TW201004623A - Pharmacological composition for prevention and treatment of respiratory disease containing pyrazolopyrimidinone compound or pharmaceutically acceptable salts thereof - Google Patents

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201004623 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種用於預防及治療呼吸道疾病之醫藥 組成物。 【先前技術】 呼吸道疾病影響著支氣管及肺部，且包括慢性阻塞性 肺部疾病、支氣管擴張症、氣喘、肺癌、以及支氣管腺瘤。 慢性阻塞性肺部疾病（COPD)係為一種當肺部吸入有 害顆粒或氣體時所產生之異常發炎反應，其會造成氣管持 續且可逆之收縮反應，並包含慢性支氣管炎或肺氣腫。如 基因體質及氣管高反應性等先天因素，以及如吸煙、傳染 病、工作及外在環境等後天因素，均為造成此疾病之主要 因素。在這些影響因素中，已知吸煙係為一種高危險因子， 即便因不同個別之基因傾向等，而有極大之差異性，但目 前已證實長時間吸煙與氣管收縮直接相關（MacNee NW, Proc Jw rAorac <S*<9c，2005)。全世界患病率估計約5至10%成 人（Halbert RJ et al·，C/zesi，2003; Halbert RJ et al.，五wr 乂 2006)，且近年有關中南美洲區域之研究報告顯 示，約7.8至19.7%為GOLD(慢性阻塞性肺病全球倡議組織） 第一級之病患，甚至更加嚴重（Menezes et al·, Lawce/1， 2005)。至於韓國國内患病率，報導顯示18歲至45歲之成人 中約7.8% (男性10.9%，女性4.9%)、而45歲以上之成人中約 17.2% (男性25.8%，女性9.6%)為GOLD第一級或更加嚴 201004623 重。隨著年齡增加’患病率也隨之提升。此外，吸煙者因 吸煙而導致之COPD惡化頻率（即所謂之COPD風險因子）係 為非吸煙者之三倍以上（26.9% vs. 8.8%);且隨著吸煙程度 增加，疾病惡化頻率也成比例增加（10隻雪茄以下、11至i 9 隻雪％、20隻雪蘇以上之頻率分別為12.8%、18.8%、以及 35.6%)( The national COPD Survey Committee, Am J Respir Care 2003)。咳嗷、多痰、咳血、氣管阻塞係為 此病症之代表性症狀，且此症狀造成社會及經濟成本也持 續增加。在美國，於1993年與COPD直接有關之醫療支出約 $14.7百萬，而包含因早逝所造成之如勞工及生產力降低等 間接成本之社會成本預估約在$23.9百萬（Sullivan SD et al^ C/ζαί，2000)。目前已有研究顯示，在2002年，這些成本甚 至增加至 $32.1 百萬（National Heart, Lung, and Blood

Institute，2004)。根據失能調整生命年（DALYs)指數顯示， 其為顯不健康狀態生存時間縮短之指數，於1990年COPD係 為排名第12之疾病’預估在2020年則成為排名第5之疾病， 此意味著COPD為一種威脅生命健康之疾病之一。 目前用於治療慢性阻塞性肺部疾病之藥物主要可分為 皮質類固醇（corticosteroid)、支氣管擴張劑 (bronchodilator)、及其混合藥劑。皮質類固醇係用以治療具 有嚴重或復發症狀之COPD患者，且因皮質類固醇會導致如 肌力喪失、器官功能衰退、及呼吸衰竭等副作用，故不建 議使用持續性藥劑。支氣管擴張劑可次分為β2激動劑（β2 agonist)、抗膽驗藥物（anticholinergic)、以及甲基黃嗓吟 (methylxanthine)。β2激動劑會造成氣管平滑肌舒張，且可 5 201004623 更分類為速效型及緩效型藥物，並會產生如心跳加速 (tachycardia)、顫抖、低血鉀（hypokalemia)、以及急速免疫 (tachyphylaxis)之副作用。抗膽驗藥物之普遍副作用係為口 乾，且目前已證實因使用某些藥物吸入用之面罩會導致之 青光眼（glaucoma)。黄嘌呤衍生物則會非選擇性的抑制罐酸 二酯酶（phosphodiesterase)(此後，係簡稱為PDE)，故會造成 支氣管擴張或抗發炎反應，且黃嗓吟衍生物已被證實因非 選擇性抑制反應可能導致藥物相關的副反應，如頭痛、失 眠、噁心、心灼熱、心房及心室心律失常（atrial and ventricular arrhythmia) ' 以及癲痛大發作（grand mal epilepsy)( Yoo Jee-Hong, Monthly Korean Pharmaceutical Industry News，2007)。 為了克服這些缺點，關於使用PDE選擇性抑制劑之新 型治療劑正蓬勃發展中。目前已知PDE係為一種酵素，其 可水解如環磷酸腺苷（cAMP)或環磷酸鳥苷（cGMP)之環核 苷酸，且在人體中存在有11種類並至少有44種不同酵素 (Chung KF，Ewr 2006)。其中，尤以使用第四 型磷酸二酯酶（PDE-4)之治療劑之研究是最受矚目的》 PDE-4不僅存在於如T細胞、B細胞、嗜伊紅血球 (eosinophil)、以及嗜中性白血球等發炎細胞，亦存在於氣 管平滑肌細胞中；且是為一種水解cAMP之酵素（Houslay MD and Adams DR，«/, 2003)。由於細胞中增加之 cAMP會抑制發炎細胞因子（pro-inflammatory cytokine)分 泌，故可展現抗發炎活性，同時透過氣管平滑肌舒張可使 支氣管擴張，因此，PDE-4可做為如COPD疾病之治療劑而 201004623 受到喝目。然而，代表性之PDE-4抑制劑’諾普利藍（rolipram) 卻會產生如嘔吐及噁心等副作用，故目前已發展出更具有 選擇性之PDE-4次世代治療藥物，但卻仍面臨難以緩和副作 用產生之問題。 近來，第五型磷酸二酯酶（PDE-5)因可用於做為治療包 含COPD之肺氣管疾病之新藥而受到矚目。PDE-5不僅僅存 在於内皮細胞，亦存在於肺部血管平滑肌、支氣管血管、 以及氣管平滑肌中，且PDE-5係為一種可水解cGMP之酵素 (Sebkhi A, Circulation, 2003; Yanaka N, Eur J Biochem, 1998)。代表性之PDE-5抑制劑，昔多芬（sildenafil)，於臨床 前試驗中顯示，其可誘發支氣管肺泡流體中之白血球擴散 抑制效果（Toward TJ, dw ·/及CWi Care Med, 2004);同 時，在兩位COPD病患之簡略臨床試驗中顯示，於第一秒吐 氣（FEV1)之用力呼氣容積係分別增加24%及12%(Charan NB，CAej/，2001)。 【發明内容】 本發明之發明者合成一種新化學式1之°比唑并嘧啶酮 化合物，其被證實此化合物可用以做為PDE-5抑制劑（WO 00/027848、韓國專利第0353014號）。同時，本發明之發明 者持續研究將吡唑并嘧啶酮化合物做為PDE-5抑制劑，並證 實吡唑并嘧啶酮化合物可有效治療前列腺增生與相關下泌 尿道症狀（韓國專利申請號06-30724及PCT/KR06/1242)、門 靜脈高血壓（韓國專利申請號05-99900及 7 201004623 PCT/KR05/3526)、以及慢性心臟衰竭（韓國專利申請號 07-56392)，而提出專利申請。 本發明之吡唑并嘧啶酮化合物可顯著增加一般PDE-5 之選擇性，故可明顯降低副作用，並於1小時内迅速產生藥 效以提高血濃度時間，且因藥物活性消除半衰期為12小 時，故可保持其持續性而製成一天一劑之形式。此外，本 發明之發明者，藉由確保藥物可在肺部組織中充分擴散， 並可有效舒張氣管平滑肌及減緩氣管高反應性，以及抑制 肺部受損及發炎細胞浸潤情形，持續研究在口服後藥物於 組織擴散之情形，而完成本發明。 本發明之主要目的係在提供一種醫藥組成物，其係用 於預防及治療包括肺氣管疾病之呼吸道疾病，如慢性阻塞 性肺部疾病、慢性支氣管炎、肺氣腫、以及氣喘，本發明 之醫藥組成物於肺部組織中具有極佳之擴散性，並透過選 擇性抑制氣管平滑肌中之PDE-5活性、以及舒緩氣道高反應 性，而可在不發生任何副作用下達到支氣管舒張之功效。 本發明提供一種醫藥組成物，其包括5-[2-丙氧基-5-(1-甲基-2-吡咯烷基乙基胺基磺酸基）苯基]-1-甲基-丙基-1,6-二 氫 -7H- 吡 唑 并 （4,3-d) 嘧啶 -7- 酮 (5-[2-propyloxy-5-(l -methyl-2-pyrolidinylethylamidosulpho nyl)phenyl]-1 -methyl-propyl -1,6-dihydro-7H-pyrazolo(4,3-d )pyrimidin-7-one)，如下列化學式1 一 °比°坐并0^咬_化合物 或其醫藥上可接受之鹽類，以做為預防及治療呼吸道疾病 之主要成分。 <化學式1> 201004623

化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物係為一種第五型磷酸 二酯酶之抑制劑。此化合物可具有極佳之PDE-5抑制活性及 選擇性。因此化合物具有較佳之溶解度，故可快速吸收， 且具有較高之生體利用率及極大之分散容積。此化合物之 特徵在於，其消除半衰期為具相同藥物機制之昔多芬或伐 地那非（vardenafil)之三倍以上。 化學式1之。比°坐并0^咬_化合物並非是水合物或溶劑 化物，而是一種、熔點為158~161 °C而pKa!及pKa2值分別為6,5 φ 及12.5之白色或淺白色粉末。此化合物無法溶於水，但可溶 於乙酸、曱醇、以及氣仿。 化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物係使用三步之合成步 驟所製備而成，且此化合物之製備方法係揭露於WO 00/027848以及韓國專利第0353014號。接下來，將簡略敘 述合成方法。 於步驟1中，製備4-[2-丙氧基-5-(氣磺醯基）苯甲醯胺 基]_1_ 甲基 -3- 丙基 -5- 胺基曱醯吡唑 (4-[2-propyloxy-5-(chlorosulfonyl)benzamido]-1 -me thy 1-3-p 9 201004623 ropyl-5-carbamoyl pyrazole)。製備過程中，將一預疋 f 之 4-[2-丙氧基苯曱醯胺基]-1·甲基·3·丙基-5-胺基甲醯吡唑 (4-[2-propyloxy benzamido]-1 - methyl-3-propyl-5-carbamoyl pyrazole)添加至一預定量之冷卻於〇C之氣％酸 (chlorosulfonic acid)中。撲:拌反應混合物’經過滤、清洗及 乾燥後，可得4-[2-丙氧基-5-(氣磺酿基）苯甲醯胺基]-1-甲基 -3-丙基-5-胺基甲醯吡唑。 於步驟2中，4-[2-丙氧基-5-(1-甲基-2-吼咯烷基乙基 胺基磺酸基）苯甲醯胺]-1-曱基-3-丙基-5-胺基甲醯吡唑 (4-[2-propyloxy-5-(l-methyl-2-pyrrolidinylethyl amidosulfonyl)benzamido]-l-methyl-3-propyl-5-carbamoyl pyrazole)係由上述步驟1製得之"比嗤化合物製備。製備過 程中，係將一預定量之2-(2-胺乙基）-1-甲基吡咯烷 (2-(2-aminoethyl)-l-methylpyrrolidine)於（TC 下添加至含有 一預定量步驟1之4-[2-丙氧基_5-(氣磺醯基）苯甲醯胺 基]-1_甲基-3-丙基-5-胺基甲醯吡唑之二氣甲烷溶液中，而 後攪拌之。完成反應後，以二氯甲烷稀釋反應溶液。清洗 有機溶劑，並乾燥、濃縮及過濾，可得到4_[2_丙氧基_5·(ι_ 甲基·2-吡咯烷基乙基胺基磺酸基）苯曱醯胺]_〖·曱基_3_丙 基-5-胺基曱醯吡唑。 於步驟3 t，5-[2-丙氧基_5仆甲基_2♦各炫基乙基 胺基石黃酸基）苯基H-甲基丙基十6_二氣H坐并 (二)鲁7-酮’即本發明之吼嗅并嘲咬酮化合物，係由 =2所製得之化合物所製備。製備過財，係將一預定 量之步驟2合成…化合物溶於叔丁醇中(t·一)，在 201004623 此，第三丁醇係添加有一預定量之叔丁醇鉀（p〇tassium t-butoxide)，而後在回流狀態下攪拌一預定時間。於反應完 成後，冷卻反應溶液，而後稀釋、清洗並乾燥。接著，減 壓蒸餾去除溶劑，並進行矽膠管柱層析，而可製得一預定 量之本發明之新穎吡唑并嘧啶酮化合物，如化學式丨所示。 本發明之醫藥可接受之鹽類，係包括藥物領域中普遍 使用之醫藥可接受之鹽類，例如，鈉鹽、錳鹽、鉀鹽、鈣 鹽、硫酸鹽、重硫酸鹽、氫氣化物、苯磺酸鹽（besylate salt)、 樟腦續酸鹽（camsylate 。 本發明之組成物較佳可用於預防及治療呼吸道疾病中 之肺氣管疾病，且更佳是用於預防及治療慢性阻塞性肺部 疾病、慢性支氣管炎、肺氣腫 '及氣喘。 本發明係提供一種醫藥組成物，其可有效預防及治療 ^氣管疾病，如慢性阻塞性肺部疾病、慢性支氣管炎、肺 氣腫、以及氣轉，且本發明之醫藥組成物可有效幫助氣管 平滑肌舒張，舒緩氣管高反應性，並透過使用對PDE-5具 ® 丨極佳選擇抑制性之°比唾并痛咬酮化合物，而可於肺部組 織展現極佳之藥物分散性。 本發明之組成物，係透過平滑肌舒張、舒緩氣管高反 應性、以及抑制肺泡損似發炎細胞擴散，或是透過選擇 性抑制第五型碟酸二醋酶（PDE-5)，而達到支氣管舒張，以 預防及治療肺氣管疾病之功效。 本發明亦提供一種預防及治療包括慢性阻塞性肺部疾 病丨又陡支氣官炎、肺氣腫、及氣喘之呼吸道疾病之方法， 201004623 其係透過將治療上有效劑量之含化學式i之㈣并哺⑽ 化合物之醫藥化合物於投予包含人類之哺乳動物。 本發明亦提供-種化學式丄之。比唾并射嗣化合物之 用途’以肋及治療包含肺氣管疾病之呼吸道疾病，如慢 性阻塞性肺部錢、慢性支氣管炎、及肺氣腫。例如，本 發明提供-種化學4 1之„比哇并嘴咬酮化合物之用途以 生產用於預防及治療呼吸道疾病之藥物或健康食品。 當本發明之醫藥組成物應用在實際臨床上時，可以各 種藥劑形式服用’包含口服以及吸人劑，且較佳為口服形 式。在藥物製備上，亦可使用一般常用之稀釋液或賦形劑 製備，如填充劑、增量劑、黏結劑、濕潤劑、崩解劑及 表面活性劑。 此外，本發明之醫藥組成物之劑量，可依照病人體重、 年齡、性別、健康狀態、飲食及排泄率，服藥時間及方法， 以及症狀嚴重性而有所改變；具體成分藥物之藥物劑量較 佳為成人一天一次或多次服用約25至約200 mg。 【實施方式】 本發明之特徵及優點可透過本發明下述較佳實施例， 並伴隨圖式更加清楚了解。首先必須強調的是，在此所使 用之語彙及文字，係基於本發明之發明者之精神而對其發 明做最適當之定義，並理解為對應於本發明技術精神之意 義及概念。同時，需了解的是，在此將省略關於本發明已 12 201004623 知之功能及結構詳細描述》以避免不必要的敛述而混看本 發明之重點。 為了確定是否口服化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物可 有效分散在肺部中、以及用於做為預防及治療上述肺氣管 疾病之藥劑，本發明之化合物係以口服方式使老鼠服用， 而後評估組織分散性。 往後，本發明將參照實施例及製備例詳細描述。然而， 下述實施例及製備例僅用於了解本發明，但本發明並非限 ❿ 於下述實施例及製備例。 下述實施例及製備例所使用之吡唑并嘧啶酮化合物， 係依照由Dong-A Pharmaceutical Co.，Ltd申請之國際公開 專利第00/027848號之化合物所製備。 <實施例1>評估口服化合物於肺部之分散性 為了評估體内本發明之化學式1之吡唑并嘧啶酮化合 物之有效分散度，將進行下列實施例。 化學式1之°比°坐并嘴咬酮化合物（講自Dong-A 粵 Pharmaceutical Co.，Ltd.)以及昔多芬，係以30 mg/kg之劑量 分別讓公白鼠（Sprague-Dawley family，體重：250 g)服用， 而經30分鐘、2小時、6小時、及24小時後，從每一群老鼠 中分離出肺臟，以評估藥物之組織分散性。肺部中之濃度 係使用高效液相層析儀（HPLC)測量。其中，移動相為流速 為1.5 ml/min之20 mM磷酸鉀/乙腈（72:28，v/v)，並使用UV 偵測儀於292 nm測量各流出區分。使用逆相管柱，且其檢 測限制為0.1 g/g。 13 201004623 [表1]老鼠於口服化合物後之組織分散度之評估結果υ 時間 30分鐘 2小時 6小時 24小時 0比0坐并痛咬 酮化合物 (ng/g組織） 9652±10345 8448±2383 11308±3087 1259±545 昔多芬 (ng/g組織） 5938±2518* 255±82.5* 37.2±16.9* 6.3±4.1* 1)結果以平均值±標準偏差表示。 *表示ρ<0.05之統計顯著性。 結果顯示，於服用藥物24小時後，化學式1之吡唑并嘧 啶酮化合物係以高濃度分散於肺部中，且濃度遠高於化學 式1之11比°坐并癌咬酮化合物對PDE-5之IC50 (2.9 ng/ml)值。 這樣的結果顯示，化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物於肺部中 可展現較強之PDE-5抑制性。換言之，不像其他PDE-5抑制 劑於組織中之濃度會隨著時間突然減少，本發明之化合物 於組織中之濃度可持續維持；且相較於其他習知之PDE-5 抑制劑，本發明之化合物對於肺部具有較高之組織親合 性。因此，由這些結果顯示，證實本發明之化合物其肺部 疾病治療效果較其他習知肺部疾病治療劑要佳，並可穩定 ® 使用。 <實施例2>化學式1之化合物對天竺鼠離體氣管之氣管 抑制作用評估 為了評估本發明化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物對氣 管收縮之抑制作用，進行下述試驗。 使用乙醚將公天竺鼠（Hartley family，體重：300 g)麻 醉，並放血致死以分離其氣管。將氣管快速浸泡在 14 201004623

Krebs-Henseleit緩衝液中。從分離之氣管上移除結締組織及 脂肪組織，並將氣管切成約3-4 mm，而後放置在含有 Krebs-Henseleit緩衝液（37°C)之組織盥洗液中，其中，此組 織盥洗液係釋放95%之02以及5°/。之C02。將一製備好之環狀 器官組織連接至與多導儀連接之力傳感器，以測量其張 力，並維持在0.3g之標準拉力下1小時。接著，施加10 " m 之組織胺，以評估只有組織中所產生之收縮反應。 使用化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物，並配製成濃度為 10、50、以及100 "m之溶液，且於10分鐘後再使用10 μ m之組織胺，以誘發收縮反應。前處理後之收縮反應對於化 合物處理前之收縮反應的相對比例，係如表2所示，而圖1 為其圖表（顯示在圖1之數值為平均值±標準偏差，而**表示 p<0.01之統計顯著性）。 此外，收縮反應（％) =(化合物處理後之收縮力/化合物 處理前之收縮力）X 100。 [表2] 化學式1之°比°坐并0^咬酮化合物 0 10 μΜ 50 μΜ 100 μΜ 濃度 100.0±22.4 88.5±15.6 54.0±26.1** 39.1±17.8** **表示ρ<〇.〇1之統計顯著性 實驗結果顯示，可觀察到使器官收縮之濃度相關抑制 反應，此意味著本發明化學式1之°比σ坐并嘯。定酮化合物可透 15 201004623 過支氣管收縮而用於做為慢性阻塞性肺部疾病、慢性支氣 管炎、及肺氣腫之治療劑。 <實施例3>評估化學式1化合物於天竺鼠模型肺氣管疾 病之氣管高反應性抑制作用 為了評估本發明化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物對於 氣管高反應性（AHR)之緩和作用，將進行下述試驗。 對公天竺鼠（Hartley family，體重：300 g)，以 10 A g 之卵白蛋白（ovalbumin)及100 mg之氫氧化铭進行腹膜内投 藥，以產生過敏反應。於過敏反應14天後，使天竺鼠吸入 10 // g之卵白蛋白1小時，以造成肺氣管疾病。於第15天， 使用體積描計儀（plethysmography)(OCP-3000，Allmedicus Co.，Ltd., U.S.A,)持續3分鐘，測量對組織胺（1 mM，吸入20 秒）之氣管高反應性（Toward TJ et al.，Jw ·/ Λαρζ·" CWi Care 2004)。 於過敏反應第13天，在施予第二次卵白蛋白前以及施 予第二次卵白蛋白6小時後，分別以腹膜内投藥方式投予3 及10 mg/kg之化學式1之°比°坐并鳴咬酮化合物。每組之測量 ® 動物數目為5，而結果列於[表3]。實驗結果係以呼吸道阻力 (Penh)、氣管高反應性指標形式表示，而計算方式如下；Penh =([吐氣時間/舒張時間]-1) X (最大呼氣流量/最大呼吸流 量）。 [表3]氣管高反應性之緩和反應評估結果 藥劑 氣管高反應 相對溶液對照 性（Penh) 組之緩和速率 (%) 16 201004623 未服藥 一 0.389±0.017 載體控制組 • 1.868±0·201 編 化學式1之β比U坐并 嘧啶鲷化合物 3 mg/kg 1.487±0.302 20 10 mg/kg 0.799土 0.064* 57 平均值±標準偏差（SEM)， 著性（Ρ<0.05)。 i示相對載體控制組之統計顯 實驗結果顯示，化學式1之η比吐并嘴唆酮化合物於 Φ Penh(呼吸道阻力）可展現與濃度相關之緩和反應，並可做為 氣道阻塞之指標。 <實施例4>評估化學式1化合物於動物模型慢性阻塞性 肺部疾病之氣管高反應性抑制作用 為了評估本發明化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物對於 氣管高反應性（AHR)之抑制作用，將進行下述試驗。 將公鼠（C57BL/6，體重：20-22 g)，以一天三次及一週 五天’暴露在雪茄煙霧中共8星期週期；1枝雪茄可產生1升 I 煙霧（焦油8.5 mg，尼古丁〇.9 mg)，並將老鼠暴露在煙霧中 6分鐘’而後通風1分鐘。再用1枝雪茄產生1升煙霧，並將 老鼠暴露在煙霧中6分鐘，而後通風1分鐘。最後，用1枝雪 茄產生1升煙霧，並將老鼠暴露在煙霧中6分鐘。藉此，動 物每天三次暴露於雪茄煙霧中（早上、中午、下午），且一天 共 54分鐘（9枝雪茄）(Valen9a SS et al.，ToxicolPathol，2004; Valeria SS et al.，NitricOxide，2009) 〇 暴露過程係使用全身暴露並在0.025 m3之空間中進行 (Mauderly JL et al·，ExpPathol，1989)。將動物暴露在雪茄煙 17 201004623 霧中3星期後，將MicroSparyer™之吸入器（IA-1C; Penn-Century，Philadelphia，PA，USA)插入動物氣管中，而 後將50 v 1之溶於無菌生理食鹽水溶液之彈性蛋白酶 (elastase)透過吸入器注入（Pang B et al., 2008;

KinoshitaT etal.， BiochemBiophysResCommun, 2007; Bivas-BenitaMetal., EurJPharmBiopharm, 2005; Hoidal JRetal.，AmRevRespirDis，1983)。於8週測試後，使用體積 描計儀測量氣管高反應性3分鐘（Kirschvink N et al.， Toxicology，2005)。實驗結果係以呼吸道阻力（Penh)、氣管 參 高反應性指標形式表示，而計算方式如下；Penh =([吐氣 時間/舒張時間]-1) X (最大呼氣流量/最大呼吸流量）。 化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物（3及10 mg/kg)以及做 為控制組藥物之昔多芬（3及10 mg/kg)，係以口服方式投藥8 週以致病，而結果係列於下述[表4]中，其中，圖2係為平均 值士標準偏差（SEM)，而*、+、及#分別為相對於正常組（無）、 載體控制組（載體）、及服用昔多芬（10 mg/kg)組（p<0,05)。 此外，圖2中之Udenafil係指本說明書之化學式1之吡唑并嘧 ❹ 咬酮化合物。 [表4] 藥劑 Penh 未服藥 - 0.401±0.008 載體控制組 - 1.860±0.140* 昔多芬 3 mg/kg 1.083±0.097+ 10 mg/kg 0.923±0.102+ 化學式1之°比β坐并嘴咬酬 化合物（Udenafil) 3 mg/kg 0.719±0.037+ 10 mg/kg 0.507±0.024+’# 平均值土標準偏差（SEM)，*、+、及#係分別為未服藥組、 18 201004623 載體控制組、及服用昔多芬（10 mg/kg)組（P<0.05)。 圖2及表4實驗結果顯示，吡唑并嘧啶酮化合物 (Udenafil)與昔多芬於Penh均具有氣管高反應性之與濃度相 關抑制活性，且亦證實相較於服用昔多芬組（3及10 mg/kg) ’吡唑并嘧啶酮化合物（1〇mg/kg)具有氣管高反應性 之統計顯著抑制性。 <實施例5>評估化學式1化合物於動物慢性阻塞性肺部 疾病之發炎細胞擴散抑制作用 為了評估本發明化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物對於 發炎細胞擴散之抑制作用，將進行下述試驗。 致病方法及服用化合物方式係與 <實施例4>所述方法 相同，並於支氣管中插入22G導管。肺泡沖洗液（BALF)係 由無菌生理食鹽水溶液中分離出，而後使用血液分析儀 (ADVIA90，Bayer Healthcare)進行白血球分類言十數（WBC differential count)(白血球分解百分比）（D’ hulst AI et al·， EurRespirJ，2005) 0 服用8週之吡唑并嘧啶酮化合物（3及l〇 mg/kg)’並以昔 多芬（3及10 mg/kg)做為對照藥物，其試驗結果係如下述[表 5 ]所示0 [表5]發炎細胞擴散之抑制反應評估結果 劑量 BALF 細胞總數 (xlO3 細胞/μΐ) 嗟中性白金 球比例（％) 嗔酸性白血 球比例(％) 未服藥組 - 0.106±0.004 15.46±1.30 5.30+1.17 載體控制組 - 0.233±0.023广" 29.10+3.35* 14.23il.24* 19 201004623 昔多芬 3 mg/kg 0.217+0.035 24.37±0.45 10.6511.85 10 mg/kg 0.180±0.053 18.65±0.25 7.35±2.05 化學式1之 D比0坐并0^咬 嗣化合物 (Udenafil) 3 mg/kg 0.223±0.030 19.7513.84 6.75±1.35 10 mg/kg 0_104±0.014+ 15.77±1.82+ 5.75±1.25+ 平均值±標2 (P<0.05)。+$ 声偏差(SEM)，*表示相對於未服藥組之統計顯著性 1示相對於載體控制組之統計顯著性(Ρ<〇·〇5)。 白血球總數之測量結果顯示，服用10 mg/kg之化學式1 吡唑并嘧啶酮化合物組其統治顯著抑制效果較載體控制組 要顯著。同時，可發現於服用昔多芬組之降低趨勢，但並 未觀察到統計上的顯著性。相對於載體控制組，服用化學 式1吡唑并嘧啶酮化合物組其發炎細胞擴散之抑制效果可 顯著被觀察出來，其於BALF中之噬中性白血球及噬酸性白 血球比例之測量結果分別為45.8%及59.6%。透過這些結果 可確定的是，化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物可具有明顯之 發炎細胞擴散抑制效果。 <實施例6>透過慢性阻塞性肺部疾病動物模型之組織 分析，評估化學式1化合物對肺泡損壞及發炎細胞擴散之抑 制作用 為了評估化學式1化合物對於肺泡損壞及發炎細胞擴 散之抑制作用，將進行下述試驗。 在進行與 <實施例4>所述方法相同之致病方法及服用 化合物方式後，於25 cmH20壓力下透過支氣管注入10%福 馬林，並維持15分鐘。將支氣管與肺臟分離，並浸泡在10% 福馬林中24小時（Nakanishi Y et al·, dm J及己印卜Cr" Care 20 201004623

Med，2009)。而後將所得之組織模型以H&E染料（組織染料） 染色，再進行支氣管周圍及血管周圍發炎現象評估（McKay A et al., 2004)，並使用平均線性截距法測量肺 泡空間大小（Thurlbeck WM, dm 1967;

Hautamaki RD et al·，1997)。接著，使用 Axioskop2 plus (ZEISS，Germany)顯微鏡，以200倍放大倍率觀測’結 果顯示於圖3及圖4。 肺泡壁缺陷之測量係使用破裂指數（destructive ® index)，並使用下列參數；至少兩個肺泡壁缺陷（1)，至少 兩個肺泡導管腔内器官碎片（2) ’明顯異常型態（3) ’典型氣 腫性變化（4)(Saetta M et al.，1985; RobbesomAA et al., ModPathol, 2003) ° 化學式1之°比°坐并喊咬_化合物（10 mg/kg)以及做為控 制組藥物之昔多芬（1 〇 mg/kg)，其投藥8週之結果係列於[表 6]、[圖3]、以及[圖4]中（於圖3中，A為未服藥組，B為載體 控制組，C為服用10 mg/kg昔多芬組’ D為服用10 mg/kg化 φ 學式1之吡唑并嘧啶酮化合物組；於圖4中’ A為未服藥組， B為載體控制組’ C為服用10 mg/kg昔多芬組’ D為服用10 mg/kg化學式1之°比。坐并喊咬酮化合物組）。 [表6]肺泡損壞之抑制作用評估結果 劑量 平均線性截距 (μιη) 破裂指數 未服用組 - 28.48±1.42 1.11+0.08 載體控制組 - 45.77±2.02* 3.17+0.22* 昔多芬 10 mg/kg 35.20+1.16+ 1.83±0.17+ 化學式1之吡唑并嘧 10 mg/kg 29.26±1.06+# 1.61±0.12+ 21 201004623 咬酮化合物(Udenafil) 平均值士標準偏差（SEM)，*、+、 載體控制組、及服用昔多芬（10 (P<0.05)。 mg/kg)組之統計顯著值 使用平均線性截距法得到之肺泡空間大小測量結果顯 示’服用10 mg/kg昔多芬組及服用1 〇 mg/kgn比〇坐并嘧咬酮組 具有肺泡空間擴張之統S十上之顯著抑制效果。相較於昔多 芬，化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物具有損壞之統計上之顯 著抑制效果。 此外，透過破裂指數所得之肺泡壁缺陷測量結果顯 示，昔多芬及化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物均具有肺泡壁 缺陷抑制效果，且分別為42.3%及49.2%[表6][圖3]。 透過組織學評估發炎細胞擴散之結果如圖4所示，其顯 示相較於載體控制組’昔多芬（10 mg/kg)及化學Si之吼。坐 并嘧啶酮化合物（10 mg/kg)均具有顯著抑制效果。 經由這些測試結果可確定的是，化學式式1之吡唑并喷 啶酮化合物具有顯著之肺泡破化及發炎細胞擴散之抑制效 果。 <製備例>製備口服用之醫藥製劑 1. 製備粉末 化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物2g 乳糖1 g 混合上述成分並放置在一密閉袋中，以製備一粉末。 2. 製備錠劑 化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物100 mg 201004623 玉米粉 100 mg 乳糖100 mg 硬脂酸鎂2 mg 混合上述成分，而後使用一般錠劑製備方法壓製，以 製備一旋劑。 3. 製備膠囊 化學式1之D比唾并啦》定酮化合物 100 mg 玉米粉 100 mg 乳糖 100 mg 硬脂酸鎂 100 mg 混合上述成分，而後使用一般錠劑製備方法填充至— 明膠膠囊中，以製備一膠囊。 4. 製備吸入劑 化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物1〇〇 mg 蛋黃卵磷脂100 mg α -生育酌'(a -tocopherol) 2 mg 抗壞血酸（Ascorbic acid) 3mg 混合上述成分並添加純水，根據一般吸入劑製備方法 製成10 ml溶液，以製備一吸入劑。 本發明之組成物可在不會造成任何副作用下，透過選 擇性抑制PDE-5活性而有效促進支氣管擴張，並緩和氣管高 反應性，以及抑制肺泡破壞及發炎細胞擴散。 此外，本發明之組成物因其藥效可快速擴散，同時藥 物擴散之有效持續時間長達12小時以上，而可以— 八一劑 23 201004623 的方式服用，故可用於預防及治療 塞性林錢、‘__、肺氣腫:=’:性阻 本發明之最佳實施例僅係為了方便說明而舉例而已， 晃、知本技術領域者可在不偏離 m u T »月專利範圍所揭露 之範圍及精神下’做㈣變更、添加、以及取代。 上述實施例僅係為了方便說明而舉例而已，本發明所 主張之權利範圍自應以中請專利範圍所述為準，而非僅限 於上述實施例。

【圖式簡單說明】 圖1係化學式1之吡唑并嘧啶酮化合物對分離天竺鼠前處理 後之組織胺誘發收縮反應之抑制作用圖。

圖2係對慢性阻塞性肺部疾病動物模型施予化學式丨之α比嗤 并嘧啶酮化合物及昔多芬後，各氣管高反應性抑制作用圖。 圖3係對慢性阻塞性肺部疾病動物模型施予化學式1之吼唑 并嘧咬酮化合物及昔多芬後，評估肺泡破壞之代表性照片 組0 圖4係對慢性阻塞性肺部疾病動物模型施予化學式i之吡唑 并嘧啶酮化合物及昔多芬後，評估發炎細胞擴散之代表性 照片組。 【主要元件符號說明】 無》 24

Claims (1)

1. 201004623 七、申請專利範圍： l-種用於預防及治療，及道疾病之醫藥組成物，該 組成物係包括： 一如化學式1之°比°坐并㈣_化合物、或其醫藥上可接 受之鹽類，以做為一活性成分， <化學式1>

   2.如申請專利範圍第1項所述之組成物，其中該呼吸 • 道疾病係為肺氣管疾病。 3·如申請專利範圍第1項所述之組成物，其中該呼吸 道疾病係為慢性阻塞性肺部疾病、慢性支氣管炎、肺氣腫、 或氣喘。 4.如申請專利範圍第2項或第3項所述之組成物，其中 係透過平滑肌舒緩及氣管高反應性緩和反應之支氣管擴張 反應’以達到預防及治療呼吸道疾病。 25 201004623 5. 如申請專利範圍第2項或第3項所述之組成物其係 透過第5型磷酸二酯酶（pDE_5)之選擇性抑制反應，以達到 預防及治療呼吸道疾病。 6. 如申明專利範圍第2項或第3項所述之組成物，其中 該醫藥組成物係為一口服形式之醫藥組成物。 7. 如申請專利範圍第6項所述之組成物，其中該口服 形式係為—天一劑服用之醫藥組成物。 8. 如申請專利範圍第1項至第3項任一項所述之組成 物係包括25〜200 mg之化學式1之η比。坐并嘴咬嗣化合物。 9. 如申請專利範圍第3項所述之組成物，其十該呼吸 道疾病係為氣喘。

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