TW201609806A - 新穎抗人類bdca-2抗體 - Google Patents
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Abstract
提供結合於人類BDCA-2,透過人類BDCA-2調節類漿細胞樹狀細胞之功能,藉以預防或治療自體免疫疾病之抗人類BDCA-2抗體。
本發明者等人,對抗人類BDCA-2抗體進行探討,提供了抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域、由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域、以及由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
Description
本發明係關於新穎的抗人類BDCA-2抗體。
BDCA-2(Blood Dendritic Cell Antigen 2),係1次膜貫通型之膜蛋白質。BDCA-2已知限定表現於人類類漿細胞樹狀細胞(plasmacytoid dendritic cells;pDCs)。BDCA-2藉由對pDCs細胞內傳達訊息,而擔當pDCs之功能調節(Int.Immunol.、Vol.25、p.271-277、2013)。
BDCA-2已知對活性化之免疫反應有抑制的功能(非專利文獻1)。此機制之詳細雖還多有不明瞭的部分,但如後述,已有報導藉由使用抗BDCA-2之抗體使BDCA-2分子交聯,可抑制處於活性化狀態之pDCs(專利文獻1、非專利文獻1~4)。
BDCA-2之特異表現細胞即pDCs,已知於全身性紅斑狼瘡、硬皮症、多發性肌炎.皮膚肌炎、乾癬、謝格連氏症候群、類風濕性關節炎、巴塞多氏病、橋本氏
甲狀腺炎等之自體免疫疾病中,於末梢血中、或障礙部位異常地活性化,而大量產生干擾素(interferon;IFN)α,已明確得知與此等自體免疫疾病的病態有深度關聯。(Arthritis Rheum.、Vol.65、p.853-863、2013)。
自體免疫疾病之一種的全身性紅斑狼瘡中,已報導患者的重症度與血中IFNα濃度有時有正相關(Lupus、Vol.9、p.664-671、2000)。又,對全身性紅斑狼瘡病態模式小鼠施以基因改變,使pDCs不發育時,會抑制全身性紅斑狼瘡的發病,由此直接證明了pDCs對全身性紅斑狼瘡病態的關聯性(Proc.Natl.Acad.Sci.U S A、Vol.110、p.2940-2945、2013)。
作為抗人類BDCA-2之抗體,已知有小鼠單株抗體的AC144(專利文獻1、非專利文獻1~4),已報導AC144藉由使BDCA-2分子交聯,可抑制處於活性化狀態之pDCs。具體而言,已報導由經類Toll受體(Toll-like receptor;TLR)9之配位子刺激的pDCs所誘導的IFNα產生等,可使用AC144來抑制(非專利文獻1~4)。又,已報導使用全身性紅斑狼瘡患者之血清作為刺激劑時,由pDCs會誘導IFNα產生,該IFNα之產生亦可同樣地使用AC144來抑制(非專利文獻4)。
〔專利文獻1〕國際公開第2001/036487號
〔非專利文獻1〕「PLoS Biology」、(美國)、Sep.11 2007、Vol.5、10、p.2190-2200
〔非專利文獻2〕「European Journal of Immunology」、(德國)、Nov.16 2007、Vol.37、p.3564-3575
〔非專利文獻3〕「Cellular Immunology」、(荷蘭)、Jul.6 2010、Vol.265、p.15-22
〔非專利文獻4〕「The Journal of Experimental Medicine」、(美國)、Dec.17 2001、Vol.194、12、p.1823-1834
本發明之課題為提供藉由與人類BDCA-2結合,透過人類BDCA-2調節pDCs之功能,以預防或治療自體免疫疾病的抗人類BDCA-2抗體。
本發明者等人,於製作抗人類BDCA-2抗體上重複相當的創意探討的結果,發現製作分別包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域、由序列編號6之胺基酸編號
1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域、以及由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗體(實施例5),此等抗體會與人類BDCA-2之細胞外區域結合(實施例7),透過人類BDCA-2來調節pDCs之功能,抑制自pDCs產生IFNα(實施例8)。此等結果,提供前述抗人類BDCA-2抗體,而完成本發明。
本發明作為醫學上或產業上有用的物質或方
法,係包含以下發明者。
(1)一種抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係由以下之1)~4)之任一者中選擇。
1)包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段;2)包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段;3)包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人
類BDCA-2抗體或其抗原結合片段;以及4)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由上述1)~3)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段。
(2)如上述(1)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
(3)如上述(1)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
(4)如上述(1)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
(5)如上述(1)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之轉譯後修飾所產生的抗體或其抗原結合片段。
(6)如上述(1)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結
合片段,其係藉由包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段。
(7)如上述(1)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段。
(8)如上述(1)及(5)~(7)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其中轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端之離胺酸缺失。
(9)如上述(1)~(8)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含人類Ig γ 1恆定區域之重鏈恆定區域。
(10)如上述(1)~(8)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含人類Ig κ恆定區域之輕鏈恆定區域。
(11)如上述(1)~(8)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含人類Igγ1恆定區域之重鏈恆定區域及人類Ig κ恆定區域之輕鏈恆定區域。
(12)如上述(2)之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號2所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(13)如上述(3)之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號6所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(14)如上述(4)之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號10所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(15)如上述(1)~(11)之任一者之抗原結合片段,其係單鏈可變區域片段、Fab、Fab’、或F(ab’)2。
(16)一種抗人類BDCA-2抗體,其係藉由上述(12)~(14)之任一者之抗人類BDCA-2抗體之轉譯後修飾所產生之抗體。
(17)如上述(16)之抗人類BDCA-2抗體,其中轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端之離胺酸缺失。
(18)如上述(16)之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸之序列編號2之胺基酸編號1至449的胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(19)如上述(16)之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號6之胺基酸編號1至449之胺基酸編號所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕
鏈。
(20)如上述(16)之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸之序列編號10之胺基酸編號1至451的胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(21)一種聚核苷酸,其係包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列。
(22)一種聚核苷酸,其係包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列。
(23)一種表現載體,其係包含如上述(21)及/或(22)之聚核苷酸。
(24)一種經上述(23)之表現載體轉形之宿主細胞,其係選自由以下之(a)~(d)所成群組。
(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的
表現載體轉形之宿主細胞;(c)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;及(d)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸。
(25)一種經上述(23)之表現載體轉形之宿主細胞,其係選自由由以下之(a)~(d)所成群組。
(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如上述(12)~(14)之任一者之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼如上述(12)~(14)之任一者之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;(c)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如上述(12)~(14)之任一者之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸;及(d)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如上述(12)~(14)之任一者之抗人類
BDCA-2抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸。
(26)一種生產抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之方法,其係包含培養選自由以下之(a)~(c)所成群組之宿主細胞,使抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段表現的步驟。
(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;以及(c)經含有包含編碼如上述(1)~(4)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞、及經含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞。
(27)一種生產抗人類BDCA-2抗體之方法,其係包含培養選自由以下之(a)~(c)所成群組的宿主細胞,使抗人類BDCA-2抗體表現的步驟。
(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含
有包含編碼如上述(12)~(14)之任一者之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼如上述(12)~(14)之任一者之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;以及(c)經含有包含編碼如上述(12)~(14)之任一者之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞、及經含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞。
(28)一種抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係以如上述(26)之方法生產。
(29)一種抗人類BDCA-2抗體,其係以如上述(27)之方法生產。
(30)一種醫藥組成物,其係含有如上述(1)~(20)、(28)、及(29)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段及藥學上容許之賦形劑。
(31)一種醫藥組成物,其係含有如上述(2)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、如上述(5)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、及藥學上容許之賦形劑。
(32)一種醫藥組成物,其係含有如上述(3)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、如上述(6)之抗
人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、及藥學上容許之賦形劑。
(33)一種醫藥組成物,其係含有如上述(4)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、如上述(7)之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、及藥學上容許之賦形劑。
(34)一種醫藥組成物,其係含有如上述(12)之抗人類BDCA-2抗體、如上述(18)之抗人類BDCA-2抗體、及藥學上容許之賦形劑。
(35)一種醫藥組成物,其係含有如上述(13)之抗人類BDCA-2抗體、如上述(19)之抗人類BDCA-2抗體、及藥學上容許之賦形劑。
(36)一種醫藥組成物,其係含有如上述(14)之抗人類BDCA-2抗體、如上述(20)之抗人類BDCA-2抗體、及藥學上容許之賦形劑。
(37)如上述(30)~(36)之任一者之醫藥組成物,其係全身性紅斑狼瘡之預防或治療用醫藥組成物。
(38)一種預防或治療全身性紅斑狼瘡之方法,其係包含投與如上述(1)~(20)、(28)、及(29)之任一者之抗人類BDCA-2抗體之治療有效量的步驟。
(39)如上述(1)~(20)、(28)、及(29)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係使用於全身性紅斑狼瘡之預防或治療。
(40)一種如上述(1)~(20)、(28)、及(29)
之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之使用,其係使用於製造全身性紅斑狼瘡之預防或治療用醫藥組成物。
前述抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,亦包含與其他胜肽及蛋白質之融合體、或結合有修飾劑之修飾體。
本發明之抗人類BDCA-2抗體,係與於pDCs表面特異地表現的人類BDCA-2之細胞外區域結合,透過人類BDCA-2來調節pDCs之功能者,可使用作為全身性紅斑狼瘡之預防或治療劑。
以下詳述本發明。
抗體係存在有IgG、IgM、IgA、IgD及IgE之5個類型(class)。抗體分子之基本構造,係各類型共通地由分子量5萬~7萬之重鏈與2~3萬之輕鏈所構成。重鏈通常由包含約440個胺基酸之多肽鏈所構成,各類型係具有特徵性構造,對應於IgG、IgM、IgA、IgD、IgE而稱作Igγ、Igμ、Igα、Igδ、Igε。進一步地,於IgG係存在有IgG1、IgG2、IgG3、IgG4之次型(subclass),各自所對應之重鏈係稱為Igγ1、Igγ2、Igγ3、Igγ4。輕鏈通常由包含約220個胺基酸之多肽鏈所構成,已知有L型與K
型2種,各自稱作Igλ、Igκ。抗體分子之基本構造的胜肽構成,係由分別相同的2條重鏈及2條輕鏈,藉由雙硫鍵(S-S鍵)及非共價鍵而結合,分子量為15萬~19萬。2種輕鏈不管與何種重鏈均可成對。個別的抗體分子,通常由相同輕鏈2條與相同重鏈2條所成。
鏈內S-S鍵,於重鏈有四個(Igμ、Igε有五
個)、於輕鏈有二個,每100~110個胺基酸殘基係成為一個環狀域(loop),在各環狀域間該立體構造類似,稱為構造單位或結構域(domain)。不管重鏈、輕鏈的位於N末端之結構域,均為即使來自同種動物之同一類型(次型)的標本,其胺基酸序列亦並非一定,稱作可變區域,各結構域分別稱為重鏈可變區域(VH)及輕鏈可變區域(VL)。較可變區域靠近C末端側之胺基酸序列,於各個類型或次型係大致恆定,而稱為恆定區域(各結構域分別表記為CH1、CH2、CH3或CL)。
抗體之抗原決定部位係由VH及VL構成,結
合的特異性係依該部位之胺基酸序列所決定。另一方面,與補體或各種細胞之結合等的生物學活性,係反映各類型Ig之恆定區域構造的差異。輕鏈與重鏈之可變區域的可變性,可知大致限定於不管於何種鏈均存在的3個小的超可變區域,此等區域稱為互補性決定區域(CDR;由N末端側起分別為CDR1、CDR2、CDR3)。可變區域之剩餘部分稱為框架區域(FR),較為恆定。
包含抗體之VH及VL的各種抗原結合片段亦
具有抗原結合活性,作為如此之代表性的抗原結合片段,可列舉單鏈可變區域片段(scFv)、Fab、Fab’、F(ab’)2。
Fab係由包含輕鏈、VH、CH1結構域與絞鏈區域之一部分的重鏈片段所構成之一價抗體片段。Fab’係由包含輕鏈、VH、CH1結構域與絞鏈區域之一部分的重鏈片段所構成之一價抗體片段,該絞鏈區域之部分係包含構成重鏈間S-S鍵之半胱胺酸殘基。F(ab’)2片段,係2個Fab’片段以絞鏈區域中之重鏈間S-S鍵結合而得的二價抗體片段。
scFv係由經連結子(linker)連結之VH與VL所構成之一價抗體片段。
本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,係包含具有以下之任一特徵的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。
1)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
2)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
3)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包
含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合
片段,較佳係具有上述1)~3)之任一特徵,且進一步包含重鏈恆定區域及輕鏈恆定區域之抗體。作為恆定區域,係不管何種次型之恆定區域(例如就重鏈而言係Igγ1、Igγ2、Igγ3或Igγ4,就輕鏈而言係Igλ或Igκ之恆定區域)均可選擇,然就重鏈恆定區域而言較佳為人類Igγ1恆定區域、就輕鏈恆定區域而言較佳為人類Igκ恆定區域。
作為人類Igγ1恆定區域,可列舉例如由序列
編號2之胺基酸編號121至450之胺基酸序列所構成的人類Igγ1恆定區域。
作為人類Igκ恆定區域,可列舉例如由序列
編號4之胺基酸編號110至215之胺基酸序列所構成的人類Igκ恆定區域。
本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合
片段,更佳係具有上述1)~3)之任一特徵,且重鏈恆定區域為人類Igγ1恆定區域、輕鏈恆定區域為人類Igκ恆定區域之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。
於1個實施形態中,本發明之抗原結合片
段,係scFv、Fab、Fab’、或F(ab’)2。
所屬技術領域中具有通常知識者,使用該領
域眾所周知之方法,能夠以融合有其他胜肽或蛋白質之融合體的形式來製作抗體或其抗原結合片段,或亦能夠以結合有修飾劑之修飾體的形式來製作。本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,亦包含如此之融合體或修飾體形態之抗體或抗原結合片段。例如,包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、或包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段中,亦包含與其他胜肽或蛋白質融合而得的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、或結合有修飾劑之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段只要係以融合體的形式具有對人類BDCA-2之細胞外區域的結合活性,則融合所用之其他胜肽或蛋白質並無特殊限定,可列舉例如人類血清白蛋白、各種標籤胜肽、人工螺旋基序(helix motif)胜肽、麥芽糖結合蛋白質、麩胱甘肽S轉移酶、各種毒素、其他可促進多聚體化之胜肽或蛋白質等。本發明之抗人類
BDCA-2抗體或其抗原結合片段只要係以修飾體的形式具有對人類BDCA-2之細胞外區域的結合活性,則修飾所用之修飾劑並無特殊限定,可列舉例如聚乙二醇、糖鏈、磷脂質、微脂體、低分子化合物等。
於1個實施形態中,本發明之抗人類BDCA-2
抗體,係具有以下之i)~iii)之任一特徵之抗人類BDCA-2抗體。
i)抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號2所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
ii)抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號6所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
iii)抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號10所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
使抗體於細胞表現的情況時,已知抗體在轉
譯後受到修飾。轉譯後修飾之例子,可列舉重鏈C末端之離胺酸被羧肽酶切斷;重鏈及輕鏈N末端之麩醯胺或麩胺酸因焦麩胺酸化而修飾為焦麩胺酸;醣苷化;氧化;脫醯胺化;糖化等,於各種抗體中,已知會產生如此之轉譯後修飾(Journal of Pharmaceutical Sciences、2008、Vol.97、p.2426-2447)。
本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合
片段,亦包含藉由轉譯後修飾所產生之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。藉由轉譯後修飾所產生之本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的例子,可列舉受到重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端之離胺酸缺失的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。於該領域中已知如此之N末端之焦麩胺酸化或C末端離胺酸缺失所致之轉譯後修飾並不會對抗體活性造成影響(Analytical Biochemistry、2006、Vol.348、p.24-39)。
本發明之抗人類BDCA-2抗體,係包含具有
下述(1)~(3)之任一特徵的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。
(1)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的轉譯後修飾所產生。
(2)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的轉譯後修飾所產生。
(3)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編
號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的轉譯後修飾所產生。
於1個實施形態中,本發明之抗人類BDCA-2
抗體,係具有下述(1)~(3)之任一特徵的抗人類BDCA-2抗體。
(1)抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號2之胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸及/或胺基酸編號450之離胺酸欠缺的序列編號2之胺基酸序列所構成之重鏈、以及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(2)抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號6之胺基酸編號1之麩胺酸被修飾為焦麩胺酸及/或胺基酸編號450之離胺酸欠缺的序列編號6之胺基酸序列所構成之重鏈、以及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(3)抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號10之胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸及/或胺基酸編號452之離胺酸欠缺的序列編號10之胺基酸序列所構成之重鏈、以及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
本發明中,亦包含具有以下之任一特徵的抗
人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。
1)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含含有由序列編號2之胺基酸編號31至35之胺基酸序列
所構成之CDR1、由序列編號2之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號2之胺基酸編號99至109之胺基酸序列所構成之CDR3的重鏈可變區域;以及含有由序列編號4之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號4之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號4之胺基酸編號89至98之胺基酸序列所構成之CDR3的輕鏈可變區域。
2)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含含有由序列編號6之胺基酸編號31至35之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號6之胺基酸編號50至66之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號6之胺基酸編號99至109之胺基酸序列所構成之CDR3的重鏈可變區域;以及含有由序列編號8之胺基酸編號24至34之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號8之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號8之胺基酸編號89至97之胺基酸序列所構成之CDR3的輕鏈可變區域。
3)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含含有由序列編號10之胺基酸編號31至37之胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號10之胺基酸編號52至67之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號10之胺基酸編號100至111之胺基酸序列所構成之CDR3的重鏈可變區域;以及含有由序列編號12之胺基酸編號24至34之
胺基酸序列所構成之CDR1、由序列編號12之胺基酸編號50至56之胺基酸序列所構成之CDR2及由序列編號12之胺基酸編號89至97之胺基酸序列所構成之CDR3的輕鏈可變區域。
本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合
片段,係結合於人類BDCA-2之細胞外區域(由序列編號13之胺基酸編號42至213之胺基酸序列所構成)。抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段是否結合於人類BDCA-2之細胞外區域,可使用眾所周知之結合活性測定方法來確認。作為測定結合活性之方法,可列舉例如Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay(ELISA)等之方法。使用ELISA的情況時,於舉例的方法中,係將人類BDCA-2(序列編號13)或如後述實施例3記載般將表現人類BDCA-2變異體(序列編號15)之細胞(例如CHO-K1細胞)播種於ELISA測定盤,對其添加被試驗抗體使反應。反應後,使標識有山葵過氧化氫酶(HRP)等之酵素的抗IgG抗體等之二次抗體反應,洗淨後,使用檢測該活性之試藥(例如HRP標識的情況時,為BM-Chemiluminescence ELISA Substrate(POD)(Roche Diagnostics公司))等,進行活性測定,藉此可確認被試驗抗體是否結合於人類BDCA-2之細胞外區域。
又,本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原
結合片段中,只要係會結合於人類BDCA-2之細胞外區域的抗體或其抗原結合片段,則除了對人類BDCA-2之細胞
外區域的結合以外,亦包含亦會結合於其他動物來源的BDCA-2(例如猴BDCA-2)之細胞外區域的抗體或其抗原結合片段。
進一步地,本發明之抗人類BDCA-2抗體或
其抗原結合片段,具有結合於人類BDCA-2之細胞外區域,抑制IFNα之產生的活性。作為抑制IFNα產生之活性的具體評估,可使用如後述實施例4記載之方法。
本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合
片段,係所屬技術領域中具有通常知識者,可基於本說明書所揭示的本發明之抗體之重鏈可變區域及輕鏈可變區域的序列資訊,使用於該領域眾所周知之方法而容易地製作。本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,並無特殊限定,例如可遵照後述之<生產本發明之抗人類BDCA-2抗體之方法及藉由該方法所生產之抗人類BDCA-2抗體>之方法來製造。
本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合
片段,可依需要進一步純化後,遵照一般方法予以製劑化,而使用於預防或治療全身性紅斑狼瘡、硬皮症、多發性肌炎.皮膚肌炎、乾癬、謝格連氏症候群、類風濕性關節炎、巴塞多氏病、橋本氏甲狀腺炎等之自體免疫疾病等的pDCs與病態形成相關聯之疾病。
本發明之聚核苷酸,係包含:包含編碼本發明之抗人
類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸、及包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸。
於1個實施形態中,包含編碼本發明之抗人
類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,係包含編碼由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸、包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸、或包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸。
包含編碼序列編號2之胺基酸編號1至120
之胺基酸序列所示之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號1之鹼基編號1至360之鹼基序列的聚核苷酸。包含編碼由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號5之鹼基編號1至360之鹼基序列的聚核苷酸。包含編碼由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號9之鹼基編號1至366之鹼基序列的聚核苷酸。
於較佳之實施形態中,包含編碼本發明之抗
人類BDCA-2抗體之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,係包含編碼由序列編號2所示之胺基酸序列所構成之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸、包含編碼由序列編號6所示之胺基酸序列所構成之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸、或包含編碼由序列編號10所示之胺基酸序列所構成之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸。
包含編碼由序列編號2所示之胺基酸序列所
構成之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號1所示之鹼基序列的聚核苷酸。包含編碼由序列編號6所示之胺基酸序列所構成之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號5所示之鹼基序列的聚核苷酸。包含編碼由序列編號10所示之胺基酸序列所構成之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號9所示之鹼基序列的聚核苷酸。
於1個實施形態中,包含編碼本發明之抗人
類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,係包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸、包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸、或包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸。
包含編碼由序列編號4之胺基酸編號1至109
之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號3之鹼基編號1至327之鹼基序列的聚核苷酸。包含編碼由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號7之鹼基編號1至324之鹼基序列的聚核苷酸。包含編碼由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號11之鹼基編號1至324之鹼基序列的聚核苷酸。
於較佳之實施形態中,包含編碼本發明之抗
人類BDCA-2抗體之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,係包含編碼由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸、包含編碼由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸、或包含編碼由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸。
包含編碼由序列編號4所示之胺基酸序列所
構成之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號3所示之鹼基序列的聚核苷酸。包含編碼由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號7所示之鹼基序列的聚核苷酸。包含編碼由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸,可列舉例如包含序列編號11所示之鹼基序列的聚核苷酸。
本發明之聚核苷酸,係所屬技術領域中具有
通常知識者可基於其鹼基序列,使用該領域眾所周知之方法而容易地製作。例如,本發明之聚核苷酸,可利用該領域眾所周知之基因合成方法來合成。作為如此之基因合成方法,可使用WO90/07861記載之抗體基因的合成方法等之所屬技術領域中具有通常知識者眾所周知之各種方法。
本發明之表現載體,係包含含有聚核苷酸之表現載體,且該表現載體係含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸及/或包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸。
較佳之本發明之表現載體,可列舉含有包含
編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體、含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體、或含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體。
用以使本發明之聚核苷酸表現的表現載體,
只要係可於真核細胞(例如動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母)及/或原核細胞(例如大腸菌)之各種宿主細
胞中表現包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸及/或包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸,而產生由此等所編碼的多肽者,則無特殊限制。如此之表現載體,可列舉例如質體載體、病毒載體(例如腺病毒、反轉錄病毒)等,較佳可使用pEE6.4或pEE12.4(Lonza公司)。又,亦可於AG-γ1或AG-κ(例如參照WO94/20632)等之預先具有人類Ig恆定區域基因之表現載體中導入可變區域基因片段來表現抗體基因。
本發明之表現載體,可含有連結於本發明之
聚核苷酸且可發揮功能的啟動子。作為用以於動物細胞表現本發明之聚核苷酸的啟動子,可列舉例如CMV、RSV、SV40等之病毒來源的啟動子、肌動蛋白啟動子、EF(elongation factor)1α啟動子、熱休克啟動子等。作為用以於細菌(例如大腸桿菌屬菌)表現的啟動子,可列舉例如trp啟動子、lac啟動子、λ PL啟動子、tac啟動子等。又,作為用以於酵母表現的啟動子,可列舉例如GAL1啟動子、GAL10啟動子、PH05啟動子、PGK啟動子、GAP啟動子、ADH啟動子等。
使用動物細胞、昆蟲細胞、或酵母,作為宿
主細胞時,本發明之表現載體,可含有開始密碼子及終止密碼子。此時,本發明之表現載體,亦可含有增強子序列、編碼本發明之抗體或其重鏈可變區域或輕鏈可變區域
的基因之5’側及3’側的非轉譯區域、分泌訊息序列、剪接(splicing)接合部、多腺苷酸化部位、或可複製單位等。使用大腸菌作為宿主細胞時,本發明之表現載體,可含有開始密碼子、終止密碼子、終止子區域、及可複製單位。此時,本發明之表現載體,亦可依目的而含有通常使用之選擇標記(例如四環黴素抗性基因、安比西林抗性基因、康黴素抗性基因、新黴素抗性基因、二氫葉酸還原酵素基因)。
本發明之經轉形的宿主細胞,係包含選自由以下之(a)~(d)所成群組之經本發明之表現載體轉形之宿主細胞。
(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;(c)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體含有
包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;及(d)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸。
於1個實施形態中,本發明之經轉形的宿主細胞,係選自由以下之(a)~(d)所成群組之經本發明之表現載體轉形之宿主細胞。
(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;(c)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸;及(d)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸。
較佳之本發明之經轉形的宿主細胞,可列舉經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼
基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;以及經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞。
進行轉形之宿主細胞,只要係適合所使用之
表現載體,可經該表現載體轉形而表現抗體者,則無特殊限定。進行轉形之宿主細胞,可列舉例如於本發明之技術領域中通常所使用的天然細胞或人工建立之細胞等各種細胞(例如動物細胞(例如CHOK1SV細胞)、昆蟲細胞(例如Sf9)、細菌(大腸桿菌屬菌等)、酵母(酵母菌屬、畢赤酵母菌屬等)等),較佳可使用CHOK1SV細胞、CHO-DG44細胞、293細胞、NS0細胞等之培養細胞。
使宿主細胞轉形之方法,並無特殊限定,例
如可使用磷酸鈣法、電穿孔法等。
生產本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之方法,係包含生產抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之方法,該方法包含培養選自由以下之(a)~(c)所成群組之宿主細胞,使抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段表現的步驟。
(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;以及(c)經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;及經含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞。
於1個實施形態中,本發明之生產抗人類BDCA-2抗體之方法,係包含生產抗人類BDCA-2抗體之方法,該方法包含培養選自由以下之(a)~(c)所成群組之宿主細胞,使抗人類BDCA-2抗體表現的步驟。
(a)經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;(b)經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼
該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;以及
(c)經含有包含編碼本發明之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;及經含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞。
本發明之生產抗人類BDCA-2抗體或其抗原
結合片段之方法,只要係包含培養本發明之經轉形的宿主細胞,使抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段表現的步驟,則無特殊限定。以該方法所使用之較佳宿主細胞,可列舉前述較佳之本發明之經轉形的宿主細胞。
經轉形的宿主細胞之培養,可藉由眾所周知
之方法來進行。培養條件,例如溫度、培養基之pH、及培養時間,係適當選擇。宿主細胞為動物細胞時,培養基例如可使用含有約5~20%之胎牛血清的MEM培養基(Science、1959、Vol.130、No.3373、p.432-7)、DMEM培養基(Virology、1959、Vol.8、p.396)、RPMI1640培養基(J.Am.Med.Assoc.、1967、Vol.199、p.519)、199培養基(Exp.Biol.Med.、1950、Vol.73、p.1-8)等。培養基之pH較佳為約6~8,培養係依需要一邊進行通氣或攪拌,一邊通常在約30~40℃進行約15~72小時。宿主細胞為昆蟲細胞時,培養基例如可使用含有胎牛血清之Grace’s培養基(Proc.Natl.Acad.Sci.USA、1985、Vol.82、p.8404)等。培養基之pH較佳為約5~8,培養係依需要一邊進行
通氣或攪拌,一邊通常在約20~40℃進行約15~100小時。宿主細胞為大腸菌或酵母時,培養基例如以含有營養源之液體培養基為適當。營養培養基較佳為含有經轉形的宿主細胞的發育所必需的碳源、無機氮源或有機氮源。碳源可列舉例如葡萄糖、右旋糖酐、可溶性澱粉、蔗糖等;無機氮源或有機氮源可列舉例如銨鹽類、硝酸鹽類、胺基酸、玉米浸液、蛋白腖、酪蛋白、肉萃取物、大豆粕、馬鈴薯萃取液等。亦可依期望含有其他營養素(例如無機鹽(例如氯化鈣、磷酸二氫鈉、氯化鎂)、維生素類等)、抗生素(例如四環黴素、新黴素、安比西林、康黴素等)。培養基之pH較佳為約5~8。宿主細胞為大腸菌時,較佳之培養基例如可使用LB培養基、M9培養基(Mol.Clo.、Cold Spring Harbor Laboratory、Vol.3、A2.2)等。培養係依需要一邊進行通氣或攪拌,一邊通常在約14~39℃進行約3~24小時。宿主細胞為酵母時,培養基例如可使用Burkholder最低營養培養基(Proc.Natl.Acad.Sci.USA、1980、Vol.77、p.4505)等。
培養係依需要一邊進行通氣或攪拌,一邊通常在約20~35℃進行約14~144小時。藉由如上述之培養,可表現本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。
本發明之生產抗人類BDCA-2抗體或其抗原
結合片段之方法,除了培養本發明之經轉形的宿主細胞,使抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段表現的步驟以外,亦可進一步包含由該經轉形的宿主細胞中回收、較佳
為單離或純化抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的步驟。單離或純化方法,可列舉例如鹽析、溶劑沈澱法等之利用溶解度的方法;透析、超微過濾、凝膠過濾等之利用分子量差異的方法;離子交換層析、羥基磷灰石層析等之利用電荷的方法;親和性層析等之利用特異親和性的方法;逆相高速液體層析等之利用疏水性差異的方法;等電點電泳等之利用等電點差異的方法等。較佳為,累積於培養上清中之抗體,可藉由各種層析,例如使用了蛋白質A管柱或蛋白質G管柱之管柱層析來純化。
本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合
片段,亦包含以本發明之生產抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之方法所生產之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。
本發明之醫藥組成物,包含含有本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段及藥學上容許之賦形劑的醫藥組成物。本發明之醫藥組成物,可使用於該領域中通常所用之賦形劑、即藥劑用賦形劑或藥劑用攜載體(carrier)等,藉由通常使用之方法來配製。此等醫藥組成物之劑型的例子,可列舉例如注射劑、點滴用劑等之非經口劑,可藉由靜脈內投與、皮下投與等來投與。製劑化時,可於藥學上容許之範圍,使用因應此等劑型之賦形劑、攜載體、添加劑等。
本發明之醫藥組成物,可含有複數種的本發
明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段。例如,含有未受到轉譯後修飾之抗體或其抗原結合片段、及藉由該抗體或其抗原結合片段之轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物,亦包含在本發明中。
於1個實施形態中,含有抗人類BDCA-2抗
體或其抗原結合片段之本發明之醫藥組成物,亦包含下述(1)~(3)之任一者之醫藥組成物。
(1)醫藥組成物,其含有包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、以及藉由該抗體或其抗原結合片段之轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段;(2)醫藥組成物,其含有包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、以及藉由該抗體或其抗原結合片段之轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段;以及(3)醫藥組成物,其含有包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域的抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片
段、以及藉由該抗體或其抗原結合片段之轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段。
本發明之醫藥組成物,亦包含含有重鏈C末端離胺酸之缺失抗體、受到N末端轉譯後修飾之抗體或其抗原結合片段、重鏈C末端離胺酸缺失且受到N末端轉譯後修飾之抗體、及/或具有重鏈C末端離胺酸且未受到N末端轉譯後修飾之抗體的醫藥組成物。
於1個實施形態中,含有抗人類BDCA-2抗體的本發明之醫藥組成物,亦包含含有下述(1)~(4)中2種以上之抗人類BDCA-2抗體的醫藥組成物。
(1)抗人類BDCA-2抗體,其包含由序列編號2之胺基酸編號1至449之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(2)抗人類BDCA-2抗體,其包含由胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸之序列編號2之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(3)抗人類BDCA-2抗體,其包含由胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸之序列編號2之胺基酸編號1至449的胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(4)抗人類BDCA-2抗體,其包含由序列編號2所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
於1個實施形態中,含有抗人類BDCA-2抗
體的本發明之醫藥組成物,亦包含含有下述(1)~(4)中2種以上之抗人類BDCA-2抗體的醫藥組成物。
(1)抗人類BDCA-2抗體,其包含由序列編號6之胺基酸編號1至449之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(2)抗人類BDCA-2抗體,其包含由胺基酸編號1之麩胺酸被修飾為焦麩胺酸之序列編號6的胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(3)抗人類BDCA-2抗體,其包含由胺基酸編號1之麩胺酸被修飾為焦麩胺酸之序列編號6之胺基酸編號1至449的胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(4)抗人類BDCA-2抗體,其包含由序列編號6所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
於1個實施形態中,含有抗人類BDCA-2抗
體的本發明之醫藥組成物,亦包含含有下述(1)~(4)中2種以上之抗人類BDCA-2抗體的醫藥組成物。
(1)抗人類BDCA-2抗體,其包含由序列編號10之胺基酸編號1至451之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(2)抗人類BDCA-2抗體,其包含由胺基酸編號1
之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸之序列編號10之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(3)抗人類BDCA-2抗體,其包含由胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸之序列編號10之胺基酸編號1至451的胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
(4)抗人類BDCA-2抗體,其包含由序列編號10所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
製劑化時,本發明之抗人類BDCA-2抗體或
其抗原結合片段的添加量,雖依患者之症狀的程度或年齡、所使用之製劑劑型、或抗體的結合力價等而不同,但例如可使用0.001mg/kg~100mg/kg左右。
本發明之醫藥組成物,可使用作為pDCs與病
態形成相關聯之疾病,例如全身性紅斑狼瘡之預防或治療用醫藥組成物。
本發明中,包含全身性紅斑狼瘡之預防或治
療用醫藥組成物,其係含有本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段及藥學上容許之賦形劑。又,本發明中,包含預防或治療全身性紅斑狼瘡之方法,其係包含將本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之治療有效量進行投與的步驟。又,本發明中,包含本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係使用於全身性紅
斑狼瘡之預防或治療。又,本發明中,包含本發明之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之使用,其係用於製造全身性紅斑狼瘡之預防或治療用醫藥組成物。
為了進一步理解本發明,此處提供參照之特
定實施例,但此等係以例示為目的,並非限定本發明者。
關於使用市售套組或試藥等的部分,若無特
別指明,則係遵照隨附的實驗流程來進行實驗。
為了使用於抗人類BDCA-2抗體之結合性試驗,取得表現人類BDCA-2變異體之CHO-K1細胞。具體而言,係將編碼藉由PCR法所放大之人類BDCA-2變異體(由序列編號15:將野生型人類BDCA-2(序列編號13)之胺基酸編號33的絲胺酸取代為半胱胺酸之胺基酸序列所構成。該變異部位係存在於膜貫通區域,因此細胞外區域之胺基酸序列係與野生型相同)的基因(序列編號14),與編碼人類FcεRIγ之全長序列的基因(序列編號16)一起插入哺乳細胞表現用載體之pIRES載體(Clontech公司),製作同時表現人類BDCA-2變異體與人類FcεRIγ之載體。接著將此載體,使用基因導入試藥Lipofectamine 2000(Life Technologies公司)對CHO-K1
細胞進行基因導入。將此細胞以含有Geneticin(Life Technologies公司)之RPMI1640培養基進行選擇培養後,藉由細胞篩選器FACSAriaTM(Becton,Dickinson and Company)進一步選出高表現人類BDCA-2變異體蛋白質之細胞集團(以下稱為人類BDCA-2變異體/CHO細胞)。
使用人類單株抗體開發技術「VelocImmune」(VelocImmune antibody technology:Regeneron公司(美國專利6596541號))小鼠來製作抗體。具體而言,係與引發免疫反應之佐劑一起,將表現人類BDCA-2細胞外區域與小鼠Fc之融合蛋白質及人類BDCA-2的CHO-K1細胞、或表現人類BDCA-2細胞外區域與小鼠Fc之融合蛋白質、猴BDCA-2細胞外區域與小鼠Fc之融合蛋白質及人類BDCA-2的CHO-K1細胞,對VelocImmune小鼠注射,誘發免疫。
之後遵照一般方法,摘出經誘發免疫之小鼠
的脾臟或淋巴節,收集淋巴球,將其與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0-Ag14進行細胞融合,藉以製作融合瘤。進行融合瘤之單株化,對各殖株以無血清培養基培養。由所得之培養上清液中純化抗體。使用VelocImmune技術所得到之抗體,係具有人類抗體之可變區域與小鼠抗體之恆定區域的抗體(亦稱為嵌合體抗體)。
為了測定抗體之抗原特異結合活性,係評估抗體對實施例1中製作之人類BDCA-2變異體/CHO細胞的結合。具體而言,首先,將人類BDCA-2變異體/CHO細胞以RPMI1640培養基(Life Technologies公司)懸浮使成為2×105個/mL,以每1孔50μL播種於被覆有聚D離胺酸之384孔盤(Greiner公司),於設定為37℃之CO2培養箱中培養一夜。之後去除培養基,將以稀釋液(含有1%牛血清白蛋白之Hank’s平衡鹽溶液)以由10000ng/mL至4.6ng/mL之濃度進行階段稀釋(以3倍稀釋系列共8階段)後的來自融合瘤之抗體(實施例2中純化之抗體)及比較抗體,分別各添加20μL,於室溫反應1小時。接著以洗淨液(含有0.1%牛血清白蛋白之Hank’s平衡鹽溶液)洗淨,添加經稀釋液稀釋為5000倍之HRP標識兔抗小鼠IgG抗體(HRP-rabbit anti-human IgG antibody:Dako公司)20μL,於室溫反應30分鐘。之後以洗淨液洗淨,添加化學發光檢測試藥之BM-Chemiluminescence ELISA Substrate(POD)(Roche Diagnostics公司)30μL,以EnVision計數器(PerkinElmer公司)測定其化學發光量。測定結果,係將EC50值藉由4參數邏輯曲線(four-parameter logistic curve)擬合來分析。本試驗中,係使用抗人類BDCA-2之小鼠抗體即AC144(非專利文獻1~4、Miltenyi Biotec公司)作為比較抗體。
其結果,命名為BDC3-12A2、BDC3-12F5、
及BDC13-32E3之抗體(嵌合體抗體),對人類BDCA-2之細胞外區域具有高的結合活性(表1)。
於人類末梢血單核細胞添加ODN2216等之TLR9之配位子來培養時,人類末梢血單核細胞中所存在之pDCs會被活性化,誘導由pDCs產生IFNα(非專利文獻1)。因而,以抗人類BDCA-2抗體所致之由pDCs所產生之IFNα的產生抑制作為指標,來評估抗體對pDCs之功能調節活性。具體而言,首先,於96孔U底盤(Greiner公司)添加使用RPMI1640培養基配製為1.6μM之ODN2216(InvivoGen公司)25μL,接著添加使用RPMI1640培養基於4000ng/mL至0.02ng/mL之範圍內11階段稀釋之來自融合瘤之抗體及比較抗體各25μL。於其中添加以含有人類IL-3(PeproTech公司)20ng/mL之RPMI1640培養基懸浮成為2×106個/mL的人類末梢血單核細胞(Lonza公司)50μL。分別準備添加有RPMI1640培養基以取代抗體之孔、添加有RPMI1640培養基以取代ODN2216之孔作為控制組。於設定為37℃之CO2培養箱
中培養20小時後,使用AlphaLISA IFNα分析套組(PerkinElmer公司)來定量上清液中之IFNα蛋白量。進一步地基於所定量之值,算出IFNα產生抑制率。更具體而言,以添加有RPMI1640培養基以取代抗體之群為0%抑制控制群,又,以添加有RPMI1640培養基以取代ODN2216之群為100%抑制控制群來進行設定。解析所算出之IFNα產生抑制率,藉由4參數邏輯曲線擬合來算出抗體之IC50值與IC90值。IC90值係可期待各自之抗體的最大作用之最小值,亦即近似於完全抑制由人類末梢血單核細胞產生IFNα所需的抗體濃度之最小值的值。於全身性紅斑狼瘡病態模式小鼠中,已報導極微量的IFNα會引起病態惡化(The Journal of Immunology、Vol.174、p.2499、2005),暗示了於全身性紅斑狼瘡之預防及治療中,完全抑制IFNα的重要性。再者,本實施例中係使用AC144作為比較抗體。
其結果,BDC3-12A2、BDC3-12F5及BDC13-32E3,不管在IC50值與IC90值的任意者,均明顯可知具有較比較抗體AC144更高之IFNα產生抑制活性(表2)。又,由IC90值之結果,明顯可知BDC3-12A2、BDC3-12F5及BDC13-32E3,相較於AC144,完全抑制IFNα產生所需的濃度更小。
由分別產生BDC3-12A2、BDC3-12F5及BDC13-32E3之融合瘤中選殖編碼抗體之重鏈及輕鏈的基因,決定序列。
前述抗體乃是其可變區域來自人類、恆定區域來自小鼠之抗體。因而,使用GS Gene Expression System(Lonza公司),構築含有重鏈及輕鏈之兩基因的表現載體,以製作可變區域及恆定區域為來自人類的完全人類型抗體。具體而言,於BDC3-12A2、BDC3-12F5、及BDC13-32E3之各抗體之重鏈可變區域基因的5’側連接編碼訊息序列(N.Whittle等人、Protein Eng.、Vol.1、p.499、1987)的基因;且於3’側連接人類Igγ1之恆定區域基因(由序列編號1之鹼基編號361至1353之鹼基序列所構成),將該重鏈基因插入pEE6.4。又,於抗體之輕鏈可變區域基因的5’側連接編碼訊息序列(N.Whittle等人、如前述)的基因;且於3’側連接人類Igκ之恆定區域基因(由序列編號3之鹼基編號328至648之鹼基序列
所構成),將該輕鏈基因插入pEE12.4。
以定序儀解析插入pEE6.4之各抗體之重鏈基
因序列、插入pEE12.4之各抗體之輕鏈基因序列,其結果,由所得之胺基酸序列,參照Kabat等人之資料庫(“Sequences of Proteins of Immunological Interest”、US Department of Health and Human Services、US Government Printing Office)來決定CDR序列。
將所製作之BDC3-12A2的完全人類型抗體
(完全人類型BDC3-12A2)之重鏈的鹼基序列示於序列
編號1、將被其編碼之胺基酸序列示於序列編號2、將該抗體之輕鏈的鹼基序列示於序列編號3、將被其編碼之胺基酸序列示於序列編號4。序列編號2表示之重鏈之可變區域,係由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成,重鏈之CDR1、CDR2、CDR3,係分別由序列編號2之胺基酸編號31至35、50至66、99至109之胺基酸序列所構成。序列編號4表示之輕鏈之可變區域,係由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成,輕鏈之CDR1、CDR2、CDR3,係分別由序列編號4之胺基酸編號24至34、50至56、89至98之胺基酸序列所構成。
將所製作之BDC3-12F5的完全人類型抗體
(完全人類型BDC3-12F5)之重鏈的鹼基序列示於序列編號5、將被其編碼之胺基酸序列示於序列編號6、將該抗體之輕鏈的鹼基序列示於序列編號7、將被其編碼之胺基
酸序列示於序列編號8。序列編號6表示之重鏈之可變區域,係由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成,重鏈之CDR1、CDR2、CDR3,係分別由序列編號6之胺基酸編號31至35、50至66、99至109之胺基酸序列所構成。序列編號8表示之輕鏈之可變區域,係由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成,輕鏈之CDR1、CDR2、CDR3,係分別由序列編號8之胺基酸編號24至34、50至56、89至97之胺基酸序列所構成。
將所製作之BDC13-32E3的完全人類型抗體(完全人類型BDC13-32E3)之重鏈的鹼基序列示於序列編號9、將被其編碼之胺基酸序列示於序列編號10、將該抗體之輕鏈的鹼基序列示於序列編號11、將被其編碼之胺基酸序列示於序列編號12。序列編號10表示之重鏈之可變區域,係由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成,重鏈之CDR1、CDR2、CDR3,係分別由序列編號10之胺基酸編號31至37、52至67、100至111之胺基酸序列所構成。序列編號12表示之輕鏈之可變區域,係由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成,輕鏈之CDR1、CDR2、CDR3,係分別由序列編號12之胺基酸編號24至34、50至56、89至97之胺基酸序列所構成。
為了製作各完全人類型抗體,以GS Gene Expression System(Lonza公司)的實驗流程之方法為參
考,將分別插入有各抗體之重鏈與輕鏈之基因的前述GS載體以NotI與PvuI之限制酵素切斷,使用Ligation-Convenience Kit(Nippon Gene公司)連結,構築插入有重鏈與輕鏈之兩基因的Double-Gene載體。接著,對CHOK1SV細胞(Lonza公司),藉由電穿孔法基因導入前述Double-Gene載體,於添加有甲硫胺酸磺醯亞胺(methionine sulfoximine)(Sigma公司)使最終濃度成為50μM的CD-CHO Medium(Life Technologies公司)中培養5日~6日。使用蛋白質A管柱或蛋白質G管柱(GE Healthcare Japan公司),由所得之培養上清液中純化各完全人類型抗體。
分析實施例5中純化之各完全人類型抗人類BDCA-2抗體的胺基酸修飾之結果,於純化抗體之大部分,完全人類型BDC3-12A2中係產生重鏈N末端之焦麩醯胺轉換及重鏈C末端之離胺酸缺失;完全人類型BDC3-12F5中係產生重鏈C末端之離胺酸缺失;完全人類型BDC13-32E3中係產生重鏈N末端之焦麩醯胺轉換及重鏈C末端之離胺酸缺失。
遵照實施例3之方法,針對各完全人類型抗體,評估對人類BDCA-2之細胞外區域的結合活性。惟,分別添加實施例5中製作之各完全人類型抗體(完全人類型BDC3-12A2、完全人類型BDC3-12F5或完全人類型BDC13-32E3)以取代來自融合瘤之抗體。又,使用HRP標識兔抗人類IgG抗體(DAKO公司),以取代HRP標識兔抗小鼠IgG抗體。本活性評估試驗係獨立實施3次。
其結果,所有的本發明之完全人類型抗體,
均確認了具有對人類BDCA-2之細胞外區域的高結合活性(表3)。表3所示之EC50值,係由3次獨立之活性評估所得之EC50值的平均。
遵照實施例4之方法,針對實施例5中製作之各完全人類型抗體,以抗人類BDCA-2抗體所致之由pDCs產生之IFNα的產生抑制為指標,評估抗體對pDCs之功能調節活性。惟,本實施例中,為了得到更安定之評估結果,使用複數個人類末梢血單核細胞之批次當中對ODN2216刺激之IFNα產生較高的批次,以含有人類IL-3之
RPMI1640培養基懸浮,使細胞成為5×106個/mL,使用於評估。又,分別添加於1200ng/mL至0.06ng/mL之範圍內9階段稀釋的各完全人類型抗體(完全人類型BDC3-12A2、完全人類型BDC3-12F5或完全人類型BDC13-32E3),以取代來自融合瘤之抗體。本實施例係使用AC144作為比較抗體。又,本活性評估試驗係獨立實施2次。
其結果,所有的本發明之完全人類型抗體,
於IC50值與IC90值的任意者,均明顯可知對pDCs具有較比較抗體AC144更高之抑制活性(表4)。又,由IC90值之結果,明顯可知BDC3-12A2、BDC3-12F5及BDC13-32E3,相較於AC144,完全抑制IFNα產生所需的濃度更小。
本發明之抗人類BDCA-2抗體,係有用於特異性表現人類BDCA-2之pDCs與病態形成相關聯的自體免疫疾病之預防或治療。又,生產本發明之聚核苷酸、表現載體、經轉形的宿主細胞及抗體的方法,係有用於產生前述抗人類BDCA-2抗體。
以下之序列表之數字標題<223>,係記載「Artificial Sequence」之說明。具體而言,序列表之序列編號1及3表示之鹼基序列,分別為完全人類型BDC3-12A2之重鏈及輕鏈的鹼基序列,序列編號2及4表示之胺基酸序列,分別為被序列編號1及3所編碼的重鏈及輕鏈之胺基酸序列。序列表之序列編號5及7表示之鹼基序列,分別為完全人類型BDC3-12F5之重鏈及輕鏈的鹼基序列,序列編號6及8表示之胺基酸序列,分別為被序列編號5及7所編碼的重鏈及輕鏈之胺基酸序列。序列表之序列編號9及11表示之鹼基序列,分別為完全人類型BDC13-32E3之重鏈及輕鏈的鹼基序列,序列編號10及12表示之胺基酸序列,分別為被序列編號9及11所編碼的重鏈及輕鏈之胺基酸序列。序列表之序列編號14表示之鹼基序列,為人類BDCA-2變異體的鹼基序列,序列編號15表示之胺基酸序列,為人類BDCA-2變異體之胺基酸序列。
<110> Astellas Pharma Inc.
<120> Novel anti-human BDCA-2 antibody
<130> A14019TW
<150> JP2013-265304
<151> 2013-12-24
<160> 16
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Claims (37)
- 一種抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係由以下之(1)~(4)之任一者中所選擇:(1)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域;(2)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域;(3)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域;以及(4)抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由如上述(1)~(3)之任一者之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項1之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
- 如請求項1之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合 片段,其係包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
- 如請求項1之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域。
- 如請求項1之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由包含由序列編號2之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號4之胺基酸編號1至109之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項1之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由包含由序列編號6之胺基酸編號1至120之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號8之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的轉譯後修飾所產生之抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項1之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係藉由包含由序列編號10之胺基酸編號1至122之胺基酸序列所構成的重鏈可變區域及由序列編號12之胺基酸編號1至108之胺基酸序列所構成的輕鏈可變區域之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的轉譯後修飾 所產生之抗體或其抗原結合片段。
- 如請求項1及5~7中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其中轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端之離胺酸缺失。
- 如請求項1~8中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含人類Ig γ 1恆定區域之重鏈恆定區域。
- 如請求項1~8中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含人類Ig κ恆定區域之輕鏈恆定區域。
- 如請求項1~8中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係包含人類Igγ1恆定區域之重鏈恆定區域、及人類Ig κ恆定區域之輕鏈恆定區域。
- 如請求項2之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號2所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
- 如請求項3之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號6所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
- 如請求項4之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號10所示之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
- 如請求項1~11中任一項之抗原結合片段,其係單鏈可變區域片段、Fab、Fab’、或F(ab’)2。
- 一種抗人類BDCA-2抗體,其係藉由如請求項12~14中任一項之抗人類BDCA-2抗體之轉譯後修飾所產生之抗體。
- 如請求項16之抗人類BDCA-2抗體,其中轉譯後修飾為重鏈可變區域N末端之焦麩胺酸化及/或重鏈C末端之離胺酸缺失。
- 如請求項16之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸之序列編號2之胺基酸編號1至449的胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號4所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
- 如請求項16之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由序列編號6之胺基酸編號1至449之胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號8所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
- 如請求項16之抗人類BDCA-2抗體,其係包含由胺基酸編號1之麩醯胺被修飾為焦麩胺酸之序列編號10之胺基酸編號1至451的胺基酸序列所構成之重鏈及由序列編號12所示之胺基酸序列所構成之輕鏈。
- 一種聚核苷酸,其係包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列。
- 一種聚核苷酸,其係包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列。
- 一種表現載體,其係含有如請求項21及/或22 之聚核苷酸。
- 一種經如請求項23之表現載體轉形之宿主細胞,其係選自由以下之(a)~(d)所成群組:(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;(c)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;及(d)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸。
- 一種經如請求項23之表現載體轉形之宿主細胞,其係選自由以下之(a)~(d)所成群組:(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含 有包含編碼如請求項12~14中任一項之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼如請求項12~14中任一項之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;(c)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如請求項12~14中任一項之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸;及(d)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如請求項12~14中任一項之抗人類BDCA-2抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸。
- 一種生產抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之方法,其係包含培養選自由以下之(a)~(c)所成群組的宿主細胞,使抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段表現的步驟:(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基 序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;以及(c)經含有包含編碼如請求項1~4中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之重鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞、及經含有包含編碼該抗體或其抗原結合片段之輕鏈可變區域的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞。
- 一種生產抗人類BDCA-2抗體之方法,其係包含培養選自由以下之(a)~(c)所成群組之宿主細胞,使抗人類BDCA-2抗體表現之步驟:(a)經表現載體轉形之宿主細胞,該表現載體係含有包含編碼如請求項12~14中任一項之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸與包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸;(b)經含有包含編碼如請求項12~14中任一項之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體與含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞;以及(c)經含有包含編碼如請求項12~14中任一項之抗人類BDCA-2抗體之重鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞、及經含有包含編碼該抗體之輕鏈的鹼基序列之聚核苷酸的表現載體轉形之宿主細胞。
- 一種抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其 係藉由如請求項26之方法所生產。
- 一種抗人類BDCA-2抗體,其係藉由如請求項27之方法所生產。
- 一種醫藥組成物,其係含有如請求項1~20、28、及29中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段及藥學上容許之賦形劑。
- 一種醫藥組成物,其係含有如請求項2之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、如請求項5之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、及藥學上容許之賦形劑。
- 一種醫藥組成物,其係含有如請求項3之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、如請求項6之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、及藥學上容許之賦形劑。
- 一種醫藥組成物,其係含有如請求項4之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、如請求項7之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段、及藥學上容許之賦形劑。
- 如請求項30~33中任一項之醫藥組成物,其係全身性紅斑狼瘡之預防或治療用醫藥組成物。
- 一種預防或治療全身性紅斑狼瘡之方法,其係包含投與如請求項1~20、28、及29中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段的治療有效量之步驟。
- 如請求項1~20、28、及29中任一項之抗人類 BDCA-2抗體或其抗原結合片段,其係使用於全身性紅斑狼瘡之預防或治療。
- 一種如請求項1~20、28、及29中任一項之抗人類BDCA-2抗體或其抗原結合片段之使用,其係用於製造全身性紅斑狼瘡之預防或治療用醫藥組成物。
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Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR3034420A1 (fr) * | 2015-03-31 | 2016-10-07 | Lab Francais Du Fractionnement | Anticorps monoclonaux anti-cd303 |
CN110709417B (zh) * | 2017-04-07 | 2023-10-31 | 美天施生物科技有限责任两合公司 | 具有突变人IgG4的多肽 |
KR20200139219A (ko) | 2018-04-02 | 2020-12-11 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 항-trem-1 항체 및 이의 용도 |
KR20220083668A (ko) * | 2019-08-05 | 2022-06-20 | 카펠라 바이오사이언스 엘티디 | Bdca-2에 결합하는 항원 결합 분자 |
AR124247A1 (es) * | 2020-12-03 | 2023-03-01 | Biogen Ma Inc | Métodos de tratamiento del lupus eritematoso cutáneo y lupus eritematoso sistémico |
CN113549152B (zh) * | 2021-07-22 | 2023-06-20 | 中国人民解放军空军军医大学 | 一种抗basigin人源化抗体及其应用 |
WO2024010118A1 (ko) * | 2022-07-07 | 2024-01-11 | 주식회사 유틸렉스 | 항 bdca-2 항체 및 이의 용도 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
ATE256751T1 (de) | 1993-03-11 | 2004-01-15 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Monoklonaler anti-hiv antikörper |
KR100868235B1 (ko) * | 1999-11-15 | 2008-11-12 | 밀테니 비오텍 게앰베하 | 수지상 세포에 특이적인 항원-결합 단편, 단편을 사용한조성물 및 방법, 그것에 의해 인식된 항원, 및 그것에의해 얻어진 세포 |
US6596541B2 (en) | 2000-10-31 | 2003-07-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
WO2002090510A2 (en) * | 2001-05-08 | 2002-11-14 | Emory University | Regulating immine responses using dendritic cells |
GB0118155D0 (en) * | 2001-07-25 | 2001-09-19 | Lorantis Ltd | Superantigen |
CN1826356B (zh) * | 2003-07-22 | 2012-05-09 | 克鲁塞尔荷兰公司 | 针对sars冠状病毒的结合分子及其应用 |
WO2006013923A1 (ja) * | 2004-08-05 | 2006-02-09 | Ginkgo Biomedical Research Institute Co., Ltd. | 自己免疫疾患を伴う関節炎の治療剤 |
RU2007116988A (ru) * | 2004-10-07 | 2008-11-20 | Универзитет Цюрих (CH) | Применение блокаторов интерферона типа i для профилактики и лечения псориаза |
DK2532681T3 (en) * | 2005-12-20 | 2015-01-05 | Sbi Biotech Co Ltd | Anti-ILT7 antibody |
EP2083017A4 (en) * | 2006-09-14 | 2011-01-12 | Med & Biological Lab Co Ltd | ANTIBODIES HAVING INCREASED ADCC ACTIVITY AND METHOD FOR PRODUCING THE SAME |
TWI422594B (zh) * | 2007-02-02 | 2014-01-11 | Baylor Res Inst | 經由樹狀細胞去唾液酸糖蛋白受體(dc-asgpr)接合抗原呈現細胞之藥劑 |
FR2968561B1 (fr) | 2010-12-13 | 2013-08-09 | Lfb Biotechnologies | Utilisation d'un anticorps dirige contre une proteine membranaire |
PL3431504T3 (pl) * | 2012-01-31 | 2021-10-18 | Sbi Biotech Co., Ltd. | Przeciwciało przeciwko fosfolipazie D4 |
EP3686218A1 (en) | 2012-12-10 | 2020-07-29 | Biogen MA Inc. | Anti-blood dendritic cell antigen 2 antibodies and uses thereof |
CN106029874B (zh) | 2013-12-16 | 2020-09-15 | 北卡罗来纳-查佩尔山大学 | 浆细胞样树突状细胞的耗竭 |
US20200199242A1 (en) * | 2017-02-02 | 2020-06-25 | Silverback Therapeutics, Inc. | Construct-peptide compositions and methods of use thereof |
-
2014
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