TW201305167A - 使用經鹵芳基取代之胺基嘌呤的治療、改善及預防方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供具有以下結構之胺基嘌呤化合物：□其中R1、R2及R3係如本文所定義，及包含有效量胺基嘌呤化合物之組合物，及治療或預防硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷或曬傷之方法，及改善或預防瘢痕形成之方法。

Description

使用經鹵芳基取代之胺基嘌呤的治療、改善及預防方法
本發明提供治療或預防硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷或曬傷之方法及改善或預防瘢痕形成之方法，其包含向有需要患者投與有效量之某些經胺基取代之嘌呤化合物。本發明亦提供使用免疫組織化學方法量測c-Jun N末端激酶(JNK)在皮膚中之抑制作用的方法。本發明進一步提供一種基於UVB照射及磷酸化c-Jun免疫反應性量測之分析，其適用於評估JNK抑制劑之劑量反應關係且鑑別及選擇對JNK抑制劑敏感或不敏感之患者群體。
本申請案主張2010年10月25日申請之美國臨時申請案第61/406,219號之權利且主張2011年7月20日申請之美國臨時申請案第61/509,638號之權利，各文獻之內容均以引用的方式併入本文中。
JNK為廣泛表現之絲胺酸/蘇胺酸激酶，其連同ERK(細胞外調節激酶)及p38一起屬於有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族。(Kyriakis JM,MAP kinases and the regulation of nuclear receptors,Sci. STKE 2000(48):pel；Whitmarsh AJ,Davis RJ,Signal transduction by MAP kinases: Regulation by phosphorylation-dependent switches,Sci. STKE 1999(1):pel；Schramek H,MAP kinases: from intracellular signals to physiology and disease,News Physiol. Sci. 2002;17:62-7；Ichijo H,From receptors to stress-activated MAP kinases,Oncogene 1999,18(45):6087-93)。MAPK為由細胞表面至核信號轉導之重要介體，使用磷酸化級聯反應藉由磷酸化所選細胞內蛋白質(包括轉錄因子)使細胞對外界刺激產生協調反應。另外，JNK亦磷酸化非核蛋白質，例如IRS-1及Bcl-2家族成員。(Davis RJ,MAPKs: new JNK expands the group,Trends Biochem. Sci. 1994;9(11):470-3；Seger R,Krebs EG,The MAPK signaling cascade,FASEB J. 1995;9(9):726-35；Fanger GR,Gerwins P,Widmann C,Jarpe MB,Johnson GL,MEKKs,GCKs,MLKs,PAKs,TAKs,and tpls: upstream regulators of the c-Jun amino-terminal kinases? Curr. Opin. Genet. Dev. 1997;7(1):67-74)。
最初在1990年代初鑑別出JNK，且該術語源自cJun N末端激酶；其熟知受質為轉錄因子cJun。(Hibi M,Lin A,Smeal T,Minden A,Karin M,Identification of an oncoprotein- and UV-responsive protein kinase that binds and potentiates the c-Jun activation domain,Genes Dev. 1993;7(11):2135-48；Dunn C,Wiltshire C,MacLaren A,Gillespie DA, Molecular mechanism and biological functions of c-Jun N-terminal kinase signalling via the c-Jun transcription factor,Cell Signal 2002;14(7):585-93；Ip YT,Davis RJ,Signal transduction by the c-Jun N-terminal kinase (JNK)-from inflammation to development,Curr. Opin. Cell Biol. 1998;10(2):205-19)。JNK亦稱為SAPKα，亦即應激活化蛋白激酶α，此係因為JNK在細胞暴露於促炎性細胞因子、生長因子及環境應力(諸如紫外光(UV)照射或熱衝擊)時活化。(Hibi M,Lin A,Smeal T,Minden A,Karin M,Identification of an oncoprotein- and UV-responsive protein kinase that binds and potentiates the c-Jun activation domain,Genes Dev. 1993;7(11):2135-48；Ip YT,Davis RJ,Signal transduction by the c-Jun N-terminal kinase(JNK)-from inflammation to development,Curr. Opin. Cell Biol. 1998;10(2):205-19；Derijard B,Hibi M,Wu IH,Barrett T,Su B,Deng T,Karin M,Davies RJ,JNK1: a protein kinase stimulated by UV light and Ha-Ras that binds and phosphorylates the c-Jun activation domain,Cell 1994;76(6):1025-37；Kyriakis JM,Banerjee P,Nikolakaki E,Dai T,Rubie EA,Ahmad MF,Avruch J,Woodgett JR,The stress-activated protein kinase subfamily of c-Jun kinases,Nature 1994;369(6476):156-60)。
由於JNK所涉及之各種壓力反應，所以單一JNK活化路徑似乎並不存在。許多刺激物經由一種以上機制使JNK活化。視細胞類型及狀態而定，JNK可涉及如細胞凋亡(Kyriakis JM,Avruch J,Mammalian mitogen-activated protein kinase signal transduction pathways activated by stress and inflammation,Physiol. Rev. 2001;81(2):807-869;Xie X,Gu Y,Fox T,Coll JT,Fleming MA,Markland W,Caron PR,Wilson KP,Su MS,Crystal structure of JNK3: a kinase implicated in neuronal apoptosis,Structure 1998;6(8):983-91)、細胞增殖(Yang YM,Bost F,Charbono W,Dean N,McKay R,Rhim JS,Depatie C,Mercola D,C-Jun NH(2)-terminal kinase mediates proliferation and tumor growth of human prostate carcinoma,Clin. Cancer Res. 2003;9(1):391-401；Schwabe RF,Bradham CA,Uehara T,Hatano E,Bennett BL,Schoonhoven R,Brenner DA,c-Jun-N-terminal kinase drives cyclin D1 expression and proliferation during liver regeneration,Hepatology 2003;37(4):824-32)及細胞分化(Li B,Tournier C,Davis RJ,Flavell RA,Regulation of IL-4 expression by the transcription factor JunB during T helper cell differentiation,EMBO J. 1999;18(2):420-32；Yang DD, Conze D,Whitmarsh AJ,Barrett T,Davis RJ,Rincn M,Flavell RA,Differentiation of CD4+ T cells to Thl cells requires MAP kinase JNK2,Immunity 1998;9(4):575-85)之不同過程；因此，JNK為生理及病理過程之必要調節劑。
硬皮病
硬皮病為罕見疾病，其穩定發生率為每1百萬人約19個病例。硬皮病之確切病因未知。異常性涉及自體免疫性及內皮細胞及纖維母細胞功能之變化。系統性硬皮病通常由手指皮膚增厚開始，伴隨雷諾氏現象(Raynaud's phenomenon)。雷諾氏病通常先於系統性硬皮病之其他表現。疾病早期，受影響皮膚可能浮腫且柔軟。皮膚增厚及硬化最大之常見位置為面部、手及手指。指皮硬化(sclerodactyly)經常存在。腱摩擦音在檢驗中通常可觸知且可能會疼痛。對於更晚期之疾病，可能出現手指潰爛及自身斷離(auto-amputation)。胃腸運動障礙(gastrointestinal dismotility)為一特徵，通常表現為胃灼熱或腹瀉及吸收障礙或假梗阻。新發高血壓或腎機能不全為相關血管損傷之表現。由於心臟纖維變性，亦可能發生心臟衰竭或心律不整。(Hachulla E,Launay D,Diagnosis and classification of systemic sclerosis,Clin Rev Allergy Immunol 2010;40(2):78-83)。
硬皮病且詳言之系統性硬化症之主要表現為不當過量之膠原蛋白合成及沈積、內皮細胞功能障礙、痙攣、虛脫及藉由纖維變性產生之管腔閉合。根據診斷，重要臨床參數為掌指關節附近皮膚增厚。雷諾氏現象為硬皮病之常見、幾乎通用之組成部分。其藉由皮膚遇冷時變色來診斷。缺血及皮膚增厚為雷諾氏病之症狀。
UV損傷及曬傷
皮膚為一種最大的身體器官，且充當一種與包括太陽輻射之環境的主要界面。曝露於太陽輻射具有刺激皮膚合成維生素D及提供輻射溫暖之有益效應。(McStay,CM Elahi EJ,Sunburn,eMedicine-Online Medical Reference Textbook(2010年5月18日進行最後修改)(線上)，(在2010年8月30日擷取)。擷取自網際網路：<URL: http://emedicine.medscape.com/article/773203-overview>)。令人遺憾的是，當皮膚經受紫外範圍內之過量輻射時，發生諸如曬傷之有害效應。曬傷為皮膚過量曝露於紫外輻射(UVR)後之急性皮膚發炎反應。發炎反應在曝露之後2至6小時內發生，且在20至24小時達到峰值，具有諸如紅斑、溫暖、觸痛、水腫及起泡(嚴重病例)之症狀。急性UVR損傷亦導致角質細胞發生細胞凋亡，造成皮膚損傷及皮膚重塑。(Merryman,J.I.,Neilsen,N.及Stanton,D.D.,Transforming growth factor-beta enhances the ultraviolet-mediated stress response in p53-/- keratinocytes,Int. J. Oncol. 1998;13(4):781-9)皮膚之長期UVR曝露可造成皮膚黑素瘤及鱗狀細胞癌。(Hildesheim J,Bulavin DV,Anver MR等人，Gadd45a protects against UV irradiation-induced skin tumors,and promotes apoptosis and stress signaling via MAPK and p53,Cancer Res. 2002;62(24):7305-15)。
曬傷之嚴重程度與曝露持續時間、皮膚類型及保護量有關。Potts JF,Sunlight,Sunburn,and Sunscreens,Postgrad. Med. 1990;87:52-61。影響皮膚對UVR之反應的因素視除曝露時間及劑量外之許多其他因子之間的相互作用而定。輻射源之波長、諸如色素沈著、水合能力及皮膚厚度之皮膚特徵及諸如風、溫度及濕度之外部因素均促成該反應。自雪及沙子產生之反射亦可導致曝露增加。已知一些藥物對紫外輻射敏感。三環抗抑鬱劑、抗組織胺、抗感染藥、抗贅生劑、抗精神病劑、利尿劑、降血糖劑、非類固醇消炎藥及防曬劑均可降低個體對陽光曝露之容許度。
曬傷之當前治療包括全身投與阿司匹林或非類固醇消炎藥(NSAID)以抑制環加氧酶路徑且由此減少前列腺素產生。NSAID若在曝露之後最初若干小時內投與，則效果最好。通常利用全身性皮質類固醇且可縮短伴隨嚴重曬傷之疼痛過程。不應將皮質類固醇給予患嚴重二度燒傷之患者，因為其會增加感染風險。局部類固醇顯示最小益處(若存在)。
非處方局部藥品包括麻醉劑，諸如利多卡因鹽酸鹽(lidocaine hydrochloride)、苯佐卡因(benzocaine)及普莫卡因鹽酸鹽(pramoxine hydrochloride)。諸如真蘆薈(aloe vera)、乙酸生育酚(維生素B)、薄荷腦、樟腦、桉葉油及異極礦之皮膚安撫成分亦為此項技術中已知之通用成分。家庭局部藥品包括用燕麥片或小蘇打(baking soda)冷浴；且將切開之馬鈴薯汁液、薰衣草精油或甘菊敷於灼傷部位。
儘管此等局部藥品可有助於安撫皮膚或暫時減輕與曬傷相關之疼痛，但其不能治療定義曬傷之潛在炎症。必須在有效曝露之後不久全身給予非類固醇消炎藥。此外，對NSAID過敏、有敏感性胃或可能存在消極藥物相互作用之患者不能耐受此治療。
當前曬傷預防方法包括穿戴防護衣及在中午避免日曬。但此等方法會限制想避免曬傷之人的戶外活動，諸如游泳。預防曬傷之局部產品分成兩類：物理屏障及化學吸收劑。化學防曬劑一般為與羰基共軛之芳族化合物。在施用之後，化學防曬劑組分會擴散至角質層中且吸附各種蛋白質或與各種蛋白質共軛。產品效用藉由穿透深度、不同蛋白質之結合親和力及保護持續時間來測定。此等化學製品會吸收UV光譜中之輻射。化學防曬劑之缺點為可能將衣服染色且導致接觸性皮膚炎。此外，近來已開始關注最通用化學防曬劑對胺基苯甲酸(PABA)及PABA酯之突變特性。諸如氧化鋅、滑石及二氧化鈦之物理阻斷劑會使UVR反射或散射。許多消費者發現此等產品難以塗覆且在美觀上無吸引力。
因此，需要治療或預防UV損傷或曬傷之方法。
瘢痕形成
由外傷或手術所產生之創口伴隨有初始發炎反應，其為身體之自然反應及創口癒合過程之第一步。初始發炎反應之後藉由纖維母細胞增殖及纖維母細胞分化成肌纖維母細胞形成纖維組織，更通常稱為瘢痕組織，此舉在創口部位產生膠原蛋白、黏多醣及葡萄糖胺聚糖。在早期癒合階段需要一定量之炎症以清除積聚於創口之細胞及蛋白質碎片，避免感染及/或慢性炎症。創口癒合之第二階段涉及修復過程，其需要纖維組織流入且增殖，部分藉由由纖維母細胞產生膠原蛋白及其他物質實現，導致形成視覺上視為瘢痕之緻密纖維結締組織。
創口癒合過程廣泛包含再生階段及修復階段，兩階段之間的區別係基於所得組織。在再生階段中，特化組織經周圍未受損傷特化細胞之增殖來置換。在修復階段中，損壞之組織經成熟從而形成瘢痕組織之肉芽組織置換。修復階段涉及產生修復物質，對於大部分肌肉骨胳損傷而言，其涉及產生瘢痕(膠原蛋白)物質。修復物質之產生在損傷之後很快即會發生，通常在24至48小時內，且在損傷之後持續幾個星期，時間部分視損傷組織中血管結構之量而定。在此期間，形成大部分瘢痕物質，其中瘢痕形成明顯且最終完成，獲得功能性瘢痕。
如上文所提及，炎症為癒合之正常且必需先決條件。發炎事件涉及事件之血管級聯反應與事件之細胞級聯反應。此等事件平行發生且顯著互連。發炎級聯反應涉及產生對癒合過程有積極貢獻之化學介體。舉例而言，細胞級聯反應涉及將嗜中性白血球、單核細胞、淋巴細胞、嗜伊紅血球、嗜鹼性球移至受傷區域且產生化學介體。發炎反應藉由產生細胞及液體滲出物引起血管反應，造成水腫。發炎反應之過程將視所毀壞之細胞數、該過程之原始因果關係及損傷時之組織狀態而定。
在炎症階段之後，創口修復開始，導致瘢痕形成。在一些個體中，瘢痕組織形成過程產生稱為肥厚性或瘢痕瘤性瘢痕之瘢痕。瘢痕瘤性瘢痕為凸起之堅固增厚紅色瘢痕，其超過損傷之邊界且可生長很長一段時間。當組織反應與正常修復及癒合所需之瘢痕組織的量不成比例時，出現瘢痕瘤性瘢痕。瘢痕尺寸之增加歸因於增長量之膠原蛋白沈積於組織中。瘢痕瘤發生與不同類型之皮膚損傷相關，包括手術、耳穿孔(ear piercing)、撕裂、灼傷、疫苗接種或炎性過程。常見部位為耳垂及上身(upper trunk)及四肢。
瘢痕形成為美觀問題且在一些情況下可為醫學問題。舉例而言，損傷或手術後不希望有面部之瘢痕且其可消極地影響人。在一些情況下，發生瘢痕瘤成長，且產生可見且不希望有之瘢痕。此外，在每一手術實務中，腹內黏連導致極其顯著之罹病率及死亡率。在手術之後通常會進行骨盆內黏連之治療，且重複手術可大大加重瘢痕形成。
仍需要預防瘢痕形成、降低過量瘢痕形成及預防黏連發生之治療。目前使用機械障壁預防黏連形成，且此等機械障壁在臨床上效用僅極小。瘢痕瘤已用向瘢痕注射皮質類固醇、藉由雷射療法及藉由投與干擾膠原蛋白合成之藥理學藥劑進行治療。需要改善瘢痕外觀及預防過量瘢痕形成及黏連而不會抑制創口癒合之方法。
量測c-Jun末端激酶在皮膚中之抑制作用。
先前研究已量測在有或無特定抑制劑下曝露於UVB照射之細胞中IL-10、TNF-α及NO之含量，表明UVB會據稱經由活化p38 MAPK信號傳導路徑而誘導彼等促發炎介體產生(Mutou Y,Tsukimoto M,Homma T,Kojima S,Immune Response Pathways in Human Keratinocyte (HaCat) Cells are Induced by Ultraviolet B via p38 Mitogen-activated Protein Kinase Activation,J. Health Science 2010;56(6):675-83)。另外，已報導人類皮膚UV照射後之c-Jun蛋白質誘導及磷酸化(Fisher G,Talwar H,Lin J,Lin P,McPhillips F,Wang Z,Li X,Wan Y,Kang S及Voorhees J,Retinoic Acid Inhibits Induction of c-Jun Protein by Ultraviolet Radiation That Occurs Subsequent To Activation Of Mitogen-Activated Protein Kinase Pathways In Human Skin In Vivo,J. Clin Invest. 1998;101(6):1432-40；及Einspahr J,Bowden T,Alberts D,McKenzie N,Saboda K,Warneke J,Salasche S,Ranger-Moore J,Lewandrowski C,Nagle R,Nickoloff B,Brooks,C,Dong Z及Stratton S,Cross-Validation of Murine UV Signal Transduction Pathways in Human Skin,Photochem. Photobiol. 2008;84(2):463-76)。
需要臨床標記以評估藥物候選者之生物效應。本文所述之方法允許評估JNK抑制劑之生物效應，且因此適用於臨床環境，諸如藉由提供直接手段以密切注意JNK抑制劑之活體內活性及評估特定患者群體對用JNK抑制劑，詳言之口服JNK抑制劑治療之敏感性來實現。
不應將本申請案第2部分中任何參考文獻之引用或標識理解為承認該參考文獻為本申請案之先前技術。
本文提供具有以下式(I)之化合物之用途：
及其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、籠形物、溶劑合物、水合物、立體異構體、互變異構體及前藥，其中R1、R2及R3係如本文所定義。
在一特定實施例中，式(I)化合物之互變異構體具有以下結構：
式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、籠形物、溶劑合物、水合物、立體異構體、互變異構體或前藥(本文中各稱為「胺基嘌呤化合物」)適用於治療或預防硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷或曬傷，且適用於改善或預防瘢痕形成。
本文提供進一步包含有效量之胺基嘌呤化合物之組合物或劑型之用途，及包含有效量之胺基嘌呤化合物及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或媒劑之組合物之用途。該等組合物適用於治療或預防硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷或曬傷，且適用於改善或預防瘢痕形成。
本文進一步提供治療或預防硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷或曬傷之方法及改善或預防瘢痕形成之方法，其包含向需要該治療、改善或預防之患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文亦提供評估胺基嘌呤化合物在患者中之作用的方法，其包含UVB照射患者之皮膚、投與胺基嘌呤化合物及使用免疫組織化學方法量測皮膚中磷酸化c-Jun表現。在一實施例中，使胺基嘌呤化合物與MAP激酶之抑制劑組合。在一實施例中，胺基嘌呤化合物之作用為胺基嘌呤化合物在患者中之劑量反應關係。在一些實施例中，胺基嘌呤化合物係經口投與。在一些實施例中，胺基嘌呤化合物為JNKi-1。在一實施例中，本文提供鑑別對胺基嘌呤化合物敏感之患者群體之方法，其包含利用偵測本文所提供之JNK抑制作用之方法。
本文提供藉由量測患者皮膚中之某些生物標記來評估JNK在患者中之抑制作用的方法。在一實施例中，本文提供量測JNK在患者中抑制作用之方法，其藉由以下來實現：將該患者皮膚之第一部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第一部分之樣品，量測該患者皮膚之該第一部分中磷酸化c-Jun之量，向該患者投與胺基嘌呤化合物，使該患者皮膚之第二部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第二部分之樣品，量測該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之量，及比較該患者皮膚之該第一部分與該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之含量，其中相對於該患者皮膚之該第一部分該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之含量降低指示JNK之抑制作用。
在另一實施例中，提供測定患者中投與胺基嘌呤化合物之劑量反應關係之方法。該等方法包含向該患者投與不同劑量(例如初始劑量及2至20種其他不同劑量)之該胺基嘌呤化合物及測定該患者中由各劑量之該胺基嘌呤化合物產生之JNK抑制量，其包含將該患者皮膚之第一部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第一部分之樣品，量測該患者皮膚之該第一部分中磷酸化c-Jun之量，向該患者投與一定劑量之該胺基嘌呤化合物，使該患者皮膚之第二部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第二部分之樣品，量測該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之量，及比較該患者皮膚之該第一部分及該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之含量，其中相對於該患者皮膚之該第一部分該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之含量降低與JNK之抑制作用成比例。
在又一實施例中，本文提供測定患者是否對胺基嘌呤化合物敏感之方法，其包含使該患者皮膚之第一部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第一部分之樣品，量測該患者皮膚之該第一部分中磷酸化c-Jun之量，向該患者投與該胺基嘌呤化合物，使該患者皮膚之第二部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第二部分之樣品，量測該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之量，及比較該患者皮膚之該第一部分及該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之含量，其中相對於該患者皮膚之該第一部分，該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之含量降低指示該患者對該胺基嘌呤化合物敏感。
在其他實施例中，提供測定用於治療或控制患者與JNK相關之疾病或病狀的胺基嘌呤化合物之有效量之方法，其包含向該患者投與不同劑量(例如初始劑量及2至20種其他不同劑量)之該胺基嘌呤化合物及測定該患者中由各劑量該胺基嘌呤化合物產生之JNK抑制量，其包含將該患者皮膚之第一部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第一部分之樣品，量測該患者皮膚之該第一部分中磷酸化c-Jun之量，向該患者投與一定劑量之該胺基嘌呤化合物，使該患者皮膚之第二部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第二部分之樣品，量測該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之量，及比較該患者皮膚之該第一部分及該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之含量，其中相對於該患者皮膚之該第一部分該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun之含量降低指示投與有效量之該胺基嘌呤化合物。
在又一實施例中，提供監測患者對胺基嘌呤化合物療法之順應性的方法。該方法包含在投與胺基嘌呤化合物之後量測患者皮膚之樣品中所表現之磷酸化c-Jun或c-Jun之含量，及測定與投與胺基嘌呤化合物之前的表現含量相比，該患者皮膚之樣品中表現含量是增加還是降低，其中表現降低指示患者對胺基嘌呤化合物療法之順應性。
本發明之實施例可藉由參考實施方式及實例更充分瞭解，其意欲例示非限制性實施例。
 定義
「烷基」為具有1至10個碳原子，通常1至8個碳，或在一些實施例中1至6、1至4或2至6個碳原子之飽和直鏈或分支鏈非環烴。代表性烷基包括-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基及-正己基；而飽和分支鏈烷基包括-異丙基、-第二丁基、-異丁基、-第三丁基、-異戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基及其類似基團。烷基可經取代或未經取代。當本文所述烷基稱為「經取代之」烷基時，其可經任何一或多個取代基取代，如本文所揭示之例示性化合物及實施例中所見之取代基，以及鹵素(氯、碘、溴或氟)；烷基；羥基；烷氧基；烷氧基烷基；胺基；烷基胺基；羧基；硝基；氰基；硫醇；硫醚；亞胺；醯亞胺；脒；胍；烯胺；胺基羰基；醯胺基；膦酸基；膦；硫羰基；磺醯基；碸；磺醯胺；酮；醛；酯；脲；胺基甲酸酯；肟；羥基胺；烷氧基胺；芳烷氧基胺；N-氧化物；胼；醯胼；腙；疊氮化物；異氰酸酯；異硫氰酸酯；氰酸酯；硫氰酸酯；B(OH)2或O(烷基)胺基羰基。
「烯基」為具有2至10個碳原子，通常2至8、或2到6個碳原子且包括至少一個碳-碳雙鍵之直鏈或分支鏈非環烴。代表性直鏈及分支鏈(C2-C8)烯基包括-乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、-1-己烯基、-2-己烯基、-3-己烯基、-1-庚烯基、-2-庚烯基、-3-庚烯基、-1-辛烯基、-2-辛烯基、-3-辛烯基及其類似基團。烯基之雙鍵可未結合或結合至另一不飽和基團。烯基可未經取代或經取代。
┌烷氧基┘為-O-(烷基)，其中烷基係如上文所定義，包括-OCH3、-OCH2CH3、-O(CH2)2CH3、-O(CH2)3CH3、-O(CH2)4CH3、-O(CH2)5CH3及其類似基團。
「烷氧基烷基」為-(伸烷基)-O-(烷基)，其中各烷基獨立地為上文所定義之烷基，包括-CH2OCH3、-CH2OCH2CH3、-(CH2)2OCH2CH3、-(CH2)2O(CH2)2CH3及其類似基團。
「烷基胺基」為單烷基胺基或二烷基胺基，諸如-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、-NH(C3-10環烷基)、-N(C3-10環烷基)(C3-10環烷基)或-N(C1-6烷基)(C3-10環烷基)，其中各C1-6烷基及C3-10環烷基獨立地如上文所定義，包括(但不限於)-NHCH3、-NHCH2CH3、-NH(CH2)2CH3、-NH(CH2)3CH3、-NH(CH2)4CH3、-NH(CH2)5CH3、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、-N((CH2)2CH3)2及-N(CH3)(CH2CH3)。
「胺基羰基」為-C(O)NR2基團，其中各R獨立地為氫或上文所定義之C1-6烷基，其中各C1-6烷基可視情況經取代。
「醯胺基」為-NRC(O)R基團，其中各R獨立地為氫或上文所定義之C1-6烷基，其中各C1-6烷基可視情況經取代。
「胺基烷基」為經一或多個NR2基團取代之C1-6烷基，其中R為氫或上文所定義之C1-6烷基，其中各C1-6烷基可視情況進一步經取代。
「烷磺醯胺基」為-NR-SO2-C1-6烷基，其中R為氫或上文所定義之烷基，其中各烷基可視情況經取代。
「環烷基」為具有單個環或多個稠合或橋連環之環狀烷基，其可視情況經1至3個烷基取代。該等環烷基包括例如單環結構，諸如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、1-甲基環丙基、2-甲基環戊基、2-甲基環辛基及其類似基團，或多環或橋連環結構，諸如金剛烷基及其類似基團。在一實施例中，環烷基具有3至10個碳原子。環烷基可經取代或未經取代。該等經取代之環烷基包括例如環己酮及其類似基團。
「羧基」為-COOH基團。
「鹵素」為氟、氯、溴或碘。
「芳基」為具有6至14個碳原子之具有單環(例如苯基)或多個稠環(例如萘基或蒽基)之芳族碳環基。在一些實施例中，芳基在該等基團之環部分含有6至14個碳，且在其他實施例中含有6至12或甚至6到10個碳原子。特定芳基包括苯基、聯苯基、萘基及其類似基團。芳基可經取代或未經取代。短語「芳基」亦包括含有稠合環之基團，諸如稠合芳族-脂族環系統(例如茚滿基、四氫萘基及其類似基團)。
「雜芳基」為具有1至4個雜原子作為雜芳環系統中之環原子的芳環系統，其中其餘原子為碳原子。在一些實施例中，雜芳基在該等基團之環部分含有5至6個環原子，且在其他實施例中含有6至9、或甚至6到10個原子。適合雜原子包括氧、硫及氮。在某些實施例中，雜芳環系統為單環或雙環。非限制性實例包括(但不限於)諸如以下之基團：吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、吡咯基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基(例如異苯并呋喃-1,3-二亞胺)、吲哚基、氮雜吲哚基(例如吡咯并吡啶基或1H-吡咯并(2,3-b)吡啶基)、吲唑基、苯并咪唑基(例如1H-苯并(d)咪唑基)、咪唑并吡啶基(例如氮雜苯并咪唑基、3H-咪唑并(4,5-b)吡啶基或1H-咪唑并(4,5-b)吡啶基)、吡唑并吡啶基、三唑并吡啶基、苯并三唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、異噁唑并吡啶基、噻萘基(thianaphthalenyl)、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、四氫喹啉基、喹喏啉基及喹唑啉基。
「雜環基」為芳族(亦稱為雜芳基)或非芳族環烷基，其中1至4個環碳原子獨立地經來自由O、S及N組成之群的雜原子置換。在一些實施例中，雜環基包括3至10個環成員，然而其他該等基團具有3至5、3至6、或3至8個環成員。雜環基亦可在任何環原子處(亦即在雜環之任何碳原子或雜原子處)連接至其他基團。雜環基烷基可經取代或未經取代。雜環基涵蓋不飽和、部分飽和及飽和環系統，諸如咪唑基、咪唑啉基及咪唑啶基。短語雜環基包括稠合環類，包括包含稠合芳族及非芳族基之彼等稠合環類，諸如苯并三唑基、2,3-二氫苯并(1,4)二氧雜環己烯基及苯并(1,3)二氧雜環戊烯基。短語亦包括含有雜原子之橋連多環系統，諸如(但不限於)啶基。雜環基之代表性實例包括(但不限於)氮丙啶基、吖丁啶基、吡咯啶基、咪唑啶基、吡唑啶基、噻唑啶基、四氫噻吩基、四氫呋喃基、二氧雜環戊烯基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、咪唑啉基、吡唑基、吡唑啉基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻唑啉基、異噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫嗎啉基、四氫哌喃基(例如四氫-2H-哌喃基)、四氫硫哌喃基、氧硫雜環己烷、二氧基、二噻烷基、哌喃基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、三嗪基、二氫吡啶基、二氫二噻基、二氫二亞硫醯基、高哌嗪基、啶基、吲哚基、吲哚啉基、異吲哚基、氮雜吲哚基(吡咯并吡啶基)、吲唑基、吲嗪基、苯并三唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噁嗪基、苯并二噻基、苯并噁噻基、苯并噻嗪基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并(1,3)二氧雜環戊烯基、吡唑并吡啶基、咪唑并吡啶基(氮雜苯并咪唑基；例如1H-咪唑并(4,5-b)吡啶基或1H-咪唑并(4,5-b)吡啶-2(3H)-酮基)、三唑并吡啶基、異噁唑并吡啶基、嘌呤基、黃嘌呤基、腺嘌呤基、鳥嘌呤基、喹啉基、異喹啉基、喹嗪基、喹喏啉基、喹唑啉基、喏啉基、酞嗪基、啶基、喋啶基、噻萘基、二氫苯并噻嗪基、二氫苯并呋喃基、二氫吲哚基、二氫苯并二氧雜環己烯基、四氫吲哚基、四氫吲唑基、四氫苯并咪唑基、四氫苯并三唑基、四氫吡咯并吡啶基、四氫吡唑并吡啶基、四氫咪唑并吡啶基、四氫三唑并吡啶基及四氫喹啉基。代表性經取代之雜環基可經單取代或經一次以上取代，諸如(但不限於)吡啶基或嗎啉基，其經2-取代、3-取代、4-取代、5-取代或6-取代，或經多個取代基，諸如以下所列舉之彼等取代基雙取代。其他非限制性實例包括以下：
包括其立體異構體、互變異構體及對映異構體，其中X每次出現時獨立地為CH2、O、S或N，且R4為H、經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之環烷基、經取代或未經取代之雜環或經取代或未經取代之雜芳基。雜芳基可經取代或未經取代。雜環基可經取代或未經取代。
「雜環羰基」為-C(O)-雜環基，其中雜環係如本文所述，其中雜環基可視情況經取代。
「羥烷基」為如上所述經一或多個羥基取代之烷基。
在一實施例中，當本文所述基團稱為「經取代」基團時，其可經一或多個適合取代基取代。取代基之實例為本文所揭示之例示性化合物及實施例中所見之取代基，以及鹵素(氯、碘、溴或氟)；C1-6烷基；C2-6烯基；C2-6炔基；羥基；C1-6烷氧基；胺基；硝基；硫醇；硫醚；亞胺；氰基；醯胺基；膦酸基；膦；羧基；硫羰基；磺醯基；磺醯胺；酮；醛；酯；氧(=O)；鹵烷基(例如三氟甲基)；B(OH)2；碳環環烷基，其可為單環或稠合或非稠合多環環烷基(例如環丙基、環丁基、環戊基或環己基)，或雜環烷基，其可為單環或稠合或非稠合多環雜環烷基(例如」咯啶基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基或噻嗪基)；碳環或雜環、單環或稠合或非稠合多環芳基(例如苯基、萘基、吡咯基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、吡啶基、喹啉基、異喹啉基、吖啶基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、苯并咪唑基、苯并噻吩基或苯并呋喃基)；胺基(一級、二級或三級胺基)；O-低碳烷基；O-芳基；芳基；芳基-低碳烷基；CO2CH3；CONH2；OCH2CONH2；NH2；SO2NH2；OCHF2；CF3；或OCF3。在一特定實施例中，取代基包括鹵素(例如氯、溴、碘或氟)、烷氧基(例如甲氧基、-O-(CH2)2-哌啶或乙氧基)、氰基、羥基、芳基(例如苯基)、CF3、烷基(例如甲基)、胺基(例如NH2)、醯胺基(例如-NH-C(O)CH3、-NH-C(O)CH2CH3、-C(O)-吡咯啶、-NH-C(O)CH(CH3)2、-NH-C(O)CH2CH(CH3)2、-NH-C(O)CH2N(CH3)2、-N(CH3)-C(O)CH3、-NHC(O)CH3、-C(O)NH2、-C(O)-(4-甲基)-哌嗪、-C(O)-NH-(CH2)2-哌啶、-C(O)-NH-CH2-CHOH-CH2OH、-C(O)-(4-羥乙基)-哌嗪、-C(O)-哌啶-吡咯啶、-C(O)-NH-哌啶、-C(O)-(4-乙基)-哌嗪、-C(O)-NHCH3、-C(O)-N(CH3)2、-C(O)-NH-環丙基、-C(O)-NH-CH2-CH2OH、-C(O)-(3-羥基)-吡咯啶、-C(O)-(2-羥甲基)-吡咯啶、-C(O)-(4-羥基)-哌啶、-C(O)-哌啶、-C(O)-NH-異丙基、-C(O)-嗎啉、-C(O)-NH-環丁基、-C(O)-NH-羥基異丙基或-C(O)-NH-乙基)、二烷基胺基(例如-N(CH3)2)、磺醯胺基(例如-NH-S(O)2CH3)、羧基、羥烷基(例如-CH2OH、-(CH2)2OH或t-BuOH)、雜環烷基(例如-(CH2)2-哌啶或-(CH2)2-吡咯啶)、烷基胺基(例如-NHCH3)、芳基烷基(例如-CH2-苯基或-CH(CH3)-苯基)、雜環基(例如嗎啉)、烷氧羰基(例如-C(O)OCH2CH3)、磺醯基(例如-S(O)2CH3)、羰基烷氧基(例如-O-C(O)-(CH2)2COOH)、醯基(例如-C(O)CH3)、環烷基(例如環丙基)、雜芳基(例如吡啶或噻吩)、氧(=O)或B(OH)2。在一實施例中，「烷基」可經一或多個本文提供之「烷基」定義中所述之取代基取代。
「JNK」意謂由JNK 1、JNK 2或JNK 3基因所表現之蛋白質或其同功異型物(Gupta,S.,Barrett,T.,Whitmarsh,A.J.,Cavanagh,J.,Sluss,H.K.,Derijard,B.及Davis,R.J.The EMBO J. 15:2760-2770(1996))。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指由醫藥學上可接受之無毒酸或鹼(包括無機酸及鹼、及有機酸及鹼)製備之鹽。胺基嘌呤化合物之適合醫藥學上可接受之鹼加成鹽包括(但不限於)由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉及鋅製造之金屬鹽或由離胺酸、N,N'-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡萄胺)及普魯卡因製造之有機鹽。適合無毒酸包括(但不限於)無機及有機酸，諸如乙酸、褐藻酸、鄰胺基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、甲酸、反丁烯二酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、麩胺酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙基磺酸、乳酸、順丁烯二酸、蘋果酸、杏仁酸、甲烷磺酸、黏液酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、柳酸、硬脂酸、丁二酸、對胺基苯磺酸、硫酸、酒石酸及對甲苯磺酸。特定無毒酸包括鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及甲烷磺酸。由此特定鹽之實例包括鹽酸鹽及甲磺酸鹽。其他鹽在此項技術中熟知，參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing,Easton PA(1990)或Remington: The Science and Practice of Pharmacy，第19版，Mack Publishing,Easton PA(1995)。
如本文所用，術語「固體形式」及本文中之相關術語係指由於晶格中分子次序而具有不同物理特性之胺基嘌呤化合物之固體形式。固體形式所呈現之物理特性之差異影響醫藥參數，諸如儲存穩定性、可壓縮性及密度(在調配及產品製造中十分重要)及溶解速率(在測定生物可用性中重要之因素)。穩定性差異可歸因於化學反應性變化(例如差別氧化，以便與包含一種固體形式時相比，包含另一種固體形式時劑型會更快褪色)或機械變化(例如錠劑在儲存時破碎，因動力學有利之固體形式轉化成熱力學上更穩定之固體形式)或兩者(例如具有一種固體形式之錠劑更易在高濕度下破裂)。由於溶解度/溶解作用差異，在極端情況下，一些固體形式轉變可導致效能缺乏，或在另一極端情況下毒性缺乏。另外，晶體之物理特性在加工中可能十分重要，例如一種固體形式可更可能形成溶劑合物或可能難以過濾且洗滌至不含雜質(亦即一種固體形式相對另一種之間的粒子形狀及尺寸分佈可能不同)。
如本文所用且除非另外指出，否則術語「籠形物」意謂呈含有其中截留有客體分子(例如溶劑或水)之間隔(例如通道)的晶格形式或胺基嘌呤化合物為客體分子之晶格形式的胺基嘌呤化合物或其鹽。
如本文所用且除非另外指出，否則術語「水合物」意謂進一步包括化學計量或非化學計量之量的由非共價分子間力結合之水的胺基嘌呤化合物或其鹽。
如本文所用且除非另外指出，否則術語「溶劑合物」意謂進一步包括化學計量或非化學計量之量的由非共價分子間力結合之溶劑的胺基嘌呤化合物或其鹽。
如本文所用且除非另外指出，否則術語「前藥」意謂可在生物條件下(活體外或活體內)水解、氧化或進行其他反應以提供活性化合物(尤指胺基嘌呤化合物)之胺基嘌呤化合物衍生物。前藥之實例包括(但不限於)胺基嘌呤化合物之衍生物及代謝物，其包括生物可水解部分體，諸如生物可水解醯胺、生物可水解酯、生物可水解胺基甲酸酯、生物可水解碳酸酯、生物可水解醯脲及生物可水解磷酸酯類似物。在某些實施例中，具有羧基官能基之化合物之前藥為羧酸之低碳烷基酯。羧酸酯宜由分子上存在之任一羧酸部分經過酯化而形成。前藥通常可使用熟知方法製備，諸如Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery第6版(Donald J. Abraham編輯，2001,Wiley)及Design and Application of Prodrugs(H. Bundgaard編輯，1985,Harwood Academic PublishersGmfh)所述之彼等方法。
如本文所用且除非另外指出，否則術語「立體異構體」或「純立體異構性」意謂實質上不含胺基嘌呤化合物之其他立體異構體之胺基嘌呤化合物之一種立體異構體。舉例而言，具有一個對掌性中心之純立體異構性化合物實質上不含該化合物之相反對映異構體。具有兩個對掌性中心之純立體異構性化合物實質上不含該化合物之其他非對映異構體。典型純立體異構性化合物包含大於約80重量%之化合物之一種立體異構體及小於約20重量%之化合物之其他立體異構體，大於約90重量%之化合物之一種立體異構體及小於約10重量%之化合物之其他立體異構體，大於約95重量%之化合物之一種立體異構體及小於約5重量%之化合物之其他立體異構體，或大於約97重量%之化合物之一種立體異構體及小於約3重量%之化合物之其他立體異構體。胺基嘌呤化合物可具有對掌性中心且可呈外消旋物、個別對映異構體或非對映異構體及其混合物之形式存在。所有該等異構形式均包括在本文所揭示之實施例內，包括其混合物。可使用諸如對掌性管柱或對掌性解析劑之標準技術進行不對稱合成法或解析此等異構體。參見例如Jacques,J.等人，Enantiomers,Racemates and Resolutions(Wiley-Interscience,New York,1981)；Wilen,S. H.等人，Tetrahedron 33:2725(1977)；Eliel,E. L.,Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw-Hill,NY,1962)；及Wilen,S. H.,Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions第268頁(E.L. Eliel編,Univ. of Notre Dame Press,Notre Dame,IN,1972)。
如本文所用且除非另外指出，否則術語┌互變異構體┘係指可彼此平衡之化合物之異構形式。異構形式之濃度將視存在化合物之環境而定，且可視例如化合物為固體抑或呈有機或水溶液形式而不同。舉例而言，在水溶液中，吡唑可呈現以下異構形式，其稱為彼此之互變異構體：
亦應注意胺基嘌呤化合物包括其E及Z異構體或混合物，及其順式及反式異構體或混合物。在某些實施例中，將胺基嘌呤化合物分離成E或Z異構體。在其他實施例中，胺基嘌呤化合物為E及Z異構體之混合物。
亦應注意胺基嘌呤化合物在一或多個原子處可含有非天然比例之原子同位素。舉例而言，化合物可用諸如氚(3H)、碘-125(125I)、硫-35(35S)或碳-14(14C)之放射性同位素放射性標記，或可富含同位素諸如氘(2H))、碳-13(13C)或氮-15(15N)。如本文所用，「同位素物」為富含同位素之化合物。術語「富含同位素」係指原子具有除彼原子之天然同位素組成以外之同位素組成。「富含同位素」亦可能係指化合物含有至少一種原子，該原子具有除原子之天然同位素組成以外之同位素組成。術語「同位素組成」係指既定原子所存在之各同位素之量。經放射性標記及富含同位素之化合物適用作治療劑，例如癌症及炎症治療劑；研究試劑，例如結合分析試劑；及診斷性藥劑，例如活體內顯影劑。如本文所述之胺基嘌呤化合物之所有同位素變化(具有放射性抑或無放射性)意欲包含於本文所提供之實施例範疇內。在一些實施例中，提供胺基嘌呤化合物之同位素物，例如同位素物為富含氘、碳-13或氮-15之胺基嘌呤化合物。在某些實施例中，胺基嘌呤化合物之同位素物包括2009年12月8日申請之PCT/US2009/067313中所述之彼等胺基嘌呤化合物，其全部內容以引用的方式併入本文中。
如本文所用，「治療」意謂完全或部分緩減與病症或病狀(例如如本文所述之硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷或曬傷)相關之症狀，或減緩或中止彼等症狀進一步發展或惡化。
如本文所用，「預防」意謂完全或部分預防疾病或病狀(如本文所述之硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷、曬傷或瘢痕形成)或其症狀發作、復發或傳播。
如本文所用，關於瘢痕形成或瘢痕瘤形成之「改善」意謂降低瘢痕或瘢痕瘤之尺寸、可見度或注意度或通常改善瘢痕或瘢痕瘤之外觀。
關於胺基嘌呤化合物之術語┌有效量┘意謂能夠治療、改善或預防諸如硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷、曬傷或瘢痕形成之本文所揭示之疾病或病狀之量。
術語「患者」包括動物，其包括(但不限於)諸如牛、猴子、馬、綿羊、豬、雞、火雞、鵪鶉、貓、犬、小鼠、大鼠、兔子或豚鼠之動物，在一實施例中為哺乳動物，在另一實施例中為人類。在一實施例中，患者為患有硬皮病、UV損傷、曬傷或瘢痕形成或其症狀或有發生硬皮病、UV損傷、曬傷或瘢痕形成或其症狀風險之人類。
如本文所用「UVA」係指波長由約320 nm延伸至約400 nm之紫外光譜區域中之電磁輻射。
如本文所用，「UVB」係指約280 nm延伸至約320 nm之紫外光譜區域中之電磁輻射。
如本文所用，「總存活時間」係指由隨機分組後直至因任何原因死亡之時間，且在意欲治療之群體中進行量測。總存活時間可在隨機對照研究中進行評估。
如本文所用，「目標反應率」係指在預先指定的一段時間結束時，預先指定之硬皮病症狀減輕之患者比例。反應持續時間通常由初始反應時間直至證明硬皮病惡化來量測。
如本文所用，「直到出現惡化之時間」意謂由隨機分組後直至目標硬皮病惡化之時間。在某些實施例中，直到出現惡化之時間不包括死亡。
如本文所用，「無惡化存活時間」意謂由隨機分組後直至目標硬皮病惡化或死亡之時間。
如本文所用，「到治療失敗所需時間」意謂由隨機分組後至治療因包括疾病發展、治療毒性及死亡之任何原因中止之任何終點量測時間。
如本文所用，「死亡率」意謂既定群體中死亡數之量度。
如本文所用，「呼吸系統疾病死亡率」意謂患者死於急性低氧血症或導致死亡之其他特定呼吸系統惡化，諸如導致死亡、呼吸停止或個體中視為實質上與呼吸有關之任何其他事件之需要機械通風。
如本文所用，「呼吸系統住院治療」意謂針對如患者入院記錄(admission note)或其他醫學意見所提供證明之肺部狀態惡化而送進醫院治療。
如本文所用，「改良式羅南皮膚評分(modified Rodnanskin score)」意謂評估真皮皮膚厚度之有效數值評分系統。
如本文所用，「皮膚厚度」意謂可使用包括硬度計及mRSS之多種技術評估之硬或硬結皮膚。
如本文所用，「皮膚硬結」意謂皮膚硬化、發紅、發炎、增厚或觸痛。
如本文所用，「皮膚病生活品質指數(dermatology quality of life index)」意謂對患有硬皮病之患者之與皮膚症狀相關之品質或生活的評估。
如本文所用，「肺功能」意謂用力呼氣流量、用力肺活量、FEV 25-75%、肺容量或肺活量之任何量測。
如本文所用，「一氧化碳擴散能力」意謂對穿過肺泡毛細血管膜攝取一氧化碳之評估。其可為量測由肺向血流轉移氧氣之肺能力的代表。
如本文所用，「馬勒呼吸困難指數(Mahler Dyspnea index)」意謂提供呼吸急促之臨床量測之手段。
如本文所用，「聖喬治呼吸問卷評分(Saint George's Respiratory Questionnaire score)」意謂量測患有肺病之患者的生活品質之手段。
如本文所用，「UCLA硬皮病臨床試驗合作聯盟胃腸道評分」意謂施與患有硬皮病之患者以評估與硬皮病(系統性硬化症)相關之胃腸症狀之問卷。
如本文所用，「血流介導之擴張」意謂患有硬皮病之患者中血管內皮功能之任何量測。
如本文所用，「六分鐘步行距離」意謂患有硬皮病之患者在6分鐘內可步行之距離之任何評估，或評估步行一段固定時間或距離之能力的任何標準程序。
術語「可能性」通常係指事件之概率增加。術語「可能性」當關於患者反應之效用使用時，通常涵蓋與JNK相關之疾病或病狀之症狀將減輕或減緩之概率增加。
術語「預測」通常意謂提前判定或告知。當用以「預測」胺基嘌呤化合物治療之效用時，例如術語「預測」可意謂一開始、在治療開始之前或在治療時期實質上發展之前即可判定治療結果之可能性。
如本文所用，術語「監測」通常係指活性之監視、管理、調節、注視、追蹤或監督。舉例而言，術語「監測與JNK相關之疾病或病狀之治療功效」係指追蹤患者之治療效用。類似地，術語「監測」在個別或在臨床試驗中關於患者順應性使用時，係指追蹤或證實患者實際上遵循根據處方所測試之治療方案。
如本文所用，術語「測定」、「量測」、「評估」、「評估」及「分析」通常係指任何量測形式，且包括測定要素存在抑或不存在。此等術語包括定量及/或定性測定。評估可為相對或絕對評估。「評估……之存在」可包括測定所存在之某物的量，以及測定存在抑或不存在。
胺基嘌呤化合物
本文提供具有以下式(I)之胺基嘌呤化合物：
及其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、籠形物、溶劑合物、水合物、立體異構體、互變異構體、對映異構體及前藥，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
在一特定實施例中，式(I)化合物之互變異構體具有以下結構：
且包括其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、籠形物、溶劑合物、水合物、立體異構體、對映異構體及前藥，其中R1至R3係如上文所定義。
在一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經取代或未經取代之芳基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經取代或未經取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經取代之苯基，在一實施例中為經烷氧基取代之苯基，在一實施例中為經對烷氧基取代之苯基，且在一實施例中為經對甲氧基取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經間烷氧基取代之苯基，在一實施例中為經間甲氧基取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經三氟甲基取代之苯基，在一實施例中為經對三氟甲基取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為C1-6烷基，在一實施例中為異丙基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經對鹵基取代之苯基，在一實施例中為經對氟取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經對C1-6烷基取代之苯基，在一實施例中為經對甲基取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經鄰鹵基取代之苯基，在一實施例中為經鄰氟取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經間，對-二鹵基取代之苯基，在一實施例中為經間，對-二氯取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經間氰基取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經對C3-10雜環基取代之苯基，在一實施例中為經對(N-嗎啉基)取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經對磺醯基取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為C3-10雜芳基，在一實施例中為吡啶或吡啶酮之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為C3-10雜環基，在一實施例中為哌啶、哌啶-2-酮、吡咯啶酮或四氫哌喃之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為N-取代之哌啶，在一實施例中為N-磺醯基取代之哌啶之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為C3-10環烷基，在一實施例中為環己基、環戊基或環丙基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經取代之C3-10環烷基，在一實施例中為經一或多個以下取代之C3-10環烷基之胺基嘌呤化合物：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、雜環羰基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經取代之C3-10環烷基，在一實施例中為經一或多個以下取代之C3-10環烷基之胺基嘌呤化合物：烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、胺基烷基、醯胺基、醯胺基烷基、羧基、雜環羰基、磺醯胺或磺醯胺基烷基。環己基及環戊基為特定C3-10環烷基。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經一或多個以下取代之環己基之胺基嘌呤化合物：烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、胺基烷基、醯胺基、醯胺基烷基、羧基、雜環羰基、磺醯胺或磺醯胺基烷基。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為C1-6烷基，在一實施例中為甲基、乙基、丙基(例如正丙基或異丙基)或丁基(例如異丁基)之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經取代之C1-6烷基，在一實施例中為經苯基、羥基、C3-10環烷基或環氧乙烷取代之C1-6烷基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為苄基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R1為經取代之C1-6烷基，在一實施例中為經C3-10雜環(例如哌啶或吡咯啶)取代之C1-6烷基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為經取代或未經取代之C3-10環烷基，在一實施例中為環己基、環戊基、環丁基或環丙基之胺基嘌呤化合物。環己基及環戊基為特定C3-10環烷基。在一實施例中，C3-10環烷基取代基包括C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、胺基烷基、醯胺基、醯胺基烷基、羧基、雜環羰基、磺醯胺及磺醯胺基烷基。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為經一或多個以下取代之環己基或環戊基之胺基嘌呤化合物：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、胺基烷基、醯胺基、醯胺基烷基、羧基、雜環羰基、磺醯胺或磺醯胺基烷基。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為經一或多個以下取代之環己基或環戊基之胺基嘌呤化合物：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、雜環羰基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為C1-6烷基，在一實施例中為丁基(例如正丁基、異丁基或第三丁基)、丙基(例如異丙基)、乙基或甲基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為經取代之C1-6烷基，在一實施例中為經氰基、C3-10環烷基或羥基取代之C1-6烷基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為經取代之C1-6烷基，在一實施例中為經C3-10雜環(例如哌啶或吡咯啶)、羥基或醯胺基取代之C1-6烷基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為芳基，在一實施例中為苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為C3-10雜環，在一實施例中為哌啶、哌啶-2-酮、四氫哌喃、四氫呋喃或吖丁啶之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為C3-10雜環，在一實施例中為含硫C3-10雜環，包括(但不限於)4-(1,1-二側氧基)硫哌喃基及3-(1,1-二側氧基)硫呋喃基之胺基嘌呤化合物。在一特定實施例中，R2為含有硫、磺醯基或磺醯胺基之C3-10雜環。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為經取代之C3-10雜環，在一實施例中為經乙醯基取代之哌啶之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2為經取代或未經取代之3-氧雜環丁烷基、3-四氫呋喃基、4-四氫哌喃基、4-哌啶基、4-(1-醯基)-哌啶基、4-(1-烷磺醯基)哌啶基、3-吡咯啶基、3-(1-醯基)吡咯啶基或3-(1-烷磺醯基)吡咯啶基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經鄰鹵基取代之苯基，在一實施例中為經鄰氟或氯取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經間鹵基取代之苯基，在一實施例中為經間氟或氯取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經對鹵基取代之苯基，在一實施例中為經對氟或氯取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經間，對-二鹵基取代之苯基，在一實施例中為經間，對-二氟或二氯取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經鄰，間-二鹵基取代之苯基，在一實施例中為經鄰，間-二氟取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經鄰，對-二鹵基取代之苯基，在一實施例中為經鄰，對-二氟取代之苯基、經鄰-氟-對溴取代之苯基或經鄰-氟-對-氯取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經鄰，鄰-二鹵基取代之苯基，在一實施例中為經鄰，鄰-二氟取代之苯基或經鄰-氯-鄰-氟取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經2,4,6-三鹵基取代之苯基，在一實施例中為經三氟取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經鄰鹵基取代，在一實施例中為經鄰氟或氯取代且經間三氟甲基取代之苯基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為經鹵基取代之C3-10雜芳基，在一實施例中為經鹵基取代之吡啶之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2不為胺基乙基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2不為五員雜環之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2不為五員含N雜環之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2不為五員含O雜環之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2不為2-四氫呋喃基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R2不為2-吡咯啶基之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，本文提供式(I)之胺基嘌呤化合物及其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、籠形物、溶劑合物、水合物、立體異構體、互變異構體及前藥，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為：
R3為芳基或C3-10雜芳基，各經一或多個鹵素取代；X在每次出現時獨立地為CH2、O、S或N；R4及R5在每次出現時獨立地為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；或R4及R5連同其所連接之N原子一起形成經取代或未經取代之5至7員雜環；及n在每次出現時獨立地為0至3範圍內之整數。
在另一實施例中，式(I)之胺基嘌呤化合物為R3為以下之胺基嘌呤化合物：
其中：X在每次出現時獨立地為F、Cl、Br或I；R6為C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基；m為1至5範圍內之整數；及p為0至4範圍內之整數。
在另一實施例中，p為1至4範圍內之整數。
在另一實施例中，本文提供具有以下式(II)之胺基嘌呤化合物：
及其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、籠形物、溶劑合物、水合物、立體異構體、互變異構體、對映異構體及前藥，其中：X在每次出現時獨立地為F、Cl、Br或I；R2為：
R4及R5在每次出現時獨立地為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；或R4及R5連同其所連接之N原子一起形成經取代或未經取代之5至7員雜環；R6為C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基；m為1至5範圍內之整數；n在每次出現時獨立地為0至3範圍內之整數；及p為0至4範圍內之整數。
在一實施例中，式(II)之胺基嘌呤化合物為X為氟之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(II)之胺基嘌呤化合物為X為氟且m為3之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，p為0。
在另一實施例中，p為1至4範圍內之整數。
在另一實施例中，本文提供具有以下式(III)之胺基嘌呤化合物：
及其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、籠形物、溶劑合物、水合物、立體異構體、互變異構體、對映異構體及前藥，其中：X在每次出現時獨立地為F、Cl、Br或I；m為1至5範圍內之整數；p為0至4範圍內之整數；R1為：
R6為C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
在一實施例中，式(III)之胺基嘌呤化合物為X為氟之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，式(III)之胺基嘌呤化合物為X為氟且m為3之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，p為0。
在另一實施例中，p為1至4範圍內之整數。
在一實施例中，本文提供具有以下式(IV)之胺基嘌呤化合物：
及其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、籠形物、溶劑合物、水合物、立體異構體、互變異構體、對映異構體及前藥，其中：R3為：
代表性胺基嘌呤化合物示於以下表1中。
表1中所示之胺基嘌呤化合物用本文所述之JNK抑制劑分析進行測試，且發現具有作為JNK抑制劑之活性(參見美國專利第7,521,446號、第7,723,340號及第7,759,342號；且國際公開案第WO 2006/076595號及第WO 2007/127382號，各文獻之揭示內容以全文引用的方式併入本文中)。在一實施例中，胺基嘌呤化合物為化合物第425號。在一實施例中，胺基嘌呤化合物為化合物第459號，亦即4-((9-((3S)-四氫-3-呋喃基)-8-((2,4,6-三氟苯基)胺基)-9H-嘌呤-2-基)胺基)-反-環己醇，其具有以下結構：
或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物(「JNKi-1」)。
在另一實施例中，胺基嘌呤化合物為4-((9-((3S)-四氫-3-呋喃基)-8-((2,4,6-三氟苯基)胺基)-9H-嘌呤-2-基)胺基)-反-環己醇之互變異構體，特定言之化合物(S,E)-4-((9-(四氫呋喃-3-基)-8-((2,4,6-三氟苯基)亞胺基)-8,9-二氫-7H-嘌呤-2-基)胺基)環己醇，其具有以下結構：
或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物。
在一實施例中，胺基嘌呤化合物為化合物第185號。
製造胺基嘌呤化合物之方法
胺基嘌呤化合物可使用習知之有機合成製造。舉例而言但不限於，胺基嘌呤化合物可根據美國專利第7,521,446號、第7,723,340號及第7,759,342號；及國際公開案第WO 2006/076595號及第WO 2007/127382號中所述之方法製備，各文獻之揭示內容以全文引用的方式併入本文中。呈結晶形式之胺基嘌呤化合物之水合物可根據美國專利申請公開案第2009/0048275號(參見例如第4頁第(0057)段至第8頁第(0098)段，包括其中所參考之圖式，及第5頁第(0071)段至第6頁第(0077)段，包括其中所參考之圖式)中所述之方法來製備，該文獻之揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
在一實施例中，胺基嘌呤化合物為游離鹼。在某些實施例中，游離鹼為固體。在某些實施例中，游離鹼為非晶固體。在又一實施例中，游離鹼為結晶。在某些實施例中，游離鹼呈結晶形式A。在一實施例中，胺基嘌呤化合物之結晶形式包含化合物(I)之互變異構體。在某些實施例中，游離鹼呈結晶形式B。
在另一實施例中，胺基嘌呤化合物為游離鹼之醫藥學上可接受之溶劑合物。在一實施例中，溶劑合物為水合物。在另一實施例中，水合物呈結晶形式。在另一實施例中，胺基嘌呤化合物之互變異構體呈結晶形式。
使用方法
胺基嘌呤化合物可用作治療、預防或改善動物或人類病狀之藥物。此外，胺基嘌呤化合物具有抗蛋白激酶之活性，包括涉及硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷、曬傷或瘢痕形成中之彼等蛋白激酶。因此，本文提供胺基嘌呤化合物之許多用途，包括治療、改善或預防本文所述之彼等病狀。本文提供之方法包含向有需要患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文提供治療硬皮病或其症狀之方法，其包含向患有硬皮病之患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供預防硬皮病或其症狀之方法，其包含向有患硬皮病風險之患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
在某些實施例中，硬皮病為局部、全身性、侷限性或彌散性硬皮病。
在某些實施例中，系統性硬皮病包含CREST症候群(鈣質沈著、雷諾氏症候群、食道功能障礙或運動不良、指皮硬化、毛細血管擴張病)。硬皮病亦稱為全身性硬化症或進行性全身性硬化症。在某些實施例中，本文提供治療或預防雷諾氏病或雷諾氏症候群之方法。在某些實施例中，全身性硬化症包含硬皮病性肺病、硬皮病性腎危機、心臟表現、肌肉無力(包括疲勞或侷限性CREST)、胃腸運動不良及痙攣、及中樞、周邊及自主神經系統異常(包括腕隧道症候群，之後為三叉神經痛)。亦包括一般功能障礙，包括抑鬱及對生活品質之影響。
在某些實施例中，侷限性硬皮病限於手、面部、頸部或其組合。
在某些實施例中，彌漫性硬皮病包含皮膚收緊，且出現在腕(或肘)以上。在某些實施例中，彌漫性全身性硬化症為無皮膚硬化的硬皮病，包含內臟器官纖維變性，但無皮膚收緊；或家族進行性全身性硬化。
在一實施例中，硬皮病與消耗，諸如疾病相關之消耗不相關。
在一實施例中，本文提供減輕、抑制或預防一或多種以下硬皮病症狀之方法：(i)皮膚逐漸硬化、增厚且收緊(例如在四肢中，諸如手、面部及足)；(ii)皮膚變色；(iii)四肢麻木；(iv)皮膚光亮；(v)皮膚表面下之噴射變成白堊白色液體之白色小腫塊；(vi)雷諾氏食道功能障礙(由暴露於寒冷或情緒壓力時血管痙攣所引起之手疼痛、麻木及/或變色)；(vii)毛細血管擴張病(例如手、掌心、前臂、面部及唇上之紅斑)；(viii)關節之疼痛及/或僵硬；(ix)手及足腫脹；(x)皮膚瘙癢；(xi)手指變硬且翹曲；(xii)諸如指關節及肘之某些關節外部上之潰瘍(瘡)；(xiii)消化問題，諸如胃灼熱、吞服困難、腹瀉、腸激躁及便秘；(xiv)疲勞及無力；(xv)呼吸急促；(xvi)關節炎；(xvii)掉髮；(xviii)內臟器官問題；(xix)手指潰爛；或(xx)手指自身斷離，該方法包含向有需要患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供治療、預防或改善瘢痕瘤(亦稱為「瘢痕瘤性瘢痕」)之方法，其包含向患有瘢痕瘤或有患瘢痕瘤風險之患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。瘢痕瘤包括在受傷皮膚之區域凸起且不明確之皮膚生長。
本文進一步提供治療或預防UV損傷或曬傷之方法，其包含向患有UV損傷或曬傷或有患UV損傷或曬傷風險之患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。胺基嘌呤化合物適用於治療或預防歸因於皮膚曝露於紫外(UV)輻射(例如日光)，包括(但不限於)UVA、UVB或UVA與UVB之UV損傷或曬傷。在一實施例中，胺基嘌呤化合物適用於預防歸因於皮膚曝露於紫外(UV)輻射(例如日光)，包括(但不限於)UVA、UVB或UVA與UVB之UV損傷或曬傷。
在一實施例中，本文提供減輕、抑制或預防一或多種以下UV損傷及/或曬傷之症狀之方法：(i)皮膚中之細胞凋亡性細胞死亡；(ii)表皮中之細胞凋亡性細胞死亡；(iii)皮膚炎症、(iv)皮膚紅斑或組織損傷；(v)立即性變黑反應(immediate pigment darkening reaction)；(vi)延遲性曬黑反應；(vii)皮膚發紅且刺激；(viii)休克；(ix)皮膚起泡；(x)寒冷；(xi)發燒；(xii)噁心或嘔吐，或兩者，(xiii)流行性感冒症狀，諸如發燒、關節及肌肉中及眼睛周圍之各種各樣的嚴重疼痛、及全身無力；或(xiv)皮膚脫落，該方法包含向有需要患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文亦提供改善或預防瘢痕形成之方法，其包含向有瘢痕形成(例如有創口或預期有創口，諸如來自手術程序之創口)風險之患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。胺基嘌呤化合物適用於改善或預防瘢痕形成。在一實施例中，本文提供改善或預防一或多種以下之方法：(i)瘢痕尺寸減小，如由瘢痕之長度、寬度或厚度所量測；(ii)與瘢痕相關之疼痛減輕或消失；(iii)與瘢痕相關之瘙癢減輕或消失；(iv)瘢痕中著色減輕或消失；(v)瘢痕中可撓性增加；或(vi)瘢痕內之血管分佈減少(例如藉由瘢痕內之顏色由紫色變為紅色、變為粉紅色、變為白色證明)，其包含向有需要患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供誘導纖維變性退化之方法，其包含向患有纖維變性之患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供抑制或降低細胞外基質蛋白質之表現或合成之方法，其包含向有需要患者投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供獲得一或多個與硬皮病、瘢痕瘤、UV損傷、曬傷或瘢痕形成相關之臨床終點的方法，其包含向有需要患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供增加患有硬皮病之患者或患者群體之總存活時間、目標反應率、直到出現惡化之時間、無惡化存活時間及/或到治療失敗所需時間之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供減少患有硬皮病之患者或患者群體之死亡率、呼吸系統疾病死亡率及/或呼吸系統住院治療之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供改善患有硬皮病之患者或患者群體之改良式羅南皮膚評分之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。在一實施例中，改良式羅南皮膚評分改善5、10、15或20個點或20個點以上。
本文進一步提供改善或減少患有硬皮病之患者或患者群體之皮膚厚度之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。在一實施例中，皮膚厚度降低約20%、約25%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或90%以上。
本文進一步提供改善或減少患有硬皮病之患者或患者群體之皮膚硬結之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供改善患有硬皮病之患者或患者群體之皮膚病生活品質指數之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供改善患有硬皮病之患者或患者群體之肺功能之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供改善患有硬皮病之患者或患者群體之一氧化碳擴散能力之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。在一實施例中，患者之一氧化碳擴散能力之改善為改善一氧化碳肺擴散能力(DLco)約10%、約20%、約25%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或90%以上。
本文進一步提供改善患有硬皮病之患者或患者群體之馬勒呼吸困難指數之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。在一實施例中，馬勒呼吸困難指數改善4、5、6、7、8、9或10個點或10個點以上。
本文進一步提供改善患有硬皮病之患者或患者群體之聖喬治呼吸問卷評分之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。在一實施例中，聖喬治呼吸問卷評分改善4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52個點或52個點以上。
本文進一步提供改善患有硬皮病之患者或患者群體之UCLA硬皮病臨床試驗合作聯盟胃腸道評分之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供治療或預防患有硬皮病之患者或患者群體之手指潰爛之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供改善患有硬皮病之患者或患者群體之血流介導之擴張之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。
本文進一步提供改善或增加患有硬皮病之患者或患者群體之六分鐘步行距離之方法，其包含向該患者或患者群體投與有效量之胺基嘌呤化合物。在一實施例中，六分鐘步行距離改善約200公尺、約250公尺、約300公尺、約350公尺、約400公尺或400公尺以上。
在某些實施例中，本文提供之方法包含投與胺基嘌呤化合物以及一或多種第二活性劑，包括血壓藥、消炎藥劑、免疫抑制劑、鈣離子通道阻斷劑、硝酸酯、選擇性血清素再吸收抑制劑、質子泵抑制劑、抗生素、潤膚劑、鈣拮抗劑、血液稀釋劑、適用於治療肺高血壓之藥劑、鬆弛素(ConXnTM)、內皮素受體拮抗劑或非類固醇消炎(NSAID)藥劑。
在一實施例中，血壓藥為血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑，諸如卡托普利(captopril)。
在一實施例中，消炎藥劑為皮質類固醇。在另一實施例中，消炎藥劑為秋水仙鹼。
在一實施例中，免疫抑制劑為硫唑嘌呤(ImuranTM、AzasanTM)、甲胺喋呤(RheumatrexTM、TrexallTM)、青黴胺(DepenTM、CuprimineTM)、環磷醯胺(CytoxanTM)、黴酚酸酯(CellCeptTM、MyforticTM)或潑尼松(prednisone)(DeltasoneTM、Liquid PredTM)。
在一實施例中，鈣離子通道阻斷劑為硝苯地平(nifedipine)(ProcardiaTM)或尼卡地平(nicardipine)。
在一實施例中，硝酸酯為硝化甘油。
在一實施例中，選擇性血清素再吸收抑制劑為氟西汀(fluoxetine)(ProzacTM)。
在一實施例中，質子泵抑制劑為奧美拉唑(omeprazole)(PrilosecTM)、埃索美拉唑(esomeprazole)(NexiumTM)或蘭索拉唑(lansoprazole)(PrevacidTM)。
在一實施例中，抗生素為四環素或紅黴素。
在一實施例中，潤膚劑為露比麗登(Lubriderm)、優塞林(Eucerin)、貝戈巴莫組織胺2阻斷劑(Bag Balm histamine 2 blocker)或曲唑酮(DesyrelTM)。
在一實施例中，血液稀釋劑為肝素。
在一實施例中，適用於治療肺高血壓之藥劑為前列環素(prostacyclin)(IloprostTM)、波生坦(bosentan)(TracleerTM)、西地那非(sildenafil)(ViagraTM)或他達拉非(tadalafil)(CialisTM)。
在一實施例中，內皮素受體拮抗劑為塞他生坦(sitaxentan)、安立生坦(ambrisentan)、阿曲生坦(atrasentan)、BQ-123、波生坦、替唑生坦(tezosentan)或BQ-788。
在一實施例中，NSAID為萘普生(naproxen)。
醫藥組合物及投藥途徑
胺基嘌呤化合物可以諸如以下之習知製劑形式經口、局部或非經腸投與患者：膠囊、微囊、錠劑、顆粒劑、散劑、片劑、丸劑、栓劑、注射劑、懸浮液、糖漿、貼片、乳霜、洗液、軟膏、凝膠、噴霧劑、溶液及乳液。適合調配物可藉由通常所用之方法使用諸如以下之習知有機或無機添加劑來製備：賦形劑(例如蔗糖、澱粉、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纖維素、滑石、磷酸鈣或碳酸鈣)、黏合劑(例如纖維素、甲基纖維素、羥甲基纖維素、聚丙基吡咯啶酮、聚乙烯吡咯啶酮、明膠、阿拉伯膠、聚乙二醇、蔗糖或澱粉)、崩解劑(例如澱粉、羧甲基纖維素、羥丙基澱粉、經低取代之羥丙基纖維素、碳酸氫鈉、磷酸鈣或檸檬酸鈣)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、輕質無水矽酸、滑石或月桂基硫酸鈉)、調味劑(例如檸檬酸、薄荷腦、甘胺酸或桔子粉)、防腐劑(例如苯甲酸鈉、亞硫酸氫鈉、對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯)、穩定劑(例如檸檬酸、檸檬酸鈉或乙酸)、懸浮劑(例如甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮或硬脂酸鋁)、分散劑(例如羥丙基甲基纖維素)、稀釋劑(例如水)及底蠟(例如可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。醫藥組合物中胺基嘌呤化合物之有效量可為實現所需作用之含量；例如，在口服與非經腸投與之單位劑量中為每公斤患者體重約0.005 mg至每公斤患者體重約10 mg。
投與患者之胺基嘌呤化合物之劑量可具有相當廣泛之變化且可以健康照護從業者之判斷為依據。一般而言，胺基嘌呤化合物可以每公斤患者體重約0.005 mg至每公斤患者體重約10 mg之劑量在患者中一天投與1至4次，但以上劑量可視患者之年齡、體重及醫學病狀及投與類型而適當改變。在一實施例中，劑量為每公斤患者體重約0.01 mg至每公斤患者體重約5 mg、每公斤患者體重約0.05 mg至每公斤患者體重約1 mg、每公斤患者體重約0.1 mg至每公斤患者體重約0.75 mg、或每公斤患者體重約0.25 mg至每公斤患者體重約0.5 mg。在一實施例中，每天給予一次劑量。在任何指定情況下，所投與之胺基嘌呤化合物之量將視諸如活性組分之溶解度、所用調配物及投藥途徑之因素而定。在一實施例中，應用局部濃度提供約0.01至10 μM之細胞內曝露或濃度。
在另一實施例中，本文提供治療或預防疾病或病症之方法，其包含向有需要患者投與每天約0.375 mg至每天約750 mg、每天約0.75 mg至每天約375 mg、每天約3.75 mg至每天約75 mg、每天約7.5 mg至每天約55 mg或每天約18 mg至每天約37 mg之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，本文提供治療或預防疾病或病症之方法，其包含向有需要患者投與每天約1 mg至每天約1200 mg、每天約10 mg至每天約1200 mg、每天約100 mg至每天約1200 mg、每天約400 mg至每天約1200 mg、每天約600 mg至每天約1200 mg、每天約400 mg至每天約800 mg、或每天約600 mg至每天約800 mg之胺基嘌呤化合物。在一特定實施例中，本文所揭示之方法包含向有需要患者投與每天400 mg、每天600 mg或每天800m g之胺基嘌呤化合物。
在另一實施例中，本文提供單位劑量調配物，其包含約1 mg與200 mg、約35 mg與約1400 mg、約125 mg與約1000 mg、約250 mg與約1000 mg、或約500 mg與約1000 mg之間的胺基嘌呤化合物。在一實施例中，單位劑量調配物為約50 mg或約100 mg胺基嘌呤化合物，例如Jnki-1。
在一特定實施例中，本文提供包含約100 mg或400 mg胺基嘌呤化合物之單位劑量調配物。
在另一實施例中，本文提供單位劑量調配物，其包含1 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、30 mg、35 mg、50 mg、70 mg、100 mg、125 mg、140 mg、175 mg、200 mg、250 mg、280 mg、350 mg、500 mg、560 mg、700 mg、750 mg、1000 mg或1400 mg之胺基嘌呤化合物。
胺基嘌呤化合物可投每天與一次、兩次、三次、四次或四次以上。在一特定實施例中，投與600 mg或600 mg以下之劑量作為每天一次劑量，且每天兩次投與600 mg以上之劑量，投與量等於總日劑量之一半。在一些實施例中，胺基嘌呤化合物係以50 mg之劑量每天一次(亦即QD)投與，以50 mg之劑量每天兩次(亦即BID)，以100 mg之劑量每天一次(亦即QD)，以100 mg之劑量每天兩次(亦即BID)，以150 mg之劑量每天一次(亦即QD)，以150 mg之劑量每天兩次(亦即BID)，以200 mg之劑量每天一次(亦即QD)或以200 mg之劑量每天兩次(亦即BID)。
出於便利之原因可經口投與胺基嘌呤化合物。在一實施例中，當經口投與時，胺基嘌呤化合物連同膳食及水一起投與。在另一實施例中，將胺基嘌呤化合物分散於水或汁液(例如蘋果汁或橙汁)中，且以懸浮液形式經口投與。
胺基嘌呤化合物亦可皮內、肌肉內、腹膜內、經皮(percutaneously)、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜上、舌下、大腦內、陰道內、經皮(transdermally)、經直腸、黏膜、藉由吸入投與或局部投與耳、鼻、眼睛或皮膚。投與模式由健康照護從業者之判斷決定，且部分可視醫學病狀之部位而定。
在一實施例中，本文提供含有胺基嘌呤化合物而無其他載劑、賦形劑或媒劑之膠囊。
在另一實施例中，本文提供包含有效量之胺基嘌呤化合物及醫藥學上可接受之載劑或媒劑之組合物，其中醫藥學上可接受之載劑或媒劑可包含賦形劑、稀釋劑或其混合物。在一實施例中，組合物為醫藥組合物。
組合物可呈錠劑、咀嚼錠、膠囊、溶液、非經腸溶液、片劑、栓劑及懸浮液形式及其類似形式。組合物可經調配在劑量單元中含有日劑量或日劑量之適宜部份，其可為單一錠劑或膠囊或適宜體積之液體。在一實施例中，由諸如鹽酸鹽之水溶鹽製備溶液。一般而言，所有組合物均根據藥物化學中已知之方法來製備。膠囊可藉由使胺基嘌呤化合物與適合載劑或稀釋劑混合且將適量之混合物填充於膠囊中來製備。常見載劑及稀釋劑包括(但不限於)惰性粉末物質，諸如許多不同種類之澱粉；粉末纖維素，尤其結晶及微晶纖維素；糖類，諸如果糖、甘露糖醇及蔗糖；穀物麵粉及類似可食用粉末。
錠劑可藉由直接壓縮、藉由濕式粒化或藉由乾式粒化來製備。其調配物通常併入有稀釋劑、黏合劑、潤滑劑及崩解劑以及該化合物。典型稀釋劑包括例如各種類型之澱粉、乳糖、甘露糖醇、高嶺土(kaolin)、磷酸鈣或硫酸鈣、無機鹽(諸如氯化鈉)及粉糖。粉末纖維素衍生物亦適用。典型錠劑黏合劑為諸如以下之物質：澱粉、明膠及糖類，諸如乳糖、果糖、葡萄糖及其類似物。天然及合成膠狀物亦適宜，包括阿拉伯膠、海藻酸鹽、甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮及其類似物。聚乙二醇、乙基纖維素及蠟亦可充當黏合劑。
錠劑調配物中可能需要潤滑劑以防止錠劑及衝壓機黏著染料。潤滑劑可選自諸如滑石、硬脂酸鎂及硬脂酸鈣、硬脂酸及氫化植物油之潤滑固體。錠劑崩解劑為當濕潤時膨脹以分解錠劑且釋放化合物之物質。其包括澱粉、黏土、纖維素、海藻膠及膠狀物。更特定言之，可使用例如玉蜀黍及馬鈴薯澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、木纖維素、粉末狀天然海綿、陽離子交換樹脂、海藻酸、瓜爾膠、柑桔渣及羧甲基纖維素以及月桂基硫酸鈉。錠劑可用如調味劑及密封劑之糖或用成膜保護劑包衣以改良錠劑之溶解特性。組合物亦可例如藉由在調配中使用諸如甘露糖醇之物質調配成咀嚼錠。
當需要投與呈栓劑形式之胺基嘌呤化合物時，可使用典型基劑。可可脂為傳統栓劑基劑，其可藉由添加蠟以略微升高其熔點而改良。廣泛使用尤其包含不同分子量之聚乙二醇之水可混溶性栓劑基劑。
胺基嘌呤化合物之作用可藉由適當調配物延遲或延長。舉例而言，可製備胺基嘌呤化合物之可緩慢溶解之集結粒且併入錠劑或膠囊中，或作為緩釋可植入裝置。該技術亦包括製造具有若干不同溶解速率之集結粒且用集結粒之混合物填充膠囊。錠劑或膠囊可用抗溶解歷時可預測之一段時間的薄膜來包衣。甚至非經腸製劑可藉由將胺基嘌呤化合物溶解或懸吊於使其緩慢分散於血清中之油性或乳化媒劑中而變得長效。
在某些實施例中，胺基嘌呤化合物可以2010年9月25日申請之美國臨時專利申請案第61/406,292號或2011年5月2日申請之美國臨時專利申請案第61/481,378號中所見調配物或劑量投與，各文獻之全文以引用的方式併入本文中。
在某些實施例中，可將胺基嘌呤化合物週期性地投與患者。週期性治療涉及投與胺基嘌呤化合物一段時間，之後停藥一段時間且反覆執行此依序投與。週期性治療可減少針對一或多種療法之抗藥性之發生，避免或降低該等療法中之一者之副作用，及/或改善治療功效。
因此，在一特定實施例中，在四至六週週期中每天以單次或分次給藥投與胺基嘌呤化合物，其中停藥約一週或兩週時間。本文提供之方法使給藥週期之頻率、數目及長度進一步增加。因此，在另一特定實施例中，本文提供之方法涵蓋投與胺基嘌呤化合物相比於單獨投與時之典型週期更多個週期。在另一特定實施例中，投與胺基嘌呤化合物相比於在未投與第二活性劑之患者中通常產生劑量限制性毒性之週期更多個週期。
在一實施例中，胺基嘌呤化合物以每天約10至約200 mg之劑量每天且連續投與三或四週，之後中斷一或兩週。在另一實施例中，胺基嘌呤化合物以每天約0.1到5 mg之劑量每天且連續投與三或四週，之後中斷一或兩週。在一特定實施例中，在四或六週週期中，胺基嘌呤化合物以每天約5、10、25或50 mg之量，較佳每天約25 mg之量投與三至四週，之後停藥一或兩週。
在另一實施例中，胺基嘌呤化合物及第二活性劑係經口投與，其中在四至六週之週期中，胺基嘌呤化合物的投與係在第二活性劑之前30至60分鐘發生。在另一實施例中，每個週期經約90分鐘藉由靜脈內輸注投與胺基嘌呤化合物及第二活性劑之組合。在一特定實施例中，一個週期包含每天投與每天約0.1至約200 mg之胺基嘌呤化合物及每天約50至約200 mg/m2之第二活性劑歷時三至四週，且接著停藥一或兩週。在另一特定實施例中，各週期包含投與每天約1至約25 mg之胺基嘌呤化合物及每天約50至約200 mg/m2之第二活性劑歷時3至4週，之後停藥一或兩週。通常，將組合治療投與患者期間之週期數將為約1個至約24個週期，更通常約2個至約16個週期，且甚至更通常約4個至約3個週期。
投與頻率在約每小時劑量至每月劑量之範圍內。在特定實施例中，每天投與8次至每隔一天一次，或每天1至3次。在一特定實施例中，長期，例如每天投與胺基嘌呤化合物。
磷酸cJun及cJUN作為活體外及活體內JNK活性之生物標記之用途
本文提供將UVB照射皮膚及使用免疫組織化學量測磷酸化c-Jun及/或c-Jun用作模型以測定胺基嘌呤化合物在人類及其他患者中之作用的方法。該等方法亦可用以測定單獨選擇性胺基嘌呤化合物或與MAP激酶之抑制劑之組合在患者中之作用；例如化合物或化合物之組合是否會在患者中抑制JNK。本文之方法可加速胺基嘌呤化合物之臨床開發，因為模型顯示所討論之化合物是否會在患者中擊中JNK目標以及評估患者之劑量-反應；其會引導臨床開發中之劑量選擇。本文之方法亦可用以鑑別對胺基嘌呤化合物敏感之患者群體。
在某些實施例中，本文提供包含向患者投與胺基嘌呤化合物及使用本文所提供之方法測定該患者中所得JNK抑制量之方法。
本文提供之方法係部分基於以下發現，患者皮膚樣品中磷酸化c-Jun或c-Jun之存在及含量可用作生物標記以跟蹤JNK之抑制作用。詳言之，此等生物標記可用以預測、評估及追蹤胺基嘌呤化合物療法，詳言之用胺基嘌呤化合物(例如JNKi-1)口服療法在患者中之效用，或監測患者對處方胺基嘌呤化合物治療方案之順應性。
在無UVB曝露之情況下，健康人類皮膚中之基線磷酸化c-Jun免疫反應性低。UVB照射確實會增加磷酸化c-Jun免疫反應性。UVB曝露之後約8小時增加開始達到穩定。在大部分患者中，以約75 mg至約200 mg之劑量經口投與胺基嘌呤化合物，諸如本文所述之彼等胺基嘌呤化合物(包括(但不限於)JNKi-1)會部分或完全抑制藉由UVB照射誘導之磷酸化c-Jun增加。JNK之抑制作用具劑量相關性。UVB照射及磷酸化c-Jun可用作模型以評估胺基嘌呤化合物，包括評估劑量-反應，及鑑別對胺基嘌呤化合物敏感之患者群體。
本文提供與使用藉由UVB照射誘導之磷酸化c-Jun表現作為生物標記以評估胺基嘌呤化合物之效用有關之方法。磷酸化c-Jun及c-Jun含量可用以判定治療在與JNK相關之疾病或病狀中是否可能成功。
在無理論限制之情況下，咸信在投與胺基嘌呤化合物之前及之後使用患者皮膚之UVB曝露及該患者皮膚之磷酸化c-Jun或c-Jun量之量測可用以評估該(等)胺基嘌呤化合物在該患者中之生物效應。在某些實施例中，本文提供之方法允許測定由投與胺基嘌呤化合物所產生之活體內JNK抑制之量。在某些實施例中，本文所提供之分析包含將該患者皮膚之第一部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第一部分之樣品，以免疫組織化學方式量測該患者皮膚之該第一部分中磷酸化c-Jun或c-Jun之量，向該患者投與胺基嘌呤化合物，使該患者皮膚之第二部分曝露於UVB照射，獲得該患者皮膚之該第二部分之樣品，以免疫組織化學方式量測該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun之量及比較該患者皮膚之該第一部分及該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun之含量，其中與該患者皮膚之該第一部分相比該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun之含量降低指示JNK之抑制作用。在某些實施例中，本文提供之分析包含使用人類皮膚模型組織。在該等實施例中，分析包含使該組織之第一樣品曝露於UVB照射，獲得該組織之該第一部分之樣品，以免疫組織化學方式量測該組織之該第一部分中磷酸化c-Jun或c-Jun之量，向該組織投與胺基嘌呤化合物，使該組織之第二部分曝露於UVB照射，獲得該組織之該第二部分之樣品，以免疫組織化學方式量測該組織之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun之量，及比較該組織之該第一部分及該組織之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun之含量，其中與該組織之該第一部分相比該組織之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun之含量降低指示JNK之抑制作用。
在該等實施例中，可使用人類皮膚模型組織，諸如EpiDermFTTM。EpiDermFTTM為復原人類皮膚相等物，其呈現與人類皮膚類似之形態及生長特點，且在與人類皮膚有關之研究中已廣泛用作模型組織系統(參見例如Zhao JF,Zhang YJ,Kubilus J,Jin XH,Santella RM,Athar M,Wang ZY,Bickers DR. Reconstituted 3-Dimensional Human Skin as a Novel in Vitro Model for Studies of Carcinogen,Biochemical and Biophysical Research Comms. 1999;254:49-53；Mahns A,Wolber R,Stb F,Klotz LO,Sies H,Contribution of UVB and UVA to UV-dependent stimulation of cyclooxygenase-2 expression in articfical epidermis,Photochem. Photobiol. Sci. 2004;3:257-62；Sedelnikova OA,Nakamura A,Kovalchuk O,Koturbash I,Mitchell SA,Marino SA,Brenner DJ,Bonner WM,DNA Double-Strand Breaks Form in Bystander Cells after Microbeam Irradiation of Three-dimensional Human Tissue Models,Cancer Res 2007;67(9):4295-4302；Hayden PJ,Burnham B,Klausner M,Kubilus J,Sheasgreen JE,Wound Healing Response of the EpiDerm Full Thickness(EpiDerm-FT) In Vitro Human Skin Equivalent after Solar UV Irradiation,呈遞於第5屆世界大會(the 5th World Congress),Berlin,Germany,August 2005 ＆ The Society of Investigative Dermatology Meeting,Providence,RI,2004年4月-5月,TR-328:1-10)。EpiDermFTTM樣品可獲自MatTek公司(Ashland,MA)。
在一些實施例中，藉由本文評估JNK活化之方法提供之對皮膚活檢體之免疫組織化學評估包含利用針對目標磷酸化c-Jun或c-Jun之一次抗體及與顯色酶結合之二次抗體之兩抗體IHC分析。在該等實施例中，當用受質反應混合物培育時二次抗體報導體結合物得以區別染色，因此標記一次抗體目標複合物之位置。接著用標準明視野照明使用例如尼康顯微鏡(Nikon microscope)記錄此區別染色。接著對顯微鏡影像進行攝影，且可藉由獨立且經過訓練之評分員使用如實例中所示之準則對電子影像進行評分(不知情)。在某些實施例中，可使用雷射掃描血細胞計數器進行探測定量IHC分析。在該等實施例中，進一步處理或片以界定上皮角質細胞之核區室。在該等實施例中，將相同IHC或片用蘇木精對比染色以標記核區室，接著使用兩個光電二極體通道掃描，DAB染色為488 nm(以標記針對磷酸化c-Jun或c-Jun之一次抗體)且蘇木精染色為633 nm，接著基於蘇木精信號對核進行計數，且針對上皮細胞中之各核整合DAB信號。在一些實施例中，本文提供之方法允許量測投與胺基嘌呤化合物之前及之後的磷酸化c-Jun或c-Jun含量，其可用作量測患者中JNK抑制作用之生物標記。在本文提供之方法之一些實施例中，相對該患者皮膚之該第一部分，該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun含量降低指示JNK之抑制作用。在一些實施例中，本文提供之方法允許量測投與胺基嘌呤化合物之前及之後的磷酸化c-Jun或c-Jun含量，其可用作測定患者中投與胺基嘌呤化合物之劑量反應關係之生物標記。在本文提供之方法之一些實施例中，相對該患者皮膚之該第一部分，該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun含量降低與JNK之抑制作用成比例。在一些實施例中，本文提供之方法允許量測投與胺基嘌呤化合物之前及之後的磷酸化c-Jun或c-Jun含量，其可用作判定患者是否對胺基嘌呤化合物敏感之生物標記。在本文提供之方法之一些實施例中，相對該患者皮膚之該第一部分，該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun含量降低指示該患者對該胺基嘌呤化合物敏感。在一些實施例中，本文提供之方法允許量測投與胺基嘌呤化合物之前及之後的磷酸化c-Jun或c-Jun含量，其可用以測定患者中治療或預防與JNK相關之疾病或病狀之胺基嘌呤化合物之有效量。在本文所提供方法之一些實施例中，相對該患者皮膚之該第一部分，該患者皮膚之該第二部分中磷酸化c-Jun或c-Jun含量降低可能係與指示投與有效量之該胺基嘌呤化合物有關。
實例
以下實例為了說明而呈現，不具有限制性。
藉由促纖維變性細胞因子活化JNK路徑且藉由化合物JNKI-1抑制JNK路徑
為分析JNK路徑是否由TGF-β及PDGF活化，在培養之真皮纖維母細胞中對c-Jun進行西方墨點分析。
在用PBS沖洗兩次之後，將真皮纖維母細胞胰蛋白酶化且用Laemmli緩衝液溶解。藉由10% SDS-PAGE分離5 μg來自各樣品之蛋白質，且根據標準方案電轉移至聚二氟乙烯(PVDF)薄膜上(Distler JH,Jungel A,Kowal-Bielecka O,Michel BA,Gay RE,Sprott H.等人，Expression of interleukin-21 receptor in epidermis from patients with systemic sclerosis. Arthritis Rheum. 2005;52(3):856-64)。在4℃下用1:200稀釋之抗c-Jun及磷酸化c-Jun之單株抗體(Santa Cruz,Heidelberg,Germany)培育免疫墨點隔夜。在用1:2000稀釋之結合辣根過氧化酶之兔子抗小鼠抗體(Dako,Hamburg,Germany)培育1小時之後，用ECL西方墨點偵測試劑(Amersham Bioscience,Freiburg,Germany)偵測信號。為確定蛋白質相等加載，使用小鼠抗人類β-肌動蛋白抗體(Sigma-Aldrich,Munich,Germany；1:10000稀釋)測定β-肌動蛋白之量。
用TGF-β及PDGF刺激會有效增加c-Jun之磷酸化(圖1)。相反，用化合物JNKi-1預培育會降低TGF-β及PDGF對c-Jun磷酸化之刺激作用。詳言之，化合物JNKi-1處理會完全阻止纖維母細胞中PDGF對c-Jun磷酸化之刺激作用(圖1)。
化合物JNKi-1在博萊黴素誘發之真皮纖維變性之小鼠中之抗纖維變性作用之活體內分析
在博萊黴素誘發之真皮纖維變性小鼠模型中測試選擇性JNK抑制劑化合物JNKi-1，該模型視為表示全身性硬化症之早期及發炎性階段(Akhmetshina A,Venalis P,Dees C,Busch N,Zwerina J,Schett G,Distler O,Distler JH,Treatment with imatinib prevents fibrosis in different preclinical models of systemic sclerosis and induces regression of established fibrosis,Arthritis Rheum. 2009;60(1): 219-24)。博萊黴素為過時抗癌治療劑，已表明其會產生肺纖維變性。在動物模型中，在傳遞部位會類似地誘發損傷及纖維變性。
使用雄性及雌性DBA/2J小鼠。小鼠餵食標準飲食及任意之水。室溫保持恆定於22℃，濕度為60%。
將化合物JNKi-1溶解於0.5%羧甲基纖維素(CMC)/0.25% Tween 80之水溶液中。將博萊黴素溶解於0.9%氯化鈉(NaCl)中，濃度為0.5 mg/mL，總體積為100 μL。將陽性對照化合物甲磺酸伊馬替尼溶解於0.9% NaCl中，濃度為每天50 mg/kg，總體積為100 μL。
在博萊黴素誘發皮膚纖維變性之小鼠模型中，使用兩種不同劑量之JNK-抑制劑化合物JNKi-1(50 mg/kg及150 mg/kg，每天兩次投與)分析抗纖維變性活性。對於陽性對照組而言，用甲磺酸伊馬替尼腹膜內(IP)處理小鼠，其先前已顯示會發揮抗纖維變性作用。DBA/2J小鼠(每組每種性別n=5)分配至五個處理組中之一者：
●　對照組：每天兩次(BID)經口(PO)投與0.5%CMC/0.25% Tween 80之水溶液，且皮下注射100 μL 0.9% NaCl。
●　未處理博萊黴素組：皮內注射博萊黴素及經口BID投與0.5% CMC/0.25% Tween 80之水溶液。
●　50 mg/kg化合物JNKi-1：皮內注射博萊黴素及經口BID投與化合物JNKi-1。
●　150 mg/kg化合物JNKi-1：皮內注射博萊黴素及經口BID投與化合物JNKi-1。
●　陽性對照組：皮內注射博萊黴素及腹膜內(IP)每天投與伊馬替尼50 mg/kg。
局部真皮纖維變性藉由在上背部之規定區域中每隔一天注射博萊黴素歷時3週誘發。由第一劑量之博萊黴素為起始物，投與化合物JNKi-1或伊馬替尼。
真皮厚度由蘇木精及伊紅(H ＆ E)染色來測定。纖維變性病變處活化纖維母細胞(肌纖維母細胞)藉由免疫組織化學(IHC)針對α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)進行定量。病變皮膚中膠原蛋白濃度藉由羥脯胺酸分析來分析。數據可表示為平均值±平均值之標準誤差(SEM)。使用SPSS17.0軟體及Mann-Whitney-U-檢驗進行統計分析。認為p值小於0.05即為統計上顯著的。
在博萊黴素誘發纖維變性之小鼠模型中，在用50 mg/kg化合物JNKi-1處理之後真皮厚度劑量依賴性降低24%±5%(p=0.012)，且在用150 mg/kg化合物JNKi-1處理之後降低45%±5%(p=0.001)(圖2)。在用50 mg/kg處理之後肌纖維母細胞數減少80%±10%(p=0.0005)，且在用150 mg/kg化合物JNKi-1處理之後減少101%±9%(p=0.001)(圖3)。在用伊馬替尼，亦即研究中之對照化合物處理之小鼠中，亦觀測到真皮增厚降低46%±5%(p=0.002)及肌纖維母細胞計數減少51%±10%(p=0.001)(圖2及圖3)。此外，與博萊黴素處理之動物相比，在用50 mg/kg化合物JNKi-1處理之後，病變皮膚中膠原蛋白含量劑量依賴性降低29%±11%(p=0.007)且在用150 mg/kg化合物JNKi-1處理之後降低47%±9%(p=0.001)(圖4)。
在假處理博萊黴素攻擊小鼠中觀測到具有緻密膠原纖維束積聚、發炎性浸潤及藉由結締組織置換皮下脂肪組織之真皮纖維變性。在用化合物JNKi-1處理之小鼠中，顯著改善藉由博萊黴素引起之纖維變性發生(圖5)。用劑量為150 mg/kg之化合物JNKi-1處理會使真皮增厚以劑量依賴性方式降低至多45±2%(p=0.001)。此真皮增厚之降低類似於劑量為50 mg/kg之伊馬替尼下所觀測到者(圖5)。
在博萊黴素誘發皮膚纖維變性小鼠模型中，JNK抑制劑化合物JNKi-1劑量依賴性抑制纖維變性病變部位之真皮厚度及膠原蛋白積聚。在此小鼠模型中，化合物JNKi-1完全阻止休眠纖維母細胞分化成肌纖維母細胞。已表明化合物JNKi-1之活體內抗纖維變性活性。
化合物JNKI-1使確立纖維變性退化
為評估JNK之抑制作用是否亦可對治療已確立之纖維變性有效，使用改良之博萊黴素誘發之真皮纖維變性模型。與博萊黴素攻擊3週之後真皮增厚為175±8%(p=0.021，與NaCl注射6週相比)相比，長期注射博萊黴素6週引起真皮增厚增加至226±6%之進行性纖維變性。最後3週用劑量為150 mg/kg之化合物JNKi-1 BID處理之小鼠中，真皮厚度顯著降低至127±4%(p=0.008，與博萊黴素處理6週相比)。因此，化合物JNKi-1會降低真皮厚度之水準至低於預處理水準(127±4%對175±8%，與NaCl注射6週相比，p=0.008及p=0.021)(圖7A)。除真皮厚度之外，當用150 mg/kg化合物JNKi-1處理時肌纖維母細胞數強烈降低至低於預處理水準(171±31%對443±15%，與NaCl注射6週相比，p=0.012及p=0.014)(圖7C)。另外，在用150 mg/kg化合物JNKi-1處理持續博萊黴素攻擊6週之最後3週之小鼠中，藉由羥脯胺酸分析所評估之膠原蛋白積聚顯著降低(p=0.025)(圖7B)。因此，JNK之抑制作用不僅會阻止不同模型中纖維變性發生，而且會誘發前在纖維變性的退化。
化合物JNKi-1在Tsk-1小鼠中之抗纖維變性作用的活體內分析
在全身性硬化症之鼠類緊致皮膚-1(Tsk-1)模型中測試JNK抑制劑化合物JNKi-1之抗纖維變性作用。在此模型中，肌原纖維蛋白1基因(Fbn1Tsk+/-)中之顯性突變導致皮膚發炎性浸潤及大規模纖維變性之全身性硬化症樣疾病(Akhmetshina A,Venalis P,Dees C,Busch N,Zwerina J,Schett G等人，Treatment with imatinib prevents fibrosis in different preclinical models of systemic sclerosis and induces regression of established fibrosis,Arthritis Rheum.2009;60(1):219-24)。
使用雄性及雌性TSK-1小鼠。小鼠餵食標準飲食及任意之水。室溫保持恆定於22℃，濕度為60%。
將化合物JNKi-1溶解於0.5%羧甲基纖維素(CMC)/0.25%Tween 80之水溶液中。作為媒劑對照組，使用0.5%CMC/0.25% Tween 80之水溶液。將甲磺酸伊馬替尼溶解於0.9% NaCl中，濃度為每天50 mg/kg，總體積為100 μL。
Tsk-1小鼠組(每組每種性別n=4)分配至五個處理組中之一者：
●　未處理野生型(Fbn1Tsk-/-)組經口(PO)每天兩次(BID)接受0.5% CMC/0.25% Tween 80之水溶液。
●　未處理Fbn1Tsk+/-小鼠經口BID接受0.5% CMC/0.25%Tween 80之水溶液。
●　化合物JNKi-1處理之Fbn1Tsk+/-經口BID接受50 mg/kg。
●　化合物JNKi-1處理之Fbn1Tsk+/-經口BID接受150 mg/kg。
●　甲磺酸伊馬替尼處理之Fbn1Tsk+/-組每天接受腹膜內(IP)投與50 mg/kg。
在第4週起始用化合物JNKi-1及對照化合物處理。在處理6週之後，處死小鼠，且分析每次處理之抗纖維變性作用。
抗纖維變性作用藉由量測真皮厚度及定量病變皮膚中肌纖維母細胞數來測定。真皮厚度藉由量測四個不同部位之H ＆ E染色切片中表皮/真皮邊緣至真皮/皮下邊緣之距離來測定。肌纖維母細胞數藉由在石蠟包埋切片中染色α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)來定量。數據可表示為平均值±平均值之標準誤差(SEM)。使用SPSS17.0軟體及Mann-Whitney-U-檢驗進行統計分析。認為p值小於0.05即為統計上顯著的。
Tsk-1小鼠顯示引人注目之下皮增厚，與未處理小鼠相比，其在用50 mg/kg化合物JNKi-1處理之後會顯著降低67%±5%(p=0.0005)且在用150 mg/kg化合物JNKi-1處理之後降低85%±7%(p=0.0003)(圖8)。與未處理動物相比，在用50 mg/kg化合物JNKi-1處理之後肌纖維母細胞數減少68%±28%(p=0.008)，且在用150 mg/kg化合物JNKi-1處理之後減少99%±9%(p=0.004)(圖9)。與未處理小鼠相比，用甲磺酸伊馬替尼對照化合物處理之小鼠顯示下皮厚度降低71%±7%(p=0.003)且肌纖維母細胞數減少99%±5%(p=0.004)(圖8及圖9)。另外，與用50 mg/kg伊馬替尼處理相比，以劑量為150 mg/kg之化合物JNKi-1處理時下皮增厚降低更明顯(圖10)。
發現化合物JNKi-1會劑量依賴性降低Tsk-1真皮纖維變性小鼠模型中之下皮肥大及肌纖維母細胞計數。
化 合物JNKi-1對來自患有全身性硬化症之人類個體真皮纖維母細胞中之細胞外基質蛋白質基因表現的作用
使用自人類全身性硬化症(SSc)患者之皮膚活檢體分離之纖維母細胞，進行活體外研究以評估選擇性JNK抑制劑化合物JNKi-1是否會影響關鍵細胞外基質蛋白質之表現。
將兩個SSc患者之真皮纖維母細胞用濃度為0.1 μM至10 μM之化合物JNKi-1處理24小時(0.5% DMSO/99.5%細胞培養基)。為研究化合物JNKi-1對生長因子誘發之膠原蛋白表現之作用，在添加JNK抑制劑化合物JNKi-124小時之後2小時將重組轉型生長因子β(TGF-β)(最終濃度為10 ng/mL)或血小板衍生生長因子-BB(PDGF-BB)(最終濃度為40 ng/mL)添加至細胞中。藉由SirCol分析分析膠原蛋白之表現。由即時聚合酶鏈反應(PCR)量測細胞外蛋白質之信使核糖核酸(mRNA)含量。β-肌動蛋白mRNA用作使用PCR量測膠原蛋白1a1 mRNA之內部對照。在存在或不存在1 μM化合物JNKi-1下進行纖維母細胞增殖分析24小時，用(溴化(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓)(MTT)分析。
先前已描述自人類SSc患者分離纖維母細胞及用於此研究之培養條件(Akhmetshina A,Dees C,Pileckyte M,Maurer B,Axmann R,Jngel A等人，Dualinhibition of c-abl and PDGF receptor signaling by dasatinib and nilotinib for the treatment of dermal fibrosis,FASEB J. 2008;22(7):2214-22)。纖維母細胞培養物係獲自SSc患者之皮膚活檢體。所有患者均滿足如LeRoy及同事所表明之SSc的準則(LeRoy EC,Black C,Fleischmajer R,Jablonska S,Krieg T,Medsger TA Jr等人，Scleroderma(systemic sclerosis): classification,subsets and pathogenesis,J. Rheumatol. 1988;15(2):202-5)。來自SSc患者之活檢體係取自所涉及之前臂皮膚。在用分散酶II酶促消化皮膚活檢體之後，在含有10%熱失活胎牛血清(FCS)、100 U/mL青黴素、100 μg/mL鏈黴素、2 mM L-麩胺醯胺及2.5 μg/mL雙性黴素B(所有均來自Invitrogen,Karlsruhe,Germany)之DMEM/F-12中培養纖維母細胞。將4至8繼代之纖維母細胞用於實驗。數據可表示為平均值±平均值之標準誤差(SEM)。
化合物JNKi-1劑量依賴性降低SSc纖維母細胞中細胞外基質蛋白質之表現。最大作用在1 μM之濃度下觀測到。在此濃度下，化合物JNKi-1會將col 1a1及col1a2之mRNA含量分別降低71±11%及61±13%，且降低纖維結合蛋白-1之含量55±14%(p<0.02，所有均與未作處理之纖維母細胞相比)(圖11A)。與mRNA含量降低一致，與對照組相比，用1 μM化合物JNKi-1培育亦會降低上清液中膠原蛋白之量21±7%(p=0.001)(圖11B)。
使用來自SSc患者之纖維母細胞評估化合物JNKi-1對細胞生存力之任何直接作用。如圖12中所示，培育24小時之後，在MTT分析中在化合物JNKi-1下未觀測到細胞毒性效應。
膠原蛋白為纖維變性中過度表現之主要細胞外基質蛋白質。TGF-β及PDGF為纖維變性病變中存在且已顯示會活體外及活體內增強纖維變性病變之最充分表徵之生長因子。測試化合物JNKi-1對藉由TGF-β或PDGF誘發之由SSc患者之纖維母細胞分泌總膠原蛋白之作用。如圖13中所示，化合物JNKi-1(1 μM)會適當抑制TGF-β與PDGF誘發之膠原蛋白分泌。
化合物JNKi-1對SKH-1雌性小鼠皮膚中紫外B刺激之細胞凋亡之作用
已知紫外B(UVB)光會誘發可觸發細胞凋亡過程之DNA斷裂(缺口)，且此等缺口可用末端脫氧核苷酸轉移酶dUTP缺口端標記(TUNEL)標記且觀測。TUNEL技術藉由在酶促反應中用改良(發螢光)之核苷酸標記游離3'-OH末端使受損細胞凋亡細胞發螢光來鑑別DNA斷裂。此研究為經設計用於測定小鼠皮膚中JNK抑制劑化合物JNKi-1對UVB誘發之細胞凋亡之作用的一系列藥理學研究中之一者。
獲得體重為15 g至20 g之雌性SKH-1小鼠(Charles River，總計n=17)。將小鼠安置於常規鞋盒型籠中且使得適應最少1週。小鼠餵食Harlan Teklad(第7001號)4%小鼠/大鼠飲食及任意之水，且維持12小時亮/暗週期。
於0.5% CMC及0.25% Tween-80水溶液中製備化合物JNKi-1之懸浮液。使用TEFLON研杵及研缽(Potter-Elvehjem組織研磨機)使調配物均質化。給藥體積為5mL/kg之媒劑(0.5% CMC及0.25% Tween-80之水溶液，儲存於4℃)及測試物品化合物。兩組小鼠(每組n=5)經口(PO)每天兩次(BID)給藥媒劑或化合物JNKi-1(75 mg/kg)持續5天(上午9點及中午12點)且在最終給藥之後曝露於UVB 1小時。
對於測定血漿及皮膚中之化合物曝露而言，個別小鼠群組(n=5)給藥化合物JNKi-1(75 mg/kg)5天，且在UV曝露之後立即收集樣品(在曝露10分鐘內)。
在UVB曝露之前，使用氯胺酮/甲苯噻嗪(分別60 mg/kg及10 mg/mL)使小鼠(每組n=5)麻醉。將通用紙標籤貼置於一半小鼠背部皮膚上以阻隔彼區域內之UVB刺激，且接著使小鼠經受UVB曝露(0.5 J/cm2；Biospectra machine,Vilber Lourmat)。
在UVB曝露之後24小時自刺激與未刺激皮膚收集皮膚活組織檢查鑽孔以進行TUNEL處理或速凍，從而測定化合物含量。經由心臟穿刺抽取血液，在血漿分離管中離心，且儲存於-80℃，直至經處理以測定化合物含量。使用另一處理群組在UV曝露之後立即及在藥物投與之後1小時收集皮膚及血樣。將經處理用於TUNEL之皮膚活檢體置於一張紙上(以防止翹曲)且在10%中性緩衝福馬林中固定2小時。一旦固定，則將樣品置於100%乙醇中，直至其可經處理實現石蠟包埋。製備組織切片(厚度6 μm)且安置於塗佈聚-1-離胺酸之或片上。將切片去除石蠟且用磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)洗滌。接著用含蛋白酶K(15 μg/mL)之PBS培育切片15分鐘且用PBS洗滌。接著在37℃下用TUNEL反應混合物(Roche 1684795)培育切片1小時。再一次用PBS洗滌切片且用防褪色之Prolong Gold封片膠(mounting media)蓋上蓋玻片。
使用具有CoolSNAP數位攝影機之Leica顯微鏡自5個皮膚表皮切片獲得5個隨機20倍放大倍數螢光影像，且計數TUNEL陽性綠細胞數以測定每個動物及每組(n=5)之平均細胞數。
執行統計學單因子變異數分析(ANOVA)，之後進行邦弗朗尼氏多重比較檢驗(Bonferroni's m ultiple comparison test)(Graph Pad Prism)。數據可表示為平均值±平均值之標準誤差(SEM)。
在UVB曝露之後24小時，量測到與未處理樣品相比顯著之TUNEL陽性細胞誘導(圖14；p<0.001)。與媒劑對照組相比，用劑量為75 mg/kg之化合物JNKi-1 PO BID長期預處理5天會顯著(p<0.01)減少UV曝露後24小時所量測到之TUNEL陽性細胞數目。
研究結果表明在UVB曝露之前經口投與化合物JNKi-1可抑制SKH-1小鼠表皮內之細胞凋亡性細胞死亡。
化合物JNKi-1在大鼠之切割創口癒合模式中之效用
創口癒合過程係藉由一系列高度協調事件所達成，其始於遏阻出血，之後為發炎反應、形成瘡痂(早期肉芽組織)、再形成上皮、膠原蛋白重塑及瘡痂分離。此癒合次序為急性損傷之典型特徵，且以成熟瘢痕形成而告終。有效皮膚創口修復包括使纖維母細胞遷移至創口部位、收縮創口且合成細胞外基質以恢復皮膚完整性之精心安排之分子事件。纖維母細胞維持有限但顯著之磷酸化c-jun蛋白質集合，其為允許遷移與運動之關鍵(Javelaud,D.,Laboureau,J.,Gabison,E.,Verrecchia,F.,Mauviel,A.,Distruption of basal JNK activity differentially affects key fibroblast functions important for wound healing,J. Biol. Chem. 2003;278: 24624-24628)。因此，其與研究JNK抑制劑是否可藉由削弱纖維母細胞功能來影響癒合過程有關。
體重為175至195 g之雄性CD-IGS大鼠(品系編碼001；每個實驗n=32至52)係獲自Charles River實驗室。將大鼠安置於常規鞋盒型籠中，且使其適應最少1週。對大鼠餵食Harlan Teklad(第7001號)4%大鼠/大鼠飲食，且可自由飲水，且維持12小時亮/暗週期。
於0.5% CMC及0.25% Tween-80水溶液中製備化合物JNKi-1之懸浮液。使用TEFLON研杵及研缽(Potter-Elvehjem組織研磨機)使調配物均質化。給藥量為5 mL/kg之媒劑(0.5%羧甲基纖維素及0.25% Tween-80之水溶液)及測試物品化合物。在程序之前4天開始之整個研究中，大鼠組(每組n=4至8隻)每天經口給藥媒劑、地塞米松(Dexamethasone)(0.5 mg/kg)或化合物JNKi-1(10 mg/kg、30 mg/kg或60 mg/kg)，且持續至多14天，即創傷後10或14天。化合物JNKi-1處理組及各別媒劑對照組每天給藥兩次(bid)，給藥之間的間隔為8小時。地塞米松處理之動物及各別媒劑對照組每天給藥一次(qd)歷時研究持續時間。實驗設計示於表2中。
藉由吸入異氟烷使大鼠麻醉，且將背部區域剃毛且用70%酒精擦洗。標記沿中線距離顱骨基底5.5及8.5 cm之兩個點。另外標記在中線兩側1 cm之4個點，在每個做標記的點處有兩個點。此等點描繪四個切割創口之中心。活組織檢查鑽孔(直徑6 mm)垂直對準標記之中心，且同時藉由施加壓力且扭轉使表皮、真皮及肌纖膜穿孔。接著移除皮膚栓塞。對於剩餘創口重複此舉(圖15)。接著使動物復原。在實驗期間將所有動物單獨置放。在程序之後每天兩次監測大鼠歷時第一個24小時，且接著每天監測直至研究結束。每週記錄體重兩次或三次。動物在創傷之後在不同時間點(第1天、第5天、第10天或第14天)經由CO2窒息處死。
使用電子數位測徑規量測各創口尺寸，且相對於第0天(創傷程序當天)記錄之初始創口尺寸計算創口剩餘開口之百分比。對於各動物取4個值之平均值(4個創口位於各大鼠上)。在整個研究之不同時間點進行量測。
使用8 mm活組織檢查鑽孔切割創口及周圍2 mm之組織。在程序之後第1天、第5天、第10天及第14天收集創口。將組織固定於中性緩衝福馬林中3小時，接著轉移至100%乙醇中。將組織進行石蠟包埋，且切割出4 μm橫截面，且安裝於聚離胺酸載片上且在室溫下儲存於或片盒中。
將各試樣之一個載片染色H＆E以評估創口間隙之粒化組織形成及上皮再形成。
用三色染色(Trichrome Stain)(馬松(Masson))套組(Sigma,HT15)染色第10天及第14天所收集之樣品以評估膠原蛋白沈積及重塑。
將組織切片去除石蠟且水合至去離子(DI)水中。在56℃下於預先加熱之布安氏溶液(Bouin' Solution)(Sigma,HT10-132)中培育切片隔夜，且接著用自來水充分沖洗。用魏格特氏鐵蘇木精溶液(Sigma,HT10-79)染色切片15分鐘，洗滌且用猩紅質酸性品紅液(Biebrich Scarlet Acid Fuchsin solution)對比染色。洗滌之後，用磷鎢酸-磷鉬酸溶液(Phosphotungstic-Phosphomolybdic acid)培育切片15分鐘，且接著用苯胺藍溶液染色。將切片脫水且於二甲苯中澄清。
在程序之後第10天及第14天評估創口癒合。使用以下準則針對上皮再形成對H＆E切片進行評分：
分數0　在一個或兩個創口邊緣無新表皮
分數1　上皮再形成不完全
分數2　創口間隙之上皮完全再形成
使用以下準則針對膠原蛋白沈積及重塑對馬松氏三色(Masson's Trichrome)切片進行評分：
分數0　無膠原蛋白沈積及重組
分數1　膠原蛋白部分重塑
分數2　膠原蛋白完全重塑(非網狀外觀)
組合H＆E及馬松氏三色評分計算總癒合分數。完全癒合之創口分數=4。
藉由IHC評估在程序之後第5天所收集之組織樣品上α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)之表現，以研究肌纖維母細胞向創口部位之遷移。將組織切片去除石蠟且水合至去離子(DI)水中。用0.6% H2O2培育切片15分鐘，以淬滅內源性過氧化酶，洗滌且用5%山羊血清阻斷10分鐘。在室溫下添加一次Ab(Sigma,A2547)歷時60分鐘，且添加生物素標記二次Ab(Sigma,B9904)歷時20分鐘。接著用ExtrAvidin-過氧化酶(Sigma,E2886)再培育切片20分鐘。將AEC(Sigma,AEC101)用作色原體以定位組織中之過氧化酶。進行α-SMA陽性染色之定性評估。
藉由IHC評估在程序之後第1天所收集之組織樣品上骨髓過氧化酶(MPO)之含量以研究嗜中性白血球向創口部位之流入。根據製造說明書進行染色。簡言之，煮沸含去除石蠟之組織之10 mM檸檬酸鹽緩衝液(Lab Vision,AP-9003)10分鐘以進行抗原恢復。用阻斷緩衝液以1:100稀釋一次Ab(Thermo Scientific Lab Vision,RB-373-A)，且在室溫下添加歷時60分鐘，且添加第二Ab歷時30分鐘。二次Ab及ABC試劑係來自Vectastain Elite ABC套組(Vector Lab,兔子IgG,PK-6101)。DAB用作色原體以定位組織中之過氧化酶。進行骨髓過氧化酶陽性染色之定性評估。
體重、創口尺寸及癒合分數可以表示為平均值+/-SEM。使用單因子ANOVA，之後使用與媒劑對照動物之鄧尼特氏比較進行統計分析。*P<0.05，**P<0.01及***P<0.001表示統計顯著性。PK數據以平均值(μM)+/-SD呈現。
結果：媒劑與化合物JNKi-1給藥組之間體重增加類似。地塞米松處理之大鼠使初始身體重量減少約10%(圖16，結果表示三個實驗)。
媒劑給藥組到創傷後第10天完全癒合。接受0.5 mg/kg地塞米松之陽性對照組中之所有動物顯示癒合過程顯著(p<0.0001)延遲，且在創傷後第10天約70%之創口間隙仍開放。在每天兩次給藥60 mg/kg化合物JNKi-1之大鼠中觀測到創口癒合之較不引人注目(僅27%，n=3個研究)但仍顯著之(p<0.05至p<0.01)延遲(圖17)。然而，在給藥30或10 mg/kg化合物JNKi-1之大鼠中未觀測到差異(圖17，圖C)。在所有化合物JNKi-1處理組中，創傷後14天實現皮膚完全修復(圖17，圖B)。在每天一次(q.d)或每天兩次(b.i.d)給藥之媒劑組中未觀測到差異(圖17，圖A)。
如實驗程序部分所述基於上皮再形成及膠原蛋白沈積/重塑評估癒合分數。在創傷之後第10天，幾乎所有媒劑給藥大鼠(8隻中有6隻)具有全新表皮及重塑呈非網狀圖案之膠原蛋白纖維。正如所料，接受地塞米松之動物均未顯示上皮完全再形成及膠原蛋白完全重塑。在化合物JNKi-1處理組中，14隻大鼠中僅有5隻到第10天已完全癒合：兩隻大鼠顯示不完全新表皮，4隻大鼠僅部分膠原蛋白重塑，且3隻大鼠顯示不完全之上皮再形成及膠原蛋白重塑。到第14天，接受化合物JNKi-1之所有動物已完全癒合(圖18，圖A)。在劑量-反應研究(研究C)中，60與30 mg/kg之劑量顯示與媒劑對照組相比癒合顯著延遲。以60 mg/kg處理之大鼠到第10天均未完全癒合，且8隻以30 mg/kg處理之大鼠中有5隻顯示不完全上皮再形成與膠原蛋白重塑。在接受10 mg/kg化合物JNKi-1之組中未觀測到顯著效應(圖18，圖B)。
肌纖維母細胞向創口間隙之遷移：在開放性創口癒合早期，常駐真皮纖維母細胞自創口邊緣增殖且遷移至由血纖維蛋白凝塊構成之臨時性基質中。在創傷之後約1週，臨時性基質經被稱為肉芽組織之基本上由小血管、細胞外基質及變為活化肌纖維母細胞之纖維母細胞構成之新形成之結締組織置換(Kwon,AH.,Qiu,Z.及Hirao,Y.,Topical application of plasma fibronect in in full-thickness skin wound healing in rats,Exp. Biol. Med. 2007;232:935-941)。肌纖維母細胞之主要標記為α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)，即血管平滑肌細胞特有之肌動蛋白同功異型物之新表現(Skalli,O.,Ropraz,P.,Trzeciak,A.,Benzonana,G.,Gillessen,D.及Gabbiani,GA,Monoclonal antibody against alpha-smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation,J. Cell Biol. 1986;103:2787-2796)。
在模型驗證期間，表明肌纖維母細胞向創口間隙之遷移在創傷之後第5天出現峰值。因此，選擇此時間點以在組織切片上藉由免疫組織化學監測α-SMA表現。所有媒劑給藥大鼠在創口部位下顯示強烈肌纖維母細胞浸潤(圖19，圖A)。相反，來自60 mg/kg化合物JNKi-1處理組之動物顯示前期癒合過程中在創口邊緣處有極少肌纖維母細胞遷移及在整個創口間隙中高度佈滿之肉芽組織(圖19，圖B)。由此表明JNK抑制劑化合物JNKi-1可藉由降低及/或延遲肌纖維母細胞向創口部位遷移影響癒合過程。
嗜中性白血球向創口間隙之遷移：嗜中性白血球流入為皮膚創傷期間對清除細菌及細胞碎屑而言必不可少的早期發炎反應(Kim,MH.,Liu,Wei.,Borjesson,DL.,Curry,FRE.,Miller,LS.,Cheung,AL.,Liu,FT.,Isseroff,R.,Simon,SI.,Dynamics of neutrophil infiltration during cutaneous wound healing and infection using fluorescence imaging,J. Invest. Dermatol. 2008;128:1812-20.)。先前已評估切割創口模型中嗜中性白血球浸潤，且確定在創傷之後第1天其數目達峰值。在皮膚切片上使用抗骨髓過氧化酶(MPO)抗體監測嗜中性白血球遷移。創口中所募集到之嗜中性白血球數目在對照組與化合物JNKi-1給藥大鼠之間類似(圖20)。此結果表明在組織損傷反應期間發炎性細胞浸潤不受60 mg/kg之化合物JNKi-1處理影響。
研究結果表明藉由用化合物JNKi-1抑制JNK活性，組織損傷之發炎反應未受影響且可獲得完全皮膚修復。然而，在化合物JNKi-1處理下觀測到之癒合過程中之延遲表明基礎JNK活性對纖維母細胞向創口部位之遷移及/或運動是關鍵的。
化合物JNKi-1對紫外線B刺激之人類皮膚之作用
研究設計：JNKi-1對JNK之抑制作用藉由在UV照射人類皮膚之後評估下游受質c-Jun(「cJun」)及磷酸化c-Jun(或「p-cJun」)之狀態來評估。
將研究設計為隨機、雙盲、安慰劑對照、多次給藥、三向交叉研究。如下所述(參見表3)將15個個體隨機分配至3個次序中之一者(每個次序5個個體)。前期最後一次給藥至下一期第一次給藥存在7天至10天之清除期(不大於14天)。
處理A=75 mg JNKi-1，QD×6天
處理B=200 mg JNKi-1，QD×6天
處理C=JNKi-1之安慰劑，QD×6天
在約28天篩選期期間評估個體之資格。確定篩選期間及第1期登記之7天內最小紅斑劑量(MED)(亦即第-7天至第-1天)。
為確定MED，各個體在其腚部之6個區域接受UC照射。各區域上之UV劑量相對於前一劑量以遞增方式增加。UV照射光譜為UV光B光譜(UVB)。UVB曝露後約22至24小時測定MED。
15個患者進行登記，14個完成研究，且包括在PD及PK分析內；所有均為具有2型費茨帕特里克皮膚(Fitzpatrick skin type 2)之健康高加索人男性志願者。平均年齡為31歲(20至49歲)且平均體重為81公斤(64至96 kg)。在第-1天晚上，患者以空腹起始(在第1天給藥之前空腹至少8小時)。個體在第1期至第3期中在空腹狀態下以基於隨機流程之次序接受治療A、治療B或治療C。對於所有3期，個體經歷相同程序(除治療之變化外)，在各期之間需要清除期。在約束期間不允許劇烈活動。作出所有努力以保持治療期之間的活性、環境、食品、程序及進度相同。
在第6天，個體腚部上之兩個部位接受2倍MED UV劑量。自兩個UV照射部位中之一者獲取一個鑽孔活檢體(直徑約3 mm，深度0.8 mm)。在第6天UV曝露後8小時(±5分鐘)獲取鑽孔活檢體。
在較低UV照射部位UV照射後24小時評估紅斑。在整個研究中進行三次紅斑評估，每期評估一次。
使用IHC分析針對磷酸化c-Jun及總c-Jun分析來自活檢體之皮膚試樣。使用0至4主觀分級量表及/或使用自動系統，亦即雷射掃描血細胞計數器(LSC)得到之客觀評分，評估光學上量測之染色之積分強度，從而定量磷酸化c-Jun。
在各期中，在第6天劑量後0至24小時收集血漿樣品，以測定JNKi-1之濃度及PK。
方法： UV曝露設備：DermaPal UV單元(由Daavlin製造)使用FS螢光太陽燈，且曝露藉由內置數位計時器調節。DermaPal經調適在燈泡上安置12 oz苯乙烯發泡體咖啡杯，其因此變成確定所有曝露距離且防止有害曝露之裝置。供應由6個分級中性密度濾光器組成之分離裝置以提供分級系列之UV劑量，以確定各患者之MED。
IHC主觀評分參數：在下文所述之程序之後分析活檢體，以使用IHC分析評估磷酸化c-Jun及c-Jun表現。用以評估JNK活化之方法為利用針對目標之一次抗體及與顯色酶結合之二次抗體之兩抗體IHC分析。因此，該方法為設計用以詢問目標c-Jun及磷酸化c-Jun之兩步免疫組織化學分析。JNK活性之任何變化可在此等目標分子c-Jun及磷酸化c-Jun量方面得以量測。當用受質反應混合物培育時二次抗體報導體結合物得以沈積紅色，因此標記一次抗體目標複合物之位置。接著用標準明視野照明使用Nikon顯微鏡記錄紅色。接著對顯微鏡影像攝影，且可藉由三個獨立且經過訓練之評分員使用以下準則對電子影像進行評分(不知情)。0分指示上皮角質細胞核之0%至19%染色；1分指示上皮角質細胞核之20%至39%染色；2分指示上皮角質細胞核之40%至59%染色；3分指示上皮角質細胞核之60%至79%染色；且4分指示上皮角質細胞核之80%至100%染色。圖21描述各別評分之代表性免疫染色。
雷射掃描細胞測量術分析：對於各組織而言，獲得上皮層中核之計數。計數所有磷酸化c-Jun或c-Jun陽性核以及其積分(強度)。計算各者之分數：分數=(p-cJun或cJun陽性核×平均強度)/總核數。
結果：JNKi-1為競爭性可逆轉JNK抑制劑。觀測到2倍MED UVB會提高磷酸化c-Jun及c-Jun表現且2倍MED UVB及本文所述之活檢方案患者良好耐受。
結果確定基於主觀評分200 mg JNKi-1在11/14(78%)之患者中會抑制磷酸化c-Jun；75 mg JNKi-1在8/14(57%)之患者中會降低磷酸化c-Jun(參見圖22)。
患者15之皮膚活檢體之磷酸化c-Jun免疫染色結果顯示在JNK抑制劑存在下上皮c-Jun陽性核之百分比優於安慰劑顯著降低(參見圖23)。
JNKi-1以看似劑量相關之方式降低磷酸化c-Jun之中值主觀分數，安慰劑分數為4,75 mg分數為3，200 mg分數為1(參見圖24)。
表4顯示磷酸化c-Jun評分(參見上文)之數據及用於JNKi-1治療之患者的評估者之間的可變性。
使用客觀LSC分析確定磷酸化c-Jun降低(參見圖25)。
數據具統計上顯著性：在用JNKi-1治療之後，對於磷酸化c-Jun較少患者具有高分(參見圖26)。分數0、1、2對分數3、4之邏輯回歸分析測定對於75 mg對安慰劑，優勢率為10.96，P值為0.0164；且對於200 mg對安慰劑，優勢率為41.89，P值為0.0045。
數據顯示藉由JNKi-1抑制c-Jun之類似模式，但基於主觀評分200 mg JNKi-1在8/14(57%)之患者中以較小程度抑制c-Jun；75 mg JNKi-1在5/14(36%)之患者中以較小程度降低c-Jun(參見圖27)。
患者15之皮膚活檢體之c-Jun免疫染色結果顯示在JNK抑制劑存在下上皮c-Jun陽性核之百分比優於安慰劑顯著降低(參見圖28)。
JNKi-1亦以看似劑量相關之方式降低c-Jun之中值主觀分數，安慰劑分數為3，75 mg分數為3，200 mg分數為2(參見圖29)。
c-Jun數據亦具統計上顯著性：在用200 mg JNKi-1治療之後，對於c-Jun較少患者具有高分(參見圖30)。分數0、1、2對分數3、4之邏輯回歸分析測定對於75 mg對安慰劑，優勢率為3.69，P值為0.1809；且對於200 mg對安慰劑，優勢率為9.30，P值為0.0427。因此，JNKi-1在人類患者中抑制JNK活化。
模型系統中JNK抑制劑對紫外線B刺激之JNK活化之作用
在此研究中使用兩個活體外系統，即nHEK及EpiDermFTTM皮膚模型。用濃度為0.1、3及10 μM之JNKi-1預先處理nHEK細胞及EpiDermFTTM樣品，之後分別進行60 mJ/cm2及135 mJ/cm2 UVB照射。在UV刺激之後，經由細胞溶胞物之免疫墨點法使用抗磷酸化c-Jun S63抗體將JNK之活性量測為磷酸化c-Jun之含量。亦評估磷酸化Stat3作為JNK活化之標記。
方法 ：nHEK模型系統：在三個繼代之後，生長出正常人類上皮角質細胞(nHEK)。在100 mm培養盤中以每培養盤2×106個接種細胞。在37℃、5% CO2下培育培養盤5天，直至約80%匯合。各培養盤用溫熱磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)洗滌且補充10 mL含有0、0.1、3或10 μM JNKi-1之培養基，且在37℃下培育1小時。移除8 mL培養基且留出。在UV交聯機中用60 mJ/cm2之UVB照射培養盤，且假照射對照培養盤。將留出之8 mL培養基放回各培養盤中且儲存於37℃下。在UV處理後30分鐘及4小時收集細胞，且溶解於冰冷細胞萃取緩衝液中。溶胞物儲存於-80℃下。
EpiDermFT TM 模型系統：在2 mL無血清維持培養基(EFT-200-MM)中培養樣品72小時。在72小時之後，培養基分別經2 mL含有0、0.1、3及10 μM JNKi-1之新鮮培養基替換。在37℃、5% CO2下使樣品浸泡6小時，接著自培養基移出且置於2 mL PBS中，且用135 mJ/cm2 UVB照射。對照組進行假照射。將樣品放回2 mL含有JNKi-1之培養基中。在UV處理後30分鐘及3小時收集樣品。將各樣品切成兩半；一半在液氮中速凍，在溶解緩衝液中均質化，且將溶胞物儲存於-80℃下。將另一半置於10%中性緩衝液福馬林中3小時，且轉移至100%乙醇進行處理。
研究設計： 在nHEK模型中，用二甲亞碸(DMSO)(圖31，泳道1、2及12至15)或指定濃度之JNKi-1(泳道3至11)預先培育細胞1小時，且接著在無(對照組，泳道1及2)或有60 mJ/cm2之UVB(泳道3至15)下照射。在UV照射之後30分鐘溶解細胞，且使細胞溶胞物經受十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，之後用抗磷酸化c-Jun抗體進行西方墨點分析。亦針對β-肌動蛋白進行溶胞物墨點分析作為內參考物。在EpiDermFTTM模型中，用DMSO(圖32，泳道1至3)或指定濃度之JNKi-1(泳道4至12)預先培育細胞2小時，且接著在無(對照組，泳道1及2)或有135 mJ/cm2之UVB(泳道4至12)下照射。在UV照射之後30分鐘溶解細胞，且使細胞溶胞物經受SDS-PAGE，之後用抗磷酸化c-Jun抗體進行西方墨點分析。亦針對β-肌動蛋白進行溶胞物墨點分析作為內參考物。
西方墨點分析：對於西方墨點分析而言，將20至25 μg總蛋白施加於SDS-PAGE凝膠，之後電泳且進行墨點分析。用抗磷酸化-cJun(S63)、抗磷酸化-JNK(T183/Y185)及抗磷酸化-Stat3(S727)抗體進行免疫偵測。經紅外成像系統(LI-COR Biosciences,Lincoln,NE)進行西方墨點法成像。各頻帶之強度藉由奧德賽2.1軟體定量且輸出至Excel中進行進一步分析。針對內參考物β-肌動蛋白校正原始強度p-JNK、pc-Jun及p-Stat3。
結果：用UVB刺激會使30分鐘時磷酸化c-Jun強烈升高(圖31，泳道12至15；圖32，泳道2及3)且磷酸化c-Jun之含量持續3小時(數據未示)。在兩個系統中，如磷酸化c-Jun含量降低所示，用JNKi-1預處理細胞會以劑量依賴性方式顯著阻斷JNK之活化(圖31，泳道3至11；圖32，泳道4至12)。UV刺激在30分鐘時會產生磷酸化Stat3含量之輕微增加，然而JNKi-1之抑制作用最小(數據未示)。藉由西方墨點分析顯示nHEK中JNKi-1對c-Jun磷酸化之作用(A)。西方墨點法之定量示於圖B中。
如圖中所示，用JNKi-1預處理會以劑量依賴性方式顯著阻斷nHEK及EpiDermFTTM皮膚模型中UVB誘導之JNK活化。兩個系統中p-cJun之IC50在0.1 μM與3 μM之間。
已引用多個參考文獻，其揭示內容以全文引用的方式併入本文中。
圖1：如對JNK目標cJun之磷酸化之西方墨點分析所表明的化合物JNKi-1處理對促纖維變性細胞因子活化之JNK路徑真皮SSc-纖維母細胞之作用。與未受刺激纖維母細胞(泳道1)相比，用TGFβ(泳道2)或PDGF(泳道4)培育會增加p-cJun之蛋白質含量。用化合物JNKi-1預處理纖維母細胞會降低TGFβ(泳道3)且尤其PDGF(泳道5)之刺激效應。蛋白質之相等加載藉由定量β-肌動蛋白來確定。(p-cJun=磷酸化cJun)
圖2：博萊黴素(bleomycin)誘發之皮膚纖維變性小鼠模型中，化合物JNKi-1處理對真皮厚度之作用。各條帶表示來自10隻小鼠之群的資料。真皮厚度由皮膚活檢體之蘇木精及伊紅(H ＆ E)染色來量測。資料顯示真皮厚度藉由用化合物JNKi-1處理而劑量依賴性降低。
圖3：化合物JNKi-1處理對博萊黴素誘發之皮膚纖維變性小鼠模型之病變皮膚中肌纖維母細胞積聚之作用。各條帶表示來自10隻小鼠之群的資料。肌纖維母細胞藉由皮膚活檢體之免疫組織化學(IHC)染色針對α-SMA來定量。資料顯示肌纖維母細胞之數目藉由用化合物JNKi-1處理而顯著減少。
圖4：化合物JNKi-1對博萊黴素誘發之皮膚纖維變性小鼠模型之病變皮膚中膠原蛋白積聚之作用。各條帶表示來自10隻小鼠之群的資料。總膠原蛋白含量藉由羥脯胺酸分析來定量。資料顯示病變皮膚中膠原蛋白含量藉由用化合物JNKi-1處理而劑量依賴性降低。
圖5：化合物JNKi-1處理對博萊黴素誘發之纖維變性小鼠模型中真皮厚度之預防作用。在小鼠中藉由皮下注射博萊黴素誘發真皮中膠原纖維束緻密積聚之真皮纖維變性，導致與接受氯化鈉注射液小鼠相比真皮厚度增加(A及B)。真皮增厚藉由用化合物JNKi-1處理而劑量依賴性降低(C及D)且可類似於伊馬替尼(E)下所觀測到者。放大100倍顯示用H＆E染色之代表性皮膚切片。
圖6：化合物JNKi-1處理對博萊黴素誘發之預先確立的真皮纖維變性小鼠模型中前在膠原蛋白積聚(表示為真皮增厚)退化之誘發作用。博萊黴素攻擊3週，之後NaCl注射再歷時3週(B)，與接受NaCl注射液6週之小鼠(A)相比真皮增厚增加。在博萊黴素連續攻擊6週(C)時，真皮增厚進一步增加。當博萊黴素連續處理使真皮增厚進一步惡化停止時，化合物JNKi-1歷時最後3週(D及E)，然而150 mg/kg之劑量會誘發病變皮膚中真皮增厚退化(E)且比伊馬替尼(F)更明顯。放大100倍顯示用H＆E染色之代表性皮膚切片。
圖7：化合物JNKi-1處理對使用治療性處理範例之實驗纖維變性退化之誘發作用。當連續攻擊最後3週時用化合物JNKi-1處理不僅中止纖維變性之進一步惡化(與用博萊黴素處理6週之小鼠相比)而且誘發纖維變性退化且劑量依賴性降低真皮增厚(A)、肌纖維母細胞計數(B)及羥脯胺酸含量(C)低於用博萊黴素攻擊3週之小鼠之程度。將接受氯化鈉注射液6週之小鼠之含量定義為100%；其他結果針對此值進行校正。資料表示平均值±SEM。*，p<0.05；**，p<0.01。
圖8：化合物JNKi-1處理在Tsk-1小鼠模型中之抗纖維變性作用。將未帶有TSK-1突變之對照小鼠(第一行)中之真皮厚度視為100%，其他結果針對此值校正。真皮厚度由皮膚活檢體之H ＆ E染色來量測。
圖9：化合物JNKi-1處理對Tsk-1小鼠中肌纖維母細胞積聚之作用。將未帶有TSK-1突變之對照小鼠(第一行)中之肌纖維母細胞數視為100%，其他結果針對此值進行校正。肌纖維母細胞藉由皮膚活檢體之IHC染色針對α-SMA來定量。
圖10：化合物JNKi-1處理對TSK-1小鼠中下皮增厚之作用。與未帶有突變之pa/pa小鼠相比，TSK-1小鼠產生下皮增厚(A及B)。用化合物JNKi-1處理TSK-1小鼠劑量依賴性降低此等組織學變化(C及D)。當用150 mg/kg處理時下皮增厚降低，化合物JNKi-1之作用比用伊馬替尼(E)處理更明顯。放大40倍顯示用H＆E染色之代表性皮膚切片。
圖11：化合物JNKi-1處理對SSc患者之真皮纖維母細胞中細胞外基質(ECM)組分之基本產生的作用。用化合物JNKi-1培育真皮SSc纖維母細胞24小時會降低coll a1、coll a2及纖維結合蛋白-1 mRNA之表現(A)及蛋白質釋放至上清液中(B)。將未作處理之纖維母細胞之含量定義為100%；其他結果針對此值進行校正。資料表示平均值±SEM。*，p<0.05；**，p<0.01。
圖12：化合物JNKi-1處理對全身性硬皮病纖維母細胞生存力之作用，表明化合物JNKi-1不會藉由降低細胞生存力間接地發揮其抑制作用。
圖13：化合物JNKi-1處理對TGF-β及PDGF誘發之總膠原蛋白分泌之作用，表明化合物JNKi-1會適當抑制TGF-β及PDGF-誘發之總膠原蛋白分泌。
圖14：UVB刺激24小時後，化合物JNKi-1處理對小鼠表皮中UVB誘發之TUNEL標記之作用。研究結果表明在UVB曝露之前經口投與化合物JNKi-1可抑制SKH-1小鼠表皮內細胞凋亡性細胞死亡。
圖15：切割創口程序，顯示動物背部中線兩側1 cm處標記之四個點。活組織檢查鑽孔(直徑6 mm)垂直對準標記之中心，且移除表皮、真皮及肌纖膜。
圖16：創口癒合模型中，用化合物JNKi-1處理對體重之作用，表明在媒劑與化合物JNKi-1處理組之間體重增加類似。研究A顯示為三個實驗之代表。
圖17：3個實驗(研究A、B且C)中化合物JNKi-1處理對創口尺寸之作用，表明在給藥60 mg/kg化合物JNKi-1(每日兩次)之大鼠中觀測到創口癒合延遲(圖A)，但在給藥30或10 mg/kg化合物JNKi-1之大鼠中並未觀測到差異(圖C)。在所有化合物JNKi-1處理組中，創傷後14天實現皮膚完全修復(圖B)。
圖18：化合物JNKi-1處理對癒合評分結果之作用(圖A：研究A及研究B之組合資料；圖B：研究C)，表明在化合物JNKi-1治療組中，到第10天14隻大鼠中僅5隻完全癒合，但到14天接受化合物JNKi-1之所有動物均完全癒合(圖A)。在研究C中，與媒劑對照組相比，30與60 mg/kg劑量均顯示癒合顯著延遲。到第10天以60 mg/kg處理之大鼠均未完全癒合，且以30 mg/kg處理之8隻大鼠中僅5隻顯示不完全上皮再形成與膠原蛋白重塑。在接受10 mg/kg化合物JNKi-1之組中未觀測到顯著效應(圖B)。
圖19：化合物JNKi-1處理對肌纖維母細胞遷移至創口間隙之作用，如由創傷後5天對組織切片進行α-SMA染色所量測，表明與媒劑處理之動物相比(圖A)，用化合物JNKi-1處理會導致創口邊緣肌纖維母細胞遷移降低(圖B)。
圖20：化合物JNKi-1處理對嗜中性白血球遷移至創口間隙中之作用，如由對皮膚切片進行抗骨髓過氧化酶(MPO)染色所量測，表明在創傷後第1天，在對組織損傷反應期間用化合物JNKi-1處理不會影響發炎性細胞浸潤(圖C)。
圖21：IHC主觀評分參數之代表性免疫染色影像。測定上皮cJun陽性核之百分比，且基於下表給予分數：分數=0:0至19%陽性核；分數=1：20至39%陽性核；分數=2:40至59%陽性核；分數=3：60至79%陽性核；分數=4:80至100%陽性核。
圖22：JNKi-1處理對磷酸化c-Jun主觀分數之作用。在75 mg劑量下，8/14的個體顯示p-cJun評分降低，而在200 mg下11/14的個體顯示p-cJun評分降低。
圖23：JNKi-1處理對代表性患者之皮膚活檢體之磷酸化c-Jun免疫染色之作用。
圖24：與安慰劑處理相比，用75 mg或200 mg JNKi-1處理之後，磷酸化c-Jun評分之抑制作用之劑量-反應及量值。中值主觀分數由安慰劑處理組中之4降至75 mg處理組中之3，降至200 mg處理組中之1。
圖25：JNKi-1處理對磷酸化c-Jun評分之作用，如由雷射掃描細胞測量術所量測，顯示與主觀評分類似之結果。
圖26：JNKi-1處理對磷酸化c-Jun主觀分數頻率分佈之作用，顯示在處理之後，較少個體具有高p-cJun評分。
圖27：JNKi-1處理對c-Jun主觀分數之作用。在75 mg劑量下，5/14的個體顯示cJun評分降低，而在200 mg下8/14的個體顯示cJun評分降低。
圖28：JNKi-1處理對代表性患者15之皮膚活檢體之c-Jun免疫染色之作用。
圖29：與安慰劑處理相比，用75 mg或200 mg JNKi-1處理之後，c-Jun評分之抑制作用之劑量-反應及量值。中值主觀分數由安慰劑處理組中之4降至200 mg處理組中之2。
圖30：JNKi-1處理對c-Jun主觀分數頻率分佈之作用，顯示在用200 mg JNKi-1處理之後，較少個體具有高cJun評分。
圖31：藉由西方墨點分析顯示JNKi-1對nHEK細胞中c-Jun磷酸化之作用(圖A)。西方墨點法之定量示於圖B中。結果顯示JNKi-1強烈抑制在正常人類上皮角質細胞中UVB誘發之JNK活化。
圖32：藉由西方墨點分析顯示EpiDermFTTM皮膚模型中JNKi-1對c-Jun磷酸化之作用(圖A)。西方墨點法之定量示於圖B中。結果指示在EpiDermFTTM中JNKi-1強烈抑制UVB誘發之JNK活化。
(無元件符號說明)

Claims (88)

  1. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以治療或預防硬皮病之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  2. 一種具有式(1)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以預防UV損傷或曬傷之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  3. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善或預防瘢痕形成之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  4. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以治療、預防或改善瘢痕瘤之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  5. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R1為經取代或未經取代之芳基。
  6. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R1為經取代或未經取代之C1-6烷基。
  7. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R1為經取代或未經取代之C3-10環烷基。
  8. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R1為經取代或未經取代之C3-10雜環。
  9. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R1為經取代或未經取代之C3-10雜芳基。
  10. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R1為經取代之C3-10環烷基。
  11. 如請求項10之用途，其中R1為經一或多個以下取代之C3-10環烷基：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  12. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R2為經取代或未經取代之芳基。
  13. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R2為經取代或未經取代之C1-6烷基。
  14. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R2為經取代或未經取代之C3-10環烷基。
  15. 如請求項14之用途，其中R2為經一或多個以下取代之環己基：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  16. 如請求項14之用途，其中R2為經一或多個以下取代之環戊基：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  17. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R2為經取代或未經取代之C3-10雜環。
  18. 如請求項17之用途，其中R2為經取代或未經取代之3-氧雜環丁烷基、3-四氫呋喃基、4-四氫哌喃基、4-哌啶基、4-(1-醯基)-哌啶基、4-(1-烷磺醯基)哌啶基、3-吡咯啶基、3-(1-醯基)吡咯啶基及3-(1-烷磺醯基)吡咯啶基。
  19. 如請求項17之用途，其中R2為經取代或未經取代之含硫C3-10雜環。
  20. 如請求項19之用途，其中該含硫C3-10雜環為4-(1,1-二側氧基)硫哌喃基或3-(1,1-二側氧基)硫呋喃基。
  21. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R2為經取代或未經取代之C3-10雜芳基。
  22. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R3為經鹵素取代之芳基。
  23. 如請求項22之用途，其中R3為經氟取代之芳基。
  24. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R3為經鹵素取代之C3-10雜芳基。
  25. 如請求項24之用途，其中R3為經氟取代之C3-10雜芳基。
  26. 如請求項1至4中任一項之用途，其中R3為 其中：X在每次出現時獨立地為F、Cl、Br或I；R6為C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基；m為1至5範圍內之整數；及p為1至4範圍內之整數。
  27. 如請求項26之用途，其中X為F、Cl或Br。
  28. 如請求項26之用途，其中m為1、2或3且X為F或Cl。
  29. 如請求項26之用途，其中m為2或3且至少一個X為F且至少一個X為Cl。
  30. 如請求項1至4中任一項之用途，其中該化合物為來自表1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體。
  31. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以增加患有硬皮病之患者群體之總存活時間、無疾病存活時間、目標反應率、直到出現惡化之時間、無惡化存活時間或到治療失敗所需時間之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  32. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以降低患有硬皮病之患者群體之死亡率、呼吸系統疾病死亡率或呼吸系統住院治療之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  33. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善患有硬皮病之患者之改良式羅南皮膚評分(modified Rodnan skin score)之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  34. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以降低或改善患有硬皮病之患者之皮膚厚度之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  35. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以降低或改善患有硬皮病之患者之皮膚硬結之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  36. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善患有硬皮病之患者之皮膚病生活品質指數(dermatology quality of life index)之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  37. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善患有硬皮病之患者之肺功能之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  38. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善患有硬皮病之患者之一氧化碳擴散能力之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  39. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善患有硬皮病之患者之馬勒呼吸困難指數(Mahler Dyspnea index)之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  40. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善患有硬皮病之患者之聖喬治呼吸問卷評分(Saint George's Respiratory Questionnaire score)之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  41. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善患有硬皮病之患者之UCLA硬皮病臨床試驗合作聯盟胃腸道評分之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  42. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以治療或預防患有硬皮病之患者之手指潰爛之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  43. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善患有硬皮病之患者之血流介導之擴張之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  44. 一種具有式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體之用途，其係用於製造用以改善或增加患有硬皮病之患者之六分鐘步行距離之藥劑： 其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  45. 一種醫藥組合物，其係用於治療或預防硬皮病，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  46. 一種醫藥組合物，其係用於預防UV損傷或曬傷，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  47. 一種醫藥組合物，其係用於改善或預防瘢痕形成，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  48. 一種醫藥組合物，其係用於治療、預防或改善瘢痕瘤，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  49. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R1為經取代或未經取代之芳基。
  50. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R1為經取代或未經取代之C1-6烷基。
  51. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R1為經取代或未經取代之C3-10環烷基。
  52. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R1為經取代或未經取代之C3-10雜環。
  53. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R1為經取代或未經取代之C3-10雜芳基。
  54. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R1為經取代之C3-10環烷基。
  55. 如請求項54之醫藥組合物，其中R1為經一或多個以下取代之C3-10環烷基：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  56. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R2為經取代或未經取代之芳基。
  57. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R2為經取代或未經取代之C1-6烷基。
  58. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R2為經取代或未經取代之C3-10環烷基。
  59. 如請求項58之醫藥組合物，其中R2為經一或多個以下取代之環己基：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  60. 如請求項58之醫藥組合物，其中R2為經一或多個以下取代之環戊基：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  61. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R2為經取代或未經取代之C3-10雜環。
  62. 如請求項61之醫藥組合物，其中R2為經取代或未經取代之3-氧雜環丁烷基、3-四氫呋喃基、4-四氫哌喃基、4-哌啶基、4-(1-醯基)-哌啶基、4-(1-烷磺醯基)哌啶基、3-吡咯啶基、3-(1-醯基)吡咯啶基及3-(1-烷磺醯基)吡咯啶基。
  63. 如請求項61之醫藥組合物，其中R2為經取代或未經取代之含硫C3-10雜環。
  64. 如請求項63之醫藥組合物，其中該含硫C3-10雜環為4-(1,1-二側氧基)硫哌喃基或3-(1,1-二側氧基)硫呋喃基。
  65. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R2為經取代或未經取代之C3-10雜芳基。
  66. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R3為經鹵素取代之芳基。
  67. 如請求項66之醫藥組合物，其中R3為經氟取代之芳基。
  68. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R3為經鹵素取代之C3-10雜芳基。
  69. 如請求項68之醫藥組合物，其中R3為經氟取代之C3-10雜芳基。
  70. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中R3為 其中：X在每次出現時獨立地為F、Cl、Br或I；R6為C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基；m為1至5範圍內之整數；及p為1至4範圍內之整數。
  71. 如請求項70之醫藥組合物，其中X為F、Cl或Br。
  72. 如請求項70之醫藥組合物，其中m為1、2或3且X為F或Cl。
  73. 如請求項70之醫藥組合物，其中m為2或3且至少一個X為F且至少一個X為Cl。
  74. 如請求項45至48中任一項之醫藥組合物，其中該化合物為來自表1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體。
  75. 一種醫藥組合物，其係用於增加患有硬皮病之患者群體之總存活時間、無疾病存活時間、目標反應率、直到出現惡化之時間、無惡化存活時間或到治療失敗所需時間，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  76. 一種醫藥組合物，其係用於降低患有硬皮病之患者群體之死亡率、呼吸系統疾病死亡率或呼吸系統住院治療，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  77. 一種醫藥組合物，其係用於改善患有硬皮病之患者之改良式羅南皮膚評分，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  78. 一種醫藥組合物，其係用於降低或改善患有硬皮病之患者之皮膚厚度，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  79. 一種醫藥組合物，其係用於降低或改善患有硬皮病之患者之皮膚硬結，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  80. 一種醫藥組合物，其係用於改善患有硬皮病之患者之皮膚病生活品質指數，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  81. 一種醫藥組合物，其係用於改善患有硬皮病之患者之肺功能，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  82. 一種醫藥組合物，其係用於改善患有硬皮病之患者之一氧化碳擴散能力，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  83. 一種醫藥組合物，其係用於改善患有硬皮病之患者之馬勒呼吸困難指數，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  84. 一種醫藥組合物，其係用於改善患有硬皮病之患者之聖喬治呼吸問卷評分，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  85. 一種醫藥組合物，其係用於改善患有硬皮病之患者之UCLA硬皮病臨床試驗合作聯盟胃腸道評分，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  86. 一種醫藥組合物，其係用於治療或預防患有硬皮病之患者之手指潰爛，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  87. 一種醫藥組合物，其係用於改善患有硬皮病之患者之血流介導之擴張，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
  88. 一種醫藥組合物，其係用於改善或增加患有硬皮病之患者之六分鐘步行距離，其包含具有式(I)之化合物： 或其醫藥學上可接受之鹽、固體形式、溶劑合物、水合物或互變異構體，其中：R1為經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；R2為H、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之C3-10環烷基、經取代或未經取代之C3-10雜環或經取代或未經取代之C3-10雜芳基；及R3為經一或多個鹵素取代之芳基或經一或多個鹵素取代之C3-10雜芳基，其中該芳基或C3-10雜芳基視情況進一步經一或多個以下取代：C1-6烷基、羥基、羥烷基、烷氧基、烷氧基烷基、胺基、烷基胺基、羧基、胺基羰基、氰基、醯胺基、烷磺醯胺基、四唑基、三唑基或咪唑基。
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