TW201813646A - 納美芬(nalmefene)在非酒精性脂肪肝炎(nash)的應用 - Google Patents

Abstract

本發明涉及嗎啡喃 (morphinans)，如納美芬 (nalmefene) 和納曲酮 (naltrexone) 及其相關衍生物，其藥物製劑及其用於預防和治療NASH，NAFLD和/或ASH的新用途。

Description

納美芬(NALMEFENE)在非酒精性脂肪肝炎(NASH)的應用

參照申請案 本案申請權利要求的依據為合併於2016年4月22日美國臨時案號62/326,435及2016年9月16日美國臨時案號62/395,436的申請案。

本發明係有關於納美芬(NALMEFENE)在非酒精性脂肪肝炎(NASH)的應用。

背景技術 本發明涉及一種使用嗎啡喃的新方法。本發明涉及納曲酮 (naltrexone) 或17-環丙基甲基-4,5α-環氧-6-氧代嗎啡喃-3,14-二醇和納美芬 (nalmefene)及其類似物及其藥物製劑及其用於預防和治療NASH (非酒精性脂肪性肝炎)，NAFLD (非酒精性脂肪性肝病) 和ASH (酒精性脂肪性肝炎) 的用途。

在PCT公開申請文件WO 03/097608中，我們已經描述了阿片樣物質和阿片樣物質化合物的一些新的醫學用途，包括納曲酮 (naltrexone) 和納美芬 (nalmefene)。在PCT公開申請文件WO WO2006029167中，我們已經描述了17-環丙基甲基-4,5α-環氧-6-亞甲基嗎啡喃-3,14-二醇的許多新的醫學用途。

中樞神經系統神經退行性疾病研究的最新進展已經表明，阿片樣物質可能在調節小膠質細胞中促炎細胞因子，花生四烯酸的促炎細胞因子，代謝產物和免疫調節因數等炎症因子的表達方面發揮作用， 相關神經變性 [Adv. Exp. Med. Biol. 1996 , 402: 29-33;Mov. Disord. 1997 ;12: 855-858 ] 和神經性疼痛 [Hutchinson MR , et al. Eur J Neurosci. 2008; 28:20-299 ]。中國專利申請 (CN102048733) 聲稱使用由通過注射納美芬 (nalmefene) 來治療高脂肪飲食引起的脂肪肝。

在本申請中，我們公開了納美芬 (nalmefene) 和納曲酮 (naltrexone) 已經證明其在預防和治療NAFLD，NASH和ASH方面的功效。

本發明提供了一種預防NAFLD炎症性肝損傷及其進展為NASH的方法。

新興的肥胖和代謝綜合徵流行導致了NASH患病率的上升，現在被認為是西方世界慢性肝病的主要原因 (Clark, J.M., et al., Nonalcoholic fatty liver disease. Gastroenterology,2002 ; 122: 1649-1657 )。 NASH影響2%至5%的美國人。另外10%至20%的美國人在肝臟中有脂肪，但沒有炎症或肝臟損害，稱為“脂肪肝”。雖然在肝臟中脂肪不正常，但其本身可能幾乎不造成傷害或永久性損傷。由血液檢測結果或肝臟掃描若懷疑肝臟發炎及脂肪堆積，便稱這種情況為非酒精性脂肪性肝病 (NAFLD)。如果在這種情況下進行肝穿刺切片，則可準確診斷並分辨NASH，以及單純的脂肪肝。 NASH或NAFLD分別與ASH (酒精性肝炎) 或ALD (酒精性肝病)相似，但不同的是NASH與NAFLD發生在少量飲酒或不飲酒的病人群中[Ludwig, J., et al., Nonalcoholic steatohepatitis: Mayo Clinic experiences with a hitherto unnamed disease. Mayo Clin Proc,1980 ; 55: p. 434-438 ]。

雖然NASH的潛在原因尚不清楚，但致病因子如胰島素抗性，脂肪細胞 所釋放的毒性炎症蛋白(細胞激素)，以及肝細胞中的氧化壓力 (肝細胞惡化或死亡) 可能促進NASH的病灶 (http:/digestive.niddk.nih.gov/ddiseases/pubs/nash)。

導致脂肪肝疾病發病和惡化的確切機制尚不完全清楚。多個研究顯示，在肝脂肪症狀會使動物對如內毒素血症等刺激反應更劇烈，並產生更大的組織損傷。。目前的廣泛認知，脂肪肝在受到諸如氧化壓力或內毒素血症的“第二次刺激”(second hit) 將容易變成脂肪性肝炎 (NAFLD轉變為NASH) (Wanless IR, Shiota K. The pathogenesis of nonalcoholic steatohepatitis and other fatty liver diseases: a four-step model including the role of lipid release and hepatic venular obstruction in the progression to cirrhosis. Semin Liver Dis.2004 ; 24:99-106; Duvnjak M, et al. Pathogenesis and management issues for non-alcoholic fatty liver disease. World J Gastroenterol.2007 ; 14;13:4539-4550 )。最為普遍接受的理論是，NAFLD經由“雙擊”(two hit) 機制進展，其中的第一擊 (first hit) 是肝細胞中的脂質積累 (脂肪肝) (Day CP, James OF. Steatohepatitis: a tale of two “hits”? Gastroenterology 1998;114 : 842-845; Sanches SC et al. Nonalcoholic Steatohepatitis: A Search for Factual Animal Models. Biomed Res Int.2015 ;2015:574832 )。第二擊則被認為是氧化壓力改變、內毒素血症或發炎反應。多次重複的炎症反應會導致肝損傷和纖維化的發生。雖然脂肪肝疾病的具體性治療是通過體重減輕和胰島素抗性恢復來反轉脂肪肝，但在許多情況下，這種方法通常不全面甚至不實際。

目前，FDA尚未核准任何藥物來治療脂肪肝疾病如NASH或ASH。 於NASH患者進行的臨床實驗療法評估包括抗氧化劑 (例如維生素E)，硒和甜菜鹼，以及新型的抗糖尿病藥物。現在醫學，製藥行業和法規機構都意識到此特定藥物治療的需要，同時患者也引頸期盼著此類藥物的上市。因此此類藥物開發方式，已從已上市糖尿病藥物[如吡格列酮(pioglitazone)或二甲双胍(metformin)]、保肝類藥物[如配妥西菲林(pentoxifylline)、熊去氧膽酸(ursodeoxycholic acid)或抗氧化劑]的學名藥製造，演變為開發具有疾病專一性，配合多重途徑阻斷，來用於治療NASH並改正這種疾病中肝損傷與纖維化。目前開發階段最接近上市的兩種分子，即奧貝膽酸(obeticholic acid)和艾拉發瑞納(elafibranor)在改善肝組織學方面表現出令人鼓舞的結果。使用改善肝纖維化的奧貝膽酸和改良血糖與脂質分佈的艾拉發瑞納，兩種化合物似乎都能清除NASH [Ratziu V., Novel Pharmacotherapy Options for NASH. Dig Dis Sci. 2016 Mar 22. (Epub ahead of print) ]。

蛋氨酸和膽鹼缺乏 (MCD) 飲食小鼠模型是一種被廣泛接受的NASH動物模型，如上所述 (參見Rivera CA, et al. 2007; Sanches SC et al. Nonalcoholic Steatohepatitis: A Search for Factual Animal Models. Biomed Res Int.2015 ;2015:574832 )。 因此，MCD飲食小鼠被廣泛用於測試化合物對NAFLD / NASH的肝臟保護作用。

在MCD合併LPS刺激實驗中，納美芬 (Nalmefene) 證實了在MCD大鼠模型中預防炎性肝損傷的效果。

酒精性肝病 (ALD) 是全世界肝臟相關發病率和死亡率的主要原因 (Arsene et al. Hepatol Int.2016 ; 10:538-552 )。 ALD的臨床和病理光譜包含從酒精性脂肪肝病 (酒精性脂肪變性) 到肝硬化 (Saberi et al. J Clin Translat Hepatol.2016 ; 4:113-122 )。 ALD可分為酒精誘發的脂肪變性 (微囊泡，大泡)，酒精性脂肪性肝炎 (ASH) 和酒精性肝硬化。 ALD的病理類似於NAFLD / NASH。 ALD和NAFLD具有相似的病理狀況，並且已經被描述為在臨床環境中共存 (Toshikuni et al World J Gastroenterol 2014;20:8393–8406; Brunt and Tiniakos. World J Gastroenterol 2010;16:5286–5296)。酒精的急性和慢性攝入導致動物模型和人類門靜脈和全身水平的內毒素的強烈升高 (Parlesak et al. J Hepatol2000 ; 32:742–747 )。內毒素(LPS，細菌產物)是酒精性肝病肝損傷的重要因子，由使用抗生素消除革蘭氏陰性細菌後改善的酒精性肝損傷，以及長期酒精暴露後肝臟對於LPS誘導的肝損傷的敏感性增加可以證明。內毒素的升高似乎主要由兩種機制引起。首先，酒精消耗導致腸胃道上端的細菌群相及數量變化 (Hauge et al. Digestion1997 ; 58:591–595 )。第二，酒精攝入會破壞腸道屏障，導致腸漏症，進而允許增加LPS進入門靜脈循環 (Bjarnason et al. Lancet1984 ; 1:179–182 )。目前，庫弗式細胞(Kupffer cell)已被證實為LPS在酒精誘發的肝損傷中的關鍵細胞(Adachi et al. Hepatology1994 ; 20:453–460 )。 ALD的實驗模型顯示，通過腸道屏障的細菌產物轉移到門靜脈循環進入肝臟引發炎症反應，並導致脂肪性肝炎。管理ASH的最有效措施是酒精飲酒者戒酒。類固醇在治療嚴重的ASH方面有一些短期的好處，但由於許多副作用，長期的效果不清楚。因此，迫切需要將發現工作重點放在ASH的有效治療預與防措施上。

發明摘要 本發明涉及嗎啡喃 (morphinan) 化合物及其藥物製劑及其用於預防和治療NASH (非酒精性脂肪性肝炎)，NAFLD (非酒精性脂肪性肝病) 和ASH (酒精性脂肪性肝炎) 的用途。

本發明涉及根據式 (I) 的嗎啡喃 (morphinan) 化合物在治療NALFD，NASH和ASH或用於藥物生產的條件下的用途，用於治療這些疾病，其中：(I) A可以是氫氧基 (OH) 或甲氧基 (OCH₃ )；R可以是氫原子 (H)，甲基 (CH₃ ) 或環丙基甲基(cyclopropylmethyl)；X是氧原子 (O)，Y是氧原子(O) 或亞甲基 (CH₂ )，Z可以是氫原子 (H) 或氫氧基 (OH)。 根據式 (I) 的化合物可以是其對映體，非對映異構體及其藥學上可接受的鹽類。

根據式 (I) 可以是以下結構之一的結構：(化合物 A) 特別傾向選的是化合物A（納美芬），其中A是氫氧基 (OH)，R是環丙基(cyclopropyl)，甲基 (CH₃ )，X是氧原子(O)，Y是亞甲基 (CH₂ )，Z是氫氧基 (OH) 的化合物 (I)。

根據式 (I) 可以是以下結構之一的結構：(化合物 B)

特別傾向選的是化合物B（納曲酮），其中A是氫氧基 (OH) 的化合物 (I)，R是環丙基甲基 (cyclopropylmethyl)，X是氧原子 (O)，Y是氧原子 (O)，Z是氫氧基 (OH)。

具體實施方式 根據本發明產出的治療或藥物包括用於預防或治療NASH（非酒精性脂肪性肝炎），NAFLD（非酒精性脂肪性肝病）和/或（ASH）酒精性脂肪性肝炎）的藥物。

根據本發明的其它實施方案，本發明涉及預防或治療NASH，NAFLD和/或ASH的方法，包括向有需要的受試者施用藥物組合物，其包含治療有效量的一種或多種指定的化合物。 現在將相對於本文所述的其它實施例更詳細地描述本發明的前述和其它方面。 應當理解，本發明可以以不同的形式實施，並且不應被解釋為限於本文所闡述的實施例。 而是提供這些實施例，使得本公開將是徹底和完整的，並且將向本領域技術人員充分地傳達本發明的範圍。

用於本發明的描述中的術語僅用於描述特定實施例的目的，而不意在限制本發明。 如在本發明和所附權利要求書的描述中所使用的，單數形式“一”，“一個”和“該”也旨在包括複數形式，除非上下文另有明確指出。

除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的普通技術人員通常理解的相同的含義。

本文引用的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻通過引用整體併入本文，用於與提及該參考文獻的句子和/或段落相關的教導。

本文所用的術語〝阿片樣物質〞是指顯示鴉片或嗎啡樣性質的化合物，包括作用劑和拮抗劑活性，其中這些化合物可與腦和其它組織中的立體特異性和飽和結合位點相互作用。 藥理性質以前包括嗜睡，呼吸抑制，情緒和精神上的變化，而不會造成意識喪失。 本文所用的術語“阿片樣物質”是指在結構和/或藥理學上與已知的阿片樣物質相似的化合物。

本文所用的〝治療 (treat or treating)〞是指對患有疾病的患者賦予益處的任何類型的治療，包括改善患者狀況 (例如，在一種或多種症狀中)，延遲進展的病情，預防或延遲疾病的發病等。

如本文所用，〝藥學上可接受的〞組成（例如鹽類，載體，賦形劑或稀釋劑）是指化合物或組合物適合於施用於受試者以實現本文所述的治療，而不會產生過度有害的副作用疾病的嚴重程度和治療的必要性。

如本文所用，術語〝預防〞是指在展示相關症狀之前向受試者施用藥物以降低其自身表現的疾病的風險，或者如果其顯示出自身，則降低其嚴重性。

本文所用的〝治療有效量〞是指預防，延遲或降低感興趣病症的嚴重性所需的量，並且還包括增強正常生理功能所需的量。

本發明的活性化合物可以是水溶性的，並且還可以包含已知的水溶性阿片樣物質和阿片樣物質衍生物。

本發明的化合物可以具有不對稱碳原子，因此能夠作為對映體或非對映異構體存在。 因此，本發明的化合物包括本發明化合物的對映體和非對映異構體以及藥學上可接受的鹽類。

本發明的活性化合物可以單獨施用或與其它治療劑組合施用。 例如，本發明的活性化合物可以與現在已知或稍後鑒定的化合物共同使用，以用於預防和/或治療NASH，NAFLD和/或ASH。

如上所述，納美芬 (nalmefene) 和納曲酮 (naltrexone) 是市面上已知且可購得的。 本發明中使用的其它化合物可以通過常規化學方法或通過使用類似於PCT公開文件WO 03/097608中描述的技術的方法修飾納美芬 (nalmefene) 來獲得。

本文所用的術語〝活性劑〞包括該化合物的藥學上可接受的鹽類。藥學上可接受的鹽類是保留母體化合物的所需生物活性並且不產生不期望的毒理作用的鹽類。這些鹽的實例是 (a) 與無機酸形成的酸加成鹽類，例如鹽酸 (hydrochloric acid)，氫溴酸 (hydrobromic acid)，硫酸 (sulfuric acid)，磷酸 (phosphoric acid)，硝酸 (nitric acid) 等；與有機酸形成的鹽類，例如乙酸 (acetic acid)，草酸 (oxalic acid)，酒石酸 (tartaric acid)，琥珀酸 (succinic acid)，馬來酸 (maleic acid)，富馬酸 (fumaric acid)，葡萄糖酸 (gluconic acid)，檸檬酸 (citric acid)，蘋果酸 (malic acid)，抗壞血酸 (ascorbic acid)，苯甲酸 (benzoic acid)，丹寧酸 (tannic acid)，棕櫚酸 (palmitic acid)，藻酸 (alginic acid)，聚谷氨酸 (polyglutamic acid)，萘磺酸 (naphthalenesulfonic acid)，甲磺酸 (methanesulfonic acid)，對甲苯磺酸 (p-toluenesulfonic acid)，萘二磺酸 (naphthalenedisulfonic acid)，聚半乳醣醛酸 (polygalacturonic acid) 等;和 (b) 由元素陰離子如氯，溴和碘形成的鹽類。在其它具體實施方案中，用蘋果酸形成藥學上可接受的鹽類。在具體實施方案中，藥學上可接受的鹽類是用鹽酸 (hydrochloric acid) 形成的。

用於製備本發明組合物的活性劑也可以是藥學上可接受的活性劑游離鹼的形式。 因為化合物的游離鹼比其鹽類的溶解度低，所以使用游離鹼組合物來提供更持久的活性劑釋放到作用區域。 存在於尚未進入溶液的作用區域中的活性劑不能誘導生理反應，而是作為逐漸溶解的生物可利用藥物的儲存庫。藥物製劑

本發明的阿片樣物質和阿片樣物質化合物可用作藥物活性劑並且可以以散裝形式使用。 然而，這些化合物更適合配製成用於給藥的藥物製劑。 可以使用許多合適的藥物製劑中的任何一種作為使用本發明化合物的賦形劑。

應當理解，上述式的某些化合物可以具有不對稱碳原子，因此能夠作為對映異構體存在。 除非另有說明，本發明包括這樣的對映異構體，包括外消旋體。 單獨的對映異構體可以由對掌性化合物 (chiral) 起始原料合成，或外消旋物可以通過化學領域眾所周知的方法進行分離，例如掌性層析法 (chiral chromatography)，非對映鹽類的分段結晶 (fractional crystallization) 等。

本發明的化合物可以配製用於治療各種病症。在製備根據本發明的藥物製劑中，本發明的化合物及其生理學上可接受的鹽類，或其任何一種的酸衍生物 (以下稱為〝活性化合物〞) 與可接受的載體，載體必須在與製劑中任何其他成分相容的意義上是可接受的，並且不能對患者有害。載體可以是固體或液體，或兩者，傾向選與作為單位劑量製劑的化合物配製，例如錠劑，其可以含有0.5重量%至95重量%的活性化合物。在一個具體實施方案中，藥物組合物包含小於80重量%的活性化合物。在其它具體實施方案中，藥物組合物包含小於50重量%的活性化合物。每種活性化合物中的一種或多種可以併入本發明的製劑中，其可以通過任何已知的藥學技術製備，所述技術基本上由混合組分，任選地包括一種或多種輔助成分組成。

本發明的製劑包括適合於口服，直腸，局部，口腔 (例如，舌下)，腸胃外 (例如皮下，肌肉，皮內或靜脈內) 和經皮給藥，儘管在任何給定情況下最合適的途徑將取決於所治療病症的性質和嚴重程度以及正在使用的特定活性化合物的性質。

適合於口服給藥的製劑可以以離散的單位呈現，例如膠囊，密封裝錠劑，錠劑，糖衣錠或糖漿，每個含有預定量的活性化合物；作為粉末或顆粒；作為在水性或非水性液體中的溶液或懸浮液；或作為油包水或油包水乳液。這樣的製劑可以通過任何合適的藥學方法來製備，其包括使活性化合物和合適的載體 (其可以含有如上所述的一種或多種輔助成分) 結合的步驟。

通常，本發明的製劑通過將活性化合物與液體或細碎固體載體或兩者均勻且緊密地混合而製備，然後如果需要，將所得混合物成形。 例如，可以通過壓縮或模製含有活性化合物的粉末或顆粒，任選地與一種或多種輔助成分來製備錠劑。 壓縮錠劑可以通過在合適的機器中以自由流動形式壓縮化合物來製備，所述化合物例如任選地與黏合劑，潤滑劑，惰性稀釋劑和/或表面活性/分散劑混合的粉末或顆粒。 模製錠劑可以通過在合適的機器中模製用惰性液體黏合劑潤濕的粉末化合物來製備。

適用於頰部 (舌下) 使用的製劑，包括在調味基質中通常包含活性化合物的錠劑，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠; 以及在惰性基質如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中包含該化合物的錠劑。

本發明適用於腸胃外給藥的製劑包括活性化合物的無菌水性製劑，該製劑的傾向與預期接受者的血液成等滲透壓狀態。 這些製劑可以通過皮下，靜脈內，肌肉或皮內注射來使用。 製備方式可為將化合物與水或甘氨酸緩衝液混合併，得到與血液溶等滲的無菌液。

適合於直腸給藥的製劑傾向以單位劑量栓劑存在。 這些可以通過將活性化合物與一種或多種常規固體載體 (例如可可脂) 混合，然後使所得混合物成形來製備。

適於局部使用於皮膚的製劑傾向採用軟膏、霜劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油劑的形式。

適於經皮給藥的製劑可以作為離散貼片提供，其適於與受體的表皮長時間保持緊密接觸。 適用於經皮給藥的製劑也可以通過離子電滲法遞送 (參見例如Pharmaceutical Research3(6) :318 (1986))，並且通常採取任選緩衝的活性化合物水溶液的形式。 合適的製劑包含檸檬酸鹽或bis \ tris緩衝液 (pH 6) 或乙醇/水，並含有0.01至0.2M活性成分。

本發明也可以配製成緩釋製劑。 緩釋組合物包括但不限於活性成分與任選地塗覆有擴散阻擋層以改變樹脂的剝離性能的離子交換樹脂結合的組合物。

可以使用的載體和/或稀釋劑包括凡士林，羊毛脂，甘油，植物油或脂肪乳劑，聚乙二醇，醇，透皮增強劑，天然或硬化油或蠟，以及它們的兩種或更多種的組合。使用方法

除了本文所述式的化合物之外，本發明還提供有用的治療方法。 例如，本發明提供了治療NASH，NALFD和/或ASH的方法。

根據本發明的說明性，鳥類包括雞、鴨、火雞、鵝、鵪鶉、雉雞、羚羊 (例如鴕鳥) 和馴養的鳥類 (例如鸚鵡和金絲雀)，並且包括鳥類。 雞和火雞是主要的類別。

根據本發明，受試者為哺乳動物是合適的。人類受試者是主要的選擇。根據本發明，受試者可以是任何性別和發育的任何階段 (即新生兒、嬰幼兒、青少年、青少年、成人) 的人類。

如上所述，本發明提供藥物製劑，其包含本文所述式的化合物或其藥學上可接受的鹽類，用於任何合適的施用途徑的藥學上可接受的載體，包括但不限於口服、直腸、局部、口腔、胃腸外、肌肉、皮內、靜脈內和經皮給藥。

根據本發明，本發明的方法包括將有效量的本發明的組合物 (如上所述) 給予受試者。組合物的有效量 (其用途在本發明範圍內) 將隨著受試者的不同而變化，並且將取決於受試者的年齡和狀況以及給藥途徑等因素。這樣的劑量可以根據本領域技術人員已知的常規藥理學程序確定。例如，本發明的化合物投予給受試者可以約從下限量0.01， 0.02，0.03，0.04，0.05，0.06，0.07，0.08，0.09，0.10，0.20，0.40，0.50，0.60，0.70，0.80，0.90，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0或10%，至約上限 10，11，12，13，14，15，16, 17, 18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40 ，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65 ，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90 ，91，92，93，94，95，96，97，98，99或100重量%的組合物。在一些實施方案中，化合物佔組合物重量的約0.05至約95%。 在其它實施方案中，化合物佔組合物重量的約0.05%至約60%。 在其它實施方案中，化合物佔組合物重量的約0.05%至約10%。

任何特定化合物的治療有效劑量將在不同化合物與不同患者之間略有不同，並且將取決於患者的狀況和給藥途徑。一般而言，約0.1至約50 mg/kg的劑量將具有治療功效，潛在地用於口服和/或噴霧劑使用的更高劑量。 化合物的毒性問題可能將靜脈注射給藥的劑量限制在較低水平的濃度，例如高達約10 mg/kg，所有重量均以化合物活性鹼的重量計算，包括使用鹽類的情況。 通常，約0.5 mg/kg至約5 mg/kg的劑量將用於靜脈內或肌肉給藥。 約1 mg/kg至約50 mg/kg的劑量可用於口服給藥。

在具體實施方案中，本發明的化合物可以每公斤動物體重約0.1毫克至約20毫克的每日劑量使用，其可以每日一次到每日四次或以持續釋放形式給予。在人體使用上，總日劑量可以在約1毫克至約1,400毫克的範圍內，例如每天1毫克至50毫克，在其它具體實施方案中，總日劑量在約10毫克至約 100毫克。 在其它實施方案中，適合於口服給藥的單位劑型可以包含約1毫克至約1,400毫克的化合物，任選與固體或液體藥物載體或稀釋劑混合。本發明的化合物，可以藉由參考相關文本和文獻和/或藉由熟知本領域的技術人員以常規實驗確定的治療病症進行治療，以適於使用於受試者的任何量使用。(參見，例如Remington，The Science And Practice of Pharmacy (第9版，1995)。然而，通常，當本發明的化合物以每公斤動物體重約0.1毫克至約20毫克的每日劑量使用時，傾向於以一次劑量分每天1至4次或以持續釋放劑型形式給藥。

前述內容是對本發明的說明，而不應被解釋為對本發明的限制。本發明由所附申請專利範圍限定，其中包括申請專利範圍的等同物。實施例 1. 本發明化合物的合成

化合物A（納美芬）和化合物B（納曲酮）為可於市場上購得的商品化產品。實施例2. 化合物A 降低在 庫弗式 細胞中由LPS 所誘發的TNF-α 和MAPK 磷酸化

肝臟炎症反應的主要源頭是庫弗式細胞。 已知TNF-α在肝臟損傷中起重要作用，其血漿濃度與肝臟損傷的嚴重程度相關。p38磷酸化是導致庫弗式細胞產生促炎介質的主要途徑之一的關鍵步驟。 2.1實驗設計

通過酶消化分離及密度梯度離心原理得到正常大鼠中的庫弗式細胞，並培養過夜。 然後用大腸桿菌LPS刺激它們，不用添加或添加化合物A 在2、4和6小時測量上清液中的TNF-α含量。 2.2結果

化合物A抑制在庫弗式細胞中由LPS所誘發的TNF-α。 [2小時後，細胞中TNF-α的過度積累干擾了實驗結果]。(圖1)。 化合物A還減少了庫弗式細胞中LPS誘導的p38 MAP激酶磷酸化 (圖2)。實施例3. 非酒精性脂肪性肝炎（NASH ）在STAM 模型的體內藥效研究

實驗程序 NASH的誘導是在雄性C57BL/6小鼠出生2天後，通過單次皮下注射200微克的鏈脲佐菌素(streptozotocin)溶液，並在出生後4週後餵食高脂肪飲食 (HFD，57kcal% 脂肪，Cat＃HFD32，CLEA Japan，Japan)。將動物分成每6隻一組，分別以每公斤口服給10毫升安慰劑 (1% 聚山梨醇酯80) 或每公斤給10毫克替米沙坦(Telmisartan)，一天給藥二次，給藥期間為第6至第9周。相同的，化合物A /納美芬 (NMN) 和化合物B/納曲酮 (NTX) 以每公斤5毫克皮下注射給藥，每天給藥兩次。受試動物在第9周犧牲。替米沙坦組平均體重在治療期間逐漸減少。在治療期間達到第9週之前，在NMN組中發現六隻受試小鼠中有一隻死亡。與對照組相比，替米沙坦組在小鼠犧牲當天平均體重顯示出減少。對照組與任一處理組之間的平均體重沒有顯著差異 (數據未顯示)。

來自對照組(vehicle)，替米沙坦，NTX和NMN的肝臟的蘇木精和伊紅(HE)染色區域的代表性顯微照片於圖3顯示。來自對照組的肝切片顯示出微泡和大泡脂肪沉積、肝細胞膨脹和炎症細胞浸潤的現象。 與對照組相比，替米沙坦、NMN和NTX組的NAS顯著降低 (NAFLD病理評分)。 表1a、NASH STAM模型組織病理學和NAFLD活性評分。 NAS：NAFLD活動評分（見表1b） 所有值代表5（納美芬）或6隻動物的平均值±SEM。 * P ＜0.05對對照組控制; 雙尾非配對t檢驗。 表1b、 NAS評分測量方法。

來自對照組的肝切片在肝小葉的中心區域顯示出增加的膠原沉積 (表1a；圖3)。 替米沙坦和NTX組纖維化面積 (天狼猩紅陽性區域) 明顯降低。與對照組相比，NMN治療組纖維化面積有減少的趨勢。實施例4. 甲硫氨酸- 膽鹼缺乏 (MCD) 飲食大鼠模型 ( 參見Szabo G. 等人2005) 4.1實驗設計

用0、5、10、20或30 mg/kg (4隻大鼠/組) 的劑量給予化合物A，每日一次口服管餵給予20隻Sprague Dawley大鼠，投與4個禮拜。在餵食期間，每週將所有動物餵食蛋氨酸/膽鹼缺乏 (MCD) 飲食 (來自Dyets，Inc) 五次，以產生飲食誘導的脂肪肝。在四周結束時，大鼠以腹膜內給藥 (IP) 2 mg/kg大腸桿菌內毒素 (LPS)，6小時後將大鼠安樂死並收集肝組織和血清。 肝臟與血液在大鼠死亡時被採取留存。 同時也留取組織學樣本。 4.2結果

如圖5所示，化合物A在脂肪肝大鼠 (n = 3/組; mpk = mg/kg) 中給予LPS後，證實了預防肝損傷功效的劑量相關性。在沒有化合物A治療的情況下，血清ALT水平為339 U/L。LPS導致ALT病理增加。以5和10 mg/kg的化合物A治療，發現ALT水平升高近50%，但由於該試驗劑量研究中的數量 (n = 3) 小，所以為達統計學顯著差異。然而，在20和30 mg/kg的情況下，ALT進一步減少，即使是低數量的測試量中，也是顯著的 (p ＜0.05)。以30 mg/kg 給藥的結果，ALT為 94.9±5.5 U/L。這些結果證明了化合物A在非酒精性脂肪性肝病大鼠中，內毒素血症後的肝損傷具有預防性藥效及藥物劑量相關性。

圖1 庫弗式細胞中TNF-α釋放的減少。

圖2 庫弗式細胞中由LPS誘導的p38 MAP激酶磷酸化的減少。在第5和第20分鐘監測p38 MAP激酶磷酸化；以100 ng/mL給藥的化合物A， n = 3重複。

圖3來自NASH的STAM模型的肝臟蘇木精-伊紅染色(HE-stained)切片的代表性顯微照片。從波恩氏溶液(Bouin’s solution)中預先加入的肝組織的石蠟塊切下切片，用 Lillie-Mayer's蘇木精和伊紅溶液染色。NAFLD活動評分 (NAS) 是根據Kleiner (Kleiner等人，2005) 的標準計算。

圖4A-4B NASH STAM 模型中的天狼猩紅陽性(Sirius red-positive)區域 (%)。a) 天狼猩紅顯微照片。為了讓膠原蛋白沉積可以被觀察到，經波恩氏溶液固定之左側肝切片以天狼猩紅(picro-Sirius red)溶液（Waldeck，Germany）染色。b) 對於纖維化區域的定量分析，這裡使用以200倍放大率的數碼相機 (DFC295; Leica，Germany) 捕獲天狼猩紅染色切片的明視野圖像，並且在5個視野/部分中的正面積使用ImageJ軟件測量 (美國國立衛生研究院)。 每個治療組的個體值和平均值±SD皆已標示。

圖5在脂肪肝大鼠肝損傷的預防效果具劑量相關性。如圖6所示，以n = 5/組，重複20mg的實驗，並產生與圖5相同的結果。

圖6 以20 mg/Kg給予化合物A於脂肪肝大鼠肝臟損傷的預防性藥效具劑量相關性(N =化合物A)。

圖7本實驗的化合物A/LPS處理的大鼠的組織病理學檢查評估的肝損傷。與對照相比，組織病理學顯示出，化合物A可預防治療大鼠的肝脂肪積累。圖7顯示出，化合物A改善了脂肪肝與LPS-treated脂肪肝損傷的肝損傷。在圖7中：a) 左上方[對照 (MCD處理的大鼠)]：表示有微囊脂肪肝，有一點微囊脂肪肝; b) 左底[MCD和化合物A處理的大鼠]：輕微的門靜脈慢性炎症 (輕度非特異性慢性肝炎)； c)右上：MCD + LPS 處理的大鼠：黑點 (箭頭) 正在死亡的肝細胞；光陰面積 (矩形) 表示壞死。有出血和門靜脈 (1區) 壞死。 沒有明顯的壅堵或構造損失; 和d) 右底[MCD + LPS +化合物A治療的大鼠]：輕微的門靜脈周圍慢性炎症。

Claims (13)

1. 一種預防或治療NAFLD、NASH或ASH的方法，其包括向有需要的人或動物施用治療量的式 (I) 化合物，其中：A是氫氧基 (OH) 或甲氧基 (CH₃ )。 R為氫原子 (H)，甲基 (CH₃ ) 或環丙基甲基(cyclopropylmethyl)；X是氧原子 (O)，Y是亞甲基 (CH₂ )或氧 (O)，Z是氧 (H)或氫氧基 (OH)，所述化合物以外消旋混合物或對映異構體，非對映異構體或藥學上可接受的鹽類的形式施用。
2. 如請求項1的方法，其中式 (I) 化合物具有以下結構之一：(化合物A) 。
3. 如請求項1的方法，其中式 (I) 化合物具有以下結構之一：(化合物B) 。
4. 如請求項1所述的方法，其中所述化合物是化合物A (納美芬)。
5. 如請求項1所述的方法，其中所述化合物是化合物B (納曲酮)。
6. 如請求項1所述的方法，其中所述方法是NAFLD。
7. 如請求項1所述的方法，其中所述方法是NASH。
8. 如請求項1所述的方法，其中所述方法是ASH。
9. 如請求項1的方法，其中所述藥物組合物是經由口服給予。
10. 如請求項1的方法，其中所述藥物組合物是經由腸胃外給藥。
11. 如請求項1所述的方法，其中所述化合物以1mg至100mg的每日劑量使用。
12. 一種根據式 (I) 化合物的用途，其中，(I) A是氫氧基 (OH) 或甲氧基 (OCH₃ )；R是氫原子 (H)，甲基 (CH₃ ) 或環丙基甲基(cyclopropylmethyl)；X是氧原子 (O)，Y是氧原子(O) 或亞甲基 (CH₂ )，Z是氫原子 (H) 或氫氧基 (OH)，其化合物可以是其對映體，非對映異構體及其藥學上可接受的鹽類用於製成藥物去治療或預防NAFLD，NASH或ASH。
13. 一種根據式 (I) 的化合物，其中，(I) A是氫氧基 (OH) 或甲氧基 (OCH₃ )；R是氫原子 (H)，甲基 (CH₃ ) 或環丙基甲基(cyclopropylmethyl)；X是氧原子 (O)，Y是氧原子(O) 或亞甲基 (CH₂ )，Z是氫原子 (H) 或氫氧基 (OH)，其化合物可以是其對映體，非對映異構體及其藥學上可接受的鹽類用於治療或預防NAFLD，NASH或ASH。