TW201634056A - 改善第二型糖尿病之芭樂果實及海藻糖飲食組成物與其用途 - Google Patents

Abstract

一種改善第二型糖尿病之芭樂果實及海藻糖飲食組成物與其用途，係藉由將恆溫研磨後的芭樂漿液以一可使過濾濾液具有低氧化還原電位之過濾元件過濾該芭樂漿液，而得具有低氧化還原電位且含有芭樂多酚之芭樂汁，並於添加海藻糖後形成一海藻糖芭樂汁飲食組成物，藉以於口服後降低因第二型糖尿病對腎臟及胰臟引起的氧化壓力及發炎反應，並提升芭樂汁的適口性。

Description

改善第二型糖尿病之芭樂果實及海藻糖飲食組成物與其用途

本發明係有關一種改善第二型糖尿病之芭樂果實及海藻糖飲食組成物與其用途，尤指一種使用芭樂多酚及海藻糖作為有效成分，以降低在活體細胞中之氧化傷害、細胞凋亡、細胞自我吞噬和發炎性細胞死亡反應者。

第二型糖尿病(Type 2 diabetes, T2DM)是目前廣泛流行的代謝症候群。研究預測第二型糖尿病的人口數，在西元2030年時會攀升至3.66億。根據台灣衛生署統計，台灣地區近年來糖尿病已高居國人十大死因前四名，估計台灣糖尿病患人口已達百萬。其中，九成以上屬於非胰島素依賴型，又稱第二型糖尿病。糖尿病的病症除了有過高的血糖濃度及明顯的尿糖外，糖尿病最可怕的是會引起一些併發症，如視網膜症、腎症、神經障害、乃至於腦及循環系統的障害。因此如何控制血糖，以避免併發症的發生則是糖尿病控制的原則之一。糖尿病的治療基本上有三大方法，分別是(1)飲食療法(2)運動療法(3)藥物療法，其中以飲食療法為最基本，也是最重要的療法。據估計，約50% 以上的患者可以因良好的飲食療法而改善病情。此外，在進行藥物療法時，如果沒有適當的飲食療法配合，藥物也將無法發揮其功能。因此對糖尿病患者而言，如何透過良好的飲食療法使血糖濃度得到良好的控制是最基本也是最重要的課題。

芭樂(Guava Fruit) (Psidium guava L.)是一種熱帶性水果，也是台灣常見的水果之一，其熱量低，每100 g僅含37.3 kcal，且富含維生素C (vitamin C)及類黃酮(flavonoids)、酚類(phenolics)，因此其抗氧化(antioxidation)、抗發炎(anti-inflammation)及抗糖尿病(anti-diabetes) (Thomas Eidenberger et al., 2013)的能力備受關注。芭樂對於STZ所誘發的第一型糖尿病的大鼠中，使胰島β細胞免於氧化壓力的破壞，而有保護的功效，進而抗高血糖(anti-hyperglycemia) (Huang et al.,2011, Food Chem Toxicol., 49(9):2189-95)。除此之外，芭樂對於腎臟也許有抗氧化、抗發炎及抗糖基化(anti-glycation)的作用(Lin and Yin, 2012, Plant Foods Hum Nutr., 67(3):303-8)。

海藻糖(Trehalose)是存在於自然界的一種雙醣，以α,α-1,1糖苷鍵鍵結兩葡萄糖所形成的非還原糖。因不產生褐變(Maillard reaction)常用於食品甜味劑。其甜度為蔗糖45%。在消化道中被小腸的海藻糖酶(Trehalase)分解。海藻糖存在於無脊椎動物及酵母、蕈菇類等等。因其具有保護蛋白質降解的功能，而能在自然環境下抗凍、抗乾燥及脫水、抗氧化(Chen, Q., and Haddad, G. G., 2004, J Exp Biol. 207(Pt 18):3125-9)。但對於其保護功效的機制並未清楚。海藻糖已被運用在細胞冷凍保存(cryopreservation of cells) (Ali Eroglu et al., 2000, Nat Biotechnol., 18(2):163-7)。除此之外，海藻糖也被研究出可防止阿茲海默中，β類澱粉蛋白(β-amyloid)的形成(Liu, R et al., 2005, Neurobiol Dis.,20(1):74-81)，以及減少polyglutamine (polyQ)在杭丁頓式舞蹈症(Huntinton’s Disease)的形成(Sovan Sarkar, et al., 2007, J Biol Chem., 282:5641–5652)。

目前對於芭樂與糖尿病之間的研究雖然已有進展，但先前的研究的動物模式多為第一型糖尿病。或是使用芭樂葉而非芭樂果實可食部位(Shen et al.,2008, Phytother Res., 22(11):1458-64 ; Thomas Eidenberger et al., 2013, Fitoterapia., 89:74-9)。為了提高便利性及適口度，本發明為探討加入海藻糖之芭樂汁對於第二型糖尿病的影響及作用機制。本目標為芭樂汁與海藻糖之特殊組成與其合併效果在糖尿病之血糖調整與對腎臟和胰臟之保護效應。同時也定位出芭樂有效成份槲皮素與其它活性成份對於糖尿病之血糖調整效應。

本發明之主要目的在提供一種改善第二型糖尿病之芭樂果實及海藻糖飲食組成物，其中該飲食組成物含有由芭樂衍生之芭樂多酚以及由海藻衍生之海藻糖作為有效成分，以降低在活體細胞中之氧化傷害、細胞凋亡、細胞自我吞噬和發炎性細胞死亡反應。

本發明之另一目的在提供一種使用自芭樂中所衍生之芭樂多酚及由海藻衍生之海藻糖於製備改善第二型糖尿病之飲食組合物之用途，其中該飲食組成物含有由芭樂衍生之芭樂多酚以及由海藻衍生之海藻糖作為有效成分，以降低活體細胞中之氧化傷害、細胞凋亡、細胞自我吞噬和發炎性細胞死亡反應。

本發明之又一目的在提供一種降低細胞氧化傷害用、降低細胞凋亡用、降低細胞自我吞噬用或降低發炎性細胞死亡用之飲食組合物，其中該飲食組成物含有由芭樂衍生之芭樂多酚以及由海藻衍生之海藻糖作為有效成分，且可製成飲料或食品形式。

於本發明之一實施例中，該芭樂多酚係選自由槲皮素、鞣花酸、柚皮素及彼等之混合物所組成的群組。

於本發明之另一實施例中，該飲食組成物係包含大於2μg/mL的槲皮素。

於本發明之另一實施例中，該飲食組成物係包含大於0.2 g/kg的海藻糖。

於本發明之另一實施例中，該芭樂多酚係以下列步驟進行製備：
a. 在恆溫下研磨芭樂以形成芭樂漿液；以及
b. 利用一可使過濾濾液具有低氧化還原電位之過濾元件過濾該芭樂漿液，以獲得一具有低氧化還原電位且含有芭樂多酚之芭樂汁。
於本發明之又一實施例中，該使用自芭樂中所衍生之芭樂多酚及由海藻衍生之海藻糖於製備改善第二型糖尿病之飲食組合物之用途係用於製造用作降低細胞凋亡、細胞自我吞噬、發炎性細胞死亡或細胞氧化傷害之飲食組合物。

為進一步了解本發明，以下舉較佳之實施例，配合圖式、圖號，將本發明之具體構成內容及其所達成的功效詳細說明如下。

無。

圖1係顯示本發明製備之芭樂汁對H₂ O₂ 和HOCl之抗氧化力表現量化長條圖。

圖2係顯示海藻糖對H₂ O₂ 和HOCl之抗氧化力表現量化長條圖。

圖3係顯示本發明製備之芭樂汁以不同比例分別與蔗糖或海藻糖結合後之對H₂ O₂ 和HOCl之抗氧化力表現量化長條圖。

圖4係顯示實驗大鼠在口服海藻糖水及葡萄糖水後血糖變化圖。

圖5係顯示第二型糖尿病大鼠於餵食芭樂汁及芭樂汁加海藻糖之第0、2、4周之空腹血糖值變化圖

圖6係顯示第二型糖尿病大鼠於餵食芭樂汁及芭樂汁加海藻糖之第0、2、4周之空腹胰島素阻抗變化圖。

圖7係顯示芭樂汁及芭樂汁加海藻糖對第二型糖尿病大鼠腎臟作用之自由基表現量化長條圖。

圖8係顯示芭樂汁及芭樂汁加海藻糖對第二型糖尿病大鼠血清作用之自由基表現量化長條圖。

圖9係顯示芭樂汁加海藻糖對腎臟內4-HNE氧化壓力作用之免疫切片染色圖及量化長條圖。

圖10係顯示芭樂汁加海藻糖對腎臟內IL-1b發炎指標作用之免疫切片染色圖及量化長條圖。

圖11係顯示芭樂汁加海藻糖對腎臟內caspase 3調控之細胞凋亡指標作用之免疫切片染色圖及量化長條圖。

圖12係顯示芭樂汁加海藻糖對胰島內細胞凋亡數目作用之免疫切片染色圖及量化長條圖。

圖13係顯示芭樂汁加海藻糖對胰臟和腎臟內的細胞吞噬和細胞凋亡表現作用之西方墨點法結果圖。

圖14係顯示芭樂汁加海藻糖對腎臟內的細胞吞噬和細胞凋亡表現作用之雙重螢光染色圖。

圖15係顯示本發明製備之芭樂汁所含的芭樂多酚以高效能液相層析儀(HPLC)分析之結果圖譜。

以下，將茲舉本發明若干實例並配合圖式作更進一步說明如后。

實例一：芭樂果實及海藻糖飲食組成物的製備與其抗自由基能力

於此實施例中，係先將芭樂果實在恆溫下研磨以形成芭樂漿液，再利用一可使過濾濾液具有低氧化還原電位之過濾元件過濾該芭樂漿液，以獲得一具有低氧化還原電位且含有芭樂多酚之芭樂汁。上述過濾元件的例子可參中華民國第I331544號發明專利(產生抗氧化與多功能吸附效應之濾膜濾芯)與中華民國第M374460號新型專利(抗氧化水生成器)。

經過濾形成的芭樂汁係藉自由基測定法，利用化學冷光(Chemiluminescence,CL)加強劑luminol，和化學冷光分析儀(Chemiluminescence analyzing system)，偵測萃取物中的自由基含量。偵測的原理是利用待測物中自由基所帶的電子轉給化學冷光加強劑(luminol)時，使自由基本身由高能階狀態轉至低能階。由能量的轉換使化學冷光加強劑發光。所產生的光子經由儀器的光電倍增管(photomultiple tube，PMT)接收，轉換成計數值(counts)。

於本文中之數值係顯示為平均值±標準誤差平均值（SEM），數據進行變異分析，控制組和阻塞腎臟組間的所有參數差異使用Student's paired t-test進行比較。各組間的差異使用One-way分析建立。組間使用Duncan's multiple-range測試進行比較。如果差異達到P <0.05的被視為顯著差異。

如圖1所示，芭樂汁具有良好的清除H₂ O₂ 和HOCl等漂白劑之抗氧化力，且當體積濃度達5-40%，就具有相當明顯的抗氧化力。而且40%的芭樂汁，也具有最強之抗氧化力。且具*p<0.05之統計意義。

如圖2所示，為檢測海藻糖是否也具有抗氧化力，也同時檢測了海藻糖水的離體自由基。結果發現，海藻糖水具有清除H₂ O₂ 且具*p<0.05之統計意義。但無法清除HOCl之選擇性抗氧化的能力。

如圖3所示，25S: 25%芭樂汁加8%蔗糖，25T: 25%芭樂汁加12%海藻糖，40T: 40%芭樂汁加12%海藻糖，40B:40%芭樂汁。左圖為外加H₂ O₂ 為自由基來源，右圖則加入HOCl為自由基來源，檢測芭樂汁的抗自由基能力。結果顯示加入不同糖類或25%及40%濃度的芭樂汁，皆有清除自由基的能力，且以40% T最具明顯降低。

因此，本發明所製備之芭樂汁因其低氧化還原電位而具有良好的清除H₂ O₂ 和HOCl等漂白劑之抗氧化力，且當體積濃度達5-40%，就具有相當明顯的抗氧化力。而且40%芭樂汁就已達到具p<0.05之統計意義之最強之抗氧化力和60%芭樂汁相當。因此本製程條件具有保持芭樂汁之抗氧化能力作用。本發明以芭樂汁(20-60%)搭配海藻糖 (1-12%)與芭樂汁(40%)。

實例二：葡萄糖耐性測定(Glucose tolerance test, OGTT)與飲食耐量試驗

於此實例中，係使用wistar品系、6至8週齡的雌性大鼠（rat）進行動物實驗，其體重皆>200g。每組8隻以上，並飼養在恆溫（22±2℃）、亮暗各12小時之動物房。

高果糖誘發高血糖之動物實驗模式係持續餵食動物含果糖21％（W/V）以上之飲用水（Yadav et al., 2007）至少8週，以及Harlan Taklad商業配方飼料持續餵食動物4週以上以誘發胰島素阻抗之產生。搭配腹腔注射Nicotinamide（NA）(230 mg/kg)＋ STZ (65 mg/dL) 誘發動物高血糖。採血測量隔夜空腹（17~24小時）血糖值，若達或超過13 mM (230+10 mg %) 時，則視為有第二型糖尿病。

誘發成功後，分為六組進行實驗，分別為CON, DM, T1, T2, T5和B1。動物的實驗分組係以長期(28天)每日灌餵方式投予芭樂汁(40%)以及海藻糖 (5%) 芭樂汁 (40%) ；受試物劑量(g/kg)除對照組外，還有3個劑量組，分別相當於人體推薦攝取量之1倍、2倍、五倍。實驗動物分組如表一所示。

[表一]

空腹血糖值的測定係給予高血糖動物受試物，測定隔夜空腹血糖值。以拜耳血糖機測定，採尾靜脈血液測試。

葡萄糖耐性測定係於隔夜空腹(10-14小時)後，以口服2g/kg、靜脈注射0.5 g/kg給予實驗大鼠葡萄糖。口服給予葡萄糖後，在給糖前與給糖後的30、60、90和120分鐘測量血糖值同時測定胰島素濃度。靜脈給予葡萄糖前以及給糖後的1、2、5、10、20、30及50分鐘測量血糖值同時測定胰島素濃度。於飼養試驗之開始、中期及後期各進行一次。並與對照組比較，其血糖變化及胰島素變化曲線下面積（AUC和△AUC）。

飲食耐量試驗係使用正常以及已誘發高血糖之動物，先給予正常飼料，然後空腹10-14小時，再以管灌方式給予添加受試樣品之試驗飲食。其血糖或胰島素測定與上述OGTT同。

如圖4所示，利用口服海藻糖水及葡萄糖水的方式來觀測血糖變化。發現口服後的第1、5、10、20、30及50分鐘時葡萄糖水的血糖明顯高於海藻糖水，且具*p<0.05之統計意義。

如圖5所示，由投予芭樂汁、芭樂汁加海藻糖後之第0、2、4周之空腹血糖值變化圖(glucose = 2 g/kg BW)中可觀察到，T1, T2和T5組在第4周時空腹血糖有明顯下降。 *p<0.05 vs. week 0。＃p<0.05 vs. DM4。其中CON為正常組；DM為第二型糖尿病組；B1為飲用芭樂汁組；T1為飲用一倍芭樂汁加海藻糖組；T2為飲用二倍芭樂汁加海藻糖組；T5為飲用五倍芭樂汁加海藻糖組。

實例三：胰島素阻抗（Insulin resistance）測定

高果糖誘發胰島素阻抗之動物實驗模式係與上述以高果糖誘發高血糖之動物實驗模式相同。

於試驗期間的前、中、後期採集空腹血漿，偵測胰島素濃度之變化。可以計算Homeostasis model assessment Insulin Resistance (Homa IR) index來檢視胰島素阻抗之情形。此測定值對於觀察產生第二型糖尿病前已誘發有胰島素阻抗現象之初期，是一相對敏感的指標。Homa IR index是在1985年由Matthews等 (Matthews et al., 1985) 所提出的。第二型糖尿病之前，胰島素阻抗現象逐漸發生，而升高血糖濃度時，胰臟β細胞會代償性地分泌更多胰島素，以維持血糖正常。所以在初期無法由單單測量空腹血糖值來觀察逐漸誘發的第二型糖尿病。但經由Homa IR值，可利用空腹血糖與胰島素數值來計算出胰島素抗性，公式為insulin（μU/mL）× glucose（mmol/L）/22.5。

如圖6所示，由投予芭樂汁或芭樂汁加海藻糖之第0、2、4周之空腹胰島素阻抗變化圖中可觀察到，T1, T2和T5組在第4周時空腹胰島素阻抗有明顯下降。*p<0.05 vs. week 0。＃p<0.05 vs. DM4。

實例四：芭樂汁和芭樂汁加海藻糖在第二型糖尿病大鼠活體腎臟自由基之作用。

腎臟活體自由基的測定方式係對實驗大鼠靜脈注射MCLA (2-Methyl-6-(4-methoxyphenyl)-3,7-dihydroimidazo-[1,2-a]-pyrazin-3-one- hydrochloride) (0.2 mg/ml/h, TCI-Ace, Tokyo Kasei Kogyo Co. Ltd., Tokyo, Japan)，並以化學發光分析系統(CLD-110, Tohoku Electronic In. Co., Sendai, Japan)檢測腎臟活體自由基。

如圖7所示，可觀察到DM組之腎臟活體自由基明顯高於其他組別，芭樂汁和芭樂汁加海藻糖會降低第二型糖尿病大鼠活體腎臟自由基。*: p<0.05 vs. CON，# p<0.05 vs. DM。

實例五：芭樂汁和芭樂汁加海藻糖在第二型糖尿病大鼠血清自由基之作用。

離體血清自由基的測定方式係取大鼠血液200 μL放於磁石攪拌的不銹鋼反應槽(dish)中，放入化學冷光分析儀中。保持平穩100秒後，加入500μL luminol(2mg luminol溶於45.5mL 0.9%生理食鹽水中)，至300秒停止測定。計算全部count面積扣除baseline面積而得結果。

如圖8所示，可觀察到DM組之血清自由基明顯高於其他組別。*: p<0.05 vs. CON，# p<0.05 vs. DM，^ p<0.05 vs. B1。

實例六：切片染色

(1)免疫切片染色：氧化壓力的增加可能引起發炎、細胞凋亡、細胞自噬和pyroptosis的產生。在腎及胰臟組織的石蠟包埋切片中，以3-nitrotyrosine（3-NT）定位評估氧化壓力化產生的位置， LC3-II染色細胞自噬，末端脫氧核苷酸轉移酶介導的缺口末端標記法（TUNEL）評估細胞凋亡和IL-1β的染色評估pyroptosis。部分的腎臟及胰臟以10％的福馬林固定，再以石蠟進行包埋。經過脫蠟及覆水。以1:50的比例稀釋多株抗體3-NT（Alpha Diagnostic International; San Antonio, TX, USA）進行免疫組織化學染色。

(2)Masson’s 染色：腎臟及胰臟組織切片進行脫臘程序之後，於室溫下浸泡Bouin’s溶液中40分鍾，以自來水已流水方式沖洗10分鍾，接著浸泡入Hematoxylin溶液5分鐘，取出後於流動自來水下沖洗10分鐘；接著以0.75% Orange G染色1分鐘，取出後用1% 醋酸浸洗5分鐘，再以Masson B染1分鐘後以1% 醋酸浸洗5分鐘。於2.5% phosphtungstic作用15分鐘後，再以1 % 醋酸浸洗5分鐘，最後用Anilin blue進行染色5分鍾；之後再浸泡於1% 冰醋酸定色5分鐘，脫水後封片保存。

(3)螢光染色：組織先用福馬林固定，接著包埋於石臘當中，用石蠟切片機切片，於60℃烤片台上烤片，脫臘(丙酮中作用 5分鐘三次)，復水(於 99.9% 乙醇5分鐘，再換至 95% 乙醇 5分鐘，再換至75% 乙醇 5分鐘)。接著是抗原回復(Ag retrieval) : 將玻片浸泡在檸檬酸鈉修復液中加熱煮沸10分鐘，冷卻20分鐘後浸泡於 PBS 10分鐘。接著以5％ BSA孵育一小時以阻斷非專一性鍵結。以一級螢光抗體於4℃孵育18小時，之後用PBS洗5分鐘三次，再以PBS 將heochst稀釋1000倍，於室溫中孵育一小時，接著以PBS洗5分鐘三次，最後用包埋膠(mounting gel)封片。

如圖9所示，可觀察到於海藻糖及芭樂汁兩者合併攝取時，可降低腎臟氧化壓力及發炎反應。因此，海藻糖加入芭樂汁可以降低腎臟內4-HNE氧化壓力而提升芭樂汁在第二型糖尿病中的保護功效。 *: p<0.05 vs. CON，# p<0.05 vs. B1。

如圖10所示，可觀察到於海藻糖及芭樂汁兩者合併攝取時，可降低腎臟發炎反應。因此，海藻糖加入芭樂汁可降低腎臟內IL-1b發炎指標而提升芭樂汁對第二型糖尿病的保護功效。 *: p<0.05 vs. CON，# p<0.05 vs. DM。

如圖11所示，可觀察到於海藻糖及芭樂汁兩者合併攝取時，可降低腎臟受傷作用。因此，海藻糖加入芭樂汁可以降低腎臟內caspase 3調控之細胞凋亡指標而提升芭樂汁在第二型糖尿病中對腎臟腎小球和腎小管的保護功效。*: p<0.05 vs. CON，# p<0.05 vs. DM。

如圖12所示，可觀察到於海藻糖及芭樂汁兩者合併攝取時，可降低胰臟在第二型糖尿病造成的受傷程度。因此，海藻糖加入芭樂汁可以降低胰島內細胞凋亡數目而提升芭樂汁海藻糖在第二型糖尿病中對胰臟的保護功效。 *: p<0.05 vs. CON，# p<0.05 vs. DM。

如圖13所示，可觀察到海藻糖加入芭樂汁可以降低腎臟內細胞凋亡與細胞自我吞噬數目而提升芭樂汁海藻糖在第二型糖尿病中對腎臟的保護功效。將兩者合併攝取，更可降低腎臟在第二型糖尿病造成的受傷程度。

如圖14所示，可觀察到海藻糖加入芭樂汁可以降低腎臟內細胞凋亡與細胞自我吞噬數目而提升芭樂汁海藻糖在第二型糖尿病中對腎臟的保護功效。將兩者合併攝取，更可降低腎臟在第二型糖尿病造成的受傷程度。

實例七：測定芭樂汁內芭樂多酚有效成份的HPLC條件

HPLC測定流程

如圖十五所示，由HPLC之分析可偵測到「芭樂多酚」的成分主要為槲皮素(quercetin)，其它成份如韖花酸(ellagic acid)與柚皮素(naringenin)含量較低，而rosmarinic acid與ferulic acid皆無法測得。

由上述該等實例可明顯觀察到，在飲食耐量試驗中，芭樂汁及海藻糖的劑量增加對血糖變化並無影響，表示灌餵海藻糖芭樂汁後，血糖應反應平穩。在連續灌餵海藻糖芭樂汁四周後，對於第二型糖尿病的血糖控制並無明顯功效，這可能是因為灌餵海藻糖芭樂汁的週期過短。而糖尿病後期，胰島細胞被破壞，胰島素將無法正常分泌。但可在圖5中觀察到在T5組的胰島素分泌量較DM組高，海藻糖芭樂汁的攝取似乎能保護胰島細胞，而使胰島素能分泌。但此胰島素的分泌並未對血糖有明顯影響。離體自由基中發現芭樂汁有顯著的抗氧化功效，與先前的研究相符。在攝取芭樂汁四周後，血清中的自由基也有顯著的降低。證明攝取芭樂汁中的抗氧化物質可清除血液中的自由基。並且，雖然海藻糖水抗氧化能力並不如芭樂汁，並且也不與濃度呈正相關，但攝取海藻糖芭樂汁之後的血清自由基卻較單單攝取芭樂汁組別低。推測海藻糖經過大鼠吸收後，對血液自由基的清除也有一定的幫助。而本發明上述實例中的免疫切片及螢光染色結果皆一致導向海藻糖芭樂汁具有抗氧化、抗發炎、抗pyroptosis、抗autophagy及抗apoptosis的功效，且與海藻糖芭樂汁劑量成正相關。

此外，由上述該等實例可觀察到20-60%芭樂汁與1-12%海藻糖的飲食組成物可以調解血糖，其主要作用在於：(1) 降低空腹血糖；(2)降低胰島素阻抗； (3)有助於保護胰島素產生細胞免於高血糖和活性氧之傷害而上調胰島素之產生。而添加海藻糖成份之芭樂汁確實在清除H₂ O₂ 與HOCl之抗氧化能力比單獨芭樂汁成份之效果越好。而且對於(1)降低空腹血糖、(2)降低胰島素阻抗、以及(3)有助於保護胰島素產生細胞免於高血糖和活性氧之傷害而上調胰島素之產生之作用，也是添加海藻糖成份之芭樂汁較單獨芭樂汁為佳。加海藻糖成份之芭樂汁較單獨芭樂汁其保護效果更佳之理由為此飲食組成物可以明顯降低在活體腎臟和胰臟細胞之氧化傷害、細胞凋亡、細胞自我吞噬和發炎性細胞死亡。而藉由HPLC分析可觀察到本發明所製備之芭樂汁中的「芭樂多酚」主要活性成分為槲皮素，且其和「海藻糖」共同作用下，可以提升芭樂汁在第二型糖尿病中的保護功效。因此將本發明所製備之芭樂汁與海藻糖兩者合併攝取後，可降低腎臟及胰臟的氧化壓力及發炎反應。

再者，本發明發現最適當量是以每公斤體重為4 mL (4 mL/kg body weight)，換算成50 kg體重約為每日200 mL；而兩倍劑量（即每日400 mL/50 kg body weight）亦達相當效果。飲用五倍劑量至1000 mL/50 kg body weight亦未見毒性作用。故本發明之海藻糖芭樂汁飲食組成物服用至高劑量並無毒性且不會產生傷害。

經下列表二之換算，對於第二型糖尿病患飲用芭樂汁，經本發明發現，濃度越高之芭樂汁含有更多之「芭樂多酚」其是因內含物主要有含量最多之槲皮素為有效物質。經HPLC量化之結果為每毫升為2.53±0.31 μg/mL (每日500 μg/200 mL之T1組)、5.05±0.80 μg/mL (每日1000 μg/400 mL之T2組)、12.63±1.68 μg/mL (每日2500 μg/1000 mL之T5組)。而這些含「芭樂多酚」槲皮素之芭樂汁內各含有海藻糖0.2 g/kg體重(每日10 g/200 mL之T1組)、0.4 g/kg體重(每日20 g/400 mL之T2組)和1 g/kg 體重(每日50 g/1000 mL之T5組)。此海藻糖芭樂汁飲食組成物可以改善胰島素分泌，如表二所述。

[表二] 芭樂汁內芭樂多酚有效成份濃度的HPLC結果、海藻糖含量與胰島素濃度關係

本項發明亦可將海藻糖芭樂汁液態之狀態作至保健食品應用至固態之粉狀或錠狀之任何型式；亦即，本發明所揭之芭樂果實及海藻糖飲食組成物摻合一食品組成份或藥學上可接受之液狀或固體狀載劑（例如溶劑、分散劑、乳化劑、緩衝劑、穩定劑、賦形劑、黏合劑、崩散劑、潤滑劑等）製造而成者，得為任何型態，如錠劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等之固形劑、通常液劑、懸浮劑、乳劑等之液劑等，其皆可達成本發明之功效。

所有本說明書中所引用之參考文獻、包括但不限於所有論文、刊物、專利、專利申請、發表、文字、報導、文稿、小冊、書籍、網路文章、期刊文章、定期性刊物等等，在此係以引用方式將它們全部併入本說明書。本文中之參考資料的討論僅欲用於總結其作者之主張，並不作為承認任何參考資料構成先前技術。

雖然已使用特定術語、裝置及方法說明本發明揭露之實施態樣，但此說明僅為描述目的。所使用文字為說明文字而非限制性文字。應了解，本技術領域中具有通常知識者在未悖離於下列申請專利範圍所主張的本揭露之精神及範疇下，可進行更改及變動。此外，應了解，各種實施態樣可全部或部分相互取代。舉例而言，雖然已例示用於製造依據該等實例所製成的液態保健食品或營養補充物的方法，但其他使用方式亦被涵蓋於本發明之中。因此，後附申請專利範圍之精神及範疇不應受限於本說明中所含的態樣。

綜上所述，依上文所揭示之內容，本發明確可達到發明之預期目的，提供一種能降低因第二型糖尿病對腎臟及胰臟引起的氧化壓力及發炎反應，且可提升芭樂汁的適口性，極具產業上利用之價值，爰依法提出發明專利申請。

 

Claims (1)

1. 1.一種改善第二型糖尿病之芭樂果實及海藻糖飲食組成物，其特徵在於含有由芭樂衍生之芭樂多酚以及由海藻衍生之海藻糖作為有效成分。
   2.如申請專利範圍第1項所述之飲食組成物，其中該芭樂多酚係選自由槲皮素、鞣花酸、柚皮素及彼等之混合物所組成的群組。
   3.如申請專利範圍第1或2項所述之飲食組成物，其中該飲食組成物係包含大於2μg/mL的槲皮素。
   4.如申請專利範圍第1或2項所述之飲食組成物，其中該飲食組成物係包含大於0.2 g/kg的海藻糖。
   5.一種使用自芭樂中所衍生之芭樂多酚及由海藻衍生之海藻糖於製備改善第二型糖尿病之飲食組合物之用途。
   6.如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該芭樂多酚係以下列步驟進行製備：
   a.在恆溫下研磨芭樂以形成芭樂漿液；以及
   b. 利用一可使過濾濾液具有低氧化還原電位之過濾元件過濾該芭樂漿液，以獲得一具有低氧化還原電位且含有芭樂多酚之芭樂汁。
   7.如申請專利範圍第6項所述之用途，其係用於製造用作降低細胞凋亡、細胞自我吞噬、發炎性細胞死亡或細胞氧化傷害之飲食組合物。
   8.如申請專利範圍第5至7項中之其中一項所述之用途，其中該芭樂多酚係選自由槲皮素、鞣花酸、柚皮素及彼等之混合物所組成的群組。
   9. 如申請專利範圍第5至7項中之其中一項所述之用途，其中該飲食組成物係包含大於2μg/mL的槲皮素。
   10. 如申請專利範圍第5至7項中之其中一項所述之用途，其中該飲食組成物係包含大於0.2 g/kg的海藻糖。