TW201902927A - 糖尿病相關應用之方法及抗體 - Google Patents

糖尿病相關應用之方法及抗體 Download PDF

Info

Publication number
TW201902927A
TW201902927A TW107113049A TW107113049A TW201902927A TW 201902927 A TW201902927 A TW 201902927A TW 107113049 A TW107113049 A TW 107113049A TW 107113049 A TW107113049 A TW 107113049A TW 201902927 A TW201902927 A TW 201902927A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
patent application
gcd59
sample
amino acid
Prior art date
Application number
TW107113049A
Other languages
English (en)
Inventor
麥可 查維特
荷西 海柏林
Original Assignee
美商梅利特公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商梅利特公司 filed Critical 美商梅利特公司
Publication of TW201902927A publication Critical patent/TW201902927A/zh

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
    • G01N2800/042—Disorders of carbohydrate metabolism, e.g. diabetes, glucose metabolism

Abstract

所揭示者係抗CD59和抗醣化CD59抗體。所提供者係包括該等抗體之分析、診斷法、套組和分析組分。所包括者係用於評估與糖尿病相關之適應症的方法及CD59醣化抑制劑和評估該等抑制劑之方法。

Description

糖尿病相關應用之方法及抗體
本發明關於用於偵測與升高之葡萄糖水準相關之因子的化合物、方法和套組。該等因子包括因血糖水準升高而已經轉譯後修飾之蛋白質。本發明亦關於基於偵測之因子對患者進行診斷、治療、監測和分層級之方法。
糖尿病之特徵為血糖水準升高。血糖水準持續升高可能藉由稱為醣化之過程影響蛋白質。醣化為葡萄糖以非酵素催化方式連接蛋白質且被認為是引起糖尿病個體組織損傷的主要病理生理機制。醣化涉及葡萄糖及/或其他還原糖與蛋白質中之胺基反應而導致形成席夫鹼(Schiffbase)或醛亞胺(aldimine)。此種不穩定之加合物可經由阿馬多里(Amadori)重排反應而互變異構化成更穩定之酮胺。
現已在糖尿病個體中鑑定出不同之醣化蛋白，包括白蛋白、血紅蛋白，等。根據受影響之胺基的位置，該醣化蛋白之功能可能受損。例如，血紅蛋白之β鏈的胺基端醣化會產生醣化之血紅蛋白(HbA1c)，該醣化血紅蛋白中對2,3-二磷酸甘油酸酯之反應降低且氧親和力增加。凝血系統之主要凝血酵素抑制劑抗凝血酵素III醣化會降低其對肝素之親和力且已被推測會促成與糖尿病相關之高凝血狀態。
測量某些蛋白質之蛋白質“醣化”程度可能為用於提供較短期指標(諸如直接測量葡萄糖水準)更穩定之血糖控制指標，最終協助改善治療效果的有價值之臨床工具。本發明者先前已證明CD59之K41醣化與異常之血糖水準有關且K41處醣化會干擾CD59之正常活性(美國專利案第6,835,545號；美國專利案第7,049,082號；和美國專利案第7,439,330號；各篇專利案之全部內容以引用方式併入本文)。
然而，對於偵測和診斷糖尿病病況之改良方法仍有需求。特別是，對於用於偵測及/或測定個體樣品中之醣化CD59(GCD59)之水準的簡單、準確和經濟合算的方法、試劑和套組仍有需求。
於一些實施態樣中，本發明提供抗體，其中該抗體包括重鏈可變結構域(VH)，該VH具有與選自由SEQ ID NO：38至43所組成之群組之胺基酸序列具有至少70% 胺基酸序列同一性的互補決定區(CDR)。該CDR可為選自由SEQ ID NO：42和43所組成之群組的CDR-H3。該VH可包括CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，該CDR-H1具有與選自由SEQ ID NO：38和39所組成之群組之序列具有至少70%序列同一性的胺基酸序列；該CDR-H2具有與選自由SEQ ID NO：40和41所組成之群組之序列具有至少70%序列同一性的胺基酸序列；該CDR-H3具有與選自由SEQ ID NO：42和43所組成之群組之序列具有至少70%序列同一性的胺基酸序列。該抗體可包括輕鏈可變結構域(VL)，該VL具有與選自由SEQ ID NO：33至37所組成之群組之胺基酸序列具有至少70% 胺基酸序列同一性之CDR。該VL不包括選自由SEQ ID NO：36及37所組成之群阻之CDR-L3。該VL可包括CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，該CDR-L1具有與選自由SEQ ID NO：33和34所組成之群組之序列具有至少70% 序列同一性的胺基酸序列；該CDR-L2具有與SEQ ID NO：35之序列具有至少30% 序列同一性之胺基酸序列；該CDR-L3具有與選自由SEQ ID NO：36和37所組成之群組之序列具有至少70% 序列同一性的胺基酸序列。該抗體可為單株抗體。該抗體可為人化抗體。該抗體可為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
本發明之抗體可包括至少一個可變結構域，該可變結構域具有與選自由SEQ ID NO：29至32所組成之群組之胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列。該至少一個可變結構域可包括VH，該VH具有與選自由SEQ ID NO：30和32所組成之群組之胺基酸序列具有至少95%序列同一性的胺基酸序列。該至少一個可變結構域可包括VL，該VL具有與選自由SEQ ID NO：29和31所組成之群組之胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列。
本發明之抗體可包括與選自由SEQ ID NO：3和5所組成之群組之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之經轉譯之胺基酸序列。該重鏈可由與選自由SEQ ID NO：7、8和10所組成之群組之核酸序列具有至少95%序列同一性之核苷酸序列所編碼。
本發明之抗體可包括具有經轉譯之胺基酸序列之輕鏈，該經轉譯之胺基酸序列與選自由SEQ ID NO：2和4所組成之群組之胺基酸序列具有至少95%序列同一性。該輕鏈可由選自由SEQ ID NO：6和9所組成之群組之核苷酸序列所編碼。
於一些實施態樣中，本發明提供包括重鏈和經鏈之抗體，該重鏈具有與選自由SEQ ID NO：3和5所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%序列同一性之經轉譯的胺基酸序列；且該輕鏈具有與選自由SEQ ID NO：2和4所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%序列同一性之經轉譯的胺基酸序列。該抗體可與CD59結合。該抗體可與CD59之非醣化抗原決定位(epitope)結合。該抗體可與不包括離胺酸41(K41)之CD59的抗原決定位結合。該抗體可與醣化CD59(GCD59)之醣化抗原決定位結合。GCD59之醣化抗原決定位可包括經阿馬多里修飾之K41。與GCD59之醣化抗原決定位結合可能之特點為平衡解離常數(KD)為約1.0 pM至約5.0×108 pM。該KD可為約1.5 pM至約150 pM。該GCD59抗原決定位之呈現形式可選自下列至少一者：與表面聯結之形式及以溶液為基礎之形式。以溶液為基礎之形式可包括具有尿液、血漿、血清、血液、汗液和唾液至少一者之溶液。該血清之稀釋比例可為約1：1至約1：100,000。
於一些實施態樣中，本發明提供套組，該套組包括捕獲劑和該套組之使用說明書。該捕獲劑可為捕獲抗體，其中該捕獲抗體為本文所描述之抗體。該捕獲抗體可與CD59結合。該套組可包括偵測劑，其中該偵測劑係選自凝集素(lectin)和偵測抗體，其中該偵測抗體為本文所描述之抗體。該偵測抗體可與CD59結合。該偵測劑可與GCD59之醣基化抗原決定位結合。該GCD59之醣基化抗原決定位可包括GCD59之N-醣基化抗原決定位。該套組可包括用於產生校準曲線之化合物。該套組可包括至少一種緩衝液。該緩衝液可用於接觸個體樣品。該緩衝液可包括下列群組至少一者：還原劑、氧化劑、二硫代蘇糖醇(DTT)和β-巰基乙醇(BME)。該套組可包括一或多個內部對照組。該一或多個內部對照組可包括一或多個血漿分析對照組。該套組可包括下列群組之一或多者：分析稀釋劑、共軛物稀釋劑和洗滌緩衝液。該套組中之一或多種試劑可經凍乾。
本發明之方法包括偵測樣品中之標靶蛋白之方法。該標靶蛋白可包括GCD59。該方法可包括取得樣品；將該樣品施加於底物(substrate)，該底物具有捕獲抗體，其中該捕獲抗體係選自與CD59之N-醣基化抗原決定位結合之抗體或本文所描述之任何抗體；將偵測抗體施加於該底物，其中該偵測抗體與選自GCD59之醣化或非醣化抗原決定位之標靶抗原決定位結合；及分析該底物是否存有該偵測抗體。該方法可包括取得樣品；將樣品施加於底物，該底物具有捕獲抗體，其中該捕獲抗體係選自本文所描述之抗體；施加偵測抗體，其中該偵測抗體與GCD59之非醣化之抗原決定位結合；及分析該底物是否存有該偵測抗體。該偵測抗體可選自本文所描述之任何抗體。該標靶抗原決定位可包括GCD59之醣基化抗原決定位。該標靶抗原決定位可包括GCD59之N醣基化之抗原決定位。該樣品可為個體樣品。該個體樣品可選自下列群組至少一者：尿液、血液、血漿、血清、汗液和唾液。該樣品可以下列群組至少一者處理：還原劑、氧化劑、二硫代蘇糖醇(DTT)和β-巰基乙醇(BME)。該樣品可為經稀釋之樣品。該樣品之稀釋比可為約1：1至約1：1,000。
於一些實施態樣中，本發明提供偵測樣品中之標靶蛋白的方法，其中該標靶蛋白包括GCD59，該方法包括取得樣品，其中該樣品包括下列群組至少一者：細胞、組織和組織切片；將偵測抗體施加至該樣品，其中該偵測抗體與標靶抗原決定位結合，該標靶抗原決定位包括GCD59之醣化抗原決定位；及分析樣品中是否存有偵測抗體。該偵測抗體可包括可偵測標記。該可偵測標記可選自由下列所組成之群組：生物素、鏈親和素(streptavidin)、抗生物素蛋白(avidin)、螢光標記、酵素標記、發光標記和放射性標記。該偵測抗體可使用第二偵測劑偵測，其中該第二偵測劑包括可偵測標記。該第二偵測劑可為抗體。該可偵測標記可選自由下列所組成之群組：生物素、鏈親和素、抗生物素蛋白、螢光標記、酵素標記、發光標記和放射性標記。該底物可選自下列群組至少一者：分析盤、小珠、膜、傳導表面和傳導奈米顆粒。該方法可在照護點(point of care)進行。該方法至少有一部分係連同患者監測裝置進行。該患者監測裝置可能接收及/或傳輸電子訊號。該患者監測裝置可為選自智慧型手機和智慧型手錶至少一者之智慧型裝置。該標靶蛋白之濃度或濃度當量可藉由測量至少一種與該可偵測標記關聯之信號來測定。
於一些實施態樣中，本發明提供評估個體之方法，該方法包括從個體收集至少一種測試樣品；進行如本文所描述之任何方法，其中該樣品包括至少一種測試樣品和至少一種對照樣品；將在該至少一個測試樣品中之標靶蛋白的濃度或濃度當量與在該至少一種對照樣品中偵測到之標靶蛋白的濃度或濃度當量相比較。
於一些實施態樣中，本發明提供藉由進行本文所描述之任何方法篩查、診斷和監測個體中與糖尿病相關之適應症之方法，其中若在至少一種測試樣品中之標靶蛋白的濃度或濃度當量與在至少一種對照樣品中偵測到之標靶蛋白的濃度或濃度當量之差異達到閾值，則該個體被診斷為具有與糖尿病相關之適應症。本發明之方法包括監測個體中之一或多種與糖尿病相關之適應症的方法，其中該個體具有一或多種與糖尿病相關之適應症，該方法包括從個體收集至少二種測試樣品，其中該至少二種測試樣品係在至少二個期間內取得；進行本文所描述之任何方法，其中該樣品包括至少二種收集之測試樣品；及監測在至少二種測試樣品中之標靶蛋白的濃度或濃度當量之間的差異。監測個體中一或多種與糖尿病相關之適應症的方法可以伴隨式診斷法(companion diagnostic method)之一部分的形式來進行。
於一些實施態樣中，本發明提供評估治療方法之有效性的方法。該治療方法可包括將至少一種治療化合物投予至少一位個體。
本發明之方法可包括分派個體風險等級之方法，其中該風險等級包括與發展一或多種與糖尿病相關之適應症有關的風險等級。該方法可包括將至少一種測試樣品中之標靶蛋白的濃度或濃度當量與至少一種對照樣品中偵測到之標靶蛋白的濃度或濃度當量相比較；及基於所執行之比較對該個體分派風險等級。該個體可為下列群組至少一者：懷孕之個體、懷疑懷孕之個體和能夠懷孕之個體。該與糖尿病相關之適應症可包括妊娠糖尿病。
於一些實施態樣中，本發明提供用於執行本文所描述之任何方法的全部或一部分之裝置。該裝置可為可穿戴裝置。該可穿戴裝置可包括腕帶。該可穿戴裝置可為智慧型手錶。
於一些實施態樣中，用於篩檢、診斷和監測個體中與糖尿病相關之適應症的本發明方法可包括偵測標靶抗原決定位，其中該標靶抗原決定位可包括GCD59之N-醣基化抗原決定位，該GCD59之N-醣基化抗原決定位包括GCD59之殘基N18，其中殘基N18為N-醣基化的。該一或多種與糖尿病相關之適應症可選自下列群組至少一者：糖尿病、糖尿病之器官特異性併發症傾向；臨床前期糖尿病週圍神經病變；臨床前期糖尿病腎病；臨床前期糖尿病視網膜病變；和臨床前期糖尿病血管疾病。
本發明之方法包括偵測N-醣基化之GCD59的方法，該方法包括使用本文所描述之抗體分離GCD59；及分析分離之GCD59以偵測是否存有N-醣基化之殘基。分析可包括使用質譜分析。分析可包括使用能與N-醣基化之殘基結合之凝集素。該N-醣基化之殘基可為GCD59之殘基N18。
於一些實施態樣中，本發明提供鑑別CD59 K41醣化之抑制劑的方法，該方法包括將至少一種樣品與至少一種測試化合物接觸，其中該至少一種樣品包括CD59及適合K41醣化之條件；測定該至少一種樣品中之GCD59的濃度或濃度當量；且若該樣品與至少一種測試化合物接觸而導致測定之GCD59濃度或濃度當量量降低時，該至少一種測試化合物之一或多者被確認為CD59 K41醣化之抑制劑。該GCD59之濃度或濃度當量可使用本文所描述之抗體進行測定。該至少一種測試化合物可選自下列群組之一或多者：小分子、胜肽、合成之構築體、融合蛋白、適體(aptamer)、核酸和抗體。於一些實施態樣中，本發明提供根據鑑定CD59 K41醣化之抑制劑的方法所研發之抑制劑，該方法包括本文呈現之方法。
於一些實施態樣中，本發明提供編碼本文所描述之一或多種抗體或其片段或變體之載體。本發明亦提供使用該等載體產生之重組抗體、包括該等載體之細胞和由該等細胞產生之抗體。
本發明之方法包括使用根據本文所描述之任何方法產生之抑制劑治療與糖尿病相關之適應症的方法。該與糖尿病相關之適應症可選自下列群組之一或多者：補體功能障礙、溶血性疾病、陣發性夜間血紅蛋白尿、非典型溶血性尿毒症候群、傷口癒合、與器官移植相關之併發症、血管適應症和與年齡相關之黃斑變性。
於一些實施態樣中，本發明提供對妊娠個體分派風險等級之方法，其中該風險等級包括與發展一或多種與GDM(妊娠糖尿病)相關之病症有關的風險等級。該方法可包括從妊娠個體之妊娠載體收集至少一個測試樣品；使用分析來測定在該測試樣品中之GCD59含量，其中該分析利用捕獲抗體和偵測抗體，該捕獲抗體和偵測抗體各自選自本文所描述之任一者；並基於該測試樣品中所測得之GCD59含量來分派與發展出一或多種與GDM相關之病況有關的風險等級。該一或多種與GDM相關之病況可選自下列群組之一或多者：巨大兒(macrosomia)、過期妊娠(large gestational age)(LGA)、出生缺陷、產傷、高膽紅素血症、低血糖症、癲癇發作和死產。
本發明之方法可透過使用平台技術來執行。該平台技術可包括自動化平台技術。
實施例1.抗體製備方法和測序
分別使用CD59片段產生針對CD59和K41經阿馬多里(Amadon)修飾之GCD59的抗體。為了製備抗K41經阿馬多里修飾之GCD59抗體，使用具有經阿馬多里修飾之K41的CD59片段。藉由小鼠免疫化及發展來自顯示出能成功表現具有高親和力和特異性之抗體之動物的雜交瘤細胞來製備抗體。發展選殖株H9作為捕獲抗體，該捕獲抗體可同時與醣化和非醣化CD59結合。發展選殖株D2和D3作為偵測抗體，其可與K41經阿馬多里修飾之GCD59結合。對抗體進行測序並分析以鑑定抗體區域。所產生之序列提供於表1至7中。抗體D2和D3之重鏈和輕鏈被發現具有完全相同之胺基酸序列，但其重鏈核苷酸序列相差一個核苷酸。 實施例2. 偵測尿液樣品中之GCD59
使用如上述之特異於經阿馬多里修飾之GCD59的偵測抗體D2偵測尿液樣品中之GCD59。首先以CD59捕獲抗體H9將分析盤塗層。從二位個體取得尿液樣品，已知一位具有高水準之HbA1C(HbA1C-H)並已知一位具有低水準之HbA1C(HbA1C-L)。高水準之HbA1C為已知之血糖升高指標。首先加入β-巰基乙醇(BME)使最終濃度為5%以製備樣品。然後將樣品在100℃下煮沸5分鐘並離心以將任何碎片沉澱下來。然後，分離出用於分析之上清液。如美國專利案第9,417,248號第27圖所示，使用替代化合物標準來製備用於產生校準曲線之一系列稀釋液。該經阿馬多里修飾之GCD59替代物包括合成之化合物(包括捕獲胜肽和偵測胜肽，其係藉由彈性連接子連接)。
將標準樣品(尿液樣品)和對照樣品[血清稀釋緩衝液(50 mM醋酸/醋酸鈉；2% NonIdet P40替代物；0.15%吐溫20；0.1% Triton X-100；50 ppm ProClin 300)]加入分析盤中，一式三份。使用血清稀釋緩衝液將尿液樣品進一步稀釋以創造在血清稀釋緩衝液中之一系列狀況，範圍從6%體積/體積(v/v)尿液樣品至0.2%尿液樣品。將分析盤在室溫下置於搖動器上1小時。然後以洗滌緩衝液[含有0.05% TWEEN®-20之磷酸緩衝鹽水(PBS)]洗滌分析盤，再加入100μl之抗體D2溶液[1.25μg/ml，在具有10%無蛋白質阻斷緩衝液之PBS(Thermo Fisher，麻薩諸塞州Waltham)中]。然後將分析盤在室溫下培育2小時並一邊搖動。
2小時後，以洗滌緩衝液洗滌分析盤並與100μl之與馬辣根過氧化物酵素(HRP)共軛結合的二級抗體一起培育，再在TMB受質試劑A和B之存在下在室溫下培育1小時並一邊搖動。以H2 SO4 溶液處理將分析盤淬滅以產生比色最終產物。然後以分光光度法檢查孔以在450nm處取得光密度值。
基於使用替代化合物標準之孔來產生校準曲線(第1A圖)。基於該校準曲線將來自尿液樣品之結果轉換成標準蛋白質單位(SPU)並對來自每個樣品之尿液百分比值作圖(第1B圖)。從HbAC1-H樣品取得之數值表明濃度依賴性抗體D2在高濃度樣品中以約2.5 SPU結合。HbAC1-L樣品之數值低表明與抗體D2幾乎沒有結合。這些結果證明H9捕獲CD59之能力和D2以濃度依賴方式偵測在流體樣品中之經阿馬多里修飾之GCD59。 實施例3.藉由西方點墨法偵測GCD59
在細胞裂解物中測試抗經阿馬多里修飾之hGCD59 mAb D2和D3對醣化之hCD59的特異性，該細胞裂解物係源自紅血球(RBC)中表現hCD59轉基因(Tg)之糖尿病轉基因小鼠。藉由投予hCD59轉基因小鼠一個劑量之鏈脲佐菌素(streptozotocin)(STZ)以誘導糖尿病並在二週後測量血糖。若小鼠之血糖水準高於200mg/dL，則該小鼠被視為患有糖尿病。從糖尿病轉基因小鼠(D)及對照之非-糖尿病小鼠(ND)取得RBC，將RBC裂解並萃取蛋白質。使用SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳)將蛋白質樣品分開並以抗經阿馬多里修飾之hGCD59抗體(D2)和抗hCD59抗體進行免疫點墨(第2圖)。與糖尿病中醣化之CD59升高相一致，糖尿病小鼠中之抗經阿馬多里修飾之hGCD59抗體顯示出明顯帶狀，而對照之非糖尿病小鼠顯示出微弱之帶狀。糖尿病小鼠和對照之非糖尿病小鼠均顯示類似之hCD59水準，證明抗經阿馬多里修飾之hGCD59抗體之特異性。 實施例4. ELISA套組
製備相對於醣化之CD59(GCD59)胜肽混種替代物特異性量化GCD59之夾心型ELISA分析。使用抗體H9作為捕獲抗體以捕獲測試之樣品中之CD59。該偵測抗體係使用胜肽抗原發展出，該胜肽抗原在CD59之K41的同等位置中含有葡糖醇離胺酸殘基。因此，該等分析係偵測還原型GCD59。該等抗葡糖醇離胺酸GCD59 ELISA套組分析亦包括利用NaBH4 作為還原劑之樣品製備步驟以將醣化形式之GCD59轉化成還原之醣化形式的GCD59。套組包括在有機溶劑中之還原劑溶液以進行此步驟。
夾心型經阿馬多里修飾之GCD59 ELISA分析不需要藉由NaBH4 還原來製備樣品，因為偵測抗體特異於非還原經阿馬多里修飾形式之GCD59。然而，以DTT處理樣品可改善抗體親和力。 實施例5. 定點照護檢驗
將揭示之套組和方法格式化以用於定點照護檢驗。此包括格式化以與患者監測裝置一起使用及可與智慧型裝置(例如智慧型手機)組合之裝置。 實施例6.可穿戴裝置
將揭示之套組和方法格式化以與可穿戴裝置一起使用，該可穿戴裝置為手錶或其他可佩戴在手腕、手指、頸部或肢體週圍之帶狀物。
前述和其他目的、特性和優點將可從下文中本發明之特定實施態樣之描述(如附圖中所說明者)顯明。該圖形不一定按比例繪製，而是將重點放在說明本發明之各種實施態樣之原理上。
第1A圖之圖形為使用經阿馬多里修飾之GCD59替代物和抗經阿馬多里修飾之GCD59抗體(D2)產生之校準曲線。
第1B圖之圖形顯示介於尿液樣品稀釋百分比與使用抗體D2偵測之合成的胜肽單位(SPU)之間的相關性。
第2圖為來自西方點墨分析之圖像，其顯示以抗體D2偵測經阿馬多里修飾之GCD59。 發明之詳細說明
於一些實施態樣中，本發明提供用於各種治療、診斷、監測及/或研究應用之化合物、組成物、試劑、方法、套組和裝置。本發明之一部分係關於用於偵測CD59之轉譯後修飾的套組，例如診斷套組。本文包括編碼與經修飾或未經修飾之CD59結合之抗體的胺基酸和核酸序列。該等抗體可用於該用於偵測經轉譯後修飾之CD59的套組中以用於各種治療應用。這些和其他抗體應用進一步詳細描述於本文中。I. 化合物和組成物 蛋白質
本發明之化合物可包括蛋白質。蛋白質可以完整多肽、多個多肽或多肽片段之形式存在，其可獨立地由一或多個核酸、多個核酸、核酸片段或前述之任一變體編碼。如本文所使用者，“多肽”意指最常藉由胜肽鍵連接在一起之胺基酸殘基(天然或非天然)之聚合物。如本文所使用者，該術語意指具有任何大小、結構或功能之蛋白質、多肽和胜肽。在某些情況下，該編碼之多肽小於約50個胺基酸，則該多肽稱為胜肽。若該多肽為胜肽，其將至少為約2、3、4或至少5個胺基酸殘基長。因此，多肽包括基因產物、天然存在之多肽、合成之多肽、前述者之同源物、直系同源物(ortholog)、旁系同源物(paralog)、片段及其他同等物、變體和類似物。多肽可為單分子或可為多分子複合物，諸如二聚體、三聚體或四聚體。其亦可包含單鏈或多鏈多肽且可聯結或連接。術語多肽亦可適用於其中一或多個胺基酸殘基為對應之天然存在之胺基酸的人造化學類似物的胺基酸聚合物。
術語“多肽變體”係指其胺基酸序列與天然或參考序列不同之分子。與天然或參考序列相較時，該胺基酸序列變體之胺基酸序列內的某些位置處可能具有取代、缺失及/或插入。通常，變體與天然或參考序列具有至少約50%同一性(同源性)，且較佳地，它們與天然或參考序列將具有至少約80%，更佳為至少約90%同一性(同源性)。
於一些實施態樣中提供“變體模擬物”。如本文所使用者，術語“變體模擬物”為一種含有一或多個會模擬活化序列之胺基酸的模擬物。例如麩胺酸化物可作為磷酸-蘇胺酸及/或磷酸-絲胺酸之模擬物。或者，變體模擬物可導致去活化或含有該模擬物之產物去活化，例如苯丙胺酸可作為酪胺酸之去活化取代；或丙胺酸可作為絲胺酸之去活化取代。本發明之多肽的胺基酸序列可包含天然存在之胺基酸，因此可被視為蛋白質、胜肽、多肽或其片段。 　　或者，本發明之多肽可同時包括天然和非天然存在之胺基酸。
術語“胺基酸序列變體”係指其胺基酸序列與天然或起始序列相比較下存在一些差異之分子。該胺基酸序列變體在該胺基酸序列內之某些位置處可具有取代、缺失及/或插入。“天然”或“起始”序列不應與野生型序列混淆。如本文所使用者，天然序列或起始序列為在比較時提及原始分子之相對術語。“天然”或“起始”序列或分子可代表野生型(自然界中發現之序列)序列，但不必一定是野生型序列。
通常，與天然序列相比較，變體將具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99.5%、至少99.8%、或至少99.9%序列同一性。當應用於胺基酸序列時，“序列同一性”之定義為在比對序列並考慮間隙和片段(若有必要)以達到最大序列同一性百分比後，候選胺基酸序列中與第二序列之胺基酸序列中之殘基完全相同的殘基百分比。計算二個聚合序列之同一性百分比可藉由，例如將該二個序列進行用於最佳比較目的之比對進行(例如可在第一和第二聚合序列之一或二者中引入間隙以用於最佳比對，而非完全一致之序列在用於比較目的時可被忽略)於某些實施態樣中，經比對以用於比較目的之序列的長度為該參考序列之長度的至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、或100%。然後比較在對應核苷酸位置處之核苷酸。當在第一序列中之位置被與第二序列中之對應位置處相同的核苷酸佔據時，則該位置處之分子相一放。介於二個序列之間的同一性百分比為考慮間隙數目及各間隙長度(為了該二個序列之最佳比對需要引入間隙)後該二個序列所共有之完全一致之位置數的函數。二個序列之間的序列比較和同一性百分比之測定可使用數學算法來完成。例如，二個核苷酸序列之間的同一性百分比可使用諸如下列文獻中所描述之方法測定：Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988；Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987；Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M.,and Griffin, H. G.,eds., Humana Press, New Jersey, 1994；及Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991；各篇以引用方式併入本文。例如，二個核苷酸序列之間的同一性百分比可利用Meyers和Miller之算法(CABIOS, 1989, 4:11-17)測定，該算法已被引入ALIGN程式(版本2.0)，使用PAM120權重殘基表(weight residue table)、間隙長度罰分為12且間隙罰分為4。或者，二個核苷酸序列之間的同一性百分比可利用GCG軟體包中之GAP程式測定，使用NWSgapdna.CMP矩陣。常用於確定序列之間的同一性百分比之方法包括，但不限於Carillo, H., and Li pMan, D., SIAM J Applied Math., 48:1073 (1988)中所揭示者(該篇以引用方式併入本文)。用於測定同一性之技術被編入可公開取得之電腦程式中。用於測定二個序列之間的同源性之示例性電腦軟體包括，但不限於GCG程式包(Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1), 387 (1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215, 403 (1990))。
當應用於胺基酸序列時，“同源物”意指與第二物種之第二序列實質上相一致之其他物種的對應序列。“類似物”意圖包括多肽變體，該多肽變體與親本多肽相差一或多個胺基酸變化(例如取代、添加或缺失胺基酸殘基)但仍保持該親本多肽之性質。“同源性”係指聚合分子之間(例如多肽分子、核酸分子和寡糖之間)的總體相關性。測定同源性時可考慮被比較之聚合分子的序列同一性、序列相似性、三維構型及/或功能。
本發明考慮數種基於胺基酸之多肽類型，包括變體和衍生物。這些包括替代、插入、缺失和共價變體和衍生物。因此，本發明之範圍包括含有取代、插入及/或添加、缺失和共價修飾之多肽。例如，可將序列標籤或胺基酸(諸如一或多個離胺酸)加入本發明之胜肽序列(例如在N端或C端)。序列標籤可用於純化或定位胜肽。離胺酸可用於增加胜肽之溶解度或允許生物素化。或者，可選擇性地刪除位於胜肽或蛋白質之胺基酸序列的羧基和胺基端區之胺基酸殘基以提供截短之序列。或者，某些胺基酸(例如C端或N端殘基)可根據序列之用途(例如表現為可溶或與固體支撐物連接之較大序列之一部分的序列)而被刪除。
當提及蛋白質時，“替代變體”為那些在天然或起始序列中有至少一個胺基酸殘基被移除且在該相同位置插入不同之胺基酸者。該取代可為其中在該分子中僅有一個胺基酸被取代之單取代，或可為其中在同一分子中有二或更多個胺基酸被取代之多取代。
如本文所使用之術語“保守性胺基酸取代”係指正常存在於該序列中之胺基酸被具有類似大小、電荷或極性之不同胺基酸取代。保守性取代之實例包括以非極性(疏水性)殘基，諸如異白胺酸、纈胺酸和白胺酸取代另一非極性殘基。同樣地，保守性取代之實例包括以一極性(親水性)殘基取代另一殘基，諸如介於精胺酸和離胺酸之間、介於麩胺醯胺和天門冬醯胺之間及介於甘胺酸和絲胺酸之間。此外，以鹼性殘基，諸如離胺酸、精胺酸或組胺酸取代另一殘基，或以一酸性殘基(諸如天門冬胺酸或麩胺酸)取代另一酸性殘基為保守性取代之另外的實例。非保守性取代之實例包括以非極性(疏水性)胺基酸殘基，諸如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸、丙胺酸、甲硫胺酸取代極性(親水性)殘基，諸如半胱胺酸、麩胺醯胺、麩胺酸或離胺酸及/或以極性殘基取代非極性殘基。
當指蛋白質時，“插入變體”為那些在天然或起始序列中有一或多個胺基酸緊鄰著特定位置處之胺基酸插入的蛋白質。“緊鄰”著胺基酸意指連接該胺基酸之α-羧基或α-胺基官能基。
當指蛋白質時，“缺失變體”為那些在天然或起始胺基酸序列中有一或多個胺基酸被移除者。通常，缺失變體在分子之特定區域中將缺失一或多個胺基酸。
如本文所使用者，術語“衍生物”與術語“變體”同義且係指以任何方式相對於參考分子或起始分子修飾或改變之分子。於一些實施態樣中，衍生物包括已經以有機蛋白質或非蛋白質衍生劑修飾及轉譯後修飾之天然或起始蛋白質。共價修飾傳統上係藉由將該蛋白質之被靶向的胺基酸殘基與能夠與選定之側鏈或終端殘基反應之有機衍生劑反應或藉由利用在選定之重組宿主細胞中發揮功能之轉譯後修飾機制來引入。所得之共價衍生物可用於針對鑑定對生物活性、免疫分析、或製備用於免疫親和純化重組蛋白之抗蛋白質抗體重要之殘基的程序中。該等修飾係在本技藝之一般技術範圍內且不需過度實驗。
某些轉譯後修飾為重組宿主細胞對表現之多肽作用的結果。麩胺醯胺醯和天門冬醯胺醯殘基經常在轉譯後脫醯胺成對應之麩胺醯和天門冬胺醯殘基。或者，該等殘基在弱酸性條件下脫醯胺。該等殘基之任一形式均可存在於根據本發明使用之蛋白質中。
其他轉譯後修飾包括脯胺酸和離胺酸之羥基化、絲胺醯或蘇胺醯殘基之羥基磷酸化、離胺酸、精胺酸和組胺酸側鏈之α-胺基甲基化(T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983))。
具體而言，共價衍生物包括其中本發明之蛋白質與非蛋白質聚合物共價結合之融合分子。該非蛋白質聚合物通常為親水性合成聚合物，即，在自然界中不存在之聚合物。然而，存在於自然界而藉由重組或體外方法產生之聚合物與從自然界分離出之聚合物同樣有用。親水性聚乙烯聚合物係在本發明之範圍內，例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯啶酮。特別有用者為聚乙烯基亞烷醚，諸如聚乙二醇、聚丙二醇。蛋白質可依美國專利案第4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337號中提出之方式連接各種非蛋白質聚合物，諸如聚乙二醇、聚丙二醇或聚氧化烯。
當指蛋白質時，“特性”之定義為分子之基於獨特之胺基酸序列的組分。本發明蛋白質之特性包括表面表現、局部構型形狀、折疊、環、半環、結構域、半結構域、位點、端或彼等之任何組合。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“表面表現”係指顯示在最外表面之基於多肽的蛋白質組分。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“局部構型形狀”意指位於蛋白質之可限定空間內之基於多肽的蛋白質結構表現。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“折疊”意指在能量最小化時所產生之胺基酸序列的構型。折疊可能發生在折疊過程之第二級或第三級。第二級折疊之實例包括β折疊和α螺旋。第三級折疊之實例包括由於活力聚集或分關而形成之結構域和區域。以此方式形成之區域包括疏水袋和親水袋，等。
當與蛋白質構形有關時，如本文所使用之術語“轉”意指將改變胜肽或多肽之主鏈方向的彎曲且可能涉及一、二、三或更多個胺基酸殘基。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“環”係指胜肽或多肽之結構特性，其將胜肽或多肽之主鏈方向逆轉且包含四或更多個胺基酸殘基。Oliva等人已鑑定出至少5種類別之蛋白環(J. Mol Biol 266 (4): 814-830; 1997)。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“半環”係指已鑑定之環的一部分，其具有至少一半其來源之環中所具有之胺基酸數。可理解的是，該環可能並不總是含有偶數個胺基酸殘基。因此，當環中含有或被鑑定為包含奇數個胺基酸時，該奇數環之半環將包含該環之整數部分或下一個整數部分(環之胺基酸數/2±0.5個胺基酸)。例如被鑑定為7個胺基酸環之環可產生具有3個胺基酸或4個胺基酸之半環(7/2=3.5±0.5為3或4)。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“結構域”係指具有一或多個可鑑別的結構或功能特徵或性質(例如結合能力)，作為蛋白質-蛋白質交互作用之位點的多肽之基序。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“半結構域”係指經鑑定之結構域的一部分，其具有至少一半其來源之結構域中所具有之胺基酸數。可理解的是，結構域可能並不總是包含偶數個胺基酸殘基。因此，在結構域含有或被鑑定為包含奇數個胺基酸之該等情況中，該奇數結構域之半結構域將包含該結構域之整數部分或下一個整數部分(結構域之胺基酸數/2±0.5個胺基酸)。例如被鑑定為7個胺基酸結構域之結構域可產生具有3個胺基酸或4個胺基酸之半結構域(7/2=3.5±0.5為3或4)。亦可理解的是，在結構域或半結構域內可鑑定出子結構域，該等子結構域所具有之結構或功能性質少於在其來源之結構域或或半結構域中所鑑定出之結構或功能性質。亦可理解的是，包含本文之任何結構域類型之胺基酸不需為沿著該多肽之骨架的連續胺基酸(即，不相鄰之胺基酸可結構上折疊以產生結構域、半結構域或子結構域)。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“位點”當與基於胺基酸之實施態樣有關時，其與“胺基酸殘基”和“胺基酸側鏈”同義。位點代表在胜肽或多肽內之位置，其可在基於多肽之本發明分子內被修飾、操縱、改變、衍生或改變。
當指蛋白質時，如本文所使用之術語“端”係指胜肽或多肽之末端。該等末端不僅限於該胜肽或多肽之第一或最終位點，且可在該終端區中包括額外之胺基酸。本發明之基於多肽之分子的特徵可為同時具有N-端(終止於具有游離胺基(NH2 )之胺基酸)和C-端(終止於具有游離羧基(CO2 H)之胺基酸))。在某些情況下，本發明之蛋白質係由多條多肽鏈組成，該多肽鏈係藉由二硫鍵或藉由非共價力結合在一起(多聚體、寡聚體)。這些蛋白質類型將具有多個N端和C端。或者，多肽端可經修飾，從而使多肽端根據情況可開始於或結束於基於非多肽之部分，諸如有機共軛物。
一旦該任一特性被鑑定或定義為本發明之分子的組分，該等特性之任何各別操作及/或修飾可藉由移動、掉換、倒置、刪除、隨機化或複製進行。此外，可理解的是，特性之操作可能導致與對本發明分子進行修飾相同之結果。例如，涉及刪除結構域之操作將導致分子長度之改變，如同修飾核酸以編碼較全長分子所編碼者少。
修飾和操作可藉由本技藝中已知之方法，諸如定點誘變完成。然後可使用體外或體內分析(諸如本文所描述者或本技藝已知之任何其他合適之篩查分析)來測試所產生之經修飾的分子之序列、結構及/或活性。同位素變體
本發明之化合物可含有一或多個為同位素之原子。如本文所使用者，術語“同位素”係指具有一或多個額外之中子的化學元素。於一實施態樣中，本發明之化合物可為經氘化的。如本文所使用者，術語“經氘化的”係指已具有一或多個被氘同位素取代之氫原子的物質。氘同位素為氫之同位素。氫之核含有一個質子，而氘核同時含有質子和中子。化合物可經氘化以改變該化合物之物理性質，諸如穩定性或允許該化合物用於診斷和實驗應用。抗體
於一些實施態樣中，本發明提供與標靶蛋白結合之抗體。如本文所使用者，“標靶蛋白質”係指包括正被分析之蛋白質的任何所欲蛋白質，其為涉及蛋白質偵測及/或分析之分析、診斷方法或本文所描述之任何其他方法之一部分。標靶蛋白亦可包括具有一或多個基於胺基酸之節段的合成構築體。合成之構築體可包括一或多個基於非胺基酸之元件，諸如連接子、化學部分或化學基團。在某些情況下，標靶蛋白包括部分或標籤(包括，但不限於可偵測標記)。
於一些實施態樣中，標靶蛋白包括CD59、CD59之片段、CD59之變體、CD59之轉譯後修飾版本及/或包括CD59、CD59片段、CD59變體、轉譯後修飾之CD59、轉譯後修飾之CD59片段及/或轉譯後修飾之CD59變體的合成構築體。成熟之人CD59(hCD59；缺少信號序列)具有胺基酸序列LQCYNCPNPT10 ADCKTAVNCS20 SDFDACLITK30 AGLQVYNKCW40 KFEHCNFNDV50 TTRLRENELT60 YYCCKKDLCN70 FNEQLEN77 (SEQ ID NO：1)。本文所提及之hCD59之殘基編號係指存在於該序列中之殘基編號。hCD59片段和變體可包括歐洲專利案第EP2348050號、國際刊物第WO2015084994號和美國專利案第US9068006號、US9417248中所描述者之任一種，各篇之全部內容以引用方式併入本文。
於一些實施態樣中，本發明之抗體與CD59之非醣化抗原決定位結合。一些捕獲抗體與不包括hCD59 (SEQ ID NO：1)之離胺酸41(本文稱為“K41)的hCD59之抗原決定位結合。本發明之一些抗體與醣化CD59(GCD59)之醣化抗原決定位結合。該等醣化抗原決定位可包括K41-醣化之人GCD59。一些醣化抗原決定位包括經阿馬多里修飾之K41。
hCD59之醣化抗原決定位可包括歐洲專利案第EP2348050號、國際刊物第WO2015084994號和美國專利案第US9068006號、US9417248號(各篇之全部內容以引用方式併入本文)中所描述者之任一種。
於一些實施態樣中，與包括GCD59之經阿馬多里修飾之K41的醣化抗原決定位(本文中亦稱為“經阿馬多里修飾之GCD59抗體”或“抗阿馬多里抗體”)結合之抗體可以約1.0 pM至約5.0×108 pM之平衡解離常數(KD )結合。在某些情況下，該KD 為約1.5 pM至約150 pM。
本發明之抗體可包括捕獲抗體。捕獲抗體係指與標靶蛋白結合以用於分離、固定及/或進一步分析該等標靶蛋白之抗體。捕獲抗體可與CD59或其片段及/或變體結合。某些捕獲抗體可與CD59結合，不論是否存有一或多種轉譯後修飾。
某些捕獲抗體與標靶蛋白之標靶抗原決定位結合。
如本文所使用者，“標靶抗原決定位”係指抗體或其他分子對其具有特異性親和力之特定序列、特性或部分。存在於CD59、CD59片段或CD59變體上之標靶抗原決定位可包括，但不限於特定胺基酸、胺基酸序列及/或三維特性，於某些情況中包括彼等之醣化、非醣化、醣基化和非醣基化特性。hCD59之標靶抗原決定位可包括任一前述CD59抗原決定位或歐洲專利案第EP2348050號、國際刊物第WO2015084994號和美國專利案第US9068006號、US9417248號(各篇之全部內容以引用方式併入本文)中所描述之任一hCD59(人CD59)抗原決定位。該等抗原決定位可以各種方式捕獲或偵測，包括使用抗體或其他生物分子，諸如凝集素、適體、其他蛋白質或核酸。例如CD59，例如hCD59抗原決定位(諸如N-醣基化抗原決定位)可使用任何足以特異結合CD59及/或將CD59從其他蛋白質或其中發現CD59蛋白質之環境分離出的偵測劑偵測。偵測劑可為能與CD59結合或識別CD59，而不考慮其醣基化狀態(例如醣化或非醣化)之抗體。
如本文所使用之偵測抗體為與標靶蛋白結合以測定該等標靶蛋白是存在、不存在及/或含量或用於表徵標靶蛋白之抗體。在某些情況下，可使用偵測抗體來測定標靶蛋白上是否存有標靶抗原決定位。該等標靶抗原決定位可包括存在於標靶蛋白上之經轉譯後修飾的抗原決定位。於一些實施態樣中，偵測抗體可靶向CD59。該等偵測抗體可識別在CD59種類之間可能不同之CD59抗原決定位(例如經不同之轉譯後修飾的CD59種類)。於一些實施態樣中，偵測抗體識別存在於CD59上之經轉譯後修飾之抗原決定位。於一實例中，偵測抗體識別醣化之CD59 (GCD59)。醣化之hCD59可包括K41醣化之hCD59。在某些情況下，偵測抗體可識別攜帶為阿馬多里形式之糖殘基之K41醣化的CD59。K41經阿馬多里修飾之hCD59的實例描述於例如美國專利案第9,068,006號和國際刊物第WO2015/ 084994號中(各篇之全部內容以引用方式併入本文)。某些偵測抗體僅與GCD59結合，但不與非醣化形式結合。本文中描述之為“捕獲”或“偵測”抗體之抗體並不分別限於捕獲和偵測功能。在某些情況下，該等抗體可用於其他目的(例如治療或製造)，包括，但不限於本文所描述之任何目的。
於一些實施態樣中，本發明之抗體與以溶液為基礎之形式呈現之標靶蛋白結合。如本文所使用者，“以溶液為基礎之形式”係指存在於溶液中之蛋白質構型。該等溶液可包括，但不限於鹽水、緩衝液(例如磷酸鹽緩衝之鹽水)、血清、血漿、血液、淋巴、汗液、尿液和唾液。在某些情況下，抗體可能在稀釋之血清或血漿中與標靶蛋白結合。在某些情況下，血清可以約1：1至約1：100,000之比例稀釋。
如本文所使用之術語“抗體”係以最廣泛之意義提及且明確涵蓋各種實施態樣，包括，但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如從至少二個完整抗體形成之雙特異性抗體)和抗體片段(例如雙價抗體)，只要其表現出理想之生物學活性(例如“功能活性”)。抗體主要為基於胺基酸之分子，但亦可包含一或多個修飾(包括，但不限於添加糖部分、螢光部分、化學標籤，等)。
如本文所使用者，“基於抗體”或“源自抗體”之組成物為包含至少一個源自已知或親本抗體序列之胺基酸區和至少一個源自非抗體序列(例如哺乳動物蛋白)之胺基酸區的單體或多聚體多肽。
本發明之抗體可為治療、診斷、工業用抗體或用於研究目的之抗體。此外，本發明之抗體可包括該等抗體之片段或已經研發以包括一或多個該等片段(例如可變結構域或互補決定區(CDR))之抗體。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可用於捕獲樣品(例如臨床樣品)中之CD59及/或GCD59。抗體生成
本發明之抗體可使用本技藝中已知之方法產生。該等方法可包括，但不限於免疫化和顯示技術(例如噬菌體顯示、酵母菌顯示和核醣體顯示)。抗體可例如使用天然或合成抗原研發。如本文所用者，“抗原”為誘導或激發生物體之免疫反應的實體。免疫反應之特徵為生物體之細胞、組織及/或器官對存在之外來實體的反應。該等免疫反應通常導致生物體產生一或多種針對外來實體之抗體，例如抗原或抗原之一部分。如本文所使用者，“抗原”亦指顯示庫中之特定抗體或結合劑的結合夥伴。
本發明之抗體可源自使用雜交瘤技術產生之抗體。宿主動物(例如小鼠、兔、山羊和美洲駝)可藉由注射抗原蛋白免疫化以引出與抗原特異結合之淋巴細胞。淋巴細胞可收集後與永生化之細胞株融合以產生雜交瘤，該雜交瘤可被培養在合適之培養基中以促進生長。可將由該培養之雜交瘤產生之抗體進行分析以測定該抗體對靶抗原之結合特異性。一旦鑑定出具有理想特徵之抗體，可透過有限稀釋程序將對應之雜交瘤分殖並藉由標準方法生長。由該等細胞產生之抗體可使用標準免疫球蛋白純化程序分離並純化。
如本文所使用者，重組抗體為藉由表現重組DNA產生之抗體。本發明之重組抗體可使用本技藝已知之標準技術產生。重組抗體可使用從源自雜交瘤細胞之抗體取得之可變結構域產生，該源自雜交瘤細胞之抗體可根據本文所描述之方法產生。抗體之重鏈和輕鏈可變區cDNA序列可使用標準生物化學技術測定。總RNA可從產生抗體之雜交瘤細胞中萃取並藉由逆轉錄酵素(RT)聚合酵素鏈反應(PCR)轉化成cDNA。PCR擴增可在產生之cDNA上進行以擴增可變區基因。該等擴增可包含使用特異於用於擴增重鏈和輕鏈序列之引物。於其他實施態樣中，重組抗體可使用從其他來源取得之可變結構域產生。這包括使用選自一或多個抗體片段集合庫之可變結構域，諸如用於抗原淘選之scFv集合庫。然後，可將所產生之PCR產物分殖入質粒中並可進行序列分析以用於驗證及/或優化。抗體編碼序列可置於表現載體中。為了將序列人化，可使用用於人重鏈和輕鏈恆定結構域及/或可變結構域框架區之編碼序列來替代同源或其他對應之鼠序列。然後可將所產生之構築體轉染入細胞(例如哺乳動物細胞)中以進行大規模轉譯。於一些實施態樣中，重組抗體及/或編碼重組抗體之載體可使用本文呈現之任何序列的一或多者產生。
本發明之抗體可使用顯示技術生成。用於產生本發明多肽之顯示技術可包括美國刊物第US2015/ 0284455號(其全部內容以引用方式併入本文)中揭示之任何顯示技術(例如顯示庫篩查技術)。於一些實施態樣中，合成抗體可使用顯示技術(例如噬菌體顯示技術)藉由篩查靶抗原來設計、選擇或優化。顯示庫可包含數百萬到數十億個顯示粒子(例如噬菌體或細胞顯示粒子)，其各自在其表面上表現獨特之抗體片段(例如為病毒外殼蛋白或細胞表面分子或蛋白質之一部分)。該等集合庫可提供豐富多樣之資源，該資源可用於選擇可能對一或多種所欲抗原具有不同親和力水準之數百種抗體片段(McCafferty, et al., 1990. Nature. 348:552-4；Edwards, B.M. et al., 2003. JMB. 334: 103-18；Schofield, D. et al., 2007. Genome Biol. 8, R254 和Pershad, K. et al., 2010. Protein Engineering Design and Selection. 23:279-88；各篇之全部內容以引用方式併入本文)。存在於該等集合庫中之抗體片段可為scFv抗體片段，其包含藉由彈性連接子連接之VH和VL抗體結構域的融合蛋白。在某些情況下，scFv可含有相同之序列，除了編碼CDR之可變環的獨特序列外。在某些情況下，scFv係以融合蛋白形式表現，連接至表面分子(例如病毒pIII殼蛋白之N端，當使用噬菌體顯示顆粒時)。VL鏈可分開表現以在複合體被併入表面分子之前在週質中或細胞內與VH鏈組裝。沉澱之集合庫成員可從已經結合之顯示顆粒測序以取得編碼所需scFv之cDNA。來自該等序列之抗體可變結構域或CDR可被直接併入抗體序列中以用於產生重組抗體或經突變並透過親和力熟化以進一步優化。
於一些實施態樣中，可使用酵母表面顯示技術產生抗體，其中抗體可變結構域序列可表現在釀酒酵母之細胞表面上。重組抗體可藉由將所欲之抗體片段以融合蛋白之形式顯示來發展，例如與酵母細胞表面上之Aga2p蛋白融合，其中該蛋白質與溶液中之蛋白質和小分子交互作用。對所欲抗原具有親和力之scFv可使用磁性分離和流式細胞術從酵母表面分離出。可能進行幾次酵母表面顯示和分離之循環以透過定向演化來取得具有所需性質之scFv。酵母顯示可，例如根據Chao, G. et al., Nat Protoc. 2006, l(2):755-68中教導之任何方法進行(其全部內容以引用方式併入本文)。IgG 合成
於一些實施態樣中，本發明之抗體為IgG抗體。IgG抗體(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)可包括一或多個本文呈現之可變結構域及/或CDR胺基酸序列(或其片段或變體)。該等IgG抗體可經合成以用於進一步測試及/或產品研發。某些IgG抗體可藉由將一或多個編碼所需胺基酸序列之cDNA節段插入適合用於產生IgG之表現載體中來產生。表現載體可包含適合用於在哺乳動物細胞中表現IgG之哺乳動物表現載體。可在哺乳動物中表現IgG以確保產生之抗體包含哺乳動物蛋白特有之修飾(例如醣基化)及/或確保抗體製劑缺乏可能存在於來自細菌表現系統之蛋白質製劑中的內毒素及/或其他污染物。抗體片段和變體
本發明之抗體可包括來自完整抗體之抗體片段(例如抗原結合區)。抗體片段之實例可包括，但不限於Fab、Fab’、F(ab’)2 和Fv片段；雙價抗體；線性抗體；及單鏈抗體分子。於一些實施態樣中，本發明之抗體包括從抗體片段形成之多特異性抗體。木瓜蛋白酵素分解抗體產生二個完全相同之抗原結合片段，稱為“Fab”片段，該二個Fab片段各具有單一抗原結合位點。亦產生殘餘之“Fc”片段，該名稱反映其容易結晶化之能力。胃蛋白酵素處理產生F(ab’)2 片段，該F(ab’)2 片段具有二個抗原結合位點且仍然能與抗原交聯。本發明之抗體可包含一或多個該等片段。在本文之目的方面，“抗體”可由重鏈和輕鏈可變區及Fc區組成。
於一實施態樣中，Fc區可為如美國專利刊物US20150065690中描述之經修飾之Fc區，其中該Fc區與野生型Fc區之對應序列相比較可具有單一胺基酸取代，其中該單一胺基酸取代產生具有較野生型Fc區之性質更佳性質的Fc區。可藉由單一胺基酸取代而被改變之Fc性質的非限制性實例包括結合性質和對pH條件之反應(例如經改變之穩定性及/或標靶親和力)。
如本文所使用者，術語“天然抗體”係指通常為約150,000道耳吞之異四聚體糖蛋白，其係由二條完全相同之輕(L)鏈和二條完全相同之重(H)鏈組成。編碼天然抗體重鏈和輕鏈之基因為已知且構成各鏈之節段已被充分表徵和描述(Matsuda, F. et al., 1998. The Journal of Experimental Medicine. 188(11)；2151-62 和 Li, A. et al., 2004. Blood. 103(12): 4602-9，各篇之全部內容以引用方式併入本文)。各輕鏈係藉由一個共價二硫鍵與重鏈連接，而不同免疫球蛋白同種型之重鏈間二硫鍵的數目不同。各重鏈和輕鏈通常具有規則間隔之鏈內二硫橋。各重鏈在一端具有重鏈可變結構域(VH )，接著為數個恆定結構域。各輕鏈之一端具有輕鏈可變結構域(VL )，其另一端具有恆定結構域；輕鏈之恆定結構域與重鏈之第一恆定結構域對齊，且該輕鏈可變結構域與重鏈之可變結構域對齊。
如本文所使用者，術語“可變結構域”係指在抗體重鏈和輕鏈上發現之特定抗體結構域，其序列在抗體之間大不相同且用於各特定抗體與其特定抗原之結合和對特定抗原之特異性。可變結構域通常包括高可變區。如本文所使用者，術語“高可變區”係指在可變結構域內，具有負責抗原結合之胺基酸殘基的區。存在於高可變區中之胺基酸決定該成為抗體之抗原結合位點之一部分的互補決定區(CDR)之結構。如本文所使用者，術語“CDR”係指抗體的一個區域，其具有與其靶抗原或抗原決定位互補之結構。該可變結構域不與抗原交互作用的其他部分稱為框架(FW)區。該抗原結合位點(亦稱為抗原合併位點或抗體結合部位(paratope))通常包括與特定抗原交互作用所必需之胺基酸殘基。構成抗原結合位點之確切殘基通常藉由與該結合之抗原共結晶來闡明，然而亦可基於與其他抗體之比較來使用電腦評估(Strohl, W.R. Therapeutic Antibody Engineering. Woodhead Publishing, Philadelphia PA. 2012. Ch.3, p47-54，其全部內容以引用方式併入本文)。測定構成CDR之殘基可包括使用編號方案，該編號方案包括，但不限於由Kabat [Wu, T.T. et al., 1970, JEM, 132(2):211-50 和Johnson, G. et al., 2000, Nucleic Acids Res. 28(1): 214-8，各篇之全部內容以引用方式併入本文]、Chothia [Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196, 901 (1987)、Chothia et al., Nature 342, 877 (1989)和Al-Lazikani, B.et al.,1997, J. Mol. Biol. 273(4):927-48，各篇之全部內容以引用方式併入本文]及Lefranc (Lefranc, M.P. et al., 2005, Immunome Res. 1:3)和Honegger( Honegger, A. and Pluckthun, A. 2001. J. Mol. Biol. 309(3):657-70，各篇之全部內容以引用方式併入本文)所教示者。
VH 和VL 結構域通常各具有三個CDR。本文中，沿可變結構域多肽從N-端向C-端移動時VL CDR按照發生順序稱為CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。本文中，沿可變結構域多肽從N-端向C-端移動時VH CDR按照發生順序稱為CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。各CDR通常具有有利之典範結構，除了CDR-H3之外，CDR-H3可包括在抗體之間序列和長度為高度可變之胺基酸序列而導致抗原結合結構域中之三維結構多樣化((Nikoloudis, D. et al., 2014. Peer J. 2:e456；其全部內容以引用方式併入本文)。在某些情況下，可在相關抗體小組中分析CDR-H3以評估抗體之多樣性。本技藝中已知各種測定CDR序列之方法並可應用於已知之抗體序列(Strohl, W.R. Therapeutic Antibody Engineering. Woodhead Publishing, Philadelphia PA. 2012. Ch. 3, p47-54，其全部內容以引用方式併入本文)。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可被格式化為Fv片段。如本文所使用者，術語“Fv”係指包含抗體上形成完整抗原結合位點所需之最小片段的抗體片段。該等區域係由二聚體所組成，該二聚體具有一個重鏈可變結構域和一個輕鏈可變結構域緊密地非共價結合。Fv片段可藉由蛋白水解裂解產生，但大多不穩定。本技藝已知用於產生穩定之Fv片段的重組方法，通常係透過在輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域之間插入彈性連接子[以形成單鏈Fv(scFv)]或透過在重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域之間引入二硫橋進行(Strohl, W.R. Therapeutic Antibody Engineering. Woodhead Publishing, Philadelphia PA. 2012. Ch. 3, p46-47，其全部內容以引用方式併入本文)。
如本文所使用者，術語“輕鏈”係指來自任何脊椎動物物種之抗體的組分，該組分基於恆定結構域之胺基酸序列被分派至二種明顯不同之類型(稱為κ和λ)的其中一者。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可被格式化為scFv。如如本文所使用者，術語“單鏈Fv”或“scFv”係指VH 和VL 抗體結構域之融合蛋白，其中該等結構域係藉由彈性胜肽連接子連接在一起成為單一多肽鏈。於一些實施態樣中，該Fv多肽連接子使scFv能夠形成抗原結合所需之結構。於一些實施態樣中，scFv係連同抗體顯示方法(例如噬菌體顯示、酵母顯示或其他顯示形式)一起使用，在抗體顯示方法中它們可與表面成員(例如噬菌體殼蛋白或細胞表面分子)聯合表現並用於鑑定用於指定抗原之高親和力胜肽。
本發明之抗體可被格式化為雙特異性抗體。如本文所使用者，術語“雙特異性抗體”係指能夠與二種不同抗原結合之抗體。該等抗體通常包含來自至少二種不同抗體之區域。雙特異性抗體可包括Riethmuller, G. 2012. Cancer Immunity. 12:12-18、Marvin, J.S. et al., 2005. Acta Pharmacologica Sinica. 26(6):649-58和Schaefer, W. et al., 2011. PNAS. 108(27):11187-92(各篇之全部內容以引用方式併入本文)中所描述之任一雙特異性抗體。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可以雙價抗體(diabody)之形式產生。如本文所使用者，術語“雙價抗體”係指具有二個抗原結合位點之小抗體片段。雙價抗體包含與相同多肽鏈中之輕鏈可變結構域VL 連接之重鏈可變結構域VH 。藉由使用太短以致不能使相同鏈上的二個結構域之間形成配對之連接子，該等結構域被迫與另一鏈之互補結構域配對並產生二個抗原結合位點。雙價抗體更充分地描述於，例如EP404097；WO1993011161；和Hollinger等人(Hollinger, P. et al., “Diabodies”: Small bivalent and bispecific antibody fragments. PNAS. 1993. 90:6444-8)中，各篇之全部內容以引用方式併入本文。
本發明之抗體可為單株抗體。如本文所使用者，術語“單株抗體”係指從一群基本上同質之細胞(或細胞株)取得之抗體，即，包含該群體之個別抗體為完全相同及/或結合相同之抗原決定位，除了在產生單株抗體期間可能出現之變體外，該等變體通常是少量存在。與通常包含針對不同決定簇(抗原決定位)之不同抗體的多株抗體製劑相反，各單株抗體係針對該抗原上之單一決定簇。
修飾語“單株”指明該抗體之特性係從基本上同質之抗體群取得且不應被解釋為需要藉由任何特定方法產生該抗體。本文中之單株抗體包括“嵌合”抗體(免疫球蛋白)，其中該重鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種之抗體或屬於特定抗體類別或亞類別之抗體中的對應序列相一致或同源，而該鏈之其餘部分與源自另一物種或屬於另一抗體類別或亞類別之抗體，及該等抗體之片段中的對應序列相一致或同源。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可為人化抗體。如本文所使用者，術語“人化抗體”係指包含來自一或多種非人(例如鼠)抗體來源之最小部分，而剩餘部分係源自一或多種人免疫球蛋白來源的嵌合抗體。大部分而言，人化抗體為人免疫球蛋白(受體抗體)且其中來自該受體抗體之高可變區的殘基被來自非人物種(諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類動物)之具有理想之特異性、親和力及/或能力的抗體(供體抗體)之高可變區之殘基置換。抗體人化可根據美國刊物第US20150284455號(各篇之全部內容以引用方式併入本文)中教導之任何方法進行。
本發明之抗體可包括抗體模擬物。如本文所使用者，術語“抗體模擬物”係指模擬抗體之功能或作用且以高親和力特異性結合其分子標靶任何分子。於一些實施態樣中，抗體模擬物可為單體，其經過設計以納入纖連蛋白第III型結構域(Fn3)作為蛋白質支架(US 6,673,901；US 6,348,584)。於一些實施態樣中，抗體模擬物可為本技藝已知者，包括，但不限於親和體(affibody)分子、親和素(affilin)、affitin、抗運載蛋白(anticalin)、avimer、Centyrins、DARPINSTM 、Fynomers和Kunitz及結構域胜肽。於其他實施態樣中，抗體模擬物可包括一或多個非胜肽區。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可包括抗體變體。如本文所使用者，術語“抗體變體”係指結構及/或功能上類似天然或起始抗體之經修飾的抗體(相關於天然或起始抗體)或生物分子(例如抗體模擬物)。與天然抗體相比較，抗體變體之胺基酸序列、組成或結構可被改變。抗體變體可包括，但不限於具有改變之同種型的抗體(例如IgA、IgD、IgE、IgG1 、IgG2 、IgG3 、IgG4 或IgM)、人化變體、優化變體、多特異性抗體變體(例如雙特異性變體)和抗體片段。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可包括其中該鉸鏈區已從IgG4分子除去之“單抗體(unibody)”。雖然IgG4分子不穩定且且可彼此相互交換輕-重鏈異二聚體，但鉸鏈區缺失會完全阻止重鏈-重鏈配對，留下高特異性之單價輕/重異二聚體，同時保留Fc區以確保體內之穩定性和半衰期。此構型可將免疫活化或致癌性生長之風險最小化，因為IgG4與FcR交互作用差且單價單抗體不能促進胞內信號傳導複合物形成。其他抗體可為“小型化”抗體，其為緊實之100kDa抗體(參見，例如Nelson, A. L., MAbs., 2010. Jan-Feb; 2(1):77–83)。
製備抗體(無論為單株或多株)可使用本技藝已知之任何方法進行。用於產生抗體之技術可依，例如Harlow and Lane“Antibodies, A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988；Harlow and Lane “Using Antibodies: A Laboratory Manual” Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999和“Therapeutic Antibody Engineering: Current and Future Advances Driving the Strongest Growth Area in the Pharmaceutical Industry” Woodhead Publishing, 2012 (各篇之全部內容以引用方式併入本文)中之描述進行。多特異性抗體
於一些實施態樣中，本發明之抗體可與一個以上之抗原決定位結合。如本文所使用者，術語“多體”或“多特異性抗體”係指其中二或更多個可變區與不同抗原決定位結合之抗體。該抗原決定位可在相同或不同之標靶上。於某些實施態樣中，多特異性抗體為“雙特異性抗體”，其識別在相同或不同抗原上之二個不同抗原決定位。抗體 - 藥物共軛物
於一些實施態樣中，本發明之抗體可包括經研發以用於抗體-藥物共軛物(ADC)治療應用之抗體。ADC為其中連接(例如直接連接或經由連接子)一或多種貨物(例如治療劑)之抗體。ADC可用於將治療劑(例如藥物)投遞至一或多個靶細胞或組織(Panowski, S. et al.,2014. mAbs 6:1, 34-45)。在某些情況下，ADC可被設計成與靶細胞上之表面抗原結合。結合時，整個抗體-抗原複合物可被內化並針對細胞溶酵素體。然後，ADC可被降解，釋出該被綁住之貨物。抗體序列
於一些實施態樣中，本發明之抗體可使用表1中列出之一或多種經轉譯之多肽產生。信號胜肽以粗體標記。在成熟抗體中，該信號胜肽可在組裝完整抗體之前移除。
一些抗體可使用與上述表格中列出之任一者具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少98.5%、至少99%、或至少99.5%序列同一性之轉譯的多肽產生。一些抗體可使用上述表格中列出之一或多種胺基酸序列之片段產生。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可使用表2中列出之一或多種核酸產生。一些抗體可包括由一或多種與所列之任何核酸具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少98.5%、至少99%、或至少99.5%序列同一性之核酸所編碼的重鏈或輕鏈。一些抗體可由包括所列之一或多個核酸序列之片段及/或密碼子優化之變體的核酸編碼。抗體可從攜帶一或多個該等核酸、其變體及/或其片段之構築體產生。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可包括轉譯之可變結構域胺基酸序列，該可變結構域胺基酸序列具有表3中列出之一或多種轉譯之前導胺基酸序列。某些抗體可具有與所列之任一胺基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少98.5%、至少99%、或至少99.5%序列同一性之轉譯的可變結構域胺基酸序列。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可包括框架區(FR)胺基酸序列，該框架區(FR)胺基酸序列包括一或多種表4中列出之胺基酸序列。FR1、FR2、FR3和FR4係指從可變結構域之N端至可變結構域之C端之框架區的位置順序。除FR4之外，框架後面通常跟隨互補決定區(CDR)，而FR4通常位於可變結構城中最後一個CDR後面。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可包括表5中呈現之一或多個重鏈可變結構域(VH)和輕鏈可變結構域(VL)胺基酸序列。某些抗體可包括至少一個可變結構域，該可變結構域具有與所列之任一序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少98.5%、至少99%、或至少99.5%序列同一性之胺基酸序列。某些抗體可包括具有所列之一或多個胺基酸序列之片段或變體的可變結構域。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可使用表6中所列之一或多個轉譯之CDR多肽產生。CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3係指存在於輕鏈可變結構域上，按可變結構域之N端至可變結構域之C端的位置順序之CDR。CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3係指存在於重鏈可變結構域上，按可變結構域之N端至可變結構域之C端的位置順序之CDR。某些抗體可使用與所列之任一序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少98.5%、至少99%、或至少99.5%序列同一性之經轉譯的多肽產生。某些抗體可使用所列之一或多個胺基酸序列之片段產生。於一些實施態樣中，本發明之抗體包括重鏈可變結構域(VH)，該重鏈可變結構域(VH)具有與選自呈現之任一CDR序列的胺基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%胺基酸序列同一性的CDR。在某些情況下，該重鏈CDR為CDR-H3。某些抗體包括VH結構域，其中該CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3均選自呈現之任一重鏈CDR或其變體，該變體與呈現之一或多個重鏈可變結構域具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%序列同一性。於一些實施態樣中，本發明之抗體包括輕鏈可變結構域(VL)，該輕鏈可變結構域(VL)具有與選自呈現之任一CDR序列的胺基酸序列具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%胺基酸序列同一性的CDR。在某些情況下，該輕鏈CDR為CDR-L3。某些抗體包括VL結構域，其中該CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3均選自呈現之任一輕鏈CDR或其變體，該變體與呈現之一或多個輕鏈可變結構域具有至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%序列同一性。
於一些實施態樣中，本發明之抗體可包括一或多個表7中所列之恆定區胺基酸序列。某些抗體可包括與所列之任一者具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少98.5%、至少99%、或至少99.5%序列同一性之恆定結構域胺基酸序列。某些抗體可包括恆定結構域，該恆定結構域包括所列之一或多個胺基酸序列之片段或變體。抗原決定位和片段
於一些實施態樣中，捕獲抗體與包括或存在於國際刊物第WO2015084994號中描述之hCD59片段及/或變體上之抗原決定位結合。該等片段及/或變體可包括： FEHCNFNDVTTRLRENELTYYCCKKDL(SEQ ID NO：46)； FEHCNFNDVTTRLRENELTYYCCKK(SEQ ID NO：47)； HCNFNDVTTRLRENELTYYCCKK(SEQ ID NO：48)； ACNFNDVTTRLRENELTYYCAAK(SEQ ID NO：49)；Ac- ACNFNDVTTRLRENELTYYCAAK-NH2 (SEQ ID NO：50，Ac為乙醯基且NH2 為胺基)；AFEHCNFNDVTTRLRENELT YYCAAKDL(SEQ ID NO：51)； AFEHCNFNDV TTRLRENELTYYC(βA)KDL(SEQ ID NO：52，βA為β-丙胺酸)；或 AFEHCNFNDVTTRLRENELTYYC(Aib)AKDL(SEQ ID NO：53，Aib為α-胺基-異丁酸)。於一些實施態樣中，該等片段及/或變體可在半胱胺酸殘基之間包括二硫鍵。於一些實施態樣中，該等片段及/或變體可包括或不包括N-及/或C-端基團(例如羥基“-OH”、乙醯基“Ac-”或胺基“ -NH2 ”)。於一些實施態樣中，捕獲抗體係藉由下述方法產生：以任一該等片段及/或變體將哺乳動物免疫化並從經免疫化之哺乳動物或從自經免疫化之哺乳動物取得之抗體生產細胞中分離出所產生之抗體。於一些實施態樣中，捕獲抗體係藉由重組或合成方式從抗體胺基酸或核酸序列產生，該抗體胺基酸或核酸序列係從經免疫化之哺乳動物取得或從來自經免疫化之哺乳動物的抗體生產細胞取得。
於一些實施態樣中，偵測抗體與包括或存在於國際刊物第WO2015084994號中描述之醣化CD59片段及/或變體上之抗原決定位結合。該等片段及/或變體可包括： NKCWKFEHCNFNDV(SEQ ID NO：54)；WKFEH(SEQ ID NO：55)； NKAWKFEHANFND(SEQ ID NO：56)；Ac-NKAWKFEHAN FNDC-OH(SEQ ID NO：57，Ac為乙醯基且OH為羥基)。於一些實施態樣中，該等片段及/或變體可包括或不包括N-及/或C-端基團(例如羥基“-OH”，乙醯基“Ac-”或胺基“-NH2 ”)。該片段及/或變體可包括醣化之離胺酸殘基。醣化之殘基可包括不同排列之化學鍵和立體化學結構。該等殘基可包括在離胺酸醣化及/或重排期間出現之結構或中間體形式。醣化之殘基可包括下文所示之結構I-VII之任一者。
於一些實施態樣中，偵測抗體係藉由下述方法產生：以上文呈現之任一醣化CD59之片段及/或變體將哺乳動物免疫化，並從經免疫化之哺乳動物分離出所產生的抗體或從自經免疫化之哺乳動物取得之抗體產生細胞分離出所產生的抗體。於一些實施態樣中，偵測抗體係從抗體胺基酸或核酸序列以重組或合成方式產生，該抗體胺基酸或核酸序列係從經免疫化哺乳動物取得或從自經免疫化哺乳動物取得之抗體生產細胞取得。K41 醣化之調控劑
於一些實施態樣中，本發明提供用於調控CD59醣化之化合物，本文中稱為“醣化調控劑”。醣化調控劑可包括，但不限於小分子、胜肽、合成構築體、融合蛋白、適體、核酸和抗體。某些醣化調控劑可調控hCD59之殘基K41的醣化。某些醣化調控劑可調控CD59醣化但不抑制CD59作為補體調節劑之功能。抑制hCD59之殘基K41之醣化的醣化調控劑在本文中稱為“K41醣化抑制劑”。K41醣化抑制劑可，例如與K41或K41附近之一或多個殘基結合或交互作用(例如沿著該多肽之長度接近K41及/或由於二級和三級蛋白質結構而接近K41)。於一些實施態樣中，K41醣化抑制劑可物理性阻斷K41處之醣化或可以防止K41變成醣化之方式改變hCD59蛋白構型。某些K41醣化抑制劑可與hCD59之殘基H44結合並阻斷K41醣化所必需之化學反應。
於一些實施態樣中， K41醣化抑制劑可包括本文揭示之抗體。該等抗體可物理性阻斷K41處之醣化或可以防止K41變成醣化之方式改變hCD59蛋白構型。某些抗體可抑制K41醣化，例如藉由靶向人類hCD59之H44。於一些實施態樣中，該等抗體可阻斷K41醣化所必需之化學反應。II. 使用方法
本發明之方法包括偵測本文所描述之各種因子是否存在、測量水準及水準變化之方法。該等因子可包括，但不限於標靶蛋白、轉譯後修飾和標準試劑。“水準”可指偵測之因子的實際數目、因子之濃度或相對量(例如透過比較偵測之因子與替代因子或標準試劑之間的偵測信號)。該等方法可包括使用捕獲劑來捕獲CD59。如本文所使用者，術語“捕獲劑”係指能夠與分析組分(例如分析標靶蛋白或化合物)結合之任何化合物。捕獲劑可包括捕獲抗體。捕獲抗體可包括本文所描述之任何抗體。在某些情況下，捕獲劑為能夠與醣基化分析組分結合之凝集素。
另外之方法可包括使用偵測劑。如本文所用者，術語“偵測劑”係指能夠與分析物結合或指示分析物是否存在及/或分析物之水準的分析組分。於一些實施態樣中，偵測劑為抗體(偵測抗體)。偵測劑可包括用於偵測GCD59之抗體。偵測抗體可包括本文所描述之任何抗體。其他偵測劑可包括能夠偵測醣基化之分析組分的凝集素。偵測劑可包含可偵測標記。該等可偵測標記可包括，但不限於生物素、鏈親和素、抗生物素蛋白、螢光標記、酵素標記、發光標記和放射性標記。在某些方法中，偵測劑可使用二級抗體偵測。
於一些實施態樣中，本發明之方法可包括使用本技藝已知之用於捕獲或偵測CD59及/或GCD59之其他抗體。該等抗體可包括下列文獻中所描述及/或申請專利的任一者： 　　歐洲專利案第EP2348050號、國際刊物第WO2015084994號和美國專利案第US9068006、US9417248號，各篇之全部內容以引用方式併入本文。
方法可包括用於捕獲蛋白質和偵測一或多個存在於該等蛋白質上之特定抗原決定位的標準免疫學分析格式。該等抗原決定位可包括經轉譯後修飾之抗原決定位。經轉譯後修飾之抗原決定部可包括醣化及/或醣基化之抗原決定位。
方法可包括免疫學分析。如本文所使用者，“免疫學分析法”係指利用至少一種用於偵測分析物之抗體的任何分析。免疫學分析法可包括，但不限於酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)、免疫沉澱分析法、免疫螢光分析法、酵素免疫分析法(EIA)、放射免疫分析法(RIA)和西方點墨分析法。本發明之方法可包括使用與表面聯結之形式或以溶液為基礎之形式。如本文所使用者，術語“與表面聯結之形式”係指包括將一或多種分析組分固定在表面上之方法。該等表面可包括，但不限於分析盤、膜、傳感器或包括表面之其他底物。於一些實施態樣中，該與表面聯結之形式可包括磁性交互作用表面、珠子或經塗覆之磁珠。於一些實施態樣中，該等方法可包括使用鐵磁性標記。
如本文所使用者，術語“以溶液為基礎之形式”係指包括將一或多個分析組分固定在能夠在液體介質中自由移動之底物上的方法。適合用於以溶液為基礎之形式的底物可包括可在液體介質中移動之小珠或其他顆粒。利用以溶液為基礎之形式的方法可藉由迫使液體介質通過可在其中偵測經綁定之分析物的管子、管道或其他通道進行分析。分析組分可以各種含量及/或塗層密度固定在表面上或以溶液為基礎之形式上。固定可透過形成任何數目之交互作用來促進，該交互作用包括，但不限於共價鍵、非共價鍵、氫鍵和疏水鍵。
於一些實施態樣中，本發明之方法包括使用捕獲抗體以將CD59固定在表面或底物上。該等方法可進一步包括使用偵測劑(例如凝集素或偵測抗體)來偵測存在於CD59上之特定抗原決定位。該等抗原決定位可包括醣化及/或醣基化之抗原決定位。醣化之抗原決定位可包括醣化之hCD59之K41。該等抗原決定位可包括經阿馬多里修飾之GCD59之K41。醣基化之抗原決定位可包括在hCD59及/或GCD59上之N-醣基化之抗原決定位。偵測N-醣基化之抗原決定位可使用凝集素作為偵測劑來進行，其中該凝集素與該等N-醣基化之抗原決定位(例如GCD59之N-醣基化殘基)結合。於一些實施態樣中，可使用偵測抗體偵測N-醣基化之抗原決定位。
根據本發明之一些方法中，抗經阿馬多里修飾之GCD59抗體可作為捕獲抗體以將GCD59固定在表面或底物上。該等方法可進一步包括使用識別GCD59之非醣化之抗原決定位的偵測抗體。某些方法可包括使用識別GCD59之醣基化之抗原決定位的偵測抗體。該等抗原決定位可包括GCD59之N-醣基化之抗原決定位。
本發明之方法可包括使用一或多種內部對照組。該等內部對照組可包括血漿分析對照組。某些方法包括一或多種分析稀釋劑、共軛物稀釋劑和洗滌緩衝液。在某些情況下，方法包括至少一種具有下列群組之一或多者的緩衝液：還原劑、氧化劑、二硫代蘇糖醇(DTT)及/或β-巰基乙醇(BME)。
於一些實施態樣中，本發明之方法可包括使用本文所描述之一或多種抗體以進行下列文獻中所描述之任何方法：歐洲專利案第EP2348050號、國際刊物第WO2015084994號和美國專利案US6835545、US9068006、US9417248號(各篇之全部內容以引用方式併入本文)。
測定濃度水準之方法可包括與標準曲線比較以測定標靶蛋白之濃度。標準曲線為從具有一系列標準試劑濃度之樣品取得之一組數據。如本文所使用者，“標準試劑”為與分析中偵測之標靶蛋白相同或代表標靶蛋白之試劑。於一些實施態樣中，標準試劑為替代化合物。如本文所使用者，“替代化合物”為顯現標靶蛋白或其他分子之一或多種特性之化合物。該等特性可包括存在於一或多種標靶蛋白上之抗原決定位。於一些實施態樣中，替代化合物包括CD59片段或其變體。於一些實施態樣中，替代化合物包括包含SEQ ID NO：50之片段。於一些實施態樣中，捕獲劑與該等片段結合。於一些實施態樣中，替代化合物包括醣化之CD59片段或其變體。醣化之片段可包括SEQ ID NO：57。該等片段可包括醣化之離胺酸殘基。於一些實施態樣中，該醣化之離胺酸殘基包括葡糖醇離胺酸(glucitollysine)。於一些實施態樣中，該醣化之離胺酸殘基包括經阿馬多里修飾之醣化之離胺酸。於一些實施態樣中，偵測劑與該等片段結合。替代化合物可包括一或多種非蛋白質組分。該等非蛋白質組分可包括不存在於天然或標靶蛋白上之連接子、標記(例如可偵測標記)、部分或其他特性。於一些實施態樣中，替代化合物可包括美國專利案第9,417,248號或美國刊物US2016/0299150號(各篇之全部內容以引用方式併入本文)中所揭示之任一者。該等替代化合物可包括美國專利案第9,417,248號之第27圖中所描繪之化合物。
於一些實施態樣中，使用標靶蛋白之濃度當量來表明該標靶蛋白之濃度。如本文所使用者，“濃度當量”為濃度指標，其係基於與使用替代化合物產生之標準曲線相比較來取得。
於一些實施態樣中，本文所描述之診斷、篩查及/或監測方法可包括比較來自個體之因子水準和閾值或接收者操作特徵(ROC)曲線。
於一些實施態樣中，本發明提供用於治療、診斷和監視應用之方法。該等方法可包括使用本文所描述之一或多種抗體。該等抗體可包括，但不限於抗經阿馬多里修飾之GCD59抗體。治療應用
於一些實施態樣中，本發明之方法包括可用於治療、預防及/或減少個體中一或多種疾病及/或病症發生或症狀之治療性應用。如本文所使用者，“個體”為任何人、個體、胎兒、新生兒、嬰兒、動物及/或患者。個體可包括妊娠個體。如本文所使用者，“妊娠個體”為停駐於子宮內之個體，儘管該術語可用於指稱同時包括個體在子宮內和子宮外的二個期間的那段時間內之個體。例如，妊娠個體之診斷可能指在出生時或出生後確認之診斷。如本文所使用者，“懷孕個體”或“妊娠載體”係指在個體之子宮內攜帶妊娠個體之個人且包括與該妊娠個體具有或不具有生物學關係之個人。如本文所使用者，術語“嬰兒個體”係指為嬰兒之個體且包括從出生至約1歲之個體。個體可能正在接受治療、可能需要治療、可能已接受治療或可能因為可能或潛在之治療而經過篩查或分層級。個體可包括動物，例如靈長類動物、非人之靈長類動物或任何動物，諸如農場動物，等。Diabetes 糖尿病
於一些實施態樣中，本發明之方法可用於治療、預防及/或減少一或多種與糖尿病相關之適應症之發生或症狀。如本文所使用者，術語“與糖尿病相關之適應症”係指與血糖水準升高、細胞葡萄糖攝取減少、胰島素水準降低或胰島素敏感性降低相關之任何疾病、病症及/或病況。與糖尿病相關之適應症包括糖尿病和糖尿病前期。
於一些實施態樣中，本發明提供診斷、監測、篩查及/或治療一或多種與糖尿病相關之適應症之方法，該適應症可包括，但不限於與補體功能障礙相關之適應症、溶血性疾病、陣發性夜間血紅蛋白尿、非典型溶血性尿毒症症候群、傷口癒合、與器官移植相關之併發症、血管適應症和與年齡相關之黃斑變性。於一些實施態樣中，與糖尿病相關之適應症可包括與臨床前期糖尿病相關之適應症。與臨床前期糖尿病相關之適應症可包括，但不限於糖尿病之器官特異性併發症傾向、臨床前期糖尿病性週圍神經病變、臨床前期糖尿病性腎病、臨床前期糖尿病性視網膜病變和臨床前期糖尿病性血管疾病。
糖尿病之疾病特徵為血糖水準升高，亦稱為高血糖症。胰島素與其他激素(包括，但不限於胰高血糖素(glucagon)和腎上腺素(epinephrine))對維持血液中之正常葡萄糖水準至關重要。與細胞受體結合之胰島素促進細胞攝取葡萄糖，為細胞提供能量來源並降低血液中之葡萄糖水準(Rodger,W.,CMAJ.1991.145(10)：1227-37)。胰島素係由胰臟β細胞表現且當血糖水準上升時其表現上調。在糖尿病中，胰島素水準及/或對胰島素之敏感性被破壞，細胞葡萄糖攝取減少且循環之葡萄糖水準提高。糖尿病的二種主要形式為胰島素依賴性(本文中亦稱幼年型糖尿病或第I型糖尿病)和非胰島素依賴性(本文中亦稱為成人發病糖尿病或第II型糖尿病)。第I型糖尿病較不常見且通常係由β細胞(胰島素之主要來源)受自體免疫破壞所引起。糖尿病患者中有90%或更多人係罹患第II型糖尿病。此種形式之疾病的特徵在於胰島素分泌減少及/或對胰島素之敏感性降低(例如胰島素刺激細胞攝取葡萄糖之能力降低)(Rodger, W., Non-insulin-dependent (TypeII)diabetes mellitus. CMAJ. 1991. 145(12)1571-81)。第II型糖尿病之發生被認為部分係由於遺傳易感性且最常發生在超重及/或肥胖之個體中。
本文所使用之術語“糖尿病”係指包含一或多種類型之胰島素缺乏的個體(例如胰島素水準降低及/或胰島素敏感性降低)。術語糖尿病包括，但不限於具有幼年型糖尿病(第I型糖尿病)、成人發病型糖尿病(第II型糖尿病)、妊娠糖尿病(GDM)和任何其他胰島素缺乏病症之個體。術語“糖尿病”為醫學專業從業人員所知和理解之技藝術語，其正式定義可在Harrison's Principles of Medicine (Harrisons, Vol 14, Principles of Internal Medicine, Eds. Fauci, A. S., E. Braunwald, K. J. Isselbacher, J. D. Wilson, J. B. Martin, D. L. Kasper, S. L. Hauser, D. L. Longo, McGraw-Hill, New York, 1999)中找到。妊娠糖尿病 (GDM)
於一些實施態樣中，本發明之方法可用於偵測、診斷妊娠糖尿病(GDM)及/或妊娠糖尿病(GDM)之預後。如本文所使用者，術語“妊娠期糖尿病”或“GDM”係指特徵為由妊娠引起之血糖水準升高、碳水化合物不耐受及/或胰島素敏感性降低之糖尿病病況。在某些情況下，每個國家之GDM診斷可能依賴由該等國家之專業機構設定之不同標準，對當地執業醫師提出建議。GDM可能影響最多18%之孕婦，造成影響母親和子女之不良後果，包括短期和長期之影響。目前，懷孕之女性個體中之GDM的診斷和監測主要依賴測量血糖水準。血糖常有變化且受到許多外部因素影響，包括餐食和活動量。葡萄糖水準可能每小時發生變化。這會藉由加強對正在進行測試之個體的飲食要求及/或限制而使得GDM測試變得複雜。
GDM為影響孕婦最常見的疾病之一且為懷孕期間、生產時，甚至在生產後帶來更大之併發症風險。此外，該等併發症可能同時影響母親和後代。患有GDM之個體缺乏將碳水化合物適當分解成能量之能力(Okun, N., Can. Fam. Physician. 1997. 43：88-93)。在某些情況下，GDM診斷可透過偵測高血糖水準及/或透過觀察妊娠期間對葡萄糖挑戰之反應能力下降來進行。該等診斷最常發生在妊娠末三個月。儘管導致GDM之機制仍不清楚，但在某些情況下，咸信懷孕期間升高之激素可能干擾正常之胰島素信號傳導，包括，但不限於胰島素抗性。此胰島素信號傳導功能障礙導致細胞葡萄糖攝取減少和血糖水準升高。顯示不同葡萄糖耐受程度之個體(包括那些被診斷為GDM之個體)中的GCD59水準可能升高。GDM 篩查和診斷
GDM為最常見之妊娠併發症之一。在每個國家中，GDM診斷可藉由負責對執業醫師發佈建議之專業機構所制定之標準確定。美國國內之專業機構之間及美國專業機構和國外專業機構之間正在就如何進行GDM診斷進行辯論。該等美國專業機構可包括，但不限於美國國立衛生研究院(NIH)、美國糖尿病協會(ADA)和美國婦產科醫師代表大會(ACOG)。該等國際機構可包括，但不限於國際糖尿病和妊娠研究團體協會(IADPSG)。美國和國外之專業機構可根據不同的研究、對該等研究之不同分析調整其方式且可能受醫療照護和經濟壓力影響。事實上，定義GDM和診斷標準之因素可能隨著時間而改變。因此，於一些實施態樣中，本文中所描述之本發明的方法可根據由每個國家牽涉孕婦、胎兒和新生兒之健康的專業機構所發佈之最新建議進行。
根據美國目前的操作，建議所有孕婦篩查GDM。在某些情況下，篩查可包括審查患者之病史、評估臨床風險因素及/或包含葡萄糖挑戰之一或多種測試。如本文所使用者，術語“葡萄糖挑戰”係指特徵為對個體投予葡萄糖之測試組分。葡萄糖挑戰測試通常評估個體對葡萄糖挑戰之反應。此可包含分析血糖水準。在葡萄糖挑戰期間投予之葡萄糖水準可有所不同。典型之測試包含投予約50g至約100g之葡萄糖。於其他實施態樣中，投予75g之葡萄糖。在某些情況下，可在一或多次葡萄糖挑戰後或餐後評估血漿葡萄糖水準。於一些實施態樣中，本發明之關於偵測GCD59的方法可在禁食或不禁食之個體中進行。某些方法可在有或無葡萄糖挑戰之個體中進行。
發展GDM之風險最低的“低風險”懷孕個體包含那些小於25歲、體重指數正常、無糖尿病家族史(在一級親屬等級)、無異常之糖代謝病史、無不良產科結果病史及非高風險種族(例如西班牙裔、美國原住民、非裔美國人和南亞裔)。懷孕個體風險評估通常係在第一次產前檢查期間進行。發生GDM風險較高之女性(例如肥胖、GDM個人病史、糖尿、糖尿病家族史，等)通常要盡快進行測試。若該等婦女之初步測試結果為陰性，則建議在懷孕第24至28週之間重新進行測試。
高血漿葡萄糖水準可為無葡萄糖挑戰時GDM之指示。本文揭示之某些方法包含空腹葡萄糖測試。根據該等測試，可測定空腹血漿葡萄糖(FPG)水準。空腹血漿葡萄糖水準係指在禁食一段時間後直接測量之葡萄糖水準。禁食期可從約1小時至約24小時。於某些實施態樣中，FPG水準可在禁食12小時後測量。根據美國糖尿病協會(ADA)之標準醫療照護的建議，先前未被診斷為具有明顯糖尿病(overt diabetes)之婦女當FPG≥92mg/dL(5.1mmol/ L)時，應在妊娠24至28週診斷GDM(ADA，Diabetes Care, 37, (Suppl 1), S14-S80, 2014)。根據國際糖尿病和妊娠研究團體協會(IADPSG)之建議，當FPG≥92mg/dL(5.1 mmol/L)但＜126mg/dL(7.0mmol/L)時，應在首次產前檢查時診斷GDM(Metzger BE,Diabetes Care,33,676,2010)。於一些實施態樣中，本文描述之用於評估個體之GCD59的方法可與FPG之評估合併進行。本發明之某些方法可在測定FPG水準之前進行或當測定之FPG水準落在ADG及/或IADPSG認可之GDM診斷水準之內或之外時在回應時進行。
於一些實施態樣中，可進行隨機葡萄糖測試。該等測試測量隨機(random)血漿葡萄糖水準(亦稱為隨意(casual)血糖水準)。隨機葡萄糖水準係指在沒有任何食用限制及/或要求(例如禁食)之情況下取得之葡萄糖水準。在懷孕個體中，高於200 mg/dl之隨機血漿葡萄糖水準表明該等個體具有GDM。於某些實施態樣中，需要在次日第二次測量FGP水準和隨機血漿葡萄糖水準以確認GDM之診斷。於本發明之一些實施態樣中，亦可在無進食限制及/或要求(例如禁食)之情況下取得GCD59水準。
於其中不易察覺高血糖症之情況下，可能需要其他方法來進行診斷。在被鑑定為高風險之懷孕個體中，單一步驟法可能就足夠。根據單一步驟法，診斷可藉由口服葡萄糖耐受試驗(OGTT)進行，而無需事先進行血糖篩查。在具有平均風險之個人方面，通常執行二步驟法。根據二步驟法，進行包含葡萄糖挑戰之初步篩查。在二步驟法之初步篩查中，美國婦產科學院於2001年提出建議要求使用50g，一小時口服葡萄糖挑戰試驗(GCT)(產科委員會，美國婦產科醫師學會：委員會意見，2011)。該一小時口服GCT在口服50g葡萄糖後1小時測量血糖濃度。80%之患有GDM的懷孕個體的血糖水準高於130mg/dl之截止值且90%個體之血糖水準高於140mg/dl之截止值。如本文所使用者，術語“截止值”係指在此數值或水準下可做出診斷決定或其他類型之決定的指示，其中低於指定之截止值的水準所導致之決定與基於高於指定之截止值之水準所做的決定不同(American Diabetes Association, Diabetes Care. 31(1): S62-S67)。
在二步驟方法之第二步驟中，可進行100g之OGTT。如本文所使用者，術語“口服葡萄糖耐受測試”或“OGTT”係指測量身體利用葡萄糖之能力的測試。該等測試通常在早晨開始，其中該個體已未進食8至12小時。基線濃度係基於初始血液樣品建立。如本文所使用者，當術語“基線”與測量有關時，水準或數值係指初始測量，後續之測量水準或數值可與該水準或數值相比較。採集初始血液樣品後，給予個體飲用之葡萄糖溶液以測量葡萄糖濃度。在100g OGTT中，100g之葡萄糖係在葡萄糖溶液中投予。個體通常需要在5分鐘之期間內喝完該飲品。最後，OGTT包含取得隨後之血液樣品以監測血糖及/或胰島素水準。根據100g OGTT，當個體之血糖水準超過基線讀值之截止值95 mg/dl、投予葡萄糖後一小時之截止值180 mg/ dl、投予葡萄糖後二小時之截止值155 mg/dl及/或投予葡萄糖後三小時之截止值140 mg/dl時，該妊娠個體可被診斷為GDM。於一些實施態樣中，GDM之診斷可能需要在四次測試中有二次產生升高之血糖水準(例如根據本文所描述之任何評估)。
在某些情況下，在二步驟方法中之第二步驟進行75g OGTT以診斷GDM。該75g OGTT可根據100g OGTT進行，除了僅投予75g葡萄糖外。根據75g OGTT，當個體之血糖水準超過基線讀值之截止值95 mg/dl、投予葡萄糖後一小時之截止值180 mg/dl、投予葡萄糖後二小時之截止值155 mg/dl時，該妊娠個體可被診斷為GDM。於一些實施態樣中，GDM之診斷可能需要在四次測試中有二次產生升高之血糖水準。
在某些情況下，可在GDM篩查期間進行餐後2小時血糖測試。餐後2小時血糖偵測包含分析餐後2小時之血糖水準。
在某些情況下，可在GDM篩查期間進行1,5-脫水葡萄糖醇測試。在高血糖症期間(其中血糖水準高於180 mg/dl)，1,5-脫水葡萄糖醇水準降低，在高血糖病況結束後需要高達2週來恢復正常(McGill, J.B. et al., Diabetes Care. 2004. 27(8):1859-65)。可進行1,5-脫水葡萄糖醇測試以測定個體是否已經忍受長時間之高血糖症。
在某些情況下，在GDM篩查期間可進行血紅蛋白A1c(HbA1c)測試。該等測試測量血液中之血紅蛋白HbA1c之醣化版的水準。在高血糖期間，HbA1c水準升高。HbA1c保持在血液中約8至約12週內，直到包含HbA1c之紅血球被替換，使HbA1c在該期間內之長期總體血糖水準讀值更佳(http://medweb.bham.ac.uk/easdec/prevention/ what_is_the_hba1c.htm)。
於一些實施態樣中，在GDM篩查期間可進行果糖胺測試。果糖胺水準在高血糖狀況下會升高。在高血糖狀況消退後，升高之果糖胺水準將維持升高二至三週，這使得果糖胺水準成為高血糖水準之良好長期指標(Delpierre, G. et al., Biochem J. 2002. 365:801-8)。
於一些實施態樣中，可在懷孕之前取得並分析個體樣品。該等個體樣品可從女性個體取得。個體樣品亦可用於測定在目前及/或未來懷孕時發展出GDM及/或子癇前症的風險等級。
於一些實施態樣中，本發明之方法可與本文所描述之任何測試組合。該等測試可包括，但不限於葡萄糖挑戰測試、口服葡萄糖耐受測試、空腹葡萄糖測試、隨機葡萄糖測試、餐後2小時葡萄糖測試、血紅蛋白A1c(HbA1c)測試、果糖胺測試和1,5-脫水葡萄糖醇測試。於一些實施態樣中，本發明之方法可與該等用於診斷、預後及/或監測GDM或其他糖尿病病況之測試組合。於一些實施態樣中，本發明之方法可用於產後篩查第2型糖尿病。
於一些實施態樣中，本發明之方法可與其他糖化蛋白質之偵測組合。存在於體液中之許多其他蛋白質包含可能被糖化之胺基。該等蛋白質可包括糖化之白蛋白、糖化之血紅蛋白、糖化之免疫球蛋白、糖化之血紅素結合蛋白(hemopexin)、糖化之維生素D結合蛋白、糖化之纖維蛋白原α鏈、糖化之載脂蛋白A1、糖化之轉鐵蛋白、糖化之巨球蛋白α2、糖化之補體組分4A、糖化之纖維蛋白原β鏈、糖化之纖維蛋白原α鏈、醣化之含自水酵素解酵素結構域蛋白1 4B、醣化之胺氯吡嗪脒(amiloride)敏感性胺氧化酵素含銅前體、醣化之血管緊張素轉化酵素同種型1前體、醣化之胜肽酵素M2族血管緊張素轉化酵素、醣化之烏頭酸酵素(aconitase)1、醣化之溶酵素體酸性磷酸酵素同種型1前體、醣化之胰臟炎相關蛋白、醣化之α-輔肌動蛋白-4、醣化之具有第1型凝血栓蛋白基序之金屬蛋白酵素(glycated metalloproteinase with thrombospondin type 1 motifs)、醣化之天門冬胺醯葡萄糖胺酵素(aspartylglucosaminidase)、醣化之腺苷高半胱胺酸酵素、醣化之α-2-HS-醣蛋白、醣化之醇脫氫酵素NADP+ 、醣化之醛-酮還原酵素第1族、醣化之醛脫氫酵素第1族成員L1、醣化之醛縮酵素B果糖二磷酸、醣化之胰澱粉酵素α2A和醣化之載脂蛋白A4 (Ukita et al., Clin. Chem. (1991) 37:504；Johansen et al., Glycobiol. (2006) 16:844；和Davies et al., J. Exp. Med. (1989) 170:637)。於一些實施態樣中，GCD59可作為包含上列任一醣化蛋白﹔生物標記組或生物標記列陣的一部分來進行偵測。GDM 類別
於一些實施態樣中，懷孕個體可根據某些標準而被放在不同之疾病亞類。二種該等類別包括那些具有葡萄糖耐受不良(IGT)和空腹血糖異常(IFG)者。該等類別為其葡萄糖水準高於正常，但未升高達到GDM水準或不符合GDM診斷要求之個體所被指派之類別。決定個體被置於該等類別之因素可能每個國家不同且可由該等國家中負責向該等國家之執業醫師提供建議的專業機構控制。
於一些實施態樣中，與具有正常之空腹葡萄糖水準者(例如根據先前之評估低於92mg/dl)和那些因其水準而導致被初步診斷為GDM者[在某些情況下，其空腹葡萄糖水準≥92mg/dL(5.1mmol/L)或其空腹葡萄糖水準≥92 mg/dL(5.1mmol/L))但＜126mg/dL(7.0mmol/L)]相比較，當懷孕個體之空腹葡萄糖水準包含約100 mg/dl至約125 mg/dl時，該懷孕個體可被診斷為IFG。在某些情況下，懷孕個體可能在OGTT結果後被診斷為IGT。在某些情況下，與具有正常水準者(在一些情況下水準低於140mg/dl)和那些因其水準而導致被初步診斷為GDM者(在某些情況下，水準高於200mg/dl)相比較，具有IGT之懷孕個體在投予葡萄糖後二小時可包含約140mg/dl至約199mg/dl之血糖水準。
於一些實施態樣中，具有IGT及/或IFG之懷孕個體被稱為患有糖尿病前期。如本文所使用者，術語“糖尿病前期”係指特徵為具有發展出糖尿病之高風險的病症(American Diabetes Association, Diabetes Care. 2008. 31(1)：S62-S67)。決定將個體置於糖尿病前期類刻之因素可能每個國家不同且可由該等國家中負責向該等國家之執業醫師提供建議的專業機構控制。
在某些情況下，患有GDM之懷孕個體可被分派至包含由波士頓普利西拉懷特(Priscilla White)博士開發 (本文中稱為“懷特氏(White’s)GDM類別”)(Dunn, P.M., Dr. Priscilla White (1900-1989)和妊娠糖尿病之GDM類別。Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 2004 May; 89(3): F276-8，其全部內容以引用方式併入本文)。該等GDM類別可包括表8中列出之任何類別。
懷特氏GDM類別包括類別A1、類別A2、類別B、類別C、類別D、類別F、類別R、類別T和類別H。在這些類別中，類別A1和A2係用於分類患有GDM，但無先前存在之糖尿病的個體。其他類別係用於分類在懷孕前的某個時點發展出糖尿病之懷孕個體。
於一些實施態樣中，GDM可根據二或更多種GDM嚴重性程度進行分類。如本文所使用者，術語“GDM嚴重性程度”係指特徵為不同程度之併發症或負面結果的疾病類別，通常從不太嚴重到較嚴重。GDM嚴重性可根據與該等併發症或負面結果相關的一或多個因素之程度分配。於其他實施態樣中，GDM嚴重性可根據血糖代謝分配。GDM嚴重性可藉由GCD59之水準決定。於該等實施態樣中，個體之GDM的輕度、中度和重度程度可根據從個體樣品獲得之GCD59濃度水準落在那個預定之截止值之間來分派。初步適應症和風險因素
通常，GDM沒有症狀。在某些情況下，確實出現症狀且包括，但不限於口渴、疲勞、噁心、嘔吐、膀胱感染、酵母菌感染和視力模糊(http://www.nlm.nih.gov/ medlineplus/ency/article/000896.htm)。疾病之初步適應症通常涉及測試結果(例如升高之葡萄糖水準、升高之醣化蛋白質水準)。
GDM之風險因素可包括，但不限於身體質量指數(BMI)提高、糖尿病或GDM之家族史、高齡產婦、多囊性卵巢症候群病史、吸煙史、產科史、高膽固醇、矮小症和族群(Ross, G., Australian Family Physician. 2006. 35(6):392-6；Bjorge, T. et al., Am J Epid. 2004. 160(12): 1168-76；Ma, R.M. at al., Diabetes Care. 2007. 30(11): 2960-1)。在某些情況下，存在或不存在風險因素可能影響與測試及/或治療女性個體相關之一或多項行動過程。
如本文所使用者，術語“身體質量指數”指從個體之體重和身高計算之與指定個體之體脂水準相關的數目。該數值係藉由將個體之體重(以公斤計)除以(高度)2 (以米計)來取得。在某些情況下，BMI值可依下述解釋：低於18.5 kg/m2 -體重過輕；18.5 kg/m2 -24.9 kg/m2 -正常；25.0kg/m2 -29.9kg/m2 -超重；30.0kg/m2 -34.9kg/m2 -第I級肥胖；35.0kg/m2 -39.9kg/m2 -第II級肥胖和高於40kg/m2 -第III級肥胖。根據該等解釋，超重之個體發展出GDM之風險增加2.14倍(Yessoufou, A. et al., Experimental Diabetes Research. 2011. 2011:1-12)。肥胖之個體發展出GDM之風險增加3.56倍，且嚴重肥胖之個體發展出GDM之風險增加8.56倍。每個國家之BMI解釋可能不同且可由該等國家及/或管理機構中負責為執業醫師設立指導方針之專業機構決定。
具有糖尿病前期及/或GDM病史之懷孕個體發展出GDM之風險較高。此外，具有糖尿病、糖尿病前期及/或GDM之家族史的懷孕個體發展出GDM之風險較高。在第一次產前約診期通常會審視個體病史及/或家族史。於一些實施態樣中，個體病史及/或家族史可用於做出關於個體測試及/或治療之決定。
高齡產婦亦為發展GDM之風險因素。不同年齡組之間懷孕個體患有GDM之百分比不同(Ross, G., Australian Family Physician. 2006. 35(6):392-6)。20歲以下之懷孕個體中約有1%在妊娠期間發展出GDM，而20至24歲之懷孕個體中約有1.8%發展出GDM，25至29歲之懷孕個體中約有2.5%發展出GDM，30至34歲之懷孕個體中約有4.1%發展出GDM，35至39歲之懷孕個體中約有6.5%發展出GDM，40至45歲之懷孕個體中約有9.8%發展出GDM且45歲以上之懷孕個體中約有12.8%發展出GDM。
GDM之比率亦受族群影響，非裔美國人、印第安人、西班牙裔和南亞裔(包括，但不限於太平洋島民)之懷孕個體的發病率較高(Kim, S.Y. et al., Prev Chronic Dis. 2012. 9: E88)。與 GDM 相關之病況
GDM為母親及其後代之產前和產後併發症的主要原因。患有GDM之妊娠載體可能已發展或處於發展出一或多種與GDM相關之病況之風險中。如本文所使用者，“與GDM相關之病況”為與GDM相關或由GDM導致之妊娠載體或妊娠個體的任何病症。妊娠載體中之與GDM相關之病況可包括，但不限於分娩時之併發症、剖腹產手術數目增加、子癇前症(pre-eclampsia)/子癇之風險、流產及/或妊娠後糖尿病。患有GDM之妊娠個體及/或妊娠載體生的嬰兒個體可能具有或處於發展出一或多種與GDM相關之病況的風險，該一或多種與GDM相關之病況包括，但不限於巨大兒、過期妊娠(LGA)、出生缺陷、產傷、高膽紅素血症、低血糖、癲癇發作和死產。於一些實施態樣中，用於診斷、評估、監測妊娠載體之GDM或將妊娠載體之GDM風險分級(即，為一或多位個體分派風險等級)之本發明方法可用於鑑別處於發展出一或多種與GDM相關之病況的風險中之妊娠個體及/或嬰兒個體。
影響妊娠及/或嬰兒個體之與GDM相關之病況可包括巨大兒。如本文所使用者，術語巨大兒係指特徵為出生體重高之嬰兒個體之病症。如本文所使用者，出生體重高係指出生體重高於約8磅、13盎司或約4kg以上。特徵為巨大兒之嬰兒個體佔總出生嬰兒之約10%。通常，與患有GDM之懷孕個體生出之嬰兒個體相關之異常或困難分娩(本文中亦稱為難產)及/或產傷係由於該等嬰兒個體之大尺寸在出生期間對母親和後代造成生理壓力(Najafian, M. et al., Obstetrics and Gynecology. 2012. 2012:353791)。在患有GDM之懷孕個體中，升高之血糖水準通常導致通過胎盤運送至發育中之後代的葡萄糖和營養素增加(Yessoufou, A. et al., Experimental Diabetes Research. 2011. 2011:1-12)。發育中之後代的營養素量過量亦可能使該等後代處於出生後發展出低血糖症或低血糖之危險中。子宮內營養素水準增加導致發育中之後代增加胰島素製造。出生後，胎盤營養素的轉移停止，嬰兒個體之循環胰島素升高引起血糖水準下降，導致低血糖。於一些實施態樣中，用於診斷、評估、監測GDM或將GDM風險分級之本發明方法可用於診斷、評估、監測及/或將發展出巨大兒之風險分級。
與GDM相關之病況可包括過期妊娠(LGA)。過期妊娠係指特徵為出生體重超過指定胎齡之第90百分位數之病況。雖然臨界體重可能有所不同，一般而言，足月出生時大於約8磅13盎司之嬰兒即屬於LGA類別。當妊娠載體患有GDM時，LGA可能係由於胎兒回應妊娠載體之高血糖水準而製造過量胰島素，導致超過正常生長及隨後之出生體重升高所造成。於一些實施態樣中，用於診斷、評估、監測或將GDM風險分級之本發明方法可用於鑑別處於發展出LGA之風險的妊娠個體。
與懷孕相關之高血壓病症，諸如子癇前症亦顯示出與GDM有關(Feig, D.S. et al., PLoS Med. 2013. 10(4): e1001425)。子癇前症為懷孕個體之嚴重病症，其特徵為血壓升高和蛋白尿(尿中蛋白質)。研究指出患有GDM之懷孕個體發展出子癇前症之風險較高。子癇前症之風險亦顯示出隨著對葡萄糖之不耐性增加而增加。此外，患有子癇前症之懷孕個體顯示出胰島素抗性之發生率較高。於一些實施態樣中，用於診斷、評估、監測或將GDM風險分級之本發明方法可用於診斷、評估、監測及/或將發展子癇前症之風險分級。妊娠窗口
在本發明之實施態樣之背景下，包含懷孕之時間長度可被分成二或更多個妊娠窗口。如本文所使用者，術語“妊娠窗口”係指任何時間上、發育上及/或生理上定義之妊娠期。妊娠窗口可包括懷孕週數。典型之人類懷孕期為約40至約42週(但在某些情況下可延長超過42週)且係從該懷孕個體最後一次月經週期結束時開始計算。如此，妊娠窗口可包含懷孕約0至約46週、約0至約42週、約2至約42週、約4至約42週、約8至約42週、約12至約42週、約16至約42週、約20至約42週、約24至約42週、約28至約42週、約32至約42週、約36至約42週、約12至約36週、約16至約36週、約20至約36週、約24至約36週、約10至約28週、約16至約28週、約20至約28週、約16至約24週、或約18至約24週。在某些情況下，妊娠窗口可包含懷孕之第1週、第2週、第3週、第4週、第5週、第6週、第7週、第8週、第9週、第10週、第11週、第12週、第13週、第14週、第15週、第16週、第17週、第18週、第19週、第20週、第21週、第22週、第23週、第24週、第25週、第26週、第27週、第28週、第29週、第30週、第31週、第32週、第33週、第34週、第35週、第36週、第37週、第38週、第39週、第40週、第41週、第42週、第43週、第44週、第45週、第46週或第46週之後。妊娠窗口亦可包含懷孕月數。典型之懷孕期為9至10個月。因此，妊娠窗口可包含約第1個月至約第10個月、約第2個月至約第10個月、約第3個月至約第10個月、約第4個月至約第10個月、約第5個月至約第10個月、約第6個月至約第10個月、約第7個月至約第10個月、約第8個月至約第10個月、約第9個月至約第10個月、約第1個月至約第9個月、約第2個月至約第9個月、約第3個月至約第9個月、約第4個月至約第9個月、約第5個月至約第9個月、約第6個月至約第9個月、約第7個月至約第9個月、約第8個月至約第9個月、約第1個月至約第6個月、約第1個月至約第4個月、約第1個月至約第3個月、約第3個月至約第9個月、約第3個月至約第6個月、約第4個月至約第6個月、約第3個月至約第7個月、約第2個月至約第7個月、或約第2個月至約第6個月。在某些情況下，妊娠窗口可包含第1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個月。於其他實施態樣中，妊娠窗口可包含三個月期。妊娠期可分成三個三個月期。妊娠之首三個月可包含懷孕之約第1個月至約第3個月及/或懷孕之約第1週至約第12週。在首三個月之期間，典型之發育包含胎兒生長至體重約28 g(或約1盎司)且為約7.6cm至約10cm(或約3至約4英寸)長。妊娠之中三個月可包含懷孕約4個月至約6個月及/或懷孕之約13週至約28週。在妊娠之中三個月之期間，典型之發育包含胎兒生長至體重約910 g(或約2磅)且長度為約23cm至約31cm(或約9英寸至約12英寸)。妊娠之末三個月可包含懷孕約7個月至約9個月及/或約29至約40週。在妊娠之末三個月之期間，典型之發育包含胎兒生長至體重約3.2 kg(或約7磅)且長度約45cm至約51cm(或約18至約20英寸)。
於一些實施態樣中，妊娠窗口可包含胎兒發育之階段。該等階段可包括，但不限於胚泡形成、胎盤形成、胚胎形成、心臟發育、肺臟發育、肝臟發育、腎臟發育、胃腸發育和神經系統發育。監測和療法
本文揭示之分析可包含使用從個體取得之單一樣品。該等樣品可包含體液樣品。體液樣品可包括，但不限於血液、尿液、黏液、羊水、唾液及/或本文揭示之其他樣品類型。生物標記水準可在單一個體樣品或多個個體樣品中分析。例如，GCD59水準可隨著時間監測。如本文所使用者，術語“監測”係指隨著時間觀察、評估及/或測量之行為。觀察、評估及/或測量可以一或多個量或值之形式記錄。
於一些實施態樣中，用於監測目的之數值可包含濃度值或濃度當量值。監測通常係藉由取得初始值或基線值，再將後續值與該初始值或基線值相比較來進行。在監測期間，可取得一或多個後續值並將其與基線值及/或任何其他先前取得之數值相比較。可取得後續值以進行短期比較、長期比較、每週比較、每月比較，等。短期比較可用於監測個體樣品中之一或多種生物標記在回應特定挑戰(例如葡萄糖挑戰)時之水準。可每10、20、30、40、50、75分鐘及/或150分鐘取得該等個體樣品並分析之以產生供比較之後續值。可每1、2、3、4、5、10、12及/或24小時取得個體樣品以產生用於短期比較之後續值。該等個體樣品可包含血液、尿液、黏液、羊水、唾液及/或本文揭示之任何其他體液。葡萄糖水準及/或醣化之蛋白質水準亦可從該等樣品取得。在某些情況下，可從用於短期比較之個體樣品獲得GCD59水準(包括，但不限於濃度值)。
於一些實施態樣中，可使用長期比較來監測個體中之一或多種生物標記之水準/濃度。可每週、每月、每季、每年及/或至少每年取得後續值以用於長期比較。長期比較可包含在相隔約2週至約2個月取得之個體樣品中獲得之後續值。該等個體樣品可包含體液樣品。該等體液樣品可包含血液、尿液、黏液、羊水、唾液及/或本文揭示之任何其他體液。於一些實施態樣中，可從用於長期比較之樣品中獲得葡萄糖水準。於其他實施態樣中，可從用於長期比較之樣品中獲得醣化之蛋白質的水準。於進一步之實施態樣中，可獲得GCD59水準(例如GCD59濃度水準)。
於與監測GDM相關之實施態樣中，觀察值、評估值及/或測量值可包括，但不限於下列數值：反映體重、血糖水準、醣化之蛋白質之水準(例如GCD59)、生物標記之水準、胎兒體重、胎兒大小和BMI之數值。監測GDM可透過重複測試及/或觀察來進行。基線值可在懷孕前、第一次產前檢查或指定之懷孕期間取得。基線值可，例如從懷孕之約12週至約36週、懷孕之約20週至約36週及/或懷孕之約24至約28週(包括在懷孕第24週、懷孕第25週、懷孕第26週、懷孕第27週及/或懷孕第28週之期間)取得。某些基線值可為濃度值。該等濃度值可從各種來源取得。基線濃度值亦可從體液取得，該體液包括，但不限於血液、尿液、黏液、羊水、唾液及/或本文揭示之任何其他體液。個體樣品水準可與基線水準及/或先前取得之水準相比較以測定正在分析之一或多種因子水準之變化。在某些情況下係將個體樣品水準與正在分析之一或多個因素的閾值相比較。
於一些實施態樣中，基線值可包含用於評估一或多種與GDM相關之因素的一或多種測試之結果。該等測試可包括，但不限於葡萄糖挑戰測試(GCT)、OGTT、空腹葡萄糖測試、伺機性葡萄糖測試、餐後2小時葡萄糖測試、HbA1c測試、果糖胺測試和1,5-脫水葡萄糖醇測試。
在GDM監測期間可取得一或多個後續值並將其與基線值及/或任何其他先前取得之數值相比較。可取得一些後續值以用於短期比較、長期比較、每週比較、每月比較、三個月期比較、跨生產比較(例如分娩前和分娩後之間的比較)、跨妊娠比較(例如懷孕前、懷孕期間及/或懷孕後之比較)和懷孕之間的比較(例如第一次懷孕和第二次、第三次及/或第四次懷孕之間的比較)。短期比較可用於監測一或多種生物標記在回應對個體之特定挑戰(例如葡萄糖挑戰)時之水準。可每10、20、30、40、50、75及/或150分鐘取得用於短期比較之體液樣品，並進行分析以產生後續值以供比較。於其他實施態樣中，可每1、2、3、4、5、10、12及/或24小時取得用於短期比較之體液以產生後續值。用於短期比較之一些體液樣品可包含血液、尿液、黏液、羊水、唾液及/或本文揭示之任何其他體液。在某些情況下，可從該等樣品獲得葡萄糖水準。亦可從用於短期比較之體液中獲得醣化蛋白質之水準(包括，但不限於濃度值)。該等水準可包含GCD59水準。
於一些實施態樣中，長期比較可用於監測懷孕個體之一或多種生物標記之水準/濃度。可每週、每個月、每三個月、每次懷孕及/或每次懷孕前、懷孕期間和懷孕後獲得用於長期比較之後續值。一些長期比較可包含從相隔約2週至約2個月取得之個體樣品獲得之後續值。一些該等個體樣品可包含體液樣品。該等體液樣品可包含血液、尿液、黏液、羊水、唾液及/或本文揭示之任何其他體液。在某些情況下，可從用於長期比較之樣品獲得葡萄糖水準。於其他實施態樣中，可從用於長期比較之樣品獲得醣化之蛋白質之水準。於進一步之實施態樣中，可獲得GCD59之水準(例如GCD59濃度水準)。
可進行監測以觀察一或多種病況及/或疾病發病。可進行一些監測以測定GDM及/或子癇前症的發病。於該等實施態樣中，獲得之基線值可能不會指示GDM及/或子癇前症；然而，獲得之後續值可指示發病。發病可藉由監測個體樣品(包括，但不限於體液)來測定。該等體液可包含血液、尿液、黏液、羊水、唾液及/或本文揭示之任何其他體液。於一些個體樣品中，可監測葡萄糖水準以測定GDM及/或子癇前症發病。於其他實施態樣中，可監測醣化之蛋白質的水準以測定GDM及/或子癇前症發病。於進一步之實施態樣中，可監測GCD59之水準(例如GCD59濃度水準)以測定GDM及/或子癇前症發病。
於一些實施態樣中，可進行監測以觀察或評估一或多種病況及/或疾病之進展或消退。可進行一些監測以觀察或評估GDM及/或子癇前症之進展或消退。於該等實施態樣中，獲得之基線值可指示GDM及/或子癇前症；然而，獲得之後續值可指示疾病之進展或消退。進展或消退可藉由監測個體樣品(包括，但不限於體液)來評估。該等體液可包含血液、尿液、黏液、羊水、唾液及/或本文揭示之任何其他體液。於一些實施態樣中，可監測葡萄糖水準以評估GDM及/或子癇前症之進展或消退。於其他實施態樣中，可監測醣化之蛋白質的水準以評估GDM及/或子癇前症之進展或消退。於進一步之實施態樣中，可監測GCD59之水準(例如GCD59濃度水準)以評估GDM及/或子癇前症之進展或消退。
於一些實施態樣中，可進行監測以觀察或評估產後個體之糖尿病病況的進展。如本文所使用者，術語“產後個體”係指最近剛分娩之個體。產後個體可包括在過去約一小時內、過去約一天內、過去約一個月內、過去約3個月內及/或過去約一年內分娩過之個體。於一些實施態樣中，本發明之方法可用於測定從產後個體取得之一或多個樣品中之GCD59之水準。從產後個體取得之一或多個樣品獲得之該等GCD59水準可用於診斷、預測或分析該等產後個體之一或多種糖尿病病況。
於一些實施態樣中，可進行個體樣品之評估以施加適當形式之療法。該等個體樣品可從患有GDM之懷孕個體取得。GDM之治療策略可包含飲食調節、增加活動、增加運動、週期性血糖監測及/或胰島素療法。基於對來自懷孕個體之樣品的評估選擇一或多種治療策略並對該懷孕個體施加一或多種該選定之治療策略可預防影響該懷孕個體產出之嬰兒個體的GDM相關病症。可評估自該等懷孕個體取得之樣品中的一或多種生物標記之水準以選擇一或多種治療策略。該等生物標記可包括醣化之蛋白質(包括，但不限於GCD59)。自懷孕個體樣品獲得之GCD59濃度值可用於選擇一或多種用於治療GDM之療法。於該等實施態樣中，可減少、逆轉及/或預防由該等懷孕個體所產出之嬰兒個體的一或多種與GDM相關之病況。
於一些實施態樣中，本發明之方法可用來監測接受GDM治療之個體。該等方法可包含基於從本文所描述之任何監測類型獲得之深入了解來調整治療劑量及/或治療類型。伴隨式診斷法
於一些實施態樣中，本發明之方法可作為伴隨式診斷法。如本文所使用者，術語“伴隨式診斷法(companion diagnostic method)”係指一種分析，該分析之結果可協助個體之診斷或治療。伴隨式診斷法可用於將患者疾病、病症或病況之嚴重程度分級，允許調整治療方案和劑量以降低成本、縮短臨床試驗之持續時間、增加安全性及/或增加有效性。伴隨式診斷法可用於預測疾病、病症或病況之發展並協助預防性療法之處方。可使用某些伴隨式診斷法來選擇用於一或多個臨床試驗之個體。在某些情況下，伴隨式診斷法分析可與特定治療結合以促進治療優化。
於一些實施態樣中，本發明之方法可用來作為與血糖水準相關之疾病、病症及/或病況的伴隨式診斷法。本發明之某些伴隨式診斷法可用於預測及/或測定糖尿病、糖尿病前期或其他糖尿病病況(包括，但不限於GDM)之嚴重性。本發明之某些伴隨式診斷法可用於藉發展糖尿病併發症之風險將個體分級。該等糖尿病併發症可包括，但不限於糖尿病酮症酸中毒、高血糖症、低血糖症、高血糖症高滲性狀態、糖尿病昏迷、呼吸道感染、牙齦疾病、心臟損傷、腎損傷、知覺減退、視力喪失、心血管疾病、肌肉退化和中風。本發明之某些伴隨式診斷法可用於促進和加速抗糖尿病藥物和代謝疾病藥物之藥物研發。定點照護檢驗 (Point of care testing)
於一些實施態樣中，本文所描述之本發明方法可用於定點照護檢驗。如本文所使用者，術語“定點照護檢驗”係指在個體正在接受醫療護理之地點或附近進行之醫學檢驗。定點照護檢驗可促進縮短檢驗之間的間隔、檢驗結果之審視和治療。定點照護檢驗亦可允許患者在醫療訪視之同一天及/或期間進行檢驗並接受藉由該等檢驗之結果所決定之治療。平台技術
於一些實施態樣中，本發明之方法可使用一或多種平台技術進行。如本文所使用者，“平台技術”係指經配置以將方法或分析之一或多個步驟標準化的儀器或系統。例如，可使用平台技術來進行免疫分析(例如ELISA、免疫沉澱分析、免疫螢光分析、EIA、RIA和西方點墨分析)。平台技術可包括用於進行免疫分析之一或多種可商購之儀器或系統，例如一或多種Bio-Rad公司(加州Hercules)儀器(包括，但不限於IMARK™微孔盤吸光度讀計、XMARK™微孔盤吸光度分光光度計、PW41微孔盤洗滌機及/或IMMUNOWASH™1575微孔盤洗滌機)；一或多種BioTek公司(佛蒙特州Winooski)儀器(包括，但不限於ELX800™吸光度讀計(ELX800™ Absorbance Reader)、SYNERGY™ HT多模式微孔盤讀計(SYNERGY™ HT Multi-mode Microplate Reader)、ELX50™微孔盤條洗滌機(ELX50™ Microplate Strip Washer)、PRECISION™XS自動移液系統(PRECISION™ XS Automated Pipetting System)、MULTIFLO™自動分配器(MULTIFLO™ Automated Dispenser)、EL406™洗滌機分配器(EL406™ Washer Dispenser)、MULTIFLO™FX多模式分配器(MULTIFLO™ FX Multi-mode Dispenser)、405 TS™微孔盤洗滌機(405 TS™ Microplate Washer)、405 LS™微孔盤洗滌機(405 LS™ Microplate Washer)、ELx405選擇深孔洗滌機(ELx405 Select Deep Well Washer)及/或ELx50洗滌機(ELx50 Washer))；一或多種Thermo-Fisher公司(麻州Waltham)儀器(包括，但不限於MULTISKAN™ FC微孔盤光度計(MULTISKAN™ FC Microplate Photometer)、MULTISKAN™ GO微孔盤分光光度計(MULTISKAN™ GO Microplate Spectrophotometer)、MULTIDROP™ Combi試劑分配器(MULTIDROP™ Combi Reagent Dispenser)、MULTIDROP™384試劑分配器(MULTIDROP™ 384 Reagent Dispenser)、MULTIDROP™DW試劑分配器(MULTIDROP™ DW Reagent Dispenser)及/或WELLWASH™微孔盤洗滌機(WELLWASH™ Microplate Washer))；一或多種分子裝置(加州Sunnyvale)儀器(包括，但不限於GENEPIX® 4300A微陣列掃描儀(GENEPIX® 4300A Microarray Scanner)、GENEPIX® 4400A微陣列掃描儀(GENEPIX® 4400A Microarray Scanner)、GENEPIX® 4000B微陣列掃描儀(GENEPIX® 4000B Microarray Scanner)、AQUAMAX®微孔盤洗滌機(AQUAMAX® Microplate Washer)、MULTIWASH+™微孔盤洗滌機(MULTIWASH+™ Microplate Washer)及/或GENEPIX®SL50自動載片機(GENEPIX® SL50 Automated Slide Loader))；及/或一或多種Tecan公司(瑞士Männedorf)儀器(包括，但不限於SUNRISE™吸光度微孔盤讀計(SUNRISE™ absorbance microplate reader)、INFINITE® F50吸光度微孔盤讀計(INFINITE® F50 absorbance microplate reader)、HYDROFLEX™微孔盤洗滌機(HYDROFLEX™ microplate washer)、HYDROSPEED™微孔盤洗滌機(HYDROSPEED™ microplate washer,)及/或CONNECT™微孔盤堆集機(CONNECT™ microplate stacker))。
於一些實施態樣中，平台技術包括自動化平台技術。自動化平台技術為經配置以標準化方式進行方法或分析之一或多個步驟之自動化儀器或系統，其與人類操作無關但可基於人類之輸入或指導來進行該等步驟。自動化平台技術可包括用於進行免疫分析之一或多種可商購之系統，例如一或多種Bio-Rad公司(加州Hercules)系統(包括，但不限於BIO-200系統及/或BIO-PLEX®3D懸浮液陣列系統)；一或多種Tecan公司(瑞士Männedorf)儀器(包括，但不限於FREEDOM EVO®系列系統)；TRITURUS®系統(加州洛杉磯Grifols)；一或多種漢密爾頓(Hamilton)實驗室溶液(懷俄明州Manitowac)系統，包括，但不限於Microlab STAR™ Line系統、Microlab NIMBUS™系統及/或Microlab VANTAGE™液體處理系統；一或多種亞培實驗室(伊利諾州亞培公園)系統(包括，但不限於ARCHITECT™ i2000SR免疫分析分析儀、ARCHITECT™ i1000SR免疫分析分析儀及/或ARCHITECT™ i4000SR免疫分析分析儀)；一或多種羅氏診斷(康乃迪克州Branford)系統(包括，但不限於COBAS® 8100自動化工作流系列系統、COBAS® 8000模塊化分析儀系統、COBAS® 6000分析儀系統，COBAS® 4000分析儀系統，COBAS® c513分析儀系統及/或Urisys2400®分析儀系統)；一或多種Meso Scale Discovery(馬利蘭州Rockville)系統(包括，但不限於MESO QuickPlex SQ 120系統及/或MESO SECTOR S 600系統)；一或多種西門子(德國慕尼黑)系統(包括，但不限於DIMENSION® EXL™系統、DIMENSION VISTA®系統、DIMENSION® XPAND® Plus系統、DIMENSION® RXL MAX®系統、ADVIA Centaur XPT免疫分析系統、ADVIA Centaur XP免疫分析系統、ADVIA Centaur CP免疫分析系統、IMMULITE 2000 XPi免疫分析系統、IMMULITE 1000免疫分析系統、VersaCell系統及/或VersaCell X3系統)；及/或一或多種Luminex(德州奧斯康)系統(包括，但不限於MAGPIX®系統及/或LUMINEX®100/200系統)。
於一些實施態樣中，用於進行免疫分析之平台技術可包括能夠執行一或多個所需步驟之一或多種模組。該等模組可經配置以進行一或多種樣品之分配、試劑添加及/或移除、培育、混合、信號偵測、信號分析、分析物定量、輕洗和樣品及/或底物處置。配製和投予 醫藥配製劑
於一些實施態樣中，本發明之化合物或組成物可使用一或多種賦形劑配製以：(1)增加穩定性；(2)增加細胞滲透性；(3)允許持續或延遲釋出(例如從配製劑)；及/或(4)改變生物分佈(例如將組成物靶向特定之組織或細胞類型)。除了傳統賦形劑(諸如任何及所有溶劑、分散介質、稀釋劑、或其他液體載劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等張劑、增稠劑或乳化劑、防腐劑，本發明之配製劑可包括，但不限於脂質體、脂質奈米顆粒、聚合物、脂質複合體(lipoplex)、核-殼奈米顆粒、胜肽、蛋白質、經本發明化合物或組成物轉染之細胞(例如用於移植入個體)及彼等之組合。賦形劑
如本文所使用者，術語“賦形劑”係指在使用前與本發明之化合物及/或組成物組合之任何物質。於一些實施態樣中，賦形劑為無活性的且主要作為用於本發明之化合物及/或組成物之載體、稀釋劑或載劑。用於配製醫藥組成物之各種賦形劑和用於製備該組成物之技術為本技藝所已知(參見Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006；以引用方式併入本文)。
除了可能與物質或其衍生物不相容之任何傳統賦形劑介質外(諸如產生任何不欲有之生物效應，或以有害的方式與該醫藥組成物之任何其他組分交互作用)，傳統賦形劑介質之用途係在本發明範圍之考量內。
本文所描述之醫藥組成物之配製劑可藉由藥理學技藝中已知或之後研發之任何方法製備。一般而言，該等製備方法包括將活性成分與賦形劑及/或一或多種其他輔助成分結合之步驟。
根據本發明之醫藥組成物可以單一單位劑量及/或數個單一單位劑量之形式製備、包裝及/或散裝銷售。
根據本發明之醫藥組成物中之活性成分、醫藥上可接受之賦形劑及/或任何另外之成分之相對量可根據接受治療之個體的身份、尺寸及/或病況變化且進一步取決於該組成物之投予途徑。
於一些實施態樣中，醫藥上可接受之賦形劑為至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%純質。於一些實施態樣中，賦形劑被核准用於人類和獸醫用途。於一些實施態樣中，賦形劑係由美國食品藥物管理局核准。於一些實施態樣中，賦形劑為藥物級。於一些實施態樣中，賦形劑符合美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、英國藥典及/或國際藥典之標準。
製造醫藥組成物所使用之醫藥上可接受之賦形劑包括，但不限於惰性稀釋劑、分散劑及/或粒化劑、表面活性劑及/或乳化劑、崩散劑、結合劑、防腐劑、緩衝液、潤滑劑及/或油。該等賦形劑可選擇性地被包含在醫藥組成物中。
示例性稀釋劑包括，但不限於碳酸鈣、碳酸鈉、磷酸鈣、磷酸二鈣、硫酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈉、乳糖、蔗糖、纖維素、微晶型纖維素、高嶺土、甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、氯化鈉、乾澱粉、玉米澱粉，糖粉，等及/或彼等之組合。
示例性粒化劑及/或分散劑包括，但不限於馬鈴薯澱粉、玉米澱粉、木薯澱粉、澱粉羥醋酸鈉、黏土、藻酸、瓜爾膠、柑橘泥、瓊脂、膨潤土、纖維素和木製品、天然海綿、陽離子交換樹脂、碳酸鈣、矽酸鹽、碳酸鈉、交聯聚(乙烯吡咯啶酮)(交聚維酮)、羧甲基澱粉鈉(澱粉羥醋酸鈉)、羧甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉(交聯羧甲基纖維素)、甲基纖維素、預膠化澱粉(澱粉1500)、微晶型澱粉、水不溶性澱粉、羧甲基纖維素鈣、矽酸鎂鋁(VEEGUM® )、月桂基硫酸鈉、季銨化合物，等及/或彼等之組合。
示例性表面活性劑及/或乳化劑包括，但不限於天然乳化劑(例如阿拉伯膠、瓊脂、藻酸、藻酸鈉、黃蓍膠、chondrux、膽固醇、黃原膠、果膠、明膠、蛋黃、酪蛋白、羊毛脂、膽固醇、蠟和卵磷脂)、膠態黏土(例如膨潤土[矽酸鋁]和VEEGUM®[矽酸鎂鋁])、長鏈胺基酸衍生物、高分子量醇(例如硬脂醇、鯨蠟醇、油醇、三醋酸甘油酯單硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、甘油單硬脂酸酯和丙二醇單硬脂酸酯、聚乙烯醇)、卡波姆(例如羧聚乙烯(carboxy polymethylene)、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物及羧乙烯聚合物)、角叉菜膠、纖維素衍生物(例如羧甲基纖維素鈉、粉狀纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素)、山梨糖醇酐脂肪酸酯(例如聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯[吐溫®20]、聚氧乙烯山梨糖醇酐[吐溫®60]、聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯[吐溫®80]、山梨糖醇酐單棕櫚酸酯[SPAN®40]、山梨糖醇酐單硬脂酸酯[Span®60]、山梨糖醇酐三硬脂酸酯[Span®65]、單油酸甘油酯、山梨糖醇酐單油酸酯[SPAN®80])、聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯單硬脂酸酯[MYRJ®45]、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚氧甲烯硬脂酸酯和SOLUTOL®)、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如CREMOPHOR®)、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂基醚[BRIJ®30])、聚(乙烯基-吡咯啶酮)、二乙二醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸鈉、油酸鉀、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、月桂基硫酸鈉、PLUORINC® F68、POLOXAMER® 188、西曲溴化銨(cetrimonium bromide)、十六烷基氯化吡啶鎓、苯扎氯銨、多庫酯鈉，等及/或彼等之組合。
示例性結合劑包括，但不限於澱粉(例如玉米澱粉和澱粉糊)；明膠；糖(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露醇)；天然和合成膠(例如阿拉伯膠、藻酸鈉、愛爾蘭苔蘚萃取物、潘沃(panwar)膠、印度樹膠(ghatti gum)、車前子殼膠漿、羧甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、微晶型纖維素、醋酸纖維素、聚(乙烯基-吡咯啶酮)、矽酸鎂鋁(Veegum®)和落葉松阿拉伯半乳聚醣)；藻酸化物；聚環氧乙烷；聚乙二醇；無機鈣鹽；矽酸；聚甲基丙烯酸酯；蠟；水；醇；等；及彼等之組合。
示例性防腐劑可包括，但不限於抗氧化劑、螯合劑、抗微生物防腐劑、抗真菌防腐劑、醇防腐劑、酸性防腐劑及/或其他防腐劑。示例性抗氧化劑包括、但不限於α-生育酚、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯、單硫代甘油、偏亞硫酸氫鉀、丙酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸鈉、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉及/或亞硫酸鈉。示例性螯合劑包括乙二胺四醋酸(EDTA)、檸檬酸一水合物、依地酸二鈉、依地酸二鉀、依地酸、富馬酸、蘋果酸、磷酸、依地酸鈉、酒石酸及/或依地酸三鈉。示例性抗微生物防腐劑包括、但不限於苯扎氯銨、苄索氯銨、苯甲醇、溴硝醇(bronopol)、西曲溴銨(cetrimide)、十六烷基吡啶鎓氯化物、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲苯酚、甲酚、乙醇、甘油、海克替啶(hexetidine)、咪脲(imidurea)、苯酚、苯氧乙醇、苯乙醇、硝酸苯汞、丙二醇及/或硫柳汞。示例性抗真菌防腐劑包括，但不限於對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、丙酸鈉及/或山梨酸。示例性醇防腐劑包括，但不限於乙醇、聚乙二醇、苯酚、酚類化合物、雙酚、氯丁醇、羥基苯甲酸酯及/或苯乙醇。示例性酸性防腐劑包括，但不限於維生素A、維生素C、維生素E、β-胡蘿蔔素、檸檬酸、醋酸、脫氫醋酸、抗壞血酸、山梨酸及/或植酸。其他防腐劑包括，但不限於生育酚、醋酸生育酚、甲磺酸去甲肟、西曲溴銨、丁基化羥基茴香醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、乙二胺、月桂基硫酸鈉(SLS)、月桂基醚硫酸鈉(SLES)、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鉀、偏亞硫酸氫鉀、GLYDANT PLUS®、PHENONIP®、對羥基苯甲酸甲酯、GERMALL®115、GERMABEN®II、NEOLONE™、KATHON™及/或EUXYL®。
示例性緩衝液包括，但不限於檸檬酸鹽緩衝溶液、醋酸鹽緩衝溶液、磷酸鹽緩衝溶液、氯化銨、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡乳醛酸鈣、葡庚糖酸鈣、葡萄糖酸鈣、D-葡糖酸、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、丙酸、乙醯丙酸鈣、戊酸、磷酸氫鈣、磷酸、磷酸三鈣、磷酸氫鈣、醋酸鉀、氯化鉀、葡萄糖酸鉀、鉀混合物、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸鉀混合物、醋酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉混合物、胺丁三醇(tromethamine)、氫氧化鎂、氫氧化鋁、藻酸、無熱原水、等張性鹽水、林格氏液、乙醇，等及/或彼等之組合。
示例性潤滑劑包括，但不限於硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、二氧化矽、滑石、麥芽、山崳酸甘油酯、氫化植物油、聚乙二醇、苯甲酸鈉、醋酸鈉、氯化鈉、白胺酸、月桂基硫酸鎂、月桂基硫酸鈉，等及彼等之組合。
示例性油包括，但不限於杏仁、杏核、酪梨、巴巴蘇、佛手柑、黑醋栗籽、琉璃苣、刺檜、甘菊、油菜、香菜、臘棕櫚、蓖麻、肉桂、可可油、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉籽、鴯鶓、桉樹、月見草、魚、亞麻籽、香葉醇、葫蘆、葡萄籽、榛果、牛膝草、肉荳蔻酸異丙酯、荷荷巴、石栗、醒目薰衣草、薰衣草、檸檬、山蒼子、夏威夷豆、錦葵、芒果籽、白芒花籽、貂油、肉荳蔻、橄欖、橙、柚子、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟籽、南瓜籽、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香、山茶花、香薄荷、沙棘果、芝麻、乳油木果、矽氧樹脂、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿樹、香根草、核桃和小麥胚芽之油類。示例性油包括，但不限於硬脂酸丁酯、辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、環聚二甲基矽氧烷、癸二酸二乙酯、聚二甲基矽氧烷360、肉荳蔻酸異丙酯、礦物油、辛基十二烷醇、油醇、矽油及/或彼等之組合。
根據配製者之判斷，賦形劑，諸如可可脂和栓劑用蠟、著色劑、塗層劑、甜味劑、調味劑及/或香味劑可存在於該組成物中。Vehicles 載劑 脂質體、脂質複合體和脂質奈米顆粒
本發明之化合物或組成物可使用一或多種脂質體、脂質複合物或脂質奈米顆粒配製。於一實施態樣中，本發明之醫藥化合物或組成物進一步包含脂質體。脂質體為人工製備之囊泡，其可主要包含一或多個脂質雙層且可作為用於投予營養素和醫藥配製劑之投遞載劑。脂質體可具有不同大小，諸如，但不限於多層囊泡(MLV)，其直徑可為數百奈米且可含有一系列藉由狹窄之含水隔室隔開之同心雙層、小單細胞囊泡(SUV)(其直徑可小於50nm)及大的單層囊泡(LUV)(其直徑可為50至500nm)。脂質體設計可包括，但不限於調理素或配體以改善脂質體附著至不健康之組織或活化事件，諸如，但不限於內吞作用。脂質體可含有低或高pH以改善醫藥配製劑之投遞。
脂質體之形成可取決於物化特性，諸如，但不限於被截留之醫藥配製劑和脂質體成分、有脂質囊泡分散於其中之介質的性質、被截留之物質的有效濃度及其潛在之毒性、在施加及/或投遞囊泡期間牽涉之任何額外過程、意圖施加之囊泡的優化尺寸、多分散性和保存期限，及批次間之再現性和大規模製造安全且有效之脂質體產品的可能性。
於一實施態樣中，亦可構造該等配製劑或改變組成，從而使其在體內被動地或主動針對不同之細胞類型。
配製劑亦可透過其表面上之不同配體(例如，但不限於葉酸化物、轉鐵蛋白、N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc))之表現和抗體靶向方法而被選擇性地靶向。
脂質體、脂質複合體或脂質奈米顆粒可用於改善本發明化合物或組成物之功能效力，因該等配製劑可能有能力增加以本發明組成物進行之細胞轉染。脂質體、脂質複合體或脂質奈米顆粒亦可用於增加本發明之化合物或組成物之穩定性。
經專門配製以用於抗體貨物(antibody cargo)之脂質體可根據本技藝已知之技術製備，諸如由Eppstein等人(Eppstein, D.A. et al., Biological activity of liposome-encapsulated murine interferon gamma is mediated by a cell membrane receptor. Proc Natl Acad Sci USA. 1985 Jun;82(11):3688-92)；Hwang等人(Hwang, K.J. et al., Hepatic uptake and degradation of unilamellar sphingomyelin/cholesterol liposomes: a kinetic study. Proc Natl Acad Sci U S A. 1980 Jul;77(7):4030-4)；US 4,485,045和US 4,544,545所描述者。具有持續循環時間之脂質體的製造方法亦描述於US 5,013,556中。
包含本發明之化合物或組成物之脂質體可利用脂質(諸如磷脂醯膽鹼、膽固醇及從聚乙二醇衍生之磷脂醯乙醇胺)，使用逆相蒸發產生。使用具有限定孔徑之過濾器來擠出具有理想直徑之脂質體。於另一實施態樣中，本發明之組成物可藉由二硫化物交換反應(如Martin等人(Martin, F.J. et al., Irreversible coupling of immunoglobulin fragments to preformed vesicles. An improved method for liposome targeting. J Biol Chem. 1982 Jan 10;257(1):286-8)所描述者)與脂質體之外表面共軛結合。聚合物和奈米顆粒
本發明之化合物或組成物可使用天然及/或合成之聚合物配製。可用於投遞之聚合物的非限制性實例包括，但不限於DMRI/DOPE、泊洛沙姆、殼聚醣、環糊精及聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)聚合物。這些可為可生物降解的。
該聚合物配製劑可允許該組成物持續或延遲釋出(例如在肌內或皮下注射後)。本發明之化合物或組成物之改變的釋出變化形廓可導致，例如該化合物或組成物在延長之期間內釋出。該聚合物配製劑亦可用於增加本發明之化合物或組成物之穩定性。
聚合物配製劑亦可透過不同配體(例如，但不限於葉酸化物、轉鐵蛋白及N-乙醯半乳糖胺(GalNAc))之表現而被選擇性地靶向 (Benoit et al., Biomacromolecules. 2011 12:2708-2714；Rozema et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 104:12982-12887；Davis, Mol Pharm. 2009 6:659-668；Davis, Nature 2010 464:1067-1070；其全部內容以引用方式併入本文)。
本發明之化合物或組成物亦可使用聚合物、脂質及/或其他可生物降解劑(諸如，但不限於磷酸鈣)之組合被配製成奈米顆粒。組分可組合在核-殼、混合體及/或逐層結構中以允許微調奈米顆粒，從而可增強本發明之化合物或組成物之投遞。在本發明之化合物或組成物方面，可使用為生理pH值之基於聚(2-(甲基丙烯醯氧基)乙基磷酸膽鹼)-嵌段-(2-(二異丙胺基)乙基甲基丙烯酸酯)(PMPC-PDPA)的系統，此為一種自組裝以形成奈米大小之囊泡的pH敏感性二嵌段共聚物，亦稱為聚合物囊泡(polymersome)。該等聚合物囊泡顯示出在活細胞內成功投遞相當高之有效載荷(Massignani, et al, Cellular delivery of antibodies: effective targeted subcellular imaging and new therapeutic tool. Nature Proceedings, May, 2010)。
於一實施態樣中，可使用PEG-電荷轉化聚合物(Pitella et al., Biomaterials. 2011 32:3106-3114)形成奈米顆粒以投遞本發明之化合物或組成物。該PEG-電荷轉化聚合物可藉由在酸性pH下裂解成聚陽離子來改善PEG-聚陰離子嵌段共聚物，從而增強內體逃逸。
核-殼奈米顆粒之用途另外聚焦於高通量方法以合成陽離子性交聯之奈米凝膠核和各種殼(Siegwart et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 108:12996-13001)。該聚合性奈米顆粒之複合、投遞和內化可藉由改變該奈米顆粒之核和殼組分中之化學組成來精確控制。
於一實施態樣中，使用聚(乙烯-共-醋酸乙烯酯)之基質來投遞本發明之化合物或組成物。該等基質描述於Nature Biotechnology 10,1446-1449(1992)中。投予途徑
本發明之化合物或組成物可藉由本技藝中已知之任何標準方法或途徑投予。
本發明之化合物或組成物可藉由任何導致治療有效結果之途徑投予。該等途徑包括，但不限於腸內、胃腸道、硬膜外、口服、透皮、硬膜外(epidural)(硬膜外(peridural))、腦內(進入大腦)、腦室內(進入腦室)、表皮(施加在皮膚上)、皮內(進入皮膚本身)、皮下(在皮膚下)、鼻腔投予(通過鼻部)、靜脈內(進入靜脈內)、動脈內(進入動脈內)、肌內(進入肌肉內)、心內(進入心臟內)、骨內輸注(進入骨髓)、鞘內(進入椎管內)、腹膜內(輸注或注入腹膜)、膀胱內輸注、玻璃體內(通過眼睛)、海綿體內注射(進入陰莖底部)、陰道內投予、子宮內、羊膜外投予、透皮(通過完整皮膚擴散以用於全身分佈)、透黏膜(通過黏膜擴散)、吹入(噴鼻)、舌下、唇下、灌腸、滴眼劑(結膜上)或在耳滴劑中。於具體之實施態樣中，化合物或組成物可以允許它們穿過血腦屏障、血管屏障或其他上皮屏障之方式投予。投予本發明之化合物或組成物之非限制性途徑描述於下文中。腸胃道外和注射投予
用於口服和腸胃道外投予之液體劑型包括，但不限於醫藥上可接受之乳劑、微乳劑、溶液、懸浮液、糖漿及/或酏劑。除了活性成分之外，液體劑型可包含本技藝常用之惰性稀釋劑，諸如，例如水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油類(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和山梨糖醇酐之脂肪酸酯及彼等之混合物。除了惰性稀釋劑外，口服組成物可包括佐劑，諸如潤濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、調味劑及/或芳香劑。於用於腸胃道外投予之某些實施態樣中，組成物與增溶劑(諸如CREMOPHOR®、醇類、油類、經改質之油類、二醇類、聚山梨醇酯、環糊精、聚合物及/或彼等之組合)混合。於其他實施態樣中，包括表面活性劑，諸如羥丙基纖維素。
可注射之製劑，例如無菌之可注射水性或油性懸浮液可根據本技藝已知之技術，使用合適之分散劑、潤濕劑及/或懸浮劑配製。無菌之可注射製劑可為無菌之可注射溶液、懸浮液及/或在無毒性腸胃道外可接受之稀釋劑及/或溶劑中之乳劑，例如為在1,3-丁二醇中之溶液的形式。可使用之可接受的載劑和溶劑中有水、林格氏液，U.S.P.和等張之氯化鈉溶液。傳統上使用無菌、固定之油作為溶劑或懸浮介質。為此，可使用任何無刺激性之固定的油，包括合成之甘油一酯或甘油二酯。在製備注射劑時可使用脂肪酸，諸如油酸。
可注射之配製劑可例如藉由通過細菌滯留過濾器過濾及/或藉由納入為無菌固體組成物形式之滅菌劑進行滅菌，該無菌固體組成物形式之滅菌劑可在使用前先溶解或分散於無菌水或其他無菌可注射介質中。
為延長該活性成分之效果，通常需要延緩從皮下或肌內注射之活性成分的吸收。此可藉由使用水溶解度差之結晶型或無定形物質之液體懸浮液完成。然後，藥物之吸收速率取決於其溶解速率，而溶解速率又取決於晶體大小和結晶形式。或者，可藉由將藥物溶解或懸浮於油性載劑中來達成延遲吸收經腸胃道外投予之藥物形式。可注射之貯庫形式可藉由在可生物降解之聚合物(諸如聚丙交酯-聚乙交酯)中形成藥物之微膠囊基質來製造。根據藥物與聚合物之比例和所使用之特定聚合物之性質可控制藥物釋出之速率。其他可生物降解聚合物之實例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。貯庫注射配製劑係藉由將藥物加入與身體組織相容之脂質體或微乳液中製備。直腸和陰道投予
用於直腸或陰道投予之組成物通常為可藉由將組成物與合適之無刺激性賦形劑，諸如可可脂、聚乙二醇或栓劑用蠟(其在周圍溫度下為固體，但在體溫下為液體，因此可在直腸或陰道腔內融化並釋出活性成分)混合來製備。口服投予
用於口服投予之固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑和顆粒。於該等固體劑型中，活性成分係與至少一種惰性醫藥上可接受之賦形劑，諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣及/或填充劑或增量劑(例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和矽酸)、黏合劑(例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖和阿拉伯膠)、濕潤劑(例如甘油)、崩散劑(例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯粉、藻酸、某些矽酸鹽和碳酸鈉)、溶液阻滯劑(例如石蠟)、吸收加速劑(例如季銨化合物)、潤濕劑(例如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯)、吸收劑(例如高嶺土和膨潤土)和潤滑劑(例如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉)及彼等之混合物。在膠囊、片劑和丸劑之情況下，該劑型可包含緩衝液。局部或透皮投予
如本文所描述者，本發明之化合物或組成物可配製成用於局部投予。由於皮膚容易接近，因此皮膚可能是用於投遞之理想標靶位點。可能避免非特異性毒性，基因表現可能不僅侷限於皮膚，亦侷限於皮膚內之特定層和細胞類型。
該投遞之化合物或組成物之皮膚表現位點將取決於核酸投遞之途徑。通常被考慮用來將本發明之化合物或組成物投遞至皮膚的途徑有三種(i)局部施加(例如用於局部/區域治療及/或美容應用)；(ii)皮內注射(例如用於局部/區域治療及/或美容應用)；和(iii)全身性投遞(例如用於治療影響皮膚和皮膚外區域之皮膚病)。本發明之化合物或組成物可藉由本技藝已知之幾種不同方法投遞至皮膚。
於一實施態樣中，本發明提供用於方便地及/或有效地實施本發明之方法的各種敷料(例如傷口敷料)或繃帶(例如膠布繃帶)。通常，敷料或繃帶可包含足量之本文所描述之本發明的醫藥組成物及/或化合物或組成物以允許使用者對個體進行多種治療。
於一實施態樣中，本發明提供將在一次以上之注射中投遞之化合物或組成物。
用於局部及/或透皮投予組成物之劑型可包括軟膏、糊劑、霜劑、塗劑、凝膠、粉末、溶液、噴霧劑、吸入劑及/或貼片。一般而言，活性成分依需要在無菌條件下與醫藥上可接受之賦形劑及/或任何需要之防腐劑及/或緩衝液混合。
此外，本發明考慮使用透皮貼片，該透皮貼片通常具有對身體提供經控制投遞之化合物的額外優點。該等劑型可，例如藉由將化合物溶解及/或分配在適當之介質中製備。或者，或此外，可藉由提供速率控制膜及/或將化合物分散在聚合物基質及/或凝膠中來控制速率。
適合用於局部投予之配製劑包括，但不限於液體及/或半液體製劑，諸如擦劑、塗劑、水包油乳劑及/或油包水乳劑，諸如霜劑、軟膏、及/或糊劑、及/或溶液、及/或懸浮液。
可局部投予之配製劑可，例如包含約1%至約10%(重量/重量(w/w))活性成分，儘管活性成分之濃度可高達該活性成分在該溶劑中之溶解度極限。用於局部投予之配製劑可進一步包含一或多種本文所描述之額外成分。長效貯庫投予
如本文所描述者，於一些實施態樣中，本發明之化合物或組成物被配製在用於延長釋出之長效貯庫中。一般而言，投予時係靶向特定之器官或組織(“標靶組織”)。
於一些實施態樣中，本發明之化合物或組成物係空間上保留在目標組織內，或接近目標組織。所提供者係藉由將哺乳動物個體之一或多個標靶組織(包含一或多個標靶細胞)與化合物或組成物在能使該化合物或組成物大體上保留在標靶組織中之條件下接觸，以對該哺乳動物個體之一或多個標靶組織提供化合物或組成物之方法，意指該組成物之至少10、20、30、40、50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99、99.9、99.99或多於99.99%之組成物被保留在標靶組織中。有利的是，保留係藉由測量進入該標靶組織及/或細胞之組成物的水準來測定。例如投予個體之本發明的化合物或組成物至少有1、5、10、20、30、40、50、60、70、80、85、90、95、96、97、98、99、99.9、99.99或多於99.99%在投予後存在於細胞內一段期間。例如對哺乳動物個體之肌內注射係使用本發明之水性組成物和轉染試劑進行，且組成物之滯留情況係藉由測量存在於肌肉細胞中之本發明化合物或組成物的水準來測定。
本發明之某些態樣係針對對哺乳動物個體之標靶組織提供化合物或組成物之方法，該方法係將哺乳動物個體之標靶組織(含有一或多個標靶細胞)與化合物或組成物在能使該化合物或組成物大體上保留在該標靶組織中之條件下接觸。於一些實施態樣中，可使用有效量之本發明的化合物或組成物，從而在至少一個標靶細胞中產生所欲效果。化合物或組成物通常含有細胞滲透劑和醫藥上可接受之載體，雖然亦可考慮“裸出”形式之化合物或組成物(諸如不具有細胞滲透劑或其他作用劑之化合物或組成物)。
於一些實施態樣中，化合物或組成物包括多種化合物或組成物。可選擇地，組成物亦含有細胞滲透劑以協助細胞內投遞組成物。測定靶向預定體積之標靶組織內的大部分細胞中之所欲標靶所需要的組成物劑量(通常，不將化合物靶向該預定體積之相鄰組織或標靶組織之遠處)。測定之後可將確定之劑量直接引入該哺乳動物個體之組織中。
於一實施態樣中，本發明藉由一次以上之注射或藉由分次之劑量注射提供欲投遞之化合物或組成物。肺部投予
醫藥組成物可以適合經由口腔進行肺部投予之配製劑形成製備、包裝及/或販售。該等配製劑可包含進一步含有活性成分且直徑為約0.5nm至約7nm或約1nm至約6nm之乾燥粒子。該等組成物適合為使用包含乾粉儲存器之裝置投予的乾粉形式，推進劑流可對準該乾粉儲存器以分散粉末及/或使用自我推進溶劑/粉末分配容器(諸如包含在密封容器中溶解及/或懸浮於低沸點推進劑中之活性成分的裝置)。該等粉末包含顆粒，其中至少98重量%之顆粒的直徑大於0.5nm且至少95 %之顆粒數的直徑小於7nm。或者，至少95重量%之顆粒的直徑大於1nm且至少90 %之顆粒數的直徑小於6nm。乾粉組成物可包括固體細粉稀釋劑(諸如糖)且可方便地以單位劑量形式提供。
低沸點推進劑通常包括在大氣壓下具有低於65°F之沸點的液體推進劑。一般而言，該推進劑可佔該組成物之50%至99.9%(重量/重量(w/w))，而活性成分可佔該組成物之0.1%至20%(w/w)。推進劑可進一步包含額外成分，諸如液體非離子性及/或固體陰離子性表面活性劑及/或固體稀釋劑(其可具有與包含該活性成分之顆粒相同的粒徑)。
經配製用於肺部投遞之醫藥組成物可提供為溶液及/或懸浮液液滴形式之活性成分。該等配製劑可以水性及/或稀釋之醇溶液及/或懸浮液之形式製備、包裝及/或銷售，其可選擇地為無菌，包含活性成分且可使用任何霧化及/或噴霧裝置方便地投予。該等配製劑可進一步包含一或多種額外之成分，包括，但不限於調味劑，諸如糖精鈉、揮發性油、緩衝液、表面活性劑及/或防腐劑，諸如羥基苯甲酸甲酯。藉由此投予途徑提供之液滴的平均直徑係在約0.1nm至約200nm之範圍內。鼻內，鼻腔和口腔投予
本文描述之用於肺部投遞之配製劑可用於鼻內投遞之醫藥組成物。適合用於鼻內投予之另一配製劑為包含活性成分且平均顆粒為約0.2μm至500μm之粗粉末。該等配製劑係藉由吸入鼻煙之方式投予，即，從擺放在接近鼻子之粉末容器快速吸入鼻腔通道。
適合用於經鼻投予之配製劑可例如包含至少約0.1%(w/w)和多達100%(w/w)之活性成分且可包含一或多種本文描述之額外成分。該醫藥組成物可以適合口腔投予之配製劑形式製備、包裝及/或銷售。該等配製劑可為採用習知方法製成之片劑及/或錠劑形式且可具有例如0.1%至20%(w/w)之活性成分，該剩餘之未定量包含可口服溶解及/或可降解之組成物及可選擇地，一或多種本文所描述之額外成分。或者，適合用於口腔投予之配製劑可包含含有活性成分之粉末及/或霧化及/或噴霧之溶液及/或懸浮液。當分散時，該等粉末化、霧化及/或霧化之配製劑的平均顆粒及/或液滴尺寸為約0.1nm至約200nm，且可進一步包含一或多種本文所描述之任何額外成分。眼部或耳部投予
醫藥組成物可以適合用於眼或耳部投予之配製劑製備、包裝及/或出售。例如，該等配製劑可為眼藥水或點耳劑之形式，包括例如在水性或油性液體賦形劑中之活性成分的0.1至1.0%(w/w)溶液及/或懸浮液。該等滴劑可進一步包含緩衝液、鹽及/或一或多種本文所描述之其他任何額外成分。其他有用之可眼部投予之配製劑包括含有為微晶型形式及/或在脂質體製劑中之活性成分。亦可使用視網膜下插入物作為投予形式。有效載荷投予
本文所描述之本發明化合物或組成物可用於其中需要對生物標靶投遞物質(該“有效載荷”)的多種不同情況中，例如投遞用於偵測該標靶之可偵測物質或投遞治療劑或診斷劑。偵測方法可包括，但不限於體外造影和體內造影方法，例如免疫組織化學、生物發光造影(BLI)、磁共振造影(MRI)、正電子發射斷層掃描(PET)、電子顯微鏡、X射線電腦斷層掃描、拉曼(Raman)造影、光學同調斷層掃描術(optical coherence tomography)、吸收造影、熱造影、螢光反射造影、螢光顯微鏡、螢光分子斷層造影、核磁共振造影、X光造影、超音波造影、光聲造影、實驗室分析或其中需要標記/染色/造影的任何情況。
本發明之化合物或組成物可被設計成同時包括連接子和為任何有用取向之有效載荷。例如，使用具有二個端點之連接子將一端連接該有效載荷，並將另一端連接本發明之化合物或組成物。於一些實施態樣中，本發明之化合物或組成物可包含一種以上之有效載荷及可裂解之連接子。於另一實例中，可使用可經由連接子連接本發明之化合物或組成物並可經螢光標記之藥物以在體內(例如在細胞內)追踪該藥物。
其他實例包括，但不限於在可逆式投遞藥物至細胞中時使用本發明之化合物或組成物。
於一些實施態樣中，本文所描述之本發明之化合物或組成物可用於將有效載荷(例如可偵測試劑或治療劑)在細胞內靶向特定之胞器。此外，本發明之化合物或組成物可用於將治療劑投遞至例如存活之動物的細胞或組織。例如，本文所描述之化合物或組成物可用於投遞化療劑以殺死癌細胞。將本文所描述之化合物或組成物透過連接子與治療劑連接可促進膜滲透以允許治療劑進入細胞到達細胞內之標靶。
於一些實施態樣中，該有效載荷可為治療劑，諸如細胞毒素、放射性離子、化療劑或其他治療劑。細胞毒素或細胞毒素劑包括任何可能對細胞有害之試劑。實例包括，但不限於紫杉醇(taxol)、細胞鬆弛素B(cytochalasin B)、短桿菌胜肽D(gramicidin D)、溴化乙錠(ethidium bromide)、依米丁(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、秋水仙素(colchicine)、阿黴素(doxorubicin)、柔紅黴素(daunorubicin)、二羥基昆布素(dihydroxyanthracinedione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光輝黴素(mithramycin)、放線菌素D(actinomycin D)、1-脫氫睾酮(1-dehydrotestosterone)、糖皮質激素(glucocorticoid)、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤黴素(puromycin)、美登素類化合物(maytansinoid)，例如美登醇(maytansinol)(參見美國專利案第5,208,020號，其全部內容併入本文)、雷切黴素(rachelmycin)(CC-1065，參見美國專利案第5,475,092、5,585,499和5,846,545號，各篇之全部內容以引用方式併入本文)及其類似物或同系物。放射性離子包括但不限於碘(例如碘125或碘131)、鍶89、磷、鈀、銫、銥、磷酸鹽、鈷、釔90、釤153和鐠。其他治療劑包括，但不限於抗代謝藥(例如甲胺蝶呤(methotrexate)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)、阿糖胞苷(cytarabine)、5-氟尿嘧啶達卡巴嗪(5-fluorouracil decarbazine))、烷化劑(例如氮芥(mechlorethamine)、噻替派(thiotepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、雷卡黴素(rachelmycin)(CC-1065)、美法崙(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、白消安(busulfan)、二溴甘露糖醇(dibromomannitol)、鏈脲黴素(streptozotocin)、絲裂黴素C (mitomycin C)和順-二氯二胺鉑(II)(DDP)(順鉑)、蒽環類(例如柔紅黴素(daunorubicin)(以前稱為道諾黴素(daunomycin))和多柔比星(doxorubicin))、抗生素(例如更生黴素(以前稱為放線菌素)、博來黴素(bleomycin)、光輝黴素(mithramycin)和安曲黴素(anthramycin)(AMC))及抗有絲分裂劑(例如長春新鹼、長春鹼、紫杉醇和美登素類化合物)。
於一些實施態樣中，有效載荷可為可偵測之試劑，諸如各種有機小分子、無機化合物、奈米顆粒、酵素或酵素受質、螢光物質、發光物質(例如魯米諾(luminol))、生物發光物質(例如螢光素酵素、螢光素和水母發光蛋白)、化學發光物質、放射性物質(例如18 F、67 Ga、81m Kr、82 Rb、111 In、123 I、133 Xe、201 Tl、125 I、35 S、14 C、3 H或99m Tc(例如為過鎝酸鹽(鎝酸鹽(VII)、TcO4 - )形式)和顯影劑(例如金(例如金奈米顆粒)、釓(例如螯合之Gd))、氧化鐵(例如超順磁性氧化鐵(SPIO)、單晶型氧化鐵奈米顆粒(MION)和超小型超順磁性氧化鐵(USPIO))、錳螯合物(例如Mn-DPDP)、硫酸鋇、碘化顯影劑(碘海醇(iohexol))、微泡或全氟化碳)。該等光學上可偵測之標記包括，例如，但不限於4-乙醯胺基-4’-異硫氰醯二苯乙烯-2,2’-二磺酸；吖啶和衍生物(例如吖啶和吖啶異硫氰酸酯)；5-(2’-胺乙基)胺基萘-1-磺酸(EDANS)；4-胺基-N-[3-乙烯基磺醯)苯基]萘二甲醯亞胺-3,5二磺酸化物；N-(4-苯胺基-1-萘基)馬來醯亞胺；鄰胺基苯甲醯胺；BODIPY；Brilliant Yellow；香豆素和衍生物(例如香豆素、7-胺基-4-甲基香豆素(AMC、香豆素120)和7-胺基-4-三氟甲基香豆素(香豆素151))；花青染料；四氯四溴螢光素(cyanosine)；4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)；5’ 5”-二溴焦棓酚-磺酸萘(溴鄰苯三酚紅)；7-二乙胺基-3-(4’-異硫氰基苯基)-4-甲基香豆素；二亞乙基三胺五醋酸酯；4,4’-二異硫氰基二氫-芪-2,2’-二磺酸；4,4’-二異硫氰基芪-2,2’-二磺酸；5-[二甲胺基]-萘-1-磺醯氯(DNS，丹醯氯)；4-二甲胺基苯偶氮苯基-4’-異硫氰酸酯(DABITC)；伊紅和衍生物(例如伊紅和異硫氰酸伊紅)；赤蘚紅和衍生物(例如赤蘚紅B和異硫氰酸赤蘚紅)；溴化乙錠；螢光素和衍生物(例如5-羧基螢光素(FAM)、5-(4,6-二氯三嗪-2-基)胺基螢光素(DTAF)、2’,7’-二甲氧基-4,5’-二氯-6-羧基螢光素、螢光素、異硫氰酸螢光素、X-羅丹明-5(和-6)-異硫氰酸酯(QFITC或XRITC)和螢光胺)；2-[2-[3-[[1,3-二氫-1,1-二甲基-3-(3-磺丙基)-2H-苯並[e]吲哚-2-亞基]亞乙基]-2-[4-(乙氧羰基)-1-哌嗪基]-1-環戊烯-1-基]乙烯基]-1,1-二甲基-3-(3-磺丙基)-1H-苯並[e]吲哚鎓氫氧化物、內鹽、具有n,n-二乙基乙胺之化合物(1：1)(IR144)；過氯酸5-氯-2-[2-[3-[(5-氯-3-乙基-2(3H)-苯並噻唑亞基)亞乙基]-2-(二苯胺基)-1-環戊烯-1-基]乙烯基]-3-乙基苯並噻唑鎓(IR140)；孔雀石綠異硫氰酸鹽；4-甲基繖形酮鄰甲酚酞；硝基酪胺酸；副品紅；酚紅；B-藻紅蛋白；鄰苯二甲醛；芘和衍生物(例如芘、丁酸芘和琥珀醯亞胺基1-芘)；丁酸鹽量子點；Reactive Red 4(CIBACRONTM Brilliant Red 3B-A)；羅丹明和衍生物(例如6-羧基-X-羅丹明(ROX)、6-羧基羅丹明(R6G)、麗絲胺羅丹明B磺醯chloride氯羅丹明(lissamine rhodamine B sulfonyl chloride rhodarnine)(Rhod)、羅丹明B、羅丹明123、異硫氰酸羅丹明X、磺基羅丹明B、磺基羅丹明101、磺基羅丹明101之磺醯氯衍生物(德克薩斯紅)、N,N,N’,N’-四甲基-6-羧基羅丹明(TAMRA)、四甲基羅丹明和異硫氰酸四甲基羅丹明 (TRITC))；核黃素；羅索酸(rosolic acid)；鋱螯合物衍生物；花青-3(Cy3)；花青-5(Cy5)；花青-5.5(Cy5.5)、花青-7(Cy7)；IRD700；IRD800；Alexa647；La Jolta Blue；酞菁；和萘菁花青。
於一些實施態樣中，該可偵測之試劑可為不可偵測之前體，該不可偵測之前體在活化後變成可偵測的(例如螢光四嗪-螢光團構築體(例如四嗪-BODIPY FL、四嗪-Oregon Green 488或四嗪-BODIPY TMR-X)或可酵素活化之螢光劑(例如PROSENSE®(VisEn Medical)))。其中可使用經酵素標記之組成物的體外分析包括，但不限於酵素連結免疫吸附分析法(ELISA)、免疫沉澱分析法、免疫螢光分析法、酵素免疫分析法(EIA)、放射免疫分析法(RIA)和西方點墨分析法。Dosage 劑量
本發明之化合物或組成物可藉由在藥物投遞科學中被考慮可能發展之任何適當途徑投遞以用於任何治療、藥物、診斷或造影。投遞可為裸出或經配製形式。裸出型投遞
於一些實施態樣中，本發明之化合物或組成物可以裸出形式投遞至細胞、組織、器官或生物體。如本文所使用者，術語“裸出的”係指在無促進轉染或滲透作用之試劑或修飾下投遞。本發明之化合物或組成物可使用本技藝已知和本文描述之投予途徑投遞至細胞、組織、器官及/或生物體。裸出型投遞可包括在單純之緩衝液，諸如鹽水或PBS中之配製劑。配製型投遞
於一些實施態樣中，本發明之化合物或組成物可使用本文所描述之方法配製。配製劑可包含可為經修飾及/或未經修飾之本發明之化合物或組成物。配製劑可進一步包括，但不限於細胞滲透劑、醫藥上可接受之載體、投遞劑、可生物蝕解或生物相容之聚合物、溶劑和持續釋出之投遞貯庫。本發明之化合物或組成物可使用本技藝已知和本文描述之投予途徑投遞至細胞。
化合物或組成物亦可經配製以藉由包括，但不限於下列之本技藝之多種方式的其中任一者直接投遞至器官或組織中：直接浸或泡、經由導管、藉由凝膠、粉末、軟膏、乳霜、凝膠、塗劑及/或滴劑、藉由使用已塗覆或浸漬化合物或組成物之基質，諸如織物或生物可降解物質，等。給藥
本發明提供包含對有需要之個體投予一或多種根據本發明之本發明化合物或組成物的方法。編碼抗體、蛋白質之核酸或包含本發明之化合物或組成物的複合物、或其藥學、造影、診斷或預防性化合物或組成物可使用能有效預防、治療、診斷疾病、病症及/或病況或將疾病、病症及/或病況造影之任何量和任何投予途徑來投予個體。所需之確切量將根據個體之物種、年齡和一般狀況、疾病之嚴重程度、特定組成物、其投予模式、其活性模式，等而在個體之間有所變化。根據本發明之化合物或組成物通常配製成劑量單位形式以方便投予及取得劑量之均一性。然而，可理解的是，本發明之化合物或組成物之總日用量將由主治醫師在合理之醫學判斷範圍內決定。用於任何特定個體之特定的治療上有效、預防上有效或適當之造影劑量水準將取決於多種因素，包括所治療之病症和病症之嚴重程度；所使用之特定化合物的活性；採用之特定組成物；患者之年齡、體重、整體健康狀況、性別和飲食；投予時間、投予途徑和所採用之特定化合物的排泄速率；治療之持續時間；與所採用之特定化合物組合或同時使用之藥物；及醫學技藝中所熟知之類似因素。
於某些實施態樣中，根據本發明之化合物或組成物可以足以每天，一天一或多次投遞約0.0001 mg/kg個體體重至約100 mg/kg個體體重、約0.01 mg/kg個體體重至約50 mg/kg個體體重、約0.1 mg/kg個體體重至約40 mg/kg個體體重、約0.5 mg/kg個體體重至約20 mg/kg個體體重、0.5 mg/kg個體體重至約30 mg/kg個體體重、約0.01 mg/kg個體體重至約10 mg/kg個體體重、約0.1 mg/kg個體體重至約10 mg/kg個體體重、約2.5 mg/kg個體體重至約5.0 mg/kg個體體重、或約1 mg/kg個體體重至約25 mg/kg個體體重之劑量水準投予個體以取得理想之治療、診斷、預防或造影效果。該所需劑量可一天投遞三次、一天投遞二次、一天投遞一次、每隔一天投遞一次、每三天投遞一次、每週投遞一次、每二週投遞一次、每三週投遞一次或每四週投遞一次。於某些實施態樣中，該所需劑量可利用多次投予來投遞(例如投予2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多次)。
根據本發明，本發明之化合物或組成物可在分割劑量方案中投予。如本文所使用者，“分割劑量”為單一單位劑量或總日劑量分割成二或更多個劑量，例如分成二或更多次投予該單一單位劑量。如本文所使用者，“單一單位劑量”為在一個劑量/一次/單一途徑/單一接觸點(即單一投予事件)中投予之任何治療劑之哥量。如本文所使用者，“總日劑量” 為在24小時之期間內給予或開立之量。其可以單一單位劑量之形式投予。於一實施態樣中，本發明之化合物或組成物係以分割之劑量投予個體。本發明之化合物或組成物可僅配製在緩衝液中或配製在本文所描述之配製劑中。本文所描述之本發明之醫藥組成物可被配製成本文所描述之劑型，諸如局部、鼻內、氣管內、或可注射(例如靜脈內、眼內、玻璃體內、肌肉內、心內、腹膜內或皮下)之劑型。在配製劑及/或製造藥劑時之一般考量可參見，例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005(以引用方式併入本文)。
於一些實施態樣中，本發明之組成物之劑量可經過調整以減少旁觀者效應。如本文所使用者，“旁觀者效應”係指對非標靶細胞或鄰近標靶細胞之細胞(本文中亦稱為旁觀者細胞)的任何負面影響。根據該等方法，可調整劑量或共軛物類型以減少旁觀者效應。該等調整可能導致該治療具有多於95%、多於90%、多於85%、多於80%、多於75%、多於70%、多於65%、多於60%、多於55%、多於50%、多於45%、多於40%、多於35%、多於30%、或多於25%之旁觀者細胞仍然存活。塗層或外殼
片劑、糖衣錠、膠囊、丸劑和顆粒劑之固體劑型可製備成具有塗層和外殼，諸如腸溶衣和藥學配製技藝中為人熟知之腸衣和其他塗層。它們可選擇地包含不透明劑且可具有僅在或優先在腸道之某個部分釋出活性成分(可選擇地以延遲之方式釋出活性成分)之組成物。可使用之包埋組成物之實例包括聚合物質和蠟。類似類型之固體組成物可被用來作為軟和硬填充明膠膠囊中之填充劑，使用諸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇，等賦形劑。組合物
於一些實施態樣中，本發明之化合物或組成物可與一或多種其他治療劑、預防、診斷或造影劑組合使用。藉由“與......組合”並不意味必須同時投予及/或配製以供一起投遞，儘管該等投遞方法係在本發明之範圍內。化合物或組成物可與一或多種其他理想之治療劑或醫療程序同時投予、在該理想之治療劑或醫療程序之前或之後投予。一般而言，各藥劑將以為該藥劑測定之劑量及/或為該藥劑測定之時間表投予。於一些實施態樣中，本發明包含投遞製藥、預防、診斷和/或造影組成物，該製藥、預防、診斷和/或造影組成物與可改善其生物可利用性、降低及/或修飾其代謝、抑制其排泄及/或修飾其在體內之分佈的試劑組合。測量 生物可利用性
與缺乏如本文所描述之投遞劑的組成物相比較，本發明之化合物和組成物當與如本文所描述之投遞/配製劑或載劑一起配製成組成物時可表現出生物可利用性增加。如本文所使用者，術語“生物可利用性”係指本發明之化合物和組成物的指定量在投予哺乳動物後之系統性生物可利用性。生物可利用性可藉由在投予哺乳動物該化合物後，測量未改變形式之化合物的曲線下面積(AUC)或最大血清或血漿濃度(Cmax )來評估。AUC為曲線下面積之測定值，該曲線為相對於橫坐標(X軸)之時間繪製縱坐標(Y軸)上之化合物血清或血漿濃度。一般而言，特定化合物之AUC可使用本技藝之一般技術人員已知之方法及如G. S. Banker, Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, v. 72, Marcel Dekker, New York, Inc., 1996 (該篇以引用方式併入本文)中之描述來計算。
該Cmax 值為將化合物投予哺乳動物後在該哺乳動物之血清或血漿中取得之最大化合物濃度。特定化合物之Cmax 值可使用本技藝之一般技術人員已知之方法測量。如本文所使用之短語“增加生物可利用性”或“改善藥物動力學”意指當將本發明之化合物和組成物與如本文所描述之投遞劑共同投予哺乳動物時，在哺乳動物中以AUC、Cmax 或Cmin 測得之本發明化合物和組成物之全身性可利用性較未發生共同投予時更高。於一些實施態樣中，本發明之化合物和組成物之生物可利用性可增加至少約2%、至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、或約100%。安全有效範圍 (therapeutic window)
與缺乏如本文所描述之投遞劑時投予之本發明之化合物和組成物的安全有效範圍相比較，當與如本文所描述之投遞劑一起配製成組成物時，本發明之化合物和組成物可顯示出所投予之本發明之化合物和組成物的安全有效範圍增加。如本文所使用之“安全有效範圍”係指很可能引發治療效果之血漿濃度範圍，或在作用部位處之治療活性物質水準的範圍。於一些實施態樣中，當與如本文所描述之投遞劑共同投予時，本發明之化合物和組成物之安全有效範圍可增加至少約2%、至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、或約100%。
於一些實施態樣中，本發明之化合物和組成物可在投予後至少2天、至少5天、至少10天、至少2週、至少4週、至少2個月、至少6個月、或至少一年在個體樣品中偵測到。分佈體積
相對於缺乏如本文所描述之投遞劑之組成物，當與如本文所描述之投遞劑一起配製成組成物時，本發明之化合物和組成物可顯示出改善之分佈體積(VDIST ) (例如減少或被靶向)。分佈體積(Vdist )係關於體內藥物之量對血液或血漿中之藥物的濃度。如本文所使用者，術語“分佈體積”係指當與血液或血漿中之濃度相同時，含有體內之總藥量所需的流體體積：Vdist 等於體內之藥物量/血液或血漿中之藥物濃度。例如對10mg劑量和10 mg/L血漿濃度而言，分佈體積將為1升。分佈體積反映藥物存在於血管外組織中之程度。與血漿蛋白結合相比較，大的分佈體積反映出化合物與組織組分結合之趨勢。在臨床設置中，Vdist 可用於測定達到穩態濃度之載荷劑量。於一些實施態樣中，與投遞劑共同投予可用來調節本發明之化合物及/或組成物之分佈體積。例如分佈體積可減少至少約2%、至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、或至少約70%。
於一些實施態樣中，本發明之化合物和組成物包含與一或多種醫藥上可接受之賦形劑組合之組成物及/或複合物。醫藥組成物可選擇地包含一或多種另外之活性物質，例如治療及/或預防活性物質。在配製及/或製造藥劑時之一般考量可參見，例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005(以引用方式併入本文)。
於一些實施態樣中，組成物係投予人類、人類患者或個體。在本發明之目的方面，短語“活性成分”通常係指欲依本文所描述者投遞之本發明之化合物和組成物。
雖然本文所提供之醫藥組成物之描述主要針對適合投予人類之醫藥組成物，本技藝之技術人員將可理解該等組成物通常適合投予任何其他動物，例如投予非人類動物(例如非人類哺乳動物)。修飾適合投予人類之醫藥組成物以使該組成物適合投予各種動物是被充分理解的，且一般技術之獸醫藥理學家可僅以普通(若有的話)之實驗來設計及/或進行該等修飾。被考慮投予該醫藥組成物之個體包括，但不限於人類及/或其他靈長類動物；哺乳動物，包括與商業有關之哺乳動物，諸如牛、豬、馬、綿羊、貓、狗、小鼠及/或大鼠；及/或鳥類，包括與商業有關之鳥類，諸如家禽、雞、鴨、鵝及/或火雞。
本文所描述之醫藥組成物的配製劑可藉由藥理學技藝中已知或之後研發的任何方法製備。一般而言，該等製備方法包括使活性成分與賦形劑及/或一或多種其他輔助成分結合之步驟，然後，若需要及/或期望時，將該產品分割、塑型及/或包裝成所需之單劑量或多劑量單位。
根據本發明之醫藥組成物可以單一單位劑量及/或以多個單一單位劑量之形式製備、包裝及/或散裝銷售。如本文所使用者，“單位劑量”為包含預定量之活性成分之醫藥組成物的不連續量。活性成分之量通常等於將投予個體之活性成分的劑量及/或該等劑量之便利部分，例如該等劑量之一半或三分之一。
根據本發明之醫藥組成物中之活性成分、醫藥上可接受之賦形劑及/或任何額外成分之相對量將根據所治療之個體的身份、尺寸及/或病況有所不同，且進一步取決於欲投予該組成物之途徑。舉例而言，該組成物可包含0.1%至100%，例如0.5至50%、1至30%、5至80%或至少80%(w/w)之活性成分。於一實施態樣中，活性成分為針對癌細胞之抗體。診斷和監測應用
於一些實施態樣中，本發明提供偵測GCD59之方法，該方法包括取得個體樣品；將該個體樣品施加於具有CD59捕獲抗體之底物；施加經阿馬多里修飾之GCD59偵測抗體；並偵測該經阿馬多里修飾之GCD59偵測抗體。該個體樣品可包括，但不限於下列群組之一或多者：細胞、組織、組織切片和體液，例如尿液、血液、汗液、血清、血漿和唾液。
根據某些方法，使用之樣品不經預處理。在某些情況下，可在分析前稀釋樣品。該等稀釋可為至少10：1、至少5：1、至少2：1、至少1：1、至少1：10、至少1：100、至少1：1,000、至少1：10,000、至少1：100,000、至少1：1,000,000、至少1：109 、至少1：1012 、或至少1：1015 。在某些情況下，樣品係稀釋約1：200至約1：300。在某些情況下，樣品在分析之前係經還原劑、氧化劑、二硫代蘇糖醇(DTT)及/或β-巰基乙醇(BME)處理。
如本文所使用者，術語“還原劑”係指任何參與或用於氧化還原反應之電子供體化學或化合物。於一些實施態樣中，還原劑係選自硼氫化鈉(NaBH4 )和氰基硼氫化鈉(NaCNBH3 )。可以還原劑進行樣品之預處理以修飾醣化之側鏈結構，例如用於偵測劑識別具有還原之K41的GCD59。NaCNBH3 處理將Schiff's鹼醣化之K41還原成葡萄糖醇離胺酸。NaBH4 處理將經席夫鹼醣化之K41和經阿馬多里修飾之醣化的K41二者均還原成葡萄糖醇離胺酸。
還原劑可單獨使用或在溶液中使用(本文中稱為“還原劑溶液”)。還原劑溶液可包括各種溶劑之任一者。於一些實施態樣中，還原劑溶液包括水。於一些實施態樣中，還原劑溶液包括有機溶劑。有機溶劑為包括基於碳之組分的溶劑。於一些實施態樣中，有機溶劑可包括，但不限於1,1-二氯乙烷、1,2-二氯乙烷、1,2-二甲氧基-乙烷、1-丁醇、1-庚醇、1-己醇、1-辛醇、1-戊醇、1-丙醇、2-胺基乙醇、2-丁醇、2-丁酮、雙(2-甲氧基乙基)醚、2-戊醇、2-戊酮、2-丙醇、3-戊醇、3-戊酮、醋酸、丙酮、乙腈、乙醯丙酮、苯胺、茴香醚、苯、苯甲腈、苯甲醇、二硫化碳、四氯化碳、氯苯、氯仿、環己烷、環己醇、環己酮、二乙醚、二乙胺、二乙二醇、二乙二醇二甲醚、二甲氧基乙烷(乙二醇二甲醚)、二甲亞碸(DMSO)、二甲醚、N,N-二甲基-醯胺(DMF)、N,N-二甲基-乙醯胺、鄰苯二甲酸二甲酯、二甲亞碸(DMSO)、鄰苯二甲酸二正丁酯、二噁烷、乙醇、乙醚、醋酸乙酯、乙醯醋酸乙酯、苯甲酸乙酯、乙二醇、甘油、庚烷、2-乙基己醇、六甲基磷醯胺、六甲基磷醯三胺(HMPT)、己烷、異丁醇、甲醇、醋酸甲酯、甲基第三丁醚(MTBE)、二氯甲烷、N,N-二甲基苯胺、硝基甲烷、N-甲基-2-吡咯啶酮、戊烷、石油醚(輕石油)、吡啶、第三丁醇、四乙二醇二甲醚、四氫呋喃(THF)、甲苯、三乙胺、硝基甲烷和三乙二醇二甲醚。於一些實施態樣中，還原劑溶液可包含三乙二醇二甲醚、雙(2-甲氧基乙基)醚及/或四乙二醇二甲醚溶劑。
具有有機溶劑之還原劑溶液可包括NaBH4 溶液。該等溶液可包括或從市售之製劑製備(例如來自密蘇里州聖路易斯市Sigma-Aldrich公司者)。該等市售之製劑可包括，但不限於在雙(2-甲氧基乙基)醚中之99%硼氫化鈉溶液0.5M；在四乙二醇二甲醚中之99%硼氫化鈉溶液3M；在三乙二醇二甲醚中之99%硼氫化鈉溶液2.0M；在雙(2-甲氧基乙基)醚中之99.5%硼氫化鈉溶液0.5M；在四乙二醇二甲醚中之99.5%硼氫化鈉溶液3M；在三乙二醇二甲醚中之99.5%硼氫化鈉溶液2.0M；在四乙二醇二甲醚中之99.9%硼氫化鈉溶液3M；在三乙二醇二甲醚中之99.9%硼氫化鈉溶液2.0M；在雙(2-甲氧基乙基)醚中之99.95%硼氫化鈉溶液0.5M；在四乙二醇二甲醚中之99.95%硼氫化鈉溶液3M；在三乙二醇二甲醚中之99.95%硼氫化鈉溶液2.0M；在雙(2-甲氧基乙基)醚中之99.99%硼氫化鈉溶液0.5M；在四乙二醇二甲醚中之99.99%硼氫化鈉溶液3M；在三乙二醇二甲醚中之99.99%硼氫化鈉溶液2.0M；在雙(2-甲氧基乙基)醚中之99.999%硼氫化鈉溶液0.5M；在四乙二醇二甲醚中之99.999%硼氫化鈉溶液3M；在三乙二醇二甲醚中之99.999%硼氫化鈉溶液2.0M；和在雙(2-甲氧基乙基)醚中之99.9%硼氫化鈉溶液0.5M。
還原劑溶液可包括約0.1M至約10M之還原劑濃度。於一些實施態樣中，所使用之還原劑溶液之貯存溶液需要在使用前稀釋。還原劑貯存溶液可包括高於1M之還原劑濃度(例如約1.1至約1.5M、約1.2M至約2M、約1.7M至約3M、約2.5M至約4M、約3.5 M至約5M、約4.5M至約8M、或約6 M至約10 M)。在樣品處理之前，可將還原劑貯存溶液稀釋成約0.5M至約1M還原劑濃度。稀釋可使用水性及/或有機溶劑進行。
於一些實施態樣中，本發明之方法中使用之抗經阿馬多里修飾之GCD59偵測抗體可包括可偵測之標記。該等可偵測之標記可包括，但不限於生物素、鏈親和素、抗生物素蛋白、螢光標記、酵素標記、發光標記和放射性標記。於一些方法中，可使用二級抗體偵測抗經阿馬多里修飾之GCD59偵測抗體。
於一些實施態樣中，1M還原劑溶液可與個體樣品以約1：1(樣品：還原劑溶液)至約1：1000之比例組合。例如該比例可為1：5、1：10、1：20、1：100或1：500。樣品可與還原劑溶液一起培育約20分鐘至約2小時、約1小時至約4小時、約3小時至約24小時、約12小時至約3天、約2天至約5天、或至少5天以允許樣品發生還原。
根據本發明之某些方法係使用微量滴定盤。
於一些實施態樣中，本發明之方法可用於監測、偵測及/或篩查個體中之糖尿病。於一些實施態樣中，本發明之方法可用於評估糖尿病個體之風險及/或將糖尿病個體之風險分層級。某些方法可作為與糖尿病相關之適應症的伴隨式診斷法之一部分。
於一些實施態樣中，本發明之方法可用於研發藥物。該等實施態樣可包括測試及/或研發用於與糖尿病相關之適應症的治療劑。在某些情況下，本發明之方法可用於進行臨床試驗。
於一些實施態樣中，本發明之方法包括遠程監測個體。該等方法可納入包含本文教示之其他方法的全部或部分。
於一些實施態樣中，本發明之方法包括評估GCD59是否存有至少一個N-醣基化之方法。N-醣基化膜GPI-錨定之蛋白質中之CD59為補體活化之主要調節劑。多種醣基化酵素催化途徑導致形成蛋白質上之成熟碳水化合物單位且該等修飾可為細胞及/或組織特異性。評估樣品之CD59 N-醣基化可用於鑑定受CD59殘基K41處醣化影響最大之器官及/或組織。在某些情況下，CD59可在殘基N18上被N-醣基化。於一些實施態樣中，可評估血漿、血清及/或尿液以鑑定受醣化影響最大且因此對糖尿病之血管併發症最敏感之器官/組織。例如偵測糖尿病前期或糖尿病患者之血液和尿液樣品中之腎臟特異性N-醣基化GCD59(GCD59之主要形式)可指示患者對發展出糖尿病腎病之易感性。在某些情況下，此種偵測可在實際之腎損傷發病前進行，而使用現有之診斷方法可能無法偵測到。該等早期偵測可用來提高患者之認知並指示對改變生活方式的需求。在某些情況下，早期偵測可指示醫生開始早期之預防性治療干預。
於一些實施態樣中，本發明提供評估GCD59之方法，該方法包括以能夠與K41經阿馬多里修飾之GCD59結合之抗體分離GCD59並偵測至少一個存在於GCD59上之N-醣基化(例如GCD59之殘基N18上之N-醣基化)的步驟。
本發明之方法可包括鑑別下列至少一者之方法：(1)糖尿病器官特異性併發症傾向；(2)臨床前期糖尿病週圍神經病變；(3)臨床前期糖尿病腎病；(4)臨床前期糖尿病視網膜病變；和(5)臨床前期糖尿病血管疾病。該等方法可包括下列步驟：(1)以特異於K41經阿馬多里修飾之GCD59之抗體分離GCD59和(2)偵測至少一個存在於GCD59上之N-醣基化(例如GCD59之殘基N18上之N-醣基化)。
GCD59N-醣基化之偵測可藉由本技藝中已知之任何方法進行。在某些情況下，GCD59N-醣基化係使用免疫學方法偵測。於其他實施態樣中，GCD59N-醣基化可使用質譜法偵測。定點照護檢驗
揭示之套組和方法(包括所有或部分該等方法)可被格式化以用於定點照護用途。於一些實施態樣中，護理點用途可包括使用一或多個患者監測裝置。該等裝置可包括能夠接收及/或傳輸電子訊號之裝置。在某些情況下，患者監測裝置可為智慧型裝置(例如智慧型手機或智慧型手錶)或可與智慧型裝置組合。CD59 醣化抑制
於一些實施態樣中，本發明提供CD59醣化抑制劑和研發這類抑制劑之方法。人類CD59為主要之補體調節劑且其正常功能可被在高血糖條件下發生之醣化降低或阻斷。hCD59含有推定之醣化基序，其包括殘基K41和H44。該等殘基落在被認為是蛋白質活性位點之整體必要組成部分的W40附近。K41之醣化需要H44以為葡萄糖與K41之ε胺基之間的化學反應提供酸鹼催化。hCD59在K41之醣化可能增加發展出與糖尿病相關之併發症(包括，但不限於血管性糖尿病)的風險。
本發明之方法可包括抑制CD59醣化之方法。根據一些該等方法，可投予靶向CD59並阻斷K41醣化之藥劑。該等藥劑可靶向例如人CD59之H44並阻斷K41醣化。於一些實施態樣中，抗經阿馬多里修飾之GCD59抗體可用於篩查程序以鑑定靶向CD59和阻斷K41醣化之藥劑。
本發明之方法可包括研發hCD59 K41醣化之抑制劑的方法。該等方法可包括使用一或多種能夠與K41醣化之CD59結合之抗體，包括，但不限於本文所描述之任何抗K41經阿馬多里修飾之hCD59抗體。於一些實施態樣中，該等方法包括下列步驟：(1)將樣品與至少一種測試化合物接觸，其中該樣品包含hCD59(純化的或重組的)和適合K41醣化之條件，及(2)使用GCD59偵測抗體評估該樣品中K41-醣化之hCD59之水準。評估可根據本文所描述或先前描述於下列任一文獻中之任一方法進行：美國專利案第6,835,545號；美國專利案第7,049,082號；美國專利案第7,439,330號；美國專利案第9,068,006號；美國專利案第9,417,248號；和美國刊物第US2016/0299150號(各篇之全部內容以引用方式併入本文)。該等方法可包括使用標準試劑，包括，但不限於GCD59替代化合物。當測試化合物能夠抑制hCD59 K41醣化時，偵測到之GCD59水準將會降低。測試化合物可包括，但不限於小分子、胜肽、合成之構築體、融合蛋白、適體、核酸和抗體。III. 套組
於一些實施態樣中，本發明提供用於測定個體樣品中之GCD59濃度之套組。該等套組可包括下列一或多者：(1)捕獲抗體，(2)偵測抗體，和(3)使用說明書。一些套組包括用於產生標準曲線之化合物。該等化合物可包括標準試劑(例如替代化合物)。於一些實施態樣中，替代化合物可包括美國專利案第9,417,248號(例如其中第27圖中呈現之替代化合物)或美國刊物第US2016/0299150號中所揭示者之任一種(各篇之全部內容以引用方式併入本文)。在某些情況下，套組包括至少一種緩衝液。該等緩衝液可用於接觸個體樣品。緩衝液可包括還原劑、氧化劑、二硫代蘇糖醇(DTT)及/或β-巰基乙醇(BME)。還原劑可以還原劑溶液之一部分的形式提供。還原劑溶液可包括水及/或有機溶劑。該有機溶劑可包括雙(2-甲氧基乙基)醚。
本發明之套組可用於偵測GCD59之存在、水準及/或水準之變化。該等套組可包括一或多種捕獲抗體以捕獲CD59及/或GCD59。捕獲抗體可包括本文所描述之任一抗體(例如由SEQ ID NO：9和10所編碼之抗體H9)。另外之套組可包括一或多種偵測抗體以偵測GCD59及/或CD59。偵測抗體可包括本文所描述之任何抗體(例如抗體D2或D3，由SEQ ID NO：6和7所編碼之D2或由SEQ ID NO：6和8所編碼之D3)。於一些實施態樣中，套組可包括本技藝已知之用於捕獲或偵測CD59及/或GCD59之其他抗體。該等抗體可包括歐洲專利案第EP2348050號、國際刊物第WO2015084994號和美國專利案第US9068006、US9417248號中所描述及/或申請專利的任何抗體(各篇之全部內容以引用方式併入本文)。
本發明之套組可包括一或多個內部對照組。該等內部對照組可包括血漿分析對照組及/或基於任何其他體液之對照組。一些套組包括一或多種分析稀釋劑、共軛物稀釋劑和洗滌緩衝液。套組試劑可為經凍乾的。
於一些實施態樣中，套組可用於測定醣基化之蛋白質抗原決定位是否存在、不存在或數量。該等醣基化之蛋白質抗原決定位可包括醣基化之CD59抗原決定位。在某些情況下，可偵測到N-醣基化之CD59及/或GCD59。該等套組可，例如用來偵測細胞及/或組織特異性N-醣基化之抗原決定位。
套組可包括歐洲專利案第EP2348050號、國際刊物第WO2015084994號和美國專利案第US9068006、US9417248號中描述及/或申請專利之任一者(各篇之全部內容以引用方式併入本文)。該等套組可具有之一或多種本文所描述之抗體作為該等套組中之描述的一或多種抗體的替代物。在某些情況下，該等套組可包括本文所描述之抗經阿馬多里修飾之GCD59抗體來代替其中之描述之偵測抗體。該等套組可在沒有還原劑之情況下組裝且可用於偵測及/或定量樣品中之GCD59，而不需要進行樣品還原步驟。IV. 裝置
揭示之套組和方法(包括該等方法之全部或部分)可被格式化以與裝置一起使用。於一些實施態樣中，裝置可包括可穿戴裝置。該等裝置可為，例如手錶及/或包括腕帶之形式。
於一些實施態樣中，本文所描述之化合物、組成物、方法、套組和試劑可與國際刊物第WO2015084994號(其全部內容以引用方式併入本文)中描述者一起使用或可為其中所描述者之改良品。V. 定義
如本文所使用者，術語“接受者操作特徵曲線”或“ROC曲線”係指產生圖表之統計工具以在二元分類模型系統之區別截止值(閾值)變化時說明二元分類模型系統之表現。ROC曲線可作為用於診斷測試評估之工具且可用於定量醫療診斷測試可如何地精確區分二個患者之狀態。於一實例中，ROC曲線可用於證明分析中之敏感性和特異性之間的平衡。使用熟悉之統計方法分析ROC曲線可用於鑑定生物標記水準之最佳診斷截止值。然後，可使用最佳診斷截止值來做出醫學決定。
如本文所使用者，術語“閾值”係指用於將連續結果劃分類別(例如正和負)之數值以表徵用於產生該結果之試劑、決定將試劑置於一或多個該等類別、或基於與一或多個該等個體相關之對應值(落在連續結果之範圍內)將個體分在不同類別內。於一些實施態樣中，閾值可為生物標記或其他指標之水準以用於將具有高於、低於或等於閾值之生物標記或其他指標水準之一或多個個體分類。例如，閾值可為存在於個體或個體樣品中之因子的濃度以用於將個體劃分入疾病類別中。當該閾值為個體中之GCD59之水準時，基於該等個體中之GCD59水準是否高於或低於該閾值，該閾值可用於將個體分派至糖尿病或非糖尿病類別中。在某些情況下，基於與一或多個患者相關之數值是否高於、低於或等於閾值，該閾值可用於做出醫學決定。於一些實施態樣中，產生連續實際值之生物標記之診斷閾值(亦稱為“截止點”)可用於描述陽性測試和陰性測試。例如，可使用血漿樣品之訓練組來產生接收者操作特徵(ROC)曲線，該接收者操作特徵(ROC)曲線為用於不同之可能截止點之真陽性率對假陽性率之圖形。採用熟悉本技藝者已知之為人熟悉的統計方法分析ROC曲線可鑑定出生物標記之最佳診斷截止值。該最佳診斷截止值可用於做出醫療決定。VI. 等效物和範圍
本技藝之技術熟習人士將認知或能夠僅使用常規實驗來確定根據本文所描述之本發明的特定實施態樣的許多等效物。本發明之範圍不欲侷限於上述說明，而是如所附之申請專利範圍中所列舉者。
在申請專利範圍中，除非指明相反的情況或從上下文中以其他方式顯明，諸如“一(a、an)”和“該”之冠詞可意指一或一個以上。除非指明相反的情況或從上下文中以其他方式顯明，在群組之一或多個成員之間包括“或”之申請專利範圍或描述中若一個、一個以上或所有群組成員存在於、用於或以其他方式與指定之產品或過程相關，則該申請專利範圍或描述被認為得到滿足。本發明包括其中正好一個該群組之成員存在於、用於或以其他方式與指定之產品或過程相關的實施態樣。本發明包括其中有一個以上或整組成員存在於、用於或以其他方式與指定之產品或過程相關的實施態樣。
亦應注意的是，術語“包含”意圖為開放的且允許，但不必要包括額外之元件或步驟。當本文中使用術語“包含”時，亦同時涵蓋和揭示術語“由...組成”。
當給予範圍時，其包括端點。此外，應理解的是，除非指明相反的情況或從上下文中以其他方式顯明，本技藝之一般技術人員理解以範圍表示之數值在本發明之不同實施態樣中可假定在該陳述範圍內之任何特定值或子範圍，直至該範圍之下限單位的十分之一，除非上下文中另外清楚指明。
此外，可理解的是，在先前技藝範圍內之本發明的任何特定實施態樣可能從申請專利範圍之任何一或多項中被明確地排除。由於該等實施態樣被認為是本技藝之一般技術人員所已知，因此即使本文中沒有明確提出排除彼等，亦可將其排除。本發明之組成物的任何特定實施態樣(例如任何核酸或由其編碼之蛋白質；任何生產方法；任何使用方法；等)可出於任何原因從申請專利範圍之任何一或多項中被排除，無論是否與現存之先前技藝有關。
所有引用之來源，例如本文中引用之參考文獻、刊物、數據庫、數據庫登錄及技藝以引用方式被併入本申請案中，即使不在引用時明確說明。在引用來源和本申請案發生衝突之情況下，以本申請案中之陳述為準。章節和表格標題並不意圖用於限制。

Claims (100)

  1. 一種抗體，其中該抗體包含重鏈可變結構域(VH)，該重鏈可變結構域(VH)具有與選自由SEQ ID NO：38至43所組成之群組之胺基酸序列具有至少70%胺基酸序列同一性的互補決定區(CDR)。
  2. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該CDR為選自由SEQ ID NO：42和43所組成之群組的CDR-H3。
  3. 如申請專利範圍第2項之抗體，其中該VH包含： 　　i. CDR-H1，其具有與選自由SEQ ID NO：38和39所組成之群組的序列具有至少70%序列同一性之胺基酸序列； 　　ii. CDR-H2，其具有與選自由SEQ ID NO：40和41所組成之群組的序列具有至少70%序列同一性之胺基酸序列；及 　　iii. and CDR-H3，其具有與選自由SEQ ID NO：42和43所組成之群組的序列具有至少70%序列同一性之胺基酸序列。
  4. 如申請專利範圍第3項之抗體，其包含輕鏈可變結構域(VL)，該輕鏈可變結構域(VL)具有與選自由SEQ ID NO：33至37所組成之群組的胺基酸序列具有至少70%之胺基酸序列同一性之CDR。
  5. 如申請專利範圍第4項之抗體，其中該VL包含選自由SEQ ID NO：36和37所組成之群組的CDR-L3。
  6. 如申請專利範圍第5項之抗體，其中該VL包含： 　　i. CDR-L1，其具有與選自由SEQ ID NO：33和34所組成之群組的序列具有至少70%序列同一性之胺基酸序列； 　　ii. CDR-L2，其具有與SEQ ID NO：35之序列具有至少30%序列同一性之胺基酸序列；and和 　　iii. CDR-L3，其具有與選自由SEQ ID NO：36和37所組成之群組的序列具有至少70%序列同一性之胺基酸序列。
  7. 如申請專利範圍第6項之抗體，其中該抗體為單株抗體。
  8. 如申請專利範圍第6項之抗體，其中該抗體為人化抗體。
  9. 如申請專利範圍第6項之抗體，其中該抗體為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗體。
  10. 一種抗體，其具有至少一個可變結構域，該可變結構域具有與選自由SEQ ID NO：29至32所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。
  11. 如申請專利範圍第10項之抗體，其中該至少一個可變結構域包括VH，該VH具有與選自由SEQ ID NO：30和32所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列。
  12. 如申請專利範圍第11項之抗體，其中該至少一個可變結構域包括VL，該VL具有與選自由SEQ ID NO：29和31所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%同一性之胺基酸序列。
  13. 一種抗體，其具有帶有經轉譯之胺基酸序列的重鏈，該經轉譯之胺基酸序列與選自由SEQ ID NO：3和5所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%序列同一性。
  14. 如申請專利範圍第13項之抗體，其中該重鏈係由與選自由SEQ ID NO：7、8和10所組成之群組的核酸序列具有至少95%序列同一性之核苷酸序列所編碼。
  15. 一種抗體，其具有帶有經轉譯之胺基酸序列的輕鏈，該經轉譯之胺基酸序列與選自由SEQ ID NO：2和4所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%序列同一性。
  16. 如申請專利範圍第15項之抗體，其中該輕鏈係由選自由SEQ ID NO：6和9所組成之群組的核苷酸序列所編碼。
  17. 一種抗體，其包含： 　　i. 重鏈，其具有與選自由SEQ ID NO：3和5所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%序列同一性之經轉譯的胺基酸序列；and和 　　ii. 輕鏈，其具有與選自由SEQ ID NO：2和4所組成之群組的胺基酸序列具有至少95%序列同一性之經轉譯的胺基酸序列。
  18. 如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體，其中該抗體與CD59結合。
  19. 如申請專利範圍第18項之抗體，其中該抗體與CD59之非醣化抗原決定位(epitope)結合。
  20. 如申請專利範圍第18項之抗體，其中該抗體與不包括離胺酸41(K41)之CD59的抗原決定位結合。
  21. 如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體，其中該抗體與醣化CD59(GCD59)之醣化抗原決定位結合。
  22. 如申請專利範圍第21項之抗體，其中該GCD59之醣化抗原決定位包含經阿馬多里(Amadori)修飾之K41。
  23. 如申請專利範圍第21項之抗體，其中該抗體藉由平衡解離常數(KD)約1.0 pM 至約5.0×108 pM與該GCD59之醣化抗原決定位結合。
  24. 如申請專利範圍第23項之抗體，其中該抗體藉由平衡解離常數約1.5 pM至約150 pM與該GCD59之醣化抗原決定位結合。
  25. 如申請專利範圍第21項之抗體，其中該GCD59之醣化抗原決定位係以選自與表面結合之形式和以溶液為基礎​之形式中至少一者之形式呈現。
  26. 如申請專利範圍第25項之抗體，其中該以溶液為基礎之形式包括包含下列至少一者之溶液：尿液、血漿、血清、血液、汗液和唾液。
  27. 如申請專利範圍第26項之抗體，其中該溶液包含血清，其中該血清係經約1:1至約1:100,000之比例稀釋。
  28. 一種套組，其包含： 　　　　捕獲劑；and和 　　　　該套組之使用說明。
  29. 如申請專利範圍第28項之套組，其中該捕獲劑為捕獲抗體，其中該捕獲抗體包含如申請專利範圍第1至27項中任一項之抗體。
  30. 如申請專利範圍第29項之套組，其中該捕獲抗體與CD59結合且其中該捕獲抗體包含如申請專利範圍第19或20項之抗體。
  31. 如申請專利範圍第30項之套組，其包含偵測劑，其中該偵測劑係選自凝集素(lectin)和偵測抗體，該偵測抗體包含如申請專利範圍第1至17項和第21至27項中任一項之抗體。
  32. 如申請專利範圍第28項之套組，其中該捕獲劑為捕獲抗體，其中該捕獲抗體包含如申請專利範圍第1至17項和第21至27項中任一項之抗體。
  33. 如申請專利範圍第32項之套組，其包含偵測劑，其中該偵測劑係選自凝集素和偵測抗體。
  34. 如申請專利範圍第33項之套組，其包含偵測抗體，其中該偵測抗體與CD59結合且其中該偵測抗體包含如申請專利範圍第19或20項之抗體。
  35. 如申請專利範圍第33項之套組，其中該偵測劑與GCD59醣基化之抗原決定位結合。
  36. 如申請專利範圍第35項之套組，其中該GCD59之醣基化抗原決定位包括GCD59之N-醣基化抗原決定位。
  37. 如申請專利範圍第28至36項中任一項之套組，其包含用於產生校準曲線之化合物。
  38. 如申請專利範圍第28至36項中任一項之套組，其包含至少一種緩衝液。
  39. 如申請專利範圍第38項之套組，其中該至少一種緩衝液包括用於接觸個體樣品之緩衝液。
  40. 如申請專利範圍第39項之套組，其中該用於接觸個體樣品之緩衝液包含下列至少一者：還原劑、氧化劑、二硫代蘇糖醇(DTT)和β-巰基乙醇(BME)。
  41. 如申請專利範圍第28至36項中任一項之套組，其包含一或多個內部對照組。
  42. 如申請專利範圍第41項之套組，其中該一或多個內部對照組包括一或多個血漿分析對照組。
  43. 如申請專利範圍第28至36項中任一項之套組，其包含下列一或多者：分析稀釋劑、共軛物稀釋劑及洗滌緩衝液。
  44. 如申請專利範圍第28至36項中任一項之套組，其中一或多種試劑係經凍乾。
  45. 一種偵測樣品中之標靶蛋白的方法，其中該標靶蛋白包含GCD59，該方法包含： 　　i. 取得該樣品； 　　ii. 將該樣品施加於底物(substrate)，該底物包含捕獲抗體，其中該捕獲抗體係選自下列至少一者：與CD59之N-醣基化抗原決定位結合之抗體、如申請專利範圍第19項之抗體及如申請專利範圍第20項之抗體； 　　iii. 將偵測抗體施加於該底物，其中該偵測抗體與標靶抗原決定位結合，該標靶抗原決定位包含GCD59之醣化或非醣化抗原決定位；and和 　　iv. 分析該底物是否存有該偵測抗體。
  46. 如申請專利範圍第45項之方法，其中該偵測抗體係選自如申請專利範圍第1至17項和第21至27項中任一項之抗體。
  47. 一種偵測樣品中之標靶蛋白之方法，其中該標靶蛋白包含GCD59，該方法包含： 　　i. 取得該樣品； 　　ii. 將該樣品施加於底物，該底物包含捕獲抗體，其中該捕獲抗體係選自如申請專利範圍第1至17項和第21至27項中任一項之抗體； 　　iii. 施加偵測抗體，其中該偵測抗體與標靶抗原決定位結合，該標靶抗原決定位包含GCD59之非醣化抗原決定位；and和 　　iv. 分析該底物是否存有該偵測抗體。
  48. 如申請專利範圍第47項之方法，其中該偵測抗體係選自如申請專利範圍第19或20項之抗體。
  49. 如申請專利範圍第47項之方法，其中該標靶抗原決定位包含GCD59之醣基化抗原決定位。
  50. 如申請專利範圍第49項之方法，其中該標靶抗原決定位包含GCD59之N-醣基化抗原決定位。
  51. 如申請專利範圍第45至50項中任一項之方法，其中該樣品為個體樣品。
  52. 如申請專利範圍第51項之方法，其中該個體樣品係選自下列至少一者：尿液、血液、血漿、血清、汗液和唾液。
  53. 如申請專利範圍第45至50項中任一項之方法，其中該樣品係以下列至少一者處理：還原劑、氧化劑、二硫代蘇糖醇(DTT)和β-巰基乙醇(BME)。
  54. 如申請專利範圍第45至50項中任一項之方法，其中該樣品為經稀釋的。
  55. 如申請專利範圍第54項之方法，其中該樣品係以約1:1至約1:1,000之比例稀釋。
  56. 一種偵測樣品中之標靶蛋白之方法，其中該標靶蛋白包含GCD59，該方法包含： 　　i. 取得該樣品，其中該樣品包含下列至少一者：細胞、組織和組織切片； 　　ii. 將偵測抗體施加至該樣品，其中該偵測抗體與標靶抗原決定位結合，該標靶抗原決定位包含GCD59之醣化抗原決定位；and和 　　iii. 分析該樣品中是否存有該偵測抗體。
  57. 如申請專利範圍第45至50項和56項中任一項之方法，其中該偵測抗體包含可偵測標記。
  58. 如申請專利範圍第57項之方法，其中該可偵測標記係選自由下列所組成之群組：生物素、鏈親和素(streptavidin)、抗生物素蛋白(avidin)、螢光標記、酵素標記、發光標記和放射性標記。
  59. 如申請專利範圍第45至50項和56項中任一項之方法，其中該偵測抗體係使用第二偵測劑來偵測，其中該第二偵測劑包含可偵測標記。
  60. 如申請專利範圍第59項之方法，其中該第二偵測劑為抗體。
  61. 如申請專利範圍第57項之方法，其中該可偵測標記係選自由下列所組成之群組：生物素、鏈親和素、抗生物素蛋白、螢光標記、酵素標記、發光標記和放射性標記。
  62. 如申請專利範圍第45至50項中任一項之方法，其中該底物係選自下列至少一者：分析盤、小珠、膜、傳導表面和傳導奈米顆粒。
  63. 如申請專利範圍第45至50項和56項中任一項之方法，其中該方法之全部或一部分係在照護點(point of care)進行。
  64. 如申請專利範圍第63項之方法，其中至少一部分之該方法係結合患者監測裝置進行。
  65. 如申請專利範圍第64項之方法，其中該患者監測裝置能夠接收及/或傳輸電子訊號。
  66. 如申請專利範圍第65項之方法，其中該患者監測裝置為選自下列至少一者之智慧型裝置：智慧型手機和智慧型手錶。
  67. 如申請專利範圍第57項之方法，其中該標靶蛋白之濃度或濃度當量係藉由測量至少一種與該可偵測標記相關聯之信號測定。
  68. 一種評估個體之方法，其包含： 　　i. 從該個體收集至少一個測試樣品； 　　ii. 進行如申請專利範圍第67項之方法，其中該樣品包含至少一個在(i)中收集之測試樣品； 　　iii. 進行如申請專利範圍第67項之方法，其中該樣品包含至少一個對照樣品；及 　　iv. 將在該至少一個測試樣品中之該標靶蛋白之濃度或濃度當量與在該至少一個對照樣品中偵測到之該標靶蛋白之濃度或濃度當量相比較。
  69. 診斷和監測個體中與糖尿病相關之適應症之方法，其包含進行如申請專利範圍第68項之方法，其中若在該至少一個測試樣品中之該標靶蛋白之濃度或濃度當量與在該至少一個對照樣品中偵測到之該標靶蛋白之濃度或濃度當量相差達到閾值，則該個體被診斷為患有該與糖尿病相關之適應症。
  70. 一種監測個體中之一或多種與糖尿病相關之適應症之方法，其中該個體具有一或多種與糖尿病相關之適應症，該方法包含： 　　i. 從該個體收集至少二個測試樣品，其中該至少二個測試樣品係在至少二個期間內獲得； 　　ii. 進行如申請專利範圍第67項之方法，其中該樣品包含至少二個在(i)中收集之測試樣品； and和 　　iii. 監測在該至少二個測試樣品中之該標靶蛋白之濃度或濃度當量之間的變化。
  71. 如申請專利範圍第68或69項之方法，其中該方法係以伴隨式診斷法(companion diagnostic method)之一部分進行。
  72. 一種評估治療方法之有效性的方法，該方法包含如申請專利範圍第68至70項中之一或多項之方法。
  73. 如申請專利範圍第72項之方法，其中該治療方法包含對至少一位個體投予至少一種治療性化合物。
  74. 一種對個體分派風險等級之方法，其中該風險等級包含與發展一或多種與糖尿病相關之適應症有關的風險等級，該方法包含： 　　i. 進行如申請專利範圍第68項之方法； 　　ii. 將在該至少一個測試樣品中之該標靶蛋白之濃度或濃度當量與在該至少一個對照樣品中偵測到之該標靶蛋白之濃度或濃度當量相比較；and和 　　iii. 基於在(ii)中進行之比較對該個體分派該風險等級。
  75. 如申請專利範圍第74項之方法，其中該個體為下列至少一者：懷孕個體、懷疑懷孕之個體和能夠懷孕之個體。
  76. 如申請專利範圍第75項之方法，其中該與糖尿病相關之適應症為妊娠糖尿病。
  77. 一種裝置，其係用於進行如申請專利範圍第45至76項中任一項之方法的全部或部分。
  78. 如申請專利範圍第77項之裝置，其中該裝置為可穿戴裝置。
  79. 如申請專利範圍第78項之裝置，其中該可穿戴裝置包含腕帶。
  80. 如申請專利範圍第79項之裝置，其中該可穿戴裝置為智慧型手錶。
  81. 如申請專利範圍第69項之方法，其中該標靶抗原決定位包含GCD59之N-醣基化抗原決定位，該GCD59之N-醣基化抗原決定位包含GCD59之殘基N18，其中殘基N18為N-醣基化的。
  82. 如申請專利範圍第81項之方法，其中該一或多種與糖尿病相關之適應症係選自下列至少一者：糖尿病、糖尿病之器官特異性併發症之傾向；臨床前期糖尿病周圍神經病變；臨床前期糖尿病腎病；臨床前期糖尿病視網膜病變；和臨床前期糖尿病血管疾病。
  83. 一種偵測N-醣基化GCD59之方法，該方法包含： 　　i. 使用如申請專利範圍第1至17項和21至27項中任一項之抗體分離GCD59；and和 　　ii. 分析在步驟(i)中分離出之GCD59以偵測是否存有N-醣基化殘基。
  84. 如申請專利範圍第83項之方法，其中步驟(ii)包括使用質譜法。
  85. 如申請專利範圍第83項之方法，其中步驟(ii)包括使用能與該N-醣基化殘基結合之凝集素。
  86. 如申請專利範圍第83至85項中任一項之方法，其中該N-醣基化殘基為GCD59之殘基N18。
  87. 一種鑑定CD59 K41醣化抑制劑之方法，其包含： 　　i. 將至少一個樣品與至少一種測試化合物接觸，其中該至少一個樣品包含CD59和適合K41醣化之條件； 　　ii. 測定在該至少一個樣品中之GCD59 的濃度或濃度當量；and及 　　iii. 若步驟(i)造成在步驟(ii)中測定之GCD59的濃度或濃度當量降低，則該至少一種測試化合物中之一或多者被鑑定為CD59 K41醣化之抑制劑。
  88. 如申請專利範圍第87項之方法，其中步驟(ii)包括使用如申請專利範圍第1至17和21至27項中任一項之抗體。
  89. 如申請專利範圍第87或88項之方法，其中該至少一種測試化合物係選自下列一或多者：小分子、胜肽、合成構築體、融合蛋白、適體(aptamer)、核酸和抗體。
  90. 一種抑制劑，其係根據如申請專利範圍第87至89項中任一項之方法研發。
  91. 一種載體，其編碼如申請專利範圍第1至17項中任一項之抗體或其一或多個片段。
  92. 一種重組抗體，其係從如申請專利範圍第91項之載體產生。
  93. 一種細胞，其包含如申請專利範圍第91項之載體。
  94. 一種抗體，其係從如申請專利範圍第93項之細胞產生。
  95. 一種如申請專利範圍第90項之抑制劑於製造用於治療與糖尿病相關之適應症的藥物之用途。
  96. 如申請專利範圍第95項之用途，其中該與糖尿病相關之適應症係選自下列一或多者：補體功能障礙、溶血性疾病、陣發性夜間血紅蛋白尿、非典型溶血性尿毒症候群、傷口癒合、與器官移植相關之併發症、血管適應症及與年齡相關之黃斑變性。
  97. 一種對妊娠個體分派風險等級之方法，其中該風險等級包含與發展出一或多種與GDM相關之病況有關之風險等級，該方法包含： 　　i. 從該妊娠個體之妊娠載體收集至少一個測試樣品； 　　ii. 使用分析來測定該測試樣品中之GCD59之水準，其中該分析法利用如申請專利範圍第20項之捕獲抗體和如申請專利範圍第22項之偵測抗體；and及 　　iii. 基於在該測試樣品中測定之該GCD59之水準來分派該與發展該一或多種與GDM相關之病況有關的風險等級。
  98. 如申請專利範圍第97項之方法，其中該一或多種與GDM相關之病況係選自下列一或多者：巨大胎兒(macrosomia)、過期妊娠(large gestational age)(LGA)、出生缺陷、產傷、高膽紅素血症、低血糖症、癲癇發作和死產。
  99. 如申請專利範圍第45至76、81至83、85至89、97或98項中任一項之方法，其包含使用平台技術。
  100. 如申請專利範圍第99項之方法，其中該平台技術包含自動化平台技術。
TW107113049A 2017-04-21 2018-04-17 糖尿病相關應用之方法及抗體 TW201902927A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762488346P 2017-04-21 2017-04-21
US62/488,346 2017-04-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201902927A true TW201902927A (zh) 2019-01-16

Family

ID=63856388

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW107113049A TW201902927A (zh) 2017-04-21 2018-04-17 糖尿病相關應用之方法及抗體

Country Status (7)

Country Link
US (1) US11866506B2 (zh)
EP (1) EP3612625A4 (zh)
JP (2) JP7303182B2 (zh)
AU (1) AU2018255244A1 (zh)
SG (1) SG11201909708VA (zh)
TW (1) TW201902927A (zh)
WO (1) WO2018195008A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7303182B2 (ja) 2017-04-21 2023-07-04 メリタス エルエルシー 糖尿病関連用途のための方法及び抗体
CN112924682B (zh) * 2019-12-05 2023-02-10 张曼 尿液纤维蛋白原α链蛋白及其多肽片段在正常妊娠中的应用
CN112904009B (zh) * 2021-02-19 2022-03-18 山东莱博生物科技有限公司 一种检测糖基化cd59的磁性微球检测试剂盒及其应用
WO2022241236A2 (en) * 2021-05-13 2022-11-17 Mellitus, Llc Methods and reagents for protein analysis

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4208479A (en) 1977-07-14 1980-06-17 Syva Company Label modified immunoassays
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
FR2619568B1 (fr) 1987-08-21 1989-07-07 Centre Nat Rech Scient Polymeres derives du polystyrene, leurs procedes de preparation et leurs applications pour l'analyse et la purification de molecules d'origine biologique
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB9110962D0 (en) 1991-05-21 1991-07-10 Ici Plc Process
EP1136556B1 (en) 1991-11-25 2005-06-08 Enzon, Inc. Method of producing multivalent antigen-binding proteins
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
AU670108B2 (en) 1992-09-11 1996-07-04 Becton Dickinson & Company Improved antibodies to plasmodium falciparum
US5670377A (en) 1996-03-14 1997-09-23 Sansum Medical Research Foundation Method of diagnosing gestational diabetes
US6348584B1 (en) 1996-10-17 2002-02-19 John Edward Hodgson Fibronectin binding protein compounds
JP3614866B2 (ja) 1997-06-12 2005-01-26 リサーチ コーポレイション テクノロジーズ，インコーポレイティド 人工抗体ポリペプチド
US7439330B2 (en) * 2000-05-08 2008-10-21 President And Fellows Of Harvard College Anti-glycated CD59 antibodies and uses thereof
US6835545B2 (en) 2000-05-08 2004-12-28 President And Fellows Of Harvard College Methods, products and treatments for diabetes
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
GB0124317D0 (en) * 2001-10-10 2001-11-28 Celltech R&D Ltd Biological products
US7460960B2 (en) 2002-05-10 2008-12-02 Epitome Biosystems, Inc. Proteome epitope tags and methods of use thereof in protein modification analysis
WO2004045520A2 (en) 2002-11-15 2004-06-03 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
ES2367302T3 (es) 2002-12-23 2011-11-02 Schering Corporation Usos de la citoquina il-23 de mamífero; reactivos relacionados.
GB2409456B (en) 2003-10-30 2006-01-04 Proimmune Ltd Oligomeric receptor ligand pair member complexes
EP1789449A1 (en) 2004-06-17 2007-05-30 The President and Fellows of Harvard College Anti-glycated cd59 antibodies and uses thereof
NZ582684A (en) 2004-06-18 2011-05-27 Ambrx Inc Use of an antibody or binding fragment thereof comprising a non naturally encoded amino acid coupled to a linker
US7833725B2 (en) 2005-01-06 2010-11-16 President And Fellows Of Harvard College Mass spectrometric methods and products
CA2589860A1 (en) 2005-01-24 2006-08-03 Amgen Inc. Humanized anti-amyloid antibody
JP2008541015A (ja) 2005-04-28 2008-11-20 ベンタナ・メデイカル・システムズ・インコーポレーテツド ナノ粒子コンジュゲート
US20070122404A1 (en) * 2005-11-17 2007-05-31 O'keefe Theresa L Humanized immunoglobulin reactive with alpha4beta7 integrin
WO2007123708A2 (en) 2006-03-31 2007-11-01 Epitome Biosystems, Inc. Post translational modification pattern analysis
WO2007133623A2 (en) 2006-05-10 2007-11-22 Biopeptides Corporation Peptide diagnostic agent for lyme disease
CN101573381A (zh) * 2006-11-09 2009-11-04 Irm责任有限公司 激动剂TrkB抗体及其用途
WO2008137165A1 (en) * 2007-05-07 2008-11-13 President And Fellows Of Harvard College Anti-glycated cd59 antibodies and uses thereof
JPWO2009051220A1 (ja) * 2007-10-19 2011-03-03 イムナス・ファーマ株式会社 Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体およびその利用
UA104132C2 (en) * 2007-11-13 2014-01-10 Тева Биофармасьютикалз Юесей, Инк. Humanized antibodies against tl1a
EP2575882B1 (en) * 2010-06-02 2017-11-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Humanized monoclonal antibodies and methods of use
WO2012027555A2 (en) * 2010-08-25 2012-03-01 President And Fellows Of Harvard College Glycated cd59 peptides, their preparation, and uses thereof
WO2012109538A2 (en) 2011-02-10 2012-08-16 President And Fellows Of Harvard College Surrogates of post-translationally modified proteins and uses thereof
EP2543679A1 (en) * 2011-07-08 2013-01-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies for the treatment and prevention of thrombosis
WO2013078122A1 (en) 2011-11-22 2013-05-30 President And Fellows Of Harvard College Diabetes diagnosis through the detection of glycated proteins in urine
CA3023553A1 (en) 2012-11-06 2014-05-15 Scholar Rock, Inc. Compositions and methods for modulating cell signaling
HUE037586T2 (hu) * 2012-12-24 2018-09-28 Abbvie Inc Prolaktin receptor kötõ proteinek és alkalmazásaik
WO2015084994A1 (en) 2013-12-03 2015-06-11 President And Fellows Of Harvard College Methods and reagents for the assessment of gestational diabetes
JP7303182B2 (ja) 2017-04-21 2023-07-04 メリタス エルエルシー 糖尿病関連用途のための方法及び抗体

Also Published As

Publication number Publication date
US20210284751A1 (en) 2021-09-16
US11866506B2 (en) 2024-01-09
JP7303182B2 (ja) 2023-07-04
AU2018255244A1 (en) 2019-10-31
SG11201909708VA (en) 2019-11-28
JP2023078133A (ja) 2023-06-06
EP3612625A4 (en) 2021-08-18
JP2020517306A (ja) 2020-06-18
WO2018195008A1 (en) 2018-10-25
EP3612625A1 (en) 2020-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210107972A1 (en) Human islet amyloid polypeptide (hiapp) specific antibodies and uses thereof
TW201902927A (zh) 糖尿病相關應用之方法及抗體
CN103154027B (zh) 可溶性人st-2抗体和分析法
JP6542219B2 (ja) 妊娠性糖尿病の評価のための方法および試薬
US20190315846A1 (en) Antibodies to Human Alpha-Synuclein
CN102596247B (zh) 新蛋白
WO2022241236A2 (en) Methods and reagents for protein analysis
US20230151089A1 (en) Novel alpha-synuclein binding antibodies, or antigen binding portions thereof
ES2626491B1 (es) Anticuerpos monoclonales frente a bambi y uso para tratamiento de enfermedades inflamatorias
JP3337523B2 (ja) β−Ｎ−アセチルグルコサミニダ−ゼのサンドイッチ免疫測定法、および該測定法に用いるモノクロ−ナル抗体
CN114867745A (zh) Asic1通道拮抗剂抗体
BR112015005549B1 (pt) Anticorpo anti-polipeptídeo, polinucleotídeo, vetor, microorganismo trasgênico, composição, método in vitro para diagnóstico e kit
CN106536552A (zh) 能够拮抗胰岛淀粉样多肽(IAPP)诱导的β细胞损伤和葡萄糖耐量受损的新的化合物
UA112757C2 (uk) Комбінована фармацевтична композиція та метод лікування діабету та порушення обміну речовин