TW201040169A

TW201040169A - Imidazole substituted pyrimidines 724

Info

Publication number: TW201040169A
Application number: TW099111649A
Authority: TW
Inventors: Per I Arvidsson; Jeremy Nicholas Burrows; Ulrika Yngve
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2009-04-15
Filing date: 2010-04-14
Publication date: 2010-11-16
Also published as: CA2761064A1; MX2011010732A; US8178529B2; CN102459252A; RU2011140238A; KR20120013951A; US20100267723A1; EP2419425A4; AU2010237100A1; JP2012524063A; EP2419425A1; UY32562A; AR076300A1; BRPI1015014A2; WO2010120237A1; US20120077813A1

Description

201040169 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於一種新穎式（I)化合物或其醫藥可接受鹽，本發明亦係關於含有該化合物之醫藥調配物及係關於該化合物於治療上之用途。本發明另係關於一種用於製備該式 (I)化合物之方法。【先前技術】肝糖合成酶激酶3(GSK3)係由兩種同型（〇1與0)構成之絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶，其係藉由不同基因編碼，但於催化功忐域内係咼度同源。GSK3高度表現在中樞及週邊神經系統。GSK3使包括τ，β-索烴素、肝糖合成酶 '丙酮酸脫氫酶與延長起始因子2b(eIF2b)之若干受質磷酸化。胰島素與生長因子激活蛋白激酶B，使絲胺酸9殘基上之GSK3磷酸化並使之失活（Kannoji等人，Expert 〇pin Ther. Targets 2008， 12， 1443-1455)。阿爾茨海默氏病（AD)癡呆，及1蛋白病變（taupathies) AD的特徵在於認知功能下降，膽鹼能機能失調及神經兀死亡、神經原纖維纏結及由澱粉樣蛋白沉積物構成之老年斑。此等事件於AD中之順序並不明確，但咸信與其有關。肝糖合成酶激酶3p(GSK3p)，磷酸化激酶，選擇 !·生石粦酸化AD大月每中過度磷酸化位點之神經元之微管相關蛋白質τ。經過度磷酸化蛋白質對微管具有較低結合性，且積聚為成對螺旋絲樣結構，其係構成AD大腦中神、”工原纖維纏結及神經纖維串連之主要組份。此導致微管之 147407.doc 201040169 解聚，致使轴突死亡及神經元營養不良（Hooper等人，j

Neurochem· 2008, 104(6)，1433-1439)。神經原纖維纏結一貫出現於諸如AD、肌萎縮性侧索硬化症、關島型帕金森氏症-癡呆、皮質基底核退化症、拳擊員癡呆及頭部創傷、唐氏綜合症、腦炎後帕金森氏症、進行性核上麻痹症、尼曼-皮克病及皮克病之疾病中發現。將澱粉樣蛋白加入原始海馬培養物，經由誘發GSK3P活性導致τ及類似成對螺旋絲樣結構狀態之過度磷酸化，接著破壞軸突運輸及神經元死亡（Imahori 與 Uchida, J. Biochem. 1997, 121,179-188)，同時已假定GSK3a可調控殿粉樣蛋白_β自身之生產（Phiel等人，Nature, 2003，423，435-439)。GSK3p 優先標記神經原纖維纏結，且已顯示在AD大腦中之預纏結神經原中為活性。來自AD病患腦組織中之GSK3蛋白質含量亦增加50%。此外，GSK30使糖酵解途徑中之關鍵酶：丙酮酸脫氫酶填酸化，並預防丙酮酸轉化為乙酿辅酶 A(Hoshi等人，PNAS 1996, 93: 2719-2723)。乙醯輔酶A對具有認知功能之神經遞質乙醯膽驗之合成很重要。殿粉樣蛋白-β之聚集係AD中之早期現象。GSK轉殖基因小鼠顯示大腦中之殿粉樣蛋白-β之含量增加。餵食链之PDAPP (APPV717F)轉殖基因小鼠亦顯示海馬中之澱粉樣蛋白·β含量減少及澱粉樣蛋白斑塊面積減少（Su等人，Biochemistry 2〇04, 43，6899-6908)。同樣地，GSK3p抑制已顯示降低澱粉樣蛋白沉積及與斑塊相關星細胞增殖，較低之τ鱗酸化，保護神經元細胞死亡及預防雙重APPsw-Tvlw小鼠模型 147407.doc 201040169 中之記憶缺失（Seren0 等人，Neurobiology of Disease， 2009, 35, 359-367)。此外，GSK3已涉及突觸塑性及記憶功能（Peineau 等人，Neuron 2007，53, 703-717; Kimura 等人，PloS ONE 2008，3, e3540)，此在AD病患中已知受損。總而言之，GSK3抑制可能對與阿爾茨海默氏症及上述所提及其他疾病相關之進程及伴隨之認知缺陷具有有利作用。急性神經退化性疾病已顯示，調節PI3K/AKt途徑之激活作用的生長因子對神經元存活扮演重要角色。此途徑之激活導致抑制GSK3 β。在細胞及動物之神經退化性模型中，諸如大腦缺血或在缺乏生長因子後，GSK30活性增加（Bhat等人，PNAS 2000, 97, 11074-11079)。已顯示具有已知GSK3p抑制作用之若干化合物在絕血中風模型大鼠中會降低梗塞體積。最近公開文獻（Koh等人，BBRC 2008, 371，894-899)在病灶性腦缺血性模型中證實，抑制GSK-3會減少絕血細胞死亡、發炎、大腦水腫、及葡萄糖含量，而降低總梗塞體積及改善神經行為功能。因此GSK3P抑制劑可用於減弱急性神經退化性疾病之進程。雙極症（BD) 雙極症之特徵為躁狂急性發作及抑鬱急性發作。基於鋰之安定情緒作用，其已用於治療BD。鋰之缺點係治療範圍狹窄及用藥過量有導致鋰中毒之危險。鋰可在治療濃度 147407.doc 201040169 下抑制GSK3之發現已提高此酵素代表腦中链之主要作用標乾之可能性（Stambolic等人 ’ Curr, Biol. 1996，68，1664-1668 ; Klein與Melton ; PNAS 1996，93, 8455-8459 ; Gould 等人 > Neuropsychopharmacology, 2〇〇5，3〇, 1223-1237) ° 已顯示GSK3抑制劑在評估抑鬱行為模型之強迫游泳試驗中縮短固定不動時間（O'Brien等人，j Neurosci 2004，24, 6791-6798)。GSK3已與雙極症II中所發現之多態性相關 (Szczepankiewicz等人，Neuropsych〇bi〇i〇gy· 2006，53，51- O 56)。因此’抑制gsk3p可能與治療bd及出現情感障礙之 AD病患有關。精神分裂症累積之證據顯示’情緒障礙及精神分裂中GSK3的活性異常。GSK3涉及多種細胞過程之連串信號轉導，尤其在神經發展期間。（Kozlovsky等人，Am. j. Psychiatry，2000, 157，831-833)發現精神分裂症病患中之〇|§κ3β含量比對照受試者低41%。此研究指出，精神分裂症涉及神經發展病理學’且異常之GSK3調控作用可能影響精神分裂症。此外，已有文獻報導’出現精神分裂症之病患之0_索烴素含，量減少（Cotter等人 ’ Neuroreport 1998，9，1379-1383)。非典型抗精神病藥’諸如金菩薩（olanzapine)、氣氮平 (clozapine)、樂思康（quetiapine)及齊拉西網（ziprasidone)藉由增加ser9磷酸化來抑制GSK3 ’此暗示抗精神病藥可經由抑制 GSK3來發揮其有利作用（Li X.等人，Int. J.of Neuropsychopharmacol，2007, 10, 7-19) ° 147407.doc 201040169 糖尿病 2型糖尿病之特徵為胰島素抗性及β_細胞失效。胰島素經由脫磷酸作用刺激骨骼肌中之肝糖合成，且因此激活肝糖合成酶並’因此增加清除葡萄糖。在休止狀態下， GSK3磷酸化，並經由脫磷酸化作用，使肝糖合成酶失活。來自II型糖尿病患者之肌肉中之GSK3亦過度表現 (Nikoulina等人，Diabetes 2000年 2 月；49(2)，263-71)。抑制GSK3可增加肝糖合成酶之活性，由此降低轉化為肝糖之葡萄糖量。於糖尿病之動物模型中，GSK3抑制劑使血漿葡萄糖含量下降達50%(Cline等人，Diabetes，2002，51: 2903-2910 ; Ring等人 ’ Diabetes 2003，52，588-595)。此外，由使用患有糖尿病之單倍體缺陷GSK3P小鼠獲得之結果顯示，降低之GSK3P活性亦可保護防止β_細胞失效 (Tanabe等人，Pl〇S Biology, 2008，6(2), 307-318)。抑制 GSK3可因此對治療ί型及Π型糖尿病具治療相關性，以增強胰島素敏感度及減少β-細胞失效，且亦因此為減少糖尿病併發症（如糖尿病神經病）之相關療法。禿頭症 GSK3磷酸化並降解β_索烴素。β_索烴素係角蛋白合成路徑之效應物。安定β_索烴素可導致頭髮生長增多。因 GSK3磷酸化之位點突變而表現安定之ρ_索烴素的小鼠經歷類似重新開始毛髮形態發生之過程（Gat等人，ceu 1998，95，605-14)。新生毛囊形成皮脂腺及真皮乳頭，其通常僅於胚胎形成中形成。因此’抑制GSK3可治療導致 147407.doc 201040169 充頭症之各種適應症。發炎疾病提供抗發炎作用之GSK3抑制劑之發現已提高使用GSK3 抑制劑治療發炎疾病之醫療干預法之可行性（Martin等人，

Nat. Immunol. 2005，6，777-784 ; Jope等人，Neurochem.

Res. 2007, 32，577-595)。發炎係包括阿爾茨海默$病及情緒障礙之寬廣範圍疾病之共同特徵。最新公開案（Kitazawa 等人，Ann. Neurol. 2008，64，15-24)指示 GSK3p 可能在包〇涵體肌炎（IBM)中扮演重要作用。癌症 GSK3過度表現於卵巢、乳房及前列腺癌細胞中，且最新數據顯示，GSK3 β可能影響若干實體腫瘤類型中之細胞增殖及存活路徑。GSK3在影響細胞增殖及諸如WNT、ΡΙ3 激酶及NFkB之存活的若干信號轉導系統具有重要作用。 GSK3 β缺陷之MEF顯示對細胞存活所媒介之NFkB路徑具有關鍵作用（Ougolkov AV 與 Billadeau DD.，Future Oncol. 〇 2006年2月，2(1)，91-100.)。因此，GSK3抑制劑可抑制實體腫瘤（包括胰腺、結腸及前列腺癌）之生長及存活。經由 * GSK3之抑制作用已證明多發性骨髓瘤細胞之生長控制 (Zhou等人，2008 Leuk. Lymphoma, 48，1946-1953)。最新公開文獻（Wang等人，Nature 2008，455，1205-1209)證明 GSK3之抑制作用對MLL白血病鼠類模型有效。因此， GSK3抑制劑亦可抑制血液腫瘤（包括多發性骨髓瘤）之生長及存活。 147407.doc 201040169 青光眼 GSK3抑制劑可用於治療青光眼。高眼壓（IOP)係青光眼發展之最重要風險因子，且目前青光眼治療致力於藉由減少房水形成或藉由促進水狀體外流而降低ΙΟΡ。最新公開之表現形態實驗（Wang等人，J. Clin. Invest. 2008, 118, 1056-1064)已揭露相對於對照受試者，可溶性WNT拮抗劑 sFRP-1過度表現在青光眼病患之眼細胞中。經由實驗提供 WNT信號路徑與青光眼之間之功能相關性，其中將重組 sFRP-1加入活體外培養之人眼睛前段，可使房水外流減少；此外，小鼠中活體内實驗證明，眼組織中sFRP-Ι之過度表現會導致眼壓增加，小分子GSK3抑制劑可拮抗此效應。總而言之，由Wang等人（2 008)報導之結果暗示，經由抑制GSK3來激活WNT信號可代表一種降低青光眼之眼壓之新穎治療方法。疼痛最新公開案（W020〇8/057933)指示，GSK3P抑制劑可藉由調控肝糖分解或醣酵解路徑而在治療疼痛，尤其神經痛扮演重要作用。骨骼相關病變及疾病基因研究已在人類之骨質量與Wnt信號之間建立相關性 (Gong等人，Am. J. Hum. Genet 1996, 59，146-51，Little等人，N. Engl. J. Med.，2002, 347, 943-4)。自此以後之小鼠中Wnt信號傳導之遺傳及藥理操作已確認此路徑對調控骨骼形成之重要作用。由Wnt激活之路徑中，其信號通過典 147407.doc 10- 201040169 型（亦即Wnt/β-索烴素）路徑，經由許多種機轉（包括再生幹細胞、刺激前造骨細胞複製、誘導造骨細胞的生成及抑制造骨細胞及骨細胞〉周亡）增加骨質量。因此，利用仍〇抑制劑單獨或組合適宜裝置增強Wnt路徑信號，可用於治療骨骼相關病變，或涉及一種需要新形成及增加骨骼形成之其他疾病’例如骨質疏鬆症（遺傳、醫源性、或經由衰老/ 荷爾蒙失衡產生）、因受傷或外科手術之骨折修復、導致 θ IM貝失之慢性發炎疾病（諸如風濕性關節炎）、導致骨路損傷之癌症（諸如乳癌、前列腺癌及肺癌）、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨骼之惡性纖維組織細胞瘤、骨絡之纖維肉瘤、癌症引起之骨路疾病、醫源性骨骼疾病、良性骨骼疾病及佩吉特氏病。再生性醫學幹細胞擴增及分化係自身再生及維持組織體内穩衡及修復所必需。已顯示β_索烴素所媒介典型Wnt信號路徑涉及〇控制幹細胞分化（Pinto等人，Exp CeU Res，2〇〇5, 3〇6, 3 57 63)。生理Wnt反應可能係受損之組織再生所必需。藉由增強Wnt信號之GSK3抑制劑可用於調控幹細胞功能以便在與組織受損或減少組織修復有關之疾病中，於活體外或活體内增強組織再生。 2007年12月04日公開之W02007/〇4〇44〇係關於經咪唑及苯基取代之嘧啶化合物，據稱其對GSK3具有選擇抑制作用，及良好生物可用率。【發明内容】 147407.doc -11 - 201040169 本發明之目的係提供一種新穎化合物，其具有高gsk3 抑制效力’且具有如經由CDK2選擇性所說明之良好之全能激酶（pan-kinase)選擇性，及在CaC〇 2細胞中之良好細胞滲透性。通式（I)之化合物

其中 R1係氫或氟； R2及R3選自氫或甲基；或其醫藥可接受鹽。於一態樣中，R1係氟；或其醫藥可接受鹽。於另一態樣中，R2與R3係氫；或其醫藥可接受鹽。於另外態樣中’ R2係甲基；或其醫藥可接受鹽。於另一‘態樣巾，R2係（R)-甲基；或其醫藥可接受鹽。於又-態樣中，R2與R3係甲基；或其醫藥可接受二。於又另-態樣中，R2與R3係⑻1基；或其醫藥可接受鹽。 & ，或其醫藥可接受於一態樣中，R1係氟，R2與R3係氫键I 〇其係 N-(2,5-二氟 _4_ 1-(四氫-2H-派喃_4_ 本發明之另一態樣係一種化合物， (嗎啉基曱基）笨基）-5-氟-4-(2-甲基_ 147407.doc •12- 201040169 基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺；或其醫藥可接受鹽。本發明之另一態樣係N-(2,5-二氟-4-(嗎琳基甲基）苯基） -5 -氟-4-(2-甲基- l-(四氫-2Η-α底喃-4-基）_iH-咪唾_5_基）喷啶-2-胺二琥珀酸鹽。本發明之又一態樣係一種化合物，其係 5 -氟-N-(2 -氟-4-(嗎琳基曱基）苯基）-4-(2 -曱基_ι_(四氫 -2H-n底喃-4-基）-1Η-^峻-5-基）嘴咬-2-胺； N-(4-(((3S，5S)-3,5-二甲基嗎啉基）甲基）_2,5_二氟苯基） -5 -氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-娘喃-4-基）-1Η-咪嗤-5-基）嘴咬-2 -胺； N-(2,5-二氟-4-(((S)-3-甲基嗎啉基）曱基）苯基）_5_氟_4_ (2 -甲基-1-(四氳- 2H-0底喃-4-基）-11^-口米〇坐-5-基）〇密咬-2-胺；或其醫藥可接受鹽。本發明之又另一態樣係一種化合物，其係N-(2,5-二氟 -4-(嗎琳基甲基）苯基）-5 -氟-4-(2-甲基- l-(四氫-2H-0底喊-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； 5 -氟-N-(2 -氣-4-(嗎淋基甲基）苯基）-4-(2 -甲基-1-(四氮 -2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； 5-氟-N-(2-氟-4-(((S)-3-甲基嗎啉基）甲基）苯基）-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； >^-(4-(((3 3,58)-3,5-二甲基嗎啉基）甲基）-2-氟苯基）-5-氟 -4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2- 胺鹽酸鹽； 147407.doc 13- 201040169 5-氟-N-(2-氟-4-(((r)_3·甲基嗎啉基）曱基）苯基）_4_(2_甲基-1-(四氮-2H-娘喃_4_基咪唑_5_基）嘧啶_2_胺鹽酸鹽； N-(4-(((3S，5S)-3,5_二曱基嗎琳基）甲基）_2,5_二氣苯基） -5-氟_4-(2-甲基-1-(四氫_2H_哌喃_心基卜1H_咪唑_5_基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； N-(2,5-二氣-4-((⑻_3_曱基嗎啉基）曱基）苯基）_5_說 (2-甲基-1-(四氫-2仏派喃_4_基）·1Η__。坐_5_基）喊。定_2，胺鹽酸鹽；或呈游離鹼或其另—醫藥可接受鹽之形式。本發明之冑步特徵係關於__種選自呈其游離驗形式或其醫藥可接受鹽之所有例示鹽之化合物。本發明之進一步特徵係由本文所揭示方法及/或特定眘例獲得之產物。 1 本發明亦提供選自以下之化合物： (S)-4-(4-溴-3-氟苯甲基）_3甲基嗎啉； (3S，5S)-4-(4-溴-3-氟苯甲基）_3 5_二甲基嗎啉； (R) -4-(4-溴-3-氟笨甲基）_3_甲基嗎啉； (3S，5S)-4-(4-氣-2,5-二氟苯甲基）_3,5_二甲基嗎啉； (S) -4-(4-溴-2,5-二氟苯甲基）_3_甲基嗎啉； 4-溴-2,5-二氟苯曱醛； 4-(4 -氣-2,5-一氟苯甲基）嗎琳； 1-(4-氯-3-氟苯甲基）_4,4_二氟哌啶； 4_(4-氯-3-氟苯曱基）嗎啉； 4-(4-溴-3-氟苯甲基）嗎啉； 147407.doc •14- 201040169 4-(4-溴_2,5-二鼠苯甲基）嗎琳；或其鹽。該等化合物適用於製備根據式⑴化合物之方法之中間物。以下所列係說明本發明之專利說明書及專利申請範圍中所採用各種術語之定義。 Ο 〇式⑴化合物可呈立體異構形式存在。因此，所有對映體、非對映異構體、外消旋體及其混合物均包含於本發明 fe圍内。各種光學異構體可藉由使用習知技術（例如分步結晶或HPLC)分離化合物之立體異構混合物而單離。或者，各種光學異構體可直接使用光學活性起始材料製備。本發明係關於具有GSK3抑制活性之式⑴化合物之任一及所有立體異構及互變異構形式。式（I)化合物之定義亦包含溶劑化物或其鹽之溶劑化物。本發明另包括本發明之同位素標記化合物。「同位素」或「放射性標記」化合物係本發明之化合物，其中一或多個原子被具有原子質量或質量數不同於一般天然發現（亦即天然出現）之原子質量或質量數之原子替換或取代。併入本發明化合物中之適宜安定或放射性核種包括（但不限於）H(亦寫為D，氘）、3h(亦寫為τ，氚）、"c、nc、"c、

N 15

N Ο 7〇、18o 18

F 35, s、36a、82Br、75Br 6Br、77Br、123I、124τ、125τ β 131t v , « 1 1及 1。併入本發明放射性標記化合物中之放射性核種係視該放射性標記化合物之特定應用而定。例如，用於活體外受體標記及競爭性分析法時了你入 3χχ、82n 1^1. .. Ί < 併入 3H、14c、82Br、125L 用於放射性顯影時，11C、 5Br、76Br或77Br—般最適用 4或35S之化合物一般最適用 18F 、 125I 、 123I 、 124工、131工 147407.doc 15 201040169 應瞭解「放射性標記化合物」係已併入至少一種放射性核種之化合物。於一些實施例中，放射性核種係選自由 3H、14C、1251、及 82Βγ 組成之群。本發明亦係關於如上文所定義之式（I)化合物之用途。用於醫藥調配物中之鹽類可係醫藥可接受鹽，但其他鹽類可用於製造式（I)化合物。醫藥調配物根據本發明之一態樣，可提供一種用於治療肝糖合成酶激酶-3相關疾病之醫藥調配物，其包含式⑴化合物或其醫藥可接受鹽。根據本發明之調配物可呈適用於經口投藥形式例如以錠劑、丸劑、糖漿、粉劑、顆粒或膠囊之形式；以無菌溶液、懸浮液或乳液之形式用於非腸道注射（包括經靜脈内、皮下、肌内、血管内或輪注）；以軟膏、貼片之形式用於外部投藥；以栓劑之形式用於直腸投藥腔或於骨腔中用於局部投藥。或乳膏及於體調藥，，備0 配物可呈適宜形式，例如以、狄W <形式用於經口我以無菌溶液或懸浮液之形式用扣孓非腸道注射。通常而上述調配物可採用醫藥載體赤接歧双髖4稀釋劑依習知方式製 ..... 卞叫閗置之开4或，社,，射溶液。錠劑可額外包含崩解劑及/或可包覆劑:戈可腸溶包衣或包覆諸如㈣丙基如可利二-… m难京之包衣劑）。式⑴化合物或其醫藥可接受鹽於治療哺乳動物（包括 147407.doc -16- 201040169 類）之適宜每曰劑量為每次經口投與約〇〇1至25〇瓜^“體重，及非經腸投藥約0‘001至250 mg/kg體重。活性成份之一般每日劑量在寬廣範圍内變化，且視諸如相關適應症、 &藥途徑、患者之年齡、重量及性別之各種因素而定且可由醫師決定。化合物或其醫藥可接受鹽可單獨使用，但一般係以邊藥調配物之形式投藥，其中活性成份係與醫藥可接受稀釋劑、賦形劑或惰性載劑結合。視投藥之模式而定，醫藥調配物可包含0·〇5至99重量％，例如G 1()至5G重量％活性成份，所有百分比係以總組合物之重量計。稀釋劑或載劑之實例包括以下成份之一或多種(但不限於）水、水性聚（乙二醇）、碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、糖 (諸如乳糖)、果膠、糊精、澱粉、黃蓍膠 '微晶纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉或可可脂。本發明進—步提供—種製備本發”藥調配物之方法， ❹”包括將如上文所定義之式⑴化合物或其醫藥可接受鹽與醫藥可接受稀釋劑、賦形劑或惰性载劑混合。、本發明之醫藥調配物之實例係可注射溶液，其包含如上文所定義之式（I)化合物或其醫藥 ^ , 罘J接受鹽，及無菌水及若需要時使用鹼或酸將最終調配物 <pH調至約4至9範圍’尤其約pH5 ’及視需要使用界面活 … m劑以助於溶解。適宜鹼係虱氧化鈉。適宜酸係鹽酸。根據本發明可使用之具有足夠 „ ^ r生之式（Ό化合物之適宜醫樂可接受鹽係（例如）酸加成鹽且例如堵如鹽酸、氫溴酸 147407.doc •17- 201040169 或硫酸之無機酸’或諸如琥珀酸、檸檬酸、富馬酸、笨甲酸、肉桂酸、甲烷磺酸、卜羥基_2_萘酸及2_萘磺酸（其他實例可參見Berge等人，J. Pharm· Sci. 1977, 66, 1-19，及/ 或 Handbook of Pharmaceutical salts: Properties, Selection and Use by Stahl and Wermuth(Wiley-VCH, 2002.) 〇此外，具有足夠酸性之本發明化合物之適宜醫藥可接受鹽係鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽或與可提供生理可接受陽離子之有機驗形成之鹽。應瞭解式（I)之某些化合物可呈溶劑化物，例如水合物，以及非溶劑化物之形式存在。應理解本發明涵蓋所有諸等具有GSK3抑制活性之溶劑化物形式。醫學用途已發現本發明中所定義之式⑴化合物較佳適於抑制肝糖合成酶激酶-3(GSK3)。因此，期望本發明化合物可用於預防及/或治療肝糖合成酶激酶_3活性相關疾病，亦即該化合物可於在需求此預防及/或治療之哺乳動物(包括中：生抑制GSK3之作用。 GSK3高度表現在中樞及週邊神經系統及其他組織中。因此，預期本發明之化合物極適用於預防及/或及週邊神經系統t肝糖合成酶激酶_3相關疾病。特定言去障^月之化°物預期可適用於預防及/或治療伴有認知障礙之疾病或具有認知缺陷之適應症，諸如·療呆，包括早老性癌呆（早期發作阿猫父.合m ^ 乍玎爾次海默氏病）；老年性癡早（阿爾茨海默氏類型癡呆）；阿爾+〜“ 干注礙呆(阿仃爾次海默氏病（AD);家 147407.doc 201040169 茨海默氏病；早期阿爾茨海默氏病；阿爾茨海默氏類型之輕度至中度癡呆；延遲阿爾茨海默氏病之疾病發展；伴有神經退化之阿爾茨海默氏病，輕度認知受損（MCI);健忘型輕度認知受損（aMCI);年齡相關記憶受損（AAMI);路易體癡呆；血管性癡呆（VD) ; HIV-癡呆；AIDS癡呆综合症；AIDS-神經併發症；額顳葉型癡呆（FTD);額顳葉型癡 Ο

呆帕金森型（FTDP);拳擊員癡呆；因傳染性試劑或代謝紊亂引起之癡呆；退化性癡呆；多發性梗塞癡呆；記憶缺失，帕金森氏病認知功能；多發性硬化症認知功能；與化學療法相關之認知缺陷；精神分裂症認知缺陷（CDS);包含精神分裂症之分裂情感性精神障礙；年齡相關認知衰退 (ARCD);無癡呆認知受損（(：出〇);源於中風或腦缺血之認知缺陷；先天性及/或發育性疾病；進行性核上麻痹 (psp);肌萎縮性側索硬化症（ALS);皮質基底核退化症 (CBD);創傷性腦損傷（TBI);腦炎後帕金森氏症；皮克病，尼曼-皮克病；唐氏综合症；亨廷頓氏疾病；賈庫氏症（Creuztfeld-Jacob、disease);普利昂蛋白病症；多發性硬化症（MS);運動神經元疾病（MND);帕金森氏症（pD广 β-澱粉樣蛋白血管病；腦澱粉樣蛋白血管病；三核苷酸重複型疾病；脊髓性肌肉萎縮症；弗里德賴希氏共濟失調；視神經脊髓炎；多發㈣、統萎縮症；傳純料狀腦病；注意力缺失症（ADD);注意力缺陷過動病症（adhd);包含急性躁狂症、雙極抑鬱症、雙極持續症之雙極症⑺D);包含抑鬱、重症抑鬱、情緒穩定、輕#症之重症抑鬱障礙 147407.doc -19- 201040169 (MDD)，辨別缺陷症；失語症；動作缺陷症；情感冷漠。本發明之一實施例係關於阿爾茨海默氏病之預防及/或治療’尤其用於延遲阿爾茨缝氏病之疾病進展。本發明之其他實施例係關於預防及/或治療選自下列各物所組成之群的病症：注意力缺失症（ADD)、注意力缺陷過動病症（ADHD)及情感性障礙，其中情感性障礙係包含急性躁狂症、雙極抑鬱症、雙極持續症之雙極症包含抑鬱、重症抑鬱、情緒穩定之重症抑鬱障礙(mdd)，包含精神分裂症及輕鬱症之分裂情感性精神障礙。本發明化合物之其他態樣係其於治療〗型糖尿病、π型糖尿病、糖尿病神經病變；包含神經痛、傷害感受性疼痛、忮性疼痛、癌症相關疼痛、風濕性疾病相關疼痛之疼痛；禿頭症；青光眼；包含包涵體肌炎（ΙΒΜ)之發炎性疾病，· 尋常天疮瘡之用途。本發明化合物之另一態樣係其於治療良性或惡性腫瘤之用途，其包括非實體腫瘤，諸如包含MLL白血病之白血病；包括多發性骨髓瘤之骨髓瘤；或淋巴瘤；及實體腫瘤，例如膽管、骨路、膀胱、腦/CNS、乳房、結腸直腸、子宮内膜、胃、頭及頸、肝、肺（尤其非小細胞肺）、神經元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、腎、皮膚、睾丸、曱狀腺、子宮及外陰癌。本發明化合物另一態樣係其於治療特定癌症（例如乳房、岫列腺、肺癌、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、脊索瘤、骨骼之惡性纖維組織細胞瘤、骨 147407.doc -20- 201040169 骼纖維肉瘤、癌症引起之骨骼疾病與醫源性骨骼疾病）之骨骼相關效應之用途。本發明化合物之另一態樣係其於治療骨質疏鬆症(遺傳、醫源性或因衰老/荷目蒙失衡引起）、目受傷或外科手術之骨折修復、導致骨絡流失之慢性發炎疾病（諸如風濕性關節炎)、導致骨路損傷之癌症(諸如乳房、前列腺及肺癌）、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、尤因氏肉瘤、軟骨肉瘤、 #索瘤、骨骼惡性纖維組織細胞瘤、骨骼纖維肉瘤、癌症弓丨起之骨路疾病、醫源性骨絡疾病、良性骨路疾病及佩吉特氏病帛於促進骨路形成，增加骨絡礦物質密度，降低月折比例及/或增加骨折疾癒速度，增加網狀骨形成及/或新骨形成。本發明亦係關於以本發明所定義之式⑴化合物於製造預防及/或治療肝糖合成酶激酶_3相關疾病的藥物上之用途。本毛月亦提（、種治療及/或預防肝糖合成酶激酶-3相關〇纟病之方法，其包括向需要此治療及/或預防之哺乳動物 ΐτ3人類）投與治療有效量如本發明所定義之式⑴化合物0 療! 生或預+防性治療特定疾病時所需劑量可視接受治療投藥路徑及所治療疾病之嚴重程度而作必要變化0 就獸醫應用而言，不鬥以變化，且視諸如二伤之用量、劑型及藥劑劑量可 ^ 所/α療動物之各別需求之各種因素而 U7407.doc •21- 201040169 本發明專利說明書中，術語「療法」或「治療」亦包括「預防」，除非另有特定指示。術語「治療性」及「醫療性」應作相應解釋。本發明專利說明書内容中，術語「失調」亦包含「疾病」，除非另有特定指示。

本發明之另一態樣中，將如本文所定義之式（I)化合物或其醫藥可接受鹽，或包含由此式（I)化合物組成之醫藥組合物或調配物採用併行、同時、依序、分開或聯合之方式，與另一醫藥活性化合物或選自下列之化合物一起投藥：

(i)抗抑鬱藥，諸如阿戈美拉汀（agomelatine)、阿密曲替林（amitriptyline)、阿莫沙平（amoxapine)、布普品 (bupropion)、西酜普蘭（citalopram)、氣米帕明 (clomipramine)、地昔帕明（desipramine)、多塞平度洛西汀 (doxepin duloxetine)、厄爾蘇南（elzasonan)、艾司西 S太普蘭（escitalopram)、說伏沙明（fluvoxamine)、氟西汀 (fluoxetine)、鴦尾銅（gepirone)、米帕明（imipramir>e)、伊沙匹隆（ipsapirone)、馬普替林（maprotiline) '去甲替林 (nortriptyline)、納發諾頓（nefazodone)、帕羅西汀 (paroxetine)、苯乙肼（phenelzine)、普羅替林 (protriptyline)、雷米替胺（ramelteon)、瑞波西汀 (reboxetine)、羅巴佐坦（robalzotan)、舍曲林（sertraline)、西布曲明（sibutramine)、赛恩西汀（thionisoxetine)、反苯環丙胺（tranylcypromaine)、曲0坐酮（trazodone)、三甲丙咪嗓（trimipramine)、文拉法辛（venlafaxine);及其同等物及 147407.doc -22- 201040169 醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (ii) 非典型性抗精神病藥，包括（例如）樂思康 (quetiapine);及其醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (iii) 抗精神病藥，包括（例如）阿米舒比利（amisulpride)、 Ο

阿立派0坐（aripiprazole)、阿森平（asenapine)、苯斯索克思迪爾（benzisoxidil)、拜福普魯諾克斯（bifeprunox)、卡巴西平（carbamazepine)、氯氮平（clozapine)、氯丙噪 (chlorpromazine)、達苯紮平（debenzapine)、雙丙戊酸 (divalproex)、度洛西汀（duloxetine)、右佐匹克隆 (eszopiclone)、氟 β底咬醇（haloperidol)、伊潘立酮 (iloperidone)、拉莫三嗪（lamotrigine)、洛沙平 (loxapine)、美索噠 °秦(mesoridazine)、金菩薩 (olanzapine)、帕潘立鲷(paliperidone) 、 0底拉平 (perlapine)、經 0底氯丙唤（perphenazine)、啡嗟嗪 (phenothiazine)、苯基丁基娘咬（phenylbutylpiperidine)、 0底迷清（pimozide)、普魯氣嗪（prochlorperazine)、理思必妥（risperidone)、色0引0朵（sertindole)、舒復寧（sulpiride)、舒普羅酮（suproclone)、舒立克隆（suriclone)、硫利達嗪 (thioridazine)、三氟拉嗪（trifluoperazine)、曲美托唤 (trimetozine)、丙戊酸鹽（valproate) _、丙戊酸（valproic acid)、佐匹克隆（zopiclone)、佐替平（zotepine)、齊拉西酮 (ziprasidone);及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物 (群）。 (iv) 抗焦慮藥，包括（例如）阿奈螺酮（alnespirone)、阿紮 147407.doc -23· 201040169 派隆（azapirones)、苯二氮平（benzodiazepines)、巴比妥類 (barbiturates)，諸如阿地嗤侖（adinazolam)、阿普。坐侖 (alprazolam)、哈拉西泮（balezepam)、苯他西泮 (bentazepam)、溴西泮（bromazepam)、溴替。坐侖 (brotizolam) 、丁螺環酮（buspirone)、氣硝西泮 (clonazepam)、氣氮卓（clorazepate)、利眠寧 (chlordiazepoxide)、環丙西泮（cyprazepam)、地西泮 (diazepam)、苯海拉明（diphenhydramine)、艾司唾命 (estazolam)、氯苯咪脲（fenobam)、氟石肖西泮 (flunitrazepam)、敗西泮（flurazepam)、富麓西泮 (fosazepam)、蘿拉西泮（lorazepam)、氣甲西泮 (lormetazepam)、甲丙胺 S旨（meprobamate)、σ米達 °坐侖 (midazolam)、硝西泮（nitrazepam)、奥沙西泮（oxazepam)、普拉西泮（prazepam)、誇西泮（quazepam)、瑞氣西泮 (reclazepam)、曲卡0坐醋（tracazolate)、曲匹泮（trepipam)、替馬西泮（temazepam)、三β坐余（triazolam)、烏達西泮 (uldazepam)、唑拉西泮（zolazepam)及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (v)抗痙攣藥’包括（例如）卡馬西平（carbamazepine)、氯硝西泮（clonazepam) ' 乙琥胺（eth〇Suximide)、非胺脂 (felbamate) 構苯妥英（fosphenytoin)、加巴潘汀 (gabapentin)、拉科酿胺（iacosarnide)、拉莫三0秦 (lamotrogine)、左乙拉西坦（ievetiracetam)、奥凯西平 (oxcarbazepine)、苯巴比妥（phen〇barbital)、苯妥英 147407.doc • 24 - 201040169 (phenytoin)、普加巴林（pregabaline)、盧非醯胺 (rufinamide)、托0比酯（topiramate)、丙戊酸鹽（valproate)、胺己稀酸（vigabatrine)、嗤尼沙胺（zonisamide);及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (vi) 阿爾茨海默氏療法，包括（例如）多奈哌齊 (donepezil)、利瓦斯的明（rivastigmine)、加蘭他敏 (galantamine)、美金剛（memantine);及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (vii) 帕金森氏症療法，包括（例如）左旋多巴（levodopa); 多巴胺激動劑，諸如阿樸嗎啡（apomorphine)、溴隱亭 (bromocriptine)、卡麥角林（cabergoline)、普拉克索 (pramipexol)、羅匹尼祿（ropinirole)、及羅替戈汀 (rotigotine);諸如司林吉林（selegeline)及雷沙吉蘭 (rasagiline)之MAO-B抑制劑；及諸如托卡朋（tolcapone)及恩他卡朋（entacapone)之其他多巴胺能類；A-2抑制劑；多巴胺再吸收抑制劑；NMDA拮抗劑；尼古丁激動劑；及神經元型一氧化氮合成酶之抑制劑；及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (viii) 偏頭痛療法，包括（例如）阿莫曲坦（almotriptan)、阿曼他丁（amantadine)、溴隱亭（bromocriptine)、布他比妥 (butalbital)、卡麥角林（cabergoline)、氯酸·比林 (dichloralphenazone)、二氫麥角胺（dihydroergotamine)、依來曲普坦（eletriptan)、夫羅曲坦（frovatriptan)、麥角乙腺（lisuride)、那拉曲坦（naratriptan)、培高利特 147407.doc -25· 201040169 (pergolide)、苯噻啶（piz〇Uphen)、普拉克索 (pramipexole)利紮曲坦（rizatriptan)、羅匹尼祿 (r〇pinir〇le)、舒馬曲坦（sumatriptan)、佐米曲普坦 (zolmitriptan)，及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (IX) 中風療法，包括（例如）利用如阿克伐司（activase)與去胺普酶（desmoteplase)、阿昔單抗（abciximab)、尼可林 (citicolme)氯 °比格雷（cl〇pidogrel)、依非巴特 (eptifibatide)、米諾環素（min〇cycHne)之溶企栓劑療法；及其同專物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (X) 尿失τκ療法’包括（例如）達非那新（darafenacjn)、黃嗣派醋（falvoxate)、奥昔布寧（〇xybutynin)、丙哌維林 (propiverine) 羅巴佐坦（robalzotan)、索非那新 (solifenacin)、托特羅定（t〇lter〇dine);及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (XI) 神經病變性疼痛療法，包括利多卡因（lid〇cain)、辣椒素（capsaicin)，及抗痙攣藥，諸如加巴潘汀 (gabapentin)、普瑞巴林（pregabaHn)，及抗抑鬱藥，諸如度洛西’丁（duloxetine)、文法拉辛（veniafaxine)、阿密曲替林（amitriptyline)、乳米帕明（ki〇mipramine);及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。

On)傷害感受性疼痛療法，包括撲熱息痛 (paracetamol)、非類固醇消炎藥（NSAIDS)及選擇性環氧化酶2抑制劑（coxibs) ’諸如塞來昔布（celec〇xib)、依他昔布 147407.doc -26- 201040169

Ο (etoricoxib)、羅美昔布（lumiracoxib)、伐地昔布 (valdecoxib)、帕瑞昔布（parecoxib)、雙氯芬酸 (diclofenac)、環氧洛芬（loxoprofen)、奈普生（naproxen)、酮基布洛芬（ketoprofen)、布洛芬（ibuprofen)、萘丁美酮 (nabumeton)、美儂西康（meloxicam)、0比羅昔康（piroxicam) 及類鴆片類，諸如嗎啡（morphine)、經可待嗣 (oxycodone) 、丁丙諾啡（buprenorfin)、特拉瑪竇 (tramadol);及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物 (群）。 (xiii)失眠療法，包括（例如）阿戈美拉汀（agomelatine)、阿洛巴比妥（allobarbital)、阿洛米S同（alonimid)、異戊巴比妥（amobarbital)、太息定（benzoctamine)、布塔巴比妥 (butabarbital)、乙甲戊醯腺（capuride)、氯駿（chloral)、氣 0底_ (cloperidone)、氣乙雙醋（clorethate)、環庚B比喧醇 (dexclamol)、乙氣維諾（ethchlorvynol)、依託0米醋 (etomidate)、格魯米特（glutethimide)、哈拉西泮 (halazepam)、經 °秦(hydroxyzine)、氯安眠酮 (mecloqualone)、退黑激素（melatonin)、甲基苯巴比妥 (mephobarbital)、安眠酮（methaqualone)、0米達氟 (midaflur)、尼索氨醋（nisobamate) ' 戊巴比妥 (pentobarbital)、苯巴比妥（phenobarbital)、普洛福 (propofol)、雷美替胺（ramelteon) 、各來米特 (roletamide)、三氣福司（triclofos)、西可巴比妥 (secobarbital)、紮來普隆（zaleplon)、°坐 °比坦（zolpidem); 147407.doc -27- 201040169 及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物（群）。 (xiv)情緒穩定劑，包括（例如）卡馬西平 (carbamazepine)、雙丙戊酸（divalproex)、加巴喷丁 (gabapentin)、樂命達（lamotrigine)、鐘鹽（lithium)、金菩薩（olanzapine)、樂思康（quetiapine)、丙戊酸鹽 (valproate)、丙戊酸（valproic acid) 維拉帕米 (verapamil);及其同等物及醫藥活性異構體（群）及代謝物 (群）。諸等組合產品採用在本文所描述劑量範圍内之本發明化合物及在核准劑量及/或公開參考文獻所描述之劑量範圍内之其他醫藥活性化合物。於本發明之一實施例中，該組合包括如以下定義之化合物（a)及（b)之群： (a)第一治療劑，其係GSK3抑制劑及（b)第二治療劑，其係選自以下之抗安定藥： (a) N-(2,5-二氟-4-(嗎琳基甲基）苯基）-5-氟-4-(2-曱基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺及（b)樂思康 (quetiapine) ° (a)第一治療劑’其係GSK3抑制劑及（b)第二治療劑，其係選自以下之α7-菸酸激動劑： (a) Ν-(2,5 -二氟-4-(嗎琳基甲基）苯基）-5-氟- 4-(2-甲基-1-(四氫-2Η-旅喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺及（b) (r)-5- (5-(嗎啉基曱基）呋喃_3_基）_3H-1，-氮雜螺[呋喃并[2 3_b]嘧啶-2,3'-雙環[2.2_2]辛烷]。 147407.doc -28- 201040169 U) N-(2,5-二氟_4·(嗎啉基曱基）苯基）-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-派喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘴11 定-2-胺及（b)((-)-螺 [1-氮雜雙環[2.2.2]辛烷-3,2，-(2',3'-二氫呋喃并[2,3-B]嘧啶)]。該組合可採用任何α-7激動劑，包括（但不限於）彼等揭示於美國專利第6，11〇,914號及第6,569,865號者；及申請中之美國公開案第 2008-0139600 (Al) 、W096/06098、 WO99/03859、WO00/42044、W001/060821、W002/096912、 W003/087103 、 W02005/030777 、W02005/030778 及 WO2007/133155 號。 (a)第一治療劑，其係GSK3抑制劑及（b)第二治療劑，其係選自以下之α4β2-神經元菸酸激動劑： (a) Ν-(2,5-二氟-4-(嗎啉基甲基）苯基）-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2Η-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺及（b) (2S)-(4E)-N-曱基_5-[3-(5-異丙基°比啶）基]-4-戊烯-2-胺； (a) N-(2,5-二氟-4-(嗎啉基甲基）苯基）-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-旅鳴-4-基）-1Η-咪吐-5-基）續咬-2-胺及（b) 3-(5· 氯-2-呋喃曱醯基）-3,7-二氮雜雙環[3.3.0]辛烷；可用於本發明組合物中之α4β2-神經元菸酸激動劑係彼等描述於 US 6,603,011、US 6,958,399 及 WO/2008/057938 中者，其等皆係以引用之方式併入本文中。特定菸酸激動劑係化合物Ν-甲基-5-[3-(5-異丙基吡啶）基]_4·戊烯_2_胺、 (4Ε)-Ν-甲基- 5-[3-(5 -異丙基°比咬）基]_4-戊稀_2-胺及（2S)-(4Ε)-Ν-曱基_5-[3-(5_異丙基》比咬）基]_4_戊浠_2_胺、3-(5- 147407.doc -29· 201040169 氣-2-咬嗔甲酿基）_3,7_二氮雜雙環[3 3〇]辛烷、先前所提及化合物之任何代謝物或前藥及醫藥可接受鹽，溶劑化物或溶劑化鹽類。此等化合物之製備述於該等美國專利中。 0)第一治療劑，其係GSK3抑制劑及（b)第二治療劑，其係BACE抑制劑。 Ο)第一治療劑，其係GSK3抑制劑N(2,5_二氟_4_(嗎啉基甲基）苯基）_5_氟_心(2_曱基]_(四氫】_派喃冰基）咪唑-5-基）鳴啶_2_胺及⑻第二治療劑，其係以⑶抑制劑0 可用於本發明組合中之藥物係彼等降低或阻斷B ACE活陧者’其因此降低腦中Αβ含量及Ap片段含量並因此減慢形成澱粉樣蛋白斑塊及AD進展或其他涉及八^或其片段沉積之疾病。 / (a)第一治療劑，其係GSK3抑制劑及（b)第二治療劑，其係H3枯抗劑。 ⑷第一治療齊卜其係GSK3抑制劑N_(2,5.二氣_4_(嗎琳基甲基）苯基）-5-氟-4-(2-甲基小（四氫_2]^底喃_4•基）_ih_ 咪唾'5-基）㈣_2_胺及⑻第二治療劑，其係出抬抗劑。已顯示組織胺H3受體可調控促認知神經遞質（諸如組織胺及乙醯膽鹼）之釋放。一些組織胺H3配位體，諸如例如·組織胺H3受體拮抗劑或反向激動劑可增加此等神經遞質於大腦中之釋放。此暗示組織細受體反向激動劑與拮抗劑可用於改善與認知缺陷（諸如AD)有關之神經退化性疾病0 147407.doc •30· 201040169 (a)第一治療劑，其係GSK3抑制劑及（b)第二治療劑，其係Αβ42抑制劑。 ” ⑷第一治療劑，其係GSK3抑制劑Ν-(2 5--翁^ ν，一軋-4-(嗎啉基甲基）苯基）-5-氟-4-(2-曱基-1-(四氫-2Η-哌喃基）_1Η 咪唑-5_基）嘧啶-2-胺及（b)第二治療劑，其係八042抑1制劑。可用於本發明組合物中之Αβ42抑制劑係彼等影響分泌酶所媒介ΑΡΡ(Αβ澱粉樣蛋白前驅體蛋白）發展且因此降低 Αβ42與Αβ40胜肽者。〇 (a)第一治療劑，其係GSK3抑制劑及（b)第二治療劑其係5-HT1A&/或5-11!'18受體之部份激動劑或拮抗劑。 (a)第一治療劑，其係GSK3抑制劑Ν·(2,5_二氟·4_(嗎啉基甲基）苯基>5-氟-4-(2-曱基-ΐ_(四氫_2Η_哌喃_4_基）咪唑-5-基）嘧啶-2·胺及（b)第二治療劑，其係5·ΗΤια&/或5_ ΗΤ1Β受體之部份激動劑或拮抗劑。 54丁^及/或5-11丁^受體之部份激動劑或拮抗劑應可用於〇預防及/或治療與5_HTlA及/或5-ΗΤ1Β受體所媒介5_ΗΤ信號傳導紊亂有關之疾病，亦即諸等可用於在需要此預防及/ 或治療之哺乳動物（包括人類）中提高乙醯膽鹼、谷胺酸鹽、Α清素含量之化合物。特定言之，5_ΗΤια及/或π。受體之部份激動劑或拮抗劑適用於預防及/或治療與認知障礙及早期失智狀態之疾病，尤其癡呆，阿爾茨海默氏病 (AD)。第一治療劑（a)以及第二治療劑可呈游離鹼或其醫藥可接受鹽之形式。 I47407.doc -31 - 201040169 製備方法藥可、R2 本發明之另一態樣提供^ ^ 接受越種裏備式（I)化合物或其醫 3風之方法，該方法（其中除非另有指明，否則r1 及R係如式⑴中所定義)包括：方法a)令式（II)嘧啶：

L (Π) 其中L係可置換基團；與式（111)之苯胺反應：

(III) 或方法b)令式（IV)之嘧啶：

(IV) 與式（V)之化合物反應： 147407.doc •32· 201040169

(V) 其中Y係可置換基團；且其後若須要： 0將式（I)化合物轉化為另一式（I)化合物； i〇移除任何保護基；且〇 L係可置換基團，l之適宜定義係（例如）齒素或磺醯基氧基’例如氣、溴、甲烷磺醯基氧基或甲苯-4-磺醯基氧基。 γ係可置換基團’ Y之適宜定義係（例如）鹵素或磺醯基氧基，例如氯、溴、碘或三氟曱烷磺醯基氧基。較佳γ係溴或氣。上述反應之特定反應條件如下：方法a)在標準Buchwald-Hartwig條件下（例如參見j. Am Q Chem. Soc.5 118, 7215; J. Am. Chem. Soc., 119, 8451; J.

Am. Chem. Soc., 125, 6653; J. 〇rg. Chem., 62，1568及 6066)，例如在醋酸鈀或丨，广雙（二笨基膦基）二茂鐵二氣鈀（Π)之存在下，在適宜溶劑例如芳香族溶劑（諸如甲笨、

一起與適宜鹼，例如無機鹼（諸如碳酸铯）或有機鹼（諸如第三丁適宜驗，三丁醇 147407.doc -33. 201040169 鉀）反應。 2007/040440中描述之式（II)咳咬（其中L係氣）可根據W〇步驟製備。式⑽苯胺係、市f可購化合物，或係文獻中已知者，或可依相關技術已知之標準方法製備。方法b)在方法a所描述之標準⑽補條件下，由式化合物與式（V)胺一起反應。式（IV)嘧啶之合成法述於w〇 2007/04〇440中。式(V)化合物係市售可購化合物，或文獻中已知者或可依相關技術已知之標準方法製備。起始材料之製備 ;實例之起始材料係市售可購或由已知材料依標準方法製備。5_氟作甲基-W四氫-2H-哌“基 5-基）t定-2-胺可如彻2〇〇7/〇4〇44〇實心⑷所描述製備。例如’以下反應係例示性’但非限於實例中所使用之一些起始材料。一方法1 (S)-4-(4-溴-3-氟苯甲基）_3_甲基嗎啉

將（S)-3-甲基嗎琳（jig mg，〇86 mm(^)、4溴_3_氟苯甲醛（175 mg，0.86 mm〇1)、三乙胺（132 w，〇 % 麗叫及三 147407.doc -34· 201040169 乙酿氧基爛氫化納（274 mg，1 ·29 mmol)溶解於二氣乙燒中 (2.5 ml)。在周溫下’於氬氣氛圍下攪拌24小時。添加鹽酸（1M)直至pH 1-2。利用二氣曱烷洗滌混合物。利用KOH (1M，水溶液）使水相為鹼性，且利用二氯甲烷萃取之。於真空下，經過NajO4乾燥合併之有機相並濃縮，得到（s)_ 4-(4-溴-3-氟苯甲基）-3-甲基嗎淋（220 mg，89 〇/〇)。 !H NMR (500 MHz 5 DMSO-d6) δ ppm 7.64 (t > 1 Η) 7.31 (dd，1 Η) 7.13 (dd，1 Η) 3.92 (m，1 Η) 3.62 (m，2 Η) 3.43 (td，1 Η) 3.15 (m ’ 2 Η) 2.39 (ddd，1 Η) 2.11 (ddd， 1 Η) 0.97 (d，3 H)。 MS (ES+) m/z 288 (Μ+Η)+。方法2 (3S，5S)-4-(4-溴-3·氟苯甲基）-3,5-二甲基嗎啉

將 4-溴-3-氟苯甲經（0.250 g，1.23 mmol)與（3S,5S)-3,5-一甲基嗎淋（〇_205 g’ 1.35 mmol)溶解於二氯甲烧（i〇 mL) 中。添加三乙醯氧基硼氫化鈉（0.3 78 g，1.79 mmol)並於氬氛圍下’在RT下’攪拌混合物20小時。利用二氣曱烷稀釋混合物並利用NaHC〇3(水溶液）洗滌《乾燥（MgS04)並蒸發有機相。藉由矽石管柱層析，以氨之甲醇溶液及二氣曱烷梯度溶離純化殘餘物。集合含有產物之溶離份並蒸發，得到液體形式之（3S，5S)-4-(4-溴-3 -氟苯甲基）·3,5-二甲基嗎琳 147407.doc -35- 201040169 (0.113 g，30 %)。 4 NMR (500 MHz，氣仿-d) δ ppm 7.46 (m，1 Η) 7.21 (dd，1 H) 7.04 (m，1 H) 3.88 (d，1 H) 3.69 (dd，2 H) 3.38 (m，3 H) 2.81 (m，2 H) 0.99 (d，6 H)。 MS (ES+) m/z 302 (M+H)+。方法3 (R)-4-(4-溴-3-氟苯甲基）-3-甲基嗎啉

根據方法1所描述之步驟製備標題化合物，得到液體形式之（R)-4-(4-溴-3-氟苯甲基）-3-甲基嗎啉（200 mg、81 %)。 !H NMR (500 MHz > DMSO-d6) δ ppm 7.64 (t > 1 Η) 7.31 (dd，1 Η) 7.13 (dd，1 Η) 3.92 (d，1 Η) 3·62 (dd，2 Η) 3.43 (td，1 Η) 3.15 (m，2 Η) 2.39 (m，1 Η) 2.11 (ddd，1 Η) 0.97 (d，3 Η)。 MS (ES + ) m/z 288 (Μ+Η)+。方法4 (3S，5S)-4-(4-氣-2,5-二氟苯甲基）-3,5-二甲基嗎啉

147407.doc -36- 201040169 將氣2,5 一氣苯甲搭（〇177 gj 〇瓜则!）與（3s，5s)_ 3,5-二曱基嗎琳（0·Ι67 g，1 1〇咖〇1)溶解於二氯甲烧⑽ mL)中。添加三乙酸氧基硼氯化納（〇3〇7 §，i45顏⑷並於氬氛圍T在RT下，搜拌混合物2〇小時。以二氣甲炫稀釋混合物並以NaHC〇3(水溶液）洗滌❶乾燥（MgS〇4)並蒸發有機相。H切石管柱層析，以氨之甲醇溶液及二氣甲院梯度溶離純化殘餘物。集合並蒸發含有產物之溶離份得到液體形式之（3S，5S)-4-(4-氣-2,5-二氟苯甲基）_3,5-二甲基嗎啉（0.118呂，43°/〇)。 H NMR (400 MHz，氣仿 _d) δ ppm 7.39 (dd，1 H) 7.11 (m ’ 1 H) 3.80 (d ’ 1 H) 3.71 (dd，2 H) 3.53 (d，1 H) 3.40 (dd，2 H) 2.85 (m，2 H) 1.01 (d，6 H)。 MS (ES+) m/z 276 (M+H)+。方法5 (S)-4-(4-溪-2,5-二氣苯甲基）-3-甲基鳴琳

F

將 4-漠-2,5-二氟J 苯甲酿（331 mg，1.5 mmol)、（S)-3 -甲基嗎淋鹽酸鹽（206 mg，1.50 mmol)及三乙酿氧基蝴氫化納 (461 mg，2.18 mmol)混合於二氯乙烧（5 mL)中。添加三乙胺（0.23 0 mL，1.65 mmol)並於RT下，氬氛圍下授拌所得混合物24小時。添加NaHC03 (25 mL)並以二氣曱烷（3x25 147407.doc -37· 201040169 mL)萃取混合物。通過MgS〇4乾燦合併之有機萃取物，過濾並濃縮，得到固體形式之（8)_4_(4_溴_2,5_二氟苯甲基）_ 3- 甲基嗎啉（432 mg，94 %)。 4 NMR (500 MHz，氣仿-d) δ ppm 7.22_7·32 (m，2 H，與殘餘 CHC13 重疊）3.88((1，1扣 3 69_3.78(111，211) 3 58_ 3.65 (m « 1 Η) 3.26-3.34 (m > 2 Η) 2.58-2.64 (m » 1 Η) 2.54 (d，1 Η) 2.25-2.33 (m，1 Η) 1.05 (d，3 Η)。 MS (ES+) m/z 306 (Μ+Η). 〇方法6 4- 溴-2,5-二氟苯甲醛

於-40°C下，將氣化異丙基鎂-氯化鋰錯合物（29.1 mL， 37.81 mmol)逐滴加入溶於四氫呋喃（80 mL)中之1,4-二溴― 2,5-二氟苯（10.28 g，37.81 mmol)。於-40°C 下 1小時後，添加N，N-二甲基甲醯胺（58 mL，756 mmol)並於-4(TC下攪拌混合物30分鐘。添加NH4C1(2M，水溶液，100 mL)並以乙酸乙酯萃取。以MgS04乾燥有機相並濃縮，得到固體形式之 4-溴-2,5-二氟苯甲醛（6.20 g，74 %)。 'H NMR (500 MHz，氯仿-d) δ ppm 10.28 (d，1 H) 7.61 (dd，1 Η) 7.48 (dd，1 H)。 147407.doc 38 - 201040169 方法7 4-(4-氣-2,5-二氟苯甲基）嗎啉

F

F 將 4-氣-2,5 -二氟苯甲酸（1 g’ 5.66 mmol)、嗎淋（0.490 ml，5.66 mmol)與三乙醯氧基硼氫化鈉（1741 g，821 mmol)混合於二氣乙烷（17 ml)中。於周溫下，氬氛圍下攪拌混合物3天。添加NaHC03(飽和水溶液，25 ml)。以二氣曱烷（x3)萃取混合物。於真空下經MgS〇4乾燥合併之有機相’過濾並濃縮，得到液體形式之4-(4-氯-2,5-二氣苯甲基）嗎啉（0.600 g，43 %)。 1h NMR (500 MHz，氯仿-d) δ ppm 7.27 (m，1 Η，與殘餘 CHCh重疊）7.13 (m，1 Η) 3.73 (m，4 Η) 3.52 (s，2 Η) 2.48 (m，4 H)。 MS (ES+) m/z 248 (Μ+Η)+。方法8 4-(4-氣-3-氟苯甲基）嗎啉

將 4-氣-3-氟苯甲醛（1.〇 g，6.31 mm〇l)、嗎啉（0·546 ml，6.31 mmol)與三乙醯氧基硼氫化鈉（1 938 g，914 147407.doc •39- 201040169 mmol)混合於二氣乙烷（19 ml)中並於周溫下，氩氛圍下授摔反應整伐·。添加1M HC1(水溶液’ 25 ml)。利用二氣甲烧（X4)萃取混合物。藉由添加KOH (固體）將pH調至約12。利用二氣甲烧（x4)萃取混合物。於真空下，通過1^^〇4乾無合併之有機相，過渡並濃縮，得到液體形式之4 _(4 _氣_ 3- 氟苯曱基）嗎啉（0.875 g，60。/〇)。 NMR (500 MHz，氯仿-d) δ ppm 7.50_7 54 (m，！ H) 7.54-7.59 (m，2 Η) 4.28-4.36 (m，2 Η) 4.09-4.15 (m，2 Η) 3.95-4.01 (m，2 Η) 3.33 (d ’ 2 H)2.80-2.91 (m，2 H)。 MS (ES+) m/z 230 (M+H)+。方法9 4- (4-溪-3 -氟苯甲基）嗎淋

將4-溴-3-氟苯甲醛（4.69 g，23.10 mmol)溶解於脫氣之二氣乙烷（40 mL)中，並於氮氣下攪拌。加入嗎啉（2.〇15 mL ’ 23.10 mm〇i)，接著逐份添加三乙醯氧基硼氫化鈉 (6.37 g，30.03 mmol)。整夜攪拌反應。添加飽和 NaHC〇3(水溶液）。分離相，並利用2MHC1(水溶液）洗滌有機相。有固體於分離漏斗中沉澱。過濾分離固體。組合水相與固體’並添加二氣甲烷。添加固體Koh將pH調至約 147407.doc -40- 201040169 10。利用二氯甲烷（2x)萃取水相並乾燥有機相，濃縮，# 到固體形式之4-(4-溴-3-氟苯甲基）嗎啉（4.45 g，70 〇/〇)。 NMR (500 MHz，氣仿-d) δ ppm 7.48 (dd，1 η)， 7.16 (dd，1 H)，7.00 (dd，1 H)，3.69-3.74 (m，4 jj)， 3.45 (s，2 H)，2.44 (d，4 H)。 MS (ES+) m/z 274 (M+H)+。方法10 4-(4-溴-2,5-二氟苯甲基）嗎啉

將4-、/臭-2,5-一氟本甲搭（15.8 g，60.8 mmol)溶解於二氣甲烧（150 mL)中並於氮氣下攪拌。添加嗎啉（5 83 mL， 66.9 mmol)，接著逐份添加三乙醯氧基硼氫化鈉（16 74 g， 0 79.0 mmol)(4x)。於周溫下，攪拌混合物整夜。利用飽和

NaHC〇3(水溶液，80 mL)中止反應。分離相。將鹽酸（水溶液，2M，80 mL)加入有機相中。攪拌混合物2〇分鐘。藉由過濾、分離固體。將2M NaOH (60 mL)、H20 (60 mL)及 EtOAc (100 mL)加入固體中。攪拌混合物15分鐘。分離相並濃縮有機相，得到固體形式之標題化合物（17 8 g，6〇9 mmol，100%)。 4 NMR (500 MHz，DMs〇_d6) δ ppm 7 69 ⑽，5 83

Hz，1 Η) 7.42 (dd，1 Η) 3.53-3.60 (m，4 Η) 3.48 (d，2 Η) 147407.doc -41- 201040169 2.30-2.47 (m，4 Η)。 MS (ES+) m/z 292 (Μ+Η). 〇【實施方式】操作實例以下操作實例描述（但不限制）本發明。實例1 5-氟-Ν-(2-氟-4-(嗎啉基甲基）苯基）_4_(2-甲基(四氮-2Η-旅喃-4-基）-1Η-咪嗤-5-基）續咬-2-胺

0 將5_敦-4-(2-甲基-1-(四氫-2Η-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘴咬-2-胺（5_12 g ’ 18.46 mmol)、4-(4-漢' -3-氟苯甲基）嗎琳 (5·0ό g，18·46 mmol)、雙（二苯基膦基）二茂鐵二氯鈀（II) (〇·152 g，〇·ΐ8 mm〇i)、9,9-二甲基-4,5-雙（二苯基膦◎ 基）二苯并哌喃（0.107 g，0.18 mmol)及第三戊醇鈉（4.〇7 g 36.92 mm〇l)混合於甲苯（7〇 mL)中並脫氣。於1 下，氮氛圍下，整夜攪拌混合物。濃縮混合物。添加二氯甲院與水並分離相。濃縮有機相並藉由製備性Ηριχ純化粗產物。將集合之溶離份濃縮至一半體積。利用她。 (X2)萃取殘餘物。於真空下，在贼下濃縮合併之有機相並乾燥殘餘物24小時，得到固體形式之標題化合物μ I47407.doc •42- 201040169 g ， 61 %)。 'H NMR (500 MHz，氯仿-d) ppm 8.13 (t，1 H) ’ 7.62 (d ’ 1 H) ’ 7.21-7.10 (m，2 H)，7.04 (d，1 H)，5.22 (s ’ 1 H)，4.03 (dd，2 H)，3.73 (br. s.，4 H)，3.47 (s ’ 2 H) ’ 3.26 (t，2 H)，2.66 (s，3 H)，2.56-2.34 (m，6 H)，i.88 (dd，2 H)。 MS: m/z 471 (M+H)+。 5·氟-N-(2-氟-4-(嗎啉基甲基）苯基）_4_(2-甲基小（四氫-2H- 〇哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽將5·氟-N-(2-氟·4_(嗎啉基甲基）苯基）_4_(2•甲基-1-(四氫-2Η-哌喃_4_基）-ΐΗ-咪唑基）嘧啶_2_胺溶解於二氣甲烷中。添加含於二乙醚中之HC1(1M，丨當量）並蒸發溶劑，得到固體形式之標題化合物。 *H NMR: (600 MHz » CD3OD): 8.42 (d > 1 Η) 7 85 (t χ Η) 7.46 (d，1 Η) 7.23 (d，1 Η) 7.15 (d，1 η) 5·15 (u，1 ❹ Η) 3·89 (dd ’ 2 Η) 3.73 (m ’ 6 Η) 3.16 (t，2 Η) 2 66 s.，4 Η) 2.61 (s，3 Η) 2.32 (m，2 Η) 1.79 (dd，2 Η) β " MS: m/z 471 (Μ+Η)+ 〇實例2 5-氟-Ν-(2-氟-4-(((R)-3_甲基嗎啉基）甲基）苯基七甲基 1·(四氩-2H-哌喃-4-基）-ΐΗ·咪唑_5_基）嘧啶_2•胺鹽酸鹽

147407.doc -43· 201040169 將（R)-4-(4-溴-3-氟苯甲基）-3-曱基嗎琳（200 mg，0.69 mmol)、5 -說-4-(2-甲基-1 -(四氫-2H-派喃-4-基）-1H-0米嗤 _5_ 基）嘧啶-2-胺（192 mg ’ 0.69 mmol)與第三丁醇鉀（78 mg , 0.69 mmol)混合於二噁烷（4 ml)中並於氬氣流下，攪拌混合物 5 分鐘。添加 pd2(dba)3 (76 mg，〇.〇8 mm〇i)與 x_Ph〇s (79 mg ’ 0.17 mmol)，接著加入DMF (1 ml)並於 120°C 之微波反應器中加熱反應混合物4 0分鐘。經由石夕藻土過淚粗產物。利用一氯甲烧稀釋遽出液並利用鹽水洗務。利用二氣甲烷（x3)萃取水相。集合有機相，蒸發並藉由矽石管柱層析’接著藉由製備性HPLC純化。集合含有產物之溶離份並添加KOH(水溶液，20%)。利用二氣甲烷（χ3)萃取混合物。於真空下，通過MgS〇4乾燥合併之有機相並濃縮。將殘餘物溶解於二氣甲烷中並添加含於乙醚中之hci(im , 〇·〇8 ml)。蒸發溶劑，得到標題化合物之鹽酸鹽（36 10〇/〇)。 PPm 8.54 (d，1 H) 7.98 1 H) 7.27 (d - 1 H) 5.06 4 H) 3.51 (t，1 H) 3.38 3 H) 2.25 (m，2 H) 1.87 ]H NMR (400 MHz » MeOH) δ (t，1 Η) 7.89 (d，1 Η) 7.35 (d， (m，1 Η) 4.02 (d，1 Η) 3.95 (m， (m ’ 1 Η) 3.04 (m，2 Η) 2.77 (s， (m，2 H) 1.41 (d，3 H)。 MS (ES+): m/z 485 (M+H)+。實例3 5_氟例2_氟_4-((⑻_3_甲基嗎琳基）甲基）苯基）邻甲基_ 1-(四氨秦旅鳴-4-基）·1Η-味唾_5_基）嘴啶2胺鹽酸鹽 147407.doc 201040169

將（S)-4-(4-溴-3-氟苯甲基）_3_甲基嗎啉（240 mg，0.83 mmol)、5-氟-4-(2-曱基-1-(四氫-2H-派喃-4-基）-1 Η-咪》坐-5-基）°密啶-2-胺（231 mg ’0.83 mmol)及第三丁醇鉀（93 mg，〇〇·83 mm〇1)混合於二噁烷（4 ml)中並於氬氣流下攪拌混合物 5 分鐘。添加 pd2(dba)3 (92 mg，0.10 mmol)與 X-Phos (95 mg ’ 0.20 mmol)，接著加入DMF (0.5 ml)並於 120°C 之微波反應器中加熱反應混合物4〇分鐘。經由矽藻土過濾粗產物。濾液分溶於二氣曱烧與鹽水之間，並利用二氣曱烧 (x3)萃取水相。集合並蒸發有機相。藉由製備性HpLc純化殘餘物。集合含產物之溶離份並添加2〇% K〇H(水溶液）。利用二氯甲烷（x3)萃取混合物並於真空下，通過MgS〇4乾 © 帛合併之有機相並濃縮。將殘餘物溶解於m中並添加含於乙鍵中之HC1(1M，〇·〇5 ml)。蒸發溶劑，得到標題化合物（24 mg，5.5°/〇)。 !H NMR (500 MHz > DMSO ^ \ s δ ppm 9.15 (s，1 Η) 8.51 (m，1 Η) 7.44 (t，1 Η) 7 3WH，1 u、， v η; /.a (d » 1 Η) 7.14 (dd > 1 Η) 7.08 (dd » 1 Η) 4.91 (m > 1 3 09 (a , TTx V ) .92 (d，1 H) 3.72 (m，2 H) 3.62 (m，2 H) 3.44 (dd，1 3 14 ^ 、 ’ V n) J·14 (m > 2 H) 2.95 (m » 2 H) 2.40 (m，1 H) 2.08 (m，3 m i , v u J H) m (m，2 H) 1,00 (d，3 147407.doc '45- 201040169 Η)。 MS (ES+): m/z 485 (Μ+Η)+。實例4 N-(4-(((3S，5S)-3,5-二甲基嗎啉基）甲基）-2-氟苯基）-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-旅喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺II 酸鹽

將（3 3,58)-4-(4-溴-3-氟苯甲基）-3,5-二甲基嗎啉（〇.11〇 g，0.36 mmol)、5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1H-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺（0.101 g，0.36 mmol)及第三丁醇鉀（0.041 g ’ 0.36 mmol)混合於二噁烷（2 mL)及 DMF (0.5 mL)中。使氬氣鼓泡通過混合物2分鐘。添加Pd2(dba)3 (0.040 g，0.04 mmol)與 X-Phos (0.042 g，0.09 mmol)並於 120°c微波反應器中加熱反應混合物40分鐘。利用二氣甲烧稀釋混合物並經過矽藻土填料過濾。利用二氯甲烷與甲醇洗滌濾器填料。濃縮並經製備性HPLC純化濾液。集合含產物之溶離份。添加NaHC03(水溶液）並利用二氣甲烷 (x3)萃取混合物。合併之有機相經乾燥（Mgs〇4)及蒸發。將殘餘物溶解於二氣甲烷（4 ml)中並添加HC1(1M乙醚溶液’〇· 1 ml)。蒸發溶劑，得到固體形式之標題化合物（35 mg，18 %) 〇 147407.doc • 46- 201040169 Ο *Η NMR (400 MHz » DMSO-dg) δ 9.63 (s，1 H) 8.76 (d，1 H) 8.01 (s，7.64 (t ’ 1 H) 7.57 (m，1 H) 4.90 (m , pPm 11.73 (br. s. ，1 H) 1 H) 7.89 (d，1 H) 4.07 (m，2 H) 3.91 (m，1 H) 3.73 (m H) 3.10 (m，3 H) 2.74 (s，3 H) 2.〇8 H) 1.38 (d，3 H) 1.28 (d，3 H)。MS (ES+): m/z 499 (M+H)+。實例5 1 H) 4.70 (dd，1 H) ’ 5 Η) 3.56 (br. s.，1 (m，2 H) 1.75 (d，2 N-(2,5-二氟-4-(嗎啉基甲基）苯基）_s -4-(2-甲基-1-(四氫 2Η-旅喃-4-基）-1Η-味嗤-5-基）嘴咬

使5-氟-4-(2-曱基-1-(四氫-2Η-哌喃，取南-4-基）_1Η·咪唑-5-基） °密咬-2-胺（0.876 g ’ 3 · 16 mmol)、4-0 . ^ (4、滇-2,5-二氟苯甲基）嗎琳（0.923 g ’ 3.16 mmol)、第：士 , ’ 一戍醇鈉（0.696 g，6.32 mmo卜（1，Γ-雙（二苯基膦基）二茂鐵）_二氣把（π) (〇〇26 g， 0.03 mmol)及（9,9-二甲基-9H-二苯并哌喃 _4 5_二基）雙（二苯基膦）（0.018 g’ 0.03 mmol)混合於曱苯（1〇 mL)中並脫氣。於110°C下’氮氛圍下整夜攪拌混合物。濃縮混合物。添加二氯甲烷與水’並分離相。濃縮有機相，粗產物 147407.doc •47- 201040169 藉由製備性HPLC純化。將集合之溶離份濃縮至—半體積並利用EtOAc (x2)萃取殘餘物。濃縮有機相，殘餘物於 40°C下真空乾燥整個週末，得到固體形式之標題化合物 (0.992 g，64 %)。 H NMR (500 MHz，氯仿 _d) ppm 8.36 (d，1 H) 8 15 (dd ’ 1 Η) ’ 7.64 (d ’ 1H)，7·30 (d，1 H)，7.19 (dd，1 H)，5.20-5.33 (m，1 H)，4_09 (dd , 2 H)，3.73 (t，4 3.52(s’2H)，3.25-3.37 (m，2H)，2.67(s，3H)，2.38- 2.58 (m，6 H)，1.93 (dd，2 H)。 MS: m/z 489 (M+H)+。 N-(2,5-二氟-4-(嗎啉基甲基）苯基）-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫_ 211-旅味-4-基）-111-咪峻-5-基）痛咬-2-胺二琥拍酸鹽將5 -乱- 4-(2 -甲基-1-(四氫- 2H-0底喃-4 -基）-1Η-口米0坐-5-基） °密。定-2-胺（33,6§，121，17 111111〇1)、4-(4-溴-2,5-二氟笨甲基）嗎琳（37,5 g，128,44 mmol)、（1，1’-雙（二苯基膦基）二茂鐵）-二氣把（11)(0,997 §，1，21111111〇1)、9,9-二甲基-4,5-雙 (二苯基膦基）二苯并β底β南（〇,701 g，1，21 mmol)及第三戊醇鈉（20,02 g，18 1，75 mmol)混合於甲笨（260 mL)中。於氬氣氛圍下，於100°C下加熱混合物24小時。添加4-(4-溴-2,5-二氟苯曱基）嗎琳（4.0 g，13.7 mmol)並於氬氣氛圍下， l〇〇°C下加熱混合物40小時。混合物留置在室溫下。加入水（100 mL)。蒸發濃縮混合物。加入二氣甲烷（250 ml + 250 ml)。利用水（2x250 mL)洗滌混合物。蒸發濃縮有機相。將殘餘物溶解於EtOAc (400 147407.doc • 48 · 201040169 mL)，加入檸檬酸（2M，水溶液，500 mL)並於室溫下強烈攪拌混合物30分鐘。分離相並利用檸檬酸（2M，水溶液， 100 mL)萃取有機相。利用固體KOH丸粒使合併之水相鹼化至pH 10-11並利用EtOAc (5x200 mL)萃取。利用鹽水洗滌合併之有機相，乾燥（MgS04)，過濾及蒸發濃縮，得到 7 2 g油粗產物。將粗產物溶解於EtOAc (180 mL)中並添加溶於MeOH (280 mL)中之琥拍酸（34,8 g，295，10 mmol)。於室溫下攪拌混合物30分鐘，然後添加庚烷（300 mL)。於室溫下強力攪拌混合物整夜。過濾分離所形成之固體。利用EtOAc : 庚烷1:2 (400 mL)之混合物洗滌固體。於真空下乾燥固體，得到呈二琥珀酸鹽形式之標題化合物（73 g，83%)。 *H NMR (400 MHz » DMSO-d6) δ ppm 12.16 (br. s. » 4 Η) 9.32 (s，1 Η) 8.56 (d，1 Η) 7.49 (dd，1 Η) 7.36 (d，1 Η) 7.24 (dd，1 Η) 4.95 (m，1 Η) 3.75 (dd，2 Η) 3.56 (t，4 Η) 3.46 (s，2 Η) 2·99 (t，2 Η) 2.37 (m，4 Η) 2.10 (m，2 Η) 1.63 (m，2 Η) 〇 MS: m/z 489 (M+H)+。藉由X-射線粉末繞射（XRPD)分析固體，此顯示其為晶體。使用 XRPD測量儀器（其係 PANalytical X'Pert Pro， Bragg-Brentano)，θ-θ，Cu Κα，旋轉樣品及PIXcel檢測器分析結晶度。以測量角度（2e)(Cu κα)及下列相對強度表示之繞射如 147407.doc -49- 201040169 T:7.12(vs)、9.41(VS)、9.90(s)、1〇68(vs)、 12.84(vs)、14.27(s)、17.86(vs)、21.45(vs)、24·6ι( 25.31(vs)。相對強度衍生自採用可變狹縫測量之繞射圖。相對於最強峰所測量之強度係以極強峰（vs)表示5〇%以上及以強峰 (s)表示介於25與50%之間。所測量之顯著角度係以。2Θ (Cu Κα)表示且相對強度為： 7.12(vs)、9.41(vs)、9.90(s)、12 84(vs)、及25 3i(vs)又。甚至更顯著之測量角度係以。20 (Cu Κα)表示且相對強度為：7.12 (vs)與 12.84(vs)。熟習此項技術者應瞭解，由於包括較佳取向之各種原因，故XRPD強度可能隨不同樣品及不同樣品製法變化:、熟習此項技術者亦應瞭解，由於各種原因，包括繞射儀中的樣品表面平整度變化’自動及手動調整之波峰設定變化，故可能發生測量角之微小偏移。因此該等數值不應視為絕對值。實例6 叫2,5_二氟冬(嗎琳基f基）苯基）_5_氣_4 (2甲基四氣_ 2H-娘喃-4-基）-1Η-味哇.5-基）鳴咬_2胺鹽酸鹽

vP 147407.doc •50- 201040169 將5·氟_4·(2·甲基-1 -(四氫-2H-哌喃-4-基）-m-咪唑-5-基）嗜°定-2-胺（432 mg ’ 1.56 mm〇i)溶解於 1，4_ 二噁烧（18 ml)中並加入4-(4·氯-2,5-二氟苯曱基）嗎啉（39〇 mg，i 57 mmol) 與第三丁醇鉀（230 mg，2.〇5 _〇1)。利用氬氣沖洗混合物並攪拌5_10分鐘。添加三（二亞苄基丙酮）二鈀（0) (144 mg，0.16 mmol)與2-二環己基膦基_2，，4丨，6，_三-異丙基-^-聯笨（150 mg，〇·31 mm〇i)。於氬氣氛圍下，1〇2。〇下加熱混合物3小時。經由矽藻土過濾粗產物並利用二氣甲烷洗滌濾器填料。於真空下濃縮溶液並藉由製備性HpLC純化殘餘物。集合含產物之溶離份並添MNa2C〇3(水溶液）。於真空下，利用二氯甲烷（χ3)萃取混合物，通過NajO*乾燥並濃縮。將殘餘物溶於二氯曱烷中並添加含於乙醚中之 HC1 (1M)。蒸發溶劑，得到呈鹽酸鹽形式2N_(2,5_二氟_ 4-(嗎啉基甲基）苯基）_5_氟·4_(2_甲基_1-(四氫_2H•哌喃_心基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺（125 mg，15 %)。 'H-NMR: (600 MHz > CD30D): 8.63 (br s > 1H) > 8.22 (br s，1H)，7.7S (br s，1H)，7.42 (br s，1H)，5.18 (m， 1H) ’ 4.32 (s，2H) ’ 4.01 (dd ’ 2H)，3.44 (m，1H)，3.36 (t ’ 3H) ’ 3.33 (m，4H)，3.17 (m ’ 1H)，2.77 (br s， 3H)，2.44 (m，2H)。 MS: m/z 489 (M++1)。實例7 ^'-(2,5-一氟-4-(((8)-3-甲基嗎琳基）甲基）苯基）_5_氟_4_(2_ 甲基-1-(四氫-2H-旅喃基）-1Η-咪唾-5_基）嘧咬·2_胺 147407.doc 51 201040169

永Ο

F 將（S)-4-(4-溴-2,5-二氟苯甲基）_3_甲基嗎啉（43〇 mg， 1.40 mmol)、5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-ih-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺（389 mg，1.40 mmol)與第三丁醇鉀（158 mg，1.4〇 mm〇l)混合於二噁烷（7 mL)中並使氬氣鼓泡通過混合物 5分鐘。加入Pd2(dba)3 (154 mg，0.17 mmol)與 X-

Phos (161 mg，0.34 mmol)，接著加入 DMF (1.75 mL)並於 120°C微波反應器中加熱反應混合物4〇分鐘。經由石夕藻土過濾混合物並利用二氯甲烷洗滌濾器填料。濃縮渡液，並藉由製備性HPLC純化殘餘物。集合含產物之溶離份，利用二氯曱烷（x3)萃取，通過MgS〇4乾燥及真空漢縮’得到固體形式之標題化合物（1 〇4 mg，15 %)。 H NMR (500 MHz，氣仿-d) δ ppm 8.35 (d，1 H) 8.11 (dd ’ 1 H) 7.64 (d，1 H) 7.35 (d，1 H) 7.20 (dd，1 h) 5.14-5.29 (m，1 Η) 4·08 (dd，2 H) 3.89 (d，1 H) 3.68-3.79 (m’2H) 3.57-3.66 (m，lH) 3.24-3.37 (m，3H)2.68(br· s. ’ 1 H) 2.67 (s，2 H) 2.64 (d，1 h) 2.49-2.57 (m，1 h) 2.44 (qd，2 H) 2.25-2.33 (m，1 H) 1_92 (d，2 h) 1.08 (d， 2 H)。 MS (APCI + )： m/z 503 (M+H)+ 〇 N-(2,5-二氟-4-(((S)-3_甲基嗎啉基）甲基）苯基）_5_氟·4_(2_ 甲基-1-(四氩-2Η-旅喃-4-基）-1Η-咪唾_5_基）鳴咬-2-胺鹽酸盥 I47407.doc -52- 201040169 將固體（104 mg)溶解於二氯甲烧（2 mi)中並加入含於醚中之HC1 (1M，0.25 mL)。過濾收集固體，得到呈鹽酸鹽形式之N-(2,5-二氟-4-(((S)-3-甲基嗎啉基）甲基）苯基）_5_氟_ 4-(2-曱基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-ih-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺 (39.0 mg)。 H NMR (500 MHz > DMSO-d6) d ppm 11.41 (br. s. » 1 H) 9.81 (br. s. ’ 1 H) 8.82 (d ’ 1 H) 8.01 (br· s.，1 H) 7.75 (br. s.，2 H) 4.96 (br_ s‘，1 H) 3.90 (m，2 H) 3.83 (d，4 H) 3.15 (t，3 H) 2.76 (s ’ 3 H) 2.13 (m，2 H) 1.83 (d，2 H) 1.40 (br. s.，3 H)。 MS (APCI+) m/z 503 (M+H)+。實例8 N-(4-(((3S，5S)-3,5_二甲基嗎啉基）甲基）_25_二氟苯基）5_ 氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）喊咬- 2-胺

將（3S，5S)-4-(4-氣-2,5·二氟苯甲基）_3,5_二甲基嗎啉 (0.118 g，0.43 mmol)、5-氟-4-(2-曱基-1-(四氫 _2Η_ 哌喃 _4_ 基）-1Η-咪"坐-5-基）喊咬-2-胺（0.142 g，0.51 mmol)與第三丁醇卸（0.058 g’ 0.51 mmol)混合於二嚼燒（2 mL)及 DMF (0.5 mL)中。使氬氣鼓泡通過混合物2分鐘。加入Pd2(dba)3 (0.047 g，0.05 mmol)與X-Phos (0.049 g，〇·10 mmol)並於 147407.doc -53- 201040169 120°C微波反應器中加熱反應混合物40分鐘。混合物係利用二氣曱烷稀釋且經由矽藻土填料過濾。利用二氣甲燒與曱醇洗務滤器填料。濃縮濾、液並藉由製備性HPLC純化。集合含產物之溶離份。加入NaHCOK水溶液）並利用二氯甲烷（x3)萃取混合物。乾燥（MgS〇4)並蒸發合併之有機相，得到固體形式之標題化合物（16 mg，7.2。/〇)。 4 NMR (500 MHz，氣仿-d) δ ppm 8.35 (d，1 H) 8 1〇 (dd ’ 1 Η) 7.64 (d ’ 1 Η) 7.31 (dd，1 Η) 7.25 (br. s,，i H) 5.27 (m，1 H) 4.08 (dd，2 H) 3.80 (d，1 H) 3.70 (dd，2 H) 3.52 (d，1 H) 3.40 (dd，2 H) 3_31 (t，2 H) 2.85 (m，2 H) 2.68 (s，3 H) 2.44 (qd，2 H) 2.01 (s，1 H) 1.93 (dd，2 H) 1.68 (br. s.，1 H) 1.27 (m，1 H) 1.03 (d，6 H) 〇 N-(4-(((3S，5S)-3,5-二甲基嗎啉基）甲基）·2,5_二氟苯基氟·4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑_5_基）鳴咬 2-胺鹽酸鹽將N-(4-(((3S，5S)-3,5-二甲基嗎啉基）曱基）_2,5_二氣苯基）-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃_4_基米唾_5_美）嘧啶-2-胺（16 mg)溶解於二氣甲烷（4 ml)中並加入含於乙醚中之HC1 (1M，0.05 ml)。蒸發溶劑，得到固體形式之桿題化合物（0.015 g)。 NMR (500 MHz，曱醇-d4) δ ppm 8.67 (d，1 H) 8 23 (br. s. ’ 1 η) 7.88 (d ’ 1 Η) 7·56 (dd ’ 1 Η) 5.18 (m，i H) 4.01 (dd，3 H) 3.39 (t，2 H) 2_83 (s，3 H) 2.41 (m，2 H) 2.01 (m，2 H) 1.46 (br. s.，6 H)。 147407.doc -54· 201040169 MS (ES+): m/z 517 (M+H)+。一般方法 iH NMR光譜係在 400 MHz、500 MHz或 600 MHz下，於所指示之氘化溶劑中記錄。採用裝配3 mm注射流量之SEI W/D-UC探針頭’依Z_梯度的Bruker av400 NMR光譜儀’ 使用BEST 215液體處理器注射樣品’或使用裝配核心探針頭，依梯度的 Bruker DPX400 NMR或 Bruker 500MHz ultrashield光譜儀取得400 MHz光譜。使用裝配有5 mm ® BBO探針頭’依Z-梯度之Bruker DRX600 NMR光譜儀獲得 600 MHz光譜’其中針對111在60() MHz下操作’針對13C在 150 MHz下操作’針對1七在60 MHz下操作。化學位移係在離TMS之低場及高場下’以PPm計。共振多重峰係分別針對單峰、雙重峰、三重峰、四重峰、多重峰及寬度以 s、d、t、q、m 及 br標示。 LC-MS 分析係於裝配有 Waters x_Terra MS ’ C8_管柱（3.5 ^ ，100 mm x 3.0 mm i.d.)之Waters LCMS上記錄。流動相系統係由A : l〇 mM含於水/乙腈（95 : 5)中之醋酸銨及 B :乙腈組成。採用k0 mL/min流速，於4-5分鐘内自0%至 100% B之線性梯度。質譜儀裝配有以正或負離子模式操作之電喷霧離子源（ESI)。毛細管電壓係3 kv，而質譜儀一般係在m/z 100-700之間掃描。或者，LC-MS HPLC條件如下：管柱：Agilent Zorbax SB-C8 (5 μιη ’ 50 mm><2 mm i d)流速：1.0 mL/min梯度：5分鐘内 95% A至 100% B。 A=含於含0·1%甲酸之水中的5%乙腈及B =含0.1%甲酸之乙 147407.doc -55- 201040169 腈。UV-DAD 210-400 nm。或者，LC-MS分析係於裝配有 Phenomenex Luna C18 (5 μιη，50x4.6 mm i.d.)之 Waters 2790 LCMS上記錄。流動相系統係由A : 10 mM含於水中之甲酸銨（pH 4)及B :乙腈組成。採用2.0 mL/min流速，於 5分鐘内自95%至5% B之線性梯度。質譜儀裝配有以正或負離子模式操作之電喷霧電離源（ESI)。毛細管電壓係3 kV，而質譜儀一般係在m/z 100-700之間掃描。質譜（MS)係使用具有大氣壓化學（APCI或CI)或電喷霧 (+ESI)電離之自動系統運行。通常，僅記錄其中觀察到之母質量之光譜。若分子之同位素分裂導致多重質譜峰時 (例如存在氣時），以質量最低之主要離子記錄。使用裝配有 Waters X-Terra MS，C8 管柱（3.0x100 mm， 3.5 μιη)之Agilent HP1100系列系統進行HPLC分析。將管柱溫度設於40°C及流速為1 .〇 mL/min。二極體陣列檢測器係自200-3 00 nm掃描。採用在4分鐘内自0%至100% B之線性梯度操作。流動相A : 10 mM含於水/乙腈（95:5)中之醋酸銨，流動相B :乙腈。使用裝配有Genesis AQ，（10〇χ4·6 mm，4 μιη)管柱之 Dionex Ρ680系列系統進行HPLC純化。將管柱溫度設為 25°C及流速為1.5 mL/min。二極體陣列檢測器係自200-600 nm掃描。流動相系統係由A : 10/90(v/v)乙腈/磷酸鹽緩衝液（25 mM，pH 6.8)及B : 70/30(v/v)乙腈/磷酸鹽緩衝液（25 mM，pH 6.8)組成。根據下表應用之梯度： 147407.doc •56- 201040169 時間(min) B% 0 5 5 5 20 100 21 5 25 5 製備性HPLC係在使用Waters XTerra® MS C8管柱 (19x300 mm，7 μιη)之具有二極體陣列檢測器之Waters自〇動化純化HPLC-UV系統上，依所描述梯度進行。已使用 CambridgeSoft MedChem ELN ν2·1或 ACD/命名， 8.08版，來自加拿大多儉多ON之Advanced Chemistry Development, Inc. (ACD/Labs)(www.acdlabs.com, 2004)的軟體或根據IUPAC慣例來命名諸等化合物。藥理學親近閃爍GSK30分析法之ATP競爭性測定於384孔透明底板之微滴定板中，採用10種抑制劑濃〇度，進行正負兩份抑制性實驗。添加生物素基化之胜肽受質（生物素-Ala-Ala-Glu-Glu-Leu-Asp-Ser-Arg-Ala-Gly-Ser (P03H2)-Pro-Gln-Leu (AstraZeneca，Lund))，其在含有 0.1 mU重組人類 GSK3p (Dundee University，UK)，（1 nmol/L 活性酵素）、10 mmol/L嗎琳丙項酸（MOPS)、0.3 mmol/L EDTA、0.01% (v/v) β-疏基乙醇、0.003% (w/v)聚乙烯23 月桂醚（Brij 35)、0_4%丙三醇及0.02 mg牛血清白蛋白 (BSA)之分析緩衝液中之最終濃度為1 mmol/L，並預培養 147407.doc -57- 201040169 10分鐘。添加 0_06 mCi [γ·33Ρ]ΑΤΡ (Amersham，UK)及未標記ATP至30 mmol/L Mg(Ac)2中，至最終濃度為1 mmol/L ATP而開始反應。最終分析體積係15 mL。使用無胜肽受質之空白對照組。於室溫下培養15分鐘後，藉由添加含有 1.3 mmol/L EDTA ' 13 mmol/L ATP ' 0.02% Triton™X-100 及0.1 5 mg已塗覆抗生物鏈菌素之SPA珠粒之終止反應溶液而使反應終止。於2000 rpm下離心5分鐘後，於液體閃爍計數器（1450 MicroBeta Trilux，Perkin Elmer，Finland)中測量輻射性。用於計算各種化合物抑制常數（Ki)之GSK3P 的 ATP Km值係 20μΜ。親近閃爍CDK2分析法中之ΑΤΡ競爭性測定

於96孔透明底板之微滴定板中，採用10種抑制劑濃度，進行正負兩份競爭性實驗。添加Cdk2/週期素Ε酵素至含有 50 mmol/L HEPES、10 mmol/L MnCl2、1 mmol/L二硫蘇糖醇（DTT)、100 μιηοΙ/L NaF、100 μπιοΙ/L 釩酸鈉、10 mmol/L甘油鱗酸納、5 pg/mL抗蛋白酶肽、2.5 pg/mL抗纖維蛋白溶酶肽及100 μιηοΙ/L PMSF之緩衝液（pH 7.5)中，使其濃度相當於被部份純化之桿狀病毒感染之昆蟲細胞溶胞產物之80倍稀釋度。使用無酵素之空白對照組。藉由添加 1.25 pg GST-Rb、最終濃度為 0· 1 μηιοΙ/L之 0· 15 μΟΜ [γ-33Ρ] ATP及未標記ATP而開始反應。最終分析體積係50 μι。於室溫下培養60分鐘後，藉由添加150 μΐ^終止溶液 (其在50 mmol/L HEPES中包含45 μί經蛋白Α塗覆之SPA珠粒）、3.28 mg抗榖胱甘肽-S-轉移酶、及5.5 mmol/L EDTA 147407.doc -58- 201040169 與35 μηιοΙ/L ATP而終止各反應。於2000 rpm下離心該分析板5分鐘，並於液體閃爍計數器（1450 MicroBeta Trilux， Perkin Elmer，Finland)中測定輻射性。用於計算各種化合物之抑制常數（Ki)之Cdk2之ATP Km值係0.5 μΜ。

CaCo-2細胞滲透性分析

針對24孔板（0·33 cm2/孔），依340500個細胞/cm2之密度’將CaCo-2細胞接種於渡膜上。細胞在由含有葡萄糖與 L-榖醯胺酸之杜氏（Dulbecco)改良伊格氏（Eagle)培養基（補充10%胎牛血清、100 U/ml青黴素-G及100 pg/ml鍵黴素及 1°/〇 (v/v) 100X非必需胺基酸）組成之培養基中生長。培養基係每兩天更換一次，且細胞係維持於37。(：、95%相對濕度、及5 % C 〇2下。採用細胞傳代數為25與5〇之間之培養 21 -28天之單層培養物進行滲透性研究。替代方案1.用於實例3、5、6及參照實例中之cac〇-2渗透性分析

CaCo-2滲透性分析係在梯度pH-梯度條件（頂部pH 6 5 ’ 底外側pH 7.4)下，依頂部至底外側方向進行。採用含有25 1^的？丑8(13117.4)與25 11^]^8({)116.5)之的88作為運輸介質。以運輸介質洗滌完全分化之細胞單層。於運輸介質（PH 6.5 (1% DMS0))中製備藥物溶液，一般為ι〇藉由將0_2 ml藥物溶液加至頂部面而開始滲透性實驗。底外側面含有0.8 ml運輸介質’ pH 7.4。每種藥物進行三次添加細胞試驗及一次無添加細胞之試驗。於於37 C下’使細胞保持於培養箱中並振盪，於振盪45與9〇分鐘時，自底外 147407.doc -59- 201040169 側面取出200 μΐ樣品。第一次取樣後，將相同體積運輸緩衝液加入底外側隔間中。藉由計算累積運輸量與殘留於供體面中之量的總和除以藥物起始量，而評估化合物回收率。使用液相層析串聯質譜儀（LC/MS/MS)線上分析樣品。於實驗期間，測量每一孔中標記放射性之甘露醇（細胞旁標記分子），以確定單層之完整性。藉由液體閃爍法分析25 μΐ樣品。替代方案2.用於實例2_4、7-8中之CaCo-2 Α至Β滲透性分析法於pH 7.4下，依頂部至底外側方向進行CaCo_2入至3驗分析法。將含有25 mM HEPES (pH 7.4)之HBSS用作運輸介質。於運輸介質（1% DMSO)中製備藥物溶液，一般為1〇 μΜ。六種化合物之試驗係於一個24孔板申進行可以產生一個96深孔分析板（最大容積6個分析板=36種化合物及6 個深孔分析板）。先利用HBSS洗滌CaCo-2細胞單層一次後才開始試驗。首先將運輸緩衝液（8〇〇叫，（HBSS，pH 7.4))分佈於單層之底邊。然後將225 每一種化合物（1〇 μΜ)添加於頂部而開始分析。直接取出樣品（供體〇)及於加入測試化合物後60分鐘後取出樣品（供體終點及受體6〇)。分別自供體隔間及受體隔間取出25 4[及15〇 μ]ι。於洗務階段及與化合物培養期間’使運輸分析板置於48〇 rpni及 37C之振盡培養器中。在〇分鐘至6〇分鐘下，測量供體隔間中之輻射標記[〗4C]甘露醇（低度被動旁細胞擴散），來監 147407.doc -60- 201040169 測上皮細胞單層之完整性。採用96-孔Luma分析板分析 [14C]甘露醇。計算累積運輸量及殘留於供體側之量的總和除以藥物起始量，來評估化合物回收率。使用液相層析串聯質譜儀（LC/MS/MS)，於線上分析樣品。表觀滲透性係數計算法如下： ρ app~ A*C0 〇其中AQ/At係每一單位時間運輸至受體隔間中之物質總量，A係表面積（cm2)，且CG係起始供體濃度。表觀滲透性Papp係以xl 〇·6 cm/秒來表示。結果就本發明式（I)化合物而言，GSK0 Ki值、CDK2 Ki值、 GSK3P相對於CDK2之選擇性係示於表1中。所有出示的數值均係平均值。本發明式（I)化合物之CaCo-2 Papp/CaCo-2 A至B Papp示於〇表2中。所有出示之數值均係平均值。 147407.doc •61 - 201040169

表2 實例編號 R1 R2(絕對組態） R3 GSK3P K, (nM) CDK2 Ki (nM) GSK3P 相對於CDK2 之選擇性 CaCo-2 Papp/ A至B (cm/s) 實例1 Η Η H 15 308 20 36xl0'6 實例2 Η CH3 (R) H 5 290 58 39xl0'6 實例3 Η CH3 (S) H 30 940 31 56x1 O'6 實例4 Η ch3 ch3 11 318 29 44x1 O'6 實例5 F H H 4.9 127 26 45x1 O'6 實例6 F H H 4.9 133 27 45x1 O'6 實例7 F CH3 (S) H 11 175 16 44x10—6 實例8 F ch3 ch3 7.7 222 29 4〇χ10·6 參照實例：W02007/040440，實例15 ; 5-氟-4-(2-曱基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑5-基）-N-(4-(嗎啉基曱基）苯基）嘧啶-2-胺

147407.doc 62- 201040169 GSK3P Ki (nM) CDK2 Kj (nM) GSK3P 相對於CDK2 之選擇性 CaCo-2 Papp/ A至 B Papp (cm/s) 8.1 110 14 26x1 O'6

已使用之下列縮寫： APCI 大氣壓化學電離 ATP 三磷酸腺苷 BSA 牛血清白蛋白 CaCo-2 人類上皮結腸直腸腺癌細胞 CDK2 週期素依賴性激酶2 Cl 化學電離 Cs2C03 碳酸铯 DCM 二氯甲烷 DMF Ν,Ν-二曱基曱醯胺 DMSO 二甲亞颯 DTT 二硫蘇糖醇 EDTA 乙二胺四乙酸 EIS 電喷霧電離 EtOAc 乙酸乙酯 GSK3 肝糖合成酶激酶3 HBSS 漢克氏（Hank's)平衡鹽溶液 HC1 鹽酸 HEPES 4 - ( 2 -經乙基）-1 -π辰嗓乙石黃酸 HPLC 南壓液相層析 KOH 氫氧化鉀 147407.doc -63- 201040169 LC-MS MeOH MES Mg(Ac)2 MOPS NaHC03 Na2S04 NaOH NH4C1 Pd2dba3 PBS PMSF RT SPA THF TMS UV UV-DAD X-Phos 液相層析質譜甲醇 2-(N-嗎啉基）乙磺酸醋酸鎂嗎琳丙績酸炭酸氫納硫酸鈉氫氧化鈉氯化銨三-(二亞苄基丙酮）二鈀（0) 磷酸鹽緩衝生理食鹽水苯基曱基磺醯氟室溫親近閃爍分析法四氫呋喃四曱基矽烷紫外線紫外線-二極體陣列檢測器 2-二環己基膦基-2',4'，6’-三異丙基聯苯 147407.doc -64-

Claims

201040169 七、申請專利範圍： 1. 一種通式（I)之化合物

R1係氫或氟；〇 R2與R3係選自氫或曱基；或其醫藥可接受鹽。 2. 如請求項1之化合物，其中R1係氟；或其醫藥可接受鹽。 3. 如請求項1或2中任一項之化合物，其中R2與R3係氫；或其醫藥可接受鹽。 4. 如請求項1或2中任一項之化合物，其中R2係曱基；或其醫藥可接受鹽。 q 5.如請求項4之化合物，其中R2係（R)-曱基；或其醫藥可接受鹽。 6. 如請求項1或2中任一項之化合物，其中R2與R3係甲基；或其醫藥可接受鹽。 7. 如請求項1之化合物，其中R1係氟，R2與R3係氩；或其醫藥可接受鹽。 8. —種化合物，其係N-(2,5-二氟-4-(嗎啉基甲基）苯基）-5-氟-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2·胺；或其醫藥可接受鹽。 147407.doc 201040169 9. 一種化合物，其係N-(2,5-二氟-4-(嗎啉基曱基）苯基）氟-4-(2-曱基-1-(四氯-2H-派喃-4-基）-1Η-口米唾-5-基）嘴啶-2-胺二琥拍酸鹽。 10. —種化合物，其係 5_氟-N-(2_氟_4_(嗎琳基甲基）苯基）-4-(2-曱基-1-(四氫_ 2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺； N-(4-(((3S，5S)-3,5-二甲基嗎啉基）甲基）-2,5-二氟苯基）-5 -氣-4-(2-甲基-1-(四風-2H-派喃-4 -基）-113米〇坐-5_ 基）嘧啶-2-胺； N-(2,5-二氟-4-(((S)-3-甲基嗎啉基）曱基）苯基）-5-氟-4-(2-曱基-1·(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2- 胺；或其醫藥可接受鹽。 11. 一種化合物’其係N-(2,5-二氟-4-(嗎啉基曱基）苯基）-5-氟-4-(2-曱基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； 5 -氟-N-(2 -氟- 4-(嗎琳基甲基）苯基）-4-(2 -甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑_5_基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； 5-氟-N-(2-氟-4-(((S)-3-甲基嗎啉基）甲基）苯基）-4-(2-甲基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5_基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； 1^-(4-(((3 8,58)-3,5-二曱基嗎啉基）甲基）-2-氟苯基）-5-氟-4-(2-曱基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5-基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； 5-氟-N-(2-氟-4-(((R)-3-甲基嗎啉基）甲基）苯基）-4-(2- 147407.doc -2- 201040169 酸鹽·氫2H辰喃_4-基）-1Η-咪唑-；5-基）嘧啶_2-胺鹽 N-(4~(((3S，5S)-3 5_ -田 # 某& ，5 一甲基嗎啉基）甲基）-2,5-二氟苯暴）'氟-4-(2-甲美】r — 其、欢士土 -(四氣_2H-哌喃-4-基）-1Η-咪唑-5- 基）嘧啶-2-胺鹽酸鹽； N-(2 5·-备. (2_甲其—_ -(((δ)'3·甲基嗎琳基）甲基）苯基）-5-氟_4· 鹽酸鹽；氣-2Η_派喃冰基）-ΐΗ_味嗤_5_基）嘴咬冬胺〇式。 5其游離鹼形式或另一醫藥可接受鹽之形 12::L!組合物，其包含如請求項1至11中任-項之式劑㈣-或其醫藥可接受鹽，與醫藥可接受輔劑、稀釋則或栽劑組合。 13_如請求項1至u 員之式⑴化合物或其醫藥可接受 a ’其係用於治療。月求項1至11中任一項之式⑴化合物或其醫藥可接受 ❹ 「U於治療認知障礙或出現認知缺陷之適應症，諸如#呆’包括早老性癡呆（早期發作阿爾茨海默氏病）；老年性癡呆（阿爾茨海默氏類型瘋呆）；阿爾茨海默 -氏病(AD);家族阿爾茨海默氏病；早期阿爾茨海默氏，病丨阿爾茨海默氏類型之輕度至中度癡呆；延遲阿爾茨海默氏病之疾病發展；與阿爾茨海默氏病相關之神經退化、輕度認知受損（MCI);健忘型輕度認知受損 (aMCI);年齡相關記憶受損（AAMI);路易體癡呆；血管性癡呆（VD)，HIV-癡呆；AIDS癡呆綜合症；AIDS_神經 147407.doc 201040169 併發症；額顳葉型癡呆（FTD);額顳葉型癡呆帕金森型 (FTDP);拳擊員癡呆；因傳染性試劑或代謝紊亂引起之癡呆；退化源性癡呆；多發性梗塞癡呆；記憶缺失；帕金森病s忍知功能；多發性硬化症認知功能；與化學療法相關之認知缺陷；精神分裂症認知缺陷（CDS);包括精神分裂症之分裂情感性精神障礙；年齡相關認知衰退 (ARCD);無癡呆認知受損（CIND);源於中風或腦缺血之認知缺陷；先天性及/或發育性疾病；進行性核上麻痹 (PSP);肌萎縮性側索硬化症（ALS);皮質基底核退化症 (CBD);創傷性腦損傷（TBI);腦炎後帕金森氏症；皮克病；尼曼-皮克病；唐氏綜合症；亨廷頓氏疾病；賈庫氏症（Crenztfeld-Jacob’s disease);普利昂蛋白病症；多發性硬化症（MS);運動神經元疾病（MND);帕金森氏症 (PD) ’ β-殿粉樣蛋白血管病；腦殿粉樣蛋白血管病；二核苷酸重複型疾病；脊髓性肌肉萎縮症；弗里德賴希氏共濟失調；視神經脊髓炎；多發性系統萎縮症；傳染性海綿狀腦病；注意力缺失症（ADD);注意力缺陷過動病症（ADHD);包括急性躁狂症、雙極抑鬱症、雙極持續症之雙極症（BD);包括抑鬱、重症抑鬱、情緒穩定、輕鬱症之重症抑鬱障礙（MDD);辨別缺陷症；失語症；動作缺陷症及情感冷漠。 15. 16. 如請求項1至11中任一項之式⑴化合物或其醫藥可接受鹽，其係用於治療阿爾茨海默氏病。一種治療認知障礙或出現認知缺陷之適應症之方法諸 147407.doc 201040169 如：癡呆，包括早老性癡呆（早期發作阿爾茨海默氏病）；老年性癡呆（阿爾茨海默氏類型癡呆）；阿爾茨海默氏病（AD);家族阿爾茨海默氏病；早期阿爾茨海默氏病，阿爾茨海默氏類型之輕度至中度癡呆；延遲阿爾茨海默氏病之疾病發展；與阿爾茨海默氏病相關之神經退化、輕度認知受損（MCI);健忘型輕度認知受損 (aMCI);年齡相關記憶受損（AAMI);路易體癡呆；血管性癡呆（VD) ; HIV-癡呆；AIDS癡呆综合症；Ams_神經併發症；額顳葉型癡呆（FTD);額顳葉型癡呆帕金森型 (FTDP);拳擊員癡呆；因傳染性試劑或代謝紊亂引起之癡呆；退化源性癡呆；多發性梗塞癡呆；記憶缺失；帕金森病認知功能；多發性硬化症認知功能；與化學療法相關之認知缺陷；精神分裂症認知缺陷（CDS);包括精神分裂症之分裂情感性精神障礙；年齡相關認知衰退 (ARCD);無癡呆認知受損（CIND);源於中風或腦缺血之認知缺陷；先天性及/或發育性疾病；進行性核上麻痹 (PSP);肌萎縮性側索硬化症（ALS);皮質基底核退化症 (CBD);創傷性腦損傷（TBI);腦炎後帕金森氏症；皮克病；尼曼-皮克病；唐氏综合症；亨廷頓氏疾病；賈庫氏症（Creuztfeld-Jacob’s disease);普利昂蛋白病症；多發性硬化症（MS);運動神經元疾病（MND);帕金森氏症 (PD) ; β-澱粉樣蛋白血管病；腦澱粉樣蛋白血管病；三核苷酸重複型疾病；脊髓性肌肉萎縮症；弗里德賴希氏共濟失調；視神經脊髓炎；多發性系統萎縮症；傳染性 147407.doc 201040169 海綿狀鱗病；注意力缺失症（ADD) l注意力缺陷過動病症（ADHD);包括急性躁狂症、雙極抑鬱症、雙極持續症之雙極症（BD);包括抑鬱、重症抑鬱、情緒穩定、輕鬱症之重症抑鬱障礙（MDD);辨別缺陷症；失語症；動作缺陷症及情感冷漠，該方法包括向需要此治療之哺乳動物（包括人類）投與醫藥有效量如請求項^中任-項之式（I)化合物或其醫藥可接受鹽。 17. 如請求項1 6之方、、土，免& # + 方法其中该疾病係阿爾茨海默氏病。 147407.doc 201040169 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：〇 i、本案若有化學式時’請^最能巧發明特徵的化學式:

147407.doc