TW201400128A - 用於治療及預防感染之植物萃取物 - Google Patents
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Abstract
本發明揭示出一種組成物,其包含地榆植物萃取物及至少一種選自於由下列所組成之群的額外植物萃取物:臭椿植物萃取物、五倍子植物萃取物、甘草植物萃取物、大黃植物萃取物及黃芩植物萃取物。亦揭示出一種包含臭椿植物萃取物或臭椿酮的組成物。
Description
本發明在其某些具體實例中係關於一種植物萃取物,更特別的是(但非唯一),係關於其用於治療或預防感染的用途,包括慢性炎性疾病之繼發性感染。
異位性皮膚炎(AD)係一種常見的慢性炎性皮膚疾病,且小孩有10-20%及成年人有1-3%的終身盛行率。疾病發生率特別在已發展國家中顯露出增加。AD與皮膚對環境觸發(其對正常非異位性個體無害)的過度反應性相關,及其象徵為搔癢、濕疹性病變、乾燥症(乾皮膚)、及皮膚苔癬化(皮膚粗厚及皮膚留痕跡)。AD經常因皮膚病灶由細菌、病毒及黴菌病原體的復發性感染而惡化(例如,患有AD的患者有85-90%會發生金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)移生)。至今AD患者可獲得的繼發性感染治療無法治癒該皮膚疾病,而是控制其症狀的嚴重性及持續時間。這些治療主要包括抗生素來治療繼發性感染、局部皮質類固醇、及局部鈣調神經磷酸脂酶抑制劑(免疫抑制劑)。由於其潛在的副作用,並未推薦長時間使用這些治療,特別對幼兒。
對AD的基本生物機制了解不足。其似乎包括數種細胞型式,包括免疫及表皮細胞,包括T淋巴細胞、肥胖細胞、嗜伊紅血球、蘭格漢氏(Langerhans)細胞及角質細胞。亦牽
涉其它因子,包括細胞素及IgE。許多早期學術及臨床報導建議一些不同病原機制。可能的機制之一為包括TH2細胞增強的免疫缺陷,其與蘭格漢氏細胞交互作用及造成介白素IL-4、IL-5、IL-6、IL-10及IL-13之產生增加。此導致IgE增加及γ干擾素程度減低。另一個理論包括角質層的缺陷性障壁功能導致引入抗原,其造成多種炎性細胞素產生。
最近建議AD患者對細菌感染的高敏感性與缺陷性內生性防禦機制相關,特別是,低的抗微生物胜肽(已知為β-防禦素(defensins))表現性。AD病灶的皮膚活體組織切片檢查闡明發炎引起的抗微生物胜肽之表現性不足地低,從而對患有AD的患者對皮膚感染之敏感性提供可能的解釋。
β-防禦素(包括人類β-防禦素(hBDs))係天然、小、陽離子、兩性分子,其包含於內生性防禦機制中。在皮膚中,這些胜肽由角質細胞分泌,及在直接殺死侵入的微生物及修改炎性事件上具有主要角色。這些胜肽破壞目標微生物的薄膜或穿透該微生物薄膜,干擾細胞內功能。它們亦顯示出額外的角色,諸如炎性及免疫反應之調節、將免疫或炎症細胞化學吸引至傷口或感染/發炎位置、加速血管生成及促進傷口癒合。
除了對抗革蘭陰性有機體的活性外,人類β-防禦素-3(hBD-3)對金黃色葡萄球菌及其它革蘭陽性細菌具有強效的殺死活性。再者,在生理鹽濃度下保留hBD-3的抗微生物活性。因此,在表皮中內生性產生hBD-3可提供抗微生物遮蔽,以保護皮膚組織不受細菌侵襲抵抗病原體(諸如,金黃
色葡萄球菌)。
β-防禦素表現性(包括人類β-防禦素-2(hBD-2)及人類β-防禦素-3(hBD-3)表現性)之調節係一種複雜的機制,其表現性由微生物、TNF-α或IFN-γ提高,及由肥胖細胞及型式2輔助T細胞(特別是IL-4及IL-13)所產生之細胞素下調。
使用原代角質細胞的試管內研究闡明IL-4及IL-13細胞素表現性會抑制β-防禦素的表現性[阿巴內西(Albanesi)C.等人,J.Immunol.(2007)179(2):984-992]。此逆相關亦在人類皮膚活體組織切片檢查中有闡明[野村(Nomura)I.等人,J.Immunol.(2003)171(6),3262-3269]。
先前已經描述出數種抑制由肥胖細胞及型式2輔助細胞引起的IL-4及/或IL-13表現性之草本萃取物。這些包括加米-丹龜米亞(Gammi-Danguieumja)處方(地黃(Rehmannia glutinosa)、朝鮮當歸(Angelica gigas)等等)[Na HJ.等人,Inflammation(2004)28,291-297]、類黃酮類(阿凡寧(avanin)、葉黃酮、芹菜素(apigenin)、黃櫨素等等)[河合(Kawai),M.等人,Allergology International(2007)56:113-123]、臭椿(Ailanthus altissima)(EAa)[花琴(Hua Jin),M.等人,Biol Pham Bult(2006)29:884-888]、光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)(歐甘草根)[蘭(Ram)A等人,Int Immunopharacol.(2006)6(9):1468-77]、總狀升麻(Cimicifuga raceomosa)[金(Kim)CD等人,Immunopharmacol Immunotoxicol(2004)26:299-308]及總狀花升麻(Cimicifuga racemosa)[金CD等人,前述]。
先前在技藝中已經描述出包含抗發炎及抗過敏性質的草本植物。這些包括在傳統中藥中已知用來治療皮膚的濕疹及疼痛之地榆(Sanguisorba officinalis),及先前描述包含抗發炎性質的水飛薊(Silybum marianum)。
美國專利案號6235287揭示出雙萜類和包含至少一種此雙萜的植物阿瑪達薑黃(curcuma amada)之萃取物或濃縮劑,其使用作為用於免疫調節及用於減輕疼痛,及用於治療或預防高敏感性疾病及自體免疫疾病之藥劑。
美國專利案號6566405及7252845揭示出包含存在於植物高良薑(Alpinia galanga)(薑科(Zingiberaceae))中及可較佳來自其之芳香族化合物及類萜類的組成物。這些顯示出關於免疫調節的協同效應及明顯抑制高敏感性反應。因此,6566405考慮到使用其來治療或預防IgE媒介性過敏性反應及症狀,諸如氣喘、過敏性鼻炎、異位性皮膚炎或無防禦性過敏、及自體免疫疾病(諸如克隆氏(Crohn’s)病、潰瘍性結腸炎、類風濕性關節炎或牛皮癬);和用來減輕疼痛。
美國專利案號5466452揭示出用來治療皮膚病(諸如,濕疹及牛皮癬)的醫藥用草本組成物。特別是,5466452教導草本植物(例如,委陵菜(Potentilla chinensis)、地黃、白芍(Radix paeoniae lactiflorae)/赤芍(veitchii)、狹葉白鮮皮(Dictamnus augustifolia)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)、防風(Ledebouriella sesloides)、蒺藜(Tribulus terrestris)、淡竹葉(Lopatheri gracile)、裂葉荊芥(Schizonepeta tenuifolia)、白木通(Akebia trifoliata))的萃取物之製備,其藉由蒸氣蒸餾
及煎煮,然後處理該萃取物以減少多醣及/或糖含量,其提供抗發炎劑、腎上腺皮質性興奮藥及皮質固醇保護劑。
美國專利案號6676975揭示出用於治療濕疹及牛皮癬的中國草本組成物。特別是,6676975係關於一種合適於治療異位性疾病、非異位性濕疹或牛皮癬之物質。該物質可從包含下列中國草本植物之混合物的冷凍乾燥煎煮物萃取:防風根(Radix Ledebouriella)、蒺藜(Fructus tribuli)、委陵菜(Herba Potentilla chinensis)、川木通(Caulis Clematis armandii)、生地黃(Radix Rehmannia)、甘草根(Radix Glycyrrhiza)、赤芍(Radix Paeonia rubra)、白鮮皮(Cortex Dictamni radicis)、淡竹葉(Herba Lopatheri)、荊芥穗(Spica Schizonepetae)。
美國專利案號7,211,567揭示出用於預防及治療型式I過敏症(包括異位性皮膚炎)的組成物。在7,211,567中教導製備該組成物所需要的黃耆甙(astragalin)可從任何包含黃耆甙的植物獲得,例如臭椿。
額外的技藝背景包括美國專利案號6,143,498、6329340、6335318、6,420,116、6911577及7,223,840及美國專利申請案案號20060147442、20070104722及20060036083。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種包含地榆(Sanguisorbae officinalis)植物萃取物與至少一種選自
於由下列所組成之群的額外植物萃取物之組成物:臭椿植物萃取物、五倍子(Galla rhois gallnut)植物萃取物、甘草(glycyrrhiza glabra)植物萃取物、大黃(Rheum palmatum)植物萃取物及黃芩(Scutellaria baicalensis)植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種治療及/或預防需要其之患者的異位性皮膚炎(AD)之方法,該方法包括將一治療有效量包含地榆植物萃取物與臭椿植物萃取物之組成物給藥至患者,因此在患者中治療及/或預防感染。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種包含地榆植物萃取物與臭椿植物萃取物的組成物之用途,其使用來治療及/或預防需要其之患者的異位性皮膚炎(AD)。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種包含植物萃取物的組成物,其中該植物係選自於由下列所組成之群:五倍子、白花前胡(Peucedanum praeruptorum)及總狀花升麻。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種包含臭椿植物萃取物與至少一種選自於由下列所組成之群的額外植物萃取物之組成物:五倍子植物萃取物、甘草植物萃取物、大黃植物萃取物及黃芩植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種包含濃度至少約0.01%的臭椿酮(Ailanthone)與一化妝或醫藥可接受的載劑之組成物。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種治療
及/或預防需要其之患者感染的方法,該方法包括將治療有效量的本發明之組成物給藥至患者,因此在患者中治療及/或預防感染。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供本發明之組成物的用途,其使用來治療及/或預防需要其之患者感染。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種包含施加器與包含在其中的本發明之組成物的傳遞系統。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一包含濃度約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物之單位劑型。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一包含濃度約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物之單位劑型。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一包含濃度約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物之單位劑型。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一包含濃度約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物之單位劑型。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一包含濃度約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物、濃度約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物及濃度約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物之單位劑型。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一包含濃度約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物、濃度約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物及濃度約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物之單位劑型。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一選自於由局部、口服、肺或眼睛單位劑型所組成之群的單位劑型,其包含濃度至少約0.01重量/重量%的臭椿酮。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種製備用於治療及/或預防感染的組成物之方法,該方法包括:(a)讓植物接受x1-10體積的水,以產生該植物的萃取物;及(b)使用大孔樹脂減少在該植物萃取物中的有機鹽及/或重金屬及/或澱粉量,此造成存在於該植物萃取物中的活性成分含量提高。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種鑑別具有炎性調節劑性質的藥劑之方法,該方法包括:(a)讓該藥劑與細胞接觸;及(b)化驗來自該細胞的人類β-防禦素分泌物,其中在該接觸後β-防禦素分泌物向上調節係該試劑具有炎性調節劑性質的象徵。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種包含大黃根萃取物、蛇床(Cnidium monnieri)果萃取物、黃芩根萃取物及甘草苷酸二鉀(dipotassium glycyrrhizate)的化粧品載劑。
根據本發明的某些具體實例之觀點,有提供一種包含地榆植物萃取物、臭椿植物萃取物、大黃根萃取物、蛇床果萃取物、黃芩根萃取物及甘草苷酸二鉀的化粧品組成物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物、臭椿植物萃取物及甘草植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物包含地榆植物
萃取物、臭椿植物萃取物及五倍子植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及臭椿植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及五倍子植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及甘草植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及大黃植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及黃芩植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物更包含地榆植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物更包含選自於由下列所組成之群的植物萃取物:五倍子植物萃取物、甘草植物萃取物、大黃根萃取物、蛇床果萃取物及黃芩根萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該組成物更包含甘草苷酸二鉀。
根據本發明的某些具體實例,該組成物調配用於局部、眼睛、口服或肺給藥。
根據本發明的某些具體實例,該臭椿酮的濃度係約0.01-1%。
根據本發明的某些具體實例,該臭椿酮的濃度係約
0.01-5%。
根據本發明的某些具體實例,該地榆植物萃取物與該至少一種額外的植物萃取物經調配在共調配物中。
根據本發明的某些具體實例,該地榆植物萃取物與該至少一種額外的植物萃取物經調配在分別的調配物中。
根據本發明的某些具體實例,在該組成物中的每種植物萃取物之濃度範圍在0.01-10%內。
根據本發明的某些具體實例,在該組成物中的每種植物萃取物之濃度範圍在0.5-2%內。
根據本發明的某些具體實例,在該組成物中的每種植物萃取物之濃度係1%。
根據本發明的某些具體實例,在該組成物中的植物萃取物之濃度範圍在0.01-10%內。
根據本發明的某些具體實例,在該組成物中的植物萃取物之濃度範圍在0.5-2%內。
根據本發明的某些具體實例,在該組成物中的植物萃取物之濃度係1%。
根據本發明的某些具體實例,該臭椿植物萃取物包含至少約0.01%的臭椿酮。
根據本發明的某些具體實例,該臭椿植物萃取物由椿根(Ailanthi radicis)植物萃取物組成。
根據本發明的某些具體實例,該椿根植物萃取物係一種極性萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該極性萃取物係使用選
自於由丁醇及乙醇所組成之群的極性溶劑萃取。
根據本發明的某些具體實例,該椿根植物萃取物使用高性能液相層析法(HPLC)進一步純化。
根據本發明的某些具體實例,該植物萃取物包含一水性植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該水性植物萃取物使用樹脂色層分析法進一步純化。
根據本發明的某些具體實例,該樹脂色層分析法包含大孔樹脂。
根據本發明的某些具體實例,該組成物不包含β-防禦素。
根據本發明的某些具體實例,該組成物係一種醫藥組成物及包含一醫藥可接受的載劑或稀釋劑。
根據本發明的某些具體實例,該組成物係一種化粧品組成物及包含一化妝可接受的載劑或稀釋劑。
根據本發明的某些具體實例,該化妝可接受的載劑或稀釋劑經調配呈選自於由下列所組成之群的形式:乳膏、凝膠、噴霧、乳液、軟膏、油、洗劑、洗髮精、肥皂及噴霧。
根據本發明的某些具體實例,該感染係對慢性發炎繼發。
根據本發明的某些具體實例,該感染與選自於由下列所組成之群的疾病相關:異位性疾病、接觸性皮膚炎、貨幣狀皮膚炎、輻射性皮炎、燒傷、非異位性濕疹、壓瘡、
眼睛炎性疾病、呼吸道炎性疾病、氣喘、胃腸疾病及口腔感染疾病。
根據本發明的某些具體實例,該患者係人類。
根據本發明的某些具體實例,該治療有效量係用以向下調節在患者細胞中的Th2型式細胞素之分泌。
根據本發明的某些具體實例,該Th2型式細胞素係選自於由下列所組成之群:IL-4、IL-5、IL-6、IL-10及IL-13。
根據本發明的某些具體實例,該治療有效量係用以向上調節在患者細胞中的人類β-防禦素之表現性。
根據本發明的某些具體實例,該治療有效量包含抗微生物活性。
根據本發明的某些具體實例,該施加器呈選自於由下列所組成之群的形式:黏著性繃帶、非黏著性繃帶、紙巾、紗布及護墊。
根據本發明的某些具體實例,該單位劑型進一步包含濃度約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該單位劑型進一步包含濃度約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該單位劑型進一步包含濃度約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該單位劑型進一步包含濃度約0.5-2重量/重量%的大黃植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該單位劑型進一步包含濃度約0.5-2%重量/重量的黃芩植物萃取物。
根據本發明的某些具體實例,該植物萃取物的濃度係1重量/重量%。
根據本發明的某些具體實例,該臭椿酮的濃度係約0.01-1重量/重量%。
根據本發明的某些具體實例,該單位劑型呈選自於由下列所組成之群的形式:黏著性繃帶、非黏著性繃帶、紙巾、紗布及護墊。
根據本發明的某些具體實例,該組成物、傳遞系統或單位劑型進一步包含選自於由下列所組成之群的因子:細胞外間質組分、生長因子、荷爾蒙、血管生成因子、凝血因子、細胞素抑制劑、化學激素抑制劑、酵素、神經介質、維他命、碳水化合物、離子、鐵螯合劑、脂肪酸、抗微生物劑、抗生素、類固醇及胺基酸。
根據本發明的某些具體實例,該給藥長期地執行。
根據本發明的某些具體實例,該給藥一天執行至少一次。
根據本發明的某些具體實例,該給藥執行至少21天。
根據本發明的某些具體實例,該植物係選自於由下列所組成之群:臭椿、五倍子、白花前胡、甘草、總狀花升麻、乳薊(Silybum marianum)、地榆、大黃及黃芩。
根據本發明的某些具體實例,該臭椿由椿根組成。
根據本發明的某些具體實例,該活性成分係選自於由下列所組成之群:臭椿酮、苦楝素(mersosin)、川楝素(toosendanin)、總人蔘皂苷(general ginsenoide)、沒食子酸
(galic acid)、甘草甙(liquiritin)、白花前胡素(praeruptorin)A、單寧酸及水飛薊賓(silybin)。
根據本發明的某些具體實例,該植物包含臭椿(Ailanthi altissima),該活性成分包含臭椿酮。
根據本發明的某些具體實例,該藥劑包含植物萃取物或其活性成分。
根據本發明的某些具體實例,該細胞包含角質細胞。
根據本發明的某些具體實例,該化粧品組成物更包含保溼劑及潤膚劑。
除非其它方面有所定義,否則於本文中所使用的全部工藝及/或科學用語皆具有與通常由本發明涉及的一般技藝之人士所了解者相同的意義。雖然可將類似或等於在本文中所描述的那些方法及物質使用在本發明之具體實例的實行或測試中,下列描述出範例性方法及/或物質。在不一致的情況中,本專利說明書(包括定義)將主導。此外,該物質、方法及實施例僅係闡明用且不想要為必需性限制。
於此描述出本發明的某些具體實例,僅以實施例說明且伴隨著參照伴隨的圖形。現在特定詳細參照圖形,要強調的是,所顯示出的詳細情況係作為實施例及用於本發明的具體實例的闡明性討論之目的。就這一點而言,與該圖形一起說明讓熟習該項技術者明瞭可如何實行本發明的具體實例。
在圖形中:
第1圖係一線圖,其描出人類β-防禦素3及GAPDH與連續稀釋的cDNAs之標準曲線。
第2圖為一線圖,其描出人類β-防禦素3的即時PCR分析,其係使用未經處理的HaCaT角質細胞(n=3)。
第3A-D圖係圖表,其描出細胞生存力的百分比,如藉由MTS分析法測量。以該草本萃取物(如指示出為1%、0.1%或0.01%)培養KU812細胞24小時。在濃度100、10及1 μM下測量黃櫨素。在490奈米處讀取該等板,及計算細胞生存力如為未處理的細胞之百分比(100%生存力)±SD。測試物質鑑定係如下列表1中所指示出。
第4A-G圖係圖表,其描出在KU812細胞中的IL-13表現性由草本萃取物抑制。以該草本萃取物處理KU812細胞(如在下列本文的實施例1中所描述般),然後化驗該細胞培養上層液的IL-13表現性。值以平均IL-13濃度(皮克/毫升)±SD顯現。第4A圖測試物質:1-甘草;2-防風(Saposhnikovia divaricata);3-雷公藤(Radix Tripterygii wilfordii);4-總狀花升麻;5-青葙(Celosia argentea);6-黃蓮根。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品6係0.05%),濃度2-0.1%(對樣品6係0.01%),濃度3-0.01%(對樣品6係0.001%);第4B圖測試物質:7-丹參(Salviae miltiorrhizae);8-三白草(Saururus Chinensis)葉;9-金盞花(Calendula officinalis);10-龍膽(Gentiana);11-水薄荷(Mentha aquatica L);12-西洋蒲公英(Taraxacum officinale)。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品10係0.1%),濃度2-0.1%(對樣品10係0.01%),濃度
3-0.01%(對樣品10係0.001%);第4C圖測試物質:13-地膚子(Broom Cypress fruit);14-知母(Anemarrhena asphodeloides);15-銀柴胡(Stellaria dichotoma L.var.Lanceolata)根;16-黃花貝母(Fritillaria verticillata);17-乳薊;18-葛棗獼猴桃(Actinidia polygama)。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品15係0.1%),濃度2-0.1%(對樣品15係0.01%),濃度3-0.01%(對樣品15係0.001%);第4D圖測試物質:19-黃柏;20-無患子(Sapindus mukurossi);21-苦蔘根(Radix Sophora flavescents);22-地榆;23-蛇床子(Fructus cnidii);24-日本山茶(Camelia japonica)。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品19係0.05%,樣品20係0.01%,樣品21係0.5%),濃度2-0.1%(對樣品19係0.01%,樣品20係0.005%),濃度3-0.01%(對樣品19,20係0.001%)。第4E圖測試物質:25-黃芩;26-大黃;27-茼蒿(Chrysanthemum);28-馬齒莧(Portulaca);A-牡丹皮(peony bark);B-當歸(Angelica sinensis)。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品27及28係0.1%),濃度2-0.1%(對樣品27及28係0.05%),濃度3-0.01%。第4F圖測試物質:C-黃耆(Astragalus membranaceus);D-吳茱萸(Evodia rutaecarpa);E-虎杖(Polygonum cuspidatum);F-濶葉麥門冬(Liriope platyphylla);G-土茯苓(Smilacis glabrae);H-薑黃。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品D及H係0.1%,樣品E及F係0.5%),濃度2-0.1%(對樣品D係0.05%,樣品H係0.01%),濃度3-0.01%(樣品H係0.001%)。第4G圖測試物質:I-靛藍;J-大風子(Semen Hydnocarpi hainanensi)。
所測量的濃度:I及J係1%、0.1%及0.01%。黃櫨素:100 μM、10 μM及1 μM。
第5圖係一線圖,其描出編號136及137的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加(參見箭號)。
第6圖係一線圖,其描出編號171的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加。
第7圖係一線圖,其描出編號194的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加。
第8圖係一線圖,其描出編號232及246的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加。
第9圖係一線圖,其描出編號362的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加。
第10圖係一長條圖,其描出六種草本萃取物(如指示出)在hBD-3表現性上的刺激效應。
第11圖係一長條圖,其描出藉由以熱水(HW)、50% EtOH及50% MeOH所萃取的草本植物(如指示出)之hBD-3刺激比較。
第12圖係一長條圖,其描出細胞生存力的百分比,如藉由MTS分析法測量。以該草本萃取物(0.3%)培養KU812細胞24小時。在490奈米處讀取該等板,及計算細胞生存力如為未處理的細胞之百分比(100%生存力)±SD。要注意的是,樣品4及B-測試物質可已與MTS溶液反應。顯微檢驗未顯示出任何細胞過度增生或細胞毒害性的跡象。測試物質標識如下:
1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆;A.臭椿;B.五倍子;C.白花前胡(Peucedanum praeruptorum)。
第13圖係一長條圖,其描出在KU812細胞中的IL-13表現性由草本萃取物抑制。以草本萃取物(0.3%)處理KU812細胞(如在下文的實施例1中所描述般),然後對該細胞培養上層液化驗IL-13釋放。值以平均IL-13濃度(皮克/毫升)±SD顯現。測試物質標識如下:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆;A.臭椿;B.五倍子;C.白花前胡。
第14A-E圖係曲線圖,其描出草本萃取物在人類β-防禦素3(hBD-3)刺激上的效應,如藉由RT-PCR測量。測量每種草本萃取物的β-防禦素刺激效應[第14A-D圖:第14A圖顯示出甘草(編號1)在hBD3表現性上的直接效應。第14B圖顯示出總狀花升麻(編號2)在hBD3表現性上的直接效應。第14C圖顯示出乳薊(編號3)在hBD3表現性上的直接效應;及第14D圖顯示出地榆(編號4)在hBD3表現性上的直接效應];第14E圖總整理草本萃取物在hBD-3表現性上的刺激活性之結果。測試物質標識如下:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆。
第15A-C圖係長條圖,其描出在草本萃取物間之協同效應。測量草本萃取物在IL-13抑制上的協同效應(KU812細胞,ELISA)(第15A圖)或β-防禦素3刺激效應(HaCaT細胞,RT-PCR)(第15B-C圖)。測量4種草本萃取物與1%椿根皮(第15B圖)或與(1%)五倍子(Galla Rhois)(第15C圖)的協同效應。第15A圖的測試物質標識如下:1.甘草;2.總狀花升麻;
3.乳薊;4.地榆。第15B圖的測試物質標識:1%臭椿與0.3%的:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆。第15C圖的測試物質標識如下:1%五倍子與0.3%的:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆。
第16圖係一長條圖,其描出草本萃取物在樹脂色層分析法前(A-C)及後(1-3)之IL-13抑制活性。測量草本萃取物在0.3%下其抑制IL-13的能力。在色層分析法最佳化前及後的測試物質標識各別為:A,1-臭椿;B,2-五倍子;C,3-白花前胡。
第17A-B圖係相片,其描出五倍子萃取物(編號232)的抗微生物活性。第17A圖描出對耐氨比西林性大腸桿菌的抗微生物活性;及第17B圖描出對金黃色葡萄球菌的抗微生物活性。
第18圖係一線圖,其描出在經治療的患者之載劑(由菱形描出)及治療(包含地榆及臭椿的組成物,由方形描出)組中,SCORAD隨著時間降低(在第0、7、14及21天評估)。
第19圖係一線圖,其描出在載劑治療組中SCORAD組成部分(程度、強度及主觀)在總計分上的影響(在第7、14及21天)。
第20圖係一線圖,其描出在治療組中(包含地榆及臭椿的組成物,在第7、14及21天)SCORAD組成部分(程度、強度及主觀)在總計分上的影響。
第21圖係一線圖,其描出在載劑與治療組間之比較:強度隨著時間減低(在第0、7、14及21天評估)。
第22圖係一線圖,其描出在載劑與治療組間之比較:主觀分數隨著時間減低(在第0、7、14及21天評估)。
第23圖係一長條圖,其描出在載劑組中具有改善症狀之患者的百分比(在第7、14及21天)。
第24圖係一長條圖,其描出在治療組中具有改善症狀之患者的百分比(在第7、14及21天)。
第25圖係一長條圖,其描出在治療21天後,於治療及載劑組中具有改善症狀之患者的百分比。
第26圖係一長條圖,其描出在載劑組中的搔癢及失眠減少(在第7、14及21天)。
第27圖係一長條圖,其描出在治療組中的搔癢及失眠減少(在第7、14及21天)。
第28圖係一長條圖,其描出在21天後,於載劑及治療組中之搔癢及失眠症改善的主觀評估。
第29圖係一長條圖,其描出在21天後,於載劑及治療組中之嚴重及非嚴重AD的SCORAD減少。
第30圖係一長條圖,其描出在載劑及治療組中的皮膚水合及經上皮的水分喪失(TEWL)。
第31圖係一流程圖,其闡明來自椿根的一系列份化。
第32A-E圖係線圖,其描出椿根的水萃取物、丁醇萃取物及醋酸乙酯萃取物在來自HaCaT細胞的人類β-防禦素3及GAPDH(內部表現性控制基因)上之效應。第32A圖描出10微升水(對照)在DEF3及GAPDH表現性上的效應;第32B圖描出10微升椿根水萃取物在DEF3及GAPDH表現性上的效
應;第32C圖描出10微升DMSO(對照)在DEF3及GAPDH表現性上的效應;第32D圖描出10微升椿根醋酸乙酯萃取物在DEF3及GAPDH表現性上的效應;及第32E圖描出10微升椿根丁醇萃取物在DEF3及GAPDH表現性上的效應。
第33圖係一由椿根丁醇萃取物的梯度HPCL所獲得之色譜圖。
第34圖係一線圖,其描出在以該25個餾分每個治療後,於DEF3表現性上之即時PCR分析。
第35圖為來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物之NMR光譜。
第36圖為來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物之NMR光譜。
第37圖為來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物之NMR光譜。
第38圖為來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物之NMR光譜。
第39A-B圖闡明來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物臭椿酮之結構。
本發明在其某些具體實例中係關於一種植物萃取物,更特別的是(但非唯一),係關於其用於治療或預防感染的用途,包括慢性炎性疾病的繼發性感染。
本發明的原理及操作可伴隨著參照圖形及伴隨的說明
有較好了解。
在詳細解釋本發明的至少一個具體實例前,要瞭解本發明在其應用上不需受限於下列說明所提出或由實施例所例示的細節。本發明能為其它具體實例或以多種方法實行或進行。同樣地,要瞭解於本文中所使用的語法及術語係用於描述目的及應該不視為限制。
雖然會降低本發明的實行,本發明家已發展出以草本萃取物為基礎用於治療或預防感染(包括用於管理慢性炎性疾病(諸如異位性皮膚炎(AD))的繼發性感染)的組成物,及其對長時間施加係安全。特別是,本發明家鑑別出抗發炎草本萃取物在β-防禦素表現性上具有刺激活性,同時在T輔助2(TH2)細胞細胞素上具有抑制效應。
如顯示在下文及接著的實施例節中,本發明家已第一時間顯示出該草本萃取物作為β-防禦素的刺激劑及作為IL-13產生的抑制劑之雙效應。本發明家已特別顯示出從地榆、臭椿、五倍子、甘草、白花前胡及總狀花升麻獲得的萃取物有效率向上調節β-防禦素表現性,同時向下調節IL-13之分泌(參見在下文中的實施例3-4及6-7)。本發明家已進一步顯示出地榆與臭椿或五倍子在β-防禦素之刺激及IL-13產生之抑制上的協同效應(參見在下文中的實施例8)。再者,本發明家已顯示出五倍子對抗金黃色葡萄球菌及耐氨比西林性大腸桿菌兩者的抗菌效應(參見在下文中的實施例9)。本發明家已在臨床試驗上進一步闡明包含地榆根萃取物、臭椿萃取物及新近調配的化粧品載劑之化粧
品組成物朝向異位性皮膚炎的治療效率(參見在下文中的實施例10)。臨床試驗的結果已在受中至嚴重的異位性皮膚炎影響而以包含地榆根萃取物、臭椿萃取物(治療組)及載劑的組成物治療之患者中,於客觀及主觀參數兩者的強度上(參見第21-22圖)和在各別症狀的強度上及在罹患該症狀的患者數目上(參見表15及第25圖)顯示出明顯改善。治療組(42%)對載劑(21%)的優異活性特別在受嚴重的異位性皮膚炎影響之患者中顯示出(SCORAD>50,參見第29圖)。特徵為嚴重異位性皮膚炎在治療組中(與載劑組比較)有較高程度的改善,諸如水腫(50%對27%)、滲泌(86%對39%)、表皮剝脫(53%對23%)及苔癬化(53%對28%)之症狀(表15)。
上述結果明確顯示出治療組在AD症狀上的優異效應,特別在與嚴重AD相關及與繼發性感染相關的症狀上。先前已經顯示出金黃色葡萄球菌的密度可到達最高107菌落形成單位/平方公分而沒有臨床感染跡象[參見例如,勾荷(Goh)等人,Int J Dermatol.(1997)36(9):653-7]。因此,雖然在登記於任一臨床試驗組的患者中無觀察到感染的臨床跡象,但細菌性移生最可能存在至少在嚴重的患者中(SCORAD>50)。本結果全然證實將二種草本萃取物(即,地榆及臭椿)加入至載劑乳液,藉由刺激β-防禦素及藉由抑制IL-13在治療AD的繼發性感染上的能力。向上調節β防禦素及向下調節IL-13的能力提供用於治療感染(諸如與慢性發炎相關的那些,如對AD的情況)之技術平台。
本發明家已進一步鑑別在臭椿內(換句話說,在其樹皮
或根皮(即,椿根)中)的活性成分,其是β-防禦素3(DEF3)表現性之原由,如為臭椿酮(參見在下文中的實施例11及第39A-B圖)。一起採用這些結果證實這些草本萃取物及其組合用於感染的治療及預防之治療及化粧品價值。
因此,根據本發明的一個觀點,有提供一種治療及/或預防需要其之患者感染的方法,該方法包括將治療有效量包含如在下列列出的植物萃取物或其活性成分之每種組成物給藥至患者,因此治療及/或預防在該患者中感染。
用語“治療”指為抑制、預防或遏制病狀(疾病、失調或症狀)發展及/或造成病狀減低、緩解或消退。熟習該項技術者將了解可使用多種方法及分析法來評估病狀發展,及類似地,可使用多種方法及分析法來評估病狀之減低、緩解或消退。
如於本文中所使用,用語“感染”指為病原微生物造成隨後的組織發炎或損傷之任何身體部分或組織的病理醫學症狀。適應於藉由本組成物治療的感染性疾病之實施例包括(但不限於)慢性感染性疾病、亞急性傳染性疾病、急性感染性疾病、病毒性疾病、細菌性疾病、原蟲疾病、寄生物病、黴菌疾病、黴漿菌疾病及蛋白感染素疾病。
根據本發明的具體實例,該感染係由革蘭陰性或革蘭陽性細菌及/或其它病原微生物造成,包括(不限於)繡色假單胞菌(P.aeruginosa)、大腸桿菌、化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌(例如,多重抗性金黃色葡萄球菌)、屎腸球菌(Enterococcus faecium)(例
如,抗萬古黴素(vancomycin)性屎腸球菌)或酵母菌白色念珠菌(Candida albicans)。
根據本發明的具體實例,該感染係一種皮膚感染(例如,皮膚傷口)。適應於藉由本組成物治療的皮膚感染之實施例包括(但不限於)例如藉由金黃色葡萄球菌或鏈球菌造成的細菌性皮膚感染、例如藉由單純疱疹病毒或帶狀疱疹病毒造成的病毒性皮膚感染、黴菌皮膚感染及酵母菌皮膚感染。
根據特定具體實例,本發明考慮到感染傷口的治療,諸如發生如為異位性皮膚炎的繼發性感染那些。
如於本文中所使用,用語“傷口”廣泛指為對皮膚及皮下組織和內部器官的損傷,其以多種方式之任何一種開始(例如,受感染性有機體折磨的傷口)及具有不同特徵。範例性實施例包括(但不限於)瘀傷、擦傷、燒傷、曬傷、切開傷、切除傷、外科傷口、壞死性筋膜炎、潰瘍、靜脈性鬱血性潰瘍、糖尿病性潰瘍、褥瘡、口瘡性潰瘍、壓瘡、損傷、疤、簇圓禿、皮膚炎、過敏性接觸性皮膚炎、異位性皮膚炎、結腸炎、化妝品皮炎(berloque dermatitis)、尿布皮膚炎、出汗障礙性皮膚炎、牛皮癬、濕疹、紅斑、疣、肛門疣、血管瘤、櫻桃狀血管瘤、香港腳、非典型痣、基底細胞癌、貝特曼氏(Bateman’s)紫瘢病、大水性類天疱瘡、念珠菌屬、耳輪軟骨皮炎(chondrodermatitis helicis)、克拉克氏(Clark’s)痣、脣泡疹、濕疣(condylomata)、囊腫、達里埃氏(Darier’s)病、皮纖維瘤、盤狀紅斑性狼瘡、錢幣狀濕疹、異位性濕
疹、出汗障礙性濕疹、手部濕疹、多形性結節性紅斑、福代斯氏斑點(Fordyce’s Condition)、頸部瘢痕瘤性毛囊炎(folliculitis keloidalis nuchae)、毛囊炎、環狀肉芽腫、格羅弗氏(Grover’s)病、痱子、單純疱疹、帶狀疱疹、化膿性汗腺炎(hidradenitis suppurativa)、水痘、多汗症、魚鱗癬、膿疱症、毛囊角化症(keratosis pilaris)、瘢痕瘤、角質棘皮瘤、扁平苔癬、扁平苔癬樣角化症、慢性單純苔癬、硬化性苔癬、淋巴瘤樣丘疹病(lymphomatoid papulosis)、皮膚狼瘡、萊姆關節炎、條紋狀苔癬(lichen striatus)、黏液樣囊腫、蕈樣徽菌病(mycosis fungoides)、觸染性軟疣、痣、指甲黴菌、糖尿病脂性漸進壞死、貨幣狀皮膚炎、甲剝離(onychoschizia)、甲黴菌病、苔癬樣糠疹(pityriasis lichenoides)、玫瑰糠疹、毛髮紅糠疹(pityriasis rubra pilaris)、蹠疣、毒長春藤、毒橡樹、汗疱疹、鬚部假毛囊炎(pseudofolliculitis barbae)、肛門搔癢(pruritus ani)及白色糠疹(pityriasis alba)。
傷口典型依傷口深度而分類成四種等級之一:(i)等級I:傷口限制至上皮;(ii)等級II:傷口擴大進入真皮;(iii)等級III:傷口擴大進入皮下組織;及(IV)等級IV(或全深層性傷口(full thickness wound)):骨頭曝露的傷口(例如,骨壓力點,諸如較大粗隆或薦骨)。
於本文中所使用的用語“部分厚度傷口”指為包括等級I-III的傷口;部分厚度傷口的實施例包括燒傷、壓瘡、靜脈性鬱血性潰瘍及糖尿病性潰瘍。
於本文中所使用的用語“深傷口”意謂著包括等級III及等級IV傷口兩者。
於本文中所使用的用語“慢性傷口”指為在三十天內尚未痊癒的傷口。
關於傷口的用語“痊癒”指為修復傷口的過程,諸如藉由疤形成。
在特定的具體實例中,本發明之某些具體實例的組成物促進(即,加速)痊癒過程。
如於本文中所使用,用語“預防”指為在患者中保持疾病、失調或症狀不發生。在某些情況中,該患者可在發展該疾病的風險下,但是尚未診斷為具有該疾病。
可根據本發明的此觀點治療之典型患者包括在需要治療或預防感染性疾病的任何年齡下之哺乳動物,諸如人類或經馴養的動物,包括(但不限於)雄性或雌性的馬類(即,馬)、牛、山羊、綿羊、豬、狗、貓、駱駝、羊駝、美洲駝及犛牛。
本發明考慮到治療全部型式的感染,包括由於炎性疾病(例如,慢性炎性疾病)發生的原發性感染及繼發性感染。
如於本文中所使用,措辭“慢性炎性疾病”指為特徵為持續性發炎的任何醫學症狀。
發炎相關的醫學症狀之實施例包括(但不限於)過敏性疾病、炎性呼吸性疾病、炎性肺病、自體免疫病、炎性惡性病、炎性移殖相關疾病、炎性變性病、炎性損傷、炎性口腔疾病、炎性眼睛症狀、炎性皮膚病、與高敏感性相關
的疾病、炎性心血管疾病、炎性腺疾病、炎性胃腸病、炎性皮膚病、炎性肝病、炎性神經性疾病、炎性肌與骨骼疾病、炎性腎病、炎性全身性疾病、炎性結締組織疾病、炎性腫瘤、壞死及/或炎性植入相關疾病。
該過敏性疾病的實施例包括(但不限於)氣喘、水痘、蕁痲疹、花粉過敏症、粉塵恙蟲過敏症、毒液過敏症、化粧品過敏症、乳液過敏症、化學過敏症、藥物過敏症、昆蟲咬過敏症、動物毛髮皮屑過敏症、有刺植物過敏症、毒長春藤過敏症、過敏性休克、無防禦性過敏、過敏性呼吸道發炎及食物過敏症。
該炎性肺病的實施例包括(但不限於)氣喘、過敏性氣喘、肺氣腫、慢性阻塞性肺疾及支氣管炎。
該炎性呼吸性疾病的實施例包括(但不限於)急性呼吸感染(由例如肺炎嗜性衣原體(Chlamydophila pneumonia)造成)。
該炎性眼睛症狀的實施例包括(但不限於)隱形眼鏡曝露(由例如繡色假單胞菌性角膜炎(P.aeruginosa keratitis)造成)。
該炎性口腔疾病的實施例包括(但不限於)潰瘍性損害。
該高敏感症的實施例包括(但不限於)型式I高敏感症、型式II高敏感症、型式III高敏感症、型式IV高敏感症、即發性高敏感症、抗體媒介性高敏感症(antibody mediated hypersensitivity)、免疫複合體媒介性高敏感症、T淋巴細胞媒介性高敏感症、延遲型式高敏感症、輔助T淋巴細胞媒介
性高敏感症、細胞毒素性T淋巴細胞媒介性高敏感症、TH1淋巴細胞媒介性高敏感症及TH2淋巴細胞媒介性高敏感症。
該炎性心血管疾病的實施例包括(但不限於)閉塞性疾病、動脈粥瘤硬化、心肌梗塞、栓塞、華格納氏(Wegeuer’s)肉芽腫病、高安氏(Takayasu’s)動脈炎、川崎(Kawasaki)症候群、抗第八因子自體免疫性疾病、壞死性小血管炎(necrotizing small vessel vasculitis)、顯微性多血管炎(microscopic polyangiitis)、雀格史錯斯(Churg and Strauss)症候群、少免疫性病灶性壞死性腎絲球腎炎、新月型腎絲球腎炎、抗磷脂症候群、抗體引發性心臟衰竭、血小板減少型紫瘢病、自體免疫性溶血性貧血、心臟性自體免疫、查加斯氏(Chagas’)病及抗輔助T淋巴細胞自體免疫。
該炎性腺疾病的實施例包括(但不限於)胰臟病及型式I糖尿病。
該炎性胃腸病的實施例包括(但不限於)結腸炎、腸炎、克隆氏病、慢性炎性腸疾病、炎性腸症候群、慢性炎性腸疾病、乳糜瀉、潰瘍、胃潰瘍、消化性潰瘍、口腔潰瘍、鼻咽潰瘍、食道潰瘍、十二指腸潰瘍及胃腸潰瘍。
該炎性皮膚病的實施例包括(但不限於)痤瘡、自體免疫性大疱性皮膚病、尋常天疱瘡、大水性類天疱瘡、葉狀天疱瘡、接觸性皮膚炎及藥疹。
該炎性肝病的實施例包括(但不限於)自體免疫性肝炎、肝硬變及膽汁性硬變。
該炎性神經病的實施例包括(但不限於)多發性硬化、阿茲海默氏病、帕金森氏病及重肌無力症。
該炎性結締組織疾病的實施例包括(但不限於)自體免疫性肌炎、原發性索格倫氏症候群、平滑肌自體免疫性病、肌炎、腱炎、韌帶發炎、軟骨炎、關節發炎、滑膜發炎、腕隧道症候群、關節炎、類風濕性關節炎、骨關節炎、關節強硬性脊椎炎、骨骼發炎、自體免疫性耳疾病及內耳自體免疫性疾病。
該炎性腎臟病的實施例包括(但不限於)自體免疫性間質性腎炎及/或腎臟癌。
該炎性全身性疾病的實施例包括(但不限於)全身性紅斑狼瘡、全身性硬化、敗血病性休克、中毒性休克症候群及惡病質。
該炎性移殖相關疾病的實施例包括(但不限於)移植排斥、慢性移植排斥、亞急性移植排斥、急性移植排斥、超急性(hyperacute)移植排斥及移植物抗宿主病。
該炎性腫瘤的實施例包括(但不限於)惡性腫瘤、良性腫瘤、實體腫瘤、轉移性腫瘤及非實體腫瘤。
該炎性損傷的實施例包括(但不限於)擦傷、瘀傷、割傷、刺穿傷、撕裂、碰撞傷、腦震盪、挫傷、熱灼傷、凍瘡、化學燒傷、曬傷、乾化、輻射灼傷、放射性灼傷、煙霧吸入、肌撕裂、肌肉拉傷、肌腱撕裂、肌腱拉傷、韌帶拉傷、韌帶撕裂、伸展過度、軟骨撕裂、骨折、壓迫神經(pinched nerve)及槍傷。
該炎性皮膚病的實施例包括(但不限於)皮膚濕疹、皮膚潰瘍、床/壓瘡、損傷、皮膚炎(例如,異位性皮膚炎、職業性皮膚炎)、毒長春藤、痤瘡、酒糟鼻及水痘。
根據本發明的具體實例,該慢性炎性疾病係異位性疾病、接觸性皮膚炎、貨幣狀皮膚炎、輻射性皮炎、燒傷、非異位性濕疹、壓瘡、氣喘、癌、眼睛炎性疾病、呼吸感染、口腔感染疾病、過敏性呼吸道發炎、炎性腸疾病(IBD)、克隆氏病或潰瘍性結腸炎。
根據本發明的特定具體實例,該慢性炎性疾病係異位性皮膚炎(AD)。
不管該適應證,將治療有效量包含該植物萃取物的組成物或包含其之單位劑型給藥至患者。
如於本文中所使用,用語“植物萃取物”指為可從植物或其任何部分獲得的任何萃取物。該植物萃取物典型包含其活性成分。
因此,該植物萃取物可從水果、水果殼或皮、種子、樹皮、葉、根、地下莖、根皮或植物莖或其組合獲得。
本發明之植物萃取物典型從臭椿、總狀花升麻、五倍子、甘草(歐甘草)、白花前胡、地榆、乳薊、防風、雷公藤、青葙、黃蓮根、丹參根、三白草(例如,葉)、金盞花、龍膽、水薄荷、蒲公英根/西洋蒲公英、地膚子、知母、銀柴胡根、黃花貝母、葛棗獼猴桃、台灣黃柏、無患子、苦蔘根(Radix Sophora flarescents)、蛇床、日本山茶、黃芩、大黃、油菊(Chrysanthemum indicum)、馬齒莧(Portulaca oleracea)、牡
丹皮、當歸、黃耆根、吳茱萸果(Evodia rutaecarpa fruit)、虎杖、土茯苓(Smilax glabra rhizoma)、薑黃、青黛(indigo naturalis)、大風子、雷公藤(Tripterygii wilfordii)、丹參、日本山茶、黃芩、大黃、牡丹(Peonia suffruticasa)、覆盆子(Rubi fructus)、靈香草(Lysimachiae foenumgraeci herba)、椿根皮、前胡根(Peucedani radix)、訶子(Terminariae fructus)、黃連(Coptidis rhizome)及合歡皮(Albizziae cortex)植物獲得。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係水性萃取物、親水性萃取物、非極性萃取物或極性萃取物。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係從地榆獲得。
根據特定的具體實例,該植物萃取物係從地榆根獲得。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係從臭椿獲得。
根據具體實例,該植物萃取物係從臭椿的樹皮或根皮(即,臭椿皮)獲得。因此,根據另一個具體實例,該臭椿植物萃取物由椿根植物萃取物組成。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係從五倍子獲得。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係從甘草獲得。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係從大黃獲得。
根據特定的具體實例,該植物萃取物係從大黃根獲得。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係從黃芩獲得。
根據特定的具體實例,該植物萃取物係從黃芩根獲得。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係從白花前胡
獲得。
根據本發明的具體實例,該植物萃取物係從總狀花升麻獲得。
亦考慮到某些組合。此在下列列出。
該植物萃取物可經進一步處理以純化那些活性成分,諸如具有抗感染活性的那些。測量抗菌活性或殺菌活性的方法在技藝中熟知及包括(沒有限制)紙片擴散(paper diffusion)、紙錠擴散(disk diffusion)、稀膠法及瓊脂稀釋抗微生物分析法(其某些列在下文中及在接著的實施例節中)。存在於本發明之植物萃取物中的活性成分包括(但不限於)臭椿酮、苦楝素、川楝素、總人蔘皂苷、沒食子酸、甘草甙、白花前胡素A、單寧酸及水飛薊賓。該活性成分可從植物萃取物純化或合成地使用。該濃度可藉由上述提及的分析法測量,及對下列臭椿酮所提供的特定範圍可執行於其它活性成分。
根據具體實例,在該植物萃取物中的活性成分係臭椿酮。
如於本文中所使用,用語“臭椿酮”或11.β.,20-環氧基-1.β.,11.α.,12.α.-三羥基苦味(trihydroxypicrasa)-3,13(21)-二烯-2,16-二酮係關於包含在“天堂樹”(日本名稱“珍珠(Shinju)”或“庭漆(Niwaurushi)”;臭椿,史文溝(Swingle),苦木科(Simarubaceae))的樹皮中之化合物及其衍生物,諸如描述在美國專利案號4,665,201及4,774,342中,其於此以參考方式併入本文。該用語係關於天然發生(植物純化)或合成
的化合物。
根據具體實例,當該植物包含臭椿時,該活性成分包含臭椿酮。
根據另一個具體實例,該臭椿植物萃取物包含至少約0.01%、至少約0.05%、至少約0.1%、至少約0.25%、至少約0.5%、至少約1%、至少約2.5%或至少約5%的臭椿酮。
特別考慮到上述每種活性成分之範圍,例如,所包含的臭椿酮係0.01-5%、0.05-2.5%、0.05-1%、0.01-1%。
根據具體實例,包含臭椿酮的組成物係缺乏臭椿物質,諸如纖維素、蛋白質及其它二級代謝物。
植物萃取物典型分成極性及非極性萃取物,及親水性與疏水性萃取物。
因此,該植物萃取物可使用極性溶劑純化(即,極性萃取物),諸如(不限於)乙基醇(乙醇)、丁基醇(丁醇)、甲醇、水或丙醇。本發明的極性萃取物可包含任何百分比的極性溶劑,包括例如1-10%極性溶劑,10-20%極性溶劑,20-30%極性溶劑,30-40%極性溶劑,40-50%極性溶劑,50-60%極性溶劑,70-80%極性溶劑,80-90%極性溶劑及90-100%極性溶劑。
再者,該植物萃取物可使用非極性溶劑純化(即,非極性萃取物)諸如(不限於)異辛烷。本發明之非極性萃取物可包含任何百分比的非極性溶劑,包括例如1-10%非極性溶劑,10-20%非極性溶劑,20-30%非極性溶劑,30-40%非極性溶劑,40-50%非極性溶劑,50-60%非極性溶劑,70-80%
非極性溶劑,80-90%非極性溶劑及90-100%非極性溶劑。
典型來說,疏水性分子趨向於非極性及從而更喜歡其它中性分子及非極性溶劑,再者,親水性分子趨向於極性及藉由水及其它極性物質溶解。
因此,本發明之植物萃取物可藉由在技藝中已知的任何方法生產,包括極性萃取物,諸如水(水性)萃取物或醇萃取物(例如,丁醇、乙醇、甲醇、己烷、氫醇,參見例如史汪森(Swanson)RL等人,2004,Biol.Bull.206:161-72)或非極性萃取物(例如,異辛烷,參見例如,Ng LK及胡佩(Hupe)M.2003,J.Chromatogr A.1011:213-9;狄汪內(Diwanay)S等人,2004,J.Ethnopharmacol.90:49-55。
不管所使用的確切溶劑,植物萃取物典型係藉由將植物樣品(例如,葉子、種子)與小量液體(例如,對每2克的植物樣品10毫升的水、醇或有機溶劑)一起放在研缽中,及使用杵徹底地研磨樣品。當該植物樣品經完整地研磨時,經由離心、過濾、陽離子交換色層分析法等等將植物萃取物與該研磨過的植物物質分離,及若需要時,進一步處理所收集的液體(經由濃縮管柱等等),活性成分可經由親和層析法、質量色層分析法及其類似方法與此萃取物分離。
根據本發明的某些具體實例,用以獲得椿根植物萃取物的範例性方法包括將經乾燥的植物樣品(例如,臭椿的樹皮或根皮)放在沸水中(例如,3小時),然後選擇性在-60℃下於減壓中冷凍乾燥該熱水萃取物。其次,該經冷凍乾燥的萃取物可以極性萃取物(諸如H2O、醋酸乙酯(EtOAc)或丁
醇(n-BuOH))再溶解。然後,若需要的話,可進一步處理所收集的植物萃取物(經由濃縮管柱等等),及該活性成分可經由例如高性能液體色層分析法(HPLC)及其類似方法與此萃取物分離。
根據特定的具體實例,本發明之植物萃取物係一種水性萃取物。為了獲得純化的植物萃取物(例如,在該植物萃取物中含有減低程度的有機鹽及/或重金屬及/或澱粉),該水性植物萃取物典型使用樹脂色層分析法(諸如大孔樹脂)或其它色層分析法進一步純化。
因此,根據另一個具體實例,有提供一種製備用以治療及/或預防感染的組成物之方法,該方法包括:(a)讓植物接受x1-10體積的水,以產生植物萃取物;及(b)使用大孔樹脂減少在該植物萃取物中的有機鹽及/或重金屬及/或澱粉量,其造成存在於該植物萃取物中的活性成分含量提高。
本發明之植物萃取物亦可從多種商業來源獲得,諸如例如來自克羅達隆(Crodarom)(克羅達隆SAS,夏納克(Chanac),法國)。
本發明之組成物可包含單一植物萃取物或可包含數種植物萃取物。
因此,根據本發明的一個具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及至少一種選自於由臭椿植物萃取物、五倍子植物萃取物及甘草植物萃取物所組成之群的額外植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含水性植
物萃取物,其中該植物係選自於由五倍子、白花前胡及總狀花升麻所組成之群。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物、臭椿植物萃取物及甘草植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物、臭椿植物萃取物及五倍子植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及臭椿植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及五倍子植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及甘草植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及大黃植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含地榆植物萃取物及黃芩植物萃取物。
根據本發明的另一個觀點,該組成物包含臭椿植物萃取物及至少一種選自於由五倍子植物萃取物、甘草植物萃取物、大黃植物萃取物及黃芩植物萃取物所組成之群的額外植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含臭椿植物萃取物及五倍子植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含臭椿植物萃取物及甘草植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含臭椿植物萃取物及大黃植物萃取物。
根據本發明的另一個具體實例,該組成物包含臭椿植物萃取物及黃芩植物萃取物。
將察知在該組成物內的每種植物萃取物之濃度可變化。因此,在該組成物內的每種植物萃取物之濃度可在範圍約0.01至10%,0.05至9%,0.1至8%,0.15至7%,0.2至6%,約0.25至5%,約0.3至4%,約0.4至3%,約0.5至2%,約1至2%或約0.1至1%。
根據特定的具體實例,在該組成物內的植物萃取物濃度為約0.5至2%。根據進一步特定具體實例,在該組成物內的植物萃取物濃度為約1%。
根據本發明的另一個觀點,有提供一種包含濃度至少約0.01%的臭椿酮及一化妝或醫藥可接受的載劑之組成物。
根據具體實例,該包含臭椿酮的組成物更包含地榆植物萃取物。諸如在描述於本文的範圍下。
根據具體實例,該包含臭椿酮的組成物更包含額外的植物萃取物,諸如例如五倍子植物萃取物、甘草植物萃取物、大黃根萃取物、蛇床果萃取物及黃芩根萃取物。
根據具體實例,該包含臭椿酮的組成物更包含甘草苷酸二鉀。
將察知在該組成物內的臭椿酮濃度可變化。因此,在該組成物內的臭椿酮濃度可在範圍約0.01至10%,約0.01至7%,約0.01至5%,約0.01至3%,約0.01至2%,約0.01至1%,
約0.01至0.5%,約0.01至0.3%,約0.01至0.2%或約0.01至0.1%。
根據具體實例,本發明之組成物可經調配用於局部、口服、眼睛或肺(例如用於吸入)給藥。其它調配物係描述在下文中及在本發明的範圍內。
本發明之組成物可就其本身或以醫藥或化粧品組成物給藥至患者。
如於本文中所使用,“醫藥或化粧品組成物”指為描述於本文的活性成分與其它化學組分(諸如生理合適的載劑及賦形劑)之製劑。該組成物的目的為使得該活性成分(例如,植物萃取物)容易給藥至患者。
如於本文中所使用,用語“活性成分”指為可對想要的生物效應(即,用於治療或預防感染)負責之植物萃取物組成物。
於此之後,可互換使用的措辭“生理可接受的載劑”及“醫藥可接受的載劑”指為不會對患者造成明顯刺激且不會廢掉所給藥的活性成分之生物活性及性質的載劑或稀釋劑。在這些措辭下包括佐藥。
於此,用語“賦形劑”指為加入至該組成物(醫藥組成物或化粧品組成物)以進一步使得本發明之活性成分之給藥容易的惰性物質。
用於藥物之調配及給藥的技術可在PA伊士頓(Easton)的馬克出版公司(Mack Publishing Co.)之最新版“雷氏醫藥科學(Remington’s Pharmaceutical Sciences)”中找到,其以參
考之方式併入本文。
本發明之每種組成物可在共調配物或在分別的組成物(例如二種調配物、三種調配物等等)中包含該植物萃取物。當未共調配時,該植物萃取物組成物之給藥可共同或相繼地執行。
在任何情況下,該組成物可經調配用於許多給藥型式。
合適的給藥途徑可例如包括口服、直腸、經黏膜(特別經鼻)、腸或非經腸式傳遞,包括肌肉內、皮下及髓內注射和鞘內、直接室內、心內(例如,進入右或左心室腔、進入共同的冠狀動脈)、靜脈內、腹膜內、鼻內或眼內注射。
再者,可將該組成物以局部而非全身性方式給藥,例如,藉由將包含該活性成分(例如,植物萃取物)與生理可接受的載劑之組成物直接注射進入患者的組織區域中(例如,進入圍繞經感染的皮膚之健康皮膚中)。
該組成物的合適給藥途徑可例如包括眼睛(例如,至眼睛)、局部(例如,至角質組織,諸如皮膚、毛髮、指甲、頭皮)、經皮、皮下、肺及口服(例如,藉由口)給藥。
根據具體實例,本發明之組成物局部、肺(例如,經由吸入)、口服或眼睛地給藥。
如於本文中所使用,措辭“口服給藥”指為藉由口,例如以液體、溶液、錠劑、膠囊或藥液酏形式給藥本發明之組成物。
如於本文中所使用,措辭“皮給藥”指為將本發明之組成物塗佈或分佈到身體之表面上(即,皮膚、頭皮、毛髮、
指甲及其類似地方),以到受感染影響的表面上為較佳。
如於本文中所使用,措辭“經皮給藥”指為穿越皮膚(例如,經由經皮貼片或藉由經皮植入物)給藥本發明之組成物用於全身性給藥。該經皮給藥典型在接近鄰近感染位置處執行,但是,經皮給藥可在如由一般技藝人士看見之適合的任何解剖學位置處進行。
如於本文中所使用,措辭“皮下給藥”指為在皮膚下(即,完全埋在皮膚中,例如經由皮下植入物)給藥本發明之組成物。皮下給藥典型在接近鄰近感染位置處執行,但是,皮下給藥可在如由一般技藝人士看見之適合的任何解剖學位置處進行。
本發明之組成物可藉由在技藝中熟知的方法製造,例如,藉由習知的混合、溶解、粒化、糖衣錠製造、研碎、乳化、囊封、包覆或冷凍乾燥方法。
因此,根據本發明的某些具體實例所使用之組成物可以習知的方式,使用一種以上生理可接受的載劑(包含賦形劑及輔助劑)調配,使得該活性成分容易加工成可化妝或醫藥使用之製劑。適合的調配物係與所選擇的給藥途徑相依。
對注射來說,該組成物的活性成分可經調配在水溶液中,較佳為在生理相容的緩衝劑中,諸如漢克氏(Hank’s)溶液、侖爵氏(Ringer’s)溶液或生理鹽緩衝液。對經黏膜給藥來說,在該調配物中使用合適於欲滲透的障壁之滲透劑。此滲透劑在技藝中廣泛已知。
對口服給藥來說,該組成物可容易地藉由結合該活性
化合物與在技藝中熟知的載劑(例如,醫藥可接受的載劑)調配。此載劑能夠讓該組成物被調配成用於由患者口服攝取的錠劑、藥丸、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、糖漿、料漿、懸浮液及其類似物。用於口服用途的藥物製劑可如下製得:使用固體賦形劑,選擇性研磨所得的混合物,及在加入合適的輔助劑(若必要時)後處理該顆粒混合物,以獲得錠劑或糖衣錠核心。特別是,合適的賦形劑有摻合料,諸如糖類,包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇;纖維素製劑,諸如例如,玉蜀黍澱粉、小麥澱粉、米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃耆膠、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉;及/或生理可接受的聚合物,諸如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)。若必要時,可加入崩解劑,諸如交聯的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或藻酸或其鹽(諸如藻酸鈉)。
對糖衣錠核心提供合適的塗層。為此目的,可使用濃縮的糖溶液,其可選擇性包括阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波剖(Carbopol)凝膠、聚乙二醇、二氧化鈦、漆溶液及合適的有機溶劑或溶劑混合物。可將染料或顏料加入至錠劑或糖衣錠塗層,用以鑑別或標出活性化合物劑量的不同組合之特徵。
可口服使用的組成物包括由明膠製得的推入配合膠囊和由明膠及塑化劑(諸如甘油或山梨糖醇)製得的軟性密封膠囊。該推入配合膠囊可在混合物中包含活性成分與摻合料(諸如乳糖)、結合劑(諸如澱粉類)、潤滑劑(諸如滑石或硬脂酸鎂),及選擇性,安定劑。在軟膠囊中,該活性成分可
溶解或懸浮在合適的液體中,諸如脂肪油、液態石蠟或液體聚乙二醇類。此外,可加入安定劑。用於口服給藥的全部調配物應該在合適於所選擇的給藥途徑之劑型中。
對頰給藥來說,該組成物可採用以習知的方式調配之錠劑或菱錠劑型式。
對藉由鼻吸入給藥來說,用於根據本發明的某些具體實例使用之活性成分合宜地以氣霧劑噴灑表現形式從增壓包或使用合適的推進劑(例如,二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯-四氟乙烷或二氧化碳)之噴霧器輸送。在加壓氣霧劑的情況中,該劑量單位可藉由提供一閥來輸送計量供給的量而決定。可將使用在分送器中的膠囊及匣(例如,明膠)調配成包含該化合物與合適的粉末基礎(諸如乳糖或澱粉)之粉末混合物。
描述於本文的組成物可調配成用於非經腸式給藥,例如,藉由巨量注射或連續輸液。用於注射的調配物可以單位劑型存在(例如,在安瓿中或在多劑量容器中),且選擇性加入防腐劑。該組成物可為在油狀或水性媒劑中的懸浮液、溶液或乳液,及可包括調配劑諸如懸浮、安定及/或分散劑。
用於非經腸式給藥的組成物包括呈可溶於水的形式之活性製劑的水溶液。額外的是,該活性成分懸浮液可如適當地製備成油狀或水基底注射懸浮液。合適的親油性溶劑或媒劑包括脂肪油,諸如芝麻油;或合成的脂肪酸酯,諸如油酸乙酯、三酸甘油脂或脂粒。水性注射懸浮液可包括
增加該懸浮液黏度的物質,諸如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡萄聚糖。該懸浮液亦可選擇性包含合適的安定劑或可增加活性成分的溶解度以允許製備高濃度溶液之試劑。
再者,該活性成分可呈粉末形式,以在使用前以合適的媒劑(例如,無菌、無發熱質之水基底溶液)構成。
本發明之某些具體實例的組成物亦可使用例如習知的栓劑基底(諸如可可脂或其它甘油酯)調配在直腸組成物中,諸如栓劑或保留灌腸法。
合適於使用在本發明的某些具體實例之上下文中的組成物包括包含量有效的活性成分以達成想要的目的之組成物。
如於本文中所使用,措辭“治療有效量”指為有效預防或治療感染的活性成分(即,植物萃取物組成物或其活性成分,如上所述)量。本發明之組成物的治療有效量亦在向下調節患者細胞(例如嗜鹼性細胞,參見例如接著的實施例節之實施例3及6)的TH2型式細胞素(例如,IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等等)之分泌上有效。本發明之組成物的治療有效量進一步在向上調節(例如刺激)患者細胞(例如角質細胞細胞,參見例如接著的實施例節之實施例4及7)之人類β-防禦素(例如人類β-防禦素3)表現性上有效。再者,本發明之組成物的治療有效量可包括抗菌活性(例如對抗金黃色葡萄球菌及耐氨比西林性大腸桿菌,參見例如接著的實施例節之實施例9)。
根據具體實例,治療有效量的臭椿酮濃度包括至少約
0.01%,至少約0.05%,至少約0.1%,至少約0.25%,至少約0.5%,至少約1%,至少約2.5%或至少約5%,或範圍約0.01至10%,約0.01至7%,約0.01至5%,約0.01至3%,約0.01至2%,約0.01至1%,約0.01至0.5%,約0.01至0.3%,約0.01至0.2%或約0.01至0.1%。
治療有效量之決定充分地在熟習該項技術者的能力內,特別按照於本文所提供的詳細揭示。
對在本發明之方法中所使用的任何製劑來說,該治療有效量或劑量可從試管內分析法初始地估計。例如,治療有效量可藉由例如PCR(例如,即時PCR)分析細胞(例如,表現出β-防禦素的角質細胞細胞株)中之人類β-防禦素的向上調節(即,增加)表現性來進行試管內評估。再者,治療有效量可藉由例如抗體(例如,IL-13特定的單株抗體)分析細胞(例如,分泌IL-13之嗜鹼性細胞株)的TH2型式細胞素(例如,IL-13)之向下調節(即,減少)分泌來進行試管內評估。
此外,可在組織培養系統(例如,體外系統)中或在動物模型中調配出劑量,以達成想要的濃度或效價。此訊息可使用來更準確地決定在人類中有用的劑量。例如,治療有效量可藉由測量在受炎性狀態影響的患者中於給藥該組成物前及後之發炎程度活體內評估[例如,使用血液試驗,諸如全血球計數(CBC);藉由觀察皮膚傷口等等]。
描述於本文的活性成分之毒性及治療效力可藉由標準醫藥程序試管內、在細胞培養物或實驗動物中決定。從這些試管內及細胞培養分析物及動物研究所獲得的資料可使
用來調配使用於人類之劑量範圍。該劑量可依所使用的劑型及所使用的給藥途徑而變化。可由各別內科醫生考慮到患者的症狀來選擇精確調配物、給藥途徑及劑量。(參見例如,芬溝(Fingl),E.等人(1975),“治療的藥物學基礎(The Pharmacological Basis of Therapeutics)”,第1章,p.1。)
依症狀的嚴重性(例如,感染的面積、深度及程度)及治療的患者之反應性而定,該服藥在持續數天至數週、數月或數年的治療過程中可係單或複數次給藥,或直到達成治癒或達成減低感染。再者,給藥該組成物以在發展出感染的風險下之患者(例如,罹患慢性炎性疾病的患者)中預防感染發生。該組成物可給藥一段時期(例如,數天、數週、數月或幾年)以便預防感染發生。
根據本發明的具體實例,本發明之組成物一天給藥至少一次。根據另一個具體實例,該組成物一天給藥兩次、一天三次或更多。
根據本發明的具體實例,該給藥係長期地執行。
根據另一個具體實例,執行該給藥至少約10天,12天,14天,16天,18天,21天,24天,27天,30天,60天,90天或更多。
當然,欲給藥的組成物量將依欲治療的患者、痛苦的嚴重性、給藥方式、開處方的內科醫生之判斷等等而定。
本發明之組成物可調配成單位劑量形式。在此形式中,該製劑再分成包含適當量的活性成分之單位劑量(諸如用於單一給藥)。該單位劑型可係經包裝的製劑,該包裝包
含各別的製劑量,例如,安瓿、分送器(dispender)、黏著性繃帶、非黏著性繃帶、紙巾、嬰兒溼紙巾(baby wipe)、紗布、護墊及衞生棉。
根據本發明之教導的單位劑型可包含濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可進一步包含濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可進一步包含濃度約0.5-5%重量/重量、約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可進一步包含濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可進一步包含濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的大黃植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可進一步包含濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的黃芩植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可包含濃度約0.5-5%重量/重量、約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可包含濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可包含濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可包含濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%;濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%;及濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可包含濃度約0.5-5%重量/重量、約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%;濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%;及濃度約0.5-5重量/重量%、約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物,或根據特定的具體實例其係約1重量/重量%。
根據本發明之教導的單位劑型可包含一選自於由局部、口服、肺或眼睛單位劑型所組成之群的單位劑型,其包含濃度至少約0.01重量/重量%,約0.01-1重量/重量%,約0.01-2重量/重量%,約0.01-3重量/重量%,約0.01-4重量/重
量%或約0.01-5重量/重量%的臭椿酮。
可根據特別的應用改變或調整在製劑的單位劑量中之活性化合物的量。
若必要時,本發明之組成物可存在於包裝或分送器裝置(諸如FDA認可的成套調配物)中,其可包含一種以上包含活性成分的單位劑型。該包裝可例如包含金屬或塑膠箔,諸如泡殼包裝。該包裝或分送器裝置可伴隨著給藥用法說明。該包裝或分送器裝置亦可伴隨著呈由管制藥物之製造、使用或銷售的政府機關所規定的形式之告示,此告示反映出該組成物呈由該機關批准用於人類或獸醫給藥之形式。此告示例如可包括由美國食品藥物管理局(U.S.Food and Drug Administration)對處方藥物認可的標籤或經認可的產品說明書。亦可製備在醫藥可接受的載劑中調配包含本發明之製劑的組成物,將其放在適當容器中,及標記用於所指定的症狀之治療,如上述進一步詳述般。
因為本發明之組成物於活體內使用,該組成物以高純度及實質上無潛在有害污染物為較佳,例如,至少國家食品(National Food)(NF)等級,通常至少分析等級,及較佳為至少醫藥等級。至在使用前必需合成所提供的化合物之程度,此合成或隨後的純化應該較佳地產生實質上無任何潛在污染性中毒性試劑(其可已經在合成期間或純化程序使用)的產物。
可將額外的因子併入本發明之組成物(即,如描述於此上述的植物萃取物)中。這些包括(但不限於)細胞外間質組
分(例如,玻連蛋白(vitronectin)、板素、膠原質、彈力蛋白)、生長因子(例如FGF 1、FGF 2、IGF 1、IGF 2、PDGF、EGF、KGF、HGF、VEGF、SDF-1、GM-CSF、CSF、G-CSF、TGF α、TGF β、NGF及ECGF)、生長因子[例如,紅血球生成素、纖維組織母細胞生長因子、顆粒球聚落生成刺激因子(G-CSF)及顆粒球巨噬細胞聚落刺激因子(GM-CSF)]、荷爾蒙(例如,胰島素、生長激素(GH)、CRH、瘦身素(leptin)、催乳激素及TSH)、血管生成因子(例如,血管生成素(angiogenin)及血管生長素(angiopoietin))、凝血及抗凝血因子[例如,第一因子、第十三因子、組織因子、鈣、vWF、蛋白質C、蛋白質S、蛋白質Z、纖維結合素、抗凝血酶、肝磷脂、纖維蛋白溶酶原,低分子量肝磷脂(克立生(Clixan))、高分子量激肽原(HMWK)、血漿激肽釋放黴原、纖維蛋白溶酶原活化劑抑制劑-1(PAI1)、纖維蛋白溶酶原活化劑抑制劑-2(PAI2)、尿激酶、凝血酶調節素、組織纖維蛋白溶酶原活化劑(tPA)、α2-抗血織維蛋白溶酶及蛋白質Z-相關的蛋白質酶抑制劑(ZPI)]、細胞素抑制劑(例如環孢素A、α-2-巨球蛋白、戊烷脒、己酮可可鹼、地塞米松(dexamethasone))、化學激素抑制劑(例如,胜肽3、NR58.3-14-3)、酵素(例如,內糖苷酶(endoglycosidases)、外切糖苷酶(exoglycosidases)、核酸內切酶類、核酸外切酶類、胜肽酶類、脂肪分解酶類、氧化酶類、去羧酶類、水化酶類(hydrases)、硫酸軟骨素酶(chondroitinase)、硫酸軟骨素酶ABC、硫酸軟骨素酶AC、玻尿酸酶、硫酸角質素酶
(keratanase)、乙醯肝素酶類(heparanases)、乙醯肝素酶剪接變方(heparanase splice variance)、膠原酶、胰蛋白酶、觸酶類(catalases))、神經傳遞質類、神經胜肽類(例如,P物質)、維他命(例如,D-生物素、氯化膽鹼、葉酸、肌醇、菸鹼醯胺、D-泛酸、鈣鹽、吡多醛.HCl、吡多醇(pyrodixine).HCl、核黃素、硫胺素.HCl、維他命B12、維他命E、維他命C、維他命D、維他命B1-6、維他命K、維他命A及維他命PP)、碳水化合物(例如,單/二/多糖,包括葡萄糖、甘露糖、麥芽糖及果糖)、離子、螯合劑(例如,Fe螯合劑、Ca螯合劑)、抗氧化劑(例如,維他命E、槲黃素(quarcetin)、超氧化物清除劑、超氧物歧化酶、H2O2清除劑、自由基清除劑、Fe清除劑)、脂肪酸(例如,三酸甘油脂、磷脂類、膽固醇類、游離脂肪酸類及非游離脂肪酸類、脂肪醇、亞麻油酸、油酸及硫辛酸)、抗生素(例如,盤尼西林類、頭孢子菌素類抗生素及四環素類)、胺基酸類(例如,基本及非基本(從A-Z),特別是麩醯胺酸及精胺酸)、鹽類(例如,prurivat鹽及硫酸鹽)、硫酸鹽(例如,硫酸鈣)、類固醇類(例如,雄性激素、雌激素、前促孕素類(progestagens)、葡萄糖皮質素類及礦物皮質酮類)、止痛劑、麻醉劑、抗菌劑、抗酵母菌劑、抗黴菌劑、抗病毒劑、益生素類(pro-biotic agents)、抗原生動物藥、止癢劑、抗皮膚炎藥、止吐劑、消炎藥、抗過度角化藥、止汗藥、治皮脂漏劑、抗組織胺劑、缺氧誘導因子(例如,HIF-1α及β及HIF-2)、兒茶酚胺類(例如,腎上腺素及正腎上腺素)、核苷類及核苷酸類(例如,嘌呤類及嘧啶類)、
前列腺素類(例如,前列腺素E2)、白三烯類、生血素類(例如,血小板生成素)、蛋白多醣(例如,硫酸乙醯肝素、硫酸角質素)、羥基磷灰石類(hydroxyapatites)[例如,羥磷石灰(Ca10(PO4)6(OH)2)]、肝球蛋白類(Hp1-1、Hp2-2及Hp1-2)、超氧化物歧化酶類(例如SOD 1/2/3)、氧化氮類、氧化氮供體(例如,硝基普魯士酸鹽,西格瑪亞得富(Sigma Aldrich),聖路易斯(St.Louis),MO,美國)、麩胱苷肽過氧化酶類、水合化合物(例如,血管加壓素)、細胞(例如,血小板)、細胞媒質(例如,M199、DMEM/F12、RPMI、Iscovs)、血清(例如,人類血清、胎牛血清(fetal calf serum)、胎牛血清(fetal bovine serum))、緩衝劑(例如,希皮士(Hepes)、碳酸氫鈉)、清潔劑(例如,屯(Tween))、消毒劑、草本植物、水果萃取物、蔬菜萃取物(例如,甘藍菜、黃瓜)、花卉萃取物、額外的植物萃取物、類黃酮類(flavinoids)(例如,石榴果汁)、香料、葉子(例如,綠茶、甘菊)、多酚類(例如,紅葡萄酒)、蜂蜜、凝集素、微粒子、奈米粒子(微脂體(lyposomes))、微胞、碳酸鈣(CaCO3,例如,沈澱碳酸鈣、研磨/粉碎碳酸鈣、艾巴卡(albacar)、PCC、GCC)、方解石、石灰石、研磨大理石、研磨石灰石、石灰及白堊(例如,白堊(whiting chalk)、香檳白堊、法國白堊)。
根據特定的具體實例,本發明之組成物不包含β-防禦素。
本調配物亦可包括包含氫、烷基、芳基、鹵基、羥基、烷氧基、烷基胺基、二烷基胺基、醯基、羧基、碳醯胺基
(carboamido)、磺醯胺基團、胺醯基、醯胺基團、胺基團、硝基、有機硒化合物、烴及環狀烴之成分、物質、元素及材料。
本調配物可與下列物質結合:諸如過氧化苯、血管收縮劑、血管擴張劑、水楊酸、視黃酸、壬二酸、乳酸、羥乙酸、pyreuric酸、單寧類、亞苄基樟腦及其衍生物、α羥基類、界面活性劑。
本發明的某些具體實例之組成物可與聚乙二醇(例如PEG,SE-PEG)生物共軛(bioconjugated),其保存該活性成分(即,本發明之植物萃取物組成物)的穩定性(例如,抗蛋白質酶活性)及/或溶解度(例如,在生物流體(諸如血液、消化液)內),同時保存其生物活性及延長其半生期。
除了揭示於本文的試劑之醫藥有效量外,本發明的此觀點之組成物亦包括皮膚學或化粧品可接受的載劑。
措辭“皮膚學可接受的載劑或稀釋劑”或“化妝可接受的載劑或稀釋劑”指為合適於局部施加到皮膚(即,角質組織)上、具有好的美觀性質、與本發明的活性試劑及任何其它組分相容、及對使用在哺乳動物上安全且無毒性的載劑。
將察知本發明之載劑(例如,化妝可接受的載劑、醫藥可接受的載劑)可包含輔助醫學症狀(例如,異位性皮膚炎)之治療的成分(例如,植物萃取物)。
因此,本發明的某些具體實例之載劑包含至少一種植物萃取物。
根據一個具體實例,在該載劑內的植物萃取物包含大
黃根萃取物、蛇床果萃取物及/或黃芩根萃取物。
根據具體實例,該載劑可進一步包含甘草苷酸二鉀。
根據一個具體實例,該化粧品載劑包含大黃根萃取物、蛇床果萃取物、黃芩根萃取物及甘草苷酸二鉀。
為了提高該活性成分(例如,本發明之植物萃取物)的經由皮吸收,可將一種以上的一些試劑加入至該醫藥或化粧品組成物,包括(但不限於)二甲基亞碸、二甲基乙醯胺、二甲基甲醯胺、界面活性劑、阿佐恩(azone)、醇、丙酮、丙二醇及聚乙二醇。
在本發明之組成物中所使用的載劑可呈廣泛多種形式。這些包括乳液載劑,包括(但不限於)油在水中、水在油中、水在油中在水中、及油在水中在聚矽氧乳液中、乳膏、軟膏、水溶液、洗劑、肥皂、糊、乳液、凝膠、噴霧或氣霧。
根據本發明的乳液通常包含醫藥有效量揭示於本文的試劑及脂質或油。該脂質及油類可來自動物、植物或石油,及可為天然或合成(即,人造)。合適的乳化劑之實施例描述在下列中:例如,美國專利案號3,755,560,狄克特(Dickert)等人,1973年8月28日頒予;美國專利案號4,421,769,狄克松(Dixon)等人,1983年12月20日頒予;及麥克卡其翁(McCutcheon’s)的清潔劑及乳化劑,北美版,第317-324頁(1986),其每篇全文皆以參考方式完整併入本文。
該乳液亦可包括抗發泡劑以減少在塗佈至角質組織後發泡。抗發泡劑包括高分子量聚矽氧類及在技藝中熟知用
於此用途之其它物質。
合適的乳液可依想要的產物形式具有廣泛範圍的黏度。
本發明之組成物可調配成由醫藥或化粧品工業使用於皮膚塗敷的任何多種形式,包括溶液、乳液、噴霧、乳膏、軟膏、油膏、凝膠、油、洗劑、洗髮精、潤髮乳等等,如進一步描述在下列。
本發明之醫藥或化粧品組成物可調配成足夠黏,以保持在治療的皮膚區域上、不容易蒸發、及/或不容易藉由以水沖洗移除,而是可以肥皂、清潔劑及/或洗髮精輔助移除。
用以製備具有此性質之組成物的方法由熟習該項技術者熟知,及詳細描述在雷氏醫藥科學,1990(前述);及藥學劑型及藥物傳輸系統(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems),第6版,威廉斯及威金斯(Williams & Wilkins)(1995)中。
本發明之組成物包括(但不限於)乳液及乳膏,可包含皮膚學或化妝可接受的保溼劑及/或潤膚劑。如於本文中所使用,“潤膚劑”指為對預防或緩解乾燥有用和用於保護皮膚的物質。廣泛種類的合適潤膚劑已知及可使用於本文。參見例如,沙加林(Sagarin),化粧品、科學及技術,第2版,第1冊,PP.3243(1972),其包括許多合適作為潤膚劑的物質之實施例及以參考之方式完整地併入本文。範例性潤膚劑有甘油。可使用的額外潤膚劑包括(但不限於)烴油及蠟,諸如礦物油、礦脂及其類似物;蔬菜及動物油及脂肪,諸如
橄欖油、棕櫚油、蓖麻油、玉米胚芽油、大豆油及其類似物;及羊毛脂及其衍生物,諸如羊毛脂、羊毛脂油、羊毛脂蠟、羊毛脂醇類及其類似物。其它潤膚劑包括具有10至20個碳原子的脂肪酸(諸如包括肉豆蔻酸、硬脂酸、異硬脂酸、棕櫚酸及其類似物)之酯類,諸如肉豆蔻酸甲酯、肉豆蔻酸丙酯、肉豆蔻酸丁酯、硬脂酸丙酯、異硬脂酸丙酯、棕櫚酸丙酯及其類似物。其它潤膚劑包括具有10至20個碳原子的脂肪酸,包括硬脂酸、肉豆蔻酸、月桂酸、異硬脂酸、棕櫚酸及其類似物。潤膚劑亦包括具有十至二十個碳原子的脂肪醇,諸如鯨蠟基、肉豆蔻基、月桂基、異硬脂基、硬脂基及其類似物。
根據具體實例,本發明之化粧品組成物包含地榆植物萃取物、臭椿植物萃取物、大黃根萃取物、蛇床果萃取物、黃芩根萃取物及甘草苷酸二鉀。
根據具體實例,該化粧品組成物進一步包含保溼劑及潤膚劑。
本發明之組成物亦可包括額外的組分,其加入例如以讓該組成物富含香味及皮膚營養因子。
在穩當的醫學判斷範圍內選擇此等組分,以合適於使用在人類角質組織上而沒有引發毒性、不相容性、不穩定性、過敏性反應及其類似狀況。此外,此選擇性組分係有用的,其限制條件為它們不會無法接受地改變本發明之活性化合物的利益。
CTFA化粧品成分手冊,第二版(1992)描述出廣泛多種
非為限制在護膚工業中通常使用的化粧品成分,其合適於使用在本發明之組成物中。這些成分種類的實施例包括:研磨物質、吸收劑、美觀組分(諸如香料、顏料、色素/著色劑、香精油、皮膚感受劑(skin sensates)、收斂劑等等,例如,丁香油、薄荷脂、樟腦、桉油、番櫻桃酚、乳酸酯、金鏤梅蒸餾液)、抗痤瘡劑、抗結塊劑、抗發泡劑、滅菌劑(例如,丁基胺基甲酸碘丙酯)、抗氧化劑、結合劑、生物添加劑、緩衝劑、膨脹劑、螯合劑、化學添加劑、著色劑、化妝用收斂劑、化粧品滅菌劑、變性劑、藥用收斂劑、外部止痛劑、用以輔助該組成物的膜形成性質及親和力之膜形成劑或物質(例如,聚合物,例如,廿碳烯與乙烯基吡咯啶酮之共聚物)、遮光劑、pH調整劑、推進劑、還原劑、隔離劑、皮膚調節劑(例如,保濕劑,包括各種各樣及閉合)、皮膚鎮靜及/或修補劑(例如,泛醇及衍生物(例如,乙基泛醇)、蘆薈、泛酸及其衍生物、尿囊素、紅沒藥醇及甘草苷酸二鉀)、皮膚治療劑、凝膠劑、及維他命及其衍生物。
如上述提及,本發明之組成物可直接塗佈至皮膚。再者,其可經由正常皮膚塗佈,藉由在技藝中已知的多種經皮藥物傳輸系統(諸如經皮貼片,其以時間釋放方式將該組成物釋放進皮膚中)輸送。在技藝中已知的其它藥物傳輸系統包括增壓氣霧瓶、離子透入法或超音波透入法(sonophoresis)。使用離子透入法來增加皮膚滲透性及促進經皮傳遞。美國專利案號5,667,487及5,658,247揭示出合適於將治療藥物超音波-離子透入媒介性傳輸穿過皮膚的離
子音波(ionosonic)裝置。再者或此外,亦可使用脂粒或微胞作為傳遞媒劑。
將察知本發明之組成物可與其它現在實行的治療(諸如(不限於)光治療[例如,用於炎性皮膚炎的光治療]及抗生素治療(例如,局部或全身性))組合著使用。
根據本發明的另一個具體實例,有提供一種鑑定具有炎性調節劑性質藥劑之方法,該方法包括:(a)讓該藥劑與細胞接觸;及(b)化驗來自該細胞的人類β-防禦素分泌物,其中在接觸後β-防禦素分泌物向上調節係該藥劑具有炎性調節劑性質的象徵。
根據具體實例,該藥劑包含植物萃取物或其活性成分。
如於本文中所使用,用語“向上調節”指為在細胞中的人類β-防禦素之RNA及/或蛋白質程度或DNA複製數增加,而造成細胞的β-防禦素分泌增加。
典型來說,人類β-防禦素程度從在未以該植物萃取物處理的細胞中之相同程度開始增加。較佳為一並執行在未以植物萃取物處理的細胞中之人類β-防禦素程度的測量,以偵測提高的表現性。
將察知根據本教導可將天然表現出人類β-防禦素或經基因修改以表現出β-防禦素的任何細胞使用來分析人類β-防禦素(例如,人類β-防禦素3、β-防禦素2或β-防禦素1)表現性的向上調節(即,增加)。
根據特定的具體實例,該細胞係上皮細胞(例如,角質細胞)。
可根據本教導使用在技藝中已知用以偵測人類β-防禦素多核苷酸或多胜肽的表現性之任何方法。
因此,例如,可使用RNA偵測方法,諸如北方墨點分析、逆轉錄PCR(RT-PCR)[例如,使用例如Light CyclerTM(羅趣(Roche))的半定量型RT-PCR、定量型RT-PCR]、RNA就地雜交(RNA-ISH)、就地RT-PCR染色及寡核苷酸微陣列分析[例如,使用阿飛美崔(Affymetrix)微陣列(阿飛美崔(Affymetrix)®,聖克拉拉,CA)]。
根據特定的具體實例,使用即時PCR來分析細胞的人類β-防禦素分泌物。
再者,可使用人類β-防禦素特定的抗體,經由免疫複合物之形成[即,在存在於生物樣品中之人類β-防禦素抗原(人類β-防禦素胺基酸序列)與人類β-防禦素特定的抗體間形成之複體],如例如藉由ELISA或藉由西方墨點法分析來測量人類β-防禦素胺基酸序列(即,人類β-防禦素蛋白質)之存在及/或程度。
如於本文中所使用,用語“約”指為±10%。
用語“包括”、“包含”、“具有”及其同源字意謂著”包括(但不限於)”。
用語“由...組成”意謂著“包括及限制至”。
用語“實質上由...組成”意謂著該組成物、方法或結構可包括額外的成分、步驟及/或部分,但是只有在該額外的成分、步驟及/或部分不顯著地改變所主張的組成物、方法或結構之基本及新穎的特徵下。
如於本文中所使用,除非上下文有明確地指定,否則單一形式“一”、“一種”及“該”包括複數參考。例如,用語“化合物”或“至少一種化合物”可包括複數種化合物,包括其混合物。
遍及本申請案,本發明的多個具體實例可以範圍形式顯現。應瞭解呈範圍形式的描述僅為了方便及簡潔,且應該不解釋為在本發明的範圍上不可變更的限制。此外,範圍之描述應該視為已特別揭示出在該範圍內的全部可能的次範圍和各別數值。例如,諸如1至6的範圍之描述應該視為已特別揭示出在其範圍內的次範圍,諸如1至3,1至4,1至5,2至4,2至6,3至6等等;和各別的數目,例如,1,2,3,4,5及6。此不管範圍的幅度皆適用。
無論於本文中指示出何種數值範圍,其意謂著包括在所指示出的範圍內之任何所引用的數字(分數或整數)。措辭“範圍/在第一指示出的數字至第二指示出的數字間之範圍”,及“範圍/從第一指示出的數字至第二指示出的數字之範圍”於本文中互換地使用,及意謂著包括第一及第二指示出的數字及於此之間的全部分數及整數數字。
如於本文中所使用,用語“方法”指為用來達成所提供的工作之方式、工具、技術及程序,包括(但不限於)由化學、藥物學、生物學、生化學及醫學技藝之從事者已知或容易地從已知的方式、工具、技術及程序發展之那些方式、工具、技術及程序。
要察知,為了清楚起見,本發明的某些特徵(其在分別
的具體實例之上下文中描述)亦可在單一具體實例中組合著提供。相反地,為了簡潔起見,本發明的多個特徵(在單一具體實例的上下文中描述)亦可分別地或以任何合適的次組合或如合適地在本發明之任何其它描述的具體實例中提供。在多個具體實例的上下文中所描述之某些特徵不欲視為那些具體實例的基本特徵,除非該具體實例沒有那些元素無法活動。
本發明如於此上述描出及如在下列申請專利範圍節中所主張的多個具體實例及觀點在下列實施例中找到實驗支撐。
現在參照下列實施例,其與上述一起以非為限制的方式闡明本發明。
通常來說,於本文中所使用的命名法及在本發明中所使用的實驗程序包括分子、生化學、微生物學及重組DNA技術。此技術在文獻中有完整解釋。參見例如,“分子選殖:實驗室手冊”,山姆布魯克(Sambrook)等人,(1989);“現代分子生物學方法(Current Protocols in Molecular Biology)”,I-III冊,歐蘇貝爾(Ausubel)R.M.編輯(1994);歐蘇貝爾等人,“現代分子生物學方法”,約翰威利及宋斯(John Wiley & Sons),巴替莫(Baltimore),馬里蘭(Maryland)(1989);佩巴爾(Perbal),”分子選殖實施指南(A Practical Guide to Molecular Cloning)”,約翰威利及宋斯,紐約(1988);瓦特森(Watson)等人,“重組DNA”,科學美國圖書
(Scientific American Books),紐約;畢冷(Birren)等人(編輯),“基因組分析:實驗室手冊系列”,1-4冊,冷泉港實驗室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press),紐約(1998);如在美國專利案號4,666,828、4,683,202、4,801,531、5,192,659及5,272,057中提出的方法;“細胞生物學:實驗室手冊”,I-III冊,西里斯(Cellis)J.E.編輯(1994);“現代免疫學方法(Current Protocols in Immunology)”,I-III冊,寇立根(Coligan)J.E.編輯(1994);史帝代斯(Stites)等人(編輯),“基本及臨床免疫學”(第8版),阿普雷通及蘭吉(Appleton & Lange),諾瓦克(Norwalk),CT(1994);米謝爾(Mishell)及西吉(Shiigi)(編輯),“在細胞免疫學中的選擇方法(Selected Methods in Cellular Immunology)”,W.H.富禮門(Freeman)及公司,紐約(1980);可獲得的免疫分析廣泛描述在專利及科學文獻中,參見例如,美國專利案號3,791,932、3,839,153、3,850,752、3,850,578、3,853,987、3,867,517、3,879,262、3,901,654、3,935,074、3,984,533、3,996,345、4,034,074、4,098,876、4,879,219、5,011,771及5,281,521;“寡核苷酸合成”,給特(Gait)M.J.編輯(1984);“核酸雜交”,哈美斯(Hames)B.D.及希金斯(Higgins)S.J.編輯(1985);“轉錄及轉譯”,哈美斯B.D.及希金斯S.J.編輯(1984);“動物細胞培養”,夫雷希尼(Freshney)R.I.編輯(1986);“固定細胞及酵素(Immobilized Cells and Enzymes)”,IRL出版社(IRL Press),(1986);“分子選殖實施指南”,佩巴爾B.,(1984)及“酵素學方法(Methods in
Enzymology)”,1-317冊,學術出版社(Academic Press);“PCR方法:方法及應用指南”,學術出版社,聖地牙哥(San Diego),CA(1990);馬謝克(Marshak)等人,“蛋白質純化策略及特徵-實驗室程序手冊(Strategies for Protein Purification and Characterization-A Laboratory Course Manual)”,CSHL出版社(CSHL Press)(1996);其全部皆以參考方式併入本文,如若完整於本文中提出般。遍及本文件提供其它的一般參考。在其中的程序咸信在技藝中熟知及為了讀者方便而提供。包含在其中的全部資訊皆以參考之方式併入本文。
將KU812細胞(人類嗜鹼性細胞,ATCC CRL-2099TM)播種進培養燒瓶中,使用RPMI,以10%胎牛血清(FBS)及50微克/毫升正大黴素及50微克/毫升兩性黴素B或青黴素/鏈黴素(pen/strep)任一種補充。在37±2℃下,在5±1%CO2下培養所播種的細胞,且每星期更換培養媒質2-3次直到已生長足夠的細胞數目。
根據品質檢驗來選擇草本植物(原料的差異及鑑定、重金屬分析、殺蟲劑殘餘檢查及活性成分含量分析)。
以x10體積的水均漿化草本物質薄切片,及在80℃下萃
取2小時伴隨著攪拌。使用相同程序重覆該萃取三次,及一起混合該三次萃取物。收集均漿,過濾過400網目篩,濃縮(80℃,0.1百萬帕),然後在10000轉/分鐘下離心20分鐘。
藉由大孔樹脂純化萃取物,然後濃縮至如需要的體積。根據品質標準來分析該等萃取物的品質檢驗(天然特徵、相對密度、pH值、重金屬分析、微生物學分析、活性成分含量測量)。
對使用於分析來說,將細胞播種進在100微升沒有酚紅的細胞培養媒質中的96井板(每井大約0.1至0.2x106個細胞)中。其次,將測試物質(1000微升,以其2x最後濃度在細胞培養媒質中製備)加入至每井,以將該培養的最後體積帶至200微升。在37±2℃及5±1%CO2下培養該板24小時。在培養後,將20微升之20:1的MTS:PMS溶液(普羅美加(Promega))加入至每井,及讓該板返回培養器額外4小時。然後,使用讀盤器在490奈米下讀取該板。
在使用於IL-13釋放分析前,在沒有FBS的RPMI媒質中培養KU812細胞二天。在此二天培養後,對該IL-13分析使用含有FBS的RPMI。
將KU812細胞播種進在100微升RPMI中的96井板(每井大約0.2至0.3x106個細胞)中。其次,將測試物質(100微升,以其2x最後濃度在細胞培養媒質中製備)加入至每井,及在37±2℃及5±1%CO2下培養細胞大約6小時。在此預處理時期
後,將10微升包含PMA及離子黴素(ionomycin)的濃縮原料溶液加入至每井(在該培養液中,20奈克/毫升PMA及1 μM離子黴素最後濃度),及在37±2℃及5±1%CO2下培養該板過夜。然後,分析該細胞培養上層液的IL-13。
製備一系列標準物(0-40皮克/毫升)及將這些標準物每種100微升給料進在96井板中的二個井(雙份)中。隨後,將25微升的每種細胞培養上層液樣品及100微升的稀釋劑B加入至額外的井(以稀釋劑B稀釋樣品,以將其IL-13程度帶至標準曲線的範圍內),及在室溫下培養該板2.5小時。在培養後,以清洗緩衝液清洗該板三次。一旦移除最後清洗液,加入100微升結合生物素的偵測抗體。在室溫下培養該板一小時後,再次如上所述清洗該板。然後,將HRP-抗生蛋白鏈菌素(100微升)加入至每井及在室溫下培養該板45分鐘。一旦移除最後的清洗液,將100微升的基質溶液(過氧化氫+四甲基聯苯胺作為發色團(chromagen))加入至每井。一旦發生足夠的顏色發展程度,將50微升終止溶液(2N硫酸)加入至每井及在460奈米下讀取該板。
測量未以測試物質處理的井之平均吸收及使用來代表100%生存力(未處理)。然後,使用下列方程式,使用此值來測量以測試物質處理的井之生存力(處理):((處理)/(未處理))x100
對IL-13 ELISA分析來說,使用已知的標準物之吸收值來產生標準曲線。然後,從此標準曲線決定未知樣品的值。
由本發明家使用KU812人類嗜鹼性培養模型來評估該草本萃取物在IL-13釋放上發揮效應之能力。在此所使用的分析系統中,以測試物質預處理KU812細胞大約6小時,然後伴隨著測試物質仍然存在,以佛波醇肉豆蔻酸酯醋酸酯(PMA)及鈣離子載體離子黴素兩者刺激細胞。在加入PMA及離子黴素後,培養該細胞過夜。隔天,化驗細胞培養上層液之IL-13釋放。
細胞素IL-4及IL-13係由許多細胞型式產生,諸如T細胞、肥胖細胞及嗜鹼細胞。雖然已經長期認為IL-4係獨自衍生自CD4+T細胞,近來的試管內研究已明確地顯示出人類嗜鹼細胞對在培養液中由周邊血液白血球所產生的IL-4及IL-13負最大責任[比嘉(Higa)S.等人,J Allergy Clin Immunol(2003)111(6):1299-1306]。亦增加證據嗜鹼細胞在異位性疾病(諸如支氣管性氣喘、異位性皮膚炎及異位性鼻炎)之發病原理上扮有角色。
嗜鹼細胞係一小群包含以嗜鹼性染料染色的細胞質顆粒之周邊血液白血球。嗜鹼細胞及肥胖細胞共享數種生化及功能性性質,例如,對IgE的高親和力受體之表現性,及
在活化後釋放組織胺及其它中介物的能力。成熟的嗜鹼細胞典型在循環中發現,然而它們可在發炎組織中發現。另一方面,獨有在組織中發現肥胖細胞。
肥胖細胞及嗜鹼細胞與特定抗原交聯導致炎性中介物及細胞素(諸如IL-4、IL-13及IL-5,其關於IgE製造、TH2分化及過敏性發炎係關鍵分子)之釋放。
端視此資訊,本發明家決定以以KU812細胞操作,一種從患有急變(blast crisis)型嗜鹼性白血病的患者建立之人類嗜鹼性細胞株。
KU812細胞係一種發育不全的嗜鹼細胞前驅細胞及亦提供作為嗜鹼細胞分化的模型。KU812細胞之分化引發數種改變,包括總組織胺含量增加、粒化增加及對IgE的高親和力受體之表現性。
不同因素已經顯示出KU812細胞株分化成嗜鹼細胞似的細胞[尼爾森(Nilsson)G.等人,Immunology(1994)81:73-78;福田(Fukuda)T.等人,Blood(1987)70:612]。一些細胞素可引發其分化成嗜鹼細胞似的細胞,包括TNF-α、IL-6、IL-3及IL-4。當以丁酸鈉與來自人類T細胞株Mo.3的調理媒質之組合培養KU812細胞時,看見分化。同樣地,來自異位性個體之培養的周邊血液單核細胞(PBMC)之調理媒質引發KU812細胞分化。尚未標出在是此效應的原由之調理媒質上層液中的因子特徵。亦已顯示出KU812細胞可在缺乏外源因素下,在無血清狀態下進行分化。
本發明家使用KU812人類嗜鹼性細胞作為模型細胞型式來找出抑制IL-13表現性的草本植物。在其校正用於分析的適當系統之研究中,本發明家發現在無血清狀態下二天後,KU812細胞表現出較高的IL-13程度,大概由於細胞分化。因此,本發明家已決定在加入刺激劑及草本萃取物前使用無血清狀態。
防禦素(hBD)由人類皮膚角質細胞在損傷或發炎後產生及由肥胖細胞、嗜鹼細胞及型式-2輔助細胞產生的細胞素向下調節。已良好建立出AD病灶與IL-4及IL-13表現性增加相關[阿巴內西(Albanesi)C.等人,J.Immunol.(2007)179(2):984-992]。細胞素抑制hBD-2及hBD-3 mRNA表現性兩者[阿巴內西C.等人,前述]。因此,IL-4及IL-13可說明在這些病灶中的防禦素低表現性。為了擴大防禦素表現性的了解,本發明家測試該草本植物萃取物在KU812人類嗜鹼性細胞中的IL-4及IL-13表現性程度上之抑制效應。
因為IL-13的功能與IL-4那些有相當大地重疊,抑制IL-13的組分通常亦抑制IL-4表現性。因此,本發明家決定使用KU812細胞測試該草本植物萃取物在IL-4表現性上的抑制效應。發明家在以PMA及離子黴素刺激後測量到非常些微的IL-4表現性(資料無顯示)。文獻檢視顯露出由促發因子(諸如IL-3)所使用的某些訊號有助於IL-13產生而非IL-4[比嘉等人,J Allergy Clin Immunol(2003)111(6):1299-1306]。因此,本發明家僅連續測量IL-13表現性。
本發明家選擇使用二種基質作為正對照:黃櫨素及地塞米松。黃櫨素先前顯示出抑制由A23187刺激誘發的KU812細胞之IL-4、IL-13及IL-5 mRNA表現性[比嘉等人(2003),前述]。在本結果中,黃櫨素之抑制明顯,但是,抑制百分比相當地低。因此,發明家加入地塞米松作為正對照,其具有高及明顯的抑制百分比。地塞米松先前顯示出減低發炎及抑制免疫系統,可能藉由抑制由T細胞及亦由嗜鹼細胞產生的IL-4及IL-13[清水(Shimizu)等人,Clin Exp Allergy(1998)28(4):497-503]。
使用角質細胞細胞株。將HaCaT細胞播種進培養75 T燒瓶中,使用DMEM(吉普扣(Gibco)),以10%FBS(吉普扣)及抗生素(吉普扣)補充。在5%CO2及37℃下培養細胞,且當群集(生長表面對板表面的比率%)到達~90%時,更換培養媒質。為了篩選萃取物,將萃取物(0.3毫升)加入至培養HaCaT細胞(~90至95%群集)之上層液,及培養該細胞48小時。
根據製造商之推薦,以三肉(TRIZOL)(因維錯俊生活科技(Invitrogen Life Technologies))分離總RNA。以乙醇析出RNA及再懸浮於焦碳酸二乙酯H2O中。再純化來自HaCaT細胞的RNA一次,以獲得足夠的RNA純度。藉由分光光度計測量RNA濃度,及僅有在藉由電泳於瓊脂糖凝膠上確認RNA之完整性後,讓所獲得的總RNA轉換成總cDNA。
根據製造商的用法說明,使用iScript cDNA合成工具箱(生物雷德(Bio-Rad)),從200奈克純RNA合成cDNA。使用AB塔克門(Taqman)MasterMix(應用生物系統(Applied Biosystems),產品編號:4369016,美國),一起分析人類β-防禦素3表現性與GAPDH表現性。用於人類β-防禦素3及GAPDH的引子係塔克門基因表現分析(Taqman Gene Expression Assays)所盤存的引子。
在ABI即時PCR 7500(應用生物系統)中,在40循環處(95℃,30秒)進行放大,接著額外的循環(58℃,30秒)。藉由即時PCR系統軟體來分析資料。對GAPDH表現性之即時PCR來計算、調整每種萃取物的相對表現性(GAPDH標準化)。在每次即時PCR實驗中,證實獲得100、10及1倍稀釋的cDNA之表現性標準(參見第1圖)。未經處理的HaCaT細胞之對照測試顯示出此使用HaCaT細胞的即時PCR係非常敏感及可信賴(參見第2圖)。
根據品質檢驗來選擇草本植物(原料的差異及鑑定、重
金屬分析、殺蟲劑殘餘檢查及活性成分含量分析)。
以x10體積的水均漿化草本物質薄切片,及在80℃下萃取2小時伴隨著攪拌。使用相同程序重覆萃取三次,並將三次萃取物混合在一起。收集均漿,過濾過400網目篩,濃縮(80℃,0.1百萬帕),然後在10000轉/分鐘下離心20分鐘。
藉由大孔樹脂純化萃取物,然後濃縮至如需要的體積。根據品質標準(天然特徵、相對密度、pH值、重金屬分析、微生物分析、活性成分含量測量)分析該萃取物的品質檢驗。
藉由本發明檢驗人類β-防禦素之刺激,此係以先前的科學報導為基準,其顯示出在人類皮膚中人類β-防禦素(特別是異構型2及3)提供作為重要的抗微生物障礙。人類β-防禦素在患有異位性皮膚炎的患者皮膚中之減低的表現性造成異位性皮膚炎相關的微生物(諸如金黃色葡萄球菌)異常移生。雖然兩異構型之減低的表現性與異位性皮膚炎相關,最近的數篇科學報導已顯示出人類β-防禦素異構型3在異位性皮膚炎的病狀中扮演主要角色。人類β-防禦素異構型3顯示出寬廣的抗微生物活性範圍,及其自身在生理濃度下具有強的抗金黃色葡萄球菌活性[哈德(Harder)等人,Nature(1997)387:861;哈德等人,J Biol Chem(2001)276:5707-13],同時hBD-2需要LL-37存在來殺死金黃色葡萄球菌[學軍錢巴(Xuejun Chenba)等人,J.Dermatol.Science(2005)40(2),123-132]。
參見於此上述的實施例1。
使用不同草本萃取物(參見下列表1)對測試物質建立安全濃度範圍以使用於IL-13抑制分析。所進行的MTS分析之結果顯現在第3A-D圖中。該值代表相對於對照(未處理)的生存力百分比。使用這些結果對使用於IL-13抑制分析之測試物質建立安全濃度範圍。測試物質標識如在表1中描出。
根據MTS結果來決定所測試的測試物質濃度(上述顯現)。所進行的IL-13抑制分析之結果顯現在第4A-G圖且總整理在下列表2中,其顯示出數種草本萃取物明顯減低IL-13釋放量,包括例如甘草、總狀花升麻及乳薊。使用濃度10 μM的地塞米松作為正對照。
本發明家使用KU812細胞測試不同草本萃取物在IL-4表現性上的抑制效應。此研究的目的為測量該測試物質是否可抑制從以PMA及離子黴素刺激的KU812細胞中釋放出IL-13。已觀察到數種草本萃取物明顯減低IL-13釋放量,包括例如甘草、總狀花升麻及乳薊。草本萃取物的IL-13抑制百分比顯現在下列表2中。
參見實施例2,於此上述。
在本研究中測試400種草本萃取物。在這些中,當考慮其在GAPDH標準化前或後之直接效應時,僅有六種草本萃取物在人類β-防禦素-3(hBD-3)上顯示出明顯的刺激效應。因此,雖然幾乎全部測試的草本萃取物皆在hBD-3表現性上顯示出無明顯效應,但有六種草本萃取物當在濃度0.33%下測量時顯示出刺激效應,如顯示在第5-9圖中。
編號136及137的草本萃取物各別顯示出573±48%及693±182%的刺激百分比,如顯示在第5圖中。有趣的是,編號136係在中國生長的覆盆子及編號137係在韓國生長的覆盆子。具有hBD-3刺激效應的草本萃取物有:靈香草、椿根皮、五倍子、前胡根及合歡皮(各別為編號171、194、232、246及362)。這六種草本萃取物在hBD-3上的刺激效應及統計值之總整理列在下列表3及第10圖中(測試六種經標識的草本萃取物三次及計算統計平均值)。
為了測試通常使用來萃取的溶劑之效應,本發明家在熱水、在50%EtOH或在50%MeOH中萃取所指示出的草本來源。
為了鑑別出從經標識的草本萃取物中萃取出活性成分的更有效方法,本發明家使用三種不同萃取溶劑(50%EtOH、50%MeOH及100%蒸餾水)來萃取經選擇的草本植物,以比較其hBD-3刺激。藉由標準化來自每種溶劑的對照組之值來計算刺激。如顯示在第11圖中,編號136、137、171、194、232、246及362的草本萃取物使用熱水萃取物具
有最高的人類β-防禦素3刺激。其它溶劑(50%EtOH及MeOH)顯示出相對高的活性,但是比水萃取物低(65%至95%)。
參見於此上述的實施例1。
在一級試管內研究後,本發明家發現10種抑制IL-13表現性(如藉由ELISA測量)的草本萃取物,及6種刺激β-防禦素3表現性(如藉由RT-PCR測量)的草本萃取物。
其次,本發明家已選擇在兩種種類中具有最明顯活性的草本萃取物。忽視會具有毒性的草本萃取物(諸如雷公藤)或未知用於人類應用且不具有INCI名稱的草本萃取物(諸如訶子),雖然它們已經具有明顯活性。
為了選擇最後的草本混合物,本發明家測試具有IL-13抑制性的草本萃取物其刺激β-防禦素的能力之活性,及具有刺激防禦素的草本萃取物其抑制IL-13釋放的能力之活性。發明家亦於兩分析(ELISA及RT-PCR)中測量在草本萃取物間之協同效應。選擇七種草本萃取物(如描述在下列表4中)。
測量在一級試管內研究中具有β-防禦素刺激活性之草本萃取物(參見上述實施例4及表4)其在MTS分析中的細胞生存力,以評估該測試物質使用在IL-13抑制分析中之安全濃度。所進行的MTS分析結果顯現在第12圖中。該值代表相對於對照(未處理)的生存力百分比。
測量在一級試管內研究中具有β-防禦素刺激活性的草本萃取物(參見上述實施例4及表4)其抑制IL-13釋放的能力。所進行的IL-13抑制分析結果顯現在第13圖中,及顯示出臭椿與五倍子兩者具有IL-13抑制活性。所測試的測試物質濃度各別至MTS結果(0.3%)。使用濃度10 μM的地塞米松作為正對照。
此研究的目的為測量已發現可刺激在角質細胞中的β-防禦素表現性之測試物質是否亦可抑制以PMA及離子黴素刺激的KU812細胞釋放出IL-13。臭椿及五倍子草本萃取物具有明顯IL-13抑制活性。
在第一研究中具有IL-13抑制的草本萃取物當中,甘草
(歐甘草)及地榆亦在此分析中具有最明顯抑制。
參見於此上述的實施例2。
在第一研究中具有明顯IL-13抑制性的四種草本萃取物當中(參見上述實施例3),當考慮其在GAPDH標準化前及後的直接效應(藉由RT-PCR測量)時,二種萃取物亦已經顯示出在人類β-防禦素-3(hBD-3)上的刺激效應,換句話說,其係乳薊及地榆。甘草(歐甘草)及總狀花升麻萃取物未顯示出任何明顯效應。地榆萃取物在β-防禦素刺激上具有最明顯的刺激效應(第14A-D圖)。該值總整理在第14E圖及下列表5中。
此研究的目的為測量在第一研究中已發現可抑制IL-13釋放的測試物質(參見上述實施例3)是否亦可刺激角質細胞(HaCaT細胞)的β-防禦素3表現性。在第一研究(參見上述實施例3)中,四種草本萃取物顯示出明顯減低IL-13的
釋放量。在此當中,乳薊亦在β-防禦素3上顯示出刺激效應(5.87倍)及地榆在β-防禦素3上顯示出最明顯的刺激效應(27.4倍)。
參見於此上述的實施例1及2。
藉由ELISA(對IL-13抑制活性)及藉由RT-PCR(對防禦素-3刺激活性)測量在草本萃取物間之協同效應。
使用下列草本植物組合觀察IL-13釋放之減低:1+2+4(1.甘草;2.總狀花升麻;4.地榆)及1+3+4(1.甘草;3.乳薊;4.地榆),當所顯現的測試物質在總濃度0.3%時。但是,當與每種草本萃取物單獨之抑制比較時,無闡明明顯的協同效應(第15A圖)。當測試物質的濃度減低至0.01%(單獨或彼此組合)時,在IL-13釋放上未觀察到明顯減低(資料無顯示)。
草本萃取物在β-防禦素3刺激上之協同效應顯示在第15B及15C圖中。地榆萃取物已顯示出與臭椿(第15B圖)及亦與五倍子(第15C圖)有協同效應。
此研究的目的為測量該測試物質是否在IL-13抑制或β-防禦素3刺激活性上包含協同活性。測試草本混合物其抑制KU812細胞釋放IL-13的能力。該混合物抑制IL-13釋放。當
測量刺激角質細胞HaCaT細胞的β-防禦素3表現性時,在(1%)臭椿與(0.33%)地榆間顯示出協同作用。伴隨著加入0.33%地榆萃取物,臭椿的活性提高2倍。亦在(1%)五倍子與(0.33%)地榆間顯示出協同作用。(1%)五倍子之刺激活性藉由加入地榆提高175%至280%。
如在於此上述的實施例2中所描述。
如在於此上述的實施例1中所描述。
如在於此上述的實施例2中所描述。
使用如先前描述的紙片擴散抗微生物分析法篩選草本萃取物其對金黃色葡萄球菌及耐氨比西林性大腸桿菌之抗微生物活性。簡而言之,將0.2毫升(2毫克/毫升)之25種經選擇的草本水萃取物負載在紙盤上。大腸桿菌抗藥性藉由加入濃度0-50微克/毫升之經稀釋的氨比西林證實。將該盤負載在含有包含金黃色葡萄球菌及耐氨比西林性大腸桿菌的瓊脂覆蓋物之瓊脂板上。藉由環燒著該盤的透明區域(殺死區域)之外觀檢驗抗微生物活性。
如由本發明所教導利用大孔樹脂(其有效地吸收、富含化及純化在草本萃取物中的活性成分)富含化該活性成分。此程序移除有機鹽及重金屬,及亦移除大量澱粉,因此,改善產物穩定性、擴大產物閑置壽命及產生較好的萃取物活性。使用具有不同多孔結構參數(孔洞尺寸、孔洞比率及比表面積)及不同極性(非極性、弱極性、中極性及強極性)的樹脂。
草本萃取物效力主要依活性成分的濃度而定。非常濃的萃取物之商業製造係一種複雜的方法,其時常產生沈積物及複雜的標準化。另一方面,樹脂色層分析法造成雜質(在蒸發後之殘餘物)濃度減低及高程度與治療有關聯的活性成分,其允許高生物學效力及較好的標準化。
因此,本發明家已發展出對具有高效力作為IL-13抑制劑及/或作為防禦素刺激劑之草本萃取物使用大孔樹脂的萃取方法。經選擇作為標誌之草本萃取物及其活性成分顯現在下列表6中。最初發現作為IL-13抑制劑的草本萃取物已經在上述試管內研究中藉由樹脂色層分析法最佳化,及顯現在第14A-E及15A-C圖中。
亦使用樹脂色層分析法最佳化最初發現作為β-防禦素刺激劑的草本植物,及偵測其抑制IL-13釋放的能力及與在最佳化前之活性萃取物比較。草本萃取物在以樹脂色層分析法最佳化前及後之抑制IL-13的能力之比較顯現在第16圖及下列表7中。因此,結果顯示出樹脂色層分析法提高草本萃取物的生物活性(2倍,對臭椿萃取物來說;1.13倍,對五倍子萃取物來說;及36倍,對白花前胡萃取物來說)。
進一步篩選草本萃取物其對抗金黃色葡萄球菌及耐氨比西林性大腸桿菌的抗微生物活性。本發明家使用紙片擴散抗微生物分析法來測試25種所選擇的草本萃取物。首先,藉由加入濃度0-50毫克/毫升之經稀釋的氨比西林證實大腸桿菌抗藥性。如所預計,該耐氨比西林性大腸桿菌甚至在以50毫克/毫升氨比西林處理後顯示出強的存活。其次,測試金黃色葡萄球菌及耐氨比西林性大腸桿菌於草本萃取物存在下之生長(參見下列表8及第17A-B圖)。如顯示在表8及第17A-B圖中,五倍子及訶子萃取物具有強的對抗金黃色葡萄球菌及耐氨比西林性大腸桿菌兩者之抗微生物活性,同時黃連萃取物僅抑制大腸桿菌。
選擇具有最明顯作為IL-13抑制劑及/或作為防禦素刺激劑活性之萃取物來發展最後產物。
在β-防禦素上具有明顯刺激的草本萃取物有:臭椿、
五倍子及白花前胡。臭椿及五倍子兩者亦具有明顯的IL-13抑制活性。
在一級分析中具有最明顯IL-13抑制活性的草本萃取物有:甘草、總狀花升麻、乳薊及地榆。地榆亦已經顯示出明顯的β-防禦素3刺激活性及亦與臭椿及五倍子萃取物具有協同效應。
因此,本教導的最後草本混合物包含:臭椿、地榆、甘草及總狀花升麻。
對包含最後混合物的草本萃取物製得分析證書(CoA)。該草本萃取物的主要特徵顯現在下列表9中。
CoA代表每種草本萃取物在使用大孔樹脂色層分析法最佳化萃取物後之活性成分(標誌)、在蒸發後之殘餘物及pH的值。對全部草本萃取物來說,重金屬具有值20ppm。對每種萃取物進行微生物學測試,同時總計數為<102/克;黴菌及酵母菌<102/克;及發現所試驗的全部草本萃取物對沙門桿菌屬(Salmonela)及大腸菌群(E.Coliform)係負。
本發明家發展出包含所選擇的草本萃取物混合物之O/W調配物。除了草本萃取物效力外,將該調配物發展成濕潤與異位性皮膚炎患者相關的乾燥皮膚,因此,該調配物亦包括潤膚劑及保溼劑物質。
該產物標明出具有pH大約五,程度類似於正常皮膚。包含正常皮膚pH的局部產物保持角質層的完整性,及脂質薄結構之形成及成熟。該pH值在異位性皮膚炎患者中具有重要的角色,特別關於皮膚障壁功能及金黃色葡萄球菌移生。
如先前描述般,藉由SCORAD指數來評估AD程度,一種使用來評估濕疹的程度及嚴重性之臨床工具(SCORing Atopic Dermatitis)[歐連傑(Oranje)AP等人,Br J Dermatol.(2007)157(4):645-8;歐連傑AP,Curr Probl Dermatol.(2011)41:149-55]。SCORAD典型由皮膚病專家使用來決定在治療前及後該治療是否已經有效。
SCORAD的參數有:
為了決定程度,典型在身體製圖上對受濕疹影響的位置畫上深淺不同的顏色。使用9種尺度來計算該受影響區域(A)如為整個身體的百分比,如下:頭及頸9%、上肢每肢9%、下肢每肢18%、前軀幹18%、背面18%及生殖器、每支手掌及每支手背每種皆1%。
加總每個區域的計分。總區域為“A”,其具有最大可能100%。
選擇典型的濕疹區域。在此區域中,評估下列跡象每種的強度如為無(0)、溫和(1)、適當(2)或嚴重(3),如下:紅色、腫大、滲泌/結痂、抓痕、皮膚粗厚(苔癬化)及乾燥(此在無發炎區域中評估)。
強度分數加在一起以提供“B”(最大18)。
由患者評分每種主觀症狀(即,癢及失眠)或相對使用視覺模擬程度,其中0為不癢(或不失眠)及10為最差可想像得到的癢(或失眠)。加總這些分數以提供“C”(最大20)。
個體的SCORAD為A/5+7B/2+C
讓參與臨床試驗(參見於下列本文中的進一步細節)的患者接收以載劑,一種包含能減低搔癢的草本萃取物及能水合皮膚的保溼劑之產物,其能夠治療溫和及適當的AD症狀;或以治療乳液,其除了在載劑乳液中所使用的成分外,亦包含二種額外的草本萃取物:地榆根萃取物及臭椿萃取物(參見表10之在臨床試驗中所使用的範例性治療乳液調配物)治療。該載劑乳液亦包含二種抑制IL-13的萃取物。
參與本臨床試驗的納入準則如下:男性及女性年齡大於18歲;異位性皮膚炎之診斷必需符合哈尼芬(Hanifin)準則(至少3個基本特徵及至少3個次特徵);在本發明家的見解中,異位性皮膚炎過去7天已經穩定;在最近5天無新潮紅;能夠塗佈研究產物一天至少兩次(每天上午及傍晚)21天久;患者同意在研究期間不改變其生活方式(包括其通常的身體衛生產品(肥皂)、每天盆浴及淋浴次數、使用來清洗衣物的洗衣清潔劑及織物軟化劑);患者同意在研究期間僅使用測試產品及患者願意簽署知情同意書。
本臨床試驗的排除準則如下:患有另一種可能干擾包括感染異位性皮膚炎病灶的臨床評估之皮膚疾病/症狀的患者;對化粧品產品或所測試的調配物之任何成分具有先前過敏症歷史的患者;在第0天的14天內已經接收任何用於異位性皮膚炎的局部或全身性免疫調節劑(諸如,皮美克羅林馬斯(pimecrolimus)或泰克利瑪(tacrolimus))或類固醇類之患者;在第0天的28天內已經接收照光治療的患者;在試驗期間延長日曬時間;在第0天的14天內已經使用任何實驗治療的患者;及懷孕或餵奶女性。
參與係自願。本發明家對每個登記者提供知情同意書形式副本。
在研究期間,患者進行3次臨床探望排程:
1.篩選評估/基線(第0天)
2.接下來的探望-第7天,第14天
3.完成探望-第21天
(由於患者有空性,准許±2天的彈性)。
在第7天、第14天及第21天(±2天)時,患者返回門診評估。進行下列評估:程度、水腫、紅斑、搔癢、苔癬化、滲泌、失眠症及乾度。根據這些測量計算SCORAD及進行繼發性感染評估。
在第一及最後探望時,進行TEWL及皮膚水合測試。
根據國際標準進行研究,其符合相關的優良臨床試驗規範(GCP)之規章。
全部患者皆告知目標、方法、預計的利益、可能的危害及機密資料。亦告知候選人他們可在任何時間點自由拒絕參與。
一級結果評量:包括分級的AD症狀之SCORAD:程度、水腫、滲泌、表皮剝脫、苔癬化、紅斑、搔癢、乾度及失眠症[時間範圍:第0天、第7天、第14天及第21天]。
二級結果評量:
1. TEWL及水合測試[時間範圍:第0天及第21天]
2.繼發性感染的次數及等級
3.副作用的次數[時間範圍:第0天、第7天、第14天及第21天]
總共50位參與研究的患者(即,同步進行二種研究,一組包含30位患者,以治療乳液治療;及一組20位患者以載劑乳液治療,總結參見下列表11)。三十位患者以治療乳液治療及20位患者以載劑治療21天。兩組中的平均年齡類似。雖然在兩組間有性別差異(表11),但在兩組中的基線AD嚴重性(如藉由SCORAD測量)類似(下列表12)。再者,患有嚴重症狀(SCORAD>50)的AD患者亞族群之比例在兩組中亦相同(在載劑組中25%及在治療組中26.7)(參見下列表12)。
在第14及21天時,在載劑與治療組之SCORAD間皆觀察到顯著差異(兩者p<0.001),如與基線值比較(參見第18圖),此指示出兩種製劑有效率減低AD外觀。
在組間無發現SCORAD的整體差異。在3週後,治療組的平均計分稍微低於載劑組(p=0.087)。但是,各別參數(如顯示在下列)的仔細分析揭示出明顯改變。
分別檢驗在載劑及治療組中主要的SCORAD組成部分(程度、強度、主觀)對總SCORAD明顯隨著時間下降的貢獻(各別為第19及20圖)。
在第19圖中的曲線圖闡明在研究期間於載劑組中程度參數的穩定性。此組成部分不受總SCORAD計分改變影響。另一方面,當與基線比較時,在第14及21天時的強度及主觀參數改變高度顯著(各別為p<0.001及p<0.01)。
在治療組中獲得相同結果(參見第20圖)。該程度不促成總SCORAD值改變。當與基線比較時,強度及主觀參數在第14及21天時明顯下降(兩者p<0.001)。
強度參數係六種AD症狀的分數總和。在第21天時,強度參數的整體差異及特別是,在組間之差異高度顯著(第21圖,p<0.01)。
比較上,在組間於主觀參數(由搔癢及失眠症狀的計分總和組成,如由患者評估)上無觀察到差異(第22圖)。
一起採用這些結果,其顯示出當與其基線比較時,每
組在第14及21天時的強度及主觀參數改變高度顯著。在研究期間,兩組的程度保持穩定,因此減少總SCORAD下降的顯著性。雖然發現到在程度參數上無明顯改變,在每個測量區域中的病灶嚴重性明顯減低,如由強度參數減低顯示出。
在21天後,在組間之比較顯示出在以治療身體乳液治療後,於強度上較高的明顯減低(52%對32%在載劑組中,第21圖)。在相對減低的主觀參數上無觀察到顯著差異(55%在治療對42%在載劑組,第22圖)。
各別組成部分(紅斑、水腫、滲泌、表皮剝脫、苔癬化及乾度)強度的較高解析分析顯示出在兩治療組中於症狀上經歷明顯改良的AD患者之實質百分比。僅根據從經歷該症狀的患者取得之資料進行分析。如在結果中闡明,在溫和-適當的AD中,二種常見的症狀(紅斑及乾度)在多於70%的患者中已經改善(第23圖)。
在第21天時,在滲泌、表皮剝脫、苔癬化及乾度之分數間的差異明顯與基線不同(參見下列表13,p<0.01)。紅斑的計分亦在第14天時明顯改善(p<0.02)。
治療身體乳液比載劑身體乳液更有效,在21天後,在多於70%患者中明顯減低全部症狀(第24圖)。
有趣的是,與繼發性感染相關的滲泌症狀在93%患者中改善86%(參見下列第24圖及表14)。在全部症狀中,在第14天及第21天時的分數對基線間之差異高度顯著(p<0.001),除了水腫外,其僅在第21天明顯不同(p<0.02)。
在載劑與治療組間之比較顯露出治療身體乳液在AD症狀的嚴重性上有極優異的減低效應。明顯較高的AD患者數目經歷AD症狀改善,如由本發明家評估(第25圖)。
治療組具有實質上較高的滲泌改善程度,如與載劑對應物比較(參見下列表15)。
因此,在治療21天後,在下列的強度減低下闡明治療身體乳液對載劑的最明顯利益:水腫(50%對27%),滲泌(86%對39%),表皮剝脫(53%對23%)及苔癬化(53%對28%)(參見表15)。
僅根據從指示出他們經歷該症狀的患者所採取之資料進行分析。
已觀察到由載劑身體乳液引起搔癢明顯減低(p<0.001),同時不影響患者的失眠,其在基線上非常低(平均=1.6)(參見第26圖)。
在治療組中,在搔癢及失眠兩者之減低上到達顯著性(參見第27圖,p<0.001)。再者,失眠的基線平均計分比載劑組高(平均=2.6)。
當比較時,在21天後,於二組間,在癢與失眠減少間無發現顯著性(參見第28圖)。不管在治療組中較高的失眠平均下降,小樣品大小對到達顯著差異扮演限制性角色。
當治療及載劑治療組兩者在搔癢上皆具有明顯減低而在二組間沒有任何明顯改變時,因此,該乳液減低搔癢的能力視為主要基於載劑活性。
分析在基線探望時患有外觀症狀嚴重(SCORAD>50)及不嚴重(溫和至適當,SCORAD<50)的AD患者亞族群之SCORAD改變。
當比較乳液在治療溫和至適當(SCORAD<50)的AD患者之效率時,治療身體乳液的效力比載劑高出35%(46%對34%),同時治療身體乳液在治療嚴重AD(SCORAD>50,典型伴隨著繼發性感染)時的效力比載劑高出多如50%(42%對21%,參見第29圖)。
一起採用,結果顯示出治療身體乳液在AD症狀上明顯優異的效應,特別在與嚴重AD及繼發性感染相關的症狀上。
保溼程度係乳液提供機械障壁及維持皮膚濕度的能力之適應證。其係藉由2種方法測試:TEWL-測量通過皮膚的蒸發
皮膚水合-保留在皮膚中的液體量。
在基線探望及第21天時進行測量。
結果闡明在兩組中於基線與第21天皮膚水分測量間有顯著差異(參見第30圖,p<0.001)。兩者乳液將皮膚水分改善至相同程度。
在天然產物化學領域之研究中,已經廣泛地了解古典
生物分析導引的份化係一種煩人且費力的方法。在過去十年間,已經伴隨著分析技術的改良(包括結合HPLC的活性剖析)發展出更有效用於印跡(tracking)生物學及藥理學活性的天然產物之策略。此使用HPLC的技術已經知曉為一種有效率可直接應用至機制及細胞基底的分析之小型化方法。
HaCaT細胞培養: 在37.0℃及5%CO2下,將人類角質細胞(HaCaT)培養在包含10%胎牛血清(FBS)及抗生素/抗黴菌劑(盤尼西林G、鏈黴素、雙性黴素B)的DEMD媒質中。
椿根萃取物之製備: 以沸水萃取乾椿根3小時及在-60℃下在減壓下冷凍乾燥該熱水萃取物。將該經冷凍乾燥的萃取物懸浮在H2O中及連續地以醋酸乙酯(EtOAc)、丁醇(n-BuOH)分配。全部貯存在-20℃下。
根據製造者的用法說明,使用三肉試劑(因維錯俊生活科技)從角質細胞萃取出總RNA。以寡聚(dT)12-18引子,使用SuperScript II核糖核酸酶H逆轉錄酶(因維錯俊生活科技),從3微克總RNA合成第一股cDNA。再者,為了移除與該cDNA互補的RNA,將2U的核糖核酸酶H(因維錯俊生活科技)加入至該反應混合物,然後在37℃下培養20分鐘。使用塔克門環宇(Taqman Universal)PCR Master Mix(應用生物系統)進行即時定量PCR。根據製造者的用法說明,藉由即時PCR系統(型號7500;應用生物系統)分析人類β防禦素3
mRNA之放大及偵測。該人類β-防禦素3引子/探針組係從應用生物系統(按需分析(Assays on-Demand),Hs0015557_ml)獲得。如下進行PCR:初始步驟在50℃下2分鐘及95℃下10分鐘,接著40循環在95℃下15秒及60℃下1分鐘。為了標準化IL-18 mRNA濃度,對每個樣品並列測量家務基因GAPDH的轉錄程度,及藉由根據GAPDH轉錄程度之標準化校正相對IL-18轉錄程度。對GAPDH來說,發明家使用預發展的分析法(應用生物系統)。全部即時PCRs皆以一式三份進行。以相關於未處理的對照之增加倍數報導基因表現性改變。
系列份化: 如在第31圖中所描述般進行來自椿根的系列份化。
在草本混合物當中,原始選擇椿根萃取物,因為其強的人類β-防禦素3刺激活性。因此,本發明家使用傳統份化技術及結合HPLC的活性剖析與即時PCR組合,標出是刺激人類角質細胞細胞株(HaCaT)的人類β防禦素3(DEF3)之原由的活性組分之特徵。為了鑑別活性組分的分子結構,使用質譜及NMR光譜。
對第一階段來說,從椿根的熱水萃取物製備3種萃取物,換句話說:1.椿根水萃取物,2.椿根丁醇萃取物,及3.椿根醋酸乙酯萃取物(第32A-E圖)。全部餾分皆經冷凍乾燥及以濃度10毫克/毫升再溶解於水(在椿根水萃取物的情況
中)及DMSO(在椿根丁醇萃取物及醋酸乙酯萃取物的情況中)。在處理後,在100微克/3毫升培養媒質的最後濃度下,將10微升的每種萃取物加入至於6井燒瓶中的HaCaT細胞培養物48小時。人類β-防禦素3 mRNA的改變與水或DMSO對照組比較,藉由即時PCR分析。
GAPDH(作為內部對照)及DEF3在全部測試組中的相對表現性改變在下列表16中闡明。當與在GAPDH及DEF3間之相對表現性改變比較時,椿根醋酸乙酯萃取物及椿根丁醇萃取物明顯增加表現性。
連續地以EtOAc、n-BuOH及H2O分配該經冷凍乾燥的產物(49克)。將n-BuOH(2.1克)之活性萃取物貯存在-20℃下。為了活性剖析,使用半製備型HPLC,以2分鐘的規則區間,根據下列條件分餾來自椿根丁醇萃取物的一部分(177毫克):初始以90%H2O包含0.1%HCOOH/10%MeOH,接著梯度至40%H2O包含0.1%HCOOH/60%MeOH 50分鐘,在流速4.0毫升/分鐘下及在254奈米處UV偵測。總共收集25
個餾分(第33圖及下列表17)。
每25個餾分進行混合、冷凍乾燥及以濃度10毫克/毫升再溶解於DMSO中。在處理後,以100微克/3毫升培養媒質的最後濃度,將10微升的每種萃取物加入至在6井燒瓶中的HaCaT細胞培養物48小時,人類β-防禦素3 mRNA改變與水或DMSO對照組比較,藉由即時PCR分析。
在全部的測試組中之GAPDH(作為內部對照)及DEF3的相對表現性改變在第34圖中闡明。當與在GAPDH及DEF3間之相對表現性改變比較時,編號12的餾分戲劇性增加在人類角質細胞細胞株(HaCaT)中的DEF3之表現性。
DEF3刺激性化合物之分離:為了從n-BuOH萃取物分離出活性化合物,在相同HPLC條件與上述活性剖析下重覆地分離一液份(1.07克)的萃取物,以提供一包含DEF3刺激性化合物的活性餾分。在梯度溶劑系統中進一步純化此化合物,80%H2O包含0.1%HCOOH/20%MeOH至70%H2O包含0.1%HCOOH/30%MeOH 70分鐘(tR:24.70分鐘,2.2毫克)。
NMR結構分析:使用瓦里安VNMRS 600MHz NMR光譜儀記錄1H、13C及2D-NMR實驗。在連接至瓦里安ProStar HPLC系統之瓦里安VNMRS 600MHz NMR光譜儀(1H:600.006 MHz)上,使用150微升三共振微流量冷凍探針進行LC/1H NMR。在停止流動模式及連續流動模式兩者下獲得1D1H NMR光譜。對停止流動模式1H NMR來說,初始以95%D2O包含0.1%HCOOH/5%ACN進行HPLC方法,接著梯度至35%D2O包含0.1%HCOOH/65%ACN超過35分鐘(總進行時間45分鐘),使用流速1.0毫升/分鐘及在280奈米處UV偵測。將樣品(50微升)注射到日火(SunFire)TM C18(5微米,4.6×150毫米,瓦特斯(Waters))逆相管柱上。在HOD、ACN及HCOOH中對1H頻率的預飽和使用標準WET1D程序。以9 kHz掃視寬度,使用33K時域點與1.82秒的採集時間獲得資
料。在每種化合物於探針流動槽中的相對濃度上使用可變的掃描數(128-512)。1H NMR光譜係參照ACN共振(1.96 ppm)。在相同梯度條件下進行連續流動LC-NMR實驗,除了流速0.2毫升/分鐘及總進行時間180分鐘外。在層析沖提期間,藉由每次連續32次掃描收集1H NMR光譜。
1H NMR光譜顯示出在δ1.20及2.02處有H-18及H-19的二個甲基質子訊號(每個3H,s),及亦顯示出在δ6.06處的烯系質子H-3(1H,br s)及外亞甲基質子H-21(2H,s)訊號。三個氧化的次甲基質子訊號(H-1、H-7及H-12)各別在δ4.26(1H,s)、4.62(1H,t,2.4)及δ3.89(1H,s)處觀察到。此外,在該光譜中一起顯示出三個在δ2.91(H-5)、2.95(H-9)及δ2.84(H-14)處的次甲基質子訊號與三個在δ2.27,2.14(H-6α及H-6β)、2.65,3.11(H-15α及H-15β)及δ3.99,3.49(H-20α及H-20β)處的亞甲基質子訊號。各別在δ170.6(H-16)及197.6(H-2)處偵測到γ-內酯及α,β-不飽和羰基訊號。其HMBC光譜顯露出分離的H-19甲基與三個羰基碳C-1、C-5及C-10相互相關,及次甲基質子訊號H-14顯示出與碳訊號C-10、C-12、C-13、C-15及C-20的長範圍相關聯性。DEF3刺激性化合物的1H、13C、COSY及HMBC NMR資料詳細地顯示在表18中。DEF3刺激性化合物的NMR光譜闡明在第35-38圖中。根據NMR結構分析,來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物經鑑別係臭椿酮(第39A-B圖)。
雖然本發明已經以其相關連的特定具體實例說明,要明瞭將由熟習該項技術者明瞭許多代用品、改質及變化。此外,想要在所附加的申請專利範圍之精神及寬廣的範圍內包括全部的此代用品、改質及變化。
在本專利說明書中所提到的全部公告、專利及專利申請案其全文於此併入本專利說明書中,至如若每篇各別的公告、專利或專利申請案特別及各別指示出以參考之方式併入本文相同的程度。此外,在本申請案中的任何參考之引証或鑑別應該不解釋為許可此參考可以先述技藝獲得本發明。它們應該不解釋為必需性限制至所使用的節標題之程度。
第1圖係一線圖,其描出人類β-防禦素3及GAPDH與連續稀釋的cDNAs之標準曲線。
第2圖為一線圖,其描出人類β-防禦素3的即時PCR分析,其係使用未經處理的HaCaT角質細胞(n=3)。
第3A-D圖係圖表,其描出細胞生存力的百分比,如藉由MTS分析法測量。以該草本萃取物(如指示出為1%、0.1%或0.01%)培養KU812細胞24小時。在濃度100、10及1 μM下測量黃櫨素。在490奈米處讀取該等板,及計算細胞生存力如為未處理的細胞之百分比(100%生存力)±SD。測試物質鑑定係如下列表1中所指示出。
第4A-G圖係圖表,其描出在KU812細胞中的IL-13表現性由草本萃取物抑制。以該草本萃取物處理KU812細胞(如
在下列本文的實施例1中所描述般),然後化驗該細胞培養上層液的IL-13表現性。值以平均IL-13濃度(皮克/毫升)±SD顯現。第4A圖測試物質:1-甘草;2-防風;3-雷公藤;4-總狀花升麻;5-青葙;6-黃蓮根。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品6係0.05%),濃度2-0.1%(對樣品6係0.01%),濃度3-0.01%(對樣品6係0.001%);第4B圖測試物質:7-丹參;8-三白草葉;9-金盞花;10-龍膽;11-水薄荷;12-西洋蒲公英。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品10係0.1%),濃度2-0.1%(對樣品10係0.01%),濃度3-0.01%(對樣品10係0.001%);第4C圖測試物質:13-地膚子;14-知母;15-銀柴胡根;16-黃花貝母;17-乳薊;18-葛棗獼猴桃。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品15係0.1%),濃度2-0.1%(對樣品15係0.01%),濃度3-0.01%(對樣品15係0.001%);第4D圖測試物質:19-黃柏;20-無患子;21-苦蔘根;22-地榆;23-蛇床子;24-日本山茶。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品19係0.05%,樣品20係0.01%,樣品21係0.5%),濃度2-0.1%(對樣品19係0.01%,樣品20係0.005%),濃度3-0.01%(對樣品19,20係0.001%)。第4E圖測試物質:25-黃芩;26-大黃;27-茼蒿;28-馬齒莧;A-牡丹皮;B-當歸。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品27及28係0.1%),濃度2-0.1%(對樣品27及28係0.05%),濃度3-0.01%。第4F圖測試物質:C-黃耆;D-吳茱萸;E-虎杖;F-濶葉麥門冬;G-土茯苓;H-薑黃。所測量的濃度:濃度1-1%(對樣品D及H係0.1%,樣品E及F係0.5%),濃度2-0.1%(對樣品D係0.05%,樣品H係0.01%),濃
度3-0.01%(樣品H係0.001%)。第4G圖測試物質:I-靛藍;J-大風子。所測量的濃度:I及J係1%、0.1%及0.01%。黃櫨素:100 μM、10 μM及1 μM。
第5圖係一線圖,其描出編號136及137的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加(參見箭號)。
第6圖係一線圖,其描出編號171的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加。
第7圖係一線圖,其描出編號194的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加。
第8圖係一線圖,其描出編號232及246的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加。
第9圖係一線圖,其描出編號362的草本萃取物,其導致hBD-3的表現性明顯增加。
第10圖係一長條圖,其描出六種草本萃取物(如指示出)在hBD-3表現性上的刺激效應。
第11圖係一長條圖,其描出藉由以熱水(HW)、50% EtOH及50% MeOH所萃取的草本植物(如指示出)之hBD-3刺激比較。
第12圖係一長條圖,其描出細胞生存力的百分比,如藉由MTS分析法測量。以該草本萃取物(0.3%)培養KU812細胞24小時。在490奈米處讀取該等板,及計算細胞生存力如為未處理的細胞之百分比(100%生存力)±SD。要注意的是,樣品4及B-測試物質可已與MTS溶液反應。顯微檢驗未顯示出任何細胞過度增生或細胞毒害性的跡象。測試物質
標識如下:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆;A.臭椿;B.五倍子;C.白花前胡。
第13圖係一長條圖,其描出在KU812細胞中的IL-13表現性由草本萃取物抑制。以草本萃取物(0.3%)處理KU812細胞(如在下文的實施例1中所描述般),然後對該細胞培養上層液化驗IL-13釋放。值以平均IL-13濃度(皮克/毫升)±SD顯現。測試物質標識如下:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆;A.臭椿;B.五倍子;C.白花前胡。
第14A-E圖係曲線圖,其描出草本萃取物在人類β-防禦素3(hBD-3)刺激上的效應,如藉由RT-PCR測量。測量每種草本萃取物的β-防禦素刺激效應[第14A-D圖:第14A圖顯示出甘草(編號1)在hBD3表現性上的直接效應。第14B圖顯示出總狀花升麻(編號2)在hBD3表現性上的直接效應。第14C圖顯示出乳薊(編號3)在hBD3表現性上的直接效應;及第14D圖顯示出地榆(編號4)在hBD3表現性上的直接效應];第14E圖總整理草本萃取物在hBD-3表現性上的刺激活性之結果。測試物質標識如下:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆。
第15A-C圖係長條圖,其描出在草本萃取物間之協同效應。測量草本萃取物在IL-13抑制上的協同效應(KU812細胞,ELISA)(第15A圖)或β-防禦素3刺激效應(HaCaT細胞,RT-PCR)(第15B-C圖)。測量4種草本萃取物與1%椿根皮(第15B圖)或與(1%)五倍子(第15C圖)的協同效應。第15A圖的
測試物質標識如下:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆。第15B圖的測試物質標識:1%臭椿與0.3%的:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆。第15C圖的測試物質標識如下:1%五倍子與0.3%的:1.甘草;2.總狀花升麻;3.乳薊;4.地榆。
第16圖係一長條圖,其描出草本萃取物在樹脂色層分析法前(A-C)及後(1-3)之IL-13抑制活性。測量草本萃取物在0.3%下其抑制IL-13的能力。該測試物質標識在色層分析法最佳化前及後各別為:A,1-臭椿;B,2-五倍子;C,3-白花前胡。
第17A-B圖係相片,其描出五倍子萃取物(編號232)的抗微生物活性。第17A圖描出對耐氨比西林性大腸桿菌的抗微生物活性;及第17B圖描出對金黃色葡萄球菌的抗微生物活性。
第18圖係一線圖,其描出在經治療的患者之載劑(由菱形描出)及治療(包含地榆及臭椿的組成物,由方形描出)組中,SCORAD隨著時間降低(在第0、7、14及21天評估)。
第19圖係一線圖,其描出在載劑治療組中SCORAD組成部分(程度、強度及主觀)在總計分上的影響(在第7、14及21天)。
第20圖係一線圖,其描出在治療組中(包含地榆及臭椿的組成物,在第7、14及21天)SCORAD組成部分(程度、強度及主觀)在總計分上的影響。
第21圖係一線圖,其描出在載劑與治療組間之比較:
強度隨著時間減低(在第0、7、14及21天評估)。
第22圖係一線圖,其描出在載劑與治療組間之比較:主觀分數隨著時間減低(在第0、7、14及21天評估)。
第23圖係一長條圖,其描出在載劑組中具有改善症狀之患者的百分比(在第7、14及21天)。
第24圖係一長條圖,其描出在治療組中具有改善症狀之患者的百分比(在第7、14及21天)。
第25圖係一長條圖,其描出在治療21天後,於治療及載劑組中具有改善症狀之患者的百分比。
第26圖係一長條圖,其描出在載劑組中的搔癢及失眠減少(在第7、14及21天)。
第27圖係一長條圖,其描出在治療組中的搔癢及失眠減少(在第7、14及21天)。
第28圖係一長條圖,其描出在21天後,於載劑及治療組中之搔癢及失眠症改善的主觀評估。
第29圖係一長條圖,其描出在21天後,於載劑及治療組中之嚴重及非嚴重AD的SCORAD減少。
第30圖係一長條圖,其描出在載劑及治療組中的皮膚水合及經上皮的水分喪失(TEWL)。
第31圖係一流程圖,其闡明來自椿根的一系列份化。
第32A-E圖係線圖,其描出椿根的水萃取物、丁醇萃取物及醋酸乙酯萃取物在來自HaCaT細胞的人類β-防禦素3及GAPDH(內部表現性控制基因)上之效應。第32A圖描出10微升水(對照)在DEF3及GAPDH表現性上的效應;第32B圖
描出10微升椿根水萃取物在DEF3及GAPDH表現性上的效應;第32C圖描出10微升DMSO(對照)在DEF3及GAPDH表現性上的效應;第32D圖描出10微升椿根醋酸乙酯萃取物在DEF3及GAPDH表現性上的效應;及第32E圖描出10微升椿根丁醇萃取物在DEF3及GAPDH表現性上的效應。
第33圖係一由椿根丁醇萃取物的梯度HPCL所獲得之色譜圖。
第34圖係一線圖,其描出在以該25個餾分每個治療後,於DEF3表現性上之即時PCR分析。
第35圖為來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物之NMR光譜。
第36圖為來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物之NMR光譜。
第37圖為來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物之NMR光譜。
第38圖為來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物之NMR光譜。
第39A-B圖闡明來自椿根萃取物的DEF3刺激性化合物臭椿酮之結構。
Claims (80)
- 一種組成物,其包含地榆植物萃取物及至少一種選自於由下列所組成之群的額外植物萃取物:臭椿植物萃取物、五倍子植物萃取物、甘草植物萃取物、大黃植物萃取物及黃芩植物萃取物。
- 一種治療及/或預防需要其之患者中的異位性皮膚炎(AD)之方法,該方法包括將治療有效量之包含地榆植物萃取物與臭椿植物萃取物的組成物給藥至該患者,藉此在患者中治療及/或預防該感染。
- 一種包含地榆植物萃取物與臭椿植物萃取物之組成物的用途,其使用來治療及/或預防需要其之患者中的異位性皮膚炎(AD)。
- 一種包含植物萃取物的組成物,其中該植物係選自於由五倍子、白花前胡及總狀花升麻所組成之群。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該組成物包含該地榆植物萃取物、該臭椿植物萃取物及該甘草植物萃取物。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該組成物包含該地榆植物萃取物、該臭椿植物萃取物及該五倍子植物萃取物。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該組成物包含該地榆植物萃取物及該臭椿植物萃取物。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該組成物包含該地榆植物萃取物及該五倍子植物萃取物。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該組成物包含該地榆植物萃取物及該甘草植物萃取物。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該組成物包含該地榆植物萃取物及該大黃植物萃取物。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該組成物包含該地榆植物萃取物及該黃芩植物萃取物。
- 一種組成物,其包含臭椿植物萃取物及至少一種選自於由下列所組成之群的額外植物萃取物:五倍子植物萃取物、甘草植物萃取物、大黃植物萃取物及黃芩植物萃取物。
- 一種組成物,其包含濃度至少約0.01%的臭椿酮及一化妝或醫藥可接受的載劑。
- 如申請專利範圍第13項之組成物,其中該組成物更包含地榆植物萃取物。
- 如申請專利範圍第13或14項之組成物,更包含選自於由下列所組成之群的植物萃取物:五倍子植物萃取物、甘草植物萃取物、大黃根萃取物、蛇床果萃取物及黃芩根萃取物。
- 如申請專利範圍第15項之組成物,更包含甘草苷酸二鉀。
- 如申請專利範圍第1或4-16項之任何一項的組成物,其經調配用於局部、眼睛、口服或肺給藥。
- 如申請專利範圍第13項之組成物,其中該臭椿酮的濃度係約0.01-1%。
- 如申請專利範圍第13項之組成物,其中該臭椿酮的濃度係約0.01-5%。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該地榆植物萃取物及該至少一種額外的植物萃取物經調配成共調配物。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中該地榆植物萃取物及該至少一種額外的植物萃取物經調配在分別的調配物中。
- 如申請專利範圍第1或12項之組成物,其中在該組成物中的每種植物萃取物之濃度範圍在0.01-10%內。
- 如申請專利範圍第1或12項之組成物,其中在該組成物中的每種植物萃取物之濃度範圍在0.5-2%內。
- 如申請專利範圍第1或12項之組成物,其中在該組成物中的每種植物萃取物之濃度係1%。
- 如申請專利範圍第4項之組成物,其中在該組成物中的植物萃取物之濃度範圍在0.01-10%內。
- 如申請專利範圍第4項之組成物,其中在該組成物中的植物萃取物之濃度範圍在0.5-2%內。
- 如申請專利範圍第4項之組成物,其中在該組成物中的植物萃取物之濃度係1%。
- 如申請專利範圍第1、5、6、7或12項之任何一項的組成物、如申請專利範圍第2項的方法、或如申請專利範圍第3項的用途,其中該臭椿植物萃取物包含至少約0.01%的臭椿酮。
- 如申請專利範圍第1、5、6、7或12項之任何一項的組成 物、如申請專利範圍第2項的方法、或如申請專利範圍第3項的用途,其中該臭椿植物萃取物由椿根植物萃取物組成。
- 如申請專利範圍第29項之組成物、方法或用途,其中該椿根植物萃取物係極性萃取物。
- 如申請專利範圍第30項之組成物、方法或用途,其中該極性萃取物係使用選自於由丁醇及乙醇所組成之群的極性溶劑萃取。
- 如申請專利範圍第29項之組成物、方法或用途,其中該椿根植物萃取物使用高性能液相層析法(HPLC)進一步純化。
- 如申請專利範圍第1、4或12項之組成物,其中該植物萃取物包含水性植物萃取物。
- 如申請專利範圍第33項之組成物,其中該水性植物萃取物使用樹脂色層分析法進一步純化。
- 如申請專利範圍第34項之組成物,其中該樹脂色層分析法包含大孔樹脂。
- 如申請專利範圍第1或4-27項之任何一項的組成物,其中該組成物不包含β-防禦素。
- 如申請專利範圍第1或4-27項之任何一項的組成物,其中該組成物係一種醫藥組成物及包含一醫藥可接受的載劑或稀釋劑。
- 如申請專利範圍第1或4-27項之任何一項的組成物,其中該組成物係一種化粧品組成物及包含一化妝可接受 的載劑或稀釋劑。
- 如申請專利範圍第38項之組成物,其中該化妝可接受的載劑或稀釋劑經調配成選自於由下列所組成之群的形式:乳膏、凝膠、噴霧、乳液、軟膏、油、洗劑、洗髮精、肥皂及噴霧。
- 一種治療及/或預防需要其之患者中之感染的方法,該方法包括將治療有效量之如申請專利範圍第1或4-27項之任何一項的組成物給藥至患者,藉此在患者中治療及/或預防該感染。
- 一種如申請專利範圍第1或4-27項之任何一項的組成物之用途,其使用來治療及/或預防需要其之患者中之感染。
- 如申請專利範圍第40項之方法或如申請專利範圍第41項之用途,其中該感染係繼發性至慢性發炎。
- 如申請專利範圍第40項之方法或如申請專利範圍第41項之用途,其中該感染係與選自於由下列所組成之群的疾病相關:異位性疾病、接觸性皮膚炎、貨幣狀皮膚炎、輻射性皮炎、燒傷、非異位性濕疹、壓瘡、眼睛炎性疾病、呼吸道炎症性疾病、氣喘、胃腸疾病及口腔感染疾病。
- 如申請專利範圍第2或40項之方法或如申請專利範圍第3或41項之用途,其中該患者係人類。
- 如申請專利範圍第2或40項之方法,其中該治療有效量係用於向下調節在該患者的細胞中之TH2型式細胞素 的分泌。
- 如申請專利範圍第45項之方法,其中該TH2型式細胞素係選自於由IL-4、IL-5、IL-6、IL-10及IL-13所組成之群。
- 如申請專利範圍第2或40項之方法,其中該治療有效量係用於向上調節在該患者的細胞中之人類β-防禦素的表現性。
- 如申請專利範圍第2或40項之方法,其中該治療有效量包含抗微生物活性。
- 一種傳遞系統,其包含一施加器及在其中包含如申請專利範圍第1或4-27項之任何一項的組成物。
- 如申請專利範圍第49項之傳遞系統,其中該施加器呈選自於由下列所組成之群的形式:黏著性繃帶、非黏著性繃帶、紙巾、紗布及護墊。
- 一種單位劑型,其包含濃度約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物。
- 如申請專利範圍第51項之單位劑型,更包含濃度約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物。
- 如申請專利範圍第51項之單位劑型,更包含濃度約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物。
- 如申請專利範圍第51項之單位劑型,更包含濃度約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物。
- 如申請專利範圍第51項之單位劑型,更包含濃度約0.5-2重量/重量%的大黃植物萃取物。
- 如申請專利範圍第51項之單位劑型,更包含濃度約0.5-2 重量/重量%的黃芩植物萃取物。
- 一種單位劑型,其包含濃度約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物。
- 一種單位劑型,其包含濃度約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物。
- 一種單位劑型,其包含濃度約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物。
- 一種單位劑型,其包含濃度約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物、濃度約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物及濃度約0.5-2重量/重量%的甘草植物萃取物。
- 一種單位劑型,其包含濃度約0.5-2重量/重量%的地榆植物萃取物、濃度約0.5-2重量/重量%的臭椿植物萃取物及濃度約0.5-2重量/重量%的五倍子植物萃取物。
- 如申請專利範圍第51-61項之任何一項的單位劑型,其中該植物萃取物的濃度係1重量/重量%。
- 一種單位劑型,其係選自於由局部、口服、肺或眼睛單位劑型所組成之群,其包含濃度至少約0.01重量/重量%的臭椿酮。
- 如申請專利範圍第63項之單位劑型,其中該臭椿酮的濃度係約0.01-1重量/重量%。
- 如申請專利範圍第51-64項之任何一項的單位劑型,其係呈選自於由下列所組成之群的形式:黏著性繃帶、非黏著性繃帶、紙巾、紗布及護墊。
- 如申請專利範圍第1或4-27項之任何一項的組成物、如 申請專利範圍第49項的傳遞系統或如申請專利範圍第51-64項之任何一項的單位劑型,更包含一選自於由下列所組成之群的因子:細胞外間質組分、生長因子、荷爾蒙、血管生成因子、凝血因子、細胞素抑制劑、化學激素抑制劑、酵素、神經介質、維他命、碳水化合物、離子、鐵螯合劑、脂肪酸、抗微生物試劑、抗生素、類固醇及胺基酸。
- 如申請專利範圍第2或40項之任何一項的方法,其中該給藥係長期執行。
- 如申請專利範圍第2或40項之任何一項的方法,其中該給藥係一天執行至少一次。
- 如申請專利範圍第2或40項之任何一項的方法,其中該給藥執行至少21天。
- 一種製備用於治療及/或預防感染的組成物之方法,該方法包括:(a)讓植物接受x1-10體積的水,以產生該植物的萃取物;及(b)使用大孔樹脂減少在該植物萃取物中的有機鹽及/或重金屬及/或澱粉量,此造成存在該植物萃取物中的活性成分之含量提高。
- 如申請專利範圍第70項之方法,其中該植物係選自於由下列所組成之群:臭椿、五倍子、白花前胡、甘草、總狀花升麻、乳薊、地榆、大黃及黃芩。
- 如申請專利範圍第71項之方法,其中該臭椿由椿根組 成。
- 如申請專利範圍第70項之方法,其中該活性成分係選自於由下列所組成之群:臭椿酮、苦楝素、川楝素、總人蔘皂苷、沒食子酸、甘草甙、白花前胡素、單寧酸及水飛薊賓。
- 如申請專利範圍第71項之方法,其中當該植物包含臭椿時,該活性成分包含臭椿酮。
- 一種鑑別具有炎性調節劑性質的藥劑之方法,該方法包括:(a)讓該藥劑與細胞接觸;及(b)化驗來自該細胞的人類β-防禦素分泌物,其中在該接觸後該β-防禦素分泌物向上調節係該藥劑具有炎性調節劑性質的象徵。
- 如申請專利範圍第75項之方法,其中該藥劑包含一植物萃取物或其活性成分。
- 如申請專利範圍第75項之方法,其中該細胞包含角質細胞。
- 一種化粧品載劑,其包含大黃根萃取物、蛇床果萃取物、黃芩根萃取物及甘草苷酸二鉀。
- 一種化粧品組成物,其包含地榆植物萃取物、臭椿植物萃取物、大黃根萃取物、蛇床果萃取物、黃芩根萃取物及甘草苷酸二鉀。
- 如申請專利範圍第79項之化粧品組成物,更包含保溼劑及潤膚劑。
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/IL2011/050081 WO2012090205A2 (en) | 2010-12-28 | 2011-12-28 | Plant extracts for the treatment and prevention of infections |
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TW201400128A true TW201400128A (zh) | 2014-01-01 |
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ID=50346288
Family Applications (1)
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TW101123162A TW201400128A (zh) | 2011-12-28 | 2012-06-27 | 用於治療及預防感染之植物萃取物 |
Country Status (1)
Country | Link |
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TW (1) | TW201400128A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112638395A (zh) * | 2018-10-29 | 2021-04-09 | 株式会社爱茉莉太平洋 | 作为有效成分含有樗白皮提取物的痤疮皮肤改善用或者皮脂分泌抑制用组合物 |
-
2012
- 2012-06-27 TW TW101123162A patent/TW201400128A/zh unknown
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN112638395A (zh) * | 2018-10-29 | 2021-04-09 | 株式会社爱茉莉太平洋 | 作为有效成分含有樗白皮提取物的痤疮皮肤改善用或者皮脂分泌抑制用组合物 |
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