TW202035402A - 噠嗪酮及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

揭示根據式（I）之化合物，及相關醫藥組合物。亦揭示治療方法，例如使用式（I）化合物治療腎病。

Description

噠嗪酮及其使用方法
相關申請案
本申請案主張2018年9月18日申請之美國臨時專利申請案第62/732,728號；及2018年12月17日申請之美國臨時專利申請案第62/780,553號之優先權。
蛋白尿為其中血液中之過量蛋白質滲漏至尿液中的病況。蛋白尿可自24小時時段內在尿液中損失30 mg蛋白質（稱作微量白蛋白尿）進展至＞300毫克/天（稱作大量白蛋白尿），隨後達到24小時時段內3.5公克蛋白質或更大的水準，或正常量的25倍。蛋白尿發生在腎臟腎小球功能障礙時，導致體液積聚於體內（水腫）。已顯示長期蛋白質洩漏導致腎衰竭。腎病症候群（NS）疾病占流行的終末期腎病病例之約12%，在美國的年度費用超過30億美元。每100,000名兒童中約有5名每年經診斷患有NS，且現今每10萬名兒童中便有15名在患有所述疾病之下生活。對於對治療有積極反應的患者，復發頻率極高。百分之九十患有腎病症候群之兒童將對治療有反應，然而，估計75%將復發。需要更有效的治療腎病（例如蛋白尿）或降低其產生風險之方法。
哺乳動物TRP通道蛋白形成六跨膜陽離子可滲透通道，其可基於胺基酸序列同源性（TRPC、TRPV、TRPM、TRPA、TRPP及TRPML）分組成六個子族。最近對TRP通道之研究表明其參與許多基本細胞功能，且係視為在許多疾病之病理生理學中起重要作用。許多TRP在腎臟中沿不同腎單位部分表現，且愈來愈多的證據表明此等通道參與遺傳，以及獲得性腎臟疾病。TRPC6、TRPM6及TRPP2分別與遺傳性局灶性節段性腎小球硬化（FSGS）、低鎂血症伴繼發性低鈣血症（HSH）及多囊性腎病（PKD）有關。
亦報導TRPC5促進下伏於先天性恐懼反應調節之機制。（《神經科學雜誌（J Neurosci.）》2014年3月5日; 34(10): 3653-3667）。
因此，需要TRPC5或TRPC4或兩者之其他抑制劑。
本發明至少部分地基於以下發現：瞬時受體電位陽離子通道子族C成員5（TRPC5）活性消除肌動蛋白應力纖維且減少黏著斑形成，從而呈現運動的遷移性足細胞表型。
本發明之一態樣為作為TRPC5或TRPC4或兩者之拮抗劑的化合物。在一些實施例中，本發明化合物為結構式I之化合物：
Figure 02_image006
，或其醫藥學上可接受之鹽； 其中： 「---」為單鍵或雙鍵 X1 為CH或N； 當「---」為雙鍵時，X2 為CH或N； 當「---」為單鍵時，X2 為N(CH3 )， 當X1 為CH時，X2 為N或N(CH3 )； Y為-O-、-N(CH3 )-、-N(CH2 CH2 OH)-、環丙-1,1-二基或-CH(CH3 )-； Q為2-三氟甲基-4-氟苯基、2-二氟甲基-4-氟苯基、2-三氟甲基苯基、2-甲基-4-氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2-氯苯基、1-(苯甲基)-4-甲基哌啶-3-基、4-三氟甲基吡啶-3-基、2-三氟甲基-6-氟苯基、2-三氟甲基-3-氰基苯基、2-乙基-3-氟苯基、2-氯-3-氰基苯基、2-三氟甲基-5-氟苯基或2-二氟甲基苯基； R3 為氫、-CH2 OH、-CH(OH)-CH2 OH、-NH2 、-CH(OH)CH3 、-OCH3 或-NH-(CH2 )2 OH；且當「---」為雙鍵時，R4 不存在； 且當「---」為單鍵時，R3 及R4 結合在一起形成=O；且 R5 及R6 中之每一者獨立地為氫或-CH3 ， 其條件為若X1 為N，X2 為N，Y為-O-或-N(CH3 )-，且Q為2-三氟甲基苯基，則R3 、R5 及R6 中之至少一者不為氫。
在一些實施例中，本發明化合物由結構式II表示：
Figure 02_image008
，或其醫藥學上可接受之鹽；其中： R1 為氯、-CF3 、-CHF2 或-CH3 ； R2 為氫或氟；且 R3 為氫、-NH2 、-CH2 OH或CH(OH)-CH2 OH。
在一個態樣中，本發明提供包括本發明化合物及醫藥學上可接受之載劑之醫藥組合物。
在一個態樣中，本發明係關於治療選自腎病、肺動脈高血壓、焦慮、抑鬱、癌症、糖尿病性視網膜病變或疼痛之疾病或病況或降低其產生風險之方法，所述方法包括向有需要之個體投予治療有效量之化合物或組合物。在一些實施例中，疾病為腎病、焦慮、抑鬱、癌症或糖尿病性視網膜病變。在一些實施例中，疾病或病況為選自以下之腎病：局灶性節段性腎小球硬化（FSGS）、糖尿病性腎病、奧爾波特症候群（Alport syndrome）、高血壓腎病、腎病症候群、類固醇耐藥性腎病症候群、微小病變腎病、膜性腎病、特發性膜性腎病、膜增生性絲球體腎炎（MPGN）、免疫複合體介導之MPGN、補體介導之MPGN、狼瘡性腎炎、感染後絲球體腎炎、薄基底膜病、腎小球膜增生性絲球體腎炎、澱粉樣變性（原發性）、c1q腎病、快速進行性GN、抗GBM病、C3絲球體腎炎、高血壓腎硬化或IgA腎病。在一些實施例中，腎病為蛋白尿性腎病。在一些實施例中，腎病為微量白蛋白尿或大量白蛋白尿腎病。在一些實施例中，待治療之疾病或病況為肺動脈高血壓。在一些實施例中，待治療之疾病或病況為選自神經性疼痛及內臟疼痛之疼痛。
在一些實施例中，疾病或病況為選自化療耐藥性乳癌、阿德力黴素耐藥性乳癌、化療耐藥性結腸直腸癌、神經管胚細胞瘤及腫瘤血管生成之癌症。
在一些實施例中，待治療之疾病或病況為移植相關FSGS、移植相關腎病症候群、移植相關蛋白尿、膽汁淤積性肝病、多囊性腎病、常染色體顯性多囊性腎病（ADPKD）、肥胖、胰島素抗性、II型糖尿病、前期糖尿病、代謝症候群、非酒精性脂肪肝病（NAFLD）或非酒精性脂肪變性肝炎（NASH）。
方法對多種個體有效，包含哺乳動物，例如人類及其他動物，諸如實驗室動物，例如小鼠、大鼠、兔或猴，或馴養動物及農畜，例如貓、狗、山羊、綿羊、豬、母牛或馬。
本發明提供若干優勢。本文所述之預防及治療方法有效地治療腎病，例如蛋白尿，且具有極小（若存在）副作用。另外，本文所描述之方法有效地鑑別治療腎病、焦慮、抑鬱或癌症或降低其產生風險的化合物。
除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域的一般技術者通常所理解之含義相同的含義。儘管類似或等效於本文所述之彼等方法及材料可用於實踐或測試本發明，但合適的方法及材料描述如下。本文所提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考案均以全文引用的方式併入本文中。在有衝突之情況下，將以本說明書（包含定義）為準。另外，本文所述之材料、方法及實例僅為說明性的且並不欲作為限制。
本發明之其他特徵、目標及優勢將自以下實施方式及申請專利範圍顯而易見。
定義
術語「醯基」係此項技術中公認的且係指由通式烴基C(O)-、較佳烷基C(O)-表示之基團。
術語「醯胺基」為此項技術中公認的且係指經醯基取代之胺基，且可例如由式烴基C(O)NH-表示。
術語「醯氧基」為此項技術中公認的且係指由通式烴基C(O)O-、較佳烷基C(O)O-表示之基團。
術語「烷氧基」係指與氧連接之烷基、較佳低碳烷基。代表性烷氧基包含甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、丙氧基、第三丁氧基及其類似基團。
術語「烷氧基烷基」係指經烷氧基取代之烷基且可由通式烷基-O-烷基表示。
如本文所用，術語「烯基」係指含有至少一個雙鍵之脂族基且意欲包含「未經取代之烯基」與「經取代之烯基」，後者係指烯基之一或多個碳上的氫經取代基置換的烯基部分。此類取代基可存在於一或多個包含或不包含於一或多個雙鍵中之碳上。此外，此類取代基包含如下文所論述之所有對於烷基所涵蓋之取代基，除非穩定性不允許。舉例而言，涵蓋烯基經一或多個烷基、碳環基、芳基、雜環基或雜芳基取代。
「烷基」或「烷烴」係完全飽和之直鏈或分支鏈非芳族烴。通常，除非另外定義，否則直鏈或分支鏈烷基具有1至約20個碳原子，較佳1至約10個碳原子。直鏈及分支鏈烷基的實例包含甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基、戊基及辛基。C1 -C6 直鏈或分支鏈烷基亦稱為「低碳烷基」。
此外，如整個說明書、實例及申請專利範圍中所用之術語「烷基」(或「低碳烷基」)意欲包含「未經取代之烷基」與「經取代之烷基」，後者係指烴主鏈之一或多個碳上的氫經取代基置換的烷基部分。此類取代基在未另外規定時可包含例如鹵素（例如，氟)、羥基、羰基（諸如，羧基、烷氧基羰基、甲醯基或醯基)、硫羰基（諸如，硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷醯基、磷酸酯基、膦酸酯基、亞膦酸酯基、胺基、醯胺基、脒、亞胺、氰基、硝基、疊氮基、硫氫基、烷基硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、胺磺醯基、磺醯胺基、磺醯基、雜環基、芳烷基，或芳族或雜芳族部分。在較佳實施例中，經取代之烷基上之取代基選自C1-6 烷基、C3-6 環烷基、鹵素、氰基或羥基。在更佳實施例中，經取代之烷基上之取代基選自氟、羰基、氰基或羥基。熟習此項技術者應瞭解烴鏈上經取代之部分本身在適當時可經取代。舉例而言，經取代烷基之取代基可包含胺基、疊氮基、亞胺基、醯胺基、磷醯基(包含膦酸酯及亞膦酸酯)、磺醯基(包含硫酸酯、磺醯胺基、胺磺醯基及磺酸酯)及矽烷基之經取代及未經取代形式，以及醚、烷基硫基、羰基(包含酮、醛、羧酸酯及酯)、-CF3 、-CN及類似基團。下文描述例示性經取代之烷基。環烷基可進一步經烷基、烯基、烷氧基、烷基硫基、胺基烷基、經羰基取代之烷基、-CF3 、-CN及類似基團取代。
除非另外規定，否則「伸烷基」本身或作為另一取代基之一部分係指具有所述碳原子數目且衍生自自對應烷烴移除兩個氫原子之飽和直鏈或分支鏈二價基團。直鏈及分支鏈伸烷基之實例包含-CH2 - (亞甲基)、-CH2 -CH2 - (伸乙基)、-CH2 -CH2 -CH2 - (伸丙基)、-C(CH3 )2 -、-CH2 -CH(CH3 )-、-CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -、-CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 - (伸戊基)、-CH2 -CH(CH3 )-CH2 -及-CH2 -C(CH3 )2 -CH2 -。
術語「Cx-y 」當與諸如醯基、醯氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基之化學部分結合使用時意欲包含鏈中含有x至y個碳的基團。舉例而言，術語「Cx-y 烷基」係指在鏈中含有x至y個碳之經取代或未經取代之飽和烴基，包含直鏈烷基及分支鏈烷基，包含鹵烷基。較佳鹵基烷基包含三氟甲基、二氟甲基、2,2,2-三氟乙基及五氟乙基。C0 烷基在基團位於末端位置時係指氫，位於內部時係指一鍵。術語「C2-y 烯基」及「C2-y 炔基」係指經取代或未經取代之不飽和脂族基，其長度及可能之取代基與上述烷基類似，但分別含有至少一個雙鍵或參鍵。
如本文所用，術語「烷基胺基」係指經至少一個烷基取代之胺基。
如本文所用，術語「烷基硫基」係指經烷基取代之硫醇基且可由通式烷基S-表示。
如本文所用，術語「炔基」係指含有至少一個參鍵之脂族基且意欲包含「未經取代之炔基」與「經取代之炔基」，後者係指炔基之一或多個碳上之氫經取代基置換的炔基部分。此類取代基可存在於一或多個碳上，其包含或不包含於一或多個參鍵中。此外，此類取代基包含如上文所論述之對於烷基所涵蓋之所有取代基，除非穩定性不允許。舉例而言，涵蓋炔基經一或多個烷基、碳環基、芳基、雜環基或雜芳基取代。
如本文所用，術語「醯胺」係指以下基團
Figure 02_image010
其中各RA 獨立表示氫或烴基，或兩個RA 與其所連接之N原子一起形成在環結構中具有4至8原子的雜環。
術語「胺」及「胺基」為此項技術中公認的且係指未經取代及經取代之胺及其鹽，例如可由下式表示之部分
Figure 02_image012
其中各RA 獨立表示氫或烴基，或兩個RA 與其所連接之N原子一起形成在環結構中具有4至8個原子的雜環。
如本文所使用之術語「胺基烷基」係指經胺基取代之烷基。
如本文所用，術語「芳烷基」係指經芳基取代之烷基。
如本文所用之術語「芳基」包含經取代或未經取代之單環芳族基，其中環之各原子為碳。環較佳為6員或10員環、更佳6員環。術語「芳基」亦包含具有兩個或更多個環之多環系統，其中兩個或更多個碳為兩個鄰接環所共用，兩個鄰接環中至少一個環為芳族，例如其他環可為環烷基、環烯基、芳基、雜芳基及/或雜環基。芳基包含苯、萘、菲、酚、苯胺及其類似基團。
術語「胺基甲酸酯」為此項技術中公認的且係指基團
Figure 02_image014
其中各RA 獨立表示氫或烴基，諸如烷基，或兩個RA 與中間原子一起形成在環結構中具有4至8個原子的雜環。
如本文所用，術語「碳環」係指飽和或不飽和環，其中環之各原子為碳。術語碳環包含芳族碳環與非芳族碳環兩者。非芳族碳環包含環烷烴環，其中所有碳原子均為飽和的；與環烯烴環，其含有至少一個雙鍵。「碳環」包含5至7員單環及8至12員雙環。雙環碳環之各環可選自飽和、不飽和及芳環。碳環包含雙環分子，其中兩個環之間共用一個、兩個或三個或更多個原子。術語「稠合碳環」係指雙環碳環，其中環中的每一個與另一環共用兩個相鄰原子。稠合碳環之各環可選自飽和、不飽和及芳環。在一例示性實施例中，芳環（例如苯基）可稠合至飽和或不飽和環，例如環己烷、環戊烷或環己烯。飽和、不飽和及芳族雙環之任何組合在價數准許時包含於碳環之定義中。例示性「碳環」包含環戊烷、環己烷、雙環[2.2.1]庚烷、1,5-環辛二烯、1,2,3,4-四氫萘、雙環[4.2.0]辛-3-烯、萘及金剛烷。例示性稠合碳環包含十氫萘、萘、1,2,3,4-四氫萘、雙環[4.2.0]辛烷、4,5,6,7-四氫-1H-茚及雙環[4.1.0]庚-3-烯。「碳環」可在能夠帶有氫原子之任何一或多個位置處經取代。
「環烷基」為完全飽和之環烴。「環烷基」包含單環及雙環。除非另外定義，否則通常，單環環烷基具有3至約10個碳原子，更通常3至8個碳原子。雙環環烷基之第二環可選自飽和、不飽和及芳環。環烷基包含雙環分子，其中兩個環之間共用一個、兩個或三個或更多個原子。術語「稠合環烷基」係指雙環環烷基，其中各環與另一環共用兩個相鄰原子。稠合雙環環烷基之第二個環可選自飽和、不飽和及芳環。「環烯基」為含有一或多個雙鍵之環烴。
如本文中所使用，術語「碳環基烷基」係指經碳環基取代之烷基。
術語「碳酸酯」為此項技術中公認的且係指基團-OCO2 -RA ，其中RA 表示烴基。
如本文中所使用，術語「羧基」係指由式-CO2 H表示之基團。
如本文所用，術語「酯」係指基團-C(O)ORA ，其中RA 表示烴基。
如本文所用，術語「醚」係指經氧連接於另一烴基之烴基。因此，烴基之醚取代基可為烴基-O-。醚可為對稱或不對稱的。醚之實例包含但不限於雜環-O-雜環及芳基-O-雜環。醚包含「烷氧基烷基」，其可由通式烷基-O-烷基表示。
如本文所用，術語「鹵基」及「鹵素」意謂鹵素且包含氯、氟、溴及碘。
如本文所用，術語「雜芳烷基」係指經雜芳基取代之烷基。
如本文中所使用，術語「雜烷基」係指具有碳原子及至少一個雜原子之飽和或不飽和鏈，其中不存在相鄰之兩個雜原子。
術語「雜芳基（heteroaryl/hetaryl）」包含經取代或未經取代之芳族單環結構，較佳5至7員環，更佳5至6員環，其環結構包含至少一個雜原子，較佳一至四個雜原子，更佳一或兩個雜原子。術語「雜芳基（heteroaryl/hetaryl）」亦包含具有兩個或更多個環狀環之多環環系統，其中兩個或更多個碳為兩個鄰接環所共用，其中環中之至少一者為雜芳環，例如，其他環可為環烷基、環烯基、芳基、雜芳基及/或雜環基。雜芳基包含例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、噠嗪及嘧啶以及類似基團。
如本文所用，術語「雜原子」意謂除碳或氫之外的任何元素的原子。較佳雜原子為氮、氧及硫。
術語「雜環基」、「雜環(heterocycle)」及「雜環(heterocyclic)」係指經取代或未經取代之非芳族環結構，較佳3至10員環，更佳3至7員環，其環結構包含至少一個雜原子，較佳一至四個雜原子，更佳一或兩個雜原子。術語「雜環基」及「雜環」亦包含具有兩個或更多個環狀環之多環系統，其中兩個或更多個碳為兩個鄰接環所共用，其中至少一個環為雜環，例如其他環狀環可為環烷基、環烯基、芳基、雜芳基及/或雜環基。雜環基包含諸如哌啶、哌嗪、吡咯啶、四氫哌喃、四氫呋喃、嗎啉、內酯、內醯胺及其類似基團。
如本文所用，術語「雜環基烷基」或「雜環烷基」係指經雜環基取代之烷基。
如本文所用，術語「烴基」係指經由碳原子鍵結之基團，所述基團不具有=O或=S取代基且通常具有至少一個碳-氫鍵及主要碳主鏈，但可視情況包含雜原子。因此，出於本申請案之目的，認為如甲基、乙氧基乙基、2-吡啶基及三氟甲基之基團為烴基，但諸如乙醯基(其在連結之碳上具有=O取代基)及乙氧基(經氧而非碳連結)之取代基不為烴基。烴基包含但不限於芳基、雜芳基、碳環、雜環基、烷基、烯基、炔基及其組合。
如本文所使用之術語「羥基烷基」係指經羥基取代之烷基。
術語「低碳」當與諸如醯基、醯氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基之化學部分結合使用時，意欲包含取代基中存在十個或更少，較佳六個或更少非氫原子之基團。「低碳烷基」例如係指含有十個或更少，較佳六個或更少碳原子的烷基。在某些實施例中，本文所定義之醯基、醯氧基、烷基、烯基、炔基或烷氧基取代基分別為低碳醯基、低碳醯氧基、低碳烷基、低碳烯基、低碳炔基或低碳烷氧基，不管其單獨出現或與其他取代基組合出現，諸如在所述羥基烷基及芳烷基中(在此情形中，例如，當計數烷基取代基中的碳原子時不計數芳基內之原子)。
術語「多環基(polycyclyl)」及「多環(polycycle/polycyclic)」係指兩個或更多個環(例如環烷基、環烯基、芳基、雜芳基及/或雜環基)，其中兩個或更多個原子為兩個鄰接環所共用，例如所述環為「稠環」。多環之環中之每一者可經取代或未經取代。在某些實施例中，多環之各環在環中含有3至10個原子，較佳5至7個。
術語「矽烷基」係指連接有三個烴基部分之矽部分。
術語「經取代」係指部分具有置換主鏈之一或多個碳上之氫的取代基。應瞭解，「取代」或「經取代」包含包含隱含的條件，即此類取代符合經取代原子及取代基之准許化合價，且取代產生穩定化合物，例如，其不會諸如藉由通過重排、環化、消除等自發地進行轉化。如本文所使用之術語「經取代」預期包含有機化合物之所有可容許取代基。在一廣泛態樣中，可容許取代基包含有機化合物之非環狀及環狀、分支及未分支、碳環及雜環、芳族及非芳族取代基。對於適當有機化合物，可容許取代基可為一或多個且相同或不同。出於本發明之目的，諸如氮之雜原子可具有氫取代基及/或本文所描述之滿足雜原子價數之有機化合物的任何可容許取代基。取代基可包含本文中所描述的任何取代基，例如鹵素、羥基、羰基（諸如，羧基、烷氧基羰基、甲醯基或醯基）、硫羰基（諸如，硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯）、烷氧基、磷醯基、磷酸酯基、膦酸酯基、亞膦酸酯基、胺基、醯胺基、脒基、亞胺基、氰基、硝基、疊氮基、硫氫基、烷基硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、胺磺醯基、磺醯胺基、磺醯基、雜環基、芳烷基，或芳族或雜芳族部分。在較佳實施例中，經取代之烷基上之取代基選自C1-6 烷基、C3-6 環烷基、鹵素、氰基或羥基。在更佳實施例中，經取代之烷基上之取代基選自氟、羰基、氰基或羥基。熟習此項技術者應瞭解，適當時，取代基可自身經取代。除非特別陳述為「未經取代」，否則在本文中提及化學部分應瞭解包含經取代之變體。舉例而言，提及「芳基」基團或部分隱含地包含經取代及未經取代之變體兩者。
術語「硫酸酯」為此項技術中公認的且係指基團-OSO3 H或其醫藥學上可接受之鹽。
術語「磺醯胺」為此項技術中公認的且係指由通式 或 表示之基團
Figure 02_image016
其中各RA 獨立表示氫或烴基，諸如烷基，或兩個RA 與中間原子一起形成在環結構中具有4至8個原子的雜環。
術語「亞碸」為此項技術中公認的且係指基團-S(O)-RA ，其中RA 表示烴基。
術語「磺酸酯」為此項技術中公認的且係指基團SO3 H或其醫藥學上可接受之鹽。
術語「碸」為此項技術中公認的且係指基團-S(O)2 -RA ，其中RA 表示烴基。
如本文所用，術語「硫烷基」係指經硫醇基取代之烷基。
如本文中所使用，術語「硫酯」係指基團-C(O)SRA 或-SC(O)RA ，其中RA 表示烴基。
如本文所用，術語「硫醚」等於醚，其中氧經硫置換。
術語「脲」為此項技術中公認的且可由以下通式表示
Figure 02_image018
其中各RA 獨立表示氫或烴基，諸如烷基，或RA 在每次出現時與另一個RA 及中間原子一起形成在環結構中具有4至8個原子的雜環。
「保護基」係指當連接至分子中之反應性官能基時遮蔽、降低或阻礙所述官能基之反應性的一組原子。通常，在合成過程中可視需要選擇性移除保護基。保護基之實例可見於Greene及Wuts, 《有機化學中的保護基（Protective Groups in Organic Chemistry ）》, 第3版, 1999, John Wiley & Sons, NY以及Harrison等人, 《合成有機方法概要（Compendium of Synthetic Organic Methods ）》, 第1卷-第8卷, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY。代表性氮保護基包含(但不限於)甲醯基、乙醯基、三氟乙醯基、苯甲基、苯甲氧羰基(「CBZ」)、第三丁氧羰基(「Boc」)、三甲基矽烷基(「TMS」)、2-三甲基矽烷基-乙磺醯基(「TES」)、三苯甲基以及經取代之三苯甲基、烯丙氧基羰基、9-茀基甲氧基羰基(「FMOC」)、硝基-藜蘆基氧基羰基(「NVOC」)及其類似基團。代表性羥基保護基包含但不限於羥基經醯基化(酯化)或烷基化之基團(諸如苯甲基及三苯甲基醚)，以及烷基醚、四氫哌喃基醚、三烷基矽烷基醚(例如，TMS或TIPS基團)、二醇醚(諸如乙二醇及丙二醇衍生物)及烯丙基醚。
如本文所用，「預防」疾病、病症或病況或「降低其產生風險」之治療劑係指在統計樣品中，相對於未處理之對照樣品減少經處理樣品之疾病、病症或病況的出現，或相對於未處理之對照樣品延遲病症或病況之一或多種症狀的發作或降低所述一或多種症狀之嚴重度的化合物。
術語「治療」包含預防性及/或治療性治療。術語「預防性或治療性」治療為此項技術中公認的且包含向宿主投予目標組合物中之一或多者。若在臨床表現不希望之病症(例如，宿主動物之疾病或其他不希望之狀態)之前投予目標組合物則治療為預防性的(亦即，其保護宿主對抗發展不希望之病症)，而若在表現不希望之病症之後投予，則治療為治療性的(亦即，其意欲減輕、改善或穩定現存不希望之病狀或其副作用)。
片語「聯合投予（conjoint administration/administered conjointly）」係指兩種或更多種不同治療化合物之任何投予形式，使得投予第二化合物，同時先前已投予之治療化合物在體內仍有效（例如兩種化合物在患者體內同時有效，其可包含兩種化合物之協同作用）。舉例而言，不同治療性化合物可以相同調配物或以單獨調配物同時或連續地投予。在某些實施例中，不同治療化合物彼此可在一小時、12小時、24小時、36小時、48小時、72小時或一週內投予。因此，接受此類治療之個體可受益於不同治療性化合物的組合作用。
術語「前藥」意欲涵蓋在生理條件下轉化為本發明之治療活性劑的化合物。製備前藥之通用方法為包含一或多個在生理學條件下水解產生所要分子的所選部分。在其他實施例中，前藥藉由宿主動物之酶活性轉化。舉例而言，酯或碳酸酯（例如，醇或羧酸之酯或碳酸酯）為本發明之較佳前藥。在某些實施例中，上文表示之調配物中之一些或所有本發明化合物可經對應的適合之前藥置換，例如其中母體化合物中之羥基呈現為酯或碳酸酯或母體化合物中存在之羧酸呈現為酯。
如本文所用，「小分子」係指分子量低於約3,000道爾頓之小有機或無機分子。一般而言，適用於本發明之小分子具有小於3,000道爾頓（Da）之分子量。小分子可例如為至少約100 Da至約3,000 Da（例如在約100至約3,000 Da、約100至約2500 Da、約100至約2,000 Da、約100至約1,750 Da、約100至約1,500 Da、約100至約1,250 Da、約100至約1,000 Da、約100至約750 Da、約100至約500 Da、約200至約1500、約500至約1000、約300至約1000 Da、或約100至約250 Da之間）。
在一些實施例中，「小分子」係指通常具有小於約1000之分子量的有機、無機或有機金屬化合物。在一些實施例中，小分子為具有約1 nm尺寸之有機化合物。在一些實施例中，本發明之小分子藥物涵蓋具有小於約1000之分子量的寡肽及其他生物分子。
「有效量」為足以達成有益效果或所要需結果之量。舉例而言，治療量為達成所要需治療性效果之量。此量可與預防有效量相同或不同，預防有效量為預防疾病或疾病症狀發作所必需之量。有效量可以一或多次投予、施用或劑量形式來投予。組合物之治療有效量取決於選擇之組合物。可每日一或多次至每週一或多次（包含每隔一日一次）地投予組合物。熟練技術人員將瞭解某些因素可能影響有效治療個體之劑量及時間安排，包含但不限於疾病或病症之嚴重程度、先前治療、個體之一般健康狀況及/或年齡及存在之其他疾病。此外，用治療有效量之本文所述之組合物治療個體可包含單次治療或一系列治療。本發明之化合物
本發明之一態樣提供TRPC5之小分子抑制劑。
在一些實施例中，本發明化合物為結構式I之化合物：
Figure 02_image020
，或其醫藥學上可接受之鹽； 其中： 「---」為單鍵或雙鍵 X1 為CH或N； 當「---」為雙鍵時，X2 為CH或N； 當「---」為單鍵時，X2 為N(CH3 )， 當X1 為CH時，X2 為N或N(CH3 )； Y為-O-、-N(CH3 )-、-N(CH2 CH2 OH)-、環丙-1,1-二基或-CH(CH3 )-； Q為2-三氟甲基-4-氟苯基、2-二氟甲基-4-氟苯基、2-三氟甲基苯基、2-甲基-4-氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2-氯苯基、1-(苯甲基)-4-甲基哌啶-3-基、4-三氟甲基吡啶-3-基、2-三氟甲基-6-氟苯基、2-三氟甲基-3-氰基苯基、2-乙基-3-氟苯基、2-氯-3-氰基苯基、2-三氟甲基-5-氟苯基或2-二氟甲基苯基； R3 為氫、-CH2 OH、-CH(OH)-CH2 OH、-NH2 、-CH(OH)CH3 、-OCH3 或-NH-(CH2 )2 OH；且當「---」為雙鍵時，R4 不存在； 且當「---」為單鍵時，R3 及R4 結合在一起形成=O；且 R5 及R6 中之每一者獨立地為氫或-CH3 ， 其條件為若X1 為N，X2 為N，Y為-O-或-N(CH3 )-，且Q為2-三氟甲基苯基，則R3 、R5 及R6 中之至少一者不為氫。
在一些實施例中，本發明化合物為由結構式II表示之化合物：
Figure 02_image022
，或其醫藥學上可接受之鹽；其中： R1 為氯、-CF3 、-CHF2 或-CH3 ； R2 為氫或氟；且 R3 為氫、-NH2 、-CH2 OH或CH(OH)-CH2 OH。
在一些實施例中，當R1 為-CHF2 時，R2 不為氫。
在一些實施例中，本發明化合物選自以下化合物中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image024
Figure 02_image026
Figure 02_image028
Figure 02_image030
Figure 02_image032
Figure 02_image034
Figure 02_image036
Figure 02_image038
Figure 02_image040
。
在一些實施例中，本發明化合物選自以下化合物中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image042
Figure 02_image044
。
在一些實施例中，本發明化合物選自以下化合物中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽：
Figure 02_image046
Figure 02_image048
Figure 02_image050
。
在某些實施例中，本發明化合物可為外消旋的。在某些實施例中，本發明之化合物可富集一種對映異構體。舉例而言，本發明之化合物可具有大於30% ee、40% ee、50% ee、60% ee、70% ee、80% ee、90% ee或甚至95%或更大ee。
本發明化合物具有超過一個立構中心。因此，本發明之化合物可富集一或多種非對映異構體。舉例而言，本發明之化合物可具有大於30% de、40% de、50% de、60% de、70% de、80% de、90% de或甚至95%或更大de。在某些實施例中，本發明之化合物在一或多個立體對稱中心處基本上具有一種異構組態，且在剩餘立體對稱中心處具有多種異構組態。
在某些實施例中，立體中心之對映異構體過量為至少40% ee、50% ee、60% ee、70% ee、80% ee、90% ee、92% ee、94% ee、95% ee、96% ee、98% ee或更大ee。
如本文所用，繪製之無立體化學之單鍵不指示化合物之立體化學。
如本文所用，散列或加粗的非楔形鍵指示相對而非絕對立體化學組態(例如並不區分既定非對映異構體之各對映異構體)。
如本文所使用，散列或加粗楔形鍵指示絕對立體化學組態。
在一些實施例中，本發明係關於包括本發明化合物及醫藥學上可接受之載劑之醫藥組合物。在某些實施例中，本發明化合物之治療製劑或醫藥組合物可經富集以主要提供化合物之一種對映異構體。對映異構富集混合物可包括例如至少60莫耳%的一種對映異構體，或更佳至少75、90、95或甚至99莫耳%。在某些實施例中，富含一種對映異構體之化合物基本上不含另一對映異構體，其中基本上不含意謂相比於另一對映異構體的量，所述物質占小於10%、或小於5%、或小於4%、或小於3%、或小於2%、或小於1%，例如在組合物或化合物混合物中。舉例而言，若組合物或化合物混合物含有98公克第一對映異構體及2公克第二對映異構體，則其將稱為含有98莫耳%第一對映異構體及僅2%第二對映異構體。
在某些實施例中，治療製劑或醫藥組合物可經富集以主要提供本發明化合物之一種非對映異構體。非對映異構性增濃混合物可包括(例如)至少60莫耳%的一種對映異構體，或更佳至少75莫耳%、90莫耳%、95莫耳%或甚至99莫耳%。治療方法
非選擇性Ca2+- 可滲透瞬時受體電位（TRP）通道充當感測器，其在包含肌動蛋白重塑及細胞遷移之不同細胞過程中將細胞外線索轉導至細胞內環境（Greka等人, 《自然神經科學（Nat Neurosci）》 6, 837-845, 2003；Ramsey等人, 《生理學年評（Annu Rev Physiol）》 68, 619-647, 2006；Montell, 《弗魯格檔案（Pflugers Arch）》 451, 19-28, 2005；Clapham, 《自然（Nature）》 426, 517-524, 2003）。肌動蛋白細胞骨架之動態重排依賴於時空調節之Ca2+ 流入（Zheng及Poo, 《細胞發育生物學年評（Annu Rev Cell Dev Biol）》 23, 375-404, 2007)；Brandman及Meyer, 《科學》 322, 390-395, 2008); Collins及Meyer, 《發育細胞（Dev Cell）》 16, 160-161, 2009）且小GTP酶RhoA及Rac1充當此等變化之關鍵調節劑（Etienne-Manneville及Hall, 《自然》 420, 629-635, 2002)；Raftopoulou及Hall, 《發育生物學》 265, 23-32, 2004）。RhoA誘導應力纖維及黏著斑形成，而Rac1介導層狀突出物形成（Etienne-Manneville及Hall, 《自然》 420, 629-635, 2002）。瞬時受體電位陽離子通道子族C成員5（TRPC5）與TRPC6協同作用以調節腎臟足細胞及纖維母細胞中之Ca2+流入、肌動蛋白重塑及細胞運動性。TRPC5介導之Ca2+ 流入增加Rac1活性，而TRPC6介導在Ca2+流入促進RhoA活性。TRPC6通道之基因沉默消除應力纖維且減少局灶性接觸，從而呈現運動的遷移性細胞表型。相比之下，TRPC5通道之基因沉默挽救應力纖維形成，從而呈現收縮細胞表型。本文所述之結果揭示保守的信號傳導機制，其中TRPC5及TRPC6通道經由與Rac1及RhoA之差異偶聯來控制細胞骨架動力學之嚴格調節的平衡。
肌動蛋白細胞骨架之Ca2+ 依賴性重塑為驅動細胞遷移之動態過程（Wei等人, 《自然》 457, 901-905, 2009）。RhoA及Rac1充當負責遷移細胞中之細胞骨架重排的開關（Etienne-Manneville及Hall, 《自然》 420, 629-635, 2002)；Raftopoulou及Hall, 《發育生物學》 265, 23-32, 2004）。Rac1活化介導運動細胞表型，而RhoA活性促進收縮表型（Etienne-Manneville及Hall, 《自然》 420, 629-635, 2002）。Ca2+ 在小GTP酶調節中起主要作用（Aspenstrom等人, 《生物化學雜誌（Biochem J）》377, 327-337, 2004）。在遷移細胞之前緣附近富集空間及時間上限制的Ca2+ 閃爍（Wei等人, Nature 457, 901-905, 2009）。因此，Ca2+微域在Rac1活性中加入了局部爆發（Gardiner等人, 《當代生物學（Curr Biol）》 12, 2029-2034, 2002；Machacek等人, 《自然》 461, 99-103, 2009）作為前緣處之重大事件。迄今為止，負責GTP酶調節之Ca2+流入源仍在很大程度上難以實現。TRP（瞬時受體電位）通道產生與纖維母細胞及神經元生長錐0中之細胞遷移相關的時間及空間限制的Ca2+ 信號。特定言之，TRPC5通道為生長錐導向1之已知調節劑且其於神經元中之活性取決於PI3K及Rac1活性（Bezzerides等人, 《自然細胞生物學（Nat Cell Biol）》 6, 709-720, 2004）。
足細胞為來源於腎小球之後腎間質的神經元樣細胞且為形成腎臟過濾裝置所必需（Somlo及Mundel, 《自然遺傳學（Nat Genet.）》24, 333-335, 2000；Fukasawa等人, 《美國腎臟病學會雜誌（J Am Soc Nephrol）》 20, 1491-1503, 2009）。足細胞具有極其精細的針對環境線索之細胞骨架適應譜系（Somlo及Mundel,《自然遺傳學》 24, 333-335, 2000；Garg等人, 《分子細胞生物學（Mol Cell Biol）》 27, 8698-8712, 2007；Verma等人, 《臨床研究雜誌（J Clin Invest）》 116, 1346-1359, 2006；Verma等人, 《生物化學雜誌（J Biol Chem）》 278, 20716-20723, 2003；Barletta等人, 《生物化學雜誌》 278, 19266-19271, 2003；Holzman等人, 《國際腎臟病雜誌（Kidney Int）》 56, 1481-1491, 1999；Ahola等人, 《美國病理學雜誌（Am J Pathol）》 155, 907-913, 1999；Tryggvason及Wartiovaara, 《新英格蘭醫學雜誌（N Engl J Med）》 354, 1387-1401, 2006；Schnabel及Farquhar, 《細胞生物學雜誌》 111, 1255-1263, 1990；Kurihara等人, 《美國國家科學院院刊（Proc Natl Acad Sci USA）》 89, 7075-7079, 1992）。足細胞損傷之早期事件係藉由肌動蛋白細胞骨架調節異常（Faul等人, 《細胞生物學發展趨勢（Trends Cell Biol）》 17, 428-437, 2007；Takeda等人, 《臨床研究雜誌》 108, 289-301, 2001；Asanuma等人, 《自然細胞生物學》 8, 485-491, 2006)及Ca2+穩態（Hunt等人, 《美國腎臟病學會雜誌》 16, 1593-1602, 2005；Faul等人, 《自然醫學（Nat Med）》 14, 931-938, 2008）表徵。此等變化與蛋白尿發作、白蛋白損失至尿液空間中及最終腎衰竭相關（Tryggvason及Wartiovaara, N Engl J Med 354, 1387-1401, 2006）。血管活性激素血管收縮素II誘導足細胞中之Ca2+ 流入，且延長治療導致應力纖維損失（Hsu等人, 《分子醫學雜誌（J Mol Med）》 86, 1379-1394, 2008）。儘管Ca2+流入與細胞骨架重組之間存在公認的聯繫，但足細胞感測及轉導調節細胞形狀及運動性之細胞外線索的機制仍難以理解。TRP Canonical 6（TRPC6）通道突變與足細胞損傷有關（Winn等人, 《科學》 308, 1801-1804, 2005；Reiser等人, 《自然遺傳學》 37, 739-744, 2005；Moller等人, 《美國腎臟病學會雜誌》 18, 29-36, 2007；Hsu等人, 《生物化學與生物物理學學報（Biochim Biophys Acta）》 1772, 928-936, 2007），但對於調節此過程之特定路徑知之甚少。此外，TRPC6與TRPC通道家族之其他六個成員具有緊密同源性（Ramsey等人, 《生理學年評》 68, 619-647, 2006；Clapham, 《自然》 426, 517-524, 2003）。TRPC5通道拮抗TRPC6通道活性以經由與不同小GTP酶之差異偶聯來控制細胞骨架動力學之嚴格調節的平衡。蛋白尿
蛋白尿為一種病理狀態，其中蛋白質存在於尿液中。白蛋白尿為一種蛋白尿。微量白蛋白尿在腎臟將少量白蛋白洩漏至尿液中時發生。在功能正常的身體中，白蛋白通常不存在於尿液中，因為其由腎臟保留於血液中。微量白蛋白尿係由24小時尿液收集（20至200 μg/min）或更通常地由在至少兩個場合之高濃度（30至300 mg/L）診斷。微量白蛋白尿可為糖尿病性腎病之先兆。高於此等值之白蛋白水準係稱作大量白蛋白尿。患有某些病況（例如糖尿病性腎病）之個體可自微量白蛋白尿進展為大量白蛋白尿且隨著腎病達到晚期階段而達到腎病範圍（＞3.5公克/24小時）。蛋白尿之病因
蛋白尿可與多種病況相關，包含局灶性節段性腎小球硬化、IgA腎病、糖尿病性腎病、狼瘡性腎炎、膜增生性絲球體腎炎、進行性（新月形）絲球體腎炎及膜性絲球體腎炎。A. 局灶性節段性腎小球硬化（ FSGS ）
局灶性節段性腎小球硬化（FSGS）為攻擊腎臟過濾系統（腎小球），引起嚴重疤痕之疾病。FSGS為稱為腎病症候群之疾病的許多病因之一，其在血液中之蛋白質洩漏至尿液中（蛋白尿）時發生。
極少治療可用於FSGS患者。許多患者用類固醇療法治療，其中大部分具有極嚴重的副作用。一些患者已展現對免疫抑制藥物以及血壓藥物（其已展現降低尿液中之蛋白質水準）產生積極反應。迄今為止，尚無普遍接受的有效治療或治癒方法，且尚無FDA批准用於治療FSGS之藥物。因此，需要減少或抑制蛋白尿之更有效方法。B. IgA 腎病
IgA腎病（亦稱為IgA腎炎、IgAN、伯格氏病（Berger's disease）及併咽喉炎性絲球體腎炎）為一種形式之絲球體腎炎（腎臟之腎小球發炎）。IgA腎病為全世界最常見的絲球體腎炎。原發性IgA腎病係藉由IgA抗體於腎小球中之沈積表徵。存在與腎絲球IgA沈積相關之其他疾病，最常見的為過敏性紫癜（Henoch-Schönlein purpura，HSP），許多人將其視為IgA腎病之全身形式。過敏性紫癜呈現出特徵性的紫癜性皮疹、關節炎及腹痛，且在年輕人（16-35歲）中更常發生。與IgA腎病相比，HSP與更良性預後相關。在IgA腎病中，25-30%之病例在20年時段期間緩慢進展為慢性腎衰竭。C. 糖尿病性腎病
糖尿病性腎病（亦稱為基-威二氏症候群（Kimmelstiel-Wilson syndrome）及毛細管間絲球體腎炎）為由腎小球中之毛細血管血管病引起的進行性腎病。其係藉由腎病症候群及彌漫性腎小球硬化表徵。其歸因於長期糖尿病且為透析之主要原因。糖尿病性腎病病程中最早可偵測之變化為腎小球增厚。在此階段，腎臟可能開始允許尿液中比正常更多的血清白蛋白。隨著糖尿病性腎病進展，增加數目之腎小球遭到結節性腎小球硬化破壞且尿液中排出之白蛋白的量增加。D. 狼瘡性腎炎
狼瘡性腎炎為作為全身性紅斑狼瘡併發症之腎臟病症。狼瘡性腎炎在抗體及補體積聚於腎臟中，引起發炎時發生。其通常引起蛋白尿且可快速進展為腎衰竭。氮廢物積聚於血流中。全身性紅斑狼瘡引起腎臟內部結構之各種病症，包含間質性腎炎。狼瘡性腎炎影響10,000人中之大約3人。E. 膜增生性絲球體腎炎 I/II/III
膜增生性絲球體腎炎為一種類型之絲球體腎炎，其由腎絲球膜中之沈積及基底膜增厚，活化補體及損害腎小球引起。存在三種類型之膜增生性絲球體腎炎。I型係由腎臟中之免疫複合體沈積引起且咸信與經典補體路徑有關。II型與I型類似，然而，咸信其與替代補體路徑有關。III型極罕見且其係藉由上皮下沈積物及I型疾病之典型病理學發現之混合物表徵。F. 進行性（新月形）絲球體腎炎
進行性（新月形）絲球體腎炎（PG）為腎臟症候群，如保持未治療，則在數月內進展為急性腎衰竭及死亡。在50%之病例中，PG與潛在疾病，諸如古巴斯德氏症候群（Goodpasture's syndrome）、全身性紅斑狼瘡或韋格納肉芽腫病（Wegener granulomatosis）相關；其餘病例為特發性的。不管根本原因，PG涉及對腎臟之腎小球的嚴重損傷，其中許多腎小球含有特徵性新月形疤痕。患有PG之患者具有血尿、蛋白尿且偶爾具有高血壓及水腫。臨床表現與腎病症候群一致，儘管蛋白尿之程度可偶爾超過3 g/24小時，其為與腎病症候群相關之範圍。未治療之疾病可進展為尿量減少（乏尿症），其與腎功能不良相關。G. 膜性絲球體腎炎
膜性絲球體腎炎（MGN）為腎臟之緩慢進行性疾病，主要影響30至50歲之間的患者，通常為高加索人。其可發展為腎病症候群。MGN係由循環免疫複合物引起。當前研究表明，大多數免疫複合物係經由抗體與抗原原位結合至腎絲球基底膜而形成。所述抗原可對於基底膜為內源性的，或自全身循環沈積。量測尿蛋白水準
尿液中之蛋白質水準可使用此項技術中已知之方法量測。直至最近，精確蛋白質量測需要24小時尿液收集。在24小時收集中，患者向容器中小便，其在去洗手間之間保持冷藏。在早晨第一次去洗手間之後，指示患者開始收集尿液。當天的其餘時間之每一滴尿液均收集於容器中。第二天早上，患者在醒來後加上第一次排尿且收集完成。
最近，研究人員發現單一尿液樣品可提供所需的資訊。在較新技術中，將尿液樣品中白蛋白的量相比於肌酐（正常肌肉分解之廢物）的量。所述量測係稱作尿液白蛋白-肌酐比（UACR）。每公克肌酐含有超過30毫克白蛋白（30 mg/g）之尿液樣品為可能存在問題之警告。若實驗室測試超過30 mg/g，則應在1至2週後進行另一UACR測試。若第二測試亦顯示高蛋白質水準，則所述個體患有持續性蛋白尿，其為腎功能下降之跡象，且應進行額外測試以評估腎功能。
量測血液中肌酐量之測試亦將顯示個體之腎臟是否有效地移除廢物。血液中過多的肌酐為個體具有腎損傷之跡象。醫師可使用肌酐量測結果來估計腎臟過濾血液之效率。此計算係稱作估算的腎小球濾過率或eGFR。當eGFR小於60毫升/分鐘（mL/min）時，存在慢性腎病。TRPC5
TRPC為動物中瞬時受體電位陽離子通道之家族。TRPC5為哺乳動物瞬時受體電位離子通道之TRPC家族的亞型。TRPC5之三個實例在下表1中突出顯示。 表1
來自三種不同物種之TRPC5直系同源物連同其GenBank Ref Seq寄存編號。
物種 核酸 胺基酸                                   基因標識
智人小家鼠 褐家鼠 NM_012471.2 NM_009428.2 NM_080898.2 NP_036603.1 NP_033454.1 NP_543174.1 7224 22067 140933
因此，在某些實施例中，本發明提供治療選自腎病、肺動脈高血壓、焦慮、抑鬱、癌症、糖尿病性視網膜病變或疼痛之疾病或病況或降低其產生風險之方法，所述方法包括向有需要之個體投予治療有效量之本發明化合物（例如結構式I之化合物）或包括所述化合物之醫藥組合物。
在一些實施例中，疾病為腎病、焦慮、抑鬱、癌症或糖尿病性視網膜病變。
在一些實施例中，疾病或病況選自以下之腎病：局灶性節段性腎小球硬化（FSGS）、糖尿病性腎病、奧爾波特症候群（Alport syndrome）、高血壓腎病、腎病症候群、類固醇耐藥性腎病症候群、微小病變腎病、膜性腎病、特發性膜性腎病、膜增生性絲球體腎炎（MPGN）、免疫複合體介導之MPGN、補體介導之MPGN、狼瘡性腎炎、感染後絲球體腎炎、薄基底膜病、腎小球膜增生性絲球體腎炎、澱粉樣變性（原發性）、c1q腎病、快速進行性GN、抗GBM病、C3絲球體腎炎、高血壓腎硬化或IgA腎病。在一些實施例中，腎病為蛋白尿性腎病。在一些實施例中，腎病為微量白蛋白尿或大量白蛋白尿腎病。
在一些實施例中，待治療之疾病或病況為肺動脈高血壓。
在一些實施例中，待治療之疾病或病況為選自神經性疼痛及內臟疼痛之疼痛。
在一些實施例中，疾病或病況為選自化療耐藥性乳癌、阿德力黴素耐藥性乳癌、化療耐藥性結腸直腸癌、神經管胚細胞瘤及腫瘤血管生成之癌症。
本發明亦提供治療焦慮或抑鬱或癌症，或降低其產生風險之方法，所述方法包括向有需要之個體投予治療有效量之本發明化合物（例如式I化合物）或包括所述化合物之醫藥組合物。
在一些實施例中，待治療之疾病或病況為移植相關FSGS、移植相關腎病症候群、移植相關蛋白尿、膽汁淤積性肝病、多囊性腎病、常染色體顯性多囊性腎病（ADPKD）、肥胖、胰島素抗性、II型糖尿病、前期糖尿病、代謝症候群、非酒精性脂肪肝病（NAFLD）或非酒精性脂肪變性肝炎（NASH）。待治療之個體
在本發明之一態樣中，個體係基於其患有腎病、肺動脈高血壓、焦慮、抑鬱、癌症、糖尿病性視網膜病變或疼痛，或處於產生所述疾病之風險下而選擇。在另一態樣中，個體係基於其患有腎病、焦慮、抑鬱、癌症或糖尿病性視網膜病變，或處於產生所述疾病之風險下而選擇。在本發明之另一態樣中，個體係基於其患有疼痛、神經性疼痛、內臟疼痛、移植相關FSGS、移植相關腎病症候群、移植相關蛋白尿、膽汁淤積性肝病、多囊性腎病、常染色體顯性多囊性腎病（ADPKD）、肥胖、胰島素抗性、II型糖尿病、前期糖尿病、代謝症候群、非酒精性脂肪肝病（NAFLD）或非酒精性脂肪變性肝炎（NASH），或處於產生所述疾病之風險下而選擇。
患有蛋白尿，或處於產生蛋白尿之風險下的個體包含患有糖尿病、高血壓或某些家族背景之個體。在美國，糖尿病為末期腎病（ESRD）之主要病因。在1型及2型糖尿病中，尿液中之白蛋白為腎功能惡化之最初跡象之一。隨著腎功能下降，尿液中白蛋白的量增加。產生蛋白尿之另一風險因素為高血壓。患有高血壓之個體的蛋白尿為腎功能下降之指標。若不控制高血壓，則個體可進展為完全腎衰竭。非洲裔美國人比高加索人更可能患有高血壓及自高血壓產生腎臟問題，即使在其血壓僅略微升高時亦如此。其他處於蛋白尿風險下之群體為美洲印第安人、西班牙裔/拉丁裔美國人、太平洋島民美國人、老年人及超重個體。
在本發明之一個態樣中，個體係基於其患有蛋白尿，或處於產生蛋白尿之風險下而選擇。患有蛋白尿或處於產生蛋白尿之風險下的個體為具有病況之一或多種症狀的個體。蛋白尿之症狀為熟習此項技術者已知且包含但不限於尿液中之大量蛋白質，此可使其在廁所中看起來呈泡沫狀。大量蛋白質損失可導致水腫，其中可發生手部、腳部、腹部或面部腫脹。此等為大量蛋白質損失之跡象，且表明腎病已進展。在發生廣泛腎損傷之前，實驗室測試為弄清蛋白質是否在個體尿液中之唯一方法。
方法對多種個體有效，包含哺乳動物，例如人類及其他動物，諸如實驗室動物，例如小鼠、大鼠、兔或猴，或馴養動物及農畜，例如貓、狗、山羊、綿羊、豬、母牛或馬。在一些實施例中，個體為哺乳動物。在一些具體實例中，個體為人類。實例
本發明進一步描述於以下實施例中，其不限制申請專利範圍中所描述之本發明範疇。實例 1 合成化合物 100
Figure 02_image052
4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下向4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（400 mg，1.48 mmol，1當量）及4-氟-2-(三氟甲基)苯酚（400.6 mg，2.22 mmol，1.5當量）於乙腈（10 mL）中的攪拌溶液中添加DBU（451.5 mg，2.97 mmol，2.00當量）。在80℃下攪拌所得混合物2 h。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。減壓濃縮所得混合物。所得混合物用DCM（3×100 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（3×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。藉由製備型TLC（PE/EtOAc 2:1）純化殘餘物，獲得呈棕色固體狀之4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（110 mg，17.94%）。4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在室溫下向4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（110 mg，0.27 mmol，1當量）於DCM（4 mL）中的攪拌溶液中添加TFA（1 mL，13.46 mmol，50.59當量）。在室溫下攪拌所得混合物1 h。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。用飽和NaHCO3 （水溶液）將混合物鹼化至pH 8。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型TLC（DCM/MeOH 12:1）純化殘餘物，獲得呈棕色固體狀之4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（50 mg，59.98%）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（50 mg，0.16 mmol，1當量）於DIEA（2 mL）中的攪拌溶液中添加4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（47.5 mg，0.19 mmol，1.19當量）。在100℃下攪拌所得混合物2 h。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。藉由製備型TLC（PE/EtOAc 2:1）純化殘餘物，獲得呈棕色固體狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（40 mg，47.65%）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（40 mg，0.08 mmol，1當量）於DCM（4 mL）中的攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL，13.46 mmol，177.00當量）。在室溫下攪拌所得混合物1 h。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。用飽和NaHCO3 （水溶液）將混合物鹼化至pH 8。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（40 mg）（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：水（10 MMOL/L NH4HCO3），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：18% B至47% B於7 min內；220 nm；Rt: 6.22 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（8.6 mg，25.59%）。實例 2 合成化合物 140
Figure 02_image054
4- 溴 -5,6,7,8- 四氫 -1,7- 萘啶 -7- 甲酸第三丁酯
在25℃下向4-溴-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶（250 mg，1.173 mmol，1當量）於THF（10 mL, 123.430 mmol，105.20當量）中之溶液中添加Boc2 O（512.13 mg，2.347 mmol，2.00當量）及TEA（474.90 mg，4.693 mmol，4當量）。在25℃下攪拌溶液2小時。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型TLC（PE/EA 5/1）純化殘餘物，獲得呈淡黃色油狀之4-溴-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶-7-甲酸第三丁酯（210 mg，57.15%）。4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5,6,7,8- 四氫 -1,7- 萘啶 -7- 甲酸第三丁酯
向4-溴-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶-7-甲酸第三丁酯（210 mg，0.671 mmol，1當量）及4-氟-2-(三氟甲基)苯酚（241.52 mg，1.341 mmol，2當量）於DMSO（10 mL）中之溶液中添加Cs2 CO3 （873.86 mg，2.682 mmol，4當量）、2-(二甲胺基)乙酸（41.46 mg，0.402 mmol，0.6當量）及CuI（76.62 mg，0.402 mmol，0.60當量）。在120℃下在氮氣氛圍下攪拌4小時之後，減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由製備型TLC純化，用PE/EA（5/1）溶離，獲得呈淡黃色固體狀之4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶-7-甲酸第三丁酯（100 mg，36.17%）。4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5,6,7,8- 四氫 -1,7- 萘啶
在25℃下向4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶-7-甲酸第三丁酯（150 mg，0.364 mmol，1當量）於DCM（10 mL，157.300 mmol，432.46當量）中之溶液中添加TFA（414.75 mg，3.637 mmol，10當量）。在25℃下攪拌溶液2小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用於下一步驟。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5,6,7,8- 四氫 -1,7- 萘啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
將4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶（60 mg，0.192 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（47.86 mg，0.192 mmol，1.00當量）於DIEA（49.67 mg，0.384 mmol，2當量）中之混合物在N2 氛圍下在100℃下攪拌2小時。藉由製備型TLC（PE/EA 1/1）純化殘餘物，獲得呈淡黃色固體狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（100 mg，99.15%）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5,6,7,8- 四氫 -1,7- 萘啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在25℃下向4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（100 mg，0.191 mmol，1當量）於DCM（10 mL，157.300 mmol，825.67當量）中之溶液中添加TFA（217.23 mg，1.905 mmol，10.00當量）。在25℃下攪拌溶液2小時。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（150 mg）（管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱30×150 mm，5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：20% B至40% B於7 min內；220 nm；Rt: 6.63 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5,6,7,8-四氫-1,7-萘啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（42.9 mg，51.09%）。實例 3 合成化合物 120
Figure 02_image056
2- 苯甲基 -5-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-1,2,3,4- 四氫 -2,6- 萘啶
在室溫下向2-苯甲基-5-溴-1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶（250 mg，0.825 mmol，1當量）及2-(二甲胺基)乙酸（170.05 mg，1.649 mmol，2.00當量）於DMSO（5 mL）中之攪拌混合物中添加4-氟-2-(三氟甲基)苯酚（89.10 mg，0.495 mmol，0.6當量）及CuI（94.22 mg，0.495 mmol，0.6當量）。接著在室溫下添加Cs2 CO3 （1074.59 mg，3.298 mmol，4當量）。將最終反應混合物在120℃下用微波輻射輻照1小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。藉由逆相閃蒸在以下條件下純化粗產物（管柱：XBridge Prep OBD C18管柱30×150 mm，5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：18% B至35% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.12 min），獲得呈棕色固體狀之2-苯甲基-5-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶（180 mg，54.25%）。5-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-1,2,3,4- 四氫 -2,6- 萘啶
在室溫下在氮氣氛圍下向2-苯甲基-5-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶（180 mg）於MeOH（10 mL）中之攪拌溶液中添加Pd/C（20 mg）。將所得混合物在室溫下在氫氣氛圍下攪拌5小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型TLC（DCM/MeOH 12:1）純化殘餘物，獲得呈棕色固體狀之5-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶（100 mg）。4- 氯 -5-[5-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-1,2,3,4- 四氫 -2,6- 萘啶 -2- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向5-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶（100 mg，0.320 mmol，1當量）於DIEA（0.1 mL）中之攪拌溶液中添加4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（63.81 mg，0.256 mmol，0.8當量）。將所得混合物在90℃下攪拌1小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。藉由製備型TLC（DCM/MeOH；12:1）純化殘餘物，獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[5-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶-2-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（130 mg，77.34%）。4- 氯 -5-[5-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-1,2,3,4- 四氫 -2,6- 萘啶 -2- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-[5-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶-2-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（107 mg，0.204 mmol，1當量）於DCM（4 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。在室溫下攪拌所得混合物1小時。藉由LCMS監測反應。用飽和NaHCO3（水溶液）將混合物鹼化至pH 7。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（50 mg）（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：30% B至50% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.55 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[5-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1,2,3,4-四氫-2,6-萘啶-2-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（60 mg，66.78%）。實例 4 合成化合物 118
Figure 02_image058
2-( 苯甲基胺基 ) 丙酸乙酯
在室溫下在氮氣氛圍下向苯甲醛（8 g, 75.384 mmol，1當量）及TEA（7.63 g, 75.384 mmol，1當量）於DCE（100 mL，1263.149 mmol，16.76當量）中之攪拌溶液中逐份添加TEA（7.63 g，75.384 mmol，1當量）及NaBH(OAc)3 （31.95 g，150.767 mmol，2當量）。將混合物在室溫下攪拌隔夜。所需產物可由LCMS偵測。所得混合物用DCM（2×150 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×90 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液，獲得呈無色油狀之2-(苯甲基胺基)丙酸乙酯（12 g，76.80%）。4-[ 苯甲基 (1- 乙氧基 -1- 側氧基丙 -2- 基 ) 胺基 ] 丁酸甲酯
在室溫下在氮氣氛圍下向2-(苯甲基胺基)丙酸乙酯（8 g，38.596 mmol，1當量）及4-側氧基丁酸甲酯(4.48 g，38.596 mmol，1.00當量)於DCE（120 mL，1515.779 mmol，39.27當量）中之攪拌溶液中逐份添加TEA（3.91 g，38.596 mmol，1當量）及NaBH(OAc)3 （16.36 g，77.193 mmol，2當量）。將混合物在室溫下攪拌隔夜。所需產物可由LCMS偵測。所得混合物用DCM（2×150 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×90 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液，獲得呈無色油狀之4-[苯甲基(1-乙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基]丁酸甲酯（10 g，84.29%）。1- 苯甲基 -2- 甲基 -3- 側氧基哌啶 -4- 甲酸甲酯
在室溫下在氮氣氛圍下向4-[苯甲基(1-乙氧基-1-側氧基丙-2-基)胺基]丁酸甲酯（8 g，26.026 mmol，1當量）於甲苯（100 mL）中之攪拌溶液中逐份添加t-BuOK（5.00 g，52.051 mmol，2當量）。在80℃下攪拌混合物2小時。所需產物係由LCMS偵測。所得混合物在真空下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（5:1至2:1）溶離，獲得呈白色固體狀之1-苯甲基-2-甲基-3-側氧基哌啶-4-甲酸甲酯（6.5 g，95.57%）。7- 苯甲基 -8- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 醇
在室溫下在氮氣氛圍下向1-苯甲基-2-甲基-3-側氧基哌啶-4-甲酸甲酯（6 g，22.960 mmol，1當量）於EtOH（80 mL，1377.083 mmol，59.98當量）中之攪拌溶液中逐份添加t-BuONa（4.41 g，45.921 mmol，2當量）及甲脒鹽酸鹽（3.70 g，45.921 mmol，2.00當量）。在80℃下攪拌混合物2 h。所需產物可由LCMS偵測。所得混合物在真空下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（3:1至2:1）溶離，獲得呈白色固體狀之7-苯甲基-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇（5 g，85.29%）。4- 羥基 -8- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在氮氣氛圍下向7-苯甲基-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇（5 g，19.583 mmol，1當量）於EtOH（60 mL，1032.812 mmol，52.74當量）中之溶液中添加Boc2 O（8.55 g，39.166 mmol，2當量）、CH3 COONa（1.81 g，23.500 mmol，1.2當量）、Pd(OH)2 /C（275.01 mg，1.958 mmol，0.1當量）。混合物在氫氣氛圍下在室溫下氫化2 h，經由矽藻土墊過濾且在減壓下濃縮，獲得呈白色固體之4-羥基-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（4.5 g，86.61%）。4- 氯 -8- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向4-羥基-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（4.5 g，16.961 mmol，1當量）及PPh3 （6.67 g，25.442 mmol，1.5當量）於DCE（60 mL，0.606 mmol，0.04當量）中之攪拌溶液中逐份添加CCl4 （5.22 g，33.922 mmol，2當量）。在70℃攪拌混合物2小時。所需產物可由LCMS偵測。所得混合物在真空下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（7:1）溶離，獲得呈白色固體狀之4-氯-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（4 g，83.11%）。4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-8- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向4-氯-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（4 g，14.096 mmol，1當量）及2-氯-4-氟苯酚（2.07 g，14.096 mmol，1當量）於DMF（50 mL）中之攪拌溶液中逐份添加K2 CO3 （3.90 g，28.193 mmol，2當量）。將混合物在70下攪拌1 h。所需產物可由LCMS偵測。所得混合物在真空下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（1:1）溶離，獲得呈白色固體狀之4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（4 g，72.05%）。4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-8- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在室溫下在氮氣氛圍下向4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（4 g，1當量）於DCM（20 mL）中之攪拌溶液中逐滴/逐份添加TFA（4 mL）。在室溫下攪拌混合物2 h。所需產物可由LCMS偵測。減壓濃縮所得混合物，獲得呈灰白色固體狀之4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（2.7 g，90.51%）。4- 氯 -5-[4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-8- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（1 g，3.404 mmol，1當量）於DIEA（1 mL）中之攪拌溶液中添加4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（0.85 g，3.404 mmol，1當量）。在100℃下攪拌混合物隔夜。所需產物可由LCMS偵測。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（1:1至1:2）溶離，獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（1 g，58.01%）。4- 氯 -5-[4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-8- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向4-氯-5-[4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（1 g，1當量）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（2 mL）。在室溫下攪拌混合物1 h。所需產物可由LCMS偵測。減壓濃縮所得混合物，獲得呈白色固體之4-氯-5-[4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（600 mg，71.95%）。4- 氯 -5-[(8R)-4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-8- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
4-氯-5-[4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（250 mg，1當量）係由製備型對掌性HPLC（管柱：CHIRALPAK IG，20×250 mm，5 μm；移動相A：Hex:DCM=3:1 (0.1%FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：20 mL/min；梯度：15 B至15 B於19 min內；220/254 nm；RT1:13.016；RT2:16.004)分離，獲得呈白色固體之4-氯-5-[(8R)-4-(2-氯-4-氟苯氧基)-8-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（144 mg，57.60%）。實例 5 合成化合物 103
Figure 02_image060
4-[2-( 二氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在80℃下在氮氣氛圍下向4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（800 mg，2.966 mmol，1當量）及乙酸2-(二氟甲基)苯酯（1104.26 mg，5.932 mmol，2.00當量）於DMF（20 mL）中之攪拌溶液中添加K2 CO3 （1229.72 mg，8.898 mmol，3當量）。將混合物攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。在室溫下用水淬滅反應物。用EtOAc（3×50 mL）萃取混合物。將合併的有機層用鹽水（3×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；移動相，MeOH/水，10%至50%梯度於10 min內；偵測器，UV 254 nm，獲得呈灰白色固體狀之4-[2-(二氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（900 mg，80.41%）。4-[2-( 二氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在室溫下向4-[2-(二氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（900 mg，2.385 mmol，1當量）於DCM中之攪拌溶液中逐滴添加3,3,3-三氟丙酸（3 mL，6.00當量）。攪拌混合物1.5小時。反應係藉由TLC（PE/EtOAc 10:1）監測。用飽和NaHCO3（水溶液）將殘餘物鹼化至pH 8。混合物經減壓濃縮。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（100 mg），獲得呈灰白色固體狀之4-[2-(二氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（329 mg，49.75%）。4- 氯 -5-[4-[2-( 二氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在70℃下向4-[2-(二氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（328 mg，1.183 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（169.05 mg，0.679 mmol，1.00當量）之攪拌溶液中逐份添加DIEA（175.43 mg，1.357 mmol，2.00當量）。在70℃下攪拌混合物2小時。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；移動相，MeOH/水，10%至50%梯度於10 min內；偵測器，UV 254 nm，獲得呈灰白色固體狀之4-氯-5-[4-[2-(二氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（328 mg，56.60%）。4- 氯 -5-[4-[2-( 二氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-[4-[2-(二氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（328 mg，0.670 mmol，1當量）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加三氟乙酸（3 mL）。在真空下濃縮混合物。藉由製備型HPLC純化產物，獲得呈灰白色固體狀之4-氯-5-[4-[2-(二氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（256.4 mg，94.38%）。實例 6 合成化合物 117 及 117a
Figure 02_image062
4-[(1- 苯乙基 ) 胺基 ] 戊酸乙酯
在25℃下在氮氣氛圍下向1-苯基乙-1-胺（25 g，206.300 mmol，1當量）及4-側氧基戊酸乙酯（29.74 g，206.300 mmol，1當量）於DCE（400 mL，5052.598 mmol，24.49當量）中之攪拌溶液中逐份添加NaBH(OAc)3 （65.59 g，309.449 mmol，1.5當量）。在25℃下攪拌溶液2小時。在0℃下藉由添加H2 O（400 mL）淬滅反應物。所得混合物用DCM（3×200 mL）萃取。合併的有機層用飽和NaCl（水溶液）（3×200 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。粗產物用於下一步驟。4-[(2- 乙氧基 -2- 側氧基乙基 )(1- 苯乙基 ) 胺基 ] 戊酸乙酯
在25℃下在氮氣氛圍下向4-[(1-苯乙基)胺基]戊酸乙酯（49 g，196.508 mmol，1當量）及2-側氧基乙酸乙酯（40.12 g，392.990 mmol，2.00當量）於DCE（500 mL，6315.747 mmol，32.14當量）中之攪拌溶液中逐份添加NaBH(OAc)3 （62.47 g，294.762 mmol，1.5當量）。在25℃下攪拌溶液2小時。在0℃下藉由添加H2 O（400 mL）淬滅反應物。所得混合物用DCM（3×200 mL）萃取。合併的有機層用飽和NaCl（水溶液）（3×200 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。粗產物4-[(2-乙氧基-2-側氧基乙基)(1-苯乙基)胺基]戊酸乙酯（57 g，86.47%）用於下一步驟。2- 甲基 -5- 側氧基 -1-(1- 苯乙基 ) 哌啶 -4- 甲酸乙酯
在0℃下向4-[(2-乙氧基-2-側氧基乙基)(1-苯乙基)胺基]戊酸乙酯（57 g，169.924 mmol，1當量）於甲苯（500 mL，4699.452 mmol，27.66當量）中之溶液中逐份添加t-BuOK（47.67 g，424.810 mmol，2.5當量）。在25℃下攪拌混合物2小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EA（50/1至10/1）溶離，獲得呈黃色油狀之2-甲基-5-側氧基-1-(1-苯乙基)哌啶-4-甲酸乙酯（29 g，58.98%）。7-(1- 環己基乙基 )-6- 甲基 - 十氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 醇
在25℃下向2-甲基-5-側氧基-1-(1-苯乙基)哌啶-4-甲酸乙酯（10 g，34.557 mmol，1當量）及甲脒鹽酸鹽（4.17 g，51.836 mmol，1.50當量）於EtOH（100 mL，1721.353 mmol，49.81當量）中之溶液中逐份添加EtONa（5.88 g，86.393 mmol，2.50當量）。在90℃下攪拌混合物2小時。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用DCM/MeOH（20/1至10/1）溶離，獲得呈黃色固體狀之7-(1-環己基乙基)-6-甲基-十氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇（3.4 g，34.96%）。4- 羥基 -6- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在氮氣氛圍下向6-甲基-7-(1-苯乙基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇（3.5 g，12.994 mmol，1當量）、HCOONH4 （4.10 g，65.022 mmol，5.00當量）及Boc2 O（8.51 g，38.983 mmol，3當量）於EtOH（50 mL，860.677 mmol，66.23當量）中之溶液中添加Pd(OH)2 /C（0.36 g，2.599 mmol，0.2當量）。混合物使用氫氣球在70℃下在氫氣氛圍下氫化2小時，經由矽藻土墊過濾且在減壓下濃縮。獲得呈黃色固體狀之4-羥基-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1.8 g，52.21%）。4- 氯 -6- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在25℃下向4-羥基-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1.8 g，6.784 mmol，1當量）及PPh3 (3.56 g，13.569 mmol，2當量)於DCE（20 mL，252.630 mmol，37.24當量）中之溶液中添加CCl4 （3.13 g，20.353 mmol，3當量）。在70℃下攪拌混合物3小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EA（10/1至1/1）溶離，獲得呈黃色固體狀之4-氯-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1.1 g，57.14%）。4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-6- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在25℃下向4-氯-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1.1 g，3.877 mmol，1當量）及2-氯-4-氟苯酚（0.85 g，5.800 mmol，1.50當量）於DMF（15 mL，193.826 mmol，50.00當量）中之溶液中添加K2 CO3 （1.07 g，7.753 mmol，2當量）。在70℃下攪拌混合物1小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EA（10/1至5/1）溶離，獲得呈黃色固體狀之4-(2-氯-4-氟苯氧基)-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1.2 g，78.60%）。4- 氯 -5-[4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-6- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
將4-(2-氯-4-氟苯氧基)-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（800 mg，2.724 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（678.42 mg，2.724 mmol，1.00當量）於DIEA（704.01 mg，5.447 mmol，2當量）中之混合物在100℃下在氮氣氛圍下攪拌16小時。藉由製備型TLC（PE/EA 1/1）純化殘餘物，獲得呈淡黃色固體狀之4-氯-5-[4-(2-氯-4-氟苯氧基)-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（530 mg，38.43%）。4- 氯 -5-[(6R)-4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-6- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在25℃下向4-氯-5-[4-(2-氯-4-氟苯氧基)-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（530 mg，1.047 mmol，1當量）於DCM（20 mL，314.601 mmol，300.57當量）中之溶液中添加TFA（1193.47 mg，10.467 mmol，10當量）。在25℃下攪拌溶液2小時。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（600 mg）（管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱30×150 mm，5 μm；移動相A：水（10 mM NH4HCO3），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：20% B至40% B於7 min內；220 nm；Rt: 6.63 min），獲得外消旋體（200 mg）。藉由對掌性製備型HPLC在以下條件下純化殘餘物（200 mg）：管柱：CHIRALPAK IE，2×25cm，5 μm；移動相A：MTBE (0.1%FA)-HPLC，移動相B：IPA--HPLC；流動速率：18 mL/min；梯度：20 B至20 B於15 min內；220/254 nm。儘管藉由此技術分離兩種異構體，但未測定絕對取向。指定為4-氯-5-[(6S)-4-(2-氯-4-氟苯氧基)-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（60.9 mg，13.78%）之化合物在9.688 min處以白色固體形式獲得。指定為4-氯-5-[(6R)-4-(2-氯-4-氟苯氧基)-6-甲基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（61.5 mg，13.92%）之化合物在11.813分鐘處以白色固體形式獲得。實例 7 合成化合物 134
Figure 02_image064
2- 氯 -4-[2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下向2-(二氟甲基)-4-氟苯酚（5.33 g，32.879 mmol，2.00當量）及2,4-二氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（5 g，16.438 mmol，1當量）於DMF（30 mL）中之攪拌溶液中添加NaHCO3（4.14 g，49.282 mmol，3.00當量）。在70℃下攪拌溶液0.5小時。混合物經減壓濃縮。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上10 mM NH4HCO3）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，70% B-95% B梯度於100 min內；偵測器：254 nm。含有所需產物之溶離份在92% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈灰白色固體狀之2-氯-4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（2.100 g）。4-[2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -2,7- 二甲酸 7- 第三丁酯 2- 甲酯
在壓力槽中向2-氯-4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（400 mg，0.931 mmol，1當量）及TEA（188.34 mg，1.861 mmol，2當量）於MeOH（15 mL，370.484 mmol，398.10當量）中之溶液中添加Pd(PPh3)4（107.54 mg，0.093 mmol，0.1當量）。將混合物用氮氣吹掃1小時且接著在100℃下用一氧化碳加壓至10 atm後維持16小時。將反應混合物冷卻至室溫且過濾以移除不溶性固體。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18 ，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上10 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，35% B-65% B梯度於20 min內；偵測器：254 nm。含有所需產物之溶離份在62% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈無色油狀之4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7-二甲酸7-第三丁酯2-甲酯（100 mg，23.70%）。4-[2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯氧基 ]-2-( 羥甲基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下向4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,7-二甲酸7-第三丁酯2-甲酯（100 mg，0.221 mmol，1當量）於t-BuOH（6 mL，63.139 mmol，286.29當量）中之攪拌溶液中添加NaBH4 （16.69 mg，0.441 mmol，2當量）。在70℃下攪拌溶液3小時。向混合物中添加水（3 mL）。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上10 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，45% B-80% B梯度於20 min內；偵測器：254 nm。含有所需產物之溶離份在74% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈無色油狀之4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-2-(羥甲基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（35 mg，37.30%）。[4-[2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -2- 基 ] 甲醇
在室溫下向4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-2-(羥甲基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（35 mg）於DCM（6 mg）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mg）。在室溫下攪拌溶液2小時。混合物經減壓濃縮。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上10 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，25% B-55% B梯度於20 min內；偵測器：254 nm。含有所需產物之溶離份在41% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈無色油狀之[4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]甲醇（20 mg）。4- 氯 -5-[4-[2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯氧基 ]-2-( 羥甲基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向25 mL圓底燒瓶中添加[4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]甲醇（20 mg，0.061 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（15.31 mg，0.061 mmol，1當量）。在室溫下向混合物中添加DIEA（15.89 mg，0.123 mmol，2當量）。在90℃下攪拌混合物2小時。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上10 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，35% B-70% B梯度於20 min內；偵測器：254 nm。含有所需產物之溶離份在65% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈無色油狀之4-氯-5-[4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-2-(羥甲基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（30 mg，90.71%）。4- 氯 -5-[4-[2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯氧基 ]-2-( 羥甲基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-[4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-2-(羥甲基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（30 mg）於DCM（5 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。在室溫下攪拌溶液2小時。混合物經減壓濃縮。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（30 mg）（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：不確定，移動相B：不確定；流動速率：60 mL/min；梯度：20% B至40% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.22 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[4-[2-(二氟甲基)-4-氟苯氧基]-2-(羥甲基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（8.7 mg）。
化合物128、125、114係藉由此實例中所述之方法及流程，在合成之第一步中分別使用2-三氟甲基苯酚、4-氟-2-三氟甲基苯酚及4-氟-2-氯苯酚替代2-(二氟甲基)-4-氟苯酚而製備。實例 8 合成化合物 112
Figure 02_image066
2- 氯 -4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向2,4-二氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（800 mg，2.630 mmol，1當量）及2-氯-4-氟苯酚（578.16 mg，3.945 mmol，1.50當量）於DMF（15 mL）中之攪拌混合物中逐份添加K2 CO3 （726.99 mg，5.260 mmol，2.00當量）。將所得混合物在70℃下在氮氣氛圍下攪拌0.5小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。減壓濃縮所得混合物。用EtOAc（3×200 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（2×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（30/1至10/1）溶離，獲得呈黃色油狀之2-氯-4-(2-氯-4-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1 g，91.78%）。4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-2-[[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向2-氯-4-(2-氯-4-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（700 mg，1.690 mmol，1當量）於THF (30 mL)中之攪拌混合物中逐份添加1-(4-甲氧基苯基)甲胺（1159.02 mg，8.449 mmol，5.00當量）。將所得混合物在60℃下在氮氣氛圍下攪拌16小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。減壓濃縮所得混合物。用EtOAc（3×200 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（2×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化（管柱，C18矽膠；移動相，乙腈/水，60%至95%梯度於20 min內；偵測器，UV 220 nm），獲得呈黃色油狀之4-(2-氯-4-氟苯氧基)-2-[[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（350 mg，40.22%）。4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-N-[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -2- 胺
在室溫下向4-(2-氯-4-氟苯氧基)-2-[[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（350 mg，1當量）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL）。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。所得混合物用DCM（3×100 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。藉由製備型HPLC在以下條件下純化殘餘物（管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5 μm，19×150 mm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：25 mL/min；梯度：2% B至32% B於1 min內；220/254 nm；Rt: 7.08 min），獲得呈黃色油狀之4-(2-氯-4-氟苯氧基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-胺（260 mg）。4- 氯 -5-[4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-2-[[(4- 甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向50 mL圓底燒瓶中添加4-(2-氯-4-氟苯氧基)-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-胺（260 mg，0.627 mmol，1當量）、4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（156.11 mg，0.627 mmol，1.00當量）及DIEA（242.99 mg，1.880 mmol，3.00當量）。將所得混合物在90℃下在氮氣氛圍下攪拌2小時。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化（管柱C18矽膠；移動相，乙腈/水，50%至85%梯度於25 min內；偵測器，UV 220 nm），獲得呈黃色固體狀之4-氯-5-[4-(2-氯-4-氟苯氧基)-2-[[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（350 mg，89.00%）。5-[2- 胺基 -4-(2- 氯 -4- 氟苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-4- 氯 -2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
向4-氯-5-[4-(2-氯-4-氟苯氧基)-2-[[(4-甲氧基苯基)甲基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（200 mg）於TFA（8 mL，107.704 mmol，328.23當量）中之攪拌溶液中。將最終反應混合物在80℃下用微波輻射輻照2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。所得混合物用DCM（2×100 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。藉由製備型HPLC在以下條件下純化殘餘物（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：水（10 mM NH4HCO3），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：25% B至40% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.35 min），獲得呈黃色固體狀之5-[2-胺基-4-(2-氯-4-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-4-氯-2,3-二氫噠嗪-3-酮（52.4 mg）。
化合物113、116及102係藉由此實例中所述之方法及流程分別使用2-氯苯酚、4-氟-2-三氟甲基苯酚、2-三氟苯酚替代合成之第一步中之2-氯-4-氟苯酚而製備。實例 9 合成化合物 129 及 130
Figure 02_image068
1-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -2- 基 ] 乙 -1- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向2-氯-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（600 mg，1.340 mmol，1當量）及三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷（967.80 mg，2.680 mmol，2.00當量）於甲苯（10 mL）中之混合物中添加Pd(PPh3 )4 （77.41 mg，0.067 mmol，0.05當量）。在110℃下攪拌所得混合物4小時。藉由LCMS監測反應。此產生呈黃色油狀之2-(1-乙氧基乙烯基)-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（700 mg，108.06%）。所得粗混合物不經進一步純化即直接用於下一步驟中。
在室溫下向2-(1-乙氧基乙烯基)-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1 g，2.068 mmol，1當量）於DCM（5 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（3.33 mL，29.239 mmol，21.70當量）。在室溫下攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。用飽和NaHCO3 （水溶液）將混合物/殘餘物鹼化至pH 8。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，43% B-55% B梯度於20 min內；偵測器：220 nm。含有所需產物之溶離份在50% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈淡黃色固體狀之1-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]乙-1-酮（750 mg，102.06%）。5-[2- 乙醯基 -4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-4- 氯 -2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向50 mL圓底燒瓶中添加1-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]乙-1-酮（750 mg，2.111 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（525.81 mg，2.111 mmol，1.00當量）。向以上混合物中添加DIEA（818.47 mg，6.333 mmol，3.00當量）。在100℃下攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，60% B-85% B梯度於20 min內；偵測器：220 nm。含有所需產物之溶離份在80% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈淡黃色油狀之5-[2-乙醯基4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-4-氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（230 mg，19.18%）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-2-(1- 羥乙基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在0℃下在氮氣氛圍下向5-[2-乙醯基4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-4-氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（230 mg，0.405 mmol，1當量）於MeOH（10 mL）中之攪拌溶液中逐份添加NaBH4 （30.64 mg，0.810 mmol，2.00當量）。在室溫下攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EtOAc 1/1）純化，獲得呈淡黃色油狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-(1-羥乙基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（120 mg，51.99%）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-2-[(1S)-1- 羥乙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮及 4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-2-[(1R)-1- 羥乙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-(1-羥乙基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（120 mg，0.211 mmol，1當量）於DCM（5 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（2.00 mL，17.541 mmol，127.89當量）。在室溫下攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應。用飽和NaHCO3 （水溶液）將殘餘物鹼化至pH 8。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18 ，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，40% B-80% B梯度於25 min內；偵測器：220 nm。在55% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮。藉由對掌性製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（50 mg）（管柱：CHIRALPAK IE，2×25cm，5 μm；移動相A：Hex (0.1%FA)--HPLC，移動相B：EtOH--HPLC；流動速率：16 mL/min；梯度：30 B至30 B於33 min內；220/254 nm；RT1:26.219；RT2:29.589）。儘管藉由此技術分離兩種異構體，但未測定絕對取向。指定為4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-[(1S)-1-羥乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（27.1 mg）之化合物在29.589 min處以灰白色固體形式獲得。指定為4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-[(1R)-1-羥乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（22.6 mg）之化合物在26.219 min處以灰白色固體形式獲得。
化合物119係藉由此實例中所述之方法及流程，使用2-氯-4-[4-氟-2-氯苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯作為起始物質而製備。
化合物122及123係藉由此實例中所述之方法及流程，使用2-氯-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯作為起始物質而製備。同樣，此等經分離異構體之絕對取向未測定且任意地指定為(S)或(R)。實例 10 合成化合物 115
Figure 02_image070
2- 氯 -4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下向2,4-二氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（2 g，6.58 mmol，1當量）及2-(三氟甲基)苯酚（1.6 g，9.86 mmol，1.5當量）於乙腈（20 mL）中之攪拌溶液中添加DBU（2.0 g，13.15 mmol，2當量）。在室溫下攪拌溶液4小時。混合物經減壓濃縮。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EtOAc 10:1）純化，獲得呈無色油狀之2-氯-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（700 mg，24.77%）。2-([2-[( 第三丁基二甲基矽烷基 ) 氧基 ] 乙基 ] 胺基 )-4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向2-氯-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，1.163 mmol，1當量）於THF（15 mL）中之溶液中添加(2-胺基乙氧基)(第三丁基)二甲基矽烷（1019.89 mg，5.816 mmol，5.00當量）。所得混合物在50℃下攪拌16小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EtOAc 3/1）純化，獲得呈淡黃色油狀之2-([2-[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]乙基]胺基)-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（440 mg，66.51%）。2-([4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -2- 基 ] 胺基 ) 乙 -1- 醇
在室溫下向2-([2-[(第三丁基二甲基矽烷基)氧基]乙基]胺基)-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（440 mg，0.774 mmol，1當量）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（3 mL，40.389 mmol，52.20當量）。在室溫下攪拌所得混合物2 h。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱，C18矽膠；移動相，ACN/水，40%至60%梯度於15 min內；偵測器，UV 254 nm，獲得呈淡黃色油狀之2-([4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]胺基)乙-1-醇（220 mg）。4- 氯 -5-[2-[(2- 羥乙基 ) 胺基 ]-4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向50 mL圓底燒瓶中添加2-([4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]胺基)乙-1-醇（220 mg，0.621 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（154.66 mg，0.621 mmol，1.00當量）。向以上混合物中添加DIEA（240.74 mg，1.863 mmol，3.00當量）。將所得混合物在100℃下攪拌2 h。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：ACN；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，45% B-60% B梯度於20 min內；偵測器：220 nm。在55% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈黃色固體狀之4-氯-5-[2-[(2-羥乙基)胺基]-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（210 mg，59.66%）。4- 氯 -5-[2-[(2- 羥乙基 ) 胺基 ]-4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-[2-[(2-羥乙基)胺基]-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（200 mg，0.353 mmol，1當量）於DCM（5 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（2 mL）。在室溫下攪拌所得混合物1 h。藉由LCMS監測反應。用飽和NaHCO3 （水溶液）將混合物鹼化至pH 8。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化殘餘物（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：不確定，移動相B：不確定；流動速率：60 mL/min；梯度：25% B至50% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.67 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[2-[(2-羥乙基)胺基]-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（106.3 mg）。實例 11 合成化合物 138 及 139
Figure 02_image072
7- 苯甲基 -2- 氯 -4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在室溫下向4-氟-2-(三氟甲基)苯酚（1469.32 mg，8.158 mmol，1.20當量）及7-苯甲基-2,4-二氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（2000 mg，6.799 mmol，1當量）於DMF（20 mL）中之攪拌溶液中添加K2 CO3 （1879.20 mg，13.597 mmol，2當量）。在70℃下攪拌溶液0.5小時。混合物經減壓濃縮。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM TFA）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，70% B-95% B梯度於20 min內；偵測器：254 nm。含有所需產物之溶離份在95% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈灰白色固體狀之7-苯甲基-2-氯-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（2331 mg，78.31%）。7- 苯甲基 -4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-1H,2H,5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -2- 酮
將7-苯甲基-2-氯-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（2 g，4.568 mmol，1當量）於HAc（10 mL, 174.515 mmol，38.20當量）及H2O（1 mL, 55.508 mmol，12.15當量）中之溶液在140℃下在N2氛圍下攪拌10小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EA 1/1）純化，獲得呈淡黃色固體狀之7-苯甲基-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-酮（530 mg，27.67%）。4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-1H,2H,5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -2- 酮
在氮氣氛圍下向7-苯甲基-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-酮（530 mg，1.264 mmol，1當量）於MeOH（10 mL，246.989 mmol，195.44當量）中之溶液中添加Pd/C（268.98 mg，2.528 mmol，2當量）。混合物使用氫氣球在室溫下在氫氣氛圍下氫化4小時，經由矽藻土墊過濾且在減壓下濃縮。獲得呈淡黃色固體狀之4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-酮（430 mg，103.34%）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-2- 側氧基 -1H,2H,5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
將4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-酮（430 mg，1.306 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（357.84 mg，1.437 mmol，1.1當量）於DIEA（337.58 mg，2.612 mmol，2.00當量）中之混合物在100℃下在N2氛圍下攪拌2小時。藉由製備型TLC（PE/EA 1/1）純化殘餘物，獲得呈淡黃色固體狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-側氧基-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（210 mg，29.67%）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-1- 甲基 -2- 側氧基 -1H,2H,5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮及 4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-2- 甲氧基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在0℃下在氮氣氛圍下向4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-側氧基-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（90 mg，0.166 mmol，1當量）及NaHCO3 (27.90 mg，0.332 mmol，2當量)於DMF（10 mL，129.218 mmol，778.02當量）中之溶液中逐滴添加CH3 I（47.15 mg，0.332 mmol，2.00當量）。將混合物在25℃下攪拌16小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EA 0/1）純化，獲得呈淡黃色固體狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1-甲基-2-側氧基-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（60 mg，64.99%）及4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-甲氧基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（15 mg）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-1- 甲基 -2- 側氧基 -1H,2H,5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在25℃下向4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1-甲基-2-側氧基-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（60 mg，0.108 mmol，1當量）於DCM（10 mL，157.300 mmol，1457.41當量）中之溶液中添加TFA（123.07 mg，1.079 mmol，10當量）。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（100 mg）（管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱30×150 mm，5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度： 20% B至40% B於7 min內；220 nm；Rt: 6.63 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-1-甲基-2-側氧基-1H,2H,5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（29.3 mg，57.54%）。4- 氯 -5-[4-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-2- 甲氧基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在25℃下向4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-甲氧基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（15 mg，0.027 mmol，1當量）於DCM（5 mL，78.650 mmol，2914.83當量）中之溶液中添加TFA（30.77 mg，0.270 mmol，10當量）。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（20 mg）（管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱30×150 mm，5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度： 20% B至40% B於7 min內；220 nm；Rt: 6.63 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-2-甲氧基-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（7.5 mg，58.91%）。實例 12 合成化合物 110
Figure 02_image074
2- 氯 -4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下向2,4-二氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（2 g，6.58 mmol，1當量）及2-(三氟甲基)苯酚（1.6 g，9.86 mmol，1.5當量）於乙腈（20 mL）中之攪拌溶液中添加DBU（2.0 g，13.15 mmol，2當量）。在室溫下攪拌溶液4小時。混合物經減壓濃縮。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EtOAc 10:1）純化，獲得呈無色油狀之2-氯-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（700 mg，24.77%）。2- 甲氧基 -4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在25℃下向2-氯-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1 g，2.327 mmol，1當量）於MeOH（20 mL，493.978 mmol，212.32當量）中之溶液中添加NaOMe（0.25 g，0.005 mmol，2當量）。將混合物在25℃下攪拌4小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EA（10/1至1/1）溶離，獲得呈淡黃色固體狀之2-甲氧基-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（100 mg，10.10%）。2- 甲氧基 -4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在25℃下向2-甲氧基-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（100 mg，0.235 mmol，1當量）於DCM（10 mL）中之溶液中添加TFA（268.03 mg，2.351 mmol，10當量）。在25℃下攪拌溶液4小時。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（150 mg）（管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱30×150 mm，5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：20% B至40% B於7 min內；220 nm；Rt: 6.63 min），獲得呈淡黃色固體狀之2-甲氧基-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（80 mg，104.62%）。4- 氯 -5-[2- 甲氧基 -4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
將2-甲氧基-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（80 mg，0.246 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（61.26 mg，0.246 mmol，1當量）於DIEA（63.57 mg，0.492 mmol，2.00當量）中之溶液在100℃下在氮氣氛圍下攪拌2小時。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EA（5/1至1/1）溶離，獲得呈淡黃色固體狀之4-氯-5-[2-甲氧基-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（120 mg，90.71%）。4- 氯 -5-[2- 甲氧基 -4-[2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在25℃下向4-氯-5-[2-甲氧基-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（120 mg，0.223 mmol，1當量）於DCM（5 mL，78.650 mmol，352.56當量）中之溶液中添加TFA（254.36 mg，2.231 mmol，10.00當量）。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（150 mg）（管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱30×150 mm，5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：20% B至40% B於7 min內；220 nm；Rt: 6.63 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[2-甲氧基-4-[2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（24.1 mg，23.81%）。實例 13 合成化合物 108
Figure 02_image076
4-(3- 溴 -2- 氯苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
向4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，1.854 mmol，1當量）及3-溴-2氯苯酚（461.46 mg，2.224 mmol，1.20當量）於DMF（10 mL）中之攪拌溶液中添加K2 CO3 （512.38 mg，3.707 mmol，2當量）。將所得混合物在70℃下攪拌1 h。混合物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：（spnerical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（5 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：20% B至60% B於55 min內；254 nm）。在40% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮。此產生呈灰白色固體狀之4-(3-溴-2-氯苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（300 mg，36.72%）。4-(2- 氯 -3- 氰基苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
向4-(3-溴-2-氯苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（450 mg，1.021 mmol，1當量）及鋅二甲腈（143.87 mg，1.225 mmol，1.20當量）於DMF（5 mL)中之攪拌溶液中添加Pd(PPh3 )4 （117.99 mg，0.102 mmol，0.1當量）。將所得混合物在120℃下在氮氣氛圍下攪拌2小時。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：spnerical C18，20-40 μm，180 g；移動相A：水（5 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：10% B至60% B於55 min內；254 nm。在40% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮。此產生呈淡黃色固體狀之4-(2-氯-3-氰基苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（280 mg，70.89%）。2- 氯 -3-[5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基氧基 ] 苯甲腈
向4-(2-氯-3-氰基苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（100 mg，0.259 mmol，1當量）於DCM（3 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。將所得混合物在室溫下在空氣氛圍下攪拌2小時。減壓濃縮所得混合物。用飽和NH4 HCO3 （水溶液）將混合物鹼化至pH 7。混合物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：spnerical C18，20-40 μm，180 g；移動相A：水（5 mM NH4HCO3），移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：30% B至60% B於30 min內；254 nm）。在45% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮。此產生呈淡黃色油狀之2-氯-3-[5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基氧基]苯甲腈（60 mg，80.95%）。2- 氯 -3-([7-[5- 氯 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-6- 側氧基 -1,6- 二氫噠嗪 -4- 基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 ) 苯甲腈
向4-(2-氯-3-氰基苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（60 mg，0.155 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（38.63 mg，0.155 mmol，1.00當量）於DIEA（40.09 mg，0.310 mmol，2當量）中之攪拌溶液中。將所得混合物在100℃下在空氣氛圍下攪拌數小時。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EtOAc 1:1）純化，獲得呈淡黃色固體狀之2-氯-3-([7-[5-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]氧基)苯甲腈（50 mg，64.56%）。2- 氯 -3-[[7-(5- 氯 -6- 側氧基 -1,6- 二氫噠嗪 -4- 基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 ] 苯甲腈
向2-氯-3-([7-[5-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]氧基)苯甲腈（50 mg，0.100 mmol，1當量）於DCM（3 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。減壓濃縮所得混合物。用飽和NH4 CO3 （水溶液）將混合物鹼化至pH 7。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：水（10 mM NH4HCO3），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：20% B至42% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.58 min），獲得呈灰白色固體狀之2-氯-3-[[7-(5-氯-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]氧基]苯甲腈（14.5 mg，34.88%）。實例 14 合成化合物 111
Figure 02_image078
4-[3- 溴 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（180 mg，0.667 mmol，1當量）及3-溴-2-(三氟甲基)苯酚（241.25 mg，1.001 mmol，1.50當量）於DMF（10 mL）中之攪拌混合物中逐份添加Cs2 CO3 （434.86 mg，1.335 mmol，2.00當量）。將所得混合物在70℃下在氮氣氛圍下攪拌0.5小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。減壓濃縮所得混合物。用EtOAc（3×200 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（2×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化（管柱，C18矽膠；移動相，乙腈/水，40%至85%梯度於30 min內；偵測器，UV 220 nm），獲得呈黃色油狀之4-[3-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（150 mg，47.39%）。4-[3- 氰基 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向4-[3-溴-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（150 mg，0.316 mmol，1當量）及Zn(CN)2 （111.43 mg，0.949 mmol，3.00當量）於DMF（8 mL）中之攪拌混合物中逐份添加Pd(PPh3)4（36.55 mg，0.032 mmol，0.1當量）。將最終反應混合物在150℃下用微波輻射輻照3小時。藉由LCMS監測反應。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化（管柱，C18矽膠；移動相，乙腈/水，40%至95%梯度於30 min內；偵測器，UV 220 nm），獲得呈黃色油狀之4-[3-氰基-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（70 mg，52.65%）。3-[5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基氧基 ]-2-( 三氟甲基 ) 苯甲腈
在室溫下向4-[3-氰基-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（70 mg）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL）。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。所得混合物用DCM（3×100 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化（管柱，C18矽膠；移動相，乙腈/水，30%至60%梯度於20 min內；偵測器，UV 220 nm），獲得呈黃色油狀之3-[5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基氧基]-2-(三氟甲基)苯甲腈（40 mg）。3-([7-[5- 氯 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-6- 側氧基 -1,6- 二氫噠嗪 -4- 基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 )-2-( 三氟甲基 ) 苯甲腈
在室溫下在氮氣氛圍下向25 mL圓底燒瓶中添加3-[5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基氧基]-2-(三氟甲基)苯甲腈（40 mg，0.125 mmol，1當量）、4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（62.22 mg，0.250 mmol，2.00當量）及DIEA（48.42 mg，0.375 mmol，3.00當量）。將所得混合物在90℃下在氮氣氛圍下攪拌16小時。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EtOAc=5/1）純化，獲得呈黃色油狀之3-([7-[5-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]氧基)-2-(三氟甲基)苯甲腈（50 mg，75.12%）。3-[[7-(5- 氯 -6- 側氧基 -1,6- 二氫噠嗪 -4- 基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 氧基 ]-2-( 三氟甲基 ) 苯甲腈
在室溫下向3-([7-[5-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]氧基)-2-(三氟甲基)苯甲腈（50 mg）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL）。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。所得混合物用DCM（3×100 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。藉由製備型HPLC在以下條件下純化殘餘物（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：25% B至45% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.07 min），獲得呈白色固體狀之3-[[7-(5-氯-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]氧基]-2-(三氟甲基)苯甲腈（10.8 mg）。實例 15 合成化合物 126 及 126a
Figure 02_image080
N-[(1E)-1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 亞乙基 ]-4- 甲苯 -1- 磺醯肼
在室溫下在氮氣氛圍下向1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙-1-酮（2 g，9.702 mmol，1當量）於EtOH（40 mL）中之攪拌溶液中逐份添加4-甲苯-1-磺醯肼（1.81 g，9.719 mmol，1.00當量）。將所得混合物在90℃下在氮氣氛圍下攪拌6小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。所得混合物在真空下濃縮。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM AcOH）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，45% B-70% B梯度於20 min內；偵測器：220 nm。在60% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈白色固體狀之N-[(1E)-1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]亞乙基]-4-甲苯-1-磺醯肼（2.5 g，68.83%）。4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 乙烯基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（750 mg，2.781 mmol，1當量）及N-[(1E)-1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]亞乙基]-4-甲苯-1-磺醯肼（2081.80 mg，5.561 mmol，2.00當量）於1,4-二噁烷（20 mL）中之攪拌混合物中逐份添加Pd(乙腈)2 Cl2 （72.14 mg，0.278 mmol，0.10當量）、Dppf（307.18 mg，0.556 mmol，0.2當量）及t-BuOLi（489.71 mg，6.117 mmol，2.20當量）。將最終反應混合物在100℃下用微波輻射輻照2小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。過濾所得混合物，用EtOAc（2×50 mL）洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM AcOH）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，50% B-90% B梯度於30 min內；偵測器：220 nm。在85% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈棕色油狀之4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙烯基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（800 mg，67.95%）。4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 乙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在氮氣氛圍下在100 mL圓底燒瓶中向4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙烯基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（150 mg）於30 mL MeOH中之溶液中添加Pd/C（10%，30 mg）。混合物使用氫氣球在室溫下在氫氣氛圍下氫化4小時，經由矽藻土墊過濾且在減壓下濃縮。此產生呈黃色油狀之4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（150 mg）。4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 乙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在室溫下向4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（150 mg）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL）。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。所得混合物用DCM（3×50 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×30 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，120 g；移動相A：水（加上5 mM AcOH）；移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，40% B-58% B梯度於15 min內；偵測器：254 nm。在53% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（100 mg）。4- 氯 -5-(4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 乙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向50 mL圓底燒瓶中添加4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（100 mg，0.307 mmol，1當量）、4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（91.88 mg，0.369 mmol，1.20當量）及DIEA（119.19 mg，0.922 mmol，3.00當量）。將所得混合物在90℃下在氮氣氛圍下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，120 g；移動相A：水（加上5 mM AcOH）；移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，40% B-60% B梯度於15 min內；偵測器：220 nm。含有所需產物之溶離份在53% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之4-氯-5-(4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（120 mg，72.57%）。4- 氯 -5-[4-[(1S)-1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 乙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮及 4- 氯 -5-[4-[(1R)-1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 乙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-(4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（200 mg）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL）。在室溫下攪拌反應混合物4小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。所得混合物用DCM（3×100 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由對掌性製備型HPLC在以下條件下純化（管柱：XBridge Prep Phenyl OBD管柱19×150 mm 5 μm 13 nm；移動相A：移動相B：流動速率：60 mL/min；梯度：20% B至37% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.97 min）。儘管藉由此技術分離兩種異構體，但未測定絕對取向。指定為4-氯-5-[4-[(1S)-1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（11.8 mg）之化合物在1.819 min處以灰白色固體形式獲得。指定為4-氯-5-[4-[(1R)-1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（13.5 mg）之化合物在2.470 min處以白色固體形式獲得。實例 16 合成化合物 133
Figure 02_image082
4-[ 甲基 [(3R,4R)-4- 甲基哌啶 -3- 基 ] 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下向25 mL圓底燒瓶中添加(3R,4R)-1-苯甲基-N,4-二甲基哌啶-3-胺（2.43 g，0.011 mmol，1.50當量）及4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（2 g，0.007 mmol，1當量）。在室溫下向混合物中添加DIEA（1.92 g，0.015 mmol，2.00當量）。將混合物在100℃下攪拌2小時。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EtOAc 1:1）純化，獲得呈灰白色固體狀之4-[甲基[(3R,4R)-4-甲基哌啶-3-基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（670 mg，25.00%）。(3R,4R)-1- 苯甲基 -N,4- 二甲基 -N-[5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 ] 哌啶 -3- 胺
在0℃下向4-[[(3R,4R)-1-苯甲基-4-甲基哌啶-3-基](甲基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（413 mg，0.914 mmol，1當量）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加三氟乙酸（3 mL，0.026 mmol，6.00當量）。在室溫下攪拌混合物2小時。藉由LCMS監測反應。在減壓下濃縮溶液。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（362 mg）（管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱，5 μm，19×150 mm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：30% B至80% B於25 min內；220 nm；Rt: 21.65 min），獲得呈紅色油狀之(3R,4R)-1-苯甲基-N,4-二甲基-N-[5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌啶-3-胺（250 mg，77.77%）。5-(4-[[(3R,4R)-1- 苯甲基 -4- 甲基哌啶 -3- 基 ]( 甲基 ) 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-4- 氯 -2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向25 mL圓底燒瓶中添加(3R,4R)-1-苯甲基-N,4-二甲基-N-[5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌啶-3-胺（263 mg，0.748 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（186.38 mg，0.748 mmol，1.00當量）。在室溫下向混合物中添加DIEA（193.41 mg，1.261 mmol，2當量）。將混合物在100℃下攪拌2小時。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，45% B-95% B梯度於30 min內；偵測器：254 nm。在85% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈灰白色固體狀之5-(4-[[(3R,4R)-1-苯甲基-4-甲基哌啶-3-基](甲基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-4-氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（245 mg，58.04%）。5-(4-[[(3R,4R)-1- 苯甲基 -4- 甲基哌啶 -3- 基 ]( 甲基 ) 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-4- 氯 -2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在0℃下向5-(4-[[(3R,4R)-1-苯甲基-4-甲基哌啶-3-基](甲基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-4-氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（88 mg，1當量）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加三氟乙酸（3 mL，0.026 mmol，6.00當量）。在室溫下攪拌混合物2小時。在減壓下濃縮溶液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM TFA）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，33% B-95% B梯度於30 min內；偵測器：254 nm。在90% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈灰白色固體狀之5-(4-[[(3R,4R)-1-苯甲基-4-甲基哌啶-3-基](甲基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-4-氯-2,3-二氫噠嗪-3-酮（33.5 mg，44.74%）。
化合物133a係藉由此實例中所述之方法及流程藉由使用(3S,4S)-1-苯甲基-N,4-二甲基哌啶-3-胺替代(3R,4R)-1-苯甲基-N,4-二甲基哌啶-3-胺而製備。實例 17 合成化合物 136
Figure 02_image084
4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
將4-氟-2-(三氟甲基)苯胺（6.64 g，37.074 mmol，2當量）、4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（5 g，18.537 mmol，1當量）、Pd(AcO)2（0.83 g，3.707 mmol，0.2當量）、氧雜蒽膦（4.29 g，7.415 mmol，0.4當量）及Cs2CO3（12.08 g，37.074 mmol，2當量）於1,4-二噁烷（80 mL）中之混合物在110℃下攪拌16小時。過濾反應混合物且濃縮濾液，得到粗產物，其藉由矽膠管柱層析純化，用PE:EA（20:1至1:2）溶離，獲得呈白色固體狀之4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（5.6 g，73.26%）。4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ](2- 甲氧基 -2- 側氧基乙基 ) 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（3 g，7.275 mmol，1當量）及2-溴乙酸甲酯（2.23 g，14.578 mmol，2.00當量）於DMF（30 mL）中之攪拌混合物中逐份添加Cs2 CO3 （4.74 g，14.548 mmol，2.00當量）。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。用EtOAc（3×400 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（2×200 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM TFA）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，55% B-85% B梯度於30 min內；偵測器：220 nm。在79% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈黃色固體狀之4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](2-甲氧基-2-側氧基乙基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，14.19%）。4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ](2- 羥乙基 ) 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在-30℃下在氮氣氛圍下向4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](2-甲氧基-2-側氧基乙基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，1.032 mmol，1當量）於THF（50 mL）中之攪拌溶液中逐份添加LiAlH4 （78.34 mg，2.064 mmol，2.00當量）。將反應混合物在室溫下攪拌16小時。藉由LCMS監測反應。在-30℃下藉由添加水（1 mL）來淬滅反應物。藉由過濾收集所沈澱之固體且用MeOH（3×30 mL）洗滌。所得混合物在真空下濃縮。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EA=1/1）純化，獲得呈黃色油狀之4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](2-羥乙基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（100 mg，21.23%）。4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 乙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在室溫下向4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（150 mg）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL）。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。所得混合物用DCM（3×50 mL）萃取。將合併的有機層用鹽水（1×30 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，120 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，40% B-58% B梯度於15 min內；偵測器：220 nm。在53% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（100 mg）。4- 氯 -5-(4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ](2- 羥乙基 ) 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向50 mL圓底燒瓶中添加2-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]([5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基])胺基]乙-1-醇（40 mg，0.112 mmol，1當量）、4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（55.92 mg，0.224 mmol，2.00當量）及DIEA（43.53 mg，0.337 mmol，3.00當量）。將所得混合物在90℃下在氮氣氛圍下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，120 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，40% B-60% B梯度於15 min內；偵測器：220 nm。含有所需產物之溶離份在55% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之4-氯-5-(4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](2-羥乙基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（50 mg，78.28%）。4- 氯 -5-(4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ](2- 羥乙基 ) 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-(4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](2-羥乙基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（50 mg）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL）。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。用EtOAc（2×50 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。藉由製備型HPLC在以下條件下純化殘餘物（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：不確定，移動相B：不確定；流動速率：60 mL/min；梯度：30% B至45% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.6 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-(4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](2-羥乙基)胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（6.2 mg）。實例 18 合成化合物 132
Figure 02_image086
4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 環丙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在40℃下在氮氣氛圍下向t-BuONa（226.97 mg，2.362 mmol，2.00當量）於DMSO（20 mL）中之攪拌溶液中逐份添加Me3SiI（472.57 mg，2.362 mmol，2.00當量）。將所得混合物在40℃下在氮氣氛圍下攪拌0.5小時。接著在室溫下在氮氣氛圍下逐滴含4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]乙烯基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，1.181 mmol，1當量）之DMSO（5 mL）。將所得混合物在室溫下在氮氣氛圍下攪拌1小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。用EtOAc（3×100 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（2×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，55% B-80% B梯度於25 min內；偵測器：220 nm。在73% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]環丙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（240 mg，46.46%）。4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 環丙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
在室溫下向4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]環丙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（240 mg，0.549 mmol，1當量）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（1 mL，13.463 mmol，24.54當量）。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。用EtOAc（2×100 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，120 g；移動相A：水（加上5 mM AcOH）；移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，33% B-45% B梯度於20 min內；偵測器：254 nm。在40% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]環丙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（150 mg，81.05%）。4- 氯 -5-(4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 環丙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向50 mL圓底燒瓶中添加4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]環丙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（150 mg，0.445 mmol，1當量）、4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-1,2,3,6-四氫噠嗪-3-酮（134.00 mg，0.534 mmol，1.20當量）及DIEA（172.42 mg，1.334 mmol，3.00當量）。將所得混合物在90℃下在氮氣氛圍下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%-5% B，10 min，40% B-60% B梯度於15 min內；偵測器：220 nm。含有所需產物之溶離份在54% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之4-氯-5-(4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]環丙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（200 mg，81.78%）。4- 氯 -5-(4-[1-[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 環丙基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-(4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]環丙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（200 mg）於DCM（10 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（2 mL）。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。殘餘物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH=8。用EtOAc（2×100 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。藉由製備型HPLC在以下條件下純化殘餘物（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：不確定，移動相B：不確定；流動速率：60 mL/min；梯度：30% B至55% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.232 min），獲得呈灰白色固體狀之4-氯-5-(4-[1-[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]環丙基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（39.2 mg）。實例 19 合成化合物 109
Figure 02_image088
4-(2- 溴 -3- 氟苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
向4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，1.854 mmol，1當量）及2-溴-3-氟苯酚（424.87 mg，2.224 mmol，1.20當量）於DMF（10 mL）中之攪拌溶液中添加K2 CO3 （512.38 mg，3.707 mmol，2當量）。將所得混合物在70℃下攪拌0.5小時。使混合物冷卻至室溫。在室溫下用水淬滅反應物。用EtOAc（2×100 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（2×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（5:1）溶離，獲得呈白色固體狀之4-(2-溴-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，63.58%）。4-(2- 乙烯基 -3- 氟苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
向4-(2-溴-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，1.178 mmol，1當量）及五甲基-1,3,2-二氧硼㖦（334.72 mg，2.357 mmol，2.00當量)於H2O（2 mL）及1,4-二噁烷（16 mL）中之溶液中添加K2 CO3 （325.75 mg，2.357 mmol，2當量）及Pd(PPh3 )4 （68.09 mg，0.059 mmol，0.05當量）。在90℃下在氮氣氛圍下攪拌隔夜之後，減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（5:1）溶離，獲得呈黃色油狀之4-(2-乙烯基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（250 mg，57.12%）。4-(2- 乙基 -3- 氟苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
向4-(2-乙烯基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（250 mg，0.673 mmol，1當量）於MeOH（10 mL）中之攪拌溶液中添加Pd/C（100 mg，0.940 mmol，1.40當量）。將所得混合物在室溫下在氫氣氛圍下攪拌2小時。過濾所得混合物，且用MeOH (2×10 mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。減壓濃縮所得混合物。此產生呈黑色油狀之4-(2-乙基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（210 mg，0.08%）。4-(2- 乙基 -3- 氟苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶
向4-(2-乙基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（210 mg，0.562 mmol，1當量）於DCM（3 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。將所得混合物在室溫下在空氣氛圍下攪拌2小時。減壓濃縮所得混合物。混合物用飽和NH4 HCO3 （水溶液）鹼化至pH 8。混合物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：spnerical C18，20-40 μm，180g；移動相A：水（5 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：25% B至60% B於40 min內；254 nm）。在40% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮。此產生呈淡黃色油狀之4-(2-乙基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（120 mg，78.07%）。4- 氯 -5-[4-(2- 乙基 -3- 氟苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
向4-(2-乙基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶（120 mg，0.439 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（109.37 mg，0.439 mmol，1.00當量）於DIEA（113.49 mg，0.878 mmol，2當量）中之攪拌溶液中。將所得混合物在100℃下在空氣氛圍下攪拌2小時。殘餘物藉由製備型TLC（PE/EtOAc 1:1）純化，獲得呈淡黃色固體狀之4-氯-5-[4-(2-乙基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（100 mg，46.87%）。4- 氯 -5-[4-(2- 乙基 -3- 氟苯氧基 )-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 ]-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
向4-氯-5-[4-(2-乙基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（100 mg，0.206 mmol，1當量）於DCM（3 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。將所得混合物在室溫下攪拌2小時。減壓濃縮所得混合物。用飽和NH4 CO3 （水溶液）將混合物鹼化至pH 7。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（管柱：XBridge Prep OBD C18 管柱30×150 mm 5 μm；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：30% B至50% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.27 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-[4-(2-乙基-3-氟苯氧基)-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2,3-二氫噠嗪-3-酮（41.6 mg，50.31%）。實例 20 合成化合物 127
Figure 02_image090
3-( 甲基胺基 ) 吡啶 -4- 甲酸甲酯
在0℃下向3-(甲基胺基)吡啶-4-甲酸（11 g，72.296 mmol，1當量）於MeOH（500 mL，12349.455 mmol，170.82當量）中之攪拌溶液中逐滴添加SOCl2 （43.01 g，361.478 mmol，5當量）。將所得混合物在70℃下攪拌30小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。減壓濃縮所得混合物。將殘餘物溶解於乙酸乙酯（50 mL）中。用飽和NaHCO3（水溶液）將混合物鹼化至pH 8。用EtOAc（2×20mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（1×30 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液，獲得呈黃色固體狀之3-(甲基胺基)吡啶-4-甲酸甲酯（9 g，粗物質）。3-(N- 甲基乙醯胺基 ) 吡啶 -4- 甲酸甲酯
在室溫下向3-(甲基胺基)吡啶-4-甲酸甲酯（9 g，54.158 mmol，1當量）於DCM（100 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加吡啶（21.42 g，270.791 mmol，5當量）及乙醯氯（6.38 g，81.237 mmol，1.5當量）。在室溫下攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應。用飽和NaHCO3（水溶液）將溶液鹼化至pH 8。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由逆相閃蒸在以下條件下純化（管柱：C18管柱330 g；移動相A：水（10 mM NH4 HCO3 ），移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：10% B至30% B於25 min內；254/220 nm），獲得呈棕色液體狀之3-(N-甲基乙醯胺基)吡啶-4-甲酸甲酯（8 g，70.94%）。4- 羥基 -1- 甲基 -1,2- 二氫 -1,7- 萘啶 -2- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向3-(N-甲基乙醯胺基)吡啶-4-甲酸甲酯（6 g，28.816 mmol，1當量）於無水1,4-二噁烷（100 mL）中之攪拌溶液中添加t-BuOK（6.47 g，57.632 mmol，2當量）。將所得混合物在90℃下在氮氣氛圍下攪拌1小時。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。所得混合物在真空下濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用DCM/MeOH（10:1）溶離，獲得呈橙色固體狀之4-羥基-1-甲基-1,2-二氫-1,7-萘啶-2-酮（4.5 g，88.64%）。4- 氯 -1- 甲基 -1,2- 二氫 -1,7- 萘啶 -2- 酮
在室溫下向4-羥基-1-甲基-1,2-二氫-1,7-萘啶-2-酮（4.5 g，25.543 mmol，1當量）於無水1,4-二噁烷（100 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加POCl3 （3.92 g，25.543 mmol，1當量）。在90℃下攪拌所得混合物16小時。使混合物冷卻至室溫。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用DCM/MeOH（10:1）溶離，獲得呈紅色固體之4-氯-1-甲基-1,2-二氫-1,7-萘啶-2-酮（2 g，40.23%）。4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 胺基 ]-1- 甲基 -1,2- 二氫 -1,7- 萘啶 -2- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向4-氯-1-甲基-1,2-二氫-1,7-萘啶-2-酮（0.8 g，4.111 mmol，1當量）於無水1,4-二噁烷（15 mL）中之攪拌溶液中添加Cs2CO3（2.68 g，8.221 mmol，2當量）、4-氟-2-(三氟甲基)苯胺（1.47 g，8.221 mmol，2.00當量）、氧雜蒽膦（0.95 g，1.644 mmol，0.4當量）及Pd(AcO)2 （0.18 g，0.822 mmol，0.2當量）。將最終反應混合物在110℃下用微波輻射輻照4小時。藉由LCMS監測反應。用EtOAc（3×50 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（1×100 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由逆相閃蒸在以下條件下純化（管柱：C18管柱330 g；移動相A：水（10 mM AcOH），移動相B：乙腈；流動速率：50 mL/min；梯度：20% B至40% B於40 min內；254/220 nm），獲得呈灰白色固體狀之4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]胺基]-1-甲基-1,2-二氫-1,7-萘啶-2-酮（1.1 g，79.34%）。4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 胺基 ]-1- 甲基 -1,2,5,6,7,8- 六氫 -1,7- 萘啶 -2- 酮
在室溫下在氮氣氛圍下向4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]胺基]-1-甲基-1,2-二氫-1,7-萘啶-2-酮（1 g，2.965 mmol，1當量）於THF（20 mL）中之攪拌溶液中添加PtO2 （67.33 mg，0.296 mmol，0.10當量）。將所得混合物在室溫下在氫氣氛圍下攪拌16小時。藉由LCMS監測反應。過濾所得混合物，用EtOAc（3×20 mL）洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由逆相閃蒸在以下條件下純化（管柱：C18管柱330 g；移動相A：水（10 mM AcOH），移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5% B至20% B於40 min內；254/220 nm）。在16% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈灰白色固體狀之4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]胺基]-1-甲基-1,2,5,6,7,8-六氫-1,7-萘啶-2-酮（750 mg，74.11%）。7-[5- 氯 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-6- 側氧基 -1,6- 二氫噠嗪 -4- 基 ]-4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ] 胺基 ]-1- 甲基 -1,2,5,6,7,8- 六氫 -1,7- 萘啶 -2- 酮
在室溫下向4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]胺基]-1-甲基-1,2,5,6,7,8-六氫-1,7-萘啶-2-酮（750 mg，2.197 mmol，1當量）及4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（1.09 g，4.395 mmol，2當量）之攪拌混合物中添加DIPEA（568.00 mg，4.395 mmol，2當量）。在100℃下攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應。將殘餘物溶解於DMF（10 mL）中。溶液藉由逆相閃蒸在以下條件下純化（管柱：C18管柱330 g；移動相A：水（10 mM FA），移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：30% B至50% B於40 min內；254/220 nm）。在44% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之7-[5-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基]-4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]胺基]-1-甲基-1,2,5,6,7,8-六氫-1,7-萘啶-2-酮（1 g，82.15%）。7-[5- 氯 -1-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-6- 側氧基 -1,6- 二氫噠嗪 -4- 基 ]-4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ]( 甲基 ) 胺基 ]-1- 甲基 -1,2,5,6,7,8- 六氫 -1,7- 萘啶 -2- 酮
在室溫下向7-[5-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基]-4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基]胺基]-1-甲基-1,2,5,6,7,8-六氫-1,7-萘啶-2-酮（800 mg，1.444 mmol，1當量）於DMF（20 mL）中之攪拌溶液中添加Cs2 CO3 （0.94 g，2.888 mmol，2當量）及MeI（614.96 mg，4.333 mmol，3當量）。在室溫下攪拌所得混合物16小時。藉由LCMS監測反應。混合物藉由逆相閃蒸在以下條件下純化（管柱：C18管柱120 g；移動相A：水（10 mM AcOH），移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：40% B至60% B於40 min內；254/220 nm）。含有所需產物之溶離份在49% B處收集且在減壓下濃縮，獲得呈黃色油狀之7-[5-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基]-4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](甲基)胺基]-1-甲基-1,2,5,6,7,8-六氫-1,7-萘啶-2-酮（80 mg，9.75%）。7-(5- 氯 -6- 側氧基 -1,6- 二氫噠嗪 -4- 基 )-4-[[4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯基 ]( 甲基 ) 胺基 ]-1- 甲基 -1,2,5,6,7,8- 六氫 -1,7- 萘啶 -2- 酮
在室溫下向7-[5-氯-1-(氧雜環己烷-2-基)-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基]-4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](甲基)胺基]-1-甲基-1,2,5,6,7,8-六氫-1,7-萘啶-2-酮（80 mg，0.141 mmol，1當量）於DCM（4.5 mL）中之攪拌溶液中逐滴添加TFA（0.5 mL，6.732 mmol，31.07當量）。在室溫下攪拌所得混合物2小時。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。用飽和NaHCO3（水溶液）將殘餘物鹼化至pH 8。溶液藉由逆相閃蒸純化，獲得呈白色固體狀之7-(5-氯-6-側氧基-1,6-二氫噠嗪-4-基)-4-[[4-氟-2-(三氟甲基)苯基](甲基)胺基]-1-甲基-1,2,5,6,7,8-六氫-1,7-萘啶-2-酮（40 mg，58.69%）。實例 21 合成化合物 135 及 137
Figure 02_image092
2- 氯 -4-(4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 )-5,8- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(6H)- 甲酸第三丁酯。
在室溫下向2,4-二氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（5 g，16.44 mmol）於DMF（50 mL）中之溶液中添加4-氟-2-(三氟甲基)苯酚（4.44 g，24.66 mmol）且添加K2 CO3 （3.41 g，24.66 mmol）。將所得混合物在70℃下攪拌1小時。在冷卻至室溫之後。進行過濾且在減壓下濃縮濾液。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化（管柱：Spherical C18，20-40 μm，330 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ；移動相B：乙腈；流動速率：80 mL/min；梯度：5%於10 min內，35% B至45% B於10 min內；偵測器：254 nm/220 nm。在44% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈白色固體狀之2-氯-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（6.2 g，85%）。4-(4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 )-2- 乙烯基 -5,8- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(6H)- 甲酸第三丁酯。
向2-氯-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，1.12 mmol）於二噁烷（10 mL）中之溶液中添加2-乙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦（344 mg，2.23 mmol）及H2 O（0.5 mL, 27.75 mmol） K2 CO3 （309 mg，2.23 mmol）及Pd(PPh3 )4 （129 mg，0.11 mmol）。在氮氣氛圍下在95℃下攪拌2小時之後，減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由製備型TLC純化，用17%乙酸乙酯/石油醚溶離，獲得呈淡黃色固體狀之2-乙烯基-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（490 mg，99%）。2-(1,2- 二羥乙基 )-4-(4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 )-5,8- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(6H)- 甲酸第三丁酯。
在室溫下向2-乙烯基-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（400 mg，0.91 mmol）於DCM（20 mL）中之溶液中添加4-羥基-4-甲基嗎啉-4-鎓（323 mg，2.73 mmol）及K2 OsO4 .2H2 O（34 mg，0.091 mmol）。在再攪拌1小時之後，減壓濃縮所得混合物且藉由逆相急驟層析在以下條件下純化殘餘物：管柱：Spherical C18，20-40 μm，120 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ；移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：5% B於10 min內，45% B至65% B於15 min內；偵測器：254 nm及220 nm。在64% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得呈白色固體狀之2-(1,2-二羥乙基)-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（280 mg，65%）。1-(4-(4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 )-5,6,7,8- 四氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -2- 基 ) 乙烷 -1,2- 二醇。
在室溫下向2-(1,2-二羥乙基)-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（280 mg，0.59 mmol）於DCM（4 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。在室溫下攪拌所得混合物1小時。所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物溶解於DCM（50 mL）中且用NaHCO3飽和水溶液（20 mL）洗滌。有機層經分離且經無水硫酸鈉乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC用8%甲醇/二氯甲烷純化殘餘物，獲得呈棕色固體狀之1-[4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]乙烷-1,2-二醇（180 mg，82%）。4- 氯 -5-(2-(1,2- 二羥乙基 )-4-(4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 )-5,8- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(6H)- 基 )-2-( 四氫 -2H- 哌喃 -2- 基 ) 噠嗪 -3(2H)- 酮。
在室溫下向2-[5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基氧基]苯甲醛（180 mg，0.71 mmol）於DIEA（0.5 mL）中之攪拌溶液中添加4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（176 mg，0.71 mmol）。將所得混合物在90℃下攪拌1小時。在冷卻至環境溫度之後，在減壓下濃縮所得混合物。殘餘物藉由製備型TLC純化，用8%甲醇/二氯甲烷溶離，獲得呈棕色固體狀之4-氯-5-(2-(1,2-二羥乙基)-4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)-2-(四氫-2H-哌喃-2-基)噠嗪-3(2H)-酮（140 mg，43%）。(S)-4- 氯 -5-(2-(1,2- 二羥乙基 )-4-(4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 )-5,8- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(6H)- 基 ) 噠嗪 -3(2H)- 酮及 (R)-4- 氯 -5-(2-(1,2- 二羥乙基 )-4-(4- 氟 -2-( 三氟甲基 ) 苯氧基 )-5,8- 二氫吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7(6H)- 基 ) 噠嗪 -3(2H)- 酮
在室溫下向4-氯-5-[2-(1,2-二羥乙基)-4-[4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（150 mg，0.27 mmol）於DCM（4 mL）中之溶液中添加TFA（1 mL）。在室溫下攪拌所得混合物1小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由逆相急驟層析在以下條件下純化：管柱：Spherical C18，20-40 μm，120 g；移動相A：水（加上5 mM NH4 HCO3 ）；移動相B：乙腈；流動速率：45 mL/min；梯度：5% B於10 min內，45% B至65% B於15 min內；偵測器：254 nm及220 nm。在64% B處收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得外消旋產物（130 mg），其藉由製備型對掌性HPLC在以下條件下分離：管柱：XBridge Prep OBD C18管柱30×150 mm，5 μm；移動相A：己烷，移動相B：EtOH；流動速率：20 mL/min；梯度：35% B於10 min內；偵測器：254/220 nm）。儘管藉由此技術分離兩種異構體，但未測定絕對取向。收集含有所需產物之溶離份且在減壓下濃縮，獲得產物：呈白色固體狀之指定為(S)-4-氯-5-(2-(1,2-二羥乙基)-4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)噠嗪-3(2H)-酮之化合物：滯留時間（4.97 min）（49.5 mg，39%）及呈白色固體狀之指定為(R)-4-氯-5-(2-(1,2-二羥乙基)-4-(4-氟-2-(三氟甲基)苯氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)噠嗪-3(2H)-酮之化合物：滯留時間（8.05 min）（45.7 mg，36%）。實例 22 合成化合物 131
Figure 02_image094
4-[[4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 ] 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在室溫下在氮氣氛圍下向4-氯-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（500 mg，1.854 mmol，1當量）及4-(三氟甲基)吡啶-3-胺（601.03 mg，3.707 mmol，2.0當量）於1,4-二噁烷（5 mL）中之攪拌混合物中添加Pd(AcO)2 （83.24 mg，0.371 mmol，0.2當量）及Cs2 CO3 （1207.95 mg，3.707 mmol，2.0當量）及氧雜蒽膦（429.04 mg，0.741 mmol，0.4當量）。將所得混合物在110℃下在氮氣氛圍下攪拌2 h。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。過濾所得混合物，用DCM（3×2 mL）洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。減壓濃縮所得混合物。粗產物藉由逆相閃蒸在以下條件下純化（管柱：C18，120 g；移動相A：水/0.05% NH4HCO3，移動相B：ACN；流動速率：45 mL/min；梯度：45% B至65% B於15 min內；偵測器，254 nm及220 nm，在64% B處收集所需產物），獲得呈白色固體狀之4-[[4-(三氟甲基)吡啶-3-基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（600mg，81.86%）。4-[ 甲基 [4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 ] 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 甲酸第三丁酯
在0℃下在氮氣氛圍下向4-[[4-(三氟甲基)吡啶-3-基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（1.32 g，3.339 mmol，1當量）及Cs2 CO3 （2.18 g，6.677 mmol，2.0當量）於DMF（10 mL）中之攪拌混合物中添加CH3I（0.95 g，6.677 mmol，2.0當量）。將所得混合物在室溫下在氮氣氛圍下攪拌2 h。藉由LCMS監測反應。粗產物藉由逆相閃蒸在以下條件下純化（管柱：C18，120 g；移動相A：水/0.05% NH4 HCO3 ，移動相B：ACN；流動速率：45 mL/min；梯度：45% B至65% B於15 min內；偵測器，254 nm及220 nm，在64% B處收集所需產物），獲得呈棕色固體狀之4-[甲基[4-(三氟甲基)吡啶-3-基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（400 mg，29.26%）。N- 甲基 -N-[5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -4- 基 ]-4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 胺
在室溫下在氮氣氛圍下向4-[甲基[4-(三氟甲基)吡啶-3-基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯（220 mg，0.537 mmol，1當量）於DCM（4 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。在室溫下攪拌所得混合物1 h。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。用飽和NaHCO3 （水溶液）將混合物鹼化至pH 8。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型TLC（DCM/MeOH 12:1）純化殘餘物，獲得呈棕色固體狀之N-甲基-N-[5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-4-(三氟甲基)吡啶-3-胺（130 mg，78.22%）。4- 氯 -5-(4-[ 甲基 [4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 ] 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-2-( 氧雜環己烷 -2- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向N-甲基-N-[5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-4-(三氟甲基)吡啶-3-胺（130 mg，0.420 mmol，1當量）於DIEA（0.5 mg）中之攪拌溶液中添加4,5-二氯-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（104.69 mg，0.420 mmol，1.0當量）。將所得混合物在90℃下攪拌1 h。藉由LCMS監測反應。使混合物冷卻至室溫。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由製備型TLC（DCM/MeOH 12:1）純化，獲得呈棕色固體狀之4-氯-5-(4-[甲基[4-(三氟甲基)吡啶-3-基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（100 mg，45.58%）。4- 氯 -5-(4-[ 甲基 [4-( 三氟甲基 ) 吡啶 -3- 基 ] 胺基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [3,4-d] 嘧啶 -7- 基 )-2,3- 二氫噠嗪 -3- 酮
在室溫下向4-氯-5-(4-[甲基[4-(三氟甲基)吡啶-3-基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2-(氧雜環己烷-2-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（100 mg，0.192 mmol，1當量）於DCM（4 mL）中之攪拌溶液中添加TFA（1 mL）。在室溫下攪拌所得混合物1 h。藉由LCMS監測反應。減壓濃縮所得混合物。用飽和NaHCO3 （水溶液）將混合物鹼化至pH 8。減壓濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC在以下條件下純化粗產物（100 mg）（管柱：XBridge Prep Phenyl OBD管柱19×150 mm 5 μm 13 nm；移動相A：水，5 mM NH4 HCO3 ，移動相B：乙腈；流動速率：60 mL/min；梯度：35% B至55% B於8 min內；220 nm；Rt: 7.13 min），獲得呈白色固體狀之4-氯-5-(4-[甲基[4-(三氟甲基)吡啶-3-基]胺基]-5H,6H,7H,8H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-2,3-二氫噠嗪-3-酮（52 mg，61.99%）。實例 23 合成中間物 A. 乙酸 2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯酯
Figure 02_image096
乙酸 4- 氟 -2- 甲醯基苯酯
在25℃下向5-氟-2-羥基苯甲醛（10 g，71.371 mmol，1當量）於吡啶（100 mL，1242.353 mmol，17.41當量）中之溶液中添加乙酸乙醯酯（14.57 g，0.143 mmol，2當量）。在25℃下攪拌溶液30 min。 減壓濃縮所得溶液。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EA（100/1至20/1）溶離，獲得呈淡黃色油狀之乙酸4-氟-2-甲醯基苯酯（12 g，92.31%）。乙酸 2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯酯
在0℃下向乙酸4-氟-2-甲醯基苯酯（12 g，65.880 mmol，1當量）於DCM（200 mL，3146.009 mmol，47.75當量）中之溶液中添加DAST（21.24 g，131.760 mmol，2當量）。在25℃下攪拌溶液4小時。用水（100 mL）淬滅所得溶液。用DCM（100 mL×2）萃取所得混合物。合併的有機層用飽和NaCl水溶液（100 mL×2）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EA（10/1至5/1）溶離，獲得呈淡黃色油狀之乙酸2-(二氟甲基)-4-氟苯酯（10 g，74.35%）。B. 2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯酚
Figure 02_image098
1- 溴 -2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯
向2-溴-5-氟苯甲醛（10 g，49.26 mmol，1當量）於DCM（60 mL）中之攪拌溶液中添加DAST（15.9 g，98.52 mmol，2當量）。在-10℃下攪拌所得混合物2小時。在-10℃下用水淬滅反應物。用EtOAc（4×30 mL）萃取所得混合物。將合併的有機層用鹽水（2×40 mL）洗滌，經無水Na2 SO4 乾燥。在過濾之後，減壓濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EtOAc（6:1）溶離，獲得呈淡黃色油狀之1-溴-2-(二氟甲基)-4-氟苯（8 g，72.18%）。2-[2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯基 ]-4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼 㖦
在25℃下在氮氣氛圍下向1-溴-2-(二氟甲基)-4-氟苯（31 g，137.773 mmol，1當量）及BPD（52.48 g，206.664 mmol，1.50當量）於1,4-二噁烷（300 mL，3541.225 mmol，25.70當量）中之溶液中添加AcOK（27.04 g，275.546 mmol，2當量）及Pd(dppf)Cl2 ●CH2 Cl2 （5.63 g，6.889 mmol，0.05當量）。在90℃下攪拌混合物2小時。減壓濃縮所得混合物。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用PE/EA（10/1）溶離，獲得呈淡黃色油狀之2-[2-(二氟甲基)-4-氟苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦（30 g，80.03%）。藉由TLC監測反應。粗物質直接用於下一步驟。2-( 二氟甲基 )-4- 氟苯酚
在0℃下向2-[2-(二氟甲基)-4-氟苯基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦（50 g，183.776 mmol，1當量）於MeOH（300 mL，7409.673 mmol，40.32當量）及H2 O（100 mL，5550.837 mmol，30.20當量）中之溶液中逐滴添加H2 O2 （30%）（50 mL，2146.131 mmol，11.68當量）。在25℃下攪拌溶液3小時。減壓濃縮所得溶液。用EA（500 mL）稀釋殘餘物，用3×200 mL飽和NaCl（水溶液）洗滌有機層。合併的有機層經無水Na2 SO4 乾燥，減壓濃縮，獲得呈淡黃色油狀之2-(二氟甲基)-4-氟苯酚（25 g，83.91%）。實例 24 TRPC4 活性分析
如下產生表現TRPC4之ICLN-1694細胞（HEK-TREx hTRPC4）。在使用2 mL不含抗生素之細胞生長培養基（1× DMEM/高葡萄糖（Hyclone #SH30022.02）；10%胎牛血清（Sigma）2 mM丙酮酸鈉、10 mM HEPES）轉染之前24小時將市售HekTrex-293細胞以每孔0.7×106 個細胞接種於1×6孔板中。使用潮黴素作為抗性基因將人類密碼子優化之TRPC4編碼序列選殖至pcDNA5/TO（Invitrogen；目錄號V103320）中，且使用T-Rex-293細胞（Invitrogen；目錄號R71007）遵循製造商之說明繁殖質體（SEQ ID NO: 1）。在第2天，製備2 µg 質體DNA加上Optimem中之6 µl Xtreme-GENE HP試劑（200 µl總體積）且在室溫下培育15分鐘。接著將此質體溶液平緩地逐滴覆蓋至各孔上且平緩地旋動盤以使與培養基之複合物混合大致30秒。經轉染細胞在37℃下在10% CO2 培育箱中培育24小時。收穫經轉染細胞且轉移至37℃之含有無抗生素之細胞生長培養基的2×150 mm培養皿中。
次日，藉由添加含有150 µg /mL潮黴素及5 µg /mL殺稻瘟菌素之細胞生長培養基開始選擇以產生穩定集合，且使細胞生長。按需要每1-2天更換具有選擇劑之培養基以移除死細胞。在7天之後，潮黴素濃度降至75 µg /mL且使細胞生長繼續。
如下選擇單一殖株。將穩定集合稀釋至10個細胞/毫升且接種（100微升/孔）至24×96孔盤（約1個細胞/孔）中且使其在細胞生長培養基中生長7天。添加新鮮培養基（100 µl）且使細胞再生長1-2週且接著冷凍儲存或立即使用。
化合物一般使用DMSO作為媒劑補足至10 mM儲備溶液，或以所述儲備溶液形式供應。使用Echo-550聲學分配器產生10點劑量反應曲線。藉由連續稀釋化合物儲備液以在DMSO中產生10 mM、1 mM及0.1 mM溶液至Echo認證之LDV盤中而製備化合物源盤。Echo接著將100% DMSO儲備溶液連續點樣至源劑量反應盤中以產生4倍稀釋流程。將100% DMSO添加至點樣劑量反應盤以使最終容積達到5 µl。接著將300 nl劑量反應儲備盤點樣至預培育及刺激分析盤中。接著將50 µl預培育緩衝液及100 µl刺激緩衝液添加至盤中，產生30 µM至0.0001 µM之最終分析測試濃度範圍與0.3%之最終DMSO濃度。
將ICLN-1694細胞（HEK-TREx hTRPC4）塗鋪至384孔、黑色pdl塗佈之微量培養盤上且在用於實驗的前一天維持於補充有1 µg /mL四環素之細胞生長培養基中。TRPC4表現係由在塗鋪時施用1 µg /mL四環素而誘發。自盤中移除培養基且將10 µl含4 µM Fluo-4 AM（與等體積之Pluronic F-127混合）之EBSS（NaCl（142 mM）、KCl（5.4 mM）、葡萄糖（10 mM）、CaCl2 （1.8 mM）、MgCl2（0.8 mM）、HEPES（10 mM），pH 7.4）添加至細胞。將細胞在室溫下避光培育60-90分鐘。在培育期之後，移除染料且經10 µl EBSS替換。將細胞、預培育及刺激盤裝載至FLIPR-II上且開始分析。FLIPR量測10秒基線且接著添加10 µl 2×化合物（或對照）。再監測螢光變化5分鐘。在5分鐘預培育之後，將20 µl之2× Englerin A（具有1×化合物或對照）添加至細胞盤中。分析中之最終Engerlin A刺激濃度為100 nM。在添加Englerin A之後，再監測螢光變化5分鐘。
如下測定TRPC4鈣反應之化合物調節。在Englerin A之後，監測螢光持續5分鐘時段。獲取最大相對螢光反應（減去1 µM已知最大限度地阻斷TRPC4鈣反應之內部對照化合物之對照反應，下式中之「REF INHIB」）且自FLIPR導出。
化合物效應係使用下式以抑制%形式計算：
Figure 02_image100
其中「RFU」為相對螢光單位。
此等分析之結果顯示於下表2中，其中「A」指示小於或等於50 nM之IC50 ；「B」指示大於50 nM且小於或等於500 nM之IC50 ；「C」指示大於500 nM且小於1 µM之IC50 ；「D」指示1 µM或更大之IC50 ；且「NT」指示化合物未經測試。實例 25 TRPC5 活性分析
如下產生表現TRPC5之ICLN-1633細胞（HEK-TREx hTRPC5）。在使用2 mL不含抗生素之細胞生長培養基（1× DMEM/高葡萄糖（Hyclone #SH30022.02）；10%胎牛血清（Sigma）2 mM丙酮酸鈉、10 mM HEPES）轉染之前24小時將市售HekTrex-293細胞以每孔0.7×106 個細胞接種於1×6孔板中。使用潮黴素作為抗性基因將人類TRPC5編碼序列（具有沉默T478C突變之NM_012471）選殖至pcDNA5/TO（Invitrogen；目錄號V103320）中，且使用T-Rex-293細胞（Invitrogen；目錄號R71007）遵循製造商之說明繁殖質體（SEQ ID NO: 2）。在第2天，製備2 µg 質體DNA加上Optimem中之6 µl Xtreme-GENE HP試劑（200 µl總體積）且在室溫下培育15分鐘。接著將此質體溶液平緩地逐滴覆蓋至各孔上且平緩地旋動盤以使與培養基之複合物混合大致30秒。經轉染細胞在37℃下在10% CO2 培育箱中培育24小時。收穫經轉染細胞且轉移至37℃之含有無抗生素之細胞生長培養基的2×150 mm培養皿中。
次日，藉由添加含有150 µg /mL潮黴素及5 µg /mL殺稻瘟菌素之細胞生長培養基開始選擇以產生穩定集合，且使細胞生長。按需要每1-2天更換具有選擇劑之培養基以移除死細胞。在7天之後，潮黴素濃度降至75 µg /mL且使細胞生長繼續。
如下選擇單一殖株。將穩定集合稀釋至10個細胞/毫升且接種（100微升/孔）至24×96孔盤（約1個細胞/孔）中且使其在細胞生長培養基中生長7天。添加新鮮培養基（100 µl）且使細胞再生長1-2週且接著冷凍儲存或立即使用。
化合物一般使用DMSO作為媒劑補足至10 mM儲備溶液，或以所述儲備溶液形式供應。使用Echo-550聲學分配器產生10點劑量反應曲線。藉由連續稀釋化合物儲備液以在DMSO中產生10 mM、1 mM及0.1 mM溶液至Echo認證之LDV盤中而製備化合物源盤。Echo接著將100% DMSO儲備溶液連續點樣至源劑量反應盤中以產生4倍稀釋流程。將100% DMSO添加至點樣劑量反應盤以使最終容積達到5 µl。接著將300 nl劑量反應儲備盤點樣至預培育及刺激分析盤中。接著將50 µl預培育緩衝液及100 µl刺激緩衝液添加至盤中，產生30 µM至0.0001 µM之最終分析測試濃度範圍與0.3%之最終DMSO濃度。
將人類ICLN-1633細胞表現塗鋪至384孔、黑色PDL塗佈之微量培養盤上且在用於實驗的前一天維持於TRPC5生長培養基中。TRPC5表現係由在塗鋪時施用1 µg /mL四環素而誘發。自盤中移除培養基且將10 μl含4 μM Fluo-4 AM（與等體積之Pluronic F-127混合）之EBSS添加至細胞中。在室溫下避光培育細胞60-90分鐘。在培育期之後，移除染料且經10 µl EBSS替換。將細胞、預培育及刺激盤裝載至FLIPR-II上且開始分析。FLIPR量測10秒基線且接著添加10 µl 2×化合物（或對照）。再監測螢光變化5分鐘。在5分鐘預培育之後，將20 µl之2× 利魯唑（具有1×化合物或對照）添加至細胞盤中。分析中之最終利魯唑刺激濃度為30 μM。在添加利魯唑之後，再監測螢光變化5分鐘。
如下測定TRPC5鈣反應之化合物調節。在Englerin A之後，監測螢光持續5分鐘時段。獲取最大相對螢光反應（減去1 µM已知最大限度地阻斷TRPC5鈣反應之內部對照化合物之對照反應，下式中之「REF INHIB」）且自FLIPR導出。
化合物效應係使用下式以抑制%形式計算：
Figure 02_image102
其中「RFU」為相對螢光單位。
此等分析之結果顯示於下表2中，其中「A」指示小於或等於50 nM之IC50 ；「B」指示大於50 nM且小於或等於500 nM之IC50 ；「C」指示大於500 nM且小於1 µM之IC50 ；「D」指示1 µM或更大之IC50 ；且「NT」指示化合物未經測試。表 2. 例示性化合物之 TRPC4 及 TRPC5 活性
化合物 TRPC5 TRPC4
100 A A
101 A A
102 A A
103 A A
104 A A
105 A A
106 A B
107 A B
108 B C
109 A B
110 B A
111 B NT
112 A B
113 A B
114 A A
115 B B
116 A A
117 A B
117a D NT
118 B B
119 A A
120 A A
121 A NT
122 A NT
123 B NT
124 A NT
125 A NT
126 A NT
126a B NT
127 B NT
128 A NT
129 A NT
130 A NT
131 A NT
132 B NT
133 B NT
133a C NT
134 A NT
135 A NT
136 A NT
137 A NT
138 B NT
139 B NT
140 B NT
所選化合物之1 H NMR及MS資料將提供於下表中：
化合物 結構 NMR MS
100
Figure 02_image104
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 8.4, 3.0 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.70 - 7.59 (m, 1H), 4.68 (s, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.98 (s, 2H)。 442
101
Figure 02_image106
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.63 (dd, J = 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.51 - 7.40 (m, 2H), 7.36 (td, J = 7.4, 2.2 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 3.80 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.03 (t, J = 5.7 Hz, 2H)。 390
102
Figure 02_image108
 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4)化學位移8.00 (s, 1H), 7.79 - 7.67 (m, 2H), 7.44 (dd, J = 13.1, 7.9 Hz, 2H), 4.51 (s, 2H), 3.87 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.93 (t, J = 5.6 Hz, 2H)。 439
103
Figure 02_image110
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.71 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 54.3 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 3.79 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.03 (t, J = 5.7 Hz, 2H)。 406
104
Figure 02_image112
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.97 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 8.3, 3.0 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 8.9, 5.3 Hz, 1H), 7.42 - 7.24 (m, 1H), 4.67 (s, 2H), 3.80 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.02 (s, 2H)。 407
105
Figure 02_image114
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.51 (ddd, J = 14.3, 10.8, 6.8 Hz, 3H), 7.13 (t, J = 53.9 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 3.79 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.03 (t, J = 5.8 Hz, 2H)。 424
106
Figure 02_image116
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.98 (s, 2H)。 442
107
Figure 02_image118
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.79 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.92 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 3.81 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.02 (s, 2H)。 425
108
Figure 02_image120
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.99 (dd, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 8.3, 1.5 Hz, 1H), 7.69 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.81 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.08 - 3.01 (m, 2H)。 415
109
Figure 02_image122
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.01 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 1H), 7.15 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 3.80 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.03 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 2.48 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 1.05 (t, J = 7.5 Hz, 3H)。 402
110
Figure 02_image124
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.98 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.88 - 7.75 (m, 2H), 7.59 - 7.48 (m, 2H), 4.60 (s, 2H), 3.77 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.89 (t, J = 5.6 Hz, 2H)。 454
111
Figure 02_image126
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.01 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 8.07 - 7.99 (m, 2H), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 3.81 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.01 (s, 2H)。 449
112
Figure 02_image128
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.95 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.62 (dd, J = 8.5, 3.1 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 9.0, 5.3 Hz, 1H), 7.31 (td, J = 8.5, 2.9 Hz, 1H), 6.50 (s, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.72 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.80 (s, 2H)。 423
113
Figure 02_image130
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.95 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.58 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.47 - 7.38 (m, 1H), 7.41 - 7.34 (m, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 1H), 6.48 (s, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.73 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.81 (d, J = 5.7 Hz, 2H)。 405
114
Figure 02_image132
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 8.4, 3.0 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 9.0, 5.3 Hz, 1H), 7.35 (td, J = 8.6, 3.0 Hz, 1H), 5.17 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.32 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.00 (d, J = 6.4 Hz, 2H)。 438
115
Figure 02_image134
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.95 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.83 - 7.72 (m, 2H), 7.48 (dd, J = 18.0, 8.2 Hz, 2H), 6.82 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.44 (s, 2H), 3.73 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.33 (m, 4H), 2.78 (s, 2H)。 483
116
Figure 02_image136
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.96 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.79 - 7.71 (m, 1H), 7.66 (td, J = 8.5, 3.0 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 9.2, 4.6 Hz, 1H), 6.54 (s, 2H), 4.41 (s, 2H), 3.72 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 5.7 Hz, 2H)。 457
117*
Figure 02_image138
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.04 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 9.2, 5.3 Hz, 1H), 7.41 - 7.31 (m, 1H), 4.75 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.62 - 4.34 (m, 2H), 3.23 (dd, J = 17.0, 6.0 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 1.20 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。 422
117a*
Figure 02_image140
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.04 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 1H), 7.36 (dd, J = 9.9, 7.3 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.63 - 4.40 (m, 2H), 3.23 (dd, J = 17.3, 5.9 Hz, 1H), 2.81 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 1.20 (d, J = 6.7 Hz, 3H)。 422
118
Figure 02_image142
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.96 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 8.4, 3.0 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 9.0, 5.3 Hz, 1H), 7.35 (td, J = 8.5, 3.0 Hz, 1H), 5.06 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.00 (dd, J = 14.1, 5.7 Hz, 1H), 3.68 (ddd, J = 14.4, 11.1, 4.2 Hz, 1H), 3.06 (ddd, J = 17.1, 11.2, 6.0 Hz, 1H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。 422
119
Figure 02_image144
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.98 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 8.4, 3.0 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 9.1, 5.3 Hz, 1H), 7.35 (td, J = 8.5, 3.0 Hz, 1H), 5.06 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.48 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 3.80 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.99 (s, 2H), 1.22 (t, J = 6.4 Hz, 3H)。 452
120
Figure 02_image146
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.90 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.6, 3.1 Hz, 1H), 7.63 (td, J = 8.6, 3.1 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 9.1, 4.6 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.78 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.95 (t, J = 5.9 Hz, 2H)。 441
121
Figure 02_image148
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.01 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.83 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 - 7.57 (m, 1H), 4.71 (s, 2H), 3.81 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.01 (s, 2H)。 442
122
Figure 02_image150
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.88 - 7.75 (m, 2H), 7.57 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.50 (p, J = 6.2 Hz, 1H), 3.80 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.96 (s, 2H), 1.23 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。 468
123
Figure 02_image152
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.88 - 7.75 (m, 2H), 7.57 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.50 (p, J = 6.4 Hz, 1H), 3.80 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.96 (s, 2H), 1.23 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。 468
124
Figure 02_image154
 1H NMR (DMSO-d6 ) δ: 12.97 (br s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.15-7.24 (m, 2H), 7.05-7.12 (m, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.78 (t, J=5.7 Hz, 2H), 3.00 (s, 2H), 2.06 (s, 3H) 388.3
125
Figure 02_image156
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.81 - 7.74 (m, 1H), 7.74 - 7.60 (m, 2H), 5.19 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.34 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.95 (s, 2H)。 472
126*
Figure 02_image158
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.98 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.63 (dd, J = 9.4, 2.6 Hz, 1H), 7.53 (p, J = 8.7 Hz, 2H), 4.71 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 4.65 (s, 2H), 3.68 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.08 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 2.57 (s, 1H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。 454
126a*
Figure 02_image160
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.97 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.60 - 7.49 (m, 2H), 4.72 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.65 (s, 2H), 3.68 (s, 2H), 3.08 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.58 (s, 1H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。 454
127
Figure 02_image162
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.98 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.81 - 7.74 (m, 1H), 7.55 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.52 (s, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.39 - 3.34(m, 2H), 3.09 (s, 3H), 1.95 (s, 2H)。 484
128
Figure 02_image164
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.01 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.88 - 7.75 (m, 2H), 7.56 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 5.19 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 4.34 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.96 (s, 2H)。 454
129*
Figure 02_image166
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 8.6, 2.9 Hz, 1H), 7.75 - 7.61 (m, 2H), 5.08 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.50 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 3.79 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.94 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 1.23 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。 486
130*
Figure 02_image168
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.00 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 8.6, 3.0 Hz, 1H), 7.67 (ddd, J = 19.1, 8.6, 3.8 Hz, 2H), 5.08 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.50 (p, J = 6.5 Hz, 1H), 3.79 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.95 (s, 2H), 1.23 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。 486
131
Figure 02_image170
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.07(s, 1H), 8.89 - 8.79 (m, 2H), 8.59 (s, 1H), 7.94 - 7.84 (m, 2H), 4.53 (s, 2H), 3.44 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 3.41 (s, 3H), 1.96 (t, J = 5.6 Hz, 2H)。 438
132
Figure 02_image172
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.94 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 4.58 (s, 2H), 3.48 (s, 2H), 2.27 (s, 2H), 1.84 (s, 2H), 1.47 (s, 2H)。 466
133
Figure 02_image174
 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4)化學位移8.34 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.33 (q, J = 7.8 Hz, 4H), 7.25 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 4.58 (d, J = 17.2 Hz, 2H), 3.97 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.47 (s, 1H), 3.39 (s, 3H), 2.94 (s, 1H), 2.81 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 2.74-2.53 (m, 3H), 2.35 (s, 1H), 2.15 (s, 1H), 1.76 (s, 2H), 1.01 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。 480
133a
Figure 02_image176
 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4)化學位移8.34 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.42 - 7.21 (m, 5H), 4.62 (q, J = 17.5 Hz, 3H), 3.97 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.47 (s, 1H), 3.39 (s, 3H), 3.15 (s, 1H), 2.94 (s, 1H), 2.87 - 2.61 (m, 3H), 2.35 (s, 1H), 2.15 (s, 1H), 1.76 (s, 2H), 1.01 (d, J = 7.0 Hz, 3H)。 480
134
Figure 02_image178
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.01 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.58 - 7.49 (m, 3H), 7.27 -7.00 (m, 1H), 5.17 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 4.66 (s, 2H), 4.34 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.79 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.99 (s, 2H)。 454
135*
Figure 02_image180
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.97 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 8.5, 3.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.61 (m, 2H), 5.12 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.57 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.37 (q, J = 5.8 Hz, 1H), 3.79 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.57 (dt, J = 11.2, 5.7 Hz, 1H), 3.46 (dt, J = 10.8, 6.1 Hz, 1H), 2.96 (t, J = 5.6 Hz, 2H)。 502
136
Figure 02_image182
 1H NMR (400 MHz, Methanol-d4)化學位移8.54 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.63 (dd, J = 8.8, 3.0 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 4.57 (m, 3H), 3.88 (s, 2H), 3.51 (m, 3H), 2.05 (s, 1H), 1.98 (s, 1H)。 485
137*
Figure 02_image184
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.94 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 8.5, 3.0 Hz, 1H), 7.75 - 7.61 (m, 2H), 5.12 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.57 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 4.37 (q, J = 5.7 Hz, 1H), 3.79 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.57 (dt, J = 11.2, 5.7 Hz, 1H), 3.52 - 3.43 (m, 1H), 2.96 (t, J = 5.6 Hz, 2H)。 502
138
Figure 02_image186
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移13.05 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 8.5, 3.1 Hz, 1H), 7.70 (td, J = 8.5, 3.2 Hz, 1H), 7.57 (dd, J = 9.1, 4.6 Hz, 1H), 4.65 (s, 2H), 3.66 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.38 (s, 3H), 2.74 (t, J = 5.4 Hz, 2H)。 472
139
Figure 02_image188
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.84 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 8.6, 2.9 Hz, 1H), 7.68 (dtd, J = 18.8, 9.0, 3.8 Hz, 2H), 4.60 (s, 2H), 3.77 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 2.88 (t, J = 5.7 Hz, 2H) 472
140
Figure 02_image190
 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)化學位移12.97 (s, 1H), 8.30 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.83 (dd, J = 8.5, 3.2 Hz, 1H), 7.68 (td, J = 8.6, 3.1 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 9.1, 4.5 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.77 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.98 (t, J = 5.8 Hz, 2H)。 441
*化合物為藉由對應外消旋混合物之HPLC與其相反異構體分離之純異構體。尚未確定絕對取向，且因此指定對掌性中心周圍的特定取向為任意的。實例 26 化合物 100 對大鼠中嘌呤黴素胺基核苷（ PAN) 誘導的腎絲球損傷之作用 目標：
此研究之目標為評估化合物100對由白蛋白尿索引之PAN誘導之腎絲球腎損傷之劑量依賴性作用。 方法：
八十（80）隻稱重為大致125-150 g且大致5-6週齡之雄性史泊格多利大鼠係獲自Charles River。向其餵以標準飲食（Harlan 8640），在標準條件下飼養，且使其在研究開始之前適應至少5天。
在第2天，將大鼠置於體重匹配之治療組中且在研究之其餘時間內置於代謝籠中單獨飼養。
收集24小時基線（第0天）尿液，接著經由有意識的尾靜脈穿刺收集基線血液。接著向大鼠投予媒劑或測試物品。
在第0天投予媒劑或測試劑之後兩（2）小時，大鼠接受投予（5 ml/kg，皮下）媒劑（無菌生理鹽水）或溶解於媒劑中之嘌呤黴素胺基核苷（PAN；刺激劑；75 mg/kg）。 測定間歇性（第4、7及10天）24小時尿液體積且獲得樣品（4個樣品/動物/時間點；0.5毫升/樣品）。另外，在AM劑量後2小時±1分鐘經由有意識的尾靜脈穿刺收集間歇性（第4、7及10天）血液樣品。
緊接在最後一次採血後，大鼠用異氟醚麻醉，收穫組織且將動物處死。獲得終點腎重量及指數。
尿液樣品緊接著快速冷凍於液體N2 中且儲存於-80℃下直至分析。
對在K3 EDTA上收集之全血樣品進行適當處理，以產生用於PK量測之血漿。 結果：
如圖1中所示，用30 mg/kg之化合物100每日一次-（QD）或兩次-（BID）治療使得PAN損傷後的尿白蛋白排泄減少。在化合物100之BID給藥之第7及10天，及在QD給藥之第10天可見顯著減少。陽性對照化合物咪唑立賓（Mizoribine）亦有效地減少白蛋白尿。 結論：
化合物100有效地減少大鼠腎絲球損傷之PAN模型中之白蛋白尿。實例 27 化合物 100 在 FSGS 之 AT1R 轉殖基因大鼠模型中有效
FSGS之AT1R轉殖基因大鼠模型係藉由人類AT1R之足細胞特異性表現表徵。與女性相比，已顯示男性之病理狀況明顯更差。已用工具化合物展示了TRPC5抑制劑在AT1R模型中之功效。參見Zhou等人, 《科學（Science）》 (2017), 第358 (6368)卷, 1332-1336。
在本發明研究中，AT1R轉殖基因大鼠之病理生理學係藉由單側腎切除（UniNX）及微型泵AngII輸注加速。化合物100以3 mg/kg或10 mg/kg每日口服給藥一次，且在治療之第-1、0、1、2及3週測定尿蛋白肌酐比。圖2顯示用化合物100治療之大鼠或用媒劑治療之大鼠在研究過程中之尿蛋白肌酐比。UniNX、AngII incept及化合物100 incept發生於指示之時間點。圖3顯示呈現為基線%之相同資料。
結果顯示化合物100在FSGS之AT1R轉殖基因大鼠模型中有效。 參考文獻併入
本文中列舉之所有美國專利及美國及PCT公開專利申請案均以引用的方式併入本文中。 同等物
前述書面說明書足以使熟習此項技術者能夠實踐本發明。本發明的範疇不限於所提供之實例，因為所述實例打算單一說明本發明之一個態樣，且在功能上等效之其他實施例均在本發明之範疇內。熟習此項技術者將根據前文描述顯而易知除本文所示及所述之修改之外的本發明之各種修改，且所述修改在隨附申請專利範圍之範疇內。本發明之各實施例未必涵蓋本發明之優勢及目標。SEQ ID NO: 1 TRPC4 質體序列
用於實例24中之TRPC4質體之DNA序列包含於下。加底線核酸表示編碼人類TRPC4之彼等。
Figure 02_image192
Figure 02_image194
Figure 02_image196
Figure 02_image198
Figure 02_image200
Figure 02_image202
SEQ ID NO: 2 TRPC5 質體序列
用於實例25中之TRPC5質體之DNA序列包含於下。加底線核酸表示編碼人類TRPC5之彼等。
Figure 02_image204
Figure 02_image206
Figure 02_image208
Figure 02_image210
Figure 02_image212
Figure 02_image214
圖 1 顯示用化合物100或咪唑立賓（mizoribine）治療之PAN受損大鼠中之白蛋白排泄。圖 2 顯示相比於媒劑，在AngII輸注下用化合物100治療之AT1R轉殖基因大鼠中之尿蛋白肌酐比資料。圖 3 顯示表示為基線%之圖2中呈現之尿蛋白肌酐比資料。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 108133609-A0101-11-0002-3

Claims (16)

  1. 一種結構式I之化合物：
    Figure 03_image216
    ，或其醫藥學上可接受之鹽； 其中： 「---」為單鍵或雙鍵 X1 為CH或N； 當「---」為雙鍵時，X2 為CH或N； 當「---」為單鍵時，X2 為N(CH3 )， 當X1 為CH時，X2 為N或N(CH3 )； Y為-O-、-N(CH3 )-、-N(CH2 CH2 OH)-、環丙-1,1-二基或-CH(CH3 )-； Q為2-三氟甲基-4-氟苯基、2-二氟甲基-4-氟苯基、2-三氟甲基苯基、2-甲基-4-氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2-氯苯基、1-(苯甲基)-4-甲基哌啶-3-基、4-三氟甲基吡啶-3-基、2-三氟甲基-6-氟苯基、2-三氟甲基-3-氰基苯基、2-乙基-3-氟苯基、2-氯-3-氰基苯基、2-三氟甲基-5-氟苯基或2-二氟甲基苯基； R3 為氫、-CH2 OH、-CH(OH)-CH2 OH、-NH2 、-CH(OH)CH3 、-OCH3 或-NH-(CH2 )2 OH；且當「---」為雙鍵時，R4 不存在； 且當「---」為單鍵時，R3 及R4 結合在一起形成=O；且 R5 及R6 中之每一者獨立地為氫或-CH3 ， 其條件為若X1 為N，X2 為N，Y為-O-或-N(CH3 )-，且Q為2-三氟甲基苯基，則R3 、R5 及R6 中之至少一者不為氫。
  2. 如請求項1之化合物，其由結構式II表示：
    Figure 03_image218
    ，或其醫藥學上可接受之鹽；其中： R1 為氯、-CF3 、-CHF2 或-CH3 ； R2 為氫或氟；且 R3 為氫、-NH2 、-CH2 OH或CH(OH)-CH2 OH。
  3. 如請求項2之化合物，其中當R1 為-CHF2 時，R2 不為氫。
  4. 如請求項1之化合物，其選自以下化合物中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽：
    Figure 03_image220
    Figure 03_image222
    Figure 03_image224
    Figure 03_image226
    Figure 03_image228
    Figure 03_image230
    Figure 03_image232
    Figure 03_image234
    。
  5. 如請求項4之化合物，其選自以下化合物中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽：
    Figure 03_image236
    Figure 03_image238
    。
  6. 如請求項5之化合物，其選自以下化合物中之任一者，或其醫藥學上可接受之鹽：
    Figure 03_image240
    Figure 03_image242
    Figure 03_image244
    。
  7. 一種醫藥組合物，其包括如請求項1至6中任一項之化合物；及醫藥學上可接受之載劑。
  8. 一種治療選自腎病、肺動脈高血壓、焦慮、抑鬱、癌症、糖尿病性視網膜病變或疼痛之疾病或病況或降低其產生風險之方法，所述方法包括向有需要之個體投予治療有效量之如請求項1至6中任一項之化合物，或如請求項7之醫藥組合物。
  9. 如請求項8之方法，其中：所述疾病或病況為選自以下之腎病：局灶性節段性腎小球硬化（FSGS）、糖尿病性腎病、奧爾波特症候群（Alport syndrome）、高血壓腎病、腎病症候群、類固醇耐藥性腎病症候群、微小病變腎病、膜性腎病、特發性膜性腎病、膜增生性絲球體腎炎（MPGN）、免疫複合體介導之MPGN、補體介導之MPGN、狼瘡性腎炎、感染後絲球體腎炎、薄基底膜病、腎小球膜增生性絲球體腎炎、澱粉樣變性（原發性）、c1q腎病、快速進行性GN、抗GBM病、C3絲球體腎炎、高血壓腎硬化或IgA腎病。
  10. 如請求項9之方法，其中所述腎病為蛋白尿性腎病。
  11. 如請求項9之方法，其中所述腎病為微量白蛋白尿或大量白蛋白尿腎病。
  12. 如請求項8之方法，其中：待治療之所述疾病或病況為肺動脈高血壓。
  13. 如請求項8之方法，其中：待治療之所述疾病或病況為選自神經性疼痛及內臟疼痛之疼痛。
  14. 如請求項8之方法，其中：所述疾病或病況為選自化療耐藥性乳癌、阿德力黴素耐藥性乳癌、化療耐藥性結腸直腸癌、神經管胚細胞瘤及腫瘤血管生成之癌症。
  15. 如請求項8之方法，其中：所述疾病或病況為移植相關FSGS、移植相關腎病症候群、移植相關蛋白尿、膽汁淤積性肝病、多囊性腎病、常染色體顯性多囊性腎病（ADPKD）、肥胖、胰島素抗性、II型糖尿病、前期糖尿病、代謝症候群、非酒精性脂肪肝病（NAFLD）或非酒精性脂肪變性肝炎（NASH）。
  16. 如請求項8至15中任一項之方法，其中所述個體為人類。
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