TW200831527A - Method of peptide synthesis - Google Patents

Description

200831527 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明關於固相載體胜肽合成領域，並特別關於一種 用於增長胜肽鏈之改良方法，其係藉由在固相合成中將受 保護之胺基酸如Fmoc-胺基酸與生長胜肽之自由队末端2 【先前技術】 已知龐大的胺基酸，特別為精胺酸、高及去甲精胺酸 泰比其他胺基酸更加難以與生長胜肽鏈偶合。問題發生於大 部分常被使用的偶合試劑，且甚至在固相合成法中更嚴 重，其中額外的空間限制可由樹脂表面引起。通常，此問 題係尋求藉由使用比標準量更多的欲偶合之胺基酸或寡胜 肽來克服，並特別藉由重複的偶合循環。當然，使用數種 過量試劑的這種方法導致有價值試劑的大量浪費。

Di Bello 等人（Semisynth· Pept Pr〇teins，~从級

Protein Semisynth^ meeting date 1977? "Coupling of arginine peptides’’，1978, 373-379 )使用標準的N，N、二環己基碳化 二醯亞胺（DCC)偶合化學來檢視這個問題，詳述實驗數 據及測试用於二胜肽 Z-Phe-Arg-OH 或 B〇C-Glu(OBzl)-Arg-OH與連接於梅里菲爾德（Merrifield)聚苯乙烯樹脂的經 保護之五或九聚物之N-末端偶合之不同偶合辅助劑。所有 的偶合在室溫下進行。最好的結果係使用偶合試劑DCC與 添加劑1-羥基笨并三唑（HOBt)之混合物所獲得，得到定 量產率。該方法必須以在N，N-二甲基甲醯胺中的5 ·· 1莫 6 200831527 ‘ 耳比的二胜肽及募聚物重複偶合循環，為其缺點。 然而’雖然使用HOBt ’但是比較高水平的外消旋化 作用留下碳化二藤亞胺偶合試劑的嚴重缺點，導致後來發 展完全不同的偶合試劑，如六氟碟酸〇_(苯并三唑-丨―基）_ N，N，N，，N，-四甲基i尿（HBTU)或六氟磷酸笨并三唑-^氧基 -參（一曱胺基）鱗（BOP )系列之試劑，如在】丨&叫等人之

Tetrahedron 1998, 54，14233-14254 中所綜述者。 根據 Nishimura 專人之 C/zem· 所万以"1976 24, 1 5 68-1 5 75 ’偶合龐大的精胺酸或高胺酸的問題可藉由例如 偶合更少的立體需求之鳥胺酸與肽鏈，並接著，即在最後 的偶合步驟之後及在整體去保護之前，將該鳥胺酸以胍基 • 化作用轉化成精胺酸而解決。此方法包含額外的化學反應 步驟，其提咼雜質水平，為其缺點。另一負面影響為需要 挑戰保護策略，因為鳥胺酸必須被正交保護基封閉，若為 — 後續的胍基化作用需要，該保護基可特定地裂解。最後， % 胍基化作用係在從樹脂裂解之後進行。然而，傳統的聚苯 乙烯為主之樹脂，如王氏（Wang)樹脂或瑞克（Rink)樹 脂’通常需要嚴格的裂解條件，導致不希望的胜肽部分或 完全去保護。 因此，對偶合龐大的胺基酸與賴胺酸殘基或其同系物， 使含有該挑戰序列模組之胜肽可接近市場規模的方法有高 度需求。一種有興趣的胜肽為抗感染之陽離子、、爪蟾抗菌 肽（mdolicidin ) " lle_LeU-Arg-Trp_Pr〇-Trp-Trp-Pro_Trp·

Arg-Arg-Lys-NH2，其顯示抗微生物及抗細菌活性。該等陽 7 200831527 離子抗感染胜肽通常由於其c_末端醯胺化之形式而更具活 险。US-A1-2003/0219854揭示爪蟾抗菌肽及其更多衍生物 為新颏別的廣效性抗微生物物質，其可幫助對付多重藥物 抗性向病原性微生物中標準抗體的快速擴散。爪蟾抗菌肽 的序歹J提出一達成可接受之偶合產量的真實挑戰，因為兩 精胺酸殘基必須緊接著與第一賴胺酸偶合。

口此’本發明的目的係設計一種用於克服與精胺酸殘 基或類似物在固相胜肽合成中的偶合問題之方法，尤其在 精胺酸或其同系物與立體需求相等的賴胺酸或賴胺酸同系 物偶合時。根據本發明，低偶合效率的問題係藉由施予侧 鏈固定策略而出乎意外地被解決。本發明得到強力改良之 偶合產量’避免在固相合成中不希望的提早鏈终止。 上述目的係藉由申請 在應用申請專利範圍第i 本發明的目的。 專利範圍第1項之方法而達成。 項之方法時所衍生之化合物也為

【發明内容】 申請人已發現一 法， 種從下式化合物 開始之胜肽合成之方

X

其中A為固相載體或接枝於 〇與10之間的整數；X為C 固相載體之鍵聯基；n為介於 μ烷氧基、經芳基取代之c 1-6 8 200831527 ' 烷氧基、芳氧基、烯丙氧基、視需要保護之胺基酸殘基、 視需要保護之胜肽殘基或NRlR2,其中…及r2獨立為氫 或烷基；及γ為與介於A與胺基官能基之間的鍵正 父之保護基；該方法包含步驟： (a) 將N-末端之α -胺基官能基去保護， (b) 將至少Ν-末端保護之胺基酸或具有自由或活化羧酸官 月b基之胜肽與步驟（a)的去保護α _胺基官能基偶合，因 此延長式I化合物， B (c)將步驟（a)及（b)視需要重複至少一次，其中至少Ν_末端 保護之胺基酸或胜肽與先前步驟（|^者相同或不同， (d) 將來自Α之所得胜肽裂解， (e) 視需要移除在步驟之後留下的所有保護基， (f) 分離及視需要純化如此所獲得的胜肽。 在此及如下，應瞭解術語、、Cin烷基夕意味含有丨至 η個碳原子之任何直鏈或支鏈烷基。例如，術語、、ί α烷 ，基包含如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、 第二丁基、第三丁基、戊基、異戊基（3_曱基丁基）、新 戊基（2，2-二甲基丙基）、己基、異己基（4_甲基戍基） 及類似物之基團。 因此’術邊、、C!·η烧氧基”意味由如上述所定義之c 1 - η烧基及以單共價鍵鍵聯之氧原子所組成的基團。 應瞭解術語、、經芳基取代之Ch烷基〃意味由在直或 支碳鏈的任何位置上被至少一個苯基取代之如上述所定義 之C^n烷基所組成的基團。苯基可視需要被至少一種選自 9 200831527 由备基、Cw烧氧基及鹵素所組成群之取代基取代。經芳 基取代之Ch烷基的實例為苯甲基、^(3-羥苯基）丙烷_2_ 基或1-(3-甲氧基苯基）丙烷基。 在此及如下，應瞭解術語、、烯丙氧基〃意味可視需要 被C ! ·3烧基或_素取代之烯丙基。 在所發明之方法的較佳具體實例中，式I化合物之Υ 為运自由Fmoc、Boc、Cbz、Npys及Alloc所組成群之正

交保護基，其先決條件係如果χ為烯丙氧基，則Y不為 Alloc 〇 在此及如下，、、Fmoc"為第_9-基甲氧基羰基之縮寫， Boc"為第三丁氧基羰基之縮寫，、、Cbz//為苯曱氧基羰 基之縮寫，、、Npys 〃為3_硝基吡啶次磺醯基之縮寫及 \\ Alloc 〃為烯丙氧基羰基之縮寫。 、、在=及如下，應瞭解與兩種不同的保護基有關的術語 正交〃意味在相同的反應條件下一個保護基可移除，而 另一者維持穩定。 ，/、保護基及在賴胺酸側鏈或其同系物之胺基官 能基與固相载體或接枝於固相載體之鍵聯基之間的鍵$關 的術°°正父〃意味在相同的反應條件下保護基可移除， 但是該鍵維持穩定。 μ 根據本發明的胜肽可為含有天然或非天然胺基酸的任 :胜肽，若為手性’呈其…構形或為外消旋物。非天 :月女基酸的實例為高半胱胺酸、高精胺酸、環己基丙胺酸、 月每醯胺（Penicillinamide) (Pen)或鳥胺酸（〇⑷。 200831527 、在本發明的上下文中，術語、、胜肽主鏈"、、、主鏈〃、 、'側鏈"及字首、、去甲"與、、高"係根據111?八(：-11^定義 (Joint IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature, ''Nomenclature and Symbolism for Amino

Acids and Peptides”，Pure Appl. Chem· 1984，56，595-624 ) 來解釋。 在其較廣的意義中，應瞭解、、高〃意味至多9個額外 的亞曱基以直鏈方式被加至賴胺酸侧鏈中。在其較狹窄且 杈佳的意義中，、、高相當於只有一個額外的亞甲基在侧 鏈中。在本發明的上下文中，、、去曱"總是被解釋成相當 於一個已從天然ε _賴胺酸側鏈消除的間斷性亞曱基。 在本發明的上下文中，應暸解胺基酸側鏈的、、ω _胺基" 思味無關於碳鏈長度的側鏈之、、末端〃胺基。 在所發明之方法的較佳具體實例中，式I化合物之η 為 〇、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 ;較佳地，η 為 〇、 • 1、2、3、4;即經由其胺基侧鏈固定之胺基殘基為ε_賴胺 基、ω-高賴胺基或ω-去曱賴胺基。 1在所發明之方法也較佳的具體實例中，式1化合物之 R1及R2獨立為氫、甲基、乙基、丙基及丁基；較佳為氯、 曱基及乙基；而最佳為氫。 在較佳的具體實例中，步驟（b)的Ν-末端保護之胺基 酸為N-末端保護之精胺酸（Arg)或高精胺酸。在 也車父佳的具體實例中，步驟⑻的N-末端保護之胜肽包括 Arg或Har作為c_末端殘基。 11 200831527

Arg或Har之胍基可受保護或未保護。可使用熟習技 術者已知的任何種類之適合的胍基保護基，如Cbz、2,3,6-三曱基-4-甲氧基苯磺醯基（Mtr)、硝基、曱苯磺醯基、5-磺醯基-2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃（Pbf) 、2,2,5,7,8_五甲 基u克-6-磺醯基（Pmc)、金鋼烷氧基羰基、第三丁氧基幾 基（Boc)或三苯甲基（Trt)。

在更佳的具體實例中，Arg或Har側鏈被Pbf保護。 根據本發明，另一較佳的具體實例是偶合Arg或Har，較 佳地在被用作Fmoc-Arg或Fmoc-Har時，沒有共價連接之 胍基保護基，但是應用非共價保護化學。這可藉由確保在 各個Arg或Har殘基偶合之後，胍基在任何進一步的偶合 反應之前被定量地質子化，因此與質子予體在有機溶劑中 形成穩定的離子對而達成。實際上，可將以樹脂鍵結之胜 狀以過量酸性偶合輔助劑處理，如h羥基苯并三嗤 (HOBt)、苯并三畊衍生物或氮雜苯并三阱，其可在芳香 族核上被進一步取代。清除胍鹽基團電荷的另一可能性為 使用四苯基硼酸根作為例如質子化之Fm〇c_保護之Η”的 抗衡離子，如在美國專利4,954,616中所陳述。 在所屬技術領域中熟知在固相合成法中，在胺基酸側 鏈中的大部分，較佳為幾乎全部㈣能基必須以永久性保 護基遮蔽，㈣護基不受在胜肽翁合㈣所使用的反應 條件影響。欲偶合的每—胺基酸胺基被較佳地與側鍵 料基正交的保護基暫時地保護，除了欲偶合的最後一個 胺基ι之外可使用與侧鏈保護基相同的去封閉化學移 12 200831527 ‘除。在第-個胺基酸的侧鏈固定之後，如本發明所陳述， 將暫時性α -胺基保護基移除。 在所屬技術領域中已知的所有適合的保護基可用於保 護在本發明的步驟⑻及⑷中所使用的胺基酸或胜狀之側鍵 官能基及胺基酸二者。適合的保護基包括但不限於：第 9-基甲氧基羰基（Fmoc)、苯甲氧基羰基（㈤、第三 丁氧基羰基（Boc)、2_(4_聯苯基)_異丙氧基羰基（Bp。。、 fc乙驢胺基甲基（Acm)、乙醯基（Ac)、烯丙基（A11)、 ’烯丙氧基羰基（Alloc)、苯甲醯基（Bz)、苯甲基（Bzi)、 3-羧基丙醯基（Suc) 、5·磺醯基_2,2,4,6,7_五 喃（間及三苯甲基（τη)。 本开夫 在所發明之方法的較佳具體實例中，式τ化合物之γ 為Fmoc，而步驟（b)及（〇的Ν_末端保護之胺基酸或胜肽經

Fmoc-保護，除了最後重複之步驟（〇的冰末端保護之胺基 酸或胜肽之外，其被與Fm〇c正交之保護基保護，較佳為 Boc 〇 在所發明之方法的較佳具體實例中，式Z化合物之γ 為AUoc，而步驟（b)及（〇)之Ν_末端保護之胺基酸或胜肽經

Fmoc-保護，除了最後重複之步驟（(〇的仏末端保護之胺基 酸或胜肽之外，其被與Fmoc正交之保護基保護，較佳為 Boc 〇 偶合試劑、偶合添加劑及非質子極性溶劑，例如二曱 基甲醯胺或N-甲基吡咯啶酮或其混合物，為所屬技術領域 中所热知’並被敘述在例如B〇danszky之“principies 13 200831527

Peptide Synthesis，，，2nd ed·，Springer Verlag，1993 中。偶合 試劑的實例為二異丙基碳化二醯亞胺（DIC ) 、1，3-二環己 基碳化二醯亞胺（DCC) 、N-乙基-N，-(3-二甲胺基丙基）_ 石厌化一酸亞胺（EDC )、六氟構酸苯并三n坐-1 _氧基三α比口各 啶鱗（PyBOB)、四氟硼酸〇-(ιη_苯并三唑小基）-Ν，ν，ν，，ν、 四甲基嫌（HBTU)及四氟硼酸〇·(ΐΗ·6-氯苯并三唾基> n，n，n’，n’-四甲基姝（TCTU)。偶合添加劑的實例為N_^ 基苯并三唑（HOBt ) 、6-氯-N-羥基苯并三唑（6•氯基· HOBt) 、N-羥基琥珀醯亞胺及N_羥基-3,4-二氫I侧氧_

1，2,3-苯并三畊（HOOBt)。較佳的是應用DIC或TCTU 作為偶合試劑及HOBt或6-氯-HOBt作為偶合添加劑。 根據本發明，在步驟（b)及（c)中所使用的每一胺基酸或 胜肽的量係介於1與3當量之間。較佳地，N_末端保護之 Arg或Har係使用介於L5與2·5當量之間的量。 固相載體可為任何常被使用的固相樹脂，較佳為經基 或羧基官能化樹脂或接枝之鍵聯基樹脂複合物的活化鹵 素、活化衍生物。樹脂的聚合物基質可為例如聚苯乙烯、 聚乙二醇（PEG)、交聯PEG、聚醯胺、聚乙烯醇（ρνΑ) 或聚氧化烯。其可為純或混合樹脂，包括嵌段共聚物或接 枝樹脂，如在PEG樹脂上接枝之PVA、pEG_接枝之聚苯 乙烯-二乙烯苯（PS_dvb )樹脂、在内聚苯乙烯基質上接 枝之聚氧乙烯樹脂，其中用於偶合之官能化基團顯露在聚 氧乙烤支鍵上。 常見的實例為2-氯三苯甲基氯聚苯乙烯（2-CTC)樹 14 200831527 ‘· 脂、漠-(4-甲苯基l·甲基聚苯乙烯樹脂、溴-(4-甲氧基苯基）-曱基聚苯乙烯樹脂、梅里菲爾德樹脂或王氏樹脂。 在本發明較佳的具體實例中，A係從選自由2-氯三苯 甲基氯聚苯乙烯樹脂、溴_(4_曱苯基）_甲基聚苯乙烯樹脂、 >臭-(4-甲氧基苯基）_甲基聚苯乙烯樹脂及活化羥基_(4_曱苯 基）-甲基聚苯乙烯樹脂所組成群之活化接枝之鍵聯基樹脂’ 複合物所形成。 % 在較佳的具體實例中，以本發明的方法所獲得的胜肽 為 TrP-Arg-Arg-LyS-NH2、Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys- ΚΙ 或 lle-Leu_Arg-Trp_Pro-Trp_Trp Pr〇 Trp Arg Arg Lys_

Nh2。

本發明的另一目的係提供下式化合物： X

其中A為固相載體或接枝於固相載體之鍵聯基；n為介於 〇與10之間的整數；X為Cl·6烷氧基、經芳基取代之6 境氧基、芳氧基、烯丙氧基、視需要保護之胺基酸殘基、 喪需要保護之胜肽殘基或NR1R2,其中…及R2獨立為氯 =烷基；及γ為與介於a與胺基官能基之間的鍵正 父之保護基，或視需要進-步經保護之胺基經保護或未 保護之胺基酸或胜肽殘基。 式I化合物可用作本發明方法中的中間物。 15 200831527 在較佳的具體實例中，式ϊ化合物之γ為選自由Fmoc、

Boc' Cbz、Npys及AU〇c所組成群之正交保護基，其先決 條件係如果X為烯丙氧基，則Y不為AUoc。 較佳的是其中n為介於0與1〇之間的整數之式I化合 物。 在也#父佳的具體實例中，式J化合物之χ為NRlR2， 其中R及R2獨立為氫或Cii〇烷基；及Y為Fm〇c、B〇c、 Cbz、Npys 或 All〇c。 進一步較佳的具體實例為其中γ 胺基經保護或 未保護之胺基酸殘基或選自由Y，_Ile_Leu_Arg-Trp_pr〇_Trp_ Trp-Pro-Trp-Arg-Arg、Y，-Tr卜Trp_Pr〇_Trp_Arg_Arg、γ，塵

Trp-Arg-Arg、Y’_Arg_Arg及Y’_Arg所組成群之視需要進 一步保護之胜肽殘基，其中γ，為氫或適合的保護基，且其 中胺基酸殘基視需要在其側鏈上以適合的保護基保護。 本發明的另一目的為下式化合物：

其中η為介於〇與1〇之間的整數；又為烷氧基、經芳 基取代之C1-0烷氧基、芳氧基、烯丙氧基或NRlR2，其中 R及R獨立為氫或烷基；及丫為Fm〇c、Boc、cbz、 NPys、Alloc、α _胺基經保護或未保護之胺基酸殘基或視 需要進一步保護之胜肽殘基；其先決條件係如果X為烯丙 200831527 氧基，則Y不為Alloc。 【實施方式】 實驗 下列的實施例進一步說明本發明，但不意圖以任何方 式限制本發明。 實施例 1 : Ile-Leu-Arg-Trp-Pr〇-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg_

Arg-Lys-NH2之固相合成

在實施例1中所使用的所有胺基酸具有L構形。將3 3 公克 H-Lys(Boc)-NH2(來自 Genzyme)藉由與 Fmoc-氯化 物及10%之NafO3在二聘烧/水（1 : 1 )中反應而轉化 成Fmoc-LyS(B〇c)-NH2。接著將保護側鏈之Boc基團在周 圍溫度下以50%三氟乙酸（TFA)在二氯曱烷中的溶液移 除。在加入甲基第三丁醚之後，Fmoc-Lys-NH〗沉殿成其TFA 鹽。將該鹽回收，溶解在水性鹼性介質中及接著萃取，以 供應溶解在有機相中的不含鹽之Finoc-Lys-NH2。 將30公克2-氯三苯曱基氯聚苯乙烯樹脂（來自CBL-Patras )加入先前萃取之有機相中及在有機鹼，較佳為二 兴丙基乙胺的存在下攪拌。在ε-胺基與樹脂反應之後，其 I載1為約0.50毫莫耳/公克，得到下式化合物：

:固相 III 17 200831527 . 接著式111化合物係藉由與20%之六氫吡啶反應而去 保護。2當量Fmoc-Arg(Pbf)-OH、1當量HOBt與1當量 二異丙基碳化二醯亞胺之混合物係在N-曱基吡咯啶酮中製 備，並加入去保護之胺基酸樹脂中。在周圍溫度下介於60 與90分鐘之間的偶合期之後，達成S 99%之偶合效率， 而沒有任何進一步重複步驟。 將二胜肽樹脂以N-曱基吡咯啶酮清洗，並將更多胺基 酸在周圍溫度下使用2-當量每一各個Fmoc-胺基酸，除了 ® 最後一個胺基酸（其為Boc-Ile-OH)之外，在二氯甲烷中 的1當量6-氯-HOBt、TCTU及二異丙基乙胺的存在下經 3 0-60分鐘之偶合期相繼組合。清洗係以N-甲基吡咯啶酮 進行。每一偶合步驟只進行一次，即未發生任何重複的單 獨偶合步驟。在最後一個胺基酸偶合之後，獲得胜肽樹脂 Boc-Ile-Leu-Arg(Pbf)-Trp(Boc)-Pro-Trp(Boc)-Trp(Boc)-Pro-Trp(Boc)-Arg(Pbf>Arg(Pbf)-Lys(固相）-NH2，該樹脂係藉 由以TFA 60%、大茴香硫醚5%、酚5%、三異丙基矽烷 B (TIS) 1%、二硫蘇糖醇（DTT2.5%)、水5%與二氯曱 烷21.5%的混合物處理而去保護及從樹脂移除，得到為白 色固體的 28·2 公克粗 Ile-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH^ (由 MS 石霍認之結構）。 實施例 2 : Ile-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH2之固相合成 在實施例2中所使用的所有胺基酸具有L構形。將54 公克 H-Lys(Boc)-NH2 X HC1 (來自 Genzyme )藉由與 18 200831527

Alloc-OSu (烯丙氧基魏氧基琥拍醯亞胺）及三乙胺在二聘 炫中反應而轉化成Alloc-Lys(Boc)-NH2。接著將保護側鏈 之Boc基團在0°C下以氯化氫氣體在二氯甲烷中的溶液移 除。在反應之後，Alloc-Lys-NH2沉澱成其HC1鹽。將該 鹽過濾及以二氯甲：)：完清洗。將50公克溴-(4-甲苯基）_甲基 聚苯乙烯樹脂（來自CBL-Patras)及31.7公克Alloc_Lys· NH：2 X HC1在昇高溫度下在二異丙基乙胺於N_甲基吡洛唆 酮中的溶液存在下偶合。在ε -胺基與樹脂反應之後，其裝 載量為約0·55毫莫耳/公克，得到下式化合物：

接著式IV化合物係藉由以在Ν，Ν_二甲基甲醯胺中的 Pd[PPhs]4及在對曱苯亞磺酸鈉的存在丁處理而去保護。其 他步驟以類似於實施例i進行，除了用於每一偶合步驟的 偶合混合物係由i當量H0Bt及i當量二異丙基碳化二醯

亞胺所組成之外。產量：41.3

Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH,(以 MS 確認之結構）。 類似於實施例1，將Fm〇c_Arg(pbf)與式IV之去保護 之胺基酸樹脂偶合，只在一個偶合步驟中就具有> 99%之 效率。 比較實施例 Cl : Ile_Leu-Arg-Trp_PrO-Trp_Trp邛r〇- 19 200831527 . Trp-Arg-Arg-Lys-NH2 之固相合成 重複實施例1的步驟，除了將第一個胺基酸殘基依傳 統上經由其C-末端固定於樹脂之外，因此供應Fmoc_ Lys(Boc)-固相。後續與Fmoc-Arg(Pbf)的偶合需要實質上 更長的偶合時間（8小時），並且每一循環與4當量 FmooArg(Pbf)的偶合步驟需要重複至少兩次。 【圖式簡單說明】 無 •【主要元件符號說明】 盤 20

Claims (1)

1. 200831527 泰 十、申請專利範圍： 1 · 一種從下式化合物開始之胜肽合成之方法， X

   其中A為固相載體或接枝於固相載體之鍵聯基；η為介於 〇與10之間的整數；X為Cl·6烷氧基、經芳基取代之c 1-6 烷氧基、芳氧基、烯丙氧基、視需要保護之胺基酸殘基、 視舄要保護之胜肽殘基或NRiR2，其中R1及r2獨立為氡 或烷基；及γ為與介於a與胺基官能基之間的鍵正 父之保護基；而該方法包含步驟： (a) 將N-末端之α -胺基官能基去保護， (b) 將至少Ν-末端保護之胺基酸或具有自由或活化羧酸官 旎基之胜肽與步驟（a)的去保護α _胺基官能基偶合，因 此延長式I化合物， (0將步驟（a)及（b)視需要重複至少一次，其中至少Ν_末端 保護之胺基酸或胜肽與先前步驟（13)者相同或不同， (d) 將來自Α之所得胜肽裂解， (e) 視需要移除在步驟（d)之後留下的所有保護基， (f) 刀離及視需要純化如此所獲得的胜肽。 2·根據申請專利範圍第丨項之方法，其_ γ為選自由 Fm〇c、Boc、Cbz、Npys及A11〇c所組成群之正交保護基； 其先決條件係如果X為烯丙氧基，則Y不為。 21 200831527 3 ·根據申請專利範圍第彳—、， 现固弟1或2項之方法，其中n為介 於0與4之間的整數；而R1及r2獨立為氫、甲基或乙基。 4.根據中請專利範K第丨至3項中任_項之方法二其 中η為1;X為NW，其中Rl 2 一 ’、 、甲R及R 一者為氫；而丫為Fm〇c 或 Alloc 〇 5·根據中請專利範圍第1至4項中任-項之方法，其 中步驟⑻的N_末端保護之胺基酸為N•末端保護之_或

   肠；或其中步驟⑻的N_末端保護之胜肽含有_或此 作為C-末端殘基。 / 6. 根據申請專利範圍第〗至5項中任一項之方法，其 中Y為Fmoc或Alloc ; i i击丰跡〜、η γ、， ，、中步驟（b)及（c)的Ν-末端保護 之胺基酸或胜狀係經Fornc保護。 7. 根據中請專利範圍第6項之方法，其中最後重複的 步驟⑷的至少N·末端保護之胺基酸或胜肽被與正交 之保護基保護。 8_根據巾請專利範圍第7項之方法，其中該正交保護 基為Boc。 9.根據申請專利範圍第1至8項中任一項之方法其 中A為選自由2-氯三苯曱基氯聚苯乙烯樹脂、溴_(4_甲基 苯基）-甲基聚苯乙烯樹脂及漠_(4•甲氧基苯基）_甲基聚苯乙 烯樹脂所組成群之活化接枝鍵聯基樹脂複合物。 10·根據申請專利範圍第【至今項中任一項之方法，其 中在步驟⑴中所獲得的胜肽為Ile_Leu_Arg_Trp_pro_Trp· Trp-Pro-Trp-Arg_Arg-Lys-NH2 〇 22 200831527 m • 11 ·根據申明專利範圍第i至9項中任一項之方法，其 中在步驟（f)中所獲得的胜肽為Trp-Trp-Pr〇-Trp-Arg_Arg_ Lys_NH2。 12·根據申請專利範圍第1至9項中任一項之方法，其 中在步驟（f)中所獲得的胜肽為丁吓士g_Arg_Lys_NH2。 13 . —種下式化合物：

   其中A為固相載體或接枝於固相載體之鍵聯基·，^為介於 〇與10之間的整數；X為燒氧基、經芳基取代之〔Η 烷氧基、方氧基、烯丙氧基、視需要保護之胺基酸殘基、 視需要保護之胜肽殘基或NRlR2，其中Rl及R2獨立為氫 或烷基；及γ為與介於A與胺基官能基之間的鍵正 交之保護基，或經視需要進一步受保護之^胺基保護或未 保護之胺基酸或胜肽殘基。 14_根據申請專利範圍第13項之化合物，其中γ為選 自由Fm〇C、Boe、Cbz、Npys& AU〇c所組成群之正交： 護基；其先決條件係如果X為埽丙氧基，則γ不為au〇c。 15.根據申請專利範圍第13或14項之化合物，其中^ 為介於0與1 0之間的整數。 1Μ艮據中請專㈣圍第丨3 i 15項中任—項之化人 物，其中X為NW，其中hR2獨立為氮或‘烧基； 23 200831527 而 Y 為 Fmoc、Boc、Cbz、Npys 或 Alloc。 17·根據申請專利範圍第i3至16項中任一項之化合 物，其中γ為α _胺基經保護或未保護之胺基酸殘基或選 自由 Y’- Ile-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg、 Y’-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg、Y，-Trp-Arg-Arg、Y，-Arg-Arg

   及Y’-Arg所組成群之視需要進一步受保護之胜肽殘基，其 中Y’為氫或適合的保護基，且其中胺基酸殘基視需要在其 侧鏈上以適合的保護基保護。 18·—種下式化合物··

   其中η為介於〇與1()之間的整數；又為k烧氧基、經芳 基取代^ Cl-&烷氧基、芳氧基、烯丙氧基或NRlR2，其中 獨立為氫或Cm。烷基；及γ為Fm〇c、Boc、cbz、 f1〇e、α -胺基經保護或未保護之胺基酸殘基或視 需要進-步受保護之胜肽殘& ;其先決條件係如* χ為烯 丙氧基’則Υ不為Alloc。 十一、国式： 益 24