TW201532602A - 單胺氧化酶抑制劑及其共軛物於治療腦癌之用途 - Google Patents

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Abstract

本發明於治療腦癌方面提供一種醫藥組成物及其用途。本用途包括施予一病患所需一有效劑量之一種或多種下列之化合物，包括：嗎氯苯甲醯胺、氯吉蘭、氯吉蘭中與近紅外光染劑鍵結的單胺氧化酶抑制劑(NMI)，以及MHI 148-氯吉蘭及其鹽類。本醫藥組成物與用途特別有效降低具替莫唑胺(TMZ)抗藥性的神經膠母細胞瘤體積。

Description

單胺氧化酶抑制劑及其共軛物於治療腦癌之用途
本發明是涉及一種單胺氧化酶們(monoamine oxidases,MAOs)的抑制作用及其抑制劑們(MAOIs)於治療腦癌之用途。
多發性神經膠母細胞瘤(Glioblastoma multiforme,GBM)是原發性腦部腫瘤中最惡性的一種，其中位存活期(median survival time)約為14個月。現行的治療方式包括外科手術、放射線以及化學治療。目前治療GBM之化學治療藥劑為DNA烷基化藥物替莫唑胺(temozolomide,TMZ)，此藥物在合併外科手術以及放射線治療，或是單獨進行的化學治療中均具療效，不幸的是，在治療後腫瘤通常會復發，且對於TMZ不再有反應，導致治療方式的選擇更為受限，因此，若一種藥物被鑑別出具良好耐受性，對神經膠質瘤具細胞毒性且可通過血腦障壁，對治療TMZ具抗藥性的再復發型GBM非常有效果。
單胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO A)是一種粒腺體結合酶，其催化單胺類神經傳導物質的氧化脫氨反應，例如血清素(serotonin)、正腎上腺素(norepinephrine)、多巴胺(dopamine)，並產生 過氧化氫(hydrogen peroxide,H2O2)，其為一種活性氧類(reactive oxygen species,ROS)，使癌症細胞逐漸產生基因損壞，藉以促進腫瘤的形成與發展。先前於發明人實驗室的研究中顯示，在前列腺癌症中將MAO A進行基因剔除(knock-down,KD)或以藥理學方式進行抑制，可減少或消除癌症的進展。氯吉蘭(Clorgyline)是一種選擇性的MAO A抑制劑(MAOI)，其可通過血腦障壁(blood-brain-barrier,BBB)，作為抗憂鬱症藥劑，並於體內實驗中顯示可減少前列腺癌。氯吉蘭共軛NMI可顯著地降低腫瘤生長，且在體內與體外實驗中顯示對癌症細胞有選擇性的細胞毒性，也可通過血腦障壁，且可藉由近紅外光影像進行觀察，在癌症診斷與癌症發展過程的監控非常有用。
MAO A的增強表現曾於先前被報導於數種癌症中，包括前列腺癌與腎細胞癌，而根據癌症基因晶片的資料庫發現，該MAO A表現的調降則表現於大多數的人類癌症中。在此之前，發明人揭示了提升MAO A的表現將促進前列腺的腫瘤形成，且在前列腺癌症細胞中誘發上皮-間質轉化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)。此外，在體外實驗以及腫瘤異種移植的體內試驗中發現，抑制MAO A可減低前列腺癌細胞株(LNCaP PCa cell)的生長。
本發明之一實施例為治療腦癌之化合物與醫藥組成物，以及使用本發明化合物與醫藥組成物以治療腦癌的治療用途。
根據本發明，一種單胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)抑制劑用於製備治療腦癌藥物之用途，包括，將一有效劑量之該單胺氧化酶抑制劑施予一具腦癌之病患，欲被治療之腦癌可以是神經膠母細胞瘤，包括多發性神經膠母細胞瘤，另欲被治療之腦癌也可以是對TMZ具抗藥性之神經膠母細胞瘤或多發性神經膠母細胞瘤。
MAO抑制劑較佳為選自以下結構所組成之群組：
較佳的是，MAO抑制劑為選自以下結構所組成之群組：
於一較佳實施例中，MAO抑制劑可透過一鍵結物與近紅外光染劑共價鍵結。近紅外光染劑包含一多烯類官能基，較佳的是，近紅外光染劑為選自以下所組成之群組：：IR-783、IR-780、IR-786以及MHI-148，更佳的是MHI-148。
於一較佳實施例中，MAO抑制劑為選自以下所組成之群組：NMI、MHI-148與嗎氯苯甲醯胺之共軛物(MHI-嗎氯苯甲醯胺)、MHI-148與苯乙肼之共軛物(MHI-苯乙肼)、MHI-148與反苯環丙胺之共軛物(MHI-反苯環丙胺)、MHI-148與丙炔甲基芐胺共軛物(MHI-丙炔甲基芐胺)、MHI-148與氯吉蘭之共軛物(MHI-氯吉蘭)、MHI-148與MAO抑制劑之共軛 物(MHI-單胺氧化酶抑制劑)及NIR-單胺氧化酶抑制劑。
較佳實施例包括： 與其鹽類、其羧酸或其酯類。
其他實施例包括具有以下化學式之化合物：
其他本發明實施例為包含以下鹽類的一化合物： 或其羧酸或其酯類類似物，以及包括上述結構之醫藥組成物以及使用上述醫藥組成物以治療腦癌之用途。
於另一實施例，本發明有助於針對治療具抗藥性腦癌的化合物與醫藥組成物，以及治療具抗藥性之腦癌的治療方法。根據本發明，治療具抗藥性之腦癌的治療方法是指施予一需要治療之腦癌病患一有效劑量之MAO抑制劑。
於另一實施例，本發明是針對有助於治療具TMZ抗藥性的腦癌對TMZ敏感化的化合物與醫藥組成物，以及治療具TMZ抗藥性之腦癌的治療用途。根據本發明，使具TMZ抗藥性的腦癌對TMZ敏感化的治療方式，是指提供一需要治療之腦癌病患一有效劑量之MAO抑制劑。本方式較佳包括同時或次序性施予有效劑量的TMZ。
本發明揭示抑制MAO A可降低腫瘤生長並增加替莫唑胺(TMZ)具抗藥性之神經膠質瘤的存活。神經膠質瘤一開始對TMZ有反應，但病人通常會逐漸開始對此藥物具抗藥性，且腫瘤會再次復發。此後將無其他治療方式可用。MAO A是粒腺體酵素，其使單胺類神經傳導物質產生氧化脫氨作用，製造過氧化氫而造成細胞損壞與癌症。人類神經膠質瘤表 現出MAO A，而正常的星狀膠質細胞則未偵測出MAO A的活性。體外實驗研究顯示MAO抑制劑-氯吉蘭以及本文定義之NMI，可增加具抗藥性之神經膠質瘤對TMZ之藥物敏感性，其中對TMZ具抗藥性之細胞只會造成對NMI而非氯吉蘭具敏感性。NMI(半抑制濃度IC50：5μM)在同時降低具抗藥性以及具藥物敏感性的人類神經膠質瘤細胞的轉移上，比氯吉蘭(半抑制濃度IC50：140與136μM)更具效果。將老鼠GL26腫瘤細胞移植到剔除MAO A基因的小鼠(MAO A KO mice)時，MAO A基因剔除鼠表現出比野生型小鼠更高的存活率，顯示MAO A在腫瘤微環境中影響著腫瘤的生長與病人之存活。原部位異種移植模式中的藥物效力研究顯示，氯吉蘭以及NMI均可降低對TMZ具抗藥性之腫瘤的生長，以及提升存活率(分別為28%、46%)。分析腫瘤組織則顯示MAO A抑制劑可減少細胞增殖、腫瘤中微血管密度(microvessel density,MVD)以及基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase)，且增加巨噬細胞的浸潤。整體而言，本發明發現MAO A在具藥物敏感性以及抗藥性的神經膠質瘤的發展中扮演之重要角色，且鑑別出MAO A抑制劑及其共軛物在治療具藥物抗藥性的腦瘤中可為一重要的治療藥劑。本發明揭示MAO A抑制劑在體外實驗以及體內試驗中皆具活性，可降低腫瘤發展並延長抗藥性神經膠質瘤病人之存活率。
圖1為NMI之合成流程；圖2A至2C顯示MAO A在神經膠質瘤組織、小鼠與人類神經膠質瘤細胞中的表現以及活性的提升。圖2A為非惡性腦瘤與神經膠質瘤(GBM)樣品以抗MAO A抗體染色。呈現陽性的細胞為紅色；細胞核為藍色。圖2B為U251R與U251S細胞以抗MAO A抗體染色；呈現紅色的細胞為MAO A表現陽性之細胞。圖2C為量測U251S、U251R、小鼠神經膠質瘤細胞(GL26)與正常星狀膠質細胞中MAO A的催化活性；圖3證明藉由氯吉蘭以及NMI在GL26細胞中可抑制MAO A。透過氯吉蘭以及NMI濃度的增加，來評估GL26細胞中MAO A的活性。氯吉蘭抑制MAO A活性的半抑制濃度(IC50)為10-9M，NMI的半抑制濃度為10-5M；圖4A至4D顯示U251S與U251R細胞之細胞群落形成與移行分析(colony formation and migration assays)。圖4A及4B為單獨以TMZ(15μM)與氯吉蘭(10μM)以及結合TMZ，分別在U251S與U251R細胞中進行48小時，並於第8天或第10天將細胞群落以1%甲基藍進行染色並計數。圖4C及4D為移行分析分別在U251S與U251R細胞經氯吉蘭(1,5,10μM)處理24與20小時後進行。誤差線為實驗進行三重複之樣本平均數的標準差* p<0.05,t-test；圖5A至5E揭示NMI的結構與在人類神經膠質瘤細胞上的功能。圖5A為NMI的結構。圖5B為以NMI處理後的神經膠質瘤細胞，以MitoTracker藥劑染色粒腺體。圖5C為群落形成測試a)U251S與b)U251R經TMZ (15μM)(T)處理，以及以NMI(1,5,10μM)(N)單獨處理以及與TMZ混合處理48小時後計算群落。圖5D為以MTS測試法量測氯吉蘭以及NMI對a)U251S以及b)U251R細胞生存能力的影響。圖5E為a)U251S與b)U251R細胞在NMI(1,5,10μM)處理24小時後進行移行測試。誤差線為樣本平均數的標準差；實驗進行三重複。*** p<0.0001,** p<0.005,* p<0.05,t-test；圖6A至6D顯示在MAO A基因剔除鼠中的神經膠質瘤進展減少且存活時間增加。圖6A將老鼠神經膠質瘤細胞移植入野生型與MAO A基因剔除鼠之顱內；10天後記錄影像。星字號(*)代表老鼠標記數量。圖6B長條圖顯示冷光值(與腫瘤尺寸相關)。圖6C野生型與MAO A基因剔除鼠的存活(天數)是以Kaplan-Meier plot作分析。圖6D腫瘤與周圍組織的MAO A活性測試；圖7A及7B顯示氯吉蘭在老鼠異種移植模式中可抑制神經膠質瘤的生長。圖7A將神經膠質瘤細胞移植皮下，7天後開始治療：溶劑對照組(水)(30μl)或氯吉蘭(30mg/kg)，每日進行共21天，於第13、28與41天記錄腫瘤影像。圖7B長條圖顯示從影像上計算出之腫瘤體積；p<0.05；圖8A至8D顯示氯吉蘭與NMI單獨或合併TMZ使用可減少腫瘤生長，且於老鼠顱內模式中可增加存活率。裸鼠顱內移植人類神經膠質瘤細胞，7天後，動物以以下物質每日治療共21天：溶劑對照組、TMZ(1mg/kg)、氯吉蘭(10mg/kg)、TMZ(1mg/kg)+氯吉蘭(10mg/kg)、NMI(5mg/kg)、TMZ(1mg/kg)+NMI(5mg/kg)。提供TMZ的治療只進行前10天。圖8A於腫瘤上定位NMI。圖8B移植後7天經連續治療後的腫瘤影像。圖8C冷 光圖(與腫瘤尺寸相關)。圖8D為Kaplan-Meier存活測試曲線；p值顯示所有治療組中的存活率均提升；圖9A至9C顯示氯吉蘭以及NMI可降低細胞增殖與血管新生，並可於活體內誘發先天免疫反應。圖9A將經溶劑對照組、氯吉蘭以及NMI治療後的動物組織，以Ki67、MMP 9以及CD31進行免疫染色。紅色代表染色結果呈陽性。(mag.400x)。組織切片結果顯示於圖9B，是以F4/80、TNF-α以及TGFβ進行免疫染色。紅色代表染色結果呈陽性(mag.400×)。圖9C治療後組織的Ki67、CD31以及F4/80之定量。*p<0.05,**p<0.01(與溶劑對照組之比較)；圖10A及10B顯示MAO A抑制劑可減少腫瘤生長，降低MAO A活性且提高動物存活率。圖10A老鼠神經膠質瘤細胞移植到顱內：6天後，每天對動物施予溶劑、TMZ(1mg/kg)、苯乙肼(10mg/kg)、TMZ(1mg/kg)+苯乙肼(10mg/kg)以及嗎氯苯甲醯胺(10mg/kg)。取存活者以Kaplan-Meier plot進行分析；p值顯示這些治療明顯的增加了存活率。圖10B經過單胺氧化酶抑制劑的治療後，MAO A的活性降低了；圖11顯示，與正常腦部組織相比，MAO A在神經膠母細胞瘤(GBM)組織中的表現量增加。以抗MAO A之抗體，對正常腦部組織與神經膠母細胞瘤(GBM)腦部樣品的冷凍切片進行染色，呈陽性的細胞呈現紅色沉積物；細胞核呈現被蘇木精(hematoxylin)染色的藍色。與正常腦部組織相比，MAO A在神經膠母細胞瘤(GBM)組織中的表現量較為增加；圖12顯示，於腫瘤衍生之細胞株(LN229,U251)，神經膠質瘤幹細胞株(USC02,USC08)，以及GBM中測試到MAO A與MAO B的活性，但並 未在正常星狀膠質細胞中觀察到，顯示MAO A的活性與癌症進展有相關性。收集細胞的總蛋白質，並與10μM碳14標定之血清素在37℃中培養20分鐘，以液態閃爍光譜測定法量測放射線活性；圖13A至13C顯示，MAO A/B基因剔除鼠中的神經膠質瘤生長顯著的降低。圖13A將螢光素酶標定之GL-26神經膠質瘤細胞移植到野生型以及A/B KO C57 B/L老鼠的顱內，並於10天後進行影像記錄。圖13B長條圖顯示與腫瘤尺寸相關之冷光。圖13C野生型以及A/B KO老鼠的存活率比較，存活率增加了116.6%(14天)。***p<0.0001；圖14顯示以氯吉蘭治療人類神經膠質瘤細胞，可減少神經膠質瘤細胞移行。在神經膠質瘤細胞(LN229)培養達滿盤階段時，加入絲裂霉素C(mitomycin C)以抑制細胞增殖。製作一道划痕(scratch)以清除一區細胞；將培養液以(A)溶劑或(B)氯吉蘭(10μM)處理24小時，結果顯示氯吉蘭減少約50%的神經膠質瘤細胞移行率。(C)數據摘要；圖15A及15B顯示以MAO A抑制劑、氯吉蘭進行治療，會誘發神經膠質瘤幹細胞的細胞毒性。圖15A以氯吉蘭處理神經膠質瘤幹細胞(GSC)96小時，再以球體形成(sphere formation)方法進行分析。圖15B以氯吉蘭以及TMZ處理GSC 72小時，接著再次加入氯吉蘭，再處理48小時並進行分析(MTT法)。結果顯示5與10μM的氯吉蘭對神經膠質瘤幹細胞具有毒性。此外，氯吉蘭結合TMZ顯示增加了50%的細胞毒性；圖16顯示MHI-氯吉蘭降低了抗-替莫唑胺神經膠質瘤細胞的群落生成。將TMZ(R)抗藥性細胞株U251接種於6孔培養盤中，並以MAO A抑制劑以及TMZ處理48小時。相較於溶劑對照組，MHI-氯吉蘭可降低65% 群落生成率(CFA)。結合TMZ與MHI-氯吉蘭的治療，使具TMZ-抗藥性之神經膠質瘤細胞對TMZ敏感化，可降低85%的群落生成率。CFA是細胞死亡的量測法；群落生成越少表示細胞死亡越多；圖17顯示單獨施予MHI-氯吉蘭或結合替莫唑胺(TMZ)可增加顱內帶有TMZ-抗藥性之神經膠質瘤的動物之存活率。於裸鼠顱內移植U251-TMZ-抗藥性之神經膠質瘤細胞株，7天後，將動物分成以下組別並每天進行治療：溶劑對照組、TMZ(1mg/kg)、氯吉蘭(10mg/kg)、MHI-氯吉蘭(5mg/kg)或TMZ(1mg/kg)+MHI-氯吉蘭(5mg/kg)。21天後停止治療，記錄存活者。結果顯示經MHI-氯吉蘭治療過之動物，比以溶劑處理之動物存活天數長50%(p<0.0001)，且經TMZ+MHI-氯吉蘭治療過之動物，比以溶劑處理之動物存活天數長70%(p<0.00001)。單獨以MHI-氯吉蘭或結合TMZ，抑制了MAO A，在減少神經膠質瘤的腫瘤進展上更有效果。 MHI-氯吉蘭使TMZ抗藥性之細胞對TMZ具敏感性；圖18前列腺癌與神經膠質瘤具有MAO A活性，可以MAO I以及MHI-氯吉蘭進行治療。胰臟癌與淋巴癌不具MAO A活性，因此無法以氯吉蘭以及MHI-氯吉蘭進行治療；圖19A及19B顯示神經膠質瘤幹細胞(GSC)中呈現MAO A活性，與以氯吉蘭及MHI-氯吉蘭進行治療，將誘發神經膠質瘤幹細胞之細胞毒性。圖19A為GSC、USC08與USC02顯示有MAO A活性。透過放射性分析量測MAO A活性。將細胞均質液與10μM碳14標定之血清素於37℃下培養20分鐘。MAO A產物催化了反應，萃取出5-HIAA並以液態閃爍光譜測定法量測其放射性。圖19B將USC08與USC02幹細胞以增加濃度之氯吉蘭以及 MHI-氯吉蘭處理後觀察其球體形成。氯吉蘭及MHI-氯吉蘭將誘發幹細胞的細胞毒性。
適於實施本發明之醫藥組成物的製備，一般是將具有所需純度之活性物質以及選擇性的與生理上可接受之載體、賦形劑或安定劑混合(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))，製備成凍晶型式或水相溶液。生理上可接受之載體、賦形劑或安定劑在所使用之劑量與濃度之下對受體不具毒性，其包括緩衝劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽與其他有機酸類；抗氧化劑包括抗壞血酸；小分子量(少於10個殘基)的多胜肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，例如乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)；胺基酸，例如：甘氨酸、麩醯胺酸、天門冬胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣類、雙醣類以及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、糊精；螯合物，例如EDTA；糖醇類，例如甘露醇或山梨糖醇；形成鹽類的相反離子，例如鈉；及/或非離子型表面活性劑，例如TWEENTM、PLURONICSTM或PEG。
使用以施予體內的藥物一般均已滅菌過，此方式可在冷凍乾燥與調製之前或之後，利用已滅菌的過濾膜進行過濾以快速完成。
可透過本發明治療方法受益或有此需求的病患，是已被診斷有腦癌者。
本發明所使用之「治療腦癌」一詞可包括具有以下效果之一者：抑制初級腫瘤的形成、擴散、巨大移轉(macrometastases)或微型移轉(micrometastases)，降低巨大移轉的規模，或改善、減緩一或多個由腦癌 引發之疾病的症狀。本發明醫藥組成物中「有效劑量」一詞，是指一個足以達成所聲明之特定目標的劑量。「有效劑量」可透過與所聲明之特定目標相關之經驗法則以及慣用方法來決定。抑制或減低巨大移轉或微型移轉的形成、規模或擴散可透過與未處理之對照組比較來表示。
本發明所揭露顯示了MAO A居中調節神經膠質瘤的發展結果，且發現抑制MAO A活性將減少神經膠質瘤的生長，因而提升了存活率。本發明所呈現的數據證明單胺氧化酶抑制劑--嗎氯苯甲醯胺、氯吉蘭及其衍生物NMI，對於降低腫瘤的生長具有活性。此為透過與非腫瘤之腦部組織比較後，GBM病人的組織樣品中MAO A的過度表現而證明之。目前常用以作為抗憂鬱劑的MAO A抑制劑，於本發明檢驗了其用以治療腦癌之效果，包括具藥物抗藥性的神經膠質瘤。
呈現於此的結果，證實了MAO A在腦瘤生長以及腫瘤微環境中所扮演的角色。在治療神經膠質瘤過程中的一個重大挑戰就是腫瘤復發性，且這些復發的腫瘤通常具備了TMZ抗藥性。本發明一重要實施例就是MAO A抑制劑與其共軛物降低具TMZ抗藥性之神經膠質瘤的生長與發展，其在臨床上具有重大意義的結果。
本發明之一實施例是指用以治療腦癌的化合物與醫藥組成物，包括惡性神經膠母細胞瘤，以及包括多發性神經膠母細胞瘤(GBM)。另一實施例是指使用此組成物，針對惡性神經膠質瘤(如GBM)的治療用途。與本發明之此實施例一致之組成物，包括MAO抑制劑(例如：一可抑制MAO活性的活性物質)；以及一生理上適用的載體。於一實施例中，一種治療惡性神經膠質瘤的方法，包括將神經膠質瘤與一有效劑量的MAO抑制 劑接觸。配合本發明之一實施例，用於製備治療患有惡性神經膠質瘤或GBM病患的藥物之用途，包括施予所需病患一有效劑量之MAO抑制劑。MAO抑制劑可以為一NIR染劑與MAO抑制劑共軛之奈米共軛物。
本發明之第二實施例是針對用以降低GBM發展之醫藥組成物，以及利用此醫藥組成物延緩GBM發展之方法。本發明所使用之「延緩發展」一詞，包括可對GBM腫瘤的任一特徵停止發展、延緩發展或延緩發展的增加速率。與本發明之實施例一致的組成物，包括MAO抑制劑(例如：一可抑制MAO活性的活性物質)；以及一生理上適用的載體。於一實施例中，一種延緩GBM發展之方法，包括施予所需病患一有效劑量之MAO抑制劑。MAO抑制劑可以為一NIR染劑與MAO抑制劑共軛之奈米共軛物。
本發明之第三實施例是針對用以降低GBM細胞移轉與侵襲之醫藥組成物，以及利用此醫藥組成物降低GBM細胞移轉與侵襲之方法。與本發明之實施例一致的組成物，包括MAO抑制劑(例如：一可抑制MAO活性的活性物質)；以及一生理上適用的載體。於一實施例中，一種降低GBM細胞移轉與侵襲之方法，包括施予所需病患一有效劑量之MAO抑制劑。MAO抑制劑可以為一NIR染劑與MAO抑制劑共軛之奈米共軛物。
本發明之第四實施例是針對用以降低神經膠質瘤幹細胞活性之醫藥組成物，以及利用此醫藥組成物降低神經膠質瘤幹細胞活性之方法。與本發明之實施例一致的組成物，包括MAO抑制劑(例如：一可抑制MAO活性的活性物質)；以及一生理上適用的載體。於一實施例中，一種降低神經膠質瘤幹細胞活性之方法，包括施予所需病患一有效劑量之MAO抑制劑。MAO抑制劑可以為一NIR染劑與MAO抑制劑共軛之奈米共軛物。
本發明之第五實施例是指敏感化具TMZ抗藥性之神經膠質瘤，包括使具TMZ抗藥性之GBM對TMZ具敏感性，藉以使對TMZ具抗藥性之細胞對於此藥物具敏感性之醫藥組成物，以及利用此醫藥組成物以敏感化具TMZ抗藥性之神經膠質瘤，包括使具TMZ抗藥性之GBM對TMZ具敏感性，藉以使對TMZ具抗藥性之細胞對於此藥物具敏感性之方法。與本發明之實施例一致的組成物，包括MAO抑制劑(例如：一可抑制MAO活性的活性物質)；以及一生理上適用的載體。與本發明之實施例一致，一種使具TMZ抗藥性之GBM對TMZ敏感性之方法，包括施予所需病患一有效劑量之MAO抑制劑，使具TMZ抗藥性之GBM對TMZ具敏感性，讓這些對TMZ具抗藥性之細胞，透過一劑量有效使TMZ抗藥性之GBM細胞對於TMZ具敏感性。MAO抑制劑可以為一NIR染劑與MAO抑制劑共軛之奈米共軛物。
本發明之第六實施例是一種用於治療惡性神經膠質瘤的醫藥組成物之用途，該惡性神經膠質瘤包括GBM，其包含施予綜合TMZ及MAO抑制劑之組成物。TMZ以及MAO抑制劑可以同時施予；或者，MAO抑制劑以及TMZ可次序性的施予，而較佳是先投予MAO抑制劑。
適當的MAO抑制劑，包括適當的其奈米共軛物，包括那些描述於2013年7月26日所申請美國之專利申請號13/353,094中者，該文件全體皆引用作為本說明書的揭示內容。適當的MAO抑制劑與其奈米共軛物，可根據描述於美國專利申請號13/353,094文件中的方法合成。
於一實施例中，與本發明使用一致之MAO抑制劑在該技藝中為已知。MAO抑制劑的範例包括但不限於：嗎氯苯甲醯胺、苯乙肼、反苯環丙胺、丙炔甲基芐胺以及氯吉蘭。可使MAO受到抑制、調降或不表現 的核酸類也是有利的選擇。核酸類MAO抑制劑的範例包括但不限於：小干擾型核醣核酸(Small interfering RNA；siRNA)、小髮夾型核醣核酸(short hairpin RNA；shRNA)、反義(antisense)或其他已知之核酸類基因靜默劑(gene silencing agents)，例如誘騙劑(decoys)、核糖酶以及核酸適體(aptamers)。此類較佳實施例可以單獨或與本文所述之醫藥組成物一起進行癌症治療用途。
適當的MAO抑制劑包括：
以及如下之化合物11-14： 與其鹽類。
如同申請於2013年7月26日之美國專利申請案號13/353,094 一文中所述，MAO抑制劑可與一近紅外光染劑(NIR)鍵結以形成一共軛物，其功能為例如優先或選擇性的標定癌細胞。與本發明一實施例一致的共軛物通常具備一NIR染劑奈米顆粒與MAO抑制劑共軛。近紅外光染劑的實施例包含一多烯類官能基，例如選自以下：IR-783、IR-780、IR-786以及MHI-148其中之一者，但非限於此。MAO抑制劑的實施例包含：苯乙肼、反苯環丙胺鏡像異構物、丙炔甲基芐胺、雷沙吉蘭、D-丙炔苯丙胺、L-丙炔苯丙胺以及如下所述之化合物11-14： 及其鹽類。
NIR染劑與MAO抑制劑之共軛，可透過於本技藝中已知之任一適當化學方式來達成。
於一較佳實施例中，本發明範例式的共軛物至少具備二官能基：一MAO抑制劑透過一含有至少一個碳與二個氫原子之鍵結物，附著於一發光元素(例如NIR染劑奈米顆粒)上。較佳者，為包含一個不飽和之雙鍵或三鍵之至少二個不飽和結構，透過一個具有1-3、1-5、或1-15個原子之主鏈，與一雜環鍵結。
範例式的鍵結物為一具有如下通式者： 其中M1為氧或硫；其中X、Y與Z中至少二者，參與由額外的碳、氧或氮原子所連接非飽和基團、及/或芳香族基團A與B(未示)之鍵結。任何不與該基團A或B鍵結的X,Y與Z係以氫或帶有低級脂肪族之基團所取代，例如C1-C6烷基。
例如，與本發明實施例一致之共軛物可具備以下化學式：
於另一實施例中，X與Y如同上述，且Z為選自以下所組成之群組： ，其中該共價鍵結合於芳香環。此化合物於本發 明中為MHI-嗎氯苯甲醯胺，係為一種MAO-A專一之可逆性抑制劑。
於另一實施例中，X與Y與上述相同，Z為 ，其中該共價鍵也與芳香環結合。此化合物於本發明 中命名為MHI-苯乙肼，係為一種MAO-A與-B抑制劑。
於另一實施例中，X與Y與上述相同，Z為具有如下結構式之(±)-反式-2-苯環丙烷-1-胺基： ，其透過芳香環進行共價連結。此化合物於本發明中命 名為MHI-反苯環丙胺，其為一種MAO-A與-B抑制劑。
於另一實施例中，X與Y與上述相同，Z為具有如下結構式之N-苄基-N-甲基炔丙基胺(N-Butyl-N-methylprop-2-yn-1-amine)： ，其中共價鍵結如彎曲線段所示與氮連結。此化合物 於本發明中命名為MHI-丙炔甲基芐胺，一種MAO-A與-B抑制劑，較佳為MAO-B抑制劑。
於一較佳實施例中，Y為硫；X為如下結構式之一群組： 且Z為如下結構式之一群組： 。此化合物於本發明中命名為MHI-氯吉蘭，其為MAO-A 專一之不可逆性抑制劑。
於另一實施例中，X與Y與上述相同，Z為選自以下結構之一者： 其共價鍵結連結於芳香環。此群組化合物於本發明中均為MHI-MAO抑制劑。
於另一實施例中，MAO抑制劑與NIR染劑之共軛物具備如下結構式：
於一較佳實施例中，為了提升MAO抑制劑對腫瘤的靶向專一性，發明人提出了範例式的NIR染劑與MAO A抑制劑之共軛物一NMI，證明了NIR染劑-MAO A抑制劑共軛物可專一性的以癌細胞的粒腺體為目標，而不影響正常細胞。NMI以如下結構之陰離子型式呈現： 於此，NMI包括陰離子的鹽類，或羧酸-該鹽類的酯類類似物。
適當的藥學上可接受的本發明化合物之鹼加成鹽包括，例如金屬鹽類，包括鹼金屬，鹼土金屬，以及過渡金屬鹽，例如鈣、鎂、鉀、鈉以及鋅鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽亦包括來自基態胺類的有機鹽類，例如N,N’-二苄基乙二胺(N,N'-dibenzylethylenediamine)、氯普魯卡因 (chloroprocaine)、膽鹼(choline)、二乙醇胺(diethanolamine)、乙二胺(ethylenediamine)、甲基葡胺(meglumine)以及普魯卡因(procaine)。藥學上不可接受的鹼加成鹽包括鋰鹽以及氰酸鹽。雖然藥學上不可接受的鹽類一般不常使用在醫藥品，然而這些鹽類之用途，可例如：做為合成化合物的媒介，或是藉由其再結晶的方式做純化。這些鹽類可透過常規方式，以對應之化合物，例如以化合物適用的酸或鹼，進行反應製備得。「藥學上可接受之鹽類」一詞代表無毒性之無機或有機酸及/或鹼加成鹽類，可參考Lit et al.,Salt Selection for Basic Drugs(1986),Int J.Pharm.,33,201-217，其引用作為本說明書的揭示內容。
包括氯吉蘭之NMI，為一種不可逆之MAO A抑制劑，透過一醯胺鍵(amide bond)與NIR MHI-148染劑共軛鍵結。此雙官能基之系統具備NIR影像能力提供診斷，且針對專一性目標癌症具有良好治療活性。
發明人檢視了例如氯吉蘭與MHI-氯吉蘭，在體外與體內腫瘤生長之功效。發明人提出這些MAO A抑制劑對GBM細胞以及神經膠質瘤幹細胞具有細胞毒性。發明人更進一步證實，在小鼠的活體原位模式中，MAO抑制劑在具TMZ抗藥性之GBM中可減少腦腫瘤進展。此外，MAO的抑制同時影響了神經膠質瘤細胞以及腫瘤之微環境。
於本文所述，NMI對人類神經膠質瘤細胞之粒腺體具靶向專一性，且抑制MAO A之活性。在體外實驗與體內實驗中，NMI都比氯吉蘭具備更好功效。NMI在具藥物敏感性以及具藥物抗藥性之神經膠質瘤中，皆可抑制細胞群落形成，且進一步在以TMZ治療具藥物敏感性以及具藥物抗藥性之神經膠質瘤時，提高其敏感性。此現象顯示MAO抑制劑影響神經 膠質瘤的機轉，不依賴由TMZ媒介之活性。
這些結果顯示NMI與氯吉蘭相比，於神經膠質瘤細胞中引發細胞毒性的功效高30倍，暗示著這些細胞死亡的增加，可能至少一部份是因為在癌細胞中NIR共軛物的高累積量。發明人更探究了氯吉蘭與NMI影響腫瘤細胞移行的能力-復發型神經膠質瘤的重要特徵，且發現NMI非常顯著的抑制了人類神經膠質瘤細胞的移行，但是氯吉蘭並未展現任何顯著功效。此觀察與一概念一致，即NMI可有效使高劑量的MAO抑制劑沉積在癌細胞中，並因此降低了MAO A與已減少生長之腫瘤的相互關係。因此利用NIR基元針對腫瘤以製造NMI，對腫瘤的生長是極其有效的抑制劑。
癌細胞通常在一複雜的腫瘤微環境中處於持續的壓力下，其包括缺氧、酸毒症、氧化壓力以及數種其他因素。高氧化壓力造成活性氧化物(reactive oxygen species,ROS)的表現量提升，例如過氧化氫。而MAO A催化氧化反應過程而產生之副產物過氧化氫，其更會轉化為其他類型之ROS。發明人研究結果呈現了腫瘤生長的減少，以及MAO A基因剔除鼠比起野生型小鼠的存活率增加。有趣的是，腫瘤中以及周圍組織中的MAO A活性比起野生型更低，顯示微環境中的MAO A可能影響神經膠質瘤的生長與存活率。透過這些結果的啟發，發明人更探究了其他MAO抑制劑對腫瘤生長影響的潛力。活體顱內異種移植小鼠模式證實了嗎氯苯甲醯胺，以及與苯乙肼和TMZ結合時將增加存活率的反應。這些數據顯示多種類的MAO抑制劑可有效減少腫瘤生長。利用顱內異種移植小鼠模式進行之體內實驗顯示，氯吉蘭(10mg/kg)以及NMI(5mg/kg)都可降低腫瘤生長率並增加存活率。此結果更顯示結合TMZ與氯吉蘭或NMI，相較於單獨使用，在 存活率的部分展現了顯著的加成反應。在腫瘤異種移植生長中，NMI(5mg/kg)呈現了顯著的抑制效果，也顯示會對腫瘤進行選擇性的定位。這些數據暗示著NMI比單獨使用氯吉蘭更具效果，且特別針對具TMZ抗藥性之神經膠質瘤似乎更有用。
為了測定MAO A抑制劑在活體中功效的潛在機制，取處理後的動物之腫瘤組織針對數種特徵進行檢測，其中包括微血管密度。數據暗示著氯吉蘭與NMI都可減少血管生長。然而此減少的理由未明。氯吉蘭與NMI並未被發現會影響正常的血管，因為鄰近大腦軟組織的血管密度並未被發現有不正常密度的表現或有血管構造。因此MAO A抑制劑專一性的影響著腫瘤脈管系統。因腫瘤脈管系統的微環境，與正常腦部相比，常表現高量的血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)，以及鹼性纖維母細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)，以及低量的第一型血小板活化素(thrombospondin-1,TSP-1)，因此MAO A抑制劑也有可能調節其他生長因子。
以MAO處理後動物之腫瘤組織，比對照組組織表現了更高量的巨噬細胞。足夠的證據顯示免疫系統，尤其是巨噬細胞，對於腫瘤進展的調節非常重要。促發炎巨噬細胞一般會減少腫瘤生長，而當免疫被抑制，抗發炎巨噬細胞將維持或促進腫瘤生長。促發炎巨噬細胞的特徵是製造TNF-α。我們的免疫組織化學染色數據顯示，NMI處理過的組織呈現出TNF-α的顯著增加，暗示著出現於此的巨噬細胞很接近促發炎細胞。因此MAO抑制劑同時調節了巨噬細胞的活性以及神經膠質瘤細胞的活性。
綜上所述，發明人證實了活體內MAO A抑制劑可減少神經 膠質瘤生長並增加存活率。MAO抑制劑的這些效果可能導致了降低細胞增殖，增加細胞毒性，及/或減少腫瘤細胞的侵襲。MAO A抑制劑更可提供調節巨噬細胞活性，及/或減少腫瘤血管密度的功能。MAO A抑制劑可能表現出多種不同的功能，因此使得這些抑制劑可對抗藥性神經膠質瘤具有功效。這些針對MAO A之標靶式治療神經膠質瘤的方式對於治療復發之腦癌是一有效途徑。
以下說明實驗方法：
A. 材料與方法
細胞培養：人類神經膠質瘤細胞株U251來自「美國細胞培養暨儲存中心」(American Type Culture Collection)；具TMZ-抗藥性之人類神經膠質瘤細胞U251R，則衍生自如先前所述(見參考文獻4)。小鼠神經膠質瘤細胞株GL26由UCLA的Dr.Linda Liau贈與。所有神經膠質瘤細胞株皆培養於10%胎牛血清(fetal calf serum,FCS)的Dulbecco's Modified Eagle's Media(Life technologies,Carlsbad,CA)培養基中，加入100U/mL盤尼西林以及0.1mg/mL鏈黴素，培養於37℃與5%二氧化碳之濕度培養箱中。
MAO A催化活性檢測：MAO A的催化活性測定法是根據先前所述(見參考文獻5)。大略說明，將細胞或組織均質液放入含1mM碳14標定之-5-羥基色胺(14C-5-hydroxytryptamine,5-HT)的檢測液中培養。將反應物萃取出來，並藉由液態閃爍光譜測定法量測放射線活性。進行抑制活性檢測時，將細胞預培養於數種逐漸增加濃度之化合物中，培養於37℃中20分鐘，再接著加入碳14標定之-5-羥基色胺再於37℃中培養20分鐘。
雷射掃描共軛焦顯微鏡：將細胞移入玻璃底面之顯微鏡盤(MatTek)(30,000細胞/400μl)中，於標準培養基中培養24小時。以NMI(1與5μM)、Mitotracker Green(200nM)(Life Technologies,Carlsbad,CA)以及DAPI(1x)；處理細胞並培養3小時。以Zeiss LSM 510倒立雷射掃描共軛焦顯微鏡進行影像觀察。激發波長設定在λmax=790nm Chameleon(DAPI，藍色激發光)、488nm(Mitotracker Green，黃綠色激發光)以及633nm(NMI，紅色激發光)。用顯微鏡之階段式順序掃描模式(multi-track mode)來取得數據，並以130-200μM的針孔光圈拍攝影像。
細胞群落生成檢測：將神經膠質瘤細胞接種培養三重複，再以氯吉蘭、NMI以及TMZ處理48小時。將培養液移除並更換新鮮培養液(不含藥物)。將細胞再培養8到10天；以1%甲基藍染色以觀察群落並計量。
MTS檢測：神經膠質瘤細胞接種培養四重複，加入氯吉蘭與NMI處理48小時。根據製造商手冊進行活性檢測(Promega,Madison,WI)；並比較未處理之對照組細胞做計算，並以SigmaPlot 12.0進行數據之統計學分析。
細胞移行檢測：將細胞加入絲裂霉素C(10μg/ml)(Sigma Aldrich,St.Louis,MO)處理2小時；以200μL的無菌分注管製作一道划痕(scratch)。將細胞加入藥物處理；並於0小時以及20-24小時進行拍照記錄。使用ImageJ，透過比較對照組與處理組覆蓋區域的量測來計量移行現象。
活體內實驗：所有動物實驗方法皆通過南加州大學之實驗動物照護及使用委員會(International Animal Care and Use Committee of USC)核准。顱內移植的進行係根據先前所述(見參考文獻6)。在針對MAO A基 因剔除的研究中(見參考文獻7)，使用C57bl/6品系的小鼠。將2×104個以螢光酵素標定之GL-26小鼠的神經膠質瘤細胞，植入到野生型(WT)(n=4)以及MAO A基因剔除(n=4)的小鼠顱內；並於植入後第6天與第10天拍攝影像。治療組的研究中，同樣植入腫瘤細胞並於6天後開始進行。將有化合物溶於10% DMSO+45%甘油+45%乙醇中，並進行皮下注射。TMZ則以管餵方式施予。動物的治療每天進行，直到死亡，並紀錄存活率。
異種移植模式部分，係使用無胸腺裸鼠(athymic)(nu/nu)。將帶有螢光酵素(2x105)的抗TMZ人類神經膠質瘤細胞(U251R)注射到顱內，並於7天後拍攝影像。待見到腫瘤生長可見時再開始進行每天的治療(21天)；TMZ僅於前十天施予。
於皮下異種移植研究中，將5×105帶有螢光酵素的細胞透過皮下注射到無胸腺裸鼠。每天提供藥物共21天；並監控腫瘤大小。對照組動物則施予溶劑作為處理。
免疫組織化學染色(Immunohistochemistry,IHC)：將冷凍的組織固定於丙酮中。IHC的進行如先前所述(見參考文獻8)。使用以下初級抗體：F4/80、TGF-β、TNF-α(Abcam,Cambridge,MA)、Ki67(Santa Cruz Biotechnology Inc.,Santa Cruz,CA)、CD31(BD Biosciences,San Jose,CA)、MMP 9 MAO A(Santa Cruz Biotechnology Inc.,Santa Cruz)以及生物素基化的二級抗體(Vector Laboratories,Berlingame,CA)。對照組則不帶初級抗體。利用Image J軟體分析影像。
統計分析：所有的參數數據係利用雙尾學生t-檢定(two-tailed studentt-test)來計算其顯著性數值。機率值(p)<0.05則可 認定為具有統計顯著性。
B. NMI的合成
一般合成方法：所有試劑與溶劑皆由商業取得，如無其他說明，則皆以收到時的內容物直接使用。所有易受潮的試劑都在氬氣環境下，配合無水溶劑以及以火燒乾之玻璃製品使用。將易受潮的液體以一注射器移出，並透過橡膠隔片加入反應瓶中。將反應後產生之溶液以減壓濃縮機於30-150毫米汞柱下進行濃縮。利用試劑級溶劑於矽膠(230-400篩孔)上進行管柱層析法。分析級薄層層析法(thin-layer chromatography,TLC)則於玻璃背板之預塗層板(0.25mm,silica gel 60,F-254,EM Science)上進行。分析級高效液相層析法是利用Microsorb-MV C8逆相層析管柱(250×4.6mm,Varian)，Shimadzu LC-10A VP幫浦以及Shimadzu SPD 10A VP紫外光/可見光可變波長紫外光檢測器。製備級高效液相層析法之純化是利用C8逆相層析製備級管柱(Grace Davison)進行。製備級高效液相層析法的流速為4mL/分鐘。所有試驗中，均以含有5%-95%之梯度氰基甲烷的0.1%液相三氟醋酸(trifluoroacetic acid,TFA)作為沖提液。純水(電阻為18MΩ)取自於Barnstead水純化系統，所有緩衝液均以0.2μm進行過濾。核磁共振(Nuclear magnetic resonance,NMR)光譜則以所述溶劑於儀器中收集得。各個中間產物與終產物的鑑別與純度係由1H NMR(Varian Mercury 400MHz)以及質譜儀(Agilent 6520 time-of-flight system)分析證實。NMI合成的總圖已揭示於圖1。
叔丁基(3-溴丙基)氨基甲酸酯(t-Butyl(3-bromopropyl)carbamate)(1)
於放有磁性攪拌棒的100-mL圓底瓶中加入3-溴丙胺溴化氫(3-bromopropylamine hydrobromide)(6.57g,30mmol,1.0eq.)以及二氯甲烷(dichloromethane)(160mL)。於製備液中加入含有二碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)(6.54g,30mmol,1.0eq.)的二氯甲烷(dichloromethane)(110mL)，接著加入三乙胺(triethylamine)(4.8mL,34.5mmol,1.15eq.)。將此溶液於室溫下攪拌95分鐘。再將反應物以飽和的碳酸氫鈉(sodium bicarbonate)(70mL,40mL)清洗二次，以及以飽和的氯化鈉一次(100mL)。將有機相以硫酸鈉乾燥之，過濾後，於真空中移除溶劑，以產生1(6.91g,97%產率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：4.67(bs,1 H),3.43(t,J=6Hz,2H),3.26(m,2 H),2.04(m,2 H),1.43(s,9 H)。
叔丁基-3-(2,4-二氯苯氧基)胺基甲酸丙酯(t-Butyl 3-(2,4-dichlorophenoxy)propylcarbamate)(3)
於一放有磁性攪拌棒的20-mL的閃爍計數瓶中加入2,4-二氯酚(2,237mg,1.45mmol,1.0eq.)，接著加入1,2-二氯乙烷(5mL)。於製備液中加入化合物1(346mg,1.45mmol,1.0eq.)、四丁基氯化銨(44.2mg,0.159 mmol,0.11eq.)，接著加入碘化鉀(24.1mg,0.145mmol,1.0eq)。加入氫氧化鈉(5mL of 10%)並將此混合液於80℃攪拌1小時。將雙相混合液分層，並將水相層以DCM(7mL)萃取二次。收集有機相並集中以硫酸鎂乾燥，過濾並濃縮。此材料(512.7mg)通過矽膠管柱(2.5”×1”，高×寬)，以100mL含10%乙酸乙酯的正己烷，100mL含15%乙酸乙酯的正己烷，與100mL 25%乙酸乙酯沖提。產物3以15%乙酸乙酯沖提各區段(fractions)。產出310mg(67%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.32(d,J=2.4Hz,1 H),7.14(dd,J1=8.8Hz,J2=2.4,1 H),6.80(d,J1=5.2Hz,1 H),5.18(bs,1 H),4.04(t,J=6Hz,2 H),3.34(m,2 H),2.00(m,2 H),1.41(s,9 H)。
叔丁基-3-(2,4-二氯苯氧基)-正丙基(丙炔基)胺甲酸酯(t-Butyl 3-(2,4-dichlorophenoxy)propyl(prop-2-ynyl)carbamate)(4)
於一20-mL的閃爍計數瓶中加入化合物3(500mg,1.57mmol,1.0eq)，接著加入氫化鈉(63mg,1.57mmol,1.0eq.)。所產生之溶液攪拌15分鐘並通氣至大氣壓，再加入溴丙炔(propargyl bromide)(470μL含80%溶液的甲苯(w/v),3.14mmol,2.0eq.)。注意：加入溴丙炔時，溶液顏色會從偏黃色改變為棕色。將反應液於室溫下攪拌4小時，於氣流中移除溶 劑，殘餘物在真空中乾燥。將殘餘物於5mL DCM中復水，加入1.65g of celite-545。將混合物蒸乾。將材料載入5”×l”(高×寬)二氧化矽樣品塞並以正己烷進行平衡，產物以100mL含2%乙酸乙酯的正己烷，200mL含5%乙酸乙酯的正己烷，以及200mL含30%乙酸乙酯的正己烷進行沖提。集中含有產物的區段(產物在含5%與30%之間的乙酸乙酯的正己烷沖提出)。產出292.6mg of化合物4(52%產率)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.35(d,J=2.8Hz,1 H),7.16(dd,J1=9.2Hz,J2=2.8,1 H),6.82(d,J1=8.8Hz,1 H),5.18(bs,1 H),4.05(m,4 H),3.55(t,J=7.2Hz,2 H),2.18(t,J=2.4Hz,2 H),2.00(m,2H),1.43(s,9 H)。
N-3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)丙炔基-1-三氟乙酸銨(N-(3-(2,4-dichlorophenoxy)propyl)prop-2-yn-1-aminium trifluoroacetate)
將含有叔丁基-3-(2,4-二氯苯氧基)-正丙基(丙炔基)胺甲酸酯之化合物4(147.6mg,412μmol)的4mL溶液，放入帶有攪拌棒的20mL閃爍計數瓶中，再加入1mL三氟醋酸，於室溫下攪拌。15分鐘後，HPLC(5-95% B(A=0.05%水相TFA；B=氰甲烷)超過20分鐘，0.8mL/分鐘)代表反應完成。溶劑在逐漸下降的壓力下移除。殘餘物與乙腈一起蒸乾數次，無需進一步純化即直接使用於下一步驟。
叔丁基-(3-氧代丙基)胺甲酸酯(t-Butyl(3-oxopropyl)carbamate)(5)
於一100mL圓底燒瓶中加入叔丁基(3-羥丙基)胺甲酸酯(1.8g,10.3mmol,1.0eq.)以及35mL的三氯甲烷與35mL的0.5M碳酸氫鈉/0.05M碳酸鉀。在劇烈攪拌下加入四丁基氯化銨(288mg,1.04mmol,0.1eq.)、四甲基哌啶氧化物(TEMPO)(162mg,1.04mmol,0.1eq.)與N-氯代丁二醯亞胺(2.1g,15.7mmol,1.53eq.)。三小時後分離各相，將有機相進行乾燥，移除溶劑以產生黏稠狀橘色油狀物。將材料以矽膠進行管柱層析法，使用4”×1”(高×寬)二氧化矽之樣品塞，並以75mL正己烷、100mL含20%乙酸乙酯之正己烷、100mL含30%乙酸乙酯之正己烷、以及50mL乙酸乙酯進行沖提。產物732.8mg(41%)。
叔丁基-3(3-((3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)(丙炔基)胺基)正丙基)胺甲酸酯(t-Butyl(3-((3-(2,4-dichlorophenoxy)propyl)(prop-2-yn-1-yl)amino)propyl)carbamate)(6)
於一帶有攪拌棒的100mL圓底燒瓶中加入含N-3-(2,4-二氯苯氧基) 正丙基)丙炔基-1-三氟乙酸銨的化合物4(1.25g,3.36mmol,1.0eq.)的25mL1,2-二氯乙烯(1,2-DCE)。接著將化合物5(0.641mg,3.4mmol,1.1eq.)加入，再加入二異丙基乙基胺(N,N-二異丙基乙基胺，584μL,3.36mmol,1.0eq)、乙酸(330μL,5.81mmol,1.73eq.)，以及三乙醯氧基硼氫化鈉(1.14g,5.38mmol,1.6eq.)。將反應液攪拌5.5小時直到約合成85%左右時，將有機層以碳酸氫鈉(100mL)洗滌二次，以無水硫酸鎂乾燥後，過濾，並以真空移除溶劑，得到1.12g的粗產物6。此材料無需進一步純化即直接使用於下一步驟。
N1-(3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)-N1-(丙炔基)丙烷-1,3-二胺2,2,2-三氟乙酸銨)(N1-(3-(2,4-dichlorophenoxy)propyl)-N1-(prop-2-yn-1-yl)propane-1,3-diaminium 2,2,2-trifluoroacetate)化合物(7)
將含有N-(3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)-N-(丙炔基)丙烷-1,3-二胺基氯之化合物7(16mg,38.5μmol)與248mg氯化氫的10mL乙酸乙酯溶液以機械攪拌。將反應結果於室溫下攪拌80分鐘，以液相層析質譜儀(LC/MS)確認反應完成。產物在逐漸下降的壓力下蒸乾，無需進一步純化即直接使用於下一步驟。
NMI
於一20-mL的閃爍計數瓶中加入MHI-148染劑8(5.79mg,8.47μmol)，接著加入二甲基甲醯胺(500μL)、N,N-二異丙基乙基胺(1.1μL,8.47μmol,1.0eq.)、與苯並三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBtU,3.2mg,8.47μmol,1.0eq.)。將混合物在加入化合物7(4.6mg,8.47μmol,1.0eq.)以及含N,N-二異丙基乙基胺(2.2μL,16.94μmol,2.0eq.)之二甲基甲醯胺(500μL)後，於室溫下攪拌10分鐘。將反應液以鋁箔包覆住，於室溫下攪拌隔夜。將二甲基甲醯胺於氣流下蒸發，殘餘物再以製備及矽膠片進行純化，並以二氯甲烷/異丙醇1：1為沖提液。產生NMI 1.2mg(14%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 1.49(m,2H,γ-CH 2(COOH)),1.56(m,2H,γ-CH 2(CONHCH2 -)),1.67(s,6H,CH 3),1.71(s,6H,CH 3),1.80(m,2H,β-CH 2),1.82(m,2H,β-CH 2),1.86(m,2H,δ-CH 2),1.88(m,2H,δ-CH 2),1.94(s,2H,O-CH2CH 2CH2N-),1.97(s,2H,NH-CH2CH 2CH2N-),2.09(s,2H,CH2),2.56-2.57(m,4H,α-CH2),2.68-2.70(m,4H,CH 2NCH 2),2.71(s,2H,CH2C=),2.75(s,2H,CH2C=), 3.38(m,2H,-NHCH 2),4.04(t,1H,HCΞC-),4.05(t,4H,N-CH 2),4.05(t,2H,O-CH 2),4.07(t,2H,CH2CΞ),4.57(bs,1H,NH-CH2CH2),6.04(d,1H,CH=CH),6.32(d,1H,CH=CH),6.85(d,1H,Ar-H),7.05(d,1H,Ar-H),7.17-7.42(m,9H,Ar-H),8.28(d,1H,CH=CH),8.40(d,1H,CH=CH)。HRMS calcd.for C57H69Cl3N3O4S C57H70Cl3N4O4 m/z 979.4457；observed m/z 979.4463.
C. MHI-148-氯吉蘭共軛物之合成
S-3-溴丙基硫代乙酸酯(S-3-bromopropyl ethanethioate)之合成
於一帶有玻璃套管熱電偶之250mL三磨口圓底燒瓶中，放入磁性攪拌棒，裝設好帶有氬氣入口(管柱中段)以及套接式隔片橡皮塞的味格氏冷凝管(vigreux column)，並於氬氣氣流中以熱風乾燥之。於氬氣下透過套管加入大約110-120mL之無水二甲基甲醯胺。於甲醇冰浴下分次將AcSK(11.68g,102.3mmol)加入燒瓶中。讓反應在約-10℃下進行7小時。在加入165mL的水終止反應後，移除甲醇冰浴槽。將反應混合物以300mL甲基第三丁基醚(MTBE)與700mL的水進行分層。水層以200mL甲基第三丁基醚洗過。甲基第三丁基醚層再依次以水、生理食鹽水以及碳酸氫鈉洗過，以硫酸鎂乾燥後過濾並蒸乾。產率98.7%(19.1g)。
S-3-((3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)(丙炔基)胺基)正丙基硫代乙酸酯(S-3-((3-(2,4-dichlorophenoxy)propyl)(prop-2-ynyl)amino) propyl ethanethioate)之合成
於5mL含有攪拌棒的瓶中放入含N-(3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)丙炔基-銨2,2,2-三氟醋酸(2.14mg,0.05mmol)的100μL氰甲烷之溶液，加入12.1mg(0.09mmol)碳酸鉀與142.4mg(0.720mmol)S-3-溴丙基硫代乙酸酯。於一油浴槽中加熱攪拌至50℃。進行薄層層析法(矽膠，甲基第三丁基醚：正己烷=9：1用以偵測起始物，甲基第三丁基醚：正己烷=1：9以偵測硫代乙酸鹽試劑的消耗)以接著進行反應流程。將混有N-(3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)丙炔基-1-三氟乙酸銨(N-(3-(2,4-dichlorophenoxy)propyl)prop-2-yn-1-aminium 2,2,2-trifluoroacetate)(17.1mg,0.05mmol)的800μL丙烯腈溶液放入帶有攪拌棒的20mL瓶中，加入碳酸鉀120.0mg(0.870mmol)以及S-3-溴丙基硫代乙酸乙酯95.2mg(0.48mmol)。將混合物以50℃油浴槽攪拌加熱5小時。將二種反應物混合一起，過濾並蒸乾。取得之粗產物(168.4mg)再與正己烷一起共蒸發三次以移除丙烯腈。以矽膠管柱(1.25g)純化粗產物。產率14%(2.6mg)。產物的結構以核磁共振與LC-MS確認之。
合成3-((3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)(丙炔基)胺基)丙硫醇(3-((3-(2,4-dichlorophenoxy)propyl)(prop-2-ynyl)amino)propane-1-thiol)
於20mL含有攪拌棒的瓶中放入含S-3-((3-(2,4-二氯苯氧基)正丙基)丙炔基)胺基)丙基硫代乙酸酯(1.17mg,3.10μmol)的200μL丙烯腈溶液，蒸乾後再與甲醇一起共蒸發三次以移除丙烯腈。將甲醇/鹽酸(200μL)加入瓶中，並將燒瓶放入85℃油浴槽中6小時。將反應物蒸乾，再依序與甲醇共蒸發三次，與丙烯腈共蒸發三次，無需進一步純化即直接使用於下一步驟。
MHI-148-氯吉蘭共軛物之合成
於一帶有攪拌棒的20mL瓶中放入MHI-148(4.7mg,6.2mmol)與二氯乙烷(1.5-2.4mg,7.8-12mmol)，以及1.5mg的4-二甲氨基吡啶(12mmol)。接著加入丙烯腈(400μL)以形成一溶液。將前一步驟的反應混合物於室溫下以滴加的方式加入200μL丙烯腈。將反應混合物以HPLC純化(GRACE Davison Apollo C8 5u column,250mm×10mm)。
以下以各實施例進行說明： 實施例1-MAO A於人類神經膠質瘤組織與細胞中表現：實驗顯示在GBM組織中很顯著的反應出MAO A被染色的結果，但是在非腫瘤之腦組織(非惡性腦瘤)中並無偵測到染色反應(圖2A)。根據型態學觀察，GBM的染色結果顯示其與腫瘤細胞相關。具敏感性(U251S)以及具抗藥性(U251R)之兩株人類神經膠質瘤細胞，如免疫染色之結果顯示，均表現出MAO A(圖2B)。再接著將這些神經膠質瘤細胞株以血清素為基質(圖2C)進行MAO活性分析，發現到這些神經膠質瘤細胞表現出MAO A的催化活性；相反的，正常的對照組星狀膠質細胞並未表現出可被偵測到之MAO A活性。
MAO A的活性亦在小鼠神經膠質瘤細胞株GL26中被量測到；這些癌細胞顯示了高度的MAO A活性。根據此一資訊，GL26細胞被選用以評估不同的單胺氧化酶抑制劑之抑制效果。氯吉蘭與苯乙肼可抑制MAO A的活性，有較低的半抑制率(IC50)，分別為10-9與10-11M。反苯環丙胺與丙炔苯丙胺抑制MAO A活性之半抑制率濃度範圍在很低的微莫耳。此抑制狀況確認了MAO A確實會表現在GL26細胞中。綜上所述，此結果顯示MAO A會表現於人類神經膠質瘤細胞以及人類GBM組織，但不會出現在正常的星狀膠質細胞中。
實施例2-MAO A抑制劑氯吉蘭以及NMI(Near-infrared dye conjugated MAO Inhibitor)可減少具TMZ敏感性與抗藥性神經膠質瘤細胞之細胞增殖，細胞活性以及細胞移行：MAO A抑制劑可針對MAO在中樞神經系統以及周邊組織之表現為標的。為了使MAO A對腦癌細胞有專一性，將MAO抑制劑氯吉蘭與近紅外光腫瘤專一染劑(near infra red,NIR) MHI-148共軛，以製造一新藥NMI(圖5A)，其可選擇性的累積於癌化損傷區。NMI的合成步驟係根據如圖1所示之流程。
使用共軛焦顯微鏡來評估人類神經膠質瘤細胞吸收NMI的狀況。經過NMI(1μM,5μM)處理過的腫瘤細胞的影像分析結果，與溶劑對照組比較，顯示出細胞吸收NMI的狀況明顯與劑量相關。利用與粒腺體專一染劑MitoTracker Green共定位後偵測，結果顯示此化合物可迅速累積於U251R細胞並定位於粒腺體(圖5B)。利用可表現大量MAO A活性的GL26小鼠神經膠質瘤細胞來研究NMI抑制MAO A活性的效果。結果顯示NMI在低量微莫耳濃度的IC50下即可抑制MAO A(圖3)。此結果暗示著NMI於體外實驗中可對神經膠質瘤細胞的粒腺體具專一性並抑制MAO A活性。
由於產生TMZ抗藥性因此腫瘤會再復發。因此使用對TMZ具抗藥性之神經膠質瘤細胞(U251R)來研究是否會對氯吉蘭與NMI發生細胞毒性。對TMZ具敏感性之神經膠質瘤細胞(U251S)則被用以作為比較組。以對TMZ具敏感性之細胞U251S來說，氯吉蘭(10μM)本身可減少約20%(p<0.05)的細胞群落形成，而TMZ(15μM)則約可減少60%。結合使用氯吉蘭與TMZ治療，則可更降低到65%(圖4A)。結果顯示體外實驗中，氯吉蘭在對藥物具敏感性之神經膠質瘤細胞(U251S)中可增加對TMZ的敏感度。
單獨使用5μM與10μM的NMI治療U251S細胞可分別降低60%與90%的細胞群落形成(圖5C(a))。結合NMI(5μM)與TMZ(15μM)則可降低90%的細胞群落形成(圖5C(a))。此結果暗示著體外實驗中，NMI會增加對藥物具敏感性之神經膠質瘤細胞(U251S)對TMZ 的敏感度。
接著評估NMI對於具抗藥性之人類神經膠質瘤細胞株U251R的影響。TMZ(μM)一如預期不具影響性。NMI則呈現出抑制細胞群落的形成與濃度相關，在濃度1,5與10μM下分別為20%、40%與80%(圖5C(b))。10μM的NMI在進行TMZ治療時，會敏化對TMZ具抗藥性之細胞，並呈現降低超過95%的細胞增殖(圖5C(b))。這些結果顯示NMI可增加已對TMZ具抗藥性之細胞對TMZ的敏感度。單獨使用氯吉蘭或結合TMZ並未顯示任何功效(圖4B)。
氯吉蘭與NMI對神經膠質瘤細胞之細胞毒性亦透過MTS檢測進行研究(圖5D(a)與(b))；結果證實了使用氯吉蘭進行治療產生之劑量與反應曲線，其50%抑制濃度(IC50)於U251S與U251R細胞分別約為175μM與136μM。相反的，以NMI治療時抑制細胞存活之IC50值在二細胞株中都為5μM，顯示與氯吉蘭相比，NMI具有30-35倍以上的功效。因此單獨使用NMI或與TMZ結合使用於具藥物抗藥性之神經膠質瘤細胞，可為一有效的細胞毒性藥物。
GBM是一具有高度侵襲性之腫瘤；因此臨床上使用化學治療藥劑以影響腫瘤細胞之移行與侵襲都非常有效果。透過移行檢測方法來研究NMI對抑制U251S與U251R細胞之移行能力。將細胞以氯吉蘭(10μM)與NMI(1,5與10μM)處理20-24小時，以溶劑對照組處理後之細胞移行到划痕封閉的時間為準。氯吉蘭本身對於人類神經膠質瘤細胞的移行率並無影響(圖4C & D)。然而，在具藥物敏感性的細胞(U251S)中，NMI(5μM)可降低50%移行率，而在具抗藥性的細胞(U251R)中則 為30%(圖5E(a)與(b))。這些結果顯示NMI在降低U251 TMZ抗藥性之細胞的移行率，比氯吉蘭更有效果。
實施例3-基因修飾之MAO A基因剔除動物(MAO A基因剔除鼠)顯示存活率增加：以IHC測定了MAO A表現於人類GBM組織中(圖2B)，相反的是在非腫瘤腦部組織中只有一些MAO A的染色結果。此結果顯示在神經膠質瘤細胞與GBM組織中，MAO A都有較高的表現，暗示著MAO A可能與GBM的進展有關。
為了測定MAO A在腫瘤生長中的體內實驗功效，腫瘤的進展是由C57bl/6小鼠品系中的MAO A基因剔除鼠(KO)來分析。本研究使用衍生自C57bl/6小鼠品系的小鼠神經膠質瘤細胞(GL26)，因為這些腫瘤細胞呈現了高程度的MAO A活性(圖2C)。腫瘤細胞以螢光酵素標定並植入MAO A基因剔除鼠以及野生種C57bl/6小鼠的顱內；螢光酵素的影像測定在第10天進行。結果顯示減少了75%的腫瘤負荷(圖6A及圖6B)以及增加17.6%(3天)的存活率(圖6C)。
野生型與基因剔除小鼠的腫瘤與周圍組織的MAO A活性於實驗最後進行測定。結果顯示MAO A基因剔除鼠的腫瘤組織中，與野生型相比，有較低的MAO A活性。有趣的是，這些結果暗示著在KO小鼠不具有MAO A活性的周圍組織，可能會影響腫瘤組織中的MAO A的活性(圖6D)。類似的結果也在MAO A基因剔除鼠以及野生型小鼠皮下植入之GL26腫瘤細胞中觀察到。這些結果顯示腫瘤以及腫瘤微環境中MAO A的降低減少了GBM的進展。
實施例4-皮下異種移植神經膠質瘤小鼠模式中氯吉蘭抑 制人類腫瘤細胞的生長：為了測定氯吉蘭在腫瘤生長中的體內實驗功效，將螢光酵素標定的U251S腫瘤細胞植入裸鼠皮下；當腫瘤生長到可藉由影像觀察到時，即每日提供溶於無菌水中的氯吉蘭(30mg/kg)共21天。溶劑對照組則以水進行處理。實驗組與對照組小鼠都有近似的體重變化，減輕體重不超過10%，表示這樣的治療處方是可被接受的。從第28天開始，以氯吉蘭治療組呈現一致性的降低腫瘤生長，在第41天時達到降低70%(圖7A & 7B)。這些結果證實了抑制MAO A將減少體內的腫瘤生長。
實施例5-氯吉蘭與NMI單獨或配合TMZ使用於顱內之小鼠腫瘤模式中可增加存活反應：為了測定MAO A抑制劑於體內是否也對TMZ具抗藥性之神經膠質瘤細胞有效果，將人類具TMZ抗藥性之神經膠質瘤細胞(U251R)移植到顱內並於七天後拍攝影像。將小數分組(n=4)並施予以下藥劑：氯吉蘭、NMI、TMZ及/或TMZ與氯吉蘭之組合物或NMI。藥劑以皮下注射，每天持續進行21天，但TMZ除外，其是以1mg/kg管餵方式進行10天。氯吉蘭注射10mg/kg，NMI 5mg/kg。體內實驗的近紅外光影像顯示NMI可特異性的攝取與累積在神經膠質瘤細胞中。螢光酵素標定生物發光之細胞，以及NMI的螢光在皮下注射NMI(5mg/kg/day)，第十天後紀錄影像。將NIR影像以及生物發光之影像重疊，可觀察到NMI已跨過血腦障蔽，並定位在腫瘤區，而於身體其他部分並未被偵測到分布狀況(圖8A)。動物影像記錄在第7,14,21,24天進行(圖8B)。28天後(植入後七天以及治療開始21天)治療停止；紀錄腫瘤生長與存活率(圖8C及8D)。存活率數據顯示所有在溶劑對照組中的動物在第28天死亡，在TMZ與氯吉蘭實驗組中的動物分別在第34天死亡(p<0.05)以及第36天死亡(p< 0.05)。氯吉蘭與TMZ的組合治療增加存活率，從腫瘤移植當天開始的第40天(p<0.05)。單獨以NMI治療呈現出增加存活率12天(第41天死亡，p<0.005)；TMZ與NMI的組合治療甚至可更增加存活率16天(第44天死亡，p<0.005)；Kaplan-Meier plot將上述數據呈現於圖4D。所有p值同時紀錄溶劑載體。實驗組與對照組小鼠都有近似的體重變化，在整個實驗過程中減輕體重不超過10%。這些數據暗示著配合氯吉蘭、或單獨以NMI治療、或NMI結合TMZ，可延緩腫瘤生長並顯著的增加存活時間。
實施例6-氯吉蘭與NMI可降低細胞增殖與血管新生並誘發體內之先天性免疫反應：為了鑑別出以氯吉蘭或NMI處理之動物增加了存活率的潛在機制，腫瘤組織在動物死亡後取出，並分析包括數種特徵：細胞增殖、微血管密度(microvessel density,MVD)、發炎細胞浸潤、以及生長因子的分泌。為了評估細胞增殖受到MAO A抑制劑的影響，將腫瘤組織以Ki67進行染色。結果顯示相對於溶劑對照組的動物(圖9A，第1排)，以氯吉蘭與NMI治療的動物中，染色細胞(紅色沉澱物)的數量降低(p<0.05,圖9C)。將組織進行基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)分析，其為一種降解細胞外基質的酵素並因此可增加腫瘤侵襲程度。結果(圖9A第2排)顯示，比起以氯吉蘭或NMI治療的動物，在溶劑對照組組織觀察到更多的MMP9染色。此數據顯示單胺氧化酶抑制劑會降低腫瘤細胞的侵襲。對於腫瘤進展具關鍵影響的血管新生與血管密度，係透過內皮細胞標誌物CD31的染色來評估。結果(圖9A第3排；圖9C)顯示以氯吉蘭(p<0.01)與NMI(p<0.05)處理過之動物具有顯著性減少的微血管密度。這些數據證實了氯吉蘭與NMI可明顯的降低細胞增生、侵襲，與腫瘤中之血 管新生，因此對於提升之存活率具有其貢獻。
先天性免疫反應在調節腫瘤生長中是一重要的貢獻者。因此分析治療後之動物的腫瘤發炎細胞。將腫瘤組織以F4/80-一種巨噬細胞標誌物來進行染色(圖9B，第1排)。結果顯示以MAO抑制劑治療之動物與溶劑對照組相比，具有明顯增加的巨噬細胞(p<0.01，圖9C)。數據顯示巨噬細胞可能參與延緩腫瘤進展。發炎性細胞激素會造成巨噬細胞更多的活性。為了判斷在腫瘤組織中偵測到之巨噬細胞是否為促發炎性，將組織樣品進行腫瘤壞死因子(TNF)-α的染色，其為一種作用強大之促發炎性生長因子。染色結果證實了以MAO抑制劑治療之動物具有更多TNF-α陽性之數量(圖9B，第2排)。結果顯示單胺氧化酶抑制劑調升了促發炎性生長因子的反應，其與巨噬細胞的出現以及減少腫瘤進展具有關連性。免疫抑制生長因子--轉化生長因子-β(ransforming growth factor TGF β)並未受到MAO A抑制劑治療的影響(圖9B,row 3)；在全部三組實驗組中均有類似的TGF β的染色結果。此腫瘤組織的染色數據強化了氯吉蘭與NMI抑制劑可改變腫瘤環境以降低活體內的腫瘤生長。
實施例7-MAO A抑制劑在小鼠顱內模式增加動物存活率：其他MAO A抑制劑在腫瘤進展的影響亦被測定。將已標定之小鼠神經膠質瘤細胞(GL26)植入顱內並於七天後拍攝影像。接著將動物隨機分組(n=5)；藥物治療組為TMZ(1mg/kg)、苯乙肼(10mg/kg)、苯乙肼+TMZ、以及嗎氯苯甲醯胺(10mg/kg)。苯乙肼是一種MAO A與B抑制劑；嗎氯苯甲醯胺為MAO A特異性可逆抑制劑。所有藥物除了TMZ之外皆每天進行皮下注射；TMZ則以管餵施予。存活率數據顯示所有溶劑對照 組的動物在第12天死亡；TMZ與苯乙肼(p<0.05)組則在第14天死亡。苯乙肼+TMZ(p<0.005)以及嗎氯苯甲醯胺(p<0.005)治療之小鼠分別在第14天與第16天死亡。透過Kaplan-Meier plot將這些數據呈現於圖10A。所有p值同時計算入溶劑載體。這些結果顯示苯乙肼結合TMZ與嗎氯苯甲醯胺可提升存活率。
為了更了解MAO活性在腫瘤進展中扮演的角色，取下腦部組織並分析MAO A活性。結果顯示苯乙肼與嗎氯苯甲醯胺分別降低了87%以及62%的酵素活性(圖10B)。此結果暗示著存活率的增加與降低MAO A活性之關聯性。
實施例8-更多結果支持了本發明具備不可預期的特性：圖18揭示的數據顯示前列腺癌與神經膠質瘤具有MAO A活性，因此可以MAO I以及MHI-氯吉蘭進行治療。胰臟癌與淋巴癌不具MAO A活性，因此無法以氯吉蘭以及MHI-氯吉蘭進行治療。
圖19證實氯吉蘭以及MHI-氯吉蘭都可以誘發幹細胞的細胞毒性，且MHI-氯吉蘭比氯吉蘭本身更具效果。
雖然本案已以實施方式揭露如上，然其並非用以限定本案，任何熟習此技藝者，在不脫離本案之精神和範圍內，當可作各種之更動與潤飾，因此本案之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
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Claims (21)

  1. 一種單胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)抑制劑用於製備治療腦癌藥物之用途，係包括：將一有效劑量之該單胺氧化酶抑制劑施予一具腦癌之病患。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該腦癌包括神經膠母細胞瘤。
  3. 如申請專利範圍第2項所述之用途，其中該神經膠母細胞瘤為具替莫唑胺(temozolomide)抗藥性之神經膠母細胞瘤。
  4. 如申請專利範圍第3項所述之用途，更包括施予替莫唑胺時搭配該單胺氧化酶抑制劑。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之用途，其中該替莫唑胺是在搭配該單胺氧化酶抑制劑時施予。
  6. 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該替莫唑胺以及該單胺氧化酶抑制劑是次序性的施予。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該腦癌為多發性神經膠母細胞瘤。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，更包括施予替莫唑胺時搭配該單胺氧化酶抑制劑。
  9. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該單胺氧化酶抑制劑為選自以下所組成之群組： 及其鹽類。
  10. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該單胺氧化酶抑制劑為選自以下所組成之群組：
  11. 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該單胺氧化酶抑制劑是透過一鍵結物與一近紅外光染劑共價鍵結。
  12. 如申請專利範圍第11項所述之用途，其中該近紅外光染劑包括一多烯類官能基。
  13. 如申請專利範圍第12項所述之用途，其中該近紅外光染劑為選自以下所組成之群組：IR-783、IR-780、IR-786以及MHI-148。
  14. 如申請專利範圍第13項所述之用途，其中該單胺氧化酶抑制劑為選自以下所組成之群組：NMI、MHI-嗎氯苯甲醯胺、MHI-苯乙肼、MHI-反苯環丙胺、MHI-丙炔甲基芐胺、MHI-氯吉蘭、MHI-單胺氧化酶抑制劑及NIR-單胺氧化酶抑制劑。
  15. 如申請專利範圍第12項所述之用途，其中該鍵結物具以下化學式： 其中M1為氧或硫；其中X,Y與Z中至少二者與基團A及B鍵結，該基團A及B為非飽和基團、芳香族基團或其二者，該基團A與B更與額外的碳、氧或氮原子連接；以及其中任何不與基團A或B鍵結的X,Y與Z係以氫或帶有1-6個碳原子的低級脂肪族基團所取代。
  16. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該單胺氧化酶抑制劑具有如下化學式：
  17. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該單胺氧化酶抑制劑為選自以下所組成之群組： 及其鹽類、其羧酸或其酯類。
  18. 如申請專利範圍第1項所述之用途，更包括同時或次序性的施予該病患一種或多種附加的腦癌治療，其中該一種或多種附加的治療包括外科手術、放射線以及化學治療。
  19. 一種化合物，包括以下之鹽類 或其羧酸或其酯類類似物。
  20. 一種醫藥組成物，包括如申請專利範圍第19項所述之化合物。
  21. 一種用於製備治療腦癌之醫藥組成物之用途，包括：施予一個體所需之一有效劑量之醫藥組成物，其中該醫藥組成物包括如申請專利範圍第20項所述之醫藥組成物。
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