TW201629014A - 三環化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明揭示式(I)化合物： □或其鹽，其中Q、R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R4、R5a、R5b、R6a、R6c、R7a、R7b、R7c及R7d定義於本文中。亦揭示使用此類化合物作為布魯頓氏酪胺酸激酶(BtK)之抑制劑之方法及包含此類化合物之醫藥組合物。此等化合物適用於在諸如自體免疫疾病及血管疾病之多種治療領域中治療、預防或減緩疾病或病症之進展。

Description

三環化合物
本發明大體上關於適用作激酶抑制劑之三環化合物，包括調節布魯頓氏酪胺酸激酶(Bruton's tyrosine kinase，Btk)及其他Tec家族激酶，諸如Itk。本文提供三環化合物、包含此類化合物之組合物及其使用方法。本發明進一步關於含有至少一種根據本發明之化合物之醫藥組合物，其適用於治療哺乳動物之與激酶調節相關之病況；及抑制激酶活性之方法，該等激酶包括Btk及其他Tec家族激酶，諸如Itk。
蛋白質激酶為人類酶之最大家族，其涵蓋遠遠超過500種蛋白質。Btk為酪胺酸激酶之Tec家族之一員，且其為早期B細胞發育以及成熟B細胞活化、信號傳導及存活之調節劑。
經由B細胞受體(BCR)之B細胞信號傳導導致廣泛範圍的生物輸出，此轉而視B細胞之發育階段而定。必須精確調節BCR信號之幅度及持續時間。異常BCR介導之信號傳導可能造成不受調節之B細胞活化及/或形成導致多種自體免疫及/或發炎疾病之病原性自身抗體。人類中之Btk突變導致X聯結丙種球蛋白缺乏症(XLA)。此疾病與B細胞之成熟受損、免疫球蛋白產量下降、T細胞獨立型免疫反應受損及對BCR刺激之持續鈣信號之顯著減弱相關。
Btk缺陷型小鼠模型中已確定Btk在過敏性病症及/或自體免疫疾病及/或發炎疾病方面之作用的證據。舉例而言，在全身性紅斑狼瘡(SLE)之標準小鼠臨床前模型中，已展示，Btk缺乏症使得疾病進展得 到顯著改善。此外，Btk缺陷型小鼠亦對罹患膠原蛋白誘發之關節炎具有抗性且更不易罹患葡萄球菌(Staphylococcus)誘發之關節炎。
大量證據支持B細胞及體液免疫系統在自體免疫及/或發炎疾病之發病機制方面之作用。發展至消耗B細胞之基於蛋白質之治療劑(諸如美羅華(Rituxan))表示治療多種自體免疫及/或發炎疾病之重要方法。因為Btk在B細胞活化方面之作用，Btk抑制劑可適用作B細胞介導之病原性活性(諸如自體抗體生產)之抑制劑。
Btk亦在肥大細胞及單核球中表現且已展示對於此等細胞之功能而言為重要的。舉例而言，小鼠之Btk缺乏症與IgE介導之肥大細胞活化受損(TNF-α及其他發炎性細胞激素釋放顯著減弱)相關，且人類之Btk缺乏症與經活化單核球之TNF-α生產大大減少相關。
因此，Btk活性抑制可適用於治療過敏性病症及/或自體免疫及/或發炎疾病，包括(但不限於)：SLE、類風濕性關節炎、多發性血管炎、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、重症肌無力、過敏性鼻炎、多發性硬化症(MS)、移植排斥反應、I型糖尿病、膜性腎炎、發炎性腸病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫甲狀腺炎、冷及熱凝集素病、伊萬斯(Evans)症候群、溶血性尿毒症症候群/血栓性血小板減少性紫癜症(HUS/TTP)、類肉瘤病、休格連氏症候群(Sjögren's syndrome)、周邊神經病(例如格林-巴利症候群(Guillain-Barre syndrome))、尋常天疱瘡及哮喘。
另外，已報導Btk在控制某些B細胞癌症中之B細胞存活中起作用。舉例而言，已展示，Btk對於BCR-Abl陽性B細胞急性淋巴母細胞白血病細胞之存活而言為重要的。因此，抑制Btk活性可適用於治療B細胞淋巴瘤及白血病。
藉由與酶反應形成共價鍵來抑制酶之化合物可提供優於未形成此類共價鍵之化合物的優勢。(參見例如Liu,Q.等人，Chem.Biol., 20：146(2013)；Barf,T.等人，J.Med.Chem.,55：6243(2012)；Kalgutkar,A.等人，Expert Opin.Drug Discov.,7：561(2012)；及Garuti,L.等人，Curr.Med.Chem.,18：2981(2011)；及其中所引用之參考文獻)。未形成共價鍵之化合物可自酶解離，自由其結合引起之抑制釋放酶。此類可逆抑制可能需要相對較高且連續濃度之抑制性化合物來驅使結合平衡朝向足夠的抑制劑酶佔有率，從而實現適用的酶抑制。較高濃度化合物可能需要向需要此類抑制之哺乳動物投與較高劑量之化合物，且在較高濃度下，抑制劑可能因抑制其他非靶酶而具有非所需作用。此類脫靶抑制可包括毒性。另外，可能需要更頻繁的給藥，因為抑制性化合物在自靶酶解離之後可能藉由代謝及/或消除自身體移除，降低實現靶酶之抑制可用的濃度。
相比之下，與其靶酶形成共價鍵之抑制劑不可逆地抑制該酶。不可逆抑制將由抑制劑之緩慢或可忽略的解離產生，因為此類解離將需要斷裂共價鍵。若此類共價抑制劑對於其靶酶之親和性相對於對於其他脫靶酶之親和性足夠大，則明顯較低濃度之抑制劑可產生相對於可逆抑制所需的濃度適用的抑制。較低濃度可減少非所需脫靶抑制及潛在毒性之可能性。此外，因為共價抑制劑可基本上不可逆地結合至靶酶，當藉由代謝及/或消除自身體移除未結合抑制劑時，游離(未結合)濃度之抑制劑可能變得極低，即使維持適用的酶抑制。此可減少非所需作用之可能性。另外，因為酶可被不可逆地抑制，可能需要較不頻繁的給藥以實現適用的抑制。
某些反應性官能基可連接至對靶酶具有良好親和性之化合物，其將允許與靶酶中之官能基形成共價鍵。舉例而言，諸如連接至拉電子基團(諸如酮、醯胺、碸、磺醯胺)或拉電子雜環(諸如吡啶基環)之乙烯系或乙炔系基團之親電子基團可與靶酶中所存在之親核性基團(諸如半胱胺酸殘基之硫醇或硫醇鹽基團)反應，以形成共價鍵。此類 反應在正常生理條件下可為基本上不可逆的。為了實現此類反應，抑制劑化合物必須結合至靶酶且以正確空間取向呈現所連接之親電子基團以允許與攻擊親核試劑之有利相互作用。若取向不正確，則可能不容易形成共價鍵，且可能不會實現所需不可逆抑制。在此情況下，化合物將類似可逆抑制劑表現且可能不會實現不可逆抑制之效益。此外，若結合抑制劑上親電體之取向不適用於與靶酶之親核性基團之反應，則抑制劑將能夠自靶酶解離，產生較高濃度之抑制劑及反應性親電子基團可與其他非靶親核試劑反應且造成諸如毒性之非所需作用的更大可能性。
美國專利第8,084,620號及第8,685,969號揭示適用作激酶抑制劑之三環甲醯胺化合物，包括調節Btk及其他Tec家族激酶。
鑒於許多病況預期受益於涉及蛋白質激酶調節之治療，立即顯而易見，能夠調節諸如Btk之蛋白質激酶之新穎化合物及使用此等化合物之方法將提供對廣泛多種患者有益之實質性治療。
仍需要適用作Btk抑制劑之化合物。此外，仍需要適用作可以較低劑量投與或在較低濃度下有效之Btk抑制劑之化合物。另外，仍需要具有作為Btk抑制劑之改良效能及拉莫斯(Ramos)FLIPR分析中之改良效能之組合的化合物。
申請人已發現作為Btk抑制劑具有活性之有效化合物。此等化合物適用作具有對於其可用藥性重要之所需穩定性、生物可用性、治療指數及毒性值之藥劑。
本發明提供包括其前藥之三環化合物，其適用作Btk抑制劑且適用於治療增生性疾病、過敏性疾病、自體免疫疾病及發炎疾病。
本發明亦提供包含至少一種式(IIa)化合物及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。
本發明亦提供一種抑制Btk活性之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與式(IIa)化合物。
本發明亦提供一種用於治療過敏性病症及/或自體免疫及/或發炎疾病之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與至少一種式(IIa)化合物。
本發明亦提供一種用於治療增生性疾病，諸如癌症之方法，其包含向有需要之哺乳動物投與至少一種式(IIa)化合物。
本發明亦提供一種治療與Btk活性相關的疾病或病症之方法，該方法包含向有需要之哺乳動物投與至少一種式(IIa)化合物。
本發明亦提供用於製得式(I)化合物之製程及中間物。
本發明亦提供適用於療法中之式(IIa)化合物。
本發明亦提供式(IIa)化合物之用途，其用於製造供治療或預防Btk相關病況，諸如增生性疾病、過敏性疾病、自體免疫疾病及發炎疾病用之藥物。
本發明亦提供式(IIa)化合物之用途，其用於製造供治療癌症用之藥物。
(IIa)化合物及包含式(IIa)化合物之組合物可用於治療、預防或治癒各種Btk相關病況。包含此等化合物之醫藥組合物適用於治療、預防或減緩多種治療領域中之疾病或病症之進展，諸如增生性疾病、過敏性疾病、自體免疫疾病及發炎疾病。
本發明之此等及其他特徵將隨本發明之繼續而得以充分闡述。
藉由參考下文所描述之隨附圖式來說明本發明。
圖1展示中間物13乙醯乙酸溶劑合物之絕對立體化學。
本發明之第二態樣提供式(I)化合物
或其鹽，其中：兩條虛線表示兩個單鍵或兩個雙鍵；且R1b及R2b僅在該兩條虛線為兩個單鍵時才存在；Q為： (i)、、或； (ii)、、、、 (iii)、、、、、、 或；或 (iv)、、、、 R1a為：(i)H、-CN、-CF3、-CH3、-CR8aR8bOH、-CR8aR8bCR8aR8bOH、-CH(OH)CH2OH、-NHR9、-C(O)NR10aR10b、-C(O)(嗎啉基)、-C(O)(哌嗪基)或-C(O)(甲基哌嗪基)；或(ii) R1b(若存在)為H或-CH3，限制條件為若R1a為H，則R1b亦為H；R2a為H、F或Cl，限制條件為若R1a不為H，則R2a為H；R2b(若存在)與R2a相同；R3為H、F或Cl；R4為H、F、Cl或-CH3；R5a為H、F、Cl、-OCH3或-OCF3；R5b為H、F、Cl、-OCH3或-OCF3；R6a為H、-CH3或環丙基； R6c為H、-CH3或環丙基；R7a為-C(O)CH=CH(R11)、-C(O)C≡CR12或-S(O)2CH=CH2；R7b為-C(O)CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR12；R7d為-CN、-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR13；R7e為-CH=CH2或-C≡CR13；R7f為經R7c取代之吡咯啶基、-CH=CHC(O)(嗎啉基)或-CH=CHC(O)(吡咯啶基)；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；R9為C1-4烷基；R10a及R10b獨立地為H或-CH3；R11為H或-CH3；R12為H、C1-4烷基或環丙基；及R13為H、C1-4烷基或環丙基；限制條件為： (a)若Q為且R7d為-CN或-C(O)CH=CH2，則R3為H；及(b)若虛線表示兩個單鍵，則： (i)Q不為、或；(ii)R11(若存在)為H；及(iii)式(I)化合物不為：
本發明之第二態樣提供式(I)化合物
或其鹽，其中：兩條虛線表示兩個單鍵或兩個雙鍵；且R1b及R2b僅在該兩條虛線為兩個單鍵時才存在；Q為： R1a為：(i)H、-CN、-CF3、-CH3、-CR8aR8bOH、-CH(OH)CH2OH、-NHR9或-C(O)NR10aR10b；或(ii) R1b(若存在)為H或-CH3，限制條件為若R1a為H，則R1b亦為H；R2a為H或F，限制條件為若R1a不為H，則R2a為H；R2b(若存在)與R2a相同；R3為H、F或Cl；R4為H、F、Cl或-CH3；R5a為H、F、Cl、-OCH3或-OCF3；R5b為H、F、Cl、-OCH3或-OCF3；R6a為H、-CH3或環丙基；R6c為H、-CH3或環丙基；R7a為-C(O)CH=CH(R11)、-C(O)C≡CR12或-S(O)2CH=CH2；R7b為-C(O)CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR12；R7d為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR13；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；R9為C1-4烷基；R10a及R10b獨立地為H或-CH3；R11為H或-CH3；R12為H、C1-4烷基或環丙基；及R13為H、C1-4烷基或環丙基；限制條件為若虛線表示兩個單鍵，則： (i)Q不為、或；(ii)R11(若存在)為H；及(iii)式(I)化合物不為
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中兩條虛線表示兩個雙鍵。此實施例之化合物具有式(Ia)結構：
其中Q、R1a、R2a及R3定義於第一態樣中。此實施例中亦包括化合物，其中Q、R1a、R2a及R3定義於第二態樣中。
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中兩條虛線表示兩個單鍵。此實施例之化合物具有式(Ib)結構：
其中Q、R1a、R1b、R2a、R2b及R3定義於第一態樣中。此實施例中亦包括化合物，其中Q、R1a、R2a及R3定義於第二態樣中。
由式(Ib)表示之四氫咔唑化合物(其中R1a不為H)亦在R1a所連接之碳原子處具有對掌性中心且因此可在此對掌性中心處以S-異構體及R- 異構體之形式存在。此等異構體為可分離且穩定的。一個實施例提供此類式(Ib)化合物，其具有R1a所連接之碳對掌性中心作為S-異構體。一個實施例提供此類式(Ib)化合物，其具有R1a所連接之碳對掌性中心作為R-異構體。
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中R1a為H、-CN、-CF3、-CH3、-CR8aR8bOH、-CR8aR8bCR8aR8bOH、-CH(OH)CH2OH、-NHR9、-C(O)NR10aR10b、-C(O)(嗎啉基)、-C(O)(哌嗪基)或-C(O)(甲基哌嗪基)；且Q、R1b、R2a、R2b、R3、R8a、R8b、R9、R10a及R10b定義於第一態樣中。此實施例之化合物在本文中稱為式(IIa)化合物。此實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CN、-CH3、-CF3、-CR8aR8bOH、-CH(OH)CH2OH、-NHR9或-C(O)NR10aR10b。
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中R1a為： 且Q、R1b、R2a、R2b及R3定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例之化合物在本文中稱為式(IIb)化合物。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中R6a為H或-CH3；R6c為H或-CH3；R7a為-C(O)CH=CH(R11)或-S(O)2CH=CH2；R13為H；且Q、R1a、R1b、R2a、R2b、R3及R11定義於第一態樣或第二態樣中。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為： 且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R4、R5a、R6a、R6c、R7a、R7c、R7e及R7f定義於第一態樣或第二態樣中。實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CH3、-CF3、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH2OH、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或-NHCH(CH3)2；R1b為H或-CH3；R2a為H；R3為H、F或Cl；R4為H或-CH3；R5a為H或-CH3；R6a為H或-CH3；R6c為H或-CH3；R7a為-C(O)CH=CH(R11)或-S(O)2CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2；R7e為-C=CH2；R7f為經R7c取代之吡咯啶基、-CH=CHC(O)(嗎啉基)或-CH=CHC(O)(吡咯啶基)；且R11為H或-CH3。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為： 且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R4、R5a、R6a、R7a及R7f定義於第一態樣或第二態樣中。實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CH3、-CF3、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH2OH、-C(O)NH2、-C(O)N(CH3)2或-NHCH(CH3)2；R1b為H或-CH3；R2a為H；R3為H、F或Cl；R4為H或-CH3；R5a為H或-CH3；R6a為H或-CH3；R7a為-C(O)CH=CH(R11)或-S(O)2CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2；R7f為經R7c取代之吡咯啶基、-CH=CHC(O)(嗎啉基)或-CH=CHC(O)(吡咯啶基)；且R11為H或-CH3。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為： 且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R5b、R7b、R7c及R7d定義於第一態樣或第二態樣中。實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CF3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH或-C(O)(嗎啉基)；R1b為H；R2a為H；R3為H或F；R7b為-C(O)CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR12；R7d為-CN、-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR13；R12為-CH3；且R13為-CH3。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為： 且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R5b、R7b、R7c及R7d定義於第一態樣或第二態樣中。實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CF3、-CH3、- CR8aR8bOH、-CR8aR8bCR8aR8bOH、-C(O)NR10aR10b或-C(O)(甲基哌嗪基)；R1b為H；R2a為H、F或Cl；R2b為H、F或Cl；R3為H、F或Cl；R6c為H；R7b為-C(O)CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CCH3；R7d為-CN、-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR13；且R13為-CH3或環丙基。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為： 且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R4、R7d及R7e定義於第一態樣或第二態樣中。實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CF3、-CR8aR8bOH、-C(O)NR10aR10b或-C(O)(甲基哌嗪基)；R1b為H；R2a為H；R3為H、F或Cl；R4為H或-CH3；R7d為-CN、-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CH；且R7e為-CH=CH2或-C≡CCH3。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為；且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R4、R5a、R6a及R7a定義於第一態樣或第二態樣中。實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CN、-CF3、-CH3、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH(OH)CH2OH、-NHCH(CH3)2、-C(O)NH2或-C(O)N(CH3)2；R2a為H；R2b為H；R5a為 H、F、-OCH3或-OCF3；R6a為H或-CH3；且R7a為-C(O)CH=CH2、-C(O)CH=CHCH3或-S(O)2CH=CH2。
一個實施例提供式(Ia)化合物或其鹽，其中Q為；且R1a、R2a、R3、R4、R5a、R6a及R7a定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合物，其中R1a為-CN、-C(CH3)2OH或-CH(OH)CH2OH；R2a為H；R4為H或-CH3；R5a為H；R6a為H或-CH3；且R7a為-C(O)CH=CH2、-C(O)CH=CHCH3或-S(O)2CH=CH2。
一個實施例提供式(Ib)化合物或其鹽，其中Q為；且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R4、R5a、R6a及R7a定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CF3、-CH3、-CH2OH、-C(CH3)2OH、-C(O)NH2或-C(O)N(CH3)2；R2a為H；R2b為H；R3為H、F或Cl；R5a為F、-OCH3或-OCF3；R6a為H或-CH3；且R7a為-C(O)CH=CH2或-S(O)2CH=CH2。
一個實施例提供式(Ib)化合物或其鹽，其中Q為；R1a為H、-CN、-CF3、-CR8aR8bOH或-NHR9；R2a為H；R3為H、F或Cl；R3為H、F或Cl；R4為H、F、Cl或-CH3；R5a為H、F、Cl或-OCH3；R6a為H、-CH3或環丙基；R7a為-C(O)CH=CH2或-S(O)2CH=CH2；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；且R9為C2-3烷基。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為；R1a為： 且R1b、R2a、R2b、R3、R4、R5a、R6a及R7a定義於第一態樣或第二態樣中。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為、、或；且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R5b及R7b定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合物，其中R1a為H、-CF3或-C(CH3)2OH；R3為F；且R5b為H。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為 或；R1a為H、-CF3或-C(CH3)2OH；且R1b、R2a、R2b、R3、R5b及R7b定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中亦包括化合物，其中R3為H或F；且R5b為H。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為 或；且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R5b及R7b定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括其中R5b為H之化合物。此實施例中亦包括式(Ia)化合物，其中R3為H或F；且R5b為H。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為 或；且R1a、R1b、R2a、R2b、R3及R7b定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括式(Ia)化合物，其中R3為H或F。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為 ；且R1a、R1b、R2a、R2b、R3、R6c及R7c定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合物，其中R6c為H；且R7c為-C(O)CH=CH2、-C(O)C≡CCH3或-C(O)C≡C(環丙基)。此實施例中亦包括式(Ib)化合物，其中R3為F；R6c為H；且R7c為-C(O)CH=CH2、-C(O)C≡CCH3或-C(O)C≡C(環丙基)。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)或式(Ib)之化合物或其鹽，其中Q為；且R1a、R1b、R2a、R2b、R3及R7d定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合物，其中R1a為H或-CF3；且R7d為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CH。此實施例中亦包括式(Ib)化合物，其中R1a為H或-CF3；R1b為H；R2a為H；R2b為H；且R7d為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CH。
一個實施例提供式(I)、式(Ia)之化合物或其鹽，其中Q為或；且R1a、R2a及R3定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合物，其中R3為H或F。亦包括化合物，其中R1a為H且R2a為H。
一個實施例提供式(Ia)化合物或其鹽，其中Q為、 、、或；R1a為H、-CN、-CF3、-CR8aR8bOH或-NHR9；R2a為H；R3為H、F或Cl；R5b為H、F、Cl或-OCH3；R7b為-C(O)CH=CH2；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；且R9為C2-3烷基。
一個實施例提供式(Ia)化合物或其鹽，其中Q為或 ；R1a為H、-CN、-CF3、-CR8aR8bOH或-NHR9；R2a為H；R3為H、F或Cl；R7b為-C(O)CH=CH2；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；且R9為C2-3烷基。
一個實施例提供式(Ia)化合物或其鹽，其中Q為；R1a為H、-CN、-CF3、-CR8aR8bOH或-NHR9；R2a為H；R3為H、F或Cl；R6c為H、-CH3或環丙基；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR12；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；R9為C2-3烷基；且R12為H、C1-4烷基或環丙基。
一個實施例提供式(Ia)化合物或其鹽，其中Q為或 ；R1a為H、-CN、-CF3、-CR8aR8bOH或-NHR9；R2a為H；R3為H、F或Cl；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；且R9為C2-3烷基。
一個實施例提供式(Ib)化合物或其鹽，其中： Q為：、、、或；R1a為：(i)H、-CH3、-CF3、-CR8aR8bOH或-C(O)NR10aR10b；或(ii) R1b為H；R2a為H或F，限制條件為若R1a不為H，則R2a為H；R2b為H或F，限制條件為若R2a及R2b相同；則R3為H、F或Cl；R4為H、F、Cl或-CH3；R5a為H、F、Cl或-OCH3；R5b為H、F、Cl或-OCH3；R6a為H、-CH3或環丙基；R6c為H、-CH3或環丙基；R7a為-C(O)CH=CH2或-S(O)2CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR12；R7d為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR13；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；R10a及R10b各為-CH3；R12為H、C1-4烷基或環丙基；且R13為H、C1-4烷基或環丙基；限制條件為式(Ib)化合物不為
一個實施例提供式(Ib)化合物或其鹽，其中：Q為；R1a為： (i)H、-CH3、-CF3、-CR8aR8bOH或-C(O)NR10aR10b；或(ii) R1b為H；R2a為H或F，限制條件為若R1a不為H，則R2a為H；R2b為H或F，限制條件為若R2a及R2b相同；則R3為H、F或Cl；R4為H、-CH3、F或Cl；R5a為H、F、Cl或-OCH3；R6a為H、-CH3或環丙基；R7a為-C(O)CH=CH2或-S(O)2CH=CH2；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；且R10a及R10b各為-CH3。
一個實施例提供式(Ib)化合物或其鹽，其中Q為；R1a為H、-CH3、-CF3、-CR8aR8bOH或-C(O)NR10aR10b；R1b為H；R2a為H或F，限制條件為若R1a不為H，則R2a為H；R2b為H或F，限制條件為若R2a及R2b相同；則R3為H、F或Cl；R6c為H、-CH3或環丙基；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR12；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；R10a及R10b為-CH3；且R12為H、C1-4烷基或環丙基；限制條件為式(Ib)化合物不為
一個實施例提供式(Ib)化合物或其鹽，其中：Q為；R1a為H、-CH3、-CF3、-CR8aR8bOH或-C(O)NR10aR10b；R1b為H；R2a為H或F，限制條件為若R1a不為H，則R2a為H；R2b為H或F，限制條件為若R2a及R2b相同；則R3為H、F或Cl；R7d為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR13；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；R10a及R10b各為-CH3；且R13為H、C1-4烷基或環丙基。
一個實施例包括式(I)化合物或其鹽，其中Q為、 、或；R3為H；且R1a、R1b、R2a、R2b、R5及R7a定義於第一態樣或第二態樣中。
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中R3為H；且R1a、R1b、R2a、R2b、R4、R5a、R5b、R6a、R7a、R7c、R7d、R7f及Q定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合物，其中Q為：
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中R3為F或Cl；且R1a、R1b、R2a、R2b及Q定義於第一態樣或第二態樣中。
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中R3為F；且R1a、R1b、R2a、R2b及Q定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合 物，其中R1a為H、-CF3、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH或-C(O)N(CH3)2。
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中R3為Cl；且R1a、R1b、R2a、R2b、R4、R5a、R6a、R7a、R7c、R7d及Q定義於第一態樣或第二態樣中。此實施例中包括化合物，其中Q為：
阻轉異構體為由圍繞單鍵軸線之旋轉受阻產生之立體異構體，其中旋轉障壁足夠高以允許單獨旋轉異構體分離。(LaPlante等人，J.Med.Chem.,54：7005(2011))。式(I)化合物(其中R3不為氫且Q為經取代之苯基，R4不為氫、經取代之1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基、經取代之3,4-二氫-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-8-基、2,3,4,5-四氫[b][1,4]氧氮呼-9-基或經取代之異吲哚啉-4-基)在三環四氫咔唑/咔唑與基團Q之間的鍵處具有立體對稱軸線。歸因於藉由此鍵連接的環上之取代基之非對稱性質且歸因於由位阻造成的圍繞此鍵之有限旋轉，此類式(I)化合物可形成旋轉異構體。若旋轉能量障壁足夠高，則圍繞此鍵之受阻旋轉以足夠慢以允許單獨的阻轉異構體分離為不同化合物之速率出現。因此，此等式(I)化合物可形成兩種旋轉異構體，其在諸如對掌性固定相層析之某些情形下可分離成單獨阻轉異構體。此類式(I)化合物可以兩種阻轉異構體之混合物形式或以單一阻轉異構體形式提供。發現此類式(I)化合物在環境及生理溫度下在溶液中為可分離且穩定的。可藉由單晶x射線晶體學測定阻轉異構體之絕對空間組態。此等式(I)化合物可以單獨阻轉異構體形式或以包含任何比例之式(I)之兩種阻轉異構體之混合物形式提供。
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中僅提供一種阻轉異構 體，或其中僅提供與少量另一阻轉異構體混合之一種阻轉異構體。在未指定絕對組態之情況下，所提供之阻轉異構體可藉由在對掌性固定相層析期間在特定條件下相對於另一阻轉異構體之溶離順序來界定。
一個實施例提供式(I)化合物或其鹽，其中該化合物為(RS)-5-(3-丙烯醯胺基苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(1)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(2)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2,2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(3)；4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(5)；(RS)-4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(6)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2-(羥甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(7)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(羥甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(8)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(9)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(10)；(RS)-(E)-4-(3-(丁-2-烯醯胺基)-2-甲基苯基)-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(11)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(12)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(13)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺(14)；4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-氰基-9H-咔唑-1-甲醯胺(15)；(RS)-4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-(1,2-二羥乙基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(16)；4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-(異丙胺基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(17)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-N 2,N 2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺 (18)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(19)；(RS)-2-(羥甲基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(20)；(RS)-N 2,N 2-二甲基-5-(2-甲基-3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺(21)；(2R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(22)；(2R)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(23)；(2R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一對映異構體(24)；(2R)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一對映異構體(25)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(26)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(27)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(28)；(RS)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(29)；(RS)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(30)；3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(31)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(32)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(33)；3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(34)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(35)；(R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(36)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3- (N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(37)；3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(38)；(R)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(39)；(S)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(40)；(R)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(41)；(RS)-5-(2-氟-3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(42)；(R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(43)；(2R)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(44)；(RS)-5-(2-氟-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(45)；(RS)-5-(2-氯-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(46)；(2R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(47)；5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(48)；5-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(49)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-4-甲氧基苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(50)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-4-(三氟甲氧基)苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(51)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-4-氟苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(52)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(53)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(54)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(羥甲基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一外消旋非鏡像異構體(55及56)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯 基)-6-氯-N 2,N 2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺，單一外消旋非鏡像異構體(57及58)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一外消旋非鏡像異構體(59及60)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一外消旋非鏡像異構體(61及62)；(S)-5-((1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(63)；(E)-4-(3-(丁-2-烯醯胺基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(64)；5-(((S)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(65)；(S)-5-(3-丙烯醯胺基哌啶-1-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(66)；(S)-4-(3-丙烯醯胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(69)；5-(((S)-1-丙炔醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(72)；(S)-5-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(73)；(S)-3-氟-4-(3-(N-甲基丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(74)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(75)；(S)-4-(3-(3-環丙基丙醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(76)；5-(((S)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一非鏡像異構體(77及78)；3-氟-4-((6-乙烯基吡啶-3-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(87)；(RS)-4-(2-丙烯醯基異吲哚啉-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(89)；4-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(90)；4-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(91)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(92)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(95)；4-(1-丙烯醯基-1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(96)；(RS)-4-(1-丙烯醯基哌啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲 醯胺(97)；4-(1-丙烯醯基哌啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺，單一對映異構體(98及99)；3-氟-4-((2-乙烯基吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(100)；4-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(112)；4-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(113及114)；順-4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(115)；順-4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(116及117)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(118)；順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(119)；順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(120及121)；3-氟-4-((2-乙烯基嘧啶-5-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(122)；順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(123)；順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(124及125)；4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(126)；4-((4aS,7aS)-1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺及4-((4aR,7aR)-1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(127及128)；3-氟-4-((2-(丙-1-炔-1-基)吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(129)；5-((S)-3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(130、131及132)；4-(2-丙烯醯基異吲哚啉-5-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(133)；4-(1-丙烯醯基-2,5-二氫-1H-吡咯-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(134)；5-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(135)；(R)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(136)；4-(1-(丁-2-炔醯基)六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(137)；4-(1-丙烯醯基-1,4,5,6-啶四氫吡啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯 胺(138)；4-(7-(丁-2-炔醯基)-2,7-二氮螺[4.4]壬-2-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(139)；4-(7-丙烯醯基-2,7-二氮螺[4.4]壬-2-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(140)；4-(1-丙烯醯基八氫-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(141)；4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(142)；4-(6-丙烯醯基-3,6-二氮雙環[3.2.0]庚-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(143)；4-(6-(丁-2-炔醯基)-3,6-二氮雙環[3.2.0]庚-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(144)；4-(7-丙烯醯基八氫-2,7-啶-2(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(145)；4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(146)；4-(1-(丁-2-炔醯基)吲哚啉-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(147)；4-(2-(丁-2-炔醯基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(148)；4-(2-(丁-2-炔醯基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(149)；4-(2-(丁-2-炔醯基)異吲哚啉-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(150)；4-(1-(丁-2-炔醯基)吲哚啉-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(151)；3-氟-4-((6-乙烯基吡嗪-2-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(152)；3-氯-4-((6-乙烯基吡嗪-2-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(153)；4-((6-乙炔基吡啶-3-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(154)；3-氯-4-((6-乙烯基吡啶-3-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(155)；4-((2-乙炔基吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(156)；3-氟-4-((2-乙烯基噻唑-5-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(157)；3-氟-4-((6-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(158)；3-氟-4-((5-乙烯基吡嗪-2-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(159)；4-(1-丙烯醯基-1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(160)；4-(1-丙烯醯基哌啶-3-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(161及162)；(S)-4-(3-丙烯醯胺基哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(163)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(164)；(R)-4-(3-(丁-2-炔醯 胺基)哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(165)；(S)-4-(3-(3-環丙基丙醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(166)；(S)-4-(3-氰胺基哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(167)；4-(2-丙烯醯基異吲哚啉-4-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(168)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-4-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(169)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-6-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(170)；4-(1-丙烯醯基-1-氮雜螺[4.4]壬-7-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(171)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(172)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-N7,N7-二甲基-9H-咔唑-1,7-二甲醯胺(173)；3-氟-N7,N7-二甲基-4-(2-乙烯基吡啶-4-基)-9H-咔唑-1,7-二甲醯胺(174)；(S)-4-((1-氰基吡咯啶-3-基)胺基)-3-氟-N7,N7-二甲基-9H-咔唑-1,7-二甲醯胺(175)；(S)-4-((1-氰基吡咯啶-3-基)胺基)-3-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(176)；4-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(嗎啉-4-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(177)；4-(2-(丁-2-炔醯基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(嗎啉-4-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(178)；4-(2-氰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(嗎啉-4-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(179)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-6-基)-3-氟-7-(2-羥乙基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(180)；4-(1-氰基吲哚啉-6-基)-3-氟-7-(2-羥乙基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(181)；4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-氯-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(182)；4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-氯-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(183)；5-(1-丙烯醯基-1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(184)；(R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-((6-乙烯基吡啶-3-基)甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(185)；5-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺 (186及187)；6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-((6-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(188)；3-氟-4-(2-乙烯基吡啶-4-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(189)；4-(7-(丁-2-炔醯基)八氫-2,7-啶-2(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(190)；4-(1-丙烯醯基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(191)；4-(1-(丁-2-炔醯基)-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(192)；3-氟-4-(5-(N-甲基丙烯醯胺基)吡啶-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(193)；4-((1S,4S)-2-丙烯醯基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(194)；3-氟-4-((2-甲基-6-乙烯基吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(195)；3-氟-4-((2-甲基-6-乙烯基嘧啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(196)；3-氟-4-((4-甲基-6-乙烯基嘧啶-2-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(197)；3-氟-4-((3-氟-2-乙烯基吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(198)；4-(3-(1-丙烯醯基吡咯啶-2-基)苯基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(199)；4-(3-(1-(丁-2-炔醯基)吡咯啶-2-基)苯基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(200)；(E)-3-氟-4-(3-(3-嗎啉基-3-側氧基丙-1-烯-1-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(201)；(E)-3-氟-4-(3-(3-側氧基-3-(吡咯啶-1-基)丙-1-烯-1-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(202)；或5-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(203及204)。
本發明可以不偏離其精神或基本特徵的其他特定形式來實施。本發明涵蓋本文中所提及之本發明之態樣及/或實施例的所有組合。應理解，本發明之任何及所有實施例可與任何其他實施例結合以描述額外實施例。亦應理解，實施例之各個別元素意欲與來自任何實施例之任何及所有其他元素組合以描述額外實施例。
定義
一般技術者在閱讀以下實施方式後可更容易地理解本發明之特徵及優勢。應瞭解，在單獨實施例之情形下，為了清楚起見上文及下 文所描述之本發明之某些特徵亦可組合形成單一實施例。相反地，為簡潔起見描述於單一實施例之上下文中之本發明之各種特徵亦可組合形成其子組合。本文中鑑別為例示性或較佳的實施例意欲為說明性的且不具限制性。
除非本文中另有具體陳述，否則以單數形式提及亦可包括複數形式。舉例而言，「一(a/an)」可指一個或一或多個。
如本文所使用，片語「化合物」係指至少一種化合物。舉例而言，式(I)化合物包括式(I)化合物及兩種或兩種以上式(I)化合物。
除非另外指明，否則具有不飽和價數之任何雜原子假定具有足以使價數飽和的氫原子。
本文所闡述之定義優先於以引用之方式併入本文中之任何專利、專利申請案及/或專利申請公開案中所闡述之定義。
下文列舉用於描述本發明之各種術語之定義。此等定義適用於術語，因為其單獨地或作為較大群組的一部分而用於整個本說明書中(除非在特定情況下以其他方式加以限制)。
在整個說明書中，熟習此領域者可選擇基團及其取代基以提供穩定的部分及化合物。
根據此項技術中所使用之定則，用於本文之結構式中以描繪部分或取代基與核心或主鏈結構之連接點之鍵。
如本文所使用，術語「烷基」係指含有例如1至12個碳原子，1至6個碳原子及1至4個碳原子之分支鏈及直鏈飽和脂族烴基。烷基之實例包括(但不限於)甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基及異丙基)、丁基(例如正丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基)及戊基(例如正戊基、異戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基、2-乙基丁基、3-甲基戊基及4-甲基戊基。當數字以下標形式出現在符號「C」後時，下 標以較多特異性定義特定基團可含有之碳原子之數目。舉例而言，「C1-4烷基」指示具有一至六個碳原子之直鏈及分支鏈烷基。
術語「羥烷基」包括經一或多個羥基取代之分支鏈及直鏈飽和烷基。舉例而言，「羥烷基」包括-CH2OH、-CH2CH2OH及C1-4羥烷基。
片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷範疇內，適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相匹配之彼等化合物、物質、組合物及/或劑型。
式(I)化合物可以非晶形固體或結晶固體形式提供。可採用凍乾提供呈非晶形固體狀之式(I)化合物。
某些式(I)化合物可以游離形式存在(在無電離之情況下)或可形成亦在本發明範疇內之鹽。除非另外指明，否則提及本發明化合物應理解為包括提及游離形式及其鹽。術語「鹽」指示用無機酸及/或有機酸形成之酸鹽。醫藥學上可接受之(亦即，無毒、生理學上可接受之)鹽較佳，諸如陰離子不會明顯造成鹽之毒性或生物活性之鹽。然而，其他鹽可適用於例如分離或純化步驟中，其可在製備期間得以採用，且因此涵蓋在本發明之範疇內。式(I)化合物之鹽可例如在介質，諸如鹽沈澱之介質中或在水性介質中藉由使式(I)化合物與一定量(諸如當量)之酸反應，繼而凍乾形成。
例示性酸加成鹽包括乙酸鹽(諸如用乙酸或三鹵乙酸(例如三氟乙酸)形成之彼等鹽)、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫氯酸鹽(用鹽酸形成)、氫溴酸鹽(用溴化氫形 成)、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽(用順丁烯二酸形成)、甲磺酸鹽(用甲磺酸形成)、2-萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽(諸如用硫酸形成之彼等鹽)、磺酸鹽(諸如本文中提及之彼等鹽)、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸烷基鹽(諸如甲苯磺酸鹽)、十一烷酸鹽及其類似鹽。
應進一步理解，式(I)化合物之溶劑合物(例如水合物)亦在本發明之範疇內。術語「溶劑合物」意謂式(I)化合物與一或多個溶劑分子(無論有機或無機)之物理締合。此物理締合包括氫鍵結。在某些情況下，溶劑合物將能夠分離，例如一或多個溶劑分子併入結晶固體之晶格中時。「溶劑合物」涵蓋溶液相與可分離溶劑合物。例示性溶劑合物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物、異丙醇化物、乙腈溶劑合物及乙酸乙酯溶劑合物。溶合方法為此項技術中已知的。
前藥之各種形式為此項技術中熟知的且描述於以下中：a) Wermuth, C.G.等人，The Practice of Medicinal Chemistry，第31章，Academic Press (1996)；b) Bundgaard, H.編，Design of Prodrugs, Elsevier (1985)；c) Bundgaard, H.，第5章，「Design and Application of Prodrugs」, A Textbook of Drug Design and Development，第113-191頁，Krogsgaard-Larsen, P.等人編，Harwood Academic Publishers (1991)；及d) Testa, B.等人，Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism, Wiley-VCH (2003)。
另外，式(I)化合物在其製備後可經分離及純化以獲得含有以重量計量等於或大於式(I)化合物之99%之組合物(「實質上純的」)，其隨後如本文所描述使用或調配。本文中亦涵蓋此類「實質上純的」式(I)化合物作為本發明之一部分。
「穩定化合物」及「穩定結構」意謂足夠穩固能經受自反應混合物分離至適用純度且調配成有效治療劑之化合物。本發明意欲體現穩定化合物。
「治療有效量」意欲包括能有效地用作Btk抑制劑或能有效地治療或預防自體免疫性及/或發炎性及/或增生性疾病病狀，諸如多發性硬化症及類風濕性關節炎之單獨本發明化合物的量或所主張之化合物之組合的量或與其他活性成分組合之本發明化合物的量。
如本文所使用，「治療(treating)」或「治療(treatment)」涵蓋治療哺乳動物，尤其人類之疾病病狀，且其包括：(a)預防哺乳動物發生疾病病狀，尤其當此類哺乳動物傾向於疾病病狀但尚未診斷為具有該疾病病狀時；(b)抑制疾病病狀，亦即遏制其產生；及/或(c)緩解疾病病狀，亦即使得疾病病狀消退。
本發明化合物意欲包括本發明化合物中出現之原子之所有同位素。同位素包括具有相同原子數但不同質量數之彼等原子。作為一般實例但非限制性地，氫之同位素包括氘(D)及氚(T)。碳同位素包括13C及14C。本發明之同位素標記化合物通常可藉由熟習此項技術者已知之習知技術或藉由類似於本文所描述之方法、使用適當同位素標記試劑代替以其他方式採用之非標記試劑來製備。舉例而言，甲基(-CH3)亦包括氘化甲基，諸如-CD3。
根據式(IIa)之化合物可藉由適用於待治療病況之任何手段投與，其可視定點治療需要或待遞送式(IIa)化合物之量而定。
本發明內亦包涵包含式(IIa)化合物及一或多種無毒醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或佐劑(在本文中統稱為「載劑」材料)及(若需要)其他活性成分之一類醫藥組合物。式(IIa)化合物可藉由任何適合的途徑投與，較佳呈適於此類途徑之醫藥組合物形式且呈預期治療有效之劑量。本發明之化合物及組合物可以含有習知醫藥學上可接受 之載劑、佐劑及媒劑之劑量單位調配物形式例如經口，經黏膜或非經腸(包括血管內、靜脈內、腹膜內、皮下、肌內及胸骨內)投與。舉例而言，醫藥載劑可含有甘露糖醇或乳糖與微晶纖維素之混合物。混合物可含有額外組分，諸如潤滑劑，例如硬脂酸鎂；及崩解劑，諸如交聯普維酮(crospovidone)。載劑混合物可填充至明膠膠囊中或壓縮為錠劑。醫藥組合物可例如以口服劑型或輸注形式投與。
對於經口投與，醫藥組合物可呈例如錠劑、膠囊、液體膠囊、懸浮液或液體形式。醫藥組合物較佳以含有特定量活性成分之劑量單位形式製得。舉例而言，醫藥組合物可以包含約0.1至1000mg，較佳約0.25至250mg，且更佳約0.5至100mg範圍內之一定量之活性成分之錠劑或膠囊形式提供。用於人類或其他哺乳動物之適合日劑量可視患者之病況及其他因素而廣泛變化，但可使用常規方法確定。
本文中涵蓋之任何醫藥組合物均可例如經由任何可接受且適合的口服製劑經口遞送。例示性口服製劑包括(但不限於)例如錠劑、糖衣錠、口含錠、水性及油性懸浮液、可分散散劑或顆粒劑、乳劑、硬及軟膠囊、液體膠囊、糖漿劑及酏劑。意欲經口投與之醫藥組合物可根據此項技術中已知之任何方法製備以便製造意欲經口投與之醫藥組合物。為了提供醫藥學上適口的製劑，根據本發明之醫藥組合物可含有至少一種選自甜味劑、調味劑、著色劑、緩和劑、抗氧化劑及防腐劑之試劑。
錠劑可例如藉由將至少一種式(IIa)化合物與至少一種適用於製造錠劑之無毒醫藥學上可接受之賦形劑摻和來製備。例示性賦形劑包括(但不限於)例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣及磷酸鈉；成粒劑及崩解劑，諸如微晶纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉、玉米澱粉及褐藻酸；結合劑，諸如澱粉、明膠、聚乙烯-吡咯啶酮及阿拉伯膠；及潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸及滑石。另外，錠劑可 為未經塗佈的或藉由已知技術經塗佈以掩蔽口味較差藥物之不佳味道，或延緩活性成分在胃腸道中之崩解及吸收，從而使活性成分之作用維持較長時間段。例示性水可溶味覺掩蔽材料包括(但不限於)羥丙基-甲基纖維素及羥丙基-纖維素。例示性延時材料包括(但不限於)乙基纖維素及乙酸丁酸纖維素。
硬明膠膠囊可例如藉由將至少一種式(IIa)化合物與至少一種惰性固體稀釋劑，諸如碳酸鈣、磷酸鈣及高嶺土混合來製備。
軟明膠膠囊可例如藉由將至少一種式(IIa)化合物與至少一種水可溶載劑(諸如聚乙二醇)及至少一種油介質(諸如花生油、液體石蠟及橄欖油)混合來製備。
水性懸浮液可例如藉由將至少一種式(IIa)化合物與適用於製造水性懸浮液之至少一種賦形劑摻和來製備。適用於製造水性懸浮液之例示性賦形劑包括(但不限於)例如懸浮劑，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基-纖維素、海藻酸鈉、褐藻酸、聚乙烯-吡咯啶酮、黃蓍膠及阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑，諸如天然存在之磷脂，例如卵磷脂；環氧烷與脂肪酸之縮合產物，諸如聚氧乙烯硬脂酸酯；環氧乙烷與長鏈脂族醇之縮合產物，諸如十七伸乙基-氧基十六醇；環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇之偏酯之縮合產物，諸如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯；及環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇酸酐之偏酯之縮合產物，諸如聚乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。水性懸浮液亦可含有至少一種防腐劑，諸如對羥基苯甲酸乙酯及對羥基苯甲酸正丙酯；至少一種著色劑；至少一種調味劑；及/或至少一種甜味劑，包括(但不限於)例如蔗糖、糖精及阿斯巴甜糖。
油性懸浮液可例如藉由使至少一種式(IIa)化合物懸浮於植物油(諸如花生油、橄欖油、芝麻油及椰子油)或礦物油(諸如液體石蠟)中來製備。油性懸浮液亦可含有至少一種增稠劑，諸如蜂蠟、硬石蠟及 鯨蠟醇。為了提供適口的油性懸浮液，可將上文已描述之甜味劑中之至少一者及/或至少一種調味劑添加至油性懸浮液中。油性懸浮液可進一步含有至少一種防腐劑，包括(但不限於)例如抗氧化劑，諸如丁基化羥基大茴香醚及α-生育酚。
可分散散劑及顆粒劑可例如藉由將至少一種式(IIa)化合物與至少一種分散劑及/或濕潤劑、至少一種懸浮劑及/或至少一種防腐劑摻和來製備。適合的分散劑、濕潤劑及懸浮劑如上文已描述。例示性防腐劑包括(但不限於)例如抗氧化劑，例如抗壞血酸。另外，可分散散劑及顆粒劑亦可含有至少一種賦形劑，包括(但不限於)例如甜味劑、調味劑及著色劑。
其至少一種式(IIa)化合物之乳劑可例如製備為水包油乳劑。包含式(IIa)化合物之乳劑之油相可以已知方式由已知成分構成。油相可由例如以下各者(但不限於)提供：植物油，諸如橄欖油及花生油；礦物油，諸如液體石蠟及其混合物。雖然該相可僅包含乳化劑，但其亦可包含至少一種乳化劑與脂肪或油或脂肪及油兩者之混合物。適合的乳化劑包括(但不限於)例如天然存在之磷脂，例如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸及己糖醇酸酐之酯或偏酯，諸如脫水山梨糖醇單油酸酯；及偏酯與環氧乙烷之縮合產物，諸如聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯。較佳地，親水性乳化劑與充當穩定劑之親脂性乳化劑一起包括在內。亦較佳包括油及脂肪兩者。乳化劑與穩定劑一起或不與穩定劑一起構成所謂的乳化蠟，且蠟與油及脂肪一起構成所謂的乳化軟膏基劑，其形成乳膏調配物之油性分散相。乳劑亦可含有甜味劑、調味劑、防腐劑及/或抗氧化劑。適合用於本發明調配物中之乳化劑及乳液穩定劑包括例如Tween 60、Span 80、鯨蠟硬脂醇、十四烷醇、單硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸鈉、單獨或含蠟之二硬脂酸甘油酯或此項技術中所熟知之其他物質。
式(IIa)化合物亦可例如經由任何醫藥學上可接受且適合的可注射形式靜脈內、皮下及/或肌內遞送。例示性可注射形式包括(但不限於)例如包含可接受之媒劑及溶劑之無菌水溶液，該等媒劑及溶劑，諸如水、林格氏溶液(Ringer's solution)及等張氯化鈉溶液；無菌水包油微乳液；及水性或油性懸浮液。
用於非經腸投與之調配物可呈水性或非水性等張無菌注射溶液或懸浮液形式。此等溶液及懸浮液可自無菌散劑或顆粒劑，使用針對用於經口投與之調配物所提及之載劑或稀釋劑中之一或多者或藉由使用其他適合的分散劑或濕潤劑及懸浮劑來製備。化合物可溶解於水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化鈉、黃蓍膠及/或各種緩衝液中。其他佐劑及投與模式在醫藥技術中較佳且廣泛已知。活性成分亦可藉由以與適合的載劑(包括生理鹽水、右旋糖或水)或與環糊精(亦即Captisol)、共溶劑增溶(亦即丙二醇)或膠束增溶(亦即Tween 80)之組合物形式注射來投與。
無菌可注射製劑亦可為無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如呈1,3-丁二醇中之溶液的形式。在可接受之媒劑及溶劑中，可採用的有水、林格氏溶液及等張氯化鈉溶液。另外，無菌不揮發性油習知用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和的不揮發性油，包括合成的單甘油酯或二甘油酯。另外，諸如油酸之脂肪酸可用於製備可注射劑。
無菌可注射水包油微乳劑可例如藉由以下製備：1)使至少一種式(I)化合物溶解於油相，諸如大豆油與卵磷脂之混合物中；2)將含有油相之式(I)與水及甘油混合物組合；及3)處理組合以形成微乳劑。
無菌水性或油性懸浮液可根據此項技術中已知之方法製備。舉例而言，無菌水性溶液或懸浮液可用無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑，諸如1,3-丁二醇製備；且無菌油性懸浮液可用無菌無毒可接受之 溶劑或懸浮介質，諸如無菌不揮發性油(例如合成的單甘油酯或二甘油酯)及脂肪酸(諸如油酸)製備。
可用於本發明之醫藥組合物中之醫藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑包括(但不限於)離子交換劑；氧化鋁；硬脂酸鋁；卵磷脂；自乳化藥物遞送系統(SEDDS)，諸如d-α-生育酚聚乙二醇1000丁二酸酯；用於醫藥劑型之界面活性劑，諸如Tweens、聚乙氧基化菌麻油(諸如CREMOPHOR界面活性劑(BASF))或其他類似聚合遞送基質；血清蛋白質，諸如人類血清白蛋白；緩衝物質，諸如磷酸鹽；甘胺酸；山梨酸；山梨酸鉀；飽和植物脂肪酸之部分甘油酯混合物；水；鹽或電解液，諸如魚精蛋白硫酸鹽；磷酸氫二鈉；磷酸氫鉀；氯化鈉；鋅鹽；膠態二氧化矽；三矽酸鎂；聚乙烯吡咯啶酮；基於纖維素之物質；聚乙二醇；羧甲基纖維素鈉；聚丙烯酸酯；蠟；聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物；聚乙二醇及羊毛脂。環糊精(諸如α-環糊精、β-環糊精及γ-環糊精)或經化學改質之衍生物(諸如羥烷基環糊精，包括2-羥丙基-環糊精及3-羥丙基-環糊精)或其他溶解的衍生物亦可有利地用於增強本文所描述之式之化合物的遞送。
本發明之醫藥學上活性化合物可根據藥劑學習知方法經處理以產生用於向包括人類及其他哺乳動物之患者投與之藥劑。醫藥組合物可經歷諸如滅菌之習知醫藥操作及/或可含有習知佐劑，諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、緩衝液等。另外可用腸溶衣製備錠劑及九劑。此類組合物亦可包含佐劑，諸如濕潤劑、甜味劑、調味劑及芳香劑。
所投與之化合物之量及用本發明之化合物及/或組合物治療疾病病況之給藥方案視多種因素而定，該等因素包括個體之壽命、體重、性別、醫學病況；疾病類型；疾病嚴重程度；投與途徑及頻率；及所採用之特定化合物。因此，給藥方案可廣泛變化，但可常規地使用標 準方法確定。約0.001至100mg/kg體重，較佳約0.0025與約50mg/kg體重之間且最佳約0.005至10mg/kg體重之間的日劑量可為適當的。日劑量可以每天一至四次劑量投與。其他給藥時程包括每週一次劑量及每兩天週期一次劑量。
出於治療目的，本發明之活性化合物通常與一或多種適當的佐劑組合以指示投與途徑。若經口投與，則化合物可與乳糖、蔗糖、澱粉粉末、烷酸之纖維素酯、纖維素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸及硫酸之鈉鹽及鈣鹽、明膠、阿拉伯膠、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮及/或聚乙烯醇摻和且隨後經製錠或囊封以便適宜投與。此類膠囊或錠劑可含有如活性化合物於羥丙基甲基纖維素中之分散液中可提供之控制釋放調配物。
本發明之醫藥組合物包含至少一種式(IIa)化合物且視情況包含選自醫藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑之其他試劑。本發明之替代組合物包含本文所描述之式(IIa)化合物或其前藥及醫藥學上可接受之載劑、佐劑或媒劑。
效用
本發明化合物調節激酶活性，包括調節Btk。可藉由本發明化合物調節之其他類型之激酶活性包括(但不限於)激酶之Tec家族，諸如BMX、Btk、ITK、TXK及Tec及其突變體。
因此，式(IIa)化合物在治療與激酶活性調節及尤其Btk活性選擇性抑制相關的病況方面具有效用。此類病況包括B細胞介導之疾病，其中由於細胞內信號傳導結果，調節細胞激素含量。
如本文所使用，術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」涵蓋反應性及預防性措施中之任一者或兩者，例如經設計以抑制或延緩疾病或病症發作、實現症狀或疾病病狀之完全或部分減少及/或緩解、改善、減輕或治癒疾病或病症及/或其症狀之措施。
鑒於其作為Btk之選擇性抑制劑之活性，式(IIa)化合物適用於治療細胞激素相關病況，分別包括(但不限於)發炎疾病，諸如克羅恩氏(Crohn's)及潰瘍性結腸炎、哮喘、移植物抗宿主病、慢性阻塞性肺病；自體免疫疾病，諸如格雷夫氏病(Graves' disease)、類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬；破壞性骨骼病症，諸如骨骼再吸收疾病、骨關節炎、骨質疏鬆、多發性骨髓瘤相關骨骼病症；增生性病症，諸如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病；血管生成病症，諸如包括實體腫瘤、眼血管再生及嬰兒血管瘤之血管生成病症；傳染病，諸如敗血症、敗血性休克及志賀桿菌病(shigellosis)；神經退化性疾病，諸如阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、由創傷性損傷引起之腦缺血或神經退化性疾病；致癌性及病毒性疾病，諸如轉移性黑素瘤、卡堡氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、多發性骨髓瘤及HIV感染及CMV視網膜炎、AIDS。
更特定而言，可用本發明化合物治療之特定病況或疾病包括(但不限於)胰臟炎(急性或慢性)、哮喘、過敏症、成人呼吸窘迫症候群、慢性阻塞性肺病、絲球體腎炎、類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、硬皮病、休格連氏症候群、慢性甲狀腺炎、格雷夫氏病、自體免疫胃炎、糖尿病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫嗜中性球減少症、血小板減少症、異位性皮炎、慢性活性肝炎、重症肌無力、多發性硬化症、發炎性腸病、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、牛皮癬、移植物抗宿主病、內毒素誘發之發炎反應、肺結核、動脈粥樣硬化、肌肉退化、惡病質、牛皮癬性關節炎、萊特爾氏症候群(Reiter's syndrome)、痛風、創傷性關節炎、風疹關節炎、急性關節膜炎、胰腺β細胞病、藉由大量嗜中性白血球浸潤表徵之疾病、類風濕性脊椎炎、痛風性關節炎及其他關節炎病況、川崎病(Kawasaki disease)、慢性發炎性脫髓鞘多發性神經病(CIDP)、皮肌炎、葡萄膜炎、抗因子VIII疾病、僵直性 脊椎炎、重症肌無力、古巴士德氏病(Goodpasture's disease)、抗磷脂症候群、ANCA相關脈管炎、皮肌炎/多發性肌炎、腦型瘧疾、慢性肺部發炎疾病、矽肺病、肺部類肉瘤病、骨骼再吸收疾病、同種異體移植排斥反應、歸因於感染之發熱及肌痛、繼發於感染之惡病質、骨髓形成、瘢痕組織形成、潰瘍性結腸炎、發熱、流感、骨質疏鬆、骨關節炎、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、轉移性黑素瘤、卡堡氏肉瘤、多發性骨髓瘤、敗血症、敗血性休克及志賀桿菌病、阿茲海默氏病、帕金森氏病、由創傷性損傷引起之腦缺血或神經退化性疾病、血管生成病症(包括實體腫瘤、眼血管再生及嬰兒血管瘤)、病毒性疾病(包括急性肝炎感染(包括A型肝炎、B型肝炎及C型肝炎))、HIV感染及CMV視網膜炎、AIDS、ARC或惡性腫瘤及疱疹、中風、心肌缺血、中風中之缺血、心臟病發作、器官低氧症、血管增生、心臟及腎臟再灌注損傷、血塞、心臟肥大、凝血酶誘發之血小板凝集、內毒素血症及/或中毒性休克症候群、與前列腺素內過氧化物酶合成酶-2相關的病況及尋常天疱瘡。
較佳治療方法為其中病況選自克羅恩氏及潰瘍性結腸炎、同種異體移植排斥反應、類風濕性關節炎、牛皮癬、僵直性脊椎炎、牛皮癬性關節炎、尋常天疱瘡及多發性硬化症之彼等者。或者較佳治療方法為其中病況選自包括由中風產生之腦缺血再灌注損傷及由心肌梗塞產生之心臟缺血再灌注損傷的缺血再灌注損傷之彼等者。另一較佳治療方法為其中病況為多發性骨髓瘤之治療方法。
另外，本發明之Btk抑制劑抑制誘導性促炎性蛋白質，諸如前列腺素過氧化物合成酶-2(PGHS-2)(亦稱為環加氧酶-2(COX-2))之表現。因此，額外Btk相關病況包括水腫、鎮痛、發熱及疼痛，諸如神經肌肉疼痛、頭痛、由癌症引起之疼痛、牙痛及關節炎疼痛。本發明化合物亦可用於治療獸病毒感染，諸如慢病毒感染，包括(但不限於) 馬傳染性貧血病毒；或逆轉錄病毒感染，包括貓免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒及大免疫缺陷病毒。
當本文使用術語「Btk相關病況」或「Btk相關疾病或病症」時，各意欲涵蓋所有以上鑑定之病況，如同詳細重複一樣，以及受Btk激酶活性影響之任何其他病況。
「治療有效量」意欲包括當以單獨或組合形式投與以抑制Btk時有效之本發明化合物之量。
一個實施例提供用於治療此類Btk激酶相關病況之方法，其包含向有需要之個體投與至少一種式(IIa)化合物。可投與治療此類病況之治療有效量。可採用本實施例之方法以治療Btk激酶相關病況，諸如治療過敏性病症及/或自體免疫及/或發炎疾病，包括(但不限於)SLE、類風濕性關節炎、多發性血管炎、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、重症肌無力、過敏性鼻炎、多發性硬化症(MS)、移植排斥反應、I型糖尿病、膜性腎炎、發炎性腸病、自體免疫溶血性貧血、自體免疫甲狀腺炎、冷及熱凝集素病、伊萬斯症候群、溶血性尿毒症症候群/血栓性血小板減少性紫癜症(HUS/TTP)、類肉瘤病、休格連氏症候群、周邊神經病(例如格林-巴利症候群)、尋常天疱瘡及哮喘。
治療Btk激酶相關病況之方法可包含單獨或彼此組合投與至少一種式(IIa)化合物及/或適用於治療此類病況之其他適合的治療劑。可投與治療有效量之至少一種式(IIa)化合物及治療此類病況之其他適合的治療劑。因此，「治療有效量」亦意欲包括能有效地治療Btk激酶相關病況之所主張之化合物之組合的量。化合物組合較佳為協同組合。如例如Chou等人，Adv.Enzyme Regul.,22：27-55(1984)所描述之協同作用在化合物效應(在此情況下，Btk之抑制)在組合投與時大於化合物作為單一藥劑單獨投與時之累加效應時出現。一般而言，協同效應在化合物之次佳濃度下最清楚地表明。協同作用可表現在與單獨組分相 比，組合之較低細胞毒性、增加的抗Btk作用或一些其他有益作用。
此類其他治療劑之例示包括皮質類固醇、咯利普蘭(rolipram)、鈣磷酸蛋白、細胞激素抑制消炎藥(CSAID)、如美國專利第4,200,750號中所揭示之4-取代之咪唑并[1,2-A]喹噁啉、介白素-10、糖皮質激素、水楊酸鹽、氧化氮及其他免疫抑制劑；核轉位抑制劑，諸如去氧斯匹胍素(DSG)；非類固醇消炎藥(NSAID)，諸如布洛芬(ibuprofen)、塞內昔布(celecoxib)及羅非昔布(rofecoxib)；類固醇，諸如潑尼松(prednisone)或地塞米松(dexamethasone)；抗病毒劑，諸如阿巴卡韋(abacavir)；抗增生劑，諸如甲胺喋呤、來氟米特(leflunomide)、FK506(他克莫司(tacrolimus)、PROGRAF®)；細胞毒性藥物，諸如硫唑嘌呤(azathiprine)及環磷醯胺；TNF-α抑制劑，諸如替尼達普(tenidap)、抗TNF抗體或可溶性TNF受體及雷帕黴素(rapamycin)(西羅莫司(sirolimus)或RAPAMUNE®)或其衍生物。
當與本發明化合物組合使用時，上述其他治療劑可例如以Physicians' Desk Reference(PDR)中所指示或如一般熟習此項技術者以其他方式測定之彼等量使用。在本發明之方法中，此類其他治療劑可在本發明化合物投與之前、同時或之後投與。本發明亦提供能夠治療Btk激酶相關病況，包括如上文所描述之IL-1、IL-6、IL-8、IFNγ及TNF-α介導之病況的醫藥組合物。
本發明組合物可含有如上文所描述之其他治療劑且可例如根據諸如醫藥調配物領域中熟知之彼等技術，藉由採用習知固體或液體媒劑或稀釋劑以及對於所需投與模式適當的類型之醫藥添加劑(例如賦形劑、黏合劑、防腐劑、穩定劑、調味劑等)來調配。
另一實施例提供適用於療法中之式(IIa)化合物。在本實施例中，療法中之用途可包括投與治療有效量之式(IIa)化合物。
本發明亦提供式(IIa)化合物之用途，其用於製造供治療或預防過 敏性病症及/或自體免疫及/或發炎疾病用之藥物。在本實施例中，用於製造藥物之用途可包括投與治療有效量之式(IIa)化合物以便於預防過敏性病症及/或自體免疫及/或發炎疾病之治療。
本發明亦提供式(IIa)化合物之用途，其用於製造供治療癌症用之藥物。本實施例可包括用於製造藥物之用途，其包括投與治療有效量之式(IIa)化合物以便於預防過敏性病症及/或自體免疫及/或發炎疾病之治療。
本發明進一步包括包含一或多種式(IIa)化合物及醫藥學上可接受之載劑的組合物。
「醫藥學上可接受之載劑」係指用於將生物活性劑遞送至動物，尤其哺乳動物之技術中普遍接受之介質。醫藥學上可接受之載劑根據一般技術者範圍內的多個因素調配。此等因素包括(但不限於)所調配之活性劑的類型及性質；投與含該試劑之組合物的個體；組合物之預期投與途徑；及所靶向之治療適應症。醫藥學上可接受之載劑包括水性及非水性液體介質，以及多種固體及半固體劑型。此類載劑可包括多種不同成分及除活性劑以外的添加劑，此類其他成分出於一般技術者熟知之多種原因(例如穩定活性劑、黏合劑等)包括於調配物中。適合的醫藥學上可接受之載劑及涉及其選擇之因素之描述見於多種容易獲得之來源中，諸如Remington's Pharmaceutical Sciences，第17版(1985)，其以全文引用之方式併入本文中。
式(IIa)化合物可藉由適用於待治療之病況之任何手段投與，其可視定點治療需要或待遞送藥物之量而定。對於皮膚相關疾病而言，局部投與通常較佳，且對於癌或癌前病況而言，全身治療較佳，但亦涵蓋其他遞送模式。舉例而言，化合物可經口遞送，諸如呈錠劑、膠囊、顆粒劑、散劑或液體調配物(包括糖漿劑)形式；局部遞送，諸如呈溶液、懸浮液、凝膠或軟膏形式；舌下、經頰、非經腸遞送，諸如 藉由皮下、靜脈內、肌肉內或胸骨內注射或輸注技術(例如呈無菌可注射水性或非水性溶液或懸浮液形式)；經鼻遞送，諸如藉由吸入噴霧；局部遞送，諸如呈乳膏或軟膏形式；經直腸遞送，諸如呈栓劑形式；或經脂質體遞送。可投與含有無毒醫藥學上可接受之媒劑或稀釋劑之劑量單位調配物。化合物可以適用於立即釋放或延長釋放之形式投與。立即釋放或延長釋放可用適合的醫藥組合物實現，或尤其在延長釋放之情況下用諸如皮下植入物或滲透泵之裝置實現。
用於局部投與之例示性組合物包括局部載劑，諸如Plastibase(用聚乙烯膠化之礦物油)。
用於經口投與之例示性組合物包括懸浮液，其可含有例如微晶纖維素用於賦予鬆散的褐藻酸或海藻酸鈉作為懸浮劑、作為黏度增強劑之甲基纖維素及甜味劑或調味劑(諸如此項技術中已知之彼等者)；及立即釋放錠劑，其可含有例如微晶纖維素、磷酸二鈣、澱粉、硬脂酸鎂及/或乳糖及/或其他賦形劑、黏合劑、增量劑、崩解劑、稀釋劑及潤滑劑(諸如此項技術中已知之彼等者)。本發明化合物亦可藉由舌下及/或經頰投與，例如用模製、壓縮或凍乾錠劑經口遞送。例示性組合物可包括快速溶解稀釋劑，諸如甘露糖醇、乳糖、蔗糖及/或環糊精。此類調配物中亦可包括高分子量賦形劑，諸如纖維素(AVICEL®)或聚乙二醇(PEG)；用以輔助黏膜黏附之賦形劑，諸如羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素鈉(SCMC)及/或順丁烯二酸酐共聚物(例如Gantrez)；及用以控制釋放之試劑，諸如聚丙烯酸共聚物(例如Carbopol 934)。亦可添加潤滑劑、滑動劑、調味劑、著色劑及穩定劑以便易於製造及使用。
用於經鼻氣霧劑或吸入投與之例示性組合物包括溶液，其可含有例如苯甲醇或其他適合的防腐劑、用以增強吸收及/或生物可用性之吸收促進劑及/或其他溶解劑或分散劑，諸如此項技術中已知之彼 等者。
用於非經腸投與之例示性組合物包括可注射溶液或懸浮液，其可含有例如適合的無毒非經腸可接受之稀釋劑或溶劑，諸如甘露糖醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等張氯化鈉溶液或其他適合的分散劑或潤濕劑及懸浮劑(包括合成的單甘油酯或二甘油酯)及脂肪酸(包括油酸)。
用於經直腸投與之例示性組合物包括栓劑，其可含有例如適合的無刺激性賦形劑，諸如可可脂、合成的甘油酯或聚乙二醇，其在常溫下為固體但在直腸腔內液化及/或溶解以釋放藥物。
本發明化合物之治療有效量可藉由一般熟習此項技術者測定且包括每天約0.05至1000mg/kg、1至1000mg/kg、1至50mg/kg、5至250mg/kg、250至1000mg/kg體重活性化合物之哺乳動物之例示性劑量，其可以單一劑量或單獨分次劑量(諸如每天1至4次)形式投與。應理解，任何特定個體之特定劑量水準及劑量頻率可改變且其將視多種因素而定，該等因素包括所採用之特定化合物之活性；彼化合物之代謝穩定性及作用時長；個體之物種、壽命、體重、一般健康狀況、性別及飲食；投與模式及時間；分泌速率；藥物組合；及特定病況之嚴重程度。治療之較佳個體包括動物，最佳為哺乳動物物種，諸如人類及家養動物，諸如狗、貓、馬及其類似動物。因此，當本文使用術語「患者」時，此術語意欲包括所有個體，最佳為受Btk酶含量介導影響之哺乳動物物種。
在下文所描述之分析中之一或多者中測試如以下「實例」章節中指定之式(I)化合物之實例。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以2nM或小於2nM，例如0.001至2nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測。此實施例中包括以1nM及小於1nM，例如0.001至1nM之IC50值抑制Btk酶之式 (IIa)化合物。此實施例之其他化合物以0.5nM及小於0.5nM，例如0.001至0.5nM之IC50值抑制Btk酶。
在一個實施例中，式(IIa)化合物在抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量方面具有適用的效能，其IC50值為450nM或小於450nM，例如0.1至450nM。此實施例中包括在以150nM或小於150nM，例如0.1至150nM之IC50值且以60nM或小於60nM，例如0.1至60nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量方面具有效能的式(IIa)化合物。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以2nM或小於2nM，例如0.001至2nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測，且以450nM或小於450nM，例如0.1至450nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以2nM或小於2nM，例如0.001至2nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測，且以150nM或小於150nM，例如0.1至150nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以2nM或小於2nM，例如0.001至2nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測，且以60nM或小於60nM，例如0.1至60nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以1nM及小於1nM，例如0.001至1nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測，且以450nM或小於450nM，例如0.1至450nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以1nM及小於1nM，例如0.001至1nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測，且以150 nM或小於150nM，例如0.1至150nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以1nM或小於1nM，例如0.001至1nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測，且以60nM或小於60nM，例如0.1至60nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以0.5nM及小於0.5nM，例如0.001至0.5nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測，且以450nM或小於450nM，例如0.1至450nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以0.5nM及小於0.5nM，例如0.001至0.5nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk醇分析所量測，且以150nM或小於150nM，例如0.1至150nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
在一個實施例中，式(IIa)化合物以0.5nM或小於0.5nM，例如0.001至0.5nM之IC50值抑制Btk酶，如人類重組Btk酶分析所量測，且以60nM或小於60nM，例如0.1至60nM之IC50值抑制抗人類IgM刺激之拉莫斯RA1 B細胞中之細胞內鈣通量。
式(IIb)化合物具有作為分析，諸如本文所揭示之人類全血Btk不活化分析中之探針分子之效用。
製備方法
本發明化合物可以熟習有機合成技術者熟知之多種方法製備。本發明化合物可使用下文所描述之方法以及有機合成化學技術中已知之合成方法或如熟習此項技術者所瞭解之其變化形式合成。較佳方法包括(但不限於)下文所描述之方法。反應在適合於所採用之試劑及材料且適用於實現轉化的溶劑或溶劑混合物中進行。熟習有機合成技術 者應理解，分子上存在的官能團應與所提出之轉化相符。有時此將需要作出判斷以修改合成步驟順序或選擇一種特定方法流程而非另一種，從而獲得所需本發明化合物。
熟習有機合成技術者將認識到，中間化合物或式(I)化合物中所存在之一些官能基可能對用於其製備或其轉化成其他中間物或式(I)化合物之反應條件中之一些為不穩定或者不適合的。在此等情況下，該等官能基可藉由轉化成對將採用之反應條件穩定或更適用的替代官能基而受到保護。此等受保護之官能基可隨後在合成後期轉化回初始官能基。實例為呈甲酸酯形式之甲酸之保護、呈第三丁氧基羰基(Boc)衍生物或苯甲氧羰基(Cbz)衍生物形式之一級胺或二級胺之保護或呈2-三甲基矽烷基乙氧基甲基(SEM)衍生物形式之咔唑或四氫咔唑氮之保護。保護基之用途在文獻中為熟知的；描述經培訓之行醫者之許多替代方案之權威性說明為Wuts,P.等人，Greene's Protective Groups in Organic Synthesis，第四版，Wiley-Interscience(2006)。
表示某些式(I)化合物之化合物3可使用流程1中所展示之方法製備。
可使經取代之咔唑甲醯胺或四氫咔唑甲醯胺1(其中Y為適當的基團，諸如Br、Cl或三氟甲烷磺醯基氧基)與硼酸或硼酸酯2(其中R為例 如H、烷基或一起形成視情況經取代之1,3,2-二氧硼烷或1,3,2-二氧硼)(其中Ar表示式(I)之基團Q中之一者，其中與咔唑或四氫咔唑部分之連接點位於Q之苯環上)反應，得到化合物3。此反應可藉由使用諸如碳酸鉀、碳酸絕或磷酸三鉀之適合的鹼及諸如肆(三苯基膦)鈀、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)或1,1'-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)之適合的催化劑，於視情況具有一或多種諸如水或乙醇之適合的共溶劑之諸如1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺或四氫呋喃之適合的溶劑中進行。此類偶合反應通常稱為鈴木-宮浦(Suzuki-Miyaura)偶合反應且在化學文獻中已知(參見例如Heravi,M.等人，Tetrahedron,68：9145(2012)及其中所引用之參考文獻)。
或者，可使用化學文獻(參見例如Ishiyama,T.等人，Tetrahedron,57：9813(2001)及其中所引用之參考文獻)中已知之方法將經取代之咔唑甲醯胺或四氫咔唑甲醯胺1轉化成對應的硼酸或硼酸酯化合物4(其中R為例如H、烷基或一起形成視情況經取代之1,3,2-二氧硼烷或1,3,2-二氧硼)。此類方法之實例為在諸如乙酸鉀之鹼及諸如1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵氯化鈀(II)之適合的催化劑存在下，於適合的溶劑中，1與諸如4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)之試劑之反應。或者，化合物1(其中Y為Br)與諸如丁基鋰或氯化異丙基鎂之有機金屬試劑之反應，繼而用諸如硼酸三甲酯或硼酸三異丙酯之硼酸酯處理，隨後繼而水解所得硼酸酯可提供硼酸4(R=H)。使用如上文所描述之鈴木-宮浦偶合反應，化合物4與適合的化合物5(其中Ar表示式(I)之基團Q中之一者，其中與咔唑或四氫咔唑部分之連接點位於Q之苯環上，且Y為適當的基團，諸如Br、Cl或三氟甲烷磺醯基氧基)之反應亦可提供化合物3。
可使用針對由化合物1製備化合物4所描述之相同方法，由化合物5製備化合物2。
在化合物3為四氫咔唑甲醯胺(其中虛線表示單鍵)且R1a及R1b彼此不同之情況下，對掌性中心將存在於R1a及R1b之連接點處，且此類化合物將以兩種對映異構體之形式存在。因此，化合物3可分離為外消旋混合物，或若化合物3係由化合物1或化合物4(其為單一對映異構體或非外消旋對映異構體混合物)製備，則化合物3可分離為單一對映異構體或非外消旋對映異構體混合物。若化合物3含有對掌性中心且不為單一對映異構體，則可使用此項技術中已知之方法，諸如對掌性固定相製備型層析將其分離成兩種單一對映異構體。
在化合物3之某些情況下，R3不為氫；且Ar為具有不為H之R4之苯環。在此等情況下，位阻可能造成圍繞鍵標記之a之有限旋轉，且化合物3a顯示對掌性(稱為旋轉對映異構現象)且可以兩種對映異構體3b及3c之形式存在，如流程2中所示。在諸如對掌性固定相層析之某些條件下，對映異構阻轉異構體在層析圖中可觀測為兩個單獨峰。此類化合物可分離為對映異構體之混合物，或可使用此項技術中已知之方法，諸如固定相製備型層析分離對映異構體。在適當的儲存及處理條件下，分離的對映異構體可為可分離且穩定的。
在某些情況下，化合物3為四氫咔唑甲醯胺(其中虛線表示單鍵) 且R1a及R1b彼此不同；R3不為氫；且Ar為具有不為H之R4之苯環。在此情況下，存在兩個對掌性中心：如上文所描述之R1a之連接點及鍵標記a。因此，四種非鏡像異構體為可能的(3e、3f、3g及3h)，如流程3中所示。化合物3d可因此以所有四種非鏡像異構體之混合物或單一非鏡像異構體或兩種或大於兩種非鏡像異構體之混合物之形式存在。非鏡像異構體對(3e及3h或3f及3g)之外消旋混合物為可能的。如上文所描述，可使用文獻中已知之方法，諸如對掌性固定相層析分離非鏡像異構體。
在某些情況下，化合物3可由對掌性四氫咔唑甲醯胺1或4之單一對映異構體(其中R3不為氫)製備。若Ar為具有不為H之R4之苯環，則兩種非鏡像異構體之混合物可由得到化合物3之鈴木-宮浦反應產生。實例為展示於流程3中之3i及3j，其中R1、R3及R4均不為氫。由適當的化合物1或4之一種對映異構體形成之化合物3i將為非鏡像異構體3e及3f之混合物，而由適當的化合物1或4之另一對映異構體形成之化合物3j將為非鏡像異構體3g及3h之混合物。如上文所描述，可使用文獻中已知之方法，諸如層析或選擇性結晶來分離此等非鏡像異構體。
在1或4為對掌性四氫咔唑甲醯胺之一些情況下，對掌性誘導可在鈴木-宮浦偶合反應期間進行，得到化合物3，其中R3不為H且Ar為具有不為H之R4之苯環。在此等情況下，可獲得非鏡像異構體之混合物，其不為等莫耳混合物；亦即，化合物3可為非鏡像異構體之混合物，其中相比於具有相反絕對組態之鍵a之一或多種非鏡像異構體，在更大程度上存在具有一種絕對組態之鍵a之非鏡像異構體中之一或多者。
可使用流程4中所說明之方法製備由7表示之某些式(I)化合物。
此等方法涉及使帶有一級胺或二級胺之化合物6(亦即，其中XH表示式(I)之基團Q，其中R7a、R7b、R7c或R7d按需要經H置換)與適當的試劑Q'-Z(其中Q'按需要表示R7a、R7b、R7c或R7d或此類基團之前驅體，且Z表示諸如Cl或OH之脫離基)反應，得到化合物7，其中XQ'表示由此類反應產生之式(I)之基團Q中之一者。胺之此類反應為文獻中 已知的。此類反應之一個實例為化合物6之胺與甲酸醯氯或甲酸酐之醯化，其通常於諸如四氫呋喃、乙酸乙酯、乙腈或二氯甲烷之適合的溶劑中，通常在諸如三乙胺、二異丙基乙胺、吡啶之鹼或諸如氫氧化鈉或碳酸鉀之無機鹼水溶液存在下進行。或者，可使用諸如吡啶之溶劑，在此情況下溶劑亦可充當鹼。
流程4中所展示之反應之另一實例為化合物6之胺與甲酸之醯化，其使用文獻中已知之多種醯胺偶合試劑中之任一者，例如六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)參(二甲胺基)鏻(亦稱為BOP或卡斯特羅試劑(Castro's reagent))、六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲(亦稱為HATU)或諸如N,N'-二環己基碳化二亞胺或1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(亦稱為EDC)及諸如1-羥基苯并三唑(亦稱為HOBT)或1-羥基-7-氮雜苯并三唑(亦稱為HOAT)之試劑之組合。此類反應通常於諸如乙酸乙酯、二氯甲烷、四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺或N-甲基吡咯啶-2-酮之適合的溶劑中，在諸如三乙胺或二異丙基乙胺之適合的鹼存在下進行。
可用於製備化合物7(其中Q'為SO2CH=CH2)之流程4中所展示之反應之另一實例為於諸如二氯甲烷或四氫呋喃之適合的溶劑中，在諸如三乙胺或二異丙基乙胺之鹼存在下用2-氯乙烷磺醯氯處理化合物6之胺。在此情況下，可形成中間物2-氯乙磺醯胺，其在鹼存在下可能經歷HCl消除得到所需乙烯磺醯胺。
可如流程5中所示製備流程4之某些化合物6(其中XH表示適合的經取代之3-胺基苯基、適合的1,2,3,4-四氫異喹啉基、適合的吲哚啉基、適合的異吲哚啉基或適合的1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)。
使用如上文所描述之鈴木-宮浦偶合(流程1)，化合物1與硼酸或硼酸酯8(其中XP類似於流程4中之XH；P可為H或適合的胺保護基，諸如第三丁氧基羰基(Boc)或苯甲氧羰基(Cbz)，其作為胺之保護基在文獻中為已知的)之反應可在必要時移除保護基P之後提供對應的化合物6。若化合物8中之P表示H，則可直接獲得化合物6。
類似於流程1中所說明之方法，製備流程4之化合物6(其中XH表示適合的2-取代-3-胺基苯基、適合的1,2,3,4-四氫異喹啉基、適合的吲哚啉基、適合的異吲哚啉基或適合的1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)之替代方法亦展示於流程5中。使用如上文所描述之鈴木-宮浦偶合，流程1之硼酸或硼酸酯4(其中R為例如H、烷基或一起形成視情況經取代之1,3,2-二氧硼烷或1,3,2-二氧硼)與化合物9(其中Y為適合的脫離基，諸如Br、Cl或三氟磺醯氧基)之反應亦可提供化合物6。如上文所描述，P可為H或P可為適合的保護基，在此情況下去保護可提供化合物6。
此外，可使用針對由化合物1製備化合物4(流程1)所描述之相同方法，由化合物9製備化合物8。
可如流程6中所示製備表示流程4之某些化合物6之化合物13。
使用文獻中已知之方法，化合物1與諸如氧氯化磷之脫水劑之反應可提供腈10。用諸如胺基吡咯啶或胺基哌啶(由HN-X'-NP、11表示，其中P可表示諸如Cbz或Boc之適合的保護基)之適合的受單保護之二胺處理化合物10可提供對應的化合物12。化合物10轉化成化合物12可使用諸如參(二亞苄基丙酮)二鈀之適合的鈀催化劑、諸如2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯二萘(亦稱為BINAP)或4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃(亦稱為氧雜蒽膦(Xantphos))之配位體及諸如碳酸銫或第三丁醇鈉之鹼，於諸如1,4-二噁烷、甲苯、N,N-二甲基乙醯胺或N-甲基吡咯啶-2-酮之適合的溶劑中實現。通常稱為布赫瓦爾德(Buchwald)偶合之此反應在文獻中為熟知的(參見例如Surry,D.等人，Angew.Chem.,47：6338(2008)及其中所引用之參考文獻)。可藉由在適合的條件下進行處理，例如藉由與硫酸水溶液一起加熱來使化合物12之腈部分水解成對應的醯胺，得到化合物13，其為流程4之化合物6之實例。保護基P(若存在於化合物12中)可使用化學文獻中已知之方法在此反應期間移除，或者可在腈水解步驟之前或之後移除。
將注意到，化合物12及13含有自11之3-胺基吡咯啶或3-胺基哌啶產生之對掌性中心。因此，若化合物1為非對掌性的，則化合物12及 13可以外消旋混合物、單一對映異構體或對映異構體之非外消旋混合物之形式存在。在化合物1為對掌性四氫咔唑甲醯胺之情況下，化合物12及13可以非鏡像異構體之混合物或單一非鏡像異構體之形式存在。若化合物1為非對掌性的且11為單一對映異構體，則可形成化合物12之單一對映異構體。若化合物1為非對掌性的且11為對映異構體之外消旋或非外消旋混合物，則將產生化合物12之兩種對映異構體，其可例如藉由對掌性固定相層析分離。若化合物1為對掌性的且單一對映異構體及11為單一對映異構體，則可形成化合物12之單一非鏡像異構體，但若11為對映異構體之外消旋或非外消旋混合物，則將形成化合物12之兩種非鏡像異構體之混合物。若化合物1為對映異構體之對掌性且外消旋或非外消旋混合物且11為單一對映異構體，則將形成化合物12之兩種非鏡像異構體之混合物，但若11為對映異構體之外消旋或非外消旋混合物，則將形成化合物12之四種非鏡像異構體之混合物。可例如藉由對掌性或非對掌性固定相層析分離非鏡像異構體之混合物。
可藉由流程7中所展示之方法製備化合物14，其為式(I)化合物之實例。可在諸如肆(三苯基膦)鈀之催化劑存在下使化合物15(其可藉由將諸如三甲基矽烷基乙氧基甲基之適合的保護基安裝於化合物10上來製備；參見流程6)與諸如16之適合的有機鋅化合物反應，得到化合物17。此類鈀催化之有機鋅化合物之偶合通常稱為根岸(Negishi)偶合，其在化學文獻中為熟知的(參見例如Negishi,E.等人於De Meijere,A.等人編，Metal-Catalyzed Cross-Coupling Reactions，第二版，第815頁，Wiley-VCH(2004)中)。化合物17之保護基之移除及在諸如肆(三苯基膦)鈀之催化劑存在下與諸如三正丁基(乙烯基)錫烷之適當的有機錫烷之反應可提供化合物18。此類鈀催化之有機錫化合物之偶合通常稱為史帝爾(Stille)偶合，其在化學文獻中為熟知的(參見例如Stille,J., Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.,25：508(1986))。使用流程6或相關方法中所描述之方法，藉由水解將化合物18之腈轉化成甲醯胺可提供化合物14。
可使用流程8中所展示之程序製備用於製備式(I)化合物之化合物1(參見流程1)。
使用文獻中已知之方法，例如藉由用含亞硝酸鈉之鹽酸水溶液處理，繼而用氯化錫(II)還原來轉化成對應的重氮鹽，可將經取代之2-胺基苯甲酸19(文獻中已知，或使用文獻中已知之程序製備)轉化成呈鹽酸鹽形式之對應的2-肼基苯甲酸20。於具有適當的催化劑(例如含鹽酸之乙醇、含對甲苯磺酸或三氟乙酸之甲苯或乙酸)之適合的溶劑中(在此情況下溶劑亦可充當催化劑)，20與適合的環己酮21之反應可提供對應的經取代之四氫咔唑22。此反應通常稱為費歇爾(Fischer)吲哚合成且在化學文獻中為已知的(例如參見Kamata,J.等人，Chem.Pharm.Bull.,52：1071(2004))。或者，費歇爾吲哚合成可以兩個連續步驟進行：在適合的條件下，20可與21反應(諸如在視情況具有適合的催化劑(諸如對甲苯磺酸)之諸如乙醇或甲苯之適當溶劑中)以形成中間物腙，其可分離且隨後在適合的條件(例如，含鹽酸之乙醇、含氯化鋅之乙酸或含三氟乙酸之甲苯)下進一步反應得到化合物22。
使用化學文獻中已知之方法，例如藉由用乙二醯氯或亞硫醯氯處理，繼而用氨處理，將化合物22轉化成對應的醯氯；或藉由在諸如碳化二亞胺或EDC與HOAT之混合物之偶合劑存在下用氨或氯化銨處理化合物22，可將化合物22之甲酸轉化成化合物23之對應的甲醯胺(其為流程1中所展示之化合物1之實例)。在R1b及R2b均為H之化合物23之情況下，可使用化學文獻中已知之方法，於適合的溶劑中，例如藉由用諸如DDQ之氧化劑處理化合物23來進行化合物23至對應的咔唑25(其為流程1中所展示之化合物1之另一實例)之轉化。
或者，醯胺形成及氧化步驟之順序可反過來以將化合物22(其中R1b及R2b均為H)轉化成化合物25。因此，可使用上文所描述之程序或類似程序使化合物22(其中R1b及R2b均為H)氧化，得到對應的化合物24。可隨後再次使用上文所描述之程序或類似程序將化合物24之甲酸轉化成一級醯胺，得到對應的化合物25。
化合物22及23(其中R1a及R1b彼此不同)含有對掌性中心且因此以兩種對映異構體之形式存在。如流程8中所示製備化合物22及23可提供外消旋產物，其可用於製備式(I)化合物，如流程1及6中所示。或者，使用諸如對掌性固定相層析之熟知方法，化合物22及23可拆分成分離的對映異構體。
熟習有機合成技術者將認識到，一些取代基R1a可能與用於製備如流程1、4、5、6、7及8中所示之式(I)化合物或中間化合物之反應條件不相容。在此等情況下，在某些合成步驟期間，不同取代基可替代R1a且使用化學文獻中已知之方法在合成之適當階段轉化成R1a。或者，在一些情況下，在某些合成步驟期間，適合的保護基可用於保護R1a且在合成之適當階段移除。此類情況對於熟習此項技術者將為顯而易見的。此類合成轉化之一些實例展示於流程9中。
流程1中所展示之帶有某些取代基R1a及R1b之化合物1可由前驅體化合物26製備。可使用流程8中所展示之方法，但3-側氧基環己烷甲酸乙酯取代流程8中之化合物21，製備化合物26。(化合物26之一些實例描述於文獻中，例如美國專利第8,084,620號中之中間物47-2及48-1及實例73-1。)化合物26之甲酸酯至R1a及R1b之一些轉化展示於流程9中；此等以及其他中之一些亦在美國專利第8,084,620號之實例中說明。流程9中之化合物27、29及31為流程1中所展示之化合物1之實例。
藉由用含諸如氫化鋰鋁之適合的還原劑之諸如四氫呋喃之適合的溶劑處理，可使化合物26之酯部分還原成化合物27(Ra及Rb均為H)之對應的一級甲醇。或者，藉由用含諸如甲基氯化鎂或甲基鋰之適合的試劑之諸如四氫呋喃之適合的溶劑處理，可將化合物26之酯部分轉化成化合物27(Ra及Rb均為甲基)之對應的三級甲醇。
例如藉由用含水性氫氧化鋰或氫氧化鈉之諸如甲醇、乙醇或四氫呋喃之適合的共溶劑處理，可使化合物26之酯部分水解成化合物28之對應的甲酸。例如藉由轉化成N,O-二甲基羥肟酸鹽(通常稱為魏因勒布(Weinreb)醯胺)，繼而用諸如甲基氯化鎂或甲基鋰之試劑處理，且隨後用諸如硼氫化鈉之適合的還原劑還原由此形成之酮，可將化合物28之甲酸部分轉化成化合物27(Ra及Rb中之一者為H且另一者為甲基)之二級甲醇部分。或者，使用多種方法中之任一者，諸如轉化成醯氯，繼而用氨或一級胺或二級胺處理，或藉由在諸如HATU、BOP 或EDC與HOBT或HOAT之組合之適合的偶合試劑存在下用氨或氯化銨或一級胺或二級胺處理，可將化合物28之甲酸部分轉化成化合物29之醯胺。
在化合物26之虛線表示單鍵之情況下，藉由用含諸如雙(三甲基矽烷基)胺基鋰或二異丙基胺基鋰之鹼之諸如四氫呋喃之適合的溶劑處理化合物26，且用諸如碘甲烷之烷化劑處理所得陰離子，可使帶有酯部分之碳原子烷基化，得到其中R'為甲基之化合物30。可隨後藉由用於製備如上文所描述之化合物27之相同方法，將化合物30之酯部分轉化成化合物31(其中Ra及Rb均為H、均為甲基或一者為H且另一者為甲基)之甲醇部分。
用於製備式(I)化合物之流程1之某些化合物1亦可使用流程10中所展示之程序製備。
由如流程8(參見例如美國專利第8,084,620號，中間物48-1)中所示之適當的2-肼基苯甲酸製備之化合物32可用適當的鹵化試劑處理，得到化合物33，其中R3為鹵素原子。舉例而言，用諸如N-氯丁二醯亞胺之氯化試劑處理化合物32可得到化合物33，其中R3為Cl，且用諸如1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷-雙(四氟硼酸酯)[SELECTFLUOR®]之氟化試劑處理化合物32可得到化合物33，其中R3為F。可使用文獻中已知之方法(其中一些描述於流程9之論述中)實現化合物33至對應的化合物34(其為流程1之化合物1之實例)之轉化。
如流程11中所示，可將化合物35轉化成化合物36，其為流程1之 化合物5之實例。類似地，可將化合物37轉化成化合物38，其為流程1之化合物2之實例。
在流程11中，Y表示適合的基團，諸如Br、Cl或三氟甲烷磺醯基氧基；(RO)2B表示硼酸或硼酸酯；且XH表示式(I)之基團Q，其經由連至Q之苯環之一鍵連接至式(I)之咔唑或四氫咔唑部分，但其中R7a、R7b、R7c或R7d按需要經H置換；且Q'表示R7a、R7b、R7c或R7d。可使用針對流程4中化合物6至化合物7之相似轉化所描述之相同方法實現化合物35至化合物36之轉化及化合物37至化合物38之轉化。此外，可使用針對流程1中化合物1至化合物4之轉化所描述之方法實現化合物35至化合物37之轉化及化合物36至化合物38之轉化。
在一些情況下，當將中間化合物轉化成另一中間化合物或式(I)化合物需要一個以上合成反應時，可改變個別步驟之順序。熟習有機合成技術者將認識到此類情況。流程11中展示一個實例。化合物35至化合物38之轉化可藉由(1)將化合物35之胺轉化成化合物36之經取代之胺，繼而(2)將化合物36之基團Y轉化成化合物38之硼酸或硼酸酯來進行。或者，化合物35至化合物38之相同轉化可藉由(1)將化合物35之基團Y轉化成化合物37之硼酸或硼酸酯，繼而(2)將化合物37之胺轉化成化合物38之經取代之胺來進行。另一實例展示於流程8中。化合物22至化合物25之轉化可藉由(1)將化合物22之甲酸轉化成化合物23之甲醯胺，繼而(2)使化合物23氧化成咔唑25來進行。或者，化合物22至化合物25之相同轉化可藉由(1)使化合物22氧化成咔唑24，繼而 (2)將化合物24之甲酸轉化成化合物25之甲醯胺來進行。
實例
本發明化合物及用於製備本發明化合物之中間物可使用以下實例中所展示之程序及相關程序製備。用於此等實例中之方法及條件及此等實例中製備之實際化合物並不意欲為限制性的，但意欲表明可如何製備本發明化合物。當未藉由本文所描述之程序製備時，用於此等實例中之起始物質及試劑通常為市售的或在化學文獻中報導或可藉由使用化學文獻中所描述之程序製備。本發明在以下實例中進一步定義。應理解實例僅為了說明而提供。依據以上論述及實例，熟習此項技術者可判明本發明之基本特徵，且在不背離其精神及範疇的情況下，可進行各種變化及修改以使本發明適於各種用途及條件。因此，本發明不受本文所闡述之說明性實例限制，而是由其隨附之申請專利範圍限定。
在給定實例中，片語「乾燥及濃縮」通常係指使用無水硫酸鈉或硫酸鎂自含溶液之有機溶劑移除大部分殘餘水，繼而過濾且自濾液(通常在減壓下且在適合於待製備材料之穩定性之溫度下)移除溶劑。管柱層析通常使用急驟層析技術(Still,W.等人，J.Org.Chem.,43：2923(1978))或利用預裝填矽膠套筒，使用Isco中壓層析設備(Teledyne Corporation)，用所指示之溶劑或溶劑混合物溶離來進行。使用大小適於待分離材料之量、通常用不斷提高之濃度之甲醇或乙腈/水梯度溶離、亦含有0.05%或0.1%三氟乙酸或10mM乙酸銨、在適合於管柱大小及待實現之分離之溶離速率下之反相管柱(Waters SunFire C18、Waters XBridge C18、Phenomenex Axia C18、YMC S5 ODS或其類似管柱)來進行製備型高壓液相層析(HPLC)。超臨界流體層析(SFC)為使用含有超臨界或亞臨界流體CO2之移動相及極性有機調節劑(諸如醇)之正相HPLC形式，其用於分離對掌性化合物。(White,C.等人，J. Chromatography A,1074：175(2005))。使用針對個別情況所描述之條件進行對映異構體或非鏡像異構體之對掌性SFC分離。藉由液相層析-質譜分析使用電噴霧電離獲得質譜資料。
在Bruker-AXS APEX2 CCD系統上，使用Cu Kα輻射(λ=1.5418Å)收集單晶x射線繞射資料。用APEX2軟體套件軟體套件/程序套(參見APEX2 User Manual,v1.27；Bruker AXS,Inc.,WI 53711 USA)進行所量測到之強度資料之索引及處理。當指示時，在資料收集期間，將晶體冷卻於Oxford Cryosystems冷沈澱流冷卻器(Cosier,J.等人，J.Appl.Cryst.,19：105(1986))之冷流中。結構藉由直接方法求解且基於使用結晶封裝SHELXTL(參見APEX2 User Manual,v1.27；Bruker AXS,Inc.,WI 53711 USA)所觀測到之反射精確化。經由全矩陣最小二乘法精確化所導出之原子參數(座標及溫度因數)。精確化時最小化之函數為ΣW(|FO|-|FC|)2。R定義為Σ ||FO|-|FC||/Σ |FO|，而RW=[ΣW(|FO|-|FC|)2/ΣW |FO|2]1/2，其中w為基於所觀測到之強度誤差之適當的加權函數。在所有精確化階段檢測差值映射。將氫引入具有各向同性溫度因數之理想化位置中，但不改變氫參數。根據Stout等人，X-Ray Structure Determination：A Practical Guide,MacMillan(1968)中所描述之程序獲得單位晶胞參數。
使用ChemBioDraw Ultra版本12.0(CambridgeSoft)測定化學名稱。
縮寫
中間物1 5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
中間物1A：5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
用環己酮(2.32mL，22.4mmol)處理4-溴-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽[根據美國專利第8,084,620號，中間物46-1，步驟1製備](5.00g，18.69mmol)於乙酸(80mL)中之懸浮液，且在100℃-105℃下加熱混合物3.5小時。使混合物冷卻至室溫且濃縮。用EtOAc濕磨殘餘物，且藉由過濾收集沈澱物，用EtOAc沖洗且風乾。固體於水中用音波處理，且再 次藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且乾燥，得到呈暗黃色粉末狀之5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(3.05g，56%產率)。質譜m/z 294,296(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.94(1 H,br.s.),10.80(1 H,s),7.34(1 H,d,J=8.1Hz),7.04(1 H,d,J=8.1Hz),2.84(2 H,br.s.),2.60(2 H,br.s.),1.63(4 H,br.s.)。
中間物1：
用HOAT(0.833g，6.12mmol)及EDC(1.173g，6.12mmol)處理5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(1.50g，5.10mmol)於THF(40mL)中之混合物，且在室溫下攪拌懸浮液。2.25小時後，用無水氨鼓泡混合物約2分鐘，形成黏稠漿液。攪拌混合物30分鐘，隨後用氨再次鼓泡約1分鐘。再攪拌2小時後，用水及EtOAc稀釋混合物。分離各層且再次用EtOAc萃取水相。經合併之有機層用0.1M NaOH水溶液洗滌兩次，隨後依次用1M HCl水溶液及飽和鹽水洗滌，乾燥且濃縮，得到呈淡棕色固體狀之5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(1.105g，67%產率，純度約90%)，其不經進一步純化即使用。質譜m/z 293,295(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.95(1 H,s),8.02(1 H,br.s.),7.44(1 H,d,J=7.9Hz),7.38(1 H,br.s.),7.14(1 H,d,J=8.1Hz),2.99(2 H,br.s.),2.75(2 H,br.s.),1.78(4 H,br.s.)。
中間物2 (RS)-5-溴-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
遵循用於製備中間物1之程序，將(RS)-3-甲基環己酮轉化成(RS)-5-溴-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。質譜m/z 307,309(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.93(s,1H),8.02(br.s., 1H),7.44(d,J=8.1Hz,1H),7.42-7.31(m,1H),7.14(d,J=8.1Hz,1H),3.22-3.10(m,1H),2.97-2.79(m,2H),2.32(dd,J=16.7,9.5Hz,1H),1.98-1.81(m,2H),1.50-1.33(m,1H),1.07(d,J=6.6Hz,3H)。
中間物3 5-溴-2,2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
遵循用於製備中間物1之程序，將3,3-二甲基環己酮轉化成5-溴-2,2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。質譜m/z 321,323(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.92(s,1H),8.02(br.s.,1H),7.44(d,J=8.1Hz,1H),7.38(br.s.,1H),7.15(d,J=8.1Hz,1H),2.98(t,J=6.2Hz,2H),2.55(s,2H),1.57(t,J=6.4Hz,2H),1.00(s,6H)。
中間物4 (RS)-5-溴-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
遵循用於製備中間物1之程序，將(RS)-3-三氟甲基環己酮轉化成(RS)-5-溴-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。質譜m/z 361,363(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.19(s,1H),8.05(br.s.,1H),7.49(d,J=7.9Hz,1H),7.41(br.s.,1H),7.18(d,J=7.9Hz,1H),3.39-3.24(m,1H),3.13(dd,J=16.0,4.3Hz,1H),3.00-2.65(m,3H),2.19(d,J=12.8Hz,1H),1.74-1.58(m,1H)。
中間物5 (RS)-5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
中間物5A：4-溴-2,5-二氟苯甲酸
用含2.5M正丁基鋰之己烷(1.04mL，2.59mmol)逐滴處理於乾冰-丙酮浴中冷卻之1,4-二溴-2,5-二氟苯(640mg，2.35mmol)於無水乙醚(10mL)中之溶液。在-78℃下攪拌溶液30分鐘，隨後用一塊乾冰處理。5分鐘後移除冷卻浴，且攪拌混合物另外30分鐘，同時升溫至室溫。用EtOAc及水稀釋混合物。分離有機相且用NaHCO3飽和水溶液洗滌兩次。經合併之水相用1M HCl水溶液酸化，用DCM萃取兩次，且乾燥經合併之有機相且濃縮得到呈白色固體狀之4-溴-2,5-二氟苯甲酸(297mg，53%產率)。
中間物5B：4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽
在95℃下加熱4-溴-2,5-二氟苯甲酸(2.50g，10.6mmol)及肼(3.81mL，121mmol)於N-甲基-2-吡咯啶酮(2mL)中之混合物4小時。將經冷卻之混合物倒入於NaCl冰浴中冷卻之經劇烈攪拌之6M HCl水溶液(400mL)中。藉由過濾收集所得沈澱物，用6M HCl水溶液(200mL)洗滌且在真空下乾燥，得到呈黃色固體狀之4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(1.88g，71%純度，44%產率)，其不經進一步純化即使用。
中間物5B之替代合成：
用亞硝酸鈉(3.24g，47.0mmol)於水(15.7mL)中之溶液逐滴處理在NaCl冰浴上攪拌之2-胺基-4-溴-5-氟苯甲酸(10.0g，42.7mmol)於37% HCl水溶液(42.7mL)與水(14.3mL)之混合物中之懸浮液。當添加完成時，攪拌混合物另外30分鐘。逐滴添加氯化錫(II)二水合物(28.9g，128mmol)於37% HCl水溶液(27.5mL)中之溶液。移除冷卻浴且在室溫下攪拌混合物45分鐘。過濾黏稠懸浮液且用水充分洗滌所收集之沈澱物，且在減壓下乾燥隔夜。用MeOH濕磨固體，伴隨音波處理，且藉由過濾收集沈澱物，用MeOH洗滌且乾燥。濃縮濾液且用DCM濕磨殘餘物。藉由過濾收集所得固體且乾燥，且組合兩種固體，得到呈白色固體狀之4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(5.37g，44%產率)。質譜m/z 249,251(M+H)+。
中間物5C：5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
在78℃下攪拌4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(5.00g，17.5mmol)及(RS)-3-三氟甲基環己酮(4.07g，24.5mmol)於乙酸(8.0mL)中之混合物18小時。使混合物冷卻至室溫且濃縮。使殘餘物懸浮於EtOAc中且藉由過濾收集沈澱物且乾燥。濃縮濾液且使殘餘物懸浮於DCM中。藉由過濾收集沈澱物且乾燥，且組合兩種沈澱物，得到呈淡橙色固體狀之5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(4.10g，55%產率)。質譜m/z 380,382(M+H)+。
中間物5：
用三乙胺(3.67mL，26.3mmol)處理5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(2.00g，5.26mmol)、NH4Cl(2.81g， 52.6mmol)及HATU(2.20g，5.79mmol)於DMF(25mL)中之溶液，且在室溫下攪拌混合物90分鐘。添加冰水(30mL)且攪拌混合物30分鐘。藉由過濾收集沈澱物且用水(60mL)洗滌。使所收集之固體懸浮於甲苯(30mL)中兩次且在真空下濃縮，隨後乾燥。對殘餘物進行用10% MeOH/EtOAc-己烷(0%-100%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到呈淡黃色固體狀之5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(1.55g，74%產率)。質譜m/z 379,381(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 7.46(d,J=9.9Hz,1H),3.46(dd,J=16.1,4.4Hz,1H),3.11(dd,J=16.4,5.3Hz,1H),3.06-2.93(m,1H),2.92-2.80(m,1H),2.79-2.59(m,1H),2.37-2.23(m,1H),1.86-1.65(m,1H)。
中間物6 5-溴-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
遵循用於將中間物5B轉化成中間物5之程序，將4,4-二氟環己酮轉化成5-溴-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。質譜m/z 347,349(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.34(s,1H),8.12(br.s.,1H),7.64(d,J=10.1Hz,1H),7.57(br.s.,1H),3.54(t,J=14.4Hz,2H),2.97(t,J=6.6Hz,2H),2.31(tt,J=13.9,6.7Hz,2H)。
中間物7 4-溴-7-氰基-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物7A：(RS)-5-溴-2-氰基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
在110℃下加熱(RS)-3-側氧基環己烷甲腈(0.200g，1.62mmol)及4-溴-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽[根據美國專利第8,084,620號，中間物46-1，步驟1製備](0.434g，1.62mmol)於乙酸(4.3mL)中之混合物3小時。使混合物冷卻至室溫，用乙醚(8mL)稀釋且攪拌5分鐘。藉由過濾收集沈澱物，用乙醚洗滌且乾燥，得到呈固體狀之(RS)-5-溴-2-氰基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(403mg，78%產率)。質譜m/z 319,321(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.15(br.s.,1H),11.16(s,1H),7.55(d,J=7.9Hz,1H),7.25(d,J=8.1Hz,1H),3.47-3.36(m,1H),3.24-2.99(m,4H),2.09(q,J=5.9Hz,2H)。
中間物7B：4-溴-7-氰基-9H-咔唑-1-甲酸
用DDQ(541mg，2.39mmol)處理(RS)-5-溴-2-氰基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(346mg，1.08mmol)於THF(7mL)中之溶液，且在60℃下加熱混合物2小時。使混合物冷卻至室溫，與來自5-溴-2-氰基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(50.0mg，0.157mmol)及DDQ(78.0mg，0.345mmol)之相同反應之混合物組合，且用乙醚(20mL)稀釋經組合之混合物且攪拌。藉由過濾收集所得沈澱物，用乙醚洗滌且乾燥，得到4-溴-7-氰基-9H-咔唑-1-甲酸(346mg，89%產率)。質譜m/z 315,317(M+H)+。
中間物7：
用28%氨水(0.21mL)及DIEA(0.30mL，1.72mmol)處理4-溴-7-氰基-9H-咔唑-1-甲酸(340mg，1.08mmol)、EDC(248mg，1.30mmol)及HOBT(198mg，1.30mmol)於THF(10mL)中之混合物，且在室溫下攪拌混合物隔夜。添加水且用EtOAc萃取混合物兩次。藉由過濾收集不可溶物質，用EtOAc洗滌且乾燥，得到呈白色固體狀之4-溴-7-氰基-9H-咔唑-1-甲醯胺(196mg，58%產率)。質譜m/z 314,316(M+H)+。
中間物8 4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺
遵循用於製備中間物7之程序，將環己酮及4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽[中間物5B]轉化成4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 307,309(M+H)+,290,292(M+H-NH3)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.73(dd,J=8.1,0.9Hz,1H),7.83(d,J=9.9Hz,1H),7.69-7.63(m,1H),7.54(ddd,J=8.2,7.1,1.2Hz,1H),7.29(ddd,J=8.1,7.1,1.0Hz,1H)。
中間物9 4-溴-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
遵循用於將中間物7A轉化成中間物7之程序，將5-溴-6-氟-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸[中間物5C]轉化成4-溴-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 416,418(M+H+CH3CN)+。 1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.83(d,J=8.6Hz,1H),8.00(d,J=0.7Hz,1H),7.89(d,J=9.8Hz,1H),7.52(dd,J=8.4,1.1Hz,1H)。
中間物10 4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物10A：5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯
在室溫下攪拌5-溴-8-胺甲醯基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯[根據美國專利第8,084,620號，中間物48-1中所描述之程序合成](0.100g，0.277mmol)及N-氯丁二醯亞胺(由甲苯再結晶；0.037g，0.277mmol)於CCl4(10mL)及DMF(2mL)中之混合物112小時。過濾混合物且用CCl4洗滌所收集之沈澱物且在真空下乾燥隔夜。藉由用己烷，隨後用EtOAc-己烷(30%，隨後50%)溶離之矽膠(40g)管柱層析純化殘餘物，得到呈蓬鬆白色固體狀之5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.071g，65%產率)。質譜m/z 395,397(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.13(s,1H),8.77(d,J=8.6Hz,1H),8.53(d,J=1.1Hz,1H),8.36(br.s.,1H),8.29(s,1H),7.89(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),7.74(br.s.,1H),4.38(q,J=7.0Hz,2H),1.38(t,J=7.0Hz,3H)。
中間物10A之替代製備：
向5-溴-8-胺甲醯基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(90g，249mmol)、CCl4(2900mL)及NMP(600mL)之混合物中添加N-氯丁二醯亞胺(36.1g， 271mmol)。在45℃下攪拌反應混合物2小時。在冷卻至室溫之後，藉由真空過濾收集固體。在60℃下於MeOH(1L)中攪拌固體2小時且使懸浮液冷卻至室溫。藉由過濾收集固體且乾燥，得到5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(69.5g，167mmol，67%產率，95%純度)。在減壓下濃縮濾液以移除CCl4。用水(2L)稀釋殘餘NMP溶液。藉由過濾收集所得沈澱物且乾燥，得到額外5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(13.7g，25%產率，75%純度)。
中間物10：
於乾冰-丙酮浴中冷卻5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(4.14g，10.5mmol)於THF(200mL)中之溶液，且歷經30分鐘用含1.6M甲基鋰之己烷(45.8mL，73.2mmol)逐份處理。在-78℃下攪拌混合物60分鐘，隨後用NH4Cl飽和水溶液逐份處理。添加水且用EtOAc萃取混合物兩次。將經合併之有機相用水洗滌兩次。合併所有水相且用DCM萃取，且用水洗滌此有機相。合併所有有機相，乾燥且濃縮。殘餘物由EtOAc結晶得到固體。藉由用EtOAc-己烷(0%-100%梯度)溶離之矽膠(330g)管柱層析純化來自母液濃縮之殘餘物，得到額外固體。組合兩種固體，得到呈淡黃色固體狀之4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(3.13g，78%產率)。質譜m/z 363,365,(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.71(s,1H),8.56(d,J=8.6Hz,1H),8.29(br.s.,1H),8.17(s,1H),7.97(d,J=1.3Hz,1H),7.66(br.s.,1H),7.42(dd,J=8.6,1.8Hz,1H),1.52(s,6H)。
中間物10之替代製備：
在氮氣下於丙酮-乾冰浴中使5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(58.56g，148mmol)於THF(700mL)中之懸浮液冷卻至-15℃。以使得內部溫度保持在-15℃與-10℃之間的速率，用含3M甲基氯化鎂之THF(395mL，1.19mol)逐滴處理混合物。5小時後，將混合物倒 入3個容器中，該等容器各含有約1.5L碎冰及500mL NH4Cl飽和水溶液。用EtOAc萃取所得混合物且乾燥並濃縮經合併之有機相。將殘餘物與來自額外2種批料之物質組合，一種以146mmol5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯為起始物質，且另一種以142mmol5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-9H-咔唑-2-甲酸乙酯為起始物質，且於丙酮(250mL)中攪拌1小時。藉由過濾收集沈澱物，用己烷洗滌且乾燥，得到呈固體狀之4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(134.56g)。濃縮濾液且於丙酮中再次攪拌殘餘物1小時，形成沈澱物，其藉由過濾收集，用己烷洗滌且乾燥，得到呈固體狀之額外4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(7.36g)，總共141.92g(88%產率)。將來自第二次過濾之濾液與來自其他批料之不純物質組合，且進行用EtOAc-己烷(40%-100%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到額外4-溴-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。
中間物11 (RS)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
中間物11A：4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽
將亞硝酸鈉(3.03g，43.9mmol)於水(14.8mL)中之溶液逐滴添加至在-10℃下在NaCl冰浴上以使溫度不超過0℃之速率攪拌之2-胺基-4-溴-5-氯苯甲酸(10.0g，39.9mmol)於37% HCl水溶液(39.9mL)及水(13.3mL)中之懸浮液中。在0℃下攪拌所得懸浮液15分鐘，隨後用水 合氯化錫(II)(22.7g，120mmol)於37% HCl水溶液(17mL)中之溶液處理。使所得混合物升溫至室溫且攪拌60分鐘。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且風乾隔夜，得到呈灰白色固體狀之4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(12.86g，96%產率)。質譜m/z 365,267(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.05(br.s.,1H),7.95(s,1H),7.55(s,1H)。
中間物11B：(RS)-5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
在105℃下加熱4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽(12.89g，37.6mmol)、(RS)-3-側氧基環己烷甲酸乙酯(7.03g，41.3mmol)及乙酸(6.45mL，113mmol)於甲苯(188mL)中之懸浮液隔夜。16小時後，添加更多的乙酸(6mL)及3-(RS)-側氧基環己烷甲酸乙酯(2.00g)，且在110℃下加熱混合物4.5小時。濃縮混合物且將殘餘物與甲苯(100mL)及TFA(20mL)組合。在90℃下加熱懸浮液隔夜。濃縮經冷卻之混合物且使殘餘物懸浮於EtOAc中。藉由過濾收集所得固體，用EtOAc洗滌且風乾，得到呈黃色固體狀之(RS)-5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(11.0g，73%產率)。質譜m/z 400,402(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.44(br.s.,1H),11.24(s,1H),7.69(s,1H),4.12(qd,J=7.1,2.3Hz,2H),3.23-2.81(m,5H),2.23-2.09(m,1H),1.91-1.75(m,1H),1.22(t,J=7.0Hz,3H)。
中間物11C：(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯
遵循用於製備中間物7之程序，將(RS)-5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸轉化成呈淡棕色固體狀之(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(8.54g，78%產率)。質譜m/z 399,401(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.44(br.s.,1H),11.24(s,1H),7.69(s,1H),4.12(qd,J=7.1,2.3Hz,2H),3.23-2.81(m,5H),2.23-2.09(m,1H),1.91-1.75(m,1H),1.22(t,J=7.0Hz,3H)。此物質混雜(10%-15%)有(RS)-5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺。質譜m/z 370,372,374(M+H)+。不純物質用於後續反應中。
中間物11：
於乾冰-丙酮浴中冷卻不純(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(7.03g，17.6mmol)於THF(200mL)中之溶液，且歷經40分鐘用含1.6M甲基鋰之THF(66.0mL，106mmol)逐份處理。60分鐘後，在-78℃下用NH4Cl飽和水溶液緩慢處理混合物且攪拌10分鐘，同時升溫至室溫。用DCM萃取混合物3次，且依次用水及鹽水洗滌經合併之有機相且乾燥並濃縮。藉由用EtOAc-己烷(0%-100%梯度)溶離之矽膠(120g)管柱層析純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(RS)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(4.66g)。質譜m/z 385,387(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.08(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.76(s,1H),7.50(br.s.,1H),3.28(d,J=5.5Hz,1H),2.94(dd,J=17.1,4.7Hz,1H),2.79-2.66(m,1H),2.49-2.39(m,1H),2.14(d,J=9.5Hz,1H),1.66(td,J=11.4,4.1Hz,1H),1.33(qd,J=12.4,5.2Hz,1H),1.15(s,6H)。
中間物12 (RS)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
中間物12A：(RS)-5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
在110℃下加熱4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽[中間物5B](5.37g，18.8mmol)、(RS)-3-側氧基環己烷甲酸乙酯(3.52g，20.7mmol)及乙酸(3.23mL，56.4mmol)於甲苯(90mL)中之混合物20小時。在減壓下移除溶劑且用甲苯(43mL)及TFA(11mL)稀釋殘餘物。在90℃-94℃下攪拌混合物隔夜。經冷卻之混合物用EtOAc稀釋，用音波處理且藉由過濾收集沈澱物。濃縮濾液且用音波處理使殘餘物懸浮於EtOAc中，產生另一沈澱物，其亦藉由過濾收集且用EtOAc洗滌。經組合之固體用MeOH濕磨兩次，得到固體。濃縮經合併之濾液且用MeOH濕磨殘餘物，得到額外固體。組合固體，得到呈淡黃色固體狀之(RS)-5-溴-2-乙氧基羰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(3.38g)。質譜m/z 384,386(M+H)+。
中間物12B：(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯
在室溫下攪拌(RS)-5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔 唑-8-甲酸(0.513g，1.34mmol)、EDC(0.384g，2.00mmol)及HOBT(0.307g，2.00mmol)於THF(10mL)及DCM(1.7mL)中之混合物20分鐘。添加NH4OH水溶液(28%，0.078mL，2.00mmol)，且在室溫下攪拌混合物60分鐘。混合物用EtOAc稀釋且用NaHCO3飽和水溶液洗滌兩次，隨後用鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層且乾燥並濃縮經合併之有機層。於MeOH中用音波處理濕磨殘餘物，得到呈黃色固體狀之(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.432g，84%產率)。質譜m/z 383,385(M+H)+。
中間物12：
歷經30分鐘用含1.6M甲基鋰之乙醚(49mL，78mmol)逐滴處理在-78℃下之(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(10.0g，26.1mmol)於THF(200mL)中之溶液。在-78℃下攪拌混合物45分鐘，隨後歷經25分鐘用額外甲基鋰溶液(33mL)處理。在-78℃下攪拌混合物額外90分鐘，隨後用NH4Cl飽和水溶液處理且升溫至室溫。混合物用EtOAc稀釋且依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層。乾燥且濃縮經合併之有機層。使殘餘物溶解於EtOAc(約100mL)中且經由用矽膠墊封頂之矽藻土墊過濾。進一步用EtOAc(約1000mL)洗滌矽藻土及矽膠。濃縮經合併之濾液，得到呈淡黃色固體狀之(RS)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(9.24g，96%產率)。質譜m/z 369,371(M+H)+。
中間物13及14 (R)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-13)及(S)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-14)
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：Chiralpak IA(3×25cm，5μm)；移動相：在124mL/min下之CO2-MeOH(50：50)，100巴，45℃；樣品製劑：39mg/mL於MeOH-DMSO(4：1)中；注入：2.33mL)分離(RS)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物11](2.35g)之樣品。自管柱溶離之第一峰提供呈黃色固體狀之(R)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物13](1.15g)。質譜m/z 385,387(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.07(s,1H),8.12(br.s.,1H),7.75(s,1H),7.57-7.45(m,1H),4.23(s,1H),3.27(d,J=4.7Hz,1H),2.93(dd,J=17.2,4.7Hz,1H),2.78-2.67(m,1H),2.48-2.39(m,1H),2.16-2.08(m,1H),1.69-1.59(m,1H),1.37-1.26(m,1H),1.14(s,6H)。自管柱溶離之第二峰提供呈灰白色固體狀之(S)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物14](0.92g)。質譜m/z 385,387(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.06(s,1H),8.12(br.s.,1H),7.74(s,1H),7.49(br.s.,1H),4.23(s,1H),3.27(d,J=5.0Hz,1H),2.93(dd,J=17.1,4.6Hz,1H),2.72(t,J=11.8Hz,1H),2.48-2.37(m,1H),2.12(d,J=9.2Hz,1H),1.69-1.59(m,1H),1.38-1.24(m,1H),1.14(s,6H)。
藉由使化合物溶解於過量1,2-二氯乙烷-EtOAc-乙酸中且在室溫下緩慢蒸發溶劑以得到二乙酸溶劑合物製備之晶體之單晶x射線分析來確證中間物13之絕對組態。單位晶胞尺寸：a=11.690(2)Å、b=7.0901(9)Å、c=14.427(3)Å、α=90°、β=110.607(5)°、γ=90°；體積=1119.2(3)Å3；單位晶胞中分子之體積/數量=560Å3；空間群： P21；中間物30之分子/不對稱單元(Z')：1；密度(計算)1.501g/cm-3。在室溫下之部分原子座標給出於表1中且結構之描繪給出於圖1中。
中間物15及16 (S)-5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-15)及(R)-5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-16)
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：OD-H(3×25cm，5μm)；移動相：在150mL/min下之CO2-MeOH(65：35)，100巴，40℃；樣品製劑：66.5mg/mL於MeOH中；注入：1.2mL)分離(RS)-5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號，實例73-1中所描述之程序合成](4.03g)之樣品。自管柱溶離之第一峰提供呈淡黃色固體狀之(S)-5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物15](1.79g)。自管柱溶離之第二峰提供呈淡黃色固體狀之(R)-5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物16](1.82g)。
中間物17及18 (R)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-17)及(S)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(I-18)
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：Chiralpak OD-H(3×25cm，5μm)；移動相：在150mL/min下之CO2-MeOH(70：30)，40℃)分離(RS)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物12]之樣品。自管柱溶離之第一峰提供(R)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物17]。自管柱溶離之第二峰提供(S)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物18]。兩種對映異構體之質譜及1H NMR光譜相同。質譜m/z 369,371(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.96(s,1H),8.07(br.s.,1H),7.55(d,J=10.3Hz,1H),7.50(br.s.,1H),4.24(s,1H),3.26(dd,J=15.8,4.4Hz,1H),2.93(dd,J=17.1,4.6Hz,1H),2.72(t,J=11.7 Hz,1H),2.48-2.40(m,1H),2.12(d,J=9.2Hz,1H),1.70-1.62(m,1H)及1.32(qd,J=12.4,5.3Hz,1H)。
替代超臨界流體層析分離：
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：Chiralpak AD-H(3×25cm，5μm)；移動相：在150mL/min下之CO2-MeOH(55：45)，40℃)分離(RS)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物12]之樣品。自管柱溶離之第一峰提供(S)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物18]。自管柱溶離之第二峰提供(R)-5-溴-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物17]。
中間物19 4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物19A：4-溴-7-乙氧基羰基-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸
在60℃下加熱(RS)-5-溴-2-(乙氧基羰基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸[中間物12A](2.87g，7.47mmol)及DDQ(3.73g，16.4mmol)於THF(45mL)中之溶液90分鐘。經冷卻之混合物用EtOAc(約50mL)稀釋且攪拌60分鐘。藉由過濾收集所得沈澱物，用EtOAc洗滌且乾燥。濃縮濾液且於MeOH中用音波處理濕磨殘餘物，過濾且用MeOH洗滌沈澱物且乾燥。組合兩種沈澱物，得到呈淡黃色固體狀之4-溴-7-乙氧基羰基-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸(2.39g，84%產率)。質譜m/z 380,382(M+H)+。
中間物19B：5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯
在室溫下攪拌4-溴-7-(乙氧基羰基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸(2.39g，6.29mmol)、EDC(1.81g，9.43mmol)及HOBT(1.44g，9.43mmol)於THF(30mL)及DCM(5mL)中之混合物20分鐘。添加NH4OH水溶液(28%，0.367mL，9.43mmol)且在室溫下攪拌混合物4小時。混合物用EtOAc稀釋，用NaHCO3飽和水溶液洗滌兩次，隨後用鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層且乾燥並濃縮經合併之有機層。於MeOH中用音波處理濕磨殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(2.26g，95%產率)。質譜m/z 379,381(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 12.02(s,1H),8.70(d,J=8.3Hz,1H),8.51(d,J=1.1Hz,1H),8.29(br.s.,1H),8.10(d,J=10.3Hz,1H),7.87(dd,J=8.5,1.5Hz,1H),7.74(br.s.,1H),4.37(q,J=6.9Hz,2H)及1.37(t,J=7.1Hz,3H)。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 8.77(d,J=8.2Hz,1H),8.36(d,J=0.9Hz,1H),7.83(d,J=8.2Hz,1H),7.46(d,J=8.2Hz,1H),4.12(q,J=7.0Hz,2H),1.58-1.36(m,4H)及1.26(t,J=7.2Hz,3H)。
中間物19B之替代合成：
在60℃下加熱5-溴-8-胺甲醯基-9H-咔唑-2-甲酸乙酯[根據美國專利第8,084,620號，中間物48-1中所描述之程序合成](0.100g，0.277mmol)及1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷雙(四氟硼酸酯)[Selectfluor®](0.100g，0.554mmol)於THF(2mL)及乙腈(2mL)中之混合物隔夜。過濾經冷卻之混合物且濃縮濾液。使用製備型反相 HPLC純化殘餘物，得到呈褐色固體狀之5-溴-8-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.035g)。
中間物19：
歷經10分鐘用含1.6M甲基鋰之乙醚(2.47mL，3.96mmol)逐滴處理在-78℃下之5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.500g，1.32mmol)於THF(9.0mL)中之溶液。在-78℃下攪拌混合物30分鐘，隨後用額外甲基鋰溶液(1.65mL，2.64mmol)處理，且在-78℃下攪拌混合物另外45分鐘。混合物用NH4Cl飽和水溶液處理且升溫至室溫。混合物用EtOAc稀釋且依次用水及鹽水洗滌。用EtOAc萃取水層，且乾燥並濃縮經合併之有機層，得到淡黃色固體，其藉由製備型反相HPLC純化。用NaHCO3飽和水溶液中和適當的溶離份且濃縮。將殘餘物分配於EtOAc與水之間且用鹽水洗滌有機層。用EtOAc萃取水層且乾燥並濃縮經合併之有機層，得到呈淡黃色固體狀之4-溴-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(0.240g，50%產率)。質譜m/z 347,349(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.58(s,1H),8.50(d,J=8.6Hz,1H),8.22(br.s.,1H),7.96(d,J=10.3Hz,1H),7.94(d,J=1.1Hz,1H),7.65(br.s.,1H),7.39(dd,J=8.5,1.5Hz,1H),5.09(s,1H)及1.51(s,6H)。
中間物19之替代合成：
於冰-水浴中冷卻5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-9H-咔唑-2-甲酸乙酯(10.0g，26.4mmol)於THF(300mL)中之溶液，且用含3.0M甲基氯化鎂之THF(70.3mL，211mmol)逐滴處理。在0℃下攪拌溶液18小時，隨後倒入1000mL於冰-水浴中冷卻之經充分攪拌之NH4Cl飽和水溶液中。所得混合物用水稀釋且用EtOAc萃取兩次。用水洗滌經合併之有機相兩次，隨後用鹽水洗滌，且乾燥並濃縮。藉由用EtOAc-DCM(20%-100%梯度)溶離之矽膠(330g)管柱層析純化殘餘物，得到4-溴-3-氟-7- (2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(6.36g，65%產率)。
中間物20 (RS)-5-溴-6-氯-2-(羥甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
於NaCl/冰浴中冷卻不純(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯[中間物11C](0.600g，1.50mmol)於THF(18.8mL)中之溶液，且用含1M氫化鋰鋁之THF(4.05mL，4.05mmol)處理。在室溫下攪拌所得黏稠懸浮液1小時，隨後用NH4Cl飽和水溶液處理。用EtOAc萃取混合物且用鹽水洗滌有機相，乾燥且濃縮。使殘餘物懸浮於EtOAc中且藉由過濾收集沈澱物且乾燥，且進行用EtOAc-己烷(80%-100%梯度)溶離之矽膠(40g)管柱層析，得到呈固體狀之(RS)-5-溴-6-氯-2-(羥甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(378mg，66%產率)。質譜m/z 357,359(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.11(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.75(s,1H),7.50(br.s.,1H),4.58(t,J=5.2Hz,1H),3.42(t,J=5.9Hz,2H),3.19(d,J=15.4Hz,1H),2.93-2.77(m,2H),2.39(dd,J=16.9,9.9Hz,1H),2.02-1.93(m,1H),1.86(br.s.,1H),1.47-1.37(m,1H)。
中間物21 (RS)-5-溴-6-氯-2-(羥甲基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
中間物21A：(RS)-5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
在115℃下加熱4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸鹽酸鹽[中間物11A](3.28g，10.86mmol)及(RS)-1-甲基-3-側氧基環己烷甲酸乙酯[其可使用PCT公開案第WO 2009/153720號，製備43或PCT公開案第WO 2013/106535號，實例254之程序製備](2.00g，10.86mmol)於乙酸(24mL)中之懸浮液。所得黏稠懸浮液用額外乙酸(12mL)稀釋，加熱另外6小時，冷卻至室溫且濃縮。用乙醚濕磨殘餘物且藉由過濾收集沈澱物且在真空下乾燥，得到呈黃色固體狀之(RS)-5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(3.01g，67%產率)。質譜m/z 414,416,418(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.22(s,1H),7.69(s,1H),4.07(qd,J=7.1,3.5Hz,2H),3.22-2.92(m,3H),2.68(s,1H),2.18-2.07(m,1H),1.87-1.76(m,1H),1.28(s,3H),1.15(t,J=7.0Hz,3H)。
中間物21B：(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯
用EDC(1.531g，7.98mmol)及HOBT(1.223g，7.98mmol)處理(RS)-5-溴-6-氯-2-(乙氧基羰基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(3.01g，7.26mmol)於DMF(10mL)中之溶液，且在室溫下攪拌1.5小時。用含0.5M NH3之1,4-二噁烷(29.0mL，14.5mmol)處理混合物且攪拌35分鐘。用水稀釋混合物，且藉由過濾收集所得沈澱物，用水洗滌且乾燥。於MeOH中濕磨固體，藉由過濾收集且乾燥，得到呈黃色 固體狀之(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(1.91g，64%產率)。質譜m/z 413,415,417(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.21(s,1H),8.14(br.s.,1H),7.77(s,1H),7.52(br.s.,1H),4.14-3.99(m,2H),3.27(d,J=17.4Hz,1H),3.13-2.92(m,2H),2.65(d,J=17.2Hz,1H),2.20-2.05(m,1H),1.79(dt,J=13.6,6.7Hz,1H),1.27(s,3H),1.14(t,J=7.0Hz,3H)。
中間物21：
在冰-水浴上攪拌(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(587mg，1.42mmol)於THF(5mL)中之懸浮液，且用氫化鋰鋁(188mg，4.97mmol)逐份處理。在0℃下攪拌混合物1小時。混合物用NH4Cl飽和水溶液處理且用DCM萃取3次。經合併之有機相用水洗滌，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(梯度20%-100%)溶離之矽膠(40g)管柱層析，得到呈黃色固體狀之(RS)-5-溴-6-氯-2-(羥甲基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(380mg，61%產率)。質譜m/z 371,373,375(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.09(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.75(s,1H),7.51(br.s.,1H),4.67-4.60(m,1H),3.30-3.20(m,2H),3.13-3.00(m,1H),2.97-2.85(m,1H),2.66(d,J=17.4Hz,1H),2.44(d,J=17.4Hz,1H),1.72-1.61(m,1H),1.58-1.47(m,1H),0.97-0.88(m,3H)。
中間物22及23 (RS)-5-溴-6-氯-N 2,N 2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺(I-22)及(RS)-5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺(I-23)
中間物22A：(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸
在室溫下攪拌不純(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯[混雜有(RS)-5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺，中間物11C](1.00g，2.50mmol)及單水合氫氧化鋰(0.250g，6.26mmol)於THF-EtOH-水混合物(3：1：1，29.4mL)中之懸浮液。15小時後，濃縮混合物。使殘餘物懸浮於水中且用1M HCl水溶液酸化(pH 1-2)。藉由過濾收集沈澱物，用水洗滌且風乾，得到呈固體狀之(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸(1.19g，78%產率)。質譜m/z 371,373,375(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.34(br.s.,1H),11.27-11.13(m,1H),8.14(br.s.,1H),7.77(d,J=1.8Hz,1H),7.52(br.s.,1H),3.23-3.11(m,1H),3.06-2.65(m,4H),2.20-2.01(m,1H),1.87-1.63(m,1H)。此物質混雜(約30%)有存在於起始物質中之(RS)-5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺。質譜m/z 370,372,374(M+H)+。不純物質用於後續反應中。
中間物22及23：
在室溫下攪拌不純(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸[混雜有(RS)-5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺](1.19g，3.20mmol)、EDC(0.921g，4.80mmol)、HOBT(0.736g，4.80mmol)及二甲胺(4.80mL，9.61mmol)於THF(47.4mL)及DCM (23.7mL)中之混合物。17小時後，將混合物分配於EtOAc與NaHCO3飽和水溶液之間。有機相用飽和鹽水洗滌，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用MeOH-EtOAc(4：96)溶離之矽膠(80g)管柱層析，得到呈固體狀之(RS)-5-溴-6-氯-N 2,N 2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺[中間物22](0.585g，44%產率)。質譜m/z 398,400,402(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.18(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.76(s,1H),7.51(br.s.,1H),3.26-3.18(m,1H),3.10-2.82(m,10H),2.06-1.96(m,1H),1.70-1.56(m,1H)。亦分離存在於起始物質中之呈固體狀之(RS)-5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺[中間物23](0.300g)。質譜m/z 370,372,374(M+H)+。
中間物24 (RS)-5-溴-N 2,N 2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺
遵循用於製備中間物22之程序，以99%產率將(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸[根據美國專利第8,084,620號，中間物49-3製備]轉化成(RS)-5-溴-N 2,N 2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺。質譜m/z 364,366(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.03(s,1H),8.02(br.s.,1H),7.45(d,J=8.1Hz,1H),7.38(br.s.,1H),7.15(d,J=8.1Hz,1H),3.21(dd,J=16.2,3.4Hz,1H),3.10-3.00(m,4H),2.98-2.81(m,6H),2.05-1.98(m,1H),1.71-1.57(m,1H)。
中間物25 (RS)-5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺
在室溫下攪拌(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸[根據美國專利第8,084,620號，中間物49-3製備](0.3g，0.890mmol)、HOBT(0.164g，1.07mmol)、DIEA(0.622mL，3.56mmol)、EDC(0.205g，1.07mmol)及NH4Cl(0.095g，1.78mmol)於DMF(5mL)中之混合物隔夜。濃縮混合物且用水及EtOAc稀釋殘餘物。過濾混合物以收集沈澱物，其用水及EtOAc洗滌且風乾，得到固體。分離濾液各層且乾燥並濃縮有機相。將殘餘物與固體組合，得到呈灰白色固體狀之(RS)-5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺，其不經進一步純化即使用。質譜m/z 336,338(M+H)+。
中間物26 (RS)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
在乾冰-丙酮浴上攪拌(RS)-5-溴-8-胺甲醯基-6-氯-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯[中間物21B](635mg，1.54mmol)於THF(10mL)中之懸浮液，且用含1.6M甲基鋰之乙醚(6.71mL，10.7mmol)逐滴處理。在-78℃下攪拌混合物30分鐘。用NH4Cl飽和水溶液處理混合物，用DCM萃取3次，且經合併之有機相用水洗滌，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(20%-100%梯度)溶離之矽膠(40g)管柱層析，得到不純物質，其再次進行用甲醇氨-DCM(3%-10%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到呈黃色固體狀之(RS)-5-溴-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(650mg，大於定量產 率，含有殘餘溶劑)，其不經進一步純化即使用。質譜m/z 399,401,403(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.04(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.75(s,1H),7.50(br.s.,1H),4.20(s,1H),3.28-3.19(m,1H),2.84(d,J=17.6Hz,1H),2.78-2.65(m,1H),1.76-1.61(m,2H),1.17(d,J=5.3Hz,6H),0.84(s,3H)。
中間物27 7-(2-羥基丙-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
用氮氣鼓泡4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號，實例73-2中所描述之程序合成](3.00g，8.64mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(2.19g，8.64mmol)及乙酸鉀(2.12g，21.6mmol)於1,4-二噁烷(30mL)中之混合物5分鐘。添加PdCl2(dppf)DCM加合物(0.353g，0.432mmol)，且用氮氣鼓泡混合物另外5分鐘。密封反應容器且在90℃下加熱隔夜。經冷卻之混合物用DCM稀釋，用水洗滌兩次，乾燥且濃縮。藉由用EtOAc-己烷溶離之矽膠管柱層析(40g+12g，堆疊管柱)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之7-(2-羥基丙-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(2.79g，82%產率)。質譜m/z 377(M+H-H2O)+。
中間物28 (RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)- 2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
遵循用於製備中間物27之程序，以79%產率將(RS)-5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號，實例73-1中所描述之程序合成]轉化成(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。質譜m/z 399(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.65(s,1H),8.00(br.s.,1H),7.50(d,J=7.5Hz,1H),7.33(br.s.,1H),7.26(d,J=7.5Hz,1H),4.20(s,1H),3.09-3.00(m,1H),2.92(dd,J=16.8,4.5Hz,1H),2.65-2.55(m,1H),2.47-2.43(m,1H),2.15-2.06(m,1H),1.74-1.64(m,1H),1.37-1.26(m,13H),1.15(m,6H)。
中間物29 5-(3-(S)-胺基哌啶-1-基)-2-(RS)-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(非鏡像異構體之混合物)
中間物29A：(RS)-5-溴-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈
用氧氯化磷(0.789mL，8.46mmol)處理(RS)-5-溴-2-甲基-2,3,4,9- 四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物2](325mg，1.06mmol)於THF(7.5mL)中之溶液，且在室溫下攪拌混合物。42小時後，濃縮混合物且於EtOAc中攪拌殘餘物。藉由過濾移除沈澱物且依次用水、NaHCO3飽和水溶液及飽和鹽水洗滌濾液，乾燥且濃縮。將殘餘物分配於EtOAc與NaHCO3飽和水溶液之間，且乾燥並濃縮有機相。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(5%-50%梯度)溶離之矽膠(40g)管柱層析，得到呈灰白色固體狀之(RS)-5-溴-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈(202mg，66%產率)。質譜m/z 289,291(M+H)+及599,601,603(2M+Na)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.89(s,1H),7.37(d,J=8.1Hz,1H),7.26(d,J=8.1Hz,1H),3.15(d,J=15.6Hz,1H),2.94-2.76(m,2H),2.33(dd,J=16.6,9.8Hz,1H),1.98-1.84(m,2H),1.43(dtd,J=13.1,10.9,5.6Hz,1H),1.09(d,J=6.6Hz,3H)。
中間物29B：(1-(8-氰基-2-(RS)-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)哌啶-3-(S)-基)胺基甲酸苯甲酯
用氮氣鼓泡(RS)-5-溴-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈(0.19g，0.657mmol)、(S)-哌啶-3-基胺基甲酸苯甲酯(0.162g，0.690mmol)、2,2'-雙(二苯基膦基)-1,1'-聯二萘(0.020g，0.033mmol)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0.030g，0.033mmol)及Cs2CO3(0.300g，0.920mmol)於1,4-二噁烷(7.30mL)中之混合物，隨後於密封容器中在100℃下在氮氣下加熱。16小時後，使混合物冷卻至室溫，用THF稀釋且經由矽藻土過濾。用THF洗滌固體且濃縮經合併之濾液。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(10%-20%梯度)溶離之矽膠(12g)管柱層析，得到呈淡 黃色固體狀之(1-(8-氰基-2-(RS)-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)哌啶-3-(S)-基)胺基甲酸苯甲酯，非鏡像異構體之混合物(0.179g，62%產率)。質譜m/z 443(M+H)+。
中間物29：
在60℃下加熱(1-(8-氰基-2-(RS)-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)哌啶-3-(S)-基)胺基甲酸苯甲酯(0.179g，0.337mmol)於80% H2SO4水溶液(1.12mL)中之懸浮液。3小時後，使所得溶液冷卻至室溫且倒到碎冰上。用KOH水溶液及Na2CO3固體將混合物之pH調節至9-10，且用3：1氯仿-異丙醇萃取。乾燥且濃縮有機相，得到呈淡棕色固體狀之5-(3-(S)-胺基哌啶-1-基)-2-(RS)-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，兩種非鏡像異構體之混合物(0.173g，99%產率)，其不經進一步純化即使用。質譜m/z 327(M+H)+。
中間物30 (S)-4-(3-胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺鹽酸鹽
中間物30A：(S)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸苯甲酯
遵循用於製備中間物29B之程序，將4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間物8]轉化成(S)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲 酸苯甲酯。質譜m/z 443(M+H)+。
中間物30：
在室溫下攪拌(S)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸苯甲酯(100mg，0.226mmol)、氯三甲基矽烷(2.0mL，15.7mmol)及水(1.0mL，55.5mmol)之混合物3天。添加額外氯三甲基矽烷(1.0mL)且持續攪拌另外一天。分離混合物之水層且濃縮，得到呈黃綠色固體狀之(S)-4-(3-胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺鹽酸鹽(78mg，95%產率)。質譜m/z 327(M+H)+。
中間物31 (S)-3-氟-4-(3-(甲胺基)哌啶-1-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
遵循用於製備中間物30之程序，但(S)-甲基(哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯取代(S)-哌啶-3-基胺基甲酸苯甲酯，將4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間物8]轉化成(S)-3-氟-4-(3-(甲胺基)哌啶-1-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺鹽酸鹽。將此物質分配於NaHCO3飽和水溶液與EtOAc之間，且乾燥並濃縮有機相，得到呈黃色固體狀之(S)-3-氟-4-(3-(甲胺基)哌啶-1-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 341(M+H)+。
中間物32 (S)-5-(3-胺基哌啶-1-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
遵循用於製備中間物29之程序，將5-溴-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物6]轉化成(S)-5-(3-胺基哌啶-1-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。質譜m/z 367(M+H)+。
中間物33 (S)-5-(吡咯啶-3-基胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
中間物33A：5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈
用氧氯化磷(1.01mL，10.9mmol)處理5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物1](355mg，1.21mmol)及THF(9mL)之混合物，且在45℃下加熱混合物。4小時後，濃縮混合物且用水處理殘餘物。藉由過濾收集所得沈澱物，依次用水、NaHCO3飽和水溶液及水洗滌，且在真空下乾燥。使殘餘固體懸浮於甲苯中且在真空下濃縮兩次，隨後進一步在真空下乾燥，得到呈棕色固體狀之5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈(322mg，87%產率)。質譜m/z 275,277(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.92(s,1H),7.37(d,J=8.1Hz,1H),7.26(d,J=8.1Hz,1H),2.98(br.s.,2H),2.73(br.s.,2H),1.80(br.s.,4H)。
中間物33B：(S)-3-((8-氰基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)胺基)吡咯啶- 1-甲酸第三丁酯
遵循用於製備中間物29B之程序，但(S)-3-胺基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代(S)-哌啶-3-基胺基甲酸苯甲酯，以77%產率將5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈轉化成(S)-3-((8-氰基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)胺基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。質譜m/z 381(M+H)+,325(M+H-C4H8)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.19(s,1H),7.25(d,J=8.1Hz,1H),6.25(d,J=8.4Hz,1H),5.19(br.s.,1H),4.17(br.s.,1H),3.72-3.52(m,1H),3.48-3.33(m,2H),3.23(d,J=10.8Hz,1H),2.91(br.s.,2H),2.65(br.s.,2H),2.20(br.s.,1H),2.03-1.89(m,1H),1.77(br.s.,4H),1.40(2s,9H)。
中間物33C：(S)-5-(吡咯啶-3-基胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈TFA鹽
使(S)-3-((8-氰基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)胺基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(317mg，0.833mmol)於DCM(5mL)中之溶液冷卻至0℃且用TFA(4mL)處理。在0℃下攪拌混合物1小時，隨後濃縮且在真空下乾燥，得到呈TFA鹽狀之(S)-5-(吡咯啶-3-基胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈(325mg)，其不經進一步純化即使用。質譜m/z 281(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 7.27(d,J=8.2Hz,1H),6.27 (d,J=8.3Hz,1H),4.53-4.32(m,1H),3.66-3.36(m,4H),3.02(br.s.,2H),2.75(br.s.,2H),2.51(td,J=14.2,8.1Hz,1H),2.30-2.10(m,1H),1.91(br.s.,4H)。
中間物33：
在60℃下加熱(S)-5-(吡咯啶-3-基胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲腈TFA鹽(325mg，0.824mmol)與80% H2SO4水溶液(2.5mL，37.5mmol)之混合物3小時。在0℃下將經冷卻之混合物添加至NaOH水溶液中(最終pH約9)，且用EtOAc萃取混合物四次。乾燥且濃縮經合併之有機層，得到呈黃色固體狀之(S)-5-(吡咯啶-3-基胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(250mg，92%產率)。質譜m/z 299(M+H)+。
中間物34 5-(吡咯啶-3-(S)-基胺基)-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(非鏡像異構體之混合物)
中間物34A：3-(S)-((8-氰基-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)胺基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(非鏡像異構體之混合物)
遵循用於製備中間物33A及33B之程序，將(RS)-5-溴-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物4]轉化成3-(S)-((8-氰基-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)胺基)吡咯啶-1-甲酸第三 丁酯，非鏡像異構體之混合物。質譜m/z 449(M+H)+,393(M+H-C4H8)+。
中間物34：
遵循用於將中間物33B轉化成中間物33之程序，將呈非鏡像異構體之混合物形式之3-(S)-((8-氰基-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)胺基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯轉化成5-(吡咯啶-3-(S)-基胺基)-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺。質譜m/z 367(M+H)+。
中間物44 N-(5-溴-2-甲氧基苯基)丙烯醯胺
依次用DIEA(0.562mL，3.22mmol)及丙烯醯氯(0.211mL，2.60mmol)處理5-溴-2-甲氧基苯胺(500mg，2.48mmol)於DCM(12mL)中之溶液，且在室溫下攪拌所得溶液。16.25小時後，在真空下濃縮溶液，得到淡棕色糊漿。對物質進行用EtOAc-己烷(20%-100%梯度)溶離之矽膠(40g)管柱層析，得到呈白色固體狀之N-(5-溴-2-甲氧基苯基)丙烯醯胺(570mg，90%產率)。質譜m/z 256,258(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.70(d,J=2.0Hz,1H),7.86(br.s.,1H),7.18(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),6.77(d,J=8.6Hz,1H),6.52-6.37(m,1H),6.36-6.21(m,1H),5.80(dd,J=10.1,1.3Hz,1H),3.91(s,3H)。
中間物45 N-(3-溴-2-甲基苯基)丙烯醯胺
用丙烯醯氯(0.218mL，2.69mmol)處理3-溴-2-甲基苯胺(500mg，2.69mmol)及DIEA(0.563mL，3.22mmol)於DCM(13.4mL)中之溶液，且在室溫下攪拌所得混合物。2小時後，混合物用EtOAc稀釋且依次用1M HCl水溶液、NaHCO3飽和水溶液及飽和鹽水洗滌。乾燥且濃縮有機相，得到呈固體狀之N-(3-溴-2-甲基苯基)丙烯醯胺(580mg，90%產率，85%純度)，其不經進一步純化即使用。質譜m/z 240,242(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.77(s,1H),7.48(d,J=7.9Hz,1H),7.42(d,J=7.9Hz,1H),7.15(t,J=8.0Hz,1H),6.51(dd,J=17.1,10.2Hz,1H),6.26(dd,J=17.2,2.0Hz,1H),5.82-5.74(m,1H),2.27(s,3H)。
中間物46 N-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)丙烯醯胺
遵循用於製備中間物44之程序，以75%產率將5-溴-2-三氟甲氧基苯胺轉化成呈白色固體狀之N-(5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基)丙烯醯胺。質譜m/z 310,312(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.79(d,J=2.4Hz,1H),7.50(br.s.,1H),7.33-7.24(m,1H),7.21-7.10(m,1H),6.54-6.43(m,1H),6.37-6.22(m,1H),5.89(dd,J=10.1,1.1Hz,1H)。
中間物47 N-(5-溴-2-氟苯基)丙烯醯胺
遵循用於製備中間物44之程序，以93%產率將5-溴-2-氟苯胺轉化 成呈褐色固體狀之N-(5-溴-2-氟苯基)丙烯醯胺。質譜m/z 244,246(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.69(dd,J=7.0,2.2Hz,1H),7.43(br.s.,1H),7.21(ddd,J=8.6,4.6,2.4Hz,1H),7.01(dd,J=10.8,8.8Hz,1H),6.56-6.43(m,1H),6.36-6.21(m,1H),5.87(dd,J=10.3,1.1Hz,1H)。
中間物48 N-(3-溴苯基)乙烯磺醯胺
在冰-水浴上攪拌3-溴苯胺(1.00mL，9.18mmol)於DCM(77mL)中之溶液，且用DIEA(2.41mL，13.8mmol)處理，隨後用2-氯乙烷磺醯氯(1.15mL，11.0mmol)逐滴處理。在室溫下攪拌混合物2小時，隨後用更多2-氯乙烷磺醯氯(0.48mL)處理，且在室溫下攪拌另外18小時。依次用1M HCl水溶液及飽和鹽水洗滌混合物，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(10%-30%梯度)溶離之矽膠(40g)管柱層析。再次對粗產物進行用DCM溶離之矽膠(24g)管柱層析，得到呈淡黃色糊漿狀之N-(3-溴苯基)乙烯磺醯胺(400mg，17%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.35-7.29(m,2H),7.20(t,J=7.9Hz,1H),7.13-7.09(m,1H),6.57(dd,J=16.4,9.8Hz,1H),6.37-6.31(m,2H),6.02(d,J=9.9Hz,1H)。
中間物49 N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺
中間物49A：3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺
用氮氣鼓泡3-溴苯胺(1.00g，5.81mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(1.55g，6.10mmol)及乙酸鉀(1.14g，11.6mmol)於1,4-二噁烷(14.5mL)中之混合物10分鐘。混合物用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.114g，0.140mmol)處理且用氮氣鼓泡另外5分鐘。將混合物加熱至回流持續2.75小時，隨後冷卻至室溫且經由矽藻土過濾。用EtOAc及THF洗滌固體。濃縮經合併之濾液且對殘餘物進行用EtOAc-己烷(10%-25%梯度)溶離之矽膠(40g)管柱層析，得到呈灰白色固體狀之3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺(1.27g，定量產率)。質譜m/z 220(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.24-7.13(m,3H),6.82-6.77(m,1H),3.64(br.s.,2H),1.35(s,12H)。
中間物49：
於冰浴中冷卻3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺(0.300g，1.37mmol)及DIEA(0.311mL，1.78mmol)於DCM(9.1mL)中之溶液，且用丙烯醯氯(0.117mL，1.44mmol)處理。在室溫下攪拌混合物40分鐘，隨後濃縮且對殘餘物進行用EtOAc-己烷(15%-40%梯度)溶離之矽膠(24g)管柱層析，得到呈白色固體狀之N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺(0.292g，78%產率)。質譜m/z 270(M+H)+。
中間物50 N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺
遵循用於製備中間物49之程序，以80%產率將2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[根據美國專利第8,084,620號，中間物50-1製備]轉化成N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺。質譜m/z 288(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.01(br.s.,1H),7.64(d,J=5.9Hz,1H),7.23(t,J=7.7Hz,1H),7.07(br.s.,1H),6.48-6.40(m,1H),6.32(br.s.,1H),5.78(d,J=9.5Hz,1H),2.49(s,3H),1.36(s,12H)。
中間物51 (E)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丁-2-烯醯胺
遵循用於製備中間物49之程序，但(E)-丁-2-烯醯氯取代丙烯醯氯，以85%產率將2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[根據美國專利第8,084,620號，中間物50-1製備]轉化成(E)-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丁-2-烯醯胺。質譜m/z 302(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.28(s,1H),7.46(d,J=7.5Hz,2H),7.15(t,J=7.7Hz,1H),6.83-6.66(m,1H),6.21(d,J=14.7Hz,1H),2.34(s,3H),1.86(dd,J=6.9,1.2Hz,3H),1.30(s,12H)。
中間物52 N-甲基-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺
中間物52A：N,2-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺
用氮氣鼓泡3-溴-N,2-二甲基苯胺(1.90g，9.50mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(2.53g，9.97mmol)及乙酸鉀(1.86g，19.0mmol)於1,4-二噁烷(23.7mL)中之混合物10分鐘。用PdCl2(dppf)DCM加合物(0.194g，0.237mmol)處理混合物且用氮氣鼓泡混合物另外5分鐘，隨後在回流下加熱。2.75小時後，使混合物冷卻至室溫，經由矽藻土過濾且用EtOAc洗滌固體。濃縮經合併之濾液且對殘餘物進行用EtOAc-己烷(5%-15%梯度)溶離之矽膠(40g)管柱層析，得到呈灰白色蠟質固體狀之N,2-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺(2.26g，96%產率)。質譜m/z 249(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.21-7.12(m,2H),6.72(dd,J=6.5,2.8Hz,1H),3.63(br.s.,1H),2.90(s,3H),2.36(s,3H),1.35(s,12H)。
中間物52：
用丙烯醯氯(0.245mL，3.02mmol)處理於冰浴中冷卻之N,2-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺(0.71g，2.87mmol)及DIEA(0.652mL，3.73mmol)於DCM(14.4mL)中之溶液，且在室溫下攪拌混合物。2小時後，濃縮混合物且對殘餘物進行用EtOAc-己烷 (15%-35%梯度)溶離之矽膠(24g)管柱層析，得到呈白色固體狀之N-甲基-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺(0.845g，98%產率)。質譜m/z 302(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.77(dd,J=7.3,1.3Hz,1H),7.25-7.16(m,2H),6.37(dd,J=16.8,2.1Hz,1H),5.90(dd,J=16.9,10.3Hz,1H),5.47(dd,J=10.3,2.2Hz,1H),3.25(s,3H),2.38(s,3H),1.37(s,12H)。
中間物53 N-甲基-N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺
中間物53A：N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺
遵循用於製備中間物52A之程序，以定量產率將3-溴-N-甲基苯胺轉化成N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺。質譜m/z 234(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.25-7.15(m,2H),7.07(d,J=2.4Hz,1H),6.73(ddd,J=7.7,2.6,1.3Hz,1H),4.02-3.43(b,1H),2.87(s,3H),1.35(s,12H)。
中間物53：
遵循用於將中間物52A轉化成中間物52之程序，以88%產率將N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺轉化成N-甲基-N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺。質譜m/z 288 (M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.77(d,J=7.3Hz,1H),7.62(d,J=1.5Hz,1H),7.42(t,J=7.7Hz,1H),7.26-7.23(m,1H),6.37(dd,J=16.7,2.0Hz,1H),6.06(dd,J=16.7,10.6Hz,1H),5.51(dd,J=10.3,2.0Hz,1H),3.36(s,3H),1.36(s,12H)。
中間物54 N-(2-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-N-甲基丙烯醯胺
中間物54A：2 N-(3-溴-2-氟苯基)甲醯胺
在90℃下加熱3-溴-2-氟苯胺(1.00g，5.26mmol)於甲酸(1.99mL，52.6mmol)中之溶液16小時。使混合物冷卻至室溫且分配於EtOAc與水之間。依次用NaHCO3飽和水溶液及鹽水洗滌有機相，乾燥且濃縮，得到呈米色固體狀之N-(3-溴-2-氟苯基)甲醯胺(1.02g，89%產率)。質譜m/z 218,220(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.50(s,1H),8.40-8.17(m,1H),7.53-7.41(m,1H),7.31(ddd,J=8.0,6.6,1.4Hz,1H),7.05(td,J=8.2,1.4Hz,1H)。
中間物54B：3-溴-2-氟-N-甲基苯胺
將N-(3-溴-2-氟苯基)甲醯胺(1.00g，4.59mmol)於THF(15mL)中之溶液冷卻至0℃，用甲硼烷-甲硫醚複合物(6.88mL，13.8mmol)逐 滴處理且在70℃下加熱2小時。使混合物冷卻至室溫且用MeOH處理。在室溫下攪拌混合物30分鐘，隨後用1M HCl水溶液緩慢處理。將混合物加熱至70℃持續1小時，隨後冷卻至室溫，用1M NaOH水溶液處理且用EtOAc萃取。有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷溶離之矽膠管柱層析，得到呈無色油狀之3-溴-2-氟-N-甲基苯胺(0.800g，85%產率)。質譜m/z 204,206(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 6.92-6.86(m,1H),6.84-6.78(m,1H),6.63-6.56(m,1H),4.03(br.s.,1H),2.88(d,J=4.6Hz,3H)。
中間物54C：2-氟-N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺
遵循用於製備中間物52A之程序，以71%產率將3-溴-2-氟-N-甲基苯胺轉化成2-氟-N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺。質譜m/z 252(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.02(d,J=7.3Hz,2H),6.85-6.73(m,1H),4.07-3.85(m,1H),2.86(s,3H),1.38-1.32(m,12H)。
中間物54：
遵循用於將中間物52A轉化成中間物52之程序，以56%產率將2-氟-N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺轉化成N-(2-氟-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-N-甲基丙烯醯胺。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.74(s,1H),7.33-7.27(m,1H),7.22-7.06(m,1H),6.37(d,J=16.7Hz,1H),6.16-5.87(m,1H),5.52(d,J=10.1Hz,1H),3.30(s,3H),1.38(s,12H)。
中間物55 N-甲基-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺
用DIEA(0.530mL，3.03mmol)處理冷卻至0℃之N,2-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[中間物52A](0.500g，2.02mmol)於DCM(10.1mL)中之溶液，隨後逐滴添加2-氯乙烷磺醯氯(0.254mL，2.43mmol)。在室溫下攪拌混合物3小時，隨後濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(10%-20%梯度)溶離之矽膠(24g)管柱層析，得到呈白色蠟質固體狀之N-甲基-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺(0.432g，63%產率)。質譜m/z 338(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.75(dd,J=7.3,1.3Hz,1H),7.27-7.23(m,1H),7.21-7.15(m,1H),6.62(dd,J=16.5,9.9Hz,1H),6.23(d,J=16.7Hz,1H),6.02(d,J=9.9Hz,1H),3.15(s,3H),2.61(s,3H),1.35(s,12H)。
中間物56 N-甲基-N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺
遵循用於製備中間物55之程序，以61%產率將N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[中間物53A]轉化成N-甲基-N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺。質譜m/z 324 (M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.62-7.54(m,2H),7.51-7.37(m,2H),6.86(dd,J=16.4,10.0Hz,1H),6.14(d,J=10.1Hz,1H),6.02(d,J=16.5Hz,1H),3.18(s,3H),1.30(s,12H)。
中間物57 N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺
遵循用於製備中間物55之程序，以49%產率將2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[根據美國專利第8,084,620號，中間物46-1，步驟1之程序製備]轉化成N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺。質譜m/z 324(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.24(s,1H),7.52-7.47(m,1H),7.27(d,J=6.6Hz,1H),7.19-7.13(m,1H),6.83(dd,J=16.5,9.9Hz,1H),5.99-5.89(m,2H),2.44(s,3H),1.30(s,12H)。
中間物58 N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺
遵循用於製備中間物55之程序，以40%產率將3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[中間物49A]轉化成N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺。質譜m/z 310(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.63(d,J=7.0Hz,1H),7.47(d,J=2.2Hz, 1H),7.44-7.40(m,1H),7.40-7.34(m,1H),6.57(dd,J=16.5,9.9Hz,1H),6.34-6.26(m,2H),5.97(d,J=9.9Hz,1H),1.36(s,12H)。
中間物59 N-(2-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-N-甲基乙烯磺醯胺
遵循用於製備中間物55之程序，將2-氟-N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[中間物54C]轉化成N-(2-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-N-甲基乙烯磺醯胺。
中間物60 N-(2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-N-甲基乙烯磺醯胺
中間物60A：N-(3-溴-2-氯苯基)甲醯胺
遵循用於製備中間物54A之程序，以97%產率將3-溴-2-氯苯胺轉化成N-(3-溴-2-氯苯基)甲醯胺。質譜m/z 234,236,238(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.53(s,1H),8.44(d,J=8.4Hz,1H),7.76(br.s.,1H),7.44(d,J=8.1Hz,1H),7.19(t,J=8.1Hz,1H)。
中間物60B：3-溴-2-氯-N-甲基苯胺
遵循用於製備中間物54B之程序，以97%產率將N-(3-溴-2-氯苯基)甲醯胺轉化成3-溴-2-氯-N-甲基苯胺。質譜m/z 220,222,224(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.09-7.01(m,1H),7.00-6.94(m,1H),6.60(dd,J=8.1,1.3Hz,1H),4.54(br.s.,1H),2.93(d,J=5.1Hz,3H)。
中間物60C：2-氯-N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺
遵循用於製備中間物52A之程序，以72%產率將3-溴-2-氯-N-甲基苯胺轉化成2-氯-N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺。質譜m/z 268,270(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.21-7.15(m,1H),7.02(dd,J=7.3,1.5Hz,1H),6.73(dd,J=8.0,1.4Hz,1H),4.50(br.s.,1H),2.91(d,J=5.1Hz,3H),1.39(s,12H)。
中間物60：
遵循用於將中間物55A轉化成中間物55之程序，以54%產率將2-氯-N-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺轉化成N-(2-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)-N-甲基乙烯磺醯胺。質譜m/z 358,360(M+H)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.78-7.62(m,1H),7.60-7.45(m,1H),7.28(s,1H),6.74-6.55(m,1H),6.23(d,J=16.5Hz,1H),5.97(d,J=9.9Hz,1H),3.21(s,3H),1.38(s,12H)。
中間物61 (RS)-3-氟-4-(異吲哚啉-4-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
中間物61A：4-溴異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯
用三乙胺(2.50mL，17.9mmol)及二碳酸二第三丁酯(2.08mL，8.95mmol)處理4-溴異吲哚啉鹽酸鹽(1.40g，5.97mmol)於DMF(30mL)中之溶液，且在室溫下攪拌混合物18小時。混合物用EtOAc(65mL)稀釋且用NaHCO3飽和水溶液洗滌三次。乾燥且濃縮有機相。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(0%-30%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到呈白色固體狀之4-溴異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯(1.70g，91%產率)。
中間物61B：4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯
用氮氣鼓泡4-溴異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯(1.70g，5.70mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(1.74g，6.84mmol)、乙酸鉀(1.68g，17.1mmol)及PdCl2(dppf) DCM加合物(0.466g，0.570mmol)於1,4-二噁烷(25mL)中之混合物，且在80℃下攪拌隔夜。使混合物冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，用水洗滌，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(0%-30%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到呈白色固體狀之4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)異吲哚啉-2- 甲酸第三丁酯(1.50g，76%產率)。
中間物61C：4-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯
用氮氣鼓泡4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間物8](40mg，0.130mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯(47.2mg，0.137mmol)、K2HPO4(68.1mg，0.391mmol)及1,1'-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(4.24mg，6.51μmol)於THF(1.00mL)及水(0.250mL)中之混合物，且在60℃下攪拌3小時。混合物用EtOAc稀釋，用水洗滌，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(0%-100%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到呈淡黃色油狀之4-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯(41mg，71%產率)。
中間物61：
在室溫下攪拌4-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯(41mg，0.092mmol)及TFA(0.500mL，6.49mmol)於DCM(1mL)中之溶液15分鐘。濃縮混合物，得到呈黃色固體狀之3-氟-4-(異吲哚啉-4-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽(38.9mg，92%產率)。質譜m/z 346(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 7.86(d,J=10.5Hz,1H),7.71-7.66(m,2H),7.64-7.60(m,1H),7.60-7.56(m,1H),7.39(ddd,J=8.3,6.7,1.7Hz,1H),6.98-6.90(m,2H),4.82-4.79(m,2H),4.43(d,J=14.7Hz,1H),4.23(d,J=14.7Hz,1H)。
中間物62 3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
遵循用於製備中間物61之程序，將7-溴-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸第三丁酯轉化成3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 360(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 7.82(d,J=10.6Hz,1H),7.61(d,J=8.2Hz,1H),7.57-7.50(m,2H),7.46(s,1H),7.38(ddd,J=8.2,7.1,1.2Hz,1H),7.18-7.12(m,1H),6.89(ddd,J=8.1,7.1,1.0Hz,1H),4.50(s,2H),3.76-3.57(m,2H),3.48-3.20(m,2H)[隱藏在殘餘MeOH峰下]。
中間物63 3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
遵循用於製備中間物61之程序，將6-溴-1,2,3,4-四氫異喹啉鹽酸鹽轉化成3-氟-4-(1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 360(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 7.80(d,J=10.6Hz,1H),7.59(d,J=8.2Hz,1H),7.48(s,3H),7.36(ddd,J=8.3,7.2,1.1Hz,1H),7.12(d,J=8.1Hz,1H),6.86(td,J=7.6,1.0Hz,1H),4.54 (ABq,J=17.1Hz,2H),3.72-3.55(m,2H),3.28-3.21(m,2H)。
中間物64 3-氟-4-(吲哚啉-4-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
遵循用於製備中間物61之程序，將4-溴吲哚啉轉化成3-氟-4-(吲哚啉-4-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 346(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 7.88(d,J=10.6Hz,1H),7.78-7.61(m,4H),7.40(ddd,J=8.3,5.3,3.0Hz,1H),6.95-6.90(m,2H),3.93-3.76(m,2H),3.20-3.07(m,1H),3.04-2.91(m,1H)。
中間物67 3-氟-4-(吲哚啉-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
遵循用於製備中間物61之程序，將6-溴吲哚啉[根據PCT公開案第WO 2010/093949號，實例82，步驟1之程序製備]轉化成3-氟-4-(吲哚啉-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 346(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 7.85(d,J=10.6Hz,1H),7.77(d,J=7.5Hz,1H),7.71-7.65(m,2H),7.63(d,J=8.1Hz,1H),7.40(t,J=7.6Hz,1H),7.14(d,J=7.9Hz,1H),6.93(t,J=7.2Hz,1H),4.06-3.95(m,2H),3.59-3.51(m,2H)。
中間物68 3-氟-4-(1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
中間物68A：3-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯
將4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間物8](120mg，0.391mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-5,6-二氫吡啶-1用氮氣淨化(2H)-甲酸第三丁酯(169mg，0.547mmol)、2M K3PO4水溶液(0.391mL，0.781mmol)及1,1'-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(20mg，0.031mmol)於THF(1.5mL)中之混合物，且在60℃下攪拌4小時。使混合物冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，用水洗滌，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(0%-50%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到呈淡黃色固體狀之3-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯(73mg，46%產率)。質譜m/z 354(M+H-C4H8)+。
中間物68：
遵循用於將中間物33B轉化成中間物33C之程序，將3-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯轉化成3-氟- 4-(1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 310(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.19-8.09(m,1H),7.76(d,J=11.0Hz,1H),7.62(d,J=8.2Hz,1H),7.45(ddd,J=8.2,7.2,1.1Hz,1H),7.19(ddd,J=8.0,7.1,1.0Hz,1H),6.31(dt,J=3.9,2.0Hz,1H),4.14-4.01(m,2H),3.64-3.53(m,2H),2.76(br.s.,2H)。
中間物69 (RS)-3-氟-4-(哌啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
在室溫下在氫氣氛圍下(50psi)攪拌3-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯[中間物68A](88mg，0.215mmol)及5% Pd/木炭(46mg，0.021mmol)於MeOH(6mL)中之混合物隔夜。過濾且濃縮混合物，使殘餘物溶解於DCM(1mL)中，用TFA(0.5mL，6.49mmol)處理，且在室溫下攪拌30分鐘。濃縮混合物且對殘餘物進行製備型逆相HPLC(Phenomenex Luna Axia C18管柱，5m，30×100mm，用含有0.1% TFA之甲醇-水溶離，20%-100%梯度，40mL/min)，得到呈白色固體狀之(RS)-3-氟-4-(哌啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽(44mg，49%產率)。質譜m/z 312(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.30-8.24(m,1H),7.78-7.72(m,1H),7.70-7.65(m,1H),7.54-7.46(m,1H),7.35-7.23(m,1H),4.41-4.30(m,1H),3.80-3.71(m,1H),3.70-3.63(m,1H),3.62-3.51(m,1H),3.24-3.12(m,1H),2.30-2.04(m,4H)。
中間物70 3-氟-4-(異吲哚啉-5-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，TFA鹽
遵循用於製備中間物35之程序，將5-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)異吲哚啉-2-甲酸第三丁酯轉化成3-氟-4-(異吲哚啉-5-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 346(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 7.81(d,J=10.6Hz,1H),7.67(d,J=8.1Hz,1H),7.63-7.57(m,3H),7.36(ddd,J=8.2,7.1,1.1Hz,1H),7.08(d,J=8.1Hz,1H),6.86(td,J=7.6,0.9Hz,1H),4.81(s,4H)。
中間物71 4-(2,5-二氫-1H-吡咯-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺，TFA鹽
中間物71A：3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯
在-60℃下將含1M LHMDS之甲苯(30.9mL，30.9mmol)添加至3-側氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(5.2g，28.1mmol)於THF(75mL)中之攪拌溶液中，攪拌15分鐘，隨後添加N,N-雙(三氟甲基磺醯基)苯胺(11.03g，30.9mmol)於THF(25mL)中之溶液。使混合物達至室溫且攪拌15分鐘。反應混合物用二氯甲烷稀釋且用碳酸氫鈉飽和溶液洗 滌。將有機相乾燥(MgSO4)且濃縮以得到粗產物。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-DCM 100：0至0：100梯度)，得到3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(3.1g，34.8%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 5.96-5.60(m,1H),4.44-4.05(m,4H),1.48(s,9H)。
中間物71B：3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯
用氮氣淨化PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.399g，0.489mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧硼)(2.48g，9.77mmol)、3-(((三氟甲基)磺醯基)氧基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(3.1g，9.77mmol)及乙酸鉀(1.92g，19.5mmol)於二噁烷(50mL)中之混合物，且在80℃下加熱3小時。反應混合物用EtOAc稀釋，用飽和碳酸氫鈉洗滌，乾燥(MgSO2)且濃縮。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至0：100梯度)，得到呈黃色油狀之3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(1.3g，45.1%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 6.54-6.36(m,1H),4.36-4.02(m,4H),1.47(s,9H),1.32-1.17(m,12H)。
中間物71：
遵循用於製備中間物68之程序，將3-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯轉化成4-(2,5-二氫-1H-吡咯-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 295(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 8.13-8.07(m,1H),7.78(d,J=11.1Hz,1H),7.65 (d,J=8.2Hz,1H),7.47(ddd,J=8.3,7.2,1.1Hz,1H),7.19(ddd,J=8.1,7.1,1.0Hz,1H),6.35(t,J=2.1Hz,1H),4.56-4.46(m,4H)。
中間物72及73 (RS)-3-氟-4-(吡咯啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽及(RS)-6-氟-5-(吡咯啶-3-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺TFA鹽
在室溫下在氫氣氛圍下(50psi)攪拌3-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)-2,5-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(54mg，0.14mmol)及20% Pd(OH)2(47.9mg，0.068mmol)於MeOH(10mL)及DMF(0.5mL)中之混合物隔夜。過濾且濃縮混合物。使殘餘物溶解於DCM(1mL)中，用TFA(0.5mL，6.49mmol)處理且在室溫下攪拌30分鐘。濃縮混合物且對殘餘物進行製備型逆相HPLC(YMC ODS 5μ 30×250mm管柱，用含有0.1% TFA之甲醇-水溶離，10%-100%梯度，40mL/min)，得到(RS)-3-氟-4-(吡咯啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽[中間物72](32mg，61%產率)。質譜m/z 298(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 8.29(d,J=8.2Hz,1H),7.79(d,J=13.3Hz,1H),7.67(d,J=8.2Hz,1H),7.49(td,J=7.7,1.0Hz,1H),7.26(ddd,J=8.1,7.2,1.1Hz,1H),4.90-4.86(m,1H),3.91-3.73(m,2H),3.72-3.53(m,2H),2.79-2.63(m,1H),2.58-2.42(m,1H)。及(RS)-6-氟-5-(吡咯啶-3-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺TFA鹽[中間物73](15mg，28.7%產率)。質譜m/z 302(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 7.41(d,J=13.4Hz,1H),4.40(t,J=9.0Hz,1H),3.77-3.57(m,3H),3.55-3.43(m,1H),2.97(br.s.,2H),2.82(t,J=4.6Hz,2H),2.60-2.34(m,2H),2.03-1.86(m,4H)。
中間物74 (R)-4-(3-胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物74A：(R)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯
遵循用於製備中間物29B之程序，將4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲腈轉化成(R)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯。質譜m/z 409(M+H)+。
中間物74：
遵循用於製備中間物30之程序，將(R)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯轉化成(R)-4-(3-胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 327(M+H)+。
中間物75 (RS)-順-3-氟-4-(八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
中間物75A：(RS)-順-6-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-甲酸第三丁酯
遵循用於製備中間物29B之程序，將4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲腈轉化成(RS)-順-6-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-甲酸第三丁酯。質譜m/z 435(M+H)+。
中間物75：
將H2O2水溶液(35%，0.13mL，1.49mmol)逐滴添加至(RS)-順-6-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-甲酸第三丁酯(65mg，0.15mmol)及30% KOH水溶液(0.140mL，0.75mmol)於DMSO(1.5mL)中之溶液中，且攪拌15分鐘。混合物用EtOAc萃取，用水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮。於TFA(1mL，12.98mmol)及DCM(1mL)中攪拌殘餘物30分鐘且濃縮。使用製備型HPLC(Phen Luna Axia C18 5μ；30×100mm管柱，用含有0.1% TFA之甲醇-水溶離，30%-100%梯度，40mL/min)純化粗物質，得到呈淡棕色固體狀之(RS)-順-3-氟-4-(八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽(46.3，66.4%產率)。質譜m/z 353(M+H)+。1H NMR (400MHz，甲醇-d4)δ 8.20(d,J=7.9Hz,1H),7.77(d,J=14.1Hz,1H),7.60(d,J=8.2Hz,1H),7.45(ddd,J=8.2,7.2,1.2Hz,1H),7.25(td,J=7.5,1.0Hz,1H),4.16-4.06(m,1H),3.99-3.89(m,1H),3.83-3.71(m,2H),3.55(t,J=8.9Hz,1H),3.49-3.38(m,1H),3.23-3.12(m,1H),2.97(d,J=4.9Hz,1H),2.13-1.96(m,3H),1.92-1.81(m,1H)。
中間物76 (RS)-順-3-氟-4-(六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
中間物76A：(RS)-順-5-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-甲酸第三丁酯
用氮氣淨化4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲腈(100mg，0.34mmol)、六氫-吡咯并[3,4-B]吡咯-1-甲酸第三丁酯(81mg，0.380mmol)、碳酸銫(282mg，0.87mmol)、BINAP(10.77mg，0.017mmol)及Pd2(dba)3(15.84mg，0.017mmol)於二噁烷(2mL)中之混合物，且在105℃下攪拌24小時。使混合物冷卻至室溫，過濾且濃縮。使用ISCO急驟層析(矽膠/己烷/乙酸乙酯100：0至50：50梯度)純化粗物質，得到呈淡黃色固體狀之5-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-甲 酸第三丁酯(65mg，44.7%產率)。質譜m/z 421(M+H)+。
中間物76：(RS)-順-3-氟-4-(六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，TFA鹽
將H2O2水溶液(35% 0.135mL，1.546mmol)逐滴添加至(RS)-順-5-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-甲酸第三丁酯(65mg，0.155mmol)及30% KOH水溶液(0.145mL，0.773mmol)於DMSO(1.5mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌15分鐘。混合物用水稀釋，用EtOAc萃取，用水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮。於TFA(1mL，12.98mmol)及DCM(1mL)中攪拌粗物質30分鐘且濃縮，得到呈棕色固體狀之粗產物(RS)-順-3-氟-4-(六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，TFA(62mg，89%產率)。質譜m/z 339(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 8.14(d,J=7.9Hz,1H),7.71(d,J=14.4Hz,1H),7.59(d,J=8.2Hz,1H),7.47-7.41(m,1H),7.27-7.21(m,1H),4.60-4.49(m,1H),4.12(dd,J=10.6,7.5Hz,1H),3.76-3.67(m,1H),3.64-3.34(m,5H),2.41-2.28(m,1H),2.25-2.14(m,1H)。
中間物77 3-氟-4-(1,4,5,6-四氫吡啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
遵循用於製備中間物68之程序，將5-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)-3,4-二氫吡啶-1(2H)-甲酸第三丁酯轉化成3-氟-4-(1,4,5,6-四氫吡啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 310(M+H)+。
中間物78 3-氟-4-(2,7-二氮螺[4.4]壬-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
遵循用於製備中間物75之程序，將7-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)-2,7-二氮螺[4.4]壬烷-2-甲酸第三丁酯轉化成3-氟-4-(2,7-二氮螺[4.4]壬-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 353(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 8.11(d,J=7.8Hz,1H),7.73(d,J=14.2Hz,1H),7.59(d,J=8.1Hz,1H),7.43(t,J=7.4Hz,1H),7.23(t,J=7.5Hz,1H),3.67-3.39(m,8H),2.37-2.16(m,4H)。
中間物79 (RS)-3-氟-4-(八氫-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。
遵循用於製備中間物75之程序，將(RS)-5-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)八氫-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-甲酸第三丁酯轉化成(RS)-3-氟-4-(八氫-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽。質譜m/z 353(M+H)+。
中間物80 5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
以使得反應溫度保持在0℃以下之速率向在-10℃下之2-胺基-4溴-5-氯苯甲酸(1.0g，3.99mmol)於濃HCl(20mL)中之懸浮液中逐滴添加亞硝酸鈉(0.289g，4.19mmol)於水(2.0mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物15分鐘。以使反應溫度保持在-5℃以下之速率將氯化錫(II)(1.590g，8.38mmol)於濃HCl(5.0mL)中之溶液添加至混合物中。在室溫下攪拌反應混合物60分鐘。過濾沈澱物，用水洗滌且風乾。得到呈白色固體狀之4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸，HCl(752mg，1.868mmol，46.8%產率)。
在110℃下攪拌4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸，HCl(1.0g，3.31mmol)及環己酮(0.650g，6.62mmol)於HOAc(20mL)中之混合物18小時。過濾沈澱物且用HOAc及DCM洗滌。粗產物得到呈淡綠色固體狀之5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(893g，2582mmol，7.80E+04%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.12(s,1H),7.67(s,1H),3.01(br.s.,2H),2.76(br.s.,2H),1.78(br.s.,4H)。LCMS：1.21分鐘，M+H 329。
中間物81 5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
在室溫下攪拌5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(100mg，0.304mmol，I-80)、氯化銨(81mg，1.522mmol)、BOP(148mg，0.335mmol)及TEA(0.297mL，2.130mmol)於DMF(5.0mL)中之混合 物2小時。混合物用EtOAc(15mL)稀釋且用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×15mL)及1.0M HCl水溶液(15mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮，得到呈淡灰色固體狀之5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(106mg，0.291mmol，96%產率)。LCMS：1.18分鐘，M+H 328。
中間物82 4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯
向5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(2.27g，6.91mmol，I-80)於THF(80mL)中之溶液中添加DDQ(3.14g，13.82mmol)，在60℃下攪拌混合物18小時。濃縮混合物，得到4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸。在回流下攪拌4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸及硫酸(0.736mL，13.82mmol)於EtOH(100mL)中之混合物18小時。濃縮混合物。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至50：50梯度)。得到呈淡棕色固體狀之4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(760mg，2.048mmol，29.6%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.12(br.s.,1H),8.82(dd,J=8.1,0.9Hz,1H),8.23-8.08(m,1H),7.65-7.48(m,2H),7.37(ddd,J=8.1,6.6,1.6Hz,1H),4.52(q,J=7.1Hz,2H),1.55-1.47(m,3H)。
中間物83 4-溴-3,6-二氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯
遵循用於製備中間物82之程序製備。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.87(s,1H),8.59(d,J=2.1Hz,1H),7.97-7.90(m,1H),7.84(d,J=8.8Hz,1H),7.61(dd,J=8.8,2.1Hz,1H),4.48(q,J=7.1Hz,2H),1.46-1.38(m,3H)。
中間物84 4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸乙酯
遵循用於製備中間物82之程序製備。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.04(br.s.,1H),8.76(d,J=7.9Hz,1H),7.85(d,J=9.3Hz,1H),7.64-7.48(m,2H),7.35(ddd,J=8.1,6.5,1.7Hz,1H),4.51(q,J=7.1Hz,2H),1.50(t,J=7.2Hz,3H)。
中間物85 (S)-4-(3-胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物85A：(S)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯
用氮氣脫氣4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲腈(2.8g，9.69mmol)、(S)-哌 啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(2.328g，11.62mmol)、碳酸銫(7.89g，24.21mmol)、BINAP(0.302g，0.484mmol)及Pd2(dba)3(0.443g，0.484mmol)於1,4-二噁烷(80mL)中之混合物，且在105℃下攪拌19小時。LC/MS指示90%轉化率。添加額外的Pd2(dba)3(0.443g，0.484mmol)及BINAP(0.030g，0.048mmol)。在110℃下攪拌反應混合物9小時。使混合物冷卻至室溫且經由矽藻土過濾且濃縮。使粗物質溶解於DCM中且攪拌隔夜。藉由真空過濾收集固體且用DCM洗滌，得到呈灰白色固體狀之(S)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(3.24g，82%產率)。質譜m/z 409(M+H)+。
中間物85B：(S)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯
歷經30分鐘將H2O2水溶液(30%，5.95ml，58.3mmol)逐滴添加至(S)-(1-(1-氰基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(2.38g，5.83mmol)及30% KOH水溶液(5.45ml，29.1mmol)於DMSO中之溶液中，且在室溫下攪拌1.5小時。轉化率為95%。添加所添加之額外的30% H2O2水溶液(1mL)且攪拌反應混合物30分鐘。用水稀釋混合物且攪拌30分鐘。藉由真空過濾收集固體且用水洗滌。隨後，用DCM濕磨產物，得到呈淡黃色固體狀之粗產物(S)-(1-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基)胺基甲酸第三丁酯(2.56g，103%產率)。質譜m/z 427(M+H)+。
中間物85：
在室溫下攪拌(S)-(1-(1-胺甲醯基-3-氟-9H-咔唑-4-基)哌啶-3-基) 胺基甲酸第三丁酯(3.09g，7.25mmol)及TFA(8mL，104mmol)於DCM(8mL)中之溶液30分鐘。濃縮混合物，使用飽和NaHCO3中和，用EtOAc萃取(3次)，用水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮，得到呈淡黃色泡沫狀之粗產物(S)-4-(3-胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(2.43g，103%產率)。質譜m/z 327(M+H)+。
實例1 (RS)-5-(3-丙烯醯胺基苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
用氮氣鼓泡(RS)-5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號，實例73-1製備](35mg，0.100mmol)、N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺[中間物49](28.6mg，0.105mmol)及肆(三苯基膦)鈀(5.76mg，4.98μmol)於甲苯(1.87mL)及乙醇(623μL)中之混合物2-5分鐘。用2M Na2CO3水溶液(126μL，0.252mmol)處理混合物，再次用氮氣鼓泡且密封於玻璃管中。在90℃下加熱混合物16小時。濃縮混合物且對殘餘物進行製備型反相HPLC(Waters XBridge C18管柱，5μm，19×150mm，用乙腈-10mM乙酸銨水溶液溶離，5%-95%梯度，20mL/min)。在高真空下濃縮適當的流出物溶離份得到(RS)-5-(3-丙烯醯胺基苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(28.4mg，68%產率)。質譜m/z 418(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.80(s,1H),10.22(s,1H),8.02(br.s.,1H),7.75-7.68(m,2H),7.60(d,J=7.4 Hz,1H),7.39(t,J=7.7Hz,1H),7.33(br.s.,1H),7.10(d,J=7.4Hz,1H),6.82(d,J=7.9Hz,1H),6.45(dd,J=17.1,10.2Hz,1H),6.26(dd,J=16.8,1.5Hz,1H),5.79-5.72(m,1H),4.21(s,1H),2.93(dd,J=16.8,5.0Hz,1H),2.47-2.41(m,1H),2.28(t,J=12.4Hz,1H),2.00(d,J=12.9Hz,1H),1.89(d,J=8.9Hz,1H),1.72-1.61(m,1H),1.10(d,J=2.0Hz,7H)。
實例2 (RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
用氮氣鼓泡(RS)-5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號，實例73-1製備](35mg，0.100mmol)、N-甲基-N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙烯磺醯胺[中間物55](33.6mg，0.100mmol)及Cs2CO3(81mg，0.249mmol)於4：1 THF-水(3.32mL)中之混合物，隨後用PdCl2(dppf)DCM加合物(4.1mg，5.0μmol)處理。混合物進一步用氮氣鼓泡，密封於氮氣下之導管中且在50℃下加熱。16小時後，冷卻且濃縮混合物。對殘餘物進行製備型反相HPLC(Waters XBridge C18管柱，5μm，19×250mm，用乙腈-10mM乙酸銨水溶液溶離，5%-95%梯度，20mL/min)。在高真空下濃縮適當的流出物溶離份得到(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(24.6mg，51%產率)。質譜m/z 482(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.75(d,J=19.8Hz,1H),8.02(br.s.,1H),7.59(d,J=7.4Hz,1H),7.39-7.24(m,3H),7.21-7.12(m,1H),7.10-7.00(m,1H),6.79-6.67(m,1H),6.24-5.99(m,2H),4.20-4.13(m,1H),3.19-3.05(m,3H),2.95-2.82(m,1H),2.47-2.31(m,1H),2.11-1.47(m,7H),1.22-0.97(m,7H)。
實例3 5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2,2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
用氬氣鼓泡5-溴-2,2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物3](35mg，0.109mmol)、N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺[中間物50](37.5mg，0.131mmol)及2.0M K3PO4水溶液(0.20mL，0.400mmol)於THF(0.80mL)中之混合物1分鐘，伴隨音波處理。用PdCl2(dppf) DCM加合物(6.67mg，8.17μmol)處理混合物。反應容器密封且進行5次利用氬氣之抽空-填充循環。在50℃下攪拌混合物16.75小時，冷卻至室溫，用MeOH稀釋且濃縮。藉由製備型反相HPLC(Phenomenex Axia C18管柱，5μm，30×100mm，用含有0.1% TFA之乙腈-水溶離，10%-100%梯度，30mL/min)純化殘餘物。合併適當的溶離份，用NaHCO3飽和水溶液(3-4mL)處理且濃縮成水性懸浮液。此用EtOAc萃取兩次且乾燥並濃縮經合併之有機相，得到呈淡棕色固體狀之5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2,2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(16.7mg，36%產率)。質譜m/z 402(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.73(s,1H),9.58(s,1H),8.00(br.s.,1H),7.61(d,J=7.5Hz,1H),7.52(d,J=7.9Hz,1H),7.30(br.s.,1H),7.24(t,J=7.7Hz,1H),7.04(d,J=7.5Hz,1H),6.72(d,J=7.7Hz,1H),6.56(dd,J=17.2,10.1Hz,1H),6.26(dd,J=17.2,2.0Hz,1H),5.75(dd,J=10.2,1.9Hz,1H),2.53(br.s.,3H),1.98-1.72(m,4H),1.30(t,J=2.0Hz,2H),0.94(d,J=4.2Hz,6H)。
實例4 4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
用氬氣鼓泡7-(2-羥基丙-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間物27](35mg，0.089mmol)、N-(3-溴-2-甲基苯基)丙烯醯胺[中間物45](30.1mg，0.107mmol)及2M Na2CO3水溶液(89μl，0.178mmol)於甲苯(1.33mL)及乙醇(0.44mL)中之混合物5-10分鐘。用肆(三苯基膦)鈀(5.1mg，4.44μmol)處理混合物，且容器密封且在90℃下加熱16小時。使混合物冷卻至室溫，用MeOH及DMSO稀釋且過濾。濃縮濾液且藉由製備型反相HPLC(Waters XBridge C18管柱，5μm，19×250mm，用乙腈-10mM乙酸銨水溶液溶離，5%-95%梯度，20mL/min)純化。在高真空下濃縮適當的流出物溶離份得到4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(5.9mg，16%產率)。質譜m/z 410(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 7.87(d,J=7.4Hz,1H),7.68(d,J=1.0Hz,1H),7.64(d,J=7.9Hz,1H),7.37(t,J=7.9Hz,1H),7.22(d,J=7.4Hz,1H), 7.06(dd,J=8.4,2.0Hz,1H),7.02(d,J=7.4Hz,1H),6.94(d,J=8.4Hz,1H),6.57-6.47(m,1H),6.45-6.37(m,1H),5.83-5.74(m,1H),1.97(s,3H),1.58(s,6H)。
實例5 (RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
用氮氣鼓泡(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物28](40mg，0.100mmol)、N-(3-溴苯基)乙烯磺醯胺[中間物48](29mg，0.110mmol)及Cs2CO3(82mg，0.251mmol)於4：1 THF-水(3.35mL)中之混合物，隨後用PdCl2(dppf)DCM加合物(4.10mg，5.02μmol)處理。進一步用氮氣鼓泡混合物，反應容器密封在氮氣氛圍下且在50℃下加熱混合物19小時。使混合物冷卻至室溫且濃縮。藉由製備型反相HPLC(Waters XBridge C18管柱，5μm，19×250mm，用乙腈-10mM乙酸銨水溶液溶離，5%-95%梯度，20mL/min)純化殘餘物。在高真空下濃縮適當的流出物溶離份得到(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(22.8mg，50%產率)。質譜m/z 454(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.81(s,1H),10.09(s,1H),8.01(br.s.,1H),7.59(d,J=7.4Hz,1H),7.39-7.29(m,2H),7.19(dd,J=8.2,1.2Hz,1H),7.16-7.13(m,1H),7.11(d,J=7.4Hz,1H),6.85-6.76(m,2H),6.13-6.00(m,2H),4.22(s,1H),2.92(dd,J=17.1,4.7Hz, 1H),2.44(d,J=15.9Hz,1H),2.30-2.20(m,1H),1.98-1.84(m,2H),1.65(td,J=11.9,4.0Hz,1H),1.11(s,7H)。
藉由實例1至5中所描述之程序或類似程序，使用所指示之起始物質製備之額外實例展示於表2中。
(a)美國專利第8,084,620號之實例73-2；(b)美國專利第8,084,620號之實例30-3；(c)美國專利第8,084,620號之實例73-1；(d)美國專利第8,084,620號之實例1-3；(e)美國專利第8,084,620號之實例68-1；(f)美國專利第8,084,620號之實例61-5
*實例4之替代製備 實例55及56 5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(羥甲基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(兩種非鏡像異構體外消旋體)
用氬氣鼓泡(RS)-5-溴-6-氯-2-(羥甲基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物21](35mg，0.094mmol)、N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺[中間物50](29.7mg，0.104mmol)及肆(三苯基膦)鈀(5.44mg，4.71μmol)於甲苯(1.77mL)及乙醇(0.59mL)中之混合物約2-5分鐘。用2M Na2CO3水溶液(0.12mL，0.24mmol)處理混合物，再次用氬氣鼓泡且在氬氣氛圍下密封反應容器且在90℃下加熱。16小時後，使混合物冷卻至室溫且藉由製備型反相HPLC(Waters XBridge C18管柱，5μm，19×250mm，用乙腈-10mM乙酸銨水溶液溶離，5%-95%，20mL/min梯度)純化，得到兩 種產物，其為5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(羥甲基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺之非鏡像異構外消旋體。
實例55(7.8mg，18%產率)：質譜m/z 452,454(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.90(s,1H),9.61(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.73(s,1H),7.57(d,J=7.9Hz,1H),7.46(br.s.,1H),7.26(t,J=7.7Hz,1H),6.97(d,J=6.9Hz,1H),6.55(dd,J=16.8,10.4Hz,1H),6.26(dd,J=17.3,2.0Hz,1H),5.75(dd,J=10.2,1.7Hz,1H),4.55(t,J=5.2Hz,1H),3.20-3.09(m,2H),2.61(d,J=17.3Hz,1H),2.39(d,J=16.8Hz,1H),1.81(s,3H),1.76-1.62(m,2H),1.40-1.31(m,1H),1.22-1.13(m，1H),0.82(s,3H)。
實例56(8.9mg，21%產率)：質譜m/z 452,454(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.90(s,1H),9.61(s,1H),8.13(br.s.,1H),7.72(s,1H),7.56(d,J=7.9Hz,1H),7.45(br.s.,1H),7.26(t,J=7.9Hz,1H),6.96(d,J=7.4Hz,1H),6.54(dd,J=17.1,10.2Hz,1H),6.25(dd,J=16.8,2.0Hz,1H),5.75(dd,J=10.2,1.7Hz,1H),4.56(t,J=5.4Hz,1H),3.20-3.07(m,2H),2.64(d,J=17.3Hz,1H),2.37(d,J=16.8Hz,1H),1.82(s,3H),1.69(d,J=5.0Hz,2H),1.33(dt,J=13.9,6.9Hz,1H),1.24-1.14(m,1H),0.80(s,3H)。
尚未指定實例55及56之C2及阻轉異構鍵處之相對組態。
藉由針對實例55及56所描述之程序或類似程序，使用所指示之起始物質製備之額外實例展示於表3中。尚未指定外消旋非鏡像異構體對之C2及阻轉異構鍵處之相對組態。
實例63 (S)-5-((1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
用DIEA(0.190mL，1.09mmol)處理(S)-5-(吡咯啶-3-基胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[中間物33](120mg，0.362mmol)於THF(9mL)及DCM(2mL)中之溶液。使溶液冷卻至0℃且歷經3分鐘用丙烯醯氯(0.024mL，0.290mmol)於THF(1mL)中之溶液逐滴處理。在0℃下攪拌混合物1.5小時，隨後濃縮。藉由用EtOAc-己烷，隨後用MeOH-DCM溶離之矽膠(24g)管柱層析純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(S)-5-((1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(35mg，27%產率)。質譜m/z 353(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.47(s,1H),7.58(br.s.,1H),7.46(dd,J=8.1,1.3Hz,1H),6.88(br.s.,1H),6.69-6.51(m,1H),6.23-6.09(m,2H),5.67(ddd,J=13.4,10.6,2.4Hz,1H),5.01(dd,J=8.6,6.8Hz,1H),4.34-4.12(m,1H),3.82-3.39(m,4H),2.92(br.s.,2H),2.69(d,J=3.7Hz,2H),2.39-2.17(m,1H),2.15-1.89(m,1H),1.76(br.s.,4H)。
藉由針對實例63所描述之程序或類似程序，使用所指示之起始物質及適當的甲酸醯氯製備之額外實例展示於表4中。
(a)美國專利第8,084,620號中之實例76-36
實例72 5-(((S)-1-丙炔醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(非鏡像異構體之混合物)
用5-((S)-吡咯啶-3-基胺基)-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物[中間物34](55mg，0.150mmol)及DIEA(0.131mL，0.751mmol)於DMF(1mL)中之溶液處理丙炔酸(16.8mg，0.240mmol)及HATU(108mg，0.285mmol)於DMF(3mL)中之溶液。在室溫下攪拌混合物2小時，隨後用1M HCl水溶液(1mL)處理，用10% LiCl水溶液稀釋且用EtOAc萃取兩次。乾燥且濃縮經合併之有機層。藉由製備型反相HPLC(Waters XBridge C18管柱，5μm，19×200mm，用含有0.1% TFA之乙腈-水溶離，15%-55%梯度，20mL/min)純化殘餘物，得到5-(((S)-1-丙炔醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(4.0mg，5.9%產率)。質譜m/z 419(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.72(br.s.,1H),7.94(s,1H),7.48(d,J=8.1Hz,1H),7.30-6.97(m,2H),6.18(dd,J=18.7,8.2Hz,1H),4.52-4.39(m,1H),4.23(d,J=19.9Hz,1H),3.82-3.68(m,1H),3.57(br.s.,1H),3.47-3.29(m,1H),3.15(d,J=10.1Hz,1H),3.05(d,J=12.5Hz,1H),2.96(br.s.,1H),2.73(s,1H),2.70-2.65(m,2H),2.28(d,J=6.1Hz,1H),2.12(br.s.,1H),2.03(br.s.,1H),1.64(d,J=6.4Hz,1H)。
藉由針對實例72所描述之程序或類似程序，使用所指示之起始物質及適當的甲酸製備之額外實例展示於表5中。
實例77及78 5-(((S)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(單一非鏡像異構體)
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：Chiralcel OD-H(3×25cm，5μm)；移動相：在85mL/min下之CO2-MeOH(60：40)；樣品製劑：4mg/mL於MeOH-乙腈中；注入：3mL)分離5-(((S)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(兩種非鏡像異構體之混合物)[實例65](40mg)之樣品。自管柱溶離之第一峰提供 5-(((S)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺之一種非鏡像異構體[實例77](11.5mg)。質譜m/z 421(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.72(s,1H),7.49(dd,J=8.3,1.3Hz,1H),6.67-6.51(m,1H),6.24-6.12(m,2H),5.69(ddd,J=12.8,10.3,2.4Hz,1H),5.07(m,1H),4.1-4.3(m,1H),3.79-3.62(m,2H),3.62-3.39(m,2H),3.17-2.92(m,3H),2.69(d,J=14.2Hz,2H),2.33-2.11(m.,3H)。
自管柱溶離之第二峰提供5-(((S)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺之另一非鏡像異構體[實例78](13.0mg)。質譜m/z 421(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 10.72(s,1H),7.49(dd,J=8.3,1.3Hz,1H),6.67-6.51(m,1H),6.24-6.12(m,2H),5.69(ddd,J=12.8,10.3,2.4Hz,1H),5.07(m,1H),4.1-4.3(m,1H),3.79-3.62(m,2H),3.62-3.39(m,2H),3.17-3.01(m,3H),2.69(d,J=14.2Hz,2H),2.33-2.11(m.,3H)。
尚未指定實例77及78之四氫咔唑環2-位置處之絕對立體化學。
實例87 3-氟-4-((6-乙烯基吡啶-3-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物87A：4-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽
在65℃下攪拌4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間物8](100mg，0.326mmol)及肆(三苯基膦)鈀(75mg，0.065mmol)於THF(1mL)中之溶液5分鐘，隨後用((6-氯吡啶-3-基)甲基)氯化鋅(II)(0.5M於THF中；1.95mL，0.977mmol)逐滴處理。持續加熱隔夜。使混合物冷卻至室溫，且用EtOAc稀釋，用NaHCO3飽和水溶液洗滌，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用含有0.1% TFA之MeOH-水(10%-90%梯度)溶離之製備型HPLC(管柱：Phenomenex Axia C18，5μ；30×100mm)，得到呈黃色固體狀之4-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽(33mg，22%產率)。質譜m/z 354,356(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.32(d,J=2.3Hz,1H),8.04(d,J=8.1Hz,1H),7.81(d,J=10.9Hz,1H),7.72-7.59(m,2H),7.46(td,J=7.7,1.0Hz,1H),7.33(d,J=8.3Hz,1H),7.17(ddd,J=8.1,7.2,1.0Hz,1H),4.76-4.73(m,2H)。
實例87：
用氮氣鼓泡4-((6-氯吡啶-3-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺TFA鹽(33mg，0.071mmol)、三正丁基(乙烯基)錫烷(67.1mg，0.212mmol)、LiCl(9.0mg，0.212mmol)及肆(三苯基膦)鈀(4.1mg，3.53μmol)於DMF(1mL)中之混合物，隨後在90℃下攪拌隔夜。經冷卻之混合物用EtOAc稀釋，用NaHCO3飽和水溶液洗滌3次，乾燥且濃縮。對殘餘物進行用MeOH-DCM(0%-5%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到呈白色固體狀之3-氟-4-((6-乙烯基吡啶-3-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(14.3mg，57%產率)。質譜m/z 346(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.42(d,J=2.0Hz,1H),8.04(d,J=8.1Hz,1H),7.80(d,J=11.0Hz,1H),7.65-7.57(m,2H),7.46-7.39(m,2H),7.14(ddd,J=8.1,7.2,1.0Hz,1H),6.75(dd,J=17.6,11.0Hz,1H),6.07(dd,J=17.7,1.0Hz,1H),5.44(dd,J=11.0,1.0Hz,1H),4.56(s,2H)。
實例88 N 1-(4-(((5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-(RS)-基)甲基)(甲基)胺基)丁基)-N 5-(15-側氧基-19-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)-4,7,10-三噁-14-唑十九烷基)戊二醯胺TFA鹽，非鏡像異構體之混合物
中間物88A：(RS)-(5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基)甲基甲烷磺酸酯
用三乙胺(0.270mL，1.93mmol)，隨後甲磺醯氯(0.072mL，0.928mmol)處理在冰-水浴上攪拌之(RS)-5-溴-2-(羥甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號，實例73-2之程序製備](250mg，0.774mmol)於THF(10mL)中之懸浮液。在室溫下攪拌混合物90分鐘。添加額外三乙胺(0.270mL，1.93mmol)及甲磺醯氯(0.072mL，0.928mmol)且持續攪拌另外90分鐘。混合物用EtOAc稀釋且依次用水、NaHCO3飽和水溶液及飽和鹽水洗滌，乾燥且濃縮，得到呈橙棕色膠狀之粗產物(RS)-(5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基)甲基甲烷磺酸酯(332mg)，其不經進一步純化即使用。質譜m/z 401,403(M+H)+。
中間物88B：(RS)-(4-(((5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基) 甲基)(甲基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁酯
用DIEA(0.810mL，4.64mmol)處理粗產物(RS)-(5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基)甲基甲烷磺酸酯(310mg，0.773mmol)及(4-(甲胺基)丁基)胺基甲酸第三丁酯，甲烷磺酸鹽[根據美國專利第7,989,465號實例45，步驟1-3之程序製備](461mg，1.55mmol)於乙腈(10mL)中之溶液，且在油浴上在70℃下加熱70小時。隨後在回流下加熱混合物95小時。使混合物冷卻至室溫且濃縮，且對殘餘物進行用EtOAc-己烷(25%-100%梯度)溶離，隨後進一步用MeOH-DCM(0%-20%梯度)溶離，隨後進一步用含有5%三乙胺之MeOH-DCM(20%)溶離之矽膠(40g)管柱層析。濃縮含有產物之流出物，且藉由製備型反相HPLC(管柱：Phenomenex Axia C18 30×100mm，用含有0.1% TFA之乙腈-水溶離，10%-100%梯度)純化殘餘物。經合併適當的流出物溶離份，用NaHCO3飽和水溶液處理且濃縮成水性殘餘物。此用EtOAc萃取兩次且乾燥並濃縮經合併之有機相，得到呈褐色玻璃狀固體狀之(RS)-(4-(((5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基)甲基)(甲基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁酯(102mg，25%產率)。質譜m/z 507,509(M+H)+,451,453(M+H-C4H8)+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 10.04(br.s.,1H),7.21(d,J=7.9Hz,1H),7.15-7.08(m,1H),5.91(br.s.,2H),4.90(br.s.,1H),3.37-3.22(m,1H),3.16(d,J=5.7Hz,2H),3.08-2.81(m,2H),2.54-2.30(m,5H),2.24(s,3H),2.17-2.01(m,2H),1.58-1.40(m+s,14H)。
中間物88C：(RS)-2-(((4-胺丁基)(甲基)胺基)甲基)-5-溴-2,3,4,9-四氫- 1H-咔唑-8-甲醯胺二鹽酸鹽
用含4M HCl之1,4-二噁烷(1mL，4.00mmol)處理(RS)-(4-(((5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-基)甲基)(甲基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁酯(77mg，0.152mmol)於1,4-二噁烷(2mL)中之溶液，形成棕色膠。用音波處理混合物且在室溫下攪拌100分鐘。所得黃色懸浮液用乙醚稀釋，用音波處理且在室溫下攪拌1.5小時。藉由過濾收集沈澱物，用乙醚沖洗且乾燥，得到呈淡黃褐色吸濕固體狀之(RS)-2-(((4-胺丁基)(甲基)胺基)甲基)-5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺二鹽酸鹽(76.6mg，定量產率)。質譜m/z 407,409(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.07-10.94(m,1H),10.25(br.s.,1H),8.06(br.s.,4H),7.49(dd,J=8.1,1.5Hz,1H),7.41(br.s.,1H),7.17(d,J=8.1Hz,1H),3.27-2.72(m,13H),2.43-2.07(m,2H),1.89-1.74(m,2H),1.69-1.49(m,3H)。
中間物88D：N 1-(4-(((5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-(RS)-基)甲基)(甲基)胺基)丁基)-N 5-(15-側氧基-19-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)-4,7,10-三噁-14-唑十九烷基)戊二醯胺TFA鹽，非鏡像異構體之混合物
用DIEA(0.093mL，0.533mmol)及EDC(35.1mg，0.183mmol)處理(RS)-2-(((4-胺丁基)(甲基)胺基)甲基)-5-溴-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺二鹽酸鹽(73.2mg，0.152mmol)、5,21-二側氧基-25-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)-10,13,16-三噁-6,20-二氮雜二十五烷-1-酸酯，二異丙基甲基胺鹽(103mg，0.152mmol)及HOAT(24.9mg，0.183mmol)於DMF(1mL)中之溶液，且在室溫下攪拌溶液16小時。濃縮混合物，且藉由製備型反相HPLC(管柱：Phenomenex Axia C18 30×100mm，用含有0.1% TFA之乙腈-水溶離，10%-100%梯度，30mL/min)純化殘餘物。合併適當的溶離份且濃縮，且由乙腈-水凍乾殘餘物，得到呈褐色非晶形固體狀之N 1-(4-(((5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-(RS)-基)甲基)(甲基)胺基)丁基)-N 5-(15-側氧基-19-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)-4,7,10-三噁-14-唑十九烷基)戊二醯胺TFA鹽，非鏡像異構體之混合物(121mg，75%產率)。質譜m/z 949,951(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)複合物，但具有正確數量之NH質子[δ 11.05(2s,1H),9.08(br.s.,1H),8.05(br.s.,1H),7.83(d,J=2.9Hz,1H),7.74(d,J=4.6Hz,2H),7.40(br.s.,1H),6.41(br.s.,2H]，芳族質子[δ 7.48(d,J=7.9Hz,1H),7.17(d,J=7.9Hz,1H)]及CH2O質子[δ 3.54-3.49(m,4H),3.49-3.44(m,4H),3.39(td,J=6.4,2.2Hz,4H)]。
實例88：
用氬氣鼓泡N 1-(4-(((5-溴-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-(RS)-基)甲基)(甲基)胺基)丁基)-N 5-(15-側氧基-19-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)-4,7,10-三噁-14-唑十九烷基)戊二醯胺TFA鹽，非鏡像異構體之混合物(116.5mg，0.109mmol)、N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙烯醯胺[中間物50](47.2mg，0.164mmol)及2.0M K3PO4水溶液(0.274mL，0.547 mmol)於THF(1mL)中之混合物約1分鐘，伴隨音波處理。用1,1'-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(4.47mg，5.47μmol)處理混合物且密封反應容器且在50℃下加熱15.75小時。濃縮經冷卻之混合物，且藉由製備型反相HPLC(管柱：Phenomenex Axia C18 30×100mm，用含有0.1% TFA之乙腈-水溶離，10%-100%梯度，30mL/min)純化殘餘物。合併適當的流出物溶離份且濃縮，且由乙腈-水凍乾殘餘物，得到呈淡黃色非晶形固體狀之N 1-(4-(((5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-8-胺甲醯基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-(RS)-基)甲基)(甲基)胺基)丁基)-N 5-(15-側氧基-19-((3aS,4S,6aR)-2-側氧基六氫-1H-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)-4,7,10-三噁-14-唑十九烷基)戊二醯胺TFA鹽，非鏡像異構體之混合物(79.9mg，59%產率)。質譜m/z 1031(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)複合物，但與預期的產物一致。芳族、乙烯基及NH質子：δ 10.92-10.79(m,1H),9.59(d,J=10.6Hz,1H),9.08-8.89(m,1H),8.03(br.s.,1H),7.81(t,J=5.4Hz,1H),7.73(br.s.,2H),7.64(dd,J=7.6,1.9Hz,1H),7.51(t,J=6.6Hz,1H),7.33(br.s.,1H),7.24(td,J=7.7,3.7Hz,1H),7.02(dd,J=10.5,7.6Hz,1H),6.75(dd,J=7.6,2.3Hz,1H),6.56(dd,J=16.9,10.3Hz,1H),6.46-6.31(m,2H),6.26(dd,J=17.1,2.1Hz,1H),5.76(dd,J=10.2,1.9Hz,1H)。同樣CH2O質子：δ 3.56-3.43(m,8H),3.39(td,J=6.3,3.0Hz,4H)。其他質子計數約49，理論上50。
藉由上文所描述之程序，使用所指示之起始物質及程序製備之額外實例展示於表6中。
表6
(a)遵循用於製備實例63之程序或類似程序製備。
(b)藉由外消旋化合物之超臨界流體層析製備。未指定絕對組態。
實例100 3-氟-4-((2-乙烯基吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物100A：4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺
用氯三甲基矽烷(2.7μL，0.021mmol)及1,2-二溴乙烷(3.9mg，0.021mmol)處理鋅(55mg，0.834mmol)於THF(2mL)中之懸浮液，且在65℃下攪拌混合物30分鐘。使混合物冷卻至0℃，用2-氯-4-(氯甲基)吡啶(101mg，0.625mmol)於THF(0.5mL)中之溶液處理，且攪拌15分鐘。混合物用4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間物8](64mg，0.208mmol)及雙(三-第三丁基膦)鈀(21.3mg，0.042mmol)於THF(1mL)中之溶液處理且升溫至室溫，隨後在65℃下攪拌隔夜。添加額外的2-氯-4-(氯甲基)吡啶(101mg，0.625mmol)及雙(三-第三丁基膦)鈀(21.3mg，0.042mmol)，且在70℃下持續攪拌隔夜。使混合物冷卻至室溫且經由矽藻土過濾。用EtOAc稀釋濾液，依次用NaHCO3飽和水溶液及水洗滌，且乾燥並濃縮。對殘餘物進行用EtOAc-己烷(0%-100%梯度)溶離之矽膠管柱層析，得到呈黃色固體狀之4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(27mg，37%產率)。質譜m/z 354,356(M+H)+。
實例100：
遵循用於將中間物87A轉化成實例87之程序，在藉由製備型反相層析(Phenomenex Luna Axia C18管柱，5μm，用含有0.1% TFA之乙腈 -水溶離，10%-90%梯度)純化且藉由分配於EtOAc與NaHCO3飽和水溶液之間而轉化成游離鹼之後，以31%產率將4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺轉化成呈白色固體狀之3-氟-4-((2-乙烯基吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 346(M+H)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.30(d,J=5.3Hz,1H),7.95(d,J=8.1Hz,1H),7.80(d,J=10.8Hz,1H),7.62(d,J=8.2Hz,1H),7.47-7.38(m,2H),7.17-7.06(m,2H),6.72(dd,J=17.6,11.0Hz,1H),6.02(dd,J=17.6,1.1Hz,1H),5.43(dd,J=11.0,1.0Hz,1H),4.75(s,2H)。
比較實例101 7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-丙醯胺基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
比較中間物101A：N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙醯胺
遵循用於製備中間物49之程序，但丙酸酐取代丙烯醯氯，以88%產率將2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[根據美國專利第8,084,620號，中間物50-1製備]轉化成N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙醯胺。質譜m/z 290(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.21(s,1H),7.52-7.34(m,2H),7.14(t,J=7.6Hz,1H),2.37-2.30(m,5H),1.30(s,12H),1.10(t,J=7.6Hz, 3H)。
比較實例101：
遵循用於製備實例1之程序，以94%產率將4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號，實例73-2中所描述之程序合成]及N-(2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)丙醯胺轉化成7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-丙醯胺基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 412(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.41(s,1H),9.40(s,1H),8.16(br.s.,1H),7.95(d,J=7.9Hz,1H),7.85(d,J=1.0Hz,1H),7.54(d,J=7.9Hz,1H),7.47(br.s.,1H),7.33(t,J=7.7Hz,1H),7.08(d,J=7.4Hz,1H),6.99(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),6.93(d,J=7.4Hz,1H),6.73(d,J=8.4Hz,1H),4.98(s,1H),2.37(q,J=7.4Hz,2H),1.86(s,3H),1.44(s,6H),1.11(t,J=7.7Hz,3H)。
比較實例102 7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(3-乙基脲基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
比較中間物102A：1-(3-溴-2-甲基苯基)-3-乙基脲
在冰-水浴上攪拌三光氣(2.249g，7.58mmol)於甲苯(26.9mL)中之溶液，且用3-溴-2-甲基苯胺(3g，16.12mmol)及DIEA(5.63mL，32.2mmol)於甲苯(5.37mL)中之溶液緩慢處理。在室溫下攪拌所得懸浮液2小時，過濾且用EtOAc洗滌沈澱物。用鹽水迅速洗滌經合併之 濾液，乾燥且濃縮，得到呈棕色固體/油混合物狀之1-溴-3-異氰酸酯基-2-甲苯(3.36g)。用乙醇處理此粗物質之一部分，得到呈灰白色固體狀之1-(3-溴-2-甲基苯基)-3-乙基脲。質譜m/z 357,259(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.80(s,1H),7.75(d,J=7.5Hz,1H),7.24(dd,J=7.9,0.9Hz,1H),7.04(t,J=8.0Hz,1H),6.50(t,J=5.4Hz,1H),3.11(qd,J=7.2,5.6Hz,2H),1.07(t,J=7.3Hz,3H)。
比較實例102：
遵循用於製備實例4之程序，以33%產率將7-(2-羥基丙-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[中間物27]及1-(3-溴-2-甲基苯基)-3-乙基脲轉化成7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(3-乙基脲基)-2-甲基苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 427(M+H-H2O)+。1H NMR(500MHz,MeOH-d4)δ 7.86(d,J=7.9Hz,1H),7.79(d,J=7.9Hz,1H),7.68(d,J=1.0Hz,1H),7.31(t,J=7.7Hz,1H),7.08(d,J=7.4Hz,1H),7.05(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),7.00(d,J=7.9Hz,1H),6.91(d,J=8.4Hz,1H),3.28(q,J=6.9Hz,2H),1.94(s,3H),1.58(s,6H),1.18(t,J=7.2Hz,3H)。
比較實例103 4-(3-(2-氰基乙醯胺基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
比較中間物103A：2-氰基-N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺
在室溫下攪拌2-氰基乙酸(0.115g，1.35mmol)、EDC(0.370g，1.93mmol)、HOBT(0.296g，1.93mmol)及DIEA(0.562mL，3.22mmol)於THF(10.7mL)及DCM(10.7mL)中之溶液30分鐘。用2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯胺[根據美國專利第8,084,620號，中間物50-1製備](0.300g，1.29mmol)處理混合物，且在室溫下攪拌混合物16小時。添加額外的氰基乙酸(0.115g)，且在另外6小時之後，添加額外的EDC(0.370g)及HOBT(0.296g)。在室溫下攪拌2天後，將混合物分配於EtOAc與NaHCO3飽和水溶液之間。乾燥且濃縮有機相，且對殘餘物進行用EtOAc-己烷(30%-50%梯度)溶離之矽膠(24g)管柱層析，得到呈白色固體狀之2-氰基-N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺(344mg，89%產率)。質譜m/z 301(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.68(s,1H),7.52-7.47(m,1H),7.43-7.38(m,1H),7.18(t,J=7.6Hz,1H),3.91(s,2H),2.34(s,3H),1.30(s,12H)。
比較實例103：
遵循用於製備實例1之程序，以19%產率將4-溴-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[根據美國專利第8,084,620號，實例73-2中所描述之程序合成]及2-氰基-N-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)苯基)乙醯胺轉化成4-(3-(2-氰基乙醯胺基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 441(M+H)+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.42(s,1H),9.86(s,1H),8.16(br.s.,1H),7.96(d,J=7.4Hz,1H),7.86(d,J=1.0Hz,1H),7.74(d,J=7.9Hz,1H),7.47(br.s., 1H),7.34(t,J=7.7Hz,1H),7.08(d,J=7.4Hz,1H),7.00(dd,J=8.4,1.5Hz,1H),6.94(d,J=7.9Hz,1H),6.72(d,J=8.4Hz,1H),4.98(s,1H),3.31(s,2H),1.89(s,3H),1.43(s,6H)。
比較實例104 4-(3-胺基-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
根據美國專利第8,084,620號，實例76-36中所描述之程序製備比較實例104。
比較實例105 4-(3-苯甲醯胺基-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
遵循用於製備實例63之程序，但苯甲醯氯取代丙烯醯氯，以68%產率將4-(3-胺基-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺[比較實例104]轉化成4-(3-苯甲醯胺基-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 460(M+H-H2O)+。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 8.01(m,1H),7.96-7.90(m,1H),7.78(s,1H),7.64-7.49(m,5H),7.43(td,J=7.7,3.5Hz,1H),7.32-7.26(m,1H),7.13-6.98(m,3H),2.07-2.00(m,3H),1.59(s,6H)。
比較實例106 5-(2-甲基-3-(1-側氧基異吲哚啉-2-基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
根據美國專利第8,084,620號，實例3-99中所描述之程序製備比較實例106。
比較實例107 4-(3-乙醯胺基-2-甲基苯基)-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
根據美國專利第8,084,620號，實例5-2中所描述之程序製備比較實例107。
比較實例108 4-(3-(環丙烷甲醯胺基)-2-甲基苯基)-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
根據美國專利第8,084,620號，實例5-49中所描述之程序製備比較 實例108。
比較實例109 (R)-4-(3-乙醯胺基哌啶-1-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
根據美國專利第8,084,620號，實例18-1中所描述之程序製備比較實例109。
比較實例110 (RS)-2-(羥甲基)-5-(2-甲基-3-(1-側氧基異吲哚啉-2-基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
根據美國專利第8,084,620號，實例31-1中所描述之程序製備比較實例110。
比較實例111 7-丙烯醯胺基-4-(2-氟苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
根據美國專利第8,084,620號，實例57-10中所描述之程序製備比較實例111。
實例112 4-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(外消旋)
將丙烯醯氯(4.94μl，0.061mmol)添加至3-氟-4-(吡咯啶-3-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，TFA(中間物72)(25mg，0.061mmol)及DIPEA(0.053mL，0.304mmol)於THF(1mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌30分鐘。濃縮混合物且使用製備型HPLC(Phen Luna Axia C18 5μ；30×100mm管柱；在220nM下偵測；流動速率=40mL/min；歷經10分鐘20% B至100% B之連續梯度+在100% B下保持5分鐘，其中A=10：90：0.1 MeOH-H2O-TFA，且B=90：10：0.1 MeOH-H2O-TFA)純化粗物質，得到呈白色固體狀之4-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(11.1mg，50.9%產率)。質譜m/z 352(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 8.22(d,J=7.9Hz,1H),7.74(dd,J=13.1,1.7Hz,1H),7.65(d,J=8.1Hz,1H),7.52-7.43(m,1H),7.23(tt,J=7.6,1.5Hz,1H),6.80-6.59(m,1H),6.34(ddd,J=16.8,6.1,2.1Hz,1H),5.86-5.71(m,1H),4.79-4.63(m,1H),4.25-3.70(m,4H),2.71-2.47(m,2H)。
實例113及114 4-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一對映異構體)
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：Chiralcel OJ-H(3×25cm，5μm)；移動相：在130mL/min下之CO2-MeOH(55-45)，100巴，35℃；樣品製劑：10mg/mL於25mL MeOH-DCM-ACN-THF-DMF中；注入：4.5mL)分離(RS)-4-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(實例112)(20mg)之樣品。自管柱溶離之第一峰提供一種對映異構體(實例113)(2.1mg)。質譜m/z 352(M+H)+。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ 8.22(d,J=7.9Hz,1H),7.74(dd,J=13.0,1.7Hz,1H),7.65(d,J=7.5Hz,1H),7.52-7.41(m,1H),7.30-7.19(m,1H),6.81-6.59(m,1H),6.34(ddd,J=16.8,6.1,2.1Hz,1H),5.87-5.70(m,1H),4.79-4.58(m,1H),4.18(d,J=8.4Hz,1H),4.12-3.85(m,2H),3.74(d,J=12.3Hz,1H),2.80-2.45(m,2H)。自管柱溶離之第二峰提供一種對映異構體(實例114)(2.6mg)。質譜m/z 352(M+H)+。未指定實例113及114之絕對組態。
實例115 順-4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(外消旋)
在室溫下攪拌3-氟-4-(六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，TFA(19mg，0.041mmol)[中間物75]、丁-2-炔酸(3.42mg，0.041mmol)、DIPEA(7.11μl，0.041mmol)及HATU(15.49mg，0.041mmol)於DMF(1mL)中之溶液30分鐘。混合物用EtOAc稀釋，用水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮。使用製備型HPLC(YMC ODS C18 5μ；30×100mm管柱；在220nM下偵測；流動速率=30mL/min；歷經40分鐘10% B至100% B之連續梯度+在100% B下保持5分鐘，其中A=05：95：0.1 ACN-H2O-TFA，且B=95：05：0.1 ACN-H2O-TFA)純化粗物質，得到呈白色固體狀之(RS)-順4-(1-(丁-2-炔醯基)六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(12.3mg，70.7%產率)。質譜m/z 419(M+H)+。
實例116及117 順-4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一對映異構體)
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：OD-H(5×25cm，5μm)；移 動相：在300mL/min下之CO2-MeOH(65：35)；100巴，35℃；樣品製劑：85mg於18mL MeOH-DCM(1：1)中；注入：4.72mg/mL)分離(RS)-順-4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(實例115)(85mg)之樣品。自管柱溶離之第一峰提供呈白色固體狀之順-4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種對映異構體(實例116)(31.5mg)。自管柱溶離之第二峰提供呈灰白色固體狀之4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一對映異構體(實例117)(31mg)。質譜m/z 419(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.39(d,J=4.4Hz,1H),8.47(br.s.,1H),8.18-8.11(m,J=10.5Hz,1H),8.09(br.s.,1H),7.91(dd,J=14.2,6.7Hz,1H),7.75(dd,J=8.1,2.8Hz,1H),7.49(br.s.,1H),7.44-7.38(m,1H),7.22(t,J=7.6Hz,1H),5.21(dq,J=16.9,8.5Hz,1H),4.35-4.24(m,1H),3.74-2.77(m,3H),2.70-2.29(m,J=15.0Hz,1H),2.08(d,J=19.0Hz,3H),1.96-1.93(m,1H),1.87(br.s.,3H),1.61-1.34(m,1H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)歸因於旋轉異構體之混合物複合。兩種對映異構體之質譜及NMR光譜相同。尚未指定實例116及117之絕對立體化學。
實例118 (S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺
將DIPEA(2.62mL，15.01mmol)添加至(S)-4-(3-胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(中間物85)(0.98g，3.00mmol)、丁-2-炔酸 (0.265g，3.15mmol)及HATU(1.199g，3.15mmol)於DMF(15mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌45分鐘。混合物用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3、水(3次)洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮。使用ISCO急驟層析(矽膠/己烷/乙酸乙酯100：0至0：100梯度)純化粗產物，得到(0.520g，51%產率)。質譜m/z 393(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.38(s,1H),8.56(d,J=7.8Hz,1H),8.31(d,J=8.1Hz,1H),8.07(br.s.,1H),7.85(d,J=14.4Hz,1H),7.73(d,J=8.1Hz,1H),7.48(br.s.,1H),7.43-7.34(m,1H),7.24-7.15(m,1H),4.03(br.s.,1H),3.26-3.16(m,2H),2.99(br.s.,2H),2.03-1.79(m,6H),1.43(br.s.,1H)。
實例119 順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一對映異構體)
將丙烯醯氯(3.48μl，0.043mmol)添加至3-氟-4-(六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，TFA(20mg，0.043mmol)(中間物75)及DIPEA(7.49μl，0.043mmol)於THF(1mL)中之溶液中，且在室溫下攪拌30分鐘。濃縮混合物且使用製備型HPLC(YMC ODS C18 5μ；30×100mm管柱；在220nM下偵測；流動速率=30mL/min；歷經40分鐘10% B至100% B之連續梯度+在100% B下保持5分鐘，其中A=05：95：0.1 ACN-H2O-TFA，且B=95：05：0.1 ACN-H2O-TFA)純化粗物質，得到呈白色固體狀之(RS)-順-4-(1-丙烯醯基六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(10.9mg， 61.3%產率)。質譜m/z 407(M+H)+。
實例120及121 順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一對映異構體)
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：AS-H(3×25cm，5μm)；移動相：在180mL/min下之CO2-MeOH(70：30)；100巴，35℃；樣品製劑：76mg於8mL MeOH中；注入：9.5mg/mL)分離(RS)-順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(實例119)(76mg)之樣品。自管柱溶離之第一峰提供呈白色固體狀之順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種對映異構體(實例120)(26.3mg)。自管柱溶離之第二峰提供呈灰白色固體狀之順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一對映異構體(實例121)(26.5mg)。質譜m/z 407(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.38(s,1H),8.12(d,J=7.9Hz,1H),8.07(br.s.,1H),7.89(d,J=14.4Hz,1H),7.73(d,J=8.1Hz,1H),7.46(br.s.,1H),7.43-7.37(m,1H),7.21(t,J=7.3Hz,1H),6.89(d,J=12.2Hz,1H),6.10(dd,J=16.7,2.4Hz,1H),5.70(br.s.,1H),5.33-4.86(m,1H),4.50-3.92(m,1H),3.81-2.71(m,5H),2.46-2.35(m,1H),1.97-1.74(m,3H),1.43(br.s.,1H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)歸因於旋轉異構體之混合物複合。兩種對映異構體之質譜及NMR光譜相同。尚未指定實例120及121之絕對立體化學。
實例122 3-氟-4-((2-乙烯基嘧啶-5-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物122A：3-氟-4-乙烯基-9H-咔唑-1-甲醯胺
用氮氣淨化4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(100mg，0.326mmol)、2,4,6-三乙烯基環三硼氧烷吡啶複合物(94mg，0.39mmol)、2M磷酸三鉀(0.41mL，0.81mmol)、1,1'-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(10.61mg，0.016mmol)於THF(3mL)中之混合物，且在60℃下攪拌隔夜。使混合物冷卻至室溫且濃縮。使用ISCO急驟層析(矽膠/己烷/乙酸乙酯100：0至0：100梯度)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之3-氟-4-乙烯基-9H-咔唑-1-甲醯胺(70mg，85%產率)。質譜m/z 255(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 8.23(d,J=8.1Hz,1H),7.73(d,J=12.1Hz,1H),7.61(d,J=8.2Hz,1H),7.49-7.37(m,2H),7.19(td,J=7.6,1.0Hz,1H),6.08(dt,J=17.9,1.7Hz,1H),5.90(dt,J=11.7,1.7Hz,1H)。
中間物122B：3-氟-4-甲醯基-9H-咔唑-1-甲醯胺
將2%四氧化鋨於水中之溶液(0.35mL，0.03mmol)添加至3-氟-4- 乙烯基-9H-咔唑-1-甲醯胺(70mg，0.26mmol；中間物8)及2,6-二甲基吡啶(0.06mL，0.55mmol)於二噁烷(0.8mL)中之溶液中。隨後，將高碘酸鈉(236mg，1.10mmol)於水(0.3mL)中之溶液添加至反應混合物中且攪拌5小時。混合物用EtOAc稀釋，用水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮。使用ISCO急驟層析(矽膠/己烷/乙酸乙酯100：0至0：100梯度)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之3-氟-4-甲醯基-9H-咔唑-1-甲醯胺(60mg，85%產率)。質譜m/z 257(M+H)+。
中間物122C：4-((2-氯嘧啶-5-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺
在80℃下攪拌3-氟-4-甲醯基-9H-咔唑-1-甲醯胺(10mg，0.04mmol)及4-甲苯磺醯肼(7.99mg，0.04mmol)於二噁烷(1mL)中之溶液90分鐘。LCMS指示甲苯磺醯腙形成。添加2-氯吡啶-4-硼酸(9.21mg，0.06mmol)及碳酸鉀(8.09mg，0.06mmol)，且在110℃下攪拌2小時(參考：Nature Chem.Voll.2009年9月.Doi：10.1038/NCHEM.328)。使混合物冷卻至室溫，用EtOAc稀釋，用水洗滌，乾燥(MgSO4)且濃縮。使用製備型HPLC(Phen Luna Axia C18 5μm；30×100mm管柱，用含有0.1% TFA之甲醇-水溶離，20%-100%梯度，40mL/min)純化粗物質，得到呈淡黃色固體狀之4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(2.3mg，16.66%產率)。質譜m/z 355(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.44(br.s.,1H),8.32(d,J=5.3Hz,1H),7.89(d,J=7.5Hz,1H),7.61-7.57(m,1H),7.55-7.49(m,1H),7.45(d,J=10.0Hz,1H),7.25-7.22(m,2H),7.21-7.16(m,1H),6.51(br.s.,1H),4.71(s,2H)。
實例122：
在90℃下攪拌4-((2-氯嘧啶-5-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(10mg，0.028mmol)、與吡啶複合之2,4,6-三乙烯基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼雜環己烷(1：1)(10.18mg，0.042mmol)、2M碳酸鉀(0.042mL，0.085mmol)及Pd(Ph3P)4(3.26mg，2.82μmol)於1,4-二噁烷(1mL)中之溶液18小時。濃縮混合物且經由製備型LC/MS(XBridge C18，19×200mm，5-μm粒子管柱，用含有10-mM乙酸銨之95乙腈-水溶離，20%-60%梯度，20mL/min)純化粗物質，得到3-氟-4-((2-乙烯基嘧啶-5-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。質譜m/z 347(M+H)+。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.44(br.s.,1H),8.32(d,J=5.3Hz,1H),7.89(d,J=7.5Hz,1H),7.61-7.57(m,1H),7.55-7.49(m,1H),7.45(d,J=10.0Hz,1H),7.25-7.22(m,2H),7.21-7.16(m,1H),6.51(br.s.,1H),4.71(s,2H)。
實例123 順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺
將丙烯醯氯(4.49μl，0.055mmol)添加至3-氟-4-(六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺，TFA(中間物76)(25mg，0.055mmol)及DIPEA(9.65μl，0.055mmol)於THF(0.5mL)中之溶液中，且攪拌30分鐘。濃縮混合物且使用製備型HPLC(YMC ODS C18 5μ；30×100mm管柱；在220nM下偵測；流動速率=30mL/min；歷經40分 鐘10% B至100% B之連續梯度+在100% B下保持2分鐘，其中A=05：95：0.1 ACN-H2O-TFA，且B=95：05：0.1 ACN-H2O-TFA)純化粗物質，得到呈淡棕色固體狀之(RS)-順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(8.9mg，39.8%產率)。質譜m/z 393(M+H)+。
實例124及125 順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一對映異構體)
藉由對掌性超臨界流體層析(管柱：AS-H(3×25cm，5μm)；移動相：在140mL/min下之CO2-MeOH(75：25)；100巴，40℃；樣品製劑：108mg於MeOH中；注入：1.35mg/mL)分離(RS)-順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(實例123)(108mg)之樣品。自管柱溶離之第一峰提供呈白色固體狀之順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種對映異構體(實例124)(42mg)。自管柱溶離之第二峰提供呈灰白色固體狀之順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺之另一對映異構體(實例125)(35mg)。質譜m/z 393(M+H)+。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 8.07-7.98(m,1H),7.73-7.66(m,1H),7.60-7.53(m,1H),7.44-7.34(m,1H),7.22-7.05(m,1H),6.88-6.56(m,1H),6.38-6.25(m,1H),5.90-5.66(m,1H),4.73-4.65(m,1H),4.10-3.74(m,4H),3.64(d,J=4.5Hz,1H),3.53-3.47(m,1H),3.41-3.18 (m,1H),2.41-2.03(m,2H)。1H NMR(400MHz,MEOH-d4)歸因於旋轉異構體之混合物複合。兩種對映異構體之質譜及NMR光譜相同。尚未指定實例124及125之絕對立體化學。
實例126 4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(外消旋)
中間物126A：5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸
以使得反應溫度保持在0℃以下之速率向在-10℃下之2-胺基-4溴-5-氯苯甲酸(1.0g，3.99mmol)於濃HCl(20mL)中之懸浮液中逐滴添加亞硝酸鈉(0.289g，4.19mmol)於水(2.0mL)中之溶液。在0℃下攪拌混合物15分鐘。以使反應溫度保持在-5℃以下之速率將氯化錫(II)(1.590g，8.38mmol)於濃HCl(5.0mL)中之溶液添加至混合物中。在室溫下攪拌反應混合物60分鐘。過濾沈澱物，用水洗滌且風乾，得到呈白色固體狀之4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸，HCl(752mg，1.868mmol，46.8%產率)。
在110℃下攪拌4-溴-5-氯-2-肼基苯甲酸，HCl(1.0g，3.31mmol)及環己酮(0.650g，6.62mmol)於HOAc(20mL)中之混合物18小時。 過濾沈澱物且用HOAc及DCM洗滌。粗物質產生呈淡綠色固體狀之5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(893g，2582mmol，7.80E+04%產率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 11.12(s,1H),7.67(s,1H),3.01(br.s.,2H),2.76(br.s.,2H),1.78(br.s.,4H)。LCMS：1.21分鐘，M+H 329。
中間物126B：4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯
向5-溴-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲酸(中間物126A)(2.27g，6.91mmol)於THF(80mL)中之溶液中添加DDQ(3.14g，13.82mmol)。在60℃下攪拌混合物18小時。濃縮混合物，得到4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸。在回流下攪拌4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸及硫酸(0.736mL，13.82mmol)於EtOH(100mL)中之混合物18小時。濃縮混合物。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至50：50梯度)，得到呈淡棕色固體狀之4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(760mg，2.048mmol，29.6%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.12(br.s.,1H),8.82(dd,J=8.1,0.9Hz,1H),8.23-8.08(m,1H),7.65-7.48(m,2H),7.37(ddd,J=8.1,6.6,1.6Hz,1H),4.52(q,J=7.1Hz,2H),1.55-1.47(m,3H)。
中間物126C：4-(1-(第三丁氧基羰基)六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯
在105℃下在氮氣下攪拌4-溴-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(200mg，0.567mmol，I-80)、八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-甲酸第三丁酯(141mg，0.624mmol)、碳酸銫(425mg，1.305mmol)、BINAP(17.66mg，0.028mmol)及Pd2(dba)3(26.0mg，0.028mmol)於脫氣1,4-二噁烷(3mL)中之混合物2天。混合物用EtOAc(15mL)稀釋且用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×15mL)及1.0M HCl水溶液(15mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至50：50梯度)，得到呈淡棕色膠狀之4-(1-(第三丁氧基羰基)六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(198mg，0.358mmol，63.1%產率)。LCMS：1.36分鐘，M+H 498。
中間物126D：6-(1-胺甲醯基-3-氯-9H-咔唑-4-基)八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-甲酸第三丁酯
在60℃下攪拌4-(1-(第三丁氧基羰基)六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(198mg，0.398mmol)及2.0M氫氧化鈉(1.988mL，3.98mmol)於MeOH(15mL)中之混合物3小時。將混合物倒入1.0N HCl水溶液(60mL)中且用EtOAc(30mL)萃取。乙酸 乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮，得到4-(1-(第三丁氧基羰基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸。LCMS：1.17分鐘，M+H 470。
在室溫下攪拌4-(1-(第三丁氧基羰基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲酸、氯化銨(213mg，3.98mmol)、BOP(176mg，0.398mmol)及TEA(0.277mL，1.988mmol)於DMF(5.0mL)中之混合物2小時。混合物用EtOAc(15mL)稀釋且用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×15mL)及1.0M HCl水溶液(15mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至0：100梯度)，得到呈白色固體狀之6-(1-胺甲醯基-3-氯-9H-咔唑-4-基)八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-甲酸第三丁酯(125mg，0.240mmol，60.3%產率)。LCMS：1.13分鐘，M+H 469。
中間物126E：3-氯-4-(八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
向6-(1-胺甲醯基-3-氯-9H-咔唑-4-基)八氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-甲酸第三丁酯(75mg，0.160mmol)於DCM(1.0mL)中之溶液中添加TFA(1.0mL)。在室溫下攪拌混合物30分鐘。濃縮混合物，得到3-氯-4-(八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺。
實例126：
向含3-氯-4-(八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺、丁-2-炔酸(13.45mg，0.160mmol)及BOP(70.7mg，0.160mmol) 之DMF(3.0mL)中添加TEA(0.111mL，0.800mmol)。在室溫下攪拌混合物60分鐘。混合物用EtOAc(15mL)稀釋且用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×15mL)及1.0MHCl水溶液(15mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至0：100梯度)，得到呈白色固體狀之實例126(65mg，0.142mmol，89%產率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.51(d,J=3.7Hz,1H),8.33-8.14(m,2H),8.11-8.03(m,1H),7.75(d,J=8.1Hz,1H),7.62-7.49(m,1H),7.44(s,1H),7.25(t,J=7.5Hz,1H),5.49-5.29(m,1H),4.40-4.21(m,1H),3.67-3.39(m,2H),3.34-3.08(m,2H),2.95-2.64(m,1H),2.45-2.33(m,1H),2.15-1.78(m,6H),1.62-1.31(m,1H)。LCMS：0.94分鐘，M+H 435。
實例127及128 4-((4aS,7aS)-1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺及4-((4aR,7aR)-1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(單一異構體)
藉由對掌性超臨界流體層析(Chiralcel OJ(3×25cm，5μm)；移動相：在160mL/min下之CO2-MeOH w 0.1% NH4OH(67/33)；100巴，40℃；樣品製劑：85mg於6mL MeOH w 0.1% NH4OH中來分離4-(1-(丁-2-炔醯基)六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(65mg)。自管柱溶離之第一峰提供呈白色粉末狀之4-(1-(丁-2- 炔醯基)六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺之一種對映異構體(18mg)。自管柱溶離之第二峰提供呈白色粉末狀之4-(1-(丁-2-炔醯基)六氫-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺之第二對映異構體(17mg)。
實例129 3-氟-4-((2-(丙-1-炔-1-基)吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺
中間物129A：4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸乙酯
根據中間物126B中之一般程序，使用製備中間物8中之酸中間物(4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸)製備中間物129A。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.04(br.s.,1H),8.76(d,J=7.9Hz,1H),7.85(d,J=9.3Hz,1H),7.64-7.48(m,2H),7.35(ddd,J=8.1,6.5,1.7Hz,1H),4.51(q,J=7.1Hz,2H),1.50(t,J=7.2Hz,3H)。
中間物129B：3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-9H-咔唑-1-甲酸乙酯
在85℃下攪拌4-溴-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(700mg，2.082 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(555mg，2.186mmol)、乙酸鉀(613mg，6.25mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(85mg，0.104mmol)於二噁烷(10mL)中之混合物18小時。混合物用EtOAc(15mL)稀釋且用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×15mL)及1.0M HCl水溶液(15mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至0：100梯度)，得到呈灰白色固體狀之3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(522mg，1.226mmol，58.9%產率)。LCMS：1.18分鐘，M+H 384。
中間物129C：4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸乙酯
向3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(100mg，0.261mmol)、1,1'-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(8.50mg，0.013mmol)及2.0M磷酸三鉀(0.391mL，0.783mmol)於THF(1.0mL)中之溶液中添加2-氯-4-(氯甲基)吡啶(42.3mg，0.261mmol)，於密封小瓶中在室溫下在氮氣下攪拌混合物18小時。混合物用EtOAc(15mL)稀釋且用碳酸氫鈉飽和水溶液(15mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至60：40梯度)，得到呈白色固體狀之4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(75mg，0.186mmol，71.3%產率)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 10.12(br.s.,1H),8.25(dd,J=5.1,0.5Hz,1H),7.97-7.82(m,2H),7.62-7.45(m,2H),7.26-7.17(m,2H),7.11(dd,J=5.1,1.0Hz,1H),4.68(s,2H),4.53(q,J=7.1Hz,2H),1.56-1.45(m,3H)。LCMS：1.14分鐘，M+H 383。
中間物129D：4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺
在60℃下攪拌4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸乙酯(75mg，0.196mmol)及氫氧化鋰(0.392mL，0.392mmol)於THF(2.0mL)中之混合物18小時。將1.0N HCl水溶液(0.4mL)添加至混合物中，且濃縮混合物，得到4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸。LCMS 5：0.94分鐘，M+H 355。
在室溫下攪拌4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲酸、氯化銨(52.4mg，0.980mmol)、BOP(87mg，0.196mmol)及TEA(0.137mL，0.980mmol)於DMF(2.0mL)中之混合物30分鐘。混合物用EtOAc(15mL)稀釋且用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×15mL)及1.0M HCl水溶液(15mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮。對粗產物進行ISCO急驟層析(矽膠/己烷-EtOAc 100：0至0：100梯度)，得到呈灰白色固體狀之4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(67mg，0.170mmol，87%產率)。LCMS：0.88分鐘，M+H 354。
實例129：
於密封小瓶中在90℃下在氮氣下攪拌4-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(20mg，0.057mmol)、三丁基(1-丙炔基)錫(55.8mg，0.170mmol)、氯化鋰(7.19mg，0.170mmol)及肆(三苯基膦)鈀(0)(3.27mg，2.83μmol)於DMF(1.0mL)中之混合物18小時。混合物用EtOAc(15mL)稀釋且用碳酸氫鈉飽和水溶液(2×15mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由製備型HPLC(管柱：XBridge C18，19×200mm，5-μm粒子；移動相A：具有10-mM乙酸銨之5：95 乙腈：水；移動相B：具有10-mM乙酸銨之95：5乙腈：水；梯度：歷經25分鐘25-55% B，隨後在55% B下保持2分鐘；流速：20mL/min)純化粗產物，得到3-氟-4-((2-(丙-1-炔-1-基)吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(14.1mg，0.037mmol，66.3%產率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 11.55(s,1H),8.36(d,J=5.0Hz,1H),8.25(br.s.,1H),8.00-7.88(m,2H),7.77(d,J=8.1Hz,1H),7.62(br.s.,1H),7.40(t,J=7.6Hz,1H),7.24-7.04(m,3H),4.65(br.s.,2H),1.97(s,3H)。LCMS：0.71分鐘，M+H 358。
實例130 5-((S)-3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(外消旋)
中間物130A：5-溴-8-氰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯
經由注射器向在室溫下之5-溴-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(1.00g，2.61mmol)於四氫呋喃(6mL)中之均勻溶液中逐滴添加磷醯三氯(0.485mL，5.22mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5天。在減壓下濃縮不均勻反應混合物。用乙酸乙酯稀釋殘餘物且藉由真空過濾收集所得固體，用乙酸乙酯洗滌且乾燥，得到呈黃色固體狀之5-溴-8-氰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.699g， 1.91mmol，73%產率)。產物之UPLC滯留時間=1.40分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=365.2及367.1。
中間物130B：5-((S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)哌啶-1-基)-8-氰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯
用真空及氮氣使5-溴-8-氰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.699g，1.91mmol)、(S)-哌啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(0.460g，2.30mmol)及(S)-哌啶-3-基胺基甲酸第三丁酯(0.460g，2.30mmol)於二噁烷(10mL)中之混合物脫氣(3次)。添加BINAP(0.060g，0.096mmol)，繼而添加Pd2(dba)3(0.088g，0.096mmol)，且使混合物脫氣(3次)。將反應混合物浸沒於103℃下之油浴中且攪拌約24小時。在冷卻至室溫之後，反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌且用鹽水洗滌。收集有機層且依次用乙酸乙酯萃取水層(2次)。經合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由ISCO急驟層析(40g管柱；0%-100%乙酸乙酯/己烷)純化殘餘物，得到呈淡黃色固體狀之5-((S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)哌啶-1-基)-8-氰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.718g，1.48mmol，77%產率)。產物之UPLC滯留時間=1.48分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=485.5。
中間物130C：5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫- 1H-咔唑-2-甲酸
將5-((S)-3-(((苯甲氧基)羰基)胺基)哌啶-1-基)-8-氰基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸乙酯(0.699g，1.348mmol)與90%硫酸水溶液(9.98ml，168mmol)之混合物浸沒於60℃下之油浴中且攪拌60分鐘。向冷卻至0℃之經攪拌之反應混合物中逐滴添加氫氧化鈉水溶液(10M)(33.7ml，337mmol)。添加少量額外滴之氫氧化鈉溶液直至pH為約9為止。隨後用鹽酸使pH降低至約5，且在減壓下過濾懸浮液。用水洗滌固體且充分乾燥，得到呈淡棕色固體狀之5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸(0.400g，1.07mmol，79%產率)。產物之UPLC滯留時間=0.723分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=375.2。
中間物130D：5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸甲酯
向在室溫下之5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸(0.380g，1.02mmol)於甲醇(2.5mL)與二氯甲烷(2.5mL)之混合物中之溶液中逐滴添加三甲基矽烷基重氮甲烷(2M於 乙醚中；0.558mL，1.12mmol)，同時藉由HPLC監測其，直至反應幾乎完成為止。在減壓下移除溶劑，且反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用碳酸氫鈉飽和水溶液洗滌，用鹽水洗滌且經無水硫酸鈉乾燥。收集在處理期間形成之沈澱物且發現其為酸性起始物質。有機層經無水硫酸鈉乾燥且濃縮，得到呈淡黃色固體狀之5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸甲酯(0.269g，0.693mmol，68%產率)。產物之UPLC滯留時間=0.753分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=389.2。
中間物130E：5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
歷經30分鐘向在-78℃下之5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-8-胺甲醯基-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2-甲酸甲酯(0.269g，0.693mmol)於四氫呋喃(5mL)中之溶液中逐滴添加甲基鋰(1.6M於乙醚中)(3當量；1.3mL，78mmol)。在-78℃下攪拌反應混合物45分鐘。歷經25分鐘添加額外3當量之甲基鋰(1.3mL)，且在-78℃下攪拌反應混合物額外1.5小時。在-78℃下用氯化銨飽和水溶液淬滅反應物，升溫至室溫。混合物用乙酸乙酯稀釋且用水洗滌，產生固體。藉由真空過濾收集固體，用水洗滌且充分乾燥。濾液用乙酸乙酯萃取，用水洗滌且用鹽水洗滌。有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。組合兩種回收到之產物，得到呈淡黃色固體狀之5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-6-氟-2-(2-羥基丙 -2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.105g，0.270mmol，39.0%產率)。產物之UPLC滯留時間=0.745分鐘-管柱：Chromolith SpeedROD 4.6×50mm(4分鐘)；溶劑A=10% MeOH、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeOH、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=389.2。
實例130：
在室溫下攪拌5-((S)-3-胺基哌啶-1-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.079g，0.203mmol)、丁-2-炔酸(0.021g，0.244mmol)、HATU(0.108g，0.285mmol)及惠寧氏鹼(Hunig's Base)(0.124mL，0.712mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(1.0mL)中之混合物40分鐘。混合物用乙酸乙酯稀釋，用10%氯化鋰水溶液洗滌(2次)且用鹽水洗滌。收集有機層且依次用乙酸乙酯萃取水層(2次)。經合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且濃縮。藉由ISCO急驟層析(4g管柱；0%-5%甲醇/二氯甲烷)純化得到呈淡黃色固體狀之產物。用甲醇濕磨化合物，伴隨音波處理且乾燥，得到呈灰白色固體狀之5-((S)-3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.0072g，0.015mmol，7.2%產率)。產物之UPLC滯留時間=0.965分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=455.4。
實例131及132 5-((S)-3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(單一異構體)
藉由反相製備型HPLC純化來自實例130之濾液，得到兩種純掌性異構體：呈白色固體狀之實例131(非鏡像異構體1)。產物之UPLC滯留時間=0.967分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=455.3。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.61(s,1H),8.51(br.s.,1H),7.90(br.s.,1H),7.42-7.36(m,1H),7.32(br.s.,1H),4.25-4.21(m,1H),3.86-3.77(m,1H),3.25-3.11(m,2H),3.06(d,J=11.3Hz,1H),2.88(dd,J=16.9,4.5Hz,3H),2.68-2.58(m,1H),2.46-2.39(m,1H),2.09(d,J=7.9Hz,1H),1.94(s,3H),1.85(br.s.,1H),1.78-1.60(m,3H),1.36-1.26(m,2H)及1.13(d,J=3.8Hz,6H)。
呈白色固體狀之實例132(非鏡像異構體2)。產物之UPLC滯留時間=0.973分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=455.3。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.60(s,1H),8.46(br.s.,1H),7.91(br.s.,1H),7.42-7.37(m,1H),7.32(br.s.,1H),4.23(s,1H),3.95-3.86(m,1H),3.19-3.11(m,2H),3.02(br.s.,2H),2.87(dd,J=16.8,4.7Hz,1H),2.71(d,J=10.7Hz,2H),2.46-2.38(m,1H),2.13-2.05(m,2H),1.93(s,3H),1.86(br.s.,1H),1.73(br.s.,1H),1.70-1.58(m,2H),1.34-1.25(m,1H)及1.13(s,6H)。
藉由上文所描述之程序或與此項技術中已知之彼等程序類似的 程序，使用適當的起始物質製備之額外實例展示於表8中。
實例203 5-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
中間物203A：5-(8-胺甲醯基-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸第三丁酯
用真空及氮氣使5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(純掌性對映異構體1，參見美國8,084,620，實例73-1，0.177g，0.504mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸第三丁酯(0.217g，0.605mmol)、磷酸三鉀(2M於水中)(0.76mL，1.512mmol)及四氫呋喃(3mL)之混合物脫氣(3次)。添加1,1'-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(0.016g，0.025mmol)且使反應混合物脫氣(2次)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌，用鹽水洗滌且經無水硫酸鈉乾燥。在減壓下濃縮，繼而藉由ISCO急驟層析(12g管柱；0%-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到呈淡黃色固體狀之5-(8-胺甲醯基-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸第三丁酯(0.208g，0.409mmol，81%產率)。產物之UPLC滯留時間=1.22分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=504.4。
中間物203B：2-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
在室溫下攪拌5-(8-胺甲醯基-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸第三丁酯(0.208g，0.413mmol)與三氟乙酸(3mL)之混合物45分鐘。在減壓下濃縮反應混合物，且殘餘物用乙酸乙酯稀釋，且用1.5M磷酸鉀(二元的)水溶液洗滌(2次)。收集有機層且依次用乙酸乙酯萃取水層(2次)。經合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥。在減壓下濃縮得到呈淡黃色固體狀之2-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.163g，0.404mmol，98%產率)。產物之UPLC滯留時間=0.777分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=404.3。
實例203：
向在室溫下之2-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.163g，0.404mmol)及惠寧氏鹼(0.282mL，1.62mmol)於四氫呋喃(3.0mL)中之混合物中添加丙烯醯氯(0.033mL，0.404mmol)。攪拌反應混合物20分鐘。反應混合物用二氯甲烷稀釋，用水洗滌且經無水硫酸鈉乾燥。在減壓下濃縮，繼而藉由ISCO急驟層析(12g管柱；梯度：0%-5%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈白色固體狀之5-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.055g，0.118mmol，29% 產率)。產物之UPLC滯留時間=0.958分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=458.3。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.75(s,1H),8.01(br.s.,1H),7.59(dd,J=7.5,4.7Hz,1H),7.32(br.s.,1H),7.29-7.22(m,2H),7.08(dd,J=5.5,2.7Hz,1H),6.93(dd,J=16.6,10.5Hz,0.4H),6.79(dd,J=16.6,10.4Hz,0.6H),6.75-6.68(m,1H),6.13(dd,J=16.6,2.1Hz,1H),5.75-5.64(m,1H),4.92-4.81(m,1H),4.81-4.67(m,1H),4.15(s,1H),3.79-3.68(m,1H),3.67-3.52(m,1H),2.88(d,J=16.5Hz,1H),2.47-2.23(m,3H),1.93-1.69(m,3H),1.61-1.50(m,1H)及1.07(s,6H)。
實例204 5-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
中間物204A：5-(8-胺甲醯基-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸第三丁酯
用真空及氮氣使5-溴-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8- 甲醯胺(純掌性對映異構體2，參見U.S.8,084,620，實例73-1)(0.185g，0.527mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸第三丁酯(0.227g，0.632mmol)、磷酸三鉀(2M於水中)(0.79mL，1.58mmol)及四氫呋喃(3mL)之混合物脫氣(3次)。添加1,1'-雙(二第三丁基膦基)二茂鐵二氯化鈀(0.017g，0.026mmol)且使反應混合物脫氣(2次)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌，用鹽水洗滌且經無水硫酸鈉乾燥。在減壓下濃縮，繼而藉由ISCO急驟層析(12g管柱；0%-100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到呈淡黃色固體狀之第三丁基-5-(8-胺甲醯基-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸酯(0.250g，0.491mmol，93%產率)。產物之UPLC滯留時間=1.22分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=504.4。
中間物204B：2-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺
在室溫下攪拌5-(8-胺甲醯基-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-5-基)-3,4-二氫異喹啉-2(1H)-甲酸第三丁酯(0.250g，0.496mmol)與三氟乙酸(3mL)之混合物45分鐘。在減壓下濃縮反應混合物，且殘餘物用乙酸乙酯稀釋，且用1.5M磷酸鉀(二元的)水溶液洗滌(2次)。收集有機層且依次用乙酸乙酯萃取水層(2次)。經合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥。在減壓下濃縮得到呈灰白色固體狀之2-(2-羥基 丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.180g，0.446mmol，90%產率)。產物之UPLC滯留時間=0.777分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=404.3。
實例204：
向在室溫下之2-(2-羥基丙-2-基)-5-(1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.180g，0.446mmol)及惠寧氏鹼(0.312mL，1.784mmol)於四氫呋喃(3.0mL)中之混合物中添加丙烯醯氯(0.036mL，0.446mmol)。攪拌反應混合物20分鐘。HPLC及LCMS指示反應完成。反應混合物用二氯甲烷稀釋，用水洗滌且經無水硫酸鈉乾燥。在減壓下濃縮，繼而藉由ISCO急驟層析(12g管柱；梯度：0%-5%甲醇/二氯甲烷)純化，得到呈白色固體狀之5-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(0.078g，0.167mmol，37.5%產率)。產物之UPLC滯留時間=0.962分鐘-管柱：Phenomenex Kinetex C18 2.1×50mm(1.5分鐘梯度)；溶劑A=10% MeCN、90% H2O、0.1% TFA；溶劑B=90% MeCN、10% H2O、0.1% TFA。LC/MS M+1=458.4。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 10.75(s,1H),8.01(br.s.,1H),7.59(dd,J=7.5,4.7Hz,1H),7.32(br.s.,1H),7.29-7.22(m,2H),7.08(dd,J=5.5,2.7Hz,1H),6.93(dd,J=16.6,10.5Hz,0.4H),6.79(dd,J=16.6,10.4Hz, 0.6H),6.75-6.68(m,1H),6.13(dd,J=16.6,2.1Hz,1H),5.75-5.64(m,1H),4.92-4.81(m,1H),4.81-4.67(m,1H),4.15(s,1H),3.79-3.68(m,1H),3.67-3.52(m,1H),2.88(d,J=16.5Hz,1H),2.47-2.23(m,3H),1.93-1.69(m,3H),1.61-1.50(m,1H)及1.07(s,6H)。
生物分析
本發明化合物之藥理學特性可藉由多種生物分析確證。已對本發明化合物進行下文所例示之生物分析。
人類重組Btk酶分析
向V底384孔培養盤中添加測試化合物、人類重組Btk(1nM，Invitrogen Corporation)、螢光化肽(1.5μM)、ATP(20μM)及分析緩衝液(20mM HEPES pH 7.4，10mM MgCl2，0.015% Brij 35界面活性劑及含4mM DTT之1.6% DMSO)，其最終體積為30μL。在室溫下培育60分鐘後，藉由將45μL 35mM EDTA添加至各樣品中來終止反應。在Caliper LabChip 3000(Caliper,Hopkinton,MA)上藉由電泳分離螢光基質及磷酸化產物來對反應混合物進行分析。藉由與100%抑制之無酶對照反應及0%抑制之無抑制劑對照進行比較來計算抑制數據。產生劑量反應曲線以測定抑制50%激酶活性所需之濃度(IC50)。以10mM將化合物溶解於DMSO中且在十一種濃度下進行評估。
拉莫斯FLIPR分析
將於RPMI minus酚紅(Invitrogen 11835-030)中密度為2×106個細胞/mL之拉莫斯RA1 B細胞(ATCC CRL-1596)及含有0.1% BSA(Sigma A8577)之50mM HEPES(Invitrogen 15630-130)添加至一半體積之鈣裝載緩衝液(用於丙磺舒(probenecid)敏感性分析之BD整體套組，640177號)中，且在室溫下在暗處培育1小時。使裝載染料之細胞成球粒(Beckmann GS-CKR，1200rpm，室溫，5分鐘)且在室溫下再懸浮於具有50mM HEPES及10% FBS之RPMI minus酚紅中，達至1×106個細 胞/mL之密度。將150μL等分試樣(150,000個細胞/孔)接種至96孔聚-D-離胺酸塗佈之分析培養盤(BD 35 4640)中，且短暫離心(Beckmann GS-CKR 800rpm，5分鐘，無制動)。隨後，將於0.4% DMSO/RPMI minus酚紅+50mM HEPES+10% FBS中之50μL化合物稀釋液添加至孔中且在室溫下在暗處培育該盤1小時。如上所述短暫離心分析盤，之後量測鈣水準。使用FLIPR1(分子裝置)，藉由添加山羊抗人類IgM(Invitrogen AHI0601)至2.5μg/mL來刺激細胞。量測到細胞內鈣濃度變化持續180秒，且相對於在僅存在刺激下可見之峰鈣水準測定抑制百分比。拉莫斯分析量測化合物移動通過細胞膜進入細胞內部之能力。較低IC50值指示較大的移動進入細胞內部之能力。
表9展示獲自人類重組Btk酶分析中實例1-66、69、72-100及112-202之評估之Btk IC50值及獲自拉莫斯FLIPR分析中實例1-12、14-65、69、72、74-90、92-96、98-100、112-126、128-129、131-140、144、155-156、159-170、172、174-177、179-183及186-187之評估之拉莫斯IC50值。
表10展示來自人類重組Btk酶分析中比較實例101至111之評估之Btk IC50值及獲自拉莫斯FLIPR分析之比較實例101至105及110之評估之拉莫斯IC50值。
將如表9中測試實例所例示之式(IIa)化合物與比較實例101至111進行比較，且發現其尤其有利。如表9及10中所示，於所報導之測試 中，本發明之實例1-12、14-65、69、72、74-78、87、89-90、92、95-96及98-100展示改良之Btk抑制活性及進入細胞內部之改良穿透之組合的驚人優勢，分別如Btk IC50值及拉莫斯IC50值所表徵。實例1-12、14-65、69、72、74-78、87、89-90、92、95-96及98-100具有所報導之Btk分析中小於2nM之Btk IC50值及拉莫斯FLIPR分析中小於450nM之拉莫斯IC50值的組合。相比之下，發現比較實例101至102及104至111具有大於4.0nM之Btk IC50值。發現比較實例103具有1.4之Btk IC50值及570nM之拉莫斯IC50值之組合。
人類全血Btk不活化分析
在各種濃度下將含有作為抗凝劑之ACD-A之人類全血(0.2mL)與測試化合物一起培育60分鐘。藉由添加含有40nM實例88之化合物之裂解緩衝液(0.2mL，Cell Signaling，目錄號9803)來製備裂解物。在室溫下振盪1小時後，將裂解物轉移至96孔塗佈抗生蛋白鏈菌素之培養盤(Pierce，目錄號15120)中，培育另外1小時且用含有0.05% Tween 20之PBS洗滌3次。添加小鼠抗Btk抗體(BD Biosciences，目錄號611116)，繼而培育另外1小時。再次洗滌培養盤，隨後添加辣根過氧化酶(HRP)聯結山羊抗小鼠IgG(Invitrogen，目錄號G21040)。培育培養盤另外1小時且如上文所描述進行洗滌。將3,3',5,5'-四甲基聯苯胺添加至培養盤中且15分鐘後藉由添加H2SO4終止反應。量測吸光度，且相對於不具有測試化合物之對照孔，計算如藉由可用以與實例88之化合物複合且捕獲於塗佈抗生蛋白鏈菌素之培養盤上之Btk量所量測之不活化百分比。
獲自人類全血不活化分析中實例5之評估之結果展示於表11中。
人類重組Btk解離透析分析
在濃度為Btk抑制之IC50之25倍或200nM(無論哪個更大)下，將測試化合物與人類重組Btk(100nM)一起培育1.5小時。於分析緩衝液(20mM HEPES(pH 7.5)、10mM MgCl2、2mM二硫蘇糖醇、50μg/mL牛血清蛋白及0.015% Brij 35)中進行培育。隨後透析反應混合物兩次持續6小時，每次相對於1L分析緩衝液。隨後將經透析之反應混合物(0.5μL)稀釋成具有ATP(2mM)及受質肽(5μM Src-tide，AnaSpec)之溶液(100μL)以使得最終Btk濃度為1nM(連同仍結合之任何抑制劑)。於基質聚丙烯384孔培養盤中進行分析。在Caliper LabChip上藉由受質及磷酸化產物之電泳分離(壓力-1.2psi，下游電壓-500V，上游電壓-2300V)監測反應進展曲線。在線性相位上量測反應速度，且在2小時時藉由比較磷酸化肽產物部分與不含有實例抑制劑之經DMSO處理之Btk對照反應來評估Btk活性之恢復百分比。不具有Btk之對照反應亦用於量測背景信號。可逆的抑制劑將展示Btk活性之幾乎完整的恢復，而不可逆抑制劑將展示Btk活性之較少恢復或無恢復。
獲自人類重組Btk解離透析分析中比較實例101-110及實例18及37之評估之結果展示於表12中。此等結果展示以5%之Btk抑制恢復結合至酶之實例18及37，指示此等化合物與人類重組Btk形成共價鍵且與人類重組Btk之結合為不可逆的。相比之下，發現比較實例101至110具有顯著的(75%)Btk抑制活性之恢復，指示與人類重組Btk之結合為可逆的。

Claims (12)

  1. 一種式(I)化合物 或其鹽，其中：兩條虛線表示兩個單鍵或兩個雙鍵；且R1b及R2b僅在該兩條虛線為兩個單鍵時才存在；Q為： (i)、、或； (ii)、、、、 (iii)、、、、、、 、或；或 (iv)、、、、 R1a為：(i)H、-CN、-CF3、-CH3、-CR8aR8bOH、-CR8aR8bCR8aR8bOH、-CH(OH)CH2OH、-NHR9、-C(O)NR10aR10b、-C(O)(嗎啉基)、-C(O)(哌嗪基)或-C(O)(甲基哌嗪基)；或(ii) R1b(若存在)為H或-CH3，限制條件為若R1a為H，則R1b亦為H；R2a為H、F或Cl，限制條件為若R1a不為H，則R2a為H；R2b(若存在)與R2a相同；R3為H、F或Cl； R4為H、F、Cl或-CH3；R5a為H、F、Cl、-OCH3或-OCF3；R5b為H、F、Cl、-OCH3或-OCF3；R6a為H、-CH3或環丙基；R6c為H、-CH3或環丙基；R7a為-C(O)CH=CH(R11)、-C(O)C≡CR12或-S(O)2CH=CH2；R7b為-C(O)CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR12；R7d為-CN、-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR13；R7e為-CH=CH2或-C≡CR13；R7f為經R7c取代之吡咯啶基、-CH=CHC(O)(嗎啉基)或-CH=CHC(O)(吡咯啶基)；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；R9為C1-4烷基；R10a及R10b獨立地為H或-CH3；R11為H或-CH3；R12為H、C1-4烷基或環丙基；及R13為H、C1-4烷基或環丙基；限制條件為： (a)若Q為且R7d為-CN或-C(O)CH=CH2，則R3為H；及(b)若該等虛線表示兩個單鍵，則： (i)Q不為、或；(ii)R11(若存在)為H；及(iii)該式(I)化合物不為：
  2. 如請求項1之化合物或其鹽，其中：Q為： R1a為：(i)H、-CN、-CF3、-CH3、-CR8aR8bOH、-CH(OH)CH2OH、-NHR9或-C(O)NR10aR10b；或(ii) R1b(若存在)為H或-CH3，限制條件為若R1a為H，則R1b亦為H；R2a為H或F，限制條件為若R1a不為H，則R2a為H；R2b(若存在)與R2a相同；R3為H、F或Cl；R4為H、F、Cl或-CH3；R5a為H、F、Cl、-OCH3或-OCF3；R5b為H、F、Cl、-OCH3或-OCF3；R6a為H、-CH3或環丙基；R6c為H、-CH3或環丙基；R7a為-C(O)CH=CH(R11)、-C(O)C≡CR12或-S(O)2CH=CH2；R7b為-C(O)CH=CH2；R7c為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR12；R7d為-C(O)CH=CH2或-C(O)C≡CR13；R8a為H或-CH3；R8b為H或-CH3；R9為C1-4烷基；R10a及R10b獨立地為H或-CH3；R11為H或-CH3；R12為H、C1-4烷基或環丙基；及R13為H、C1-4烷基或環丙基； 限制條件為若該等虛線表示兩個單鍵，則： (i)Q不為、或；(ii)R11(若存在)為H；及(iii)該式(I)化合物不為：
  3. 如請求項1之化合物或其鹽，其中：R1a為H、-CN、-CF3、-CH3、-CR8aR8bOH、-CH(OH)CH2OH、-NHR9或-C(O)NR10aR10b。
  4. 如請求項1之化合物或其鹽，其中：R6a為H或-CH3；R6c為H或-CH3；R7a為-C(O)CH=CH(R11)或-S(O)2CH=CH2；及R13為H。
  5. 如請求項1之化合物或其鹽，其具有式(Ia)結構：
  6. 如請求項1之化合物或其鹽，其具有式(Ib)結構：
  7. 如請求項1之化合物或其鹽，其中： Q為。
  8. 如請求項1之化合物或其鹽，其中： Q為或。
  9. 如請求項1之化合物或其鹽，其中該化合物為：(RS)-5-(3-丙烯醯胺基苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(1)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(2)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2,2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(3)；4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(4)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(5)；(RS)-4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(6)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2-(羥甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(7)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(羥甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(8)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(9)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)- 2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(10)；(RS)-(E)-4-(3-(丁-2-烯醯胺基)-2-甲基苯基)-3-氯-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(11)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(12)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(13)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺(14)；4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-氰基-9H-咔唑-1-甲醯胺(15)；(RS)-4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-(1,2-二羥乙基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(16)；4-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-7-(異丙胺基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(17)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-N 2,N 2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺(18)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(19)；(RS)-2-(羥甲基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(20)；(RS)-N 2,N 2-二甲基-5-(2-甲基-3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺(21)；(2R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(22)；(2R)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(23)；(2R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一對映異構體(24)；(2R)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一對映異構體(25)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(26)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H- 咔唑-1-甲醯胺(27)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(28)；(RS)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(29)；(RS)-3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(30)；3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(31)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(32)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(33)；3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(34)；(RS)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(35)；(R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(36)；7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(37)；3-氟-7-(2-羥基丙-2-基)-4-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(38)；(R)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(39)；(S)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(40)；(R)-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(41)；(RS)-5-(2-氟-3-(N-甲基丙烯醯胺基)苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(42)；(R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(43)；(2R)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(44)；(RS)-5-(2-氟-3-(N-甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(45)；(RS)-5-(2-氯-3-(N- 甲基乙烯基磺醯胺基)苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(46)；(2R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(47)；5-(3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(48)；5-(2-甲基-3-(乙烯基磺醯胺基)苯基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(49)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-4-甲氧基苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(50)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-4-(三氟甲氧基)苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(51)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-4-氟苯基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(52)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(53)；(RS)-5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(54)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(羥甲基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一外消旋非鏡像異構體(55及56)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-N 2,N 2-二甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-2,8-二甲醯胺，單一外消旋非鏡像異構體(57及58)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一外消旋非鏡像異構體(59及60)；5-(3-丙烯醯胺基-2-甲基苯基)-6-氯-2-(2-羥基丙-2-基)-2-甲基-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一外消旋非鏡像異構體(61及62)；(S)-5-((1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(63)；(E)-4-(3-(丁-2-烯醯胺基)-2-甲基苯基)-7-(2-羥基丙-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(64)；5-(((S)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(65)；(S)-5-(3-丙烯醯胺基哌啶-1-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺 (66)；(S)-4-(3-丙烯醯胺基哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(69)；5-(((S)-1-丙炔醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(RS)-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，非鏡像異構體之混合物(72)；(S)-5-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3,3,6-三氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(73)；(S)-3-氟-4-(3-(N-甲基丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(74)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(75)；(S)-4-(3-(3-環丙基丙醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(76)；5-(((S)-1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)胺基)-2-(三氟甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺，單一非鏡像異構體(77及78)；3-氟-4-((6-乙烯基吡啶-3-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(87)；(RS)-4-(2-丙烯醯基異吲哚啉-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(89)；4-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(90)；4-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(91)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(92)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(95)；4-(1-丙烯醯基-1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(96)；(RS)-4-(1-丙烯醯基哌啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(97)；4-(1-丙烯醯基哌啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺，單一對映異構體(98及99)；3-氟-4-((2-乙烯基吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(100)；4-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(112)；4-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(113及114)；順-4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(115)；順-4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(116及117)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(118)；順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6- 基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(119)；順-4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(120及121)；3-氟-4-((2-乙烯基嘧啶-5-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(122)；順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(123)；順-4-(1-丙烯醯基六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(124及125)；4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(126)；4-((4aS,7aS)-1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺及4-((4aR,7aR)-1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(127及128)；3-氟-4-((2-(丙-1-炔-1-基)吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(129)；5-((S)-3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(130、131及132)；4-(2-丙烯醯基異吲哚啉-5-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(133)；4-(1-丙烯醯基-2,5-二氫-1H-吡咯-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(134)；5-(1-丙烯醯基吡咯啶-3-基)-6-氟-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(135)；(R)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(136)；4-(1-(丁-2-炔醯基)六氫吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(137)；4-(1-丙烯醯基-1,4,5,6-四氫吡啶-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(138)；4-(7-(丁-2-炔醯基)-2,7-二氮螺[4.4]壬-2-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(139)；4-(7-丙烯醯基-2,7-二氮螺[4.4]壬-2-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(140)；4-(1-丙烯醯基八氫-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(141)；4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(142)；4-(6-丙烯醯基-3,6-二氮雙環[3.2.0]庚-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(143)；4-(6-(丁-2-炔醯基)-3,6-二氮 雙環[3.2.0]庚-3-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(144)；4-(7-丙烯醯基八氫-2,7-啶-2(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(145)；4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-3-氯-9H-咔唑-1-甲醯胺(146)；4-(1-(丁-2-炔醯基)吲哚啉-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(147)；4-(2-(丁-2-炔醯基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-7-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(148)；4-(2-(丁-2-炔醯基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(149)；4-(2-(丁-2-炔醯基)異吲哚啉-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(150)；4-(1-(丁-2-炔醯基)吲哚啉-6-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(151)；3-氟-4-((6-乙烯基吡嗪-2-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(152)；3-氯-4-((6-乙烯基吡嗪-2-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(153)；4-((6-乙炔基吡啶-3-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(154)；3-氯-4-((6-乙烯基吡啶-3-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(155)；4-((2-乙炔基吡啶-4-基)甲基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(156)；3-氟-4-((2-乙烯基噻唑-5-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(157)；3-氟-4-((6-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(158)；3-氟-4-((5-乙烯基吡嗪-2-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(159)；4-(1-丙烯醯基-1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(160)；4-(1-丙烯醯基哌啶-3-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(161及162)；(S)-4-(3-丙烯醯胺基哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(163)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(164)；(R)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(165)；(S)-4-(3-(3-環丙基丙醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(166)；(S)-4-(3-氰胺基哌啶-1-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(167)；4-(2-丙烯醯基異吲哚啉-4-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺 (168)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-4-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(169)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-6-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(170)；4-(1-丙烯醯基-1-氮雜螺[4.4]壬-7-基)-3-氟-7-(三氟甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(171)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(172)；(S)-4-(3-(丁-2-炔醯胺基)哌啶-1-基)-3-氟-N7,N7-二甲基-9H-咔唑-1,7-二甲醯胺(173)；3-氟-N7,N7-二甲基-4-(2-乙烯基吡啶-4-基)-9H-咔唑-1,7-二甲醯胺(174)；(S)-4-((1-氰基吡咯啶-3-基)胺基)-3-氟-N7,N7-二甲基-9H-咔唑-1,7-二甲醯胺(175)；(S)-4-((1-氰基吡咯啶-3-基)胺基)-3-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(176)；4-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(嗎啉-4-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(177)；4-(2-(丁-2-炔醯基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(嗎啉-4-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(178)；4-(2-氰基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-7-(嗎啉-4-羰基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(179)；4-(1-丙烯醯基吲哚啉-6-基)-3-氟-7-(2-羥乙基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(180)；4-(1-氰基吲哚啉-6-基)-3-氟-7-(2-羥乙基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(181)；4-(1-丙烯醯基八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-氯-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(182)；4-(1-(丁-2-炔醯基)八氫-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-氯-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(183)；5-(1-丙烯醯基-1,2,5,6-四氫吡啶-3-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(184)；(R)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-((6-乙烯基吡啶-3-基)甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(185)；5-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(186及187)；6-氟-2-(2-羥基丙-2-基)-5-((6-(丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)甲基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(188)；3-氟-4-(2-乙烯基吡啶-4-基)-9H-咔唑-1- 甲醯胺(189)；4-(7-(丁-2-炔醯基)八氫-2,7-啶-2(1H)-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(190)；4-(1-丙烯醯基-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(191)；4-(1-(丁-2-炔醯基)-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(192)；3-氟-4-(5-(N-甲基丙烯醯胺基)吡啶-2-基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(193)；4-((1S,4S)-2-丙烯醯基-2-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(194)；3-氟-4-((2-甲基-6-乙烯基吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(195)；3-氟-4-((2-甲基-6-乙烯基嘧啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(196)；3-氟-4-((4-甲基-6-乙烯基嘧啶-2-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(197)；3-氟-4-((3-氟-2-乙烯基吡啶-4-基)甲基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(198)；4-(3-(1-丙烯醯基吡咯啶-2-基)苯基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(199)；4-(3-(1-(丁-2-炔醯基)吡咯啶-2-基)苯基)-3-氟-9H-咔唑-1-甲醯胺(200)；(E)-3-氟-4-(3-(3-嗎啉基-3-側氧基丙-1-烯-1-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(201)；(E)-3-氟-4-(3-(3-側氧基-3-(吡咯啶-1-基)丙-1-烯-1-基)苯基)-9H-咔唑-1-甲醯胺(202)；或5-(2-丙烯醯基-1,2,3,4-四氫異喹啉-5-基)-2-(2-羥基丙-2-基)-2,3,4,9-四氫-1H-咔唑-8-甲醯胺(203及204)。
  10. 如請求項2至9中任一項之化合物，其適用於治療自體免疫疾病或慢性發炎疾病之療法中。
  11. 一種醫藥組合物，其包含如請求項2至9中任一項之化合物及醫藥學上可接受之載劑。
  12. 一種如請求項2至9中任一項之化合物之用途，其用於製造供治療自體免疫疾病或慢性發炎疾病用之藥物。
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