TW201923068A - 可胞外分泌重組胜肽或重組蛋白質的改質菌株 - Google Patents

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一種改質菌株，其屬於大腸桿菌，且包含：一用以編碼OmpA訊息胜肽的核酸片段、以及一用以編碼重組胜肽或重組蛋白質並直接連接於用以編碼OmpA訊息胜肽之核酸片段3'端的核酸片段，而此改質菌株缺少tolA 基因、tolB 基因、與pal 基因。

Description

可胞外分泌重組胜肽或重組蛋白質的改質菌株
本發明有關一種透過基因工程技術取得的改質菌株，且特別攸關一種可胞外分泌重組胜肽或重組蛋白質的改質菌株。
大腸桿菌（Escherichia coli ，E. coli ）具備清楚完整的遺傳訊息、低生長週期、高複製速度、易培養、與高蛋白質表現，因而已廣泛使用於重組蛋白質（recombinant protein）的製備。依移位（translocation）位置，大腸桿菌所表現的重組蛋白質可分成：胞內表現型、周質（periplasmic）分泌型、與胞外分泌型。胞外分泌型的重組蛋白質雖然濃度低，但不用破壞菌體本身便可取得，於胞內折疊（folding）而具生物活性不須於取得後進行折疊，且幾乎無菌體原生蛋白質的汙染，因此於產業上佔有較佳應用價值。
目前已發現大腸桿菌有五種分泌途徑用來移位蛋白質經穿透細胞膜至胞外，分別為：1至5型分泌途徑。涉及這些途徑的組成與調控機制相當複雜，且分泌能力的本質不變，故咸認為大腸桿菌不利重組蛋白質的胞外分泌。已有文獻報導表現量與分泌速度間的平衡為重組蛋白質胞外分泌的關鍵步驟。至今已有許多用來改善大腸桿菌所表現之重組蛋白質胞外分泌的策略，特別是針對轉運蛋白質--伴護蛋白質（Chaperone）與目標蛋白質間的機制。此外，改善蛋白質分泌的處理、構築造成外膜洩漏（leakage）的突變、及添加改善細胞膜通透性的化學物質均為常見手段。
本發明之一目的在於提出一種新穎改質菌株，其屬於大腸桿菌，且包含：一用以編碼OmpA訊息胜肽（signal peptide）的核酸片段、以及一用以編碼重組胜肽或重組蛋白質並直接連接於用以編碼OmpA訊息胜肽之核酸片段3'端的核酸片段，而此改質菌株缺少tolA 基因、tolB 基因、與pal 基因。
依本發明，所提的改質菌株能分泌重組胜肽或重組蛋白質至胞外的培養液，而可直接自培養液中純化出重組胜肽或重組蛋白質不須破壞菌體本身。此外，純化的重組胜肽或重組蛋白質為經折疊過的而具有生物活性，故不須於純化後進行折疊。
本發明之另一目的在於提出一種製備重組胜肽或重組蛋白質的方法，其包含：培養上述改質菌株於一培養液中以表現重組胜肽或重組蛋白質；以及自培養液中純化出重組胜肽或重組蛋白質。
為讓本發明上述及/或其他目的、功效、特徵更明顯易懂，下文特舉較佳實施方式，作詳細說明：
本發明第一實施方式提出一種改質菌株，其屬於大腸桿菌，且包含：一可編碼OmpA訊息胜肽的核酸片段、及一可編碼重組胜肽或重組蛋白質的核酸片段，後者的核酸片段為直接連接於前者之核酸片段的3'端。此外，本實施方式的改質菌株缺少tolA 基因、tolB 基因、與pal 基因。
本實施方式的菌株可於培養液中表現重組胜肽或重組蛋白質，並將其胞外分泌至培養液中。基於此特性，可直接於培養液中純化出重組胜肽或重組蛋白質而不須破壞菌體本身。另外，重組胜肽或重組蛋白質屬於胞外分泌型重組蛋白質，故其為經折疊的而具生物活性，不須於純化後對其進行折疊。
本文所用的術語「直接連接」意指二核酸片段可構成一開放讀序框架（open reading frame，ORF）；換言之，二核酸片段轉譯所得的蛋白質片段為相連的，兩者間可或不可具有其他核酸片段。本文所用的術語「OmpA」為outer membrane protein A的縮寫。本文所用的術語「tolA 」或其他類似用語意指TolA-TolQ-TolR複合體的嵌膜（membrane-anchored）蛋白質。本文所用的術語「tolB 」或其他類似用語意指周質蛋白質。本文所用的術語「pal 」或其他用語為peptidoglycan-associated outer membrane lipoprotein的縮寫。
於一較佳實施樣態，大腸桿菌的品系可為BL21(DE3)、W3110、 JM109、JM109(DE3)、或DH5α。
於一較佳實施樣態，可編碼OmpA訊息胜肽的核酸片段與可編碼重組胜肽或重組蛋白質的核酸片段可為位於菌株的染色體上。
於一較佳實施樣態，可編碼OmpA訊息胜肽的核酸片段與可編碼重組胜肽或重組蛋白質的核酸片段可為位於一位在菌株內的質體上。
於一較佳實施樣態，此菌株更可含有至少一轉譯強化單元（translation enhancing element，TEE），其為直接連接於可編碼OmpA訊息胜肽之核酸片段的5'端。轉譯強化單元可透過提升重組胜肽或重組蛋白質的轉譯以增進其胞外分泌量；較佳地，此菌株含有五、十、或十五個轉譯強化單元。
於一較佳實施樣態，此菌株另可含有一啟動子，其為可操作地連接於可編碼OmpA訊息胜肽之核酸片段的5'端。本文所用的術語「可操作地連接」意指二核酸片段相當接近，其中一者影響另一者。因此，啟動子可透過提升此些核酸片段的轉錄以增進重組胜肽或重組蛋白質的胞外分泌量，而啟動子的實例可以為但不限於T7啟動子、lac啟動子、T7-lac操縱子、lacUV5啟動子、araBAD啟動子、λ PL啟動子、λ PR啟動子、phoA啟動子、tac啟動子、trc啟動子、或trp啟動子。
本發明第二實施方式提出一種製備重組胜肽或重組蛋白質的方法，其包含：培養第一實施方式的改質菌株於一培養液中以表現重組胜肽或重組蛋白質；以及自培養液中純化出重組胜肽或重組蛋白質。
於一較佳實施樣態，培養液更可含有酪蛋白胺基酸（casamino acid）及/或甜菜鹼（betaine）。此二物質可增進重組胜肽或重組蛋白質的胞外分泌量，其中酪蛋白胺基酸與重組胜肽或重組蛋白質共同競爭胞外蛋白質酶（proteinase）的分解來實現此效果。較佳地，於含有酪蛋白胺基酸的條件下，以培養液的總重量為基準，酪蛋白胺基酸的重量百分比為0.5％至2％，而更佳地為1％；又較佳地，於含有甜菜鹼的條件下，以培養液的總體積為基準，甜菜鹼的莫耳體積濃度為0.05M至0.2M，而更佳地為0.1M。
於一較佳實施樣態，第一實施方式的改質菌株含有啟動子的狀況下，培養液另可含有一誘導劑（inducer），此可與啟動子作用而提升此些核酸片段的轉錄並增進重組胜肽或重組蛋白質的胞外分泌量。舉例而言，啟動子為lac啟動子、T7-lac操縱子、lacUV5啟動子、tac啟動子、或trc啟動子時，誘導劑為異丙基β-D-1-硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）；又舉例而言，啟動子為araBAD啟動子時，誘導劑為L-阿拉伯糖（L-arabinose ）；再舉例而言，啟動子為trp啟動子時，誘發劑為3-吲哚丙烯酸（3-indoleacrylic acid，IAA）。
此外，培養與純化條件（如培養液成分、pH、培養溫度、時間、純化溶液成分、pH）應為本發明所屬技術領域之人士可依實際情況調整的。舉例而言，若第一實施方式的改質菌株含有λ PL啟動子或λ PR啟動子，則培養溫度為42℃。
茲以下述實施例，詳細說明本發明：
＜實施例1：改質菌株的建構＞
以含FRT-抗生素基因的質體pKD3為模板，利用引子對（5’-aattaaccctcactaaagggcg-3’；5’-taatacgactcactatagggctc-3’）進行PCR。1mM的L-阿拉伯糖誘導轉殖有含λ-red重組酶基因之質體pKD46的大腸桿菌BL21(DE3)後，電穿孔轉殖PCR產物至菌內。於37℃培養菌株3小時後，塗佈菌株於含有抗生素的LB固態培養基上並培養隔夜。之後，對培養長成的菌落進行colony PCR，從中挑選出含FRT-抗生素基因的菌株。先轉殖含FLP基因的質體pCP20至所挑選的菌株，再於42℃培養菌株以剔除抗生素基因。最後，以LB固態培養基與含抗生素的LB固態培養基確認抗生素基因為剔除的。此時所得的菌株為一缺少tolA 基因（SEQ ID NO：5）的改質菌株。另再參照上述流程剔除菌株內的tolB 基因（SEQ ID NO：7）與pal 基因（SEQ ID NO：9），詳細流程不再敘述。
透過分子選殖技術使(TEE)15 -OmpA訊息胜肽-表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）的核酸片段（SEQ ID NOs：1、3、11）插入至質體pET-30b(+)的多樣選殖位點（multiple cloning site，MCS）。接著，得到的質體（圖1）轉殖至上述最後得到之缺少tolA 基因、tolB 基因、與pal 基因的改質菌株內。
＜實施例2：表皮生長因子的胞外分泌＞
首先，將上述轉殖有圖1所示之質體的改質菌株培養於LB培養液中，直到生長週期中期。接著，加入0.2mM的IPTG至培養液中，並於30℃培養菌株以促進重組蛋白質表現與胞外分泌。最後，18小時後離心分離菌株與LB培養液，並進行分析。
請參照圖2與表1，此改質菌株可分泌表皮生長因子至培養液中，而且培養液中含有酪蛋白胺基酸與甜菜鹼下，生長因子的分泌量最大。 表1、改質菌株於不同培養液中培養後的表皮生長因子分泌量
惟以上所述者，僅為本發明之較佳實施例，但不能以此限定本發明實施之範圍；故，凡依本發明申請專利範圍及發明說明書內容所作之簡單的等效改變與修飾，皆仍屬本發明專利涵蓋之範圍內。
無
圖1為一含(TEE)15 -OmpA訊息胜肽-表皮生長因子之核酸片段的質體pET-30b(+)圖譜；其中，簡寫符號：PT7lac ，T7-lac操縱子；TEE，轉譯強化單元；OmpASP，OmpA訊息胜肽；EGF，表皮生長因子；TT，轉錄終點；ColE1 ori，ColE1複製起始點；Kan，卡那黴素。 圖2為一西方點墨結果圖，比較不同培養液培養菌株後的EGF含量。
＜110＞明志科技大學 ＜120＞可胞外分泌重組胜肽 或重組蛋白質的改質菌株 ＜160＞12 ＜210＞1 ＜211＞63 ＜212＞DNA ＜213＞大腸桿菌（Escherichia coli ） ＜221＞CDS ＜222＞（1）…（63） ＜223＞用以編碼OmpA訊息胜肽的核酸片段 ＜400＞1 atg aaa aag aca gct atc gcg att gca gtg gca ctg gct ggt ttc gct 48 Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala 1 5 10 15 acc gta gcg cag gcc 63 Thr Val Ala Gln Ala 20 ＜210＞2 ＜211＞21 ＜212＞PRT ＜213＞大腸桿菌（Escherichia coli ） ＜223＞OmpA訊息胜肽 ＜400＞2 Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala 1 5 10 15 Thr Val Ala Gln Ala 20 ＜210＞3 ＜211＞159 ＜212＞DNA ＜213＞智人（homo sapiens ） ＜221＞ CDS ＜222＞（1）…（159） ＜223＞用以編碼EGF的核酸片段 ＜400＞3 aat agt gat tct gaa tgt cca ctt tct cac gat ggt tat tgt ctt cat 48 Asn Ser Asp Ser Glu Cys Pro Leu Ser His Asp Gly Tyr Cys Leu His 1 5 10 15 gat ggt gtt tgc atg tac att gaa gca ttg gac aaa tat gca tgt aat 96 Asp Gly Val Cys Met Tyr Ile Glu Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Cys Asn 20 25 30 tgt gtt gtt gga tat atc ggt gaa aga tgt caa tac cgt gat tta aaa 144 Cys Val Val Gly Tyr Ile Gly Glu Arg Cys 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Ser Gly Gln Ile Arg Gln Val Thr Asp Gly Arg Ser 275 280 285 aac aat acc gaa ccg acc tgg ttc ccg gat agc cag aac ctg gca ttt 912 Asn Asn Thr Glu Pro Thr Trp Phe Pro Asp Ser Gln Asn Leu Ala Phe 290 295 300 act tct gac cag gcc ggt cgt ccg cag gtt tat aaa gtg aat atc aac 960 Thr Ser Asp Gln Ala Gly Arg Pro Gln Val Tyr Lys Val Asn Ile Asn 305 310 315 320 ggc ggt gcg cca caa cgt att acc tgg gaa ggt tcg cag aac cag gat 1008 Gly Gly Ala Pro Gln Arg Ile Thr Trp Glu Gly Ser Gln Asn Gln Asp 325 330 335 gcg gat gtc agc agc gac ggt aaa ttt atg gta atg gtc agc tcc aat 1056 Ala Asp Val Ser Ser Asp Gly Lys Phe Met Val Met Val Ser Ser Asn 340 345 350 ggt ggg cag cag cac att gcc aaa caa gat ctg gca acg gga ggc gta 1104 Gly Gly Gln Gln His Ile Ala Lys Gln Asp Leu Ala Thr Gly Gly Val 355 360 365 caa gtt ctg tcg tcc acg ttc ctg gat gaa acg cca agt ctg gca cct 1152 Gln Val Leu Ser Ser Thr Phe Leu Asp Glu Thr Pro Ser Leu Ala Pro 370 375 380 aac ggc act atg gta atc tac agc tct tct cag ggg atg gga tcc gtg 1200 Asn Gly Thr Met Val Ile Tyr Ser Ser Ser Gln Gly Met Gly Ser Val 385 390 395 400 ctg aat ttg gtt tct aca gat ggg cgt ttc aaa gcg cgt ctt ccg gca 1248 Leu Asn Leu Val Ser Thr Asp Gly Arg Phe Lys Ala Arg Leu Pro Ala 405 410 415 act gat gga cag gtc aaa ttc cct gcc tgg tcg ccg tat ctg 1290 Thr Asp Gly Gln Val Lys Phe Pro Ala Trp Ser Pro Tyr Leu 420 425 430 tga 1293 ＜210＞8 ＜211＞430 ＜212＞PRT ＜213＞大腸桿菌（Escherichia coli ） ＜223＞TolB蛋白質 ＜400＞8 Met Lys Gln Ala Leu Arg Val Ala Phe Gly Phe Leu Ile Leu Trp Ala 1 5 10 15 Ser Val Leu His Ala Glu Val Arg Ile Val Ile Asp Ser Gly Val Asp 20 25 30 Ser Gly Arg Pro Ile Gly Val Val Pro Phe Gln Trp Ala Gly Pro Gly 35 40 45 Ala Ala Pro Glu Asp Ile Gly Gly Ile Val Ala Ala Asp Leu Arg Asn 50 55 60 Ser Gly Lys Phe Asn Pro Leu Asp Arg Ala Arg Leu Pro Gln Gln Pro 65 70 75 80 Gly Ser Ala Gln Glu Val Gln Pro Ala Ala Trp Ser Ala Leu Gly Ile 85 90 95 Asp Ala Val Val Val Gly Gln Val Thr Pro Asn Pro Asp Gly Ser Tyr 100 105 110 Asn Val Ala Tyr Gln Leu Val Asp Thr Gly Gly Ala Pro Gly Thr Val 115 120 125 Leu Ala Gln Asn Ser Tyr Lys Val Asn Lys Gln Trp Leu Arg Tyr Ala 130 135 140 Gly His Thr Ala Ser Asp Glu Val Phe Glu Lys Leu Thr Gly Ile Lys 145 150 155 160 Gly Ala Phe Arg Thr Arg Ile Ala Tyr Val Val Gln Thr Asn Gly Gly 165 170 175 Gln Phe Pro Tyr Glu Leu Arg Val Ser Asp Tyr Asp Gly Tyr Asn Gln 180 185 190 Phe Val Val His Arg Ser Pro Gln Pro Leu Met Ser Pro Ala Trp Ser 195 200 205 Pro Asp Gly Ser Lys Leu Ala Tyr Val Thr Phe Glu Ser Gly Arg Ser 210 215 220 Ala Leu Val Ile Gln Thr Leu Ala Asn Gly Ala Val Arg Gln Val Ala 225 230 235 240 Ser Phe Pro Arg His Asn Gly Ala Pro Ala Phe Ser Pro Asp Gly Ser 245 250 255 Lys Leu Ala Phe Ala Leu Ser Lys Thr Gly Ser Leu Asn Leu Tyr Val 260 265 270 Met Asp Leu Ala Ser Gly Gln Ile Arg Gln Val Thr Asp Gly Arg Ser 275 280 285 Asn Asn Thr Glu Pro Thr Trp Phe Pro Asp Ser Gln Asn Leu Ala Phe 290 295 300 Thr Ser Asp Gln Ala Gly Arg Pro Gln Val Tyr Lys Val Asn Ile Asn 305 310 315 320 Gly Gly Ala Pro Gln Arg Ile Thr Trp Glu Gly Ser Gln Asn Gln Asp 325 330 335 Ala Asp Val Ser Ser Asp Gly Lys Phe Met Val Met Val Ser Ser Asn 340 345 350 Gly Gly Gln Gln His Ile Ala Lys Gln Asp Leu Ala Thr Gly Gly Val 355 360 365 Gln Val Leu Ser Ser Thr Phe Leu Asp Glu Thr Pro Ser Leu Ala Pro 370 375 380 Asn Gly Thr Met Val Ile Tyr Ser Ser Ser Gln Gly Met Gly Ser Val 385 390 395 400 Leu Asn Leu Val Ser Thr Asp Gly Arg Phe Lys Ala Arg Leu Pro Ala 405 410 415 Thr Asp Gly Gln Val Lys Phe Pro Ala Trp Ser Pro Tyr Leu 420 425 430 ＜210＞9 ＜211＞522 ＜212＞DNA ＜213＞大腸桿菌（Escherichia coli ） ＜221＞CDS ＜222＞（1）…（519） ＜223＞pal 基因 ＜400＞9 atg caa ctg aac aaa gtg ctg aaa ggg ctg atg att gct ctg cct gtt 48 Met Gln Leu Asn Lys Val Leu Lys Gly Leu Met Ile Ala Leu Pro Val 1 5 10 15 atg gca att gcg gca tgt tct tcc aac aag aac gcc agc aat gac ggc 96 Met Ala Ile Ala Ala Cys Ser Ser Asn Lys Asn Ala Ser Asn Asp Gly 20 25 30 agc gaa ggc atg ctg ggt gcc ggc act ggt atg gat gcg aac ggc ggc 144 Ser Glu Gly Met Leu Gly Ala Gly Thr Gly Met Asp Ala Asn Gly Gly 35 40 45 aac ggc aac atg tct tcc gaa gag cag gct cgt ctg caa atg caa cag 192 Asn Gly Asn Met Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Leu Gln Met Gln Gln 50 55 60 ctg cag cag aac aac atc gtt tac ttc gat ctg gac aag tac gat atc 240 Leu Gln Gln Asn Asn Ile Val Tyr Phe Asp Leu Asp Lys Tyr Asp Ile 65 70 75 80 cgt tct gac ttc gct caa atg ctg gat gca cat gca aac ttc ctg cgt 288 Arg Ser Asp Phe Ala Gln Met Leu Asp Ala His Ala Asn Phe Leu Arg 85 90 95 agc aac ccg tct tac aaa gtc acc gta gaa ggt cac gcg gac gaa cgt 336 Ser Asn Pro Ser Tyr Lys Val Thr Val Glu Gly His Ala Asp Glu Arg 100 105 110 ggt act ccg gaa tac aac atc tcc ctg ggt gaa cgt cgt gcg aac gcc 384 Gly Thr Pro Glu Tyr Asn Ile Ser Leu Gly Glu Arg Arg Ala Asn Ala 115 120 125 gtt aag atg tac ctg cag ggt aaa ggc gtt tct gca gac cag atc tcc 432 Val Lys Met Tyr Leu Gln Gly Lys Gly Val Ser Ala Asp Gln Ile Ser 130 135 140 atc gtt tct tac ggt aaa gaa aaa cct gca gta ctg ggt cat gac gaa 480 Ile Val Ser Tyr Gly Lys Glu Lys Pro Ala Val Leu Gly His Asp Glu 145 150 155 160 gcg gca tac tcc aaa aac cgt cgt gcg gta ctg gtt tac 519 Ala Ala Tyr Ser Lys Asn Arg Arg Ala Val Leu Val Tyr 165 170 taa 522 ＜210＞10 ＜211＞173 ＜212＞PRT ＜213＞大腸桿菌（Escherichia coli ） ＜223＞Pal蛋白質 ＜400＞10 Met Gln Leu Asn Lys Val Leu Lys Gly Leu Met Ile Ala Leu Pro Val 1 5 10 15 Met Ala Ile Ala Ala Cys Ser Ser Asn Lys Asn Ala Ser Asn Asp Gly 20 25 30 Ser Glu Gly Met Leu Gly Ala Gly Thr Gly Met Asp Ala Asn Gly Gly 35 40 45 Asn Gly Asn Met Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Leu Gln Met Gln Gln 50 55 60 Leu Gln Gln Asn Asn Ile Val Tyr Phe Asp Leu Asp Lys Tyr Asp Ile 65 70 75 80 Arg Ser Asp Phe Ala Gln Met Leu Asp Ala His Ala Asn Phe Leu Arg 85 90 95 Ser Asn Pro Ser Tyr Lys Val Thr Val Glu Gly His Ala Asp Glu Arg 100 105 110 Gly Thr Pro Glu Tyr Asn Ile Ser Leu Gly Glu Arg Arg Ala Asn Ala 115 120 125 Val Lys Met Tyr Leu Gln Gly Lys Gly Val Ser Ala Asp Gln Ile Ser 130 135 140 Ile Val Ser Tyr Gly Lys Glu Lys Pro Ala Val Leu Gly His Asp Glu 145 150 155 160 Ala Ala Tyr Ser Lys Asn Arg Arg Ala Val Leu Val Tyr 165 170 ＜210＞11 ＜211＞15 ＜212＞DNA ＜213＞大腸桿菌（Escherichia coli ） ＜221＞CDS ＜222＞（1）…（15） ＜223＞轉譯強化單元（translation enhancing element，TEE） ＜400＞11 atg aat cac aaa gtg 15 Met Asn His Lys Val 1 5 ＜210＞12 ＜211＞5 ＜212＞PRT ＜213＞大腸桿菌（Escherichia coli ） ＜223＞TEE所編碼的胜肽 ＜400＞12 Met Asn His Lys Val 1 5

Claims (10)

  1. 一種改質菌株，係屬於大腸桿菌，且包括： 一用以編碼OmpA訊息胜肽（signal peptide）的核酸片段；以及 一用以編碼重組胜肽或重組蛋白質並直接連接於該用以編碼OmpA訊息胜肽之核酸片段3'端的核酸片段； 其中，該改質菌株缺少tolA 基因、tolB 基因、與pal 基因。
  2. 如請求項第1項所述之改質菌株，其中該大腸桿菌的品系選自BL21(DE3)、W3110、 JM109、JM109(DE3)、或DH5α。
  3. 如請求項第1項所述之改質菌株，其中該用以編碼OmpA訊息胜肽的核酸片段與該用以編碼重組胜肽或重組蛋白質的核酸片段係位於該菌株的染色體上或位於一位在該菌株內的質體上。
  4. 如請求項第1項所述之改質菌株，更包括： 至少一轉譯強化單元（translation enhancing element，TEE），係直接連接於該用以編碼OmpA訊息胜肽之核酸片段的5'端。
  5. 如請求項第1項所述之改質菌株，更包括： 一啟動子，係可操作地連接於該用以編碼OmpA訊息胜肽之核酸片段的5'端。
  6. 如請求項第1項所述之改質菌株，其中該重組胜肽或重組蛋白質係表皮生長因子。
  7. 一種製備重組胜肽或重組蛋白質的方法，係包括： 培養一如請求項第1至6項中任一所述之改質菌株於一培養液中以表現該重組胜肽或重組蛋白質；以及 自該培養液中純化出該重組胜肽或重組蛋白質。
  8. 如請求項第7項所述之方法，其中該培養液更含有酪蛋白胺基酸（casamino acid）。
  9. 如請求項第7項所述之方法，其中該培養液更含有甜菜鹼（betaine）。
  10. 如請求項第7項所述之方法，其中該培養液更含有一誘導劑（inducer）。
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