TW201945400A - 抗TrkA抗體 - Google Patents

抗TrkA抗體 Download PDF

Info

Publication number
TW201945400A
TW201945400A TW108105098A TW108105098A TW201945400A TW 201945400 A TW201945400 A TW 201945400A TW 108105098 A TW108105098 A TW 108105098A TW 108105098 A TW108105098 A TW 108105098A TW 201945400 A TW201945400 A TW 201945400A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
pain
seq
antibody
amino acid
trka
Prior art date
Application number
TW108105098A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI702233B (zh
Inventor
凱瑟琳 玻迪甘 貝勒
丹尼爾 史考特 吉拉德
查坦庫瑪 奈法羅 佩托
Original Assignee
美商美國禮來大藥廠
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商美國禮來大藥廠 filed Critical 美商美國禮來大藥廠
Publication of TW201945400A publication Critical patent/TW201945400A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI702233B publication Critical patent/TWI702233B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本發明提供原肌球蛋白(tropomysin)受體激酶(TrkA)之抗體、包括此類抗體之組合物及使用此類抗體來治療疼痛之方法，該疼痛包括手術後疼痛、類風濕性關節炎疼痛、神經性疼痛及骨關節炎疼痛。

Description

抗TrkA抗體
本發明屬於醫學領域。特定言之，本發明係關於原肌球蛋白(tropomysin)受體激酶A (TrkA)之抗體、包含此類抗TrkA抗體之組合物及使用此類抗體來治療疼痛之方法。該等抗體及其使用方法可治療急性或慢性的傷害感受性/發炎性、神經病性、塑性(nociplastic)或混合病源學疼痛。在其他實施例中，該等抗體及方法可用於治療肌肉骨胳或神經病性病因的急性或慢性疼痛。疼痛之具體非限制性實施例包括例如：手術後疼痛、類風濕性關節炎疼痛、骨關節炎疼痛、神經性疼痛、糖尿病性神經性疼痛(DNP)及慢性下背痛(CLBP) (包括非神經根(非神經病性)及神經根下背痛(其有時被稱作腰骶神經根病變(LSR)或坐骨神經痛)以及內臟疼痛(諸如慢性前列腺炎疼痛、間質性膀胱炎疼痛(膀胱疼痛)或慢性骨盆疼痛)。
美國專利申請公開案第2013/0336964號解釋TrkA及神經生長因子(NGF)在人類疼痛系統中之作用。具體言之，在某些情形下，NGF將與TrkA蛋白結合且激活TrkA蛋白，作為體內疼痛途徑之一部分。經由多種機制，此結合增強疼痛信號傳導。(參見WO 2016/087677)。因此，靶向NGF潛在地可適用於治療疼痛，且在動物模型中，發炎相關疼痛可藉由中和NGF生物活性而顯著地降低。(參見例如WO 2016/087677；和美國專利第7,449,616號)。美國專利申請公開案第2013/0336961號、美國專利第7,601,818號、WO 2000/73344及WO 2016/087677列舉設計成與TrkA結合的各種抗體。人類TrkA之蛋白序列提供於美國專利申請公開案第2013/0336961號中。
持續性疼痛代表一種主要健康問題，且導致顯著損失生活品質。持續性疼痛可以不同嚴重程度水準存在，且與各種病變相關聯，該等病變諸如背損傷或變性性椎間盤疾病、偏頭痛、關節炎、糖尿病性神經病、癌症及其他疾病。輕度疼痛當前用乙醯胺苯酚、阿司匹林(aspirin)及其他(通常非處方)藥品治療。中度疼痛可使用皮質類固醇藥物，諸如皮質醇及強的松(prednisone)控制。現有治療之效果和/或耐受性之問題為熟知的，且例如皮質類固醇展示顯著不良效果，包括體重增加、失眠及免疫系統減弱。中度或重度疼痛可用類鴉片(諸如嗎啡鹼(morphine)及芬太尼(fentanyl))治療，但長期使用鴉片劑受到幾種嚴重缺點限制，包括發展成癮、耐受性及身體依賴性。鑒於越來越多的人使用類鴉片且可能類鴉片成癮，潛在過度使用類鴉片已被表徵為「類鴉片流行性」。
由於目前的疼痛療法通常不太有效及/或具有嚴重的非所需副作用，所以迫切需要研發針對新分子靶標且可提供具有改良藥理學性質之組合的藥物，該等藥理學性質包括安全性、效能、功效及耐受性，特定言之用於治療慢性疼痛的藥物。迄今為止，尚未有靶向TrkA信號傳導之藥劑批准用於治療疼痛。因此，仍需要可抑制TrkA信號傳導之藥劑，諸如替代性抗TrkA抗體。亦需要提供治療效益之此類藥劑。
本發明提供結合TrkA之抗體，且其包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，其中該HCVR包含互補決定區(CDR) HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該LCVR包含CDR LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO. 3，HCDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO. 4，HCDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO.5，LCDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO. 7，LCDR2之胺基酸序列SEQ ID NO. 8，及LCDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO. 9。如下文所提及，具有SEQ ID NO. 7之LCDR1之胺基酸序列包含在殘基10處之Xaa ，該Xaa 為N、A或Q中之一者。在當前較佳實施例中之一些中，在SEQ ID NO. 7之位置10處之Xaa 為A。在其他當前較佳實施例中，在SEQ ID NO. 7之位置10處之Xaa 為Q。
本發明之實施例提供一種結合TrkA之抗體，其包含HCVR及LCVR，其中HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO. 10，且LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO. 11。如下文所提及，具有SEQ ID NO. 11之LCVR之胺基酸序列包括在殘基33處之Xaa ，該Xaa 為N、A或Q中之一者。在當前較佳實施例中之一些中，在SEQ ID NO. 11之殘基33處之Xaa 為A。在其他當前優選實施例中，在SEQ ID NO. 11之殘基33處之Xaa 為Q。
在其他實施例中，本發明提供一種結合TrkA之抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中HC之胺基酸序列係選自由SEQ ID NO. 1及SEQ ID NO. 2組成之群，且LC之胺基酸序列為SEQ ID NO. 6。如下文所提及，定義於SEQ ID NO. 6中之LC之胺基酸序列包括在殘基33處之Xaa ，該Xaa 為N、A或Q中之一者。在當前較佳實施例中之一些中，在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為A。在其他當前較佳實施例中，在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為Q。在一些實施例中，存在兩個HC及兩個LC，其中LC中之每一者具有SEQ ID NO. 6之胺基酸序列，且HC中之每一者具有SEQ ID NO. 1或SEQ ID NO. 2之胺基酸序列。
具有SEQ. ID NO. 6之LC之各種實施例可與具有SEQ ID NO. 1之HC或具有SEQ ID NO. 2之HC一起使用。在一個實施例中，HC由SEQ ID NO. 1定義，且構築具有SEQ ID NO. 6之LC，使得在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為Q。在另一實施例中，HC由SEQ ID NO. 1定義，且構築具有SEQ ID NO. 6之LC，使得在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為A。在其他實施例中，HC由SEQ ID NO. 2定義，且構築具有SEQ ID NO. 6之LC，使得在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為Q。在又一另外實施例中，HC由SEQ ID NO. 2定義，且構築具有SEQ ID NO. 6之LC，使得在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為A。
本發明進一步提供醫藥組合物，其包含本發明之抗體及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。此外，本發明提供一種治療疼痛之方法，其包含向有需要之患者投與本發明之醫藥組合物。在又另一實施例中，本發明提供一種治療急性或慢性的傷害感受性/發炎性、神經病性、塑性或混合病源學疼痛的方法。在其他實施例中，疼痛為肌肉骨胳或神經病性病因的急性或慢性疼痛。可藉由本發明實施例治療之疼痛之具體非限制性實施例包括例如手術後疼痛、類風濕性關節炎疼痛、神經性疼痛及骨關節炎疼痛。(如本文所用，骨關節炎疼痛明確地包括非神經根(非神經病性)疼痛。如本文所用，神經性疼痛明確地包括神經根疼痛CLBP、DNP及LSR。)在一些實施例中，疼痛為慢性疼痛，諸如肌肉骨胳以及神經病性病因之慢性疼痛。在其他實施例中，疼痛為內臟疼痛(諸如慢性前列腺炎疼痛、間質性膀胱炎疼痛(膀胱疼痛)或慢性骨盆疼痛)。
在又另一實施例中，本發明提供一種治療疼痛之方法，其包含向有需要之患者投與本發明之醫藥組合物。在一些實施例中，疼痛為慢性疼痛，諸如肌肉骨胳以及神經病性病因之慢性疼痛。
另外，本發明提供一種治療疼痛之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之本發明之抗體。在更多特定實施例中，本發明提供一種治療急性或慢性的傷害感受性/發炎性、神經病性、塑性或混合病源學疼痛的方法。在其他實施例中，疼痛為肌肉骨胳或神經病性病因的急性或慢性疼痛。疼痛之具體非限制性實施例包括手術後疼痛、類風濕性關節炎疼痛、神經性疼痛及骨關節炎疼痛(包括(例如)非神經根(非神經病性)與神經根CLBP、DNP及LSR)，其包含向有需要之患者投與有效量之本發明之抗體。在一些實施例中，治療方法涉及治療疼痛，該疼痛為慢性疼痛，諸如肌肉骨胳以及神經病性病因之慢性疼痛。在其他實施例中，治療方法涉及治療疼痛，該疼痛為內臟疼痛(諸如慢性前列腺炎疼痛、間質性膀胱炎疼痛(膀胱疼痛)或慢性骨盆疼痛)。
本發明亦提供用於治療之本發明的抗體。更特定言之，本發明提供一種用於治療疼痛之本發明的抗體。在特定實施例中，本發明提供一種用於治療急性或慢性的傷害感受性/發炎性、神經病性、塑性或混合病源學疼痛之本發明的抗體，該疼痛包括(但不限於)手術後疼痛、神經性疼痛、類風濕性關節炎疼痛及骨關節炎疼痛，該骨關節炎疼痛包括(例如)非神經根(非神經病性)與神經根CLBP、DNP及LSR。在一些實施例中，本發明之抗體用於治療疼痛，該疼痛為慢性或急性疼痛，諸如肌肉骨胳以及神經病性病因之慢性疼痛。在其他實施例中，本發明之抗體用於治療疼痛，該疼痛為內臟疼痛(諸如慢性前列腺炎疼痛、間質性膀胱炎疼痛(膀胱疼痛)或慢性骨盆疼痛)。
此外，本發明提供一種本發明之抗體之用途，其用於製造用於治療急性或慢性的傷害感受性/發炎性、神經病性、塑性或混合病源學疼痛的藥物，該急性或慢性疼痛包括(但不限於)手術後疼痛、神經性疼痛、類風濕性關節炎疼痛及骨關節炎疼痛，該骨關節炎疼痛包括(例如)非神經根(非神經病性)與神經根CLBP、DNP及LSR。在一些此類實施例中，本發明之抗體用於製造用於治療疼痛的藥物，該疼痛為急性或慢性疼痛，諸如肌肉骨胳以及神經病性病因的慢性疼痛。在其他實施例中，本發明之抗體用於製造用於治療疼痛的藥物，該疼痛為內臟疼痛(諸如慢性前列腺炎疼痛、間質性膀胱炎疼痛(膀胱疼痛)或慢性骨盆疼痛)。
本發明實施例亦提供一種結合TrkA之抗體或包含此類抗體之醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療疼痛的藥物，該抗體包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，其中HCVR包含互補決定區(CDR) HCDR1、HCDR2及HCDR3，且LCVR包含CDR LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO. 3，HCDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO. 4，HCDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO. 5，LCDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO. 7，LCDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO.8，且LCDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO. 9。在一些實施例中，抗體(或包含此類抗體之醫藥組合物)用於製造用於治療急性或慢性的傷害感受性/發炎性、神經病性、塑性或混合病源學疼痛的藥物，該急性或慢性疼痛包括(但不限於)手術後疼痛、類風濕性關節炎疼痛、神經性疼痛及骨關節炎疼痛，該骨關節炎疼痛包括(例如)非神經根(非神經病性)與神經根CLBP、DNP及LSR，亦稱為坐骨神經痛。在其他實施例中，抗體(或包含此類抗體之醫藥組合物)用於製造用於治療慢性疼痛的藥物。在其他實施例中，抗體(或包含此類抗體之醫藥組合物)用於製造用於治療內臟疼痛(諸如慢性前列腺炎疼痛、間質性膀胱炎疼痛(膀胱疼痛)或慢性骨盆疼痛)的藥物。在其他實施例中，抗體(或包含此類抗體之醫藥組合物)用於製造用於治療肌肉骨胳或神經病性病因之急性或慢性疼痛的藥物。
本發明抗體與TrkA結合。更具體言之，本發明抗體可與TrkA結合，使得阻斷或防止NGF與TrkA結合。一般而言，NGF將與TrkA受體之域5結合。然而，本發明抗體可與TrkA結合，且因此阻斷/預防NGF與TrkA之域5之全部或一部分或TrkA之另一部分結合。
根據35 U.S.C. §119(e)，本申請案主張2018年2月28日提交之美國臨時申請案序列號62/636,207之權益，其揭示內容以引用之方式併入本文中。
以下為在本發明實施例之範疇內之一些例示性抗體的序列：
具有SEQ ID. NO. 6 (其中在SEQ ID. NO. 6之殘基33處之Xaa 為N)之LC及SEQ ID. NO. 1之HC的抗體(下文被稱作「mAb A」)：
輕鏈

重鏈

具有SEQ ID. NO. 6 (其中在SEQ ID. NO. 6之殘基33處之Xaa 為A)之LC及SEQ ID. NO. 1之HC的抗體(下文被稱作「mAb B」)：
輕鏈

重鏈

具有SEQ ID. NO. 6 (其中在SEQ ID. NO. 6之殘基33處之Xaa 為Q)之LC及SEQ ID. NO. 1之HC的抗體(下文被稱作「mAb C」)：
輕鏈

重鏈
具有SEQ ID. NO. 6 (其中在SEQ ID. NO. 6之殘基33處之Xaa 為A)之LC及SEQ ID. NO. 2之HC的抗體(下文被稱作「mAb D」)：
輕鏈

重鏈
具有SEQ ID. NO. 6 (其中在SEQ ID. NO. 6之殘基33處之Xaa 為Q)之LC及SEQ ID. NO. 2之HC的抗體(下文被稱作「mAb E」)：
輕鏈


重鏈
具有SEQ ID. NO. 6 (其中在SEQ ID. NO. 6之殘基33處之Xaa 為N)之LC及SEQ ID. NO. 2之HC的抗體(下文被稱作「mAb F」)：
輕鏈

重鏈
此外，本發明提供一種根據方法製備的抗體，其中該方法包含：在使得表現該抗體之條件下培養包含本發明之聚核苷酸序列的宿主細胞，及自該宿主細胞回收本發明的抗體。
如本文所用，「抗體」為包含由二硫鍵互連之2個HC及2個LC之免疫球蛋白分子。各LC及HC之胺基端部分包括約100-120個胺基酸之可變區，該可變區主要負責經由其中所含有之CDR識別抗原。CDR與稱為構架區(「FR」)之更保守區穿插。各LCVR及HCVR由3個CDR及4個FR構成，其按以下順序自胺基端至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。LC之3個CDR被稱為「LCDR1、LCDR2及LCDR3」，且HC之3個CDR被稱為「HCDR1、HCDR2及HCDR3」。CDR含有與抗原形成特異性相互作用的大部分殘基。抗體結合特定抗原之功能性能力很大程度上受六個CDR影響。本發明之抗體之LCVR及HCVR區內之CDR域的胺基酸的排列係基於熟知的Kabat編號規則(Kabat等人,Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971)；Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest , 第五版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991))及North編號規則(North等人,A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations , Journal of Molecular Biology, 406:228-256 (2011))。
將LC歸類為κ或λ，其各自特徵在於如此項技術中已知的特定恆定區。本發明之抗體包括κ LC。將HC歸類為γ、μ、α、δ或ε，且分別將抗體之同型定義為IgG、IgM、IgA、IgD或IgE。本發明之抗體包括IgG HC。IgG抗體可進一步分成子類，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。在一特定實施例中，本發明之抗體為IgG4或IgG1。各HC之羧基端部分界定主要負責效應功能之恆定區。在一特定實施例中，本發明之抗體在各HC之恆定區中具有降低效應功能或改良抗體穩定性的一或多種修飾。
本發明之抗體為單株抗體(「mAb」)。mAb可例如藉由融合瘤技術、重組技術、噬菌體呈現技術、合成技術(例如，CDR移植)或此類技術之組合或此項技術中已知之其他技術生產。如本文中所提及，mAb為衍生自單一複本或純系(包括(例如)任何真核、原核或噬菌體純系)之抗體，而不是生產其的方法。
生產及純化抗體之方法為此項技術中所熟知。舉例而言，可篩選噬菌體文庫，由此篩選出與重組人類Trk相互作用的數千Fab片段。所得相互作用片段可進行回收、純化，且使用此項技術中熟知的習知方法來測定胺基酸序列，由此可構築初始前導抗體。本發明之抗體經工程改造為含有一或多個人類構架區。人類構架生殖系序列可自ImMunoGeneTics (INGT)經由其網站http://imgt.cines.fr獲得，或自Marie-Paule Lefranc及Gerard Lefranc的The Immunoglobulin FactsBook , Academic Press, 2001, ISBN 012441351獲得。根據特定實施例，用於本發明之抗體中之生殖系HC及LC構架區分別包括3-21及A23。
在本發明之特定實施例中，抗體或編碼其之核酸以經分離形式提供。如本文所用，術語「經分離」係指蛋白質、肽或核酸不含或實質上不含細胞環境中所發現之其他大分子物種。
本發明之抗體可使用已知方法製備及純化。舉例而言，編碼HC (例如由SEQ ID NO. 1給出之胺基酸序列)及LC (例如由SEQ ID NO. 6給出之胺基酸序列)之cDNA序列可經選殖且工程改造至麩醯胺酸合成酶(glutamine synthetase，GS)表現載體中。經工程改造的免疫球蛋白表現載體可隨後穩定轉染至CHO細胞中。如熟習此項技術者應瞭解，抗體之哺乳動物表現會引起糖基化，通常在Fc區中之高度保守的N-糖基化位點處。可驗證穩定純系用於表現特異性結合TrkA之抗體。可在生物反應器中，將陽性純系在無血清培養基中擴增以用於產生抗體。可藉由習知技術純化其中已分泌有抗體之培養基。舉例而言，可將培養基方便地施加至已用相容性緩衝液(諸如磷酸鹽緩衝鹽水)平衡之蛋白A或G瓊脂糖凝膠FF管柱。洗滌管柱以移除非特異性結合組分。例如藉由pH梯度來溶離結合的抗體，且諸如藉由SDS-PAGE來偵測抗體級分，且合併抗TrkA與TrkA。可使用常見技術濃縮及/或無菌過濾抗體。可藉由常見技術，包括尺寸排阻、疏水性相互作用、離子交換或羥磷灰石層析有效移除可溶聚集體及多聚體。可立即將產物冷凍在例如-70℃下或可將其凍乾。
本發明之抗體可用於治療患者。更特定言之，預期本發明之抗體用以治療一類疼痛，諸如急性或慢性的傷害感受性/發炎性、神經病性、塑性或混合病源學疼痛。此類疼痛明確地包括(但不限於)手術後疼痛、神經性疼痛、類風濕性關節炎疼痛及骨關節炎疼痛，該骨關節炎疼痛包括(例如)非神經根(非神經病性)與神經根CLBP、DNP及LSR。儘管預期本發明之抗體適用於治療疼痛，包括如上文所描述之手術後疼痛、神經性疼痛、類風濕性關節炎疼痛及骨關節炎疼痛，但此類抗體亦可適用於治療其他疼痛。如在本文中互換地使用，「治療(treatment)」及/或「治療(treating)」及/或「治療(treat)」旨在指其中可減緩、阻斷、遏制、控制、終止或逆轉本文所描述之病症之進展的所有方法，但未必表示完全消除所有病症症狀。治療亦可包括預防疼痛。
治療包括投與本發明之抗體以用於治療將自TrkA活性降低獲益之人類之疾病或病狀，且包括：(a)抑制疾病之進一步進展，亦即遏制其發展；(b)減輕疾病，亦即引起疾病或病症消退或緩解其症狀或併發症；及(c)預防疾病症狀發作。
如本文所定義之治療明確地包括降低疼痛發生率、改善疼痛或疼痛之一或多個症狀、緩和疼痛或疼痛之一或多個症狀、延遲疼痛發展。在一些情形下，治療亦包括治療疼痛，但不一定改善產生疼痛之潛在疾病或病狀。
「降低」疼痛之「發生率」意謂以下中之任一者：降低嚴重程度(其可包括降低對(例如暴露於)其他藥物及/或對於此病狀一般使用之療法(包括(例如)鴉片劑)的需求及/或降低其量)、降低持續時間及/或降低頻率(包括(例如)延遲或增加個體的手術後疼痛的時間)。如熟習此項技術者所理解，個體在其對於治療的反應方面可變化，且因此例如「method of reducing incidence of rheumatoid arthritis pain or osteoarthritis pain in an individual」反映基於合理的期望投與抗體，使得此類投與可能引起在該特定個體中的此類發生率降低。
「改善」疼痛或疼痛(諸如類風濕性關節炎疼痛或骨關節炎疼痛)之一或多個症狀意謂，相較於不投與抗體，減輕或改良疼痛之一或多個症狀。「改善」亦包括縮短或減少症狀之持續時間。
「緩和」疼痛或疼痛(諸如類風濕性關節炎疼痛或骨關節炎疼痛)之一或多個症狀意謂，減輕用根據本發明之抗體治療之個體或個體群體之手術後疼痛的一或多種非所需臨床表現的程度。
如其中所用，「延遲」疼痛之發展意謂推遲、阻止、減緩、延緩、穩定及/或推延疼痛之進展，該疼痛諸如手術後疼痛、類風濕性關節炎疼痛或骨關節炎疼痛。此延遲可具有不同時間長度，視所治療之疾病及/或個體的病史而定。如熟習此項技術者顯而易見，充分或顯著延遲可實際上涵蓋預防，使得該個體不發展疼痛。「延遲」症狀發展之方法為一種當與不使用該方法相比較時，在給定時間範圍內降低症狀發展之機率及/或在給定時間範圍內減輕症狀程度之方法。此類比較通常基於臨床研究，使用統計顯著數目的個體。
如本文所用，「疼痛」係指任何病源學疼痛，包括傷害感受性/發炎性病源學疼痛、神經病性病源學疼痛、塑性病源學疼痛或混合病源學疼痛。疼痛明確地包括急性及慢性疼痛。疼痛明確地包括肌肉骨胳或神經病性病因的急性或慢性疼痛。疼痛亦包括伴隨發炎性組分的任何疼痛。疼痛亦包括內臟疼痛(諸如慢性前列腺炎疼痛、間質性膀胱炎疼痛(膀胱疼痛)或慢性骨盆疼痛)。疼痛之非限制性實例包括：手術後疼痛；術後疼痛(包括牙痛)；偏頭痛；頭痛及三叉神經痛；燒傷、創傷或腎結石相關疼痛；外傷(包括創傷性頭部損傷)相關疼痛；神經性疼痛；肌肉骨骼病症(諸如類風濕性關節炎、骨關節炎(包括(例如)非神經根(非神經病性)與神經根CLBP (包括LSR或坐骨神經痛)、DNP、僵直性脊椎炎、血清陰性(非類風濕性)關節病、非關節性風濕及關節周圍病症)相關疼痛；及癌症相關疼痛(包括「突發疼痛」及晚期癌症相關疼痛)；周邊神經病變及疱疹後神經痛。伴隨發炎性組分之疼痛之非限制性實施例(除上文所描述之彼等中之一些以外)包括風濕性疼痛、黏膜炎相關疼痛及痛經。
如本文所定義之疼痛明確地包括肌肉骨胳以及神經病性病因之慢性疼痛。疼痛亦明確地包括急性疼痛或突發疼痛。
「手術後疼痛」(互換地稱為「切取後」或「創傷後疼痛」)係指外部外傷產生或造成的疼痛，該外部外傷諸如個體組織中之切割、穿刺、切口、撕裂或創傷(包括來源於所有手術程序的彼創傷，無論是否為侵入性或非侵入性的)。如本文所用，手術後疼痛不包括在無外部身體創傷的情況下發生(產生或發起)的疼痛。在一些實施例中，手術後疼痛為內部或外部(包括周邊)疼痛，且創傷、切割、外傷、撕裂或切口可以為偶然(如同創傷性創傷)或有意地(如同手術切口)。如本文所用，「疼痛」包括傷痛刺激及疼痛感覺，且可使用疼痛評分及此項技術中熟知的其他方法來客觀及主觀地評定疼痛。如本文所用，手術後疼痛包括觸摸痛(亦即，對通常無害的刺激的反應增加)及痛覺過敏(亦即，對通常有害或不適的刺激的反應增加)，此可轉而實質上為熱或機械(觸感)。在一些實施例中，疼痛之特徵在於熱敏感性、機械敏感性及/或靜息疼痛。在一些實施例中，手術後疼痛包含機械誘發疼痛或靜息疼痛。在其他實施例中，手術後疼痛包含靜息疼痛。疼痛可為一級或二級疼痛，如此項技術中熟知的。
如在本文中可互換地使用，術語「患者」、「個體(subject/individual)」係指人類。在某些實施例中，患者之另外特徵為患有將自TrkA活性降低獲益之病症、疾病或病狀(例如疼痛，例如一級或二級頭痛及/或偏頭痛，包括慢性偏頭痛)。在另一實施例中，患者之另外特徵為正處於發展上文所描述之病狀或將自TrkA活性降低獲益之病狀的風險下。
如本文所用，術語「結合(bind/binds)」或「與...結合(binds to)」係指抗體與人類TrkA之抗原決定基相互作用。如本文所用，術語「抗原決定基」係指抗原之由本發明之抗體識別的分散三維位點。
可將本發明之抗體併入醫藥組合物中，該醫藥組合物可藉由此項技術中熟知之方法來製備且包含本發明之抗體及一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑(例如，Remington ,The Science and Practice of Pharmacy , 第22版, Loyd V.編, Pharmaceutical Press, 2012，其提供如從業者一般已知之調配技術的綱要)。醫藥組合物之適合載劑包括當與本發明之抗體組合時保留分子活性且與患者之免疫系統為非反應性的任何材料。
可藉由腸胃外途徑(例如，皮下、靜脈內、腹膜內、肌肉內或經皮)，向處於如本文所描述之疾病或病症風險下或呈現該等疾病或病症之患者，投與包含本發明之抗體的醫藥組合物。本發明之醫藥組合物含有「有效」或「治療有效」量(如在本文中可互換地使用)之本發明的抗體。有效量係指達成所要治療結果所必需之量(在一定劑量下，及對於一定時間段而言，及對於投與方法而言)。抗體之有效量可根據諸如個體之疾病狀態、年齡、性別及體重以及抗體引發個體中期望性反應之能力的因素而變化。有效量亦為本發明之抗體之治療有利效果超過其任何毒性或不利效果的量。在一些實施例中，有效量得到疼痛臨床上顯著降低。
實例
實例使用當前所主張之抗體中之一些，包括mAb A、mAb B、mAb C、mAb D及mAb E，其中此類抗體之序列在本文中給出。
實例 1. mAb A-E 之工程改造、表現及純化
為了研發對TrkA具特異性之抗體，用His標記的人類TrkA胞外域(ECD)免疫AlivaMab小鼠(Ablexis) (人類免疫球蛋白可變區轉殖基因的)。藉由螢光活化細胞分選(FACS)分選人類TrkA結合陽性的小鼠B細胞，且藉由單一細胞聚合酶鏈反應(PCR)將抗體選殖為人類IgG4PAA/κ抗體。經工程改造的分子製備為IgG4PAA同型及IgG1EN同型。
本發明之抗體可藉由熟知方法生物合成、純化及調配用於投藥。用用於分泌抗體之表現系統(使用預定HC:LC載體比率(若使用兩種載體))或編碼重鏈及輕鏈兩者之單一載體系統，瞬時或穩定轉染適當宿主細胞，諸如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)。適合於自此等常用宿主細胞表現及分泌抗體之載體為熟知的。在表現及分泌抗體之後，使培養基澄清以移除細胞。將澄清的培養基施加至已用相容性緩衝液(諸如PBS (pH 7.4))平衡之蛋白A親和管柱。管柱用補充有1M NaCl之緩衝液洗滌，以移除非特異性結合組分。例如用在pH~3.5下之檸檬酸鈉來溶離結合的抗體，且用1M 2-胺基-2-(羥甲基)丙烷-1,3-二醇(Tris)緩衝液中和級分。諸如藉由十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)或尺寸排阻分析來偵測抗體級分，且隨後將其合併。可藉由常見技術，包括尺寸排阻、疏水性相互作用、離子交換或羥磷灰石層析有效移除可溶聚集體及多聚體。使用常見技術，濃縮及/或無菌過濾本發明之例示抗體。例示抗體在此等層析步驟之後之純度超過95%，且可緊接著將樣本冷凍在-70℃下或儲存在4℃下幾個月。
本發明實例抗體與TrkA結合及/或抑制藉由TrkA之信號傳導之能力可根據實例2-7來評定。
實例 2. mAb A-E 之結合動力學及親和力
如下文所描述，在BIACORETM 8K儀器(GE Healthcare)上使用表面電漿子共振分析，測定例示抗體與人類、食蟹獼猴、大鼠、小鼠及兔TrkA之結合動力學及親和力。評價兩種不同的人類TrkA同功異型物(同功異型物1及同功異型物2)與人類TrkB及人類TrkC。BIACORETM 8K底塗有HBS-EP+ 電泳緩衝液[10mM 2-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸(Hepes pH 7.4，150 mM NaCl，3 mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.05%聚山梨醇酯20界面活性劑(P20, TWEEN® 20)]。分析溫度設定為37℃，且樣本區室設定為15℃。藉由抗體捕捉方法，使用平行動力學分析，獲得結合動力學及親和力。將抗體捕捉至一系列S感測器蛋白A CM5晶片(GE Healthcare)上。對於每一通道，流動池1 (FC1)稱為緩衝液參考，且流動池2 (FC2)經指派用於抗體捕捉。所有八個通道上之所有FC2設定成在10 µL/min流速下捕捉大致89反應單位(RU)的抗體。藉由稀釋至電泳緩衝液中，製備在1 µg/mL下之抗體樣本。藉由稀釋至電泳緩衝液中，製備在最終濃度為400、200、100、50、25、12.5、6.25及3.125 nM下之人類TrkA同功異型物1及2、小鼠、大鼠、兔及食蟹獼猴TrkA分析物。藉由稀釋至電泳緩衝液中，製備在最終濃度為800、400、200、100、50、25、12.5及6.25 nM下之人類TrkB及TrkC分析物。在分析循環之前，藉由以100 µL/min在FC1及FC2上3次注射甘胺酸(pH~1.5) 15秒接觸時間來更新晶片，以清洗晶片表面。更新之後，進行由以下組成之調節步驟：(1)在FC2上以5 µL/min注射5 µg/mL之IgG4同型對照抗體15秒；(2)在FC1及FC2上以30 µL/min注射電泳緩衝液250秒及解離600秒；(3)以100 µL/min一次注射甘胺酸(pH~1.5) 15秒接觸時間來更新晶片表面。各分析循環由以下組成：(1)捕捉測試抗體於所有八個FC2上，其中所有八個個別FC1對用作緩衝液參考，在10 µL/min下；(2)電泳緩衝液洗滌步驟；(3)在通道1-8上以100 µL/min，注射TrkA、TrkB或TrkC，120秒接觸時間，以便降低濃度；(4)返回至緩衝液流以進行600秒解離時間；(5)以100 µL/min用兩次注射甘胺酸(pH~1.5) 15秒/注射來更新晶片表面；(6)最終電泳緩衝液洗滌步驟。使用減去參考之預定義抗體平行動力學來處理資料，且使用BIACORETM 8K評價軟體(版本1.1.1.7442)擬合於1:1結合模型來測定結合速率(結合速率kon，M-1 s-1 單位)及解離速率(解離速率，koff，s-1 單位)。由關係使KD = koff /kon 計算平衡解離常數(KD )，以莫耳為單位。除非另外提及，否則自三個獨立實驗測定平均(Avg) KD 及誤差(報導為標準差(SD))。例示抗體表明與人類、食蟹獼猴、大鼠、小鼠及兔TrkA的濃度依賴性結合。在所注射之人類TrkB及人類TrkC最高濃度(800 nM)下，結合反應信號未達到理論半最大反應信號。因此，所測試抗體針對人類TrkB及人類TrkC之KD 經估計為＞800 nM。結果顯示於表1中。


表 1 ： mAb A-E 之 BIACORETM 結合動力學及親和力
表1中之「分析物」欄所列之Trk蛋白之序列在下文SEQ ID NO. 20-27中給出。
實例 3. mAb A-E 之活體外神經突生長分析
使用大鼠NEUROSCREENTM -1細胞(嗜鉻細胞瘤PC12次純系，CELLOMICS® )，評定神經元上之NGF誘發的神經突生長的抑制。在37℃、95%濕度下，將細胞維持在膠原蛋白塗覆之燒瓶中之F-12K基礎培養基中，該基礎培養基為12.5%熱滅活馬血清、2.5%熱滅活胎牛血清(FBS)、1X GlutaMAXTM (INVITROGENTM ，目錄號35050061)及1X抗-抗(INVITROGENTM ，目錄號15240)。為了量測神經突生長，使用僅內部60個孔，在生長培養基中以2000個細胞/孔，將NEUROSCREENTM -1細胞接種至膠原蛋白I 96孔盤中。在第二天，移除培養基，且在存在或不存在25 ng/mL之NGF (R&D SYSTEMS® ，目錄號：256-GF)下，用含有8點稀釋系列之抗TrkA抗體之新鮮生長培養基替換。在稀釋系列中每一點存在三個技術重複。在37℃、95%濕度下培育培養盤4天，且隨後用1X偏好固定劑(Anatech, Ltd)固定1小時。培養盤用1X杜爾貝科氏(Dulbecco's)磷酸鹽緩衝鹽水(DPBS)洗滌兩次及用1X NO緩衝液[1X DBPS，0.5%牛血清白蛋白(BSA)，0.01%皂素]洗滌一次。在NO緩衝液中，細胞用以1:800稀釋之一級抗體小鼠抗β3微管蛋白(TU-20，INVITROGENTM ，目錄號MA1-19187)免疫染色隔夜，且在NO緩衝液中用以1:500稀釋之二級抗體山羊抗小鼠DYLIGHT® 488 (INVITROGENTM ，目錄號35502)免疫染色＞2小時。培養盤用NO緩衝液洗滌一次，用DPBS洗滌兩次，密封，且負載至CELLINSIGHTTM 儀上以進行高內容成像且使用Neuronal Profiling v4.0演算法進行分析。利用GraphPad PRISM® 軟體，處理演算法所產生之資料，以進行IC50 計算。結果顯示於表2中。
表 2 ：活體外神經突生長活性
例示抗TrkA抗體顯示NGF誘發之神經突生長之濃度依賴性抑制。例示抗體D及E顯示在不存在NGF的情況下，對於神經突生長的一致較高刺激性效果。
實例 4. mAb A-E 對於 NGF 誘發之人類或大鼠 TrkA 磷酸化的抑制 ( 及一些比較資料 )
在經轉染且分別在人胎腎細胞(HEK293)或標準纖維母細胞(3T3)背景中表現大鼠或人類TrkA受體之細胞中，評定大鼠或人類NGF刺激之TrkA磷酸化的抑制。在室溫下，在用或不用10 µg/mL大鼠或人類β-NGF刺激5分鐘之前，將細胞與PBS或測試抗體一起培育5分鐘。在1.5 mL埃彭道夫管(Eppendorf tube)中，抗體濃度在1 µM至0.1 pM於300-450 µL PBS (Gibco，目錄號20012-027)體積中的範圍內。將樣本冷凍在乾冰上，且儲存在-80℃下直到提取為止。細胞裂解緩衝液由以下組成：2X組織裂解緩衝液(CELLTECHNOLOGY® ，目錄號9803S)、與100X HALTTM 蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物(ThermoFisher)以及1 mM氟化苯基甲基磺醯基。向各試管中添加裂解緩衝液，且在冰上均質化(Qiagen均質器) 10秒。藉由ELISA方法，分析由在4℃下以12,000相對離心力(RCF)離心15分鐘所得之上清液，使用Price等人(J Neurosci Methods 282:34-42, 2017)中所描述之方法，量測pTrkA，各樣本量測重複兩次或重複四次。
用碳酸鹽-碳酸氫鹽緩衝液(PIERCETM CHEMICAL，目錄號28382)稀釋大鼠TrkA捕捉抗體(R&D SYSTEMS® ，目錄號AF1056)或人類TrkA捕捉抗體(R&D SYSTEMS® ，目錄號MAB1751)至3 µg/mL，且在4℃下使用100微升/孔來塗佈黑色MAXISORPTM 96孔盤(NUNCTM ，目錄號446471)隔夜。培養盤用含有150 mM NaCl、pH~7.4之20 mM Tris緩衝液鹽水(TBS)洗滌，在TBS中在室溫下用3% BSA (Sigma，目錄號A3059)阻斷1小時，隨後吸乾，密封且在2週內使用之前儲存在4℃下。向各孔添加上文所描述之勻漿(100 µL)，且在4℃下培育隔夜。培養盤用TBST (TBS與0.05% TWEEN® -20，3 X 300 µL/孔)洗滌，且以1:20,000將兔磷酸-TrkA (Tyr674/675)/TrkB (Tyr706/707) (CELL SIGNALLING TECHNOLOGY® ，目錄號4621)稀釋於1% BSA/TBST中，以100 µL/孔添加且在室溫下培育2小時。如前洗滌培養盤，且以1:20,000將二級抗體山羊抗兔鹼性磷酸酶(Jackson Immunoresearch Labs，目錄號111-055-144)稀釋在1% BSA/TBST中，以100 µL/孔添加，且在室溫下培育1小時。培養盤用TBST以5 × 300 µL/孔洗滌，且以100 µL/孔添加鹼性磷酸酶CDP起始受質(APPLIED BIOSYSTEMSTM ，目錄號T2214)。稍後在Envision® (PerkinElmer)讀板儀中，用增強發光方案，讀取培養盤30分鐘。用以下等式將所得每秒計數(CPS)轉化為NGF信號之百分比：100 × (CPS樣本-CPS對照)/(CPS NGF-CPS對照)，相對於例示抗體之濃度作圖，且使用Graph Pad PRISM® 7測定四參數曲線擬合，得到IC50 /EC50 值。
表 3 ： NGF 誘發之人類 TrkA 磷酸化之抑制
表 4 ： NGF 誘發之大鼠 TrkA 磷酸化之抑制
表 5 ： 人類 TrkA 磷酸化之刺激
表 6 ： 大鼠 TrkA 磷酸化之刺激
例示抗TrkA抗體顯示NGF誘發之大鼠及人類TrkA受體磷酸化之濃度依賴性抑制。在兩個另外獨立實驗中測試例示mAb B，且在表7中概述實驗全組。所稱之TrkA受體抗體mAb 1及mAb 2不抑制 (IC50 ＞ 1000 nM) NGF誘發之人類TrkA受體磷酸化。(如下文所概述，來製備及純化mAb 1及mAb2。)
表 7 ： NGF 誘發之大鼠或人類 TrkA 磷酸化之刺激或抑制
*根據曲線擬合之最大刺激或抑制作為NGF刺激反應之百分比
# ND =由於模擬信號過低不能精確曲線擬合而未測定。
實例 5. mAb A 之 TrkA 受體抗體活體外內化
藉由在四個不同細胞株(人類TrkA 3T3、SKNSH神經母細胞瘤、大鼠TrkA HEK293及PC12嗜鉻細胞瘤)中執行高內容活細胞成像分析，來量測對應於總mAb A及mAb A之內化的螢光信號。簡言之，將33 nM (5 μg/mL)之mAb A與標記有DYLIGHT® 650 (Thermo Fisher，目錄號62266)或pHAb染料(Promega，目錄號G9845)之0.2 μM (10 μg/mL)之抗人類IgG Fcγ片段特異性Fab片段(Jackson ImmunoResearch，目錄號109-007-008)在培養基中混合，且在96孔盤中在37℃下與所生長之活細胞培育隔夜。第二天，洗滌細胞，與NUCBLUE® Hoechst染料(Thermo Fisher，目錄號R37605)一起培育20 min，再次洗滌，且用CYTATIONTM 5高內容成像器(BIOTEK® )成像。DYLIGHT® 650信號量測總抗體水準，而pHAb pH感測器染料信號量測僅內化螢光。將各孔中之信號之強度除以Hoechst染色核之數目，以測定每個細胞的信號強度。根據人類IgG同型對照測定背景信號，且自最終值減去該背景信號。隨後，藉由DYLIGHT® 650將內化螢光信號標準化為總抗體螢光，以測定細胞株中之相對螢光。
表 7A. TrkA 受體抗體 mAb A 之內化
實例 6. mAb A 之活體內 CFA 誘發步態缺陷之減弱
藉由遞送至關節內空間之完全弗氏佐劑(Complete Freund's Adjuvant，CFA)誘發之時序及空間步態特徵之減弱，利用本發明之mAb A評定，如先前所描述(Adams等人, 2016)。簡言之，將在測試開始時稱重在175與209 g之間的雌性Sprague Dawley大鼠(Envigo)分組圈養，任意取用食物及水，在測試期間除外。大鼠在研究開始時接受ExerGait跑步機設備(Columbus Instruments)適應階段。在大鼠在容納於塑膠玻璃室內之大致10.5"長×3.5"寬之跑步機傳動帶上行走同時，數位攝影機(Basler)以100幀/秒記錄活動。在適應階段期間，在跑步機關閉之情況下，將大鼠置放於該室中大致30秒。打開跑步機，且逐漸緩慢地增加至3 cm/秒、8 cm/秒、12 cm/秒及15 cm/秒，同時大鼠進行兩次向前行走。在適應之後，大鼠接受50 μL關節內注射完全弗氏佐劑(1 mg/毫升濃度CFA，Sigma，批次號：SLBK1731V)，該完全弗氏佐劑與弗氏不完全佐劑(IFA，MP Biomedicals LLC，目錄號：642861，批次號：07263)混合，形成0.4 mg/L (1 mL/kg)之10 mg/kg IgG4陰性對照，0.1、1或10 mg/kg mAb A或陽性對照。在PBS中，將mAb A (批次號BE05366-048)自初始濃度12.4 mg/mL稀釋至0.1、1及10 mg/mL。在PBS中，將對照IgG4PAA自14.5 mg/mL稀釋至10 mg/mL。在投與CFA 1、2及3天後，進行測試階段。對於每一測試階段，將大鼠置放於室中，且使跑步機自0 cm/秒緩慢升至16 cm/秒。在足夠數目之幀(大致1200-2000幀)內，以16 cm/秒記錄大鼠步行之視訊。依賴性量測包括：各肢之運動範圍(在站立開始至站立結束時，減去自後腳爪至身體中線之距離)、站立/擺動比率(對於各肢，站立時間除以擺動時間)、標準化的站立距離(站立期之步幅的時間百分比乘以總步幅長度)及腳印大小(如藉由捕捉與跑步機接觸之肢之預設顏色條件所測定的腳印中所偵測到之像素數目)。藉由與未注射有CFA之對側肢進行比較，將此等四個試驗指標轉化為指數量測值，以得到與對照肢的變化百分比。隨後，將所有四個量測值求和，得到步態指數評分。進行重複量測ANOVA，其中α水準為0.05，隨後與IgG4對照進行鄧尼特氏(Dunnet's)事後比較。mAb A之1 mg/kg及10 mg/kg劑量水準均顯示綜合步態指數評分相對於IgG4對照之統計學上顯著改良(如由表中之*指示)。
表 8 ： 給藥三天後 ， mAb A 對於 CFA 誘發步態缺陷之效果
N = 9-10隻/組，平均值± SEM，* = p ＜ 0.05
實例 7. mAb A 對於 NGF 誘發之離體大腦、皮膚及背根神經節中之 TrkA 磷酸化的抑制
在大腦皮膚或背根神經節組織中，離體評定NGF刺激之TrkA磷酸化之抑制。將雌性Sprague Dawley大鼠安樂死，且含有100 µL PBS (Gibco，目錄號20012-027)或100 µL大鼠β-NGF (10 µg/mL，於PBS中)之每2 mL埃彭道夫管，將一個海馬區與一個尾狀大腦區域合併。類似地，自後爪墊獲得兩個6 mm皮膚鑽取物，且將其置放於含有150 µL PBS或150 µL大鼠β-NGF (Sigma-Aldrich，目錄號N-2513，10 µg/mL，於PBS中)之2 mL試管中。剝離背根神經節，且將10個神經節置放於含有200 µL PBS或150 µL大鼠β-NGF (10 µg/mL，於PBS中)之2 mL試管中。向各樣本中添加兩個5 mm不鏽鋼珠粒，且人工振盪10秒，且在室溫下培育5分鐘。將樣本冷凍在乾冰上，且儲存在-80℃下直到提取為止。向各試管中添加由2X組織裂解緩衝液(CELL SIGNALING TECHNOLOGY® ，目錄號9803S)、1X HALTTM 蛋白酶、磷酸酶抑制劑混合物(ThermoFisher，目錄號78441)及1mM苯甲磺醯氟組成之細胞裂解緩衝液(得到總體積500 µL)，且使用設定為30 Hz 2 × 3分鐘之Qiagen組織裂解器均質化。藉由ELISA方法，使用Price等人(J Neurosci Methods 282:34-42, 2017)中所描述之程序，分析在4℃下以12,000 RCF離心15分鐘所得上清液，以量測pTrkA。
用碳酸鹽-碳酸氫鹽緩衝液(THERMO SCIENTIFICTM PIERCETM CHEMICAL，目錄號28382)稀釋大鼠TrkA捕捉抗體(R&D SYSTEMS® ，目錄號AF1056)或人類TrkA捕捉抗體(R&D SYSTEMS® ，目錄號MAB1751)至3 µg/mL，且在4℃下使用100微升/孔來塗佈黑色MAXISORPTM 96孔盤(NUNCTM ，目錄號446471)隔夜。培養盤用含有150 mM NaCl (Sigma-Aldrich，目錄號S3014-500G)、pH 7.4之20 mM Tris緩衝液鹽水(INVITROGENTM ，目錄號15567-027) (TBS)洗滌，在室溫下用含3% BSA (Sigma-Aldrich，目錄號A3059)之TBS阻斷1小時，吸乾，密封，且在2週內使用之前儲存在4℃下。向各孔添加上文所描述之勻漿(100 µL)，且在4℃下培育隔夜。培養盤用TBST (具有0.05% TWEEN® -20 (Fisher Biochemical，目錄號BP337100)之TBS，3 × 300 µL/孔)洗滌，且以1:20,000將兔磷酸-TrkA (Tyr674/675)/TrkB (Tyr706/707) (CELL SIGNALING TECHNOLOGY® ，目錄號4621)稀釋在1% BSA/TBST中，每孔添加100 µL，且在室溫下在平緩振盪器上培育培養盤2小時。如前洗滌培養盤，且添加(100 µL/孔)以1:20,000稀釋於1% BSA/TBST中之二級抗體山羊抗兔鹼性磷酸酶(Jackson Immunoresearch Laboratories, INC.，目錄號111-055-144)，且在室溫下培育1小時。培養盤用TBST以5 × 300 µL/孔洗滌，且以100 µL/孔添加鹼性磷酸酶CDP起始受質(APPLIED BIOSYSTEMSTM ，目錄號T2214)。30分鐘後在Envision® (PerkinElmer)讀板儀上，用增強發光方案，讀取培養盤。來自各動物之各組織樣本之基線及NGF刺激的所得每秒平均計數(CPS)呈現於表9中。
表 9. 組織 TrkA 之抑制
平均值 ± SEM (N)
*/**相對於NGF刺激的IgG對照，p ＜ 0.05/0.001，雙因素ANOVA，隨後鄧尼特式事後分析比較。
可製備本文所描述之抗體之對應DNA序列。mAb A、mAb B、mAb C、mAb D及mAb E之此類DNA序列在本文中列出，如在下文表10中所指示。


表 10- 一些本文所描述之抗體之 DNA 序列的清單
實例 8. mAb A-E 阻斷人類 TrkA 與 NGF 之結合
在4℃下，用100微升/孔之在pH7.2磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中稀釋至2 μg/mL的重組人類TrkA蛋白，塗覆96孔高度結合的透明底微量滴定盤(Microlon，#655061)的每一列隔夜。第二天，移除塗覆溶液，且在25℃、平緩振盪下，用150 µL酪蛋白-PBS (Thermo Scientific，#37528)阻斷培養盤1小時。隨後，用補充有0.05% Tween20之PBS (PBST)洗滌培養盤三次。以20 nM於酪蛋白-PBS中開始，產生例示抗體與IgG4及IgG1同型對照抗體的兩倍稀釋系列。在37℃、平緩振盪下，向孔中添加100 μL各稀釋系列樣本30 min。隨後用PBST洗滌培養盤三次。製備生物素標記之重組人類NGF (btNGF)於酪蛋白-PBS緩衝液中之100 nM溶液，且以100 µL/孔向培養盤添加，且在37℃、平緩振盪下培育75 min。隨後用PBST洗滌培養盤三次。製備抗生蛋白鏈菌素-HRP (Thermo Scientific，#21130)於酪蛋白-PBS中之1 mg/mL儲備溶液的1:3500稀釋液，且在37℃、平緩振盪下向各孔添加100 µL 20 min。用PBST洗滌培養盤三次。向各孔添加100 µL 1:1 TMB:H2 O2 (Thermo Scientific，#1854050，#1854060)之溶液，且培育3 min。藉由向各孔添加100 µL 1M H3 PO4 終止反應。使用SpectraMax 340PC讀板儀(Molecular Devices)來量測在450 nm下之吸光度(Abs450)。相對於抗體濃度繪製Abs450，且使用SigmaPlot 12.5 (Systat Software Inc.)測定四參數曲線擬合，得到IC50 值。
例示mAb A-E，但不是IgG4及IgG1同型對照抗體，在所測試之抗體濃度範圍內，以劑量依賴性方式阻斷人類TrkA與NGF的結合(如表11中所示)。
表 11- 人類 TrkA 與 NGF 之結合之阻斷
實例 9. mAb 1 及 mAb 2 之工程改造、表現及純化
使用專利WO2016/087677 A1中提供之輕鏈序列(序列ID#29)及重鏈序列(序列ID#57)，產生哺乳動物表現mAb 1之表現載體。因此，mAb 1具有WO2016/087677 A1之由序列ID#29定義之輕鏈序列及由序列ID#57定義之重鏈序列。使用專利US2013/0336964 A1中提供之輕鏈序列(序列ID#91)及重鏈序列(序列ID#90)，產生哺乳動物表現mAb 2之表現載體。因此，mAB2具有美國專利申請公開案第2013/0336964號之由序列ID #91定義之輕鏈序列及由序列ID#90定義之重鏈序列。
此等抗體可藉由熟知方法生物合成、純化及調配用於投藥。用用於分泌抗體之表現系統(使用預定HC:LC載體比率(若使用兩種載體))或編碼重鏈及輕鏈兩者之單一載體系統，瞬時或穩定轉染適當宿主細胞，諸如中國倉鼠卵巢細胞(CHO)。適合於自此等常用宿主細胞表現及分泌抗體之載體為熟知的。在表現及分泌抗體之後，使培養基澄清以移除細胞。將澄清的培養基施加至已用相容性緩衝液(諸如PBS (pH 7.4))平衡之蛋白A親和管柱。管柱用補充有1M NaCl之緩衝液洗滌，以移除非特異性結合組分。例如用在pH~3.5下之檸檬酸鈉來溶離結合的抗體，且用1M 2-胺基-2-(羥甲基)丙烷-1,3-二醇(Tris)緩衝液中和級分。諸如藉由十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)或尺寸排阻分析來偵測抗體級分，且隨後將其合併。可藉由常見技術，包括尺寸排阻、疏水性相互作用、離子交換或羥磷灰石層析有效移除可溶聚集體及多聚體。使用常見技術，濃縮及/或無菌過濾本發明之例示抗體。例示抗體在此等層析步驟之後之純度超過95%，且可緊接著將樣本冷凍在-70℃下或儲存在4℃下幾個月。可根據實例10-12，來評定mAb 1及mAb 2與TrkA結合及/或抑制TrkA之信號傳導的能力。
實例 10. mAb B 、 mAb 1 及 mAb 2 之 結合動力學及親和力
如下文所描述，在BIACORETM 8K儀器(GE Healthcare)上使用表面電漿子共振分析，測定例示抗體與人類、食蟹獼猴、大鼠、小鼠及兔TrkA之結合動力學及親和力。評價兩種不同的人類TrkA同功異型物(同功異型物1及同功異型物2)與人類TrkB及人類TrkC。BIACORETM 8K底塗有HBS-EP+ 電泳緩衝液[10mM 2-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸(Hepes pH 7.4，150 mM NaCl，3 mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.05%聚山梨醇酯20界面活性劑(P20, TWEEN® 20)]。分析溫度設定為37℃，且樣本區室設定為15℃。藉由抗體捕捉方法，使用平行動力學分析，獲得結合動力學及親和力。將抗體捕捉至一系列S感測器蛋白A CM5晶片(GE Healthcare)上。對於每一通道，流動池1 (FC1)稱為緩衝液參考，且流動池2 (FC2)經指派用於抗體捕捉。所有八個通道上之所有FC2設定成在10 µL/min流速下捕捉大致89反應單位(RU)的抗體。藉由稀釋至電泳緩衝液中，製備在5 µg/mL下之所有抗體樣本。藉由稀釋至電泳緩衝液中，製備最終濃度為400、200、100、50、25、12.5、6.25及3.125 nM之人類TrkA同功異型物2分析物。在分析循環之前，藉由以100 µL/min在FC1及FC2上3次注射甘胺酸(pH~1.5) 15秒接觸時間來更新晶片，以清洗晶片表面。更新之後，進行由以下組成之調節步驟：(1)在FC2上以5 µL/min注射5 µg/mL之IgG4同型對照抗體15秒；(2)在FC1及FC2上以30 µL/min注射電泳緩衝液250秒及解離600秒；(3)以100 µL/min一次注射甘胺酸(pH~1.5) 15秒來更新晶片表面。各分析循環由以下組成：(1)捕捉測試抗體於所有八個FC2上，其中所有八個個別FC1對用作緩衝液參考，在10 µL/min下；(2)電泳緩衝液洗滌步驟；(3)在通道1-8上以100 µL/min，注射TrkA分析物120秒，以便降低濃度；(4)返回至緩衝液流以進行600秒解離時間；(5)以100 µL/min用兩次注射甘胺酸(pH~1.5) 15秒/注射來更新晶片表面；(6)最終電泳緩衝液洗滌步驟。對於所評價之各抗體重複此操作。使用減去參考之預定義抗體平行動力學來處理資料，且使用BIACORETM 8K評價軟體(版本1.1.1.7442)擬合於1:1結合模型來測定結合速率(結合速率kon，M-1 s-1 單位)及解離速率(解離速率，koff，s-1 單位)。由關係使KD = koff /kon 計算平衡解離常數(KD )，以莫耳為單位。自三個獨立實驗測定平均(Avg) KD 及誤差(報導為標準差(SD))。例示抗體mAb B及mAb 1表明與人類TrkA之濃度依賴性結合。然而，例示抗體mAb 2顯示在所注射之最高人類TrkA濃度(400 nM)下無可觀測的結合信號，且結合反應信號未達到理論半最大反應信號。因此，mAb 2針對人類TrkA之KD 經估計為＞400 nM。結果顯示於表12中。
表 12 ： mAb B 、 mAb 1 及 mAb 2 之 BIACORETM 結合動力學及親和力
實例 11. mAb 1 及 mAb B 對於 NGF 誘發之人類 TrkA 磷酸化的抑制
在經轉染且表現人類TrkA受體標準纖維母細胞(3T3)背景之細胞中，評定在預處理1或24小時之後，抗體對於人類NGF刺激之TrkA磷酸化的抑制。方法如關於實例4所描述，例外如下。以800,000個細胞/孔，將細胞接種至標準24孔盤中之標準生長介質中，且置放於37℃/5% CO2 培育箱中1.5至2小時，以使細胞黏附。在添加培養基或人類β-NGF之前1小時或24小時，以1 µM之最終濃度，向培養基添加例示mAb B、IgG4對照mAb或所稱的TrkA受體抗體mAb 1，得到最終濃度10 µg/mL。在室溫下培育5分鐘之後，移除培養基。添加一毫升上文所描述之細胞裂解緩衝液，刮下細胞且將勻漿轉移至1.5 mL Eppendorf試管，且冷凍在乾冰上並儲存在-80℃下。將樣本解凍，分析在4℃下以12,000相對離心力(RCF)離心15分鐘所得上清液的蛋白濃度，且藉由ELISA方法，使用Price等人(J Neurosci Methods 282:34-42, 2017)中所描述之方法，分析相等蛋白質量以量測pTrkA，如實例4中所詳述。
所得每秒計數(CPS)在下文表13中：
表 13 ： NGF 誘發之人類 TrkA 磷酸化之刺激或抑制
如自表X中之結果所見，當預培育1或24小時時，例示mAb B抑制NGF誘發之人類TrkA磷酸化至類似程度。相比之下，當與細胞一起預培育1或24小時時，mAb 1不抑制NGF誘發之人類TrkA磷酸化。
實例 12. 對於 mAb B 及 mAb 1 ， 阻斷人類 TrkA 與 NGF 之結合
在4℃下，用100微升/孔之在pH7.2磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中稀釋至2 μg/mL的重組人類TrkA蛋白，塗覆96孔高度結合的透明底微量滴定盤(Microlon，#655061)的每一列隔夜。第二天，移除塗覆溶液，且在25℃、平緩振盪下，用150 µL酪蛋白-PBS (Thermo Scientific，#37528)阻斷培養盤1小時。隨後，用補充有0.05% Tween20之PBS (PBST)洗滌培養盤三次。以300 nM於酪蛋白-PBS中開始，產生mAb B、mAb 1及IgG4同型對照mAb的三倍稀釋系列。在37℃、平緩振盪下，向孔中添加100 μL各稀釋系列樣本30 min。隨後用PBST洗滌培養盤三次。製備生物素標記之重組人類NGF (btNGF)於酪蛋白-PBS緩衝液中之100 nM溶液，且以100 µL/孔向培養盤添加，且在37℃、平緩振盪下培育75 min。包含酪蛋白-PBS緩衝液對照列，其中省略樣本之btNGF以評定背景信號。隨後用PBST洗滌培養盤三次。製備抗生蛋白鏈菌素-HRP (Thermo Scientific，#21130)於酪蛋白-PBS中之1 mg/mL儲備溶液的1:3500稀釋液，且在37℃、平緩振盪下向各孔添加100 µL 20 min。用PBST洗滌培養盤三次。向各孔添加100 µL 1:1 TMB:H2 O2 (Thermo Scientific，#1854050，#1854060)之溶液，且培育3 min。藉由向各孔添加100 µL 1M H3 PO4 終止反應。使用SpectraMax 340PC讀板儀(Molecular Devices)來量測在450 nm下之吸光度(Abs450)。繪製相對於抗體濃度之Abs450。藉由Abs450是否達到在所測試之最高抗體濃度下緩衝液基線之水準來測定TrkA與NGF結合之完全阻斷。結果概述於表14中。
由於結合信號達到在所測試之最高抗體濃度下之緩衝液對照基線，例示mAb B呈現以劑量依賴性方式TrkA與NGF之完全阻斷。由於結合信號並未達到在所測試之最高抗體濃度下之緩衝液對照基線，分子mAb 1在所測試濃度範圍內並未呈現TrkA與NGF之完全阻斷。實際上，mAb 1之結合信號在結合信號高於緩衝液對照基線時達到平穩。此表明，mAb 1為TrkA與NGF結合之部分阻斷劑。IgG4同型對照mAb在所測試濃度範圍內不阻斷TrkA與NGF結合。
表 14- 人類 TrkA 與 NGF 之結合之阻斷
序列
例示 HC #1 ( 人類 IgG4PAA/ κ ) (SEQ ID NO. 1)
例示 HC # 2 ( 人類 IgG1EN/ κ ) (SEQ ID NO. 2)
例示 HCDR1 (SEQ ID NO. 3)
AASGFTFSGVSIN
例示 HCDR2 (SEQ ID NO. 4)
SETTSSGTIYYADSVKG
例示 HCDR3 (SEQ ID NO. 5)
ARSYYYGMDV
例示 LC (SEQ ID NO. 6)

其中在殘基33處之Xaa 為N、A或Q中之一者
例示 LCDR1 (SEQ ID NO. 7)
RSSQSLVHRXaa GNTYLS
其中在殘基10處之Xaa 為N、A或Q中之一者
例示 LCDR2 (SEQ ID NO. 8)
YKISNRFS
例示 LCDR3 (SEQ ID NO. 9)
MQARQFPLT
例示 HCVR (SEQ ID NO. 10)
例示 LCVR (SEQ ID NO. 11)

其中在殘基33處之Xaa 為N、A或Q中之一者
mAb A ( 未最佳化 DNA) 之 輕鏈 DNA 序列 (SEQ ID NO. 12) ( 未最佳化 )
mAb A ( 未最佳化 DNA) 之 重鏈 DNA 序列 (SED ID NO. 13) ( 未最佳化 )

mAb B ( 密碼子最佳化 ) 之 輕鏈 DNA 序列 (SED ID NO. 14) ( 最佳化 )

mAb B 及 mAb C ( 密碼子最佳化 ) 之 重鏈 DNA 序列 (SEQ ID NO. 15) ( 最佳化 )

mAb C ( 密碼子最佳化 ) 之 輕鏈 DNA 序列 (SEQ ID NO. 16) ( 最佳化 )
mAb D ( 密碼子最佳化 ) 之 輕鏈 DNA 序列 (SEQ ID NO. 17) ( 最佳化 )

mAb E ( 密碼子最佳化 ) 之 輕鏈 DNA 序列 (SEQ ID NO. 18) ( 最佳化 )
mAb D 及 mAb E ( 密碼子最佳化 ) 之 重鏈 DNA 序列 (SEQ ID NO. 19) ( 最佳化 )

人類 TrkA 胞外域同功異型物 1 (33-414) ( 純化標記 ： N 端 8X 組胺酸 ) (SEQ ID NO. 20)

人類 TrkA 胞外域同功異型物 2 (33-408) ( 純化標記 ： N 端 8X 組胺酸 ) (SEQ ID NO. 21)
人類 TrkB 胞外域 (32-430) ( 純化標記 ： N 端 8X 組胺酸 ) (SEQ ID NO. 22)
人類 TrkC 胞外域 (32-428) ( 純化標記 ： N 端 8X 組胺酸 ) (SEQ ID NO. 23)
食蟹獼猴 TrkA 胞外域 (59-434) ( 純化標記 ： N 端 8X 組胺酸 ) (SEQ ID NO. 24)
小鼠 TrkA 胞外域 (33-417 ，其中 396-401 缺失 ) ( 純化標記 ： N 端 8X 組胺酸 ) (SEQ ID NO. 25)

大鼠 TrkA 胞外域 (33-411) ( 純化標記 ： N 端 8X 組胺酸 ) (SEQ ID NO. 26)
兔 TrkA 胞外域 (33-414) ( 純化標記 ： C 端 聚組胺酸標記 ( 未知長度 )) (SED ID NO. 27)
Figure TW201945400A_D0059
Figure TW201945400A_D0060
Figure TW201945400A_D0061
Figure TW201945400A_D0062
Figure TW201945400A_D0063
Figure TW201945400A_D0064
Figure TW201945400A_D0065
Figure TW201945400A_D0066
Figure TW201945400A_D0067
Figure TW201945400A_D0068
Figure TW201945400A_D0069
Figure TW201945400A_D0070
Figure TW201945400A_D0071
Figure TW201945400A_D0072
Figure TW201945400A_D0073
Figure TW201945400A_D0074
Figure TW201945400A_D0075
Figure TW201945400A_D0076
Figure TW201945400A_D0077
Figure TW201945400A_D0078
Figure TW201945400A_D0079
Figure TW201945400A_D0080
Figure TW201945400A_D0081
Figure TW201945400A_D0082

Claims (17)

  1. 一種結合原肌球蛋白(tropomysin)受體激酶(TrkA)之抗體，其包含重鏈可變區(HCVR)及輕鏈可變區(LCVR)，其中該HCVR包含互補決定區(CDR) HCDR1、HCDR2及HCDR3，且該LCVR包含CDR LCDR1、LCDR2及LCDR3，其中HCDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO. 3，HCDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO. 4，HCDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO. 5，LCDR1之胺基酸序列為SEQ ID NO. 7，LCDR2之胺基酸序列為SEQ ID NO. 8及LCDR3之胺基酸序列為SEQ ID NO. 9。
  2. 如請求項1之抗體，其中在SEQ ID NO. 7之殘基10處之Xaa 為A。
  3. 如請求項1之抗體，其中在SEQ ID NO. 7之殘基10處之Xaa 為Q。
  4. 如請求項1之抗體，其中該HCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO. 10且該LCVR之胺基酸序列為SEQ ID NO. 11。
  5. 如請求項4之抗體，其中在SEQ ID NO. 11之殘基33處之Xaa 為A。
  6. 如請求項4之抗體，其中在SEQ ID NO. 11之殘基33處之Xaa 為Q。
  7. 一種結合原肌球蛋白受體激酶(TrkA)之抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，其中該HC之胺基酸序列係選自由SEQ ID NO. 1及SEQ ID NO. 2組成之群，且其中該LC之胺基酸序列為SEQ ID NO. 6。
  8. 如請求項7之抗體，其中存在兩個HC，其中之每一者具有SEQ ID NO. 1之胺基酸序列；且其中存在兩個LC，其中之每一者具有SEQ ID NO. 6之胺基酸序列。
  9. 如請求項8之抗體，其中在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為A。
  10. 如請求項8之抗體，其中在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為Q。
  11. 如請求項7之抗體，其中存在兩個HC，其中之每一者具有SEQ ID NO. 2之胺基酸序列；且其中存在兩個LC，其中之每一者具有SEQ ID NO. 6之胺基酸序列。
  12. 如請求項11之抗體，其中在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為A。
  13. 如請求項11之抗體，其中在SEQ ID NO. 6之殘基33處之Xaa 為Q。
  14. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至13中任一項之抗體及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  15. 一種如請求項1至13中任一項之抗體或如請求項14之醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療疼痛的藥物。
  16. 如請求項15之用途，其中該疼痛為以下中之一者：手術後疼痛、神經性疼痛、類風濕性關節炎疼痛及骨關節炎疼痛。
  17. 如請求項15之用途，其中該疼痛為慢性疼痛。
TW108105098A 2018-02-28 2019-02-15 抗TrkA抗體 TWI702233B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862636207P 2018-02-28 2018-02-28
US62/636,207 2018-02-28

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201945400A true TW201945400A (zh) 2019-12-01
TWI702233B TWI702233B (zh) 2020-08-21

Family

ID=65686081

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108105098A TWI702233B (zh) 2018-02-28 2019-02-15 抗TrkA抗體

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10618974B2 (zh)
EP (1) EP3759138A1 (zh)
JP (1) JP7017641B2 (zh)
CN (1) CN111788230B (zh)
AR (1) AR114110A1 (zh)
TW (1) TWI702233B (zh)
WO (1) WO2019168730A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR122141A1 (es) 2020-05-28 2022-08-17 Lilly Co Eli Inhibidor de trka
CN112961244B (zh) * 2021-02-28 2023-08-29 熙源安健医药（上海）有限公司 抗TrkA抗体或其抗原结合片段、其制备方法和应用
WO2023125477A1 (en) * 2021-12-28 2023-07-06 4B Technologies (Beijing) Co., Limited TrkA ANTIBODY AND APPLICATION THEREOF

Family Cites Families (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0471205A1 (en) 1990-08-15 1992-02-19 E.R. SQUIBB & SONS, INC. Monoclonal antibodies which bind TRK proto-oncogene protein
US5877016A (en) 1994-03-18 1999-03-02 Genentech, Inc. Human trk receptors and neurotrophic factor inhibitors
US5844092A (en) 1994-03-18 1998-12-01 Genentech, Inc. Human TRK receptors and neurotrophic factor inhibitors
US20040058416A1 (en) 1994-03-18 2004-03-25 Presta Leonard G. Human trk receptors and neurotrophic factor inhibitors
NZ501161A (en) 1994-03-18 2001-03-30 Genentech Inc Chimeric human trkA-IgG polypeptides which bind to human nerve growth factor.
GB9525180D0 (en) 1995-12-08 1996-02-07 Univ Mcgill Design of hormone-like antibodies with agonistic and antagonistic fuctions
IT1306704B1 (it) * 1999-05-26 2001-10-02 Sirs Societa Italiana Per La R Anticorpi monoclonali e suoi derivati sintetici o biotecnologici ingrado di agire come molecole antagoniste per il ngf.
US20020169154A1 (en) 2001-04-04 2002-11-14 Cephalon, Inc. Novel methods and compositions involving trk tyrosine kinase inhibitors and antineoplastic agents
KR101410692B1 (ko) 2002-12-24 2014-06-24 리나트 뉴로사이언스 코프. 항-ｎｇｆ 항체 및 그것을 이용하는 방법
ME02785B (me) 2003-07-15 2012-12-31 Amgen Inc Humana anti-ngf neutrališuća antitela kao selektivni inhibitori ngf signalnog puta
ITRM20030601A1 (it) 2003-12-24 2005-06-25 Lay Line Genomics Spa Metodo per l'umanizzazione di anticorpi e anticorpi umanizzati con esso ottenuti.
US20060058250A1 (en) 2004-09-10 2006-03-16 Cephalon, Inc. Methods of treating proliferative skin diseases using carbazole derivatives
US20060275797A1 (en) 2005-03-21 2006-12-07 Alcon Manufacturing, Ltd. Use of agents which inhibit connective tissue growth factor (CTGF) binding and signaling via the TrkA/p75NTR receptor complex for the prevention and treatment of CTGF-mediated ocular disorders
ITRM20050290A1 (it) 2005-06-07 2006-12-08 Lay Line Genomics Spa Uso di molecole in grado di inibire il legame tra ngf e il suo recettore trka come analgesici ad effetto prolungato.
AU2014277649A1 (en) 2005-06-07 2015-01-22 Abbott Research B.V Molecules that are able to inhibit the binding between NGF and the TrkA receptor as analgesics with prolonged effect
ITRM20050332A1 (it) 2005-06-24 2006-12-25 Lay Line Genomics Spa Uso di molecole in grado di bloccare l'attivita' di trka per potenziare gli effetti di analgesici oppiacei sul dolore.
CA2623648C (en) 2005-09-21 2018-05-22 The Regents Of The University Of California Systems, compositions, and methods for local imaging and treatment of pain
ITRM20060367A1 (it) 2006-07-13 2008-01-14 Lay Line Genomics Spa Muteine del hngf usi terapeutici e composizioni farmaceutiche
US8642040B2 (en) 2006-07-24 2014-02-04 Biogen Idec Ma Inc. Methods for promoting myelination, neuronal survival and oligodendrocyte differentiation via administration of Sp35 or TrkA antagonists
US8144893B2 (en) 2007-07-26 2012-03-27 Sherman Kenneth N Mobile microphone
WO2009036068A2 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Emory University Gambogic amine, a selective trka agonist with neuroprotective activity
MY191348A (en) 2008-02-04 2022-06-17 Lay Line Genomics Spa Antibodies and derivatives thereof
US20130336961A1 (en) 2010-07-16 2013-12-19 The Ohio State University B Cell Depletion for Central Nervous System Injuries and Methods and Uses Thereof
AU2011336470B8 (en) 2010-12-01 2017-09-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof
JP2012201621A (ja) 2011-03-24 2012-10-22 Univ Of Fukui ＴｒｋＡを阻害するペプチド化合物及びその用途
WO2013026021A2 (en) 2011-08-18 2013-02-21 Buck Institute For Research On Aging Trka as a target for inhibiting app cleavage and/or progression of alzheimer's disease
US20130344064A1 (en) 2012-06-08 2013-12-26 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Anti-trka antibodies with enhanced inhibitory properties and derivatives thereof
EP2674439B1 (en) * 2012-06-13 2017-02-01 Rottapharm Biotech S.r.l. Anti-TrkA antibodies, derivatives and uses thereof
WO2014004549A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
AU2013337277B2 (en) 2012-11-05 2018-03-08 Foundation Medicine, Inc. Novel NTRK1 fusion molecules and uses thereof
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
FR3025717A1 (fr) 2014-09-16 2016-03-18 Univ Lille Sciences Tech Utilisation conjointe d'un inhibiteur de trka et d'un inhibiteur de epha2 pour une utilisation dans le traitement de cancers
GB201418713D0 (en) 2014-10-21 2014-12-03 Kymab Ltd Bindings Proteins
US9517238B2 (en) 2014-11-07 2016-12-13 Children's Hospital Medical Center Compositions and methods for treating allergic inflammation through inhibition of NTRK1
MA41097A (fr) * 2014-12-05 2017-10-10 Glenmark Pharmaceuticals Sa Anticorps anti-trka à propriétés inhibitrices améliorées et dérivés desdits anticorps destinés à être utilisés pour traiter les douleurs osseuses
SG11201704872RA (en) 2014-12-18 2017-07-28 Genzyme Corp Pharmaceutical formulations of tropomyosin related kinase (trk) inhibitors
WO2016146730A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Neuheart S.R.L. PEPTIDES HAVING TrkA-RECEPTOR-AGONISTIC ACTIVITY OR HAVING NGF-ANTAGONISTIC ACTIVITY
US20170362327A1 (en) 2015-04-24 2017-12-21 Glenmark Pharmaceuticals S.A. Anti-trka antibodies with enhanced inhibitory properties and derivatives thereof for use in treating bone associated pain
AU2016370846B2 (en) 2015-12-18 2022-08-25 Ignyta, Inc. Combinations for the treatment of cancer
CA3035807A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 European Molecular Biology Laboratory Irradiation treatment of neurological sensations by photoablation

Also Published As

Publication number Publication date
AR114110A1 (es) 2020-07-22
US20190263932A1 (en) 2019-08-29
JP7017641B2 (ja) 2022-02-08
JP2021514960A (ja) 2021-06-17
CN111788230A (zh) 2020-10-16
WO2019168730A1 (en) 2019-09-06
US10618974B2 (en) 2020-04-14
CN111788230B (zh) 2023-11-03
EP3759138A1 (en) 2021-01-06
TWI702233B (zh) 2020-08-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2473564C2 (ru) Антитела человека с высокой аффинностью к фактору роста нервов человека
AU2011265050B2 (en) CGRP antibodies
US7988966B2 (en) Method for the potentiation of opioid analgesics effects on pain
TWI702233B (zh) 抗TrkA抗體
US10954292B2 (en) Anti-PACAP antibody
CN109929035A (zh) 抗人ngf抗体及其制备方法和用途
RU2716101C2 (ru) Антитело к склеростину, его антигенсвязывающий фрагмент и медицинское применение
CN108948193B (zh) 针对tim-3的抗体分子,抗原结合片段及其医药用途
US20240043562A1 (en) Musk activation