TW200845982A

TW200845982A - Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors

Info

Publication number: TW200845982A
Application number: TW097104668A
Authority: TW
Inventors: David C Tully; Arnab K Chatterjee; Agnes Vidal; Badry Bursulaya
Original assignee: Irm Llc
Priority date: 2007-02-09
Filing date: 2008-02-05
Publication date: 2008-12-01
Also published as: AU2008214214B2; CL2008000408A1; BRPI0806970A2; MX2009008493A; EA200901082A1; WO2008097673A1; US20100239551A1; AR065266A1; PE20081753A1; JP2010518097A; EP2117541A1; CN101646437A; AU2008214214A1; CA2677485A1

Description

200845982 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明大體而言係關於通道活化蛋白酶（CAP)抑制劑。申請案主張2007年2月9曰申請之美國臨時申請案第 60/889,008號之權利，該案之全文以引用的方式併入本文 * 〇 w 【先前技術】前列腺絲胺酸蛋白酶（Prostasin)為存在於各種哺乳動物 Φ 組織中之一種似胰蛋白酶之絲胺酸蛋白酶。其為一種表現在細胞之胞外隔膜上但亦可分泌進入體液如精液、尿液及呼吸道表面液體之膜固定蛋白酶。前列腺絲胺酸蛋白酶 (PRSS8)以蛋白酶如蛋白裂解酶（matriptase)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、PRSS22、TMPRSS11、組織蛋白酶A及中性球彈性纖維酶可刺激阿米洛麗敏感（amiloride-sensitive)之上皮鈉通道（ENaC)活性。抑制此等酵素可引發上皮離子傳送改變且因此使通過上皮膜之流體等穩化。例如腎臟中之 • CAP抑制被認為可促進利尿，而呼吸道中之CAP抑制可促進肺部黏膜及痰之清除。腎臟中之CAP抑制因此可用於治 . 療性處置高血壓。呼吸道中之CAP抑制可預防呼吸分泌停滯，其反而傾向易遭受續發性細菌感染。【發明内容】本發明提供一種化合物、醫藥組合物及使用該化合物介導通道活化蛋白酶（CAP)之方法。例如，本發明之化合物及組合物可用於介導前列腺絲胺酸蛋白酶，PRSS22、 127187.doc 200845982 TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、 TMPRSSS、TMPRSS4 (Μ丁SP-2)、蛋白裂解酶（matriptase) (MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或中性球彈性纖維酶。本發明之一目的係提供一種下式之化合物：

或其醫藥可接受性鹽，其中 r (CR2)n B為 R3——Y-

ή I 或（CR2)k-Rf /為媽-、-NHC0_、-C0_或.o.c(哪，但限制條件當R為C!·6烧基或苯基時，γ為s〇2 ; J為包括一或多個選自N、0及S之雜原子之視情況取之5 -1 2貝單環或稠合之雜環系環； R為Η、視情況鹵化之c p其 n ^ 々I1·6烷基、Cw烯基或c3-6炔基氮基、OH、〇(CR2)iR6、ρ6 c , ’ s〇2R ' C〇NR(CR2)lR6 . conr7r^ + NR7R8，其中以7及汉8與 7 、NRR中之N一起形成經由氮原與（CR2)m附接之視情況取代之5 7 g左4严么狀5_7感㈣環；或R1為視取代之Cw環烷基、芳基或不含氮原子 / 或雜芸其·々-S-ro~ ’、千之5-7貝雜J展系 ^ ’其中環p為視情況取代之5·7 127187.doc 200845982 碾環系環； 5R2為Cw烷基、(：2·6烯基、c2 6炔基、芳基或_^(

R ’ 其中 L為〇、s、S(〇)、s〇2或 0C(0) ; P =為CV6烷基、c2 6烯基、c2 6炔基或_(cr^_r5 ;

R 為 Η、Cw烷基、c2 6烯基、-CR=cr_r6、Cu炔義。、視情況取代之5_12員碳環㈣、雜環系環、芳基或：:戈基’或尺4為+CR=C5) ’其中環e為視情況取代之5_:2員；環系或稠合之碳環系或雜環系環； r及r6獨立為視情況取代之5_12員碳環系環環、芳基或雜芳基；或基或C26稀基/、衣糸各尺糾、或Cl-6烧基、c26烯基或C26块基； 1為0-6 ;且 k、m、n&P獨立為 1-6。上述式⑴中，V可為Cl_6燒基、視情或-L-(CR2)P_R5,其中L為〇。 '之本基本备明之-具體例中提供—種下式（2)之化合物： >(R9)q

H2) CIO /IV

R^-Y

(2) °惡二嗤其中J為苯并W基、基、 127187.doc 200845982 2-基；i’2’4-嚼二唑_3·基；噁唑并[4,5_b]吼啶_2_基、噁唑并[4’5 e]比疋2·基、嚼唾并[5,4_e]n比咬_2_基或嗔唾并[5，心 b]吡啶-2-基’各基視情況經C"烷基、鹵基、環丙基、 scMCw烧基）、0Ch3、s〇2N(CH3)2、s〇2NH2、cF3或似士 R5取代； Y 為 S Ο 2 或*· Ο - c (=〇 ); q 為 1 - 5， R9為幽基、（^-6¾基或0(c[6烧基）；且 R、R1 ' R3、r4、R5、m&n係如式⑴中之定義。部分實例中，式（2)中之γ為S〇2,且R3為Ci6烷基。其他實例中，R4為視情況取代之哌啶基、環己基、苯基、 _ CH \ /或令CH=<C~^NH。特定實例中，R4為娘咬基。本發明另一具體例中提供一種下式（3)之化合物：

其中R為C3_7環烧基或苯基， q 為 1 - 5 ; R9為鹵基、Cw烷基或CKCm烷基）；且 R、r5、J、k及η係如式（1)中之定義。 127187.doc -9- 200845982 上述式（2)及（3)中， q 了為1-2，且R9為鹵基。部分實例中’式（3)中，R5可為j目 ^ 馬現h況取代之環己基、哌啶基或噻唑基特疋貝例中，R5為視情況經派咬基取代之售嗤基。上述式⑴、(2)及（3)中、了可為苯并。惡4基；1，2,3·喔二 K基；U，4jh2•基；小基；㈣并 CWtL^ 定基或惡哇并[5,4_b]tj比啶_2·基，各基視情況經Ci_6燒土 β 基％丙基、soxcw烷基卜 OCH3、s〇2N(CH3)2、 S 2 2 CI?3或-(CR2)1_R5取代。特定實例中，J為1，2,4-口惡坐3基其可視情況經例如Cl6烷基、Cf3 取代，、其中…為視情況取代之苯基或c”環烷基。上述式（1) (2)及（3)中，R1可為Ci6烧基、c“稀基、快基CF3 〇H、Cl·6燒氧基、〇(节基）、SCMC"燒基）、 CONHCCu烧基）、c〇N(c“6烧基或氰基；或^為苯基、丙基％丁基、環戍基、環己基、四氣吼喃基、咬喃基_基、^1酮基…比17各淀小戴基、 ^ \~^或_ CH=^C^3 ’各基視情況經鹵基、Ci_6烧基、C2.6烯基、c3_6块基、氰基、亂私·说氧基取代。本發明另一目的係提供一種包括式（1)、（2)或（3)之化合物及醫藥可接受性賦型劑之醫藥組合物。本發明亦提供一種介導通道活化蛋白酶之方法，包括對系統或哺乳動物投與治療有效量之式（1)、（2)或（3)之化合物或其醫藥可接受性鹽或醫藥組合物，因而介導該通道活 127187.doc 200845982 化蛋白酶。本發明之一具體例中提供一種抑制通道活化蛋白酶之方法，包括對細胞或組織系統或對哺乳動物投與治療有效量之式（1)、（2)或（3)之化合物或其醫藥可接受性鹽或醫藥組合物，其中該通道活化之蛋白酶為前列腺絲胺酸蛋白酶、 ^ PRSS22、TMPRSS11(例如，TMPRSS 1 IB、TMPRSS 11E)、攀 TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶 (MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或中性球 ® 彈性纖維酶，因而抑制該通道活化蛋白酶。本發明特定實例係提供一種抑制前列腺絲胺酸蛋白酶之方法。本發明另一目的係提供一種減輕或治療受通道活化蛋白酶所介導之症狀之方法，包括對細胞或組織系統或對哺乳動物投與有效量之式（1)、（2)或（3)之化合物或其醫藥可接受性鹽或醫藥組合物，且視情沉與第二種治療劑併用，其中該通道活化之蛋白酶為前列腺絲胺酸蛋白酶、PRSS22、 TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、 TMPRSS3、TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶（MTSP-1)、 CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或中性球彈性纖維 , 酶，因而治療該症狀。再者，本發明提供一種式（1)、（2)或（3)之化合物用於治療受通道活化棄白酶介導之症狀之方法。本發明亦提供式 (1)、（2)或（3)化合物及視情況與第二種治療劑併用之用途，係用於製造供治療受通道活化蛋白酶介導之症狀之醫藥。 127187.doc -11 - 200845982 特定實例中’本發明化合物可用於治療前列腺絲胺酸蛋白酶介導之症狀。一具體例中，該第二種治療劑可為消炎劑、支氣管擴張劑、抗組織胺、止咳劑、抗生素或DN 酶，且係在式（1)、（2)或（3)之化合物之前、同時或之後投藥。部分實例中，本發明化合物係對支氣管上皮組織細胞 ‘ 投藥’尤其對人類支氣管上皮組織細胞投藥。 ‘ 可使用本發明化合物得以減輕或治療之症狀實例包含 (但不限於）與通過離子傳送上皮組織之流體移動或呼吸組籲、織中之枯膜或痰累積或其組合有關之症狀。部分實例中，可使用本發明化合物介導之症狀為囊腫纖維化、原發性纖維運動障礙、肺癌、慢性支氣管炎、慢性肺部阻塞性疾病、氣喘或呼吸道感染。【實施方式】定義 ”烷基”係指基團或作為其他基團之構造成分，例如鹵基 ⑩=狀燒基及絲基，且可為直鏈或分支。本域用之視【月况取代之烷基、烯基或炔基可視情況經鹵化（例如 3)或可具有一或多個以雜原子如NR、〇或s取代或置、火例如-〇CH2CH2〇…烷基硫醇、硫代烷氧基、烧 ^ 胺等）。 η

方基/糸指含有碳原子之單環或祠合之雙環系芳族環。例如’芳基可為I J為本基或萘基。”伸芳基”意指由芳基二價基。〜本文所用之”雜芳基”係如上述芳基之定義，其中一或多 127187.doc 12 200845982 個％»成貝為雜届工 .. 其、#Γ 方基之實例包含（但不限於）。比咬土木土、0弓i哇基、喧嚼琳基、喧琳基、苯并咬嗔其、 =喃！：苯并硫㈣基、苯并[1，3]二氣雜環戊絲、只Λ 土一本开·咪°坐基、喷咬基、咬喃基…惡。坐基、異鳴 β坐基、三唾基、时基、㈣基、嗟吩基等。、

本文所用之”碳環系環"係指含有碳原子之飽和或部分不飽和、單環、稠合之雙環或橋接之多㈣m，其可視情況 :例如—〇取代。碳環系環之實例包含(但不限於)環丙基、 % 丁基糸戊基、環己基、環伸丙基、環己酮等。本文所用之”雜環系環”係如上述碳環系環之定義，其中或夕個％碳為雜原子。例如，雜環系環可含N、〇、 ^•^'-^⑼^⑼以戈视…其中該汉可為氫、 C〗·4烷基或保護基。雜環系環之實例包含琳…各咬詞、㈣基ϋ基、㈣酮基、1，4-二氧雜氮雜_螺[45]癸_8_基等。 2非另有說明，否則若取代基被認為"視情況經取代”，則意指取代基為可經_或多個單獨且獨立選自例如下列各者之基團取代：視情況鹵化之烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷基胺基、烷基硫基、炔基、醯胺、胺基包含單_及二-取代之胺基、芳基、芳基氧基、芳基硫基、羰基、碳 %、氰基、環烷基、_素、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜方基、雜環、經基、異氰酸酿基、異疏代氰酸酉旨基、氣疏基、確基、〇-胺甲醯基、Ν_胺甲醯基、〇_硫代胺甲醯基^ Ν-硫代胺甲醯基、C-醯胺基、Ν-醯胺基、s_硫醯胺基、^ 127187.doc -13- 200845982 硫酿胺基、c_魏基、〇 -魏基、全鹵烧基、全氣烧基、發烧基、磺醯基、硫代羰基、硫代氰酸酯基、三鹵曱烷磺醯基、及其經保護之化合物。可形成上述取代基之經保護化合物之保護基為熟悉本技意者所了解，且可參見如Greene j and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3 Ed·，John ' Wiley & Sons，New York，NY，1999,及 Kocienski，Protective . Groups，Thieme Verlag，New York，NY，1994，該等文獻均併入本文中供參考。 • 本文所用之名詞”共-投藥”或”合併投藥’’或類似詞意味著涵蓋對單一病患投與經選擇之治療劑，且意圖包含其中該等藥劑未必以相同投藥路徑或同時投藥之治療療程。本文所用名詞π醫藥結合物’’係指由混合或合併活性成分獲得，且包含活性成分之固定或非固定結合之產物。名詞 ”固定結合物”意指活性成分例如式（1)化合物及輔-藥劑二者同時以單一實體或劑量對病患投藥。名詞’’未固定結合物’’意指活性成分例如式（1)化合物及輔-藥劑二者以分開之 ^ 實體同時、併行或在沒有特定時間限制下依序對病患投藥，其中該投藥對病患之身體提供治療有效量之活性成分。，後者亦適用於雞尾酒療法，例如投與三或多種活性成分。名詞π治療有效量”意指研究者、獸醫、醫師或其他臨床醫師決定之會引出細胞、組織、器官、系統、動物或人類之生物或醫藥反應之目標化合物量。名詞”投藥”及/或”投與’’目標化合物應了解係指對需要治療之個體提供包含本發明化合物之前藥之本發明化合物。 127187.doc -14· 200845982 广用名月治療”、”處理”及，，處置”係指減輕或減缓疾病及/或其伴隨之病症之方法。

〕歹〗素蛋白酶Π亦可能指：人類通道-活化蛋白酶 ^道-活化蛋白酶」、及pRSS8、疆处〇1^ ID S01.159 〇本發明之執行方法 u提供化合物、醫藥組合物及使用該化合物介導通道活化蛋白酶（CAP)之方法。

本毛月之目的係提供_種下式⑴之化合物：

R1 ⑴ 或其醫藥可接受性鹽，其中

B為 r (CR2)n R3—γ—Ν | 或（CR2)k-R5 ; γ 為 _S02— -NHCO-、-CO-或-〇-C(=0)·，但限制條件為當R2為cN6烷基或苯基時，γ為s〇2 ; j為包括一或多個選自Ν、Ο及S之雜原子之視情況取代之5-12員單環或稠合之雜環系環； R1為Η、視情況鹵化之Cu烷基、C2·6稀基或C3 6快基、氰基、OH、0(CR2)iR6、S02R6、CONR(CR2)iR6、c〇NR7R8* 127187.doc -15- 200845982 W，其中r7及V與nr7r8中之N 一起形成經由氮原子與（CR2)ln附接之視情況取代之5_7員雜環系環；或⑷為奸，取代之q-7環烷基、^基或不含氮原子之5_7員雜二或雜芳基；或十CR=C^)，其中環p為視情況取 ^ 碳環系環； 1 ^2為CV6烷基、c2_6烯基、c2_6炔基、芳基或_l_(CR2) · R，其中 L為〇、s、s(o)、so2 或〇c(〇); R為cU6烧基、c2.6烯基、(：2·6炔基或-(cm ; R 為 Η、C"烷基、c2-6烯基、-CR=CR-R6、c：2 6炔基戋視情況取代之5-12員碳環系環、雜環系環、芳基或雜芳基，或R為-^cr=：(0，其中環E為視情況取代之5_丨2員單環系或稠合之碳環系或雜環系環； R5及R6獨立為視情況取代之5_12員碳環系環、雜環系環、芳基或雜芳基；或R6可為Cl-6烷基或c2_6烯基；各R為H、或cK6烷基、c2_6烯基或〇2_6炔基； 1為0 - 6，且 k、m、n及P獨立為1-0。本發明之一具體例係提供下式（2)之化合物：

127187.doc -16· 200845982 其中J為苯并噁唑基；1，2,3-噁二唑-4-基；1，3,4-噁二唾_ 2-基；1，2,4-噁二唑-3-基；噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基、噁唑并[4,5π]σ比。定-2-基、°惡1坐并[5,4-(：]0比°定-2-基或。惡^坐并[5斗· b]吼咬-2-基，各基視情況經Cl 6烷基、_基、環丙基、 SC^Cw烷基)、〇ch3、S02N(CH3)2、S〇2NH2、CF3 或-(CR2)1_ R5取代； Y為 S〇2或-〇-C(=〇)-; q為 1-5 ;

R9為鹵基、烷基或〇((^_6烷基）；I R、R1、R3、R4、R5、茁及!1係如式（1)中之定義。本發明另一具體例提供下式（3)之化合物：

(CH2)

R5—(CRH 0

(CR2)m I R1 (3) 其中Rl為（：3_7環烷基或苯基； q 為 1 - 5 ; 為_基、C〗_6烧基或0(C】_6烧基），且汉、J、k及η係如式（1)中之定義。其他具體例中，上述式（1)、（2)及（3)中之J係選自包含不限於）下列各者之群組：咪也琳-2-基；咪唾-2-基；。惡 127187.doc -17- 200845982 唑啉-2-基；噁唑-2-基；噻唑啉_2_基；噻唑_2_基；噻唑_5_ 基；1，3,4’二峻-2-基；1，2,4-售二哇-3-基；^4“塞二嗤 _ 5-基；異噻唑-3-基；；ι，2,3_噻唑基；三唑_5·基·， 1，2,4-二嗪-3-基，1，3,5-三嗪-2-基；四唑-5-基；異噁唑基；1，2,3,4-嗔三唾i基；U3-嚼二唑_4_基；up惡二唑-2-基，l，2,4-噁二唑-3-基；2-吡唑啉基；吡唑基；吡嗪-2-基；塔嗪-3·基；喊啶_2·基；1Hh3·基；苯并噁唑-2-基；苯并咪唑_2_基；苯并噻唑_2_基；4,5,6,7_ 四氫-苯并噻唑-2-基；噌啉_3_基；酞嗪·丨·基；萘并[2，^] 塞坐2基，萘并[i，2-d]嗟唾-2-基；啥嚼琳_2-基；4-氧代喹唑啉-2-基；喹唑啉_2_基；喹唑啉_4_基；嘌呤_2_基；嘌 %-8-基，喋啶-2-基；喋啶_6-基；噁唑并[4,5^]吡啶_2_ 基；噁唑并[4,5-c]吡啶-2-基；噁唑并[5,4<]咄啶_2_基；噁唑并[5,4-b]咄啶-2-基；噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基；噻唑并 [5,4-b]吡啶-2-基及噻唑并[5,4-c]吡啶_2_基。特定具體例中，J為苯并噁唑基；^’3·噁二唑_4_基；噁二唑_2_ 基；1，2,4-噁二唑_3_基；噁唑并[4,5讣]吡啶基、噁唑并 [4’5 c]比啶基、噁唑并[5,4-c]吡啶·基或噁唑并[5,4_b] 吡啶-2-基，各基可視情況經Ci_6烷基、鹵基、環丙基、 S〇2(Cb6烷基）、〇CH3、s〇2N(ch丄、s〇2nH2、d 或 _(CR2)rR5取代。述气（1)、（2)及（3)中，r1為非驗性取代或或相對弱驗歹兔 /、有例如pKa<5、pKa<2或pKa<0。R〗之實例包含 (仁不限於）H、視情況鹵化之CN6烷基、C2-6烯基或（：3-6炔 127187.doc -18 · 200845982 基；氰基、OH、〇(CR2)lR6、S〇2R6、c〇Nr(cr2) r6 c〇nr7r8 或-一 ’其中❼V與皿7r8中之N 一起形成視情況取代之5-7貝雜環系環；伙為視情況取代之^環院基、芳孓Ύ含氮原子之5·7員雜環系環或雜芳基，或 CR吵其中環Ρ為視情況取代之5·7員雜環系環。述式⑴（2)及(3)中’各視情況取代之基團可經鹵基、=〇、‘烧氧基、胺基、Cl_6炫基、&稀基或^块基（各視情況經鹵化，或視情況具有可經n、〇或§置換或 ^ ^^ co2Rl〇. O-(CR2)rC(O>RJ0 . ,CR2)rRl〇. _(CR2)rC；^ R或-(cr2)1-S〇2-Ri。、或其組合取代，其中各汉1〇_、胺基、

Ci-6烷基或視情況取代之碳環系環、雜環系環、芳基：芳基。 / J發明亦包含本發明化合物之所有適宜同位素變體或其面樂可接党性鹽。本發明化合物之同位素變體或其醫藥可接2鹽定義為其中至少一個原子以具有相同原子序但原子貝里與自然界常見之原子質量不同之原子置換。可加於本發明化合物及其醫藥可接受性鹽中之同位素實例包含 ::旦二限於〕氫、碳、氮及氧之同位素，如2H、3H、丨丨C、丨3C、 ^、15N、17〇、18〇、35s、18f、36C1 及 1231。本發明化合物及其醫糸可接文性鹽之某些同位素變體，例如其中加入放射性同 ::如3H或"C者可用於藥物及/或受質組織分布研究。特疋貝例中，3H及14C同位素可針對其製備及價測之難易度使用纟他實例十’以同位素如2H取代可獲得源自較大代 I疋性之某些治療上之優點，如增加體内半生期或降低 127i87.doc -19- 200845982 劑夏需求。本發明化合物或其醫藥可接受性鹽之同位素變體通秦可經由習知之程序，使用適宜試劑之適宜同位素變體製備。本發明化合物及組合物可用於介導通道活化蛋白酶。可使用本發明化合物及組合物介導之通道活化蛋白酶實例包含（但不限於）前列腺絲胺酸蛋白臃、PRSS22、TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3、

TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶（MTSIM)、CAp2、CAp3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或中性球彈性纖維酶。本發明化合物亦可抑制刺激離子通道活性之蛋白酶活性，如上皮組織鈉通道，且可用於治療與CAp有關之疾病。醫藥及用途本發明化合物可介導通道活化蛋白酶活性，尤其是似膜蛋白酶之絲胺酸蛋白酶如前列腺絲胺酸蛋白酶等，因此可用於治療其中前列腺絲胺酸蛋白酶對疾病之病理及/或症狀學影響之疾病或障礙症。〜穴疋W厥蛋白酶之絲胺酸蛋白酶如前列腺絲胺酸蛋白酶所介 LV之疾病包含與調節通過上皮組織隔膜之流體體積有關之疾病。例如，呼面液體之體積為黏膜纖毛清除及保持肺部健康之 = :素。通道活化蛋白酶之抑制會促使流體累積在呼吸道：，組織之黏額且因此促使黏料除且避免_ 在呼吸組織（包含肺部呼吸道）中。 /、積 μ等疾病包含呼吸疾症如囊狀纖維化、原發性纖維運動障礙、—、 |又I王叉氣管炎、慢 127187.doc -20- 200845982 性肺部阻塞疾病（C0PD)、氣喘、呼吸道感染（急性及慢性、病毒型及細菌型）及肺癌。受通道活化蛋白酶之抑制作用所介導之疾病，除呼吸疾病以外，亦包含與通過上皮組織之不正常流體調節有關、可能涉及其表面上之保護性表面液體之不正常生理機能有關之疾病，例如口乾症（口乾）或角結膜炎（keratoconjunctivitis sire)(乾眼）。此外，腎臟中ENaC之CAP調節可用於促進利尿且因此可引發低血壓慢性肺部阻塞疾病包含慢性支氣管炎或因其引起之呼吸困難（dySpnoea)、肺氣腫、以及因其他藥物療法尤其是其他吸入性藥物療法造成之呼吸道過度反應之加劇。本發明亦可用於治療不管任何種類或起源之支氣管炎，包含例如急性、化生酸、黏膜炎、浮膜性、慢性或結核性支氣管氣喘包含内因性（非過敏）氣喘及非本質（過敏）性氣喘、

或早期氣喘。

制作用所介導之疾病之前背J如用以治療由通道活化蛋白酶抑别列腺絲胺酸蛋白酶抑制劑之適用 127187.doc -21 - 200845982 性可依據下列所述之檢測及遵循本技藝中已知之方法，麫由測定通道活化蛋白酶抑制劑之抑制作用而測試。依據前述，本發明另提供一種預防或治療需要該治療之個體之任一種上述疾病或障礙症之方法，該方法包括對該個體投與治療有效量之式⑴、⑺或（3)化合物或其醫藥^ 接受性鹽。針對任一上述用途’所需劑量將隨著投藥模 - S、欲治療之特殊症狀及期望之作用而變（參閱"Administ⑽⑽ and Pharmaceutical Compositions”，infra) 〇 ® 投藥及醫藥組合物大體而言，本發明之化合物將經由本技藝中已知之任一種常用且可接受之模式，以治療有效之量單獨或與一或多種治療劑併用投藥。本發明之通道活化蛋白酶抑制劑亦可用作與另_種治療劑併用之輔治療劑。例如，通道活化蛋白酶抑制劑可盘消炎劑、支氣管擴張劑、抗組織胺或鎮咳藥、抗生素或_

酶治療劑併用。該通道活化I • 、亿蛋白鉍抑制劑及其他治療劑可為相同或不同之醫藥組合物。s k道/舌化蛋白酶抑制劑可與其他治療劑以固定之醫藥組虑、、曰人 /、、成此a，或可在其他治療劑投 * 藥之前、同時或之後分開投筚。兮從Ώ# 又樂该併用尤其可用於治療囊纖維化或阻塞性或發炎性啐哄、今及道疾病如之前所述及者，例如作為該等藥物之治療活性辦庄曰強劑，或作為降低該藥物所品劑里或潛在副作用之手段。適且之消炎治療劑包含類[51龄 , 女十 S頦固知，尤其是糖皮質類固醇如

布第耐德（budesonide)、p帝μ机L 、田果木又松（beclamethasone)二丙 127187.doc -22- 200845982

酸鹽、孚替卡松（fluticasone)丙酸鹽、西雷替（ciclesonide) 或糖酸莫袂塔松（mometasone)、或下列國際專利申請案中所述之類固醇：WO 02/88167、WO 02/12266、WO 02/100879、 WO 02/00679 (例如實例 3、11、14、17、19、26、34、 37、39、51、60、67、72、73、90、99及 101)、WO 03/35668、 WO 03/48181、WO 03/62259、WO 03/64445、WO 03/72592、 WO 04/39827及WO 04/66920 ;非類固醇糖皮質受體激動劑如下列文獻中所述者：DE 10261874、WO 00/00531、 WO 02/10143、WO 03/82280、WO 03/82787、WO 03/86294、 WO 03/104195、WO 03/101932、WO 04/05229、WO 04/18429、 WO 04/19935及WO 04/26248 ; LTD4拮抗劑如孟魯斯特 (montelukast)及札魯斯特（zafirlukast) ; PDE4抑制劑如希洛斯特（cilomilast) (ARIFLO® GlaxoSmithKline)、ROFLUMILAST® (Byk Gulden) > V-11294A (Napp) ^ BAY19-8004 (Bayer) > SCH-351591 (Schering-Plough) > AROFYLLINE® (Almirall Prodesfarma) > PD189659/PD168787 (Parke-Davis)、AWD-12-281 (Asia Medica)、CDC-801 (Celgene)、SelCID(TM) CC-10004 (Celgene)、 VM554/UM565 (Vernalis)、T-440 (Tanabe)、KW-4490 (Kyowa Hakko Kogyo)，及 WO 92/19594、WO 93/19749、 WO 93/19750、WO 93/19751、WO 98/18796、WO 99/16766、WO 01/13953、WO 03/104204、WO 03/104205、WO 03/39544、WO

04/000814、WO 04/000839、WO 04/005258、WO 04/018450、WO 04/018451、WO 04/018457、WO 04/018465、WO 04/018431、WO 04/018449、WO 04/018450、WO 04/018451、WO 04/018457、WO 127187.doc -23 - 200845982 04/018465、WO 04/019944、WO 04/019945、WO 04/045607及WO 04/037805中所述者及腺苷酸A2B受體拮抗劑如WO 02/42298 中所述者，各文獻均併入本文供參考。

適宜之支氣擴張性治療劑包含β-2雄激素受體激動劑如歐普妥醇（albuterol)(沙普特莫（salbutamol))、異丙喘寧 (metaproterenol)、特普他琳（terbutaline)、沙普特莫紛妥醇 (salmeterol fenoterol)、普卡妥醇（卩1*〇〇&161*〇1)、法莫妥醇 (formoterol)、卡莫特醇（carmoterol)或其醫藥可接受性鹽，及如WO 00/75 114中所述之式（1)化合物（游離或鹽或溶劑化物形式），為下式之化合物：〇

WO 04/16601之式（1)化合物（游離或鹽或溶劑化物形式）、及 EP 1440966、JP 05025045、WO 93/18007、WO 99/64035、US 2002/0055651、WO 01/42193、WO 01/83462、WO 02/66422 > WO 02/70490、WO 02/76933、WO 03/24439、 WO 03/42160、WO 03/42164、WO 03/72539、WO 03/91204、 WO 03/99764、WO 04/16578、WO 04/22547、WO 04/32921、 WO 04/33412、WO 04/37768、WO 04/37773、WO 04/37807、 WO 04/39762、WO 04/39766、WO 04/45618、WO 04/46083及 WO 04/80964之化合物或其醫藥可接受性鹽，各文獻均併 127187.doc •24- 200845982 入本文供參考。

適宜之支氣管擴張性治療劑亦包含抗膽鹼劑或抗蕈毒鹼劑，尤其是漠化依普托品（ipratropium bromide)、氧托漠銨（oxitropium bromide)、嗟托漠銨（tiotropium)鹽及 CHF 4226 (Chiesi)，及甘羅溴銨（glycopyrrolate)，以及 EP 424021、US 3714357、US 5171744、WO 01/04118、WO 02/00652、WO 02/51841、WO 02/53564、WO 03/00840、 WO 03/33495、WO 03/53966、WO 03/87094、WO 04/018422 及WO 04/05285中所述者，各文獻均併入本文供參考。適宜之雙重消炎及支氣管擴張性治療劑包含雙重β-2雄激素受體激動劑/簟毒鹼拮抗劑如US 2004/0167167、WO 04/74246 及 WO 04/74812中所揭示者。適宜之抗組織胺治療劑包含醯替立e秦（cetirizine)鹽酸鹽、乙醯胺苯紛（acetaminophen)、富馬酸氯馬斯、;丁 (clemastine fumarate)、異丙唤（promethazine)、氯雷他。定 (loratidine)、地氣雷他 °定（desloratidine)、二苯海拉明 (diphenhydramine)及鹽酸菲索罪納淀(fexofenadine hydrochloride)、活瓦汀（activastine)、阿特17米唾（astemizole)、查雷汀（azelastine)、愛貝汀（ebastine)、皮納汀（epinastine)、ϋ米峻雷汀（mizolastine)及特吩納 °定（tefenadine)以及 JP 2004107299、WO 03/099807 及 WO 04/026841 中揭示者，各文獻均以其全文併入本文供參考。適宜之抗生素包含大環内酯類抗生素例如脫普黴素 (tobramycin)(TOBITM) 〇 127187.doc -25· 200845982 適宜之DN酶治療劑包含α-鏈道酶（dornase alfa) (PULMOZYMETM)，為一種重組人類去氧核醣核酸酶I (rhDN酶）之高度純化溶液，其選擇性使DNA斷裂。α-鏈道酶係用於治療囊狀纖維化。通道活化蛋白酶抑制劑與消炎治療劑之其他有用之結合物為與趨化素受體之拮抗劑之結合物，例如<：011-1、（：^ 2、CCR-3、CCR-4、CCR-5、CCR-6、CCR-7、CCR-8、 CCR-9 及 CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、 CXCR5，尤其是CCR-5拮抗劑如Schering-Plough拮抗劑 SC-351 125、SCH-55700 及 SCH-D，Takeda拮抗劑如N-[[4-[[[6,7-二氫-2-(4-甲基-苯基）-5H-苯并-環庚烯-8-基]羰基]胺基]苯基]-甲基]四氫-N，N-二甲基-2H-吡喃-4-銨氯化物 (TAK-770)、及US 6166037、WO 00/66558、WO 00/66559、 W0 04/018425 及 W0 04/026873 中所述之 CCR-5拮抗劑，各文獻全文併入本文供參考。在治療本發明之藉由前列腺絲胺酸蛋白酶抑制作用所介導之疾病中，本發明之通道活化蛋白質抑制劑（游離形式或醫藥可接受性鹽形式）可經由任何適宜之路徑投藥’例如：以例如錠劑、膠囊或液態經口投藥，以例如注射溶液或懸浮液非經腸胃投藥，或例如使用適宜之經鼻輸送裝置，以氣溶膠或其他可霧化之調配物投藥，如鼻腔噴劑諸如本技藝中已知者，或經由吸入，特別是配合噴霧器使用。通道活化蛋白酶抑制劑可以醫藥組合物，配合醫藥可接 127187.doc -26- 200845982 :性稀釋劑或载劑一起投藥。該組合物可為末、錠劑、膠羹男、广触, ^ ^ ^ 吸入n 亦可為注射溶液、灌注溶液或于文其可使用其他調配成份及本技藝中已知之技術製備。夭之技訪子離形式或醫藥可技& 接又性鹽形式之通道活化蛋白酶抑制劑之劑量取決於各種因素，如活性成分之活性及作用

間、欲治療症狀之穿舌从上用J 厓狀之嚴重性、投藥模式、物種' 族、個體年齡及濟舌B ' 種及體重及/或其個別症狀。對溫血動物尤豈疋體重約75公斤人類例如口服投藥之典型每曰投藥劑量為約〇·7毫克至約1400毫克，更特別為約5毫克至約200毫克。該劑量可以例如單一劑量或分數部份之劑量例 2〇〇毫克投藥。田、.且α物包括氣溶膠調配物，其可含例如氫·氟_ (HFA)推進劑如職1343或則27或此等之混合物且^ 3或夕種本技藝已知之辅溶劑如乙醇（高達重量％)，及/或-或多種界面活性劑如油酸或山梨糖醇酐三油酸酉旨，及/或一或多種結塊劑如乳糖。當該組合物包括乾粉調配物’則其可含有例如粒徑達ι〇微米之通道活化蛋白：抑制劑之粉末調配物，視情況搭配所需粒徑分布之稀釋劑或載劑如乳糖，及有助於保護以免因為水氣造成產品性能受損之化合物例如硬脂酸鎂。當組合物包括霧化之調配物’則其可含有例如溶解或雜於含水載體、輔溶劑如乙醇或丙二醇之通道活化蛋白酶抑制劑以及可為界面活之安定劑。 ^ 127187.doc -27- 200845982 本發明之特定具體例係提供—種可吸入型式之式⑴ 之化合物，例如氣溶膠形式或其他可霧或可吸人齡例如微米化形式。本發㈣提供 ^ 吸入形式之本發明化合物之可吸入藥物；包括可二化合物組合吸入裝置之藥物產物；及包括可吸入形式：：發明化合物之吸入裝置。 < + 本發明化合物之製法

本發明化合物可依循實例中列舉之程序製備。上述反應中，終產物所需之反應性官能基（例如，經基、胺基、亞胺基、硫基或鲮基）可使用本技藝中已知之保護基保護，以避免其不必要之參與反應。習知之保護基可依據標準實務使用，例如參見丁| Greene and p Q Μ

Wuts in "Protective Groups in Organic Chemistry·', John Wiley and Sons，1991 〇本發明化合物亦可經由使游離鹼形式之化合物與醫藥可接受性無機或有機酸反應製備成醫藥可接受性酸加成鹽。或者，可經由使游離酸形式之化合物與醫藥可接受性無機或有機鹼反應製備本發明化合物之醫藥可接受性驗加成鹽。或者，可使用起始物質或中間物之鹽製備本發明化合物之鹽形式。游離酸或游離鹼形式之本發明化合物可分別由對應之驗加成鹽或酸加成鹽製備。例如，酸加成鹽形式之本發明化合物可經由以適宜鹼（例如，氫氧化銨溶液、氫氧化鈉及類似物）處理轉化成對應之游離鹼。鹼加成鹽形式之本發 127187.doc •28- 200845982 明化合物可經由以適宜酸（例如鹽酸等）處理轉化成對應之游離酸。 ~ 非乳化形式之本發明化合物可在適宜惰性有機溶劑（例如乙猜、乙醇、二鳴、烧水溶液或類似物），在〇至8〇。〇下、還:原知（例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、蝴氫化鐘、硼氫化鈉、二氯化碟、三溴化物或類似物）處理自本發明化合物之N-氧化物製得。本發明化合物之前藥衍生物可以熟悉本技藝者已知之方法（例如’更詳細之細節參閱Sauinier et ai，（1994) Bioorgamc and Medicinal Chemistry Letters, V〇l. 4? p 1985)製備。例如，適宜之前藥可經由使未衍生之本發明化合物與適宜之胺基甲醯基化劑（例如，醯氧基烷基碳氯化物（acyl〇xyalkylcarban〇chl〇ridate)、對·硝基苯碳酸酯或類似物）反應而製備。本發明化合物之經保護衍生物可經由熟悉本技藝者已知之方法製備。可用於建立保護基及其移除之技術細節可參閱 T· W· Greene，"Protecting Gr〇ups in 〇rganic Chemis々，，， 3rd edition, John Wiley and Sons，Inc·，1999。本發明化合物可在本發明製程期間適宜的製備或形成溶劑化物（例如水合物）。本發明化合物之水合物可使用有機溶劑如戴奥辛（dioxin)、四氫呋喃或甲醇，自水性/有機溶劑混合物再結晶而適宜地製備。本發明化合物可經由使化合物之消旋混合物與光學活性解析劑反應形成成對之非對映異構物化合物，使該等非對 127187.doc -29- 200845982 離且回收光學上純的對映異構物而製得其個別立體/、構物。雖然可使用本發明化合物之共價非對映物衍生物進行對映異構物之解析，但較好為可分離之錯合物(例如’結晶非對映異構物鹽)。非對映異構物具有不同物理性質（例如m點、溶解度、反應性等），且可私取此等差異點之優點輕易地分離。非對映異構物可經由層析、基於不同溶解度之分離/解析技術而㈣。料以不會造成消旋作用之任何實際方式，伴隨著解析劑回收光學上純的對映異構物。可用於使化合物之立體異構物自其消旋混合物解析之技術之更詳細描述可見於ja—es，

Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enanti〇mers, Racemates and Resolutions”，John Wiley And s〇ns，w，i98i。概括而言，本發明化合物可如實例中舉例般製備，且式 (1)、（2)及（3)可經由包含下列各者之製程製備： (a) 視情況使本發明化合物轉化成醫藥可接受性鹽； (b) 視情況使本發明化合物之鹽形式轉化成非鹽形式； (0視情況使本發明化合物之未氧化形式轉化成醫藥可接受性N-氧化物； (d) 視情況使本發明化合物之沭氧化物形式轉化成其未氧化態； (e) 視情況自異構物之混合物解析出本發明化合物之個別異構物； (f) 視情況使非衍生之本發明化合物轉化成醫藥可接受性前藥衍生物；及 127187.doc -30- 200845982 (g)視情況使本發明化合物之前藥衍生物轉化成其非衍生形式。

雖然並未特別描述起始物質之製造，但此等化合物為已知，或可以本技藝中已知類似之方法製備，或如下文之實例中所述般製備。熟悉本技藝者應了解上述轉換僅為製備本發明化合物方法之代表例，而且可同樣的使用其他習知之方法。本發明可以下列中間物（參考化合物）及說明本發明化合物製備之實例進一步的舉例（但非限制用）。參考例1

1-B :將起始物質cbz_Phe_〇H(15 〇克，5〇〇毫莫耳）溶於 THF(150毫升）中且使溶液冷卻至·_，接著添加三乙胺 (7.1毫升，50.0毫莫耳），且滴加氯甲酸異丁酯（71毫升， 55¾莫耳）。使所得懸浮液在〇ct下攪拌兩小時。過濾反應混合物且冷卻至-10。(：。在〇。〇下使NaBH4(3 97克，1〇5毫莫耳）/谷於水（50¾升）中，且將該溶液滴加於THF溶液中。使反應混合物升溫至室溫且攪拌一小時。以丨N HC1溶液使 127187.doc -31 - 200845982 反應混合物酸化且以EtOAc萃取水相數次。合併之有機相以水、飽和NaHC〇3水溶液及鹽水洗滌，以MgS04脫水且真空移除溶劑。使產物經快速管柱層析（己烷/乙酸乙酯）純化，獲得白色發泡體狀所需產物。 1-C :將醇（12.02克，42·1毫莫耳）溶於DCM(100毫升）中且冷卻至0°C。逐次添加含Dess-Martin試劑（19.5克，46.2 毫莫耳）之DCM(100毫升）溶液。使懸浮液升溫至室溫且攪拌直到完全轉化（約2小時）。添加飽和NaHC03水溶液及1 M Na2S2〇3溶液之1:1混合物，且使所得雙相系統劇烈攪拌2〇为鐘。分離有機層且以D C Μ萃取水層一次。合併之有機層經真空蒸餾且將所得之油置於EtOAc中，以 NaHC〇3/Na2S2〇3/昆合物、水及鹽水洗務六次，以脫水，且真空移除 >谷劑’獲得黃色油狀粗製之駿。該物直未經進一步純化直接用於下一步驟中。 1-D :在-20 C下於含b〇_PrMgCl(70.3毫莫耳，35毫升獲自Sigma-Alddch之2M-THF溶液）之THF(l〇〇毫升）溶液中添加苯并噁唑（8·36克，7〇·3毫莫耳）之THF(20毫升）。使反應混合物在-20°C下攪拌30分鐘（顏色改變：深紅色），且在控制於-20 C至-15 C之溫度下緩慢添加含駿（11 ·9克，42·0毫莫耳）之THF(20 ^:升）溶液。使反應混合物升溫至室溫且攪拌直到反應完全。以飽和NHUCl水溶液終止反應且真空移除 >谷劑。水相以EtO Ac萃取三次，且以1 n HC1、水及鹽水充分洗滌該合併之有機層’以MgS〇4脫水且真空移除溶劑’獲得深紅色油狀粗製苯并噁唑。在矽膠上以Et〇Ac/己 127187.doc -32- 200845982 烷（I:5至1:1)純化，獲得漤至 # X1于火貝色固態苯并噁唑。 1-E :使化合物5(1·6克， ·96毛莫耳）溶於乙醇（3毫中。添加Pd/C(10%渴廑，η 》 "、、度，Degussa型），且將瓶至於卜汀搖晃器上隔夜，且接受4〇 P之虱軋。使觸媒經Celite過濾，且真空移除溶劑。使粗製物初貝、、、工决速層析純化，先使用己烧/EtOAc梯度移除極性改車乂低且有色之雜質，接著使用 DCM/MeOH梯度溶離所需而之化合物5。真空移除溶劑，獲得白色固態所需化合物。參考化合物2

Boc〆 ΌΗ

Boc〆

Boc，

2-A

2-B

2-C

OH

Boc〆

OH

H2N、

2-E

2-D 使用與製備參考化合物1 -B所述類似之方法，自l_ Boc-烯丙基甘胺酸製備該化合物。 2-C •使用與製備參考化合物1-C所述類似之方法，自參考化合物2-B製備該化合物。 2_D ’使用與製備參考化合物1-D所述類似之方法，自參考化合物24製備該化合物。 2·Ε ··將參考化合物2_D(350毫克，1.10毫莫耳）溶於二氯 127187.doc -33- 200845982

在室溫下攪拌獲得產物2-E 甲烧（3毫升）中。添加TFA(2毫升），且使反應直到起始物質㈣完為止。冑空移除溶劑，之TFA鹽，其可未經進一步純化使用。參考化合物3

將細粉末狀Κ〇Η(19·4克，〇·346莫耳）溶於DMs〇中，且在室溫下攪拌20分鐘，接著冷卻至〇°C。使N-Boc-反式_4_ 羥基-L-脯胺酸（Boc_Hyp_〇H)(1〇克，43·3毫莫耳）溶於 DMSO(1〇毫升）中並加入，且使反應混合物在〇。〇下再攪拌 10分鐘。接著，添加4-氯苄基氯（33.0克，0.204莫耳），且使反應混合物在〇°C下再攪拌1 5分鐘，隨後移開冰浴且使反應混合物升溫至室溫且攪拌4 h。將反應混合物倒入水 (300毫升）中，且以額外整份之水（3〇〇毫升）沖洗反應槽。合併之水層以乙醚（2x300毫升）萃取並丟棄。水層以87% HjPO4酸化至pH 2.3，接著以乙醚（3x300毫升）萃取。合併之乙醚萃取液以水（2x400毫升）及鹽水（2x400毫升）洗滌，接著以MgSCU脫水，經過濾並經真空濃縮。使殘留物在石夕膠上以EtOAc/己烷（梯度0至100%)層析純化，獲得透明油狀化合物 3。MS m/z 256.1 (M+1-Boc); 4 NMR (DMSO-D6, 400 MHz) δ 7.39-7.31 (4H，m)，4.52-4.40 (2H，m)，4.16-4.10 (2H， m)，3.48-3.41 (2H，m)，2.40-2.30 (1H，m)，2.03-1.94 (1H，m)， 127187.doc -34- 200845982 1.39-1.34 (9Ή5 m) 〇參考化合物4

•35- 200845982 滌。有機層經脫水（MgS04)且蒸發溶劑，獲得4-C。W NMR (CDC13, 400 MHz) δ 9.72 (1H，s)，4.07-4.01 (2H，m)，2.70-2.57 (2H，m)，2.35-2.31 (2H，m)，2.05-1.94 (1H，m)，1·64-1·46 (2H，m)， 1.39 (9H，s)，1.30-1.02 (2H，m)。 4-D :在-78°(：下於含Cbz-α·膦醯基甘胺酸三甲酯（2.8 克，8.45毫莫耳）之THF溶液中添加1，1，3,3-四甲基·胍 (1.022毫升，8·14毫莫耳）。10分鐘後，添加醛3(1.76克， 7.76毫莫耳）。接著將溶液置於〇°〇之冰浴中歷時1小時，升溫至室溫且再攪拌一小時。以EtOAc稀釋溶液，以1 Μ NaHS〇4洗滌，經脫水（MgS〇4)並經真空濃縮。使殘留物經乙酸乙酯/己烷0至100%之層析（ISC0)純化，獲得白色固態

7.33 (5H，m)，6.63 (1H，t，J = 8 Ηζ)，6·30 (1H，bs)，5.12 (2H，s)， 4.10-4.04 (2H，m)5 3·73 (3H，s)，2·67·2·62 (2H，m)，2.14 (2H，t，J =6.8 Hz)，1.63-1.46 (3H，m)，1.43 (9H，s)，(2H，m)。 4-F(步驟d及e):在氮氣中於Parr槽中注入4_D(1克，2·31 毫莫耳）及MeOH(100毫升）。使溶液經抽真空且通入氮氣氣體之三次循環，且添加催化劑（r，r)·乙基_DUpH〇s_ Rh(COD)三氟甲烷磺酸鹽（30毫克，〇·〇4毫莫耳）。在室溫下將混合物置於60 psi之氫氣中歷時24小時。24 h後完全轉化成4-E，且未經進一步純化用於下一步驟（e)中。溶液以氮氣沖洗且添加Pd/C(5 wt%)。在”了將混合物置於5〇 psi之Η,中再歷時24 h。以氮氣沖洗混合物且以ceme過渡。以MeOH洗務濾、餅且真空濃縮有機溶液。添加己烷接 127187.doc -36· 200845982 著真空蒸發以共济移除剩餘之甲醇，獲得油狀4_F，其可未經進一步純化用於下一步驟中。 4 G ·將粗製4_F(〇 6克，毫莫耳）溶於(⑺毫升）中，且於該溶液中添加2,4,6-三甲基吼咬（315毫克，238毫莫耳）及甲烷磺醯氯（〇·π〇毫升，2.19毫莫耳）且攪拌2小 . 時。反應以Et〇Ac(5〇毫升）稀釋，以！ M NaHS〇4(2x25毫 • 升）及鹽水（25毫升）洗滌並經脫水（MgS04)。真空移除溶劑且使粗製殘留物經快速層析，使用己烷及Et〇Ac2梯度純 • 化’獲得所需產物4-G。 4-H:將化合物4-G(0.70克，1·84毫莫耳）溶於二噁烷（7 笔升）中’且添加溶於水（4毫升）中之Li〇H · Η20(232毫克’ 5 · 5 5耄莫耳）。使反應混合物攪拌1 h。蒸發溶劑且以 EtOAc(25毫升）稀釋殘留物，以in NaHS04(25毫升）及鹽水 (25毫升）洗滌，並經脫水（MgS〇4)。真空移除溶劑，且以矽膠層析（己烷/EtOAc梯度）使粗製產物純化，獲得白色固態參考化合物4。參考化合物5

OH Η2Ν^γ' 0、 ο 5-Α

Boc

參考化合物5 參考化合物3之反應程序中，試劑及條件為： (a)SOCl3(3.0 當量），MeOH，0°C，100〇/〇 ; (b)曱烷磺醯氯 127187.doc -37- 200845982 (1.2當量），Et3N(3.0當量），催化量DMAP，THF，23°C， 79%，（c) Hoveyda-Grubbs 易位觸媒（8 莫耳％)，N-Boc-4-亞甲基哌啶（3,0當量）、DCM，40°C，51% ; (d)LiOH，二嚼烷，H2〇，23〇C，100%。 5·Α :使D·烯丙基甘胺酸（5·03克，43·73毫莫耳，ι ·〇當 ’ 量）在冰-水浴中之甲醇（70毫升）懸浮液中漿料化。於1〇分 ^ 鐘内滴加亞硫醯氯（9.6毫升，131.19毫莫耳，3·0當量）。使反應升溫至室溫直到經LC/MS顯示反應完全為止。蒸發溶 •液且所得白色固態5-Α可直接用於下一步驟中。 5-Β :使D-稀丙基甘胺酸甲酯鹽酸鹽（5_α，7·20克， 43.73¾莫耳）、Et3N( 1 8毫升，131.19毫莫耳，3.0當量）及 DMAP(l〇毫克，催化量）溶於thF(11〇毫升）中，且在室溫下攪拌。滴加甲烧磺醯氣（4.0毫升，52.48毫莫耳，1.2當量）’且使反應在室溫下擾拌6h。蒸發THF且使粗製反應產物〉谷於EtOAc(100^:升）中’以水（1〇〇毫升）、1 n HCl(2xl00 毫升）及鹽水（100毫升）洗滌並經脫水（MgS04)。真空移除溶劑且使粗製物質經快速層析（己烷：Et0Ac)純化，獲得黃色油狀5-B。

. 5_C :經針筒將無水二氯甲烷（1〇毫升，0·1Μ)添加於5-B • (2.15克’ 10.37毫莫耳，U當量）中，且在氮氣中添加

Hoveyda-Grubbs第二代易位觸媒（1，3_雙兴2,4,6•三甲基苯基）-2-亞咪唑啶基）二氯（鄰-異丙氧基苯基亞甲基）—π二氣化物）（510毫克，0·815毫莫耳，8莫耳％)。經針筒添加Ν-Boc-4-亞甲基哌啶（6毫升，31.11毫莫耳，3·〇當量）且將回 127187.doc •38- 200845982 流冷凝器配置於反應上並加熱至40°C歷時17 , + ， J A 4小時。以 LC/MS顯示反應完全後，使反應混合物經自動化石夕膠純化 (0-100%乙酸乙酯之己烷）直接純化，獲得深綠色油狀5_ C。MS m/z 277·2 (Μ-Boc+l)。參考化合物5 :使用先前所述製備參考化合物4(步棘g) 之程序使5-C完成皂化。參考化合物6

6-A :在〇°C下於冰浴中於攪拌下將亞硫醯氯（91毫升， 125宅莫耳）添加於曱醇（25〇毫升）中。攪拌3〇分鐘後，添加 N-cx-Cbz七2,3-二胺基丙酸（Z-Dap_〇H)(15 克，μ毫莫耳）且使反應在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，並以乙醚 (3 00¾升）將所得白色固體研散並經過濾，獲得甲酯卜a之鹽酸鹽。 6·Β ·將參考化合物6·Α(5〇克，17·4毫莫耳）置於〇私〇12 (70毫升）中並冷卻至〇。〇。於該溶液中添加三乙胺（5.4毫升，39.0¾莫耳），接著添加5•氣戊醯氣（2.63克，ΐ8·7毫莫 127187.doc -39- 200845982 耳）。使反應混合物升溫至室溫且攪拌4h。將反應倒在鹽水（100毫升）上且以DCM(2x50毫升）萃取有機層，以1NHC1 洗滌並經脫水（MgS〇4)。真空移除溶劑且使粗製物質經快速層析（己烷/EtOAc)純化，獲得透明油狀所需產物。 6-C ·將氯化物6>Β(4·1克，1毫莫耳）溶於dmfg 1〇毫升）中並冷卻至〇。(：。於該溶液中添加NaH(〇 53克之6〇%礦物油分散液，13·3毫莫耳），且使混合物在室溫下攪拌4 h。真空移除DMF，且將殘留物置於Et〇A(^，以} ΝΗα、飽和NaHC〇3及鹽水洗滌，且以MgSCu脫水。使粗製物質經石夕膝層析純化’獲得透明油狀内醯胺6_c。 6-D :使用先前所述製備參考化合物4(步驟g)之程序使^ C完成息化。芩考化合物6(步驟e、f、g&h) ··使用先前所述至備參考化合物1之程序使6_D轉化成參考化合物6。參考化合物7

參考化合物7 使D-均苯基丙胺酸乙_鹽酸鹽（5〇〇克，2〇·5毫莫耳）及 DIEA(8.7t升，51·25毫莫耳）溶於THF(1〇〇毫升）中並在室溫攪拌。滴加甲烷磺醯氣（1.67毫升，21,52毫莫耳），且使反應在室溫下攪拌6 h。蒸發THF並使粗製產物溶於 Et〇AC(100 宅升）中，並以水（100 毫升）、1 N HCl(2xl〇〇毫 127187.doc 200845982 升）及鹽水（100¾升）洗滌’並經脫水（MgS〇4)。真空移除溶劑且使粗製物質經快速層析（己烧：Et〇 Ac)純化，獲得乙酯。使所得乙酯溶於二噁烷（50毫升）中且在室溫下攪拌。添加溶於水（2〇毫升）中之Li〇H · Η2〇(1·〇〇毫克，24毫莫耳），且攪拌反應直到乙酯消失為止（以TLC及lcms確涊）。真空移除溶劑且使粗製物質分溶於Et〇Ac(5〇毫升）及 IN HCl(5〇毫升）中。水層wEt〇Ae(2x5〇毫升）萃取並% NaHS〇4(2x50毫升）及鹽水（5〇毫升）洗滌合併之有機相並經 MgS〇4脫水。蒸發溶劑且使粗製物質經快速層析己烷梯度）純化，獲得白色粉末狀參考化合物7。參考化合物8

h3c-s-n ο Ο Η 參考化合物8 〖

使用與製備參考化合物7所述類似之〈方法，自均環己基丙胺酸起始製備該化合物。參考化合物9

參考化合物9 <方法，自3-氰基苯使用與製備參考化合物7所述類似基丙胺酸起始製備該化合物。 127187.doc -41 - 200845982 參考化合物1 〇

參考化合物10 苓考化合物10之反應程序中，試劑及條件為：»^^ OSu ’ Et3N，THF，水，76〇/〇 ;⑻ Hoveyda_Grubbs 易位觸媒 ’ N-Boc-4-亞甲基哌啶，DCM，40°C，47%。 10-B :將D-烯丙基甘胺酸（2 〇7克，18 〇毫莫耳）&N气苄基氧基羰基氧基）琥珀醯亞胺（cbz-〇Su)(4 49克，18〇毫莫耳）添加於含THF(60毫升）及水（20毫升）之圓底瓶中。使混合物在室溫下攪拌且添加Et3N(10.1毫升，72.0毫莫耳），且使反應在室溫下攪拌隔夜。以Et〇Ac(2〇〇毫升）稀釋透明溶液’以1 N HCl(3xl〇〇毫升）及鹽水（lxl00毫升）洗滌，且以MgSCU脫水。真空蒸發溶劑，獲得白色固態，其可未經進一步純化使用。參考化合物10 :以針筒將無水二氯甲烧（4毫升，〇 2M) 添加於10-B(193毫克，〇·766毫莫耳，ΐ·〇當量）中且在氮氣中添加Hoveyda-Grubbs第二代易位觸媒（1，3_雙_(2,4,6_三甲基苯基）-2-亞咪唑啶基）二氯（鄰-異丙氧基苯基亞甲基）釕π 二氣化物）（98毫克，〇·115毫莫耳，15莫耳％)。經針筒添加 1^-6〇〇-4-亞甲基派唆（604毫克，3.06毫莫耳，4.0當量），且將回流冷凝器配置於反應上並加熱至4〇它歷時12小時。以 127187.doc -42- 200845982 LC/MS顯示反應完全後，使反應混合物經自動化秒膠純化 ((M 00%乙酸乙酯之己烷）直接純化，獲得深綠色油狀象考化合物 10。MS m/z 422·3 (Μ-Boc+l)。參考化合物11 OH Bo〆

參考化合物11

2-D

使用與合成參考化合物1 0所用類似之方法，以亞甲基環己烷使2-D完成交互易位。後續之B〇c去保護係使用與合成 2-E所用類似之方法達成，以獲得參考化合物u。參考化合物12

參考化合物12 將 Cbz-Asp_OMe(2 5克，8 89毫莫耳）溶於dcm(5〇毫升）中，添加二曱胺鹽酸鹽（797毫克，9·78毫莫耳）及 HATU (3·72克’ 9·78毫莫耳），且使溶液在室溫下擾摔1〇分鐘。接者添加0把八(3.8毫升，22.23毫莫耳），且使反應混合物在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，且以快速層析 (己烷/EtOAc梯度）將粗製物質直接純化。真空移除溶劑，獲得參考化合物12-B。 12-C ··於含甲酯i2-B(2,71克 8·8毫莫耳）之100毫升無 127187.doc •43- 200845982 水DCM冰冷（-78。〇溶液中滴加含1 3 1 M DlBAL-H之己烷溶液 (22毫升，21.1毫莫耳），同砗福G十 — 寸使反應溫度維持在_7〇。〇。使所得溶液在-78°C下攪拌1 h，且於巧處、日八且於反應合物中添加5〇/0擰檬酸水溶液（60毫升）。使混合物 ^ 切隹至溫下攪拌10分鐘，接著使層分離。有機層以DCM萃取$ a 人" 、、、卒取兩次。合併之DCM溶液以水洗務’以NaJO4脫水並緣讲、、壶、# w上 ^ I、、、工過濾。濃縮濾液獲得醛 C，其可未經進一步純化直接用於下一步驟中。使用先前所述製備參考化合物1(步驟C及d)之程序將12{ 轉化成參考化合物12。參考化合物13

13*A 13-B

6

13-D 13-E

參考化合物13 (步驟aAb):使用先前所述製備參考化合物卜c(步驟a及b)之程序，使市售B〇c_Cha_〇H轉化成醛。古Π c .將溶於二噁烷（ίο毫升）中之醛13_B(5 06克，19 8 :莫耳)添加於含亞硫酸氫鈉（2〇7克，19.8毫莫耳）之水（ι〇毛升水冷卜5。〇溶液中。添加溶水（5毫升）中之KCN(h29 19.8¾莫耳），且使反應逐漸升溫至室溫同時攪拌隔 127187.doc -44- 200845982 夜。真空濃縮反應且以水稀釋。以1 M NaHS04調整pH至 5，且以EtOAc萃取水相。合併之有機層以Na2S04脫水並經濃縮。使粗製物質經快速層析（己烷/EtOAc)純化，獲得偕氰醇（cyanohydrin) 13-C。 13-D :使偕氰醇13-C(3.61克，12.8毫莫耳）溶於 - EtOAc(50毫升）中且以50%羥基胺水溶液（1毫升）處理。攪 . 拌溶液且加熱至60°C歷時2 h，此時經LCMS確認反應完全。真空移除溶劑且使所得粗製物質未經進一步純化直接 # 用於下一步驟中。 13-E:在 SMITH PROCESS VIAL™中使羥基脒 13-D(1.0克， 3·17毫莫耳）溶於二噁烷（10毫升）中。添加丙酸酐（0.45毫升，3.49毫莫耳）且將溶液置於微波反應器（例如Personal Chemistry Emrys Optimizer微波反應器）中，且加熱至 1 5 0 °C歷時3 5分鐘。真空移除溶劑，且使粗製殘留物經矽膠層析（己烷/EtOAc作為溶離液）純化，獲得噁二唑 13-E。參考化合物13··將°惡二峻13-E(515毫克，1.46毫莫耳）溶於二氣甲烷（3 0毫升）中。添加TFA(20毫升）並使反應在室溫 . 下擾拌直到起始物質耗盡為止。真空移除溶劑，與己烧共沸且蒸發至乾，獲得產物之TFA鹽，該產物可未經進一步純化使用。參考化合物14 127187.doc -45- 200845982 h2n-nh

a 14-A

14-B b

14-C 參考化合物14 14_B :將市售環丙烷曱酸聯醯胺14-A(l.〇毫升，1〇〇毫料）添加於原甲酸三甲醋⑽毫升）中。添加對-甲苯石黃i 早^合物（5毫克）且使反應混合_拌並加熱至回流隔夜。

真空移除溶劑且真空蒸餾所得粗製殘留物，獲得2_環丙基 [1 ’ 3，4 ] °惡—u坐 14 - B。使含2-環秉基-Π，3,4]噁二唑14-B(257毫克，2.33 之無水THF(12毫升）溶液冷卻至_78。〇。滴加卜 Μ於己烧中，L46毫升，2.33毫莫耳），且使反應 14-C ：毫莫耳） BuLi(l .6 否物在78 C下攪拌40分鐘。添加MgBr2 · OEt(603毫克，2·33毫莫耳），且使反應升溫至-45°C，且接著在室溫下攪拌90分鐘。添加含醛13_B(595毫克，厶33毫莫耳）之 THF(5t升）溶液，且使反應升溫至_2〇它並再攪拌4 h。以飽和ΝΗαι終止反應且接著以Et0Ac萃取。合併之有機萃取液以鹽水洗祿且以MgS〇4脫水。真空移除溶劑，且使粗製殘留物經矽膠層析（己烷/Et〇Ac)純化，獲得所需產物 14-C。參考化合物14 :使用先前所述製備參考化合物13(步驟f) 之程序使14-C去保護。參考化合物15 127187.doc •46· 200845982

15-C 15-D 參考化合物15 15-八：在-65°(3下於1〇分鐘内將正丁基鋰（2.5 1^於己烷中，19·8毫升，49.7毫莫耳）添加於含叁（甲硫基）甲烷（7·0 毫升，49.7毫莫耳）之THF(135毫升）攪拌溶液中。20分鐘後形成沉澱物，且在30分鐘内添加含醛13-B(2.96克，11.6毫莫耳）之THF(50毫升）預冷卻（-65°C)溶液，此時沉澱物溶解。在-65°C下持續攪拌5h。接著將反應混合物倒入飽和 NH4C1之飽和水溶液/DCM(400毫升，1:12)之攪拌混合物中。使層分離，且以DCM(3x 100毫升）萃取水層。合併之有機相以水及鹽水洗滌，經脫水（MgS04)、過濾且真空蒸發至乾。使粗製產物經矽膠層析純化，獲得油狀 15-A。 15-B :使含原硫代酯15-A(0.988克，2.41毫莫耳）之 MeOH (46毫升）及水（4毫升）之溶液與HgCl2(2.20克，8.10 毫莫耳）及HgO(0.658克，3·04毫莫耳）攪拌三天。反應混合物經Celite過濾，且以DCM(300毫升）、MeOH(50毫升）及水 (50毫升）洗滌殘留物。分離雙相濾液且以DCM(3x50毫升） 127187.doc -47- 200845982 萃取水層。合併之有機相以飽*NHU〇Ac水溶液（3χι〇〇毫升）及飽和NH4C1水溶液（2χ1⑽毫升）萃取，經脫Ζ (NajO4)、過濾並經真空濃縮。使所得粗製油經矽膠層析純化，獲得甲酯15-B。 15-C ··於含甲酯15-B(302毫克，0,96毫莫耳）之， THF/MeOH/H2〇(20毫升/5毫升/5毫升)攪拌溶液中添加粉末 .狀LiOH · H20(112毫克，2.67毫莫耳）。15分鐘後，添加 1M NaHSCU水溶液（8毫升），且減壓蒸發溶劑。殘留物以瞻 h2o(io毫升）稀釋，以i M NaHS〇4水溶液酸化至pH=2，且以EtOAc (3x10毫升）萃取。合併之有機相以h2〇及鹽水洗滌’經脫水（NajO4)、過濾並經真空濃縮，獲得酸 15-C 〇 15-D :將酸15-C(50毫克，0.16毫莫耳）溶於DCM(5毫升）中’添加N-羥基丙脒（15毫克，0.16毫莫耳）及DCC(34毫克’ 0.16毫莫耳），且使反應攪拌2 h。過濾二環己基脲副鲁產物’且減壓移除溶劑。使殘留物溶於THF(5亳升）中，移到 SMITH PROCESS VIAL™，置於Personal Chemistry Emrys Optimizer微波反應器内且加熱至i80〇c歷時1〇分鐘。真空移 , 除溶劑’且使粗製殘留物經矽膠層析（己烷/EtOAc作為溶 . 離液）純化，獲得噁二唑15-D。參考化合物15 :使用先前所述製備參考化合物13(步驟f) 之程序使15-D去保護。 127187.doc •48- 200845982

實例1

d

1-D

實例1

i-A :將參考化合物aTFA^(895毫克，3·34毫莫耳）溶於CH2C12(50毫升）中。添加參考化合物3(1·3〇克，3·67毫莫耳）及^!八丁11(1.40克，3.67毫莫耳），且使溶液在室溫下攪拌 W分鐘。經針筒添加DIEA(1.5毫升，8·4毫莫耳）並使反應混合物在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，且使粗製物質經快速層析（H)G克㈣，己驗t()Ae梯度）直接純化。真空移除溶劑獲得1-A之發泡體。 :於20毫升螺旋蓋之藥瓶中加入授拌棒及Μ(⑽毫 127187.doc •49- 200845982 克，0，16耄莫耳）。添加含TFA(2〇%)之DCM(5毫升），且使溶液在室溫下攪拌i h。真空移除溶劑，添加己烷且接著再度經真空蒸發至乾，且若需要可重複共沸去除剩餘之丁FA。粗製物質未經進一步純化直接用於下一步驟中。卜 1-C :使化合物之TFA鹽（99毫克，〇16毫莫耳）溶於 CHAW毫升）中。添加參考化合物《Μ毫克，毫莫耳）及HATU(67毫克，ο」76毫莫耳）且使溶液在室溫下授摔 10分鐘。經針筒添加毫升，〇19毫莫耳），且使反應混合物在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，且使粗製物質經快速層析（己烷/EtOAc梯度）直接純化。真空移除溶劑獲得1-C之發泡體。 1-D :使醇κ(113毫克，〇 13毫莫耳毫升）中，且添加 Dess-Martin 過碘烷（periodinane)(66毫克，〇 15 毫莫耳）。使反應混合物在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶训，且使粗製產物經快速層析，使用Et〇Ac:己烷梯度純化’獲得白色發泡體狀酿j。實例1 ··使酮1-D(59毫克，0·069毫莫耳）溶於]〇(：：]^(1毫升）中且添加含50% 丁 FAiDCM(5毫升）。使反應在室溫下攪拌2 h並真空移除溶劑。使粗製物質經逆相純化，且使溶劑凍乾，獲得白色粉末狀實例i。實例2-74 依循與實例1類似之方法，使用適宜之酸及熟悉本技藝者輕易了解之胺化合物製備實例2-74。 127187.doc -50- 200845982

實例75

實例75 / ·社

工7王乳τ玩溶液(2M於二乙鍵中）(4·7毫升’ 9.45毫莫耳）添加於溶於ch2叫制η 5:U25毫升）之參考化合物3(2.4克’ 8·6毫莫耳）。起始物質耗盡時(以LC/MS測定），以乙酸使反應混合物終止反應：經真空濃縮’且使粗製殘留物經快速層析（梯度⑽：己烧）純化，獲得透明油狀甲酯75_Α。 75-Β:於圓底瓶中加入攪拌棒及75部1〇毫克，毫莫耳)。添加含丁師0%)之DCM(6毫升)，且使溶液在室溫下攪拌1 h。真空移除溶劑，添加己烷且接著再度… 127187.doc -51 - 200845982 瘵發至乾，且若需要可重複共沸去除剩餘TFA。粗製物質未經進一步純化直接用於下一步驟中。 75-C:將脯胺酸75_B2TFA鹽（1〇7克，2·8毫莫耳）溶於 CH2Cl2(30毫升）中·，添加參考化合物4(1.02克，2.7毫莫耳）及HATU(1.12克，2·94毫莫耳），且使溶液在室溫下攪拌分鐘。經針筒添加DIEA(15毫升，8·4毫莫耳），且使反應此合物在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，且使粗製物質經快速層析（120克矽膠，己烷/Et〇Ac梯度）直接純化。真空移除溶劑獲得75-C之油狀半固體。 75-D :使甲酯75-C(1.15克，187毫莫耳,）溶於二噁烷毫升）中，使氫氧化鋰（120毫克，2·8毫莫耳）溶於水（15毫升）中，且滴加於甲酯75-C之溶液中，並在室溫下攪拌 3 h。真空濃縮反應混合物以移除二噁烷，以1 酸化，且以EtOAc萃取。合併之有機層以鹽水洗滌並經 MgS〇4脫水。真空移除溶劑，獲得蠟狀固態羧酸75_〇。 75 E ·使緩酸75-D(l 02毫克，〇·ΐ7毫莫耳）溶於DCM(5毫升）中。添加參考化合物13(62毫克，〇17毫莫耳）及 HATU(7 1耄克，〇· 19毫莫耳），且使混合物在室溫下攪拌j 〇分鐘。接著添加DIEA(0.10毫升，〇·51毫莫耳），且使反應混合物在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，且使粗製產物溶於EtOAc(15毫升）中，同時以1 μ HCl(2xl5毫升）洗滌，接著以飽和NaHC〇3水溶液（2x15毫升）及鹽水（15毫升）洗務，並以無水NaJO4脫水。移除溶劑且使殘留物經快速層析（己烷/EtOAc)純化，獲得所需產物之白色發泡體。 127187.doc -52- 200845982 75-F :將醇75-E(94毫克，0.11毫莫耳）溶於DCM(10毫升）中且添加Dess-Martin過碘烷（56毫克，0.13毫莫耳）。使反應混合物在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，且使粗製產物經快速層析，使用EtOAc··己烷梯度純化，獲得白色發泡體狀酮。

實例75 :使酮75-F(60毫克，0.072毫莫耳）溶於DCM(1毫升）中且添加含TFA 50%之DCM(5毫升）。使反應在室溫下攪拌2h並真空移除溶劑。使粗製物質經逆相HPLC純化，且使溶劑凍乾，獲得白色粉末。實例76-91 依循與實例1及75類似之方法，使用適宜之酸及熟悉本技藝者可輕易了解之胺化合物製備實例76-9 1。表1呈現如實例1-91中所述之式（1)化合物。表1 化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 !HNMR400 MHz (DMSO-馬） 1 以'。d w MS m/z 750.3 (M+l) 127187.doc -53 - 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ]ΗΝΜΚ400ΜΗζ (DMSO-J5) 2 0 〇，s-η 〇 /=( Λ=/ Me H F MS m/z 768.3 (M+l) 3 0 Me H Q F MS m/z 768.3 (M+l) 4 w。 μΓΝΉ 0 ^ MS m/^ 756.4 (M+ i) 5 〇。4_ 务 Me H 〉 MS m/z 7153 (M+ 1) 6 (S μΓνή 0 ^ MS m/z 818.3 及 820.3 (M+l) 127187.doc -54- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO〇 7 0 h RX MS 爪/z 762.2及764.2 (Μ + 1) 8 Q Me H \ MS m/z 764.3及766.3 (Μ + 1) 9 (S ^c，o Me H \ MS m/z 720.3 (M+l) 10 0 ^c，〇 Me H \ MS m/z 716.3 (M+ 1) 11 6产。 1故广b Me H \ MS m/z 702.3 (M+ 1) 127187.doc -55- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO〇 12 « QX>C, μΓΝΉ ° 、〜 MS m/z 742.3 (M+ 1) 13 〇、、LfA 0 / n^Q- Me H MS m/z 764.3及766.3 (M + 1) 14 o^-n^o ° / N^〇 Me H MS m/z 750.2及752_2 (M + 1) 15 ¢) Q々： 0 H w 0」 MS m/z 758.4 (M+ 1) 16 〇 μΓΝΉ ° <f ^ MS m/z 714.3 (M+l) 127187.doc -56- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO-木） 17 0《〜 MS m/z 700.3 (M + 1) 18 (S Me Η MS m/z 762,2及764.2 (M + 1) 19 w。 Me H \ MS m/z 704.3 (M+ 1) 20 〇 —/ H MS m/z 702.3 (M+ 1) 21 0 ?°^\ Me H MS m/z 706.3 (M+l) 127187.doc -57- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ]HNMR400MHz (DMS0O 22 h3c η MS m/z 702.3 (Μ + 1) 23 ¢)〆： h3c η MS m/z 688.3 (M+ 1) 24 ^ν；Λ^ η：?Λ 0 ^ ^ MS m/z 727.4 (M+ 1) 25 « oXrc' 〇4-nM〇 ° / N^0 H" 'H b MS m/z 764.4 (M+ 1) 26 (s〆乂 Ογβ人。〇4-Ν^〇 0 Δ Me Η MS m/z 670.3 (M+ 1) 127187.doc -58 - 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO〇 27 $ XT' 。〇 νΌ MS m/z 742.4 (M+ 1) 28 W r〇^C' 〇4-ηΛ 0-y H-〇 Me H 八 MS m/z 730.4 (M+ 1) 29 w。 0 OH 心 MS m/z 6903 (M+ 1) 30 〇 ^c，o h 〇 0 u MS m/z 736.3 (M+l) 31 0 ^'〇 MS m/z 766.3 (M+ 1) 127187.doc -59- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/2：)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO〇 32 。‘知 Me Η 丨 MS m/z 716.3 (M+l) 33 ^ rCr°' °,S-N 〇〇 \=J Me H 〉 Ph MS m/z 780.3 (M+ 1) 34 0 ^C10 04-^¾¾ Me H MS m/z 702.3 (M+l) 35 Qr〇TC' 义人。 n谷 Me H MS m/z 6923 (M + 1) 36 〇 μΓνή 0 ( ^ MS m/z 767.4 (M+l) 127187.doc -60- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO-J5) 37 MSm/z742.4(M+ 1) 38 ¢) Qf^。 0 d ^ MS m/z 728.3 (M+ 1) 39 4-Ν“。 H3c Η 义〉 MS m/z 716.4 (M+ 1) 40 w。 0,S-N、 0 厂N \=/ Me H 〈 \=〇 MS m/z 6713 (M+ 1) 41 〇 0,S-N、 0 rN \=/ Me H Cj^〇 MS m/z 657.3 (M+ 1) 127I87.doc -61 - 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 lRNMR 400 MHz (DMSO-^) 42 0 〇，S-N、〇 Cx \=/ Me Η 、、Ν MS m/z 699.3 (M + 1) 43 δ〆 0 〇七心 / MS m/z 745.3 (M+l) 44 ^ rOr0 ^Νη 〇 0 ^ MeO’ MS m/z 780.3 (M+l) 45 Λ A 〇 7 ^ MS m/z 7803 (M+l) 46 0 4-^^¾ Me Η ~\{ MS m/z 722.3 (M+l) 127187.doc -62- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO〇 47 W。 Me Η 一Υ MS m/z 706.3 (M+ 1) 48 〇 4-:办 71¾ Me/、H 飞叱 MS m/z 702.3 (M + 1) 49 w。 Me H MS m/z 706.3 (M+l) 50 ^ r〇 Me H MS m/z 672.3 (M+l) 51 6 >。 0《〜 MS m/z 684.3 (M+i) 127187.doc •63- 200845982

化合物結構物理數據 MS (m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO〇 52 0 Me H MS m/z 740.3 (M+ 1) 53 〇4-n^〇 0 / N^〇-〇Me Me H MS m/z 718.3 (M+1) 54 〇〇^'〇 Λ。"办， MS m/z 795.3 (M+ 1) 55 H r^ya C) q ° 7 N^〇 o’、nh2 MS m/z 767.3 (M+l) 56 〇 >； MS m/z 718.3 (M+l) 127187.doc -64- 200845982

化合物結構物理數據 MS (m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO-馬） 57 〇 ^c，o MS m/z 754.4 (M+ 1) 58 0 μΓΝΉ 〇 / NJ MS m/z 689.3 (M+ 1) 59 w: :r'H 0 / ^ MS m/z 698.3 (M+l) 60 XT' ΗΝ-λ Q °d ^ MS m/z 732.3 (M+l) 61 6 P。 MS m/z 691.5 (M+l) 127187.doc -65- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 !HNMR400MHz (DMSO-木） 62 Xr 〇，s-N' 0 /=( Λ=/ Me Η Q MS m/z 749.3 (M+l) 63 MS m/z 6573 (M+l) 64 0 μ?λ ° J MS m/z 757.4 (M+l) 65 ¢)〆： d〇H 0 MS m/z 813.4 (M + i) 127187.doc -66- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ^NMR^OMHz (DMSO-J5) 66 « QX)^C, ΛνΚ'Αν, Vn^o n^D d〇H 0 MS 811.4 (M+ 1) 67 0 4-办 Nf% Me H 〇Me MSm/z718.3(M+l) 68 〇 Me H 〉 Me〇/ MS m/z 7323 (M+ 1) 69 〇>c， Me H MeO MS m/z 798.3 (M+ 1) 127187.doc -67- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及々NMIMOOMHz (DMSO-右） 70 w: Me Η /Ν—ν Η’ \ MS m/z 745.3 (M+ 1) 71 Q μΓνή 0 〇^Να ^ MS m/z 759.3 (M+l) 72 ^ QX^C, 〇fh y ❺ Me Η ν^\ Ο MS m/z 771.3 (M+ 1) 73 χτ Me Η Q MS m/z 743.3 (M+l) 74 々Qxr °d ^ MS m/z 732.3 (M+l) 127187.doc -68- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 ]ΗΝΜΚ400ΜΗζ (DMS0〇 75 Me Η <〉 MS m/z 735.4 (M+ 1) 76 6 q々 y N'° MS m/z 775.3 (M+l) 77 ^ 0^c^c, ：f^° y n'n MS m/z 747.4 (M+ 1) 78 ^ 0^^CI ^ y N'° MS m/z 747.4 (M+l) 79 ^ rO^0 ^VAvx 〇fN“。M 0、P Me H 、> MS m/z 735.4 (M+ I) 127187.doc -69- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 !ΗΝΜΚ400ΜΗζ (DMSO〇 80 Me Η MS m/z 679.3 (M+l) 81 0^' 0Mr、H 0〈〇 MS m/z 735.3 (M+l) 82 ^ r〇^C' 0 < N'° Q OMe MS m/z 773.3 (M+l) 83 〇 MS m/z 743.3 (M+l) 84 Q ^C，0 0Mr〜。d MS-775.3 (M+l) 127187.doc -70- 200845982

化合物結構物理數據 MS(m/z)，元素分析，及 !HNMR400MHz (DMSOO 85 ^ Xrc' y n、n MS m/z 7473 (M+l) 86 ^YfxK> μ?Λ ° (j MS m/z 783.3 (M+ 1) 87 MS m/z 783.3 (M+l) 88 ^ r^O^0' °i-^ y n'n 〇 MS m/z 797.4 (M+ 1) 89 Q ^ >^p\ '。d 弋 MS m/z 747.3 (M+l) 127187.doc -71 - 200845982

通道活化蛋白於治療受通道、、舌7 前列腺絲胺酸蛋白酶抑制劑用匕蛋白酶之抑制作用介導之疾病之適用性可耩由測定诵$ & 、活化蛋白酶抑制劑對於下列各者之抑制效果而測定：mm、立 ιυ使用適宜之生物化學檢測設計，利用

Shipway et al.； Biochemical and Biophysical Research

Communications 2004; 324(2):953-63所述之方法測定對天然、分離、經純化或重組通道活化蛋白酶之抑制效果；及/或 (2)使用 Bridges et al·; American Journal of Physiology Lung Cell Molecular Physiology 2001; 281(l):L16-23 ;及

Donaldson et al.； Journal of Biological Chemistry 2002; 277(10):8338-45所述之方法測定對適宜之單離細胞或融合 I27187.doc •72- 200845982 上皮組織巾之料通道/料料魏之抑制效果。生物化學檢測依據 Shipway 以 ai,

肽受質添加於該檢測混合物中。#受質因活化酵素而斷裂時’螢光(使用適宜之螢光板讀取機測量)增加且可量化受質之更換速率（亦即酵素活性）且因此為任何試驗化合物之抑制效果。言式驗化合物之效率係以引發酵素活性之 50%哀減之濃度表示。 -locnem. and Biophys. Res. C咖趾細4;324⑺:953·63所述之方法產生重組人類前列腺絲胺酸蛋白酶及蛋白裂解酶及天竺鼠前列腺絲胺酸蛋白酶。重組之酵素係在適宜之多孔檢測盤如％或384孔盤中於含有試驗化合物或載體之電解質緩衝液中培養。使酵素與化合物錢體混合後之狀時間下，將適宜之勞光胜大體而言，轉明化合物之心值為0」副至5 _。在部分實例中，本發明化合物之1值為01111^至5〇〇111^;自〇1 碰至50 ηΜ ;自0]囊至5剔；或自〇】囊至〇 $囊。特定實例中’本發明化合物之Kj值狀i碰至〇 5 ηΜ ;自〇 5 ιιΜ至 5 ηΜ ;自 5 ηΜ至 50 ηΜ ;自 50 ηΜ至 500 ιιΜ ;或自 500 nM至5 μΜ。又其他實例中，化合物之&值小於〇 ]虛或大於5 μΜ。上皮組織離子傳輸人類支氣苔上皮組織細胞係依據Danahay et ai，Am_ J.

Physiol· Lung Cell Mol. Physiol· 2002; 282(2):L226-36所述之方法培養。當適當分化時（建立頂點-空氣 127187.doc -73- 200845982 面後ι‘2ΐ天），以载體、抑肽酶（2〇〇盹/ml)或試驗化合物處理上皮組織細胞90分鐘。接著將上皮組織置於Danahay et al·，所述之箱中，維持載劑、抑肽酶或試驗化合物在上皮組織之頂點側上的濃度。接著經由夾住上皮組織之電壓為零毫伏特而測量短路電流（ISC)。接著在上皮組織之頂點表面添加阿米洛莉（1〇 μΜ)以測量阿米洛利_敏感之 ISC。试驗化合物之效力係以引發阿米洛利敏感之isc之總抑肽酶敏感成分之50%抑制的濃度表示。大體而言，本發明化合物之ICsg值為i nM至1〇 μΜ。在部分實例中，本發明化合物之值為} ηΜ至i μΜ，或特佳為1 ηΜ至100 ηΜ。又其他實例中，本發明化合物之IC5〇值為ΙΟΟηΜ至1 μΜ，或1 μ]ν^10μΜ。又其他實例中，化合物之IC5G值小於1 ηΜ，或超過至丨〇 μΜ。氣管電位差（體内）使用短效吸入麻醉劑如氟烷及％〇將天竺鼠麻醉。經短效麻醉後，經口咽路徑將口服管飼用針插入氣管中。置於氣管内之後，將小量（50-200 μΐ)含載劑或試驗化合物之適宜水性稀釋劑慢慢滴入呼吸道中。接著使動物恢復正常且可完全走動。或者，可使用氣溶膠或乾粉劑投藥對動物投與試驗化合物。投藥一段時間後，使用適宜之麻醉劑如κ 他命（ketamine)及甲苯噻嗪（xyiazine)對動物進行手術麻醉。接著露出氣管且將塑膠瓊橋接電極插入氣管腔中。同時將參考電極插入動物頸部之肌肉層中。接著使用適宜之高阻抗電壓計測量氣管電位差，如TakahasM et ^ 127187.doc -74- 200845982

Toxicol Appl Pharmacol. 1995; 131(1):3 1-6中所述。試驗化合物之效力以引發氣管電位差之感應成分降低5〇%之劑量表示。應了解本域㈣似具體㈣Μ 藝者可提出各種改良或改變， ^…。本技及要項以及附屬申請專利範圍之範二於本說明書之精神公報、專利及專利巾請案均 ^本文陳述之所有考。所有目的併入本文中供參

127I87.doc

Claims

200845982 十、申請專利範圍： 1 ·種下式（1)之化合物

HIN

V 、—y 11 X^V 或其醫藥可接受性鹽，其中 r (cr2)「

或（CR2)k-Rf Y為^〇2-、_NHCO_、_co_或_0_c(=0)…其限制條件為當R2為烷基或苯基時，γ為s〇2 ; 】為包括一或多個選自N、〇及S之雜原子之視情況取代之5-1 2員單環或稠合之雜環系環； R1為Η、視情況鹵化之Ci·6烷基、Cw烯基或块基；氰基、OH、0(Cr2)iR6、s〇2R6、c〇nr(Cur6、 CONRV或+nr7r8，其中r7及r8與nr7r8中之n 一起形成經由氮原子與（CR2)m附接之視情況取代之5_7員雜環系環；或R】為視情況取代環烷基、芳基或不含Z为子之心雜環系環或雜芳基·，或十_㊀，其中環巧視情況取代之5_7員碳環系環； R為Cl·6垸基、C2-6稀基、C2_6炔基、芳基或心(CR2)p, 127187.doc 200845982 R5，jfI^〇、s、s(0)、s〇^oc(0); R為Cb6燒基、c 視情況取代之μ 2員碳=t '、r=R、C2.6块基或基；或R4為如=0二二、雜壤糸環、芳基或雜芳 ^或_合之碳環^雜環系環；貝早

浐、獨立為視情況取代之5-12員碳環系環、雜環系衣、方土或雜芳基；献6可為Ci6烧基或&稀基；各1^、或Cl_6院基、C2_6稀基或C26块基； 1為0-6 ;且 k、m、n&P獨立為 1-6。 2·如請求項1之化合物，其中；為苯并噪嗤基；惡二唑_4·基；U，4-噁二唑基，· 1，2,4-噁二唑-3-基；噁唑开[4,5-b]吼啶_2_基、σ惡唑并[4,5_小比啶_2_基、噁唑并 [5,4_+比啶_2_基或噁唑并[5,44]。比啶_2_基，各基視情況經匸!-6烷基、鹵基、環丙基、s〇2(Cu烷基）、〇c^、 S02N(CH3)2、S02NH2、CF3或-(CR2)rR5取代。 3·如請求項1之化合物，其中1為1，2,4_噁二唑_3_基且視情況經Cw烷基、eh或·（crAiR5取代，其中R5為視情況取代之苯基或0：3_7環烷基。 4·如請求項1之化合物，其中R〗aci 6烷基、c2_6烯基、c z、6 炔基、CF3、OH、Ci-6烷氧基、〇(苄基）、sOJCw烷基）、CONHCCh烧基）、c〇N(cK6烷基）2或氰基；或R1為苯基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、四氫吡0南 127187.doc 200845982 土、呋喃基、哌啶-2-酮基、吡咯啶-2-酮基、，比嘻咬-；1- 振基、十ch=〈3或+CH="0，各基視情況經_基、 1 6燒基、C2-6細基、C3-6炔基、氰基、〇H或C；l6烧氧基取代。 5·如清求項1之化合物，其中R2為Cl_6烷基、視情況取代之苯基或 _L-(CR2)P-R5，其中 L為〇。 6·如請求項1之化合物，其中該化合物具有式（2):

其中J為苯并噁嗤基、1，2,3-噁二唑-4-基、1，3,4-嚼二唑-2-基；1，2,4-σ惡二吐-3-基；σ惡嗤并[4,5-b]^。定-2-基、。惡唑并[4,5<]吼咬-2-基、噁唑并[5,4-〇]吼咬-2-基或噁唑并 [5,4-b]吡啶-2-基，各基視情況經匕^烷基、_基、環丙基、SOdC"烷基）、och3、so2n(ch3)2、so2nh2、cf3 或-(CR2)rR5取代； Y為 802或-0-(：(=0)-; q為1 - 5，且 R9為i基、Cw烷基或CKCw烷基）。 127187.doc 200845982 7·如請求項6之化合物，其中J為1，2,4-噁二唑-3-基且視情況經C!_6烷基、CF3或-(CUrR5取代，其中R5為視情況取代之笨基或C3_7環烧基。 8·如請求項6之化合物，其中Y為S02且113為Cw烷基。 9·如請求項6之化合物，其中q為1-2且R9為鹵基。 1 〇·如請求項6之化合物，其中R4為視情況取代之哌啶基

環己基、苯基、< 、f 11 ·如請求項1 〇之化合物，其中R4為哌啶基。 12·如請求項1之化合物，其中該化合物具有式（3): -卜ch={)或

其中R為C3-7環烧基或苯基； q為1-5 ;且 R為鹵基、Ci-6燒基或〇(Ck6燒基）。 13.如凊求項11之化合物豆中5 切具〒K為視情況取代之環己基、旅σ定基或嗟σ坐基。 14·如請求項i之化合物， • 共你&自下列各者所組成之群 127187.doc 200845982

127187.doc 200845982

127187.doc 6- 200845982

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33

79

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15. —種醫藥組合物，其包括治療有效量之如請求項1-14中任一項之化合物。 16 · —種如請求項1 -14中任一項之化合物之用途，其係用以於細胞或組織系統中或哺乳類中抑制通道活化蛋白酶，其中該通道活化蛋白酶為前列腺絲胺酸蛋白酶、 PRSS22、TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、 TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶（MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A 或中性球彈性纖維酶。 17. —種如請求項1-14中任一項之化合物之用途，其係用以製造供治療細胞或組織系統中或哺乳類中受通道活化蛋白酶所介導之症狀之藥物，且其視情況與第二治療劑倂用；其中該通道活化蛋白酶為前列腺絲胺酸蛋白酶、 PRSS22、TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、 TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶（MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A 或中性球彈性纖維酶。 18. 如請求項17之用途，其中該症狀與通過離子傳.送上皮組織之流體移動或呼吸組織中粘膜及痰之累積或其組合有 127187.doc -14- 200845982 關。 1 9 ·如請求項纖維化、原發性慢性肺部阻塞性、之用途，其中該症狀為囊腫纖維運動障磁 , 野I早礙、肺癌、慢性支氣管炎、疾病、氣喘或呼吸道感染。月、托項1 7之用途，其中該第二治療劑為消炎劑、支氣官擴張劑、抗組織胺、止咳劑、抗生素或DN酶，並在如明求項1 -1 3中任一項之化合物之前、同時或之後投藥。

21·如請求項16或17之用途，其中該通道活化蛋白酶為前列腺絲胺酸蛋白酶。 22·如請求項16或17之用途，其中該細胞或組織系統包括支氣管上皮組織細胞。

127187.doc 15- 200845982 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明：

八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

⑴

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