TW200529871A - Liquid formulations of antibody conjugates - Google Patents

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TW200529871A
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cyclodextrin
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Patrick Garidel
Karoline Bechtold-Peters
Christian Berger
Stefan Bassarab
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Boehringer Ingelheim Pharma
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Description

200529871 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於抗體之液態醫藥組合物，較佳爲與一效應 分子共軛之抗體之液態醫藥組合物。特定而言，本發明係 關於抗體-DM1複合物之穩定液態調配物。 【先前技術】 重組抗體分子在此項技術中早已爲人習知，例如人源化 鼠抗體（Shin等人 ’ 1989 ; Gtissow及 Seemann，1991)、雙特 異性抗體（Weiner等人，1993 ; Goodwin，1989)、單鏈抗體 (scFv，Johnson及Bird，1991)、完整或片斷免疫球蛋白 (Coloma等人 ’ 1992，Nesbit等人，1992 ; Barbas等人，1992) 或藉由鏈改組産生之抗體（Winter等人，1994)。目前，全人 抗體可（例如）藉由「噬菌體呈現」方法（Aujame等人，1997 ; 美國專利第5,885,793號；美國專利第5,969，108號；美國專 利第6,300,064號；美國專利第6,248,516號；美國專利第 6,291，158號）或藉助轉錄過人類功能1§基因之轉基因小鼠 來製備（歐洲專利第0 4 3 8 4 7 4號；歐洲專利第〇 4 6 3 1 5 1號； 歐洲專利第〇 546 073號）。 抗體與效應分子之共軛物亦爲人習知，例如單鏈抗體/毒 素-融合蛋白（Chaudhary等人，1990 ; Friedman等人，1993); 抗體與下列物質之共軛物：放射性同位素（例如η 4、 In、99mTc)或放射性化合物（Larson 等人，1991 ; Thomas 等人，1989 ; Srivastava，1988)、酶（例如過氧化物酶或鹼 性磷酸酶）(Catty及 Raykundalia，1989)、熒光染料（Johnson， 97599.doc 200529871 1989)或生物素分子（Guesdon等人，1979);毒素（Vitetta等 人，1991 ; Vitetta及 Thorpe，1991 ; Kreitman 等人，1993 ; Theuer等人，1993)、細胞生長抑制素（Schrappe等人，1992)、 前藥（Wang等人，1992 ; Senter等人，1989)、放射性物質， 及與細胞因子或若干其他免疫調節多肽（例如腫瘤壞死因 數或介白素-2)結合之共輛物。 CD44係一以不同同型體在複數個細胞上表現之蛋白質 (更多資訊請參見例如 WO 02/094879A1 ; WO 02/094325A2)。 然而，細胞外區域中含有v6結構域之剪接變體（CD44v6)之 表現僅限於上皮組織的一部分。如同其他變體外顯子 (CD44v3、CD44v5、CD44v7/v8、CD44vlO)，CD44v6係一 在人類腫瘤及正常組織中具一有利表現模式之腫瘤相關抗 原（Heider等人，1995 ; Heider等人，1996 ; Dali等人，1996 ; Beham-Schmid等人，1998 ; Tempfer等人，1998 ; Wagner 等人，1998)。對僅在一上皮細胞亞群上表現的某些CD44 剪接變體（CD44v、CD44var)具特異性之抗體在先前技術中 已爲人習知。舉例而言，可提及CD44v6-特異性抗體（WO 02/094879A1)，尤其亦可提及其與放射性或細胞毒性物質 結合之共軛物及與類美登素（maytansinoid)結合之共輛物 (WO 02/094325A2)。 爲將所述抗體共軛物施予患者，需要開發穩定調配物。 先前技術之一缺點係於液態形式産品貯存期間分子之該 功能化學部分自抗體上解離。因此本發明之目的係提供抗 體共軛物之新穎液態調配物。 97599.doc 200529871 【發明内容】 該目的於本發明說明書及申請專利範圍之範圍内達成。 本發明係關於由抗體與一效應分子共軛形成之抗體共軛 物之具環糊精及/或一低pH之液態醫藥組合物或調配物。特 疋而口，本發明係關於抗體_DM丨複合物之穩定液態調配 物。 【實施方式】 在闡述本發明較佳具體實施例前，應該指出，除非特別 有相反說明或從上下文中可明確看出，否則本發明之說明 書及申請專利範圍中所用單數（「—」、「該」等）亦包括複數。 :非另有疋義’否貝’所有所用術語皆具有於本項技術中 舀头之W義此處所提及之所有出版物及專利說明書因此 皆完全併入本說明書中，尤其是併入所討論之語境中。 液態調配物係-簡單實用且廉價之有利製劑。 目則肖b得到之抗體共軛物之液態調配物於2至8〇c溫度儲 存僅具有12週之有效期。 口 本&月係關於含有抗體《效應分子共輛物調配物之 穩疋邊藥組合物及製備該等穩定抗體_效應分子共軛物之 方法。j目的係減少產品儲存期間游離效應分子之形成。 此目的令人彆奋从π ^ , 鳥了地可猎由降低溶液之pH來實現。 另選擇爲’或與降低溶液pH組合，藉由加入一環糊精 或兩丨生刀子足一令人驚奇之有用方法可得到更加穩定之 液態調配物，如下文所詳述。 已也月下列方法特別適於穩定呈液態之複合物·· 97599.doc 200529871 1.降低pH至pH 5至6，較佳5.5。 /·加入濃度爲重量百分數爲〇·〇1至約4〇(w%)之環糊精， 較佳0.1至20 W%，0」至1〇 wt %尤其佳。 具低pH及/或環糊精之調配物可以一令* '驚奇之有利方 式防止共軛效應分子自抗體解離。 依據本發明使用之環糊精（CD)係其環系統由6、7或8個 連接之葡萄糖單位組成之環形低聚糖或環形聚合 物且依早體數量稱爲α、β-或厂環糊精。該等環糊精已知 〜、不同生物刀子(例如脂肪酸或胺基酸)形成包藏複合 物，或可包圍它們至飽和點。可用之不同環糊精不同之處 要在係’、環大小不同（α_環糊精、環糊精、丫_環糊精）。 亦存在經不同取代之環糊精，其毒性及蛋白質_環糊精相互 作用性質不同。 +合,之環糊精包括(例如)經取代β_環糊精(由7個吡喃葡 萄糖早位組成）、㈣基_β_環糊精（抓卜⑶）、硫代丁醚-卜 環糊精（SBE|CD)、γ·環糊精（由8個吼d南葡萄糖單位組成） 及經丙基个環糊精（HP个CD)。 本發明之環糊精較佳係具下式之硫代烷基醚_環糊精 (SAE-CD)：
其中 97599.doc 200529871 n== 4、5 或 6 基團 Rl、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8 及 R9在每種情況 下皆獨立表示或一-0-(C2_C6伸烷基）_s〇3_基， 其中Rl及R2中至少一個獨立表示一 -0-(cvc6伸烷基）_ S 〇3 -基’ 較佳一-0-(CH2)mS03_基， 其中㈤係 4(例如-〇CH2CH2CH2SOr或-OCH2CH2CH2CH2SOr);及 S!、S2、s3、s4、s5、s6、s7、s8&s9在每一種情況下皆 獨立表不一醫藥上可接受陽離子，包含（例如）H+、鹼金屬 (例如Li+、Na+、K+)、鹼土金屬（例如ca.++、Mg++)、銨離子 及胺陽離子例如（C1_C6)烷基胺、哌啶、吡嗪、（C1_C6)鏈烧 醇胺及（C4-C8)-環鏈烷醇胺之陽離子。 特定而言’特別佳之環糊精係γ-環糊精（Y_CD)、羥丙基 環糊精（HP个CD)、經丙基_β_環糊精（ΗΡ-β-CD)或硫代丁 _一 β-環糊精（SBEJ-CD)。 在迄今已出版涉及到環糊精（尤其是β-環糊精）之製備及 用途之浩瀚文獻中，我們僅藉由舉例方式提及以下出版 物：Manning，Μ·等人，Pharm. Res. 6，1903-1918，1989 ; Yoshida，Α·等人，Int. J· Pharm· 461，217-222，1988 ; Brewster，M·等人，Int· J. Pharm· 59, 231-243，1980; Pitha， J.等人，Int· J· Pharm. 29，73-82，1986 ; Pitha，J· & Pitha J·，J. Pharm. Sci· 74，987-990，1985 ; Brewster，M.等人， J· Parent· Sci. Technol. 43 ’ 231-240 ’ 1978 〇 特定而言，pitha J· & Pitha，J·，loc· cit. (1986)闡述羥丙基-β-環糊精 97599.doc -10- 200529871 (ΗΡ-β-CD)之製備，且報告ΗΡ-β-CD之使用可提高各種活性 物質及生物大分子之水溶性。關於環糊精於醫藥領域之用 途參見藉由 Pitha，J.等人在 Controlled Drug Delivery [Bruck，S.D.，Ed·] Vol· I，CRC Press，Boca Raton，Florida， 125-148, 1983 中或 Uekama，K·，等人在 CRC Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems，Vol· 3 (1)，1_40，1987 中或 Uekama，K.在 Topics in Pharmaceutical Sciences 1987 [Breimer，D.D.及 Speiser，P.，Ed·] Elsevier Science Publishers B.V. (Biomedical Division)，181-194，1987)中概 述之文章。特定而言，由Brewster，Μ·Ε·等人於Pharm. Res. 8，792-795，1991中更詳細闡述使用2-羥丙基-β-環糊精來 溶液化及穩定具不同生物活性之蛋白質。 特別佳地，本發明之環糊精係一選自下表之環糊精。 表1 環糊精 縮寫 基團 η α-環糊精 a-CD H 4 β-環糊精 β-CD H 5 γ-環糊精 γ-CD H 6— 緩甲基-β-環糊精 CM-P-CD CH2C02H 或 H 5 竣曱基-乙基-β_環糊精 CME-p-CD CH2C02H、CH2CH3 或H 5 二乙基-β-環糊精 DE-p-CD CH2CH3 或 H 5 二曱基-β-ί哀糊精 DM-P-CD CH3 或 H 5 甲基-β-壞糊精 Μ-β-CD CH3 或 H 5 無規曱基-β-環糊精 RM-P-CD CH3 或 Η Ί 5 葡萄糖基-β-環糊精 GrP-CD 葡萄糖基或H 5 麥芽糖基-β-環糊精 g2-P-cd 麥芽糖基或H 5 經乙基-β-環糊精 ΗΕ-β-CD CH2CH2OH 或 Η 5 經丙基-β-環糊精 ΗΡ-β-CD CH2CHOHCH3 或 Η 5 硫代丁鱗-β-壞糊精 SBE-p-CD (CH2)4S03Na 或 Η 5 97599.doc 200529871 莫耳取代水平係0.5至0_7之最佳羥丙基-γ-環糊精由（例 如）Messrs Wacker-Chemie GmbH，D-Burghausen以商品名 「CAVASOL ㊣ W8 HP Phanna」出售。 令人驚奇地，已證明，使用亦可以商品名Captisol (Messrs CyDex，USA)購得之環糊精即硫代丁醚-β-環糊精 (SBE-P-CD)之調配物尤其有利。 根據本發明，該尤其佳之環糊精在較佳調配物中之濃度 係每體積之重量百分數（wt·%)爲0_001至大約40 w%，較佳 地係0.1至20 wt·%，尤其佳係0.1至10 wt_%或1至5 wt·%。本 發明之環糊精之含量係大約1.5或15 wt.%最佳。特別佳地， SBE-P-CD之含量爲大約1.5或15 wt·%。 本發明係關於抗體共軛物之調配物。術語「抗體」與「抗 體分子」意義相同。抗體可爲含有兩條重鏈及兩條輕鏈之 所有免疫球蛋白、此等免疫球蛋白之片段（例如Fab、Fab*、 或F(ab)2片段）、重組産生之抗體分子（例如嵌合抗體、人源 化抗體或全人抗體）。抗體共軛物意指抗體與效應分子之複 合物。較佳地效應分子藉由共價鍵與抗體連結。 舉例而言，根據本發明下列作爲抗體提及：HER2抗體例 如（例如）Herceptin®(曲司佐單抗（trastuzumab)，Genentech公 司）、VEGF特異性抗體例如貝伐佐單抗（Bevacizumab) (Genentech公司）；Rituxan(利妥西單抗（rituximab))、抗-EFGR 抗體 ABX-EGF;抗體 ABX-CBL(Abgenix);抗體 ICR-62(ICR， Sutton，England)及 Xolair(奥馬佐單抗（omalizumab))、C242(抗 突奇單抗（cantuzimab)，ImmunoGen)、Erbitux(西土 西單抗 97599.doc -12· 200529871 (Cetuximab)，IMC-C225，ImClone Systems);單株抗體 425 (Merck KGaA);米托莫單抗（Mitumomab)(Imclone Systems 及 Merck KGaA) ; Antegren(那他珠單抗（natalizumab))。一 本發明抗體共軛物可自本發明抗體之一及一效應分子（視 需要連同連接分子（一所謂連接體））製得。 一效應分子之實例包括：毒素（例如下述較佳之類美登素 或以實例方式提及之DM1)、放射性同位素（例如1311、nlIn、 99mTc)、酶（例如過氧化物酶或鹼性磷酸酶）、熒光染料或生 物素分子、細胞生長抑制素（阿黴素（doxorubicin)、紫杉烧例 如Taxotere®)，（歐洲專利第0 253 738號、美國專利第4,814,470 號）多稀紫杉醇（docetaxel)、柔紅黴素（daunorubicin)、更生黴 素（dactinomycin)、普卡黴素（plicamycin)、絲裂黴素 (mitomycin)、博萊黴素（bleomycin)、伊達比星（idarubicin)、 環構醯胺、氮芥、美法侖（melphalan)、瘤可寧（chlorambucil)、 曱节肼（procarbazine)、達卡巴嗓（dacarbazine)、六甲蜜胺 (altretamine)、氯氨始（cisplatin)、卡始（carboplatin)、奥沙 利柏（oxaliplatin)、異丙始（iproplatin)、奥馬始（ormaplatin)、 四氣環己始（tetraplatin))、胺甲蝶呤、Μ基嗓呤、硫鳥17票呤、 填酸氟達拉濱（fludarabine phosphate)、克拉屈濱（cladribine)、 喷托他丁（pentostatin)、氟尿哺。定：5-FU、阿糖胞苦、氮雜 胞苷、前藥、細胞因子、免疫調節多肽例如腫瘤壞死因數 或介白素-2。 可提及之本發明抗體共軛物實例包括抗體共軛物AS1406 (antisoma)、人源化抗體HMFG1(其與RNase酶結合）、澤娃靈 97599.doc -13- 200529871 (zevalin)(替依莫單抗（ibritumomab tiuxetan))、bexxar (corixa， 填1-131托西莫單抗（i〇cjine I_ 131 tositumomab))或類美登素或 在下文中提及之DM1共軛物。 依據本發明，該抗體共軛物複合物之濃度在0.01與4〇毫 克/¾升之間，較佳地在0·1至20毫克/毫升之間，尤佳在 至丨〇毫克/毫升之間。 本發明另一具體實例涉及該抗體共軛物與環糊精及經基 酸之複合。所需環糊精之量可藉由形成一由該抗體共輛 物、相關環糊精及一羥基酸組成之三元複合物來減少。合 適之環糊精包括（例如）HPJ-CD、SBE-P-CD、γ-CD及 ΗΡ-γ-CD。因此，除活性物質及環糊精外，設計用於非經腸 才又藥之本發明醫藥組合物可含有經基酸，例如蘋果酸、乳 酸、酒石酸、琥珀酸或檸檬酸。 根據本發明，活性物質與環糊精之莫耳比在1: 1與丨：3300 之間。較佳之莫耳比係i : 1〇〇至1 : 15〇〇，尤其是1⑼ 至1 : 600。在存在羥基酸時根據本發明活性物質與環糊精 之莫耳比如上所述。 用於替代本發明醫藥組合物中之本發明環糊精之合適兩 性分子係（例如）：膽鹼衍生物（C6_C2〇);天然存在之膽鹼（蛋 類及大豆卵磷脂），例如二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼（DMpc)、 一棕櫚醯磷脂醯膽鹼（DPPC)、二油醯磷脂醯膽鹼⑴〇pc); 或乙醇胺衍生物（C6至C20);天然存在之乙醇胺（蛋類及大 丑乙醇胺），例如二豆蔻醯磷脂醯乙醇胺（DMPE)、二棕櫚醯 磷脂醯乙醇胺（DPPE)、二油醯磷脂醯乙醇胺（D〇pE)，其中 97599.doc 200529871 DOPE尤其佳。此外，相應之甘油衍生物（C6-C20)或帶有飽 和及不飽和脂肪酸之碟脂酸（C6-C20)皆可作爲另外之構脂 來使用。 本發明醫藥組合物視需要亦含有傳統賦形劑及載劑，例 如等滲劑（葡萄糖、甘露醇或氣化鈉）或與乙酸結合作爲緩衝 液之乙酸鈉或三水乙酸納或檸檬酸/磷酸鹽緩衝液（由（例如） 檸檬酸與碌酸氫二納或二水鱗酸氫二鈉組成）。溶劑通常係 注射用水。 此種賦形劑及載劑之濃度爲熟習此項技術者所知，且可 見（例如）Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990)，18th ed· Mack Publ.，Easton 〇 pH可使用下列试劑（已製成酸性，依原始pH而定）降低： HC卜H3P04及鱗酸之其他衍生物、hn〇3、H2S04、ch3cooh 或所有已知適用於此目的之醫藥上可接受酸，或藉由選擇 選自基於下列之緩衝系統之合適緩衝系統來調整：一元 酸：乙酸、安息香酸、葡萄糖酸、甘油、乳酸；二元酸： 烏頭酸、己二酸、抗壞血酸、碳酸、縠胺酸、蘋果酸、琥 珀酸、酒石酸；多元酸：擰檬酸、磷酸；或鹼：氨水、二 乙醇胺、甘胺酸、三乙醇胺、胺丁三醇及其鹽。若該阳因 太低而不得不提高，則可使用合適的已知物質或其溶液， 例如NaOH、KOH、氨溶液等等。 醫藥組合物亦含有鹽或鹽溶液（尤其爲醫藥上可接受鹽 例如無機鹽，例如氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、二磷酸越、 氫演酸鹽及/或石肖酸鹽）作爲另外成份或作爲附加釋定劑。該 97599.doc 15 200529871 脂質懸浮液亦可含有有機鹽，例如蘋果酸鹽、馬來酸鹽、 富馬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、乙基琥珀酸鹽、檸檬酸 · 鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、甲烷磺酸鹽、安息香酸鹽、抗壞血 * 酸鹽、對曱苯磺酸鹽、棕橺酸鹽（palmoate)、水楊酸鹽、硬 月曰酸鹽、依托酸鹽、葡庚糖酸鹽或拉比歐酸鹽（labi〇nate)。 該醫藥組合物可含有各種胺基酸（例如精胺酸及甘胺酸） 作爲附加賦形劑。其他合適胺基酸爲熟習此項技術者所習 知。 視需要可於本發明醫藥組合物中含有之聚合物實例包括 聚乙烯吡硌烷酮、纖維素衍生物（例如羥甲基、羥乙基或羥 丙基-乙基纖維素）、聚合糖（例如水溶性聚蔗糖或葡聚糖）、 澱粉（例如羥乙基或羥丙基澱粉）、糊精（例如環糊精（2_羥丙 基-β-環糊精、硫代丁醚-β_環糊精））、聚乙烯、乙二醇、殼 聚糖、膠原、透明質酸、聚丙烯酸酯、聚乙烯醇及/或果膠。 視需要可於本發明醫藥組合物中含有之糖類實例包括單_、 一-、寡聚-或多聚糖或其組合。單糖之實例較佳地係已醛 籲 糖、已酮糖及其衍生物及其旋光異構體、果糖、麥芽糖、 半礼糖、葡萄糖、D.甘露糖、山梨糖、D⑴·葡萄糖、D(+)_ 甘路糖D(+)_半乳糖、D(_)_果糖、D(+)_山梨糖及其類似 物。 、二糖之實例係乳糖、餘（saeeha⑽e)、蔗糖（suerGse)、 ^ 海藻糖、纖維素二糖及其類似物。 合適多糖之實例特定而言包括棉子糖、松三糖、糊精、 殿粉及其類似物。 97599.doc -16- 200529871 視需要可於本發明醫藥組合物中含有之糖醇實例除甘露 醇或D-甘露醇之㈣包括木_、麥芽糖醇、半乳糖醇、 阿拉伯糖醇、戊五醇、乳糖醇、&梨糖醇(葡糖醇卜比。南糖 基山梨醇、環己六醇、肌醇及其類似物。 該醫藥組合物亦可含有清潔劑作爲另外之成份，較佳地 選自吐溫（TWeen)20、吐溫60、吐溫8〇(聚山梨醇酿2〇、6〇、 ⑽）、泊洛沙姆（P〇i〇xamere)(Pluronic(聚氧乙烯+聚氧丙 烯）），其濃度係爲0.01至5重量％，較佳爲〇 〇1至〇丨重量％， 〇·〇2至〇.〇4重量％尤其佳。 本發明醫藥組合物可在本發明範圍内用於 藥，例如靜脈内、血管内、肌肉内、動脈内、腹：= 内投藥。本發明醫藥組合物之更爲局部之投藥可藉由皮 下皮内、心内、葉内、髓内或肺内途徑或直接進入或接 近待治療器官（結締組織、骨、肌肉、神經或上皮組織）來實 現。 本發明醫藥製劑可用於各種其中毒性化合物直接以表現 CD44之細胞爲目的之臨床或非臨床應用。 本發明另一具體實施例中涉及一藉由將本發明醫藥製劑 之治療有效量施予一需治療之患者來治療癌症之方法。該 癌症較佳係扁平上皮癌（例如「頭頸部鱗狀細胞癌（sec)」、 艮笞see、肺see、皮膚see、乳腺癌、肺癌、子宮頸gee、 胰腺癌、結腸癌、胃癌）。在臨床治療癌症中，本發明醫藥 製劑（例如）按照下列治療方案投藥，例如1至6週每週一次靜 脈推注或連續灌注5天。 97599.doc 200529871 該推注劍量可以溶於加有5至1〇毫升人類血清白蛋白之 5〇至1〇0毫升標準鹽水中之形式施與。連續灌注可以溶於· 2%至綱毫升標準鹽水令之形式施與，且每24小時向鹽水· 中加入25至50毫升人類血清白蛋白。每次施用之抗體共軛 物」里通萬係1〇宅克至4〇〇毫克/平方米體表面積。一方 面’该劑量須高至有效，但亦應低於所謂「劑量上限毒性」 (DLT)。=低於DLT之可以最大劑量爲「最大耐受劑量」 (MTD)。熟習此項技術者皆知如何測定等人， 觸）。對每週投藥一次而言，該则大概在1〇〇至·毫克攀 /平方米範圍内。或者，投藥之時間間隔可以更長，例如二 至四週，李父佳爲三週。在此情況下該贈〇預期爲介於· 至3⑼毫克/平方米之間。或者，還可以$天每天一次之劑量 後接著間隔數週來投藥。此時該MTD預期低於剛毫克/平 方米。舉例而言，依據本發明該醫藥製劑可每以天以3毫克 /刀知之速率作一單次靜脈灌注來施與。至多進行7個週期 治療。若臨床情況需要，所用劑量之變化可超出指定範圍。φ 舉例而言，若發現該MTD高於給定值，則一單次劑量亦可 Γ7於400¾克/平方米，或每週一次之劑量可高於2⑼毫克/ 平方米。 本發明抗體共軛物之非經腸組合物具體實施例所含該活 性物質之劑量係每天1毫克/公斤體重至40毫克/公斤體重， - 車乂仏/丨於3至15 Φ克/公斤體重之間。下列劑量亦較佳（以[毫 · 克/平方米]來表示）：10[毫克/平方米]至2〇〇[毫克/平方米]; 更L爲20至100[耄克/平方米]，最佳爲10、20、40或50毫克 97599.doc -18- 200529871 /平方米。 在一較佳具體實施例中’該製劑藉由連續灌注〇 · 5至2 4小 時或可能數天來施與，以維持穩態血漿水平。所施與體積 爲50至5 00毫升，較佳地爲1〇〇至250毫升，即所施與活性物 質之濃度介於80毫克/500毫升=0.16毫克/毫升（0.015%)至 1500毫克/100毫升=15毫克/毫升（1.5%)之間。活性物質濃度 較佳係0.5毫克/毫升=0.05%(g/v)至3.5毫克/毫升=0.35% (g/v)較佳。本發明一關鍵點在於由抗體偶聯到類美登素組 成之抗體共輛物之調配物或醫藥組合物。抗體-DM 1共輕物 尤其最佳。本發明抗體-DM 1共輛物之實例有：由類美登素 DM 1與單株抗體載體T-MAV(其特異性地連結至前列腺特 異性膜蛋白）組成之抗體共軛物MLN2704 ; C242/CanAg-特異 性人源化單株抗體-DM1共輛物抗突祖單抗（cantuziimab)-DMl(Liu等人，1996 ; Lambert等人，1998);對 CD56抗原具 特異性之人源化單株抗體-DM1共軛物「huN901-DMl」 (Chari等人，2000);對CD33抗原具特異性之人源化單株抗 體-DM1 共軛物 My9-6-DMl(Aventis);對 IGF-1 受體「抗-IGF1 hu MAbs」具特異性之人源化單株抗體-DM1共軛物 (MorphoSys/ImmunoGen)；具靶分子EGFR之人源化單株抗 體-DM1共軛物抗-EGFRvIII_DMl(Abgenix)。下式之抗體共軛 物之醫藥組合物尤其佳： A(LB)n 其中 A 係一抗體分子； 97599.doc -19- 200529871 係一連接體物質；
B 係一對細胞有毒性之化合物；及 係一十進制數字，η = 1至1 〇。 其中該連接體物質含有一可在細胞内解離之化學鍵的上 式之醫藥組合物亦特別佳。其中該化學鍵係二硫鍵之上式 之醫藥組合物亦特別佳。 、有利地，該抗體-DM1共軛物可用上述賦形劑等以上述方 式之一來進行調配。 ,體分子Α對CD44(較佳為CD44變體）具有結合特異性。 對CD44特|」思艮p该抗體特異地與⑶區之抗原決定 斗位、、⑺&較佳地，本發明抗體結合至藉由人類CD44基因 之v6可變外顯子編碼之胺基酸序列。一較佳抗體分子特異 f生地、、、σ &至含有或由隨附序列表中之序列seq ZD no: 1或 該序列之等位基因變體組成之肽.。特別佳地，本發明抗體 分子特異性地結合至胺基酸序列SEq ID NO:〕或SEQ ID ΝΟ·3。此類抗體可藉由先前技術已知之方法來製備（w〇 95/3 3 771 ’ WO 97/21 104) ’例如藉由用上述序列之化學合 成肽使實驗室動物免疫來製備。 車乂佳抗體係鼠單株抗體VFF-1 8，其藉由寄存雜交瘤細胞 (1994年6月7日寄存，登錄號DSM ACC2174，於DSM-Deutsche Sammlung fiir Mikroorganismen 及 Zellkulturen GmbH，Mascheroder Weg lb，D-38124 Braunschweig，
Germany)···(詞語省略）。其中VFF· 18之所謂的互補決定區 (CDR)已施力口至人類免疫球蛋白基因之輕鏈及重鏈之相應 97599.doc -20- 200529871 區域的人源化重組抗體亦較佳。互補決定區之定義近似於 Kabat等人（1991)與Chothia及Lesk(1987)所述定義之聯合。 最佳地，抗體A係一含有具胺基酸序列SEQIDN0:4之輕鏈 及具胺基酸序列SEQ ID N0:6之重鏈之抗體。該抗體稱爲 BIWA4，且係一人源化VFF-18變體。抗體A係一含有具胺 基酸序列SEQIDNO··8之輕鏈及具胺基酸序列SEQIDNO:6 之重鏈之抗體亦特別佳。該抗體稱爲BIWA8且係一人源化 VFF-18變體。本發明抗體可分別用核苷酸序列SEQ IDN0:5 和 SEQ ID N0:7 (BIWA4)及 SEQ ID N0:9和 SEQ ID N0:7 (BIWA8)以類似於 WO 02/094879 A1 及 WO 02/094325 A2 之 所述方法來製備。與本發明毒素之結合亦詳細顯示於wo 02/094325 A2(其全文特此併入本申請案中）。 若一物質抑制或完全阻斷細胞功能及/或引起細胞毁 滅，則該物質係「有毒」。毒性物質作爲配體可抑制細胞生 長或對細胞具有毒性，導致細胞週期停止或細胞死亡。此 等物質可藉由幹擾核酸合成、使核酸失活或藉由微管蛋白 結合在不同點上幹擾細胞週期。較佳地，毒性化合物B係一 類美登素，即美登素之衍生物（CAS 35846538)。較佳地，B 係一美登素醇之C-3酯。可偶聯到抗體上之類美登素業已予 以闡述（Chari等人，.1992 ; Liu等人，1996 ;美國專利第 5,208,020號）。該等類美登素可用於本發明中。較佳毒性化 合物B係N2'-去乙醯基_ N2'-(3-毓基-1-氧代丙基）-美登素 (CAS號1395 04-50-0)，其亦稱爲DM1。較佳地，該類美登 素係一藉由美登素醇之C-3位置之二硫橋鍵偶聯到抗體上 97599.doc -21 - 200529871 、”-子何物。特別佳地，本發明抗體/類美登素共軛 物自下式之類美登素製得： 式（II) 其中
(CH2)mSR，
R】表示Η或SR4，其中R4表示曱其、7甘 ^ ^ 取丁 T I 乙基、直鏈烷基 支鏈烷基、環烷基、單或取代芳基或一雜環； R2表示C1或Η ; R3表示Η或CH3 ;及 m表示1、2或3。
Ri 較佳係 Η、CH3 或 SCH3，R2*C1 其中 Ri = Η、R2 = Cl、R3 = ch3及 中稱爲DM1。 ，R3係 CH3及 m = 2。 m = 2之化合物在文獻 在一較佳具體實施例中，本發明
化合物具有式III 97599.doc -22- 200529871 CH, 〇 Η
㈧ (式 ΙΠ) 其中 A係一抗體分子，其對CD44具有特異性，較佳對外顯子 v6變體具有特異性，較佳對胺基酸序列SEQIDN0:3具有特 異性； (L’）係一可選連接體分子 P係'—h進制數字，其中p = 1至10。 較佳地p= 3至4，約爲3.5尤其佳。 製備該等類美登素之方法在此項技術中已爲人所知（特 別參見美國專利第5,208,020號，實例1 ; WO 02/094325A2)。 在一較佳具體實施例中，式（I)化合物之毒性小於化合物 B、B-X或B-L’’-Χ，該等化合物於細胞内解離後釋放。 較佳者係藉由二硫鍵連接之抗體/類美登素共軛物，其可 釋放類美登素分子。該類細胞結合共軛物可藉由先前技術 所述方法製備（美國專利第5,208,020號；W0 02/094325A2)。 97599.doc -23 - 200529871 另一方面，該共輛物由一 CD44v6-特異性抗體分子與一類 美登素組成。「CD44v6-特異性」意指該抗體對一於具藉由 CD44(較佳人類CD44)外顯子V6變體編碼之胺基酸序列之 肽中[詞語遺漏？]之抗原決定部位具有一特異性性結合親和 力。本發明一較佳抗體分子特異性地與包含或正好具有胺 基酸序列SEQ ID ΝΟ··1或該序列之一等位基因變體之肽或 多肽結合。較佳地，該抗體分子與該序列中一抗原決定部 位特異性性結合。特別地佳，本發明抗體分子與胺基酸序 列SEQ ID ΝΟ:2或SEQ ID Ν〇:3之抗原決定部分結合。 較佳地，在該共軛物中之本發明抗體分子係單株抗體 VFF-18(DSM ACC2174)或一具有VFF-18之互補結合區 (CDR)之重組抗體。特別佳地，本發明抗體分子含有具胺基 酸序列SEQ ID NO:4之輕鏈及具胺基酸序列SEq m N〇:6i 重鏈。本發明抗體分子含有具胺基酸序列SEQ ID NO:8之輕 鏈及具胺基酸序列SEQ ID NO:6之重鏈亦尤其佳。 該類美登素較佳藉由一二硫鍵與該抗體偶聯且具有化學 式·· 97599.doc -24- 200529871 〇
CH, Ό CH,
〇CH 8h 式（IV) 其中經由式IV中硫原子與抗體之連結係連接至另一在抗 體分子中之硫原子。爲得到抗體分子中該類結合用硫原 子，可用一合適連接體修飾該抗體分子，如WO 02/094325A2 中所述。較佳地，該類美登素藉由一 S-CH2CH2-CO-、 -S-CH2CH2CH2CH2-CO-或-S-CH(CH3)CH2CH2-C〇-基與該 抗體分子結合。該類連接體基團中之硫原子與類美登素形 成二硫鍵，而羰基官能團可能結合到一胺基酸侧鏈上可能 含有之胺基官能團上。 這樣，數個類美登素基團可能與一個抗體分子結合。較 佳地，每抗體分子結合3至4個類美登素基團。 最佳者係一 CD44v6-特異性抗體分子與一類美登素之共 軛物，其中該抗體分子含有具胺基酸序列SEQ ID N〇:4之輕 鏈及具胺基酸序列SEQ ID NO:6之重鏈，且其中該類美登素 具有化學式 97599.doc -25 - 200529871
C
式（ιν) 並經由一二硫鍵與該抗體偶聯。 較佳地，該連接體基團係-S-CH2CH2CH2CH2-CO-或-s-ch(ch3)ch2ch2-co-，且每個抗體分子結合類美登素 基團之數目係3至4。 因此，本發明一首選目的係減少抗體-類美登素或1 複合物之類美登素或DM 1分子部分之化學（較佳水解性）解 離’藉此避免調配物中出現游離類美登素或DM 1。 藉此’必須具有可確保抗體_DM1複合物之高儲存穩定性 的各種物理及化學條件。此可藉由改造液態調配物及藉由 使用新賦形劑來達成。 本發明用於製備穩定抗體-類美登素或-DM1複合物之較 佳方法可降低産品儲存期間游離類美登素或dmi及其衍 物之形成。 々人驚奇地，士卜# 匕了猎由降低pH來達成。另一選擇爲，或 97599.doc 200529871 與降低溶液pH組合， 兩性分子可以令人驚 配物，如上文所述。 藉由加入一種或多種上述環糊精或— 可之有利方法得到更加穩定之液態調 較佳環糊精尤其爲γ_環糊精（y_eD)、_ m (ΗΡ-γ-CD)、㈣基_β•環糊精（Hp似d)或硫代丁: 精（SBEJ-CD)。 蝴 已證明’使用環糊精C— (SBE|Cd ·硫代丁 環糊精）（〇.〇〇1至40·69 wt %)特別有用。 … 已迅明’下列條件尤其適合於穩定液態複合物： Φ 1·降低pH至pH 5-6，軔祛汕$ ς銥丄太 土 苹乂仏地5·5，猎由琥珀酸鈉來緩衝尤 其 。 2·加入〉辰度爲001至大约舌 王穴、、々40重里百分數（wt%)之環糊 較佳地0.1至20 wt% ’ n1〇 wt %尤其佳。 依據-較佳具體實施例，該抗體共辆物複合物之 ⑽與4〇毫克/毫升之間，較佳地如與2Q毫克/毫升^ 更佳地在0.1與10毫克/毫升之間。
具低pH及/或環㈣奢之調配物令人驚奇地能有利防止 結合效應分子自該抗體上解離。 與-參考調配物比較，藉由相應地結合上述方法可將 液態調配物（在2至8〇C儲存）之使用期延長至3至4倍（參見』 例）。 / 根據另-具體實施例，本發明涉及一藉由聯合上述… 方法（即降低pH及在調配中含有㈣⑻）來穩定—液^ 配物中抗體-DM1複合物之方法。 〜 97599.doc -27- 200529871 本發明已可提供防止一液態調配物中DM1從抗體上解離 之方法。本發明方法之特徵係抗體_DM1複合物在一水性介 質中具咼度穩定性，此使得該産品可調配爲液態製劑以用 於非經腸投藥，較佳用於靜脈内投藥。 令人驚奇地，已發現降低pH及/或存在(^邛比〇1可穩定抗 體-DM 1複合物之液態調配物。依據一較佳具體實施例，該 抗體-DM1複合物之濃度係在0.01與40毫克/毫升之間，較佳 地在0.1與20毫克/毫升之間，更佳地在〇1與1〇毫克/毫升之 間。對於穩定液態複合物，已證明下列尤其合適： 3·降低pH至5-6，較佳地5.5， 4.加入 Captisol (〇.〇1 至約 40 wt·%)，較佳地 〇1 至 2〇 wt·%，更佳地〇.1 至 10 wt %。 一較佳調配物含有一磷酸鹽緩衝液、食鹽、吐溫2〇及上 述抗體共軛物之一，特別佳地CD44v6-特異性抗體與類美登 素DM 1偶聯之抗體共輛物，如上所述。特別佳者係一 pH爲5 至6且含有下列之調配物··一包含1至19 mM NaH2p〇4 χ H20 4至 5 mM KH2P〇4、3.5至 4.5 mM Na2HP〇4之石粦酸鹽緩 衝液，以及30至lOOmMNaC卜0·01至0·05 wt%吐溫2〇及抗 體共軛物（較佳地係抗體-DM1共軛物，尤其佳地係CD44v6-特異性抗體與類美登素DM1偶聯之抗體共軛物，如上所 述’其濃度係1至5毫克/毫升）。PH 5.5尤其佳。 特別佳者係一 pH爲6·5(較佳5 · 5)且含有下列之調配物：包 含大約1.4511^心1^04乂1120、大約4.1911^〖1_12?〇4、大 約3.91 mM Na2HP〇4之磷酸鹽緩衝液，以及大約6〇 mM[ 97599.doc -28- 200529871
NaCM，及大約0.02 wt·%吐溫20及抗體共軛物（較佳地係抗體 -DM1共輛物，尤其佳地係CD44v6-特異性抗體與類美登素 DM1偶聯之抗體共軛物，如上所述，其濃度係1至2.5毫克/ 毫升，較佳1.8毫克/毫升）。 一每2毫克/毫升抗體共軛物包含10 mM琥珀酸鹽緩衝液 (例如琥珀酸鈉緩衝液）之製劑尤其最佳，該抗體共軛物較佳 係抗體-DM1共|厄物，特別佳地係CD44v6-特異性抗體與類 美登素DM1偶聯之抗體共輛物，如上所述。該尤其佳之醫 藥製劑之其他可選擇成份係NaCl(在3 0至100 mM NaCl範圍 内，較佳60 mM NaCl)及/或吐溫20(在0·01至0.05 wt·%吐溫 20範圍内，較佳地〇·〇2 wt·%)。將該pH調節至5至6，調節至 5-5尤其佳。 下列實例用於更詳細地闡述本發明而非以任何方式限制 本發明之範圍。 例示性具體實施例 下面的實例用於舉例說明本發明之目的及方法。 儀器及方法： 化學藥品： 所用賦形劑滿足對於批准用於醫藥用途之賦形劑的要 求。表2所示係所用賦形劑。WFI (注射用水）來自Boehringei· Ingelheim，Biberach，德國。 97599.doc • 29- 200529871 表2 物質 供貨商 分子量(以克/莫耳計） KH2P〇4 BTP BI 136.09 NaH2P04 x 2H20 BTP BI 156.0 Na2HP04 x 2H20 BTP BI 177.99 NaCl BTP BI 58.44 甘露醇BTP BI 182.17 嚴糖(Saccharose) BTP BI 342.3 正磷酸85% Fluka ΗΡ-β-CD BI (DE) 1521.0 ΗΡ-γ-CD Wacker (DE) 1297.0 γ-CD Wacker (DE) 1576.0 Captisol (SBE-p-CD) cyDex(USA) 2163.0 HP :羥基-丙基
SBE :硫代丁醚 CD :環糊精 所有所用環糊精皆係市面有售（參見表1)。 所用抗體-DM1複合物係一 CD44v6-特異性抗體分子與類 美登素DM1之共軛物，其中該抗體分子含有具胺基酸序列 8丑(5 10 1^〇:4之輕鏈及具胺基酸序列3£(^10 1^0:6之重鏈， 且其中該類美登素具有式 _ 97599.doc 30- 200529871
及藉由一二硫鍵與該抗體偶聯。 製備一抗體-DM 1液態調配物： /爲製備1.8¾克/耄升之抗體-DM1溶液，將起始溶液在 緩衝（用標準方法）後加人到將要測試之溶液中，或者將相應 賦形劑一起加入。該等調配物之精確構成闡述於各實。 分析量測方法： -pH值、滲透壓、外觀、顏色及澄明度根據現行歐洲藥典 及美國藥典方法測定。 -HP-SEC(咼效排阻層析）。使用Hp-SEC測定溶液中單體 之合里。T2係從SEC官柱等度洗脫，且藉由積分評價單體 峰值。 -RP-HPLC (反相高效液相層析）··使用定游離 DM1含量。該分析方法基於聯合]9[凡(：：與一「屏蔽」反相管 柱（其使得可區別在蛋白質分子存在時有UV-吸收的小化學 97599.doc 200529871 分子）。該聯合方法結合大小排除層析及反相層析之優點。 大分子不能滲入多孔管柱基質中，結果大分子不能結合於 基質之疏水内部。另一方面，小分子能進入管柱基質而結 合到疏水内部。將含游離DM1(「小」）之抗體-DM1複合物 (「大」）溶液上樣到管柱。只有游離DM 1能結合上，抗體_dm 1 複合物則被洗脫下來。DM1及相應安絲菌素（ansarnit〇cine) 衍生物藉助一乙腈梯度從管柱上洗脫下來。 用於應力穩定性研究之初包裝 藥瓶：20/25毫升標準藥瓶（20R)，無色，GA1 Inj.(Messrs
Schott，DE) 瓶塞：Gusto WS 579’ W 1 888灰色，鐵氟龍（Tefl〇n)(Messrs
West，USA) 帶凸緣瓶蓋：Kombika/Alu-KU (Messrs West，DE) 貫施應力穩定性研究 使待檢測之不同液態調配物通過一無菌
ί過一無菌濾器（0.22微米， 柷中。體積容量 ，並倒置儲存。 0、4及8週。 合物穩定性之影響 .(抗體-DM1複合物）皆係1.8毫
97599.doc 200529871 物質 組合物 蛋白質 濃度：1.8毫克/毫升___ KH2P〇4 4.19 mM NaH2P04 x H,〇 1.45 mM 一 Na2HP04 3.91 mM _ NaCl 139.6 mM _ 吐溫20 0.02 wt.% _ 6.5 用1 N磷酸自對照調配物（表3)開始將所研究的不同調配 物之pH調整至ρΗ6·0及5.5。 每一種調配物各20毫升轉入到一 20 R藥瓶中，並將該藥 瓶倒置儲存於40。(：。 應力穩定性研究結果示於圖1及表4中。 表4 ·· 時間 pH 5.5 pH 6.0 nH6.5 週 HP-SEC 單體[%] ACC pH值 HP-SEC 單體[%] ACC pH值 HP-SEC 單體[%] ACC pH 值 0 94 1.3 5.5 93 1.2 5.9 92 1.6 6.3 4 84 2.1 5.3 84 2.0 5.9 82 2.6 6.4 8 87 1.4 5.4 85 2.8 5.8 81 5.2 6.4 圖1顯示游離DM 1含量之差別。其顯示在零值與4週值之 間之游離DM 1之差別及在零值與8週值之間之差別。 DM1含量測定之評價說明··將每一次取樣所測的不同 DM1分子之面積相加。此會産生各個體樣本中DM1衍生物 之總面積。曲線圖顯示對於每一調配物該等面積在〇與4週 (淺色）之間增加且在0與8週（深色）之間增力口（相應調配中游 離類美登素增加）。 令人驚奇地發現，pH值對抗體-DM1複合物之穩定性有报 大影響。 & 97599.doc -33 - 200529871 圖1清楚地顯示pH之影響。pH 5 ·5之調配物中游離DM1含 量低至爲pH 6.5之調配物中的1/2至1/3。 pH 5.5之調配物中單體含量較pH 6.5之調配物高2至 6%。低pH對ACC(外觀、顏色、澄明度）參數亦有有利影響（彖 見表3)。 概言之，可確定將pH從6.5降低至5·5對穩定抗體七“丨複 合物有一正面影響。與pH 6.5之調配物相比，當儲存於2至 8 °C時有效期可延長至2至3倍。 實例2 :環糊精對抗體_DM1複合物穩定性之影響 在第二個試驗中，在一加速研究中評價環糊精對抗鹘 -DM 1複合物穩定性之影響。 丑 測試4種不同環糊精： •羥基-丙基-β-環糊精（HPj_CD) •羥基-丙基个環糊精（Hp_y_cd) 環糊精（γ-CD) •硫代丁醚-β-環糊精（SBE_p_CD，captis〇l) 基礎調配物由下列賦形劑組成（表5): 表5 ·· Έ¥~ -- 組合物 蛋白質 濃度：1.8毫克/毫升 ΚΗ2ΡΟ4 4.19 mM~ ' NaH2P〇4 X H20 1.45 mM Na2HP〇7~·~~"~ 3.91 mM~"" ~ NaCl 60 mM ’ 吐溫20^ … 0.02 wt.% —' PH ~6~5 ~ 在所有CD製劑中PH在PH 6·5上保持恒定。 97599.doc 200529871 環糊精含量在mi5wt%之間變 表6 :
加速研究之結果示;本 禾不方、圖3及表7至1〇中。（對結果之陳述參 見實例1)。 表7
表8 : 時間 B1 B5 B15 週 HP-SEC 單體[%] ACC HP-SEC 單體[%] ACC HP-SEC 單體[%] ACC 0 93 1.0 93 1.0 94 0.9 4 86 Γ 5.4 87 7.0 88 6.2 8 82 L 4.3 83 6.2 82 8.5 97599.doc -35- 200529871 表9 : 時間 Cl C5 週 HP-SEC 單體[%] ACC HP-SEC 單體[%] ACC — 0 93 72 93 254 4 88 114 89 195 8 84 50 86 171 表10 時間 D1 D5 D15 週 HP-SEC 單體[%] ACC HP-SEC 單體[%] ACC HP-SEC 單體[°/〇] ACC 0 93 1.0 92 1.5 93 1.4 4 87 4.2 85 3.6 85 2.8 8 81 5.0 78 5.2 81 4.9 圖2顯示，調配物D(Captisol)之游離DM1含量最低。比較 (例如）調配物D1與B1(環糊精含量相同）顯示，調配物⑴之 游離DM 1含量係調配物B 1之一半。將調配物d與不含環糊 精之調配物比較（圖1)顯示，對於8週值，後者之dm 1含量值 增加（加倍）。 不同環糊精調配物之單體含量與pH 6.5之對照調配物（表 3)相當。 概曰之’可確定具環糊精（尤其是Captisol)之調配物有助 於穩定抗體-DM1複合物。因此，與對照調配物相比，産品 之有效期延長。 [參考文獻]
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97599.doc -49- 200529871 序列表 <110〉德商百靈佳殷格翰製藥公司 < 120>抗體共輛物之液態調配物 <130> P01-1601/WO <140〉 093140301 <141〉 2004-12-23 * <160> 9 <170> Patent In version 3. 1
<210〉 1 <211〉 42 <212> PRT <213> Homo sapiens CD44 Exon v6 <400〉 1
Gin Ala Thr Pro Ser Ser Thr Thr Glu Glu Thr Ala Thr Gin Lys Glu 15 10 15
Gin Trp Phe Gly Asn Arg Trp His Glu Gly Tyr Arg Gin Thr Pro Arg 20 25 30
Glu Asp Ser His Ser Thr Thr Gly Thr Ala 35 40 <210> 2 〈211〉 14 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 2
Gin Trp Phe Gly Asn Arg Trp His Glu Gly Tyr Arg Gin Thr 1 5 10 <210〉 3 〈211〉 11 <212〉 PRT <213〉智人 <400〉 3
Trp Phe Gly Asn Arg Trp His Glu Gly Tyr Arg 1 5 10
<210> 4 <211> 213 <212〉 PRT <213〉人源化抗體輕鏈A <400〉 4 97599 200529871
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser lie Asn Tyr lie 20 25 30
Tyr Trp Leu Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg lie Leu lie Tyr 35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gin Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210〉 5 <211〉 702 <212> DNA <213〉人源化抗體輕鏈A <400〉 5 atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctgctct ggctcccaga taccaccgga gaaattgttc tcacccagtc tccagcaacc ctgtctctgt ctccagggga gagggccacc ctgtcctgca gtgccagctc aagtataaat tacatatact ggtaccagca gaagccagga caggctccta gactcttgat ttatctcaca tccaacctgg cttctggagt ccctgcgcgc ttcagtggca gtgggtctgg aaccgacttc actctcacaa tcagcagcct ggagcctgaa gattttgccg tttattactg cctgcagtgg agtagtaacc cgctcacatt cggtggtggg accaaggtgg agattaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 97599 200529871 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ga 702
<210〉 6 <211> 444 <212> PRT <213〉人源化抗體重鏈 <400〉 6
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Thr lie Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser lie 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gin Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu 165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190
Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 97599 200529871
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285
Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300
Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He Ser Lys Ala 325 330 335
Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 340 345 350
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro 370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin 405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430
Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440
<210> 7 <211> 1392 <212〉 DNA <213〉人源化抗體重鏈 <400> 7 atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgtgaa 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggctta gtgaagcctg gagggtccct aagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac tttcagtagc tatgacatgt cttgggttcg ccaggctccg 180 gggaaggggc tggagtgggt ctcaaccatt agtagtggtg gtagttacac ctactatcta 240 gacagtataa agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaactc cctgtacctg 300 caaatgaaca gtctgagggc tgaggacacg gccgtgtatt actgtgcaag acaggggttg 360 gactactggg gtcgaggaac cttagtcacc gtctcctcag ctagcaccaa gggcccatcg 420 gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc 480 ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc 540 agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 600 gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac 660 aagcccagca acaccaaggt ggacaagaaa gttgagccca aatcttgtga caaaactcac 720 acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc 780 97599 -4- 200529871 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 840 gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 900 cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 960 gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1020 aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1080 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc 1140 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1200 gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1260 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1320 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1380 ccgggtaaat ga 1392
<210〉 8 <211〉 213 <212> PRT <213〉人源化抗體輕鏈B <400〉 8
Glu lie Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser lie Asn Tyr lie 20 25 30
Tyr Trp Leu Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg lie Leu lie Tyr 35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro Glu 65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gin Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110
Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140
Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu 145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 97599 200529871
Asn Arg Gly Glu Cys 210
<210〉 9 <211〉 702 <212〉 DNA <213〉人源化抗體輕鏈B <400〉 9 atggaagccc cagctcagct tctcttcctc ctgctgctct ggctcccaga taccaccgga 60 gaaattgttc tcacccagtc tccagcaacc ctgtctctgt ctccagggga gagggccacc 120 ctgtcctgca gtgccagctc aagtataaat tacatatact ggctccagca gaagccagga 180 caggctccta gaatcttgat ttatctcaca tccaacctgg cttctggagt ccctgcgcgc 240
ttcagtggca gtgggtctgg aaccgacttc actctcacaa tcagcagcct ggagcctgaa 300 gattttgccg tttattactg cctgcagtgg agtagtaacc cgctcacatt cggtggtggg 360 accaaggtgg agattaaacg tacggtggct gcaccatctg tcttcatctt cccgccatct 420 gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 540 agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 600 agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 660 agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt ga 702
97599 -6-

Claims (1)

  1. 200529871 十、申請專利範圍： i•-種醫藥組合物，其含有抗體共_、 水之混合物。 ％糊扣及 2·如請求項1之醫藥組合物，盆 ,^ ^ , E ，、中忒&糊精係β-環糊精。 3 ·如明求項1之醫藥組合物，豆中兮s ，、中^衣糊精係γ-環糊精。 4·如#未項1之醫藥組合物，並中兮戸β 環糊精。 ，、中·糊精係硫代咖_ 5·如請求項丨、2或4任一項之醫藥組合 山护欢卞，η /、中该％糊精係 由石爪代丁醚-β_環糊精、羥基_基 環糊精及γ·環糊精組成之群中選出讀I經丙基个 & =員…任一項之醫藥組合物，其中該環糊精之含 =:至40重量％，較佳係。.㈣重量％，〇1 尤其佳，1重量％最佳。 7.如請求項1至4任一項之醫藥組合 臨、7 w ”各有選自磷酸 | 乙馱鹽、琥珀酸鹽緩衝液之緩衝液。 8· 2求項14任一項之醫藥組合物’其特徵係調整PR至$ 至6 ’較佳至pH 5.5。 9·項1至4任一項之醫藥組合物’其含有選自甘露醇 及庶糖之糖。 r 二H，1至4任—項之醫藥組合物’其另外含有聞。 (丁二:：1至4任一項之醫藥組合物，其含有選自吐溫 (een)2〇、吐溫80之清潔劑。 12.如請求項U之醫藥組合物，其另外含 潔劍，上― 肖K員11之、✓月 '、^潔劑之濃度係〇.〇1至1重量％，較佳❹別至“ 97599.doc 200529871 13. 14. 15. 16. 17. 18. 重量％，特別佳爲0·02至〇.〇4重量％。 如明求項1至4任一項之醫藥組合物，其中該抗體共軛物 ,、 %特異性抗體分子與類美登素（maytansinoid)之 共輛物。 士明求項13之醫藥組合物，其中該抗體分子對胺基酸序 列SEQ id NO:3内之抗原決定部分具特異性。 如明求項13之醫藥組合物，其中該抗體分子係單株抗體 vff]8(dsm Acam)或具有VFF_1S之互補決定區 (CDR)之重組抗體。 如請求項13之醫藥組合物，其中該抗體分子包含具胺基 酸序列SEQ ID N0:4或SEQ ID NO:8之輕鏈及具胺基酸二 列SEQ ίο n〇:6之重鏈。 如請求項1 3之醫藥組合物 鍵與該抗體分子偶聯。 如請求項13之醫藥組合物 式 其中該類美登素藉由一二硫 其中°亥類美登素具以下化學 97599.doc 200529871 9H3
    S-~
    〇 式（IV)。 19.如請求項13之醫藥組合物，其中該抗體分子包含具胺基 酸序列SEQ ID NO:4之輕鏈及具胺基酸序列SEQ ID NO:6 之重鏈，且其中該類美登素具化學式 CH, 〇 CH
    S- CH, OCH Ο Η Η (式 IV) 且藉由一二硫鍵與該抗體結合。 20.如請求項13之醫藥組合物，其中一或多個類美登素基團 97599.doc 200529871 與該抗體分子結合。 2 1.如請求項1 3之醫藥組合物，其中3至4個類美登素基團與 該抗體分子結合。 97599.doc
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