TW200812626A - Aptamers labeled with 68GA - Google Patents
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200812626 九、發明說明: 【發明所屬之技術領域】: 本發明係關於新穎基於核苷酸之化合物、製備放射性標 定之化合物的方法及該等化合物用於影像診斷之用途。 【先前技術】 腱糠蛋白〜c作為腫瘤學影像診斷的潛在輕點
除了其他引人關注的耙點外,腱糖蛋白_c,主要位於細 胞外間質(ECM )中的六聚醣蛋白,可充當癌病變之特異 性分子影像的適當靶點。該蛋白質係由上皮細胞及周圍間 葉細胞產生(參見Harold P. Erickson,知㈣· jRev· CW/ 5/〇厂
5 (1989) 71-92; R Chiquet-Ehrismann,EJ Mackie,CA
Pearson ’ T Sakakura,Tenascin: an Extracellular Matrix Protein Involved in Tissue Interactions during Fetal Development and Oncogenesis > Cell 47 (1986) 131-139; R Chiquet-Ehrismann,P Kalla,CA Pearson,K Beck,M Chiquet,Tenascin Interferes with Fibronectin Action,Cell 53 (1988) 383-390)。其參與細胞增殖、癌侵襲、轉移及繼 發性腫瘤形成。其於胚胎發育及傷口癒合中亦以高含量存 在,但其在成人正常組織中的表現很有限(參見,例如 Bourdon Μ·Α.,Wikstrand C.J.,Furthermayr H·, Metthews T.J. 5 Bigner D.D. ^ Cancer Res. 43 (1983) 2796-2805; N Hiraiwa,H Kida,T Sakakura,M Kusakabe, Induction of tenascin in cancer cells by interactions with embryonic mesenchyme mediated by a diffusible factor 5 122467.doc 200812626
Journal of Cell Science 104 (1993) 289-296) °
腱糖蛋白-C係在組織培養中由纖維母細胞與膠質細胞分 泌。人類腱糖蛋白-C之一個實驗來源為神經膠質瘤細胞株 U251MG,但其他細胞,諸如U373、PC3及F9表現大量蛋 白。人類腱耱蛋白-C次單位各包括三種類型的結構模式: 14 1/2個類表皮生長因子重複、15個纖維結合蛋白(FN>_ 三個同源性重複及由215個與人類纖維蛋白原之β與γ鏈之 球狀域同源之胺基酸組成的COOH-末端節。 由於蛋白質腱糖蛋白-C (TN-C)在多種腫瘤中具有高表 現,因而成為多種腫瘤診斷與治療的引人注意的靶點(參 見 AM T0k6s5 E Hortov^nyi,J Kulka,M Jakel,T Ker6ny,A Kadar, Tenascin expression and angiogenesis in breast cancer, Pathol. Res. Pract. 195 (1999) 821-828; Y Soini,P Paakko,Tenascin immun ore activity in lung tumors,Am· 1. Clin. Path. 100 (!993) 145-150; S Riedl5 A Faissner, P Schlag,A Aon-Herbay,K Koretz,P Mdller,altered content and distribution of tenascin in colitis, colon adenoma and colorectal carcinoma, Gastroenterology 103 (1992) 400-
406; MM Bonsanto, Klinische und funktionelle Aspekte der Tenascin-Expression im Zuge der Gliomprogression, http://www.ub.inii-heidelberg.de/archiv/4305)。產生抗 TN-C之抗體並經放射性標定以測試其在放射療法中的適用性 (參見,例如 G Akabani,DA Reardon,RE Coleman,TZ Wong, SD Metzler, JE Bowsher, DP Barboriak, JM 122467.doc 200812626
Provenzale, KL Greer, D DeJong, HS Friedman, AH Friedman,XG Zhao,CN Pegram,RE McLendon,DD Bigner, MR Zalutsky, Dosimetry and Radiographic Analysis of 131I-Labeled Anti-Tenascin 81C6 Murine Monoclonal Antibody in Newly Diagnosed Patients with malignant Gliomas: A Phase II Study, The Journal of Nuclear Medicine 46 (2005) 1042-1050; G Paganeili, C Grana? M chinol, M Cremonesi, C De Cicco,F De Braud,C Robertson,S Zurrida,C Casadio,S Zoboli,AG Siccardi, U Veronesi, Antibody-guided three-step therapy for high grade glioma with yttrium-90, European Journal of Nuclear Medicine 26 (1999) 348-357; F Petronzelli,A Pelliccia,AM Anastasi,V D!Alessio, C Albertoni,A Rosi,B Leoni,C De Angelis,G Paganeili, G Palombo,M Dani,P Carminat,R De Santis:, Improved Tumor Targeting by Combined Use of Two Antitenascin Antibodies, Clin Cancer Res 11 (2005) 7137s-7145s; MR Zalutsky, RP Moseley, HB Coakham, RE Coleman, DD Bigner, Pharmacokinetics and Tumor Localization of I-Labeled Anti-Tenascin Monoclonal Antibody 81C6 in Patients with Gliomas and Other Intracranial Malignancies, Cancer Research 49 (1989)
2807-2813; G Akabani, I Cokgor, RE Coleman, DG Trotter, TZ Wong5 HS Friedman, AH Friedman, A Garcia-Turner, JE Herndon II,D DeLong,RE McLendon, XG Zhao, CN 122467.doc 200812626
Pegram, JM Provenzale, DD binger, MR Zalutsky5 Dosimetry and Dose-Response Relationships in Newly Diagnosed Patients with Malignant Gliomas Treated with Iodine-13 1 -Labeled Anti-Tenascin Monoclonal Antibody 81C6 Therapy, Int. J. Radiation Oncology Biol. Phys, 46 (2000) 947- 95 8)。經放射性標定之抗體在該等研究中表現 出高腫瘤吸收。儘管高親和力結合,此方法充滿大尺寸抗 體,此致使血液滯留時間長且組織滲透緩慢。此情況又引 起不良的經放射性標定之抗體的腫瘤至非腫瘤分布。此 外,抗體可為免疫原性且生產成本高,這兩個因素限制了 其在診斷應用中的用途。諸如適體之合成性寡聚核苷酸將 克服該等問題。適體為非免疫原性且對其靶點具有選擇性 結合。其與其他組織幾乎沒有任何相互作用,同時其具有 中等分子量(7-20 kDa)而很快被身體清除。適體的可能結 合位點可為腱糖蛋白-C之末端節。因此,每個腱糖蛋白-C 分子可能存在6個可能的結合位點。 淳體 , 適體為合成性DNA或RNA分子,其可根據其與靶分子的 結合能力選自寡聚核苷酸庫(M Famulok,G Mayer, Aptamers as Tools in Molecular Biology and Immunology, In: Combinatorial Chemistry in Biology, Current Topics in Microbiology and Immunology (M Famulok, CH Wong, EL Winnacker編),Springer Verlag Heidelberg,1999,243 卷, 123-136)。由Watson-Crick驗基配對將其摺疊成三維結 122467.doc 200812626 構。該三維結構使得適體能夠進行分子鑑別且可形成對特 定靶點的高親和力及選擇性。其之預成形結構可將與靶點 結合過程中的熵損失降至最低。其以高特異性與蛋白質結 合的能力很引人注意(L Cerchia,J Hamm,D Libri,B Tavitian? V de Franciscis, Nucleic acid aptamers in cancer medicine,S 528 (2002),12-16)。結合親和力通
常在次奈莫耳範圍内。值得注意的是適體可選擇性識別生 物分子的微小序列變異甚至是通常具有若干數量級之小分 子的對應異構體(SM Nimjee,CP Rus.coni,BA Sullenger, Aptamers: An Emerging Class of Therapeutics, Annu, Rev· Med. 56 (2005) 555-583; RR White, BA Sullenger, CP Rusconi, Developing aptamers into therapeutics, The Journal of Clinical Investigation 1Q6 (2QQ0) 929-934) o 文獻中描述與各種靶點結合的適體。其中存在對a-凝血 酶具有高親和力之適體(MF Kubik,AW Stephens,D Schneider, RA Marlar? D Tasset, High-affinity RNA ligands to human α-thrombin, Nucleic Acids Research 22 (1994)2619-2626)、HIV-1 逆轉錄酶(C Tueirk,S MacDougal, L Gold, RNA pseudoknots that inhibit human immunodeficiency virus type 1 reverse transcriptase,Proc. 伽乂版m 89 (1992) 6988-6992)及鹼性纖維母 細胞生長因子(D Jellinek,CK Lynott,DB Rifkin,N Janjic, High-affinity RNA ligands to basic fibroblast growth factor inhibit receptor binding, Proc. NatL Acad. Sci· U.S.A. 90 122467.doc -10- 200812626 (1993) 1 1227-11231)。首先獲得fdA批准的適體藥物為 Macugen,一種由 NeXstar(NX-1 838)識別的分子(1 Melnikova » Wet age-related macular degeneration ^ Nature 4 (2005) 711-712)。其特異性地以血管内皮生長因 子(VEGF)(—種促進血管生長之蛋白質)為靶點,其為新生 血管(濕)黃斑退化的標誌。因此,其減緩濕黃斑退化的進 程,黃斑退化是50歲以上的人失明的主要原因。由於適體 對特定靶點的高選擇性或,其極有可能在放射性影像診斷 及治療中用作目苗準探針。其處於抗體與肽之間之理想尺寸 結合高潛在結合親和力可獲得高信u喿比。 該等高親和力結合適體可在稱作SELEX(指數富集配位 體的系統進化)活體外過程中產生。該迭代過程由Gold等 人於1990年在選擇及放大預期高親和力結合適體的基礎上 建立(JM Bacher AD EUingtcm,Nucleic acid selecti〇n 沾 a tool for drug discovery, DDT 3 (1998) 265- 273; L Gold, B Polisky, 〇 Uhlenbeck, M Yarus? Diversity 〇f Oligonucleotide Functions, Annu. Rev. Biochem, 64 (1995) 763-797)。選擇养聚核苷酸適體的起始庫含有單股〇^ a或 RNA募聚核苷酸,其中隨機序列(至多1〇15個不同序列)之 中心區域在恆定區域鄰接以隨後進行逆轉錄及放大。該等 單股募聚核苷酸經靶分子(例如腱糖蛋白_c)培養,接著藉 由通過硝化纖維過濾為進行分隔:收集與蛋白結合的寡聚 核苷酸且將其逆轉錄成RNA(或DNA),並使用聚合酶鏈反 應(PCR)放大,產生新的可用於下一輪SELEX的池。經過 122467.doc 200812626 數次重複(通常為8-12次)之後,通常以增加的嚴謹性進 行,對所選配位體之結合能力排序且評價。 TTA1 :腱糖蛋白_(:結合適體 抗人類間質蛋白腱糠蛋白-C之適體經SELEX過程使用腱 等蛋白-C表現U251細胞株以及經純化人類腱糖蛋白蛋白 識別’且首先由Hicke等人發表(BJ Hicke,C Marion,Yi?
Chang,T Gould,CK Lynott,D Parma,PG Schmidt,S
Warren ^ Tenascin-C Aptamers Are Generated Using Tumor Cells and Purified Protein - The Journal of Biological CTzemz•以276 (2001) 48644-48654; WO 01/09390 Al)。隨 機2’F穩定之嘧啶RNA序列以蛋白表現細胞株培養。9輪 後’最佳結合序列以經純化腱糖蛋白_c培養。需要再進行 兩輪以發現對IxlO-9 Μ之腱糖蛋白-C具有結合親和力的序 列。接著將最終適體修飾以使其能耐受活體内降解。修飾 包括尺寸最小化、進一步核酸酶穩定化及附著生物共軛把 手。尺寸最小化包括以(CH2〇)6基團置換17個鹼基而無親 和力損失 '在SELEX過程前已使用2,F嘧啶引入核酸酶阻 力,進一步穩定化藉由將2,OH嘌呤轉化成2,〇Me嘌呤完 成。Ebcke等人發現5個鳥苷(G)中2ΌΗ的轉化導致活性損 失:G1、G9、G11、G】4及 G17。因此 該等5個核苷酸保留 2ΌΗ。此外,添加3’帽以進一步增強核酸酶穩定性。最 後,向寡聚核苷酸的5’端添加cvNH2連接體且再次測試最 終適體的結合親和力。合成性寡聚核苷酸具有5 X〗%之 KD,此表明母體實際尺寸適體親和力減少5倍。最終分子 122467.doc -12- 200812626 被稱為TTA1 ’此代表腱糖蛋白-C把向適體-1且經測定序列 為:
NH2-C6-5 丨-GGG AGG ACG-(CH2CH20)6-CGU CGC CGU AAU GGA UGU UUU GCU CCC UG-3、3、T 最後,TTA1由39個核苷酸組成,該等核苷酸藉由用癌 咬核糖主鏈之2,氟取代基及用嘌呤核酸中的2匕〇_甲基取代 基取代2,〇H基而使其對核酸酶降解變得穩定。此外,可藉 由將3’核苷酸轉化形成新的5,_〇H基團使3,端受到保護以對 抗外切核酸酶降解,其中3,對3,鍵鍵接至倒數第二鹼基。 連接體上之胺基可用於引入例如螯合配位體或染料。 TTA1的特徵是分子量為13·3 kDa且對人類腱糖蛋白_c的結 合親和力Kd=5 nM。 適於以[99mTC(V)〇r進行後續放射性標定之偶合至巯基 乙醯基二甘胺酸(MAh,配位配位體)之丁丁幻為當前的: 主要結構。假設幹2與幹3對於結合至靶點蛋白都至關重 要,而幹1對於結構穩定性很重要。 活體外與活體内測試經放射性標定之主要化合物。一項 對於帶有腫瘤小鼠的器官分布研究顯示出主要化合物的明 顯腫瘤吸收與在諸如肝臟及腎臟排泄器官中活性的相當大 的吸收。伴有明顯腸内吸收的緩慢膽管清除通常會導致不 良影像診斷,因為背景活性相當高。 本發明之目的在於提供具有改良性質且適於影像診 新穎化合物。 【發明内容】 122467.doc -13- 200812626 本發明提供新穎式ϊ化合物及經鋼系元素或類綱系元素 孟屬4示疋之式I化合物。 、 、 本發明亦提供包含經放射性標定之式〗化合物與醫藥學 上可接受之载劑或稀釋劑之組合物。 八 •本發明進-步提供-種顯影疾病之方法,該方法包含向 • 4者體内引入可制量之經標定式Ϊ化合物或其醫藥學上 可接受之鹽、酯或醯胺。 子 • 本發明提供式1化合物或經標定之式I化合物以用作藥 物。 ’、 本發明之另一態樣係關於式][化合物用於製造藥物之用 途。 本發明亦提供一種用於製備敢射性藥物製劑之套組,該 套組包含一含有預定量之式〗化合物之密封瓶。 本發明之另一態樣係關於經標定之式丨化合物用於ρ Ε τ顯 影之用途。 * 詳言之’本發明之化合物可用於顯影各種癌症,包括 (但不限於):癌瘤,諸如膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎癌、 , 肝癌、包括小細胞肺癌之肺癌、食道癌、膽_膀脱癌、印 I癌、胰腺癌、胃癌、宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌及皮 t癌;淋巴及骨髓系統之造血性腫瘤;間葉細胞來源的腫 瘤;中樞外周神經系統之腫瘤;其他腫瘤,包括黑素瘤、 精原細胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、著色性乾皮病、角質黃瘤 (kerat〇Xanih〇ma)、甲狀腺濾泡狀癌及卡波西(Karposh)惡 性腫瘤。 122467.doc -14- 200812626 【實施方式】 在第一態樣中,本發明係關於式Ϊ之化合物:
A-B-L-C (I) 其中, A代表適體。 就本發明之目的而言,術語”適體"係指合成分子,包含 4至100個核苷酸,其中至少兩個單一核苷酸係經由一含磷 二酯鍵互相連接。該適體具有與靶分子特異性結合之能力 (參見,例如 M Famulok,G Mayer,Aptamers as Tools in Molecular Biology and Immunology,In: Combinatorial Chemistry in Biology 9 Current Topics in Microbiology and Immunology (M Famulok,CH Wong,EL Winnacker, Eds.)、Springer Verlag Heidelberg,1999,第 243卷,123-13 6)。對於熟習此項技術者而言,如何產生對於特定$巴分 子具有特異性之該等適體,有許多已知方法。WO 01/09390中給出一實例,其之揭示内容以引用之方式併入 本文中。該等適體可包含經取代或未經取代之天然及非天 然核苷酸。適體可於活體外使用例如一自動化合成器合成 (參見 5 M 'kp S Verma j F Eckstein j Modified Oligonucleotides: Synthesis and Strategy for Users,Annual Reviews of 67 (1998) 99-134)。本發明之適體可例如用 嘧啶核糖主鏈之2’-氟取代基及用嘌呤核酸中的to-曱基 取代基取代2ΆΗ基團而使對核酸酶降解穩定。此外,適 體之3’端可藉由將3’核苷酸轉化形成新的5’-OH基團進行保 I22467.doc -15- 200812626
護以對抗外切核酸酶降解,其中3,對3,鍵鍵接至倒數第二 驗基(參見,例如 BJ Hicke,C Marion,YF Chang,T
Gould,CK Lynott,D Parma,PG Schmidt,S Warren,腱 糖蛋白-C Aptamers Are Generated Using Tumor Cells and
Purified Protein ^ The Journal of Biological Chemistry 276 (2001) 48644-48654) 〇
就本發明之目的而言,術語,,核普酸"係指包含一含氮驗 基、5-碳糖及一或多個磷酸根之分子。該驗基之實例包含 (二_不限於腺嘌呤、鳥嘌呤、胞核嘧啶、尿嘧啶及胸腺 *疋亦包括非天然、經取代或未經取代之驗基。碳糖 之實例包括(但不限於):D_核糖及〇_2_脫氧核糖。亦包括 其他天然:及非天然、經取代或未經取代之5_碳糖。本發明 所用之核苷酸包括1至3個磷酸根。 在式1化合物之較佳實施例中,適體A係選自腱糖蛋白_c 結合適體。 就本發明之目的而言,術笋 • ϋσ腱糖蛋白-c結合"應具有 列έ義:腱糖蛋白-C結合適體對睡她 對腱糖蛋白-C展示出i m 戈更小之、、.口合親和力’其中 苴且+ AA 干更小意謂在奈莫耳及/或次 莫耳之祀圍内更具特異性之親和由 . 此結合親和力彳系栋 >口用已久之檢定來量測,該檢六 _ ’、 術者所熟知。該檢定於例如wo 、仃且為#白此項 以引用之方式併入本文中。 939〇中詳細描述, 該等適體A之其他較佳實施例對 祕或更小之結合親和力,較佳為搪蛋白-c具有η 園為5〇 ηΜ至1 ρΜ。 122467.doc 200812626 在式I化合物之較佳實施例中,適體A包含10至50個核苷 酸。 包括橋式結構B之該等適體A之其他較佳實施例係選自 下列各物組成之群: TTA1: 5-NH2-C6-0-P〇2~〇-GGG AGG AC:G-(CH2CH20)6-CGU CGC CGU AAU GGA UGU UUU GCU CCC UG-3'-3-I, TTA2: 5-NH2-C6-0-P02-〇-mGmGmG mAmGG mAfCmG-(CH2CH20)6-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGfCfU fCfCfC UmG-3、3、T, 十丁A3: S’-NHrCs-O-PC^O-mGmGmG mAmGG mAfCmG^Ch^Ct^C^-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGfCfU fCfCfC UG-S^S-T , TTA4: S'mGmGmG mAmGG mAfCmG-(CH2CH2〇〉6-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGfCfU fC(C6-NH2)CfC-3,-3,-T , TTA5: 5,-(胺基修飾劑 C2 dl>mA mGmGmG mAmGG mAfCmG-(CH2CH20)6-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGfCfU fCfCfC fUmG-3,-3-T , TTA6: S^NHa-Ce-O-SPO-O-mGmGmG mAmGG mAfCmG-(CH2CH20)6-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGiU fUfUfU mGiCfU fCfCfC fUmG-3、3,-T , TTA7: 5、LGLGLG LALGmG mAfCrG-(CH2OCH2)6-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fU_ mGLCLU LCLCLC-(CH2)6NH2-及 TTA8: S'-mGmGmG mAmGrnG mAfCrG-(CH2〇CH2MCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGrriCmU mCmCrnC-(CH2)6NH2-3丨 B不存在或代表橋式結構。 適體之5,端可於游離磷酸根處經一允許其他化學結構(例 茹連接體L)接合之橋式結構取代。該橋式結構包含帶有胺 官能基之經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烧基、低 碳非支鏈或支鏈烯烴,或經取代或未經取代之低碳非支鏈 或支鏈醛。如本說明書及隨附之申請專利範圍中所使用, 除非另外規定,否則術語”低碳非支鏈或支鏈烧基”應具有 以下含義:僅由碳與氫組成,不含不飽和鍵且具有1至8個 碳原子之單價或二價直鏈或支鏈基團,例如,但不限於: 曱基、乙基、正丙基、正戊基、i,1-二甲基乙基(第三丁 -17· 122467.doc 200812626 基)正庚基及其類似基團。如本說明書及隨附之申請專 利範圍中所使用,除非另外規定,否則術語"低碳非支鏈 或支鏈烯烴”應具有以下含義:僅由碳與氫組成,含有至 少一個不飽和鍵且具有個碳原子的單價或二價直鏈或 支鏈基團。如本說明書及隨附之申請專利範圍中所使用, 除非另外規疋,否則術語η低碳非支鏈或支鏈醛”應具有以 下含義:僅由碳與氫及至少一個醛基組成且具有〗至8個碳 原子之單價或二價直鏈或支鏈基團。 在式I化合物之較佳實施例中,該橋式結構Β為己基胺。 v 為連接體。 就本發明之目的而言,術語”連接體”係指一經由橋式結 構Β或適體之胺基連接適體a與螯合劑c的化學個體。連接 體自身可為一鍵或特徵為存在可用於將螯合劑c連接至分 子之游離酼基(SH)-官能基。該等連接體[之實例為,但不 限於·一鍵、帶有至少一個巯基之經取代或未經取代之低 石反非支鏈或支鏈烷基、低碳非支鏈或支鏈烯烴或低碳非支 鏈或支鏈醛、帶有至少一個游離巯基之包含一傭胺基酸或 具有2至20個胺基酸之胺基酸序列之化學結構、聚乙二醇 (PEG)序列或其之任意組合。 在式I化合物之較佳實施例中,L為一帶有至少一個游離 巯基之化學結構,其中該化學結構包含一具有2至丨〇個胺 基酸之胺基酸序列、巯基乙醯基_甘胺酸_甘胺酸(參見,例 WSHilger,MCWiUis5MWolters,WAPieken,Tc-99m- labeling of modified RNA, Nucleosides Nucleotides 18 I22467.doc -18- 200812626 (1999) 1479-1481, B Johannsen, H Spies, Technetium(V) Chemistry as Relevant to Nuclear Medicine, Topics in 176 (1996) 78-120)、巯基 丁醯亞胺基、 經威基取代之烧基、經魏基取代iCK(:4烯烴或經駿 基取代酸。 . 就本發明之目的而言,術語”胺基酸序列α在本文中定義 * 為可由至少兩個胺基酸之聚縮合獲得之聚醯胺。就本發明 _ 之目的而言,術語,,胺基酸,,意謂任一包含至少一個胺基及 至少一個羧基但分子内無肽鍵之分子。換言之,胺基酸為 具有一羧酸官能基及一具有至少一個較佳位於以位之游離 氫之胺氮但分子結構中無醯胺鍵之分子。如此,在上述定 義中’於Ν-端具有一游離胺基且C-端具有一游離羧基之二 肽並不認為其為單一”胺基酸η。 如本文所使用,醯胺鍵意謂具有以下結構之任一共價 鍵: ' -C(=〇卜 NH-CH 或 HC_HN-(〇=)C-其中羰基係由一個分子提供且NH-基係由另—欲接合之分 子提供。兩個相鄰的胺基酸殘基之間的由聚縮合所得之= 胺鍵定義為"肽鍵"。聚醯胺主鏈的氮原子(如上述之nh)視 情況可獨立經烷基化,例如經-C]_C6_烷基、較佳烷基 化。 3几土 就本說明書之目的而言,胺基酸殘其系 土义坎I知由相應胺基酸藉 122467.doc -19- 200812626 由與另一胺基酸形成肽鍵衍生而來。 就本說明書之目的而言,胺基酸序列可包含天然發生 及/或人工形成之胺基酸殘基、蛋白性及/或非蛋白性胺基 酸殘基。非蛋白性胺基酸殘基可進一步分成:(句蛋白性胺 • 基酸之同質類似物;(b)蛋白性胺基酸殘基之卜同質類似 物,以及(c)其他非蛋白性胺基酸殘基。 因此,胺基酸殘基係衍生自相應胺基酸,例如 φ •蛋白性胺基酸,意即,Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、
Gin、Glu、Gly、HiS、lie ' Leu、Lys、Met、Phe、
Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr及 Val ;或 •非蛋白性胺基酸,諸如 〇蛋白性胺基酸之同質類似物,其中側鏈已藉由亞曱基 延伸,例如同質丙胺酸(Hal)、同質精胺酸(Har)、同 質半胱胺酸(Hey)、同質麩醯胺酸(Hgi),同質組胺酸 (Hhi)、同質異白胺酸(Hil)、同質白胺酸(Hie)、同質 • 離胺酸(Hly)、同質曱硫胺酸(Hme)、同質苯丙胺酸 (Hph)、同質脯胺酸(Hpr)、同質絲胺酸(Hse)、同質蘇 胺酸(Hth)、同質色胺酸(Htr)、同質路胺酸(Hty)及同 質纈胺酸(Hva); • 〇蛋白性胺基酸β-同質類似物,其中亞甲基已插入α-碳 與緩基之間,得到β-胺基酸,例如,β-同質丙胺酸 (PHal)、β-同質精胺酸(βΗα〇、β·同質天冬醯胺酸 (PHas)、β-同質半胱胺酸(pHcy)、同質麩醯胺酸 (pHgl)、β-同質組胺酸(pHhi)、β_同質異白胺酸 122467.doc -20 - 200812626 (βΗιΙ)、β_同質白胺酸(pHle)、β_同質離胺酸(pHly)、 β-同質曱硫胺酸(pHme)、β-同質苯丙胺酸(βΗρΙι)、β-同質脯胺酸(βΗρι〇、β-同質絲胺酸(pHse)、β-同質蘇 胺酸(PHth)、β-同質色胺酸(pHtr)、β>同質酪胺酸 (pHty)及同質纈胺酸(pHva); 〇其他非蛋白性胺基酸,例如心胺基己二酸(Aad)、胺 基己二酸(pAad)、α-胺基丁酸(Abu)、α-胺基異丁酸 _ (Aib)、β-丙胺酸(βΑ1&)、4-胺基丁酸(4-Abu)、5-胺基 戊酸(5-Ava)、6-胺基己酸(6-Ahx)、8-胺基辛酸(8-Aoc)、9-胺基壬酸(9-Anc)、10-胺基癸酸(i〇-Adc)、 I2·胺基十二酸(12-Ado)、α-胺基辛二酸(Asi〇、吖丁 咬-2-曱酸(Aze)、β-環己基丙胺酸(Cha)、瓜胺酸 (Cit)、脫氫丙胺酸pha)、γ-羧基麩胺酸(Gia)、α-環 己基甘胺酸(Chg)、炔丙基甘胺酸(pra)、焦麩胺酸 (Glp)、α-第三丁基甘胺酸(Tie)、4-苯曱酿基苯丙胺酸 _ (BPa)、δ-羥基離胺酸(Hyl)、4-羥基脯胺酸(Hyp)、別- 異白胺酸(alle)、羊毛硫胺酸(Lan)、(l·萘基.)丙胺酸 (Ι-Nal)、(2-萘基)丙胺酸(2-Nal)、正白胺酸(Nle)、正 纈胺酸(Nva)、鳥氨酸(〇rn)、苯基甘胺酸(phg)、六氫 ‘ 於生僉酸(Pip)、肌胺酸(Sar)、砸基半胱胺酸(sec)、
Statine(Sta)、β-噻吩基丙胺酸(Thi)、1,253,4-四氫異 喹啉-3-甲酸(Tic)、別-蘇胺酸(aThr)、噻唑烷_4-曱酸 (Thz)、γ-胺基丁酸(GABA)、異-半胱胺酸(異_cys)、 二胺基丙酸(Dpr)、2,4-二胺基丁酸(Dab)、3,4-二胺基 122467.doc -21 - 200812626 丁酸(y,pDab)、聯苯丙胺酸(Bip)、對仅經-q-CV烧 基、-鹵基、-NH2或-C〇2H取代之苯丙胺酸(phe(4-R),其中烧基,-齒基,-NH2或-C02H);肽 核酸(PNA,cf. Ρ·Ε· Nielsen,Acc· Chem. Res· 32, 624- 30) •或其N-燒基化類似物,諸如其N-甲基化類似物。
環狀胺基酸可為蛋白性或非蛋白性,諸如pr〇、Aze、 Glp、Hyp、Pip、Tic及 Thz。 其他實例及細節可參考例如j.H. J〇nes,j. peptide Sei. 2003,9,1-8,其以引用之方式併入本文中。 術語”非蛋白性胺基酸,,及”非蛋白性胺基酸殘基”亦涵蓋 蛋白性胺基酸之衍生物。舉例而言,蛋白性胺基酸殘基之 側鏈可經衍生,藉此賦予蛋白性胺基酸殘基"非蛋白性 同樣適於終止*基酸序狀蛋白性胺基酸殘基c_末端 及/或N-末端的衍生物。 就本說明書之目的而言,蛋白性胺基酸殘基係衍生自選 自由下列各物組成之群之L_構型或D_構型之蛋白性胺基 酸:Ala、Arg、Asn、Asp、…、⑽、Giu、吻、仙、 A、仏、LyS、Met、Phe、Pr。、Ser、Thr、Trp、Tyr及 Val ’ Thr與lie之第三掌性中心可為r•構型或s_構型。因 此,舉例而言,胺基酸序列之任何翻譯後修飾,諸如队燒 基化(其可天然發生),賦·^目應經修飾胺基酸殘基”非蛋白 性”,雖然該胺基酸殘基實質上併入蛋白質中。 c為金屬離子螯合劑。 就本發明之目的而言 金屬離子螯合劑C適於與鑭系元 Ϊ 22467.doc -22 ‘ 200812626 素及類鑭系元素金屬錯合。該等螯合劑在文獻中為熟知且 在 S Liu, DS Edwards, Bifunctional Chelators for Therapeutic Lanthanide Radiopharmaceuticals, Bioconjugate C/zem/siry 12 (2001) 7-34 中給出其實例。 在式I化合物之較佳實施例中,C係選自下列各物: a)D03A-馬來醯亞胺,1〇-{2-[(2-{[2-(2,5-二氫二氧 代-1H^比咯-1-基)乙基]胺基氧代乙基)胺基]小甲基-2-氧代乙基}-1,4,7,10-四氮雜環十二烷_i,4,7-三乙酸
b)具有以下通式之DOTA-型配位體:
其中, R係選自經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烷基、 經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烯烴,或包含 122467.doc •23- 200812626 至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至20個胺基酸 之胺基酸序列。 c) 1,4,7-參(2-巯基乙基卜丨儿'三氮雜_環壬烷·型配位體
其中 R係選自經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烷基、 經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烯烴,或包含 至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至2〇個胺基酸 之胺基酸序列。 d) 1,4,7-二氮雜锿壬烷-1,4,7三乙酸型配位
R=烷基、肽 122467.doc -24、 200812626 其中 R係選自經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烷基、 經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烯烴,或包含 至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至20個胺基酸 之胺基酸序列。 e) 1,4,7-參(3,5-二曱基-2-羥基苄基)-1,4,7_三氮雜-環壬烷- *型配位體
Rz院基、狀 其中 經取代或未經取代之低碳非支 至少一個胺基酸之化學, 之胺基酸序列。 低碳非支鏈或支鏈烷基、 支鏈或支鏈烯烴,或包含
R係選自經取代或未經取代之 f)三齒配位體 122467.doc 200812626
其中 R係選自經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烷基、 φ 經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烯烴,或包含 至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至20個胺基酸 之胺基酸序列。 除非另外規定,當指式I化合物本身,經標定式I化合 物,以及指其之任一醫藥組合物時,本發明包括本發明之 化合物之所有水合物、溶劑合物、錯合物及前藥。前藥為 任何共價結合之化合物,其釋放出式I之活性母體藥物。 在本發明之另一態樣中,提供經鑭系元素或類鑭系元素 _ 之金屬離子標定的式I化合物及任何較佳實施例。該等經 標定反應之方法及條件為熟習技術者所熟知(RE Weiner, ML Thakur, Chemistry of Gallium and Indium
Radiopharmaceuticals, in MJ Welch, CS Redvanly,
Handbook of Radiopharmaceuticals, Wiley (2003) 363- 399)。 鑭系元素與類鑭系元素金屬的主要優點在於不涉及氧化 還原作用。銦、鎵及釔在水溶液中的氧化態為+3。根據 HSAB理論,In(III)、Ga(III)及Y(III)為硬質金屬且因此寧 122467.doc -26- 200812626 願選擇硬質供體原子,諸如氧及氮(CJ Anderson,MJ Welch, Radiometal-Labeled Agents (Non-Technetium) for Diagnostic Imaging,C/^m. 99 (1999) 2219-2234) o 銦、鎵及紀在水溶液中具有相似離子半徑及相似配位化 學,該配位化學可相當於於姻系元素金屬的配位化學(S Liu,DS Edwards, Bifunctional Chelators for Therapeutic Lanthanide Radio pharmaceuticals, Bioconjugate Chemistry 12 (2001) 7:34) 〇 為提高金屬錯合物的熱力學穩定性及動力學惰性,可使 用多齒螯合劑。鑭系元素與類鑭系元素金屬能夠與各種.多 f配位體形成極其穩定的錯合物。最常用於該等金屬離子 的配位體為二伸乙基三胺五乙酸(DTPA)及1,4,7,10-四氮雜 環十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)衍生物。 諸如具有三維空腔之DOTA衍生物之多齒配位體尤其-受 到關注,因其未錯合形式能夠採取預定構形。 較佳同位素為 lnIn、67Ga、68Ga、86Y、90Y及 177Lu。 就可用性及半衰,期而言,68Ga為具有最佳性質之顯影同 位素,而成為PET應用中18F的潛在金屬替代品。自20世紀 70年代以來,68Ge/68Ga發生器系統經過評估,且因此,在 碍去的20多年中,已對68Ga化學進行研究(Green MS, Welch MJ? Gallium radiopharmaceutical chemistry, Int. J. Rad. AppL Instrum B 16 (1989) 435-448; Moerlein SM5 Welch MJ5 The chemistry of gallium and indium as related to radiopharmaceutical production, Int. J. Nucl. Med, Biol. 122467.doc -27- 200812626 8 (1981) 277-287; Hnatowich DJ, A review of
radiopharmaceutical development with short-lived generator-produced radionuclides other than Tc-99m, Int J
Appl Radiat Isot 28 (1977) 169-181) 〇 在本發明之一態樣中,提供經67以、68以、86γ、9Gy、 Lu或1 In標定之式I化合物及任何較佳實施例。 在其他較佳實施例中,式Ϊ化合物係經68Ga標定。 若本發明之式I化合物或經標定之式j化合物存在掌性中 心或另一形式的異構中心,則本文欲包括所有形式之異構 體,包括對映異構體及非對映異構體。含有掌性中心之化 合物可以外消旋混合物或富對映異構體之混合物形式使 用,或外消旋混合物可使用熟知技術分離且個別對映異構 體可单獨使用。在化合物具有不飽和碳碳鍵(雙鍵)的情況 下,順式異構體與反式異構體均在本發明之範圍内。在化 合物可以互變異構形式存在的情況下,諸如嗣烯醇互變異 構體,預期各互變異構形式包括於本發明之範圍内,不管 是否存在平衡或一種形式為主。 —本發明亦提供包含式1化合物或經標定之式I化合物及 C子上可接叉之.載劑或稀釋劑之組合物。醫藥學上可接 之載劑或稀釋劑可包括任何及所有溶劑、分散介質、抗 菌劑及抗真菌齊卜等張劑、酶抑制劑、轉移配位 (ansfer ligand),諸如葡萄糖酸鹽、酒石酸鹽、桴檬酸 或甘露糖醇及其類似物。料組合物可調配成無菌、無 原非經腸可接受之水溶液,視情況可以束乾形式供應 122467.doc -28- 200812626
本發明之組合物可以套組之組份形式提供,套組 衝液、額外小瓶、使用說明書及其類似物。 、’ 在另-態樣中’本發明提供—種包含含有預 合物之密封瓶的套組。 化 提供式I化合物與經標定之式I 在本發明之另一態樣中 兮合物以用作藥物。
提供式I化合物與經標定之式^ 較佳用作PET應用之顯影劑。 提供式I化合物與經標定之气I 在本發明之另一態樣中 化合物以用作診斷顯影劑 在本發明之另一態樣中 化合物以用於製造藥物。 在本發明之另-態樣中’提供式他合物與經標定
化合物以用於製造診斷顯影劑。 x I 在本發明之另一態樣中,提供式〗化合物與經標定之^ 化合物以用於製造PET顯影劑。 式1 由本叙明之所提供的經放射性標定之式1化合物可於 :面、藥學上可接受之载劑(例如鹽水介質水溶液之習知介 貝)或血漿介質(諸如用於靜嚴内注射之醫藥組合物)中經私 脈内投樂。該介質亦可含有習知醫藥物質,例如,調節: 透壓之醫藥學上可接受之鹽;緩衝液;防腐劑;及其類二 物其中較佳介質為生理鹽水及血漿。適當之醫藥學可接 又之载d為沾習此項技術者已知。關於此,可參考例如
Remington s Practice of Pharmacy(第 11版)。 式^化合物與醫藥學上可接受之載劑,例如在含水介質 中的沒度隨特枝用領域而變化。當可獲得令人滿意的顯 122467.doc -29- 200812626 影目標(例如腫瘤)的顯現時,足量即存在於醫藥學上可接 受之載劑中。
根據本發明,中性錯合物或具有醫藥學上可接受之反離 子之鹽形式的經放射性標定之式!化合物以單—單位可注 射劑量投藥。熟習此項技術者已知之任何普通載劑,諸如 無菌鹽水溶液或血漿,可在放射性標定後使用,以製備可 注射溶液㈣賴性_各㈣官、_及根據本發 類似物。一般而言’診斷劑之欲投藥之單位劑量的放射活 性為約(M mCi至約100 mCi,較佳為i ‘至2〇 ^。對於 放射性治療劑而言,治療單位劑量之放射性為約ι〇爪以至 邮,較佳為50 mCi至4〇〇 mCi。欲以單位劑量注射之 溶液為約0.(H mi至約30仏對於靜脈内投藥後之診斷目 的而言’ m或腫瘤活體㈣影可在大概數分鐘内發生。 然而,必要時’在注射入患者體内後數小時或更長時間内 發生顯影。在大多數情況下’足量的投藥劑量將在約“ 二'時内於欲顯影之區域中累積,以允許進行閃燦掃描顯 衫。根據本發明可使用任何習知用於診斷目的之閃爍 顯影方法。 田 實例 實例1:合成適體-D03A共軛物 Μ 合成 ΗΚ2-({2-[(2-{2,5_ 二氧代·3_[(2_ 氧代 _2_{[2_ 氧代 _2 收氧代-2-[(ΤΤΑ1)-基胺基]乙基}胺基)乙基]胺基}乙基)硫 基]吡咯啶-丨-基}乙基)胺基]_2_氧代乙基}胺基)_丨_曱基-2_ 氧代乙基^/义⑻四氮雜環十二烷十4,7三乙酸 " 122467.doc -30- 200812626
TTA1-MAG2-D03A 於37°c下以1 mg(1.5 pm〇i)D03A-馬來醯亞胺將12 mg| 於30 μ卜〇.2 M磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)中的TTA1-MAG2培 養1小時。使用13,000 rpm、i〇 kDa截止過濾器於n,〇〇〇 ^ rpm下藉由旋轉透析移除過量D03 A-馬來醯亞胺。過濾器 上的產物以100 μΐ水洗滌三次且於13,〇〇() rpni下過濾2〇分 鐘。樣本保存於-7〇°CT。 • 分析
Mass (ESI ):計算值[m]: 14055 ;實驗值[m/z]: 14094 (M +K+) 以下給出合成1〇·[2-({2·[(2_{2,5_二氧代-3_[(2_氧代_2_ {[2_氧代氧代_2_ [(ΤΤΑ1)-基胺基]乙基}胺基)乙基] 胺基}乙基)硫基:l·比咯啶-l-基}乙基)胺基]-2-氧代乙基}胺 基曱基^氧代乙基)-1,4,7,10-四氮雜環十二烷-i,4,7-三 乙酸(TTA1-MAG2-D03A)(15)的反應流程:
/NH TTA1 I22467.doc -31- 200812626 合成 TTA1-MAG2-D03A(15) a)TTAl-MAG2(2),硼酸鹽緩衝液,室溫,b)TCEP,乙酸 鹽緩衝液’室溫’ c)D03 A-馬來醯亞胺(6a),翊酸鹽緩衝 液,室溫 1))合成10-(2-{[2-({2-[3-({4-亞胺基-4-[(打八1)-基胺基]丁 基}硫基)-2,5-二氧代°比洛。定-1-基]乙基}胺基分2_氧代乙基] 胺基}-1-甲基-2-氧代乙基)-1,4,7,10·四氮雜環十二烧_ 1,4,7-三乙酸
TTA7-MBI-D03A 將溶於15 μΐ珊酸鹽緩衝液(〇·2 Μ,pH 8)中之1.2 mg
(100 nmol)TTA7-NH2 與溶於 5 μΐ 硼酸鹽緩衝液(〇·2 Μ,PH 8)中之0.28 mg(2 μηιο1)2-亞胺基硫雑環戊烷於〇°c下培養j 小時。之後’使用1 〇 kDa截止過濾器於1 3,000 rpm下藉由 旋轉過濾移除過量2-亞胺基硫雑環戊烷。過濾器上的產物 以100 μΐ磷酸鹽緩衝液(〇·1 Μ,pH 7.4)洗滌三次且於 13,000 rpm下過濾2〇分鐘。 然後,於37°C下使存在於25 μΐ磷酸鹽緩衝液(〇.1M, pH 7·4)中的產物與1 mg(i.5 μπι〇ΐ)Β〇3Α-馬來醯亞胺(8)反 應2小時。使用1〇 kDa截止過濾器於13,000 rpm下藉由旋轉 透析移除過量D03A-馬來醯亞胺。過濾器上的產物以1〇〇 μΐ水洗滌三次且於13,000 rpm下過濾20分鐘。樣本儲存於 -7〇〇〇下。 以下給出合成1〇-(2-{[2-[3-({4-亞胺基-4-[(TTA7)-基胺 基]丁基}硫基>2,5-二氧代吼咯啶-1-基]乙基}胺基)-2-氧代 122467.doc -32- 200812626 乙基]胺基卜1-甲基-2-氧代乙基)_i,457,10-四氮雜環十二烧_ 1,4,7-三乙酸(1^八7-倾314〇3八)(16)的反應流程。
適體
合成TTA7_MBI-D03A(16) a)磷酸鹽缓衝液,室溫,b) D03A-馬來醯亞胺(8)、石粦酸鹽緩衝液,室溫 實例2:68Ga(III)標定適體-D〇3a共輛物 -一般註解- 188Re的標定條件 乙酸錢緩衝液, 類綱糸元素金屬的標定要求盘"mTc及 不同。緩衝系統需要由磷酸鈉緩衝液變成 化合物。實際上,Liu等人 可能是類鑭系元素之金屬離 骨的原因。已知乙酸鹽為其 父換反應的適當的辅助配位 > 3形成的金屬氫氧化物沈
以防止形成不溶性金屬磷酸鹽 推測金屬峨酸鹽化合物的形成 子的南親和力局部化於活體内 他配位體與類鑭系元素同位素 體。因此可防止出現通常於pH I22467.doc -33- 200812626 殿。此為重要的,因為對於適體共輛物的標定反應而言, 由於當pH < 5.5時適體會沈澱,pH必須升至5·5及更高。在 存在諸如D03A及MX-DTPA之多齒Ν,〇,螯合配位體的情況 下,類鑭系元素金屬乙酸鹽輔助配位體錯合物傾向於接著 快速轉化。
a) 68Ga標定 TTAI-MAG2-D03A 將 200 pg TTA1-MAG2-D03A(15 nmol)溶於 4〇〇 μ1 乙酸銨 缓衝液(pH 5·5,0.5 Μ)溶液中。添加 loo μΐ (100-300 MBq)[6gGa]GaCl3溶離液,接著將反應混合物在i〇〇°q下培 養20分鐘。使用10 kDa截止過滤器於13000 rpm下藉由旋 轉過濾純化產物。 產物純度經PAGE與HPLC測定大於90%(表9.6)。
b) 1】】In標定 TTA7-MBI-D03A ιηΙη標定 TTA7-MBI-D03A類似於 ηιΙη標定 TTA卜MAG2-D03A完成。使用乙酸銨缓衝液於pH 5.5下形成產物。反 應於100°C下進行20分鐘。經旋轉過濾純化後,產物產率 高達70%。產物純度通常超過95%,化合物身份由HPLC與 PAGE(數據未展示)證明。結果與lnIn-TTAl-MAG2-D03A 獲得之數據一致。 實例3 ··結合親和力 a)式14匕合物對人類腱糖蛋白-C的結合親和力 進行競爭過濾結合檢定以確定結合常數(EC5G)。2 nM人 類 TN-C樣本以 1 nM 99mTc-TTAl-MAG2 在 TBSMC缓衝液(20 mM tris5 pH 7.4; 137 mM NaCl; 1 mM CaCl2; 1 mM MgCl2) 122467.doc -34- 200812626
中培養且結合與各種濃度的未標定適體競爭進行(參見圖 9.1之吸移圖解)。於37°C培養15分鐘。接著將溶液吸移至 裝備有經支撐琐化纖維素膜及Whatman濾紙之Minifold Device上,且使用真空以緩衝液洗滌。使用磷光影像掃描 分析儀(?11039]102^11^§€^)對由於腱糖蛋白-€結合標定適體 而殘留於過濾器上的放射活性進行定量。緣製單側競爭非 線性回歸曲線使用 GraphPadPrism 3.02(San Diego,CA, USA)計算EC5〇值。 表2 :較佳適體對腱糖蛋白-C結合親和力 適體 EC50,以nM計 TTA1 6 TTA2 31 TTA3 19 TTA4 20 TTA5 39 TTA6 14 TTA7 2 TTA8 14 W 7"/卜7X4厂的結合親和力 作為經類鑭系元素金屬標定之適體共軛物之實例,研究 niIn-TTAl-MAG2-D03A對人類腱糠蛋白-C的結合親和 力。直接藉由以不同量(1.25 χ1 (Γ7 Μ至6.35 XI (Γ12Μ)之腱糖 蛋白-C培養給定濃度之經放射性標定之化合物ιηΙη-ΤΤΑ1-MAG2-D03A來計算解離常數 KD。niIn-TTAl-MAG2-D03A 的KD經確定為1 nM。 圖1描述結合曲線之說明。 實例4:生物分布研究 a) 68Ga-TTAl-MAG2-D03A之竺物分布研究 I22467.doc -35· 200812626 使用帶有U251腫瘤裸NMRI小鼠通過生物分布實驗研究 68Ga-TTAl-MAG2-D03A。由於68Ga的半衰期短,此項研究 僅選取早期時間點。
68Ga-TTAl-MAG2-D03A的注射後1小時的腫瘤吸收經偵 測為2.0% ID/g。在該時間點,在血液中僅觀察到0.4% ID/g。發現腎臟及肝臟於1 h p.i.的吸收低於經ιηΙη標定之 化合物。68Ga-TTAl-MAG2-D03A主要經由尿清除(於1 h p.i.為71.7% ID),而在此時間點於腸内僅發現0.9 % ID/g。 表3 : 68Ga-TTAl-MAG2-D03A隨時間的清除 6iiGa-TTAl-MAG2-D03A 5 min p.i. 1 hp.i. 腸内(%ro/g) 1.9±0.2 0.9 士 0·6 尿(% ID) 40.9士 5.6 71·7 士 6.4 表4 :腫瘤對血液(T/B)、腫瘤對腎臟(171〇及腫瘤對肝臟 (T/L)的腫瘤對器官之比 T (%ID/g) Τ/Β (%ID/g) Τ/Κ (%ID/g) T/L (%ID/g) ⑽ Ga-TTA1-D03A 2.0 5.1 0.2 0.7 25 b) 99mTc-TTA 卜 MAG2 與 68Ga-TTA 卜 MAG2-D03A 芏物分布的 比較 研究帶有皮下人類U251神經膠母細胞瘤之裸小鼠體内經 放射性標定之適體的生物分布。先前已使用125Ι-抗-TN-C 抗體確認人類TN-C在U251異種移植體中的表現。體重約 為22 g之雌性裸小鼠(NMRI-Foxnlnu,Taconic)於右手肋經 皮下接種於100 μΐ PBS中之2.2xl06 U251人類神經膠母細 胞瘤細胞(ATCC)。3-4週後,向患有明顯腫瘤(約100 mg) 122467.doc -36 - 200812626 之小鼠的尾靜脈注射74-111 KBq經放射性標定之適體共軛 物。於注射後(p.L)〇,25 h、1 h、5 h及24 h的每個時間點將 三隻小鼠致死且於γ-計數器(Compugamma LKB Wallac)中 選擇有放射活性計數的器官。計算器官、尿及糞便的 %ID/g(每公克組織之注射劑量%)及%id(注射劑量%)。 表5描繪比較99mTc-TTAl-MAG2數據在帶有腫瘤之小鼠 體内生物分布研究的結果。 表 5 : 68Ga-TTAl-MAG2-D03A 與 99mTc-TTAl-MAG2 生物分 布的比較 腫瘤 (%ID/g) 血液 (%ID/g) 腎臟 (%ID/g) 肝臟 (%ID/g) 尿 (%ID) 腸 (%ID) ^Ga-TTAl-MAGr D03A 1·95 士 0·55 0·38 土 0.07 8.8 士 3.5 2.79 士 0.89 71J±6A 〇·9 士 0.6 ^mTc-TTAl-MAG2 〇.73±0.34 0.28 士 0.04 0.62 士 0.06 0.76 士 0,43 38.4 士 3.3 14.1 士 2·0 表 6 :自 68Ga-TTAl-MAG2-D03A 與 99mTc-TTAl-MAG2 在 帶有U25 1腫瘤之裸NMRI小鼠中之器官分布研究所選擇的 數據(每個時間點n=3,ID =注射劑量)。各欄表示腫瘤、血 液、腎臟及肝臟中注射後1 h每公克組織的注射劑量百分 比(% ID/g)。表(b)描繪腸内% ID/g及注射後1 h尿中發現的 % ID值 〇 , 腫瘤/血液 腫瘤/腎臟 腫瘤/肝臟 ^Ga-TTA 1 -MAG2-D03 A 5.13 0.22 0.70 ^ηιΤο-ΤΤΑ1-ΜΑ02 2.61 1.18 0.96 實例5 : 68Ga-TTAl-MAG2-D03A的活體内顯影 向帶有U251腫瘤之裸小鼠注射40 MBq經標定化合物且 進行動態PET顯影研究。由於68Ga的半衰期短,顯影僅進 122467.doc -37- 200812626 行至注射後1 h,參見圖2。 根據生物分布結果 1 h腫瘤清楚可見。 此外,膀胱非常突出 吸收。 *八⑺…π 射後 腎臟為具有最高示蹤劑吸收的器官。 。於1 h時間點未觀察到肝臟或腸内 【圖式簡單說明】
圖1 :丨丨丨In-TTA1-MAG2_D〇3A(15A)與腱糖蛋白_c的沾 合檢定。增加量之™<(1.25χ10-7厘至6.35 χ1〇·12μ)相^ 於與頌化纖維素濾器結合之放射活性作圖。由曲線計算出 為 1 nM 〇 圖2 :於注射後(p.i.)l h所觀察到之在帶有U251腫瘤之裸 小鼠中68Ga-TTAl-MAG2-D03A微PET顯影。發現放射活性 示蹤劑在腫瘤中有吸收。此外,通過膀胱清除看到放射活 性在腎中有吸收。
122467.doc 38-
Claims (1)
- 200812626 十、申請專利範圍: 1· 一種式I化合物: A-B-L-C 其中 (I) A代表適體,B不存在或代表橋式結構, L為連接體,及 、 C為金屬離子螯合劑。 2· ^項1之化合物’其中A係選自腱糖蛋白(Te—n)- c結合適體。 3·如明求項1或2之化合物,其中A係對於腱糖蛋白弋具有^ mM或更小之結合親和力的適體。 4.如凊求項1或2之化合物,其中a包含1〇至5〇個核苷酸。 5·如请求項1或2之化合物,其中B為己基胺。6.如請求項1或2之化合物,其中C係選自由下列各物組成 之群: a) D〇3A•馬來醯亞胺,10_{2-[(2-{[>(2,5_二氫二氧 代-1Η、。比咯-1-基)乙基]胺基}-2-氧代乙基)胺基]甲 基1氧代乙基h1,4,7,1^四氮雜環十二烷_1,4,7-三 乙酸 I22467.doc 200812626R係選自經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烷 基、經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烯烴, 或包含至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至20 個胺基酸之胺基酸序列, c) 1,4,7-參(2-酼基乙基)-1,4,7_三氮雜-環壬烷—型配位體烷基、肽 其中 122467.doc 200812626 R係選自經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烧 基、經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烯烴, 或包含至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至2〇 個胺基酸之胺基酸序列, d) 1,4,7-三氮雜環壬烧-i,4,7三乙酸型配位體(ΝΟΤΑ)烷基、肽 其中 R係選自經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烷 基、經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烯熳, 或包含至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至2〇 個胺基酸之胺基酸序列,. 環壬 e) 1,4,7-參(3,5-二曱基羥基节基)_m,7•三氮雜- 烷-型配位體 122467.doc 200812626R=烧基、肽 其中 R係選自經取代或未經取代之低 反非支鏈或支鏈% 土、經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈稀烴 或包含至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至2 個胺基酸之胺基酸序列, f)三齒配位體Cl 其中 R係選自經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈烷 基、經取代或未經取代之低碳非支鏈或支鏈稀烴, 或包含至少一個胺基酸之化學結構,或具有2至2〇 I22467.doc 200812626 個胺基酸之胺基酸序列。 7.如請求項1或2之化合物,其中L為帶有至少一個游離巯 基之化學結構,其中該化學結構包含具有2至10個胺基 酸之胺基酸序列、MAG2、巯基丁醯亞胺基、經巯基取 代之CVC4烷基、經疏基取代之CrC4垛烴或經巯基取代 之C!-C4醛。 8. 如請求項1或2之化合物,其中L為MAG2。 9. 如請求項1或2之化合物,其中八3係選自下列化合物組 成之群: TTA1: S^NHa-Ce-O-POrO-GGG AGG ACG-(CH2CH20)e-CGU CGC CGU AAU GGA UGU UUU GCU CCC UG-ΠΤ · TTA2: S'-NHrCrO-POzO-mGmGmG mAmGG mAiCmG-(CH2CH20)e-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGfCfU fCfCfC UmG-3^3^T, TTA3: 5*-NH2-Ce-0-P〇2-0-mGmGmG mAmGG mAfCmG-(CH2CH2〇)e-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGfCfU fCfCfC , TTA4: 5,-mGmGmG mAmGG mAfCmG-(CH2CH2〇VfCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA RirnGfU fUfUfU mGfCfU iC(c^m2)〇ic^y-y, TTA5: 5*-( BSSilf C2 dT)-mA mGmGmG mAmGG mAfCmG-(CH2CH20)6-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfy fUfUfU mGfCfU fCfCfC fUmG-S^S^T , TTASr S^NHj-Ce-O-SPO-O-mGmGmG mAmGG mAfCmG-(CH?CH20)e4CGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGRi fUfUfU mGfCfU fCfCfC fUmG-3r-3-T, TTA7: 5*-LGLGLG LALGmG mAfCrG-(CH2OCH2)6-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGLCUi ΙΧ!ΧΚΗ〇)2)βΝϊν3*,及 ΤΤΑΒ: 5**mGmGmG mAmGmG mAfCrG-(CH2OCH2)6-fCGfU fCGfC fCGfU mAmAfU mGmGmA fUmGfU fUfUfU mGmCmli mCmCmC-(CH2)eNHr3’ 10. 如請求項1或2之化合物,其中該化合物係經網系元素或 類鑭系元素之金屬離子標定。 11. 如請求項1或2之化合物,其中該化合物係經67Ga、 68Ga、86Y、9GY、177Lu或 ηιΙη標定。 12·如請求項1或2之化合物,其中該化合物係經68Ga標定。 1 3, —種組合物,其包含如請求項1至12中任一項之化合物 及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。 122467.doc 200812626 】4· 一種套組,其包含一含有預定量之如請求項 項之化合物的密封瓶。 】5·如請求項1或2之化合物,其係用作藥物。 1 6.如鳴求項〗或2之化合物,其係用作診斷顯影劑 作影劑。 17· —種如請求項1至12中任一項之化合物用於 用途。 】至12中任 ’較佳用 造藥物之 18. 一種如1至12中任一項之化合物用於製造診 佳PET顯影劑)之用途。 辦顯影劑(較 19· 一種如1至12中任一項之化合物用於製造診 佳PET顯影劑)供顯影腫瘤之用途。 断顯影劑(較 122467.doc
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