TW201716070A - 羥丙基β－環糊精組合物及方法 - Google Patents

Abstract

本揭示內容提供在一或多個羥基位置處由羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子，該等混合物用作醫藥活性成份；製備該等混合物之方法；確定該等混合物合格用於適於鞘內或腦室內投與之醫藥組合物的方法；包含該等混合物之適於鞘內或腦室內投與之醫藥組合物；及使用該等醫藥組合物來治療C型尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease)之方法。

Description

羥丙基β-環糊精組合物及方法 相關申請案交叉參考

本申請案主張以下美國臨時申請案之權益：於2016年6月3日提出申請之第62/345,721號；於2016年5月3日提出申請之第62/331,385號；於2016年3月29日提出申請之第62/314,765號；於2016年3月15日提出申請之第62/308,736號；於2016年1月8日提出申請之第62/276,728號；於2015年12月4日提出申請之第62/263,599號；於2015年11月2日提出申請之第62/249,876號；於2015年10月23日提出申請之第62/245,974號；於2015年7月6日提出申請之第62/189,114號；於2015年6月12日提出申請之第62/175,075號；及於2015年6月10日提出申請之第62/173,889號，其各自之全部內容皆以引用方式併入本文中。

關於由聯邦政府發起的研究或開發的聲明

本發明係在與國立衛生研究院(National Institutes of Health)、衛生與公共服務部之機構(Agency of the Department of Health and Human Services)之合作研究與發展協議(Cooperative Research and Development Agreement)之實施中產生。美國政府對本發明具有某些權利。

C型尼曼-匹克病(NPC)係由NPC1或NPC2基因中之體染色體隱性 突變引起之溶酶體脂質儲存病症。症狀通常在圍產期開始表現且貫穿生命進展。該病症通常包括神經症狀，例如小腦共濟失調、發音困難、癲癇、垂直凝視麻痹、運動受損、吞嚥困難、精神病發作及進行性失智症，以及諸如肝、脾或肺等其他器官中之全身症狀。NPC已闡述為細胞膽固醇運輸缺陷，但在腦中，亦發生諸如GM2及GM3神經節苷酯等其他脂質之累積(Vanier,2010,Orphanet Journal of Rare Diseases，第5卷：16)。由於不同臨床表現及疾病過程，NPC1疾病通常分類為嬰兒早期發作(<2歲)、嬰兒晚期發作(2至<6歲)、幼年發作(6至<15歲)及青少年/成人發作(>15歲)。

治療人類之NPC之努力集中於受質減少療法，例如利用(例如)正丁基去氧野艽黴素(麥格司他(miglustat)，Zavesca^®)抑制鞘糖脂合成，或經由清除機制改善整體脂質儲存，特定而言膽固醇及鞘糖脂之儲存。

已顯示2-羥丙基-β-環糊精可緩和NPC細胞中之過量膽固醇儲存(Abi-Mosleh,L.等人，Proceedings of the National Academy of Sciences USA,2009，第106卷(46)，第19316-19321頁)，此與自細胞之質膜萃取膽固醇之相關環糊精之先前報導一致(Rodal,S.K.等人，1999,Molecular Biology of the Cell，第10卷，第961-974頁)。亦觀察到羥丙基β-環糊精在NPC之動物模型中具有有益效應。舉例而言，據報導包含2-羥丙基-β-環糊精之組合物可逆轉Npc1剔除小鼠之肝及腦中膽固醇之缺陷型溶酶體運輸，且引起與無治療相比該等突變體之生命延長(Liu,B.等人，2009,Proceedings of the National Academy of Sciences USA，第106卷(7)，第2377-2382頁；Davidson等人，2009,PLoS One 4：e6951)。

在美國、巴西及日本，在同情使用豁免下，已向人類NPC患者投與各種羥丙基β-環糊精組合物，個案報告各種體徵及症狀一定改良。 然而，尚未完成用以測定安全性及效能之羥丙基β-環糊精組合物之盲化臨床試驗(Ottinger,E.A.等人，2014,Current Topics in Medicinal Chemistry，第14卷(3)，第330-339頁)。由於個案報告中可能之觀察者偏差，需要控制臨床研究以確認羥丙基β-環糊精提供臨床益處。

NPC之有效治療需要自嬰兒開始長期鞘內或腦室內投與，且先前用於人類患者中之羥丙基β-環糊精之非經腸級組合物含有使得其不適於長期直接投與嬰兒及兒童之腦脊髓液之雜質：丙二醇，認為其具有耳毒性；無羥丙基取代之β-環糊精分子，已知其形成沈澱且具有急性毒性(Muller及Brauns,1985,International Journal of Pharmaceutics，第26卷，第77-88頁)；及細菌內毒素，其具有高度發炎性。因此，需要純度較高之羥丙基β-環糊精之醫藥組合物。

另外，羥丙基β-環糊精之所有現存非經腸級組合物含有具有不同羥丙基取代度之羥丙基β-環糊精物質之複雜混合物。混合物內該等物質之比率在不同供應商之間廣泛不同，且甚至在來自單一供應商之各批次間變化。未知該等不同物質如何促進複雜混合物之藥理學效應。因此，需要羥丙基β-環糊精之醫藥組合物，其具有該等物質之更精確界定且精確控制之混合物或指紋。

最後，需要在GMP條件下以商業規模製造適於長期鞘內或腦室內投與、具有低含量之雜質且具有特定及結構上界定之組合物之羥丙基β-環糊精之醫藥組合物的方法。

分析I期臨床試驗之初始數據，其中具有1型NPC疾病之患者係藉由使用現存非經腸級組合物Kleptose^® HPB(Roquette)鞘內投與2-羥丙基β-環糊精(「HPBCD」)來治療。在由NIH執行之此非隨機化、開放標記、單一中心研究中，Kleptose^® HPB係以遞增劑量經由腰注射投與患者之非用藥隊列。在吾人之某些分析中，亦包括在個別IND下在 另一機構處經鞘內Kleptose^® HPB治療之三個患者的數據。

分析確認Kleptose^® HPB之鞘內投與在1型NPC疾病中提供治療益處。使用標準聚集結果量度(即NPC臨床嚴重程度量表)，觀察到與已研究未治療疾病之自然史之患者之隊列中的0/13相比，7/15患者具有穩定或改良疾病。使用由數據之事後分析告知之新複合終點，發現11/15研究患者顯示穩定或改良疾病，相對於自然史隊列中僅4/13具有穩定疾病。

然而，更詳細分析顯示，儘管HPBCD之鞘內投與改良1型NPC疾病之某些體徵及症狀，但其僅減緩其他體徵及症狀之進展，且自相矛盾地似乎加速其他症狀之進展。具體而言，在接受鞘內Kleptose^® HPB之患者中，聽力損失似乎加速。Kleptose^® HPB之代表性批次之分析揭示，此非經腸級產物包含具有不同取代度之β-環糊精分子之複雜混合物；未知該等物質中哪種促進各種臨床域之觀察之改良、進展之減緩及進展之加速。

為製備HPBCD將以更頻繁劑量直接投與腦脊髓液達較長時間段之臨床試驗，研發降低以下物質之含量之方法：丙二醇，其係假定耳毒素；無羥丙基取代之β-環糊精分子，已知其形成沈澱；及細菌內毒素，其具有高度發炎性。儘管該等方法成功減少指定雜質，但觀察到利用氧化鋁之吸附層析不論單獨使用或與溶劑沈澱組合使用亦改變組成指紋，從而實質上降低具有單一羥丙基取代(DS-1)之β-環糊精分子之量並降低具有2個羥丙基(DS-2)之β-環糊精分子之量。具有低取代度(DS-0，按預期；及DS-1及DS-2，意外)之分子之盛行率之降低增加混合物之平均取代度(DS_a)。

儘管存在自Kleptose^® HPB之指紋變化，但令人驚奇地，已知參與膽固醇代謝及運輸之基因之表現無變化，如藉由活體外基因表現剖析實驗所評價。此發現將容許藉由鞘內或腦室內途徑向具有NPC疾病 之患者之CSF投與更高度純化及組成不同之HPBCD組合物達較長時段、視情況以更頻率劑量、具有治療效應及改良安全性。

因此，在第一態樣中，提供在一或多個羥基位置處由羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子。該混合物包含總共小於1%之未經取代之β-環糊精(「DS-0」)及經1個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-1」)；總共至少85%之經3個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-3」)、經4個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-4」)、經5個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-5」)及經6個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-6」)；及總共小於1%之經9個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-9」)及經10個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-10」)，其各自係如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在某些實施例中，總共小於0.1%之β-環糊精混合物係DS-0及DS-1。在一些實施例中，總共小於0.01%之β-環糊精混合物係DS-0及DS-1。在一些實施例中，總共至少87%之β-環糊精混合物係DS-3、DS-4、DS-5及DS-6。在一些實施例中，總共至少90%之β-環糊精混合物係DS-3、DS-4、DS-5及DS-6。在一些實施例中，總共小於0.1%之β-環糊精混合物係DS-9及DS-10。在某些實施例中，總共小於0.01%之β-環糊精混合物係DS-9及DS-10。

在另一態樣中，混合物包含總共小於1%之未經取代之β-環糊精(「DS-0」)及經1個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-1」)及總共小於1%之經9個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-9」)及經10個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-10」)，其各自係如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定，且混合物具有介於0.50至0.80範圍內之平均莫耳取代(「MS」)。

在某些實施例中，總共小於0.1%之β-環糊精混合物係DS-0及DS-1。在一些實施例中，總共小於0.01%之β-環糊精混合物係DS-0及DS-1。在一些實施例中，總共小於0.1%之β-環糊精混合物係DS-9及DS- 10。在某些實施例中，總共小於0.01%之β-環糊精混合物係DS-9及DS-10。在各個實施例中，MS介於0.60至0.70之範圍內。在該等實施例中之一些中，MS介於0.64至0.68之範圍內。在某些實施例中，MS係約0.66至0.67。

在另一態樣中，提供醫藥組合物，該等醫藥組合物包含本文所述β-環糊精混合物及醫藥上可接受之稀釋劑。

在一些實施例中，組合物包含不超過0.5%丙二醇，如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測。在一些實施例中，組合物包含不超過0.01%丙二醇，如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測。在一些實施例中，醫藥組合物包含不超過(「NMT」)5 EU內毒素/克β-環糊精混合物。在具體實施例中，醫藥組合物包含NMT 1.5 EU內毒素/克β-環糊精混合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含不超過1ppm環氧丙烷，根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。

在典型實施例中，醫藥組合物適於鞘內或腦室內投與。在一些實施例中，醫藥組合物具有約300mOsm/kg至約450mOsm/kg之滲透壓。在一些實施例中，組合物包含約10mg/mL至約200mg/mL之β-環糊精混合物。

在另一態樣中，醫藥組合物包含在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物及對於鞘內、腦室內或靜脈內投與醫藥上可接受之稀釋劑，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子。組合物包含不超過(「NMT」)5 EU內毒素/克β-環糊精混合物、不超過0.5%丙二醇(如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測)、及不超過1ppm環氧丙烷(根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定)。

在一些實施例中，組合物包含NMT 1.5 EU內毒素/克β-環糊精混 合物。在一些實施例中，組合物包含不超過0.01%丙二醇，如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測。在某些實施例中，混合物包含總共小於3%之未經取代之β-環糊精(「DS-0」)、經1個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-1」)及經2個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-2」)；總共至少65%之經5個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-5」)、經6個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-6」)及經7個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-7」)；及總共小於3%之經9個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-9」)及經10個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-10」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在另一態樣中，提供治療C型尼曼-匹克病之方法，該等方法包含向有需要之患者投與治療有效量之醫藥組合物。

在典型實施例中，組合物係經鞘內或藉由腦室內投與來投與。在一些實施例中，該方法包含向患者投與約300mg至約2000mg β-環糊精混合物。在某些實施例中，組合物係每週一次、每兩週一次、每三週一次、每月一次、每兩個月一次或每三個月一次投與。在某些實施例中，該方法包含每兩週一次向患者投與約900mg至約1800mg β-環糊精混合物。在某些實施例中，該方法包含每兩週一次向患者投與約900mg β-環糊精混合物。

在一些實施例中，該方法包含投與足以調節腦脊髓液中以下中之一或多者之含量之量的β-環糊精混合物：τ蛋白、類澱粉肽、神經絲微蛋白(NFL)、膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)、固醇、氧化固醇、幾丁三糖酶活性、鈣結合蛋白、溶酶體相關膜蛋白1(LAMP-1)、GM2或GM3神經節苷酯、神經鞘胺醇及神經鞘胺醇-1-磷酸鹽(S1P)。

在一些實施例中，該方法包含投與足以調節血漿中以下中之一或多種之含量之量的β-環糊精混合物：7-酮膽固醇、7β-羥基膽固醇、24S-羥基膽固醇、25-羥基膽固醇、27-羥基膽固醇及膽甾烷-3β,5α,6β- 三醇。

在一些實施例中，該方法包含投與足以調節尿液中以下中之一或多種之含量之量的β-環糊精混合物：3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CA)、甘胺酸結合之3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CG)及牛磺酸結合之3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CT)。

在一些實施例中，該方法包含投與足以維持或降低選自以下之NPC嚴重程度量表之一或多個域評分之量的β-環糊精混合物：活動、精細動作技能、認知、言語、吞嚥、眼運動、記憶力、聽力及癲癇。

在另一態樣中，提供製備β-環糊精混合物之方法，其包含利用氧化鋁上之吸附層析處理Kleptose® HBP。

在一些實施例中，該方法包含氧化鋁上之吸附層析與溶劑沈澱之組合。在一些實施例中，溶劑沈澱係使用水與丙酮作為沈澱劑。在其他實施例中，溶劑沈澱係使用甲醇與丙酮作為沈澱劑。

在另一態樣中，在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物係藉由用氧化鋁上之吸附層析與溶劑沈澱之組合處理Kleptose® HBP製得，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子。

在又一態樣中，提供確定在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物合格用於供鞘內或腦室內投與之醫藥組合物的方法，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子。方法包含(a)實施混合物之電噴射MS分析；(b)量測峰高度；及(c)基於峰高度計算整個混合物中每一β-環糊精物質之百分比。混合物經確定合格供使用-亦即具有足以使用之品質-若其中混合物包含總共小於1%之DS-0及DS-1；總共至少85%之DS-3、DS-4、DS-5及DS-6；及總共小於1%之DS-9及DS-10。

在另一態樣中，本發明提供包含未經取代之β-環糊精分子及在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物作為醫藥活性成份的醫藥組合物，其中該混合物具有每個β-環糊精約3至約7之羥丙基平均數(「DSa」)。在較佳實施例中，醫藥組合物包含不超過0.5%丙二醇、不超過(「NMT」)1.5 EU內毒素/克β-環糊精混合物，且不超過1%之混合物未經羥丙基取代(「DS-0」)。在各個較佳實施例中，β-環糊精混合物之平均莫耳取代(MS)介於約0.58至約0.68範圍內(DSa介於約4.06至4.76範圍內)。在該等較佳實施例中之某些中，混合物之MS為0.58至0.68(DSa為4.06至4.76)，且在一些實施例中MS為約0.63。在各個較佳實施例中，混合物之平均莫耳取代(MS)介於約0.65至約0.68範圍內(DSa 4.6-4.7)，且在一些實施例中，平均莫耳取代為約0.67。

在一些實施例中，混合物中之β-環糊精由以下結構之葡萄糖單元組成：

其中R¹、R²及R³在每次出現時皆獨立地係-H或-HP，其中HP包含一或多個羥丙基。

在一些實施例中，每個β-環糊精中HP之平均出現次數係約3至約7。

在一些實施例中，組合之R¹及R²之總出現次數之至少15%係HP。

在一些實施例中，R³之出現次數之至少30%係HP。

在一些實施例中，至少70% β-環糊精總共具有每個β-環糊精約4至約6之HP之平均出現次數。

在一些實施例中，DSa係約3至約4。在一些實施例中，DSa係3.3±0.3。在一些實施例中，DSa係3.7±0.3。

在一些實施例中，DSa係約3.5至約4.5。在一些實施例中，DSa係3.8±0.3。在一些實施例中，DSa係4.2±0.3。

在一些實施例中，DSa係約4至約5。在一些實施例中，DSa係4.3±0.3。在一些實施例中，DSa係4.7±0.3。

在一些實施例中，DSa係約4.5至約5.5。在一些實施例中，DSa係4.8±0.3。在一些實施例中，DSa係5.2±0.3。

在一些實施例中，DSa係約5至約6。在一些實施例中，DSa係5.3±0.3。在一些實施例中，DSa係5.7±0.3。

在一些實施例中，DSa係約5.5至約6.5。在一些實施例中，DSa係5.8±0.3。在一些實施例中，DSa係6.2±0.3。

在一些實施例中，DSa係約6至約7。在一些實施例中，DSa係6.3±0.3。在一些實施例中，DSa係6.7±0.3。

在一些實施例中，至少70% β-環糊精具有DSa±1之DS。在一些實施例中，至少90% β-環糊精具有DSa±1內之DS。

在一些實施例中，羥丙基在β-環糊精之羥基位置處作為結構[CH₂CH(CH₃)O]_nH之羥丙基鏈取代，其中n1且每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係約3至約7。在一些實施例中，至少70%羥丙基鏈具有n=1。在一些實施例中，小於30%羥丙基鏈具有n=2。在一些實施例中，小於10%羥丙基鏈具有n>2。在一些實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係約4至約6。在一些實施例中，至少70% β-環糊精總共具有每個β-環糊精約4至約6之羥丙基鏈之平均數。

在一些實施例中，本文揭示之醫藥組合物含有小於約10國際單位(IU)、例如小於約6 IU、小於約3 IU或小於約1.5 IU之內毒素/克醫藥活性成份。內毒素之含量係藉由鱟變形細胞溶解物測試來測定。

在一些實施例中，醫藥活性成份含有小於約2重量%、例如小於約1重量%未經取代之β-環糊精。

在一些實施例中，醫藥活性成份含有小於約0.5重量%、例如小於約0.2重量%丙二醇或丙二醇寡聚物。

在一些實施例中，醫藥活性成份含有小於約1ppm環氧丙烷。

在一些實施例中，醫藥組合物包含醫藥活性成份，其中於室溫下在約24小時後藉由UV光譜法量測時，醫藥活性成份於1mL蒸餾水中之20%(w/v)溶液溶解至少2mg(例如至少3mg、至少4mg或至少5mg)未酯化膽固醇。

在一些實施例中，醫藥組合物展現較Trappsol® Cyclo低之耳毒性。在一些實施例中，耳毒性係藉由豪斯耳科研究中心-柯氏器官1(House Ear Institute-organ of Corti 1)(HEI-OC1)細胞中之毒性活體外測定。在一些實施例中，耳毒性係藉由個體(例如小鼠、大鼠、貓、狗或人類)中之腦幹聽性誘發反應(BAER)測試活體內測定。

在一些實施例中，醫藥組合物適於鞘內或腦室內投與。

在一些實施例中，醫藥組合物具有約300mOsm/kg至約450mOsm/kg之滲透壓。

在一些實施例中，醫藥組合物包含約10mg/mL至約200mg/mL醫藥活性成份。

在一些實施例中，醫藥組合物之單一醫藥活性成份係藉由純化Kleptose® HBP、Kleptose® HP、Trappsol® Cyclo或Cavasol® W7 HP Pharma獲得。在某些實施例中，醫藥組合物之單一醫藥活性成份係藉由純化Kleptose® HBP獲得。在某些實施例中，醫藥組合物之單一醫藥活性成份係藉由純化Trappsol® Cyclo獲得。在一些實施例中，純化包含親水或疏水相互作用或親和力純化且可涉及層析方法，例如藉由HPLC或凝膠層析純化。

本揭示內容亦提供治療C型尼曼-匹克病之方法，其包含藉由(例如)鞘內或腦室內投與向有需要之個體投與治療有效量之如本文所述醫藥組合物。在一些實施例中，該方法包含向患者投與約300mg至約3000mg醫藥活性成份。在一些實施例中，投與係每週、每兩週、每三週、每月、每兩個月或每三個月進行。舉例而言，該方法可包含每兩週向個體投與約600mg至約1800mg醫藥活性成份。

在一些實施例中，該方法包含投與足以調節腦脊髓液中以下中之一或多者之含量之量的醫藥活性成份：τ蛋白、類澱粉肽、神經絲微蛋白(NFL)、膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)、固醇、氧化固醇、幾丁三糖酶活性、鈣結合蛋白、溶酶體相關膜蛋白1(LAMP-1)、GM2或GM3神經節苷酯、神經鞘胺醇及神經鞘胺醇-1-磷酸鹽(S1P)。

在一些實施例中，該方法包含投與足以調節血漿中以下中之一或多種之含量之量的醫藥活性成份：7-酮膽固醇、7-羥基膽固醇、24S-羥基膽固醇、25-羥基膽固醇、27-羥基膽固醇及膽甾烷-3β,5α,6β-三醇。

在一些實施例中，該方法包含投與足以調節尿液中以下中之一或多種之含量之量的醫藥活性成份：3-磺氧基-7-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CA)、甘胺酸結合之3-磺氧基-7-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CG)及牛磺酸結合之3-磺氧基-7-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CT)。

在一些實施例中，該方法進一步包含維持或降低選自以下之NPC嚴重程度量表之一或多個域評分：活動、精細動作技能、認知、言語、吞嚥、眼運動、記憶力、聽力及癲癇。

圖1圖解說明促成根據Yanjanin等人，「Linear Clinical Progression,Independent of Age of Onset,in Niemann-Pick Disease, Type C」,Am.J.Med.Genet.Part B 153B：132-140(2010)之標準NPC臨床嚴重程度量表之臨床域。

圖2概述實例1中所述I期臨床試驗之初始分析的結果。

圖3概述實例1中所述I期臨床試驗之其他分析。

圖4概述使用自基線之變化之I期臨床試驗數據的分析。

圖5概述使用整體NPC評分之I期臨床試驗之早期結果。

圖6概述去除聽力影響之I期臨床試驗之早期結果。

圖7概述促使新穎「NPC複合」終點或嚴重程度評分之臨床域。

圖8概述使用新穎NPC複合終點之I期臨床試驗之早期結果。

圖9繪示使用CD-篩選方法之代表性HPLC層析圖。

圖10繪示在CD-篩選方法中使用不同溶劑之比較HPLC層析圖。 上跡線：甲醇；下跡線：乙腈。

圖11繪示使用CD-篩選管柱之具有不同取代度(DS)之羥丙基β-環糊精的質譜萃取離子層析圖。

圖12繪示使用LiChrosphere C18反相管柱之代表性HPLC層析圖。

圖13繪示在LiChrosphere C18反相層析方法中使用不同溶劑之比較HPLC層析圖。上跡線：甲醇；下跡線：乙腈。

圖14繪示使用LiChrosphere C18管柱之具有不同取代度(DS)之羥丙基β-環糊精的質譜萃取離子層析圖。

圖15繪示在HILIC管柱中使用不同溶劑之比較HPLC層析圖。上跡線：水中之79%乙腈之梯度；下跡線：75%乙腈。

圖16繪示使用HILIC管柱之具有不同取代度(DS)之羥丙基β-環糊精的質譜萃取離子層析圖。

圖17繪示使用矽膠管柱之代表性HPLC層析圖。

圖18繪示使用矽膠管柱之具有不同取代度(DS)之羥丙基β-環糊精的質譜萃取離子層析圖。

圖19顯示商業Kleptose HPB®(Roquette，批次E0223)(上跡線)及在藉由與D-檸檬烯複合純化後(下跡線)之重疊HPLC跡線。X軸顯示滯留時間(分鐘)。

圖20顯示與商業Kleptose HPB®(Roquette，批次E0223)相比在使用水/丙酮混合物溶劑沈澱後獲得之試樣之HPLC跡線(上跡線)。

圖21顯示商業Kleptose HPB®(Roquette，批次E0223)(上跡線)及在藉由樹脂及木炭處理純化後(下跡線)之重疊HPLC跡線。X軸顯示滯留時間(分鐘)。

圖22顯示商業Kleptose HPB®(Roquette，批次E0223)(上跡線)及在藉由氧化鋁澄清純化後之重疊HPLC跡線。下跡線顯示在氧化鋁澄清後之純化濾液之數據；中間跡線顯示在氧化鋁澄清後純化第一次沖洗之數據。X軸顯示滯留時間(分鐘)。

圖23顯示自Kleptose^® HPB之氧化鋁層析獲得之部分A至H(排除E)中之每一者之比較HPLC跡線。部分A至H分別對應於試樣5.4.3.2.2A至5.4.3.2.2H(排除E)。X軸顯示滯留時間(分鐘)。

圖24顯示自藉由Kleptose HPB®之氧化鋁層析純化收集之部分A至H中之每一者之雜質含量之百分比的圖。x軸上之A至H分別對應於試樣5.4.3.2.2A至5.4.3.2.2H。Y軸顯示雜質含量%。PG%=丙二醇%(對角線條)；總其他雜質%=總環糊精相關之雜質%(黑色條)；BCD%=未經取代之β-環糊精%(中空條)；HPBCD DS-1%=經單取代之β-環糊精%(反對角線條)。

圖25繪示鑑別丙二醇(欲量測之雜質)及乙二醇(內標準品)之Kleptose HPB®之實例性氣相層析圖。X軸顯示時間(分鐘)；y軸顯示反應。

圖26繪示丙二醇衍生物之實例性氣相層析圖。X軸顯示時間(分鐘)；y軸顯示反應(毫伏)。

圖27繪示用以測定氣相層析試樣中丙二醇濃度之校正圖。PG/EG=如所指示丙二醇對乙二醇之比率。

圖28繪示使用歐洲藥典(European Pharmacopeial)方法之Kleptose HPB®(DS_a為4.1)之實例性¹H NMR譜。

圖29提供第一實驗室之電噴射MS譜數據，其中圖29A顯示Kleptose^® HPB譜且圖29B顯示Trappsol^® Cyclo^TM之譜。向譜添加數字以鑑別每一峰中之羥丙基部分之數目。

圖30提供第二實驗室之電噴射MS數據，其中圖30A顯示Kleptose^® HPB之譜且圖30B顯示Trappsol^® Cyclo^TM之譜。

圖31比較由兩個不同實驗室實施之Kleptose^® HPB之三個不同批次之電噴射MS數據。

圖32提供使用與用於產生圖31中所示Kleptose數據相同之條件之由兩個不同實驗室實施之Trappsol^® Cyclo^TM之兩個不同批次之電噴射MS譜。

圖33顯示電噴射MS譜，其中與圖29至32相比，Y軸擴展以顯示1090m/z與1230m/z之間之峰。圖33A係自Trappsol^® Cyclo^TM獲得之譜。圖33B係自Kleptose^® HPB獲得之譜。

圖34提供進一步比較Kleptose^® HPB與Trappsol^® Cyclo^TM之間之差異之電噴射MS數據，其中圖34A顯示Kleptose^® HPB譜且圖34B顯示Trappsol^® Cyclo^TM之譜。向譜添加數字以鑑別每一峰中之羥丙基部分之數目。

圖35提供995m/z與1095m/z之間之Kleptose^® HPB與Trappsol^® Cyclo^TM之間之額外MS譜差異，其中圖35A顯示Kleptose^® HPB譜且圖35B顯示Trappsol^® Cyclo^TM之譜。

圖36提供顯示利用氧化鋁吸附之純化對取代指紋之效應的電噴射MS數據。圖36A顯示Kleptose^®HPB起始材料之譜且圖36B提供批次 CYL-4063之譜，該批次藉由氧化鋁上之吸附層析與溶劑沈澱(水-丙酮)之組合來純化。

圖37顯示經一系列Kleptose^® HPB濃度(0.1mM至10mM)處理之GM18453及GM05659細胞中之選擇膽固醇穩態相關基因之表現的變化倍數。

圖38顯示膽固醇穩態基因之亞組中針對NPC1突變為純合之GM18453細胞中之表現之變化倍數，其中對於以下四種不同組合物在處理後表現在統計上顯著不同(p<0.001)：STD(Kleptose^® HPB「標準」)；AC(藉由氧化鋁層析之Kleptose^® HPB純化)；SP(藉由溶劑沈澱之Kleptose^® HPB純化)；及AP(藉由氧化鋁層析及溶劑沈澱之Kleptose^® HPB純化)。

圖39顯示在GM18453細胞分別經藉由包括吸附至鋁之方法純化之Kleptose^® HPB及一批Kleptose^® HPB處理後受影響最顯著、藉由統計顯著性分級之生物路徑。

圖40顯示自一批Kleptose^® HPB之製備型CD-篩選層析分離獲得之各個部分的層析圖，其經注釋以顯示層析分離之羥丙基β-環糊精物質之取代度。

圖41顯示Kleptose^® HPB、「L」部分、「M」部分及「H」部分之電噴射MS譜，其經注釋以由羥丙基取代度鑑別信號，其中圖41A顯示Kleptose^® HPB批次E0245；圖41B顯示「L」部分(僅部分2)；圖41C顯示「M」部分(部分4-15之彙集)；且圖41D顯示「H」部分(部分16-24之彙集)。

圖42顯示以統計顯著性遞降之次序分級，10個受用1.0mM「L」、「M」及「H」部分處理NPC細胞影響最大之生物路徑。

圖43顯示自一批Kleptose^® HPB(批次E0245)之製備型鋁吸附層析分離獲得之各個部分的層析圖，其經注釋以顯示經彙集產生部分 「A」-「F」及「K」之數字部分，且經注釋以顯示層析分離之羥丙基β-環糊精物質之取代度。

圖44顯示在不同純化方法後HPBCD混合物之層析圖，其中圖44A顯示在方法II-IX後純化HPBCD混合物之層析圖，且圖44B顯示在方法X及XI後純化HPBCD混合物之層析圖。

圖45概述針對18個月時NPCI期臨床試驗數據執行之分析。

圖46顯示18個月時I期臨床試驗數據之年變化比率。

圖47顯示18個月時I期臨床試驗數據自基線之平均變化。

圖48顯示18個月時I期臨床試驗數據之反應者分析。

圖49顯示治療對聽力之影響。

圖50概述治療對聽力之影響。

6.1. 實驗觀察

如下文實例1中詳細闡述，分析由NIH執行之I期臨床試驗之初始數據，其中具有1型NPC疾病之患者係藉由使用現存非經腸級組合物Kleptose^® HPB(Roquette)鞘內投與2-羥丙基β-環糊精(「HPBCD」)來治療。在此非隨機化、開放標記、單一中心研究中，Kleptose^® HPB係以遞增劑量經由腰注射投與患者之非用藥隊列。在吾人之某些分析中，亦包括在個別IND下在另一機構處經鞘內Kleptose^® HPB治療之三個患者的數據。

分析確認Kleptose^® HPB之鞘內投與在1型NPC疾病中提供治療益處。使用標準聚集結果量度(即NPC臨床嚴重程度量表)(參見Yanjanin等人，「Linear Clinical Progression,Independent of Age of Onset,in Niemann-Pick Disease,Type C,」Am.J.Med.Genet.Part B 153B：132-140(2010)；亦參見本文中之圖1及表1)，觀察到與已研究未治療疾病之自然史之患者之隊列中的0/13相比，7/15患者具有穩定 或改良疾病(參見圖5)。使用由數據之事後分析告知之新複合終點(圖7)，發現11/15研究患者顯示穩定或改良疾病，相對於自然史隊列中僅4/13具有穩定疾病(參見圖8)。在吾人之某些分析中，使用去除聽力及聽性腦幹反應(ABR)之NPC臨床嚴重程度評分。

然而，更詳細分析顯示，儘管HPBCD之鞘內投與改良1型NPC疾病之某些體徵及症狀，但其僅減緩其他體徵及症狀之進展，且自相矛盾地似乎加速其他症狀之進展。具體而言，在接受鞘內Kleptose^® HPB之患者中，聽力損失似乎加速(參見例如圖2、3、4)。

如下文實例3中詳細闡述，藉由層析方法分析Kleptose^® HPB之代表性批次。該等分析揭示，此非經腸級產物包含具有不同取代度之β-環糊精分子之複雜混合物(參見例如圖11、14、16、18)；未知該等物質中哪種促進各種臨床域之觀察之改良、進展之減緩及進展之加速。

實例5中所述使用電噴射質譜之其他分析展現，與不同市售羥丙基β-環糊精組合物Trappsol^® Cyclo^TM之取代指紋相比，實例1中所述之I期臨床試驗中所用之羥丙基β-環糊精組合物Kleptose^® HPB之取代指紋存在顯著差異。發現Kleptose^® HPB具有取代指紋之低批間變化及低含量之雜質(尤其丙二醇)。相比之下，發現Trappsol^® Cyclo^TM展現其取代指紋之高批間變化及顯著較高含量之丙二醇(一種假定耳毒素)。

為製備HPBCD將以更頻繁劑量直接投與腦脊髓液達較長時間段之臨床試驗，研發降低以下物質之含量之方法：丙二醇，其係假定耳毒素；無羥丙基取代之β-環糊精分子，已知其形成沈澱；及細菌內毒素，其具有高度發炎性，如實例6及7中所述。儘管該等方法成功減少指定雜質，但觀察到利用氧化鋁之吸附層析不論單獨使用或與溶劑沈澱組合使用亦改變組成指紋，從而實質上降低具有單一羥丙基取代(DS-1)之β-環糊精分子之量並降低具有兩個取代(DS-2)之β-環糊精分 子之量(參見實例7；表20)。具有低取代度(DS-0，按預期；及DS-1及DS-2，意外)之分子之盛行率之降低增加混合物之平均取代度(DS_a)。

如實例8中詳述及圖35-38中概述，使用吸附至鋁進一步純化之Kleptose^® HPB及一批Kleptose^® HPB之基因表現剖析實驗進一步展現，針對NPC1突變為純合之細胞上之羥丙基β-環糊精混合物之活性係由具有不同羥丙基取代度之物質單獨貢獻之活性之複合物。儘管與Kleptose^® HPB相比組成指紋變化，但令人驚奇地，已知參與膽固醇代謝及運輸之基因之表現無變化。此發現將容許藉由鞘內或腦室內途徑向具有NPC疾病之患者之CSF投與新穎之更高度純化及組成不同之HPBCD組合物達較長時段、具有治療效應及增加安全性。

6.2. 醫藥組合物

本發明提供包含在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物作為醫藥活性成份的醫藥組合物，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子。

6.2.1. 醫藥活性成份

醫藥活性成份係在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子。在本揭示內容中，術語「醫藥活性成份」與「活性醫藥成份」同義使用。

6.2.1.1. 平均取代度

如本文所用之「在一或多個羥基位置處經羥丙基取代」係指用羥丙基或羥丙基寡聚物置換β-環糊精分子之一或多個羥基之氫。例如，「在一或多個羥基位置處經羥丙基取代」可指在β-環糊精分子上之一或多個O-H鍵內插入一或多個-CH₂CH(CH₃)O-取代基，從而產生疑惑多個醚鏈接。

β-環糊精之混合物中每脫水葡萄糖單元之羥丙基之數目係「莫耳取代」或「MS」，且係根據Hydroxypropyl Betadex(USP NF 2015) (「USP Hydroxypropyl Betadex專論」)上USP專論中闡述之程序測定，該專論之內容以引用方式併入本文中。在本揭示內容中，術語「平均莫耳取代」或「MS_a」在USP Hydroxypropyl Betadex專論中使用該術語時與「MS」同義使用，且術語「葡萄糖單元」在USP Hydroxypropyl Betadex專論中使用該術語時與「脫水葡萄糖單元」用作同義詞。

如本文所用之「取代度」或「DS」係指β-環糊精分子上直接或間接取得之羥丙基之總數目。舉例而言，含有各自經1個羥丙基取代之葡萄糖單元之β-環糊精分子具有DS=7。在另一實例中，七個葡萄糖單元中之僅一個經羥丙基取代且羥丙基自身經另一羥丙基取代之β-環糊精分子(例如，HP單次出現且包含2個羥丙基之β-環糊精)具有DS=2。

如本文所用之「每個β-環糊精中羥丙基之平均數」(亦稱作「平均取代度」、「平均DS」或「DS_a」)係指β-環糊精群體中之羥丙基之總數目除以β-環糊精分子之數目。在闡釋性實例中，含有各自經1個羥丙基取代之葡萄糖單元之β-環糊精及含有各自經2個羥丙基取代之葡萄糖單元之β-環糊精之相等份數混合物具有DS_a=10.5(DS=7及DS=14之相等份數β-環糊精之平均數)。在另一闡釋性實例中，33.3%七個葡萄糖單元中之僅一個經羥丙基取代之β-環糊精(即，DS=1)及66.7%含有各自經1個羥丙基取代之葡萄糖單元之β-環糊精(即，DS=7)的混合物具有DS_a=5.0。

DS_a係藉由用MS乘以7測定。如本文所用之DS_a在USP Hydroxypropyl Betadex專論中定義該術語時與「取代度」同義使用。

在一些實施例中，混合物中之β-環糊精由以下結構之葡萄糖單元組成：

其中R¹、R²及R³在每次出現時皆獨立地係-H或-HP，其中HP包含一或多個羥丙基。

在一些實施例中，HP包含1個羥丙基。在一些實施例中，HP基本上由1個羥丙基組成。在一些實施例中，HP由1個羥丙基組成。

在一些實施例中，每個β-環糊精中HP之平均出現次數係約3至約7，例如約3至約6、約3至約5、約3至約4、約4至約7、約4至約6、約4至約5、約5至約7、約5至約6或約6至約7。

在一些實施例中，R³=HP之總出現次數大於R¹=HP或R²=HP之總出現次數。在某些實施例中，R³=HP之總出現次數大於R¹=HP且R²=HP之總組合出現次數。

在一些實施例中，組合之R¹及R²之總出現次數之至少約5%、例如至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%或至少約45%係HP。

在一些實施例中，組合之R¹及R²之總出現次數之不超過約95%、例如不超過約90%、不超過約85%、不超過約80%、不超過約75%、不超過約70%、不超過約65%、不超過約60%、不超過約55%或不超過約50%係HP。

在一些實施例中，作為HP之組合之R¹及R²之百分比介於以下範圍內：約5%至約95%，例如約10%至約95%、約15%至約95%、約20%至約95%、約25%至約95%、約30%至約95%、約35%至約95%、約40%至約95%、約45%至約95%、約50%至約95%、約55%至約95%、約60%至約95%、約65%至約95%、約70%至約95%、約75%至約95%、約80%至約95%、約85%至約95%、約90%至約95%；例如約5% 至約90%、約10%至約90%、約15%至約90%、約20%至約90%、約25%至約90%、約30%至約90%、約35%至約90%、約40%至約90%、約45%至約90%、約50%至約90%、約55%至約90%、約60%至約90%、約65%至約90%、約70%至約90%、約75%至約90%、約80%至約90%、約85%至約90%；例如約5%至約85%、約10%至約85%、約15%至約85%、約20%至約85%、約25%至約85%、約30%至約85%、約35%至約85%、約40%至約85%、約45%至約85%、約50%至約85%、約55%至約85%、約60%至約85%、約65%至約85%、約70%至約85%、約75%至約85%、約80%至約85%；例如約5%至約80%、約10%至約80%、約15%至約80%、約20%至約80%、約25%至約80%、約30%至約80%、約35%至約80%、約40%至約80%、約45%至約80%、約50%至約80%、約55%至約80%、約60%至約80%、約65%至約80%、約70%至約80%、約75%至約80%；例如約5%至約75%、約10%至約75%、約15%至約75%、約20%至約75%、約25%至約75%、約30%至約75%、約35%至約75%、約40%至約75%、約45%至約75%、約50%至約75%、約55%至約75%、約60%至約75%、約65%至約75%、約70%至約75%；例如約5%至約70%、約10%至約70%、約15%至約70%、約20%至約70%、約25%至約70%、約30%至約70%、約35%至約70%、約40%至約70%、約45%至約70%、約50%至約70%、約55%至約70%、約60%至約70%、約65%至約70%；例如約5%至約65%、約10%至約65%、約15%至約65%、約20%至約65%、約25%至約65%、約30%至約65%、約35%至約65%、約40%至約65%、約45%至約65%、約50%至約65%、約55%至約65%、約60%至約65%；例如約5%至約60%、約10%至約60%、約15%至約60%、約20%至約60%、約25%至約60%、約30%至約60%、約35%至約60%、約40%至約60%、約45%至約60%、約50%至約60%、約55%至約60%； 例如約5%至約55%、約10%至約55%、約15%至約55%、約20%至約55%、約25%至約55%、約30%至約55%、約35%至約55%、約40%至約55%、約45%至約55%、約50%至約55%；例如約5%至約50%、約10%至約50%、約15%至約50%、約20%至約50%、約25%至約50%、約30%至約50%、約35%至約50%、約40%至約50%、約45%至約50%；例如約5%至約45%、約10%至約45%、約15%至約45%、約20%至約45%、約25%至約45%、約30%至約45%、約35%至約45%、約40%至約45%；例如約5%至約40%、約10%至約40%、約15%至約40%、約20%至約40%、約25%至約40%、約30%至約40%、約35%至約40%；例如約5%至約35%、約10%至約35%、約15%至約35%、約20%至約35%、約25%至約35%、約30%至約35%；例如約5%至約30%、約10%至約30%、約15%至約30%、約20%至約30%、約25%至約30%；例如約5%至約25%、約10%至約25%、約15%至約25%、約20%至約25%；例如約5%至約20%、約10%至約20%、約15%至約20%；例如約5%至約15%、約10%至約15%；或約5%至約10%。

在一些實施例中，R³之出現次數之至少約5%、例如至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%或至少約50%係HP。

在一些實施例中，R³之出現次數之不超過約95%、例如不超過約90%、不超過約85%、不超過約80%、不超過約75%、不超過約70%、不超過約65%、不超過約60%或不超過約55%係HP。

在一些實施例中，作為HP之R³之出現次數之百分比介於以下範圍內：約20%至約90%，例如約25%至約90%、約30%至約90%、約35%至約90%、約40%至約90%、約45%至約90%、約50%至約90%、約55%至約90%、約60%至約90%、約65%至約90%、約70%至約90%、約75%至約90%、約80%至約90%、約85%至約90%、約20%至 約85%、約25%至約85%、約30%至約85%、約35%至約85%、約40%至約85%、約45%至約85%、約50%至約85%、約55%至約85%、約60%至約85%、約65%至約85%、約70%至約85%、約75%至約85%、約80%至約85%、約20%至約80%、約25%至約80%、約30%至約80%、約35%至約80%、約40%至約80%、約45%至約80%、約50%至約80%、約55%至約80%、約60%至約80%、約65%至約80%、約70%至約80%、約75%至約80%、約20%至約75%、約25%至約75%、約30%至約75%、約35%至約75%、約40%至約75%、約45%至約75%、約50%至約75%、約55%至約75%、約60%至約75%、約65%至約75%、約70%至約75%、約20%至約70%、約25%至約70%、約30%至約70%、約35%至約70%、約40%至約70%、約45%至約70%、約50%至約70%、約55%至約70%、約60%至約70%、約65%至約70%、約20%至約65%、約25%至約65%、約30%至約65%、約35%至約65%、約40%至約65%、約45%至約65%、約50%至約65%、約55%至約65%、約60%至約65%、約20%至約60%、約25%至約60%、約30%至約60%、約35%至約60%、約40%至約60%、約45%至約60%、約50%至約60%、約55%至約60%、約20%至約55%、約25%至約55%、約30%至約55%、約35%至約55%、約40%至約55%、約45%至約55%、約50%至約55%、約20%至約50%、約25%至約50%、約30%至約50%、約35%至約50%、約40%至約50%、約45%至約50%、約20%至約45%、約25%至約45%、約30%至約45%、約35%至約45%、約40%至約45%、約5%至約40%、約10%至約40%、約15%至約40%、約20%至約40%、約25%至約40%、約30%至約40%、約35%至約40%、約20%至約35%、約25%至約35%、約30%至約35%、約20%至約30%、約25%至約30%或約20%至約25%。

在一些實施例中，至少約70%、例如至少約75%、至少約80%、 至少約85%、至少約90%或至少約95%之β-環糊精總共具有每個β-環糊精約4至約7、例如約4至約6、約4至約5、約5至約7、約5至約6或約6至約7之HP之平均出現次數。

在一些實施例中，總共具有每個β-環糊精約4至約7、例如約4至約6、約4至約5、約5至約7、約5至約6或約6至約7之HP之平均出現次數之β-環糊精的百分比介於以下範圍內：約50%至約99%，例如約55%至約99%、約60%至約99%、約65%至約99%、約70%至約99%、約75%至約99%、約80%至約99%、約85%至約99%、約90%至約99%、約95%至約99%；例如約50%至約97%、例如約55%至約97%、約60%至約97%、約65%至約97%、約70%至約97%、約75%至約97%、約80%至約97%、約85%至約97%、約90%至約97%、約95%至約97%；例如約50%至約95%、約55%至約95%、約60%至約95%、約65%至約95%、約70%至約95%、約75%至約95%、約80%至約95%、約85%至約95%、約90%至約95%；例如約50%至約90%、約55%至約90%、約60%至約90%、約65%至約90%、約70%至約90%、約75%至約90%、約80%至約90%、約85%至約90%；例如約50%至約85%、約55%至約85%、約60%至約85%、約65%至約85%、約70%至約85%、約75%至約85%、約80%至約85%；例如約50%至約80%、約55%至約80%、約60%至約80%、約65%至約80%、約70%至約80%、約75%至約80%；例如約50%至約75%、約55%至約75%、約60%至約75%、約65%至約75%、約70%至約75%；例如約50%至約70%、約55%至約70%、約60%至約70%、約65%至約70%；例如約50%至約65%、約55%至約65%、約60%至約65%；例如約50%至約60%、約55%至約60%；或例如約50%至約55%。

在某些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物包含未經取代之β-環糊精分子及在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混 合物作為醫藥活性成份，其中該混合物具有每個β-環糊精分子約3至約7之羥丙基之平均數(DS_a)。

在一些實施例中，DS_a係約3至約5，例如約3至約4。在一些實施例中，DS_a係3.3±0.3、3.5±0.3或3.7±0.3。在其他實施例中，DS_a係3.2±0.2、3.3±0.2、3.4±0.2、3.5±0.2、3.6±0.2、3.7±0.2或3.8±0.2。在其他實施例中，DS_a係3.1±0.1、3.2±0.1、3.3±0.1、3.4±0.1、3.5±0.1、3.6±0.1、3.7±0.1、3.8±0.1或3.9±0.1。

在一些實施例中，DS_a係約3.5至約5.5，例如約3.5至約4.5。在一些實施例中，DS_a係3.8±0.3、4.0±0.3或4.2±0.3。在其他實施例中，DS_a係3.7±0.2、3.8±0.2、3.9±0.2、4.0±0.2、4.1±0.2、4.2±0.2或4.3±0.2。在其他實施例中，DS_a係3.6±0.1、3.7±0.1、3.8±0.1、3.9±0.1、4.0±0.1、4.1±0.1、4.2±0.1、4.3±0.1或4.4±0.1。

在一些實施例中，DS_a係約4至約6，例如約4至約5。在一些實施例中，DS_a係4.3±0.3、4.5±0.3或4.7±0.3。在其他實施例中，DS_a係4.2±0.2、4.3±0.2、4.4±0.2、4.5±0.2、4.6±0.2、4.7±0.2或4.8±0.2。在其他實施例中，DS_a係4.1±0.1、4.2±0.1、4.3±0.1、4.4±0.1、4.5±0.1、4.6±0.1、4.7±0.1、4.8±0.1或4.9±0.1。

在一些實施例中，DS_a係約4.5至約6.5，例如約4.5至約5.5。在一些實施例中，DS_a係4.8±0.3、5.0±0.3或5.2±0.3。在其他實施例中，DS_a係4.7±0.2、4.8±0.2、4.9±0.2、5.0±0.2、5.1±0.2、5.2±0.2或5.3±0.2。在其他實施例中，DS_a係4.6±0.1、4.7±0.1、4.8±0.1、4.9±0.1、5.0±0.1、5.1±0.1、5.2±0.1、5.3±0.1或5.4±0.1。

在一些實施例中，DS_a係約5至約7，例如約5至約6。在一些實施例中，DS_a係5.3±0.3、5.5±0.3或5.7±0.3。在其他實施例中，DS_a係 5.2±0.2、5.3±0.2、5.4±0.2、5.5±0.2、5.6±0.2、5.7±0.2或5.8±0.2。在其他實施例中，DS_a係5.1±0.1、5.2±0.1、5.3±0.1、5.4±0.1、5.5±0.1、5.6±0.1、5.7±0.1、5.8±0.1或5.9±0.1。

在一些實施例中，DS_a係約5.5至約6.5。在一些實施例中，DS_a係5.8±0.3、6.0±0.3或6.2±0.3。在其他實施例中，DS_a係5.7±0.2、5.8±0.2、5.9±0.2、6.0±0.2、6.1±0.2、6.2±0.2或6.3±0.2。在其他實施例中，DS_a係5.6±0.1、5.7±0.1、5.8±0.1、5.9±0.1、6.0±0.1、6.1±0.1、6.2±0.1、6.3±0.1或6.4±0.1。

在一些實施例中，DS_a係約6至約7。在一些實施例中，DS_a係6.3±0.3、6.5±0.3或6.7±0.3。在其他實施例中，DS_a係6.2±0.2、6.3±0.2、6.4±0.2、6.5±0.2、6.6±0.2、6.7±0.2或6.8±0.2。在其他實施例中，DS_a係6.1±0.1、6.2±0.1、6.3±0.1、6.4±0.1、6.5±0.1、6.6±0.1、6.7±0.1、6.8±0.1或6.9±0.1。

在一些實施例中，DS_a係約4.1±15%、約4.2±15%、約4.3±15%、約4.4±15%或約4.5±15%，例如約4.1±10%、約4.2±10%、約4.3±10%、約4.4±10%或約4.5±10%，例如約4.1±5%、約4.2±5%、約4.3±5%、約4.4±5%或約4.5±5%。舉例而言，在某些實施例中，DS_a係約4.31±10%、約4.32±10%、約4.33±10%、約4.34±10%、約4.35±10%、約4.36±10%或約4.37±10%，例如約4.31±5%、約4.32±5%、約4.33±5%、約4.34±5%、約4.35±5%、約4.36±5%或約4.37±5%。在特定實施例中，DS_a係約4.34±10%，例如約4.34±5%。

在一些實施例中，DS_a係約4.3±15%、約4.4±15%、約4.5±15%、約4.6±15%或約4.7±15%，例如約4.3±10%、約4.4±10%、約4.5±10%、約4.6±10%或約4.7±10%，例如約4.3±5%、約4.4±5%、約4.5±5%、約4.6±5%或約4.7±5%。舉例而言，在某些實施 例中，DS_a係約4.47±10%、約4.48±10%、約4.49±10%、約4.50±10%、約4.51±10%、約4.52±10%或約4.53±10%，例如約4.47±5%、約4.48±5%、約4.49±5%、約4.50±5%、約4.51±5%、約4.52±5%或約4.53±5%。在特定實施例中，DS_a係約4.50±10%，例如約4.50±5%。

在一些實施例中，DS_a係約6.1±15%、約6.2±15%、約6.3±15%、約6.4±15%或約6.5±15%，例如約6.1±10%、約6.2±10%、約6.3±10%、約6.4±10%或約6.5±10%，例如約6.1±5%、約6.2±5%、約6.3±5%、約6.4±5%或約6.5±5%。舉例而言，在某些實施例中，DS_a係約6.34±10%、約6.35±10%、約6.36±10%、約6.37±10%、約6.38±10%、約6.39±10%或約6.40±10%，例如約6.34±5%、約6.35±5%、約6.36±5%、約6.37±5%、約6.38±5%、約6.39±5%或約6.40±5%。在特定實施例中，DS_a係約6.37±10%，例如約6.37±5%。

在一些實施例中，DS_a係約6.3±15%、約6.4±15%、約6.5±15%、約6.6±15%或約6.7±15%，例如約6.3±10%、約6.4±10%、約6.5±10%、約6.6±10%或約6.7±10%，例如約6.3±5%、約6.4±5%、約6.5±5%、約6.6±5%或約6.7±5%。舉例而言，在某些實施例中，DS_a係約6.50±10%、約6.51±10%、約6.52±10%、約6.53±10%、約6.54±10%、約6.55±10%或約6.56±10%，例如約6.50±5%、約6.51±5%、約6.52±5%、約6.53±5%、約6.54±5%、約6.55±5%或約6.56±5%。在特定實施例中，DS_a係約6.53±10%，例如約6.53±5%。

未經取代之β-環糊精分子及在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物內之取代度之分佈可變。舉例而言，含有各自經1個羥丙基取代之葡萄糖單元之β-環糊精及含有各自經2個羥丙基 取代之葡萄糖單元之β-環糊精之相等份數混合物具有DS_a=10.5(DS=7及DS=14之相等份數β-環糊精之平均數)。儘管DS_a=10.5，但在此實例中，混合物內無具有DS=10或DS=11之β-環糊精。在其他情形下，β-環糊精之混合物內之大多數β-環糊精具有接近DS_a之DS。

在本揭示內容之一些實施例中，混合物內至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±X σ內之DS，其中σ係標準偏差，且X係1、2或3。舉例而言，在一些實施例中，混合物內至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±1 σ內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±1 σ內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±1 σ內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±1 σ內之DS。

在一些實施例中，混合物內至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±2 σ內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±2 σ內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±2 σ內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±2 σ內之DS。

在一些實施例中，混合物內至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±3 σ內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±3 σ內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±3 σ內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±3 σ內之DS。

在一些實施例中，至少約50%、例如至少約55%、約60%、約 65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±1內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±1內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±1內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±1內之DS。

在一些實施例中，至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±0.8內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±0.8內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±0.8內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±0.8內之DS。

在一些實施例中，至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±0.6內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±0.6內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±0.6內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±0.6內之DS。

在一些實施例中，至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±0.5內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±0.5內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±0.5內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±0.5內之DS。

在一些實施例中，至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±0.4內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊 精具有DS_a±0.4內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±0.4內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±0.4內之DS。

在一些實施例中，至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±0.3內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±0.3內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±0.3內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±0.3內之DS。

在一些實施例中，至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±0.2內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±0.2內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±0.2內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±0.2內之DS。

在一些實施例中，至少約50%、例如至少約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之β-環糊精具有DS_a±0.1內之DS。在一些實施例中，至少70%之β-環糊精具有DS_a±0.1內之DS。在一些實施例中，至少90%之β-環糊精具有DS_a±0.1內之DS。在一些實施例中，至少95%之β-環糊精具有DS_a±0.1內之DS。

在一些實施例中，MS介於以下範圍內：0.40至0.80，例如0.41至0.79、0.42至0.78、0.43至0.77、0.44至0.76、0.45至0.75、0.46至0.74、0.47至0.73、0.48至0.72、0.49至0.71、0.50至0.70、0.51至0.69、0.52至0.68、0.53至0.67、0.54至0.66、0.55至0.65、0.56至0.64、0.57至0.63、0.58至0.62或0.59至0.61。

在某些實施例中，MS係約0.40、約0.41、約0.42、約0.43、約0.44、約0.45、約0.46、約0.47、約0.48、約0.49、約0.50、約0.51、約0.52、約0.53、約0.54、約0.55、約0.56、約0.57、約0.58、約0.59、約0.60、約0.61、約0.62、約0.63、約0.64、約0.65、約0.66、約0.67、約0.68、約0.69、約0.70、約0.71、約0.72、約0.73、約0.74、約0.75、約0.76、約0.77、約0.78、約0.79或約0.80。

在某些實施例中，MS係約0.571-0.686(DS_a為約4.0至約4.8)。在該等實施例中之一些中，MS介於約0.58至約0.68範圍內。在當前較佳實施例中，MS介於0.58-0.68之範圍內。

在各個實施例中，MS係至少約0.55。在某些實施例中，MS係至少約0.56、0.57、0.58、0.59或0.60。在某些實施例中，MS係不超過約0.70。在具體實施例中，MS係不超過約0.69、0.68、0.67、0.66或0.65。

羥丙基可鍵結至β-環糊精作為單體，或可自身依序鍵結至一或多個額外羥丙基以形成羥丙基寡聚物，其隨後鍵結至β-環糊精。在一些實施例中，羥丙基在β-環糊精之羥基位置處經取代作為結構-[CH₂CH(CH₃)O]_nH之羥丙基鏈，其中n1且每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係約3至約7，例如約3至約6、約3至約5、約3至約4、約4至約7、約4至約6、約4至約5、約5至約7、約5至約6或約6至約7。在一些實施例中，n係1、2、3或4。

在一個闡釋性實例中，結構-CH₂CH(CH₃)OH之羥丙基鏈在羥丙基鏈中包括1個羥丙基(即，n=1)。在另一闡釋性實例中，結構-[CH₂CH(CH₃)O]₃H之羥丙基鏈在羥丙基鏈中包括3個羥丙基(即，n=3)。

在某些實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係3.3±0.3、3.4±0.3、3.6±0.3或3.8±0.3。在其他實施例中，每個β-環糊 精中羥丙基鏈之平均數係4.0±0.3、4.2±0.3、4.4±0.3、4.6±0.3或4.8±0.3。在其他實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係5.0±0.3、5.2±0.3、5.4±0.3、5.6±0.3或5.8±0.3。且在其他實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係6.0±0.3、6.2±0.3、6.4±0.3、6.6±0.3或6.7±0.3。

在一些實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係3.2±0.2、3.3±0.2、3.4±0.2、3.5±0.2、3.6±0.2、3.7±0.2或3.8±0.2。在其他實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係4.0±0.2、4.1±0.2、4.2±0.2、4.3±0.2、4.4±0.2、4.5±0.2、4.6±0.2、4.7±0.2或4.8±0.2。在其他實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係5.0±0.2、5.1±0.2、5.2±0.2、5.3±0.2、5.4±0.2、5.5±0.2、5.6±0.2、5.7±0.2或5.8±0.2。且在其他實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係6.0±0.2、6.1±0.2、6.2±0.2、6.3±0.2、6.4±0.2、6.5±0.2、6.6±0.2、6.7±0.2或6.8±0.2。

在一些實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係3.1±0.1、3.2±0.1、3.3±0.1、3.4±0.1、3.5±0.1、3.6±0.1、3.7±0.1、3.8±0.1或3.9±0.1。在其他實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係4.0±0.1、4.1±0.1、4.2±0.1、4.3±0.1、4.4±0.1、4.5±0.1、4.6±0.1、4.7±0.1、4.8±0.1或4.9±0.1。在其他實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係5.0±0.1、5.1±0.1、5.2±0.1、5.3±0.1、5.4±0.1、5.5±0.1、5.6±0.1、5.7±0.1、5.8±0.1或5.9±0.1。且在其他實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係6.0±0.1、6.1±0.1、6.2±0.1、6.3±0.1、6.4±0.1、6.5±0.1、6.6±0.1、6.7±0.1、6.8±0.1或6.9±0.1。

在一些實施例中，至少約50%、例如約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%之羥丙基 鏈具有n=1。在一些實施例中，至少70%之羥丙基鏈具有n=1。在一些實施例中，至少90%之羥丙基鏈具有n=1。

在一些實施例中，具有n=1之羥丙基鏈之百分比介於以下範圍內：約50%至約99%，例如約55%至約99%、約60%至約99%、約65%至約99%、約70%至約99%、約75%至約99%、約80%至約99%、約85%至約99%、約90%至約99%、約95%至約99%；例如約50%至約97%，例如約55%至約97%、約60%至約97%、約65%至約97%、約70%至約97%、約75%至約97%、約80%至約97%、約85%至約97%、約90%至約97%、約95%至約97%；例如約50%至約95%、約55%至約95%、約60%至約95%、約65%至約95%、約70%至約95%、約75%至約95%、約80%至約95%、約85%至約95%、約90%至約95%；例如約50%至約90%、約55%至約90%、約60%至約90%、約65%至約90%、約70%至約90%、約75%至約90%、約80%至約90%、約85%至約90%；例如約50%至約85%、約55%至約85%、約60%至約85%、約65%至約85%、約70%至約85%、約75%至約85%、約80%至約85%；例如約50%至約80%、約55%至約80%、約60%至約80%、約65%至約80%、約70%至約80%、約75%至約80%；例如約50%至約75%、約55%至約75%、約60%至約75%、約65%至約75%、約70%至約75%；例如約50%至約70%、約55%至約70%、約60%至約70%、約65%至約70%；例如約50%至約65%、約55%至約65%、約60%至約65%；例如約50%至約60%、約55%至約60%；或例如約50%至約55%。

在一些實施例中，小於約50%、例如約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%、約5%或約3%之羥丙基鏈具有n=2。在一些實施例中，小於30%之羥丙基鏈具有n=2。在一些實施例中，小於10%之羥丙基鏈具有n=2。

在一些實施例中，具有n=2之羥丙基鏈之百分比介於以下範圍 內：約5%至約50%，例如約10%至約50%、約15%至約50%、約20%至約50%、約25%至約50%、約30%至約50%、約35%至約50%、約40%至約50%、約45%至約50%；例如約5%至約45%、約10%至約45%、約15%至約45%、約20%至約45%、約25%至約45%、約30%至約45%、約35%至約45%、約40%至約45%；例如約5%至約40%、約10%至約40%、約15%至約40%、約20%至約40%、約25%至約40%、約30%至約40%、約35%至約40%；例如約5%至約35%、約10%至約35%、約15%至約35%、約20%至約35%、約25%至約35%、約30%至約35%；例如約5%至約30%、約10%至約30%、約15%至約30%、約20%至約30%、約25%至約30%；例如約5%至約25%、約10%至約25%、約15%至約25%、約20%至約25%；例如約5%至約20%、約10%至約20%、約15%至約20%；例如約5%至約15%、約10%至約15%；或約5%至約10%。

在一些實施例中，小於約50%、例如約45%、約40%、約35%、約30%、約25%、約20%、約15%、約10%、約5%或約3%之羥丙基鏈具有n>2。在一些實施例中，小於10%之羥丙基鏈具有n>2。

在一些實施例中，具有n>2之羥丙基鏈之百分比介於以下範圍內：約5%至約50%，例如約10%至約50%、約15%至約50%、約20%至約50%、約25%至約50%、約30%至約50%、約35%至約50%、約40%至約50%、約45%至約50%；例如約5%至約45%、約10%至約45%、約15%至約45%、約20%至約45%、約25%至約45%、約30%至約45%、約35%至約45%、約40%至約45%；例如約5%至約40%、約10%至約40%、約15%至約40%、約20%至約40%、約25%至約40%、約30%至約40%、約35%至約40%；例如約5%至約35%、約10%至約35%、約15%至約35%、約20%至約35%、約25%至約35%、約30%至約35%；例如約5%至約30%、約10%至約30%、約15%至約30%、約20%至約 30%、約25%至約30%；例如約5%至約25%、約10%至約25%、約15%至約25%、約20%至約25%；例如約5%至約20%、約10%至約20%、約15%至約20%；例如約5%至約15%、約10%至約15%；或例如約5%至約10%。

在一些實施例中，每個β-環糊精中羥丙基鏈之平均數係約4至約6。在一些實施例中，至少約60%、例如至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約97%之β-環糊精總共具有每個β-環糊精約4至約6之羥丙基鏈之平均數。在一些實施例中，總共具有每個β-環糊精約4至約6之羥丙基鏈之平均數之β-環糊精的百分比介於以下範圍內：約60%至約97%，例如約65%至約97%、約70%至約97%、約75%至約97%、約80%至約97%、約85%至約97%、約90%至約97%；例如約60%至約95%、約65%至約95%、約70%至約95%、約75%至約95%、約80%至約95%、約85%至約95%、約90%至約95%；例如約60%至約90%、約65%至約90%、約70%至約90%、約75%至約90%、約80%至約90%、約85%至約90%；例如約60%至約85%、約65%至約85%、約70%至約85%、約75%至約85%、約80%至約85%；例如約60%至約80%、約65%至約80%、約70%至約80%、約75%至約80%；例如約60%至約75%、約65%至約75%、約70%至約75%；例如約60%至約70%、約65%至約70%；或例如約60%至約65%。

6.2.1.2. 取代指紋

6.2.1.2.1. DS-0

在典型實施例中，醫藥活性成份含有小於約2%、例如小於約1.5%、小於約1.4%、小於約1.3%、小於約1.2%、小於約1.1%、小於約1.0%、小於約0.9%、小於約0.8%、小於約0.7%、小於約0.6%、小於約0.5%、小於約0.4%、小於約0.3%、小於約0.2%、小於約0.1%、 小於約0.09%、小於約0.08%、小於約0.07%、小於約0.06%或小於約0.05%之未經取代之β-環糊精(「DS-0」；「BCD」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在典型實施例中，不超過(「NMT」)1%之β-環糊精混合物未經羥丙基取代(BCD)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在一些實施例中，醫藥活性成份中未經取代之β-環糊精之含量介於以下範圍內：約0.05%至約2%，例如約0.05%至約1.5%、約0.05%至約1.4%、約0.05%至約1.3%、約0.05%至約1.2%、約0.05%至約1.1%、約0.05%至約1.0%、約0.05%至約0.8%、約0.05%至約0.6%、約0.05%至約0.5%、約0.05%至約0.4%、約0.05%至約0.3%、約0.05%至約0.2%、約0.05%至約0.1%、約0.05%至約0.07%、約0.07%至約1.5%、約0.07%至約1.4%、約0.07%至約1.3%、約0.07%至約1.2%、約0.07%至約1.1%、約0.07%至約1.0%、約0.07%至約0.8%、約0.07%至約0.6%、約0.07%至約0.5%、約0.07%至約0.4%、約0.07%至約0.3%、約0.07%至約0.2%、約0.07%至約0.1%、約0.1%至約1.5%、約0.1%至約1.4%、約0.1%至約1.3%、約0.1%至約1.2%、約0.1%至約1.1%、約0.1%至約1.0%、約0.1%至約0.8%、約0.1%至約0.6%、約0.1%至約0.5%、約0.1%至約0.4%、約0.1%至約0.3%、約0.1%至約0.2%、約0.2%至約1.5%、約0.2%至約1.4%、約0.2%至約1.3%、約0.2%至約1.2%、約0.2%至約1.1%、約0.2%至約1.0%、約0.2%至約0.8%、約0.2%至約0.6%、約0.2%至約0.5%、約0.2%至約0.4%、約0.2%至約0.3%、約0.3%至約1.5%、約0.3%至約1.4%、約0.3%至約1.3%、約0.3%至約1.2%、約0.3%至約1.1%、約0.3%至約1.0%、約0.3%至約0.8%、約0.3%至約0.6%、約0.3%至約0.5%、約0.3%至約0.4%、約0.4%至約1.5%、約0.4%至約1.4%、約0.4%至約1.3%、約0.4%至約1.2%、約0.4%至約1.1%、約0.4%至約1.0%、約0.4%至約0.8%、約 0.4%至約0.6%、約0.4%至約0.5%、約0.5%至約1.5%、約0.5%至約1.4%、約0.5%至約1.3%、約0.5%至約1.2%、約0.5%至約1.1%、約0.5%至約1.0%、約0.5%至約0.8%、約0.5%至約0.6%、約0.6%至約1.5%、約0.6%至約1.4%、約0.6%至約1.3%、約0.6%至約1.2%、約0.6%至約1.1%、約0.6%至約1.0%、約0.6%至約0.8%、約0.8%至約1.5%、約0.8%至約1.4%、約0.8%至約1.3%、約0.8%至約1.2%、約0.8%至約1.1%、約0.8%至約1.0%、約1.0%至約1.5%、約1.0%至約1.4%、約1.0%至約1.3%、約1.0%至約1.2%、約1.0%至約1.1%、約1.1%至約1.5%、約1.1%至約1.4%、約1.1%至約1.3%、約1.1%至約1.2%、約1.2%至約1.5%、約1.2%至約1.4%、約1.2%至約1.3%、約1.3%至約1.5%、約1.3%至約1.4%或約1.4%至約1.5%。

在各個實施例中，組合物包含不超過約0.01% BCD、不超過約0.02% BCD、不超過約0.03% BCD、不超過約0.04% BCD或不超過約0.05% BCD之β-環糊精混合物。

6.2.1.2.2. DS-1

在典型實施例中，小於4%之β-環糊精混合物係經僅1個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-1」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在各個實施例中，小於3.9%、小於3.8%、小於3.7%、小於3.6%或小於3.5%之β-環糊精混合物係DS-1。在某些實施例中，醫藥活性成份包含小於3.5%、3.4%、3.3%、3.2%、3.1%或3.0% DS-1。在特定實施例中，醫藥活性成份包含小於2.9%、2.8%、2.7%、2.6%、2.5%、2.4%、2.3%、2.2%、2.1%或2.0% DS-1。在一些實施例中，β-環糊精分子之混合物包含小於1.9%、1.8%、1.7%、1.6%、1.5%、1.4%、1.3%、1.2%、1.1%或1.0% DS-1。在目前較佳實施例中，醫藥活性成份包含小於0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%或0.1% DS-1、甚至小於約0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、 0.04%、0.03% DS-1。在某些較佳實施例中，組合物包含小於0.03%、甚至低至0.02% DS-1。

在當前較佳實施例中，組合物包含小於約0.05% BCD及小於約0.03% DS-1。

6.2.1.2.3. DS-2

在各個實施例中，β-環糊精混合物具有低百分比之經2個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-2」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在各個實施例中，小於3.9%、小於3.8%、小於3.7%、小於3.6%或小於3.5%之β-環糊精混合物係DS-2。在某些實施例中，醫藥活性成份包含小於3.5%、3.4%、3.3%、3.2%、3.1%或3.0% DS-2。在特定實施例中，醫藥活性成份包含小於2.9%、2.8%、2.7%、2.6%、2.5%、2.4%、2.3%、2.2%、2.1%或2.0% DS-2。在一些實施例中，β-環糊精分子之混合物包含小於1.9%、1.8%、1.7%、1.6%、1.5%、1.4%、1.3%、1.2%、1.1%或1.0% DS-2。在目前較佳實施例中，醫藥活性成份包含小於0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%或0.1% DS-2、甚至小於約0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、0.04%、0.03% DS-2。在某些較佳實施例中，組合物包含小於0.03%、甚至低至0.02% DS-2。

6.2.1.2.4. DS-3

在典型實施例中，混合物包含作為總混合物之百分比之至少10%具有3個羥丙基取代之β-環糊精分子(「DS-3」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。在各個實施例中，至少11%、至少12%、至少13%、至少14%、至少15%、至少16%、至少17%、至少18%、至少19%、至少20%、至少21%、至少22%、至少23%、至少24%或至少25%之β-環糊精混合物係DS-3。

在各個實施例中，混合物包含作為總混合物之百分比之不超過 30%、例如不超過29%、不超過28%、不超過27%、不超過26%、不超過25%、不超過24%、不超過23%、不超過22%、不超過21%、不超過20%、不超過19%、不超過18%、不超過17%、不超過16%或不超過15%之DS-3。

在某些實施例中，整個混合物中DS-3之百分比介於以下範圍內：10%至30%，例如11%至29%、12%至28%、13%至27%、14%至26%、15%至25%、16%至24%、17%至23%、18%至22%或19%至21%。

在各個實施例中，混合物包含約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、約20%、約21%、約22%、約23%、約24%或約25% DS-3。

6.2.1.2.5. DS-4

在典型實施例中，混合物包含作為總混合物之百分比之至少20%具有4個羥丙基取代之β-環糊精分子(「DS-4」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。在各個實施例中，至少21%、至少22%、至少23%、至少24%、至少25%、至少26%、至少27%、至少28%、至少29%、至少30%、至少31%、至少32%、至少33%、至少34%或至少35%之β-環糊精混合物係DS-4。

在各個實施例中，混合物包含作為總混合物之百分比不超過40%、例如不超過39%、不超過38%、不超過37%、不超過36%、不超過35%、不超過34%、不超過33%、不超過32%、不超過31%、不超過30%、不超過29%、不超過28%、不超過27%、不超過26%或不超過25%之DS-4。

在某些實施例中，整個混合物中DS-4之百分比介於以下範圍內：20%至40%，例如21%至39%、22%至38%、23%至37%、24%至36%、25%至35%、26%至34%、27%至33%、28%至32%或29%至 31%。

在各個實施例中，混合物包含約25%、約26%、約27%、約28%、約29%、約30%、約31%、約32%、約33%、約34%或約35% DS-4。

6.2.1.2.6. DS-5

在典型實施例中，混合物包含作為總混合物之百分比之至少15%具有5個羥丙基取代之β-環糊精分子(「DS-5」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。在各個實施例中，至少16%、至少17%、至少18%、至少19%、至少20%、至少21%、至少22%、至少23%、至少24%、至少25%、至少26%、至少27%、至少28%、至少29%或至少30%之β-環糊精混合物係DS-5。

在各個實施例中，混合物包含作為總混合物之百分比之不超過35%、例如不超過34%、不超過33%、不超過32%、不超過31%、不超過30%、不超過29%、不超過28%、不超過27%、不超過26%、不超過25%、不超過24%、不超過23%、不超過22%、不超過21%或不超過20%之DS-5。

在某些實施例中，整個混合物中DS-5之百分比介於以下範圍內：15%至35%，例如16%至34%、17%至33%、18%至32%、19%至31%、20%至30%、21%至29%、22%至28%、23%至27%或24%至26%。

在各個實施例中，混合物包含約20%、約21%、約22%、約23%、約24%、約25%、約26%、約27%、約28%、約29%或約30% DS-5。

6.2.1.2.7. DS-6

在典型實施例中，混合物包含作為總混合物之百分比之至少5%具有6個羥丙基取代之β-環糊精分子(「DS-6」)，如藉由電噴射MS光 譜之峰高度所測定。在各個實施例中，至少6%、至少7%、至少8%、至少9%、至少10%、至少11%、至少12%、至少13%、至少14%、至少15%、至少16%、至少17%、至少18%、至少19%或至少20%之β-環糊精混合物係DS-6。

在各個實施例中，混合物包含作為總混合物之百分比不超過25%、例如不超過24%、不超過23%、不超過22%、不超過21%、不超過20%、不超過19%、不超過18%、不超過17%、不超過16%、不超過15%、不超過14%、不超過13%、不超過12%、不超過11%或不超過10%之DS-6。

在某些實施例中，整個混合物中DS-6之百分比介於以下範圍內：5%至25%，例如6%至24%、7%至23%、8%至22%、9%至21%、10%至20%、11%至19%、12%至18%、13%至17%或14%至16%。

在各個實施例中，混合物包含約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%或約17% DS-6。

6.2.1.2.8. DS-7

在典型實施例中，作為總混合物之百分比小於10%之β-環糊精混合物係經7個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-7」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。在各個實施例中，小於9%、小於8%、小於7%、小於6%、小於5%、小於4%、小於3%、小於2%或小於1%之β-環糊精混合物係DS-7。

在某些實施例中，整個混合物中DS-7之百分比介於以下範圍內：1%至10%、例如2%至9%、3%至8%、4%至7%或5%至6%。

在各個實施例中，混合物包含約10%、約9%、約8%、約7%、約6%、約5%、約4%、約3%、約2%或約1% DS-7。

6.2.1.2.9. DS-8

在典型實施例中，β-環糊精混合物包含作為總混合物之百分比小 於2%之經8個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-8」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。在各個實施例中，小於1.5%、小於1.4%、小於1.3%、小於1.2%、小於1.1%、小於1%、小於0.9%、小於0.8%、小於0.7%、小於0.6%、小於0.5%、小於0.4%、小於0.3%、小於0.2%、小於0.1%、小於0.09%、小於0.08%、小於0.07%、小於0.06%、小於0.05%、小於0.04%、小於0.03%、小於0.02%或小於0.O1%之β-環糊精係DS-8。

在某些實施例中，整個混合物中DS-8之百分比介於以下範圍內：0.01%至2%，例如0.02%至1.9%、0.03%至1.8%、0.04%至1.7%、0.05%至1.6%、0.06%至1.5%、0.07%至1.4%、0.08%至1.3%、0.09%至1.2%、0.1%至1.1%、0.2%至1%、0.3%至0.9%、0.4%至0.8%或0.5%至0.7%。

在各個實施例中，混合物包含約1.5%、約1.4%、約1.3%、約1.2%、約1.1%、約1%、約0.9%、約0.8%、約0.7%、約0.6%、約0.5%、約0.4%、約0.3%、約0.2%、約0.1%、約0.09%、約0.08%、約0.07%、約0.06%、約0.05%、約0.04%、約0.03%、約0.02%或約0.01% DS-8。

6.2.1.2.10. DS-9

在典型實施例中，作為總混合物之百分比不超過1%之β-環糊精混合物係經9個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-9」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。在各個實施例中，不超過0.9%、不超過0.8%、不超過0.7%、不超過0.6%、不超過0.5%、不超過0.4%、不超過0.3%、不超過0.2%、不超過0.1%、不超過0.09%、不超過0.08%、不超過0.07%、不超過0.06%、不超過0.05%、不超過0.04%、不超過0.03%、不超過0.02%或不超過0.01%之β-環糊精係DS-9。

6.2.1.2.11. DS-10

在典型實施例中，作為總混合物之百分比不超過1%之β-環糊精混合物係經10個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-10」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。在各個實施例中，不超過0.9%、不超過0.8%、不超過0.7%、不超過0.6%、不超過0.5%、不超過0.4%、不超過0.3%、不超過0.2%、不超過0.1%、不超過0.09%、不超過0.08%、不超過0.07%、不超過0.06%、不超過0.05%、不超過0.04%、不超過0.03%、不超過0.02%或不超過0.01%之β-環糊精係DS-10。

6.2.1.2.12. 概況

在各個實施例中，β-環糊精混合物含有作為整個混合物之百分比總共至少75%之DS-3、DS-4、DS-5及DS-6。在某些實施例中，混合物中總共至少76%、至少77%、至少78%、至少79%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%或至少98%之β-環糊精係DS-3、DS-4、DS-5及DS-6。

在各個實施例中，β-環糊精混合物包含作為整個混合物之百分比總共介於以下範圍內之DS-3、DS-4、DS-5及DS-6：約75%至約98%，例如約76%至約97%、約77%至約96%、約78%至約95%、約79%至約94%、約80%至約93%、約81%至約92%、約82%至約91%、約83%至約90%、約84%至約89%、約85%至約88%或約86%至約87%。

在典型實施例中，β-環糊精混合物包含作為整個混合物之百分比總共至少25%之DS-5及DS-6。在某些實施例中，混合物中總共至少26%、至少27%、至少28%、至少29%、至少30%、至少31%、至少32%、至少33%、至少34%、至少35%、至少36%、至少37%、至少38%、至少39%、至少40%、至少41%、至少42%、至少43%、至少44%、至少45%、至少46%、至少47%、至少48%、至少49%或至少 50%之β-環糊精係DS-5及DS-6。

在各個實施例中，β-環糊精混合物包含作為整個混合物之百分比總共介於以下範圍內之DS-5及DS-6：約25%至約50%，例如約26%至約49%、約27%至約48%、約28%至約47%、約29%至約46%、約30%至約45%、約31%至約44%、約32%至約43%、約33%至約42%、約34%至約41%、約35%至約40%、約36%至約39%或約37%至約38%。

在各個實施例中，作為整個混合物之百分比之具有最大盛行率之β-環糊精物質係DS-4。

6.2.1.3. 起始材料

在某些實施例中，本發明闡述醫藥組合物，其中單一醫藥活性成份係藉由純化一或多種選自以下之羥丙基β-環糊精產物來獲得：Kleptose^® HBP、Kleptose^® HP、Trappsol^® Cyclo及Cavasol^® W7 HP Pharma。

Kleptose® HBP及Kleptose® HP係可自Roquette Pharma,Lestrem,France獲得之羥丙基β-環糊精產物。Kleptose® HBP係DS_a為約4.3之羥丙基β-環糊精之非經腸級內毒素控制之組合物。Kleptose® HP係具有較Kleptose® HBP高之DS_a之羥丙基β-環糊精之內毒素控制之組合物。Trappsol® Cyclo係DS_a為約6.37之非經腸級羥丙基β環糊精，且可以粉末化或無菌液體形式自Sphingo Biotechnology,Inc.(CTD Holdings,Inc.之部門，Alachua,Florida,USA)獲得。Cavasol® W7 HP Pharma係DS_a為約4.1至約5.1(例如DS_a為約4.5)之可自Wacker Chemie AG,München,Germany獲得之醫藥級羥丙基-β-環糊精。

在闡釋性實例中，醫藥組合物係其中單一醫藥活性成份係藉由純化Kleptose^® HBP獲得者。在某些實施例中，醫藥組合物係其中單一醫藥活性成份係藉由親水相互作用、例如藉由HPLC純化、或藉由親和力純化(例如親和力層析)純化Kleptose^® HBP(Roquette)獲得者。 在各個實施例中，醫藥活性成份係藉由本文實例6、7及9中所述程序中之一或多者純化Kleptose^® HBP(Roquette)來獲得。

在多個實施例中，純化提供具有增加活性(例如增加之對未酯化膽固醇之親和力)之Kleptose® HBP之部分或級分。

在其他實施例中，醫藥組合物係其中單一醫藥活性成份係藉由親水相互作用、例如藉由HPLC純化、或藉由親和力純化(例如親和力層析)純化Trappsol^® Cyclo(CTD)獲得者。在各個實施例中，醫藥活性成份係藉由本文實例6、7及9中所述程序中之一或多者利用氧化鋁上之吸附層析純化Trappsol^® Cyclo來獲得。

在一些實施例中，自Trappsol^® Cyclo(CTD)純化之醫藥組合物包含在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物及對於鞘內、腦室內或靜脈內投與醫藥上可接受之稀釋劑，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子。組合物包含不超過(「NMT」)5 EU內毒素/克β-環糊精混合物、不超過0.5%丙二醇(如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測)、及不超過1ppm環氧丙烷(根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定)。

在一些實施例中，自Trappsol^® Cyclo(CTD)純化之醫藥組合物包含NMT 1.5 EU內毒素/克β-環糊精混合物。在一些實施例中，組合物包含不超過0.01%丙二醇，如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測。

在某些實施例中，自Trappsol^® Cyclo(CTD)純化之醫藥活性成份包含總共小於5%、例如小於4.5%、小於4%、小於3.5%、小於3%、小於2.5%、小於2%、小於1.5%、小於1%、小於0.5%或小於0.1%未經取代之β-環糊精(「DS-0」)、經1個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-1」)及經2個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-2」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在某些實施例中，自Trappsol^® Cyclo(CTD)純化之醫藥活性成份包含總共至少50%、例如至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%或至少90%之經5個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-5」)、經6個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-6」)及經7個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-7」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在某些實施例中，自Trappsol^® Cyclo(CTD)純化之醫藥活性成份包含總共小於5%、例如小於4.5%、小於4%、小於3.5%、小於3%、小於2.5%、小於2%、小於1.5%、小於1%、小於0.5%或小於0.1%之經9個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-9」)及經10個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-10」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。

在其他實施例中，醫藥組合物係其中單一醫藥活性成份係藉由親水相互作用、例如藉由HPLC純化、或藉由親和力純化(例如親和力層析)純化Cavasol^® W7 HP獲得者。在各個實施例中，醫藥活性成份係藉由本文實例6、7及9中所述程序中之一或多者純化Cavasol^® W7 HP來獲得。

在某些實施例中，純化一或多種選自Kleptose^® HBP、Kleptose^® HP、Trappsol^® Cyclo及Cavasol^® W7 HP Pharma之羥丙基β-環糊精產物包含複合物形成、沈澱及吸附層析中之一或多者。在一些實施例中，純化包含一種方法，例如吸附層析。在一些實施例中，純化包含兩種或更多種方法，例如沈澱與吸附層析組合。在純化包含兩種或更多種組合使用之方法之情形下，該等方法可以任何次序組合以純化羥丙基β-環糊精產物。在闡釋性實例中，Kleptose® HBP或Trappsol® Cyclo可首先經受吸附層析，隨後層析步驟之一或多個選擇部分可經受溶劑沈澱以形成沈澱溶劑系統以實現進一步純化。在替代實例中，Kleptose® HBP可首先經受溶劑沈澱以形成沈澱溶劑系統，隨後沈澱 可經受吸附層析以實現進一步純化。

在一些實施例中，一或多種羥丙基β-環糊精產物(例如Kleptose® HBP或Trappsol® Cyclo)之純化由於去除未經取代(DS=0)及/或經單取代(DS=1)之β-環糊精而引起DS_a增加。在闡釋性實例中，具有DS_a=4.34之Kleptose® HBP之商業試樣含有0.6%未經取代之β-環糊精(DS=0)及3.68%經單取代之β-環糊精(DS=1)。可使用以下方程計算去除DS=0及DS=1物質後之DS_a：x(0)+y(1)+z(DS_a)=4.34 x+y+z=1

其中x=未經取代之β-環糊精之分數；y=經單取代之β-環糊精之分數；z=DS2之β-環糊精之分數。在此情況下，去除具有DS=0及DS=1之β-環糊精後所得試樣之DS_a係4.5。

因此，在某些實施例中，本發明提供純化一或多種選自以下之羥丙基β-環糊精產物之方法：Kleptose® HBP、Kleptose® HP、Trappsol® Cyclo及Cavasol® W7 HP Pharma，特定而言Kleptose® HBP或Trappsol® Cyclo，其中該純化方法降低產物中丙二醇或丙二醇寡聚物之量(例如，藉由溶劑沈澱)及/或未經取代之β-環糊精(DS=0)之量及/或經單取代之β-環糊精(DS=1)之量(例如，藉由吸附層析)。在其中降低產物中未經取代之β-環糊精(DS=0)之量及/或經單取代之β-環糊精(DS=1)之量的某些該等實施例，純化產物展現增加之DS_a。因此，在某些實施例中，本發明提供增加一或多種選自以下之羥丙基β-環糊精產物之DS_a之方法：Kleptose® HBP、Kleptose® HP、Trappsol® Cyclo及Cavasol® W7 HP Pharma，特定而言Kleptose® HBP或Trappsol® Cyclo，該方法包含(例如)根據一或多種本文所述純化步驟(例如吸附層析)降低產物中未經取代之β-環糊精(DS=0)及/或經單取代之β-環糊精(DS=1)之量。

儘管Kleptose® HBP、Kleptose® HP、Trappsol® Cyclo及Cavasol® W7 HP Pharma各自具有如上文所論述之報告DS_a，但DS_a係平均量度，且因此，該等羥丙基β-環糊精產物中之每一者皆包括具有變化DS值之羥丙基β-環糊精。在一些實施例中，本文所述醫藥活性成份係藉由自該等產物中之一或多者分離一或多種具有本文所述DS_a之羥丙基β-環糊精部分來獲得。

6.2.2. 內毒素含量

在某些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物含有低含量之細菌內毒素。低含量之細菌內毒素容許藉由某些途徑(例如經由鞘內或腦室內投與)以較利用具有較高含量之內毒素之其他組合物所可安全進行者更長之持續時段及更高之量投與所揭示之醫藥組合物。

如本文所用之「IU」係指細菌內毒素之國際單位，亦稱作美國藥典(USP)內毒素單位(「EU」)。組合物中細菌內毒素之含量(IU；與EU同義)係藉由鱟變形細胞溶解物試驗根據以下中所述程序來測定：「<85>Bacterial Endotoxins Test,」the United States Pharmacopeial Convention,Interim Revision Announcement，日期為2011年4月1日(「USP內毒素專論」)，其全文以引用方式併入本文中。

在一些實施例中，醫藥組合物含有小於約10 IU、例如小於約6、約5、約4、約3、約2、約1.5、約1.2、約1 IU、約0.8 IU、約0.6 IU、約0.5 IU、約0.4 IU、約0.3 IU、約0.2 IU、約0.1 IU、約0.07 IU或約0.05 IU內毒素/克醫藥活性成份。在一些實施例中，醫藥組合物含有以下範圍內之含量之細菌內毒素：約0.05 IU至約10 IU、例如約0.05 IU至約6 IU、約0.05 IU至約5 IU、約0.05 IU至約4 IU、約0.05 IU至約3 IU、約0.05 IU至約2 IU、約0.05 IU至約1.5 IU、約0.05 IU至約1.2 IU、約0.05 IU至約1 IU、約0.05 IU至約0.8 IU、約0.05 IU至約0.6 IU、約0.05 IU至約0.5 IU、約0.05 IU至約0.4 IU、約0.05 IU至約0.3 IU、約0.05 IU至約0.2 IU或約0.05 IU至約0.1 IU內毒素/克β-環糊精混合物。

在某些實施例中，醫藥組合物包含不超過(「NMT」)5 EU/g β-環糊精混合物、NMT 4 EU/g β-環糊精混合物、NMT 3 EU/g β-環糊精混合物或不超過2 EU/g β-環糊精混合物。在較佳實施例中，醫藥組合物包含NMT 1.5 EU/g β-環糊精混合物。在某些實施例中，醫藥組合物包含NMT 1.4 EU/g β-環糊精混合物、NMT 1.3 EU/g β-環糊精混合物、NMT 1.2 EU/g β-環糊精混合物、NMT 1.1 EU/g β-環糊精混合物或NMT 1.0 EU/g β-環糊精混合物。

6.2.3. 過程雜質

包含羥丙基β-環糊精之混合物之醫藥組合物可含有自羥丙基β-環糊精之合成產生之雜質。該等雜質可包括未反應之起始材料(例如未經取代之β-環糊精及環氧丙烷)及反應副產物(例如丙二醇及丙二醇寡聚物)。在某些實施例中，本文所述醫藥組合物展現該等雜質中之一或多者之降低含量。

6.2.3.1. 丙二醇

在一些實施例中，醫藥活性成份包含小於約1%、例如小於約0.9%、0.8%、0.7%、0.6%或0.5%之丙二醇，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。在各個實施例中，醫藥活性成份包含小於約0.4%、0.3%、0.2%或0.1%丙二醇，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。在某些實施例中，醫藥組合物包含小於約0.09%、0.08%、0.07%或小於約0.05%丙二醇，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。在當前較佳實施例中，醫藥活性成份包含不超過0.5%丙二醇，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。

在一些實施例中，醫藥活性成份包含約0.05%至約1%丙二醇，例 如約0.05%至約0.8%、約0.05%至約0.6%、約0.05%至約0.5%、約0.05%至約0.4%、約0.05%至約0.3%、約0.05%至約0.2%、約0.05%至約0.1%、約0.05%至約0.07%、約0.07%至約1%、約0.07%至約0.8%、約0.07%至約0.6%、約0.07%至約0.5%、約0.07%至約0.4%、約0.07%至約0.3%、約0.07%至約0.2%、約0.07%至約0.1%、約0.1%至約1%、約0.1%至約0.8%、約0.1%至約0.6%、約0.1%至約0.5%、約0.1%至約0.4%、約0.1%至約0.3%、約0.1%至約0.2%、約0.2%至約1%、約0.2%至約0.8%、約0.2%至約0.6%、約0.2%至約0.5%、約0.2%至約0.4%、約0.2%至約0.3%、約0.3%至約1%、約0.3%至約0.8%、約0.3%至約0.6%、約0.3%至約0.5%、約0.3%至約0.4%、約0.4%至約1%、約0.4%至約0.8%、約0.4%至約0.6%、約0.4%至約0.5%、約0.5%至約1%、約0.5%至約0.8%、約0.5%至約0.6%、約0.6%至約1%、約0.6%至約0.8%或約0.8%至約1.0%，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。

在一些實施例中，醫藥活性成份包含小於約0.01%丙二醇單體，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。在一些實施例中，醫藥活性成份包含小於約0.2%丙二醇二聚體，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。在一些實施例中，醫藥活性成份包含小於約0.2%丙二醇三聚體，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。

6.2.3.2. 環氧丙烷

在一些實施例中，醫藥活性成份含有小於約1ppm、例如小於約0.8ppm、小於約0.6ppm、小於約0.5ppm、小於約0.4ppm、小於約0.3ppm、小於約0.2ppm、小於約0.1ppm、小於約0.07ppm或小於約0.05ppm環氧丙烷，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。舉例而言，醫藥活性成份可具有約1、約0.8、約0.6、約0.5、約 0.4、約0.3、約0.2、約0.1、約0.07或約0.05ppm環氧丙烷，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。

在一些實施例中，醫藥活性成份具有以下範圍內之量之環氧丙烷：約0.05至約1ppm，例如約0.05至約0.8、約0.05至約0.6、約0.05至約0.5、約0.05至約0.4、約0.05至約0.3、約0.05至約0.2、約0.05至約0.1、約0.1至約1、約0.1至約0.8、約0.1至約0.6、約0.1至約0.5、約0.1至約0.4、約0.1至約0.3、約0.1至約0.2、約0.2至約1、約0.2至約0.8、約0.2至約0.6、約0.2至約0.5、約0.2至約0.4、約0.2至約0.3、約0.3至約1、約0.3至約0.8、約0.3至約0.6、約0.3至約0.5、約0.3至約0.4、約0.4至約1、約0.4至約0.8、約0.4至約0.6、約0.4至約0.5、約0.5至約1、約0.5至約0.8、約0.5至約0.6、約0.6至約1、約0.6至約0.8或約0.8至約1ppm，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。

6.2.4. 其他組成特徵

本文提供包含本揭示內容之醫藥活性成份及視情況一或多種額外治療劑(例如章節4.3.3.中所述之組合治療劑)之羥丙基β-環糊精組合物。

在某些實施例中，醫藥組合物包含約100mg至約2000mg、例如約100至約1800、約100至約1600、約100至約1500、約100至約1200、約100至約1000、約100至約800、約100至約600、約100至約500、約100至約400、約100至約300、約100至約200、約200至約2000、約200至約1800、約200至約1600、約200至約1500、約200至約1200、約200至約1000、約200至約800、約200至約600、約200至約500、約200至約400、約200至約300、約300至約2000、約300至約1800、約300至約1600、約300至約1500、約300至約1200、約300至約1000、約300至約800、約300至約600、約300至約500、約300至約400、約400至約2000、約400至約1800、約400至約1600、約400至約1500、約400至約 1200、約400至約1000、約400至約800、約400至約600、約400至約500、約500至約2000、約500至約1800、約500至約1600、約500至約1500、約500至約1200、約500至約1000、約500至約800、約500至約600、約600至約2000、約600至約1800、約600至約1600、約600至約1500、約600至約1200、約600至約1000、約600至約800、約800至約2000、約800至約1800、約800至約1600、約800至約1500、約800至約1200或約800至約1000mg之醫藥活性成份。舉例而言，醫藥組合物可包含約100、約200、約300、約400、約500、約600、約800、約1000、約1200、約1400、約1500、約1600、約1800或約2000mg之醫藥活性成份。

在一些實施例中，供投與之醫藥組合物(例如適於鞘內投與之醫藥組合物)具有以下濃度之醫藥活性成份：約10mg/mL至約200mg/mL，例如約10至約180、約10至約150、約10至約120、約10至約100、約10至約80、約10至約60、約10至約50、約10至約40、約10至約30、約10至約20、約20至約200、約20至約180、約20至約150、約20至約120、約20至約100、約20至約80、約20至約60、約20至約50、約20至約40、約20至約30、約30至約200、約30至約180、約30至約150、約30至約120、約30至約100、約30至約80、約30至約60、約30至約50、約30至約40、約40至約200、約40至約180、約40至約150、約40至約120、約40至約100、約40至約80、約40至約60、約40至約50、約50至約200、約50至約180、約50至約150、約50至約120、約50至約100、約50至約80、約50至約60、約60至約200、約60至約180、約60至約150、約60至約120、約60至約100、約60至約80、約80至約200、約80至約180、約80至約150、約80至約120、約80至約100、約100至約200、約100至約180、約100至約150、約100至約120、約120至約200、約120至約180、約120至約150、約150至約200、約150至約 180或約180至約200mg/mL。舉例而言，醫藥組合物可具有以下濃度之醫藥活性成份：約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90、約100、約110、約120、約130、約140、約150、約160、約170、約180、約190或約200mg/mL。在某些實施例中，供鞘內投與之醫藥組合物具有約200mg/mL之濃度之醫藥活性成份。

在某些實施例中，本文所述醫藥組合物在投與動物時展現低耳毒性位準。在一些實施例中，醫藥組合物展現較Trappsol® Cyclo低之耳毒性。耳毒性可藉由豪斯耳科研究中心-柯氏器官1(HEI-OC1)細胞內之毒性活體外評價或藉由動物(例如小鼠、大鼠、貓、狗、猴、黑猩猩或人類)中之腦幹聽性誘發反應(BAER)測試活體內評價。參見(例如)Leigh-Paffenroth,E.等人「Objective Measures of Ototoxicity,」2005年9月，第9卷，第1期，第10-16頁，Perspectives on Hearing and Hearing Disorders：Research and Diagnostics,Special Interest Division 6 of the American Speech-Language-Hearing Association，其全文以引用方式併入本文中。

在一些實施例中，醫藥組合物(例如適於鞘內投與之醫藥組合物)具有以下範圍內之滲透壓：約300至約450mOsm/kg，例如約300至約400、約300至約350、約350至約450或約350至約400mOsm/kg。在一些實施例中，組合物之滲透壓為約300、約320、約350、約380、約400、約420或約450mOsm/kg。

適於如本文所述醫藥組合物(例如適於鞘內或腦室內投與之醫藥組合物)之稀釋劑包括等滲鹽水溶液。亦可將組合物(例如適於鞘內投與之醫藥組合物)用Elliotts B®溶液(緩衝鞘內電解質/右旋糖注射劑，來自Lukare Medical,LLC,Scotch Plains,New Jersey,USA)稀釋。

在一些實施例中，注射用醫藥組合物係藉由將活性醫藥成份(β-環糊精分子之混合物)溶解於水中、添加氯化鈉至0.9% w/v及視需要 用0.01N氫氧化鈉調節pH至6.0-8.0來製得。隨後將醫藥組合物無菌過濾至小瓶中並經高壓滅菌。產物穩定且可儲存於15℃至25℃下。

組合物通常作為通常包括醫藥上可接受之載劑之無菌醫藥組合物之一部分供應。此組合物可呈任何適宜形式(取決於期望投與方法)。舉例而言，醫藥組合物可調配為水溶液且藉由鞘內注射或鞘內輸注。

在一些實施例中，醫藥組合物包含含有每個劑量一定量之本揭示內容之醫藥活性成份的單位劑型。該單位可含有(例如但不限於)約5mg至約5g、例如5mg至約4g、5mg至約3g、5mg至約2g、5mg至約1g、約50mg至約5g、約50mg至約4g、約50mg至約3g、約50mg至約2g、約50mg至約1g、約200mg至約5g、約200mg至約4g、約200mg至約3g、約200mg至約2g、約200mg至約1g、約400mg至約5g、約400mg至約4g、約400mg至約3g、約400mg至約2g、約400mg至約1g、約500mg至約5g、約500mg至約4g、約500mg至約3g、約500mg至約2g、約500mg至約1g、約600mg至約5g、約600mg至約4g、約600mg至約3g、約600mg至約2g、約600mg至約1g、約800mg至約5g、約800mg至約4g、約800mg至約3g、約800mg至約2g、約800mg至約1g、約1g至約5g、約1g至約4g、約1g至約3g、約1g至約2g、約1200mg至約5g、約1200mg至約4g、約1200mg至約3g、約1200mg至約2g、約1400mg至約5g、約1400mg至約4g、約1400mg至約3g、約1400mg至約2g、約1600mg至約5g、約1600mg至約4g、約1600mg至約3g、約1600mg至約2g、約1800mg至約5g、約1800mg至約4g、約1800mg至約3g或約1800mg至約2g之醫藥活性成份。某些實施例包括含有約900mg、約1200mg及約1800mg醫藥活性成份之單位劑量。

在某些實施例中，單位劑量可含有介於約200mg與約900mg之 間之本揭示內容之醫藥活性成份，例如約200mg、約250mg、約300mg、約350mg、約400mg、約450mg、約500mg、約550mg、約600mg、約650mg、約700mg、約750mg、約800mg、約850mg或約900mg醫藥活性成份。

本揭示內容之羥丙基β-環糊精混合物之醫藥組合物可藉由將具有期望純度之醫藥活性成份與業內常用之可選醫藥上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(其所有在本文中皆稱作「載劑」)(即緩衝劑、穩定劑、防腐劑、等滲劑、非離子清潔劑、抗氧化劑及其他各種各樣的添加劑)混合製備以凍乾調配物或水溶液形式儲存。參見Remington’s Pharmaceutical Sciences，第16版(Osol編輯，1980)。

在一些實施例中，使用緩衝劑以幫助將pH維持在接近生理條件之範圍內：約2mM至約50mM，例如約2至約40、約2至約30、約2至約20、約2至約10、約10至約50、約10至約40、約10至約30、約10至約20、約20至約50、約20至約40、約20至約30或約40至約50mM。舉例而言，一或多種緩衝劑可以約2、約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45或約50mM之濃度存在。用於本發明之適宜緩衝劑包括有機及無機酸及其鹽，例如檸檬酸鹽緩衝液(例如，檸檬酸單鈉-檸檬酸二鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸三鈉混合物、檸檬酸-檸檬酸單鈉混合物等)、琥珀酸鹽緩衝液(例如，琥珀酸-琥珀酸單鈉混合物、琥珀酸-氫氧化鈉混合物、琥珀酸-琥珀酸二鈉混合物等)、酒石酸鹽緩衝液(例如，酒石酸-酒石酸鈉混合物、酒石酸-酒石酸鉀混合物、酒石酸-氫氧化鈉混合物等)、富馬酸鹽緩衝液(例如，富馬酸-富馬酸單鈉混合物、富馬酸-富馬酸二鈉混合物、富馬酸單鈉-富馬酸二鈉混合物等)、葡萄糖酸鹽緩衝液(例如，葡萄糖酸-葡萄糖酸鈉混合物、葡萄糖酸-氫氧化鈉混合物、葡萄糖酸-葡萄糖酸鉀混合物等)、草酸鹽緩衝液(例如，草酸-草酸鈉混合物、草酸-氫氧化鈉混合物、草酸-草酸 鉀混合物等)、乳酸鹽緩衝液(例如，乳酸-乳酸鈉混合物、乳酸-氫氧化鈉混合物、乳酸-乳酸鉀混合物等)及乙酸鹽緩衝液(例如，乙酸-乙酸鈉混合物、乙酸-氫氧化鈉混合物等)。另外，可使用磷酸鹽緩衝液、組胺酸緩衝液及三甲胺鹽(例如Tris)。

在一些實施例中，添加介於以下範圍內之量之防腐劑以妨礙微生物生長：0.01%-1%(w/v)，例如0.1%-1%、0.2%-1%、0.3%-1%、0.5%-1%、0.01%-0.5%、0.02%-0.5%、0.05%-0.5%、0.1%-0.5%、0.2%-0.5%、或0.05%-0.2%(w/v)。舉例而言，可添加約0.02%、約0.05%、約0.1%、約0.2%、約0.5%、約0.8%(w/v)之量之防腐劑。適用於本發明之防腐劑包括苯酚、苯甲醇、間甲酚、對羥基苯甲酸甲基酯、對羥基苯甲酸丙基酯、十八烷基二甲基苄基氯化銨、苯紮鹵化物(例如，苯紮氯銨、苯紮溴銨及苯紮碘銨)、氯化六甲雙銨及對羥基苯甲酸烷基酯(例如對羥基苯甲酸甲基酯或對羥基苯甲酸丙基酯)、鄰苯二酚、間苯二酚、環己醇及3-戊醇。

在一些實施例中，添加等滲劑(有時稱作「穩定劑」)以確保本發明之液體組合物之等滲性且該等等滲劑包括多元糖醇，例如三元或更多元糖醇，例如甘油、赤蘚醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇及甘露醇。穩定劑係指廣泛種類之賦形劑，其功能可在增積劑至穩定治療劑或有助於防止變性或黏附至容器壁之添加劑的範圍內。典型穩定劑可為多元糖醇(上文所列舉)；胺基酸，例如精胺酸、離胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、丙胺酸、鳥胺酸、L-白胺酸、2-苯基丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等；有機糖或糖醇，例如乳糖、海藻糖、水蘇糖、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、肌醇、衛矛醇、甘油及諸如此類，包括環多醇，例如肌醇；聚乙二醇；胺基酸聚合物；含硫還原劑，例如脲、麩胱甘肽、硫辛酸、巰基乙酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油及硫代硫酸鈉；低分子量多肽(例如，10個或更少殘基之 肽)；蛋白質，例如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，例如聚乙烯吡咯啶酮；單醣，例如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二醣，例如乳糖、麥芽糖、蔗糖；以及三醣，例如棉子糖；及多醣，例如葡聚糖。在一些實施例中，穩定劑係以0.1至10,000重量/重量份數醫藥活性成份、例如0.1至1,000、0.2至2,000、0.5至5,000、1至10,000或1至1,000重量/重量份數醫藥活性成份存在。舉例而言，穩定劑可以約0.2、約0.5、約1、約5、約10、約20、約50、約100、約200、約500、約1,000、約2,000、約5,000或約8,000重量/重量份數醫藥活性成份存在。

在一些實施例中，添加離子表面活性劑以有助於溶解治療劑以及保護活性成份抵抗攪動誘導之聚集。在一些實施例中，添加非離子表面活性劑或清潔劑(亦稱作「潤濕劑」)以有助於溶解治療劑以及保護活性成份抵抗攪動誘導之聚集。適宜非離子表面活性劑包括聚山梨醇酯(20、80等)、泊洛沙姆(polyoxamer)(184、188等)、普流尼克(Pluronic)多元醇、聚氧乙烯山梨醇酐單醚(TWEEN®-20、TWEEN®-80等)。在一些實施例中，非離子表面活性劑係以介於以下範圍存在：約0.05mg/mL至約1.0mg/mL，例如約0.05mg/mL至約0.2mg/mL、約0.07mg/mL至約0.2mg/mL、約0.1mg/mL至約0.3mg/mL或約0.1mg/mL至約0.5mg/mL。例如，非離子表面活性劑可以約0.05、約0.07、約0.08、約0.1、約0.2、約0.3、約0.4、約0.5、約0.6、約0.8或約1.0mg/mL存在。

其他各種各樣的賦形劑包括增積劑(例如，澱粉)、螯合劑(例如，EDTA)、抗氧化劑(例如，抗壞血酸、甲硫胺酸、維他命E)及共溶劑。

在一些實施例中，除本揭示內容之醫藥活性成份(本文所述β-環糊精之混合物)外，本文之醫藥組合物亦含有治療劑(例如第二治療劑) 之組合。適宜組合治療劑之實例提供於下文章節4.3.3.中。

在一些實施例中，本文所述醫藥組合物將脂質溶解於水性介質中。水性介質可為(例如)蒸餾水或去離子水，或可為個體體內之水性環境(例如，血液、腦脊髓液或淋巴液)。組合物之溶解能力通常可藉由溶液之UV透射性質量測，例如如藉由UV光譜法或藉由HPLC所監測，其中透射降低與溶液內形成懸浮液相關。在一些實施例中，溶解之脂質包含未酯化或酯化膽固醇；膽固醇代謝物，例如7-酮膽固醇、7β-羥基膽固醇、24S-羥基膽固醇、25-羥基膽固醇、27-羥基膽固醇及膽甾烷-3β,5α,6β-三醇；神經鞘酯；醣酯；神經醯胺；神經節苷酯，例如GM2((2S,3R,4E)-3-羥基-2-(十八醯基胺基)十八-4-烯-1-基2-乙醯胺基-2-去氧-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-[5-乙醯胺基-3,5-二去氧-D-甘油-α-D-半乳糖基-壬-2-酮吡喃糖基-(2→3)]-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-葡萄吡喃糖苷)或GM3(單唾液酸二己糖基神經節苷酯)；或其任一組合。

如本文所用，每體積之重量(「重量/體積」或「w/v」)溶液係指溶解於一定體積之水中之溶質之重量。在闡釋性實例中，羥丙基β-環糊精之10%(w/v)溶液具有於10mL水溶液中之1g溶質。在另一實例中，羥丙基β-環糊精之20%(w/v)溶液具有1mL水溶液中之200mg溶質。

在一些實施例中，在約24小時後(例如)藉由UV光譜法量測時，於室溫下1mL本文所述醫藥活性成份之20%(w/v)溶液將至少2mg、例如至少3mg、至少4mg、至少5mg、至少6mg、至少7mg、至少8mg或至少10mg未酯化膽固醇溶解於蒸餾水中。在一些實施例中，在約24小時後量測時，於室溫下約200mg醫藥活性成份將至少2mg、例如至少3mg、至少4mg、至少5mg、至少6mg、至少7mg、至少8mg或至少10mg未酯化膽固醇溶解於蒸餾水中。

6.3. 治療方法

本揭示內容提供治療C型尼曼-匹克病(NPC)(例如C1型尼曼-匹克病(NPC1)或C2型尼曼-匹克病(NPC2))之方法，其包含向患有尼曼-匹克病之個體投與治療有效量之如本文所述醫藥組合物。

如本文所用「個體」係哺乳動物，例如小鼠、大鼠、貓、狗、牛、豬、馬。在一些實施例中，哺乳動物係靈長類動物，例如猴、黑猩猩或人類。舉例而言，個體可為人類個體，即人類患者。在某些實施例中，患者係小兒患者或成人患者。小兒人類患者包括患有特徵為在嬰兒早期發作(小於2歲)、嬰兒晚期發作(2至小於6歲)、幼年發作(6至小於15歲)及青少年發作(15歲或更大)之疾病之小兒患者。

術語「治療」(「treat」、「treating」或「treatment」)係指投與本文所述醫藥組合物以便有益地調節與基線值相比一或多種脂質生物標記之含量或如章節4.3.4.中所述之治療效應之位準。實例性治療期涉及重複投與本文所述醫藥組合物，其中如章節4.3.4.2中所定義之NPC嚴重程度量表之一或多個域之評分與先前基線值相比降低。

術語「維持」(「maintain」、「maintaining」或「maintenance」)係指投與本文所述醫藥組合物以保持一或多個如章節4.3.4中所述之生物效應之基線值恆定。與未投與或投與安慰劑相比，投與之維持期可防止NPC進展。維持期之闡釋性實例係重複投與本文所述醫藥組合物，其中如章節4.3.4.2中所定義之NPC嚴重程度量表之一或多個域之評分保持與基線值相同之位準下。

6.3.1. 羥丙基β-環糊精醫藥組合物之投與

在一些實施例中，該方法包含每次投與向個體投與約200mg至約3000mg，例如約200至約2800、約200至約2600、約200至約2500、約200至約2400、約200至約2200、約200至約2000、約200至約1800、約200至約1600、約200至約1500、約200至約1200、約200至約1100、 約200至約1000、約200至約800、約200至約700、約200至約600、約200至約500、約200至約400、約200至約300；約300至約3000、約300至約2800、約300至約2600、約300至約2500、約300至約2400、約300至約2200、約300至約2000、約300至約1800、約300至約1600、約300至約1500、約300至約1200、約300至約1100、約300至約1000、約300至約800、約300至約700、約300至約600、約300至約500、約300至約400；例如約400至約3000、約400至約2800、約400至約2600、約400至約2500、約400至約2400、約400至約2200、約400至約2000、約400至約1800、約400至約1600、約400至約1500、約400至約1200、約400至約1100、約400至約1000、約400至約800、約400至約700、約400至約600、約400至約500；例如約500至約3000、約500至約2800、約500至約2600、約500至約2500、約500至約2400、約500至約2200、約500至約2000、約500至約1800、約500至約1600、約500至約1500、約500至約1200、約500至約1100、約500至約1000、約500至約800、約500至約700、約500至約600；例如約600至約3000、約600至約2800、約600至約2600、約600至約2500、約600至約2400、約600至約2200、約600至約2000、約600至約1800、約600至約1600、約600至約1500、約600至約1200、約600至約1100、約600至約1000、約600至約800、約600至約700；例如約700至約3000、約700至約2800、約700至約2600、約700至約2500、約700至約2400、約700至約2200、約700至約2000、約700至約1800、約700至約1600、約700至約1500、約700至約1200、約700至約1100、約700至約1000、約700至約800；例如約800至約3000、約800至約2800、約800至約2600、約800至約2500、約800至約2400、約800至約2200、約800至約2000、約800至約1800、約800至約1600、約800至約1500、約800至約1200、約800至約1100、約800至約1000；例如約1000至約3000、約1000至約2800、約1000至約 2600、約1000至約2500、約1000至約2400、約1000至約2200、約1000至約2000、約1000至約1800、約1000至約1600、約1000至約1500、約1000至約1200、約1000至約1100；例如約1100至約3000、約1100至約2800、約1100至約2600、約1100至約2500、約1100至約2400、約1100至約2200、約1100至約2000、約1100至約1800、約1100至約1600、約1100至約1500、約1100至約1200；例如約1200至約3000、約1200至約2800、約1200至約2600、約1200至約2500、約1200至約2400、約1200至約2200、約1200至約2000、約1200至約1800、約1200至約1600、約1200至約1500；例如約1500至約3000、約1500至約2800、約1500至約2600、約1500至約2500、約1500至約2400、約1500至約2200、約1500至約2000、約1500至約1800、約1500至約1600；例如約1600至約3000、約1600至約2800、約1600至約2600、約1600至約2500、約1600至約2400、約1600至約2200、約1600至約2000、約1600至約1800；例如約1800至約3000、約1800至約2800、約1800至約2600、約1800至約2500、約1800至約2400、約1800至約2200、約1800至約2000；例如約2000至約3000、約2000至約2800、約2000至約2600、約2000至約2500、約2000至約2400、約2000至約2200；例如約2200至約3000、約2200至約2800、約2200至約2600、約2200至約2500、約2200至約2400；例如約2400至約3000、約2400至約2800、約2400至約2600、約2400至約2500；例如約2500至約3000、約2500至約2800、約2500至約2600；例如約2600至約3000、約2600至約2800；或約2800至約3000mg醫藥活性成份。

在一些實施例中，劑量時間表由每週一次、每兩週一次、每三週一次、每月一次、每兩個月一次或每三個月一次投與組成。舉例而言，該方法可包含每次投與向個體投與約200、約300、約400、約500、約600、約700、約800、約900、約1000、約1200、約1400、約 1500、約1600、約1800、約2000、約2200、約2400、約2500或約3000mg醫藥活性成份。

在一些實施例中，投與係每次投與以單一劑量發生。在其他實施例中，醫藥組合物每次投與係以分開劑量投與，其中全部劑量分成兩個劑量、三個劑量或甚至四個劑量，例如在一週、兩週、一個月、兩個月等內，具體而言在兩週內。端視所治療病況、投與途徑及個體之年齡、重量及狀況而定，組合物可連續或以任何有效範圍或其中之值投與。

在一些實施例中，本揭示內容之醫藥組合物適於鞘內或腦室內投與。在某些實施例中，醫藥組合物之鞘內投與係經由鞘內埠。在某些該等實施例中，埠係Celsite®埠(B.Braun Medical,France)。在某些實施例中，鞘內投與包含以鞘內緩慢濃注(1-2分鐘，端視所投與體積而定)形式投與腰穿刺注射(最大投與速率=4.5mL/分鐘)。在某些實施例中，腰穿刺之技術包括使用非切割針(例如Whiteacre或Sprotte針)、平行於硬膜纖維插入及在移除針之前更換管心針。在某些實施例中，在注射之前，移除等於欲投與之體積之體積之CSF流體。

在另一闡釋性實例中，腦室內投與可經由Ommaya儲存器。

對於本文所述NPC之治療，醫藥活性成份羥丙基β-環糊精混合物之有效劑量可介於以下範圍內：約0.001至約1000mg/kg，例如約0.1至約1000、約1至約1000、約10至約1000、約20至約1000、約50至約1000、約100至約1000、約200至約1000、約300至約1000、約400至約1000、約500至約1000、約600至約1000、約800至約1000；例如約0.1至約800、約1至約800、約10至約800、約20至約800、約50至約800、約100至約800、約200至約800、約300至約800、約400至約800、約500至約800、約600至約800；例如約0.1至約600、約1至約600、約10至約600、約20至約600、約50至約600、約100至約600、約200至約 600、約300至約600、約400至約600、約500至約600；例如約0.1至約500、約1至約500、約10至約500、約20至約500、約50至約500、約100至約500、約200至約500、約300至約500、約400至約500；例如約0.1至約400、約1至約400、約10至約400、約20至約400、約50至約400、約100至約400、約200至約400、約300至約400；例如約0.1至約300、約1至約300、約10至約300、約20至約300、約50至約300、約100至約300、約200至約300；例如約0.1至約200、約1至約200、約10至約200、約20至約200、約50至約200、約100至約200；例如約0.1至約100、約1至約100、約10至約100、約20至約100、約50至約100；例如約0.1至約50、約1至約50、約10至約50、約20至約50；例如約0.1至約20、約1至約20、約10至約20；例如約0.1至約10、約1至約10；或約0.1至約1mg/kg。

在一些實施例中，該方法包含治療期，其中投與係每週、每兩週、每三週或每月發生以減少NPC之症狀。

在一些實施例中，該方法包含維持期，其中投與係每三週、每月、每兩個月或每三個月發生，以維持疾病之穩定態。

在一些實施例中，醫藥組合物係以濃注、之後連續維持劑量形式投與。

在某些實施例中，醫藥組合物係經由鞘內或腦室內投與每月投與。在某些實施例中，醫藥組合物係經由鞘內或腦室內投與連續投與。

在一些實施例中，該方法包含治療期(其中900mg醫藥活性成份係作為初始劑量投與患者)及維持期(其中小於900mg醫藥活性成份係藉由鞘內投與每個一週投與)。

6.3.2. 多種投與途徑

在一些實施例中，該方法包含使用多種投與途徑投與醫藥活性 成份。在某些實施例中，該方法包含(i)鞘內或藉由腦室內投與及(ii)靜脈內投與醫藥活性成份。該等實施例有用地減少中樞神經系統及周邊器官中膽固醇累積。

在一些實施例中，靜脈內投與包含在6至8小時內藉由靜脈內輸注向患者投與約200mg/kg至約4000mg/kg β-環糊精混合物。在一些實施例中，靜脈內投與包含在6至8小時內藉由靜脈內輸注向患者投與約500mg/kg至約4000mg/kg β-環糊精混合物。

在典型實施例中，醫藥組合物包含約200mg/mL β-環糊精混合物。在某些其他實施例中，醫藥組合物包含約250mg/mL β-環糊精混合物。在一些實施例中，醫藥組合物係每三天一次、每週一次、每兩週一次、每三週一次、每月一次、每兩個月一次或每三個月一次投與。在某些實施例中，靜脈內投與係在出生後不久即開始。在某些其他實施例中，靜脈內投與係在起始鞘內(或腦室內)投與之後開始。在一些實施例中，監測患者之肝體積、脾體積及/或肝酶活性以測定治療之效能並用於調節劑量時間吧。

6.3.3. 組合治療

下文闡述組合治療方法，其中可視情況利用本揭示內容之羥丙基β-環糊精醫藥組合物。在一些實施例中，本揭示內容之組合方法涉及向個體投與至少兩種藥劑，第一者係本文所述羥丙基β-環糊精混合物(例如於本文所述醫藥組合物中)，且額外藥劑係組合治療劑。羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑可同時(例如，在如本文所述醫藥組合物中)、依序或分開投與。

本發明之組合治療方法可產生過加和效應，即協同效應，例如提供大於羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑在各自個別投與時之益處之預計和的治療益處。

在一些實施例中，羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑係並行、 同時或接續投與。如本文所用，若羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑係在同一天(例如在相同個體拜訪期間)投與個體，則據稱其係接續投與。接續投與可間隔1、2、3、4、5、6、7、或8小時發生。相比之下，若羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑係在不同天投與個體，例如羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑可以1天、2天或3天、1週、2週或每月間隔投與，則據稱其係分開投與。在本發明之方法中，羥丙基β-環糊精混合物之投與可在組合治療劑之投與之前或之後。

作為非限制性實例，羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑可並行投與一段時間，之後交替投與羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑之第二段時間。

由於投與羥丙基β-環糊精混合物及組合治療劑之潛在協同效應，該等藥劑可以若該等藥劑中之一者或二者單獨投與並不治療有效之量以治療有效組合形式投與。

在某些實施例中，組合治療劑係維生素E或其衍生物、酶替代療法、類固醇、葡萄糖基轉移酶抑制劑、組織蛋白去乙醯酶(HDAC)抑制劑或分子伴護蛋白活化劑。

維生素E或維生素E衍生物包括(但不限於)α-生育酚、δ-生育酚及生育酚衍生物。在一些實施例中，維生素E衍生物包括酯化生育酚(例如乙酸生育酚)及化學相關生育酚衍生物，例如闡述於PCT公開案第WO 2014/078573號中之彼等，該案件之全文以引用方式併入本文中。

酶替代療法包括(但不限於)無半乳糖甘酶β(Fabrazyme®)、伊米苷酶(imiglucerase)(Cerezyme®)、維拉苷酶α(verlaglucerase alfa)(VPRIV^TM)、他利苷酶(taliglucerase)(Elelyso^TM)、阿葡糖苷酶α(Myozyme®或Lumizyme®)、拉羅尼酶(laronidase)(Aldurazyme®)、靜脈內依度硫酶(idursulfase)(Elaprase®)及加硫酶(Naglazyme^TM)。

類固醇包括(但不限於)神經類固醇，例如異孕甾烷醇酮(allopregnanolone)及加奈索酮(ganaxolone)。

葡萄糖基轉移酶抑制劑包括(但不限於)醣基化神經醯胺合酶抑制劑，例如麥格司他(Zavesca®)。

HDAC抑制劑包括(但不限於)伏立諾他(vironostat)、羅米地辛(romidepsin)、曲古抑菌素A(trichostatin A)、丙戊酸鹽、丁酸鹽、曲泊欣(trapoxin)及阿匹西定(apicidin)。

分子伴護蛋白活化劑包括(但不限於)阿瑞洛莫(arimoclomol)。

6.3.4. 方法之生物效應

6.3.4.1. 對生物標記之效應

在一些實施例中，治療NPC之方法包含維持或調節一或多個身體器官中(例如腦中)累積且導致疾病症狀之一或多種脂質(例如未酯化膽固醇或神經節苷酯)之含量。在某些實施例中，調節一或多種脂質之含量包括降低一或多種脂質之含量。在一些實施例中，方法之效能係藉由量測在治療開始之前(基線值)及之後一或多種脂質之儲存之含量來測定。舉例而言，在一些實施例中，標的方法將一或多種脂質之含量相對於基線值降低約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%。

在一些實施例中，標的方法將一或多種脂質之含量相對於基線值降低20%±5%、25%±5%、30%±5%、35%±5%、40%±5%、45%±5%、50%±5%、55%±5%、60%±5%、65%±5%、70%±5%、75%±5%、80%±5%、85%±5%、90%±5%或95%±5%。

在一些實施例中，標的方法將一或多種脂質之含量相對於基線值降低20%±3%、25%±3%、30%±3%、35%±3%、40%±3%、45%±3%、50%±3%、55%±3%、60%±3%、65%±3%、70%± 3%、75%±3%、80%±3%、85%±3%、90%±3%、95%±3%或97%±3%。

在一些實施例中，標的方法將一或多種脂質之含量相對於基線值降低20%±2%、25%±2%、30%±2%、35%±2%、40%±2%、45%±2%、50%±2%、55%±2%、60%±2%、65%±2%、70%±2%、75%±2%、80%±2%、85%±2%、90%±2%、95%±2%或97%±2%。

在一些實施例中，標的方法將一或多種脂質之含量相對於基線值降低至少約20%、例如至少約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%。

在一些實施例中，標的方法將一或多種脂質之含量相對於基線值降低以下範圍：約20%至約97%，例如約20%至約95%、約20%至約90%、約20%至約85%、約20%至約80%、約20%至約75%、約20%至約70%、約20%至約65%、約20%至約60%、約20%至約55%、約20%至約50%、約20%至約45%、約20%至約40%、約20%至約35%、約20%至約30%、約20%至約25%；例如約25%至約97%、約25%至約95%、約25%至約90%、約25%至約85%、約25%至約80%、約25%至約75%、約25%至約70%、約25%至約65%、約25%至約60%、約25%至約55%、約25%至約50%、約25%至約45%、約25%至約40%、約25%至約35%、約25%至約30%；例如約30%至約97%、約30%至約95%、約30%至約90%、約30%至約85%、約30%至約80%、約30%至約75%、約30%至約70%、約30%至約65%、約30%至約60%、約30%至約55%、約30%至約50%、約30%至約45%、約30%至約40%、約30%至約35%；例如約35%至約97%、約35%至約95%、約35%至約90%、約35%至約85%、約35%至約80%、約35%至約75%、約35%至 約70%、約35%至約65%、約35%至約60%、約35%至約55%、約35%至約50%、約35%至約45%、約35%至約40%；例如約40%至約97%、約40%至約95%、約40%至約90%、約40%至約85%、約40%至約80%、約40%至約75%、約40%至約70%、約40%至約65%、約40%至約60%、約40%至約55%、約40%至約50%、約40%至約45%；例如約45%至約97%、約45%至約95%、約45%至約90%、約45%至約85%、約45%至約80%、約45%至約75%、約45%至約70%、約45%至約65%、約45%至約60%、約45%至約55%、約45%至約50%；例如約50%至約97%、約50%至約95%、約50%至約90%、約50%至約85%、約50%至約80%、約50%至約75%、約50%至約70%、約50%至約65%、約50%至約60%、約50%至約55%；例如約55%至約97%、約55%至約95%、約55%至約90%、約55%至約85%、約55%至約80%、約55%至約75%、約55%至約70%、約55%至約65%、約55%至約60%；例如約60%至約97%、約60%至約95%、約60%至約90%、約60%至約85%、約60%至約80%、約60%至約75%、約60%至約70%、約60%至約65%；例如約65%至約97%、約65%至約95%、約65%至約90%、約65%至約85%、約65%至約80%、約65%至約75%、約65%至約70%；例如約70%至約97%、約70%至約95%、約70%至約90%、約70%至約85%、約70%至約80%、約70%至約75%；例如約75%至約97%、約75%至約95%、約75%至約90%、約75%至約85%、約75%至約80%；例如約80%至約97%、約80%至約95%、約80%至約90%、約80%至約85%；例如約85%至約97%、約85%至約95%、約85%至約90%；例如約90%至約97%、約90%至約95%或約95%至約97%。

在NPC患者中，可藉由監測腦脊髓液(CSF)、血漿或尿液之試樣中之一或多個生物標記量測一或多種脂質之儲存之含量。在一些實施例中，使用CSF以直接測定一或多種脂質之排泄程度。在一些實施例 中，監測藉由一或多種脂質之含量變化調節之下游蛋白質生物標記。在一些實施例中，該方法包含投與足以調節、例如相對於基線值降低腦脊髓液中以下中之一或多者之含量之量的醫藥活性成份：τ蛋白、類澱粉肽、神經絲微蛋白(NFL)、膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)、固醇、氧化固醇、幾丁三糖酶活性、鈣結合蛋白、溶酶體相關膜蛋白1(LAMP-1)、GM2或GM3神經節苷酯、神經鞘胺醇及神經鞘胺醇-1-磷酸鹽(S1P)。

在一些實施例中，使用血漿試樣以測定在治療之前及之後血液中存在之一或多種脂質(例如膽固醇或膽固醇代謝物)之含量。在一些實施例中，該方法包含投與足以調節、例如相對於基線值降低血漿中以下中之一或多者之含量之量的醫藥活性成份：7-酮膽固醇、7β-羥基膽固醇、24S-羥基膽固醇、25-羥基膽固醇、27-羥基膽固醇及膽甾烷-3β,5α,6β-三醇。

監測在NPC1患者之尿液中報告之其他脂質(例如代謝物，例如3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CA)、甘胺酸結合之3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CG)及牛磺酸結合之3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CT))可提供有用生物標記(Maekawa,M.等人「Focused metabolomics using liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry for analysis of urinary conjugated cholesterol metabolites from patients with Niemann-Pick disease type C and 3β-hydroxysteroid dehydrogenase deficiency.」Annals of Clinical Biochemistry OnlineFirst，2015年3月2日公開)。在一些實施例中，該方法包含投與足以調節、例如相對於基線值降低尿液中以下中之一或多者之含量之量的醫藥活性成份：3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CA)、甘胺酸結合之3β-磺氧基-7β-N-乙醯基 葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CG)及牛磺酸結合之3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CT)。

6.3.4.2. 治療效應

在一些實施例中，本揭示內容之方法對NPC之一或多種症狀具有有益效應。

用以表徵及量化NPC疾病進展之其他量度係經由使用NPC嚴重程度量表，其測定九個主要域(活動、認知、眼運動、精細動作技能、聽力、記憶力、癲癇、言語及吞嚥)及八個次要域(聽性腦幹反應、行為、癡笑性猝倒症、反射亢進、失禁、嗜睡病、精神病及呼吸問題)中之臨床體徵及症狀(Yanjanin等人，「Linear Clinical Progression,Independent of Age of Onset,in Niemann-Pick Disease,Type C,」Am.J.Med.Genet.Part B 153B：132-140(2010))(「Yanjanin 2010」)。整體臨床嚴重程度評分(或「整體評分」)係主要及次要域中之每一者之所有評價之總計，且係藉由所有個別域評分之和來測定。參見下表1；亦參見圖1。

在一些實施例中，該方法包含維持或降低選自以下之NPC嚴重程度量表之一或多個域評分：活動、精細動作技能、認知、言語、吞嚥、眼運動、記憶力、聽力、癲癇、聽性腦幹反應、行為、癡笑性猝倒症、反射亢進、失禁、嗜睡病、精神病及呼吸問題。在一些實施例中，該方法包含維持或降低選自以下之NPC嚴重程度量表之一或多個域評分：活動、精細動作技能、認知、言語、吞嚥、眼運動、記憶力、聽力及癲癇。在一些實施例中，該方法包含維持或降低選自以下之NPC嚴重程度量表之一或多個域評分：活動、精細動作技能、認知、言語、吞嚥、記憶力及癲癇。在一些實施例中，該方法包含維持或降低選自以下之NPC嚴重程度量表之一或多個域評分：活動、精細動作技能、認知及吞嚥。

在一些實施例中，改良患者之病況之治療包含降低與基線評分相比NPC嚴重程度量表之一或多個域之評分。在一些實施例中，與基線評分相比，評分降低介於以下範圍內：約20%至約95%，例如約30%至約95%、約40%至約95%、約50%至約95%、約60%至約95%、約70%至約95%、約80%至約95%、約90%至約95%；例如約30%至約90%、約40%至約90%、約50%至約90%、約60%至約90%、約70%至約90%、約80%至約90%；例如約20%至約80%、約30%至約80%、約40%至約80%、約50%至約80%、約60%至約80%、約70%至約80%； 例如約20%至約70%、約30%至約70%、約40%至約70%、約50%至約70%、約60%至約70%；例如約20%至約60%、約30%至約60%、約40%至約60%、約50%至約60%；例如約20%至約50%、約30%至約50%、約40%至約50%；例如約20%至約40%、約30%至約40%；或約20%至約30%。舉例而言，與基線評分相比，評分降低可為約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約95%。

在一些實施例中，標的方法將一或多個域之評分相對於基線值降低20%±5%、25%±5%、30%±5%、35%±5%、40%±5%、45%±5%、50%±5%、55%±5%、60%±5%、65%±5%、70%±5%、75%±5%、80%±5%、85%±5%、90%±5%或95%±5%。

在一些實施例中，標的方法將一或多個域之評分相對於基線值降低20%±3%、25%±3%、30%±3%、35%±3%、40%±3%、45%±3%、50%±3%、55%±3%、60%±3%、65%±3%、70%±3%、75%±3%、80%±3%、85%±3%、90%±3%、95%±3%或97%±3%。

在一些實施例中，標的方法將一或多個域之評分相對於基線值降低20%±2%、25%±2%、30%±2%、35%±2%、40%±2%、45%±2%、50%±2%、55%±2%、60%±2%、65%±2%、70%±2%、75%±2%、80%±2%、85%±2%、90%±2%、95%±2%或97%±2%。

在一些實施例中，改良患者之病況之治療包含降低與基線整體評分相比NPC嚴重程度量表之整體評分。在一些實施例中，與基線整體評分相比，整體評分降低介於以下範圍內：約20%至約97%，例如約25%至約97%、約30%至約97%、約35%至約97%、約40%至約97%、約45%至約97%、約50%至約97%、約55%至約97%、約60%至 約97%、約65%至約97%、約70%至約97%、約75%至約97%、約80%至約97%、約85%至約97%、約90%至約97%；例如約20%至約95%、約25%至約95%、約30%至約95%、約35%至約95%、約40%至約95%、約45%至約95%、約50%至約95%、約55%至約95%、約60%至約95%、約65%至約95%、約70%至約95%、約75%至約95%、約80%至約95%、約85%至約95%、約90%至約95%；例如約20%至約90%、約25%至約90%、約30%至約90%、約35%至約90%、約40%至約90%、約45%至約90%、約50%至約90%、約55%至約90%、約60%至約90%、約65%至約90%、約70%至約90%、約75%至約90%、約80%至約90%、約85%至約90%；例如約20%至約85%、約25%至約85%、約30%至約85%、約35%至約85%、約40%至約85%、約45%至約85%、約50%至約85%、約55%至約85%、約60%至約85%、約65%至約85%、約70%至約85%、約75%至約85%、約80%至約85%；例如約20%至約80%、約25%至約80%、約30%至約80%、約35%至約80%、約40%至約80%、約45%至約80%、約50%至約80%、約55%至約80%、約60%至約80%、約65%至約80%、約70%至約80%、約75%至約80%；例如約20%至約75%、約25%至約75%、約30%至約75%、約35%至約75%、約40%至約75%、約45%至約75%、約50%至約75%、約55%至約75%、約60%至約75%、約65%至約75%、約70%至約75%；例如約20%至約70%、約25%至約70%、約30%至約70%、約35%至約70%、約40%至約70%、約45%至約70%、約50%至約70%、約55%至約70%、約60%至約70%、約65%至約70%；例如約20%至約65%、約25%至約65%、約30%至約65%、約35%至約65%、約40%至約65%、約45%至約65%、約50%至約65%、約55%至約65%、約60%至約65%；例如約20%至約60%、約25%至約60%、約30%至約60%、約35%至約60%、約40%至約60%、約45%至約60%、約50%至約 60%、約55%至約60%；例如約20%至約55%、約25%至約55%、約30%至約55%、約35%至約55%、約40%至約55%、約45%至約55%、約50%至約55%；例如約20%至約50%、約25%至約50%、約30%至約50%、約35%至約50%、約40%至約50%、約45%至約50%；例如約20%至約45%、約25%至約45%、約30%至約45%、約35%至約45%、約40%至約45%；例如約20%至約40%、約25%至約40%、約30%至約40%、約35%至約40%；例如約20%至約35%、約25%至約35%、約30%至約35%；例如約20%至約30%、約25%至約30%；或例如約20%至約25%。舉例而言，與基線整體評分相比，NPC嚴重程度量表之整體評分之降低可為約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約97%。

在一些實施例中，標的方法將整體評分相對於基線整體值降低20%±5%、25%±5%、30%±5%、35%±5%、40%±5%、45%±5%、50%±5%、55%±5%、60%±5%、65%±5%、70%±5%、75%±5%、80%±5%、85%±5%、90%±5%或95%±5%。

在一些實施例中，標的方法將整體評分相對於基線整體值降低20%±3%、25%±3%、30%±3%、35%±3%、40%±3%、45%±3%、50%±3%、55%±3%、60%±3%、65%±3%、70%±3%、75%±3%、80%±3%、85%±3%、90%±3%、95%±3%或97%±3%。

在一些實施例中，標的方法將整體評分相對於基線整體值降低20%±2%、25%±2%、30%±2%、35%±2%、40%±2%、45%±2%、50%±2%、55%±2%、60%±2%、65%±2%、70%±2%、75%±2%、80%±2%、85%±2%、90%±2%、95%±2%或97%±2%。

在一些實施例中，保持患者之病況恆定之維持期包含與基線評分相比將NPC嚴重程度量表之域之評分保持在一定範圍內。在一些實 施例中，評分之維持係指在基線值下之評分之約15%內、例如約10%或約5%內的評分。

在一些實施例中，標的方法產生相對於基線評分在5%±3%、10%±3%或15%±3%內之評分。在一些實施例中，標的方法產生相對於基線評分在5%±2%、10%±2%或15%±2%內之評分。

在一些實施例中，保持患者之病況恆定之維持期包含與基線整體評分相比將NPC嚴重程度量表之整體評分保持在一定範圍內。在一些實施例中，整體評分之維持係指在基線值下之整體評分之約15%內、例如約10%或約5%內的整體評分。

在一些實施例中，標的方法產生相對於基線整體評分在5%±3%、10%±3%或15%±3%內之整體評分。在一些實施例中，標的方法產生相對於基線整體評分在5%±2%、10%±2%或15%±2%內之整體評分。

可用於表徵本揭示內容之方法之效能之其他量度包括整體域，其包含治療後變化之盲化臨床醫師臨床整體印象(CGI-臨床醫師)或變化之照護者臨床整體印象(CGI-照護者)、計時起走(TUG)測試、9孔柱測試(9-HPT)及生活品質量度(例如美國國立衛生研究院(United States National Institutes of Health)PROMIS-PRO(患者報告結果量測資訊系統-患者報告結果)照護者生活品質分級)。

本揭示內容之方法可藉由臨床安全性量度表徵，該等量度包括以下中之一或多者：臨床不良事件之表徵及嚴重程度；聽力學測試，例如藉由BAER測試；臨床實驗室測試，例如血液學、臨床化學、凝固、尿分析、CSF分析；生命徵象；身體及神經檢查發現；及心電圖。

6.3.5. 其他溶酶體儲存病症之治療

如實例8中所展現(參見章節5.8.2.5)，本文所述羥丙基β-環糊精混 合物對與自體吞噬有關之基因具有顯著效應，從而展現本文所述醫藥活性成份及醫藥組合物將有效改善其他溶酶體儲存病症中之缺陷之後果。

因此，在另一態樣中，提供治療除C型尼曼-匹克病(NPC)外之溶酶體儲存病症的方法，其包含向具有除NPC外之溶酶體儲存病症之個體投與治療有效量之如本文所述醫藥組合物。

在各個實施例中，溶酶體儲存病症選自天冬胺醯葡糖胺尿症、沃爾曼病(Wolman disease)、胱胺酸病、達農病(Danon disease)、法布瑞氏病(Fabry disease)、法伯病(Farber disease)、岩藻糖沈積症、高雪氏病(Gaucher disease)、I/II/III型GM1-神經節苷脂貯積病、GM2-神經節苷脂貯積病、I/II型α-甘露醣儲積症、β-甘露醣儲積症、異染性腦白質營養不良、I/II型唾液酸沈積症、IV型黏脂貯積病、施艾氏症候群(Scheie syndrome)、亨特氏症候群(Hunter syndrome)、聖菲利波症候群A(Sanfilippo syndrome A)、聖菲利波症候群B、聖菲利波症候群C、聖菲利波症候群D、I/II型半乳糖唾液酸苷貯積症、克拉貝病(Krabbe disease)、桑德霍夫病(Sandhoff disease)、伏-施二氏病(Vogt-Spielmeyer disease)、賀勒氏症候群(Hurler syndrome)、除C型尼曼-匹克病外之尼曼-匹克病、I細胞疾病(黏脂貯積病II)、擬-賀勒氏多處營養不良、莫爾丘症候群(Morquio syndrome)、馬羅托-拉米症候群(Maroteaux-Lamy syndrome)、斯萊症候群(Sly syndrome)、IX型黏多糖貯積症、多發性硫酸脂酶缺乏症、巴登氏病(Batten disease)、塔伊-薩克斯病(Tay-Sachs disease)、龐貝氏病(Pompe disease)、嬰兒晚期北方癲癇(Northern Epilepsy)、緻密成骨不全症、辛德勒病(Schindler disease)、唾液酸尿症及紮拉病(Salla disease)。

在某些實施例中，溶酶體儲存病症係塔伊-薩克斯病、鞘脂類代 謝障礙、高雪氏病、黏脂貯積病、半乳糖唾液酸苷貯積症、紮拉病症、胱胺酸病、達農病、法布瑞氏病、法伯病、脂褐質沈積症、龐貝氏病、神經節苷脂貯積病、ISSD、克拉貝病、除NPC外之尼曼-匹克病、腦白質營養不良、賀勒氏病(Hurler disease)、施艾氏病(Scheie disease)、亨特氏病(Hunter disease)、聖菲利波病(San Filippo disease)、桑德霍夫病、辛德勒病、巴登氏病症或沃爾曼病。

在又一實施例中，溶酶體儲存病症係除NPC外之尼曼-匹克病、塔伊-薩克斯病、法布瑞氏病、法伯病、聖菲利波病、巴登氏病症或沃爾曼病。

7. 實例

提供以下實例以實施例示及舉例說明而非予以限制。

7.1. 實例1：C型尼曼-匹克病之I期臨床試驗

由NIH使用市售非經腸級羥丙基β-環糊精混合物根據以下方案起始1期臨床試驗。

7.1.1. 方案

在由NIH執行之此1期非隨機化、開放標記、單中心研究中，經由腰注射向3名患者之非用藥隊列各自以200mg之初始劑量、之後遞增至300mg、400mg及900mg經鞘內投與羥丙基β-環糊精(Kleptose^® HPB,Roquette)。隊列中之所有患者(每個隊列3名患者)皆每月一次接受HP-B-CD達至少兩個劑量，且劑量遞增之決定係基於安全性及生物化學數據。隨後劑量遞增係以高達300mg之增量實施。藉由不良事件(AE)、聽力學評估、臨床實驗室測試、生命體徵、體檢、胸部X射線及心電圖(ECG)評價安全性。藉由血漿24(S)-HC自基線之變化量測生物化學效能。評價血漿HP-β-CD之PK。

7.1.2. 藥物產品(Kleptose® HPB)

此I期臨床試驗中所用之羥丙基β-環糊精產品係Kleptose^® HPB (Roquette,France)，DS_a為約4.34±10%。

7.1.3. 納入準則

患者合格性納入準則係：

1)在入選時年齡大於或等於2歲且小於或等於25歲，任一性別及任何族群。

2)基於以下中之一者之NPC1之診斷：a)兩個NPC1突變；b)陽性非律平(filipin)染色及至少一個NPC1突變；c)垂直核上性凝視麻痹(VSNGP)與以下中之任一者之組合：i)一個NPC1突變，或ii)陽性非律平染色及無NPC2突變。

3)具有NPC1之至少一種神經表現之患者。舉例而言但不限於，聽力損失、垂直核上性凝視麻痹、共濟失調、失智症、緊張不足、癲癇、發音困難或吞嚥困難。

4)重複行進至NIH CC進行評估及隨訪之能力。

5)若服用麥格司他，則患者必須在基線評估之前服用藥劑之恆定劑量達不小於3個月並必須願意在試驗之持續時間內維持該劑量值。

6)願意中斷所有非處方補充物，適齡多維生素除外。

7)育齡女性必須願意在試驗之持續時間內使用有效避孕方法。

8)願意參與試驗設計之所有態樣，包括連續血液及CSF採集。

7.1.4. 排除準則

患者合格性排除準則：

1)在入選試驗時年齡低於2歲或高於25歲。

2)若個體之重量對於鹽水或藥物投藥將產生將超過0.2 EU/kg之內毒素含量，則排除該等個體。

3)將干擾患者遵從此方案之需求之能力之NPC1之嚴重表現。

4)神經學上無症狀患者。

5)已接受任何形式之環糊精以試圖治療NPC1之患者。利用含有環糊精作為賦形劑之另一藥物製劑治療另一醫學適應症將不排除患者。

6)對環糊精或調配物之組份有過敏性反應病史。

7)在研究期間之任何時間懷孕或母乳哺育。

8)懷疑CNS感染或任何全身性感染之患者。

9)將影響實施腰穿刺之能力之脊柱畸形。

10)腰區中皮膚感染。

11)嗜中性球減少症，定義為絕對嗜中性球計數(ANC)小於1,500。

12)血小板減少症(血小板計數小於75,000/立方毫米)。

13)CSF循環紊亂之證據。

14)麻醉之禁忌。

15)先前使用抗凝劑或具有臨床出血之增加風險或INR大於2之出血病症之病史/存在。

16)具有含黃疸或右上腹疼痛之症狀之急性肝病之臨床證據的患者。

17)存在貧血，定義為對於年齡及性別之兩個標準偏差低於正常。

18)對於18歲及更大之個體，自動計算eGFR且由NIH CC實驗室利用CKD-EPI肌酸酐2009方程報告。若eGFR小於或等於60mL/min/1.73m2，則排除大於或等於18歲之個體。對於<18歲之個 體，利用NKDEP計算器(http：//www.nkdep.nih.gov/lab-evaluation/gfr-calculators/children-conventional-unit.shtml)。結果報告為>75mL/min/1.73m2或更低。若eGFR小於或等於75 15mL/min/1.73m2，則排除<18歲之個體。

19)單一尿分析時血尿，如由American Urological Association(AUA)定義為在顯微鏡評估自適當採集之尿分析樣品之尿沉降時每個高倍視野五個或更多個紅血球(或>25/micro L)。若2個後續尿液樣品如由AUA定義呈血尿陰性，則將不排除患者。

20)蛋白尿(尿分析時1+蛋白質)，由患者之主要醫療提供者或NIH腎臟病學會診評估且分類為良性或在正常尿液蛋白肌酸酐比率之背景下及在不存在臨床症狀(水腫、高血壓)下除外。

21)活動性肺病、氧需求或血氧飽和度降低之臨床顯著病史、肺療法或需要主動抽吸。

22)不能完成行為聽力學評估(包括純音臨限值評價(500Hz至8000Hz))以監測耳毒性及OAE在基線處不可容易地獲得之患者。

23)具有進行性癲癇、在入選之前2個月內頻率、類型或持續時間不穩定、在入選之前2個月內需要改變抗癲癇醫藥之劑量(針對重量進行之調節除外)、或需要3個或更多個抗癲癇醫藥以控制癲癇的患者。

24)在研究者之觀點下不能遵從方案或具有將潛在增加參與風險之特定健康問題之患者。

7.1.5. 臨床數據之初始分析

如下分析此研究之初始數據與亦使用Kleptose^® HPB之鞘內投與之另一機構處之個別IND(「I-IND」)之額外數據：

7.1.5.1. 初始數據之分析之概述

實施分析以檢查包括NIH個體及另一機構處I-IND研究之三個個 體之數據組中之NPC臨床嚴重程度評分及其主要域的變化比率。下文列舉主要發現：

在比較表2及表3(參見下文)時，藥物劑量影響NPC臨床嚴重程度評分及其域之變化比率，在聽力中觀察到最大變化。

環糊精通常降低NPC臨床嚴重程度評分及其分量之減少速率(表4)(下文)。此對於所有分量尤其如此，只是眼運動、聽力及癲癇除外。

在限制對NIH個體之環糊精與NIH自然史研究之比較(表5)時，型式亦與以較慢速率減少之環糊精組一致，只是眼運動除外。

I期臨床試驗數據之初始分析之結果概述於圖2-3中。

7.1.5.2. 分析方法

以下分析之目標係瞭解12個NIH 1期研究個體(以「CDA」開始鑑別)及3個來自另一地點之亦接受Kleptose^® HPB之鞘內治療之個體(以「I-IND」開始鑑別)中隨時間之變化。以下結果係基於15個接受羥丙基β-環糊精之個體。以下分析中不包括個體CDA113及CDA114，此乃因尚未接受羥丙基β-環糊精之劑量。15個個體中之四(4)個具有基線及6個月時之可用數據(個體CDA110、CDA111、CDA112及I-IND-3)；其餘11個個體具有基線、6個月及12個月時之可用數據(CDA101-CDA109、I-IND-1)。

使用線性混合模型以獲得隨時間變化之估計斜率。混合於「線性混合模型」之詞語用於表示模型包括「固定」及「隨機」效應之事實。模型之「隨機」部分解釋關於每一個體之重複量測或數據之縱向性質。模型之「固定」部分提供隨時間之平均變化、亦即變化之斜率之估計。此方法係有利的，此乃因其利用所有收集數據且相互作用項容許探索組中之不同變化比率。假設未結構化相關矩陣擬合此模型，此意指關於多個量測之間之相關性未進行假設且估計每一相關性。在 未來分析中，可向下文模型添加共變量以探索共變量(例如劑量)之效應。

計算此分析中提供之每一模型之消退診斷且使用Cook’s D以鑑別潛在離群值/有影響之觀察，從而重新擬合模型，其中鑑別離群值/有影響之觀察(注意：離群值/有影響之觀察定義為Cook’s D值為0.4或更大之觀察)。選擇Cook’s D作為目標診斷，此乃因其包括結果及任何共變量以鑑別潛在離群值。在鑑別離群值時，提供兩組模型；所提供之第一模型係基於全數據組，而第二組模型係基於去除離群值之數據。對於此分析，去除所有I-IND-1個體之值而非僅基線值。該等值存於表2及表3之最後兩欄中。注意，自該兩個分析獲得之結果可極為不同，此乃因模型中包括1期研究中之15個個體之相對較小樣本大小及總計41個觀察(在包括全數據組時)。

亦使用相同方法以比較1期個體與NIH自然史數據組。NIH自然史數據組闡述於Yanjanin等人，「Linear Clinical Progression,Independent of Age of Onset,in Niemann-Pick Disease,Type C,」Am.J.Med.Genet.Part B 153B：132-140(2010)中。

對於本文提供之分析，將基本模型擬合至接受環糊精之個體(提供於表2中)。對於此分析，提供在一年之時段內相應NPC結果之估計變化。在表3中，提供在控制時對於所接收劑量隨時間之平均變化之結果。表4及表5提供比較環糊精個體與NIH自然史研究中相當年齡範圍內之個體的模型。所提供結果係兩組中之每一者之估計斜率及用於測試兩組之間之斜率之相等性之p值。

7.1.5.3. 接受環糊精之個體隨時間之變化

表2提供15個接受至少一個劑量之環糊精之個體之整體NPC評分及其分量中之每一者之平均斜率。該等結果提供關於一年內結果之變化比率之資訊。該等比率小於先前分析中提供之全自然史群體中觀察 到之彼等。注意：去除1個具有31之總評分、去除聽力之31之總評分、4之活動、3之吞嚥、4之精細動作及4之認知之I-IND個體的基線數據。總之，此個體隨時間改良。另外，1個NIH個體係眼運動分析中之離群值，此乃因此域中5之高值。全數據組之分析提供於第2及3欄中且在去除離群值時獲得之結果提供於第4及5欄中。

表3含有包括劑量作為模型之部分之分析結果。該等模型提供關於藥物之劑量之效應之資訊。在檢查聽力時注意此之效應。在模型中 包括劑量時，隨時間變化之斜率不再顯著。

7.1.5.4. 1期及I-IND個體與自然史研究中相應個體之比較

為更好地瞭解環糊精之效應，比較1期及I-IND研究中之個體與NIH自然史研究中年齡相當之個體。對於此比較，將數據組限於具有超過數據之單一時間點且年齡介於6歲與26歲之間之個體。用模型中之時間、治療組及時間乘以治療組之相互作用項擬合混合模型。下表4提供此分析之結果。

表4中提供之結果與和與自然史群體相比環糊精組之較慢變化速率一致，只是眼運動及聽力亞域除外。

7.1.5.5. 1期個體與自然史研究中之相應個體之比較

為更好地瞭解環糊精在NIH群體內之效應，比較1期研究中之個體與自然史研究中年齡相當之個體。對於此比較，將數據組限於具有超過數據之一個時間點且年齡介於6歲與26歲之間之個體。將混合模型與模型中之時間、治療組及時間乘以治療組之相互作用項擬合。下表提供該等分析之結果，其類似於表4中之彼等。注意，癲癇結果稍微不穩定且具有若干離群值。僅提供全數據組結果。眼運動除外，環糊精組中之所有比率皆小於自然史研究中觀察之彼等。

7.1.5.6. 僅比較曾經使用麥格司他之個體之分析

下文提供之結果包括在時間段期間使用麥格司他之個體。此包括自然史研究之8個個體及1期研究之14個個體。隨後對於此群體重新運行表4中提供之分析。該等結果提供於下表6中。

下表7提供僅包括NIH個體之結果。對於此比較去除I-IND之三個個體。此處提供之結果類似於上表5中提供之彼等。兩個群體之間之差異在於自群體去除自然史研究中之5個NIH個體及1期研究中之1個NIH個體，此乃因該等個體報告在任何時間點皆無麥格司他使用。

7.1.6. 臨床數據之其他分析

對相同NIH臨床試驗數據組實施其他分析，其中上述分析中不包括之對照數據組中包括4個數據點。該等分析概述於圖4、5、6及8中。

7.2. 實例2：藥物產品之標準分析

實例I中所述之I期臨床試驗中所用之羥丙基β-環糊精產品係Kleptose® HPB(Roquette,France)，且DSa為約4.34±10%。如由製造者實施之Kleptose® HPB之兩個實例性批次之標準分析示於以下4頁 上。

KLEPTOSE® HPB親代級(實例性批次1) 第1/2頁

定義：

HYDROXYPROPYLBETADEX係betadex之部分取代之聚(羥丙基)醚。

CAS編號：128446-35-5

EINECS：420-920-1

INCI：羥丙基環糊精

規範：

A)特徵

外觀 白色或幾乎白色，非晶形或結晶粉末。

溶解性 易溶於水及丙二醇中。

B)鑑別

C)測試

相關物質

微生物污染：

* 順從性數據-未實施測試

** 監測計劃

KLEPTOSE® HPB親代級(實例性批次1) 第2/2頁

典型值：

關於相關物質之內部需求：

注釋：

由Roquette使用之方法可為EP或USP或內部驗證方法，已將其與 藥典專論進行比較。

此物質適用於製造非經腸製劑。

一致性：

當前藥典：E.P.(1804)及U.S.P/N.F。

儲存：

儲存：

- 保藏在充分密封之容器中。

- 吸濕性產品：在控制室條件下操作。

重新測試日期：

- 在其初始包裝中3年。

* 順從性數據-未實施測試

** 監測計劃

KLEPTOSE® HPB親代級(實例性批次2) 第1/2頁

定義：

HYDROXYPROPYLBETADEX係betadex之部分取代之聚(羥丙基)醚。

CAS編號：128446-35-5

EINECS：420-920-1

INCI：羥丙基環糊精

規範：

A)特徵

外觀 白色或幾乎白色，非晶形或結晶粉末。

溶解性 易溶於水及丙二醇中。

B)鑑別

C)測試

相關物質

* 順從性數據-未實施測試

** 監測計劃

KLEPTOSE® HPB親代級(實例性批次2) 第2/2頁

-微生物污染：

典型值：

注釋：

由Roquette使用之方法可為EP或USP或內部驗證方法，已將其與藥典專論進行比較。

此物質適用於製造非經腸製劑。

一致性：

當前藥典：E.P.(1804)及U.S.P/N.F。

儲存：

- 保藏在充分密封之容器中。

- 吸濕性產品：在控制室條件下操作。

重新測試日期：

- 在其初始包裝中3年。

* 順從性數據-未實施測試

** 監測計劃

7.3. 實例3：羥丙基β-環糊精混合物之HPLC分離

使用各種層析方法以評價市售非經腸級羥丙基β-環糊精醫藥組合物Kleptose^® HPB(其之批次用於I期臨床試驗中)中之環糊精混合物之複雜性。

7.3.1. CD-篩選管柱

使用歐洲藥典專論第1804號(Hydroxypropylbetadex)(於2009年1月1日修訂)之HPLC方法以分離市售Kleptose HBP^®(Roquette)中之組份。

HPLC條件：固定相：CD-篩選，粒徑5μm(ChiroQuest)，管柱：l=250mm，Ø=4.0mm；溫度：30℃。移動相：移動相A：水；移動相B：水：甲醇(10：90 V/V)。流速：1.0mL/min；檢測：Alltech 3300蒸發性光散射檢測器；載體氣體：氮；流速：1.5L/min；蒸發器溫度：70℃；注射：20μL。

梯度程式(歐洲藥典方法)：

圖9繪示CD-篩選HPLC方法中Kleptose^® HBP(DS_a=4.2)羥丙基β-環糊精之結果。物質以增加DS之次序溶析。未經取代之β-環糊精於約5min時溶析，且經單取代之羥丙基β-環糊精於約6min時溶析。圖10繪示使用具有甲醇及乙腈溶劑梯度之CD-篩選管柱之羥丙基β-環糊精的比較層析圖(利用甲醇之梯度：0min 30% B，40min 100% B；利用乙腈之梯度：0-5min 18% B，25min 40% B。其他方法參數保持不變)。滯留時間根據溶劑強度及移動相之極性變化。

質譜檢測方法：利用6460三相四極柱質譜儀之Agilent 1260 HPLC。Agilent Jet Stream電噴射離子化(ESI)來源，負性模式，m/z 500-3000；碎裂器電壓：35V，來源參數：氣體溫度：300℃，氣體流速：13L/min，霧化器：60psi，鞘層氣體流速：11L/min，鞘層氣體溫度(加熱器)：400℃，毛細管電壓：3500V。施加甲酸銨緩衝液(0.1M，pH=6.0)代替移動相中之水用於HPLC-MS量測。

圖11顯示HPLC-MS分析之試樣之萃取離子層析圖。BCD=未經取代之β-環糊精；DSx=DS為x之羥丙基β-環糊精。舉例而言，「DS3」係指具有DS=3之羥丙基β-環糊精。

7.3.2. 反相C18層析

分析Kleptose^® HBP(Roquette)(與章節5.3.1中所用相同之批次)。 向分析管柱(4mm×250mm)填充LiChroprep RP18矽膠。一組測試條件包括以下：固定相：LiChroprep RP18矽膠，粒徑25-40μm(Merck)，管柱：l=250mm，Ø=4.0mm；溫度：30℃。移動相：移動相A：水；移動相B：水：甲醇R(10：90 V/V)。梯度程式使用以下條件：0min以10%移動相B梯度至20min以100%移動相B。流速：1.0mL/min；檢測：Alltech 3300蒸發性光散射檢測器；載體氣體：氮；流速：1.5L/min；蒸發器溫度：70℃。

圖12顯示C18固定相上Kleptose^® HPB(DS_a=4.2)之典型HPLC層析圖。圖13顯示使用利用甲醇及乙腈溶劑梯度之LiChrosphere C18管柱之羥丙基β-環糊精的比較層析圖。(利用甲醇之梯度：0min 10% B，15min 30% B，40min 80% B。利用乙腈之梯度：0min 5% B，40min 80% B。方法之其他參數不變)。

使用如章節5.3.1中所述之質譜條件。圖14顯示來自HPLC-MS分析之具有不同DS之羥丙基β-環糊精的萃取離子層析圖。

7.3.3. 親水相互作用液相層析(HILIC)

親水相互作用液相層析(HILIC)使用親水固定相與通常用於反相層析之溶析液。該方法使用液-液分配層析原理，使得分析物可以增加極性之次序溶析。本文所述方法使用含有鍵結至矽膠表面之胺基丙基之胺基管柱。

分析Kleptose^® HBP(Roquette)(與章節5.3.1中所用相同之批次)。HPLC條件：固定相：Nucleosil NH2，粒徑5μm(Macherey Nagel)，管柱：l=250mm，Ø=4.0mm；溫度：30℃。移動相：移動相A：乙腈-水(80：20 V/V)；移動相B：水。流速：1.0mL/min；檢測：Agilent 385蒸發性光散射檢測器；載體氣體：氮；流速：1.2L/min；蒸發器溫度：50℃；霧化器溫度：30℃。

圖15顯示在Nucleosil NH2管柱上使用HILIC方法之羥丙基β-環糊 精的分離。

質譜條件與章節5.3.1中所述彼等相同。圖16顯示來自HPLC-MS分析之具有不同DS之羥丙基β-環糊精的萃取離子層析圖。BCD=未經取代之β-環糊精；DSx=DS為x之羥丙基β-環糊精。舉例而言，「DS3」係指具有DS=3之羥丙基β-環糊精。在此HPLC方法中，首先溶析出較高DS取代之羥丙基β-環糊精。

7.3.4. 矽膠層析

分析Kleptose HBP®(Roquette)(與章節5.3.1中所用者相同之批次)。HPLC方法：固定相：LiChrosphere Si-60，粒徑5μm(Merck)，管柱：l=250mm，Ø=4.0mm；溫度：30℃。移動相：移動相A：乙腈-0.1M甲酸銨pH=7.5(80：20 V/V)；移動相B：0.1M甲酸銨pH=7.5。流速：1.0mL/min；檢測：Agilent 385蒸發性光散射檢測器；載體氣體：氮；流速：1.2L/min；蒸發器溫度：50℃；霧化器溫度：30℃。

圖17顯示使用LiChrosphere Si 60管柱之羥丙基β-環糊精之組份之分離。在此情況下，將β-環糊精摻入試樣中以有利於檢測。

質譜條件與章節5.3.1中所述彼等相同。圖18顯示具有不同DS之羥丙基β-環糊精的萃取離子層析圖。BCD=未經取代之β-環糊精；DSx=DS為x之羥丙基β-環糊精。舉例而言，「DS3」係指具有DS=3之羥丙基β-環糊精。在此HPLC方法中，首先溶析出較高DS取代之羥丙基β-環糊精。

7.4. 實例4：改良之分析方法

7.4.1. 氣相層析

用於測定Hydroxypropylbetadex中之丙二醇(PG)含量之官方歐洲藥典專論方法具有相對於HPBCD僅約0.5%之定量極限。因此，需要更靈敏的分析方法，且研發具有經修改試樣製備之改良方法(與歐洲 藥典Hydroxypropylbetadex分析(專論號：1804，於2009年1月1日修訂)相比)。此方法用於定量0.01%含量(相對於HPBCD)下之PG，此係較歐洲藥典方法中之檢測極限遠更大之靈敏性。

方法之條件係如下：裝置：氣相層析儀：Shimadzu GC-17A；檢測器：火焰離子化檢測器(FID)；注射器：Shimadzu AOC-5000自動注射器；軟體：Shimadzu Class-VP 7.4版；氣體：載體氣體：氦(99.999%)，其他氣體：氮(99.999%)，合成空氣(99.999%)，氫(來自Whatman氫生成器)。

管柱：Supelco Supercowax-10(30m×0.32mm×1.0μm)

丙二醇滯留時間約6.35min；內標準品乙二醇滯留時間約7.15min。

5個校正點：介於0.1mg/mL與2mg/mL之間，對應於0.01%、0.02%、0.05%、0.1%、0.2%與HPBCD相關之PG。

自約200mg丙二醇之溶液製備校正原液，將其精確稱重至10mL有刻度之玻璃燒瓶中並用純化水填充至標記(表14)。為獲得下表中所列舉之濃度，實施適當稀釋。一旦達到目標濃度(參見下表14)，將1mL此溶液、100μL內標準品溶液(IST)、500mg NaCl及1mL水添加於螺旋蓋小瓶中並將溶液用1mL二氯甲烷(DCM)萃取。自有機相收穫試樣並直接注射。

使用校正溶液KAL2以藉由實施五個平行量測測定系統適合性(需求：RSD<5%-PG及EG之面積比之RSD)。

萃取空白試樣：將1mL DCM添加至0.1mL IST溶液、500mg NaCl及2mL蒸餾水中，隨後劇烈攪拌0.5min，並靜置。在分離各相後，向小瓶中放入約0.2mL DCM相。

試樣分離：將1mL DCM添加至螺旋蓋小瓶中之1.0g HPBCD試樣、0.1mL IST溶液、500mg NaCl及2mL蒸餾水中並劇烈攪拌0.5 min，並靜置。在分離各相後，向小瓶中放入約0.2mL DCM相。含有約0.18% PG之Kleptose HPB®(Roquette)試樣之代表性層析圖繪示於圖25中。

藉由繪製校正曲線計算HPBCD試樣之丙二醇(PG)含量，該校正曲線展示隨PG/EG峰面積變化之丙二醇/乙二醇(PG/EG)重量濃度比(weigh-in concentration ratio，mg/mL)。在HPBCD試樣中，未知參數係自其他三個因子及校正曲線之方程推出之PG含量。

用以分離單丙二醇與其二-及三取代之衍生物之方法的適合性示於圖26中。過取代之二醇顯示若干峰且由於較高沸點稍後溶析出。在起始材料及最終試樣中測試二-及三丙二醇含量。

藉由測試如表14中所述PG濃度之5個試樣(介於0.1mg/mL與2mg/mL之間，對應於0.01%、0.02%、0.05%、0.1%、0.2%與HPBCD相關之PG)證明方法之線性。一式三份地分析每一試樣以評價方法之精密度。表15概述精密度及線性分析之實驗數據。校正組之線性曲線繪示於圖27中。

PG=丙二醇；EG=乙二醇；RSD=相對標準偏差。

表15中之數據顯示方法在0.01-0.2% PG含量範圍內係線性的。

7.4.2. 分析型HPLC

利用歐洲藥典7.8(Hydroxypropylbetadex，專論號：1804，於2009年1月1日修訂)中HPLC方法且如章節5.3.1中所述測定殘餘BCD(未經取代之β-環糊精)含量、取代度為1之HPBCD分數及除BCD外之環糊精(CD)相關雜質之總和。亦利用相同方法記錄物質之分佈指紋。

7.4.3. NMR

自¹H-NMR譜自羥丙基中之甲基之三個質子之信號與附接至脫水葡萄糖單元之C1碳之質子(變旋異構質子)之信號的比率計算平均取代度(DS_a)。

自¹H NMR量測約1.2ppm(A)處甲基之雙峰及+5ppm與+5.4ppm(B)之間之變旋異構質子之信號的峰面積。實例性譜示於圖28中。作為參照，將變旋異構質子之峰面積設定為7.0，此乃因7個質子提供β-環糊精衍生物中之此峰。遵循參照峰之分配，使用以下表達計算平均取代度：DS_a=A/3。

7.4.4. 膽固醇溶解分析

如下實施活體外膽固醇溶解分析。於室溫下攪拌蒸餾水中之羥丙基β-環糊精混合物測試溶液，隨後添加過量未酯化膽固醇，使得一定量之膽固醇保持未溶解。24小時後，過濾出固體，且藉由HPLC方法量測溶液中存在之膽固醇。

HPLC條件：分析管柱：Nucleosil 120，C8，5μm，100mm×4.0mm(Macherey Nagel)；管柱溫度：40℃；移動相：乙腈：水=78：22；流速：1.5mL/min；注射體積：20μL；檢測器：UV 210nm；停止時間：5min。

藉由將10mg膽固醇稱重並轉移至10mL乙腈/異丙醇(75：25)中製備膽固醇之原液。藉由將原液用HPLC移動相稀釋10倍(以產生0.1 mg/mL之濃度)製備膽固醇之參照溶液。

在過濾後，將用於溶解性實驗之試樣用乙腈稀釋兩倍，且若需要，使用額外HPLC移動相用於進一步稀釋。

利用以下方程測定溶解膽固醇之濃度：膽固醇濃度(mg/mL)=(面積 _S /面積 _R )×Conc _R

面積 _S =來自試樣溶液之層析圖之膽固醇之峰面積

面積 _R =來自參照溶液之層析圖之膽固醇之峰面積

Conc _R =校正標準溶液中之SBECD-WS之濃度(mg/mL)。

7.5. 實例5：電噴射MS分析

如上文實例2中所論述，Kleptose^® HPB之平均莫耳取代為0.58-0.68(DS_a 4.06-4.76)，其中兩個代表性批次之平均莫耳取代為0.62(DS_a 4.34)。Trappsol^® Cyclo^TM(一種自不同製造商購得之羥丙基β-環糊精組合物)具有約0.91之較高之報告平均莫耳取代(DS_a 6.37)。

由兩個實驗室對Kleptose^® HPB及Trappsol^® Cyclo^TM(CTD Holdings,Inc.)(「Trappsol^®」)之市售試樣實施電噴射質譜分析。

由第一實驗室使用之方法係如下。將約50μg羥丙基β-環糊精(「HPBCD」)試樣溶解於1mL 80%甲醇水溶液中之1%甲酸中。將此HPBCD溶液輸注至API-4000質譜儀(Applied Biosystems)中。自m/z 1100至2000對MS掃描施加正離子電噴射模式。記錄MS譜(10-15次平均掃描)。量測β-環糊精之環氧丙烷加成產物之每一信號高度且自個別信號高度之總和計算HPBCD之環氧丙烷加合物群體。使用Analyst 1.51軟體(Applied Biosystems)進行MS操作。如圖29中所示，第一實驗室之電噴射MS數據展現，平均莫耳取代差異係由Kleptose^® HPB(圖29A)及Trappsol^®(圖29B)中之羥丙基取代之顯著不同程度及分佈引起。向譜添加數字以鑑別每一峰中之羥丙基部分之數目。

由第二實驗室使用之方法係如下。將試樣在水中以1mg/mL製備 且在1：1水：乙腈中稀釋至約5μM用於電噴射。使用Agilent Nanospray來源利用600nL/min之直接輸注速率(於150℃下之鞘層氣體且流速為5L/min且Vcap電位為1500V)形成離子。針對最佳信號強度調節ESI來源與離子遷移漂移管之間之界面之電位。將譜於單一電位下跨越漂移管累積3min，且明確顯示電噴射煙流中多種種類之離子之間的離子遷移分離。所用分析儀係Agilent 6560(一種線性低場離子遷移質譜儀)，且可將其視為Agilent Q-TOF的經實質性修改之形式，其在MS取樣孔口處容納IM漂移管且採用離子漏斗技術。圖30中所示之第二實驗室之電噴射MS數據確認取代指紋之差異(比較圖30A(Kleptose^® HPB)與30B(Trappsol^®))。數據亦確認電噴射MS係足夠穩健之分析工具，其可由不同實驗室常規使用以可重現地採取羥丙基β-環糊精組合物之指紋。

圖31比較由兩個不同實驗室(圖31A及31B，第二實驗室；圖31C，第一實驗室)實施之三個不同批次之Kleptose^® HPB之電噴射MS數據，且展現取代指紋在批次間幾乎相同。取代指紋之低批間變化與以下觀察一致：平均莫耳取代在Kleptose^® HPB之兩個實例性批次之間相同，如上文實例2中所論述。圖32提供由兩個不同實驗室(圖32A，第一實驗室；圖32B，第二實驗室)使用與用於產生圖31A及31B中所示之Kleptose數據相同之條件進行之Trappsol^®之兩個不同批次的電噴射MS譜，且展現Trappsol^®取代指紋存在顯著批間變化。

圖33顯示來自第二實驗室之電噴射MS譜，其中與圖29-32相比，Y軸擴展以顯示1090m/z與1230m/z之間之峰。圖33A係自Trappsol^®獲得之譜。圖33B係自Kleptose^® HPB獲得之譜。譜顯示在Trappsol^®(丙二醇峰標記於圖33A中)中、而非Kleptose^® HPB中存在大量丙二醇。Kleptose^® HPB具有較小但可檢測量之未經取代之環糊精，由圖33B中標記之峰顯示。

圖34顯示Kleptose^® HPB與Trappsol^®試樣之間之其他差異：1)DS在兩個試樣之間顯著不同。Trappsol^®顯示必須包括軸向及赤道型羥基之縮合反應；2)兩個試樣之主要離子係自固體中存在之氨之NH₄ ⁺加合物。對於每一DS亦存在MH⁺離子；3)主要離子中之每一者之同位素簇顯示銨加合物之雙倍帶電均-二聚體。在Trappsol^®之情形下，亦觀察到質子化離子之雙倍帶電二聚體；4)兩種材料皆顯示來自質子及銨之加合之雙倍帶電均-二聚體；5)在兩種材料中形成針對m/z 1530下之DS6-DS7記錄之雙倍帶電雜-二聚體，但在Trappsol^®中較在Kleptose^® HPB中遠更強烈；6)在80% ACN中於2.5μM濃度下維持所有該等差異。此指示二聚體具有強的分子間締合。

圖35顯示Kleptose^® HPB與Trappsol^®試樣之間之額外差異係呈同來源及異來源之三倍帶電二聚體之形式。該等顯示在Trappsol^®中之更大強度且在Kleptose^® HPB中實質上不存在。

概言之，電噴射MS分析展現與市售之不同羥丙基β-環糊精組合物Trappsol^® Cyclo^TM之取代指紋相比，實例1中所述I期臨床試驗中所用之羥丙基β-環糊精組合物Kleptose^® HPB之取代指紋之顯著差異。Kleptose^® HPB具有取代指紋之低批間變化及低含量之雜質(尤其丙二醇)。相比之下，Trappsol^®展現其取代指紋之高批間變化及顯著較高含量之丙二醇(一種假定耳毒素)。Trappsol^®亦展現同來源及異來源之三倍帶電環糊精二聚體，其在Kleptose^® HPB中不存在。

7.6. 實例6：羥丙基β-環糊精組合物之純化

研究三種純化方法(複合、沈澱及吸附)進一步減少Kleptose^® HBP中丙二醇(PG)及未經取代之β-環糊精(DS=0)雜質之能力。

7.6.1. 與有機化合物複合/締合

實驗5.6.1A：將1.0g HPBCD(Kleptose HBP®(Roquette))溶解於水(10mL)中。向溶液中添加對二甲苯(試驗編號5.6.1.1)或甲苯(試驗 編號5.6.1.2)(1.0mL)並將混合物於室溫下攪拌24hr並於5℃至7℃下攪拌1hr。經由0.45μm乙酸纖維素膜過濾器過濾乳白色溶液並將濾液於40℃下蒸發至乾燥。

試驗編號5.6.1.1：0.7g；產率：70%。

試驗編號5.6.1.2：0.8g；產率：80%。

實驗5.6.1B：將2.0g HPBCD(Kleptose HBP®(Roquette))溶解於水(4mL)中。向溶液中添加D-檸檬烯(試驗編號5.6.1.3，0.04mL，約10當量)或L-薄荷醇(試驗編號5.6.1.4，0.04g，約10當量)或苄醇(試驗編號5.6.1.5，0.03mL，約10當量)或膽固醇(試驗編號5.6.1.6，0.1g，約10當量)並將混合物於室溫下攪拌72hr。將溶液於5℃下保持4hr。

試驗編號5.6.1.4及試驗編號5.6.1.5保持澄清溶液，未形成沈澱。

試驗編號5.6.1.3及試驗編號5.6.1.6形成沈澱。經由0.45μm乙酸纖維素膜過濾器各自過濾試驗編號5.6.1.3及試驗編號5.6.1.6之溶液並將濾液於40℃下蒸發直至乾燥。

試驗編號5.6.1.3：2.1g；產率：105%。

試驗編號5.6.1.6：1.4g；產率：70%。

源自與小分子之選擇性複合物性或締合之試樣之結果概述於表9中。

ND=未測定。

試驗編號5.6.1.1、編號5.6.1.2及編號5.6.1.3顯示與市售Kleptose^® HBP相比，未經取代之β-環糊精含量減少。另外，試驗編號5.6.1.3中之D-檸檬烯顯示經單取代之羥丙基β-環糊精(「HPBCD DS=1」)及其他環糊精相關雜質之含量減少(參見圖19)。圖19顯示雜質：滯留時間約5min時之未經取代之β-環糊精(BCD)、滯留時間約6min時之經單取代之羥丙基β-環糊精(DS-1)及滯留時間約7.4min時之DS=2之羥丙基β-環糊精(DS-2)。

7.6.2. 沈澱

一般方法：將1.0g HPBCD(Kleptose HBP®(Roquette))溶解於5mL或2mL溶劑(S)中，並在50mL或20mL沈澱劑(PA)中沈澱。將經過濾固體物質用3mL PA沖洗3次。試驗編號5.6.2.11例外：將1.0g HPBCD溶解於水(2mL)中並用氯仿(3×10mL)萃取。合併有機相，在Na₂SO₄上乾燥，傾析，並於40℃下蒸發直至乾燥。每一試驗之製備皆概述於表10中。

ND=未測定。

溶劑沈澱實驗之分析結果概述於表11中。

ND=未測定。

如表11中所示，沈澱減少羥丙基β-環糊精試樣中丙二醇之含量。使用甲醇與分別丙酮、乙腈或氯仿之組合作為沈澱劑之試驗編號5.6.2.10、5.6.2.2及5.6.2.3分別能夠將丙二醇含量減少92%、81%及22%。使用水與分別丙酮或乙腈之組合作為沈澱劑之試驗編號5.6.2.7.2及5.6.2.8.2將丙二醇含量減少>95%(參見圖20，比較試驗編號5.6.2.7.2對Kleptose HPB®)。相比之下，與市售Kleptose HPB®相比，使用水及氯仿之試驗編號5.6.2.11不顯著改變丙二醇含量。

7.6.3. 吸附

7.6.3.1. 利用氧化鋁之澄清

將2.0g HPBCD(Kleptose HBP®(Roquette))溶解於甲醇(8mL，試驗編號5.6.3.1.1)或乙醇(8mL，試驗編號5.6.3.1.2)中，並於室溫下與氧化鋁(2.0g，標準化氧化鋁90，Merck)一起攪拌半小時。過濾出氧化鋁，用甲醇或乙醇(3×2mL)及水(3×2mL)洗滌。於40℃下蒸發濾液(SZ)及第一沖洗溶劑(M1[甲醇]或E1[乙醇])直至乾燥。

試驗編號5.6.3.1.1：試樣5.6.3.1.1-SZ：1.6g；產率：80%。

試驗編號5.6.3.1.1：試樣5.6.3.1.1-M1：0.2g；產率：10%。

試驗編號5.6.3.1.2：試樣5.6.3.1.2-SZ：1.5g；產率：75%。

試驗編號5.6.3.1.2：試樣5.6.3.1.2-E1：0.2g；產率：10%。

7.6.3.2. 氧化鋁上層析

試驗編號5.6.3.2.1：將2.0g HPBCD(Kleptose HBP®(Roquette))溶解於甲醇(2mL)中，並經由具有甲醇之氧化鋁(10g，標準化氧化鋁90，Merck)層析，流速：3mL/min，1min/部分，30個部分。將管柱用水洗滌，流速：10mL/min，20min(W)。組合以下部分並將其於40℃下蒸發直至乾燥。

試樣5.6.3.2.1A：第2部分：0.5g，產率：25%。

試樣5.6.3.2.1B：第3-8部分：1.1g，產率：55%。

試樣5.6.3.2.1C：第9-14部分：0.2g，產率：10%。

試樣5.6.3.2.1D：第15-W部分：0.2g，產率：10%。

試驗編號5.6.3.2.2：將5.0g HPBCD(Kleptose HBP®(Roquette))溶解於甲醇(10mL)中，並經由氧化鋁(200g，標準化氧化鋁90，Merck)利用以下溶劑梯度層析：100%甲醇，流速：5mL/min，3min/部分，第1-30部分；80%甲醇，20%水，5mL/min，3min/部分，第31-43部分；50%甲醇-水，5mL/min，3min/部分，第44-60部分；100%水，5mL/min，3min/部分，第61-70部分；洗滌(W)：100%水，10mL/min，30min。

組合以下部分並將其於40℃下蒸發直至乾燥。

試樣5.6.3.2.2A：第0-5部分：0.1g，產率：2%。

試樣5.6.3.2.2B：第6-10部分：0.6g，產率：12%。

試樣5.6.3.2.2C：第11-16部分：0.5g，產率：10%。

試樣5.6.3.2.2D：第17-45部分：1.1g，產率：22%。

試樣5.6.3.2.2E：第46-51部分：0.5g，產率：10%。

試樣5.6.3.2.2F：第52-56部分：0.9g，產率：18%。

試樣5.6.3.2.2G：第57-66部分：0.5g，產率：10%。

試樣5.6.3.2.2H：第67-W部分：1.3g，產率：26%。

7.6.4. 陰離子交換樹脂

試驗編號5.6.3.3：將1.0g HPBCD溶解於水(10mL)中，且利用0.1N NaOH將pH設定介於10-12之間(藉由萬能pH紙量測，Merck pH 1-14)。將溶液與5.0g陰離子交換樹脂(Purolite，產品碼：47111)一起攪拌14hr。過濾出樹脂，將濾液用陽離子交換樹脂(Purolite，產品碼：15131)中和並用木炭處理。藉由於40℃下蒸發直至乾燥分離固體試樣，以產生試樣5.6.3.3，產率：0.9g，90%。

來自吸附之試樣之表徵

ND=未測定。

ND=未測定。

表12及13中之數據之圖形表示繪示於圖21-24中。部分A至H分別對應於試樣5.6.3.2.2A至5.6.3.2.2H。儘管陰離子交換樹脂、之後木炭處理用於減少一些雜質(試驗編號5.6.3.3，圖21)，但發現氧化鋁吸附 有效減少CD相關雜質含量(試驗編號5.6.3.1，圖22)，甚至在應用於層析時減少更多(圖23)。圖21-23顯示雜質：滯留時間約5min時之未經取代之β-環糊精(BCD)、以及滯留時間約6min時之經單取代之羥丙基β-環糊精(DS-1)及滯留時間約7.4min時之DS=2之羥丙基β-環糊精(DS-2)。試驗編號5.6.3.2.2中收集之8個部分(A至H)繪示於圖24中。部分B-D含有極低濃度之靶標雜質、丙二醇及BCD。BCD降低低於部分A-G之量化限值。同時，部分A-F中之DS-1 HPBCD含量低於0.15%(96%或更大減少)；且部分B-D中之CD相關其他雜質顯著減少。基於該等發現，認為基於Al₂O₃之層析適於有效自HPBCD去除CD相關雜質。

7.7. 實例7：較大規模之純化

為準備H期臨床試驗，研究三種純化方法(沈澱、氧化鋁上吸附及沈澱與氧化鋁吸附之組合)以較大規模減少Kleptose^® HBP中丙二醇(PG)及未經取代之β-環糊精(DS=0)雜質的能力。對10g HPBCD(Kleptose^® HBP(Roquette))之批次實施純化；亦對30g批次實施沈澱。自10g批次獲得之結果闡述於表16、17及18中。自30g批次獲得之結果闡述於表19中。

7.7.1. 溶劑沈澱

在10g HPBCD之製備期間，自水與丙酮進行沈澱。將HPBCD溶解於半當量水(20g HPBCD，於10ml水中)中，倒入五倍體積(100ml)之丙酮中並在傾析後用雙倍體積(40ml)之丙酮洗滌三次。使用超音波及攪拌，溶解耗時30-60分鐘。藉由在過濾之前用丙酮洗滌三次降低沈澱之膠質性質。產率係87-93%。

於30g規模下，使用甲醇代替水用於溶解HPBCD。將43g HPBCD溶解於43ml甲醇中，且隨後倒入430ml丙酮中。在用丙酮(43ml)洗滌三次後，沈澱易於過濾。產率為99%。基於GC結果，在純化 期間使用甲醇較使用水快且產生更好產率。

7.7.2. 氧化鋁上層析

將HPBCD溶解於甲醇中以獲得約1mg/ml溶液。舉例而言，將10.0g HPBCD溶解於甲醇(10mL)中，並經由具有甲醇之氧化鋁(220g氧化鋁填料之180cm³管柱)層析，流速為5mL/min，每10分鐘收集各部分，總計8-20個部分。溶析液係100%甲醇。為製造10g純化HPBCD，對於純產物以70-75%產率使用20-22g起始材料。

7.7.3. 氧化鋁上層析與溶劑沈澱之組合

對於組合方案，對於10.0g HPBCD批次，如上文所述溶劑沈澱之後係上述氧化鋁上層析。

表20比較3種純化方法之結果。

7.7.4. 純化對取代指紋之效應

基本上如實例5(第二實驗室)中所述在批次CYL-4063(該批次係藉由氧化鋁上吸附層析與溶劑沈澱(水-丙酮)之組合純化)之等份試樣及Kleptose^® HPB之母批之等份試樣上實施電噴射MS分析。在圖36中比較譜，其中圖36A顯示起始材料之譜且圖36B顯示純化批次之譜。如可見，純化消除未經取代之β-環糊精分子(「DS-0」)、幾乎所有具 有單一羥丙基取代之環糊精分子(「DS-1」)，並降低具有2個羥丙基取代之環糊精分子(「DS-2」)之濃度。譜亦表明相對比例變化極小且因此更高度取代之羥丙基β-環糊精物質DS3、DS4、DS5、DS6及DS7之分佈變化極小。

量化14批Kleptose^® HPB(「EOxxx」)及純化批次CYL-4063之峰分佈。每一峰之信號及對總信號之每一峰貢獻之百分比概述於表21中。

7.8. 實例8：純化對基因表現圖譜之效應

如實例7中所論述，大規模之純化努力成功減少以下物質：丙二醇，其係假定耳毒素；無羥丙基取代之β-環糊精分子(DS-0)，已知其形成沈澱；及細菌內毒素，其具有高度發炎性。然而，觀察到利用氧化鋁之吸附層析不管單獨使用或與溶劑沈澱組合使用亦實現組成特性或指紋之顯著改變，實質上降低DS-1羥丙基β-環糊精之量，及-在藉由電噴射MS分析之批次(其藉由利用氧化鋁之吸附層析與溶劑沈澱之組合純化)中-降低DS-2羥丙基β-環糊精之量，且對Kleptose^® HPB中存在之更高度取代之物質(DS3、DS4、DS5、DS6、DS7)之存在及比率之效應極不明顯。

為評價組成指紋之此實質改變之潛在藥理學效應，實施基因表現剖析。

7.8.1. 材料及方法

7.8.1.1. 細胞

自Coriell Medical Institute獲得GM18453細胞(針對NPC1突變係純合的)及野生型GM05659細胞。將細胞系在10% FBS、DMEM及100單位/ml之青黴素及鏈黴素中培養。在環糊精處理之前，使500,000個細胞/孔與10ug/ml絲裂黴素同步。以研究中所用之範圍之濃度(0.1mM至10mM)將羥丙基環糊精(HPCD)溶解於PBS中。

7.8.1.2. RNA製備及全轉錄體分析

溶解NPC1(GM18453)及野生型細胞(GMO5659)並使用Trizol^®試劑(Invitrogen)萃取RNA。隨後使細胞經受DNAse I(Qiagen)處理。利用Qubit分光光度計及Nano Drop ND-1000檢查試樣之純度及濃度且使用Agilent 2100 Bioanalyzer評估RNA完整性(RIN)。根據製造商之說明使用RiboMinus^TM真核生物套組富集萃取之mRNA。RNA之最終量係10μg/反應。使用Clontech SMARTer Stranded RNA-Seq Kit生成之cDNA文庫經選擇大小在150-250bp範圍內且根據由Illumina提供之方案測序。使用HiSeq 2000平臺利用75bp正向引子及35反向引子對試樣進行測序。

7.8.1.3. RNA-Seq數據分析

cDNA文庫之測序每個試樣產生20941134至42375128個成對讀數。對於較大定位品質，將鹼基讀數修整至50個鹼基對。使用利用Bowtie 1.0.0版之TopHat v2.1.0將所有色彩間隔讀數與人類參照基因體(Ensembl，發行號73)比對。利用Cufflinks v2.0.2計算用於評價基因表現程度之RPKM(讀數/轉錄之千鹼基/百萬定位讀數)之值且利用Illumina BaseSpace Core Apps使用自Ensembl(發行號73)下載之蛋白 質編碼基因之基因注釋擷取粗計數。利用edgeR在粗計數上估計差異表現/變化倍數。所有程式皆以其缺省參數使用，且TopHat設定為不尋找新接點。

使用TIBCO Spotfire(6.5版)可視化每一基因之變化倍數。使用樹圖與條形圖之組合以展示差異基因表現變化。為觀察10mM HPCD處理之全轉錄體變化，發現條形圖視圖最佳。

7.8.1.4. RNA Seq分析驗證分析

使粗RNA Seq鹼基讀數經受膽固醇穩態基因之選擇組之定向計算分析以確立對Kleptose^® HPB處理之反應。選擇基因列示於下表22中。

7.8.1.5. 代謝路徑分析

分析所有環糊精細胞處理以測定18453 NPC1細胞系中實施之關鍵代謝路徑。使用Ingenuity Pathway分析軟體，使用基因ID、每基因之變化倍數及p值以生成Volcano散佈圖。該等圖揭示各種處理之上調及下調基因。隨後針對多組基因干擾特定代謝路徑之能力(-log10(pACCC))相對於其差異表現程度(-Dlog10(pORA)對其進行概率加權。可能干擾路徑之基因成員之概率定位不必排除干擾其他路徑中之其他基因成員之參與。

在以下情況下分析該等數據：自the Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)資料庫(發行號73.0+/03-16，3月15日)(Kanehisa等人，2000；Kanehisa等人，2002)獲得之路徑，來自Gene Ontology Consortium資料庫(2014年9月19日)(Ashburner等人，2000；Gene Ontology Consortium,2001)之基因存在論，來自miRBase(發行號21)及TARGETSCAN(TargetScan Release 6.2(2015年3月更新))資料庫(Griffiths-Jones等人，2008；Kozomara及Griffiths-Jones，2014；Friedman等人，2009；Grimson等人，2007)之miRNA，及來自KEGG資料庫(發行號73.0+/03-16，3月15日)(Kanehisa等人，2000；Kanehisa等人，2002)之疾病。

Ingenuity路徑分析(Qiagen)使用由(Draghici等人，2007；Tarca等人，2009,Khatri等人，2007)提出之影響分析對路徑進行評分。影響分析使用兩類證據：i)給定路徑中差異表現(DE)基因之過度呈現及ii) 藉由傳播橫跨路徑拓撲結構之所量測表現變化計算之該路徑的干擾。該等態樣係由兩個獨立概率值pORA及pAcc捕獲，其隨後組合於獨特整體p值中。包括基因及其相互作用之路徑拓撲結構係自KEGG資料庫(Kanehisa等人，2000；Kanehisa等人，2010；Kanehisa等人，2012；Kanehisa等人，2014)獲得。

第一概率pORA代表在給定路徑上獲得大於或等於僅偶然觀察之數目之DE基因之概率(Draghici等人，2003；Draghici 2011)。認為存在實驗中量測之N個基因，其中該等中之M個在給定路徑上。基於DE基因之優先權選擇，發現M個基因中之K個差異表現。在給定路徑上精確觀察x個差異表現基因之概率係基於超幾何分佈計算：由於超幾何係離散分佈，故在給定路徑上僅偶然觀察少於x個基因之概率可藉由對在路徑上具有1或2或...或x-1個基因之概率進行加和來計算：

為計算過度呈現，在給定路徑上獲得大於或等於Ingenuity路徑工具上觀察之數目之DE基因之p值計算pORA=p(x)=1-p(x-1)：

第二概率pAcc係基於每一路徑中量測之干擾之量來計算。使用以下計算路徑上之每一基因之干擾因子：

在所示方程中，△E(g)項代表基因g之標記正規化量測之表現變化，且α(g)係基於基因之類型之優先權重。第二項係所有緊鄰靶基因g上游之基因u之干擾因子之總和，其藉由每一該基因之下游基因數N (u)正規化。β之值量化基因g與u之間之相互作用強度。β之符號代表相互作用之類型：對於活化類信號為加，且對於抑制類信號為減。隨後，Ingenuity路徑分析計算每一基因之含量下之淨干擾累積Acc(g)作為干擾因子PF(g)與觀察之log變化倍數之間之差：

(5) Acc(g _i )=PF(g _i )-△E(g _i )

藉由對線性方程系統求解同時計算所有干擾累積，該方程系統係藉由組合上文路徑上之所有基因之方程(參見上文)獲得。一旦計算所有基因干擾累積，Ingenuity路徑計算路徑之總累積作為基因之所有絕對累積之和。經由自舉評價僅偶然獲得較大總累積(pAcc)之顯著性。

使用Fisher方法將兩類證據pORA及pAcc組成成一個最終p值。隨後使用FDR及Bonferroni針對多重比較校正此p值。Bonferroni係兩者中之最簡單且更保守者(Bonferroni,1935；Bonferroni,1936)。其藉由對由總比較次數加權之每一比較施加更嚴格臨限值降低錯誤發現率。FDR在發現更多偽陽性之程度下更有力(Benjamini及Hochberg,1995；Benjamini及Yekutieli,2001)。其確保偽陽性之整體百分比低於所選臨限值。

7.8.2. 結果

7.8.2.1. 分析驗證

在實施完全轉錄體分析之前，將GM18453及GM05659細胞用一系列Kleptose^® HPB濃度(0.1mM至10mM)處理並評價對所選膽固醇穩態相關基因之效應。

將結果在下表23中製錶，且在圖37中製圖。結果表示為變化倍 數(log(FC))。

結果展現Kleptose^® HPB對純合NPC1細胞之劑量依賴效應，且進一步展現在三個測試濃度中，1.0mM Kleptose^® HPB適於提供有意義之數據。

7.8.2.2. 純化組合物之分析

7.8.2.2.1. 對預選擇之膽固醇穩態基因之表現之效應

如實例7中所論述，發現包括吸附至氧化鋁之純化方案顯著改變羥丙基β-環糊精混合物之取代指紋。為評價該等變化如何改變組合物之藥理學效應，比較對以下之膽固醇穩態基因之表現的效應：(i)不同純化組合物及(ii)針對NPC1突變為純合之GM18453細胞中之 Kleptose^® HPB。

令人驚奇地，未發現差異。

圖38顯示膽固醇穩態基因之亞組中針對NPC1突變為純合之GM18453細胞中之表現的變化倍數，其中對於以下四種不同組合物在處理後表現在統計上顯著不同(p<0.001)：STD(Kleptose^® HPB「標準品」)；AC(藉由氧化鋁層析純化之Kleptose^® HPB)；SP(藉由溶劑沈澱純化之Kleptose^® HPB)；及AP(藉由氧化鋁層析及溶劑沈澱純化之Kleptose^® HPB)。關於純化方案及各別組合物之詳情，參見實例7。

儘管去除氧化鋁純化組合物中之低DS物質，但實際上，於測試濃度之任一者下之純化組合物與母體組合物Kleptose^® HPB(「STD」)無不同。因此，組合物之相關藥理學活性(其對膽固醇穩態之效應)似乎駐留於Kleptose^® HPB中存在之更高度取代之物質中，此乃因未經取代之β-環糊精分子(DS-0)、經單取代之羥丙基β-環糊精(DS-1)之去除及二取代之羥丙基β-環糊精(DS-2)之大量減少對組合物改變NPC1細胞中之膽固醇穩態基因之表現的能力具有不可辨別之效應。

7.8.2.2.2. 全基因體分析

在上述分析中，評價針對與由NPC1突變引起之主要缺陷之相關性預選擇之基因之表現變化，並比較對預選擇基因之該亞組之表現之效應，其表現在用羥丙基β-環糊精處理後在統計上顯著不同。為確認低DS物質之去除對相關藥理學活性無可觀效應之觀察，且進一步探索組合物之間之可能差異，實施全基因體分析以鑑別在統計基礎上受處理影響最大之生物路徑。

實施經1.0mM Kleptose^® HPB及1.0mM純化批次CYL-4063處理之NPC1細胞之全基因體路徑分析。如實例7中詳細闡述，CYL-4063係藉由氧化鋁上吸附層析與溶劑沈澱之組合自Kleptose^® HPB製備。 如實例7中之表21中所示，純化顯著降低低DS物質之盛行率，其中與Kleptose^® HPB中16.2%之DS-0、DS-1及DS-2之平均總含量相比，CYL-4063中總共僅具有3.2%環糊精物質具有0、1及2個取代。

如圖39中所示，在鑑別為統計上受1.0mM Kleptose^® HPB之處理影響最顯著之4個路徑中，以下3個路徑亦在統計上受1.0mM CYL-4063之處理影響最大：erbB信號傳導路徑、MAPK信號傳導路徑及GnRH信號傳導路徑。該等結果確認儘管自CYL-4063去除低DS物質，GM 18453細胞上之羥丙基β-環糊精混合物之整體活性存在較小干擾。

此外，亦觀察到類固醇生物合成路徑(直接受由該等細胞中之NPC1突變引起之主要缺陷影響的路徑)係在用1.0mM CYL-4063處理後第二最顯著影響之路徑，但僅六個路徑在統計上受1.0mM Kleptose^® HPB之處理影響最顯著。該等結果與以下假說一致：組合物對膽固醇穩態之效應駐留於更高度取代之環糊精物質中，其以更大濃度存於純化組合物中。

7.8.2.3. 具有不同取代度之部分之活性

為直接評價具有不同羥丙基取代度之環糊精物質之差異貢獻，將一批Kleptose^® HPB分級分離成三個分別具有低、中等及高羥丙基取代度之彙集物，且測試該等彙集部分對NPC1細胞中之基因表現之效應。

7.8.2.3.1. 方法

(a)分級分離

自Kleptose^® HPB批次E0245製備部分。E0245起始材料中之β-環糊精物質之分佈示於表21(實例7)中，摘錄於下表24中之相關部分中。

基本上如上文實例5.3.1中所述在CD-篩選管柱上分離15g Kleptose^® HPB(批次E0245)之試樣且收集各部分。圖40顯示自製備型CD-篩選層析分離獲得之各個部分之層析圖，該等部分經注釋以顯示層析分離之羥丙基β-環糊精物質之取代度。

選擇部分2作為具有低取代度之部分，即「L」(CYL-4103)。具有中等取代度物質之部分(即部分「M」(CYL-4104))係部分4-15之彙集。具有高取代度之部分(即部分「H」(CYL-4105))係部分16-24之彙集。圖41顯示以下之電噴射MS譜：(A)Kleptose^® HPB批次E0245，其經注釋以藉由羥丙基取代度鑑別信號；(B)「L」彙集部分；(C)「M」彙集部分；及(D)「H」彙集部分。

(b)表現剖析

用1.0mM「L」、「M」及「H」部分平行處理NPC細胞系GM18453(500,000個細胞/孔)。自每一處理分離RNA，之後根據先前方法生成cDNA文庫。cDNA文庫之測序每個試樣產生28891287至50245721個成對讀數。對於較大定位品質，將鹼基讀數修整至50個鹼基對。使用利用Bowtie 1.0.0版之TopHat v2.1.0將所有色彩間隔讀數與人類參照基因體(Ensembl，發行號73)比對。利用Cufflinks v2.0.2計算基因表現程度之RPKM(讀數/轉錄之千鹼基/百萬定位讀數)值且利用Illumina BaseSpace Core Apps使用自Ensembl(發行號73)下載之蛋白質編碼基因之基因注釋擷取粗計數。利用edgeR在粗計數上估計差 異表現/變化倍數。所有程式皆以其缺省參數使用，且TopHat設定為不尋找新接點。使用TIBCO Spotfire(7.0版)可視化每一基因之變化倍數。使用樹圖與條形圖之組合以展示差異基因表現變化。

對於比較，使用Kleptose^® HPB及未分級分離之純化批次CYL-4077(參見實例7)實施類似分析。

7.8.2.3.2. 結果

實施全基因體轉錄體分析以鑑別在統計基礎上受「L」、「M」及「H」部分之處理影響最大之10個生物路徑。

圖42顯示以統計顯著性遞降之次序分級10個受用1.0mM「L」、「M」及「H」部分處理NPC細胞影響最大之生物路徑。與先前觀察一致，「L」部分不引起類固醇生物合成路徑中基因之表現在統計上顯著變化。顯著相反，類固醇生物合成路徑係在用「M」部分處理NPC1細胞時受影響最顯著之生物路徑。「M」部分主要由具有3、4、5及6個羥丙基取代(DS3、DS4、DS5及DS6)之β-環糊精物質組成。主要包括DS5、DS6及DS7之「H」部分亦引起膽固醇生物合成路徑之基因表現之變化，其中膽固醇生物合成路徑似乎作為第二最顯著路徑。

該等結果提供以下之直接證據：恢復膽固醇穩態之能力駐留於具有較高羥丙基取代度之Kleptose^® HPB中存在之環糊精物質中。

7.8.2.4. 部分與未分級分離組合物之比較

具有不同羥丙基取代度之環糊精物質差異影響NPC細胞中之基因表現之觀察的推論係總體組合物之整體藥理學活性必須取決於組成指紋，亦即取決於組合物中存在之差異羥丙基化物質之相對比例。

藉由逐個特定基因(即按GeneID)比較在用1.0mM以下物質中之任一者處理NPC細胞後之基因表現變化來確認此假說：(i)未分級分離之Kleptose^® HPB，(ii)未分級分離之CYL-4077，其藉由氧化鋁上 吸附層析及選擇性溶劑沈澱自Kleptose^® HPB純化，(iii)「L」部分，(iv)「M」部分，或(v)「H」部分。

觀察到表現顯著受1.0mM Kleptose^® HPB影響之64%基因亦顯著受1.0mM純化批次(批次CYL-4077)之處理影響。

此共有百分比顯著高於表現顯著受1.0mM Kleptose^® HPB及1.0mM「L」、「M」及「H」部分中之任一者(分別37%、43%及48%)之處理影響的基因之百分比。

類似地，受Kleptose^® HPB及CYL-4077二者影響之基因之64%共有一致性顯著高於表現顯著受1.0mM CYL-4077及1.0mM「L」、「M」及「H」部分(分別41%、38%及44%)中之任一者之處理影響之基因的百分比。

7.8.2.5. 參與自體吞噬之基因

已展現羥丙基β-環糊精可增強在NPC疾病中累積之蛋白脂質聚集物的自體吞噬清除。(Song等人，2014,J.Biol.Chem.第289卷(14)，第10211-10222頁)。因此，分析GM18453 NPC細胞中用1.0mM及10.0mM Kleptose^® HPB、CYL-4077及「H」、「M」及「L」部分中之每一者之處理對自體吞噬相關基因之表現的效應。

表25顯示在處理後表現變化在統計上顯著(p<0.05)之所有自體吞噬基因，且展現1.0mM濃度對自體吞噬相關基因之效應極小。

表26顯示在於10.0mM濃度下處理後表現變化在統計上顯著 (p<0.05)之所有自體吞噬基因。

使用10.0mM之結果展現Kleptose^® HPB及CYL-4077對參與自體吞噬之基因之表現具有類似效應，且進一步展現該等效應係由具有較高取代度之物質貢獻，其中與「H」部分及「M」部分相比，「L」部分對參與自體吞噬之基因之表現具有最少效應。

7.8.3. 討論

使用基因表現圖譜實驗，已展現非經腸級羥丙基β-環糊精組合物Kleptose^® HPB能恢復針對NPC1突變為純合之細胞中之膽固醇穩態基因之表現程度並增加自體吞噬相關基因之表現。該等數據與I期人類臨床試驗之數據一致，其展現Kleptose^® HPB之鞘內投與有效穩定具有NPC疾病之患者之症狀或減緩其進展。與臨床數據之相關性展現基因表現分析可提供功效之活體外量度。

電噴射MS展現Kleptose^® HPB係以可重現比例含有具有不同羥丙 基化程度之β-環糊精分子的複雜混合物。

經研發以自Kleptose^® HPB去除製程相關及其他雜質之純化製程偶然地去除具有低取代度之β-環糊精物質，從而改變組成指紋。基因表現圖譜實驗展現，儘管組成指紋之此變化，組合物正規化針對NPC突變為純合之細胞中之膽固醇生物合成路徑中之基因之表現的能力無顯著變化。

該等數據表明，相關藥理學活性主要係由較在純化期間消除之彼等具有大之取代度之物質貢獻。

藉由將複雜混合物分級分離成具有含低(「L」)、中等(「M」)及高(「H」)羥丙基取代度之β-環糊精物質的彙集並評價對NPC細胞中之基因表現之效應確認此推斷。結果展現「L」部分對膽固醇生物合成路徑或自體吞噬中之基因之表現無明顯效應，而「M」及「H」部分顯著影響膽固醇生物合成及自體吞噬基因之表現。該等實驗進一步展現總體組合物之藥理學活性係由具有不同羥丙基取代度之β-環糊精物質單獨貢獻之活性之複合物；整體藥理學活性取決於組成指紋，亦即取決於組合物中存在之差異羥丙基化物質之相對比例。

儘管總體組合物之藥理學活性係由具有不同羥丙基取代度之β-環糊精物質單獨貢獻之活性之複合物，但意外地，藉由純化製程去除之物質(具有低羥丙基取代度之彼等)對與NPC疾病之治療藥理學相關之混合物之特定活性貢獻極小(倘若有)。此發現容許新穎、更高度純化且組成不同之HPBCD組合物，其經研發以藉由鞘內或腦室內途徑投與具有NPC疾病之患者之CSF達較長時段，具有治療效應及增加安全性。

7.9. 實例9：替代製備部分方法

如實例8中所論述，使用CD-篩選管柱進行層析分離製備三個具有不同平均取代度之部分用於基因表現剖析實驗。

作為替代，亦基本上如上文實例5.7.2中所述使用氧化鋁管柱製備Kleptose^® HPB(批次E0245)之部分。將試樣施加至氧化鋁管柱並用100%甲醇等梯度溶析。圖43顯示各個部分之層析圖，其經注釋以顯示經彙集產生部分「A」-「F」及「K」之數字部分，且進一步經注釋以顯示層析分離之羥丙基β-環糊精物質之取代度。

將實驗參數進一步最佳化以儘可能多地自Kleptose^® HPB去除未經取代之BCD及DS1 HPBCD，其中DS2及DS3 HPBCD之損失最少。如下文闡述純化方法之詳情：

每一測試方法(方法II-XI)之相同參數：

210g氧化鋁管柱；30ml/min流速；100sec/部分；60sec延遲時間。

僅MeOH作為溶析液：

方法II. 21g Kleptose，30個部分，溶析液：100% MeOH等度溶析，產率：79.4%

方法III. 10.5g Kleptose，30個部分，溶析液：100% MeOH等度溶析，產率：72.3%

方法IV. 15g Kleptose，30個部分，溶析液：100% MeOH等度溶析，產率：77.7%

MeOH+水作為溶析液：

方法V. 10.4g Kleptose，30個部分，溶析液：100% MeOH等度溶析(產率：73.8%)+30個部分，100% MeOH等度溶析(60個部分之總產率：75.9%)+30個部分，在各步驟之間具有短(100sec)過渡梯度溶析之3步等度溶析(90%、80%、70% MeOH，各自15min)，90個部分之總產率：83.1%

方法VI. 10.5g Kleptose，溶析液：MeOH+水，75個部分，20min 100->80% MeOH梯度溶析，106min 80% MeOH等度溶析，產率：82.8%

方法VII. 與方法VI.相同，但70% MeOH而非80%，產率：91.2%

方法VIII. 10.5g Kleptose，溶析液：MeOH+水，75% MeOH等度溶析，30個部分，產率：86.4%

方法IX. 10.6g Kleptose，溶析液：MeOH+水，70% MeOH等度溶析，30個部分，產率：89.2%

EtOH(96%純度)+水作為溶析液：

方法X. 10.5g Kleptose，30個部分，溶析液：100% EtOH等度溶析(產率：27.6%)+30個部分，70% EtOH等度溶析，60個部分之總產率：82.1%

方法XI. 10.5g Kleptose，60個部分，溶析液：80% EtOH等度溶析，產率：82.3%

圖44顯示在不同純化方法後HPBCD混合物之層析圖。純化後混合物中之DS2/DS1比率概述於表27中。

7.10. 實例10：於18個月時NPC之I期臨床試驗

對C型尼曼-匹克病之I期臨床試驗之數據(包括18個月時之效能結果)執行進一步分析。結果示於圖45-50中。如圖45中所概述，使用年斜率、自基線之變化及反應者分析以分析18個月I期臨床試驗數據。自年變化比率，18個月治療結果揭示HPBCD混合物係疾病調修療法(圖46)。HPBCD混合物顯示NPC患者中自基線之疾病之一致改良或穩定(圖47)。HPBCD混合物治療亦顯示較大百分比之顯示穩定或改良疾病之反應者(圖48)。治療對聽力之影響主要在高頻範圍內，且影響可利用助聽器校正(圖49)。圖50概述關於治療對聽力之影響之數據的推論。

8. 等效內容及以引用方式併入

本申請案中引用之所有出版物、專利、專利申請案及其他文件之全部內容出於所有目的皆以引用方式併入本文中，其併入程度如同將每一個別出版物、專利、專利申請案或其他文件個別指明出於所有目的以引用方式併入一般。

儘管已闡釋並闡述各個具體實施例，但應瞭解，可進行各種改變而不背離本揭示內容之精神及範疇。

Claims (44)

1. 一種在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子的混合物，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子，其中：該混合物包含總共小於1%之未經取代之β-環糊精(「DS-0」)及經1個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-1」)；該混合物包含總共至少85%之經3個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-3」)、經4個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-4」)、經5個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-5」)及經6個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-6」)；該混合物包含總共小於1%之經9個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-9」)及經10個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-10」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。
2. 如請求項1之混合物，其中總共小於0.1%之該β-環糊精混合物係DS-0及DS-1。
3. 如請求項2之混合物，其中總共小於0.01%之該β-環糊精混合物係DS-0及DS-1。
4. 如請求項1之混合物，其中總共至少87%之該β-環糊精混合物係DS-3、DS-4、DS-5及DS-6。
5. 如請求項4之混合物，其中總共至少90%之該β-環糊精混合物係DS-3、DS-4、DS-5及DS-6。
6. 如請求項1之混合物，其中總共小於0.1%之該β-環糊精混合物係DS-9及DS-10。
7. 如請求項6之混合物，其中總共小於0.01%之該β-環糊精混合物係DS-9及DS-10。
8. 一種在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子的混合 物，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子，其中：該混合物包含總共小於1%之未經取代之β-環糊精(「DS-0」)及經1個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-1」)；該混合物包含總共小於1%之經9個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-9」)及經10個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-10」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定；且該混合物具有介於0.50至0.80範圍內之平均莫耳取代(「MS」)。
9. 如請求項8之混合物，其中總共小於0.1%之該β-環糊精混合物係DS-0及DS-1。
10. 如請求項9之混合物，其中總共小於0.01%之該β-環糊精混合物係DS-0及DS-1。
11. 如請求項8之混合物，其中總共小於0.1%之該β-環糊精混合物係DS-9及DS-10。
12. 如請求項11之混合物，其中總共小於0.01%之該β-環糊精混合物係DS-9及DS-10。
13. 如請求項8之混合物，其中該MS係介於0.60至0.70之範圍內。
14. 如請求項13之混合物，其中該MS係介於0.64至0.68之範圍內。
15. 如請求項14之混合物，其中該MS係約0.66至0.67。
16. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1之β-環糊精混合物及醫藥上可接受之稀釋劑。
17. 如請求項16之醫藥組合物，其中該組合物包含不超過(「NMT」)5 EU之內毒素/克β-環糊精混合物。
18. 如請求項17之醫藥組合物，其中該組合物包含NMT 1.5 EU之內毒素/克β-環糊精混合物。
19. 如請求項16之醫藥組合物，其中該組合物包含不超過0.5%丙二 醇，如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測。
20. 如請求項19之醫藥組合物，其中該組合物包含不超過0.01%丙二醇，如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測。
21. 如請求項16之醫藥組合物，其中該組合物包含不超過1ppm環氧丙烷，其係根據USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。
22. 如請求項16之醫藥組合物，其中該組合物適於鞘內或腦室內投與。
23. 如請求項22之醫藥組合物，其中該組合物具有約300mOsm/kg至約450mOsm/kg之滲透壓。
24. 如請求項22之醫藥組合物，其中該組合物包含約10mg/mL至約200mg/mL之該β-環糊精混合物。
25. 一種醫藥組合物，其包含在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物及對於鞘內、腦室內或靜脈內投與醫藥上可接受之稀釋劑，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子，其中：該組合物包含不超過(「NMT」)5 EU之內毒素/克β-環糊精混合物；該組合物包含不超過0.5%丙二醇，如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測；該組合物包含不超過1ppm環氧丙烷，其係根據該USP Hydroxypropyl Betadex專論所測定。
26. 如請求項25之醫藥組合物，其中該組合物包含NMT 1.5 EU之內毒素/克β-環糊精混合物。
27. 如請求項25之醫藥組合物，其中該組合物包含不超過0.01%丙二 醇，如藉由USP Hydroxypropyl Betadex專論中所述之HPLC方法所量測。
28. 如請求項25之醫藥組合物，其中：該混合物包含總共小於3%之未經取代之β-環糊精(「DS-0」)、經1個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-1」)及經2個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-2」)；該混合物包含總共至少65%之經5個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-5」)、經6個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-6」)及經7個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-7」)；該混合物包含總共小於3%之經9個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-9」)及經10個羥丙基取代之β-環糊精(「DS-10」)，如藉由電噴射MS光譜之峰高度所測定。
29. 一種如請求項16之醫藥組合物之用途，其用於製造用於治療C型尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease)之藥劑。
30. 如請求項29之用途，其中該藥劑係藉由鞘內或腦室內投與來投與。
31. 如請求項29之用途，其中該治療包含向患者投與約300mg至約2000mg之該β-環糊精混合物。
32. 如請求項29之用途，其中該藥劑之投與方式係每週一次、每兩週一次、每三週一次、每月一次、每兩個月一次或每三個月一次。
33. 如請求項29之用途，其中該治療包含向患者每兩週一次投與約900mg至約1800mg之該β-環糊精混合物。
34. 如請求項33之用途，其中該治療包含向患者每兩週一次投與約900mg之該β-環糊精混合物。
35. 如請求項29之用途，其中該治療包含投與足以調節腦脊髓液中 以下各項中一或多者含量之量的該β-環糊精混合物：τ蛋白、類澱粉肽、神經絲微蛋白(NFL)、膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)、固醇、氧化固醇、幾丁三糖酶活性、鈣結合蛋白、溶酶體相關膜蛋白1(LAMP-1)、GM2或GM3神經節苷酯、神經鞘胺醇及神經鞘胺醇-1-磷酸鹽(S1P)。
36. 如請求項29之用途，其中該治療包含投與足以調節血漿中以下各項中一或多者含量之量的該β-環糊精混合物：7-酮膽固醇、7β-羥基膽固醇、24S-羥基膽固醇、25-羥基膽固醇、27-羥基膽固醇及膽甾烷-3β,5α,6β-三醇。
37. 如請求項29之用途，其中該治療包含投與足以調節尿液中以下各項中一或多者含量之量的該β-環糊精混合物：3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CA)、甘胺酸結合之3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CG)及牛磺酸結合之3β-磺氧基-7β-N-乙醯基葡萄糖胺基-5-膽烯-24-酸(SNAG-△⁵-CT)。
38. 如請求項29之用途，其中該治療包含投與足以維持或降低選自以下之NPC嚴重程度量表之一或多個域評分之量的該β-環糊精混合物：活動、精細動作技能、認知、言語、吞嚥、眼運動、記憶力、聽力及癲癇。
39. 一種製備如請求項1之β-環糊精混合物之方法，其包含：利用氧化鋁上吸附層析處理Kleptose^® HBP。
40. 如請求項39之方法，其進一步包含：利用溶劑沈澱處理Kleptose^® HBP。
41. 如請求項40之方法，其中該溶劑沈澱係使用水與丙酮作為沈澱劑來實施。
42. 如請求項40之方法，其中該溶劑沈澱係使用甲醇與丙酮作為沈 澱劑來實施。
43. 一種在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子且係藉由如請求項39之方法製得。
44. 一種確定在一或多個羥基位置處經羥丙基取代之β-環糊精分子之混合物合格用於供鞘內或腦室內投與之醫藥組合物的方法，該混合物視情況包括未經取代之β-環糊精分子，該方法包含：a)實施該混合物之電噴射MS分析；b)量測所有峰之高度；及c)計算整個混合物中每一β-環糊精物質之百分比，其中該混合物若滿足以下條件則經確定合格使用：該混合物包含總共小於1%之DS-0及DS-1；該混合物包含總共至少85%之DS-3、DS-4、DS-5及DS-6；該混合物包含總共小於1%之DS-9及DS-10。