TW201408696A - 抗cd22抗體及免疫結合物 - Google Patents
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Abstract
本發明提供抗CD22抗體及免疫結合物以及其使用方法。
Description
本發明係關於包含抗CD22抗體之免疫結合物及其使用方法。
諸如CD19、CD22及CD52之B細胞抗原代表具有用於治療淋巴瘤之治療潛力的目標(Grillo-Lopez A.J.等人,Curr Pharm Biotechnol,2:301-11,(2001))。CD22為一種僅在成熟分化階段表現在B細胞表面上之135-kDa B細胞限制性唾液酸醣蛋白(sialoglycoprotein)(Dorken,B.等人,J.Immunol.136:4470-4479(1986))。CD22在人類中之主要形式為CD22β,其在細胞外域中含有7個免疫球蛋白超家族域(Wilson,G.L.等人,J.Exp.Med.173:137-146(1991))。一種變異形式CD22α缺乏免疫球蛋白超家族域3及4(Stamenkovic,I.及Seed,B.,Nature 345:74-77(1990))。已顯示人類CD22之配體結合與免疫球蛋白超家族域1及2(亦稱為抗原決定基1及2)相關(Engel,P.等人,J.Exp.Med.181:1581-1586,1995)。
B細胞相關病症包括(但不限於)惡性淋巴瘤(非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin's Lymphoma),NHL)、多發性骨髓瘤及慢性淋巴細胞性白血病(CLL,B細胞白血病(CD5+ B淋巴細胞))。非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)為一組主要起因於B淋巴細胞之異質癌症,其佔所有新近診斷癌症之約4%(Jemal,A.等人,CA-Cancer J Clin,52:23-47,(2002))。侵襲性NHL佔成人NHL之約30-40%(Harris,N.L.等人,Hematol.J.1:53-
66(2001))且包括彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、套膜細胞淋巴瘤(MCL)、周邊T細胞淋巴瘤及退行性大細胞淋巴瘤。一線組合化學療法治癒之侵襲性NHL患者少於半數,且大多數患者最終死於其疾病(Fisher,R.I.Semin.Oncol.27(增刊12):2-8(2000))。
在B細胞NHL中,在侵襲性群體及無痛群體中,CD22表現分別在91%至99%之範圍內(Cesano,A.等人,Blood 100:350a(2002))。CD22可充當B細胞活化複合物之組分(Sato,S.等人,Semin.Immunol.10:287-296(1998))與黏著分子(Engel,Pl等人,J.Immunol.150:4719-4732(1993))兩者。CD22缺乏小鼠之B細胞具有較短壽命及增強之細胞凋亡,此表明此抗原在B細胞存活中具有作用(Otipoby,K.L.等人,Nature(Lond)384:634-637(1996))。在與其天然配體或抗體結合之後,CD22快速內化,從而在初級B細胞中提供共刺激信號且在贅生性B細胞中提供促細胞凋亡信號(Sato,S.等人,Immunity 5:551-562(1996))。
此項技術中對靶向CD22以供診斷及治療CD22相關病狀,諸如癌症之藥劑存在需要。本發明滿足彼需要且提供其他益處。
本發明提供抗CD22抗體及免疫結合物以及其使用方法。
在一些實施例中,提供一種包含共價連接於細胞毒性劑之結合CD22之抗體的免疫結合物,其中該抗體結合SEQ ID NO:28之胺基酸20至240內之抗原決定基。在一些實施例中,細胞毒性劑為奈莫柔比星(nemorubicin)衍生物。
在一些實施例中,抗體包含(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3,及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2。在一些實施例中,抗體包含(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-
H3。在一些實施例中,抗體包含:a)(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3,(iv)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1,(v)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(vi)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3;或b)(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3,(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1,(v)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(vi)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在一些實施例中,抗體包含:a)(i)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3;或b)(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在一些實施例中,抗體包含:a)與胺基酸序列SEQ ID NO:7具有至少95%序列一致性之VH序列;或b)與胺基酸序列SEQ ID NO:8具有至少95%序列一致性之VL序列;或c)如(a)中之VH序列及如(b)中之VL序列。在一些實施例中,抗體包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:7之VH序列。在一些實施例中,抗體包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:6之VL序列或具有胺基酸序列SEQ ID NO:8之VL序列。在一些實施例中,抗體為IgG1、IgG2a或IgG2b抗體。
在一些實施例中,提供一種包含共價連接於細胞毒性劑之結合CD22之抗體的免疫結合物,其中該抗體包含(a)具有胺基酸序列SEQ ID NO:7之VH序列及具有胺基酸序列SEQ ID NO:8之VL序列,且其中該細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
在一些實施例中,免疫結合物具有式Ab-(L-D)p,其中:(a)Ab為
抗體;(b)L為連接子;(c)D為細胞毒性劑;且(d)p在1-8之範圍內。
在一些實施例中,D為奈莫柔比星衍生物。在一些此等實施例中,D具有選自以下之結構:
在一些實施例中,免疫結合物包含可由蛋白酶裂解之連接子。
在一些此等實施例中,連接子包含val-cit二肽或Phe-高Lys二肽。在一些實施例中,免疫結合物包含酸不穩定性連接子。
在一些實施例中,免疫結合物具有選自以下之式:
其中R1及R2係獨立地選自H及C1-C6烷基。在一些實施例中,p在1-3之範圍內。
在一些實施例中,提供一種免疫結合物,其中該免疫結合物具有選自以下之式:
其中Ab為抗體,其包含(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3,(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1,(v)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(vi)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3;且其中p在1至3之範圍內。在一些此等實施例中,抗體包含VH序列SEQ ID NO:7及VL序列SEQ ID NO:8。在一些實施例中,抗體包含重鏈SEQ ID NO:26及輕鏈SEQ ID NO:23。
在本文論述之任何實施例中,抗體可為單株抗體。在一些實施例中,抗體可為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。在一些實施例中,抗體為結合CD22之抗體片段。在一些實施例中,抗體結合人類CD22。在一些此等實施例中,人類CD22具有序列SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:29。
在一些實施例中,提供醫藥調配物,其中該調配物包含本文所
述之免疫結合物及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中,醫藥調配物包含另一治療劑。
在一些實施例中,提供治療患有CD22陽性癌症之個體之方法。在一些實施例中,方法包含向個體投與有效量之本文所述之免疫結合物。在一些實施例中,CD22陽性癌症係選自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)及套膜細胞淋巴瘤。在一些實施例中,方法進一步包含向個體投與另一治療劑。在一些此等實施例中,另一治療劑包含結合CD79b之抗體。在一些實施例中,另一治療劑為包含共價連接於細胞毒性劑之結合CD79b之抗體的免疫結合物。
在一些實施例中,提供一種治療患有CD22陽性癌症之個體之方法,其中該CD22陽性癌症對第一治療劑具有抗性。在一些實施例中,該方法包含向個體投與有效量之本文所述之免疫結合物。在一些實施例中,CD22陽性癌症係選自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。在一些實施例中,第一治療劑包含結合除CD22以外之抗原之第一抗體。在一些實施例中,第一治療劑為包含結合除CD22以外之抗原之第一抗體及第一細胞毒性劑的第一免疫結合物。在一些實施例中,第一抗體結合CD79b。在一些實施例中,第一治療劑包含結合CD22之第一抗體。在一些實施例中,第一治療劑為包含結合CD22之第一抗體及第一細胞毒性劑的第一免疫結合物。
在一些實施例中,第一細胞毒性劑與本文所述之免疫結合物之細胞毒性劑不同。在一些實施例中,第一細胞毒性劑為MMAE。在一些實施例中,第一細胞毒性劑為吡咯并苯并二氮呯。在一些實施例中,第一細胞毒性劑為美登木素(maytansinoid)。在一些實施例中,對第一治療劑具有抗性之CD22陽性癌症表現P-醣蛋白(P-gp)。
在一些實施例中,提供一種治療患有CD22陽性癌症之個體之方法,其中該CD22陽性癌症表現P-gp。在一些實施例中,該方法包含向個體投與有效量之本文所述之免疫結合物。在一些實施例中,CD22陽性/P-gp陽性癌症係選自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。在一些實施例中,CD22陽性/P-gp陽性癌症比對照細胞或組織表現更高含量之P-gp mRNA及/或蛋白質。
在一些實施例中,提供一種抑制CD22陽性細胞增殖之方法。在一些此等實施例中,該方法包含在容許免疫結合物結合細胞表面上之CD22的條件下使細胞暴露於本文所述之免疫結合物,藉此抑制細胞之增殖。在一些實施例中,細胞為贅生性B細胞。在一些實施例中,細胞為淋巴瘤細胞。
圖1A-1B:圖1A顯示鼠類10F4抗CD22抗體(m10F4)之重鏈可變區之胺基酸序列與人類化10F4形式1(hu10F4v1)重鏈可變區及人類化10F4形式3(hu10F4v3)重鏈可變區的比對及與人類子組III序列的比對。對HVR加框(HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3)。包圍HVR之序列為構架序列(FR-H1至FR-H4)。序列係根據Kabat編號加以編號。Kabat、Chothia及接觸CDR在加框HVR附近加以指示。圖1B顯示鼠類10F4抗
CD22抗體(m10F4)之輕鏈可變區之胺基酸序列與人類化10F4形式1(hu10F4v1)輕鏈可變區及人類化10F4形式3(hu10F4v3)輕鏈可變區的比對及與人類κI序列的比對。抗體hu10F4v3在HVR-L1之胺基酸28(N28V)處不同於hu10F4v1。對HVR加框。FR-L1、FR-L2、FR-L3及FR-L4序列包圍HVR(HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3)。序列係根據Kabat編號加以編號。Kabat、Chothia及接觸CDR在加框HVR附近加以指示。
圖2顯示人類化抗CD22抗體10F4v3(IgG1同型)之輕鏈及重鏈之全長胺基酸序列(可變區及恆定區)。加下劃線部分為恆定域。
圖3顯示抗CD22半胱胺酸工程改造抗體之胺基酸序列,其中改變輕鏈或重鏈或Fc區以將所選胺基酸位置上之胺基酸置換為半胱胺酸。所示半胱胺酸工程改造抗體包括抗CD22 10F4變異型輕鏈,其中使Kabat位置205上之纈胺酸(序列位置纈胺酸210)改變成半胱胺酸(「抗CD22 V205C h10Fv3半胱胺酸工程改造輕鏈」);抗CD22 10F4變異型重鏈,其中使EU位置118上之丙胺酸(序列位置丙胺酸121)改變成半胱胺酸(「抗CD22 A118C h10Fv3半胱胺酸工程改造重鏈」);及抗CD22 10F4變異型Fc區,其中使EU位置400上之絲胺酸(序列位置絲胺酸403)改變成半胱胺酸(「抗CD22 S400C h10Fv3半胱胺酸工程改造Fc區」)。在各圖中,改變之胺基酸以加有雙下劃線之粗體文本顯示。單下劃線指示恆定區。可變區不加下劃線。
圖4顯示實例A中所述之(A)10F4v3-PNU-2;及(B)10F4v3-PNU-1之連接子及藥物結構。
圖5顯示如實例B中所述,各種抗體-藥物結合物在WSU-DLCL2小鼠異種移植物模型中之功效。
圖6顯示如實例C中所述,各種抗體-藥物結合物在Granta-519小鼠異種移植物模型中之功效。
圖7顯示如實例D中所述,各種抗體-藥物結合物在SuDHL4-luc小鼠異種移植物模型中之功效。
圖8顯示如實例E中所述,在SuDHL4-luc小鼠異種移植物模型中10F4v3-PNU-1對腫瘤生長之劑量依賴性抑制。
圖9顯示如實例F中所述,在Bjab-luc小鼠異種移植物模型中10F4v3-PNU-1對腫瘤生長之劑量依賴性抑制。
圖10顯示如實例G中所述,如藉由FACS所測定,P-gp在BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1及BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1抗性細胞中及在穩定表現P-gp之Bjab-luc細胞中之表現。
圖11顯示如實例G中所述,PNU-159682對穩定表現P-gp之Bjab-luc細胞之劑量依賴性抑制。
圖12顯示如實例G中所述,10F4v3-MMAE及10F4v3-PNU-1在BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1抗性細胞異種移植物模型中之功效。
圖13顯示如實例H中所述,如藉由FACS所測定,P-gp在WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1及WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1抗性細胞中之表現。
圖14顯示如實例H中所述,10F4v3-MMAE及10F4v3-PNU-1在WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1抗性細胞異種移植物模型中之功效。
I.定義
出於本文之目的,「接受體人類構架」為以下構架:其包含源於如以下定義之人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架的胺基酸序列。「源於」人類免疫球蛋白
構架或人類共同構架之接受體人類構架可包含其相同胺基酸序列,或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中,胺基酸變化數目為10或10以下、9或9以下、8或8以下、7或7以下、6或6以下、5或5以下、4或4以下、3或3以下、或2或2以下。在一些實施例中,VL接受體人類構架在序列方面與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架序列相同。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總和之強度。除非另外指示,否則如本文所用,「結合親和力」係指反映結合對之成員(例如抗體及抗原)之間的1:1相互作用之內在結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力可通常由解離常數(Kd)表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所述者)加以量測。量測結合親和力之特定說明性及示範性實施例在下文中描述。
「親和力成熟」抗體係指相較於在一或多個高變區(HVR)中不具有一或多個改變之親本抗體,具有此等改變之抗體,此等改變會導致抗體對抗原之親和力得到改良。
術語「抗CD22抗體」及「結合CD22之抗體」係指能夠以足以使抗體在靶向CD22時適用作診斷劑及/或治療劑之親和力結合CD22之抗體。在一個實施例中,抗CD22抗體結合無關非CD22蛋白質之程度小於抗體與CD22之結合之約10%,如例如藉由放射免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中,結合CD22之抗體之解離常數(Kd)為1μM、100nM、10nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如10-8M或10-8M以下,例如10-8M至10-13M,例如10-9M至10-13M)。在某些實施例中,抗CD22抗體結合CD22中在來自不同物種之CD22中保守的抗原決定基。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結
構,包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段,只要其展現所要抗原結合活性即可。
「抗體片段」係指非完整抗體之分子,其包含完整抗體之一部分且結合完整抗體所結合之抗原。抗體片段之實例包括(但不限於)Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2;微型雙功能抗體;線性抗體;單鏈抗體分子(例如scFv);及由抗體片段形成之多特異性抗體。
作為參照抗體之「結合相同抗原決定基之抗體」係指在競爭分析中使參照抗體與其抗原之結合被阻斷50%或50%以上之抗體,且反之,參照抗體在競爭分析中使該抗體與其抗原之結合被阻斷50%或50%以上。本文提供一示範性競爭分析。
術語「癌症」及「癌性」係指或描述哺乳動物之特徵通常在於細胞生長/增殖不受調控之生理病狀。癌症之實例包括(但不限於)黑素瘤、癌瘤、淋巴瘤(例如霍奇金氏及非霍奇金氏淋巴瘤)、母細胞瘤、肉瘤及白血病。癌症之更特定實例包括B細胞相關癌症,包括例如高級、中級及低級淋巴瘤(包括B細胞淋巴瘤,諸如黏膜相關淋巴組織B細胞淋巴瘤及非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、套膜細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、邊緣區淋巴瘤、彌漫性大細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、及霍奇金氏淋巴瘤及T細胞淋巴瘤)及白血病(包括繼發性白血病、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)(諸如B細胞白血病(CD5+ B淋巴細胞))、骨髓性白血病(諸如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病)、淋巴細胞性白血病(諸如急性淋巴母細胞性白血病(ALL))及骨髓發育不良)、及其他血液系統癌症及/或B細胞或T細胞相關癌症。亦包括其他造血細胞之癌症,該等細胞包括多形核白血球(諸如嗜鹼性球、嗜酸性球、嗜中性球)及單核細胞、樹突細胞、血小板、紅血球及天然殺傷細胞。亦包括選自以下之癌性B細胞增生病症:淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性
NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)及套膜細胞淋巴瘤。B細胞癌症之起源包括如下:邊緣區B細胞淋巴瘤起源於邊緣區中之記憶B細胞,濾泡性淋巴瘤及彌漫性大B細胞淋巴瘤起源於生髮中心之明區(light zone)中之中心細胞,慢性淋巴細胞性白血病及小淋巴細胞性白血病起源於B1細胞(CD5+),套膜細胞淋巴瘤起源於套膜區中之天然B細胞且伯基特氏淋巴瘤起源於生髮中心之暗區(dark zone)中之中心母細胞。在本文中稱為「造血細胞組織」之包括造血細胞之組織包括胸腺及骨髓及周邊淋巴組織,諸如脾、淋巴結、與黏膜相關之淋巴組織(諸如腸管相關淋巴組織、扁桃腺、派亞氏淋巴叢(Peyer's patches)及闌尾)及與其他黏膜相關之淋巴組織,例如支氣管內襯(bronchial lining)。此等癌症之其他特定實例包括鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、胰腺癌、神經膠質瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝細胞瘤、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝癌(liver cancer)、前列腺癌、陰門癌、甲狀腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、白血病及其他淋巴細胞增生性病症及各種類型之頭頸部癌。
本文之「B細胞惡性疾病」包括非霍奇金氏淋巴瘤(NHL),包括低級/濾泡性NHL、小淋巴細胞性(SL)NHL、中級/濾泡性NHL、中級彌漫性NHL、高級免疫母細胞性NHL、高級淋巴母細胞性NHL、高級小非分裂細胞NHL、巨大腫塊疾病NHL、套膜細胞淋巴瘤、AIDS相關淋巴瘤及瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、淋巴細胞佔優性霍奇金氏病(LPHD)、小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、慢性淋巴細胞性白血病
(CLL)、無痛NHL,包括復發無痛NHL及利妥昔單抗(rituximab)難治性無痛NHL;白血病,包括急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、毛細胞白血病、慢性骨髓母細胞性白血病;伯基特氏淋巴瘤;套膜細胞淋巴瘤;及其他血液學惡性疾病。此等惡性疾病可用針對B細胞表面標記(諸如CD22)之抗體治療。此等疾病在本文中預期藉由投與針對B細胞表面標記(諸如CD22)之抗體加以治療,且包括投與未結合(「裸」)抗體或結合於如本文揭露之細胞毒性劑之抗體。此等疾病在本文中亦預期藉由組合療法加以治療,該組合療法包括本發明之抗CD22抗體或抗CD22抗體藥物結合物與同時或連續投與之另一抗體或抗體藥物結合物、另一細胞毒性劑、放射或其他治療的組合。在一示範性治療方法中,抗CD22免疫結合物係與抗CD79b抗體、免疫球蛋白或其CD79b結合片段組合共同或依序投與。抗CD79b抗體可為裸抗體或抗體藥物結合物。在另一示範性治療方法中,抗CD22免疫結合物係與抗CD20抗體、免疫球蛋白或其CD20結合片段組合共同或依序投與。抗CD20抗體可為裸抗體或抗體藥物結合物。在組合療法之一些實施例中,抗CD22免疫結合物係與Rituxan®(利妥昔單抗)一起投與。
如本文所用之術語「非霍奇金氏淋巴瘤」或「NHL」係指除霍奇金氏淋巴瘤以外之淋巴系統癌症。霍奇金氏淋巴瘤可通常根據在霍奇金氏淋巴瘤中存在里德-斯特恩伯格細胞(Reed-Sternberg cell)而在非霍奇金氏淋巴瘤中不存在該等細胞來與非霍奇金氏淋巴瘤進行區分。由如本文所用之該術語涵蓋之非霍奇金氏淋巴瘤的實例包括將由熟習此項技術者(例如腫瘤學家或病理學家)根據此項技術中已知之分類流程,諸如如Color Atlas of Clinical Hematology(第3版),A.Victor Hoffbrand及John E.Pettit(編)(Harcourt Publishers有限公司,2000)中所述之修訂歐洲-美國淋巴瘤(Revised European-American
Lymphoma,REAL)流程鑒別為此淋巴瘤之任何淋巴瘤。特別參見圖11.57、11.58及11.59中之清單。更特定實例包括(但不限於)復發或難治NHL、一線低級NHL、III/IV期NHL、化學療法抗性NHL、前驅B淋巴母細胞性白血病及/或淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、B細胞慢性淋巴細胞性白血病及/或前淋巴細胞性白血病及/或小淋巴細胞性淋巴瘤、B細胞前淋巴細胞性淋巴瘤、免疫細胞瘤及/或淋巴漿細胞性淋巴瘤、淋巴漿細胞性淋巴瘤、邊緣區B細胞淋巴瘤、脾邊緣區淋巴瘤、結外邊緣區-MALT淋巴瘤、結節性邊緣區淋巴瘤、毛細胞白血病、漿細胞瘤及/或漿細胞骨髓瘤、低級/濾泡性淋巴瘤、中級/濾泡性NHL、套膜細胞淋巴瘤、濾泡中心淋巴瘤(濾泡性)、中級彌漫性NHL、彌漫性大B細胞淋巴瘤、侵襲性NHL(包括侵襲性一線NHL及侵襲性復發NHL)、在自體幹細胞移植之後復發或為自體幹細胞移植所難治之NHL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤、高級免疫母細胞性NHL、高級淋巴母細胞性NHL、高級小非分裂細胞NHL、巨大腫塊疾病NHL、伯基特氏淋巴瘤、前驅體(周邊)大顆粒淋巴細胞性白血病、蕈樣真菌病及/或塞紮萊症候群(Sezary syndrome)、皮膚(皮膚性)淋巴瘤、退行性大細胞淋巴瘤、血管中心淋巴瘤。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分源於特定來源或物種,而重鏈及/或輕鏈之其餘部分源於不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區之類型。存在五個主要抗體類別:IgA、IgD、IgE、IgG及IgM,且若干此等類別可進一步分成子類(同型),例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同免疫球蛋白類別之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或導致細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包括(但不限於)放射性同
位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素);化學治療劑或藥物(例如甲胺蝶呤(methotrexate)、阿德力黴素(adriamicin)、長春花生物鹼(長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、依託泊苷(etoposide))、小紅莓(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C(mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、道諾黴素(daunorubicin)或其他插入劑);生長抑制劑;酶及其片段,諸如核分解酶;抗生素;毒素,諸如小分子毒素或細菌、真菌、植物或動物來源之酶活性毒素,包括其片段及/或變異體;及以下揭露之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。
「化學治療劑」為適用於治療癌症之化合物。化學治療劑之實例包括烷基化劑,諸如噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN®);烷基磺酸鹽,諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及保釋芬(piposulfan);氮丙啶,諸如本多帕(benzodopa)、卡巴醌(carboquone)、米特多帕(meturedopa)及優多帕(uredopa);伸乙亞胺及甲基蜜胺(methylamelamine),包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(triethylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphoramide)及三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine);多聚乙醯(acetogenin)(尤其布拉它辛(bullatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone));δ-9-四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol),MARINOL®);β-拉帕醌(beta-lapachone);拉帕醇(lapachol);秋水仙素(colchicine);樺木酸(betulinic acid);喜樹鹼(camptothecin)(包括合成類似物拓撲替康(topotecan)(HYCAMTIN®)、CPT-11(伊立替康(irinotecan),CAMPTOSAR®)、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、莨菪素(scopolectin)及9-胺基喜樹鹼(aminocamptothecin));苔蘚抑素
(bryostatin);凱利他汀(callystatin);CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物);鬼臼毒素(podophyllotoxin);足葉草酸(podophyllinic acid);替尼泊苷(teniposide);念珠藻素(cryptophycin)(特定言之念珠藻素1及念珠藻素8);多拉司他汀(dolastatin);倍癌黴素(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1);軟珊瑚醇(eleutherobin);潘卡他汀(pancratistatin);匍枝珊瑚醇(sarcodictyin);海綿抑制素(spongistatin);氮芥,諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、二氯甲基二乙胺氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、松龍苯芥(prednimustine)、氯乙環磷醯胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard);亞硝基脲,諸如卡莫司汀(carmustine)、吡葡亞硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine);抗生素,諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin),尤其卡奇黴素γ1I及卡奇黴素ωI1(參見例如Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994));達內黴素(dynemicin),包括達內黴素A;埃斯培拉黴素(esperamicin);以及新抑癌素(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、重氮絲胺酸(azaserine)、博萊黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓
(doxorubicin)(包括N-嗎啉基-小紅莓、氰基(N-嗎啉基)-小紅莓、2-(N-吡咯基)-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycin)(諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、波弗黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代謝物,諸如甲胺蝶呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物,諸如二甲葉酸(denopterin)、甲胺蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate);嘌呤類似物,諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine);嘧啶類似物,諸如環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine);雄激素(androgen),諸如二甲睾酮(calusterone)、屈他雄酮丙酸鹽(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾內酯(testolactone);抗腎上腺劑,諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);葉酸(folic acid)補充劑,諸如弗羅林酸(frolinic acid);乙醯葡醛酯(aceglatone);醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside);胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid);恩尿嘧啶(eniluracil);安吖啶(amsacrine);倍曲布西(bestrabucil);比生群(bisantrene);依達曲沙(edatraxate);地佛法明(defofamine);地美可辛(demecolcine);地吖醌(diaziquone);
依洛尼塞(elfornithine);依利醋銨(elliptinium acetate);埃博黴素(epothilone);依託格魯(etoglucid);硝酸鎵(gallium nitrate);羥基脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);洛尼代寧(lonidainine);美登木素,諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin);米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫匹丹莫(mopidanmol);二胺硝吖啶(nitraerine);噴司他汀(pentostatin);苯來美特(phenamet);吡柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(losoxantrone);2-乙基醯肼;丙卡巴肼(procarbazine);PSK®多醣複合物(JHS Natural Products,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);根黴素(rhizoxin);西索菲蘭(sizofiran);螺旋鍺(spirogermanium);細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid);三亞胺醌(triaziquone);2,2',2"-三氯三乙胺;新月毒素(trichothecene)(尤其T-2毒素、維拉庫林A(verracurin A)、桿孢菌素A(roridin A)及蛇形菌素(anguidine));烏拉坦(urethan);長春地辛(vindesine)(ELDISINE®,FILDESIN®);達卡巴嗪(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴衛矛醇(mitolactol);哌泊溴烷(pipobroman);格塞圖辛(gacytosine);阿拉伯糖苷(arabinoside)(「Ara-C」);噻替派(thiotepa);紫杉烷(taxoid),例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL®;Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、ABRAXANETM無聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor-free)之白蛋白工程改造太平洋紫杉醇奈米粒子調配物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)及多西他賽(docetaxel)(TAXOTERE®;Rhône-Poulenc Rorer,Antony,France);苯丁酸氮芥(chloranbucil);吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR®);6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine);巰基嘌呤(mercaptopurine);甲胺蝶呤;鉑類似物,諸如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin);長春花鹼(vinblastine)(VELBAN®);鉑;依託泊苷(VP-16);異環磷醯胺;米托
蒽醌;長春新鹼(vincristine)(ONCOVIN®);奧沙利鉑(oxaliplatin);亞葉酸(leucovovin);長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE®);諾安托(novantrone);依達曲沙(edatrexate);道諾黴素(daunomycin);胺基蝶呤(aminopterin);伊班膦酸鹽(ibandronate);拓撲異構酶抑制劑RFS 2000;二氟甲基鳥胺酸(DMFO);類視色素(retinoid),諸如視黃酸(retinoic acid);卡培他濱(capecitabine)(XELODA®);任何上述各物之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物;以及兩種或兩種以上上述各物之組合,諸如CHOP,亦即環磷醯胺、小紅莓、長春新鹼及潑尼松龍(prednisolone)之組合療法之縮寫;CVP,亦即環磷醯胺、長春新鹼及潑尼松龍之組合療法之縮寫;及FOLFOX,已即使用奧沙利鉑(ELOXATINTM)與5-FU及亞葉酸組合之治療方案之縮寫。
「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區之彼等生物活性,其隨抗體同型而變化。抗體效應功能之實例包括:C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC);Fc受體結合;抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC);吞噬作用;細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調;及B細胞活化。
藥劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在必需劑量下且持續必需時期,有效達成所要治療或防治結果之量。
術語「抗原決定基」係指抗原分子上抗體所結合之特定位點。
本文之術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之含有恆定區之至少一部分之C末端區。該術語包括天然序列Fc區及變異型Fc區。在一個實施例中,人類IgG重鏈Fc區自Cys226或Pro230延伸至重鏈之羧基末端。然而,Fc區之C末端離胺酸(Lys447)可存在或可不存在。除非本文另外規定,否則Fc區或恆定區中之胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統,亦稱為EU索引,如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,National
Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
「構架」或「FR」係指除高變區(HVR)殘基以外之可變域殘基。可變域之FR通常由四個FR域組成:FR1、FR2、FR3及FR4。因此,HVR及FR序列通常按以下順序出現在VH(或VL)中:FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換使用來表示具有與天然抗體結構實質上類似之結構或具有含有如本文定義之Fc區之重鏈的抗體。
術語「CD22之糖基化形式」係指藉由添加碳水化合物殘基而經轉譯後修飾的CD22之天然存在之形式。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指其中已引入外源性核酸之細胞,包括此等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型體」及「轉型細胞」,其包括初級轉型細胞及源於其之子代而不考慮繼代數目。子代在核酸內含物方面可能不完全與母細胞相同,而是可能含有突變。本文包括具有如在原始轉型細胞中所篩檢或選擇之相同功能或生物活性之突變型子代。
「人類抗體」為具有某一胺基酸序列之抗體,該胺基酸序列對應於由人類或人類細胞產生或源於利用人類抗體譜系或其他人類抗體編碼序列之非人類來源之抗體的胺基酸序列。人類抗體之此定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類共同構架」為代表在人類免疫球蛋白VL或VH構架序列之選擇中最常存在之胺基酸殘基的構架。一般而言,人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之子組。一般而言,序列子組為如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中之子組。在一個實施例中,對於VL,子組為如Kabat等人(上文)中之子組κ I。在
一個實施例中,對於VH,子組為如Kabat等人(上文)中之子組III。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中,人類化抗體將包含至少一個且通常兩個可變域之實質上全部,其中全部或實質上全部HVR(例如CDR)對應於非人類抗體之HVR,且全部或實質上全部FR對應於人類抗體之FR。人類化抗體視情況可包含源於人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體(例如非人類抗體)之「人類化形式」係指已經受人類化之抗體。
如本文所用之術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域之在序列方面高度可變及/或形成結構確定環(「高變環」)之各區。一般而言,天然四鏈抗體包含六個HVR;三個在VH中(H1、H2、H3),且三個在VL中(L1、L2、L3)。HVR通常包含來自高變環之胺基酸殘基及/或來自「互補決定區」(CDR)之胺基酸殘基,後者具有最高序列可變性及/或參與抗原識別。示範性高變環存在於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)處。(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)。)示範性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)存在於L1之胺基酸殘基24-34、L2之胺基酸殘基50-56、L3之胺基酸殘基89-97、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-65及H3之胺基酸殘基95-102處。(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)。)除VH中之CDR1之外,CDR通常包含形成高變環之胺基酸殘基。CDR亦包含作為接觸抗原之殘基之「特異性決定殘基」或「SDR」。SDR包含在CDR之稱為縮短CDR或a-CDR之區域內。示範性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2及a-CDR-H3)存在於L1之胺基酸殘基31-34、L2之胺基酸殘基
50-55、L3之胺基酸殘基89-96、H1之胺基酸殘基31-35B、H2之胺基酸殘基50-58及H3之胺基酸殘基95-102處。(參見Almagro及Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)。)除非另外指示,否則HVR殘基及可變域中之其他殘基(例如FR殘基)在本文中係根據Kabat等人(上文)加以編號。
「免疫結合物」為結合於一或多個異源分子(包括(但不限於)細胞毒性劑)之抗體。
「個體」或「受試者」為哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)馴化動物(例如母牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物,諸如猴)、兔及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。在某些實施例中,個體或受試者為人類。
「經分離抗體」為已與天然環境之組分分離之抗體。在一些實施例中,將抗體純化至純度大於95%或99%,如藉由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)所測定。對於評估抗體純度之方法之評述,參見例如Flatman等人,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
「經分離核酸」係指已與天然環境之組分分離之核酸分子。經分離核酸包括通常含有核酸分子之細胞中所含之核酸分子,但核酸分子係存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置之染色體位置上。
「編碼抗CD22抗體之經分離核酸」係指一或多個編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之核酸分子,包括在單一載體或各別載體中之此(等)核酸分子及存在於宿主細胞中之一或多個位置上之此(等)核酸分子。
除非另外指示,否則如本文所用之術語「CD22」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然CD22,該脊椎動物來源包括哺乳動物,諸
如靈長類動物(例如人類、食蟹獼猴(cynomolgus monkey)(cyno))及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」未加工CD22以及CD22之由在細胞中加工所產生之任何形式。該術語亦涵蓋CD22之天然存在之變異體,例如拼接變異體、對偶基因變異體及同功異型物。
CD22之主要同功異型物(CD22β)包含847個胺基酸且在細胞外域中包含7個免疫球蛋白樣區(參見Wilson,G.L.等人,J.Exp.Med.173:137-146(1991))。次要同功異型物CD22α包含647個胺基酸且在細胞外域中缺乏免疫球蛋白樣域3及4(參見Stamenkovic,I.及Seed,B.,Nature 345:74-77(1990))及Wilson等人(1991),上文)。一示範性人類CD22β前驅體(具有信號序列)之胺基酸序列展示於SEQ ID NO:28中。一示範性人類成熟CD22β(無信號序列)之胺基酸序列展示於SEQ ID NO:29中。一示範性人類CD22α前驅體(具有信號序列)之胺基酸序列展示於SEQ ID NO:30中。一示範性人類成熟CD22α(無信號序列)之胺基酸序列展示於SEQ ID NO:31中。
術語「CD22陽性癌症」係指包含在表面上表現CD22之細胞之癌症。
術語「CD22陽性細胞」係指在表面上表現CD22之細胞。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體之群體獲得之抗體,亦即除可能之變異型抗體(例如含有天然存在之突變或在製造單株抗體製劑之期間產生之突變,此等變異體通常以少量存在)之外,構成該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原決定基。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體之多株抗體製劑不同,單株抗體製劑之各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。因此,修飾語「單株」指示如自實質上均質抗體群體獲得之抗體之特性,且不應解釋為需要藉由任何特定方法來製造抗體。舉例而言,欲根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製備,該等技術包括(但不限於)
融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體呈現方法及利用含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座之轉殖基因動物之方法,此等方法及製備單株抗體之其他示範性方法在本文中描述。
「裸抗體」係指未結合於異源部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記之抗體。裸抗體可存在於醫藥調配物中。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然存在之免疫球蛋白分子。舉例而言,天然IgG抗體為約150,000道爾頓(dalton)之雜四聚醣蛋白,由經二硫鍵鍵結之兩個相同輕鏈及兩個相同重鏈構成。自N末端至C末端,各重鏈具有可變區(VH),亦稱為可變重域或重鏈可變域,隨後為三個恆定域(CH1、CH2及CH3)。類似地,自N末端至C末端,各輕鏈具有可變區(VL),亦稱為可變輕域或輕鏈可變域,隨後為恆定輕(CL)域。抗體之輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列指定為稱為κ及λ之兩種類型之一。
術語「包裝插頁」用於代表慣常包括在治療產品之商業包裝中之說明書,其含有關於適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症及/或涉及此等治療產品之使用之警告的資訊。
關於參照多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比,且不考慮任何保守性取代作為序列一致性之一部分之後,候選序列中與參照多肽序列中之胺基酸殘基相同的胺基酸殘基之百分比。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的之比對可以屬於此項技術中之技能之多種方式達成,該等方式例如使用可公開獲得之電腦軟體,諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定適用於比對序列之參數,包括在所比較之序列之全長上達成最大對準所需之任何算法。然而,出於本文目的,使用序列比較電腦程式ALIGN-2產生胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程式由
Genentech公司創造,且原始碼已與用戶文件一起在美國版權辦公室(U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559)備案,其中其在美國版權登記號TXU510087下登記。ALIGN-2程式可公開自Genentech公司(South San Francisco,California)獲得,或可自原始碼編譯。ALIGN-2程式應經編譯以在UNIX操作系統(包括數位UNIX V4.0D)上使用。所有序列比較參數皆由ALIGN-2程式設置且不改變。
在ALIGN-2用於胺基酸序列比較之情形下,指定胺基酸序列A對於、與或相對於指定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(其可替代地措詞為指定胺基酸序列A具有或包含對於、與或相對於指定胺基酸序列B之某一胺基酸序列一致性%)係如下計算:100×分數X/Y
其中X為藉由序列比對程式ALIGN-2在彼程式進行A與B比對時計分為相同匹配之胺基酸殘基數,且其中Y為B中之胺基酸殘基總數。應瞭解當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時,A對於B之胺基酸序列一致性%將不等於B對於A之胺基酸序列一致性%。除非另外明確陳述,否則本文使用之所有胺基酸序列一致性%值皆係使用ALIGN-2電腦程式如前一段落中所述來獲得。
術語「醫藥調配物」係指以下製劑:其呈允許其中所含之活性成分之生物活性有效之形式,且不含對將投與調配物之個體具有不可接受毒性之額外組分。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成分以外之對個體無毒的成分。醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本文所用,「治療(treatment)」(及其語法變化形式,諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指企圖改變所治療個體之天然病程,且可為達成防治或在臨床病變過程中進行之臨床介入。合乎需要
之治療效果包括(但不限於)防止疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理學後果、防止轉移、降低疾病進展速率、改善或緩解疾病病況及緩和或改良預後。在一些實施例中,本發明之免疫結合物用於延遲疾病發展或減緩疾病進展。
術語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與抗體結合抗原之域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)通常具有類似結構,其中各域包含四個保守構架區(FR)及三個高變區(HVR)。(參見例如Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91頁(2007)。)單一VH或VL域可能足以賦予抗原結合特異性。此外,結合特定抗原之抗體可使用來自結合該抗原之抗體之VH或VL域來分離以分別篩檢互補VL或VH域之文庫。參見例如Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993);Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
如本文所用之術語「載體」係指核酸分子,其能夠使其所連接之另一核酸增殖。該術語包括呈自我複製核酸結構之載體,以及併入其已引入之宿主細胞之基因組中的載體。某些載體能夠指導與其可操作地連接之核酸之表現。此等載體在本文中稱為「表現載體」。
「烷基」為含有正鏈碳原子、第二碳原子、第三碳原子或環狀碳原子之C1-C18烴。實例為甲基(Me、-CH3)、乙基(Et、-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr、正丙基、-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr、異丙基、-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu、正丁基、-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu、異丁基、-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu、第二丁基、-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu、第三丁基、-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基、-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-
1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3。
如本文所用之術語「C1-C8烷基」係指具有1至8個碳原子之直鏈或分支鏈飽和或不飽和烴。代表性「C1-C8烷基」包括(但不限於)-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基、-正辛基、-正壬基及-正癸基;而分支鏈C1-C8烷基包括(但不限於)-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基、-異戊基、2-甲基丁基,不飽和C1-C8烷基包括(但不限於)-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基、3-己基、-乙炔基、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、-2-戊炔基、-3-甲基-1-丁炔基。C1-C8烷基可未經取代或經一或多個包括(但不限於)以下之基團取代:-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-SO3R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN;其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
如本文所用之術語「C1-C6烷基」係指具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈飽和或不飽和烴。代表性「C1-C6烷基」包括(但不限於)-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基及-正己基;而分支鏈C1-C6烷基包括(但不限於)-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基、-異戊
基及2-甲基丁基;不飽和C1-C6烷基包括(但不限於)-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基及-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基及3-己基。C1-C6烷基可未經取代或經一或多個如上對於C1-C8烷基所述之基團取代。
如本文所用之術語「C1-C4烷基」係指具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈飽和或不飽和烴。代表性「C1-C4烷基」包括(但不限於)-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基;而分支鏈C1-C4烷基包括(但不限於)-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基;不飽和C1-C4烷基包括(但不限於)-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基及-異丁烯基。C1-C4烷基可未經取代或經一或多個如上對於C1-C8烷基所述之基團取代。
「烷氧基」為單鍵鍵結於氧之烷基。示範性烷氧基包括(但不限於)甲氧基(-OCH3)及乙氧基(-OCH2CH3)。「C1-C5烷氧基」為具有1至5個碳原子之烷氧基。烷氧基可未經取代或經一或多個如上對於烷基所述之基團取代。
「烯基」為具有至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp2雙鍵)之含有正鏈碳原子、第二碳原子、第三碳原子或環狀碳原子之C2-C18烴。實例包括(但不限於):乙烯基(ethylene/vinyl;-CH=CH2)、烯丙基(-CH2CH=CH2)、環戊烯基(-C5H7)及5-己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH=CH2)。「C2-C8烯基」為具有至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp2雙鍵)之含有2至8個正鏈碳原子、第二碳原子、第三碳原子或環狀碳原子之烴。
「炔基」為具有至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp參鍵)之含有正鏈碳原子、第二碳原子、第三碳原子或環狀碳原子之C2-C18烴。實例包括(但不限於):乙炔基(-C≡CH)及炔丙基(-CH2C≡CH)。「C2-C8炔
基」為具有至少一個不飽和位點(亦即碳-碳sp參鍵)之含有2至8個正鏈碳原子、第二碳原子、第三碳原子或環狀碳原子之烴。
「伸烷基」係指具有1-18個碳原子且具有藉由自母體烷烴之同一或兩個不同碳原子移除兩個氫原子所獲得之兩個單價基團中心的飽和分支鏈或直鏈或環狀烴基團。典型伸烷基包括(但不限於):亞甲基(-CH2-)、1,2-乙基(-CH2CH2-)、1,3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)及其類似基團。
「C1-C10伸烷基」為具有式-(CH2)1-10-之直鏈飽和烴基團。C1-C10伸烷基之實例包括亞甲基、伸乙基、伸丙基、伸丁基、伸戊基、伸己基、伸庚基、伸辛基、伸壬基及伸癸基。
「伸烯基」係指具有2-18個碳原子且具有藉由自母體烯烴之同一或兩個不同碳原子移除兩個氫原子所獲得之兩個單價基團中心的不飽和分支鏈或直鏈或環狀烴基團。典型伸烯基包括(但不限於):1,2-伸乙基(-CH=CH-)。
「伸炔基」係指具有2-18個碳原子且具有藉由自母體炔烴之同一或兩個不同碳原子移除兩個氫原子所獲得之兩個單價基團中心的不飽和分支鏈或直鏈或環狀烴基團。典型伸炔基包括(但不限於):伸乙炔基(-C≡C-)、炔丙基(-CH2C≡C-)及4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。
「芳基」係指碳環芳族基團。芳基之實例包括(但不限於)苯基、萘基及蒽基。碳環芳族基團或雜環芳族基團可未經取代或經一或多個包括(但不限於)以下之基團取代:-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN;其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C5-C20芳基」為在碳環芳族環中具有5至20個碳原子之芳基。
C5-C20芳基之實例包括(但不限於)苯基、萘基及蒽基。C5-C20芳基可如上對於芳基所述經取代或未經取代。「C5-C14芳基」為在碳環芳族環中具有5至14個碳原子之芳基。C5-C14芳基之實例包括(但不限於)苯基、萘基及蒽基。C5-C14芳基可如上對於芳基所述經取代或未經取代。
「伸芳基」為如以下結構中所示,具有兩個共價鍵且可呈鄰位、間位或對位組態之芳基:
其中苯基可未經取代或經至多四個包括(但不限於)以下之基團取代:-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN;其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「芳基烷基」係指非環烷基,其中一個鍵結於碳原子(通常為末端或sp3碳原子)之氫原子經芳基置換。典型芳基烷基包括(但不限於)苯甲基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘并苯甲基、2-萘并苯基乙-1-基及其類似基團。芳基烷基包含6至20個碳原子,例如芳基烷基之烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)為1至6個碳原子且芳基部分為5至14個碳原子。
「雜芳基烷基」係指非環烷基,其中一個鍵結於碳原子(通常為末端或sp3碳原子)之氫原子經雜芳基置換。典型雜芳基烷基包括(但不限於)2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基及其類似基團。雜芳基烷基包含6至20個碳原子,例如雜芳基烷基之烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)為1至6個碳原子且雜芳基部分為5至14個碳原子以及1至3個選自
N、O、P及S之雜原子。雜芳基烷基之雜芳基部分可為具有3至7個環成員(2至6個碳原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環,例如:雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。
「經取代之烷基」、「經取代之芳基」及「經取代之芳基烷基」分別意謂一或多個氫原子各自獨立地經取代基置換之烷基、芳基及芳基烷基。典型取代基包括(但不限於)-X、-R、-O-、-OR、-SR、-S-、-NR2、-NR3、=NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N=C=O、-NCS、-NO、-NO2、=N2、-N3、NC(=O)R、-C(=O)R、-C(=O)NR2、-SO3 -、-SO3H、-S(=O)2R、-OS(=O)2OR、-S(=O)2NR、-S(=O)R、-OP(=O)(OR)2、-P(=O)(OR)2、-PO- 3、-PO3H2、-C(=O)R、-C(=O)X、-C(=S)R、-CO2R、-CO2 -、-C(=S)OR、-C(=O)SR、-C(=S)SR、-C(=O)NR2、-C(=S)NR2、-C(=NR)NR2,其中各X獨立地為鹵素:F、Cl、Br或I;且各R獨立地為-H、C2-C18烷基、C6-C20芳基、C3-C14雜環、保護基或前藥部分。如上所述之伸烷基、伸烯基及伸炔基亦可類似地經取代。
「雜芳基」及「雜環」係指一或多個環原子為雜原子(例如氮、氧及硫)之環系統。雜環基團包含3至20個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子。雜環可為具有3至7個環成員(2至6個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至3個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環,例如:雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。
示範性雜環例如描述於Paquette,Leo A.,「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」(W.A.Benjamin,New York,1968),特定言之第1、3、4、6、7及9章;「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs」(John Wiley & Sons,New York,1950出版),
特定言之第13、14、16、19及28卷;及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566中。
雜環之實例包括(例如而不限於)吡啶基、二氫吡啶基、四氫吡啶基(哌啶基)、噻唑基、四氫噻吩基、硫氧化四氫噻吩基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、噻萘基、吲哚基、吲哚烯基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯啶基、2-吡咯啶酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、雙-四氫呋喃基、四氫哌喃基、雙-四氫哌喃基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、八氫異喹啉基、吖辛基、三嗪基、6H-1,2,5-噻二嗪基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻蒽基、哌喃基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、2H-吡咯基、異噻唑基、異噁唑基、吡嗪基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、萘啶基、喹噁啉基、喹唑啉基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、啡啶基、吖啶基、嘧啶基、啡啉基、啡嗪基、啡噻嗪基、呋呫基、啡噁嗪基、異基、基、咪唑啶基、咪唑啉基、吡唑啶基、吡唑啉基、哌嗪基、吲哚啉基、異吲哚啉基、啶基、嗎啉基、噁唑啶基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、羥吲哚基、苯并噁唑啉基及靛紅醯基。
舉例而言且不加限制地,碳鍵結雜環係在以下位置處鍵結:吡啶之2、3、4、5或6位;噠嗪之3、4、5或6位;嘧啶之2、4、5或6位;吡嗪之2、3、5或6位;呋喃、四氫呋喃、硫呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之2、3、4或5位;噁唑、咪唑或噻唑之2、4或5位;異噁唑、吡唑或異噻唑之3、4或5位;氮丙啶之2或3位;氮雜環丁烷之2、3或4位;喹啉之2、3、4、5、6、7或8位;或異喹啉之1、3、4、5、6、7或8位。更通常地,碳鍵結雜環包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-噠嗪基、4-噠嗪基、5-噠嗪基、6-噠嗪
基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
舉例而言且不加限制地,氮鍵結雜環係在以下位置處鍵結:氮丙啶、氮雜環丁烷、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑之1位;異吲哚或異吲哚啉之2位;嗎啉之4位;及咔唑或β-咔啉之9位。更通常地,氮鍵結雜環包括1-氮丙啶基、1-氮雜環丁烷基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基及1-哌啶基。
「C3-C8雜環」係指芳族或非芳族C3-C8碳環,其中一至四個環碳原子係獨立地經來自由O、S及N組成之群之雜原子置換。C3-C8雜環之代表性實例包括(但不限於)苯并呋喃基、苯并噻吩、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基、異喹啉基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、喹啉基、嘧啶基、吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、噠嗪基、異噻唑基、異噁唑基及四唑基。C3-C8雜環可未經取代或經至多七個包括(但不限於)以下之基團取代:-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN;其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C8雜環基」係指以上定義之C3-C8雜環基團,其中雜環基團之一個氫原子經鍵置換。C3-C8雜環基可未經取代或經至多六個包括(但不限於)以下之基團取代:-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN;其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳
基。
「碳環」意謂具有3至7個碳原子呈單環形式,或具有7至12個碳原子呈雙環形式之飽和或不飽和環。單環碳環具有3至6個環原子,更通常具有5或6個環原子。雙環碳環具有例如排列為雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統之7至12個環原子、或排列為雙環[5,6]或[6,6]系統之9或10個環原子。單環碳環之實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環庚基及環辛基。
「C3-C8碳環」為3、4、5、6、7或8員飽和或不飽和非芳族碳環。代表性C3-C8碳環包括(但不限於)-環丙基、-環丁基、-環戊基、-環戊二烯基、-環己基、-環己烯基、-1,3-環己二烯基、-1,4-環己二烯基、-環庚基、-1,3-環庚二烯基、-1,3,5-環庚三烯基、-環辛基及-環辛二烯基。C3-C8碳環基團可未經取代或經一或多個包括(但不限於)以下之基團取代:-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R'、-OC(O)R'、-C(O)OR'、-C(O)NH2、-C(O)NHR'、-C(O)N(R')2-NHC(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)R'、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R')、-N(R')2及-CN;其中各R'係獨立地選自H、-C1-C8烷基及芳基。
「C3-C8碳環基」係指以上定義之C3-C8碳環基團,其中碳環基團之一個氫原子經鍵置換。
「連接子」係指包含共價鍵或原子鏈之使抗體共價連接於藥物部分之化學部分。在各種實施例中,連接子包括二價基團,諸如烷基二基、芳基二基、雜芳基二基、諸如-(CR2)nO(CR2)n-之部分、烷基氧基之重複單元(例如聚伸乙基氧基、PEG、聚亞甲基氧基)及烷基胺基之重複單元(例如聚伸乙基胺基,JeffamineTM);及二酸酯及醯胺,包括丁二酸酯、丁二醯胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯及己醯胺。在各種實
施例中,連接子可包含一或多個胺基酸殘基,諸如纈胺酸、苯丙胺酸、離胺酸及高離胺酸。
術語「對掌性」係指分子具有鏡像搭配物之不可重疊性之性質,而術語「非對掌性」係指分子可重疊在其鏡像搭配物上。
術語「立體異構體」係指具有相同化學組成,但關於原子或基團在空間中之排列不同之化合物。
「非鏡像異構體」係指具有兩個或兩個以上對掌性中心且分子不為彼此之鏡像之立體異構體。非鏡像異構體具有不同物理性質,例如熔點、沸點、光譜性質及反應性。非鏡像異構體之混合物可在諸如電泳及層析之高解析度分析程序下分離。
「鏡像異構體」係指化合物之彼此為不可重疊鏡像之兩種立體異構體。
本文使用之立體化學定義及慣例通常遵循S.P.Parker編,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book公司,New York;及Eliel,E.及Wilen,S.,Stereochemistry of Organic Compounds(1994)John Wiley & Sons公司,New York。許多有機化合物以光學活性形式存在,亦即其能夠使平面偏振光之平面旋轉。在描述光學活性化合物時,字首D及L或R及S用於表示分子圍繞其對掌性中心之絕對組態。字首d及l或(+)及(-)用於表明化合物使平面偏振光旋轉之記號,其中(-)或l意謂化合物為左旋的。字首為(+)或d之化合物為右旋的。對於指定化學結構,此等立體異構體為相同的,除其為彼此之鏡像以外。特定立體異構體亦可稱為鏡像異構體,且此等異構體之混合物常稱為鏡像異構混合物。鏡像異構體之50:50混合物稱為外消旋混合物或外消旋物,其可在化學反應或過程中不存在立體選擇性或立體特異性時出現。術語「外消旋混合物」及「外消旋物」係指兩種鏡像異構物質之缺乏光學活性之等莫耳混合物。
「離去基團」係指可經另一官能基取代之官能基。某些離去基團在此項技術中為熟知的,且實例包括(但不限於)鹵化物(例如氯化物、溴化物、碘化物)、甲烷磺醯基(甲磺醯基)、對甲苯磺醯基(甲苯磺醯基)、三氟甲基磺醯基(三氟甲磺酸酯基)及三氟甲基磺酸酯基。
術語「保護基」係指通常用於阻斷或保護特定官能基而使化合物上之其他官能基反應之取代基。舉例而言,「胺基保護基」為連接於胺基之阻斷或保護化合物中之胺基官能基的取代基。適合胺基保護基包括(但不限於)乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧基羰基(BOC)、苯甲基氧基羰基(CBZ)及9-茀基亞甲基氧基羰基(Fmoc)。對於保護基及其使用之一般性描述,參見T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,New York,1991或後期版本。
II.組合物及方法
在一個態樣中,本發明係部分地基於結合CD22之抗體及包含此等抗體之免疫結合物。本發明之抗體及免疫結合物例如適用於診斷或治療CD22陽性癌症。
A.示範性抗CD22抗體
在一些實施例中,提供結合CD22之經分離抗體。CD22為一種在成熟分化階段在B細胞表面上表現之135-kDa B細胞限制性唾液酸醣蛋白。CD22表現於各種B細胞相關病症及癌症,包括各種淋巴瘤,諸如非霍奇金氏淋巴瘤中。
具有信號序列(胺基酸1至19)之一示範性天然存在之人類CD22前驅體序列提供於SEQ ID NO:28中,且相應成熟CD22序列顯示於SEQ ID NO:29(對應於SEQ ID NO:28之胺基酸20至847)中。具有信號序列(胺基酸1至19)之另一示範性天然存在之人類CD22前驅體序列提供於SEQ ID NO:30中,且相應成熟CD22序列顯示於SEQ ID NO:31(對應於SEQ ID NO:30之胺基酸20至670)中。
在某些實施例中,抗CD22抗體結合SEQ ID NO:28之胺基酸20至240內之抗原決定基。非限制性示範性此等抗體包括10F4及其人類化形式。在一些實施例中,抗CD22抗體結合人類CD22。在一些實施例中,抗CD22抗體結合人類CD22及食蟹獼猴CD22。
在一些實施例中,抗CD22抗體結合人類CD22之親和力為10nM或5nM或4nM或3nM或2nM且視情況0.0001nM或0.001nM或0.01nM。非限制性示範性此等抗體包括mu10F4、hu10F4v1及hu10F4v3,其結合人類CD22之親和力分別為2.4nM、1.1-1.7nM及1.6nM。參見例如US 2008/0050310。
分析
為確定抗CD22抗體是否「結合SEQ ID NO:28之胺基酸20至240內之抗原決定基」,使具有N末端及C末端缺失之CD22多肽在CHO細胞中表現且如先前所述,藉由FACS測試抗體與截短多肽之結合。參見例如US 2008/0050310。相對於與在CHO細胞中表現之全長CD22之結合,抗體與截短多肽之結合實質性降低(70%降低)或消除指示抗體不結合彼截短多肽。
使用在表面上表現CD22之CHO細胞,在競爭分析中使用連續稀釋之未標記抗CD22抗體來確定抗CD22抗體是否「以10nM或5nM或4nM或3nM或2nM之親和力進行結合」。參見例如US 2008/0050310。抗體之結合親和力KD可根據利用非線性曲線擬合程式進行之標準斯卡查德(Scatchard)分析來確定(參見例如Munson等人,Anal Biochem,107:220-239,1980)。
抗體10F4及其他實施例
在一些實施例中,本發明提供一種包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR之抗CD22抗體或免疫結合物:(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1;(b)包含胺基酸序列
SEQ ID NO:10之HVR-H2;(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3;(d)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1;(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在一些實施例中,本發明提供一種包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個選自以下之HVR之抗CD22抗體或免疫結合物:(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2;(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3;(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1;(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。
在一個態樣中,本發明提供一種包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列之抗體或免疫結合物:(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2;及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3。在一個實施例中,抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3。在另一實施例中,抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3及含有胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在另一實施例中,抗體包含含有胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3、含有胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3及含有胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2。在另一實施例中,抗體包含(a)含有胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1;(b)含有胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2;及(c)含有胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3。
在另一態樣中,本發明提供一種包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列之抗體或免疫結合物:(a)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之
HVR-L3。在另一態樣中,本發明提供一種包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列之抗體或免疫結合物:(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在一個實施例中,抗體包含(a)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在一個實施例中,抗體包含(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。
在另一態樣中,本發明之抗體或免疫結合物包含(a)VH域,其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列:(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,及(iii)包含選自SEQ ID NO:11之胺基酸序列之HVR-H3;及(b)VL域,其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列:(i)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在另一態樣中,本發明之抗體或免疫結合物包含(a)VH域,其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VH HVR序列:(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,及(iii)包含選自SEQ ID NO:11之胺基酸序列之HVR-H3;及(b)VL域,其包含至少一個、至少兩個或全部三個選自以下之VL HVR序列:(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。
在另一態樣中,本發明提供一種包含以下之抗體或免疫結合
物:(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2;(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3;(d)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1;(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在另一態樣中,本發明提供一種包含以下之抗體或免疫結合物:(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2;(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3;(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1;(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。
在任何以上實施例中,抗CD22抗體經人類化。在一個實施例中,抗CD22抗體包含如任何以上實施例中之HVR,且進一步包含人類接受體構架,例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。在某些實施例中,人類接受體構架為人類VL κ 1(VLKl)構架及/或VH構架VHIII。在一些實施例中,人類化抗CD22抗體包含(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2;(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3;(d)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1;(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在一些實施例中,人類化抗CD22抗體包含(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2;(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3;(d)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1;(e)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(f)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。
在另一態樣中,抗CD22抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO:7具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%
或100%序列一致性之重鏈可變域(VH)序列。在某些實施例中,相對於參照序列,與胺基酸序列SEQ ID NO:7具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VH序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失,但包含彼序列之抗CD22抗體保留結合CD22之能力。在某些實施例中,在SEQ ID NO:7中,總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,在SEQ ID NO:7中,總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。
視情況,抗CD22抗體包含VH序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7,包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中,VH包含一個、兩個或三個選自以下之HVR:(a)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3。
在一些實施例中,提供一種抗CD22抗體,其中該抗體包含與胺基酸序列SEQ ID NO:8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之輕鏈可變域(VL)。在某些實施例中,相對於參照序列,與胺基酸序列SEQ ID NO:8具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性之VL序列含有取代(例如保守性取代)、插入或缺失,但包含彼序列之抗CD22抗體保留結合CD22之能力。在某些實施例中,在SEQ ID NO:8中,總計1至10個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,在SEQ ID NO:8中,總計1至5個胺基酸已經取代、插入及/或缺失。在某些實施例中,取代、插入或缺失發生在HVR以外之區域中(亦即在FR中)。視情況,抗CD22抗體包含VL序列SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8,包括彼序列之轉譯後修飾。在一特定實施例中,VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR:(a)包含胺基
酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。在一些實施例中,VL包含一個、兩個或三個選自以下之HVR:(a)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1;(b)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2;及(c)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。
在另一態樣中,提供一種抗CD22抗體,其中該抗體包含如任何以上提供之實施例中之VH及如任何以上提供之實施例中之VL。在一些實施例中,抗體包含分別SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中之VH序列及VL序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。在一些實施例中,抗體包含分別SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中之VH序列及VL序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。在一些實施例中,抗體包含分別SEQ ID NO:24及SEQ ID NO:23中之重鏈序列及輕鏈序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。在一些實施例中,抗體包含分別SEQ ID NO:26及SEQ ID NO:23中之重鏈序列及輕鏈序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。在一些實施例中,抗體包含分別SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:23中之重鏈序列及輕鏈序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。在一些實施例中,抗體包含分別SEQ ID NO:27及SEQ ID NO:23中之重鏈序列及輕鏈序列,包括彼等序列之轉譯後修飾。
在另一態樣中,本發明提供一種與本文提供之抗CD22抗體結合相同抗原決定基之抗體或免疫結合物。舉例而言,在某些實施例中,提供一種與包含VH序列SEQ ID NO:7及VL序列SEQ ID NO:8之抗CD22抗體結合相同抗原決定基的抗體或免疫結合物。在某些實施例中,提供一種結合SEQ ID NO:28之來自胺基酸20至240、在胺基酸20至240內或與胺基酸20至240重疊之抗原決定基的抗體。
在本發明之另一態樣中,根據任何以上實施例之抗CD22抗體為
單株抗體,包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。在一個實施例中,抗CD22抗體為抗體片段,例如Fv、Fab、Fab'、scFv、微型雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施例中,抗體為實質上全長抗體,例如IgG1抗體或如本文定義之其他抗體類別或同型。
在任何上述免疫結合物中,抗體可結合於藥物部分。在一些實施例中,抗體結合於細胞毒性劑。在一些此等實施例中,細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物,諸如PNU-159682。本文論述各種非限制性示範性奈莫柔比星衍生物。
在另一態樣中,根據任何以上實施例之抗CD22抗體或免疫結合物可併有單一或呈組合形式之如以下章節1-7中所述之任何特徵。
1.抗體親和力
在某些實施例中,本文提供之抗體之解離常數(Kd)1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM,且視情況為10-13M。(例如10-8M或10-8M以下,例如10-8M至10-13M,例如10-9M至10-13M)。
在一個實施例中,Kd係如以下分析所述,藉由用相關抗體之Fab型式及其抗原進行放射性標記抗原結合分析(RIA)來量測。Fab對抗原之溶液結合親和力係藉由在一滴定系列之未標記抗原存在下,使Fab與最小濃度之(125I)標記抗原平衡,接著用抗Fab抗體塗佈之盤捕捉所結合抗原來量測(參見例如Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。為建立分析條件,將MICROTITER®多孔盤(Thermo Scientific)用含5μg/ml捕捉抗Fab抗體(Cappel Labs)之50mM碳酸鈉(pH 9.6)塗佈隔夜,且隨後在室溫(約23℃)下用含2%(w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷2-5小時。在非吸附盤(Nunc #269620)中,將100pM或26pM[125I]-抗原與相關Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中對抗VEGF抗體Fab-12之評估一致)。接著
將相關Fab培育隔夜;然而,培育可持續較長時期(例如約65小時)以確保達到平衡。此後,將混合物轉移至捕捉盤中以在室溫下培育(例如1小時)。接著移除溶液且用含0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20®)之PBS將盤洗滌八次。當盤已乾燥時,每孔添加150μl閃爍體(MICROSCINT-20TM;Packard),且在TOPCOUNTTM γ計數器(Packard)上對盤持續10分鐘計數。選擇各Fab之達成小於或等於最大結合之20%的濃度以用於競爭性結合分析中。
根據另一實施例,使用BIACORE®-2000或BIACORE®-3000(BIAcore公司,Piscataway,NJ),用固定之抗原CM5晶片在約10反應單位(RU)下在25℃下使用表面電漿子共振分析來量測Kd。簡言之,根據供應商說明書用N-乙基-N'-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基丁二醯亞胺(NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5,BIACORE公司)。用10mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM),隨後在流速5μl/min下注射以達成約10反應單位(RU)之偶合蛋白質。在注射抗原之後,注射1M乙醇胺以阻斷未反應基團。對於動力學量測,在25℃下在流速約25μl/min下注射Fab於含0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)界面活性劑之PBS(PBST)中之兩倍連續稀釋液(0.78nM至500nM)。藉由同時擬合締合及解離感測器圖,使用簡單一對一朗繆爾結合模型(BIACORE®評估軟體第3.2版)計算締合速率(k締合)及解離速率(k解離)。平衡解離常數(Kd)係計算為比率k解離/k締合。參見例如Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。若由以上表面電漿子共振分析獲得之締合速率超過106M-1 s-1,則可藉由使用螢光淬滅技術來測定締合速率,該技術量測在如在分光計(諸如停流配備分光光度計(Aviv Instruments)或具有攪拌比色皿之8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic))中量測之遞增濃度之抗原存在下,在25℃下於PBS(pH 7.2)中之20nM抗抗原抗體(Fab形
式)之螢光發射強度(激發=295nm;發射=340nm,16nm帶通)的增加或降低。
2.抗體片段
在某些實施例中,本文提供之抗體為抗體片段。抗體片段包括(但不限於)Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv及scFv片段及下述其他片段。對於某些抗體片段之評述,參見Hudson等人Nat.Med.9:129-134(2003)。對於scFv片段之評述,參見例如Pluckthün,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg及Moore編,(Springer-Verlag,New York),第269-315頁(1994);亦參見WO 93/16185;及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。對於包含結合抗原決定基殘基之補救受體且活體內半衰期增加之Fab及F(ab')2片段之論述,參見美國專利第5,869,046號。
微型雙功能抗體為可為二價或雙特異性之具有兩個抗原結合位點之抗體片段。參見例如EP 404,097;WO 1993/01161;Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003);及Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。微型三功能抗體及微型四功能抗體亦描述於Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)中。
單域抗體為包含抗體之全部或一部分重鏈可變域或全部或一部分輕鏈可變域之抗體片段。在某些實施例中,單域抗體為人類單域抗體(Domantis公司,Waltham,MA;參見例如美國專利第6,248,516 B1號)。
抗體片段可藉由各種技術製備,包括(但不限於)蛋白水解消化完整抗體以及如本文所述,藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E.coli)或噬菌體)產生。
3.嵌合及人類化抗體
在某些實施例中,本文提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體
例如描述於美國專利第4,816,567號;及Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))中。在一個實例中,嵌合抗體包含非人類可變區(例如源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(諸如猴)之可變區)及人類恆定區。在另一實例中,嵌合抗體為「類別轉換」抗體,其中類別或子類已自親本抗體之類別或子類發生改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施例中,嵌合抗體為人類化抗體。通常,非人類抗體經人類化以降低對人類之免疫原性,同時保留親本非人類抗體之特異性及親和力。一般而言,人類化抗體包含一或多個可變域,其中例如CDR之HVR(或其部分)源於非人類抗體,且FR(或其部分)源於人類抗體序列。人類化抗體視情況亦將包含至少一部分人類恆定區。在一些實施例中,人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如HVR殘基所來源之抗體)之相應殘基取代,例如以恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法例如評述於Almagro及Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中,且進一步例如描述於Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988);Queen等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989);美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號;Kashmiri等人,Methods 36:25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植);Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述「表面重塑」);Dall'Acqua等人,Methods 36:43-60(2005)(描述「FR改組」);及Osbourn等人,Methods 36:61-68(2005)及Klimka等人,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述FR改組之「引導選擇」方法)中。
可用於人類化之人類構架區包括(但不限於):使用「最佳擬合」方法選擇之構架區(參見例如Sims等人J.Immunol.151:2296
(1993));源於輕鏈或重鏈可變區之特定子組之人類抗體的共同序列之構架區(參見例如Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992);及Presta等人J.Immunol.,151:2623(1993));人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro及Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008));及由篩檢FR文庫獲得之構架區(參見例如Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
4.人類抗體
在某些實施例中,本文提供之抗體為人類抗體。人類抗體可使用此項技術中已知之各種技術來產生。人類抗體一般性地描述於van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中。
人類抗體可藉由向已經修改以回應於抗原攻擊而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體之轉殖基因動物投與免疫原來製備。此等動物通常含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座,其置換內源性免疫球蛋白基因座或存在於染色體外或隨機整合至動物之染色體中。在此等轉殖基因小鼠中,內源性免疫球蛋白基因座通常已不活化。對於自轉殖基因動物獲得人類抗體之方法之評述,參見Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。亦參見例如描述XENOMOUSETM技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號;描述HUMAB®技術之美國專利第5,770,429號;描述K-M MOUSE®技術之美國專利第7,041,870號及描述VELOCIMOUSE®技術之美國專利申請公開案第US 2007/0061900號)。來自由此等動物產生之完整抗體之人類可變區可例如藉由與不同人類恆定區組合而進一步修飾。
人類抗體亦可藉由基於融合瘤之方法製備。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株已有描述。(參見例
如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984);Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63頁(Marcel Dekker公司,New York,1987);及Boerner等人,J.Immunol.,147:86(1991)。)經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中。其他方法包括例如描述於美國專利第7,189,826號(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述人類-人類融合瘤)中之方法。人類融合瘤技術(三源融合瘤技術)亦描述於Vollmers及Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)中。
人類抗體亦可藉由分離自人類來源噬菌體呈現文庫選擇之Fv純系可變域序列來產生。此等可變域序列可接著與所要人類恆定域組合。用於自抗體文庫選擇人類抗體之技術在以下描述。
5.文庫來源之抗體
抗體可藉由篩檢組合文庫中具有一或多種所要活性之抗體來分離。舉例而言,此項技術中已知多種用於產生噬菌體呈現文庫及篩檢此等文庫中具有所要結合特徵之抗體之方法。此等方法例如評述於Hoogenboom等人Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人編,Human Press,Totowa,NJ,2001)中,及例如進一步描述於McCafferty等人,Nature 348:552-554;Clackson等人,Nature 352:624-628(1991);Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Marks及Bradbury,Methods in Molecular Biology 248:161-175(Lo編,Human Press,Totowa,NJ,2003);Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004);Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004);及Lee等人,
J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)中。
在某些噬菌體呈現方法中,藉由聚合酶鏈反應(PCR)分別選殖VH及VL基因之譜系且隨機重組於噬菌體文庫中,可接著篩檢該等文庫中之抗原結合噬菌體,如Winter等人,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所述。噬菌體通常呈現呈單鏈Fv(scFv)片段形式或呈Fab片段形式之抗體片段。來自經免疫來源之文庫提供對免疫原具有高親和力之抗體而無需構築融合瘤。或者,可選殖(例如自人類選殖)天然譜系以提供單一來源之針對廣泛範圍之非自體抗原以及自體抗原的抗體而不進行任何免疫,如Griffiths等人,EMBO J,12:725-734(1993)所述。最後,天然文庫亦可藉由以下方式合成製備:自幹細胞選殖未重排V基因區段,及使用含有隨機序列之PCR引子以編碼高度可變CDR3區及在活體外達成重排,如Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所述。描述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括例如:美國專利第5,750,373號、及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段在本文中被視為人類抗體或人類抗體片段。
6.多特異性抗體
在某些實施例中,本文提供之抗體為多特異性抗體,例如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中,一個結合特異性係針對CD22且另一個係針對任何其他抗原。在某些實施例中,雙特異性抗體可結合CD22之兩個不同抗原決定基。雙特異性抗體亦可用於使細胞毒性劑定位於表現CD22之細胞。雙特異性抗體可製備成全長抗體或抗體片段。
製備多特異性抗體之技術包括(但不限於)重組共表現具有不同特異性之兩對免疫球蛋白重鏈-輕鏈(參見Milstein及Cuello,Nature 305:537(1983);WO 93/08829及Traunecker等人,EMBO J.10:3655(1991))及「孔中鈕(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體亦可藉由以下方式來製備:工程改造用於製備抗體Fc雜二聚分子之靜電牽引效應(WO 2009/089004A1);交聯兩個或兩個以上抗體或片段(參見例如美國專利第4,676,980號及Brennan等人,Science,229:81(1985));使用白胺酸拉鍊以產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992));使用「微型雙功能抗體」技術來製備雙特異性抗體片段(參見例如Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993));及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994));及如例如Tutt等人J.Immunol.147:60(1991)中所述製備三特異性抗體。
本文亦包括具有三個或三個以上功能性抗原結合位點之工程改造抗體,包括「章魚抗體(Octopus antibody)」(參見例如US 2006/0025576A1)。
本文之抗體或片段亦包括「雙重作用性FAb」或「DAF」,其包含結合CD22以及另一不同抗原之抗原結合位點(參見例如US 2008/0069820)。
7.抗體變異體
在某些實施例中,涵蓋本文提供之抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言,可能需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物性質。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入編碼抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。此等修飾包括例如抗體之胺基酸序列內之殘基的缺失及/或插入及/或取代。可對缺失、插入及取代進行任何組合
以獲得最終構築體,其限制條件為最終構築體具有所要特徵,例如抗原結合性。
a)取代、插入及缺失變異體
在某些實施例中,提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。用於取代性突變誘發之相關位點包括HVR及FR。保守性取代展示於表1中之標題「較佳取代」下。更實質性變化提供於表1中之標題「示範性取代」下,且如以下關於胺基酸側鏈類別進一步所述。胺基酸取代可引入相關抗體中且篩檢具有所要活性(例如維持/改良之抗原結合性、降低之免疫原性或改良之ADCC或CDC)之產物。
可根據共同側鏈性質對胺基酸分組:(1)疏水性:正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile;(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;(3)酸性:Asp、Glu;(4)鹼性:His、Lys、Arg;(5)影響鏈定向之殘基:Gly、Pro;(6)芳族:Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將需要將此等類別之一之成員更換成另一類別。
一種類型之取代變異體涉及取代親本抗體(例如人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言,選用於進一步研究之所得變異體相對於親本抗體將在某些生物性質方面具有改變(例如改良)(例如親和力增加、免疫原性降低)及/或將實質上保留親本抗體之某些生物性質。一示範性取代變異體為親和力成熟抗體,其可例如使用基於噬
菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所述者)便利地產生。簡言之,使一或多個HVR殘基突變且使變異型抗體呈現在噬菌體上並針對特定生物活性(例如結合親和力)加以篩檢。
可在HVR中進行改變(例如取代)例如以改良抗體親和力。可在HVR「熱點」(亦即由在體細胞成熟過程期間以高頻率經受突變之密碼子編碼之殘基)(參見例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))及/或SDR(a-CDR)中進行此等改變,且測試所得變異型VH或VL之結合親和力。藉由構築二級文庫並自其進行再選擇來達成親和力成熟已例如描述於Hoogenboom等人Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人編,Human Press,Totowa,NJ,(2001)。)中。在親和力成熟之一些實施例中,藉由多種方法(例如易出錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向突變誘發)中之任一者將多樣性引入選用於成熟之可變基因中。接著產生二級文庫。接著篩檢文庫以鑒別具有所要親和力之任何抗體變異體。引入多樣性之另一方法涉及HVR定向方法,其中使若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化來特異性鑒別抗原結合中涉及之HVR殘基。特定言之,通常以CDR-H3及CDR-L3為目標。
在某些實施例中,取代、插入或缺失可發生在一或多個HVR內,只要此等改變不實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言,可在HVR中進行不實質上降低結合親和力之保守性改變(例如如本文提供之保守性取代)。此等改變可在HVR「熱點」或SDR以外。在以上提供之變異型VH及VL序列之某些實施例中,各HVR未改變或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
一種適用於鑒別抗體之可作為突變誘發之目標之殘基或區域的方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」,如Cunningham及Wells(1989)Science,244:1081-1085所述。在此方法中,鑒別某一殘基或一組目標
殘基(例如帶電荷殘基,諸如arg、asp、his、lys及glu)且置換為中性或帶負電荷胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)以確定抗體與抗原之相互作用是否受到影響。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置上引入進一步取代。或者或另外,使用抗原-抗體複合物之晶體結構來鑒別抗體與抗原之間的接觸點。此等接觸殘基及相鄰殘基可作為取代候選物而靶向或消除。可篩檢變異體以確定其是否含有所要性質。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或一百個以上殘基之多肽之範圍內的胺基末端及/或羧基末端融合、以及具有單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N末端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N末端或C末端與增加抗體之血清半衰期之酶(例如用於ADEPT)或多肽的融合。
b)糖基化變異體
在某些實施例中,改變本文提供之抗體以增加或降低抗體糖基化之程度。對抗體添加糖基化位點或使抗體缺失糖基化位點可藉由改變胺基酸序列以使得產生或移除一或多個糖基化位點來便利地達成。
當抗體包含Fc區時,可改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含通常藉由N-鍵聯連接於Fc區之CH2域之Asn297的分支雙觸角寡醣。參見例如Wright等人TIBTECH 15:26-32(1997)。寡醣可包括各種碳水化合物,例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸、以及連接於雙觸角寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的海藻糖。在一些實施例中,可對抗體中之寡醣進行修飾以產生具有某些改良性質之抗體變異體。
在一個實施例中,提供具有缺乏(直接或間接)連接於Fc區之海藻糖之碳水化合物結構的抗體變異體。舉例而言,海藻糖在此抗體中之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。如藉由
MALDI-TOF質譜法所量測,藉由相對於連接於Asn297之所有糖結構(例如複合、雜合及高甘露糖結構)之總和計算Asn297上之糖鏈內海藻糖的平均量來測定海藻糖之量,如例如WO 2008/077546中所述。
Asn297係指位於Fc區中約位置297(Fc區殘基之Eu編號)上之天冬醯胺殘基;然而,Asn297亦可由於抗體中之微小序列變化而位於位置297之上游或下游約±3個胺基酸處,亦即在位置294與300之間。此等海藻糖基化變異體可具有改良之ADCC功能。參見例如美國專利公開案第US 2003/0157108號(Presta,L.);第US 2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo有限公司)。與「去海藻糖基化」或「海藻糖缺乏」抗體變異體相關之公開案之實例包括:US 2003/0157108;WO 2000/61739;WO 2001/29246;US 2003/0115614;US 2002/0164328;US 2004/0093621;US 2004/0132140;US 2004/0110704;US 2004/0110282;US 2004/0109865;WO 2003/085119;WO 2003/084570;WO 2005/035586;WO 2005/035778;WO2005/053742;WO2002/031140;Okazaki等人J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004);Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能夠產生去海藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質海藻糖基化作用之Lec13 CHO細胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986);美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號,Presta,L;及WO 2004/056312 A1,Adams等人,尤其在實例11中)及基因剔除細胞株,諸如α-1,6-海藻糖基轉移酶基因FUT8基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004);Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006);及WO2003/085107)。
進一步提供具有二等分寡醣之抗體變異體,例如其中連接於抗體之Fc區之雙觸角寡醣係由GlcNAc二等分。此等抗體變異體可具有
降低之海藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此等抗體變異體之實例例如描述於WO 2003/011878(Jean-Mairet等人);美國專利第6,602,684號(Umana等人);及US 2005/0123546(Umana等人)中。亦提供在連接於Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變異體。此等抗體變異體可具有改良之CDC功能。此等抗體變異體例如描述於WO 1997/30087(Patel等人);WO 1998/58964(Raju,S.);及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
c)Fc區變異體
在某些實施例中,可將一或多個胺基酸修飾引入本文提供之抗體之Fc區中,藉此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置上包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中,本發明涵蓋具有一些而非所有效應功能之抗體變異體,該等效應功能使該抗體變異體成為抗體之活體內半衰期較為重要但某些效應功能(諸如補體及ADCC)不必要或有害之應用所需要的候選物。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性之降低/去除。舉例而言,可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合性(因此可能缺乏ADCC活性),但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FcγRIII,而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)第464頁上之表3中。評估相關分子之ADCC活性之活體外分析的非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號(參見例如Hellstrom,I.等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985);美國專利第5,821,337號(參見Bruggemann,M.等人,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))中。或者,
可採用非放射性分析方法,(參見例如用於流動式細胞測量術之ACTITM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology公司Mountain View,CA);及CytoTox 96®非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI)。適用於此等分析之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者或另外,相關分子之ADCC活性可例如在動物模型,諸如Clynes等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中揭露之動物模型中進行活體內評估。亦可進行C1q結合分析以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評估補體活化,可進行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202:163(1996);Cragg,M.S.等人,Blood 101:1045-1052(2003);及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。亦可使用此項技術中已知之方法對FcRn結合及活體內清除率/半衰期進行測定(參見例如Petkova,S.B.等人,Int'l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
效應功能降低之抗體包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者經取代之抗體(美國專利第6,737,056號)。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或兩者以上處具有取代之Fc突變體,包括殘基265及297取代成丙胺酸之所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
與FcR之結合改良或削弱之某些抗體變異體已有描述。(參見例如美國專利第6,737,056號;WO 2004/056312及Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。)
在某些實施例中,抗體變異體包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代(例如在Fc區之位置298、333及/或334(EU殘基編號)處之取代)之Fc區。
在一些實施例中,在Fc區中進行導致C1q結合及/或補體依賴性細
胞毒性(CDC)改變(亦即改良或削弱)之改變,例如如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所述。
半衰期增加且與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc受體(FcRn)(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))之結合改良的抗體描述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。彼等抗體包含其中具有一或多個改良Fc區與FcRn之結合之取代的Fc區。此等Fc變異體包括在以下一或多個Fc區殘基處具有取代之變異體:238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434,例如Fc區殘基434之取代(美國專利第7,371,826號)。
亦參見Duncan及Winter,Nature 322:738-40(1988);美國專利第5,648,260號;美國專利第5,624,821號;及WO 94/29351,涉及Fc區變異體之其他實例。
d)半胱胺酸工程改造抗體變異體
在某些實施例中,可能需要產生半胱胺酸工程改造抗體,例如「硫基單抗(thioMAb)」,其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中,經取代殘基存在於抗體之可及位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基,反應性硫醇基藉此定位在抗體之可及位點處且可用於使抗體結合於其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)以產生免疫結合物,如本文進一步所述。在某些實施例中,任一或多個以下殘基可經半胱胺酸取代:輕鏈之V205(Kabat編號);重鏈之A118(EU編號);及重鏈Fc區之S400(EU編號)。抗CD22抗體之非限制性示範性半胱胺酸工程改造重鏈及輕鏈展示於圖3(SEQ ID NO:25至27)中。可如例如美國專利第7,521,541號中所述來產生半胱胺酸工程改造抗體。
e)抗體衍生物
在某些實施例中,本文提供之抗體可經進一步修飾以含有此項技術中已知且容易獲得之其他非蛋白質部分。適於使抗體衍生化之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其在水中之穩定性而可具有製造優勢。該聚合物可具有任何分子量,且可分支或未分支。連接於抗體之聚合物之數目可變化,且若連接一個以上聚合物,則其可為相同或不同分子。一般而言,用於衍生化之聚合物之數目及/或類型可基於包括(但不限於)欲改良之抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將在確定條件下用於療法中等考慮因素加以確定。
在另一實施例中,提供抗體與可藉由曝露於輻射而選擇性加熱之非蛋白質部分的結合物。在一個實施例中,非蛋白質部分為碳奈米管(Kam等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。輻射可具有任何波長,且包括(但不限於)不損害普通細胞但會將非蛋白質部分加熱至鄰近於抗體-非蛋白質部分之細胞被殺死之溫度的波長。
B.重組方法及組合物
可使用例如如美國專利第4,816,567號中所述之重組方法及組合物來產生抗體。在一個實施例中,提供編碼本文所述之抗CD22抗體之經分離核酸。此核酸可編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及/或包含抗體之VH之胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例
中,提供一或多種包含此核酸之載體(例如表現載體)。在另一實施例中,提供一種包含此核酸之宿主細胞。在一個此實施例中,宿主細胞包含(例如已用以下轉型):(1)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列及包含抗體之VH之胺基酸序列的核酸之載體,或(2)包含編碼包含抗體之VL之胺基酸序列的核酸之第一載體及包含編碼包含抗體之VH之胺基酸序列的核酸之第二載體。在一個實施例中,宿主細胞為真核的,例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中,提供一種製備抗CD22抗體之方法,其中該方法包含在適於表現該抗體之條件下培養如以上提供之包含編碼該抗體之核酸的宿主細胞,及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
對於重組產生抗CD22抗體,分離編碼例如如上所述之抗體之核酸且將其插入一或多種載體中以用於進一步在宿主細胞中選殖及/或表現。此核酸可易於使用習知程序(例如藉由使用能夠特異性結合編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因之寡核苷酸探針)進行分離及定序。
適於選殖或表現抗體編碼性載體之宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。舉例而言,抗體可在細菌中產生,特定言之當不需要糖基化及Fc效應功能時。對於抗體片段及多肽在細菌中之表現,參見例如美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號。(亦參見Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo編,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254頁,描述抗體片段在大腸桿菌中之表現。)在表現之後,抗體可自細菌細胞糊狀物分離於可溶性部分中且可進一步純化。
除原核生物之外,諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物亦為適於抗體編碼性載體之選殖或表現宿主,包括糖基化路徑已經「人類化」,從而產生具有部分或完全人類糖基化型態之抗體之真菌及酵母
菌株。參見Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004);及Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
適於表現糖基化抗體之宿主細胞亦源於多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑒別眾多可連同昆蟲細胞一起使用之桿狀病毒株,尤其用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(描述用於在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言,適合於懸浮生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為經SV40轉型之猴腎CV1細胞株(COS-7);人類胚腎細胞株(如例如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中所述之293或293細胞);幼小倉鼠腎細胞(BHK);小鼠賽托利細胞(sertoli cell)(如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述之TM4細胞);猴腎細胞(CV1);非洲綠猴腎細胞(VERO-76);人類子宮頸癌細胞(HELA);犬腎細胞(MDCK);布法羅大鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL 3A);人類肺細胞(W138);人類肝細胞(Hep G2);小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562);如例如Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述之TRI細胞;MRC 5細胞;及FS4細胞。其他適用哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞,包括DHFR-CHO細胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980));及骨髓瘤細胞株,諸如Y0、NS0及Sp2/0。對於適於抗體製造之某些哺乳動物宿主細胞株之評述,參見例如Yazaki及Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo編,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268頁(2003)。
C.分析
可藉由此項技術中已知之各種分析來鑒別、篩檢或表徵本文提供之抗CD22抗體之物理/化學性質及/或生物活性。
在一個態樣中,例如藉由已知方法,諸如ELISA、BIACore®、FACS或西方墨點法(Western blot)來測試抗體之抗原結合活性。
在另一態樣中,競爭分析可用於鑒別與本文所述之任何抗體競爭結合CD22之抗體。在某些實施例中,該種競爭性抗體結合由本文所述之抗體所結合之同一抗原決定基(例如線性或構形抗原決定基)。定位抗體所結合之抗原決定基之詳述示範性方法提供於Morris(1996)「Epitope Mapping Protocols,」Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。
在一示範性競爭分析中,在包含結合CD22之第一經標記抗體(例如本文所述之任何抗體)及要測試與第一抗體競爭結合CD22之能力之第二未標記抗體的溶液中培育經固定CD22。第二抗體可存在於融合瘤上清液中。作為對照,在包含第一經標記抗體而無第二未標記抗體之溶液中培育經固定CD22。在容許第一抗體結合CD22之條件下培育之後,移除過量未結合抗體,且量測與經固定CD22締合之標記之量。若相對於對照樣品,與經固定CD22締合之標記之量在測試樣品中實質上降低,則指示第二抗體與第一抗體競爭結合CD22。參見Harlow及Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
D.免疫結合物
本發明亦提供包含結合於一或多種細胞毒性劑之本文抗CD22抗體之免疫結合物,該等細胞毒性劑為諸如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白質毒素;細菌、真菌、植物或動物來源之酶活性毒素;或其片段)或放射性同位素(亦即放射性結合物)。
免疫結合物允許藥物部分靶向傳遞至腫瘤,且在一些實施例
中,允許在腫瘤中細胞內累積,其中全身性投與未結合藥物可對正常細胞造成不可接受程度之毒性(Polakis P.(2005)Current Opinion in Pharmacology 5:382-387)。
抗體-藥物結合物(ADC)因使有效細胞毒性藥物靶向抗原表現性腫瘤細胞(Teicher,B.A.(2009)Current Cancer Drug Targets 9:982-1004),藉此藉由使功效增至最大且使脫靶毒性降至最低來增強治療指數(Carter,P.J.及Senter P.D.(2008)The Cancer Jour.14(3):154-169;Chari,R.V.(2008)Acc.Chem.Res.41:98-107)而為組合抗體與細胞毒性藥物兩者之性質之靶向化學治療分子。
本發明之ADC化合物包括具有抗癌活性之化合物。在一些實施例中,ADC化合物包括結合(亦即共價連接)於藥物部分之抗體。在一些實施例中,抗體經由連接子共價連接於藥物部分。本發明之抗體-藥物結合物(ADC)將有效劑量之藥物選擇性傳遞至腫瘤組織,藉此可達成較高選擇性(亦即較低有效劑量),同時增加治療指數(「治療窗」)。
抗體-藥物結合物(ADC)之藥物部分(D)可包括具有細胞毒性或細胞抑制作用之任何化合物、部分或基團。示範性藥物部分包括(但不限於)奈莫柔比星及其具有細胞毒性活性之衍生物,諸如PNU-159682。以下進一步詳細論述此等免疫結合物之非限制性實例。
1.示範性抗體-藥物結合物
抗體-藥物結合物(ADC)化合物之一示範性實施例包含靶向腫瘤細胞之抗體(Ab)、藥物部分(D)、及使Ab連接於D之連接子部分(L)。在一些實施例中,抗體經由一或多個胺基酸殘基(諸如離胺酸及/或半胱胺酸)連接於連接子部分(L)。
一示範性ADC具有式I:Ab-(L-D)p I
其中p為1至約20。在一些實施例中,可結合於抗體之藥物部分之數目受限於遊離半胱胺酸殘基之數目。在一些實施例中,藉由本文所述之方法將遊離半胱胺酸殘基引入抗體胺基酸序列中。示範性式I之ADC包括(但不限於)具有1、2、3或4個工程改造半胱胺酸胺基酸之抗體(Lyon,R.等人(2012)Methods in Enzym.502:123-138)。在一些實施例中,一或多個遊離半胱胺酸殘基在不使用工程改造下已存在於抗體中,在該情況下,現存遊離半胱胺酸殘基可用於使抗體結合於藥物。在一些實施例中,使抗體暴露於還原條件,隨後進行抗體結合以產生一或多個遊離半胱胺酸殘基。
a)示範性連接子
「連接子」(L)為可用於使一或多個藥物部分(D)連接於抗體(Ab)以形成式I抗體-藥物結合物(ADC)之雙官能或多官能部分。在一些實施例中,可使用具有可供共價連接於藥物及抗體之反應性官能基之連接子來製備抗體-藥物結合物(ADC)。舉例而言,在一些實施例中,抗體(Ab)之半胱胺酸硫醇可與連接子或藥物-連接子中間物之反應性官能基形成鍵以製備ADC。
在一個態樣中,連接子具有能夠與存在於抗體上之遊離半胱胺酸反應以形成共價鍵之官能基。非限制性示範性此等反應性官能基包括順丁烯二醯亞胺、鹵基乙醯胺、α-鹵基乙醯基、活化酯(諸如丁二醯亞胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯)、酸酐、酸氯化物、磺醯氯、異氰酸酯及異硫氰酸酯。參見例如Klussman等人(2004),Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773之第766頁之結合方法及本文中之實例。
在一些實施例中,連接子具有能夠與存在於抗體上之親電子基團反應之官能基。示範性此等親電子基團包括(但不限於)醛及酮羰基。在一些實施例中,連接子之反應性官能基之雜原子可與抗體上之
親電子基團反應且與抗體單元形成共價鍵。非限制性示範性此等反應性官能基包括(但不限於)醯肼、肟、胺基、肼、硫縮胺基脲、肼羧酸酯及芳基醯肼。
連接子可包含一或多種連接子組分。示範性連接子組分包括6-順丁烯二醯亞胺基己醯基(「MC」)、順丁烯二醯亞胺基丙醯基(「MP」)、纈胺酸-瓜胺酸(「val-cit」或「vc」)、丙胺酸-苯丙胺酸(「ala-phe」)、對胺基苯甲基氧基羰基(「PAB」)、N-丁二醯亞胺基4-(2-吡啶基硫基)戊酸酯(「SPP」)及4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(「MCC」)。各種連接子組分在此項技術中為已知的,其中一些在以下描述。
連接子可為有助於釋放藥物之「可裂解連接子」。非限制性示範性可裂解連接子包括酸不穩定連接子(例如包含腙)、蛋白酶敏感性(例如肽酶敏感性)連接子、光不穩定連接子或含有二硫化物之連接子(Chari等人,Cancer Research 52:127-131(1992);US 5208020)。
在某些實施例中,連接子具有下式II:-Aa-Ww-Yy- II
其中A為「延伸子單元」,且a為整數0至1;W為「胺基酸單元」,且w為整數0至12;Y為「間隔子單元」,且y為0、1或2。包含式II連接子之ADC具有式I(A):Ab-(Aa-Ww-Yy-D)p,其中Ab、D及p係如上對於式I所定義。此等連接子之示範性實施例描述於美國專利第7,498,298號中,該專利以引用的方式明確併入本文中。
在一些實施例中,連接子組分包含使抗體連接於另一連接子組分或藥物部分之「延伸子單元」(A)。以下展示非限制性示範性延伸子單元(其中波形線指示與抗體、藥物或其他連接子組分共價連接之位點):
在一些實施例中,連接子組分包含「胺基酸單元」(W)。在一些此等實施例中,胺基酸單元允許連接子由蛋白酶裂解,藉此有助於在暴露於細胞內蛋白酶(諸如溶酶體酶)時自免疫結合物釋放藥物(Doronina等人(2003)Nat.Biotechnol.21:778-784)。示範性胺基酸單元包括(但不限於)二肽、三肽、四肽及五肽。示範性二肽包括(但不限於)纈胺酸-瓜胺酸(vc或val-cit)、丙胺酸-苯丙胺酸(af或ala-phe);苯丙胺酸-離胺酸(fk或phe-lys);苯丙胺酸-高離胺酸(phe-homolys);及N-甲基-纈胺酸-瓜胺酸(Me-val-cit)。示範性三肽包括(但不限於)甘胺酸-纈胺酸-瓜胺酸(gly-val-cit)及甘胺酸-甘胺酸-甘胺酸(gly-gly-gly)。胺基酸單元可包含天然存在之胺基酸殘基及/或次要胺基酸及/或非天然存在之胺基酸類似物,諸如瓜胺酸。胺基酸單元可針對由特定酶(例如腫瘤相關蛋白酶、組織蛋白酶B、C及D、或纖維蛋白溶酶(plasmin)蛋白酶)酶促裂解進行設計及最佳化。
通常,肽型連接子可藉由在兩個或兩個以上胺基酸及/或肽片段之間形成肽鍵來製備。此等肽鍵可例如根據液相合成方法製備(例如E.Schröder及K.Lübke(1965)「The Peptides」,第1卷,第76-136頁,
Academic Press)。
在一些實施例中,連接子組分包含使抗體直接或經由延伸子單元及/或胺基酸單元連接於藥物部分之「間隔子單元(Y)」。間隔子單元可為「自我分解型」或「非自我分解型」。「非自我分解型」間隔子單元為間隔子單元之一部分或全部在ADC裂解後仍然保持結合於藥物部分之間隔子單元。非自我分解型間隔子單元之實例包括(但不限於)甘胺酸間隔子單元及甘胺酸-甘胺酸間隔子單元。在一些實施例中,腫瘤細胞相關蛋白酶酶促裂解含有甘胺酸-甘胺酸間隔子單元之ADC會導致甘胺酸-甘胺酸-藥物部分自ADC之其餘部分釋放。在一些此等實施例中,甘胺酸-甘胺酸-藥物部分在腫瘤細胞中經受水解步驟,由此自藥物部分裂解甘胺酸-甘胺酸間隔子單元。
「自我分解型」間隔子單元允許釋放藥物部分。在某些實施例中,連接子之間隔子單元包含對胺基苯甲基單元。在一些此等實施例中,對胺基苯甲醇經由醯胺鍵連接於胺基酸單元,且在苯甲醇與藥物之間形成胺基甲酸酯、胺基甲酸甲酯或碳酸酯(Hamann等人(2005)Expert Opin.Ther.Patents(2005)15:1087-1103)。在一些實施例中,間隔子單元包含對胺基苯甲基氧基羰基(PAB)。在一些實施例中,包含自我分解型連接子之ADC具有結構:
其中Q為-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-鹵素、-硝基或-氰基;m為在0至4之範圍內之整數;X可為一或多個其他間隔子單元或可不存在;且p在1至約20之範圍內。在一些實施例中,p在1至10、1至7、1至5、或1至4之範圍內。非限制性示範性X間隔子單元包括:
;其中R1及R2係獨立地選自H
及C1-C6烷基。在一些實施例中,R1及R2各自為-CH3。
自我分解型間隔子之其他實例包括(但不限於)在電子方面與PAB基團類似之芳族化合物,諸如2-胺基咪唑-5-甲醇衍生物(美國專利第7,375,078號;Hay等人(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237)及鄰胺基苯甲基縮醛或對胺基苯甲基縮醛。在一些實施例中,可使用在醯胺鍵水解時經歷環化之間隔子,諸如經取代及未經取代之4-胺基丁酸醯胺(Rodrigues等人(1995)Chemistry Biology 2:223)、經適當取代之雙環[2.2.1]及雙環[2.2.2]環系統(Storm等人(1972)J.Amer.Chem.Soc.94:5815)及2-胺基苯基丙酸醯胺(Amsberry等人(1990)J.Org.Chem.55:5867)。藥物與甘胺酸殘基之α-碳之鍵聯為可適用於ADC中之自我分解型間隔子之另一實例(Kingsbury等人(1984)J.Med.Chem.27:1447)。
在一些實施例中,連接子L可為用於經由分支多官能連接子部分使一個以上藥物部分共價連接於抗體之樹枝型連接子(Sun等人(2002)Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215;Sun等人(2003)Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768)。樹枝狀連接子可增加藥物與抗體之莫耳比,亦即裝載量,此與ADC之效能相關。因此,當抗體僅攜帶一個反應性半胱胺酸硫醇基時,眾多藥物部分可經由樹枝狀連接子進行連接。
非限制性示範性連接子在下文展示在式I之ADC之上下文中:
;其中R1
及R2係獨立地選自H及C1-C6烷基。在一些實施例中,R1及R2各自為-CH3。
Phe-高Lys-PAB-
Ab;其中n為0至12。在一些實施例中,n為2至10。在一些實施例中,n為4至8。
其他非限制性示範性ADC包括結構:
其中X為:
Y為:
各R獨立地為H或C1-C6烷基;且n為1至12。
在一些實施例中,連接子係經調節溶解性及/或反應性之基團取代。作為一非限制性實例,諸如磺酸酯基(-SO3 -)或銨之帶電荷取代基可增加連接子試劑之水溶性且有助於連接子試劑與抗體及/或藥物部分之偶合反應,或有助於Ab-L(抗體-連接子中間物)與D、或D-L(藥物-連接子中間物)與Ab之偶合反應,視用於製備ADC之合成途徑而定。在一些實施例中,連接子之一部分偶合於抗體且連接子之一部分偶合於藥物,且接著使Ab-(連接子部分)a偶合於藥物-(連接子部分)b以形成式I之ADC。
本發明化合物明確涵蓋(但不限於)用以下連接子試劑製備之ADC:雙-順丁烯二醯亞胺基-三氧基乙二醇(BMPEO)、N-(β-順丁烯二醯亞胺基丙基氧基)-N-羥基丁二醯亞胺酯(BMPS)、N-(ε-順丁烯二醯亞胺基己醯基氧基)丁二醯亞胺酯(EMCS)、N-[γ-順丁烯二醯亞胺基丁醯基氧基]丁二醯亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基碸(HBVS)、丁二醯亞胺基4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-羧基-(6-醯胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基-N-羥基丁二醯亞胺酯(MBS)、4-(4-N-順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸醯肼(MPBH)、3-(溴乙醯胺基)丙酸丁二醯亞胺基酯(SBAP)、碘乙酸丁二醯亞胺基酯(SIA)、(4-碘乙醯基)胺基苯甲酸丁二醯亞胺基酯(SIAB)、N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、N-丁二醯亞胺基-4-(2-吡啶基硫基)戊酸酯(SPP)、4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸丁二醯亞胺基酯(SMCC)、4-(對順丁烯二醯亞胺基苯基)丁酸丁二醯亞胺基酯(SMPB)、6-[(β-順丁烯二醯亞胺基丙醯胺基)己酸]丁二醯亞胺基酯(SMPH)、亞胺基硫雑環戊烷(IT)、磺酸基-EMCS、磺酸基-GMBS、磺酸基-KMUS、磺酸基-MBS、磺酸基-SIAB、磺酸基-SMCC及磺酸基-SMPB及丁二醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯(SVSB),且包括雙-順丁
烯二醯亞胺試劑:二硫基雙順丁烯二醯亞胺基乙烷(DTME)、1,4-雙順丁烯二醯亞胺基丁烷(BMB)、1,4-雙順丁烯二醯亞胺基-2,3-二羥基丁烷(BMDB)、雙順丁烯二醯亞胺基己烷(BMH)、雙順丁烯二醯亞胺基乙烷(BMOE)、BM(PEG)2(以下展示)及BM(PEG)3(以下展示);亞胺基酯之雙官能衍生物(諸如二亞胺代己二酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二丁二醯亞胺基酯)、醛(諸如戊二醛)、雙-疊氮基化合物(諸如雙(對疊氮基苯甲醯基)己烷二胺)、雙-重氮衍生物(諸如雙-(對重氮苯甲醯基)-伸乙基二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。在一些實施例中,雙-順丁烯二醯亞胺試劑允許抗體中之半胱胺酸之硫醇基連接於含硫醇藥物部分、連接子或連接子-藥物中間物。可與硫醇基反應之其他官能基包括(但不限於)碘乙醯胺、溴乙醯胺、乙烯基吡啶、二硫化物、吡啶基二硫化物、異氰酸酯及異硫氰酸酯。
某些適用連接子試劑可自各種商業來源,諸如Pierce Biotechnology公司(Rockford,IL)、Molecular Biosciences公司(Boulder,CO)獲得,或可根據此項技術中(例如Toki等人(2002)J.Org.Chem.67:1866-1872;Dubowchik等人(1997)Tetrahedron Letters,38:5257-60;Walker,M.A.(1995)J.Org.Chem.60:5352-5355;Frisch等人(1996)Bioconjugate Chem.7:180-186;US 6214345;WO 02/088172;US 2003130189;US2003096743;WO 03/026577;WO 03/043583;及WO 04/032828)中所述之程序合成。
碳-14-標記之1-異硫氰酸酯基苯甲基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸
(MX-DTPA)為一種用於使放射性核苷酸結合於抗體之示範性螯合劑。參見例如WO94/11026。
b)示範性藥物部分
在一些實施例中,ADC包含蒽環黴素(anthracycline)。蒽環黴素為展現細胞毒性活性之抗生素化合物。儘管不欲受任何特定理論束縛,但研究已指出蒽環黴素可藉由許多不同機制發揮作用來殺死細胞,該等機制包括:1)藥物分子插入細胞之DNA中,藉此抑制DNA依賴性核酸合成;2)藥物產生自由基,其接著與細胞巨分子反應對細胞造成破壞,及/或3)藥物分子與細胞膜相互作用(參見例如C.Peterson等人,「Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia」,Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy;N.R.Bachur,「Free Radical Damage」(同上),第97-102頁)。由於蒽環黴素之細胞毒性潛力,其已用於治療眾多癌症,諸如白血病、乳癌、肺癌、卵巢腺癌及肉瘤(參見例如P.H-Wiernik,Anthracycline:Current Status And New Developments第11頁)。
非限制性示範性蒽環黴素包括小紅莓(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊達比星(idarubicin)、道諾黴素(daunomycin)、奈莫柔比星及其衍生物。已製備並研究道諾黴素及小紅莓之免疫結合物及前藥(Kratz等人(2006)Current Med.Chem.13:477-523;Jeffrey等人(2006)Bioorganic & Med.Chem.Letters 16:358-362;Torgov等人(2005)Bioconj.Chem.16:717-721;Nagy等人(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834;Dubowchik等人(2002)Bioorg.& Med.Chem.Letters 12:1529-1532;King等人(2002)J.Med.Chem.45:4336-4343;EP 0328147;US 6630579)。抗體-藥物結合物BR96-小紅莓與腫瘤相關抗原Lewis-Y特異性反應且已在第I期及第II期研究中加以評估(Saleh等人(2000)J.Clin.Oncology 18:2282-2292;Ajani等人
(2000)Cancer Jour.6:78-81;Tolcher等人(1999)J.Clin.Oncology 17:478-484)。
PNU-159682為奈莫柔比星之一種有效代謝物(或衍生物)(Quintieri等人(2005)Clinical Cancer Research 11(4):1608-1617)。奈莫柔比星為一種在小紅莓之糖苷胺基上具有2-甲氧基(N-嗎啉基)之半合成小紅莓類似物且已處於臨床評估中(Grandi等人(1990)Cancer Treat.Rev.17:133;Ripamonti等人(1992)Brit.J.Cancer 65:703;),包括針對肝細胞癌之第II/III期試驗(Sun等人(2003)Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22,Abs1448;Quintieri(2003)Proceedings of the American Association of Cancer Research,44:第1版,Abs 4649;Pacciarini等人(2006)Jour.Clin.Oncology 24:14116)。
一包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物之非限制性示範性ADC展示於式Ia中:
其中R1為氫原子、羥基或甲氧基且R2為C1-C5烷氧基;或其醫藥學上可接受之鹽;L1及Z一起為如本文所述之連接子(L);T為如本文所述之抗體(Ab);且m為1至約20。在一些實施例中,m為1至10、1至7、1至5、或1至
4。
在一些實施例中,R1及R2均為甲氧基(-OMe)。
另一包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物之非限制性示範性ADC展示於式Ib中:
其中R1為氫原子、羥基或甲氧基且R2為C1-C5烷氧基;或其醫藥學上可接受之鹽;L2及Z一起為如本文所述之連接子(L);T為如本文所述之抗體(Ab);且m為1至約20。在一些實施例中,m為1至10、1至7、1至5、或1至4。
在一些實施例中,R1及R2均為甲氧基(-OMe)。
在一些實施例中,含奈莫柔比星之ADC之奈莫柔比星組分為PNU-159682。在一些此等實施例中,ADC之藥物部分可具有一種以下結構:
其中波形線指示與連接子(L)之連接。
包括PNU-159682在內之蒽環黴素可經由若干鍵聯位點及包括本文所述之連接子在內之多種連接子(US 2011/0076287;WO2009/099741;US 2010/0034837;WO 2010/009124)結合於抗體。
包含奈莫柔比星及連接子之示範性ADC包括(但不限於):
PNU-159682順丁烯二醯亞胺縮醛-Ab;
PNU-159682-val-cit-PAB-Ab;
PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子-Ab;
PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子(R1R2)-Ab,其中:
R1及R2係獨立地選自H及C1-C6烷基;及
PNU-159682-順丁烯二醯亞胺-Ab。
PNU-159682順丁烯二醯亞胺縮醛-Ab之連接子具有酸不穩定性,而PNU-159682-val-cit-PAB-Ab、PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子-Ab及PNU-159682-val-cit-PAB-間隔子(R1R2)-Ab之連接子可為蛋白酶所裂解。
c)藥物裝載量
藥物裝載量由p,亦即式I分子中每個抗體所對應之藥物部分之平均數表示。藥物裝載量可在每個抗體1至20個藥物部分(D)之範圍內。式I ADC包括結合有一定範圍(1至20個)之藥物部分之抗體的集合。由結合反應獲得之ADC製劑中每個抗體所對應之藥物部分之平均數可藉由諸如質譜法、ELISA分析及HPLC之習知手段表徵。亦可測定用p表示之ADC之定量分佈。在一些情況下,自具有其他藥物裝載量之ADC分離、純化及表徵p為某一數值之均質ADC可藉由諸如逆相HPLC或電泳之手段來達成。
對於一些抗體-藥物結合物,p可受限於抗體上連接位點之數目。舉例而言,當連接為如以上某些示範性實施例中之半胱胺酸硫醇時,抗體可僅具有一個或若干個半胱胺酸硫醇基,或可僅具有可供連接連
接子之一個或若干個具有足夠反應性之硫醇基。在某些實施例中,較高藥物裝載量(例如p>5)可導致某些抗體-藥物結合物之聚集、不溶、毒性或細胞滲透性降低。在某些實施例中,ADC之平均藥物裝載量在1至約8;約2至約6;或約3至約5之範圍內。實際上,已顯示對於某些ADC,每個抗體所對應之藥物部分之最佳比率可小於8,且可為約2至約5(US 7498298)。
在某些實施例中,少於理論最大值之藥物部分在結合反應期間結合於抗體。抗體可含有例如不與如下論述之藥物-連接子中間物或連接子試劑反應之離胺酸殘基。一般而言,抗體不含許多可連接於藥物部分之遊離及反應性半胱胺酸硫醇基;實際上,抗體中之大多數半胱胺酸硫醇殘基以二硫橋形式存在。在某些實施例中,抗體可用諸如二硫蘇糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)之還原劑在部分或完全還原性條件下還原以產生反應性半胱胺酸硫醇基。在某些實施例中,使抗體經受變性條件以顯露反應性親核基團,諸如離胺酸或半胱胺酸。
ADC之裝載量(藥物/抗體比率)可以不同方式且例如藉由以下加以控制:(i)限制藥物-連接子中間物或連接子試劑相對於抗體之莫耳過量,(ii)限制結合反應時間或溫度,及(iii)部分或限制用於半胱胺酸硫醇修飾之還原性條件。
應瞭解當一個以上親核基團與藥物-連接子中間物或連接子試劑反應時,則所得產物為具有一定分佈之一或多個連接於抗體之藥物部分之ADC化合物的混合物。每個抗體所對應之藥物之平均數可藉由對抗體具有特異性且對藥物具有特異性之雙重ELISA抗體分析自混合物計算。可藉由質譜法鑒別混合物中之個別ADC分子且藉由HPLC(例如疏水性相互作用層析)進行分離(參見例如McDonagh等人(2006)Prot.Engr.Design & Selection 19(7):299-307;Hamblett等人(2004)Clin.Cancer Res.10:7063-7070;Hamblett,K.J.等人「Effect of drug
loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate,」摘要編號624,American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月;Alley,S.C.等人「Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates,」摘要編號627,American Association for Cancer Research,2004 Annual Meeting,2004年3月27-31日,Proceedings of the AACR,第45卷,2004年3月)。在某些實施例中,具有單一裝載量值之均質ADC可藉由電泳或層析自結合混合物分離。
d)某些製備免疫結合物之方法
式I ADC可採用熟習此項技術者已知之有機化學反應、條件及試劑,藉由若干途徑製備,包括:(1)抗體之親核基團與二價連接子試劑反應以經由共價鍵形成Ab-L,隨後與藥物部分D反應;及(2)藥物部分之親核基團與二價連接子試劑反應以經由共價鍵形成D-L,隨後與抗體之親核基團反應。經由後述途徑製備式I ADC之示範性方法描述於US 7498298中,該專利以引用的方式明確併入本文中。
抗體上之親核基團包括(但不限於):(i)N末端胺基,(ii)側鏈胺基,例如離胺酸,(iii)側鏈硫醇基,例如半胱胺酸,及(iv)糖羥基或胺基,其中抗體經糖基化。胺基、硫醇基及羥基具有親核性且能夠與包括以下之連接子部分及連接子試劑上之親電子基團反應以形成共價鍵:(i)活性酯,諸如NHS酯、HOBt酯、鹵基甲酸酯及酸鹵化物;(ii)烷基及苯甲基鹵化物,諸如鹵基乙醯胺;及(iii)醛、酮、羧基及順丁烯二醯亞胺基團。某些抗體具有可還原鏈間二硫化物,亦即半胱胺酸橋。可藉由用諸如DTT(二硫蘇糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)之還原劑處理以使抗體完全或部分還原來使抗體具有反應性以供與連接子試劑結合。各半胱胺酸橋因此將在理論上形成兩個反應性硫醇親核體。其
他親核基團可經由修飾離胺酸殘基,例如藉由使離胺酸殘基與2-亞胺基硫雑環戊烷(特勞特氏試劑(Traut's reagent))反應,從而使胺轉化成硫醇,而引入抗體中。反應性硫醇基亦可藉由引入一個、兩個、三個、四個或四個以上半胱胺酸殘基而引入抗體中(例如藉由製備包含一或多個非天然半胱胺酸胺基酸殘基之變異型抗體)。
本發明之抗體-藥物結合物亦可藉由抗體上之親電子基團(諸如醛或酮羰基)與連接子試劑或藥物上之親核基團之間的反應來產生。連接子試劑上之適用親核基團包括(但不限於)醯肼、肟、胺基、肼、硫縮胺基脲、肼羧酸酯及芳基醯肼。在一個實施例中,修飾抗體以引入能夠與連接子試劑或藥物上之親核取代基反應之親電子部分。在另一實施例中,糖基化抗體之糖可例如用過碘酸鹽氧化試劑氧化以形成可與連接子試劑或藥物部分之胺基反應之醛或酮基團。所得亞胺希夫鹼(Schiff base)基團可形成穩定鍵聯,或可例如由硼氫化物試劑還原以形成穩定胺鍵聯。在一個實施例中,糖基化抗體之碳水化合物部分與半乳糖氧化酶或偏過碘酸鈉之反應可在抗體中產生可與藥物上之適當基團反應之羰基(醛及酮)(Hermanson,Bioconjugate Techniques)。在另一實施例中,含有N末端絲胺酸或酥胺酸殘基之抗體可與偏過碘酸鈉反應,從而產生醛替代第一胺基酸(Geoghegan及Stroh,(1992)Bioconjugate Chem.3:138-146;US 5362852)。可使該種醛與藥物部分或連接子親核體反應。
藥物部分上之示範性親核基團包括(但不限於):胺、硫醇、羥基、醯肼、肟、肼、硫縮胺基脲、肼羧酸酯及芳基醯肼基團,其能夠與包括以下之連接子部分及連接子試劑上之親電子基團反應以形成共價鍵:(i)活性酯,諸如NHS酯、HOBt酯、鹵基甲酸酯及酸鹵化物;(ii)烷基及苯甲基鹵化物,諸如鹵基乙醯胺;(iii)醛、酮、羧基及順丁烯二醯亞胺基團。
可用於製備ADC之非限制性示範性交聯試劑在本文中描述於標題為「示範性連接子」之章節中。使用此等交聯試劑來連接兩個部分(包括蛋白質部分及化學部分)之方法在此項技術中為已知的。在一些實施例中,可例如藉由重組技術或肽合成來製備包含抗體及細胞毒性劑之融合蛋白。重組DNA分子可包含編碼結合物之抗體及細胞毒性部分之區域,該等區域彼此相鄰或由編碼不破壞結合物之所要性質之連接子肽的區域分開。
在另一實施例中,抗體可結合於「受體」(諸如抗生蛋白鏈菌素(streptavidin))以用於腫瘤預靶向中,其中向患者投與抗體-受體結合物,隨後使用清除劑自循環移除未結合結合物且接著投與結合於細胞毒性劑(例如藥物或放射性核苷酸)之「配體」(例如抗生蛋白(avidin))。
E.用於診斷及偵測之方法及組合物
在某些實施例中,本文提供之任何抗CD22抗體皆適用於偵測生物樣品中CD22之存在。如本文所用之術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。「生物樣品」包含例如細胞或組織,(例如生檢材料,包括癌性或潛在癌性淋巴組織,包括來自患有或懷疑患有B細胞病症及/或B細胞增生病症之個體之組織,該B細胞病症及/或B細胞增生病症包括(但不限於)淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。
在一個實施例中,提供一種用於診斷或偵測方法中之抗CD22抗體。在另一態樣中,提供一種偵測生物樣品中CD22之存在之方法。在某些實施例中,該方法包含使生物樣品與如本文所述之抗CD22抗體在容許該抗CD22抗體結合CD22之條件下接觸,及偵測在該抗CD22
抗體與該生物樣品中之CD22之間是否形成複合物。此方法可為活體外或活體內方法。在一個實施例中,抗CD22抗體用於選擇適於用抗CD22抗體治療之個體,例如當CD22為用於選擇患者之生物標記時。在另一實施例中,生物樣品為細胞或組織,(例如癌性或潛在癌性淋巴組織,包括患有或懷疑患有B細胞病症及/或B細胞增生病症之個體之組織,該B細胞病症及/或B細胞增生病症包括(但不限於)淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。
在另一實施例中,例如出於診斷、預測或分級癌症;確定適當療程;或監測癌症對療法之反應之目的,活體內使用抗CD22抗體例如藉由活體內成像來偵測個體之CD22陽性癌症。此項技術中已知之一種用於活體內偵測之方法為免疫正電子發射斷層攝影術(免疫PET),如例如van Dongen等人,The Oncologist 12:1379-1389(2007)及Verel等人,J.Nucl.Med.44:1271-1281(2003)中所述。在此等實施例中,提供一種用於偵測個體之CD22陽性癌症之方法,該方法包含向患有或懷疑患有CD22陽性癌症之個體投與經標記抗CD22抗體,及偵測該個體中之該經標記抗CD22抗體,其中偵測到該經標記抗CD22抗體指示在該個體中存在CD22陽性癌症。在某些此等實施例中,經標記抗CD22抗體包含結合於諸如68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr及124I之正電子發射體之抗CD22抗體。在一特定實施例中,正電子發射體為89Zr。
在其他實施例中,診斷或偵測方法包含使固定於基質之第一抗CD22抗體與欲測試CD22之存在之生物樣品接觸,使該基質暴露於第二抗CD22抗體,及偵測該第二抗CD22是否結合於該第一抗CD22抗體
與該生物樣品中之CD22之間的複合物。基質可為任何支撐性介質,例如玻璃、金屬、陶瓷、聚合珠粒、載片、晶片及其他基質。在某些實施例中,生物樣品包含細胞或組織,(例如生檢材料,包括癌性或潛在癌性淋巴組織,包括來自患有或懷疑患有B細胞病症及/或B細胞增生病症之個體之組織,該B細胞病症及/或B細胞增生病症包括(但不限於)淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤)。在某些實施例中,第一或第二抗CD22抗體為本文所述之任何抗體。
可根據任何以上實施例診斷或偵測之示範性病症包括CD22陽性癌症,諸如CD22陽性淋巴瘤、CD22陽性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL;包括(但不限於)CD22陽性侵襲性NHL、CD22陽性復發侵襲性NHL、CD22陽性復發無痛NHL、CD22陽性難治NHL及CD22陽性難治無痛NHL)、CD22陽性慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、CD22陽性小淋巴細胞性淋巴瘤、CD22陽性白血病、CD22陽性毛細胞白血病(HCL)、CD22陽性急性淋巴細胞性白血病(ALL)、CD22陽性伯基特氏淋巴瘤及CD22陽性套膜細胞淋巴瘤。在一些實施例中,CD22陽性癌症為得到大於「0」之抗CD22免疫組織化學(IHC)計分之癌症,計分「0」對應於在>90%之腫瘤細胞中染色極弱或無染色。在一些實施例中,CD22陽性癌症以1+、2+或3+程度表現CD22,其中1+對應於在>50%贅生性細胞中達成弱染色,2+對應於在>50%贅生性細胞中達成中度染色,且3+對應於在>50%贅生性細胞中達成強染色。在一些實施例中,CD22陽性癌症為根據原位雜交(ISH)分析,表現CD22之癌症。在一些此等實施例中,使用與用於IHC之計分系統類似之計分系統。在一些實施例中,CD22陽性癌症為根據偵測CD22 mRNA之逆轉錄酶
PCR(RT-PCR)分析,表現CD22之癌症。在一些實施例中,RT-PCR為定量RT-PCR。
在某些實施例中,提供經標記抗CD22抗體。標記包括(但不限於)直接偵測之標記或部分(諸如螢光、發色、電子緻密、化學發光及放射性標記)以及例如經由酶促反應或分子相互作用間接偵測之部分,諸如酶或配體。示範性標記包括(但不限於)放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I、螢光團(諸如稀土螯合物或螢光素及其衍生物)、若丹明(rhodamine)及其衍生物、丹醯基、傘形酮(umbelliferone)、螢光素酶(例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶(美國專利第4,737,456號))、螢光素(luciferin)、2,3-二氫呔嗪二酮、辣根過氧化酶(HRP)、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖澱粉酶、溶菌酶、醣氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶)、與採用過氧化氫以氧化染料前驅體之酶(諸如HRP、乳過氧化酶(lactoperoxidase)或微過氧化酶(microperoxidase))偶合之雜環氧化酶(諸如尿酸酶(uricase)及黃嘌呤氧化酶)、生物素/抗生蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基及其類似標記。在另一實施例中,標記為正電子發射體。正電子發射體包括(但不限於)68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr及124I。在一特定實施例中,正電子發射體為89Zr。
F.醫藥調配物
如本文所述之抗CD22抗體或免疫結合物之醫藥調配物係藉由混合具有所要純度之此抗體或免疫結合物與一或多種視情況選用之醫藥學上可接受之載劑(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.編(1980))製備成凍乾調配物或水溶液形式。醫藥學上可接受之載劑通常在所用劑量及濃度下對接受者無毒,且包括(但不限於):緩衝劑,諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸;抗氧化劑,包括抗壞血酸及甲硫胺酸;防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基苯甲基銨;氯化
六羥季銨;氯化苯甲烴銨;苄索氯銨;苯酚、丁醇或苯甲醇;對羥基苯甲酸烷酯,諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯;兒茶酚(catechol);間苯二酚(resorcinol);環己醇;3-戊醇;及間甲酚);低分子量(小於約10個殘基)多肽;蛋白質,諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白;親水性聚合物,諸如聚乙烯吡咯啶酮;胺基酸,諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸;單醣、雙醣及其他碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合劑,諸如EDTA;糖,諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇;成鹽相對離子,諸如鈉;金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物);及/或非離子界面活性劑,諸如聚乙二醇(PEG)。本文示範性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質藥物分散劑,諸如可溶性中性-活性玻尿酸酶(hyaluronidase)醣蛋白(sHASEGP),例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白,諸如rHuPH20(HYLENEX®,Baxter International公司)。某些示範性sHASEGP(包括rHuPH20)及使用方法描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中,sHASEGP與一或多種其他葡糖胺聚糖酶,諸如軟骨素酶(chondroitinase)組合。
示範性凍乾抗體或免疫結合物調配物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體或免疫結合物調配物包括美國專利第6,171,586號及WO2006/044908中所述者,後述調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝劑。
本文調配物亦可含有一種以上如為所治療之特定適應症所必需之活性成分,較佳為具有不會不利地影響彼此之互補活性者。
活性成分可包埋在例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合所製備之微囊中,例如分別於膠態藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米粒子及奈米囊)中或於巨乳液中之羥甲基纖維素或明膠-微囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊。此等技術揭露於Remington's
Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.編(1980)中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含有抗體或免疫結合物之固體疏水性聚合物之半透性基質,該等基質呈成形物品,例如薄膜或微囊形式。
欲用於活體內投藥之調配物通常無菌。無菌性可易於例如藉由經無菌過濾膜過濾來達成。
G.治療方法及組合物
本文提供之任何抗CD22抗體或免疫結合物皆可用於例如治療方法之方法中。
在一個態樣中,本文提供之抗CD22抗體或免疫結合物用於抑制CD22陽性細胞增殖之方法中,該方法包含在容許該抗CD22抗體或免疫結合物結合於該細胞表面上之CD22的條件下使該細胞暴露於該抗CD22抗體或免疫結合物,藉此抑制該細胞之增殖。在某些實施例中,該方法為活體外或活體內方法。在一些實施例中,細胞為B細胞。在一些實施例中,細胞為贅生性B細胞,諸如淋巴瘤細胞或白血病細胞。
可使用可自Promega(Madison,WI)購得之CellTiter-GloTM發光細胞活力分析來分析活體外細胞增殖抑制。彼分析基於對所存在ATP之定量來測定培養物中之活細胞數,ATP為具有代謝活性之細胞之指標。參見Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88;美國專利第6602677號。分析可以96或384孔格式進行,從而使得分析適用於自動高通量篩檢(HTS)。參見Cree等人(1995)AntiCancer Drugs 6:398-404。分析程序涉及向培養細胞中直接添加單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)。此導致細胞溶解及產生由螢光素酶反應所產生之發光信號。發光信號與所存在ATP之量成比例,所存在ATP之量與培養物中存在之活細胞數成正比。資料可由光度計或CCD攝影機成像裝置記錄。發光
輸出表示為相對光照單位(RLU)。
在另一態樣中,提供一種用作藥劑之抗CD22抗體或免疫結合物。在其他態樣中,提供一種用於治療方法中之抗CD22抗體或免疫結合物。在某些實施例中,提供一種用於治療CD22陽性癌症之抗CD22抗體或免疫結合物。在某些實施例中,本發明提供一種用於治療患有CD22陽性癌症之個體之方法中的抗CD22抗體或免疫結合物,該方法包含向該個體投與有效量之該抗CD22抗體或免疫結合物。在一個此實施例中,該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種例如如下所述之其他治療劑。
在另一態樣中,本發明提供抗CD22抗體或免疫結合物用於製造或製備藥劑之用途。在一個實施例中,藥劑係用於治療CD22陽性癌症。在另一實施例中,藥劑係用於治療CD22陽性癌症之方法中,該方法包含向患有CD22陽性癌症之個體投與有效量之該藥劑。在一個此實施例中,該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種例如如下所述之其他治療劑。
在另一態樣中,本發明提供一種用於治療CD22陽性癌症之方法。在一個實施例中,該方法包含向患有此CD22陽性癌症之個體投與有效量之抗CD22抗體或免疫結合物。在一個此實施例中,該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種如下所述之其他治療劑。
根據任何以上實施例之CD22陽性癌症可為例如淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。在一些實施例中,CD22陽性癌症為得到大於「0」之抗CD22免疫組織化學(IHC)或原位雜交(ISH)計分之癌症,計分「0」對應於在>90%之腫瘤細胞中染色極弱
或無染色。在另一實施例中,CD22陽性癌症以1+、2+或3+程度表現CD22,其中1+對應於在>50%贅生性細胞中達成弱染色,2+對應於在>50%贅生性細胞中達成中度染色,且3+對應於在>50%贅生性細胞中達成強染色。在一些實施例中,CD22陽性癌症為根據偵測CD22 mRNA之逆轉錄酶PCR(RT-PCR)分析,表現CD22之癌症。在一些實施例中,RT-PCR為定量RT-PCR。
在一些實施例中,包含經由蛋白酶可裂解連接子共價連接於抗CD22抗體之奈莫柔比星衍生物之免疫結合物適用於治療彌漫性大B細胞淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤,如例如藉由實例B、C及D中所示之異種移植物模型所證實。在一些實施例中,用於治療彌漫性大B細胞淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤之免疫結合物可包含PNU-159682及包含val-cit之連接子,諸如圖4C中所示之免疫結合物。在一些實施例中,包含經由蛋白酶可裂解連接子共價連接於抗CD22抗體之奈莫柔比星衍生物之免疫結合物適用於治療伯基特氏淋巴瘤。
在一些實施例中,提供治療患有CD22陽性癌症之個體之方法,其中該CD22陽性癌症對第一治療劑具有抗性。在一些實施例中,對第一治療劑具有抗性之CD22陽性癌症表現P-醣蛋白(P-gp)。在一些實施例中,方法包含向個體投與有效量之包含結合CD22之抗體的免疫結合物。在一些實施例中,CD22陽性癌症係選自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。在一些實施例中,第一治療劑包含結合除CD22以外之抗原之第一抗體。在一些實施例中,第一治療劑為包含結合除CD22以外之抗原之第一抗體及第一細胞毒性劑的第一免疫結合物。在一些實施例中,第一抗體結合CD79b。在
一些實施例中,第一細胞毒性劑與包含結合CD22之抗體之免疫結合物的細胞毒性劑不同。在一些此等實施例中,第一細胞毒性劑係選自MMAE、卡奇黴素、美登木素及吡咯并苯并二氮呯。在一些此等實施例中,第一細胞毒性劑為MMAE且包含結合CD22之抗體之免疫結合物的細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。在一些此等實施例中,第一細胞毒性劑為吡咯并苯并二氮呯且包含結合CD22之抗體之免疫結合物的細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。在一些此等實施例中,第一細胞毒性劑為美登木素且包含結合CD22之抗體之免疫結合物的細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
在一些實施例中,第一抗體結合CD22。在一些此等實施例中,第一細胞毒性劑係選自MMAE、卡奇黴素及吡咯并苯并二氮呯且本文所述之免疫結合物之細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。在一些實施例中,第一細胞毒性劑為MMAE且本文所述之免疫結合物之細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。在一些實施例中,第一細胞毒性劑為吡咯并苯并二氮呯且本文所述之免疫結合物之細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。在一些實施例中,第一細胞毒性劑為美登木素且本文所述之免疫結合物之細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
在一些實施例中,提供一種治療患有CD22陽性/P-gp陽性癌症之個體的方法。在一些實施例中,該方法包含向個體投與有效量之本文所述之免疫結合物。在一些實施例中,CD22陽性/P-gp陽性癌症係選自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。在一些實施例中,當癌症比對照細胞或組織表現更高含量之P-gp mRNA及/或蛋白質時,該癌症被視為P-gp陽性。在各種實施例中,對
照細胞或組織可為來自同一患者之非癌性細胞或組織;來自不同患者或健康個體或來自一組患者或健康個體之非癌性或癌性細胞或組織;來自同一患者之在較早時間點,諸如在初始治療方案之前獲取的非癌性或癌性細胞或組織;或來自健康個體之細胞或組織等。
在一些實施例中,提供治療患有癌症之個體之方法,其中該癌症對第一治療劑具有抗性。在一些實施例中,第一治療劑為包含經由第一連接子連接於第一細胞毒性劑之第一抗體的第一免疫結合物。在一些實施例中,治療患有對第一治療劑(諸如第一免疫結合物)具有抗性之癌症之個體的方法包含投與包含經由第二連接子連接於第二細胞毒性劑之第二抗體的第二免疫結合物。在一些實施例中,第一抗體及第二抗體結合不同抗原且第一細胞毒性劑與第二細胞毒性劑為相同或不同的。在一些實施例中,第一抗體及第二抗體結合存在於至少一些相同細胞上之不同抗原。在一些實施例中,第一抗體及第二抗體結合不同抗原且第一細胞毒性劑與第二細胞毒性劑不同。在一些實施例中,第一抗體及第二抗體結合相同抗原,且第一細胞毒性劑與第二細胞毒性劑不同。在任何上述實施例中,第一連接子與第二連接子可為相同或不同的。在一些實施例中,第一抗體及第二抗體結合不同抗原,第一連接子與第二連接子不同,且第一細胞毒性劑與第二細胞毒性劑不同。
根據任何以上實施例之「個體」可為人類。
在另一態樣中,本發明提供包含本文提供之任何抗CD22抗體或免疫結合物之醫藥調配物,其係例如用於任何以上治療方法中。在一個實施例中,醫藥調配物包含本文提供之任何抗CD22抗體或免疫結合物及醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中,醫藥調配物包含本文提供之任何抗CD22抗體或免疫結合物及至少一種例如如下所述之其他治療劑。
本發明之抗體或免疫結合物可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。舉例而言,本發明之抗體或免疫結合物可與至少一種其他治療劑共投與。
在一些實施例中,抗CD22免疫結合物係與抗CD79b抗體或免疫結合物組合投與。一非限制性示範性抗CD79b抗體或免疫結合物包含huMA79bv28之高變區,以致該抗CD79b抗體或免疫結合物包含(i)具有序列SEQ ID NO:32之HVR H1,(ii)具有序列SEQ ID NO:33之HVR H2,(iii)具有序列SEQ ID NO:34之HVR H3,(iv)具有序列SEQ ID NO:35之HVR L1,(v)具有序列SEQ ID NO:36之HVR L2,及(vi)具有序列SEQ ID NO:37之HVR L3。在一些實施例中,抗CD79b抗體或免疫結合物包含huMA79bv28之重鏈可變區及輕鏈可變區。在一些此等實施例中,抗CD79b抗體或免疫結合物包含具有序列SEQ ID NO:38之重鏈可變區及具有序列SEQ ID NO:39之輕鏈可變區。在一些實施例中,抗CD79b免疫結合物包含選自奧莉斯汀(auristatin)、奈莫柔比星(nemorubicin)衍生物及吡咯并苯并二氮呯之細胞毒性劑。在一些實施例中,抗CD79b免疫結合物包含選自MMAE、PNU-159682及具有以下結構之PBD二聚體的細胞毒性劑:
其中波形線指示與連接於抗CD79b抗體之連接子的連接,且其中n為0或1。可用於抗CD79b免疫結合物中之非限制性示範性連接子包括本文所述者。在一些實施例中,抗CD79b免疫結合物係選自例如US 8,088,378 B2中所述之硫基huMA79bv28 HC A118C-MC-val-cit-PAB-MMAE免疫結合物;硫基huMA79bv28 HC S400C-MC-val-cit-PAB-MMAE免疫結合物;硫基huMA79bv28 LC V205C-MC-val-cit-PAB-
MMAE免疫結合物;硫基huMA79bv28 HC A118C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682;硫基huMA79bv28 HC A118C-MC-縮醛-PNU-159682;硫基huMA79bv28 HC A118C-MC-val-cit-PAB-PBD;硫基huMA79bv28 HC S400C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682;硫基huMA79bv28 HC S400C-MC-縮醛-PNU-159682;硫基huMA79bv28 HC S400C-MC-val-cit-PAB-PBD;硫基huMA79bv28 LC V205C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682;硫基huMA79bv28 LC V205C-MC-縮醛-PNU-159682及硫基huMA79bv28 LC V205C-MC-val-cit-PAB-PBD。硫基huMA79bv28 HC A118C之重鏈序列及輕鏈序列分別展示於SEQ ID NO:40及41中。硫基huMA79bv28 HC S400C之重鏈序列及輕鏈序列分別展示於SEQ ID NO:43及41中。硫基huMA79bv28 LC V205C之重鏈序列及輕鏈序列分別展示於SEQ ID NO:42及44中。除特定抗體序列之外,抗CD79b免疫結合物之結構類似於本文及US 2008/0050310中所述之抗CD22免疫結合物之結構。
在一些實施例中,抗CD22免疫結合物係與抗CD20抗體(裸抗體或ADC)組合投與。在一些實施例中,抗CD20抗體為利妥昔單抗(Rituxan®)或2H7(Genentech公司,South San Francisco,CA)。在一些實施例中,抗CD22免疫結合物係與抗VEGF抗體(例如貝伐單抗(bevicizumab),商標名Avastin®)組合投與。
其他治療方案可與投與抗CD22免疫結合物組合,包括(但不限於)放射療法及/或骨髓及周邊血液移植及/或細胞毒性劑。在一些實施例中,細胞毒性劑為一種藥劑或藥劑之組合,諸如環磷醯胺(cyclophosphamide)、羥基道諾黴素(hydroxydaunorubicin)、阿德力黴素(adriamycin)、多柔比星(doxorubincin)、長春新鹼(vincristine)(OncovinTM)、潑尼松龍(prednisolone)、CHOP(環磷醯胺、多柔比星、長春新鹼及潑尼松龍之組合)、CVP(環磷醯胺、長春新鹼
及潑尼松龍之組合)、或免疫治療劑,諸如抗CD20劑(例如利妥昔單抗,商標名Rituxan®)、抗VEGF劑(例如貝伐單抗,商標名Avastin®)、紫杉烷(taxane)(諸如太平洋紫杉醇及多西他賽)及蒽環黴素(anthracycline)抗生素。
以上指示之此等組合療法涵蓋組合投藥(其中兩種或兩種以上治療劑包括在同一或各別調配物中)、及分開投藥,在該情況下,投與本發明之抗體或免疫結合物可在投與其他治療劑及/或佐劑之前、同時及/或之後進行。本發明之抗體或免疫結合物亦可與放射療法組合使用。
本發明之抗體或免疫結合物(及任何其他治療劑)可藉由任何適合手段投與,包括非經腸、肺內及鼻內投藥,且必要時,對於局部治療而言,包括病變內投藥。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投藥。給藥可藉由任何適合途徑進行,例如藉由注射,諸如靜脈內或皮下注射,部分地視投藥為暫時的抑或長期的而定。本文涵蓋各種給藥時程,包括(但不限於)單次投藥或歷經各種時間點多次投藥、團式投藥及脈衝輸注。
本發明之抗體或免疫結合物將以符合優良醫學規範之方式調配、給藥及投與。在此情形下之考慮因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之病因、藥劑傳遞部位、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知之其他因素。抗體或免疫結合物無需但視情況與一或多種當前用於預防或治療所述病症之藥劑一起調配。此等其他藥劑之有效量取決於調配物中存在之抗體或免疫結合物之量、病症或治療之類型、及以上論述之其他因素。此等藥劑通常以如本文所述之相同劑量及用如本文所述之投藥途徑,或以本文所述之劑量之約1%至99%,或以憑經驗/臨床上確定為適當之任何劑量且藉由憑經驗/臨床上確定為適當之任何途徑加以使用。
對於預防或治療疾病,本發明之抗體或免疫結合物(當單獨或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)之適當劑量將取決於欲治療疾病之類型、抗體或免疫結合物之類型、疾病之嚴重性及病程、投與抗體或免疫結合物係出於預防目的抑或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體或免疫結合物之反應、及主治醫師之判斷。抗體或免疫結合物適合一次性或歷經一系列治療投與患者。視疾病之類型及嚴重性而定,約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)之抗體或免疫結合物可為用於向患者投與之初始候選劑量,無論例如藉由一或多次分開投藥或藉由連續輸注。視以上提及之因素而定,一種典型每日劑量可能在約1μg/kg至100mg/kg或100mg/kg以上之範圍內。對於歷經若干天或更長時間之重複投藥,視病狀而定,治療將通常持續直至出現所要疾病症狀抑制。抗體或免疫結合物之一種示範性劑量將在約0.05mg/kg至約10mg/kg之範圍內。因此,可向患者投與一或多劑的約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何組合)。此等劑量可間歇投與,例如每週或每三週(例如以使患者接受約兩劑至約二十劑,或例如約六劑抗體)。可依次投與初始較高負荷劑量及一或多次較低劑量。然而,其他給藥方案可能適用。此療法之進展易於藉由習知技術及分析進行監測。
在一些實施例中,較低劑量之包含諸如PNU-159682之奈莫柔比星衍生物之10F4v3 ADC可用於與較高劑量之包含MMAE部分之10F4v3 ADC達成相同功效。
應瞭解任何以上調配物或治療方法皆可使用本發明之免疫結合物與抗CD22抗體兩者進行。
H.製品
在本發明之另一態樣中,提供一種含有適用於治療、預防及/或診斷上述病症之材料之製品。製品包含容器及在該容器上或與該容器
相伴之標籤或包裝插頁。適合容器包括例如瓶、小瓶、注射器、靜脈內溶液袋等。容器可由諸如玻璃或塑料之多種材料形成。容器容納單獨或與有效治療、預防及/或診斷病症之另一組合物組合之組合物且可具有無菌進入端口(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿之塞之靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為本發明之抗體或免疫結合物。標籤或包裝插頁指示組合物用於治療所選病狀。此外,製品可包含(a)其中含有組合物之第一容器,其中該組合物包含本發明之抗體或免疫結合物;及(b)其中含有組合物之第二容器,其中該組合物包含另一細胞毒性劑或另外的治療劑。本發明之此實施例中之製品可進一步包含指示組合物可用於治療特定病狀之包裝插頁。或者或另外,製品可進一步包含第二(或第三)容器,其包含醫藥學上可接受之緩衝劑,諸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。其可進一步包括自商業及使用者觀點看來合乎需要之其他材料,包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。
III.實例
以下為本發明之方法及組合物之實例。應瞭解鑒於以上提供之一般性描述,可實施各種其他實施例。
A.抗CD22抗體藥物結合物之製造
抗CD22抗體10F4及包括人類化變異體hu10F4v1及hu10F4v3之某些變異體例如描述於US 2008/0050310中。抗體10F4、hu10F4v1及hu10F4v3包含SEQ ID NO:9、10及11之重鏈HVR(分別為HVR H1、HVR H2及HVR H3)。抗體10F4及hu10F4v1包含SEQ ID NO:12、13及14之輕鏈HVR(分別為HVR L1、HVF L2及HVR L3)。Hu10F4v3包含SEQ ID NO:15、13及14之輕鏈HVR(分別為HVR L1、HVF L2及HVR L3),其中hu10F4v3之HVR L1相對於10F4及10F4v1之HVR L1包含單
一胺基酸變化(N28V)。發現三種抗體對人類CD22之結合親和力類似(在1.4nM至2.3nM之範圍內)。在hu10F4v1之HVR L1中進行某些其他胺基酸取代,且該等取代展示於SEQ ID NO:16至22中。包含彼等HVR L1序列中之各者之抗體對人類CD22之結合親和力自hu10F4v1之結合親和力變化小於2倍。參見例如US 2008/0050310。
對於較大規模之抗體製造,在CHO細胞中產生抗體。將編碼VL及VH之載體轉染至CHO細胞中且藉由蛋白質A親和層析自細胞培養基純化IgG。
藉由使硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C抗體結合於某些藥物部分來產生抗CD22抗體-藥物結合物(ADC)。硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C為一種在重鏈中具有添加可結合硫醇基團之A118C突變的人類化抗CD22 10F4v3抗體。參見例如US 2008/0050310。硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C之重鏈之胺基酸序列展示於SEQ ID NO:26中(參見圖3),且硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C之輕鏈之胺基酸序列展示於SEQ ID NO:23中(參見圖2)。如下製備免疫結合物。
硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C-MC-縮醛-PNU-159682(「10F4v3-PNU-2」)
在結合之前,用二硫蘇糖醇(DTT)還原抗體以自硫基抗體之工程改造半胱胺酸移除阻斷基團(例如半胱胺酸)。此過程亦還原抗體之鏈間二硫鍵。純化還原之抗體以移除釋放之阻斷基團且使用去氫抗壞血酸(dhAA)再氧化鏈間二硫化物。接著將完整抗體與藥物-連接子部分MC-縮醛-PNU-159682組合以使藥物-連接子部分結合於抗體之工程改造半胱胺酸殘基。藉由添加過量N-乙醯基-半胱胺酸來與任何游離連接子-藥物部分反應以淬滅結合反應,且純化ADC。ADC之藥物裝載量(每個抗體所對應之藥物部分之平均數目)為約1.8,如以下實例中所指示。10F4v3-PNU-2具有圖4B中所示之結構(p=藥物裝載量)。
硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682(「10F4v3-PNU-1」)
在結合之前,用二硫蘇糖醇(DTT)還原抗體以自硫基抗體之工程改造半胱胺酸移除阻斷基團(例如半胱胺酸)。此過程亦還原抗體之鏈間二硫鍵。純化還原之抗體以移除釋放之阻斷基團且使用去氫抗壞血酸(dhAA)再氧化鏈間二硫化物。接著將完整抗體與藥物-連接子部分MC-val-cit-PAB-PNU-159682(「val-cit」在本文中亦可稱為「vc」)組合以使藥物-連接子部分結合於抗體之工程改造半胱胺酸殘基。藉由添加過量N-乙醯基-半胱胺酸來與任何游離連接子-藥物部分反應以淬滅結合反應,且純化ADC。ADC之藥物裝載量(每個抗體所對應之藥物部分之平均數目)在約1.8至1.9之範圍內,如以下實例中所指示。10F4v3-PNU-1具有圖4C中所示之結構(p=藥物裝載量)。
硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C-MC-val-cit-PAB-MMAE(「10F4v3-MMAE」)
在結合之前,用二硫蘇糖醇(DTT)還原抗體以自硫基抗體之工程改造半胱胺酸移除阻斷基團(例如半胱胺酸)。此過程亦還原抗體之鏈間二硫鍵。純化還原之抗體以移除釋放之阻斷基團且使用去氫抗壞血酸(dhAA)再氧化鏈間二硫化物。接著將完整抗體與藥物-連接子部分MC-val-cit-PAB-MMAE(「val-cit」在本文中亦可稱為「vc」)組合以使藥物-連接子部分結合於抗體之工程改造半胱胺酸殘基。藉由添加過量N-乙醯基-半胱胺酸來與任何遊離連接子-藥物部分反應以淬滅結合反應,且純化ADC。ADC之藥物裝載量(每個抗體所對應之藥物部分之平均數目)測定為約2,如以下實例中所指示。硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C-MC-val-cit-PAB-MMAE例如描述於US 2008/0050310中。
B.人類化抗CD22抗體藥物結合物在WSU-DLCL2異種移植物模型
中之活體內抗腫瘤活性
為測試硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C與PNU-159682之結合物(「10F4v3-PNU-1」及「10F4v3-PNU-2」)的功效,檢查結合抗體在WSU-DLCL2腫瘤(彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞株)之小鼠異種移植物模型中之作用。
雌性CB17 ICR SCID小鼠(12-13週齡,來自Charles Rivers Laboratories;Hollister,CA)各自用2×107個WSU-DLCL2細胞(DSMZ,德國微生物及細胞培養物保藏中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures),Braunschweig,Germany)於側腹皮下接種。當異種移植物腫瘤達到平均腫瘤體積150-300mm3時(稱為第0天),投與第一且唯一劑量之治療劑。基於使用測徑規量測之兩個尺寸,根據式:V=0.5a×b2計算腫瘤體積,且用mm3表示,其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。為分析同一動物隨時間之腫瘤體積之重複量測結果,使用混合模型化方法(參見例如Pinheiro J,等人nlme:linear and nonlinear mixed effects models.2009;R套件,第3.1-96版)。此方法可闡明重複量測結果與歸因於在研究結束之前非治療相關移除動物之適度漏失率兩者。使用三次回歸樣條來擬合在各劑量下log2腫瘤體積之時程的非線性概況。接著使此等非線性概況與混合模型內之劑量相關聯。
各組9隻小鼠用2或8mg ADC/kg之單次靜脈內(i.v.)劑量之硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C免疫結合物或對照抗體-藥物結合物(對照ADC)治療。對照ADC結合不在WSU-DLCL2細胞之表面上表現之蛋白質。在整個實驗期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。在腫瘤體積達到3000mm3之前或當腫瘤顯示逼近潰爛之跡象時對小鼠實施安樂死。所有動物方案皆由機構動物照護及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee,IACUC)核准。
彼實驗之結果展示於表2及圖5中。表2展示各治療組、在研究結束時具有可觀測腫瘤(「TI」)之小鼠之數目、顯示部分反應(「PR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至第0天量測之腫瘤體積之50%以下)之小鼠之數目、顯示完全反應(「CR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至0mm3)之小鼠之數目、各組之藥物劑量、各組之抗體劑量及所投與各ADC之藥物裝載量。
在使用如表2中所示之藥物結合物及劑量的35天時程中,相較於
媒劑及對照ADC(「對照-PNU-1」),經由蛋白酶可裂解連接子與PNU-159682結合之10F4v3 ADC(「10F4v3-PNU-1」)顯示抑制具有WSU-DLCL2腫瘤之SCID小鼠中之腫瘤生長。參見圖5。相較於媒劑及對照ADC(「對照-PNU-2」),經由酸不穩定連接子與PNU-159682結合之硫基Hu抗CD22(「10F4v3-PNU-2」)亦顯示抑制具有WSU-DLCL2腫瘤之SCID小鼠中之腫瘤生長。
在此研究中,測定各劑量組中之體重變化百分比。結果指示投與10F4v3 ADC不導致體重在研究期間顯著降低。
C.人類化抗CD22抗體藥物結合物在Granta-519異種移植物模型中之活體內抗腫瘤活性
為測試硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C與PNU-159682之結合物(「10F4v3-PNU-1」及「10F4v3-PNU-2」)的功效,檢查結合抗體在Granta-519腫瘤(人類套膜細胞淋巴瘤細胞株)之小鼠異種移植物模型中之作用。
雌性CB17 ICR SCID小鼠(10-11週齡,來自Charles Rivers Laboratories;Hollister,CA)各自用2×107個Granta-519細胞(DSMZ,德國微生物及細胞培養物保藏中心,Braunschweig,Germany)於側腹皮下接種。當異種移植物腫瘤達到平均腫瘤體積150-300mm3時(稱為第0天),投與第一且唯一劑量之治療劑。基於使用測徑規量測之兩個尺寸,根據式:V=0.5a×b2計算腫瘤體積,且用mm3表示,其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。為分析同一動物隨時間之腫瘤體積重複量測結果,使用混合模型化方法(參見例如Pinheiro等人2009)。此方法可闡明重複量測結果與歸因於在研究結束之前非治療相關移除動物之適度漏失率兩者。使用三次回歸樣條來擬合在各劑量下log2腫瘤體積之時程的非線性概況。接著使此等非線性概況與混合模型內之劑量相關聯。
各組9隻小鼠用1mg ADC/kg之單次靜脈內(i.v.)劑量之10F4v3免疫結合物或對照抗體-藥物結合物(對照ADC)治療。對照ADC結合不在Grant-519細胞之表面上表現之蛋白質。在整個實驗期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。在腫瘤體積達到3000mm3之前或當腫瘤顯示逼近潰爛之跡象時對小鼠實施安樂死。所有動物方案皆由機構動物照護及使用委員會(IACUC)核准。
彼實驗之結果展示於表3及圖6中。表3展示各治療組、在研究結束時具有可觀測腫瘤(「TI」)之小鼠之數目、顯示部分反應(「PR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至第0天量測之腫瘤體積之50%以下)之小鼠之數目、顯示完全反應(「CR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至0mm3)之小鼠之數目、各組之藥物劑量、各組之抗體劑量及所投與各ADC之藥物裝載量。
在使用如表3中所示之1mg ADC/kg劑量之藥物結合物的29天時程中,相較於媒劑及對照ADC(「對照-PNU-1」),經由蛋白酶可裂解連接子與PNU-159682結合之硫基Hu抗CD22 ADC(「10F4v3-PNU-1」)顯示抑制具有Granta-519腫瘤之SCID小鼠中之腫瘤生長。參見圖6。相較於媒劑及對照ADC(「對照-PNU-2」),經由酸不穩定連接子與PNU-159682結合之硫基Hu抗CD22(「10F4v3-PNU-2」)亦顯示抑制具有Granta-519腫瘤之SCID小鼠中之腫瘤生長。最後,當在1mg/kg下給與時,10F4v3-PNU-1比與奧莉斯汀藥物MMAE結合之人類化抗CD22硫基單抗(「10F4v3-MMAE」)更好地抑制腫瘤生長。
接受10F4v3-PNU-1之小鼠皆顯示腫瘤消退,而大多數用10F4v3-MMAE治療之小鼠不顯示腫瘤消退。單次劑量之10F4v3-PNU-1產生2個部分反應及7個完全反應。
在此研究中,測定各劑量組中之體重變化百分比。結果指示投
與10F4v3 ADC不導致體重在研究期間顯著降低。
D.人類化抗CD22抗體藥物結合物在SuDHL4-luc異種移植物模型中之活體內抗腫瘤活性
為測試硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C與PNU-159682之結合物(「10F4v3-PNU-1」及「10F4v3-PNU-2」)的功效,檢查結合抗體在SuDHL4-luc腫瘤(彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞株)之小鼠異種移植物模型中之作用。
雌性CB17 ICR SCID小鼠(11-12週齡,來自Charles Rivers Laboratories;Hollister,CA)各自用2×107個SuDHL4-luc細胞(自DSMZ,德國微生物及細胞培養物保藏中心,Braunschweig,Germany獲得,且在Genentech進行工程改造以穩定表現螢光素酶(luciferase)基因)於側腹皮下接種。當異種移植物腫瘤達到平均腫瘤體積150-300mm3時(稱為第0天),投與第一且唯一劑量之治療劑。基於使用測徑規量測之兩個尺寸,根據式:V=0.5a×b2計算腫瘤體積,且用mm3表示,其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。為分析同一動物隨時間之腫瘤體積重複量測結果,使用混合模型化方法(參見例如Pinheiro等人2008)。此方法可闡明重複量測結果與歸因於在研究結束之前非治療相關移除動物之適度漏失率兩者。使用三次回歸樣條來擬合在各劑量下log2腫瘤體積之時程的非線性概況。接著使此等非線性概況與混合模型內之劑量相關聯。
各組8隻小鼠用2或8mg ADC/kg之單次靜脈內(i.v.)劑量之10F4v3免疫結合物或對照抗體-藥物結合物(對照ADC)治療。對照ADC結合不在SuDHL4-luc細胞之表面上表現之蛋白質。在整個實驗期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。在腫瘤體積達到3000mm3之前或當腫瘤顯示逼近潰爛之跡象時對小鼠實施安樂死。所有動物方案皆由機構動物照護及使用委員會(IACUC)核准。
彼實驗之結果展示於表4及圖7中。表4展示各治療組、在研究結束時具有可觀測腫瘤(「TI」)之小鼠之數目、顯示部分反應(「PR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至第0天量測之腫瘤體積之50%以下)之小鼠之數目、顯示完全反應(「CR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至0mm3)之小鼠之數目、各組之藥物劑量、各組之抗體劑量及所投與各ADC之藥物裝載量。
在使用如表4中所示之藥物結合物及劑量的35天時程中,相較於媒劑及對照ADC(「對照-PNU-1」),經由蛋白酶可裂解連接子與PNU-159682結合之硫基Hu抗CD22 ADC(「10F4v3-PNU-1」)顯示抑制
具有SuDHL4-luc腫瘤之SCID小鼠中之腫瘤生長。參見圖7。相較於媒劑及對照ADC(「對照-PNU-2」),經由酸不穩定連接子與PNU-159682結合之硫基Hu抗CD22(「10F4v3-PNU-2」)亦顯示抑制具有SuDHL4-luc腫瘤之SCID小鼠中之腫瘤生長。
在此研究中,測定各劑量組中之體重變化百分比。結果指示投與10F4v3 ADC不導致體重在研究期間顯著降低。
E. 10F4v3-PNU-1在SuDHL4-luc異種移植物模型中之劑量遞增研究
檢查10F4v3-PNU-1在各種劑量下於SuDHL4-luc腫瘤(彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞株)之小鼠異種移植物模型中之功效。
雌性CB17 ICR SCID小鼠(10-11週齡,來自Charles Rivers Laboratories;Hollister,CA)各自用2×107個SuDHL4-luc細胞(自DSMZ,德國微生物及細胞培養物保藏中心,Braunschweig,Germany獲得,且在Genentech進行工程改造以穩定表現螢光素酶基因)於側腹皮下接種。當異種移植物腫瘤達到平均腫瘤體積150-300mm3時(稱為第0天),投與第一且唯一劑量之治療劑。基於使用測徑規量測之兩個尺寸,根據式:V=0.5a×b2計算腫瘤體積,且用mm3表示,其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。為分析同一動物隨時間之腫瘤體積重複量測結果,使用混合模型化方法(參見例如Pinheiro等人2008)。此方法可闡明重複量測結果與歸因於在研究結束之前非治療相關移除動物之適度漏失率兩者。使用三次回歸樣條來擬合在各劑量下log2腫瘤體積之時程的非線性概況。接著使此等非線性概況與混合模型內之劑量相關聯。
各組7隻小鼠用0.2、0.5、1或2mg ADC/kg之單次靜脈內(i.v.)劑量之10F4v3-PNU-1或對照-PNU-1治療,該對照-PNU-1結合不在SuDHL4-luc細胞之表面上表現之蛋白質。在整個實驗期間一週1-2次
量測小鼠之腫瘤及體重。在腫瘤體積達到3000mm3之前或當腫瘤顯示逼近潰爛之跡象時對小鼠實施安樂死。所有動物方案皆由機構動物照護及使用委員會(IACUC)核准。
彼實驗之結果展示於表5及圖8中。表5展示各治療組、在研究結束時具有可觀測腫瘤(「TI」)之小鼠之數目、顯示部分反應(「PR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至第0天量測之腫瘤體積之50%以下)之小鼠之數目、顯示完全反應(「CR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至0mm3)之小鼠之數目、各組之藥物劑量、各組之抗體劑量及所投與各ADC之藥物裝載量。
在使用如表5中所示之藥物結合物及劑量的49天時程中,10F4v3-PNU-1顯示以劑量依賴性方式抑制具有SuDHL4-luc腫瘤之SCID小鼠中之腫瘤生長。當在0.5mg/kg或更高劑量下投與時,相較於媒劑或對照ADC,10F4v3-PNU-1顯示明確抑制活性。參見圖8。
在此研究中,測定各劑量組中之體重變化百分比。結果指示投與10F4v3-PNU-1不導致體重在研究期間顯著降低。
F. 10F4v3-PNU-1在Bjab-luc異種移植物模型中之劑量遞增研究
檢查10F4v3-PNU-1在各種劑量下於Bjab-luc腫瘤(伯基特氏淋巴瘤細胞株)之小鼠異種移植物模型中之功效。
雌性CB17 ICR SCID小鼠(12-13週齡,來自Charles Rivers Laboratories;Hollister,CA)各自用2×107個Bjab-luc細胞(可例如自Lonza,Basel,Switzerland獲得,且在Genentech進行工程改造以穩定表現螢光素酶基因)於側腹皮下接種。當異種移植物腫瘤達到平均腫瘤體積150-300mm3時(稱為第0天),投與第一且唯一劑量之治療劑。基於使用測徑規量測之兩個尺寸,根據式:V=0.5a×b2計算腫瘤體積,且用mm3表示,其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。為分析同一動物隨時間之腫瘤體積重複量測結果,使用混合模型化方法(參見例如Pinheiro等人2008)。此方法可闡明重複量測結果與歸因於在研究結束之前非治療相關移除動物之適度漏失率兩者。使用三次回歸樣條來擬合在各劑量下log2腫瘤體積之時程的非線性概況。接著使此等非線性概況與混合模型內之劑量相關聯。
各組8隻小鼠用0.2、0.5、1或2mg ADC/kg之單次靜脈內(i.v.)劑量之10F4v3-PNU-1或對照-PNU-1治療,該對照-PNU-1結合不在Bjab-luc細胞之表面上表現之蛋白質。在整個實驗期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。在腫瘤體積達到3000mm3之前或當腫瘤顯示逼近潰爛之跡象時對小鼠實施安樂死。所有動物方案皆由機構動物照護及使用委員會(IACUC)核准。
彼實驗之結果展示於表6及圖9中。表7展示各治療組、在研究結束時具有可觀測腫瘤(「TI」)之小鼠之數目、顯示部分反應(「PR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至第0天量測之腫瘤體積之
50%以下)之小鼠之數目、顯示完全反應(「CR」;其中在投藥之後任何時間之腫瘤體積降低至0mm3)之小鼠之數目、各組之藥物劑量、各組之抗體劑量及所投與各ADC之藥物裝載量。
在使用如表6中所示之藥物結合物及劑量的41天時程中,10F4v3-PNU-1顯示以劑量依賴性方式抑制具有Bjab-luc腫瘤之SCID小鼠中之腫瘤生長。當在1mg/kg或更高劑量下投與時,相較於媒劑或對照ADC,10F4v3-PNU-1顯示明確抑制活性。參見圖9。此外,2mg/kg之單次劑量之10F4v3-PNU-1在所有治療動物中皆導致完全腫瘤消退。
在此研究中,測定各劑量組中之體重變化百分比。結果指示投與10F4v3-PNU-1不導致體重在研究期間顯著降低。
G.包含奈莫柔比星衍生物之抗CD22免疫結合物在對抗CD22-vc-MMAE具有抗性之Bjab-luc細胞中的功效
為測定包含奈莫柔比星衍生物之抗CD22免疫結合物在已對抗
CD22-vc-MMAE發展出抗性之非霍奇金氏淋巴瘤中之功效,活體內產生對抗CD22-vc-MMAE具有抗性之Bjab-luc細胞。
用於HBSS中之2000萬個Bjab-luc細胞於CB17 SCID小鼠(Charles River Laboratories,Hollister,CA)之背側右側腹皮下接種。20隻用Bjab-luc細胞接種之小鼠在第0天靜脈內給與1.5mg/kg hu抗CD22 10F4v3-MC-vc-PAB-MMAE。為確定何時將再次及在什麼劑量下對小鼠給藥,考慮以下因素:腫瘤在初始治療之後是否再生長(亦即腫瘤生長回在第0天時之初始腫瘤體積尺寸)及再生長速率。所投與劑量之頻率隨時間變化但不超過2劑/週。靜脈內劑量不超過300μL。所投與劑量之範圍為1.5、2、3、4、5、6、8、15及20mg/kg。一旦腫瘤不再對一系列遞增劑量起反應(亦即其顯示對一系列遞增劑量具有抗性),即中斷給藥。
產生2個稱為BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1及BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1之抗性細胞株。CD22在抗性細胞之表面上表現,且抗CD22抗體由抗性細胞內化。在BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1異種移植物模型中確認對hu抗CD22 10F4v3-MC-vc-PAB-MMAE之活體內抗性。
藉由RT-PCR、FACS及表面電漿子共振測定P-醣蛋白(P-gp,亦稱為多藥物抗性蛋白質1或MDR1)在抗性細胞及親本Bjab-luc細胞中之表現。所有三種方法皆顯示相較於親本Bjab-luc細胞,P-gp在BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1及BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1細胞中上調。圖10顯示如藉由FACS所測定的P-gp於抗性細胞中之表現。
為支持P-gp至少部分負責在BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1及BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1細胞中觀測到之10F4v3-MMAE抗性的假設,產生穩定表現P-gp之Bjab-luc細
胞。圖10展示P-gp在兩個穩定表現Bjab-luc細胞株(高表現細胞株及低表現細胞株)中之表現。亦發現Bjab-luc_P-gp高表現及低表現細胞對10F4v3-MMAE具有抗性。
為確定包含奈莫柔比星衍生物之抗CD22免疫結合物是否可有效對抗抗性細胞,在P-gp表現Bjab-luc細胞株中測試PNU-159682之功效。如圖11中所示,儘管PNU-159682為一種蒽環黴素類似物,但其似乎不為P-gp之受質。P-gp高表現Bjab-luc細胞與P-gp低表現Bjab-luc細胞均對PNU-159682敏感。
在BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1異種移植物模型中測定硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682(「10F4v3-PNU-1」)之功效。雌性CB17 ICR SCID小鼠(10週齡,來自Charles Rivers Laboratories;Hollister,CA)各自用2×107個BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1細胞於側腹皮下接種。當異種移植物腫瘤達到平均腫瘤體積100-200mm3時(稱為第0天),投與第一且唯一劑量之治療劑。基於使用測徑規量測之兩個尺寸,根據式:V=0.5a×b2計算腫瘤體積,且用mm3表示,其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。為分析同一動物隨時間之腫瘤體積重複量測結果,使用混合模型化方法(參見例如Pinheiro等人2008)。此方法可闡明重複量測結果與歸因於在研究結束之前非治療相關移除動物之適度漏失率兩者。使用三次回歸樣條來擬合在各劑量下log2腫瘤體積之時程的非線性概況。接著使此等非線性概況與混合模型內之劑量相關聯。
各組8隻小鼠用1mg ADC/kg之單次靜脈內(i.v.)劑量之10F4v3-PNU-1或8mg ADC/kg之單次靜脈內劑量之10F4v3-MMAE治療。在整個實驗期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。在腫瘤體積達到3000mm3之前或當腫瘤顯示逼近潰爛之跡象時對小鼠實施安樂死。所有動物方案皆由機構動物照護及使用委員會(IACUC)核准。
彼實驗之結果展示於圖12中。彼圖中之未標記線條顯示投與單獨媒劑之小鼠中之腫瘤生長。BJAB.Luc_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1細胞對10F4v3-MMAE具有活體內抗性,但對10F4v3-PNU-1敏感。
H.包含奈莫柔比星衍生物之抗CD22免疫結合物在對抗CD22-vc-MMAE具有抗性之WSU-DLCL2細胞中的功效
為測定包含奈莫柔比星衍生物之抗CD22免疫結合物在已對抗CD22-vc-MMAE發展出抗性之非霍奇金氏淋巴瘤中之功效,活體內產生對抗CD22-vc-MMAE具有抗性之WSU-DLCL2細胞。
用於HBSS中之2000萬個WSU-DLCL2細胞於CB17 SCID小鼠(Charles River Laboratories,Hollister,CA)之背側右側腹皮下接種。20隻用WSU-DLCL2細胞接種之小鼠在第0天靜脈內給與12mg/kg hu抗CD22 10F4v3-MC-vc-PAB-MMAE。為確定何時將再次及在什麼劑量下對小鼠給藥,考慮以下因素:腫瘤在初始治療之後是否再生長(亦即腫瘤生長回在第0天時之初始腫瘤體積尺寸)及再生長速率。所投與劑量之頻率隨時間變化但不超過2劑/週。靜脈內劑量不超過300μL。所投與劑量之範圍為12、15、18、20、25及30mg/kg。一旦腫瘤不再對一系列遞增劑量起反應(亦即其顯示對一系列遞增劑量具有抗性),即中斷給藥。
產生2個稱為WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1及WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1之抗性細胞株。CD22在抗性細胞之表面上表現,且抗CD22抗體由抗性細胞內化。在WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1異種移植物模型中確認對hu抗CD22 10F4v3-MC-vc-PAB-MMAE之活體內抗性。
藉由RT-PCR、FACS及表面電漿子共振測定P-醣蛋白(P-gp,亦稱為多藥物抗性蛋白質1或MDR1)在抗性細胞及親本WSU-DLCL2細胞中之表現。所有三種方法皆顯示相較於親本WSU-DLCL2細胞,P-gp在
WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1及WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.2X1細胞中上調。圖13展示如藉由FACS所測定的P-gp於抗性細胞中之表現。
在WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1異種移植物模型中測定硫基Hu抗CD22 10F4v3 HC A118C-MC-val-cit-PAB-PNU-159682(「10F4v3-PNU-1」)之功效。雌性CB17 ICR SCID小鼠(11週齡,來自Charles Rivers Laboratories;Hollister,CA)各自用2×107個WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1細胞於側腹皮下接種。當異種移植物腫瘤達到平均腫瘤體積100-250mm3時(稱為第0天),投與第一且唯一劑量之治療劑。基於使用測徑規量測之兩個尺寸,根據式:V=0.5a×b2計算腫瘤體積,且用mm3表示,其中a及b分別為腫瘤之長直徑及短直徑。為分析同一動物隨時間之腫瘤體積重複量測結果,使用混合模型化方法(參見例如Pinheiro等人2008)。此方法可闡明重複量測結果與歸因於在研究結束之前非治療相關移除動物之適度漏失率兩者。使用三次回歸樣條來擬合在各劑量下log2腫瘤體積之時程的非線性概況。接著使此等非線性概況與混合模型內之劑量相關聯。
各組8隻小鼠用2mg ADC/kg之單次靜脈內(i.v.)劑量之10F4v3-PNU-1或12mg ADC/kg之單次靜脈內劑量之10F4v3-MMAE治療。在整個實驗期間一週1-2次量測小鼠之腫瘤及體重。在腫瘤體積達到3000mm3之前或當腫瘤顯示逼近潰爛之跡象時對小鼠實施安樂死。所有動物方案皆由機構動物照護及使用委員會(IACUC)核准。
彼實驗之結果展示於圖14中。彼圖中之未標記線條為投與單獨媒劑之小鼠中之腫瘤生長。WSU-DLCL2_10F4v3-vcE(CD22)_T1.1X1細胞對10F4v3-MMAE具有活體內抗性,但對10F4v3-PNU-1敏感。
儘管上述本發明已出於清楚理解之目的藉由說明及實例方式詳細描述,但描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文引用之所有專利及科學文獻之揭露內容皆以全文引用的方式明確併入本文中。
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Claims (49)
- 一種免疫結合物,其包含共價連接於細胞毒性劑之結合CD22之抗體,其中該抗體結合SEQ ID NO:28之胺基酸20至240內之抗原決定基,且其中該細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
- 如請求項1之免疫結合物,其中該抗體包含(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3,及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2。
- 如請求項1或請求項2之免疫結合物,其中該抗體包含(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3。
- 如請求項1之免疫結合物,其中該抗體包含:a)(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3,(iv)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1,(v)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(vi)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3;或b)(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:9之HVR-H1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:10之HVR-H2,(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:11之HVR-H3,(iv)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1,(v)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(vi)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。
- 如請求項1至3中任一項之免疫結合物,其中該抗體包含:a)(i)包含選自SEQ ID NO:12及15至22之胺基酸序列之HVR-L1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(iii)包含胺 基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3;或b)(i)包含胺基酸序列SEQ ID NO:15之HVR-L1,(ii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:13之HVR-L2,及(iii)包含胺基酸序列SEQ ID NO:14之HVR-L3。
- 如請求項1至5中任一項之免疫結合物,其中該抗體包含:a)與胺基酸序列SEQ ID NO:7具有至少95%序列一致性之VH序列;或b)與胺基酸序列SEQ ID NO:8具有至少95%序列一致性之VL序列;或c)如(a)中之VH序列及如(b)中之VL序列。
- 如請求項6之免疫結合物,其包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:7之VH序列。
- 如請求項6之免疫結合物,其包含具有胺基酸序列SEQ ID NO:6之VL序列或具有胺基酸序列SEQ ID NO:8之VL序列。
- 一種免疫結合物,其包含共價連接於細胞毒性劑之結合CD22之抗體,其中該抗體包含(a)具有胺基酸序列SEQ ID NO:7之VH序列及具有胺基酸序列SEQ ID NO:8之VL序列,且其中該細胞毒性劑為奈莫柔比星衍生物。
- 如請求項1至9中任一項之免疫結合物,其中該抗體為IgG1、IgG2a或IgG2b抗體。
- 如請求項1至10中任一項之免疫結合物,其中該免疫結合物具有式Ab-(L-D)p,其中:(a)Ab為該抗體;(b)L為連接子;(c)D為該細胞毒性劑;且(d)p在1-8之範圍內。
- 如請求項11之免疫結合物,其中D為奈莫柔比星衍生物。
- 如請求項12之免疫結合物,其中D具有選自以下之結構:
- 如請求項11至13中任一項之免疫結合物,其中該連接子可由蛋白酶裂解。
- 如請求項14之免疫結合物,其中該連接子包含val-cit二肽或Phe-高Lys二肽。
- 如請求項11至13中任一項之免疫結合物,其中該連接子具有酸不穩定性。
- 如請求項16之免疫結合物,其中該連接子包含腙。
- 如請求項12之免疫結合物,其具有選自以下之式:
- 如請求項11至18中任一項之免疫結合物,其中p在1-3之範圍內。
- 一種免疫結合物,其具有選自以下之式:
- 如請求項20之免疫結合物,其中該抗體包含VH序列SEQ ID NO:7及VL序列SEQ ID NO:8。
- 如請求項21之免疫結合物,其中該抗體包含重鏈SEQ ID NO:26及輕鏈SEQ ID NO:23。
- 如前述請求項中任一項之免疫結合物,其中該抗體為單株抗體。
- 如前述請求項中任一項之免疫結合物,其中該抗體為人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
- 如前述請求項中任一項之免疫結合物,其中該抗體為結合CD22之抗體片段。
- 如前述請求項中任一項之免疫結合物,其中該抗體結合人類CD22。
- 如請求項26之免疫結合物,其中人類CD22具有序列SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:29。
- 一種醫藥調配物,其包含如前述請求項中任一項之免疫結合物 及醫藥學上可接受之載劑。
- 如請求項28之醫藥調配物,其進一步包含另一治療劑。
- 一種治療患有CD22陽性癌症之個體之方法,該方法包含向該個體投與有效量之如請求項1至27中任一項之免疫結合物。
- 如請求項30之方法,其中該CD22陽性癌症係選自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)及套膜細胞淋巴瘤。
- 如請求項31之方法,其進一步包含向該個體投與另一治療劑。
- 如請求項32之方法,其中該另一治療劑包含結合CD79b之抗體。
- 如請求項33之方法,其中該另一治療劑為包含共價連接於細胞毒性劑之結合CD79b之抗體的免疫結合物。
- 一種抑制CD22陽性細胞增殖之方法,該方法包含在容許如請求項1至27中任一項之免疫結合物結合該細胞之表面上之CD22的條件下使該細胞暴露於該免疫結合物,藉此抑制該細胞之增殖。
- 如請求項35之方法,其中該細胞為贅生性B細胞。
- 如請求項36之方法,其中該細胞為淋巴瘤細胞。
- 一種治療患有CD22陽性癌症之個體之方法,其中該CD22陽性癌症對第一治療劑具有抗性,該方法包含向該個體投與有效量之如請求項1至27中任一項之免疫結合物。
- 如請求項38之方法,其中該CD22陽性癌症係選自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、 急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。
- 如請求項38或請求項39之方法,其中該第一治療劑包含結合除CD22以外之抗原之第一抗體。
- 如請求項40之方法,其中該第一治療劑為包含結合除CD22以外之抗原之第一抗體及第一細胞毒性劑的第一免疫結合物。
- 如請求項40或請求項41之方法,其中該第一抗體結合CD79b。
- 如請求項38或請求項39之方法,其中該第一治療劑包含結合CD22之第一抗體。
- 如請求項43之方法,其中該第一治療劑為包含結合CD22之第一抗體及第一細胞毒性劑的第一免疫結合物。
- 如請求項41至44中任一項之方法,其中該第一細胞毒性劑與如請求項1至27中任一項之免疫結合物之細胞毒性劑不同。
- 如請求項45之方法,其中該第一細胞毒性劑為MMAE。
- 如請求項46之方法,其中該CD22陽性癌症表現P-醣蛋白(P-gp)。
- 一種治療患有CD22陽性癌症之個體之方法,其中該CD22陽性癌症表現P-gp,該方法包含向該個體投與有效量之如請求項1至27中任一項之免疫結合物。
- 如請求項48之方法,其中該CD22陽性癌症係選自淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、侵襲性NHL、復發侵襲性NHL、復發無痛NHL、難治NHL、難治無痛NHL、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、小淋巴細胞性淋巴瘤、白血病、毛細胞白血病(HCL)、急性淋巴細胞性白血病(ALL)、伯基特氏淋巴瘤及套膜細胞淋巴瘤。
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