TR2022000292A2 - SARS-CoV-2 Virüsüne Karşı Koruyucu Pastil/Çiğneme Tableti Üretimi - Google Patents

Abstract

Bu buluş, yeşil çay, yaban mersini, nar kabuğu ve Kara Kavak propolisi ekstrelerinden oluşan karışımın(18) elde edilmesiyle ilgilidir. Beklenmedik bir şekilde karışım (18) SARS-CoV-2 virüsüne karşı etkinlik göstermesi sonrası karışım (18) pastil/çiğneme tableti formuna getirilmiş olup SARS-CoV-2 virüsüne karşı etkinliği gösterilmiştir. Buluş, SARS-CoV-2 virüsünün ilk giriş noktası olan ağız ve boğaz çevresinde koruyucu etki göstermesini sağlamak amacıyla boğaz pastili/ çiğneme tableti formunda geliştirilmiştir. Buluşa konu olan karışımın (18) SARS-CoV-2 virüsüne karşı etkinliği in vitro yöntemlerle VERO E6 hücreleri üzerinde test edilmiştir. Karışım (18), 160 saat süren deneyin sonunda 110 &#956#&g/mL konsantrasyonda %112 oranında (% 61 hücre canlılığında) ve 70 &#956#&g/mL konsantrasyonda % 35 oranında (% 82 hücre canlılığında ) virüsü nötralize etmiştir.

Description

TARIFNAME SARS-CoV-Z Virüsüne Karsi Koruyucu PastillÇigneme Tableti Üretimi Bulusun Ilqili Oldugu Teknik Saha Bu bulus, SARS-CoV-2 virüsüne karsi etkinligi in vitro testler ile ispatlanmis yesil çay, yaban mersini, nar kabugu ve Kara Kavak propolisi ekstrelerinden olusan karisiminin elde edilmesi ve pastiI/çigneme tableti haline getirilmesiyle ilgilidir. Formüle edilen karisimin SARS-CoV-2 virüsüne karsi etkili oldugu in vitro (VERO E6 hücreleri üzerinde) testler ile ispatlanmistir. Gelistirilen üründe sitotoksisite testleri de gerçeklestirilmistir. Ürünün pastil/çigneme tableti formunda gelistirilmesinin sebebi SARS-CoV-Z virüsünün ilk giris noktasi olan agiz ve bogaz çevresinde koruyucu etki göstermesini saglamaktir. Teknigin Bilinen Durumu 2019 yilinda Çin'de baslayan ve tüm dünyaya yayilan Covid-19 (Koronavirüs pandemisi) insanligi tehdit eden bir salgin haline gelmistir. Covid-19 hastaligi etkeni olan SARS-CoV-2 insanlarda ciddi solunum yolu enfeksiyonuna sebep olan bulasici viral bir hastaliktir. SARS-CoV-2 insan ve bazi hayvan türlerini enfekte edebilen, genetik materyal olarak tek zincirli RNA (ribonükleik asit) tasiyan zarfli bir virüs türüdür. Bu virüs grubu özellikle üst solunum yolu enfeksiyonuna sebep olarak soguk alginligi ve grip benzeri semptomlar gösterir. Bogaz agrisi, kuru öksürük, burun akintisi, halsizlik ve yorgunluk en yaygin semptomlari arasindadir [5]. Su ana kadar dünya genelinde Covid-19 vaka sayisi 185 milyonu asmis, 4 milyondan fazla ölüm meydana gelmistir [1]. Covid-19 küresel düzeyde ülkelerin saglik sistemlerini önemli ölçüde etkilemistir. Bunun yani sira egitim ve ekonomi alaninda problemlere sebep olmus, gida ve turizm sektörlerini de büyük ölçüde etkilemistir. Ayrica toplumun izole edilmesi bireylerin sosyal hayatini sinirlayarak psikolojik sorunlar gelisimine yol açmistir. C0vid-19'un insanlar arasinda hizli bir sekilde bulasmasi ve sebep oldugu yüksek ölüm orani, hastaligin tedavisine yönelik yeni tedavi yöntemlerinin gelistirilmesi için acil bir ihtiyaç olusturmustur. Tüm dünyada simdilik C0vid-19'u tedavi edebilen etkili bir yöntem bilinmemekle birlikte 19 farkli asi gelistirilmistir [1]. Muhtemel anti-viral ilaçlarin klinik çalismalari devam etmektedir. Bitki ekstrelerinin zengin biyoaktif ve fitokimyasal bilesik içerikleri sayesinde viral kaynakli hastaliklarin tedavisine yönelik ilaç gelistirilmesinde büyük öneme sahip olduklari yapilan klinik çalismalar ile gösterilmistir [6]. Bitkiler gelismek ve hayatta kalmak için çok genis biyolojik aktiviteye sahip olan sekonder metabolitleri sentezlemektedirler. Bu metabolitlerin çogu, bitkide biyotik stres (böcekler, parazitler ve mikrobiyal patojenler) ve abiyotik stres (düsük ya da yüksek sicaklik, yetersiz ya da fazla su, tuzlu ortam, agir metaller ve UV isigi) karsisinda savunma mekanizmasi olusturan kimyasallardir [7]. Yüzyillar boyunca insanlar bitki ekstrelerini hastaliklara karsi tedavi ve korunma amaciyla kullanmislardir. Farkli ve çok sayida bitki kökenli bilesenin SARS-CoV-2 karsisindaki terapötik etkisi arastirilmaktadir. Mevcut durumda bagisiklik sisteminin güçlendirilmesi üzerine kullanilan takviye edici gidalar bulunmaktadir. Takviye edici gida olarak bagisiklik sisteminin güçlendirilmesi için piyasada beta glukan, kara mürver ekstresi, afrika sardunyasi, zerdeçal ekstresi, üzüm çekirdegi ekstresi, yesil çay ekstresi, nar kabugu ekstresinin vitamin ve minerallerle farkli kombinasyonlarini içeren tablet, kapsül ve pastil formunda ürünler bulunmaktadir. Özellikle bogaz enfeksiyonlarinda, agriyi azaltmak ve yutkunmayi kolaylastirmak amaciyla kullanilan pastiller/çigneme tabletleri tükürük bezlerinin harekete geçmesine sebep olmaktadir. Bu sayede agizda mevcut dogal antimikrobiyal madde Iizozim sekresyonu artarak pastiller/çigneme tabletleri yeni baslayan bogaz enfeksiyonlari dahil agiz ve burun yoluyla vücuda girecek olan mikroorganizmalarin gelisimi, kolonizasyonu önlenebilmektedir. Diger taraftan, SARS-CoV-2 tipi virüs ve varyantlarinin hücrelerin ACE-2 ve TMPRSSZ reseptörlerine tutunarak hücre içerisine penetre olduklari bildirilmektedir. Bu reseptörlerin en yüksek yogunlukta bulundugu hücrelerin agiz boslugu ve burun mukozasi oldugu bildirilmektedir. Dolayisiyla agiz mukozasinda bu reseptörlere virüslerin tutunmasi ve penetrasyonunun engellenmesinde pastiller/çigneme tabletlerinin önemli rol oynayabilecegi bildirilmektedir. Mevcut durumda var olan patent/er ve basvurular asagida özetlenmi'sti'r. and application thereof" baslikli patent dokümani, bagisiklik sisteminin arttirilmasina yönelik olup mevcut bulustan farkli olarak Terminali'a ferdinandi'ana, Undari'a pinnatiiîda, Curcuma longa ve Viti's vinfera ekstrelerini içermektedir. dokümani, mevcut bulustan farkli olarak SARS-CoV-19'a karsi degil genel bagisiklik sisteminin düzenlenmesi için gida takviyesi, dogal preparatlar veya müstahzarlarin gelistirilmesine yöneliktir. numarali Japon patent dokümaninda, mevcut bulustan farkli olarak koronavirüs ajani olarak görev alan proantosiyanidin, katesin ve üzüm ekstresi içeren gida ürünlerinin gelistirilmesinden bahsedilmistir. TR2021/01716 numarali "SARS-CoV-Z'ye Karsi Antiviral Etkili Yeni Seçenekler" baslikli Türk patent dokümaninda ise mevcut bulustan farkli olarak Covid-19'a karsi potansiyel anti-viral etkiye sahip Viti's vi'ni'fera çekirdek yagi, Karvakrol, Timol ve Gama Aminobütirik Asit'in kombinasyonlarinin gelistirildiginden bahsedilmistir. Türk patent dokümaninda mevcut bulustaki bitkilerin ve ari ürününün disindaki bitki/bitkilerin farkli kisimlarindan elde edilen Covid-19'a karsi anti-viral etkinlige sahip fermente edilmis sivi ekstraktlar gelistirildiginden bahsedilmektedir. Throat and Respiratory Tract" baslikli patent dokümani Curcuma i'onga, Puni'ca granatum ve Zi'ngi'ber offici'nale ekstraktlarini içermektedir. Bu karisimin bakteri plagi olusumunu engelleyerek üst solunum yollari hastaliklarinin önlenmesinde ve anti-viral, antioksidan aktivite, anti-inflamatuar etki ile beraber tükürükte lizozim miktarini arttirarak üst solunum yollari hastaliklarinin tedavisinde etkili oldugu in vitro ve klinik çalismalarla kanitlanmistir. Basvurusu yapilan bulus ise Punica granatum ekstresinin yaninda Camellia sinensi's, Vacci'ni'um myiti'llus ekstrelerini ve ari ürünü olan Kara Kavak propolisi ekstresini içermekle birlikte dogrudan SARS-CoV-2 virüsüne karsi etkinligi in vitro deneylerle ispatlanmistir. ingredients" baslikli patent dokümaninda, mevcut bulustan farkli olarak laden (Cistus creticus L.) bitkisinden elde edilen minimum %40 (m/m) oraninda polifenol içeren ekstrelerin ekstraksiyon reçeteleri tanimlanmistir. Ayrica, %60 polifenol içeren ekstrenin Clostrridium perfringens, Vibrio cholerae ve influenza A H1N1 virüslerine karsi etkili oldugu belirtilmistir. Bulusun damla, burun spreyi, surup, tablet, pastil, toz formlarda uygulanabilecegi belirtilmistir. natural extracts and related methods" isimli patent çalismasi puni'ca granatum, myri'sti'ca fragrans, zingi'ber officinale ve zizyphus joazeiro bitkilerinden en az üçünün kombinasyonu ile elde edilen karisimin hazirlanmasi ve karsimin agiz bakim ürünleri formülasyonunda kullanilmasi hakkindadir. Elde edilen agiz bakim ürünlerinin antimikrobiyal, anti-inflamatuar, antioksidan özellik gösterip, ayrica kserostomi tedavisinde baska bir antibakteriyel ajan kullanimina gerek kalmadan etkili oldugu belirtilmistir. Karisimin özelligi agiz yüzeyine uygulanabilmesi için istenen forma, sivi, toz, jel, çigneme tableti, damla, film gibi girebilmesidir. pomegranate extracts against the common cold" baslikli patent dokümaninda, mevcut bulustan farkli olarak bütün narin ya da narin herhangi bir bileseninin iki ya da daha fazla ekstraktindan elde edilen bir karisimin adenovirüs, rinovirüs, koronavirüs ve insan parainfluenza virüsünün veya bunlarin herhangi bir varyasyonunun herhangi bir sayida viral ajanin neden oldugu soguk alginliginin tedavisinde kullanilabileceginden bahsedilmistir. Mevcut durumda var olan basvurulardan çogunlugu bagisiklik sistemini güçlendirerek virüslere karsi anti-viral özellik gösteren buluslardir. Bunun yani sira, mevcut bulusta kullanilan bitki ve ari ürünü ekstrelerinin disinda SARS-CoV-2 virüsüne karsi potansiyel anti-viral etkinlige sahip bitkisel sivi ekstraktlar ve sentetik ve dogal moleküllerin farkli kombinasyonlarindan olusan ürünler yer almaktadir. Yesil çay (Camellia sinensis), taze hasat edilen Camellia sinensis yapraklarinin oksidasyon ve fermantasyona ugramadan sicak hava veya buhar altinda kurutulmasi yöntemiyle elde edilir. Yesil çayda bulunan en önemli fenolik bilesikler katesinlerdir Gallat (EGCG)] [8]. Katesinlerin kardiyovasküler hastaliklar, obezite, diyabet, oksidatif ve inflamatuvar hastaliklar, bakteriyel ve viral hastaliklar, kanser ve nörolojik hastaliklarin önlenmesinde ve tedavisinde önemli bir yere sahip oldugu gözlenmistir yardimci, antioksidan ve SARS-COV-Z'ye karsi anti-viral olma özelliklerine sahiptir. Ayrica yesil çaydaki fenolik bilesikler SARS-COV-Z'ye karsi anti-viral olma özelligine de sahiptir. Akdeniz bölgesinde yogun olarak yetistirilen nar (Puni'ca granatum L.), Elajik tanen (ET'Ier), Gallik Asit (GA), Ellajik Asit (EA), Punikalin ve antosiyaninler gibi polifenoller bakimindan oldukça zengindir [11]. Nar meyvesinin %40'ini kabuk olusturmaktadir. Nar kabugu diyet lif ve polifenol açisindan çok zengindir ayni zamanda posaya nazaran çok yüksek antioksidan kapasiteye sahiptir [12]. Yapilan çalismalarda nar etkisi oldugu ve anti-inflamatuvar aktiviteye sahip oldugu tespit edilmistir. Nar kabugunda bulunan ETs, GA, EA, Punikalin bagisiklik sistemi güçlendirici ve SARS- COV-2'ye karsi anti-viral olma özelliklerine sahiptir. Yaban mersini (Vacci'nium myrti'i'i'us) iliman iklim kusaginda yetisen bir bitki türüdür, meyvesi üzümsü meyveler grubunda yer alir. Türkiye'de Karadeniz bölgesi basta olmak üzere, Marmara Bölgesi ve Dogu Anadolu florasinda yabani formlari yetismektedir. Yaban mersini, fenolik bilesenler özellikle antosiyaninler (Malvidin, Delphinidin ve Kuromarin) açisindan oldukça zengindir [18, 19]. Yaban mersini içerdigi fenolik bilesikler ve antosiyaninler (Malvidin, Delphidin, Kuromarin vb.) sayesinde SARS-COV-Z'ye karsi anti-viral olma özelligine sahiptir. Propolis (Propolire) bal arilarinin kovanlarini korumak için ürettikleri reçineli bir materyaldir ve bagisiklik sisteminin güçlendirilmesinde yaygin olarak kullanilmaktadir. Fenolik maddeler (Kafeik Asit Fenetil Ester (KAFE), Kafeik asit, p-kumarik asit, t- sinnamik asit vd. Hidroksisinnamik asit türevleri) ve flavonoitler (galangin, krizin, kersetin, pinosembrin, pinobanksin) içeren propolis bagisiklik sistemini güçlendirici, iltihap giderici (anti-inflamatuvar) ve SARS-CoV-2'ye karsi (anti-viral) etkili olma özelligine sahiptir [20]. Kara Kavak (Populus nigra) propolisi fenolik içeriginde yer alan etkili bilesenler arasinda kafeik asit fenetil esteri (KAFE) yürütülen bilimsel arastirmalarda genis bir farmakolojik etkinlik spektrumuna sahip oldugu bildirilmektedir. KAFE'nin ülkemizde bulundugu tespit edilen diger üç propolis tipi içerisinde (titrek kavak tipi, 3-metil kersetin tip ve içerigi belirsiz bir tip) bulunmadigi gözlemlenmistir. Bu bakimdan propolise atfedilen biyolojik yararlarin saglanabilmesi bakimindan Kara Kavak propolisi son derece önemlidir. Ayrica, Kara Kavak propolisi içerisinde bulunan pinosembtrin, pinobanksin, galangin ve krizin'in antimikrobiyal etkiden sorumlu fenolik bilesenler oldugu bildirilmektedir [21]. Kara Kavak propolisi, içeriginde bulunan fenolik maddeler; KAFE, Kafeik asit, p-kumarik asit, t-sinnamik asit vd. hidroksisinnamik asit türevleri) ve flavonoitler (galangin, krizin, kersetin, pinosembrin, pinobanksin) vasitasiyla bagisiklik sistemini güçlendirici, iltihap giderici (anti-inflamatuar) ve SARS-CoV-2'ye karsi (anti-viral) etkili olma özelliklerine sahiptir. Mevcut bulus, fenolik bilesenler açisindan zengin ve SARS-CoV-2'ye karsi (anti-viral) etkili olma özelligine sahip ekstraktlarin toz forma getirilerek belirli oranlarda formüle edilmesiyle ilgilidir. Biyoaktiflerce zengin karisimin kurutularak toz haline dönüstürülmesi, bozulmanin önlenmesi, raf ömrünün arttirilmasi ve kullanim kolayligi açisindan önemlidir. Mevcut durumda teknigin bilinen durumunda var olan bilgiler bagisiklik sistemini güçlendirerek virüslere karsi anti-viral özellik göstermesine yöneliktir. Bunun yani sira, mevcut bulusta kullanilan bitki ve ari ürünü ekstrelerinin disinda SARS-CoV-2 virüsüne karsi potansiyel anti-viral etkinlige sahip bitkisel sivi ekstraktlar ve sentetik ve dogal moleküllerin farkli kombinasyonlarindan olusan ürünler yer almaktadir. Ayrica, teknigin bilinen durumundan farkli olarak mevcut bulusta bitkisel ekstrelerin yani sira ari ürünü de yer almaktadir. Bir ari ürünü olan Kara Kavak (Populus nigra) propolisi içermis oldugu Kafeik Asit Fenetil Ester (KAFE) ve zengin polifenol içeriginden dolayi SARS-CoV-2 ve diger patojenlere karsi etkinligi mevcut bulusa arti deger katmaktadir. Kara Kavak propolisinin SARS-CoV-Z'ye karsi etkinligi ilk defa bu bulus sayesinde ortaya konulmustur. Bulusa genis etkinlik profili kazandirmak amaciyla ari ürünü olan Kara Kavak propolisi ilave edilmistir. Mevcut bulus, SARS-CoV-Z'ye karsi anti-viral etkinligi in vitro deneylerle kanitlanmis, ayni zamanda bagisiklik sistemini güçlendiren, agiz ve burun yolundan bulasan virüsün miktarini azaltan [110 ug/ml konsantrasyonda %112 (%61 hücre canliligi) nötralizan aktivite], kullanimi kolay, toksisitesi düsük takviye edici gida ile ilgilidir. Ayrica, diger buluslardan farkli olarak bu bulusta bitkisel ekstrelerin yani sira ari ürünü de yer almaktadir. Bulusun Çözümünü Amaçladigi Teknik Problem Dünya genelinde pandemiye sebep olan SARS-CoV-2 için simdilik Covid-19'u tedavi edebilen etkili bir yöntem bilinmemekle birlikte su ana kadar 19 farkli asi gelistirilmistir Bu bulus, konak proteinleri hedef alan viral enfeksiyonu önleyen, üst solunum yolu ile bulasan SARS-CoV-2 virüsün etkinligini azaltan yesil çay, yaban mersini, nar kabugu ve Kara Kavak propolisi ekstrelerinden olusan karisim ile ilgilidir. Bulus, SARS-CoV-2 virüsünün ilk giris noktasi olan agiz ve bogaz çevresinde koruyucu etki göstermesini saglamak amaciyla bogaz pastili/ çigneme tableti formunda gelistirilmistir. Bulusa konu olan karisimin SARS-CoV-2 virüsüne karsi etkinligi in vitro yöntemlerle VERO E6 hücreleri üzerinde test edilmistir. Karisim, 160 saat süren deneyin sonunda 110 ug/mL konsantrasyonda %112 oraninda (% 61 hücre canliliginda) ve 70 ug/mL konsantrasyonda % 35 oraninda (% 82 hücre canliliginda ) virüsü nötralize etmistir. Bitkisel maddeler sindirim sistemindeki farkli pH ve enzim kosullarinda büyük ölçüde metabolize olmaktadir. Dolayisiyla, in-vi'tro kosullarda yapilan çalismalarin sonuçlarinin sistematik olarak bütün vücutta ayni etkinligi göstermesi olasiligi düsüktür. Ancak lokal olarak agizda (pastil/çigneme tableti olarak) uygulandiginda sindirim sistemine girmeyecegi için .in-vitro sonuçlarin birebir etkinliginin saglanmasi mümkün olabilecektir. Bu bulusun pastil/çigneme tableti formunda olmasi sayesinde etken maddelerin sindirim sisteminde metabolize olmadan lokal etkinlik göstermesi saglanmistir. SARS-CoV-Z ve diger mikroorganizmalarin baslica giris noktalari oral kavite oldugu düsünüldügünde böyle bir pastilin enfeksiyonlarin önlenmesinde önemli rol oynamasi beklenmektedir. Sekillerin Açiklamasi Sekil 1. Anti-viral etkinligi olan karisim elde edilmesi Sekil 2. Karisimin VERO EG hücreleri üzerinde xCELLigence RTCA MP cihazindan elde edilen SARS-CoV-2 virüsüne karsi nötralizasyon etkinligi grafigi Sekillerdeki Referanslarin Açiklamasi A: Yesil Çay Ekstraksiyonu 1: %100 Etanol 2: Sicaklik (A) 3.1: Süzme B: Süzme Islemi 1: %100 Etanol 4.1: Süzüntü C: Kurutma Islemi .1: Sicaklik (C) 6.1: Yesil Çay Ekstresi 7: %50 Etanol 8: Sicaklik (D) 3.2: Süzme B: Süzme Islemi 1: %100 Etanol 4.2: Süzüntü C: Kurutma Islemi .2: Sicaklik (C) 6.2: Yaban Mersini Sulu Ekstrakti E: Liyofilizasyon Islemi 9: Sicaklik (E) : Maltodekstrin 11: Yaban Mersini Ekstresi F: Nar Kabugu Ekstraksiyonu 12: %30 Etanol 13: Sicaklik (F) 3.3: Süzme B: Süzme Islemi 1: %100 Etanol 4.3: Süzüntü C: Kurutma Islemi .2: Sicaklik (C) E: Liyofilizasyon Islemi 9: Sicaklik (E) : Maltodekstrin 14: Nar Kabugu Ekstresi G: Kara Kavak Propolisi Ekstraksiyonu : %70 Etanol 16: Sicaklik (G) 3.4: Süzme B: Süzme Islemi 4.3: Süzüntü (1) 4.4: Süzüntü (2) C: Kurutma Islemi .3: Sicaklik (C) 6.4: Kara Kavak Propolisi Sulu Ekstrakti E: Liyofilizasyon Islemi 9: Sicaklik (E) : Maltodekstrin 17: Kara Kavak Propolisi Ekstresi 18: Yesil çay ekstresi (6.1), yaban mersini ekstresi (11), nar kabugu ekstresi (14) ve Kara Kavak propolisi ekstresi (17) karisimi Bulusun Açiklanmasi Bu bulus, konak proteinleri hedef alan viral enfeksiyonu önleyen, üst solunum yolu ile bulasan SARS-CoV-2 virüsünün etkinligini azaltan yesil çay (6.1 ), yaban mersini (11), nar kabugu (14) ve Kara Kavak propolisi (17) ekstrelerinden olusan karisim ile ilgilidir. Bulus, SARS-CoV-2 virüsünün ilk giris noktasi olan agiz ve bogaz çevresinde koruyucu etki göstermesini saglamak amaciyla bogaz pastili/ çigneme tableti formunda gelistirilmistir. Bulusa konu olan karisimin SARS-CoV-2 virüsüne karsi etkinligi in vitro yöntemlerle VERO E6 hücreleri üzerinde test edilmistir. Karisim, 160 saat süren deneyin sonunda 110 iJg/mL konsantrasyonda %112 oraninda (%61 hücre canliliginda) ve 70 pg/mL konsantrasyonda %35 oraninda (%82 hücre canliliginda) virüsü nötralize etmistir. Bulusta; bogaz pastili/ çigneme tableti gelistirilmesi Örnek-2'de gösterilmistir. Mevcut bulusta yardimci madde olarak; sorbitol (E420), askorbik asit (E300), sitrik asit (E330), tartarik asit (E334), yag asitlerinin magnezyum tuzlari (E470b), mikrokristalin selüloz (E460i), maltodekstrin, arap zamki (E414), Iesitin, sigirjelatini (E441), polietilen glikol sukroz, sukroloz (E955), sakkaroz, ksiloz, gliserol (E422), sodyum klorür, dogal aroma vericiler (nane, limon aromasi gibi) ve dogal renk maddelerinden (beta karoten, Iikopen gibi) en az biri veya birkaçi kullanilmaktadir. Mevcut bulusta, anti-viral etkinlikleri in vitro testler ile kanitlanmis yesil çay (6.1), yaban mersini (11), nar kabugu (15) ve Kara Kavak propolisinin (17) su ve alkol çözeltisinin kullanildigi sivi ekstraksiyon takiben kurutularak toz forma getirilip belirli oranlarda formüle edilmektedir. Bulus, SARS-CoV-2 virüsüne karsi kullanildiginda 110 ug/mL konsantrasyonda %112 oraninda virüsü nötralize etme kabiliyetine sahiptir ve bu konsantrasyonda hücre canliligi %61 olarak bulunmustur. Ekstrelerin Elde Edilmesi: (2) (tercihen 85 °C) 0.5-2 saat (tercihen 1 saat) süreyle su banyosunda karistirilir. Karisim oda sicakligina geldikten sonra filtreden geçirilirken (3.1) °C'de (5.1) vakum altinda kuruluga gelene kadar uçurulur. Yesil Çay Ekstresi (6.1) elde edilir. Yesil Çay Ekstresi (6.1) eldesinde kati/sivi ekstraksiyonuna alternatif olarak bunlarla sinirli kalmamak kosuluyla süper kritik sivi ekstraksiyonu, basinçli sivi ekstraksiyonu, hizlandirilmis solvent ekstraksiyonu, sulu ekstraksiyon gibi teknikler kullanilabilir. J Yaban Mersini'Ekstresi (11).' Dondurulmus yaban mersini meyvesi ögütüldükten sicakligi) 0.5 - 2 saat (tercihen 1 saat) süreyle karistirilir. Ardindan, karisim filtreden geçirilirken (3.2) %100 etanolle (1) yikanir, süzüntünün (4.2) içindeki etanol (1) 40 °C'de (5.2) vakum altinda uçurulur. Yaban mersini sulu ekstrakti (6.2) Maltodekstrin (10) ile karistirilarak kalan suyun uzaklastirilmasi için 72 saat süreyle -40 °C"den (9) baslayarak liycfilizasycna konulur. Islem (E) sonrasi yaban mersini ekstresi (11) elde edilir. (11) eldesinde sivi ekstraksiyonuna alternatif olarak bunlarla sinirli kalmamak kosuluyla süper kritik sivi ekstraksiyonu, basinçli sivi ekstraksiyonu, hizlandirilmis solvent ekstraksiyonu, sulu ekstraksiyon gibi teknikler kullanilabilir. Nar Kabugu Ekstresi' (14): Kurutulmus nar kabuklari ince toz haline getirildikten etanol (12) (tercihen %30, v/v) çözgeni ile 15 dakika - 2 saat (tercihen 30 dakika) süreyle su banyosunda karistirilir. Karisim oda sicakligina geldikten sonra filtreden (3.3) geçirilirken %100 etanolle (1) yikanir, süzüntünün (4.3) içindeki etanol (1) 40 °C'de (5.2) vakum altinda uçurulur. Nar kabugu sulu ekstrakti (6.3) Maltodekstrin (10) ile karistirilarak kalan suyun uzaklastirilmasi için 72 saat süreyle -40 °C'den (9) baslayarak liycfilizasycna konulur. Islem (E) sonrasi ekstre (14) elde edilir. (14) eldesinde sivi ekstraksiyonuna alternatif olarak bunlarla sinirli kalmamak kosuluyla süper kritik sivi ekstraksiyonu, basinçli sivi ekstraksiyonu, hizlandirilmis solvent ekstraksiyonu, sulu ekstraksiyon gibi teknikler kullanilabilir. Kara Kavak Propolisi Ekstresi' (17): Ham Kara Kavak propolisi ince toz haline getirildikten sonra kati:sivi orani 1:2 - 1:20 (tercihen 1:10, w:v) olacak sekilde (tercihen 24 °C) 2 saat - 4 saat (tercihen 3 saat) süreyle karistirilir. Karisimin üst kismi dikkatlice süzülür (3.4). Ayni islem tekrar edilir (B). Ardindan, süzüntüler (4.3 ve 4.4) birlestirilir ve etanol 40 °C`de (5.3) vakum altinda tutularak uçurulur (C). Kara Kavak Sulu Ekstrakti (6.4) maltodekstrin (10) ile karistirilarak kalan suyun uzaklastirilmasi için 6.4 72 saat süreyle -40 °C'den (9) baslayarak liycfilizasycna konulur. Islem (E) sonrasi ekstre (17) elde edilir. (17) eldesinde sivi ekstraksiyonuna alternatif olarak süper kritik sivi ekstraksiyonu, basinçli sivi ekstraksiyonu, hizlandirilmis solvent ekstraksiyonu, sulu ekstraksiyon gibi teknikler kullanilabilir. 6.1, 11, 14 ve 17 ayri ayri elde edildikten sonra bir çigneme tableti/pastilde yesil miktar araliklarinda karistirilarak bulusa konu olan karisim elde edilir. Elde edilen karisima yardimci maddeler ilave edilerek pastil, çigneme tableti nihai formlarina dönüstürülür. Karisim nihai formuna getirilirken bunlarla sinirli kalmamak kosuluyla soft jel, tablet, bogaz spreyi vb. formlarina da dönüstürülebilir. yesil çay ekstresi (6.1), agirlikça %10-50 yaban mersini ekstresi (11), agirlikça ekstresi (17) ve yardimci maddeler içermektedir. Kavak propolisi ekstresinin agirlikça oranlari sirasiyla Tablo 1. SARS-CoV-Ztye karsi etkili karisimda kullanilan ekstrei'er ve örnek formüi'asyonu Kod Bitki Kökeni Ekstraksiyon Etken Birim Kosullari madde basina miktari (en %oran 6.1 Yesil Camel/fa sinensi's Kati:sivi orani Çay 1:10 (w:v), EGCG _ 85°C, 1 saat, % 10 10 55 11 Yaban Vaccirii'um myIIii'i'us Katizsivi orani Toplam Mersini 1:10 (w:v), oda Antosiyanin 14 Nar Puni'ca granatum Katizsivi orani EA* 17 Kara Popui'us nigra Katizsivi orani KAFE propolisi sicakligi, 3 saat, *Ellajik asit (EA) sonucu, puni'cai'i'n, valonei'k asit dilakton, galaji'k asit dilakton ve ellajik asit bilesenleriniri ellajik asit esdeger olarak sonucudur. Bulusa ait örnek formülasyon: SARS-CoV-2'ye karsi etkili çigneme tableti formülasyonu Yesil çay ekstresi, (en az %10 EGCG) 35 mg Nar kabugu ekstresi, (en az %02 EA*) 46 mg Yaban mersini ekstresi, (%0.75 antosiyanin) 35 mg Kara Kavak propolisi ekstresi, (en az %065 46 mg Sorbitol (E420) 350 mg Mikrokristalin selüloz (E460i) 29 mg Maltodekstrin 22 mg Aroma verici (Mentol) 0.52 mg Yag asitlerinin magnezyum tuzlari (E470b) 9 mg Sukraloz 0.29 mg *Ellaji'k asit (EA) sonucu, punicalin, valonei'k asit dilakton, galajik asit dilakton ve ellajik asit bilesenlerinin ellajik asit esdeger olarak sonucudur. in vitro deneyler Anti-viral etkinlik testi xCELLigence MP gerçek zamanli hücre analiz cihazi kullanilarak empedansa dayali olarak gerçeklestirilir. Bu çalismada, SARS-CoV-Z virüsünün baglandigi ACE2 reseptörüne sahip olan VERO E6 hücreleri (ATCC CRL 1586), besi yeri olarak DMEM ve katki maddeleri olarak %10 fetal bovin serum (FBS, heat inactivated, Hyclone) + 1% antibiyotik-antimikotik solüsyonu kullanilmistir [2-4]. VERO EG hücreleri xCELLigence RTCA MP cihazinin tek kullanimlik steril 96 kuyucuklu E-plate hücre plakasina, kuyucuk basina 25000 hücre düsecek sekilde ekilir. Cihaz tüm deney boyunca inkübatörün içerisinde tutulur ve ekilen hücreler cihaza yerlestirilerek 24 saat boyunca büyütülür. Numune hazirlama protokolüne göre inkübe edilir. Inkübasyonun ardindan örnekler, hücre büyütme kabindaki hücrelerin üzerinde yer alan besi yeri uzaklastirilarak kuyulara eklenir, 37 OC'de %5 C02 ile 160 saat boyunca inkübe edilir. 15 dakikalik araliklarla toplanan veriler RTCA Software Pro yazilimi yardimiyla analiz edilir. Sekil 2'de, bogaz pastili/çigneme tableti örneginin VERO E6 hücreleri üzerinde xCELLigence RTCA MP cihazindan elde edilen SARS-CoV-2 virüsüne karsi nötralizasyon etkinligi sonucu grafigi gösterilmektedir. Örnek ve virüs hücre üzerine 24. saatte eklenmis ve deney sonuçlari bir önceki okuma araligina göre normalize edilmistir. Deney 160 saat boyunca devam etmistir. Grafikte, (*) media kontrolünü (yalniz hücre/virüs), (i) 110 ug/mL virüs içeren bogaz pastiIi/çigneme tabletini, (ir ) 55 ug/mL virüs içeren bogaz pastili/çigneme tabletini ve ( x )virüs kontrolünü (3, göstermektedir. 110 ug/mL konsantrasyonda bogaz pastili/çigneme tableti virüsü %112 oraninda (% 61 hücre canliliginda) nötralize etmektedir. Bulusun Sanayiye Uygulanma Biçimi Bu bulus, ilaç ve gida sektöründe faaliyet gösteren herhangi bir firma tarafindan kolaylikla üretilerek ticarilestirilip eczanelerde veya marketlerde takviye edici gida olarak satisa sunulabilir. Referanslar: Cellular impedance measurement as a new tool for poxvirus titration, antibody neutralization testing and evaluation of antiviral substances. Biochem Biophys Res B., Sousa E., Gonthier C., Zorn E., Vetter E., Saintpierre C., Riou P., Gaillac D. Robust real-time cell analysis method for determining viral infectious titers during development Q., Wu J. Coronavirus infections and immune responses. J Med Virol (2020) 92(4), 424-432. phytochemicals from medioinal plants: Applications and drug delivery strategies. Drug 558-567. of the therapeutic effects of Camellia sinensis (green tea) on oral and periodontal A literature review. Chin Med (2010) 5(13). Voorspoels S., Koivumaki T., Kroon P., Pelvan E., Saha 8., Tomas-Barberan F., Validated method for the characterization and quantification of extractable and nonextractable ellagitannins after acid hydrolysis in pomegranate fruits, juices, and of pomegranate peel extract in comparison with pomegranate pulp extract. Food Chem bioactive compounds, antioxidant, antibacterial and antityrosinase activities of spike binding to human ACE2 receptor (in vitro):A promising source of novel antiviral Pomegranate peel extract inhibits internalization and replication of the influenza capacity of various blackberry and blueberry genotypes determined by high- performance liquid chromatography/mass spectrometry. J Sci Food Agr (2005) 85(3), 2149-2158. TR