TW201717925A

TW201717925A - 乾眼症改善劑

Info

Publication number: TW201717925A
Application number: TW105129254A
Authority: TW
Inventors: Tohru Mizushima
Original assignee: Ltt Bio-Pharma Co Ltd
Priority date: 2015-09-10
Filing date: 2016-09-09
Publication date: 2017-06-01
Also published as: WO2017043612A1; JP2017052723A

Abstract

本發明係提供一種效果較強，且副作用較少之乾眼症改善劑。本發明係一種以地匹福林或腎上腺素作為有效成分之乾眼症改善劑或MCP-1表現抑制劑。

Description

乾眼症改善劑

本發明係關於一種乾眼症改善劑。

乾眼症係由各種要因所引起之淚液及角結膜上皮之慢性疾病，且係伴隨著眼不適感或視覺功能異常之疾病，據說日本之乾眼症患者數量有約2200萬人，並存在增加之傾向。又，患病率會因年齡增加而上升。關於乾眼症，認為由於淚液之分泌減少、蒸發增加而產生淚液之高滲透壓化，而於角膜、結膜中引起炎症反應、細胞損害，從而導致淚液層不穩定，結果乾眼症發病(非專利文獻1)。作為目前之乾眼症之治療方法，使用有玻尿酸鈉、地誇磷索鈉(diquafosol sodium)(促進黏蛋白分泌)、瑞巴派特(促進黏蛋白產生)等淚液補充療法或者眼鏡或護目鏡之佩戴、淚點栓塞法等。又，於專利文獻1中記載有腎上腺素β受體促效劑、尤其是腎上腺素β2受體促效劑(R-沙丁胺醇)會促進因乾眼症而受到損害之動物之瞼腺分泌之情況。 [先前技術文獻] [專利文獻] [專利文獻1]國際公開第2011/068786號 [非專利文獻] [非專利文獻1]日本眼科學會主頁

[發明所欲解決之問題] 然而，專利文獻1所記載之沙丁胺醇之乾眼症改善效果並不充分，進而期望一種乾眼症改善效果較強，且副作用之產生頻度較少之乾眼症改善劑。因此，本發明之課題在於提供一種效果較強，且副作用較少之乾眼症改善劑。 [解決問題之技術手段] 因此，本發明者為了開發新穎之乾眼症改善劑而進行各種研究，結果發現：雖根據上述專利文獻1之記載，選擇性腎上腺素β2受體促效劑作為乾眼症改善劑有效，但完全意外的是，並非為選擇性β2受體促效劑之作為刺激α及β受體兩者之物質的腎上腺素及地匹福林具有較沙丁胺醇優異之乾眼症改善效果及炎症性細胞激素MCP-1表現抑制效果，且不會如沙丁胺醇般使眼壓上升，因此可用作安全之乾眼症改善劑，從而完成本發明。即，本發明提供以下[1]～[8]。 [1]一種乾眼症改善劑，其係以地匹福林或腎上腺素作為有效成分。 [2]一種MCP-1表現抑制劑，其係以地匹福林或腎上腺素作為有效成分。 [3]一種地匹福林或腎上腺素之用途，其係用以製造乾眼症改善劑。 [4]一種地匹福林或腎上腺素之用途，其係用以製造MCP-1表現抑制劑。 [5]一種地匹福林或腎上腺素，其係用以改善乾眼症。 [6]一種地匹福林或腎上腺素，其係用以抑制MCP-1之表現。 [7]一種乾眼症改善方法，其特徵在於投予地匹福林或腎上腺素之有效量。 [8]一種MCP-1之表現抑制方法，其特徵在於投予地匹福林或腎上腺素之有效量。 [發明之效果] 本發明之乾眼症改善劑可用作乾眼症改善效果優異，且不會使眼壓上升，進而使黏蛋白量增大而副作用較少之乾眼症改善劑。

本發明之乾眼症改善劑及MCP-1表現抑制劑之有效成分為地匹福林或腎上腺素。此處，已知腎上腺素刺激α及β受體兩者。腎上腺素係用作針對過敏性休克或敗血症之血管收縮藥、支氣管哮喘發作時之支氣管擴張劑，但未用於乾眼症治療。地匹福林係化學名[2(2,2-二甲基丙醯氧基)-4-(1-羥基-2-甲基胺基-乙基)苯基]2,2-二甲基丙酸酯之化合物，由於為腎上腺素之前藥，故而具有刺激α及β受體兩者之作用，而用作開放性青光眼之治療藥。然而，未用於乾眼症治療。關於腎上腺素及地匹福林，由於鍵結有羥基之碳原子為不對稱碳原子，故而存在光學異構物，因此亦包含光學活性物質。於腎上腺素之情形時，較佳為(R)體，於地匹福林之情形時，較佳為(±)體。地匹福林及腎上腺素係如下述實施例所示般具有如下作用，即抑制由高滲透壓力所引起之角膜上皮細胞存活率之降低，抑制依賴於高滲透壓力之角膜上皮細胞凋亡，抑制角膜損害，使黏蛋白量增大，因此可用作乾眼症改善劑。又，認為地匹福林及腎上腺素由於不會使眼壓上升，故而不會產生如沙丁胺醇之副作用。又，地匹福林及腎上腺素較強地抑制由高滲透壓力及LPS(lipopolysaccharide，脂多糖)刺激所引起之MCP-1之表現，進而亦較強地抑制由莨菪胺持續投予所引起之MCP-1之表現。因此，認為地匹福林及腎上腺素抑制作為炎症性細胞激素之MCP-1之表現，藉此表現出乾眼症改善效果。再者，作為β₂ 促效劑之沙丁胺醇不會抑制由高滲透壓力所引起之MCP-1之表現。作為本發明之乾眼症改善劑或MCP-1表現抑制劑之投予形態，可列舉滴眼液等。為了設為滴眼液之形態，可與藥學上所容許之載體一起進行製劑化。作為此種載體，例如可列舉：薄荷腦、龍腦、樟腦等清涼化劑；氯丁醇、去氫乙酸鈉、苯乙醇、對羥基苯甲酸酯類、己二烯酸鉀等保存劑；氯化鈉、氯化鉀、甘露醇、丙二醇等等張劑；乙二胺四乙酸鈉、環糊精、亞硫酸氫鈉等穩定劑；聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素等黏稠劑；鹽酸、檸檬酸或其鹽、硼酸或其鹽、磷酸或其鹽、乙酸或其鹽、酒石酸或其鹽、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉等pH值調整劑。於將本發明之乾眼症改善劑設為滴眼液之情形時，除地匹福林或腎上腺素以外，亦可調配玻尿酸鈉、地誇磷索鈉、瑞巴派特等。進而，本發明之乾眼症改善劑或MCP-1表現抑制劑中之本發明之有效成分的含量並無特別限定，通常，相對於滴眼液總量為0.01～10重量%，較佳為0.01～1重量%。本發明之乾眼症改善劑或MCP-1表現抑制劑之投予量根據要投予之患者的症狀、年齡、投予方法而有所不同，但以地匹福林或腎上腺素計較佳為0.05～50 μg/kg/天，尤佳為0.1～10 μg/kg/天。 [實施例] 其次，列舉實施例而進一步詳細地說明本發明。實施例1(高滲透壓條件下之細胞損害之抑制效果) 將HCE細胞(human corneal epithelial cells，人類角膜上皮細胞)1×10⁶ cells/60 or 100 mm 培養皿(dish)於包含受檢化合物之高滲透壓培養基中培養24小時。培養基係藉由150 mM之NaCl、280 mM之葡萄糖、280 mM之山梨醇、280 mM之蔗糖而設為高滲透壓條件。藉由MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽)法測定活細胞數，算出相對於對照組(等張壓條件)之吸光度之相對值。將結果示於圖1～圖5。數值為平均±SD(n＝3)，**P＜0.01。根據圖1～圖5，腎上腺素明顯地抑制因高滲透壓條件而產生之角膜上皮細胞存活率之降低。其效果強於作為β2受體刺激劑之沙丁胺醇。實施例2(高滲透壓條件下之細胞凋亡抑制效果) 將HCE細胞於包含受檢化合物及150 mM之NaCl之高滲透壓培養基中進行培養。使用螢光肽受質而測定培養2小時後之作為細胞凋亡標記之類半胱天冬酶-3活性，將結果示於圖6。又，將經作為活細胞之核染色劑之Hoechst 33258染色之結果示於圖7。數值為平均±S.D.(triplicate)，**P＜0.01。根據圖6及圖7，腎上腺素明顯地抑制高滲透壓力依賴性之角膜上皮細胞之細胞凋亡。實施例3(大鼠之角膜表面損害治療效果) 去除大鼠之淚腺而製作乾眼症模型。於淚腺去除後之1～5週之期間，將包含受檢化合物之水溶液5 μL以1天3次之方式進行滴眼投予。藉由棉線測試而測定淚液量，將結果示於圖8。將經螢光素染色之角膜之圖像示於圖9。算出螢光素之得分並示於圖10。測定TUNEL陽性細胞量並示於圖11。數值為平均±S.E.M.，*P＜0.05；**P＜0.01。根據圖8～11，腎上腺素及作為其前藥之地匹福林於乾眼症模型大鼠中未使淚液量發生變化而抑制角膜表面之損害。又，其作用亦較沙丁胺醇優異。實施例4(信使RNA表現量之變化(黏蛋白之表現效果)) 將HCE細胞於包含受檢化合物之培養基中進行培養。藉由實時逆轉錄-聚合酶鏈反應(real time RT-PCR)法測定培養3小時及24小時後之muc1、muc4信使RNA表現量。算出相對於肌動蛋白(actin)信使RNA之表現量之相對值，並將結果示於圖12。數值為平均±S.D.(triplicate)，*P＜0.05。根據圖12可知，腎上腺素增大角膜上皮細胞之黏蛋白表現量。實施例5(對眼壓之作用) 將被試驗化合物以4天(Day0～Day4)每天投予1次之方式向大鼠進行滴眼投予，而研究對大鼠之眼壓之作用。將結果示於圖13。根據圖13，腎上腺素及地匹福林使眼壓降低。另一方面，沙丁胺醇雖最初使眼壓降低，但4天後反之使眼壓上升。實施例6(高滲透壓條件下之對MCP-1表現之效果) 將HCE細胞於包含受檢化合物及50～100 mM之NaCl之高滲透壓培養基中進行培養。藉由使用有MCP-1基因特異性引子之實時逆轉錄-聚合酶鏈反應而測定培養6小時後之作為炎症性細胞激素之MCP-1基因的表現量。結果係以相對於等張壓條件下之肌動蛋白(對照組)之作用之相對值表示。將結果示於圖14、圖16及圖17。數值為平均±SD(n＝3)，**P＜0.01，*P＜0.05。根據圖14，腎上腺素明顯地抑制因高滲透壓條件而產生之MCP-1之表現。又，根據圖16及圖17，作為β₂ 促效劑之沙丁胺醇未抑制因高滲透壓條件而產生之MCP-1之表現，而作為α₁ 促效劑之萘甲唑啉抑制因高滲透壓條件而產生之MCP-1之表現。實施例7(對由LPS刺激所引起之MCP-1表現之效果) 將HCE細胞於包含受檢化合物及1 nM或1000 nM之LPS(脂多糖)之培養基中進行培養。以與實施例6相同之方式藉由逆轉錄-聚合酶鏈反應而測定培養6小時後之MCP-1基因之表現量。結果係以相對於肌動蛋白(對照組)之作用之相對值表示。將結果示於圖15。數值為平均±SD(n＝3)，**P＜0.01，*P＜0.05。根據圖15，腎上腺素明顯地抑制因LPS刺激而產生之MCP-1之表現。實施例8 利用已植入至皮下之滲透壓泵(Alzet(註冊商標)2ML2)自day0起持續注入莨菪胺(12.5 mg/天)，藉此製作乾眼症大鼠模型。受檢化合物(腎上腺素)係於day8至day14之期間進行局部投予。腎上腺素之投予係將0.01%(0.55 mM)含有液(5 μl)或生理鹽水(對照組)以1天3次之方式進行滴眼。最終投予(day14)2小時後，藉由眼科外科用刮刀刮掉角膜上皮。以與實施例6相同之方式藉由逆轉錄-聚合酶鏈反應而測定角膜上皮中之MCP-1基因之表現量。將結果示於圖18。結果係以相對於肌動蛋白(對照組)之作用之相對值表示。數值為平均±S.E.M。根據圖18，腎上腺素明顯地抑制作為乾眼症模型動物之莨菪胺持續注入大鼠中之MCP-1表現。

圖1係表示高滲透壓條件(NaCl 150 mM)下之腎上腺素對細胞損害之抑制作用。圖2係表示高滲透壓條件(NaCl 150 mM)下之沙丁胺醇對細胞損害之抑制作用。圖3係表示高滲透壓條件(葡萄糖 280 mM)下之腎上腺素對細胞損害之抑制作用。圖4係表示高滲透壓條件(山梨醇 280 mM)下之腎上腺素對細胞損害之抑制作用。圖5係表示高滲透壓條件(蔗糖 280 mM)下之腎上腺素對細胞損害之抑制作用。圖6係表示高滲透壓條件下(NaCl 150 mM)之腎上腺素之類半胱天冬酶-3活性。圖7係表示高滲透壓條件下(NaCl 150 mM)之腎上腺素之細胞凋亡抑制作用。圖8係表示大鼠乾眼症模型之基於棉線測試之對淚液量(schimer score)之作用。圖9係表示大鼠乾眼症模型中之角膜之圖像。圖10係表示大鼠乾眼症模型之對螢光素之得分之作用。圖11係表示大鼠乾眼症模型中之活細胞量(TUNEL陽性細胞)。圖12係表示黏蛋白之表現效果。圖13係表示對大鼠之眼壓之作用。圖14係表示高滲透壓條件(NaCl 100 mM)下之腎上腺素對MCP-1表現之抑制作用。圖15係表示腎上腺素對由LPS刺激所引起之MCP-1表現之抑制作用。圖16係表示高滲透壓條件(NaCl 100 mM)下之α₁ 促效劑(萘甲唑啉)對MCP-1表現之作用。圖17係表示高滲透壓條件(NaCl 100 mM)下之β₂ 促效劑(沙丁胺醇)對MCP-1表現之作用。圖18係表示腎上腺素滴眼對由莨菪胺持續投予所引起之MCP-1表現之作用。CRL為對照組，賦形劑(Vehicle)為生理鹽水，Adre為腎上腺素投予群。

無

Claims

一種地匹福林或腎上腺素之用途，其係用以製造乾眼症改善劑。
一種地匹福林或腎上腺素之用途，其係用以製造MCP-1表現抑制劑。