TW200826925A - Isolated hydroxy and N-oxide metabolites and derivatives of O-desmethylvenlafaxine and methods of treatment - Google Patents

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200826925 九、發明說明： L 明所屬 ；3 本發明係有關於0·去曱基文拉法辛之經分離的羥基及 N-氧化物之代謝物及衍生物以及治療方法。 5 【先前技術】 發明背景 文拉法辛，化學名稱為1_[2_(二甲基胺基)_1_(4_甲氧基 本基）乙基]壤己醇’已知為一強效之單胺類(monoamine)神 經傳導劑吸收抑制劑，該吸收作用為一與臨床抗憂鬱活性 10相關之機制。由於其新穎結構，文拉法辛具有一作用機制 與其他目前可獲得之抗憂鬱劑不相關，如三環抗憂鬱劑地 昔帕明（desipramine)、諾斯替林(nostriptyline)、普羅替林 (protriptyline)、依米帕明（imipramine)、愛米替林 (amitryptyline)、三米替林(trimipramine)與朵西平(doxepin)。 15 一般相信文拉法辛之作用機制與單胺類神經傳導劑血 清素與正腎上腺素之再吸收有關。較小相關程度為，文拉 法辛亦抑制多巴胺之再吸收，但對於單胺類氧化酶並無抑 制作用。0-去甲基文拉法辛，為文拉法辛在人體中之主要 代謝物，具有類似之藥理學作用。文拉法辛抑制正腎上腺 20素與血清素(5_HT)再吸收之能力，已被預測可與三環類抗 憂鬱劑匹敵或更佳。Montgomery，S.A.,文拉法辛：A New

Dimension in Antidepressant Pharmacotherapy，J Clin

Psychiatry，54(3):119 (1993)。 相對於典型之三環類抗憂鬱劑藥物，文拉法辛在體外 200826925 對於蕈毒驗型（muscarinic)、組織胺型（histaminergic)或腎 上腺素型（adrenergic)受體並無親和力。這些受體之藥理學 活性係與三環抗憂鬱劑藥物之各種抗膽鹼性、鎮靜與心血 管效應相關。 5 文拉法辛係揭示於U.S. Pat· No· 4,535，186 (Husbands et al·)，並已報導可使用作為抗憂鬱劑。

〇-去甲基文拉法辛(“DV”），化學名稱為1 -[2-(二甲基胺 基)-1_(4_酚基）乙基]-環己醇，為文拉法辛之主要代謝物， 並顯示可抑制正腎上腺素與血清素之再吸收。Klamerus，K. 10 J. et al·，“Introduction of the Composite Parameter to the Pharmacokinetics of Venlafaxine and its Active O-Desmethyl Metabolite”，J· Clin· Pharmacol. 32:716-724 (1992). A particularly useful novel salt form of O-desmethyl Venlafaxine with unique properties, O-desmethyl Venlafaxine 15 succinate (“DVS”)，was disclosed in U.S. Pat. No· 6,673,838 (Hadfield et al.)。 先前對於文拉法辛與O-去基文拉法辛之代謝物僅有部 分瞭解，不論是以自由鹼或鹽類形式存在。因此，當某些 文拉法辛之代謝產物資訊公開時，請見Howell, S.R. et al·， 20 Metabolic Disposition of 14C- Venlafaxine in Mouse, Rat,

Dog，Rhesus Monkey and Man，，，Xen〇bi〇tica 23(4):349359 (1993)，先前技藝便缺乏對所有這些代謝物與其活性之完 整瞭解。而本發明人現在對於其所產生之代謝物及終端用 途有更完整之瞭解。 6 200826925 【發明内容】 發明概要 本發明係提供一種新穎之經分離化合物，其特徵為其 為DV之代謝物或衍生物、其相對應之醫藥組成物與治療方 5 法。 特別的是，本發明包括一相關之經分離羥基-DV代謝 物或衍生物，具下式

其中 10 羥基係連結於環己基環上之2-位置（鄰位置）或3-位置 (間位置）之碳上，如虛線方塊表示； 及其醫藥上可接受之鹽類。在一實施例中，該經分離 之DV代謝物為2-羥基-DV代謝物。在另一實施例中，該經 分離之DV代謝物為3-羥基-DV代謝物。 15 本發明亦包括一種經分離之羥基-DV葡醣醛酸苷代謝 物或衍生物，如下式 200826925

其中一羥基係連結於環己基環上之2_位置（鄰）、3-位置 (間），或4-位置（對）之碳上，如虛線方塊所示； 及其醫藥上可接受之鹽類。在一實施例中，該經分離之DV 5 代謝物為2-羥基-DV葡醣醛酸苷代謝物。在另一實施例中， 該經分離之DV代謝物為3_羥基-DV醣酸苷代謝物。在另一 實施例中，該經分離之DV代謝物為4-羥基-DV葡醣醛酸苷 代謝物。 本發明更包括一種經分離之N-氧化物DV代謝物或衍 10 生物，如下式

OH

及其醫藥上可接受之鹽類。 本發明更相關於一種經分離之T基羥基-DV代謝物或 衍生物，如下式 200826925 ch3

其中一羥基係連結於苄基上之2_位置或位置碳上； 及其醫藥上可接受之鹽類。在一實施例中，該經分離之〇^ 代謝物為2_苄基羥基_DV。在另一實施例中，該經分離之 5 DV代謝物為3-苄基輕基-DV。 類似地，本發明包括醫藥組成物，其包含本發明任一 代謝物或衍生物，與醫藥上可接受之載體或賦形劑結合。 其包括一種治療哺乳動物至少一中樞神經系統病症之方 法，包含提供有需要之哺乳動物有效劑量之本發明化合物。 10 圖式簡單說明 第1圖係説明一種新穎之經分離化合物，特徵為 代謝物。第1(A)圖說明四種獨特之羥基-DV化合物。環己醇 環上之-OH基團可位於虛線方塊中所示之任一位置上。第 1(B)圖說明四種獨特之羥基丨-Dv葡醣醛酸苷。環已醇環上 15之一0Η基團可位於虛線方塊中所示之任一位置上。第1(c) 圖說明DV化合物之沁氧化物。第1(D)圖說明一苄基羥基 -DV化合物。苄基上之—0H基團可位於虛線方塊中所示之任 一位置上。 第2圖說明合成2-羥基DV化合物之一方法。 第3圖說明合成2-羥基DV葡醣醛酸苷化合物之一方 20 200826925 第4圖說明合成N-氧化物DV化合物之一方法。 第5圖說明合成苄基羥基DV之一方法。 第6圖係提供代表性之放射層析圖，在單一劑量口服投 藥DVS (20 mg/kg)至一大鼠後。第6(A)圖顯示投藥後1小時 5 之公鼠血漿。第6(B)圖說明投藥後0-8小時收集之公鼠尿 液。第6(C)圖說明投藥後8-24小時後收集之排泄物。 第7(A)與7(B)圖說明假設之DVS片段圖，以及產物離子 m/z 264之質譜。 第8(A)與8(B)圖說明假設之M6片段圖，在大鼠中產物 10 離子m/z 280之質譜。在整份說明書與圖示中，字母“M”後 之數字係指此述之代謝產物。 第9(A)與9(B)圖係提供一種假設之M7片段圖，以及大 鼠中產物離子m/z 440之質譜。 第10(A)與10(B)圖說明假設之M10片段圖，以及大鼠中 15 產物離子m/z 250之質譜。 第11(A)與11(B)圖係說明假設之合成n，〇-二去甲基文 拉法辛之片段圖，以及產物離子[m+h]+(m/z 250)之質譜。 第12(A)與12(B)圖係提供假設之M13片段圖，以及大鼠 中產物離子m/z 426之質譜。 2〇 第13(A)與13(B)圖係提供假設之N-氧化物DV片段圖， 以及大鼠中產物離子m/z 280之質譜。 第14圖係顯示代謝物之代表性放射層析譜圖，在〇^^ (30 mg/kg)單一口服投藥至犬，（A)投藥後1小時之血聚，⑻ 投藥後8-24小時收集之尿液，以及(c)投藥後〇_24小時之排 10 200826925 泄物。 第15(A)與15(B)圖係提供假設之M6片段圖，以及犬中 產物離子m/z 280之質譜。 第16(A)與16(B)圖係提供假設之M7片段圖，以及犬中 5 產物離子m/z 440之質譜。 第17(A)與17(B)圖係提供假設之M9片段圖，以及犬中 產物離子m/z 280之質譜。 第18(A)與18(B)圖係提供假設之M10片段圖，以及犬中 產物離子m/z 250之質譜。 1〇 第19(A)與19(B)圖係提供假設之M12片段圖，以及犬中 產物離子m/z 456之質譜。 第20(A)與20(B)圖係提供假設之M13片段圖，以及犬中 產物離子m/z 426之質譜。 第21(A)與21(B)圖係提供假設之M14片段圖，以及產物 15 離子m/z 236之質譜。 第22(A)與22(B)圖係提供假設之合成之ν，Ν，0-三甲基 文拉法辛片段圖，以及產物離子[m+h]+(m/z 236)之質譜。 第23(A)與23(B)圖係提供假設之N·氧化物〇V片段圖， 以及犬中產物離子m/z 280之質譜。 20 【實施方式】 較佳實施例之詳細說明 I·本發明化合物 A·經分離之DV代謝物舆衍生物 本發明係相關於一種新辨識出 之DV代謝物與衍生 11 200826925 物，預期具有增進之特性。某些化合物為天然代謝物（由 酵素反顏其他體内或生物模式内反應產生），其餘的則與 預期具有貫質上相似活性之結構物(衍生物)相關。第【圖顯 示出這些化合物之結構。

5 如第1⑷圖所示，（2或3)·經基-DV化合物為經基化DV 衍生物，具有祕基團，連結至環己基之2_位置或3_位置碳 上。該2·與3-位置上之碳為在第i⑷圖虛線方塊中者。總共 有八個潛在位置連結於2_與弘位置碳上（每個碳上有兩 個），然而，由於對稱性，在環上2_位置群與2_位置之碳可 產生四種不同之化合物，因此，該經基可連結至2_位置碳 或3-位置碳二者之一。 DV代謝物在環己基環上2_、3_或4_位置上之羥基化可 為葡醣醛酸苷化，以形成環己基羥基_DV葡醣醛酸苷，顯示 於第1(B)圖。羥基可連結於虛線方塊中之任一碳上。 15 第UC)圖顯示N-氧化物DV，一種DVS衍生物，在二 甲基胺基團之氮上具有一氧原子。 第1(D)圖顯示苄基羥基DV，一種DVS代謝物或衍生 物’在节基環上之2_位置或3-位置上連結一羥基。 本申請案提供顯示每一化合物結構之圖示、相關於該 20 化合物作為DV代謝產物之資訊、分離及/或合成方法，以及 每一化合物預期之活性。 L由大鼠醴内實驗鑑定之化合物 DVS之代謝係於大鼠中進行研究，在單一口服投藥20 mg/kg (以自由鹼形式測定之劑量)後。DVS大量且快速地在 12 200826925 大氣體内被代謝，主要代謝為〇-去甲基文拉法辛〇_葡膽酸 酸苦(DV葡祕酸们。Dv葡麟酸*在所有分析之血聚與 尿液中為主要之藥物相關化合物。 Μ1-Μ6，六種羥基_代謝物，係以Lc/Ms偵測，而某些 5樣本係由放射層析法偵測。在這些代謝物中，該羥基係連 結於環己醇環上之2-、3-與4-位置上，產生六種不同之化合 物，M1-M6。這些羥基DV代謝物之葡醣醛酸苷並未在大鼠 内觀察到。N-氧化物DV係於大鼠血漿、尿液與排泄物中觀 察到，經由LC/MS。亦觀察到其他代謝物。 10 2·由犬體内實驗鑑定之化合物 在比高犬(beagle dog)體内之DVS代謝係於單一 口服投 藥30 mg/kg (自由鹼)後測定。DVS係於犬中大量且快速地被 代謝。DV葡醣醛酸苷為最大量之代謝物，在尿液與血漿中 以放射層析法測定。 15 化合物M1-M6係經由LC/MS，在血漿、尿液與排泄物 中觀察到。化合物Mil與M12係於尿液中觀察到（經由放射 層析法與LC/MS)。N-氧化物DV化合物係於血漿（經由 LC/MS)、尿液(經由LC/MS)，與排泄物（經由放射層析法與 LC/MS)中觀察到。亦觀察到其他代謝物。 20 簡言之，DVS可於犬體内大量且快速地被代謝為數種 代謝物。偵測到最大量之代謝物為DVO-葡醣醛酸苷。在目 前研究中觀察到之代謝物類似於在大鼠血漿、尿液與排泄 物中觀察到者，在口服投藥之後，而在比高犬中具有更多 種代謝物。 13 200826925 B. 活性 本發明化合物係偵測為DVS代謝物或衍生物，一般相 信具有類似於文拉法辛與DVS之活性形式。羥基七v葡醣醛 酉欠苷一般相k係作用為前藥，在具有活性前，葡醣駿酸苷 5先於體内切割。葡醣醛酸苷之切割可經由β-葡醣醛酸苷酶 作用而產生，其在腸胃道中特別具活性，或在酸性條件下， 如於胃中產生。該羥基_£^與沁氧化物DV化合物預期在目 前形式中具活性。本發明化合物可測試特異性生物活性， 使用受體結合ό式驗’與體内代謝與藥效研究’其為技術上 10 已知。請見範例5。 C. 合成 1·自由鹼化合物之合成 本發明化合物可使用下述方法，以及有機合成技術中 已知之合成方法，或是此技術領域者所知之這些方法之變 15 化製備。請見，“Selectivity， Strategy & Efficiency in Modern Organic Chemistry，，，ed·，Ι· Fleming, Pergamon Press, New York (1991); Comprehensive Organic Chemistry, uThe Synthesis and Reactions of Organic Compounds”，ed· J.F. Stoddard，Pergamon Press，New York 20 (1979)。適當之方法包括，但不侷限於，以下列出者。 第2圖係提供一種合成本發明2-羥基DV化合物之方 法。在本合成之第一步驟中，4-(二甲基胺甲醯基甲基)酚係 以一T基保護。該溴化甲苯保護基適用於本發明中，以合 成本發明之化合物，由於其易於在最終步驟中移除。然而， 14 200826925 5 亦可使用其他保護基。 在第二步驟中，該經保鑊之9 之包基環己酮（羥基經保護) 之酸性溶液中，係於適當侔# 、 、田悚件下加入二異丙基醯胺鋰。適 當之保護基為技術上已知，力姑^ G祜下基…三甲基矽烷基_，以 及第三-丁基-二曱基石夕烧基。 10 在第三步驟中，剛員係使用氫氧化她移除。或者， 酮類可使用錢化鈉移除。最終步驟指出移除保護基。類 似之方法可祕合鈔_DV化合物，❹料之經保護 3-取代環己酮。此外’此方法可用於製備4•經基㈣匕合物， 使用適當之經保護4-取代環己_。 第3圖係提供-種合成雜Dv葡祕酸狀方法。在 此方法中’ 一適當之羥基-DV化合物係耦合至葡醣醛酸苷之 二氣亞酿胺物上’如圖所示。 15 第4圖係提供一種合成N-氧化物〇ν化合物之方法。在 此方法中’ N-氧化物DV係以3-氣過氧苯甲酸(MCPBA)氧化 .# . \ 〇-去甲基文拉法辛而製備。 T基羥基DV化合物可依據下列流程製備，Yardley，JP et al.9 2-Phenyl-2-(l-hydroxycycloalkyl)ethylamine Derivatives: Synthesis and Antidepressant Activity，，，Journal of Medicinal 20 Chemistry 33(10): 2899-905 (1990)。熟習此技術領域者應 可採用Yardley指出之其他結構物合成流程製備，就合成本 發明2-苄基羥基DV化合物與3-羥基DV化合物而言。例如， 以（3,4-雙-苄基氧基-苯基)-醋酸起始，一3-取代苄基羥基DV 可依據第5圖所示製備。如另一範例，（2,4-雙-苄基氧基-苯 15 200826925 基)-醋酸可用於製備2_取代节基經基DV化合物。此外，依 據Yardley之流程’（2,4_雙-节基氧基_苯基)_乙腈與(3,4_雙_ 节基氧基-苯基)-乙腈，可用於製備相對應之2•與3_取代节基 羥基DV化合物。 5 2·蘯類之合成 10 本發明化合物可以其自由鹼與鹽類形式使用。本發明 化合物之醫藥上可接受酸添加鹽類，係以一般自由驗與等 置任-可形成非毒性鹽類之酸反應形成。示範之酸為無機 或有機ϋ包括氫氯酸、氣演酸、反丁歸二酸、順丁稀二 酉夂、琥ί白酸、硫酸、顧、酒石酸、醋酸、择樣酸、草酸、 苯Ά苯甲g文、知腦確酸、乙稀績酸、葡萄糖酸、麵胺 ^皂基乙、礼酸、蘋果酸、扁桃酸、甲旙酸、黏酸、 15 7酸、㈣、泛酸、卜甲苯俩與類似之酸。就非口服之 投藥而.可使用水溶性鹽類，雖然不論自由驗或醫藥上 可接党之鹽類，皆可應用於本發明化合物之口服或非口服 投藥中。 j·立體化學 化人像細彡式存在，且本發明包括本發明 20 物盥s ϋ肖κ物以及立體化學單狀形雜_鏡像 物兵S-鏡像物），除非另有指出。 D.分離 此外，本發明化合物 之排泄物樣本中純化出， 純化出，使用此領域已知 可自血漿、尿液或含有該化合物 或自含有該化合物之體外系統中 之技術。特別的是，該化合物可 16 200826925 使用製備級HPLC(prep-HPLC)製備，在可分離出單一代謝 物之條件下，如使用二動相之線性梯度，A與B，其中動相 A可為1〇 mM醋酸銨，pH 5·5，以及動相B可為乙腈，在流 速可產生分離之條件下，如範例1-2所述。 5 此經分離之化合物可使用其經純化之形式，或實質上 經純化之形式，意指其可自其天然環境中移出。實質上純 之化合物可包括99%、98%、97%、96%、95%、94%、930/。、 92%、91%、90%、85%、80%、75%、70%、65% 純之化 合物。 10 Ε.醫藥劑量形式 含有本發明化合物之醫藥組成物代表本發明之另一態 樣。該活性成分可複合為任何一般口服藥劑形式，包括藥 錠、膠囊與液體製劑，如酏劑與懸浮液，其含有各種增色 劑、香味劑、穩定劑與香味遮蔽物質。就複合口服藥劑形 15 式而言，該活性成分可與各種一般製錠材料混合，如澱粉、 碳酸鈣、乳糖、蔗糖與構酸二鈣，以幫助製錠或製膠囊過 程。硬脂酸鎂，作為一種添加物，係提供可使用之潤滑功 能’若有需要的話。該活性成分可溶解或懸浮於醫藥上可 接受之無菌液體載體中，如無菌水、無菌有機溶劑或二者 20 之混合物。液體載體可為適用於非口服注射者。其中該活 性成分係具備足夠之溶解，可溶於作為載體之一般生理食 鹽水中，若其相當難溶，通常可溶於適當之有機溶劑中， 如水性丙二醇或聚乙二醇溶液。含有1〇%至75%甘油之水性 丙二醇相當適合。在其他範例中，其他組成物可藉由分散 17 200826925 該經良好分離之活性成分於水性澱粉或羧基甲基纖維素溶 液中’或於適當之油中，如花生油而製備。液體醫藥組成 物’其為無菌溶液或懸浮液，可用於肌内、腹膜内或皮下 注射。 5 本發明化合物可與醫藥載體或賦形劑組合（如醫藥上 可接受之載體或賦形劑），依據一般醫藥複合技術，以形成 醫藥組成物或藥劑形式。適當之醫藥上可接受載體或賦形 劑包括’但不侷限於，描述於Remingt〇n，s，The Science _

Practice of Pharmacy, (Gennaro? A.R., ed.? 19th edition, 1995, 10 Mack Pub· c〇·)中者。術語“醫藥上可接受，，係指添加物或組 成物為生理上可接受，一般不會產生過敏或類似不希望之 作用，如胃不舒服、暈眩及類似症狀，當投藥至動物時， 如哺乳動物（如人類）。就口服液體醫藥組成物而言，醫藥載 劑與賦形劑可包括，但不侷限於水、甘油、油、醇類、香 15味劑、防腐劑、增色劑及類似物。口服固體醫藥組成物可 包括，但不侷限於，澱粉、糖類、微結晶纖維素、稀釋劑、 顆粒劑、潤滑劑、黏著劑與分解劑。醫藥組成物與藥劑形 式亦包括文拉法辛、〇_去甲基文拉法辛或其鹽類，如上所 述0 藥劑形式包括，但不侷限於，藥錠、含片、菱形片、 政液‘浮液、拴劑、藥T、巴布劑(cataplasms)、貼布、 粕末乳相、溶液、膠囊（包括包覆球體），以及貼片。藥劑 形式亦包括立即釋放形式，以及用於經控制、持續、延展 或L遲釋放之形式。藥錠或球體可視需要以標準水性或非 18 200826925 水性技術包覆外衣。 醫藥組成物可使用於單位藥劑形式中，如，作為藥錠 或膠囊。在此形式中，該組成物在單位劑量中為次分離， 其含有適當量之活性成分；該單位藥劑形式可為經組裝之 5組成物，如，包裝好之粉末或小瓶或安瓿(ampoules)。該單 位藥劑形式可為膠囊、含片或藥錠，或可為這些包裝形式 之適當種類。組成物單位藥劑中之活性成份量可變化，或 依據特定需要與活性成分之活性調整。 II·治療方法 10 A.可治療之疾病 本發明方法涉及投以有需要哺乳動物有效劑量之一或 多種本發明化合物。 本發明化合物一般相信具有類似於文拉法辛與〇 _去甲 基文拉法辛之活性。經基-DV葡St酸酸苷可作用為前藥，在 15體内失去附加之葡醣醛酸苷，形成相對應之羥基_DV化合 物。葡醣醛酸苷之切割可經由β-葡醣醛酸苷酶產生，其在 腸胃道中，或在酸性條件下，如胃中，特別具活性。剩餘 之化合物預期在其目前之形式中具有活性。 如 Contemporary Pharmacology, Volume 9(5) page 20 293-302 (1998)回顧文獻中所述，去甲基-文拉法辛具有如 表1所示之藥理特性。 19 200826925 表1· Ο-去甲基文拉法辛之藥理特性 藥效(體内） 利血平(Reserpine)-誘發低體溫之逆轉 (最小作用；mg&g i.p.): 5 10 15 藥效(體外） 胺再吸收之抑制（IC50; uM): 正腎上腺素 血清素 多巴胺 各種神經受體之親和性 (%於1 uM之抑制）： D2 s膽鹼型 腎上腺素型a 組織胺型Hi 鴉片型（Opiate) 1.16 0.18 13.4 6 7 0 0 7 20 因此，本發明之化合物、組成物與方法可用於治療患 有或可能患有至少一中樞神經系統疾病之病患，該病症包 括，但不侷限於憂鬱症（包括但不侷限於重鬱症、躁鬱症與 輕鬱症），纖維肌痛、焦慮、疼痛病症、廣場恐怖症、創傷 後壓力病症、經前煩躁不安症（亦知為經前症候群）、注意力 25不足過動症（有或無過動症）、強迫症（包括拔毛症）、社交焦 慮症、一般性焦慮症、自閉症、精神分裂症、肥胖、厭食 症、暴食症、抽動穢語綜合症（Gilles de la Tourette Syndrome)、血管運動潮紅症(vas()in〇t〇r flushing)、古柯驗 與酒精成瘾症、性功能障礙（包括早泄）、邊緣性人格異常、 20 200826925 慢性疲勞症候群、失禁（包括大便失林 大不、尿失禁'被動性失 不、回流性錢、應力性尿失禁、急迫性尿失禁、用力型 尿失禁與尿錢）、疼她括，但不限置於，偏輔、慢性 背痛、患肢痛、中枢性疼痛、神經病變疼痛如糖尿病神經 病變，以及治療後神經病變）、shyD喻綜合症、雷氏症 候群（Raynaud’s syndrome)、帖 I 本 I 林氏症（Parkinson’s 10

Dis，、義與其他症狀。本發日枝合物與城物亦可用 於預防憂t症之復發或再發，包括連續心療先前已患有憂 繁症且狀態減輕之病患；用於誘發老人癡呆症、阿兹海默 症與失憶症患者認知之及/或増進騎緒；減或其他 煙草使用者戒斷之處方。此外’本發明化合物與組成物可 用於治療下視丘性無月經症’於患有或未患有憂繫症之人 類女性中。 β·投藥舆劑量 本發明提供治療、預防、抑制或減輕哺乳動物，包括 人類中之上述母一病症之方法，該方法包含投以有需要哺 乳動物有效劑量之本發明化合物。有效劑量為一足以預 防、抑制或減輕前述症狀之一或多者之劑量。 可用於治療、預防、抑制或減輕前述每一症狀之劑量， 之0 係依據待治療症狀之嚴重程度與投藥途徑而不同。投藥與 投藥頻率依據每一病患之年紀、體重、反應與過去病史而 不同。一般而言，此述病症之建議每日劑量範圍包括10 mg 至1000 mg本發明化合物每日。其他適當之劑量包括50 mg 至 800 mg每日，75 mg至600 mg每日，1〇〇 mg至 500 mg每 21 200826925 日，以及150 mg至300 mg每日，以及200 mg每日。特定之 劑量包括上述列出所有者。藥劑係以自由鹼形式描述，並 非以任一 w藥上可接受之鹽類描述。就病患管理而言，治 療可起始於較低劑量並視需要增加。非人類病患之投藥可 5 由此技術領域者調整。 本發明化合物亦可以與文拉法辛、〇_去甲基文拉法 辛、DVS，或其他醫藥上可接受鹽類組合形式提供。本發 明化合物亦可以其他已知之精神病-活性化合物組合，如其 他抗憂鬱劑或抗焦慮藥物、贺爾蒙治療、疼痛藥物與其他 10 治療。 任一適當之投藥路徑可用於提供病患有效劑量之有興 趣化合物。例如’口服、黏膜（如鼻内、舌下、口内、直腸 或陰道）、非經腸胃（如靜脈内或肌内）、經皮與皮下途徑， 皆可使用。 15 下列範例係用於說明，但不代表限制本發明。 範例 範例1· SPRAGUE DAWLEY大鼠中單一口服投藥後 【14C]DVS之代謝 六經基DV化合物與N-氧化物DV化合物，以及其他化 20 合物，係於尿液、排泄物與血漿中偵測[14C]DVS之代謝情 況，在強飼單一口服投藥後，於公鼠與母鼠中。 放射標記之[14C]DVS (批次編號CFQ13003，[環己基 -I，1 C]DVS)係由 Amersham Biosciences (Buckinghamshire, UK)供應。未經標記之DVS (Batch RB1636 ;自由鹼65.2%) 22 200826925 係得自 Wyeth Research, Rouses Point，NY。DVS之平均分子 量為381.5，含有O-去甲基文拉法辛，約為69.0%重。 [14C]DVS (總體藥物）之特異性活性為144 pCi/mg (209 pCi/mg，就自由鹼而言），自由鹼之放射性純度為99.3%， 5 以HPLC決定，使用放射性偵測。 用於製備口服投藥溶液之水係得自EM Science (Gibbstown，NJ)。甲基纖維素與聚山梨醇80係分別得自 Sigma Chemical Co· (St. Louis，MO)與Mallinckrodt Baker (Phimpsburg，NJ)。液體振盪混合溶液用於測定尿液、血清 10 樣本、排泄物均質物與投藥溶液分液中之放射線活性，得 自 Ultima Gold (Perkin Elmer，Wellesley，ΜΑ)。 307 Tri_Carb Sample Oxidizer模組，裝配有〇ximate-80 Robotic Automatic Sampler (Perkin Elmer)，係用於燃燒血 液與排泄物樣本。PermaFluor® E+液體振盪混合溶液 15 (Perkin Elmer)、Carbosorb® E (Perkin Elmer)二氧化碳吸收 劑與HPLC級水，係用於捕捉氧化儀中樣本燃燒產生之放射 活性二氧化碳。排泄物均質物與血液樣本係轉移至燃燒錐 區（combusto-cones)與覆蓋墊（Perkin Elmer)，以進行燃 燒。 20 Sprague Dawley大鼠（12隻公鼠與6隻母鼠），係選用重 量介於0.311至0.345 kg間之公氛，重量介於0.263至0.311 kg 間之母鼠’在投藥的時候。任意給予動物食物與水。為了 報導方便’公鼠編號為001M至012M，母鼠編號為〇〇iF至 006F。在最終時間點，三隻動物，公母都有，係分別飼養 23 200826925 於代謝籠中’收集尿液與排泄物。其他動物係分別飼養於 標準籠中。 口服投藥溶液係以結合86.4 mL之3.0 mg/mL· (2.0 mg/mL，自由鹼）未標記DVS溶液與3.6mL之43mg/mL(3〇 5 mg/mL自由鹼）[14C]DVS溶液而製備。溶液係製備於〇 25% 聚山梨醇80、0.5%甲基纖維素水溶液中。該放射化學純度、 特異活性與[C]DVS濃度（總體藥物與投藥溶液)係使用配 備有放射線偵測之HPLC測定。投藥溶液分液係於投藥前、 中與後採集，以測定投藥溶液之特異活性與放射活性濃度。 1〇 每一動物之目標劑量為3 〇 mg/kg (自由鹼；3 · 〇 mg/mL， 1〇 mL/kg，250 ei/kg) [uc]〇_去甲基文拉法辛經由口服 強飼。 全血（約5 mL)係由心臟穿刺方式收集至塗有肝素之試 3中，於適當之時間點〇、4、8與24小時，就公鼠而言， 15以及1與8小時，就母鼠而言，㈣，在某一時間點之每一 種性別）。全血之三重複分液_此)係置於燃燒錐區中， 稱重並置於空氣中乾燥。這些樣本係經氧化。殘餘之血液 係於5_ X g，代離心 10分鐘（Model Legend RT centrifuge， Sorvall)。所得之血槳係轉移至新鮮試管中，三重複分液_ ^ )係用於刀析其放射線活性量。殘餘之血漿係儲存於， °C，至進行代謝物分析。 母一性別之三隻動物之尿液與排泄物係分別於乾冰上 收集1收集時間點為公鼠0_8與8-24小時，母鼠0.8小時。排 泄物樣本係於約五倍水中（y/w)均質化。約Μ克該均質物之 24 200826925 分液係置於輯錐區巾，稱重並靜置的氣巾乾燥。這此 樣本之後經氧化。殘餘之尿液樣本與㈣物均質物轉 於-7(TC，直至進行代謝物分析。 存 血液樣本與排泄物均質物係氧化，於Model 307 5 Tri-Carb樣本氧化儀中，使用Carb⑽#E(6mL)作為捕捉 =劑，PennaFluor® E+ (1〇 mL)作為減劑。氧化效率係以 14C-Spec-Chec (perkin Elmer)之氧化情況決定此為一種 標準已知之放射線活性，測定為98.7%。背景讀取值(控制 組血液或排泄物樣本之平均值）係由每一樣本讀取值中減 10去。尿液與血漿之分液係經於加入10 mL之Ultima Gold™ 振盪流體後直接分析。 所有放射線活性係以Tri_Carb Model 3100TR液體振盪 技術器（Perkin Elmer)測定’其配備有ultima Gold™或甲苯 標準曲線。每分鐘計數（CPM)係轉換為每分鐘衰變 15 (DPM)，藉由使用已知放射線活性之外插標準值。每一標 準品之焊熄（quench)係以每一外插放射活性標準之經轉換 光譜指數(t SIE)而測定。該偵測之低極限係定義為背景值之 二倍0 血漿代謝物樣本 20 血漿樣本係於投藥後1、4與8小時後分析其代謝物分 佈。0.5 mL血漿分液係與等體積之乙腈混合，置於冰上約 10分鐘，之後於3500 rpm，4°C 之Sorvall Super 21 中離心 10 分鐘。上清液係轉移至乾淨試管中。係分析上清液之放射 線活性。上清液係於氮氣流中濃縮，於TurboVap(Zymark， 25 200826925

Hopinkton，ΜA)中，移除乙腈。水性殘餘物之分液係以HpLC 分析其代謝物分佈。挑選之樣本亦經LC/MS分析，鑑定其 放射線活性高峰。

大鼠血漿中[14C]DVS之穩定性係經測定。[hc]DvS 5 (0·01 mg/mL，最終濃度)係加至控制組大鼠血漿中，並置於 37°C搖晃水浴中。分液(〇.5mL)係於0、1、4、8與24小時移 出。樣本係以上述方法萃取，放射線純度係以hplc分析評 估。 尿液代謝物樣本 0 所有尿液樣本皆分析其代謝物分佈。0.5 mL尿液分液 係於3500 rpm，4。〇之S〇rvall Super 21中離心1〇分鐘。上清 液係轉移至新鮮試管中，並分析其放射活性量，並以HpLc 分析其分佈經挑選之樣本亦以LC/MS分析，鑑定其放射活 性尖峰。 5 大鼠尿液中[14C]DVS之穩定性亦經測定。 (〇-13mg/mL，最終濃度)係加入控制組大鼠尿液中，並置於 37 C晃動水浴中。分液(0.5 mL)係於0、卜4、8與24小時移 出。樣本係如上述萃取，其放射線純度係經HpLC分析評估。 排泄物代謝物樣本 〇 由公鼠中收集之排泄均質物，於投藥後8與24小時收

集，係分析其代謝物分佈。約1克之排泄均質物分液係於 35〇〇rpm與4°C 下，於S〇rvallSuper21 中離心10分鐘。上清 液係轉移至乾淨试管中。歹爱餘物重新以i 之水：乙猜（U 26 200826925 合，殘餘物重新懸浮於1 mL乙腈中。懸浮液係如上述離心， 上清液合併’用於放射線活性分析。上清液之後於氮氣流 下，於Turbo Vap中濃縮，移除乙腈。水性殘餘物之分液係 經HPLC分析其分佈情況。經選擇之樣本亦經LC/MS分析， 5 鑑定其放射線活性尖峰。 樣本分析 層析法分析係使用Waters Alliance模組2690 HPLC系 統(Waters Corp·，Milford，MA)進行。其裝配有一内建之自 動樣本儀，並與模組2487可微調式UV偵測器，設定監測波 10 長為225 nm，以及FloOn串連。模組525放射線活性流速偵 測器（Perkin Elmer)配備有一 250 μΐ^ LQTR 流速槽。Ultima Flow Μ振盪液體之流速為1 mL/min，使振蘯混合溶液比動 相之混合比例為5:1。代謝物尖峰之分離係使用Phenomenex Luna C18(2)管柱，150 X 2.0 mm，5微米（Phenomenex， 15 Torrance，CA)，二動相A與B係使用線性梯度。動相A為10 mM醋酸銨，pH 6.0,以及動相B為乙腈。流速為0·2 mL/min。 動相傳送係如下表2。 27 200826925 表2.層析法動相傳送條件。 動相A =10 MM醋酸銨於水中，PH 5.5。 動相B =乙腈。 時間 動相A 動相B 流速 (分鐘） (%) (%) (mL/min) 0 95 5 0.2 30 85 15 0.2 40 85 15 0.2 41 5 95 0.5 55 5 95 0.5 56 95 5 0.5 62 95 5 0.5 63 95 5 0.2 65 95 5 0.2

Agilent Model 1100 HPLC 系統（Agilent Technologies, Wilmington，DE)，包括一自動樣本儀與二極體陣列UV偵 5 測器，係用於LC/MS分析。該UV偵測器係設定為監測200 至400 nm。分離係於5微米 Phenomenex Luna C18(2)管柱， 150 x 2 mm (Phenomenex)中進行。管柱溫度為25°C。動相 與梯度程式如下。 用於代謝物鑑定之質譜儀為Micromass Q-TOF-2四極 10 柱-飛行時間複合質譜儀(Micromass，Inc.，Beverly, MA)。質 譜儀係裝配有電灑式離子化(ESI)介面，並於正離子化模式 下操作。質譜儀之設定列於表3。 28 200826925 表3·微質譜Q_TOF-2質譜儀之設定 毛細管電壓 3.2 kV 錐區(cone) 28 V 源極區塊溫度 80°C 溶媒揮散溫度 200°C 溶媒揮散氣流 350 L/hr 錐區氣流 75 L/hr CID氣流入口壓力 13-14 psig FloOne分析軟體（版本3·65，Packard BioScience，Boston， MA)係用於分析收集物並分析放射線活性之尖峰。電腦程 5 式Microsoft Excel® 97係用於計算平均值與標準差。 MassLynx軟體(版本3.5)係用於分析LC/MS數據。 結果 [14 C ] D V S (總體化合物）之放射線純度與特異性活性係 以HPLC測定，其配備有放射線偵測器，分別為99.3%與209 10 pCi/mg (自由鹼）。投藥溶液中之[14C]0-去曱基文拉法辛之 濃度、放射線純度與特異性活性分別為2.05 mg/mL、97.8% 與11·7 pCi/mg。投藥前、中、後之投藥溶液分液具有相似 之濃度與純度。[14C]DVS平均投藥劑量為19.9 ± 0.24 mg/kg (自由鹼）。此劑量係衍生自目標劑量30 mg/kg (自由鹼），由 15 於藥劑分離之原始重量並未計算到DVS為0-去甲基文拉法 辛（自由鹼)之琥珀酸鹽。 [14 C ] D V S於控制組大鼠尿液與血漿中之穩定度 [C]DVS於37 C控制組大鼠尿液與控制組大鼠血裝中 29 200826925 皆維持穩定，至多24小時。[14C]DVS於大鼠血漿中之放射 線純度大於98.9%，在所有時間點，而在大鼠尿液中之放射 線純度則大於99.5%，在所有時間點。 血液至血漿之分液 5 血液與血漿中之放射活性濃度，與血液之血漿之分 液，係如表4所示。在公鼠與母鼠血液或血漿中偵測到之放 射線活性濃度並無明顯差異。在公鼠中總放射活性之平均 血漿濃度分別為11.0、1.48、0·89與0.07 Mg當量/mL，於投 藥後1、4、8與24小時。就母鼠而言，總放射活性之平均血 1〇 漿濃度分別為9.90與0.92 pg當量/mL，於投藥後1與8小時。 在時間點1、4與8小時，該放射活性血液比血漿濃度範圍介 於〇·59至0.67之間，二性都是，而在時間點24小時，該比例 為0.99，在公鼠中。 採樣 全血之放射活性 (pg 當量/mL) 血漿中之放射活性 當量/mL) 血液比血 町，日J - (小時/性別） 單獨大鼠 平均值 土 S.D. 單獨大鼠 平均值 土 S.D. 平均值 土 S.D. 1/M 6.11 5.66 8.85 6.87 土 1.50 10.4 8.90 13.7 11.0士 2.2 0.62 士 0.03 1/F 5.63 5.76 7.15 6.18 土 0.74 9.61 8.74 11.3 9.90 土 1.2 0.63 土 0.04 4/M 0.95 0.96 0.72 0.88 士 0.12 1.59 1.62 1.22 1.48 士 0.20 0.59 士 0.00 8/M 0.35 0.71 0.71 0.59 土 0.18 0.53 1.10 1.05 0.89 士 0.27 0.67 士 0.01 8/F 0.59 0.50 0.66 0.58 土 0.07 0.86 0.82 1.08 0.92 土 0.12 0.64 士 0.05 24/M 0.06 0.08 0.05 0.07 土 0.01 0.07 0.08 0.05 0.07 土 0.01 0.99 土 0.04 30 200826925 血漿代謝物分佈狀況 血聚中之放射活性平均萃取效率為％ 7 ± 13 〇% (資料 未顯示）。由投藥0小時收集之公鼠血聚之代表性放射層 析係不於第6⑷圈。在投藥後⑻小時，㈣到在 5表4中列為M7)為主要尖峰’由放射層析法偵測。在投藥後工 與4小時，在公鼠血漿中之放射活性分別為88 7與93 6%， 與DV葡醣搭酸苦尖峰相關。在母鼠中，投藥後丄小時之μ 葡酿越酸苦血聚中放射活性為86 6%。8與24小時之樣本並 無明顯之放射活性，經放射層析法分析。也聚樣本中另一 1〇僅有之主要放射層析尖峰為未改變之DVS，血漿中之放射 活性測定為2.6與U)%，當偵_。其他血㈣本中偵測到 之次要代謝物包括在代謝物環己院環上經基化(Mi_m6，經 基DV化合物）。M1-M6血漿中之放射活性分別測定為小於 2%，在每一時間點上。 15 大鼠血漿中額外之次要代謝物，未出現於放射層析， 係經偵測並以LC/MS鑑定（表5)。這些代謝物包括沁氧化物 DV ’ N，0-二去甲基文拉法辛(M1〇)、N，〇_二去甲基文拉法 辛〇-葡醣醛酸苷(M13)。 31 200826925 餘癍sw/crm-龚费vw-B-荽袭笨碟疼皞，鉍省鎰γ .s_ +【Hi (缴令) ι,ραΓ>QS5.2 had >Q bDCLr來丧4^硪 ά-^ο-οΝ Ήύ Λα^ιί dDcc如嬸逾攤®όΛα a c >Q^ ^ fepCLT 5¾ Λ31ί 5 c Λ31ί dTa c ACTfli Λΰα;Λ3^ Μ W鍥蝤眨Μ ?Ή9 砩Η 硪ΗΟ-4蚪铢确铤砩»: fi^TOlf OOOCN 寸 9CNos(N οοοζ 0寸寸 9CS寸 OS OS 08CN 0¾ οοοίΝ ζ/9ε6>ε S9>Ι 寸·寸I ι·寸I σει 600 寸·卜 S·寸 Γ寸 om is cnms I § mm 32 200826925 尿液代謝物分佈情況 尿液為排泄之主要路徑，在投藥後前s小時，大於5〇% 之放射活性藥劑係於尿液樣本中回收，並在投藥後^小時 回收85%。尿液中制到之放射活性濃度列於表6，以放射 5層析法分析之放射活性之百分比分佈表示。投藥後〇_8小時 收集之大鼠尿液之代表性放射層析圖示於第6(抝圖。在所 有分析樣本中偵測到的主要放射活性尖峰為D V葡 醣醛酸 苷(M7)，在每-時間點之所有尿液樣本中偵測到的放射活 性大峰為約75%。在尿液中偵測到之未變化[Mc]DVS介於 10約9與2〇%間。小量之二羥基-DV化合物係於尿液中债測 到，使用放射層析。其中之一與M2，為這些代謝物之最大 量’尿液中有至多約7.5%之放射活性。 表6·單一劑量口服投藥，您頌㈣至大鼠後 ，放射活性之 採樣時間 放射活性， 以劑量％為單位 以放射層析法偵測之化合物 (平均值 +S.D.,n = 3)a (小日gv性別） 單獨 平均值土 S.D. Ml M2 M7 DVS 0-8/Μ 60.1 50.7 66.5 59.1 ±7.9 5.1 士 0.9 7.5 ±0.9 76.5 ±1.9 10.9 士 2.1 0-8/F 53.8 42.7 67.1 54.5 ± 12 0.9 ±0.2 5.1 ±0.4 74.0 ±3.3 20.0 ±3.5 8-24/Μ 24.6 32.3 19.7 25.5 ±6.4 6.3 ±0.5 7.4 ±1.2 77.2 ±1.2 9.1 ±1.1 a:此數值係以放射層析法偵測之總尖峰百分比表示 尿液中額外之次要代謝物，未出現於放射層析圖中， 15係經LC/MS偵測與鑑定（表5)。這些代謝物包括M3、M4、 M5、M6、N-氧化物DV、N，〇-二去甲基文拉法辛(M1〇)、 33 200826925 N，0-^—去甲基文拉法辛O-葡酸酸苦(Μ 13)。 排泄物代謝物分佈情況 5 自投藥後8-24小時之排泄物樣本之放射活 十生萃取效 率，在放射層析之前為74.8 ± 1.9% (資料未顯示）。僅有小 比例之放射活性劑量（約1 〇%)在投藥後24小時，以排、世物方 式排出。小於0.1%之放射活性劑量係於〇_8隨排泄物排 出。各大鼠排泄物中回收之百分比，經放射層析分析與放 10 15 射活性之分佈，係示於表7。投藥後8_24小時收集之經萃取 大鼠排泄物之代表性放射層析圖係示於第6(c)固。放射層 析法偵測到之最大量尖峰為N，0-二去甲基文拉法辛 (M10)，在排泄物中測定為34〇/。放射活性。排泄物中約21% 之放射活性為未改變之DVS。排泄物中N_氧化物DV之放射 活性為7%。合併之羥基化代謝物M1-M6之放射活性，在排 泄物中偵測約38.6%，排泄物中各代謝物之放射活性範圍為 1.7至12.2%。小量之〇-去甲基文拉法辛〇_葡醣醛酸苷（M7) 係於排泄物中觀察到’但僅於LC/MS上觀測到。 34 200826925 表7·單一劑量口服投藥[14C]DVS (20 MG/KG)至大鼠後8_24小時收 排泄物中之放射活性濃度與百分比分佈 集 之 大鼠 編號 放射活性， 為劑量之％ 以放射層析法偵測之化合物a Ml M2 M3 M4 M5 M6 M10 DVS N-氧化物 010M 8.5 b 8.0 10.4 3.1 1.8 1.7 11.0 33.6 22.0 8.5 011M 10.8 9.5 9.7 3.2 1.8 3.6 12.2 34.5 19.6 6.0 012M 9.5 8.8 9.9 3.9 3.9 2.1 11.4 32.6 20.8 6.7 平均值 士 9.6 士 1.1 8.8 10.0 3.4 2.5 2.5 11.5 33.6 20.8 7.1 S.D. ±0.8 ±0.4 ±0.5 土 1.2 土 1.0 土 0.6 ±0.9 ±1.2 ±1.3 a:此數值係以放射層析法偵測之總尖峰百分比表示 b:收集自投藥後0-8小時之公鼠與母鼠之排泄物樣本，分別含有0.017與〇〇25%之放射活性劍詈 並非由放射層析法分析。 以液相層析/質譜法鑑定代謝物 質譜係以LC/MS與LC/MS/MS獲得，分析大鼠血漿、尿 5 液與排泄物中之DVS與其代謝物。大鼠中DVS代謝物之結 構鑑定係列於表5。LC/MS數據代表DVS代謝物為葡醣醛酸 苷（M7)、N，0-二去甲基文拉法辛（M10)，以及羥基化產物 (M1-M6)。這些代謝物，DVS、N-氧化物DV，與一次要代 謝物(M13)之質譜鑑定係於下討論。

10 DVS DVS標準品之質譜鑑定係用於與代謝物比較。在dvs 之LC/MS譜圖中，質子化之分子離子，[m+h]+，係於m/z 264觀察到。第7圖顯示位於m/z 264之DVS產物之質譜，得 自碰撞誘發解離(CID)，以及假設之片段圖。該分子離子 15 損失H2〇產生位於m/z 246之產物離子。更進一步損失二甲 基胺基，產生位於m/z 201之產物。由DVS損失環己醇基 35 200826925 團，係以位於m/z 164之產物離子表示。位於m/z 58之產物 係代表（CH3)2NCH2+之存在。此外，位於瓜/z 1〇7、133、 145、159與173之產物離子，分別對應於DVS分子之甲 基、丙基、丁基、戊基與己基-酚部分。因此，這些離子 5 可用於偵測代謝位置，位於二甲基胺基、經基苄基與環己 醇基團。 代謝物Ml、M2、M3、M4、M5舆M6 (羥基DV化合物） 代謝物Ml至M6，產生一 [M+H]+，位於m/z 280，其為 16〇3大於0¥8，假定為羥基化或协氧化。第8圈顯示^16位 10 於m/z 280之產物之譜圖。代謝物Ml至M6之質譜非常類 似。由該分子離子損失H20會產生m/z 262之產物離子。位 於m/z 58、107與217之代謝物產物離子，對應m/z 58、107 與201之DVS產物離子，代表環己烷環為代謝位置。因此， 代謝物Ml至M6假設為羥基DVS代謝物，其中環己烷環為代 15 謝位置。 代謝物M7(0-去甲基文拉法辛〇_葡醣醛酸苷，dv葡醣醛 酸苷） 此代謝物之[M+H]+係於m/z 440觀察到，其代表一分 子量439。第9圈，顯示M7產物離子位於m/z 440之譜圖。 20由分子離子損失176 Da，於m/z 280處產生離子，代表此代 謝物為葡St酸酸皆。位於m/z 246、201、159、145、 133、107與58之產物離子係於DVS中觀察到。該質譜數據 並未指出共軛位置。然而，DVS會進行相同之h2〇損失， 產生[MH-H2〇]+，位於m/z 246 (第7圖）。這些h20之損失已 36 200826925 發生於環己醇基團上。此代表酚，而非環己醇，為葡醣醛 酸苷化位置。此外，該酚基團更具共軛位置代謝性。因 此，M7為DVS之0-葡醣醛酸苷，具有酚基為共軛位置。 代謝物M10 (N，0_二去甲基文拉法辛） 5 M10之[M+H]+係於m/z 250處觀察到。第10圈顯示M10 產物離子m/z 250之質譜。由位於m/z 250之分子離子損失 Η20，產生產物離子位於m/z 232。之後由m/z 232損失甲基 胺，產生診斷性產物離子m/z 201。此現象，以及缺乏位 於m/z 58之產物，指示出該DVS之二甲基胺基已轉換為甲 10 基胺基，經由N_去甲基化形成。M10位於m/z 250之質譜恰 好吻合位於m/z 250之合成N，0-二去甲基文拉法辛產物之 質譜。第11圖顯示位於m/z 250之合成N，0-二去甲基文拉法 辛產物之質譜。因此，M10辨識為忱0_二去甲基文拉法 辛。 15代謝物M13 (N，0-二去甲基文拉法辛〇-葡醣醛酸苷） 觀察到此代謝物之[M+H]+位於m/z 426，其代表分子 量為425 ◦第12圈顯示M13產物離子之光譜。由m/z 426損失 176 Da會產生位於m/z 250之離子。由環己醇片段損失Η20 會產生位於m/z 408之基線尖峰。由位於m/z 408損失176 Da 20 會產生之診斷性產物離子，位於m/z 232。之後由m/z 232損失甲基胺，產生位於m/z2〇1之產物離子。因此，M13 係假設為N，0-二去甲基文拉法辛〇_葡醣醛酸苷，具有酚基 為葡醣醛酸苷化位置。

N_氧化物DV 37 200826925 此DVS之[M+H]+係相關於在m/z 280處觀察到之成 分，其代表經基化或N-氧化。第13圓顯示此DV^關化合 物之m/z 280產物之質譜。由[M+H]+損失61 Da，會產生位 於m/z 219之化合物離子。此對應於損失二甲基羥基胺， 5與N-氧化物一致。因此，此此代謝物係辨識為DVS之N-氧 化物。 範例2· [14C】0-去甲基文拉法辛在比高犬中，經單一口服投 藥後之代謝 (2或3)·羥基DV化合物，羥基DV葡醣醛酸苷、N-氧化 10 物DV化合物，以及其他化合物，以及一节基羥基化合 物，係於[14C]DVS之尿液、排泄物與血漿代謝物中偵測 到，在單一口服劑量強飼投藥至公比高犬後，如下所述。 材料舆方法 經放射標記之[14C]DVS (批次編號CFQ13003，[環己基 15 -1_14C]DVS)係由 Amersham Biosciences (Buckinghamshire， UK)供應。未經標記之DVS (Batch RB1636 ;自由鹼65.2%) 係得自 Wyeth Research, Rouses Point, NY。DVS之平均分子 量為381.5，含有O-去甲基文拉法辛，約為69.0%重。 [14C]DVS (總體藥物）之特異性活性為144 pCi/mg (209 20 pCi/mg，就自由驗而言），自由驗之放射性純度為99.3%， 以HPLC決定，使用放射性偵測。 用於製備口服投藥溶液之水係得自EM Science (Gibbstown，NJ)。曱基纖維素與聚山梨醇80係分別得自 Sigma Chemical Co. (St· Louis，MO)與Mallinckrodt Baker 38 200826925 (PhillipSburg，NJ)。液體振盈混合溶液用於測定尿液、血清 樣本、排泄物均質物與投藥溶液分液中之放射線活性，得 自 Ultima Gold™ (Perkin Elmer，Wellesley，MA)。 307 Tri-Carb樣本氧化儀模組，裝配有〇ximate-80 5 Robotlc自動樣本器（Perkin Elmer)，係用於燃燒血液與排 泄物樣本。PermaFluor® E+液體振盪混合溶液（Perkin Elmer)、Carbosorb® E (Perkin Elmer)二氧化碳吸收劑與 HPLC級水’係用於捕捉氧化儀中樣本燃燒產生之放射活性 二氧化碳。排泄物均質物與血液樣本係轉移至燃燒錐區 10 (combusto-cones)與覆蓋墊(Perkin Elmer)，以進行燃燒。 動物 係使用公比高犬(n==4)，在投藥時間點重量介於14.4與 16.2 kg間（室内培養物種）。為了報導方便，動物係編號為5 至8。藥劑製備、動物投藥與樣本收集係於Wyeth Research， 15 Pearl River，NY進行。 藥劑製備、投藥舆分析 口服投藥溶液係以下方法製備，懸浮19.0 mg之 [14C]DVS與4168.3 mg之未經標記DVS於270 mL之載劑中 (0.25%聚山梨醇80、0.5%甲基甲基纖維素於水中）。 20 [14c]dvs之放射化學活性、特異性活性與濃度(總體藥物與 投藥溶液)係使用配備有放射線偵測之HPLC測定。投藥溶 液分液係於投藥前、中與後採集，以測定投藥溶液之特異 活性與放射活性濃度。 每一動物之目標劑量為30 mg/kg (自由鹼；3.0 mg/mL， 39 200826925 10 mL/kg，250 pCi/kg) [14c]DVS，經由口 服強飼。目標劑 量係經選擇’由於其已應用於先前之藥物動力學研究。此 外’此藥劑經皮下投藥，公SpragUe Dawley大鼠大腦中正 腎上腺素含量明顯增加。 5 血液收集舆分析 全血（約10 mL)收集至塗有肝素之試管中，於投藥後 1、4、8與24小時收集(N=4，就每一時間點而言），係經分 析。1 mL之血液係轉移至新鮮試管中，用於決定放射活性 濃度。獲得之血漿係於採集血液2小時内，於4°c離心。血 10漿與全血樣本係置於乾冰上送往Wyeth Research，

Biotransformation Division (Collegeville，PA)進行分析。全 血之三重複分液(200 PL)係置於燃燒區，並靜置於空氣中乾 燥。這些樣本之後經氧化，並決定放射活性含量。分析血 漿樣本之三重複分液（1〇〇 pL)之放射活性含量。殘餘之血漿 15 係儲存於-70°C，直至代謝物進行分析。 就每隻犬而言，尿液與排泄物係單獨收集，尿液收集 於乾冰上，排泄物於室溫收集。尿液在0-8與8-24小時收 集，排泄物於0-24小時收集。尿液與排泄物樣本係置於乾 冰上送往 Wyeth Research，Biotransformation Division 2〇 (Collegeville，PA)進行分析。排泄物樣本係於約5倍水中 (v/w)均質化。該均質物約0.2克之分液係置於燃燒區中，稱 重並靜置於空氣中乾燥。這些樣本之後經氧化，並決定其 放射活性。殘餘之尿液樣本與排泄物均質物係儲存於_7〇 °C，直至進行代謝物分析。 40 200826925 血液樣本與排泄物均質物係氧化，於Model 307 Tri-Carb樣本氧化儀中，使用Carbosorb® E (6 mL)作為捕捉 試劑，PermaFluor® E+(10 mL)作為振盪劑。背景讀取值(控 制組血液或排泄物樣本之平均值）係自每一樣本讀取值中 5 減去。尿液與血漿之分液係經於加入10 mL之Ultima GoldTM 振盪流體後直接分析。 所有放射線活性係以Tri-Carb Model 3100TR液體振盪 技術器（Perkin Elmer)測定，其配備有Ultima Gold™或甲苯 標準曲線。每分鐘計數（CPM)係轉換為每分鐘衰變 10 (DPM)，藉由使用已知放射線活性之外插標準值。每一標 準品之焯熄（quench)係以每一外插放射活性標準之經轉換 光譜指數(tSIE)而測定。該偵測之低極限係定義為背景值 之二倍。 血漿代謝物樣本 15 血漿樣本係於投藥後1與4小時後分析其代謝物分佈。1 mL血漿分液係與等量之乙腈混合，置於冰上至少1〇分鐘， 之後於14000 rpm下離心，於Eppendorf Model 5415C中離心 10分鐘。上清液係轉移至乾淨試管中。分析上清液之放射 活性。上清液係於氮氣流中濃縮，於Turbo Vap (Zymark， 20 H〇Pinkton，ΜΑ)中，移除乙腈。水性殘餘物之分液係以HPLC 分析其代謝物分佈。挑選之樣本亦經LC/MS分析，鑑定其 放射線活性高峰。 犬血漿中[14C]DVS之穩定性係經測定。[14c]DVS (0.012 mg/mL，最終濃度)係加至控制組犬血漿中，並靜置 41 200826925 於37°C之搖晃水浴中。二重複分液(ι mL)係於0、1、4、8 1424小日$移出。樣本係以上述方法萃取，放射線純度係以 HPLC分析評估。 尿液代謝物樣本 5 尿液樣本係於投藥後8至24小時間收集，分析其代謝物

刀佈f月况尿液为液係於14000 rpm下離心，於Eppend〇rf Model 5415C中離心U)分鐘。上清液係轉移至乾淨試管中。 係分析上清液之放射線活性，並使用出^^分析其代謝物分 佈。經選擇之樣本亦&lc/ms分析並鑑定其放射活性尖峰。 ίο [14c]dvs在犬尿液中之穩定度係經測定。[14C]DVS (0.025 mg/mL ’最終濃度)係加至控制組犬尿液中，並置於 37°C搖晃水浴中。分液（1 mL)係於〇、1、4、8與24小時移 出。樣本係以上述方法萃取，放射線純度係以HPLC分析評 估。 15 排泄物代謝物樣本 / 排泄物均質物係於投藥後至多24小時收集，分析其代 謝物分佈情況。約2克之排泄均質物分液係轉移至新鮮試 管中，並加入等體積之乙腈(v/w)，試管經渦旋震盪。樣本 之後於 14000 rpm下離心，於Eppendorf Model 5415C 中離 20 心1〇分鐘。上清液轉移至乾淨試管中。殘餘物重新懸浮於 1 mL乙腈中並如上所述離心。所得之上清液係與原上清液 合併，並分析其放射活性。上清液之後於氮氣流下，於 Turbo Vap中濃縮，移除乙腈。水性殘餘物之分液係經 HPLC分析其分佈情況。經選擇之樣本亦經LC/MS分析， 42 200826925 鑑定其放射線活性尖峰。 樣本分析 層析法分析係使用Waters Alliance模組2690 HPLC系 統(Waters Corp·，Milford，MA)進行。其裝配有一内建之自 5動樣本儀，並與模組2487可微調式UV偵測器，設定監測波 長為225 nm ’以及FloOn串連。模組515放射線活性流速補 測器（Perkin Elmer)配備有一 250 pL LQTR流速槽。Ultima Flow Μ振蘯液體之流速為3 mL/min，使振蘆混合溶液比動 相之混合比例為3:1。代謝物炎峰之分離係使用phenomenex 10 Luna Cl8(2)官柱 ’ 250 X 4.6 mm，5微米（Phenomenex， Torrance，CA)，二動相A與B係使用線性梯度。動相A為10 mM醋酸銨，pH 5.5，以及動相B為乙腈。流速為1 mL/min。 動相傳送係如下表8。 表8·層析法動相傳送條件 〇 時間(分鐘） A(%) B (%) 0 95 5 30 85 15 40 85 15 41 10 90 46 10 90 47 95 5

Agilent Model 1100 HPLC 系統（Agilent Technologies， 15 Wilmington，DE)，包括一自動樣本儀與二極體陣列UV偵 測器，係用於LC/MS分析。該UV偵測器係設定為監測200 43 200826925 至40〇11111。分離係於5微米？1^11〇11^1^1^1^(：18(2)管柱， 150 x 2 mm (Phenomenex)中進行。管柱溫度為25°C。動相 與梯度程式列於表2。就經選擇之LC/MS分析而言，放射 層析圖需要使用β-RAM模組3放射活性流速偵測儀(IN/US 5 Systems Inc·，Tampa，FL)，裝配有固體振盪流速槽。 用於代謝物鑑定之質譜儀為四極柱-飛行時間複合質 譜儀（Micnmiass，Inc.，Beverly, MA)，以及Finnigan LCQ Deca離子捕捉質譜儀(ThermoFinnigan，San Jose，CA)。質 譜儀係裝配有電灑式離子化(ESI)介面，並於正離子化模式 10下操作。質譜儀之設定列於表9與表1〇。 表9·微質譜Q-TOF-2質譜儀之設定 毛係管電壓 3.2 kV 錐區(cone) 28 V 源極區塊溫度 80°C 溶媒揮散溫度 200°C 溶媒揮散氣流 350 L/hr 錐區氣流 75 L/hr CID氣流入口壓力 13-14 psig 表10· FINNIGAN LCQ離子捕捉質譜儀設定 中和氣體 80 arb.單位 輔助氣體 10 arb.單位 喷灑電壓 5.0 KV 加熱毛細管溫度 300°C 全掃瞄AGC設定 5 xlO7 相對碰撞能量 35% 44 200826925 為了確認DVS之葡醣醛酸苷化位置，係使用犬肝微粒 體進行靜置。這些靜置比較出DVS與文拉法辛之葡醣醛酸 苷化。簡言之，文拉法辛或DVS (100 μΜ)係與犬肝臟微粒 體（1 mg/mL)與MgCl2 (10 mM)靜置於0.1 Μ磷酸鈉/磷酸鉀 5 緩衝液中。樣本係預靜置於37°C搖晃水浴中2分鐘。反應係 以加入UDPGA (最終濃度1 mM)起始。額外之靜置係使用於 文拉法辛與UDPGA，以及NADPH產生系統。總靜置體積為 500 μΐ^，靜置長度為30。反應係以加入500 pL乙腈停止， 如上述處理。樣本係以LC/MS分析。 0 FloOne分析軟體（版本3.65，Packard BioScience)係用 於積分放射活性尖峰。電腦程式Microsoft Excel® 97係用於 計算平均值與標準差。MassLynx軟體(版本3·5)係用於分析 LC/MS資料。 結果 15 [14c]dvs (總體化合物）之放射線純度與特異性活性係 以HPLC測定，其配備有放射線偵測器，分別為99.3%與209 |^Ci/mg (自由驗）。投樂溶液中之[14C]0-去甲基文拉法辛之 濃度、放射線純度與特異性活性分別為10.3 mg/mL、98.3% 與1·03 pCi/mg。投藥前、中、後之投藥溶液分液具有相似 20之濃度與純度(數據未顯示）。[14c]dvs平均投藥劑量為310 ± 0· 18 mg/kg (自由驗）。 [14C]DVS於37°C控制組犬尿液與控制組犬血漿中皆維 持穩定，至多24小時。未偵測到明顯的降解產物於任一時 間點，至多並包括24小時。 45 200826925 氧化效率係以14C-Spec-Chec (Perkin Elmer)之氧化情 況決定，此為一種標準已知之放射線活性，測定為99.1%。 每一時間點血液與血漿中之放射活性濃度，以及血液比血 漿之分液，列於表11。公犬中總放射活性之平均血槳濃度 5 分別為13.3、16.9、7.43與0.81 pg當量/mL，於投藥後1、4、 8與24小時。在每一時間點，血液比血漿之放射活性比例範 圍為0.51至〇·64之間。 表U·單一劑量口服投藥[14C]DVS (30 MG/KG)至犬後之 全血與血漿放射活性濃度與分液 採樣 全血之放射活性 (gg 當量/mL) 血漿中之放射活性 (Mg 當量/mL) 血液比血 漿之比例 時間 單獨犬 平均值 土 s.a 單獨犬 平均值 士 S.D· 平均值 土 S.D. lhr 8.56 8.61 6.40 9.91 8.37 土 1.45 14.6 11.5 9.56 17.5 13.3 土 3.5 〇^64±~ 0.09 4hr 8.16 8.03 8.82 9.30 8.58 士 0.59 17.0 16.8 16.5 17.1 16.9 土 0.3 0.51 士 0.04 8hr 3.30 3.79 5.27 2.98 184 土 1.01 4.51 ⑽ 10.2 5.87 7.43 土 2.68 0.54 土 0.13 24 hr 0.38 0.47 0.75 0.31 0.48 土 0.20 0.66 0.86 1.14 0.56 0.81 土 0.25 〇·58 土 0.05 血漿代謝物分佈狀況 10 血漿中之放射活性平均萃取效率為87.6 ± ΐ〇·1%(資料 未顯示）。由投藥後1小時收集之犬血漿之代表性放射層析 係示於第14(A)圖。DV葡醣醛酸苷(Μ7)為偵測到之主要尖 峰。在投藥後1與4小時，在血漿中之放射活性分別為”乃 與96.4%，係與Μ7尖峰相關。而8與24小時之樣本則不具 15明顯之放射活性，在放射層析法分析中。血漿樣本中偵測 到之另一僅有之成分為未改變之DVS。 46 200826925 犬血漿中9個額外之次要代謝物係以LC/MS鑑定（表 12)。這些代謝物包括6個於環己醇環上羥基化(M1-M6，羥 基DV化合物）之代謝物、N，0-二去甲基文拉法辛（M10)、 N，0-二去甲基文拉法辛0-葡醣醛酸苷(M13)，以及N-氧化物 5 DV。 47 200826925 Λρατ審 qKt-zAa Λα tnffcAs ΐ·^ fe.n Λα^ώ-^-τ—Μ ϋι Aa^lt! drs Λα5 dDecAas ¾^¾ >Q nVi 许嬸逾黻i ό Λα^άΫ丨z 5¾ As« d ϊι c mw 5 Vi Λαϊ dDarasm n 饰嬸镄癟®0Aa^s5 p 珈溆迪le«-o>a4s! 糾赵赛vNr +K去】 ,(黎令)ss

審齑V ^srfSKM ooor00·汔 M s 硪 STfiM OSONcsfnOS ^si^iM 9£<nCNoirn2S 硪栌 oooz ooe i OS 寸·9Ι 92ti^TOfi oooz s §画硪§-翕 0寸寸OOH § 画硪119畲«硪鸽硪5-4 9fs寸 6TI ei fsfj^08<ni i If^rolf 08Zrzcp§ fi^roli ooofN<NvoCNS ϊδΓϋΙί ooorsl'Ini 4H9 翕铢 ti^tofi 9$ ε·ςcsi _HO 丨衾破汔寸οο’ε、9.ε-?ε 'qceus 莨筚絮噢某杉-ffi侩^^^l^v^ll1*。矣¾笨：ΡΗί 起碜：η ί 鉍肩：d :q 。£000丨330卜0丨11〇條鼕实你孤諜孝迗啻樂^82/31^ 48 200826925 尿液代謝物分佈情況 尿液為排泄之主要路徑，大於75%之放射活性藥劑係 於尿液樣本中回收，在投藥後24小時。尿液中偵測到之放 射活性濃度係列於表13，以放射層析法分析放射活性之百 5分比表示。投藥後8_24小時收集之犬尿液之代表性放射層 析圖示於第14(B)圖。在所有分析樣本中偵測到的主要放射 活性尖峰為〇-去甲基文拉法辛〇_葡醣醛酸苷(M7, Dv葡醣 醛酸苷），其測定為約85%尿液中偵測到之放射活性尖峰。 N，〇-二去甲基文拉法辛〇-葡醣醛酸苷(M13)，測定約々％尿 10 15

液中偵測到之藥物相關尖峰。未變化之rc]DVs測定為介 於4至8%尿液巾制狀放射活性。代騎Mu無12 (代 謝物在環己烧環上之羥基化之葡随酸料絲DV 葡㈣酸們分別敎為平均埃4%尿液中偵測到之放射 活性。觀央峰含有三個共沖提代謝物⑽u、觀㈣ 咖〇,每-者皆以LC/MS辨識，為代謝物在環己烧環上之 .基化之葡醣酸酸苷共輛物。 49 200826925 表13.放射服投藥 放射活性’ 為劑量之％ 以放射層析法備測之化合物3 犬編號 Mil Μ12 Μ13 Μ7 DVS 5 64.0 2.6 3.0 3.6 86.8 4.0 6 85.4 1.9 2.7 3.3 84.1 7.9 7 63.0 2.0 4.3 3.5 83.5 5.7 8 86.6 2.6 3.8 4.3 83.9 5.4 平均值 土 S.D. 74.8 ± 13.0 b 2·3 土 0.4 3.5 ±0.7 3·7 ±0.4 84.6 ±1.5 5.8 土 1.6 a:此數值係以放射層析法偵測之總尖峰百分比表示’為2次分析之平均 b:收集自投藥後〇-8小時與8-24小時之％值’但0-8小時收集物含有小於0.1%之劑量。 10個尿液中額外之次要代謝物係經LC/MS分析。這些 次要代謝物包括Ml-M6，在节基基團上羥基化之代謝物 5 (M9)、N，0-二去甲基文拉法辛（M10)、Ν，Ν，0-三去曱基文 拉法辛(M14)，以及N-氧化DV (表12)。 排泄物代謝物分佈情況 自投藥後0-24小時之排泄物樣本之放射活性之萃取效 率，在放射層析之前為76.8 ± 6.2% (資料未顯示）。排泄物 10中回收之百分比與放射層析後放射活性之分佈示於表14。 僅有小比例之放射活性劑量（約3%)在投藥後24小時内排 出。投藥後0-24小時收集之經萃取犬排泄物之代表性放射 層析圖係不於第14(C)圖。係偵測到4個放射活性尖峰，每 -層析圖巾具有未變化之DVS為主要尖峰，敎有約76% 15之放射活性於排泄物中。次大量之放射活性尖峰為刪， 測定有約12%之放射活性排放於排泄物中。N_氧化物㈣與 50 200826925 Ν，Ν，0-三去甲基文拉法辛（M14)亦存在於排泄物萃取物之 放射層析圖中，分別測定約7與5%。 表14·單一劑量口服投藥[14C]DVS (30 MG/KG)至犬後0-24小時 收集之排泄物中之放射活性濃度與百分比分佈 犬編5虎 放射活性， 以放射層析法偵測之化合物b 為劑量之％ M14 M10 DVS N-氧化物 5 3.3 0.0 11.2 88.8 0.0 6 4.4 4.4 9.8 78.6 7.3 7a 0.3 16.1 17.7 50.6 15.7 8 4.0 0.0 8.6 85.7 5.7 平均值士 S.D. 3.0 ±1.9 5.1 ±7.0 11.8 ±4.9 75.9 ±17.4 7.2 ±6.1 a:在投藥後24小時，7號犬無排泄物，因此收集持續至48小時。 b:此數值係以放射層析法偵測之總尖峰百分比表示，為2次分析之平均。 8個額外之次要代謝物，於放射層析圖中未偵測到，係 5 以LC/MS分析鑑定排泄物之萃取物。這些代謝物包括 M1-M6、M7與M9(表 12)。 以液相層析/質譜鑑定代謝物 質譜係以LC/MS與LC/MS/MS獲得，分析犬血漿、尿液 與排泄物中之DVS與其代謝物。犬中DVS代謝物之結構鑑 10定係列於表12。LC/MS數據代表DVS代謝物為葡醣醛酸苷 (M7)、N-去甲基DVS (Mio)，以及單氧化產物。〇\^與14 代謝物之質譜鑑定係如下討論。

DVS DVS標準品之質譜鑑定係用於與代謝物比較。在dvS 15 2LC/MS譜圖中，質子化之分子離子，[M+H]+係於m/z 264 51 200826925 觀察到。第7圖顯示位於m/z 264之DVS產物之質譜，得自碰 撞誘發解離(CID)，以及假設之片段圖。分子離子喪失1120 而產生位於m/z 246之產物離子。更進一步損失二甲基胺 基，產生位於m/z 201之產物。由DVS損失環己醇基團，係 5 以產物離子m/z 164表示。位於m/z 58之產物係表示 (CH3)2NCH2+之存在。此外，位於m/z 107、133、145、159 與173之產物離子，分別對應於DVS分子之甲基、丙基、丁 基、戊基與己基-酚部分。因此，這些離子可用於偵測代謝 位置，位於二甲基胺基、羥基节基與環己醇基團。 10 代謝物]^卜]\42、]^3、]^4、1^5與^16(羥基0\^化合物）， 產生一 [M+H]+，位於m/z 280，其為16 Da大於DVS，假定 為經基化或N-氧化。第15圈顯示顯示M6位於m/z 280之產物 離子之譜圖。代謝物Ml至M6之質譜非常類似。由該分子離 子損失H2〇會產生m/z 262之產物離子。位於m/z 58、107與 15 217之代謝物產物離子，對應m/z 58、107與201之DVS產物 離子，代表環己烷環為代謝位置。因此，代謝物Ml至M6 假設為羥基DV代謝物，其中環己烷環為代謝位置。 代謝物M7 (0-去甲基文拉法辛〇-葡醣醛酸苷，DV葡醣 酸酸苷）此代謝物之[M+H]+係於m/z 440觀察到，其代表一 20 分子量439。第16圖，顯示M7產物位於之m/z 440譜圖。由 分子離子損失176 Da會於m/z 264處產生離子，代表此代謝 物為DVS之葡醣酸酸苷。該質譜數據並未指出共輛位置。 以犬肝臟微粒體進行靜置，DVS或文拉法辛係用於決定葡 醣酸酸苷化位置。在僅有UDPGA存在下，係觀察到DVS之 52 200826925 葡醋醛酸苷化，而非文拉法辛。文拉法辛之葡醣醛酸苦化 僅在UDPGA與NADPH二者皆存在下才觀察到。由文拉法辛 形成之葡醣醛酸苷具有與M7相同之[M+H]+與遲滯時間，其 為〇-去甲基化，之後酚基羥基葡醣醛酸苷化之結果。Dvs 5 與文拉法辛結構上唯一之不同為DVS之酚基羥基在文拉法 辛上為甲基化。此顯不紛基為DVS-相關化合物葡醣酸酸苦 化所必須。因此，M7係假設為DV之0-葡醣醛酸苦，其中 酚基為共輛位置。 代謝物M9 10 代謝物M9於m/z 280產生[M+H]+，其為16 Da大於 DVS，並假設為羥基化或N_氧化。第17圖顯示M9產物m/z 之圖譜。位於123、149與161之產物離子，為16 Da大於相 對應之DVS產物離子，分別位於m/z 107、133與145，其代 表苄基之羥基化。因此，M9為羥基DV，具有苄基為氧化 15 位置。 代謝物M10 M10之[M+H]+係於m/z 250觀察到。第18圖顯示M10位 於m/z 250之產物離子之圖譜。m/z 250之分子離子喪失 ，產生位於m/z 232之產物離子。之後由m/z 232損失 20甲基胺，產生位於m/z 201之產物離子。此現象，以及缺 乏位於m/z 58之產物離子，指出DV之二曱基胺基已轉換為 甲基胺基，藉由N-去曱基化。此外，M10位於m/z 250之質 譜吻合位於m/z 250之合成'〇_二去甲基文拉法辛之質 譜。因此，M10係辨識為N，〇_二去甲基文拉法辛。 53 200826925 代謝物Mila、Mllb、Mile舆M12 (羥基DV葡醣醛酸苷）

Mila、Mllb、Mile與M12之[M+H]+係於m/z 456觀察 到，其代表一分子量455。第19圈顯示M12位於m/z 456產物 之圖譜。Mila、Mllb、Mile與M12之質譜資料類似。由分 5 子離子損失Π6 Da會產生位於m/z 280之離子，其為羥基DV 代謝物之[M+H]+。該質譜並未指出共輊位置。酚基係假設 為共軛位置，基於DVS與文拉法辛葡醣醛酸苷化體外試驗 之結果，如代謝物M7所討論者。位於m/z 58、107與217之 代謝物產物離子，對應位於m/z 58、107與201之DVS，指出 10 環己烷環上有羥基化。因此，Mila、Mllb、Mile與M12 係假設為羥基DV代謝物之〇-葡醣醛酸苷。 代謝物Μ13 (Ν，0-二去曱基文拉法辛〇-葡醣醛酸苷）。 此代謝物之[Μ+Η]+係於m/z 426處觀察到，其代表分子量為 425。第20圖顯示M13產物離子之質譜。由m/z 426損失176 15 Da會產生位於m/z 250之離子。由環己醇片段損失h2〇會產 生位於m/z 408之基線尖峰。由位於m/z 408之離子損失176 Da會產生M10診斷性產物離子，位於m/z 232。之後由m/z 232損失甲基胺會產生產物離子位於m/z 201。因此，M13 係假设為N，0-一去甲基文拉法辛〇-葡醣酸酸皆，具有紛基 20 為葡醣醛酸苷化位置。 代謝物M14產生位於m/z 236之[M+H]+。第21圖顯示 M14位於m/z 236產物離子之圖譜。由該分子離子損失h2〇 與NH3會產生位於m/z 201之分子離子。此現象與缺乏位於 m/z 58之產物離子，表示有N_二去甲基化現象。位於m/z 54 200826925 107、133、145、159與173之產物離子，亦於DVS中觀察 到。M14位於m/z 236之產物質譜吻合合成Ν，Ν，0-三去甲基 文拉法辛之質譜，如同第22圖所示。因此，M14係辨識為 Ν，Ν，0-三去甲基文拉法辛。

5 N-氧化物DV 係觀察到此DVS相關成分之[M+H]+位於m/z 280，其 代表羥基化或N-氧化。第23圖顯示此DVS相關化合物位於 m/z 280之質譜。由[m+H]+離子損失61 Da會產生位於m/z 219之產物離子。此對應於損失二甲基羥基胺，與N_氧化 10 物一致。因此，此代謝物係辨識為N-氧化物DV。 範例3· 2·經基_DV化合物之合成 本發明之2-羥基-DV化合物可以下列方法製備。4-(二 甲基胺甲醯基甲基）酚之二甲基甲醯胺（DMF)溶液，係以 KAO3處理，之後以溴化甲苯處理。混合物於室溫下攪拌， 15 之後於6〇°C加熱1小時。混合物濃縮移除DMF，以EtOAc稀 釋並以水清洗。加入乾燥之MgS〇4，混合物經過濾並濃縮 至小體積。加入己烧以沈澱縮酮(ketal)中間產物。固體經過 濾收集並乾燥。 2-苄基氧基-環己酮之100 mL THF/50 mL MeOH溶 20液，係與酸(如HC1)加熱，之後於室溫下攪拌。反應係以飽 和KWO3中止，並以EtOAc萃取，並濃縮為油狀物。產物自 熱EtOAc/己烷中結晶，得酮類中間產物，如第2圈所示。 酮類之THF溶液係於-78 °C加至鋰鋁氫化物（LAH)沈澱 物之THF懸浮液中。混合物回溫至室溫，並攪拌至少3小 55 200826925 時。反應係以MeOH，之後以10%NaOH中止，並攪拌至少 3小時。固體過濾移除，之後清洗(如使用THF)，並濃縮， 得一固體。所得之固體係自EtOAc/己烷中結晶，得相對應 之节基鱗。 5 二苄基保護基皆以攪拌於Pd/C之100 mL乙醇溶液中， 並於壓力下氫化至隔日而移除。該固體係經過濾純化，之 後以乙醇清洗。固體經濃縮，並於EtOAc/己烷中再結晶， 得最終產物。 範例4· 2-羥基DV葡醣醛酸苷化合物之合成

1〇 2_羥基DV葡醣醛酸苷化合物可如下合成。在2-羥基DV (1·〇 g，3.6 mmol)與2.05 g (4.3 mmol)三氣亞醯胺之二氯甲 烷溶液中（15 mL)，滴加入BF3OET2 (0.54 mL，4.4 mmol)， 歷時5分鐘。反應係於氮氣下攪拌至隔日。之後反應混合物 倒入NaHC〇3 (飽和），並以二氯甲烷萃取。有機層係分離 15出、除水並真空濃縮。粗產物係通過短矽膠管柱，以二氣 曱烧-甲醇沖提。渡液經濃縮，得經保護之2-經基DVO-葡醣 醛酸苷(請見第3圖）。 經保護之2_羥基DV葡醣醛酸苷（三乙醯基甲酯）（1〇 g, 1·7 mmol)係溶於二噁烷_Me〇H _h2〇 (2:1:1) 8茁乙之混合物 2〇中，並加、Ll〇H (0·4 g，17 mmo1)，所得溶液係加熱至60 c，1 hr。反應混合物之後經冷卻，並以醋酸稀釋。混合 物真空濃縮，殘餘物可於矽膠上純化，以二氯曱烷_甲醇沖 提，得2-羥基DV葡醣醛酸苷。 範例5· N-氧化物DV之合成 56 200826925 N-氧化物DV係使用下列合成策略製備。製備第4圖所 示之N-氧化物DV I : ODV (1.0 g，3.8 mmol)係溶於氯仿中 (45 mL) ’ 並冷卻至〇。〇。之後MCPBA (0.786 g，4.56 mmol) 之氣仿（15 mL)係滴加入反應混合物中。反應係於氮氣下攪 5 拌至隔日。此期間溫度回溫至室溫。之後反應混合物係倒 入鹼性氧化鋁管柱中（40 g)，其已預先以氣仿填充好。反應 混合物吸附於氧化鋁管柱上，之後氣仿（150 mL)通過管柱 (無施加壓力）。之後甲醇：氯仿混合物（1:3)係通過管柱，以 沖提出希望之產物。含有產物之濾液係經濃縮，所得固體 10 係溶於氣仿中，並通過矽藻土（Celite)墊。濾液經濃縮，產 生希望之N-氧化物（1.26 g > 100%)，為白色固體。 Mp.l71-173〇C ° lU NMR (DMSO-d6)? 5(ppm): 0.68-1.64 (m? 10H)，2.95 (s，3H)，3.14 (s，3H)，3.19 (d，J = 5.7 Hz，1H)， 3.54 (d，J = 12.7 Hz，1H)，3.89 (dd，J = 7.5 Hz 與 7.3 Hz， 15 1H)，6·67 (d，J = 8.4 Hz，2H)，6.98 (d，J = 8.4 Hz，2H)，9.51 (s，1H); (M + H)+ 280; (M - H)_ 278;分析物計算值 C16H25N03: C，68·79; Η, 9·02; N，5·01;觀測值：C，57·64; H， 7.36; Ν，3·73;分析級HPLC (5-95% 乙腈/水)；98.4%於210 nM; 99.3% 於230 nM。 20 第4圖顯示之N-氧化物DV II [(S)-4-[2-二甲基胺基 -1-(1-羥基-環己基)_乙基]-酚之N-氧化物]，係製備為化合物 I。化合物為白色固體（1.03 g，97.3%)。Mp· 175-176°C。屯 NMR (DMSO-d6)，δ(ρριη): 0.68-1.64 (m，10H)，2.95 (s，3H)， 3.14 (s，3H)，3.19 (d，J = 5·7 Hz，1H)，3·54 (d，J = 12.7 Hz， 57 200826925 1H)，3.89 (dd，J = 7.5 Hz 與7·3 Hz，1H)，6.67 (d，J = 8·4 Hz， 2H)，6.98 (d，J = 8·4 Hz，2H)，9.51 (s，1H); (M + H)+ 280; (M - H)· 278;分析物計算值C16H25N03: C，68.79; H, 9.02; N， 5.01;觀測值C，60.62; H，7·84; N，4.02;分析級HPLC (5-95% 5 乙腈/水）；98.0% 於210 nM，99.0%於230 nM;旋光度： -15.49 (校正氣仿不純物）。 (R)-4-[2-二甲基胺基-1-(1-羥基-環己基)_乙基]-酚(in) 之N-氧化物，係製備為化合物1與11 (請見第4圖）。此斗氧 化物DV為白色粉末（〇·88 g，82·9%)°Μρ· 181_182〇C; 4 10 NMR (DMSO-d6)，δ(ρριη): 0.68-1.64 (m，10H)，2.95 (s，3H)， 3.14 (s，3H)，3.19 (d，J = 5·7 Hz，1H)，3.54 (d，J = 12.7 Hz， 1H)，3.89 (dd，J = 7.5 Hz and 7.3 Hz，1H)，6.67 (d，J = 8.4 Hz， 2H)，6.98 (d，J = 8·4 Hz，2H)，9.51 (s，1H); (M + H)+ 280; (M - H)_ 278;分析物計算值：C16H25N03: C，68.79; H， 15 9·02; N，5.01;觀測值：C，67.10; H，8.92; N，4.77 ;旋光度： + 19.07 (校正氣仿不純物）。 範例6·受髏結合試驗決定活性

本發明化合物可測試其生物活性，使用受體結合試 驗。這些研究描述於下列文獻中，並可獲得自 20 NOVASCREEN，HANOVER，MARYLAND。可使用之受體 結合試驗包括，但不侷限於：腎上腺素型A-2A (人類）結合 試驗(Ό·Β. ΒΥΙΛΤΝΏ ET AL，J PHARMACOL & EXP THER, 245(2):600-607 (1988); JA TOTARO ET AL，LIFE SCIENCES, 44:459-467 (1989));多巴胺轉位子 58 200826925

(TRANSPORTER)結合試驗(MADRAS ET AL, MOL· PHARMACOL·，36:518-524; JJ JAVITCH ET AL, MOL PHARMACOL，26:35_44 (1984));組織胺 HI 結合試驗 (CHANG, ETAL·, J NEUROCHEM, 32:1658-1663 (1979); JI 5 MARTINEZ-MIR, ET AL., BRAIN RES, 526:322-327 (1990); EEJ HAAKSMA, ET AL, PHARMACOL THER, 47:73-104 (1990));咪唑啉結合試驗（CM BROWN £T AL，/ 99(4):803-809 (1990);蕈毒鹼M5(人類重組） 結合試驗（NJ BUCKLEY ΕΓ dZ，MOZ 10 35:469-476 (1989););正腎上腺素轉位子（HUMAN RECOMBINANT)結合試驗(R. RAISMAN，五:TIL.，五⑽ PHARMACOL, 78:345-351 (1982); S.Z. RAISMAN, ET ALf EUR J PHARMACOL, 72:423 (1981)); 钱合試驗(R] Ό，ΑΜΑΎΟ, ET AL, J PHARMACOL & EXP 15 THER, 242:364-371 (1987); NL BROWN ET AL, EUR J ™^姐⑽，123:161-165 (1986)”細胞/功能性試驗包括 正腎上腺素轉移（NET-T)人類（A. GALLI，£T dZ，^/五ZP 5皿，198:2197-2212 (1995);以及血清素轉移(人類)試驗 (D’AMATO ，如上所引述，以及NL BROWN £7^1， 20 五W? 123:161-165 (1986))。結果可以受體 之抑制％表示。 範例7·本發明化合物於微透析模式中之體内藥效 本發明化合物可以微透析試驗評估，舉例而言，於公 SPRAGUE-DAWLEY 大鼠中。MT TABER ET AL， 59 200826925 “DIFFERENTIAL EFFECTS OF COADMINISTRATION OF FLUOXETINE AND WAY-100635 ON SEROTONERGIC NEUROTRANSMISSION IN VIVO: SENSITIVITY TO SEQUENCE OF INJECTIONS，，，38(1): 17-26 5 (OCT· 2000)。此技術可捕捉化合物於自由運動之齧齒類動 物大腦中之神經化學效應。此效應可於大鼠背側額面皮質 (DORSAL LATERAL FRONTAL CORTEX)中研究，其為一 大腦區域，涉及憂鬱症之病原學及/或治療。為了瞭解是否 可觀察到血清素之作用，本發明化合物（劑量為30 MG/KG， 10 SC)可與選擇性5-HT1A拮抗劑、Ν-[2·[4-(2-曱氧基苯基)小 哌嗪基]乙基]-Ν-(2-吡啶基)環己烷甲醯胺一同測試。此動作 之理由為阻斷樹突體5-ΗΤ1Α自體受體調節5-ΗΤ之釋放。此 可消除進行慢性（14天)神經化學之需要，其單獨以化合物使 5-ΗΤ1Α受體去敏化。適用於本發明之條件列於下： 15 動 物：公SPRAGUE-DAWLEY 大鼠(280-350G) 大腦區域：背側(DL)額面皮質（A/P+3.2MM，M/L 士 3.5ΜΜ， D/V-1.5MM) 投 藥：操作後24小時回收 探針置入後平衡3 hr 20 1小時40分鐘基準線 投以5·ΗΤ1Α拮抗劑N-[2_[4-(2_甲氧基苯基)小派 嗪基] 乙基]-Ν-(2-σΛσ定基）環己燒甲醯胺（〇.3 mg/kg， s.c·)，在二甲基胺基_1_(4_酚）乙基]_順_1，4- 60 200826925 環己二醇(30 mg/kg，p〇)前20分鐘 樣本收集··樣本係於注射後3小時2分收集 分 析：5-HT量係以HPLC-ECD定量 5 在這些條件下，可觀察到體内神經化學效應。亦可觀 不八他SNRIS與SSRIS，如文拉法辛與氟西汀（flu〇xetine)之 體内神經化學效應，與5-HT1A之拮抗作用，以作比較。 本說明書已以其中所引用之參考範例作詳盡說明而更 臻清楚。本說明書中之實施例係用以說明本發明實施例， 1〇而非侷限本發明範.。熟習此技術領域者應瞭解到許多其 他實施例亦包含於本發明中。於此所引用之所有文獻與專 利案皆在此完整併入本案以作為參考資料。與本說明書矛 盾或不一致之部分，本說明書中會取代此部分。任何文獻 之引用並不代表承認該份參考資料為本發明先前技術。 除非另有指出，本說明書，包括巾請專利範圍中所有 表達成份、反應條件以及類似情況之數字，應瞭解為可以 術語“約，，修飾，在所有範例中。·，除非有特別指出， 數字參數為近似值，取決於本發明認為教之特性。至 J ’且並非以本發明範•來限制應用與等效方法，每一數 20字參數應理解為-般清楚之數字，與—般圓滿之解釋。 除非另有指出，術語“至少，，代表一系列之元素，且應 瞭解為代表在此系列中之每_元素。熟習此技術領域者應 可瞭解或清楚使用-般實驗法，以及本發明特定實施例之 等效物。此等效物亦包含於下列中請專利·中。 200826925 範例8.去文拉法辛之額外代謝物 本發明之其他實施例包括下列之去文拉法辛代謝物：

h3〇 or2

= H, glu, S03H R2 = H, glu, S03H R3 = H, glu, SO3H

R1 = H, glu, SOsH R2 ^ H, giu, S03H

R3 = H (但非 R2與R3同時=H), glu, S03H

Ri = H, glu, SO3H R2 = H，glu, S03H R3 = H, glu, SO3H

R1 = H, glu, S03H R2 = H, glu，S03H R3 = H,gIu, S03H R4 = H, giu, S03H 62 200826925

Ri = H, glu, S03H = H, glu，S03H

R2 = H, glu, SO3H R2 = H, glu, S03H

R3 = H, C(0)CH3f OH R3 = H, C(0)CH3, OH R4 = H,CH3 r4 = h,ch3

不包括, R2, R3 = H於同一結構上 R5 = H, glu, S03H

R1 ~ H, glu, SO3H R2 = H, glu, SO3H R3 = H，C(0)CH3, OH R4 = H, CH3 R5 = H, glu, SO3H R6 = H, glu, S03H

R1 = H, glu, SO3H R2 = H, glu, SO3H R3 = h, C(〇)CH3, oh R4 = H, CH3 R5 = H, glu, SO3H 63 200826925

Ri = H, glu, S03H R2 = H, glu, SO3H R3 = H, glu, SO3H R4 = H, glu, SO3H

R1 = H, glu, S03H R2 = H, glu, SO3H R3 = H, glu, S03H

= H, glu, S03H R2 = H, glu, SO3H R3 = H, glu, S03H 64 200826925 L圖式簡單説明2 第1圖係說明一種新穎之經分離化合物，特徵為DVs之 代謝物。第1(A)圖說明四種獨特之羥基-DV化合物。環已醇 環上之-OH基團可位於虛線方塊中所示之任一位置上。结 上0第 5 1(B)圖說明四種獨特之羥基1-DV葡醣醛酸苷。環己醇環上 之-OH基團可位於虛線方塊中所示之任一位置上。第1(c) 圖說明DV化合物之N-氧化物。第1(D)圖說明一苄基輕基 -DV化合物。苄基上之-OH基團可位於虛線方塊中所示之任 一位置上。 10 第2圖說明合成2-羥基DV化合物之一方法。 第3圖說明合成2-羥基DV葡醣醛酸苷化合物之_方 法。 第4圖說明合成N-氧化物DV化合物之一方法。 第5圖說明合成苄基羥基DV之一方法。 15 第6圖係提供代表性之放射層析圖’在早一劑量口服投 藥DVS (20 mg/kg)至一大鼠後。第6(A)圖顯示投藥後1小時 之公鼠血漿。第6(B)圖說明投藥後0-8小時收集之公鼠尿 液。第6(C)圖說明投藥後8-24小時後收集之排泄物。 苐7(A)與7(B)圖說明假設之DVS片段圖’以及產物離子 20 m/z 264之質譜。 第8(A)與8(B)圖說明假設之M6片段圖’在大鼠中產物 離子m/z 280之質譜。在整份說明書與圖示中，字母“M”後 之數字係指此述之代謝產物。 第9(A)與9(B)圖係提供一種假設之M7片段圖，以及大 65 200826925 鼠中產物離子m/z 440之質譜。 第10(A)與10(B)圖說明假設之M10片段圖，以及大鼠中 產物離子m/z 250之質譜。 第11(A)與11(B)圖係說明假設之合成n，〇-二去甲基文 5 拉法辛之片段圖’以及產物離子[m+h]+ (m/z 250)之質譜。 第12(A)與12(B)圖係提供假設之M13片段圖，以及大鼠 中產物離子m/z 426之質譜。 第13(A)與13(B)圖係提供假設之N·氧化物DV片段圖， 以及大鼠中產物離子m/z 280之質譜。 10 第14圖係顯示代謝物之代表性放射層析譜圖，在Dvs (30 mg/kg)單一口服投藥至犬，（A)投藥後1小時之血裝，（B) 投藥後8_24小時收集之尿液，以及⑷投藥後0-24小時之排 泄物。 第15(A)與15(B)圖係提供假設之M6片段圖，以及犬+ 15 產物離子m/z 280之質譜。 第16(A)與16(B)圖係提供假設之M7片段圖，以及犬中 產物離子m/z 440之質譜。 第17(A)與17(B)圖係提供假設之M9片段圖，以及 產物離子m/z 280之質譜。 20 第18(A)與18(B)圖係提供假設之M10片段圖，以及犬中 產物離子m/z 250之質譜。 第19(A)與19(B)圖係提供假設之M12片段圖，以及犬中 產物離子m/z 456之質譜。 第20(A)與20(B)圖係提供假設之M13片段圖，以及犬中 66 200826925 產物離子m/z 426之質譜。 第21(A)與21(B)圖係提供假設之M14片段圖，以及產物 離子m/z 236之質譜。 第22(A)與22(B)圖係提供假設之合成之N，N，〇_三甲基 文拉法辛片段圖，以及產物離子加外疒加^ 236)之質譜。 第23(A)與23(B)圖係提供假設之义氧化物片段 以及犬中產物離子m/z 280之質姚。 ° 【主要元件符號說明】 (無） 67

Claims (1)

1. 200826925 十、申請專利範圍： 1. 一種經分離之去甲基文拉法辛（DV)之代謝物或衍生 物，如下式

   OH 5 其中 一羥基係連結至環己基環2-位置或3-位置之碳上； 及其醫藥上可接受之鹽類。 2.如申請專利範圍第1項之分離之DV代謝物，其中該羥基 係連結至環己基環之2·位置碳上。 10 3.如申請專利範圍第1項之分離之DV代謝物，其中該羥基 係連結至環己基環之3-位置碳上。 4. 一種經分離之去甲基文拉法辛（DV)之代謝物或衍生 物，如下式

   15 其中 68 200826925 一羥基係連結至環己基環上之2-位置、3-位置或4-位置之碳上； 及其醫藥上可接受之鹽類。 5. 5 10 8. 如申請專利範圍第4項之經分離DV代謝物，其中該羥基 係連結至環己基環之2-位置碳上。 如申請專利範圍第4項之經分離DV代謝物，其中該羥基 係連結至環己基環之3-位置碳上。 如申請專利範圍第4項之分離之DV代謝物，其中該羥基 係連結至環己基環之4-位置碳上。 一種經分離之去甲基文拉法辛（DV)之代謝物或衍生 物，如下式

   及其醫藥上可接受之鹽類。 9. 15 一種經分離之去甲基文拉法辛（DV)之代謝物或衍生 物，如下式

   69 200826925 其中 一羥基係連結至苄基上之2-位置或3_位置之一之碳 上； 及其醫藥上可接受之鹽類。 5 10.如申請專利範圍第9項之經分離DV代謝物，其中該羥基 係連結至苄基之2-位置碳上。 11. 如申請專利範圍第9項之經分離DV代謝物，其中該羥基 係連結至苄基之3-位置碳上。 12. —種醫藥組成物，包含如專利申請範圍第1項、第4項、 10 第8項或第9項之化合物，以及醫藥上可接受之載體或賦 形劑。 13. 如申請專利範圍第12項之醫藥組成物，其更包含文拉法 辛、0-去甲基文拉法辛與0-去甲基文拉法辛琥珀酸鹽之 一或多者，或其醫藥上可接受之鹽類。 15 14. —種治療哺乳動物至少一中樞神經系統病症之方法，包 含提供有需要之哺乳動物有效劑量之如專利申請範圍 第1項、第4項、第8項或第9項之化合物。 15.如申請專利範圍第14項之方法，其中該化合物係口服投 藥。 20 16. —種經分離之DV代謝物或衍生物，選自於： 70 200826925

   Ri = H, giu, SO3H Ri = H，glu, S03H R2 = H, glu, SO3H R2 = H，glu，S03H R3 = H, gkvS03H R3 = H (但非R2與R3 同時=H), glu, S03H

   R1 = H, glu, S03H R2 = H, glu, SO3H R3 = H,giu, S03H = H, glu, S03H R2 = H, glu, SO3H R3 = H, glu, S03H R4 = Hi glu, S03H 71 200826925

   r3 = h,c(o)ch3,oh R4 = H, ch3 R5 = H, glu, SO3H = H, glu, SO3H R2 = Ht glu, S03H R3 = H，C(0)CH3,0H r4 = h, ch3 不包括Rh R2, R3 = H於同一結構上

   R1 = H，glu，S03H R2 = H, glu, SO3H R3 = H, C(0)CH3i OH R4 = H, CH3 R5 = H, glu, S03H R6 = H, glu，S03H R^H, glu, S03H R2 = H, glu, SO3H R3 = H, C(0)CH3, OH r4 = h, ch3 R5 = H, glu, S03H 72 200826925

   Rt = H, glu, S03H R2 = H, glu, SO3H Ri = H, giu, SO3H R2 = H, qIu, SO3H R3 = H, glu, SO3H R4 = H, glu, SO3H

   •°>r ;及 h3c - CH3

   R1 = H, glu, SO3H R2 = H, glu, SO3H R3 = H, glu, SO3H = H, glu, S03H R2 = H, glu, SO3H R3 = H, glu, S03H 73