TW201010733A

TW201010733A - New L-glutamic acid and L-glutamine derivative (III), use thereof and method for obtaining them

Info

Publication number: TW201010733A
Application number: TW098116728A
Authority: TW
Inventors: Ludger Dinkelborg; Heribert Schmitt-Willich; Keith Graham; Norman Koglin; Mathias Berndt; Matthias Friebe; Andre Mueller
Original assignee: Bayer Schering Pharma Ag
Priority date: 2008-05-20
Filing date: 2009-05-20
Publication date: 2010-03-16
Also published as: AR073844A1; UY31834A; JP2011520931A; CN102083773A; WO2009141090A8; PE20091926A1; US20110064673A1; EP2123620A1; WO2009141090A1; CA2723594A1; KR20110013411A; WO2009141090A9; EP2282981A1; US20140227191A1

Description

201010733 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於其中氟原子係19f之氟化麩胺酸（麩胺酸酯）及麩醯胺衍生物。麩胺酸（麩胺酸酯）及麩醯胺衍生物係通式I化合物，其涵蓋其所有可能的非對映異構體及/或對映異構體衍生物或混合物。本發明化合物可用於與麩醯胺分 ^ 解代謝有關之疾病的治療且本發明另外亦係關於可用於氟-19磁共振顯像（19F MRI)及可用作鑑別各[F-18]衍生物之參照化合物的改良顯像劑。【先前技術】麩胺酸酯係細胞代謝中之關鍵分子。在人類中，膳食蛋白係藉由消化為胺基酸而被分解，該等胺基酸在機體中用作其他功能作用之代謝燃料。胺基酸降解中之關鍵過程係胺基酸之胺基轉移至α-酮酸之轉胺基作用，該過程通常藉由轉胺酶來催化。麩酿胺具有各種生化功能，其包括： Φ DNA合成之受質，在蛋白質合成中起主要作用， _ 腸上皮細胞（在小腸内部排列成行之細胞）之燃料的主要來源，使免疫細胞迅速分裂從而有助於免疫功能之前體，藉由產生銨來調節腎臟中之酸-鹼平衡。參見： http://en.wikipedia.org/wiki/Glutamine及 Daniel Larraya 等人，Nutrients Department, November-December 140348.doc 201010733 2002 「Glutamine: This amino acid promises much - for mind, muscle and immunity. Can taking glutamine really help you? j

Medina 等人，（Molecular and Cellular Biochemistry 113:1-15，1992)提及已顯示對培養中之腫瘤細胞呈現高度毒性及對白血病及B 1 6黑素瘤呈現「活體内」高度毒性的麵酿胺類似物，即L-麵胺酸γ-單-異經將酸鹽。Medina等人提出可將麩醯胺酶用於治療用途或者可利用選擇性地抑制腫瘤細胞之麩醯胺轉運來減少腫瘤增生。人們明確需要參與治療諸如腫瘤及癌症等增生型疾病的替代麩醯胺類似物。已驚奇地發現本發明化合物可用於MRI顯像以及治療應用。【發明内容】本發明係關於其中納入19F之氟化麩胺酸（麩胺酸酯）及麩醯胺衍生物。本發明化合物可用於MRI顯像及治療增生型疾病。本發明亦揭示了包含本發明化合物之組合物。本發明亦係關於包含新穎氟化麩胺酸（麩胺酸酯）及麩醯胺衍生物之套組。【實施方式】在第一態樣中，本發明係關於通式I化合物

140348.doc 201010733 其中 A係 a) 經基， b) 具支鏈或不具支鏈之C^-Cs烷氧基， c) 具支鏈或不具支鏈之羥基CrCs烷氧基， d) 具支鏈或不具支鏈之0-CVC5烷基-(0-CVC4烷基）n-0-CVC4 烷基， e) NCCi-Cs 烷基）2， f) NH2， g) N(H)-L， h) O-L，或 i) O-Z， G係 a) 經基， b) O-Z， b) 具支鏈或不具支鏈之O-C^-Cs烷基， c) 具支鏈或不具支鏈之0-C2-C5烯基， d) 具支鏈或不具支鏈之O-CVCs烷基-(O-CVCU烷基）n-O-Ci-C^烷基，或 e) 具支鏈或不具支鏈之0-C2-C5炔基，且R1及/或R2分別獨立地為 a) 氫， b) 具支鏈或不具支鏈之BF-q-Cio烷氧基， c) 具支鏈或不具支鏈之BF-Ci-Cw烷基， 140348.doc · 5 - 201010733 d) 具支鍵或不具支鏈之19F_C2-Cig烯基， e) 具支鏈或不具支鏈之i9F_c2_c1()炔基， f) 經取代或未經取代之i9F_C6_C1G單環或二環芳基， g) 經取代或未經取代之i9F_烷基-C6-C1G單環或二環芳基， h) 經取代或未經取代之i9F_c5-C1()單環或二環雜芳基， * i) 經取代或未經取代之！9F_烷基-C5-C1G單環或二環雜芳基， ❹ j) 經取代或未經取代之19f-c3-c6環-烷基， k) 經取代或未經取代之i9F_烷基-C3-C6環-烷基， l) 經基， m) 具支鏈或不具支鏈之Cl-c5烷基，或 η)具支鏈或不具支鏈之c^-Cs烷氧基，其中燒基視情況間插有〇、S或N或由其置換，前提條件為取代基R1或R2中一者包含原子且另一取代基不包含19F原子， _ L係 a) 具支鏈或不具支鏈之Ci-Cs烷基， b) 具支鏈或不具支鏈之c2-C5烯基， c) 具支鏈或不具支鏈之CVC5烷基—(〇_Ci_C4烷基ν〇· “ CVC4烷基或 d) 具支鏈或不具支鏈之c2-C5炔基， Z係金屬離子等效物， 140348.doc 201010733 n=〇、1、2或 3及其醫藥鹽、非對映異構體及對映異構體。熟習此項技術之人員習知，在7.4之生理pH值下’本發明式（I)化合物呈或可呈兩性離子及/或鹽形式。在式I化合物之一個較佳實施例中，A係經基、具支鍵或不具支鍵之C1-C5烷氧基或nh2。在一個更佳實施例中，A係乙氧基。在式I化合物之一個較佳實施例中，G係羥基或具支鏈或不具支鏈之烷氧基。在一個更佳實施例中，G係曱氧基。在式I化合物之一個較佳實施例中，R1及/或R2各自獨立地為 a) 氫， b) 具支鏈或不具支鏈之19F-C2-C1G烷氧基， c) 具支鏈或不具支鏈之Bf-G-Cw烷基， d) 具支鏈或不具支鏈之19F-C3-Ch)烯基， e) 具支鏈或不具支鏈之19F-C3-C1Q炔基， f) 經取代或未經取代之19F-C6_C1()單環或二環芳基， g) 經取代或未經取代之19F-C5-Ci〇單環或二環雜芳基， h) 經取代或未經取代之19F-C3-C6環-烷基， i) 經基， j) 具支鏈或不具支鏈之C〗-C5烷基，或 k) 具支鏈或不具支鏈之烷氧基， 140348.doc -7- 201010733 前提條件為取代基R1或R2之一包含19?原子且另一取代基不包含19 F原子，在式I化合物之一個較佳實施例中’ Rl或r2 係 a)具支鏈或不具支鏈之19F-C2-C1()烷氧基’ a) 具支鍵或不具支鍵之19F-Ci-Cig烧基’ b) 具支鏈或不具支鏈之19F-C3-C1Q烯基， c) 具支鏈或不具支鏈之19F-C3-C1G炔基。在式I化合物之一個較佳實施例中，R1或R2 係 a) 具支鍵或不具支鏈之19F-C2-C5烧氧基、更佳19F-C3 烧氧基， b) 具支鏈或不具支鏈之烷基、更佳19F-C3烷基， c) 具支鏈或不具支鍵之19F-C3-C5烯基、更佳19f_C3婦基，

基。式I化合物之一個更佳實施例中，Rl或R2 在式I化合物之 a) 具支鍵或不具支鍵之19j? C6烷氧基， b) 具支鏈或不具支鏈之！9f 烷基， -C6-C1G烷氧基、更佳19 烧基、更佳 I40348.doc -8 - 201010733 更佳19F-C6 更佳19f-c6 C)具支鍵或不具支鍵之i9F<：6_CiQ烯基烯基， d)具支鏈或不具支鏈之r a * f U6-C1Q 炔基炔基。在式i化合物之又一較佳實施例中，&1或&2 係〆

a)b) 經取代或未經取代之19F-C6-Cl2單環或經取代或未經取代之單環基二環芳基，或二環雜芳 c)經取代或未經取代之191〇3-(：6環_烷基。在式I化合物之又一較佳實施例中，…係〗^且R2係氫。在一個較佳實施财，z係選自Mg2+、〜+、仏+及κ+。在一個更佳實施例中，Ζ係Na+。在一個較佳實施例中，n=〇、1或2。在一個更佳實施例中，n=〇、1。

本發明化合物係D-或L·麩胺酸/麩醯胺（C2位）之衍生物且在C4位具有R-或S-構型。在個較佳實施例中，式I化合物係L-麩胺酸/麩醯胺之衍生物且在C4位具有S-構型。在該 '组中’—個較佳化合物亞群係選自下述者：

140348.doc 201010733

140348.doc -10- 201010733 Ο

140348.doc •11 201010733

140348.doc • 12 201010733

在式1化合物之一個較佳實施例中，不主張下述化合物 4-[F-19]氟-麩胺酸醋， 4-[F-19]氟乙氧基-楚胺酸西旨， 4-[F-19]氟丙基-麵胺酸醋，及 4-[F-19]氟丁基·麵胺酸酯。在第二態樣中，本發明係關於一或多種通式〖化合物及醫藥上可接受之載劑。在第三態樣中，本發明係關於藉由使未經氟化之式I化合物與含氟化物或氟部分反應來獲得式〖化合物之方法。在第四態樣中，本發明係關於用作藥劑之式I化合物。在一個較佳實施例中，本發明係關於式I化合物製造用作增生型疾病抑制劑之藥劑的用途。較佳地’增生型疾病之特徵為病灶轉移或腫瘤。更佳地，增生型疾病係發展成選自惡性淋巴瘤、咽癌、肺癌、肝癌、膀胱瘤、直腸癌、前列腺癌、子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、腦瘤及惡性黑素瘤之惡性腫瘤的疾病。另外，式I化•合物係經口、非經腸、經直腸或經局部投與。在一個更佳實施例中，該藥劑係用於治療、預防或減輕增生型疾病發展。在一個較佳實施例中，本發明係關於治療增生型疾病之 140348.doc 13· 201010733 方法，其包含向有需要的個體投與治療有效量之如上文所定義之式I化合物。在第五態樣中，本發明係關於用作顯像劑之式I化合物。在一個較佳實施例中，本發明係關於式j化合物用於製造使增生型疾病顯像之顯像劑的用途。較佳地’增生型疾病之特徵為病灶轉移或腫瘤。更佳地’增生型疾病係發展成選自惡性淋巴瘤、咽癌、肺癌、肝癌、膀胱瘤、直腸癌、前列腺癌、子宮癌、卵巢參癌、乳腺癌、腦瘤及惡性黑素瘤之惡性腫瘤的疾病。另外，式I化合物係經口、非經腸、經直腸或經局部投與。在一個更佳實施例中’該顯像劑係磁共振顯像（MRI) 劑。在一個較佳實施例中，本發明係關於使增生型疾病、更佳病灶轉移及腫瘤顯像之方法，其包含向有需要的個體投與治療有效量之式I化合物。 Θ 在第六態樣中，本發明係關於如上文所定義之式J化合物用於鑑別F-18-PET-示蹤劑之用途。化合物可用作鑑別新穎F-18-PET-示蹤劑之競爭劑。 · 實例除非另有定義，否則本文所用所有技術及科學術語皆與 —名熟習本發明所屬技術者通常所瞭解之含義具有相同的含義。儘管在本發明之實踐或測試中可使用任何類似或等 140348.doc -14· 201010733 效於彼等本文所述者之方法及材料，但下文閣述了較佳之方法及材料。下述示意性實例係關於式合物之製備。下文所呈現實例不應理解為將本發明限定於本文所例示方法。 ’ 定義本文所用術語「治療有效量」係指當投與有需要的個體時，足以對病灶轉移產生如下文所定義治療作用之本發明 • 〖合物，量。視為「治療有效量」之量將端視化合物、疾病及其嚴重性、及擬治療人類年齡而有所變化，但可由一名普通技術人員在考慮到其自身知識及該揭示内容後根據常規確定。本文所用「治療」係指治療增生型疾病且包括： ⑴防止該疾病在個體中復發，具體而言，當此個趙在經過先前手術或藥劑治療後需要進一步藥劑治療時； (11)抑制該疾病’即’阻止其發展；或馨（111)減輕該疾病，即，使該疾病消退。本文所用術語「炫基」係指CjCi〇直鍵或支鍵院基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、正戊基、新戊基、庚基、或癸基。烧基可經全氣化或經選自由以下組成之群的丨至5個取代基取代··鹵素、羥基、 C1-C4烷氧基、或芳基（其可經【至3個鹵素原子取代）。更佳地，烷基係（^至^或匕至^❶烷基。倘若烷基間插有〇、8或\ ’則烷基係^至^❹直鏈或支鍵统基。 140348.doc 15 201010733 本文所用術語「烯基」係指含有至少一個雙鍵且具有2 至10個碳原子之直鏈或具支鏈單價或二價基團，例如，乙烯基、丙-2·稀-1-基、丁締基、戊小稀基戊二稀基、及諸如此類。本文所用術語「炔基」係指含有至少一個三鍵且具有〕至10個碳原子之經取代或未經取代的錢或域的單價或二價基團，例如，乙块基、丙·!炔基、丁 ^•块基、戍炔基、戊-3-炔基、及諸如此類。

烯基及块基可經選自由以下組成之群的一個或多個㈣基取代：齒素、經基、絲基、_C〇2H、_c〇2燒基、顧2 、-N02、-N3、-CN、Cl_c2〇醯基、或 Ci_c2〇醯氧基。2

本文所用術語「芳基」係指含有5至1〇個環原子之芳游碳環或雜環部分’例如’苯基、萘基、β夫録、嗔吩基、吡啶基、吡唑基、嘧啶基、噁唾基、嗒嗪基、吡嗪基：, 琳基、或嗟唾基。芳基可經選自由以下組成之群的一或多個取代基取代H、經基、烧氧基、-co2h、_c〇2^ 基、-NH2、烷基·NH2、Ci_C2G烷基_硫咮基、_N〇2、_Ν32、λ CN、q-CM院基、Cl_c2()酿基、或C〗_C2Q酿氧基。雜原号可絰氧化，只要此不導致芳香性質喪失，例如，吡啶部分可經氧化而得到吡啶N-氧化物。無論何時使用術語「經取代」，皆意欲表示—或多個在使用、，！取代」之表達中所指定原子上之氫可經選自指定基團之基團取代’前提條件為不超過所指定原子之正常化合價且該取代產生在化學上穩定的化合物，即，足夠穩鍵 140348.doc •16· 201010733 以在自反應混合物分離達適宜純度及調配成醫藥組合物後仍存留之化合物。取代基可選自鹵素原子、羥基、硝基、 (CVC6)幾基、氰基、腈、三氟曱基、（Ci_C6)續酿基、（Ci· c6)烷基、（CVC6)炫氧基及（Cl_c6)硫基。熟習此項技術之人員習知，在7.4之生理pH值下，本發明化合物（若適用）呈或可呈兩性離子及/或鹽形式。通常，將有效量之包含F磁共振顯像劑及醫藥上可接受 _ 之載劑的顯像劑調配物投與患者並使該患者或該患者之一部分顯像。本文所用術語「有效量」表示足以增強或改變所獲得MRI影像之無毒量，更具體而言，其表示可有利於更佳地觀測器官及/或組織顯像之量。較佳地’該患者係哺乳動物；最佳地，該患者係人類。本發明F磁共振顯像劑可藉由任一適宜途徑以各種方式來投與，包括（例如）經口投與以使上胃腸道顯像；經直腸投與以使包括結腸之下胃腸道顯像；經鼻投與以使鼻及交 • 流通道顯像；經陰道投與以使輸卵管及交流通道顯像；非經腸投與（包括皮下、肌内、靜脈内、真皮内及肺）以使内部器官、組織、腫瘤及諸如此類顯像。應瞭解較佳途徑將 . 1¾擬顯像之器官或組織而改變。較佳投與途徑包括非經腸及經口、更佳經靜脈内。儘管可能單獨投與該顯像劑，但其較佳以醫藥調配物形式呈現’該醫藥調配物包含至少一種顯像劑化合物及諸如稀釋劑或賦形劑等一或多種醫藥上可接受之載劑，該（等）載劑可包括（例如）填充劑、增量劑、潤濕劑、崩解劑、表 140348.doc 17 201010733 面活性劑、或潤滑劑，端視投與性質及方式及劑型而定。在可與調配物其他成份兼容且不損害患者之意義上，每一載劑必須為「可接受的」。該醫藥調配物可視情況包括其他診斷劑或治療劑。技術及調配物可參見（例如） Remington’s Pharmaeeutical 以&…出版公司， Easton，ΡΑ·(最新版本）。

週於經口投與之本發明調配物可以水溶液形式呈現。者，調配物可卿囊、域或錠劑形式投與，且每—者含有預定量之顯像劑、粉劑、顆粒或膏糊。適於非經腸投與之調配物包括水性等渗無菌注射液，可含有抗氧化劑、緩衝液、抑菌劑及使該調配物與意欲又者之血液等滲之溶f;及水性無菌懸浮液其可包括浮劑及增稠劑、及_體或其它經設計以將該化合物乾至一或多種組織或H官之微粒㈣。該等調配物可劑量或多㈣密封容器（例如，純及小瓶）呈現， =存東乾燥（;東乾）條件下且僅需在❹前添加用於;

射之無滅液體載劑，例如、可由益菌（②時配製之注射液及懸浮; J由無菌粉劑、顆粒或錠劑製備。應瞭解5除上文转Rif 4a Ύί 文特別鈦及之成份以外，類型本發明調配物亦可包據所呔調配4 彼笼'了包括業内習用的其他製劑，例如等其他製劑。括諸如甜味劑、增稠劑及墙味旁本發明之F磁共振顯像_ t s 劑亦可以可藉由（例如）業内習田方法製備之獸用調配物形内習用々式呈現以供使用。 140348.doc •18· 201010733 對於有效F MRI而言，丨吁磁妓挺磁振顯像劑之劑量將端視顯像劑調配物之自旋密度、流動 (擴政及灌主）、磁敏感性及 :豫效能(T1及T2)而定。含，F之顯像劑可以每公斤患者之 F毫克數（縮寫為mg F/kg)來方便地計算。舉例而古，對 Μ㈣投與而言’典型劑量可為約50至約咖mg F/kg ' 更佳約 1〇0至約 5〇〇 mg F/kg。

連續投與方法（例如，靜脈内）之適宜投與速率為業内已知。典型投與速率係約〇.5至5 mL調配物/秒、更佳約卜] mL/s。顯像可在開始投與之前或之後開始、續、並可在投與後繼續。應瞭解，劑量、劑量體積期^ 物濃度、投與速率、及顯像方案將受到個體化處理以適用於具體患者及所尋求檢查且可由熟練從業者確定。選擇此等參數之指導原則為業内已知（尤其可參見Katzberg，1992 supra) 〇化學化合物作為造影劑之效用及效能端視其在活體内展現可預測及期望之生物分佈及代謝的能力而定。其活體内行為端視諸如分子量、電荷、滲透壓、疏水性' 分配係數、對代謝分解之易感性及把向組織或器官之效能等參數而定。為了改良其溶解性及/或生物分佈，可將許多造影劑與諸如乳液、脂質體及微粒等遞送系統聯合使用。實例：實例1 (2S，4S)-2-胺基-4-(3-氟丙基）-戊二酸 a) (2S，4S)-4-烯丙基-2·第三-丁氧基羰基胺基-戊二酸二 140348.doc 19- 201010733

將 11.01 g (40 mmol) Boc-麵胺酸二甲酯（Advanced Chemtech) 溶解於160 mL四氫呋喃（THF)中並冷卻至-70T：。在-7(TC 下，逐滴添加88 mL (88 mmol)雙（三甲基甲梦炫基）醯胺鐘於THF中之1 Μ溶液歷時1 hr時間，並在_7(TC下將其再攪拌2 hr。隨後，逐滴添加14.52 g (120 mmol)烯丙基溴歷時 2 hr時間，之後移除冷卻浴，並添加2〇〇 mL 2 N鹽酸及400 mL乙酸乙酯。分離出有機相，用水洗滌至中性，經硫酸鈉乾燥’過濾並藉由蒸發縮減體積。藉助矽膠用己烷/乙酸乙酯對粗製物實施層析。合併所得各產物部分並將溶劑蒸發至乾燥。產率：3.3 g (26。/〇) 元素分析：計算值：C 57.13 Η 7.99 Ν 4.44 實驗值：C 56.97 Η 8.12 Ν 4.30 b) (2S，4S)-2-第三-丁氧基羰基胺基-4-(3-羥丙基）-戊二酸二甲酯

將3.15 g (10 mmol)產物la溶解於50 mL THF中並在冰浴中冷卻°在氮氣流及冰冷卻下經20 min時間逐滴添加存於 140348.doc -20· 201010733 THF中之二硼烷/THF·錯合物（1 Μ 13.3 mL)。將混合物在冰上授拌1 hr，並使其於室溫下過夜。隨後，逐滴添加15 mL 1 N氫氧化鈉，之後逐滴添加13.3 mL 30%過氧化氫水溶液。在30 min後用水稀釋反應混合物，蒸餾出THF並用乙酸乙酯萃取水性剩餘物。分離出有機相，用水洗滌至中性’經硫酸鈉乾燥，過濾並藉助蒸發器蒸發來縮減體積。藉助矽膠管柱層析使用己烷/乙酸乙酯梯度純化粗製產物。合併各產物部分並將溶劑蒸發至乾燥。產率：0.6 g (18 %) 元素分析：計算值：C 54.04 Η 8.16 Ν 4.20 實驗值·· C 53.88 Η 8.25 Ν 4.39 c) (28,48)-2-第三-丁氧基羰基胺基_4-(3-氟丙基）-戊二酸二甲酯

將0.33 g (1 mmol)羥基化合物lb溶解於15 mL二氯甲烷中並在冰浴中冷卻。在添加0.32 g (2 mm〇i)二乙基胺基硫二氟化物（DAST)後，將反應混合物在冰浴上授拌i &。隨後用水洗務混合物並用硫酸鈉乾燥有機相，過遽並藉助蒸發器洛發來縮減體積。藉助碎膠用己炫/乙酸乙醋對原料實施層析。合併各產物部分並藉由蒸發移除溶劑至乾燥。產率：25 mg (8。/〇) 140348.doc •21 - 201010733 元素分析：計算值：C 53.72 Η 7.81 F 5.66 Ν4.18 實驗值：C 53.55 Η 7.94 F 5.21 Ν 4.37 d) (2S，4S)-2-胺基-4-(3-氟丙基）-戊二酸

將23_5 mg (0.07 mmol)氟化化合物ld溶解於2 mL thf 中，補充1 mL 1 N氫氧化鈉並在室溫下攪拌4 hr。隨後，縮減混合物體積直至乾燥。使剩餘物再溶解於3 ν HC1/二乙醚中，攪拌過夜，藉由蒸發縮減體積並使用二乙喊反覆再蒸餾。藉助C1 8-矽膠用水/甲醇梯度對粗製物實施層析。合併各產物部分並縮減其體積至乾燥。產率：4 mg (27 %) 元素分析（關於無水化合物之計算）：計算值：C 46.37 Η 6.81 F 9.17 Ν 6.76 實驗值：C 46.11 Η 7,02 F 8.87 Ν 6.93 實例2 (25^4 (5)-2-胺基- 4-(3 -氟丙基）-戊二酸之中性納鹽 a) (2<S，4<S)-4-稀丙基-2-第三-丁氧基羰基胺基_戊二酸二_ 第三-丁基酯

將 26.96 g (75 mmol) Boc-麩胺酸二-第三-丁基醋（J〇urnal 140348.doc -22- 201010733 of Peptide Research (2001)，58，338)溶解於 220 mL THF 中並冷卻至-70°C。在-70°C下經2 hr時間添加雙（三曱基曱破烧基）酿胺裡存於THF中之165 mL (165 mmol) 1 Μ溶液並在-70C下將其再擾拌2 hr。隨後，逐滴添加27.22 g (225 mmol)烯丙基溴’且在-70 °C下2 hr後移除冷卻浴並添加3 75 mL 2 N鹽酸及1.25 L乙酸乙酯。分離出有機相，用水洗滌至中性，經硫酸鈉乾燥，過濾並藉由蒸發縮減體積。藉助矽膠用己烷/乙酸乙酯對所得粗製物實施層析。合併所得各產物部分並將溶劑蒸發至乾燥。產率：15.9 g (53.1 %) MS (ESIpos): m/z=400 [M+H] + 1H NMR(300 MHz，氣仿-<^)(1卩卩111 1.32-1.58 (111,2711)1.81-1.92 (m, 2H) 2.25-2.39 (m, 2H) 2.40-2.48 (m, 1H), 4.10-4.18 (m, 1H) 4.85-4.92 (d, 1H) 5.02-5.11 (m, 2H) 5.68-5.77 (m，1H) _ b) (25,45)-2-第三-丁氧基羰基胺基_4_(3_羥基丙基）戊一酸二-第三_丁基g旨

將15.58 g (39 mmol)實例2a中所述化合物溶解於2〇〇 mL THF中並在冰浴中冷卻。在氮氣流下使用冰冷卻經2〇⑺化時間逐滴添加存於THF中之二硼烷/THF_錯合物（1 M 546 mL (54·6 mmol)) ^將混合物在冰上攪拌2 h並使其於室溫 140348.doc -23- 201010733 58.5 mL (58.5 下過夜。隨後在〇t下再依次逐滴添加 mmol) 1 N氫氧化鈉，58 5 mL 3〇過氧化氫水溶液。在該溫度下1小時後，用水稀釋反應混合物，蒸館出thf並用乙酸乙酯萃取水性剩餘物。分離出有機相，用水洗滌至中性，經硫酸鈉乾燥，過濾並將濾液蒸發至乾燥。藉助矽膠用己烷/乙酸乙酯對所得粗製產物層析。合併各產物部分並將溶劑蒸發至乾燥。產率：8.5 g (52.2 %) MS (ESIpos): m/z=418 [M+H] + 1H NMR(300 MHz，氣仿-c/)d ppm 1.32-1.58 (m，27H) 1 60 1.70 (m, 2H) 1.73-1.94 (m, 4H) 2.05-2.12 (m, 1H), 2.33-2.40 (m, 1H) 3.58-3.68 (m, 2H) 4.15-4.22 (m, 1H) 4.95-5.〇3 (d，1H) c) (2«S，4S)-2-第三-丁氧基幾基胺基·4·(3_氟丙基）戊二酸二-第三-丁基酯

將29.22 g (70 mmol)實例2b中所述經基化合物溶解於7〇〇 mL THF中，之後添加42.5 g (420 mmol)三乙胺。在添加 25.14 mL (140 mmol)全氟丁炫績醯氟（Aldrich)及 22.57 g (140 mmol)三乙胺/氫氟酸（Aldrich)後，在室溫下將混合物攪拌65 h，藉由蒸發縮減體積並藉助矽膠用己烷/乙酸乙酯對所得粗製產物實施層析。合併各產物部分並藉由蒸發將 140348.doc •24- 201010733 其縮減至乾燥。產率：15_9 g (54_1 %) MS (ESIpos): m/z=420 [M+H] + 1H NMR(300 MHz，氣仿-£/)(1131)1111.40_1.55(111，2711)1.6〇- 1.95 (m, 6H) 2.33-2.42 (m, 1H) 4.15-4.22 (m, 1H) 4.30-4.40 (m, 1H) 4.48-4.55 (m, 1H) 4.85-4.90 (d, 1H) d) (25,45)-2-胺基-4-(3-氟丙基）-戊二酸之中性納鹽

將15.52 g (37 mmol)實例2c中所述化合物小心地溶解於 110 mL三氟乙醇（起泡丨）中並在室溫下攪拌3天。隨後將反應混合物蒸發至乾燥並用二乙醚將所得粗製產物再蒸餾3 次且使殘餘物溶解於約2〇〇 mL水中，用2〇 mL 1N鹽酸將 PH值調整為2，之後接連用二氯甲烷及乙酸乙酯洗滌並用i N氫氧化鈉（約65 mL)將水溶液pH值調整為7 4。將該溶液冰凍乾燥並隨後藉助C18-矽膠用水/曱醇對其實施層析且合併所得各部分並藉由蒸發縮減體積。產率：7.5 g (88 0/〇) MS (ESIpos): m/z=208 [M+H] + 1H NMR(300 MHz，甲醇-咖 ppm 87 (m，5H) 2 u (m，1H) 2.47-2.52 (m, 1H) 3.45 (m，1H) 4.41 (m，2H) 實例3 ’ 生物學數據 140348.doc -25- 201010733 在細胞毒性分析中採用A549細胞（人類券//、加虑摩痛）使用標準 Alamar Blue 分析（Invitrogen 編號 DAL1025)研究 (25^45)-2-胺基-4-(3-氟丙基）·戊二酸、（2s，4S)-2-胺基-4-[2-氟-5-(三氟甲基）苄基]-戊二酸及l_麵胺酸酯之生物學效應。使用補充有麵醯胺及1 〇〇/。胎牛血清（FCS)之杜貝克氏改良鷹氏培養基（Dulbecco's modified Eagle's Medium) (Sigma D0422)作為培養緩衝液。使用測試化合物將細胞培養48h並依照製造商方案對其進行研究。對照細胞及用2 mM L-麩胺酸酯培養之細胞顯示無細胞參活力差異。然而，用（25·，45>2-胺基-4-(3-氟丙基）-戊二酸及（2S，4S)-2-胺基-4-[2-氟-5-(三氟甲基）苄基]-戊二酸二者培養之細胞皆驚人地顯示細胞活力急劇降低。該效應對於 (2S，45>2-胺基-4-(3-氟丙基）_戊二酸而言最為明顯。為了確定劑量依賴性，使用在4 μΜ-2 mM範圍内之漸增濃度的胺基·4_(3_氟丙基）戊二酸培養A549細胞之後使用如上文所述Alamar Blue分析套組來量測細

胞活力。 Q 細胞活力似乎因使用測試化合物㈣4外2-胺基-4-(3_氟丙基）-戊-酸培養而以劑量依賴方式受到影響。ec5〇係約 3 8 μΜ 〇實例4 2-胺基-4-(6-氟己基）_戊二酸 a) (2<Μ5)·2·第二.丁氧基幾基胺基_4·(6_蛾己基）·戊二酸二甲酯 140348.doc -26 - 201010733

將 5.51 g (20 mmol) Boc-L-楚胺酸二甲酯（Advanced Chemtech)溶解於6〇 mL四氫呋喃（THF)中並冷卻至-70°C。在-70°C下經1小時時間逐滴添加雙（三甲基甲矽烷基）醯胺鋰存於THF中之44 mL (44 mmol) 1 Μ溶液並在-70。(：下將其繼續攪拌2 h。隨後，逐滴添加20.28 g (60 mmol) 1,6-二碘己烷，並在-70°C下2 h後移除冷卻浴並添加1〇〇 mL 2 N 鹽酸及300 mL乙酸乙酯。分離出有機相，用水洗滌至中性’經硫酸納乾燥’過滤並藉由蒸發縮減遽液體積。藉助矽膠用己烷/乙酸乙酯對所得粗製產物實施層析。合併所得各部分並藉由蒸發縮減其體積。產率：0·2 g (2.1 %) MS (ESIpos): m/z=486 [M+H] + 1H NMR(300 MHz，氣仿_£^)(1??11112〇_17〇(111，2州）175_ 2.10 (m, 5H) 2.40-2.50 (m, ih) 3.14-3.20 (m, 2H), 3.5〇- 3.75 (m, 3H), 4.15-4.25 (2H) 4.32-4.42 (m, 1H) 5.00-5.10 (d, 1H) b) (2S，4«S)-2-第二-丁氧基羰基胺基_4_(6_氟己基）_戊二酸二曱酯

140348.doc •27· 201010733 將152 mg (1.12 mmol)氟化銀存於！ 5 mL水中之溶液添加至0.49 g (1 mmol)在實例3a中所述且存於3〇 mL乙腈之化合物中並在4(TC下將其攪拌過夜。將所得懸浮液過濾，將溶液蒸發至乾燥並藉助矽膠用己烷/乙酸乙酯對所得粗製產物實施層析。合併所得各部分並藉由蒸發縮減其體積。產率：132 mg (35 %) MS (ESIpos): m/z=378 [M+H] + 1H NMR(300 MHz，氣仿-(i)d ppm 1.20-1.70 (m, 29H) 1.75· 2.10 (m, 5H) 2.40-2.50 (m, 1H) 3.14-3.20 (m, 2H), 3.5〇_ 3.75 (m, 3H), 4.15-4.25 (2H) 4.32-4.42 (m, 1H) 5.00-5.10 (d, 1H) c) (25,45)-2-胺基-4-(6-氟己基）_戊二酸

將26.4 mg (0_07 mmol)實例3b中所述化合物溶解於2 mL THF中，之後添加1 mL 1 N氫氧化納並在室溫下授拌41ι。隨後將反應混合物蒸發至乾燥並使所得粗製產物溶解於存於二乙醚中之約20 ml 3 N氯化氫中，攪拌過夜，蒸發至乾燥並使用二乙醚再蒸餾若干次。藉助C18_矽膠用水/甲醇對所得粗製產物實施層析。合併所得各部分並藉由蒸發縮減其體積。產率：5.8 mg (33 %) 140348.doc -28 - 201010733 MS (ESIpos): m/z=250 [M+H] + 實例5 a) (2S，4S)-2-第三-丁氧基羰基胺基-4_(2_氟-5_三氟曱基-节基）-戊-二酸二-第三-丁基醋

將 2.7 g (7·5 mmol) Boc-麩胺酸二-第三-丁基酯（J〇urnal of Peptide Research (2001)，58, 338)溶解於 30 mL THF 中並冷卻至-70°C。在70°C下經40 min時間添加雙（三甲基甲石夕烧基）酿胺链存於THF中之16.5 mL (16· 5 mmol) 1 Μ溶液並在-70°C下將其再授拌2 h。隨後，逐滴添加存於7 mL THF 中之1.93 g (7.5 mmol) 2-氟-5-三氟甲基苄基溴，且在_7(rc 下2 hr後移除冷卻浴並添加37.5 mL 2 N鹽酸及1〇〇 niL二氣甲貌。分離出有機相’用水洗滌至中性，經硫酸鈉乾燥，過濾並藉由蒸發縮減體積。藉助矽膠用己烷/乙酸乙醋對所得粗製物實施層析。合併所得各產物部分並將溶劑蒸發至乾燥。產率：2.3 g (57.3 %) MS (ESIpos): m/z=536 [M+H] + 1H NMR(300 MHz，氯仿-(1)£1卩卩1111.〇3-1.50(111，2711)1.8〇- 2.00 (m, 2H) 2.60-3.10 (m, 3H) 4.05-4.30 (m, 1H) 4.85-4.95 (d, 1H) 7.05-7.15 (m, 1H) 7.40-7.55 (m, 2H) b) (25,45)-2-胺基-4-(2-氟-5-三氟甲基-节基戊二酸之 140348.doc •29- 201010733 中性鈉鹽

將2.14 g (4 mm〇l)實例Sa中所述化合物溶解於i〇 mL THF中。添加存於二己醚中之5〇mL2N鹽酸並在室溫下將混合物攪拌2天。隨後將反應混合物蒸發至乾燥並用二乙醚將所得粗製產物再蒸餾3次且使殘餘物溶解於約1〇 ^^水中並用1 N氫氧化鈉將水溶液pH值調整為74。將該溶液冰凍乾燥並隨後藉助C18_矽膠用水/曱醇對其實施層析且合併所得各部分並藉由蒸發縮減體積。產率：1.25 g (97 %) MS (ESIpos): m/z=324 [M+H] + 1H NMR (300 MHz, D2〇) d ppm 1.97-2.20 (mj 2H) 3.02- 3.08 (m, 3H) 3.72-3.78 (m, 1H) 7.25-7.32 (m, iH) 7.62-7.68 (m, 2H) 【圖式簡單說明】圖1 : (2^4^)-2-胺基-4-(3-氟丙基）·戊二酸及未經取代之[_麩胺酸酯之細胞毒性的比較。使用測試化合物培養A549細胞並依照Alamar Blue分析製造商方案來對其進行研究。圖2 : (2<S，4S)-2-胺基-4-(3-氟丙基）·戊二酸在A459細胞中之潛在細胞毒性的劑量依賴性。 140348.doc -30-

Claims

201010733 七、申請專利範圍··

其中 A係 a)羥基， φ b)具支鏈或不具支鏈之CVCs烷氧基， c) 具支鏈或不具支鏈之羥基烷氧基， d) 具支鏈或不具支鏈之0-CVC5烷基-(0-CVC4烷基）n-0-C 1 - C4烧基， e) 烷基）2， f) NH2， g) N(H)-L， h) O-L ，或 • i) O-Z，且G係， a)羥基， ’ b) O-Z ， = b)具支鏈或不具支鏈之O-CVQ烷基， c) 具支鏈或不具支鏈之0-C2-C5稀基， d) 具支鏈或不具支鏈之O-CVCs烷基-(O-CVQ烷基）n-0-CVC4烷基，或 140348.doc 201010733 e)具支鏈或不具支鏈之且R1及/或R2分別獨立地為 a)氫， b) 具支鏈或不具支鏈之19F-CVe c) 具支鏈或不具支鏈之19F-CVe d) 具支鏈或不具支鏈之19F-CVe e) 具支鏈或不具支鏈之19F-C2_c： 10燒氧基 ίο烷基， 1 〇缚基， 10炔基， f) 經取代或未經取代之19F-C6_e @ Ιιο單環或二環芳基， g) 經取代或未經取代之19F-焓IW 基-。6-(：1〇單基環或二環芳

h) i) 基經取代或未經取代之19f-c5、c 經取代或未經取代之19f-燒基 10單環或二環雜芳基， 'CS-C1G單環或二環雜芳 j) 經取代或未經取代之19F-(Vp @ 3 16%-烷基， k) 經取代或未經取代之mF-燒基<3<6環_烧基， l) 經基， m) 具支鏈或不具支鏈之（VC5烷基，或〇 η)具支鏈或不具支鏈之C]-C5烷氧基，其中烷基視情況插有Ο、S或N或由其置換，前提條件為取代基R1或R2中一者包含19F原子，且另一取代基不包含19 F原子， · 且L係 a) 具支鏈或不具支鏈之C^-Cs烷基， b) 具支鏈或不具支鏈之C2-C5烯基， 140348.doc -2· 201010733 C)具支鏈或不具支鏈之Ci-Cs烷基-(O-Ct-C^烷基）n-O-Cr C4炫1基，或 d)具支鏈或不具支鏈之C2-C5炔基，且Z係金屬離子等效物， n=0、1、2或 3，且其中該化合物包含所有可能的非對映異構體及/或對映異構體之混合物以及對映異構純化合物及其醫藥上之鹽。 2.如請求項！之化合物，其中…係！^且r2係氫。

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φ 4，一種醫藥組合物’其包含一或多種通式以匕合物及醫藥上可接受之载劑。 5. —種獲得如請求項1之通式I化合物之方法，其藉由使式j 之未經氟化化合物與氟原子或衍生物反應而達成。 6. 如請求項1至3之通式I化合物，其用作藥劑。 7. —種如請求項1至3之通式I化合物之用途，其用於製備用作患者之增生型疾病之抑制劑的藥劑。 140348.doc 201010733 8.如唄求項7之用途，其中該藥劑係用於治療、預防或減輕增生型疾病。種〜療增生型疾病之方法’其包含向有需要的個體投與/α療有效量之如請求項丨至3中任一項所定義之通式以匕合物。 1〇_如印求項7至10中任一項之用途或方法，其中該式1化合物係經口、非經腸、經直腸或經局部投與。鲁 η·如請求項1至3之通式I化合物，其用作顯像劑。 12· —種如請求項1至3之通式〗化合物之用途其用於製備使患者之增生型疾病顯像之顯像劑。 13.如請求項π之用途’其中該顯像劑係磁共振顯像（mri) 劑。 14· 一種使增生型疾病顯像之方法，其包含向有需要的個體投與治療有效量之如請求項1至3中任一項所定義之通式工化合物。 • 15_如請求項ό至15中任一項之用途或方法，其中該式j化合物係經口、非經腸、經直腸或經局部投與。 16. —種套組，其包含如請求項1至3中任一項中所定義之通式I化合物。 140348.doc