TW200536858A - Preparation process of oligoglycosaminoglycan, and reducing end glucuronic acid type oligochondroitin sulfate and pharmaceutical composition comprising the same - Google Patents
Preparation process of oligoglycosaminoglycan, and reducing end glucuronic acid type oligochondroitin sulfate and pharmaceutical composition comprising the same Download PDFInfo
- Publication number
- TW200536858A TW200536858A TW094109494A TW94109494A TW200536858A TW 200536858 A TW200536858 A TW 200536858A TW 094109494 A TW094109494 A TW 094109494A TW 94109494 A TW94109494 A TW 94109494A TW 200536858 A TW200536858 A TW 200536858A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- group
- groups
- alkyl
- hydrogen atom
- alkenyl
- Prior art date
Links
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 30
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 29
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 title claims description 42
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 10
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 title abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 34
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 225
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 95
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 36
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims abstract description 25
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 120
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 85
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 76
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 75
- -1 fluorenyl galactosamine Chemical compound 0.000 claims description 75
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 67
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 63
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 59
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 56
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 51
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 46
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 46
- 125000003983 fluorenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3CC12)* 0.000 claims description 44
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical group [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 31
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 31
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 claims description 30
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 26
- IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N iduronic acid Chemical class O=C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-LECHCGJUSA-N 0.000 claims description 25
- DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N chondroitin Chemical group CC(O)=N[C@@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@H](O)C=C(C(O)=O)O1 DLGJWSVWTWEWBJ-HGGSSLSASA-N 0.000 claims description 23
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 229920002567 Chondroitin Polymers 0.000 claims description 17
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 17
- FTVLMFQEYACZNP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate Chemical group C[Si](C)(C)OS(=O)(=O)C(F)(F)F FTVLMFQEYACZNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 claims description 16
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 claims description 16
- 229930182480 glucuronide Natural products 0.000 claims description 15
- 125000000649 benzylidene group Chemical group [H]C(=[*])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 14
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 13
- 150000008134 glucuronides Chemical group 0.000 claims description 13
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 125000004956 cyclohexylene group Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 claims description 8
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 150000002905 orthoesters Chemical class 0.000 claims description 8
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 8
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 claims description 8
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 claims description 8
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 6
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 6
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 6
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 5
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 5
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- PNIWLNAGKUGXDO-LNCRCTFVSA-N (2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r)-5-amino-4,6-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical class O[C@@H]1[C@@H](N)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 PNIWLNAGKUGXDO-LNCRCTFVSA-N 0.000 claims description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical group 0.000 claims description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims description 2
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-O sulfonium group Chemical group [SH3+] RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 2
- 125000001889 triflyl group Chemical group FC(F)(F)S(*)(=O)=O 0.000 claims description 2
- VJEZYZLITKUTFH-UHFFFAOYSA-N 2-(hydrazinecarbonyl)benzoic acid Chemical group NNC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O VJEZYZLITKUTFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- VEXJSFASSDRQRD-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutanimidamide Chemical group CCC(C)C(N)=N VEXJSFASSDRQRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102100021022 Gastrin Human genes 0.000 claims 1
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 claims 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims 1
- 150000001336 alkenes Chemical group 0.000 claims 1
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 claims 1
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 claims 1
- SFYLVTNFLRJWTA-UHFFFAOYSA-N fluoren-1-imine Chemical group C1=CC=C2C3=CC=CC(=N)C3=CC2=C1 SFYLVTNFLRJWTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 abstract description 53
- AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N L-idopyranuronic acid Chemical class OC1O[C@@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-HNFCZKTMSA-N 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 89
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 68
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 61
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 47
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 41
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 35
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 31
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 22
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 18
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 15
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 14
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 12
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 12
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- NIHNNTQXNPWCJQ-UHFFFAOYSA-N o-biphenylenemethane Natural products C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3C2=C1 NIHNNTQXNPWCJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 10
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 10
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 9
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 8
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 8
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 8
- OQLZINXFSUDMHM-UHFFFAOYSA-N Acetamidine Chemical compound CC(N)=N OQLZINXFSUDMHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 7
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 7
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 7
- 239000000976 ink Substances 0.000 description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 7
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 6
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical group NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 6
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 5
- MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N (S)-camphorsulfonic acid Chemical compound C1C[C@@]2(CS(O)(=O)=O)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-GMSGAONNSA-N 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101150041968 CDC13 gene Proteins 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 5
- YFHNDHXQDJQEEE-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrazine Chemical compound NN.CC(O)=O YFHNDHXQDJQEEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000006177 alkyl benzyl group Chemical group 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L dermatan sulfate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](OS([O-])(=O)=O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C([O-])=O)O1 AVJBPWGFOQAPRH-FWMKGIEWSA-L 0.000 description 5
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 5
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 5
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 5
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 5
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920000288 Keratan sulfate Polymers 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000006307 alkoxy benzyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N keratan Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@H]3[C@H]([C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H](O)[C@@H]3O)O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]2O)COS(O)(=O)=O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H]1O KXCLCNHUUKTANI-RBIYJLQWSA-N 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 125000006178 methyl benzyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 4
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 4
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 4
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M triflate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 4
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical group CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 0 CC(C1O)[C@](O[C@]2C(*)C(*)[C@](OC(C(*)[C@](O[C@](C(*)O[C@@](*)C3*)C3OC)OC3OP=C)[C@@]3Oc3ccccc3)OC2C)OC(COP=C)[C@@]1Oc1ccccc1 Chemical compound CC(C1O)[C@](O[C@]2C(*)C(*)[C@](OC(C(*)[C@](O[C@](C(*)O[C@@](*)C3*)C3OC)OC3OP=C)[C@@]3Oc3ccccc3)OC2C)OC(COP=C)[C@@]1Oc1ccccc1 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 150000002256 galaktoses Chemical class 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- DXASQZJWWGZNSF-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylmethanamine;sulfur trioxide Chemical compound CN(C)C.O=S(=O)=O DXASQZJWWGZNSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000003808 silyl group Chemical group [H][Si]([H])([H])[*] 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001180 sulfating effect Effects 0.000 description 3
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- FNHMJTUQUPQWJN-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanimidamide Chemical group CC(C)(C)C(N)=N FNHMJTUQUPQWJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical class N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000066 S-methyl group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical class O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactopyranuronic acid Natural products OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 239000007806 chemical reaction intermediate Substances 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- FGZJXVSDDHVZAH-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane silane Chemical class [SiH4].CCOCC FGZJXVSDDHVZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 238000005987 sulfurization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- OEANUJAFZLQYOD-CXAZCLJRSA-N (2r,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5r,6r)-5-acetamido-3-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methoxyoxan-4-yl]oxy-4,5-dihydroxy-3-methoxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](OC)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC)[C@H](C(O)=O)O1 OEANUJAFZLQYOD-CXAZCLJRSA-N 0.000 description 1
- NAWXUBYGYWOOIX-SFHVURJKSA-N (2s)-2-[[4-[2-(2,4-diaminoquinazolin-6-yl)ethyl]benzoyl]amino]-4-methylidenepentanedioic acid Chemical compound C1=CC2=NC(N)=NC(N)=C2C=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CC(=C)C(O)=O)C(O)=O)C=C1 NAWXUBYGYWOOIX-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ARDGQYVTLGUJII-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanimidamide;hydrochloride Chemical compound Cl.CC(C)(C)C(N)=N ARDGQYVTLGUJII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanoyl chloride Chemical compound CC(C)(C)C(Cl)=O JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJAHGEUFOYIGKR-UHFFFAOYSA-N 2-chloroethanimidamide Chemical compound NC(=N)CCl NJAHGEUFOYIGKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QPILHXCDZYWYLQ-UHFFFAOYSA-N 2-nonyl-1,3-dioxolane Chemical compound CCCCCCCCCC1OCCO1 QPILHXCDZYWYLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006181 4-methyl benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 208000036487 Arthropathies Diseases 0.000 description 1
- 208000008035 Back Pain Diseases 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000027791 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108091016585 CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-MGCNEYSASA-N D-galactonic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-MGCNEYSASA-N 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000851593 Homo sapiens Separin Proteins 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SKNVOMKLSA-N L-idonic acid Chemical class OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SKNVOMKLSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 208000008930 Low Back Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- SKQHRBRVCRUFSX-UHFFFAOYSA-N Muronic acid Natural products CC(=O)CCCCCCCCCCCCCC1OC(=O)C(=C)C1C(O)=O SKQHRBRVCRUFSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010034464 Periarthritis Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 102100036750 Separin Human genes 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000004760 Tenosynovitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- DRUIESSIVFYOMK-UHFFFAOYSA-N Trichloroacetonitrile Chemical compound ClC(Cl)(Cl)C#N DRUIESSIVFYOMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTPYQWVXECMZMA-UHFFFAOYSA-N [dimethyl(sulfo)silyl]methane Chemical compound C[Si](C)(C)S(O)(=O)=O UTPYQWVXECMZMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000004171 alkoxy aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005036 alkoxyphenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005037 alkyl phenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 150000001409 amidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000043 antiallergic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 238000005285 chemical preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003885 eye ointment Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 150000008275 galactosamines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 230000001279 glycosylating effect Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 1
- 239000012433 hydrogen halide Substances 0.000 description 1
- 229910000039 hydrogen halide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002454 idoses Chemical class 0.000 description 1
- 125000000879 imine group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000000654 isopropylidene group Chemical group C(C)(C)=* 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002597 lactoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 210000004373 mandible Anatomy 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 125000001037 p-tolyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O phosphonium Chemical compound [PH4+] XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- KOUKXHPPRFNWPP-UHFFFAOYSA-N pyrazine-2,5-dicarboxylic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C1=CN=C(C(O)=O)C=N1 KOUKXHPPRFNWPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 206010042772 syncope Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 210000003582 temporal bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 1
- STMPXDBGVJZCEX-UHFFFAOYSA-N triethylsilyl trifluoromethanesulfonate Chemical compound CC[Si](CC)(CC)OS(=O)(=O)C(F)(F)F STMPXDBGVJZCEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- YVXGFRYOIRBVJP-UHFFFAOYSA-N tripropylsilyl trifluoromethanesulfonate Chemical compound CCC[Si](CCC)(CCC)OS(=O)(=O)C(F)(F)F YVXGFRYOIRBVJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical group OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 125000005023 xylyl group Chemical group 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
- C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
- C07H5/04—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to nitrogen
- C07H5/06—Aminosugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
200536858 (1) 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明關於用來有效製備由四個或更多個,尤其是五 個或更多個組成用糖所·構成的寡糖胺聚糖的化學製備方法 。本發明亦關於由五個或更多個組成用糖所構成的還原端 葡醛酸型硫酸軟骨素寡醣,以及含彼之藥學組成物,此藥 學組成物可用來改良、治療及預防由CD44分子之參與所 φ 引的狀況或疾病。 【先前技術】 葡糖胺聚糖爲一種具有重複之基礎雙醣單位構造的多 醣,此基礎雙醣單位係由一糖醛酸或半乳糖酸,或其衍生 物,以及一己糖胺或其衍生物所構成。葡糖胺聚糖在活體 內係以非常長之糖鏈型式存在,其係由約40至100個重 複之基礎雙醣單位所形成,且在大部分的情况中係共價結 • 合至蛋白聚糖中之核心蛋白質。 下列爲已知之葡糖胺聚糖:硫酸軟骨素、硫酸皮膚素 、硫酸乙醯肝素、肝素、硫酸角質素,等。在一種硫酸軟 骨素中,其基礎雙醣單位係由葡醛酸或其衍生物,及N-醯基半乳糖胺或其衍生物所構成。在一種硫酸皮膚素中, 其基礎雙醣單位係由艾杜糖酸或其衍生物,及N-醯基半 乳糖胺或其衍生物所構成。在一種硫酸角質素中,其基礎 雙醣單位係由半乳糖或其衍生物,及N-醯基半乳糖胺或 其衍生物所構成。
Cs -4- 200536858 (2) 近年,這些葡糖胺聚糖之細胞辨識功能已吸引人們高 度的注意,且顯示出:表現在不同細胞中之含有葡糖胺聚 糖的糖鏈可透過與胞外成分之交互作用來參與不同的生理 功能。 例如:JP 2003-512807A中揭示具有16至100個糖單 位之硫酸皮膚素可作爲凝血酵素產生和補體活化的抑制劑 ,此種糖單位係由含有艾杜糖酸及硫酸化之乙醯基半乳糖 Φ 胺的雙醣的重複單位所構成。在ARTHRITIS & RHEUMATISM,Vol· 42,No. 4,1 999,pp. 659-668 中亦揭 示在老鼠之關節風濕病模型中,玻尿酸可在活體內與一已 .知參與不同之細胞功能的CD44抗原交互作用,且若以特 殊抗體抑制玻尿酸對CD44之結合作用時,可緩解關節風 濕病之情況。 再者,在最近的硏究中已提出或指出:可經由裂解從 活體萃取出之長鏈葡糖胺聚糖來取得之寡糖胺聚糖(其中 • ”寡’’一詞在此文中係指其係由2至20個組成用糖所構成 )與胞外成分交互作用,並參與生理功能。 例如:THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol· 277,No· 15,pp· 12921-12930,2002 中揭示由四個組 成用糖所構成之硫酸軟骨素E與L-分泌激素和P-分泌 激素交互作用。然而,此參考資料亦指出部分硫酸化或完 全未硫酸化之相對應的軟骨素族不會與L-分泌激素和P -分泌激素交互作用。再者,此參考資料亦揭示由二個組 成用糖所構成之葡糖胺聚糖與CD44交互作用,並更具體 -5- 200536858 (3) 地指出由二個組成用糖所構成之軟骨素、皮膚素和玻尿酸 不論是否硫酸化或未硫酸化均與CD44交互作用,也就是 :在糖鏈上的硫酸根基團不會促成其與CD44交互作用。 本參考資料描述藉由胞質基因共振分析來分析各寡糖 胺聚糖與.CD44之交互作用,但並未證明任何實際之生理 功能。 就此點而言,WO 96/1 6973中揭示由二個至五個組成 • 用糖所構成之在還原端具有硫酸化乙醯葡糖胺的寡硫酸角 質素可作爲抗發炎劑、抗過敏劑、免疫調節劑、細胞分化 誘導劑及細胞凋亡誘導劑。 還有,JP 5-178876A中描述具有抗過敏作用、抗發炎 作用及玻尿酸酶抑制作用的寡軟骨素,其係由2至8個具 有礎雙醣單位之組成用糖所構成,而該基礎雙醣單位係由 D—半乳糖胺衍生物和D-葡醛酸衍生物所構成。 然而,此篇文獻中並未描述依所揭示之製備方法(其 # 中由單糖所構成之糖給予體透過糖苷鍵結依序地結合)實 際製備出由四個或更多個糖所構成的寡醣。當然,在此參 考資料中僅證明由二個組成用糖所構成之軟骨素的藥理學 活性。 THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 278,No.34,pp.32259-32265,2003中指出含有數種具有不 同鏈長之寡玻尿酸(由6至14個組成用糖所構成)的寡 聚體混合物可誘導CD44降解,而由1 000個或更多個組 成用糖所構成的玻尿酸,以及由二個組成用糖所構成的玻 •6- (s; 200536858 (4) 尿酸不會誘導CD44降解。 同時,由於寡糖胺聚糖之功能逐漸吸引人們的注意力 ,因而對選擇性地製備具有特殊鏈長及修改基團(其係藉 由在特殊位置處加入一特殊基團來形成,如:藉由硫酸化 作用和一種特殊之立體構造)的寡糖胺聚糖的方法的需求 愈來愈強烈。 傳統上,已知一種利用裂解酶來將從活體萃取之長鏈 φ 糖胺聚糖裂解的方法可用來取得寡糖胺聚糖:例如, WO 96/16973 和 JP 5-058716 A 中所揭示者。 然而,此種酶的方法由於污染其它活體的成分,因而 當用來製造藥品時有容易造成副作用的疑慮。另外,根據 此種酶的方法並無法取得具有預定鏈長之糖胺聚糖,而實 際上最常取得的爲由二個組成用糖所構成者。其它的限制 爲,該修改基團和立體構造基本上係由從活體萃取之糖胺 聚糖決定。 Φ 另一方面,一種可用來取得未受雜質污染、具有預定 之鏈長、在預定之位置處的修改基團,及/或預定之立體 構造的糖胺聚糖的化學合成方法已引起注意。 例如:上述JP-5- 1 78876-A中揭示一種方法,其中D -半乳糖胺衍生物和D-葡醛酸衍生物透過糖苷鍵結依序 地彼此結合’來製備由其重複之基礎雙醣單位所構成的2 一至8—寡醣。 然而’即使此方法需要每次以保護基保護單醣,再去 除保護基的步驟,以將單醣一個接一個連接,但其仍無法 20Θ536858 (5) 用來取得高產量之由四個或更多個組成用糖所構成的糖胺 聚糖。實際上,本參考資料未描述任何示範製備由四個或 更多個組成用糖所構成之糖胺聚糖的方法實例。此參考資 料亦未描述任何將特殊位置之羥基團選擇性地硫酸化的方 法。 另一方面,本發明者已報導一種用來取得還原端葡醛 酸型四醣硫酸軟骨素的方法,其係經由將由二個疊氮化之 • 組成用糖所構成的糖給予體與一由二個以類似方法疊氮化 之組成用糖所構成的糖接受體,在BF3 · OEt2 (其爲一種 路易斯酸)的存在下反應來進行(Carbohydrate Ressearch 305 ( 1 998 ) 43 -63 and Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vo 1. 5,No· 13,pp. 1 3 5 1 - 1 3 54,1 995 ) o 本方法解決上述專利文獻中所揭示之方法中的問題, 並可取得50%產量之還原端葡醛酸型四醣硫酸軟骨素。 # 然而,根據這些參考資料中所描述的製備方法很難去 合成由五個或更多個組成用糖所構成之還原端葡醛酸型硫 酸軟骨素,因爲當合成由五個或更多個組成用糖所構成之 乙醯基半乳糖胺時無法將疊氮根基團轉化成乙醯胺根基團
Carbohydrate Research 326 ( 2000 ) ,88-97 中揭示 一種將預定之葡糖胺聚糖的經基團擇性地硫酸化的方法。 然而,本參考資料之方法爲一種將N-醯基半乳糖胺在4 一或6—位置處硫酸化的方法,而非一種可將n—醯基半 20Θ536858 (6) 乳糖胺在4 -和6 -二個位置處選擇性地硫酸化的方法。 【發明內容】 本發明鑑於上述先前技術的問題而致力於提供以高度 立體選擇的方式來製備高產量和高純度之由四個或更多個 ,尤其是五個或更多個組成用糖所構成之具有預定鏈長和 構造的寡糖胺聚糖的方法。另外,本發明致力於藉由本發 # 明方法來首次取得高純度之由五個或更多個預定數目的組 成用糖所構成的還原端葡醛酸型寡硫酸軟骨素,以及含彼 之藥學組成物。 爲了解決上述問題,本發明者已檢視在上述 Carbohydrate Research 3 0 5 ( 1 99 8 ) ,43-63 中戶斤描述的 製備方法。然後,本發明者發現利用由乙醯胺化之組成用 糖所構成的糖給予體和糖接受體,以及作爲促進劑之路易 斯酸(其爲該糖給予體之平衡離子,如:三氟甲磺酸三甲 • 矽烷酯,或其類似之化合物)可製備出高產量和高純度之 由四個或更多個組成用糖所構成之具有預定鏈長的寡糖胺 聚糖。因此,此發現可達成本發明。 也就是,本發明提供製備寡糖胺聚糖的方法,或在本 製備方法之獨特糖基化反應步驟中取得其特殊中間體的方 法,其中該方法的特徵在於其包含:步驟(A),其係將 在還原端具有一葡醛酸或艾杜糖酸衍生物之糖給予體(其 中係在欲糖基化之還原端羥基團加入一離去基,而其它羥 基團和羧基團爲經保護的)與在非還原端具有一 N-醯基 -9 - 200536858 (7) 半乳糖胺衍生物之糖接受體(其中該欲糖基化之非還原端 經基團爲游離的’而其它羥基團爲經保護的)在一作爲促 進劑之路易斯酸(其係以該糖給予體之平衡離子的型式存 在),如:由下列通式(1 )所代表的化合物,的存在下 進行糖基化反應。 R2
t I R —Si —Ο—Tf (1 ) R3 在一種較佳之實施態樣中,本發明亦提供一種用於製 備寡糖胺聚糖或其中間體的方法,其中該方法的特徵在於 其包含:步驟(A),此步驟係將含有一葡醛酸或艾杜糖 酸衍生物(其中係在欲糖基化之還原端羥基團加入一離去 基,而其它羥基團和羧基團爲經保護的),或通常由二個 至十個組成用糖所構成之寡醣衍生物(其含有基礎雙醣單 位作爲其基礎組成單位,而該基礎雙醣單位係由一 N-醯 φ 基半乳糖胺衍生物和一葡醛酸或艾杜糖酸衍生物所構成, 且其中係在欲糖基化之還原端羥基團加入離去基,而其它 羥基團和羧基團爲經保護的)的糖給予體與在非還原端含 有一葡醛酸或艾杜糖酸衍生物(其中該欲糖基化之非還 原端羥基團爲游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保護的 ),或包含基礎雙醣單位(其係由N-醯基半乳糖胺衍生 物和一葡醛酸或艾杜糖酸所組成)作爲其基礎組成單位的 寡醣衍生物(其中欲糖基化之非還原端羥基團爲游離的, 而其它羥基團和羧基團爲經保護的)的糖接受體,在上述 -10- d 200536858 (8) 促進劑之存在下進行糖基化反應。 在一種較佳之實施態樣中,本發明之製備方法除了上 述之步驟(A )外還包含步驟(B ),此步驟係將在上述 步驟(A )中所取得之寡醣衍生物的非還原端的一個保護 基去除;及步驟(C ),此步驟係在上述促進劑之存在下 ,將去除一個保護基之寡醣衍生物與上述之糖接受體(宜 由一個或二個組成用糖所構成)進行糖基化反應。由五個 φ 或更多個組成用糖所構成之具有預定鏈長的寡糖胺聚糖可 藉由以所要之1至8次之內的重複次數重複進行步驟(B )和(C)來製備。關於高產量方面,較令人滿意的爲, 藉由重複進行步驟(B)和(C) 1至5次來製備具有預定 鏈長的寡糖胺聚糖。 在本發明的製備方法中,上述之糖給予體和糖接受體 可根據靶的寡糖胺聚糖來選擇。例如:當製備還原端葡醛 酸型寡糖胺聚糖或其衍生物時可使用下列者作爲糖給予體 # :一種葡醛酸或艾杜糖酸衍生物,其中係在欲糖基化之還 原端羥基團加入一離去基,而其它羥基團和羧基團爲經保 護的;或通常由二個至十個組成用糖所構成之寡醣衍生物 ,其含有基礎雙醣單位作爲其基礎組成單位,而該基礎雙 醣單位係由一 N-醯基半乳糖胺衍生物(其中所有的羥基 團爲經保護的)和一葡醛酸或艾杜糖酸衍生物(其中係在 欲糖基化之還原端羥基團加入離去基,而其它羥基團和羧 基團爲經保護的)所構成。更具體地說,當製備寡軟骨素 或其衍生物時可使用下列者:由通式(2 )或通式(2 / ) -11 - 200536858 (9) 所代表之由一個或二個組成用糖所構成的糖給予體 6 p6, (2) P5
〇〇^^Ρ〇Ώ^° ^^NR^R5 d〇OP°
類似地,當製備製備還原端葡醛酸型寡糖胺聚糖或其 衍生物時可使用下列者作爲糖接受體:一種葡醛酸或艾杜 糖酸衍生物,其中該欲糖基化之非還原端羥基團爲游離的 ,而其它羥基團和羧基團爲經保護的;或一種寡醣衍生物 ,其通常係由二個至十個含有基礎雙醣單位作爲其基礎組 成單位之組成用糖所構成,而該基礎雙醣單位係由一 N-醯基半乳糖胺衍生物(其中欲糖基化之非還原端羥基團爲 游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保護的)和一葡醛酸 或艾杜糖酸衍生物(其中所有的羥基團和羧基圑爲經保護 的)所組成。更具體地說,在一種製備寡軟骨素或其衍生 物之較佳的實施態樣中’可使用由通式(3 )所代表之由 二個組成用糖所構成的糖接受體: nr6r7 coop10 (3) 200536858 (10) 本發明所使用之促進劑宜爲由上述通式(1 )所代表 之化合物,其中R1、R2和R3分別爲相同或獨立地爲氫原 子,或直鏈型或支鏈型烷基團。尤其是,宜爲其中該烷基 團具有五個或更少個碳原子的化合物,如:三氟甲磺酸三 甲矽烷酯(TMSOTf)。 一般而言,本發明之製備方法包含去除在上述步驟( A)或(C)中所取得之寡醣的所有保護基。除了去除在 φ 上述步驟(A)或(C)中所取得之寡醣的所有保護基外 ,本方法還可包含根據目的將各N-乙醯基葡糖胺在第4 及/或第6位置處選擇性地硫酸化。無需多言,去除這些 保護基之步驟及/或硫酸化之步驟可由另一個未參與步驟 (A)或(C)的人進行。 在一種較佳之實施態樣中,本發明可包含下列步驟: 將在上述步驟(A)或(C)中所取得之寡醣的各N-醯 基半乳糖胺中的第4及第6位置處的羥基以亞苄基、亞烷 # 氧苄基及/或亞環己基加以保護;以三甲基乙醯基團保護 在非還原端寡醣之組成用糖中的第4及第6位置處以外的 其它羥基團;將保護第4和第6位置處之羥基團的亞苄基 、亞烷氧苄基及/或亞環己基去除;接著,將在第4和第 6位置處之去保護的羥基團進行硫酸化作用,以將N-醯 基半乳糖胺中之第4和第6位置選擇性地硫酸化。 本發明亦包含在本發明之製備方法的步驟中所產生之 具有特殊構造的寡糖胺聚糖的中間體,此中間體可由通式 (4 / )代表: -13- 200536858
本發明還提供新穎之還原端葡醛酸型寡軟骨素,還原 端葡醛酸型寡硫酸軟骨素,或還原端艾杜酸型寡硫酸軟骨 素,或其鹽或衍生物:以下有時總稱爲"還原端葡醛酸型 寡軟骨素或其硫酸化物等”。具體地說,本發明提供由通 式(4)代表之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物, 等:
在本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物, 等,中,就去除CD44之引發能力而言,較合適的爲由下 述通式(4 )所代表的化合物:其中R14和R15至少有一 爲隨意地被選自如下群體之任一員所取代的硫酸根基團: -14 - 200536858 (12) 鈉、鉀、銅、鈣、鐵、錳、鋅、銨、鋇和鋰,且特別合適 的爲:由式(4 )所代表之化合物,且其中R1 4和R1 5二 者爲隨意地被選自如下群體之任一員所取代的硫酸根基團 •納、紳、銅、錦、鐵、鐘、鲜、錢、鎖和鍵。在本發明 之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物,等中,就有效 生產和去除CD44之引發能力而言,較合適的爲其中^爲 3至6之由通式(4)所代表的化合物。 • 本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物,等 完全不含有雜質,如:其它活體成分之脂質和蛋白質。 本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物,等在去 除CD44之引發能力方面具有高活性,因此,可作爲用來 改良、治療或預防由CD44分子所引發之疾病或狀況的活 性成分。 以此方式,本發明亦提供一種用來改良、治療或預防 由CD44分子所引發之疾病或狀況的藥學組成物,其含有 # 本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物,等,及 一藥理學上可接受的載體。 再者,本發明亦提供本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨 素或其硫酸化物,等於製備可改良、治療或預防由CD44 分子之作用所引發之疾病或狀況的藥學組成物上的用途。 還有,本發明提供改良、治療或預防由CD44分子之 作用所引發之疾病或狀況的方法,其包含將本發明之還原 端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物,等投給實驗對象。 (§: 200536858 (13) 【實施方式】 本發明之製備方法爲一種包含下述步驟(A)的方法 :將在還原端具有一葡醛酸或艾杜糖酸衍生物之糖給予體 (其中係在欲糖基化之還原端羥基團加入一離去基,而其 它羥基團和羧基團爲經保護的)與在末端具有一 N-醯基 半乳糖胺衍生物之糖接受體(其中該欲糖基化之非還原端 羥基團爲游離的,而其它羥基團爲經保護的)在一特殊之 • 路易斯酸型促進劑的存在下進行糖基化反應。 在一種較佳之實施態樣中,本發明之製備方法還包含 步驟(B):將在上述步驟(A)中所取得之寡醣的非還 原端的一個保護基去除;及(C):在上述促進劑之存在 下,將在非一還原端具有游離之羥基團的寡醣與上述之糖 接受體進行糖基化反應;並以所要之1至8次之內的次數 重複進行步驟(B )和(C )。 以下,各步驟係參考顯示本發明之一種實施態樣的反 • 應圖解的第1至5,和11圖來具體描述。第1至5,和 11圖顯示用來取得由5或6個組成用糖所構成之還原端 葡醛酸型硫酸軟骨素之反應的反應圖解,此爲一下述之典 型實例。因此,本發明完全不應受限於這些圖形。吾人需 了解:當欲製備另一種寡糖胺聚糖時需根據靶的寡糖胺聚 糖來適當選擇相對應之糖給予體、糖接受體和保護基。 在如下述之本發明中,基團v烷基〃、、烯基〃、〜 芳烷基〃、 ''烷氧基〃、 ''芳基〃、、亞烷基〃、、醯基 〃和'v醚〃通常分別含有下列數目之碳原子: -16- 200536858 (14) 烷基團:通常爲1至10個,宜爲1至7個,以1至 5個更佳; 烯基團:通常爲2至10個,宜爲1至7個,以1至 5個更佳; 芳烷基團:通常爲6至30個,宜爲7至20個,以6 至1 5個更佳; 烷氧基團:通常爲1至10個,宜爲1至7個,以1 φ 至5個更佳; 芳基團:通常爲5至20個,宜爲6至15個,以6至 1 3個更佳; 亞烷基團:通常爲1至10個,宜爲1至7個,以1 至5個更佳; 醯基團:通常爲1至20個,宜爲1至1〇個,以2至 7個更佳;及 醚:通常爲2至20個,宜爲2至10個,以2至7個 ®更佳。 (A)乙醯胺化之糖給予體和糖接受體的糖基化作用 (A — 1 )糖給予體 如第1和1 1圖所示,本發明所使用之糖給予體可爲 一種在末端處具有葡醛酸或艾杜糖酸衍生物的化合物,其 中係在欲糖基化之還原端羥基團加入一離去基(如第1和 1 1圖中所示之Im ),而其它羥基團和羧基團爲經保護的 (如第1和1 1圖中所示之P2至P6和P6 > )。再者,下 -17- 200536858 (15) 述者爲較佳之糖給予體:一種葡醛酸或艾杜糖酸衍生物, 其中係在欲糖基化之還原端羥基團加入一離去基(如第 11圖中所示之Irn),而其它羥基團和羧基團爲經保護的 (如第11圖中所示之P2至P5# ):或通常由二個至十 個組成用糖所構成之寡醣衍生物,其具有基礎雙醣單位作 爲其基礎組成單位,而該基礎雙醣單位係由一 N-醯基半 乳糖胺衍生物和一葡醛酸或艾杜糖酸衍生物(其中係在欲 φ 糖基化之還原端羥基團加入一離去基(如第1圖中所示之 Im),而其它羥基團和羧基團爲經保護的(如第1圖中所 示之P2至P6和P6 / ))所構成。 經由使用這類由乙醯胺化之組成用糖所構成的糖給予 體可避免在延伸成四個或更多個糖時因乙醯胺化所導致的 低產量的問題。 在用於本發明之糖給予體方面,其它項目並無限制, 且可根據靶的寡糖胺聚糖之類型來選擇糖給予體。 • 例如:當製備寡硫酸軟骨素時,糖給予體可含有下列 者··一種葡醛酸衍生物,其中在組成用糖中欲糖基化之還 原端羥基團被醯亞胺化,而其它羥基團和羧基團爲經保護 的;或者,一種含有基礎雙醣單位作爲其基礎組成單位之 寡醣衍生物,該基礎雙醣單位係由一 N -醯基半乳糖胺衍 生物和一葡醛酸衍生物(其中在組成用糖中欲糖基化之還 原端羥基團被醯亞胺化,而其它羥基團和羧基團爲經保護 的)所構成。 類似地,當製備硫酸皮膚素時,糖給予體可含有下列 -18- 200536858 (16) 者:一種艾杜糖酸衍生物,其中在組成用糖中欲糖基化之 非-還原端羥基團被醯亞胺化,而其它羥基團和羧基團爲 經保護的;或者,一種含有基礎雙醣單位作爲其基礎組成 單位之寡醣衍生物,該基礎雙醣單位係由一 N-醯基半乳 糖胺衍生物和一艾杜糖酸衍生物(其中在組成用糖中欲糖 基化之非一還原端羥基團被醯亞胺化,而其它羥基團和羧 基團爲經保護的)所構成。當製備硫酸角質素時,糖給予 • 體可含有下列者:一種半乳糖衍生物,其中在組成用糖中 欲糖基化之非-還原端羥基團被醯亞胺化,且其它羥基團 和羧基團爲經保護的;或者,一種含有基礎雙醣單位作爲 其基礎組成單位之寡醣衍生物,該基礎雙醣單位係由一 N -醯基半乳糖胺衍生物和一半乳糖衍生物(其中在組成用 糖中欲糖基化之非還原端的羥基團被醯亞胺化,而其它羥 基團和羧基團爲經保護的)所構成。 這些糖給予體之保護基可包含,例如:烷基團,如: • 甲基和乙基;芳烷基團,如:苄基和甲苄基;烷氧苄基團 ,如:對一甲氧苄基;三苯烷基團,如:三苯甲基;烯基 團,如:烯丙基;鹵素;硫烷基團,如:硫甲基;亞烷基 團,如:亞異丙基;隨意地被烷基團或烷氧基團所取代的 亞苄基團,如:亞苄基和亞烷氧苄基,如:對-亞甲氧苄 基;隨意地被烷基團或烷氧基團所取代的亞環己基團;隨 意地被鹵素所取代的醯基團,如:苄醯基、乙醯基和一氯 乙醯基;磺醯基團;或隨意地被烷基團或烷氧基團所取代 的矽烷基或矽烷醚基團。 -19- (§: 200536858 (17) &本發明中,最好能根據靶的化合物來適當地設計保 護S和取代基,以經由透過糖基化反應延伸和選擇性地加 入硫酸根基團,等來取得具有所需構造之化合物。 例I Μ =在欲與稍後加入之糖給予體進行糖基化之位置 處的保護基(如:在第1圖中之Ρ5)宜爲如下群體··隨 意地被鹵素所取代之乙醯基團、烯基團(如··烯丙基)、 醯基團1 '芳烷基團或隨意地被烷基團或烷氧基團所取代的 • 砂院基團(如:三甲矽烷基),而特別合適的爲一氯乙醯 基、對-甲氧苄基或乙醯丙醯基,如此,在糖基化之前, 僅有在所需位置處的保護基可被去除。 另外’爲了使反應經由具有穩定之碳陽離子原酸酯構 造的中間體進行,以取得高產量之所需最終產物,較合適 的爲以電子供給取代基(例如:醯基團)保護在糖給予體 之第2位置處的羥基,特別合適的爲以隨意地被烷基團或 烷氧基團所取代的苄醯基團保護,其中在該原酸酯之共軛 • 系統長,且已形成穩定之陽離子構造:在第1和11圖中 ’在第2位置處之保護基係表示爲Ρ2。隨意地被烷基團 或烷氧基團所取代的苄醯基團可包括苄醯基、甲苄醯基、 乙苄醯基、丙苄醯基、二甲苄醯基、甲氧苄醯基、乙氧苄 醯基和二甲氧苄醯基,等,其中以甲氧苄醯基爲較佳者。 再者’爲了將各Ν-醯基半乳糖胺之第4和第6位置 選擇性地硫酸化,宜以亞苄基、亞烷氧苄基,如:對一亞 甲氧苄基或亞環己基保護:在第1圖中,第4和第6位置 處之保護基係顯示爲Ρ6和Ρ6 /。 -20- ⑧ 200536858 再者,當在整個製備過程中保護一特殊位置時,宜使 用如下群體作爲保護基:烷基團,如:甲基;芳烷基團, 如:苄基和甲苄基;烷芳基團,如:三苯甲基;烷氧苄基 團,如:對一甲氧苄基;烯基團(如:烯丙基);或隨意 地被鹵素所取代的醯基團,如:苄醯基、乙醯基和一氯乙 醯基。這些保護基可藉由本技藝所熟知之任何方法形成。 本發明中所使用之糖給予體(用於製備如下述之還原 φ 端葡醛酸型寡硫酸軟骨素的糖給予體)的較佳實例顯示於 通式(2 )和(2 / )中:
在通式(2 )和(2 / )中,R4和R5爲相同或獨立地 選自如下群體··氫原子、隨意地被鹵素所取代的乙醯基團 、烷基團、烯基團(如··烯丙基)、隨意地被鹵素所取代 的醯基團和酞醯基團,宜選自如下群體:乙醯基、鹵乙醯 基、苄醯基和酞醯基。
Im爲隨意地被鹵素所取代之醯亞胺醯基團’較合適 的爲一選自如下群體旳離去基:三氯乙醯亞胺醯基、三氟 乙醯亞胺醯基和乙醯亞胺醯基。 P2和P3爲相同或獨立地選自如下群體··氫原子、烷 d 200536858 (19) 基團、烯基團(如:烯丙基)、芳烷基團、芳基團和隨意 地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如:三甲矽烷 基),且宜選自如下群體:苄基、烷苄基、三苯烷基和矽 烷基。 P4係選自如下群體:烷基團、烯基團(如··烯丙基) 和芳烷基團,且宜選自如下群體:苄基、烷苄基和鹵烷基 〇 • P5和P5/係選自如下群體:隨意地被烷基團或烷氧 基團所取代的苄基團、烯基團(如:烯丙基)、隨意地被 鹵素所取代的醯基團((如:隨意地被鹵素所取代的乙醯 基)、芳烷基團和隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽 烷基團(如:三甲矽烷基),且宜選自如下群體:一氯乙 醯基、對一甲氧苄基和乙醯丙醯基。 P6和P6 >爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團(如:烯丙基)、芳基團、隨意地被烷基 # 團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如:三甲矽烷基),以 及亞烷基團,且宜選自如下群體:苄基、亞苄基和矽烷基 〇 上述糖給予體之特殊實例可爲甲基-(2-乙醯胺- 4 ,6— Ο —亞苄基一2 —脫氧基一 3 — Ο—乙醯丙醯基一 /3 — D —吡喃半乳糖基)一(1— 4) 一 2,3—二一 Ο — (4一甲 苄醯基)一 1 一 0_三氯乙醯亞胺醯基一 α - D-吡喃葡糖 醛酸酯)和甲基一 2,3—二一 0— (4—甲苄醯基)一 Ιο— 三氯乙 醯亞胺 醯基一 α - D-吡 喃葡糖醛酸酯 ) 。 -22- d: 200536858 (20) 這些糖給予體可根據習知方法取得。例如:這些糖,給 予體可根據 Carbohydrate Research 305 ( 1998) 43-63 ( 其倂爲此文之參考資料)中所描述之方法取得。 (A - 2 )糖接受體 如第1和1 1圖所示,本發明中所使用之糖接受體可 爲在末端具有N -醯基半乳糖胺衍生物之化合物,或者, • 當其係由一個組成用糖所構成時爲一種葡醛酸或艾杜糖酸 衍生物,其中該欲糖基化之非還原端羥基團爲游離的,而 其它羥基團爲經保護的。較合適的爲,這類糖接受體爲下 列者:一種通常由二個至十個組成用糖所構成之寡醣衍生 物,其含有基礎雙醣單位作爲基礎組成單位,此基礎雙醣 單位係由一 N -醯基半乳糖胺衍生物和一葡醛酸或艾杜糖 酸衍生物(其中在組成用糖中欲糖基化之非還原端羥基團 爲游離的,其相當於第1圖中之N一醯基半乳糖胺衍生物 Φ 的第3位置處的羥基團,而其它羥基團和羧基團爲經保護 的,如第1和1 1圖中所示之P 7至P1 1和P1 1 /)所構成 ;或一種葡醛酸或艾杜糖酸衍生物,其中在欲糖基化之非 一還原端羥基團爲游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保 護的,此未顯示在第1和Π圖中。 類似於糖給予體,經由使用由乙醯胺化之組成用糖所 構成的糖接受體可避免在延伸成四個或更多個糖時因乙醯 胺化所導致的低產量的問題。 糖接受體在任何其它項目方面並無限制,且可根據靶 -23-
(S 200536858 (21) 的寡糖胺聚糖之類型來選擇。 例如:當製備寡硫酸軟骨素時,糖接受體可爲下列者 :一種葡醛酸衍生物,其中在組成用糖中欲糖基化之非還 原端羥基團爲游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保護的 ;或含有基礎雙醣單位作爲其基礎組成單位之寡醣衍生物 ,該基礎雙醣單位係由一 N -醯基半乳糖胺衍生物和一葡 醛酸衍生物(其中在組成用糖中欲糖基化之非還原端羥基 • 團爲游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保護的)所構成 〇 類似地,當製備硫酸皮膚素時,糖接受體可爲下列者 :一種艾杜糖酸衍生物,其中在組成用糖中欲糖基化之非 -還原端羥基團爲游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保 護的;或含有基礎雙醣單位作爲其基礎組成單位之寡醣衍 生物,該基礎雙醣單位係由一 N-醯基半乳糖胺衍生物和 一艾杜糖酸衍生物(其中在組成用糖中欲糖基化之非-還 # 原端羥基團爲游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保護的 )所構成。當製備硫酸角質素時,糖接受體可爲下列者: 一種半乳糖衍生物,其中在組成用糖中欲糖基化之非-還 原端羥基團爲游離的,且其它羥基團和羧基團爲經保護的 ;或含有基礎雙醣單位作爲其基礎組成單位之寡醣衍生物 ,該基礎雙醣單位係由一 N-醯基半乳糖胺衍生物和一半 乳糖衍生物(其中在組成用糖中欲糖基化之非還原端羥基 團爲游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保護的)所構成 -24- 200536858 (22) 這些糖接受體之保護基可包括,例如:烷基團,如: 甲基和乙基;芳烷基團,如:苄基;三苯烷基團,如:三 苯甲基;烯基團,如:烯丙基;鹵素;硫烷基團,如:硫 甲基;亞烷基團,如:亞異丙基;隨意地被烷基團或烷氧 基團所取代的亞苄基團,如:亞苄基和亞烷氧苄基,如: 對一亞甲氧苄基;隨意地被烷基團或烷氧基團所取代的亞 環己基團;隨意地被鹵素所取代的醯基團,如:苄醯基; # 和隨意地被鹵素所取代的乙醯基,如:乙醯基和一氯乙醯 基;磺醯基團;隨意地被烷基團或烷氧基團所取代的矽烷 基,如:矽烷醚。 在本發明中,最好能根據靶的化合物,以類似於用於 糖給予體之方式來適當地設計用於糖接受體的保護基和取 代基。 例如:在組成用糖中還原端之異位性碳原子位置處的 羥基團宜以烷氧芳基團,如:對-甲苯基保護之:在第1 ® 和〗1圖中,這類羥基團之保護基係表示爲P7。 類似地,例如:爲了將各N -醯基半乳糖胺之第4和 第6位置選擇性地硫酸化,宜以亞苄基、亞烷氧苄基,如 :對-亞甲氧苄基或亞環己基保護這些位置:在第1和 圖中,在第4和第6位置處之保護基係表示爲P11和 P1 1 ^ 〇 再者,當在整個製備過程中保護一特殊位置時,宜使 用如下群體作爲保護基··烷基團(如··甲基),芳烷基團 (苄基和甲苄基),烷芳基團(如:三苯甲基),烷氧苄 -25- 200536858 (23) 基團(如:對一甲氧苄基),烯基團(如:烯丙基),醯 基團(如:苄醯基),或隨意地被鹵素所取代的乙醯基團 (如:乙醯基或一氯乙醯基)。這些保護基可藉由本技藝 所熟知之任何方法形成。 此處’本發明中所使用之糖接受體(用於製備如下述 之還原端葡醛酸型寡硫酸軟骨素的糖接受體)的較佳實例 顯示於通式(3 )中
、 NReR7 COOP10『Λ势 (3) 在通式(3 )中,R6和R7爲相同或獨立地選自如下 群體:氫原子、烷基團、烯基團(如:烯丙基)、隨意地 被鹵素所取代的醯基團(如:隨意地被鹵素所取代的乙醯 基)和酞醯基團,且宜選自如下群體··乙醯基、鹵乙醯基 φ 、卡醯基和駄醯基。 P7係選自如下群體:烷基團:芳烷基團、烯基團(如 :烯丙基),和芳基團,且宜選自如下群體:苯基、烷苯 基、烷氧苯基、苄基、烷苄基、烷氧苄基、萘基和三苯烷 基。 P8和P9爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團(如:烯丙基)、芳烷基團、芳基團、醯基 團、和隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如 :三甲矽烷基),且宜選自如下群體:苄基、烷苄基、三 苯烷基和矽烷基。
-26- (S 200536858 (24) P 1G係選自如下群體:隨意地被鹵素所取代的烷基 團、烯基團(如:烯丙基)和芳烷基團’且宜選自如下群 體:苄基、烷苄基和鹵烷基。 P11和P11/爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團(如:烯丙基)、芳烷基團、芳基團、隨 意地被烷基團或烷氧基團、烯基團所取代之矽烷基團(如 :三甲矽烷基)以及亞烷基團,且宜選自如下群體:苄基 • 、亞苄基和矽烷基,其包括一種保護基:其中該二個基團 彼此交聯。 上述糖接受體之特殊實例可爲甲基-(2-乙醯胺- 4 ,6— 0 —亞苄基一 2 —脫氧基一点一D—吡喃半乳糖基) 一 (1^4) — [4 一甲氧苯基一 2,3—二一 0_ (4 — 甲苄醯 基)一 ^ — D —卩比喃葡糖酵酸酯和甲基一 2,3 -二一 0-(4 —甲;酿基)一1 一 Ο—二氯乙釀胺酿基一 α — D —卩比 喃葡糖苷]糖醛酸酯。 # 這些糖接受體可根據習知方法取得。例如:這些糖接 受體可根據上述 Carbohydrate Research 305 ( 1 998 ) 43 -63 或 B i ο 〇 r g an i c & M e d i c i n a 1 C h e m i s t ry L e 11 e r s,V ο 1 · 5, No· 1 3,PP· 1 3 5 1 - 1 3 54,1 995 (其倂爲此文之參考資料)中 所描述之方法取得。 (A - 3 )促進劑 如第1和1 1圖所示,本發明中,上述糖給予體係藉 由一作爲促進劑之具有平衡離子的路易斯酸(其可活化糖 -27- 200536858 (25) 給予體之離去基)來與糖接受體進行糖基化反應。 在本發明中,特別適合使用之促進劑爲由下列通式( 1 )所代表者: R2 R1 —Si — Ο — Tf (1 ) R3 在上列之通式(1 )中,R1、R2和R3爲相同或獨立 • 地代表氫原子,或直鏈型或支鏈型烷基團或未經取代之芳 基團,或其氫原子中有至少一個被取代者,且Tf代表三 氟甲磺醯基團。 令人驚訝地,與平常之方法(也就是使用BF3 · OEt2 )相較下,藉由使用上述促進劑可將產量增加20%或更 多。 還有,本發明可合成由五個或更多個組成用糖所構成 之爲乙醯胺型糖鏈的軟骨素型糖鏈,或可轉化成無法以平 ^ 常方法合成之軟骨素型糖鏈的糖鏈。 上述促進劑可包括三氟甲磺酸三甲矽烷酯、三氟甲磺 酸三乙矽烷酯、三氟甲磺酸三丙矽烷酯、三氟甲磺酸二甲 基乙矽烷酯、三氟甲磺酸三苄矽烷酯、三氟甲磺酸三萘矽 烷酯或三氟甲磺酸三苄基甲矽烷酯。 在本發明中,以產量而言,特佳之促進劑爲其中R1 、R2和R3爲氫原子,或直鏈型或支鏈型烷基團之由上述 通式(1)所代表者。由於三氟甲磺酸三甲矽烷酯( TMSOTf)較容易取得,因此通常係使用其作爲促進齊ϋ。
-28- (S 200536858 (26) 本發明中之糖基化反應通常係在- 4〇至40°C/之溫度 範圍內進行1 2至4 8小時。另外,宜使用一捕捉物質(如 :分子篩)來去除系統中之,如:水和鹵化氫酸。 (B)去除組成用糖中欲糖基化之還原端位置處的保護基 在本發明之製備方法中,當進一步延伸寡糖時,於延 伸反應(其將描述於(C)部分)前,先將在上述(A) • 之方法中所取得之寡糖在欲糖基化位置處的保護基(如: 第1圖中之P5)去除(如:第2圖中所示者)。 去除步驟可根據欲糖基化之位置處的保護基(P5)和 其它保護基(P2至P4和P6至P11’)來選擇合適的去除 反應。 例如:當使用乙醯丙醯基、一氯乙醯基,等作爲欲糖 基化之位置處的保護基時,可先將在步驟(A)中所取得 的寡醣溶解在有機溶劑,如:乙醇/甲苯之混合溶液中, # 然後將靶的保護基與,如:醋酸肼反應來去除此靶的保護 基。 通常,去除反應係在0至60 °C之溫度範圍內進行0.5 至5小時。另外,爲了分離出高產量和高純度的靶的寡醣 (其中已去除保護基),通常在反應後將溶劑蒸發掉,並 藉由凝膠過濾法,等來純化殘質。 (C )延伸反應 如第3圖中所示,根據本發明之一種實施態樣,具有 -29- (S: 200536858 (27) 五個或更多個組成用糖之寡糖胺聚糖可藉由將已在上述步 驟(B)中除去欲糖基化位置處之保護基(5)的寡醣,在 與步驟(A )中相同之促進劑的存在下,以與步驟(A ) 中相同的糖給予體進一步糖基化來製備。 本發明中,由於在本步驟中係使用與步驟(A )相同 的促進劑和糖給予體,因此可以化學合成方法製得高產量 之由五個或更多個組成用糖所構成之具有預定鏈長的寡糖 • 胺聚糖。 基本上,此步驟之不同條件與步驟(A)中所描述者 相同。 在本發明的一種實施態樣中,經由以所要之1至8次 之內的次數重複進行上述之保護基去除步驟(B)及此延 伸步驟(C)可製備出由五個或更多個組成用糖所構成之 具有預定鏈長的寡糖胺聚糖。本發明中,必須做的爲決定 此反應循環的次數以控制靶的寡糖胺聚糖之鏈長。因此, • 終止反應並非必須的。另外,僅有具有所需鏈長的寡糖胺 聚糖可容易取得。然而,爲了維持高產量並有效製備所需 之寡糖胺聚糖,宜將保護基去除步驟(B)及延伸步驟( C)重複進行1至6次,以重複進行1至5次更佳,以重 複進行1至4次更佳。 (D)所有保護基的去除和選擇性的硫酸化作用 在上述步驟(A)或(C)之後’本發明的製備方法 還可包括下列步驟:去除在這些步驟中所取得之寡醣的所 -30- 200536858 (28) 有保護基(如:第1圖中之P2至P1 1 / )的步驟(如: 第4圖中所示)·,或去除在上述步驟(A)或步驟(C) 中所取得之寡醣的所有保護基(如:第1圖中之P2至 Ρ Π /)的步驟及選擇性地將各組成用糖之特殊位置進行 硫酸化作用的步驟:例如··第5和第1 1圖代表硫酸鈉結 合至在第4和第6位置上的羥基團。 去除在上述步驟(A)或步驟(C)中所取得之寡醣 • 的保護基的步驟可利用習知方法來進行,且最好根據上述 保護基的種類藉由合適之反應程序來去除保護基。 例如:當保護基爲乙醯丙醯基時,可先將在步驟(A )或步驟(C )中所取得的寡醣溶解在有機溶劑,如:乙 醇/甲苯之混合溶液中,然後將靶的保護基與,如:醋酸 肼反應來去除此靶的保護基。當保護基爲亞苄基、亞烷氧 苄基或亞環己基時,可先將在步驟(A)或步驟(C)中 所取得的寡醣溶解,再去除保護基,或者,將寡醣在二氯 • 甲烷/甲醇,等之混合溶液中再進行一附加的保護基去除 步驟,然後,以一種酸,如:樟腦磺酸、醋酸或氫氯酸將 其水解。 醯基團,如:乙醯基和苄醯基可利用鹼,如:氫氧化 鋰和氫氧化鈉,在一種溶劑,如:水溶性四氫呋喃中進行 水解來去除。 爲了去除在步驟(A)或步驟(C)中所取得之寡醣 的所有保護基並選擇性地將在各組成用糖中之特殊位置處 的羥基團硫酸化,最好能經由選擇性地僅將在欲硫酸化之 -31 - (S: 200536858 (29) 位置處的保護基去除來進行硫酸化作用,而其它羥基團爲 經保護的。 具體地說,爲了選擇性地將各N -醯基半乳糖胺的第 4和第6位置硫酸化,上述步驟(A )或步驟(A )至(C )的過程可,如:使用其中在各N—醯基半乳糖胺中之第 4和第6位置被至少任一種如下群體之保護基所保護的糖 給予體和糖接受體:亞苄基、亞烷氧苄基和亞環己基,且 φ 各葡醛酸衍生物的所有其它羥基團和羧基團均被烷基團或 醯基團所保護。 接著,當在步驟(A)或步驟(C)中所取得之寡醣 的非還原端的組成用糖爲N-醯基半乳糖胺時,除了第4 和第6位置外的羥基團係被三甲基乙醯基所取代。 例如:當以三甲基乙醯基取代保護基(如:乙醯丙醯 基)時,先將寡醣溶解在有機溶劑,如:乙醇/甲苯之混 合溶液中,再將具有保護基(如:乙醯丙醯基)之寡醣與 # ,如:醋酸肼反應來去除保護基(如:乙醯丙醯基),然 後,將所產生之化合物溶解在,如:吡啶中,再將其與三 甲基乙醯氯在一種催化劑(如:N,N —二甲胺基吡啶) 之存在下進行反應。 接著,將三甲基乙醯基化之寡醣的亞苄基、亞烷氧苄 基及/或亞環己基去除,以將N-醯基半乳糖胺在第4和 第6位置處選擇性地去保護。 例如··去除亞苄基之步驟可經由先將欲硫酸化之寡醣 溶解在二氯甲烷/甲醇,等之混合溶液中,再以一種酸, -32- (§: 200536858 (30) 如:樟腦磺酸、醋酸和氫氯酸將其水解來進行1 ° 硫酸化作用可藉由將,如:在N -醯基半乳糖胺組成 用糖之所需位置(如:如上述之第4和第6位置)處去保 護的靶的寡醣溶解在一種溶劑,如:二甲基甲醛中,然後 將寡醣與,如:三氧化硫-三甲胺複合物反應來進行。此 反應係在〇至100°C之溫度範圍內進行,反應時間通常爲 1 2至7 2小時。 • 其它保護基去除步驟的內容類似於上述者。爲了分離 出高產量和高純度之靶的寡醣,最好能在各步驟結束之後 將溶劑蒸發去除,並將殘質藉由,如:凝膠過濾法純化。 (E )中間體 接著說明藉由上述方法所取得之寡糖胺聚糖的獨特中 間體。 本發明之中間體的一種實施態樣係由通式(4 /)代 表
(S -33- 200536858 (31)
其中係選自如下群體:烷基團、烯基團、芳烷基 團和芳基團,且宜選自如下群體··苯基、甲苯基、乙苯基 、丙苯基、二甲苯基、甲氧苯基、乙氧苯基和二甲氧苄醯 基; P3係選自如下群體:氫原子、烷基團、烯基團(如: 烯丙基)、芳烷基團、芳基團及隨意地被烷基團或烷氧基 團所取代之矽烷基團(如:三甲矽烷基); P4係選自如下群體:烷基團、烯基團(如:烯丙基) 和芳烷基團; P11和爲相同或係獨立地選自如下群體:氫原子 、烷基團、烯基團(如:烯丙基)、芳烷基團、芳基團、 隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如:三甲 矽烷基)以及亞烷基團,並包括一種其中其二個基團交聯 的情況;且 G1係選自如下群體:氫原子、烷基團、芳烷基團、 (S: -34- 200536858 (32) 烯基團(如:烯丙基)、芳基團及由下列通式(4 一 1)所 代表基: (4-1)
其中m爲0至4之整數; R6和R7爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團(如:烯丙基)、醯基團和酞醯基團; P8和P9爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團(如:烯丙基)、芳烷基團、芳基團、醯基 團和隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如: φ 三甲矽烷基); P1()係選自如下群體:烷基團、烯基團(如:烯丙基 )和芳烷基團; P11和P11/爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團(如:烯丙基)、芳烷基團、芳基團、隨 意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如··三甲矽 烷基)以及亞烷基團,並包括一種其中其二個基團交聯的 情況;且 G1 /係選自如下群體:氫原子、烷基團、烯基團(如 -35- 200536858 (33) :烯丙基)、芳烷基團、芳基團及由下列通式(4 一 1,) 所代表之基: (4-1')
其中p7係選自如下群體:烷基團、芳烷基團、烯基 團(如:儲丙基)和芳基團; P8和P9爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團(如··烯丙基)、芳烷基團、芳基團、醯基 團和隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如: 三甲矽烷基);且 P1()係選自如下群體:烷基團、烯基團(如:烯丙基 )和芳烷基團;且 G2係選自如下群體:氫原子、烯基團(如:烯丙基 •)、醯基團、芳烷基團、隨意地被烷基團或烷氧基團所取 代之矽烷基團(如:三甲矽烷基)及由下列通式(4 一 2) 所代表之基:
其中λ爲0至4之整數; •36-
(S 200536858 R4和R5爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團(如:烯丙基)、醯基團和酞醯基團; P2和P3爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團(如:烯丙基)、芳烷基團、芳基團、和隨 意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如:三甲矽 烷基); P4係選自如下群體:烷基團、烯基團(如:烯丙基) φ 和芳烷基團; P6和P6 >爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團(如:烯丙基)、芳烷基團、芳基團、隨 意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如:三甲矽 烷基)以及亞烷基團;且 〇2>係選自如下群體:氫原子、烯基團(如:烯丙基 )、醯基團、芳烷基團、隨意地被烷基團或烷氧基團所取 代之矽烷基團(如:三甲矽烷基)及由下列通式(4 一 2/ •)所代表之基:
nr4r5 其中R4和R5爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子 、烷基團、烯基團(如:烯丙基)、醯基團和酞醯基團; P5係選自如下群體:烯基團(如:烯丙基)、醯基團 -37- 200536858 (35) 、芳烷基團和隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基 團(如:三甲矽烷基):且 P6和P6 >爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 院基團、儲基團(如:嫌丙基)、芳院基團、芳基團、隨 意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團(如:三甲矽 烷基)以及亞烷基團。 該中間體爲一種藉由路易斯酸之平衡離子穩定的原酸 φ 酯型陽離子中間體,及一種其中該原酸酯型陽離子中間體 還結合其它給予體或接受體之乙醯胺基團中的氧原子的中 間體。 這些中間體由於具有穩定的原酸酯構造,因而可令吾 人以高度立體選擇方式製備出高產量和高純度之所需的寡 糖胺聚糖及其類似物。 (F)新穎之寡糖胺聚糖 接著說明可藉由上述之化學合成方法取得之本發明的 新穎寡糖胺聚糖。 本發明之新穎寡糖胺聚糖關於還原端葡醛酸型軟骨素 或其硫酸化物,等,且由下列通式(4 )代表z
200536858 (36) η爲2至10之整數; R8代表氧原子’或保護基; R9至R11爲相同或獨立地分別代表氫原子,或保護基 R12和R13爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團(如:烯丙基)、隨意地被鹵素所取代的 醯基團和酞醯基團,且宜分別選自如下群體:乙醯基、鹵 φ 乙醯基、苄醯基和酞醯基; R14和R15爲相同或獨立地代表氫原子,或其中該氫 原子隨意地被選自如下群體之任一員所取代的硫酸根基團 或磷酸根基團:鈉、鉀、銅、鈣、鐵、錳、鋅、銨、鋇和 鋰;且 R16代表氫原子、保護基,或由下列通式(5 )所代表 之葡醛酸或艾杜糖酸衍生物: COOR19
R170 其中R17、R18,和R19與上述通式(4)之R9至R11 相同,且R2G與上述通式(4 )之R9相同。 在本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物等 物中,上述通式(4 )中由R8、R9至R1 1和R16所代表的 保護基並無限制,且該保護基可包括,如:甲氧苯基。 再者’以去除CD44之引發能力(如下述)而言,較 200536858 (37) 合適的爲,上述通式(4)之R14和R15至少有一爲硫酸 根基團,且特別合適的爲,R14和R15二者均爲硫酸根基 在由通式(4)所代表之還原端葡醛酸型軟骨素的鹽 ,或還原端葡醛酸型硫酸寡軟骨素或其衍生物方面,其金 屬鹽爲較佳者,尤其以其鉀和鈉鹽較佳。 如上述,本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸 φ 化物,等在還原端總具有一葡醛酸或其衍生物,因此,其 具有無法藉由酶裂解方法取得之特殊構造。再者,本發明 之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物,等無脂質、蛋 白質,等(其爲活體內之其它成分)之污染。本發明之還 原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物與那些藉由酶裂解方 法所取得者之不同之處還有:其僅可具有一種特殊鏈長。 再者,由本發明之製備方法可首次產生無法藉由習知 化學合成方法來取得之由五個或更多個組成用糖所構成之 • 寡軟骨素或其硫酸化物。因此,新穎之寡軟骨素或其硫酸 化物對本領域之硏究者有極大貢獻。 接著說明本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸 化物等的醫學應用。 本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸化物等在 去除CD44之引發能力方面具有高生理活性。 因此,其可作爲用來改良、治療或預防由CD44分子 所引發之疾病或狀況的活性成分。 具體地說,本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫 -40- 200536858 (38) 酸化物等本身可作爲用來改良、治療或預防經由CD44分 子之參與所引發之疾病或狀況的藥品。當然,根據本發明 亦可提供含有本發明之還原端葡醛酸型寡軟骨素或其硫酸 化物等和藥理學上可接受之載體的藥學組成物。 本發明之藥品可廣泛應用在經由CD44分子之參戶斤 引發的疾病或狀況中,且,具體地說,其可用來改良、治 療或預防,如:自體免疫疾病,如:慢性關節風濕病、系 Φ 統性紅斑性狼瘡、多發性硬化、謝格倫(Shogren )症候 群、橋本氏病、愛迪生氏病和第I型糖尿病;例如:關節 炎,如··骨關節炎、牛皮癬性關節炎、腰痛、肱膊關節周 圍炎、顳骨與下頜之關節病或腱鞘炎;例如:過敏性疾病 ,如:過敏性鼻炎、花粉熱、暈厥、蓴麻疹、異位性皮膚 炎或支氣管性氣喘,或癌症;或用於免疫調節,或用於誘 導細胞分化或細胞凋亡。 如下列實例所示,尤其是上述在N -醯基半乳糖胺之 # 第4和第6位置處硫酸化的寡硫酸軟骨素對CD44分子具 有巨大的去除引發能力,因此,其在上述應用中之醫療效 果極佳。 本發明之藥學組成物在投服和劑型方面並無特別限制 。因此,其可根據投服型式,如:口服、透皮、吸附和注 射(其包括肌肉內投服、皮內投服、皮下投服、靜脈內投 服、腔內投服、給至眼內和腹膜內注射)來製備。劑型可 包括注射劑、膠囊劑、顆粒劑、粉末藥品、錠劑、液態藥 品、脂粒劑、油膏劑、凝膠劑、噴霧劑、吸入粉末藥品、 -41 - ⑧ 200536858 (39) 眼睛淸洗劑和眼油膏劑。通常,用於成人之劑量爲每日 0.1至1000毫克,但其可根據患者之體重、狀况,等而適 當地變化。本發明之藥學組成物可含有其它一般成分,如 :賦形劑、結合劑、潤滑劑、染色劑、甜味劑和崩散劑。 再者,亦可包含其它自體免疫病治療劑、關節炎治療劑、 過敏性疾病治療劑、免疫調節劑、細胞分化誘導劑或細胞 凋亡誘導劑作爲活性成分。 以下說明本發明之實例以詳細解釋本發明。然而,本 發明完全不應受限於下列實例。 在下示之實例中,在各步驟中之處理和各步驟中所取 得之化合物的分析均根據下列條件。 (1 )旋轉角度 以 HORITA SEPA — 200 在 22±3°C 測量。
φ ( 2 ) ]H NMR 以JEOL ECP在5 00 MHz測量。使用Me4Si作爲內部 標準:t—BuOH=1.23 ppm,對重水。在化學位移方面, 如:與糖殘質3之C一 1結合的質子以表示。 (3 )矽膠色層分析法 在矽膠方面,使用來自和光純化學公司之矽膠C -200和C— 300,及來自坎多(Kant0)化學公司之矽膠 60N (中性,球形,40至1 〇〇微米)。在凝膠過濾法之載 -42- 200536858 (40) 體方面’使用來自乂默森(Amersham)生物科學 交聯葡聚糖LH— 20和LH — 60。 (4)分子篩(MS) 在分子筛方面,使用來自GL科學公司之分子歸,先 將其在減低之壓力下,於1 8 0 °C乾燥後才使用。 • ( 5 )薄層色層分析法 使用來自默克公司之砂膠F254,並使用甲苯/醋酸乙 酯或醋酸乙酯/甲醇溶劑。 實例1 :由6個組成用糖所構成之還原端葡醛酸型寡硫酸 軟骨素的合成方法冷一 D_GalNAc— (1— [4] — /3 — D — GlcA— (1—3) — /3— D— GalNAc — (1->) 24) — 冷 一 d 一 GlcA — (1—〇MP(20)或;?一 D — GalNAc ( 4,6 —二
# 一 〇S3Na ) — ( 1— [4]-冷一D— GlcA — 3 ) — /? 一 D 一 GlaNAc(4,6 -二—〇S3Na) — (1— )24) 一 β — Ό 一 GlcA— ( 1— ΟΜΡ ( 21 )之製備方法 此實例之反應過程參考顯示其大綱之第6- 1和6- 2 圖具體描述於下。 (A)由四個組成用糖所構成之還原端葡醛酸型寡軟骨素 的合成方法 (A — 1)糖給予體之製備方法 -43- d: 200536858 (41) 在第6— 1圖中由式(10)所代表之由二個組成用糖 所構成的化合物已爲人所熟知,並可根據J. Tamura et al·,Carbohy dr. Res·,305,and 43-63 ( 1998)中戶斤描述之 方法製備。簡單地說,此化合物係經由將由單一糖所構成 之糖給予體和由單一糖所構成之糖接受體糖基化,再將所 產生之化合物的保護基醯亞胺化來取得。 將由式(1 0 )所代表之由二個組成用糖所構成的化合 • 物(172.7毫克,0.184毫莫耳)溶解在乙腈(CH3CN,8 毫升)和水(2毫升)的混合溶液中,將硝酸鈽(IV)二 銨(CAN,500毫克)加入其中,並將溶液攪動1小時。 反應結束後,以氯仿(CHC13 )和飽和之生理食鹽水 溶液稀釋反應溶液。以飽和之生理食鹽水溶液淸洗有機層 ,在無水硫酸鎂上乾燥,將其過濾後,在減低之壓力下將 溶劑蒸發。藉由矽膠管柱色層分析法(矽膠60N,球形, 中性,10克,甲苯/醋酸乙酯 3:2至1:5,或醋酸乙 # 酯/甲醇 50:1)來純化殘質,如此,可取得一種半縮 醛化合物(125.7毫克)。 接著,以二氯甲烷(CH2C12,5毫升)稀釋所得之半 縮醛化合物。將三氯乙腈(CC13CN,0.5毫升)加入其中 ,再在〇°C下,一邊攪動一邊加入1,8 -二氮雜二環 [5.4.0]十一碳一 7—烯(1滴)。30分鐘後,在室溫下, 將CC13CN (0.2毫升)加入其中,並再持續攪動10分鐘 。藉由矽膠管柱色層分析法(C-200,30克,甲苯/醋 酸乙酯2 : 1至1 : 5 0 )來純化反應溶液,可取得式(1 1 ,44 _ ⑧ 200536858 (42) )之雙醣化合物(131.1毫克),產量73%。( Rf値: 〇 · 5 8 (醋酸乙酯/甲醇10:1))。將此化合物作爲糖給 予體’以用於糖基化反應’無需任何更進一步之純化。 (A - 2)糖接受體之製備方法 在第6— 1圖中由式(12)所代表之由二個組成用糖 所構成的化合物已爲人所熟知,並可根據J. Tamura et φ al·,Carbohydr. Res·,3 05,43 -63 ( 1 998 )中所描述之方法 製備。簡單地說,此化合物係經由將由單一糖所構成之糖 給予體和由單一糖所構成之糖接受體糖基化,再進行去保 護來取得。 (A — 3)四醣之合成方法:式(13)之化合物 將乾燥之分子篩 AW300(MSAW300(5克))加入 如上述由式(11)所代表之糖給予體(1.18克,1.21毫 • 莫耳)和由式(12)所代表之糖接受體(858.6毫克, 1·〇2毫莫耳)的CH2C12 ( 43毫升)溶液中,並將溶液在 室溫中攪動1小時。將溶液冷卻至- 20 °C,並在攪動下, 將三氟甲磺酸三甲矽烷酯(TMSOTf,213微升,1.18毫 莫耳)加入其中。將反應溶液之溫度慢慢提高至室溫,一 天之後,將三乙胺和飽和之碳酸氫鈉溶液加入反應溶液中 ,並以CHC13稀釋此溶液。 濾出不溶物,以飽和之生理食鹽水溶液淸洗有機層, 並在無水硫酸鎂上乾燥及過濾後,將溶劑在減低之壓力下 -45- ⑧ 200536858 (43) 蒸發。藉由凝膠過濾法(LH — 20,CHC13 /甲醇 1:1) 和矽膠管柱色層分析法(C 一 200,30克,甲苯/醋酸乙 酯 2 : 1至1 : 2 )來純化殘質,如此,可取得式(13 ) 之化合物(1.20克,71 % )。物理性質與 Tamura et al·,Carbohydr. Res·,3 05,43 -63 ( 1 998 )]中所示之數據 相符。 φ (Β)移除四醣,式(13)之化合物的乙醯丙醯基團 將醋酸肼(40.0毫克,43 4微莫耳)加入依上述方法 取得之由式(1 3 )所代表之由四個組成用糖所構成的化合 物(71.8毫克,43.3微莫耳)的乙醇/甲苯 5:1溶液( 5毫升)中,並將溶液在室溫中攪動20分鐘。將溶劑在 減低之壓力下蒸發,並藉由凝膠過濾法(LH - 20,CHC13 /甲醇1 : 1 )來純化殘質,以取得具有下列物理性質之 式(14)的化合物,產量92% (62.0毫克)。 物理性質 (1) Rf:0.32(醋酸乙酸/甲醇 4〇 :i) (2) 〔 a〕D+ 13。( C 0.43,CHC13 ) (3 )元素分析 a) 計算出之數値:(C83H86N2〇28· h20) C,63.18 ;Η, 5_63; N, 1.78 b) 觀察値:C,62.90 ; Η,5.52 ; N,1.71 c) !Η NMR 數據(CDC13) : (5 7.89 — 7.8 1 ( 8H,m -46 - ⑧ 200536858 (44) ,A r ) ,7.48 - 7.47 (2H,m ,A r ), 7.36 - 7.27 (8H ,m ,A r ) ,7.19 — 7. 1 3 (6H,m ,A r ), 7.10- 7.06 (2H ? m ,Ar ) ,6.89- 6.87 (2H,m ,A r ), 6.75 - 6.73 (2H » m ,Ar ) ,5.73 ( 1H, bt,J= 8 .87Hz, H — 3 1 ) ,5 .61 ( 1H ,dd, J2,3 = 5·27,J 3,4 = 8.02Hz ^ H — 33 ) » 5.54 (1H ,d ,J2,nh = 7·79Ηζ,NH4 ) ,5·49 ( 1H,dd,Ji,2= 6·68, J2,3 = 8.942Hz » H- 21 ) ,5.49(lH,s,PhCH) » 5.44 ( 1H,d,J2,NH = 6· 1 8,NH2 ) ,5.3 1 ( 1H,s,PhCH) ’
5.22 ( 1H,t,Ji,2 = 5.27Hz > H— 23) ,5.18 ( 1H,d,H -11) » 5.17 ( 1H » d » Ji,2= 8.24Hz » H- 14) ,5.02( 1H,d,H— 13) ,4.68 ( 1H,dd,J2,3 = 1 1.00,J3,4 = 3.67Hz,H— 34) ,4.64 ( 1H,brt,J= 10·08Ηζ,H - 43
), 4.53 ( 1H ,brt,J = 8.83H z,H -41 ), 4.29 (1H ,s ,H - -44 ) ,4.28 ( 1H ,d ,J 1,2 = 10.3 1 Hz, H - 12 ) , 4.25 (1H,d, j 4,5 ~ 10· 3 1H z, H - 53 ) ,4.22 ( 1 H,d J4,5 = :9.16Hz, H — 5 1 ) ,3 . 85 (1H » m » H - 6a4 ) ,3. 84 (1H ,brs , H -42),: 5.78 (1 H, m » H —6a 2 ), 3.75 ( 1H, m , H — 22 ) , 3. 7 4, 3 . .72, 3.72 (3Hx3 , 3s, 2 COOMe,MeOPh ) ,3.69 ( 1H » m » H — 6b4 ) ,3. 52 ( 1 H ,m ,H - 6a2) ,3.34 ( 1H 5 m l,H -32 ) 丨,: 1.25 ( 1H, m ,H - -24 ) ,3 .03 ( 1H, s » H — 54 ) ,2· 68 ( 1H, s,H — 52 ) ,2.37,2 • 35,2.34 ,2 • 30 (3Hx4 , 4s, 4 Me Ph ) 1.91 (3H,s, MeCO ), 1.7 1( 3H, s,W [eCO )° 200536858 (45) (C)藉由延伸反應合成六醣,式(a)之化合物 將MSAW300(700毫克)加入第6— 1圖中之式(11 )所代表的化合物(144.3毫克,0.148毫莫耳)和式( 14)所代表之化合物(160.6毫克,0.103毫莫耳)的 CH2C12 ( 7毫升)溶液中,並將溶液在室溫中攪動1小時 。將溶液冷卻至一 20°C,並在攪動下,將TMSOTf ( 19微 升,〇. 1 1毫莫耳)加入其中。將反應溶液之溫度慢慢提高 • 至室溫,一天之後,將三乙胺和飽和之碳酸氫鈉溶液加入 此反應溶液中,並以CHC13稀釋此溶液。 濾出不溶物,以飽和之生理食鹽水溶液淸洗有機層, 並在無水硫酸鎂上乾燥及過濾後,將溶劑在減低之壓力下 蒸發。藉由凝膠過濾法(LH — 60,CHC13 /甲醇 1:1) 和矽膠管柱色層分析法(C 一 3 00,6克,甲苯/醋酸乙酯 1 : 1至1 : 1.5,醋酸乙酯/甲醇100 : 1 )來純化殘質, 以取得式(9)之化合物(161.4毫克,66%),其具有下 φ列物理性質。 物理性質 (1) 1^:0.42(醋酸乙酸/甲醇 40:1). (2) 〔a〕D+24o(C0.56,CHCl3) (3 )元素分析 a )計算出數値:(C126H13iN3 043 · 2H20 ) C,62.75 ;Η, 5.65; N, 1.74 b)觀察値:C,62·89; Η,5.52; N,1.72% -48- 200536858 (46) c )】H NMR 數據(CDC13) ·· 57.96(2H,d,J - 8.02Hz,Ar ) ,7.91—7.88 ( 3H,m,Ar ) ,7.85 ( 7.80 (6H,m,Ar ) ,7 · 6 2 ( 1 H,J = 7 · 3 3 H z,Ar ) ,7.48 ( 1H,d,J二 6.41Hz,Ar) ,7.38— 7.35 (2H,m,Ar), 7.32— 7.21( 17H,m,Ar) ,7.18— 713(5H,m,Ar) ,7.06 ( 2H,d,J = 8·02Ηζ,Ar ) ,6 · 9 0 - 6 · 8 6 ( 2 H,m ,Ar) ,6.76— 6.73 (2H,m,Ar) ,5.73(lH,t,J2,3 • =J3,4=8.93Hz,H— 31) ,5.67( lH,s,PhCH) » 5.60 —5.56(2H,m,H— 33,35) ,5.49(lH,s,PhCH), 5.48 ( 1H,dd,Ji j2 = 7.33Hz » H - 21 ) ,5.46 ( 1H,d, J2,nh = 7·56Ηζ,NH6 ) ,5.26 ( 1H,s’ PhCH ) ,5.17 ( lH,m,H-23) ,5.17(2H,d,H— 11,16) » 5.04 - 4·98 (3H,m,H-13,15,25) ,4.83 ( 1H,dd,J3,4 = 7.56,J4,5=10.54Hz,H— 45) ,4.65(2H,m,H-43,
36) ,4.62 ( 1H,d,J 2,N H = 8 · 7 1 Η z,NH4 ) ,4.5 1 ( 1H • ,brt,J = 9.05Hz,H — 41 ) ,4.46 ( 1H,d,J3,4 二 3.44Hz,H— 44) ,4.34 ( 1H,dd,J 3,4 < 5 · 5 Η z,H - 4 6 ),4.32 ( 1H,d,J4,5 = 10.77Hz,H-55) ,4·30(1Η, dd,J2,3 = 10.31,J3,4=3.36Hz,H— 32) ,4.23 ( 1H,d ,J4,5=9.85Hz,H— 53) ,4.20 ( 1H,d,J4,5=9.17Hz, H— 51) » 4.14(1H» d» J1j2=8.71Hz^ H-12) » 4.04 ( lH,bt,J=9.91Hz,H-22) ,3.91(2H,d,J = 12.15Hz,H-6a2,6a4) ,3.88(lH,d,H— 42) » 3.87 (lH,m,H— 34) ,3.86(lH,m,NH2) ,3·83(1Η, -49- 200536858 (47) d,Jgem 二 6·65Ηζ,Η - 6a6 ) ,3 · 7 5 — 3 · 6 6 ( 2 Η,m ’ Η — 14,24) ,3.72(lH,m,H— 6b4) ,3.72,3.71,3.65 (3Hx4,3s,3 COOMe,MeOPh) ’ 3.69 (1H,m’ H -6b6) ,3·53 ( 1H,d,Jg e m = 8 · 2 5 Hz,H — 6 b 2 ) ’ 3.24 ( lH,m,H-26) ,2.97(lH,s,H— 56) ,2.78(lH,s ,H - 54) ,2.70—2.41 (4H,m,2CH2) ,2.52(lH,s
,H— 52) ,2.43,2.40 » 2.38 > 2.37,2.34,2.30 ( 18H _ ,6s,6 MePh ) ,2.03 ( 3H,s,COCH3 ) ,1.80,1 .77, 1.72 ( 3Hx3,3s,3 NAc )。 (D)去除六醣,式(9)之化合物的乙醯丙醯基團 如第6 - 2圖所示,將醋酸肼(12.6毫克,28·2毫莫 耳)加入由式(9)所代表之化合物(30.8毫克,13.0微 莫耳)的乙醇/甲苯 4:1溶液(2.5毫升)中,並將溶 液在室溫中攪動1小時。將溶劑在減低之壓力下蒸發,並 • 藉由凝膠過濾法(LH— 20,CHC13 /甲醇 1:1)來純化 殘質,以取得具有下列物理性質之式(1 5 )的化合物( 29.9毫克)。 物理性質 (1 ) Rf : 0.43 (醋酸乙酸/甲醇10:1) (2) 〔 a〕d+ 19。( C 0.68,CHC13 ) (3 )元素分析 a )計算出之數値:(C121H3〇4N3〇41Na,[M + Na]) -50- 200536858 (48) 2298.77 b )觀察値:2298.94 c ) NMR 數據(CDC13) : δ 7.91 - 7.79 ( 12H » m ,Ar) ,7.54(2H,d,J=7.11Hz,Ar) ,7.45— 7.44 ( 2H,m,Ar) ,7.37—7.28 ( 12H,m,Ar) ,7.23— 7.12 (9H,m,Ar ) ,7 · 0 6 ( 2 H,d,J = 8.2 5 H z,Ar ) ,6.89 -6.87(2H,m,Ar) ,6.75-6.74 (2H,m,Ar) » 5.72
(1H,bt,J = 8.82Hz » H— 31) ,5.60 ( 1H,dd,J2,3 = 3.90,J3,4=7.55Hz,H— 35) ,5.58 ( 1H,dd,J2,3 = 6.18,J3,4 = 8.24Hz,33 ) ,5.56 ( 1H,s,PhCH ) ,5.48 (1H,dd,Ji,2 = 7.10 » J2,3=8.94Hz,H— 21) ,5.44 ( 1H,s,PhCH) ,5.40 ( 1H,d,J 2,N H = 6 · 6 3 Η z,NH6 )
,5.33 ( 1H,s,PhCH ) ,5.20 ( 1H,bt,J=5.83Hz,H -23 ) » 5.17 ( 1H » d » Ji,2= 8.25Hz » H- 16) ,5.16( 1H,d,H - 1 1 ) ,5.08 ( 1H,bt,J = 4.0 1Hz > H— 25) ,5.00 ( 1H,d,Ji,2= 4.12Hz » H — 15) ,4.96 ( 1H,d,
Ji,2= 5.73Hz,H— 13) ,4.92 ( 1H,d,J 2,N H = 6 · 8 8 H z,
NH2 ) ,4.75 ( 1H,d,J2,NH = 8·70Ηζ,NH4 ) ,4.73 ( 1H ,dd,J4,5=10.54Hz,H— 45) ,4.69 ( 1H,d,Jj,2 = 8.48Hz,H— 14) ,4 · 6 3 ( 1 H,d d,J 2,3 二 1 1 · 〇 〇,J3,4 = 3.44Hz > H— 36) ,4.60 ( 1H,dd,J4,5 = 8 · 02Hz,H — 43 ),4.50(lH,brt,J=8.82Hz,H-41) ,4.31(lH,d ,J3,4=4.12Hz,H-44) ,4.29(lH,d,H— 55) » 4.22 (1H,d,H— 46) ,4·19(2Η,d,J=9.39Hz,H— 51, -51 -
(S 200536858 (49)
53) » 4.13 ( 1H^ d» Jif2=8.48Hz^ H-12) ,4.04(1H ,m,H— 34) ,3.89 ( 1H,d,Jgem = 12·38Ηζ,H-6a4) ,3.86(lH,d,Jgem=12.61Hz,H— 6a2) ,3·84(1Η, d * Jgem~ 11.45Hz j H — 6a6) ’ 3·84 ( 1H ’ d ’ J3,4 = 3.66Hz,H— 42) ,3.75(lH,m,H-22) ,3.73 ,3.70 ,3·65 ( 3Hx4,3s,3 COOMe,MePh) ,3.65 ( 2H , m, H — 6b4,6b6) ,3.54(lH,d,H-6b2) ,3.54(lH,m
,H— 24) ,3.23(lH,ddd,H-26) ,3.15(lH,m,H — 32) ,2.96( lH,s,H— 56) ,2.82(lH,s,H-54) ,2.59 ( 1H,s,H — 52 ) ,2 · 4 0,2 · 3 8,2 · 3 7,2 · 3 5, 2·34,2·30 ( 3Hx6,6s,6 MePh ) ,1.85» 1.70,1.66 ( 3Hx3,3s,3NAc )。 (E)去除其它保護基,亞苄基和醯基 將樟腦磺酸(4·2毫克)加入由上述式(15 )所代表 φ 之化合物(17.8毫克,7·82微莫耳)的CH2C12 /甲醇1 :1溶液(1.6毫升)中,並將溶液在室溫中攪動1 2小時 。將樟腦磺酸(6.6毫克)加入其中,再將溶液在室溫中 再攪動24小時。將過量之二異丙基乙胺加入反應溶液中 ,將溶劑在減低之壓力下蒸發,並藉由凝膠過濾法(LH 一 20, CHC13 /甲醇 1 : 1 )來純化殘質,以取得式(17 )的化合物,產量 78% (12.2毫克)。 以1H NMR確認已將亞苄基從式(15)之化合物去除 後,將式(17)之化合物(5·4毫克)溶解在四氫呋喃/ -52- 200536858 (50) 水 1 5 : 1溶液(1 .6毫升)中,並在0 °C,攪動下,將 1 . 2 5 Μ氫氧化鋰溶液(4 5微升)加入其中。將溶劑在減低 之壓力下蒸發1小時,將甲醇(1 ·5毫升)加入殘質中, 並在攪動下,將〇·1Μ甲醇鈉(0.5毫升)滴入此溶液中 。三天後,以5 0 %醋酸終止此反應,並將溶劑在減低之 壓力下蒸發。藉由凝膠過濾法(LH - 20’ 1%醋酸)來純 化殘質,以取得由下列通式(2 〇 )所代表的化合物’產量
92% ( 3.3 毫克) ΟΗ ΟΜΡ (2〇) 所得之化合物的物理性質顯示於下。 物理性質 (1)1^:0.32(正—丁醇/醋酸/水 1:1:1) (2 ) 〔 〇:〕d+ 20° ( C 0.33,水) (3 )元素分析 a) 計算出之數値:(C49H58N3〇Na,[M+Na - 3Η]2 -)640.68 b) 觀察値:640.69 c) 4 NMR 數據(D20) : 57.09(2H,d,J = 9.17Hz » Ph ) ,6.69(2H,d,J=8.94Hz,Ph) ,5.07( 2H » d » Ji,2 = 7.79Hz » H - 1 1 ) » 4.54 ( 1H > d » Ji,2 = 7.79Hz,H - 13 或 15) > 4.53 ( 2H ^ d > Ji,2= 7.56Hz ^ H —12 或 14,15 或 13) ,4.49(1H,d,Ji,2=8.48Hz,Η 200536858 (51) -14 或 12),4.45(lH,d,J12=8.24Hz,H- 16), 4·09— 4.07 (3H,m,H-42,44,46) ,4.〇5—4·〇〇(ιη ,bt,J 二 9·63Ηζ,Η — 22 或 24) ,3 · 9 8 ( 1Η,b t,J 二 9·74Ηζ,H-24 或 22) ,3.91—3.66 ( 19H, m,Η — 31, 41 , 51 , 32 , 52 , 62x2 , 43 , 53 , 34 , 54 , 64x2 , 45 , 55 ,36,56,66x2) ,3.85(lH,m,H— 26) ,3·80(3Η ,s’ MeOPh) ,3·62(1Η,bt,J=9.32Hz,H— 33 或 35 • ) ,3·61(2H,bt,J=8·83Hz,H-21,35或 33), 3·36,3·34 ( 2H,m,H— 23,25 ) ,2 · 02 ( 3 H,s,MeCO ),1.99 ( 6H,s,MeCO )。 (F)選擇性硫酸化作用:式(21)之化合物的合成方法 如第6— 2圖中所示,將三甲基乙醯氯(30微升)和 催化量之N,N —二甲胺基吡啶加入由式(丨5 )所代表之 化合物(28.7毫克,12.6微莫耳)的吡D定溶液(1.5毫升 # )中,並將溶液在80 °C攪動3小時。將三甲基乙醯氯( 90微升)加入其中,並將溶液在80 °C攪動2小時。讓反 應溶液回復至室溫,再將過量甲醇加入其中,並藉由凝膠 過濾法(LH - 20,CHC13 /甲醇1 : 1 )來純化反應溶液 ,以取得式(16)之化合物(27.0毫克,89%)。 接著,將樟腦磺酸(2.9毫克)加入由式(16)所代 表之化合物(8·6毫克,3.6微莫耳)的CH2C12/甲醇 1 :1溶液(1毫升)中,並將溶液在室溫中攪動20小時。 將過量之二異丙基乙胺加入反應溶液中,將溶劑在減低之 -54- ⑧ 200536858 (52) 壓力下蒸發,並藉由凝膠過濾法(LH - 20) ,CHC13 /甲 醇 1 : 1 )來純化殘質,以取得式(1 8 )的化合物(8. 1 毫克)。 接著,將三氧化硫一三甲胺複合物(60毫克)加入 由式(18)所代表之化合物(8.1毫克,3.6微莫耳)的 二甲基甲醯胺溶液(0.5毫升)中,並將溶液在57°C攪動 22小時。將三氧化硫一三甲胺複合物(59毫克)加入其 φ 中,並將溶液再在5 7 °C中攪動26小時。將反應溶液冷卻 至室溫,並藉由凝膠過濾法(LH — 20,CHC13 /甲醇1 : 1 )和離子交換樹脂[Dowex 50W(Na+),甲醇/水 8: 1] 來純化反應溶液,以取得式(19 )的化合物(9.6毫克, 91% )。 最後,將式(19)之化合物(9.6毫克)溶解在四氫 呋喃(0.5毫升)和水(0.04毫升)的混合溶液中,並在 〇°C,攪動下,將1.25M之氫氧化鋰溶液(0.2毫升)加 • 入其中。在室溫持績攪動一整夜。在減低之壓力下將溶劑 蒸發,將甲醇(0.5毫升)、CH2C12 ( 0.15毫升)加入殘 質中,並將0.5M氫氧化鈉(0.3毫升)在攪動下加入此 溶液中。22小時後,以50%醋酸終止此反應,並將溶劑 在減低之壓力下蒸發。藉由凝膠過濾法(LH - 20,1%醋 酸)來純化殘質,以取得由下列通式(2 1 )所代表的化合 物,產量 54% ( 3.7毫克): 二gf辱马。背每 OMP (21) 200536858 (53) 所得之化合物的物理性質顯示於下。 物理性質 (1)1^:0.14(正一丁醇/醋酸/水 1:1:1) (2 ) 〔a〕D— 8.1(C0.37,水) (3 )元素分析 a )計算出之數値:(C49H62N3Q35Na6,[M - 3Na]3 —
b )觀察値:62 3.3 4 c ) lH NMR 數據(D20) : (57·09 (2H,d,J = 9.17Hz,Ar) ,6.96(2H,d,J=9.17Hz,Ar) ,5.12( 2H > d » Ji,2 - 7.79Hz » H - 1 1 ) ,4.79(2H,s,H— 42, 44 ) ,4.71(lH,s,H-46) ,4.65(2H,m,H— 12, 14) ,4.60 ( 2H,d,J】,2= 8·02Ηζ,H— 16) ,4.56, 4.55 (2H,d,Ji,2 = 7.79Hz » H-13,15) ,4.32 - 4.2 1
(6H,m,H — 6 2x2,66x2 ) ,4.18 ( 2H,d,J4,5 = 9.85Hz,H— 51) ,4.11(3H,m,H— 52,54,56), 4.05— 4.01 (3H,m<H— 22,34 或 32) ,4.00,3.99( 2H,d,J4,5=9.62Hz,H— 53,55) ,3.93— 3·78(7Η,
m,H— 31,41,3 2 或 34,43,45,26,36 ) ,3.80 ( 3H ,s,MeOPh ) ,3.66( 1H,bt,J=8.47Hz,H- 33 或 35 ),3.66(lH,bt,J=9.05Hz,H-35 或 33) » 3.63 ( 1H,bt,J = 9.17Hz » H— 21) ,3.41 ( 1H,bt,J =
10.77Hz,H— 23 或 25) ,3·40(1Η,bt,J=10.20Hz,H 200536858 (54) —25 或 23) ,2.02 ( 3H,s,MeCO ) ,2.00 ( 6H,s, 2MeCO)。 比較性實例1 = 如第7圖中所示,以與實例1相同之方式製備由六個 組成用糖所構成之還原端葡醛酸型寡軟骨素及其硫酸化物 ,但利用第7圖中由式(3 )和(4 )所代表之疊氮化的糖 φ 給予體和糖接受體來取代上述實例1中之糖給予體和糖接 受體,並在取代上述實例1之促進劑的BF30 · Et2之存在 下來進行糖基化反應,再將由式(8)所代表之反應產物 (其係經由式(6 )所代表之化合物與糖給予體之延伸反 應取得),在林德拉(Lindlar)催化劑之存在下,在醋酸 乙酯中進行N—乙醯基化反應。 參考實例 • 另一種利用硫代醋酸取代上述比較性實例1之製備方 法中所使用之林德拉催化劑的製備方法提供於BiO. Med. Chem. Lett. 1 995 ; 5 ( 1 3 ) : 1 3 5 1 - 1 3 54 中。 結果: 根據實例1之製備方法(其中係使用三氟甲磺酸三甲 矽烷酯(TMSOTf )作爲促進劑,且將雙醣階段中之疊氮 化物還原後,將各糖鏈單位進行糖基化反應)結果可取得 71%高產量之第6— 1圖中由式(13)所代表的由四個組
(S 200536858 (55) 成用糖所構成的化合物,及66%高產量之第6 - 2圖中由 式(20 )和(2 1 )所代表的由六個組成用糖所構成的還原 .端葡醛酸型寡軟骨素和還原端葡醛酸型寡硫酸軟骨素。 另一方面,在比較性實例1之製備方法(其中係使用 BF3 · OEt2作爲促進劑)中,將疊氮化物型糖給予體和疊 氮化物型糖接受體進行糖基化,以進行延伸反應,且在四 醣或六醣之階段中,將疊氮根基團還原成N-乙醯基;當 φ 將疊氮化之四醣進行還原反應時,產量爲50%,此較實 例1之產量低20%或更多。當將疊氮化之六醣(6)進行 還原反應時,不會發生轉化成N-乙醯基的反應,而未取 得式(9)之靶的化合物。 在參考方法中,當將疊氮化之四醋進行還原反應時, 產量爲43%,此較實例1之方法低30%或更多。 實例2:由五個組成用糖所構成的還原端葡醛酸型寡軟骨 修素的合成方法 五醣之製備方法
(2,3,4一三—Ο—乙醯基一 β - D-吡喃葡糖基糖醛酸 酯)一(1—3) —(2—乙醯胺基一 4,6— 0 —亞苄基一2 一脫氧基一 /3— D-吡喃半乳糖基)一(1—4) 一(甲基 2,3—二一Ο —(4 一甲苄醯基)— D —吡喃葡糖基糖 醛酸酯)一 (1— 3) — (2-乙醯胺基一 4,6— Ο-亞苄 基一 2 —脫氧基一3— D-啦喃半乳糖基)—(1~~>4)— (4 —甲氧苯基 2,3 —二一〇 — (4 —甲苄醯基)一/5 — D -58- 200536858 (56) -吡喃葡糖苷)糖醛酸甲酯(34)之製備方法 (A — 1和A - 2 )糖給予體和糖接受體 第6 — 3圖中所示之糖接受體(31 )係根據J. Tamura Μ· Tokuyoshi ’ Biosci. Biotech. Biochem., 68, 243 6- 2443 ( 2 004 )製備,類似地,糖給予體(32)係根據J· -C. Jac quinet, Carbohydr. Res·,199,1 53 - 1 8 1 ( 1 9 9 0 )製 備。 (A — 3)五醣之合成方法,式(34)之化合物 如第6 - 3圖所示,將MS A W3 00 ( 464毫克)加入糖 接受體(31) (207.4毫克,0.133毫莫耳)和糖給予體 (23) (205.6毫克,0.430毫莫耳)的二氯甲烷溶液( 8.3毫升)中,並將所產生之溶液在室溫中攪動1小時。 將溶液冷卻至一 20°C,並在攪動下,將TMSOTf(23微升 ,〇· 13毫莫耳,0.3當量(相對於糖給予體(32)))加 • 入其中,將溶液攪動一整夜,並使溫度持續提高至室溫。 反應結束後,將溶液在寅氏鹽進行上過濾,以CHC13萃取 濾液。以飽和之碳酸氫鈉溶液和飽和之生理食鹽水溶液淸 洗有機層,並在無水硫酸鎂上乾燥及過濾。然後,將濾液 濃縮,藉由凝膠過濾法(LH - 20,CHC13 /甲醇 1:1) 進行純化,以取得粗產物。將此產物再藉由矽膠管柱(己 烷/醋酸乙酯=2: 1至1: 20 —甲醇/醋酸乙酯=1: 80—1 :60 )進一步純化,以取得具下列物理性質之似糖漿的式 (34)化合物,(69.6毫克,37.1微莫耳),產量28% -59- 200536858 (57) 物理性質 (1 ) 〔 a〕D— 21·1° ( C 1.05,CHC13 ) (2 )元素分析
a )計算出之數値:(C96H1()2N203 7 · H20,C,60.91 ;Η,5.55; N,1.48%。 b)觀察値:C,60.81; Η,5·53; N,1.48%。 c ) JH NMR ( CDC13 ) : 57.87— 7.80(m,8H,Ph ) ,7.47 — 7.28 ( m,10H,Ph ) ,7 · 1 8 — 7 · 0 5 ( m,8 H,Ph ),6.87 ( m,2H,Ph ) ,6.74 ( m,2H,Ph ) ,5.72 ( brt,1H,J 二 8.83Hz,H - 31 ) ,5.59 (brt,1H,J2,3 = 6.41 » J3,4=8.24Hz,H— 33) ,5.47 (dd,1H » Ji,2= 6.87 ’ J2,3=8.94Hz,H— 21) ,5.40(s,1H,PhCH ) ,5.39 (d,1H,J = 7.1 OHz,NH4 ) 5.32 ( s,1H,PhCH ), 5.32 (br,1H,NH2) 5.24 (t,1 H » Ji ,2 = J2,3 - 6.4 1 Hz » H-23) » 5.20-5.13 (m» 4Η» H-l1» l4» 45» 35),
4.96 (d,1H » Ji,2= 6.42Hz » H- l3 ) ,4.91 (brt,1H,J = 8.02Hz,H-25) ,4.84(d,1H » Ji,2= 8.25Hz > Η- l2 ),4.77 ( d,1H,J,,2= 7.33Hz,H - 1 5 ) ,4.63 ( dd, 1H,H-34) 4.56 (brt,1H,H— 43) ,4.50(t,1H, J3,4=J4,5 二 8·94Ηζ,Η— 41) ,4.23(br,lH— H32),
4.23 ( d ^ 1H,J3,4 二 3.20Hz,H - 44 ) ,4.19 (d,1H,H 200536858 (58) —5】),4.18 (d,1H,J4,5=9.62Hz,H - 53 ) ,4.06 ( d ,1H,J3,4= 3·21Ηζ,H - 42 ) ,3.96 ( d,1H,J4,5 = 9.62Hz,H-55 ) ,3.86(d,1H,Jgem=11.46Hz,H— 6a2 ),3·85 ( d,1H,Jgem = 1 2. 14Hz,H — 6a4 ) ,3.73,
3.71,3.70,3.67 ( 4s ^ 3Hx4,40Me) ,3.64(d,1H - H -6b4) ,3.60(d,lH,H-6b2) ,3.44(m,lH,H—22 ),3·22(πι,1Η,Η— 24) ,2.97(s,lH,H— 54), • 2.83 (s,lH,H-52) ,2.36,2.34,2.34,2.32(4s, 3Hx4,4PhMe ) 2.00,1.99,1.98 ( 3s » 3Hx3,30Ac ), 1.90» 1.63 ( 2s » 3Hx2,2NAc )。 當以類似方式進行反應,但使用〇·7當量(相對於糖 給予體(32))的TMSOTf時,式(34)化合物之產量爲 30% 〇 保護基之去除 • (2,3,4一三—Ο —乙醯基一/3 - D-吡喃葡糖基糖醛酸 酯)一(1~~>3) — (2-乙醯胺基一 2-脫氧基一D — 吡喃半乳糖基)一(1— 4) — {2,3—二—0— (4 —甲; 醯基)一 /3 — D —吡喃葡糖基糖醛酸甲酯}一 (1—3) 一 (2—乙醯胺基—2-脫氧基一 0 - D-吡喃半乳糖基)一 (1—4) 一 {4 一甲氧苯基 2,3—二一 〇— (4 一甲苄醜基 )一卢一 D—吡喃葡糖苷}糖醛酸甲酯(36)之製備方法 將化合物(34) (23.9毫克,12.7毫莫耳)溶解在 二氯甲烷(1.4毫升)和甲醇(1.4毫升)中,並將樟腦 -61 - 200536858 (59) 磺酸(9 · 8毫克)加入其中,再將溶液在室溫中 夜。反應結束後,加入三乙胺以中和此溶液,並 苯共沸來將溶液濃縮。將濃縮之殘質經由凝膠 LH — 20,CHC13 :甲醇=1 : 1 )進行純化,以取 物理性質之式(3 6 )的化合物(1 8.2毫克,1 〇 ),產量84%。藉由1H-NMR來確認亞苄基袍 溶液可直接用於下一步驟,不需進一步純化。 iH-NMR (CD3OD,經選出者)·· δ Ί .Ί9 —. 8Η ’ Ph) ,7· 14 — 7·07 ( m,8H,Ph ) ,6.76 (
Ph) ,6.67 ( m,2H,Ph ) ,3.69 » 3.66,3.60 '
,3HX4,40Me ) ,2 · 2 7,2 · 2 6,2 · 2 4,2 · 2 3 ( 4 s 4PhMe ) ,1.92» 1.88,1.86» 1.85,12.0 ( 5S 30Ac,2NAc)。 (C)硫酸化作用 • /3 — D —吡喃葡糖基糖醛酸一 (1-3) — 2—乙濃 —脫氧基—4,6 —二一0 —擴酸酯—0 — D — 口比 基一(1—4) 一 /3— D —吡喃葡糖基糖醛酸〜( 2—乙醯胺基一 2 —脫氧基一 4,6 —二—0 —磺酸 D — H比喃半乳糖基一 (1—4) _4 一甲氧苯基yg — 葡糖基糖醛酸,四鈉鹽(38)之製備方法 將化合物(36) (18.2毫克,10.7微莫耳 DMF ( 1.2 毫升)中,將 S03 · Me3N ( 1 19.2 毫 所產生的溶液中,並將溶液在6 0 °C攪動一整夜 1攪動一整 i藉由與甲 過濾法( :得具下列 .7微莫耳 :去除,此 L65 ( m, m,2H, 3.57 ( 4s 丨,3Hx4 , ,3Hx5 , I胺基一 2 喃半乳糖 1 — 3 )- 酯一/3 — D —吡喃 )溶解在 克)加入 。第二天 -62- 200536858 (60) ,將S Ο 3 · M e 3 N ( 1 1 9 · 9毫克)加入溶液中,並將溫度保 持在6 0 °C ’再將溶液再攪動一整夜。反應結束後,讓溫 度回至室溫,經由凝膠過濾法(L Η — 2 0,C H C13 :甲醇= 1 : 1 )將溶液純化,並以Dowex AG50 ( Na + )管柱洗提 出硫酸化物(21.2毫克,10.1微莫耳),產量94%。將 硫酸化物溶解在THF ( 1·4毫升)和水(6滴)中,並在 冰冷條件下,將1.25Ν LiOH ( 0·6毫升)加入溶液中,將 • 溶液攪動一整夜,並使溫度持續上升至室溫。反應結束後 ,將溶液濃縮,再將濃縮之殘質溶解在甲醇(1.4毫升) 和二氯甲烷(0·42毫升)中,且將0.5Ν NaOH(0.8毫升 )加入此溶液中。將溶液在室溫攪動4 · 5小時。反應結束 後,加入5 0 % AcOH以中和此溶液,並經由凝膠過濾法( LH - 20,1 % AcOH )進行純化,以取得具下列物理性質 之式(38)化合物(9.2毫克,6.28微莫耳)’經由該二 步驟所得之產量爲59%。
物理性質 (1 ) 〔 a〕d+ 1.2。( C 0.52,H2〇)
-63- (S 200536858 (61) (2) ^-NMR ( D2〇 ) ·· 5 7. 1 0 ( m,2H,Ph ), 7.09 ( m,2H,Ph ) ,5.12 ( d,1H,J】,2= 8·02Ηζ,H — 1 1 ) ,4.84 » 4.8 1 (2s,1Ηχ2,H - 42,44) ,4.86(m, 2H,H - l2,l4 ) ,4.56 (d,1H,Ji,2=7.79Hz,Η— l3) > 4.53 (d^ 1H^ Ji,2=7.79Hz^ H~l5) ,4.29-4.20 (m ,4H,H - 62,64) ,4.18(d,1H,J4,5 二 9·85Ηζ,Η— 51 ),4.11(m,2H,H—52,54) ,4.04(m,4H,H— 2, • 24,32,34) ,4.00 ( d,1H,J4,5 = 9 · 8 5 Hz,H - 53 ),
3.95 (d,1H,J4,5=9.85Hz,H—55) ’ 3·91 (brt,1H,J =9.28Hz » H - 41) ,3.85 (brt,1H,J = 9.17Hz » H— 43 ),3.80(m,lH,H— 31) ,3.80(s,3H,OMe), 3.67 ( brt,1H,J = 9.28Hz,H— 33) ,3.63 ( dd,1H,
j23=9.39Hz,H - 21 ) ,3.61 (brt,1H,J=9.61Hz,H —45) ,3.48 (brt,1H,J=9.28Hz,H - 35 ) ,3.41 ( dd ,1H,J2,3 = 9· 1 7Hz,H — 23 ) ,3.37 ( dd,1H,J2,3 = • 9·16Ηζ,H - 25) ,2.01,2.00 (2s,3Hx2,2NAc)。 MS ( ESI ) ·· m/ z : C41H51N2Na5042 S4 之(M-3H +
Na) 2·計算値 743.02 ;實測値 732.0 1 ; C41H52N2Na4042 S4 之(M-2H ) 2·計算値 73 2.03 ;實測値 732.02 ; C41H53N2Na3042S4 之(M-2Na) 2·計算値 72 1.03 ;實測値 72 1.03 ; C41H5IN2Na4042S4 (Μ-3Η)3·之計算値 487.68; 實測値 487.67 ; C41H52N2Na3042S4 之(M-2H_Na) 計算 値 480.3 5 ;實測値 480.34,C41H53N2Na2042H2 之(M-H-2Na) 31十算値 473.03 ;實測値 473.02。 -64 -
(I 200536858 (62) 實例3 :由五個組成用糖所構成之還原端葡醛酸型寡軟骨 素的合成方法(2 ) 五醣之製備方法 {2,3,4 —三一Ο— (4 一甲爷醯基)一 yS—D—u比喃葡糖 基糖酵酸酯}— (1— 3) —(2 —乙醯胺基一 4,6— 0 —亞 爷基一 2-脫氧基一 /3 - D—卩比喃半乳糖基)〜(ι_^4) 一 {2,3 —二一 Ο — (4 一甲;醯基)一y3— D〜卩仕喃葡糖 • 基糖醛酸甲酯}一(1— 3) - (2-乙醯胺基〜4, 6 一 〇 — 亞;基一 2—脫氧基一 /5 — D—卩比喃半乳糖基)一(丨—斗 )—{4 一甲氧苯基 2,3—二一 0— (4—甲爷醯基)—a —D—吡喃葡糖苷}糖醛酸甲酯(35)之製備方法 (A - 1和A - 2)糖給予體和糖接受體 第6— 3圖中所示之糖接受體(31)係根據j Tamura & M. Tokuyoshi, Biosci. Biotech. Biochem·,68,2436-2443 ( 2004 )製備。類似地,糖給予體(33)係根據F. • Goto & Τ· Ogawa,Tetrahedron Lett·,33,684 1 -6844 ( 1 992 )製備。 (A — 3)五醣之合成方法(式(35)之化合物) 如第6-3圖所示,將MSAW300 (231.6毫克)加入 糖接受體(31) (110.0毫克,70.5微莫耳)和糖給予體 (33) (101.7毫克,144微莫耳)的二氯甲烷溶液(4.5 毫升)中’並將所產生之溶液在室溫中攪動1小時。 將溶液冷卻至—20°C後,將TMSOTf ( 23微升,0· 1 3 200536858 (63) 毫莫耳’ 0.7當量(相對於糖給予體(33 )))加入溶液 中’並將溶液攪動一整夜,再使溫度持續提高至室溫。反 應結束後,將溶液在寅氏鹽進行上過濾,再以CHC13萃取 濾液。以飽和之碳酸氫鈉溶液和飽和之生理食鹽水溶液清 洗有機層,並在無水硫酸鎂上乾燥及過濾。然後,將濾液 濃縮,藉由凝膠過濾法(LH — 20, CHC13 :甲醇=1 : 1 ) 進行純化,以取得粗產物。將此產物再藉由矽膠管柱(己 • 烷:醋酸乙酯=7:1至1:5—甲醇:醋酸乙酯=1: 60至1 :20)進一步純化,以取得具下列物理性質之似糖漿的式 (35)化合物(74.4毫克,35.4微莫耳),產量50%。 物理性質 (1 ) [ a ] 〇+ 23.Γ ( C 1.34^ CHC13 ) (2 )元素分析 a )計算出之數値:C114H114N2037 · 1·5Η20,C, φ 64.72 ; Η,5·59 ; Ν,1.32%。 b) 觀察値:C,64·45; Η,5.72; Ν,1.37%。 c) iH-NMR ( CDC13 ) : (5 7·84 - 7.76 ( m,12H,Ph ),7·69 ( d,2H,J = 8·25Ηζ,Ph ) ,7.34 - 7.27 ( m, l〇H,Ph) ,7.18— 7.13(m,8H,Ph) » 7.09 - 7.04 ( m ,6H,Ph ) ,6·87 ( m,2H,Ph ) ,6.74 ( m,2H,Ph ) ,5·79 (brt,1H,J = 9.28Hz > H— 35) ,5.71 (t,1H, j2,3=J3,4=8.70Hz,H-33) ,5.59 (brt,1H,J=9.63Hz ,H— 45) » 5.58 (brt» 1H^ J=7.79Hz> H-31) » 5.47 200536858 (64) (dd,1H,:h,2 二 7.90Hz,H— 23) ,5.42 (dd,1H,J】,2 =7.33,J2,3 = 9.16Hz,H — 25 ) ,5 · 3 8 ( b r d,1 H,J = 7·10Ηζ,NH2) ,5.36 (d,1H,J=6.88Hz,NH4 ) ,5.3 1 (s,1H,PhCH_) ,5.28 ( s,1H,PhCH_) ,5.23 ( brt, 1H,J=7.12Hz,Η— 21) ,5.17 (d,1H,Ji,2 = 8.25Hz ^ H-l4) ,5.16(d,lH,H—l3) ,5.09(d,lH,H— l5 ),4.96 ( d,1H,J】,2= 8.02Hz,H-l2) ,4.90 ( dd,
1H » Ji,2= 6.86Hz » H- l1 ) ,4.60(dd,1H,J2,3=11.00 ,J3,4 = 3.44Hz,H - 34 ) ,4.49 ( t,1H,J3,4= J4,5 = 8.70Hz,H— 43) ,4.45 (brt,1H,J=8.60Hz,Η— 41) ,4.45 ( m,1H,H— 32 ) ,4 · 2 4 ( d,1 H,J 4,5 = 9 · 8 5 H z, H— 55) ,4.18(d,lH,H— 53) ,4.13(brs,lH,H — 44) ,4.13 (brs,1H,H— 42) ,4.10(d,1H,J4,5 = 9.40Hz » H - 51 ) ,3.84 (brd,1H,Jgem = 12·37Ηζ,H — 6a4) ,3.8 1 ( d,1H,Jge m = 1 2 · 0 0 Η z,H — 6 a2 ) ,3.72 »
3.69 » 3.67 » 3.56 ( 4s,3Hx4,40Me ) ,3.61 ( brd,1H ,J= 10.77Hz,H- 6b4) ,3.56 ( m,1H,H- 6b2), 3.32(m,1H,H— 22) ,3.18(m,1H,H-24) ,2.95 (s,lH,H-54) ,2.84(s,lH,H-52) ,2.36,2.34 ,2.34,2.30 » 2.30,2.28 ( 6s » 3Hx7,7PhMe ) ,1.60, 1 .56 ( 2s,3Hx2,2NAc )。 當使用 〇·3當量(相對於糖給予體(33 ))的 TMSOTf時,式(35)化合物之產量爲23%。 200536858 (65) 討論: (1 )根據使用本發明之醯亞胺化物的糖基化反應係 去除一醯亞胺醯氧基,以在糖給予體的第一個位置處產生 一陽離子。所產生之陽離子性中間體和糖接受體之游離羥 基團彼此結合,也就是,產生糖基化反應。由實例1之方 法所產生之高產量係基於下列理由:在實例1中作爲促進 劑之三氟甲磺酸三甲矽烷酯(TMSOTf )與陽離子性中間 φ 體形成一離子對,以穩定該不穩定之陽離子中間體,因而 可壓抑其降解。因此,可預期包括在上述通式(1)中之 化合物可具有相同效果。 還有,使用乙醯胺型雙醣單位作爲糖給予體亦被對高 產量具有很大的貢獻。 (2)在上述實例1中之(11) + (14)4 (9)的反 應中,將該反應產物進行薄層色層分析。反應開始時,所 觀察到之主要墨點係爲分別在Rf= 0.07、0.38、0.49、 • 〇·62和0·78的墨點,反應結束時,那些墨點大體上聚合 在Rf= 0·41的一點上。 通常,雖然糖基化反應可經由糖給予體之降解而產生 多個墨點,在這種情況中,那些墨點並未聚合。因此,此 結果顯示出在本發明實例中之反應係經由二或更多個中間 體來產生靶的縮合物。 就此點而言,當糖基化反應係如第1 2圖中所示般在 一種路易斯酸之存在下發生時,則可預期下列路徑:通常 ’將糖給予體之醯亞胺醯基團活化,而糖接受體攻擊在糖 -68- (s 200536858 (66) 給予體(其已轉化成可能的陽離子)之第i 原子,此二者再進行縮合反應(路徑A); 予體之第2個位置的羥基團受醯基保護時,該 基氧攻擊已活化之糖給予體之第2個位置的碳 成一反應中間體(Π),糖接受體之氧原子攻 (II)之第1個位置上的碳原子,此二者再進 (路徑C)。 Φ 然而,這二種路徑均無法解釋上述多個墨 及接下去之聚合現象,和本發明實例中之/3 -此,在(11) + (14) — (9)之反應中提出一 和C不同的反應路徑。 本發明者考量本發明之實例中的反應經由 所顯示之路徑D進行反應的現象。也就是, 方法中,可預期糖接受體之乙醯胺基團的氧原 體II之原酸酯的碳原子,以形成中間體III, # 體III之第1個位置處的碳原子被糖接受體之 ,以合成靶的/3 -選擇性縮合物。 此預期之反應機制與上述之多-墨點現象 該多個墨點聚合的現象相符。也就是,該多-認爲可歸因於糖給予體和糖接受體中存在著三 醯胺基圑,以及存在著多個中間體III的次基 接下去之聚合現象可解釋爲係由該經由中間體 予體之縮合所產生之/5 -選擇性縮合物所造成 另外,當經由上述之反應路徑(D )時, -69- 位置上的碳 者,當糖給 醯基團之羰 原子,以形 擊在中間體 行縮合反應 點的現象以 選擇性,因 種與上述A 第12圖中 在本發明之 子攻擊中間 而在此中間 氧原子攻擊 ,以及其中 墨點現象被 種類型的乙 團。再者, 111和糖給 〇 在糖給予體 200536858 (67) 之第1個位置處的碳原子受到立體控制,而反應中間體II 僅有無原酸酯存在之一側受攻擊。經由本發明此路徑所取 得之最終產物與實例1和3中僅取得/3 -糖苷之結果相一 致。 再者,實例2和3已證明,與被乙醯基型取代基取代 的情況相較下,當糖給予體之第2個位置被苄醯基型取代 基所取代時產量會大幅增加:式35化合物之產量爲50% φ ,而式34化合物之產量爲30%。此結果符合下述事實: 當糖給予體之第2個位置受苄醯基型取代基保護,而非受 乙醯基型取代基保護時,中間體II之原酸酯碳陽離子的 共軛系統較長且較穩定。 實例4 : 藉由合成之寡醣來去除CD44之引發作用 在實例1中所取得之式(20 )和(21 )化合物方面, • 根據第8圖中所示之方法,在癌細胞中評估CD44去除引 發之能力的情況。 試驗結果 如第9和1 0圖中所示,即使是未硫酸化之由六個組 成用糖所構成的還原端葡醛酸型軟骨素亦可誘導CD4之 去除。再者,相較於還原端葡醛酸型軟骨素,該由六個組 成用糖所構成,且其中N-醯基半乳糖胺之第4和6個位 置被硫酸化的還原端葡醛酸型硫酸軟骨素E可更有效地誘 -70- (S: 200536858 (68) 導CD44之去除。 此證明構成還原端葡醛酸型硫酸軟骨素E之骨架的還 原端葡醛酸型軟骨素主鏈本身參與去除CD44之引發能力 。此證明在還原端葡醛酸型軟骨素主鏈上之硫酸根基團亦 參與誘導去除CD44之引發能力。 已知,CD44分子參與多種疾病。因此,很明顯的, 本發明之由六個組成用糖所構成的還原端葡醛酸型寡硫酸 φ 軟骨素可根據高CD4 4脫去誘導力來有效治療CD 44分子 所涉及之疾病和狀況。 工業上之適用性 如上述,根據本發明可提供一種可以高度立體選擇方 式製備出高產量和高純度之由四個或更多個,尤其是五個 或更多個組成用糖所構成之具有預定鏈長及構造的寡糖胺 聚糖的簡單方法。再者,根據本發明可提供一種高純度之 • 由五個或更多個預定數目的組成用糖所構成的還原端葡醛 酸型寡硫酸軟骨素,以及含彼之藥學組成物。 【圖式簡單說明】 第1圖爲一反應圖解,其顯示本發明之製備方法的一 種實施態樣中的步驟(A)的大綱。 第2圖爲一反應圖解,其顯示本發明之製備方法的一 種實施態樣中的步驟(B )的大綱。 第3圖爲一反應圖解,其顯示本發明之製備方法的一 -71 -
D 200536858 (69) 種實施態樣中的步驟(c )的大綱。 第4圖爲一反應圖解,其顯示本發明之製備方法的一 種實施態樣中的保護基去除步驟的大綱。 第5圖爲一反應圖解,其顯示本發明之製備方法的一 種實施態樣中的選擇性硫酸化步驟的大綱。 第6— 1和6一 2圖爲顯示實例1之製備方法中的步驟 大綱的反應圖解。 # 第6— 3圖爲顯示實例2和3之製備方法的大綱的反 應圖解。 第7圖爲顯示比較性實例丨之製備方法的大綱的反應 圖解。 第8圖爲顯示實例4中進行之試驗方法的大綱的流程 圖。 第9圖爲一電泳相片的複本,其中顯示實例4中所進 行之試驗的電泳結果。 # 第10圖爲顯示實例4中所進行之試驗的的CD44去 除指數的圖形。計算CD44去除指數時係將無刺激的狀態 假定爲1。 第11圖爲顯示本發明之製備方法的另一種實施態樣 的反應圖解。 第12圖爲顯示本發明之一種實施態樣中的反應機制 大綱的反應圖解。 -72-
(E
Claims (1)
- 200536858 (1) 十、申請專利範圍 1. 一種用於製備寡糖胺聚糖或其中間體的方法,其 中該方法包含: 步驟(A),其係將在還原端具有一葡醛酸或艾杜糖 酸衍生物之糖給予體(A - 1 )(其中係在欲糖基化之還 原端羥基團加入一離去基,而其它羥基團和羧基團爲經保 護的)與在非還原端具有一 N—醯基半乳糖胺衍生物之糖 Φ 接受體(A — 2)(其中該欲糖基化之非還原端羥基團爲 游離的,而其它羥基團爲經保護的)在一作爲促進劑之路 易斯酸(A - 3)(其爲該糖給予體之離去基的活化劑) 的存在下進行糖基化反應。 2. 如申請專利範圍第1項之方法,其中該中間體係 由下列通式(4 /)代表:其中係選自如下群體:院基團、嫌基團、方院基 團和芳基團; -73- 200536858 (2) P3係選自如下群體:氫原子、烷基團、烯基團、芳烷 基團、芳基團,及隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽 烷基團; P4係選自如下群體:烷基團、烯基團,和芳烷基團; P 1 1和P 11 /爲相同或係獨立地選自如下群體:氫原子 、烷基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、隨意地被烷基團 或烷氧基團所取代之矽烷基團、以及亞烷基團,並包括一 Φ 種其中其二個基團交聯的情況;且 G1係選自如下群體:氫原子、烷基團、芳烷基團、 烯基團、芳基團,及由下列通式(4 一 1)所代表之基: (4-1)其中m爲0至4之整數; R6和R7爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團、醯基團和酞醯基團; P8和P9爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、醯基團、和隨意地被 烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團; P1()係選自如下群體:烷基團、烯基團和芳烷基團; P11和Pii /爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 -74- 200536858 (3) 烷基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、隨意地被烷基團或 烷氧基團所取代之矽烷基團、以及亞烷基團,並包括一種 其中其二個基團交聯的情況;且 G1#係選自如下群體:氫原子、烷基團、烯基團、芳 烷基團、芳基團、及由下列通式(4 一 1/ )所代表之基: (4-1,)烯基 團 和芳基團; 、院 地被 P8和P9爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子 基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、醯基團、和隨意 烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團;且 P1()係選自如下群體:烷基團、烯基團和芳烷基團; 且 G2係選自如下群體:氫原子、烯基團、醯基團、芳 烷基團、隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團、 及由下列通式(4 一 2 )所代表之基: (4-2) ‘-75 ⑧ 200536858 (4) 其中λ爲0至4之整數; R4和R5爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團、醯基團和酞醯基團; Ρ2和Ρ3爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、和隨意地被烷基團或 烷氧基團所取代之矽烷基團;Ρ4係選自如下群體:烷基團、烯基團,和芳烷基團; Ρ6和Ρ6 >爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、隨意地被烷基團或 烷氧基團所取代之矽烷基團、以及亞烷基團;且 G2>係選自如下群體:氫原子、烯基團、醯基團、芳 烷基團、隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團、 及由下列通式(4 一 2 /)所代表之基:其中R4和R5爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子 、烷基團、烯基團、醯基團和酞醯基團; P5係選自如下群體:烯基團、醯基團、芳烷基團、和 隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團;且 P6和P6 /爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、隨意地被烷基團或 -76- ⑧ 200536858 (5) 烷氧基團所取代之矽烷基團、以及亞烷基團。 3 ·如申請專利範圍第1或2項之方法,其中該促進 劑爲由下列通式(1 )代表之化合物: R2 R 1 _Si — Ο 一 Tf ( 1 ) R3 其中R1、R2和R3爲相同或獨立地代表直鏈型或支鏈 • 型烷基團,或未經取代之芳基團,或其氫原子中有至少一 個被取代者,且Tf代表三氟甲磺醯基團。 4·如申請專利範圍第1項之方法,其中: 該糖給予體爲一種葡醛酸或艾杜糖酸衍生物(其中係 在欲糖基化之還原端羥基團加入一離去基,而其它羥基團 和羧基團爲經保護的),或具有基礎雙醣單位作爲其基礎 組成單位之寡醣衍生物,該基礎雙醣單位係由一 N-醯基 半乳糖胺衍生物和一葡醛酸或艾杜糖酸衍生物(其中係在 # 欲糖基化之還原端羥基團加入離去基,而其它羥基團和羧 基團爲經保護的)所構成;且 該糖接受體爲一種葡醛酸或艾杜糖酸衍生物(其中該 欲糖基化之非還原端羥基團爲游離的,而其它羥基團和羧 基團爲經保護的),或具有一 N -醯基半乳糖胺衍生物和 一葡醛酸或艾杜糖酸衍生物(其中欲糖基化之非還原端羥 基團爲游離的,而其它羥基團和羧基團爲經保護的)作爲 其基礎組成單位之寡醣衍生物。 5 .如申請專利範圍第1項之方法,其還包含下列步 -77- ⑧ 200536858 驟: (B )將上述步驟(a )中所取得之寡醣衍生物的非 還原端的一個保護基去除,及 (C)在促進劑之存在下,將去除一個保護基之寡醣 衍生物與糖接受體進行糖基化反應;及 在步驟(A)後,以所要之1至8次之內的重複次數 重複進行這些步驟。 6.如申請專利範圍第4項之方法,其中 該糖給予體爲一由下列通式(2 )所代表之軟骨素衍 生物:其中R4和R5爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子 、烷基團、烯基團、醯基團和酞醯基團; Im爲隨意地被鹵素所取代之醯亞胺醯基; P2和P3爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、和隨意地被烷基團或 烷氧基團所取代之矽烷基團; P4係選自如下群體:烷基團、烯基團、和芳烷基團; P5係選自如下群體:烯基團、醯基團、芳烷基團、和 隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團;且 P6和P6 /爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、隨意地被烷基團或 ⑧ 200536858 (7) 烷氧基團所取代之矽烷基團、以及亞烷基團;且 該糖接受體爲由下列通式(3)所代表之還原端葡醛 酸型軟骨素衍生物:馨其中R6和R7爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子 、烷基團、烯基團、醯基團、和酞醯基團; P7係選自如下群體:烷基團、芳烷基團、烯基團, 和芳基團; P8和P9爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、醯基團、和隨意地被 烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團; P1G係選自如下群體:烷基團、烯基團、和芳烷基團 • •,且 P11和P11 '爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、隨意地被烷基團或 烷氧基團所取代之矽烷基團、以及亞烷基團,並包括一種 其中其二個基團交聯的情況。 7.如申請專利範圍第4項之方法, 其中: 該糖給予體爲由下列通式(2 /)所代表之軟骨素衍 生物: 79· ⑧ (2·) 200536858 (8)其中Im爲隨意地被鹵素所取代之醯亞胺醯基團; P2和P3爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、和隨意地被烷基團或 烷氧基團所取代之矽烷基團; P4係選自如下群體:烷基團、烯基團、和芳烷基團; 且 P5>係選自如下群體:烯基團、醯基團、芳烷基團、 和隨意地被烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團;且 該所使用之糖接受體爲由下列通式(3 )所代表之還 原端葡醛酸型軟骨素衍生物 (3) 〜 NR6R7 COOP10 ρ,1ρΐι· 其中R6和R7爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子 、烷基團、烯基團、醯基團和酞醯基團; P7係選自如下群體:烷基團、芳烷基團、烯基團、和 芳基團; P8和P9爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、烷 基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、醯基團、及隨意地被 烷基團或烷氧基團所取代之矽烷基團; -80- ⑧ 200536858 (9) P1G係選自如下群體:烷基團、烯基團、和芳烷基團 •,且 P11和P11/爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 烷基團、烯基團、芳烷基團、芳基團、隨意地被烷基團或 烷氧基團所取代之矽烷基團、以及亞烷基團,並包括一種 其中其二個基團交聯的情況。 8 .如申請專利範圍第1、4、6和7項中之任一頂的 • 方法,其中該在糖給予體中之葡醛酸或艾杜糖酸衍生物的 第2位置處的取代基係由一可穩定鄰酯之醯基團所保護。 9.如申請專利範圍第3項之方法,其中R1、R2和 R3係獨立地爲氫原子,或直鏈型或支鏈型烷基團。 1 〇.如申請專利範圍第9項之方法,其中該促進劑爲 三氟甲磺酸三甲矽烷酯(TMSOTf)。 1 1 ·如申請專利範圍第5項之方法,其中該步驟(B )和(C)重複進行一至五次。 • 1 2.如申g靑專利範圍第1、4至7、和1 1項中之任一 項的方法,其還包含步驟(D — 1),其中將步驟(A)或 (C)中所取得之寡醣衍生物的所有保護基全部去除。 1 3 ·如申請專利範圍第1、4至7、和n項中之任一 項的方法,其還包含步驟(D-2),其中將步驟(A)或 (C)中所取得之寡醣衍生物的所有保護基全部去除,且 各N〜醯基半乳糖胺在其第4和第6個位置處被選擇性地 硫酸化。 1 4 ·如申請專利範圍第1 3項之方法,其中該糖給予 -81 - ⑧ 200536858 (10) 體爲由通式(2)或(2> )所代表之化合物,且該糖接受 體爲由通式(3 )所代表之還原端葡醛酸型軟骨素衍生物 其中,若在步驟(A)或(C)中所取得之寡醣衍生 物在非還原端具有一 N -醯基半乳糖胺衍生物,則以Ξ甲 基乙醯基團保護位在Ν-醯基半乳糖胺衍生物之第4和胃 6位置處以外的位置上的羥基團; 將保護各Ν-醯基半乳糖胺衍生物之第4和第6位® 的基團去除; 將經去保護之寡醣進行硫酸化,以將各Ν -醯基半乳 糖胺之第4和第6位置選擇性地硫酸化。 1 5 .如申請專利範圍第1 4項之方法,該保護基爲亞 苄基、烷氧亞苄基或亞環己基。 16. 一種由通式(4 >)所代表之寡糖胺聚糖中間體 化合物: 200536858 (11) pll I其中R’、p3、P4、pH、plI,、和G2與申請專利範 圍第2項中所定義者相同。 17·—種由下列通式(4 )所代表之還原端葡醛酸型寡 &胃素’或還原端葡醛酸型寡硫酸軟骨素,或其鹽,或衍 生物:R8代表氫原子,或保護基; R9至R11爲相同或獨立地代表氫原子,或保護基; R12和R13爲相同或獨立地選自如下群體:氫原子、 -83- 200536858 (12) 烷基團、烯基團、醯基團和酞醯基團; R14和R15爲相同或獨立地代表氫原子,或隨意地被 選自如下群體之任一員所取代的硫酸根基團或磷酸根基團 :鈉、鉀、銅、鈣、鐵、錳、鋅、銨、鋇和鋰;且 R16代表氫原子,或由下列通式(5)所代表之葡醛酸 或艾杜糖酸衍生物:或保護基,或鈉、鉀、銅、鈣、鐵、錳、鋅、銨、鋇或鋰 :且 R2()代表氫原子,或保護基。 1 8 ·如申請專利範圍第i 7項之還原端葡醛酸型寡硫 ® 酸軟骨素,或其鹽,或衍生物,其中R14和R15爲隨意地 被選自如下群體之一員所取代的硫酸根基團:鈉、鉀、銅 、鈣、鐵、錳、鋅、銨、鋇和鋰。 1 9 ·如申請專利範圍第丨7或1 8項之還原端葡醛酸型 寡軟骨素,或還原端葡醛酸型寡硫酸軟骨素,或其鹽,或 衍生物,其中η爲3至6。 20·—種藥學組成物,其含有至少一種選自如下群體 的化合物··如申請專利範圔第1 7至1 9項中之任一項的還 原端葡醛酸型寡軟骨素,和還原端葡醛酸型寡硫酸軟骨素 (S -84- 200536858 (13) ,及其鹽,和衍生物,加上一藥理學上可接受之載體。 2 1.如申請專利範圍第20項之藥學組成物,其係用 於改良、治療或預防由CD44分子所誘發之狀況或疾病。 22.如申請專利範圍第2 1項之藥學組成物,其係用 於治療自體免疫疾病、關節炎、過敏性疾病、或癌症,或 用於調節免疫性,或用於誘導細胞分化或細胞凋亡。 23 . —種如申請專利範圍第1 7至1 9項中之任一項的 φ 還原端葡醛酸型寡軟骨素,或還原端葡醛酸型寡硫酸軟骨 素,或其鹽,或衍生物於製備用於改良、治療或預防由 CD44分子所誘發之狀況或疾病的藥學組成物上的用途。-85- ⑧
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004093219 | 2004-03-26 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW200536858A true TW200536858A (en) | 2005-11-16 |
Family
ID=34962550
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW094109494A TW200536858A (en) | 2004-03-26 | 2005-03-25 | Preparation process of oligoglycosaminoglycan, and reducing end glucuronic acid type oligochondroitin sulfate and pharmaceutical composition comprising the same |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20070219161A1 (zh) |
EP (1) | EP1740620A1 (zh) |
JP (1) | JP2007530713A (zh) |
TW (1) | TW200536858A (zh) |
WO (1) | WO2005092931A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111978360B (zh) * | 2020-09-02 | 2022-11-25 | 华东理工大学 | 石莼b3s型硫酸寡糖类化合物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2535324A1 (fr) * | 1982-10-27 | 1984-05-04 | Choay Sa | Station perfectionnee pour l'epuration d'eaux usees |
FR2521566A1 (fr) * | 1982-02-16 | 1983-08-19 | Choay Sa | Nouveaux tetrasaccharides et leur preparation |
GB9711443D0 (en) * | 1997-06-03 | 1997-07-30 | Leo Pharm Prod Ltd | Chemical suppositions |
-
2005
- 2005-03-25 JP JP2006533381A patent/JP2007530713A/ja active Pending
- 2005-03-25 TW TW094109494A patent/TW200536858A/zh unknown
- 2005-03-25 US US10/594,447 patent/US20070219161A1/en not_active Abandoned
- 2005-03-25 WO PCT/JP2005/006439 patent/WO2005092931A1/en active Application Filing
- 2005-03-25 EP EP05727690A patent/EP1740620A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1740620A1 (en) | 2007-01-10 |
US20070219161A1 (en) | 2007-09-20 |
JP2007530713A (ja) | 2007-11-01 |
WO2005092931A1 (en) | 2005-10-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2295515C (en) | Method for large-scale production of di(uridine 5'-tetraphosphate) and salts thereof | |
AU2001291960B2 (en) | Polysaccharides with antithrombotic activity comprising at least a covalent bond with biotin or a biotin derivative | |
JP3048198B2 (ja) | 硫酸化グリコサミノグリカノイド誘導体 | |
US6713458B1 (en) | Therapeutic uses of di(uridine 5′)-tetraphosphate and salts thereof | |
US6319908B1 (en) | Method for large-scale production of di(uridine 5′-tetraphosphate) and salts thereof | |
JPH11217394A (ja) | 炭水化物誘導体 | |
JP3594990B2 (ja) | 3−デオキシオリゴ糖、その製造方法およびそれを含有する医薬組成物 | |
RU2193040C2 (ru) | Новые пентасахариды и содержащие их фармацевтические композиции | |
JP3501813B2 (ja) | 合成ポリサッカライド、それらの製造法およびそれらを含む医薬組成物 | |
TW200536858A (en) | Preparation process of oligoglycosaminoglycan, and reducing end glucuronic acid type oligochondroitin sulfate and pharmaceutical composition comprising the same | |
KR20090074226A (ko) | 혈액응고를 방해하는 화합물 | |
US6548658B2 (en) | Di-(uridine 5′)-tetraphosphate and salts thereof | |
WO2002008239A1 (es) | Nuevos disacaridos con accion antiartrosica | |
JP2005536577A (ja) | N−アシル−(エピ)k5−アミン−o−硫酸塩誘導体の製造方法およびn−アシル−(エピ)k5−アミン−o−硫酸塩誘導体 | |
US20060166927A1 (en) | Compounds that bind to the interferon-gamma, preparation method thereof and medicaments containing same | |
EP1018515B1 (en) | Oligosaccharide, method for producing it and pharmaceutical composition containing it | |
JP4913272B2 (ja) | オリゴ糖の製造方法ならびに新規オリゴ糖およびそれを含む医薬組成物 | |
EP2721044B1 (en) | Synthetic pentasaccharides having short half-life and high activity | |
Desoky | Synthesis of Sulfated Carbohydrates Using Sulfuryl Imidazolium Salts | |
WO2013174017A1 (zh) | 制备全保护的肝素五糖的方法及其中间体 |