TW202005644A - ３’－羥基染料木黃酮抗光老化之用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種3’-羥基染料木黃酮之用途，所述3’-羥基染料木黃酮具有抗老化之功效。藉此，所述3’-羥基染料木黃酮可用於製備抗老化的組合物。
Description
本發明是有關於一種3’-羥基染料木黃酮之用途，特別是一種3’-羥基染料木黃酮應用於抗老化之用途。
在生物學及醫學上，老化(aging)是指一個生物體之生理狀態隨時間而惡化的現象，皮膚的老化可起因於內在影響以及外在影響，內在影響為自然老化(intrinsic aging)，而外在影響主要因長時間曝曬在太陽光下，陽光中的紫外線(ultraviolet,UV)與紅外線(infrared,IR)對皮膚造成傷害而導致皮膚老化，又稱光老化(photoaging)。
皮膚光老化的典型臨床表現為皮膚曝光部位粗糙、增厚、乾燥、皮膚鬆弛、皺紋加深加粗、局部有過度的色素沉著或毛細血管擴張等皮膚狀況，甚至可能出現各種良性或惡性腫瘤(如日光角化病、麟狀細胞癌、惡性黑素瘤等)。
皮膚光老化的症狀與真皮結締組織的組織變化及細微構造變化息息相關，這些變化包括酵素的分解以及減少新生成的膠原蛋白，使皮膚提早產生皺紋。此外，即使是 少量的紫外線亦會破壞皮膚主要的結構性蛋白-膠原纖維，令一些不正常的彈性硬蛋白積聚，導致皮膚失去彈性。而玻尿酸及蛋白多醣基質的改變也會導致細胞水含量減少而讓細胞鬆弛。
本發明之一態樣是在提供一種3’-羥基染料木黃酮(3’-hydroxygenistein)之用途，其係用於製備一抗老化之組合物。
依據前述之3’-羥基染料木黃酮之用途，所述抗老化之組合物可為基質金屬蛋白酶-1(Matrix Metalloproteinase-1,MMP-1)抑制劑。
依據前述之3’-羥基染料木黃酮之用途，所述抗老化之組合物可用以預防因暴露於紫外線輻射而出現之皮膚光老化的狀況。所述抗老化之組合物亦可用以減少皮膚光老化的狀況。而所述皮膚光老化的狀況可選自由皺紋產生、色斑及/或色素沉著過度、皮膚粗糙或皮革狀、下垂或鬆垂、變黃、乾燥及皮膚贅生物所組成之群組。
依據前述之3’-羥基染料木黃酮之用途，所述抗老化之組合物之有效劑量可為6.25μg/mL至2000μg/mL。較佳地，所述抗老化之組合物之有效劑量可為18μg/mL至1000μg/mL。更佳地，所述抗老化之組合物之有效劑量為25μg/mL至200μg/mL。
依據前述之3’-羥基染料木黃酮之用途，所述抗 老化之組合物可為一水劑、一乳劑、一膏劑或一粉劑。
依據前述之3’-羥基染料木黃酮之用途，所述抗老化之組合物可為一醫藥組合物、一化妝品組合物或一保健食用組合物。
藉此，本發明之3’-羥基染料木黃酮具有抑制基質金屬蛋白酶-1的能力，進而達到抗老化的功效，特別是預防或減少皮膚光老化的狀況。是以3’-羥基染料木黃酮可用於製備抗老化之組合物，所述組合物可為醫藥組合物、化妝品組合物或保健食用組合物，具有運用於生醫保健市場之潛能。
上述發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。
為讓本發明之上述和其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：第1圖為3’-羥基染料木黃酮對人類纖維母細胞之細胞存活率影響之分析結果圖；以及第2圖為3’-羥基染料木黃酮抑制基質金屬蛋白酶-1活性之分析結果圖。
本說明書揭露內容提出3’-羥基染料木黃酮的新穎用途，特別是3’-羥基染料木黃酮應用於抗老化的新穎用途。以細胞體外試驗評估3’-羥基染料木黃酮抗老化的功效，並進一步驗證3’-羥基染料木黃酮係為藉由抑制基質金屬蛋白酶-1(Matrix Metalloproteinase-1,MMP-1)的活性，達到抗老化的功效。本說明書揭露內容提出的3’-羥基染料木黃酮為潛在的抗老化物質，特別可作為抑制基質金屬蛋白酶-1的物質，可用以製備預抗老化的醫藥組合物。
茲以下列具體試驗例進一步示範說明本發明，用以有利於本發明所屬技術領域通常知識者，可在不需過度解讀的情形下完整利用並實踐本發明，而不應將這些試驗例視為對本發明範圍的限制，但用於說明如何實施本發明的材料及方法。
3’-羥基染料木黃酮為染料木黃酮的衍生物，染料木黃酮為大豆異黃酮的一種主要活性因子，具有多種生理功能，3’-羥基染料木黃酮的化學結構式如下所示：
3’-羥基染料木黃酮的製備方式有很多種，例如利用生物轉換作用(biotransformation)製備而得，但本發明在此並不加以限定其製備方式，舉凡涉及利用3’-羥基染料木黃酮用於製備抗老化之組合物，應視為本發明所請之範圍內。
為確定3’-羥基染料木黃酮對正常細胞的安全性和安全劑量，以不同劑量的3’-羥基染料木黃酮對人類纖維母細胞進行細胞存活檢測。本試驗所使用的細胞株為人類纖維母細胞株Hs68，其係購自食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center；BCRC)，編號為BCRC 60038。細胞培養液為DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)，其中包含10%的胎牛血清、100μg/ml的鏈黴素和100unit/ml的青黴素。將Hs68細胞以前述之細胞培養液置於培養箱維持5% CO2、37℃恆溫培養，每3天繼代細胞一次。
進行細胞存活率之測定時，先將Hs68細胞以1×104cells/well的密度接種於96孔細胞分析盤中，將細胞置於37℃、5% CO2培養至隔天細胞貼壁後，去除原細胞培養液，再分別將以細胞培養液序列稀釋的3’-羥基染料木黃酮加入96孔細胞分析盤中作為實驗組，實驗組的3’-羥基染料木黃酮最終濃度分別為31.25μg/mL、62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL和2000μg/mL，每一濃度的3’-羥基染料木黃酮樣品進行3重複試驗，試驗上另包含未處理3’-羥基染料木黃酮的控制組。並 以alamarBlue®試劑(Thermo)檢測Hs68細胞的細胞存活率，再利用FlexStation 3讀取數值與分析。
請參照第1圖，為3’-羥基染料木黃酮對人類纖維母細胞之細胞存活率影響之分析結果圖，其中細胞存活率係以控制組的細胞存活率作為100%。第1圖的結果顯示，實驗組的Hs68細胞的細胞存活率皆大於100%，顯示3’-羥基染料木黃酮對於Hs68細胞不具有細胞毒性，且其安全劑量可達2000μg/mL。
基質金屬蛋白酶-1為膠原蛋白分解酶的一種，是調節光老化的重要因子。當纖維母細胞受陽光之紫外線輻射刺激時，會引發細胞膜產生脂質過氧化反應，脂質過氧化會促進了基質金屬蛋白酶-1的大量生成，進而降解細胞外基質(extracellular matrix,ECM)，使人體皮膚真皮組織中的膠原蛋白發生降解，進而影響到皮膚的緊縮性及彈性，並且會誘發皮膚提前老化現象。
因此本試驗例的抗老化分析試驗先以不同劑量的3’-羥基染料木黃酮處理人類纖維母細胞株後，以酵素結合免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析3’-羥基染料木黃酮對於基質金屬蛋白酶-1的抑制效果，並進行細胞存活檢測。
進行抗老化分析試驗時，先將Hs68細胞以1×104cells/well的密度接種於96孔細胞分析盤中，將細胞置於37℃、5% CO2培養至隔天細胞貼壁後，去除原細胞培養 液，再分別將以細胞培養液序列稀釋的3’-羥基染料木黃酮加入96孔細胞分析盤中作為實驗組，實驗組的3’-羥基染料木黃酮最終濃度分別為6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL，每一濃度的3’-羥基染料木黃酮樣品進行3重複試驗，試驗上另包含未處理3’-羥基染料木黃酮的控制組。在Hs68細胞處理3’-羥基染料木黃酮6小時後，於96孔細胞分析盤的每一孔中加入10ng/mL的腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激Hs68細胞生成基質金屬蛋白酶-1。將再處理TNF-α後的Hs68細胞於37℃、5% CO2培養18小時後，收取控制組和每一實驗組的上清液。將上清液以預先披覆基質金屬蛋白酶-1抗體的分析盤中進行酵素結合免疫吸附分析，檢測控制組和每一實驗組上清液中的基質金屬蛋白酶-1含量。並以alamarBlue®試劑(Thermo)檢測Hs68細胞的細胞存活率，再利用FlexStation 3讀取數值與分析。
請參照第2圖，為3’-羥基染料木黃酮抑制基質金屬蛋白酶-1活性之分析結果圖。由第2圖的結果可見，控制組和實驗組的Hs68細胞的細胞存活率皆大於80%，顯示3’-羥基染料木黃酮對於Hs68細胞不具有細胞毒性。此外由控制組可見，未處理TNF-α的Hs68細胞所生成的基質金屬蛋白酶-1約為1.3ng/mL，而處理TNF-α的Hs68細胞所生成的基質金屬蛋白酶-1約為6.7ng/mL，顯示處理TNF-α確實會使Hs68細胞產生大量的基質金屬蛋白酶-1。而在實驗組的部分，可見不論是在處理或未處理TNF-α的Hs68細 胞，其所生成基質金屬蛋白酶-1的含量皆降低。在處理TNF-α的實驗組Hs68細胞部分，其所生成的基質金屬蛋白酶-1含量依處理3’-羥基染料木黃酮的濃度由低至高(6.25μg/mL至200μg/mL)分別為4.96ng/mL、4.25ng/mL、3.15ng/mL、2.34ng/mL、1.56ng/mL和0.88ng/mL。而在未處理TNF-α的實驗組Hs68細胞部分，其所生成的基質金屬蛋白酶-1含量依處理3’-羥基染料木黃酮的濃度由低至高(6.25μg/mL至200μg/mL)分別為1.01ng/mL、0.96ng/mL、0.92ng/mL、0.84ng/mL、0.93ng/mL和0.68ng/mL。請再參照下表一，為依據上述數據所計算3’-羥基染料木黃酮對基質金屬蛋白酶-1的抑制率，其中抑制率的計算公式如下：
由表一的結果顯示，處理3’-羥基染料木黃酮對於Hs68細胞的基質金屬蛋白酶-1抑制率具有劑量依賴性，在未處理TNF-α的實驗組，施用濃度為6.25μg/mL至200μg/mL的3’-羥基染料木黃酮，對於Hs68細胞的基質金屬蛋白酶-1生成抑制率可達22.4%至47.9%。而在處理TNF-α 的實驗組，施用濃度為6.25μg/mL至200μg/mL的3’-羥基染料木黃酮，對於Hs68細胞的基質金屬蛋白酶-1生成抑制率更可達25.5%至86.9%，且3’-羥基染料木黃酮對於誘導性的基質金屬蛋白酶-1的半抑制濃度(IC50)為18.53±0.90μg/mL(77.44±3.76μM)，顯示3’-羥基染料木黃酮對於內源性的基質金屬蛋白酶-1和誘導性的基質金屬蛋白酶-1皆具有良好的抑制效果。
根據上述試驗結果，3’-羥基染料木黃酮對於基質金屬蛋白酶-1具有良好的抑制效果，是以可作為一種抗老化的組合物，特別是一種基質金屬蛋白酶-1抑制劑，並可用以預防因暴露於紫外線輻射而出現之皮膚光老化的狀況的抗老化的組合物，或是可用以減少皮膚光老化的狀況，而所述皮膚光老化的狀況可選自由皺紋產生、色斑及/或色素沉著過度、皮膚粗糙或皮革狀、下垂或鬆垂、變黃、乾燥及皮膚贅生物所組成之群組。
所述抗老化之組合物之有效劑量可為6.25μg/mL至2000μg/mL。較佳地，所述抗老化之組合物之有效劑量可為18μg/mL至1000μg/mL。更佳地，所述抗老化之組合物之有效劑量為25μg/mL至200μg/mL。
而所述抗老化之組合物可為一水劑、一乳劑、一膏劑或一粉劑，且所述抗老化之組合物可為一醫藥組合物、一化妝品組合物或一保健食用組合物。
當抗老化之組合物為醫藥組合物時，可根據眾所接受的藥學製程來製備，且可更包含一或多種藥學上可接 受之載劑，上述藥學上可接受之載體可包括，但不限於溶劑、分散媒(dispersion medium)、套膜(coating)、抗菌與抗真菌試劑與一等滲透壓與吸收延遲(absorption delaying)試劑等與藥學投予相容者。對於不同的給藥方式，可利用一般方法將藥學組合物配置成劑型(dosage form)。例如，供口服投藥的劑型可包括，但不限定於，藥錠、膠囊、乳劑(emulsions)、水性懸浮液(aqueous suspensions)、分散液(dispersions)與溶液。
當抗老化之組合物為化妝品組合物時，可更包含一般廣泛使用之化妝品上可接受的佐劑(cosmetically acceptable adjuvant)，例如包含一或多種選自於溶劑、膠凝劑、活性劑、防腐劑、抗氧化劑、遮蔽劑(screening agent)、螯合劑、介面活性劑、增稠劑(thickening agent)、香料以及氣味吸收劑的佐劑，且佐劑的選用係為熟習此項技術之人士的專業常識與例行技術範疇內。
另外，抗老化之組合物可作為外敷施用，在外敷施用的情況下，可更包含一媒劑可做為活性成分之稀釋劑、分散劑或載體。媒劑可包括常在皮膚護理產品中使用的材料，如水、液體或固體軟化劑、矽酮油、乳化劑、溶劑、濕潤劑、增稠劑、粉末、噴射劑與類似物。媒劑可以在沒有其它佐劑的存在下構成組合物的其餘部份。
綜上所述，本發明之3’-羥基染料木黃酮具有優異地抑制基質金屬蛋白酶-1的能力，進而達到抗老化的功效，特別是預防或減少皮膚光老化的狀況。是以3’-羥基染 料木黃酮可用於製備抗老化之組合物，所述組合物可為醫藥組合物、化妝品組合物或保健食用組合物，具有運用於生醫保健市場之潛能。
然本發明已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明的精神和範圍內，當可作各種的更動與潤飾，因此本發明的保護範圍當視後附的申請專利範圍所界定者為準。
Claims (10)
- 一種3’-羥基染料木黃酮(3’-hydroxygenistein)之用途，其係用於製備一抗老化之組合物。
- 如申請專利範圍第1項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該抗老化之組合物為一基質金屬蛋白酶-1(Matrix Metalloproteinase-1,MMP-1)抑制劑。
- 如申請專利範圍第2項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該抗老化之組合物用以預防因暴露於紫外線輻射而出現之一皮膚光老化的狀況。
- 如申請專利範圍第2項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該抗老化之組合物用以減少一皮膚光老化的狀況。
- 如申請專利範圍第3項或第4項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該皮膚光老化的狀況係選自由皺紋產生、色斑及/或色素沉著過度、皮膚粗糙或皮革狀、下垂或鬆垂、變黃、乾燥及皮膚贅生物所組成之群組。
- 如申請專利範圍第1項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該抗老化之組合物之有效劑量為6.25μg/mL至2000μg/mL。
- 如申請專利範圍第6項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該抗老化之組合物之有效劑量為18μg/mL至1000μg/mL。
- 如申請專利範圍第7項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該抗老化之組合物之有效劑量為25μg/mL至200μg/mL。
- 如申請專利範圍第1項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該抗老化之組合物為一水劑、一乳劑、一膏劑或一粉劑。
- 如申請專利範圍第1項所述的3’-羥基染料木黃酮之用途，其中該抗老化之組合物為一醫藥組合物、一化妝品組合物或一保健食用組合物。
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