係指1,3-二環己基碳二亞胺；「DCE」係指二氯乙烷；「DCM」係指二氯甲烷；「DIC」係指1,3-二異丙基碳二亞胺；「DIEA」係指N,N-二異丙基乙胺；「DMAP」係指4-二甲胺基吡啶；「DMSO」係指二甲亞碸；「DTBPF」係指1,1’-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵；「EDCI」係指1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；「EtOAc」係指乙酸乙酯；「EtOH」係指乙醇；「HATU」係指(二甲胺基)-N,N-二甲基(3H -[1,2,3]三唑并[4,5-b ]吡啶-3-基氧基)亞甲基氮鎓六氟磷酸鹽；「HBTU」係指(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲胺基)-N,N-二甲基亞甲基氮鎓六氟磷酸鹽；「HEPES」係指4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸；「HOAt」係指1-羥基-7-氮雜苯并三唑；「HOBt」係指1-羥基苯并三唑水合物；「IL-17A」係指介白素17A；「IPA」係指異丙醇；「LDA」係指二異丙基胺基鋰；「MeOH」係指甲醇；「MTBE」係指甲基第三丁基醚；「NBS」係指N-溴琥珀醯亞胺；「NCS」係指N -氯琥珀醯亞胺；「NMP」係指N-甲基吡咯啶酮；「Pd₂ (dba)₃ 」係指參(二伸苄基丙酮)二鈀(0)；PdCl₂ (dppf)係指[1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)；「PCC」係指氯鉻酸吡啶；「PyBOP」係指(苯并三唑-1-基-氧基三吡咯啶膦鎓六氟磷酸鹽)；「 PyBrOP」係指溴(三吡咯啶基)膦鎓六氟磷酸鹽；「Rh-COD-[(S)-MaxPhos]-BF4」係指[((R)-第三丁基甲基膦基)(二第三丁基膦基)胺](1,5-環辛二烯)銠(I)四氟硼酸鹽；「SCX」係指強陽離子交換；「SFC」係指超臨界流體層析法；「TEA」係指三乙胺；「TFA」係指三氟乙酸；「THF」係指四氫呋喃；「Xantphos」係指4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧雜蒽。

反應圖 1

於反應圖1中，步驟A，Wittig-Horner反應可在此項技術中熟知之條件下在化合物(1)與化合物(2)之間使用適宜有機鹼(諸如DBU)於適宜溶劑(諸如NMP)中進行以得到化合物(3)。步驟B描述化合物(3)上之酯利用NaOH水溶液於適宜溶劑(諸如THF)中在環境溫度下鹼性水解以得到化合物(4)。化合物(4)使用適宜觸媒(諸如Rh-COD-[(S)-MaxPhos]-BF4)於適宜溶劑(諸如MeOH)中在氫氣氛圍下之不對稱氫化以得到化合物(5)示於步驟C中。將乙酸第三丁酯於溶劑(諸如THF)中在-78℃下用適宜有機鋰試劑(諸如LDA)處理及添加至亦在-78℃下於THF中之經CDI活化之化合物(5)中以形成化合物(6)，如步驟D中所述。步驟E顯示化合物(6)利用適宜溴化劑(諸如NBS)使用適宜有機鹼(諸如2,6-二甲基吡啶)於適宜溶劑(諸如MeOH)中之溴化。於溴化後，使用適宜酸(諸如TFA)於溶劑(諸如甲苯)中進行脫羧以得到化合物(7)。

反應圖 2

反應圖2，步驟A描述此項技術中熟知之Dakin-West反應，透過使用三氟乙酸酐於適宜溶劑(諸如丙酮)中在約0℃下在化合物(8)上進行該反應以形成化合物(9)。步驟B描述化合物(9)利用水在環境溫度下水解以得到化合物(10)。化合物(10)於溶劑(諸如甲苯)中在105℃下利用胺(諸如(1S)-1-苯基乙胺)處理得到化合物(11)，如步驟C中所示。於步驟D中，不對稱氫化可在化合物(11)上使用適宜觸媒(諸如Rh-COD-[(S)-MaxPhos]-BF4)於適宜溶劑(諸如第三戊醇)中在氫氣氛圍下進行以得到化合物(12)。化合物(12)利用HCl於適宜溶劑體系(諸如二噁烷及水)中在95℃下脫去保護基以得到化合物(13)述於步驟E中。

反應圖 3

反應圖3，步驟A描述化合物(14)透過此項技術中良好建立之條件之氧化及肟形成，其使用適宜氧化劑(諸如戴斯-馬丁(Dess-Martin)高碘烷或PCC)於溶劑(諸如DCM)中得到中間體醛，然後使該醛與羥胺鹽酸鹽於適宜鹼/溶劑體系(諸如碳酸氫鈉及DCM或碳酸氫鉀於水及MeOH中)中反應以得到化合物(15)。步驟B顯示一鍋轉化，其中可將化合物(15)首先於適宜溶劑(諸如DCM或氯仿)中用適宜鹵化劑(諸如NBS或NCS)處理以得到鹵代中間體，然後可將其使用適宜有機鹼(諸如TEA)於適宜溶劑(諸如DCM或氯仿)中用(E)-3-(二甲胺基)丙-2-烯酸乙酯處理以得到環化化合物(16)。步驟C描述化合物(16)上之酯利用適宜鹼(諸如NaOH水溶液)於溶劑(諸如THF、MeOH及水)之適宜溶劑組合中鹼性水解以得到化合物(17)。

反應圖 4

反應圖4，步驟A描述化合物(18)利用適宜還原劑(諸如氫化鋁鋰)於溶劑(諸如乙醚)中在-78℃下部分還原以得到化合物(19)。於步驟B中，可將化合物(19)添加至含羥胺鹽酸鹽及適宜鹼(諸如碳酸氫鈉)之溶劑(諸如水)中在約0℃下形成肟，化合物(20)。於步驟C中化合物(20)至化合物(21)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟B中之轉化。熟習此項技術者應知曉於步驟D中將化合物(21)於溶劑(諸如乙醚)中在約0℃之溫度下使用適宜還原劑(諸如二異丁基氫化鋁)還原以得到化合物(22)。步驟E顯示化合物(22)於適宜溶劑(諸如丙酮)中在0℃至環境溫度之溫度下使用適宜氧化劑(諸如三氧化鉻與硫酸及水)氧化以得到化合物(23)。

反應圖 5

反應圖5，步驟A顯示步驟A中化合物(24)至化合物(25)之轉化，其基本上類似於反應圖3，步驟A。於步驟B中化合物(25)至化合物(26)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟B中之轉化。熟習此項技術者應知曉化合物(26)利用適宜酸(諸如含於MeOH中之HCl)於適宜溶劑(諸如EtOH)中脫去保護基至化合物(27)，如步驟C中所示。步驟D描述化合物(27)於溶劑(諸如DCM)中使用適宜氧化劑(諸如戴斯馬丁高碘烷)氧化以得到化合物(28)。化合物(28)之氟化述於步驟E中且可使用適宜有機溶劑(諸如DCM)與適宜氟化劑(諸如DAST)在約-25℃下進行以得到化合物(29)。於步驟F中化合物(29)至化合物(30)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟C中之轉化。

反應圖 6

反應圖6，步驟A描述化合物(31)於溶劑(諸如乙醚)中在0℃下利用適宜還原劑(諸如氫化鋁鋰)還原以得到化合物(32)。於步驟B中化合物(32)至化合物(33)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟A中之轉化。於步驟C中化合物(33)至化合物(34)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟B中之轉化。於步驟D中，化合物(34)至化合物(35)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟C中之轉化。

反應圖 7

於反應圖7，步驟A中，使用化合物(36)使用適宜鹼(諸如碳酸鉀)於適宜溶劑(諸如DMF)中將苯甲酸烷基化以得到化合物(37)。化合物(37)之氟化以得到化合物(38)可利用氟化劑(諸如DAST)於適宜溶劑(諸如DCE)中進行，如步驟B中所示。步驟C描述化合物(38)利用水性鹼(諸如NaOH)脫去保護基以得到化合物(39)。於步驟D中化合物(39)至化合物(40)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟A中之轉化。於步驟E中化合物(40)至化合物(41)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟B中之轉化。於步驟F中化合物(41)至化合物(42)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟C中之轉化。

反應圖 8

反應圖8，步驟A描述化合物(43)於溶劑(諸如乙醚)中在0℃下利用適宜還原劑(諸如氫化鋁鋰)還原以得到化合物(44)。於步驟B中化合物(44)至化合物(45)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟A中之轉化。於步驟C中化合物(45)至化合物(46)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟B中之轉化。於步驟D中化合物(46)至化合物(47)之轉化基本上類似於反應圖3，步驟C中之轉化。

反應圖 9

反應圖9，步驟A描述化合物(48)於適宜溶劑(諸如乙酸)中與硝酸鈉水溶液反應以得到化合物(49)。步驟B顯示化合物(49)於適宜溶劑(諸如EtOH)中使用適宜鹼(諸如乙酸鈉)或適宜酸溶液(諸如含於二噁烷中之HCl)在約50至80℃之溫度下與羥胺鹽酸鹽反應以得到化合物(50)。化合物(50)至化合物(51)之環化可利用CDI於適宜溶劑(諸如THF)中進行，如步驟C中所示。化合物(51)之水解可使用水性鹼(諸如氫氧化鋰)於適宜溶劑體系(諸如THF及水)中進行以得到化合物(52)，如步驟D中所述。或者，化合物(51)至化合物(52)之水解可使用HCl水溶液在約100℃下於適宜溶劑體系(諸如二噁烷及水)中進行。

反應圖 10

反應圖10，步驟A描述醯胺形成，利用化合物(53)及適宜胺溶液(諸如含於EtOH中之甲胺)加熱至回流以得到化合物(54)。添加亞硝酸鈉至含於適宜溶劑體系(諸如乙腈及乙酸)中之化合物(54)及含於HCl中之氯化鋰溶液之溶液中將提供化合物(55)中所見之胺基轉化成氯化物，如步驟B中所示。步驟C描述化合物(55)之氯於適宜溶劑(諸如MeOH)中使用甲醇鈉經甲氧基置換以得到化合物(56)。熟習此項技術者應知曉化合物(56)於適宜溶劑(諸如DCM)中在適宜鹼(諸如DMAP)之存在下利用二碳酸二第三丁酯保護以得到化合物(57)，如步驟D中所示。

反應圖 11

反應圖11，步驟A，可在此項技術中熟知之條件下在化合物(58)上利用胺(諸如胺基甲酸第三丁酯)使用適宜觸媒及配位體組合(諸如Pd₂ (dba)₃ 及DTBPF)，及適宜鹼(諸如碳酸鉀)於溶劑(諸如甲苯)中在約75℃下進行布赫瓦爾德(Buchwald)偶合以形成化合物(59)。步驟B描述化合物(59)上之酯於適宜溶劑(諸如THF)中在環境溫度下利用NaOH水溶液鹼性水解以得到化合物(60)。熟習此項技術者應知曉步驟C中之轉化，其顯示化合物(60)上之甲酸透過使用適宜氯甲酸酯(諸如氯甲酸乙酯)形成混合酸酐接著在-78℃至0℃之溫度下添加含於溶劑(諸如MeOH)中之適宜還原劑(諸如硼氫化鈉)還原以形成化合物(61)。化合物(61)之氧化可使用此項技術中良好建立之條件使用適宜氧化劑(諸如戴斯-馬丁高碘烷)於溶劑(諸如DCM)中進行以得到化合物(62)，如步驟D中所示。還原胺化可利用此項技術中熟知之條件在化合物(62)與化合物(13)之間進行，其中首先於適宜溶劑(諸如DCM)中使用有機鹼(諸如TEA)在40℃下加熱形成亞胺。利用在環境溫度下添加適宜還原劑(諸如氰基硼氫化鈉)連同MeOH及乙酸將所得亞胺還原以得到化合物(63)，如步驟E中所證實。可於適宜溶劑(諸如THF)中使用CDI將化合物(63)環化以得到化合物(64)，如步驟F中所述。於步驟G中，化合物(64)可在此項技術中熟知之酸性條件下，諸如使用含4M HCl之1,4-二噁烷於溶劑(諸如甲醇)中在50℃下脫去保護基以得到化合物(65)。

反應圖 12

反應圖12，步驟A描述化合物諸如化合物(65)與鹵代酮諸如化合物(7)之烷基化及隨後於密封容器中於適宜溶劑(諸如THF)中加熱至80℃利用硼酸三甲酯及適宜有機鹼(諸如DIEA)環化成化合物(66)。步驟B顯示化合物(66)透過此項技術中熟知之氫化條件使用觸媒(諸如10% Pd/C)於適宜溶劑(諸如EtOH)中在氫氣氛圍下脫去保護基以得到化合物(67)。於步驟C中，可利用化合物(67)及各種經取代之雜環羧酸使用有機鹼(諸如DIEA)及適宜偶合劑(諸如HATU)於適宜溶劑(諸如THF或DMF)中進行醯胺偶合以得到式I化合物。熟習此項技術者應知曉存在自羧酸與胺之反應產生之醯胺形成的若干適宜方法。例如，在偶合試劑之存在下，在有或無有機鹼(諸如DIEA或TEA)下，胺化合物與適宜羧酸之反應可提供步驟C之化合物。偶合試劑包括碳二亞胺(諸如DCC、DIC、EDCI)或羰二咪唑(諸如CDI)。醯胺偶合添加劑(諸如HOBt及HOAt)亦可用於增強該反應。此外，可使用非親核陰離子之脲鎓或膦鎓鹽(諸如HBTU、PyBOP及PyBrOP)代替更多傳統偶合試劑。諸如DMAP之添加劑可用於增強該反應。或者，可使用適宜醯基氯在鹼(諸如TEA或吡啶)之存在下將化合物(67)醯化以得到式I化合物。式I化合物亦可於適宜溶劑(諸如乙腈)中經由化合物(67)與經活化之雜環醯胺之間之轉醯胺基化形成。

反應圖 13

反應圖13，步驟A描述化合物(68)與三甲基乙醯氯使用適宜鹼(諸如吡啶)於適宜溶劑(諸如1-甲基-2-吡咯啶酮)中之醯化以得到化合物(69)。步驟B顯示化合物(69)與1,1-二乙氧基-N,N-二甲基-甲胺於適宜溶劑(諸如DMF)中在120℃下反應以得到烯胺化合物(70)。於步驟C中，描述烯胺至醛之轉化，係透過於適宜溶劑體系(諸如THF及水)中將化合物(70)用高碘酸鈉處理以得到化合物(71)。熟習此項技術者應知曉，添加適宜格氏(Grignard)試劑至化合物(71)以得到化合物(72)，如步驟D中所示。於步驟E中化合物(72)至化合物(73)之轉化基本上類似於反應圖11，步驟D中之轉化。於步驟F中化合物(73)至化合物(74)之轉化基本上類似於反應圖11，步驟E中之轉化。於步驟G中化合物(74)至化合物(75)之轉化基本上類似於反應圖11，步驟F中之轉化。步驟H描述化合物(75)於溶劑(諸如MeOH)中利用適宜酸(諸如HCl)進行酸性脫去保護基以得到化合物(76)。步驟I描述化合物(76)與化合物(13)之烷基化及隨後使用適宜鹼(諸如碳酸氫鈉)於適宜溶劑(諸如THF)中在70℃下環化以得到化合物(77)。於步驟J中化合物(77)脫去保護基至化合物(78)基本上類似於反應圖12，步驟B中之轉化，其中步驟J亦顯示在該等條件下環氯之失去。於步驟K中所述之轉化可透過利用化合物(78)與適宜羧酸使用丙基膦酸酐利用適宜鹼(諸如TEA)於溶劑(諸如EtOAc)中醯胺偶合進行以得到式II化合物。或者，式II化合物可透過化合物(78)之游離鹼與適宜酯使用適宜鹼(諸如DMAP)於溶劑(諸如MeOH)中在70℃下加熱反應形成。熟習此項技術者應知曉，存在用於產生自羧酸與胺之反應之醯胺形成的若干適宜方法，如反應圖12，步驟C中所述。

反應圖 14

反應圖14，步驟A描述化合物(79)使用甲醇及過硫酸銨之Minisci羥甲基化作用以得到化合物(80)。步驟B顯示化合物(80)使用對甲苯磺酸酐及適宜鹼(諸如TEA及DMAP)於適宜溶劑(諸如乙腈)中之甲苯磺醯化以得到化合物(81)。步驟C描述化合物(81)上之甲苯磺酸酯使用適宜鹼(諸如K₃ PO₄ )於適宜溶劑(諸如DMSO)中經(2S)-3,3,3-三氟丙烷-1,2-二胺置換以得到化合物(82)。步驟D中描述化合物(82)與CDI於溶劑(諸如DMSO)中之環化以得到化合物(83)。熟習此項技術者應知曉步驟E中所示之化合物(83)於溶劑(諸如MeOH)中利用適宜酸(諸如濃HCl)酸性脫去保護基以得到化合物(84)。於步驟F中化合物(84)至化合物(85)之轉化基本上類似於反應圖13，步驟I中之轉化。於步驟G中化合物(85)至化合物(86)之轉化基本上類似於反應圖13，步驟J中之轉化。

反應圖 15

反應圖15，步驟A描述化合物(87)使用適宜鹼(諸如正丁基鋰)於適宜溶劑體系(諸如THF及己烷)中接著添加氯三甲基矽烷之三甲基矽基化以得到化合物(88)。步驟B顯示化合物(88)利用適宜試劑(諸如NCS)於溶劑(諸如DMF)中氯化以得到化合物(89)。步驟C描述化合物(89)上之烷基氯使用碘化鈉及適宜鹼(諸如DIEA)於適宜溶劑(諸如乙腈)中經(2S)-3,3,3-三氟丙烷-1,2-二胺置換以得到化合物(82)。於步驟D中化合物(82)至化合物(83)之轉化基本上類似於反應圖11，步驟F中之轉化。

製備 1 2-(苄氧羰基胺基)-2-(4,4-二氟伸環己基)乙酸甲酯

反應圖1，步驟A：重複下列反應五次：在15℃下，將2-(苄氧羰基胺基)-2-二甲氧基膦醯基-乙酸甲酯(882 g，2.66 mol)添加至含NMP (1.7 L)之燒瓶中。在攪拌下滴加DBU (367 g，2.41 mol)，同時維持溫度接近15℃，然後在相同溫度下保持30分鐘。將4,4-二氟環己酮(340 g，2.53 mmol)溶解於NMP (680 mL)中及以稠物流添加烯醇化物溶液，同時保持溫度在20℃以下。將溶液在10至20℃下攪拌12小時。合併來自五個反應之粗反應混合物，在10至15℃下添加至水(18 L)中，及在真空下過濾。將濾餅用石油醚(15 L)洗及乾燥以得到白色固體。將固體在15至20℃下溶解於1,4-二噁烷(8 L)中及添加水(8 L)。將所得懸浮液過濾，用石油醚(15 L)洗，及於空氣中乾燥以得到呈白色固體之標題化合物(3.90 kg，90%)。ES/MS (m/z): 340 (M+H)。

製備 2 2-(苄氧羰基胺基)-2-(4,4-二氟伸環己基)乙酸

反應圖1，步驟B：重複下列程序五次：在15℃下，在氮氣下，將2-(苄氧羰基胺基)-2-(4,4-二氟伸環己基)乙酸甲酯(500 g，1.47 mol)添加至含THF (1.5 L)之燒瓶中及攪拌直至溶解。滴加1.5M NaOH水溶液(1.47 L)，保持反應混合物在18℃以下。於完全添加後，將反應混合物加熱至25℃，同時攪拌12小時。合併五種粗反應混合物及於真空中濃縮以移除大多數THF。將所得溶液用MTBE (1 × 5 L，1 × 2.5 L)洗。將水相用5 N H₂ SO₄ 調整至pH約為1及在15℃下攪拌10分鐘。將所得混合物用EtOAc (1 × 5 L，1 × 3L，1 × 2 L)萃取。將合併之有機萃取物用飽和氯化鈉水溶液(1 × 4 L，1 × 2 L)洗，經無水硫酸鈉乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到白色固體。將固體懸浮於石油醚(8 L)中，過濾，及於空氣中乾燥以得到呈白色固體之標題化合物(2.0 kg，84%)。¹⁹ F NMR (DMSO-d 6)，δ 95.67。

製備 3 (2S)-2-(苄氧羰基胺基)-2-(4,4-二氟環己基)乙酸

反應圖1，步驟C：重複下列程序兩次：在15至20℃下，將2-(苄氧羰基胺基)-2-(4,4-二氟伸環己基)乙酸(350 g，1.08 mol)添加至含MeOH (1.4 L)之5 L高壓滅菌鍋中及將溶液用氮氣飽和1小時。於手套箱中，將Rh-COD-[(S)-MaxPhos]-BF4 (6.8 g，10.76 mmol)添加至反應混合物中，然後將其用氫氣淨化三次。將反應混合物在30℃下在氫氣(100 psi)下攪拌22小時。合併粗反應混合物及於真空中濃縮以得到黃色固體。將固體懸浮於水(6 L)中及滴加2 N NaOH直至pH達到約13及該混合物係均勻。將溶液用MTBE (1 × 3 L，1 × 2 L)洗。將水溶液之pH用5N HCl調整至約1及在15℃下攪拌10分鐘。將溶液用EtOAc (1 × 4 L，1 × 3 L，1 × 2 L)萃取。合併有機萃取物及用飽和氯化鈉水溶液(1 × 2 L，1 × 1 L)洗，經硫酸鈉乾燥，過濾及於真空中濃縮以得到呈白色固體之經銠污染之標題化合物(630 g，90%)。將此半純淨物質與來自相同反應之分開運行之另外化合物合併以進一步純化。

重複下列程序四次：在15至20℃下，在氮氣下，將(2S)-2-(苄氧羰基胺基)-2-(4,4-二氟環己基)乙酸(266 g，813 mmol)添加至EtOAc (2.66 L)中，然後添加聚縮硫醛多分支鏈烷基多硫化物丙基二氧化矽(62.5 g)。在氮氣下，將混合物加熱至25℃持續15小時。合併反應，通過矽藻土過濾，及於真空中濃縮以得到呈白色固體之經871 ppm銠污染之標題化合物(1040 g，97%，98% ee)。ES/MS (m/z): 350 (M+Na)。用於ee測定之對掌性SFC方法：Chiralpak AD-3, 3 µM，0.46 cm ID x 15 cm L，流動相A = CO₂ ，流動相B = 2-丙醇，梯度溶離10至40% B / A歷時6分鐘在2.5 mL/min下，220 nM偵測波長。主要對映異構體在2.59分鐘溶離，次要對映異構體在2.97分鐘溶離：98% ee。銠藉由將100 mg樣品溶解於5 mL濃硝酸中定量。將溶液稀釋1000倍及經由ICP-MS分析：871 ppm銠。

製備 4 (4S)-4-(苄氧羰基胺基)-4-(4,4-二氟環己基)-3-側氧基-丁酸第三丁酯

反應圖1，步驟D：在氮氣氛圍下向圓底燒瓶中添加(2S)-2-(苄氧羰基胺基)-2-(4,4-二氟環己基)乙酸(15 g，48 mmol)、THF (400 mL)及CDI (7.8 g，48 mmol)。將溶液在室溫下攪拌1.5小時，然後冷卻至-78℃。於分開圓底燒瓶中，在氮氣氛圍下，添加THF (150 mL)及DIEA (29 mL，206 mmol)。將溶液冷卻至0℃及滴加含於己烷中之2.5 M正丁基鋰之溶液(82 mL，210 mmol)。於10分鐘後，將溶液冷卻至-78℃及滴加乙酸第三丁酯(27.8 mL，206 mmol)。於另一小時後，將烯醇化物溶液經由套管添加至以上溶液中。於1小時後，將反應在-78℃下用300 mL飽和氯化銨水溶液淬滅。將反應自冷浴移除，用1 L水稀釋，及在減壓下將溶劑體積減少300至400 mL。將混合物用EtOAc (3 × 100 mL)萃取。合併有機層及用1N HCl (2 × 100 mL)、水(100 mL)及飽和氯化鈉水溶液(100 mL)洗，經硫酸鈉乾燥，過濾及於真空中濃縮。將殘餘物藉由急驟層析法，用己烷及EtOAc溶離純化以得到標題化合物(19.5 g，95%)。ES/MS (m/z): 424 (M-H)。

製備 5 N-[(1S)-3-溴-1-(4,4-二氟環己基)-2-側氧基-丙基]胺基甲酸苄酯

反應圖1，步驟E：向含於MeOH (80 mL)中之(4S)-4-(苄氧羰基胺基)-4-(4,4-二氟環己基)-3-側氧基-丁酸第三丁酯(19.5 g，45.8 mmol)及2,6-二甲基吡啶(0.4 mL，3.44 mmol)之溶液中添加NBS (8.0 g，44.5 mmol)。將反應在室溫下攪拌2.5小時及在-20℃下儲存另外24小時。將反應用EtOAc (600 ml)稀釋，然後用含於水中之50%飽和氯化鈉溶液(3 × 100 mL)及飽和氯化鈉水溶液(3 × 100 mL)洗。將有機相經硫酸鈉乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到粗製中間體溴化物，然後將其溶解於甲苯(230 mL)中。將TFA (25 mL)添加至溶液中，然後將該溶液加熱至80℃。於80℃下2小時後，移除熱及於真空中移除溶劑。將殘餘物藉由矽膠急驟層析法利用甲苯及EtOAc溶離純化以得到標題化合物(10.3 g，56%)。ES/MS m/z(⁷⁹ Br/⁸¹ Br) 404/406 [M+H]⁺ ，[α]_D ²⁰ = +22.5° (C=1.0, CH₂ Cl₂ )。

製備 6 2-苯基-4-(2,2,2-三氟乙醯基)-4H-噁唑-5-酮

反應圖2，步驟A：將2-苯甲醯胺基乙酸(200 g，1.116 mol)及丙酮(1 L)添加至4 L夾套反應器中以得到漿液。將反應器冷卻至3℃及滴加三氟乙酸酐(500 mL，3.56 mol)首先25 mL，然後呈緩慢物流，確保反應溫度不超過5℃。將反應混合物在0℃下攪拌過夜持續23小時。將反應在0℃下藉由緩慢添加水(2 L)淬滅，其中首先歷時30分鐘添加150 mL及歷時另外40分鐘添加剩餘部分。將混合物攪拌10分鐘，過濾，用水(1 L)沖洗，及放置在氮氣壓力機上20小時以得到呈紫色固體之標題化合物(287 g，88%)。ES/MS (m/z): 258 (M+H)。

製備 7 N-(3,3,3-三氟-2,2-二羥基-丙基)苯甲醯胺

反應圖2，步驟B：將2-苯基-4-(2,2,2-三氟乙醯基)-4H-噁唑-5-酮(252 g，980 mmol)添加至配備有頂置式攪拌器之4 L燒瓶中及於THF (1.6 L)中成漿液。歷時15分鐘添加水，保持反應溫度在28℃以下，及然後在環境溫度下攪拌24小時。添加水(0.5 L)及將pH用5 N NaOH調整至7.5。添加MTBE (500 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(0.5 L)及飽和氯化鈉水溶液(200 mL)及分離有機層。將有機層用飽和氯化鈉水溶液(200 mL)洗，經無水硫酸鈉乾燥，及過濾。將濾液於真空中部分濃縮直至固體開始沉澱。添加庚烷(0.8 L)，然後於真空中濃縮直至剩餘500 mL溶液。將所得固體過濾，用庚烷(300 mL)沖洗，及放置在氮氣壓力機上1小時以得到呈黃橙色固體之標題化合物(203.7 g，83%)。ES/MS (m/z): 250 (M+H)。

製備 8 N-[(Z)-3,3,3-三氟-2-[[(1S)-1-苯乙基]胺基]丙-1-烯基]苯甲醯胺

反應圖2，步驟C：在氮氣下，將N-(3,3,3-三氟-2,2-二羥基-丙基)苯甲醯胺(203 g，814.6 mmol)添加至具有頂置式攪拌及配備有Dean-Stark阱之4 L燒瓶中。添加甲苯(2 L)以產生漿液，然後添加(1S)-1-苯甲乙胺(120 mL，930 mmol)。將反應混合物加熱至105℃，同時攪拌7.5小時，然後冷卻至22℃持續16小時。於此時後，將反應於真空中濃縮。將殘餘物在矽膠[用20% MTBE /庚烷(1 L)預洗]上利用20% MTBE /庚烷(6 L)溶離純化。將溶離物濃縮以得到粗產物(204 g)，然後將其溶解於EtOH (1 L)中，接著滴加水(410 mL)直至溶液渾濁。添加晶種(200 mg)，接著滴加水(290 mL)。將此渾濁溶液冷卻至10℃，滴加水(50 mL)，及然後將溶液冷卻至5℃持續10分鐘以進一步將產物結晶。將所得固體過濾及用10% EtOH /水(500 mL)然後水(50 mL)沖洗。將固體在氮氣壓力機上乾燥過夜以得到呈橙色固體之標題化合物(172 g，63%)。ES/MS (m/z): 335 (M+H)。

製備 9 N-[(2S)-3,3,3-三氟-2-[[(1S)-1-苯乙基]胺基]丙基]苯甲醯胺

反應圖2，步驟D：重複下列程序四次：將N-[(Z)-3,3,3-三氟-2-[[(1S)-1-苯乙基]胺基]丙-1-烯基]苯甲醯胺(43 g，128.6 mmol)、Rh-COD-[(R)-MaxPhos]-BF4 (700-2000 mg，1.25-3.57 mmol)及第三戊醇(400 mL)添加至手套箱中600 mL頂置式攪拌高壓滅菌鍋中。然後將反應容器密封及自手套箱移出。在容器中放入氫氣(150 psi)及排氣三次，接著放入氫氣(150 psi)及在20至30℃攪拌20至31小時。將容器移至手套箱，排氣，及添加另外Rh-COD-[(R)-MaxPhos]-BF4 (0至1000 mg，0至1.78 mmol)。將容器密封，自手套箱移出，放入氫氣(150 psi)，及排氣三次。在容器中再次放入氫氣(150 psi)及在30℃攪拌0至43小時。將反應容器排氣及將粗反應物轉移至燒瓶中，用MeOH (100 mL)沖下。合併粗反應混合物及於真空中濃縮。將所得殘餘物經由矽膠利用35% EtOAc於庚烷中(6 L)溶離純化，得到半純物質(藉由¹ H NMR，94.5:5.5比率之非對映異構體)。將物質溶解於庚烷(1.5 L)中，歷時20分鐘加熱至80℃，然後冷卻至22℃持續1小時。將所得固體過濾得到144 g化合物。將濾液與來自管柱含有不純產物之溶離份合併，及於真空中濃縮，得到25 g粗產物。合併所有產物批，於庚烷(1.5 L)中成漿液，及歷時2小時加熱至80℃。將熱度保持在80℃持續30分鐘，然後歷時14小時以4℃/小時緩慢冷卻至25℃。將所得漿液過濾，得到標題化合物(133 g，77%)，藉由¹⁹ F NMR呈98:2比率之非對映異構體。ES/MS (m/z): 337 (M+H)。¹⁹ F NMR (DMSO-d 6) δ 73.1 (主要非對映異構體)，73.6 (次要非對映異構體)。

製備 10 (2S)-3,3,3-三氟丙烷-1,2-二胺二鹽酸鹽

反應圖2，步驟E：將N-[(2S)-3,3,3-三氟-2-[[(1S)-1-苯乙基]胺基]丙基]苯甲醯胺(110 g，327 mmol)、1,4-二噁烷(200 mL)及水(500 mL)添加至2 L燒瓶中。緩慢添加濃HCl (12M，250 mL)及將反應混合物加熱至95℃持續72小時。於此時後，將反應混合物冷卻至22℃及用甲苯(2 × 400 mL)洗。將水溶液經由旋轉蒸發器用正丁基醇(3 × 600 mL)共沸蒸餾。將含有結晶固體之剩餘澄清黃色母液用IPA (750 mL)稀釋及在10℃下冷卻過夜。將所得固體過濾，用IPA (400 mL)沖洗，及於50℃真空烘箱中乾燥1小時以得到呈白色固體之標題化合物(63.5 g，96.6%)。ES/MS (m/z): 129 (M+H-2HCl)。

製備 11 (1E)-2,2-二氟丙醛肟

反應圖3，步驟A：將戴斯-馬丁高碘烷(11.6 g，27.3 mmol)添加至含於DCM (130 mL)中之2,2-二氟丙-1-醇(2.5 g，26.0 mmol)中及在22℃下用力攪拌30分鐘。添加羥胺鹽酸鹽(5.42 g，78.1 mmol)及碳酸氫鈉(10.9 g，130 mmol)及將反應混合物在22℃下用力攪拌2.5小時。將反應混合物用含於水(50 mL)中之硫代硫酸鈉(12 g，76 mmol)之溶液淬滅及用力攪拌5分鐘。然後將反應混合物用乙醚(200 mL)稀釋及用飽和碳酸氫鈉水溶液(3 × 30 mL)及飽和氯化鈉水溶液(30 mL)洗。將有機物經無水硫酸鎂乾燥，過濾及於真空中濃縮以得到呈淺黃色油之標題化合物(3.30 g，77%)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 7.57 (s, 1H), 7.55 (t, 1H,J = 4.1 Hz), 1.82 (t, 3H,J = 18.5 Hz)。

製備 12 3-(1,1-二氟乙基)異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖3，步驟B：將(1E)-2,2-二氟丙醛肟(3.3 g，67質量%，20.0 mmol)溶解於氯仿(40 mL)中。將溶液冷卻至0℃及添加NBS (3.55 g，20.0 mmol)及允許將溶液升溫至22℃持續15小時。然後在22℃下將(E)-3-(二甲胺基)丙-2-烯酸乙酯(3.27 mL，22 mmol)添加至反應混合物中，接著滴加TEA (4.18 mL，30 mmol)。將反應混合物在22℃下攪拌5小時，然後於真空中濃縮。將殘餘物藉由矽膠急驟層析法利用己烷及EtOAc溶離純化以得到呈無色油之標題化合物(2.21 g，45%)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 8.99 (s, 1H), 4.38 (q, 2 H,J = 7.1 Hz), 2.17 (t, 3H,J = 18.9 Hz), 1.39 (t, 3H,J = 7.1 Hz)。

製備 13 3-(氟甲基)異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖3，步驟A至B：將戴斯-馬丁高碘烷(11.0 g，25.9 mmol)添加至含於DCM (100 mL)中之2-氟乙醇(1.5 g，23 mmol)之溶液中及在環境溫度下攪拌30分鐘。於此時後，添加碳酸氫鈉(12.2 g，145 mmol)及羥胺鹽酸鹽(4.7 g，68 mmol)，及將反應攪拌過夜。將所得溶液通過矽藻土過濾，用約20 mL DCM沖洗。使用所得溶液，因為假設100%轉化成中間體肟。

向所得混合物中添加4滴吡啶，接著NCS (2.9 g，22 mmol)。將混合物在環境溫度下攪拌6小時，然後在40℃下加熱75分鐘更久。將反應混合物冷卻回環境溫度，然後用3-(二甲胺基)丙-2-烯酸乙酯(5.0 mL，34 mmol)接著單一部分TEA (5.0 mL，36 mmol)處理。將所得混合物攪拌45分鐘，然後於真空中濃縮及藉由矽膠急驟層析法利用MTBE及己烷溶離純化以得到呈無色揮發油之標題化合物(694 mg，17%產率)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 8.95 (s, 1H), 5.70 (d, 2H,J = 46 Hz), 4.38 (q, 2H,J = 7.1 Hz), 1.39 (t, 3H,J = 7.1 Hz)。

製備 14 3-(1,1-二氟乙基)異噁唑-4-甲酸

反應圖3，步驟C：將3-(1,1-二氟乙基)異噁唑-4-甲酸乙酯(1.00 g，4.09 mmol)溶解於THF (2 mL)及MeOH (2 mL)中及然後冷卻至0℃。添加5N NaOH水溶液(1.3 mL，6.55 mmol)及將反應混合物攪拌15分鐘。將反應混合物用水稀釋及用EtOAc洗。將水層用5N HCl水溶液(1.3 mL)酸化及用EtOAc (50 mL)萃取。將有機層經硫酸鎂乾燥，過濾及於真空中濃縮以得到無色油。將該油懸浮於水(5 mL)中及音波處理以得到懸浮於水中之稠的白色沉澱。將所得懸浮液冷凍，然後凍乾以得到呈白色固體之標題化合物(427 mg，59%)。ES/MS (m/z) = 176 (M-H)。

製備 15 3-(氟甲基)異噁唑-4-甲酸

反應圖3，步驟C：將含於MeOH (4 mL)、THF (4 mL)及水(3 mL)中之3-(氟甲基)異噁唑-4-甲酸乙酯(694 mg，4.0 mmol)之溶液於冰浴中冷卻。然後將混合物用5 M NaOH水溶液(0.96 mL，4.8 mmol)處理。於10分鐘後，允許將反應在環境溫度下攪拌30分鐘，之後將其在添加1.2 mL 5M HCl水溶液後酸化。將混合物用水稀釋，及用EtOAc萃取兩次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鎂乾燥，及於真空中濃縮以得到呈白色固體之標題化合物(506 mg，87%產率)。¹ H NMR (DMSO-d₆ ) δ 13.39 (br s, 1H), 9.62 (s, 1H), 5.60 (d, 2H,J = 46 Hz)。

製備 16 2,2-二氟乙醛肟

反應圖4，步驟A及B：向烘箱乾燥之1 L燒瓶中添加2,2-二氟乙酸乙酯(25.4 mL，242 mmol)及乙醚(40 mL)，及將混合物冷卻至-78℃。歷時25分鐘之時間經由添加漏斗向混合物中滴加氫化鋁鋰(含於THF中之1M溶液，61.0 mL，61.0 mmol)。將添加漏斗進一步用乙醚(5 mL)洗及滴加。於2小時45分鐘後，將反應利用緩慢添加EtOH (6 mL)淬滅，及允許在室溫下攪拌20分鐘。然後將混合物倒入含於碎冰(200 mL)中之濃硫酸(15 mL)之混合物中。於攪拌5分鐘後，將混合物用乙醚(150 mL)稀釋，倒入分液漏斗中，及分離各層。將水層再次用乙醚(200 mL)萃取，及將合併之有機物經硫酸鎂乾燥，過濾及於真空中濃縮以得到具有假定定量產率之體積45 mL之中間體1-乙氧基-2,2-二氟乙醇。

於分開500 mL圓底燒瓶中，將羥胺鹽酸鹽(19.32 g，278.0 mmol)及碳酸氫鈉(23.4 g，279 mmol)溶解於水(60 mL)中及於冰水浴中冷卻。經由注射器向快速攪拌之溶液中添加呈穩定物流之上述1-乙氧基-2,2-二氟乙醇(242 mmol)之溶液。允許將混合物在室溫下攪拌1小時50分鐘，此時將水溶液用乙醚(2 × 50 mL)萃取，及將合併之有機物經硫酸鎂乾燥及過濾。然後藉由在大氣壓力下短程蒸餾移除大多數揮發物以得到經THF及乙醇污染之呈液體之標題化合物(E/Z異構體之12.5:1混合物，17.35 g，基於殘餘溶劑約40質量%，30%)。¹ H NMR (CDCl₃ )主要異構體δ8.52 (s, 1 H), 7.50 (m, 1 H), 6.16 (dt,J = 54.1 Hz, 6.4 Hz, 1 H)。次要異構體δ8.68 (s, 1 H), 6.94 (m, 1 H), 6.75 (dt,J = 53.8 Hz, 5.3 Hz, 1 H)。

製備 17 3-(二氟甲基)異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖4，步驟C：以基本上類似於製備12之方法之方式自2,2-二氟乙醛肟製備標題化合物(3.375 g，32%)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ9.01 (s, 1 H), 7.08 (t,J = 52.7 Hz, 1 H), 4.40 (q,J = 7.2 Hz, 2 H), 1.40 (t,J = 7.2 Hz, 3 H)。

製備 18 3-(二氟甲基)異噁唑-4-甲酸

反應圖4，步驟D及E：將含於乙醚(50 mL)中之3-(二氟甲基)異噁唑-4-甲酸乙酯(1.98 g，10.4 mmol)之溶液於冰水浴中冷卻。向混合物中添加二異丁基氫化鋁(含於己烷中之1.0M溶液，22.8 mL，22.8 mmol)。於45分鐘後，添加另外二異丁基氫化鋁(含於己烷中之1.0M溶液，1.0 mL，1.0 mmol)。將混合物再攪拌15分鐘及然後用1M HCl水溶液淬滅。將所得混合物攪拌約15分鐘及然後轉移至分液漏斗及用乙醚萃取三次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗兩次，經硫酸鎂乾燥，過濾，及於真空中濃縮。

將所得粗製[3-(二氟甲基)異噁唑-4-基]甲醇(假定10.4 mmol)溶解於丙酮(18 mL)中及於冰水浴中冷卻。向溶液中滴加含於濃硫酸(1.4 mL)及水(4.2 mL)之混合物中之三氧化鉻(1.53 g，15.3 mmol)之溶液。將所得溶液在室溫下快速攪拌4小時40分鐘。此時，添加水及將混合物用EtOAc萃取三次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗兩次，經硫酸鎂乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到呈低熔點白色固體之足夠純淨標題化合物(1.426 g，83%)。¹ H NMR (d₆ -DMSO) δ13.67 (br s, 1 H), 9.76 (s, 1 H), 7.40 (t,J = 52.3 Hz, 1 H)。

製備 19 3-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖5，步驟A及B：向含於DCM (130 mL)中之3-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基丙-1-醇(5.0 g，26.3 mmol)之溶液中添加戴斯-馬丁高碘烷(12.33 g，28.2 mmol)。將混合物在室溫下攪拌35分鐘。然後向反應中添加碳酸氫鈉(11.5 g, 137 mmol)及羥胺鹽酸鹽(5.5 g，79 mmol)。於3.5小時後，將反應用硫代硫酸鈉(22 g)及水(100 mL)淬滅。於攪拌5分鐘後，將混合物轉移至分液漏斗及分離各層。將有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液洗，然後用飽和氯化鈉水溶液洗兩次。將有機層經硫酸鎂乾燥及於真空中濃縮。

將所得粗製肟溶解於氯仿(80 mL)中及添加4滴吡啶接著添加NCS (3.35 g，25.1 mmol)。將反應在45℃下加熱1小時，及然後冷卻至室溫。向混合物中添加含於氯仿(4 mL)中之3-(二甲胺基)丙-2-烯酸乙酯(4.6 g，32 mmol)之溶液，接著添加三乙胺(5.50 mL，39.5 mmol)。於1小時25分鐘後，將混合物於真空中濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠急驟層析法利用己烷及MTBE溶離純化以得到呈無色油之標題化合物。ES/MS (m/z): 300.0 (M+H)。

製備 20 3-(2,2-二氟乙基)異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖5，步驟C、D及E：向含於EtOH (40 mL)中之3-[2-[第三丁基(二甲基)矽基]氧基乙基]異噁唑-4-甲酸乙酯(2.72 g，90%純度，8.18 mmol)之溶液中添加含於MeOH中之4M HCl溶液(20 mL，80 mmol)。於15分鐘後，將混合物於真空中濃縮，分配在EtOAc與飽和碳酸氫鈉水溶液之間。水相再用EtOAc萃取一次及用DCM萃取一次。將合併之有機物經硫酸鎂乾燥及於真空中濃縮以獲得所得粗製醇。

然後將粗製醇溶解於DCM (60 mL)中及用戴斯-馬丁高碘烷(3.77 g，8.62 mmol)處理。將所得混合物在環境溫度下攪拌35分鐘，及用硫代硫酸鈉(6.0 g，38 mmol)及50 mL水淬滅。將混合物用DCM萃取。將有機物經硫酸鎂乾燥及於真空中濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠急驟層析法利用DCM及丙酮溶離純化。將所得物質溶解於DCM (50 mL)中及用飽和碳酸氫鈉水溶液用力攪拌。將混合物通過相分離器過濾及及將有機層於真空中濃縮至含有不純醛產物之淡黃色油。

將粗製醛中間體溶解於DCM (50 mL)中及於乾冰/丙酮浴中在-25℃下冷卻。滴加DAST (2.50 mL，18.9 mmol)及攪拌，允許冷浴逐漸升溫。於30分鐘後，添加另外DAST (0.8 mL，6 mmol)，具有約-10℃之浴溫。於再攪拌40分鐘後，將反應混合物冷卻至-40℃及用飽和碳酸氫鈉水溶液小心淬滅。將混合物升溫至室溫，用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋，及用DCM萃取三次。將合併之有機物再次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗，經硫酸鎂乾燥及於真空中濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠急驟層析法利用己烷及MTBE溶離純化以得到呈無色油之標題化合物(479 mg，28%總產率)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 8.94 (s, 1 H), 6.28 (tt, 1 H,J = 56.2 Hz, 4.8 Hz), 4.37 (q, 2 H,J = 7.2 Hz), 3.57 (td, 2 H,J = 15.5 Hz, 4.8 Hz), 1.40 (t, 3 H,J = 7.2 Hz)。

製備 21 3-(2,2-二氟乙基)異噁唑-4-甲酸

反應圖5，步驟F：以基本上類似於製備15之方法之方式自3-(2,2-二氟乙基)異噁唑-4-甲酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (DMSO-d₆ ) δ 13.40 (br s, 1 H), 9.58 (s, 1 H), 6.43 (tt, 1 H,J = 56.0 Hz, 4.5 Hz), 3.54 (td, 2 H,J = 16.8 Hz, 4.5 Hz)。

製備 22 3-(2-氟乙基)異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖3，步驟A及B：以基本上類似於製備13之方法之方式自3-氟丙-1-醇製備標題化合物。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 8.91(s, 1 H), 4.82 (dt, 2 H,J = 46.6 Hz, 6.3 Hz), 4.36 (q, 2 H,J = 7.1 Hz), 3.40 (dt, 2 H,J = 22.0 Hz, 6.3 Hz), 1.39 (t, 3 H,J = 7.1 Hz)。

製備 23 3-(2-氟乙基)異噁唑-4-甲酸

反應圖3，步驟C：以基本上類似於製備15之方法之方式自3-(2-氟乙基)異噁唑-4-甲酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 9.01 (s, 1 H), 4.85 (dt, 2 H,J = 46.6 Hz, 6.3 Hz), 3.40 (dt, 2 H,J = 22.1 Hz, 6.3 Hz)。

製備 24 3-(1-氟-1-甲基-乙基)異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖6，步驟A、B及C：向含有2-氟-2-甲基-丙酸甲酯(5.0 mL，41.6 mmol)之圓底燒瓶中添加乙醚(100 mL)。將燒瓶放置在氮氣下及於0℃冰浴中冷卻。向混合物中添加氫化鋁鋰(2.0M含於THF中，25 mL，50 mmol)。於1小時後，將反應用水(1.9 mL)，接著5M NaOH水溶液(1.9 mL)，然後水(5.7 mL)淬滅，及將所得混合物攪拌25分鐘。將硫酸鎂添加至反應中，及將混合物在矽藻土及矽膠上過濾，利用DCM溶離。將所得溶液濃縮約50%及直接帶入下個步驟，假定定量產生2-氟-2-甲基-丙-1-醇(假定41.6 mmol)。

向此溶液中添加戴斯-馬丁高碘烷(18.54 g，43.7 mmol)，及將所得混合物在室溫下攪拌30分鐘。向混合物中添加碳酸氫鈉(17.48 g，208.2 mmol)及羥胺鹽酸鹽(8.68 g，124.9 mmol)。將混合物攪拌過夜，之後將其在添加10%硫代硫酸鈉水溶液後淬滅。將混合物用乙醚萃取。將有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液及然後飽和氯化鈉水溶液洗三次。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾及於真空中濃縮以得到粗製肟之黃色溶液。將此直接用於下個步驟，假定定量產率。

向含有粗製肟之圓底燒瓶中添加氯仿(41 mL)及20滴吡啶，接著NCS (5.56 g，41.6 mmol)。將所得微弱綠色溶液在45℃下加熱90分鐘。向混合物中以一份式添加含於氯仿(43 mL)中之3-(二甲胺基)丙-2-烯酸乙酯(7.15 mL，49.9 mmol)之溶液。然後向混合物中滴加TEA (11.6 mL，83.2 mmol)，產生橙色溶液。將混合物加熱至50℃持續120分鐘，然後允許在環境溫度下攪拌過夜。將反應於真空中濃縮，及與第二批粗物質(經由相同路徑，以8.33 mmol丙酸2-氟-2-甲酯開始合成)合併。將粗物質用飽和碳酸氫鈉水溶液稀釋及用DCM萃取兩次。將有機物用飽和氯化鈉水溶液洗，然後經硫酸鈉乾燥及於真空中濃縮。將所得殘餘物經由矽膠急驟層析法利用己烷及MTBE溶離純化以得到呈無色油之標題化合物(1.27 g，13%總產率)。ES/MS (m/z): 202.0 (M+H)。

製備 25 3-(1-氟-1-甲基-乙基)異噁唑-4-甲酸

反應圖6，步驟D：以基本上類似於製備15之方法之方式自3-(1-氟-1-甲基-乙基)異噁唑-4-甲酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (DMSO-d₆ ) δ 13.9 (br s, 1H), 9.57 (s, 1H), 1.80 (d, 6H,J = 22 Hz)。

製備 26 苯甲酸(2-環丙基-2-側氧基-乙酯)

反應圖7，步驟A：向含於DMF (500 mL)中之苯甲酸(32.3 g，262 mmol)及碳酸鉀(74 g，524.7 mmol)之混合物中滴加2-溴-1-環丙基乙酮(45 g，262.2 mmol)。將所得混合物在環境溫度下攪拌20小時，及然後用水稀釋。將混合物用乙醚(5 × 200 mL)萃取，然後將合併之有機層用水洗三次，經硫酸鎂乾燥，及於真空中濃縮。將粗製殘餘物用乙醚(20 mL)稀釋及用600 mL己烷沉澱，過濾，進一步用己烷沖洗，及乾燥。將所得濾液再次於真空中濃縮，用己烷研磨，及過濾。合併所獲得之固體以得到呈灰白色固體之標題化合物(43.6 g，81%產率)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 8.13 (m, 2 H), 7.61 (m, 1 H), 7.50 (m, 2 H), 5.08 (s, 2 H), 2.07 (m, 1 H), 1.20 (m, 2 H), 1.02 (m, 2 H)。

製備 27 苯甲酸(2-環丙基-2,2-二氟-乙酯)

反應圖7，步驟B：向含於DCE (250 mL)中之苯甲酸(2-環丙基-2-側氧基-乙酯) (43 g，210.6 mmol)之溶液中添加DAST (104 g，611 mmol)。將所得混合物用氮氣淨化及加熱至75℃。於18小時後，將反應冷卻至環境溫度，然後於冰水浴中冷卻10分鐘。然後在0℃下，在攪拌下，將混合物緩慢倒入500 mL飽和碳酸氫鈉水溶液中。添加另外飽和碳酸氫鈉水溶液(200 mL)。分離各層及將水相用DCM萃取三次。將合併之有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液洗三次，用1N HCl水溶液洗一次，再次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗，及最後用飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鎂乾燥，及於真空中濃縮。將粗物質藉由矽膠急驟層析法利用DCM及己烷溶離純化以得到呈橙色液體之標題化合物(7.3 g，16%產率)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 8.12 (m, 2 H), 7.61 (m, 1 H), 7.50 (m, 2 H), 4.60 (t, 2 H,J = 12.2 Hz), 1.38 (m, 1 H), 0.77 (m, 2 H), 0.68 (m, 2 H)。

製備 28 3-[環丙基(二氟)甲基]異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖7，步驟C、D及E：向含於MeOH (20 mL)中之苯甲酸(2-環丙基-2,2-二氟-乙酯) (7.5 g，33 mmol)之溶液中添加5 N NaOH水溶液(13 mL，65 mmol)。將混合物在環境溫度下攪拌15分鐘，此時將其用水稀釋及用乙醚萃取三次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鎂乾燥及於真空中在0℃下濃縮以得到呈淺橙色液體之粗製2-環丙基-2,2-二氟-乙醇。

將所得粗製液體溶解於DCM (100 mL)中及逐份添加戴斯-馬丁高碘烷(14.3 g，32.7 mmol)。將混合物在氮氣下在環境溫度下攪拌1小時。向混合物中添加碳酸氫鈉(15.8 g，186 mmol)，接著添加羥胺鹽酸鹽(6 g，82.9 mmol)及水(20 mL)。將反應再攪拌50分鐘，用水稀釋，及用飽和硫代硫酸鈉洗兩次。將有機層依次用飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鎂乾燥，及於真空中在0℃下濃縮，得到呈淺橙色液體之粗製2-環丙基-2,2-二氟-乙醛肟(3.1 g，基於質量回收率假定88%產率)。

將所得物質溶解於DMF (100 mL)中，及向混合物中添加NCS (3.2 g，23 mmol)。將混合物放置在氮氣下及在50℃下加熱1.5小時，然後在環境溫度下攪拌過夜。然後將混合物用乙醚稀釋及用10% LiCl水溶液洗。分離各層及將水層再用乙醚萃取兩次。將合併之有機層用10% LiCl水溶液洗三次，用飽和氯化鈉水溶液洗一次，經硫酸鎂乾燥，及於真空中濃縮以得到粗製2-環丙基-2,2-二氟-N-羥基-亞胺乙醯氯。添加EtOAc (200 mL)及在快速攪拌下向混合物中添加3-(N,N-二甲胺基)丙烯酸乙酯(2.8 mL，19 mmol)，接著碳酸氫鈉(2.8 g，33 mmol)。將混合物在室溫下在氮氣下攪拌3小時。然後將混合物用1N硫酸氫鉀水溶液洗兩次，用0.05M碳酸鈉水溶液及飽和氯化鈉水溶液洗兩次。將有機層經硫酸鎂乾燥及於真空中濃縮。將殘餘物經由矽膠急驟層析法利用己烷及MTBE溶離純化以得到呈無色液體之標題化合物(1.82 g，24%總產率)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 8.99 (s, 1 H), 4.39 (q, 2 H,J = 7.1 Hz), 2.02 (m, 1H), 1.39 (t, 3 H,J = 7.1 Hz), 0.91 (m, 2 H), 0.75 (m, 2 H)。

製備 29 3-[環丙基(二氟)甲基]異噁唑-4-甲酸

反應圖7，步驟F：以基本上類似於製備15之方法之方式自3-[環丙基(二氟)甲基]異噁唑-4-甲酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 9.11 (s, 1 H), 2.02 (m, 1H), 0.93 (m, 2 H), 0.76 (m, 2 H)。

製備 30 3-(1-甲基環丙基)異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖3，步驟A及B：向含於DCM (88 mL)中之PCC (19.35 g，87.1 mmol)之懸浮液中添加含於DCM (33 mL)中之(1-甲基環丙基)甲醇(6.76 mL，69.6 mmol)之溶液。將所得黑色溶液在環境溫度下攪拌2小時。然後將反應混合物通過矽膠墊過濾，用DCM沖洗以得到1-甲基環丙烷甲醛之溶液，將其直接用於下個步驟。

於分開燒瓶中，添加碳酸鉀(5.8 g，41.8 mmol)、羥胺鹽酸鹽(5.3 g，76.5 mmol)、水(100 mL)及MeOH (100 mL)。於鼓泡平息後，將上述1-甲基環丙烷甲醛之粗製溶液添加至反應混合物中。於30分鐘後，將混合物轉移至分液漏斗中及用水稀釋。將混合物用乙醚萃取兩次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鈉乾燥，及於真空中濃縮以得到粗製1-甲基環丙烷甲醛肟，使用其無需進一步純化，假定定量產率。

將所得粗製殘餘物溶解於氯仿(70 mL)中，及向混合物中添加NCS (9.31g，69.7 mmol)。然後將混合物加熱至45℃持續2小時。然後向反應中添加含於氯仿(69 mL)中之3-(二甲胺基)丙-2-烯酸乙酯(12 mL，83.8 mmol)之溶液，接著滴加TEA (19.5 mL，140 mmol)。在添加完成後，將混合物加熱至50℃持續2小時，然後冷卻至室溫及攪拌3天。將反應混合物於真空中濃縮及溶解於DCM中。將此粗物質與以11.6 mmol規模之通過相同路徑合成之另一批合併。將合併之批分配在DCM與飽和碳酸氫鈉水溶液之間，然後將水層用DCM萃取三次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鈉乾燥，及於真空中濃縮。將所得殘餘物經由矽膠急驟層析法利用己烷及MTBE溶離純化以得到呈無色油之標題化合物(4.94 g，31%總產率)。ES/MS (m/z): 196.0 (M+H)。

製備 31 3-(1-甲基環丙基)異噁唑-4-甲酸

反應圖3，步驟C：以與製備15之方法基本上類似之方式自3-(1-甲基環丙基)異噁唑-4-甲酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (DMSO-d₆ ) δ 13.03 (s, 1 H), 9.41 (s, 1 H), 1.40 (s, 3 H), 0.96 (m, 2 H), 0.73 (m, 2H)。

製備 32 3-(1-氟環丙基)異噁唑-4-甲酸乙酯

反應圖8，步驟A、B及C：於圓底燒瓶中，將1-氟環丙烷甲酸(5.5 g，53 mmol)溶解於THF (180 mL)中及冷卻至0℃及用氫化鋁鋰(2M含於THF中，27 mL，54 mmol)處理。允許將反應升溫至環境溫度及攪拌過夜。將反應利用滴加水(2.2 mL)，接著1N NaOH水溶液(2.2 mL)，及最後水(7 mL)淬滅。添加硫酸鎂(約5 g)及將溶液攪拌1小時。然後將混合物通過矽藻土墊過濾，用DCM洗，及將濾液於真空中小心濃縮以得到粗製(1-氟環丙基)甲醇，使用其無需進一步純化。

將所得粗物質溶解於具有矽膠(11 g，183 mmol)之DCM (100 mL)中。將混合物用PCC (14.3 g，64.4 mmol)處理及將混合物攪拌2小時。此時，添加另外PCC (5 g，23.3 mmol)及將反應攪拌過夜。添加另外PCC (3 g，13.9 mmol)及將混合物攪拌5小時。然後將混合物用DCM稀釋，及通過矽藻土及矽膠墊過濾以得到1-氟環丙烷甲醛之DCM溶液，將其直接帶入下個步驟中。

於圓底燒瓶中，將羥胺鹽酸鹽(3.6 g，52 mmol)及碳酸鉀(4.6 g，33 mmol)溶解於水(50 mL)及MeOH (50 mL)中。於鼓泡平息後，添加上述1-氟環丙烷甲醛之溶液及將反應在環境溫度下攪拌過夜。然後將混合物與自4.80 mmol 1-氟環丙烷甲酸開始透過相同路徑製備之粗製肟之另一批合併。將合併之混合物用水稀釋及用乙醚萃取三次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鈉乾燥，及於真空中濃縮以得到呈淺黃色油之粗製1-氟環丙烷甲醛肟，將其用於下個步驟無需進一步純化。

將粗製肟溶解於氯仿(50 mL)中及用吡啶(0.3 mL，4 mmol)及NCS (6.6 g，49 mmol)處理。將混合物在氮氣下攪拌及加熱至45℃持續1.5小時。向混合物中添加含於氯仿(20 mL)中之3-(二甲胺基)丙-2-烯酸乙酯(7.9 mL，55 mmol)之溶液，接著添加TEA (13 mL，93.3 mmol)。將混合物加熱至50℃持續2小時，然後冷卻至室溫及攪拌3天。然後將混合物於真空中濃縮，用飽和碳酸氫鈉稀釋，及用DCM萃取三次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鈉乾燥，及於真空中濃縮。將所得殘餘物經由矽膠急驟層析法利用己烷及MTBE溶離純化以得到呈無色液體之標題化合物(3.4 g，35%產率)。ES/MS (m/z): 200.0 (M+H)。

製備 33 3-(1-氟環丙基)異噁唑-4-甲酸

反應圖8，步驟D：以與製備15之方法基本上類似之方式自3-(1-氟環丙基)異噁唑-4-甲酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (DMSO-d₆ ) δ 13.28 (br s, 1 H), 9.61 (s, 1 H), 1.45 (m, 2 H), 1.26 (m, 2 H)。

製備 34 3-(3,3-二氟環丁基)異噁唑-4-甲酸

反應圖3，步驟A至D：以與製備30及15中所見之方法基本上類似之方式自(3,3-二氟環丁基)甲醇製備標題化合物。¹ H NMR (DMSO-d₆ ) δ 13.24 (br s, 1 H), 9.52 (s, 1 H), 3.74 (m, 1 H), 2.83-3.08 (m, 4 H)。

製備 35 3-環丙基-2-羥基亞胺基-3-側氧基-丙酸乙酯

反應圖9，步驟A：將3-環丙基-3-側氧基-丙酸乙酯(4.78 g，30.6 mmol)溶解於乙酸(30 mL)中及將溶液冷卻至8℃。滴加含於水(10 mL)中之亞硝酸鈉(3.17 g，45.9 mmol)之溶液，保持溫度在15℃以下。將混合物冷卻至5℃，然後升溫至環境溫度及攪拌18小時。將粗反應混合物倒入經用力攪拌之EtOAc及飽和碳酸氫鈉水溶液之混合物中。於氣體排放停止後，分離混合物及將有機層用飽和碳酸氫鈉接著飽和氯化鈉水溶液洗。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到呈淺黃色液體之標題化合物(5.70 g，100%)。ES/MS (m/z): 186.0 (M+H)。

製備 36 2-羥基亞胺基-4-甲基-3-側氧基-戊酸乙酯

反應圖9，步驟A：以與製備35中所見之方法基本上類似之方式自異丁醯基乙酸乙酯製備標題化合物。ES/MS m/z 188.0 (M+H)。

製備 37 2-羥基亞胺基-3-側氧基-戊酸甲酯

反應圖9，步驟A：以與製備35中所見之方法基本上類似之方式自3-側氧基戊酸甲酯製備標題化合物。ES/MS m/z 160.0 (M+H)。

製備 38 4,4-二氟-2-羥基亞胺基-3-側氧基-丁酸乙酯

反應圖9，步驟A：以與製備35中所見之方法基本上類似之方式自4,4-二氟-3-側氧基-丁酸乙酯製備標題化合物。ES/MS m/z 196.0 (M+H)。

製備 39 3-環丙基-2,3-雙(羥基亞胺基)丙酸乙酯

反應圖9，步驟B：將3-環丙基-2-羥基亞胺基-3-側氧基-丙酸乙酯(2.65 g，14.3 mmol)溶解於EtOH (70 mL)中及添加羥胺鹽酸鹽(2.98 g，42.9 mmol)及乙酸鈉(2.35 g，28.6 mmol)。將混合物加熱至80℃持續18小時，然後冷卻至環境溫度及於真空中濃縮至約10 mL體積。添加EtOAc及水。分離各層及將有機層用水接著飽和氯化鈉洗四次。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到呈粗製黃色油之標題化合物(1.17 g，41%)。ES/MS (m/z): 201.0 (M+H)。

製備 40 2,3-雙(羥基亞胺基)-4-甲基-戊酸乙酯

反應圖9，步驟B：以與製備39中所見之方法基本上類似之方式自2-羥基亞胺基-4-甲基-3-側氧基-戊酸乙酯製備標題化合物。ES/MS m/z 203.0 (M+H)。

製備 41 2,3-雙(羥基亞胺基)戊酸甲酯

反應圖9，步驟B：以與製備39中所見之方法基本上類似之方式自2-羥基亞胺基-3-側氧基-戊酸甲酯製備標題化合物。ES/MS m/z 175.0 (M+H).

製備 42 4,4-二氟-2,3-雙(羥基亞胺基)丁酸乙酯

反應圖9，步驟B替代程序：向壓力瓶中添加4,4-二氟-2-羥基亞胺基-3-側氧基-丁酸乙酯(43 g，132 mmol)、羥胺鹽酸鹽(41 g，584 mmol)、EtOH (150 mL)及含於二噁烷中之4M HCl (600 mmol，150 mL)。將瓶密封及將混合物在50℃下攪拌直至起始物質完全消耗。於冷卻至室溫後，過濾掉過量羥胺鹽酸鹽及用乙醚沖洗。將濾液於真空中在40℃下濃縮。將殘餘物用飽和碳酸氫鈉水溶液小心中和及用乙醚萃取。將合併之有機層經硫酸鎂乾燥及過濾。在減壓下移除溶劑及將殘餘物藉由矽膠急驟層析法利用EtOAc及DCM溶離純化以得到呈黃色液體之標題化合物(4.9 g，18%)。ES/MS (m/z): 211.0 (M+H)。

製備 43 4,4,4-三氟-2,3-雙(羥基亞胺基)丁酸乙酯

反應圖9，步驟A、B：將含於水(27 mL)中之亞硝酸鈉(4.5 g，64.6 mmol)之溶液滴加至含於乙酸(36 mL)中之4,4,4-三氟乙醯基乙酸乙酯(10.0 g，53.8 mmol)之0℃溶液中。允許將反應緩慢升溫至環境溫度及攪拌5小時。向混合物中添加水(100 mL)，及將混合物用乙醚(4 × 100 mL)萃取。將合併之有機萃取物用飽和碳酸氫鈉(5 × 50 mL)及飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗。將有機層經硫酸鎂乾燥及於真空中濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠急驟層析法利用己烷及EtOAc溶離純化以獲得不純產物(10.13 g)，將其帶入下個步驟中無需進一步純化。

將所得殘餘物溶解於EtOH (240 mL)中及添加羥胺鹽酸鹽(9.75 g，140 mmol)及乙酸鈉(7.85 g)。將混合物加熱至80℃。於5小時後，將混合物冷卻至室溫，過濾，及於真空中濃縮。將殘餘物溶解於乙醚(400 mL)中及用飽和碳酸氫鈉水溶液(1 × 100 mL)洗。將水層用乙醚(100 mL)萃取及將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗，經硫酸鎂乾燥，及於真空中濃縮。將殘餘物經由矽膠急驟層析法利用己烷及EtOAc溶離純化以得到呈淡紅色油之呈2種異構體之混合物之標題化合物(2.58 g，24%總產率)。¹ H NMR (DMSO-d₆ ) δ13.46 (s, 1 H), 13.15 (s, 1 H), 4.25 (q, 2 H,J = 7.0), 4.0 (q, 2 H,J = 7.1 Hz), 1.24 (t, 3 H,J = 7.1 Hz), 1.18 (t, 3 H,J = 7.1 Hz)。

製備 44 4-環丙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯

反應圖9，步驟C：將3-環丙基-2,3-雙(羥基亞胺基)丙酸乙酯(1.17 g，5.84 mmol)溶解於THF (23 mL)中及添加CDI (1.42 g，8.77 mmol)。將混合物在環境溫度下攪拌2小時。將混合物於真空中濃縮，然後經由矽膠急驟層析法利用己烷及EtOAc溶離純化以得到呈無色油之標題化合物(90 mg，8%)。¹ H NMR (CDCl3) δ4.50 (q, J = 7.0 Hz, 2 H), 2.36-2.45 (m, 1H), 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.14-1.19 (m, 2H), 1.08-1.13 (m, 1H)。¹³ C NMR (CDCl3) δ158.8, 158.3, 147.1, 62.8, 14.1, 11.9, 10.2, 4.7。

製備 45 4-異丙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯

反應圖9，步驟C：以與製備44中所見之方法基本上類似之方式自2,3-雙(羥基亞胺基)-4-甲基-丙酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (CDCl3) δ4.50 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.47-3.54 (m, 1H), 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.39 (s, 3H)。

製備 46 4-乙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸甲酯

反應圖9，步驟C：以與製備44中所見之方法基本上類似之方式自2,3-雙(羥基亞胺基)丙酸甲酯製備標題化合物。¹ H NMR (d6-DMSO) δ3.95 (s, 3H), 2.96 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.29 (t, J = 7.4Hz, 3H)。¹³ C NMR (d6-DMSO) δ159, 157, 148, 54, 18, 12。

製備 47 4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯

反應圖9，步驟C：以與製備44中所見之方法基本上類似之方式自4,4-二氟-2,3-雙(羥基亞胺基)丁酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (d6-DMSO) δ7.47 (t, J = 51.71 Hz, 1H), 4.46 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。¹³ C NMR (d6-DMSO) δ156, 151, 147, 110, 108, 105, 63, 14。

製備 48 4-(三氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯

反應圖9，步驟C：以與製備44中所見之方法基本上類似之方式自4,4,4-三氟-2,3-雙(羥基亞胺基)丁酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (d6-DMSO) δ4.46 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.35 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。¹⁹ F NMR (d6-DMSO) δ60.46 (3 F)。

製備 49 4-乙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸

反應圖9，步驟D：向含於THF (10 mL)及水(10 mL)中之4-乙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸甲酯(438 mg，2.81 mmol)之混合物中添加含於水中2M LiOH (3.5 mL，3.5 mmol)。將混合物在室溫下攪拌20分鐘及於真空中濃縮。將殘餘物用水稀釋及用乙醚洗。將水層用1N HCl水溶液酸化及用乙醚萃取。將合併之有機層經硫酸鎂乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到呈靜置時固化之油之標題化合物(382 mg，96%)。¹ H NMR (DMSO-d6) δ 2.96 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 1.27 (t, J= 7.5 Hz, 3H)。

製備 50 4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸

反應圖9，步驟D，替代程序：於微波小瓶中，將4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯(400 mg，2.08 mmol)溶解於水(5 mL)及1,4-二噁烷(5 mL)中。向混合物中添加濃HCl水溶液(12M，2 mL)。將小瓶密封及將混合物在100℃下攪拌約3.5小時。於冷卻至室溫後，將混合物用水稀釋及用乙醚萃取。將合併之有機層經硫酸鎂乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到含有40% 1,4-二噁烷之標題化合物(365 mg，64%)。¹ H NMR (DMSO-d6) δ 7.12 - 6.86 (t. J = 53 Hz, 1H)。

製備 51 4-胺基-N-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖10，步驟A：向4-胺基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯(2.00 g，12.5 mmol)中添加甲胺(33%含於EtOH中，30 mL，241 mmol)。將混合物加熱至回流持續10分鐘，然後允許在室溫下攪拌2小時。將粗反應混合物與以300 mg規模相同進行之分開反應合併，及將溶液於真空中濃縮。將所得深褐色固體用MeOH研磨以移除有色雜質。過濾固體及用1:1 MeOH :乙醚洗。將固體於真空烘箱中乾燥以得到標題化合物(2.01 g，99%產率)。¹ H NMR (MeOD) δ 2.92 (s, 3H)。

製備 52 4-氯-N-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖10，步驟B：向含於乙腈(25 mL)中之4-胺基-N-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺(1.00 g，7.04 mmol)之0℃溶液中添加乙酸(25 mL，436 mmol)，接著添加含於濃HCl (12 M，18.1 mL)中之LiCl (895 mg，21.1 mmol)之溶液。向混合物中滴加含於水(1.2 mL)中之亞硝酸鈉(728 mg，10.55 mmol)之溶液。於2小時後，將反應用飽和氯化銨水溶液(100 mL)稀釋。將混合物用EtOAc (3 × 100 mL)萃取。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗，然後用飽和碳酸氫鈉水溶液洗兩次，然後再次用飽和氯化鈉水溶液洗。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾及於真空中濃縮。將所得粗製油溶解於DCM (60 mL)中，再次用飽和碳酸氫鈉水溶液洗，然後經硫酸鈉乾燥，及於真空中濃縮以得到呈白色固體之標題化合物(774 mg，68%產率)。¹ H NMR (CDCl₃ ) δ 6.76 (br s, 1H), 3.07 (d, 3 H,J = 5.1 Hz)。

製備 53 4-甲氧基-N-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖10，步驟C：向含有含4-氯-N-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺(333 mg，2.06 mmol)之MeOH (2 mL)之燒瓶中添加甲醇鈉(0.5M含於MeOH中，10 mL，5 mmol)。將混合物加熱至50℃持續2小時，然後將反應混合物濃縮。將粗製殘餘物溶解於DCM中及用飽和氯化銨水溶液洗。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到呈白色固體之標題化合物(309 mg，95%產率)。ES/MS (m/z) 158.0 (M+H)。

製備 54 N-(4-甲氧基-1,2,5-噁二唑-3-羰基)-N-甲基-胺基甲酸第三丁酯

反應圖10，步驟D：向含於DCM (5 mL)中之4-甲氧基-N-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺(300 mg，1.91 mmol)之溶液中添加DMAP (25 mg，0.21 mmol)及二碳酸二第三丁酯(630 mg，2.88 mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。將所得溶液於真空中濃縮及藉由矽膠急驟層析法利用DCM及己烷溶離純化以得到呈無色油之標題化合物(420 mg，82%產率)。ES/MS (m/z) 280.0 (M+Na)。

製備 55 6-(第三丁氧羰基胺基)嗒嗪-4-甲酸甲酯

反應圖11，步驟A：於烘箱乾燥之燒瓶中添加6-氯嗒嗪-4-甲酸甲酯(25.0 g，142 mmol)、碳酸鉀(42.0 g，303.8 mmol)、胺基甲酸第三丁酯(35.0 g，292.7 mmol)、Pd₂ (dba)₃ (3.40 g，3.71 mmol)及DTBPF (3.70 g，7.72 mmol)。將燒瓶排空及用氮氣再填充，然後經由注射器添加甲苯(270 mL)。然後將燒瓶排空，用氮氣再填充及排空三次，及最後排空及用氬氣再填充。將所得混合物在75℃下加熱6小時。於此時後，將反應通過利用EtOAc溶離之用矽藻土層覆蓋之矽膠塞過濾。將濾液於真空中濃縮以得到標題化合物(35.95 g，100%)。ES/MS (m/z): 254 (M+H)。

製備 56 6-(第三丁氧羰基胺基)嗒嗪-4-甲酸

反應圖11，步驟B：將5N NaOH水溶液(32.0 mL，160 mmol)添加至含有含於MeOH (300 mL)及水(130 mL)中之6-(第三丁氧羰基胺基)嗒嗪-4-甲酸甲酯(35.95 g，142 mmol)之燒瓶中及將溶液攪拌10分鐘。於此時後，經由旋轉蒸發移除MeOH。將所得混合物用水(70 mL)稀釋及用DCM (250 mL，3 × 50 mL)洗。將水相轉移至圓底燒瓶中及在攪拌下歷時2分鐘添加5 N HCl水溶液(33 mL，165 mmol)及形成稠的白色沉澱。將沉澱真空過濾，用冰冷水(100 mL)洗，及在抽吸下空氣乾燥。將所得固體轉移至燒瓶中，與丙酮/ MeOH (1:1)共同蒸發，及與甲苯共同蒸發。將所得淺褐色固體在40℃下於真空烘箱中乾燥20小時以得到標題化合物(28.48 g，83%)。ES/MS (m/z): 240.0 (M+H)。

製備 57 N-[5-(羥甲基)嗒嗪-3-基]胺基甲酸第三丁酯

反應圖11，步驟C：於燒瓶中，將6-(第三丁氧羰基胺基)嗒嗪-4-甲酸(13.38 g，55.9 mmol)溶解於THF (400 mL)及TEA (9.80 mL，70 mmol)中。將反應排空，放置在氮氣下，及冷卻至0℃。歷時1.5分鐘之時間添加氯甲酸乙酯(6.70 mL，70 mmol)，接著攪拌15分鐘。然後將反應混合物冷卻至-60℃並攪拌10分鐘。於此時後，添加硼氫化鈉(5.91 g，156 mmol)，接著添加MeOH (400 mL，於-78℃乾冰/丙酮浴中冷卻20分鐘)。允許歷時30分鐘之時間將混合物升溫至-30℃，此時將反應帶至0℃。於80分鐘後，將所得混合物用丙酮(50 mL)淬滅。將粗製混合物於真空中濃縮及分配在EtOAc與飽和碳酸氫鈉水溶液之間。將水層再次用EtOAc萃取。將合併之有機層經硫酸鎂乾燥及於真空中濃縮。將所得殘餘物經由矽膠急驟層析法利用己烷及丙酮溶離純化以得到可接受純度之呈淺黃色固體之標題化合物(7.90 g，59%)。ES/MS (m/z): 226.0 (M+H)。

製備 58 N-(5-甲醯基嗒嗪-3-基)胺基甲酸第三丁酯

反應圖11，步驟D：向含於DCM (165 mL)中之N-[5-(羥甲基)嗒嗪-3-基]胺基甲酸第三丁酯(7.90 g，33.0 mmol)之懸浮液中添加戴斯-馬丁高碘烷(16.8 g，39.6 mmol)，接著添加另外DCM (70 mL)。將反應混合物攪拌2小時50分鐘，此時添加另外戴斯-馬丁高碘烷(1.80 g，4.2 mmol)。將混合物再攪拌5分鐘，然後用飽和碳酸氫鈉水溶液(150 mL)及硫代硫酸鈉(29.0 g，183.5 mmol)淬滅。將混合物快速攪拌30分鐘，之後分離各層。將水層再次用DCM萃取。將合併之有機層用水洗，經硫酸鎂乾燥，及於真空中濃縮以得到粗製標題化合物(使用其無需進一步純化) (7.36 g，100%)。ES/MS (m/z): 222.0 (M-H)。

製備 59 N-[5-[[[(2S)-2-胺基-3,3,3-三氟-丙基]胺基]甲基]嗒嗪-3-基]胺基甲酸第三丁酯

反應圖11，步驟E：將N-(5-甲醯基嗒嗪-3-基)胺基甲酸第三丁酯(7.36 g，33.0 mmol)溶解於DCM (245 mL)中。添加(2S)-3,3,3-三氟丙烷-1,2-二胺二鹽酸鹽(6.63 g，33.0 mmol)，接著添加TEA (10.1 mL，72.4 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌10分鐘，接著在40℃下加熱40分鐘。於此時後，將反應冷卻至室溫及添加氰基硼氫化鈉(7.25 g，115 mmol)、MeOH (30 mL)及乙酸(9.5 mL，170 mmol)。將混合物攪拌20分鐘及然後於真空中濃縮。將所得殘餘物溶解於DCM (100 mL)中及用飽和碳酸氫鈉水溶液(100 mL)快速攪拌。分離各層及將水相用DCM (2 × 100 mL)萃取。將合併之有機層經硫酸鎂乾燥及於真空中濃縮以得到呈橙色油之標題化合物(使用其無需進一步純化) (11.1 g，100%)。ES/MS (m/z): 336.0 (M+H)。

製備 60 N-[5-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]嗒嗪-3-基]胺基甲酸第三丁酯

反應圖11，步驟F：將N-[5-[[[(2S)-2-胺基-3,3,3-三氟-丙基]胺基]甲基]嗒嗪-3-基]胺基甲酸第三丁酯(11.1 g，33.0 mmol)溶解於THF (300 mL)中及加熱至65℃持續5分鐘。然後添加CDI (16.1 g，99.3 mmol)及將反應攪拌50分鐘。於此時後，移除熱及將反應用1N NaOH (80 mL)小心淬滅。於真空中移除約2/3之溶劑。將混合物用EtOAc及水稀釋。分離各層及水相再用EtOAc萃取一次。將合併之有機層依次用水及飽和氯化鈉水溶液洗，經硫酸鎂乾燥，及於真空中濃縮。將所得殘餘物經由矽膠急驟層析法利用DCM及丙酮溶離純化以得到呈淺黃色固體之標題化合物(6.88 g，58%)。ES/MS (m/z): 362.0 (M+H)。

製備 61 (4S)-1-[(6-胺基嗒嗪-4-基)甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮鹽酸鹽

反應圖11，步驟G：將含於二噁烷中之4M HCl (200 mL，800 mmol)添加至含於MeOH (70 mL)中之N-[5-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]嗒嗪-3-基]胺基甲酸第三丁酯(6.88 g，19.0 mmol)之懸浮液中及將混合物加熱至50℃。於80分鐘後，將混合物於真空中濃縮，溶解於MeOH中，及再次於真空中濃縮。將所得殘餘物溶解於MeOH /庚烷(2:1)之混合物中及於真空中濃縮。將所得發泡體再次溶解於MeOH中及於真空中濃縮以得到呈無色吸濕粉末之標題化合物(5.44 g，96%)。ES/MS (m/z): 262.0 (M+H)。

製備 62 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]胺基甲酸苄酯

反應圖12，步驟A：平行建立三個反應：向小瓶中添加(4S)-1-[(6-胺基嗒嗪-4-基)甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮鹽酸鹽(700 mg，2.35 mmol)及(S)-(3-溴-1-(4,4-二氟環己基)-2-側氧基丙基)胺基甲酸苄酯(1.25 g，3.1 mmol)。然後添加THF (14 mL)、硼酸三甲酯(1.30 mL，11.4 mmol)及DIEA (1.70 mL，9.75 mmol)。將反應小瓶密封及加熱至80℃持續7.5小時。將三個反應冷卻至環境溫度，合併，及於真空中濃縮。將所得殘餘物經由矽膠急驟層析法利用DCM及丙酮溶離純化以得到呈淺橙色固體之標題化合物(1.70 g，42%)。ES/MS (m/z): 468.2 (M+H)。

製備 63 (4S)-1-[[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮

反應圖12，步驟B：向氫化容器中添加N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]胺基甲酸苄酯(580 mg，1.0 mmol)、EtOH (15 mL)及10% Pd/C (560 mg，0.53 mmol)。將容器密封，在減壓下排空，及用氫氣充氣至10 psi。重複脫氣程序3次，之後在10 psi下再次用氫氣充氣。於室溫下攪拌1.5小時後，將混合物通過矽藻土墊及將溶劑於真空中濃縮以得到足夠純度之標題化合物(377 mg，81%)。ES/MS (m/z): 433.2 (M+H)。

製備 64 5,5,5-三氟-2-羥基亞胺基-3-側氧基-戊酸乙酯

反應圖9，步驟A：以與製備35中所見之方法基本上類似之方式自5,5,5-三氟-3-側氧基-戊酸乙酯製備標題化合物。ES/MS (m/z): 228.0 (M+H)。

製備 65 5,5,5-三氟-2,3-雙(羥基亞胺基)戊酸乙酯

反應圖9，步驟B：以與製備39中所見之方法基本上類似之方式自5,5,5-三氟-2-羥基亞胺基-3-側氧基-戊酸乙酯製備標題化合物。ES/MS (m/z): 243.0 (M+H)。

製備 66 4-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯

反應圖9，步驟C：以與製備44中所見之方法基本上類似之方式自5,5,5-三氟-2,3-雙(羥基亞胺基)戊酸乙酯製備標題化合物。¹ H NMR (d6-DMSO) δ4.54 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.01 (q, J = 9.7 Hz, 2H), 1.48 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。

製備 67 N-(6-氯-5-甲基-嗒嗪-3-基)-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖13，步驟A：向配備有頂置式攪拌、內部溫度探針及氮氣墊之4 L夾套固定反應器中添加呈固體之6-氯-5-甲基-嗒嗪-3-胺(250 g，1.74 mol)。向反應器中添加1-甲基-2-吡咯啶酮(1.0 L)，接著添加吡啶(280 mL，3.46 mol)。將混合物冷卻至15℃之內部溫度，及以緩慢物流添加三甲基乙醯氯(280 mL，2.29 mol)，產生放熱，歷時10至15分鐘達到35℃。於1小時後，將混合物升溫至35℃持續另外30分鐘，然後允許冷卻回15℃。向混合物中滴加水(1.5 L)，之後將混合物在5℃下攪拌1小時。將所得稠漿液過濾以收集固體，將其用冷水(1 L)洗。將固體在氮氣壓力下乾燥24小時以得到呈白色固體之標題化合物(365 g，92%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 228.0/230.0 [M+H]⁺ 。

製備 68 N-[6-氯-5-[(E)-2-(二甲胺基)乙烯基]嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖13，步驟B：向含有N-(6-氯-5-甲基-嗒嗪-3-基)-2,2-二甲基-丙醯胺(34.0 g，149 mmol)之燒瓶中添加1,1-二乙氧基-N,N-二甲基-甲胺(100 mL，583 mmol)及DMF (13 mL)。然後在攪拌下在氮氣氛圍下，將混合物加熱至120℃。於5小時後，停止攪拌及使混合物在室溫下靜置1小時50分鐘。在此期間，大的黃色晶體沉積在燒瓶底部。將所得固體過濾，用乙醚(150 mL)沖洗，及於真空烘箱中在45℃下乾燥過夜以得到呈黃色結晶固體之標題化合物(25.68 g，61%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 283.0/285.0 [M+H]⁺ 。

製備 69 N-(6-氯-5-甲醯基-嗒嗪-3-基)-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖13，步驟C：向含於THF (150 mL)及水(150 mL)中之N-[6-氯-5-[(E)-2-(二甲胺基)乙烯基]嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺(25.58 g，90.45 mmol)之懸浮液中添加高碘酸鈉(67.5 g，316 mmol)，其於數分鐘內形成稠的白色沉澱。將混合物用力攪拌45分鐘。於此時後，過濾固體及用EtOAc沖洗。將所得濾液轉移至分液漏斗中及用EtOAc萃取兩次。將合併之有機層用飽和氯化鈉水溶液洗兩次，經MgSO₄ 乾燥，及於真空中濃縮。將所得殘餘物經由矽膠層析法利用己烷及EtOAc溶離純化以得到呈淺黃色固體之標題化合物(19.28 g，82%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 242.0/244.0 [M+H]⁺ 。

製備 70 N-[6-氯-5-(1-羥基-2-甲氧基-乙基)嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖13，步驟D：將含於THF (200 mL)中之鎂屑(12.7 g，522 mmol)之懸浮液用氮氣淨化。向該等屑中添加1,2-二溴乙烷(3 mL，34.5 mmol)，及將混合物用熱槍溫柔升溫，直至鼓泡產生。啟動後，添加另外1,2-二溴乙烷(1 mL，2.18 mmol)。允許混合物歷時約20分鐘達到環境溫度，及再攪拌10分鐘。然後向混合物中添加氯化汞(700 mg，2.57 mmol)，產生渾濁懸浮液，將其攪拌30分鐘，然後於-15℃乾冰/丙酮浴中冷卻。歷時30分鐘滴加含於THF (100 mL)中之甲基氯甲基醚(35 mL，453 mmol)之溶液，導致溫度增加至-8℃。於完全添加後，將反應冷卻至-25℃並攪拌2小時，允許溫度升高至-6℃。於分開燒瓶中，將N-(6-氯-5-甲醯基-嗒嗪-3-基)-2,2-二甲基-丙醯胺(21 g，86.9 mmol)溶解於THF (100 mL)中，放置在氮氣下，及冷卻至-78℃。經由套管添加上述格氏試劑溶液，導致沉澱之形成。於添加後，移除冷浴及將反應在環境溫度下攪拌20分鐘。在添加飽和NH₄ Cl水溶液後淬滅反應及用EtOAc萃取兩次。將合併之有機層用飽和NH₄ Cl水溶液接著飽和氯化鈉水溶液洗，經MgSO₄ 乾燥，及於真空中濃縮。將粗物質用EtOAc (150 mL)及己烷(200 mL)研磨，及經由過濾收集固體。將濾液濃縮及經由矽膠層析法利用己烷及EtOAc溶離純化。將經純化之物質及最初收集之固體合併以得到標題化合物(13.66 g，55%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 288.0/290.0 [M+H]⁺ 。

製備 71 N-[6-氯-5-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖13，步驟E至G：向含於DCM (500 mL)中之N-[6-氯-5-(1-羥基-2-甲氧基-乙基)嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺(13.66 g，47.47 mmol)之溶液中添加戴斯-馬丁高碘烷(27.0 g，61.7 mmol)。將混合物在環境溫度下在氮氣下攪拌。於3小時後，將反應用硫代硫酸鈉(31 g，193 mmol)接著飽和NaHCO₃ 水溶液淬滅及攪拌1小時。分離各層，及將有機層用飽和Na₂ S₂ O₃ 水溶液、飽和NaHCO₃ 水溶液，然後飽和氯化鈉水溶液洗。將有機層經MgSO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮。使用所得酮無需進一步純化。ES/MS (m/z): 286.0 (M+H)。

將粗製酮及(2S)-3,3,3-三氟丙烷-1,2-二胺二鹽酸鹽(14.6 g，72.6 mmol)懸浮於異丙醇(150 mL)中。添加三乙胺(21 mL，149 mmol)及將混合物在75℃下攪拌2小時，然後在環境溫度下攪拌過夜。將混合物於真空中濃縮及溶解於MeOH (250 mL)中。逐份添加氰基硼氫化鈉(17.8 g，269 mmol)，其中氣體排放發生。將所得懸浮液攪拌5分鐘，然後添加乙酸(20 mL，346 mmol)。將反應在40℃下加熱，同時攪拌30分鐘，此時將其冷卻及於真空中濃縮。將殘餘物用DCM (200 mL)稀釋及用飽和NaHCO₃ 水溶液中和，同時用力攪拌。分離各層及將水層用DCM (2 × 50 mL)萃取。將合併之有機層用飽和NaHCO₃ 水溶液(50 mL)及飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗，經MgSO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮。使用所得二胺無需進一步純化。ES/MS (m/z): 398.0 (M+H)。

將粗製二胺溶解於THF (150 mL)中及加熱至60℃。向混合物中逐份添加1,1’-羰二咪唑(19.4 g，116 mmol)。允許將反應在此溫度下攪拌1小時，此時將反應冷卻至環境溫度。添加5N氫氧化鈉(25 mL，125 mmol)及將混合物攪拌2分鐘。將反應用EtOAc稀釋，及將有機層用飽和氯化鈉水溶液洗三次，經MgSO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮。將殘餘物經由矽膠層析法利用己烷及丙酮溶離純化，收集第二溶離非對映異構體以得到標題化合物(7.74 g，38%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 424.0/426.0 [M+H]⁺ 。

製備 72 N-[(S)-[6-氯-7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]-(4,4-二氟環己基)甲基]胺基甲酸苄酯

反應圖13，步驟H及I：於具有回流冷凝器之2頸圓底燒瓶中向含於MeOH (20 mL)中之N-[6-氯-5-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺(7.7 g，18 mmol)之溶液中添加5M鹽酸水溶液(70 mL，350 mmol)。將混合物在110℃下加熱30分鐘。於冷卻後，將反應混合物於真空中濃縮，然後與MeOH共同蒸發一次。然後將殘餘物溶解於少量MeOH中及用EtOAc稀釋。在添加5N NaOH後將混合物鹼化，然後將其用EtOAc萃取三次。將合併之有機層經MgSO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到粗製胺，將其無需純化即可用於下個步驟。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 340.0/342.0 [M+H]⁺ 。

將粗製胺連同N-[(1S)-3-溴-1-(4,4-二氟環己基)-2-側氧基-丙基]胺基甲酸苄酯(7.71 g，19.1 mmol)及碳酸氫鈉(4.1 g，48 mmol)溶解於THF (100 mL)中。將所得混合物在70℃下加熱及在氮氣下攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫，過濾掉反應之所得固體，及用DCM洗。將濾液於真空中濃縮及將所得殘餘物經由矽膠層析法利用DCM及MeOH溶離純化以得到標題化合物(9.04 g，77%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 645.2/647.2 [M+H]⁺ 。

製備 73 (4S)-1-[(1S)-1-[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]-2-甲氧基-乙基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮鹽酸鹽

反應圖13，步驟J：向壓力瓶中添加5%碳載鈀(2.1 g，0.99 mmol)。在氮氣下，向觸媒中添加呈含於冷MeOH (100 mL)中之溶液之N-[(S)-[6-氯-7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]-(4,4-二氟環己基)甲基]胺基甲酸苄酯(9.0 g，13.12 mmol)。將瓶用氮氣淨化，然後裝入氫氣(20 psi)，及在環境溫度下攪拌過夜。此時後，將反應混合物通過矽藻土過濾，將其進一步用MeOH沖洗。將濾液於真空中濃縮。向粗產物中添加2-丙醇(50 mL)及將混合物在環境溫度下攪拌10分鐘。將所得懸浮液冷卻至-78℃持續10分鐘，過濾，及將固體用1:1己烷/醚(200 mL)沖洗，然後進一步用己烷洗。將所得白色固體在氮氣壓力下乾燥以得到呈白色固體之標題化合物(5.86 g, 87%)。ES/MS (m/z): 477.2 (M+H)。

製備 74 4-甲基苯磺酸[3-氯-6-(2,2-二甲基丙醯胺基)嗒嗪-4-基]甲酯

反應圖14，步驟A至B：將N-(6-氯嗒嗪-3-基)-2,2-二甲基-丙醯胺(42.1 g，197 mmol)及MeOH (0.50 L)添加至3頸燒瓶中及將溶液加熱至80℃。歷時25分鐘向反應混合物中緩慢添加水(250 mL)及將混合物攪拌15分鐘。分開地，製備含於水(250 mL)中之過硫酸銨(67 g，293.6 mmol)之溶液及將其升溫至環境溫度，之後歷時約35分鐘經由添加漏斗將其添加至反應中。然後將反應再攪拌45分鐘及移除熱。歷時10分鐘以細物流向反應中添加含於水(250 mL)中之亞硫酸鈉(50 g，396.7 mmol)之溶液。將反應混合物在環境溫度下攪拌過夜。然後將混合物過濾，及將固體用2:1 MeOH/水(100 mL)接著水(100 mL)洗。然後將濾液轉移至分液漏斗中及用乙酸異丙酯(300 mL，然後200 mL)萃取。遺棄水層，及將合併之有機萃取物用2M K₂ CO₃ 水溶液及飽和氯化鈉水溶液(100 mL)之1:1溶液洗。過濾合併之有機物，然後與乙腈(2 ×250 mL)共同蒸發以獲得橙色油。將所得粗製油在環境溫度下攪拌及滴加水(25 mL)。將固體產物接種至混合物中及添加另外100 mL水。於再攪拌10分鐘後，歷時10分鐘添加另外水(100 mL)及將混合物攪拌過夜。經由過濾收集所得固體及用水(100 mL)洗。再次過濾濾液，及將所得固體與最初收集之固體批合併及在真空(10 mbar，40℃)下乾燥四天。將所得粗製固體用於隨後步驟中無需進一步純化(12.53 g，約80質量%純度)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 244.0/246.0 [M+H]⁺ 。

將所得固體(12.45 g，40.9 mmol，80質量%純度)於乙腈(60 mL)中成漿液及在環境溫度下攪拌。向混合物中添加TEA (9 mL，64.6 mmol)及 DMAP (250 mg，2.0 mmol)，產生棕色溶液。將反應於冰浴中冷卻，及以四個相等部分添加對甲苯磺酸酐(15.2 g，45.2 mmol)。於約35分鐘後，呈晶種添加小部分先前製備之產物。將2M硫酸氫鉀水溶液(40 mL，80 mmol)於水(120 mL)中稀釋及以細物流添加。將所得漿液在環境溫度下攪拌2小時20分鐘。經由過濾收集固體，用25%乙腈水溶液(100 mL)，然後水(100 mL)沖洗。將固體於真空烘箱(40℃，10 mbar)中乾燥過夜以得到呈白色固體之標題化合物(16.97 g，歷經2個步驟20%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 398.0/400.0 [M+H]⁺ 。

製備 75 N-[6-氯-5-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖14，步驟C至D：向配備有機械攪拌器、溫度探針及氮氣入口之1 L燒瓶中添加(2S)-3,3,3-三氟丙烷-1,2-二胺二鹽酸鹽(26.3 g，131 mmol)及磷酸三鉀(69 g，325 mmol)。向固體中添加DMSO (220 mL)，及將混合物放置於環境溫度水浴中以維持24℃之內部溫度。向混合物中添加4-甲基苯磺酸[3-氯-6-(2,2-二甲基丙醯胺基)嗒嗪-4-基]甲酯(43.9 g，108 mmol)，接著添加另外DMSO (25 mL)以沖洗燒瓶壁。將反應攪拌過夜。將混合物於冰水浴中冷卻至約10℃及以四個相等部分以約10分鐘之間隔添加CDI (45 g，272 mmol)。於完全添加後，將混合物攪拌35分鐘，之後添加另外CDI (5 g，30.2 mmol)。將反應再攪拌5分鐘，然後添加水及將混合物攪拌1小時。向溶液中添加氫氧化鈉(5N水溶液，50 mL，250 mmol)及將混合物攪拌2.5小時。歷時10分鐘經由添加漏斗向所得溶液中添加水(440 mL)，造成在添加期間白色固體分散。將所得懸浮液攪拌1小時，然後經由過濾收集固體及用25% DMSO水溶液(400 mL)接著用水(600 mL)洗。將粗製固體在真空下乾燥，獲得不純產物。然後將固體添加至1 L燒瓶中及於環戊基甲基醚(650 mL)中成漿液。附接冷凝器及將混合物加熱至110℃持續4.5小時。停止加熱及使混合物以攪拌冷卻4小時40分鐘。經由過濾收集所得固體及用環戊基甲基醚(100 mL)洗。將固體於真空烘箱中乾燥過夜(50℃，10 mbar)，得到呈白色粉末之標題化合物(30.2 g，71%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 380.1/382.1 [M+H]⁺ 。

製備 76 (4S)-1-[(6-胺基-3-氯-嗒嗪-4-基)甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮

反應圖14，步驟E：將含於MeOH (75 mL)中之N-[6-氯-5-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺(30.0 g，77.4 mmol)之懸浮液添加至於水(75 mL)中稀釋之濃鹽酸(75 mL，873.2 mmol)之溶液中。將混合物在70℃下加熱，同時攪拌7小時，然後允許在室溫下再攪拌9.5小時。歷時10分鐘向混合物中添加氫氧化銨(28%水溶液，150 mL，1100 mmol)，導致沉澱形成。將混合物攪拌5.5小時，及經由過濾收集固體及用水(150 mL)沖洗。將固體空氣乾燥，然後於真空烘箱(10 mbar，50℃)中進一步乾燥以得到標題化合物(20.2 g，87%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 296.0/298.0 [M+H]⁺ 。

製備 77 N-[(S)-[6-氯-7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]-(4,4-二氟環己基)甲基]胺基甲酸苄酯

反應圖14，步驟F：向燒瓶中添加(4S)-1-[(6-胺基-3-氯-嗒嗪-4-基)甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮(23.88 g，80.8 mmol)、N-[(1S)-3-溴-1-(4,4-二氟環己基)-2-側氧基-丙基]胺基甲酸苄酯(38.0 g，94.0 mmol)、THF (400 mL)及碳酸氫鈉(23.0 g，273.8 mmol)。將混合物在65℃下加熱。於6.25小時後，添加另外N-[(1S)-3-溴-1-(4,4-二氟環己基)-2-側氧基-丙基]胺基甲酸苄酯(2.0 g，4.9 mmol)。將反應混合物再加熱16小時，然後冷卻至環境溫度。過濾所得固體及用DCM沖洗。然後將所得濾液與以93.6 mmol規模進行之第二反應混合物合併。將合併之濾液於真空中濃縮及經由矽膠層析法利用2至5% MeOH及DCM溶離純化。將經純化之物質與正庚烷共同蒸發以得到呈淺橙色固體之標題化合物(97 g，91%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 601.0/603.0 [M+H]⁺ 。

製備 78 (4S)-1-[[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮鹽酸鹽

反應圖14，步驟G：在氮氣氛圍下，向含有N-[(S)-[6-氯-7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]-(4,4-二氟環己基)甲基]胺基甲酸苄酯(15.1 g，23.4 mmol)及10%碳載鈀 (6.49 g，3.05 mmol)之燒瓶中添加MeOH (140 mL)。將燒瓶排空及用來自氣球之氫氣回填。然後將來自氣球之氫氣通過溶液鼓泡約10分鐘及將混合物在氣球氫氣壓力下攪拌過夜。將所得混合物通過矽藻土過濾及通過濾餅用EtOH (300 mL)接著DCM (100 mL)沖洗。將濾液在減壓下濃縮以獲得橙色發泡體。向殘餘物中添加2-丙醇(400 mL)及將物質加熱至回流直至其變得幾乎均勻。然後將所得溶液冷卻至環境溫度，然後放置於-20℃冷凍器中過夜。過濾所得漿液，及將固體用1:1 乙醚:正庚烷(125 mL)洗。將固體空氣乾燥，然後轉移至容器中及進一步於真空烘箱中乾燥以得到呈白色固體之標題化合物(8.98 g，82%)。LCMS (m/z): ES/MS (m/z): 433.0 (M+H)。

製備 79 N-[6-氯-5-(三甲基矽基甲基)嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖15，步驟A：向配備有頂置式攪拌、內部溫度探針及氮氣層之4 L夾套固定反應器中添加DIEA (195 mL，1.39 mol) 及THF (500 mL)。使用乾冰/丙酮浴將溶液冷卻至-30℃，及滴加正丁基鋰(2.5M含於己烷中，500 mL，1.30 mol)，同時維持內部溫度在-20℃與-15℃之間。將混合物攪拌10分鐘，然後歷時約30分鐘滴加含於THF (500 mL)中之N-(6-氯-5-甲基-嗒嗪-3-基)-2,2-二甲基-丙醯胺(125.0 g，549 mmol)之溶液，同時維持內部溫度在-20℃與-15℃之間。將所得暗紅色混合物再攪拌10分鐘。添加氯三甲基矽烷(80 mL，629 mmol)，同時維持內部溫度在-20℃以下。於30分鐘後，允許將反應歷時30分鐘升溫至0℃，此時將反應混合物緩慢倒入飽和NH₄ Cl水溶液(1 L)中及於冰浴中冷卻，保持溫度在10℃以下。將混合物用力攪拌10分鐘及分離相。遺棄水層及將有機層用飽和NH₄ Cl水溶液(2 x 1 L)，接著飽和氯化鈉水溶液(500 mL)洗。然後將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮至最小體積。將粗製殘餘物用正庚烷(500 mL)稀釋及於真空中濃縮以移除大多數己烷及THF。將所得懸浮液在室溫下攪拌過夜。然後將漿液濃縮至約1 vol庚烷(250 g總重量)，放置於冰浴中，及攪拌2小時。然後過濾漿液及將固體用冷正庚烷(100 mL)沖洗及在氮氣壓力下利用真空抽吸乾燥以得到呈白色固體之標題化合物(91.3 g，56%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 300.0/302.0 [M+H]⁺ 。

製備 80 N-[6-氯-5-(氯甲基)嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖15，步驟B：向含於2-丙醇(500 mL) 中之N-[6-氯-5-(三甲基矽基甲基)嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺(37.1 g，124 mmol)之溶液中添加 NCS (17.26 g，129.3 mmol)，接著添加DMF (100 mL)。將混合物在環境溫度下攪拌1.5小時，此段時間期間混合物變得均勻。將反應緩慢倒入含有冰水(2 L)及飽和NaHCO₃ 水溶液(500 mL)之燒瓶中及形成白色沉澱。將混合物用力攪拌，同時添加另外1 L去離子水。然後經由過濾收集所得固體，用水(3 × 500 mL)洗。將固體在氮氣壓力下乾燥及於真空烘箱中進一步乾燥(40℃，10 mbar)以得到呈白色粉末之標題化合物(27.6 g，85%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 262.0/264.0 [M+H]⁺ 。

製備 81 N-[6-氯-5-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺

反應圖15，步驟C至D：向含於乙腈(720 mL)中之N-[6-氯-5-(氯甲基)嗒嗪-3-基]-2,2-二甲基-丙醯胺(28.6 g，109.1 mmol)之溶液中添加(2S)-3,3,3-三氟丙烷-1,2-二胺二鹽酸鹽(24.1 g，120.0 mmol)，接著添加DIEA (76 mL，436 mmol)及碘化鈉(16.4 g)。將反應在環境溫度下攪拌2.25小時，此時添加另外(2S)-3,3,3-三氟丙烷-1,2-二胺二鹽酸鹽(2.5 g，12.4 mmol)及DIEA (5 mL，28.6 mmol)。將反應攪拌過夜，然後於真空中濃縮至約100 mL之總體積。向混合物中添加飽和NaHCO₃ 水溶液，然後將其用DCM萃取三次。將合併之有機層用1:1飽和NaHCO₃ 水溶液及飽和氯化鈉水溶液洗，經MgSO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到橙色固體，使用其無需進一步純化。

將所得殘餘物懸浮於THF (400 mL)中及加熱至65℃。向反應中逐份添加CDI (45.0 g，277.5 mmol)。於15分鐘後，將反應混合物移除熱及在緩慢逐份添加水(50 mL)後小心淬滅。一旦氣體排放平息，就將混合物加熱至65℃並攪拌20分鐘。將反應混合物於真空中濃縮以移除約150 mL溶劑，然後將混合物緩慢倒入含有冰水(2 L)之4 L燒瓶中，同時快速攪拌，造成棕褐色沉澱形成。將混合物進一步用水(700 mL)稀釋及攪拌10分鐘。過濾冷懸浮液及將固體用水(約500 mL)洗。將固體空氣乾燥，然後用乙醚(200 mL，然後50 mL)洗。將所得白色粉末在氮氣壓力下利用真空抽吸乾燥，然後於真空烘箱中進一步乾燥以得到標題化合物(34.26 g，82%)。ES/MS m/z(³⁵ Cl/³⁷ Cl) 380.0/382.0 [M+H]⁺ 。

實例 1 3-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：向小瓶中添加HATU (151 mg，0.395 mmol)、3-環丙基異噁唑-4-甲酸(64 mg，0.397 mmol)及THF (5 mL)。將漿液攪拌5分鐘及添加DIEA (172 µL，0.99 mmol)。於另外10分鐘後，添加(4S)-1-[[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮(151 mg，0.396 mmol)及將反應在環境溫度下攪拌1小時。於真空中移除溶劑，及將粗物質藉由逆相純化[管柱：86 g C18；溶離：35%至45%乙腈/ 10 mM碳酸氫銨溶液w/5% MeOH (pH 10.0)之梯度]而純化以得到標題化合物(150 mg，70%)。ES/MS (m/z): 568.2 (M+H)。

實例 2 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-乙基-異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例1之方法之方式自3-乙基異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 556.2 (M+H)。

實例 3 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-甲基-異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例1之方法之方式自3-甲基異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 542.2 (M+H)。

實例 4 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(二氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例1之方法之方式自3-(二氟甲基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物(此酸之製備述於Eur. J. Org. Chem. 2017 , 3935-3940中)。ES/MS (m/z): 578.0 (M+H)。

實例 5 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1,1-二氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例1之方法之方式自3-(1,1-二氟乙基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 592.0 (M+H)。

實例 6 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖12，步驟C：於小瓶中，將4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸(490 mg，3.825 mmol)及HATU (1.30 g，3.42 mmol)溶解於DMF (10 mL)中及於-40℃乾冰/丙酮浴中冷卻。向混合物中添加TEA (850 uL，6.10 mmol)，及將混合物攪拌2分鐘。此時，將反應內容物經由注射器轉移至含有(4S)-1-[[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮(988 mg，2.28 mmol)之燒瓶中，及允許將反應在環境溫度下攪拌。於約50分鐘後，將混合物用EtOAc (150 mL)稀釋，轉移至分液漏斗中，及用1:1飽和氯化鈉水溶液及飽和碳酸氫鈉水溶液洗，然後進一步用飽和氯化鈉水溶液洗一次。將水層用EtOAc反萃取一次。將合併之有機層經硫酸鎂乾燥，及過濾。於真空中移除溶劑，及將粗物質藉由逆相純化[管柱：275 g C18；溶離：35%至60%乙腈/ 10 mM碳酸氫銨溶液之梯度]而純化以得到標題化合物(710 mg，57%)。ES/MS (m/z): 543.1 (M+H)。

實例 7 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例1之方法之方式自3-(氟甲基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 560.2 (M+H)。

實例 8 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(2,2-二氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-(2,2-二氟乙基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 592.2 (M+H)。

實例 9 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(2-氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-(2-氟乙基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 574.2 (M+H)。

實例 10 3-(3,3-二氟環丁基)-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-(3,3-二氟環丁基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 618.1 (M+H)。

實例 11 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(三氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-(三氟甲基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 596.1 (M+H)。

實例 12 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-氟環丙基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-(1-氟環丙基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 586.2 (M+H)。

實例 13 3-[環丙基(二氟)甲基]-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-[環丙基(二氟)甲基]異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 618.3 (M+H)。

實例 14 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-甲基環丙基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-(1-甲基環丙基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 582.2 (M+H)。

實例 15 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-氟-1-甲基-乙基)異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-(1-氟-1-甲基-乙基)異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 588.2 (M+H)。

實例 16 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-異丙基-異噁唑-4-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以與實例1之方法基本上類似之方式自3-異丙基異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 570.2 (M+H)。

實例 17 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-乙基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例6之方法之方式自4-乙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸製備標題化合物。ES/MS m/z 557.2 (M+H)。

實例 18 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例6之方法之方式自4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸製備標題化合物。ES/MS m/z 579.0 (M+H)。

實例 19 4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖12，步驟C：將4-環丙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯(75 mg，0.41 mmol)溶解於THF (4.0 mL)及水(2.0 mL)中，然後添加LiOH水溶液(1.0M，0.45 mL，0.45 mmol)。將混合物在環境溫度下攪拌4小時，然後添加另外LiOH水溶液(1.0M，0.25 mL，0.25 mmol)。於環境溫度下攪拌1小時後，將混合物於真空中濃縮。添加甲苯及於真空中濃縮。將殘餘物溶解於DMF (1.6 mL)中及於乙腈/乾冰浴中冷卻至-30℃。添加HATU (0.31 g，0.84 mmol)，將混合物在-30℃下攪拌5分鐘，然後移除浴。在達到0℃後，添加(4S)-1-[[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮(175 mg，0.41 mmol)，及允許將反應升溫至環境溫度。於1小時後，將混合物用EtOAc稀釋，轉移至分液漏斗中，及用1:1水/飽和碳酸氫鈉水溶液接著飽和氯化鈉水溶液洗。將有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，及於真空中濃縮。將粗物質藉由矽膠急驟層析法利用丙酮及己烷溶離純化以得到標題化合物(130 mg，56%)。ES/MS (m/z) 569.2(M+H)。

實例 19a 製備4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺乙磺酸藉由將4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺(1.8 g，3.166 mmol) (實例19)溶解於EtOAc (10 mL)中，同時在環境溫度下在800 rpm下攪拌至澄清微黃色溶液來製備4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺之乙磺酸鹽。將此溶液通過0.45 µm注射器式過濾器過濾至新的乾淨小瓶中。向此溶液中添加95%乙磺酸(300 µL，3.473 mmol)及澄清溶液持續存在。該溶液於數分鐘內開始渾濁。於1小時後，白色固體之稠的漿液形成，及添加另外10 mL EtOAc以使漿液稍微變稀。允許將此漿液在800 rpm下攪拌過夜。產生亮白色固體之稠漿液。將白色固體在真空下在Whatman紙過濾器上單離。將亮白色固體之餅在氮氣物流下適當乾燥15分鐘，然後保持於70℃真空烘箱中過夜以得到標題化合物(1.283 g，59.7%)。

晶型之X-射線粉末繞射在配備有CuKα源及Vantec偵測器之在35 kV及50 mA下操作之Bruker D4 Endeavor X-射線粉末繞射儀上獲得結晶固體之XRPD圖案。將樣品在4與40 2θ°之間掃描，其中步長為0.008 2θ°及掃描速率為0.5秒/步驟，及使用1.0 mm發散，6.6 mm固定抗散射器，及11.3 mm偵測器狹縫。將乾粉末堆疊在石英樣品固持器上及使用載玻片獲得光滑表面。在環境溫度及相對濕度下收集晶型繞射圖案。於基於內部NIST 675標準之全圖案位移後於MDI-Jade中測定晶體峰位置，具有8.853及26.774 2θ°處之峰。結晶學技術之熟習技工應瞭解針對任何給定晶型，由於自諸如晶體形態學及習性之因素產生之較佳定向，繞射峰之相對強度可變化。在較佳定向之影響存在之情況下，峰強度改變，但是多晶型物之特徵峰位置不變(參見，例如，美國藥典(The United States Pharmacopeia) #23，國家調配物(National Formulary) #18, 第1843至1844頁，1995)。此外，結晶學技術之熟習技工亦應瞭解針對任何給定晶型，角峰位置可輕微變化。例如，由於分析樣品之溫度之變化、樣品替代或內部標準之存在或不存在，峰位置可移動。於本案中，考慮此等潛在變數，在不阻礙指定晶型之明確識別下假定± 0.2 2θ°之峰位置可變性。可基於區別峰之任何獨特組合確認出晶型。

結晶4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺乙磺酸之X-射線粉末繞射結晶實例19a (4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺乙磺酸)之經製備樣品藉由使用CuKα輻射之X-射線粉末繞射圖表徵，其具有如下表A中所述之繞射峰(2-θ值)，及特定言之具有19.2處之峰與一或多個選自由19.7、6.5及8.4組成之群之峰組合；具有0.2°之繞射角之公差。表 A ：結晶4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺乙磺酸之X-射線粉末繞射峰


峰	角(°2-θ) +/- 0.2°	相對強度(最強烈峰之%)
1	6.5	83.7%
2	7.9	52.3%
3	8.4	58.7%
4	15.9	27.8%
5	18.2	43.4%
6	19.2	100.0%
7	19.7	97.5%
8	22.5	18.9%
9	23.9	43.0%
10	25.6	25.2%

實例 20 4-異丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例19之方法之方式自4-異丙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯製備標題化合物。ES/MS (m/z) 571.2 (M+H)。

實例 21 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(三氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖12，步驟C：將含於乙腈(0.17 mL)中之4-(三氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯(61 mg，0.29 mmol)及(4S)-1-[[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮(55.7 mg，0.129 mmol)之混合物於密封小瓶中在90℃下加熱。於攪拌16小時後，將反應冷卻及藉由矽膠急驟層析法利用己烷及丙酮溶離純化以獲得不純產物。然後將所得殘餘物經由逆相HPLC [乙腈/10 mM (NH₄ )₂ CO₃ (pH 10)]純化以得到呈白色固體之標題化合物(22 mg，29%)。ES/MS (m/z) 597.2 (M+H)。

實例 22 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲氧基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖12，步驟C：向N-(4-甲氧基-1,2,5-噁二唑-3-羰基)-N-甲基-胺基甲酸第三丁酯(65 mg，0.25 mmol)中添加含於乙腈(2 mL)中之(4S)-1-[[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]甲基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮(100 mg，0.23 mmol)之溶液。將混合物加熱至60℃持續40分鐘，然後加熱至80℃持續18小時。將混合物於真空中濃縮及經由矽膠急驟層析法利用7N氨水/ MeOH及DCM溶離純化以得到呈黃色發泡體之標題化合物(94 mg，73%產率)。ES/MS (m/z) 559.2 (M+H)。

實例 23 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖12，步驟C：以基本上類似於實例19之方法之方式自4-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯製備標題化合物。ES/MS (m/z): 611.2 (M+H)。

實例 24 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖13，步驟K：向含於EtOAc (150 mL)中之(4S)-1-[(1S)-1-[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]-2-甲氧基-乙基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮鹽酸鹽(7.5 g，15 mmol)之懸浮液中添加三乙胺(8.2 mL，58 mmol)。於攪拌5分鐘後，添加4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸(2.2 g，17 mmol)，接著添加丙基膦酸酐(1.67M溶液含於EtOAc中，26 mL，43.4 mmol)。於環境溫度下攪拌1小時後，添加另外4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸(640 mg，5 mmol)、三乙胺(0.70 mL，5 mmol)及丙基膦酸酐(1.67M溶液含於EtOAc中，3 mL，5 mmol)。於再攪拌1小時後，將反應用水接著飽和NaHCO₃ 水溶液淬滅。將混合物攪拌5分鐘，轉移至分液漏斗中，及分離各層。將水層用EtOAc多萃取兩次，及將合併之有機層用飽和NaHCO₃ 水溶液接著飽和氯化鈉水溶液洗。將有機層經MgSO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮。將粗物質經由矽膠層析法利用DCM及MeOH溶離純化以獲得不純產物，將其經由矽膠層析法利用DCM及EtOH溶離再純化以得到呈白色固體之標題化合物(6.61 g，77% )。ES/MS (m/z): 587.2 (M+H)。

實例24a 製備N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺半乙烷-1,2-二磺酸藉由將N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺(2.92 g，4.98 mmol) (參見實例24)溶解於乙腈(10 mL)中至澄清黃色溶液，然後通過0.45 µm注射器式過濾器過濾至新的乾淨小瓶中來製備N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺之半乙二磺酸鹽。在80℃下，將1,2-乙烷二磺酸二水合物(580 mg，2.513 mmol)溶解於乙腈(20 mL)中。當在800 rpm下在60℃下攪拌時，快速添加此澄清無色乙烷二磺酸溶液，然後通過 0.45 µm注射器式過濾器熱過濾至化合物之澄清黃色溶液中。該澄清黃色溶液快速轉變成黃色上清液下之白色固體之渾濁漿液。隨著完全添加酸，黃色上清液中產生白色固體之稠漿液。將此漿液在800 rpm/60℃下攪拌30分鐘。停止加熱及當樣品冷卻至室溫時，將其在300 rpm下攪拌。亮白色固體之厚層在黃色上清液下產生。將白色固體在Whatman紙過濾器上在真空下單離。將亮白色固體之餅在氮氣物流下適當乾燥15分鐘，然後於70℃真空烘箱中乾燥1小時以得到化合物(3.03 g，89.3%)。

結晶N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺半乙烷-1,2-二磺酸(實例24a)之X-射線粉末繞射如實例19a中所述獲得結晶固體之XRPD圖案。結晶實例24a (N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺半乙烷-1,2-二磺酸)之經製備樣品藉由使用CuKα輻射之XRD圖案表徵，其具有如下表B中所述之繞射峰(2-θ值)，及特定言之具有17.1處之峰與一或多個選自由7.6、19.4及10.7組成之群之峰組合；具有0.2°之繞射角之公差。表 B ：結晶N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺半乙烷-1,2-二磺酸之X-射線粉末繞射峰


峰	角(°2-θ) +/- 0.2°	相對強度(最強烈峰之%)
1	7.6	76.4%
2	8.2	17.5%
3	10.7	54.9%
4	16.8	52.1%
5	17.1	100.0%
6	17.9	28.3%
7	19.4	64.1%
8	22.6	25.8%
9	23.8	22.6%
10	24.3	24.5%

實例 25 4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖13，步驟K：以基本上類似於實例24之方法之方式自4-環丙基-1,2,5-噁二唑-3-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 613.2 (M+H)

實例 26 3-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺

反應圖13，步驟K：以基本上類似於實例24之方法之方式自3-環丙基異噁唑-4-甲酸製備標題化合物。ES/MS (m/z): 612.2 (M+H)

實例 27 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖13，步驟K：於分液漏斗中，將含於EtOAc中之(4S)-1-[(1S)-1-[2-[(S)-胺基-(4,4-二氟環己基)甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-7-基]-2-甲氧基-乙基]-4-(三氟甲基)咪唑啶-2-酮鹽酸鹽(80%質量純度，1.0 g，1.56 mmol)之溶液用飽和NaHCO₃ 水溶液洗兩次。將有機層經MgSO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到對應游離鹼，其無需進一步純化即可使用。ES/MS (m/z): 477.2 (M+H)。

將所得胺及4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯(750 mg，3.12 mmol)於小瓶中合併，溶解於MeOH (10 mL)中，及添加4-二甲胺基吡啶(400 mg，3.24 mmol)。將小瓶密封，及將混合物在70℃下攪拌9小時，然後允許在環境溫度下繼續攪拌過夜。將粗反應混合物濃縮及經由逆相層析法(360 g C18管柱；溶劑A：0.1% HCO₂ H水溶液，溶劑B：乙腈；30至100%溶劑B歷時39分鐘)純化。將含有產物之溶離份於真空中濃縮以移除揮發物及將所得水性混合物用飽和NaHCO₃ 水溶液中和。將混合物用EtOAc萃取三次，及將合併之有機層經MgSO₄ 乾燥，過濾，及於真空中濃縮以得到呈黃褐色固體之標題化合物(113 mg，12%)。ES/MS (m/z): 623.2 (M+H)。

實例 28 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(三氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺

反應圖13，步驟K：以基本上類似於實例27之方法之方式自4-(三氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲酸乙酯製備標題化合物(121 mg，82%)。ES/MS (m/z): 641.2 (M+H)。

IL-17A:IL-17RA α LISA 化合物抑制IL-17A結合至IL-17RA之能力可利用αLISA檢定評估。用於αLISA之蛋白質試劑IL17A及IL17RA之表現及純化可基本上如下進行。使具有C端AVI標籤，接著His標籤之細胞介素IL-17A (參考序列NP_002181)殘基1-155之構築體於昆蟲細胞中表現，與BirA一起用於活體內生物素化。使具有突變N206D/N265D之受體IL-17RA (NP_055154)殘基1-317於昆蟲細胞中表現，其具有C端凝血酶裂解位點，接著FLAG標籤。IL-17A及IL-17RA各經PCR擴增及TOPO選殖至定製TOPO適應之pFastBac 載體(Thermo Fisher Scientific. Carlsbad, CA)中。表 1 ： IL17A 、 BirA 及 IL17RA 構築體序列之 SEQ ID 編號

針對以下之胺基酸序列：	SEQ ID NO:
IL17A殘基1-155 + AVI標籤 + His標籤 (參考序列NP_002181)	1
BirA (用於活體內生物素化)	2
具有突變N206D、N265D 之IL17RA殘基1-317 +凝血酶裂解位點+ FLAG標籤 (NP_055154)	3

使用Bac至Bac系統協定(Thermo Fisher Scientific. Carlsbad, CA)之經修改版本與DH10EMBacY桿粒(Geneva Biotech. Geneva, Switzerland)組合之標準桿狀病毒表現係用於產生病毒。IL-17A及IL-17RA於Sf 9細胞中之發酵為長度72小時。藉由離心收穫所得蛋白質及轉移上清液用於純化。藉由鎳親和層析法將IL-17A自上清液單離，及藉由尺寸排阻層析法進一步純化。藉由FLAG親和層析法將IL-17RA自上清液單離，及藉由尺寸排阻層析法進一步純化。

為檢定本發明之化合物，將0.1 µL測試化合物原液於384孔proxiplate (Perkin Elmer)中使用Echo聲學液體處理器(LabCyte Sunnydale, CA)於100% DMSO中連續稀釋。將另外5 µL IL-17RA-FLAG添加至板中，接著添加5 µL Avi標記之IL-17A-His以各自提供2 nM IL-17RA及IL-17A之最終濃度。於20 mM HEPES，150 mM NaCl，0.05% Tween-20，0.1%人類血清白蛋白，pH 7及1% DMSO中進行檢定。允許將檢定混合物在室溫下培育2小時。於2小時培育後，將10 µL鏈黴抗生物素(streptavidin)供體珠(20 µg/ml最終)及抗FLAG受體珠(20 µg/ml最終)添加至板中。允許將板在室溫下培育1小時，然後在Envision (Perkin Elmer)上讀取。使用如方程式1中所示之四參數擬合測定相對IC₅₀ 值。於此方程式中，底部及頂部經定義為曲線之平臺，且H為Hill斜率。自僅添加0.1% DMSO未觀察到抑制作用。方程式 1 Y = Y_底部 + (Y_頂部 – Y_底部 /1 + 10^{(log IC50-x)*H)} )

表2中針對實例1至28所提供之IC₅₀ 值說明IL-17受體介導之信號傳導對IL-17A反應之抑制，且說明請求項1之化合物作為IL-17A結合至IL-17RA之抑制劑，及因此作為IL-17A介導之信號傳導之抑制劑的活性。

基於細胞之人類 IL-17A 中和檢定 化合物中和IL-17A之活性之能力可利用基本上如下實施之基於細胞之人類IL-17A中和檢定評估。將HT-29細胞(#HTB-38; ATCC)於補充有10% FBS 之麥考伊氏(McCoy’s) 5A (改性)培養基 (#16600-082; Gibco)中以20,000個細胞/孔接種於96孔板(#3596; Costar)中。在指定濃度之抑制劑之存在下，將細胞用90 ng/mL人類IL-17A (#317-ILB; R&D Systems)處理。評價0.06 nM至16,000 nM之劑量範圍。於48小時後，使用商業ELISA套組(#DY275; R&D Systems)量測培養基中之CXCL1/GROα。單獨培養基處理包含於每個實驗中以評估CXCL1/GROα之基礎水平。使用下列方程式計算抑制%：

。

表2中針對實例1至28所提供之IC₅₀ 值說明中和HT-29細胞中之人類IL-17A介導之信號傳導，且說明請求項1之化合物作為IL-17A之抑制劑之活性。表 2 ： 針對實例 1 至 28 所提供之 IC₅₀ 值

化合物	αlisa IC₅₀	HT-29 IC₅₀
實例1	15.7 ± 7.0 nM (n = 6)	51.6 ± 23.5 nM (n = 7)
實例2	15.2 ± 2.5 nM (n = 2)	53.3 ± 26.4 nM (n = 3)
實例3	27.7 ± 2.4 nM (n = 4)	127 nM (n =1)
實例4	13.0 ± 2.0 nM (n = 4)	93.7 nM (n = 1)
實例5	20.0 nM (n = 1)	104 nM (n = 1)
實例6	＜9.45 nM (n = 1)	94.2 nM (n = 1)
實例7	37.8 nM (n = 1)	128 nM (n = 1)
實例8	15.5 nM (n = 1)	52.4 nM (n = 1)
實例9	10.6 nM (n = 1)	46.5 nM (n = 1)
實例10	47 nM (n = 1)	48.9 nM (n = 1)
實例11	＜9.45 nM (n = 1)	148 nM (n = 1)
實例12	18.1 nM (n = 1)	107 nM (n = 1)
實例13	47.1 nM (n = 1)	53.1 nM (n = 1)
實例14	36.1 nM (n = 1)	33.3 nM (n = 1)
實例15	51.9 nM (n = 1)	82.9 nM (n = 1)
實例16	19.3 nM (n = 4)	10.8 nM (n = 1)
實例17	＜9.45 nM (n = 1)	15.9 nM (n = 1)
實例18	＜9.45 nM (n = 1)	22.7 nM (n = 1)
實例19	＜9.45 nM (n = 1)	10.1 nM (n = 1)
實例20	＜9.45 nM (n = 1)	14.3 nM (n = 1)
實例21	＜9.45 nM (n = 1)	10.1 nM (n = 1)
實例22	11.4 nM (n = 1)	83.4 nM (n = 1)
實例23	＜9.45 nM (n = 1)	14.9 nM (n = 1)
實例24	＜9.45 nM (n = 3)	9.3 ± 6.0 nM (n = 4)
實例25	＜9.45 nM (n = 2)	2.2 ± 1.6 nM (n = 4)
實例26	＜9.45 nM (n = 1)	7.0 nM (n = 1)
實例27	＜9.45 nM (n = 1)	2.8 nM (n = 1)
實例28	＜9.45 nM (n = 1)	4.6 nM (n = 1)

小鼠口服生物可利用率 本發明化合物之口服生物可利用率(%F)可於小鼠中藉由於基本上如下進行之靜脈內及口服投與後測定8小時血漿AUC (nM*hr)來測定。經由靜脈內(IV)團式注射(1 mg/kg)或口服(3 mg/kg)對雄性小鼠(n = 3)投與化合物。針對靜脈內投與，使用5 mL/kg之體積之含於調整至pH 2之NaPO₄ 緩衝液中之20% w/v卡普西托(capsitol) (25 mM)的媒劑。針對口服投與，使用10 mL/kg之體積之HEC/P80/AF/PW (經探針音波處理以提供均勻懸浮液)的媒劑。藉由隱靜脈出血使用K2 EDTA作為抗凝血劑對血液採樣。經由毛細管收集約20 μL血液(或足夠用於1個斑點)及轉移至卡作為乾血斑。允許將卡乾燥至少2小時，之後送去分析。藉由液相層析法/串聯質譜法在0.08 (僅IV)、0.25、0.5、0.75、2、4及8小時之時間點量測各小鼠之化合物之血液濃度。經由下列方程式測定口服生物可利用率(%F)：[%F = (AUC/劑量)_PO / (AUC/劑量)_IV ]。於下表中以%F提供實例化合物1至7、 9、11、19、24及25之口服生物可利用率結果。此等數據說明本發明之各種化合物之藥理學上有利口服可利用性。

化合物	%F ( 小鼠)
實例1	34
實例2	28
實例 3	35
實例 4	59
實例 5	49
實例 6	75
實例 7	47
實例 9	12
實例11	55
實例19	47
實例24	107
實例25	37

本發明之化合物提供IL-17A介導之信號傳導之新穎抑制劑，且於4天大鼠研究中證實藥理學性質(諸如強效抑制IL-17A結合至IL-17受體及經由IL-17受體之信號傳導、口服生物可利用率及一般有利毒物學特性)之有利組合。因而，據信本發明之化合物(特定言之式I化合物)及本文中所提供之實例可用於治療牛皮癬、類風濕性關節炎及/或多發性硬化症、牛皮癬性關節炎、中軸脊椎關節炎、僵直性脊柱炎、化膿性汗腺炎、全身性紅斑狼瘡、掌蹠膿皰病(PPP)、異位性皮炎、哮喘及COPD。

胺基酸及核苷酸序列之列表 ＜SEQ ID NO:1；PRT1；人工序列＞IL17A殘基1-155 + AVI標籤+ His標籤 MTPGKTSLVSLLLLLSLEAIVKAGITIPRNPGCPNSEDKNFPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKRSSDYYNRSTSPWNLHRNEDPERYPSVIWEAKCRHLGCINADGNVDYHMNSVPIQQEILVLRREPPHCPNSFRLEKILVSVGCTCVTPIVHHVAGLNDIFEAQKIEWHEHHHHHH ＜SEQ ID NO:2；PRT1；人工序列＞BirA MALKDNTVPLKLIALLANGEFHSGEQLGETLGMSRAAINKHIQTLRDWGVDVFTVPGKGYSLPEPIQLLNAKQILGQLDGGSVAVLPVIDSTNQYLLDRIGELKSGDACIAEYQQAGRGRRGRKWFSPFGANLYLSMFWRLEQGPAAAIGLSLVIGIVMAEVLRKLGADKVRVKWPNDLYLQDRKLAGILVELTGKTGDAAQIVIGAGINMAMRRVEESVVNQGWITLQEAGINLDRNTLAAMLIRELRAALELFEQEGLAPYLSRWEKLDNFINRPVKLIIGDKEIFGISRGIDKQGALLLEQDGIIKPWMGGEISLRSAEK ＜SEQ ID NO:3；PRT1；人工序列＞具有突變N206D、N265D之 IL17RA殘基1-317 +凝血酶裂解位點+ FLAG標籤 MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGASLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQGDLFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRWRFTFSHFVVDPDQEYEVTVHHLPKPIPDGDPNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPDITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSDVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSATVSCPEMPDTPEPIPDYMLVPRGSDYKDDDDK

Claims

一種下式化合物：
其中： X為CH或N； R¹ 為-CH₃ 、-CH₂ F、-CHF₂ 、-CF₃ 、-CH₂ CH₃ 、-CH₂ CF₃ 、-CH(CH₃ )₂ 、-CH₂ CHF₂ 、-CH₂ CH₂ F、-CF(CH₃ )₂ 、-CF₂ CH₃ 、-OCH₃ 、
、
、
、
及
；且 R² 為-H或-CH₂ OCH₃ ；或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1之化合物，其中X為CH，或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1之化合物，其中X為N，或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項2或3之化合物，其中R² 為-CH₂ OCH₃ ，或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項3之化合物，其為下式：
，或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項5之化合物，其為結晶4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺乙磺酸。
如請求項6之化合物，其為藉由使用CuKα輻射之X-射線粉末繞射圖案表徵之結晶4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺乙磺酸具有在19.2之繞射角2-θ之繞射峰與一或多個選自由19.7、6.5及8.4組成之群之峰組合；具有0.2°之繞射角之公差。
如請求項4之化合物，其為下式：
，或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項8之化合物，其為結晶N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺半乙烷-1,2-二磺酸。
如請求項9之化合物，其為藉由使用CuKα輻射之X-射線粉末繞射圖案表徵之結晶N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺半乙烷-1,2-二磺酸具有在17.1之繞射角2-θ之繞射峰與一或多個選自由7.6、19.4及10.7組成之群之峰組合；具有0.2°之繞射角之公差。
如請求項1之化合物，其係選自由以下組成之群： 3-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-乙基-異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-甲基-異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(二氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1,1-二氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(2,2-二氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(2-氟乙基)異噁唑-4-甲醯胺； 3-(3,3-二氟環丁基)-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(三氟甲基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-氟環丙基)異噁唑-4-甲醯胺； 3-[環丙基(二氟)甲基]-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-甲基環丙基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-(1-氟-1-甲基-乙基)異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-3-異丙基-異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-乙基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； 4-異丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲氧基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]甲基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(2,2,2-三氟乙基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； 4-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺； 3-環丙基-N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]異噁唑-4-甲醯胺； N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(二氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺；及 N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-(三氟甲基)-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺，或其醫藥上可接受之鹽。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至11中任一項之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，及醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
一種如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療選自由以下組成之群之疾病或病症之藥劑：牛皮癬、類風濕性關節炎、脊椎關節炎、多發性硬化症、牛皮癬性關節炎、中軸脊椎關節炎、僵直性脊柱炎、化膿性汗腺炎、全身性紅斑狼瘡、掌蹠膿皰病(PPP)、異位性皮炎、哮喘及/或COPD。
如請求項13之用途，其中該藥劑包含N-[(S)-(4,4-二氟環己基)-[7-[(1S)-2-甲氧基-1-[(4S)-2-側氧基-4-(三氟甲基)咪唑啶-1-基]乙基]咪唑并[1,2-b]嗒嗪-2-基]甲基]-4-甲基-1,2,5-噁二唑-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項13之用途，其中該藥劑係用於治療牛皮癬。