TW202024606A - 固態檢驗設備及使用方法 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種檢驗設備,其包含一光學目標物,該光學目標物包括一固態主體材料及嵌入於該固態主體材料中的一螢光材料。該固態主體材料具有一預定光子能量HOSTPE
。該螢光材料顯現一選擇接地能階及與該接地能階分開對應於所關注之一螢光發射波長之一第一能隙的一目標物激勵(TE)能階。該螢光材料具有相對於該TE能階之一次低窪(NLL)能階。該NLL能階在該TE能階下方隔開一第二能隙FMEG2
,其中該FMEG2
/HOSTPE
之一比率為三或大於三。
Description
本申請案係關於固態檢驗設備及使用方法。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2017年1月7日申請之美國臨時申請案第62/443,675號的權益,該案之內容以全文引用的方式併入本文中。
光學目標物頻繁地用於光學系統中的校準、對準及量測中。別的就先不提,光學目標物在判定光學系統之準確性及效能時利用。藉助於實例,光學目標物給予系統可量化光學解析度、焦深、光學及機械漂移、失真、基於透鏡之像差、色差及類似者相對於的基礎。
然而,一些預先存在之光學目標物已經歷了某些限制。舉例而言,一些先前存在之光學目標物包括輸送液體之通道,在該液體中提供有螢光染料,其中染料在所要發射光譜中發射螢光。一些先前存在之光學目標物包括入口埠及出口埠以允許通道內之液體染料被更換,此允許不同染料材料在不同時間點用於共同光學目標物中。然而,通道以及入口埠及出口埠之使用增大光學目標物之流體複雜度。此外,特定操作可必須被遵循以便在液體染料材料改變或傳遞通過通道時避免將氣泡引入至光學目標物的通道中。
需要促進光學偵測系統之對準之準確校準及驗證的工具。
定義
包括但不限於以下各者之在本申請案中敍述之所有文獻及類似材料以全文引用之方式明確地併入:專利、專利申請案、文章、書籍、論文及網頁,不管此等文獻及類似材料的格式。在所併入文獻及類似材料中之一或多者(包括(但不限於)定義術語、術語用法、所描述之技術或類似者)與本申請案不同或抵觸的情況下,以本申請案為準。
如本文中所使用,以下術語具有所指示之含義。
術語「固態主體材料」指具有一原子或分子結構之材料,該原子或分子結構以晶格或其他矩陣配置,使得固態主體材料顯現預定光子能量HOSTPE
。固態主體材料可包含能夠摻雜有或以其他方式嵌入有如本文中所描述之螢光材料的任何結晶、半結晶或非晶形材料。舉例而言,陶瓷表示結晶材料之一個實例。玻璃及一些聚合物可表示可摻雜/嵌入有所關注之螢光材料的非結晶或半結晶材料。固態主體材料之選擇(至少部分)由將使用固態主體材料之應用來判定。舉例而言,在許多應用中,固態主體材料選擇係基於其機械性質(例如,硬度)、化學穩定性/惰性、熱性質及/或光學性質。諸如晶格配置、化學結構及光子頻譜之微觀性質在選擇固態主體材料時亦可為相關的。舉例而言,晶格及化學結構依據特定摻雜劑類型及濃度起作用,而光學光子頻譜經由非輻射衰變影響特定轉變的量子效率。
術語「螢光材料」指一或多種化學元素、化學元素之組合或其他材料,該等其他材料添加至固態主體材料且在激勵時單獨或與固態主體材料協作地發螢光。舉例而言,固態主體材料可經灌注或摻雜有一或多種化學元素,諸如過渡金屬離子、稀土鑭系離子及/或錒系離子。螢光材料可被稱為摻雜劑,諸如當過渡金屬離子、稀土鑭系離子及/或錒系離子被添加至固態主體材料時。螢光材料可包含單一元素,或可包含元素之組合(例如,共摻雜劑)。應認識到,雖然術語「螢光材料」指添加至固態主體材料之一或多種元素,但在至少一些實例中,添加至固態主體材料之元素可能並不獨立於固態主體材料發螢光。實情為,一或多種元素在與固態主體材料協作時形成螢光材料。視情況,在替代性實例中,添加至固態主體材料之元素可獨立於固態主體材料發螢光。視情況,螢光材料可表示嵌入於環氧樹脂內之螢光染料。作為另一實例,除將螢光材料摻雜於固態主體材料內之外或替代將螢光材料摻雜於固態主體材料內,螢光薄膜可塗佈於光學目標物頂部上。
術語「量子點」(QD)指具有不同於較大粒子之性質之光學及電子性質的極小半導體粒子(例如,大小為若干奈米)。量子點經設計以回應於施加至其之電力或光發射具有所關注之特定頻率的光。發射頻率可藉由改變點大小、形狀及/或材料來調諧。在一些實例中,奈米級半導體材料緊密地約束電子或電洞。藉助於實例,量子點亦可被稱作人造原子,即強調量子點為具有受到束縛之離散電子狀態的術語,如同天然出現之原子或分子狀況一般。量子點具有依據大小及形狀兩者改變的光電性質。較大QD(例如,5至6 nm之半徑)發射較長波長,從而導致諸如橙色或紅色的發射色彩。較小QD(例如,2至3 nm之半徑)發射較短波長,從而導致類似於藍色及綠色之發射色彩,儘管特定色彩及大小取決於QD之準確組合物而發生變化。
術語「固態本體」包括用以圍封螢光材料之任何非液體、非氣態基質。固態本體之一個實例為一種固態主體材料,其具有摻雜或以其他方式嵌入於固態主體材料內的一或多種螢光材料。固態本體之另一實例包括圍封量子點的非液體、非氣態基質。
如本文中所使用,諸如「頂部」、「底部」、「前部」、「後部」、「第一」、「第二」、「上部」及「下部」之相對或空間術語用作關於參考對象、點或軸線之方向的術語。根據本文中所揭示之實例,相對或空間術語相對於定位成鄰近於檢驗設備時之器具中之物鏡而使用。舉例而言,檢驗設備之接近/最靠近於物鏡之結構、部分及/或表面可被稱作「頂部」、「上部」等。類似地,檢驗設備之在物鏡遠端/距物鏡較遠的結構、部分及/或表面可被稱作「底部」、「下部」等。
根據本文中所揭示之實例,提供一種檢驗設備,其包含一光學目標物,該光學目標物包括一固態主體材料及嵌入於該固態主體材料中之一螢光材料。該固態主體材料具有一預定光子能量HOSTPE
。該螢光材料顯現一選擇接地能階及與該接地能階分開對應於所關注之一螢光發射波長(FEWI)之一第一能隙的一目標物激勵(TE)能階。螢光材料具有相對於該TE能階之一次低窪(NLL)能階。該NLL能階在該TE能階下方隔開一第二能隙FMEG2
,其中該FMEG2
/HOSTPE
之一比率為三或大於三。
視情況,FMEG2
/HOSTPE
之比率等於四、十或介於四與十之間。視情況,固態主體材料包括以下各者中之至少一者:玻璃、非晶形聚合物、結晶材料、半結晶聚合物、金屬玻璃或陶瓷。視情況,螢光材料表示稀土元素或過渡金屬元素中至少一者的離子。視情況,固態主體材料具有低於或等於580 cm-1
的最大光子能量。視情況,所關注之螢光發射波長具有1000 nm或低於1000 nm的中心波長。
視情況,該設備可進一步包含一本體,該本體具有一凹穴以收納光學目標物,其中該本體包括一插入區,該插入區位於頂表面處且包圍該凹穴;及一透明層,其安裝於該插入區中且定位於光學目標物上方。視情況,本體包括至少部分包圍該凹穴之通道,該通道收納黏著劑以接合至光柵層。通道包括圍繞該通道分佈之一連串減壓凹穴。減壓凹穴減輕藉由黏著劑在固化過程期間誘發於光柵層上的應力。視情況,本體可進一步包含形成於透明層或光學目標物中之至少一者之表面上的微結構以形成光柵層。視情況,設備可進一步包含具有凹穴以收納光學目標物的光學目標物保持本體。本體可由鋁形成,該鋁包括具有不大於約20%之反射率的表面。本體可包括位於頂表面處且包圍凹穴的插入區。設備可進一步包含透明光柵層,其安裝於插入區中且可定位於光學目標物上方且由邊緣間隙與光學目標物隔開。如上文所提及,本體可包括凹穴以收納光學目標物。本體可包括位於凹穴下方之擴散井。擴散井可接收穿過光學目標物之激勵光。擴散井可包括具有表面修整之井底部,該表面修整顯現不大於約20.0%的反射率。設備可進一步包含形成於透明層或光學目標物中之至少一者之表面上的抗反射塗層。
視情況,根據替代性實例,檢驗設備可包括在無任何額外支撐本體結構情況下直接接合在彼此上的光學目標物及透明層。微結構可設置於光學目標物與透明層之間的界面處。微結構可表示形成於光學目標物之頂表面上及/或透明層之底表面上的一或多個鉻圖案。視情況,根據替代性實例,檢驗設備可用作直接位於流量槽上而非安裝至器具上的檢驗設備。視情況,透明層可被整個忽略。視情況,光學目標物可在無透明層或諸如本體之任何其他支撐結構情況下用作單獨檢驗設備。
應理解,檢驗設備之任何特徵可以任何所要方式及/或組態組合在一起。
根據本文中之實例,提供一種光學偵測裝置。光學偵測裝置包括光學目標物,該光學目標物包括圍封螢光材料之固態本體。物鏡朝向光學目標物導引激勵光且接收來自光學目標物之螢光發射。驅動器將物鏡移動至接近於光學目標物的關注區。用以儲存程式指令之記憶體亦為光學偵測裝置之部分。處理器執行用於結合器具之光學對準或校準中之至少一者偵測來自光學目標物之螢光發射的程式指令。
視情況,物鏡可將激勵光導引至光學目標物上。處理器可自螢光發射導出參考資訊。處理器可結合器具之光學對準或校準中之至少一者而利用參考資訊。光學目標物可永久地安裝在接近於物鏡之校準位置處。校準位置可與器具內之流量槽通道分離。視情況,光學目標物包括固態主體材料及嵌入於固態主體材料中之螢光材料,該固態主體材料具有預定光子能量HOSTPE
。螢光材料顯現選擇接地能階、目標物激勵(TE)能階及在TE能階下方隔開達能隙FMEG2
的次低窪(NLL)能階,其中FMEG2
/HOSTPE
之比率為三或大於三。
固態本體可表示基板,該基板包含固態主體材料與嵌入於固態主體材料中的螢光材料。固態本體可表示圍封量子點之環氧樹脂或聚合物中之至少一者,該等量子點在由激勵光照射時發射所關注之一或多個預定發射頻帶中的螢光。
在實例中,光學偵測裝置進一步包含形成於光學目標物上之抗反射塗層。
應理解,光學偵測裝置之任何特徵可以任何所要方式組合在一起。此外,應理解,光學偵測裝置及/或檢驗設備之特徵之任何組合可一起使用,及/或來自此等態樣中之任一者或兩者之任何特徵可與本文中所揭示之實例中的任一者組合。
根據本文中所揭示之實例,提供一種方法。該方法對準器具之物鏡與光學目標物,該光學目標物包括圍封螢光材料的實心本體。該方法將激勵光導引於光學目標物上,偵測來自光學目標物之螢光發射作為參考資訊,且結合器具之光學對準或校準中之至少一者而利用參考資訊。
視情況,該方法可進一步包含將激勵光聚焦於焦點,該焦點可係在光學目標物之上表面下方。
對準操作可包含:對準物鏡與光柵區,該光柵區包括位於光學目標物上方之微結構;及聚焦激勵光至微結構處之第一焦點處;及對準物鏡與非光柵區,該非光柵區沒有微結構;及將激勵光聚焦至在光學目標物之上表面下方的第二焦點。視情況,螢光材料可包含一化學元素,該化學元素包含鉺、鈥或鐠中之至少一者的離子,且固態主體材料包含以下各者中之至少一者:矽酸鹽、鍺酸鹽、InF3
或ZBLAN(亦即,重金屬氟化物玻璃,諸如ZrF4
-BaF2
-LaF3
-AlF3
-NaF)。
應理解,方法之任何特徵可以任何所要方式組合在一起。此外,應理解,來自方法及/或光學偵測裝置及/或檢驗設備之特徵之任何組合可一起使用,及/或來自此等態樣中之任一者或全部的任何特徵可與本文中所揭示之實例之特徵中的任一者相組合。
本文中所揭示之實例描述利用裏面具有螢光材料之固態本體之光學目標物。光學目標物取決於正量測之光學性質而可用以以預定精確度及準確性位準諸如以奈米規模或微米規模等校準基於螢光之光學系統的光學件。本文中所揭示之實例中的一或多者給予顯著益處。舉例而言,固態本體目標物系統相較於習知基於液態模具之目標物及流體對應體目標物相對易於製造。固態本體目標物系統顯現相對長之存放期,此係由於零件並不隨時間洩漏或光致降級。又,固態本體目標物系統並不需要自訂內用程序,且因此對於供應商可易於外購。又,固態本體目標物系統賦予在給定光功率下無光降級情況下隨時間係恆定的螢光發射,此提供固態本體目標物系統在處於場中同時可用於器具照明源之電力計量及電力校準的可能。將前述功能性永久地整合至系統測定系統中使得遠端系統監視成為可能以改良器具正常運行時間。
圖1A說明根據本文中所揭示之實例形成的檢驗設備100之立體圖。檢驗設備100包括具有頂表面104及底表面106之本體102,該頂表面及底表面通常平坦於彼此地延伸。本體102可包括在橫向側面108與前端110及後端112之間轉變的修圓隅角。在本實例中,本體102形狀為矩形,儘管可利用替代性形狀。檢驗設備100經塑形並設定尺寸以安裝於執行光學量測及分析的器具內。藉助於實例,器具可為流體學器具,儘管本文中所揭示之實例可與非流體光學器具一起使用。作為實例,本文中所描述之檢驗設備100可結合微型流體學、半導體、生物技術及消費品行業器具利用。舉例而言,檢驗設備100可用於諸如遮罩對準器及步進器之半導體工具的對準、用於機器視覺系統之校準、用於諸如光學相干層析成像及基於螢光之生物成像之應用中的光學平台。作為另一實例,檢驗設備100可結合諸如螢光顯微鏡之標準消費品光學工具的校準而利用。
本文中之實例可結合利用各種螢光方法之下一代定序系統利用。舉例而言,檢驗設備100可結合由Illumina公司(San Diego, CA)給予之MINISEQ®器具、HISEQ®器具、NEXTSEQ®器具及MISEQ®器具及/或結合由其他公司給予之器具利用。根據至少一些實例,檢驗設備100在不需要螢光參考粒子或螢光模具(如習知地使用)情況下使得器具之光學校準成為可能。習知螢光參考粒子及模具提供對少數更頻繁地使用之螢光團(例如,螢光素及藻紅蛋白)的校準。然而,習知螢光參考粒子及染料遭受熱及光穩定性、洩漏及/或機械故障。
根據本文中提供之實例,檢驗設備100可被用作內建式遠端診斷光學目標物。檢驗設備100可永久地安裝於器具內且經定位以使得器具內之偵測器能夠執行光學量測而不必人工地加載任何額外工具。檢驗設備100可藉由器具使用以結合各種活動提供遠端診斷資訊。舉例而言,器具可利用檢驗設備100來執行諸如器具之點散佈函數上之趨勢的資料趨勢分析、雷射對準、光學校準及在器具之使用壽命上的光透射效率。資料可在無使用者干預情況下自動地收集,且經上載至雲端以便執行遠端除錯、執行預測診斷且趨向於越過多個器具。檢驗設備100可用以評估器具之光學系統之各種態樣以及XYZ平台之態樣。舉例而言,若雷射對準發現為偏離,則軟體可自動地致動指標鏡以使雷射對準。
根據一些實例,檢驗設備100可經組裝並與每一器具一起運送,其中器具包括檢驗應用程式之當前軟體版本,該檢驗應用程式控制器具以藉由檢驗設備100進行各種測試。當檢驗設備100經設定尺寸以經裝載並卸載時,檢驗設備100可經組態為經充分設定大小之檢驗設備,該檢驗設備可用於量測光學度量值。經充分設定大小之檢驗設備將與流量槽固持器配合,且用以評估流量槽固持器對準。全大小檢驗設備將延長定序流量槽之全長度以啟用定序進行之模擬。視情況,檢驗設備100大小可經減小,且鄰近於流量槽通路於分級位置處安裝於器具內。當檢驗設備100永久地安裝於器具內(以減小之佔據面積)時,器具可在不需要裝載及卸載檢驗設備100情況下執行檢驗操作。減小之佔據面積之檢驗設備可用以執行光學度量。
光學目標物120包括大體上平坦且平行於彼此定向的頂部目標物表面107及底部目標物表面109。側壁105圍繞光學目標物120延伸。在本實例中,光學目標物120大體上具有長方體形狀,但應認識到,基於特定應用可利用替代形狀。如本文中所解釋,光學目標物120表示固態本體結構,其包括固態主體材料及嵌入於固態主體材料內之螢光材料。固態主體材料可為完全透明的或至少部分透明的。舉例而言,固態主體材料中之透明度可部分基於自光學目標物120發射之螢光發射的所要強度。藉助於實例,固態本體結構或基板之固態主體材料可表示玻璃基板或如本文中所描述之具有所要機械及光學性質的另一固態主體材料。
作為一個實例,固態主體材料可為銦氟化物玻璃。舉例而言,固態主體材料可包括以下各者中之至少一者:玻璃、非晶形聚合物、結晶材料、半結晶聚合物、金屬玻璃、陶瓷及其類似者。以下表1說明可在固態本體結構或基板內利用之固態主體材料的實例。如表1中所說明,固態主體材料可表示重金屬氟化物玻璃(例如,ZBLAN)。ZBLAN玻璃可利用與諸如ZrF4
、BaF2
、LaF3
、AlF3
及NaF之氟化物的各種組合。視情況,固態主體材料可為CaF2
。固態主體材料顯現低的最大光子能階。根據一些實例,固態主體材料可顯現低於或等於預定波數之最大光子能量。作為另一實例,固態主體材料可顯現為約370 cm-1
與約525 cm-1
或介於約370 cm-1
與約525 cm-1
之間的最大光子能量。固態主體材料可由其他材料形成,該等其他材料包括低的最大光子能量且顯現在所關注位置處之可用能帶以獲得對應於關注光學通道之發射頻帶內的螢光。
表1
玻璃成型器 | 最大光子能量(cm-1 ) |
ZrF4 | 580 |
HfF4 | 580 |
GaF3 | 525 |
InF3 | 510 |
CdF2 /CdCl2 | 370 |
螢光材料可為:稀土元素,諸如稀土離子:Tm3+
(455 nm)、Ho3+
(550 nm)、Tb3+
(540 nm)、Eu3+
(611 nm)、Sm3+
(550 nm)、Pr3+
(488、590 nm)、Dy3+
(480 nm與575 nm)或Er3+
(550 nm與660 nm);來自錒系元素之元素:U;過渡金屬離子:Ti3+
、Cr2+/ 3+
等。螢光材料可貫穿固態主體材料以均勻且均質之固定方式分佈,諸如以形成Er-InF3
玻璃。螢光材料在一或多個所關注發射頻道中發射。舉例而言,螢光材料可以短於1000 nm之波長發射。
螢光材料可以各種濃度提供於固態主體材料內,其中螢光材料之濃度部分地基於待回應於預期激勵光強度獲得之所要螢光發射強度而管理。在以上實例中,當主體基板為摻雜有三價鉺離子之銦-氟化物(InF3
)玻璃時,三價鉺離子可以原子分數計以為約0.1%與約10.0%或介於約0.1%與約10.0%之間的摻雜劑濃度提供,例如以約0.5%與約6%或介於約0.5%與約6%之間的摻雜劑濃度提供。作為另一實例,三價鉺離子之摻雜劑濃度範圍以原子分數計可為約1.0%至3.0%+/-0.01%。螢光材料顯現可藉由調整組合物調諧之選擇發射強度。舉例而言,發射強度及/或色彩可藉由以下操作來發生變化:調整螢光材料之濃度,添加次要摻雜劑(例如,共摻雜劑),及/或調整固態主體材料之組合物。舉例而言,第一摻雜劑可表示主要摻雜劑或活化劑離子,而次要摻雜劑可經添加以增大或減低主要摻雜劑的發射強度。次要摻雜劑表示敏化劑離子。組合一種以上摻雜劑可增強螢光強度。藉由共摻雜有額外敏化劑離子,發射強度可藉由敏化劑離子與活化劑離子(例如,Er)之間的能量傳送而增大。舉例而言,當Er3+
用作活化劑離子時,Yb3+
或Tm3+
可用作敏化劑離子。作為其他實例,Yb、Ho及YF3
可被用作敏化劑離子。
視情況,組合一種以上摻雜劑可用以減低一或多個發射頻帶之螢光強度。藉由共摻雜有額外敏化劑離子,發射強度可藉由敏化劑離子與活化劑(例如,Er)之間的能量傳送而降低。舉例而言,Tb/Eu可在Yb2
O3
中予以共摻雜,其中自Tb至Eu之能量傳送引起自紅色至綠色之發射改變。作為另一實例,Tm可共摻雜有Tb或Ho以促成於1.5微米(µm)發出雷射的連續波(continuous wave;cw)。用於共摻雜之組合物之實例描述於以下各者中:公開於OSA TOPS第26卷高階固態雷射中之「Properties of the 1.5 and 2.3 um laser emissions of various Tm doped fluoride crystals codoped with Tb or Yb ions」;公開於Journal of Luminescence 115(2005)第131至137頁中之「Ultraviolet and visible emissions of Er3+
in KY(WO4
)2
single crystals co-doped with Yb3+
ions」;公開於Nanoscale Res Lett.(2012)中的「Color-tunable properties of Eu3+
- and Dy3+
-codoped Y2
O3
phosphor particles」;及由Tien-Pei Lee編輯的書籍「Current Trends in Optical Amplifiers and Their Applications」,其完整主題以全文引用方式併入。
固態主體材料及摻雜劑可經選擇,使得組合物顯現所要能階比率。舉例而言,組合物可顯現HOSTPE
/FMET
之能階比率,其中HOSTPE
表示固態主體材料之最大光子能量,且FMET
表示目標物發射能階與螢光材料之最近相鄰能階之間的能量轉變。
根據本文中所揭示之實例,固態主體材料及螢光材料顯現FMEG2
/HOSTPE
>=(≥)4之能階比率,其中HOSTPE
表示固態主體材料之光子能量,且FMEG2
表示目標物激勵能階與螢光材料之次低窪(NLL)能階之間的能量轉變。藉助於實例,表2在下文予以提供以展示各種固態主體材料情況下之實例螢光材料能隙FMEG2
的關係。舉例而言,螢光材料可表示TE能階為4
F9/2
能階且NLL能階為4
I9/2
能階的三價鉺離子(Er3+
)元素。4
F9/2
能階與4
I9/2
能階之間的能隙為2900 cm-1
的波數。在表2中,實例固態主體材料包括矽酸鹽、鍺酸鹽及ZBLAN,其分別具有1100 cm-1
、900 cm-1
及500 cm-1
的最大光子能量。三價鉺離子(Er3+
)與固態主體材料即矽酸鹽、鍺酸鹽及ZBLAN之能階比率(FMEG2
/HOSTPE
)分別為3、4及6,而量子效率分別為約0.22%、14%及90%。「量子效率」(Q.E.)為所發射螢光光子之數目與入射激勵光光子之數目的比率。如在表2中顯而易見的是,對於特定螢光材料Er3+
而言,ZBLAN相較於矽酸鹽及鍺酸鹽顯現高的量子效率程度。視情況,當不同螢光材料用作摻雜劑時,矽酸鹽及鍺酸鹽相較於表2中所說明被給予較高量子效率。對於摻雜有Er3+
之InF3
玻璃,能階比率為6,從而對應於約90%的量子效率。認識到,其他螢光材料在所列出之固態主體材料情況下將顯現不同量子效率。
表2
主體材料 | 最大光子能量 | 針對Er3+ 之能階比率(FMEG2 /HOSTPE ) | 量子效率 |
矽酸鹽 | 1100 cm-1 | 3 | 0.22% |
鍺酸鹽 | 900 cm-1 | 4 | 14% |
ZBLAN | 580 cm-1 | 5 | 85% |
InF3 | 500 cm-1 | 6 | 90% |
繼續參看圖1A,本體102可包含鋁或具有類似機械或光學性質之另一材料。本體102可經由研磨製程或向本文中所論述之各種凸耳、壁、井等給予所要容許度的另一製造製程來形成。本體102包括越過頂表面104提供之插入區118。中心凹穴114及通道116設置於插入區118之內部區域內。中心凹穴114經組態以收納光學目標物120。光學目標物120可以各種方式諸如用黏著劑緊固於凹穴114內。視情況,凹穴114可形成有與光學目標物120之周邊壁牢固嚙合(例如,以壓入配合方式)之周邊特徵。插入區118經組態以收納玻璃層(圖1A中未展示)或覆蓋光學目標物120至凹穴114中之其他透明材料(亦即,透明層)。通道116收納黏著劑,該黏著劑接合至玻璃層及本體102,藉此覆蓋光學目標物120並氣密密封該光學目標物免受外部環境影響。根據至少一些實例,玻璃層可具有形成於其上之微結構,藉此界定光柵層(例如,圖2A中之122)。視情況,玻璃層可被整個忽略,且光學目標物120可自本體102之頂表面104暴露。
在圖1A之實例中,中心凹穴114為狹長的且經定位以沿著本體102之長度在縱向方向上延伸。通道116沿著凹穴114之對置側形成。通道116包括其通道之底部中自通道116之底部延伸至本體102之底表面106的一或多個入口/出口埠117。入口/出口埠117可用以在頂部玻璃已插入至插入區118中之後將黏著劑注入至通道116中。
視情況,光學目標物120可用作單獨檢驗設備,該檢驗設備上面不形成或近接於其不提供微結構或其他圖案。舉例而言,光學目標物120可在無任何其他支撐結構情況下簡單地直接安裝於流量槽上及/或器具內。
圖1B說明根據替代性實例形成之本體202的俯視平面圖。本體202包括頂表面204,該頂表面包括形成於其中之插入區218。插入區218為淺的且向下延伸至本體202中達一深度,其中該深度通常對應於待收納於插入區218中之玻璃層(例如,光柵層)之厚度。在圖1B之實例中,插入區218通常為正方形或矩形,儘管可利用替代性形狀。另外,在圖1B之實例中,插入區218具有對應於玻璃層之厚度的通常均勻/共同的深度。然而,插入區218可在其不同區中具有變化之深度,諸如當需要利用具有數個部分之玻璃層時,該等部分具有不同厚度及/或分離段以形成玻璃層。
本體202亦包括通常在插入區218內定中心之凹穴214。凹穴214經塑形並設定尺寸以收納光學目標物120。凹穴214在插入區218之深度下方延伸達預定深度。通道216設置於插入區218內且經定位以大體上包圍凹穴214。通道216大體對應於圖1A中之通道116,除了通道216為連續的以包圍凹穴214之外。通道216包括表示孔之入口/出口埠217,該等孔延伸穿過本體202至該本體之底表面。入口/出口埠217可用以在插入情況下接入玻璃層之內部且將黏著劑插入至通道216中。
在一實例中,通道216亦包括圍繞通道216分佈之一系列減壓凹穴221。如下文更詳細地揭示,減壓凹穴221減輕藉由添加至通道216中之黏著劑聚矽氧誘發於玻璃層上的應力。更具體而言,當聚矽氧經由入口/出口埠217引入至通道216中時,聚矽氧至少部分在凹穴221上方橋接,藉此在每一凹穴221中捕獲小量空氣。隨著聚矽氧固化,聚矽氧收縮,藉此引入拉動/收縮力於光柵層及通道216的周圍壁上。凹穴221中捕獲之空氣形成用於聚矽氧之第一釋放區,藉此減小由聚矽氧施加於光柵層上之拉力。
凹穴214及通道216藉由內部凸耳215分離,該凸耳在圖1B之實例中亦為矩形。認識到,說明於圖1B中之正方形或矩形幾何形狀中的任一者可經修改為類似於大量替代性形狀。通道216在其外部周邊上由外部凸耳219包圍。內部凸耳215及外部凸耳219形成收納玻璃層的擱板。
當組裝時,光學目標物120插入至凹穴214中且可用黏著劑、藉由凹穴214之壁與光學目標物120之側面之間的摩擦干涉及類似者來保持於該凹穴中。一旦光學目標物120插入至凹穴214中,玻璃層就插入至插入區218,直至停置於內部凸耳215及外部凸耳219上。根據本文中揭示之一些實例,插入區218收納充當光柵層(例如,參見圖2A中之122)的透明層(例如,由玻璃形成且因此亦被稱作玻璃層)。光柵層密封至插入區218中以在組裝完成之後防止污染物進入凹穴214中。舉例而言,終端使用者可用清潔劑(例如,乙醇)定期擦拭檢驗設備以清潔檢驗設備。本文中之實例利用注入至通道216中以將光柵層附接至本體202的抗酒精黏著劑,其中黏著劑對於乙醇暴露將保持良好。舉例而言,黏著劑可為在乙醇中高度穩定之聚矽氧,而UV固化黏著劑傾向於在乙醇中分解。聚矽氧被注入,直至通道116被填充。然而,聚矽氧在固化時可顯現「除氣」。
本文中揭示之實例隔離凹穴214及光學目標物120與除氣製程之副產物。如此做,一旦光柵層插入至插入區218中且停置於內部凸耳215及外部凸耳219上,除氣障壁213便圍繞光柵層與內部凸耳215之間的界面形成。除氣障壁211亦圍繞光柵層與外部凸耳219之間的界面形成。除氣障壁213、215可藉由以下操作而形成:穿過入口/出口埠217中之一或多者注入工具及將預定體積之障壁黏著劑沿著光柵層與內部凸耳215之間的界面之邊緣且沿著光柵層與外部凸耳219之間的界面之邊緣而沈積。舉例而言,障壁黏著劑可為低黏度(例如,300 cp)UV固化黏著劑。在等待預定時段之後,障壁黏著劑越過內部凸耳215及外部凸耳219芯吸以在內部凸耳215、外部凸耳219與光柵層之間形成薄的接合層(藉由短劃線211、213指明為除氣障壁)。光柵層將處於無應力狀態,且下拉至內部凸耳215及外部凸耳219。UV固化在此狀態下維持光柵層為平坦的且將適當地定位而不使用可使光柵層彎曲的任何夾持夾具。另外,內部凸耳215處之除氣障壁213防止任何聚矽氧除氣進入至凹穴214中。
圖1C說明根據替代性實例形成之檢驗設備250的立體圖。檢驗設備250包括本體252、光學目標物270及光柵層272。本體252包括通常定中心於插入區268內之凹穴264。凹穴264經塑形並設定尺寸以收納光學目標物270。通道266設置於插入區268內並經定位以大體包圍凹穴264。通道266包括入口/出口埠267。插入區268包括以共面方式配置並經定位以收納光柵層272之下表面的內部凸耳265及外部凸耳269。本體252以維持光柵層272中所要量之平坦度的方式形成。維持光柵層272中所要量之平坦度為有益的,此係由於一些光學校準利用鉻圖案之平坦區。在聚矽氧固化時,聚矽氧可收縮,此可將光柵層272下拉至通道266中,除非以其他方式校正。若光柵層272被拉動至通道266中,則光柵層272之中心部分可在光學目標物270上方之區中向上彎曲。又,在黏著劑固化期間將頂部玻璃(光柵層272)夾持於適當位置可以黏著劑在此狀態下固化時變得永久之方式使光柵層272彎曲。
根據本文中之實例,光柵層272之頂表面以所要量之平坦度/平面幾何形狀維持。如此做,通道266具備圍繞通道266分佈之一系列減壓凹穴271。減壓凹穴271減輕在固化製程期間藉由添加至通道266中之黏著劑聚矽氧誘發於光柵層272上的應力。本文中揭示之一些實例防止聚矽氧在固化時將光柵層272下拉至通道266中。UV固化黏著劑(圖1B中之障壁211、213)將光柵層272向下固持於通道266的兩側上,藉此避免柵格層272之彎曲(或至少大體上減小彎曲)。使光柵層272彎曲之可能藉由使通道266之部分不受約束而進一步減小,使得聚矽氧可收縮而不拉動柵格層272。此可藉由在通道266之底部中製造週期性凹穴271(孔)來達成。當聚矽氧流動通過通道266時,空氣在凹穴271內部被捕獲。當聚矽氧固化時,氣泡隨著聚矽氧收縮而自由地向上膨脹至通道266中。相較於將光柵層272下拉至通道266中,容易得多的是將空氣氣泡抽吸至通道266中,因此光柵層272在固化期間並不變形。
視情況,本體252可包括一或多個安裝特徵251,諸如設置於本體之對置末端處的開口。安裝特徵251收納器具上之配合組件以將檢驗設備250定位於所要位置處。在圖1C之實例中,安裝特徵251表示收納對應銷之孔。可利用替代性或額外安裝特徵。
將描述用於組裝檢驗設備250之通用程序。光學目標物270插入至凹穴264中。在圖1C之實例中,凹穴264之對置末端包括促進黏著劑之引入的凹穴263。舉例而言,加載有黏著劑之工具(例如,注射器)可在光學目標物270之末端處插入至凹穴263中。黏著劑自工具引入且被允許沿著光學目標物270之底表面至少部分越過底部凹穴凸耳259經由毛細管力芯吸/流動。毛細管力與凹穴凸耳259之底部相抵地拉動光學目標物270,藉此將光學目標物270維持於凹穴264內之所要深度。視情況,當黏著劑表示UV固化黏著劑時,UV光可在此時被引入以固化黏著劑。
光柵層272被裝載至插入區268中,其中插入區268之周邊鄰接光柵層272之外部周邊。本體252包括圍繞插入區268之周邊的一或多個凹穴249,使得一旦光柵層272定位於適當位置,凹穴249便圍繞光柵層272之周邊分佈。一旦光柵層272安裝至插入區268中,黏著劑施配工具(例如,加載有注射器之氣動黏著劑施配器)便可用以在圍繞柵格層272之周邊的一或多個點處引入受控量之黏著劑。舉例而言,注射器之尖端可在光柵層272之隅角處插入至凹穴249中。引入預定量之黏著劑。黏著劑經由毛細管力沿著光柵層272與外部凸耳269之間的界面拉動。毛細管力致使黏著劑沿著外部邊緣269芯吸/流動而不在光柵層272接近於光學目標物270之部分上方流動。毛細管力與外部凸耳269相抵地拉動光柵層272,藉此在插入區268內之所要深度處維持光柵層272。視情況,當黏著劑表示UV固化黏著劑時,UV光可在此時被引入以固化黏著劑。
另外或替代地。黏著劑可引入於內部凸耳265上。黏著劑可在光柵層272插入至插入區268中之前或之後被引入至內部凸耳265中。舉例而言,一或多滴黏著劑在插入光柵層272之前可位於內部凸耳268上。視情況,黏著劑施配工具可用以在插入光柵層272之後將黏著劑引入至內部凸耳265。舉例而言,注射器之尖端可經由入口/出口埠267中之一或多者插入,且注射器可引入預定量之黏著劑。黏著劑經由毛細管力沿著光柵層272與內部凸耳265之間的界面拉動。毛細管力致使黏著劑沿著內部凸耳265芯吸/流動而不在光柵層272接近於光學目標物270之部分上方流動。毛細管力與內部凸耳265相抵地拉動光柵層272,藉此在插入區268內之所要深度處維持光柵層272。視情況,當黏著劑表示UV固化黏著劑時,UV光可在此時被引入以固化黏著劑。
黏著劑(例如,聚矽氧)經由入口/出口埠267中之一或多者而引入至通道266中。舉例而言,通道266之一或多個隅角處之入口/出口埠267可用作用以引入黏著劑之入口,而通道266之一或多個其他隅角處之入口/出口埠267形成用以允許空氣自通道266排出的出口。如上所解釋,隨著黏著劑流動通過通道266且黏著劑在凹穴271上方橋接。凹穴271稍後提供空氣釋放口用於隨著黏著劑固化的收縮。
圖2A說明圖1A之檢驗設備100沿著圖1A中之線2A-2A的側視截面圖,其中安設了光學目標物120。圖2A說明安設於凹穴114中之光學目標物120以及安裝於插入區118中之表示光柵層122的透明層。光柵層122可具有待結合不同類型之對準操作及/或校準測試使用的不同區。舉例而言,如下文結合圖2D所論述,光柵層122可包括一或多個「貼塊」,其表示物鏡(圖2D中之200)經定位以結合各種操作收集資訊的區。藉助於實例,光柵層122可包括一或多個影像品質貼塊、失真貼塊、空白貼塊、基準物及類似者。物鏡相對於各種貼塊定位以結合執行各種測試而收集資訊。光柵層122亦可用以監視激勵空間輪廓之均一性及位置。光柵層122可由具有各種微結構123之空白載體基板(例如,玻璃)形成,該等微結構設置於該空白載體基板上且以一或多個預定圖案塑形。微結構123設置於一或多個貼塊/區域中,物鏡結合對應校準操作及測試而定位於該一或多個貼塊/區域處。各種校準操作及測試之實例下文結合圖10予以描述。舉例而言,微結構123可包含鉻或另一不透光組合物,其中組合物對於激勵光及/或所關注之一或多個螢光發射頻帶顯現所要量之不透明度(例如,部分或完全不透明)。舉例而言,鉻層可經由各種技術沈積於光柵層122之表面上,其中鉻之不同區形成不同圖案(亦被稱作「鉻」或「鉻圖案」)以如本文中所描述結合不同對準及/或校準操作而利用。微結構123可經塑形有各種圖案,諸如條帶、點、銷孔及類似者。視情況,微結構123可經提供作為具有預定圖案之固態層,該預定圖案藉由形成通道、銷孔及類似者的穿過微結構123之開口或間隙表示。微結構123可設置於光柵層122之上表面及/或下表面上,其中上表面及下部表面相對於器具之物鏡指定。舉例而言,上表面表示接近於物鏡之表面,而下表面表示在物鏡遠端之表面。替代地,光柵結構可直接圖案化於固態螢光基板(例如參見圖2E)上以形成單體結構。在此實例中,光柵結構與光學目標物120接觸,其增大激勵照明至光學目標物之耦合且同樣增大光學目標物120之螢光至光柵結構之耦合,使得發射之光強度達成所要位準(例如,經最大化)。視情況,光柵層122可被整個忽略。視情況,光柵層122與光學目標物120之間的間距可經調整以提供球面畸變。
在展示於圖2A中之實例中,微結構123包括藉由中心區119分離之第一光柵區115及第二光柵區117。中心區119沒有微結構123。
如圖2A中所展示,抗反射塗層121可形成於透明層(光柵層122)或光學目標物120中之至少一者的表面上。抗反射塗層121可形成於面向光柵層122與光學目標物120之間的邊緣間隙的任何表面上。在一個實例中,抗反射塗層121定位於光學目標物120之表面上。在另一實例中,抗反射塗層121定位於光柵層122之表面上,包括微結構123上。在又一實例中,抗反射塗層121定位於光學目標物120之表面上且光柵層122之表面上,包括微結構123上。
為了形成抗反射塗層121之一個實例,抗反射材料可塗覆至光學目標物120之表面,該表面在光學目標物120定位於凹穴114中時面向邊緣間隙124。為了形成抗反射塗層121之另一實例,微結構123可形成於透明層(亦即,光柵層122)之表面上,且接著可將抗反射材料塗覆至表面。
抗反射塗層121可經包括以減小或消除可在邊緣間隙124中與自光學目標物120之表面與光柵層122之間反射的光發生光學干涉。因此,光學干涉圖案或條紋可自在使用本文中所揭示之設備及裝置時獲得的影像中被減小或消除。
雖然抗反射塗層121展示為單一層,但應理解,可使用單一層或可使用多個層來達成所要抗反射效應。舉例而言,多個層可經堆疊以便在所關注發射頻帶/波長下達成最小反射或無反射。舉例而言,多層抗反射塗層121可在範圍為約520 nm至約700 nm之波長下顯現自0%反射率至1%反射率,且在範圍為約500 nm至約520 nm之波長下顯現自0%反射率至約5%反射率,且亦可在範圍為約700 nm至約1000 nm之波長下顯現自0%反射率至約9%反射率。因此,抗反射塗層121之抗反射性質對於不同波長可能並不相同,且可取決於正使用設備或裝置所在之應用而發生變化。
可用以形成抗反射塗層121之合適抗反射材料的實例包括任何透明材料,該等透明材料具有等於置放材料所在之基板(例如,光學目標物120或光柵層122)之折射率的平方根之折射率。抗反射材料之一些實例包括氟化鎂(MgF2
)、氟聚合物、介孔二氧化矽奈米離子,二氧化矽與較高折射率材料之交替層或在正使用之所要發射頻帶/波長內顯現所要抗反射性質的其他抗反射材料。
在本實例中,插入區118形成有插入凸耳126及插入壁127,該插入凸耳及插入壁形成於本體102中。插入凸耳126在本體102之頂表面104下方隔開預定距離,且向內延伸預定距離。插入凸耳126界定插入區118之深度,其中深度對應於光柵層122之厚度。舉例而言,插入凸耳126可向內延伸達足以支撐光柵層122之距離。作為一個實例,黏著劑可沿著插入凸耳126施加以保持光柵層122於所要位置。插入凸耳126可具有經部分判定以允許黏著劑越過插入凸耳126散佈而不溢出至凹穴114中的長度。凸耳壁127經塑形並設定尺寸以圍繞插入區118之周邊延伸。插入區118經形成從而與凹穴114為連續的。
凹穴114藉由凹穴凸耳128及凹穴壁129接界並界定。凹穴凸耳128在插入凸耳126下方隔開預定距離,且向內延伸預定距離。舉例而言,凹穴凸耳128可向內延伸達足以支撐光學目標物120之距離。作為一個實例,黏著劑可沿著凹穴凸耳128塗覆以將光學目標物120保持於所要位置。凹穴凸耳128可向內延伸達一長度,該長度經部分判定以允許黏著劑越過凹穴凸耳128散佈而不溢出至擴散井130中。凹穴114在本體102內向內隔開,使得凹穴114在本體102中定中心以防止黏著劑在光學目標物120之中心區119下方。
凹穴壁129經塑形並設定尺寸以對應於光學目標物120之形狀。凹穴壁129具有自凹穴凸耳128延伸至插入凸耳126中之高度。凹穴壁129之高度129A為大於光學目標物120之高度120A的預定距離,使得當光學目標物120經插入並緊緊地抵靠凹穴凸耳128時,光學目標物120之頂表面位於插入凸耳126之平面下方。光學目標物120之頂表面位於插入凸耳126之平面下方達邊緣間隙124的厚度。邊緣間隙124對應於光學目標物120之頂表面(或光學目標物上之抗反射塗層121)與光柵層122(或光柵層上之抗反射塗層121)之底表面之間的距離。邊緣間隙124足夠大以避免干涉條紋。干涉條紋在光柵層122及光學目標物120在一或多個點處直接接觸時發生。邊緣間隙124足夠大以避免光學目標物120與光柵層122之間的直接接觸。邊緣間隙124足夠小以避免在光在光柵層122與光學目標物120之間通過時引入不利光學性質。舉例而言,若邊緣間隙124製造得不適當地大,則過多量的光可在穿過邊緣間隙124同時失去。在光在光柵層122與光學目標物120之間通過時,邊緣間隙124避免光在邊緣間隙124內的不當損失。舉例而言,邊緣間隙124可具有為約10 µm與約100 µm或介於約10 µm與約100 µm之間的厚度,且在一實例中具有約30 µm(+/- 20 µm)的厚度。視情況,邊緣間隙124可具有不同厚度,限制條件為光損耗量保持在預定光損耗限值內(例如,小於或等於入射光強度之約20%)。視情況,光柵層122及光學目標物120可經歷受控之最小量之接觸,其可引入並不不適當地影響光學目標物120之使用的小的干涉條紋。如上文所提及,干涉條紋可藉由在光學目標物120及光柵層122中之一或或兩者上包括抗反射塗層121而進一步減小或消除。
視情況,折射率匹配流體或折射率匹配環氧樹脂可經提供以填充邊緣間隙124以減小隨時間在光柵層122與光學目標物120之間移動的可能。至少某些折射率匹配環氧樹脂可隨時間經歷色彩的輕微改變(例如,變色),其在至少某些應用中可為非所要的。又,存在折射率匹配流體可隨時間自邊緣間隙124洩漏的可能。因此,存在如下可能:至少某些折射率匹配流體及/或環氧樹脂可致使螢光發射之強度隨時間改變。舉例而言,隨著時間過去,匹配流體或環氧樹脂可稍微減輕撞擊於光學目標物120上之激勵光強度及/或越過邊緣間隙124之螢光發射的強度。因此,在至少某些實例中,利用邊緣間隙124內之空氣可表示用於維持自檢驗設備100發射之螢光之恆定強度的至少一個態樣。另外,添加折射率匹配流體或環氧樹脂可引入額外步驟/複雜度至在邊緣間隙124填充有空氣時不以其他方式存在的製造製程。
凹穴114與擴散井130結合,該擴散井位於凹穴114下方(在物鏡200遠端,展示於圖2B中)且在插入於凹穴114中時位於光學目標物120下方。擴散井130位於凹穴114下方且在光學目標物120內定中心。擴散井130經組態以接收穿過光學目標物120之光。光隨著光橫越擴散井130漸進地變得散焦或擴散,直至接觸井基座132。當光嚙合井基座132時,光已擴散至足以避免井基座132之光致漂白的所要程度。
凹穴114具有一高度,該高度經設定尺寸以提供光之焦點(在光學目標物120內)與本體120之底部部分之間的所要距離(例如,最大距離)。擴散井130包括井底部132,該井底部可具備基於顏料之黑色修飾面層或塗層以促進光致漂白之避免且管理反射率在所要位準內(例如,小於或等於約6%)。舉例而言,基於顏料之黑色修飾面層可表示使用諸如由紐約錫拉庫紮Anoplate公司給予之ANOBLACK™EC之無機金屬鹽的電解塗黑粉料。根據本文中所揭示之實例,利用顏料且非染料提供黑色修飾面層,此係由於黑色染料具有大分子(相對於顏料之分子大小),大分子對於在暴露至激勵光情況下隨時間分解更敏感。根據至少一些實例,用以形成黑色修飾面層之顏料由較小分子形成,該等較小分子對於激勵光較不敏感且不隨時間分解。作為一個實例,顏料可為富含磷之黑色氧化鎳,其形成黑色修飾面層,具有相對小的分子大小,該等分子大小對於藉由激勵光進行分解並不敏感且因此維持相對恆定之反射率。又,顏料可經選擇以在塗層中給予低螢光,此係因為塗層中之低的初始螢光將意謂塗層螢光將不隨時間下降太多。
視情況,本體102之表面(例如,頂表面104及/或底表面106)、橫向側面108及/或前端110及後端112之各種其他部分可覆蓋有修飾面層或塗層。
圖2B說明根據本文中之實例的光學目標物120與定位於第一量測位置處之物鏡200的模型之側視圖。圖2C說明根據本文中之實例的光學目標物120與定位於第二量測位置處之物鏡200之模型的側視圖。圖2B及圖2C說明相對於檢驗設備100分別定位於第一量測位置及第二量測位置的物鏡200。圖2B及圖2C之模型說明本體102、光學目標物120、光柵層122及擴散井130外加其他結構,儘管為了簡化說明,邊緣間隙124及圖2A之其他特徵並未詳細地說明。
在圖2B中,檢驗設備200諸如結合執行激勵量測操作接近於光柵層122之中心區119定位。當物鏡200定位於中心區119內時,激勵光202避免光柵區115、117中之微結構123。物鏡200將激勵光202導向至檢驗設備100中,其中激勵光202基於正執行之特定量測而聚焦至不同焦點。舉例而言,結合框架量測操作(對應於圖2B),物鏡200將激勵光202聚焦至在光學目標物120之上表面107下方(例如,50 µm)的焦點204。物鏡200管理角形孔隙208以在焦點204處獲得所要聚焦程度並獲得所要擴散度/在光學目標物120內且其後之較大深度處散焦。物鏡200接收在中心區119內發射自光學目標物120之上表面107的螢光發射。
在操作期間,基於非光柵之量測(例如,光學強度量測)可藉由將物鏡200定位於區119上方來獲得。舉例而言,基於非光柵之量測可結合相對於偵測攝影機之視野使激勵光照明之位置成像來執行。焦點204位於上表面107下方以便自焦平面溢出刮擦、灰塵、指紋及類似者,諸如光學目標物120之表面中的殘渣、刮擦及瑕疵,使得此等潛在干擾效應對量測無影響或具有相對小的影響。其他操作結合可利用自區119獲得之影像的圖10來論述。
激勵光自物鏡200發射,且行進通過光柵層122且至光學目標物120中而不穿過微結構123。回應地,光學目標物120產生來自光學目標物120內之螢光發射,該等螢光發射經由區119傳回且衝擊物鏡200,其中螢光發射經由內部光學件重新導向至一或多個偵測器。物鏡200將激勵光聚焦於位於光學目標物120之表面下方一預定距離的焦點處。舉例而言,焦點204可在光學目標物120之表面107下方相距約20 µm至約100 µm地定位。作為另一實例,焦點204可定位於光學目標物120之表面107下方約50 µm處。激勵光在焦點204下方擴散於光學目標物120之下部部分內以引起越過光學目標物120內之相對大區域的螢光發射,藉此給予相對均一之掃描。至少一些實例藉由將焦點204定位於光學目標物120之表面107下方且管理角形孔隙208而消除或大體上減小光學目標物120及/或光柵層122之表面107上的刮擦、殘渣、指紋及類似者的負面效應。
在圖2C中,檢驗設備200諸如結合執行光柵量測操作接近於光柵區115、117中的一者定位。當物鏡200接近於光柵區115、117中之一者定位時,激勵光202撞擊微結構123,從而穿過其之間的間隙或孔隙。物鏡200將激勵光202聚焦於對應於光柵層122之底表面的焦點206。物鏡200管理角形孔隙210以在焦點206處獲得所要聚焦度且獲得所要擴散度/在光學目標物120內且其後在較大深度處散焦。焦點206亦對應於微結構123之位置。物鏡200接收在對應光柵區115、117內自光學目標物120發射之螢光發射。根據至少一些實例,發射之全部或一部分可來自光學目標物120之頂部容積,而無發射或發射之較小部分來自光學目標物120之剩餘容積。
在操作期間,基於光柵之量測藉由將物鏡200定位於第一光柵區115及第二光柵區117中之一者或兩者上方來獲得。激勵光發射自物鏡200,行進通過光柵區115、117且行進至光學目標物120中。激勵光在光學目標物120內之較大深度處以藉由角形孔隙210判定之速率超出焦點206擴散或散焦。回應於激勵光,光學目標物120之對應區產生螢光發射,其自上表面107發射出且撞擊光柵層122之下表面(及微結構123)。螢光發射在光柵層122上之微結構123之間通過,且向上通過直至撞擊物鏡200。螢光發射經由內部光學件被重新導向至一或多個偵測器並因此予以處理。在激勵光通過光學目標物120之意義上,激勵光在接觸井底部132之前在穿過擴散井130時顯現所要散焦度。接觸井底部132之激勵光的強度低於預定臨限值且因此避免井底部132之光學性質隨著時間改變的可能。
隨著激勵光通過超出微結構132,雷射光發散至較大區域中,其使得光學目標物120之相對大部分在發射螢光時發光。因此,器具內之攝像機能夠自可橫向於焦點206之任一側定位的微結構132之數個部分收集鉻圖案量測值,藉此給予針對鉻圖案量測值之改良的照明均一性。
物鏡200可具備大型數值孔徑,使得物鏡200移動遠離光柵層122之表面愈遠,激勵源離焦程度變得更大。激勵雷射隨著激勵光移動遠離焦點206而發散。激勵光發散/聚焦所用之速率部分取決於物鏡200之數值孔徑。根據至少一些實例,激勵光大體上由激勵光離開光學目標物120之底表面的時間散焦。激勵光隨著激勵光通過擴散井130而繼續進一步發散(變得更加不集中)。藉由激勵光撞擊井底部132的時間,激勵光經散焦/發散達所要程度以限制撞擊井底部132之任何點的能量強度至低於所要強度臨限值。
根據本文中之實例,物鏡200及檢驗設備100藉由在較大區域(X方向上2.3mm且Y方向上0.53 mm)上散佈激勵雷射線而避免本體102的不當光降級(例如,使光致漂白最小化)。此外,一些實例藉由管理激勵光之焦點而部分避免(例如,最小化)本體102上之結構的不當自動螢光,使得激勵光在激勵光撞擊本體102之表面時被散焦達所要量(在低於Er-InF3
信號之1.5%下量測)。
此外,擴散井130及焦點206與井底部132之間的距離減小自動螢光之可能。自動螢光回應於接收到激勵光可發源於井底部132。在井底部132發射任何螢光能量的意義上,此螢光能量變成大體上分散的,同時行進通過擴散井130而不影響來自光學目標物120之所關注特性。
視情況,根據至少一些實例,光學目標物120之長度可相對於光柵區115、117內之微結構123以所要方式設定尺寸。舉例而言,可能需要的是管理物鏡200之位置,使得當對光柵執行量測(對應於圖2C)時,數值孔徑210內之激勵光並不衝擊凹穴壁129。
根據本文中之實例,檢驗設備100給予在大時段上保持大體上恆定的螢光源。舉例而言,檢驗設備100並不顯現螢光強度之顯著損耗,且在至少10000個檢驗操作上保持大體上穩定(其中每一檢驗操作對應於光學目標物之藉由激勵光進行的至少一個照明操作)。作為另一實例,檢驗設備100在至少10000個檢驗操作上可顯現不大於約3%的螢光發射強度改變。更一般而言,檢驗設備100在根據本文中所描述之實例形成時在與檢驗設備100一起利用之對應器具的可用年限上顯現不超過約2%的螢光發射強度減小。
圖2D說明根據實例形成之檢驗設備的俯視平面圖。光柵層(圖2A中之122)及微結構配置於各種貼塊/區域中以結合不同類型之測試使用。圖2D中之標記為281及283之方框內的區(包括方框281及283內識別之任何子區)對應於鉻/微結構設置於光柵層上的區域。應理解,此等區域亦可為具有銷孔之鉻。標記為281或283之區外部的任何區(例如,281或283與周邊之間或者281與283之間的區)表示未定位鉻/微結構的空白區域。應理解,正號內之區域亦可為不定位鉻/微結構之空白區域。
檢驗設備包括結合針對成像設備之自動定中心操作利用之頂部自動定中心基準物280及底部自動定中心基準物282。提供影像品質貼塊284以供影像品質測試使用。失真貼塊286經設置以結合失真測試利用。空白貼塊288經設置以供照明均一性及平場校正操作使用。空白區域290經設置以供雷射線量測使用。水平刀口292及垂直刀口294結合雷射光點位置檢查而設置。空白孔之圖案設置於貼塊296處以結合量測調變傳送功能利用。視情況,可提供額外、較少或替代性貼塊區域。
圖2E說明根據替代性實例形成之檢驗設備300的側向截面圖。檢驗設備300以各種方式類似於圖2A之檢驗設備100,其中下文論述差異。檢驗設備300包括收納光學目標物320於凹穴314中之本體302。凹穴314包括凹穴凸耳328,其將光學目標物320維持於擴散井330上方且在本體302內維持於預定深度。透明層322(例如,由玻璃形成)插入至界定於本體302中之插入區318中。外部凸耳326將透明層322維持於光學目標物320上方的預定距離,其中外部凸耳326與光學目標物320之間有邊緣間隙324。光學目標物320包括形成於其頂表面上之微結構323。微結構323與透明層322分開邊緣間隙324。微結構323將光柵層形成於光學目標物320之表面上,該光學目標物與透明層322分離且與該透明層截然不同。視情況,透明層322可被完全忽略。視情況,透明層322與光學目標物320之間的間距可經調整以提供球面畸變。因此,檢驗設備300藉由將鉻圖案(微結構323)直接印刷於光學目標物320之頂表面上而非透明層322之底部上來進行。
雖然未展示,但展示於圖2E中之實例亦可在透明層322之面向邊緣間隙324的表面上及/或在光學目標物320之表面上且在形成於光學目標物320上之微結構323上包括抗反射塗層121。本文中所揭示之抗反射材料的任何實例可用於此實例中。
透明層322之厚度設定為補償成像系統之球面畸變。若成像系統經設計為具有零球面畸變,則透明層322可被完全忽略且鉻圖案將印刷於光學目標物320之頂部上。若成像系統具有球面畸變(由於其經設計以經由某厚度之玻璃查看),則透明層322將予以使用,即使鉻圖案印刷於光學目標物320上。視情況,邊緣間隙324可被完全忽略,使得光學目標物320直接停置於光學目標物320之頂表面上且抵靠該頂表面。
圖2F說明根據替代性實例形成之檢驗設備350的側向橫截面圖。檢驗設備350並不包括獨立本體(諸如,上文所描述之本體302或本體102)。檢驗設備350包括直接接合於彼此上方的光學目標物356及透明層352。微結構353設置於光學目標物356與透明層352之間的界面處。微結構353可表示形成於光學目標物356之頂表面上及/或透明層352之底表面上的一或多個鉻圖案。藉助於實例,檢驗設備350可用於如下實例中:檢驗設備350直接位於流量槽上而非安裝於器具中。另外或替代地,檢驗設備350亦可安裝於器具內。
視情況,透明層352可被整個忽略。舉例而言,本文中所描述之光學目標物120、320、356中的任一者可用作單獨檢驗設備,其中無額外本體組件或透明層與檢驗設備一起提供。視情況,光學目標物120、320及356可用作單獨檢驗設備,該檢驗設備上面不形成或近接於其不提供微結構或其他圖案。舉例而言,光學目標物120、320及356可在無任何其他支撐結構情況下簡單地直接安裝於流量槽上及/或器具內。
圖3A說明結合根據本文中之實例利用的螢光材料之能階圖。能階圖說明沿著垂直軸之能量(cm-1
)及越過水平軸散佈的替代轉變。說明接地能階302連同較高能階304至309,三價鉺離子之電子在被激勵時可升高至該等較高能階。舉例而言,鉺離子之電子可吸收約18,800 cm-1
之能量,從而使得電子自4
I15/2
接地能階302移動至4
S3/2
目標物激勵(target excitation;TE)能階308。作為另一實例,鉺離子之電子可吸收約15,000 cm-1
之能量,從而使得電子自4
I15/2
接地能階302移動至不同的4
F9/2
TE能階307。鉺離子之電子吸收來自激勵光之能量且接著移動至對應TE能階307、308。一旦離子已移動至對應較高TE能階,則離子接著排出呈光子之形式的所吸收之能量且返回至接地能階302。TE能階與接地能階分開對應於所關注之螢光發射波長(fluorescence emission wavelength of interest;FEWI)之第一能隙FMEG1
。舉例而言,FEWI可為紅色、綠色、藍色或其他發射波長。排出光子接著由物鏡作為螢光發射接收到。螢光發射之色彩取決於光子之對應於第一能隙FMEG1
的能量。當離子自目標物激勵能階307轉變至接地能階302時,對應排出之光子具有約15000 cm-1
之能量,其作為650 nm之所關注之螢光發射波長可偵測到(作為紅色螢光發射可見)。當離子自目標物激勵能階308轉變至接地能階302時,對應排出光子具有約18,800cm-1
之能量,其作為約532 nm之所關注之螢光波長發射可偵測到(作為綠色螢光發射可見)。
圖3A亦說明可藉由三價鉺離子顯現之額外能階轉變。能階304至308中之每一者具有一個對應次低窪能階。根據本文中之實例,固態主體材料及螢光材料部分基於一或多個目標物激勵能階(例如,308)與次低窪能階(例如,307)之間的能隙來選擇。4
F9/2
能階307表示相對於4
S3/2
能階308的次低窪(NLL)能階。4
I9/2
能階306表示相對於4
S3/2
能階307的NLL能階。
電子可經提昇至能階304、305及306,且當返回至接地能階302時排出具有對應量之能量的光子。在自能階304至306之轉變期間排出之光子分別具有1520 nm、975 nm及800 nm的對應波長。此外,電子可在中間較高能階304至308之間轉變。當電子在鄰接或中間較高能階之間轉變時,具有對應量之能量的光子排出,其對應於起始較高能階與結束較高能階之間的差。圖3A說明結合電子在不同較高能階之間轉變時發射之光子可能可見的實例波長。舉例而言,處於能階308之電子可轉變至能階307、306、305及304中之任一者,在此狀況下,經排出之光子將分別具有3230 nm、1670 nm、1210 nm及840 nm之波長。作為另一實例,當處於能階307之電子轉變至另一中間較高能階306至304時,對應排出之光子將分別具有3450nm、1940 nm及1132 nm的波長。排出之光子將以對應於光子波長之色彩發射螢光。
若干但非所有本文中所描述的實例涵蓋結合利用在所關注之預定發射頻帶中之螢光發射之流體學系統使用檢驗設備。藉助於實例,發射頻帶可定中心於對應於綠色螢光發射及/或對應於紅色螢光發射的波長處。當所關注之發射頻帶圍繞對應於紅色或綠色之波長定中心時,關注圖3A之能量圖的對應部分。更具體而言,當綠色發射受到關注時,所要的是在目標物激勵能階308與接地能階302之間轉變。當紅色發射受到關注時,所要的是在目標物激勵能階307與接地能階302之間轉變。在本實例中,圖3A之圖中其他能階組合之間的轉變結合利用所關注之紅色及/或綠色發射頻帶之器具未受到關注。
認識到,前述論述為一個實例,且其他實例預期為係在本發明之範圍內。另外或替代地,其他發射頻帶可受到關注。舉例而言,器具可利用與800 nm及/或975 nm相關聯之發射頻帶。當所關注之發射頻帶具有圍繞約800 nm及/或975 nm定中心之波長時,位準306與302之間且位準305與302之間的能量轉變受到關注。一般而言,高於1000 nm之能帶可典型地並不結合流體學器具受到關注,此係由於結合執行定序發射之螢光通常並不利用高於1000 nm之能帶。因此,第一較高能階304與接地能階302之間的轉變可能並不受到關注,或並非結合流體學器具可用。
根據本文中之實例,來自螢光材料之螢光藉助於雷射或發光二極體(light emitting diode;LED)源藉由至上凸能階(亦被稱作目標物激勵能階)之光學激勵來達成。在光學激勵製程之後,衰變至雜子離子內之次窪能階經由兩個競爭能量傳送製程來發生:藉由光子之對應發射(螢光)進行的輻射衰變,及藉助於至周圍晶格結構之光學光子發射的非輻射衰變。非輻射衰變速率取決於周圍晶格與雜質離子之間的耦合相互作用,從而以所發射光子之數目按指數規律降低。因此,涉及大量發射光子之非輻射製程具有低的發生機率。兩個能階之間的非輻射轉變機率藉由指數衰變函數來適當地描述:Wmp
= Cexp(-αΔE)[n(T)+1]p
,其中C及α為對於固態主體材料特定的常數,ΔE為分離兩個能階的能隙,n(T)為溫度T下的波斯-愛因斯坦佔據數目,且p為橫跨能隙需要之光子的最小數目。一般而言,經由多光子製程之非輻射衰變可藉由選擇具有低的最大光子能量之主體來最小化。舉例而言,為了觀測自Er3+ 4
F9/2
至4
I15/2
之轉變在約660 nm下的可見螢光,有必要的是使4
F9/2
位準至次窪狀態4
I9/2
之間的非輻射衰變最小化。由於4
F9/2
至4
I9/2
位準之間的能量分離為~2900 cm-1
,有利的是選擇具有低於或等於約580 cm-1
之最大光子能量(對應於5或大於5之光子的同時發射)的主體材料。除支持紅色波長區中之發射之外,選擇低光子主體材料亦增強自Er3+4
S3
/2
受激狀態的綠色發射,對於該Er3+4
S3
/2
受激狀態而言,次低窪能階(4
F9/2
)位於約3100 cm-1
下方。
固態主體材料具有預定光子能量HOSTPE
,而螢光材料顯現選擇接地能階及與接地能階分開對應於所關注之螢光發射波長(FEWI)之第一能隙的目標物激勵能階。在圖3A之實例中,FEWI為綠色及/或紅色發射波長。螢光材料具有相對於該TE能階之下一次低窪(NLL)能階。該NLL能階在該TE能階下方以第二能隙FMEG2
隔開,其中該FMEG2
/HOSTPE
之一比率為三或大於三。視情況,FMEG2
/HOSTPE
之比率為四、十或係在四與十之間。
認識到,圖3A表示與可能螢光材料相關聯之能階圖的一個實例,該可能螢光材料可摻雜於固態主體材料內。如本文所論述,替代性螢光材料可用作摻雜劑。作為實例,圖3B說明與三價鐠離子(Pr3+)相關聯之離子能階圖,且圖3C說明與三價鈥離子(Ho3+)相關聯的離子能階圖。圖3B及圖3C中之圖說明接地能階、目標物激勵能階及中間較高能階,以及在對應指明能階之間轉變時與藉由電子發射之光子相關聯的波長。繼續前述實例,能階轉變之受到關注之子集係基於所關注之發射頻帶。
關於Pr3+(圖3B),目標物激勵能階3
P0與接地能階3
H5
之間的轉變將發射具有在515 nm與548 nm之間的波長之光子(其包括532 nm下之所關注之頻帶)。關於Pr3+
,目標物激勵能階3
P0
與中間能階3
F4
之間的轉變將發射具有在597 nm與737 nm之間的波長之光子(其包括660 nm下之所關注頻帶)。因此,Pr3+
可表示待摻雜至固態主體材料中之螢光材料的潛在候選者。在圖3B之實例中,當目標物激勵能階為3
P0
時,次低窪能階為1
D2
。
關於Ho3+
(圖3C),目標物激勵能階3
F4
與接地能階5
I8
之間的轉變將發射具有約544 nm之波長的光子(其接近於532 nm下之所關注之波長頻帶)。目標物激勵能階3
S2
與中間能階5
I7
之間的轉變將發射具有約656 nm之波長的光子(其接近於660 nm下之所關注之頻帶)。因此,Ho3+
可表示待摻雜至固態主體材料中之螢光材料的潛在候選者。在圖3C之實例中,當目標物激勵能階為3
S2
時,次低窪能階為5
F5
。
圖4說明針對不同螢光發射色彩顯現之強度的實例。垂直軸線繪製能量強度,而水平軸線繪製摻雜至固態主體材料中之螢光材料的濃度(以百分數計)。作為參考點,資料點402對應於在激勵液體綠色染料之後量測的強度,而資料點404對應於在激勵液體紅色染料之後量測的強度。當液體綠色染料藉由激勵雷射照明時,液體綠色染料發射綠色能量頻譜中的螢光,其中強度為約1650個計數。當液體紅色染料藉由激勵雷射照明時,液體紅色染料發射紅色能量頻譜中的螢光,其中強度為約1150個計數。
圖4亦說明結合固態光學目標物執行之資料量測,即資料點410至416。資料點410及414對應於在激勵固態光學目標物之後便量測的強度,在該固態光學目標物中,主體銦氟化物玻璃以2.5%的濃度摻雜有三價鉺離子。資料點412、416對應於在激勵固態光學目標物之後便量測的強度,在該固態光學目標物中,主體銦氟化物玻璃以約4%的濃度摻雜有三價鉺離子。如自圖4顯而易見的是,2.5%摻雜之固態光學目標物以約650個計數發射綠色能量頻譜中的螢光,且以約1300個計數發射紅色能量頻譜中的螢光。4.0%摻雜之固態光學目標物以約500計數發射綠色能量頻譜中的螢光,且以約2350計數發射紅色能量頻譜中的螢光。自前述測試資料,三價鉺摻雜劑之濃度可基於所要螢光強度來判定。舉例而言,當需要光學目標物發射在紅色能量頻譜中的螢光時,可需要的是增大三價鉺離子摻雜劑之濃度至3.5%或高於3.5%(例如,4%、4.5%)。當需要光學目標物發射綠色能量頻譜中之螢光時,可需要的是減低三價鉺離子之濃度至介於約1.5%與約2%之間。
另外,自前述測試資料,三價鉺摻雜劑之濃度可在需要光學目標物發射具有相等強度之兩個或多於兩個能量頻譜中(例如,綠色能量頻譜及紅色能量頻譜中)的螢光時予以判定。舉例而言,可能需要的是將三價鉺離子摻雜劑濃度維持於介於約1.25%與約2%之間。作為另一實例,銦氟化物玻璃內之三價鉺離子摻雜劑濃度可介於約1.3%與約1.5%之間。圖5說明藉由以約2%濃度且約5%濃度之三價鉺離子與金屬氟化物玻璃(ZBLAN)摻雜形成之固態主體材料的測試結果。圖5沿著垂直軸線繪製螢光發射之強度且沿著水平軸線繪製發射波長。2%濃度及5%濃度之鉺離子顯現以約550 nm為中心的強度尖峰。2%及5%鉺濃度亦顯現大約660 nm處之次級強度尖峰。
在圖4之實例中,三價鉺離子表示活性螢光材料。視情況,一或多個額外元素可經添加作為共摻雜劑至固態主體材料。共摻雜劑可用以增大或降低活性螢光材料(例如,鉺)的發射強度。
圖6A說明根據替代性實例形成之檢驗設備600的側向截面圖。檢驗設備600包括將光學目標物620固持於凹穴614中之本體602。光柵層622接近於物鏡(圖中未示)地定位於光學目標物620上方。光柵層622包括於光柵層622之底表面上以預定圖案形成的微結構623。
光學目標物620可與光柵層622分開邊緣間隙624。光學目標物620包括通常為平面的且平行於彼此定向的頂部目標物表面607及底部目標物表面609。光學目標物620包含固態本體,該固態本體包括嵌入於其中的多個量子點621。固態本體可藉由環氧樹脂、聚合物及其他材料形成,其可圍封多個離散本體(例如,量子點621)且以固定配置固持離散本體。量子點621貫穿光學目標物620大體上均勻地分佈,使得當藉由激勵光照射時,量子點621發射在所關注之一或多個預定發射頻帶中的螢光。檢驗設備600可以與本文中所描述之任何其他檢驗設備相同的方式而利用。
視情況,量子點621可形成為矽(Si)量子點諸如以使得波長被調諧。
圖6B說明根據替代性實例形成之檢驗設備640之一部分。檢驗設備640包括光柵層662及本體642。光學目標物660固持於本體642內且與光柵層662直接嚙合。光柵層662包括形成於該光柵層之背部表面或底表面上(相對於物鏡)的微結構663。光學目標物660由微結構663包圍並氣密密封。光學目標物660包括貫穿該光學目標物分佈之量子點661。量子點661亦設置於微結構663之間的區665內。藉助於實例,光學目標物660可由環氧樹脂、聚合物或其他組合物形成,其將流動至微結構663之間的間隙665中並填充間隙,且將量子點661之分散式群組氣密地圍封於其中。
圖6C說明根據替代性實例形成之檢驗設備670之一部分。檢驗設備670包括光柵層682及本體672以及固持於本體672內之光學目標物680。光學目標物680直接嚙合光柵層682且填充形成在光柵層682之背部側/底部側上之微結構683之間的間隙685。在圖6C之實例中,量子點681固持於間隙685內且經叢集化以接近於並包圍微結構683而定位。光學目標物680之遠離微結構683的部分大體上沒有量子點681。
在圖6A至圖6C之實例中,量子點621、661、681可經建構以取決於發射頻帶或所關注之發射頻帶以發射定中心於所關注之一或多個波長處的螢光。舉例而言,量子點621、661、681之一部分可經建構以發射處於約532 nm之波長的螢光,而量子點621、661、681之另一部分可經建構以發射處於約660 nm之波長的螢光。視情況,替代前述實例或除前述實例外,量子點621、661、681可經建構以在其他波長下發射。
視情況,螢光材料可經設置作為有機聚合物。視情況,螢光材料可表示嵌入於環氧樹脂內之螢光染料。作為另一實例,除將螢光材料摻雜於固態主體材料內之外或替代將螢光材料摻雜於固態主體材料內,螢光薄膜可塗佈於光學目標物頂部上。
應用
本文中之實例可結合用於生物或化學研究之器具使用,包括大量受控反應之執行。反應可藉由具有例如合適流體學、光學及電子件之自動化系統根據預定協定進行。系統可用以(例如)產生生物或化學產品以供後續使用或分析樣本來偵測樣本的某些性質/特性。當在一些狀況下分析樣本時,包括可識別標記(例如,螢光標記)之化學部分可經遞送至腔室,在該腔室處,樣本經定位且選擇性地鍵接至樣本之另一化學部分。此等化學反應可藉由用輻射激勵標記並自標記偵測光發射來觀測或確認。此等光發射亦可經由其他手段諸如化學發光而設置。
一些已知系統使用諸如流量槽之流體裝置,其包括藉由流量槽之一或多個內部表面界定的流動通道(例如,內部腔室)。反應可沿著內部表面進行。流量槽典型地接近於光學總成而定位,該光學總成包括用於使流動通道內之樣本成像的裝置。光學總成可包括物鏡頭經及/或固態本體成像裝置(例如,電荷耦合裝置(charge-coupled device ;CCD)或互補金屬氧化物半導體(complementary metal-oxide-semiconductor;CMOS))。在一些狀況下,物鏡頭經並未予以使用,且固態本體成像裝置緊鄰流量槽定位從而使流動通道成像。
本文中所描述之檢驗設備之任何實例可與偵測樣本中之用於生物或化學分析之所要反應的各種系統、方法、總成及設備一起使用。舉例而言,在一種合成測序(sequencing-by-synthesis;SBS)技術中,流動通道之一或多個表面具有經由橋PCR形成的核苷酸叢集(例如,純系擴增)的陣列。在產生叢集之後,核酸經「線性化」以提供單鏈DNA(single stranded DNA;sstDNA)。為了完成定序循環,數個反應組份根據預定排程流動至流動通道中。舉例而言,每一定序循環包括使一或多個核苷酸(例如,A、T、G、C)至流動通道中從而使sstDNA延伸達單一鹼基。附接至核苷酸之可逆性終止子可確保僅單一核苷酸按循環藉由sstDNA併入。每一核苷酸具有用以偵測對應核苷酸之獨特螢光標記,其在經激勵時發射一色彩(例如,紅色、綠色、藍色及類似者)。藉由新併入之核苷酸,眾多叢集之影像在四個通道中獲得(亦即,一個通道用於每一螢光標記)。在成像之後,另一反應組份流動至流動通道中以化學地分解螢光標記及來自sstDNA之可逆性終止子。sstDNA接著準備好用於另一循環。因此,數個不同反應組份經提供至流動通道用於每一循環。單一定序作業階段可包括大量循環,諸如100個、300個或更多。檢驗設備可經建構建構而以在分析中由螢光標記利用的色彩發射螢光。檢驗設備可在定序作業階段之前及/或期間用於各種點處。
在一些實例中,所要反應提供藉由光學總成偵測到之光學信號。檢驗設備可用以驗證、核對、校準等光學總成。光學信號可為來自標記之光發射,或可為已由樣本反射或折射之透射光。舉例而言,光學總成可用以執行或促進執行在流量槽中定序sstDNA的定序協定。
根據本文中之實例,檢驗設備可與光學掃描裝置及流體匣一起使用,該流體匣可用以提供樣本及試劑至裝置。流體匣可包括外殼,該外殼保護諸如儲集器、流體連接件、泵、閥及類似者之各種流體組件。流量槽可在其與外殼內之試劑流體連通的位置整合至流體匣中。舉例而言,外殼可具有開口,流量槽之一面經由該開口暴露,使得該流量槽在流體匣置放於匣容器中時與光學掃描裝置以光學方式互動。該裝置包括一或多個微型螢光計。
圖7說明根據實例形成之光學偵測裝置700(亦被稱作偵測器)之方塊圖。偵測器700包括一或多個處理器730,該一或多個處理器執行儲存於記憶體732中之程式指令以執行本文中所描述之操作。處理器730指導一或多個驅動器734在Z方向上移動物鏡701且在XY方向方向上移動偵測器700。偵測器700接近於具有上部層771及下部層773之流量槽770定位,該上部層及該下部層藉由流體填充通道775分離。在所展示之組態中,上部層771為光學透明的,且偵測器700聚焦至上部層771之內部表面772上的區域776。在替代性組態中,偵測器700可聚焦於下部層773之內表面774上。表面772、774中之一或兩者可包括將由偵測器700偵測的陣列特徵。
偵測器700包括物鏡701,該物鏡經組態以將激勵輻射自輻射源702導引至流量槽770且將來自流量槽770之發射導引至偵測器708。在實例佈局中,來自輻射源702之激勵輻射在其路徑上穿過透鏡705,接著穿過光束分光器706且接著穿過物鏡至流量槽770。在所展示之實例中,輻射源702包括兩個發光二極體(LED)703及704,其於不同於彼此之波長產生輻射。來自流量槽770之發射輻射藉由物鏡701捕獲,且經由調節光學件707藉由光束分光器706反射且至偵測器708(例如,CMOS感測器)。光束分光器706用以在正交於激勵輻射之路徑的方向上導引發射輻射。物鏡701之位置可在Z方向上移動以變更微型螢光計之焦點。偵測器700可在Y方向上來回移動以捕獲流量槽770之上部層771之內表面772的若干區域之影像。
圖1A至圖1C、圖2A至圖2F及圖6A至圖6C之檢驗設備可位於流量槽770內之預定義位置處。視情況,檢驗設備可定位於鄰近於物鏡701之範圍內的流量槽770之預定義位置處。物鏡701可結合各種類型之測試在定序作業階段之前、期間及/或之後移動至檢驗設備。
圖8出於證明各種光學組件之功能配置之目的展示實例微型螢光計之分解視圖。展示包括綠色LED(LEDG)及紅色LED(LEDR)的兩個激勵源。來自每一激勵源之激勵光/輻射分別穿過綠色LED集光器透鏡(L6)及紅色LED集光器透鏡(L7)。LED摺疊鏡面(M1)反射綠色激勵輻射至二色性組合器(F5),其將綠色激勵輻射反射穿過激勵濾光片(F2)、接著反射穿過雷射二極體光束分光器(F3)、接著反射穿過激勵場光闌(field stop;FS)、接著反射穿過激勵投影透鏡群組(L2)至二色性激勵/發射(F4),該二色性激勵/發射(F4)將綠色激勵輻射反射穿過靜態物鏡透鏡群組(L3)及平移物鏡群組(L4)至流量槽(FC)之表面。紅色激勵輻射自紅色LED集光器透鏡(L7)傳遞至二色性組合器(F5),其後,紅色激勵符合遵循與綠色激勵輻射相同之路徑至流量槽(FC)的表面。如圖8中所展示,聚焦藉由上下(亦即,沿著Z方向)移動平移物鏡透鏡群組(L4)而致動。來自流量槽(FC)表面之發射經由平移物鏡群組(L4)且接著通過靜止物鏡透鏡群組(L3)傳遞回至二色性激勵/發射(F4),其將發射輻射傳遞至發射投影透鏡群組(L1)直至發射濾光片(F1)且接著至CMOS影像感測器(S1)。雷射二極體(laser diode;LD)亦經由雷射二極體耦接透鏡群組(L5)導向至雷射二極體光束分光器(F3),其反射雷射二極體輻射通過激勵場光闌(FS)、激勵投影透鏡群組(L2)、二色性激勵/發射(F4)、靜止物鏡群組(L3)及平移物鏡群組(L4)至流量槽(FC)。
圖1A至圖1C、圖2A至圖2F及圖6A至圖6C之檢驗設備可位於流量槽(FC)內之預定義位置處。視情況,檢驗設備可在微型螢光計之範圍內鄰近於流量槽(FC)定位於一預定義位置處。微型螢光計可結合各種類型之測試在定序作業階段之前、期間及/或之後移動至檢驗設備。
圖9說明可利用根據本文中揭示之實例的檢驗設備之偵測設備的方塊圖。讀出印刷電路板(readout printed circuit board;PCB)存在於讀取頭端處,且連接至典型地含有於偵測設備外殼內之主PCB。在替代性實例中,主PCB可位於器具外部。資料可經由LVDS線在讀出PCB與主PCB之間傳達。LVDS線可經組態以將影像資料自讀出PCB傳達至主PCB,且將用於攝影機控制之指令自主PCB傳達至讀出PCB。
在圖9之實例中,主PCB亦經由USB 3.0 SS I/F連接器或其他合適連接器連接至外部主要分析個人電腦(personal computer;PC)。在一些實例中,主要分析電腦可位於偵測設備之外殼內。然而,置放主要分析電腦於器具外部允許多種電腦之可互換使用以用於不同應用、藉由替換方便地維護主要分析電腦而不必中斷偵測設備之活動及用於偵測設備之小佔據面積。可使用多種電腦中之任一者,包括例如桌上型電腦、膝上型電腦或伺服器,其含有與可存取記憶體及指令之操作通信的處理器從而實施本文中所描述的電腦實施之方法。主PCB亦連接至液晶顯示器(liquid crystal display;LCD)以供通信至人類使用者。亦可使用其他使用者介面。
在一些實例中,使用者介面可包括用以顯示或請求來自使用者之資訊的顯示器(例如,LCD)及用以接收使用者輸入的使用者輸入裝置(例如,鍵盤)。在一些實例中,顯示器及使用者輸入裝置為同一裝置。舉例而言,使用者介面可包括觸敏式顯示器,其經組態以偵測個別觸控之存在且亦識別觸控在顯示器上的位置。然而,可使用其他使用者輸入裝置,諸如滑鼠、觸控板、鍵盤、小鍵盤、手持型掃描儀、語音辨識系統、運動辨識系統及類似者。
讀出PCB包括用於將資料自個別傳感器(亦即,偵測器)傳送至LVDS線之傳輸器、3.3伏特切換調節器、5伏特切換調節器及用於LED激勵輻射源的LED降壓驅動器。主PCB包括經組態以接受來自LVDS之影像資料的FPGA處理器。DDR3 DIMM圖框緩衝器電子連接至FPGA處理器。主PCB亦包括用於各種驅動馬達之熱控制調節器及控制電路,諸如Y軸馬達、濾筒馬達、閥馬達及泵馬達。
圖1A至圖1C、圖2A至圖2F及圖6A至圖6C之檢驗設備相對於圖9之偵測設備可位於預定義位置處。偵測設備可結合各種類型之測試在定序作業階段之前、期間及/或之後移動至檢驗設備。
影像模組之多種特性中的任一者可使用本文中所描述之檢驗設備來評估。下文在用檢驗設備測試定序器器具情形下闡述若干實例。應理解,類似測試可使用不同檢驗設備針對其他分析系統進行。此外,每一測試之細節並不需要在所有應用中為必要的,如當將以下所例示之原理應用至替代性分析系統及檢驗設備時對於熟習此項技術者將為顯然的。
圖10說明可利用根據本文中揭示之實例形成之檢驗設備執行的各種量測及測試的實例。根據本文中之實例,圖10之方法使器具之物鏡與光學目標物對準,該光學目標物包括圍封螢光材料之固態本體。圖10之方法將激勵光導引於光學目標物上,偵測來自光學目標物之螢光發射作為參考資訊,且結合器具之光學對準或校準中之至少一者而利用參考資訊。本文中論述各種類型之參考資訊。參考資訊之非限制性實例包括在圖10之操作中之每一者處記錄的資訊(如下文所論述)。
雖然圖10之操作按次序描述,但應理解,操作可以替代性次序執行。又,應理解,圖10之操作中之一或多者可被整個忽略。在1002處,器具之一或多個處理器指導馬達以調整流量槽蓋板之傾角,該流量槽蓋板固持光學目標物及定序流量槽以執行自動傾斜操作。在自動傾斜操作期間,器具判定並記錄最終傾斜馬達座標。在1004處,器具之一或多個處理器指導馬達以調整流量槽蓋板之XY位置以執行自動定中心操作。在自動定中心操作期間,器具記錄檢驗設備上基準物的XY平台位置。基準物的位置用以監視流量槽插入至器具中時器具之XY平台及/或流量槽蓋板位置的漂移。
在1006處,器具獲得雷射線之一或多個圖框模式影像,且因此調整雷射線XY位置。結合以上操作,物鏡移動至檢驗器具上之空白區域,且經調整以將預定深度聚焦至光學目標物(例如,光學目標物之表面以下100 µm)。捕獲包括雷射線之圖框模式影像。調整雷射線之XY位置,且捕獲額外圖框模式影像。程序經重複,直至達成針對雷射線之所要XY位置。
在1008處,器具收集檢驗設備上空白區域之時間延遲及積分(time delay and integration;TDI)影像,並調整器具之光束擴展器以達成均一照明。舉例而言,TDI影像可在檢驗設備上之空白貼塊處獲得,其中物鏡聚焦至光學目標物中之預定深度。雷射變焦光束擴展器可經調整,直至獲得選擇照明均一性。在1010處,器具之一或多個處理器判定照明均一性及雷射線位置是否滿足預定臨限值或規格。當照明均一性及雷射線位置並不滿足臨限值/規格時,流程返回至重複1006及1008處之操作的1006。替代地,當照明均一性及雷射線位置滿足臨限值/規格時,流程繼續至1012。在1006及1008處之操作之後,器具記錄雷射XY指向致動器及變焦光束擴展器致動器之最終位置。器具亦記錄最終照明均一性、X方向及Y方向上之雷射線位置、雷射線寬度及相對於雷射線之攝影機旋轉。
在1012處,器具之一或多個處理器量測聚焦模型可重複性。結合以上情形,物鏡移動至檢驗設備上之影像品質貼塊,且器具獲得聚焦模型並測試自動聚焦位置可重複性。在1012處,器具記錄最佳焦點Z位置處之自動聚焦光點位置、自動聚焦雷射強度、自動聚焦捕獲範圍、自動聚焦增益、自動聚焦雜散光及自動聚焦Z位置可重複性。
在1014處,器具之一或多個處理器量測影像品質及光學對準,且保存攝影機傾斜偏移校準。當器具自動傾斜定序流量槽時,系統調整某些傾斜馬達以設定流量槽成像平面平行於X平台的行進方向。XY平台之行進方向意欲垂直於物鏡之光軸。然而,輕微變化可出現。在製造期間,物鏡及攝影機可經傾斜,使得成像表面與適當去傾斜流量槽之影像共面。然而,調整可隨時間發生,且漂移可被引入。檢驗設備可用以量測攝影機傾斜。如此進行,一或多個處理器收集銷孔陣列之影像之貫穿焦點堆疊,並分析影像以判定鉻層(微結構)相對於攝影機傾斜的傾斜。器具利用自動聚焦光點及/或貫通聚焦堆疊中之一或兩者量測鉻層的傾斜。識別出攝影機傾斜與鉻層之傾斜之間的誤差,並藉由量測鉻層之角度來校正該誤差。藉助於實例,鉻層之角度可藉由在不同X座標處進行多個貫通聚焦堆疊且比較每一X座標處之最佳焦點Z位置來量測。另外或替代地,鉻層之角度可藉由使用器具自動聚焦系統在多個X位置處偵測鉻層的Z位置來量測。攝影機傾斜校準可在每一定序進行開始時執行,其中傾斜馬達經調整以基於其結果來補償。
當量測影像品質及光學對準時,器具將物鏡定位於設置於檢驗設備上之影像品質貼塊上方。影像品質貼塊形成有穿過鉻或另一微結構之銷孔陣列(例如,3 µm間距六邊形圖案上的1 µm銷孔)。器具內之成像系統收集一連串影像,其中物鏡在影像中之一或多個之間在Z位置上進行調整。隨著物鏡在影像之間在Z位置上移動,銷孔聚焦並散焦。具有不同物鏡位置之數個系列影像經分析以識別具有所要焦點品質的影像(例如,最佳焦點)。舉例而言,系統可判定使銷孔在數個系列堆疊影像之間緊密聚焦的方式,其給予影像品質(例如,半高全寬)之指示。作為另一實例,藉由判定銷孔越過視野在各種點處最佳聚焦的Z位置,系統可評估不同發射色彩之間的軸向色度移位(例如,紅色及綠色)、場曲率、攝影機傾斜及可用場深度。在1014處,器具記錄影像品質(FWHM)、軸向色度、場曲率及可用場深度。器具亦記錄最佳焦點Z位置。器具亦記錄相對於X平台之攝影機傾斜及傾斜馬達偏移以補償攝影機傾斜。
在1016處,器具之一或多個處理器藉由量測失真並保存失真校正係數而執行失真校正校準。當使每一叢集處於已知位置之圖案流量槽成像時,可有利的是補償成像系統中之光學失真,使得器具將知曉叢集應在影線內顯現之位置。檢驗設備可用以在定序進行開始時校準失真校正。如此進行,物鏡定位於失真校正貼塊上方。失真校正貼塊包括橫越整個視野(例如,10 nm)以預定位置容許度定位的銷孔,藉此提供具有一致預定銷孔間距的銷孔陣列。影像經分析以識別鄰接銷孔之位置間橫越視野的移位。移位接著諸如藉由使多項式適配於銷孔移位而分解,其中多項式指示叢集應顯現於在定序程序期間獲得之後續影像中的位置。在1016處,器具記錄針對失真校正多項式、光學放大率、流量槽蓋板之旋轉及Y平台之旋轉的係數。
在1018處,器具之一或多個處理器執行針對一或多個雷射在Y方向上之位置的自動聚焦雷射光點量測。結合檢查自動聚焦雷射光點位置,物鏡定位於水平刀口上方之最佳焦點處,該水平刀口顯現空白區域與鉻區域之間的急劇轉變。自動聚焦雷射光點在鉻區域上方為明亮的,且在空白區域上方為極暗淡的。TDI掃描使用紅色及/或綠色攝像機來進行。影像用以識別每一所關注發射頻帶之攝影機視野相對於水平刀口定位的位置。物鏡接著初始定位於鉻區域上方且接著在Y方向上緩慢地向下步進,直至雷射光點消失,其在雷射光點不再導向於鉻之一部分上且確切而言整個導向於接近於水平刀口之空白區域上時發生。系統可接著識別Y方向上相對於紅色及綠色攝影機視野的自動聚焦光點位置。在1018處,器具記錄所關注發射頻帶的Y方向上相對於視野(例如,相對於紅色及綠色視野)的自動聚焦雷射光點位置。
在1020處,器具之一或多個處理器執行針對一或多個雷射在X方向上之位置的自動聚焦雷射光點量測。結合檢查自動聚焦雷射光點位置,物鏡定位於垂直刀口上方,該垂直刀口顯現空白區域與鉻區域之間的急劇轉變。自動聚焦雷射光點在鉻區域上方為明亮的,且在空白區域上方為極暗淡的。TDI掃描使用紅色及/或綠色攝像機來進行。影像用以識別每一所關注之發射頻帶之攝影機視野相對於垂直刀口定位的位置。物鏡接著初始定位於鉻區域上方且接著在X方向上緩慢地向下步進,直至雷射光點消失,其在雷射光點不再導向於鉻之一部分上且確切而言整個導向於接近於垂直刀口之空白區域上時發生。系統可接著識別X方向上相對於紅色及綠色攝影機之視野的自動聚焦光點位置。在1020處,器具記錄所關注之發射頻帶的X方向上相對於視野(例如,相對於紅色及綠色視野)的自動聚焦雷射光點位置。
在1022處,器具中之一或多個處理器可執行平場校正校準。結合以上情形,在執行平場校正校準時,器具將物鏡移動至空白貼塊並將物鏡聚焦於光學目標物之表面下方預定距離處。平場校正校準包括獲得平場校正影像。一或多個處理器計算成像系統之光學透射效率且結合該光學透射效率保存平場校正係數。定序期間之鹼基確定操作係基於影像內叢集的強度。橫越視野之強度不均一性可影響鹼基確定。器具將均一地照明流量槽內之叢集以使誤差最小化,然而完美地達成均一照明並非總是實際的。攝影機中像素的增益及偏移在製造期間予以校準,然而攝影機像素之校準可能隨時間及/或隨溫度改變的可能存在。為了執行平場校正校準,物鏡定位於檢驗器具之空白區域上方且於預定深度(例如,100 µm)聚焦至光學目標物中。獲得量測值以提供針對影像強度之均一性基準。其後,在一或多個定序進行開始時,器具可藉由執行平場校正校準來補償照明不均一性以及攝影機像素增益及偏移改變。
平場校正校準包括獲得影像中在雷射擋板關閉情況下聚焦至光學目標物內預定深度之檢驗設備的空白區域之影像(以產生暗淡影像)及以多個雷射功率用雷射獲得空白區域之影像以獲得不同強度計數(例如,約500、約1000、約1500、約2000、約2500、約3000及約3500的強度計數)下的影像。藉助於實例,且影像可為約1.4 mm長,使得灰塵、指紋等之影響可藉由在掃描(Y)維度上對所有像素進行平均而計算平均值。對於3200個像素中之每一者(在攝影機之非掃描維度上),器具使用暗淡讀數及不同強度讀數,且使多項式適配至資料以特徵化該像素之回應(像素曝光至之光的數量結合攝影機之該像素之光回應的組合)。當在定序期間獲得叢集之影像時,器具使用每一像素之所量測的多項式回應且調整叢集影像中該像素的強度以使得整個影像等效於在極均一照明且極均一像素增益及偏移情況下將獲得的影像。在1022處,器具記錄針對像素之全部或至少一部分在X方向及Y方向中之一者或兩者中的光學透射效率及平場校正多項式係數。
在1024處,器具之一或多個處理器檢查濾光穿透及背景光。結合以上情形,器具將物鏡移動至檢驗設備上之固態鉻貼塊,且執行濾光穿透測試。舉例而言,濾光穿透貼塊可形成為顯現為鏡面的固態鉻區。器具成像系統經設計以濾除所有雷射光而不命中攝影機。因此,當物鏡定位於濾光穿透貼塊上方時,系統將預期為在攝影機處未偵測到光。當在攝影機處偵測到光時,源可係來自各種因素。舉例而言,光學濾光片可能並不適當地濾除所有雷射光。另外或替代地,光徑中之污染物可藉由所關注發射頻帶中之雷射激勵光及螢光(例如,紅色或綠色)激勵。當光學濾光片並非適當地操作或污染物存在於光徑中時,兩個情形可導致高背景位準藉由攝影機偵測到。可進行各種校正性量測。在1024處,器具記錄濾光穿透資訊、背景光資訊及類似者。
在1026處,一或多個處理器量測XY平台位置可重複性。結合此情形,器具將物鏡移動至自動定中心基準物並執行XY平台位置可重複性測試。器具將X及Y平台自每一方向移動至自動定中心基準物多次,且在每一移動之後,器具獲得自動定中心基準物的影像。理想地,自動定中心基準物將準確地展示於每一移動之後影像中的相同位置。影像中基準物的移動指示XY平台之不完美定位。器具記錄X方向及Y方向上之位置可重複性。器具亦記錄顯現於X方向及Y方向上之遲滯。在1028處,一或多個處理器記錄在遠端診斷位點處在前述程序中收集之結果的全部。其後,器具依序定序操作。
結合前述操作,器具可經導向以執行遠端診斷。藉由週期性地收集並分析檢驗設備之影像(例如,在每一定序進行開始時),器具可監視成像系統隨時間的效能。結果可儲存於本地硬碟機上及/或上載至遠端伺服器或雲端伺服器。診斷資訊可經監視以監視器具之成像系統的健康情況且識別器具之效能隨時間的傾向。若成像系統之任何態樣正傾向於發生故障,則修復可在器具實際發生故障之前進行排程。此將增大客戶正常運行時間。又,當關於在成像系統情況下器具是否正經歷問題的問題發生時,對準資料可經收集以判定成像系統之任何態樣是否已改變。此將快速地消除作為許多問題之潛在根本原因的成像系統,或可指向成像系統情況下的特定問題。若器具並不將資訊上載至雲端,則現場服務工程師將能夠藉由審閱儲存於本地硬碟機上之歷史結果而確定資料隨時間的趨勢。
另外,螢光強度與摻雜劑濃度成比例。藉由控制摻雜劑濃度(例如,約1.1%+ / -0.01%),檢驗設備可控制所量測螢光至所要容許度(例如,紅色上+/-0.6%及綠色上+ / -0.1%)。以某掃描速度及一個器具上之雷射功率量測檢驗設備的強度將提供指示在大體上所有類似器具上預期到的強度之量測資訊。來自檢驗設備之螢光強度量測可用以指示器具是否正適當地表現(例如,假定適當雷射功率遞送至流量槽、收集並遞送適當量的螢光至攝影機等)。假定檢驗設備之發射特性將不隨時間改變,器具之壽命上所量測之螢光強度的任何改變將指示,適當雷射功率並非遞送至流量槽或並非所有螢光正遞送至攝影機。
應認識到,以上操作為可利用檢驗設備執行之各種操作的非限制性實例。上文論述之操作可完全獨立於彼此且在不同時間點執行。可利用檢驗設備自動地執行之遠端診斷及度量的非限制性實例包括:光學透射效率、影像品質(全寬半高)、攝影機傾角、軸向色性、場曲率、可用場深度、失真、放大率、雷射線XY位置及線寬、照明均一性、相對於雷射線之攝影機旋轉、平場校正係數自動聚焦Z位置可重複性、最佳焦點處之自動聚焦光點位置、相對於紅色及綠色視野的自動聚焦光點位置、自動聚焦雷射強度、自動聚焦捕獲範圍、自動聚焦增益、自動聚焦雜散光、最佳聚焦Z位置、自動傾斜之後的自動傾斜馬達座標、X及Y上的遲滯、X及Y上之位置可重複性、流量槽蓋板之旋轉、Y平台行進方向、BIRD基準物之XY平台位置、雷射指向致動器之位置以及雷射變焦光束擴展器致動器的位置。
根據本文中之實例,檢驗方法可包括用於設定針對適當影像強度之激勵源電流的常式。常式可包括如下依序步驟:將檢驗設備定位於成像模組中,使得通道之敞開面積(亦即,無微結構情況下)被偵測到;設定達1 ms之攝影機曝光及達30%的LED電流;在1 ms曝光且LED不接通情況下捕獲暗淡影像;1 ms曝光情況下捕獲紅色及綠色光學通道中的影像;計算影像之平均強度;及調整LED電流以在1 ms曝光情況下命中2500計數的所要強度。LED電流對於測試之剩餘部分保持於此等值處。所有後續測試可基於微結構圖案之幾何形狀使用不同曝光時間。舉例而言,基準物貼塊及均一性貼塊(缺少微結構)可在1 ms曝光情況下偵測到,自動聚焦貼塊可在4 ms曝光情況下偵測到,影像品質貼塊可在150 ms曝光情況下偵測到,且濾光穿透貼塊(在上部玻璃之內部表面上充分塗佈有金屬)可在500 ms曝光情況下偵測到。
根據本文中之實例,檢驗方法可包括針對激勵源校準之常式。常式可如下進行。器具之XY平台移動至自動聚焦貼塊。貫穿焦點堆疊以紅色產生,且計算最佳焦點Z高度(例如,步長為6 µm,曝光時間為4 ms,且掃掠範圍為108 µm)。接著,XY平台移動至鄰近貼塊以收集雷射影像。此操作進行以減輕檢驗設備中製造缺陷的風險,在該檢驗設備處,並非所有鉻在自動聚焦貼塊中之500平方微米開口內部移除。此缺陷將使得雷射光點強度在自動聚焦貼塊處過於明亮。程序接著收集雷射貫穿焦點影像(將標準設定用於聚焦模型產生),且檢查雷射光點強度。此等量測期間的步長為2微米,其中Z範圍為+/-18微米。接著,調整雷射曝光時間,直至AF光點針對「最明亮光點」為2000+/-200計數(關於紅色最佳焦點在+/-18微米內)。若「保存校準」在使用者介面上予以選擇,則用於定序之雷射曝光時間予以儲存。
根據本文中之實例,方法可包括偵測器校準測試。作為一個實例,測試可如下進行。檢驗設備之影像在以下4個不同LED強度下獲得:(1)暗淡(LED關斷),(2)中間低強度,(3)中間高強度,及(4)明亮強度(約3000個計數)。當獲得此等影像時,XY平台在每一影像之間移動。選擇單工通道中之所有貼塊用以對任何非均一螢光進行平均(歸因於檢驗之頂部上的殘渣或指紋)。攝影機校正不需要應用至進行選擇之任何後續測試。
結束陳述
應理解,本發明之各種態樣可具體化為方法、系統、電腦可讀媒體及/或電腦程式產品。本發明之態樣可採用如下形式:硬體實例、軟體實例(包括韌體、駐留軟體、微碼等),或本文中可皆通常稱作「電路」、「模組」或「系統」之組合軟體及硬體態樣的實例。此外,本發明之方法可採用具有具體化於媒體中之電腦可用程式碼之電腦可用儲存媒體上的電腦程式產品之形式。
任何合適之電腦可用媒體可用於本發明之軟體態樣。舉例而言,電腦可用或電腦可讀媒體可為(但不限於)電子、磁性、光學、電磁、紅外線或半導體系統、設備、裝置或傳播媒體。電腦可讀媒體可包括暫時實例。電腦可讀媒體之更特定實例(非窮盡性列表)將包括以下各者中之一些或全部:具有一或多根導線之電連接件、攜帶型電腦磁盤、硬碟、隨機存取記憶體(RAM)、唯讀記憶體(ROM)、可抹除可程式化唯讀記憶體(EPROM或快閃記憶體)、光纖、攜帶型緊密光碟唯讀記憶體(CD-ROM)、光學儲存裝置、諸如支援網際網路或企業內部網路之彼等的傳輸媒體,或磁性儲存裝置。應注意,電腦可用或電腦可讀媒體甚至可為列印有程式之紙張或另一適合媒體,因為程式可經由(例如)對紙張或其他媒體之光學掃描而以電子方式捕獲,接著被編譯、解譯或在必要時以一適合方式進行其他處理,且接著被儲存在電腦記憶體中。在此文獻之情形下,電腦可用或電腦可讀媒體可為可含有、儲存、傳達、傳播或輸送程式以供指令執行系統、設備或裝置使用或結合指令執行系統、設備或裝置使用的任何媒體。
用於進行本文中所闡述之方法及設備之操作的程式碼可以諸如Java、Smalltalk、C++或類似者之物件導向式程式設計語言來撰寫。然而,用於進行本文中所闡述之方法及設備之操作的程式碼亦可以諸如「C」程式設計語言或類似程式設計語言之習知程序設計語言來撰寫。程式碼可由處理器、特殊應用積體電路(ASIC)或執行程式碼之其他組件來執行。程式碼可被簡稱為儲存於記憶體(諸如上文所論述之電腦可讀媒體)中之軟體應用程式。程式碼可使得處理器(或任何處理器控制裝置)產生圖形使用者介面(「GUI」)。圖形使用者介面可視覺地產生於顯示裝置上,然而圖形使用者介面亦可具有可聽特徵。然而,程式碼可在諸如以下各者之任何處理器控制裝置中操作:電腦、伺服器、個人數位助理、電話、電視或利用處理器及/或數位信號處理器之任何處理器控制裝置。
程式碼可經本地及/或遠端地執行。程式碼例如可整個或部分地儲存於處理器控制裝置之本端記憶體中。然而,程式碼亦可至少部分經遠端地儲存、存取並下載至處理器控制裝置中。使用者之電腦例如可完全執行程式碼或僅部分執行程式碼。程式碼可為至少部分在使用者之電腦上及/或部分在遠端電腦上執行或完全在遠端電腦或伺服器上執行的單獨套裝軟體。在後一情境下,遠端電腦可經由通信網路連接至使用者之電腦。
可應用本文中所闡述之方法及設備而不考慮網路連接環境。通信網路可為在射頻域及/或網際網路協定域中操作之纜線網路。然而,通信網路亦可包括分散式計算網路,諸如網際網路(有時替代地稱作「全球資訊網」)、企業內部網路、區域網路(local-area network, LAN)及/或廣域網路(wide-area network, WAN)。通信網路可包括同軸纜線、銅導線、光纖線及/或混合式同軸線。通信網路可甚至包括利用利用電磁頻譜之任何部分及任何傳信標準(諸如,IEEE 802系列標準、GSM/CDMA/TDMA或任何蜂巢式標準,及/或ISM頻帶)的無線部分。通信網路可甚至包括電力線部分,在該等電力線部分中,信號經由電佈線來傳達。本文中所闡述之方法及設備可應用至任何無線/有線通信網路而不考慮實體部件、實體組態或通信標準。
本發明之某些態樣參看各種方法及方法步驟來描述。應理解,每一方法步驟可藉由程式碼及/或藉由程式指令來實施。程式碼及/或機器指令可產生用於實施方法中指定之功能/動作的構件。
程式碼亦可儲存於電腦可讀記憶體中,該電腦可讀記憶體可指導處理器、電腦或其他可程式資料處理裝置來以特定方式起作用,使得儲存於電腦可讀記憶體中之程式碼產生或變換製品,該製品包括實施方法步驟之各種態樣之指令構件。
程式碼亦可加載於電腦或其他可程式化資料處理設備上以使得一系列操作步驟經執行以產生處理器/電腦實施之程序,使得程式碼提供用於實施本發明之方法中指定之各種功能/動作的步驟。
貫穿本發明包括申請專利範圍使用之術語「大體上」及「約」用以描述並慮及諸如歸因於處理上之變化的小波動。舉例而言,其可指小於或等於±5%,諸如小於或等於±2%、諸如小於或等於±1%、諸如小於或等於±0.5%、諸如小於或等於±0.2%、諸如小於或等於±0.1%、諸如小於或等於±0.05%。
本文中在說明書及申請專利範圍中使用之術語「包含」、「包括」、「含有」等以及其變化意欲為開放式,包括不僅所敍述之元素,而且進一步涵蓋任何額外元素。貫穿說明書對「一個實例」、「另一實例」、「實例」等等之參考意謂,結合實例描述之特定元素(例如,特徵、結構及/或特性)包括於本文中所描述之至少一個實例中,且可能或可能不存在於其他實例中。另外,應理解除,非上下文另外明確指明,否則用於任何實例的所描述元件可以任何合適方式組合在各種實例中。
應瞭解,前述概念及下文更詳細地論述之額外概念的所有組合(限制條件為此等概念並不彼此不相容)經涵蓋作為本文中所揭示之發明主題的部分。詳言之,在本發明結尾處所主張主題的全部組合預期為本文所揭示之發明性主題的部分。亦應瞭解,亦可顯現於以引用方式併入之任何揭示內容中的本文中明確地使用之術語應符合於與本文中揭示之特定概念大部分相符的含義。
應理解,本文提供的範圍包括陳述的範圍及陳述範圍內的任何值或子範圍。舉例而言,藉由等於四、十或介於四與十之間(4至10)表示的範圍應解譯為不僅包括自4至10的明確敍述限值,而且包括個別值,諸如約6、7.5、9等,以及子範圍,諸如自約5至約8等。
雖然已詳細描述了若干實例,但應理解,所揭示實例可經修改。因此,前述描述應視為非限制性的。
100:檢驗設備
102:本體
104:頂表面
105:側壁
106:底表面
107:上表面/頂部目標物表面
108:橫向側面
109:底部目標物表面
110:前端
112:後端
114:中心凹穴
115:第一光柵區
116:通道
117:第二光柵區/入口/出口埠
118:插入區
119:中心區
120:光學目標物
120A:高度
121:抗反射塗層
122:光柵層
123:微結構
124:邊緣間隙
126:插入凸耳
127:插入壁/凸耳壁
128:凹穴凸耳
129:凹穴壁
129A:高度
130:擴散井
132:井基座
200:物鏡
202:激勵光/本體
204:焦點/頂表面
206:焦點
208:角形孔隙
210:角形孔隙
211:除氣障壁/短劃線
213:除氣障壁/短劃線
214:凹穴
215:內部凸耳
216:通道
217:入口/出口埠
218:插入區
219:外部凸耳
221:減壓凹穴
249:凹穴
250:檢驗設備
251:安裝特徵
252:本體
259:底部凹穴凸耳
263:凹穴
264:凹穴
265:內部凸耳
266:通道
267:入口/出口埠
268:插入區
269:外部凸耳/外部邊緣
270:光學目標物
271:減壓凹穴
272:光柵層
280:頂部自動定中心基準物
281:方框
282:底部自動定中心基準物
283:方框
284:影像品質貼塊
286:失真貼塊
288:空白貼塊
290:空白區域
292:水平刀口
294:垂直刀口
296:貼塊
300:檢驗設備
302:本體/接地能階
307:4F9/2TE能階
308:TE能階
309:較高能階
314:凹穴
318:插入區
320:光學目標物
322:透明層
323:微結構
324:邊緣間隙
326:外部凸耳
328:凹穴凸耳
330:擴散井
350:檢驗設備
352:透明層
353:微結構
356:光學目標物
402:資料點
404:資料點
410:資料點
412:資料點
414:資料點
416:資料點
600:檢驗設備
602:本體
607:頂部目標物表面
609:底部目標物表面
614:凹穴
620:光學目標物
621:量子點
622:光柵層
623:微結構
624:邊緣間隙
640:檢驗設備
642:本體
660:光學目標物
661:量子點
662:光柵層
663:微結構
665:區
670:檢驗設備
672:本體
680:光學目標物
681:量子點
682:光柵層
683:微結構
685:間隙
700:光學偵測裝置/偵測器
701:物鏡
702:輻射源
703:發光二極體(LED)
704:發光二極體(LED)
705:透鏡
706:光束分光器
707:調節光學件
708:偵測器
730:處理器
732:記憶體
734:驅動器
770:流槽
771:上部層
772:表面
773:下部層
774:表面
775:流體填充通道
776:區域
F1:發射濾光片
F2:激勵濾波器
F3:雷射二極體光束分光器
F4:二色性激勵/發射
F5:二色性組合器
FC:流槽
FS:激勵視場光闌
L1:投影透鏡群組
L2:激勵投影透鏡群組
L3:靜態物鏡群組
L4:物鏡群組
L5:雷射二極體耦接透鏡群組
L6:綠色發光二極體(LED)集光器透鏡
L7:紅色發光二極體(LED)集光器透鏡
LD:雷射二極體
M1:發光二極體(LED)摺疊鏡面
S1:CMOS影像感測器
[圖1A]說明根據本文中之實例形成之檢驗設備的立體圖,其中光學目標物展示為與用以接收光學目標物的本體分離。
[圖1B]說明根據替代性實例形成之本體的俯視平面圖。
[圖1C]說明根據替代性實例形成之檢驗設備之立體圖,其中光學目標物及光柵層展示為與用以收納光學目標物及光柵層的本體分離;
[圖2A]說明圖1A之檢驗設備沿著圖1A中之線2A-2A的側向截面圖,其中光學目標物根據本文中之實例而安設。
[圖2B]說明根據本文中之實例的具有定位於第一量測位置處之物鏡之光學目標物的模型之側視圖。
[圖2C]說明根據本文中之實例的具有定位於第二量測位置處之物鏡的光學目標物之模型的側視圖。
[圖2D]說明根據實例形成之檢驗設備的俯視平面圖。
[圖2E]說明根據替代性實例形成之檢驗設備的側向截面圖。
[圖2F]說明根據替代性實例形成之檢驗設備的側向橫截面圖。
[圖3A]說明根據本文中之實例的結合所利用之三價鉺離子(Er3+
)的能帶圖。
[圖3B]說明根據本文中之實例的與三價鐠離子(Pr3+
)相關聯的離子能階圖。
[圖3C]說明根據本文中之實例的與三價鈥離子(Ho3+
)相關聯的離子能階圖。
[圖4]說明根據本文中之實例的結合各種光學目標物收集之對應於不同螢光發射色彩的實例強度測試量測。
[圖5]說明根據本文中之實例的藉由以預定濃度之三價鉺離子與金屬氟化物玻璃(ZBLAN)摻雜形成之固態主體材料的測試結果。
[圖6A]說明根據替代性實例形成之檢驗設備的側向截面圖。
[圖6B]說明根據替代性實例形成之檢驗設備之一部分的側視圖。
[圖6C]說明根據替代性實施例形成之檢驗設備之一部分的側視圖。
[圖7]說明根據實例形成之光學偵測裝置的方塊圖。
[圖8]展示根據本文中之實例的出於證明針對各種光學組件之功能配置的實例微型螢光計之分解視圖。
[圖9]說明可利用根據本文中之實例的檢驗設備之偵測設備的方塊圖。
[圖10]說明可利用根據本文中之實例的檢驗設備執行的實例自動化處理流程。
102:本體
104:頂表面
105:側壁
106:底表面
107:上表面/頂部目標物表面
108:側面
109:底部目標物表面
110:前端
112:後端
114:中心凹穴
116:通道
117:第二光柵區/入口/出口埠
118:插入區
120:光學目標物
120A:高度
Claims (11)
- 一種光學偵測裝置,其包含: 光學目標物,其包括圍封螢光材料之固態本體; 物鏡,其朝向所述光學目標物導引激勵光且接收來自所述光學目標物之螢光發射; 驅動器,其將所述物鏡移動至接近於所述光學目標物的關注區; 記憶體,其用以儲存程式指令;以及 處理器,其執行用於結合器具之光學對準或校準中之至少一者偵測來自所述光學目標物之螢光發射的所述程式指令。
- 如請求項1之光學偵測裝置,其中所述物鏡將所述激勵光導引至所述光學目標物上,所述處理器可自所述螢光發射導出參考資訊,所述處理器結合所述器具之光學對準或校準中之所述至少一者而利用所述參考資訊。
- 如請求項1之光學偵測裝置,其中所述光學目標物可永久地安裝在接近於所述物鏡之校準位置處,所述校準位置與所述器具內之流量槽通道分離。
- 如請求項1之光學偵測裝置,其中所述光學目標物包括固態主體材料及嵌入於所述固態主體材料中之所述螢光材料,所述固態主體材料具有預定光子能量HOSTPE ,所述螢光材料顯現選擇接地能階、目標物激勵(TE)能階及在所述目標物激勵能階下方隔開能隙FMEG2 的次低窪(NLL)能階,其中FMEG2 /HOSTPE 之比率為三或大於三。
- 如請求項1之光學偵測裝置,其中所述固態本體表示基板,所述基板包含固態主體材料,所述固態主體材料摻雜有一或多個離子以形成所述螢光材料。
- 如請求項1之光學偵測裝置,其中所述固態本體表示圍封量子點之環氧樹脂或聚合物中之至少一者,該些量子點在由所述激勵光照射時發射所關注之一或多個預定發射頻帶中的螢光。
- 如請求項1之光學偵測裝置,其進一步包括形成在所述光學目標物上的抗反射塗層。
- 一種方法,包括: 對準器具之物鏡與光學目標物,所述光學目標物包括圍封螢光材料的固態本體; 將激勵光導引至所述光學目標物上; 偵測來自所述光學目標物之螢光發射作為參考資訊;及 結合所述器具之光學對準或校準中之至少一者來利用所述參考資訊。
- 如請求項8之方法,其進一步包括將所述激勵光聚焦於焦點,所述焦點係在所述光學目標物之上表面下方。
- 如請求項8之方法,其中所述對準操作包括: 對準所述物鏡與包括微結構之光柵區且將所述激勵光聚焦於所述微結構處之第一焦點處,所述微結構位於所述光學目標物上方;及 對準所述物鏡與非光柵區且將所述激勵光聚焦於在所述光學目標物之上表面下方的第二焦點,所述非光柵區沒有所述微結構。
- 如請求項10之方法,其中所述螢光材料包含化學元素,所述化學元素包含鉺、鈥或鐠中至少一者之離子,且其中所述固態主體材料包含矽酸鹽、鍺酸鹽、InF3 或ZBLAN中的至少一者。
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