TW201731487A - 包含金盞花萃取物及百合球莖水性萃取物之抗污染複合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於包含金盞花水性萃取物、金盞花油性萃取物及百合水性萃取物之抗污染複合物，關於包含該抗污染複合物的美容局部組成物，及關於保護皮膚不受污染有害效應，特別是不受廢氣與重金屬有害效應，的美容方法。

Description

包含金盞花萃取物及百合球莖水性萃取物之抗污染複合物及其用途
本發明屬於局部美容產品，特別是皮膚美容產品，的技術領域。
特別地，本發明係關於包含金盞花(Calendula officinalis，也稱為金盞菊或Calendula arvensis，也稱為原野萬壽菊或野生萬壽菊)-這些金盞花種類在本發明中通稱為「金盞花」)水性萃取物、金盞花油性萃取物及百合(一般稱為六月百合或白百合)水性萃取物之抗污染複合物，關於包含該抗污染複合物的美容局部組成物，及關於保護皮膚不受污染有害效應，特別是不受廢氣與重金屬有害效應，的美容方法。
當今的環境狀況(例如暖化與空調、乾燥、暴露於陽光及空氣污染)對皮膚施加嚴重的壓力並且加速自然老化過程。廢氣排放似乎是其中最具破壞性之污染物。
主要的空氣污染物分成二大家族：一級污染物與二級污染物。
一級污染物直接由污染源(交通、工業、加熱、農業...)排放。其由二氧化碳、硫氧化物、氮氧化物、揮發性有機化合物(VOC)、懸浮微粒(PM)(特別是直徑低於10μm的PM(PM10)及低於2.5μm之PM(PM2.5))、金屬(特別是重金屬(鉛、汞、鎘...))組成。
二級污染物並非直接在大氣中排放而是來自氣體(例如臭氧、二氧化氮、二氧化硫、氨)與和其他次級粒子間的化學反應。
某些污染物，像二氧化氮或懸浮微粒，會是一級或二級污染物。
這些污染物全部對皮膚非常有害，皮膚是人體的最大器官且具有約2m2的表面積。氧化劑(例如臭氧或氮氧化物)是刺激物並且產生自由基。懸浮微粒通常是酸性且亦刺激-其可能導致皮膚保濕作用及組織氧化作用降低。主要來自廢氣排放之一氧化碳產生組織缺氧。二氧化硫造成皮膚皮脂膜改變及刺激。金屬(特別是重金屬，例如鎘、汞與鉛)會利用改變經酵素調節的反應之方式來阻礙細胞代謝作用。金屬使細胞對抗自由基之防衛措施的活性降低及促成DNA之氧化性破壞和細胞脂質損傷。因此，在皮膚上的污染有害效應影響細胞呼吸且由導致皺紋、緊緻性與彈性喪失、老人斑、乾燥等之皮膚加速老化所反映。
各種美容組成物已經被提出來預防由污染物(廢氣與/或重金屬)引起的有害效應，特別是含有植物萃取物之美容組成物。
例如，美國專利第2009/0035235號描述能對抗及預防空氣污染在皮膚上的效應之美容組成物，其包含二種植物萃取物：茶樹(Camellia sinensis)(白茶)與多肋稻槎菜(Lapsana communis)。含有此二種萃取物之組成物顯出抗自由基活性，其提供對抗由廢氣引起的脂質過氧化作用之保護及刺激粒腺體呼吸作用。
然而，隨著污染增加，還是需要用於有效對抗在皮膚上的污染物有害效應，特別是預防細胞呼吸作用退化和皮膚加速老化，的其他藥劑。
因此，本發明之目的是提供具有至少這些性質之抗污染美容局部組成物。
本發明之發明者所進行的研究業已證實至少一種金盞花水性萃取物、至少一種金盞花油性萃取物和至少一種百合球莖水性萃取物的組合物在預防在皮膚上的污染有害效應上具有加乘活性，特別是該組合物在刺激細胞呼吸作用及預防細胞能量程度減少上具有加乘活性。此外，該組合物在預防氧化壓力上具有高效活性。該性質特別有用於對抗在皮膚上的污染物有害效應，特別是廢氣與重金屬有害效應。最後，受測量之該組合物沒有細胞毒性效應。
金盞花是菊科中的一個約15至20種一年生與多年生草本植物之屬。原產於西南亞、西歐、馬卡羅尼西亞、地中海且非常耐負溫度(至多-20℃)。該屬中最常被栽種與使 用的成員是金盞菊(Calendula officinalis)。植物藥理學研究表明金盞花萃取物具有體外抗病毒性、抗基因毒性、與抗發炎性(Jimenez-Medina,E.,et al.,2006,BMC Cancer.6：6)。在本草學中，金盞花懸浮液或酊劑被局部性用於治療痤瘡、降低發炎、抑制出血、及鎮定受刺激組織(Duran,V et al.,Int J Tissue React.,2005,27(3),101-106和Pommier,P.,et al.,J.Clin.Onco.,2004,22(8)1447-1453)。新近，據報告，煎煮的金盞花花朵能被局部性用於燒傷、擦傷、及其他皮膚病，由於萬壽菊乙醇性萃取物之酚與類黃酮內容而顯出抗氧化劑與抗發炎活性(Kanlayavattanakul,Mayuree,and Nattaya Lourith,"An update on cutaneous aging treatment using herbs",Journal of Cosmetic and Laser Therapy,Accepted for publication:1-31,May 2015)。
百合是真百合科植物。原產於希臘、西巴爾幹半島及中東，且被引進歐洲其餘部分(法國、義大利、烏克蘭等)及北非、和加那利群島、墨西哥、及其他地方。百合在地面形成球莖，及和其他百合不同，冬天具有基部蓮座葉叢，其在夏季回枯。典型上達高度1.2公尺的多葉花莖在春末出現，且在夏季帶有可愛而頭痛的香花。花朵底色是白透黃色。球莖之化學組成(皂苷與多醣)賦予萃取物鎮定性、抗發炎性及保護性。萃取物也具有保濕性及緩和性(多醣)。可溶性多醣在皮膚上具有成膜(filmogenic)作用，其促進腦醯胺產生與皮膚保濕(參見例如EP 0 993 822)。 其作用是保水，因此維持角質層的適當含水率，進而改善皮膚彈性。
然而，並不知道至少一種金盞花水性萃取物、至少一種金盞花油性萃取物和至少一種百合球莖水性萃取物的組合物在預防在皮膚上的污染有害效應上具有加乘活性，特別是該組合物在刺激細胞呼吸作用及預防細胞能量程度減少上具有加乘活性。
因此，本發明之第一目的是一種抗污染複合物，其包含：- 至少一種金盞花花朵水性萃取物，- 至少一種金盞花花朵油性萃取物，及- 至少一種百合球莖水性萃取物。
本發明之第二目的是如本發明之第一目的所定義之複合物的用途，其係作為在美容局部組成物中用於對抗及實質上預防在皮膚上的污染有害效應之美容抗污染成分。
本發明之第三目的是一種局部美容組成物，其包含如本發明之第一目的所定義之抗污染複合物。
本發明之第四目的是一種美容保養方法，其係用於對抗及實質上預防該在皮膚上的污染有害效應，特別是廢氣與重金屬有害效應，該方法包含至少一個在有其需要之人皮膚上施加情感量的包含如本發明之第一目的所定義之抗污染複合物的局部美容組成物之步驟。
最後，本發明之第五目的是一種包含如本發明之第一目的所定義之抗污染複合物的美容局部組成物之非治療性 用途，其係用於對抗及實質上預防該在皮膚上的污染有害效應，特別是廢氣與重金屬有害效應。
金盞花花朵水性萃取物可利用下列方法製得：在室溫下把乾燥金盞花(Calendula officinalis或Calendula arvensis)花朵在純水中浸漬幾個小時(典型上從約10至24個小時)。在該浸漬步驟後，將花朵浸漬物在從約2至8℃範圍內(典型上約4℃溫度)的溫度下冷卻，然後過濾。這樣的金盞花花朵水性萃取物之乾物質含量一般是在從約2.5至約2.7重量%範圍內(當把100g乾燥花朵用於1L純水時)。該金盞花花朵水性萃取物成分之中包含丁香油素、香草酸與辛酸。該水性萃取物具有下列特性：
- 乾物質含量：2.5至2.7w.%
- pH：4.0至6.0
- 折射率：1.330至1.380
- 密度：0.950至1.050
- 異鼠李素(Isorhamnetin)-3-O-芸香糖苷：0.1至0.26g/l
金盞花花朵油性萃取物可利用下列方法製得：在室溫下把乾燥花朵在醇(例如乙醇)中浸漬幾個小時(典型上從約10至24個小時)。在該浸漬步驟後，將醇浸漬物過濾。這樣的金盞花花朵醇性萃取物之乾物質含量一般是在從約0.6至約0.8重量%範圍內(當把100g乾燥花朵用於1L乙醇時)。然後將油相加到濾液中，再把乙醇全部蒸發。油相的實例是辛酸三甘油脂/癸酸三甘油脂混合物(例如，以 名稱Miglyol®或Mirytol®所賣者)及油酸葵花油(Aldivia)。金盞花花朵油性萃取物成分之中包含類胡蘿蔔素、類黃酮與三萜二醇(triterpendiol)，特別是欵冬醇與欵冬醇酯。
白百合球莖水性萃取物可利用下列方法製得：在室溫下把冷凍後磨碎的白百合球莖在純水中浸漬幾個小時(典型上從約10至24個小時)。在該浸漬步驟後，將水性浸漬物煮沸幾個小時(典型上從約10至12個小時)然後熱過濾。這樣的白百合球莖水性萃取物之乾物質含量一般是在從約1.0至約1.4重量%範圍內(當把100g冷凍後磨碎的白百合球莖用於1L純水時)。然後將此水性萃取物濃縮到乾物質含量達到約50重量%。該白百合球莖水性萃取物成分之中包含30w.%的多醣(以乾物質總量為基準計)。
根據本發明之一個較佳實施方式，該抗污染複合物包含：- 從約0.5至30重量%(w.%)，更佳地從約15至25w.%的金盞花花朵水性萃取物，- 從約0.5至30w.%，更佳地從約15至25w.%的金盞花花朵油性萃取物，- 從約0.5至30w.%，更佳地從約15至25w.%的百合球莖水性萃取物，- 從約0.1至5w.%，更佳地從約2至5w.%的增稠劑，及- 足量的水使總重量達到100w.%。
增稠劑可選自常用來增加美容組成物黏度且為該領域之習知技藝者眾所周知的組分。在這樣的增稠劑中，聚合物類例如聚丙烯酸鹽(Carbomers)、聚丙烯醯胺、三仙膠、鹿角菜膠、纖維素衍生物(例如羥乙基纖維素)等，及礦物類增稠劑例如氧化矽。在這些增稠劑中，較佳為聚丙烯酸鹽。
根據本發明之一個特定且較佳實施方式，該抗污染複合物包含：- 約20w.%的金盞花花朵水性萃取物，- 約20w.%的金盞花花朵油性萃取物，- 約20w.%的百合球莖水性萃取物，- 從約2至5w.%的聚丙烯酸鹽，例如聚丙烯酸鈉，- 足量的水使總重量達到100w.%。
除上述成分外，根據本發明之抗污染複合物也可另包含一或多種添加劑，例如防腐劑、著色劑、香料等。
根據本發明之抗污染複合物可利用(例如)機械式攪拌器把各種萃取物、隨意的成分與水混合來簡單地製得。
在製備末端後，根據本發明之抗污染複合物可立即作為在美容局部組成物中用於對抗及實質上預防在皮膚上的污染有害效應之抗污染劑或被儲存以用於進一步用途。
根據本發明之一個較佳實施方式，在構成本發明之第三目的之局部美容組成物中的抗污染複合物量是在從約0.5至5w.%範圍內，更佳地在從約1.5至3w.%範圍內。根據本發明之一個特定且更佳實施方式，在該局部美 容組成物中的抗污染複合物量等於約2w.%。
除該抗污染複合物外，根據本發明之局部美容組成物可另包含一或多種能使該抗污染複合物的有利性質強化與/或完整之額外活性成分。在此之際，該領域之習知技藝者會當心此額外活性成分不妨礙或減少該抗污染複合物的有利性質。
該額外活性成分可選自：例如，植物萃取物(例如綠茶與葡萄籽萃取物)、大豆異黃酮素萃取物、維生素(例如維生素C(抗壞血酸)、維生素E(乙酸生育酚)與維生素B3(菸鹼醯胺))、玻尿酸、己間苯二酚、視黃醇、α羥酸、白藜蘆醇、腦醯胺、脂肪酸(例如亞麻油酸/次亞麻油酸)及磷脂等。
根據本發明之局部美容組成物在皮膚耐受性很好其呈現(無光毒性)且即使長時間施加在皮膚上也不引起任何全身作用。
該局部美容組成物可以被調整來局部施用的各種蓋倫(galenic)調配物形式呈現，特別是呈凝膠、乳液(例如乳霜或乳液)、水包油型或油包水型二相性乳液、面膜、洗液、濃溶液、精華液、奈米膠囊、脂質體、唇膏等形式，該蓋倫調配物另包含一或多種可和局部美容用途相容的傳統賦形劑或載體。根據本發明之局部美容組成物較佳為呈乳霜、精華液、洗液或凝膠形式。
特別地，根據本發明之局部美容組成物可另包含一或多種調配物劑或添加劑，例如，舉非限定性實例來說，浸 透劑(例如植烷三醇與辛基十二烷醇)、增稠劑(例如天然膠與合成聚合物)、界面活性劑、緩和劑(例如辛酸鯨蠟硬脂基酯、十四烷酸異丙酯、異壬酸鯨蠟硬脂基酯)、聚二甲基矽氧烷(dimethicone)、環甲基矽氧烷(cyclomethicone)、乳化劑(例如聚甘油衍生物)、防腐劑(例如苯氧基乙醇與脫氫乙酸)、油類、UV-A與UV-B濾光劑、顏料(例如二氧化鈦與二氧化鋅)、色素、成膜劑、礦物裝料、香料等。
根據如本發明之第五目的之美容保養方法，可一日一次或二次在有其需要之人皮膚上，特別是在臉上施加該局部美容組成物。
提供以下實施例作舉例用且不能解釋為對本發明之範圍的限制。以下實施例係關於：抗污染複合物之製備、根據本發明之抗污染複合物的加乘抗細胞毒性及其對能量代謝作用之效應的評估、該抗污染複合物對ATP合成速率的效應之評估、該抗污染複合物的抗自由基性之評估、及本發明中包含的局部美容組成物。
[實施例] 實施例1：根據本發明之抗污染複合物的製備 1.金盞花花朵水性萃取物之製備
在室溫下把100朵乾燥金盞花(Calendula officinalis)花朵在1L純水中浸漬12個小時。然後將浸漬物冷卻到4℃的溫度，然後在濾紙上過濾。
得到具有下列特性之金盞花水性萃取物：
- 乾物質含量：2.5至2.7w.%
- pH：5
- 折射率：1.350
- 密度：1.050
- 異鼠李素-3-O-芸香糖苷：0.15g/l
2.金盞花花朵油性萃取物之製備
在室溫下把100朵乾燥金盞花(Calendula officinalis)花朵在1L乙醇中浸漬12個小時，然後在濾紙上過濾。濾液之乾物質含量等於0.8w.%。然後將500mL的BASF公司販售的辛酸三甘油脂/癸酸三甘油脂混合物(商品名稱Mirytol® 318)加到濾液中，在約60℃溫度下於旋轉真空蒸發器中由混合物中蒸發出乙醇。金盞花花朵油性萃取物具有下列特性：
- 折射率：1.440至1.460
- 過氧化物指數：5.00
- 酸指數：5.00
3.百合球莖水性萃取物之製備
將100g新鮮百合球莖在研缽中磨碎，然後在4℃溫度下於1L純水中浸漬12個小時。然後把混合物煮沸12個小時及在濾紙上熱過濾。濾液之乾物質含量是1.4w.%。然後將所產生的濾液利用蒸發方式來濃縮到乾物質含量達 到50w.%為止。在此濃縮物中的多醣量是30w.%(以乾物質總含量為基準計)。
4.抗污染複合物之製備
製得具有下列組成的根據本發明之第一目的之抗污染複合物：
- 步驟1中製得之金盞花花朵水性萃取物 20w.%
- 步驟2中製得之金盞花花朵油性萃取物 20w.%
- 步驟3中製得之百合球莖水性萃取物 20w.%
- 聚丙烯酸鈉 2.8w.%
- 純水qs 100w.%
用機械式攪拌器把不同成分混合。
實施例2：根據本發明之抗污染複合物在抗廢氣有害效應上的加乘性之評估
在本實施例中，試驗在將培養的人角質化細胞暴露於廢氣後，在實施例1中所製得之抗污染複合物的抗細胞毒性性質及其對能量代謝作用之效應。
2.1細胞毒性研究
本研究之目的是證實廢氣之細胞毒性效應的可逆性，其係將在用根據本發明之抗污染複合物(即包含(金盞花花朵水性萃取物、金盞花花朵油性萃取物與百合球莖水性萃取物)三種萃取物的組合物)處理後的廢氣之細胞毒性效應 和個別使用這些萃取物中的各者的效應相比較所得到。
使用甲臢藍檢定(MTT)來進行此試驗。在割包皮期間採集人包皮細胞並在KGM2培養基(Clonetics)中放大，在該培養基中補充胰島素、EGF與垂體萃取物，得到角質化細胞培養物。
在有或無不同濃度之被研究的產品下培養24個小時之後，然後慢慢地傾覆裝有細胞的孔使其倒空，然後用培養基清洗細胞層。把200μL稀MTT溶液分配到全部孔中。然後將盤在37℃下培育2至4個小時。然後可觀測到甲臢藍結晶形成，其量與所得琥珀酸去氫酶成反比。然後再次慢慢地傾覆該孔使其倒空。然後加入200μL二甲亞碸(DMSO)溶解細胞及甲臢藍結晶。攪動使顏色均勻，然後使用分光光度計在570nm下觀測該盤。
廢氣由發動機產生。將廢氣與培養的角質化細胞接觸2個小時，然後把該細胞在有或無被研究的產品下另培養22個小時。
被試驗的不同產品如下：- APC：根據本發明及如實施例1中所製得之抗污染複合物，- AECF：單獨金盞花花朵水性萃取物：此對比組成物(非形成本發明之一部分)相同於實施例1中所製得之抗污染複合物，除將該3種萃取物組合物換成60w.%的實施例1之步驟1中所製得之金盞花花朵水性萃取物外，- OECF：單獨金盞花花朵水性萃取物：此對比組成物 (非形成本發明之一部分)相同於實施例1中所製得之抗污染複合物，除將該3種萃取物組合物換成60w.%的實施例1之步驟2中所製得之金盞花花朵油性萃取物外，- AELcB：單獨百合球莖水性萃取物：此對比組成物(非形成本發明之一部分)相同於實施例1中所製得之抗污染複合物，除將該3種萃取物組合物換成60w.%的實施例1之步驟3中所製得之百合球莖水性萃取物外。
- 批次1：負控制：未接受任何產品，- 批次2：正控制：使細胞暴露於廢氣，- 批次3：使細胞暴露於廢氣，然後用1.0重量%的APC處理，- 批次4：使細胞暴露於廢氣，然後用2.0重量%之APC處理，- 批次5：使細胞暴露於廢氣，然後用1.0重量%的AECF處理，- 批次6：使細胞暴露於廢氣，然後用2.0重量%之AECF處理，- 批次7：使細胞暴露於廢氣，然後用1.0重量%的OECF處理，- 批次8：使細胞暴露於廢氣，然後用2.0重量%之OECF處理，- 批次9：使細胞暴露於廢氣，然後用1.0重量%的AELcB處理，- 批次10：使細胞暴露於廢氣，然後用2.0重量%之 AELcB處理。
每一批次作6次測量。將在暴露於廢氣但沒用產品後的細胞(正控制-批次2)存活率和在暴露於廢氣及用每一被試驗產品處理後的細胞存活率相比較，來計算出廢氣效應之可逆性。
2.2細胞毒性研究結果
結果參照下表1：
這些結果顯示根據本發明之抗污染複合物(即含有金盞花花朵水性萃取物、金盞花花朵油性萃取物與百合球莖水性萃取物的組合物)當用1w.%的複合物(+15%)或用2w.%之複合物(+28%)處理細胞時，在由廢氣誘發的細胞毒性之可逆性上具有加乘活性。此細胞存活率增加高於用等 量的每一萃取物個別處理細胞所得到之細胞存活率，證實3種萃取物組合物之加乘效應。當使用濃度2w.%的抗污染複合物(+28%)對個別使用相同濃度之萃取物(分別得到+11%、+17%與+13%)時，此加乘效應特別顯著。
2.3抗污染複合物對呼吸速率之效應的研究
呼吸速率是每百萬個細胞每分鐘的氧消耗。
在割包皮期間採集人包皮細胞並在KGM2培養基(Clonetics)中放大，在該培養基中補充胰島素、EGF與垂體萃取物，得到角質化細胞培養物。
廢氣由發動機產生。將該細胞與廢氣接觸2個小時，然後把該細胞在有或無待測產品下培養20分鐘。在2個不同條件下進行研究：i)在葡萄糖存在下對非透性化細胞中的基底細胞呼吸速率之效應，ii)在丙酮酸鹽-蘋果酸鹽基質存在下對透性化細胞的粒腺體呼吸速率之效應。
對在胰蛋白酶中解離之培養的角質化細胞進行此研究。將5百萬至1千萬個培養之角質化細胞在溫度30℃下放進1mL的Hanks-Hepes培養基懸浮液中，該培養基含有20mM之葡萄糖(基底呼吸)或丙酮酸鹽(10mM)與蘋果酸鹽(10mM)(粒腺體呼吸)。即時監測呼吸並且以每106個細胞每分鐘消耗的氧(以picoatom計)表示。加不同量之產品到測氧器(oxygraph)槽中顯示可能的呼吸作用之刺激 或抑制。
使用Clark電極測得培養基中之溶氧量。在-0.8V下的極化鉑陰極減少透過Teflon®膜擴散之氧。在這些條件下，在此陰極與銀陽極間通過的電流和溶液中氧濃度成正比。由半飽和KCl溶液提供離子橋。利用微電腦(IBM-PC)進行與處理測量。
在這裡也試驗和上述試驗2.1相同的批次1至10。每一批次作4次測量。
2.4抗污染複合物對呼吸速率之效應的結果
基底呼吸之結果參見下表2：
這些結果顯示根據本發明之抗污染複合物(即含有金 盞花花朵水性萃取物、金盞花花朵油性萃取物與百合球莖水性萃取物的組合物)當用1w.%的複合物(+27%)或用2w.%之複合物(+38%)處理細胞時，在基底呼吸廢氣效應上具有加乘活性。此效應高於用等量的每一萃取物個別處理細胞所得到之效應，證實3種萃取物組合物之加乘效應。當使用濃度2w.%的抗污染複合物(+38%)對個別使用相同濃度之萃取物(分別得到+13%、+21%與+16%)時，此加乘效應特別顯著。
粒腺體呼吸之結果參見下表3：
這些結果顯示根據本發明之抗污染複合物(即含有金盞花花朵水性萃取物、金盞花花朵油性萃取物與百合球莖 水性萃取物的組合物)當用1w.%的複合物(+21%)或用2w.%之複合物(+25%)處理細胞時，在粒腺體呼吸廢氣效應上具有加乘活性。此效應高於用等量的每一萃取物個別處理細胞所得到之效應，證實3種萃取物組合物之加乘效應。當使用濃度2w.%的抗污染複合物(+25%)對個別使用相同濃度之萃取物(分別得到+13%、+16%與+18%)時，此加乘效應特別顯著。
實施例3：根據本發明之抗污染複合物對基底與粒線體ATP合成作用的效應之評估
在割包皮期間採集人包皮細胞並在KGM2培養基(Clonetics)中放大，在該培養基中補充胰島素、EGF與垂體萃取物，得到角質化細胞培養物，對該角質化細胞培養物進行試驗。
本研究之目的是評估根據本發明之包含(金盞花花朵水性萃取物、金盞花花朵油性萃取物與百合球莖水性萃取物)三種萃取物的組合物抗污染複合物對培養之角質化細胞的基底與粒線體ATP合成速率之效應。這利用使用螢光素/螢光素酶套組的生物發光來測得。利用在下列ATP消耗反應期間發射之光來測得各等分樣品中的新合成與基底ATP量：
使用來自Boehringer Mannheim之具ATP監控劑(ATP Bioluminescence Assay Kit HS II)的光度計(Luminoscan)來 測得在此反應期間發射之光的強度。此裝置將反應期間發射之光轉錄成相對發光度單位(RLU)。根據標準ATP量表把實測RLU轉換成ATP莫耳數。給予以奈莫耳/分鐘/106個細胞表示的ATP合成速率。把培養之角質化細胞在CO2培養箱中於ADM培養基(Clonetics)中在106/運轉的速率下培養。
廢氣由發動機產生。將該細胞與廢氣接觸2個小時。然後把該細胞在有或無待測產品下在2個條件下培養20分鐘：i)在葡萄糖存在下對非透性化細胞中的基底合成速率之效應，ii)在丙酮酸鹽-蘋果酸鹽基質存在下對透性化細胞的粒腺體合成速率之效應。
該處理包含將所欲濃度的如上述實施例1中所製得之抗污染複合物直接施加於在測氧器(oxygraph)槽中懸浮液的細胞。把濃度106個細胞/mL之細胞放進在具設定於30℃的恆溫器之測氧器(oxygraph)槽中的「呼吸緩衝液」(Hanks-Hepes葡萄糖20mM)懸浮液中並且攪拌。使用毛地黃皂苷把細胞透性化來測得粒腺體合成速率。加入呼吸基質(用於基底合成速率之20mM葡萄糖/用於粒腺體合成速率的10mM丙酮酸鹽與10mM蘋果酸鹽)使能觀測到氧消耗速率(根據機會的狀態2)。定期間隔將不同量之抗污染複合物(最終濃度1w.%與2w.%)加到測氧器(oxygraph)槽中，然後從測氧器(oxygraph)槽中取出一等分樣品，根 據上述方法來滴定其ATP。因此將不同量的根據本發明之抗污染複合物加到測氧器(oxygraph)槽中可顯示可能的ATP合成作用之活化或抑制。
每一試驗濃度作4次測量。
結果參見下表4與5：
這些結果顯示根據本發明之抗污染複合物(即含有金盞花花朵水性萃取物、金盞花花朵油性萃取物與百合球莖水性萃取物的組合物)當用1w.%的複合物(+20%與+19%)與用2w.%之複合物(+25%與+26%)處理細胞時，刺激在 暴露於廢氣後的角質化細胞中之ATP合成作用。
實施例4：根據本發明之抗污染複合物的抗自由基性之評估
本研究之目的是評估根據本發明之抗污染複合物的抗自由基性。
在割包皮期間採集人包皮細胞並在KGM2培養基(Clonetics)中放大，在該培養基中補充胰島素、EGF與垂體萃取物，得到角質化細胞培養物，對該角質化細胞培養物進行試驗。
廢氣由發動機產生。將該細胞與廢氣接觸2個小時。然後把該細胞在有或無待測產品下培養24個小時。
在如實施例1中所製得之抗污染複合物與不同濃度(0.5w.%、1w.%與2w.%)的細胞接觸24個小時後，以一式三份方式進行試驗。
該試驗係以滴定丙二醛為基礎。自由基產生生物體內的脂質過氧化過程。丙二醛(MDA)是細胞中的多不飽和脂肪酸過氧化作用之最終產物中的一者。自由基增加引起MDA過度產生。
丙二醛(MDA)之萃取
在複合物與細胞接觸24個小時後，使該細胞返回包含下列成分之培養基懸浮：- 250μL的Tris緩衝液，50mM，pH 8、含有0.1M NaCl與20mM EDTA，- 25μL之7%十二烷基硫酸鈉(SDS)，- 300μL的0.1N HCl，- 38μL之1%水中磷鎢酸，- 300μL的0.67%水中硫低巴比妥酸(TBA)。
在黑暗中於50℃下培養1個小時及在冰冷水中冷卻，然後把300mL正丁醇加到各試管中。在0℃下於10,000g下離心10分鐘。將上層相回收用來滴定MDA。
MDA之滴定
在利用HPLC分離MDA-TBA複合物後，利用測量螢光的方法來滴定MDA：
- Bischoff Pump Model 2.200
- Automatic Alcoot injector Model 788自動取樣器
- Ultrasep C18管柱(30cm x 0.18cm)孔隙6mm
- 螢光偵測器(Jasco 821-F1)。
用515nm激發與553nm發射來進行螢光偵測。使用的洗提液由甲醇：水=40/60(v/v)組成，用1M KOH把pH調整成6.3±0.5。使用被處理成為樣品(0.125、0.25、0.5與1mM)的標準品用ICS軟體應用(Pic 3)(Instrumentation,Consommable Service)來進行量化。
蛋白質滴定
使用分光光度計利用Bradford方法來進行蛋白質之滴 定。在595nm時的吸光度增加和蛋白質濃度成正比。
結果參見下表6：
這些結果顯示根據本發明之抗污染複合物(即含有金盞花花朵水性萃取物、金盞花花朵油性萃取物與百合球莖水性萃取物的組合物)在3個試驗濃度下具有顯著抗自由基之保護效應。
實施例5：保濕乳液
利用該技術領域中具有通常知識眾所周知的習知技術製得具有下列組成之保濕乳液：
- 植酸鈉 0.100g
- 甘油 5.000g
- 脫氫乙酸 0.150g
-辛酸三甘油脂/癸酸三甘油脂混合物(商品名稱Mirytol® 318，BASF所賣) 5.000g
- 甘油單硬脂酸酯 0.500g
- 葵花油 1.000g
- PEG 100硬脂酸酯 3.000g
- 杏仁油 3.000g
- 聚二甲基矽氧烷 1.000g
- 生育酚 0.100g
- 辛醯二醇(caprylyl glycol) 0.500g
- 甘油辛酸酯 0.500g
- 苯甲醇 0.500g
- 卡波姆(Carboner)(以名稱CarbopolETD 2001,Gattefossé所賣) 0.100g
- 氫氧化鈉 0.075g
- 香料 0.500g
- 實施例1中所製得之抗污染複合物 0.500g
- 去礦物質水qs 100.000g
此乳液具有抗污染性且可一日一次或二次施加於皮膚上。
實施例6：抗污染面霜
利用該技術領域中具有通常知識者眾所周知的習知技術製得具有下列組成之面霜：
- 卡波姆(Carboner)(以名稱CarbopolETD 2001,Gattefossé所賣) 0.100g
- EDTA四鈉(Tetrasodic EDTA) 0.100g
- 甘油 5.000g
- 1,2-己二醇 1.000g
- 辛醯二醇 0.500g
- 脫氫乙酸 0.150g
- 辛酸三甘油脂/癸酸三甘油脂混合物(以名稱Mirytol® 318，BASF所賣) 5.000g
- 牛油樹油脂 2.500g
- 甘油單硬脂酸酯 1.500g
- 環戊矽氧烷 1.000g
- 十八醇 1.000g
- 葵花油 1.000g
- 玉米油 1.000g
- 杏仁油 1.000g
- 辣木油(Moeinga oil) 1.000g
- 蜂蠟 0.750g
- Ceteareth 33 0.750g
- 生育酚 0.100g
- 氫氧化鈉 0.050g
- 香料 0.500g
- 實施例1中所製得之抗污染複合物 2.000g
- 去礦物質水qs 100.000g
此面霜具有抗污染性且可一日一次或二次施加於皮膚上。

Claims (15)

  1. 一種抗污染複合物，其包含：- 至少一種金盞花花朵水性萃取物，- 至少一種金盞花花朵油性萃取物，及- 至少一種百合球莖水性萃取物。
  2. 如申請專利範圍第1項之抗污染複合物，其中該抗污染複合物包含：- 從約0.5至30重量%(w.%)的金盞花花朵水性萃取物，- 從約0.5至30w.%的金盞花花朵油性萃取物，- 從約0.5至30w.%的百合球莖水性萃取物，- 從約0.1至5w.%的增稠劑，及- 足量的水使總重量達到100w.%。
  3. 如申請專利範圍第1項之抗污染複合物，其中該抗污染複合物包含：- 從約15至25重量%(w.%)的金盞花花朵水性萃取物，- 從約15至25w.%的金盞花花朵油性萃取物，- 從約15至25w.%的百合球莖水性萃取物，- 從約2至5w.%的增稠劑，及- 足量的水使總重量達到100w.%。
  4. 如申請專利範圍第1項之抗污染複合物，其中該抗污染複合物包含：- 約20w.%的金盞花花朵水性萃取物， - 約20w.%的金盞花花朵油性萃取物，- 約20w.%的百合球莖水性萃取物，- 從約2至5w.%的聚丙烯酸鹽，例如聚丙烯酸鈉，- 足量的水使總重量達到100w.%。
  5. 一種如申請專利範圍第1至4項中任一項之抗污染複合物的用途，其係作為在美容局部組成物中用於對抗及實質上預防在皮膚上的污染有害效應之美容抗污染成分。
  6. 一種局部美容組成物，其包含如申請專利範圍第1至4項中任一項所定義之抗污染複合物。
  7. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該抗污染複合物量是在從約0.5至5w.%範圍內。
  8. 如申請專利範圍第6或7項之組成物，其中該抗污染複合物量是在從約1.5至3w.%範圍內。
  9. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該抗污染複合物量等於約2w.%。
  10. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該組成物包含一或多種選自下列的額外成分：植物萃取物、維生素、玻尿酸、己間苯二酚、視黃醇、α羥酸、白藜蘆醇、腦醯胺、脂肪酸及磷脂。
  11. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該組成物是下列形式：凝膠、乳液、水包油型或油包水型二相性乳液、面膜、洗液、濃溶液、漿液、奈米膠囊、脂質體、唇膏。
  12. 如申請專利範圍第6項之組成物，其中該組成物 另包含一或多種配方劑或添加劑。
  13. 如申請專利範圍第12項之組成物，其中該劑或添加劑係選自：浸透劑、增稠劑、界面活性劑、緩和劑、聚二甲基矽氧烷(dimethicone)、環甲基矽氧烷(cyclomethicone)、乳化劑、防腐劑、油類、UV-A與UV-B濾光劑、顏料、色素、成膜劑、礦物裝料及香料。
  14. 一種美容保養方法，其係用於對抗及實質上預防該在皮膚上的污染有害效應，特別是廢氣與重金屬有害效應，該方法包含至少一個在有其需要之人皮膚上施加情感量的如申請專利範圍第6至13項中任一項所定義之局部美容組成物的步驟。
  15. 一種如申請專利範圍第6至13項中任一項所定義之美容局部組成物的非治療性用途，其係用於對抗及實質上預防該在皮膚上的污染有害效應，特別是廢氣與重金屬有害效應。
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