TW200400178A

TW200400178A - Cyclic N-substituted alpha-imino carboxylic acids for selective inhibition of collagenase

Info

Publication number: TW200400178A
Application number: TW092103970A
Authority: TW
Inventors: Petra Stahl; Reinhard Kirsch; Sven Ruf; Volkmar Wehner; Klaus-Ulrich Weithmann
Original assignee: Aventis Pharma Gmbh
Priority date: 2002-03-02
Filing date: 2003-02-26
Publication date: 2004-01-01
Also published as: EP1483244B1; CA2477474C; JP2005528350A; PE20030883A1; EP1483244A1; BR0308088A; WO2003074489A1; CA2477474A1; AU2003214063A1; MXPA04007844A; DE10209299A1; JP4520744B2; AR038857A1

Description

200400178 A7 B7 五、發明說明（i) 本發明係關於用以選擇性抑制膠原酶(MMP 13)之環狀N-經取代之aipha-亞胺基羧酸之應用，式I化合物因此可用於治療關節變性病症。在例如骨關節炎及風渔病之病症中存在對於關節之 5 破壞，尤其是經由膠原酶之膠原蛋白分解變性所造成，膠原酶屬於金屬蛋白酶(MP)或基質金屬蛋白酶(MMP)之總科，MMPs形成一組Zn依賴性的酶其與細胞外基質之生物變性相關（D. Yip et al 於 Investigational New Drugs 17 (1999)，387-399 及 Michaelides et al 於 Current 10 Pharmaceutical Design 5 (1999) 787-819)，這些 MMPs 特別是可以變性微纖維及非微纖維性膠原及蛋白聚糖，兩者代表重要的基質組成物，MMPs與傷口癒合、腫瘤發病、腫瘤轉移及血管生成、多發性硬化、心臟衰竭及動脈粥樣硬化症（Mochaelides ρ· 788;見上述），具體地 15 说，其在骨關節病、骨關節炎或類風溼性關節炎之關節病及關節炎的關節基質變性中扮演重要的角色。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在MMPs中選擇的次族是例如經由膠原酶形成，只有膠原酶可以變質天生的膠原，其在基質中終究行使重要的支持功能，此次族包括間質性膠原酶、中性粒細胞 20 膠原酶MMP-8及不久經鑑定之MMP-13，在健康成人體内偵測出MMP-13非常重要，其只有在生病過程例如在癌症細胞或潰瘍中表達，MMP-13也曾經在關節病的病人及哺乳動物之關節基質中被偵測，尤其是在臨床晚 /月的關卽病，但是其沒有出現在健康成人之關節組織，本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇χ297公釐） 200400178 A7 B7 五、發明說明（Ο 經由適當的抑制劑抑制ΜΜΡ-13因此特別合適用於控制該疾病。已知有MMPs及膠原酶之多種不同的抑制劑（£Ρ 0 606 046、WO 94/28889、WO 96/27583)，也已知環狀及 5 雜環狀N-取代之alpha-亞胺基氧肟酸及羧酸是金屬蛋白酶之抑制劑（EP 〇 861 236)。經在人類之初步臨床研究後，現經浮現MMPs造成副作用，主要可提及的副作用是肌肉及骨骼疼痛或關節痛，從先前技藝明顯地可預期選擇性的抑制劑將可減少 10 提到的這些副作用（Yip，387頁，見上述）。 MMPs的已知抑制劑之缺點因此通常是缺乏只有抑制一種MMPs之專一性，據此，大部分的MMP抑制劑同時抑制多種MMPs，因為MMPs具有類似結構之催化結構域據此，此抑制劑在不欲的方式下作用在許多酶 15 上，甚至是具有重要功能者（Massova I，et αι 丁以 FASEB Journal (1998) 12，1075-1095) 〇經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 WO 97/18194 (EP 0 86i 236)已經揭示環狀及雜環狀 N-取代之alpha-亞胺基氧肟酸及alpha-亞胺基緩酸對於 MMP-3及MMP-8具有強烈的抑制效應，在w〇 ' 20 97Π 8194的實例中陳述的化合物，經由我們自己再产、則量也顯示對MMP-13有強烈的抑制效應。又“ 在努力尋找有效的化合物用於治療結締組織病症時，現經發現根據本發明使用之化合物是基質金屬蛋白酶13之強烈抑制劑，而且根據本發明使用之化人物卞 -4- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（3) 質上對於MMPs3及8沒有作用，根據本發明使用之這些化合物因此更合適在此遠較標的化之方式下用於選擇性治療該疾病，優於在W0 97/18194之實例中揭示及陳述之化合物，其除了 MMP-13以外還抑制其他MMPs， 5 因此可以預期這些選擇性的抑制劑在治療該疾病時將顯現大幅改善副作用之範圍。本發明因此係關於式I化合物

及/或式I化合物之全部立體異構物形式及/或這些形式在任何比例之混合物、及/或式I化合物之生理耐受性鹽 15 類製造藥劑用於預防及醫療其中與基質金屬蛋白酶13強化活性進展相關的病症之應用，其中 A是碳原子或氮原子，其中 A是未經取代或經-(CrC4)-烷基取代， η是1或2之整數， 20 R1是l.JCVC^)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2. -(C2-C 10)-烯基其中烯基是直鏈或支鏈， 3. -(C2-C10)-炔基其中炔基是直鏈或支鏈，烷基苯基， 5.-(CrC4)-烷基-(C3-C7)-環烷基，本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

200400178 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（4) 6. -(C3-C7)-環烷基或 7. _CH2CF3，且 R2是氫原子或-(CVC}烷基。本發明還關於式I化合物之應用，其中 5 A是碳原子或氮原子，其中 A是未經取代或經甲基取代， η是1或2之整數， R1是l.-(C2-C6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2.-CH2-苯基，或 10 3.-CH2-i^ 丙基，且 R2是氫原子或甲基。本發明還關於式II化合物之應用，其中

N O 一 R1

其中 20 R1是l.-(C2-C6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2. -CH2-苯基，或 3. -CH2-環丙基，且 R2是氫原子或甲基。本發明之另一方面是關於式III化合物之應用，其 -6- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

200400178 A7 B7 五、發明說明（5 中 Ο

VA Ν Ο — R1 其中 R1是l.-(C2-C6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 10 2.-CH2-苯基，或 3.-CH2_i^ 丙基·，且 R2是氫原子或甲基。本發明之另一方面是關於新穎的式I化合物， 15 〇

〇 ⑴ N 〇 —R1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 及/或式I化合物之全部立體異構物形式及/或這些形式在任何比例之混合物、及/或式I化合物之生理耐受性鹽類，其中 A是碳原子或氮原子，其中 A是未經取代或經-(CrC4)-烷基取代，

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 A7 B7 五、發明說明（6 ) 5 ο 11 5 11 η是1或2之整數， R1是l.JCrCio)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2.-(C2-C10)-烯基其中烯基是直鏈或支鏈， 3 .-(C2-C1())-炔基其中炔基是直鏈或支鏈，烷基苯基，烷基-(C3-C7)-環烷基， 6. -(C3-C7)-環烷基或 7. -CH2CF3，且 R2是氫原子或-(CVQ)-烷基。本發明還關於式I化合物，其中 A是碳原子或氮原子，其中 A是未經取代或經甲基取代， η是1或2之整數， R1是l.-(C2-C6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2. -CH2-苯基，或 3. -CH2-環丙基，且 R2是氫原子或甲基。本發明之另一方面是關於式II化合物，經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20

Ο 5：人㈣

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 A7 B7 五、發明說明（7 ) 其中 R1是l.-(CVC6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈 2_-CH2-苯基，或 3.-CH2-環丙基，且 5 R2是鼠原子或甲基。 10 本發明之另一方面是關於式III化合物，〇

Ο N 0—R1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 其中 R1是l.-(C2_C6)_烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 15 2.-CH2-苯基，或 3.-CH2-環丙基，且 R2是氫原子或甲基。名詞’’(CrCio)-烧基”係指烴基其中碳鏈是直鏈或支鏈且含1至10個碳原子，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第三丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基、2,3-二甲基丁基、新己基、庚基、辛基、壬基、癸基。名詞”(C2-C1())-烯基”係指烴基其中碳鏈是直鏈或支鏈且含1至10個碳原子，且決定於鏈長度，含丨、2或 9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）一 200400178 A7 B7 五、發明說明（8) 3個雙鍵，（C3-C7)-環烷基是例如衍生自3-至7-員單環之化合物例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基或環庚基。本發明還關於一種用於製備式I化合物及/或式I化 5 合物之立體異構物形式及/或式I化合物之生理耐受性鹽類之方法，其包括 a)使式IV化合物〇

/Re 〇 10 其中A、R2及η相同於在式I之定義且Re是氫原子或酯保護基，與式V化合物 15

O.N

V 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中Rz是氣原子、咪唑基或oh, 20在驗存在下反應而得到式VI化合物〇

(VI) NO. 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱） 200400178 A7 B7 五、發明說明（9) 其中A、R2及η相同於在式I之定義且Re相同於上述之定義，且 b)用氫氣及金屬觸媒將在a)製備之式VI化合物還原成式VII之胺

10 且隨後使式VII化合物與式VIII化合物 cr 〇 ,R1 (VIII) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中R1相同於在式I之定義， 15 在鹼性化合物例如三乙胺、三曱胺或吡啶存在下反應而得到式IX化合物 20 〇

〇人- Η .R1 (IX) 其中Rl、R2、Α及η相同於在式I之定義且Re相同於上述之定義， c)將經由步驟a)製備之式I化合物分餾且因為其化學結 -11- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 A7 B7 五、發明說明（10) 構，將發生的對掌異構性形式經由與純對掌異構性的酸或驗形成鹽而成為純對掌異構物，在對掌性固相上層析或使用純對掌異構性化合物例如胺基酸衍生化，念離在此方式所得的非對掌異構物，並消除對掌性輔助基，或 5 d)不論是分離經由步驟b)或C)製備之式〗化合物，在其中酸性或驗性基存在之情形下，轉化成生理耐受的鹽。可以使用的S曰保遵基Re是例如在 Groups in Organic Synthesis, T.H. Greene, P. G. M. Wuts5 Wiley-Interscience，1991中揭示用於酯之保護基，較佳 10的酯保護基是例如曱基、乙基、異丙基、第三丁基或苄基，使用的起始物質或試劑可以經由已知方法製備或購貝，政采素壞糸統可例如根據S. Klutchko et al. (J. Heterocyclic· Chem·，28, 97,（1991))之揭示製備。反應例如根據WO 97/18194之揭示進行，在製程步 15 驟a)的反應是在鹼例如KOH、NaOH、LiOH、N，0-雙 (三甲基矽烷基）乙醯胺（BSA)、N-曱基嗎福啉（NMM)、經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 N-乙基嗎福啡（NEM)、三乙胺（TEA)、二異丙基乙基胺 (DIPEA)、吼σ定、可力丁、咪σ坐或碳酸鈉存在下載溶劑例如四氫呋喃（THF)、二甲基曱醯胺（DMF)、二甲基乙 20 醯胺、二σ号烧、乙腈、甲苯、氯仿或二氣曱烷中或在水存在下進行。在製程步驟b)的反應是例如使用金屬觸媒Pd/C、 SnCl2或Zn在標準情形下進行。在製程方法c)中，式I化合物如果其在選擇的合成 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（U) 中出現為非對掌異構性或對掌異構性形式且導致其混合物時，分離成純的立體異構物是在視需要選用的對掌性支撐物質上經由層析法進行，或如果外消旋性式I化合物可形成鹽類時，經由分步結晶與作為輔劑之光學活性 5驗或酸形成的非對掌異構性鹽類，經由薄層或管柱層析法分離對掌異構物時，合適的對掌性固相實例是改良的石夕膠支撐物（稱為Pirkle層）及高分子量碳水化合物例如二乙酿基纖維素，用於分析目的時，在從事此藝者已知的適當衍生化後也可使用在對掌性固相上的氣相層析 10法，分離外消旋性羧酸之對掌異構物時，可以使用通常可商業化供應之光學活性驗例如㈠_於驗酸、（+)_及（_)_ 苯基乙基胺、奎寧鹼、L-賴胺酸或L-及D-精胺酸形成不同溶解度之非對掌異構性鹽類，將較低溶解度之成份以固體分_，使較南溶解度之非對掌異構物從母液沈 15積，從在此方式下所得的非對掌異構性鹽類得到純的對掌異構物。也可以在原則上相同的方式下，將含鹼性基例如胺基之外/肖方疋性式I化合物用光學活性酸例如（+)_ 樟腦-10-續酸、D-及L-酒石酸、D-及L-乳酸與（+)及㈠― 扁桃酸轉化成純的對掌異構物。含醇或胺官能基的對掌 20 性化合物也可用適當活化或視需要N-保護的純對掌異構性胺基酸轉化成對應的酯類或酿胺類，或相反地，對掌性羧酸可用羧基保護之純對掌異構性胺基酸轉化成醯胺類或用純對掌異構性羥基羧酸例如乳酸轉化成對應的對掌性酯類，隨後可利用加入純對掌異構性形式的胺基 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200400178 五、發明說明（η) 酸或醇基之對掌性，經由進行現在可經由結晶法或在合適的固相上之層析法分離非對掌異構物而將異構物分離，且隨後使用合適的方法消除包含的對掌性部佾。式I化合物之酸性或鹼性產物可以是其鹽類形式或 5 自由態形式，較宜是藥理上可接受的鹽類，例如鹼金屬或鹼土金屬鹽類，及鹽酸鹽、溴酸鹽、硫酸鹽、半硫酸鹽、全部可能的磷酸鹽，及胺基酸、天然鹼或羧酸之鹽類。在製程步驟d)中，從包括其立體異構物形式之可以 10 形成鹽類的式I化合物製備生理耐受性鹽類是在本身已知的方式下進行，式I化合物與鹼性試劑例如氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、醇鹽及氨或有機鹼例如三甲胺或三乙胺、乙醇胺或三乙醇胺或其他鹼性胺基酸例如賴胺酸、鳥胺酸或精胺酸形成安定的驗金屬、驗土金屬或 15 視需要經取代之銨鹽，如果式I化合物含鹼性基，也可用強酸製備成安定的酸加成鹽，合適用於此目的的是無機及有機酸例如氫氣酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、4-溴苯磺酸、環己醯基磺酸、三氟甲基磺酸、醋酸、草酸、酒石酸、琥珀酸或三 20 氟醋酸。本發明也關於藥劑，其含有效量至少一種式I化合物及/或式I化合物之生理耐受性鹽類及/或視需要選用的式I化合物之立體異構物形式，以及藥學上合適且生理而ί受性之載劑、添加劑及/或其他活性成份及賦形 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）

A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200400178 五、發明說明（I3) 劑。因為具有藥理性質，本發明化合物合適用於選擇性預防及醫療其中與基質金屬蛋白酶13強化活性進展相關之病症，這些病症包括關節變性病例如骨關節炎、椎關 5 節強硬、關節受傷或半月板或膝蓋骨受傷或韌帶撕裂後長期關節固定之軟骨溶解，其也包括結締組織病症例如成膠質病、牙周病、傷口癒合障礙及運動系統之慢性病症例如發炎、免疫性或與代謝相關的急性與慢性關節炎、關節病、肌痛及骨代謝障礙，式I化合物也合適用 10 於治療潰瘍、動脈粥樣硬化症及狹窄，式I化合物還合適用於治療發炎性病症、癌症、腫瘤轉移、惡質病、厭食症及敗血性休克，該病症可以使用根據本發明之化合物更專一性地治療且有較少的副作用，因為其實質上只抑制 MMP-13。 15 本發明藥劑之用藥可經由口服、吸入、直腸或經皮用藥進行，或經由皮下、關節内、腹膜内或靜脈内注射，較宜是口服用藥。本發明也關於用於製備藥劑之方法，其包括將至少一種式I化合物轉化成合適的給藥形式，其含藥學上合 20 適且生理耐受性的載劑，且視需要選用其他合適的活性成份、添加劑或賦形劑。合適的固體或醫藥製劑實例是粒劑、粉劑、包衣片劑、片劑、（微）膠囊劑、栓劑、酏劑、口服溶液、懸浮液、乳液、滴劑、可注射的溶液、及延長釋放活性成份 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

200400178 A7 B7 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 =:衣rn統的輔劑例如載劑、調味劑、祠化劑及溶解劑，通=用：,劑或潤滑劑、是碳酸鎂、-氧化钕 < 可舉例的1|形劑石奶4 糖、甘露醇及其他糖類、滑石、奶蛋白、明膠、殿粉、纖維植物油勤H 及細絲、動物及醇及溶劑例如二如無园水及早兀或多元醇類例如甘油。匕西樂產品較宜在給藥單元生產及用藥入特定劑量本發明之式I化合物作為活性成703 u 卞馮活性成份，在固體給如片劑、膠囊劑、包衣片劑或栓劑之情形中，可以達到約麵毫克，但較宜約50至300毫且在瓶形式用於注射之溶液中，可以達到約3〇〇毫克，但較宜約10至1〇〇毫克。用於治療體重約70公斤的成年病人之每曰劑從約20¾克至麵毫克之活性成份，較宜約⑽毫克至50〇毫克，由式I化合物之活性決定，但是在部份情形中，較高或較低的每日劑量也合適，每日劑量可以在單背丨畺單元經由當天一次用藥，或在多個較小的劑量單元在一定間隔下分成多次用藥。最終的產物通常是經由光譜法(FAB_、ESI_MS)測定，在各情形下列出主峰，溫度是以攝氏溫度表示， RT係指室溫（22°c至26t)，使用的縮寫是經說明或對應於一般習慣用法。經由下列實例詳細說明本發明。

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（2〗〇χ297公

200400178 A7 B7 五、發明說明（！5) 在表1中的化合物1、3、4及5是類似於實例2敘述之方法製備。實例2 步驟1 ·製備2-(4’-确基聯苯基-4-續g篮基)-1，2,3,4_四氫 5 異喳咁-3-(R)-羧酸將44.2克（250毫莫耳）的1，2,3,4-四氫異喳咁-3_(R)_ 羧酸溶解在500毫升1當量濃度氫氧化鈉水溶液，且在攪拌下加入溶解在500毫升四氫呋喃中的15〇克（3〇〇毫莫耳）的4’-硝基聯苯基-4-磺醯氯，此時將反應溫度保持 10低於25 C，並經由添加1當量濃度NaOH將溶液之pH 調整成pH 10，將反應混合物在室溫攪拌12小時。處理時，將反應溶液經由澄清層過濾，隨後在旋轉蒸發器内在減壓下將過濾液濃縮至原先體積之一半，經由加入20%強度擰檬酸水溶液將所得的溶液 15酸化至ΡΗ2至3，反應產物沈澱成無色固體，將所得的固體過濾並在40°C之真空爐中乾燥，得到77.9克（71 %理論值，無色固體）。質言晋：ESI: [M+H+]: m/z=439.4 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製步驟2 :製備2-(4’-硝基聯苯基-4-磺醯基)-i，2,3,4-四氫 20 異喳咁-3-(R)-羧酸甲酯將77.5克（177毫莫耳）在步驟1製備的羧酸逐份添加至65宅升亞硫酿氯（885毫莫耳）在800毫升甲醇並在-15°C至-10°C之溶液，然後將混合物在25°C攪拌1小時並在50°C攪拌1小時。 -17- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱） 200400178 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（16) 處理日τ，將反應浴液在減壓下濃縮並與300晕升二氯甲烷及300毫升飽和的NaHC03水溶液攪拌，然後將有機層用水清洗至中性並經由Na2S04乾燥，在減眞下將洛劑去除，將此方式所得的粗產物（8〇克，標色油）在 5矽膠(4〇μ-63μ)上用正庚烷：醋酸乙酯=2:1作為流動相經由層析法純化，得到27克（34%理論值，無色油）。質譜：ESI: [Μ+Η+]: m/z=453.4 步驟3 :製備2-(4’-胺基聯苯基-4-磺酿基)-i，2,3,4-四氫異喳咁-3-(R)-羧酸曱酯 10 將5:3克（117毫莫耳）在步驟2製備的硝基化合物溶解在四氫呋喃（THF)與甲醇之ι·5升1:1混合物，加入i 克Pd (10%於活性碳上）後，在氫化裝置内用H2氫化直到停止消耗H2 (氫氣消耗7·2升）。處理時，將觸媒經由Celite®之澄清層過濾，隨後在 15旋轉蒸發器内在減壓下將過濾液濃縮，將油性殘留物溶解在一氣甲烧並經由NajO4乾燥，在減壓下將溶劑去除，將此方式所得的粗產物從乙_再結晶，得到45.7 克（93%理論值，無色固體）。質譜· ESI: [M+H+]: m/z=423.4 20步驟4:製備2-(4、異丙酯基胺基聯笨基磺醯基)_ 1，2,3,4-四氫異喳咁-3-(11)-魏酉曼甲酯將16.9克(40毫莫耳）步驟3之化合物溶解在2〇〇毫升無水二氯甲烷，在_70它至_60。(:及攪拌下，依序加入4.9毫升吡啶(60毫莫耳）及44毫升(44毫莫耳）氣曱 -18- 本纸張尺度適用中國國豕標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱）

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酸異丙酯，然後將混合物在此溫度授拌3小時，處理時，將反應混合物在0°C經由加入10毫升水進行水解，取出有機層後將其用水清洗至中性並經由NhS〇4 乾燥，在減壓下在旋轉蒸發器内將溶劑去除，加入1〇〇毫升正戊烷後，將此方式所得的殘留物結晶成橙紅色晶體形式，得到20.1克（98%，橙紅色晶體）。質譜：ESI: [M+H+]:m/z=509.5 步驟5 :製備2-(4，-異丙酯基胺基聯苯基_4_磺醯基)_ 1，2,3,4_四氫異喳啡_3_(幻_緩g吏 10 將20克在步驟4製備之羧酸酯（39·4毫莫耳）溶解在200毫升THF，在25°C加入48毫ff 1莫耳濃度 Li0H溶液，將反應溶液在25°C攪拌3小時。 15 然後將反應混合物在減壓下濃縮，將殘留物溶解在 75〇毫升水中並經由Celite®及活性碳之澄清層過濾用檸檬酸水溶液將母液酸化，將沈澱的反應產物過濾並在矽膠(4〇μ-63μ)上用比例是9:1之二氣曱烷：曱醇作為流動相經由層析法純化，得到141克（72%理論值，無色固體）。經濟部智慧財產局員工消费合作社印製質譜：ESI: [Μ+Η+]: m/z=495.2 2〇實例6 步驟1 : 5_(4’_硝基聯笨基_4_磺醯基)_ι·曱基_4,5,6,7-四氫-1H-咪唑並[4,5-c]吡啶-6-羧酸將2克1-甲基波菜素(9· 19毫莫耳）溶解在15毫升水中，在0。(：加入3當量的3當量濃度]^&01·!溶液(919 -19- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200400178 A7 B7 五、發明說明（18) 毫升），經10分鐘後，緩慢逐滴加入4’-硝基聯苯基-4-磺醯氯（2.74克，9·19毫莫耳）在乙腈之溶液，到達室溫後，將混合物再攪拌12小時，將粗產物經由層析法純化，得到1.9克（47%理論值，無色固體）。 5 質譜：ESI: [Μ+Η+]·· m/z=443 步驟2 : 5-(4’-胺基聯苯基-4-磺醯基）-1-曱基-4,5,6,7-四氫-1H-咪唑並[4,5-c]吡啶-6-羧酸將1克（2.3毫莫耳）的5-(4’-硝基聯苯基-4-磺醯基)-1-曱基-4,5,6,7-四氫-111-咪唑並[4,5<]吡啶-6-羧酸溶解 10 在15毫升二曱基甲醯胺(DMF)，加入0.1克氫化觸媒 (10%Pd在活性碳上）後，在2小時内定量氫化，去除溶劑後，將粗產物經由層析法純化，得到0.74克（78%理論值，無色固體）。質譜：ESI: [M+H+]: m/z=413 15 步驟3 · 5- (4’-烧S旨基胺基聯苯基-4-績酸基)-1 -甲基_ 4,5,6,7-四氫-111-1：7米嗤並[4,5_(：]°比°定-6-敌酸將500毫克（1.2毫莫耳）的5-(4’-胺基聯苯基-4-磺醯基）-1-甲基-4,5,6,7-四氫-11^-咪唑並[4,5<]吡啶-6-羧酸溶解在3毫升DMF，且在冰浴中冷卻至0°C後加入2.4毫 20 莫耳吡啶，在0°C攪拌15分鐘後，加入1.8毫莫耳氯甲酸異丙酯，將反應溶液在室溫攪拌2小時，將粗產物經由層析法純化，得到0.38克（64%理論值，無色固體）。質譜·· ESI: [M+H+]: m/z=499 在表1中的化合物7至10是類似於實例6敘述之 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

A7 200400178 B7 五、發明說明（19) 方法製備。 .計· •線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（2〇 ) 表1

-22- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 A7 B7 五、發明說明（21 5 Ν 〇、 507 6 \ Ά又 '—Ν ^ 乂 499 7 〈Ό、/ 〇 547 8 〇乂〇 527 9 <^ίΟ'°〇2Η ° 〇>- Ο 513 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 A7 B7 五、發明說明（22 )

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 B7 五、發明說明（23 ) 藥理實例製備及測定人類斯特麥酶（stromelysin) (MMP 3)及嗜中性細胞膠原酶(MMP 8)之催化結構域之酶活性根據 Ye et al. (Biochemistry; 31 (1992)，11231-5 11235頁）之揭示，製備兩種酶-斯特麥酶（stromelysin) (MMP 3)及嗜中性細胞膠原酶(MMP 8)，為了測量酶活性或酶抑制效應，將70微升緩衝溶液及10微升酶溶液在生理pH用視需要含酶抑制劑之1〇微升1〇%強度(v/v) 二甲亞砜水溶液培養15分鐘，加入含1毫莫耳/升作用 10 物之1〇微升10%強度（v/v)二曱亞砜水溶液後，經由螢光光譜（328毫微米（消光)/393毫微米（放射）)監視酶反應。酶活性是以增加消光/分鐘代表，列在表2之IC50 值是測量的抑制劑濃度其在各情形下導致酶之50%抑 15 制。緩衝溶液含 0.05%Br*ij (Sigma，Deisenhofen， Germany)及〇·1 莫耳/升 Tris/HCl、0.1 莫耳/升 NaCl、經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 0.01莫耳/升CaCl2及0·1莫耳/升六氫吡畊-N，N，-雙[2-乙磺酸](ρΗ=7·5)。 20 酶溶液含5微克/毫升根據Ye et aL之揭示製備之其中一種酶結構域，作用物溶液含1毫莫耳/升螢光作用物（7-甲氧基香豆素-4-基）乙醯基-Pro-Leu-Gly-Leu-3-(2,4-«一石肖基苯基)-L-2,3-二胺基丙酿基-Ala-Arg-NH2 (Bachem，Heidelberg，Germany) 〇 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 Α7 五、發明說明（24 ) 測定人類膠原酶3 (MMP 13)之催化結構域之酶活性此蛋白質是從INVITEK，Berlin (目錄編號3〇 1〇〇 803)得到為失活的酶原。酶原之活化： _ 5 將2體積組份之酶原用1體積組份之APMA溶液 ί 培養I.5小時，從10毫莫耳/升對胺基苯基醋酸汞溶液在0.1毫莫耳/升NaOH中經由用3體積組份之 Tris/HCl緩衝液pH 7.5 (見下文）稀釋而製備ApMA溶液，經由加入1毫莫耳/升HC1將pH調整至介於7〇及 1〇 7.5,將酶活化後，用Tris/HCw衝液將其稀釋至漠度疋1·67微克/毫升。為了測量酶活性，將10微升酶溶液用1〇微升3% 強度（V/V)緩衝化的二甲亞砜溶液（反應培養15分鐘，為了測量酶抑制活性，將1G微升酶溶液用含酶抑制劑 Μ 15之ίο微升3%強度(v/v)緩衝化的二甲亞石風溶液（反應2) 培養。加入含0.75毫莫耳/升作用物之1〇微升3%強度經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (啊緩衝化的二甲亞财溶液後，在反應」及反應2之酶反應是經由螢光光譜(328毫微米（消光)/393毫微米 2〇 (放射）)監視，酶活性是以增加消光/分鐘代表，抑制效應是經由下式之抑制百分比計算： %抑制=100-[(在反應2之增加消光/分鐘）/(在反應i之增加消光/分鐘)χ 100] -26- 200400178 A7 _ B7 五、發明說明（25 )'^ IC5〇值，也就是50%抑制酶活性所需要的抑制劑濃度，是經由在不同抑制劑濃度之抑制百分比作圖發現。緩衝溶液含〇.〇5%Brij (Sigma，Deisenhofen，

Germany)及（U 莫耳/升 Tris/Hcl、〇」莫耳/升 Naa、 5 0·01 莫耳/升 CaCl2 (ρΗ=7·5)。酶/谷液含1.67微克/毫升酶結構域，作用物溶液含〇·75毫莫耳/升螢㈣用物(7_甲氧基香豆素_4•基）乙酿基-Pr〇_LeU_Gly-Leu-3-(2,4_二硝基苯基）_L_2 3 二胺基丙醯基-Ala-Arg-NH2 (Bachem，Heidelberg，Germany)。 10 下表2列出結果。表2 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製實例 MMP 3 MMP 8 MMP 13 編號 IC50 (πΜ) IC5〇 (nM) IC5〇 (nM) 1 3000 2300 40 2 3000 6000 30 3 >10000 _ 2000 70 4 2000 3000 20 5 3000 4000 20 6 10000 4000 80 7 >10000 1000 60 8 >10000 5000 70 9 10000 200 60 10 >10000 700 20 比較例 -27- ifcrr,XTQ\A/i 200400178 A7 B7 五、發明說明（26 ) 下列表3所列之化合物是根據WO 97/18194製備。表3 : 實例編或* 結構 MMP 13 η (ηΜ) MMP 32) (ηΜ) ΜΜΡ 82) (ηΜ) 34 CO：^〇H ^xx〇 50 500 10 35 CO/H 。气 30 100 5 39 CO：/〇H / 2.9 100 1 tl· Μ 1) 根據上述進行測定 2) 及3)從WO 97/18194得到之數據經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 表3顯示從先前技藝獲得之類似結構化合物對於只有MMP 13之抑制作用顯現無選擇性。 -28- 士试改P亦田由两BR它样淮/r^XTC、Ad JS故1CT7人\雜、

Claims

A8 B8 C8 D8 Ο

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200400178 六、申請專利範圍 1. 一種式I化合物 ⑴ 〇 ?人 Ν Ο—R1 及/或式I化合物之全部立體異構物形式及/或這些形式在任何比例之混合物、及/或式I化合物之生理耐受性鹽 10 類製造藥劑用於預防及醫療其中與基質金屬蛋白酶13強化活性進展相關的病症之應用，其中 A是碳原子或氮原子，其中 A是未經取代或經-(CVQ)-烷基取代， η是1或2之整數， 15 R1是l.JCVC^)·烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2.-(C2-C10)-烯基其中烯基是直鏈或支鏈， 3 .-(C2-C10)-炔基其中炔基是直鏈或支鏈， 4. -(Ci_C4)_烧基本基， 5. -(Ci_C4)-烧基-(〔3-匚7)-壞烧基， 20 6.-(C3-C7)-環烷基或 7:CH2CF3，且 R2是氫原子或-(CVQ)-烷基。 2. 根據申請專利範圍第1項之應用，其使用的式I化合物是其中 -29 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

ο 11 (II

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200400178 A8 B8 C8 _____D8_ 六、申請專利範圍 A是碳原子或氮原子，其中 A是未經取代或經甲基取代， η是1或2之整數， R1是l.-(C2-C6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈，
2.-CH2-苯基，或丙基，且 R2是氫原子或甲基。 3.根據申請專利範圍第1或2項之應用，其使用的式II 4匕合物

OH 15 其中 R1是l.-(C2-C6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈，
2.-CH2-苯基，或 20 3.-CH2-環丙基，且 R2是氫原子或曱基。 4·根據申請專利範圍第1或2項之應用，其使用的式III化合物 -30 -

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200400178 六、申請專利範圍〇 OH R2 (IH) Ο 一 R1 10 15 20 其中 / R1是1，(C2-C士燒基其中燒基是直鍵或支鍵， 2-CH2-苯基，或 3.-CH2-環丙基，且 R2疋鼠原子或甲基。 5. 根據中請專利範圍第i至4項―或多項m中病症是關節變性病例如骨關節炎、椎關節強硬、關節受傷或半月板或膝蓋骨受傷或物帶撕裂後長期關節固定之軟骨溶解，或結締組織病症例如成膠質病、牙周病傷口癒合障礙’或運料、統讀性病㈣如發炎、免疫性或與代謝相關的急性與慢性關節炎、關節病、肌痛或骨代謝障礙，或潰瘍、動脈粥樣硬化症或狹窄或發炎性病症或癌症、腫瘤轉移、惡質病、厭食症及敗血性休克二 6. 根據申請專利範圍第丨至5項一或多項之應用，其中用藥是經由口服、吸入、直腸或經皮用藥或經皮下” 節内、腹膜内或靜脈内注射進行。、關 7·—種式I化合物，訂線 ·! -3 1 - 亦；杰田由闭撕它播淮姻故，八你 200400178 A8 B8 C8

Ο

及/或式I化合物之全部立體異構物形式及/或這些形式在任何比例之混合物、及/或式I化合物之生理财受性鹽 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 類，其中孤 A是碳原子或氮原子，其中 A是未經取代或經_(Ci_C4)_烷基取代， η是1或2之整數， R1疋1·-((ν€10)-烧基其中烧基是直鏈或支鏈， 2〃(C2-C 10)-烯基其中烯基是直鏈或支鏈， -(C2-C10)-炔基其中快基是直鏈或支鏈， -(C1-C4)-烧基苯基， _(Ci_C4)H(C3-C7)-環烧基， •-(C3-C7)-環院基或 7 _CH2CF3，且 R2是氫原子或_(Ci-c4)_烷基。 8·根據申請專利範圍第7項之式I化合物，其中 A是碳原子或氮原子，其中 A是未經取代或經甲基取代， n是1或2之整數， 4 6 -32 200400178 六、申請專利範圍 R1疋lyCVC6)·烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2--CH2-笨基，或 3·-(ϋΗ2-環丙基，且 R2是氫原子或曱基。其中 9’根據申請專利範圍第7項之式II化合物

10 其中 R1是l.-(CVC6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2. -CH2-苯基，或 15
3. -CH2-環丙基，且 R2是氫原子或曱基。 10·根據申請專利範圍第7項之式πι化合物，其中〇 20 、OH R2 Ο m Ν 〇—R1 其中 33 - :二糸I 200400178 A8 B8 C8 _D8_ 六、申請專利範圍 R1是l.-(C2-C6)-烷基其中烷基是直鏈或支鏈， 2.-CH2-苯基，或 3•丙基，且 R2是氫原子或曱基。 5 11.—種用於製備根據申請專利範圍第7至10項一或多項式I化合物之方法，其包括 a)使式IV化合物〇

IV 其中A、R2及η相同於在式I之定義且Re是氫原子或酉旨保護基，與式V化合物

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製其中Rz是氣原子、咪唑基或OH， 20 在驗存在下反應而得到式VI化合物〇

(VI) NO, -34 士祕技I?办：*田忐朗嫌古接推/r^NTQ、Adia故广OCT7人\路、 200400178 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍其中A、R2及η相同於在式I之定義且Re相同於上述之定義，且 b)用氫氣及金屬觸媒將在a)製備之式VI化合物還原成式VII之胺

10 且隨後使式VII化合物與式VIII化合物 α人/R1 (Vm) 其中R1相同於在式I之定義， 15 在鹼性化合物例如三乙胺、三甲胺或吡啶存在下反應而得到式IX化合物經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20

〇人- Η ,R1 (IX) 其中Rl、R2、A及η相同於在式I之定義且Re相同於上述之定義， c)將經由步驟a)製備之式I化合物分餾且因為其化學結

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200400178 as Βδ C8 __D8_ 六、申請專利範圍構，將發生的對掌異構性形式經由與純對掌異構性的酸或鹼形成鹽而成為純對掌異構物，在對掌性固相上層析或使用純對掌異構性化合物例如胺基酸衍生化，处離在此方式所得的非對掌異構物，並消除對掌性辅助基，或 5 d)不論是分離經由步驟b)或c)製備之式I化合物，在其中酸性或驗性基存在之情形下，轉化成生理对受的鹽。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200400178 l h __議

(一）、本案指定代表圖爲：第圖(ί 本代表圖之元件代表符號簡單說明：無本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的 i議8義_隱____國^

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