TW200529792A - Method of assessing skin and overall health of an individual - Google Patents

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Georgios N Stamatas
Nikiforos Kollias
Janeta Nikolovski
Benjamin Carl Wiegand
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Johnson & Johnson Consumer
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Description

200529792 、 > 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種使用螢光來評估皮膚與個體(individual)之整體 健康的方法。 【先前技術】 人類以及老鼠皮膚之天然螢光(native fluorescence)已顯現出會隨著 年紀與UV暴露而以一種可預期之方式變化。見Brancaleon等人於J.
Invest· Dermatol· 1999 年 113(6) ·· 977-982 ; Kollias 等人於 J. Invest· Dermatol· 1998 年 111(5) : 776-780 ; Leffell 等人於 Arch Dermatol. 1988 年 124(10): 1514-1518 ; Na 等人於 J· Invest· Dermatol. 2001 年 116(4): 536-540;以及 Tian 等人於 J· Invest Dermatol. 2001 年 116(6) ·· 840-845 〇 因此，螢光光譜已證明為研究皮膚因年齡引起的老化(aging)以及因日 曬引起的老化(photoaging)之客觀(objective)量化(quantitative)方法。 已藉由活體内螢光光譜檢測出之主要(major)螢光帶(band) 包括·· a)分配至色胺酸(tryptophan)之帶(最大在295 nm激發、345 nm 放射），b)分配至胃蛋白(pepsin)可消化之膠原(collagen)絡接(cross-links) 之帶（最大在335 nm激發、390 nm放射），c)分配至膠原蛋白酶 (collagenase)可消化之膠原(collagen)絡接之帶(最大在370nm激發、460 nm放射)以及d)由於彈性蛋白(elastin)與膠原絡接而為最可能之帶(最大 在390至420 nm寬帶激發、500 nm放射）。見Gillies等人於J. Invest· Dermatol. 2000 年 115(4) ·· 704-707。第二級(secondary)螢光帶已被辨識 出為與膠原過氧化(peroxidation)(Odetti等人於Lab Invest. 1994年 70(1) : 61-67)或彈性蛋白(Leffell 等人於 Arch Dermatol· 1988 年 124(10): 1514-1518)有關：二者分別為在356nm激發、420nm放射以 及在390 nm激發、460 nm放射。 吾人已發現，當上皮細胞的增生(epidermal proliferation)增加時，分 5 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 配至色胺酸一部分(moiety)在原處〇价測量之螢光訊號會增加。見
Kollias 等人於 J· lnvest· Dermatol· 1998 年 111(5) : 776-780 及 Zhang 等 人於Lasers Surg. Med· 1997年20(3) ·· 319-331。此已經藉由在例如撕除 膠帶之機械性侵害後，誘發表皮修復而驗證之。見Brancaleon等人於 J· Invest. Dermatol· 1999 年 113(6) : 977-982。此外，人體表皮内由果酸 誘發(α-hydroxy-add-induced)之細胞代換之增加，會使該295 nm激發 帶以依劑量而定之方式增加。見Doukas等人於Photochem. Photobiol. 2001年74(1) : 96-102。SKH無毛老鼠的螢光(其肇因於色胺酸一部分） 隨著年紀而降低，暗示表皮細胞代換速度之降低與年紀相關。見K〇llias 等人於 J· Invest· Dermatol· 1998 年 111(5) ·· 776-780。 蛋白質的非酵素(non-enzymatic)糖化(glyCOSilati〇n)會隨著老化而自 然發生（見 Monnier 等人於 Clin Endocrinol Metab. 1982 年 11(2): 431-452 ; Njoroge 等人於 J· Biol. Chem· 1988 年 263(22) : 10646-10652 ; Sell 等人於 J· Biol. Chem. 1989 年 246(36) : 21597-21602 ;以及 Shaklai 等人於J· Biol. Chem· 1984年259(6) : 3812-3817)，造成蛋白質吸收與 螢光(梅納反應Maillard reaction)之增加。這種葡萄糖_蛋白質複合體 (adduct)再排列及脫水(dehydrate)，以形成棕色與螢光之色素，其可形 成造成被降低之蛋白質溶解度與被改變之機械性質的絡結。此種絡結 在例如彈性蛋白與膠原的長時性(l〇ng-lived)蛋白中係為顯性的。在膠原 中螢光絡結的累積已在糖尿病中用作受觀察之加速老化速度的標記 物。見 Monnier 等人於 Clin· Endorcrinol. Metab 1982 年 11(2) ·· 431-452。 SKH老鼠的可消化胃蛋白絡接螢光之最大量值隨著根據時間之老化而 增加，然而可消化膠原分解膠原絡接及與彈性蛋白相關之螢光的最大 里值的增加則不太大。見Kollias等人於j· invest Dermatol. 1998年 111(5) : 776-780。類似的趨勢已在老鼠活體外(以Ww)(〇detti等人於 Lab Invest· 1994年70(1) : 61-67)、人體臀部皮膚活體内(Na等人於j Invest· Dermatol. 2001 年 116(4): 536-540)、及在病人進行血管手術時， 6 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 * * 由皮膚取出之人體真皮活體外(〇detti等人於胸a減伽聰 41⑹=655-658)觀察到。 發明人已料地發現，讀之聽自發螢光係為皮膚健料老 化(例如隨_之老化與因日曬引起的老化)對皮膚健康之影響的工具。 【發明内容】 、在:方面’本發明之特徵為—種判定—皮膚區域之皮膚健康的方 法，其係藉由(i)將該皮膚區域暴露於—第—暴露_下，以誘發該皮 膚區域發出-第-螢光放射，其中該第_暴露輻射包含主要從約㈣ nm至約300 nm的波長；（ii)測量該具有從約32〇至約35〇的波長之第 -螢光放射之強度；㈣_皮膚區域暴露於—第二暴露輻射下，以誘 發该皮膚區域發出-第二螢光放射，其中該第二暴絲射包含主要從 約330nm至約420 nm的波長；（iv)測量該具有從約38〇至約47〇的波 長之第二螢統射之強度；（v)計算在轉⑼測制的強度與在步驟㈣ 測量到的強度之比率；以及(vi)將該比率與一控制比率做比較。 在另一方面，本發明之特徵為一種判定對一主體(subject)的皮膚之 治療效果的方法，其係藉由⑴將一第一皮膚區域暴露於一第一暴露輻 射下，以誘發該皮膚區域發出-第-螢光放射，其中該第一暴露^ 包含主要從約290 nm至約300 nm的波長，且其中該第一皮膚區域係 暴露於該混合物；（ii)測量該具有從約320至約350的波長之第一螢光 放射之強度；（111)將該第一皮膚區域暴露於一第二暴露輻射下，以誘發 該皮膚區域發出一第二螢光放射，其中該第二暴露輻射包含主要從約 330 rnn至約420 nm的波長；（iv)測量該具有從約38〇至約47〇的波長 之弟一營光放射之強度；（v)計算在步驟(ii)測量到的強度與在步驟(n) 測量到的強度之比率；（vi)對一第二皮膚區域重複步驟⑴至(v)，其中該 二皮膚區域不暴露於該混合物；以及(vii)將該第一皮膚區域之比率與該 第二皮膚區域之比率做比較。 7 H.\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 斤在第二方面，本發明係關於評估一個體之整體健康的方法，包括為 複數個健康個體產生-標準曲線，其係藉由聰每—健康個體之一皮 膚區域暴露於-第-暴露輻射τ，㈣發該皮雜域發出—第一勞光 放射二其中該第-暴露輕射包含主要從約29〇nm至約3⑻⑽的波長； Π)測量該具有從約320 nm至約35G nm的波長之第一螢光放射之強 又^)將"亥皮膚區域暴路於一第二暴露輪射下，以誘發該皮膚區域發 出一第二螢光放射，其中該第二暴露輕射包含主要從約33〇咖至約 420 nm的波長；IV)測量該具有從約380nm至約470 nm的波長之第二 螢光放射之較；v)計算在步娜)_強度與在步驟(ιν)測量到 的強度之比率；繪出爐的年紀相對於步驟V的時之—標準曲線； 對-個體執彳了步驟π與Iv之啦,·計算該麵㈣v之比率；以及 將所討論之體在步驟V之比率與該鮮曲線作比較， 體之整體健康。 —或者，依據年紀之平均螢光值可藉由依循上述相同步驟而判定之。 接著’-麵(其整舰康係在討論巾)之贱值可與辭紀之平均榮光 值做比較。若該個體的螢光值低於該依據年紀之平均螢光值，則代表 可能有例如糖尿病的健康問題。 【實施方式】 何限制性 吾人相信熟悉此技藝者應可根據此處描述之内容而使用本發明至 其極限。下述之特定實施讎觸示用，對本揭露之其他部分絲任 除非另外定義，此處所用之所有技術性與科學性用詞均為具有本發 明所屬技藝中之-般知識者所理解的意義。另外，此處所提到的所^ =版物專利申凊案、專利及其他參考物皆併入供參考。除非另外有 才曰出’否則-百分比(％)代表重量百分比(亦即，％(w/w))。 8 H:\Barbam\LSJCCI-93572-spec.doc 200529792 暴露輕射 在一實施例中，皮膚區域暴露於至少二種暴露輻射下(例如，來自 如氙氣弧燈(xenon arc lamps)或水銀燈(mercury iamps)之uv輻射源）。 在一實施例中，該第一暴露輻射包含主要從約29〇nm至約3〇〇11111的 波長’且該第二暴露輻射包含主要從約330 nm至約420 nm的波長。 主要意為該暴露輻射之至少一半的波長。在一進一步的實施例 中，该第一暴露輻射包含主要為約295nm的波長，且該第二暴露輻射 包含主要從約390 nm至約410 nm的波長。 將該暴露輻射導向皮膚，以放射一螢光放射，並測量此等放射(例 如，一特定波長或波長範圍)之強度。在一實施例中，本方法包括測量 该具有從約330 nm至約350 nm的波長(例如約340 nm)之第一螢光放 射之強度，及測罝遠具有從約380 nm至約470 nm的波長(例如約440 nm)之第二螢光放射之強度。 可以計算以上測量出的二強度的比率，並將其與一控制比率作比 較。“控制比率’’意為一已經建立之標準比率(例如，先前從同一皮膚 區域獲得，或從例如一尚未暴露於UV輻射之另一皮膚區域(如腋下或 月口P)獲得）。因此，本方法可以判定該主體的皮膚健康。吾人已發現， 暴露的皮膚區域與受保護的皮膚區域之該比率值的差異，一般係隨著 年紀而下降。據信該差異係為皮膚藉由自我修復而對外部刺激反應之 月b力的扎示。因此，據#將暴露區域與未暴露區域相比，較高的比率 代表能夠自我再生的魏皮膚。更進―步，據信絲露區域與未暴露 區域相比，較高的比率亦代表能夠皮膚的年輕度(youthfulness)。 在一實施例中，本方法用來判定對一主體皮膚治療的影響。此等治 療包括但不限於化妝品與藥學治療(例如局部的⑼扭⑽、非口服的 (parenteml)、或口服的_))、雷射治療、或磨損治療(例如水 晶磨皮霜(rmcroderm abrasion))。在一實施例中，該治療為一局部混合 物，例如包含如類維生素A(retinoid)(例如維生素a酸㈣n〇1 add)或維 9 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 生素A的(retinol))之一抗老化劑的局部乳液(i〇ti〇n)或乳霜(cream)。 申請人已發現到，當肇因於色胺酸一部分之螢光單純的隨著年紀而 降低時，分配至胃蛋白與可消化膠原分解膠原絡接之螢光帶、以及肇 因於彈性蛋白絡接之螢光帶則會增加。吾人驚訝地發現這些趨勢與地 理區域及季節性影響無關。在對陽光為受保護的區域亦發現類似趨 勢。根據肇因於色胺酸一部分之螢光強度(以295 nm激發為中心)與分 配至膠原和彈性蛋白絡接之螢光強度(以39〇 nm激發為中心)之比率， 亦發現一與皮膚老化強烈關聯的標記。已發現此標記隨著年紀老化而 降低，而日曬引起的老化則加速該降低的速度。亦已發現一般化的色 胺酸能夠用來監控抗老化治療的效果。 螢光測量 可例如使用一附接於一螢光分光計（Spectr〇f[uorimeter)(例如 SkinSkan(JYHoriba，Edison，NJ))之光纖探測器(fiber optic probe)來實 施活體内螢光光譜分析。此方法需要：a) — UV輻射源(例如氙氣弧燈 或水銀燈）’ b)—選擇該輪射波長的方法(例如單色器、 稜鏡(prism)或光柵(grating))，c)一遞送該輻射至組織(tissue)(例如纖維 束(fiberbundle))的方法，d)—從該組織(例如纖維束)收集放射的輻射的 方法，e)—選擇該放射的輻射波長的方法(例如單色器、稜鏡或光柵）， 以及〇—檢測該放射的輪射的方法(例如光電倍增管(photomultiplier)、 一單一光電二極體(photodiode)、一光電二極體陣列、或一電荷耦合 CCD 陣列）。見例如 Stamatas GN 等人於 J Invest Dermatol 2002 年 118(2) : 295-302。 藉由放置光纖探測器而與探討中之皮膚部位接觸來實施測量。在每 一組測量前，儀器為激發與放射在250 nm至650 nm區間作光譜測定 (calibration)。螢光分光計之半階解析度(chromatic resolution)為 +/- 1 10 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 取得激發光譜為測量活體内皮膚螢光之較佳方法。選擇取得放射光 譜的原因是基發光譜與吸收光譜類似，且帶通常比在放射取得内要 窄，以上二原因有利於在複雜的光譜中辨識出個別的螢光團 (fluorophore)。用於本研究之激發光譜係如下：a)具有在34〇腿放射組 之從240 nm掃描至320 nm的激發(色胺酸激發在295 nm最大），b)具 有在390 nm放射組之從240 nm掃描至380 nm的激發(可消化胃蛋白 膠原絡接激發在335 nm最大），c)具有在420 nm放射組之從240 nm掃 描至410 nm的激發(可消化膠原分解膠原絡接激發在36〇nm最大），d) 具有在500 nm放射組之從260 nm掃描至490 nm的激發(彈性蛋白絡 接一鎖鏈素與異鎖鏈素一激發在390 nm最大）。 為能考慮皮膚天然色素形成(其會減弱被檢測螢光訊號）中的各種 變化，螢光強度係在對應波長處以同一皮膚位置之擴散反射訊號標準 化。見例如 Stamatas GN 等人於 J Invest Dermatol 2002 年 118(2): 295-302。一擴散反射光譜可藉由將激發與放射單色器同步化以選擇相 同的波長、掃描從240 nm至500 nm之範圍而得到。對於波長大於315 nm者，修正尤其必要。在此波長區測量到的螢光從真皮發出(Gmies 等人2000年，Kollias等人1998年），意味著激發光必須行經整個表皮， 其於該處被表皮黑色素與蛋白質減弱。接著，放射光必須再次行經整 個表皮到達收集纖維。這意味激發與放射強度均遭損害。另一方面， 對於位在表皮的螢光團，亦即，激發波長小於315 nm的訊號(見Gillies 等人於 J. Invest. Dermatol. 2000 年 115(4) : 704-707)而言，這種減弱影 響則不太嚴重。更進一步，光源的強度低於300 nm，而藉由該擴散反 射訊號的螢光標準化放大此等雜訊。這個問題只在色胺酸帶(295 nm激 發)發生。為克服此問題，色胺酸螢光訊號可被標準化至另一螢光帶， 而非至該於295 nm的擴散反射值。由於已發現390 nm可改變老化至 最慢速，故使用將色胺酸帶標準化至390 nm激發帶。其他之帶亦可用 於標準化。又，若該輻射源強度足以在約295 nm以該擴散反射信號標 11 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 準化之，可以使用於此之波長。 臨床研究 為了研究老化對人類臉部皮膚之天_光的影 個體的臉頰區域的光譜，他們的年紀從15歲至乃歲二刀位健康 洋地區五個不同地理位置：a)中國廣州，b)中 〃」來自亞洲太平 ,、, °嗍項，c)中國上淹， 糾仙台，以及e)菲律賓馬尼拉。為了辨識_的季節筆海 二個位置(哈爾濱與上海)對相同個體在夏天與冬天測量部馨曰^ 有主體的皮膚種類皆為II-IV。 赏尤所 為了探究所觀察到的臉部皮膚螢光之改變係因為隨時間年紀 化或是因為暴露於陽光（日曬引起的老化），故執行第二組測量。測旦 45位年紀從22歲至63狀健康主體的上内臂（“未暴露部位，，）= 臉頰區域之皮膚螢光。所有主體的皮膚種齡為π_Ιν。此研究是在十 月份於New Jersey的Skillman進行。 在第三組的實驗中，研究維生素A對臉部皮膚的影響。對2〇位年 紀從5〇歲至7〇歲之高加索血統健康個體每天施加包含〇15%維生素A 之乳箱處方包§ -寬f光谱SPF 15遮光劑(sunscreen)於臉部之一側， 而-匹配之SPF 15賦職(vehide)__eGntIOl)(無維生素A)於臉部 之另一側。主動(actlve)及佐藥(vehicle)均隨機性地分配給每一主體臉部 的每一側。本研究之參與者及探究者對於該分配規定(code)均並無所 悉。此研究是在二月份於Ariz〇na的Tucs〇n開始進行。螢光激發光譜 係於基線、三個月與六個月時，從臉頰以及未受治療、對陽光為受保 護控制的上内臂取得。糖尿病患者被排除在外 ，因為該情況可能影響 螢光測量。 資料分< 使用隶小平方差演舁法(least sqUare err〇r啦⑹出邱計算此資料之 12 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 線性回歸。配適度—8(魏__係數(R2)表示。使用學生的配 對資料分佈t_teSt計算$統狀㈣邮gniflcance) 〇 已發現皮膚螢光之強度係隨著年紀而改變。如圖丨所示，一系列的 激發光譜=從二個分別為3〇歲與6G歲、皮膚種_為n的個體的臉 ，區域取得。一般而言，歸因於色胺酸一部分(295nm)的螢光激發帶隨 著年紀降低，而膠原與彈性蛋白絡接(335 nm、36〇皿1與39〇〇却則增 加0 從中國上海之108位個體得到的對295舰、335 nm、36〇 nm與39〇 激發帶之螢光強度的年紀分佈係分別顯示於圖&、％、與^。 此貝料已經與線性回歸配適，且顯示在平均+/_ 一標準偏差之間的區 間。很明顯的，在295 nm激發帶，此資料分佈的標準偏差值為較年輕 者較高。對其他所有帶則發現相反結果。此295nm激發帶為唯一隨著 =紀而降低(以-0.002單位/年)之帶。所有歸因於膠原與彈性蛋白絡接之 V增加，代表細胞外間質(extracellularmatrix)絡接係隨著年紀而累積。 從這^帶中，390 rnn帶顯示隨年紀增加最慢者(〇 〇〇5單位/年）。相關係 數(R )最佳者為 390 nm 帶(0.61)，接著是 360 nm(0.55)、335 nm(0.41) 及 295 nm(；0.32)。 吾人觀察到相同的趨勢與地理區域、皮膚種類或季節性測量無關。 該資料之最佳線性配適的斜度代表螢光強度的改變速度，其顯示於表 1。皮膚螢光帶的改變速度(單位/年)與標準化色胺酸螢光(l295nm/l39〇nm)。 所有的測量係於臉部(臉頰)上執行。從最佳線性配適的斜度計算出這些 改變速度。這些值在螢光帶係以螢光單位/每年、在標準化色胺酸螢光 係以係以比率單位/每縣枕。PDCXL =胃蛋自可狀之膠原絡接， CC)CXL=膠原蛋白酶可消化之膠原絡接，NTF=標準化色胺酸營光。 13 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 表i 地理區域 季鮮 in 色胺酸 295 nm PDCXL 335 nm CDCXL 360 nm 彈性蛋白 390 nm —-— NTF比率 295nm/390nm 中國廣州 夏 108 -0.0021 0.010 0.013 0.0053 -0.103 中國哈爾濱 夏 106 -0.0007 0.012 0.015 0.0062 -0.074 中國哈爾濱 冬 64 -0.0025 0.014 0.016 0.0047 -0.091 中國上海 夏 100 -0.0017 0.012 0.018 0.0060 -0.119 中國上海 ----▼ 冬 100 -0.0024 0.012 0.013 0.0053 -0.135 曰本仙台 夏 108 -0.0019 0.010 0.016 0.0047 -0.128 菲律賓 馬尼拉 夏 100 -0.0003 0.002 0.010 0.0060 -0.038 美國 ^Skill^nNJ 秋 45 -0.0773 0.008 0.006 0.0063 -0.088 色胺酸帶螢光強度在所有進行此研究的地理區域、且與季節無關均 隨年紀降低，而其他三帶的強度則增加。更進一步，斜度值在不確定 的限制内相當靠近。 將295 nm帶螢光強度值對其他三帶標準化而造成一螢光標記，其 · 相當獨立於皮膚色素形成之外。更進一步，由於295 nm帶之強度降低， 而歸因於絡接之帶之強度增加，上述之比率造成對年紀較強之依賴 性。造成最強年紀依賴的比率為295 nm帶之螢光強度對390 nm帶之 螢光強度。中國上海的標準化色胺酸螢光(I295nm/I39Gnm)之年紀分佈係顯 不於圖3。此資料的所有特性已經與線性回歸配適，且提供在平均+/_ —標準偏差之間的區間。此資料分佈的標準偏差值為較年輕者較高， 然而變異係數(平均/標準偏差)與年紀並沒有重要關聯。除了馬尼拉(R2 ==0.15)之外，所有地方的相關係數皆為〇.4至〇.5。 14 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 選擇臉頰區域個為其在-生中被職會接收會造成累積性皮膚 傷害的陽光uv輻射。為了探究暴露於陽光(因日㈣起的老化)會影塑 所觀察到之標準化色胺酸螢光隨著年紀的降低，對45位志願者進杜 内臂(相當未暴露部位)以及臉頰(暴露於陽光)的測量。結果顯示於圖知 及4b。根據圖3顯示之資料，從臉部取得之營光比率(l29Wi^隨著 年紀降低(圖如）。該降低速度_7單位/年)與表j所#之其他區域的 值相近。對陽光為受保護的部位之標準化色胺酸榮光亦隨著年紀降低 (圖4b)，但是速度慢多了 (0.010單位/年）。 使用在活體内之皮膚螢光測量以繼續以維生素A局部治療之抗老 化效果。以包含G.15%維生素A或卿體處謂臉頰部位治療之結果 係顯示於圖5a、5b及5c。二群組均顯現在295 nm帶螢光之降低(圖5a)， 但臉頰接收維生素A之治耕低的速度義較小（絲治療群組之 -0.01單位/月對安慰劑治療群組之__單位/月）。390 帶在本研究 』間並未顯著改變’但疋在主動與安慰劑治療群組二者均有明顯的微 幅增加之趨勢(圖⑽。對39〇nm激發帶之色胺酸螢光帶標準化(圖5c) 2示在維生素A治療群組於295 rnn帶之降低最可能是因為該主體在研 究期間色素形成之增加(注意本研究係在二肛七月間進行)。賦形體治 療群組之標準化色胺酸螢光值的改變速度為_〇〇62 +/· 〇〇29比率單位/ 每月。相較於賦形體治療部位，接收維生素A治療的部位在295 帶 之強度降低係被顯著減弱(p < 〇〇1)。對維生素A治療的部位，標準化 色胺素螢光值維持垂直恆定，與接收賦形體治療部位之相對值顯著不 同(Ρ<0·05)。 曰本研究在時間為〇、3及6個月時由個體上内臂(未治療)得到的測 里顯不’其標準化色胺酸榮光值係為降低，雖然相較於根據圖4b顯示 之貧料之安慰劑治療皮膚，其降低為慢的多。以螢光測量的維生素A j療的抗老化結果，與在該治療區域皺紋之顯現降低之肉眼觀察結果 符合。僅以賦形體乳霜治療並沒有皺紋顯現之效果。 15 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 在一分開的研究中，建立一健康個體的臉部皮膚螢光(標準化色胺 酸螢光或“NTF “)之與年紀相關的曲線。 欲召9位健康及13位Π型糖尿病患（自我宣告）、年紀在45歲至 60歲之志願者參加螢光測量研究。對糖尿病人口測試，其值分 佈於5.7至8.1。對所有志願者從臂之腹面(ventrai arm)取得螢光光譜。 榮光之取彳于係由對在具有5〇 nm之常數St〇kes位移之25〇至6⑻ nm乾圍之激發與放射波長之同步掃描所組成，並以螢光分光計 (SkmSkan(IY HGriba，EdiSGn，_實施。此掃描提供資訊給⑽酸# 光(激發295 nm，放射345 nm)以及膠原與彈性蛋白絡接相關之螢光， 其包括色胺酸螢光被標準化之帶(激發390 nm，放射440 nm)。 在對照物群組測量之標準化色胺酸螢光值(平均+/_ 一標準偏差 =2·94 +Λ 1.94)係高於糖尿病群組(平均+Λ 一標準偏差=〇85 +/_ 〇·45)。糖尿病群組之低NFT數字相較於對照健康群組，對表皮修護之 能力的降低。 ^ 糖尿病患皮膚的降低之NFT值可能與糖尿病患皮膚之較差的傷口 癒合及修護能力有關。將該資料(表2)與先前所繪之資料比較。根據從 先刖研究絲絲之“暴露”區域的NTF值，其顯示朗物群組落入 年紀匹配(age-mated)之“健康，，曲線内，而糖尿病患則有較低的值。 以圖示參加者之NTF值與HbAcl值的關聯。一確定的趨勢為，較 咼的HbAcl值與較高的NTF值相關。由於這兩個參數為糖尿病的指 標，而並不必然有原因影響(cause_effect)之關聯，所以這種關聯性不必 非常強。 如表3所示，糖尿病患之NTF值與年紀匹配對照物群組之平均Ντρ 值的差異’與糖尿病患之HbAcl值略有關聯。因此ntf值為糖尿病之 級數(progression)的指示。 H:\Barbara\J&JCCI-93572-Spec.doc 200529792 表2 年紀 η NTF值 對照物* 16.6 +/- 1.9 19 7.5548+/- 3.7455 對照物* 36· 1 +/-2.4 20 4.4387+/-2.0563 對照物* 57.8+/- 1.8 20 2.4180+/- 1.4281 對照物* 69.2 +/-3.0 22 2.0012+/- 1.3322 對照物** 48.1 +/- 6.4 9 2.9455+/- 1.9440 糖尿病# 51.5 +/-3.6 13 0.8481 +/- 0.4467 臉頰；**前臂 表3
HbAlc(5) 與對照物之NTF差異 5.7 1.7681 6.2 2.3265 6.2 2.1470 6.4 2.2231 6.5 1.5200 6.8 2.2914 7.2 2.5223 7.3 2.1321 7.5 1.8445 7.7 2.6253 8.1 2.4168 17 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 此資料指出’-倾之整體健射藉由纽齡麵之鮮曲線以 及將-個體(其健康係在討論中)之比率與在該曲線之比率做比較。如上 面所Μ ’洛於該鮮崎τ面的比糊代表該個财例如糖尿病之 健康問題。 應理解本發_6由詳細描述制之，但前述之描述僅為閣示之 用，並_來關本伽之制。本發以範_峨狀巾請專利 範圍界定。其他之態樣、優點與修正均在本申請專利範圍内。 【圖式簡單說明】 圖1顯示兩個年紀分別為30歲(虛線)及60歲(實線)的個體之激發 光譜。 圖2a顯示在295 nm激發帶之螢光強度的年紀分佈。 圖2b顯示在335 nm激發帶之螢光強度的年紀分佈。 圖2c顯示在360nm激發帶之螢光強度的年紀分佈。 圖2d顯示在390nm激發帶之螢光強度的年紀分佈。 圖3顯示在295 nm激發帶之螢光強度相對390 nm激發帶之螢光 強度標準化的年紀分佈。 圖4a顯示對陽光為暴露的皮膚區域之標準化螢光強度的年齡分 佈。 圖4b顯示對陽光為受保護的皮膚區域之標準化螢光強度的年齡分 佈。 圖5a顯示在295 nm激發之螢光強度在以維生素A(retinal)(主動） 及安慰劑(placebo)治療之皮膚隨時間之變化。 圖5b顯示在390 nm激發之螢光強度在以維生素A(retinal)(主動） 及安慰劑(placebo)治療之皮膚隨時間之變化。 圖5c顯示標準化螢光強度在以維生素A(retinal)(主動)及安慰劑 (placebo)治療之皮膚隨時間之變化。 18 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 【主要元件符號說明】 無 19 J:\menu\Pending-93\93572. doc

Claims (1)

  1. 200529792 十、申請專利範圍： 1· -種般-皮膚區域之皮膚健康的方法，該方法包括以下步 驟： (1)將4皮膚區域暴露於-第_暴露輻射下，以誘發該皮膚區域 毛出第一螢光放射，其中該第一暴露輻射包含主要從約 290 nm至約300 nm的波長； ⑻測量該具有從約320mn至約350nm的波長之第-螢光放射 之強度； Μ㈣皮膚區域暴露於-第二暴聽射下，以誘發該皮膚區域 發出-第二螢光放射，其中該第二暴露輻#包含主要從約 330 nm至約420 nm的波長； ㈣測量該具有從約380nm至約47〇11111的波長之第二榮光放射 之強度； (v) 計算在免驟⑼測量到的強度與在表驟⑽測量到的強度之比 率；以及 (vi) 將该比率與一控制比率做比較。 2.如申請專利範圍帛1工員之方法，其中該第一暴露輻射包含主 要為約295 nm的波長。 3·如申请專利範圍帛2項之方法，其中該步驟⑻包含測量具 有約340 nm的波長之該第一螢光放射的強度。 4.如申请專利範圍帛1j員之方法，其中第二暴露輻射包含主要 從約390 nm至約410 nm的波長。 5·如申請專利範圍帛2㉟之方法，其中第二暴露輕射包含主要 從約390nm至約410nm的波長。 6·如申請專利範圍第3項之方法，其中第二暴露輻射包含主要 從約390 nm至約410 nm的波長。 7.如申清專利範圍帛4項之方法，其中該步驟㈣包含測量具 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 20 200529792 有約440 nm的波長之該第二螢光放射的強度。 8_如申請專利範圍第5項之方法，其中該步驟(iv)包含測量具 有約440 nm的波長之該第二螢光放射的強度。 9·如申請專利範圍第6項之方法，其中該步驟(iv)包含測量具 有約440 nm的波長之該第二螢光放射的強度。 1〇·如申請專利範圍第1項之方法，其中該控制比率為藉由對該 主體之一第二皮膚區域重複步驟⑴至(v)而計算出的比率。 L 種判定對一主體的皮膚之治療效果的方法，該方法包括以下 步驟： (I) 將一第一皮膚區域暴露於一第一暴露輻射下，以誘發該皮膚 區域發出一第一螢光放射，其中該第一暴露輻射包含主要從 約290nm至約300nm的波長，且其中該第一皮膚區域係暴 露於該治療； (II) 測量該具有從約320 nm至約350 nm的波長之第一螢光放射 之強度； (III) 將該第一皮膚區域暴露於一第二暴露輻射下，以誘發該皮膚 區域發出一第二螢光放射，其中該第二暴露輻射包含主要從 約330 nm至約420 nm的波長； (lv)測量該具有從約380 nm至約470 nm的波長之第二螢光放射 之強度； (V) 叶算在步驟(ii)測量到的強度與在步驟出^測量到的強度之比 率； (VI) 對一第二皮膚區域重複步驟①至(v)，其中該二皮膚區域不暴 露於該治療；以及 U (Vl!)_第-皮膚區域之比率與該第二皮膚區域之比率做比較。 如申睛專利範圍第η項之方法，其中該第一暴露輻射包含主 要為約295 nm的波長。 21 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 13. 如申請專利範圍第12項之方法，其中該步驟⑼包含測量且 有約340 nm的波長之該第—營光放射的強度。 14. 如申請專利範圍第η項之方法，其中第二暴露輻射包含主要 從約390 nm至約410 nm的波長。 15·如申凊專利範圍第12項之方法，其中第二暴露輻射包含主要 從約390 nm至約410 nm的波長。 16.如申請專利範圍第13項之方法，其中第二暴露輻射包含主要 從約390 nm至約410 nm的波長。 17·如申請專利範圍帛14項之方法，其中該步驟(iv)包含測量具 有約440 nm的波長之該第二螢光放射的強度。 18·如申明專利範圍第15項之方法，其中該步驟(iv)包含測量具 有約440 n m的波長之該第二螢光放射的強度。 19·如申請專利範圍第16項之方法，其中該步驟(iv)包含測量具 有約440 nm的波長之該第二螢光放射的強度。 20·如申請專利範圍第U項之方法，其中該第一皮膚區域與該 第二皮膚區域為相同皮膚區域，且其中對該第二皮膚區域之 比率的計算係在該治療之前發生。 21. —種評估一個體之整體健康的方法，包括： 為複數個健康個體產生一標準曲線，其係藉由乃將每一健康個體 之一皮膚區域暴露於一第一暴露輻射下，以誘發該皮膚區域發出 一第一螢光放射，其中該第一暴露輻射包含主要從約29〇nm至約 300nm的波長；II)測量該具有從約32〇nm至約35〇nm的波長之 第一螢光放射之強度；III)將該皮膚區域暴露於一第二暴露輻射 下，以誘發該皮膚區域發出一第二螢光放射，其中該第二暴露輻 射包含主要從約330nm至約420 nm的波長；IV)測量該具有從約 380 nm至約470 nm的波長之第二螢光放射之強度；v)計算在步 驟(II)測量到的強度與在步驟(IV)測量到的強度之比率；繪出個體 22 H:\Barbara\J&JCCI-93572-spec.doc 200529792 的年紀相對於步驟v的比率之一標準曲線； 對一個體執行步驟II與IV之測量； 計算該個體步驟V之比率；以及 將所討論之該個體在步驟V之比率與該標準曲線作比較，以判定 5亥個體之整體健康。 22· —種評估一個體之整體健康的方法，包括·· 為複數個健康個體產生一平均螢光值，其係藉由乃將每一健康個 體之一皮膚區域暴露於一第一暴露輻射下，以誘發該皮膚區域發 出一第一螢光放射，其中該第一暴露輻射包含主要從約29〇nm至 約300 nm的波長；Π)測量該具有從約32〇 nm至約35〇 nm的波 長之第一螢光放射之強度；III)將該皮膚區域暴露於一第二暴露輻 射下，以誘發該皮膚區域發出一第二螢光放射，其中該第二暴^ 輻射包含主要從約330 nm至約420 nm的波長；IV)測量該具有從 約380 nm至約470 nm的波長之第二螢光放射之強度；v)計算依 據年紀之平均螢光值； 又 個體(其整體健康係在討論中)之螢光值可與該年紀之平均勞光 值做比較。若該個體的螢光值低於該依據年紀之平均螢光值，則 代表可能有例如糖尿病的健康問題。；繪出個體的年紀相對於步 驟V的比率之一標準曲線； 對一其健康係在討論中之個體執行步驟n與1¥之測量；以及 將其健康係在討論中之該個體之螢光值與該依據年紀之平均螢光 值作比較，以判定該個體之整體健康。 23 H:\Barbara\J&JCCI.93572-spec.doc
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