TW201416350A - 吲哚啉酮衍生物之結晶型及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於如說明書中所示之結晶吲哚啉酮衍生物、其製造方法及其在治療中之用途。

Description

吲哚啉酮衍生物之結晶型及其用途
本發明係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基(meth-(Z)-ylidene)]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，尤其呈結晶型，尤其係關於呈結晶自由鹼型之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，尤其如本文所述，及其視情況與一或多種其他治療劑組合在治療中之用途。
詳言之，本發明係關於一種3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型、其製造方法及其視情況與一或多種其他治療劑組合在適用於治療之醫藥組合物中之用途。
國際專利申請案WO 2010/012747揭示吲哚啉酮衍生物，其包括3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，下文敍述該化合物之結構呈如式(I)之自由鹼型，及其用於製備適用於治療特徵為過量或異常細胞增殖之疾病之藥劑的用途。
儘管，此項技術中揭示及以上所提及之吲哚啉酮衍生物之藥理學上有價值之特性構成化合物作為藥劑或用於醫藥組合物之有效用途之基本前提，在任何情況下，活性物質必須滿足額外需要以被接受用作藥物或用於醫藥劑型及其製劑中。此等參數主要與活性物質，尤其 呈其固體形式之活性物質之物理化學性質有關。
因此，仍需要活性物質之新穎結晶型，其宜可經調配投與患者且其為實質上純且高度結晶的以滿足確切醫藥需求及規格。
較佳地，該等化合物容易以適當產量形成，展示良好之提高等級的能力、可製造性及可加工性，且具有足夠整體特徵(bulk characteristics)。該等整體特徵之實例可為乾燥時間、容積密度、流動性、可濾性、溶解度概況、固有溶解速率、總體穩定性(例如熱穩定性、溶液狀態穩定性、化學穩定性、機械穩定性等)及/或吸濕性。該等參數通常可與各別形式之固態特徵相關。
所用醫藥組合物中不存在分解產物亦有利，此係因為若醫藥組合物中存在分解產物，則醫藥調配物中存在之活性物質的含量可能低於規定含量。
待控制之另一關鍵參數為吸濕性，因為吸濕會因由水吸收所引起之重量增加而降低醫藥學活性物質之含量。具有吸收水分之趨勢之醫藥組合物在儲存期間應例如藉由添加適當乾燥劑或藉由將藥物儲存於經防水保護之環境中來保護以使得免於吸收水分。另外，若醫藥物質以任何方式暴露於未經防水保護之環境中，則在製造期間水分之吸收可降低醫藥學活性物質之含量。因此，醫藥學活性物質之吸濕性較佳應充分表徵且亦可穩定。
因為活性物質之晶體變體對於製劑之可再生活性物質含量係重要的，所以需要儘可能地闡明以結晶型存在之活性物質之任何現有多態現象。若活性物質存在不同多晶型性變體，則須注意確保該物質之結晶變體在隨後自其產生的醫藥製劑中不會變化。另外，此舉可對藥物之可再生效能產生有害影響。針對此背景，僅藉由輕微多晶型現象表徵之活性物質較佳。
在某種情況下，視調配物之選擇或製造過程之選擇而定可具有 重要性之另一準則為活性物質之溶解度及溶解行為。若例如製備醫藥溶液(例如用於輸注)，重要的是活性物質應可充分溶於生理學上可接受之溶劑，尤其含水介質。對於口服之藥物而言，一般極其重要的是活性物質應可充分溶解、可易於分解及生物可用。
晶格中有機溶劑之含量降低亦有利，部分係歸因於隨溶劑而變對接受者之潛在溶劑毒性。
在某種情況下，對於藥物開發使用無水形式而非水合物形式可能亦有利，此係因為例如水合物之製備及處理有時可能困難，因為水合形式之再生性及穩定性可以複雜方式視外界影響而定，或一些水合物之可溶性可趨於相對於同源無水形式較小，亦對於活性化合物本身之溶解速率特性及其經由胃腸道之吸收概況具有潛在有害作用。
此外，製備該化合物之方法亦需要宜以工業規模進行。
因此，在步驟限制之情況下，需要控制之參數的實例為各種環境條件下起始物質的(應力)穩定性、醫藥調配物製造期間的穩定性及藥物之最終組成的穩定性。
用以製備醫藥組合物之醫藥學活性物質因此應具有甚至在各種環境條件下均要確保之極大(化學及物理)穩定性。
此外，因為接受用作藥物可能更具優勢，所以活性物質適用於口服投藥可能有利。同樣地，活性物質適用於製造固體口服醫藥形式(諸如錠劑及膠囊)或液體口服醫藥形式(諸如經口投與之溶液及懸浮液)可能有利，藉此可能強調固體口服劑型。
通常，在醫藥組合物之製備中，尋覓一種具有所需特性之平衡之活性成分形式。因此，需要提供一種不僅特徵在於高藥理學效能而且儘可能滿足以上所提及之物理化學要求的醫藥學活性物質。
因此，本發明之目的為提供一種適用於醫藥用途之具有令人關注且有用特性之呈固體形式之式(I)化合物。
對於熟練技術者而言，本發明之其他目的可自上述及以下說明中變得顯而易知。
已發現下文敍述結構呈如式(I)之自由鹼形式的3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，可製備成其結晶型以及反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、柳酸鹽、酒石酸鹽、甲烷磺酸鹽、硫酸鹽或杏仁酸鹽酸加成鹽形式；其結晶自由鹼型較佳。
本發明係關於呈結晶型，較佳呈結晶自由鹼型之式(I)化合物，且次佳呈式(I)化合物之結晶反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、柳酸鹽、酒石酸鹽、甲烷磺酸鹽、硫酸鹽或杏仁酸鹽形式(亦即本發明之結晶型)。
本發明較佳係關於本文更詳細描述之呈結晶自由鹼型之式(I)化合物。
式(I)：
此外，已進一步發現上文所概述之問題較佳藉由3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺(式(I)化合物)之結晶自由鹼型解決且此結晶自由鹼型具有適當固態特性且尤其適用於本發明之目的。
因此，本文更詳細描述之本發明之結晶自由鹼型具有令人關注 且有用之特性。
舉例而言，本發明之此結晶自由鹼型可調配成醫藥劑型，尤其口服醫藥劑型，諸如固體或液體口服醫藥劑型，諸如懸浮液或錠劑或膠囊。
在一個實施例中，本發明之具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型的特徵在於在x射線粉末圖中其尤其具有特徵值d=3.95Å、4.31Å、4.40Å、4.71Å及8.51Å。
在一個實施例中，本發明之具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型的特徵在於：T熔化>約278℃，在分解下熔融(DSC：10℃/min，加熱速率)。分解在約>250℃下起始(DSC/TG信號)。
在另一個實施例中，本發明之具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型的特徵在於其具有T熔化>約278℃，在分解下熔融(DSC：10℃/min，加熱速率)，且另外在x射線粉末圖中其尤其具有特徵值d=3.95Å、4.31Å、4.40Å、4.71Å及8.51Å。
在另一個實施例中，本發明之具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型的特徵在於單位晶胞參數約等於以下：具有下列晶胞大小之單斜晶胞：a=9.6242(18)Å，b=30.086(8)Å，c=9.5745(23)Å，ß=112.360(20)°， V=2563.9(8)Å3，空間群P21/c。
本發明之具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型為不吸濕無水形式，其具高度結晶性且無多晶型現象之跡象(例如在20%至80%相對濕度之濕度範圍內水之吸收僅約0.4%，其在結晶度或多晶型形式無變化之情況下完全可逆)。
因此，如本文所提供及提及之本發明化合物尤其係關於具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，尤其呈結晶型，尤其係關於如本文所述之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。
本發明之另一態樣係指一種製造本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型之方法以及中間物。
本發明之另一態樣係指包含本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型以及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑之醫藥組合物(尤其口服劑型，諸如口服或液體口服劑型)。
本發明之另一態樣係指一種治療及/或預防可受抑制MEK及/或奧諾拉激酶(Aurora kinase)影響之病症，諸如癌症疾病(尤其如本文所述之該癌症疾病)的方法，其包含向有需要患者(尤其人類患者)投與有效量之本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。
本發明之另一態樣係指本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其係用於治療及/或預防可受抑制MEK及/或奧諾拉激酶影響之病症，諸如癌症疾病(尤其如本文所述之該癌症疾病)的方法。
本發明之另一態樣係指本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型之用途，其係用於製備適用於治療及/或預防可受抑制MEK及/或奧諾拉激酶影響之病症，諸如癌症疾病(尤其如本文所述之該癌症疾病)的醫藥組合物。
本發明之另一態樣係指大量式(I)化合物，其中至少50%，較佳至少75%，更佳至少95%，甚至更佳至少99%該物質以如本文所定義之本發明之式(I)化合物之結晶自由鹼型形式存在。
本發明之另一態樣係指一種醫藥組合物，其包含本發明之式(I)化合物之結晶自由鹼型及視情況選用之一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑，其中至少50%，較佳至少75%，更佳至少95%，甚至更佳至少99%該活性物質以結晶型存在，例如呈式(I)化合物之結晶自由鹼型形式。
本發明亦係關於一種適用作雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑之本發明之結晶型。
因此，本發明亦係關於一種適用於抑制MEK及/或奧諾拉激酶之本發明之結晶型。
本發明亦係關於一種製備本發明之醫藥組合物之方法，其包含較佳藉由非化學方法將至少一種本發明之結晶型併入一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑中。
本發明亦係關於一種醫藥組合物，其包含治療有效量之至少一 種本發明之結晶型及視情況選用之一或多種醫藥學上可接受之載劑及/或稀釋劑或由其製造。
本發明亦係關於本發明之結晶型之用途，其係用於製備適用於治療及/或預防可受抑制MEK及/或奧諾拉激酶影響之病症，諸如癌症疾病(尤其如本文所述之該癌症疾病)的醫藥組合物。
本發明亦係關於一種治療及/或預防有需要之哺乳動物(尤其人類)患者中可受抑制MEK及/或奧諾拉激酶影響之疾病或病狀，例如癌症疾病(尤其如本文所述之該癌症疾病)，諸如本文所提及之彼等疾病及病狀中之任一者的方法，其包含向該患者投與治療有效量之本發明之結晶型。
本發明亦係關於一種本發明之結晶型，其係用於治療及/或預防可受抑制MEK及/或奧諾拉激酶影響之病狀，例如癌症疾病(尤其如本文所述之該癌症疾病)，諸如本文所提及之彼等疾病及病狀中之任一者之方法，該方法包含視情況單獨投與該結晶型或與一或多種其他治療劑，諸如選自本文所提及之治療劑者組合(諸如分別、依序、同時、並行或按序交錯)投與。
在某些實施例中，本發明亦係關於一種本發明之結晶型，其係呈實質上純形式(例如實質上無雜質及/或其他形式)，例如各別形式之純度為約>80%、>85%、>90%、>95%、>98%或>99%。
在某些實施例中，本發明亦係關於一種呈實質上純形式之本發明之結晶型，意謂例如各別形式包括小於20重量%、小於10重量%、小於5重量%、小於3重量%或小於1重量%之任何雜質或其他物質形式。
本發明之其他態樣由上文及下文之說明書(包括實例)以及申請專利範圍變得顯而易知。
圖1顯示本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型之X射線粉末繞射圖，其係使用裝有位置敏感偵測器(position-sensitive detector；PSD)及Cu陽極作為具有單色CuKα1輻射之X射線源之傳輸型STOE STADI P繞射器記錄(λ=1.54056Å，40kV，40mA)。
圖2顯示本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型之熱分析(DSC/TG)，DSC/TG數據由TA儀器之Q系列TM之DSC儀及TG儀或由Mettler DSC822e/TGA/SDTA851e系統(加熱速率10K/min)收集。
所用縮寫：
式(I)化合物之結晶自由鹼型：具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼之以下固態特徵、溶解度、溶解作用、穩定性及製備通常可與本發明有關。
因此，本發明係關於具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，如特徵可在於一或多個以下特徵。
製備本發明之結晶3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺： 本發明提供一種製造3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺(式(I)化合物)之結晶自由鹼型之方法，其包含：在適當溫度下形成3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺於適當溶劑或溶劑混合物(諸如選自有機溶劑，較佳極性有機溶劑，更佳偶極非質子性有機溶劑，例如二甲亞碸及酮(例如丙酮)或其混合物，較佳偶極非質子性有機溶劑(尤其二甲亞碸)與酮(尤其丙酮)之混合物)中之溶液。
在一個較佳實施例中，較佳在高溫(諸如約45℃至55℃)下將3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺溶解於二甲亞碸與丙酮之混合物(例如重量比為約2.0至2.3：1)中。
視情況過濾(例如精緻過濾)(熱)溶液。
該方法進一步包含自上述溶液結晶3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。
在某些實施例中，例如藉由在適當溫度下誘導(例如藉由添加反溶劑或不良溶劑，諸如水)自溶液沈澱晶體。
在一個較佳實施例中，3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型藉由以下來沈澱：較佳在高溫(例如約45℃至55℃)下將水(較佳逐滴，較佳經適當時間)添加至3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺於二甲亞碸及丙酮中之(熱)溶液中，且接著冷卻所得懸浮液至適當溫度(例如約15℃至25℃)，較佳在適當溫度-時間曲線內。
該方法進一步包含分離或收集3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之自由鹼型之晶體。在某些實施例中，藉由過濾(例如過濾乾燥器)或離心分離晶體。
在另一實施例中，該方法進一步包含視情況洗滌及/或乾燥分離之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。
在某些實施例中，用水洗滌晶體。
在某些實施例中，在適當溫度下，例如在約50℃之溫度下乾燥晶體。在某些實施例中，減壓乾燥晶體。可進行乾燥步驟適當時間(例如直至剩餘溶劑含量小於0.5%)。
因此，本發明係關於一種(較佳在水存在下或藉由添加水)自二甲亞碸與丙酮之混合溶劑結晶之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。
此外，本發明係關於一種實質上根據如本文所述之程序可獲得或獲得之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之自由鹼型，例如呈粗物質、濕磨、洗滌、乾燥、純化及/或結晶形式。
此外，本發明係關於實質上根據如本文所述之程序可獲得或獲得之如本文所述之任何中間物，例如呈粗物質、再加工、洗滌、乾燥、純化及/或結晶形式。
本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型之固態特徵：結晶度及多晶型現象
此3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之自由鹼之晶形具高度結晶性。在一個實施例中，物質表現為黃色微晶粉末。
本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之此形式之X射線粉末繞射圖示於圖1中。
本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之此形式之高達30°2Θ之相關X射線粉末反射/指示XRPD峰及強度(校正)顯示於以下表1中(波長：λ=1.54056Å)。
使用裝有位置敏感偵測器(PSD)及Cu陽極作為具有單色CuKα1輻射之X射線源之傳輸模式之STOE-STADI P繞射儀產生X射線粉末圖。
(λ=1,54056Å，40kV，40mA)
在以上表1中，值「2Θ[°]」表示以度計之繞射角且值「dhkl[Å]」表示晶格面之間的以Å計之規定距離。
3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之此結晶自由鹼型之晶格量度如下：具有以下晶胞常數之單斜晶胞可能存在指標：a=9.6242(18)Å，b=30.086(8)Å，c=9.5745(23)Å，ß=112.360(20)°，V=2563.9(8)Å3。
所有反射峰均可指示。根據消光條件可指定空間群P21/c(14號)。
因此，本發明係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有實質上圖1中所示之x射線繞射圖案。
在另一個實施例中，本發明係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其特徵為單位晶胞參數約等於以下：晶胞大小：a=9.6242(18)Å，b=30.086(8)Å，c=9.5745(23)Å，ß=112.360(20)°，V=2563.9(8)Å3，空間群P21/c。
本發明進一步係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有包含一或多個以下之XRPD圖案：2θ為10.39、18.81、20.15、20.60及22.47度之峰(例如每一2θ約±0.05-0.3度)。
本發明進一步係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其特徵在於在x射線粉末圖中其尤其具有特徵值d=3.95Å、4.31Å、4.40Å、4.71Å及8.51Å(例如強度大於約40%之圖中之大多數主峰)。
此外，表1中所示之研究結果，本發明進一步係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲 哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其特徵在於在x射線粉末圖中其尤其具有特徵值3.95Å、4.25Å、4.31Å、4.38Å、4.40Å、4.45Å、4.45Å、4.55Å、4.71Å、7.66Å及8.51Å(例如強度大於約20%)。
在正常條件下，本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型以非溶劑合物(ansolvate)及/或無水(非水合物)形式存在。
為研究此物質之吸濕特性，例如經來自Surface Measurement Systems之DVS-1吸水監測器記錄吸附等溫線。在25℃下以10%相對濕度階距在10%相對濕度至90%相對濕度之範圍內完成吸附及脫附等溫線。
發現本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型不吸濕。觀測到在20%至80%相對濕度範圍內水吸收僅約0.4%。在發生水分吸附/脫附期間此方法完全可逆且結晶度或多晶型形式無變化。
因此，在一個實施例中，本發明進一步係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其特徵在於其為無水形式。
3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼形式之熱分析(DSC及TG)顯示：T熔化>278℃，分解(開始，DSC，加熱速率10℃/min)
不能指定清晰熔點，因為化合物在熔融之前發生分解。根據DSC/TG信號，在>250℃下開始分解。
至230℃之乾燥失重=2.2%。
水測定(卡爾-費歇爾滴定(Karl-Fischer titration))揭示水含量約 0.3%。圖2顯示DSC/TG圖。
因此，本發明係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有實質上根據圖2中所示在每分鐘10K之加熱速率下之DSC及/或TG熱曲線。
在另一個實施例中，本發明進一步係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有T熔化>約278℃之熔化溫度(藉由DSC測定；加熱速率：10K/min)。
在另一個實施例中，本發明係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有實質上根據圖1中所示之x射線繞射圖案及實質上根據圖2中所示在每分鐘10K之加熱速率下之DSC熱曲線。
在另一個實施例中，本發明係關於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有本文所提及之XRPD定義之實施例中之任一者的至少一種特徵及本文所提及之DSC/TG定義之實施例中之任一者的至少一種特徵。
本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型具有其他額外特性，諸如在固態下對熱、濕度及光解作用不敏感(固態化學穩定性，例如在70℃及>90%相對濕度下3天：分解<1%；在105℃下3天：分解<1.5%；在250W/m2之紫外線輻射下24小時：分解<1.5%)。
在溶液狀態下，本發明之式(I)化合物顯示在pH 2.2-10下對水解不敏感或僅有較小敏感性(溶液狀態穩定性，例如0.1M HCl，在37℃ 下8小時：分解<1%；Mc Ilvaine緩衝劑7.4，在60℃下3天：分解<1.5%)。
在本發明之範疇內，已獲得僅呈一種多晶型形式之本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。因此，本發明之結晶自由鹼型由於其多晶型現象之傾向程度低而較佳。
本發明之結晶型，尤其本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型之用途：本發明化合物具有有價值的藥理學特性且可用於醫藥工業用以製造用於人類及/或獸醫學之醫藥組合物。本發明進一步係關於含有一或多種本發明化合物之醫藥組合物以及本發明化合物用作藥劑之用途，尤其用於製備用以治療及/或預防特徵為過量或異常細胞增殖之疾病、尤其癌症之醫藥組合物。另外，本發明係關於製備本發明化合物及醫藥組合物之方法。此外，本發明係關於本發明之化合物及醫藥組合物，其係用於雙重抑制MEK及奧諾拉激酶以及治療及/或預防可受抑制MEK及/或奧諾拉激酶影響之病症，諸如癌症疾病(尤其如本文所述之該癌症疾病)的方法。此外，本發明係關於本發明之化合物及醫藥組合物，其適用作雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑。
在一個實施例中，本發明之治療及/或預防方法包含鑑別對抗癌治療及/或預防敏感之患者之步驟，該鑑別包含測試患者是否對MEK抑制劑治療敏感。詳言之，該鑑別包含測試患者之癌症是否對MEK信號傳導路徑有反應或MEK在患者之癌症中是否活化，該鑑別尤其包含測試RAF(例如BRAF)或RAS(例如KRAS及/或NRAS)是否在患者之癌症中發生突變。
該等本發明之治療及/或預防方法進一步包含向測定為對治療及/ 或預防敏感之患者投與本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑、醫藥組合物或組合。
此外，涵蓋雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑、醫藥組合物或組合的可用性，各自如本文所述用於治療及/或預防方法，或根據本發明用於對奧諾拉激酶及/或MEK抑制劑治療敏感之患者中，諸如癌症對MEK信號傳導路徑有反應之患者中(或癌症MEK活化者中)或用於癌症與MEK信號傳導路徑無關之患者中(不考慮腫瘤的BRAF/RAS突變狀態)，詳言之在癌症具有BRAF或RAS突變之患者中(例如本文所定義者)。
此外，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑、醫藥組合物或組合亦適用於治療對MEK及/或奧諾拉激酶之抑制有益的病狀。
此外，本發明係指一種治療及/或預防如下癌症類型之方法：對MEK(例如MEK1及/或MEK2)抑制敏感或有反應之癌症類型，例如MAPK信號傳導路徑過度活化之該等癌症類型，尤其具有RAS(例如KRAS及/或NRAS)或RAF(例如BRAF)突變之該等癌症類型；及/或對奧諾拉(尤其奧諾拉-B)激酶抑制敏感或有反應之癌症類型，該方法包含向有需要患者投與治療有效量之本發明之雙重的奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
本發明含義內之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑係指作為一或多種奧諾拉激酶(尤其奧諾拉-B)之抑制劑與一或多種MEK激酶(MEK1及/或MEK2)之抑制劑的化合物。為避免任何疑問，本發明含義內之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑係指一種具有該兩種不同特性之化合物，亦即奧諾拉激酶抑制劑(AKI)特性及MEK抑制劑特性。
奧諾拉激酶(奧諾拉-A、奧諾拉-B、奧諾拉-C)為對細胞增殖必不可少且經鑑別作為有絲分裂及減數分裂中形成有絲分裂紡錘體至細胞質分裂之範圍內之不同步驟之關鍵調節劑的絲胺酸/蘇胺酸蛋白激 酶。奧諾拉家族激酶對於細胞分裂關鍵，且與腫瘤形成及癌症易感性密切相關。在各種人類癌症中，已觀測到奧諾拉-A、奧諾拉-B及/或奧諾拉C激酶活性之過度表現及/或上調。奧諾拉激酶之過度表現臨床上與癌症進展及存活預後不良相關。奧諾拉激酶與調節細胞週期之磷酸化事件(例如組蛋白H3之磷酸化)有關。細胞週期之誤調節可導致細胞增殖及其他異常。
絲胺酸/蘇胺酸激酶奧諾拉-B與若干有絲分裂過程之調節有關，包括染色體凝聚、集合及分離以及細胞質分裂。奧諾拉B不活化會消除紡綞體總成檢查點(SAC)且導致有絲分裂退出過早而不發生細胞質分裂，產生最終中止進一步DNA複製之多倍體細胞。奧諾拉B抑制劑誘導有絲分裂越過(mitotic override)(有絲分裂滑脫)。奧諾拉B激酶之抑制劑亦阻斷各種人類癌細胞株中之增殖且誘導多倍性、衰老及細胞凋亡。
奧諾拉B抑制劑會消除紡綞體總成檢查點(SAC)且誘導有絲分裂越過(有絲分裂滑動)，從而產生異常多倍體細胞而非細胞週期停滯。當檢查點控制越過且變得基因不穩定時多倍體細胞花費少量時間在有絲分裂上。奧諾拉B激酶之抑制可主要誘導緩慢衰老相關之細胞死亡而非細胞凋亡，由此可使其區別於其他抗有絲分裂原理。與另一M期一樣，靶向藥物為此抗癌治療原理之普遍適用性。奧諾拉激酶在有絲分裂期間實際上有限制地表現且因此獨佔地見於增殖細胞中。
MEK(有絲分裂原活化之蛋白激酶/細胞外信號相關之激酶激酶)為在各種癌症類型中具有病理生理相關性之「RAS-RAF-MEK-ERK路徑」中之關鍵角色。MEK之直接下游底物為ERK，其以其磷酸化狀態進入細胞核中且與基因表現之調節有關。MEK通常在腫瘤中活化，在RAS或BRAF突變時尤其如此。已知BRAF及RAS突變互相排斥。根據文獻，RAF抑制劑在KRAS突變之癌症中未活化，而MEK抑制劑可 主要作用於KRAS與BRAF突變之癌症(亦參見以下表a)。迄今為止已知兩種MEK同功異型物(MEK1、MEK2)之間的相關性及功能無差異。RAS依賴性RAF/MEK/ERK1/2有絲分裂原活化蛋白(MAP)激酶信號傳導路徑在細胞增殖及存活之調節中起重要作用。
RAS/RAF/MEK/ERK信號傳導路徑之組成性活化與惡性轉化有關。KRAS(所有癌症之約15%)及BRAF(所有癌症之約7%)之突變活化為許多人類腫瘤中可見之常見互相排斥事件(參見以下表a)。
當一起考量時，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(作為奧諾拉B激酶，亦即與致癌突變無關之所有癌細胞之有絲分裂必不可少之目標之抑制劑)藉由誘導多倍性及衰老顯示在大量癌症中之功效。另外，由於MEK信號傳導之有效抑制，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑在歸因於RAS或RAF基因突變之依賴於致癌MEK信號傳導之癌症子集中尤其有效。
因此，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑適用於治療及/或預防 a)對MEK(例如MEK1及/或MEK2)抑制敏感或有反應之該等癌症 類型，尤其例如歸因於RAS或RAF突變之MAPK信號傳導路徑過度活化之該等癌症類型；及/或b)對奧諾拉(尤其奧諾拉-B)激酶抑制敏感或有反應之該等癌症類型，例如對誘發有絲分裂檢查點越過、癌細胞多倍性及/或(緩慢衰老相關之)癌細胞死亡敏感或有反應之該等癌症類型。
因此，舉例而言，可經受本發明治療之癌症類型包括(但不限於)尤其具有KRAS突變腫瘤或KRAS野生型腫瘤之結腸直腸癌(colorectal cancer)(結腸直腸瘤(colorectal carcinoma)，CRC)、尤其具有KRAS突變或KRAS野生型腫瘤之胰臟癌(pancreatic cancer)(胰臟瘤(pancreatic adenocarcinoma)，PAC)、尤其具有BRAF突變或BRAF野生型之黑素瘤及/或尤其具有KRAS突變之非小細胞肺癌(non-small-cell lung cancer)(非小細胞肺瘤(non-small cell lung carcinoma)，NSCLC)。
在本發明之一個特定實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑為奧諾拉激酶B之抑制劑與激酶MEK1及/或MEK2之抑制劑。
本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑為具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽(諸如其反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、柳酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸酯、硫酸鹽或杏仁酸鹽)，尤其呈結晶自由鹼型之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，尤其如本文所述。
較佳地，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑係如本文所述之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。
本發明AKI/MEK抑制劑之雙重抑制活性可根據熟習此項技術者習用之方法，例如藉由文獻中已知或如本文所述之方法或其類似方法 來測定。用於量測奧諾拉激酶抑制活性之分析以及用於量測化合物之MEK抑制活性之分析自文獻已知、可購得或係在本文實例章節中進行描述。
如本文所述，本發明範疇內之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑係關於展示對奧諾拉激酶與MEK之激酶的抑制活性之化合物。該抑制活性各可藉由IC50值表徵。
較佳按以下實例中給出之分析量測，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑抑制奧諾拉激酶(尤其奧諾拉B激酶)之IC50值較佳低於200nM，較佳低於40nM，更佳低於10nM(例如約1nM至約10nM)。
較佳按以下實例中給出之分析量測，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑抑制MEK激酶(MEK1及/或MEK2)之IC50值較佳低於1000nM，較佳低於200nM，更佳低於100nM，甚至更佳低於50nM(例如低於30nM)。
較佳按以下實例中給出之分析量測，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑例如抑制奧諾拉B激酶之IC50值可低於200nM，較佳低於40nM，更佳低於10nM(例如約1nM至約10nM)，且抑制MEK激酶(MEK1及/或MEK2)之IC50值可低於1000nM，較佳低於200nM，更佳低於100nM，甚至更佳低於50nM(例如約1nM至約50nM，諸如MEK1 IC50為約1nM至約25nM)。
作為說明性實例，按以實例章節中給出之分析量測，雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺抑制奧諾拉激酶B之IC50值為3nM且抑制MEK1之IC50值為25nM。
此雙重活性亦可在各別生物標記分析中得以證實，諸如在磷酸組蛋白H3分析(例如H460，Cellomics)中，其中作為奧諾拉B激酶抑制之標記的p-組蛋白H3被抑制，且在磷酸ERK分析(例如SK-MEL 28， FACE ELISA)中，其中作為MEK抑制之標記的p-ERK被抑制。
舉例而言，較佳按以下實例中給出之分析量測，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑減少磷酸組蛋白H3之EC50值可低於1000nM，較佳低於200nM，更佳低於100nM(例如約10nM至約50nM)，且減少磷酸ERK之EC50值可低於1000nM，較佳低於200nM，更佳低於100nM(例如約30nM至約70nM)。
按實例章節中給出之分析量測，雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺抑制奧諾拉激酶B之IC50值為3nM且抑制MEK1及MEK2之IC50值分別為25nM及4nM，且減少磷酸組蛋白H3之EC50為44nM(同步化H460 NSCLC細胞，1小時處理，分子磷酸化分析，Cellomics)且減少磷酸ERK之EC50為59nM(SK-MEL 28黑素瘤細胞，FACE ELISA)。
在A375及BRO黑素瘤細胞中可進一步證實藉由本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑對MAP激酶信號傳導路徑之直接抑制。
對奧諾拉B激酶之抑制活性可藉由多倍性表型進一步證實。
如DNA含量分析(Cellomics ArrayScan)在寬濃度範圍內所測定，雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺在H460細胞中誘導多倍性。在7nM下，在曝露於化合物42小時之後81%之細胞為多倍體。
可在各種分析中測定細胞效能，包括在10%胎牛血清存在下進行之基於阿拉馬藍之增殖分析(Alamar Blue based proliferation assays)。舉例而言，在基於細胞之增殖分析中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑之EC50值可低於1000nM，較佳低於200nM，更佳低於100nM，甚至更佳低於50nM(例如約5nM至約20nM)。雙重奧諾拉 激酶/MEK抑制劑3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺抑制5種測試腫瘤細胞株增殖(參見下表)：
對本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑敏感之許多細胞株之RAS或RAF基因發生突變。
本發明化合物之雙重路徑抑制使其對用於治療及/或預防其中MEK及奧諾拉激酶之雙重路徑抑制有益的該等病狀尤其重要。
舉例而言，在許多適應症中預期此雙重路徑抑制對抗癌治療有益，包括有證據表明RAS(例如KRAS及/或NRAS)及/或BRAF突變反調節之適應症。
因此，在一個實施例中，本發明係指本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑之用途，其係用於治療具有一或多個如本文所示之彼等突變的癌症或腫瘤。
在另一個實施例中，本發明係指本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑在治療對MEK信號傳導路徑有反應之癌症子集，尤其具有一或多個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變之該等癌症子集中之用途。
在另一個實施例中，本發明係指本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑在治療與MEK信號傳導路徑無關(不考慮癌症之BRAF或RAS突變狀態)之癌症子集中之用途。
在另一個實施例中，本發明係指本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑在治療對用選擇性MEK(MEK1、MEK2或MEK1/2)抑制劑治療 不敏感之癌症子集中之用途。
在另一個實施例中，本發明係指本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑在治療對用選擇性奧諾拉激酶(尤其奧諾拉B激酶)抑制劑治療不敏感之癌症子集中之用途。
在另一個實施例中，本發明係指本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑在治療對MEK信號傳導路徑有反應(尤其具有一或多個BRAF或RAS(例如KRAS或NRAS)基因突變之該等癌症子集)且對用選擇性MEK(MEK1、MEK2或MEK1/2)抑制劑治療不敏感之癌症子集中之用途。
本發明進一步係指本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於在所治療腫瘤，尤其在對MEK信號傳導路徑有反應之彼等腫瘤中，尤其具有一或多個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變之腫瘤，例如具有一或多個本文所示之彼等突變之該等腫瘤中引起細胞死亡及/或腫瘤消退。
本發明進一步係指本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於在所治療之腫瘤，尤其在對MEK信號傳導路徑有反應之彼等腫瘤，詳言之具有一或多個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變之腫瘤中引起細胞凋亡、衰老及/或多倍性。
此外，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑亦適用作癌症中細胞週期(有絲分裂的檢查點)及信號轉導之雙重抑制劑。
本發明亦係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療對MEK信號傳導路徑起反應之癌症。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療MEK(MEK1及/或MEK2)活化之癌症(腫瘤)。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)發生突變之 癌症(腫瘤)。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療BRAF發生突變之癌症(腫瘤)。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療KRAS發生突變之癌症(腫瘤)。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療NRAS發生突變之癌症(腫瘤)。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療包含一或多種以下突變之癌症(腫瘤)：密碼子464-469及/或尤其密碼子V600中之BRAF突變，諸如選自V600E、V600G、V600A及V600K之突變，或選自V600E、V600D、V600K及V600R之突變，或選自V600E、V600D及V600K之突變，或選自V600E、V600D、V600M、V600G、V600A、V600R及V600K之突變；密碼子12(外顯子1)、密碼子13(外顯子1)及/或密碼子61(外顯子2)，尤其密碼子12及/或13中之KRAS突變，諸如選自Gly12Asp、Gly12Val、Gly13Asp、Gly12Cys、Gly12Ser、Gly12Ala及Gly12Arg之突變，或選自12D、12V、12C、12A、12S、12R、12F、13D、13C、13R、13S、13A、13V、13I、61H、61L、61R、61K、61E及61P之突變；密碼子12、13及/或61中之NRAS突變，諸如選自p.G12D、p.G12S、p.G12C、p.G12V、p.G12A、p.G13D、p.G13R、p.G13C、p.G13A、p.Q61R、p.Q61K、p.Q61L、p.Q61H及p.Q61P之突變。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療包含一或多種以下突變之癌症(腫瘤)：密碼子464-469中及/或尤其密碼子V600中之BRAF突變，諸如選 自V600E、V600D、V600G、V600A、V600R、V600M及V600K之突變。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療包含一或多種以下突變之癌症(腫瘤)：密碼子12、13及/或61，尤其密碼子12及/或13中之KRAS突變，諸如選自Gly12Asp、Gly12Val、Gly13Asp、Gly12Cys、Gly12Ser、Gly12Ala及Gly12Arg之突變；或選自12D、12V、12C、12A、12S、12R、12F、13D、13C、13R、13S、13A、13V、13I、61H、61L、61R、61K、61E及61P之突變。
本發明進一步係關於一種如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療包含一或多種以下突變之癌症(腫瘤)：密碼子12、13及/或61中之NRAS突變，諸如選自p.G12D、p.G12S、p.G12C、p.G12V、p.G12A、p.G13D、p.G13R、p.G13C、p.G13A、p.Q61R、p.Q61K、p.Q61L、p.Q61H及p.Q61P之突變。
如本文所述之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑在BRAF及/或RAS突變癌症中具有活性。由此提供多種適應症及亞群。本發明化合物之特定癌症適應症包括以下： 黑素瘤：高BRAF(約43%)及NRAS(約20%)突變狀態， CRC：實質突變率(37% KRAS，11% BRAF)， 胰臟癌：KRAS突變狀態約70%，高度未滿足之需要， NSCLC：中度KRAS突變率(18%)。
此外，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防癌症對MEK信號傳導路徑起反應之患者或癌症MEK活化者，諸如癌症具有一或多個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)突變，諸如一或多個本文所述突變之患者中之癌症(尤其選自之上文或下文所述之彼等癌症之癌症)。
此外，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防癌細胞之特徵在於異種接合子或同種接合子BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)突變基因型之患者中之癌症(諸如CRC、PAC、NSCLC或黑素瘤)。
此外，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防癌細胞之特徵在於野生型基因型之患者中之癌症(諸如CRC、PAC、NSCLC或黑素瘤)。
在一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如具有一或多個KRAS突變(例如密碼子12、13及/或61，尤其密碼子12及/或13中之KRAS突變，諸如選自Gly12Asp、Gly12Val、Gly13Asp、Gly12Cys、Gly12Ser、Gly12Ala及Gly12Arg之突變；或選自12D、12V、12C、12A、12S、12R、12F、13D、13C、13R、13S、13A、13V、13I、61H、61L、61R、61K、61E及61P之突變)之結腸直腸癌(CRC)。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如具有一或多個BRAF突變(例如密碼子464至469及/或尤其密碼子V600中之BRAF突變，諸如選自V600E、V600D、V600G、V600A、V600R及V600K之突變，或選自V600E、V600D、V600G、V600A、V600R、V600M及V600K之突變)之結腸直腸癌(CRC)。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如野生型基因型之結腸直腸癌(CRC)。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如KRAS野生型基因型之結腸直腸癌(CRC)。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如具有一或多個KRAS突變(例如密碼子12、13及/或61，尤其密碼子12及/或13中之KRAS突變，諸如選自Gly12Asp、Gly12Val、Gly13Asp、Gly12Cys、Gly12Ser、Gly12Ala及Gly12Arg之突變；或選自12D、12V、12C、12A、12S、12R、12F、13D、13C、13R、13S、13A、13V、13I、61H、61L、61R、61K、61E及61P之突變)之胰臟癌(PAC)。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如KRAS野生型基因型之胰臟癌(PAC)。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如與KRAS突變狀態無關之胰臟癌(PAC)。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如具有一或多個BRAF突變(例如密碼子464至469及/或尤其密碼子V600中之BRAF突變，諸如選自V600E、V600D、V600G、V600A、V600R及V600K之突變，或選自V600E、V600D、V600G、V600A、V600R、V600M及V600K之突變)之惡性黑素瘤。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如具有一或多個NRAS突變(例如密碼子12、13及/或61之NRAS突變，諸如選自p.G12D、p.G12S、p.G12C、p.G12V、p.G12A、p.G13D、p.G13R、p.G13C、p.G13A、p.Q61R、p.Q61K、p.Q61L、p.Q61H及p.Q61P突變)之惡性黑素瘤。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧 諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如野生型基因型之惡性黑素瘤。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如BRAF野生型基因型之惡性黑素瘤。
在另一個實施例中，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療及/或預防諸如具有一或多個KRAS突變(例如密碼子12、13及/或61，尤其密碼子12及/或13中之KRAS突變，諸如選自Gly12Asp、Gly12Val、Gly13Asp、Gly12Cys、Gly12Ser、Gly12Ala及Gly12Arg之突變；或選自12D、12V、12C、12A、12S、12R、12F、13D、13C、13R、13S、13A、13V、13I、61H、61L、61R、61K、61E及61P之突變)之非小細胞肺癌(NSCLC)。
因此，可經受本發明治療之特定癌症類型係選自：結腸直腸癌(CRC)，尤其帶有一或多個KRAS突變之CRC；胰臟癌(PAC)，尤其帶有一或多個KRAS突變之PAC或帶有KRAS野生型之PAC；黑素瘤，尤其黑帶有一或多個BRAF突變之素瘤；及非小細胞肺癌(NSCLC)，尤其帶有一或多個KRAS突變之NSCLC。
在一個特定實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其組合物適用於治療患有結腸直腸癌(CRC，包括轉移性CRC)之患者，尤其腫瘤帶有一或多個KRAS突變之彼等CRC患者；諸如，例如在至少兩線標準化學療法(例如基於奧沙利鉑(oxaliplatin)之方案及基於伊立替康(irinotecan)之方案)失效之後作為第三線治療；視情況與一或多種其他抗癌劑組合。
在另一個實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其 組合物適用於治療患有結腸直腸癌(CRC，包括轉移性CRC)之患者，尤其腫瘤帶有KRAS野生型之彼等CRC患者；諸如，例如在標準化學療法(例如基於奧沙利鉑之方案或基於伊立替康之方案)及EGFR靶向治療(例如基於西妥昔單抗(cetuximab)或帕尼單抗(panitumumab)之方案)失效之後作為第三線治療；視情況與一或多種其他抗癌劑組合。
在一個特定實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其組合物適用於治療患有胰臟癌(PAC，包括轉移、晚期或不可切除PAC)之患者，尤其腫瘤帶有一或多個KRAS突變之PAC患者；諸如作為第一線治療；視情況與一或多種其他抗癌劑組合。
在一個特定實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其組合物適用於治療患有胰臟癌(PAC，包括轉移、晚期或不可切除PAC)之患者，尤其腫瘤帶有一或多個KRAS野生型之PAC患者；諸如作為第一線治療；視情況與一或多種其他抗癌劑組合。
在一個特定實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其組合物適用於治療患有黑素瘤(包括轉移性黑素瘤)之患者，尤其腫瘤帶有一或多個BRAF突變之黑素瘤患者；諸如作為第一線治療；視情況與一或多種其他抗癌劑組合。
在另一個實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其組合物適用於治療患有黑素瘤(包括轉移性黑素瘤)之患者，尤其腫瘤帶有BRAF野生型之黑素瘤患者；諸如作為第一線治療；視情況與一或多種其他抗癌劑組合。
在另一個實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其組合物適用於治療患有黑素瘤(包括轉移性黑素瘤)之患者，尤其腫瘤帶有一或多個BRAF突變之黑素瘤患者；諸如作為第一或第二線治療；視情況組合一或多種其他抗癌劑(例如包括Braf抑制劑，諸如維羅非尼(vemurafenib)或達拉非尼(dabrafenib)，視情況有或無MEK抑制 劑，諸如司美替尼(selumetinib)或GSK-1120212)。
在另一個實施例中，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其組合物適用於治療患有黑素瘤(包括轉移性黑素瘤)之患者，尤其腫瘤帶有一或多個NRAS突變之彼等黑素瘤患者；視情況與一或多種其他抗癌劑組合。
此外，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於如本文所述之抗癌治療。
此外，本發明係關於如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑視情況組合一或多種如本文所述之其他抗癌劑之用途，其係用於製備用於治療及/或預防如本文所述之癌症疾病之醫藥組合物。
此外，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其用於治療及/或預防如本文所述之癌症疾病，視情況與一或多種如本文所述之其他抗癌劑組合。
此外，本發明係關於一種治療及/或預防如本文所述之癌症疾病之方法，其包含向有需要患者投與治療有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑及視情況選用之一或多種如本文所述之其他抗癌劑。
此外，本發明係關於一種測定哺乳動物(尤其人類)腫瘤細胞(尤其選自上文或下文中所述之彼等腫瘤之腫瘤細胞，諸如黑素瘤、CRC、胰臟癌或NSCLC腫瘤細胞)對用如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑治療之反應性的方法，該方法包含測定該腫瘤細胞中至少一個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變之存在，其中該突變表示細胞對治療是否可能反應或有反應(例如經歷細胞死亡或抑制細胞增殖)。
此外，本發明係關於一種評估如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑治療有需要患者之癌症(尤其選自上文或下文所述之彼等 癌症之癌症，諸如黑素瘤、CRC、胰臟癌或NSCLC)之功效的方法，該方法包含- 測試患者之癌症對MEK信號傳導路徑有反應或MEK在患者之癌症中活化，尤其測定源自患者之腫瘤組織樣品中之至少一個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)之存在，其中該存在指示用雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑治療有效(例如導致腫瘤細胞死亡及/或腫瘤消退)。
此外，本發明係關於一種測定診斷患有癌症(尤其選自上文或下文所述彼等癌症之癌症，諸如黑素瘤、CRC、胰臟癌或NSCLC)之個體藉由如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)治療產生藥理學效用之可能性增加之方法，該方法包含- 使來自個體癌症(腫瘤)樣品之核酸樣品經受BRAF或RAS(例如KRAS或NRAS)突變測試或PCR，其中至少一個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變，諸如一或多個本文所述之彼等突變之存在指示治療產生藥理學效用之可能性增加。
此外，本發明係關於一種如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，其係用於治療有需要患者之癌症(尤其選自上文或下文所述之彼等癌症之癌症，諸如黑素瘤、CRC、胰臟癌或NSCLC)之方法，該方法包含- 測試患者之癌症是否對MEK信號傳導路徑有反應或MEK是否在患者之癌症中活化，尤其測試患者之腫瘤中一或多個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)，及- 向患者投與雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，視情況與一或多 種其他抗癌劑組合。
此外，本發明係關於一種鑑別患者之包含如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)之癌症治療資格的方法，該方法包含- 提供來自患者，尤其來自患有癌症(例如選自黑素瘤、CRC、胰臟癌及NSCLC)之患者之腫瘤組織樣品；- 測定患者之癌症是否對MEK信號傳導路徑有反應或MEK是否在患者之癌症中活化，尤其測定患者之腫瘤組織樣品中至少一個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)之存在；- 鑑別認為有資格接受癌症治療之患者，其中患者之癌症經測定對MEK信號傳導路徑有反應或MEK經測定在患者之癌症中活化，尤其其中患者之腫瘤組織樣品經測定具有至少一個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)。
此外，本發明係關於一種治療癌症(例如黑素瘤、CRC、胰臟癌或NSCLC)之方法，該方法包含鑑別如本文所述之癌症患者及向該患者投與有效量如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
此外，本發明係關於一種治療患有癌症(尤其選自上文或下文所述之彼等癌症之癌症，諸如黑素瘤、CRC、胰臟癌或NSCLC)之哺乳動物(特定人類)患者之方法，該方法包含：- 自該患者之癌症樣品獲得核酸樣品；- 測定患者之癌症是否對MEK信號傳導路徑有反應或MEK是否在患者之癌症中活化， 尤其使樣品經受BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)突變測試或PCR，且鑑別至少一個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)之存在；及- 向經測定對MEK信號傳導路徑有反應或癌症MEK經測定活化之患者，尤其向樣品經鑑別存在至少一個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)之患者投與有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
此外，本發明係關於一種治療方法，其包含a)鑑別需要治療癌症(例如晚期實體腫瘤)，諸如結腸直腸癌(CRC)、胰臟癌(PAC)、黑素瘤或非小細胞肺癌(NSCLC)之患者(特定人類患者)，b)測定患者之癌症對MEK信號傳導路徑有反應或MAPK路徑在患者之癌症中過度活化，尤其測定患者之癌症帶有一或多個BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)，c)向患者投與治療有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
此外，本發明係關於一種治療方法，其包含a)鑑別需要治療結腸直腸癌(CRC，例如轉移性CRC)之患者(特定人類患者)，b)測定患者之腫瘤帶有一或多個KRAS基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)，c)向患者投與治療有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
此外，本發明係關於一種治療方法，其包含a)鑑別需要治療結腸直腸癌(CRC，例如轉移性CRC)之患者(特定人類患者)，b)測定患者之腫瘤帶有KRAS野生型基因，c)向患者投與治療有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
此外，本發明係關於一種治療方法，其包含a)鑑別需要治療胰臟癌(PAC，例如轉移性、不可切除或局部晚期PAC)之患者(特定人類患者)，b)測定患者之腫瘤帶有一或多個KRAS基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)，c)向患者投與治療有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
此外，本發明係關於一種治療方法，其包含a)鑑別需要治療胰臟癌(PAC，例如轉移性、不可切除或局部晚期PAC)之患者(特定人類患者)，b)測定患者之腫瘤帶有KRAS野生型基因，c)向患者投與治療有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
此外，本發明係關於一種治療方法，其包含a)鑑別需要治療黑素瘤(例如轉移性黑素瘤)之患者(特定人類患者)，b)測定患者之腫瘤帶有一或多個BRAF基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)，c)向患者投與治療有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
此外，本發明係關於一種治療方法，其包含a)鑑別需要治療黑素瘤(例如轉移性黑素瘤)之患者(特定人類患者)，b)測定患者之腫瘤帶有BRAF野生型基因，c)向患者投與治療有效量之如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑(視情況與一或多種其他抗癌劑組合)。
在某些實施例中，在本發明之治療內，本發明之患有結腸直腸癌(CRC)之特定患者亞群係指至少兩線標準化學療法(例如基於奧沙利鉑之方案及基於伊立替康之方案)皆失敗之該等(轉移性)CRC患者。
在本發明之另一個實施例中，另一本發明之患有結腸直腸癌(CRC)之特定患者亞群係指CRC腫瘤帶有KRAS基因突變(諸如一或多個本文所述之彼等突變)且至少兩線標準化學療法(例如基於奧沙利鉑之方案及基於伊立替康之方案)皆失敗之該等(轉移性)CRC患者。
在其他某些實施例中，在本發明之治療內，本發明之患有結腸直腸癌(CRC)之特定患者亞群係指標準化學療法(例如基於奧沙利鉑之方案或基於伊立替康之方案)及EGFR靶向治療(例如基於西妥昔單抗或帕尼單抗之方案)失敗之該等(轉移性)CRC患者。
在本發明之另一個實施例中，另一本發明之患有結腸直腸癌(CRC)之特定患者亞群係指CRC腫瘤帶有KRAS野生型基因且標準化學療法(例如基於奧沙利鉑之方案或基於伊立替康之方案)及EGFR靶向治療(例如基於西妥昔單抗或帕尼單抗之方案)失敗之該等(轉移性)CRC患者。
在本發明之另一個實施例中，本發明之患有結腸直腸癌(CRC)之患者亞群係指對用EGFR抑制劑(諸如抗EGFR抗體，諸如西妥昔單抗或帕尼單抗)治療無反應之該等(轉移性)CRC患者。
在本發明之另一個實施例中，本發明之患有結腸直腸癌(CRC)之 患者亞群係指CRC腫瘤帶有KRAS野生型基因且對用EGFR抑制劑(諸如抗EGFR抗體，諸如西妥昔單抗或帕尼單抗)治療無反應之該等(轉移性)CRC患者。
在本發明之另一個實施例中，本發明之患有黑素瘤之患者亞群係指對用BRaf抑制劑(諸如維羅非尼)治療無反應之該等(轉移性、晚期或後期)黑素瘤患者。
在本發明之另一個實施例中，本發明之患有黑素瘤之患者亞群係指黑素瘤腫瘤帶有BRAF基因突變(例如BRAF V600中之突變，諸如一或多個本文所述之彼等突變，包括例如V600E突變)且對用BRaf抑制劑(諸如維羅非尼或達拉非尼)治療無反應之該等(轉移性、晚期或後期)黑素瘤患者。
此外，本發明係關於如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑之用途，其視情況與另一抗癌劑組合用於製備用於如本文所述之抗癌治療，例如用於如上文及下文所述之癌症患者之治療方法之醫藥組合物。
此外，本發明係關於如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑之用途，其視情況與另一抗癌劑組合用於如本文所述之抗癌治療，例如用於如上文及下文所述之癌症患者之治療方法。
本發明之BRAF突變之實例可包括(但不限於)密碼子464-469及/或尤其密碼子V600中之突變，諸如選自V600E、V600G、V600A及V600K之突變，或選自V600E、V600D、V600K及V600R之突變，或選自V600E、V600D及V600K之突變，或選自V600E、V600D、V600M、V600G、V600A、V600R及V600K之突變。
在某些實施例中，本發明之BRAF突變之特定實例可包括V600中之突變，尤其V600E突變。
本發明之KRAS突變之實例可包括(但不限於)密碼子12、13及/或 61，尤其密碼子12及/或13中之突變，諸如選自Gly12Asp、Gly12Val、Gly13Asp、Gly12Cys、Gly12Ser、Gly12Ala及Gly12Arg之突變；或選自12D、12V、12C、12A、12S、12R、12F、13D、13C、13R、13S、13A、13V、13I、61H、61L、61R、61K、61E及61P之突變。
在某些實施例中，本發明之KRAS突變之特定實例可包括密碼子12或13中之突變，尤其選自12D、12V、12C、12S、12A、12R及13D之突變。
本發明之NRAS突變之實例可包括(但不限於)密碼子12、13及/或61中之突變，諸如選自p.G12D、p.G12S、p.G12C、p.G12V、p.G12A、p.G13D、p.G13R、p.G13C、p.G13A、p.Q61R、p.Q61K、p.Q61L、p.Q61H及p.Q61P之突變。
熟習此項技術者已知BRAF或RAS突變之測試方法。舉例而言，臨床樣品中之常用突變偵測方法可包括或基於如下：核酸定序(例如雙脫氧或焦磷酸定序)、單股構形多晶型現象分析、熔融曲線分析、即時PCR(諸如例如使用與目標擴增子互補之螢光探針進行之熔融曲線分析，其可用以藉由自目標解離探針所需之熔融溫度之差異區別基因變異體)或對偶基因特異性PCR(諸如以用以例如使用使突變體相對於野生型序列特異性擴增之寡核苷酸引子，諸如使用ARMSTM技術區別突變序列與野生型序列之各種方式。擴增產物可藉由凝膠電泳至即時PCR範圍內之許多方法，諸如使用ScorpionTM技術偵測)。
舉例而言，偵測BRAF、KRAS或NRAS致癌基因突變之診斷套組可基於焦磷酸定序、RotorGeneQTM(Qiagen)或CobasTM(Roche)技術。
偵測BRAF致癌基因突變之市售診斷套組為例如TheraScreenTM B-Raf突變偵測套組，尤其用於偵測突變V600E及V600K，或MutectorTM B-Raf V600突變偵測套組，尤其用於偵測突變V600E、V600A及 V600G，或PyroMarkTM B-Raf套組，例如用於定序密碼子600及密碼子464-469。
偵測KRAS致癌基因突變之市售診斷套組為例如TheraScreenTM K-Ras突變偵測套組，用於偵測突變12Ala、12Asp、12Arg、12Cys、12Ser、12Val及13Asp。
偵測BRAF致癌基因突變之診斷套組為例如Qiagen之TheraScreenTM BRAF PCR套組，尤其用於偵測選自V600E、V600D及V600K之突變的型式及偵測選自V600E、V600D、V600K及V600R之突變的型式，或Qiagen之TheraScreenTM BRAF Pyro套組，例如用於偵測選自V600E、V600A、V600M及V600G之突變。
偵測KRAS致癌基因突變之診斷套組為例如Qiagen之TheraScreenTM KRAS PCR套組(例如用於偵測選自G12A、G12D、G12S、G12V、G12R、G12C及G13D之突變)，或PyroMarkTM KRAS分析，或Qiagen之TheraScreenTM KRAS Pyro套組，例如用於偵測選自G12A、G12D、G12S、G12V、G12R、G12C、G13D、Q61H、Q61E及Q61L之突變。
偵測NRAS致癌基因突變之診斷套組為例如Qiagen之TheraScreenTM NRAS Pyro或qPCR套組。
鑑別KRAS基因突變之另一診斷套組為例如Roche之cobasTM KRAS突變測試，其為即時PCR測試且可用於偵測KRAS基因之密碼子12、13及61中之多種突變，涵蓋突變12D、12V、12C、12A、12S、12R、12F、13D、13C、13R、13S、13A、13V、13I、61H、61L、61R、61K、61E及61P。
另一鑑別BRAF基因突變之診斷套組為例如Roche之cobasTM BRAF突變測試，其為即時PCR測試。
對於突變測試，使用包含核酸之典型癌症(腫瘤)樣品，其可選自 由以下組成之群：組織、生物檢體探針、細胞溶胞物、細胞培養物、細胞株、器官、細胞器、生物流體、血液樣品、尿樣品、皮膚樣品及其類似物。在一個特定實施例中，包含核酸之癌症(腫瘤)樣品為生物檢體探針。
本發明進一步提供作為本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑之伴同性診斷物之該BRAF或RAS突變套組之用途，其係用於有需要之癌症患者，諸如患有如本文所述之癌症的患者。
本發明進一步提供適用於測定哺乳動物，較佳人類，診斷患有癌症(諸如本文所述彼等癌症)之患者中藉由如本文所定義之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑視情況與一或多種其他抗癌劑組合治療之效用之可能性增加之該等套組，該套組較佳包含用於偵測BRAF或RAS(例如KRAS及/或NRAS)致癌基因突變，尤其一或多個該等本文所述突變之構件。
本發明之式(I)之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑化合物可如本文所述或如WO 2010/012747所述，或以與其類似或相似之方法，例如如以下反應流程中所示合成，其中X表示適當離去基，諸如溴或碘。吲哚啉酮中間化合物已知或其可使用標準合成方法或與WO 2007/122219或WO 2008/152013中所述方法類似之方法或如例如以下反應流程所示合成。丙炔酸乙醯胺及4-二甲基胺基甲基苯胺已知或可根據標準方法來製備。
流程：
熟習此項技術者另外已知，若起始或中間化合物上存在多個反應中心，則可能需要藉由保護基暫時阻斷一或多個反應中心以使反應在所需反應中心處特定進行。在所需反應發生之後，通常以適當方式移除保護基。大量經證實保護基之使用的詳細說明見於例如T.Greene及P.Wuts,「Protective Groups in Organic Synthesis」(John Wiley & Sons,Inc.,2007，第4版)或P.Kocienski,「Protecting Groups(Thieme Foundations Organic Chemistry Series N Group」(Thieme Medical Publishers,2004)中。
舉例而言，可藉由包含以下之方法(例如參見實驗章節)製備具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，諸如呈結晶型： - 較佳在鹼(無機或有機鹼，例如三乙胺)及視情況選用之促進劑(例如DMAP)存在下在適當溶劑(例如2-甲基四氫呋喃)中藉助於適當苯甲醯化試劑(例如苯甲醯氯)，將6-碘吲哚啉酮諸如經由1,3-二苯甲醯-6-碘吲哚啉酮(或其互變異構體)作為中間物(其可為經分離或非分離的)轉化成3-苯甲醯基-6-碘吲哚啉酮或其互變異構體，以致於獲得1,3-二苯甲醯-6-碘吲哚啉酮(或其互變異構體)，且因此較佳在適當鹼(無機或有機鹼，例如鹼金屬氫氧化物，諸如LiOH或NaOH)存在下在適當溶劑(例如2-甲基四氫呋喃)中將其轉化成3-苯甲醯基-6-碘吲哚啉 酮或其互變異構體，且視情況烯醇化成烯醇型(3-(羥基-苯基-亞甲基)-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮，具有式IV)；- 諸如藉由烯胺形成反應，較佳經由矽烷基烯醇醚中間物(具有式III)使3-苯甲醯基-6-碘吲哚啉酮或其互變異構體，較佳其烯醇型(3-(羥基-苯基-亞甲基)-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮)與4-二甲基胺基甲基苯胺反應形成3-[(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-苯基-亞甲基]-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮(具有式II)，該中間物藉助於適當矽烷化試劑(例如三甲基矽烷基咪唑)製備，且因此在適當溶劑(例如甲苯)中轉化成烯胺3-[(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-苯基-亞甲基]-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮(具有式II)；- 較佳在適當催化劑，諸如含有Pd之催化劑(視情況含與有Cu之共催化劑，例如以Cu(I)形式一起使用)、適當鹼(無機或有機鹼，例如N-甲基哌啶)存在下在適當溶劑(例如N-甲基吡咯啶酮)中使3-[(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-苯基-亞甲基]-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮(具有式II)與丙炔酸乙醯胺反應形成式I之標題化合物(粗物質形式)；- 例如如本文所述視情況對式I化合物(諸如自二甲亞碸及丙酮之溶液，例如藉由添加反溶劑，諸如水)進行濕磨(例如用正丙醇)及/或(再)結晶。
視情況，式I化合物可轉化成其鹽(例如酸加成鹽)。
視所診斷之疾病而定，若本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑與一或多種其他習用於各別疾病之活性物質，諸如一或多種選自其他抗癌劑(諸如細胞抑制或細胞毒性物質、細胞增殖抑制劑、抗血管生成物質、類固醇或抗體)中之活性物質，尤其本文提及之彼等(靶向或靶向)抗癌劑組合，則可獲得改良之治療效果。該組合治療可以物質之自由組合或以固定組合形式，包括分裝部分之套組形式提供。此舉所需之組合組分之醫藥調配物可以醫藥組合物購得或可由熟習此項技 術者使用習知方法來調配。
在本發明之範圍內，應瞭解，本發明之組合、組合物、套組或組合使用可設想活性成分之同時、依序或分開投與。應瞭解，活性組分可依賴性地或獨立地投與，諸如活性組分可作為相同醫藥組合物/劑型之一部分或以各別醫藥組合物/劑型投與。
關於此點，本發明含義內之「組合(combination；combined)」可包括(但不限於)固定及非固定(例如自由)形式(包括套組)及使用，諸如組分或成分之同時、並行、依序、連續、交替或分開使用。
投與活性組分可藉由共同投與活性組分或成分進行，諸如藉由將其以一種單一或兩種各別調配物或劑型同時或並行投與。或者，投與活性組分可藉由諸如以兩種各別調配物或劑型依序、相繼或交替投與活性組分或成分進行。
在本文所述治療中可與本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑組合投與之其他抗癌劑可選自以下化學治療劑：(i)烷基化或胺甲醯基化劑，諸如氮芥類(具有雙(2-氯乙基)基團)，諸如環磷醯胺(cyclophosphamide)(CTX，例如癌得星(Cytoxan)、環斯汀(Cyclostin)、安道生(Endoxan))、苯丁酸氮芥(chlorambucil；CHL，例如瘤可寧(Leukeran))、異環磷醯胺(例如和樂生(Holoxan))或美法侖(melphalan)(例如馬法蘭(Alkeran))；烷基磺酸酯類，諸如二甲磺酸丁酯(例如白消安(Myleran))、甘露舒凡(mannosulphan)或曲奧舒凡(treosulphan)；亞硝基脲類，諸如鏈脲佐菌素(例如鏈佐星(Zanosar))或氯乙基亞硝基脲CENU，如卡莫司汀BCNU(carmustine BCNU)或洛莫司汀CCNU(lomustine CCNU)或福莫司汀(fotemustine)；肼類，諸如丙卡巴肼；三氮烯類/咪唑并四嗪類，諸如達卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC)或替莫唑胺(temozolomide)(例如替莫達(Temodar))；或乙烯亞胺類/氮丙啶類/甲基三聚氰胺類，諸如絲裂黴 素C、噻替派(thiotepa)或六甲蜜胺(altretamine)或其類似物；(ii)鉑衍生物，諸如順鉑(cisplatin)(CisP，例如鉑帝爾(Platinex)、順氯氨鉑(Platinol))、奧沙利鉑(例如樂沙定(Eloxatin))、賽特鉑(satraplatin)或卡鉑(carboplatin)(例如碳鉑(Carboplat))或其類似物；(iii)抗代謝物，諸如葉酸拮抗劑類，諸如甲胺喋呤(methotrexate)(MTX，例如法米曲沙(Farmitrexat))、雷替曲賽(raltitrexed)(例如拓優得(Tomudex))、依達曲沙(edatrexate)或培美曲塞(pemetrexed)(例如愛甯達(Alimta))；嘌呤拮抗劑類，諸如6-巰嘌呤(6-mercaptopurine)(6MP，例如樂疾寧(Puri-Nethol))、6-硫鳥嘌呤、噴司他汀(pentostatin)、克拉屈濱(cladribine)、氯法拉濱(clofarabine)或氟達拉濱(fludarabine)(例如福達樂(Fludara))；或嘧啶拮抗劑類，諸如阿糖胞苷(cytarabine)(Ara-C，例如愛力生(Alexan)、賽德薩(Cytosar))、氮尿苷、單獨或與甲醯四氫葉酸組合之5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil；5-FU)、喃氟啶(tegafur)、5-氮雜胞苷(例如維達紮(Vidaza))、卡西他濱(capecitabine)(例如希羅達(Xeloda))、地西他濱(decitabine)(例如達克金(Dacogen))或吉西他濱(gemcitabine)(例如健擇(Gemzar))或其類似物；(iv)抗腫瘤/細胞毒素抗生素，諸如蒽環黴素類(anthracyclines)，諸如道諾黴素(daunorubicin)(包括其鹽酸鹽)(包括脂質體調配物)、小紅莓(doxorubicin)(包括其鹽酸鹽及檸檬酸鹽)(例如亞德里布黴素(Adriblastin)、亞德里亞黴素(Adriamycin)，包括脂質體調配物，如多喜(Doxil)或凱萊(Caelyx))、表柔比星(epirubicin)或伊達比星(idarubicin)(包括其鹽酸鹽)(例如利福黴素(Idamycin))；蒽二酮類，諸如米托蒽醌(mitoxantrone)(例如諾凡特龍(Novantrone))；或鏈黴菌，諸如博萊黴素(bleomycin)、絲裂黴素(mitomycin)或放線菌素D/更生黴素(dactinomycin)或其類似物； (v)拓撲異構酶(包括I及II)抑制劑，諸如喜樹鹼及喜樹鹼類似物，諸如伊立替康(例如開普拓(Camptosar))(包括其鹽酸鹽)、拓朴替康(topotecan)(例如癌康定(Hycamtin))、魯比替康(rubitecan)或二氟替康(diflomotecan)；表鬼臼素類，諸如依託泊苷(etoposide)(例如凡畢複(Etopophos))或替尼泊苷(teniposide)；蒽環黴素類(參見上文)、米托蒽醌、洛索蒽醌(losoxantrone)或放線菌素D、或胺萘非特(amonafide)或其類似物；(vi)微管干擾劑，諸如長春花生物鹼類，諸如長春鹼(vinblastine)(包括其硫酸鹽)、長春新鹼(vincristine)(包括其硫酸鹽)、長春氟寧(vinflunine)、長春地辛(vindesine)或長春瑞濱(vinorelbine)(包括其酒石酸鹽)；紫杉烷類(taxanes)(紫杉烷二萜類(taxoids))，諸如多烯紫杉醇(docetaxel)(例如剋癌易(Taxotere))、太平洋紫杉醇(paclitaxel)(例如紫杉酚(Taxol))或其類似物、衍生物或結合物(例如泰索帝(larotaxel))；或埃博黴素類(epothilones)，諸如埃博黴素B(帕妥匹隆(patupilone))、氮雜埃博黴素(伊沙匹隆(ixabepilone))、ZK-EPO(沙戈匹隆(sagopilone))或KOS-1584或其類似物、衍生物或結合物或其類似物；(vii)激素治療劑，諸如抗雄激素藥，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)或比卡魯胺(bicalutamide)(康士得(casodex))；抗雌激素藥，諸如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)或氟維司群(fulvestrant)；LHRH促效劑，諸如戈舍瑞林(goserelin)、亮丙瑞林(leuprolide)、布舍瑞林(buserelin)或曲普瑞林(triptolerin)；GnRH拮抗劑，諸如阿倍瑞克(abarelix)或地加瑞克(degarelix)；芳香酶抑制劑，諸如類固醇(例如依西美坦(exemestane)或福美司坦(formestane))或非類固醇(例如來曲唑(letrozole)、法屈唑(fadrozole)或阿那曲唑(anastrozole))。
在本文所述治療中可與本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑組合投與之其他抗癌劑之其他實例可包括(但不限於)細胞信號傳導及/或血管生成抑制劑。
細胞信號傳導及/或血管生成抑制劑可包括(但不限於)靶向(例如抑制)內皮特異性受體酪胺酸激酶(Tie-2)、表皮生長因子(受體)(epidermal growth factor(receptor)；EGF(R))、胰島素樣生長因子(受體)(insulin-like growth factor(receptor)；IGF-(R))、纖維母細胞生長因子(受體)(fibroblast growth factor(receptor)；FGF(R))、血小板衍生生長因子(受體)(platelet-derived growth factor(receptor)；PDGF(R))、肝細胞生長因子(受體)(hepatocyte growth factor(receptor)；HGF(R))或血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor；VEGF)或VEGF受體(VEGF receptor；VEGFR)之藥劑；以及凝血栓蛋白類似物、基質金屬蛋白酶(例如MMP-2或MMP-9)抑制劑、沙立度胺(thalidomide)或沙立度胺類似物、整合素、血管生長抑素、內皮生長抑素、血管破壞劑(vascular disrupting agent；VDA)、蛋白激酶C(protein kinase C；PKC)抑制劑及其類似物。
特定血管生成抑制劑為靶向(例如抑制)血管內皮生長因子(VEGF)或VEGF受體(VEGFR)之藥劑。
靶向(例如抑制)VEGF/VEGFR之藥劑係關於靶向(例如抑制)VEGF或VEGFR家族之一或多個成員(VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3)之化合物且包括任何血管內皮生長因子(VEGF)配位體之抑制劑(諸如配位體抗體或可溶性受體)以及任何VEGF受體(VEGFR)之抑制劑(諸如VEGFR酪胺酸激酶抑制劑、VEGFR拮抗劑或受體抗體)。
VEGFR抑制劑為靶向血管內皮生長因子(VEGF)受體家族之一或多個成員，尤其酪胺酸激酶之VEGFR家族之一或多個成員之藥劑(單一激酶抑制劑或多重激酶抑制劑形式)，包括小分子受體酪胺酸激酶 抑制劑及抗VEGFR抗體。
小分子VEGFR抑制劑之實例包括(但不限於)索拉非尼(sorafenib)(蕾莎瓦(Nexavar)，亦為Raf、PDGFR、Flt3、Kit及RETR之抑制劑)、舒尼替尼(sunitinib)(紓癌特(Sutent)，亦為Kit，Flt3及PDGFR之抑制劑)、帕佐泮尼(pazopanib)(GW-786034，亦為Kit及PDGFR之抑制劑)、西地尼布(cediranib)(瑞生汀(Recentin)，AZD-2171)、阿西替尼(axitinib)(AG-013736，亦為PDGFR及Kit之抑制劑)、凡德他尼(vandetanib)(紮可馬(Zactima)，ZD-6474，亦為EGFR及Ret之抑制劑)、凡塔藍尼(vatalanib)(亦為PDGFR及Kit之抑制劑)、莫特塞尼(motesanib)(AMG-706，亦為PDGFR及Kit之抑制劑)、布立尼布(brivanib)(亦為FGFR抑制劑)、列尼凡尼(linifanib)(ABT-869，亦為PDGFR、Flt3及Kit之抑制劑)、替沃紮尼(tivozanib)(KRN-951，亦為PDGFR、Kit及MAP之抑制劑)、E-7080(亦為Kit及Kdr之抑制劑)、瑞戈非尼(regorafenib)(BAY-73-4506，亦為Tek之抑制劑)、伏瑞替尼(foretinib)(XL-880，亦為Flt3、Kit及Met之抑制劑)、替拉替尼(telatinib)(BAY-57-9352)、MGCD-265(亦為c-MET、Tie2及Ron之抑制劑)、多韋替尼(dovitinib)(亦為PDGFR、Flt3、Kit及FGFR之抑制劑)、尼特達尼(nintedanib)(亦為FGFR及PDGFR之抑制劑)、XL-184(卡博替尼(cabozantinib)，亦為Met、Flt3、Ret、Tek及Kit之抑制劑)。
抑制VEGF(R)之生物實體之實例包括(但不限於)抗VEGF配位體抗體，諸如貝伐單抗(bevacizumab)(阿瓦斯汀(Avastin))；可溶性受體，諸如阿柏西普(aflibercept)(VEGF-Trap)；抗VEGF受體抗體，諸如雷莫蘆單抗(ramucirumab)(IMC-1121b)或IMC-18F1；VEGFR拮抗劑，諸如CT-322或CDP-791。
小分子VEGFR-1(Flt-1)抑制劑之實例包括(但不限於)舒尼替尼、西地尼布及多韋替尼。
小分子VEGFR-2(Flk-1、Kdr)抑制劑之實例包括(但不限於)索拉非尼、舒尼替尼、西地尼布及多韋替尼。
小分子VEGFR-3(Flt-4)抑制劑之實例包括(但不限於)索拉非尼、舒尼替尼及西地尼布。
靶向(例如抑制)PDGFR之藥劑係關於靶向(例如抑制)PDGFR家庭之一或多個成員之化合物且包括血小板衍生生長因子受體(platelet-derived growth factor receptor；PDGFR)家族酪胺酸激酶之抑制劑(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)以及抗PDGFR抗體。
PDGFR抑制劑為靶向PDGFR家族之一或多個成員，尤其酪胺酸激酶PDGFR家族之一或多個成員之藥劑(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)，包括小分子受體酪胺酸激酶抑制劑及抗PDGFR抗體。
小分子PDGFR抑制劑之實例包括(但不限於)尼特達尼(亦為VEGFR及FGFR之抑制劑)、阿西替尼(亦為VEGFR及Kit之抑制劑)、多韋替尼(亦為VEGFR、Flt3、Kit及FGFR之抑制劑)、舒尼替尼(亦為VEGFR、Flt3及Kit之抑制劑)、莫特塞尼(亦為VEGFR及Kit之抑制劑)、帕佐泮尼(亦為VEGFR及Kit之抑制劑)、尼羅替尼(nilotinib)(亦為Abl及Kit之抑制劑)、坦度替尼(tandutinib)(亦為Flt3及Kit之抑制劑)、凡塔藍尼(亦為VEGFR及Kit之抑制劑)、替沃紮尼(KRN-951，亦為VEGFR、Kit及MAP之抑制劑)、AC-220(亦為Flt3及Kit之抑制劑)、TSU-68(亦為FGFR及VEGFR之抑制劑)、KRN-633(亦為VEGFR、Kit及Flt3之抑制劑)、列尼非尼(linifinib)(亦為Flt3、Kit及VEGFR之抑制劑)、索拉非尼(蕾莎瓦，亦為Raf、VEGFR、Flt3、Kit及RETR之抑制劑)、伊馬替尼(imatinib)(格列衛(Glevec)，亦為Abl及Kit之抑制劑)。抗PDGFR抗體之實例包括(但不限於)IMC-3G3。
靶向FGFR之藥劑係關於靶向FGFR家族之一或多個成員之化合物 且包括纖維母細胞生長因子受體家族酪胺酸激酶之抑制劑(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)。
FGFR抑制劑為靶向FGFR家族之一或多個成員(例如FGFR1、FGFR2、FGFR3)，尤其酪胺酸激酶之FGFR家族之一或多個成員之藥劑(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)，包括小分子受體酪胺酸激酶抑制劑及抗FGFR抗體。
小分子FGFR抑制劑之實例包括(但不限於)尼特達尼(亦為VEGFR及PDGFR之抑制劑)、多韋替尼(亦為VEGFR、Flt3、Kit及PDGFR之抑制劑)、KW-2449(亦為Flt3及Abl之抑制劑)、布立尼布(亦為VEGFR抑制劑)、TSU-68(亦為PDGFR及VEGFR之抑制劑)。
靶向(例如抑制)EGFR之藥劑係關於靶向(例如抑制)表皮生長因子受體家族之一或多個成員(erbB1、erbB2、erbB3、erbB4)之化合物且包括表皮生長因子受體(EGFR)家族激酶之一或多個成員之抑制劑(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)以及結合於表皮生長因子受體(EGFR)家族之一或多個成員之抗體。
EGFR抑制劑為靶向EGFR家族之一或多個成員，尤其酪胺酸激酶之EGFR家族之一或多個成員之藥劑(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)，包括小分子受體酪胺酸激酶抑制劑及抗EGFR抗體。
小分子表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑之實例包括(但不限於)埃羅替尼(erlotinib)(特羅凱(Tarceva))、吉非替尼(gefitinib)(易瑞沙(Iressa))、阿法替尼(afatinib)、拉帕替尼(lapatinib)(泰克泊(Tykerb))、凡德他尼(紮可馬，亦為VEGFR及RETR之抑制劑)、來那替尼(neratinib)(HKI-272)、凡利替尼(varlitinib)、AZD-8931、AC-480、AEE-788(亦為VEGFR之抑制劑)。
抗表皮生長因子受體(EGFR)之抗體之實例包括(但不限於)抗ErbB1抗體西妥昔單抗、帕尼單抗或尼妥珠單抗(nimotuzumab)；抗 ErbB2抗體曲妥珠單抗(trastuzumab)(赫賽汀(Herceptin))、帕妥珠單抗(pertuzumab)(奧密塔克(Omnitarg))或厄妥索單抗(ertumaxomab)；及抗EGFR抗體紮魯姆單抗(zalutumumab)。
本發明含義內之EGFR抑制劑可指可逆EGFR酪胺酸激酶抑制劑，諸如吉非替尼、埃羅替尼、凡德他尼或拉帕替尼，或不可逆EGFR酪胺酸激酶抑制劑，諸如來那替尼或PF-299804。
本發明含義內之EGFR抑制劑可指erbB選擇性抑制劑，諸如erbB1抑制劑(例如埃羅替尼、吉非替尼、西妥昔單抗、帕尼單抗)，或erbB2抑制劑(例如曲妥珠單抗)、雙重erbB1/erbB2抑制劑(例如拉帕替尼、阿法替尼)或泛erbB抑制劑(例如PF-299804)。
IGF(R)抑制劑為靶向胰島素樣生長因子(IGF)家族之一或多個成員(例如IGF1及/或IGF2)，尤其酪胺酸激酶之IGFR家族之一或多個成員，例如IGFR-1(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)，及/或胰島素受體路徑之一或多個成員之藥劑，且可包括(但不限於)IGFR酪胺酸激酶抑制劑OSI-906(林西替尼(linsitinib))及1-{4-[(5-環丙基-1H-吡唑-3-基)胺基]吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-2-基}-N-(6-氟-3-吡啶基)-2-甲基-L-脯胺醯胺(BMS-754807)，以及抗IGF(R)抗體芬妥木單抗(figitumumab)、西妥木單抗(cixutumumab)、達妥珠單抗(dalotuzumab)、蓋尼塔單抗(ganitumab)及羅妥木單抗(robatumumab)。
HGF(R)抑制劑為靶向肝細胞生長因子(HGF)家族之一或多個成員，尤其酪胺酸激酶之HGFR家族之一或多個成員之藥劑(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)，且可包括(但不限於)HGFR酪胺酸激酶抑制劑卡博替尼(XL-184，亦為VEGFR、Flt3、Ret、Tek及Kit之抑制劑)、克唑替尼(crizotinib)(亦為Alk之抑制劑)、伏瑞替尼(亦為Flt3、Kit及VEGFR之抑制劑)及替伐替尼(tivantinib)以及抗HGF(R)抗 體非妥珠單抗(ficlatuzumab)及奧妥珠單抗(onartuzumab)。
血管靶向劑(Vascular targeting agent；VTA)可包括(但不限於)血管損傷或破壞劑，諸如5,6-二甲基酮-4-乙酸(5,6-dimethylxanthenone-4-acetic acid；DMXAA，伐地美紮(vadimezan))、康普立停A4磷酸酯(combretastatin A4 phosphate)(齊布斯特(Zybrestat))或康普立停A4類似物，諸如奧拉布林(ombrabulin)(AVE-8062)。
凝血栓蛋白類似物可包括(但不限於)ABT-510及其類似物。
基質金屬蛋白酶(Matrix metalloprotease；MMP)抑制劑可包括(但不限於)馬立馬司他(marimastat)及其類似物。
PKC抑制劑為抑制蛋白激酶C(protein kinaseC；PKC)家族之一或多個成員之藥劑(單一激酶抑制劑形式或多重激酶抑制劑形式)且可包括(但不限於)恩紮妥林(enzastaurin)、苔蘚抑素(bryostatin)及米哚妥林(midostaurin)。
用於本發明之組合治療之血管生成抑制劑可選自貝伐單抗(阿瓦斯汀)、阿柏西普(VEGF-Trap)、凡德他尼、西地尼布、阿西替尼、索拉非尼、舒尼替尼、莫特塞尼、凡塔藍尼、帕佐泮尼、多韋替尼及尼特達尼。
聯合本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑投與之特定血管生成抑制劑為尼特達尼。
因此，在一個實施例中，本發明之細胞信號傳導及/或血管生成抑制劑較佳係指血管生成抑制劑，諸如靶向VEGF或VEGFR之藥劑。
在一個特定實施例中，本發明含義內之血管生成抑制劑或VEGFR抑制劑為具有下式之尼特達尼(BIBF 1120)：
視情況呈其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽形式(例如氫乙烷磺酸鹽)。
本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑亦可聯合erbB1受體(EGFR)及erbB2(Her2/neu)受體酪胺酸激酶之抑制劑，尤其阿法替尼成功投與。
因此，在另一個實施例中，本發明之細胞信號傳導及/或血管生成抑制劑較佳係指細胞信號傳導抑制劑，諸如靶向EGFR之藥劑，例如雙重不可逆EGFR/Her2抑制劑。
在一個特定實施例中，本發明含義內之細胞信號傳導抑制劑或EGFR抑制劑(尤其雙重不可逆EGFR/Her2抑制劑)為具有下式之阿法替尼(BIBW 2992)：
視情況呈其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽形式。
在本文所述治療中可與本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑組合投與之其他抗癌劑之其他實例可包括(但不限於)組蛋白脫乙醯基酶抑制劑、蛋白酶體抑制劑、HSP90抑制劑、運動素紡綞體蛋白抑制劑、環加氧酶抑制劑、雙膦酸酯、生物反應調節劑(例如細胞因子， 諸如IL-2，或干擾素，諸如干擾素-γ)、反義寡核苷酸、Toll樣受體促效劑、類維生素(deltoids)或類視黃素、Abl抑制劑或Bcr-Abl抑制劑、Src抑制劑、FAK抑制劑、JAK/STAT抑制劑、PI3K/PDK1/AKT/mTOR路徑之抑制劑(例如mTOR抑制劑、PI3K抑制劑、PDK1抑制劑、AKT抑制劑或雙重PI3K/mTOR抑制劑)、Ras/Raf/MEK/ERK路徑之抑制劑(例如法呢基轉移酶抑制劑或Ras(例如H-Ras、K-Ras或N-Ras)或Raf(A-Raf、B-Raf或C-Raf)致癌或野生型同功異型物之抑制劑或MEK抑制劑)、端粒酶抑制劑、甲硫胺酸胺肽酶抑制劑、肝素酶抑制劑、Flt-3R受體激酶家族之抑制劑、C-kit受體激酶家族之抑制劑、RET受體激酶家族之抑制劑、MET受體激酶家族之抑制劑、RON受體激酶家族之抑制劑、TEK/TIE受體激酶家族之抑制劑、CDK抑制劑、PLK抑制劑(例如PLK1抑制劑)、免疫治療劑、放射性免疫治療劑或(抗增生性、促凋亡或抗血管生成)抗體。
組蛋白脫乙醯基酶(HDAC)抑制劑可包括(但不限於)帕比司他(panobinostat)(LBH-589)、辛二醯苯胺異羥肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid；SAHA，伏立諾他(vorinostat)，卓林紮(Zolinza))、縮肽(羅米地辛(romidepsin))、貝林司他(belinostat)、瑞索司他(resminostat)、恩替諾特(entinostat)、莫可司他(mocetinostat)、吉維司他(givinostat)及丙戊酸。
蛋白酶體抑制劑可包括(但不限於)硼替佐米(bortezomib)(萬珂(Velcade))及卡非佐米(carfilzomib)。
熱休克蛋白90抑制劑可包括(但不限於)坦螺旋黴素(tanespimycin)(17-AAG)、格爾德黴素(geldamycin)、瑞他黴素(retaspimycin)(IPI-504)及AUY-922。
Ras-法呢基轉移酶抑制劑為抑制法呢基轉移酶及Ras之化合物且可包括(但不限於)替吡法尼(tipifarnib)(紮奈司他(Zarnesta))及洛那法 尼(lonafarnib)。
Abl抑制劑可包括(但不限於)博舒替尼(bosutinib)(亦為Src之抑制劑)、達沙替尼(dasatinib)(亦為Bcr及Src之抑制劑)、伊馬替尼(亦為Bcr之抑制劑)、普納替尼(ponatinib)(亦為Bcr及Src之抑制劑)及尼羅替尼(亦為Kit及PDGFR之抑制劑)。
mTOR抑制劑可包括(但不限於)雷帕黴素(rapamycin)(西羅莫司(sirolimus)、雷帕鳴(Rapamune))或雷帕羅吉(rapalogues)、依維莫司(everolimus)(山萊恩(Certican)，RAD-001)、地磷莫司(ridaforolimus)(MK-8669，AP-23573，地伏莫司(deforolimus))、替西羅莫司(temsirolimus)(馱瑞塞爾(Torisel)，CCI-779)、OSI-027、INK-128、AZD-2014或AZD-8055或[5-[2,4-雙[(3S)-3-甲基嗎啉-4-基]吡啶并[5,6-e]嘧啶-7-基]-2-甲氧基苯基]甲醇及其類似物。
PI3K抑制劑可包括(但不限於)BKM-120、XL-147、RG-7321(GDC-0941)、CH-5132799及BAY-80-6946。在一個實施例中，本發明含義內之PI3K抑制劑係指PI3K-α之抑制劑(諸如BYL-719)。
雙重PI3K/mTOR抑制劑可包括(但不限於)BEZ-235、XL-765、PF-4691502、GSK-2126458、RG-7422(GDC-0980)及PKI-587。
Raf抑制劑可包括(但不限於)索拉非尼(蕾莎瓦)或PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)。在一個實施例中，本發明含義內之Raf抑制劑係指BRaf之抑制劑(例如BRaf V600)，尤其BRaf V600E抑制劑(諸如PLX-4032或GSK-2118436)。
類維生素及類視黃素可包括(但不限於)全反式視黃酸(all-trans retinoic acid；ATRA)、芬維A胺(fenretinide)、維甲酸(tretinoin)、貝瑟羅汀(bexarotene)及其類似物。
Toll樣受體促效劑可包括(但不限於)利尼莫德(litenimod)、阿托莫德(agatolimod)及其類似物。
反義寡核苷酸可包括(但不限於)奧利默森(oblimersen)(根納三思(Genasense))。
PLK抑制劑可包括(但不限於)PLK1抑制劑伏拉舍替(volasertib)。
AKT抑制劑可包括(但不限於)MK-2206或N-{(1S)-2-胺基-1-[(3,4-二氟苯基)甲基]乙基}-5-氯-4-(4-氯-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-呋喃甲醯胺。
除本發明之雙重化合物外之MEK抑制劑可包括(但不限於)司美替尼(AZD-6244)或N-[3-[3-環丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-3,4,6,7-四氫-6,8-二甲基-2,4,7-三側氧基吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基]苯基]乙醯胺(GSK-1120212)。
本發明含義內之抑制劑可包括(但不限於)小分子抑制劑及抗體。
除非另外說明，否則本文所提及之激酶抑制劑可包括特定抑制一種激酶及/或一種激酶同功異型物之單一激酶抑制劑或抑制兩種或兩種以上激酶及/或兩種或兩種以上激酶同功異型物之多重激酶抑制劑(例如雙重或三重激酶抑制劑或全激酶抑制劑)。
如本文所提及之其他抗癌劑(尤其其中之小分子)亦可包含其任何醫藥學上可接受之鹽、其水合物及溶劑合物，包括各別結晶形式。
抗體意謂例如完整單株抗體(包括(但不限於)人類、鼠類、嵌合及人類化單株抗體)、多株抗體、結合(單株)抗體(例如接合化學治療藥物、放射性粒子、細胞毒素或其類似物之彼等抗體)、由至少兩種完整抗體形成之多特異性抗體及抗體片段，只要其展示所需生物活性即可。
可用於本發明之組合治療內之抗體之實例可為抗CD19抗體，諸如布林莫單抗(blinatumomab)；抗CD20抗體，諸如利妥昔單抗(rituximab)(美羅華(Rituxan))、維妥珠單抗(veltuzumab)、托西莫單抗(tositumumab)、阿妥珠單抗(obinutuzumab)或奧伐單抗(ofatumumab) (阿折侖(Arzerra))；抗CD22抗體，諸如依帕珠單抗(epratuzumab)；抗CD23抗體，諸如魯昔單抗(lumiliximab)；抗CD30抗體，諸如伊拉莫單抗(iratumumab)；抗CD33抗體，諸如吉妥珠單抗(gemtuzumab)或林妥珠單抗(lintuzumab)；抗CD40抗體，諸如魯卡木單抗(lucatumumab)或達西珠單抗(dacetuzumab)；抗CD51抗體，諸如依奈莫單抗(inetumumab)；抗CD52抗體，諸如阿侖單抗(alemtuzumab)(坎帕斯(Campath))；抗CD74抗體，諸如米拉珠單抗(milatuzumab)；抗CD80抗體，諸如伽利昔單抗(galiximab)；抗CTLA4抗體，諸如曲美木單抗(tremelimumab)或伊匹單抗(ipilimumab)；抗TRAIL抗體，諸如抗TRAIL1抗體馬哌圖單抗(mapatumumab)或抗TRAIL2抗體替加珠單抗(tigatuzumab)、康納木單抗(conatumumab)或來沙木單抗(lexatumumab)；抗Her2/neu抗體，諸如曲妥珠單抗(赫賽汀)、帕妥珠單抗(奧密塔克)或厄妥索單抗；抗EGFR抗體，諸如西妥昔單抗(艾比特思(Erbitux))、尼妥珠單抗、紮魯姆單抗或帕尼單抗(維克替比(Vectibix))；抗VEGF抗體，諸如貝伐單抗(阿瓦斯汀)；抗VEGFR抗體，諸如雷莫蘆單抗；抗IGFR抗體，諸如芬妥木單抗、西妥木單抗、達妥珠單抗或羅妥木單抗；或抗HGFR抗體，諸如利洛木單抗(rilotumumab)；或結合抗體，諸如放射性標記抗CD20抗體替伊莫單抗(ibritumumab tiuxetan)(90Y結合物，澤娃靈(Zevalin))或托西莫單抗(tositumomab)(131I結合物、百克沙(Bexxar))或免疫毒素吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumab ozogamicin)(抗CD33卡奇黴素結合物，麥羅塔(Mylotarg))、伊珠單抗奧唑米星(inotuzumab ozagamicin)(抗CD22卡奇黴素結合物)、BL-22(抗CD22免疫毒素)、布妥昔單抗維多汀(brentuximab vedotin)(抗CD30阿瑞他汀E結合物(anti-CD30 auristatin E conjugate))或90Y-依帕珠單抗(90Y-epratuzumab)(抗CD22放射免疫結合物)。
本發明之治療(單一或組合治療)亦可與諸如手術、放射線療法(例如輻射治療)、放射免疫療法、內分泌療法、生物反應調節劑、高溫、冷凍療法及/或減弱任何不利作用之藥劑(例如止吐劑)之其他治療組合。
在一個實施例中，本發明之治療劑組合或(組合)治療可進一步涉及或包含手術及/或放射線療法。
因此，本發明進一步提供一種治療有需要人類患者之癌症(例如選自本文所述彼等癌症)之方法，該方法包含投與治療有效量之本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，諸如具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，較佳本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，及一或多種其他抗癌劑，較佳選自上文及下文所提及之彼等抗癌劑。
此外，本發明進一步提供一種組合，其包含本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑，諸如具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，較佳本發明之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，及一或多種其他抗癌劑，較佳選自上文及下文所提及之彼等抗癌劑。
在某一個實施例中，本發明之組合療法係用於治療患有帶有KRAS、NRAS及/或BRAF(例如BRAF V600)突變之胰臟癌、結腸直腸 癌、惡性黑素瘤、NSCLC或其他晚期或轉移性實體腫瘤之患者。
在一個特定實施例中，本發明之組合療法係用於治療患有帶有一或多個KRAS或野生型基因型突變之胰臟癌(PAC)之患者。
在一個特定實施例中，本發明之組合療法係用於治療患有具有一或多個KRAS或BRAF(例如BRAF V600)突變之結腸直腸癌(CRC)之患者。
在一個特定實施例中，本發明之組合療法係用於治療患有具有一或多個BRAF(尤其BRAF V600)或NRAS突變之惡性黑素瘤之患者。
在一個特定實施例中，本發明之組合療法係用於治療患有具有一或多個KRAS突變之非小細胞肺癌(NSCLC)之患者。
在本發明之一個實施例中，一或多種其他抗癌劑係選自由以下組成之群：卡西他濱、5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑、順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、替莫唑胺、福莫司汀、伊立替康、吉西他濱、培美曲塞、太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、血管生成抑制劑、VEGF(R)抑制劑、EGF(R)抑制劑、IGF(R)抑制劑、抗CTLA4抗體、BRaf抑制劑、mTOR抑制劑、雙重PI3K/mTOR抑制劑、AKT抑制劑及PI3K抑制劑。
在本發明之一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括血管生成抑制劑。在某一個實施例中，血管生成抑制劑為貝伐單抗。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括VEGF(R)抑制劑。在某一個實施例中，VEGFR抑制劑為尼特達尼。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括EGF(R)抑制劑。在某一個實施例中，EGFR抑制劑為阿法替尼。在另外某一個實施例中，EGFR抑制劑係選自西妥昔單抗、帕尼單抗及埃羅替尼。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括IGF(R)抑制劑。在某一個實施例中，IGF(R)抑制劑係選自芬妥木單抗、達妥珠單抗、西妥 木單抗、蓋尼塔單抗、BMS-754807及OSI-906(林西替尼)。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括抗CTLA4抗體。在某一個實施例中，抗CTLA4抗體為伊匹單抗。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括BRaf抑制劑。在某一個實施例中，BRaf抑制劑為PLX-4032(維羅非尼)。在另外某一個實施例中，BRaf抑制劑為GSK-2118436(達拉非尼)。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑除本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑外包括BRaf抑制劑(諸如達拉非尼或維羅非尼)視情況與MEK抑制劑(諸如司美替尼或GSK-1120212)組合。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括mTOR抑制劑。在某一個實施例中，mTOR抑制劑為(5-{2,4-雙[(3S)-3-甲基嗎啉-4-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇(AZD-8055)。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括雙重PI3K/mTOR抑制劑。在某一個實施例中，雙重PI3K/mTOR抑制劑為2-甲基-2-[4-(3-甲基-2-側氧基-8-喹啉-3-基-2,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-苯基]-丙腈(BEZ-235)。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括PI3K抑制劑。在某一個實施例中，PI3K抑制劑為5-[2,6-二(4-嗎啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺(BKM-120)。
在一個實施例中，一或多種其他抗癌劑包括AKT抑制劑。在某一個實施例中，AKT抑制劑為8-[4-(1-胺基環丁基)苯基]-9-苯基-1,2,4-三唑并[3,4-f][1,6]啶-3(2H)-酮(MK-2206)。在另外某一個實施例中，AKT抑制劑為N-{(1S)-2-胺基-1-[(3,4-二氟苯基)甲基]乙基}-5-氯-4-(4-氯-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-呋喃甲醯胺。
在本發明之一個實施例中，一或多種其他抗癌劑係選自由以下組成之群： 卡西他濱、5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑、順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、替莫唑胺、福莫司汀、伊立替康、吉西他濱、培美曲塞、太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、貝伐單抗、西妥昔單抗、帕尼單抗、埃羅替尼、伊匹單抗、芬妥木單抗、達妥珠單抗、西妥木單抗、蓋尼塔單抗、BMS-754807、OSI-906(林西替尼)、PLX-4032(維羅非尼)、GSK-2118436(達拉非尼)、AZD-8055、BEZ-235、BKM-120、MK-2206、阿法替尼及尼特達尼。
在另一個實施例(實施例E1)中，一或多種本發明之其他抗癌劑係選自由以下組成群(群G1)：卡西他濱、5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑、順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、替莫唑胺、福莫司汀、伊立替康、吉西他濱、培美曲塞、太平洋紫杉醇及多烯紫杉醇。
在另一個實施例(實施例E2)中，一或多種本發明之其他抗癌劑係選自由以下組成群(群G2)：貝伐單抗、西妥昔單抗、帕尼單抗、埃羅替尼及伊匹單抗。
在另一個實施例(實施例E3)中，一或多種本發明之其他抗癌劑係選自由以下組成群(群G3)：芬妥木單抗、達妥珠單抗、西妥木單抗、蓋尼塔單抗、BMS-754807、OSI-906(林西替尼)、PLX-4032(維羅非尼)、GSK-2118436(達拉非尼)、AZD-8055、BEZ-235、BKM-120、MK-2206、阿法替尼及尼特達尼。
舉例而言，可發現藉由使用與靶向(例如抑制)IGF/PI3K/AKT/mTOR軸之藥劑組合的本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑可在有需要患者中(諸如在本文所述之彼等患者中)實現抗腫瘤反應改良，諸如抑制或預防細胞週期進程、抑止細胞增殖、調節細胞生長、抑制DNA合成或誘導細胞凋亡。此外，本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑與IGF/PI3K/AKT軸抑制劑之組合亦可阻斷藉由MEK抑制誘導之補償反饋迴路。
進一步舉例而言，可見藉由使用與BRaf抑制劑組合之本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑可在有需要患者中(諸如在本文所述之彼等患者中)實現抗癌效應或抗腫瘤反應改良，諸如阻斷細胞增殖及增強路徑抑制，其可產生與細胞抑制效應相對之細胞毒性效應。此外，尤其在RAS或BRaf突變腫瘤(例如帶有RAS或BRAF V600突變之晚期實體腫瘤，諸如本文所述彼等實體腫瘤)中，雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑與BRaf抑制劑之組合亦可用以延遲對其中任一者之耐藥性的發作、克服、治療或預防對其中任一者之耐藥性。
進一步舉例而言，可見藉由使用與mTOR抑制劑組合之本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑可在有需要患者中(諸如在本文所述之彼等患者中)得到抗癌效應或抗腫瘤反應之改良，諸如抑止細胞增殖、調節細胞生長或抑制/減緩細胞蛋白轉譯。
進一步舉例而言，可見藉由使用與EGF(R)抑制劑組合之本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑可在有需要患者中(諸如在本文所述之彼等患者中)得到抗癌效應或抗腫瘤反應之改良，諸如抑止細胞增殖、提高例如有或無EGFR突變之腫瘤中之細胞毒性或調節腫瘤生長或尺寸、增加腫瘤消退或減少轉移。此外，雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑及EGF(R)抑制劑之組合亦可用於延遲對其中任一者之耐藥性的發作、克服、治療或預防對其中任一者之耐藥性。
進一步實例，可發現藉由使用本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑與血管生成抑制劑(例如VEGF(R)抑制劑)組合在有需要患者中(諸如在本文所述之該等患者中)可得到抗癌效應或抗腫瘤反應的改良，諸如抑制或減緩腫瘤生長。
進一步實例，可發現藉由使用本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑與(標準)化學治療抗癌劑組合在有需要患者中(諸如在本文所述之該等患者中)可得到抗癌效應或抗腫瘤反應的改良，諸如提高細胞毒 性，同時降低有效治療或預防所需(標準)化學治療藥物之處方劑量或延遲對其中任一者之耐藥性發作。
本發明之治療方法或治療用途之抗癌效應包括(但不限於)抗腫瘤效應、反應率(例如總反應率)、疾病進展時間或存活率(例如無進展存活或總存活)。本發明治療方法之抗腫瘤效應包括(但不限於)腫瘤生長抑制、腫瘤生長延遲、腫瘤消退、腫瘤縮減、治療停止時腫瘤再生長之時間增加、疾病進展減緩。
預期當本發明之治療方法或治療用途施用於需要治療癌症之溫血動物(諸如人類)時，該治療方法將產生例如以下一或多者所測量之效應：抗腫瘤效應之程度、反應率、疾病進展之時間及存活率。抗癌症效應可包括預防性治療以及現有疾病之治療。
此外，本發明之組合可有助於克服對單一療法中任一治療之抗性。
在本發明之組合療法內之一個特定實施例(實施例F1)中，本發明之組合、組合物、方法及用途係關於包含雙重奧諾拉激酶/MEK及其他抗癌劑之組合，其中本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑為具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其醫藥學上可接受之鹽，較佳為本發明之結晶自由鹼型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，且其他抗癌劑較佳根據以下表i中之條目進行選擇。
在一些實施例中，對於本發明之在結腸直腸癌(CRC)治療中之用途而言，雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑可與一或多種諸如選自以下之其他抗癌劑組合：DNA複製抑制劑(諸如奧沙利鉑)、拓撲異構酶I抑制劑(諸如伊立替康)、(口服)氟嘧啶(諸如卡西他濱)、抗血管生成劑(諸如貝伐單抗)及/或EGFR抑制劑(諸如抗EGFR抗體，諸如西妥昔單 抗或帕尼單抗)或其組合。
在一些實施例中，對於本發明之在胰臟癌(PAC)治療中之用途而言，雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑可與一或多種諸如選自以下之其他抗癌劑組合：吉西他濱、DNA複製抑制劑(諸如奧沙利鉑、順鉑)、拓撲異構酶I抑制劑(諸如伊立替康)、氟嘧啶(諸如5-FU或卡西他濱)、抗血管生成劑(諸如貝伐單抗)及/或EGFR抑制劑(諸如西妥昔單抗或埃羅替尼)或其組合。
在一些實施例中，對於本發明之在黑素瘤治療中之用途而言，雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑可與一或多種諸如選自以下之其他抗癌劑組合：達卡巴嗪、替莫唑胺、伊匹單抗及/或BRaf抑制劑(諸如維羅非尼)或其組合。
舉例而言，以下癌症疾病可用本發明之化合物或組合治療，然而並不侷限於此：腦瘤，諸如聽神經瘤、星形細胞瘤(諸如毛細胞性星形細胞瘤、纖維型星形細胞瘤、原漿性星形細胞瘤、肥胖型星形細胞瘤、多形性星形細胞瘤)及神經膠母細胞瘤、腦淋巴瘤、腦轉移灶、垂體腫瘤(諸如泌乳素瘤)、產生HGH(人生長激素(human growth hormone))之腫瘤及產生ACTH之腫瘤(促腎上腺皮質激素(adrenocorticotrophic hormone))、顱咽管瘤、髓母細胞瘤、腦膜瘤及少枝膠質瘤；神經腫瘤(贅瘤)，諸如植物性神經系統之腫瘤，諸如交感神經母細胞瘤、節細胞神經瘤、副神經節瘤(嗜鉻細胞癌(phaeochromocytoma)及嗜鉻細胞瘤(chromaffinoma))及頸動脈球瘤、周圍神經系統中之腫瘤(諸如截肢性神經瘤、神經纖維瘤、神經鞘瘤(neurinoma)(神經鞘膜瘤(neurilemoma)、許旺氏細胞瘤(Schwannoma))及惡性許旺氏細胞瘤以及中樞神經系統之腫瘤，諸如腦及脊髓腫瘤；腸癌，諸如直腸瘤、結腸瘤、肛門瘤、小腸腫瘤及十二指腸腫瘤；眼瞼腫瘤，諸如基底細胞癌或基底細胞瘤；胰腺癌或胰 臟瘤；膀胱癌或膀胱瘤；肺癌(支氣管癌)，諸如小細胞支氣管癌(燕麥細胞癌)及非小細胞支氣管癌，諸如鱗狀上皮癌、腺癌及大細胞支氣管癌；乳癌，諸如乳腺瘤，諸如浸潤型導管癌、膠質性癌、侵襲性小葉癌、管狀癌、腺樣囊性癌及乳頭狀癌；非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphomas；NHL)，諸如伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、低惡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及蕈樣真菌病；子宮癌或子宮內膜癌或子宮體癌；CUP症候群(原發灶不明癌(cancer of unknown primary))；卵巢癌或卵巢瘤，諸如黏液癌、子宮內膜癌或漿液性癌；膽囊癌；膽管癌，諸如克拉特氏腫瘤(Klatskin's tumour)；睾丸癌，諸如精原細胞瘤及非精原細胞瘤；淋巴瘤(淋巴肉瘤)，諸如惡性淋巴瘤、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)(諸如慢性淋巴性白血病)、毛細胞白血病、免疫細胞瘤、漿細胞瘤(多發性骨髓瘤)、免疫母細胞瘤、伯基特氏淋巴瘤、T區蕈樣真菌病、大細胞多形性淋巴母細胞瘤及淋巴母細胞瘤；喉癌，諸如聲帶腫瘤、聲門上、聲門及聲門下喉腫瘤；骨癌，諸如骨軟骨瘤、軟骨瘤、軟骨母細胞瘤、軟骨黏液樣纖維瘤、骨瘤、骨樣骨瘤、骨母細胞瘤、嗜酸性球性肉芽腫、巨細胞腫瘤、軟骨肉瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、網狀細胞肉瘤、漿細胞瘤、纖維性結構不良、幼年骨囊腫及動脈瘤骨囊腫；頭/頸腫瘤，諸如唇、舌、口底、口腔、齒齦、上齶、唾液腺、咽、鼻腔、鼻旁竇、喉及中耳之腫瘤；肝癌，諸如肝細胞瘤或肝細胞癌(hepatocellular carcinoma；HCC)；白血病，諸如急性白血病，諸如急性淋巴/淋巴母細胞白血病(acute lymphatic/lymphoblastic leukaemia；ALL)、急性骨髓白血病(acute myeloid leukaemia；AML)；慢性白血病，諸如慢性淋巴白血病(chronic lymphatic leukaemia；CLL)、慢性骨髓白血病(chronic myeloid leukaemia；CML)；胃癌或胃瘤，諸如乳頭狀、管狀及黏液 腺癌、印戒細胞瘤、腺樣鱗狀細胞瘤、小細胞瘤及未分化性瘤；黑素瘤，諸如表面擴散、結節性惡性雀斑樣及肢端雀斑樣黑素瘤；腎癌，諸如腎細胞瘤或腎上腺樣瘤或格臘維次氏腫瘤(Grawitz's tumour)；食道癌或食道瘤；陰莖癌；前列腺癌；咽癌或咽瘤，諸如鼻咽瘤、口咽瘤及下嚥瘤；視網膜胚細胞瘤；陰道癌或陰道瘤；鱗狀上皮癌、腺癌、原位癌、惡性黑素瘤及肉瘤；甲狀腺癌，諸如乳頭狀、濾泡性及髓質甲狀腺癌，以及多形性癌瘤；鱗狀細胞癌(spinalioma)，皮膚之棘細胞癌及鱗狀上皮癌瘤；胸腺瘤、尿道癌及外陰癌。
在另一個實施例中，本發明係關於一種治療Raf、Ras、MEK及PI3K/Pten中之每一者為野生型或突變型之癌症或減輕其嚴重程度的方法。此情況包括(但不限於)患有如下特徵之癌症之患者：RAF為突變型、RAS為野生型、MEK為野生型且PI3K/PTEN為野生型；RAF為突變型、RAS為突變型、MEK為野生型且PI3K/PTEN為野生型；RAF為突變型、RAS為突變型、MEK為突變型且PI3K/PTEN為野生型；且RAF為突變型、RAS為野生型、MEK為突變型且PI3K/PTEN為野生型。
如此項技術中所瞭解，術語「野生型」係指未經基因修飾之天然群體中存在之多肽或聚核苷酸序列。亦如此項技術中所瞭解，「突變型」包括分別與野生型多肽或聚核苷酸中所見之相應胺基酸或核酸相比，胺基酸或核酸具有至少一個修飾之多肽或聚核苷酸序列。術語突變型中包括單核苷酸多晶型現象(Single Nucleotide Polymorphism；SNP)，其中與最普遍可見之(野生型)核酸股相比，核酸股之序列中存在單一鹼基對區別。藉由已知方法鑑別Raf、Ras、MEK為野生型或突變型或PI3K/Pten為突變型之癌症。舉例而言，野生型或突變型腫瘤細胞可藉由DNA擴增及定序技術、DNA及RNA偵測技術(分別包括(但不限於)北方及南方墨點法)及/或各種生物晶片及陣列技術加以鑑別。 野生型及突變型多肽可藉由許多技術偵測，該等技術包括(但不限於)免疫診斷技術，諸如ELISA、西方墨點法或免疫細胞化學技術。適當地，可使用焦磷酸解活化聚合反應(Pyrophosphorolysis-activated polymerization；PAP)及/或PCR方法。Liu,Q等人；Human Mutation 23：426-436(2004)。
在其他實施例中，本發明係關於：一種具有式(I)之化合物3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，尤其呈結晶型，尤其結晶自由鹼型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，尤其如本文所述，其係與BRaf抑制劑、較佳PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)組合使用。
一種具有式(I)之化合物3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，尤其呈結晶型，尤其結晶自由鹼型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，尤其如本文所述，其係與BRaf抑制劑、較佳PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)組合用於治療黑素瘤癌症。
一種具有式(I)之化合物3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，尤其呈結晶型，尤其結晶自由鹼型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，尤其如本文所述，其係與BRaf抑制劑、較佳PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)組合用於 治療腫瘤帶有BRaf V600突變(諸如BRaf V600E突變)之患者的癌症、較佳黑素瘤癌症。
一種具有式(I)之化合物3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，尤其呈結晶型，尤其結晶自由鹼型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，尤其如本文所述，其與為PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)之BRaf抑制劑組合諸如用於如本文中所述之用途。
一種治療較佳腫瘤帶有BRaf V600突變(諸如BRaf V600E突變)之患者之癌症(較佳黑素瘤癌症)的方法，其包含投與有效量之具有式(I)之化合物3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，尤其呈結晶型，尤其結晶自由鹼型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，尤其如本文所述，及為PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)之BRaf抑制劑。
一種含有具有式(I)之化合物3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽，尤其呈結晶型，尤其結晶自由鹼型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺，尤其結晶自由鹼型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺(尤其如本文所述)之醫藥組合物及為PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)之BRaf抑制劑之醫藥組合物之套組，該等組分較佳同時、並行、依序、連續、交替或分開使 用。
本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或組合之治療適用性可包括對患者之第一線、第二線、第三線或其他線治療。癌症可具轉移性、復發性、再發性、對一或多種抗癌治療具抗性或難治癒。因此，患者可未經治療，或可能已接受一或多種先前抗癌症治療，該等治療尚未完全治癒疾病。
具有再發性及/或對一或多種其他(標準)抗癌劑有抗性或失效之患者亦可經受本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑治療，例如用於第二或第三線治療週期，視情況與一或多種其他抗癌劑組合(例如作為附加組合或作為替換治療)。
因此，涉及本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑之一些所揭示方法對治療癌症已再發、或癌症已具耐藥性或多重耐藥性、或癌症已對用一或多種其他抗癌劑(例如用一或多種如本文提及之其他抗癌劑，尤其標準化學治療、靶向或非靶向藥物)進行一線、二線或更多線(單一或組合)治療失效之個體有效。
最初對抗癌藥物(諸如如本文所述之抗癌劑)有反應之癌症可再發且當例如儘管投與增加劑量之抗癌藥物，但抗癌藥物對治療患癌症之個體不再有效時，該癌症變得耐抗癌藥物。認為已顯現對兩種或兩種以上抗癌藥物具有抗性之癌症具有多重耐藥性。
因此，在本發明之一些(組合)治療方法中，若患者對最初或先前投與之一或多種藥劑具有抗性或顯現抗性，則開始用第二或第三次投與之藥劑(例如雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑)治療。患者可僅接受用各藥劑治療之單一療程或用一種、兩種或兩種以上藥劑治療之多個療程。
在某些情況下，本發明之組合治療因此可包括初始或附加組合、替換或維持治療。
含有活性物質及視情況選用之一或多種醫藥學上可接受之載劑、賦形劑及/或稀釋劑之醫藥組合物可根據熟習此項技術者本身習用或與已知程序類似或相似之方法製備。製備本發明之該醫藥組合物之方法可包含組合或混合活性物質及一或多種醫藥學上可接受之載劑、賦形劑及/或稀釋劑。
適當製劑包括例如錠劑、膠囊、栓劑、溶液(例如注射(皮下、靜脈內、肌內)及輸注用溶液)、酏劑、乳液或可分散性散劑。醫藥學活性化合物之含量應在以組合物為整體之0.1至90重量%，較佳0.5至50重量%之範圍內，亦即量足以達到下文所規定之劑量範圍。必要時，所規定劑量可為一天幾次。
適當錠劑可例如藉由使活性物質與已知賦形劑混合，視情況組合而獲得，該等已知賦形劑為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、磷酸鈣、纖維素或乳糖；崩解劑，諸如玉米澱粉或海藻酸或交聯普維酮(crospovidon)；黏合劑，諸如澱粉(例如預膠凝化澱粉)、纖維素(例如微晶纖維素)、共聚普維酮(copovidone)或明膠；助流劑；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或滑石；及/或用以延緩釋放之藥劑，諸如羧甲基纖維素、鄰苯二甲酸乙酸纖維素或聚乙酸乙烯酯。錠劑可藉由常見方法，諸如藉由直接壓縮或碾壓來製備。錠劑亦可包含若干層。
舉例而言，本發明之適當醫藥組合物(尤其固體口服劑型，例如錠劑)包含本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑及視情況選用之一或多種通常選自以下之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑及/或稀釋劑：乳糖、微晶纖維素、預膠凝化澱粉、共聚普維酮、交聯普維酮、二氧化矽及硬脂酸鎂。
因此，包衣錠劑可藉由用通常用於錠劑包衣(例如基於聚合物或多醣、視情況包括塑化劑及顏料)之物質(例如可力酮或蟲膠、阿拉伯膠、滑石、二氧化鈦或糖)包覆類似於錠劑所製造之核心來製備。為 實現延遲釋放或防止不相容，核心亦可由許多層組成。類似地，錠劑包衣層可由許多層組成以實現延遲釋放，可能使用以上所提及之用於錠劑之賦形劑。
舉例而言，本發明之適當包衣錠劑包括包含成膜劑、塑化劑、助流劑及視情況選用之一或多種顏料之薄膜包衣。
含有本發明之活性物質或其組合之糖漿或酏劑可另外含有甜味劑，諸如糖精、環己胺基磺酸鹽(cyclamate)、丙三醇或糖，及香味增強劑，例如香料，諸如香草醛(vanillin)或橙萃取物。其亦可含有懸浮佐劑或增稠劑(諸如羧甲基纖維素鈉)、濕潤劑(諸如脂肪醇與氧化乙烯之縮合產物)或防腐劑(諸如對羥基苯甲酸酯)。
注射及輸注用溶液以常見方式製備，例如添加等張劑、防腐劑(諸如對羥基苯甲酸酯)或穩定劑(諸如乙二胺四乙酸之鹼金屬鹽)，視情況使用乳化劑及/或分散劑，同時若將水用作稀釋劑，則例如有機溶劑可視情況用作溶劑化劑或溶解助劑，且轉移至注射小瓶或安瓶或輸注瓶中。
含有一或多種活性物質或活性物質組合之膠囊可例如藉由使活性物質與諸如乳糖或山梨糖醇之惰性載劑混合且將其包裝於明膠膠囊中來製備。
合適栓劑可例如藉由與出於此目的所提供之載劑(諸如中性脂肪或聚乙二醇或其衍生物)混合來製成。
可用之賦形劑包括例如水；醫藥學上可接受之有機溶劑，諸如石蠟(例如石油餾分)、植物油(例如花生或芝麻油)、單官能或多官能醇(例如乙醇或丙三醇)；載劑，諸如天然礦物粉末(例如高嶺土、黏土、滑石、白堊)、合成礦物粉末(例如高度分散之矽酸及矽酸鹽)、糖(例如蔗糖、乳糖及葡萄糖)、乳化劑(例如木質素、亞硫酸廢液、甲基纖維素、澱粉及聚乙烯吡咯啶酮)及潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石、硬 脂酸及十二烷基硫酸鈉)。
本發明之組合之元素可藉由熟習此項技術者習用之方法，例如藉由口服、經腸、非經腸(例如肌肉內、腹膜內、靜脈內、經皮或皮下注射或植入)、經鼻、經陰道、經直腸或局部投藥途徑(視情獨立)投與，且可單獨或一起調配為含有適用於各投藥途徑之習知無毒醫藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑之適合劑量單位調配物。
本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑藉由常見方法，較佳藉由口服或非經腸途徑，最佳藉由口服途徑(例如呈口服劑型，諸如固體口服劑型(例如錠劑或膠囊)或液體口服劑型(例如口服懸浮液、糖漿或酏劑))投與。對於口服投藥而言，錠劑除上述載劑外可含有添加劑，諸如檸檬酸鈉、碳酸鈣及磷酸二鈣以及各種添加劑，諸如澱粉(較佳為馬鈴薯澱粉)、明膠及其類似物。此外，諸如硬脂酸鎂、十二烷硫酸鈉及滑石之助流劑及/或潤滑劑可同時用於製錠製程中。在水性懸浮液之情況下，活性物質可與除以上所提及之賦形劑外之各種香味增強劑或著色劑組合。
對於非經腸使用而言，可使用活性物質與適當液體載劑之溶液。
口服使用之劑量為每天1至2000mg(例如每天50至700mg，較佳每天100mg到200mg)。視情況，將每天之量分成多份且一天投與各份1至4次。靜脈內使用之劑量為每小時1-1000mg，較佳介於每小時5與500mg之間。
然而，有時有必要背離所規定之量，此取決於體重、投藥途徑、個體對藥物的反應、其調配物性質及藥物投藥之時間或間隔。因此，在一些情況下，使用小於上文提供之最小劑量可能足夠，而在其他情況下可能超過上限。當大量投與時，將其分成遍佈一天中之許多較小劑量可能明智。
酸加成鹽可藉由使自由化合物與所需酸組合或反應，例如藉由將自由化合物溶解或懸浮於含有所需酸或接著將添加所需酸之適當溶劑(例如非質子性或質子性、極性或非極性有機溶劑，例如酮、低分子量脂族醇、水等或其混合物)中獲得。鹽可藉由過濾、再沈澱、用酸加成鹽之一種反溶劑沈澱或藉由蒸發溶劑而獲得。所獲得之鹽可例如藉由與適當酸反應或藉助於適當離子交換劑轉化成另一物質。同樣地，所獲得之鹽可轉化成自由化合物，又可藉由鹼化及酸化轉化成鹽。以此方式，醫藥學上不可接受之鹽可轉化成醫藥學上可接受之鹽。
本發明之化合物可使用本文所述方法獲得，為達到此目的該等方法亦可與熟習此項技術者由其專業知識已知之方法組合。
此外，本發明進一步包括可自本文所揭示之方法或合成步驟獲得之產物。
本發明之固體形式亦可用以製備其他形式，諸如鹽或自由形式(包括例如多晶型、結晶型或非晶型)及/或其調配物。
如以下實例所述獲得之本發明之任何或所有化合物或結晶型(尤其作為最終化合物)為本發明內尤其關注之標的。
本發明並不限於本文所述之特定實施例之範疇。熟習此項技術者自本揭示案顯而易知除本文所述內容之外的本發明之多種修正。該等修正意欲在隨附申請專利範圍之範疇內。
本文所引用之所有專利申請案均以全文引用的方式併入本文中。
本發明之其他實施例、特徵及優勢自以下實例顯而易知。以下實例用於以實例方式說明本發明之原理而不對其進行限制。
實例 1.奧諾拉B激酶分析： 使用野生型(wt)-有爪蟾蜍(Xenopus laevis)奧諾拉B/INCENP複合物之放射性激酶分析：
蛋白質表現：基本上如Sessa等人2005所述製備野生型(wt)有爪蟾蜍奧諾拉B60-361/INCENP790-847複合物。複合物之ATP-KM值為61μM。在100μM ATP存在下使用10μM底物肽運作激酶分析。使用pAUB-IN847轉化含有pUBS520輔助質體之大腸桿菌菌株BL21(DE3)。蛋白質與其突變體在基本上相同之條件下皆得以表現且純化。蛋白質表現在0.45-0.7之OD600下由0.3mM IPTG誘導。接著在23-25℃下在攪動下持續表現約12-16小時。藉由用Beckman JLA 8.1轉子以4000rpm離心15分鐘來收集細菌細胞，且集結粒再懸浮於溶解緩衝劑(50mM Tris HCl(pH 7.6)、300mM NaCl、1mM DTT、1mM EDTA、5%丙三醇、Roche完全蛋白酶抑制劑錠劑)中。每公升大腸桿菌培養物使用20-30ml溶解緩衝劑。細胞藉由音波處理溶解，且藉由用JA20轉子以12000rpm離心45-60分鐘清除溶胞物。以每公升細菌培養物300μl GST瓊脂糖凝膠快流型(GST Sepharose Fast Flow)(Amersham Biosciences)培育上清液。首先用PBS緩衝劑洗滌樹脂且最終用溶解緩衝劑平衡。在4℃下攪動4-5小時之後，用30體積溶解緩衝劑洗滌珠粒，且接著用30體積裂解緩衝劑(50mM Tris(pH 7.6)、150mM NaCl、1mM DTT、1mM EDTA)平衡。為自奧諾拉B裂解GST，添加每毫克底物10單位前切割蛋白酶(Prescission protease)(Amersham Biosciences)且在4℃下延長培育16小時。收集含有裂解產物之上清液且加載於用離子交換緩衝劑(50mM Tris(pH 7.6)、150mM NaCl、1mM DTT、1mM EDTA)平衡之6m1ResourceQ管柱(Amersham Biosciences)上。奧諾拉B/INCENP複合物收集於流經管柱之物流中。濃縮流經Resource Q管柱之物流且加載於用尺寸排阻層析(SEC)緩衝劑(Tris HCl 10mM(pH 7.6)、NaCl 150mM、DTT 1mM、EDTA 1 mM)平衡之Superdex 200 SEC管柱上。收集含有奧諾拉-B/INCENP之溶離份且使用Vivaspin濃縮器(MW cutoff 3-5K)濃縮至最終濃度為12mg/ml。最終產量為每公升細菌約1-2mg純複合物。在-80℃下將純化(wt)-有爪蟾蜍奧諾拉B60-361/INCENP790-847複合物儲存於去鹽緩衝劑(50mM Tris/Cl(pH 8.0)、150mM NaCl、0.1mM EDTA、0.03% Brij-35、10%丙三醇、1mM DTT)中。
分析條件：在連續抑制劑稀釋液存在或不存在下分析酶活性。對於激酶分析(反應體積50微升/孔)而言，使用96孔PP微定量盤(Greiner，655201)。向10μl化合物於25% DMSO中之溶液中添加：30μl PROTEIN-MIX(166μM ATP、激酶緩衝劑[50mM Tris/HCl(pH 7.5)、25mM MgCl2、25mM NaCl]、10ng wt-奧諾拉-B60-361/INCENP790-847)，隨後在室溫下培育15分鐘(攪動，350rpm)。向此溶液中添加10μl PEPTIDE-MIX(2倍激酶緩衝劑、5mM NaF、5mM DTT、1μCi 33P-ATP、50μM肽(生物素-LRRWSLGLRRWSLGLRRWSLGLRRWSLG))。在室溫下培育混合物60分鐘(攪動，350rpm)，隨後添加180μl 6.4% TCA(最終濃度：5%)以中止反應。隨後，用100μl 70%乙醇及1% TCA平衡多屏過濾板(Millipore，MAIP NOB 10)，之後添加中止之激酶反應物。在用180μl 1% TCA洗滌5次之後，乾燥板之下半部。添加25μl閃爍混合液(Microscint，高效LSC混合液，Packard，6013611)且用適當閃爍計數器量測合併之γ磷酸酯。
數據分析：將抑制劑濃度轉化成對數值且校正原始數據。使用此等校正值計算IC50值。使用S形曲線分析程式(Graph Pad Prism 3.0版)及可變希爾斜率(Hill slope)藉由迭代計算擬合數據。各微量滴定板含有內部對照物，諸如空白、最大反應程度之反應物及歷史參比化合物。
NCI-H460細胞中組蛋白H3磷酸化之分析：
將NCI-H460細胞以4000個細胞/孔之細胞密度接種於96孔平底Falcon板中。在第二天，藉由用300nM BIVC0030BS處理該等細胞16小時使其同步。此CDK1抑制劑使細胞停滯於G2。藉由用培養基洗滌一次使細胞自抑制G2阻斷釋放。同步進入有絲分裂在60分鐘之後產生高百分比(70-80%)之有絲分裂的細胞。將新鮮培養基及化合物添加至各孔中，各藥物濃縮物一式兩份。每孔之最終體積為200μl且測試化合物之最終濃度涵蓋在10μM與5nM之間的範圍內。最終DMSO濃度為0.1%。在37℃及5% CO2下於濕潤氛圍中培育細胞正好60分鐘。吸出培養基且在室溫下用100μl含有Triton X-100(1：200)之溫熱4%甲醛溶液固定且滲透細胞10分鐘。在用阻斷緩衝劑(0.3% BSA/PBS)洗滌兩次之後，在室溫下歷時1小時添加50μl以1：500稀釋之多株抗體抗磷酸H3(Ser28)之溶液。在用阻斷緩衝劑洗滌兩次之後，在室溫下在黑暗中用50μl山羊抗兔子F(ab)2片段Alexa Fluor 594(：2000)+DAPI(最終濃度為300nM)培育細胞1小時。洗滌該等板，添加200μl PBS，用黑色箔片密封該等板且用應用細胞週期生物應用程式之Cellomics ArrayScan分析。藉由程式PRISM(GraphPad Inc.)來分析產生於分析中之數據。將抑制劑濃度轉化成對數值且藉由非線性回歸曲線擬合(S形劑量-反應(可變斜率))計算EC50。
2.MEK激酶分析：
使用Invitrogen之Z'-LYTETM激酶分析量測化合物之MEK抑制活性。
Z'-LYTE®生物化學分析採用基於螢光之偶聯酶格式且基於磷酸化及非磷酸化肽對蛋白水解裂解之差異敏感性。肽底物用兩個螢光團標記，每端一個，組成FRET對。
在初級反應中，激酶將ATP之γ磷酸酯轉移至合成FRET肽中之單 一酪胺酸、絲胺酸或蘇胺酸殘基中。在二級反應中，位點特異性蛋白酶識別且裂解非磷酸化FRET肽。FRET肽之磷酸化藉由顯色劑抑止裂解。裂解破壞FRET肽上供體(亦即香豆素)與接受體(亦即螢光素)螢光團之間的FRET，而未裂解磷酸化FRET肽維持FRET。使用計算在400nm下激發供體螢光團之後供體發射與接受體發射之比率(發射比)的比例量測法定量反應進展，如以下方程所示：發射比=香豆素發射(445nM)/螢光素發射(520nM)。
裂解與未裂解之FRET肽皆有助於螢光信號且因此有助於發射比。FRET肽之磷酸化程度可由發射比計算。若FRET肽為磷酸化FRET肽(亦即無激酶抑制)，則保持低發射比，且若FRET肽為非磷酸化FRET肽(亦即激酶抑制)，則保持高發射比。
用1% DMSO(最終)將測試化合物篩檢於孔中。對於10點滴定，自起始濃度(1μM)進行3倍連續稀釋。
用適當激酶緩衝劑將所有肽/激酶混合物稀釋至2倍操作濃度。
用激酶緩衝劑(50mM HEPES(pH 7.5)，0.01% BRIJ-35、10mM MgCl2、1mM EGTA)將所有ATP溶液稀釋至4倍操作濃度。
預先使用Z'-LYTE®分析測定ATP表觀Km。
分析方案：
1. 2.5μL-4倍測試化合物或100nL 100倍加2.4μL激酶緩衝劑
2. 5μL-2倍肽/激酶混合物
3. 2.5μL-4倍ATP溶液
4. 30秒板震盪
5. 在室溫下激酶反應培育60分鐘
6. 5μL-顯色劑溶液
7. 30秒板震盪
8. 在室溫下顯色反應培育60分鐘
9. 經螢光板讀取器讀取且分析數據
MAP2K1(MEK1)特異性分析條件-級聯格式：
用50mM HEPES(pH 7.5)、0.01% BRIJ-35、10mM MgCl2、1mM EGTA製備2倍MAP2K1(MEK1)/非活性MAPK1(ERK2)/Ser/Thr 03混合物。最終10μL激酶反應物由存於50mM HEPES(pH 7.5)、0.01% BRIJ-35、10mM MgCl2、1mM EGTA中之1.29-5.18ng MAP2K1(MEK1)、105ng非活性MAPK1(ERK2)及2μM Ser/Thr 03組成。在激酶反應物培育1小時之後，添加5μL顯色劑A之1：1024稀釋液。
MAP2K2(MEK2)特異性分析條件-級聯格式：
用50mM HEPES(pH 7.5)、0.01% BRIJ-35、10mM MgCl2、1mM EGTA製備2倍MAP2K2(MEK2)/非活性MAPK1(ERK2)/Ser/Thr 03混合物。最終10μL激酶反應物由存於50mM HEPES(pH 7.5)、0.01% BRIJ-35、10mM MgCl2、1mM EGTA中之1.13-4.5ng MAP2K2(MEK2)、105ng非活性MAPK1(ERK2)及2μM Ser/Thr 03組成。在激酶反應物培育1小時之後，添加5μL顯色劑A之1：1024稀釋液。
Z'-LYTE®分析對照組：0%磷酸化對照組(100%抑制對照組)：最大發射比藉由不含ATP且因此不展示激酶活性之0%磷酸化對照組(100%抑制對照組)確定。此對照組在顯色反應中產生100%裂解肽。
100%磷酸化對照組：由與肽底物相同之序列之合成磷酸化肽組成的100%磷酸化對照組經設計以使得計算磷酸化百分比。
此對照組在顯色反應中產生極低百分比之裂解肽。
0%磷酸化及100%磷酸化對照組使得實現在特異性反應物孔中計算磷酸化百分比。對照孔不包括任何激酶抑制劑。
0%抑制對照組：篩檢中之最小發射比藉由含有活性激酶之0%抑制對照組確定。此對照組經設計以在激酶反應中產生10-70%磷酸化肽。
針對在相同板上作為激酶之各個激酶運作已知抑制劑(星形孢菌素IC50 MEK1/MEK2 14.7nM/15.2nM，在100μM ATP下)對照標準曲線，10點滴定，確保激酶在先前測定之預期IC50範圍內受到抑制。
顯色反應干擾：顯色反應干擾藉由比較不含ATP之測試化合物對照孔對0%磷酸化對照組(不含測試化合物)來確定。無干擾化合物之預期值應為100%。標記90%至110%範圍外之任何值。
測試化合物螢光干擾：測試化合物螢光干擾藉由比較不含激酶/肽混合物之測試化合物對照孔(零肽對照組)對0%抑制對照組來測定。無螢光化合物之預期值應為0%。標記大於20%之任何值。
製圖時使用來自IDBS之軟體XLfit。劑量反應曲線曲線擬合成205型號(S形劑量-反應模型)。若曲線之底部在-20%與20%抑制之間不擬合，則將其設為0%抑制。若曲線之頂部在70%與130%抑制之間不擬合，則將其設為100%抑制。
SK-MEL-28細胞中ERK磷酸化之分析：
基於快速活化細胞之ELISA(Fast actived cell-based ELISA；FACE)SK-MEL-28 p-ERK：細胞培養：使用補充有10%胎牛血清、2%碳酸氫鈉、1%丙酮酸鈉溶液、1% NEAA 100×及2mM L-麩胺醯胺之MEM培養基使SK-MEL28細胞(人類黑素瘤)在T75燒瓶中生長。在37℃及5% CO2下在濕潤氛圍中培育培養物，其中培養基變化或轉種一週進行2次。
分析條件：將7,500個細胞/孔/90微升培養基接種於96孔板(平底，Costar 3598號)中。
在第二天，用培養基(儲備溶液)稀釋或用培養基加10% DMSO(所有其他稀釋步驟)連續稀釋化合物(儲備液：10mM 100% DMSO溶液)。每孔添加10μl稀釋之化合物，DMSO之最終濃度為1%。測試化合物之濃度通常涵蓋在10微莫耳與最小2.4奈莫耳之間的範圍內。在37℃及5% CO2下於濕潤氛圍中培育細胞2小時。
移除上清液。在室溫下用150μl含4%甲醛之PBS固定細胞20分鐘。
用200μl含0.1% Triton X-100之PBS洗滌細胞層5次，每次歷時5分鐘，隨後用阻斷緩衝劑(含5%脫脂奶粉之TBS-T)培育90分鐘。
阻斷緩衝劑每孔用50μl一級抗體[單株抗MAP激酶二磷酸化Erk-1&2(Sigma，M8159號)；1：500 Verd.]替換且在4℃下培育隔夜。
用200μl含0.1% Triton X-100之PBS洗滌細胞層5次，每次歷時5分鐘。
每孔用50μl二級抗體[多株兔子抗小鼠HRPO偶聯，(Dako,P0161號)；用阻斷緩衝劑1：1000稀釋]培育細胞層1小時。
用200μl含0.1% Tween20之PBS洗滌細胞層5次，每次歷時5分鐘。
藉由在黑暗中每孔添加100μl染色溶液(TMB過氧化酶底物溶液；Bender MedSystems BMS406號)歷時5-30分鐘進行過氧化酶染色。藉由每孔添加100μl 1M磷酸中止反應。
用多標記讀取器(Wallac Victor 2)在450nm下量測染色。
使用S形曲線分析程式(Prism 3.0版，Graph PAD)及可變希爾斜率(FIFTY 2版)藉由迭代計算擬合數據。
活體內功效
用在裸小鼠中顯示各種致癌基因組特徵之標準人類腫瘤模型評估本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑之活體內功效：舉例而言，源自HCT116(K-RASG13G/D及PIK3CAH1047H/R突變體)、及Colo205(B-RAFV600E突變體)結腸癌瘤、NCI-H460(K-RASQ61H及PIK3CAE545K/E突變體)及Calu-6(K-RASQ61K及TP53R196*突變體)非小細胞肺瘤、BxPC-3(TP53Y220C突變體)胰臟瘤或黑素瘤A-375(B-RAFV600E突變體)細胞株之異種移植物為已確立之腫瘤學化合物之臨床前期評估模型。將腫瘤細胞皮下(s.c.)注射至裸小鼠之右側腹。另外，評估本發明之雙重MEK/奧諾拉B激酶抑制劑在MDR1過度表現之人類結腸癌瘤CxB1之裸小鼠異種移植物模型中之功效(CxB1腫瘤移植亦顯示K-RASG13D及TP53R175H及P72R突變)。將帶有平均體積為50-100mm3之已確立腫瘤之小鼠隨機化分成處理組及對照組。治療通常在腫瘤已達到約50mm3之中值體積時起始且持續3至6週。在異種移植實驗之前，在無腫瘤裸小鼠中，用耐受性測試測定最大耐受劑量(maximum tolerated dose；MTD)。較佳地，經口(p.o.)投與本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑。
用各別化合物進行有效處理之特徵為當以其各別MTD使用時一處理即生長延遲。較佳地，在所處理之動物中長期處理誘導腫瘤消退。MEK之藥效抑制可藉由測定ERK/MAPK(一種MEK之直接底物)之磷酸化狀態進行活體內監測。免疫組織化學分析證實目標抑制作用，顯示pERK腫瘤在所處理之動物中的含量相比於媒劑處理對照組明顯減少(>50%)。
奧諾拉B之藥效抑制可藉由測定組蛋白H3(一種奧諾拉B之底物)之磷酸化狀態進行活體內監測。免疫組織化學分析證實目標抑制作用，顯示磷酸化組蛋白H3腫瘤在所處理之動物中的含量相比於媒劑 處理對照組明顯減少(>50%)。
舉例而言，相較於對照腫瘤，在藉由以最大耐受劑量投與之例示性本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑處理之HCT-116結腸瘤中，奧諾拉B對組蛋白H3之磷酸化減少至少50%。
類似地，在A-375黑素瘤異種移植物中，所處理之腫瘤中的MEK底物ERK之磷酸化相較於對照組減少至少50%(或甚至更多)。
組合用於癌細胞增殖抑制之實驗程序
在37℃下，使細胞在5% CO2之濕潤氛圍中在如ATCC所表明之培養基中生長。將細胞接種於平底96孔微量滴定板中且在37℃下在5% CO2之濕潤氛圍中培育24小時。
添加化合物且同時固定「零時」未處理細胞板。將化合物自最高測試濃度(1或2μM)連續稀釋5倍且一式兩份對5種濃度進行分析。最終培養物中溶劑DMSO之濃度為0.1%。72小時培育期之後，用CellTiter 96Aqueous單溶液細胞增殖分析盒(Promega G3581號)染色細胞。使用Spectramax平台在490nm之波長下量測各孔之總吸光度。分析信號與培養孔中之細胞數目(「細胞計數」)相關。
將培育72小時之後對照細胞之細胞增殖分析輸出(對應於100%細胞增殖)視為所有隨後計算之參比細胞計數。根據下式計算經化合物處理之培養物中相對細胞生長抑制(CGI%)：
St 72=POC-化合物處理孔(t=72小時)
Sc 0=POC-對照孔(t=0小時)
Sc 72=POC-對照孔(t=72小時)
使用布利斯可加性模型(Bliss additivism model)鑑別協同作用。
比預計布利斯可加性模型過量之抑制藉由自各對濃度之實驗觀測之抑制減去預計布利斯效應來計算。
舉例而言，對於3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺(化合物A)與B-Raf抑制劑(亦即維羅非尼或達拉非尼)之組合而言，在該分析類型(CellTiter 96Aqueous單溶液細胞增殖分析盒-MTS(Promega G3581號)，培養板：96孔Edge板，Nunc 167314號；在於補充有10% FCS之培養基中生長、預先培育1小時且處理72小時之所示細胞株中測試各別組合處理)中獲得以下結果：
考慮對於各濃度所計算之CGI值及布利斯過量且如下將組合效應評級：組合效應之評級：
- 相比於單一療法無效
-/+ 低於相加
+ 相加
++ 高於相加
小鼠中之人類腫瘤異種移植物
使約六週齡之無胸腺雌性BomTac：NMRI-Foxnl nu 小鼠適應周圍條件至少五天，之後將其用於實驗。動物在標準條件下以7-10隻一組收容於Macrolon® III型籠中。任意提供標準飲食(PROVIMI KLIBA)及熱壓處理過之自來水。為確立皮下腫瘤，藉由胰蛋白酶處理收集細胞、 離心、洗滌且再懸浮於冰冷PBS+5% FCS中。視細胞類型而定，將含有約106至107個細胞之100μL細胞懸浮液皮下注射至裸小鼠之右側腹(每隻小鼠一個部位)。當腫瘤充分確立且體積已達到40-120mm3時，將小鼠隨機分佈於處理與媒劑對照組之間(細胞注射之後12天)。一週用測徑規量測腫瘤直徑三次(星期一、星期三及星期五)。根據式「腫瘤體積=長度×直徑2×π/6」計算各腫瘤之體積(以mm3計)。為監測處理之副作用，每天檢查小鼠之異常行為且一週測定體重三次(例如星期一、星期三及星期五)。在處理起始之後約十週研究結束時處死動物。出於倫理方面之原因，在研究期間提前處死具有壞死腫瘤或腫瘤尺寸超過1500mm3之動物。
為快速概述可能之處理效應，各處理組之中值腫瘤體積T與對照組之中值腫瘤體積C相關。第1天直至第d天之腫瘤生長抑制(Tumor growth inhibition；TGI)計算為：TGI=100×[(C d -C 1 )-(T d -T 1 )]/(Cd-C 1 )，其中‧C 1 及T 1 表示在第1天在實驗開始時對照組及處理組之中值腫瘤體積，且‧C d 及T d 表示在第d天在實驗結束時對照組及處理組之中值腫瘤體積。
人類黑素瘤異種移植物之處理敏感性
將腫瘤源自黑素瘤細胞株G361V600V/E之小鼠經口用B-Raf抑制劑維羅非尼以120mg/kg之劑量每天處理四次，或用3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺(化合物A)以10mg/kg之劑量每天處理四次或僅用媒劑處理。另外，小鼠經口用B-Raf抑制劑維羅非尼以120mg/kg之劑量每天處理四次組合用化合物A以10mg/kg之劑量每天處理四次。
下表概述分別用B-Raf抑制劑維羅非尼、化合物A或B-Raf抑制劑與化合物A之組合處理之裸小鼠中生長之黑素瘤異種移植物之敏感性：
以下圖1為顯示所得G361生長動力學之圖表。將帶有G361(黑素瘤)腫瘤之小鼠用B-Raf抑制劑維羅非尼、化合物A、其組合或用媒劑處理。將中值腫瘤體積隨時間繪圖。具有圓形之線顯示用媒劑處理，具有三角形之線顯示用維羅非尼處理，具有正方形之線顯示用化合物A處理且具有菱形之線顯示用維羅非尼與化合物A之組合處理。
圖2為顯示各別處理下體重隨時間變化之圖表。將中值體重變化隨時間繪圖。
圖2：
醫藥調配物之實例：
調配物之以下實例用以更充分說明本發明，而並非將其限於此等實例之內容。術語「活性物質」表示一或多種本發明化合物，尤其表示本發明之雙重奧諾拉激酶/MEK抑制劑或其與另一抗癌劑之組合。
將精細研磨之活性物質、乳糖及一些玉米澱粉混合在一起。將混合物篩選，接著用聚乙烯吡咯啶酮之水溶液濕潤，捏合，濕式造粒且乾燥。將顆粒、剩餘玉米澱粉及硬脂酸鎂篩選且混合在一起。將混合物壓縮以製成具有適當形狀及尺寸之錠劑。
將精細研磨之活性物質、一些玉米澱粉、乳糖、微晶纖維素及聚乙烯吡咯啶酮混合在一起，將混合物篩選且以剩餘玉米澱粉及水處理以形成顆粒，將其乾燥且篩選。添加及混合羥甲基澱粉鈉及硬脂酸鎂且壓縮該混合物以形成具有適當尺寸之錠劑。
將活性物質在水固有pH下或視情況在pH 5.5至6.5下溶解於水中，且添加氯化鈉以使其具等張性。過濾所獲得之溶液使其不含熱原質，且在無菌條件下將濾液轉移至安瓿瓶中，接著將其滅菌且藉由熔化密封。安瓶含有5mg、25mg及50mg之活性物質。
其他實例 合成結晶型3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺 步驟1，合成式(IV)之烯醇中間物：
反應流程：
合成之描述：
在氬氣逆流下，氮氣淨化之容器裝載起始物質6-碘吲哚啉酮(105kg，405mol，1.0當量)、催化劑4-二甲胺基吡啶(4-dimethylaminopyridine；DMAP)(2.52kg)。接著將三乙胺(145kg，3,5當量)及溶劑2-甲基四氫呋喃(605kg)裝入容器中且使所得溶液冷卻至-15℃至-5℃(優先-10℃)。在內部溫度為-10℃至50℃時在至少30分鐘內將苯甲醯氯(176.6kg，3.1當量)添加至此混合物中。
接著用2-甲基四氫呋喃(22kg)沖洗加料漏斗且在內部溫度為10至30℃時再攪拌反應混合物1小時。若起始物質6-碘吲哚啉酮之含量大於2.5面積%(HPLC)，則再添加一部分苯甲醯氯(5.7kg)以完成反應。若起始物質6-碘吲哚啉酮之含量小於2.5面積%(HPLC)，則以溫度控制方式添加大小不同之5份氫氧化鋰(59.4kg，6.0當量)(第一份：18.0kg，第二份：6.0kg，第三份：6.0kg，第四份：15.0kg，第五份：14.4kg)：在前兩份之後，攪拌混合物1小時。在第3份及第4份之後，攪拌混合物30分鐘。在最後一份之後，攪拌混合物兩小時。接著在內部溫度為20至30℃時攪拌反應混合物(懸浮液)至少12小時。若非分離式(V)之中間物之含量小於0.5面積%(HPLC)，則添加水(525L)且在攪拌下加熱混合物至內部溫度為60至70℃。接著關掉攪拌器，使混合物沈降且在內部溫度為60至70℃時分離各相。向上層有機層中添加水(525L)且在內部溫度為60至70℃時進行第二次相分離。(視情況，可在室溫下靜置混合物長達24小時。)接著將部分溶劑轉變成四氫呋 喃：在夾套溫度為70℃時蒸餾溶劑三次直至剩餘體積為390L，隨後添加四氫呋喃(第一份：233kg，第二份：233kg，第三份：117kg)。為進行結晶，首先添加甲醇(83kg)。
視情況，可在室溫下靜置混合物長達24小時。
其次，在內部溫度為60至70℃時添加水(112L)，隨後添加濃鹽酸(156.2kg)。用水(20L)沖洗加料漏斗。在至少70分鐘內使所得懸浮液冷卻至20至30℃(視情況，可在室溫下靜置混合物長達72小時)且接著在至少30分鐘內冷卻至內部溫度為-5至5℃。接著離心懸浮液且依序用水(368L)、甲醇(112kg)洗滌固體，且在夾套溫度為50℃時乾燥直至達到剩餘溶劑<=1%。獲得產率為84.6%之呈固體狀之式(IV)之烯醇產物。
步驟1之替代合成變化形式： 步驟1，合成式(IV)之烯醇中間物：
獲取30.00kg(115.81mol)6-碘吲哚啉酮，且添加0.71kg(5.79mol)4-二甲胺基吡啶及105.0公升二甲基甲醯胺。接著在無水條件下添加37.50kg(370.60mol)三乙胺且用15.0公升二甲基甲醯胺沖洗混合物。使懸浮液冷卻至5℃且在此溫度下量入34.19kg(243.21mol)苯甲醯氯。用30.0公升二甲基甲醯胺洗滌混合物。在5℃下攪拌反應混合物約1小時。在反應結束(HPLC)之後，添加46.32kg(579.06mol)技術級氫氧化鈉溶液(50%)與10.0公升純化水之混合物且用35.0公升純化水沖洗混合物。在20-25℃下攪拌反應混合物約1小時。反應結束(HPLC)之後，在20-25℃開始添加240.0公升純化水與58.20kg(590.64mol)濃鹽酸之混合物。在添加結束時將溫度調節至50℃。用30.0公升純化水沖洗混合物。在50℃下攪拌懸浮液1小時。接著離心出產物且用120.0公升升溫至50℃之純化水洗滌兩次。
將潮濕產物置於反應器中且添加300.0公升技術級丙酮。加熱懸 浮液至50℃，且接著添加90.01純化水與8.40kg(85.24mol)濃鹽酸之混合物。用120.0公升純化水稀釋混合物。使懸浮液冷卻至22℃且在此溫度下攪拌30分鐘。接著離心出式(IV)之產物，用30.0公升丙酮與30.0公升純化水之混合物洗滌兩次且於乾燥櫃中在45℃下乾燥。
視情況存在之步驟1a，再加工式(IV)之烯醇：
使50.00kg(82.61mol)式(IV)之烯醇懸浮於400.0公升技術級丙酮及200.0公升純化水中且加熱至回流溫度。伴隨攪拌回流懸浮液15分鐘。使混合物冷卻至20℃且攪拌30分鐘。離心出產物，用50.0公升技術級丙酮與25.0公升純化水之混合物洗滌兩次且於乾燥櫃中在50℃下乾燥。
步驟2，合成式(II)之烯胺中間物：
合成之描述：
在氮氣淨化容器中，使95kg(261.6mol)式(IV)之烯醇中間物懸浮於甲苯(315kg)中且加熱至內部溫度為85℃。在內部溫度為80至90℃時添加三甲基矽烷基咪唑(110.1kg)。用甲苯(41kg)沖洗加料漏 斗且在內部溫度為80至90℃時攪拌反應混合物至少10分鐘。接著經由加料漏斗添加4-二甲基胺基甲基苯胺(47.1kg)與甲苯(16kg)之混合物。用甲苯(41kg)沖洗加料漏斗。在回流下攪拌所得反應混合物10小時(視情況，可在<=80℃下攪拌混合物長達24小時)。若式(IV)之烯醇之含量小於1.0面積%(HPLC)，則使反應混合物冷卻至55至65℃，且以溫度控制之方式(內部溫度：55至65℃)將預先加熱之甲醇(413kg)添加至反應混合物中。使懸浮液冷卻至15至25℃且再攪拌至少30分鐘(視情況，可在室溫下攪拌混合物長達127小時)。接著離心產物且用甲醇(375kg)洗滌且在50℃下乾燥直至剩餘溶劑<=0.2%。獲得產率為90.6%呈黃色固體狀之式(II)產物。
步驟2之替代合成變化形式： 步驟2，合成式(II)之烯胺中間物：
使30.00kg(82.61mol)式(IV)之烯醇懸浮於120.0公升甲苯中且加熱至85℃。在85℃量入34.76kg(247.82mol)三甲基矽烷基咪唑，用15.0公升甲苯沖洗混合物且攪拌10分鐘。接著在85℃下添加14.89kg(99.13mol)4-二甲基胺基甲基苯胺且用15.0公升甲苯沖洗混合物。加熱反應混合物至回流溫度且伴隨攪拌回流10小時。在反應結束(HPLC)之後，使反應混合物冷卻至55℃且使得注入150.0公升甲醇。在55℃下攪拌懸浮液30分鐘，冷卻至20℃且再攪拌30分鐘。接著離心出式(II)之產物，用60.0公升甲醇洗滌兩次且於乾燥櫃中在60℃乾燥。
步驟3，合成粗式(I)化合物
反應流程：
合成之描述：
在恆定氬氣逆流下，氮氣淨化反應器快速裝載式(II)之烯胺中間物(80kg，161.5mol，1.0當量)、催化劑氯化雙三苯膦鈀(II)(2.84kg)、共催化劑碘化銅(I)(1.85kg)、配位體三苯基膦(0.43kg)及鹼碳酸鉀(44.7kg)。添加完成時，中止氬氣逆流且密封容器。接著依序添加溶劑N-甲基吡咯啶酮(168.4kg)、鹼N-甲基哌啶(48.4kg)。加熱混合物至內部溫度為40至50℃。接著在至少40分鐘內在內部溫度為40至55℃時向反應溶液中添加N-甲基吡咯啶酮(20.6kg)及起始物質丙炔酸乙醯胺(24.3kg)之溶液。用N-甲基吡咯啶酮(37.0kg)沖洗加料漏斗。在內部溫度為42至52℃時攪拌所得溶液至少60分鐘。若式(II)之烯胺中間物之含量小於1.0面積%(HPLC)，則添加二水合EDTA二鈉鹽(18.0kg)及N-乙醯基-L-半胱胺酸(7.9kg)且在內部溫度為60至70℃時攪拌反應混合物至少30分鐘。為進行沈澱，在內部溫度為55至65℃時在40至50分鐘內向反應混合物中依序添加丙酮(142.2kg)、第一份水(72L)。添加完成時，在內部溫度為55至65℃時再攪拌所得混合物25至35分鐘。接著在內部溫度為55至65℃時在50至70分鐘內添加第二份水(168L)且再攪拌所得混合物15至25分鐘。
視情況，在內部溫度為55至65℃時將濃鹽酸(82.0kg)添加至懸浮液中直至pH值為7.5至8.0。添加完成時，在內部溫度為55至65℃時再攪拌懸浮液5至15分鐘。
視情況，此時可關掉攪拌器且可使懸浮液冷卻至室溫。若進行 此操作，則隨後將溶液加熱至55至65℃，且在此溫度下保持懸浮至少15分鐘。
接著分批離心溶液且隨後依序用水(225L，調節至55至60℃)及水/丙酮之混合物(130L/102.7kg，調節至55至60℃)洗滌。接著在夾套溫度為70℃下乾燥分離之產物直至剩餘溶劑含量小於3.0%且丙酮含量小於1.0%(GC)。獲得產率為73%之呈黃色固體狀之式(I)之產物。
在視情況存在之替代步驟中，使用起始物質丙炔酸乙醯胺及N-甲基吡咯啶酮或第三丁基甲醚之預先形成之溶液。
步驟3之替代合成變化形式： 步驟3，合成粗式(I)化合物
將20.00kg(40.37mol)式(II)之烯胺、708.5g(1.009mol)氯化雙三苯膦鈀(II)、461.4g(2.42mol)碘化銅(I)，105.9g(0.404mol)三苯基膦及11.16kg(80.75mol)碳酸鉀脫氣且與35.0公升脫氣之N-甲基吡咯啶酮混合。添加12.01kg(121.12mol)1-甲基哌啶且用6.0公升脫氣之N-甲基吡咯啶酮沖洗混合物。加熱反應器內含物至50℃。在50℃，在45分鐘內添加7.84kg(80.75mol)丙炔酸乙醯胺與10.0公升脫氣之N-甲基吡咯啶酮之混合物。用9.0公升脫氣之N-甲基吡咯啶酮沖洗混合物。在50℃攪拌30分鐘。在反應結束(藉由HPLC監測)之後，在50℃添加4.51kg(12.11mol)二水合EDTA二鈉鹽及1.98kg(12.11mol)N-乙醯基-L-半胱胺酸且攪拌混合物30分鐘。使得注入45.0公升技術級丙酮。接著在50℃在1小時內使得注入18.0公升純化水。在50℃攪拌混合物30分鐘。在50℃在30分鐘內添加42.0公升純化水且在50℃攪拌混合物1小時。用過濾乾燥器分離產物且用33.3公升純化水與33.3公升技術級丙酮之混合物分3批洗滌。接著用56.7公升純化水分2批洗滌混合物。在50℃真空乾燥式(I)產物直至獲得可排出一致性。
步驟3a，用正丙醇濕磨
將來自先前步驟之式(I)之產物放回反應器中。添加140.7公升正丙醇ACE且加熱混合物至回流溫度。伴隨攪拌回流30分鐘。在2小時內冷卻反應器內含物至22℃。按壓反應器內含物通過過濾乾燥器。用28.1公升正丙醇ACE洗滌式(I)之產物且在50℃真空乾燥。
步驟4，再結晶式(I)化合物
合成之描述：
在氬氣逆流下，氮氣淨化容器裝載粗式(I)化合物(60.0kg)。接著該容器裝入溶劑二甲亞碸(456.4kg)及丙酮(200kg)。
視情況，混合物可在室溫靜置72小時。
在至少30分鐘內加熱所得混合物至內部溫度為45至55℃。接著在內部溫度為45至55℃時再攪拌混合物15分鐘直至獲得澄清溶液，且接著過濾(精緻過濾)至第二清潔容器(夾套溫度預先加熱至45至55℃)中。第一容器裝入二甲亞碸(19.2kg)及丙酮(6.0kg)，加熱混合物至45至55℃，且接著經由過濾器沖洗至第二容器中。
視情況，混合物可在室溫下靜置72小時。
加熱混合物至45至55℃且在內部溫度為45至55℃時在至少120分鐘內添加水(200L)。在至少90分鐘內使所得懸浮液冷卻至內部溫度為15至25℃。
視情況，混合物可在室溫下靜置72小時。
分批離心懸浮液，用水(720L)洗滌且乾燥直至剩餘溶劑含量小 於0.5%。獲得產率為90%之呈黃色固體狀之式(I)之結晶產物。
步驟4之替代合成變化形式： 步驟4，再結晶式(I)化合物
將105.0公升技術級二甲亞碸與44.0公升技術級丙酮之混合物加熱至50℃。添加15.0kg(32.29mol)粗式(I)產物。用1.0公升技術級丙酮沖洗混合物。在50℃攪拌10分鐘，接著過濾澄清液至第二反應器中。用7.5公升技術級二甲亞碸與22.5公升技術級丙酮之混合物沖洗。在50℃在4小時內將75.0公升純化水逐滴添加至濾液中。在1.5小時內使混合物冷卻至20℃，在20℃攪拌30分鐘且按壓通過過濾乾燥器。用60.0公升純化水洗滌過濾乾燥器中之產物三次。在50℃真空乾燥式(I)之產物。

Claims (36)

  1. 一種化合物，其為呈結晶型之具有式(I)之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基(meth-(Z)-ylidene)]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺 或其互變異構體或醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其為3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。
  3. 一種化合物，其為3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其特徵在於X射線粉末圖中尤其具有特徵值d=3.95Å、4.31Å、4.40Å、4.71Å及8.51Å。
  4. 一種化合物，其為3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有實質上根據圖1中所示之x射線繞射圖案。
  5. 一種化合物，其為3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其特徵在於單位晶胞參數約等於以下： 單斜晶胞具有下列晶胞大小：a=9.6242(18)Å，b=30.086(8)Å，c=9.5745(23)Å，ß=112.360(20)°，V=2563.9(8)Å3，及空間群P21/c。
  6. 一種化合物，其為3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有實質上根據圖2中所示之DSC及/或TG熱曲線。
  7. 一種化合物，其為3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型，其具有約T熔化>278℃之熔化溫度。
  8. 一種化合物，其為自二甲亞碸與丙酮之溶劑混合物結晶之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型。
  9. 如請求項2至8中任一項之化合物，其中該3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型為無水形式。
  10. 如請求項2至8中任一項之化合物，其中該3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之結晶自由鹼型可由以下製備：a)在高溫下形成3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺於二甲亞碸與丙酮之混合物中之溶液，且視情況過濾該熱溶液； b)將水逐滴添加至該熱溶液中，以誘導結晶；c)在適當溫度-時間曲線內冷卻該熱溶液或懸浮液以進一步結晶；d)過濾或離心所得懸浮液以分離固體物質；及e)洗且乾燥該結晶物質。
  11. 一種醫藥組合物，其含有如請求項1至10中任一項之化合物，視情況連同一或多種惰性載劑、稀釋劑及/或賦形劑一起。
  12. 一種如請求項1至10中任一項之化合物之用途，其係用於製造用以治療及/或預防可受抑制MEK及/或奧諾拉激酶(Aurora kinase)影響之病症的藥劑。
  13. 一種如請求項1至10中任一項之化合物之用途，其係用於製造用以治療患有選自以下癌症類型之患者的藥劑：帶有KRAS突變之結腸直腸癌(CRC)，帶有野生型KRAS之結腸直腸癌(CRC)，帶有KRAS突變之胰臟癌(PAC)，帶有野生型KRAS之胰臟癌(PAC)，帶有BRAF突變之黑素瘤，帶有野生型BRAF之黑素瘤，帶有NRAS突變之黑素瘤，及/或帶有KRAS突變之非小細胞肺癌(NSCLC)；其中該藥劑視情況組合使用或進一步包含一或多種其他抗癌劑。
  14. 如請求項13之用途，其中該KRAS突變係在KRAS之密碼子12、13或61中選自Gly12Asp、Gly12Val、Gly13Asp、Gly12Cys、Gly12Ser、Gly12Ala及Gly12Arg；或選自12D、12V、12C、12A、12S、12R、 12F、13D、13C、13R、13S、13A、13V、13I、61H、61L、61R、61K、61E及61P；及/或其中該BRAF突變係在BRAF V600中選自V600E、V600G、V600A、V600K、V600D及V600R，或選自V600E、V600G、V600A、V600K、V600D、V600M及V600R；及/或其中該NRAS突變係在NRAS之密碼子12、13或61中。
  15. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係用作第一線、第二線或第三線治療。
  16. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係用作單一治療。
  17. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含一或多種選自由以下組成之群的其他抗癌劑：卡西他濱(capecitabine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、達卡巴嗪(dacarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、福莫司汀(fotemus-tine)、伊立替康(irinotecan)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇(doce-taxel)、血管生成抑制劑、VEGF(R)抑制劑、EGF(R)抑制劑、IGF(R)抑制劑、抗CTLA4抗體、BRaf抑制劑、mTOR抑制劑、雙重PI3K/mTOR抑制劑、AKT抑制劑及PI3K抑制劑。
  18. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含一或多種選自由以下組成之群的其他抗癌劑：卡西他濱、5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑、順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、替莫唑胺、福莫司汀、伊立替康、吉西他濱、培美曲塞、太平洋紫杉醇、多烯紫杉醇、貝伐單抗(bevacizumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、埃羅替尼(erlotinib)、伊匹單抗(ipilimumab)、芬妥木單抗(figitumumab)、達妥珠單抗 (dalotuzumab)、西妥木單抗(cixutumumab)、蓋尼塔單抗(ganitu-mab)、BMS-754807、OSI-906(林西替尼(linsitinib))、PLX-4032(維羅非尼(vemurafenib))、GSK-2118436(達拉非尼(dabra-fenib))、AZD-8055、BEZ-235、BKM-120、MK-2206、阿法替尼(afatinib)及尼特達尼(nintedanib)。
  19. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含EGF(R)抑制劑。
  20. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含VEGF(R)抑制劑。
  21. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含IGF(R)抑制劑。
  22. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含BRaf抑制劑。
  23. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含抗CTLA4抗體。
  24. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含mTOR抑制劑。
  25. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含雙重PI3K/mTOR抑制劑。
  26. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含AKT抑制劑。
  27. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含PI3K抑制劑。
  28. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步包含阿法替尼。
  29. 如請求項12、13或14之用途，其中該藥劑係組合使用或進一步 包含尼特達尼。
  30. 一種3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其醫藥學上可接受之鹽及BRaf抑制劑之用途，其係用於製造用以治療患者癌症之藥劑。
  31. 如請求項30之用途，其中該BRaf抑制劑為PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)。
  32. 如請求項30或31之用途，其中該癌症為黑素瘤癌症。
  33. 如請求項30或31之用途，其中該等患者為腫瘤帶有BRaf V600突變之患者。
  34. 一種3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其醫藥學上可接受之鹽組合BRaf抑制劑之用途，該BRaf抑制劑為PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)，其係用於製造用以治療及/或預防如請求項12至15中任一項中所述病症之藥劑。
  35. 一種套組，其含有3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺或其醫藥學上可接受之鹽之醫藥組合物及BRaf抑制劑PLX-4032(維羅非尼)或GSK-2118436(達拉非尼)之醫藥組合物，該等組分同時、並行、依序、連續、交替或分開使用。
  36. 一種製備如請求項1或10之3-{3-[1-(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-1-苯基-亞甲-(Z)-基]-2-側氧基-2,3-二氫-1H-吲哚-6-基}-丙炔酸乙醯胺之方法，其包含：使6-碘吲哚啉酮轉化成3-(羥基-苯基-亞甲基)-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮；使3-(羥基-苯基-亞甲基)-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮或其互變異 構體與4-二甲基胺基甲基苯胺反應形成3-[(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-苯基-亞甲基]-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮；使3-[(4-二甲胺基甲基-苯胺基)-苯基-亞甲基]-6-碘-1,3-二氫-吲哚-2-酮與丙炔酸乙醯胺在適合催化劑存在下，視情況在含有銅之共催化劑存在下反應形成標題化合物；視情況研磨及/或結晶該標題化合物。
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